MX2014011980A - Copolimeros de bloque para micelas estables. - Google Patents

Copolimeros de bloque para micelas estables.

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MX2014011980A
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Adam Carie
Joseph Edward Semple
Tomas Vojkovsky
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Intezyne Technologies Inc
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Abstract

La presente invención se refiere al campo de química de polímero y más particularmente a copolímeros de bloques múltiples y micelas que comprenden los mismos. Las composiciones de la presente son útiles para aplicaciones de suministro de fármaco.

Description

COPOLIMEROS DE BLOQUE PARA MICELAS ESTABLES Campo de la Invención La presente invención se refiere al campo de química de polímeros y más particularmente a copolímeros de bloques múltiples y usos de los mismos.
Antecedentes de la Invención El desarrollo de nuevos agentes terapéuticos ha mejorado dramáticamente la calidad de vida e índice de supervivencia de pacientes que sufren de una variedad de trastornos. Sin embargo, las innovaciones para el suministro de fármaco son necesarias para mejorar la tasa de éxito de estos tratamientos. Específicamente, los sistemas de suministro son todavía necesarios que minimicen efectivamente la excreción prematura y/o metabolismo de agentes terapéuticos y suministrar estos agentes específicamente a células enfermas de este modo reduciendo su toxicidad a células sanas.
Los portadores de fármaco nanoscópicos racionalmente designados o "nanovectores" , ofrecen un procedimiento prometedor para lograr estas metas debido a su capacidad inherente para superar muchas barreras biológicas. Sin embargo, su multi-funcionalidad permite la incorporación de grupos de objetivo celular, agentes de diagnóstico, y una multitud de fármacos en un sistema de suministro único. Las REF.: 251186 micelas de polímero, formadas por el ensamble molecular de copolímeros de bloque anfifílieos, funcionales, representan un tipo notable de nanovector multifuncional .
Las micelas de polímero son particularmente atractivas debido a su capacidad para suministrar grandes cargas útiles de una variedad de fármacos (por ejemplo, molécula pequeña, proteínas, y terapéuticos de ADN/ARN) , su estabilidad in vivo mejorada comparada con otros portadores coloidales (por ejemplo, liposomas) , y su tamaño nanoscópico el cual permite la acumulación pasiva en tejidos enfermos, tales como tumores sólidos, por su efecto de retención y permeacion mejorados (EPR, por sus siglas en inglés) . Usando funcionalidad de superficie apropiada, las micelas de polímero son además decoradas con grupos de objetivo a la célula y potenciadores de la permeacion que pueden activamente dirigir células enfermas y ayudan en la entrada celular, resultando en el suministro mejorado específico de la célula.
Mientras el auto ensamble representa un método conveniente para el diseño de abajo hacia arriba de nanovectores , las fuerzas que conducen y sostienen el ensamble de micelas de polímero son dependientes de la concentración e inherentemente reversibles. En aplicaciones clínicas, donde las micelas de polímero son rápidamente diluidas después de la administración, esta reversibilidad, junto con altas concentraciones de componentes sanguíneos desestabilizantes de la micela (por ejemplo, proteínas, lípidos, y fosfolípidos) , a menudo conduce a disociación prematura de micelas cargadas de fármaco antes de que el objetivo activo o pasivo se logre efectivamente. Para que las micelas de polímero alcancen completamente su potencial dirigido a la célula y exploten su multi-funcionalidad contemplada, el tiempo de circulación in vivo debe ser mejorado. Los vehículos de suministro de fármaco son necesarios, los cuales son infinitamente estables para dilución post-administración, pueden evitar las barreras biológicas (por ejemplo, absorción del sistema reticuloendotelial (RES, por sus siglas en inglés) , y fármacos de suministro en respuesta al ambiente fisiológico encontrado en tejidos enfermos, tales como tumores sólidos.
Breve Descripción de las Figuras Figuras la y Ib. Ilustraciones esquemáticas que representan el copolímero de tribloque y micela de polímero de la presente invención.
Figura 2. Ilustraciones esquemáticas que muestran la preparación de micelas cargadas de fármaco.
Figura 3. Ilustraciones esquemáticas que muestran la reticulación de una micela cargada de fármaco con iones de metal.
Figura 4. Ilustraciones esquemáticas que representan la micela cargada de fármaco, reticulada de la presente invención.
Figura 5. Validación de encapsulación de daunorubicina por diálisis de la formulación no reticulada a 20 mg/ml (barra negra) y 0.2 mg/mL (barra blanca) por 6 horas contra amortiguador de fosfato a pH 8.
Figura 6. Verificación de reticulación dependiente del fierro por diálisis a 0.2 mg/mL en amortiguador de fosfato a pH por 6 horas.
Figura 7. Verificación de la dependencia del tiempo en reticulación mediada por fierro por diálisis a 0.2 mg/mL en amortiguador de fosfato a pH 8 por 6 horas.
Figura 8. La muestra no reticulada se reconstituyó a 20 mg/ml y pH ajustado a 3, 4, 5, 6, 7, 7.4 y 8 para determinar la dependencia de pH de reticulación mediada por fierro. Las muestras se diluyeron a 0.2 mg/mL y se dializaron contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8 por 6 horas.
Figura 9. Liberación dependiente del pH de la formulación de daunorubicina reticulada dializada contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH ajustado a 3, 4, 5, 6, 7, 7.4 y 8 por 6 horas.
Figura 10. Liberación dependiente de la sal de la formulación de daunorubicina reticulada a 0.2 mg/mL dializada contra 10 mM de amortiguador de fosfato con concentraciones de NaCl de 0, 10, 50, 100, 200, 300, 400 o 500 mM.
Figura 11. Histograma de DLS que demuestra la distribución del tamaño de partícula para la formulación de aminopterina reticulada.
Figura 12. Verificación de encapsulación por diálisis de la formulación anterior (20 mg/mL, barra negra) y por debajo del (0.2 mg/mL, barra blanca) CMC.
Figura 13. Verificación de reticulación y liberación dependiente del pH de formulación de aminopterina a 0.2mg/mL por diálisis en 10 mM de amortiguador de fosfato durante 6 horas .
Figura 14. Viabilidad celular para células de cáncer de pulmón A549 tratadas con aminopterina libre, formulación de aminopterina no reticulada, formulación de aminopterina reticulada, vehículo de micela vacío no reticulado, y vehículo de micela vacío reticulado.
Figura 15. Viabilidad celular para células de cáncer de ovario 0VCAR3 tratadas con aminopterina libre, formulación de aminopterina no reticulada, formulación de aminopterina reticulada, vehículo de micela vacío no reticulado y vehículo de micela vacío reticulado.
Figura 16. Viabilidad celular para células pancreáticas PANC-1 (receptor de folato +) tratadas con aminopterina libre, formulación de aminopterina no reticulada, formulación de aminopterina reticulada, vehículo de micela vacío no reticulado y vehículo de micela vacío reticulado.
Figura 17. Viabilidad celular para células de cáncer pancreático BxPC3 (receptor de folato -) tratadas con aminopterina libre, formulación de aminopterina no reticulada, formulación de aminopterina reticulada, vehículo de micela vacío no reticulado y vehículo de micela vacío reticulado .
Figura 18. Concentración de SN-38 en el compartimiento de plasma de ratas a partir de la formulación de IT-141 (NHOH; 127C) comparada con la formulación de IT-141 (Asp; 127E) a 10 mg/kg.
Figura 19. Farmacocinéticas de rata de formulaciones de SN-38.
Figura 20. Liberación dependiente del pH de formulación de cabizataxel reticulada dializada contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH ajustado a 3, 4, 5, 6, 7, 7.4 y 8 por 6 horas .
Figura 21. Farmacocinéticas libres daunorubucina y formulaciones de daunorubicina en ratas.
Figura 22. Niveles de plasma en rata de cabizataxel después de la administración de la formulación de cabizataxel reticulada y libres de cabizataxel.
Figura 23. Eficacia anti-tumoral de formulaciones de SN-39 reticuladas en un modelo de xenoinjerto HCT-116.
Figura 24. Biodistribución de aminopterina a partir de formulaciones de aminopterina reticuladas en un modelo de xenoinjerto OVCAR-3.
Figura 25. Eficacia anti-tumoral de formulaciones de aminopterina reticuladas en un modelo de xenoinjerto MFE-296.
Descripción Detallada de la Invención 1. Descripción General .- De conformidad con una modalidad, la presente invención proporciona una micela que comprende un copolímero de bloque múltiple el cual comprende un bloque hidrofílico polimérico, opcionalmente un poli (bloque de aminoácido) reticulable o reticulado, y un bloque de poli (aminoácido) D,L-mezclado hidrofóbico, caracterizado porque tal micela tiene un núcleo interno, opcionalmente un núcleo externo reticulable o reticulado, y una cubierta hidrofilica. Se apreciará que el bloque hidrofílico polimérico corresponde a la cubierta hidrofilica, el poli (bloque de aminoácido) opcionalmente reticulable o reticulado corresponde al núcleo externo opcionalmente reticulado, y el bloque de poli (aminoácido) D,L-mezclado hidrofóbico corresponde al núcleo interno.
El bloque de "poli (aminoácido) D,L-mezclado hidrofóbico", como se describe en la presente, consiste de una mezcla de enantiómeros D y L para facilitar la encapsulación de porciones hidrofóbicas . Está bien establecido que homopolímeros y copolímeros de aminoácidos, que consisten de un estereoisomero único, pueden presentar estructuras secundarias tales como la hélice- o lámina- ß. Véase a-Aminoacid-N-Caroboxi-Anhydrides and Related Heterocycles, H.R. Kricheldorf, Springer-Verlag, 1987. Por ejemplo, poli (L-bencil glutamato) presenta típicamente una conformación a-helicoidal; sin embargo esta estructura secundaria puede ser alterada por un cambio de solvente o temperatura (véase Advances in Protein Chemistry XVI, P. Urnes and P. Doty, Academic Press, New York 1961) . La estructura secundaria también puede ser alterada por la incorporación de aminoácidos estructuralmente distintos tales como aminoácidos que forman láminas-ß (por ejemplo, prolina) o a través de la incorporación de aminoácidos con estereoquímica distinta (por ejemplo, mezcla de estereoisómeros D y L) , los cuales resultan en poli (aminoácidos) con una conformación de espiral aleatoria. Véase Sakai, R. ; Ikeda; S . ; Isemura, T. Bul! Chem. Soc. Japan 1969, 42, 1332-1336, Paolillo, L.; Temussi, P.A.; Bradbury, E. .; Crane-Robinson, C. Biopolimers 1972, 11, 2043-2052, y Cho, I.; Kim, J.B.; Jung, H.J. Polymer 2003, 44, 5497-5500.
Mientras los métodos para influenciar la estructura secundaria de poli (aminoácidos) se han conocido por algún tiempo, se ha descubierto de manera sorprendente que los copolímeros de bloque que poseen una conformación de espiral aleatoria son particularmente útiles para la encapsulacion de moléculas hidrofóbicas y nanopartículas cuando se compara con polímeros de bloque similares que poseen un segmento helicoidal. Véase Solicitud de Patente Estadounidense 2008-0274173. Sin desear ser ligado a cualquier teoría particular, se cree que proporcionar copolímeros de bloque que tienen una conformación de espiral-espiral permite el envasado y carga eficiente de porciones hidrofílicas dentro del núcleo de la micela, mientras las demandas estéricas de una conformación de varilla-espiral para un copolímero de bloque que contiene hélice resulta en encapsulacion menos efectiva.
Las fuerzas hidrofóbicas que conducen el ensamble acuoso de portadores de fármaco coloidales, tales como micelas de polímero y liposomas, son relativamente débiles, y estas estructuras ensambladas se disocian por debajo de una concentración finita conocida como la concentración crítica de micela (CMC, por sus siglas en inglés) . El valor de CMC de las micelas de polímero es de mayor importancia en aplicaciones clínicas debido a que los portadores coloidales cargados de fármaco son diluidos en la corriente sanguínea después de la administración y alcanza rápidamente concentraciones por debajo de la CMC (µ? o menos) . Este efecto de dilución conducirá a la disociación de la micela y liberación del fármaco hacia afuera del área de objetivo y cualquiera de los beneficios asociados con el tamaño de la micela (efecto de EPR) u objetivo activo se perderá. Mientras que una gran cantidad de investigación a través de los años 90 se enfocó en identificar micelas de polímero con valores de CMC ultra-bajos (nM o menos), Maysinger (Savic et . al, Langmuir, 2006, p3570-3578) y Schiochet (Lu et . al, Macromolecules, 2011, p6002-6008) han redefinido el concepto de una CMC biológicamente relevante mostrando que los valores de CMC para las micelas de polímero cambian por dos órdenes de magnitud cuando los valores de CMC en salina son comparados con y sin suero.
Además de su morfología de cubierta de núcleo, las micelas de polímero pueden ser modificadas para permitir el objetivo celular activo y pasivo para maximizar los beneficios de agentes terapéuticos actuales y futuros. Debido a que las micelas cargadas de fármaco poseen típicamente diámetros mayores de 20 nm, presentan tiempo de circulación dramáticamente incrementado cuando se comparan con fármacos independientes debido a la separación renal minimizada. Esta característica única de nanovectores y fármacos poliméricos conduce a la acumulación selectiva en el tejido enfermo, especialmente tejido canceroso debido a la permeación y efecto de retención mejorados ("EPR"). El efecto de EPR es una consecuencia de la naturaleza desorganizada de la vasculatura tumoral, lo cual resulta en permeabilidad incrementada de los terapéuticos poliméricos y retención de fármaco en el sitio del tumor. Además del objetivo de células pasivas por el efecto de EPR, las micelas son diseñadas para dirigir activamente células tumorales a través de la unión química de grupos de objetivo a la periferia de la micela. La incorporación de tales grupos es muy a menudo realizada a través de la funcionalización de grupo final del bloque hidrofílico usando técnicas de conjugación química. Como partículas virales, las micelas funcionalizadas con grupos de objetivo utilizan interacciones de ligando-receptor para controlar la distribución espacial de las micelas después de la administración, mejorando además el suministro específico de la célula de terapéuticos. En terapia de cáncer, grupos de objetivo están diseñados para interactuar con receptores que son sobre-expresados en tejido canceroso con relación al tejido normal tal como ácido fólico, oligopéptidos , azúcares, y anticuerpos monoclonales . Véase Pan, D. ; Turner, J. L.; Wooley, K. L. Chem. Commun. 2003, 2400-2401; Gabizon, A.; Shmeeda, H. ; Horowitz, A.T. ; Zalipsky, S. Adv. Drug Deliv. Rev. 2004, 56, 1177-1202; Reynolds, P. N. ; Dmitriev, I . ; Curiel, D. T. Vector. Gene Ther. 1999, 6, 1336-1339; Derycke, A. S. L.; Kamuhabwa, A.; Gijsens, A.; Roskams, T.; De Vos, D.; Kasran, A.; Huwyler, J. ; Missiaen, L. ; de Witte, P. A. M. T J. Nat. Cáncer Inst . 2004, 96, 1620-30; Nasongkla, N. , Shuai, X., Ai, H.; Weinberg, B. D. P. , J. ; Boothman, D. A. ; Gao, J. Angew. Chem. Int. Ed. 2004, 43, 6323-6327; Jule, E.; Nagasaki, Y.; Kataoka, K. Bioconj . Chem. 2003, 14, 177-186; Stubenrauch, K. ; Gleiter, S . ; Brinkmann, U. ; Rudolph, R. ; Lilie, H. Biochem. J. 2001, 356, 867-873; Kurschus , F. C; Kleinschmidt , M. ; Fellows, E . ; Dornmair, K. ; Rudolph, R. ; Lilie, H . ; Jenne, D. E. FEBS Lett . 2004, 562, 87-92; y Jones, S. D . ; Marasco, W. A. Adv. Drug Del . Rev. 1998, 31, 153-170.
A pesar del gran volumen de trabajo en portadores de fármaco micelares, se ha enfocado poco esfuerzo en el mejoramiento de su estabilidad in vivo para dilución. Una razón potencial es que los efectos verdaderos en la dilución de la micela in vivo no son completamente realizados hasta que se utilizan estudios mínimos más grandes. Debido a que el metabolismo del ratón es muy superior que el de los animales más grandes, pueden recibir dosis considerablemente superiores de fármacos tóxicos cuando se comparan con animales más grandes tales como ratas o perros. Por lo tanto, cuando las micelas cargadas de fármaco son administradas y completamente diluidas a través del volumen de sangre completo, la concentración de polímero correspondiente siempre será más alta en el modelo de ratón. Por lo tanto, podrá ser altamente deseable preparar una micela que es estabilizada (reticulada) para dilución dentro del medio biológico .
En la presente invención, el poli (bloque de aminoácido) opcionalmente reticulable o reticulado está comprendido de funcionalidad química que se une fuertemente o coordina con iones de metal. Un ejemplo específico son los ácidos hidroxámicos y fierro (III) . Otro ejemplo son grupos hidroxibenceno orto-sustituidos (catecoles) con fierro. Las porciones tanto de ácido hidroxámico como catecol son comunes en sideroforos, agentes quelantes de fierro de alta afinidad producidos por microorganismos. Adicionalmente , se ha reportado que los poli (acrilatos) modificados de ácido hidroxámico pueden formar un gel reticulado después del tratamiento con fierro (III) (Rosthauser and Winston, Macromolecules, 1981, p538-543) . Sin desear ser ligado por cualquier teoría particular, se cree que la incorporación de grupos quelantes de metal de alta afinidad tal como ácidos hidroxámicos y catecoles en el núcleo externo de la micela, después del tratamiento con un ión de metal resultará en una micela que es estable a dilución dentro del medio biológico.
El trabajo previo ha utilizado ácidos carboxílieos para interactuar con iones de metal con el fin de proporcionar estabilidad de la micela. Véase Solicitud de Patente Estadounidense 2006-0240092. Se ha descubierto de manera sorprendente que el uso de polímeros modificados de ácido hidroxámico es efectivo para estabilizar reversiblemente la micela de polímero para dilución dentro del medio biológico. Esta química de ácido hidroxámico ha sido demostrada por ser particularmente efectiva cuando se encapsula un fármaco que posee una o más funcionalidades químicas conocidas por unirse al fierro (por ejemplo, ácidos carboxílieos) . Sin desear ser ligado por cualquier teoría particular, se cree que los iones de metal usados para estabilizar la micela potencialmente se unirán a grupos quelantes de metal de alta afinidad tales como ácidos hidroxámicos y catecoles, resultando en una micela estabilizada. Además, la reacción de quelación entre el hierro (III) y porciones de ácido hidroxámico precede dentro de segundos, permitiendo una rápida etapa de reticulación. 2. Definiciones: Los compuestos de esta invención incluyen aquellos descritos en general anteriormente, y son además ilustrados por las modalidades, sub-modalidades, y especies descritas en la presente. Como se usa en la presente, las siguientes definiciones deben aplicarse a menos que se indique de otro modo. Para propósitos de esta invención, los elementos químicos son identificados de conformidad con la Tabla Periódica de los Elementos, versión CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75a a. g¿ Adicionalmente , principios generales de química orgánica se describen en "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, y "March's Advanced Organic Chemistry", 5th Ed., Ed. : Smith, M.B. y March, J. , John iley & Sons, New York: 2001, los contenidos completos de los cuales están de este modo incorporados por referencia.
Como se usa en la presente, el término "polimerización secuencial" , y variaciones del mismo, se refiere al método en donde, después que un primer monómero (por ejemplo, NCA, lactama, o imida) es incorporado en el polímero, de este modo formando un "bloque" de aminoácido, un segundo monómero (por ejemplo, NCA, lactama, o imida) se agrega a la reacción para formar un segundo bloque de aminoácido, en el cual el proceso puede ser continuado en una forma similar para introducir bloques de aminoácido adicionales en los copolímeros de bloques múltiples resultantes .
Como se usa en la presente, el término "copolímero de bloque múltiple" se refiere a un polímero que comprende una porción de polímero sintético y dos o más porciones de poli (amino ácido) . Tales copolímeros de bloques múltiples incluyen aquellos que tienen el formato W-X-X' , en donde W es una porción de polímero sintético y X y X' son cadenas de poli (amino ácido) o "bloques de aminoácidos" . En ciertas modalidades, los copolímeros de bloques múltiples de la presente invención son copolímeros de tribloque . Como se describe en la presente, uno o más de los bloques de aminoácidos pueden ser "bloques mezclados", significando que estos bloques pueden contener una mezcla de monómeros de aminoácido de este modo creando copolímeros de bloques múltiples de la presente invención. En algunas modalidades, los copolímeros de bloques múltiples de la presente invención comprenden un bloque de aminoácido mezclado y son copolímeros de tetrabloque.
Un experto en la técnica reconocerá que una unidad de repetición de monómero es definida por paréntesis alrededor de la unidad de monómero de repetición. El número (o letra que representa un intervalo numérico) a la derecha inferior del paréntesis representa el número de unidades de monómero que están presentes en la cadena de polímero. En el caso donde solamente un monómero representa el bloque (por ejemplo, un homopolímero) , el bloque será denotado solamente por el paréntesis. En el caso de un bloque mezclado, los monómeros múltiples comprenden un bloque continuo, único. Se entenderá que los corchetes definirán una porción o bloque. Por ejemplo, un bloque puede consistir de cuatro monómeros individuales, cada uno definido por su propia serie individual de paréntesis y número de unidades de repetición presentes. Todas las cuatro series de paréntesis estarán encerradas por una serie de corchetes, denotando que todos los cuatro de estos monómeros se combinarán en aleatorio, o casi aleatorio, con el fin de comprender el bloque mezclado. Por claridad, el bloque aleatoriamente mezclado de [BCADDCBADABCDABC] podría ser representado en forma abreviada por t(A)4(B)4(C)4(D)4] .
Como se usa en la presente, la unidad de repetición de monómero descrita anteriormente es un valor numérico que representa el número promedio de unidades de monómero que comprenden la cadena de polímero. Por ejemplo, un polímero representado por (A) 10 corresponde a un polímero que consiste de diez unidades de monómero "A" ligadas en conjunto. Uno de habilidad ordinaria en la técnica reconocerá que el número 10 en este caso representará una distribución de números con un promedio de 10. La amplitud de esta distribución es representada por el índice de polidispersidad (PDI) . Un PDI de 1.0 representa un polímero en donde cada longitud de cadena es exactamente el mismo (por ejemplo, una proteína) . Un PDI de 2.0 representa un polímero en donde las longitudes de cadena tienen una distribución Gaussiana. Los polímeros de la presente invención típicamente posee un PDI de menos de 1.20.
Como se usa en la presente, el término "copolímero de tribloque" se refiere a un polímero que comprende una porción de polímero sintético y dos porciones de poli (aminoácidos) .
Como se usa en la presente, el término "copolímero de tetrabloque" se refiere a un polímero que comprende una porción de polímero sintético y ya sea dos porciones de poli (aminoácido) , en donde 1 porción de poli (aminoácido) es un bloque mezclado o un polímero que comprende una porción de polímero sintético y tres porciones de poli (aminoácidos) .
Como se usa en la presente, el término "núcleo interno" como se aplica a una micela de la presente invención se refiere al centro de la micela formado por el bloque de poli (aminoácido) D,L-mezclado hidrofóbico. De conformidad con la presente invención, el núcleo interno no es reticulado. Por medio de ilustración, en un polímero de tribloque del formato W-X'-X", como se describe anteriormente, el núcleo interno corresponde al bloque X" .
Como se usa en la presente, el término "núcleo externo" como se aplica a una micela de la presente invención se refiere a la capa formada por el primer bloque de poli (aminoácido) . El núcleo externo cae entre el núcleo interno y la cubierta hidrofílica . De conformidad con la presente invención, el núcleo externo es ya sea reticulable o es reticulado. Por medio de ilustración, en un polímero de tribloque del formato W-X'-X", como se describe anteriormente, el núcleo externo corresponde al bloque X' . Se contempla que el bloque X' puede ser un bloque mezclado.
Como se usa en la presente, los términos "cargado de fármaco" y "encapsulado" , y derivados de los mismos, son usados intercambiablemente. De conformidad con la presente invención, una micela "cargada de fármaco" se refiere a una micela que tiene un fármaco, o agente terapéutico, situado dentro del núcleo que tiene un fármaco, o agente terapéutico, situado dentro del núcleo de la micela. En ciertos casos, el fármaco o agente terapéutico está situado en la interfaz entre el núcleo y la corona hidrofílica. Este también es referido como un fármaco, o agente terapéutico, siendo "encapsulado" dentro de la micela.
Como se usa en la presente, el término "bloque hidrofílico polimérico" se refiere a un polímero que no es un poli (amino ácido) y es hidrofílico en naturaleza. Tales polímeros hidrofílicos son bien conocidos en la técnica e incluyen polietilenóxido (también referido como polietilenglicol o PEG) , y derivados de los mismos, poli (N-vinil-2 -pirolidona) , y derivados de los mismos, poli(N-isopropilacrilamida) , y derivados de los mismos, poli (hidroxietil acrilato) , y derivados de los mismos, poli (hidroxiletil metacrilato) , y derivados de los mismos, y polímeros de N- (2-hidroxipropoil) metacrilamida (HMPA) y derivados de los mismos.
Como se usa en la presente, el término "poli (amino ácido) " o "bloque de aminoácido" se refiere a una cadena de aminoácido ligada covalentemente en donde tal monómero es una unidad de aminoácido. Tales unidades de aminoácido incluyen aminoácidos naturales y no naturales. En ciertas modalidades, cada unidad de aminoácido del poli (bloque de aminoácido) opcionalmente reticulable o reticulado está en la configuración L. Tales poli (aminoácidos) incluyen aquellos que tienen grupos funcionales adecuadamente protegidos. Por ejemplo, los monómeros de aminoácido pueden tener porciones hidroxilo o amino, las cuales son opcionalmente protegidas por un grupo protector hidroxilo o un grupo protector amina, como sea apropiado. Tales grupos protectores hidroxilo adecuados y grupos protectores amina son descritos en más detalle en la presente, infra. Como se usa en la presente, un bloque de aminoácido comprende uno o más monómeros o una serie de dos o más monómeros. En ciertas modalidades, un bloque de aminoácido comprende uno o más monómeros de manera que el bloque total es hidrofílico. En todavía otras modalidades, los bloques de aminoácidos de la presente invención incluyen bloques de aminoácidos aleatorios, es decir, bloques que comprenden una mezcla de residuos de aminoácidos .
Como se usa en la presente, el término "bloque de poli (amino ácido) D, L-mezclado" se refiere a un bloque de poli (aminoácido) en donde el poli (amino ácido) consiste de una mezcla de aminoácidos en tanto las configuraciones D- y L. En ciertas modalidades, el bloque de poli (aminoácido) D,L-mezclado es hidrofílico. En otras modalidades, el bloque de poli (aminoácido) D, L-mezclado consiste de una mezcla de grupos de cadena lateral de aminoácidos hidrofóbicos D-configurados y aminoácidos hidrofílicos L-configurados de manera que el bloque de poli (aminoácido) total que comprende es hidrofílico.
Poli (aminoácidos) ejemplares incluyen poli (bencil glutamato) , poli (bencil aspartato) , poli (L-leucina-co-tirosina) , poli (D-leucina-co-tirosina) , poli (L-fenilalanina-co-tirosina) , poli (D-fenilalanina-co-tirosina) , poli (L-leucina-ácido coaspártico) , poli (D-leucina-ácido co-aspártico) , poli (L-fenilalanina-ácido co-aspártico) , poli (D-fenilalanina-ácido co-aspártico) .
Como se usa en la presente, la frase "grupo de cadena lateral de aminoácido natural" se refiere al grupo de cadena lateral de cualquiera de los 20 aminoácidos que se originan naturalmente en las proteínas. Por claridad, el grupo de cadena lateral -CH3 podría representar el aminoácido alanina. Tales aminoácidos naturales incluyen los aminoácidos no polares o hidrofóbicos , glicina, alanina, valina, leucina isoleucina, metionina, fenilalanina, triptofano, y prolina. Las cisteína es algunas veces clasificada como no polar o hidrofóbica y otras veces como polar. Los minoácidos naturales también incluyen aminoácidos polares o hidrofílieos , tales como tirosina, serina, treonina, ácido aspártico (también conocido como aspartato, cuando se carga) , ácido glutámico (también conocido como glutamato, cuando se carga), asparagina, y glutamina. Ciertos aminoácidos polares o hidrofílieos, tienen cadenas laterales cargadas. Tales aminoácidos cargados incluyen lisina, arginina, e histidina. Uno de habilidad ordinaria en la técnica podría reconocer que la protección de una cadena lateral de aminoácido polar o hidrofilico puede proporcionar tal aminoácido no polar. Por ejemplo, un grupo tirosina hidroxilo adecuadamente protegido puede proporcionar tal tirosina no polar e hidrofóbica en virtud de proteger el grupo hidroxilo.
Como se usa en la presente, la frase "grupo de cadena lateral de aminoácido no natural" se refiere a aminoácidos no incluidos en la lista de 20 aminoácidos que se originan naturalmente en las proteínas, como se describe anteriormente. Tales aminoácidos incluyen el isómero-D de cualquiera de los 20 aminoácidos que se originan naturalmente. Los aminoácidos no naturales también incluyen homoserina, ornitina, y tiroxina. Otras cadenas laterales de aminoácidos no naturales son bien conocidas por uno de habilidad ordinaria en la técnica e incluyen cadenas laterales alifáticas no naturales. Otros aminoácidos no naturales incluyen aminoácidos modificados, que incluyen aquellos que son N-alquilados , ciclizados, fosforilados , acetilados, amidados, azidilados, etiquetados, y similares.
Como se usa en la presente, el término "tacticidad" se refiere a la estereoquímica del bloque hidrofóbico de poli (amino ácido) . Un bloque de poli (aminoácido) que consiste de un estereoisómero único (por ejemplo, todo el isómero L) es referido como "isotáctico" . Un poli (amino ácido) que consiste de una incorporación aleatoria de monómeros de aminoácido D y L es referido como un polímero "atáctico" . Un poli (amino ácido), con estereoquímica alternante (por ejemplo, ...DLDLDL... ) es referido como un polímero "sindiotáctico" . La tacticidad del polímero es descrita en más detalle en "Principies of Polimerization" , 3rd Ed. , G. Odian, John iley & Sons, New York: 1991, los contenidos completos de los cuales están de este modo incorporados por referencia.
Como se usa en la presente, la frase "extremo de cadena de polímero vivo" se refiere al término que resulta de una reacción de polimerización la cual mantiene la capacidad para reaccionar además con un monómero adicional o con un terminador de polimerización.
Como se usa en la presente, el término "terminación" se refiere a la unión a un grupo terminal con un extremo de cadena de polímero por la reacción de un polímero vivo con un compuesto apropiado. Alternativamente, el término "terminación" puede referirse a la unión a un grupo terminal con un extremo hidroxilo o amina, o derivado del mismo, de la cadena de polímero.
Como se usa en la presente, el término "terminador de polimerización" es usado intercambiablemente con el término "agente de terminación de polimerización" y se refiere a un compuesto que reacciona con un extremo de cadena de polímero vivo para proporcionar un polímero con un grupo terminal. Alternativamente, el término "terminador de polimerización" puede referirse a un compuesto que reacciona con un extremo hidroxilo o amina, o derivado del mismo, de la cadena de polímero, para proporcionar un polímero con un grupo terminal .
Como se usa en la presente, el término "iniciador de polimerización" se refiere a un compuesto, el cual reacciona con, o cuyo anión o base libre forma reactivos con, el monómero deseado en una manera la cual resulta en polimerización de tal monómero. En ciertas modalidades, el iniciador de polimerización es el compuesto que reacciona con un óxido de alquileno para proporcionar un bloque de óxido de polialquileno . En otras modalidades, el iniciador de polimerización es una sal de amina como se describe en la presente. En ciertas modalidades, el iniciador de polimerización es una sal de amina de ácido trifluoroacético .
El término "alifático" o "grupo alifático", como se usa en la presente, denota una porción de hidrocarburo que puede ser de cadena recta (es decir, no ramificada) , ramificada, o cíclica (que incluye fusionada, puenteada, y policíclica espiro-fusionada) y puede ser completamente saturada o puede contener una o más unidades de insaturación, pero las cuales no son aromáticas. A menos que se especifique de otro modo, los grupos alifáticos contienen 1-20 átomos de carbono. En algunas modalidades, los grupos alifáticos contienen 1-10 átomos de carbono. En otras modalidades, los grupos alifáticos contienen 1-8 átomos de carbono. En todavía otras modalidades, los grupos alifáticos contienen 1-6 átomos de carbono, y en aún otras modalidades los grupos alifáticos contienen 1-4 átomos de carbono. Los grupos alifáticos incluyen, pero no se limitan a, grupos alquilo, alquenilo y alquinilo lineales o ramificados, e híbridos de los mismos tales como (cicloalquil) alquilo, (cicloalquenil) alquilo o (cicloalquil) alquenilo.
El término "heteroátomo" significa uno o más de oxígeno, azufre, nitrógeno, fósforo o silicio. Este incluye cualquier forma oxidada de nitrógeno, azufre, fósforo o silicio; la forma cuaternizada de cualquier nitrógeno básico, o; un nitrógeno sustituible de un anillo heterocíclico que incluye =N- como en 3 , 4-dihidro-2H-pirrolilo, -NH- como en pirrolidinilo, o =N(Rf)- como en pirrolidinilo N-sustituido .
El término "insaturado" , como se usa en la presente, significa que una porción tiene una o más unidades de insaturación .
Como se usa en la presente, el término "cadena de hidrocarburo C1-C12 recta o ramificada, saturada o insaturada, bivalente", se refiere a cadenas alquileno, alquenileno y alquinileno bivalentes que son rectas o ramificadas como se define en la presente.
El término "arilo" usado solo o como parte de una porción más grande como en "aralquilo" , "aralcoxi", o "arilalcoxialquilo" , se refiere a sistemas de anillo moncíclico, bicíclico, y tricíclico que tienen un total de cinco a catorce elementos en el anillo, en donde al menos un anillo en el sistema es aromático y en donde cada anillo en el sistema contiene tres a siete elementos en el anillo. El término "arilo" puede ser usado intercambiablemente con el término "anillo arilo" .
Como se describe en la presente, los compuestos de la invención pueden contener porciones "opcionalmente sustituidas". En general, el término "sustituido", si es precedido por el término "opcionalmente" o no, significa que uno o más hidrógenos de la porción designada son reemplazados con un sustituyente adecuado. A menos que se indique de otro modo, un grupo "opcionalmente sustituido" puede tener un sustituyente adecuado en cualquier posición sustituible del grupo, y cuando más de una posición en cualquier estructura dada puede ser sustituida con más de un sustituyente seleccionado a partir de un grupo especificado, el sustituyente puede ser ya sea el mismo o diferente en cualquier posición. Combinaciones de sustituyentes contempladas por esta invención son preferiblemente aquellas que resultan en la formación de compuestos estables o químicamente factibles. El término "estable", como se usa en la presente, se refiere a compuestos que no son sustancialmente alterados cuando se someten a condiciones para permitir su producción, detección, y, en ciertas modalidades, su recuperación, purificación, y uso para uno o más de los propósitos descritos en la presente.
Sustituyentes monovalentes en un átomo de carbono sustituible de un grupo "opcionalmente sustituido" son independientemente halógeno; - (CH2) 0-4R0 ; - (CH2) 0-4OR0 ; -0- (CH2) 0-4C (O) 0R°; - (CH2) o-4CH(OR°)2; - (CH2) 0-4SR0 ; -(CH2)0-4Ph, los cuales pueden ser sustituidos con R°; - (CH2) 0-4O (CH2) o-iPh los cuales pueden ser sustituidos con R° ; -CH=CHPh, los cuales pueden ser sustituidos con R° ; -N02; -CN; -N3 ; - (CH2) 0-4N (R° ) 2; - (CH2) o-4N(R0)C(0)R°; -N (R° ) C (S) R° ; - (CH2) 0-4N (R° ) C (O) NR°2 ; -N(R°) C (S)NR°2; - (CH2) 0-4N (R° ) C (0) OR° ; -N(R°)N(R°)C(0)R°; N(R°)N(R°)C(0)NRo2; -N (R° ) N (R° ) C (0) 0R° ; - (CH2) 0-4C (0) R° ; C(S)R°; - (CH2) o-4C(0)OR° ; - (CH2) 0-4C (O) SR° ; - (CH2) 0-4C (O) 0SÍR°3 ; - (CH2) o-40C(0)R°; -0C (0) (CH2) 0-4SR- , SC(S)SR°; - (CH2) 0-4SC (0) R° ; - (CH2) 0-4C(0)NR°2; -C(S)NR°2; -C(S)SR°; -SC(S)SR°, (CH2) 0-4OC (0)NR°2; -C(0)N(0R°)R°; -C (O) C (O) R° ; -C (0) CH2C (0) R° ; -C(N0R°)R°; - (CH2) 0-4SSR0 ; - (CH2) 0-4S (0) 2R° ; - (CH2) 0-4S (0) 20R° ; -(CH2) o-40S(0)2R°; -S(0)2NR°2; - (CH2) 0-4S (O) R° ; -N (R° ) S (O) 2NR°2 ; -N(R°)S(0)2R°; -N(0R°)R°; -C(NH)NR°2; -P(0)2R°; -P(0)R°2; -0 P(0)R°2; -0P (0) (0R°) 2; SiR°3; - (alquileno C1-4 recto o ramificado) 0-N (R° ) 2; o -(alquileno C1-4 recto o ramificado) C (0) 0-N (R° ) 2, en donde cada R° puede ser sustituido como se define abajo y es independientemente hidrógeno, alifático Ci-6, -CH2Ph, -0 (CH2) 0-iPh, o un anillo arilo, saturado, parcialmente insaturado, de 5-6 elementos que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o, a pesar de la definición anterior, dos apariciones independientes de R° , tomadas junto con su(s) átomo (s) de intervención, forman un anillo arilo mono- o bicíclico, saturado, parcialmente insaturado de 3 a 12 elementos que tienen 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, el cual puede ser sustituido como se define abajo.
Sustituyentes monovalentes en R° (o el anillo formado tomando dos apariciones independientes de R° junto con sus átomos de intervención) , son independientemente halógeno, -(CH2)0-2Re, - (haloR») , -(CH2)o-20H, - (CH2) o-2ORV - (CH2) o-2CH(OR«) 2; -0(haloR*), -CN, -N3, - (CH2) 0-2C (0) R», (CH2) o-2C(0)OH, - (CH2)o-2C(0)ORV - (CH2) o-2SR», -(CH2)0-2SH, (CH2)o-2NH2, - (CH2) o-2NHR», - (CH2) o-2NR*2 , -N02, -SiR*3, -0SiR«3, -C(0)SR* - (alquileno Ci-4 recto o ramificado) C (O) OR* , o -SSR* en donde cada R* es insustituido o donde se precede por "halo" es sustituido solamente con uno o más halógenos, y es independientemente seleccionado a partir de alifático C1-4, -CH2Ph, -O (CH2) o-iPh, o un anillo arilo, saturado, parcialmente insaturado, de 5-6 elementos que tienen 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre. Tales sustituyentes divalentes en un átomo de carbono saturado de R° incluyen =0 y =S .
Sustituyentes divalentes en un átomo de carbono saturado de un grupo "opcionalmente sustituido" incluyen los siguientes: =0, =S, =NNR*2, = NHC(0)R*, = NHC (0) 0R*, =NNHS(0)2R*, =NR* , =N0R , -0(C (R*2) ) 2-3O- , o -S (C (R*2) ) 2-3S- , en donde cada aparición independiente de R* se selecciona a partir de hidrógeno, alifático C1-6 el cual puede ser sustituido como se define abajo, o un anillo arilo, saturado, parcialmente insaturado, insustituido de 5-6 elementos que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre. Sustituyentes divalentes que están unidos a carbonos adecuados vecinales de un grupo "opcionalmente sustituido" incluyen: -0 (CR*2) 2-3O- , en donde cada aparición independiente de R* se selecciona a partir de hidrógeno, alifático C1-6 el cual puede ser sustituido como se define abajo, o un anillo arilo, saturado, parcialmente insaturado, insustituido de 5-6 elementos que tienen 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre. Un sustituyente tetravalente que se une a carbonos de metileno sustituibles vecinales de un grupo "opcionalmente sustituido" es el agrupamiento de dicobalto hexacarbonilo representado por cuando se representa con los metilenos los cuales porta .
Sustituyentes adecuados en el grupo alifático de R* incluyen halógeno, -R*, - (haloR*) , -OH, -OR«, -0(haloR»), -CN, -C(0)0H, -C(0)0R«, -NH2, -NHR* , -NR»2, o -N02, en donde cada R* es insustituido o donde se precede por "halo" es sustituido solamente con uno o más halógenos, y es independientemente alifático Ci-4, -CH2Ph, -0 (CH2) o-iPh, o un anillo arilo, saturado, parcialmente insaturado, de 5-6 elementos que tienen 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre.
Sustituyentes adecuados en un nitrógeno sustituible de un grupo "opcionalmente sustituido" incluyen -R†, -NR†2, -C(0)R\ -C(0)0R\ -C(0)C(0)R†, -C (O) CH2C (O) Rf , -S(0)2R†, S(0)2NRf2, -C(S)N Rf2, -C (NH) NRf2 , o -N (Rf) S (O) 2Rf ; en donde cada Rf es independientemente hidrógeno, alifático Ci-6 el cual puede ser sustituido como se define abajo, -OPh insustituido, o un anillo arilo, saturado, parcialmente insaturado, insustituido de 5-6 elementos que tienen 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o, a pesar de la definición anterior, dos apariciones independientes de R† , tomadas junto con su(s) átomo (s) de intervención forman un anillo arilo mono- o bicíclico, saturado, parcialmente insaturado, de 3-12 elementos insustituido que tienen 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre.
Sustituyentes adecuados en el grupo alifático de R† son independientemente halógeno, -Re, - (haloR*) , -OH, OR», -0(haloR«), -CN, -C(0)OH, -C(0)OR», -NH2, -NHR», -NR*2, o -NO2, en donde cada R» es insustituido o donde se precede por "halo" es sustituido solamente con uno o más halógenos, y es independientemente alifático C1-4, -C Ph, -0 (CH2) o-iPh, o un anillo arilo, saturado, parcialmente insaturado, de 5-6 elementos que tienen 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre.
Grupos hidroxilo protegidos son bien conocidos en la técnica e incluyen aquellos descritos en detalle en Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene y P. G. M. Wuts, 3ra edición, John Wiley & Sons, 1999, la totalidad de la cual se incorpora en la presente por referencia. Ejemplos de grupos hidroxilo adecuadamente protegidos incluyen además, pero no se limitan a, esteres, carbonatos, alilésteres de sulfonato, éteres, sililéteres, alquiléteres, arilalquiléteres , y alcoxialquiléteres . Ejemplos de ésteres adecuados incluyen formiatos, acetatos, proprionatos , pentanoatos, crotonatos, y benzoatos. Ejemplos específicos de ésteres adecuados incluyen formiato, formiato de benzoilo, cloroacetato, trifluoroacetato, metoxiacetato, trifenilmetoxiacetato, p-clorofenoxiacetato, 3-fenilpropionato, 4-oxopentanoato, 4,4-(etileneditio) pentanoato, pivaloato (trimetilacetato) , crotonato, 4-metoxi-crotonato, benzoato, p-benilbenzoato, 2 , 4 , 6-trimetilbenzoato . Ejemplos de carbonatos incluyen 9-fluorenilmetilo, etilo, 2 , 2 , 2 -tricloroetilo, 2- (trimetilsilil) etilo, 2 - ( fenilsulfonil ) etilo, vinilo, alilo, y carbonato de p-nitrobencilo . Ejemplos de sililéteres incluyen trimetilsililo, trietilsililo, t-butildimetilsililo, t-butildifenilsililo, triisopropilsililéte , y otros trialquilsililéteres . Ejemplos de alquiléteres incluyen metilo, bencilo, p-metoxibencilo, 3 , 4 -dimetoxibencilo, tritilo, t-butilo, y aliléter, o derivados de los mismos. Alcoxialquiléteres incluyen acétales tales como metoximetilo, metiltiometilo, (2-metoxietoxi) metilo, benciloximetilo, beta- (trimetilsilil) etoximetilo, y tetrahidropiran-2-iléter. Ejemplos de arilalquiléteres incluyen bencilo, p-metoxibencilo (MPM) , 3 , 4 -dimetoxibencilo, O-nitrobencilo, p-nitrobencilo, p-halobencilo, 2 , 6-diclorobencilo, p-cianobencilo, 2- y 4-picoliléteres .
Aminas protegidas son bien conocidas en la técnica e incluyen aquellos descritos en detalle en Greene (1999) . Aminas monoprotegidas incluyen además, pero no se limitan a, aralquilaminas , carbamatos, alilaminas, amidas, y similares. Ejemplos de porciones amino mono-protegidas incluyen t-butiloxicarbonilamino (-NHBOC), etiloxicarbonilamino, metiloxicarbonilamino, tricloroetiloxicarbonilamino, aliloxicarbonilamino (-NHAloc), benciloxocarbonilamino (-NHCBZ), alilamino, bencilamino (-NHBn), fl orenilmetilcarbonilo ( -NHFmoc) , formamido, acetamido, cloroacetamido, dicloroacetamido, tricloroacetamido, fenilacetamido, trifluoroacetamido, benzamido, t-butildifenilsililo, y similares. Aminas di-protegidas incluyen aminas que son sustituidas con dos sustituyentes seleccionados independientemente a partir de aquellas descritas anteriormente como aminas mono-protegidas, y además incluyen aminas cíclicas, tales como ftalimida, maleimida, succinimida, y similares. Aminas di-protegidas también incluyen pirróles y similares, 2 , 2 , 5 , 5-tetrametil- [1 , 2 , 5] azadisilolidina y similares, y azida.
Aldehidos protegidos son bien conocidos en la técnica e incluyen aquellos descritos en detalle en Greene (1999) . Los aldehidos protegidos además incluyen, pero no se limitan a, acétales acíclicos, acétales cíclicos, hidrazonas, iminas, y similares. Ejemplos de tales grupos incluyen dimetilacetal , dietilacetal , diisopropilacetal , dibencilacetal , bis (2-nitrobencil) acetal, 1 , 3 -dioxanos , 1,3-dioxolanos, semicarbazonas , y derivados de los mismos. Ácidos carboxílicos protegidos son bien conocidos en la técnica e incluyen aquellos descritos en detalle en Greene (1999) . Los ácidos carboxílicos protegidos incluyen además, pero no se limitan a, ásteres alifáticos Ci-6 opcionalmente sustituidos, arilésteres opcionalmente sustituidos, sililésteres, ásteres activados, amidas, hidrazidas, y similares. Ejemplos de tales grupos esteres incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, bencilo, y feniléster, en donde cada grupo es opcionalmente sustituido. Ácidos carboxílieos protegidos adicionales incluyen oxazolinas y ortoésteres.
Tioles protegidos son bien conocidos en la técnica e incluyen aquellos descritos en detalle en Greene (1999) . Tioles protegidos incluyen además, pero no se limitan a, disulfuros, tioéteres, sililtioéteres , tioésteres, tiocarbonatos , y tiocarbamatos , y similares. Ejemplos de tales grupos incluyen, pero no se limitan a, alquiltioéteres , bencilo y benciltioéteres sustituidos, trifenilmetiltioéteres , y tricloroetoxicarboniltioéster, por nombrar solo algunos.
A menos que se declare de otro modo, estructuras representadas en la presente también significan incluir todas las formas isoméricas (por ejemplo, enantiomérica, diastereotnérica, y geométrica (o conformacional ) ) de la estructura; por ejemplo, las configuraciones R y S para cada centro asimétrico, isómeros de enlace doble Z y E, e isómeros conformacionales de Z y E. Por lo tanto, isómeros estereoquímicos únicos así como también mezclas enantioméricas , diastereoméricas , y geométricas (o conformacionales) de los presentes compuestos están dentro del alcance de la invención. A menos que se declare de otro modo, todas las formas tautoméricas de los compuestos de la invención están dentro del alcance de la invención. Adicionalmente , a menos que se declare de otro modo, las estructuras representadas en la presente también significan incluir compuestos que difieren solamente en la presencia de uno o más átomos isotópicamente enriquecidos. Por ejemplo, los compuestos que tienen las presentes estructuras excepto para el reemplazo de hidrógeno por deuterio o tritio, o el reemplazo de un carbono por un carbono enriquecido con 13C- o 14C- están dentro del alcance de esta invención. Tales compuestos son útiles, por ejemplo, como en experimentos de dispersión de neutrón, como sondas o herramientas analíticas en ensayos biológicos .
Como se usa en la presente, el término "porción detectable" es usado intercambiablemente con el término "etiqueta" y se refiere a cualquier porción capaz de ser detectada (por ejemplo, etiquetas primarias y etiquetas secundarias) . Una "porción detectable" o "etiqueta" es el radical de un compuesto detectable.
Etiquetas "primarias" incluyen porciones que contienen de radioisótopos (por ejemplo, porciones que contienen 32P, 33P, 35S, o 14C) , etiquetas de masa, y etiquetas fluorescentes, y son grupos reporteros que generan señal los cuales pueden ser detectados sin modificaciones adicionales.
Otras etiquetas primarias incluyen aquellas útiles para la tomografía de emisión de positrón que incluyen moléculas que contienen radioisótopos (por ejemplo, 18F) o ligandos con metales radioactivos unidos (por ejemplo, 62Cu) . En otras modalidades, las etiquetas primarias son agentes de contraste para imagen de resonancia magnética tales como partículas de gadolinio, quelatos de gadolinio, u óxido de hierro (por ejemplo, Fe304 y Fe203) . De manera similar, las nanopartículas semiconductoras (por ejemplo, selenuro de cadmio, sulfuro de cadmio, telúrido de cadmio) son útiles como etiquetas fluorescentes. Otras nanopartículas de metal (por ejemplo, oro coloidal) también sirven como etiquetas primarias .
Etiquetas "secundarias" incluyen porciones tales como biotina, o antígenos de proteína, que requieren la presencia de un segundo compuesto para producir una señal detectable. Por ejemplo, en el caso de una etiqueta de biotina, el segundo compuesto puede incluir conjugados de la enzima estreptavidina . En el caso de una etiqueta de antígeno, el segundo compuesto puede incluir un conjugado de enzima de anticuerpo. Adicionalmente , ciertos grupos fluorescentes pueden actuar como etiquetas secundarias transfiriendo energía a otro compuesto o grupo en un proceso de transferencia de energía de resonancia fluorescente no radiativa (FRET) , causando que el segundo compuesto o grupo entonces genere la señal que es detectada.
A menos que se indique de otro modo, las porciones que contienen radioisótopo son grupos de hidrocarburos opcionalmente sustituidos que contienen al menos un radioisótopo. A menos que se indique de otro modo, porciones que contienen radioisótopo contienen desde 1-40 átomos de carbono y un radioisótopo. En ciertas modalidades, porciones que contienen radioisótopo contienen desde 1-20 átomos de carbono y un radioisótopo.
Los términos "etiqueta fluorescente", "grupo fluorescente", "compuesto fluorescente", "tinte fluorescente", y "fluoróforo" , como se usan en la presente, se refieren a compuestos o porciones que absorben energía de luz en una longitud de onda de excitación definida y emiten energía de luz a una diferente longitud de onda. Ejemplos de compuestos fluorescentes incluyen, pero no se limitan a: tintes Alexa Fluor (Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 532, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660 y Alexa Fluor 680), tintes AMCA, AMCA-S, BODIPY (BODIPY FL, BODIPY R6G, BODIPY TMR, BODIPY TR, BODIPY 530/550, BODIPY 558/568, BODIPY 564/570, BODIPY 576/589, BODIPY 581/591, BODIPY 630/650, BODIPY 650/665), Carboxirodamina 6G, carboxi-X-rodamina (ROX) , Cascade Blue, Cascade Yellow, Cumarina 343, tintes de Cianuro (Cy3, Cy5, Cy3.5 , Cy5.5), Dansilo, Dapoxilo, Dialquilaminocumarina, 41 , 5 ' -Dicloro-2 ' , 71 -dimetoxi-fluoresceina, DM-NERF, Eosina, Eritrosina, Fluoresceína, FAM, Hidroxicumarina, TintesIR (IRD40, IRD 700, IRD 800) , JOE, Lissamina rodamina B, Marina Blue, Metoxi cumarina, Nafto fluoresceína, Oregon Green 488, Oregon Green 500, Oregon Green 514, Pacific Blue, PyMPO, Pireno, Rodamina B, Rodamina 6G, Rodamina Green, Rodamina Red, Rodol Green, 2', 4', 5' ,7'-Tetra-bromosulfona-fluoresceina, Tetrametil-rodamina (T R) , Carboxitetrametilrodamina (TAMRA) , Texas Red, Texas Red-X.
El término "sustrato" , como se usa en la presente se refiere a cualquier material o complejo macromolecular al cual un grupo final funcionalizado de un copolímero de bloque puede ser unido. Ejemplos de sustratos comúnmente usados incluyen, pero no se limitan a, superficies de vidrio, superficies de sílice, superficies de plástico, superficies de metal, superficies que contienen un recubrimiento químico o metálico, membranas (por ejemplo, nilón, polisulfona, sílice) , micro-perlillas (por ejemplo, látex, poliestireno, u otro polímero) , matrices de polímero porosas (por ejemplo, gel de poliacrilamida, polisacárido, polimetacrilato) , complejos macromoleculares (por ejemplo, proteína, polisacárido) .
El término ácido hidroxámico, como se usa en la presente, se refiere a una porción que contiene un grupo funcional de ácido hidroxámico ( -CO-NH-OH) . La estructura es representada por FAN H-OH y también puede ser representada por Un experto en la técnica podrá reconocer que el enlace punteado representa el punto de unión al resto de la molécula .
El término hidroxamato, como se usa en la presente, se refiere a una porción que contiene ya sea ácido hidroxámico o un ácido hidroxámico N-sustituido . Debido a la N-sustitución, existen dos ubicaciones separadas para la unión química, como se muestra por los grupos R y R' aquí los hidroxamatos de También pueden ser representados por en la presente.
El término catechol, como se usa en la presente, se refiere a un derivado de orto-dihidroxibenceno sustituido. Dos diferentes conformaciones isoméricas son representadas por El catecol es también conocido como pirocatecol y bencen- 1 , 2 -diol . 3. Descripción de Modalidades Ejemplares : ?. Copolímeros de bloques múltiples En ciertas modalidades, el copolímero de bloque múltiple comprende un bloque de poli (etilenglicol) hidrofílico, un bloque de poli (aminoácido) que contiene ácido hidroxámico, y un bloque de poli (aminoácido) hidrofóbico caracterizado porque la micela resultante tiene un núcleo interno, un núcleo externo que contiene ácido hidroxámico, y una cubierta hidrofílica. Se apreciará que el bloque de poli (etilenglicol) hidrofílico corresponde a la cubierta hidrofílica, el bloque de poli (aminoácido) que contiene ácido hidroxámico estabilizante corresponde al núcleo externo que contiene ácido hidroxámico, y el bloque de poli (aminoácido) hidrofóbico corresponde al núcleo interno.
En otras modalidades, el copolímero de bloque múltiple comprende un bloque de poli (etilenglicol) hidrofílico, un bloque de poli (aminoácido) que contiene catecol, y un bloque de poli (aminoácido) hidrofóbico caracterizado porque la micela resultante tiene un núcleo interno, un núcleo externo que contiene catecol, y una cubierta hidrofílica. Se apreciará que el bloque de poli (etilenglicol) hidrofílico corresponde a la cubierta hidrofílica, el bloque de poli (aminoácido) que contiene catecol estabilizante corresponde al núcleo externo que contiene catecol, y el bloque de poli (aminoácido) hidrofóbico corresponde al núcleo interno.
En ciertas modalidades, el copolímero de bloque múltiple comprende un bloque de poli (etilenglicol) hidrofílico, un bloque de poli (aminoácido) que contiene hidroxamato, y un bloque de poli (aminoácido) hidrofóbico caracterizado porque la micela resultante tiene un núcleo interno, un núcleo externo que contiene hidroxamato, y una cubierta hidrofílica. Se apreciará que el bloque de poli (etilenglicol ) hidrofílico corresponde a la cubierta hidrofílica, el bloque de poli (aminoácido) que contiene hidroxamato estabilizante corresponde al núcleo externo que contiene hidroxamato, y el bloque de poli (aminoácido) hidrofóbico corresponde al núcleo interno.
En ciertas modalidades, el copolímero de bloque múltiple comprende un bloque de poli (etilenglicol) hidrofílico, un bloque de poli (aminoácido) que contiene ácido hidroxámico, y un bloque de poli (aminoácido) D,L-mezclado hidrofóbico caracterizado porque la micela resultante tiene un núcleo interno, un núcleo externo que contiene ácido hidroxámico, y una cubierta hidrofílica. Se apreciará que el bloque de poli (etilenglicol ) hidrofílico corresponde a la cubierta hidrofílica, bloque de poli (aminoácido) que contiene ácido hidroxámico estabilizante corresponde al núcleo externo que contiene ácido hidroxámico, y el bloque de poli (aminoácido) D,L-mezclado hidrofóbico corresponde al núcleo interno.
En otras modalidades, el copolímero de bloque múltiple comprende un bloque de poli (etilenglicol) hidrofílico, un bloque de poli (aminoácido) que contiene catecol, y un bloque de poli (aminoácido) D,L-mezclado hidrofóbico caracterizado porque la micela resultante tiene un núcleo interno, un núcleo externo que contiene catecol, y una cubierta hidrofílica. Se apreciará que el bloque de poli (etilenglicol) hidrofílico corresponde a la cubierta hidrofílica, el bloque de poli (aminoácido) que contiene catecol estabilizante corresponde al núcleo externo que contiene catecol, y el bloque de poli (aminoácido) D,L-mezclado hidrofóbico corresponde al núcleo interno.
En ciertas modalidades, el copolímero de bloque múltiple comprende un bloque de poli (etilenglicol) hidrofílico, un bloque de poli (aminoácido) que contiene hidroxamato, y un bloque de poli (aminoácido) D,L-mezclado hidrofóbico caracterizado porque la micela resultante tiene un núcleo interno, un núcleo externo que contiene hidroxamato, y una cubierta hidrofílica. Se apreciará que el bloque de poli (etilenglicol) hidrofílico corresponde a la cubierta hidrofílica, el bloque de poli (aminoácido) que contiene hidroxamato estabilizante corresponde al núcleo externo que contiene hidroxamato, y el bloque de poli (aminoácido) D,L-mezclado hidrofóbico corresponde al núcleo interno.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un copolímero de tribloque de fórmula I : en donde : n es 20-500; x es 3 a 50; y es 5 a 100; Rx es una porción que contiene hidroxamato o catecol ; Ry se selecciona a partir de uno o más grupos de cadena lateral de aminoácido natural o no natural de manera que el bloque total es hidrofóbico ; R1 es -Z(CH2CH2Y)p(CH2)tR3, en donde: Z es -0-, -NH-, -S-, -C=C-, o -CH2-; cada Y es independientemente -O- o -S- t es 0-10; y R3 es hidrógeno, -N3, -CN, -NH2/ -CH3, una porción de ciclooctina de cadena, una amina mono-protegida, una di-amina protegida, un aldehido opcionalmente protegido, un hidroxilo opcionalmente protegido, un ácido carboxílico opcionalmente protegido, un tiol opcionalmente protegido, o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, de 5-8 elementos, alifático, que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, un anillo aril bicíclico saturado, parcialmente insaturado, de 8-10 elementos que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o una porción detectable; Q es un enlace de valencia o una cadena hidrocarburo C1-12 recta o ramificada, saturada o insaturada, bivalente, en donde 0-6 unidades de metileno de Q son reemplazadas independientemente por -Cy-, -O-, -NH- , -S-, -0C(0)-, -C(0)0-, -C(0)-, -SO-, -S02-, -NHSO2-, -SO2NH- , - HC(O)-, -C(0)NH-, -OC(0)NH-, o -NHC(0)0-, en donde : -Cy- es un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 5-8 elementos opcionalmente sustituido que tienen 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o un anillo arilo bicíclico saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 8-10 elementos opcionalmente sustituido, que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre; R2 es una amina mono-protegida, una di-amina protegida, N(R4)2, -NR4C(0)R4, -NR4C (O) N (R4) 2 , -NR4C(0)OR4, o -NR4S02R4; y cada R4 es independientemente hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, de 5-8 elementos, alifático, que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, un anillo aril bicíclico saturado, parcialmente insaturado, de 8-10 elementos que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o una porción detectable, o: dos R4 en el mismo átomo de nitrógeno son tomados en conjunto con tal átomo de nitrógeno para formar un anillo arilo o saturado, parcialmente insaturado, de 4-7 elementos opcionalmente sustituido, que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre.
De conformidad con otra modalidad, la presente invención proporciona compuestos de fórmula I, como se describe anteriormente, en donde tales compuestos tienen un índice de polidispersidad ("PDI") de 1.0 a 1.2. De conformidad con otra modalidad, la presente invención proporciona compuestos de fórmula I, como se describe anteriormente, en donde tal compuesto tiene un índice de polidispersidad ("PDI") de 1.01 a 1.10. De conformidad con aún otra modalidad, la presente invención proporciona compuestos de fórmula I, como se describe anteriormente, en donde tal compuesto tiene un índice de polidispersidad ("PDI") de 1.10 a 1.20. De conformidad con otras modalidades, la presente invención proporciona compuestos de fórmula I que tiene un PDI de menos de 1.10.
Como se define en general anteriormente, n es 20 a 500. En ciertas modalidades, la presente invención proporciona compuestos en donde n es 225. En otras modalidades, n es 40 a 60. En otras modalidades, n es 60 a 90. En todavía otras modalidades, n es 90 a 150. En otras modalidades, n es 150 a 200. En algunas modalidades, n es 200 a 300, 300 a 400, o 400 a 500. En todavía otras modalidades, n es 250 a 280. En otras modalidades, n es 300 a 375. En otras modalidades, n es 400 a 500. En ciertas modalidades, n se selecciona a partir de 50 ± 10. En otras modalidades, n se selecciona a partir de 80 ± 10, 115 ± 10, 180 ± 10, 225 ± 10, o 275 ± 10.
En ciertas modalidades, x es 3 a 50. En ciertas modalidades, x es 10. En otras modalidades, x es 20. De conformidad con aún otra modalidad, x es 15. En otras modalidades, x es 5. En otras modalidades, x se selecciona a partir de 5 ± 3 , 10 ± 3, 10 ± 5, 15 ± 5, o 20 ± 5.
En ciertas modalidades, y es 5 a 100. En ciertas modalidades, y es 10. En otras modalidades, y es 20. De conformidad con aún otra modalidad, y es 15. En otras modalidades, y es 30. En otras modalidades, y se selecciona a partir de 10 ± 3, 15 ± 3, 17 ± 3, 20 ± 5, o 30 ± 5.
En ciertas modalidades, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es -N3.
En otras modalidades, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es -CH3.
En algunas modalidades, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es hidrógeno.
En ciertas modalidades, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es un grupo alifático qpcionalmente sustituido. Ejemplos incluyen metilo, t-butilo, 5-norbornen-2-ilo, octan-5-ilo, acetilenilo, trimetilsililacetilenilo, triisopropilsililacetilenilo, y t-butildimetilsililacetilenilo. En algunas modalidades, tal porción R3 es un grupo alquilo opcionalmente sustituido. En otras modalidades, tal porción R3 es un grupo alquinilo o alquenilo opcionalmente sustituido. Cuando tal porción R3 es un grupo alifático sustituido, sustituyentes en R3 incluyen CN, N3, trimetilsililo, triisopropilsililo, t-butildimetilsililo, N-metilpropiolamido, N-metil-4-acetilenilanilino, N-metil-4-acetilenilbenzcamido, bis- (4-ethinil-bencil) -amino, dipropargilamino, di-hex-5-inil-amino, di-pent-4-inil-amino, di-but-3-inil-amino, propargiloxi, hex-5-iniloxi, pent-4-iniloxi, di-but-3-iniloxi, N-metil-propargilamino, N-metil-hex-5-inil-amino, N-metil-pent-4-inil-amino, N-metil-but-3-inil-amino, 2-hex-5-inildisulfanilo, 2-pent-4-inildisulfanilo, 2-but-3-inildisulfanilo, y 2-propargildisulfanilo. En ciertas modalidades, el grupo R1 es 2- (N-metil-N-(etinilcarbonil) amino) etoxi, 4-etinilbenciloxi, o 2- (4-etinilfenoxi ) etoxi .
En ciertas modalidades, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es un grupo arilo opcionalmente sustituido. Ejemplos incluyen fenilo opcionalmente sustituido y piridilo opcionalmente sustituido. Cuando tal porción R3 es un grupo arilo sustituido, sustituyentes en R3 incluyen CN, 3, NO2, -CH3, -CH2N3, -CH=CH2, -C=CH, Br, I, F, bis- (4 -etinil -bencil ) -amino, dipropargilamino, di-hex-5-inil-amino, di-pent-4-inil-amino, di-but-3 - inil-amino, propargiloxi, hex-5 -iniloxi , pent-4-iniloxi, di-but-3-iniloxi, 2-hex-5-iniloxi-etildisulfanilo, 2-pent-4-iniloxi-etildisulfanilo, 2-but-3-iniloxi-etildisulfanilo, 2 -propargiloxi -etildisulfanilo, bis-benciloxi -metilo, [1, 3] dioxolan-2-ilo, y [1 , 3 ] dioxan-2 - il .
En otras modalidades, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es un grupo aldehido protegido. En ciertas modalidades la porción de aldehido protegido de R3 es un acetal acíclico, un acetal cíclico, una hidrazona, o una imina. Grupos R3 ejemplares incluyen dimetilacetal , dietilacetal , diisopropilacetal , dibencilacetal , bis (2-nitrobencil) acetal , 1,3-dioxano, 1 , 3 -dioxolano, y semicarbazona . En ciertas modalidades, R3 es un acetal acíclico o un acetal cíclico. En otras modalidades, R3 es un dibencilacetal .
En aún otras modalidades, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es un grupo de ácido carboxílico protegido. En ciertas modalidades, la porción de ácido carboxílico protegido de R3 es un éster opcionalmente sustituido seleccionado a partir de alifático Ci-6 o arilo, o un sililéster, un éster activado, una amida, o una hidrazida. Ejemplos de tales grupos éster incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, bencilo, y feniléster. En otras modalidades, la porción de ácido carboxílico protegido de R3 es una oxazolina o un ortoéster. Ejemplos de tales porciones de ácido carboxílico protegido incluyen oxazolin-2 - ilo y 2 -metoxi- [1 , 3] dioxin-2 -ilo . En ciertas modalidades, el grupo R1 es oxazolin-2 -ilmetoxi o 2-oxazolin-2-il-l-propoxi .
En todavía otras modalidades, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es una porción detectable. De conformidad con un aspecto de la invención, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es una porción fluorescente. Tales porciones fluorescentes son bien conocidas en la técnica e incluyen cumarinas, quinolonas, benzoisoquinolonas, hostasol, y tintes de rodamina, por nombrar solo algunos. Porciones fluorescentes ejemplares del grupo R3 de R1 incluyen antracen-9-ilo, piren-4-ilo, 9-H-carbazol-9-ilo, el carboxilato de rodamina B, el carboxilato de cumarina 343. En ciertas modalidades, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es una porción detectable seleccionada a partir de: En ciertas modalidades, la porción R3 del grupo R1 fórmula I es un grupo adecuado para química Clic. Las reacciones Clic tienden a involucrar reactivos de alta energía ("resorte cargado") con coordinados de reacción bien definidos, dando origen a eventos que forman enlaces selectivos de amplio alcance. Ejemplos incluyen el atrapamiento nucleofílico de electrófilos de anillo de cadena (epóxido, aziridinas, iones de aziridinio, iones de episulfonio) , ciertas formas de reactividad de carbonilo (aldehidos e hidrazinas o hidroxilaminas , por ejemplo) , y varios tipos de reacciones de cicloadición . La cicloadición 1,3-dipolar de azida-alquilo es una de tal reacción. La química Clic es conocida en la técnica y uno de habilidad ordinaria en la técnica podrá reconocer que ciertas porciones R3 de la presente invención son adecuadas para química Clic.
Compuestos de fórmula I que tienen R3 porciones adecuadas para química Clic son útiles para conjugar tales compuestos a sistemas biológicos o macromoléculas tales como proteínas, virus, y células, por nombrar solo algunos. La reacción Clic es conocida por proceder rápidamente y selectivamente bajo condiciones fisiológicas. Por el contrario, la mayoría de las reacciones de conjugación se llevan a cabo usando la funcionalidad de amina primaria en las proteínas (por ejemplo, lisina o grupo final de proteína) . Debido a que la mayoría de las proteínas contienen una multitud de lisinas y argininas, tal conjugación ocurre incontrolablemente en sitios múltiples en la proteína. Esto es particularmente problemático cuando las lisinas o argininas están localizadas alrededor del sitio activo de una enzima u otra biomolécula. De este modo, otra modalidad de la presente invención proporciona un método para conjugar los grupos R1 de un compuesto de fórmula I a una macromolécula mediante química Clic. Aún otra modalidad de la presente invención proporciona una macromolécula conjugada a un compuesto de fórmula I mediante el grupo R1. conformidad con una modalidad, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es un grupo que contiene azida. De conformidad con otra modalidad, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es un grupo que contiene alquino. En ciertas modalidades, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I tiene una porción alquino terminal. En otras modalidades, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es una porción alquilo que tiene un grupo atrayente del electrón. Por consiguiente, en tales modalidades, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es en donde E es un grupo atrayente de electrón e y es 0-6. Tales grupos atrayentes del electrón se conocen por uno de habilidad ordinaria en la técnica. En ciertas modalidades, E es un éster. En otras modalidades, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es en donde E es un grupo atrayente del electrón, tal como un grupo -C(0)0- e y es 0-6.
Ciertas porciones Clic libres de metal se conocen en la literatura. Ejemplos incluyen 4 -dibenzociclooctinol (DIBO) (de Ning et . al; Angew Chem Int Ed, 2008, 47, 2253) ; ciclooctinas difluoradas (DIFO o DFO) (de Codelli, et . al.; J. Am. Chem. Soc . 2008, 130, 11486-11493.); biarilazaciclooctinona (BARAC) (de Jewett et. al; J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 3688) ; o biciclononina (BCN) (de Dommerholt , et . al.; Angew Chem Int Ed, 2010, 49, 9422-9425) . La preparación de derivados PEG clic libres de metal se describe en la Solicitud Estadounidense Número 13/601,606, los contenidos completos de los cuales están de este modo incorporados por referencia.
De conformidad con una modalidad, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es una porción Clic libre de metal. En otra modalidad, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es una porción de ciclooctina de cadena sustituida. En ciertas modalidades, la porción R3 del grupo R1 de fórmula I es una porción Clic libre de metal seleccionada a partir de: Como se define en general anteriormente, Q es un enlace de valencia o una cadena hidrocarburo C1 - 12 recta o ramificada, saturada o insaturada, bivalente, en donde 0-6 unidades de metileno de Q son reemplazadas independientemente por -Cy-, -O-, -NH-, -S-, -OC(O)-, -C(0)0-, -C(O)-, -SO-, -SO2 - , -NHSO2 - , - SO2NH - , -NHC(O)-, -C(0)NH-, -OC(0)NH-, o - NHC(0)0-, en donde -Cy- es un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 5-8 elementos opcionalmente sustituido que tienen 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o un anillo arilo bicíclico saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 8-10 elementos opcionalmente sustituido, que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre. En ciertas modalidades, Q es un enlace de valencia. En otras modalidades, Q es una cadena alquileno Cl-12 saturada, bivalente, en donde 0-6 unidades de metileno de Q son reemplazadas independientemente por -Cy-, -0-, -NH-, -S-, -0C(0)-, -C(0)0-, o -C(O)-, en donde -Cy- es un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 5-8 elementos opcionalmente sustituido que tienen 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o un anillo arilo bicíclico saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 8-10 elementos opcionalmente sustituido, que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre.
En ciertas modalidades, Q es -Cy- (es decir, una cadena alquileno Ci en donde la unidad de metileno es reemplazada por -Cy-), en donde -Cy- es un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 5-8 elementos opcionalmente sustituido que tienen 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre. De conformidad con un aspecto de la presente invención, -Cy- es un grupo arilo bivalente opcionalmente sustituido. De conformidad con otro aspecto de la presente invención, -Cy- es un grupo fenilo bivalente opcionalmente sustituido. En otras modalidades, -Cy- es un anillo carbocíclico saturado, bivalente de 5-8 elementos opcionalmente sustituido. En todavía otras modalidades, -Cy-es un anillo heterocíclico saturado, bivalente de 5-8 elementos, opcionalmente sustituido que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre. Grupos -Cy- ejemplares incluyen anillos bivalentes seleccionados a partir de fenilo, piridilo, pirimidinilo, ciclohexilo, ciclopentilo, o ciclopropilo .
Como se define anteriormente, Rx es una porción que contiene hidroxamato o catecol . En ciertas modalidades, Rx es una porción que contiene ácido hidroxámico. En otras modalidades, Rx es una porción que contiene catecol. En ciertas modalidades, Rx se selecciona a partir de En ciertas modalidades, Rx se selecciona a partir de: Como se define anteriormente, Rv se selecciona a partir de uno o más grupos de cadena lateral de aminoácido natural o no natural de manera que el bloque total es hidrofóbico. Tales grupos de cadena lateral de aminoácido hidrofóbico incluyen una cadena lateral de tirosina opcionalmente protegida, una cadena lateral de serina opcionalmente protegida, una cadena lateral de treonina opcionalmente protegida, fenilalanina, alanina, valina, leucina, triptofano, prolina, bencil y alquil glutamatos, o bencil y alquil aspartatos o mezclas de los mismos. Uno de habilidad ordinaria en la técnica podrá reconocer que la protección de una cadena lateral de aminoácido polar o hidrofóbico puede proporcionar tal aminoácido no polar. Por ejemplo, un grupo de tirosina hidroxilo adecuadamente protegido puede proporcionar tal tirosina no polar e hidrofóbica en virtud de proteger el grupo hidroxilo. Los grupos protectores para los grupos hidroxilo, amino, y tiol, y carboxilato funcionales de Ry son como se describen en la presente. Además, uno de habilidad ordinaria en la técnica podrá reconocer que las cadenas de aminoácido hidrofílicas e hidrofóbicas pueden ser combinadas de manera que el bloque total es hidrofílico. Por ejemplo, una mayoría de grupos de cadena lateral de leucina pueden ser combinados con una mayoría de grupos de cadena lateral de ácido aspártico en donde el bloque resultante es hidrofóbico puro. Tales mezclas de grupos de cadena lateral de aminoácido incluyen tirosina y leucina, tirosina y fenilalanina, serina y fenilalanina, ácido aspártico y fenilalanina, ácido glutámico y fenilalanina, tirosina y bencil glutamato, serina y bencil glutamato, ácido aspártico y bencil glutamato, ácido glutámico y bencil glutamato, ácido aspártico y leucina, y ácido glutámico y leucina.
En algunas modalidades, Ry consiste de una mezcla de tres grupos de cadena lateral de aminoácido natural o no natural de manera que el bloque total es hidrofóbico. Tales mezclas ternarias de grupos de cadena lateral de aminoácido incluyen, pero no se limitan a: leucina, tirosina, y ácido aspártico; leucina, tirosina, y ácido glutámico; fenilalanina, tirosina, y ácido aspártico; o fenilalanina, tirosina, y ácido glutámico.
En otras modalidades, Ry consiste de una mezcla de grupos D-hidrofóbicos y L-hidrofílieos de cadena lateral de aminoácido de manera que el bloque de poli (aminoácido) total que comprende R7 es hidrofóbico y es una mezcla de aminoácidos D- y L-configurados . Tales mezclas de grupos de cadena lateral de aminoácido incluyen L-tirosina y D-leucina, L-tirosina y D-fenilalanina, L-serina y D-fenilalanina, L-ácido aspártico y D-fenilalanina, L-ácido glutámico y D-fenilalanina, L-tirosina y D-bencil glutamato, L-serina y D-bencil glutamato, L-ácido aspártico y D-bencil glutamato, L-ácido glutámico y D-bencil glutamato, L-ácido aspártico y D-leucina, y L-ácido glutámico y D-leucina. La relaciones (D-hidrofóbica a L-hidrofílica) de tales mezclas incluyen cualquiera de 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4; 1:5, y 1:6.
Como se define en general anteriormente, el grupo R2 de fórmula I es una amina mono-protegída, una di-amina protegida, -NHR4, -N(R4)2, -NHC(0)R4, -NR4C(0)R4, NHC (0) NHR4 , -NHC(0)N(R )2, -NR4C(0)NHR4, NR4C (O) N (R4) 2 , -NHC(0)0R4, NRC(0)0R4, -NHS02R4, o -NR4S02R4, en donde cada R4 es independientemente un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, de 5-8 elementos, alifático, que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, un anillo arilo bicíclico saturado, parcialmente insaturado, de 8-10 elementos que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o una porción detectable, o dos R4 en el mismo átomo de nitrógeno son tomados en conjunto con tal átomo de nitrógeno para formar un anillo arilo o saturado, parcialmente insaturado, de 4-7 elementos opcionalmente sustituido, que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre.
En ciertas modalidades, el grupo R2 de fórmula I es -NHR4 o -N(R4)2 en donde cada R4 es un grupo alif tico opcionalmente sustituido. Un grupo R4 ejemplar es 5-norbornen-2-il-metilo. De conformidad con aún otro aspecto de la presente invención, el grupo R2a de fórmula I es -NHR4 en donde R4 es un grupo alifático Ci-6 sustituido con N3. Ejemplos incluyen -CH2N3. En algunas modalidades, R4 es un grupo alquilo C1-6 opcionalmente sustituido. Ejemplos incluyen metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, 2- (tetrahidropiran-2-iloxi) etilo, piridin-2-ildisulfanilmetilo, metildisulfanilmetilo, (4-acetilenilfenil) metilo, 3- (metoxicarbonil) -prop-2-inilo, metoxicarbonilmetilo, 2- (N-metil-N- (4-acetilenilfenil) carbonilamino) -etilo, 2-phthalimidoetilo, 4-bromobencilo, 4-clorobencilo, 4-fluorobencilo, 4-yodobencilo, 4-propargiloxibencilo, 2-nitrobencilo, 4-(bis-4-acetilenilbencil) aminometil-bencilo, 4 -propargiloxi-bencilo, 4-dipropargilamino-bencilo, 4- (2 -propargiloxi- etildisulfanil) bencilo, 2-propargiloxi-etilo, 2-propargildisulfanil-etilo, 4-propargiloxi-butilo, 2- (N-metil-N-propargilamino) etilo, y 2- (2-dipropargilaminoetoxi) -etilo. En otras modalidades, R4 es un grupo alquenilo C2-6 opcionalmente sustituido. Ejemplos incluyen vinilo, alilo, crotilo, 2-propenilo, y but-3-enilo. Cuando el grupo R4 es un grupo alifático sustituido, sustituyentes en R4 incluyen N3, CN, y halógeno. En ciertas modalidades, R4 es - CH2CN , CH2CH2CN , -CH2CH (OCH3) 2 , 4- (bisbenciloximetil) fenilmetilo, y similares.
De conformidad con otro aspecto de la presente invención, el grupo R2 de fórmula I es -NHR4 en donde R4 es un grupo alquinilo C2-6 opcionalmente sustituido. Ejemplos incluyen -CC=CH, -CH2C=CH, -CH2C=CCH3, y -CH2CH2C=CH.
En ciertas modalidades, el grupo R2 de fórmula I es -NHR4 en donde R4 es un anillo arilo de 5-8 elementos opcionalmente sustituido. En ciertas modalidades, R4 es fenilo opcionalmente sustituido o piridilo opcionalmente sustituido. Ejemplos incluyen fenilo, 4-t-butoxicarbonilaminofenilo, 4 -azidometilfenilo, 4-propargiloxifenilo, 2-piridilo, 3-piridilo, y 4-piridilo. En ciertas modalidades, R2a es 4 -t-butoxicarbonilaminofenilamino, 4 -azidometilfenamino, o 4 -propargiloxifenilamino .
En ciertas modalidades, el grupo R2a de fórmula I es -NHR4 en donde R4 es un anillo fenilo opcionalmente sustituido. Sustituyentes en el anillo fenilo de R4 incluyen halógeno; -(CH2)o-4R°; - (CH2) o-4OR° ; - (CH2) 0-4CH (0R° ) 2 ; (CH2)o-4SR°; -(CH2)0-4Ph, los cuales pueden ser sustituidos con R° ; - (CH2) 0-4O (CH2) o-iPh los cuales pueden ser sustituidos con R° ; -CH=CHPh, los cuales pueden ser sustituidos con R° ; -N02; -CN; -N3; - (CH2) 0-4N (R° ) 2 ; - (CH2) 0-4N (R° ) C (0) R° ; -N (R° ) C (S) R° ; - (CH2)o-4N(R°)C(0)NR°2; -N (R° ) C (S) NR°2 ; - (CH2) 0-4N (R° ) C (0) 0R° ; -N(R°)N(R°)C(0)R°; -N (R° ) N (R° ) C (0) NR°2 ; -N (R° ) N (R° ) C (0) 0R° ; - (CH2)o-4C(0)R°; -C(S)R°; - (CH2) 0-4C (O) 0R° ; - (CH2) 0-4C (O) SR° ; - (CH2) 0-4C(O)OSiR°3; - (CH2) 0-4OC (0) R° ; - (CH2) 0-4SC (0) R° ; (CH2) 0-4C (0) NR°2 ; -C(S)NR°2; - (CH2) 0-4OC (0) NR°2 ; -C (O) N (0R° ) R° ; -C(0)C(0)R°; -C(0)CH2C(0)R°; -C(N0R°)R°; - (CH2) 0-4SSR0 ; (CH2)o-4S(0)2R°; - (CH2)o-4S(0)2OR0; - (CH2) 0-4OS (O) 2R° ; -S(0)2NR°2; - (CH2) 0-4S (0)R° ; -N(R°)S(0)2NR°2; -N (R° ) S (O) 2R° ; -N(OR°)R°; -C(NH)NR°2; -P(0)2R°; -P(0)R°2; -0 P(0)R°2; SiR°3; en donde cada aparición independiente de R° es como se define en la presente supra. En otras modalidades, el grupo R2a de fórmula I es -NHR4 en donde R4 es fenilo sustituido con uno o más grupos alifáticos C1-6 opcionalmente sustituidos. En todavía otras modalidades, R4 es fenilo sustituido con vinilo, alilo, acetilenilo, -CH2N3, -CH2CH2N3, -CH2C=CCH3, o -CH2C=CH.
En ciertas modalidades, el grupo R2 de fórmula I es -NHR4 en donde R4 es fenilo sustituido con N3, N(R°)2, C02R° , o C(0)R° en donde cada R° es independientemente como se define en la presente supra.
En ciertas modalidades, el grupo R2 de fórmula I es -N(R4)2 en donde cada R4 es independientemente un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de alifático, fenilo, naftilo, un anillo arilo de 5-6 elementos que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o un anillo arilo bicíclico de 8-10 elementos que tiene 1-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o una porción detectable.
En otras modalidades, el grupo R2 de fórmula I es - N(R4)2 en donde los dos grupos R4 son tomados en conjunto con tal átomo de nitrógeno para formar un anillo arilo o saturado, parcialmente insaturado, de 4-7 elementos opcionalmente sustituido, que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre. De conformidad con otra modalidad, los dos grupos R4 son tomados en conjunto para formar un anillo saturado o parcialmente insaturado de 5-6 elementos que tiene un nitrógeno en donde tal anillo es sustituido con uno o dos grupos oxo. Tales grupos R2a incluyen, pero no se limitan a, ftalimida, maleimida y succinimida.
En ciertas modalidades, el grupo R2 de fórmula I es un grupo amino mono-protegido o di-protegido. En ciertas modalidades R2a es una amina mono-protegida. En ciertas modalidades R2a es una amina mono-protegida seleccionada a partir de aralquilaminas, carbamatos, alilaminas, o amidas. Porciones amino mono-protegidas ejemplares incluyen t-butiloxicarbonilamino, etiloxicarbonilamino, metiloxicarbonilamino, tricloroetiloxi-carbonilamino, aliloxicarbonilamino, benciloxocarbonilamino, alilamino, bencilamino, fluorenilmetilcarbonilo, formamido, acetamido, cloroacetamido, dicloroacetamido, tricloroacetamido, fenilacetamido, trifluoroacetamido, benzamido, y t-butildifenilsililamino . En otras modalidades R2a es una diamina protegida. Porciones amino di-protegidas ejemplares incluyen di-bencilamino, di-alilamino, ftalimida, maleimido, succinimido, pirrólo, 2,2,5, 5-tetrametil- [1 , 2 , 5] azadisilolidino, y azido. En ciertas modalidades, la porción R2a es ftalimido. En otras modalidades, la porción R2a es mono- o di-bencilamino o mono- o di-alilamino.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un copolímero de tribloque de fórmula II: II en donde : n es 20-500; m es O, 1, o 2 ; x es 3 a 50; y es 5 a 100; Ry se selecciona a partir de uno o más grupos de cadena lateral de aminoácido natural o no natural de manera que el bloque total es hidrofóbico; R1 es -Z (CH2CH2Y)P (CH2) tR3, en donde: Z es -O-, -NH-, -S-, -C=C-, o -CH2-; cada Y es independientemente -O- o -S-; p es 0-10; t es 0-10; y R3 es hidrógeno, -N3, -CN, -NH2, -CH3, una porción de ciclooctina de cadena, una amina mono-protegida, una di-amina protegida, un aldehido opcionalmente protegido, un hidroxilo opcionalmente protegido, un ácido carboxílico opcionalmente protegido, un tiol opcionalmente protegido, o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, de 5-8 elementos, alifático, que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, un anillo aril bicíclico saturado, parcialmente insaturado, de 8-10 elementos que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o una porción detectable.
En ciertas modalidades, un copolímero de tribloque de fórmula II se selecciona a partir de los siguientes compuestos ejemplares mostrados en la Tabla 1, en donde n es 20 a 500, x es 3 a 50, y1 es 3 a 50, 3 y" es 3 a 50.
Tabla 1. ?? ?? 25 ?? 72 En ciertas modalidades, un copolímero de tribloq- fórmula II es En ciertas modalidades, un copolímero de tribloque fórmula II es En ciertas modalidades, un copolímero de tribloque de Fórmula II es En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un copolímero de tribloque de fórmula III: III en donde : n es 20-500; m es 0, 1, o 2; x es 3 a 50; y es 5 a 100; R se selecciona a partir de uno o más grupos de cadena lateral de aminoácido natural o no natural de manera que el bloque total es hidrofílico; R1 es -Z(CH2CH2Y)p(CH2)tR3, en donde: Z es -O-, -NH-, -S-, -C=C-, O -CH2-; cada Y es independientemente -0- o -S-; p es 0-10; t es 0-10; y R3 es hidrógeno, -N3/ -CN, -NH2, -CH3, una porción de ciclooctina de cadena, una amina mono-protegida, una di-amina protegida, un aldehido opcionalmente protegido, un hidroxilo opcionalmente protegido, un ácido carboxílico opcionalmente protegido, un tiol opcionalmente protegido, o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, de 5-8 elementos, alifático, que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, un anillo aril bicíclico saturado , parcialmente insaturado, de 8 - 10 elementos que tiene 0 - 5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno , oxígeno , o azufre , o una porción detectable .
En ciertas modalidades , un copolímero de tribloque de fórmula III se selecciona a partir de los siguientes compuestos ej emplares como se muestra en la Tabla 2 , es 3 a 50 , e y ' ' es 3 a 50 .
Tabla 2 ?? ?? ?? En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un copolímero de tribloque de fórmula IV: IV en donde : n es 20-500; m es 0, 1, o 2; x es 3 a 50; y es 5 a 100; RY se selecciona a partir de uno o más grupos de cadena lateral de aminoácido natural o no natural de manera que el bloque total es hidrofóbico; R1 es -Z(CH2CH2Y)p(CH2)tR3, en donde: Z es -O-, -NH-, -S-, -C=C-, o -CH2-; cada Y es independientemente -O- o -S-; p es 0-10; t es 0-10; y R3 es hidrógeno, -N3, -CN, -NH2, -CH3, una porción de ciclooctina de cadena, una amina mono-protegida, una di-amina protegida, un aldehido opcionalmente protegido, un hidroxilo opcionalmente protegido, un ácido carboxílico opcionalmente protegido, un tiol opcionalmente protegido, o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, de 5-8 elementos, alifático, que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, un anillo aril bicíclico saturado, parcialmente insaturado, de 8-10 elementos que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o una porción detectable .
B. Unión del Grupo de Objetivo Compuestos de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV que tienen porciones R3 adecuadas para química Clic son útiles para conjugación de tales compuestos a sistemas biológicos o macromoléculas tales como péptidos, proteínas, virus, y células, por nombrar solo algunos. La reacción Clic es conocida por proceder rápidamente y selectivamente bajo condiciones fisiológicas. Por el contrario, la mayoría de las reacciones de conjugación se llevan a cabo usando la funcionalidad de amina primaria en las proteínas (por ejemplo, lisina o grupo final de la proteína) . Debido a que la mayoría de las proteínas contienen una multitud de lisinas y argininas, tal conjugación ocurre de manera incontrolable en sitios múltiples en la proteína. Esto es particularmente problemático cuando las lisinas o argininas están localizadas alrededor del sitio activo de una enzima u otra biomolécula. De este modo, otra modalidad de la presente invención proporciona un método para conjugar los grupos R1 de un compuesto de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV a una macromolécula mediante química Clic. Aún otra modalidad de la presente invención proporciona una macromolécula conjugada a un compuesto de cualquiera de de las fórmulas I, II, III, y IV mediante el grupo R1.
Después de la incorporación de las porciones de bloque de poli (aminoácido) en el copolímero de bloque múltiple de la presente invención que resultan en un copolímero de bloque múltiple de la forma W-X-X', la otra funcionalidad del grupo final, que corresponde a la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV puede ser usada para unirse a grupos de objetivo para suministro específico de la célula que incluye, pero no se limita a, unión de grupos de objetivo para suministro específico de la célula que incluye, pero no se limita a, proteínas, oligopéptidos , anticuerpos, monosacáridos , oligosacáridos, vitaminas, u otras biomoléculas pequeñas. Tales grupos de objetivo incluyen, pero no se limitan a anticuerpos monoclonales y policlonales (por ejemplo, anticuerpos IgG, IgA, IgM, IgD, IgE) , azúcares (por ejemplo, mañosa, manosa-6-fosfato, galactosa) , proteínas (por ejemplo, Transíerrina) , oligopéptidos (por ejemplo, oligopéptidos que contienen RGD cíclicos y acíclicos) , y vitaminas (por ejemplo, folato) . Alternativamente, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV está unida a una biomolécula, fármaco, célula, u otro sustrato.
En otras modalidades, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV está unida a biomoléculas las cuales promueven la entrada celular y/o escape endosomal . Tales biomoléculas incluyen, pero no se limitan a, oligopéptidos que contienen dominios de transducción de proteína tales como la secuencia de péptido Tat del VIH (GRKKRRQRRR) u oligoarginina (RRRRRRRRR) . Los oligopéptidos los cuales sufren cambios conformacionales en ambientes de pH variantes tales como oligohistidina (HHHHH) también promueven la entrada celular y escape endosomal .
En otras modalidades, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV está unida a porciones detectables, tales como tintes o etiquetas fluorescentes para tomografía de emisión de positrón que incluyen moléculas que contienen radioisótopos (por ejemplo, 18F) o ligandos con enlaces de metales radioactivos (por ejemplo, 62Cu) . En otras modalidades, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV está unida a agentes de contraste para imagen de resonancia magnética tales como partículas de gadolinio, quelatos de gadolinio, u óxido de fierro (por ejemplo. Fe3Ü y Fe2C>3) - En otras modalidades, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV está unida a una nanopartícula semiconductora tal como selenuro de cadmio, sulfuro de cadmio, o telúrido de cadmio o unida a otras nanopartículas de metal tales como oro coloidal. En otras modalidades, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV está unida a superficies naturales o sintéticas, células, virus, tintes, fármacos, agentes quelantes, o usada para incorporación en hidrogeles u otros andamiajes de tejidos.
En una modalidad, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es un alquino o un derivado alquilo terminal el cual es capaz de someterse a reacciones de cicloadición [3+2] con moléculas y biomoleculas que portan azida complementaria. En otra modalidad, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es una azida o un derivado de azida el cual es capaz de someterse a reacciones de cicloadición [3+2] con moléculas y biomoléculas que portan alquino complementarias (es decir, química Clic) .
La química Clic ha llegado a ser un método popular de bioconjugación debido a su alta reactividad y selectividad, aún en medio biológico. Véase Kolb, H.C.; Finn, M.G.; Sharpless, K.B. Angew. Chem. Int. Ed. 2001, 40, 2004-2021; y Wang, Q.; Chan, T. R. ,- Hilgraf, R. ; Fokin, V. V. ; Sharpless, K. B . ; Finn, M. G. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 3192-3193. Además, las técnicas recombinantes actualmente disponibles permiten la introducción de azidas y aminoácidos no canónicos que portan alquinos en proteínas, células, virus, bacterias, y otras entidades biológicas que consisten de o presentan proteínas. Véase Link, A. J. ; Vink, M. K. S . ,-Tirrell, D. A. J. Am. Chem. Soc. 2004, 126, 10598-10602; Deiters, A.; Cropp, T. A.; Mukherji, M. ; Chin, J. . ; yerson, C; Schultz, P. G. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 11782-11783.
En otra modalidad, la reacción de cicloadición [3+2] de los nanovectores que portan azida o acetileno y biomoléculas que portan azida o acetileno complementarios, son catalizadas por metales de transición. Las moléculas que contienen cobre las cuales catalizan la reacción "Clic" incluyen, pero no se limitan a, bromuro de cobre (CuBr) , cloruro de cobre (CuCl) , sulfato de cobre (CuS04) , yoduro de cobre (Cul), [Cu (MeCN) 4] (OTf) , y [Cu (MeCN) 4] (PF6) . Los ligandos que se unen a meta orgánico e inorgánico pueden ser usados en conjunto con catalizadores de metal e incluyen, pero no se limitan a, ascorbato de sodio, ligandos de tris (triazolil) amina, tris (carboxietil ) fosfina (TCEP) , y ligandos de batofenantrolina sulfonados.
En otra modalidad, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es un derivado de hidrazina o hidrazida el cual es capaz de someterse a reacción con biomoléculas que contienen aldehidos o cetonas para formar enlaces de hidrazona. En otra modalidad, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es un derivado de aldehido o cetona el cual es capaz de someterse a reacción con biomoléculas que contienen un derivado de hidrazina o hidrazida para formar enlaces de hidrazona.
En otra modalidad, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es un derivado de hidroxilamina el cual es capaz de someterse a reacción con biomoléculas que contienen aldehidos o cetonas. En otra modalidad, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es un aldehido o cetona el cual es capaz de someterse a reacción con biomoléculas que contienen una hidroxilamina, o un derivado de hidroxilamina.
En aún otra modalidad, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es un derivado de aldehido o cetona el cual es capaz de someterse a reacción con biomoléculas que contienen aminas primarias o secundarias para formar enlaces imina. En otra modalidad, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es una amina primaria o secundaria la cual es capaz de someterse a reacción con biomoléculas que contienen una funcionalidad aldehido o cetona para formar enlaces imina . Se apreciará que los enlaces imina pueden ser además convertidos a enlaces amina estables por tratamiento con un agente reductor (por ejemplo, hidruro de aluminio y litio, borohidruro de sodio, cianoborohidruro de sodio, etc.) En aún otra modalidad, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es una amina (primaria o secundaria) o alcohol el cual es capaz de someterse a reacción con biomoléculas que contienen ésteres activados (por ejemplo, 4-nitrofenoléster, N-hidroxisuccinimida, pentafluorofeniléster, orto-piridiltioéster) , para formar enlaces amida o éster. En todavía otras modalidades, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es un éster activado el cual es capaz de someterse a reacción con biomoléculas que poseen amina (primaria o secundaria) o alcoholes para formar enlaces amida o éster.
En todavía otras modalidades, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es una amina o alcohol el cual está unido a biomoléculas con funcionalidad de ácido carboxílico usando un agente de acoplamiento. En todavía otras modalidades, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es una funcionalidad de ácido carboxílico la cual está unida a biomoléculas que contienen funcionalidad amina o alcohol usando un agente de acoplamiento. Tales agentes de acoplamiento incluyen, pero no se limitan a, carbodiimidas (por ejemplo, l-etil-3- (3-dimetilaminopropil) -carbodiimida (EDC) , diisopropilcarbodiimida (DIC) , diciclohexilcarbodiimida (DCC) ) , derivados de aminio o fosfonio (por ejemplo, PyBOP, PyAOP, TBTU, HATU, HBTU) , o una combinación de 1-hidroxibenzotriazol (HOBt) y un derivado de aminio o fosfonio.
En otra modalidad, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es un electrófilo tal como una maleimida, un derivado de maleimida, o un derivado de bromoacetamida, el cual es capaz de reacción con biomoléculas que contienen tioles o aminas. En otra modalidad, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es un nucleófilo tal como una amina o tiol el cual es capaz o reacciona con biomoléculas que contienen funcionalidad electrofílica tal como maleimida, un derivado de maleimida, o un derivado de bromoacetamida.
En todavía otras modalidades, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es una porción de disulfuro orto-piridilo la cual se somete a intercambio de disulfuro con biomoléculas que contienen funcionalidad tiol. En todavía otras modalidades, la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es un tiol o derivado tiol el cual se somete a intercambio de disulfuro con biomoléculas que contienen funcionalidad de disulfuro orto - i ridi 1 o . Se apreciará que tales reacciones de intercambio resultarán en un enlace disulfuro, el cual es reversible en la presencia de un agente reductor (por ejemplo, glutationa, ditiotreitol (DTT) , etc . ) .
En ciertas modalidades, micelas de la presente invención son micelas mezcladas que comprenden uno o más compuestos de fórmulas I, II, III, y IV. Se apreciará que las micelas mezcladas que tienen diferentes grupos R1, como se describe en la presente, pueden ser conjugadas a múltiples otros compuestos y/o macromoléculas . Por ejemplo, una micela mezclada de la presente invención puede tener un grupo R1 adecuado para química Clic y otro grupo R1 adecuado para unión covalente mediante una variedad de reacciones de acoplamiento. Tal micela mezclada puede ser conjugada a diferentes compuestos y/o macromoléculas mediante estos diferentes grupos R1. Tales reacciones de conjugación son bien conocidas por uno de habilidad ordinaria en la técnica e incluye aquellas descritas en la presente.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un copolímero de tribloque de fórmula V: V en donde cada uno de Q, x, y, n, Rx , Ry y R2 es como se define anteriormente y como se describe en las clases y subclases de la presente, tanto individualmente como en combinación; J es independientemente un enlace de valencia o una cadena hidrocarburo C 1 - 12 recta o ramificada, saturada o insaturada, bivalente, en donde 0-6 unidades de metileno de Q son reemplazadas independientemente por -Cy-, -0-, -NH- , -S-, -OC(0) -, -C(0)0-, -C(0) -, -SO-, - S02-, - NH S O 2 - , - S O2 NH - , NHC(O) -, -C(0)NH-, -0C(0)NH-, o -NHC(0)0-, en donde: -Cy- es un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 5-8 elementos opcionalment e sustituido que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o un anillo arilo bicíclico saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 8-10 elementos opc ionalment e sustituido, que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre; cada T es independientemente un grupo de objetivo.
Como se describe en general anteriormente, T es un grupo de objetivo. Tales grupos de objetivo son descritos en detalle en la publicación de solicitud de patente Estadounidense número 2009/01 10662, publicada el 30 de Abril de 2009, la totalidad de la cual se incorpora de este modo por referencia. Los grupos de objetivo adicionales son descritos en detalle en la solicitud de patente Estadounidense número 13/415,910, presentada el 9 de Marzo de 2012, la totalidad de la cual está de este modo incorporada por referencia.
En ciertas modalidades, el grupo J es un enlace de valencia como se describe anteriormente. En ciertas modalidades, el grupo J es un grupo metileno. En otras modalidades, el grupo J es un grupo carbonilo. En ciertas modalidades, el grupo J de fórmula V es un enlace de valencia. En otras modalidades, el grupo J está representado por una porción en la Tabla 3.
Tabla 3.
C. Formación de Micela Los copolímeros de bloques múltiples anfifílieos, como se describen en la presente, pueden auto-ensamblarse en solución acuosa para formar estructuras de tamaño nano y micro. En agua, estos copolímeros de bloques múltiples anfifílicos se ensamblan por micelización multimolecular cuando se presentan en solución arriba de la concentración crítica de la micela (CMC) . Sin desear ser ligado por cualquier teoría particular, se cree que la porción de poli (aminoácido) hidrofóbica o "bloque" del copolímero, se colapsa para formar el núcleo micelar, mientras el bloque de PEG hidrofílico forma una corona periférica e imparte solubilidad en agua. En ciertas modalidades, los copolímeros de bloques múltiples de conformidad con la presente invención poseen distintos segmentos hidrofóbicos e hidrofílicos que forman micelas . Además, estos polímeros de bloque múltiple comprenden opcionalmente un bloque de poli (aminoácido) el cual contiene funcionalidad para reticulación. Se apreciará que esta funcionalidad se encuentra en la cadena lateral de aminoácido correspondiente.
D. Carga de Fármaco De conformidad con una modalidad, la presente invención proporciona una micela que comprende un copolímero de tribloque el cual comprende un bloque hidrofílico polimérico, opcionalmente un poli (bloque de aminoácido) reticulable o reticulado, y un bloque de poli (aminoácido) D,L-mezclado hidrofóbico, caracterizado porque tal micela tiene un núcleo interno, opcionalmente un núcleo externo reticulable o reticulado, y una cubierta hidrofílica. Como se describe en la presente, las micelas de la presente invención son especialmente útiles para encapsular agentes terapéuticos. En ciertas modalidades el agente terapéutico es hidrofílico .
Sin desear ser ligado por cualquier teoría particular, se cree que la acomodación de agentes terapéuticos estructuralmente diversos dentro de una micela de la presente invención es efectuada ajustando el bloque de poli (aminoácido) D, L-mezclado hidrofóbico, es decir, el bloque que comprende Ry. Como se discute anteriormente, la mezcla hidrofóbica de estereoisómeros D y L proporcionan un bloque de poli (aminoácido) con una conformación de espiral aleatorio de este modo mejorando la encapsulacion de fármacos hidrofóbicos .
Fármacos de molécula pequeña hidrofóbicos adecuados para cargar en micelas de la presente invención son bien conocidos en la técnica. En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco como se describe en la presente. En otras modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco como se describe en la presente, en donde el fármaco es un fármaco hidrofóbico seleccionado a partir de aquellos descritos en la presente, infra.
Como se usa en la presente, los términos fármacos de molécula pequeña hidrofóbicos, fármacos de molécula pequeña, agente terapéutico, y agentes terapéuticos hidrofóbicos son todos intercambiables .
De conformidad con otra modalidad, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco que comprende un copolímero de tribloque de fórmula I y un agente terapéutico.
De conformidad con otra modalidad, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco que comprende un copolímero de tribloque de fórmula I y un agente terapéutico hidrofóbico.
En otras modalidades, la presente invención proporciona un sistema que comprende un copolímero de tribloque de fórmula I y un agente terapéutico hidrofóbico. En otra modalidad, la presente invención proporciona un sistema que comprende un copolímero de tribloque de cualquiera de las fórmulas I, II, III, o IV, ya sea individualmente o en combinación, y un agente terapéutico hidrofóbico. En aún otra modalidad, la presente invención proporciona un sistema que comprende un copolímero de tribloque de fórmula II y un agente terapéutico hidrofóbico.
En algunas modalidades, la presente invención proporciona una micela, que tiene un agente terapéutico hidrofóbico adecuado encapsulado en este, que comprende un copolímero de bloque múltiple de fórmula I y un copolímero de bloque múltiple de fórmula V, en donde cada una de la fórmula I y formula V son como se definen anteriormente y se describen en la presente, en donde la relación de la fórmula I a la fórmula V es entre 1000:1 y 1:1. En otras modalidades, la relación es 1000:1, 100:1, 50:1, 33:1, 25:1, 20:1, 10:1, 5:1, O 4:1. En aún otras modalidades, la relación es entre 100:1 y 25:1.
En algunas modalidades, la presente invención proporciona una micela, que tiene un agente terapéutico hidrofóbico encapsulado en este, que comprende un copolímero de bloque múltiple de fórmula II y un copolímero de bloque múltiple de fórmula V, en donde cada una de la fórmula II y formula V son como se definen anteriormente y se describen en la presente, en donde la relación de la fórmula II a la fórmula V es entre 1000:1 y 1:1. En otras modalidades, la relación es 1000:1, 100: 1, 50:1, 33:1, 25:1, 20:1, 10:1, 5:1, o 4:1. En aún otras modalidades, la relación es entre 100:1 y 25:1.
Modalidades con respecto a cada uno de los grupos R1, R2a, Q, Rx, Ry, n, m, y m1 de fórmula I, son como se describen en varias clases y subclases, tanto individualmente como en combinación, en la presente.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es un taxano.
Los taxanos son bien conocidos en la literatura y son productos naturales producidos por las plantas del género Taxus . El mecanismo de acción es estabilización por microtúbulo, de este modo inhibiendo la mitosis. Muchos taxanos son escasamente solubles o casi completamente insolubles en agua.
Paclitaxel Doxetaxel Cabazitaxel Las epotilonas son un grupo de moléculas que han sido mostradas por ser estabilizadores del microtúbulo, un mecanismo similar al paclitaxel (Bollag DM et al. Cáncer Res. 1995, 55, 2325-2333) . Estudios bioquímicos demuestran que las epotilonas compiten por el mismo sitio de enlace (Kowalski RJ, Giannakakou P, Hamel E. J Biol Chem. 1997, 272, 2534-2541) . Una ventaja de las epotilonas es que ejercen un efecto citotóxico mucho mayor en células que sobreexpresan PGP comparado con el paclitaxel. Epotilonas ejemplares se muestran abajo.
Epotilona D Ixebepilona En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es paclitaxel.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es docetaxel .
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es cabazitaxel.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es una epotilona.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es Epotilona B o Epotilona D.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es Epotilona A o Epotilona C.
Los alcaloides vinca son bien conocidos en la literatura y son una serie de agentes anti -micóticos . Los alcaloides vinca incluyen vinblastina, vincristina, vindesina, y vinorelbina, y actúan para prevenir la formación de microtúbulos . Alcaloides vinca ejemplares se muestran abaj o .
Vincristina Vinblastina Vindesina Vinorelbina En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es un alcaloide vinca.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es vinorelbina.
La berberina es bien conocida en la literatura y muestra efectos farmacéuticos en un intervalo de aplicaciones que incluyen aplicaciones antibacterianas y oncología. La actividad anti-tumoral de berberina y derivados asociados se describe en Hoshi, et. al. Gann, 1976, 67, 321-325. Específicamente, la berberrubina y derivados de éster de berberrubina se muestran por tener actividad antitumoral incrementada con respecto a la berberina. Las estructuras de berberina y berberrubina se muestran abajo.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es berberina.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es berberrubina.
La camptotecina de la planta alcaloide antitumoral (CPT) es un agente anticancerígeno de amplio espectro que dirige la topoisomerasa I del ADN. Aunque la CPT ha mostrado actividad antitumoral prometedora in vitro e in vivo, no se ha usado clínicamente debido a su baja eficacia terapéutica y toxicidad severa. Entre los análogos de CPT, el clorhidrato de irinotecano (CPT-11) ha sido recientemente mostrado por ser activo contra el cáncer colorrectal, de pulmón y ovario. El CPT-11 mismo es un profármaco y es convertido a 7-etil-10- hidroxi-CPT (conocido como SN-38) , un metabolito biológicamente activo de CPT-11, por carboxilésterasas in vivo. Un número de derivados de camptotecina están en desarrollo, las estructuras de los cuales se muestran abajo.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es a camptotecina .
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es SN-38.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es S39625.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es una antraciclina .
Se han producido varios derivados de antraciclina y se encontró uso en la clínica para el tratamiento de leucemias, linfoma de Hodgkin, así como también cánceres de la vejiga, mama, estómago, pulmón, ovarios, tiroides, y sarcoma de tejido blando. Tales derivados de antraciclina incluyen daunorubicina (también conocido como Daunomicina o daunomicina cerubidina) , doxorubicina (también conocido como DOX, hidroxidaunorubicina, o adriamicina) , epirubicina (también conocido como Elence o Farmorubicina) , idarubicina (también conocido como 4-desmetoxidaunorubicina, Zavedos, o Idamicina) , y valrubicina (también conocido como N-trifluoroacetiladriamicina-14-valerato o Valstar) . Las antraciclinas son típicamente preparadas como una sal de amonio (por ejemplo, sal de clorhidrato) para mejorar la solubilidad en agua y permitir facilidad de administración.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es daunorubicina.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es doxorubicina.
La aminopterina es bien conocida en la literatura y es un análogo de ácido fólico que es un agente antineoplásico . La aminopterina funciona como un inhibidor de enzima compitiendo por la mira de enlace folato de la enzima dihidrofolato reductasa. La estructura de aminopterina se muestra abajo.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es aminopterina.
Los terapéuticos a base de platino son bien conocidos en la literatura. Los terapéuticos de platino son ampliamente usados en oncología y actúan para reticular ADN el cual resulta en la muerte celular (apoptosis) . Carboplatino, picoplatino, cisplatino, y oxaliplatino son terapéuticos de platino ejemplares y las estructuras se muestran abajo.
Cisplatino Carboplatino Oxaliplatino Picoplatino En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es picoplatino.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde el fármaco es un terapéutico de platino.
Fármacos de molécula pequeña adecuados para carga en micelas de la presente invención son bien conocidos en la técnica. En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco como se describe en la presente, en donde el fármaco es un fármaco hidrofóbico seleccionado a partir de analgésicos, agentes antiinflamatorios, inhibidores de HDAC, inhibidores mitóticos, estabilizadores del microtúbulo, intercaladores de ADN, inhibidores de topoisomerasa, antihelmínticos, agentes anti-arrítmicos, agentes anti-bacterianos, agentes anti-virales, anticoagulantes, anti-depresivos, anti-diabéticos, anti-epilépticos, agentes antifúngicos, agentes anti-gota, agentes anti-hipertensivos, anti-materiales, agentes anti-migraña, agentes anti-muscarínicos, agentes anti-neoplásicos, agentes que mejoran la disfunción eréctil, inmunosupresores, agentes anti-protozoarios, agentes anti -tiroideos, agentes ansiolíticos, sedativos, hipnóticos, neurolépticos, ß-bloqueadores, agentes inotrópicos cardiacos, corticoesteroides, diuréticos, agentes antiparquinsonianos, agentes gastro-intestinales, antagonistas del receptor histamina, queratolípticos, agentes reguladores lípidos, agentes anti-anginales, inhibidores de Cox, inhibidores del leucotrieno, macrólidos, relajantes musculares, agentes nutricionales , analgésicos opioides, inhibidores de proteasa, hormonas sexuales, estimulantes, relajantes musculares, agentes anti-osteoporosis , agentes anti -obesidad, mejoradores de la cognición, agentes anti-continencia urinaria, agentes anti-hipertrofia prostética benigna, ácidos grasos esenciales, ácidos grasos no esenciales, y mezclas de los mismos.
En otras modalidades, el fármaco hidrofóbico se selecciona a partir de uno o más anlagésicos, agentes anti-bacterianos, agentes anti-virales, agentes anti-inflamatorios, anti-depresivos, antidiabéticos, anti-epilépticos, agentes anti-hipertensivos , agentes anti-migraña, inmunosupresores, agentes ansiolíticos, sedativos, hipnóticos, neurolépticos , ß-bloqueadores , agentes gastro- intestinales , agentes reguladores de lípidos, agentes anti-anginales , inhibidores de Cox-2, inhibidores del leucotrieno, macrólidos, relajantes musculares, analgésicos opioides, inhibidores de proteasa, hormonas sexuales, mej oradores de la cognición, agentes anti - incontinencia urinaria, y mezclas de los mismos.
De conformidad con un aspecto, la presente invención proporciona una micela, como se describe en la presente, cargada con un fármaco hidrofóbico seleccionado a partir de cualquiera o más de una Exemestance (aromasina) , Camptosar ( irinotecano) , Elence (epirubicina) , Femara (Letrozol) , Gleevac (mesilato de imatinib) , Lentaron (formestano) , Citadren/Orimeten (aminoglutetimida) , Temodar, Prosear ( finasterido) , Viadur (leuprolido) , Nexavar (Sorafenib) , Kitril (Granisetron) , Taxotero (Docetaxel) , Taxol (paclitaxel) , Kitril (Granisetron) , Vesanoide (tretinoina) (retina A) , XELODA (Capecitabina) , Arimidax (Anastrozol) , Casodex/Cosudex (Bicalutamida) , Faslodex (Fulvestrant ) , Iressa (Gefitinib) , Nolvadex, Istubal, Valodex (citrato de tamoxifeno) , Tomudex (Raltitrexed) , Zoladex (acetato de goserelina) , Leustatina (Cladribina) , Velcade (bortezomib) , Milotarg (ozogamicina de gemtuzumab) , Alimta (pemetrexed) , Gemzar (clorhidrato de gemcitabina) , Rituxan (rituximab) , Revlimid ( lenalidomido) , Thalomid ( talidomido) , Alkeran (melfalano) , y derivados de los mismos.
E. Químicas de Reticulación En ciertas modalidades, la presente invención proporciona micelas reticuladas con agentes terapéuticos iónicos o hidrofóbicos efectivamente encapsulados a pH 7.4 (sangre) pero se disocian y liberan el fármaco a valores de pH acídicos, de objetivo, que varían desde 5.0 (pH endosomal) hasta 6.8 (pH de tumor extracelular) . En aún otras modalidades, el valor de pH puede ser ajustado entre 4.0 y 7.4. Estos nanovectores de pH objetivo dramáticamente mejorarán el suministro específico del cáncer de agentes quimioterapéuticos y minimizan los efectos secundarios nocivos comúnmente encontrados con fármacos de quimioterapia potentes. Además, la utilización de químicas las cuales pueden ser ajustadas para disociarse a través de un intervalo de valores de pH hacen de estas micelas cargadas de fármaco, aplicables en el tratamiento de tumores sólidos y malignidades que han llegado a ser resistentes al fármaco.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco que comprende un copolímero de tribloque, en donde tal micela tiene un núcleo interno cargado de fármaco, un núcleo externo reticulado, y una cubierta hidrofílica, en donde el copolímero de tribloque es de la fórmula VI : VI en donde cada uno de Q, J, T, x , y, n, Rx, y R2 es como se define anteriormente y como se describe en las clases y subclases de la presente, tanto individualmente como en combinación; M es un ión de metal ; Cada RT se selecciona independientemente a partir de ya sea -J-T o -Z (CH2CH2Y) P (CH2) tR3 , en donde: Z es -O-, -S-, -C=C-, o -CH2-; cada Y es independientemente -0- o -S-; p es 0-10; t es 0-10; y R3 es -N3, -CN, una amina mono-protegida, una di- amina protegida, un aldehido protegido, un hidroxilo protegido, un ácido carboxílico protegido, un tiol protegido, un éter corona de 9-30 elementos, o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, de 5-8 elementos, alifático, que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, un anillo aril bicíclico saturado, parcialmente insaturado, de 8-10 elementos que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o una porción detectable; Q es un enlace de valencia o una cadena hidrocarburo C1 - 12 recta o ramificada, saturada o insaturada, bivalente, en donde 0-6 unidades de metileno de Q son reemplazadas independientemente por -Cy-, -O-, -NH-, -S-, 0C(0)-, -C(0)0-, -C(O)-, -SO-, - SO2 - , -NHSO2 - , - SO2NH- , -NHC(O)-, -C(0) H-, -0C(0)NH-, o -NHC(0)0-, en donde : -Cy- es un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 5-8 elementos opcionalmente sustituido que tienen 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o un anillo arilo bicíclico saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 8-10 elementos opcionalmente sustituido, que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre; En ciertas modalidades, M es fierro. En otras modalidades, M es zinc. En otra modalidad, M es níquel, cobalto, cobre, o platino. En otras modalidades, M es calcio o aluminio. En aún otras modalidades, M es estroncio, manganeso, platino, paladio, plata, oro, cadmio, cromo, indio, o plomo.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco que comprende un copolímero de tribloque, en donde tal micela tiene un núcleo interno cargado de fármaco, un núcleo externo reticulado, y una cubierta hidrofílica, en donde el copolímero de tribloque es de la fórmula VII: VII en donde cada uno de Q, J, T, M, m, y, n, RX y RT es como se define anteriormente y como se describe en las clases y subclases de la presente, tanto individualmente como en combinación; x1 es 1-20; y x2 es 0-20.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco que comprende un copolímero de tribloque, en donde tal micela tiene un núcleo interno cargado de fármaco, un núcleo externo reticulado, y una cubierta hidrofílica, en donde el copolímero de tribloque es de la fórmula VIII: en donde cada uno de Q, J, T, M, m, y, x1, x2, n, RY y RT es como se define anteriormente y como se describe en las clases y subclases de la presente, tanto individualmente como en combinación.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco que comprende un copolímero de tribloque, en donde tal micela tiene un núcleo interno cargado de fármaco, un núcleo externo reticulado, y una cubierta hidrofílica, en donde el copolímero de tribloque es de la fórmula IX: en donde cada uno de M, x1, x2, y n es como se define anteriormente y como se describe en las clases y subclases de la presente, tanto individualmente como en combinación; y1 es 5-30; y y2 es 10-40.
Será obvio para un experto en la técnica que el fármaco cargado, la micela reticulada de la presente invención está comprendido de decenas a cientos de cadenas poliméricas. Debido a que el hecho de que solamente dos cadenas poliméricas ligadas por un ión de metal están representadas en cualquiera de las fórmulas VI, VII, VIII, o IX, se entenderá que la micela de polímero está comprendido de muchas más cadenas poliméricas que no son representadas por facilidad de presentación.
En otras modalidades, la presente invención proporciona un sistema que comprende un copolímero de tribloque de fórmula I, un agente terapéutico hidrofóbico, y un ión de metal. En otra modalidad, la presente invención proporciona un sistema que comprende un copolímero de tribloque de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV, ya sea individualmente o en combinación, un agente terapéutico hidrofóbico, y un ión de metal. En aún otra modalidad, la presente invención proporciona un sistema que comprende un copolímero de tribloque de fórmula II, un agente terapéutico hidrofóbico, y un ión de metal.
En otras modalidades, la presente invención proporciona un sistema que comprende un copolímero de tribloque de fórmula VI y un agente terapéutico hidrofóbico. En otra modalidad, la presente invención proporciona un sistema que comprende un copolímero de tribloque de cualquiera de las fórmulas VI, VII, VIII, y IX, ya sea individualmente o en combinación, y un agente terapéutico hidrofóbico. En aún otra modalidad, la presente invención proporciona un sistema que comprende un copolímero de tribloque de fórmula VII y un agente terapéutico hidrofóbico. En algunas modalidades, la presente invención proporciona un sistema que comprende un copolímero de tribloque de fórmula XI y un agente terapéutico hidrofóbico.
La meta final de la reticulación mediada por el metal es asegurar la estabilidad de la micela cuando se diluye en la sangre (pH 7.4) seguido por disolución rápida y liberación del fármaco en respuesta a un cambio de pH finito tal como aquel encontrado en un ambiente tumoral .
En un aspecto de la invención, una micela cargada de fármaco es reticulada mediante una porción de ácido hidroxámico. Los ácidos hidroxámicos como se describe anteriormente quelan ciertos metales como se describe en Rosthauser et. al. Macromolecules 1981, 14, 538-543 y en Miller Chemical Reviews 1989, 89, 1563-1579 (posteriormente "Miller") . Esta química de quelación de muestra en el Esquema de reacción 1.
Esquema de reacción 1 Metal Divalente Metal A Por consiguiente , la adición de un ion de metal a una micela cargada de fármaco de la presente invención podría resultar en la quelación de los iones de metal por el ácido hidroxámico , proporcionando una micela cargada de fármaco, reticulada. Los iones de metal son seleccionados a partir de, pero no limitado a: hierro, níquel, cobalto, zinc, calcio, cobre, estroncio, platino, paladio, vanadio, manganeso, y titanio.
Un experto en la técnica reconocerá que el grupo M de fórmula VI, VII , o VIII puede ser ya sea un ión de metal divalente o trivalente . También se reconoce que las estructuras de fórmula VI , VII, o VIII , por claridad, son representadas usando un ión de metal divalente . En el caso de un ión de metal trivalente como se describe en el Esquema de reacción 1, se entiende que pueden existir tres grupos de ácido hidroxámico o catecol unidos a un ión de metal único .
En un aspecto de la invención, una micela cargada de fármaco es reticulada mediante una porción de catecol . Los catecoles, como se describen anteriormente, son iones de complejo de metal como se representa en el Esquema de reacción 2. La quelación de catecoles con iones de metal también se describe en Miller. Por consiguiente, la adición de un ión de metal a una micela cargada de fármaco de la presente invención podría resultar en la quelación de los iones de metal por el ácido hidroxámico, proporcionando una micela cargada de fármaco, reticulada. Los iones de metal son seleccionados a partir de, pero no limitados a: fierro, níquel, cobalto, zinc, calcio, cobre, estroncio, vanadio, manganeso, y titanio.
Esquema de reacción 2.
Metal Divalente En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el polímero es En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el polímero es En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el polímero es En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es un taxano .
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es paclitaxel .
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es docetaxel .
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es cabazitaxel .
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es una epotilona.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es Epotilona B o Epotilona D.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es Epotilona A o Epotilona C.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es un alcaloide vinca.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es vinorelbina.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es berberina.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es berberrubina.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es una camptotecina .
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una raicela cargada de fármaco , reticulada , como se describe en la presente , en donde el fármaco es SN- 38 .
En ciertas modal idades , la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada , como se describe en la presente , en donde el fármaco es S39625 .
En ciertas modal idades , la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es una antraciclina.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es daunorubicina.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es doxorubicina .
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada, como se describe en la presente, en donde el fármaco es aminopterina .
En ciertas modalidades , la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada , como se describe en la presente , en donde el fármaco es picoplatino .
En ciertas modalidades , la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, reticulada , como se describe en la presente , en donde el fármaco es un terapéutico de platino . 4. Métodos Generales para Proporcionar Compuestos de la Presente Invención Los copolímeros de bloques múltiples de la presente invención son preparados por métodos conocidos por uno de habilidad ordinaria en la técnica. En general, tales copolímeros de bloques múltiples son preparados polimerizando secuencialmente uno o más monómeros de aminoácido cíclicos en un polímero hidrofílico que tiene una amina terminal en donde tal polimerización es iniciada por tal amina. En ciertas modalidades, tal polimerización ocurre por polimerización de apertura de anillo de los monómeros de aminoácido cíclicos. En otras modalidades, el monómero de aminoácido cíclico es un aminoácido NCA, lactama o imida.
Esquema de reacción 3 El Esquema de reacción 3 anterior representa un método general para preparar polímeros de bloque múltiple de la presente invención. Un macroiniciador de fórmula A es tratado con un primer aminoácido NCA para formar un compuesto de fórmula B que tiene un primer bloque de aminoácido. El segundo aminoácido NCA, se agrega al polímero vivo de la fórmula B para dar un copolímero de tribloque de fórmula C que tiene dos diferentes bloques de aminoácidos. Cada uno de R1, R2, n, Q, Rx, Ry, x, e y los grupos representados en el Esquema de reacción 3 son como se definen y describen en las clases y subclases, individualmente y en combinación, en la presente.
Una etapa en la preparación de un compuesto de fórmula I comprende terminar el extremo de cadena de polímero vivo del compuesto de fórmula C con un terminador de polimerización para proporcionar un compuesto de fórmula I . Uno de habilidad ordinaria en la técnica podrá reconocer que el terminador de polimerización proporciona el grupo R2 de fórmula I. Por consiguiente, modalidades dirigidas al grupo R2 de fórmula I como se exponen anteriormente y en la presente, también se dirigen al terminador de polimerización mismo, y de manera similar, las modalidades se dirigen al terminador de polimerización, como se exponen anteriormente y en la presente, también se dirigen al grupo R2 de la fórmula I .
Como se describe anteriormente, compuestos de fórmula I son preparados a partir de compuestos de fórmula C por tratamiento con un agente de terminación. Uno de habilidad ordinaria en la técnica podrá reconocer que compuestos de fórmula I son también fácilmente preparados directamente a partir de compuestos de fórmula C. Uno de habilidad ordinaria en la técnica también podría reconocer que el método anterior para preparar un compuesto de fórmula I puede ser realizado como una síntesis de "un crisol" de compuestos de fórmula I que utilizan el extremo de cadena de polímero vivo para incorporar el grupo R2 de fórmula I. Alternativamente, los compuestos de fórmula I también pueden ser preparados en una forma de etapas múltiples. Por ejemplo, el extremo de cadena de polímero vivo de un compuesto de fórmula C puede ser apagado para proporcionar un grupo amino el cual puede entonces ser además derivatizado, de conformidad con métodos conocidos, para proporcionar un compuesto de fórmula I .
Uno de habilidad ordinaria en la técnica reconocerá que una variedad de agentes de terminación de polimerización son para la presente invención. Tales agentes de terminación de polimerización incluyen cualquier grupo que contiene R2 capaz de reaccionar con el extremo de cadena de polímero vivo de un compuesto de fórmula C, o el grupo amino de base libre de fórmula C, para proporcionar un compuesto de fórmula I. De este modo, los agentes de terminación de polimerización incluyen anhídridos, y otros agentes acilantes, y grupos que contienen un grupo saliente LG que es sometido a desplazamiento nucleofílico .
Alternativamente, los compuestos de fórmula C pueden ser acoplados a grupos que contienen ácido carboxílico para formar una imida del mismo. De este modo, se contempla que el grupo amina de fórmula C puede ser acoplado con una porción de ácido carboxílico para proporcionar compuestos de fórmula I en donde R2 es -NHC(0)R4. Tales reacciones de acoplamiento son bien conocidas en la técnica. En ciertas modalidades, el acoplamiento se logra con un reactivo de acoplamiento. Tales reactivos son bien conocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, DCC y EDC, entre otros. En otras modalidades, la porción de ácido carboxílico es activada para uso en la reacción de acoplamiento. Tal activación incluye formación de un haluro de acilo, uso de un reactivo ukaiyama, y similares. Estos métodos, y otros, son conocidos para uno de habilidad ordinaria en la técnica, por ejemplo, véase, "Advanced Organic Chemistry, " Jerry March, 5th Ed., pp. 351-357, John iley and Sons, N.Y.
Un "grupo saliente adecuado que es sometido a desplazamiento nucleofílico" , es un grupo químico que es fácilmente desplazado por una porción química entrante deseada. Los grupos salientes adecuados son bien conocidos en la técnica, por ejemplo, véase, March. Tales grupos salientes incluyen, pero no se limitan a, halógeno, alcoxi, sulfoniloxi, alquilsulfoniloxi opcionalmente sustituido, alquenilsulfoniloxi opcionalmente sustituido, arilsulfoniloxi opcionalmente sustituido y porciones de diazonio. Ejemplos de grupos salientes adecuados incluyen cloro, iodo, bromo, fluoro, metansulfoniloxi (mesiloxi) , tosiloxi, trifliloxi, nitro-fenilsulfoniloxi (nosiloxi) , y bromo-fenilsulfoniloxi (brosiloxi) .
De conformidad con una modalidad alterna, el grupo saliente puede ser generado in situ dentro del medio de reacción. Por ejemplo, un grupo saliente puede ser generado in situ a partir de un precursor de tal compuesto en donde tal precursor contiene un grupo fácilmente colocado por tal grupo saliente in situ.
Alternativamente, cuando el grupo 2 de fórmula I es una mono- o di-amina protegida, el (los) grupo (s) protector (es ) son removidos y tal grupo funcional puede ser derivatizado o protegido con un diferente grupo protector. Se apreciará que la remoción de cualquier grupo protector del grupo R2 de fórmula I se realiza por métodos para tal grupo de protección. Tales métodos se describen en detalle en Green.
En otras modalidades, el grupo R2 de fórmula I es incorporado por derivatización del grupo amino de fórmula C mediante acoplamiento anhídrido, opcionalmente en la presencia de una base como se apropiado. Uno de habilidad ordinaria en la técnica podrá reconocer que los agentes de terminación de polimerización anhídridos que contienen una azida, un aldehido, un hidroxilo, un alquilo, y otros grupos, o formas protegidas de los mismos, pueden ser usados para incorporar tal azida, tal aldehido, tal hidroxilo protegido, tal alquino, y otros grupos en el grupo R2 de compuestos de fórmula I . También se apreciará que tales agentes de terminación de polimerización anhídridos son también adecuados para terminar el extremo de la cadena de polímero vivo de un compuesto de fórmula C, o base libre del mismo. Tales agentes de terminación de polimerización anhídridos incluyen, pero no se limitan a, aquellos expuestos en la Tabla 3 abajo.
Tabla 3. Agentes de Terminación de Polimerización Anhídridos Representativos En ciertas modalidades, el bloque de polímero hidrofílico es poli (etilenglicol) (PEG) que tiene una amina terminal ( "macroiniciador PEG" ) - Este macroiniciador PEG inicia la polimerización de NCAs para proporcionar los copolímeros de bloques múltiples de la presente invención. Tales polímeros sintéticos que tienen un grupo amina terminal se conocen en la técnica e incluyen aminas PEG. Las aminas-PEG se pueden obtener por la desprotección de una amina-PEG adecuadamente protegida. La preparación de tales aminas-PEG adecuadamente protegidas y métodos para desproteger las mismas, se describen en detalle en la Solicitud de Patente Estadounidense serie número 11/256,735, presentada el 24 de Octubre de 2005, y publicada como US 20060142506 el 29 de Junio de 2006, la totalidad de la cual está de este modo incorporada en la presente por referencia.
Como se describe en el documento US 20060142506, aminas-PEG adecuadamente protegidas pueden ser formadas terminando el extremo de cadena de polímero viva de un PEG con un agente de terminación que contiene una amina adecuadamente protegida. Por consiguiente, en otras modalidades, el agente de terminación tiene un grupo amino adecuadamente protegido en donde el grupo protector es lábil al ácido.
Alternativamente, los polímeros sintéticos que tienen una amina terminal pueden ser preparados a partir de polímeros sintéticos que contienen grupos funcionales terminales que pueden ser convertidos a aminas por rutas sintéticas conocidas. En ciertas modalidades, la conversión de los grupos funcionales terminales a la amina se conduce en una etapa sintética única. En otras modalidades, la conversión de los grupos funcionales terminales a la amina se logra por medio de una secuencia de etapas múltiples. En aún otra modalidad, un iniciador de amina protegida puede ser usado para polimerizar el óxido de etileno después terminado con un grupo funcional apropiado para formar el grupo R1 de fórmula I . El iniciador de amina protegida puede entonces ser desprotegido para proporcionar la amina libre para polimerización subsecuente. Las transformaciones del grupo funcional que proporcionan aminas o aminas protegidas son bien conocidas en la técnica e incluyen aquellas descritas en Larock, R.C., "Comprehensive Organic Transformations , " John Wiley & Sons, New York, 1999.
Esquema de reacción 4 A El Esquema de reacción 4 anterior muestra un método ejemplar para preparar los PEGs bifuncionales usados para preparar los copolímeros de bloques múltiples de la presente invención. En la etapa (a), el iniciador de polimerización E es tratado con una base para formar F. Una variedad de bases son adecuadas para la reacción en la etapa (a) . Tales bases incluyen, pero no se limitan a, naftalénido de potasio, difenilmetilpotasio, trifenilmetil potasio, e hidruro de potasio. En la etapa (b) , el anión resultante es tratado con óxido de etileno para formar el polímero G. El polímero G es entonces apagado con un agente de terminación en la etapa (c) para formar el grupo R1 del polímero H. Los agentes de terminación ejemplares para el Polímero G se pueden encontrar en la Tabla 4. El polímero H puede ser transformado en la etapa (d) a un compuesto de fórmula A por desprotección del grupo dibencil amina por hidrogenación .
Tabla 4. Agentes de Terminación PEG Ejemplares D-9 D-10 D-11 De conformidad con otra modalidad, la presente invención proporciona un método para preparar una micela que comprende un copolímero de bloque múltiple el cual comprende un bloque hidrofílico polimérico, opcionalmente un poli (bloque de aminoácido) reticulable o reticulado, y un bloque de poli (aminoácido) hidrofóbico, caracterizado porque tal micela tiene un núcleo interno, un núcleo externo opcionalmente reticulable o reticulado, y una cubierta hidrof ílica, tal método comprende las etapas de: (a) proporcionar un copolímero de bloque múltiple de fórmula I : en donde cada uno de R1, R2, Q, Rx, Ry, n, x, e y grupos de fórmula I, son como se describen en varias clases y subclases, tanto individualmente como en combinación, en la presente , (b) combinar tal compuesto de fórmula I con un agente terapéutico; y (c) tratar la micela resultante con un reactivo de reticulación para reticular Rx.
En una modalidad, los fármacos son cargados en el núcleo interno de la micela agregando una alícuota de una solución de copolímero en agua al fármaco a ser incorporado. Por ejemplo, se elabora una solución base del fármaco en un solvente orgánico polar y se deja evaporar, y después se agrega la solución de copolímero/agua. En otra modalidad, el fármaco es incorporado usando una técnica de emulsión aceite en agua. En este caso, el fármaco es disuelto en un solvente orgánico y agregado por goteo a la solución de micela en agua, y el fármaco es incorporado en la micela durante la evaporación del solvente. En otra modalidad, el fármaco es disuelto con el copolímero en un solvente orgánico polar común y dializado contra agua u otro medio acuoso. Véase Alien, C; Maysinger, D.; Eisenberg A. Colloid Surface B 1999, 16, 3-27. 5. Usos, Métodos y Composiciones Como se describe en la presente, micelas de la presente invención pueden encapsular una amplia variedad de agentes terapéuticos útiles para tratar una amplia variedad de enfermedades. En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una micela cargada de fármaco, como se describe en la presente, en donde tal micela es útil para tratar el trastorno por el cual el fármaco es conocido por tratar. De conformidad con una modalidad, la presente invención proporciona un método para tratar uno o más trastornos seleccionados a partir de dolor, inflamación, arritmia, artritis (reumatoide u osteoartritis) , aterosclerosis , restenosis, infección bacteriana, infección viral, depresión, diabetes, epilepsia, infección fúngica, gota, hipertensión, malaria, migraña, cáncer u otro trastorno proliferativo, disfunción eréctil, un trastorno de la tiroides, trastornos neurológicos y enfermedades relacionadas con la hormona, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntingon, enfermedad de Alzheimer, un trastorno gastro-intestinal, alergia, un trastorno autoinmune, tal como asma o psoriasis, osteoporosis, obesidad y comorbidades , un trastorno cognitivo, apoplejía, demencia asociada con SIDA, esclerosis lateral amiotrófica (ALS, enfermedad de Lou Gehrig) , esclerosis múltiple (MS) , esquizofrenia, ansiedad, trastorno bipolar, tauopotía, una lesión del nervio periférico o médula espinal, infarto al miocardio, hipertrofia al cardiomiocito, glaucoma, un trastorno por déficit de atención (ADD o ADHD) , un trastorno del sueño, reperfusión/isquemia, un trastorno angiogénico, o incontinencia urinaria, que comprende administrar a un paciente una micela que comprende un copolímero de bloque múltiple el cual comprende un bloque hidrofílico polimérico, opcionalmente un poli (bloque de aminoácido) reticulable o reticulado, y un poli (bloque de aminoácido) D, L-mezclado, hidrofóbico, caracterizado porque tal micela tiene un núcleo interno cargado de fármaco, opcionalmente un núcleo externo reticulable o reticulado, y una cubierta hidrofílica, en donde tal micela encapsula un agente terapéutico adecuado para tratar tal trastorno.
En otras modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar uno o más trastornos seleccionados a partir de enfermedad autoinmune, una enfermedad inflamatoria, un trastorno metabólico, un trastorno psiquiátrico, diabetes, un trastorno angiogénico, tauopotía, un trastorno neurológico o neurodegenerativo, una lesión de la médula espinal, glaucoma, calvicie, o una enfermedad cardiovascular, que comprende administrar a un paciente un copolímero de bloque múltiple el cual comprende un bloque hidrofílico polimérico, opcionalmente un poli (bloque de aminoácido) reticulable o reticulado, y un poli (bloque de aminoácido) D, L-mezclado, hidrofóbico, caracterizado porque tal micela tiene un núcleo interno cargado de fármaco, opcionalmente un núcleo externo reticulable o reticulado, y una cubierta hidrofílica, en donde tal micela encapsula un agente terapéutico adecuado para tratar tal trastorno.
En ciertas modalidades, micelas cargadas de fármaco de la presente invención son útiles para tratar cáncer. Por consiguiente, otro aspecto de la presente invención proporciona un método para tratar cáncer en un paciente que comprende administrar a un paciente un copolímero de bloque múltiple el cual comprende un bloque hidrofílico polimérico, opcionalmente un poli (bloque de aminoácido) reticulable o reticulado, y un poli (bloque de aminoácido) D, L-mezclado, hidrofóbico, caracterizado porque tal micela tiene un núcleo interno cargado de fármaco, opcionalmente un núcleo externo reticulable o reticulado, y una cubierta hidrofílica, en donde tal micela encapsula un agente quimioterapéutico . De conformidad con otra modalidad, la presente invención se refiere a un método para tratar un cáncer seleccionado a partir de mama, ovario, cerviz, próstata, testículos, tracto genitourinario, esófago, laringe, glioblastoma, neuroblastoma, estómago, piel, queratocantoma, pulmón, carcinoma pidermoide, carcinoma de células grandes, carcinoma de células pequeñas, adenocarcinoma de pulmón, hueso, colon, adenoma, páncreas, adenocarcinoma, tiroides, carcinoma folicular, carcinoma no diferenciado, carcinoma papilar, seminoma, melanoma, sarcoma, carcinoma de vejiga, carcinoma de hígado, y pasajes biliares, carcinoma de riñon, trastornos mieloides, trastornos linfoides, Hodgkin, células pilosas, cavidad bucal y faringe (oral) , labios, lengua, boca, faringe, intestino delgado, colon-recto, intestino grueso, recto, sistema nervioso central y cerebral, y leucemia, que comprende administrar una micela de conformidad con la presente invención en donde tal micela encapsula un agente quimioterapéutico adecuado para tratar tal cáncer.
La glicoproteína-P (Pgp, también llamada proteína de resistencia a fármaco múltiple) se encuentra en la membrana plasmática de eucariotas superiores donde es responsable de la exportación accionada por hidrólisis de ATP de moléculas hidrofóbicas . En animales, la Pgp juega un papel importante en la excreción de, y protección de toxinas ambientales, cuando se expresa en la membrana plasmática de células de cáncer, puede conducir a falla de quimioterapia previniendo a los fármacos quimioterapéuticos hidrofóbicos de alcanzar sus objetivos dentro de las células. Sin embargo, la Pgp se conoce por transportar fármacos quimioterapéuticos fuera de las células tumorales . De conformidad con un aspecto, la presente invención proporciona un método para suministrar un fármaco quimioterapéutico hidrofóbico a una célula de cáncer mientras previene, o disminuye, la excreción de Pgp de tal fármaco quimioterapéutico, que comprende administrar una micela cargada de fármaco que comprende un polímero de bloque múltiple de la presente invención cargada con un fármaco quimioterapéutico hidrofóbico. Tales fármacos quimioterapéuticos hidrofóbicos son bien conocidos en la técnica e incluyen aquellos descritos en la presente.
Composiciones De conformidad con otra modalidad, la invención proporciona una composición que comprende una micela de esta invención o un derivado de la misma farmacéuticamente aceptable y un portador, adyuvante, o vehículo farmacéuticamente aceptable. En ciertas modalidades, la composición de esta invención es formulada para administración a un paciente en necesidad de tal composición.
En otras modalidades, la composición de esta invención es formulada para administración oral a un paciente.
El término "paciente", como se usa en la presente, significa un animal, preferiblemente un mamífero, y muy preferiblemente un humano.
El término "portador, adyuvante, o vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a un portador, adyuvante, o vehículo no tóxico que no destruye la actividad farmacológica del compuesto con el cual es formulado. Portadores, adyuvantes o vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden ser usados en las composiciones de esta invención incluyen, pero no se limitan a, intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas del suero, tales como albúmina de suero humano, sustancias amortiguadoras tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, fosfatohidrógeno disódico, fosfatohidrógeno potásico, cloruro de sodio, sales de zinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias a base de celulosa, poletilenglicol , carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos, ceras, polímeros de bloque de polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y grasa de lana.
Sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención incluyen aquellas derivadas de ácidos orgánicos e inorgánicos farmacéuticamente aceptables y bases. Ejemplos de sales de ácido incluyen acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencensulfonato, bisulfato, butirato, citrato, camforato, camforsulfonato, ciclopentanpropionato, digluconato, dodeci1sulfato, etansulfonato, formiato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, glicolato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxi etansulfonato, lactato, maleato, malonato, metansulfonato, 2-naftalensulfonato, nicotinato, nitrato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, salicilato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, tosilato y undecanoato. Otros ácidos, tales como oxálico, mientras no son los mismos farmacéuticamente aceptables, pueden ser empleados en la preparación de sales útiles como intermediarios en la obtención de los compuestos de la invención y sus sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables.
Sales derivadas de bases apropiadas incluyen sales de metal álcali (por ejemplo, sodio y potasio), metal alcalino terreo (por ejemplo, magnesio), amonio y N+ (alquilo Ci- ) - Esta invención también contempla la cuaternización de cualquiera de los grupos que contienen nitrógeno básico de los compuestos descritos en la presente. Se pueden obtener productos dispersables o solubles en aceite o agua por tal cuaternización.
Las composiciones de la presente invención pueden ser administradas oralmente, parenteralmente, por atomización por inhalación, tópicamente, rectalmente, nasalmente, bucalmente, vaginalmente , o mediante un reservorio implantado. El término "parenteral" como se usa en la presente incluye técnicas de inyección o infusión subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intra-sinovial , intrasternal , intratecal, intrahepática, intralesional e intracranial . Preferiblemente, las composiciones son administradas oralmente, intraperitonealmente o intravenosamente. Las formas inyectables estériles de las composiciones de esta invención pueden ser suspensiones acuosas u oleaginosas. Estas suspensiones pueden ser formuladas de conformidad con las técnicas conocidas en la técnica usando agentes de dispersión o humectantes y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o solvente parenteralmente aceptable no tóxico, por ejemplo, como una solución en 1, 3 -butandiol . Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden ser empleados están agua, solución Ringer, y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, los aceites fijos estériles, son convencionalmente empleados como un medio solvente o de suspensión.
Para este propósito, cualquier aceite fijo blando puede ser empleado incluyendo mono- o di-glicéridos . Los ácidos grasos, tales como ácido oleico y sus derivados glicéridos son útiles en la preparación de inyectables, como son aceites farmacéuticamente aceptables naturales, tales como aceite de oliva o aceite de ricino, especialmente en sus versiones polioxietiladas . Estas soluciones o suspensiones aceitosas también pueden contener un diluyente o dispersante de alcohol de cadena larga, tal como carboximetilcelulosa o agentes dispersantes similares que son comúnmente usados en la formulación de formas de dosificación farmacéuticamente aceptables que incluyen emulsiones y suspensiones. Otros tensoactivos comúnmente usados, tales como Tweens, Spans y otros agentes emulsificantes o potenciadores de la biodisponibilidad los cuales son comúnmente usados en la manufactura de formas de dosificación sólidas, líquidas u otras farmacéuticamente aceptables, también pueden ser usados para los propósitos de la formulación.
Las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención pueden ser oralmente administradas en cualquier forma de dosificación oralmente aceptable, que incluyen, pero no se limitan a, cápsulas, tabletas, suspensiones o soluciones acuosas. En el caso de tabletas para uso oral, los portadores comúnmente usados incluyen lactosa y almidón de maíz. Los agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio, también son típicamente agregados. Para administración oral en una forma de cápsula, los diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz seco. Cuando las suspensiones acuosas son requeridas para uso oral, el ingrediente activo es combinado con agentes emulsificantes y de suspensión. Si se desea, ciertos agentes endulzantes, saborizantes , o colorantes también pueden ser agregados. En ciertas modalidades, composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención son entéricamente recubiertas.
Alternativamente, las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención pueden ser administradas en la forma de supositorios para administración rectal . Estas pueden ser preparadas mezclando el agente con un excipiente no irritante adecuado que es sólido a temperatura ambiente pero líquido a temperatura rectal y por lo tanto fusionará en el recto para liberar el fármaco. Tales materiales incluyen manteca de cacao, cera de abeja y polietilenglicoles .
Las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención también pueden ser administradas tópicamente, especialmente cuando el objetivo del tratamiento incluye áreas u órganos fácilmente accesibles para aplicación tópica, que incluyen, enfermedades del ojo, la piel, o el tracto intestinal inferior. Las formulaciones tópicas adecuadas son fácilmente preparadas para cada una de estas áreas u órganos.
La aplicación tópica para el tracto intestinal inferior puede ser efectuada en una formulación de supositorio rectal (véase anteriormente) o en una formulación de enema. Los parches tópicamente transdermales también pueden ser usados.
Para aplicaciones tópicas, las composiciones farmacéuticamente aceptables pueden ser formuladas en un ungüento que contiene el componente activo suspendido o disuelto en uno o más portadores. Los portadores para administración tópica de los compuestos de esta invención incluyen, pero no se limitan a, aceite mineral, petrolato líquido, petrolato blanco, propilenglicol , polioxietileno, compuesto de polioxipropileno, cera emulsificante y agua. Alternativamente, las composiciones farmacéuticamente aceptables pueden ser formuladas en una loción o crema que contiene los componentes activos suspendidos o disueltos en uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. Portadores adecuados incluyen, pero no se limitan a, aceite mineral, monoestearato de sorbitán, polisorbato 60, ceras de cetilésteres , alcohol cetearílico, 2 -octildodecanol , alcohol bencílico, y agua.
Para uso oftálmico, las composiciones farmacéuticamente aceptables pueden ser formuladas como suspensiones micronizadas en salina estéril de pH ajustado, isotónicas, o, preferiblemente, como soluciones en salina estéril de pH ajustado, isotónica, ya sea con o sin un preservativo tal como cloruro de bencilalconio. Alternativamente, para usos oftálmicos, las composiciones farmacéuticamente aceptables pueden ser formuladas en un ungüento tal como petrolato.
Las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención también pueden ser administradas por aerosol nasal o inhalación. Tales composiciones son preparadas de conformidad con técnicas bien conocidas en la técnica de formulación farmacéutica y pueden ser preparadas como soluciones en salina, empleando alcohol bencílico u otros preservativos, promotores de absorción para mejorar la biodisponibilidad, fluorocarbonos , y/u otros agentes solubilizantes o dispersantes convencionales.
En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención son formuladas para administración oral.
La cantidad de los compuestos de la presente invención que pude ser combinada con los materiales portadores para producir una composición en una forma de dosificación única variará dependiendo del hospedero tratado, el modo particular de administración. Preferiblemente, las composiciones deben ser formuladas de manera que una dosificación de entre 0.01 - 100 mg/kg de peso corporal/día del fármaco, puede ser administrada a un paciente que recibe estas composiciones.
Se apreciará que dosificaciones típicamente empleadas para el fármaco encapsulado están contempladas por la presente invención. En ciertas modalidades, un paciente es administrado con una micela cargada de fármaco de la presente invención en donde la dosificación del fármaco es equivalente a la que es típicamente administrada para tal fármaco. En otras modalidades, un paciente es administrado con una micela cargada de fármaco de la presente invención en donde la dosificación del fármaco es inferior que la que es típicamente administrada para tal fármaco.
Se debe entender que un régimen de tratamiento y dosificación específico para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores, que incluyen la actividad del compuesto específico empleado, la edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, tiempo de administración, velocidad de excreción, fármaco de combinación, y el juicio del especialista que atiende y la severidad de la enfermedad particular siendo tratada. La cantidad de un compuesto de la presente invención en la composición también dependerá del compuesto particular en la composición.
Con el fin de que la invención descrita pueda ser más completamente entendida, se exponen los siguientes ejemplos. Se entenderá que estos ejemplos son para propósitos ilustrativos solamente y no están siendo construidos como limitantes de esta invención en cualquier manera.
EJEMPLIFICACIÓN Como se describe en general anteriormente, los copolímeros de bloques múltiples de la presente invención son preparados usando los PEG heterobifuncionales descritos en la presente y en la solicitud de patente Estadounidense serie número 11/256,735, presentada el 24 de Octubre de 2005, publicada como WO2006/047419 el 4 de Mayo de 2006, y publicada como US 20060142506 el 29 de Junio de 2006, la totalidad de la cual está de este modo incorporada en la presente por referencia. La preparación de polímeros de bloque múltiple de conformidad con la presente invención se realiza por métodos conocidos en la técnica, que incluyen aquellos descritos en detalle en la solicitud de patente Estadounidense serie número 11/325,020, presentada el 4 de Enero de 2006, publicada como WO2006/74202 el 13 de Julio de 2006 y publicada como US 20060172914 el 3 de Agosto de 2006, la totalidad de la cual está de este modo incorporada en la presente por referencia.
En cada uno de los Ejemplos siguientes, donde un aminoácido, o NCA correspondiente es designado "D" , entonces tal aminoácido, o NCA correspondiente, es de la configuración-D. Donde no se menciona tal designación, entonces tal aminoácido, o NCA correspondiente, es de la configuración-L .
Métodos Generales: Análisis de Tamaño de Partícula. Se usó dispersión de luz dinámica con un lector de placa Wyatt Dynapro para determinar los tamaños de partículas de las formulaciones reticuladas y no reticuladas. Las soluciones de las formulaciones se hicieron a 1 mg/mL en 150 mM de NaCl . Las muestras se centrifugaron a 2000 RPM por 5 minutos, y después 300 L, se agregaron cada uno a una cavidad de una placa de 96 -cavidades por triplicado para análisis. Se usaron 10 adquisiciones por cavidad con tiempos de adquisición de 30 segundos y la auto-atenuación láser para recolectar los datos .
Diálisis de Verificación de Encapsulación. La formulación no reticulada se disolvió en 3.5 mL de 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8 a 20 mg/mL, y a 0.2 mg/mL. 3 mL de las muestras se agregaron a bolas de diálisis de valor de referencia de peso molecular 3500, y los restantes 0.5 mL se agregaron a viales de HPLC para las muestras de pre-diálisis. Las bolsas de diálisis se colocaron en 300 mL de 10 mM de PB a pH 8 y se agitaron por 6 horas. Las alícuotas se tomaron entonces a partir del interior de las bolsas de diálisis y el análisis de HPLC se usó para determinar las áreas pico del fármaco a partir de las muestras de pre-diálisis y post-diálisis . Las áreas fueron entonces usadas para calcular el % de fármaco restante post-diálisis.
Análisis y Reticulación Dependiente del Fierro. La formulación no reticulada se reconstituyó en agua a 20 mg/mL con ya sea 0.1, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 2.5, 5, 7.5 o 10 mM de cloruro de fierro (III) y se dejó agitar durante la noche a temperatura ambiente. Las muestras entonces se diluyeron a 0.2 mg mL en 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8, con un volumen final de 5 mL. Alícuotas de 1.5 mL se tomaron como muestras de pre-diálisis para análisis de HPLC, después 3 mL de cada muestra se agregaron a una bolsa de diálisis de valor de referencia 3500 MWC y se dializaron contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8 por 6 horas. Después de 6 horas las muestras se removieron a partir de adentro de las bolsas de diálisis y se analizaron por HPLC. El área pico post-diálisis para cada muestra se dividió por las áreas pico de pre-diálisis y se multiplicó por 100 para convertir el porcentaje restante.
Análisis y Reticulación Dependiente del Tiempo. La formulación no reticulada se reconstituyó en agua a 20 mg/mL, y 50 µL se diluyeron en 4.95 mL para la muestra no reticulada. Una solución base de 500 mM de cloruro de fierro (III) entonces se agregó a la solución no reticulada para una concentración final de 10 mM de cloruro de fierro (III) . Esta se usó como la solución base reticulada, donde 50 alícuotas se tomaron a 5 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas y 16 horas y se diluyeron a 0.2 mg mL en 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8, con un volumen final de 5 mL. Alícuotas de 1.5 mL se tomaron como muestras de pre-diálisis para análisis de HPLC, después 3 mL de cada muestra se agregaron a una bolsa de diálisis de valor de referencia 3500 M C y se dializaron contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8 por 6 horas. Después de 6 horas, las muestras se removieron a partir de adentro de las bolsas de diálisis y se analizaron por HPLC. El área pico de la post-diálisis para cada muestra se dividió por las áreas pico de la pre-diálisis y se multiplicó por 100 para convertir el porcentaje restante .
Análisis y Reticulación Dependiente del pH. La formulación no reticulada se reconstituyó en agua a 20 mg/mL con 10 mM de cloruro de fierro (III) a pH 3, 4, 5, 6, 7, 7.4 y 8. Las muestras se dejaron incubar por 10 minutos después de la reconstitución y ajuste de pH, y después se diluyeron a 0.2 mg mL en 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8, con un volumen final de 5 mL. Alícuotas de 1.5 mL se tomaron como muestras de pre-diálisis para análisis de HPLC, después 3 mL de cada muestra se agregaron a una bolsa de diálisis de valor de referencia 3500 MWC y se dializaron contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8 por 6 horas. Después de 6 horas las muestras se removieron a partir de adentro de las bolsas de diálisis y se analizaron por HPLC. El área pico post-diálisis para cada muestra se dividió por las áreas pico de pre-diálisis y se multiplicó por 100 para convertir el porcentaje restante.
Liberación Dependiente del pH de Formulaciones Reticuladas. La formulación no reticulada se reconstituyó en agua a 20 mg/mL con 10 mM de cloruro de fierro (III) , pH ajustado a 8.0 con NaOH y se dejó agitar durante la noche a temperatura ambiente. Al siguiente día la muestra se diluyó a 0.2 mg/mL 3n 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 3 , 4, 5, 6, 7, 7.4 y 8, con un volumen final de 5 mL por muestra. Alícuotas de 1.5 mL se tomaron como muestras de pre-diálisis para análisis de HPLC, después 3 mL de cada muestra se agregaron a una bolsa de diálisis de valor de referencia 3500 MWC y se dializaron contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8 por 6 horas . Después de 6 horas las muestras se removieron a partir de adentro de las bolsas de diálisis y se analizaron por HPLC . El área pico de la post-diálisis para cada muestra se dividió por las áreas pico de la pre-diálisis y se multiplicó por 100 para convertir el porcentaje restante .
Liberación Dependiente del pH de Formulaciones No Reticuladas. La formulación no reticulada se reconstituyó en agua a 20 mg/mL, el pH se ajustó a 8.0 con NaOH y se dejó agitar durante la noche a temperatura ambiente. Al siguiente día la muestra se diluyó a 0.2 mg/mL en 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 3, 4, 5, 6, 7, 7.4 y 8, con un volumen final de 5 mL por muestra. Alícuotas de 1.5 mL se tomaron como muestras de pre-diálisis para análisis de HPLC, después 3 mL de cada muestra se agregaron a una bolsa de diálisis de valor de referencia 3500 M C y se dializaron contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8 por 6 horas. Después de 6 horas las muestras se removieron a partir de adentro de las bolsas de diálisis y se analizaron por HPLC. El área pico post-diálisis para cada muestra se dividió por las áreas pico de pre-diálisis y se multiplicó por 100 para convertir el porcentaje restante.
Liberación Dependiente de la Sal de Formulaciones Reticuladas. La formulación no reticulada se reconstituyó en agua a 20 mg/mL con 10 mM de cloruro de fierro (III) , el pH se ajustó a 8.0 con NaOH y se dejó agitar por 10 minutos. La muestra entonces se diluyó a 0.2 mg/mL en 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8 con concentración incrementada de NaCl de 0 a 10, 50, 100, 200, 300, 400 y 500 mM con un volumen final de 5 mL por muestra. Alícuotas de 1.5 mL se tomaron como muestras de pre-diálisis para análisis de HPLC, después 3 mL de cada muestra se agregaron a una bolsa de diálisis de valor de referencia 3500 MWC y se dializaron contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8 con la concentración de sal correspondiente por 6 horas . Después de 6 horas las muestras se removieron a partir de adentro de las bolsas de diálisis y se analizaron por HPLC. El área pico post-diálisis para cada muestra se dividió por las áreas pico de pre-diálisis y se multiplicó por 100 para convertir el porcentaje restante.
Citotoxicidad in vifcro de Formulaciones de Aminopterina. Células originalmente adquiridas de ATCC (A549, Panc-1, OVCAR3, y BXPC-3) se sembraron en placas de cultivo de tejido de 96 cavidades para ser 50% confluentes por 24 horas. Las células se incubaron a 37°C con 5.0% de CO2. Las células se trataron con dosis escaladas de aminopterina libre, formulación de aminopterina reticulada, formulación de aminopterina no reticulada, y formulaciones de micela no cargadas de fármaco 24 horas después del sembrado de la placa. La aminopterina libre se disolvió en DMSO y se administró a las células con un volumen total de DMSO igual a o menos de 0.0025 %. Las formulaciones de micelas se resuspendieron en agua de grado biológico. Las diluciones se hicieron en placas de cavidad profunda con medio celular y agua o DMS (para aminopterina libre solamente) igualando el volumen desplazado. El medio de incubación se aspiró a partir de las placas de 96 cavidades y 100 µL de cada dilución se agregaron a las cavidades por triplicado e incubaron durante 72 horas a 37°C con 5.0% de CO2. Las formulaciones de micela no cargadas de fármaco reticuladas y no reticuladas se administraron a las cuatro dosis más altas y se calcularon a concentraciones comparativas de mg/ml a concentraciones de micelas cargadas de fármaco del vehículo de suministro. Después de 72 horas de incubación, las placas se dejaron enfriar a temperatura ambiente y 25 \ih del titulador celular-glo se agregaron a cada cavidad. Las placas se sacudieron brevemente para mezclar y las lecturas de luminiscencia se leyeron en un lector de placa. Las lecturas de luminiscencia para dosis triplicadas son promediadas y divididas por las lecturas de luminiscencia promedio a partir de células no tratada en la misma placa para calcular el % de células viables por dosis.
Método A de Formulación. El polímero se disolvió en agua a una concentración de 5 mg/mL por agitación y calentamiento a 40 °C por aproximadamente 30 minutos. Entonces se agregó sacarosa a la solución de polímero a 5 mg/mL y se agitó a temperatura ambiente hasta que es homogénea. La solución entonces se dejó enfriar a temperatura ambiente mientras se agita. El ingrediente farmacéutico activo (API) se disolvió en solvente orgánico solo por debajo del límite de solubilidad. La solución APl/orgánica entonces se agregó a la solución de polímero/sacarosa mientras se mezcla en corte a 10,000 PM por aproximadamente 30 segundos, o hasta que resulta una emulsión homogénea. La solución entonces se procesó con un paso único a través de un microfluidizador con una presión de operación de aproximadamente 1620 kg/cm2 (23,000 PSI) con la corriente de salida enfriada por un baño de agua fría. La solución se pasó entonces a través de un filtro de extremo muerto de 0.22 mieras, y después se procesó por ultrafiltración usando filtración de flujo tangencial hasta que se intercambió un total de 4 veces el volumen original del amortiguador de sacarosa y la concentración final del polímero en solución fue aproximadamente 20 mg/mL. Cloruro de fierro (III) se agregó entonces a la formulación para una concentración final de 10 mM. El pH de la solución entonces se ajustó a 6.0 con NaOH y se agitó a temperatura ambiente por 4 horas. Un volumen de amortiguador que contiene un agente criopreservador a 20 mg/mL entonces se agregó a la solución, y después de concentró nuevamente descendente a aproximadamente 20 mg/mL de concentración de polímero. La solución entonces se congeló a - 40°C y se liofilizó.
Método B de Formulación. El polímero se disolvió en agua a una concentración de 2 mg/mL por agitación y calentamiento a 40°C por aproximadamente 30 minutos. La solución entonces se dejó enfriar a temperatura ambiente mientras se agita. El ingrediente farmacéutico activo (API) se disolvió en solvente orgánico solo por debajo del límite de solubilidad. La solución APl/orgánica entonces se agregó a la solución de polímero/sacarosa mientras se mezcla en corte a 10,000 RPM por aproximadamente 30 segundos, o hasta que resulta una emulsión homogénea. La solución entonces se agitó durante la noche en una campana extractora para permitir a la solución orgánica evaporarse. Al siguiente día la solución entonces se pasó a través de un filtro de extremo muerto de 0.22 mieras, y después se procesó por ultrafiltración usando filtración de flujo tangencial para concentrar la muestra a partir de 2 mg/mL hasta aproximadamente 20 mg/mL. Cloruro de fierro (III) se agregó entonces a la formulación para una concentración final de 10 mM. El pH de la solución entonces se ajustó a 6.0 con NaOH y se agitó a temperatura ambiente por 4 horas. La solución entonces se congeló a - 40 °C y se liofilizó.
Análisis de Carga de Peso de la Formulación SN-38.
La carga de peso se determinó comparando una curva estándar de SN38 a una concentración conocida de formulación por análisis de HPLC. Se disolvió SN38 en metanol en un intervalo a partir de 30 µg/mL hasta 150 µg/mL, y la formulación se disolvió a 5 mg/mL en metanol. La cantidad de SN-38 en la formulación es entonces convertida al % con base en la cantidad conocida de la formulación usada (es decir, 5 mg/mL) .
Análisis de Carga de Peso de la Formulación de Daunorubicina . La carga de peso se determinó comparando una curva estándar de daunorubicina a una concentración conocida de formulación por análisis de HPLC. La daunorubicina se disolvió en metanol en un intervalo a partir de 40 µg/mL a 200 µg/mh, y la formulación se disolvió a 2 mg/mL en metanol.
La cantidad de daunorubicina en la formulación es entonces convertida al % con base en la cantidad conocida de formulación usada (es decir, 2 mg/mL) .
Análisis de Carga de Peso de la Formulación de Aminopterina. La carga de peso se determinó comparando una curva estándar de aminopterina a una concentración conocida de formulación por el análisis de HPLC. La aminopterina se disolvió en HPLC de fase móvil (60% de acetonitrilo, 40 % 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8) en un intervalo desde 40 pg/mL hasta 200 pg/mL, y la formulación se disolvió a 5 mg/mL en HPLC de fase móvil. La cantidad de aminopterina en la formulación es entonces convertida al % con base en la cantidad conocida de formulación usada (es decir, 5 mg/mL) .
Análisis de Carga de Peso de la Formulación de Berberina. La carga de peso se determinó comparando una curva estándar de berberina a una concentración conocida de formulación por análisis de HPLC. La berberina se disolvió en metanol en un intervalo a partir de 40 µg/mL a 200 µg/mL, y la formulación se disolvió a 5 mg/mL en metanol. La cantidad de berberina en la formulación fue entonces convertida al % con base en la cantidad conocida de la formulación usada (es decir, 5 mg/mL) .
Análisis de Carga de Peso de la Formulación de Cabazitaxel. La carga de peso se determinó comparando una curva estándar de cabazitaxel a una concentración conocida de formulación por análisis de HPLC . El cabazitaxel se disolvió en metanol en un intervalo a partir de 40 Ug/mL a 200 pg/mL, y la formulación se disolvió a 10 mg/mL en metanol. La cantidad de cabazitaxel en la formulación fue entonces convertida al % con base en la cantidad conocida de la formulación usada (es decir, 10 mg/mL) .
Análisis de Carga de Peso de la Formulación de Epotilona D. La carga de peso se determinó comparando una curva estándar de epotilona D a una concentración conocida de formulación por análisis de HPLC. La Epotilona D se disolvió en metanol en un intervalo a partir de 40 ug/mL a 200 g/mL, y la formulación se disolvió a 10 mg/mL en metanol. La cantidad de Epotilona D en la formulación fue entonces convertida al % con base en la cantidad conocida de la formulación usada (es decir, 10 mg/mL) .
Experimentos Generales de Farmacocinét ica en Rata. Ratas Sprague -Dawley quirúrgicamente modificadas con catéteres de la vena yugular se adquirieron a partir de Harían Laboratories, Dublin, VA. Las formulaciones se disolvieron en agua con 150 mM de NaCl para una concentración final de típicamente 10 mg de API por kg de peso corporal del animal por 1 mL de inyección del bolo mediante durante aproximadamente 1 minuto, seguido por un lavado a chorro de aproximadamente 250 de salina heparini zada . Los puntos de tiempo para la recolección de sangre después de la administración del artículo de ensayo fueron como sigue: 1, 5, 15 minutos, 1, 4, 8 y 24 horas. Aproximadamente 250 de sangre por punto de tiempo se recolectaron en tubos de recolección de sangre K3-EDTA seguido por un lavado a chorro de aproximadamente 250 de salina heparini zada . La sangre entonces se centrifugó a 2000 RPM por 5 minutos para aislar el plasma. El plasma entonces se recolectó y se congeló instantáneamente hasta que se procesó para análisis de HPLC. Las muestras se prepararon para análisis descongelando primero las muestras de plasma a temperatura ambiente. 50 L de plasma se agregaron a un tubo eppendorf de 2 mL de 150 il¡ de solución de extracción (0.1% de ácido fosfórico en metanol, 5 ug/mL de estándar interno) . Las muestras entonces se sometieron a vórtices por 10 minutos y se centrifugaron por 10 minutos a 13,000 RPM. El sobrenadante entonces se transfirió en viales de HPLC, después se analizó por HPLC. La cuantificación de API se determinó usando una curva estándar de la formulación de API en el plasma de rata comparado con muestras recolectadas a partir de ratas en cada punto tiempo .
Ejemplo 1 Dibencilamino Etanol. Cloruro de bencilo (278.5g, 2.2 mol) , etanol amina (60 mL, 1 mol), carbonato de potasio (283.1 g, 2.05 mol) y etanol (2 L) se mezclaron juntos en un matraz de 3 cuellos de 3 1, equipado con un agitador de cabeza, un condensador y un tapón de vidrio. El aparato se calentó hasta reflujo por 36 hrs, después de lo cual lo sólido insoluble se filtró a través de una frita mediana. Lo filtrado se recuperó y se removió etanol por evaporación rotatoria. El líquido viscoso se disolvió nuevamente en éter, la suspensión sólida se removió por filtración y se extrajo dos veces contra agua. La solución de éter se mantuvo y la capa acuosa se extrajo dos veces con diclorometano (2 x 400 mL) . Las fracciones se recombinaron, se secaron sobre MgSC , se agitaron sobre negro de carbono por 15 min y se filtraron a través de una almohadilla de celite. Se removió Diclorometano y lo sólido se disolvió nuevamente en una cantidad mínima de éter (volumen combinado de 300 mL con la primera fracción de éter, 300 mL) . Se agregaron hexanos (1700 mL) y la solución se calentó levemente hasta completar la disolución del producto. La solución después se enfrió levemente, colocada en el refrigerador (+4°C) durante la noche y se obtuvieron cristales blancos. La recristalización se realizó una segunda vez. 166.63g, 69% de rendimiento. RMN XH (de-DMSO) d 7.39-7.24 (10H), 4.42 (1H), 3.60 (4H) , 3.52 (2H) , 2.52 (2H) .
Ejemplo 2 Dibencilamino-PEG-metoxi . Un aparato que consiste de un matraz de polimerización de 3 cuellos enchaquetado de 4L equipado con una barra agitadora magnética de vidrio y embudo de adición enchaquetado térmicamente aislado se evacuó a 1.33 Pa (10 mTorr) después se rellenó con argón. El matraz de reacción se cargó con N, N-dibencilaminoetanol (4.28 g, 17.7 mmol) y 50% de KH sólido en cera de parafina (1.70 g, 21.2 mmol) bajo una corriente suave de gas argón. Se introdujo THF anhidro, aproximadamente 2L, en el matraz de reacción y la mezcla se agitó bajo Argón a temperatura ambiente por 16 h. La suspensión resultante se enfrió a 10 °C, y el embudo de adición bajo vacío se enfrió a -30 °C. Se condensó gas de óxido de etileno en el embudo evacuado enfriado, se recolectó hasta 225 mL (4.8 mol) de EO líquido. El óxido de etileno líquido en el embudo de condensación se agregó en una porción en la mezcla de reacción. La mezcla de reacción se agitó en un matraz cerrado a 10 °C por 6 horas, después a 20 °C por 16 horas. La polimerización se completó elevando la temperatura a 30 °C por 16 horas, después a 40 °C por 2 días. La mezcla de reacción se enfrió a 25 °C, después yoduro de metilo (1.6 mL) se agregó a la vez y la mezcla se agitó a 25 °C por 10 horas. El exceso de hidruro de potasio sin reaccionar después se destruyó por adición de etanol (99%, 100 mL) . Después de 30 min, la mezcla de reacción apagada se transfirió en un vaso de precipitado grande y el producto polimérico se precipitó por adición de éter de etilo (8 L) . El producto precipitado se recolectó por filtración en un embudo Buchener grande y después se secó in vacuo. El rendimiento fue 215.1 g de un sólido blanco. GPC acuoso mostró n de 12. OkDa y un PDI de 1.01. 1H-NMR (d6-DMSO, 400MHz) : 7.344 (m, 8H) , 7.225 (m, 4H) , 3.681 (m, 8H) , 3.507 (m, aprox. 1000H) , 3.320 (m, 6H + señal de agua), 3.237 (s, 3H) , 2.551 (t, 6.0Hz, 2H) .
Ejemplo 3 mPEG-amina. producto mPEG-dibencilamina del Ejemplo 3 (214.0 g) se disolvió en agua desionizada (1L) . El catalizador de Pearlman 13.2g (20% de hidróxido Pd en carbono, Aldrich) suspensión en agua desionizada (150 mL) se activó por agitación bajo balón de hidrógeno a temperatura ambiente. El hidrógeno en el matraz se reemplazó con nitrógeno, la solución de material de partida mPEG dibencilamino se agregó a la suspensión catalizadora y el matraz se evacuó, después se rellenó con hidrógeno (se repitió 3 veces) . La hidrogenación después se continuó a temperatura ambiente bajo balón de hidrógeno por 2 ½ días punto en el cual ^-H-NMR indicó una desaparición completa de señales de bencilo. Se agregó cloruro de sodio (350 g) sólido a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó por medio día bajo nitrógeno, el catalizador consumido se removió por filtración y se enjuagó completamente con salmuera. Los filtrados combinados se hicieron alcalinos (a aprox. pH 11) por adición de un volumen pequeño de NaOH 1M y se extrajo con diclorometano (4 x 0.7 L) . Los extractos combinados se secaron con carbonato de sodio anhidro, se filtró y se concentró en rotoevaporador hasta aproximadamente 0.75 L volumen total, después se precipitó sin retraso agregando exceso de éter (8L) . El producto precipitado se recolectó por filtración y se secó in vacuo para proporcionar 202.5 g de un sólido en forma de nieve blanco voluminoso. ^-H-NMR (d6-DMS0, 400MHz) : 3.681 (m, 8H) , 3.507 (m, aprox. 1000H) , 3.341 (m, 4H + señal de agua), 3.238 (s, 3H) , 2.634 (t, 5.7Hz, 2H) .
Ejemplo 4 D-Leucina NCA. H-D-Leu-OH (100 g, 0.76 mol) se suspendió en 1 L de THF anhidro y se calentó a 50 °C mientras se agita fuertemente. Se agregó fosgeno (20% en tolueno) (500 mL, 1 mol) a la suspensión de aminoácido. Después de lh 20min, el aminoácido se disolvió, formando una solución clara. La solución se concentró en el rotoevaporador, se transfirió en un vaso de precipitado, y se agregó hexano para precipitar el producto. Lo sólido blanco se aisló por filtración y se disolvió en tolueno (~ 700 mL) con una cantidad pequeña de THF (~ 60 mL) . La solución se filtró sobre un lecho de Celite para remover cualquier material insoluble. Se agregó un exceso de hexano (~ 4 L) a lo filtrado para precipitar el producto. El NCA se aisló por filtración y se secó in vacuo. (91g, 79% de rendimiento) Se aisló D-Leu NCA como un sólido cristalino, blanco. RMN LH (d6-DMSO) d 9.13 (1H), 4.44 (1H) , 1.74 (1H), 1.55 (2H) , 0.90 (6H) ppm.
Ejemplo 5 Aspartato NCA de tere-Butilo. H-As (OBu) -OH (120g, 0.63mol) se suspendió en 1.2 L de THF anhidro y se calentó a 50°C mientras se agita fuertemente. Se agregó fosgeno (20% en tolueno) (500 mL, 1 mol) a la suspensión de aminoácido. Después de lh 30min, el aminoácido se disolvió, formando una solución clara. La solución se concentró en el rotoevaporador, se transfirió en un vaso de precipitado, y se agregó hexano para precipitar el producto. Lo sólido blanco se aisló por filtración y se disolvió en THF anhidro. La solución se filtró sobre un lecho de Celite para remover cualquier material insoluble . Se agregó un exceso de hexano para precipitar el producto. El NCA se aisló por filtración y se secó in vacuo. 93g (68%) de NCA Asp(OBu) se aisló como un sólido cristalino, blanco. RMN XH (d6-DMSO) d 8.99 (1H) , 4.61 (1H) , 2.93 (1H), 2.69 (1H), 1.38 (9H) ppm.
Ejemplo 6 NCA de Bencil Tirosina. H-Tyr (OBzl ) -OH (140g, 0.52 mol) se suspendió en 1.5 L de THF anhidro y se calentó a 50°C mientras se agita fuertemente. Se agregó fosgeno (20% en tolueno) (500 mL, 1 mol) a la suspensión de aminoácido por medio de canulación. El aminoácido se disolvió durante el curso de aprox. lh 30, formando una solución amarillo pálido. La solución primero se filtró a través de un Buchner equipado con un papel hatman #1 para remover cualquiera de las partículas aún en suspensión. Después, la solución se concentró por evaporación rotatoria, se transfirió en un vaso de precipitado, y se agregó hexano para precipitar el producto. Lo sólido blancuzco se aisló por filtración y se disolvió en THF anhidro (~ 600 mL) . La solución se filtró sobre un lecho de Celite para remover cualquier material insoluble . Se agregó un exceso de hexano (-6 L) a lo filtrado para precipitar el producto. El NCA se aisló por filtración y se secó in vacuo. 114.05 g, 74.3% de NCA Tyr(OBzl) se aisló como un polvo blancuzco. RMN ¾ (d6-DMS0) d 9.07 (1H) , 7.49-7.29 (5H), 7.12-7.07 (2H) , 6.98-6.94 (2H) , 5.06 (2H) , 4.74 (1H) , 3.05-2.88 (2H) ppm.
Ejemplo 7 NCA Fenilalanina . H-L-Phe-OH (20.0 g, 132 mmol) se suspendió en 300 mL de THF anhidro y se calentó a 50 °C. Se agregó fosgeno (20% en tolueno) (90 mL, 182 mmol) a la suspensión de aminoácido, y el aminoácido se disolvió durante el curso de aprox. 1 hr, formando una solución turbia. La solución se filtró a través de un filtro de papel (Whatman #1) , se concentró por evaporación rotatoria, se transfirió en un vaso de precipitado, y se agregó hexano para precipitar el producto. Lo sólido blanco se aisló por filtración y se disolvió en THF anhidro. La solución se filtró sobre un lecho de Celite para remover cualquier material insoluble. Un exceso de hexanos se agregaron a lo filtrado mientras se agita con una espátula. El NCA se aisló por filtración y se secó in vacuo. 20.0 g (86% de rendimiento) de D-PheNCA se aisló como un sólido cristalino, blanco. RMN ?? (d6-DMS0) d 9.09 (1H) , 7.40-7.08 (5H) , 4.788 (1H) , 3.036 (2H) ppm.
Ejemplo 8 NCA L-bencilglutamato . H-Glu (OBn) -OH Secado a vacío (71.2 g, 300.0 mmol) se suspendió en 900 mL de THF anhidro. Fosgeno (20% en tolueno) (210 mL, 420 mmol) se agregó a la suspensión de aminoácido a temperatura ambiente y después de diez minutos, la mezcla se calentó a 50°C. El aminoácido se disolvió durante el curso de aprox. 1 hr, formando una solución clara. La solución se enfrió ligeramente y se concentró en el rotoevaporador . THF anhidro fresco (400 mL) se agregó al residuo y la solución se evaporó nuevamente en el rotoevaporador para dar un sólido incoloro, el cual se disolvió en 300 mL de THF anhidro, se transfirió un vaso de precipitado de 4L y precipitó por la adición lenta de 1.5 L de heptano anhidro. El NCA anhidro se aisló por filtración por succión y se secó in vacuo. 75.31 g (95.4% de rendimiento) de NCA Glu(OBn) se aisló como un sólido cristalino, incoloro. RMN XH (CDC13) d 7.36 (5H) , 6.40 (1H), 5.14 (2H) , 4.40 (1H), 2.60 (2H) , 2.22 (2H).
Ejemplo 9 NCA D-bencilglutamato . Usando el mismo método y escala de reacción del Ejemplo 8 y sustituyendo H-d-Glu (OBn) -OH como material de partida, la reacción con fosgeno por 1.25 horas a 50°C proporcionó 75.53 g (Rendimiento = 95.6%) de NCA d-Glu(OBn) como un sólido cristalino, incoloro. RMN 1H (CDC13) : idéntico al Ejemplo 8.
Ejemplo 10 mPEG12K-j -Poli- (d-Glu(OBn) 5- co-Glu (OBn) 5) -Jt>-Poli (Tyr (OBn)3o-co-d-Pheio) -Ac . m-PEG12k-NH2 , (119.7 g, 10.0 mmol) se pesó en un matraz de fondo redondo de 2L, secado en horno, se disolvió en tolueno (1 L) , y se secó por destilación azeotrópica. Después de la destilación a sequedad, el polímero se dejó bajo vacío por tres horas. El matraz subsecuentemente se rellenó con N2, se vació nuevamente bajo presión reducida, y N-metilpirrolidona seca (NMP) (1100 mL) se introdujo por cánula. La mezcla se calentó de forma breve a 40°C para facilitar la disolución y después se enfrió nuevamente a 25°C. Se agregaron NCA Glu(OBn) (13.16 g, 50.0 mmol) y NCA d-Glu(OBn) (13.16 g, 50.0 mmol) al matraz, y la mezcla de reacción se dejó agitar por 16 horas a temperatura ambiente bajo gas de nitrógeno. Después, se agregaron NCA d-Phe (19.12 g, 100 mmol) y NCA Tyr (OBn) (89.19 g, 300 mmol) y la solución se dejó agitar a 35°C por 48 horas punto en el cual la reacción se completó (GPC, DMF/0.1% de LiBr) . La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron anhídrido acético (10.21 g, 100 mmol, 9.45 mL) , N-metilmorfolina (NMM) (11.13 g, 110 mmol, 12.1 mL) y dimetilaminopiridina (DMAP) (1.22 g, 10.0 mmol). La agitación se continuó por 1 día a temperatura ambiente. El polímero se precipitó en éter dietílico (14 L) y se aisló por filtración, se lavó con porciones de 500 mL de éter dietílico fresco, y se secó in vacuo para dar el copolímero en bloque como un polvo casi incoloro, fino (214.7 g, Rendimiento = 92.3%). RMN XH (d6-DMS0) d 8.42-7.70 (teo. 50H, obs . 47H) , 7.30 (teo. 250H, obs. 253H) , 6.95 (teo. 120H, obs. 122H ), 5.10-4.85 (teo. 80H, obs . 80H) , 4.65-4.20 ((teo. 50H, obs . 56H) , 3.72-3.25 (teo. 1087H, obs . 1593H) , 3.05-2.45 (teo. 80H, obs. 83H) , 2.44-1.60 (teo. 40H, obs . 42H) .
Ejemplo 11 mPEG12K-jb-Poli- [d-Glu(OBn) 5- co-Glu (OBn) 5] -b- Poli (Tyr (OH) 3o-co-d-Pheio) -Ac . mPEG12K-£>-Poli- (d-Glu (OBn) 5-co- Glu (OBn) 5) -¿-Poli (Tyr (OBn) 3o-co-d-Pheio) -Ac del Ejemplo 10 (151.3 g, 6.5 mmol) y pentametilbenceno (86.1 g, 0.58 mol) se disolvieron en 1400 mL de ácido trifluoroacético (TFA) . La reacción rápidamente se agitó por seis horas a temperatura ambiente. El TFA se removió en un evaporador rotatorio con la temperatura del baño de agua que no excede 35 °C. La pasta dura resultante se disolvió en 800 mL de THF seco y el producto crudo se precipitó en 12 L de éter dietílico mientras se enfría a -30 °C. Lo sólido resultante se recolectó por filtración, se disolvió nuevamente en 500 mL de THF seco y reprecipitó en 3 L de éter dietílico. Un polímero esponjoso, inodoro, casi incoloro se obtuvo después del secado de producto durante la noche in vacuo (126.0 g, Rendimiento = 94.2 %) . RMN ¾ (de-DMSO) d 9.09 (teo. 30H, obs. 29.4H), 8.50-7.75 (teo. 50H, obs. 52.7H), 7.40-6.45 (teo. 220H, obs. 220H) , 5.04 (teo. 20H, obs . 17.5H), 4.70-4.20 (teo. 50H, obs. 54.5H), 3.91-3.05 (teo. 1087H, obs. 1391H) , 3.03-2.10 (teo. 80H, obs. 91H) , 2.09-1.50 (teo. 40H, obs. 46H) .
Ejemplo 12 mPEG12K-jb-Poli- [d-Glu (NHOH) 5 -co-Glu (NHOH) 5] -b-Poli ( yr (OH) 30 -co-d-Pheio) -Ac. mPEG12K-jb-Poli- [d-Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5] -¿-Poli (Tyr (OH) 30-co-d-Pheio) -Ac (113.3 g, 5.5 mmol) se disolvió en 1130 mL de THF seco y se trató con solución de hidroxilamina (50% acuoso, 2.20 mol, 146 mL) y 1,5,7-triazabiciclo [4. .0] dec-5-eno (TBD, 2.30 g, 16.5 mmol) . La solución ligeramente turbia resultante se agitó a 50 °C por 19 horas bajo N2, se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con 1130 mL de MeOH. El producto crudo se precipitó de 8 L de éter dietílico mientras se enfría a -30 °C. Lo sólido resultante se recolectó por filtración, se disolvió nuevamente en una mezcla de 250 mL de THF seco y 125 mL de acetona, se trató con ácido acético (4.72 g, 79 mmol, 4.5 mL) , se calentó a reflujo por cinco minutos, y después se dejó agitar a temperatura ambiente por 1.5 horas. El producto se precipitó por adición de 2 L de éter dietílico, se recolectó por filtración por succión, se lavó con porciones de éter dietílico fresco, y se secó durante la noche in vacuo para proporcionar 106.3 g (Rendimiento = 97.5 %) de polímero espumoso, casi incoloro. RMN ? (de-DMSO d 9.12 (teo. 30H, obs. 30H) , 8.80-7.75 (teo. 50H, obs . 38.4H), 7.15 (teo. 50H, obs. 50H) , 6.80 (teo. 120H, obs. 120H) , 4.65-4.05 (teo. 50H, obs. 50.4H), 3.80-3.15 (teo. 1087H, obs. 1360H) , 3.00-2.20 (teo. 80H, obs. 79H) , 2.15-1.60 (teo. 40H, obs. 40H) .
Ejemplo 13 mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (OBn) 5 -co-Glu (OBn) 5) - -Poli (d-Leu5-co-Asp (OtBu) io-co-Tyr (OBn) 25) -Ac . Usando el protocolo general detallado en el Ejemplo 10 y sustituyendo los materiales de partida de NCA apropiados se proporcionó un polímero crudo que se precipitó con 12 volúmenes de éter dietílico, después se precipitó nuevamente el diclorometano/éter dietílico : 1 , 12. Después de la filtración y secado in vacuo, el compuesto del título (Rendimiento 93.9%) se obtuvo como un sólido inodoro, incoloro, fino.
Ejemplo 14 mPEG12K-J -Poli- (d-Glu (OBn) 5 -co-Glu (OBn) 5) -J -Poli (d-Leus-co-Asp (OH) io-co-Tyr (OH) 25) -Ac . Usando el método del Ejemplo 11 y sustituyendo mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5) -J -Poli (d-Leu5-co-Asp (OtBu) 10-co-Tyr (OBn) 25) -Ac como material de partida, la reacción por tres horas, 15 minutos a temperatura ambiente proporcionó el producto del título (Rendimiento = 97.0%) como un polímero esponjoso, incoloro, inodoro .
Ejemplo 15 mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (NHOH) 5 -co-Glu ( HOH) 5) -b-Poli (d-Leu5-co-Asp(OH)io-co-Tyr(OH)25) -Ac . mPEG12K-£>-Poli - (d-Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5) -b-Poli (d-Leu5 -co-Asp (OH) 10-co-Tyr (OH) 25) -Ac (20.81 g, 1.0 mmol) se disolvió en 210 mL de THF y se trató con solución de hidroxilamina (50% acuoso, 0.80 mol, 53.0 mL) y 1 , 5 , 7 -triazabiciclo [4.4.0] dec-5-eno (TBD, 0.84 g, 6.0 mmol). La solución ligeramente turbia resultante se agitó a 50°C por 17 horas bajo N2 , se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con 210 mL de MeOH. El producto crudo se precipitó con 1 L de éter dietílico, se filtró, se lavó con porciones de éter dietílico fresco, y se secó durante la noche in vacuo (Rendimiento = 93.3%, sal de hidroxilamina) como un polímero incoloro, fino.
E emplo mPEG12K-J -Poli- (d-Glu (OBn) 5 -co-Glu (OBn) 5) -±>-Poli (d-Leu3o-co-Asp (OtBu) io) -Ac . Usando el protocolo general detallado en el Ejemplo 10 y sustituyendo los materiales de partida de NCA apropiados se proporcionó un polímero crudo que se precipitó con 30 volúmenes de éter dietílico/heptano : 6 , 1 , después se precipitó nuevamente de diclorometano/éter dietílico : 1 , 20. Después de la filtración y secado in vacuo, el compuesto del título (Rendimiento = 90 . 7 % ) se obtuvo como un sólido cremoso incoloro, inodoro.
Ejemplo 17 mPEG12K-b-Poli- (d-Glu (OBn) 5 -co-Glu (OBn) 5) -b-Poli (d-Leu3o-co-Asp (OH) io) -Ac . Usando el método del Ejemplo 11, sustituyendo mPEG12K-jb-Poli- (d-Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5) -b- Poli (d-Leu3o -co-Asp (OtBu) io) -Ac como material de partida y omitiendo PMB, la reacción por dos horas a temperatura ambiente proporcionó el producto del título (Rendimiento = 97.4%) como un polímero esponjoso, incoloro.
Ejemplo 18 mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (NHOH) 5 -co-Glu (NHOH) 5) -b-Poli (d-Leu3o-co-Asp (OH) io) -Ac . Usando el método del Ejemplo 12 y sustituyendo mPEG12K-jb-Poli - (d-Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5) -b-Poli (d-Leu3o -co-Asp (OH) io) -Ac como material de partida, la reacción por 17 horas a 50°C proporcionó el producto del título (Rendimiento = 96.4%, sal de hidroxilamina) como un polímero incoloro, fino.
Ejemplo 19 mPEG12K-Jb-Poli- (Glu(OBn) i0) -ib-Poli (d-Phe20-co- Tyr (OBz) 20) -Ac . Usando el protocolo general detallado en el Ejemplo 10 y sustituyendo los materiales de partida de NCA. apropiados se proporcionó un polímero crudo que se precipitó con 9 volúmenes de éter dietílico, después se precipitó nuevamente de diclorometano/éter dietílico:l, 14. Después de la filtración y secado in vacuo, el compuesto del título (Rendimiento = 89%) se obtuvo como un sólido cremoso incoloro, inodoro.
Ejemplo 20 mPEG12K-i -Poli- (Glu (OBn) io) -J -Poli (d-Phe2o-co-Tyr2o) - Ac . Usando el método del Ejemplo 11, sustituyendo mPEG12K-¿>- Poli- (Glu(OBn) 10) -b-Poli (d-Phe2o -co-Tyr (OBz) 20) -Ac como material de partida y haciéndolo reaccionar por cuatro horas a temperatura ambiente se proporcionó el producto del título (Rendimiento = 87%) como un polímero esponjoso, incoloro.
Ejemplo 21 mPEG12K-J -Poli- (Glu( HOH) 10) -¿-Poli (d-Phe2o-co-Tyr2o)-Ac. Usando el método del Ejemplo 12 y sustituyendo mPEG12K-j -Poli- (Glu (OBn) 10) -jb-Poli (d-Phe2o-co-Tyr2o) -Ac como material de partida, la reacción por 17 horas a 50 °C proporcionó el producto del título (Rendimiento = 94%, sal de hidroxilamina) como un polímero incoloro, fino.
Ejemplo 22 1. Tolueno, 60*C mPEG12K-6-Poli-(d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5)-t»-Poli (Tyr(OBn)3o-co-d-Pheio)-Ac Síntesis de mPEG12K-J -Poli- (d-Glu (OBn) s-co- Glu(OBn) 5) -Jb-Poli (Tyr (OBn) 30-co-d-Pheio) -Ac . m-PEG10k- NH2 (119.7 g, 10.0 mmol, Ejemplo 3) se pesó en un matraz de fondo redondo de 2L, secado en horno, se disolvió en tolueno (1 L) , y se secó por destilación azeotrópica. Después de la destilación a sequedad, el polímero se dejó bajo vacío por tres horas. El matraz subsecuentemente se rellenó con N2, se vació nuevamente bajo presión reducida, y se introdujo N-metilpirrolidona seca (NMP) (1100 mL) por cánula. La mezcla se calentó de forma breve a 40°C para facilitar la disolución y después se enfrió nuevamente a 25°C. Se agregaron NCA Glu(OBn) (13.16 g, 50.0 mmol) y NCA d-Glu(OBn) (13.16 g, 50.0 mmol) al matraz, y la mezcla de reacción se dejó agitar por 16 horas a temperatura ambiente bajo gas de nitrógeno. Después, se agregaron NCA d-Phe (19.12 g, 100 mmol) y NCA Tyr (OBn) (89.19 g, 300 mmol) y la solución se dejó agitar a 35 °C por 48 horas punto en el cual la reacción se completó (GPC, DMF/0.1% de LiBr) . La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron anhídrido acético (10.21 g, 100 mmol, 9.45 mL) , N-metilmorfolina (NMM) (11.13 g, 110 mmol, 12.1 mL) y dimetilaminopiridina (DMAP) (1.22 g, 10.0 mmol). La agitación se continuó por 1 día a temperatura ambiente. El polímero se precipitó en éter dietílico (14 L) y se aisló por filtración, se lavó con porciones de 500 mL de éter dietílico fresco, y se secó in vacuo para dar el copolímero en bloque como un polvo casi incoloro, fino (214.7 g, Rendimiento = 92.3%). RMN ¾ (de-DMS0) d 8.42-7.70 (teo. 50H, obs . 47H) , 7.30 (teo. 250H, obs. 253H) , 6.95 (teo. 120H, obs. 122H ), 5.10-4.85 (teo. 80H, obs . 80H) , 4.65-4.20 ((teo. 50H, obs. 56H) , 3.72-3.25 (teo. 1087H, obs. 1593H) , 3.05-2.45 (teo. 80H, obs. 83H) , 2.44-1.60 (teo. 40H, obs. 42H) .
Ejemplo 23 mPEG12K-í)-Poli-[d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5]-->Poli-(Tyr(OH)3o-co-d-Pheio)-Ac Síntesis de mPEG12K-J -Poli- [d-Glu (OBn) 5 -co- Glu(OBn)5] -b-Poli- (Tyr (OH)30-co-d-Pheio) -Ac. mPEG12K-j -Poli- [d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5] -¿-Poli- (Tyr (OBn) 3o-co-d-Pheio) -Ac (151.3 g, 6.5 mmol) y pentametilbenceno (86.1 g, 0.58 mol) se disolvieron en 1400 mL de ácido trifluoroacético (TFA) . La reacción rápidamente se agitó por seis horas a temperatura ambiente. La TFA se removió en un evaporador rotatorio con la temperatura del baño de agua que no excede 35 °C. La pasta dura resultante se disolvió en 800 mL de THF seco y el producto crudo se precipitó en 12 L de éter dietílico mientras se enfría a -30 °C. Lo sólido resultante se recolectó por filtración, se disolvió nuevamente en 500 mL de THF seco y se precipitó nuevamente en 3 L de éter dietílico. Un polímero esponjoso, inodoro, casi incoloro se obtuvo después del secado de producto durante la noche in vacuo (126.0 g, Rendimiento = 94.2 %) . RM ¾ (d6-DMSO) d 9.09 (teo. 30H, obs. 29.4H), 8.50-7.75 (teo. 50H, obs . 52. H) , 7.40-6.45 (teo. 220H, obs. 220H) , 5.04 (teo. 20H, obs. 17.5H), 4.70-4.20 (teo. 50H, obs. 54.5H), 3.91-3.05 (teo. 1087H, obs. 1391H) , 3.03-2.10 (teo. 80H, obs. 91H) , 2.09-1.50 (teo. 40H, obs. 46H) .
Ej emplo 24 Síntesis de mPEG12K-J -Poli- [d-Glu (NHOH) 5-co- Glu(NHOH)5] -J -Poli- (Tyr (OH) 30-co-d-Pheio) -Ac . mPEG12K-jb-Poli- [d-Glu(OBn) 5-co-Glu(OBn) 5] -Jb-Poli - (Tyr (OH) 30-co-d-Pheio) -Ac (113.3 g, 5.5 mmol) se disolvió en 1130 mL de THF seco y se trató con solución de hidroxilamina (50% acuoso, 2.20 mol, 146 mL) y 1 , 5 , 7-triazabiciclo [4.4.0] dec-5-eno (TBD, 2.30 g, 16.5 mmol). La solución ligeramente turbia resultante se agitó a 50 °C por 19 horas bajo N2, se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con 1130 mL MeOH . El producto crudo se precipitó de 8 L de éter dietílico mientras se enfría a -30 °C. Lo sólido resultante se recolectó por filtración, se disolvió nuevamente en una mezcla de 250 mL de THF seco y 125 mL de acetona, se trató con ácido acético (4.72 g, 79 mmol, 4.5 mL) , se calentó a reflujo por cinco minutos, y después se dejó agitar a temperatura ambiente por 1.5 horas. El producto se precipitó por adición de 2 L de éter dietílico, se recolectó por filtración por succión, se lavó con porciones de éter dietílico fresco, y se secó durante la noche in vacuo para proporcionar 106.3 g (Rendimiento = 97.5 %) de polímero espumoso, casi incoloro. RMN 1H (d6-DMS0 d 9.12 (teo. 30H, obs. 30H) , 8.80-7.75 (teo. 50H, obs . 38.4H), 7.15 (teo. 50H, obs. 50H) , 6.80 (teo. 120H, obs. 120H) , 4.65-4.05 (teo. 50H, obs. 50.4H) , 3.80-3.15 (teo. 1087H, obs. 1360H) , 3.00-2.20 (teo. 80H, obs. 79H) , 2.15-1.60 (teo. 40H, obs. 40H) .
Ejemplo 25 mPEG12K- >Pol¡-(Asp(OtBu)io-->Poli-(Tyr(OBn)2o-co-d-Glu(OBn)2o-Ac Síntesis de mPEG12K-J -Poli- (Asp (OtBu) ío-b-Poli- ÍTyr (OBn) 20 -co-d-Glu (OBn) 20-Ac . Usando el protocolo detallado en el Ejemplo 22, reemplazando el solvente NMP con diclorometano : DMF : 10 , 1, y sustituyendo los materiales de partida de NCA apropiados, se preparó el compuesto del título (Rendimiento = 93.9%) como un sólido inodoro, incoloro, fino. RMN !H (de-DMSO) d 8.42-7.85 (teo. 50H, obs . 51H) , 7.30 (teo. 200H, obs.l98H), 6.98 (teo. 80H, obs. 72H ), 5.15-4.85 (teo. 80H, obs. 80H) , 4.68-4.20 (teo. 50H, obs. 46H) , 3.72-3.25 (teo. 1087H, obs. 1415H) , 3.05-1.50 (teo. 120H, obs. 114H) , 1.35 (teo. 90H, obs. 76H) . em lo TFA. peiitametilbeiicerio P BK TA mPEG12K-/>Pol¡-(Asp(OH)io-/>Pol¡-(Tyr(OH)2o-co-d-Glu(OBn)2o-Ac Síntesis de mPEG12K-i»-Poli - (Asp (OH) io -£>-Poli- (Tyr (OH) 2o-co-d-Glu (OBn) 20-Ac . Usando el método del Ejemplo 23 y sustituyendo mPEG12K-¿-Poli- (Asp (OtBu) lo-b-Poli- (Tyr(OBn)2o-co-d- Glu (OBn) 20-Ac como material de partida, la reacción por tres horas, 15 minutos a temperatura ambiente y precipitación de una mezcla de diclorometano, éter dietílico:l,8.5 proporcionó el producto del título (Rendimiento = 98.9%) como un polímero fino, incoloro, inodoro. RMN ¾ (ds-DMSO) d 12.38 (teo. 10H, obs. 9H) , 9.13 (teo. 20H, obs . 17H) , 8.40-7.80 (teo. 50H, obs. 43H) , 7.32 (teo. 100H, obs. 82H) , 6.80 (teo. 80H, obs. 83H) , 5.04 (teo. 40H, obs. 34.2H), 4.60- 4.20 (teo. 50H, obs. 55H) , 3.80-3.20 (teo. 1087H, obs. 1100H) , 2.95-1.45 (teo. 140H, obs. 154.6H) Ejemplo 27 mPEG12K-¿»-Poli-(Asp(OH)io-t>-Poli-(Tyr(OH)2o-co-d-Glu(NHOH)2o-Ac Síntesis de mPEG12K-J -Poli- (Asp (OH) io-J -Poli- (Tyr (OH) 2o-co-d-Glu (NHOH) 2o-Ac . mPEG12K-jb-Poli- (Asp (OH) io-b- Poli- (Tyr (OH) 2o-co-d-Glu (OBn) 20-Ac (20.81 g, 1.0 mmol) se disolvió en 210 mL de THF y se trató con solución de hidroxilamina (50% acuoso, 0.80 mol, 53.0 mL) y 1,5,7-triazabiciclo [4.4.0] dec-5-eno (TBD, 0.84 g, 6.0 mmol). La solución ligeramente turbia resultante se agitó a 50 °C por 17 horas bajo N2, se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con 210 mL de MeOH. El producto crudo se precipitó con 1 L de éter dietílico, se filtró, se lavó con porciones de éter dietílico fresco, y se secó durante la noche in vacuo para proporcionar 19.68 g (Rendimiento = 98.5 %) de polímero incoloro, esponjoso como la sal de hidroxilamina. Una porción de la sal de hidroxi lamina (10.0 g) se disolvió en 1 L de 30% de alcohol de terc-butílico/agua, se trató con carbonato de amonio (3.33 g) , y se liofilizó para proporcionar la forma salina del ácido carboxílico nativo (rendimiento cuantitativo) como un sólido incoloro, inodoro, esponjoso. RM ¾ (ds-DMSO, sal de hidroxi lamina) d 9.08 (teo. 20H, obs. 10H) , 6.80 (teo. 80H, obs . 80H) , 4.60-4.02 (teo. 50H, obs. 54.7H) , 3.80-3.15 (teo. 1087H, obs. 1211H) , 2.90 (teo. 40 H, obs. 45H) , 2.80-1.50 (teo. 100H, obs. 120H) . El espectro mostró restos de solvente que afecta la integración la región campo arriba.
Ejemplo 28 V 270 mPEG12K-/>Poli-(d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5)->Poli(d-Leu5-co-Asp(OtBu)io-co-Tyr(OBn)25)-Ac Síntesis de mPEG12K-J -Poli- (d-Glu (OBn) 5-co- Glu (OBn) 5) -jb-Poli (d-Leus -co-Asp (OtBu) io-co-Tyr (OBn) 25) -Ac .
Usando el protocolo general detallado en el Ejemplo 22 y sustituyendo los materiales de partida de NCA apropiados se proporcionó un polímero crudo que se precipitó con 12 volúmenes de éter dietílico, después se precipitó nuevamente de diclorometano/éter dietílico:l, 12. Después de la filtración y secado in vacuo, el compuesto del título (Rendimiento = 89.2%) se obtuvo como un sólido inodoro, incoloro, fino. RMN ¾ (de-DMSO) d 8.52-7.75 (teo. 50H, obs. 49H) , 7.35 (teo. 175H, obs. 198H) , 7.11 (teo. 50 H, obs. 49H) , 6.80 (teo. 50H, obs. 50H) , 5.10-4.75 (teo. 70 H, obs. 75H) , 4.70-4.15 (teo. 50H, obs. 56H) , 3.72-3.25 (teo. 1087H, obs. 1580H) , 3.05-1.65 (teo. 110H, obs. 144H) , 1.58-0.55 (teo. 135H, obs. 155H) .
Ejemplo 29 mPEG12K-d-Pol¡-(d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5)-b-Pol¡(d-Leu5-co-Asp(OH)io-co-Tyr(OH)25)-Ac Síntesis de mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (OBn) 5 -co- Glu(OBn)5) -ib-Poli (d-Leu5-co-Asp (OH) 10-co-Tyr (OH) 25 ) -Ac . Usando el método del Ejemplo 23 y sustituyendo mPEG12K-jb-Poli- (d- Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5) --b-Poli (d-Leu5 -co-Asp (OtBu) 10-co- Tyr (OBn) 25) -Ac como material de partida, la reacción por tres horas, 15 minutos a temperatura ambiente y precipitaciones de una mezcla de diclorometano, éter dietílico:l,24 seguido por diclorometano, éter dietílico:l, 12 proporcionó el producto del título (Rendimiento = 97.0%) como un polímero esponjoso, incoloro, inodoro. RMN ¾ (de-OMSO) ) d 9.4-8.5 (teo. 35H, obs. 34H) , 8.40-7.75 (teo. 50H, obs. 61H) , 7.35-7.15 (teo. 50H, Obs. 43H) , 6.98 (teo. 50 H, obs. 49H) , 6 . 60 (teo. 50H, obs. 50H ), 5.04 (teo. 20H, obs. 18H) , 4.65-4.10 (teo. 50H, obs. 58H) , 3.80-3.20 (teo. 1087H, obs. 1367H, contiene pico de H20 enmascarado) , 3.00-2.15 (teo. 90H, obs. 95H) , 2.05-1.70 (teo. 20H, obs. 26H ) , 1. 63-0.57 (teo. 45 H , obs. 45H) .
Ejemplo 30 mPEG12K-/>Poli-(d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5)-/>Poli(d-Leu5-co-Asp(OH)io-co-Tyr(OH)25)-Ac Síntesis de mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (OBn) 5 -co- Glu(OBn)s) -ib-Poli (d-Leu5-co-Asp (OH) io-co-Tyr (OH) 25) -Ac . Usando el método del Ejemplo 27 y sustituyendo mPEG12K-jb-Poli- (d-Glu(OBn) 5 -co-Glu(OBn)5) -j -Poli(d-Leu5-co-Asp(OH)io-co-Tyr(OH)25) -Ac como material de partida, la reacción por 12 horas a 50°C proporcionó el producto del título (Rendimiento = 93.3%, sal de hidroxilamina) como un polímero incoloro, fino. RMN ¾ (<½-??30) d 9.4-8.5 (teo. 35H, obs . 34H) , 8.60-7.75 (teo. 50H, obs. 43H) , 7.2-6.85 (teo. 50H, obs. 55H) , 6.60 (teo. 50 H, obs. 50H) , 4.60-4.00 (teo. 50H, obs . 41H) , 3.80-3.00 (teo. 1087H, obs. 1174H, contiene pico de H20 enmascarado) , 3.00-1.65 (teo. 110H, obs. 124H) , 1.63-0.57 (teo. 45 H, obs. 40H) .
Ejemplo 31 mPEG12K-/>Poli-(d-Glu(OBn)s-co-Glu(OBn)s)-->Poli(d-Leu30-co-Asp(OtBu)io)-Ac Síntesis de mPEG12K-J -Poli- (d-Glu (OBn) 5 -co-Glu (OBn) 5) -ib-Poli (d-Leu30 -co-Asp (OtBu) 10) -Ac . Usando el protocolo general detallado en el Ejemplo 22 y sustituyendo los materiales de partida de NCA apropiados se proporcionó un polímero crudo que se precipitó con 30 volúmenes de éter dietílico/heptano : 6, 1, después se precipitó nuevamente de diclorometano/éter dietílicorl, 20. Después de la filtración y secado in vacuo, el compuesto del título (Rendimiento = 90.7%) se obtuvo como un sólido cremoso incoloro, inodoro. RMN ¾ (d4_MeOH) d 7.31 (teo. 50H, obs . 66H) , 5.04 (teo. 20H, obs. 20H) , 4.45-3.97 (teo. 50H, obs. 37H) , 3.95-3.25 (teo. 1087H, obs. 1876H) , 3.05-0.80 (teo. 420H, obs. 313H) .
Ejemplo 32 mPEG12K-¿>Poli-(d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5)-í>Poli(d-Leu5-co-Asp(OH)io-co-Tyr(OH)25)-Ac Síntesis de mPEG12K-b-Poli - (d-Glu (NHOH) - o- Glu( HOH)5) -J -Poli (d-Leu5-co-Asp (OH) io-co-Tyr (OH) 25) -Ac . Usando el método del Ejemplo 27 y sustituyendo mPEG12K-jb-Poli- (d-Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5) -j -Poli (d-Leu5 -co-Asp (OH) 10-co-Tyr (OH) 25) -Ac como material de partida, la reacción por 12 horas a 50 °C proporcionó el producto del título (Rendimiento = 93.3%, sal de hidroxilamina) como un polímero incoloro, fino. RM ¾ (de-DMSO) d 9.4-8.5 (teo. 35H, obs . 34H) , 8.60-7.75 (teo. 50H, obs. 43H) , 7.2-6.85 (teo. 50H, obs. 55H) , 6.60 (teo. 50 H, obs. 50H) , 4.60-4.00 (teo. 50H, obs. 41H) , 3.80-3.00 (teo. 1087H, obs. 1174H, contiene pico de H20 enmascarado), 3.00-1.65 (teo. 110H, obs. 124H) , 1.63-0.57 (teo. 45 H, obs. 40H) .
Ejemplo 33 mPEG12K-/>Pol¡-(d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5)-- Poli(d-Leu30-co-Asp(OH)io)-Ac Síntesis de mPEG12K-J -Poli- (d-Glu (OBn) 5-co- Glu (OBn) 5) -b-Poli (d-Leu3o -co-Asp (OH) 10) -Ac . Usando el método del Ejemplo 23, sustituyendo mPEG12K-jb-Poli- (d-Glu (OBn) s-co-Glu (OBn) 5) -¿-Poli (d-Leu30-co-Asp (OtBu) io) -Ac como material de partida y omitiendo P B, la reacción por dos horas a temperatura ambiente y precipitación de diclorometano, éter dietílico:l, 13 proporcionó el producto del título (Rendimiento = 97.4%) como un polímero esponjoso, incoloro. RMN XH (d4_MeOH) d 7.31 (teo. 50H, obs . 61H) , 5.04 (teo. 20H, obs. 20H) , 4.45-3.97 (teo. 50H, obs. 29H) , 3.95-3.25 (teo. 1087H, obs. 1542H) , 3.05-0.80 (teo. 330H, obs. 258H) .
Ejemplo 34 mPEG12K-b-Poli-(d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5)-->Poli(d-Leu30-co-Asp(OH)io)-Ac Síntesis de mPEG12K-jb-Poli- (d-Glu (NHOH) 5-co- Glu ( HOH) 5) -¿-Poli (d-Leu3o-co-Asp (OH) io) -Ac . Usando el método del Ejemplo 27 y sustituyendo mPEG12K-jb-Poli- (d-Glu (OBn) 5-co- Glu(OBn)5) -b-Poli(d-Leu3o-co-Asp(OH) io) -Ac como material de partida, la reacción por 17 horas a 50°C proporcionó el producto del título (Rendimiento 96.4%, sal de hidroxi lamina ) como un polímero incoloro, fino. RMN iH (d6-DMSO) d 8.8-7.2 (teo. 70H, obs . 67H) , 4.55-3.85 (teo. 50H, obs . 50H) , 3.80-3.30 (teo. 1087H, obs. 1520H) , 3.29-2.60 (teo. 60H, obs . 80 H) , 2.42-0.70 (teo. 270H, obs. 278H) .
Ejemplo 35 mPEG12K-í Poli-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5]-- Poli-(Tyr(OH)3o-co-d-Pheio)-Ac Síntesis de mPEG12K-j -Poli- [d-Glu (NHOH) 5-co Glu(NHOH)5] -h-Poli- (Tyr (OH) 3o-co-d-Phei0) -Ac. mPEG12K-r-Poli [d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5] -J -Poli- (Tyr (OH) 30-co-d-Pheio) -Ac (30.86 g, 1.50 mmol) se disolvió en 310 mL de THF seco y se trató con solución de hidroxi lamina (50% acuoso, 0.60 mol, 39.7 mL) y 1 , 5 , 7 - 1ri a zabi c ic lo [4.4.0] dec-5-eno (TBD, 626.4 mg , 4.5 mmol) . La solución ligeramente turbia resultante se agitó a temperatura ambiente por 69 horas bajo N2 y se diluyó con 310 mL de MeOH . El producto crudo se precipitó de 3 L de éter dietílico mientras se enfría a -30 °C. Lo sólido resultante se recolectó por filtración, se disolvió nuevamente en una mezcla de 150 mL de THF seco y 100 mL de acetona, se trató con ácido acético (1.26 g, 21.0 mmol, 1.2 mL) y después se dejó agitar a temperatura ambiente por 2 horas. El producto se precipitó por adición de 1.5 L de éter dietílico, se recolectó por filtración por succión, se lavó con porciones de éter dietílico fresco, y se secó durante la noche in vacuo para proporcionar 29.41 g (Rendimiento = 98.9 %) de polímero espumoso, casi incoloro. RMN XH (de-DMSO) : idéntico al Ejemplo 24.
Ejemplo 36 mPEG12K-/ Poli-(d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5)-ti-Poli-(Tyr(OBn)25-co-cl-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5) -i-Poli- (Tyr (OBn) 25-co-d-Phei5) -Ac . Usando el protocolo detallado en el Ejemplo 24 y sustituyendo los materiales de partida de NCA apropiados se proporcionó un polímero crudo que se precipitó con 10 volúmenes de éter dietílico. Después de la filtración y secado in vacuo, el compuesto del título (Rendimiento = 83.6%) se obtuvo como un sólido inodoro, incoloro, fino. RMN ? (d6-DMSO) d 8.42-7.80 (teo. 50H, obs. 43H) , 7.42-6.68 (teo. 350H, obs . 350H) , 5.10-4.80 (teo. 70H, obs. 73H) , 4.65-4.20 (teo. 50H, obs. 50H) , 3.75-3.25 (teo. 1087H, obs. 1755H) , 3.01-2.30 (teo. 80H, obs. 85H) , 2.02-1.60 (teo. 40H, obs. 38H) .
Ejemplo 37 mPEG12K-b-Pol¡-[d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5]-->Poli-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-Jb-Poli- [d-Glu (OBn) 5-co- Glu (OBn) 5] -J -Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac . Usando el método del Ejemplo 23 y sustituyendo mPEG12K-£>-Poli- [d-Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5] -¿-Poli- (Tyr (OBn) 25-co-d-Phei5) -Ac como material de partida, la reacción por 5.25 horas a temperatura ambiente proporcionó el producto del título (Rendimiento = 99.3%) como un polímero fino, incoloro, inodoro. RMN :H (d6-DMSO) d 9.09 (teo. 25H, obs. 22H) , 8.40-7.75 (teo. 50H, obs . 49H) , 7.40-6.50 (teo. 225H, obs. 225H) , 5.04 (teo. 20H, obs. 21H) , 4.65-4.20 (teo. 50H, obs. 54H) , 3.81-3.20 (teo. 1087H, obs. 1613H) , 3.05-2.10 (teo. 80H, obs. 90H) , 2.05-1.63 (teo. 40H, obs. 38H) .
Ejemplo 38 mPEG12K-0-Poli-[d-Glu(NHOH)s-co-Glu(NHOH)5]-b-Poli-(Tyr(OH)25-co-d-Phe15)-Ac Síntesis de mPEG12K-J -Poli- [d-Glu (NHOH) 5 -co- Glu(NHOH)5] -J -Poli- (Tyr (OH) 2s -co-d-Phei5) -Ac . mPEG12K-jb-Poli - [d-Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5] -Jb-Poli- (Tyr (OH) 25 -co-d-Phei5) -Ac (51.23 g, 2.50 mmol) se disolvió en 515 mL de THF seco y se trató con solución de hidroxilamina (50% acuoso, 1.00 mol, 66.3 mL, 40 equi . /Porción de éster Bn) y 1 , 5 , 7 -triazabiciclo [4.4.0] dec-5-eno (TBD, 1.044 g, 7.5 mmol, 0.3 equiv.). La solución ligeramente turbia resultante se agitó a temperatura ambiente por 108 horas bajo N2 y se diluyó con 515 mL de IPA. El producto crudo se precipitó de 6 L de éter dietílico. Lo sólido resultante se recolectó por filtración, se disolvió nuevamente en una mezcla de 300 mL de THF seco y 200 mL de acetona, se trató con ácido acético (2.25 g, 37.5 mmol, 2.15 mL) , y después se dejó agitar a temperatura ambiente por 2.5 horas. El producto se precipitó por adición de 3 L de éter dietílico, se recolectó por filtración por succión, se lavó con porciones de éter dietílico fresco, y se secó durante la noche in vacuo para proporcionar 45.16 g (Rendimiento = 91.5 %) del compuesto del título como un polímero espumoso, casi incoloro con un ligero olor de ácido acético. RMN 1H (d6-DMS0) d 9.35-8.85 (teo. 45H, obs . 28H) , 8.42-7.75 (teo. 50H, obs . 37H) , 7.37-6.46 (teo. 175H, obs. 164H) , 4.65-4.00 (teo. 50H, obs. 50H) , 3.82-3.07 (teo. 1087H, obs. 1708H, contiene pico de H20 enmascarado), 3.05-2.20 (teo. 80H, obs. 84H) , 2.18-1.63 (teo. 40H, obs. 68H, contiene restos de HOAc) .
Ejemplo 39 mPEG12K-íPoli-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5]-b-Pol¡-(Tyr(OH)25-co-cl-Phe15)-Ac Síntesis de mPEG12K-Jb-Poli- [d-Glu ( HOH) s-co- Glu ( HOH) 5 ] --b-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Pheis) -Ac . Usando el método del Ejemplo 38 e incrementando la concentración de hidroxilamina (80 equiv. /Ester Bn) , la reacción por 65 horas a temperatura ambiente y desarrollo como anteriormente, proporcionó el producto del título (Rendimiento = 87.8%) como un polímero incoloro, fino con un ligero olor a ácido acético. RMN ¾ (de-DMSO) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 40 mPEG12K-/>Poli-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5]-d-Poli-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-j -Poli- [d-Glu ( HOH) -co- Glu (NHOH) 5] -¿-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac . Usando el método del Ejemplo 39 y sustitución de TBD con 2-hidroxipiridina (0.3 equiv.), la reacción por 137 horas a temperatura ambiente y desarrollo como anteriormente, proporcionó el producto del título (Rendimiento = 91.2%) como un polímero incoloro, fino con un ligero olor de ácido acético. RMN 1H (de-DMSO) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 41 mPEG12K-b-Poli-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5]-->Poli-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-Jb-Poli- [d-Glu ( HOH) 5 -co- Glu ( HOH) 5] --b-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac . Usando el método del Ejemplo 38 y sustitución de TBD con 2-hidroxipiridina (0.3 equiv.), la reacción a 50°C por 24.5 horas y desarrollo como anteriormente, proporcionó el producto del título (Rendimiento = 91.2%) como un polímero incoloro, fino con un ligero olor de ácido acético. RMN ? (d6-DMS0) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 42 mPEG12K-/>Pol¡-(d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5)-í)-Pol¡-(Tyr(OBn)25-co-cl-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-Jb-Poli - (d-Glu (OBn) 5 -co-Glu (OBn) 5) -J -Poli- (Tyr (OBn) 25-co-d-Phei5) -Ac . Usando el protocolo detallado en el Ejemplo 36 y sustituyendo los materiales de partida de NCA apropiados se proporcionó un polímero crudo que se precipitó con 5 volúmenes de isopropanol. Después de la filtración y secado in vacuo, el compuesto del título (Rendimiento = 84.2%) se obtuvo como un sólido inodoro, incoloro, fino. RMN ?? (d6-DMSO) : idéntico al Ejemplo 36.
Ejemplo 43 mPEG12 -/ Pol¡-[d-Glu(OBn)s-co-Glu(OBn)5]-í Poli-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-i -Poli- [d-Glu (OBn) s -co-Glu (OBn) 5] -¿-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Pheis) -Ac . Usando el método del Ejemplo 37, la reacción de mPEG12K-jb-Poli- [d-Glu (OBn) s-co-Glu (OBn) 5] -Jb-Poli- (Tyr (OBn) 25-co-d-Phei5) -Ac con PMB en TFA por cuatro horas a temperatura ambiente y precipitación de una mezcla de clorobutano, TBME:1,3 proporcionó el producto del título (Rendimiento = 93.1%) como un polímero fino, incoloro, inodoro. RMN K (d6-DMSO) : idéntico al Ejemplo 37.
Ejemplo 44 mPEG12K-¿-Poli-[d-Glu(NHOH)s-co-Glu(NHOH)s]-- Pol¡-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-b-Poli- [d-Glu (NHOH) 5-co- Glu( HOH)5l -¿-Poli- (Tyr (OH) 25 -co-d-Pheis) -Ac . mPEG12K-b-Poli-[d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5] -Jb-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac (4.10 g, 0.20 mmol) se disolvió en 41 mL de THF seco y se trató con solución de hidroxilamina (50% acuoso, 40.0 mmol, 2.65 mL, 20 equiv . /Porción de éster Bn) y monohidrato hidróxido de litio (84.0 mg, 2.0 mmol, 1.0 equiv. /Porción de éster Bn) . La solución amarillo pálido claro resultante se agitó a temperatura ambiente por 22 horas bajo N2 y se diluyó con 41 mL de IPA. El producto crudo se precipitó de 160 mL de TBME con agitación rápida. Lo sólido resultante se recolectó por filtración, se secó in vacuo, y se disolvió nuevamente en una mezcla de 24 mL de THF seco y 16 mL de acetona. La solución se trató con ácido acético (0.18 g, 3.00 mmol, 0.17 mL) , brevemente se calentó a reflujo, y se dejó agitar a temperatura ambiente por 15 horas. El producto se precipitó por adición de volúmenes de TBME, se recolectó por filtración por succión, se lavó con porciones nuevas de TBME, y se secó durante la noche in vacuo para proporcionar 3.62 g (Rendimiento = 91.7%) del compuesto del título como un polímero espumoso, casi incoloro. RMN ¾ (d6-DMSO) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 45 mPEG12K-/>Poli-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5]-- Pol¡-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-i-Poli- [d-Glu ( HOH) 5-co- Glu (NHOH) 5] -ib-Poli- (Tyr (OH) 25 -co-d-Pheis) -Ac . Usando el método descrito anteriormente en el Ejemplo 44, mPEG12K-jb-Poli- [d- Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5] -jb-Poli- (Tyr (OH) 25 -co-d-Phei5) -Ac se convirtió al compuesto del título usando monohidrato hidróxido de litio (2.0 equiv. /Porción de éster Bn) . El tiempo de reacción fue 18 horas. El producto crudo se precipitó de 16 volúmenes de IPA y lo sólido resultante se trató con THF, acetona, y ácido acético como se detalla en el Ejemplo 44. Después de la precipitación de dos volúmenes de TBME, filtración, y secado in vacuo, el compuesto del título (Rendimiento = 96.2%) se obtuvo como un sólido fino, incoloro. RMN XH (d6-DMS0) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 46 mPEG12K-/>Poli-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5]-¿>Poli-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-2?-Poli - [d-Gl (NHOH) 5-co- Glu(NHOH)5] -ib-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Pheis) -Ac . mPEG12K-£>-Poli- [d-Glu(OBn) B-co-Glu(OBn) 5] -ib-Poli- (Tyr (OH) 25 -co-d-Phei5) -Ac (2.05 g, 0.10 mmol) se disolvió en 21 mL de metanol y se trató con solución de hidroxilamina (50% acuoso, 20.0 mmol, 1.32 mL, 20 equiv. /Porción de éster Bn) y solución de hidróxido de litio 1M (1.0 mL, 1.0 mmol, 1.0 equiv. /Porción de éster Bn) . La solución amarilla pálida resultante se agitó a temperatura ambiente por 22 horas bajo 2 y después se agregó una porción adicional de solución de hidróxido de litio 1M (1.0 mL, 1.0 mmol, 1.0 equiv. /Porción de éster Bn) . Después de unas 24 horas adicionales, el producto crudo se precipitó de 160 mL de TBME. Lo sólido resultante se recolectó por filtración, se secó in vacuo, y se disolvió nuevamente en una mezcla de 12 mL de THF seco y 8 mL de acetona. La solución se trató con ácido acético (0.21 g, 3.50 mmol, 0.20 mL) , brevemente se calentó a reflujo, y se dejó agitar a temperatura ambiente por 16 horas. El producto se precipitó por adición de 40 mL de TBME, se recolectó por filtración por succión, se lavó con porciones nuevas de TBME, y se secó durante la noche in vacuo para proporcionar 1.87 g (Rendimiento = 94.9%) del compuesto del título como un polímero espumoso, casi incoloro. RMN XH (d6-DMS0) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 47 mPEG12K-fa-Pol¡-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5]-¿>-Poli-(Tyr(OH)2s-co-d-PheiS)-Ac Síntesis de mPEG12K-Jb-Poli- [d-Glu (NHOH) 5-co- Glu (NHOH) 5] -J -Poli- (Tyr (OH) 2s-co-d-Phei5) -Ac . Usando el método descrito anteriormente en el Ejemplo 44, mPEG12K-j -Poli - [d- Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5] -Jb-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac se convirtió al compuesto del título usando solución de hidróxido de litio (0.5 equi . /Porción de éster Bn) . El tiempo de reacción fue 72 horas. La solución se diluyó con un volumen de IPA, y el producto crudo se precipitó de dos volúmenes de TBME . Lo sólido resultante se trató con THF, acetona, y ácido acético como se detalla en el Ejemplo 44.
Después de la precipitación de dos volúmenes de TBME, filtración, y secado in vacuo, el compuesto del título (Rendimiento = 91.1%) se obtuvo como un sólido fino, incoloro. RIVL ?? (d6-DMS0) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 48 mPEG12K-¿>Poli-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5]-b-Poli-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-b-Poli- [d-Glu (NHOH) 5 -co-Glu( HOH)5] -J -Poli- (Tyr(OH)25-co-d-Phei5) -Ac. Usando el método descrito anteriormente en el Ejemplo 47, mPEG12K-jb-Poli- [d-Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5] -¿-Poli- (Tyr (OH) 25 -co-d-Phei5) -Ac se convirtió al compuesto del título usando solución de hidróxido de potasio 1M (2.0 equiv . /Porción de éster Bn) . El tiempo de reacción fue 6 horas. El desarrollo proporcionó el compuesto del título (Rendimiento = 92 . 4% ) como un sólido fino, incoloro. RMN XH (d6-DMSO) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 49 mPEG12 -í>Poli-(d-Glu(OBn)3.5-co-Glu(OBn)3.5)-í>Pol¡ (Tyr(OBn)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-Jb-Poli- (d-Glu (OBn) 3 · 5 -co- Glu(OBn) 3.5) -Jb-Poli (Tyr (OBn) 25 -co-d-Pheis) -Ac . m-PEG10k-NH2 , ( 59.86 g, 5.0 mmol) se pesó en un matraz de fondo redondo de 1L, secado en horno, se disolvió en tolueno (450 mL) , y se secó por destilación azeotrópica. Después de la destilación a sequedad, el polímero se dejó bajo vacío por 16 horas. El matraz subsecuentemente se rellenó con N2, se vació nuevamente bajo presión reducida, y se introdujeron N- metilpirrolidona seca (NMP, 250 mL) y después diclorometano ( 250 mL) por cánula. La mezcla se calentó de forma breve a 40°C para facilitar la disolución y después se enfrió nuevamente a 25°C. Se agregaron NCA Glu(OBn) (4.61 g, 17.5 mmol) y NCA d-Glu(OBn) (4.61 g, 17.5 mmol) al matraz, y la mezcla de reacción se dejó agitar por 24 horas a temperatura ambiente bajo gas de nitrógeno. Después, se agregaron NCA d-Phe (14.34 g, 75.0 mmol) y NCA Tyr (OBn) (37.16 g, 125.0 mmol) y la solución se dejó agitar a temperatura ambiente por tres días y después se calentó a 35 °C por 7 horas punto en el cual la reacción se completó (GPC, DMF/0.1% de LiBr) . La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron anhídrido acético (5.11 g, 50.0 mmol, 4.80 mL) , N-metilmorfolina (NMM) (5.56 g, 55.0 mmol, 6.1 mL) y dimetilaminopiridina (DMAP) (0.61 g, 5.0 mmol). La agitación se continuó por 18 horas a temperatura ambiente y el diclorometano se removió en el evaporador rotatorio. El polímero se precipitó en isopropanol (2.6 L) y se aisló por filtración, se lavó con porciones de 500 mL de isopropanol fresco, y se secó in vacuo para dar el copolímero en bloque como un polvo casi incoloro, fino (102.40 g, Rendimiento = 92.6%). RMN ¾ (d6-DMSO) d 8.42-7.80 (teo. 47H, obs . 44H) , 7.35 (teo. 75H, obs. 75H) , 7.28-6.65 (teo. 125H, obs. 125H) , 5.10-4.84 (teo. 64H, obs. 59H) , 4.64-4.20 (teo. 47H, obs. 39H) , 3.72-3.25 (teo. 1087H, obs. 16713H) , 3.00-2.20 (teo. 80H, obs. 88H) , 2.03-1.60 (teo. 28H, obs. 27H) .
Ejemplo 50 mPEG12K-¿>Poli-(d-Glu(OBn)3.5-co-Glu(OBn)3.5)-->Pol¡ (Tyr(OBn)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (OBn) 3.5 -co- Glu (OBn) 3.5) -J -Poli (Tyr (OBn) 25-co-d-Pheis) -Ac . Usando el protocolo detallado en el Ejemplo 49 con N-metilpirrolidona seca (NMP, 125 mL) y diclorometano (375 mL) como solventes proporcionó un polímero crudo que se precipitó con 5 volúmenes de isopropanol . Después de la filtración y secado in vacuo, el compuesto del titulo (Rendimiento = 96.5%) se obtuvo como un sólido inodoro, incoloro, fino. RMN ¾ (d6-DMSO) : idéntico al Ejemplo 49.
Ejemplo 51 mPEG12K-->Pol¡-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5]-/ Pol¡-(Tyr(OH)25-co-cl-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-jb-Poli- [d-Glu ( HOH) s-co- Glu(NHOH)5] -¿-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Pheis) -Ac . mPEG12K-jb-Poli- [d-Glu(0Bn)5-co-Glu(0Bn)5] -Jb-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac (4.10 g, 0.20 mmol) se disolvió en 41 mL de THF y se trató con solución de hidroxilamina (2.65 mL, 40.0 mmol) y hidróxido de potasio 1M (2.0 mL, 2.0 mmol, 1.0 equi . /Porción de éster Bn) . La solución rosa ligeramente turbia resultante se agitó a temperatura ambiente por 42 horas bajo 2 y después se diluyó con acetona (58.1 g, 1.0 mol, 74 mL) . Se agregó ácido acético (2.40 g, 40.0 mmol, 2.3 mL) , la solución se calentó de forma breve a reflujo, y después se agitó a temperatura ambiente por cuatro horas . El producto se precipitó con TBME (300 mL) usando agitación vigorosa. Después de la agitación adicional por 30 minutos, la filtración y secado in vacuo proporcionó el compuesto del título (Rendimiento = 92.9%) como un sólido fino, incoloro. RM E (de-DMSO) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 52 mPEG12K-í>Poli-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5]-f -Pol¡-(Tyr(OH)25-co-cl-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-J -Poli- [d-Glu( HOH) s-co- Glu(NHOH) 5] -J -Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Pheis) -Ac . Usando el método descrito anteriormente en el Ejemplo 51, mPEG12K-jb-Poli - [d- Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5] -Jb-Poli- (Tyr (OH) 2s -co-d-Phei5) -Ac se convirtió al compuesto del título usando solución de hidróxido de litio 1 (2.0 equi . /Porción de éster Bn) . El tiempo de reacción fue 6 horas. Desarrollo como anteriormente y dilución con IPA (1 volumen) seguido por precipitación con TBME (3 volúmenes) proporcionó el compuesto del título (Rendimiento = 90.6%) como un sólido fino, incoloro. RMN 1H (d6-DMSO) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 53 mPEG12K-->Pol¡-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5]-/>Pol¡-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-b-Poli- [d-Glu (NHOH) 5-co- Glu ( HOH) 5] -i?-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Pheis) -Ac Usando el método descrito anteriormente en el Ejemplo 52, mPEG12K-j -Poli - [d- Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5] -ib-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac se convirtió al compuesto del' título usando sólido monohidrato hidróxido de litio (2.0 equiv. /Porción de éster Bn) . El tiempo de reacción fue 6 horas. Desarrollo proporcionó el compuesto del título (Rendimiento = 99.2%) como un sólido fino, incoloro. RM ?? (d6-DMS0) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 54 mPEG12K-b-Poli-[d-Glu(OBn)3.5-co-Glu(OBn)3.5]-b-Pol¡-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-jfc>-Poli- [d-Glu (OBn) 3.5-co- Glu(OBn) 3.5] -i-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac. Usando el método del Ejemplo 37, la reacción de mPEG12K-£»-Poli - [d-Glu (OBn) 3.5-co-Glu (OBn) 3.5] -¿-Poli- (Tyr (OBn) 25-co-d-Phei5) -Ac con PMB en TFA por 3.5 horas a temperatura ambiente y precipitación de una mezcla de diclorometano, TBME:1,7 proporcionó el producto del título (Rendimiento = 96.1%) como un polímero fino, incoloro, inodoro. RMN ? (d6-DMSO) d 9.09 (teo. 25H, obs . 22H) , 8.46-7.79 (teo. 47H, obs. 48H) , 7.40-6.45 (teo. 210H, obs. 229H) , 5.04 (teo. 14H, obs. 13H) , 4.65-4.20 (teo. 47H, obs. 47H) , 3.81-3.15 (teo. 1087H, obs. 1308H) , 3.03-2.10 (teo. 80H, obs. 78H) , 2.06-1.62 (teo. 40H, obs. 27H) .
Ejemplo 55 mPEG12K-b-Poli-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5]-- Poli-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-b-Poli- [d-Glu (NHOH) s-co- Glu (NHOH) 5] -ib-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac . Usando el método descrito anteriormente en el Ejemplo 51, mPEG12K-jb-Poli- [d-Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5] -¿-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac se convirtió al compuesto del título usando solución de hidróxido de sodio 4M (2.0 equiv . /Porción de éster Bn) . El tiempo de reacción fue 4 horas. La solución se diluyó con acetona (0.30 volúmenes en base al volumen de mezcla de reacción total) y se agregó ácido acético (1.0 equiv. /hidroxilamina) . Después de 14 horas, el producto crudo se precipitó de tres volúmenes de TBME, se agitó por tres días, y se filtró. La torta filtrada se lavó con TBME (50 mL) , TBME, IPA:20,1 (50 mL) y se secó in vacuo para proporcionar el compuesto del título (Rendimiento = 93.5%) como un sólido fino, incoloro con un ligero olor de ácido acético. RMN XK (d6-DMSO) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 56 mPEG12K-ó-Pol¡-[d-Glu(NHOH)3.5-co-Glu(NHOH)3.5]-->Pol¡-(Tyr(OH)„5-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-j -Poli- [d-Glu (NHOH) 3.5-co- Glu(NHOH)3.s] -Jb-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac. Usando el método descrito anteriormente en el Ejemplo 52, mPEG12K-jb- Poli - [d-Glu(OBn) 3.5-co-Glu(OBn) 3.5] -jb-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac se convirtió al compuesto del título usando sólido tnonohidrato hidróxido de litio (2.0 equiv. /Porción de éster Bn) . El tiempo de reacción fue 6 horas. El desarrollo proporcionó el compuesto del título (Rendimiento = 94.9%) como un sólido fino, incoloro con un ligero olor de ácido acético. RMN ¾ (de-DSO) d 10.2-9.2 (teo. 25H, obs. 19H) , 8.52-7.90 (teo. 47H, obs. 38H), 7.40-6.49 (teo. 175H, obs. 175H) , 4.63-4.00 (teo. 47H, obs. 42H) , 3.84-3.11 (teo. 1087H, obs. 1496H, contiene pico de ¾0 enmascarado), 3.00-2.20 (teo. 80H, obs. 78H) , 2.16-1.60 (teo. 28H, obs. ~26H, contiene traslape De pico HOAc a d 1.69) .
Ejemplo 57 mPEG12K-ó-Poli-[d-Glu(NHOH)3.5-co-Glu(NHOH)3.5]-/>Poli-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-¿>-Poli- [d-Glu ( HOH) 3 Glu(NHOH)3.5] -b-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac. Usando método descrito anteriormente en el Ejemplo 52, mPEG12K-£>-Poli- [d-Glu(OBn) 3.5-co-Glu(OBn) 3.5] -ib-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac se convirtió al compuesto del título usando solución de hidróxido de sodio 10M (2.0 equiv. /Porción de éster Bn) . El tiempo de reacción fue 3 horas. El desarrollo proporcionó el compuesto del título (Rendimiento = 85.8%) como un sólido fino, incoloro con un ligero olor de ácido acético. RM H (d6-DMS0) : idéntico al Ejemplo 56.
Ejemplo 58 mPEG12K- Poli-(d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5)- Poli(d-Phei5-co-Asp(OtBu)5-co-Tyr(OBn)2o)-Ac Síntesis de mPEG12K-Jt>-Poli- (d-Glu (OBn) 5 -co- Glu (OBn) 5) -J -Poli (d-Pheis -co-Asp (OtBu) 5-co-Tyr (OBn) 20) -Ac .
Usando el método detallado en el Ejemplo 49 con diclorometano anhidro (2 partes) y ?,?-dimetilacetamida (DMAC, 1 parte) como solventes y sustituyendo los bloques de construcción de NCA. apropiados proporcionó un polímero crudo que se precipitó con 5 volúmenes de isopropanol. Después de la filtración y secado in vacuo, el compuesto del título (Rendimiento = 95.4%) se obtuvo como un sólido inodoro, incoloro, fino. RMN ¾ (de-DMSO) d 8.57-7.75 (teo. 50H, obs. 47H) , 7.41-6.67 (teo. 305 H, obs . 305H) , 5.10-4.85 (teo. 60 H, obs . 59H) , 4.70-4.18 (teo. 50H, obs . 49H) , 3.72-3.25 (teo. 1087H, obs. 1131H) , 3.05-2.20 (teo. 80H, obs. 100H) , 2.05-1.58 (teo. 40H, obs. 25H) , 1.38-1.20 (teo. 45H, obs. 40H) .
Ejemplo 59 mPEG12K-/>Pol¡-(d-Glu(OBn)5-c^Glu(OBn)5)-b-Poli(d-Leui5-co-Asp(OtBu)5-co-Tyr(OBn)2o)-Ac mPEG12K-b-Poli- (d-Glu (OBn) 5 -co-Glu (OBn) 5) -b-Poli- (d- Leuis-co-Asp (OtBu) 5-co-Tyr (OBn) 2o) -Ac . Usando el método detallado en el Ejemplo 58 y sustituyendo los bloques de construcción de NCA apropiados proporcionó un polímero crudo que se precipitó con 5 volúmenes de isopropanol. Después de la filtración y secado in vacuo, el compuesto del título (Rendimiento = 95.5%) se obtuvo como un sólido inodoro, incoloro, fino. RM (d6-DMSO) d 8.45-7.78 (teo. 50H, obs. 47H) , 7.45-6.67 (teo. 230H, obs. 230H) , 5.10-4.80 (teo. 60 H, obs. 59H) , 4.65-4.00 (teo. 50H, obs. 52H) , 3.70-3.25 (teo. 1087H, obs. 1196H) , 3.05-2.55 (teo. 40H, obs. 41H) , 2.48-2.30 (teo. 40H, obs. 33H) , 2.05-1.71 (teo. 40H, obs. 25H) , 1.69- 1.02 (teo. 60H, obs. T5?) , 0.95-0.55 (teo. 90H, obs. 83H) .
Ejemplo 60 mPEG12K-í>Poli-[d-Glu(NHOH)3.5-co-Glu(NHOH)3.5]- >Pol¡-(Tyr(OH)25-cc5-cl-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-±»-Poli- [d-Glu (NHOH) 3 . 5 -co- Glu (NHOH) 3.s] -ib-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phe15) -Ac. Usando el método descrito anteriormente en el Ejemplo 57, mPEG12K-jb-Poli- [d-Glu(OBn) 3 . 5-co-Glu(OBn) 3 . 5 ] -¿-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Pheis) -Ac se convirtió al compuesto del título usando solución de hidróxido de sodio 4M (2.0 equiv. /Porción de éster Bn) . El tiempo de reacción fue 16 horas. El desarrollo con tres veces el volumen normal de IPA seguido por precipitación con TBME proporcionó el compuesto del título (Rendimiento = 92.7%) como un sólido color crema pálido, fino con un ligero olor de ácido acético.
Ejemplo 61 mPEG12K- Poli-(d-Glu(OBn)6-co-Glu(OBn)5)-- Poli-(d-Tyr(OBn)2o-co-Tyr(OBn)2o)-Ac Síntesis de mPEG12K-Jb-Poli - (d-Glu (OBn) 5 Glu (OBn) 5) -Jb-Poli- (d-Tyr (OBn) 20-co-Tyr (OBn) 20) -Ac . Usando método de solvente de reacción mezclado detallado en el Ejemplo 58 y sustituyendo los bloques de construcción de NCA apropiados proporcionó un polímero crudo que se precipitó con 9 volúmenes de isopropanol . Después de la filtración y secado in vacuo, el compuesto del título (Rendimiento = 96.6%) se obtuvo como un sólido inodoro, incoloro, fino. RMN 1H {de-DMSO) d 8.44-7.80 (teo. 50H, obs . 47H) , 7.40-6.75 (teo. 410H, obs. 410H ), 5.11-4.84 (teo. 100H, obs. 94H) , 4.60-4.20 (teo. 50H, obs. 52H) , 3.70-3.25 (teo. 1087H, obs. 1605H) , 3.00-2.28 (teo. 80H, obs. 95H) , 2.03-1.60 (teo. 40H, obs. 31H) .
Ejemplo 62 mPEG12K-/>Poli-(d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5)--5-Poli(cl-Leui5-co-Asp(OH)5-co-Tyr(OH)2o)-Ac Síntesis de mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (OBn) 5 -co- Glu(OBn)5) -b-Poli- (d-Leul5 -co-Asp (OH) 5 -co-Tyr (OH) 20) -Ac .
Usando el método del Ejemplo 54, la reacción de mPEG12K-£>-Poli- (d-Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5) -ib-Poli- (d- Leui5-co-Asp (OtBu) 5-co-Tyr (OBn) 20) -Ac con PMB en TFA por 3.5 horas a temperatura ambiente y precipitación de una mezcla de diclorometano, TB E:1,6 proporcionó el producto del título (Rendimiento = 95.5%) como un polímero fino, incoloro, inodoro. RM 1H (d6-DMSO) d 9.15 (teo. 20H, obs . 18H) , 8.43-7.60 (teo. 50H, obs . 47H) , 7.40-6.45 (teo. 130H, obs. 130H) , 5.04 (teo. 20H, obs. 13H) , 4.65-4.00 (teo. 50H, obs. 48H) , 3.85-3.15 (teo. 1087H, obs. 1334H) , 3.01-2.10 (teo. 80H, obs. 80H) , 2.05-1.65 (teo. 40H, obs. 42H) , 1.63-0.55 (teo. 90H, obs. 75H) .
Ejemplo 63 mPEG12K- >Poli-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5]-- Pol¡-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-Jb-Poli- [d-Glu (NHOH) s-co- Glu( HOH)5] -ib-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac. Usando el método descrito anteriormente en el Ejemplo 47, mPEG12K-jb-Poli- [d- Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5] -Jb-Poli- (Tyr (OH) 25 -co-d-Phei5) -Ac se convirtió al compuesto del título usando hidróxido de potasio sólido (2.0 equiv. /Porción de éster Bn) disuelto previamente en la solución de hidroxi lamina. El tiempo de reacción fue 5.5 horas. El desarrollo proporcionó el compuesto del título (Rendimiento = 74.0%) como un sólido fino, incoloro con un ligero olor de ácido acético. RMN ¾ (d6-D SO) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 64 mPEG12K-->Poli-(d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5)-->Poli-(d-Tyr(OH)2o-co-Tyr(OH)2o)-Ac Síntesis de mPEG12K-jb-Poli - (d-Glu (OBn) 5-co- Glu(OBn)5) -ib-Poli- (d-Tyr (OH) 20-co-Tyr (OH) 2o) -Ac . Usando el método del Ejemplo 54, la reacción de mPEG12K-jb-Poli- (d- Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5) -ib-Poli- (d-Tyr (OBn) 20-co-Tyr (OBn) 20) -Ac con PMB en TFA por 4.5 horas a temperatura ambiente y precipitación de una mezcla de diclorometano, TBME:1,5 proporcionó el producto del título (Rendimiento = 97.7%) como un sólido inodoro, incoloro, fino. RMN ¾ (ds-DMSO) d 9.1 (teo. 40H, obs. 33H) , 8.36-7.77 (teo. 50H, obs. 52H), 7.40-6.45 (teo. 210H, obs. 234H) , 5.04 (teo. 20H, obs. 17H) , 4.60-4.20 (teo. 50H, obs. 50H) , 4.02-3.15 (teo. 1087H, obs. 1384H, contiene pico de agua oscurecido) , 3.00-2.10 (teo. 80H, Obs. 78H) , 2.06-1.62 (teo. 40H, obs . 39H) .
Ejemplo 65 mPEG12K->Pol¡-(d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5)-->Poli(d-Leui5-co-Asp(OH)5-co-Tyr(OH)2o)-Ac Síntesis de mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (NHOH) 5-co- Glu( HOH) s) -¿-Poli- (d-Leui5 -co-Asp (OH) s-co-Tyr (OH) 20) -Ac .
Usando el método descrito anteriormente en el Ejemplo 52, mPEG12K-Jb-Poli- (d-Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5) -b-Poli- (d-Leui5-co-Asp (OH) 5 -co-Tyr (OH) 20) -Ac se convirtió al compuesto del título usando monohidrato hidróxido de litio (2.0 equiv. /Porción de éster Bn) . El tienpo de reacción fue 15 horas. El desarrollo seguido por precipitación con IPA, TB E proporcionó el conpuesto del título (Rendimiento = cuantitativo) como un sólido fino, incoloro con un ligero olor de ácido acético. RMN ¾ (ds-D SO) d 10.2-9.0 (teo. 40H, obs. 31H) , 8.65-7.75 (teo. 50H, obs. 37H) , 7.27-6.50 (teo. 80H, obs. 80H) , 4.61-4.00 (teo. 50H, obs. 58H) , 3.90-3.15 (teo. 1087H, obs. 1356H) , 3.02-2.20 (teo. 80H, obs. 100H) , 2.40-1.70 (teo. 40H, obs. ~47H, contiene traslape De pico HOAc a d 1.69) , 1.63- 0.55 (teo. 105H, obs. 96H) .
Ejemplo 66 mPEG12K-í>Pol¡-(d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5)-6-Poli-(d-Tyr(OH)2o-co-Tyr(OH)20)-Ac Síntesis de mPEG12K-Jb-Poli - (d-Glu (NHOH) 5-co- Glu(NH0H)5) -J -Poli- (d-Tyr (OH) 20-co-Tyr (OH) 20) -Ac . Usando el método descrito anteriormente en el Ejemplo 52, mPEG12K-b- Poli- (d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5) -b-Poli- (d-Tyr (OH) 20-co- Tyr (OH) 2o) -Ac se convirtió al compuesto del título usando monohidrato hidróxido de litio (2.0 equiv. /Porción de éster Bn) . El tiempo de reacción fue 5.5 horas. El desarrollo seguido por precipitación con IPA, TBME proporcionó el compuesto del título (Rendimiento = 93.2%) como un sólido fino, incoloro con un ligero olor de ácido acético. RM ¾ (de-EMSO) d 9.55 (teo. 40H, obs. 26H) , 8.45-7.90 (teo. 50H, obs. 34H) , 7.37-6.51 (teo. 160H, obs. 166H) , 4.55-4.10 (teo. 50H, obs. 50H) , 3.80-3.20 (teo. 1087H, obs. 1269H, contiene pico de agua oscurecido), 3.00-2.20 (teo. 80H, obs. 108H) , 2.18-1.60 (teo. 40H, obs. 39H, contiene traslape de pico HOAc a d 1.69) .
Ejemplo 67 mPEG12K-/ Pol¡-[d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5]-->Pol¡-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-Jb-Poli - [d-Glu (OBn) 5-co- Glu(OBn) 5] -ib-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac. Usando el método del Ejemplo 43, la reacción de mPEG12K-jb-Poli- [d-Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5] -¿-Poli- (Tyr (OBn) 25-co-d-Phei5) -Ac con PMB en TFA por 3.5 horas a temperatura ambiente dio un producto crudo, el cual se disolvió en diclorometano (2 volúmenes) y después se precipitó de TBME (5 volúmenes) . La filtración y secado in vacuo proporcionó el producto del título (Rendimiento 93.1%) como un sólido inodoro, incoloro, fino. RMN 1H (d6-DMSO) : idéntico al Ejemplo 37.
Ejemplo 68 mPEG12K-/ Poli-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)s]-->Poli-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-b-Poli - [d-Glu ( HOH) 5-co- Glu(NHOH) 5] -ib-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac . mPEG12K-£>-Poli- [d-Glu(OBn) 5-co-Glu (OBn) 5] -¿-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac (38.94 g, 1.90 mmol) se disolvió en 390 mL de THF y se trató con solución de hidroxilamina (25.2 mL, 380.0 mmol) y solución de hidróxido de potasio 4M (9.5 mL, 38.0 mmol, 2.0 equiv. /Porción de éster Bn) . La solución amarilla pálido ligeramente turbia resultante se agitó a temperatura ambiente por 5.5 horas bajo 2 y después se diluyó con acetona (220.7 g, 3.8 mol, 280 mL) . Se agregó ácido acético (22.82 g, 380.0 mmol, 21.7 mL) , la solución se calentó de forma breve a reflujo, y después se agitó a temperatura ambiente por 18 horas. La solución se diluyó con 280 mL de acetona y el producto se precipitó por adición de TBME (5 L) y éter dietílico (1L) usando agitación mecánica vigorosa. Después del enfriamiento a -25°C y la agitación adicional por 30 minutos, filtración y secado in vacuo proporcionó el compuesto del título (35.98 g, Rendimiento = 87.3%) como un sólido fino, incoloro con un ligero olor de ácido acético. R N ¾ (de-DMSO) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 69 mPEGHK-b-Poli-(d-Glu(OBn)5-coGlu(OBn)5)-- Poli-(d-Phei5-co-Tyr(OBn)25)-Ac Síntesis de mPEGHK-i -Poli- (d-Glu (OBn) s-co- Glu (OBn) s) -ií-Poli- (d-Pheis-co-Tyr (OBn) 25) -Ac . Utilizando el diclorometano, método de co-solvente DMAC detallado en el Ejemplo 58 con m-PEGllk-NH2 ( 1 . 10 kg, 100 . 0 mmol) y los bloques de construcción de NCA apropiados proporcionó una solución de polímero crudo en DMAC que se precipitó con 8 volúmenes de isopropanol. Después de la filtración, el producto crudo se sometió a suspensión en 5 volúmenes de isopropanol por dos horas. Lo sólido resultante se filtró, se lavó con IPA/Et2Ü, Et2Ü fresco y después se secó en un horno a vacío durante la noche para proporcionar 2130 g (97.8% de rendimiento) de producto como un sólido casi incoloro, inodoro. ^-H-NMR (d6-DMS0) d 8.45-7.85 (teo. 50H, obs . 50H) , 7.45-6.60 (teo. 350H, obs. 350H) , 5.10-4.84 (teo. 70H, obs. 68H) , 4.65-4.20 (teo. 50H, obs. 48H) , 3.72-3.25 (teo. 1000H, obs. 112OH) , 3.05-2.55 (teo. 50H, obs. 49H) , 2.44-1.60 (teo. 70H, obs . 68H) .
Ejemplo 70 mPEG12K-t>-Pol¡-[d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)5]-->Poli-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-J -Poli- [d-Glu (OBn) 5 -co- Glu (OBn) 5] -b-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac . Usando el método del Ejemplo 37, la reacción de mPEG12K-jb-Poli- [d-Glu (OBn) 5- co-Glu (OBn) 5] -j -Poli- (Tyr (OBn) 25-co-d-Pheis) -Ac con PMB en TFA por tres horas a temperatura ambiente y precipitación de una mezcla de diclorometano, TBME:1, 5 proporcionó el producto del título (Rendimiento = 92.7%) como un polímero fino, incoloro, inodoro. RMN ¾ (d6-DMS0) idéntico al Ejemplo 37.
Ejemplo 71 mPEG12K-/>Poli-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5]-/>Poli-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-Jb-Poli- [d-Glu ( HOH) 5-co- Glu (NHOH) 5] -¿-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac . Usando el método descrito en el Ejemplo 52, mPEG12K-j -Poli- [d-Glu (OBn) 5-co-Glu (OBn) 5] -¿-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Pheis) -Ac se convirtió al compuesto del título usando solución de hidroxilamina (5 equiv. /porción de éster) y solución de hidróxido de potasio 4M (2.0 equiv. /Porción de éster Bn) . El tiempo de reacción fue 5.25 horas. El desarrollo de acetona/ácido acético, precipitación con IPA, TBME : 1 , 2 y trituración adicional de la torta filtrada con IPA, TBME : 1 , 2 y secado a vacío proporcionó el compuesto del título (Rendimiento = 89.9%) como un sólido color crema con un ligero olor de ácido acético. RMN ¾ (de-DMSO) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 72 mPEG12K-/>Poli-[d-Glu(NHOH)5-co-Glu(NHOH)5]-- Poli-(Tyr(OH)25-co-d-Phei5)-Ac Síntesis de mPEG12K-J -Poli- [d-Glu (NHOH) s-co- Glu (NHOH) 5] -¿-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Pheis) -Ac . Usando el método descrito en el Ejemplo 71, mPEG12K-j -Poli- [d-Glu (OBn) 5-co- Glu (OBn) 5] -¿-Poli- (Tyr (OH) 25-co-d-Pheis) -Ac se convirtió al compuesto del título usando solución de hidroxilamina (10 equiv. /porción de éster) y solución de hidróxido de potasio 4M (2.0 equiv . /Porción de éster Bn) . El tiempo de reacción fue 5.5 horas. El desarrollo de acetona/ácido acético, precipitación con IPA, TBME:1, 4 y secado a vacío proporcionó el compuesto del título (Rendimiento = 82.9%) como un sólido fino, incoloro con un ligero olor de ácido acético. RMN ? (de-DMSO) : idéntico al Ejemplo 38.
Ejemplo 73 mPEG12K-fc-Pol¡-(d-Glu(OBn)5-co-Glu(OBn)s)-- Poli (Tyr(OBn)io-co-d-Phe2o-co-Asp(oTbu)io-Ac Síntesis de mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (OBn) 5-co-Glu(OBn)s) -J -Poli (Tyr (OBn) io -co-d-Phe2o-co-Asp (oTbu) io-Ac. mPEG12K-NH2 preparado de la misma manera como en el Ejemplo 3, se pesó (30g, 2.5mmol) en un matraz de fondo redondo de 500 mL limpio y se disolvió completamente en tolueno y se secó por destilación azeotrópica. Se recolectó tolueno en un segundo matraz de fondo redondo de 500 mL enfriado con nitrógeno, por medio de un puente de cristal sencillo. Lo sólido resultante se dejó secar completamente por tres horas. A lo sólido seco recientemente destilado se agregó N-metilpirrolidina por medio de cánula y se transfirió a vacío. Esta mezcla se dejó disolver completamente antes de la adición de NCA. El NCA como se preparó del Ejemplo 8 y ejemplo 9 por lo tanto, se pesó en un matraz de fondo redondo de dos cuellos limpio NCA Glu(oBn) (2.87g) NCA d-Glu(oBn) (2.87g) y se vació durante una hora antes de que este sólido se disolviera completamente en NMP, y después se sometió a cánula en el matraz que contiene el PEG. Esta polimerización se agitó a temperatura ambiente y se monitoreo por GPC (DMF,.1% de LiBr) para asegurar la terminación (aproximadamente 16hrs) . Al término de la polimerización de este primer bloque de NCA, la segunda adición de NCA se realizó de la misma manera como la primera, y consiste de d-Phe (9.5g) del Ejemplo 7, Tyr(oBn) (7.4g) del Ejemplo 6, y Asp(otBu) (5.38g) del Ejemplo 5. Esto se dejó polimerizar a temperatura ambiente por dos horas y después se calentó a 35°C hasta el término (aproximadamente 24hrs) . Una vez confirmado por GPC, se agregó N-Metil -Morfolina (2.5 g, 2.7 mL, 25 mmol) , DMAP (.3 g, 2.5 mmol) , y anhídrido acético (2.5 g, 2.36mL, 25 mmol), a la solución de reacción se agitó durante la noche. Esta mezcla de reacción se vertió en un vaso de precipitado de dos litros con una barra agitadora magnética, y se agregó lentamente éter dietílico hasta que se observó un precipitado blanco. Este sólido se filtró y se lavó en una frita de cristal sinterizado de porosidad media. Este sólido se secó in vacuo, caracterizado con RMN 1H y GPC. (rendimiento = 74.8%, 40 gramos). RMN ¾ (d6-DMSO) d 8.42-7.70, 7.30, 6.95, 5.10-4.9, 4.65-4.20, 3.77-3.25, 3.05-2.45, 2.44-1.60, 1.38-1.22.
Ejemplo 74 Síntesis de mPEG12K-Jb-Poli - (d-Glu (OBn) 5-co- Glu (OBn) 5 ) -ib-Poli (Tyrio-co-d-Phe2o-co-Aspio-Ac . El co-polímero de tribloque protegido (Ejemplo 73) se pesó (30 g, 1.4 mmol) en un vaso de precipitado de 500 mL limpio y se disolvió en ácido trifluoroacético . Se agregó pentametilbenceno (4 g, 26.98 mmol) y se agitó con una barra agitadora magnética. La mezcla de reacción se agitó por dos horas y se monitoreo por MR para eliminación completa de los grupos protectores bencílicos en tirosina y grupo t-butilo en aspartato. Después del término de esta protección la solución se precipitó en éter dietílico frío. Este sólido después se filtró en una frita de cristal sinterizado mediano y se disolvió nuevamente en cloruro de metileno y nuevamente precipitó en éter frío y se filtró. Este sólido (24.7g, Rendimiento= 88.4%) se secó in vacuo y se caracterizó. RMN 2? (d6-DMS0) d 9.09, 8.50-7.75, 7.40-6.45, 5.03, 4.70-4.20, 3.91-3.05, 3.03-2.10, 2.09-1.50.
Ejemplo 75 Síntesis de mPEG12K-.b-Poli- (d-Glu (oBn) 5-co- Glu(oBn5) -j -Poli (Tyr (OBn) 10 -co-d-Leu2o-co-Asp (oTbu) 10-Ac . Usando el protocolo general del Ejemplo 73 y sustituyendo materiales de partida NCA apropiados, resultó en el polímero crudo, este se precipitó con éter dietílico aproximadamente 10 volúmenes. Después de la filtración y secado el compuesto del título (Rendimiento = 80.2%) se recolectó como un sólido incoloro. RM XH (de-DMSO) d 8.50-7.75, 7.40-6.6, 5.03, 4.70-4.20, 3.69-3.09, 3.03-2.10, 2.09-1.50, 1.43-1.25, 0.85-0.62.
Ejemplo 76 Síntesis de mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (oBn) 5 -co- Glu (oBn) 5--b-Poli (Tyr (OBn) io-co-d-Leu.2o-co-Asp (oTbu) 10) -Ac .
Treinta y cuatro gramos del polímero de tribloque protegido (Ejemplo 75) se pesó en un vaso de precipitado de 500 mL limpio y se disolvió en ácido trifluoroacético (500 mL) . A ésta solución (4 g, 27 mmol) se agregó pentametil -benceno y se agitó con una barra agitadora magnética. A los treinta minutos después de la adición de pentametil -benceno se observó un precipitado en solución. La mezcla de reacción se agitó por 2.5 horas y se monitoreo por NMR para eliminación completa de los grupos protectores bencílicos en tirosina y grupo t-butilo en aspartato. Después del término de esta protección, la solución se sometió a rotoevaporador hasta obtener una pasta espesa, se disolvió nuevamente en cloruro de metileno y después se precipitó en éter dietílico frío. Este sólido después se filtró en una frita de cristal sinterizado mediano y se disolvió nuevamente en cloruro de metileno y nuevamente precipitó en éter frío y se filtró. Este sólido se secó bajo vacío y se caracterizó. RMN 1? (?ß-DMSO) d 9.09, 8.50-7.75, 7.45-6.55, 5.03, 4.65-4.00, 3.69-3.09, 3.03-2.10, 2.09-1.50, 0.85-0.55.
Ejemplo 77 Síntesis de mPEG12K-J - (d-Glu ( HOH) 5 -co-Glu (NHOH) -b-Poli (Tyr (OH) io-co-d- Leu2o-co-Aspio) -Ac . Ester de tribloque (Ejemplo 76) se pesó (20 g, 0.96 mmol) en un en un matraz de fondo redondo de 500 mL limpio y se agregó 200 mL de tetrahidrofurano y se disolvió completamente. A ésta solución de treinta equivalentes de hidroxilamina (1.9 mL, 28 mmol) y 0.5 g de Catalizador TBD se agitó bajo nitrógeno a 50°C durante la noche. El término se verificó por RMN ?. Ésta solución se mezcló con 100 mL metanol y precipitó con éter dietílico (aproximadamente 7 volúmenes) . Este sólido blanco se recolectó por filtración y se lavó con éter dietílico fresco. Lo sólido recolectado después se disolvió en acetona y una cantidad catalítica de ácido acético se dejó agitar durante la noche. La solución se vertió en un vaso de precipitado limpio de dos litros y se agregó éter dietílico lentamente a la solución con la agitación. RMN i-H (de-DMSO) d 9.4-8.6, 8.51-7.77, 7.44-7.57, 6.96, 6.56, 4.52-4.00, 3.75-3.29, 3.03-2.45, 2.08-1.21, 0.95-0.57.
Ejemplo 78 Síntesis de mPEG12K-J - (d-Glu (OBn) 5 -co-Glu (OBn) 5) -b- Poli (Tyr (OBn) 3o-co-d-Pheio) -Ac . El primer bloque del copolímero se preparó usando la misma escala y procedimiento como en el Ejemplo 73. Al término de este primer bloque de NCA una segunda adición de NCA de NCA d-Phe (4.78 g, 25 mmol) preparado de la misma manera como en el Ejemplo 7, y de NCA Tyr(oBn) (22.29 g, 75 mmol) del procedimiento en el Ejemplo 6. Ésta solución se dejó polimerizar a temperatura ambiente por dos horas y después se calentó a 35°C hasta el término (aproximadamente 48hrs) . Una vez confirmado por GPC, se agregó N-Metil -Morfolina (2.5 g, 2.7 mL, 25 mmol), DMAP (.3 g, 2.5 mmol) , y Anhídrido acético (2.5 g, 2.36mL, 25 mmol) , a la solución de reacción se agitó durante la noche. Este polímero tapado se desarrolló de la misma manera como en el Ejemplo 73. ( rendimiento= 79.6%) aproximadamente 40 gramos. RMN ¾ (de-DMSO) d 8.46-7.72, 7.44-6.57, 5.10-4.80, 4.62-4.13, 3.74-3.23, 3.03-2.77, 2.62-2.21, 2.02-1.56 (impurezas del solvente) .
Ejemplo 79 Síntesis de mPEG12K-b-Poli- (d-Glu (oBn) s-co- Glu (oBn) 5-Jb-Poli (Tyr (OH) 30-co-d-Pheio) -Ac . El co-polímero de tribloque protegido (del Ejemplo 78) se pesó (34 g, 1.46 mmol) en un vaso de precipitado de 500 mL limpio y se disolvió en ácido trifluoroacético (500 mL) . A ésta solución (4 g, 27 mmol) se agregó pentametil-benceno y se agitó con una barra agitadora magnética. A los treinta minutos después de la adición de pentametil -benceno, se observó un precipitado en solución. La mezcla de reacción se agitó por 2.5 horas y se monitoreo por NMR para eliminación completa de los grupos protectores bencílicos en tirosina. Después del término de esta protección (3hrs) la solución se sometió a rotoevaporador hasta obtener una pasta espesa, se disolvió nuevamente en cloruro de metileno y después se precipitó en éter dietílico frío. Este sólido después se filtró en una frita de cristal sinterizado mediano y se disolvió nuevamente en cloruro de metileno y nuevamente precipitó en éter frío y se filtró. Este sólido se secó in vacuo y se caracterizó. RMN ¾ (de-DMSO) d 9.10, 8.38-7.77, 7.39-6.73, 6.59, 5.03, 4.64-3.79, 3.71-3.30, 2.98-2.56, 2.02-1.62.
Ejemplo 80 Síntesis de mPEG12K-J -Poli- (d-Glu (NHOH) 5 -co- Glu(NHOH) 5) -ib-Poli (Tyr (OH) 30-co-d-Pheio) -Ac . 20g de Ester de tribloque (Del Ejemplo 79) se pesó en un matraz de fondo redondo de 500 mL limpio y se agregó 200 mL de tetrahidrofurano y se disolvió completamente. A ésta solución de diez equivalentes de hidroxi lamina, y 1 , 5 , 7 - triazabiciclo [4.4.0] dec-5-eno (TBD, .5g, 3.5 mmol) se agitó bajo nitrógeno a temperatura ambiente. El término se verificó por RM ¾ (48Hrs) . Ésta solución se mezcló con 100 mL metanol y ésta solución se vertió en un vaso de precipitado limpio de dos litros. Éter de metiltercbutilo (aproximadamente 5 volúmenes) se agregó lentamente a la solución con agitación. Lo sólido blanco resultante después se recolectó en una frita mediana y se secó in vacuo. (17.34 g, Rendimiento = 90%) . RMN ¾ (d6-DMSO) d 9.10-8.65, 8.39-7.78, 7.28-6.75, 6.80, 6.59, 4.59-4.31, 3.75-3.13, 3.00-2.57, 2.16-1.57.
Ejemplo 81 Síntesis de mPEG12K-i)-Poli- (d-Glu (OBn) 1.5-co- Glu (OBn) 1.5 ) -Jb-Poli (Tyr (OBn) 25 -co-d- Pheis ) -Ac . mPEG12KNH2 preparado de la misma manera como en el Ejemplo 3 (25 g, 2.08 mm) se pesó en un matraz de fondo redondo, de dos cuellos de 1000 mL, secado en horno, limpio y se disolvió en tolueno (300mL) con calentamiento y se secó por destilación azeotrópica. Después de la destilación a sequedad, el polímero se dejó bajo vacío por tres horas. El matraz subsecuentemente se rellenó con 2, se vació nuevamente bajo presión reducida, y N-metilpirrolidona seca ( MP) (250 mL) se introdujo por cánula. La mezcla se calentó de forma breve a 40°C para facilitar la disolución y después se enfrió a 25°C. NCA Glu(OBn) (.82 g, 3.1 mmol) hecho de la misma manera como en el Ejemplo 8, y NCA d-Glu(OBn) (.82 g, 3.1 mmol) del Ejemplo 9, se agregaron al matraz directamente, y la mezcla de reacción se dejó agitar por 18 horas a temperatura ambiente bajo gas de nitrógeno. Después, NCA d-Phe (5.97 g, 31.25 mmol) del Ejemplo 7, y NCA Tyr(OBn) (15.49 g, 52.08 mmol) preparado del Ejemplo 6, y después se agregaron a la solución y se agitó por 2 horas, después se calentó a 35 °C por 48 horas punto en el cual la reacción se completó (GPC, DMF/0.1% de LiBr) . La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron anhídrido acético (2.04 g, 20 mmol, 1.88 mL) , N-metilmorfolina (NMM) (2.23 g, 22 mmol, 2.47 mL) y dimetilaminopiridina (DMAP) (.24 g, 2.0 mmol). La agitación se continuó por 1 día a temperatura ambiente. El polímero se precipitó en éter dietílico : heptano 10:1 (2.5 L) y se aisló por filtración, se lavó con porciones de 100 mL de éter dietílico fresco, y se secó in vacuo para dar el copolímero en bloque como un polvo blancuzco, fino (39.81 g, Rendimiento = 90.3%). RMN XH (de-DMSO) d 9.26-9.04, 8.36-7.75, 7.41-7.25, 6.97, 6.60, 5.04, 4.59-4.13, 3.81-3.13, 2.96-2.76, 2.75-2.57, 2.43-2.12, 2.00-1.45.
Ejemplo 82 Síntesis de mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (OBn) 15 -co- Glu (OBn) 15) -J -Poli (Tyr (OH) 25 -co-d-Pheis) -Ac . El polímero del Ejemplo 81 se desprotegió usando el método general del Ejemplo 74 solamente por ajuste de estequiometría . Una vez completa (3 hrs) la solución se sometió a rotoevaporador hasta obtener una pasta espesa y después se disolvió nuevamente en diclorometano y precipitó en éter dietílico frío, se recolectó por filtración y se secó in vacuo. Esta reacción proporcionó 22 g de material seco (Rendimiento = 76.92 %) . RMN XH (d6-DMSO) d 9.09, 8.50-7.75, 7.35-6.45, 5.04, 4.70-4.20, 3.91-3.05, 3.03-2.10, 2.09-1.50.
Ejemplo 83 mPEG12K-¿-Poli- (d-Glu(NHOH) i.5 -co-GluCNHOH) 1.5) -J -Poli (Tyr (OH) 25-co-d-Phei5) -Ac Síntesis de mPEG12K-b-Poli- (d-Glu( HOH)i.s-co-Glu(NHOH) 1.5) -Jb-Poli (Tyr (aH)25-co-d-Phei5) -Ac. El polímero del Ejemplo 82 (13.2g, 0.705 mmol) se disolvió completamente en 160 mL de THF con calentamiento, ésta solución se dejó enfriar a temperatura ambiente antes de agregar 1, 5, 7-triazabiciclo [4.4.0] dec-5-eno (TBD, 0.3g, 2.2mmol) seguido por hidroxilamina (50% solución de agua, 25mL, 378 mmol) ésta solución se agitó a temperatura ambiente por 24 horas. Se agregó metanol (80 mL) y después se precipitó con éter de metiltercbutilo, se recolectó por filtración, y se disolvió en acetona. Se agregó ácido acético a ésta solución de acetona y se agitó por 5 horas. La solución se evaporó hasta casi secarse, se disolvió nuevamente en cloruro de metileno y precipitó en MTBE, se recolectó por filtración y se secó in vacuo (12.1 g, Rendimiento= 92.8%) . RMN ¾ (d6-DMSO) d 9.11, 8.34-7.75, 7.37-7.05, 6.92, 6.58 4.60-4.32, 3.81-3.12, 2.99-2.57, 2.49-2.32, 2.10-1.73.
Ejemplo 84 ?. Tolueno, 6 °C A ze atropo 3 Hr 2. NMP, por medio de cánula 3. GkifoBn) NCA, tí-Glu(oBn) NCA 18hi«., T.A. 4. <J-Phe NCA, Tyr(o8n) NCA. 8hrs.. T.A. -> §¾ 5. NMM, OMAP, AcANH ?.?, , ?,?. mPEG12K-jb-Poli- (d-Glu (OBn) 2.5-co-Glu (OBn) 2 · s) -J -Poli Síntesis de mPEG12K-i -Poli- (d-Glu (OBn) 2.5-co- Glu (OBn) 2.5) -Jb-Poli (Tyr (OBn) 25 -co-d-Pheis) -Ac . mPEG12KNH2 preparado del mismo método como en el Ejemplo 3, (25 g, 2.08 mm) se pesó en un matraz de fondo redondo, de dos cuellos de 1000 mL, secado en horno, limpio y se disolvió en tolueno (300mL) con calentamiento y se secó por destilación azeotrópica. Después de la destilación a sequedad, el polímero se dejó bajo vacío por tres horas. El matraz subsecuentemente se rellenó con N2, se vació nuevamente bajo presión reducida, y N-metilpirrolidona seca (NMP) (250 mL) se introdujo por cánula. La mezcla se calentó de forma breve a 40°C para facilitar la disolución y después se enfrió a 25°C. NCA Glu (OBn) (1.37 g, 5.2 mmol) y NCA d-Glu(OBn) (1.37 g, 5.2 mmol) se agregaron al matraz, y la mezcla de reacción se dejó agitar por 18 horas a temperatura ambiente bajo gas de nitrógeno. Después del término del primer bloque de NCA, NCA d-Phe (5.97 g, 31.25 mmol) preparado de la misma manera como en el Ejemplo 79, y NCA Tyr (OBn) (15.49 g, 52.08 mmol) del Ejemplo 6, se agregaron y la solución se dejó agitar a temperatura ambiente por dos horas a 35 °C por 48 horas, punto en el cual la reacción se completó (GPC, DMF/0.1% de LiBr) . La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron anhídrido acético (2.04 g, 20 mmol, 1.88 mL) , N-metilmorfolina (NM ) (2.23 g, 22 mmol, 2.47 mL) y dimetilaminopiridina (DMAP) (.24 g, 2.0 mmol). La agitación se continuó por 1 día a temperatura ambiente. El polímero se precipitó en éter dietílico :heptano 10:1 (2.5 L) y se aisló por filtración, se lavó con porciones de 100 rtiL de éter dietílico fresco, y se secó in vacuo para dar el copolímero en bloque como un polvo blancuzco, fino (36 g, Rendimiento = 80 %) . RMN ¾ (de-IMSO) d 9.10 8.37-7.83, 7.39-7.21, 6.95, 6.56, 5.02, 4.61-4.34, 4.32-4.20, 3.71-3.25, 2.94-2.59, 2.40-2.10, 1.96-1.45.
Ejemplo 85 Síntesis de mPEG12K-Jb-Poli- (d-Glu (OBn) 2.5-co- Glu (OBn) 2.5) -ib-Poli (Tyr (OH) 25 -co-d-Pheis) -Ac . Usando el método general del Ejemplo 74 y ajustando la estequiometría , el polímero del Ejemplo 84 se desprotegió (32 g, 1.65 mmol) . Una vez completa (3 Hrs.) la solución se sometió a rotoevaporador hasta obtener una pasta espesa y después se disolvió nuevamente en DCM y precipitó en éter dietílico frío, se recolectó por filtración y se secó in vacuo. Esta reacción proporcionó 27g de material seco (94.2 %) . RMN ¾ (de-EMSO) d 9.09, 8.50-7.75, 7.35-6.45, 5.04, 4.70-4.20, 3.91-3.05, 3.03-2.10, 2.09-1.50.
Ejemplo 86 Síntesis de mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (NHOH) 2.5-co-Glu( HOH) 2.5) -J -Poli (Tyr (OH) 2.5-co-d-Phei5) -Ac . El polímero del Ejemplo 85 (20 g, 1 mmol) se disolvió completamente en 160 mL de THF con calentamiento, ésta solución se dejó enfriar a temperatura ambiente antes de agregar 1 , 5 , 7-triazabiciclo [4.4.0] dec-5-eno (TBD,.5 g, 3.6 mmol), seguido por hidroxilamina (50% solución de agua, 30mL, 545 mmol) ésta solución se agitó a temperatura ambiente por 24 horas. Se agregó metanol (80 mL) y después se precipitó con éter de metiltercbutilo, se recolectó por filtración, y se disolvió en acetona. Se agregó ácido acético a ésta solución de acetona y se agitó por 5 horas, después ésta solución se sometió a rotoevaporador hasta casi secarse, se disolvió nuevamente en cloruro de metileno y precipitó en MTBE, se recolectó por filtración y se secó in vacuo (18 g, Rendimiento= 91.7%). RMN XH (d6-DMS0) d 9.11, 8.34-7.75, 7.15, 6.80, 4.60-4.32, 3.81-3.12, 2.99-2.32, 1.93-1.83).
Ejemplo 87 1. Tolueno, eO°C Azeotropo 3His, 2. NMP, por medio de cánula 3. Glu(oBn) NCA, d-Glu(oBn) NCA 18 hr., .T.A 4. d-Phe NCA, TyifoBn) NCA, 48 hr., T.A -> 35°C 5. NMM, DMAP, AcANH O.N.. T.A.
Síntesis de mPEG12K -Jb -Pol i -( d- Glu ( OBn ) 3.5 - co- Glu(OBn) 3.5) -Jb-Poli (Tyr (OBn) 25 -co-d-Pheis) -Ac. mPEG12KNH2 preparado de la misma manera como en el Ejemplo 3 (25 g, 2.08 mm) se pesó en un matraz de fondo redondo, de dos cuellos de 1000 mL, secado en horno, limpio y se disolvió en tolueno ( 300mL) . Este polímero se preparó de la misma manera como en el Ejemplo 1. NCA Glu(OBn) (1.92 g, 7.3 mmol) del Ejemplo 8 y NCA d-Glu(OBn) (1.92 g, 7.3 mmol) del Ejemplo 9, se agregaron al matraz, y la mezcla de reacción se dejó agitar por 18 horas a temperatura ambiente bajo gas de nitrógeno. Después, se agregaron NCA d-Phe (5.97 g, 31.25 mmol) del Ejemplo 7 y NCA Tyr (OBn) (15.49 g, 52.08 mmol) preparado en la misma forma como en el Ejemplo 6, y la solución se dejó agitar a temperatura ambiente por 2 horas y después se calentó a 35 °C por 48 horas punto en el cual la reacción se completó (GPC, DMF/0.1% de LiBr) . La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron anhídrido acético (2.04 g, 20 mmol, 1.88 mL) , N-met ilmorfolina (NMM) (2.23 g, 22 mmol, 2.47 mL) y dimetilaminopiridina (DMAP) (.24 g, 2.0 mmol) . La agitación se continuó por 1 día a temperatura ambiente. El polímero se precipitó en éter diet í 1 i co : hept ano 10:1 (2.5 L) y se aisló por filtración, se lavó con porciones de 100 mL de éter dietílico fresco, y se secó in vacuo para dar el copolímero en bloque como un polvo casi incoloro, fino (37.0 g, Rendimiento = 80.6 %) . RMN ? (d6-DMS0) d 9.08 8.42-7.70, 7.29, 6.96, 6.58, 5.10-4.85, 4.65-4.20, 3.71-3.25, 2.94-2.59, 2.40-2.10, 1.97-1.50.
Ejemplo 88 Síntesis de mPEG12K-b-Poli- (d-Glu (OBn) 3.5 -co- Glu (OBn) 3.5) -J -Poli (Tyr (OH) 2.5 -co-d-Pheis) -Ac . El polímero del Ejemplo 87 se desprotegió usando el método general del Ejemplo 74 solamente por ajuste de estequiometría (32 g, 1.61 mmol) . Una vez completa (3 Hrs . ) la solución se sometió a rotoevaporador hasta obtener una pasta espesa y después se disolvió nuevamente en DCM y precipitó en éter dietílico frío, se recolectó por filtración y se secó in vacuo. Esta reacción proporcionó 23 g de material seco (80 %) . R N 1H (d6-DMSO) d 9.09, 8.50-7.75, 7.35-6.45, 5.04, 4.70-4.20, 3.91-3.05, 3.03-2.10, 2.09-1.50.
Ejemplo 89 Síntesis de mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (NHOH) 3.5-co-Glu(NHOH) 3.5) - -Poli (Tyr (OH) 25 -co-d-Pheis) -Ac . El polímero (20 g, 1 mmol) del Ejemplo 88 se disolvió completamente en 160mL de THF con calentamiento, ésta solución se dejó enfriar a temperatura ambiente antes de agregar 1, 5, 7 -triazabiciclo [4.4.0] dec-5-eno (TBD,.5 g, 3.6 mmol), seguido por hidroxilamina (50% solución de agua, 30mL, 545 mmol) ésta solución se agitó a temperatura ambiente por 24 horas. Se agregó metanol (80 mL) y después se precipitó con éter de metiltercbutilo, se recolectó por filtración, y se disolvió en acetona. Se agregó ácido acético a ésta solución de acetona y se agitó durante la noche. La solución se sometió a rotoevaporador hasta casi secarse, se disolvió nuevamente en cloruro de metileno y precipitó en MTBE, se recolectó por filtración y se secó in vacuo (18.1 g, Rendimiento= 92.9%). RM ¾ (d6-DMSO) d 9.11, 8.34-7.75, 7.15, 6.80, 4.60-4.32, 3.81-3.12, 2.99-2.32, 1.93-1.83.
Ejemplo 90 1. Tote no, 80°C Azeotrope 3Hrs. 2. HUP, por medio de cánula 3. Glu(oBn) NCA, d-Glu(oBn) NCA -|8hrs„T.A. 4. d~Phe NGA. Tyi<oBn) NCA, 48hr., .T.A.? 3S°C 5. NMM, DMAP, AcANH O.N., T.A.
Síntesis de mPEG12K-J -Poli- (d-Glu (OBn) s-co- Glu (OBn) 5) -b-Poli (Tyr (OBn) 25-co-d-Pheis) -Ac . mPEG12KNH2 preparado por el mismo método como en el Ejemplo 3, se pesó (25 g, 2.08 mm) en un matraz de fondo redondo de dos cuellos de 1000 mL secado en horno, limpio y se disolvió en tolueno (300mL) . Este polímero se preparó de la misma manera como en el Ejemplo 73. Después se agregaron NCA Glu(OBn) (2.74 g, 10.4 mmol) preparado de la misma manera como en el Ejemplo 8, y NCA d-Glu(OBn) (2.74 g, 10.4 mmol) preparado de la misma manera como en el Ejemplo 9, al matraz, y la mezcla de reacción se dejó agitar por 18 horas a temperatura ambiente bajo gas de nitrógeno. Después, NCA d-Phe (5.97 g, 31.25 mmol) del Ejemplo 7 y NCA Tyr (OBn) (15.49 g, 52.08 mmol) preparado del método en el Ejemplo 6, se agregaron y la solución se dejó agitar a temperatura ambiente por 2 horas y después se calentó a 35 °C por 48 horas punto en el cual la reacción se completó (GPC, DMF/0.1% de LiBr) . La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron anhídrido acético (2.04 g, 20 mmol, 1.88 mL) , N-metilmorfolina (NMM) (2.23 g, 22 mmol, 2.47 mL) y dimetilaminopiridina (DMAP) (.24 g, 2.0 mmol). La agitación se continuó por 1 día a temperatura ambiente. El polímero se precipitó en éter dietílico : heptano 10:1 (2.5 L) y se aisló por filtración, se lavó con porciones de 100 mL de éter dietílico fresco, y se secó in vacuo para dar el copolímero en bloque como un polvo casi incoloro, fino (38.48 g, Rendimiento = 81.4 %) . RMN ¾ (d6-DMSO) d 9.08 8.42-7.70, 7.29, 6.97, 5.11-4.84, 4.65-4.20, 3.72-3.25, 3.05-2.45, 2.44-1.59.
Ejemplo 91 Síntesis de mPEG12K-J -Poli- (d-Glu (OBn) 5 -co- Glu (OBn) s) -Jb-Poli (Tyr (OH) 25-CO-d-Pheis) -Ac Usando el método general del Ejemplo 74 solamente por ajuste de estequiometría este polímero se desprotegió (32 g, 1.56 mmol) . Una vez completa (3 Hrs.) la solución se sometió a rotoevaporador hasta obtener una pasta espesa y después se disolvió nuevamente en DCM y precipitó en éter dietílico frío, se recolectó por filtración y se secó in vacuo. Esta reacción proporcionó 27g de material seco (93.6 %) . RMN XH (d6-DMSO) d 9.09, 8.50-7.75, 7.35-6.45, 5.04, 4.70-4.20, 3.91-3.05, 3.03- 2.10, 2.09-1.50.
Ejemplo 92 Síntesis de mPEG12K-j -Poli- (d-Glu ( HOH) 3.5 -co-Glu ( HOH) 3.5) -b-Poli (Tyr (OH) 25 -co-d-Phei5) -Ac El polímero (18 g, .88 mmol) del Ejemplo 91 se disolvió completamente en 160 mL de THF con calentamiento, ésta solución se dejó enfriar a temperatura ambiente antes se agregó 1,5,7-triazabiciclo [4. .0] dec-5-eno (TBD, 0.5 g, 3.6 mmol), seguido por hidroxilamina (50% solución de agua, 30mL, 545 mmol) ésta solución se agitó a temperatura ambiente por 24 horas. Se agregó metanol (80 mL) y después se precipitó con éter de metiltercbutilo, se recolectó por filtración, y se disolvió en acetona. Se agregó ácido acético a ésta solución de acetona y se agitó por 5 horas y después se desarrolló. La solución se sometió a rotoevaporador hasta casi secarse, se disolvió nuevamente en cloruro de metileno y precipitó en MTBE, se recolectó por filtración y se secó in vacuo (16.7 g, Rendimiento= 96.3%).
Ejemplo 93 Síntesis de mPEG12K-2>-Poli- (d-Glu (OBn) 7.5 -coGlu(OBn)7.s) -ib-Poli (Tyr (OBn) 25 -co-d-Phei5) -Ac mPEG12KNH2 (25 g, 2.08 mm) preparado de la misma manera como en el Ejemplo 3, se pesó en un matraz de fondo redondo, de dos cuellos de 1000 mL, secado en horno, limpio y se disolvió en tolueno (300mL) . Este polímero se preparó de la misma manera como en el Ejemplo 1. Glu(OBn)NCA (2.74 g, 10.4 mmol) preparado en la misma forma como en el Ejemplo 8 y d-Glu (OBn) NCA (2.74 g, 10.4 mmol) del Ejemplo 9, se agregaron al matraz, y la mezcla de reacción se dejó agitar por 18 horas a temperatura ambiente bajo gas de nitrógeno. Después, d-Phe NCA (5.97 g, 31.25 mmol) del Ejemplo 7 y Tyr (OBn) CA (15.49 g, 52.08 mmol) del Ejemplo 6, se agregaron y la solución se dejó agitar a temperatura ambiente por 2 horas y después se calentó a 35 °C por 48 horas punto en el cual la reacción se completó (GPC, DMF/0.1% LiBr) . La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron anhídrido acético (2.04 g, 20 mmol, 1.88 mL) , N-metilmorfolina (NM ) (2.23 g, 22 mmol, 2.47 mL) y dimetilaminopiridina (DMAP) (.24 g, 2.0 mmol). La agitación se continuó durante la noche a temperatura ambiente. El polímero se precipitó en éter dietílico : heptano 10:1 (2.5 L) y se aisló por filtración, se lavó con porciones de 100 mL de éter dietílico fresco, y se secó in vacuo para dar el copolímero en bloque como un polvo casi incoloro (37.0 g. Rendimiento = 74.66 %) . RMN ¾ (d6-DMS0) d 9.10 8.42-7.71, 7.27, 6.97, 5.11-4.85, 4.65-4.20, 3.72-3.25, 3.05-2.45, 2.45-1.60.
Ejemplo 94 Síntesis de mPEG12K-jb-Poli- (d-Glu (OBn) 7.5 -co- Glu (OBn) 7.5) -¿-Poli (Tyr (OH) 25-co-d-Pheis) -Ac Usando el método general del Ejemplo 74 solamente por ajuste de estequiometría este polímero se desprotegió (32 g, 1.48 mmol) . Una vez completa (3 Hrs.) la solución se sometió a rotoevaporador hasta obtener una pasta espesa y después se disolvió nuevamente en DCM y precipitó en éter dietílico frío, se recolectó por filtración y se secó in vacuo. Esta reacción proporcionó 24g de material seco (82.8 %) . RMN 1H (d6-DMS0) d 9.09, 8.50-7.75, 7.35-6.45, 5.04, 4.70-4.20, 3.91-3.05, 3.03-2.10, 2.09-1.50.
Ejemplo 95 Síntesis de mPEG12K-J -Poli- (d-Glu ( HOH) 3.5-co-Glu(NHOH) 3.5) -b-Poli (Tyr (OH) 25-CO-d-Phei5) -Ac . El polímero (19 g,.88 mmol) preparado en el Ejemplo 94 se disolvió completamente en 160mL de THF con calentamiento, ésta solución se dejó enfriar a temperatura ambiente antes de agregó 1 , 5 , 7 -triazabiciclo [4.4.0] dec-5-eno (TBD,.5 g, 3.6 mmol) , seguido por hidroxilamina (50% solución de agua, 30mL, 545 mmol) ésta solución se agitó a temperatura ambiente por 24 horas. Se agregó metanol (80 mL) y después se precipitó con éter de metiltercbutilo, se recolectó por filtración, y se disolvió en acetona. Se agregó ácido acético a ésta solución de acetona y se agitó por 5 horas. La solución se sometió a rotoevaporador hasta casi secarse, se disolvió nuevamente en cloruro de metileno y precipitó en MTBE, se recolectó por filtración y se secó in vacuo (16.4 g, Rendimiento= 91.1%). RMN 1H (d6-DMSO) d 9.11, 8.34-7.75, 7.15, 6.80, 4.60-4.32, 3.81-3.12, 2.99-2.32, 1.93-1.83.
Ejemplo 96 Meto^,0^NH2 Síntesis de mPEG12K-j -Poli- (d-Glu (OBn) io-co- Glu (OBn) io) -b-Poli (Tyr (OBn) 25 -co-d-Phei5) -Ac mPEG12KNH2 (25g, 2.08 mm) preparado en la misma manera como en el Ejemplo 3, se pesó en un matraz de fondo redondo de dos cuellos, de 1 L, secado en horno, limpio y se disolvió en tolueno (300mL) . Este polímero se preparó de la misma manera como en el Ejemplo 1. Glu(OBn)NCA (5.48 g, 20.8 mmol) preparado de la misma manera como en el Ejemplo 8, y d-Glu (OBn) CA (5.48 g, 20.8 mmol) preparado por el método en el Ejemplo 9, se agregaron al matraz directamente, y la mezcla de reacción se dejó agitar por 16 horas a temperatura ambiente bajo gas de nitrógeno. Después, d-Phe NCA (5.97 g, 31.25 mmol) del Ejemplo 7 y Tyr (OBn) NCA (15.49 g, 52.08 mmol) del Ejemplo 6, se agregaron y la solución se dejó agitar a temperatura ambiente por 2 horas y después se calentó a 35 °C por 48 horas punto en el cual la reacción se completó (GPC, DMF/0.1% LiBr) . La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron anhídrido acético (2.04 g, 20 mmol, 1.88 mL) , N-metilmorfolina (NMM) (2.23 g, 22 mmol, 2.47 mL) y dimetilaminopiridina (DMAP) (.24 g, 2.0 mmol). La agitación se continuó por 1 día a temperatura ambiente. El polímero se precipitó en éter dietílico : heptano 10:1 (2.5 L) y se aisló por filtración, se lavó con porciones de 100 mL de éter dietílico fresco, y se secó in vacuo para dar el copolímero en bloque como un polvo casi incoloro, fino (38.9 g, Rendimiento = 75.23 %) . RMN ? (d6-DMS0) d 9.08, 8.40-7.65, 7.35-7.25, 6.99, 6.76, 5.10-4.85, 4.65-4.20, 3.72-3.25, 3.06-2.45, 2.34-1.59.
Ejemplo 97 Síntesis de mPEG12K-j -Poli - (d-Glu (OBn) io-co- Glu(OBn)io) -ib-Poli (Tyr (OH) 25- co-d-Phei5) -Ac Usando el método general del Ejemplo 74 solamente por ajuste de estequiometría este polímero se desprotegió (32 g, 1.41 mmol) . Una vez completa (3 Hrs.) la solución se sometió a rotoevaporador hasta obtener una pasta espesa y después se disolvió nuevamente en DCM y precipitó en éter dietílico frío, se recolectó por filtración y se secó in vacuo. Esta reacción proporcionó 27g de material seco (92.8 %) . RMN ¾ (d6-DMS0) d 9.09, 8.50-7.75, 7.35-6.45, 5.04, 4.70-4.20, 3.91-3.05, 3.03- 2.10, 2.09-1.50.
Ejemplo 98 Síntesis de mPEG12K-Jb-Poli- (d-Glu(NHOH) io-co- Glu(NHOH) io) -J -Poli (Tyr (OH) 2s -co-d-Pheis) -Ac El polímero (20 g, 0.88 mmol) del Ejemplo 98 se disolvió completamente en 160mL de THF con calentamiento, ésta solución se dejó enfriar a temperatura ambiente antes de que se agregara 1,5,7-triazabiciclo [4.4.0] dec-5-eno (TBD,.5 g, 3.6 mmol), seguido por hidroxilamina (50% solución de agua, 30mL, 545 mmol) ésta solución se agitó a temperatura ambiente por 24 horas . Se agregó metanol (80 mL) y después se precipitó con éter de metiltercbutilo, se recolectó por filtración, y se disolvió en acetona. Se agregó ácido acético a ésta solución de acetona y se agitó por 5 horas y después se desarrolló. La solución se sometió a rotoevaporador hasta casi secarse, se disolvió nuevamente en cloruro de metileno y precipitó en MTBE, se recolectó por filtración y se secó in vacuo (17.2 g, Rendimiento= 92.1%). R N ¾ (d6-DMSO) d 9.1 1, 8.33-7.69, 7.15, 6.98, 6.79, 5.06-4.85, 4.60-4.32, 3.81-3.19, 2.99-2.32, 2.03-1.59.
Ejemplo 99 Síntesis de mPEG12K-Jt>-Poli- (d-Glu(OBn) 3.5-co-Glu(OBn) 3.5) -i-Poli ( yr (OBn) 25-co-d-Phei5) -Ac mPEG12KNH2 (45.34 g, 3.78 mmol) preparado por el mismo método detallado en el Ejemplo 3, se pesó en un matraz de fondo redondo, de dos cuellos de 1000 mL, secado en horno, limpio y se disolvió en tolueno (300mL) . Este polímero se preparó de la misma manera como en el Ejemplo 73. Glu (OBn) NCA (3.5 g, 13.29 mmol) a partir del método detallado en el Ejemplo 8, y d-Glu (OBn) CA (3.5 g, 13.29 mmol) a partir del método detallado en el Ejemplo 9, se agregaron al matraz, y la mezcla de reacción se dejó agitar por 16 horas a temperatura ambiente bajo gas de nitrógeno. Después, d-Phe NCA (10.89 g, 56.9 mmol) a partir del método detallado en el Ejemplo 7, y Tyr (OBn) CA (28.24 g, 94.98 mmol) a partir del método detallado en el Ejemplo 6, se agregaron y la solución se dejó agitar a 35 °C por 48 horas punto en el cual la reacción se completó (GPC, DMF/0.1% LiBr) . La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron anhídrido acético (3.88 g, 37.8 mmol, 3.58 mL) , N-metilmorfolina (NMM) (3.76 g, 37.8 mmol, 4.16 mL) y dimetilaminopiridina (DMAP) (0.47 g, 3.8 mmol). La agitación se continuó por 1 día a temperatura ambiente. El polímero se precipitó en éter dietílico : heptano 10:1 (2.5 L) y se aisló por filtración, se lavó con porciones de 100 mL de éter dietílico fresco, y se secó in vacuo para dar el copolímero en bloque como un polvo casi incoloro, fino (68.22 g, Rendimiento = 82.2 %) . RMN ¾ (d6-DMSO) d 8.43-7.84, 7.30, 6.98, 6.97-6.65, 5.04, 4.98- 4.80, 4.66-4.16, 3.72-3.21, 3.01-2.76, 2.74-2.56, 2.41-2.26, 2.23-2.10, 2.01-1.58.
Ejemplo 100 Síntesis de mPEG12K-ib-Poli- (d-Glu (OBn) 3.5-00- Glu (OBn) 3.5) -Jb-Poli (Tyr (OH) 25-co-d-Pheis) -Ac Usando el método general del Ejemplo 74 solamente por ajuste de estequiometría este polímero se desprotegió (60 g, 2.73 mmol) . Una vez completa (5 Hrs.) la solución se sometió a rotoevaporador hasta obtener una pasta espesa y después se disolvió nuevamente en DCM y precipitó en éter dietílico frío, se recolectó por filtración, se lavó varias veces con porciones frescas de 200 mL de éter dietílico frío y se secó in vacuo. Esta reacción proporcionó 43.8g de material seco (81.4 %) . RM 2? (d6-DMSO) d 9.04, 8.38-7.73, 7.38-6.73, 5.04, 4.62-4.19, 3.82-3.27, 3.02-2.76, 2.75-2.56, 2.42- 2.26, 2.20-1.61, 1.08 (solvente, éter) .
Ejemplo 101 Síntesis de mPEG12K-J -Poli- (d-Glu (NHOH) 3.5-co-Glu(NHOH)3.5) -J -Poli (Tyr (OH) 25-co-d-Pheis) -Ac El polímero (40 g, 1 mmol) del Ejemplo 100, se disolvió completamente en 700 mL de THF con calentamiento, ésta solución se dejó enfriar a temperatura ambiente antes de que se agregara 1,5,7-triazabiciclo [4.4.0] dec-5-eno (TBD, 1.5 g, 10.8 mmol), seguido por hidroxilamina (50% solución de agua, 45 mL, 817.5 mmol) ésta solución se agitó a temperatura ambiente por 24 horas. Se agregó isopropanol (200 mL) y después se precipitó con éter de metiltercbutilo, se recolectó por filtración, y se disolvió en acetona (500 mL) . Se agregó ácido acético (5 mL) a ésta solución de acetona y se agitó durante la noche. La solución se sometió a rotoevaporador hasta casi secarse, se disolvió nuevamente en cloruro de metileno y precipitó en MTBE, se recolectó por filtración y se secó in vacuo (33.5 g, Rendimiento= 86 %) . RMN ¾ (d6-DMSO) d 9.03, 8.37-7.70, 7.36-6.72, 6.68-6.42, 4.64-4.14, 3.73-3.10, 3.00-2.76, 2.71-2.56, 2.42-2.27, 2.21-1.61.
Ejemplo 101A Síntesis de mPEGll .5K-jb-Poli- (d-Glu (OBn) 3.5 -co-Glu(OBn)3.s) -Jb-Poli (Tyr (OBn) 25 -co-d-Pheis) -Ac mPEGll .5K H2 (15 g, 1.3 mmol) preparado con el mismo método como en el Ejemplo 3 con la excepción del peso molecular, se pesó en un matraz de fondo redondo, de dos cuellos de 1000 mL, secado en horno, limpio y se disolvió en tolueno (300mL) . Este polímero se preparó de la misma manera como en el Ejemplo 73. Glu(OBn)NCA (1.2 g, 4.56 mmol) preparado con el mismo método como en el Ejemplo 8, y d-Glu (OBn) NCA (1.2 g, 4.56 mmol) preparado con el mismo método como en el Ejemplo 9, se agregaron al matraz, y la mezcla de reacción se dejó agitar por 16 horas a temperatura ambiente bajo gas de nitrógeno. Después, d-Phe NCA (2.88 g, 19.56 mmol) preparado con el mismo método como en el Ejemplo 7, y Tyr (OBn) NCA (8.26 g, 32.60 mmol) preparado con el mismo método como en el Ejemplo 6, se agregaron y la solución directamente, se dejó agitar a temperatura ambiente por 2 horas y después se calentó a 35 °C por 48 horas punto en el cual la reacción se completó (GPC, DMF/0.1% LiBr) . La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron anhídrido acético (1.34 g, 13 mmol, 1.23 mL) , N-metilmorfolina (NMM) (1.3 g, 13 mmol, 1.43 mL) y dimetilaminopiridina (DMAP) (0.16 g, 1.3 mmol). La agitación se continuó por 16 horas a temperatura ambiente. El polímero se precipitó en éter dietílico : heptano 10:1 (2.5 L) y se aisló por filtración, se lavó con porciones de 100 mL de éter dietílico fresco, y se secó in vacuo para dar el copolímero en bloque como un polvo casi incoloro, fino (26 g, Rendimiento = 82.2 %) . R N ¾ (d6-DMS0) d 8.40-7.83, 7.27, 7.16-6.98, 6.83-6.64 , 5.06-4.79, 4.62-4.18, 3.71-3.21, 2.98-2.78, 2.75-2.58, 2.42-2.25, 2.22-2.13, 1.99-1.70.
Ejemplo 102 Glu(OBn)3.5) -Jb-Poli (Tyr (OBn) 25-co-d-Phei5) -Ac mPEGll .5KNH2 (15 g, 1.3 mmol) preparado con el mismo método en el Ejemplo 3 con la excepción del peso molecular, se pesó en un matraz de fondo redondo, de dos cuellos de 1000 mL, secado en horno, limpio y se disolvió en tolueno (300mL) con calentamiento y se secó por destilación azeotrópica. Después de la destilación a sequedad, el polímero se dejó bajo vacío por tres horas. El matraz subsecuentemente se rellenó con N2, se vació nuevamente bajo presión reducida, y se introdujo NMP:DCM (1:1) (450 mL) seco por cánula. Glu(OBn)NCA (1.2 g, 4.56 mmol) preparado con el mismo método como en el Ejemplo 8, y d-Glu (OBn) NCA (1.2 g, 4.56 mmol) preparado con el mismo método como en el Ejemplo 9, se agregaron al matraz, y la mezcla de reacción se dejó agitar por 48 horas a temperatura ambiente bajo gas de nitrógeno. Después, d-Phe NCA (2.88 g, 19.56 mmol) preparado con el mismo método como en el Ejemplo 7 y Tyr (OBn) NCA (8.26 g, 32.60 mmol) preparado con el mismo método como en el Ejemplo 6, se agregaron y la solución se dejó agitar a temperatura ambiente por dos horas y después se calentó a 35 °C por 48 horas punto en el cual la reacción se completó (GPC, DMF/0.1% LiBr) . La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron anhídrido acético (1.34 g, 13 mmol, 1.23 mL) , N-metilmorfolina (NMM) (1.3 g, 13 mmol, 1.43 mL) y dimetilaminopiridina (DMAP) (.16 g, 1.3 mmol). La agitación se continuó por 16 horas a temperatura ambiente. El polímero se precipitó en éter dietílico : heptano 10:1 (2.5 L) y se aisló por filtración, se lavó con porciones de 100 mL de éter dietílico fresco, y se secó in vacuo para dar el copolímero en bloque como un polvo casi incoloro, fino (25 g, Rendimiento = 82.2 %) . RMN ¾ (d6-DMSO) d 8.38-7.80, 7.42-7.18, 6.75, 5.02, 4.97- 4.80, 4.66-4.16, 3.75-3.20, 3.02-2.80, 2.76-2.56, 2.44-2.25, 2.00-1.59.
Ejemplo 103 1. Tolueno Azeotropo, 60°C, 3 Hrs 2. Glu(oBn)NCA, d-Glu(oBn)NCA T A., 16 Hrs, 1 :3 NMP:DC 3. d-Phe NCA, Tyr(oBn)NCA TA -> 35°C 48 Hrs. 4. N , AcAnh. DMAP T.A., 16 Hrs.
Síntesis de mPEGll .5K-jb-Poli- (d-Glu (OBn) 3.5-co- Glu(OBn)3.5) -J -Poli (Tyr (OBn) 25-co-d-Phei5) -Ac mPEGll .5K H2 (15 g, 1.3 mmol) preparado con el mismo método como en el Ejemplo 3 con la excepción del peso molecular, se pesó en un matraz de fondo redondo, de dos cuellos de 1000 mL, secado en horno, limpio y se disolvió en tolueno (300mL) con calentamiento y se secó por destilación azeotrópica. Después de la destilación a sequedad, el polímero se dejó bajo vacío por tres horas. El matraz subsecuentemente se rellenó con N2, se vació nuevamente bajo presión reducida, y se introdujo (NMP) y DCM (relación 1:3) (450 mL) seco por cánula. Glu(OBn)NCA (1.2 g, 4.56 mmol) preparado con el mismo método como en el Ejemplo 8, y d-Glu (OBn) CA (1.2 g, 4.56 mmol) preparado con el mismo método como en el Ejemplo 9, se agregaron al matraz, y la mezcla de reacción se dejó agitar por 48 horas a temperatura ambiente bajo gas de nitrógeno. Después, d-Phe NCA (2.88 g, 19.56 mmol) preparado con el mismo método como en el Ejemplo 7, y Tyr (OBn) CA (8.26 g, 32.60 mmol) preparado con el mismo método como en el Ejemplo 6, se agregaron y la solución directamente se dejó agitar a temperatura ambiente por 2 horas y después se calentó a 35 °C por 48 horas, punto en el cual la reacción se completó (GPC, DMF/0.1% LiBr) . La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron anhídrido acético (1.34 g, 13 mmol, 1.23 mL) , N-metilmorfolina (NMM) (1.3 g, 13 mmol, 1.43 mL) y dimetilaminopiridina (DMAP) (.16 g, 1.3 mmol). La agitación se continuó por 16 horas a temperatura ambiente. El polímero se precipitó en éter dietílico : heptano 10:1 (2.5 L) y se aisló por filtración, se lavó con porciones de 100 mL de éter dietílico fresco, y se secó in vacuo para dar el copolímero en bloque como un polvo casi incoloro, fino (26 g, Rendimiento = 82.2 %) . RMN ¾ (d6-DMSO) d 8.46-7.85, 7.48-6.95, 6.84-6.61, 5.02, 4.97-4.79, 4.66-4.16, 3.75-3.21, 3.00-2.79, 2.76-2.56, 2.43-2.25, 2.00-1.57.
Ejemplo 104 Síntesis de mPEGll .6K-Jb-Poli- (d-Glu (oBn) s-co-Glu(oBn5) -ib-Poli (Tyr (OBn) io-co-d-Leuio-co-Asp (oTbu) io-Ac Usando el protocolo general del Ejemplo 73 y sustituyendo materiales de partida NCA apropiados y usando una relación 1:1 de NMP:DCM resultó en el polímero crudo, este se precipitó con éter dietílico aproximadamente 10 volúmenes. Después de la filtración y secado, el compuesto del título se recolectó como un sólido incoloro (30.5 g, Rendimiento = 87.1%). RMN ? (d6-DMSO) d 8.39-7.94, 7.41-7.17, 7.15-7.02, 6.82, 5.01, 4.60-4.16, 3.72-3.30, 2.70, 2.42-2.26 2.02-1.71, 1.33, 0.9-0.55.
Ejemplo 105 Síntesis de mPEGll .6K-Jb-Poli- (d-Glu (oBn) s-co-Glu (oBns) -b-Poli (Tyr (OH) io-co-d-Leu2o-co-Aspio) -Ac El co-polímero de tribloque del Ejemplo 104 se pesó (29 g, 1.38 mmol) en un vaso de precipitado de 500 mL limpio y se disolvió en ácido trifluoroacético . A ésta solución se agregó pentametil-benceno (6.14 g, 41.4 mmol) y se agitó con una barra agitadora magnética. A los treinta minutos después de la adición de pentametil-benceno se observó un precipitado en solución. La mezcla de reacción se agitó por dos horas y se monitoreo por NMR para eliminación completa de los grupos protectores bencílicos en tirosina y grupo t-butilo en aspartato. Después del término de esta protección (5 Hrs) la solución se sometió a rotoevaporador hasta obtener una pasta espesa, se disolvió nuevamente en cloruro de metileno y después se precipitó en éter dietílico frío y se recolectó por filtración. Este sólido se lavó tres veces con porciones de 100 mL de éter frío y se secó in vacuo y se caracterizó. (26 g, Rendimiento = 96.6 %) RMN 2? (d6-DMS0) d 9.09, 8.44-7.58, 7.35-6.89, 6.96, 6.58, 5.03, 4.62- 4.16, 3.71-3.22, 2.75-2.64, 2.40-2.26, 2.23-2.04, 0.92-0.54.
Ejemplo 106 Síntesis de mPEGll .6K-b-Poli- (d-Gl ( HOH) 5-co-Glu(NHOH) -b-Poli (Tyr (OH) i0-co-d-Leu2o-CO-AsplO) -Ac Ester de tribloque del Ejemplo 105 se pesó (25 g, 1.38 mmol) en un matraz de fondo redondo de 500 mL limpio y el polímero se disolvió completamente en 200 mL de tetrahidrofurano . A ésta solución treinta equivalentes de hidroxilamina (1.9 mL, .028 mmol) y monohidrato hidróxido de litio (1.16 g, 27.6 mmol) se agitaron bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante la noche. El término de la reacción se verificó por RMN Ésta solución se mezcló con 100 mL de metanol y precipitó con éter dietílico (aproximadamente 7 volúmenes) . Este sólido blanco se recolectó por filtración y se lavó con éter dietílico fresco. Lo sólido recolectado después se disolvió en acetona y una cantidad catalítica de ácido acético se dejó agitar durante la noche, la solución se vertió en un vaso de precipitado limpio de dos litros y se agregó éter dietílico lentamente a la solución con la agitación. Este sólido blanco se recolectó por filtración y después se secó in vacuo. Proporcionó 22 g (92%). RMN ¾ (d6-DMSO) d 9.4-8.5, 8.40-7.71, 7.40-7.1 1, 6.93, 6.57, 5.10, 4.53-3.99, 3.86-3.02, 2.99-2.87, 2.09-1.19, 1.6-1.2, 1.01-0.5.
Ejemplo 107 Síntesis de mPEGll .5K-£>-Poli- (d-Glu(oBn) s-co- Glu (0B115) -b-Poli, (Tyr (OBn) 10-co-d-Pheio-co-Asp (otBu) 10) -Ac mPEGll .5K H2 (31 g, 2.7 mmol) preparado por el mismo método como en el Ejemplo 3 excepto por el peso molecular, se pesó en un matraz de fondo redondo, de dos cuellos de 1000 mL, secado en horno, limpio y se disolvió en tolueno (400mL) con calentamiento y se secó por destilación azeotrópica. Después de la destilación a sequedad, el polímero se dejó bajo vacío por tres horas. El matraz subsecuentemente se rellenó con N2, se vació nuevamente bajo presión reducida, y se introdujo una relación 1:2 de dimetilacetamida : cloruro de metileno por cánula y se disolvió completamente. Glu (OBn) NCA (3.4 g, 12.9 mmol) preparado por el mismo método en el Ejemplo 8, y d-Glu(OBn)NCA (3.4 g, 12.9 mmol) preparado por el mismo método como en el Ejemplo 9, se pesaron en un matraz de fondo redondo de 500 mL limpio y se vaciaron por 2 horas, se rellenaron con 2 y después se disolvieron en DMAC y se sometieron a cánula en el matraz que contiene PEG. Esta mezcla de reacción se dejó agitar por 14 horas a temperatura ambiente bajo gas de nitrógeno. Después, d-Phe NCA (5.15 g, 26.9 mmol) preparado por el mismo método como en el Ejemplo 7 y Tyr (OBn) NCA (7.99 g, 26.9 mmol) preparado por el mismo método como en el Ejemplo 6, se agregaron de la misma manera como se menciona anteriormente y la solución se dejó agitar a temperatura ambiente por dos horas y después se calentó a 35 °C por 26 horas punto en el cual la reacción se completó (GPC, DMF/0.1% LiBr) . La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron anhídrido acético (2.77 g, 269 mmol, 2.46 mL) , N-metilmorfolina ( MM) (2.69 g, 269 mmol, 1.43 mL) y dimetilaminopiridina (DMAP) (.33 g, 2.7 mmol) . La agitación se continuó por 1 día a temperatura ambiente. La solución de reacción se sometió a rotoevaporador para remover el cloruro de metileno y después el polímero se precipitó en isopropanol (3.5 L) y se aisló por filtración, se lavó con porciones frescas de 100 mL de isopropanol, y se secó in vacuo para dar el copolímero en bloque como un polvo casi incoloro (44.5 g, Rendimiento = 83.1 %) . RM ¾ (d6-DMSO) d 8.59- 7.86, 7.45-7.25, 7.10, 6.79, 5.12-4.79, 4.69-4.17, 3.84-3.23, 3.02-2.58, 2.40-2.23, 2.04-1.71, 1.33.
Ejemplo 108 Síntesis de mPEGll .5K-b-Poli- (d-Glu (oBn) 5 -co-Glu(oBns) -b-Poli- (Tyr (OH) io-co-d-Pheio-co-Asp (OH) io) -Ac Usando el método general del Ejemplo 74 solamente a ustando la escala, este polímero se desprotegió (30 g, 1.54 mmol) . Una vez completa (3 Hrs . ) la solución se sometió a rotoevaporador hasta obtener una pasta espesa y después se disolvió nuevamente en DCM y precipitó en MTBE, se recolectó por filtración, se lavó varias veces con porciones frescas de 100 raL de MTBE y se secó in vacuo. Esta reacción proporcionó 24 g de material seco (86.9 %) . RMN ¾ (d6-DMS0) d 9.07, 8.50-7.80, 7.40- 7.28, 6.98, 6.62, 5.04, 4.69-4.17, 3.72-3.23, 3.02-2.76, 2.73-2.57, 2.42-2.27, 2.23-1.59.
Ejemplo 109 1. KOH (10M), Hidroxilamina TA, 24 Hrs. 2. Ácido Acético, Acetona Síntesis de mPEG11.5K-J -Poli- (d-Glu ( HOH) s-co-Glu(NHOH) s-J -Poli (Tyr(OH)io-co-d-Pheio-co-Asp(OH)10) -Ac El polímero del Ejemplo 108 (22 g, 1.2 mmol) se disolvió completamente en 200 mL de THF con calentamiento. Ésta solución se dejó enfriar a temperatura ambiente antes de que se agregara 10M de solución de KOH (2 mL, 1.5 g, 10.8 mmol) , seguido por Hidroxilamina (50% solución de agua, 6 mL, 3.6g, 108 mmol) ésta solución se agitó a temperatura ambiente por 24 horas. Se agregó acetona 20 mL y ácido acético (2 mL) a ésta solución de reacción y se agitó 4 horas. La solución se sometió a rotoevaporador hasta casi secarse, se disolvió nuevamente en cloruro de metileno y precipitó en MTBE, se recolectó por filtración y se secó in vacuo (20 g, Rendimiento= 94.9 %) . RM ¾ (d6-DMSO) d 8.61-7.90, 7.50-6.29, 5.38-5.01, 4.63-4.12, 3.78-3.22, 2.17, 2.11, 1.81-1.63.
Ejemplo 110 mPEG12K-b-Poli-(Asp(Ot-Bu)io)-- Pol¡-(cl-Leu2o-co-Tyr(OBn)2o)-Ac Síntesis de mPEG12K-b-Poli- (Asp (Ot-Bu) i0) -ib-Poli- (d- Leu2o-co-Tyr (OBn) 2o) -Ac mPEG12K H2 del Ejemplo 3 (360 g, 30.0 mmol) se pesó en un matraz enchaquetado de fondo redondo, de tres cuellos, de 5000 mL, secado en horno, limpio y se disolvió en tolueno (3000 mL) con calentamiento en un baño de aceite a 55-60°C y se secó por destilación de vacío azeotrópico. Después que aproximadamente 30% del tolueno se removió la destilación se detuvo y se agregó ácido diflouroacético (DEA) por jeringa (2.26 mL, .036 mmol) para formar la sal de DFA. La solución se agitó por 30 minutos y después el azeotropo se inició de nuevo y se secó completamente. La sal de polímero se dejó bajo vacío durante la noche. El matraz subsecuentemente se rellenó con 2, se vació nuevamente bajo presión reducida, y se introdujo N-metilpirrolidona seca (NMP) (3500 mL) por cánula. La mezcla se calentó de forma breve a 40 °C para facilitar disolución y después se enfrió a 25°C. Asp (OtBu) NCA (64.56 g, 300 mmol) se pesó en un RBF de 2 cuellos, de 1 L limpio, y se vació por una hora antes de que el NMP recientemente destilado se canulara en el matraz y se disolviera completamente el NCA. Ésta solución después se sometió a cánula en el matraz de PEG y se dejó agitar a temperatura ambiente por 48 horas bajo gas de nitrógeno. Después, se agregaron d-Leu NCA (94.30 g, 600 mmol) y Tyr (OBn) NCA (178.39 g, 600 mmol) a la solución por el mismo método como se describe anteriormente y la solución resultante se dejó agitar a 35 °C por 48 horas punto en el cual la reacción se consideró completa (GPC, DMF/0.1% LiBr) .
La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron anhídrido acético (45.9 g, 0.45 mol, 42.5 mL) , piridina (59.3 g, 0.75 mol, 60.7 mL) y dimetilaminopiridina (DMAP) (0.37 g, 3.0 mmol) . La agitación se continuó por 1 día a temperatura ambiente. El polímero se precipitó en 5 volúmenes de éter dietílico (15 L) y se aisló por filtración, se lavó con porciones frescas de 300 mL de éter dietílico, y se secó in vacuo para dar el copolímero en bloque como un polvo blancuzco, fino (434.9 g, Rendimiento = 69.0 %) . RMN ? (d6-DMSO) d 8.50-7.90, 7.60-7.30, 7.25-6.77, 5.10-4.85, 4.65-4.10, 3.72-3.25, 3.05-2.45, 2.44-1.60, 1.40-1.25, 0.90-0.50.
Ejemplo 111 mPEG12K-/ -Poli-(Asp(OH)io)-- Poli-(d-Leu-2o-co-Tyr(OH)2o)-Ac Síntesis de mPEG12K-b-Poli- (Asp (OH) io) -b-Poli- (d- Leu2o-CO-Tyr (OH) 20) -Ac mPEG12K-jb-Poli- (Asp (Ot-Bu) 10) -jb-Poli- (d-Leu2o-co-Tyr (OBn) 20) -Ac del Ejemplo 1 10 (314.5 g, 14.9 mmol) y pentametilbenceno (141.4 g, 0.954 mol) se disolvieron en 2.2 L de ácido trifluoroacético (TFA) . La reacción rápidamente se agitó por 14 horas a temperatura ambiente . El TFA se removió en un evaporador rotatorio con la temperatura del baño de agua que no excede 35 °C. El sólido como masilla resultante se disolvió en 1.4 L de diclorometano, se transfirió a un tubo de 12 L, y se precipitó por adición lenta de 5.6 L de éter dietílico usando agitación mecánica rápida. La suspensión resultante se agitó por 30 minutos, los sólidos se recolectaron por filtración, se lavaron con porciones 2xlL de éter dietílico fresco, y se secaron en vacío. Lo sólido se disolvió nuevamente en 900 mL de diclorometano y precipitó por adición de 10 L de éter dietílico. La filtración y secado a vacío proporcionó el producto como un sólido esponjoso, incoloro (254.4 g, Rendimiento = 91.3 %) . RMN = (d6-DMSO) d 12.4, 9.09, 8.50-7.80, 7.05-6.45, 4.65-4.0, 3.85-3.1, 3.03-2.45, 2.44-1.63, 1.58-0.95, 0.90-0.50.
Ejemplo 112 Formulación de Daunorubicina. El copolímero de tribloque del Ejemplo 18 (330 mg) se disolvió en agua a 1.65 mg/mL por agitación a ~ 50 °C por 10 minutos. La solución se dejó enfriar y el pH se ajustó a 7.0 con NaOH 0.1N. La tasa de alimentación de daunorubicina para la formulación fue 10 % del peso del polímero. Una solución orgánica (20% de metanol, 80% de diclorometano) se usó para disolver 33 mg de daunorubicina a 8.25 mg/mL colocando la solución en un baño de agua de sonicación seguido por calentamiento y sometimiento a vórtices, y repitiendo hasta que persiste una solución roja, clara. La solución orgánica se dejó enfriar a temperatura ambiente después se agregaron 17 ]ih de trietilamina . La solución orgánica después se agregó a la solución del polímero mientras se mezcla el corte a 10,000 RPM por ~ 1 minuto. La emulsión resultante, la cual fue una solución roja, turbia, se dejó agitar en una campana extractora durante la noche. Conforme el solvente orgánico se evaporó la solución llegó a ser menos turbia y más roja en color. Al siguiente día la solución se filtró a través de un filtro de extremo muerto, de 0.22 mieras. Un aparato de filtración de flujo tangencial equipado con un filtro de valor de referencia 10 kD se usó para concentrar la muestra desde 200 mL hasta aproximadamente 50 mL. La formulación después se congeló a -70 °C y se liofilizó. La formulación de daunorubicina resultó en un 88 % de rendimiento. Se determinó la carga de peso comparando una curva estándar de daunorubicina a una concentración conocida de la formulación por análisis de HPLC. Se disolvió daunorubicina en metanol en un intervalo desde 40 µg/mL hasta 200 g/mL, y la formulación se disolvió a 2 mg/mL en metanol. La cantidad de daunorubicina en la formulación después se convirtió a % con base en la cantidad conocida de la formulación usada (es decir, 2 mg/mL) . Esta formulación demostró una carga de peso de 7.8 % de una alimentación al 10%; representando un proceso 69% eficiente. El análisis del tamaño de partícula de la formulación no reticulada por dispersión de luz dinámica resultó en un diámetro promedio de 75 nm. La encapsulación de daunorubicina se verificó por diálisis de la formulación no reticulada arriba de la concentración crítica de la micela (CMC) a 20 mg/mL, y por debajo de la CMC a 0.2 mg/mL. Como se muestra en la Figura 5, la formulación dializada arriba de la CMC resultó en aproximadamente 88% de retención de daunorubicina mientras la diálisis por debajo de la CMC resultó en aproximadamente 15% de retención de daunorubicina. Estos resultados demuestran que la daunorubicina es efectivamente encapsulada en la micela a altas concentraciones (arriba de la CMC) y que la micela falla aparte cuando se diluye por debajo de la CMC.
Ejemplo 113 Reticulación de Micelas Cargadas de Daunorubicina.
Las micelas cargadas de daunorubicina del Ejemplo 112 estuvieron en agua a 20 mg/mL con 0.1, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 2.5, 5, 7.5 o 10 mM de cloruro de fierro (III) por aproximadamente 16 horas. Cada una de las nueve muestras separadas se diluyó a 0.2 mg/mL y se dializó por 6 horas contra amortiguador de fosfato a pH 8 para determinar la extensión de la reticulación. El resultado de este experimento se muestra en la Figura 6. Este resultado demuestra que las micelas cargadas de daunorubicina son estables para dilución (reticuladas) cuando se tratan con cloruro de fierro (III) , con los mejores resultados obtenidos con concentraciones arriba de 5 mM de cloruro de fierro (III) .
Ejemplo 114 Optimización del Tiempo de Reticulación. Las micelas cargadas de daunorubicina del Ejemplo 112 estuvieron en 10 mM de cloruro de fierro (III) a 20 mg/mL. Se tomaron alícuotas de la muestra a 5 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas y 16 horas, junto con una muestra no reticulada sin fierro a 5 minutos, se diluyó a 0.2 mg/mL y se dializó contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8 por 6 horas. El % de daunorubicina restante post -diálisis para la reticulación dependiente del tiempo se muestra en la Figura 7. Con base en la figura 3 la reticulación de la muestra ocurre rápidamente, con casi 70% de retención de la daunorubicina restante después de solo 5 minutos de incubación de la muestra con la solución de cloruro de fierro (III) previo a la dilución por debajo de la CMC.
Ejemplo 115 Optimización de pH de Reticulación. Las micelas cargadas de daunorubicina del Ejemplo 112 estuvieron en 10 mM de cloruro de fierro (III) a 20 mg/mL después alícuotas de esta solución se ajustaron a pH 3, 4, 5, 6, 7, 7.4 y 8 con hidróxido de sodio diluto y se agitó por 10 minutos. Cada muestra después se diluyó a 0.2 mg/mL y se dializó contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8 por 6 horas. El % de daunorubicina restante post-diálisis contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8 se muestra en la Figura 8. Este resultado demuestra que el pH óptimo para reticulación es 7.4.
Ejemplo 116 Liberación Dependiente del pH de Daunorubicina a partir de Micelas Reticuladas. Las micelas cargadas de daunorubicina del Ejemplo 112 estuvieron en 10 mM de cloruro de fierro (III) a 20 mg/mL después se ajustó a pH 7.4 con hidróxido de sodio diluto y se agitó por 10 minutos. Esta muestra después se diluyó a 0.2 mg/mL y se dializó contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 3, 4, 5, 6, 7, 7.4 y 8 por 6 horas. El % de daunorubicina restante postdiálisis contra 10 mM de amortiguador de fosfato como una función de pH se muestra en la Figura 9. Este resultado demuestra una liberación dependiente del pH del fármaco a partir de una micela reticulada.
Ejemplo 117 Liberación Dependiente de la Sal de Daunorubicina a partir de Micelas Reticuladas. Las micelas cargadas de daunorubicina del Ejemplo 112 estuvieron en 10 mM de cloruro de fierro (III) a 20 mg/mL después se ajustó a pH 7.4 con hidróxido de sodio diluto y se agitó por 10 minutos. Cada muestra después se diluyó a 0.2 mg/mL y se dializó contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8 con concentraciones que varían desde 0 hasta 500 mM de NaCl por 6 horas. El % de daunorubicina restante post-diálisis contra 10 mM de amortiguador de fosfato como una función de la concentración de la sal se muestra en la Figura 10. Este resultado demuestra una liberación dependiente de la sal del fármaco a partir de una micela reticulada.
Ejemplo 118 Encapsulación de Aminopterina. - El copolímero de tribloque del Ejemplo 18 (800 mg) se disolvió en agua a 2 mg/mL por agitación a ~ 50 °C por 30 minutos. La solución se dejó enfriar y el pH se ajustó a 7.0 con NaOH 0.1N. La aminopterina alimentada para la formulación fue 4% del peso del polímero. Una solución orgánica (20% de metanol, 80% de diclorometano, 15 mg/mL de ácido para-toluensulfónico) se usó para disolver 32 mg de aminopterina a 3.2 mg/mL colocando la solución en un baño de agua de sonicación seguido por calentamiento y sometimiento a vórtices, y repitiendo hasta que persiste una solución amarilla clara. Una vez que la solución orgánica se enfría, se agrega a la solución del polímero mientras se mezcla el corte a 10,000 RPM por ~ 1 minuto. La emulsión resultante, la cual es una solución amarilla turbia, se dejó agitar en una campana extractora durante la noche. Conforme el solvente orgánico se evaporó la solución llegó a ser menos turbia y más amarilla en color. Al siguiente día la solución se ajustó de pH a 7.0 con NaOH y se filtró a través de un filtro de extremo muerto, de 0.22 mieras. Un aparato de filtración de flujo tangencial equipado con un filtro de valor de referencia 10 kD se usó por diafiltración con un amortiguador de intercambio tres veces para remover la aminopterina no encapsulada y solventes traza. La formulación después se congeló a -70 °C y se liofilizó. La formulación de aminopterina con el copolímero de tribloque resultó en un 85% de rendimiento de producto. Se determinó la carga de peso comparando una curva estándar de aminopterina a una concentración conocida de la formulación por análisis de HPLC. La aminopterina se disolvió en HPLC de fase móvil (60% de acetonitrilo, 40% de 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8) en un intervalo desde 40 yg/mL a 200 yg/mL, y la formulación se disolvió a 5 mg/mL en HPLC de fase móvil. La cantidad de aminopterina en la formulación después se convirtió a % con base en la cantidad conocida de la formulación usada (es decir, 5 mg/mL) . La micela cargada de aminopterina se encontró por tener una carga de 2.5% de carga en peso de una alimentación al 4%, resultando en un proceso eficiente al 53%. El tamaño de partícula de la formulación no reticulada demostró un tamaño de partícula promedio de distribución única de aproximadamente 70 nm, como se muestra en la Figura 11.
Ejemplo 119 Verificación de Encapsulación de Aminopterina. Las micelas cargadas de aminopterina del Ejemplo 118 se disolvieron a 20 mg/mL en 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8. La formulación no reticulada también se diluyó por debajo de la CMC (0.2 mg/mL) y se dializó contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 8 por seis horas. El histograma mostrado en la Figura 12 demuestra la estabilidad de la formulación no reticulada a 20 mg/mL, con más de 75% de la aminopterina restante dentro de la bolsa de diálisis durante 6 horas. Sin embargo, cuando se diluyó a 0.2 mg/mL, menos de 10% de la aminopterina se dejó en la bolsa de diálisis después de 6 horas. Estos resultados demuestran que la aminopterina es efectivamente encapsulada en la micela a altas concentraciones (arriba de la CMC) y que la micela falla aparte cuando se diluye por debajo de la CMC.
Ejemplo 120 Liberación Dependiente del pH de Aminopterina a partir de Micelas Reticuladas . Las micelas cargadas de aminopterina del Ejemplo 118 se disolvieron a 20 mg/mL en 10 mM de cloruro de fierro (III) y se agitó por 10 minutos. Esta muestra después se diluyó a 0.2 mg/mL y se dializó contra 10 mM de amortiguador de fosfato a pH 3, 4, 5, 6, 7, 7.4 y 8 por 6 horas. El % de aminopterina restante post-diálisis contra 10 mM de amortiguador de fosfato como una función de pH se muestra en la Figura 13. Este resultado demuestra una liberación Dependiente del pH de aminopterina a partir de una micela reticulada.
Ejemplo 121 Citotoxicidad Micelas Reticuladas Cargadas de Aminopterina. Las micelas cargadas de aminopterina del Ejemplo 118 y Ejemplo 120 se probaron por citotoxicidad comparada con la aminopterina libre y las formulaciones de micela no cargas de fármaco reticuladas y no reticuladas (a partir del polímero del Ejemplo 18) contra líneas de células de cáncer de pulmón A549, ovario OVCAR3 , pancreática PANC-1 (receptor folato +) y BxPC3 (receptor folato -) . Los perfiles de citotoxicidad para cada tratamiento para cada línea de células en la Figura 14 (Pulmón A549) , Figura 15 (Ovario 0VCAR3) , Figura 16 (Pancreático PANC-1) , y Figura 17 (pancreática BxPC3) . La viabilidad celular inhibida por aminopterina por 50% (IC50) en el intervalo nanomolar bajo (- 7 - 25 nM) en células A549 y PANC-1, sin embargo no se obtuvo la IC50 para células OVCAR3 o BxPC3. Del mismo modo, las formulaciones reticuladas y no reticuladas demostraron valores de IC50 en el intervalo nanomolar bajo (~ 20 - 70 nM) para células A549 y PANC-1 sin alcanzar el 50% de inhibición en células 0VCAR3 o BxPC3. El tratamiento con micelas no cargadas de fármaco reticuladas y no reticuladas fue bien tolerado, con más de 80% de viabilidad para todas las células probadas.
Ejemplo 122 Encapsulación de Berberina - El copolímero de tribloque del Ejemplo 18 (300 mg) se disolvió en agua a 2 mg/mL por agitación a ~ 50 °C por 10 minutos. La solución se dejó enfriar y el pH se ajustó a 7.0 con NaOH 0.1N. La tasa de alimentación de berberina para la formulación fue 5% del peso del polímero. Una solución orgánica (20% de metanol, 80% de diclorometano) se usó para disolver 15 mg de berberina a 6 mg/mL por sometimiento a vórtices hasta que persiste una solución amarilla clara. La solución orgánica después se agregó a la solución del polímero mientras se mezcla el corte a 10,000 RPM por ~ 1 minuto. La emulsión resultante, la cual es una solución amarilla turbia, se dejó agitar en una campana extractora durante la noche. Conforme el solvente orgánico se evaporó la solución llegó a ser menos turbia y más amarilla en color. Al siguiente día la solución se filtró a través de un filtro de extremo muerto, de 0.22 mieras. Un aparato de filtración de flujo tangencial equipado con un filtro de valor de referencia 10 kD se usó para concentrar la muestra desde 200 mL hasta aproximadamente 50 mL. La formulación después se congeló a -70 °C y se liofilizó. Se determinó la carga de peso comparando una curva estándar de berberina a una concentración conocida de la formulación por análisis de HPLC . La berberina se disolvió en metanol en un intervalo desde 40 yg/mL hasta 200 pg/mL, y la formulación se disolvió a 5 mg/mL en metanol . La cantidad de berberina en la formulación después se convirtió a % con base en la cantidad conocida de la formulación usada (es decir, 5 mg/mL) . La carga de peso de la formulación de berberina fue 4% a partir de una alimentación al 5%, como se determina por análisis de HPLC de la formulación comparada con una curva estándar del fármaco libre. La eficiencia de encapsulación de la formulación fue 72%. El análisis del tamaño de partícula por dispersión de luz dinámica resultó en un tamaño de partícula promedio de 72.5 nm para la muestra no reticulada. La diálisis de encapsulación resultó en 53% de retención, demostrando que la berberina es efectivamente encapsulada en la micela.
Ejemplo 123 Reticulación de la micela cargada de berberina - El polvo no reticulado liofilizado del Ejemplo 122 fue reconstituido en agua a 20 mg/mL. Se agregó cloruro de fierro (III) a la solución para una concentración final de 5 mM, y se agitó por ~ 30 minutos. La formulación después se congeló a -70 °C y se liofilizó. Para verificar la reticulación, las muestras reticuladas y no reticuladas se diluyeron a 0.2 mg/mL y se dializaron por 6 horas. La micela no reticulada mostró 5% de la berberina retenida, la muestra reticulada mostró 43% de berberina restante. Este resultado demuestra que la micela de berberina es estabilizada por la adición de fierro.
Ejemplo 124 Encapsulación de Paclitaxel - El copolímero de tribloque del Ejemplo 18 (300 mg) se disolvió en agua a 2 mg/mL por agitación a ~ 50 °C por 10 minutos. La solución se dejó enfriar y el pH se ajustó a 7.0 con NaOH 0.1N. La tasa de alimentación de Paclitaxel para la formulación fue 1% del peso del polímero. Una solución orgánica (20% de metanol, 80% de diclorometano) se usó para disolver 3 mg de paclitaxel a 3 mg/mL por sometimiento a vórtices hasta que persiste una solución incolora, clara. La solución orgánica después se agregó a la solución del polímero mientras se mezcla el corte a 10,000 RPM por ~ 1 minuto. La emulsión resultante se dejó agitar en una campana extractora durante la noche. Al siguiente día la solución se filtró a través de un filtro de extremo muerto, de 0.22 mieras. La formulación después se congeló a -70 °C y se liofilizó. La carga de peso de la paclitaxel formulación fue 0.78% a partir de una alimentación al 1%, como se determina por análisis de HPLC de la formulación comparada con una curva estándar del fármaco libre. El análisis del tamaño de partícula por dispersión de luz dinámica resultó en un tamaño de partícula promedio de 45.7 nm para la muestra no reticulada. La diálisis de verificación de encapsulación arriba de la concentración crítica de la micela (20 mg/mL) resultó en 52% de retención del paclitaxel post-diálisis .
Ejemplo 125 Encapsulación de SN-38 - El copolímero de tribloque del Ejemplo 18 (1 g) se disolvió a 5 mg/mL en agua por agitación a ~ 50 °C por 10 minutos. Se agregó sacarosa (1 g) a la solución del polímero y se agitó hasta que se disolvió completamente. La solución se dejó enfriar a temperatura ambiente y se ajustó el pH a 6.0 con NaOH 0.1N. La alimentación de SN-38 para la formulación fue 3% del peso del polímero. Se usó DMSO para disolver 30 mg de SN-38 a 80 mg/mL por calentamiento, sometimiento a vórtices y colocación de la solución en un baño de agua de sonicación hasta que persiste una solución amarilla clara. La solución orgánica se dejó enfriar a temperatura ambiente y después se agregó a la solución del polímero mientras se mezcla el corte a 10,000 RPM por ~ 1 minuto. La emulsión resultante, la cual fue una solución amarilla ligera, turbia, entonces después se transfirió a la cámara de alimentación de un microfluidizador . La solución fue procesada con un paso único a través de un microfluidizador Micro fluidics M110Y. La corriente de salida del microfluidizador se enfrió con un baño de agua helada. La solución después se filtró a través de un filtro de extremo muerto de 0.22 mieras, y la solución resultante entonces se sometió a ultrafiltración con un sistema de filtración de flujo tangencial Espectro Labs KrosFlo y una membrana de diafiltración de 10 kDa. La solución se concentró de 200 mL a ~ 50 mL, después se agregó 150 mL de agua con 3 mg/mL de sacarosa y se concentró nuevamente descendente a ~ 50 mL. La ultrafiltración se repitió hasta que un total de 4 veces el volumen original del amortiguador se intercambió (800 mL) . La solución resultante entonces se congeló a -70 °C y se liofilizó.
Ejemplo 126 Reticulación de Micela de SN-38 - Micelas de SN-38 del Ejemplo 125 se disolvieron a 20 mg/mL en 10 mM de FeCl3 acuoso. El pH entonces se ajustó a 6.8 con NaOH diluto. La solución se agitó por 1 h a temperatura ambiente después se liofilizó. Esta micela cargada de SN-38, reticulada, se aisló como un polvo parduzco con una carga de peso de 1.75%, representando un proceso eficiente al 81.4%. El análisis del tamaño de partícula por dispersión de luz dinámica resultó en un diámetro promedio de 70 nm.
Ejemplo 127 Preparación y Reticulación de Micelas de SN-38 - Se hicieron formulaciones con los siguientes polímeros: 127A = mPEG12k-¿-p [Glu (NHOH) 2] -jb-p [Phei5-co-Tyr25] -Ac, del Ejemplo 81; 127B = mPEG12k-jb-p [Glu (NHOH) 7] - -p [Phei5-co-Tyr25] -Ac del Ejemplo 56; 127C = mPEG12k-jb-p [Glu (NHOH) 10] -£>-p [Pheis -co-Tyr25]-Ac, del Ejemplo 38; 127D = mPEG12k-jb- p [Glu (NHOH) 20] -b-p [Pheis -co-Tyr25] -Ac, del Ejemplo 98; y 127E = mPEG12k-jb-p [Aspio] -Jb-p [Leu2o-co-Tyr20] -Ac del Ejemplo 111. El copolímero de tribloque (1 g) se disolvió a 5 mg/mL en agua por agitación a ~ 40 °C por 30 minutos. 1 g de sacarosa después se agregó a la solución del polímero y se agitó hasta que se disolvió completamente. La solución se dejó enfriar a temperatura ambiente y se ajustó el pH a 6.0 con NaOH. La tasa de alimentación de SN38 para la formulación fue 5% del peso del polímero. Se usó DMSO para disolver 50 mg de SN-38 a 80 mg/mL por calentamiento, sometimiento a vórtices y colocación de la solución en un baño de agua de sonicación hasta que persiste una solución amarilla clara. La solución orgánica se dejó enfriar a temperatura ambiente y después se agregó a la solución del polímero mientras se mezcla el corte a 10,000 RPM por ~ 1 minuto. La emulsión resultante, la cual fue una solución amarilla ligera, turbia, entonces después se transfirió a la cámara de alimentación de un microfluidizador . La solución fue procesada con un paso único a través del microfluidizador . La corriente de salida del microfluidizador se enfrió con un baño de agua helada. La solución después se filtró a través de un filtro de extremo muerto de 0.22 mieras, y la solución resultante entonces se sometió a ultrafiltración con un sistema de filtración de flujo tangencial Espectro Labs KrosFlo y una membrana de diafiltración de 10 kDa. La solución se concentró de 200 mL a ~ 50 mL, después se agregó 150 mL de agua con 5 mg/mL de sacarosa y se concentró nuevamente descendente a ~ 50 mL. La ultrafiltración se repitió hasta que se intercambió un total de 4 veces el volumen original del amortiguador (800 mL) . Se agregó entonces cloruro de fierro (III) a la formulación para una concentración final de 10 mM. El pH de la solución entonces se ajustó a 6.0 con NaOH y se agitó a temperatura ambiente por 4 horas. Un volumen de amortiguador que contiene sacarosa a 20 mg/mL entonces se agregó a la solución, y después se concentró nuevamente descendente a aproximadamente 20 mg/mL de concentración del polímero. La solución entonces se congeló a - 40°C y se liofilizó. Las formulaciones de SN-38 con los copolímeros de tribloques resultaron en un rendimiento promedio de 85% de producto con una carga de peso de 3.5%. Cargas de peso actual: A=3.4%, B=3.2%, C=3.6%, D=3.6%, E=3.2%. El análisis del tamaño de partícula por dispersión de luz dinámica resultó en un diámetro promedio de 90 nm. Tamaños actuales de partículas: A=84 nm B=88 nm, C=89 nm, D=l 10 nm, E=91 nm.
Ejemplo 128 Farmacocinéticas de Micelas de SN-38 Reticuladas - Ratas Sprague-Dawley quirúrgicamente modificadas con catéteres en la vena yugular, se adquirieron de Harían Laboratories, Dublin, VA. Formulaciones reticuladas de SN-38 (del Ejemplo 127C y 127E) se disolvieron en agua con 150 mM de NaCl para una concentración final de 10 mg de SN-38 por kg del peso corporal del animal por inyección de bolo de 2 mL por medio de JVC durante aproximadamente 1 minuto, seguido por un lavado a chorro de aproximadamente 250 de salina heparinizada . Los puntos de tiempo para la recolección de sangre después de la administración del artículo de ensayo fueron como sigue: 1, 5, 15 minutos, 1, 4, y 24 horas. Aproximadamente 250 de sangre por punto de tiempo se recolectaron por JVC en tubos de recolección de sangre K3-EDTA por un lavado a chorro de aproximadamente 200 de salina heparinizada. La sangre entonces se centrifugó a 2000 RPM por 5 minutos para aislar el plasma. El plasma después se recolectó y se congeló instantáneamente hasta ser procesada por análisis de HPLC. Las muestras se prepararon por análisis descongelando primero las muestras de plasma a temperatura ambiente. Se agregaron 50 µL de plasma a un tubo eppendorf de 2 mL de 150 µL, de la solución de extracción (0.1% de ácido fosfórico en metanol, 5 µg/mL de estándar interno de camptotecina) . Las muestras entonces se sometieron a vórtices por 10 minutos y se centrifugaron por 10 minutos a 13,000 RPM. El sobrenadante entonces se transfirió en viales de HPLC, después se analizó por HPLC. La cuantificación de SN-38 se determinó usando una curva estándar de la formulación de SN-38 en el plasma de rata comparado con las muestras recolectadas de ratas en cada punto de tiempo. Los resultados de este experimento se muestran en la Figura 18. La CMax de SN-38 en el plasma de IT-141 (NHOH; 127C) fue 304.5 ug/mL, determinado 1 minuto post-administración . La exposición de SN-38 al compartimiento de plasma suministrada por la formulación de ácido hidroxámico fue 111.5 pg*h/mL. La exposición de SN-38 al compartimiento de plasma de IT- 141 (Asp; 127E) fue 31.6 µ9*?/??, con una CMax de 156.0 g/mL.
Ejemplo 129 Determinación de longitud de bloque de reticulación óptimo determinada por f rmacocinéticas de rata. Usando el procedimiento del Ejemplo 128, las Formulaciones de los Ejemplos 127A, 127B, y 127D se administraron a ratas a 10 mg/kg. La CMax de SN-38 en el plasma del Ejemplo 127D (NHOH-20) fue 292.9 ug/mL, determinada 1 minuto postadministración. La exposición de SN-38 al compartimento de plasma como se determina por el área bajo la curva de concentración contra tiempo suministrada por la formulación fue 85.7 yg*h/mL. La exposición de SN-38 al compartimento de plasma del Ejemplo 127B(NH0H-7) fue 71.3 ug*h/mL, con una CMax de 256.9 µg/mL determinada a 1 minuto postadministración. La CMax de SN-38 en el plasma del Ejemplo 127 A (NHOH-2) fue 267.7 pg/mL, determinada 1 minuto post-administración. La exposición de SN38 al compartimento de plasma como se determina por el área bajo la curva de concentración contra tiempo suministrada por la formulación fue 41.8 yg*h/mL. Los resultados se muestran en la Figura 19. Se determinó que el Ejemplo 127C demuestra los resultados de reticulación óptimos.
Ejemplo 130 Preparación de Micelas Cargadas Daunorubicina . El copolímero de tribloque del Ejemplo 111 (Bloque de núcleo de ácido aspártico) y agua (2 L) se agregó a un vaso de precipitado de 4L y se agitó hasta que una solución homogénea estuvo presente. El clorhidrato de daunorubicina (301 mg) se suspendió en 4:1 de diclorometano:metanol (60 mL) , seguido por la adición de trietilamina (82 uL) . La suspensión de daunorubicina resultante se agregó por goteo a la solución acuosa rápidamente agitada. La solución resultante fue cubierta con papel aluminio y se dejó agitar por unas ocho horas adicionales. La solución se filtró a través de un filtro de 0.22 µp? y después se liofilizó para dar 2.95 g (89% de rendimiento) como un polvo rojo. Una porción de este material se disolvió a 25 mg/mL de concentración del polímero en 20 mM de Tris, pH 7.5 suplementado con 5mM de FeCl3. Una vez que una solución homogénea estuvo presente, el pH se ajustó a 8.0 con NaOH 1N, después se agitó durante la noche. La solución fue congelada y se liofilizó para dar un polvo rojo oscuro.
Ejemplo 131 Preparación de Micelas de Aminopterina . El copolímero de tribloque del Ejemplo 30 mPEG12k-¿>-p [Glu(NHOH) io] -b-p [Asp5 -co-Leul5 -co-Tyr20] -Ac (800 mg) se disolvió en agua a 2 mg/mL por agitación a ~ 40 °C por 30 minutos. La solución se dejó enfriar y el pH se ajustó a 7.0 con NaOH. La tasa de aminopterina alimentada para la formulación fue 4% del peso del polímero. Una solución orgánica (20% de metanol, 80% de diclorometano, 25 mg/mL de ácido para-toluensulfónico) se usó para disolver 32 mg de aminopterina a 3.2 mg/mL colocando la solución en un baño de agua de sonicación seguido por calentamiento y sometimiento a vórtices, y repitiendo hasta que persiste una solución amarilla clara. Una vez que la solución orgánica se enfría, se agrega a la solución del polímero mientras se mezcla el corte a 10,000 RP por ~ 1 minuto. La emulsión resultante, la cual es una solución amarilla turbia, se dejó agitar en una campana extractora durante la noche. Conforme el solvente orgánico se evaporó la solución llegó a ser menos turbia y más amarilla en color. Al siguiente día la solución se ajustó de pH a 7.0 con NaOH y se filtró a través de un filtro de extremo muerto de 0.22 mieras, y la solución resultante entonces se sometió a ultrafiltración con un sistema de filtración de flujo tangencial Espectro Labs KrosFlo y una membrana de diafiltración de 10 kDa. La solución se concentró a partir de 2 mg/mL de concentración del polímero hasta aproximadamente 20 mg/mL de concentración del polímero, y se agregó cloruro de fierro (III) a la formulación para una concentración final de 10 mM. El pH de la solución entonces se ajustó a 7.0 con NaOH y se agitó a temperatura ambiente por 4 horas. La solución entonces se ajustó a 5 mg/mL de concentración del polímero con agua, y se concentró hasta aproximadamente 20 mg/mL por ultrafiltración . La solución entonces se congeló a - 40°C y se liofilizó. La formulación de aminopterina con el copolímero de tribloque resultó en un 85% de rendimiento de producto con un 2.5% de carga en peso de una alimentación al 4%, resultando en un proceso eficiente al 53%. El tamaño de partícula de las formulaciones reticuladas y no reticuladas demostró un tamaño de partícula promedio de distribución única de aproximadamente 70 nm.
Ejemplo 132 Preparación de Micelas de Cabizataxel. El copolímero de tribloque del Ejemplo 38 mPEG12k-jb-p [Glu(NHOH) 10] -jb-p [Phel5-co-Tyr25] -Ac (300 mg) se disolvió en agua a 2 mg/mL por agitación a ~ 40°C por 30 minutos. La solución se dejó enfriar y el pH se ajustó a 7.0 con NaOH. La tasa de alimentación de Cabazitaxel para la formulación fue 1.5% del peso del polímero. Una solución orgánica (20% de metanol, 80% de diclorometano) se usó para disolver 4.5 mg de cabazitaxel a 2 mg/mL por sometimiento a vórtices hasta que persiste una solución incolora, clara. La solución orgánica después se agregó a la solución del polímero mientras se mezcla el corte a 10,000 RPM por ~ 1 minuto. La emulsión resultante se dejó agitar en una campana extractora durante la noche. Al siguiente día la solución se filtró a través de un filtro de extremo muerto de 0.22 mieras, y la solución resultante entonces se sometió a ultrafiltración con un sistema de filtración de flujo tangencial Espectro Labs KrosFlo y una membrana de diafiltración de 10 kDa. La solución se concentró a partir de 2 mg/mL de concentración del polímero hasta aproximadamente 20 mg/mL de concentración del polímero, y se agregó cloruro de fierro (III) a la formulación para una concentración final de 10 mM. El pH de la solución entonces se ajustó a 7.0 con NaOH y se agitó a temperatura ambiente por 4 horas. La solución entonces se ajustó a 5 mg/mL de concentración del polímero con agua, y se concentró hasta aproximadamente 20 mg/mL por ultrafiltración. La solución entonces se congeló a - 40°C y se liofilizó. La carga de peso para la formulación de cabazitaxel fue 1% a partir de una alimentación al 1.5%. El tamaño de partícula de la formulación fue 62 nm de diámetro. La diálisis de encapsulación de la formulación no reticulada resultó 68% de retención arriba de la CMC a 20 mg/mL, y 72% de retención cuando la formulación reticulada se diluyó a 0.2 mg/mL. La figura 20 muestra los resultados de la diálisis de reticulación dependiente del pH para micelas de Cabizataxel reticuladas.
Ejemplo 133 Preparación de Micelas de Epotilona D. El copolímero de tribloque del Ejemplo 98 mPEG12k-jb-p [Glu (NHOH) 20] -jb-p [Phel5-co-Tyr25] -Ac (300 mg) se disolvió en agua a 2 mg/mL por agitación a ~ 40°C por 30 minutos. La solución se dejó enfriar y el pH se ajustó a 7.0 con NaOH. La tasa de alimentación de Epotilona D para la formulación fue 2% del peso del polímero. Una solución orgánica (20% de metanol, 80% de diclorometano) se usó para disolver 6 mg de epotilona D a 2 mg/mL por sometimiento a vórtices hasta que persiste una solución incolora, clara. La solución orgánica después se agregó a la solución del polímero mientras se mezcla el corte a 10,000 RP por ~ 1 minuto. La emulsión resultante se dejó agitar en una campana extractora durante la noche. Al siguiente día la solución se filtró a través de un filtro de extremo muerto de 0.22 mieras, y la solución resultante entonces se sometió a ultrafiltración con un sistema de filtración de flujo tangencial Espectro Labs KrosFlo y una membrana de diafiltración de 10 kDa . La solución se concentró a partir de 2 mg/mL de concentración del polímero hasta aproximadamente 20 mg/mL de concentración del polímero, y se agregó cloruro de fierro (III) a la formulación para una concentración final de 10 m . El pH de la solución entonces se ajustó a 6.0 con NaOH y se agitó a temperatura ambiente por 4 horas. La solución entonces se ajustó a 5 mg/mL de concentración del polímero con agua, y se concentró hasta aproximadamente 20 mg/mL por ultrafiltración . La solución entonces se congeló a - 40°C y se liofilizó. Este proceso resultó en un proceso eficiente al 71% con una carga de peso de 1.5% a partir de una alimentación al 2% y un rendimiento total de 94%. El tamaño de partícula de la formulación fue 82 nm de diámetro. La diálisis de encapsulacion de la formulación no reticulada resultó en 88% de retención de epotilona D durante 6 horas a 20 mg/mL, mientras la dilución a 0.2 mg/mL resultó en 10% de retención del fármaco durante 6 horas .
Ejemplo 134 Preparación de Micelas de Berberina. El copolímero de tribloque del Ejemplo 98 mPEG12k-L>-p [Glu (NHOH) 10] -b-p [Asp5 -co-Leul5-co-Tyr20] -Ac (300 mg) se disolvió en agua a 2 mg/mL por agitación a ~ 40°C por 30 minutos. La solución se dejó enfriar y el pH se ajustó a 7.0 con NaOH 0.1N. La tasa de alimentación de berberina para la formulación fue 5% del peso del polímero. Una solución orgánica (20% de metanol, 80% de diclorometano) se usó para disolver 15 mg de berberina a 6 mg/mL por sometimiento a vórtices hasta que persiste una solución amarilla clara. La solución orgánica después se agregó a la solución del polímero mientras se mezcla el corte a 10,000 RPM por ~ 1 minuto. La emulsión resultante, la cual es una solución amarilla turbia, se dejó agitar en una campana extractora durante la noche. Conforme el solvente orgánico se evaporó la solución llegó a ser menos turbia y más amarilla en color. Al siguiente día la solución se filtró a través de un filtro de extremo muerto de 0.22 mieras, y la solución resultante entonces se sometió a ultrafiltración con un sistema de filtración de flujo tangencial Espectro Labs KrosFlo y una membrana de diafiltración de 10 kDa . La solución se concentró a partir de 2 mg/mL de concentración del polímero hasta aproximadamente 20 mg/mL de concentración del polímero, y se agregó cloruro de fierro (III) a la formulación para una concentración final de 10 mM. El pH de la solución entonces se ajustó a 7.0 con NaOH y se agitó a temperatura ambiente por 4 horas . La solución entonces se ajustó a 5 mg/mL de concentración del polímero con agua, y se concentró hasta aproximadamente 20 mg/mL por ultrafiltración. La solución entonces se congeló a - 40°C y se liofilizó. La carga de peso de la formulación de berberina fue 4% a partir de una alimentación al 5%, como se determina por análisis de HPLC de la formulación comparada con una curva estándar del fármaco libre. La eficiencia de encapsulación de la formulación fue 72%. El análisis del tamaño de partícula por dispersión de luz dinámica resultó en un tamaño de partícula promedio de 66.7 nm de diámetro para la muestra reticulada, y 72.5 nm para la muestra no reticulada.
Ejemplo 135 Preparación de Micelas de Vinorelbina. El copolímero de tribloque del Ejemplo 38 (300 mg) se disolvió en agua a 2 mg/mL por agitación a ~ 40°C por 30 minutos. La solución se dejó enfriar y el pH se ajustó a 7.0 con NaOH 0.1N. La tasa de alimentación de vinorelbina para la formulación fue 5% del peso del polímero. Una solución orgánica (20% de metanol, 80% de diclorometano) se usó para disolver 15 mg de vinorelbina a 6 mg/mL por sometimiento a vórtices hasta que persiste una solución incolora, clara. La solución orgánica después se agregó a la solución del polímero mientras se mezcla el corte a 10,000 RPM por ~ 1 minuto. La emulsión resultante, la cual fue una solución turbia, se dejó agitar en una campana extractora durante la noche. Conforme el solvente orgánico se evaporó la solución llegó a ser menos turbia e incolora. Al siguiente día la solución se filtró a través de un filtro de extremo muerto de 0.22 mieras, y la solución resultante entonces se sometió a ultrafiltración con un sistema de filtración de flujo tangencial Espectro Labs KrosFlo y una membrana de diafiltración de 10 kDa. La solución se concentró a partir de 2 mg/mL de concentración del polímero hasta aproximadamente 20 mg/mL de concentración del polímero, y se agregó cloruro de fierro (III) a la formulación para una concentración final de 10 mM. El pH de la solución entonces se ajustó a 7.0 con NaOH y se agitó a temperatura ambiente por 4 horas. La solución entonces se ajustó a 5 mg/mL de concentración del polímero con agua, y se concentró hasta aproximadamente 20 mg/mL por ultrafiltración . La solución entonces se congeló a - 40°C y se liofilizó.
Ejemplo 136 Preparación de Micelas de Everolimus . El copolímero de tribloque del Ejemplo 38 (300 mg) se disolvió en agua a 2 mg/mL por agitación a ~ 40°C por 30 minutos. La solución se dejó enfriar y el pH se ajustó a 7.0 con NaOH 0.1N. La tasa de alimentación de everolimus para la formulación fue 5% del peso del polímero. Una solución orgánica (20% de metanol, 80% de diclorometano) se usó para disolver 15 mg de everolimus a 6 mg/mL por sometimiento a vórtices hasta que persiste una solución incolora, clara. La solución orgánica después se agregó a la solución del polímero mientras se mezcla el corte a 10,000 RPM por ~ 1 minuto. La emulsión resultante, la cual fue una solución turbia, se dejó agitar en una campana extractora durante la noche. Conforme el solvente orgánico se evaporó la solución llegó a ser menos turbia e incolora. Al siguiente día la solución se filtró a través de un filtro de extremo muerto de 0.22 mieras, y la solución resultante entonces se sometió a ultrafiltración con un sistema de filtración de flujo tangencial Espectro Labs KrosFlo y una membrana de diafiltración de 10 kDa. La solución se concentró a partir de 2 mg/mL de concentración del polímero hasta aproximadamente 20 mg/mL de concentración del polímero, y se agregó cloruro de fierro (III) a la formulación para una concentración final de 10 mM. El pH de la solución entonces se ajustó a 7.0 con NaOH y se agitó a temperatura ambiente por 4 horas. La solución entonces se ajustó a 5 mg/mL de concentración del polímero con agua, y se concentró hasta aproximadamente 20 mg/mL por ultrafiltració . La solución entonces se congeló a - 40°C y se liofilizó.
Ejemplo 137 Farmacocinétlcas de rata de micelas de daunorubicina comparadas con daunorubicina libre. Ratas Fisher que poseen un catéter de la vena yugular se inyectaron con 10 mg/kg de micelas de daunorubicina reticulada (ácido hidroxámico) , daunomicina libre (preparadas de conformidad con el Ejemplo 113) , y micelas cargadas de daunorubicina reticuladas con ácido carboxílico (preparadas de conformidad con el Ejemplo 130) por un bolo rápido IV con un volumen de inyección de 2 mL. El vehículo de suministro para la administración del fármaco fue salina isotónica. La sangre de la rata se recolectó a partir del catéter en tubos de K2-EDTA por punción cardiaca en puntos de tiempo de 1, minuto, 5 minutos, 15 minutos, 1 hora, 4 horas, 8 horas y 24 horas. El plasma se aisló por centrifugación a 1000 RPM por 5 minutos, y 150 uL de solución de extracción (metanol enfriado en hielo/100 ng/mL de estándar interno de daunorubicina) se agregó a 50 uL de cada muestra de plasma. Las muestras entonces se sometieron a vórtices por 10 minutos, se centrifugaron a 13,000 RPM por 10 minutos, y 150 uL del sobrenadante se transfirieron a viales de HPLC para análisis. Las muestras se analizaron en un Waters Alliance 2695 equipado con un detector de fluorescencia 2475 (Ex = 470 nm; Em = 580) . Una inyección de muestra de 5 L se hizo sobre un Waters 4 µt? Nova Pak C18 (3.9 x 150 mm) a 30 °C con una velocidad de flujo de 0.750 mL por minuto de 10 mM de amortiguador de fosfato (pH=1.4), metanol y acetonitrilo (el gradiente desde 70/10/20 hasta 40/10/50 para amortiguador/metanol/acetonitrilo se hizo durante ocho minutos). El analito eluido a 5.9 minutos bajo estas condiciones, se normalizó al estándar interno, y se cuantificó usando una curva estándar comprendida de siete estándares. Los parámetros de farmacocinética se resumen en la tabla siguiente y las curvas se muestran en la Figura 21. La exposición de daunorubicina al compartimento de plasma como se determina por el área bajo la curva de concentración contra tiempo (AUC) suministrada por la formulación de ácido hidroxámico fue 383.6 µg*h/mL. La vida útil terminal (eliminación) de daunorubicina suministrada al plasma por la formulación fue 3.9 horas. Esto se comparó con el fármaco libre que mostró una AUC de 1.3 pg*h/mL y una vida útil de 3.4 horas así como también la formulación de ácido carboxílico que mostró una AUC de 51.8 pg*h/mL y una vida útil de 2.4 horas. Por lo tanto, las formulaciones reticuladas de ácido carboxílico tienen una exposición 40 veces superior que el fármaco libre, y la formulación de ácido hidroxámico tiene una exposición 295 veces mejor que el fármaco libre.
Ejemplo 138 Farmacocinéticas de rata de micelas de cabizataxel reticulado. Ratas Fisher que poseen un catéter de la vena yugular se inyectaron con 5 mg/kg de micela de cabizataxel reticulado o cabizataxel libre (preparado de conformidad con el Ejemplo 132) por un bolo rápido IV con un volumen de inyección de 2 mL. El vehículo de suministro para la administración del fármaco fue salina isotónica. La sangre de la rata se recolectó a partir del catéter en tubos de K2-EDTA por punción cardiaca en puntos de tiempo de 1, minuto, 5 minutos, y 15 minutos. El plasma se aisló por centrifugación a 1000 RPM por 5 minutos, y 150 uL de solución de extracción se agregó a 50 uL de cada muestra de plasma. Las muestras entonces se sometieron a vórtices por 10 minutos, se centrifugaron a 13,000 RPM por 10 minutos, y 150 uL del sobrenadante se transfirieron a viales de HPLC para análisis. La figura 22 demuestra la concentración de cabazitaxel en el plasma de rata por los primeros 15 minutos después de la administración del artículo de prueba. La exposición de cabazitaxel al compartimento de plasma durante 15 minutos fue 10 µ9*?/t??. con una CMax de 44.5 g/mL, comparado con 0.2 g*h/mL de exposición para el fármaco libre con una CMax. de 1.2 yg/mL.
Ejemplo 139 Eficacia anti-tumoral de micelas de SN-38. Células de cáncer de colon HCT-116 se cultivaron de conformidad con las directrices del ATCC, se recolectaron por incubación de tripsina, y se resuspendieron a una concentración de 2 millones de células por 0.1 mL en salina por inyección. Los ratones se inocularon inyectando 0.1 mL (es decir, 2 millones de células) subcutáneamente en los flancos derechos de los ratones. Cuando los tumores alcanzaron aproximadamente 100 mm3 los ratones se aleatorizaron en grupos de tratamiento. Cada grupo consiste de 8 ratones por grupo. Los grupos de tratamiento incluyen control de salina; control de polímero; irinotecano libre a 35 mg/kg; y formulación SN-38 del Ejemplo 127C a 20, 35, y 50 mg/kg. Los ratones se dosificaron por un bolo rápido IV en la vena de la cola; el volumen de inyección fue 0.2 mL. Los tumores se midieron por calibración digital, y el volumen (mm3) se calculó usando la fórmula V=(W2xL)/2, donde la anchura (W) es la medición del diámetro más grande y la longitud (L) es la medición del diámetro perpendicular a la anchura. El esquema de dosificación fue una vez a la semana por tres semanas (3xQW) . El vehículo para el suministro del polímero fue salina isotónica. Las observaciones clínicas durante el estudio incluyeron cambios en el peso corporal del ratón, observaciones morfológicas del síndrome del ratón enfermo (deshidratación, curvatura espinal, e infecciones oportunistas de los ojos, genitales, o erupciones en la piel) , y cambios patológicos graves determinados por necropsias después de la terminación del experimento. La gráfica de la velocidad de crecimiento se muestra en la Figura 23. Los datos mostraron un incremento de 6 veces en el volumen del tumor para el grupo de control de salina, con una velocidad de crecimiento media de 46.8 mm3 por día. El grupo de control de polímero no mostró diferencia estadística en el crecimiento del tumor comparado con el grupo de control de salina, con un incremento de 5.5 veces en volumen y una velocidad de crecimiento media de 43.7mm3 por día. El irinotecano a 50 mg/kg del grupo de control de fármaco libre mostró un 40% de reducción en el volumen del tumor comparado con salina, con un incremento de 2.7 veces en volumen y una velocidad de crecimiento media de 18.9 mm3 por día. El grupo de formulación SN-38 de 20 mg/kg mostró un 71% de inhibición en el volumen del tumor comparado con el control de salina y una velocidad de crecimiento media de 13.6 mm3 por día. El grupo de formulación SN-38 de 35 mg/kg mostró 30% de regresión en el volumen del tumor con una disminución de 1.5 veces en el tamaño y una velocidad de regresión del tumor media de -2.4 mm3 por día. El grupo de formulación SN-38 de 50 mg/kg SN-38 mostró 47.6% de regresión en el volumen del tumor con una disminución de 2.1 veces en tamaño y una velocidad de regresión del tumor media de -3.8 mm3 por día.
Ejemplo 140 Farmacocinéticas y Biodistribución de micelas de amino terina reticuladas. Ratones sin pelo atímicos hembra se suministraron por Harían ( Indianápolis , IN) . Los ratones se recibieron a 4-5 semanas de edad, 12-15 g en peso. Los ratones se alojaron en un microaislador y se mantuvieron bajo condiciones libres de patógeno específicas. Los ratones Hembra del estudio se inocularon subcutáneamente en el flanco derecho con 0.1 mi de una mezcla al 50% de RPMI/50% de Matrigel™ (BD Biosciences, Bedford, MA) que contiene una suspensión de células tumorales OVCAR-3 (aproximadamente 5.0 x 106 células/ratón). Los tumores se midieron usando calibres y el peso del tumor se calculó usando la fórmula V=(W2xL)/2, donde la anchura (W) es la medición del diámetro más largo y la longitud (L) es la medición del diámetro perpendicular a la anchura. Los días de inicio del estudio fueron escalonados por grupo debido a los patrones de crecimiento variante en los tumores. Los animales se administraron con el material de prueba, micelas de aminopterina del Ejemplo 131 a 20 mg/kg, una vez que el tumor alcanzó 150-250 mm3. Después de la eutanización de cada ratón a 5 y 15 minutos, 1, 4, 12, 24, y 48 horas después del tratamiento (4 ratones por punto de tiempo) , se recolectaron especímenes de plasma, tumor, bazo, hígado y pulmón. Se analizaron muestras de tejido y plasma de ratón heparinizado (hígado, pulmón, bazo y tumor) usando un ensayo de cromatografía líquida de alta presión con detección espectral de masa en serie (LC- MS/MS) . Las muestras de control de calidad y calibradoras (QC) se prepararon enriqueciendo aminopterina en plasma humano heparinizado con sodio. Las muestras del tejido se homogenizaron en 50% de metanol y se almacenaron congeladas a -80°C hasta que se analizaron. Cada tipo de matriz de estudio se analizó en un lote analítico separado junto con calibración duplicada y muestras de QC. Una alícuota de 100 ]iL del calibrador, QC, blanco, o muestra de estudio (homogenado de plasma o tejido) se mezcló con 50.0 uL de amortiguador de dilución (1.0 mM de formiato de amonio que contiene 0.1% de ácido fórmico) seguido por 400 de acetonitrilo que contiene el estándar interno (IS; metotrexato 50.0 ng/ml) en un tubo de microcentrífuga para precipitar las proteínas. Los tubos se taparon, sometieron a vórtices, se dejaron digerir por 5 minutos, y se centrifugaron a 14,000 rpm y 4 °C por 5 minutos. Una alícuota de 100 uL del sobrenadante se diluyó con 1.5 mL de amortiguador de dilución, se mezcló en vórtices, y se inyectaron 20 uL en el sistema de LC-MS/MS. La concentración de cada muestra se determina por comparación con una curva estándar. Se construyeron curvas de concentración-tiempo para cada compartimiento y los datos de farmacocinética se calcularon para cada compartimiento. Los perfiles de PK de tejido y plasma medios pueden ser vistos en la Figura 24. El NCA de plasma determina la vida útil media de Aminopterina por ser 37.65 horas. La AUCO-48hrs media en plasma se encontró por ser 12571 ng*hr/ml. La vista útil media de de Aminopterina en el tumor, pulmones y bazo se determinó por ser de 9.65, 11153 y 51.87 horas, respectivamente. La inclinación terminal de las concentraciones del hígado no permitieron un cálculo de la vida útil puesto que a las 48 horas la concentración fue superior que a 12 y 24 horas. La AUCO-48hrs media del tumor, pulmones, bazo e hígado se encontró por ser 9559, 4276, 4586, y 9909 ng*hr/g, respectivamente.
Ejemplo 141 Eficacia anti- tumoral de micelas de aminopterina retic ladas. La línea de células de tumor endometrial humano MFE-296 se recibió de y cultivó de conformidad con el ATCC. Ratones sin pelo NCR atímicos hembra (CrTac :NCr-Foxlnu) se suministraron por Taconic. Ratones sin pelo atímicos hembra se inocularon subcutáneamente en el flanco derecho con 0.1 mi de una mezcla al 50% de RPMI 1640/50% de Matrigel™ (BD Biosciences, Bedford, MA) que contiene una suspensión de células de tumor MFE-296 (aproximadamente 1 x 107 células/ratón) . Veinte días después de la inoculación, los tumores se midieron usando pinzas y el peso del tumor se calculó usando la fórmula V=(W2xL)/2, donde la anchura ( ) es la medición de diámetro más largo y longitud (L) es la medición del diámetro perpendicular a la anchura. Cincuenta ratones con tamaños de tumor de 80-257 mm3 se aleatorizaron en cinco grupos de diez ratones cada uno con una media de aproximadamente 143 mm3 por equilibrio aleatorio. Los pesos corporales se registraron cuando los ratones se aleatorizaron y se tomaron dos veces por semanas posteriormente en conjunto con las mediciones del tumor. Los grupos de tratamiento incluyen control de polímero, aminopterina libre a 1.5 mg/kg, micelas de aminopterina del Ejemplo 131 a 1.5 mg/kg y 7.5 mg/kg. Los tratamientos se realizaron en el Día 1, 8, y 15, o una vez a la semana por tres semanas (3xQW) por administración intravenosa de la vena de la cola. Las inyecciones fueron de 0.2 mL y el vehículo fue salina isotónica. La gráfica del crecimiento del tumor para cada grupo se muestra en la Figura 25. El grupo de control de polímero alcanzó un peso de tumor medio de 973.9 mg por el Día 28. Este grupo no experimentó pérdida de peso corporal apreciable durante el estudio. No se observaron reacciones de dosificación adversas. El tratamiento con la formulación de aminopterina a 1.5 mg/kg resultó en un peso de tumor medio de 1330.4 mg por el Día 28. Este grupo no produjo inhibición reportable cuando se compara con el control de vehículo en el Día 28. Este grupo no experimentó pérdida de peso corporal apreciable durante el estudio. No se observaron reacciones de dosificación adveras. El tratamiento con la formulación de aminopterina de 7.5 mg/kg resultó en un peso de tumor medio de 599.7 mg por el Día 28. Este grupo produjo una inhibición de 44.8% cuando se compara con el control de vehículo en el Día 28. Este grupo experimento leve pérdida de peso corporal con un medio de 4.3% en el Día 4. Los pesos corporales fueron completamente recuperados por el Día 15. No se observaron reacciones de dosificación adversas. El tratamiento con aminopterina libre de 1.5 mg/kg resultó en un peso de tumor medio de 1115.1 mg por el Día 28. Este grupo no produce inhibición reportable cuando se compara con el control de vehículo al Día 28. No se observó diferencia significante en el peso del tumor cuando se compara con el control de vehículo al Día 28. Este grupo no experimentó pérdida de peso apreciable durante el estudio.
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (14)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :
1. Micela caracterizada porque comprende al menos un copolímero de bloque múltiple, tal copolímero de bloque múltiple comprende: • un bloque polimérico, • un bloque de poli (aminoácido) reticulado o reticulable, • un bloque de poli (aminoácido) D , L-mezclado, en donde tal micela tiene un núcleo interno, un núcleo externo reticulable o reticulado, y una cubierta, en donde el bloque polimérico corresponde a la cubierta, el poli (bloque de aminoácido) reticulable o reticulado corresponde al núcleo externo, y el bloque de poli (aminoácido) D, L-mezclado corresponde al núcleo interno, de la micela, respectivamente; en donde tal bloque de poli (aminoácido) reticulable o reticulado comprende una funcionalidad química que se une fuertemente o coordina con iones de metal, en donde tal funcionalidad química es o comprende ácido hidroxámico, un hidroxamato, o un derivado del mismo, o es o comprende un grupo dihidroxibenceno orto-sustituido, es decir, un catechol, o un derivado del mismo.
2. Micela de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el bloque polimérico es hidrofílico y el bloque de poli (aminoácido) D,L-mezclado es hidrofóbico.
3. Micela de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque el bloque de poli (aminoácido) es una cadena de aminoácido covalentemente ligada, en donde cada monómero es un aminoácido natural o no natural.
4. Micela de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque al menos un copolímero de bloque múltiple posee una conformación de espiral aleatoria.
5. Micela de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque el ión de metal es o comprende fierro.
6. Micela de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque al menos un agente terapéutico está situado dentro del núcleo de tal micela, preferiblemente en donde tal agente terapéutico es hidrofóbico .
7. Micela de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque tal agente terapéutico se selecciona a partir del grupo que comprende: taxano, paclitaxel, docetaxel, cabazitaxel, epotilona, en particular Epotilona B, Epotilona D, Epotilona A, Epotilona C, un alcaloide vinca, vinorelbina, berberina, berberrubina, una camptotecina, SN- 38, S39625, antraciclina, daunorubicina, doxorubicina, aminopterina, picoplatino, o un terapéutico de platino, o combinaciones de los mismos.
8. Micela de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque un polímero en el bloque polimérico, preferiblemente el bloque polimérico hidrofílico, se selecciona a partir del grupo que comprende polietilenóxido, también referido como polietilenglicol o PEG, y derivados de los mismos, poli (N-vinil-2-pirolidona) , y derivados de los mismos, poli (N-isopropilacrilamida) , y derivados de los mismos, poli (hidroxietil acrilato) , y derivados de los mismos, poli (hidroxiletil metacrilato) , y derivados de los mismos, y polímeros de N- (2 -hidroxipropoil) metacrilamida (HMPA) y derivados de los mismos.
9. Micela de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque el hidroxamato comprende una porción que contiene ya sea ácido hidroxámico o un ácido hidroxámico N-sustituido .
10. Micela de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque comprende (A) : al menos un copolímero de tribloque de fórmula I: I en donde : n es 20-500; x es 3 a 50; y es 5 a 100; Rx es una porción que contiene hidroxamato o catecol ; R se selecciona a partir de uno o más grupos de cadena lateral de aminoácido natural o no natural de manera que el bloque total es hidrofóbico; R1 es -Z(CH2CH2Y)p(CH2)tR3, en donde: cada Y es independientemente p es 0-10; t es 0-10 y R3 es hidrógeno, -N3, -CN, -NH2, -CH3, una porción de ciclooctina de cadena, una amina mono-protegida, una di-amina protegida, un aldehido opcionalmente protegido, un hidroxilo opcionalmente protegido, un ácido carboxílico opcionalmente protegido, un tiol opcionalmente protegido, o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, de 5-8 elementos, alifático, que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, un anillo aril bicíclico saturado, parcialmente insaturado, de 8-10 elementos que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre; Q es un enlace de valencia o una cadena hidrocarburo C1 - 12 recta o ramificada, saturada o insaturada, bivalente, en donde 0-6 unidades de metileno de Q son reemplazadas independientemente por -Cy-, -0-, -NH-, -S-, 0C(0)-, -C(0)0-, -C(O)-, -SO-, - SO2 - , -NHSO2 - , - SO2NH- , -NHC(O)-, -C(0)NH-, -0C(0)NH-, o -NHC(0)0-, en donde : -Cy- es un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 5-8 elementos opcionalmente sustituido que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o un anillo arilo bicíclico saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 8-10 elementos opcionalmente sustituido, que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre; R2 es una amina mono-protegida, una di-amina protegida, N(R4)2, -MR4C(0)R4, -NRC (O) N (R4) 2 , -NRC(0)0R4, o - NR4S02R4; y cada R4 es independientemente hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, de 5-8 elementos, alifático, que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, un anillo aril bicíclico saturado, parcialmente insaturado, de 8-10 elementos que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o dos R4 en el mismo átomo de nitrógeno son tomados en conjunto con tal átomo de nitrógeno para formar un anillo arilo o saturado, parcialmente insaturado, de 4-7 elementos opcionalmente sustituido, que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre; o: que comprende (B) : al menos un copolímero de tribloque de fórmula II: II en donde : n es 20-500; m es 0, 1, o 2; y es 5 a 100; Ry se selecciona a partir de uno o más grupos de cadena lateral de aminoácido natural o no natural de manera que el bloque total es hidrofóbico ; R1 es -Z(CH2CH2Y)p(CH2)tR3, en donde: Z es -0-, -NH-, -S-, -C=C-, o -CH2-; cada Y es independientemente -0- o -S-; p es 0-10; t es 0-10; y R3 es hidrógeno, -N3, -CN, -NH2, -CH3/ una porción de ciclooctina de cadena, una amina mono-protegida, una di-amina protegida, un aldehido opcionalmente protegido, un hidroxilo opcionalmente protegido, un ácido carboxílico opcionalmente protegido, un tiol opcionalmente protegido, o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, de 5-8 elementos, alifático, que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, un anillo aril bicíclico saturado, parcialmente insaturado, de 8-10 elementos que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre; O : que comprende (C) : al menos un copolímero tribloque de fórmula III: III en donde : n es 20-500; m es 0, 1, o 2 ; x es 3 a 50; y es 5 a 100; R se selecciona a partir de uno o más grupos cadena lateral de aminoácido natural o no natural de manera que el bloque total es hidrofóbico; R1 es -Z(CH2CH2Y)p(CH2)tR3, en donde: Z es -0-, -NH-, -S-, -C=C-, o -CH2-; cada Y es independientemente -0- o -S-; p es 0-10; t es 0-10; y R3 es hidrógeno, -N3, -CN, -NH2, -CH3, una porción de ciclooctina de cadena, una amina mono-protegida, una di -amina protegida, un aldehido opcionalmente protegido, un hidroxilo opcionalmente protegido, un ácido carboxílico opcionalmente protegido, un tiol opcionalmente protegido, o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, de 5-8 elementos, alifático, que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, un anillo aril bicíclico saturado, parcialmente insaturado, de 8-10 elementos que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre; o : que comprende (D) : al menos un copolímero de tribloque de fórmula IV: IV en donde : n es 20-500; m es 0, 1, o 2; x es 3 a 50; y es 5 a 100; Ry se selecciona a partir de uno o más grupos de cadena lateral de aminoácido natural o no natural de manera que el bloque total es hidrofóbico; R1 es -Z(CH2CH2Y)p(CH2)tR3, en donde: Z es -O-, -NH-, -S-, -C=C-, o -CH2-; cada Y es independientemente -0- o -S-; p es 0-10; t es 0-10; y R3 es hidrógeno, -N3, -CN, -NH2, -CH3, una porción de ciclooctina de cadena, una amina mono-protegida, una di-amina protegida, un aldehido opcionalmente protegido, un hidroxilo opcionalmente protegido, un ácido carboxílico opcionalmente protegido, un tiol opcionalmente protegido, o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, de 5-8 elementos, alifático, que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, un anillo aril bicíclico saturado, parcialmente insaturado, de 8-10 elementos que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre;
11. Micela de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es un alquino o un derivado alquino terminal el cual es preferiblemente capaz de someterse a reacciones de cicloadición [3+2] con moléculas y biomoléculas que portan azida complementaria, o en donde la porción R1 de cualquiera de las fórmulas I, II, III, y IV es una azida o un derivado de azida, el cual es preferiblemente capaz de sufrir reacciones de cicloadición [3+2] con moléculas y biomoléculas que portan alquino complementarias.
12. Micela de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, caracterizada porque comprende al menos un copolímero de tribloque de fórmula V: en donde cada uno de Q, x , y, n, Rx, R^ y R2 es como se define en la reivindicación 10, J es independientemente un enlace de valencia o una cadena hidrocarburo C1-12 recta o ramificada, saturada o insaturada, bivalente, en donde 0-6 unidades de metileno de Q son reemplazadas independientemente por -Cy-, -0-, -NH-, -S-, -OC(0)-, -C(0)0-, -C(0)-, -SO-, - S02-, -NHSO2-, -S02NH-, -NHC(O)-, -C(0)NH-, -0C(0)NH-, o -NHC(0)0-, en donde : -Cy- es un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 5-8 elementos opcionalmente sustituido que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o un anillo arilo bicíclico saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 8-10 elementos opcionalmente sustituido, que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre; cada T es independientemente un grupo de objetivo.
13. Micela de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque tiene un agente terapéutico encapsulado en esta, que comprende (A) un copolímero de bloque múltiple de fórmula I y un copolímero de bloque múltiple de fórmula V, en donde cada una de la fórmula I y formula V son como se definen en las reivindicaciones 10 y 12, respectivamente, en donde preferiblemente la relación de la fórmula I a la fórmula V es entre 1000:1 y 1:1, preferiblemente 1000:1, 100:1, 50:1, 33:1, 25:1, 20:1, 10:1, 5:1, o 4:1; O : que comprende (B) un copolímero de bloque múltiple de fórmula II y un copolímero de bloque múltiple de fórmula V, en donde cada una de la fórmula II y formula V son como se definen en las reivindicaciones 10 y 12, respectivamente, en donde la relación de la fórmula II a la fórmula V es preferiblemente entre 1000:1 y 1:1, preferiblemente además es 1000:1, 100:1, 50:1, 33:1, 25:1, 20:1, 10:1, 5:1, O 4:1.
14. icela caracterizada porque comprende copolímero de tribloque, en donde tal copolímero de tribloque es de fórmula VI : vi, en donde M es un ión de metal; cada RT se selecciona independientemente a partir de ya sea -J-T o -Z (CH2CH2Y) P (CH2) tR3, en donde: Z es -O-, -S-, -C=C-, o -CH2-; cada Y es independientemente -O- o -S-; p es 0-10; t es 0-10; y R3 es -N3, -CN, una amina mono-protegida, una diamina protegida, un aldehido protegido, un hidroxilo protegido, un ácido carboxílico protegido, un tiol protegido, un éter corona de 9-30 elementos, o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, de 5-8 elementos, alifático, que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, un anillo aril bicíclico saturado, parcialmente insaturado, de 8-10 elementos que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre; Q es un enlace de valencia o una cadena hidrocarburo C1-12 recta o ramificada, saturada o insaturada, bivalente, en donde 0-6 unidades de metileno de Q son reemplazadas independientemente por -Cy-, -0-, -NH-, -S-, 0C(0)-, -C(0)0-, -C(0)-, -SO-, -SO2-, -NHSO2-, -S02NH-, -NHC(O)-, -C(0)NH-, -OC(0)NH-, o -NHC(0)0-, en donde : -Cy- es un anillo arilo saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 5-8 elementos opcionalmente sustituido que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o un anillo arilo bicíclico saturado, parcialmente insaturado, bivalente, de 8-10 elementos opcionalmente sustituido, que tiene 0-5 heteroátomos seleccionados independientemente a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre; en donde tal copolímero de tribloque es de la fórmula VII : VII, ?1 es 1-20; y X2 es 0-20; o: en donde tal copolímero de tribloque es de la fórmula VIII: en donde tal copolímero de tribloque es de la fórmula IX: es 5-30; y es 10-40.
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