MX2014008042A - Derivados de quinazolinona como inhibidores del virus de la hepatitis c. - Google Patents

Abstract

Inhibidores de la replicación del VHC de fórmula I (ver Fórmula) que incluyen las formas estereoquímicamente isoméricas, sales y solvatos de estos, donde R y R' tienen los significados que se definen en la presente; la presente invención también se refiere a procesos para preparar dichos compuestos, a composiciones farmacéuticas que los contienen y a su uso, solo o combinado con otros inhibidores del VHC, en la terapia contra el VHC.

Description

DERIVADOS DE QUINAZOLINONA COMO INHIBIDORES DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C CAMPO TÉCNICO Esta invención se refiere a derivados heterobicíclicos, en particular, a derivados de quinazolinona, los cuales son inhibidores del virus de la hepatitis C (VHC), a su síntesis y a su uso, solo o combinado con otros inhibidores del VHC, en el tratamiento o la profilaxis del VHC.

ANTECEDENTES DE LA TÉCNICA El VHC es un virus que contiene ARN de cadena sencilla y sentido positivo, el cual pertenece al género Hepacivirus de la familia Flaviviridae. El genoma vírico se traduce en un único marco de lectura abierto que codifica múltiples proteínas estructurales y no estructurales.

Tras la infección aguda inicial, la mayoría de los individuos infectados desarrollan hepatitis crónica, debido a que el VHC se replica preferentemente en los hepatocítos, aunque no es directamente citopático. En particular, la ausencia de una respuesta enérgica por parte de los linfocitos T y la elevada tendencia del virus a mutar parecen ser las causas que propician la elevada tasa de infecciones crónicas. La hepatitis crónica puede evolucionar hasta provocar fibrosis hepática, la cual puede acabar en cirrosis, enfermedad hepática terminal y CHC (carcinoma hepatocelular), por lo cual se ha convertido en la causa principal de trasplante de hígado.

Existen seis genotipos principales del VHC y más de 50 subtipos, los cuales se distribuyen geográficamente de forma distinta. El genotipo 1 del VHC es el que predomina en Europa y en los EE. UU. La considerable heterogeneidad genética del VHC tiene implicaciones importantes para el diagnóstico y en el ámbito clínico, y podría explicar las dificultades que se encuentran en el desarrollo de vacunas y la falta de respuesta a las terapias actuales.

La transmisión del VHC puede producirse a través del contacto con sangre o productos sanguíneos contaminados, por ejemplo, después de una transfusión de sangre o del uso de un fármaco por vía intravenosa. La introducción de pruebas de diagnóstico utilizadas en los análisis de sangre ha dado como resultado una tendencia a disminuir la incidencia del VHC después de las transfusiones. Sin embargo, debido a la lenta evolución de las enfermedades hepáticas terminales, las infecciones existentes seguirán suponiendo una seria carga médica y económica durante décadas.

Las terapias actuales para combatir el VHC se basan en interferón-alfa (IFN-a) (pegilado) combinado con ribavirina. Esta terapia combinada proporciona una respuesta virológica sostenida en un 40% de los pacientes infectados con el VHC de genotipo 1 y en aproximadamente un 80% de aquellos infectados con los genotipos 2 y 3. Además de la eficacia limitada para el genotipo 1 del VHC, esta terapia combinada presenta efectos secundarios significativos, que incluyen síntomas de la gripe, anomalías hematológicas y síntomas neuropsiquiátricos. Por lo tanto, se necesitan tratamientos más eficaces, más convenientes y que se toleren mejor.

La experiencia con los fármacos para combatir el VHC, en particular, con los inhibidores de proteasas del VHC, ha puesto de manifiesto que unos parámetros farmacocinéticos subóptimos y unas pautas posológicas complejas provocan rápidamente deficiencias involuntarias en el cumplimiento del tratamiento. A su vez, esto significa que la concentración mínima en un periodo de 24 horas (concentración mínima en plasma) de los fármacos respectivos empleados en un régimen para combatir el VIH se reduce frecuentemente hasta un nivel inferior al umbral de C½ o DEgo durante gran parte del día. Se considera que un nivel mínimo en un periodo de 24 horas de al menos la CI50 y, de forma más realista, la CI90 o la DE90, es esencial para ralentizar el desarrollo de mutantes resistentes a fármacos. El hecho de conseguir unos parámetros farmacocinéticos y una velocidad del metabolismo del fármaco necesarios para obtener tales niveles mínimos supone un reto importante para el diseño de fármacos.

La proteína NS5A del VHC se localiza en un punto posterior a la proteína NS4B y anterior a la proteína NS5B. Tras la escisión posterior a la traducción por parte de la serina-proteasa vírica NS3/4A, la NS5A madura y se obtiene una fosfoproteína de tres dominios que contiene zinc, la cual existe como una especie hipofosforilada (56-kDa, p56) o una especie hiperfosforilada (58-kDa, p58). La NS5A del VHC participa en múltiples aspectos del ciclo vital vírico, que incluyen la replicación vírica y el acoplamiento de las partículas infecciosas, así como también en la modulación del entorno de su célula huésped. Aunque no se ha atribuido ninguna función enzimática a la proteína, se ha descrito que interacciona con numerosos factores víricos y celulares.

Una serie de patentes y solicitudes de patente describen compuestos con actividad inhibitoria del VHC, en particular que tienen NS5A como diana. El documento WO2006/133326 describe derivados de estilbeno, mientras que los documentos WO 2008/021927 y WO 2008/021928 describen derivados bifenílicos que poseen actividad inhibitoria de NS5A del VHC. El documento WO 2008/048589 describe derivados de 4-(feniletinil)-1 H-pirazol y su uso antivírico. El documento WO 2008/070447 describe una amplia gama de compuestos inhibidores del VHC que incluyen un resto de bencimidazol. Los documentos WO-2010/017401 y WO-2010/065681 describen inhibidores de tipo bisimidazol de NS5A del VHC.

Se necesitan inhibidores del VHC que puedan resolver las desventajas de las terapias actuales para combatir el HCV, tales como los efectos secundarios, la eficacia limitada, la aparición de resistencia y las deficiencias en el cumplimiento del tratamiento, así como también mejorar la respuesta a la carga vírica sostenida.

La presente invención se refiere a un grupo de derivados de quinazolinona que inhiben el VHC con propiedades útiles respecto a uno o más de los siguientes parámetros: eficacia antivírica, perfil favorable de desarrollo de resistencia, toxicidad y genotoxicidad reducidas o nulas, parámetros farmacocinéticos y farmacodinámicos favorables, formulación y administración sencillas, e interacciones fármaco-fármaco limitadas o nulas con otras sustancias farmacológicas, en particular otros agentes contra el VHC.

Los compuestos de la invención también pueden resultar atractivos debido al hecho de que carecen de actividad frente a otros virus, en particular contra el VIH. Los pacientes infectados con el VIH sufren a menudo infecciones conjuntas tales como las debidas al VHC. El tratamiento de tales pacientes con un inhibidor del VHC que también inhibiera el VIH podría provocar la aparición de cepas de VIH resistentes.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En una primera realización, la presente invención proporciona un subgrupo de compuestos de fórmula I, que puede ser representado por la fórmula (I); (I) o un estereoisómero de estos, donde: al menos un grupo se selecciona independientemente de un grupo que comprende a R y R' se seleccionan independientemente entre -CR1R2R3, arilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados entre halo y metilo, o heterocicloalquilo, donde R1 se selecciona entre alquilo C1-4, alquilo C2-4 sustituido con metoxi o hidroxilo, y fenilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre halo y metilo; R2 es hidroxilo, amino, mono- o di(alquil examino, (alquil C1. 4)carbonilamino, (alquiloxi Ci-4)carbonilam¡no; R3 es hidrógeno o alquilo C^; o una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de estos.

En una realización preferida, selecciona independientemente de un grupo que comprende Incluso más preferentemente es un compuesto de fórmula I don Más preferentemente, los compuestos de la invención proporcionan compuestos que se pueden representar con la fórmula la En una realización adicional de la invención, F¾ se selecciona del grupo que comprende (alquil Ci-4)carbonilamino o (alquiloxi Ci. 4)carbonilamino.

En otra realización más de la invención, Ri se selecciona entre alquilo 03.4 ramificado, alquilo C2-3 sustituido con metoxi, y fenilo opcionalmente sustituido con 1 sustituyente seleccionado entre halo y metilo.

En otra realización más de la invención, R3 es hidrógeno.

En una realización adicional, R y R' son idénticos.

En una realización adicional más, R2 es (alquil Ci_ 4)carbonilamino o (alquiloxi Ci-4)carbonilamino, y R3 es hidrógeno.

La invención también proporciona un método para el tratamiento o la profilaxis de una infección provocada por el VHC, en particular del genotipo 1a o 1 b, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según se ha definido anteriormente en la presente.

Las formas estereoisoméricas puras de los compuestos y los intermedios que se mencionan en la presente se definen como isómeros sustancialmente exentos de otras formas enantioméricas o diastereoméricas de la misma estructura molecular básica de dichos compuestos o intermedios. En particular, la expresión "estereoisoméricamente puro" se refiere a compuestos o intermedios que tienen un exceso estereoisomérico de al menos un 80% (es decir, un mínimo de un 90% de un isómero y un máximo de un 10% de los otros isómeros posibles) y hasta un exceso estereoisomérico de un 100% (es decir, un 100% de un isómero y nada de los demás), más concretamente, compuestos o intermedios que tienen un exceso estereoisomérico desde un 90% hasta un máximo de un 100%, aún más concretamente que tienen un exceso estereoisomérico desde un 94% hasta un máximo de un 100% y, aún más concretamente, que tienen un exceso estereoisomérico desde un 97% hasta un máximo de un 100%. Las expresiones "enantioméricamente puro" y "diastereoméricamente puro" se deben interpretar de un modo similar, pero haciendo referencia al exceso enantiomérico y el exceso diastereomérico, respectivamente, de la mezcla en cuestión.

Las formas estereoisoméricas puras o los estereoisómeros puros de los compuestos y los intermedios de esta invención se pueden obtener mediante la aplicación de procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los enantiómeros se pueden separar unos de otros mediante la cristalización selectiva de sus sales diastereoméricas con ácidos o bases ópticamente activos. Algunos ejemplos de estos son el ácido tartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido ditoluoiltartárico y ácido canforsulfónico. Como alternativa, los enantiómeros se pueden separar mediante técnicas cromatográficas utilizando fases estacionarias quirales. Dichas formas estereoquímicamente isoméricas puras también pueden obtenerse a partir de las formas estereoisoméricas puras correspondientes de los materiales de partida adecuados, siempre que la reacción tenga lugar de manera estereoespecífica. Preferentemente, si se desea obtener un estereoisómero específico, dicho compuesto se sintetizará mediante métodos de preparación estereoespecíficos. En estos métodos, se emplearán convenientemente materiales de partida enantioméricamente puros.

Los racematos diastereoméricos de los compuestos de fórmula I se pueden obtener por separado mediante métodos convencionales. Los métodos físicos de separación adecuados que se pueden utilizar de forma beneficiosa son, por ejemplo, la cristalización selectiva y la cromatografía, p. ej., la cromatografía en columna o la cromatografía de fluidos supercríticos.

Los compuestos de fórmula I y los subgrupos de los compuestos de fórmula I según se han definido anteriormente en la presente contienen varios centros de quiralidad. Son de interés los centros estereogénicos del anillo de pirrolidina en el átomo de carbono 2. La configuración en esta posición puede ser la correspondiente a L-prolina, es decir, o la correspondiente a D-prolina, es decir, Son de particular interés los compuestos de fórmula I subgrupos de estos, según se define en la presente, que se corresponden c la fórmula la.

También es de interés la configuración del grupo -CR1R2R3 donde R3 es H: cuando R1 se selecciona entre alquilo C3- ramificado y alquilo C2-3 sustituido con metoxi, entonces se prefiere la configuración S; cuando R1 se selecciona entre fenilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre halo y metilo, entonces se prefiere la configuración R.

Las sales de adición farmacéuticamente aceptables comprenden las formas salinas de adición de ácido y base atóxicas terapéuticamente activas de los compuestos de fórmula I o subgrupos de estos. Son de interés las formas libres, es decir, no salinas, de los compuestos de fórmula I o de cualquier subgrupo de compuestos de fórmula I especificado en la presente.

Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables se pueden obtener convenientemente tratando la forma básica con un ácido adecuado de este tipo. Los ácidos adecuados comprenden, por ejemplo, ácidos inorgánicos tales como haluros de hidrógeno, p. ej., ácido clorhídrico o bromhídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico y los ácidos similares; o ácidos orgánicos tales como, por ejemplo, ácido acético, propiónico, hidroxiacético, láctico, pirúvico, oxálico (es decir, etanodioico), malónico, succínico (es decir, ácido butanodioico), maleico, fumárico, málico (es decir, ácido hidroxibutanodioico), tartárico, cítrico, metanosulfónico, etanosulfónico, bencenosulfónico, p-toluenosulfónico, ciclámico, salicílico, p-aminosalicílico, pamoico y los ácidos similares. A la inversa, dichas formas salinas se pueden convertir en la forma de base libre tratándolas con una base adecuada.

Los compuestos de fórmula (I) que contienen un protón ácido también se pueden convertir en sus sales de adición de base, en particular en formas salinas de adición de amina o metal, tratándolas con bases orgánicas e inorgánicas adecuadas. Las formas salinas de adición de base adecuadas comprenden, por ejemplo, las sales de amonio, las sales de metales alcalinos y alcalinotérreos, p. ej., las sales de litio, sodio, potasio, magnesio, calcio y similares, las sales con bases orgánicas, p. ej., las sales de benzatina, N- metil-D-glucamina, hidrabamina, y las sales con aminoácidos tales como, por ejemplo, arginina, Usina y similares.

El término "solvatos" engloba cualesquiera solvatos farmacéuticamente aceptables que los compuestos de fórmula I, así como también las sales de estos, puedan formar. Tales solvatos son, por ejemplo, hidratos, alcoholatos, p. ej., etanolatos, propanolatos y similares.

Algunos de los compuestos de fórmula I también pueden existir en formas tautoméricas. Por ejemplo, las formas tautoméricas de grupos amida (-C(=0)-NH-) son iminoalcoholes (-C(OH)=N-). Se pretende que las formas tautoméricas, aunque no se indiquen de forma explícita en las fórmulas estructurales representadas en la presente, queden incluidas dentro del alcance de la presente invención.

La expresión "alquilo C1-C4", tal como se utiliza en la presente, como un grupo o parte de un grupo, define grupos hidrocarbonados saturados de cadena lineal o ramificada que contienen de 1 a 4 átomos de carbono tales como, por ejemplo, metilo, etilo, 1 -propilo, 2-propilo, 1 -butilo, 2-butilo, 2-metil-1 -propilo y 2-metil-2-propilo. A los efectos de la presente invención, entre los grupos alquilo C1- son de interés los grupos alquilo C3-4, es decir, grupos hidrocarbonados de cadena lineal o ramificada que contienen 3 o 4 átomos de carbono tales como 1 -propilo, 2-propilo, 1 -butilo, 2-butilo, 2-metil-1 -propilo, 2-metil-2-propilo. Pueden ser de particular interés los grupos alquilo C3-4 ramificados tales como 2-propilo, 2-butilo, 2-metil-1 -propilo, 2-metil-2-propilo.

La expresión "cicloalquilo CW, como un grupo o parte de este, define grupos hidrocarbonados cíclicos saturados que contienen de 3 a 6 átomos de carbono, los cuales forman conjuntamente una estructura cíclica. Los ejemplos de grupos cicloalquilo C3-6 incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.

La expresión "alcoxi Ci- ', como un grupo o parte de un grupo, se refiere a un grupo de fórmula -0-(alquilo C- ) donde el alquilo C- es como se ha definido anteriormente. Algunos ejemplos de grupos alcoxi C- son metoxi, etoxi, n-propoxi e isopropoxi.

El término "halo" es genérico para fluoro, cloro, bromo y yodo.

Los términos "(=0)" u "oxo", tal como se utilizan en la presente, hacen referencia a grupos que forman un resto carbonilo cuando se unen a un átomo de carbono. Cabe destacar que un átomo solo podrá estar sustituido con un grupo oxo cuando la valencia de ese átomo lo permita.

El término "arilo", como un grupo o parte de este, tal como se utiliza en la presente a los efectos de su definición, se refiere a una estructura anular aromática que comprende opcionalmente uno o dos heteroátomos seleccionados entre N, O y S, en particular entre N y O. Dicha estructura anular aromática puede tener 5 o 6 átomos anulares.

El prefijo "hetero-", tal como se utiliza en la presente en la definición de un grupo, se refiere a que el grupo comprende al menos 1 heteroátomo seleccionado entre N, O y S, en particular N y O. Por ejemplo, el término "heteroarilo" se refiere a una estructura anular aromática según sea definido para el término "arilo" que comprende al menos 1 heteroátomo seleccionado entre N, O y S, en particular entre N y O, por ejemplo, furanilo, oxazolilo, piridinilo. Como alternativa, la expresión "hetero(cicloalqu¡lo C3-6)" se refiere a un grupo hidrocarbonado cíclico saturado según se ha definido para "cicloalquilo C3-6" que comprende además al menos 1 heteroátomo seleccionado entre N, O y S, en particular entre N y O, por ejemplo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, piperidinilo.

Cuando la posición de un grupo en un resto molecular no se especifique (por ejemplo, un sustituyente en un fenilo) o se represente con un enlace flotante, dicho grupo podrá estar localizado en cualquier átomo del resto en cuestión, con la condición de que la estructura resultante sea químicamente estable. Cuando una variable cualquiera esté presente más de una vez en la molécula, cada definición será independiente.

Se pretende que las expresiones "compuestos de fórmula I", "compuestos de la presente" o similares, siempre que se utilicen en la presente, incluyan los compuestos de fórmula I, incluidas las formas estereoisoméricas posibles, así como las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de estos.

Métodos sintéticos generales ESQUEMA 1 Los bloques moleculares (building blocks) utilizados en la síntesis de los compuestos de fórmula I se describen en el esquema 1. La o aminocetona lia (esquema 1 , A= NH2), donde X es un halógeno, en particular bromo o yodo, se acopla con un derivado protegido adecuadamente III, donde PG' es un grupo protector del nitrógeno, preferentemente íe f-butoxicarbonilo, en presencia de un reactivo de acoplamiento para la acilación de grupos amino, preferentemente HATU, en presencia de una base tal como DIPEA. El intermedio formado de este modo se cicla para obtener un compuesto imidazólico de fórmula general IV mediante el tratamiento con acetato de amonio, preferentemente a una temperatura comprendida en el intervalo entre 0 °C y 150 °C.

Como alternativa, el intermedio imidazólico IV se puede obtener mediante el acoplamiento de una a-halocetona llb, donde X y A representan cada uno independientemente un átomo halogenado, X se selecciona preferentemente entre yodo o bromo y A se selecciona preferentemente entre cloro, bromo o yodo, con un compuesto protegido adecuadamente III, donde PG' es un grupo protector del nitrógeno, preferentemente teAf-butoxicarbonilo, en presencia de una base adecuada, por ejemplo, DI PEA, y a continuación la delación para obtener el intermedio imidazólico IV según se ha descrito anteriormente. Este intermedio IV se puede transformar para obtener un éster borónico de fórmula V en condiciones de catálisis con Pd, por ejemplo, en presencia de Pd(dppf)CI2, b/'s(pinacolato)diboro y una base, por ejemplo, acetato de potasio.

En los esquemas (2A, 2B) se describen otros bloques moleculares.

ESQUEMA 2A La síntesis de los compuestos de fórmula IX y IXa se describe en el esquema 2a. La formación de un enlace de tipo amida partiendo de VI (X' es un halógeno seleccionado entre yodo o bromo, preferentemente bromo) y VII da como resultado la formación del compuesto VIII. Esta reacción se puede llevar a cabo convirtiendo el compuesto VII en un haluro de ácido, por ejemplo, un fluoruro de ácido o cloruro de ácido, y a continuación haciéndolo reaccionar con VI en presencia de una base. Otro ejemplo consiste en la formación de VIII a partir de VI y VII mediante el uso del reactivo de acoplamiento cloruro de 4-(4,6-dimetoxi[1.3.5]triazin-2-il)-4-metilmorfolinio o BF4 (DMTMM). A continuación, los compuestos VIII se convierten en los compuestos de fórmula general IX en condiciones básicas, por ejemplo, KOH o Na2CO3 en etanol. En el caso de que los compuestos de fórmula IX se puedan desproteger (p. ej., con HCI en dioxano en el caso de que PG equivalga a terf-butoxicarbonilo), la amina formada se podrá acoplar con un ácido de fórmula R(CO)OH en condiciones habituales de formación de enlaces de tipo amida (p. ej., mediante el tratamiento con HATU y una base tal como DIPEA o EDCI/HOBt/DIPEA).

De forma similar, los compuestos de fórmula IV se pueden transformar en compuestos de fórmula IVa y Va según se representa en el esquema 2B.

ESQUEMA 2B El bloque molecular IX, obtenido mediante los métodos descritos en el esquema 2a y V (Esquema 1 , 2B) se puede convertir en la estructura X, utilizando las condiciones de Suzuki-Miyaura (esquema 3).

ESQUEMA 4 Cuando PG' y PG en los esquemas 1-4 representan R'(C=0)- y R(C=0)-, respectivamente, los compuestos de estructura general X quedan englobados dentro la definición de los compuestos de fórmula I, por ejemplo, utilizando Va y IXa en un acoplamiento de Suzuki. En este caso, el esquema 3 describe la síntesis de los compuestos de fórmula I, por ejemplo, utilizando Va y IXa en un acoplamiento de Suzuki. Como alternativa, X se puede desproteger según se describe en el esquema 4. Por ejemplo, mediante el tratamiento con ácido (por ejemplo, HCI en ¡PrOH) cuando PG o PG' representan ferf-butiloxicarbonilo (Boc). El compuesto XIII se puede transformar en un compuesto de fórmula Ib, donde R y R' son idénticos, mediante la formación clásica de una amida entre un ácido R-(C=0)OH y la bisamina XIII según se describe en el esquema 5. Los métodos preferidos consisten en el uso de HATU en presencia de una base tal como DIPEA o HOBt/EDCI/DIPEA.

ESQUEMA 5 Cuando PC es distinto de PG, es posible realizar una desprotección selectiva, según se describe en el esquema 4, la cual daría como resultado los compuestos XII o XI cuando se parte de X. Por ejemplo, en el caso de que PG' sea ferf-butiloxicarbonilo (Boc) y PG sea benciloxicarbonilo (Cbz), se puede llevar a cabo una desprotección selectiva eliminando el grupo protector Boc en condiciones ácidas, tales como HCI en iPrOH a temperatura ambiente, o eliminando el grupo protector CBz en condiciones reductoras, tales como hidrógeno en presencia de un catalizador, p. ej., Pd(OH)2.

Cuando PG' representa R'(C=0)- o PG representa R(C=0)-, la síntesis de los compuestos X según se describe en los esquemas 1-3 da como resultado el compuesto de fórmula XIV (esquema 6) o XVI (esquema 7), respectivamente. Los compuestos XIV y XVI se pueden obtener a partir del compuesto XII y R'(C=0)OH o XI y R(C=O)OH, respectivamente, en las condiciones habituales para la formación de amidas. A continuación, estos compuestos se pueden transformar en los compuestos de fórmula I. La desprotección selectiva de XIV para obtener XV seguida de la formación de un enlace de tipo amida entre XV y R(C=0)-OH da ^ como resultado los compuestos de fórmula I. A continuación, se puede aplicar una secuencia de reacciones análoga para transformar XVI en XVII y seguir los pasos posteriores para obtener los compuestos de fórmula I.

ESQUEMA 6 ESQUEMA 7 En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I según se especifica en la presente y un portador farmacéuticamente aceptable. En este contexto, una cantidad terapéuticamente eficaz es una cantidad suficiente para estabilizar o para reducir una infección provocada por el VHC en sujetos infectados, o una cantidad suficiente para prevenir una infección provocada por el VHC en sujetos que corren el riesgo de ser infectados. En un aspecto adicional más, esta invención se refiere a un proceso para preparar una composición farmacéutica según se especifica en la presente, que comprende mezclar de forma íntima un portador farmacéuticamente aceptable con una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, según se especifica en la presente.

Por consiguiente, los compuestos de la presente invención o cualquier subgrupo de estos se pueden formular en varias formas farmacéuticas con el fin de poderlos administrar. Como composiciones adecuadas, se pueden citar todas las composiciones empleadas normalmente para administrar fármacos por vía sistémica. Para preparar las composiciones farmacéuticas de esta invención, se combina una cantidad eficaz del compuesto particular, opcionalmente en forma de sal de adición o complejo metálico, como principio activo, en mezcla íntima con un portador farmacéuticamente aceptable, pudiendo adoptar dicho portador una gran variedad de formas dependiendo de la forma del preparado que se desee para la administración. Es deseable que estas composiciones farmacéuticas adopten una forma farmacéutica unitaria adecuada, en particular, para la administración por vía oral, rectal, percutánea o por inyección parenteral. Por ejemplo, en la preparación de composiciones en una forma farmacéutica oral, se puede emplear cualquiera de los medios farmacéuticos habituales tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparados líquidos orales tales como suspensiones, jarabes, elixires, emulsiones y soluciones; o portadores sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares en el caso de polvos, pastillas, cápsulas y comprimidos. Debido a que su administración resulta sencilla, los comprimidos y las cápsulas representan las formas farmacéuticas unitarias orales más convenientes, en cuyo caso se emplean obviamente portadores farmacéuticos sólidos. Para las composiciones parenterales, el portador normalmente comprenderá agua esterilizada, al menos en gran parte, aunque puede incluir otros ingredientes, por ejemplo, para incrementar la solubilidad. Se pueden preparar soluciones inyectables, por ejemplo, en las que el portador comprenda solución salina, solución de glucosa o una mezcla de solución salina y de glucosa. También se pueden preparar suspensiones inyectables, en cuyo caso se pueden emplear portadores líquidos, agentes de suspensión y similares que sean adecuados. También se incluyen preparados en forma sólida que están diseñados para convertirlos, poco antes de su uso, en preparados en forma líquida. En las composiciones adecuadas para la administración percutánea, el portador comprende opcionalmente un agente potenciador de la penetración y/o un agente humectante adecuado, opcionalmente combinados con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones minoritarias, donde los aditivos no provocan ningún efecto perjudicial significativo en la piel. Los compuestos de la presente invención también se pueden administrar mediante inhalación o insuflación oral, en forma de una solución, una suspensión o un polvo seco, utilizando cualquier sistema de suministro conocido en la técnica.

Es especialmente conveniente formular las composiciones farmacéuticas mencionadas anteriormente en formas farmacéuticas unitarias debido a la uniformidad de la dosis y a que se pueden administrar fácilmente. La expresión "forma farmacéutica unitaria", tal como se utiliza en la presente, se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de principio activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, asociada con el portador farmacéutico requerido. Algunos ejemplos de tales formas farmacéuticas unitarias son comprimidos (incluidos los comprimidos recubiertos o ranurados), cápsulas, pastillas, supositorios, sobres de polvos, obleas, soluciones o suspensiones inyectables y similares, y múltiplos segregados de estos.

Los compuestos de fórmula I presentan actividad contra el VHC y se pueden utilizar en el tratamiento y la profilaxis de una infección provocada por el VHC o de enfermedades asociadas con el VHC. Estas últimas incluyen fibrosis hepática progresiva, inflamación y necrosis que provocan cirrosis, enfermedad hepática terminal y carcinoma hepatocelular. Además, existe constancia de que una serie de compuestos de esta invención son activos contra cepas mutadas del VHC. Además, los compuestos de esta invención pueden presentar unas propiedades atractivas en cuanto a la biodisponibilidad, pueden presentar un perfil farmacocinético favorable, que incluye una semivida, AUC (área bajo la curva) y valores máximos y mínimos aceptables, y pueden carecer de fenómenos desfavorables tales como un inicio que no sea suficientemente rápido o retención en los tejidos.

La actividad antivírica in vitro contra el VHC que presentan los compuestos de fórmula I se puede evaluar en un sistema celular de replicones del VHC basado en Lohmann et al. (1999), Science 285: 110-113, con las modificaciones adicionales descritas en Krieger et al. (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624 y en Lohmann et al. (2003) Journal of Virology 77: 3007-3019 para el genotipo 1b y en Yi et al. (2004) Journal of Virology 78: 7904-7915 para el genotipo 1a (que se incorporan a la presente por referencia), según se ilustra adicionalmente en la sección de ejemplos. Aunque este modelo no representa un modelo completo de infección para el VHC, está aceptado de forma generalizada como el modelo más sólido y eficaz para la replicación autónoma del ARN del VHC que se encuentra disponible en la actualidad. Se debe considerar que es importante distinguir entre los compuestos que interfieren de manera específica con las funciones del VHC y los que ejercen efectos citotóxicos o citostáticos en el modelo de replicones del VHC y, como consecuencia, provocan una reducción de la concentración del ARN del VHC o de las enzimas marcadoras asociadas. En la técnica se dispone de ensayos para evaluar la citotoxicidad celular, que se basan, por ejemplo, en la determinación de la actividad de enzimas mitocond ríales utilizando colorantes fluorogénicos rédox tales como la resazurina. Además, existen análisis celulares secundarios para evaluar la inhibición no selectiva de la actividad de genes marcadores asociados tales como la luciferasa de la luciérnaga. Se puede introducir un gen marcador de una luciferasa, cuya expresión depende de un promotor del gen que presenta una actividad constitutiva, en tipos celulares adecuados mediante una transfección estable y estas células se pueden utilizar en un análisis secundario para descartar inhibidores no selectivos.

Debido a sus propiedades contra el VHC, los compuestos de fórmula I o subgrupos de estos, según se especifica en la presente, son útiles en la inhibición de la replicación del VHC, en particular en el tratamiento de animales de sangre caliente, en particular seres humanos, infectados con el VHC, y para la profilaxis de infecciones provocadas por el VHC en animales de sangre caliente, en particular seres humanos. La presente invención se refiere además a un método de tratamiento para un animal de sangre caliente, en particular un ser humano, infectado por el VHC o que corre el riesgo de ser infectado por el VHC, donde dicho método comprende la administración de una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, según se ha definido anteriormente en la presente.

Por consiguiente, los compuestos de fórmula I, según se especifican en la presente, se pueden utilizar como una medicina, en particular como una medicina contra el VHC. Dicho uso como una medicina o método de tratamiento comprende la administración sistémica a sujetos infectados con el VHC o a sujetos susceptibles de ser infectados con el VHC de una cantidad eficaz para aliviar o prevenir los síntomas y las afecciones asociadas con una infección provocada por el VHC.

La presente invención también se refiere al uso de los compuestos de la presente en la elaboración de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una infección provocada por el VHC.

En general, se considera que una cantidad antivírica diaria eficaz sería de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 50 mg/kg o de aproximadamente 0.02 mg/kg a aproximadamente 30 mg/kg de peso corporal. Podría resultar adecuado administrar la dosis requerida como dos, tres, cuatro o más subdosis en intervalos adecuados a lo largo del día. Dichas subdosis se pueden formular como formas farmacéuticas unitarias, por ejemplo, que contengan de aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg, o de aproximadamente 1 a aproximadamente 300 mg, o de aproximadamente 1 a aproximadamente 100 mg, o de aproximadamente 2 a aproximadamente 50 mg del principio activo por forma farmacéutica unitaria.

Terapia combinada La invención también se refiere a una combinación de un compuesto de fórmula I, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable de este, y otro compuesto antivírico, en particular otro compuesto contra el VHC. El término "combinación" se refiere a un producto que contiene (a) un compuesto de fórmula I, según se ha definido anteriormente en la presente, y (b) otro inhibidor contra el VHC, como un preparado combinado para el uso simultáneo, secuencial o por separado en el tratamiento de infecciones provocadas por el VHC.

Las combinaciones de la presente invención se pueden utilizar como medicamentos. Por consiguiente, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) o cualquier subgrupo de este según se ha definido anteriormente para la elaboración de un medicamento útil a la hora de inhibir la actividad del VHC en un mamífero infectado con un virus de tipo VHC, donde dicho medicamento se utiliza en una terapia combinada, comprendiendo dicha terapia combinada en particular un compuesto de fórmula (I) y al menos otro agente contra el VHC diferente, por ejemplo, IFN-a, IFN-a pegilado, ribavirina, albuferón, taribavirina, nitazoxanida, Debio025 o una combinación de estos.

Otros agentes que se pueden combinar con los compuestos de la presente invención incluyen, por ejemplo, inhibidores nucleosídicos o no nucleosídicos de la polimerasa del VHC, inhibidores de proteasas, inhibidores de helicasas, inhibidores de NS4B y agentes que inhiben funcionalmente el sitio interno de entrada al ribosoma (IRES), así como otros agentes que inhiben la unión a la célula del VHC o la entrada del virus, la traducción del ARN del VHC, la transcripción del ARN del VHC, la replicación o maduración del VHC, el acoplamiento o la liberación del virus. Los compuestos específicos de estas clases incluyen inhibidores de proteasas del HVC tales como telaprevir (VX-950), boceprevir (SCH-503034), narlaprevir (SCH-900518), ITMN-191 (R-7227), TMC-435350 (TMC-435), MK- 7009, BI-201335, BI-2061 (ciluprevir), B S-650032, ACH-1625, ACH-1095, GS 9256, VX-985, IDX-375, VX-500, VX-813, PHX-1766, PHX2054, IDX-136, IDX-316, ABT-450, EP-013420 (y otros del mismo género) y VBY-376; los inhibidores nucleosídicos de la polimerasa del VHC útiles en la invención incluyen TMC649128, R7128, PSI-7851 , PSI 7977, INX-189.IDX-184, IDX-102, R1479, UNX-08189, PSI-6130, PSI-938 y PSI-879, así como otros análogos nucleosídicos y nucleotídicos diferentes e inhibidores del VHC, incluidos los derivados que son nucleósidos con una modificación de tipo 2 -C-metilo, nucleósidos con una modificación de tipo 4'-aza y nucleósidos con una modificación de tipo T-desaza. Los inhibidores de la polimerasa del VHC no nucleosídicos útiles en la invención incluyen HCV-796, HCV-371, VCH-759, VCH-916, VCH- 222, ANA-598, MK-3281 , ABT-333, ABT-072, PF-00868554, BI-207127, GS-9190, A-837093, JKT-109, GL-59728, GL-60667, ABT-072, AZD-2795 y TMC647055.

Se pretende que los siguientes ejemplos ilustren la invención y no se deben interpretar como una limitación de su alcance.

Parte experimental: Métodos de LCMS Método A: información general: fase móvil A: H20 (0.1% de TFA); B: CH3CN (0.05% de TFA); tiempo de parada: 2 min; tiempo del gradiente (min) [%A/%B]: desde 0.01 [90/10] hasta 0.9 [20/80] hasta 1.5 [20/80] hasta 1.51 [90/10]; flujo: 1.2 mUmin; temp. de la columna: 50 °C Método A1 : Shimadzu LCMS 2010, Shim-pack XR-ODS, 3*30 mm Método A2: Xtimate C18 2.1*30 mm, 3 pm Método A3: SHIMADZU Shim pack 2*30 Método B: Agilent 1100, YMC-PACK ODS-AQ, 50^2.0 mm, 5 pm, fase móvil A: H20 (0.1% de TFA); B: CH3CN (0.05% de TFA); tiempo de parada: 10 min; tiempo del gradiente (min) [%A/%B]: desde 0 [100/0] hasta 1 [100/0] hasta 5 [40/60] hasta 7.5 [40/60] hasta 8 [100/0]; flujo: 0.8 mlJmin; temp. de la columna: 50 °C Método C: Agilent 1100, YMC-PACK ODS-AQ, 50x2.0 mm, 5 µ??, fase móvil A: H20 (0.1% de TFA); B: CH3CN (0.05% de TFA); tiempo de parada: 10 min; tiempo del gradiente (min) [%A/%B]: desde 0 [90/10] hasta 0.8 [90/10] hasta 4.5 [20/80] hasta 7.5 [20/80] hasta 8 [90/10]; flujo: 0.8 mL/min; temp. de la columna: 50 °C Método D; Shimadzu LCMS 2010, Shim-pack XR-ODS,3*30 mm, fase móvil A: H20 (0.1% de TFA); B: CH3CN (0.05% de TFA); tiempo de parada: 2 min; tiempo del gradiente (min) [%A/%B]: desde 0.01 [100/0] hasta 0.9 [70/30] hasta 1.5 [70/30] hasta 1.51 [100/0]; flujo: 1.2 mIJmin; temp. de la columna: 50 °C Método E: cromatografía líquida: Waters Alliance 2695, detector de UV: Waters 996 PDA, intervalo: 210-400 nm; detector de masas: Waters ZQ, fuente de iones: ES+, ES-; columna utilizada: SunFire C18 3.5 pm 4.6x100 mm; fase móvil A: NH4OOCH 10mM + 0.1% de HCOOH en H2O; fase móvil B: CH3OH; temp. de la columna: 50 °C; flujo: 1.5 mL/min; tiempo del gradiente (min) [%A/%B]: desde 0 [65/35] hasta 7 [5/95] hasta 9.6 [5/95] hasta 9.8 [65/35] hasta 12 [65/35].

Método F: Xtimate C18 2.1*30 mm, 3 Mm, fase móvil A: H2O (1.5 ml_ de TFA /4 L); B: CH3CN (0.75 ml_ de TFA/4 L); tiempo de parada: 3 min; tiempo del gradiente (min) [%A/%B]: desde 0.0 [90/10] hasta 1.35 [20/80] hasta 2.25 [20/80] hasta 2.26 [90/10] hasta 3.0 [90/10]; flujo: 0.8 mUmin; temp. de la columna: 50 °C Método G: condiciones generales: fase móvil A: H20 (1.5 mL de TFA /4 L); B: CH3CN (0.75 mL de TFA/4 L); tiempo de parada: 2min; tiempo del gradiente (min) [%A/%B]: desde 0.0 [100/0] hasta 0.9 [40/60] hasta 1.5 [40/60] hasta 1.51 [100/0] hasta 2.0 [100/0]; flujo: 1.2 mL/min; temp. de la columna: 50 °C.

Método G1 : Xtimate C18, 2.1*30 mm, 3 pm Método H: condiciones generales: fase móvil A: H20 (0.1% de TFA); B: CH3CN (0.05% de TFA); tiempo de parada: 10 min; tiempo del gradiente (min) [%A/%B]: desde 0.0 [90/10] hasta 0.8 [90/10] hasta 4.5 [20/80] hasta 7.5 [20/80] hasta 9.5 [90/10]; flujo: 0.8 mlJmin; temp. de la columna: 50 °C Método H1 : Agilent TC-C18, 2.1*50 mm, 5pm Método I: Shimadzu LCMS 2010, Shim-pack XR-ODS,3*30 mm, fase móvil A: H20 (0.1% de TFA); B: CH3CN (0.05% de TFA); tiempo de parada: 7 min; tiempo del gradiente (min) [%A/%B]: desde 0.01 [90/10] hasta 6.0 [20/80] hasta 6.5 [20/80] hasta 6.51 [90/10]; flujo: 0.8 mL/min; temp. de la columna: 50 °C Método J: Agilent TC-C18, 50x2.1 mm, 5 pm, fase móvil A: H20 (0.1% de TFA); B: CH3CN (0.05% de TFA); tiempo de parada: 10 min; tiempo posterior: 0.5 min; tiempo del gradiente (min) [%A/%B]: desde 0 [100/0] hasta 1 [100/0] hasta 5 [40/60] hasta 7.5 [15/85] hasta 9.5 [100/0]; flujo: 0.8 mL/min; temp. de la columna: 50 °C Síntesis de los intermedios: Se disolvió 2-bromo-1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona (526.5 g, 1204. mmol) en CH3CN (6000 mL). Se añadió Boc-L-prolina (284 g, 1325 mmol) a la solución y la mezcla de reacción se agitó durante 20 minutos a temperatura ambiente. Se añadió Et3N (480 mL, 3612 mmol) gota a gota a la solución. La mezcla de reacción se agitó durante 15 horas a temperatura ambiente. Se eliminó el disolvente al vacío y el crudo SC-1 (794 g) se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional. Método A1; tR: 1.68 min. m/z : 484.1 (M+Na)+ Masa exacta: 461.1 Se disolvió SC-1 (794 g, 1204 mmol) en tolueno (6000 mL) y se añadió acetato de amonio (1855 g, 24096 mmol) a la solución. La mezcla se agitó durante 12 horas a 100 °C. La solución se diluyó con acetato de etilo (1000 mL) y se lavó con agua (2 x 500 mL). La fase inorgánica se extrajo con acetato de etilo (2 x 500 mL). Las fases orgánicas combinadas se concentraron al vacío. El residuo se lavó disgregándolo en CH3CN (300mL) durante 0.5 horas a 0 °C, para proporcionar el compuesto SC-2 (140 g, 26% de rendimiento basado en la 1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona). Método A; ÍR: 1.28 min. m/z : 442.1 (M+H)+ Masa exacta: 441.1 A la solución del compuesto SC-2 (75 g, 170 mmol), se añadió dioxano/HCI (750 mL) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante 1 hora. La mezcla se filtró para obtener el compuesto SC-3 (73 g).

A una solución del ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (47.2 g, 270 mmol) en CH3CN (1200 mL), se añadieron HOBt (36.4 g, 270 mmol) y EDCI (51.6 g, 270 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente y se añadió SC-3 (73 g). A continuación, la solución se enfrió hasta 0 °C, se añadió diisopropiletilamina (75 g, 578 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La mezcla se diluyó con CH2Cl2 (1500 mL) y se lavó con NaOH acuoso (0.5 N, 1000 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera. La fase orgánica combinada se secó y se concentró. El producto crudo obtenido se lavó con CH3CN, para proporcionar el compuesto SC-4 (80 g).

Se añadió Pd(PPh3) (11.6 g, 15.8 mmol) a una mezcla del compuesto SC-2 (140 g, 316.5 mmol), bis(pinacolato)diboro (160.7 g, 633 mmol), KOAc (62 g, 633 mmol) y tolueno (4000 mL) en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 15 h a 85 °C. Después de enfriarla, se añadió CH2CI2 y la mezcla se lavó con Na2CÜ3 y después con salmuera. El agua se extrajo con CH2CI2 (3 x 900 mL). Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2S04, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se recristalizó en una mezcla de disolventes de hexano/i-P^O (3/2, 2 x 150 mL) para proporcionar el compuesto SC-5 (105 g, 63% de rendimiento). Método A3; tR: 1.35 min. m/z: 490.1 (M+H)+ Masa exacta: 489.3 Se añadieron SC-4 (69 g, 138.2 mmol), 4,4,4,,4,,5,5,5\5,-octametil^^'-biíl.S^-dioxaborolano) (70.2 g, 276.4 mmol) y CH3COOK (27.1 g, 276.4 mmol) a tolueno (1500 mL) y a continuación se añadió Pd(dppf)Cl2 (5 g, 6.9 mmol) en atmósfera de N2 a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante toda la noche. Después de enfriarla, se añadió acetato de etilo (1000 mL) y la mezcla se lavó con NaHC03 saturado (1500 mL) y salmuera. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se secó con Na2S04 y, después de filtrarla, se concentró al vacío. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar el compuesto SC-6 (52 g, 68% de rendimiento). Método C; tR: 4.01 min. m/z : 547.3 (M+H)+ Masa exacta: 546.3.

SFC: columna: (AS)-H 150 mm x 4.6 mm, 5 µ?t?; flujo: 3 mL/min; fase móvil: A: C02, B: EtOH (0.05% de dietilamina), de un 5 a un 40% de B en A; ÍR: 3.11 min.

SFC: columna: OD-H 50 mm x 4.6 mm, 3 pm; flujo: 4 mLJmin; fase móvil: A: C02, B: EtOH (0.05% de dietilamina), de un 5 a un 40% de B en A; tR: 1.34 min Se disolvió 1-(6-bromonaftalen-2-il)-2-cloroetanona (5.53 g, 18.79 mmol) en acetonitrilo (15 mL). Se añadieron PR-1 (4.27 g, 18.79 mmol) y NEÍ3 (6.65 g, 65.76 mmol) a 25 °C y la mezcla se agitó durante 5 horas. Los componentes volátiles se eliminaron al vacío, para proporcionar un residuo, el cual se utilizó como tal. Una solución del residuo obtenido (10 g, 18.79 mmol) se disolvió en tolueno anhidro (50 mL) y se agitó a 20 °C. Se añadió NH4OAc (29 g, 375.8 mmol) y la mezcla se agitó durante 2 horas a 100 °C. La solución se diluyó con acetato de etilo (50 mL) y se lavó con H2O (40 mL). La fase orgánica se secó con Na2SÜ4 y, después de filtrarla, los componentes volátiles se eliminaron al vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente en gradiente: éter de petróleo/acetato de etilo desde 100/1 hasta 1/100). Se recolectaron las fracciones puras y se eliminó el disolvente al vacío, para proporcionar el compuesto SC-7 (6.5 g). Método A2; tR: 0.94 min. m/z : 456.0 (M+H)+ Masa exacta: 455.1 El compuesto SC-7 (6.5 g, 14.3 mmol) se disolvió en CH2CI2 (30 ml_) y se agitó a 20 °C. Se añadió HCI 4 N/dioxano (30 ml_) gota a gota a 0 °C. A continuación, la mezcla se agitó a 25 °C durante 1 hora y después se eliminaron los componentes volátiles al vacío, para proporcionar un residuo (8 g). Método A2; tR: 0.84 min. m/z : 353.9 (M+H)+ Masa exacta: 353.1. Este residuo se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional. Una mezcla del residuo obtenido (8 g), ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (5.5 g, 31.5 mmol), EDCI (6.0 g, 31.5 mmol) y HOBt (4 ml_, 31.5 mmol) en CH2CI2 (80 ml_) se agitó a 0 °C y se añadió DIPEA (18.48 g, 143 mmol). La mezcla se agitó a 20 °C durante 12 horas. La mezcla se diluyó con CH2CI2 (20 mL) y H20 (50 mL). La fase orgánica se separó, se lavó con NaHC03 acuoso saturado (50 mL) y salmuera, y se secó con Na2S04. Los componentes volátiles se eliminaron al vacío y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo desde 100/1 hasta 1/100). Se recolectaron las fracciones puras y se eliminó el disolvente al vacío, para proporcionar el compuesto SC-8 (4.6 g). Método A2; tR: 1.00 min. m/z : 512.9 (M+H)+ Masa exacta: 512.1 Una mezcla del compuesto SC-8 (4.6 g, 8.99 mmol), 4,4,4,,4,,5,5,5,,5,-octametil-2I2,-bi(1 l3I2-dioxaborolano) (4.57 g, 17.99 mmol), Pd(dppf)CI2 (0.66 g, 0.9 mmol) y KOAc (1.76 g, 17.99 mmol) en dioxano (50 mL) se agitó durante 2 horas a 100 °C en atmósfera de N2. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró al vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente en gradiente: éter de petróleo/acetato de etilo desde 100/1 hasta 1/100). Se recolectó la fracción que contenía el producto y se eliminó el disolvente al vacío, para proporcionar el compuesto SC-9 (4.8 g). Método A2; tR: 0.98 min. m/z : 559.3 (M+H)+ Masa exacta: 558.3 Al compuesto PR-2 (30 g, 123 mmol) en THF (120 mL), se añadieron etano-1,2-diol (53.6 g, 864 mmol), trietoximetano (54.6 g, 369 mmol) y TsOH (3 g, 3.69 mmol) a 25 °C. La mezcla se agitó a reflujo durante 5 horas. La mezcla se vertió sobre NH4CI acuoso (400 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron con Na2S04. La fase orgánica se concentró al vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (hexano: acetato de etilo = 10:1) para proporcionar el compuesto PR-3 (8.4 g).

A una solución agitada del compuesto PR-3 (8.4 g, 29.3 mmol) en THF /H20 (100 mL, 1 :1), se añadió NaOH (5.85 g, 146 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 1 hora y se trató con acetato de etilo (20 mL). La fase inorgánica combinada se separó, se ajustó su pH a 4 con HCI 2 N y se extrajo con CH2CI2 (3 x 50 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con Na2S04 y se concentró al vacío para proporcionar el compuesto PR-4 (5.9 g).

A una solución agitada del compuesto PR-4 (5.9 g, 21.6 mmol) en DMF (100 mL), se añadió Cs2C03 (10.6 g, 32.4 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 0.5 horas. A continuación, se añadieron 1-(6-bromonaftalen-2-il)-2-cloroetanona (9.2 g, 32.4 mmol) y Nal (4.86 g, 32.4 mmol) a la mezcla y se continuó agitando a 20 °C durante 2 horas. La mezcla se lavó con agua (90 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mL), las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SÜ4 y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (hexano: acetato de etilo = 5:1) para proporcionar un residuo (5.9 g). A una solución agitada del residuo obtenido, que se obtuvo como se ha descrito anteriormente (8.4 g, 16.2 mmol), en xileno (80 mL) en un autoclave, se añadió NH4OAc (26.2 g, 32.3 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 160 °C durante 1 hora. La mezcla se enfrió, se lavó con agua (90 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 mL); la fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con Na2S04 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (hexano: acetato de etilo =2:1) para proporcionar el compuesto SC-10 (5.2 g). Método A2; tR: 1.07 min. m/z : 500.0 (M+H)+ Masa exacta: 499.1 A una solución agitada del compuesto SC-10 (5.2 g, 10.4 mmol) y lutidina (2.2 g, 20.8 mmol) en CH2CI2 anhidro (100 mL) a 0 °C, se añadió TMSOTf (9.2 g, 40.6 mmol) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 30 minutos, se desactivó con NH4CI acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mL); las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SO y se concentraron al vacío para proporcionar el compuesto SC-11 (3.0 g) como un sólido blanquecino. Método A2; tR: 0.98 min. m/z : 401.9 (M+H)+ Masa exacta: 401.1 A una solución agitada del compuesto SC-11 (3.0 g), ácido (S)-2-(metox¡carbonilamino)-3-metilbutanoico (1.57 g, 9 mmol), EDCI (1.73 g, 9 mmol) y HOBt (0.12 g, 0.9 mmol) en CH2CI2 anhidro (50 mL), se añadió NEt3 (15.2 g, 15 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 2 horas, se desactivó con a2C03 acuoso saturado y se extrajo con CH2CI2 (3 x 10 mL); la fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con Na2S04 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (hexano: acetato de etilo = 1 :1) para proporcionar un residuo blanco sólido (2.2 g). A una solución agitada de este residuo (2.2 g) y Pd(dppf)CI2 (0.2 g, 0.395 mmol) en dioxano anhidro (25 mL), se añadieron 4,4,4',4,,5,5,5,,5,-octametil-2,2,-b¡(1 ,3,2-dioxaborolano) (1.5 g, 5.93 mmol) y KOAc(0.77 g, 7.9 mmol). La mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 20 minutos, se desactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con Na2S04 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (hexano: acetato de etilo = 1 :1) para proporcionar el compuesto SC-12 (1.9 g) como un sólido. Método A2; tR: 0.97 min. m/z : 605.1 (M+H)+ Masa exacta: 604.3 PR-5 PR-6 El compuesto PR-5 (15.7 g, 63.1 mmol) se disolvió en CH2CI2 anhidro (250 mL) y se añadió DMF (1.5 mL) a la solución. Se añadió cloruro de oxalilo (13.5 mL, 157.5 mmol) gota a gota a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 0.5 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo (PR-6, 22 g) se utilizó directamente sin purificación adicional.

PR-6 QA-1 A la solución del compuesto PR-6 (22 g de crudo) en THF anhidro (250 mL), se añadieron 2-amino-4-bromobenzamida (7.6 g, 35.3 mmol) y NaOH 1 N (ac. 85 mL, 85 mmol). La mezcla se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con NaOH 1 N en agua (15 mL) y con salmuera, se secaron con Na2S04 y se concentraron al vacío para proporcionar un residuo crudo (17 g). El residuo crudo, obtenido de un modo similar al descrito anteriormente (25 g), junto con Na2C03 (17.8 g, 168 mmol) en etanol (250 mL) y H20 (250 mL), se calentó a reflujo durante 2 horas. El disolvente orgánico se evaporó al vacío. La mezcla se extrajo con diclorometano (2 x 200 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SO_t y se purificaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: acetato de etilo). Las fracciones deseadas se evaporaron a sequedad. El residuo obtenido se agitó en acetato de etilo (50 mL), el precipitado se separó por filtración y se lavó con acetato de etilo para proporcionar el compuesto QA-1 (17 g).

El compuesto QA-1 (8 g, 18.6 mmol) se disolvió en HOAc (80 mL) y se añadió HBr al 40% (40 mL). La mezcla se agitó a 80 °C durante toda la noche. Se eliminó la mayor parte del disolvente al vacío. El precipitado se separó por filtración y se lavó con éter f-butil metílico. El sólido se evaporó conjuntamente con tolueno (2 x 20 mL) para proporcionar un residuo crudo (6.5 g). A continuación, parte de este residuo (6.4 g), junto con el ácido (S)-2- (metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (4.5 g, 25.6 mmol), EDCI (4.9 g, 25.6 mmol) y HOBt (1.15 g, 8.5 mmol) en CH2CI2 (120 ml_) se enfriaron hasta 0°C. Se añadió DIPEA (14.8 ml_, 85.0 mmol). La mezcla se agitó durante 1.5 horas a 20 °C. La fase orgánica se lavó con NaHC03 acuoso saturado (100 mL) y se secó con Na2S04. El disolvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente en gradiente: éter de petróleo: acetato de etilo desde 100:0 hasta 0:100) para proporcionar el compuesto QA-2 (3.3 g).

PR-7 PR-8 Se agitó el compuesto PR-7 (7.0 g, 23.21 mmol) en THF (70 mL) a 0 °C. Se añadieron dicloruro de oxalilo (7 mL, 46.2 mmol) y DMF (2 gotas) gota a gota y la mezcla se agitó durante 10 min a 0 °C. La mezcla se agitó y se calentó a reflujo durante 1 hora. La mezcla se enfrió y se evaporó al vacío para proporcionar el compuesto PR-8 (7 g).

A la solución del compuesto PR-8 (7 g, 21 mmol) en THF (70 mL), se añadieron 2-amino-4-bromobenzamida (4.5 g, 21 mmol) y NaOH 1 N (42 mL, 42 mmol). La mezcla se agitó durante 1 hora a 25 °C. La mezcla se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas se recolectaron, se lavaron con NaOH 0.5 N y salmuera, se secaron y se concentraron al vacío, para proporcionar un residuo crudo (9 g). Este residuo (9 g), junto con Na2CO3 (5.7 g, 54 mmol) en H2O (200 mL) y THF (200 mL), se agitó y se calentó a reflujo durante 2 horas. La mezcla se concentró al vacío y se extrajo con CH2CI2 (2x), se lavó con salmuera, se secó y se evaporó al vacío. El residuo se disolvió en CH2CI2, se lavó con HCI 1 N (3 x) y salmuera, se secó y se evaporó al vacío, para proporcionar QA-3 (4.4 g). Método A2; tR: 1.27 min. m/z=: 484.0 (M+H)+ Masa exacta: 483.1 PR-2 PR-9 Al compuesto PR-2 (10 g, 41.2 mmol) en THF (100 mL), se añadieron 1 , 3-propanodiol (22 g, 288 mmol), ortoformiato de trietilo (18.3 g, 123.6 mmol) y ácido tolueno-4-sulfónico (1 g, 0.2 mmol) a 25 °C. La mezcla se agitó a reflujo durante 2 horas. La mezcla se vertió sobre NH4CI acuoso (400 mL), se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mL) y se separó. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron con Na2SO4. La fase orgánica se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (hexano: acetato de etilo = 5:1) y el compuesto obtenido (3.8 g) se disolvió en THF /H20 (40 mL, 1 :1). Se añadió NaOH (2.52 g, 63 mmol), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se trató con acetato de etilo (20 mL). La fase inorgánica combinada se separó, se ajustó su pH a 4 con HCI 2 N y se extrajo con CH2CI2 (3 x 20 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con Na2S04 y se concentró al vacío para proporcionar el compuesto PR-9 (5.9 g).

PR-9 QA-4 Se añadió dicloruro de oxalilo (2.5 mL, 13.11 mmol) gota a gota a una mezcla del compuesto PR-9 (2.5 g, 8.74 mmol) y 2-amino-4-bromobenzamida (2.5 g, 10.49 mmol) en diclorometano (20 mL) y piridina (20 mL) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. El disolvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (éter de petróleo: acetato de etilo = 1 :1). El compuesto intermedio de tipo amida obtenido (0.98 g), Na2CC»3 (1.08 g. 10.15 mmol), H2O (5 mL) y CH3CH2OH (5 mL) se agitaron durante 2 horas a reflujo. La mayor parte del CH3CH2OH se eliminó al vacío y el residuo obtenido se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se secó con Na2S04 y se concentró al vacío. El residuo se lavó con éter í-butil metílico para proporcionar el compuesto QA-4 (0.89 g).

A una solución agitada del compuesto QA-4 (0.89 g, 1.92 mmol) y lutidina (0.41 g, 3.84 mmol) en CH2CI2 anhidro (10 mL) a 0 °C, se añadió TMSOTf (1.7 g, 7.68 mmol) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 30 minutos, se desactivó con NH4CI acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo; las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2S04 y se concentraron al vacío. El residuo obtenido se utilizó como tal en la siguiente reacción (0.3 g). Método A2; ÍR: 0.68 min. m/z=: 368.0 (M+H)+ Masa exacta: 367.0. Se añadió NEt3 (0.5 mL, 2.46 mmol) a una solución del residuo obtenido anteriormente (0.3 g), ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0.22 g, 1.23 mmol), HOBt (0.17 g, 1.23 mmol) y EDCI (0.24 g, 1.23 mmol) en diclorometano (15 mL) en un baño de hielo. La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. A continuación, la mezcla se diluyó con diclorometano (20 mL), se lavó con NaHCOa saturado y salmuera, y se secó con Na2SO.j. El disolvente se eliminó al vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna (hexano: acetato de etilo = 1 :1), para obtener el compuesto QA-5 (0.2 g). Método A2; tR: 1.14 min. miz-. 547.1 (M+Na)+ Masa exacta: 524.1 Se añadió cloruro de oxalilo (2.9 mL, 33 mmol) gota a gota a una mezcla del compuesto PR-1 (5 g, 22 mmol), 2-amino-4-bromobenzamida (4.7 g, 22 mmol) y piridina (50 mL). La mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. El disolvente se eliminó al vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía (éter de petróleo: acetato de etilo = 5:1) para proporcionar un intermedio (3.6 g). Método A2; ÍR: 1.15 min. m/z=: 447.7 (M+Na)+ Masa exacta: 425.1. El intermedio obtenido anteriormente (3.6 g), Na2C03 (2.7 g. 25.4 mmol), H20 (20 mL) y CH3CH2OH (20 mL) se agitaron durante 2 horas a reflujo. La mayor parte del CH3CH2OH se eliminó al vacío. El residuo se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 mL). La fase orgánica se secó con Na2S04 y se concentró al vacío. El residuo se lavó con éter í-butil metílico para proporcionar el compuesto QA-6 (3.4 g).

El compuesto QA-6 (3.4 g, 8.4 mmol) se disolvió en diclorometano (30 mL) y se añadió HCI/dioxano (3 mL) gota a gota a la mezcla a 0 °C. la mezcla de reacción se agitó durante 5 horas a temperatura ambiente. El disolvente se eliminó al vacío. El residuo se lavó con éter f-butil metílico y el residuo crudo obtenido se utilizó como tal (2.7 g). A una solución de este crudo (2.7 g), ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (2.75 g, 15.76 mmol), HOBt (2.42 g, 17.33 mmol) y EDCI (3.32 g, 17.33 mmol) en diclorometano (20 mL) enfriada en un baño de agua-hielo, se añadió DIPEA (14 mL, 78.8 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con diclorometano (20 mL), se lavó con NaHC03 saturado y salmuera, y se secó con Na2S04. El disolvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (hexano: acetato de etilo = 1 :1) para proporcionar el compuesto QA-7 (2.5 g). SFC: columna: AD-H 250 mm x 4.6 mm, 5 µ?t?; flujo: 2.35 mL/min; fase móvil: A: C02, B: EtOH (0.05% de dietilamina), de un 5 a un 40% de B en A; tR: 9.99 min Se agitó el compuesto PR-10 (2.0 g, 7.3 mmol) en CH2CI2 (20 mL) a 0 °C. Se añadieron dicloruro de oxalilo (2.3 g, 18.2 mmol) y DMF (2 gotas) gota a gota y la mezcla se agitó durante 10 minutos a 0 °C. La mezcla se agitó durante 1 hora a 20 °C. La mezcla se enfrió y se evaporó al vacío. El residuo se diluyó dos veces con tolueno (2 x 10 mL) y se evaporó, para proporcionar un residuo (PR-11, 2.5 g).

A la solución del compuesto PR-11 (2.5 g) en THF (30 mL), se añadieron 2-amino-4-bromobenzam¡da (1.57 g, 7.3 mmol) y NaOH 1 N (14.6 mL, 14.6 mmol). La mezcla se agitó durante 1 hora a 25 °C. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2x). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con NaOH 0.5 N y salmuera, se secaron y se concentraron al vacío, para proporcionar un residuo (3.5 g), el cual se agitó con Na2CO3 (2.32 g, 21.9 mmol) en H2O (50 mL) y THF (50 mL), y se calentó a reflujo durante 2 horas.

Los componentes volátiles se eliminaron al vacío. La mezcla se extrajo con CH2CI2 (2x), se lavó con salmuera, se secó y los componentes volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se disolvió en CH2CI2, se lavó con HC1 1 N (3x) y salmuera, se secó y los componentes volátiles se eliminaron al vacío, para proporcionar el compuesto QA-8 (1.5 g). Método A2; ÍR: 1.15 min. m/z=: 453.9 (M+H)+ Masa exacta: 453.1 Se añadió CICOCOCI (44.4 mL, 510.2 mmol) gota a gota a una mezcla de PR-12 (100.6 g, 374 mmol), 2-amino-4-bromobenzamida (73.2 g, 340 mmol) y piridina (760 mL) en atmósfera de nitrógeno a 0 °C. La mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. El disolvente se eliminó al vacío. Se añadió aHC03 saturado al residuo y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo tres veces. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con NaHC03 saturado y salmuera, y se secaron con Na2S04. El disolvente se eliminó al vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía (CH2CI2:MeOH = 50:1) para proporcionar un compuesto intermedio de tipo amida (50.6 g). Método A2; tR: 1.15 min. m/z=: 490.1 (M+Na)+ Masa exacta: 467.1. Una solución del intermedio obtenido anteriormente (50.61 g), Na2CÜ3 (34.51 g, 325.6 mmol), H20 (300 mL) y CH3CH2OH (300 mL) se agitó durante 3 horas a reflujo. Se eliminó el EtOH al vacío y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 300 ml_). Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron al vacío. El residuo obtenido se lavó con éter f-butil metílico para proporcionar el compuesto QA-9 (39.2 g). Método A2; tR: 1.37 min. m/z=: 448.1 (M+H)+ Masa exacta: 447.1 Se disolvió QA-9 (39.2 g, 87.5 mmol) en diclorometano (400 mL). Se añadió HCI/dioxano (470 mL) gota a gota a la mezcla a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 3.5 horas a temperatura ambiente. El disolvente se eliminó cuidadosamente al vacío. El residuo obtenido se lavó con éter f-butil metílico para proporcionar un residuo (30.8 g). Método A2; ÍR. 0.92 min. m/z=: 348.1 (M+H)+ Masa exacta: 347.1 Se añadió DIPEA (54.2 mL, 308 mmol), a 0 °C, a una solución del residuo anterior (30.84 g, 61.6 mmol), ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (11.9 g, 67.8 mmol) y HBTU (35.0 g, 92.4 mmol) en diclorometano (265 mL) en atmósfera de nitrógeno. A continuación, la mezcla de reacción se agitó durante 3 horas en atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano, se lavó con NaHC03 saturado y salmuera, y se secó con Na2S04. El disolvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1), para obtener el compuesto QA-10 (31.1 g). Método A2; tR: 1.28 min. m/z=: 507.2 (M+H)+ Masa exacta: 506.1 SC-13 A una mezcla de 1-(6-bromonaftalen-2-il)-2-cloroetanona (15 g, 55.3 mmol) en DMF (100 ml_), se añadieron el compuesto PR-12 (67 g, 310 mmol), DI PEA (7.8 g, 60.8 mmol) y Nal (9.1 g, 60.8 mmol) a 25-35 °C. A continuación, la mezcla de reacción se calentó hasta 40-45 °C y se agitó durante 1-2 horas a esta temperatura. Se añadió acetato de etilo (100 ml_) y la mezcla se lavó con NaHC03 saturado y salmuera. La fase orgánica se separó, se secó y a continuación se concentró al vacío, para proporcionar un residuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar el (2S,3aS,7aS)-hexahidro-1H-indol-1 ,2(2H,3H)-dicarboxilato de 1-terf-butilo y 2-(2-(6-bromonaftalen-2-il)-2-oxoetilo) (28 g) como un aceite. A este intermedio (28 g, 54.2 mmol) en tolueno (300 mL), se añadió CH3COONH4 (45.9 g, 596.2 mmol). La mezcla se calentó hasta 75-85 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a 75-85 °C. La solución se diluyó con acetato de etilo y se lavó con NaHC03 saturado y salmuera. La fase orgánica se concentró al vacío para proporcionar el compuesto SC-13 (16 g). Método A2; \R: 1.14 min. m/z=: 496.2 (M+H)+ Masa exacta 495.2 A una solución del compuesto SC-13 (16 g, 32.3 mmol), se añadió HCI/dioxano a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla se concentró al vacío. Se añadió CH2CI2 (100 mL) al residuo obtenido y la mezcla se lavó con Na2C03 saturado. La fase orgánica se separó y se concentró al vacío, para proporcionar un intermedio desprotegido (14 g). A una solución del ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (7.9 g, 45.3 mmol) en CH3CN (100 mL), se añadieron HOBt (6.1g, 45.3 mmol) y EDCI (8.6 g, 45.3 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente y a continuación se añadió el intermedio desprotegido obtenido anteriormente (14 g). A continuación, la solución se enfrió hasta 0 °C y se añadió DIPEA (12.5 g, 97.2 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La mezcla se diluyó con CH2CI2 (200 mL) y se lavó con Na2C03 acuoso (0.5 N, 100 mL) y salmuera. La fase orgánica se secó y se concentró, para proporcionar SC-14 (14 g).

El compuesto SC-14 (14 g, 25.3 mmol), 4,4,4,,4',5,5,5,,5'-octametil^'-b I.S^-dioxaborolano) (12.9 g, 276 mmol) y CH3COOK (4.96 g, 50.6 mmol) se agitaron en tolueno (100 mL). Se añadió Pd(dppf)Cl2 en atmósfera de N2 a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante toda la noche. Después de enfriarla, se añadió acetato de etilo (200 mL) y la mezcla se lavó con NaHCC (200 mL) saturado y salmuera. La fase orgánica se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2S0 y se concentraron al vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna, para proporcionar el compuesto SC-15 (15 g). Método A2; tR: 1.17 min. m/z=: 601.4 (M+H)+ Masa exacta: 600.4 - Se añadió dicloruro de oxalilo (2.5 mL, 13.11 mmol) gota a gota a una mezcla del compuesto PR-4 (3.3 g, 12 mmol) y 2-amino-4-bromobenzamida (3.1 g, 14.5 mmol) en diclorometano (30 mL) y piridina (30 mL). La mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo obtenido se purificó mediante cromatografía (éter de petróleo: acetato de etilo = 1 :1) para proporcionar una amida intermedia (0.7 g). Esta amida intermedia (0.7 g), junto con Na2C03 (0.82 g. 7.5 mmol), H20 (10 mL) y CH3CH2OH (10 mL), se agitó durante 2 horas a reflujo. Después de enfriar, se eliminó la mayor parte del CH3CH2OH al vacío. El residuo se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se secó con Na2S04 y se concentró al vacío. El residuo se lavó con éter f-butil metílico para proporcionar el compuesto QA-11 (0.55 g). Método A2; tR: 1.04 min. m/z=: 454.0 (M+H)+ Masa exacta: 453.1 A una solución agitada del compuesto QA-11 (0.55 g, 1.2 mmol) y 2, 6-lutidina (0.25 g, 2.4 mmol) en CH2CI2 anhidro (5 mL) a 0 °C, se añadió TMSOTf (1.1 g, 4.8 mmol) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 30 minutos, se desactivó con NH4CI acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SÜ4 y se concentraron al vacío para proporcionar un residuo (0.56 g). Se añadió NEt3 (0.24 g, 2.4 mmol) a una solución del residuo obtenido anteriormente (0.56 g), ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0.29 g, 1.4 mmol), HOBt (0.1 g) y EDCI (0.27 g, 1.4 mmol) en CH2CI2 (10 mL) en un baño de hielo-agua. La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. A continuación, la mezcla se diluyó con diclorometano (20 mL), se lavó con NaHCÜ3 sat. y salmuera, y finalmente se secó con Na2S04. El disolvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (hexano: acetato de etilo = 1 :1), para proporcionar el compuesto QA- 2 (0.3 g). Método A2; tR: 1.11 min. m/z=: 511.1 (M+H)+ Masa exacta: 510.1 A una solución agitada de PR-13 (4.32 g, 17.9 mmol) en DMF (60 mL), se añadió CS2CO3 (8.12 g, 26.9 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 0.5 horas. A continuación, se añadieron 1-(6-bromonaftalen-2-il)-2-cloroetanona (7.2 g, 26.85 mmol) y Nal (3.75 g, 26.85 mmol) y la mezcla se agitó adicionalmente a 20 °C durante 2 horas. La mezcla se lavó con agua (90 ml_) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml_), las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2S04 y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (hexano: acetato de etilo = 5:1) para proporcionar el (S)-5-azaespiro[2.4]heptano-5,6-dicarboxilato de 5-terí-butilo y 6-(2-(6- bromonaftalen-2-il)-2-oxoetilo) (6.5 g). A una solución agitada de este compuesto (6.5 g) en tolueno (60 ml_), se añadió NH4OAc (21.6 g, 267 mmol) y a continuación la mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante 12 horas. La mezcla se lavó con agua (50 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 mL); la fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con Na2SO.j y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (hexano: acetato de etilo = 2:1) para proporcionar el compuesto SC-16 (3.2 g). Método A2; tR: 1.08 min. m/z=: 470.2 (M+H)+ Masa exacta: 469.1 El compuesto SC-16 (3.2 g, 6.85 mmol) se agitó en HCI/dioxano durante 1 hora. La mezcla se concentró al vacío a sequedad y se extrajo con CH2CI2. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SÜ4 y se concentraron al vacío para proporcionar un residuo (2.8 g).

A este residuo (2.8 g), junto con el ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (1.63 g, 9.16 mmol), EDCI (1.75 g, 9.16 mmol) y HOBt (1.24 g, 9.16 mmol) en CH2CI2 anhidro (30 mL), se añadió NEt3 (1.54 g, 15.26 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 2 horas, se desactivó con Na2C03 acuoso saturado y se extrajo con CH2CI2 (3 x 20 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con Na2S04 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (hexano: acetato de etilo = 1 :1) para proporcionar el compuesto SC-17 (3.2 g). Método A2; tR: 1.03 min. m/z=: 527.2 (M+H)+ Masa exacta: 526.1 A una solución agitada de SC-17 (3.2 g, 6.1 mmol) y Pd(dppf)CI2 (0.4 g, 0.61 mmol) en dioxano anhidro (30 mL), se añadieron 4,4,4',4,,5,5,5,,5'-octametil-2,2'-bi(1 ,3,2-dioxaborolano) (1.92 g, 7.32 mmol) y KOAc (1.2 g, 12.2 mmol). La mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 20 minutos, se desactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con Na2S04 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (hexano: acetato de etilo = 1 :1) para proporcionar el compuesto SC-18 (2.7 g).

Una mezcla del compuesto QA-5 (0.2 g, 0.38 mmol), el compuesto SC-9 (0.19 g, 0.32 mmol), Pd(dppf)CI2 (0.15 g, 0.032 mmol), Na2C03 (5 ml_, 2 N) y THF (10 mL) se agitó durante 0.5 horas a 80 °C en atmósfera de N2. Los componentes volátiles se eliminaron al vacío. Se añadieron diclorometano (20 mL) y agua (10 mL). La fase orgánica se separó y se secó con Na2S04. El disolvente se eliminó al vacío y el crudo obtenido se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (columna: Diamonsil C18 150 * 20 mm * 5 µ??; método: desde un 20 hasta un 40% de B en A en 14 minutos; A: H20 + 0.1% de TFA, B: MeCN; tasa de flujo (mL/min): 40). Las fracciones puras se recolectaron y se neutralizaron con NaHCC>3 saturado. El disolvente orgánico se eliminó al vacío. La fase inorgánica se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 mL). Las fases orgánicas combinadas se concentraron al vacío para proporcionar el compuesto 1 (60 mg) como un polvo blanquecino. Método J; .R: 4.66 min. m/z : 875.5 (M+H)+ Masa exacta: 874.4; SFC: columna: AS-H 250 mm x 4.6 mm, 5 µ?t?; flujo: 2.5 mLVrnin; fase móvil: A: C02, B: MeOH (0.05% de dietilamina), 40% de B en A; tR: 4.32 min A una solución agitada del compuesto SC-12 (30 mg, 0.05 mmol), el compuesto QA-12 (30 mg, 0.06 mmol) y Pd(dppf)CI2 (4 mg, 0.006 mmol) en THF anhidro (1 mL), se añadió Na2C03 (0.5 mL, 2 N). La mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 20 min, se desactivó con agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 5 mL); la fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con Na2S04y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (columna: Phenomenex Synergi C18 150 * 30 mm * 4 pm; método: desde un 30 hasta un 50% de B en A en 12 minutos; A: H20 + 0.1 % de TFA, B: MeCN; tasa de flujo (mlJmin): 25). Las fracciones puras se recolectaron y se neutralizaron con NaHC03 saturado. El disolvente orgánico se concentró al vacío. El precipitado se filtró, se lavó con H20 (10 mL) y se secó con un vacío elevado, para proporcionar el compuesto 2 (20 mg). Método J; tR: 4.62 min. m/z : 907.7 (M+H)+ Masa exacta: 906.4; SFC: columna: OJ-H 250 mm x 4.6 mm, 5 µ??; flujo: 2.35 mL/min; fase móvil: A: CO2, B: MeOH (0.05% de dietilamina), de un 5% a un 40% de B en A; tR: 9.88 min; SFC: columna: OD-H 150 mm x 4.6 mm; 5 Mm; flujo: 2.35 mL/min; fase móvil: A: C02, B: MeOH (0.05% de dietilamina), 40% de B en A; tR: 8.34 min A una solución agitada del compuesto QA-7 (160 mg, 0.34 mmol), SC-9 (223 mg, 0.4 mmol) y Pd(dppf)CI2 (4 mg, 0.006 mmol) en THF anhidro (4 mL), se añadió Na2CÜ3 (2 mL, 2 N). La mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 20 minutos, se desactivó con agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 5mL); la fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (columna: Phenomenex Synergi C18 150 * 30 mm * 4 µp?; tasa de flujo (mL/min): 40; fase móvil: A: H2O + 0.1 % de TFA, B: MeCN, gradiente: 25-55%). Las fracciones puras se recolectaron y se neutralizaron con NaHC03 saturado. El disolvente orgánico se concentró al vacío. El precipitado se filtró, se lavó con H20 (10 mL) y se secó con un vacío elevado para proporcionar un producto que era el compuesto 3 (72 mg) como un sólido amarillo. Método H; tR: 3.39 min. m/z : 815.6 (M+H)+ Masa exacta: 814.4; SFC: columna: AS-H 250 mm x 4.6 mm, 5 pm; flujo: 2.35 mL/min; fase móvil: A: C02, B: EtOH (0.05% de dietilamina), 40% de B en A; tR: 3.40 min; SFC: columna: OD-H 250 mm x 4.6 mm, 5 pm; flujo: 2.35 mL/min; fase móvil: A: C02, B: EtOH (0.05% de dietilamina), 40% de B en A; tR: 8.16 min.

Una mezcla del compuesto QA-7 (0.184 g, 0.4 mmol), el compuesto SC-12 (0.2 g, 0.33 mmol), Pd(dppf)CI2 (0.01 g, 0.014 mmol), Na2CO3 (5 mL, 2 N) y THF (10 mL) se agitó durante 0.5 horas a 80 °C en atmósfera de N2. Los componentes volátiles se eliminaron al vacío. Se añadieron diclorometano (20 mL) y agua (10 mL). La fase orgánica se separó y se secó con Na2SO4. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo obtenido se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (columna: Diamonsil C18 150 * 20 mm * 5 pm; método: desde un 20 hasta un 40% de B en A en 14 minutos; A: H20 + 0.1% de TFA, B: MeCN; tasa de flujo (mL/min): 40). Las fracciones puras se recolectaron y se neutralizaron con NaHC03 saturado. El disolvente orgánico se eliminó al vacío. La fase inorgánica se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 mL). Las fases orgánicas combinadas se concentraron al vacío para proporcionar el compuesto 4 (72 mg) como un polvo blanquecino. Método J; tR: 4.66 min. m/z : 861.7 (M+H)+ Masa exacta: 860.4; SFC: columna: OJ-H 250 mm x 4.6 mm, 5 µ??; flujo: 2.35 mL/min; fase móvil: A: C02, B: ¡PrOH (0.05% de dietilamina), 40% de B en A; tR: 3.68 min A una solución agitada del compuesto SC-12 (250 mg, 0.41 mmol), el compuesto QA-2 (223 mg, 0.496 mmol) y Pd(dppf)CI2 (20 mg, 0.395 mmol) en THF anhidro (20 mL), se añadió Na2CO3 (10 mL, 2 N). La mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 20 minutos, se desactivó con agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 mL); la fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con Na2S04 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (columna: Phenomenex Synergi C18 200 * 30 mm * 4 µ?t?; método: de un 31 a un 51 % de B en A en 12 minutos; A: H20 + 0.1% de TFA, B: MeCN; tasa de flujo (mlJmin): 40). Las fracciones puras se recolectaron y se neutralizaron con NaHC03 saturado. El disolvente orgánico se concentró al vacío. El precipitado se filtró, se lavó con H2O (10 ml_) y se secó con un vacío elevado para proporcionar el compuesto 5 (1 15 mg) como un sólido. Método J; tR: 4.65 min. m/z : 849.5 (M+H)+ Masa exacta: 848.4; SFC: columna: OJ-H 250 mm x 4.6 mm, 5 µ?t?; flujo: 2.5 mLVmin; fase móvil: A: C02, B: MeOH (0.05% de dietilamina), 40% de B en A; tR: 10.1 min Una mezcla del compuesto SC-9 (1.0 g, 1.79 mmol), el compuesto QA-3 (0.87 g, 1.79 mmol), Pd(PPh3)4 (0.21 g, 0.18 mmol) y Na2CO3 (1.52 g, 14.32 mmol) en tolueno/etanol/H2O = 1 :1 :1 (30 ml_) se agitó durante 2 horas a 100 °C en atmósfera de N2. Los componentes volátiles se eliminaron al vacío. Se añadieron diclorometano (15 mL) y agua (10 mL). La fase orgánica se separó y se secó con a2S04. El disolvente se eliminó al vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo desde 100/1 hasta 1/100). Se recolectaron las fracciones puras y se concentró el disolvente al vacío para proporcionar el compuesto 6 (1.0 g). Método A; tR: 1.02 min. m/z : 834.5 (M+H)+ Masa exacta: 833.4 El compuesto 6 (1.0 g, 1.20 mmol), Boc20 (0.52 g, 2.4 mmol) y NEt3 (0.366 g, 3.60 mmol) se agitaron en metanol (10 mL) con Pd/C (húmedo) al 10% (0.1 g) a 20 °C, en atmósfera de hidrógeno (30 Psi) durante 24 horas. El catalizador se separó por filtración y el filtrado se concentró al vacío. El residuo obtenido (1.0 g) se disolvió en CH2CI2 (10 mL) y se agitó a 20 °C. Se añadió HCI 4 N/dioxano (10 mL) gota a gota a 0 °C y la mezcla se agitó a 25 °C durante 1 hora. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo obtenido, el ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0.46 g, 2.64 mmol), EDCI (0.51 g, 2.64 mmol) y HOBt (0.356 g, 2.64 mmol) se agitaron en CH2CI2 (10 ml_) a 0 °C y se añadió DIPEA (1.55 g, 12 mmol). La mezcla se agitó a 20 °C durante 12 horas. La mezcla se diluyó con CH2CI2 (20 mL) y H20 (50 mL). La fase orgánica se separó, se lavó con NaHC03 (50 mL) acuoso saturado y salmuera, y se secó con Na2S04. El disolvente se eliminó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/ acetato de etilo desde 100/1 hasta 1/100). Se recolectaron las fracciones puras y se concentró el disolvente al vacío para proporcionar el compuesto 7 (0.15 g). Método I; tR: 3.83 min. m/z : 857.6 (M+H)+ Masa exacta: 856.4; SFC: columna: AS-H 250 mm x 4.6 mm, 5 pm; flujo: 2.5 mL/min; fase móvil: A: C02, B: MeOH (0.05% de dietilamina), 40% de B en A; tR: 4.1 min El compuesto QA-3 (0.5 g, 1 mmol), el compuesto SC-12 (0.63 g, 1 mmol), Pd(PPh3)4 (0.35 g, 0.3 mmol) y Na2C03 (0.42 g, 4 mmol) se calentaron a reflujo en tolueno (5 mL), etanol (5 mL) y H20 (5 mL) en atmósfera de N2 durante 12 horas. El disolvente se eliminó al vacío. La mezcla se extrajo con CH2CI2 (2x) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron con Na2S04. Después de eliminar el disolvente al vacío, el residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/EtOAc = 10/1 a continuación 1/100 v/v). Se recolectaron las fracciones puras y se concentró el disolvente al vacío, para proporcionar el compuesto 8 (0.55 g).

El compuesto 8 (0.55 g, 0.63 mmol), Boc20 (0.27 g, 1.24 mmol) y trietilamina (0.19 g, 1.88 mmol) se agitaron en CH3OH (10 mL) con Pd/C al 10% (0.15 g) como catalizador a 20 °C en atmósfera de hidrógeno (30 Psi) durante 14 horas. El catalizador se separó por filtración y el filtrado se concentró. El producto crudo obtenido se disolvió en CH2CI2 (5 mL). Se añadió HCI 4 N/dioxano (5 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 2 horas. El disolvente se eliminó al vacío. El residuo se evaporó conjuntamente con tolueno (2 x 5 mL) para proporcionar 0.5 g de un intermedio desprotegido. Este producto (0.5 g), el ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0.13 g, 0.74 mmol), EDCI (0.18 g, 0.94 mmol) y HOBt (0.042 g, 0.31 mmol) en CH2CI2 (5 mL) se agitaron a 0 °C. Se añadió DIPEA (0.4 g, 3.1 mmol). La mezcla se agitó durante 2 horas a 20 °C. La mezcla se lavó con H20 (2 x 5 mL) y salmuera (5 mL), se secó con Na2SO_i y la solución obtenida se concentró al vacío a sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (C18, eluyente: CH3CN/H2O desde 15/85 hasta 35/65 con un 0.1 % de CF3COOH como tampón). Se recolectaron las fracciones puras y la mezcla se basificó con NaHC03 hasta obtener un pH = 9. El disolvente orgánico se evaporó, el precipitado se separó por filtración y se secó al vacío, para proporcionar el compuesto 9 como un sólido (0.12 g). Método H; tR: 3.80 min. m/z : 903.6 (M+H)+ Masa exacta: 902.4.

SFC: columna: AS-H 250 mm x 4.6 mm, 5 m; flujo: 2.35 mL/min; fase móvil: A: C02, B: MeOH (0.05% de dietilamina), 40% de B en A; tR: 3.68 min; 1H RMN (600 MHz, DMSO-cfe) d ppm 0.81 (d, J=6.6 Hz, 3 H), 0.86 (d, J=6.7 Hz, 3 H), 0.88 (d, J=6.5 Hz, 3 H), 0.94 (d, J=6.7 Hz, 3 H), 1.18 -1.36 (m, 2 H), 1.46 (d, J=10.3 Hz, 1 H), 1.60 - 1.71 (m, 1 H), 1.72 - 1.80 (m, 2 H), 1.82 - 1.90 (m, 1 H), 1.92 - 1.98 (m, 1 H), 1.98 - 2.06 (m, 2 H), 2.06 - 2.16 (m, 1 H), 2.19 - 2.28 (m, 1 H), 2.34 - 2.42 (m, 1 H), 2.46 (d, J=8.2 Hz, 2 H), 3.54 (s, 3 H), 3.55 (s, 3 H), 3.80 (d, J=11.2 Hz, 1 H), 3.88 (dd, J=9.4, 8.8 Hz, 1 H), 3.90 - 4.05 (m, 5 H), 4.07 (d, J=10.9 Hz, 1 H), 4.37 - 4.55 (m, 1 H), 4.75 (t, J=8.9 Hz, 1 H), 5.11 (t, J=8.4 Hz, 1 H), 7.35 (d, J=8.7 Hz, 1 H), 7.55 (d, J=8.2 Hz, 1 H), 7.71 (s a, 1 H), 7.75 (s, 1 H), 7.87 (s a, 1 H), 7.92 (dd, J=8.3, 1.5 Hz, 1 H), 7.95 (d, J=8.4 Hz, 1 H), 8.03 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 8.04 - 8.10 (m, 1 H), 8.20 (d, J=8.2 Hz, 1 H), 8.24 - 8.34 (m, 2 H), 11.99 (s a, 1 H), 12.40 (s, 1 H) Una mezcla del compuesto SC-9 (1.0 g, 1.79 mmol), el compuesto QA-2 (0.8 g, 1.79 mmol), Pd(PPh3) (0.21 g, 0.18 mmol) y Na2C03 (1.52 g, 14.32 mmol) en tolueno/etanol/H20 = 1 :1 :1 (30 mL) se agitó durante 2 horas a 100 °C en atmósfera de N2. Los componentes volátiles se eliminaron al vacío. Se añadieron diclorometano (100 mL) y agua (40 mL). La fase orgánica se separó y se secó con Na2S04. Se eliminó el disolvente al vacío. Del polvo amarillo obtenido (1.0 g), una parte (600 mg) se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (columna: Phenomenex Synergi C18 150 * 30 mm * 4 µ?t?; método: desde un 20 hasta un 50% de B en A en 1 1 minutos; A: H20 + 0.1% de TFA, B: MeCN; tasa de flujo (mL/min): 40). Las fracciones puras se recolectaron y se neutralizaron con NaHC03 saturado. El disolvente orgánico se eliminó al vacío. El precipitado se filtró, se lavó con H20 (10 mL) y se secó con un vacío elevado, para proporcionar el compuesto 10 como un polvo blanquecino (360 mg). Método H; tR: 3.39 min. m/z : 803.4 (M+H)+ Masa exacta: 802.4; SFC: columna: AS-H 250 mm x 4.6 mm, 5 pm; flujo: 2.35 mUmin; fase móvil: A: C02, B: MeOH (0.05% de dietilamina), de un 5 a un 40% de B en A; tR: 9.48 min El compuesto QA-8 (0.5 g, 1.1 mmol), el compuesto SC-12 (0.62 g, 1.1 mmol), Pd(PPh3)4 (0.38 g, 0.33 mmol) y Na2C03 (0.47 g, 4.4 mmol) se calentaron a reflujo en tolueno (5 ml_), CH3CH2OH (5 ml_) y H20 (5 mL) en atmósfera de N2 durante 12 horas. El disolvente se eliminó al vacío. La mezcla se extrajo con CH2CI2 (2 x 20 mL) y las fases orgánicas se lavaron con salmuera y se secaron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1 y a continuación 1/100 v/v). Se recolectaron las fracciones puras y se eliminó el disolvente al vacío, para proporcionar el compuesto 11 (0.35 g).

El compuesto 11 (0.35 g, 0.44 mmol), Boc20 (0.19 g, 0.88 mmol) y NEt3 (0.13 g, 1.32 mmol) se sometieron a una hidrogenación en CH3OH (10 mL) con Pd/C al 10% (0.1 g) como catalizador a 20 °C (30 Psi) durante 14 horas. Después de que la hidrogenación se completara, el catalizador se separó por filtración y los componentes volátiles se eliminaron al vacío, para proporcionar un residuo (0.3 g). Este residuo (0.3 g) se disolvió en CH2CI2 (5 mL) y se añadió HCI 4 M/dioxano (3 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 2 horas. El disolvente se eliminó al vacío, el residuo obtenido se diluyó dos veces con tolueno (2 x 5 mL) y a continuación se eliminó el tolueno, para proporcionar un residuo (0.3 g). Este residuo (0.3 g), el ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0.093 g, 0.53 mmol), EDCI (0.13 g, 0.66 mmol) y HOBt (0.030 g, 022 mmol) en CH2CI2 (5 mL) se agitaron a 0 °C. Se añadió DIPEA (0.28 g, 2.2 mmol) y la mezcla se agitó durante 2 horas a 20 °C. La mezcla se lavó con H20 (2 x 5 mL) y salmuera, se secó con Na2S04 y los componentes volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (C18, eluyente: CH3CN H20 desde 15/85 hasta 35/65 con un 0.1% de CF3COOH como tampón). Las fracciones puras se recolectaron y la mezcla se basificó con NaHC03 hasta obtener un pH = 9. El disolvente orgánico se evaporó y el precipitado se filtró. El sólido se secó al vacío y a continuación se purificó mediante cromatografía de tipo SFC (Chiralcel AD-H, 20 µ??; C02 supercrítico: MeOH, v/v, 200 mIJmin). Se recolectaron las fracciones puras y se eliminó el disolvente al vacío, para proporcionar el compuesto 12 (0.06 g). Método H; tR: 3.5 min. m/z : 829.5 (M+H)+ Masa exacta: 828.4; SFC: columna: AS-H 250 mm x 4.6 mm, 5 pm; flujo: 2.5 mL/min; fase móvil: A: C02, B: EtOH (0.05% de dietilamina), 40% de B en A; tR: 3.67 min A una solución agitada de SC-18 (1.4 g, 2.45 mmol), QA-10 (1.49 g, 2.94 mmol) y Pd(dppf)CI2 (0.2 g, 0.245 mmol) en THF anhidro (30 mL), se añadió NaHC03 (15 mL, 2 N). La mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 20 minutos, se desactivó con agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con Na2S04 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (columna: Diamonsil C18 250 * 50 mm * 10 pm; método: A: H20 + 0.1% de TFA, B: CH3CN, desde un 25 hasta un 40% de B en A en 17 minutos; tasa de flujo (mL/min): 90). La fracción pura se recolectó y se neutralizó con NaHC03 saturado. La mezcla se extrajo con CH2CI2 (3 x 20 mL). Las fases orgánicas combinadas se concentraron al vacío para proporcionar el compuesto 13 (600 mg). Método H; Í : 3.92 min. m/z : 871.6 (M+H)+ Masa exacta: 870.4; A una solución agitada del compuesto QA-10 (2.5 g, 4.96 mmol), el compuesto SC-15 (2.5 g, 4.13 mmol) y Pd(dppf)CI2 (0.2 g, 0.496 mmol) en THF anhidro (30 mL), se añadió NaHC03 (15 mL, 2 N). La mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 20 minutos, se desactivó con agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con Na2S04 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (columna: Diamonsil C18 250 * 50 mm * 10 pm; método: A: H20 + 0.1% de TFA, B: CH3CN, desde un 25 hasta un 40% de B en A en 17 minutos; tasa de flujo (mUmin): 90). La fracción pura se recolectó y se neutralizó con NaHC03 saturado. El disolvente orgánico se concentró al vacío. El precipitado se filtró, se lavó con H2O (10 mL) y se secó con un vacío elevado para proporcionar el compuesto 14 (1000 mg). Método H; tR: 4.11 min. m/z : 899.5 (M+H)+ Masa exacta: 898.5; SFC: columna: AS-H 250 mm x 4.6 mm, 5 pm; flujo: 2.5 mL/min; fase móvil: A: CO2, B: MeOH (0.05% de dietilamina), 40% de B en A; tR: 5.1 min; SFC: columna: OJ-H 250 mm x 4.6 mm, 5 pm; flujo: 2.5 mL/min; fase móvil: A: C02, B: MeOH (0.05% de dietilamina), 40% de B en A; tR: 3.14 min A una solución agitada de QA-10 (2.0 g, 3.97 mmol), el compuesto SC-6 (1.8 g, 3.31 mmol) y Pd(dppf)CI2 (0.2 g, 0.397 mmol) en THF anhidro (20 ml_), se añadió NaHCO3 (10 ml_, 2 N). La mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 20 minutos, se desactivó con agua (20 ml_) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con Na2S0 y se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (columna: Diamonsil C18 250 * 50 mm * 10 µ??; método: A: H20 + 0.1% de TFA, B: CH3CN, desde un 25 hasta un 40% de B en A en 17 minutos; tasa de flujo (mL/min): 90). La fracción pura se recolectó y se neutralizó con NaHC03 saturado. El disolvente orgánico se concentró al vacío. El precipitado se filtró, se lavó con H20 (10 mL) y se secó con un vacío elevado para proporcionar el compuesto 15 (700 mg). Método H; tR: 3.81 min. m/z : 845.5 (M+H)+ Masa exacta: 844.4; SFC: columna: AS-H 250 mm x 4.6 mm, 5 µ??; flujo: 2.5 mIJmin; fase móvil: A: C02, B: MeOH (0.05% de dietilamina), 40% de B en A; ÍR: 3.84 min; SFC: columna: AS-H 250 mm x 4.6 mm, 5 pm; flujo: 2.5 mL/min; fase móvil: A: C02, B: ¡PrOH (0.05% de dietilamina), 40% de B en A; tR: 5.15 min.

EJEMPLOS BIOLÓGICOS Actividad anti-VHC de los compuestos de fórmula I Ensayos de replicón Los compuestos de fórmula I se examinaron para determinar su actividad inhibitoria en el replicón del VHC. Este ensayo celular se basa en un constructo de expresión bicistrónico, según describen Lohmann et al. (Science (1999) 285: 110-1 13; Journal of Virology (2003) 77: 3007-3019) con las modificaciones descritas por Krieger et al. (Journal of Virology (2001) 75: 4614-4624) y Lohmann et al. (Journal of Virology (2003) 77: 3007-3019) para el genotipo 1b y por Yi et al. (Journal of Virology (2004) 78: 7904-7915) para el genotipo 1a, en una estrategia de cribado con múltiples dianas.

Transfección estable El método se llevó a cabo como se indica a continuación. El ensayo utilizó la línea celular transfectada de forma estable Huh-7 luc/neo (que se denomina en lo sucesivo en la presente Huh-Luc). Esta línea celular contiene un ARN que codifica un constructo de expresión bicistrónico que comprende las regiones NS3-NS5B de origen natural del VHC de tipo 1b traducidas a partir de un sitio interno de entrada al ribosoma (IRES) del virus de la encefalomiocarditis (VEMC), precedidas por una porción marcadora (luciferasa de luciérnaga) y una porción marcadora seleccionare (neoR, neomicina-fosfotransferasa). El constructo está flanqueado por NTR (regiones no traducidas) 5' y 3' del VHC de tipo 1b. El cultivo continuado de las células con replicón en presencia de G418 (neoR) depende de la replicación del ARN del VHC. Las células con replicón transfectadas de forma estable que replican el ARN del VHC de forma autónoma y hasta niveles elevados, las cuales codifican la luciferasa entre otras, se utilizaron para analizar los compuestos antivíricos.

Las células con replicón se colocaron en placas de 384 pocilios en presencia de los compuestos de prueba y control, los cuales se añadieron con diferentes concentraciones. Tras una incubación de tres días, la replicación del VHC se midió evaluando la actividad luciferasa (utilizando sustratos y reactivos para el ensayo de la luciferasa estándar y un equipo para la obtención de imágenes de microplacas Perkin Elmer ViewLuxTM ultraHTS). Las células con replicón en los cultivos de control presentan una expresión de la luciferasa elevada en ausencia de cualquier inhibidor. Se monitorizó la actividad inhibitoria del compuesto en las células Huh-Luc, con lo cual se pudo obtener una curva de dosis-respuesta para cada compuesto de prueba. A continuación, se calcularon los valores de CE50, los cuales representan la cantidad de compuesto necesaria para reducir el nivel de actividad luciferasa detectada en un 50% o, más específicamente, para reducir la capacidad para replicarse del ARN del replicón del VHC genéticamente ligado.

Resultados Cuando un compuesto de fórmula I se evaluó más de una vez en el ensayo del replicón, en esta Tabla 1 se proporciona la media de todos los resultados del ensayo.

Transfección transitoria En una configuración transitoria, una línea de carcinoma hepatocelular Huh-7 lunet se transfectó de forma transitoria con un ARN que se replica de forma autónoma y que codifica un constructo de expresión bicistrónico. Este constructo comprende un gen marcador de la luciferasa de luciérnaga que precede a la región subgenómica NS3-NS5B del VHC (genotipo 1a H77 o 1b Con1). La traducción de la región subgenómica del VHC está mediada por un sitio interno de entrada al ribosoma del virus de la encefalomiocarditis. Además, el constructo está flanqueado por regiones no traducidas 5' y 3' del VHC (genotipo 1a H77 o 1b Con 1, respectivamente), que hacen posible la replicación del ARN.

Las células se colocaron en placas de 384 pocilios en presencia de los compuestos de prueba y control, los cuales se añadieron con diferentes concentraciones. Tras una incubación de dos días, la replicación del ARN del replicón subgenómico del VHC se midió evaluando la actividad luciferasa (utilizando sustratos y reactivos para el ensayo de la luciferasa estándar y un equipo para la obtención de imágenes de microplacas Perkin Elmer ViewLuxTM ultraHTS). Las células que contienen el replicón subgenómico del VHC en los cultivos de control presentan una expresión de la luciferasa elevada en ausencia de cualquier inhibidor. Se monitorizó la actividad inhibitoria del compuesto, con lo cual se pudo obtener una curva de dosis-respuesta para cada compuesto de prueba. A continuación, se calcularon los valores de CE5o, los cuales representan la cantidad de compuesto necesaria para reducir el nivel de actividad luciferasa detectada en un 50% o, más específicamente, para reducir la capacidad para replicarse del ARN subgenómico del VHC genéticamente ligado.

Análisis secundarios Las líneas celulares de los análisis secundarios incluyeron una línea de carcinoma hepatocelular Huh-7, la cual contenía el constructo de tipo promotor temprano inmediato principal del citomegalovirus humano-Luc (Huh7-CMV-Luc), y una línea de linfocitos T MT4, la cual contenía una repetición terminal larga-marcador Luc (MT4-LTR-Luc).

Claims (12)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto de fórmula I o un estereoisó se selecciona independientemente de un grupo que comprende R y R' se seleccionan independientemente entre -CR1R2R3, arilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados entre halo y metilo, o heterocicloalquilo, donde R1 se selecciona entre alquilo C1-4, alquilo C2- sustituido con metoxi o hidroxilo, y fenilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre halo y metilo; R2 es hidroxilo, amino, mono- o di(alquil C^amino, (alquil C-i-^carbonilamino, (alquiloxi C-i^carbonilamino; R3 es hidrógeno o alquilo C-M; O una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de este.

2.- El compuesto de fórmula I de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque al menos un grupo se selecciona independientemente del grupo que comprende

3.- El compuesto de fórmula I, de conformidad con las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado además porque menos un grupo independientemente

4.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado además porque tiene la fórmula la la

5.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado además porque R2 es (alquil C-i. 4)carbonilamino o (alquiloxi Ci^carbonilamino y R3 es hidrógeno.

6.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado además porque Ri se selecciona entre alquilo C3-4 ramificado, alquilo C2-3 sustituido con metoxi, y fenilo opcionalmente sustituido con 1 sustituyente seleccionado entre halo y metilo.

7. - Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y un portador farmacéuticamente aceptable.

8. - Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o una composición farmacéutica de la reivindicación 7, para usarse como un medicamento.

9.- Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o una composición farmacéutica de la reivindicación 7, para usarse en la prevención o el tratamiento de una infección provocada por el VHC en un mamífero.

10.- Un producto que contiene (a) un compuesto de fórmula I según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y (b) otro inhibidor del VHC, como un preparado combinado para usar simultánea, secuencial o separadamente en el tratamiento de infecciones provocadas por el VHC.

11.- El uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o una composición farmacéutica de la reivindicación 7, para preparar un medicamento para la prevención o tratamiento de una infección provocada por el VHC en un mamífero.

12.- El uso de un producto que contiene (a) un compuesto de fórmula I según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y (b) otro inhibidor del VHC, como un preparado combinado para preparar un medicamento para el tratamiento de infecciones provocads por VHC, en donde el medicamento está adaptado para ser administrable simultánea, separada o secuencialmente.