MX2012011453A - Compuestos de tetraciclina policíclica. - Google Patents

Compuestos de tetraciclina policíclica.

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Louis Plamondon
Trudy Grossman
Xiao-Yi Xiao
Roger Clark
Diana Hunt
Magnus Roenn
Minsheng He
Joyce Sutcliffe
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Tetraphase Pharmaceuticals Inc
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Abstract

(ver fórmula (I)) La presente invención es concerniente con un compuesto representado por la fórmula estructural (I) o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo. Las variables para la fórmula estructural (I) son definidas en la presente. También se describe una composición farmacéutica que comprende el compuesto de fórmula estructural (I) y su uso terapéutico.

Description

COMPUESTOS DE TETRACICLINA POLICÍCLICA SOLICITUD RELACIONADA Esta solicitud reivindica la prioridad de la Solicitud Provisional de Estados Unidos N° 617319.614, presentada el 31 de marzo de 2010. Las enseñanzas completas de la solicitud anterior se incorporan en este documento como referencia.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las tetraciclinas son agentes anti-microbianos de amplio espectro que se usan ampliamente en la medicina humana y veterinaria. La producción total de tetraciclinas por fermentación o semi-síntesis se mide en miles de toneladas métricas por año.
El uso generalizado de tetraciclinas para fines terapéuticos ha dado lugar a la aparición de resistencia a estos antibióticos, incluso entre especies bacterianas altamente susceptibles. Por lo tanto, existe la necesidad de nuevos análogos de tetraciclina con actividades y eficacias antibacterianas mejoradas frente a otras enfermedades o trastornos con respuesta a tetraciclina.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN Una primera realización de la presente invención se refiere a un compuesto representado por la Fórmula Estructural (I): o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: X se selecciona entre halo, -R, -OR, -SR, -S(O)mR, -N(R)2, -N(R)C(O)R, N(R)C(O)OR' y N(R)S(O)mR\ en la que: cada R se selecciona independientemente entre H, alquilo (d-Ce), carbociclilo o heterociclilo, o dos grupos R tomados junto con el átomo o átomos a los que están unidos forman un heterociclilo no aromático de 4-7 miembros; y R' es alquilo (CrC6), carbociclilo o heterociclilo; anillo A es un anillo heterocíclico no aromático de 5-7 miembros opcionalmente que contiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente entre N, S y O además del átomo de nitrógeno indicado, donde: R1 se selecciona entre hidrógeno, -alquilo (C-i-Ce), -alquileno (Co-Ce)-carbociclilo, -alquileno (Co-C6)-heterociclilo, -alquileno (C-i-C6)-O-alquilo (Ci-C6), -alquileno (C2-C6)-O-carbociclilo, -alquileno (C2-C6)-O-heterociclilo, -S(O)m-alquilo (CrC6), -S(O)m-carbociclilo, -S(O)m-heterociclilo, -alquileno (C2-C4)-S(O)m-carbociclilo, -alquileno (C2-C4)-S(O)m-heterociclilo, -C(O)-[C(R4)(R4)]0-4-N(R2)(R3), -C(O)-alquilo (CrC6), -C(O)-heterociclilo, -C(O)-carbociclilo, -S(O)m-[C(R4)(R )]0-4-N(R2)(R3), y -S(O)m-alquileno (Ci-C4)-carboc¡clilo, -S(0)m-alquileno (CrC4)-heterociclilo, o R1 tomado junto con un átomo de anillo adyacente al átomo de nitrógeno al que R1 está unido forma un anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A; cada uno de R2 y R3 se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo (CrC8), -alquileno (C0-C6)-carbociclilo, -alquileno (C0-C6)-heterociclilo, -alquileno (C2-C6)-0-carbociclilo, -alquileno (C2-C6)-O-heterociclilo, -S(0)m-alquilo (Ci-C6), -S(0)m-carbociclilo, -S(0)m-heterociclilo, -alquileno (C2-C4)-S(0)m-carbociclilo y -alquileno (C2-C4)-S(0)m-heterociclilo; o R2 y R3, tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo, donde el heterociclilo opcionalmente comprende de 1 a 4 heteroátomos adicionales seleccionados independientemente entre N, S y O; cada R4 se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo (CrC6), carbociclilo, heterociclilo o un resto de cadena lateral de aminoácidos de origen natural, o dos R4 tomados junto con un átomo de carbono común al que están unidos forman un carbociclo no aromático de 3-7 miembros o un heterociclilo no aromático de 4-7 miembros, donde el heterociclilo formado por dos R4 comprende de uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente entre N, S y O; cualquier átomo de carbono sustituido en el anillo A está opcionalmente: (i) sustituido con uno a dos sustituyentes seleccionados independientemente entre -alquilo (CrC4) y -alquileno(C0-C4)-carboc¡cl¡lo; o (ii) sustituido con =0; (iii) tomado junto con un átomo de anillo adyacente para formar un carbocíclico de 3-7 miembros o un anillo heterociclilo saturado de 4-7 miembros; o (iv) espirocondensado a un carbociclilo saturado de 3-7 miembros; cualquier heteroátomo de N adicional en el anillo A está sustituido con hidrógeno, alquilo C1-C6, carbociclilo o heterociclilo; cada alquilo o alquileno en la Fórmula Estructura I está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre halo, -OH, =O, -O-alquilo (C1-C4), -alquilo (CrC4) fluoro-sustituido, -S(O)m-alquilo (C C4) y -N(R5)(R5); cada porción de carbociclilo o heterociclilo de un sustituyente del anillo A o el anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre halo, -alquilo (C-i-C4), -OH, =O, -O-alquilo (C1-C4), -alquileno (Ci-C4)-O-alquilo (CrC4), -alquilo (C-1-C4) halo-sustituido, -O-alquilo (C C4) halo-sustituido, -C(0)-alquilo (C1-C ), -C(O)-(alquilo (C C4) fluoro-sustituido), -S(O)m-alquilo (C C ), -N(R5)(R5) y CN; cada R5 se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo (d-C4), donde cada alquilo en el grupo representado por R5 está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre -alquilo (C1-C4), cicloalquilo (C3-C6), halo, -OH, -O-alquilo (C C4) y -alquileno (C C4)-O-alquilo (C C4); y cada m es independientemente 1 ó 2, con la condición de que cuando X sea hidrógeno, el anillo A no sea un radical bivalente sin sustituir.
En un aspecto de la primera realización, X se selecciona entre halo, -R\ -OR, -SR, -S(0)mR, -N(R)2, -N(R)C(0)R, N(R)C(0)OR' y N(R)S(O)mR'; y R' es alquilo (?-?-?ß), carbociclilo o heterociclilo, donde los valores para las variables restantes son como se definen el la primera realización.1 Otra realización de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable y un compuesto representado por la Fórmula Estructural (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La composición farmacéutica se usa en terapia, tal como tratar una infección (por ejemplo, una infección bacteriana) en un sujeto.
Otra realización de la presente invención es un método para tratar una infección (por ejemplo, una infección bacteriana) en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula Estructural (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otra realización de la presente invención es un método de prevención de una infección (por ejemplo, una infección bacteriana) en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto representado por la Fórmula Estructural (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otra realización de la presente invención es el uso de un compuesto representado por la Fórmula Estructural (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la preparación de un medicamento para tratar una infección (por ejemplo, una infección bacteriana) en un sujeto.
Otra realización de la presente invención es el uso de un compuesto representado por la Fórmula Estructural (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la preparación de un medicamento para prevenir una infección (por ejemplo, una infección bacteriana) en un sujeto.
Otra realización de la presente invención es el uso de un compuesto representado por la Fórmula Estructural (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en terapia, tal como tratar o prevenir una infección (por ejemplo, una infección bacteriana) en un sujeto.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Lo anterior será evidente a partir de la siguiente descripción más particular de las realizaciones de los ejemplos de la invención, como se ilustran en los dibujos adjuntos en los que los caracteres de referencia similares se refieren a las mismas partes a lo largo de las diferentes vistas. Los dibujos no están necesariamente a escala, en su lugar se hará énfasis en la ilustración de las realizaciones de la presente invención.
La FIG. 1 es un gráfico de barras que demuestra la eficacia de los Compuestos 102, 143, 130, 126 y 135 a 10 mg/kg IV, BID y 30 mg/kg, BID por vía oral en un modelo de pulmón de S. pneumoniae SP160. La linezolida a 5 mg/kg IV, BID y 30 mg/kg, BID por vía oral sirvió como control.
La FIG. 2 un gráfico de barras que demuestra el Compuesto 102 en el modelo de infección de pulmón de ratón inmunocompetente con S. pneumoniae SP514, dosificación oral.
La FIG. 3 es un gráfico de barras que demuestra la eficacia de los Compuestos 102, 143 y 130 en el modelo de pulmón de MRSA SA191. Los Compuestos 102, 143 y 130 y la linezolida se evaluaron a 10 mg/kg IV, BID. Todos los compuestos se ensayaron a 50 mg/kg, BID por vía oral con la excepción de la linezolida. La linezolida se evaluó a 30 mg/kg, BID por vía oral.
La FIG. 4 es un gráfico de barras que demuestra la eficacia del Compuesto 102 en un modelo de infección de pulmón de rata con H. influenzae HI551.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Valores y Valores Alternativos para las Variables La presente invención se refiere a un compuesto representado por la Fórmula Estructural (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Los valores y valores alternativos para las variables en la Fórmula Estructural I y para cada una de las realizaciones descritas en este documento se proporcionan en los siguientes párrafos. Se entenderá que la invención incluye todas las combinaciones de las variables dé sustituyentes (es decir, R1, R2, R3, etc.) definidas en este documento.
X se selecciona entre halo, -R, -OR, -SR, -S(0)mR, -N(R)2, -N(R)C(0)R, -N(R)C(0)OR' y -N(R)S(0)mR', donde cada R se selecciona independientemente entre H, alquilo (C-i-Ce), carbociclilo o heterociclilo; o dos grupos R tomados junto con el átomo o átomos a los que están unidos forman un heterociclilo no aromático de 4-7 miembros; y R' es alquilo (C1-C6), carbociclilo o heterociclilo.
Como alternativa, X se selecciona entre halo, -R', -OR, -SR, -S(O)mR, -N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)C(O)OR' y -N(R)S(O)mR', donde cada R se selecciona independientemente entre H, alquilo (C Ce), carbociclilo o heterociclilo; o dos grupos R tomados junto con el átomo o átomos a los que están unidos forman un heterociclilo no aromático de 4-7 miembros; y R' es alquilo (C-i-Ce), carbociclilo o heterociclilo.
Además, X se selecciona entre flúor, cloro, hidrógeno, metoxi, metilo, trifluorometilo, trifluorometoxi y dimetilamino. Como alternativa, X se selecciona entre flúor, cloro, metoxi, metilo, trifluorometilo, trifluorometoxi y dimetilamino.
X se selecciona entre flúor, cloro, metoxi, trifluorometilo y dimetilamino. Como alternativa, X es metoxi o dimetilamino. Específicamente, X es flúor.
El anillo A es un anillo heterocíclico no aromático de 5-7 miembros opcionalmente que contiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente entre N, S y O además del átomo de nitrógeno indicado.
El anillo A se selecciona entre Como alternativa, el anillo A es . Como alternativa R1 se selecciona entre hidrógeno, -alquilo (C-i-Ce), -alquileno (Co-C6)-carbociclilo, -alquileno (C0-C6)-heteroc¡clilo, -alquileno (Ci-C6)-0-alquilo (C1-C6), -alquileno (C2-C6)-0-carbociclilo, -alquileno (C2-C6)-0-heterociclilo, -S(0)m-alquilo (Ci-C6), -S(0)m-carbociclilo, -S(O)m-heterociclilo, -alquileno (C2-C4)-S(0)m-carbociclilo, -alquileno (C2-C4)-S(0)m-heterociclilo, -C(O)-[C(R4)(R )]0-4-N(R2)(R3), -C(0)-alquileno (C C6), -C(0)-heterociclilo, -C(0)-carbociclilo, -S(0)m-[C(R4)(R4)](M-N(R2)(R3) y -S(O)m-alquileno (Ci-C )-carbociclilo, -S(0)m-alquileno (CrC4)-heterociclilo, o R1 tomado junto con un átomo de anillo adyacente al átomo de nitrógeno al que R1 está unido forma un anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A.
Como alternativa, R1 se selecciona entre hidrógeno, -alquilo (C-i-Ce), -alquileno (C2-C4)-0-alqu¡lo (C-i-C4), -alquileno (C0-C3)-(heterociclo saturado), -alquileno (C0-C3)-c¡cloalquilo (C3-C7), -C(0)-alquileno (d-C- -N R^R3), o R1 tomado junto con un átomo de anillo adyacente al átomo de nitrógeno al que R1 está unido forma un anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A; donde cualquier porción alquilo o alquileno de R1 o el anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A está opcionaímente sustituido con flúor o hidroxi.
Además, R1 se selecciona entre hidrógeno; alquilo (C1-C3) lineal opcionalmente sustituido con uno o más de: de 1 a 5 grupos metilo, un grupo hidroxi individual, un grupo metoxi individual, de 1 a 3 grupos flúor, un heterociclo saturado individual y un grupo cicloalquilo (C3-C7) individual; cicloalquilo (C3-C7); tetrahidrofuranoilo; y -C(0)-CH2-N(R2)(R3); o R1 tomado junto con un átomo de anillo adyacente al átomo de nitrógeno al que R1 está unido forma un anillo pirrolidinilo o piperidinilo condensado al anillo A, donde el anillo pirrolidinilo o piperidinilo condensado al anillo A está opcionalmente sustituido con hidroxi o flúor.
Como alternativa, R1 se selecciona entre etilo, propilo, alquilo (C3-C5) ramificado, cicloalquilo (C3-C5), alquileno (CrC3)-ciclopropilo, -C(0)CH2NH-ciclopentilo y -C(0)CH2-pirrolid¡n-1-ilo, donde R1 está opcionalmente sustituido con flúor. Como alternativa, R1 se selecciona entre 3-fluoroetilo, propilo, isopropilo, sec-butilo, tere-butilo, cicloalquilo (C3-C5), -C(CH3)2-ciclopropilo, -C(0)CH2NH-ciclopentilo y -C(0)CH2-(3-fluoropirrolidin-1-ilo). Como alternativa, R se selecciona adicional entre ferc-pentilo. Como alternativa, R1 se selecciona entre hidrógeno y alquilo (C1-C4). Como alternativa, R1 se selecciona entre hidrógeno, metilo, isobutilo y íerc-butilo.
Cada uno de R2 y R3 se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo (C-pCe), -alquileno (Co-C6)-carbociclilo, -alquileno (Co-C6)-heterociclilo, -alquileno (C2-C6)-0-carbociclilo, -alquileno (C2-C6)-0-heterociclilo, -S(0)m-alquilo (CrC6), -S(0)m-carbociclilo, -S(0)m-heterociclilo, -alquileno (C2-C4)-S(0)m-carbociclilo y -alquileno (C2-C4)-S(0)m-heterociclilo; o R2 y R3, tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo, donde el heterociclilo opcionalmente comprende de 1 a 4 heteroátomos adicionales seleccionados independientemente entre N, S y O.
Como alternativa, R2 se selecciona entre hidrógeno y alquilo (C1-C3) y R3 se selecciona entre alquilo (C1-C3) y cicloalquilo (C3-C7), o R2 y R3, tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo saturado de 4-7 miembros, donde el heterociclilo está opcionalmente sustituido con flúor.
Como alternativa, R2 y R3 son simultáneamente metilo; R2 es hidrógeno y R3 es cicloalquilo C3-C7; o R2 y R3, tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo pirrolidinilo opcionalmente sustituido con flúor.
Cada R4 se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo (C-i-Ce), carbociclilo, heterociclilo o un resto de cadena lateral aminoacídica de origen natural.
Como alternativa, dos R4 tomados junto con un átomo de carbono común al que están unidos forman un carbocíclico no aromático de 3-7 miembros o un heterociclilo no aromático de 4-7 miembros, donde el heterociclilo formado por dos R4 comprende de uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente entre N, S y O.
Cualquier átomo de carbono sustituible en el anillo A está opcionalmente: (i) sustituido con uno a dos sustituyentes seleccionados independientemente entre -alquilo (C C4) y -alquileno (C0-C4)-carbociclilo; o (ii) sustituido con =O; (iii) tomado junto con un átomo de anillo adyacente para formar un carbociclilo saturado de 3-7 miembros o un anillo heterociclilo saturado de 4-7 miembros; o (iv) espirocondensado a un carbociclilo saturado de 3-7 miembros.
Cualquier heteroátomo de N adicional en el anillo A está sustituido con hidrógeno, alquilo (Ci-C6), carbociclilo o heterociclilo.
Cada alquilo o alquileno en la Fórmula Estructural I está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre halo, -OH, =O, -O-alquilo (C1-C4), -alquilo (C C4) fluoro-sustituido, -S(0)m-alquilo (C C4) y -N(R5)(R5).
Cada porción de carbociclilo o heterociclilo de un sustituyente del anillo A o el anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre halo, -alquilo (C1-C4), -OH, =0, -O-alquilo (C1-C4), -alquileno (C-i-C4)-O-alquilo (C C4), -alquilo (C1-C4) halo-sustituido, -O-alquilo (C1-C4) halo-sustituido, -C(O)-alquilo (Ci-C4), -C(O)-(alquilo (CrC4) fluoro-sustituido), -S(0)m-alquilo (d-C4), -N(R5)(R5) y CN.
Cada R5 se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo (C1-C4), donde cada alquilo en el grupo representado por R5 está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre -alquilo (C1-C4), cicloalquilo (C3-C6), halo, -OH, -O-alquilo (C C4) y -alquileno (CrC4)-O-alquilo (C1-C4).
Como alternativa, cuando X es hidrógeno, el anillo A no es un radical piperidina bivalente sin sustituir.
Cada m es independientemente 1 ó 2.
R6a se selecciona entre hidrógeno y metilo.
R6 se selecciona entre hidrógeno, alquilo (d-C ) opcionalmente sustituido con hidroxi o fenilo; o R6 tomado junto con R1 y el átomo de nitrógeno y el átomo de carbono al que están unidos respectivamente forman un anillo pirrolidinilo o piperidinilo condensado al anillo A, donde el anillo pirrolidinilo o piperidinilo está opcionalmente sustituido con -OH o -F; o R6 y R6a se toman junto con el átomo de carbono al que están unidos para formar un anillo ciclopropilo.
Como alternativa, R6 se selecciona entre hidrógeno, ( )-alquilo (C1-C4) o -CH2-fenilo, o R1 y R6 tomados junto con el átomo de nitrógeno y el átomo de carbono al que están unidos respectivamente forman un anillo pirrolidinilo condensado al anillo A. Además, R6 se selecciona entre hidrógeno, (R)-metilo, (f?)-isobutilo, ( )-sec-butilo, ( )-isopropilo y -CH2-fenilo. Además, al menos uno de R1 y R6 es distinto de hidrógeno.
Cada uno de R7a y R7b es hidrógeno. Como alternativa, R7a y R7b se toman juntos para formar =O.
Una primera realización de la presente invención se refiere a un compuesto representado por la Fórmula Estructural (I): o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en la que: X se selecciona entre halo, -R, -OR, -SR, -S(O)mR, -N(R)2) -N(R)C(O)R, N(R)C(0)OR' y N(R)S(0)mR\ donde: cada R se selecciona independientemente entre H, alquilo (C Ce), carbociclilo o heterociclilo, o dos grupos R tomados junto con el átomo o átomos a los que están unidos forman un heterociclilo no aromático de 4-7 miembros; y R' es alquilo (C-i-Ce), carbociclilo o heterociclilo; el anillo A es un anillo heterocíclico no aromático de 5-7 miembros que contiene opcionalmente 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente entre N, S y O además de átomo de nitrógeno indicado, en la que: R1 se selecciona entre hidrógeno, -alquilo (C Cs), -alquileno (Co-C6)-carbociclilo, -alquileno (Co-C6)-heterociclilo, -alquileno (CrC6)-0-alquilo (CrCe), -alquileno (C2-C6)-0-carbociclilo, -alquileno (C2-C6)-0-heterociclilo, -S(0)m-alquilo (C Ce), -S(0)m-carbociclilo, -S(O)m-heterociclilo, -alquileno (C2-C4)-S(0)m-carbociclilo, -alquileno (C2-C4)-S(0)m-heterociclilo, -C(O)-[C(R4)(R4)]0-4-N(R2)(R3), -C(0)-alquilo (C C6), -C(O)-heterociclilo, -C(0)-carbociclilo, -S(O)m-[C(R4)(R )]0-4-N(R2)(R3), y -S(0)m-alquileno (CrC4)-carbociclilo, -S(0)m-alquileno (CrC4)-heterociclilo, o R1 tomado junto con un átomo de anillo adyacente al átomo de nitrógeno al que R1 está unido forma un anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A; cada uno de R2 y R3 se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo (CrCs), -alquileno (Co-C6)-carbociclilo, -alquileno (Co-C6)-heterociclilo, -alquileno (C2-C6)-0-carbociclilo, -alquileno (C2-C6)-0-heterociclilo, -S(0)m-alquilo (CrCe), -S(0)m-carbociclilo, -S(0)m-heterociclilo, -alquileno (C2-C4)-S(0)m-carbociclilo, y -alquileno (C2-C4)-S(O)m-heterociclilo; o R2 y R3, tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo, en el que el heterociclilo opcionalmente comprende de 1 a 4 heteroátomos adicionales seleccionados independientemente entre N, S y O; cada R4 se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo (CrC6), carbociclilo, heterociclilo o un resto de cadena lateral aminoacídico de origen natural, o dos R4 tomados junto con un átomo de carbono común al que están unidos forman un carbociclilo no aromático de 3-7 miembros o un heterociclilo no aromático de 4-7 miembros, donde el heterociclilo formado por dos R4 comprende uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente entre N, S y O; cualquier átomo de carbono sustituible en el anillo A esta opcionalmente: (i) sustituido con uno a dos sustituyentes seleccionados independientemente entre -alquilo (C1-C4) y -alquileno (Co-C4)-carbociclilo; o (ii) sustituido con =O; (iii) tomado junto con un átomo del anillo adyacente para formar un carbociclilo saturado de 3-7 miembros o un anillo heterociclilo saturado de 4-7 miembros; o (iv) espirocondensado a un carbociclilo saturado de 3-7 miembros; cualquier heteroátomo de N adicional en el anillo A está sustituido con hidrógeno, alquilo Ci-C6, carbociclilo o heterociclilo; cada alquilo o alquileno en la Fórmula Estructural I está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre halo, -OH, =O, -O-alquilo (C1-C4), -alquilo (C1-C4) fluoro-sustituido, -S(0)m-alqu¡lo (C C4) y -N(R5)(R5); cada porción carbociclilo o heterociclilo de un sustituyente del anillo A o el anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre halo, -alquilo (C C4), -OH, =O, -O-alquilo (C1-C4), -alquileno (d-C4)-O-alquilo (C1-C4), -alquilo (CrC4) halo-sustituido, -O-alquilo (CrO,) halo-sustituido, -C(0)-alquilo (CrC4), -C(0)-(alquilo (C C4) fluoro-sustituido), -S(O)m-alquilo (C C4), -N(R5)(R5) y CN; cada R5 se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo (C1-C4), donde cada alquilo en el grupo representado por R5 está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre -alquilo (C1-C4), cicloalquilo (C3-C6), halo, -OH, -O-alquilo (C1-C4) y -alquileno (CrC4)-O-alqu¡lo (C C4); y cada m es independientemente 1 ó 2, con la condición de que cuando X sea hidrógeno, el anillo A no sea un radical de piperidina bivalente sin sustituir.
En un aspecto de la primera realización, X se selecciona entre flúor, cloro, hidrógeno, metoxi, metilo, trifluorometilo, trifluorometoxi y dimetilamino, donde los valores para las variables restantes son como se definen en la primera realización o en los valores o valores alternativos que se han descrito anteriormente.
En un segundo aspecto de la primera realización, X se selecciona entre halo, -R', -OR, -SR, -S(0)mR, -N(R)2, -N(R)C(0)R, N(R)C(0)OR' y N(R)S(O)mR'; y R' es alquilo (?-?-?ß), carbociclilo o heterociclilo, donde los valores para las variables restantes son como se definen en la primera realización o en los valores o valores alternativos que se han descrito anteriormente.
En un tercer aspecto de la primera realización: X se selecciona entre flúor, cloro, metoxi, metilo, trifluorometilo, trifluorometoxi y dimetilamino; donde los valores para las variables restantes son como se definen en el segundo aspecto de la primera realización o en los valores o valores alternativos que se han descrito anteriormente.
En un cuarto aspecto de la primera realización, R1 se selecciona entre hidrógeno, -alquilo (CrCe), -alquileno (C2- C4)-0-alquilo (C-i-C4), -alquileno (C0-C3)-(heterociclo saturado), -alquileno (C0-C3)-cicloalquilo (C3-C7), -C(0)-alquileno (C C3)-N(R2)(R3), o R1 tomado junto con un átomo de anillo adyacente al átomo de nitrógeno al que R1 está unido forma un anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A; donde: cualquier porción alquilo o alquileno de R1 o el anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A está opcionalmente sustituido con flúor o hidroxi; R2 se selecciona entre hidrógeno y alquilo (C1-C3); R3 se selecciona entre alquilo (C1-C3) y cicloalquilo (C3-C7), o R2 y R3, tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo saturado de 4-7 miembros, en el que el heterociclilo está opcionalmente sustituido con flúor, donde los valores para las variables restantes son como se definen en la primera realización o en los valores o valores alternativos que se han descrito anteriormente.
En un quinto aspecto de la primera realización, en el que: R se selecciona entre hidrógeno; alquilo (C1-C3) lineal opcionalmente sustituido con uno o más de: 1 a 5 grupo metilo, un grupo hidroxi individual, un grupo metoxi individual, 1 a 3 grupos flúor, un heterociclo saturado individual y un grupo cicloalquilo (C3-C7) individual; cicloalquilo (C3-C7); tetrahidrofuranoilo; y -C(0)-CH2-N(R2)(R3), donde R2 y R3 son simultáneamente metilo; R2 es hidrógeno y R3 es cicloalquilo C3-C7; o R2 y R3, tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo pirrolidinilo opcionalmente sustituido con flúor, o R1 tomado junto con un átomo de anillo adyacente al átomo de nitrógeno al que R1 está unido forma un anillo pirrolidinilo o piperidinilo condensado al anillo A, donde el anillo pirrolidinilo o piperidinilo condensado al anillo A está opcionalmente sustituido con hidroxi o flúor donde los valores para las variables restantes son como se definen en la primera realización o en los valores o valores alternativos que se han descrito anteriormente.
En una segunda realización, el compuesto de la presente invención se representa por la Fórmula Estructural (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R se selecciona entre hidrógeno y metilo; y R6 se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C1-C4) opcionalmente sustituido con hidroxi o fenilo; o R6 tomado junto con R1 y el átomo de nitrógeno y el átomo de carbono al que están unidos respectivamente forman a anillo pirrolidinilo o piperidinilo condensado al anillo A, donde el anillo pirrolidinilo o piperidinilo está opcionalmente sustituido con -OH o -F; o R6 y R6a se toman junto con el átomo de carbono al que ambos están unidos para formar un anillo ciclopropilo; y cada uno de R7a y R7b es hidrógeno o se toman juntos para formar =O; donde los valores para las variables restantes son como se han definido en la primera realización o aspecto de las mismas o en los valores o valores alternativos que se han descrito anteriormente.
Por ejemplo, los compuestos de la segunda realización se representan por la Fórmula Estructural (II), (Illa), (IVa), (Va) o (Vía): o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, donde los valores para las variables restantes son como se han definido en la primera realización o aspecto de las mismas, la segunda realización, o en los valores o valores alternativos que se han descrito anteriormente.
En una tercera realización, el compuesto de la presente invención se representa por la Fórmula Estructural (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: el anillo A es X se selecciona entre flúor, cloro, metoxi, trifluorometilo y dimetilamino; y R1 se selecciona entre etilo, propilo, alquilo (C3-C5) ramificado, cicloalquilo (C3-C5), alquileno (C C3)-c¡clopropilo, -C(0)CH2NH-ciclopentilo y -C(0)CH2-pirrolidin-1-ilo, donde R1 está opcionalmente sustituido con flúor, donde los valores para las variables restantes son como se han definido en la primera o segunda realizaciones o aspectos de las mismas o en los valores o valores alternativos que se han descrito anteriormente.
En un aspecto específico de la tercera realización, X se selecciona entre flúor, cloro, metoxi, trifluorometilo y dimetilamino; y R1 se selecciona entre 3-fluoroetilo, propilo, isopropilo, sec-butilo, tere-butilo, cicloalquilo (C3.C5), -C(CH3)2-ciclopropilo, -C(O)CH2NH-ciclopentilo, -C(0)CH2-(3-fluoropirrolidin-1-ilo); y cuando X es metoxi o dimetilamino, R1 se selecciona adicional entre terc-pentilo, donde los valores para las variables restantes son como se han definido en la primera o segunda realizaciones o aspectos de las mismas o en los valores o valores alternativos que se han descrito anteriormente.
En una cuarta realización, el compuesto de la presente invención se representa por la Fórmula Estructural (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: el anillo A es , X es flúor; y R se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C C ), donde los valores para las variables restantes son como se han definido en la primera o segunda realizaciones o aspectos de las mismas o en los valores o valores alternativos que se han descrito anteriormente.
En un aspecto específico de la cuarta realización, R1 se selecciona entre isopropiio, propilo o etilo, donde los valores para las variables restantes son como se han definido en la primera o segunda realizaciones o aspectos de las mismas o en los valores o valores alternativos que se han descrito anteriormente.
En una quinta realización, el compuesto de la presente invención se representa por la Fórmula Estructural (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: el anillo A es X es flúor; R1 se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C1-C4); R6 se selecciona entre hidrógeno, (R)-alquilo (C1-C4), o -CH2-fenilo, o R1 y R6 tomados junto con el átomo de nitrógeno y el átomo de carbono al que están unidos respectivamente forman un anillo pirrolidinilo condensado al anillo A; cada uno de R7a y R7b es hidrógeno o se toman juntos para formar =O, donde al menos uno de R , y R6 es distinto de hidrógeno, donde los valores para las variables restantes son como se han definido en la primera o segunda realizaciones o aspectos de las mismas o en los valores o valores alternativos que se han descrito anteriormente.
En un aspecto específico de la quinta realización, R1 se selecciona entre hidrógeno, metilo, isobutilo y tere-butilo; y R6 se selecciona entre hidrógeno, ( )-metilo, (R)-isobutilo, (f?)-sec-butilo, (/?)-isopropilo y -Chb-fenilo. "(f?)" se refiere a la quiralidad en el átomo de carbono al que R6 está unido. Las estructuras específicas son como se indican a continuación: (R)-metilo: (R)-sec-butilo: Como alternativa, R1 y R6 tomados junto con el átomo de nitrógeno y el átomo de carbono al que están unidos respectivamente forman un anillo pirrolidinilo condensado al anillo A. Los valores para las variables restantes son como se definen en la primera o segunda realizaciones o aspectos de las mismas o en los valores o valores alternativos que se han descrito anteriormente.
Los compuestos ejemplares representados por la Fórmula Estructural (II) se muestran en las siguientes Tablas 1-4: Tabla 1 Tabla 2. Compuestos ejemplares de Fórmula III Tabla 3. Compuestos ejemplares de Fórmula IV.
Compuesto R1 Tabla 4. Compuestos ejemplares de Fórmula V o VI. 5 10 15 20 5 10 15 20 En una sexta realización, el compuesto de la invención se representa por una cualquiera de la fórmulas estructurales que se han descrito en las Tablas 1 , 2, 3 ó 4, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una séptima realización, el compuesto de la invención es un compuesto seleccionado entre uno cualquiera de los Compuestos 100, 103, 110, 112, 113, 114, 115, 118, 119, 120, 121 , 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 132, 135, 138, 141 , 142, 143, 144, 145, 148 y 149 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una octava realización, el compuesto de la invención es un compuesto seleccionado entre uno cualquiera de los Compuesto 300, 304 y 307 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una novena realización, el compuesto de la invención es un compuesto selección entre uno cualquiera de los Compuestos 400, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 412, 413, 416, 417, 419, 421 , 422, 423, 424, 427, 428 y 429 o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
DEFINICIONES "Alquilo" significa un radical hidrocarburo monovalente alifático saturado de cadena ramificada o lineal opcionalmente sustituido que tiene el número especificado de átomos de carbono. Por lo tanto, "alquilo (CrC6)" se refiere a un radical que tiene de 1-6 átomos de carbono en una disposición lineal o ramificada. "Alquilo (Ci-C6)" incluye metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo y hexilo.
"Alquileno" se refiere a un radical hidrocarburo divalente alifático saturado de cadena lineal o ramificada opcionalmente sustituido que tiene el número especificado de átomos de carbono. Por lo tanto, "alquileno (CrC6)" se refiere a un radical divalente alifático saturado que tiene de 1-6 átomos de carbono en una disposición lineal, por ejemplo, -[(CH2)n]-, donde n es un número entero de 1 a 6. "Alquileno (?-?-?ß)" incluye metileno, etileno, propileno, butileno, pentileno y hexileno. Como alternativa, "alquileno (CrC6)" se refiere a un radical divalente saturado que tiene de 1-6 átomos de carbono en una disposición ramificada, por ejemplo: -[(CH2CH2CH2CH2CH(CH3)]-, -[(C^ChfeChfeChfeCíCHaM-, [(CH2C(CH3)2CH(CH3))]-, y similares. Un alquileno C3 ramificado específico es Cada alquilo o alquileno en la Fórmula Estructural I está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre halo, -OH, =O, -O-alquilo (C1-C4), -alquilo (C1-C4) fluoro-sustituido, -S(O)m-alquilo (CrC4) y -N(R5)(R5). it 'Arilo" o "aromático" se refiere a un sistema de anillos carbocíclico monocíclico o policíclico aromático (por ejemplo, bicíclico o tricíclico). En una realización, "arilo" es un sistema monocíclico o bicíclico de 6-12 miembros. Los sistemas arilo incluyen, pero sin limitación, fenilo, naftalenilo, fluorenilo, indenilo, azulenilo y antracenilo.
"Carbociclilo" se refiere a un grupo cíclico con solo átomos de carbono en los anillos. "Carbociclilo" incluye anillos hidrocarburo alifáticos saturados o insaturados de 3-12 miembros o anillos arilo de 6-12 miembros. Un resto carbociclilo puede ser monocíclico, bicíclico condensado, bicíclico puenteado, espiro bicíclico o policíclico.
Los carbociclilos monocíclicos son anillos hidrocarburo cíclicos alifáticos saturados o insaturados o anillos hidrocarburo aromáticos que tienen el número especificado de átomos de carbono. Los carbociclilos monocíclicos incluyen cicloalquilo, cicloalquenilo, cicloalquinilo y fenilo.
Un carbociclilo bicíclico condensado tiene dos anillos que tienen dos átomos adyacentes en el anillo en común. El primer anillo es un carbociclilo monocíclico y el segundo anillo es un carbociclilo monocíclico o un heterociclilo monocíclico.
Un carbociclilo bicíclico puenteado tiene dos anillos que tienen tres o más átomos adyacentes en el anillo en común. El primer anillo es un carbociclilo monocíclico y el segundo anillo es un carbociclilo monocíclico o un heterociclilo monocíclico.
Un carbociclilo espiro bicíclico tiene dos anillos que tienen solo un átomo del anillo en común. El primer anillo es un carbociclilo monocíclico y el segundo anillo es un carbociclilo monocíclico o un heterociclilo monocíclico.
Los carbociclilos policíclicos tienen más de dos anillos (por ejemplo, tres anillos que dan como resultado un sistema de anillo tricíclico) y los anillos adyacentes tienen al menos un átomo del anillo en común. El primer anillo es un carbociclilo monocíclico y el resto de las estructuras del anillo son carbociclilos monocíclicos o heterociclilos monocíclicos. Los sistemas de anillos policíclicos incluyen sistemas de anillos condensados, puenteados o espiro. Un sistema de anillos policíclico condensado tiene al menos dos anillos que tienen dos átomos adyacentes en el anillo en común. Un sistema del anillo policíclico espiro tiene al menos dos señales que tiene solo un átomo del anillo en común. Un sistema de anillos policíclico puenteado tiene al menos dos anillos que tienen tres o más átomos adyacentes en el anillo en común.
"Cicloalquilo" se refiere a un anillo hidrocarburo cíclico alifático saturado. Por lo tanto, "cicloalquilo C3-C7" se refiere a un radical hidrocarburo de un anillo hidrocarburo cíclico alifático saturado (3-7 miembros). Un cicloalquilo C3-C7 incluye, pero sin limitación ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo.
"Cicloalqueno" se refiere a anillo hidrocarburo cíclico alifático que tiene uno o más dobles enlaces en el anillo.
"Cicloalquino" se refiere a un anillo hidrocarburo cíclico alifático que tiene uno o más triples enlaces en el anillo.
"Hetero" se refiere al reemplazo de al menos un miembro de átomo de carbono en un sistema de anillos por al menos un heteroátomo seleccionado entre N, S y O. "Hetera" también se refiere al reemplazo de al menos un miembro de átomo de carbono en un sistema acíclico. Un sistema de anillos hetera o un sistema acíclico hetera puede tener 1 , 2, 3 ó 4 miembros de átomos de carbono reemplazados por un heteroátomo.
"Heterociclilo" significa un anillo alifático o aromático, saturado o insaturado de 4-12 miembros que contiene 1 , 2, 3, 4 ó 5 heteroátomos seleccionados independientemente entre N, O o S. Cuando un heteroátomo es S, puede estar opcionalmente mono- o di-oxigenado (es decir -S(O)- o -S(O)2-). El heterociclilo puede ser monocíclico, bicíclico condensado, bicíclico puenteado, espiro bicíclico o policíclico.
"Heterociclilo saturado" se refiere a un grupo heterociclilo alifático sin ningún grado de insaturación (es decir, sin doble enlace o triple enlace). Puede ser monocíclico, bicíclico condensado, bicíclico puenteado, espiro bicíclico o policíclico.
Los ejemplos de heterociclilos saturados monocíclicos incluyen, pero sin limitación, azetidina, pirrolidina, piperidina, piperazina, azepano, hexahidropirimidina, tetrahidrofurano, tetrahidropirano, morfolina, tiomorfolina, tiomorfolina 1 ,1 -dióxido, tetrahidro-2H-1 ,2-tiazina, tetra h id ro-2H-1 ,2-tiazina 1 ,1-dióxido, isotiazolidina, 1 ,1-dióxido de isotiazolidina.
Un heterociclilo bicíclico condensado tiene dos anillos que tienen dos átomos adyacentes en el anillo en común. El primer anillo es un heterociclilo monocíclico y el segundo anillo es un carbociclo monocíclico (tal como un cicloalquilo o fenilo) o un heterociclilo monocíclico. Por ejemplo, el segundo anillo es un cicloalquilo (G3-C6), tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo. Como alternativa, el segundo anillo es fenilo. Los ejemplos de heterociclilos bicíclicos condensados incluyen, pero sin limitación, octahidrociclopenta[c]pirrolilo, indolina, isoindolina, 2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol, 2,3-dihidrobenzo[d]oxazol, 2,3-dihidrobenzo[d]tiazol, octahidrobenzo[d]oxazol, octahidro-1H-benzo[d]imidazol, octahidrobenzo[d]tiazol, octahidrociclopenta[c]pirrol, 3-azabiciclo[3.1.Ojhexano 3-azabiciclo[3.2.0]heptano.
Un heterociclilo espiro bicíclico tiene dos anillos que tienen solo un átomo del anillo en común. El primer anillo es un heterociclilo monocíclico y el segundo anillo es un carbociclo monocíclico (tal como un cicloalquilo p fenilo) o un heterociclilo monocíclico. Por ejemplo, el segundo anillo es un cicloalquilo (C3-C6). Como alternativa, el segundo anillo es fenilo. El ejemplo de heterociclilo espiro bicíclico incluye, pero sin limitación, azaespiro[4.4]nonano, 7-azaespiro[4.4]nonano, azaespiro[4.5]decano, 8-azaespiro[4.5]decano, azaespiro[5.5]undecano, 3-azaespiro[5.5]undecano y 3,9-diazaespiro[5.5]undecano.
Un heterociclilo bicíclico puenteado tiene dos anillos que tienen tres o más átomos adyacentes en el anillo en común. El primer anillo es un heterociclilo monocíclico y el otro anillo es un carbociclo monocíclico (tal como un cicloalquilo o fenilo) o un heterociclilo monocíclico. Los ejemplos de heterociclilos bicíclicos puenteados incluyen, pero sin limitación, azabiciclo[3.3.1]nonano, 3-azabiciclo[3.3.1]nonano, azabiciclo[3.2.1]octano, 3-azabiciclo[3.2.1]octano, 6-azabiciclo[3.2.1]octano y azabiciclo[2.2.2]octano, 2-azabiciclo[2.2.2]octano.
Los heterociclilos policíclicos tienen más de dos anillos, uno de los cuales es un heterociclilo (por ejemplo, tres anillos que dan como resultado en un sistema de anillos tricíclico) y anillos adyacentes que tienen al menos un átomo del anillo en común. Los sistemas de anillos policíclicos incluyen sistemas de anillos condensados, puenteados y espiro. Un sistema de anillos policíclico condensado tiene al menos dos anillos que tienen dos átomos adyacentes en el anillo en común. Un sistema de anillos policíclicos espiro tiene al menos dos anillos que tienen solo un átomo en el anillo en común. Un sistema de anillos policíclico puenteado tiene al menos dos anillos que tienen tres o más átomos adyacentes en el anillo en común.
"Heteroarilo" o "anillo heteroaromático" se refiere a un radical de anillos monocíclico o bicíclico monovalente heteroaromático de 5-12 miembros. Un heteroarilo contiene 1 , 2, 3 ó 4 heteroátomos seleccionados independientemente entre N, O y S. Los heteroarilos incluyen, pero sin limitación furano, oxazol, tiofeno, 1 ,2,3-triazol, 1 ,2,4-triazina, 1 ,2,4-triazol, 1 ,2,5-tiadiazol 1 ,1-dióxido, 1 ,2,5-tiadiazol 1 -óxido, 1 ,2,5-tiadiazol, 1,3,4-oxadiazol, 1 ,3,4-tiadiazol, 1 ,3,5-triazina, imidazol, isotiazol, isoxazol, pirazol, piridazina, piridina, N-óxido de piridina, pirazina, pirimidina, pirrol, tetrazol y tiazol. Los anillos heteroarilo bicíclicos incluyen, pero sin limitación, sistemas de anillos condensados biciclo[4.4.0] y biciclo[4.3.0], tales como indolizina, indol, isoindol, indazol, benzoimidazol, benzotiazol, purina, quinolina, isoquinolina, cinnolina, ftalazina, quinazolina, quinoxalina, 1 ,8-naftiridina y pteridina.
En una realización particular, cada porción carbociclilo o heterociclilo de un sustituyente del anillo A o el anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A está opcional e independientemente sustituido. Los sustituyentes ejemplares incluyen halo, -alquilo (CrC4), -OH, =O, -O-alquilo (C1-C4), -alquileno (Ci-C4)-0-alquilo (C C4), -alquilo (C C4) halo-sustituido, -O-alquilo (C C4) halo-sustituido y -C(O)-alquilo (C1-C4).
"Halógeno", como se usa en este documento, se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.
"Alcoxi" se refiere a un radical alquilo unido a través de un átomo de unión a oxígeno. "Alcoxi (C C6)" incluye metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, pentoxi y hexoxi.
Haloalquilo y halocicloalquilo incluyen grupos mono, poli y perhaloalquilo en los que cada halógeno se selecciona independientemente entre flúor, cloro y bromo.
"Halógeno" y "halo" se usan en este documento de forma intercambiable y cada uno se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.
"Flúor" significa -F.
Como se usa en la presente memoria, -alquilo (C1-C4) fluoro-sustituido se refiere a un alquilo (C C4) sustituido con uno o más grupo -F. Los ejemplos de -alquilo (C C4) fluoro-sustituido incluyen, pero sin limitación, -CF3, -CH2CF3, -CH2CF2H, -CH2CH2F y -CH2CH2CF3.
"Resto de cadena lateral aminoacídica de origen de natural" se refiere a cualquier resto de cadena lateral aminoacídico presente en un aminoácido natural.
Otra realización de la presente invención es una composición farmacéutica que comprende uno o más vehículos y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables y un compuesto descrito en este documento o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
"Vehículo farmacéuticamente aceptable" y "diluyente farmacéuticamente aceptable" se refiere a componentes no terapéuticos que son de suficiente pureza y calidad para su uso en la formulación de una composición de la invención que, cuando se administran adecuadamente a un animal o ser humano, típicamente no producen una reacción adversa, y que se usan como un vehículo para una sustancia farmacéutica (es decir un compuesto de la presente invención).
También se incluyen sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención. Por ejemplo, puede obtenerse una sal ácida de un compuesto de la presente invención que contiene una amina u otro grupo básico haciendo reaccionar el compuesto con un ácido orgánico o inorgánico adecuado, dando como resultado formas de sales aniónicas farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de sales aniónicas incluyen las sales acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bitartrato, bromuro, edetato cálcico, camsilato, carbonato, cloruro, citrato, diclorhidrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gliceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, bromhidrato, clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, pamoato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, sulfato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato y trietyoduro.
Las sales de los compuestos de la presente invención que contienen un ácido carboxílico u otro grupo funcional ácido pueden prepararse haciéndolos reaccionar con una base adecuada. Una sal farmacéuticamente aceptable de este tipo puede prepararse con una base que proporciona un catión farmacéuticamente aceptable, que incluye sales de metales alcalinos (especialmente sodio y potasio), sales de metales alcalinotérreos (especialmente calcio y magnesio), sales de aluminio y sales de amonio, así como sales hechas a partir de bases orgánicas fisiológicamente aceptables, tales como trimetilamina, trietilamina, morfolina, piridina, piperidina, picolina, diciclohexilamina, ?,?'-dibenciletilendiamina, 2-hidroxietilamina, bis-(2-hidroxietil)amina, tri-(2-hidroxietil)amina, procaína, dibencilpiperidina, deshidroabietilamina, ?,?'-bisdeshidroabietilamina, glucamina, N-metilglucamina, colidina, quinina, quinolina y aminoácidos básicos, tales como lisina y arginina.
La invención también incluye diversos isómeros y mezclas de los mismos. Ciertos los compuestos de la presente invención pueden existir en diversas formas estereoisoméricas. Los estereoisómeros son compuestos que difieren únicamente en su disposición espacial. Los enantiómeros son pares de estereoisómeros cuyas imágenes especulares no pueden superponerse, más comúnmente debido a que contienen un átomo de carbono sustituido asimétricamente que actúa como un centro quiral. "Enantiómero" se refiere a una de un par de moléculas que son imágenes especulares entre sí y pueden superponerse. Los diastereoisómeros son estereoisómeros que no se relacionan como imágenes especulares, más comúnmente por que contienen dos o más átomos de carbono asimétricamente sustituidos. "R" y "S" representan la configuración de sustituyentes alrededor de uno o más átomos quirales de carbono. Cuando un centro quiral no está definido como R o S, está presente un enantiómero puro o una mezcla de ambas configuraciones.
"Racemato" o "mezcla racémica" se refiere a un compuesto de cantidades equimolares de dos enantiómeros, en los que dichas mezclas no muestran actividad óptica; es decir, no giran el plano de luz polarizada.
Los compuestos de la invención pueden prepararse como isómeros individuales por síntesis isómero-específica o resueltos a partir de una mezcla isomérica. Las técnicas de resolución convencionales incluyen la formación de la sal de una base libre de cada isómero de un par isomérico usando un ácido ópticamente activo (seguido de cristalización fraccional y regeneración de la base libre), formando la sal de la forma ácida de cada isómero de un par isomérico usando una amina ópticamente activo (seguido de cristalización fraccional y regeneración del ácido libre), formando un éster o amida de cada uno de los isómeros de un par isomérico usando un ácido, amina o alcohol ópticamente puros (seguido de separación cromatográfica y la retirada del auxiliar quiral), o resolviendo una mezcla isomérica de un material de partida o un producto final usando diversos métodos cromatográficos bien conocidos.
Cuando la estereoquímica un compuesto descrito se nombra o se representa por su estructura, el estereoisomero nombrado o representado es puro al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 99% o 99,9% en peso con respecto a los demás estereoisómeros. Cuando un enantiómero individual se nombra o se representa por su estructura, el enantiómero representado o nombrado es ópticamente puro al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 99% o 99,9% en peso. El porcentaje de pureza óptica en peso es la proporción del peso del enantiómero que está presente dividido por el peso combinado del enantiómero que está presente y el peso de su isómero óptico.
La presente invención también proporciona un método de tratamiento o prevención de un sujeto con una enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
"Enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina" se refiere a una enfermedad o trastorno que se puede tratar, prevenir o mitigar de otro modo mediante la administración de un compuesto de tetraciclina de la presente invención. La enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina incluye infecciones, cáncer, enfermedades inflamatorias, enfermedad autoinmune, arteriesclerosis, ulceración corneal, enfisema, artritis, osteoporosis, ostéoartritis, esclerosis múltiple, osteosarcoma, osteomielitis, bronquiectasia, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedades cutáneas y oculares, periodontitis, osteoporosis, artritis reumatoide, colitis ulcerosa, prostatitis, desarrollo e invasión tumoral, metástasis, diabetes, proteinuria diabética, panbronquiolitis, aneurismas aórticos o vasculares, heridas en tejido cutáneo, ojo seco, degeneración ósea, de cartílago, malaria, senescencia, diabetes, ictus vascular, trastornos neurodegenerativos, enfermedad cardiaca, diabetes juvenil, bronquitis aguda y crónica, sinusitis e infecciones respiratorias, que incluyen el resfriado común, granulomatosis de Wegener; dermatosis neutrofílicas y otras enfermedades inflamatorias tales como dermatitis herpetiforme, vasculitis leucocitoclástica, lupus eritematoso ampolloso, psoriasis pustular, eritema elevatum diutinium; vitíligo, lupus eritematoso discoide; pioderma gangrenoso, psoriasis pustular, blefaritis ó meibomianitis, enfermedad de Alzheimer, maculopatía degenerativa; gastroenteritis y colitis aguda y crónica; cistitis y uretritis aguda y crónica; dermatitis aguda y crónica; conjuntivitis aguda y crónica, serositis aguda y crónica, pericarditis urémica; colecistitis aguda y crónica, fibrosis quística, vaginitis aguda y crónica, uveítis aguda y crónica, reacciones a fármaco, picaduras de insecto, quemaduras y quemaduras solares, trastorno de masa ósea, lesión pulmonar aguda, trastornos pulmonares crónicos, isquemia, ictus o ictus isquémico, herida cutánea, aneurisma aórtico o vascular, retinopatía diabética, ictus hemorrágico, angiogénesis y otros estados para los que se ha observado que los compuestos de tetraciclina son activos (véase, por ejemplo las Patentes de Estados Unidos N° 5.789.395; 5.834.450; 6.277.061 y 5.532.227, cada una de las cuales está incorporada expresamente en este documento por referencia).
Además, está abarcado el método para tratar cualquier enfermedad o patología que se podría beneficiar de modular la expresión y/o función de óxido nítrico, metaloproteasas, mediadores pro-inflamatorios y citocinas, especies de oxígeno reactivas, componentes de la respuesta inmune, incluyendo quimiotaxis, transformación de linfocitos, hipersensibilidad retardada, producción de anticuerpos, fagocitosis y metabolismo oxidativo de fagocitos. Está abarcado un método para tratar cualquier enfermedad o patología que se podría beneficiar de modular la expresión y/o función de la proteína C-reactiva, rutas de señalización (por ejemplo, ruta de señalización de FAK) y/o aumento de la expresión de COX-2 y producción de PGE2. Está abarcado un método para tratar cualquier enfermedad o patología que se podría beneficiar de la inhibición de la neovascularización.
Los compuestos de la invención se pueden usar para prevenir o tratar enfermedades de mamífero y veterinarias importantes tales como diarrea, infecciones del tracto urinario, infecciones de la piel y estructuras cutáneas que incluyen heridas, celulitis y abscesos, infecciones del oído, nariz y garganta, mastitis y similares. Además también están incluidos métodos para tratar neoplasias usando compuestos de tetraciclina de la invención (van der Bozert er al., Cáncer Res., 48: 6686-6690 (1988)).
Las infecciones que se pueden tratar usando compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen, pero sin limitación, infecciones cutáneas, infecciones del Gl, infecciones del tracto urinario, infecciones genito-urinarias, infecciones del tracto respiratorio, infecciones de los senos, infecciones del oído medio, infecciones sistémicas, infecciones intra-abdominales, pielonefritis, neumonía, vaginosis bacteriana, angina estreptocócica, prostatitis bacteriana crónica, infecciones ginecológicas y pélvicas, enfermedades bacterianas transmitidas por vía sexual, infecciones oculares y óticas, cólera, gripe, bronquitis, acné, psoriasis, rosácea, impétigo, malaria, enfermedad transmitida por vía sexual que incluye la sífilis y gonorrea, enfermedad del legionario, enfermedad de Lyme, fiebre de manchas Rocky Mountain, fiebre Q, tifus, peste bubónica, gangrena gaseosa, infecciones adquiridas en el hospital, leptospirosis, tos ferina, carbunco e infecciones causadas por los agentes responsables del linfogranuloma venéreo, conjuntivitis de inclusión o psitacosis. Las infecciones pueden ser infecciones bacterianas, fúngicas, parasitarias y víricas (incluyendo las que son resistentes a otros compuestos de tetraciclina).
En una realización, la infección es una infección respiratoria. En un aspecto particular, la infección respiratoria es Neumonía Bacteriana Adquirida en la Comunidad (CABP). En una realización más particular, la infección respiratoria, por ejemplo, CABP, está causada por una bacteria seleccionada entre S. aureus, S. pneumoniae, S. pyogenes, H. influenza, M. catarrhalis y Legionella pneumophila.
En otra realización, la infección es una infección cutánea. En un aspecto particular, la infección cutánea es una infección bacteriana aguda de la piel o de la estructura cutánea (ABSSSI). En una realización más particular, la infección cutánea, por ejemplo ABSSSI, está causada por una bacteria seleccionada entre S. aureus, CoNS, S. pyrogenes, S. agalactiae, E. faecalis y E. faecium.
En una realización, la infección puede estar causada por una bacteria (por ejemplo, una bacteria anaerobia o aerobia).
En otra realización, la infección está causada por una bacteria Gram-positiva. En un aspecto específico de esta realización, la infección está causada por una bacteria Gram-positiva seleccionada entre la clase de Bacilli, incluyendo, pero sin limitación, Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Bacillus spp., Listeria spp.; filo de Actinobacteria, incluyendo, pero sin limitación, Propionibacterium spp., Corynebacterium spp., Nocardia spp., Actinobacteria spp., y la clase Clostridia, incluyendo, pero sin limitación Clostridium spp.
En otra realización, la infección está causada por una bacteria Gram-positiva seleccionada entre S. aureus, CoNS, S. pneumoniae, S. pyogenes, S. agalactiae, E. faecalis y E. faecium.
En otra realización, la infección está causada por una bacteria Gram-negativa. En un aspecto de esta realización, la infección está causada por filo de Proteobacteria (por ejemplo, Betaproteobacteria y Gammaproteobacteria), incluyendo Escherichia coli, Salmonella, Shigella, otras Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Moraxella, Helicobacter, Stenotrophomonas, Bdellovibrio, bacterias de ácido acético, Legionella o proteobacteria-alfa tal como Wolbachia. En otro aspecto, la invención está causada por una bacteria Gram-negativa seleccionada entre cianobacterias, espiroquetas, bacterias verdes del azufre o verdes no de azufre. En un aspecto específico de esta realización, la infección está causada por una bacteria Gram-negativa seleccionada entre Enterobactericeae (por ejemplo, E. coli, Klebsiella pneumoniae incluyendo las que contienen ß-lactamasas y/o carbapenemasas de espectro ampliado), Bacteroidetes (por ejemplo, Bacteroides fragilis)., Vibrionaceae (Vibrio cholerae), Pasteurellaceae (por ejemplo, Haemophilus influenzae), Pseudomonadaceae (por ejemplo, Pseudomonas aeruginosa), Neisseriaceae (por ejemplo Neisseria meningitidis), Rickettsiae, Moraxellaceae (por ejemplo, Moraxella catarrhalis), cualquier especie de Proteeae, Acinetobacter spp., Helicobacter spp., y Campylobacter spp. En una realización particular, la infección está causada por una bacteria Gram-negativa seleccionada entre el grupo que consiste en Enterobactericeae (por ejemplo, E. coli, Klebsiella pneumoniae), Pseudomonas, y Acinetobacter spp. En otra realización, la infección está causada por un organismo seleccionado entre el grupo que consiste en K. pneumoniae, Salmonella, E. hirae, A. baumanii, M. catarrhalis, H. influenzae, P. aeruginosa, E. faecium, E. coli, S. aureus, y E. faecalis.
En otra realización, la infección está causada por una bacteria gram negativa seleccionada entre H. influenza, M. catarrhalis y Legionella penumophila.
En una realización, la infección está causada por un organismo que se desarrolla ¡ntracelularmente como parte de su proceso de infección.
En otra realización, la infección está causada por una organismo seleccionado entre el grupo que consiste en el orden Rickettsiales; filó Chlamydiae; orden Chlamydiales; Legionella spp.; clase Mollicutes, incluyendo, pero sin limitación, Mycoplasma spp. (por ejemplo Mycoplasma pneumoniae); Mycobacterium spp. . (por ejemplo Mycobacterium tuberculosis); y el filo Spirochaetales (por ejemplo Borrelia spp. y Treponema spp.).
En otra realización, la infección está causada por un organismo de Biodefensa de Categoría A como se describe en http://www.bt.cdc.gov/agent/agentlist-category.asp, cuyas enseñanzas en su totalidad están incorporadas en este documento por referencia. Los ejemplos de organismos de Categoría A incluyen, pero sin limitación, Bacillus anthracis (carbunco), Yersinia pestis (peste), Clostridium botulinum (botulismo) o Francisella tularensis (tularemia). En otra realización, la infección es una infección por Bacillus anthracis. La "infección por Bacillus anthracis" incluye cualquier estado, enfermedad o trastorno causado o que se produce por la exposición o supuesta exposición a Bacillus anthracis u otro miembro del grupo de bacterias de Bacillus cereus.
Las infecciones adicionales que se pueden tratar usando compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen, pero sin limitación, carbunco, botulismo, peste bubónica y tularemia.
En otra realización, la infección está causada por un organismo de biodefensa de Categoría B como se describe en http://www.bt.cdc.gov/agent/agentlist-category.asp, cuyas enseñanzas en su totalidad están incorporadas en este documento por referencia. Los ejemplos de organismos de Categoría B incluyen, pero sin limitación, Brucella spp, Clostridium perfringens, Salmonella spp., Escherichia coli 0157:H7, Shigella spp., Burkholderia mallei, Burkholderia pseudomallei, Chlamydia psittaci, Coxiella burnetii, enterotoxina estafilocócica B, Rickettsia prowazekii, Vibrio cholerae y Cryptosporidium parvum.
Las infecciones adicionales que se pueden tratar usando compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen, pero sin limitación, Brucelosis, Clostridium perfringens, enfermedad de origen alimentario, Muermo, Melioidosis, Psitacosis, fiebre Q y enfermedades de origen acuático.
En otra realización más, la infección puede estar causada por uno o más de uno de los organismos que se han descrito anteriormente. Los ejemplos de tales infecciones incluyen, pero sin limitación, infecciones intra-abdominales (con frecuencia una mezcla de especies Gram-negativas tales como E. coli y un anaerobio tal como B. fragilis), pie diabético (diversas combinaciones de Streptococcus, Serratia, Staphylococcus y Enterococcus spp., anaerobios (S.E. Dowd, et al., PloS one 2008; 3: e3326, cuyas enseñanzas en su totalidad están incorporadas en este documento por referencia) y enfermedad respiratoria (especialmente en pacientes que tienen infecciones crónicas tales como fibrosis quística - por ejemplo, S. aureus más P. aeruginosa o H. influenzae, patógenos atípicos), heridas y abscesos (diversas bacterias Gram-negativas y Gram-positivas, de forma notable MSSA/MRSA, estafilococos negativos a coagulasa, enterococos, Acinetobacter, P. aeruginosa, E. coli, B. fragilis) e infecciones del torrente sanguíneo (el 13% eran polimicrobianas (H. Wisplinghoff, et al., Clin. Infect. Dis. 2004; 39: 311-317, cuyas enseñanzas en su totalidad están incorporadas en este documento por referencia)).
En una realización, la infección está causada por un organismo resistente a uno o más antibióticos.
En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a tetraciclina o cualquier miembro de primera y segunda generación de antibióticos de tetraciclina (por ejemplo, doxiciclina o minociclina).
En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a meticilina.
En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a vancomicina.
En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a una quinolona o fluoroquinolona.
En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a tigeciclina o cualquier otro derivado de tetraciclina. En una realización particular, la infección está causada por un organismo resistente a tigeciclina.
En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a ß-lactama o antibiótico cefalosporina o un organismo resistente a penemos o carbapenemos.
En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a un péptido antimicrobiano o un tratamiento terapéutico biosimilar. Los péptidos antimicrobianos (también denominados péptidos de defensa del hospedador) son un componente conservado evolutivamente de la respuesta inmune innata y se encuentran entre todas las clases de vida. En este caso, el péptido antimicrobiano se refiere a cualquier molécula de origen natural o cualquier molécula semi/sintética que sean análogas de péptidos aniónicos, péptidos a-helicoidales, cationicos lineales, péptidos cationicos enriquecidos en aminoácidos específicos (es decir, ricos en prolina, arginina, fenilalanina, glicina, triptofano) y péptidos aniónicos y cationicos que contienen cisteína y forman enlaces disulfuro.
En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a macrólidos, lincosamidas, antibióticos de estreptogramina, oxazolidinonas y pleuromutilinas.
En otra realización, la infección está causada por un organismo resistente a PTK0796 (7-dimetilamino, 9-(2,2-dimetil-propil)-aminometilciclina).
En otra realización, la infección está causada por un patógeno con resistencia múltiple a fármacos (que tiene resistencia intermedia o completa a cualquiera de dos o más antibióticos).
En una realización adicional, la enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina no es una infección bacteriana. En otra realización, los compuestos de tetraciclina de la invención son esencialmente no antibacterianos. Por ejemplo, los compuestos no antibacterianos de la invención pueden tener valores de MIC superiores a aproximadamente 4 µ?/??? (medidos mediante ensayos conocidos en la técnica y/o el ensayo dado en el Ejemplo 151. En otra realización, los compuestos de tetraciclina de la invención tienen efectos tanto antibacterianos como no antibacterianos.
La enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina también incluye enfermedades o trastornos asociados con estados asociados a proceso inflamatorio (IPAS). La expresión "estado asociado a proceso inflamatorio" incluye estados en los que están implicados inflamación o factores inflamatorios (por ejemplo, metaloproteinasas de matriz (MMP), óxido nítrico (NO), TNF, interleucinas, proteínas del plasma, sistemas de defensa celular, citocinas, metabolitos lipidíeos, proteasas, radicales tóxicos, moléculas de adhesión, etc.) o están presentes en un área en cantidades anómalas, por ejemplo, en cantidades que pueden ser ventajosas para alterar, por ejemplo, para beneficiar al sujeto. El proceso inflamatorio es la respuesta del tejido vivo a lesión. La causa de la inflamación puede deberse a lesión física, sustancias químicas, microorganismos, necrosis tisular, cáncer u otros agentes. La inflamación aguda es de corta duración, durando solamente unos pocos días. Sin embargo, si dura más tiempo, entonces puede denominarse inflamación crónica.
Los IPAS incluyen trastornos inflamatorios. Los trastornos inflamatorios generalmente están caracterizados por calor, enrojecimiento, hinchazón, dolor y pérdida de función. Los ejemplos de causas de trastornos inflamatorios incluyen, pero sin limitación, infecciones microbianas (por ejemplo, infecciones bacterianas y fúngicas), agentes físicos (por ejemplo, quemaduras, radiación y traumatismo), agentes químicos (por ejemplo toxinas y sustancias cáusticas), necrosis tisular y diversos tipos de reacciones inmunológicas.
Los ejemplos de trastornos inflamatorios que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen, pero sin limitación, osteoartritis, artritis reumatoide, infecciones agudas y crónicas (bacterianas y fúngicas, incluyendo difteria y pertusis); bronquitis aguda y crónica, sinusitis e infecciones respiratorias superiores, incluyendo el resfriado común; gastroenteritis y colitis aguda y crónica; trastorno inflamatorio del intestino; cistitis y uretritis aguda y crónica; vasculitis; septicemia; nefritis; pancreatitis; hepatitis; lupus; trastornos inflamatorios de la piel incluyendo, por ejemplo, eczema, dermatitis, psoriasis, pioderma gangrenoso, acné rosácea y dermatitis aguda y crónica; conjuntivitis aguda y crónica; serositis aguda y crónica (pericarditis, peritonitis, sinovitis, pleuritis y tendinitis); pericarditis urémica; colecistitis aguda y crónica, vaginitis aguda y crónica; uveítis aguda y crónica; reacciones a fármaco; picaduras de insecto; quemaduras (térmicas, químicas y eléctricas); y quemadura solar.
Los IPAS también incluyen estados asociados a metaloproteinasa de matriz (MMPAS). Los MMPAS incluyen estados caracterizados por cantidades anómalas de MMP o actividad de MMP. Los ejemplos de estados asociados a metaloproteinasa de matriz ("MMPAS") que pueden tratarse usando compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen, pero sin limitación, arteriesclerosis, ulceración corneal, enfisema, osteoartritis, esclerosis múltiple (Liedtke et al., Ann. Neurol. 1998, 44: 35-46; Chandler et al., J. Neuroimmunol. 1997, 72: 155-71 ), osteosarcoma, osteomielitis, bronquiectasia, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedades cutáneas y oculares, periodontitis, osteoporosis, artritis reumatoide, colitis ulcerosa, trastornos inflamatorios, desarrollo e invasión tumoral (Stetler-Stevenson et al., Annu. Rev. Cell Biol. 1993, 9: 541-73; Tryggvason et al., Biochim. Biophys. Acta 1987, 907: 191-217; Li et al., Mol. Carcillog. 1998, 22: 84-89)), metástasis, lesión pulmonar aguda, ictus, isquemia, diabetes, aneurismas aórticos o vasculares, heridas tisulares de la piel, ojo seco, degradación de hueso y cartílago (Greenwald et al., Bone 1998, 22: 33-38; Ryan et al., Curr. Op. Rheumatol. 1996, 8: 238- 247). Otros MMPAS incluyen los que se han descrito en las Patentes de Estados Unidos N° 5.459.135; 5.321.017; 5.308.839; 5.258.371 ; 4.935.412; 4.704.383, 4.666.897, y RE 34.656, incorporadas en este documento en su totalidad por referencia.
En una realización adicional, los IPAS incluyen trastornos descritos en las patentes de Estados Unidos N° 5.929.055 y 5.532.227, incorporadas en este documento por referencia en su totalidad.
La enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina también incluye enfermedades o trastornos asociados con estados asociados a NO. La expresión "estados asociados a NO" incluye estados que implican o están asociados con óxido nítrico (NO) u óxido nítrico sintasa inducible (¡NOS). El estado asociado a NO incluye estados que están caracterizados por cantidades anómalas de NO y/o ¡NOS. Preferiblemente, el estado asociado a NO se puede tratar administrando compuestos de tetraciclina. de la invención. Los trastornos, enfermedades y estados descritos en las Patentes de Estados Unidos N° 6.231.894; 6.015.804; 5.919.774; y 5.789.395 también están incluidos como estados asociados a NO. Los contenidos en su totalidad de cada una de estas patentes se incorporan de este modo en este documento por referencia.
Los ejemplos de enfermedades o trastornos asociados con estados asociados a NO que se pueden tratar usando los compuestos de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen, pero sin limitación, malaria, senescencia, diabetes, ictus vascular, trastornos neurodegenerativos (enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Huntington), enfermedad cardiaca (lesión asociada a reperfusión después de infarto), diabetes juvenil, trastornos inflamatorios, osteoartritis, artritis reumatoide, infecciones aguda, recurrente y crónica (bacteriana, vírica y fungica); bronquitis aguda y crónica, sinusitis e infecciones respiratorias, incluyendo el resfriado común; gastroenteritis y colitis aguda y crónica; cistitis y uretritis aguda y crónica; dermatitis aguda y crónica; conjuntivitis aguda y crónica; serositis aguda y crónica (pericarditis, peritonitis, sinovitis, pleuritis y tendinitis); pericarditis urémica; colecistitis aguda y crónica; fibrosis quística, vaginitis aguda y crónica; uveítis aguda y crónica; reacciones a fármaco; picaduras de insecto; quemaduras (térmica, química y eléctrica); y quemadura solar.
En otra realización la enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina es cáncer. Los ejemplos de cánceres que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen todos los tumores sólidos, es decir, carcinomas, por ejemplo, adenocarcinomas y sarcomas. Los adenocarcinomas son carcinomas derivados de tejido glandular o en los que las células tumorales forman estructuras glandulares reconocibles. Los sarcomas incluyen de forma general tumores cuyas células están incluidas en una sustancia fibrilar u homogénea tal como el tejido conectivo embrionario. Los ejemplos de carcinomas que se pueden tratar usando los métodos de la invención incluyen, pero sin limitación, carcinomas de la próstata, mama, ovario, testículo, pulmón, colon y mama. Los métodos de la invención no están limitados al tratamiento de estos tipos de tumor pero se extienden a cualquier tumor sólido procedente de cualquier sistema orgánico. Los ejemplos de cánceres que se pueden tratar incluyen, pero sin limitación, cáncer de colon, cáncer de vejiga, cáncer de mama, melanoma, carcinoma ovárico, carcinoma de próstata, cáncer de pulmón y una diversidad de otros cánceres del mismo modo. Los métodos de la invención también causan la inhibición del desarrollo de cáncer en adenocarcinomas, tales como, por ejemplo, los de la próstata, mama, riñon, ovario, testículo y colon. En una realización, los cánceres tratados mediante los métodos de la invención incluyen los descritos en las Patentes de Estados Unidos N° 6.100.248; 5.843.925; 5.837.696; o 5.668.122, incorporadas en este documento por referencia en su totalidad.
Como alternativa, los compuestos de tetraciclina pueden ser útiles para prevenir o reducir la probabilidad de recurrencia de cáncer, por ejemplo, para tratar cáncer residual después de resección quirúrgica o radioterapia. Los compuestos de tetraciclina útiles de acuerdo con la invención son especialmente ventajosos ya que son sustancialmente no tóxicos en comparación con otros tratamientos de cáncer.
En una realización adicional, los compuestos de la invención se administran en combinación con terapia de cáncer convencional, tal como, pero sin limitación, quimioterapia.
Los ejemplos de estados que responden a tetraciclina que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos también incluyen trastornos neurológicos que incluyen trastornos tanto neuropsiquiátricos como neurodegenerativos, pero no están limitados a los mismos, tales como enfermedad de Alzheimer, demencias relacionadas con enfermedad de Alzheimer (tal como enfermedad de Pick), enfermedad de Parkinson y de cuerpos difusos de Lewy diferentes, demencia senil, enfermedad de Huntington, síndrome de Gilíes de la Tourette, esclerosis múltiple, esclerosis lateral amiotrófica (ALS), parálisis supranuclear progresiva, epilepsia y enfermedad de Creutzfeldt-Jakob; trastornos de la función autónoma tales como hipertensión y trastornos del sueño y trastornos neuropsiquiátricos, tales como depresión, esquizofrenia, trastorno esquizoafectivo, psicosis de Korsakoff, manía, trastornos de ansiedad o trastornos de fobia; trastornos del aprendizaje o memoria, por ejemplo, amnesia o pérdida de memoria relacionada con la edad, trastorno por déficit de atención, trastorno distímico, trastorno depresivo mayor, manía, trastorno obsesivo-compulsivo, trastornos por uso de sustancias psicoactivas, ansiedad, fobias, trastorno de pánico así como trastorno afectivo bipolar, por ejemplo, trastorno (anímico) afectivo bipolar grave (BP-1 ), trastornos neurológicos afectivos bipolares, por ejemplo, migraña y obesidad.
Otros trastornos neurológicos incluyen, por ejemplo, los enumerados en el Manual de Trastornos Mentales (DSM) de Diagnóstico y Estadístico de la Asociación Psiquiátrica Americana, cuya versión más actual se incorpora en este documento por referencia en su totalidad.
En otra realización, la enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina es diabetes. La diabetes que se puede tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluye, pero sin limitación, diabetes juvenil, diabetes melitus, diabetes de tipo I o diabetes de tipo II. En una realización adicional, la glucosilación de proteínas no se ve afectada por la administración de los compuestos de tetraciclina de la invención. En otra realización, el compuesto de tetraciclina de la invención se administra en combinación con terapias diabéticas convencionales, tales como, pero sin limitación, terapia con insulina.
En otra realización, la enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina es un trastorno de masa ósea. Los trastornos de masa ósea que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen trastornos en los que los huesos de un sujeto tienen trastornos y estados en los que la formación, reparación o remodelación del hueso es ventajosa. Por ejemplo, los trastornos de masa ósea incluyen osteoporosis (por ejemplo, una disminución en la resistencia y densidad del hueso), fracturas óseas, formación ósea asociada con procedimientos quirúrgicos (por ejemplo, reconstrucción facial), osteogénesis imperfecta (enfermedad de huesos frágiles), hipofosfatasia, enfermedad de Paget, displasia fibrosa, osteopetrosis, enfermedad ósea de mieloma y el agotamiento de calcio en hueso, tal como el que está relacionado con el hiperparatiroidismo primario. Los trastornos de masa ósea incluyen todos los estados en los que la formación, reparación o remodelación de hueso es ventajosa para el sujeto así como todos los demás trastornos asociados con los huesos o sistema esquelético de un sujeto que se pueden tratar con los compuestos de tetraciclina de la invención. En una realización adicional, los trastornos de masa ósea incluyen los descritos en las Patentes de Estados Unidos N° 5.459.135; 5.231.017; 5.998.390; 5.770.588; RE 34.656; 5.308.839; 4.925.833; 3.304.227; y 4.666.897, cada una de las cuales se incorpora de este modo en este documento por referencia en su totalidad.
En otra realización, la enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina es lesión pulmonar aguda. Las lesiones pulmonares agudas que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen síndrome de distrés respiratorio del adulto (ARDS), síndrome post-bomba (PPS) y traumatismo. Los traumatismos incluyen cualquier lesión en el tejido vivo causada por un agente o acontecimiento extrínseco. Los ejemplos de traumatismo incluyen, pero sin limitación, lesiones por accidente, contacto con una superficie dura o corte u otra lesión a los pulmones.
La enfermedad o trastornos que responden a tetraciclina de la invención también incluyen trastornos pulmonares crónicos. Los ejemplos de trastornos pulmonares crónicos que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen, pero sin limitación, asma, fibrosis quística, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y enfisema. En una realización adicional, los trastornos pulmonares agudos y/o crónicos que se pueden tratar usando los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos incluyen los descritos en las Patentes de Estados Unidos N° 5.977.091 ; 6.043.231 ; 5.523.297; y 5.773.430 cada una de las cuales se incorpora de este modo en este documento por referencia en su totalidad.
En otra realización más, la enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina es isquemia, ictus o ictus isquémico.
En una realización adicional, los compuestos de tetraciclina de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos se pueden usar para tratar tales trastornos como se ha descrito anteriormente y en las Patentes de Estados Unidos N° 6.231.894; 5.773.430; 5.919.775 y 5.789.395, incorporadas en este documento por referencia.
En una realización adicional más, los compuestos de tetraciclina de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos se pueden usar para tratar dolor, por ejemplo, dolor inflamatorio, nociceptivo o neuropático. El dolor puede ser agudo o crónico.
En otra realización, la enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina es una herida cutánea. La invención también proporciona un método para mejorar la respuesta de cicatrización del tejido epitelializado (por ejemplo, piel, mucosas) a lesión traumática aguda (por ejemplo, corte, quemadura, raspadura, etc.). El método incluye usar un compuesto de tetraciclina de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para mejorar la capacidad de tejido epitelializado para cicatrizar heridas agudas. El método puede aumentar la velocidad de acumulación de colágeno o del tejido que cicatriza. El método también puede disminuir la actividad proteolítica en el tejido epitelializado disminuyendo la actividad colagenolítica y/o gelatinolítica de MMP. En una realización adicional, el compuesto de tetraciclina de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra a la superficie de la piel (por ejemplo, por vía tópica). En una realización adicional, el compuesto de tetraciclina de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se usa para tratar una herida cutánea y otros trastornos tales como se describen, por ejemplo, en las Patentes de Estados Unidos N° 5.827.840; 4.704.383; 4.935.412; 5.258.371 ; 5.308.839. 5.459.135; 5.532.227; y 6.015.804; cada una de las cuales se incorpora en este documento por referencia en su totalidad.
En otra realización más, la enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina es un aneurisma aórtico o vascular en el tejido vascular de un sujeto (por ejemplo, un sujeto que tiene o que está en riesgo de tener un aneurisma aórtico o vascular, etc.). El compuesto de tetraciclina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede ser eficaz para reducir el tamaño del aneurisma vascular o se puede administrar al sujeto antes de la aparición del aneurisma vascular de tal forma que se evita el aneurisma. En una realización, el tejido vascular es una arteria, por ejemplo, la aorta, por ejemplo, la aorta abdominal. En una realización adicional, los compuestos de tetraciclina de la invención se usan para tratar trastornos descritos en las Patentes de Estados Unidos N° 6.043.225 y 5.834.449, incorporadas en este documento por referencia en su totalidad.
Los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos se pueden usar en solitario o en combinación con uno o más agentes terapéuticos en los métodos de la invención descrita en este documento.
La expresión "en combinación con" otro agente terapéutico o tratamiento incluye la co-administración del compuesto de tetraciclina y con los otros agentes terapéuticos o tratamiento como una única forma de dosificación de combinación o como múltiples formas de dosificación separadas, administración en primer lugar del compuesto de tetraciclina, seguido del otro agente terapéutico o tratamiento y administración del otro agente terapéutico o tratamiento en primer lugar, seguido del compuesto de tetraciclina.
El otro agente terapéutico puede ser cualquier agente que se conozca en la técnica para tratar, prevenir o reducir los síntomas de una enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina. La elección del agente o agentes terapéuticos adicionales se basa en la enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina particular que se está tratando. Tal elección pertenece al conocimiento del médico a cargo del caso. Además, el otro agente terapéutico puede ser cualquier agente que sea beneficioso para el paciente cuando se administra en combinación con la administración de un compuesto de tetraciclina.
Los compuestos de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos se pueden usar en solitario o en combinación con uno o más antibióticos y/o inmunomoduladores (por ejemplo, ácido Desoxicólico, Macrocina, Abatacept, Belatacept, Infliximab, Adalimumab, Certolizumab pegol, Afelimomab, Golimumab y FKBP/Ciclofilina/Calcineurina: Tacrolimus, Ciclosporina, Pimecrolimus).
Como se usa en este documento, el término "sujeto" significa un mamífero que necesita tratamiento o prevención, por ejemplo, animales de compañía (por ejemplo, perros, gatos y similares), animales de granja (por ejemplo, vacas, cerdos, caballos, ovejas, cabras y similares) y animales de laboratorio (por ejemplo, ratas, ratones, cobayas y similares). Típicamente, el sujeto es un ser humano que necesita el tratamiento especificado.
Como se usa en este documento, el término "tratar" o "tratamiento" se refiere a obtener el efecto farmacológico y/o fisiológico deseado. El efecto puede incluir conseguir, parcial o sustancialmente, uno o más de los siguientes resultados: reducir parcialmente o totalmente el alcance de la enfermedad, trastorno o síndrome; mitigar o mejorar un síntoma clínico o indicador asociado con el trastorno; retrasar, inhibir o disminuir la probabilidad de la progresión de la enfermedad, trastorno o síndrome.
Como se usa en este documento "prevenir" o "prevención" se refiere a reducir la probabilidad de la aparición o desarrollo de enfermedad, trastorno o síndrome.
Una "cantidad eficaz" significa la cantidad de agente de compuesto activo que provoca la respuesta biológica deseada en un sujeto. En una realización, la cantidad eficaz de un compuesto de la invención es de aproximadamente 0,01 mg/kg/día a aproximadamente 1.000 mg/kg/día, de aproximadamente 0,1 mg/kg/día a aproximadamente 100 mg/kg/día o de aproximadamente 0,5 mg/kg/día a aproximadamente 50 mg/kg/día.
La invención incluye además el proceso para preparar la composición que comprende mezclar uno o más de los presentes compuestos y un vehículo farmacéuticamente aceptable opcional; e incluye las composiciones que se producen de tal proceso, proceso que incluye técnicas farmacéuticas convencionales.
Las composiciones de la invención incluyen formulaciones ocular, oral, nasal, transdérmica, tópica con o sin oclusión, intravenosa (tanto en embolada como en infusión), inhalables e inyección (por vía intraperitoneal, por vía subcutánea, por vía intramuscular, por vía intratumoral o por vía parenteral). La composición puede estar en una unidad de dosificación tal como un comprimido, pildora, cápsula, polvo, gránulo, liposoma, resina de intercambio iónico, solución ocular estéril o dispositivo de suministro ocular (tal como una lente de contacto y similares que facilitan la liberación inmediata, liberación sincronizada o liberación sostenida), solución o suspensión parenteral, aerosol o pulverizador líquido graduado, gota, ampolla, dispositivo autoinyector o supositorio; para la administración por vía ocular, por vía oral, por vía intranasal, por vía sublingual, por vía parenteral o por vía rectal o medíante inhalación o insuflación.
Las composiciones de la invención adecuadas para la administración oral incluyen formas sólidas tales como pildoras, comprimidos, comprimidos encapsulados, cápsulas (incluyendo cada uno formulaciones de liberación inmediata, liberación sincronizada y liberación sostenida), gránulos y polvos; y formas líquidas tales como soluciones, jarabes, elíxires, emulsiones y suspensiones. Las formas útiles para la administración ocular incluyen soluciones estériles o dispositivos de suministro ocular. Las formas útiles para la administración parenteral incluyen soluciones, emulsiones y suspensiones estériles.
Las composiciones de la invención se pueden administrar de una forma adecuada para la administración una vez por semana o una vez al mes. Por ejemplo, una sal insoluble del compuesto activo puede adaptarse para proporcionar una preparación de liberación prolongada para la inyección intramuscular (por ejemplo, una sal de decanoato) o para proporcionar una solución para la administración oftálmica.
La forma de dosificación que contiene la composición de la invención contiene una cantidad eficaz del ingrediente activo necesaria para proporcionar un efecto terapéutico. La composición puede contener de aproximadamente 5.000 mg a aproximadamente 0,5 mg (preferiblemente de aproximadamente de 1.000 mg a aproximadamente 0,5 mg) de un compuesto de la invención o forma de sal del mismo y se puede constituir en cualquier forma adecuada para el modo de administración seleccionado. La composición se puede administrar de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 veces por día. Se puede emplear la administración diaria o la dosificación post-periódica.
Para la administración oral, la composición está preferiblemente en forma de un comprimido o cápsula que contiene, por ejemplo, de 500 a 0,5 miligramos del compuesto activo. Las dosificaciones variarán dependiendo de factores asociados con el paciente particular que se está tratando (por ejemplo, edad, peso, alimentación y momento de administración), la gravedad de la afección que se está tratando, el compuesto que se está empleando, el modo de administración y la fuerza de la preparación.
La composición oral se formula preferiblemente como una composición homogénea, en la que el ingrediente activo está dispersado de forma uniforme a lo largo de la mezcla, que se puede subdividir de forma sencilla en unidades de dosificación que contienen cantidades iguales de un compuesto de la invención. Preferiblemente, las composiciones se preparan mezclando un compuesto de la invención (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) con uno o más vehículos farmacéuticos opcionalmente presentes (tales como almidón, azúcar, diluyente, agente de granulación, lubricante, emoliente, agente de unión y agente disgregante), uno o más excipientes farmacéuticos inertes opcionalmente presentes (tales como agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes saporíferos, conservantes, agentes colorantes y jarabe), uno o más ingredientes de formación de comprimidos, convencionales opcionalmente presentes (tales como almidón de maíz, lactosa, sacarosa, sorbitol, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, fosfato dicálcico y cualquiera de una diversidad de gomas) y un diluyente opcional (tal como agua).
Los agentes de unión incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales (por ejemplo, glucosa y ß-lactosa) edulcorantes de maíz y gomas naturales y sintéticas (por ejemplo, goma arábiga y tragacanto). Los agentes disgregantes incluyen almidón, metilcelulosa, agar y bentonita.
Los comprimidos y cápsulas representan una forma unitaria de dosificación oral ventajosa. Los comprimidos pueden recubrirse con azúcar o recubrirse con película usando técnicas convencionales. Los comprimidos también pueden cubrirse o formar el compuesto de otro modo para proporcionar un efecto terapéutico de liberación controlada prolongado. La forma de dosificación puede comprender un componente de dosificación interno y uno de dosificación externo, en la que el componente externo está en forma de una envuelta sobre el componente interno. Los dos componentes pueden separase además por una capa que resiste la desintegración en el estómago (tal como una capa entérica) y permite que el componente interno pase intacto al duodeno o una capa que retrasa o sostiene la liberación. Se puede usar una diversidad de materiales de capa o recubrimiento entéricos y no entéricos (tales como ácidos poliméricos, gomas laca, alcohol cetílico y acetato de celulosa o combinaciones de los mismos).
Los compuestos de la invención también se pueden administrar mediante una composición de liberación lenta; en la que la composición incluye un compuesto de la invención y un vehículo de liberación lenta biodegradable (por ejemplo, un vehículo polimérico) o un vehículo de liberación lenta no biodegradable farmacéuticamente aceptable (por ejemplo, un vehículo de intercambio iónico).
Los vehículos de liberación lenta biodegradables y no biodegradables se conocen bien en la técnica. Los vehículos biodegradables se usan para formar partículas o matrices que retienen un agente o agentes activos y que se degradan/disuelven lentamente en un entorno adecuado (por ejemplo, acuoso, ácido, básico y similares) para liberar el agente. Tales partículas se degradan/disuelven en fluidos corporales para liberar el compuesto o los compuestos activos en su interior. Las partículas son preferiblemente nanopartículas o nanoemulsiones (por ejemplo, en el intervalo de aproximadamente 1 a 500 nm de diámetro, preferiblemente de aproximadamente 50-200 nm de diámetro y más preferiblemente de aproximadamente 100 nm de diámetro). En un proceso para preparar una composición de liberación lenta en primer lugar un vehículo de liberación lenta y un compuesto de la invención se disuelven o dispersan en un disolvente orgánico. La mezcla resultante se añade a una solución acuosa que contiene un agente o agentes con actividad superficial opcionales para producir una emulsión. Después se evapora el disolvente orgánico de la emulsión para proporcionar una suspensión coloidal de partículas que contienen el vehículo de liberación lenta y el compuesto de la invención.
El compuesto descrito en este documento puede incorporarse para la administración por vía oral o mediante inyección en una forma de líquido tal como soluciones acuosas, jarabes aromatizados de forma adecuada, suspensiones acuosas u oleosas, emulsiones aromatizadas con aceites comestibles tales como aceite de semilla de algodón, aceite de sésamo, aceite de coco o aceite de cacahuete y similares o en elixires o vehículos farmacéuticos similares. Los agentes de dispersión o suspensión adecuados para suspensiones acuosas incluyen gomas sintéticas y naturales tales como tragacanto, goma arábiga, alginato, dextrano, carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, polivinil-pirrolidona y gelatina. Las formas líquidas en agentes de suspensión o dispersión aromatizados de forma adecuada también pueden incluir gomas sintéticas y naturales. Para la administración parenteral se desean suspensiones y soluciones estériles. Se emplean preparaciones isotónicas, que contienen generalmente conservantes adecuados, cuando se desea la administración intravenosa.
Los compuestos se pueden administrar por vía parenteral mediante inyección. Una formulación parenteral puede consistir en el ingrediente activo disuelto en o mezclado con un vehículo líquido inerte apropiado. Los vehículos líquidos aceptables comprenden habitualmente disolventes acuosos y otros ingredientes opcionales para ayudar a la solubilidad o conservación. Tales disolventes acuosos incluyen agua estéril, solución de Ringer o una solución salina acuosa isotónica. Otros ingredientes opcionales incluyen aceites vegetales (tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón y aceite de sésamo) y disolventes orgánicos (tales como solcetal, glicerol y formilo). Se puede emplear un aceite no volátil estéril como un disolvente o agente de suspensión. La formulación parenteral se prepara disolviendo o suspendiendo el ingrediente activo en el vehículo líquido por lo que la unidad de dosificación final contiene del 0,005 al 10% en peso del ingrediente activo. Otros aditivos incluyen conservantes, isotonizantes, solubilizantes, estabilizantes y agentes que mitigan el dolor. Se pueden preparar también suspensiones inyectables, en cuyo caso se pueden emplear vehículos líquidos, agentes de suspensión y similares apropiados.
Los compuestos de la invención se pueden administrar por vía intranasal usando un vehículo intranasal adecuado.
En otra realización, los compuestos de esta invención pueden administrase directamente a los pulmones mediante inhalación.
Los compuestos de la invención también se pueden administrar por vía tópica o potenciar usando un vehículo transdérmico tópico adecuado o un parche transdérmico.
Para la administración ocular, la composición está preferiblemente en forma de una composición oftálmica. Las composiciones oftálmicas se formulan preferiblemente como formulaciones de gotas oculares y se cargan en recipientes apropiados para facilitar la administración al ojo, por ejemplo, un cuentagotas equipado con una pipeta adecuada. Preferiblemente, las composiciones son estériles y basadas en agua, usando agua purificada. Además del compuesto de la invención, una composición oftálmica puede contener uno o más de: a) un tensioactivo tal como un éster de ácido graso de polioxietileno; b) un agente espesante tal como celulosa, derivados de celulosa, polímeros de carboxivinilo, polímeros de polivinilo y polivinilpirrolidonas, típicamente a una concentración en el intervalo de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 5% (p/vol); c) (como una alternativa a o además de almacenar la composición en un recipiente que contiene nitrógeno y que incluye opcionalmente un absorbedor de oxígeno libre tal como Fe), un anti-oxidante tal como hidroxianisol butilado, ácido ascórbico, tiosulfato sódico o hidroxitolueno butilado a una concentración de aproximadamente el 0,00005 a aproximadamente el 0,1% (p/vol); d) etanol a una concentración de aproximadamente el 0,01 al 0,5% (p/vol); y e) otros excipientes tales como un agente isotónico, tampón, conservante y/o agente de control del pH. El pH de la composición oftálmica está de forma deseable en el intervalo de 4 a 8.
En ciertas realizaciones, la composición de esta invención incluye uno o más agentes adicionales. El otro agente terapéutico puede ser cualquier agente que sea capaz de tratar, prevenir o reducir los síntomas de una enfermedad o trastorno que responde a tetraciclina. Como alternativa, el otro agente terapéutico puede ser cualquier agente que sea beneficioso para un paciente cuando se administra en combinación con el compuesto de tetraciclina en esta invención.
Aunque esta invención se ha mostrado y descrito particularmente con referencia a realizaciones ejemplares de la misma, se entenderá por los expertos en la materia que se puedan realizar en la misma diversos cambios en forma y detalles sin apartarse del alcance de la invención abarcada por las reivindicaciones adjuntas.
EJEMPLIFICACIÓN Las siguientes abreviaturas se usan a lo largo de toda la solicitud.
Ac acetilo AIBN 2,2'-azobis(2-metilpropionitrilo) ac. acuoso Bn bencilo Boc ferc-butoxicarbonilo Bu butilo Cbz benciloxicarbonilo Cy triciclohexilfosfina dba dibencilidenoacetona DIBAL-H hidruro de diisobutilaluminio DIEA A/,A/-diisopropiletilamina DMAP 4-(dimetilamino)piridina DME 1 ,2-dimetoxietano DMF A/,/V-dimetilformamida DMPU 1 ,3-dimetil-3,4-5,6-tetrahidro-2(1H)-pirimidona DMSO dimetilsulfóxido EDC A/-(3-dimetilaminopropil)-/\/'-etilcarbodiimida ESI ionización por electronebulización Et etilo EtOAc acetato de etilo HPLC cromatografía líquida de alta resolución HOBt 1-hidroxibenzotriazol /' iso IBX ácido 2-yodoxibenzoico LDA diisopropilamida de litio LHMDS bis(trimetilsilil)amida de litio LTMP 2,2,6,6-tetrametilpiperidida de litio MeOH metanol Ms metanosulfonilo MS espectrometría de masas MTBE metil terc-butil éter PM peso molecular NBS A-bromosuccinimida NCS /V-clorosuccinimida RMN espectrometría de resonancia magnética nuclear Ph fenilo Pr propilo s secundario t terciario TMEDA ?/,?/,?/'?/'-tetrametiletilendiamina TBS íerc-butildimetilsililo TEA trietilamina Tf trifluoromathanosulfonilo TFA ácido trifluoroacético TFAA anhídrido trifluoroacético THF tetrahidrofurano TLC cromatografía de capa fina Ts para-toluenosulfonilo TsOH ácido para-toluenosulfónico Xantphos 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno Se exponen procedimientos detallados para cada un de las etapas representadas en los siguientes Esquemas 1-13 en la sección de Ejemplos.
Los compuestos de Fórmula II se prepararon de acuerdo con uno de los Esquemas 7-9, dependiendo de la estructura real. Los intermedios usados en el Esquema 7-9 se prepararon mediante uno de los Esquemas 1-6, según fue apropiado para la estructura final del compuesto.
Los compuestos de Fórmula II, en la que X es flúor se sintetizaron usando a intermedio de 4-(benciloxi)-7-fluoro-6-metilisoindolina-5-carboxilato de fenilo N-sustituido común, que se prepara de acuerdo con el Esquema 1.
Esquema 1 Se muestra una ruta alternativa para ciertos intermedios de 4-(benciloxi)-7-fluoro-6-metilisoindolina-5-carboxilato de fenilo N-sustituido en el Esquema 2.
Esquema 2 Los compuestos de Fórmula II, en la que X es cloro se sintetizaron usando un intermedio de 4-(benciloxi)-7-cloro-6-metilisoindolina-5-carboxilato de fenilo N-sustituido común , que se prepara de acuerdo con el Esquema 3.
Los compuestos de Fórmula II, en la que X es CF3 se sintetizaron usando un intermedio de 4-(benciloxi)-7-trifluorometil-6-metilisoindolina-5-carboxilato de fenilo N-sustituido común, que se prepara de acuerdo con el Esquema 4.
Esquema 4 Los compuestos de Fórmula II, en la que X es OCH3 se sintetizaron usando un intermedio 4-(benciloxi)-7-metoxi-6-metilisoindolina-5-carboxilato de fenilo N-sustituido común, que se prepara de acuerdo con el Esquema 5.
Esquema 5 Los compuestos de Fórmula II, en la que X es N(CH3)2 se sintetizaron usando un intermedio de 4-(benciloxi)-7-dimetilamino-6-metilisoindolina-5-carboxilato de fenilo N-sustituido común, que se prepara de acuerdo con el Esquema 6.
Esquema 6 Los compuestos de Fórmula II se sintetizaron combinando cualquiera de los intermedios S1-11 , S2-1 , S3-13, S4-10, S5-9 o S6-2 que se han descrito anteriormente en los Esquemas 1-6 con una enona S7-1 seguido de desprotección y reducción de acuerdo con el Esquema 7.
Esquema 7 Los compuestos de Fórmula II, en la que X es flúor y R es -C(0)CH2N(R2)(R3) o hidrógeno se prepararon de acuerdo con el Esquema 8.
Esquema 8 El compuesto de Fórmula II, en la que X es hidrógeno se prepara por reducción de los compuestos correspondientes en los que X es cloro de acuerdo con el Esquema 9.
Esquema 9 Los compuestos de Fórmula III se sintetizaron a través de un intermedio de 8-(benciloxi)-5-fluoro-6-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-7-carboxilato de fenilo N-sustituido común (S10-3) de acuerdo con el Esquema 10, que se indica a continuación.
Esquema 10 Los compuestos de Fórmula IV se prepararon usando un intermedio de 5 (benciloxi)-8-fluoro-7-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-6-carboxilato de fenilo N sustituido común de acuerdo con el Esquema 11.
Esquema 11 Los compuestos de Fórmula V, en la que R y R se toman juntos para formar =0 se sintetizan de acuerdo con el Esquema 12.
Esquema 12 Los compuestos de Fórmula V, en la que R7a y R7b son hidrógeno se preparan de acuerdo con el Esquema 13.
Esquema 13 Ejemplo 1. Preparación de fenilo 4-(benciloxi)-2-íerc-butil-7-fluoro-6-metilisoindolina-5-carboxilato (S1 -1 1 -1 ).
Síntesis de S1-2.
A una solución de THF de ácido 5-fluoro-2-metoxibenzoico (S1 -1 , 500 mg, 2,94 mmol, Aldrich 523097) enfriada a -78°C se le añadió una solución de THF de s-BuLi (4,60 mi, 1 ,40 M, 6,44 mmol, 2,2 equiv.) y TMEDA (0,97 mi, 6,47 mmol, 2,2 equiv.). La reacción se agitó a -78°C durante 2 h. A la mezcla de reacción se le añadió gota a gota yoduro de metilo (1 ,10 mi, 17,64 mmol, 6 equiv.). La reacción se dejó calentar a 25°C durante 1 h y se agitó a 25°C durante 1 h. Se añadió NaOH (6 N, 20 mi). La mezcla resultante se extrajo con f-butil metil éter (20 mi x 2). La capa acuosa se acidificó con HCI (6 N) a pH 1 y se extrajo con EtOAc (20 mi x 4). Los extractos de EtOAc se secaron (Na2SO4) y se concentraron para dar 510 mg del producto en bruto S1 -2: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,06 (dd, J = 9,8, 8,5 Hz, 1 H), 6,75 (dd, J = 9,8, 3,7 Hz, 1 H), 3,86 (s, 3 H), 2,34 (d, J = 2,4 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 185,12 (M+H).
Síntesis de S1-3.
Se añadió cloruro de oxalilo (0,95 mi, 1 1 ,10 mmol, 5,5 equiv.) a una solución de CH2CI2 (15 mi, anhidro) de S1 -2 (510 mg, 2,00 mmol). A la mezcla resultante se le añadió DMF (0,1 mi). La reacción se agitó a 25°C durante 1 h y se concentró. El sólido resultante se disolvió de nuevo en 15 mi de CH2CI2 anhidro. A la mezcla de reacción se le añadieron fenol (520 mg, 5,50 mmol, 2,8 equiv.), DMAP (670 mg, 5,6 mmol, 2,8 equiv.) y trietilamina (1 ,90 mi, 13,90 mmol, 7,0 equiv.). La mezcla se agitó a 25°C durante 12 h y se concentró. Al residuo se le añadieron EtOAc y H20. La capa orgánica se lavó con NaOH (1 N), H20 y salmuera, se secó ( a2S04) y se concentró. La cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (40:1 de hexanos/EtOAc) produjo 400 mg del compuesto S1-3 (52% en 2 etapas): 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,47-7,41 (m, 2 H), 7,31 -7,24 (m, 3 H), 7,08 (dd, J = 9,2, 9,2 Hz, 1 H), 6,77 (dd, J = 9,2, 3,7 Hz, 1 H), 3,88 (s, 3 H), 2,36 (d, J = 2,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 261 , 12 (M+H).
Síntesis de S1-4.
Se añadió BBr3 (1 ,85 mi, 1 M, 1 ,85 mmol, 1 ,2 equiv.) a una solución de CH2CI2 (8 mi) de S1 -3 (400 mg, 1 ,54 mmol) a -78°C. La reacción se agitó de -78°C a 25°C durante 1 ,5 h, se interrumpió con NaHC03 saturado y se concentró. A la mezcla de reacción se le añadieron EtOAc y H2O. La capa acuosa se extrajo con EtOAc. Los extractos de EtOAc combinados se secaron (Na2SO4) y se concentraron para proporcionar 360 mg de S1 -4 en bruto: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 10,66 (s, 1 H), 7,50-7,44 (m, 2 H), 7,36-7,31 (m ,1 H), 7,26-7,18 (m, 3 H), 6,86 (dd, J = 9,3, 4,9 Hz, 1 H), 2,60 (d, J = 2,4 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 245,1 1 (M-H).
Síntesis de S1-5.
El compuesto S1 -4 (4,92 g, 95% de pureza, 20 mmol) se disolvió en ácido acético (50 mi) y bromo (1 ,54 mi, 30 mmol) y se añadió a través de una jeringa a temperatura ambiente. Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, el análisis por LC/MS indicó que el material de partida se había consumido. Esta mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con agua (3 x 100 mi) y salmuera. Los productos orgánicos se secaron sobre NaaSO^ se filtraron y se concentraron a presión reducida. Esto proporcionó 7,06 g del compuesto S1 -5 en forma de un sólido de color amarillo claro: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 1 1 ,14 (s, 1 H), 7,52 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,49-7,43 (m, 2 H), 7,36-7,30 (m. 1 H), 7,21 -7,16 (m, 2 H), 2,55 (d, J = 2,3 Hz, 3 H).
Síntesis de S1-6.
El compuesto S1 -5 (en bruto, 1 ,06 g, 2,97 mmol) se disolvió en acetona (20 mi) con carbonato potásico (821 mg, 5,94 mmol, 2,0 equiv.) y se enfrió a 0°C en un baño de hielo. Se añadió gota a gota bromuro de bencilo (540 µ?, 4,45 mmol, 1 ,5 equiv.). Después de 2 h, el análisis por LC/MS indicó que el material de partida se había consumido al 40%. La mezcla de reacción se calentó a 50°C durante una hora y el material de partida se consumió por completo. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (100 mi) y se lavó con agua y salmuera. Los productos orgánicos se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Esto proporcionó 2,2 g del S1-6 en bruto, que se purificó por cromatografía en columna (columna Biotage 10 g, gradiente de acetato de etilo del 2 al 5% de hexano), proporcionando 1 ,03 g (84% en dos etapas) del compuesto puro S1-6 en forma de un aceite incoloro: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,50-7,47 (m, 2 H), 7,40-7,33 (m, 6 H), 7,25 (t, J = 7,3 Hz, 1 H), 7,04 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 5,09 (s, 2 H), 2,32 (d, J = 1 ,8 Hz, 3 H).
Síntesis de S1-7.
La solución de LDA se preparó añadiendo n-BuLi (1 ,6 M, 5,1 mi, 8,16 mmol, 1 ,5 equiv.) a diisopropilamina (1 ,15 mi, 8,16 mmol) en THF (15 mi) a -78°C. La mezcla de reacción se calentó hasta -20°C y se agitó durante 15 min. Después la solución de LDA se enfrió a -78°C, se añadió gota a gota el compuesto S1-6 (2,26 g, 5,44 mmol) en THF (5 mi), formando una solución de color naranja-rojo. Después de 10 min, se añadió gota a gota DMF (1 ,26 mi, 16,3 mmol, 3 equiv.). La solución de reacción se dejó calentar hasta a -20°C en 1 hora y se inactivo con NH4CI (solución ac.). El análisis por LC/MS indicó que el material de partida se había consumido por completo. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (100 mi) y se lavó con agua y salmuera. Los productos orgánicos se secaron sobre Na2S04, se filtró y se concentró a presión reducida. Esto proporcionó 2,42 g del S 1-7 en bruto, que se purificó por cromatografía en columna (columna Biotage 24 g, gradiente acetato de etilo del 5 al 10% de hexano), produciendo 2,23 g (92%) del compuesto en bruto S1-7 en forma de un sólido de color amarillo claro. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 10,37 (s, 1 H), 7,51-7,47 (m, 2 H), 7,40-7,33 (m, 5 H), 7,27 (t, J = 7,3 Hz, 1 H), 7,06-7,02 (m, 2 H), 5,12 (s, 2 H), 2,37 (d, J = 2,3 Hz, 3 H).
Síntesis de S1 -8.
El compuesto S1-7 (416 mg, 0,94 mmol) se disolvió en metanol (5 mi) y se añadió en varias partes borohidruro sódico (75,6 mg, 2 mmol). Durante la adición, se observó desprendimiento de gas. Después de agitar a ta durante 30 min, el análisis por LC/MS indicó que el material de partida se había consumido. Esta mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con agua (2 x 20 mi) y salmuera. Los productos orgánicos se secaron sobre Na2S04, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna (columna Biotage 10 g, gradiente de acetato de atilo del 5 al 20% de hexano), produciendo 367 mg (87,7%) del compuesto en bruto S 1-8 en forma de un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 10,37 (s, 1 H), 7,49 (dd, J = 7,8, 2,3 Hz, 2 H), 7,40-7,33 (m, 5 H), 7,25 (t, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,07-7,02 (m, 2 H), 5,10 (s, 2 H), 4,91 (dd, J = 6,9, 2,3 Hz , 2 H), 2,35 (d, J = 2,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 467,10, 469,08 (M+Na).
Síntesis de S1-9.
Se añadió una solución de cloruro de i-propil magnesio/cloruro de litio (Chemetall Foote Corporation, solución 1 ,2 M en THF, 4,4 mi, 5,3 mmol) a una solución a -78°C del compuesto S1-8 (472 mg, 1 ,06 mmol) en THF (10 mi). La mezcla de reacción se dejó calentar a 0°C durante 1 hora. Se añadió paraformaldehído (318 mg, 10,6 mmol) y la reacción se dejó calentar a ta. Después de 1 hora, la mezcla de reacción se calentó a 40°C. Después de 1 hora, la mezcla de reacción se inactivo con cloruro de amonio (solución acuosa saturada) y se extrajo con EtOAc (2 x). Los extractos combinados se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna (columna Biotage 10 g, gradiente de EtOAc del 10 al 35% de hexano), produciendo 337 mg (80%) del S1-9 en forma de un aceite denso. H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,45-7,34 (m, 7 H), 7,30-7,23 (m, 1 H), 7,10 (d, J = 7,8 Hz, 2 H), 5,08 (s, 2 H), 4,85 (s, 2 H), 4,76 (s, 2 H), 2,39 (d, J = 2,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 419,19 (M+Na).
Síntesis de S 1-10.
A una solución del compuesto S1-9 (2,98 g, 7,52 mmol, 1 equiv.) en 1 ,2-dicloroetano (20 mi) se le añadieron cloruro de tionilo (2,18 mi, 30,1 mmol, 4 equiv.) y cloruro de tetrabutilamonio (174 mg, 0,76 mmol, 0,1 equiv.). El recipiente de reacción se cerró herméticamente, la mezcla se calentó a 80°C durante 2 h y después se concentró a presión reducida. La purificación del aceite en bruto resultante a través de cromatografía en columna sobre gel de sílice (Redisep, 80 g, gradiente de EtOAc del 4 al 6% de hexano) proporcionó 2,66 g del S1-10 (81 %) en forma de un sólido ceroso de color blanco: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,48-7,42 (m, 2 H), 7,41-7,34 (m, 4 H), 7,29-7,24 (m, 1 H), 7,10-7,05 (m, 2 H), 5/13 (s, 2 H), 4,81 (s, 4 H), 2,44-2,39 (m, 3 H); MS (ESI) m/z 431 ,14, 433,16 (M+H).
Síntesis de S1 -11-1.
El compuesto S1-10 (120 mg, 0,277 mmol), f-butilamina (0,032 mi, 0,305 mmol) y diisopropiletilamina (0,096 mi, 0,554 mmol) se calentaron a 1 10°C en 1 ,2-dimetoxietano (1 mi). Después de 2 horas, se añadió más cantidad de í-butilamina (0,100 mi, 0,95 mmol). Después de 2 horas más, se añadió más cantidad de t-butilamina (0,500 mi, 4,75 mmol) y la mezcla de reacción se calentó durante una noche. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y se purificó mediante cromatografía en columna (columna Biotage 10 g, gradiente de EtOAc del 5 al 20% de hexano), produciendo 64,1 mg (53%) del producto, Rf = 0,25 en EtOAc al 20% en hexano; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,42-7,30 (m, 7 H), 7,27-7,20 (m, 1 H), 7,04 (d, J = 7,8 Hz, 2 H), 5,02 (s, 2 H), 4,08 (s, 2 H), 4,04 (s, 2 H), 2,33 (d, J = 1 ,8 Hz, 3 H), 1 ,15 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 434,29 (M+H).
Los siguientes compuestos se prepararon mediante métodos similares a los descritos para el S1-11-1.
Ejemplo 2. S1-1 1-2.
H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,41-7,30 (m, 7 H), 7,25-7,20 (m, 1 H), 7,05-7,00 (m, 2 H), 5,01 (s, 2 H), 4,67 (t, J = 4,9 Hz, 1 H), 4,55 (t, J = 4,9 Hz, 1 H), 4,08 (s, 4 H), 3,08 (t, J = 4,9 Hz, 1 H), 3,01 (t, J = 4,9 Hz, 1 H), 2,34-2,32 (m, 3 H); MS (ESI) m/z 424,63 (M+H).
Ejemplo 3. S1 -1 1-3. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,43-7,31 (m, 7 H), 7,25-7,20 (m, 1 H), 7,07-7,01 (m, 2 H), 5,03 (s, 2 H), 4,07 (s, 4 H), 3,57 (t, J = 5,5 Hz, 2 H), 3,41 (s, 3 H), 2,95 (t, J = 5,5 Hz, 2 H), 2,36-2,34 (m, 3 H); MS (ESI) m/z 436,38 (M+H).
Ejemplo 4. S1-11-4. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,37-7,31 m (m, 7 H), 7,29-7,23 (m, 1 H), 7,05-6,99 (m, 2 H), 5,01 (s, 2 H), 3,95 (s, 3 H), 2,47 (d, J = 6,1 Hz, 2 H), 2,33 (s, 3 H), 1 ,83-1 ,72 (m, 1 H), 0,95 (d, J = 5,5 Hz, 6 Hz); MS (ESI) m/z 434,27 (M+H).
Ejemplo 5. S1 -1 1 -5. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,41 -7,32 (m, 7 H), 7,25-7,20 (m, 1 H), 7,07-7,02 (m, 2 H), 5,03 (s, 2 H), 4,16-4,01 (m, 5 H), 3,96-3,87 (m, 1 H), 3,84-3,76 (m, 1 H), 3,37-3,27 (m, 1 H), 2,89-2,77 (m, 2 H), 2,35 (s, 3 H), 1 ,98-1 ,83 (m, 2 H), 1 ,66-1 ,54 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 462,82 (M+H).
Ejemplo 6. S1 -1 1 -6. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,41 -7,32 (m, 7 H), 7,25-7,20 (m, 1 H), 7,07-7,02 (m, 2 H), 5,03 (s, 2 H), 4,16-4,01 (m, 5 H), 3,96-3,87 (m, 1 H), 3,84-3,76 (m, 1 H), 3,37-3,27 (m, 1 H), 2,89-2,77 (m, 2 H), 2,35 (s, 3 H), 1 ,98-1 ,83 (m, 2 H), 1 ,66-1 ,54 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 462,80 (M+H).
Ejemplo 7. S1 -1 1 -7. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,44-7,30 (m, 7 H), 7,25-7,20 (m, 1 H), 7,08-7,00 (m, 2 H), 5,04 (s, 2 H), 4,06-3,95 (m, 4 H), 2,82-2,71 (m, 1 H), 2,35 (s, 3 H), 1,18 (d, J = 6,1 Hz, 6 H); MS (ESI) m/z 420,62 (M+H).
Ejemplo 8. S1-11-8. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,43-7,30 (m, 7 H), 7,25-7,20 (m, 1 H), 7,08-7,01 (m, 2 H), 5,04 (s, 2 H), 4,06-3,95 (m, 4 H), 2,67-2,56 (m, 1 H), 2,35 (s, 3 H), 1 ,72-1 ,57 (m, 1 H), 1 ,51-1 ,37 (m, 1 H), 1 ,13 (d, J = 6,1 Hz, 3 H), 0,94 (t, J = 7,0 Hz, 3 H); MS (ESI) miz 434,00 (M+H).
Ejemplo 9. S1-11-9. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,43-7,29 (m, 7 H), 7,25-7,20 (m, 1 H), 7,08-7,00 (m, 2 H), 5,04 (s, 2 H), 4,05-3,96 (m, 4 H), 2,66-2,55 (m, 1 H) 2,34 (s, 3 H), 1 ,72-1 ,57 (m, 1 H), 1 ,51-1 ,37 (m, 1 H), 1 ,13 (d, J = 6,1 Hz, 3 H), 0,95 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 434,64 (M+H).
Ejemplo 10. S1 -11-10. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,43-7,29 (m, 7 H), 7,25-7,20 (m, 1 H), 7,08-7,00 (m, 2 H), 5,04 (s, 2 H), 4,05-3,96 (m, 4 H), 2,66-2,55 (m, 1 H) 2,34 (s, 3 H), 1 ,72-1 ,57 (m, 1 H), 1 ,51 -1 ,37 (m, 1 H), 1 ,13 (d, J = 6,1 Hz, 3 H), 0,95 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 434,60 (M+H).
Ejemplo 1 1 . S1-1 1-1 1. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,42-7,34 (m, 7 H), 7,29-7,22 (m, 1 H), 7,06-6,99 (m, 2 H), 5,04 (s, 2 H), 4,02-3,95 (m, 4 H), 2,51 -2,42 (m, 1 H), 2,34 (s, 3 H), 1 ,98-1 ,87 (m, 1 H), 1 ,01 (d, J = 6,1 Hz, 3 H), 0,95 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,89 (d, J = 6,7 Hz, 3 H): MS (ESI) m/z 448,85 (M+H).
Ejemplo 12. S1-1 1-12. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,42-7,34 (m, 7 H), 7,29-7,22 (m, 1 H), 7,06-6,99 (m, 2 H), 5,04 (s, 2 H), 4,02-3,95 (m, 4 H), 2,51 -2,42 (m, 1 H), 2,34 (s, 3 H), 1 ,98-1 ,87 (m, 1 H), 1 ,01 (d, J = 6,1 Hz, 3 H), 0,95 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,89 (d, J = 6,7 Hz, 3 H): MS (ESI) m/z 446,48 (M-H).
Ejemplo 13. S1-1 1-13. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,41-7,3 (m, 7 H), 7,28-7,19 (m, 1 H), 7,05-7,00 (m, 2 H), 5,01 (s, 2 H), 3,99-3,94 (m, 4 H), 2,93-2,91 (m, 1 H), 2,33 (s, 3 H), 1 ,93-1 ,80 (m, 2 H), 1 ,80-1 ,67 (m, 2 H), 1 ,66-1 ,45 (m, 4 H); MS (ESI) m/z 446,61 (M+H).
Ejemplo 14. S1-11-14. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,41-7,32 (m, 7 H), 7,25-7,20 (m, 1 H), 7,07-7,02 (m, 2 H), 5,03 (s, 2 H), 4,04-3,94 (m, 5 H), 3,93-3,81 (m, 2 H), 3,77-3,70 (m, 1 H), 3,37-3,27 (m, 1 H), 2,37-2,31 (m, 3 H), 2,10-2,05 (m, 1 H), 2,02-2,10 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 448,80 (M+H).
Ejemplo 15. S1-11-15. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,40-7,20 (m, 7 H), 7,28-7,25 (m, 1 H), 7,16- 7,02 (m, 2 H), 5,02 (s, 2 H), 4,05 (s, 2 H), 4,00 (s, 2 H), 2,33-2,32 (m, 3 H), 1 ,52 (s, H), 1 ,49 (c, J = 7,3 Hz, 2 H), 1 ,05 (s, 6 H), 0,90 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 48,25 (M+H).
Ejemplo 16. S1-1 1-16. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,40-7,23 (m, 7 H), 7,28-7,25 (m, 1 H), 7,16-,02 (m, 2 H), 5,03 (s, 2 H), 4,17 (s, 2 H), 4,12 (s, 2 H), 2,34-2,32 (m, 3 H), 1 ,03-,98 (m, 7 H), 0,47-0,40 (m, 2 H), 0,31-0,26 (m, 2 H); MS (ESI) m/z 460,28 (M+H).
Ejemplo 17. S1-1 1-17.
H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,42-7,28 (m, 7 H), 7,25-7,20 (m, 1 H), 7,08-,00 (m, 2 H), 5,03 (s, 2 H), 4,09 (s, 2 H), 4,03 (s, 2 H), 2,35 (s, 3 H), 1 ,46 (s, 2 H), ,19 (s, 6 H), 1 ,02 (s, 9 H); MS (ESI) m z 490,34 (M+H).
Ejemplo 18. S1-1 1-18. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,42-7,28 (m, 7 H), 7,25-7,20 (m, 1 H), 7,08-,00 (m, 2 H), 5,04 (s, 2 H), 4,15 (s, 2 H), 4,13 (s, 2 H), 2,35 (s, 3 H), 2,10-2,02 (m, H), 0,60-0,48 (m, 4 H); MS (ESI) /n z 416,41 (M-H).
Ejemplo 19. S1 -1 1-19. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,42-7,28 (m, 7 H), 7,25-7,20 (m, 1 H), 7,08-7,00 (m, 2 H), 5,03 (s, 2 H), 3,96 (s, 2 H), 3,94 (s, 2 H), 3,35-3,22 (m, 1 H), 2,35 (s, 3 H), 2,10-2,1 ,98 (m, 4 H), 1 ,80-1 ,70 (m, 2 H); MS (ESI) m/z 430,46 (M-H).
Ejemplo 20. S1 -1 1-20. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,41 -7,31 (m, 7 H), 7,27-7,21 (m, 1 H), 7,08-7,03 (m, 2 H), 5,03 (s, 2 H), 4,05 (s, 2 H), 3,94 (s, 2 H), 3,40 (m, 2 H), 2,35 (s, 3 H), 1 ,1 1 (s, 6 H); MS (ESI) m/z 448,35 (M-H).
Ejemplo 21 . S1-1 1-21. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,43-7,30 (m, 7 H), 7,25-7,20 (m, 1 H), 7,07-7,01 (m, 2 H), 6,00-5,87 (m, 1 H), 5,33-5,24 (m, 1 H), 5,19 (d, J = 10,4, 1 H), 5,02 (s, 2 H), 4,00 (s, 4 H), 3,36 (d, J = 6,1 , 3 H), 2,35 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 418,26 (M+H).
Ejemplo 22. Síntesis de S1 -1 1-22.
Se añadió gota a gota una solución de alcohol S1-1 1 -20 (92,1 mg, 0,205 mmol, 1 equiv.) en CH2CI2 (1 mi) a una solución de piridina (33,2 µ?, 0,410 mmol, 2 equiv.) y trifluoruro de dietilaminoazufre (30,1 µ?, 0,246 mmol, 1 ,2 equiv.) en CH2CI2 (2 mi) a 0°C. La solución resultante se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h. La reacción se diluyó con una solución de NH4CI acuosa saturada (2 mi) y se extrajo con EtOAc (2 x 30 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La purificación del aceite resultante por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (Biotage, 25 g, del 5 al 30% de EtOAc en gradiente de hexanos) proporcionó 40,0 mg de S1-11-22 (43%) en forma de un aceite transparente: H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,41-7,32 (m, 7 H), 7,25-7,20 (m, 1 H), 7,07-7,02 (m, 2 H), 5,03 (s, 2 H), 4,12 (s, 4 H), 2,89 (s, 1 H), 2,82 (s, 1 H), 2,34 (s, 3 H), 1 ,44 (s, 3 H), 1 ,39 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 450,45 (M-H).
Ejemplo 23. Síntesis de S1 -1 1 -23.
A una solución de DMSO (23,9 µ?, 0,337 mmol, 2 equiv.) en CH2CI2 (1 mi) a -70°C se le añadió cloruro de oxalilo (17,3 µ?, 0,201 mmol, 1 ,2 equiv.). Después de 15 minutos, se añadió gota a gota el alcohol S1-11-20 (75,8 mg, 0,168 mmol, 1 equiv.) en CH2CI2 (500 µ?). Después de 20 minutos más a -70°C, se añadió DIEA (147 µ?, 0,84 mmol, 5 equiv.) y la solución se retiró del baño de refrigeración. Después de 5 minutos, se añadió la solución de NH4CI acuosa saturada (800 µ?) y la mezcla se dejó calentar. La solución se diluyó adicionalmente con una solución de NH4CI (4 mi) y se extrajo con CH2CI2 (2 x 7 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 mi), se secaron (Na2S04), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El aceite en bruto resultante se disolvió en CH2CI2 (1 mi) y se añadieron pirrolidina (69,7 µ?, 0,84 mmol, 5 equiv.) y ácido acético (48 µ?, 0,84 mmol, 5 equiv.). Después de 40 minutos, se añadió triacetoxiborohidruro sódico (178,4 mg, 0,84 mmol, 5 equiv.). Después de 50 minutos, la reacción se vertió en una solución de NaHCC>3 saturada acuosa (8 mi) y se extrajo con EtOAc (2 x 30 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtraron y concentraron a presión reducida. La purificación del aceite resultante por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (Biotage, 10 g, gradiente de metanol del 1 al 12% en un gradiente de CH2CI2) proporcionó 30,3 mg de S1-11-23 (36%) en forma de un sólido de color blanco: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,44-7,31 (m, 7 H), 7,26-7,21 (m, 1 H), 7,09-7,02 (m, 2 H), 5,04 (s, 2 H), 4,16 (s, 2 H), 4,12 (s, 2 H). 2,77-2,52 (m, 4 H), 2,35 (s, 3 H), 1 ,75 (s, 4 H), 1,15 (s, 6 H); MS (ESI) m/z 503,38 (M+H).
Ejemplo 24. Síntesis de S2-1-1.
Se añadió gota a gota el cloruro de metanosulfonilo (0,0446 mi, 0,575 mmol) a una solución del compuesto S1-9 (76,0 mg, 0,192 mmol) y trietilamina (0,107 mi, 0,768 mmol) en diclorometano (2 mi). Después de 1 hora, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con agua (2 x) y salmuera (1 x). Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material se disolvió en DMF (2 mi), se añadieron diisopropiletilamina (0,100 mi, 0,575 mmol) y neopentilamina (16,7 mg, 0,192 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 60°C. Después de calentar durante una noche, la mezcla de reacción se purificó por cromatografía en columna (columna Biotage 5 g, gradiente de EtOAc del 0 al 8% de hexano), proporcionando 26,5 mg (31 %) del producto S2-1 -1 en forma de un sólido de color blanco. Rf = 0,42 en 10% de EtOAc en hexano; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,44-7,30 (m, 7 H), 7,28-7,21 (m, 1 H), 7,05 (d, J = 7,8 Hz, 2 H), 5,02 (s, 2 H), 4,12 (s a, 4 H), 2,53 (s, 2 H), 2,34 (d, J = ,8 Hz, 3 H), 0,96 (s, 9H); MS (ESI) m/z 448,32 (M+H).
Ejemplo 25. Síntesis de 4-(benciloxi)-7-cloro-6-metil-2-ferc-pentilisoindolina-5-carboxilato de fenilo (S3-13-1 ).
Síntesis de S3-2.
A una solución de 2-metoxi-6-metilanilina (S3-1 , 25,12 g, 183,1 mmol) en metanol (79 mi) y ácido acético (25 mi) se le añadió gota a gota una solución de bromo (9,41 mi, 183,1 mmol) en ácido acético (79 mi) mediante un embudo de adición. La mezcla de reacción se dejó en reposo durante 2 h después de completar la adición. Se añadió EtOAc (150 mi), el sólido se recogió por filtración y se lavó con EtOAc, proporcionando 37,2 g de sal HBr del compuesto S3-2 en forma de un sólido de color blanquecino.
Síntesis de S3-3.
Se suspendió 4-bromo-2-metoxi-6-metilanilina (S3-2, 20 g, 92,7 mmol) en HCI concentrado (22 mi) y hielo picado (76 g) y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió gota a gota una solución de NaN02 (6,52 g, 94,6 mmol) en H20 (22 mi). La mezcla resultante se agitó a 0°C durante 30 min y después se mineralizó con a2C03. Una suspensión de CuCN (10,4 g, 115,9 mmol) en H2O (44 mi) se mezcló con una solución de NaCN (14,4 g, 294,8 mmol) en H2O (22 mi) y se enfrió en un baño de hielo. La mezcla de sal de diazonio inicial se añadió a la solución de CuCN y NaCN junto con tolueno (180 mi) con agitación vigorosa. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 h, ta durante 2 h y 50°C durante 1 h. Después de enfriar a ta, las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo adicionalmente con tolueno. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron. El residuo se pasó a través del lecho de gel de sílice, se lavó con tolueno y se concentró para dar 14,5 g del compuesto S3-3 en forma de un sólido de color amarillo claro.
Síntesis de S3-4.
A una solución de S3-3 (11 ,34 g, 50,2 mmol) en THF (100 mi) se le añadió DIBAL-H (solución 1 ,5 M en tolueno, 40,1 mi, 60,2 mmol) lentamente a -78°C. La mezcla de reacción se dejó calentar a ta gradualmente y se agitó durante una noche. Después de enfriar a 0°C, la reacción se interrumpió cuidadosamente con HC1 1 N y la mezcla resultante se agitó a ta durante 1 h. La mezcla se extrajo tres veces con EtOAc. Las capas de EtOAc combinadas se lavaron con H20, NaHC03 acuoso saturado y salmuera, se secó sobre MgS04 y se concentró para proporcionar el compuesto S3-4 en forma de un sólido de color amarillo, que se usó directamente para la siguiente etapa.
Síntesis de S3-5.
A una suspensión de S3-4 (50,2 mmol asumidos) en f-BuOH (200 mi) se le añadió una solución de NaCI02 (11 ,34 g, 100,3 mmol) y NaH2P04 (34,6 g, 250,8 mmol) en H20 (100 mi) mediante un embudo de adición. Después de que se completara la adición, se añadió 2-metil-2-buteno. La solución homogénea resultante se agitó a ta durante 30 min y después los volátiles se retiraron. El residuo se suspendió en 150 mi de H2O. La solución se acidificó a pH ~1 con HCI 1 N y se extrajo tres veces con ferc-butil metil éter. La solución orgánica combinada se extrajo tres veces con NaOH 1 N. La solución acuosa combinada se acidificó con HCI 6 N y se extrajo tres veces con EtOAc. Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04 y se concentraron para proporcionar 6,84 g de ácido benzoico (S3-4-a) en forma de un sólido de color blanquecino. Esto fue lo suficientemente puro para su uso directamente en la siguiente etapa.
A una solución del ácido benzoico anterior (8,64 g, 35,2 mmol) en diclorometano (70 mi) se le añadió cloruro de oxalilo (3,76 mi, 42,3 mmol, 1 ,2 equiv.), seguido de un par de gotas de DMF (precaución, desprendimiento de gas). La mezcla se agitó a ta durante 30 min y la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se secó adicionalmente a alto vacío. El cloruro de benzoílo en bruto se re-disolvió en diclorometano (70 mi). Se añadieron trietilamina (12,3 mi, 88,1 mmol, 2,5 equiv.), fenol (3,98 g, 42,3 mmol, 1 ,2 equiv.) y DMAP (0,43 g, 3,52 mmol, 0,1 equiv.). La mezcla se agitó a ta durante 1 h momento en el que el análisis por LC-MS mostró que se había consumido todo el MP. El disolvente se evaporó. El residuo se suspendió en EtOAc y el precipitado se retiró por filtración. Después, la solución orgánica se lavó con HCI 1 N (tres veces), H2O, NaHCO3 ac. sat. y salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. La purificación del residuo por cromatografía ultrarrápida Biotage proporcionó el compuesto S3-5 (10,05 g) en forma de un sólido de color blanquecino: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 2,42 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 6,97 (d, J = 0,9 ??,? ?), 7,04 (d, J = 0,9 Hz, 1 H), 1,22-1,27 (m, 3H), 7,41-7,45 (m, 2H); MS (electronebulización) m/z 319,0 (M-H), calculado para Ci5H12Br03 319,0.
Síntesis de S3-6.
A una solución del compuesto S3-5 (2,52 g, 7,87 mmol) en CH3CN (16 mi) se le añadió en una porción NCS (1 ,104 g, 8,27 mmol, 1 ,05 equiv.). La mezcla resultante se calentó a 60°C durante 45 h. El disolvente se evaporó. El residuo se suspendió en Et2Ü (400 mi), se lavó con NaOH 1 N, H2O y salmuera, se secó sobre Na2S04 y se concentró para proporcionar 2,76 g del compuesto S3-6 en forma de un sólido de color blanco. Este material se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 2,51 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 7,13 (s, 1 H), 7,22-7,28 (m, 3H), 7,44 (dd, J = 1,8, 7,8 Hz, 2H); MS (electronebulización) m/z 353,0 (M-H), calculado para deHuBrCIC^ 352,97.
Síntesis de S3-7.
El compuesto S3-6 (2,76 g, 7,76 mmol) se disolvió en diclorometano anhidro (78 mi) y se añadió una solución de tribromuro de boro (1 ,0 M en diclorometano, 7,76 mi, 7,76 mmol, 1 ,0 equiv.) a -78°C. La solución de color amarillo resultante se agitó a -78°C durante 15 min y después a 0°G durante 30 min, después de lo cual se añadió NaHC03 ac. sat. La mezcla se agitó a ta durante 10 min y se extrajo tres veces con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2S04 y concentraron para proporcionar 2,69 g del intermedio fenol en forma de un sólido de color blanquecino. Este material se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 2,83 (s, 3H), 7,19 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,27 (s, 1 H), 7,32 (dd, J = 7,8, 7,8 Hz, 1 H), 7,46 (dd, J = 7,8, 7,8 Hz, 2H); MS (electronebulización) m/z 339,0 (M-H), calculado para C14H9BrCI03 338,95.
El fenol anterior (2,65 g, 7,76 mmol) se disolvió en acetona (40 mi) y se añadió K2CO3 (2,14 g, 15,5 mmol, 2 equiv.) seguido de bencilbromuro (0,97 mi, 8,15 mmol, 1 ,05 equiv.). Después de agitar durante una noche a ta, la solución se filtró a través de un lecho de Celite. La torta sólida se lavó adicionalmente con tres partes de EtOAc. La solución orgánica combinada se concentró. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida Biotage para producir 2,97 g del compuesto S3-7 en forma de un sólido de color blanco: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) ¿ 2,51 (s, 3H), 5,11 (s, 2H), 7,05 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,19-7,26 (m, 2H), 7,33-7,43 (m, 7H); MS (electronebulización) m/z 429,0 (M-H), cale, para C2iH 5BrCI03 429,00.
Síntesis de S3-8.
A una solución del compuesto S3-7 (1 ,98 g, 4,59 mmol) en THF anhidro (23 mi) se le añadió gota a gota /'-PrMgCI.LiCI (1 ,2 M en THF, 7,65 mi, 9,18 mmol, 2 equiv.) a -78°C en una atmósfera de N2. Después de 10 min, la temperatura se elevó a 0°C. Después de agitar durante 1 h más a 0°C, se añadió DMF (1 ,80 mi, 22,9 mmol, 5 equiv.). La agitación se mantuvo durante 30 min a ta. La reacción se interrumpió mediante la adición de NH4CI acuoso saturado. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces adicionalmente con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. La purificación del residuo por cromatografía ultrarrápida Biotage produjo el compuesto S3-8 (1 ,45 g) en forma de un sólido de color blanco: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) ¿ 2,51 (s, 3H), 5,19 (s, 2H), 7,05 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,25-7,27 (m, 1 H), 7,33-7,44 (m, 8H) 10,51 (s, 1 H); MS (electronebulización) m/z 379,1 (M-H), cale, para C22Hi6CI04 379,08.
Síntesis de S3-9.
El compuesto S3-8 (2,51 g, 6,59 mmol) se suspendió en metanol (25 mi) y se añadió en varias porciones borohidruro sódico (373 mg, 9,88 mmol). Después de que cesara el desprendimiento de gas y se consiguiera una solución completa, la mezcla de reacción se inactivo con NaHCO3 (solución acuosa saturada) y se extrajo con EtOAc (3 x ). Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Esto proporcionó 2,49 g (99%) de S3-9 en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,46-7,32 (m, 7 H), 7,27-7,21 (m, 1 H), 7,13 (s, 1 H), 7,07 (d, J = 8,7 Hz, 2 H), 5,16 (s, 2 H), 4,77 (d, J = 6,4 Hz , 2 H), 2,46 (s, 3 H), 2,06 (t, J = 6,4 Hz, 1 H); MS (ESI) m/z 405,15 (M+H).
Síntesis de S3-10.
Se añadió paladio al 10% sobre carbono (Degussa, 50 mg) a una solución del compuesto S3-9 (1 ,85 g, 4,84 mmol) en EtOAc (10 mi), metanol (10 mi) y clorobenceno (1 ,5 mi) y se introdujo una atmósfera de hidrógeno. Después de 5 horas, la mezcla de reacción se purgó con nitrógeno y se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró a presión reducida, produciendo el intermedio fenol en forma de un sólido de color blanco. El intermedio se disolvió en ácido acético (15 mi) y se añadió acetato sódico (0,595 g, 7,26 mmol). Se añadió gota a gota bromo (0,372 mi, 7,26 mmol) durante ~3 min. Después de 10 min, la mezcla de reacción se inactivo con Na2S2O3 (solución acuosa al 5%) y se diluyó con EtOAc. Las capas se separaron, y la capa de EtOAc se lavó con agua (3 x) y salmuera (1 x). Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material se disolvió en acetona (30 mi) y se añadieron K2C03 (1 ,34 g, 9,68 mmol) y bromuro de bencilo (0,633 mi, 5,32 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 50°C durante una noche. Después de la refrigeración a ta, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con agua (3 x) y salmuera (1 x).
Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material se purificó por cromatografía en columna (columna Biotage 50 g, gradiente de EtOAc del 7 al 60% en hexano), produciendo 2,03 g (91 %) de S3-10, 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,51-7,47 (m, 2 H), 7,41-7,31 (m, 5 H), 7,30-7,23 (m, 1 H), 7,03 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 5,12-5,05 (m, 4 H), 2,48 (s, 3 H), 2,18 (t, J = 7,1 Hz, 1 H); MS (ESI) m/z 482,99, 484,99, 486,99 (M+Na).
Síntesis de S3-11.
Se añadió una solución de cloruro de i-propil magnesio/cloruro de litio (Chemetall Foote Corporation, solución 1 ,2 M en THF, 4,4 mi, 5,3 mmol) a una solución a -78°C del compuesto S3-10 (490 mg, 1 ,06 mmol) en THF (10 mi). La mezcla de reacción se dejó calentar a 0°C durante 1 hora. Se añadió paraformaldehído (318 mg, 10,6 mmol) y la reacción se calentó a 40°C. Después de 1 hora, la mezcla de reacción se inactivo con cloruro de amonio (solución acuosa saturada) y se extrajo con EtOAc (3 x). Los extractos combinados se lavaron con agua (3 x) y salmuera (1 x), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material se purificó por cromatografía en columna (columna Biotage 25 g, gradiente EtOAc del 7 al 80% en hexano), produciendo 238 mg (54%) de S3-11 en forma de un aceite espeso. Rf - 0,22 en EtOAc al 30% en hexano; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,45-7,30 (m, 7 H), 7,28-7,22 (m, 1 H), 7,09 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 5,09 (s, 2 H), 5,00 (d, J = 6,4 Hz, 2 H), 4,80 MS (ESI) m/z 435,12 (M+Na).
Síntesis de S3-12.
A una solución de S3-1 1 (2,76 g, 6,67 mmol, 1 equiv.) en 1 ,2-dicloroetano (25 mi) se le añadieron cloruro de tionilo (1 ,93 mi, 26,6 mmol, 4 equiv.) y cloruro de tetrabutilamonio (154,3 mg, 0,67 mmol, 0,1 equiv.). El recipiente de reacción se cerró herméticamente y la mezcla se calentó a 80°C durante 2 h y después se concentró a presión reducida. La purificación del aceite en bruto resultante por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (Biotage, 100 g, gradiente de EtOAc del 2 al 18% de hexano) proporcionó 2,47 g de S3-12 (82%) en forma de un sólido ceroso de color blanco: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,48-7,37 (m, 7 H), 7,35-7,324 (m, 1 H), 7,10-7,06 (m, 2 H), 5,15 (s, 2 H), 4,96 (s, 2 H), 4,83 (s, 2 H), 2,53 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 447,28, 449,30 (M+H).
Síntesis de S3-13-1.
El compuesto S3-12 (150 mg, 0,334 mmol), t-amilamina (0,041 mi, 0,35 mmol) y diisopropiletilamina (0,233 mi, 1 ,34 mmol) se calentaron a 60°C en 1 ,2-dimetoxietano (0,8 mi). Después de 1 hora, la mezcla de reacción se calentó a 80°C durante una noche. Después de la refrigeración a ta, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (20 mi) y se lavó con NaHCO3 (solución saturada acuosa, 2 x) y salmuera (1 x). Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material se purificó por cromatografía en columna (columna Biotage 25 g, del 2 al 20% de EtOAc en un gradiente de hexano), produciendo 62,8 mg (40%) del producto, Rf = 0,42 en EtOAc al 15% en hexano; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,45-7,30 (m, 7 H), 7,28-7,20 (m, 1 H), 7,01 (d, J = 7,8 Hz, 2 H), 5,05 (s, 2 H), 4,15-4,04 (m, 4 H), 2,43 (s, 3 H), 1 ,49 (c, J = 7,8 Hz, 2 H), 1 ,07 (s, 6 H), 0,91 (t, 7,8 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 464,24, 466,24 (M+H).
Los siguientes compuestos se prepararon mediante métodos similares a aquellos descritos para S3-13-1.
Ejemplo 26. Síntesis de S3-13-2.
Rf = 0,19 en EtOAc al 15% en hexano; MS (ESI) m/z 450,21 , 452,20 (M+H). Ejemplo 27. Síntesis de S3-13-3..
R = 0,18 en EtOAc al 15% en hexano; MS (ESI) m/z 436,21 , 438,19 (M+H). Ejemplo 28. Síntesis de S3-13-4.
Rf = 0,22 en EtOAc al 15% en hexano; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,42- 7,28 (m, 7 H), 7,26-7,18 (m, 1 H), 7,01 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 5,05 (s, 2 H), 4,15-4,00 (m, 4 H), 2,43 (s, 3 H), 1 ,74-1 ,62 (m, 1 H), 1 ,50-1 ,36 (m, 2 H), 1 ,12 (d, J = 6,4 Hz, 3 H), 0,94 (t, 7,6 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 450,26, 452,26 (M+H).
Ejemplo 29. Síntesis de S3-13-5.
Rf = 0,22 en EtOAc al 15% en hexano; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,44- 7,30 (m, 7 H), 7,28-7,20 (m, 1 H), 7,03 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 5,07 (s, 2 H), 4,10 (s, 2 H), 4,04 (s, 2 H), 2,45 (s, 3 H), 1 ,74-1 ,62 (m, 1 H), 1 ,50-1 ,38 (m, 2 H), 1 ,14 (d, J = 6,4 Hz, 3 H), 0,96 (t, 7,6 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 450,21 , 452,21 (M+H).
Ejemplo 30. Síntesis de 4-(benciloxi)-2-isopropil-6-met¡l-7- (trifluorometil)isoindolina-5-carboxilato de fenilo (S4-10-1 ).
Síntesis de S4-1.
Se añadieron el compuesto S3-5 (20 g, 62,5 mmol, 1 ,0 equiv.), complejo de 2,4,6-trivinil-ciclotriboroxano-piridina (7,8 g, 31 ,25 mmol, 0,50 equiv.), Pd(PPh3)4 (2,2 g, 1 ,88 mmol, 0,030 equiv.) y K2C03 (17,25 g, 125 mmol, 2,0 equiv.) a un recipiente en 1 ,4-dioxano:H2O (3:1 , V:V). La mezcla se burbujeó con N2 para retirar 02 durante 6 veces. La mezcla se calentó a reflujo durante 19 h. La mezcla se concentró. El residuo se repartió entre EtOAc y agua. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a sequedad. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con (éter de petróleo:EtOAc = 200:1? 100:1? 50:1 ) para producir 14,8 g del compuesto S4-1 (88%) en forma de un sólido de color amarillo claro.
Síntesis de S4-2.
Una corriente enriquecida en ozono de oxígeno se burbujeó a través de una solución fría (-78°C) del compuesto S4-1 (21 g, 78,3 mmol, 1 ,0 equiv.) en CH2CI2 anhidro y la reacción se controló por TLC hasta que el material de partida se consumió. La solución se purgó con argón a -78°C durante 10 min para retirar el exceso de 03. CH3SCH3 (50 mi) se añadió en la mezcla de reacción y se agitó durante 1 hora desde -78°C hasta 25°C. La mezcla de reacción se concentró. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluído con (éter de petróleo: EtOAc = 100:1 ? 50: -» 30:1 ) para producir 13 g del compuesto 4-2 (62%) en forma de un sólido de color amarillo claro.
Síntesis de S4-3.
El compuesto S4-2 (1 ,8 g, 6,62 mmol, 1 equiv.) se disolvió en HOAc. A la solución se le añadió gota a gota bromo (1 ,6 mi, 26,5 mmol, 4 equiv.). La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a ta. La mezcla se concentró. El residuo se extrajo con EtOAc y NaHCC>3 saturado. La capa orgánica se lavó con salmuera y agua a su vez, se secó sobre Na2SO4 y se concentró a sequedad. Para proporcionar 1 ,9 g del compuesto S4-3 en forma de un sólido de color amarillo claro.
Síntesis de S4-4.
Se añadió BBr3 (4,9 g, 1 ,9 mi, 19,5 mmol, 1 ,5 equiv.) a una solución de CH2CI2 (30 mi) de S4-3 (3,5 g, 13,0 mmol, 1 ,0 equiv.) a -78°C. La reacción se agitó desde -78°C a 25°C durante 1 ,5 h, se interrumpió con NaHCO3 saturado y la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados de EtOAc se secaron (Na2SO4) y se concentraron para producir 3,3 g del intermedio fenol.
Se añadieron K2CO3 (3,6 g, 26,0 mmol, 2,0 equiv.) y BnBr (4,2 g, 26,0 mmol, 2,0 equiv.) a una solución del fenol en bruto anterior (3,3 g, 13,0 mmol, 1 ,0 equiv.) en DMF (15 mi). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 2 h. La mezcla de reacción se filtró y se lavó con EtOAc. A la misma se le añadió agua (150 mi) y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na2S04 y se concentró. El compuesto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluído con (éter de petróleo :EtOAc= 100:1? 50:1 ) para producir 3,5 g del compuesto S4-4 (62% en 3 etapas) en forma de un sólido de color amarillo claro.
Síntesis de S4-5.
S4-5 Una solución de DMF (50 mi) del compuesto S4-4 (5 g, 1 1 ,8 mmol, 1 ,0 equiv.), Me02CCF2S02F (11 ,3 g, 59 mmol, 5,0 equiv.) y Cul (4,5 g, 23,6 mmol, 2,0 equiv.) en un tubo cerrado herméticamente se calentó a 100°C durante 20 h. La mezcla se filtró y el sólido se lavó con EtOAc. La solución se concentró y se repartió con EtOAc y agua. La capa orgánica se separó y se secó sobre Na2SO4, se concentró para dar 7 g del compuesto en bruto S4-5 en forma de un aceite pardo.
Síntesis de S4-6.
A una suspensión agitada de S4-5 (3,24 g, 7,81 mmol, 1 equiv.) en metanol (40 mi) se añadió borohidruro sódico (389 mg, 10,2 mmol, 1 ,3 equiv.). El desprendimiento de gas fue evidente; la solución fue homogénea después de 5 min. Después de 2 h la mezcla de reacción se vertió en una solución acuosa saturada NH4CI (95 mi), agua (5 mi) y se extrajo con EtOAc (2 x 80 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtraron y se concentraron a presión reducida. MS (ESI) m/z 415,39 (M-H).
Síntesis de S4-7.
S4-7 El compuesto S4-6 (en bruto, 7,81 mmol) se disolvió en metanokdioxano (40 mi, 5:1 ). Se añadió paladio sobre carbono (10%, 160 mg) y el recipiente se equipó con un tapón de goma, se evacuó, se rellenó con gas hidrógeno tres veces y después se agitó a temperatura ambiente en un globo de hidrógeno. Después de 2 h, se añadieron 100 mg más de catalizador de paladio y se repitió el procedimiento de evacuación y de relleno. Después de 16 h, se añadieron 500 mg más de catalizador de paladio y en el recipiente de reacción, los procedimientos de evacuación y relleno se repitieron y la solución desgasificó con hidrógeno burbujeante durante 5 min. Después de 3 h más, la suspensión se filtró a través de Celite para retirar el catalizador de paladio y se concentró a presión reducida. El aceite resultante se suspendió en ácido acético (30 mi). Después de la adición de acetato sódico (958 mg, 1 1 ,7 mmol, 1 ,5 equiv.) la solución se volvió homogénea. Se añadió bromo gota a gota (602 µ?_, 11 ,7 mmol, 1 ,5 equiv.) durante seis minutos. Después de 1 h, se añadió una solución de tiosulfato sódico (acuosa al 5%, 40 mi) y la solución se agitó vigorosamente durante 15 minutos. La solución de reacción se extrajo con EtOAc (2 x 45 mi) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (2 x 20 mi) y salmuera (20 mi), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. A este intermedio en bruto en acetona (35 mi), se añadieron bromuro de bencilo (1 ,02 mi, 8,59 mmol, 1 ,1 equiv.) y carbonato potásico (2,16 g, 15,6 mmol, 2 equiv.). El matraz se equipó con un condensador de reflujo y se calentó a 50°C durante 6 h. La solución de reacción se diluyó con agua (30 mi) y se extrajo con EtOAc (2 x 100 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron ( a2S0 ), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La purificación del aceite en bruto resultante por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (Biotage, 100 g, gradiente de EtOAc del 7 al 55% en hexano) proporcionaron 2,13 g del compuesto intermedio 8-bencilalcohol-9-bromo S4-7 (55%, 4 etapas) en forma de un sólido ceroso de color amarillo: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,53-7,48 (m, 2 H), 7,42-7,32 (m, 5 H), 7,29-7,24 (m, 1 H), 7,10-6,95 (m, 2 H), 5,14 (s, 2 H), 5,05-4,95 (m, 4 H), 2,58-2,53 (m, 3 H), 2,20-2,13 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 493,39, 495,27 (M-H).
Síntesis de S4-8.
S4-8 El compuesto S4-7 (2,13 g, 4,30 mmol, 1 equiv.) se secó por destilación azeotrópica tres veces a partir de tolueno y se secó al vacío durante 18 h. A una solución de este bromuro en THF (35 mi) en N2 a -50°C se le añadió complejo cloruro de isopropil magnesio-cloruro de litio (solución 1 ,2 M en THF, 17,9 mi, 21 ,5 mmol, 5 equiv.) gota a gota durante 10 minutos. La solución de color amarillo oscuro resultante se dejó calentar a 0°C durante 1 h. Se añadió paraformaldehído (1 ,27 g, 43,1 mmol, 10 equiv.) en forma de un sólido a 0°C, el matraz de reacción se equipó con un condensador de reflujo y el recipiente se calentó a 40°C en un baño de aceite durante 2 h. Después de un periodo de refrigeración, la suspensión resultante se vertió en una solución de NH4CI acuosa saturada (40 mi) y agua (15 mi) y se extrajo con EtOAc (2 x 90 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (30 mi), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La purificación del aceite en bruto resultante por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (Biotage, 100 g, gradiente de EtOAc del 6 al 55% en hexano) proporcionaron 1 ,47 g de S4-8 (76%) en forma de un sólido de color blanco: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,48-7,35 (m, 7 H), 7,29-7,23 (m, 1 H), 7,10-7,03 (m, 2 H), 5,14 (s, 2 H), 4,92-4,83 (m, 4 H), 2,96 (t, J = 6,7 Hz, 1 H), 2,78 (t, J = 6,7 Hz, 1 H), 2,62-2,55 (m, 3 H): MS (ESI) m/z 445,38 (M-H).
Síntesis de S4-9.
S4-9 A una solución de S4-8 (1 ,47 g, 3,29 mmol, 1 equiv.) en 1 ,2-dicloroetano (13 mi) se le añadieron cloruro de tionilo (956 µ?, 13,2 mmol, 4 equiv.) y cloruro de tetrabutilamonio (75 mg, 0,33 mmol, 0,1 equiv.). El recipiente de reacción se cerró herméticamente, la mezcla se calentó a 80°C durante 3 h y después se concentró a presión reducida. La purificación del aceite en bruto resultante por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice ((Biotage, 50 g, gradiente de EtOAc del 2 al 20% en hexano) proporcionaron 1 ,41 g de S4-9 (89%) en forma de un sólido ceroso de color blanco: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,48-7,35 (m, 7 H), 7,29-7,23 (m, 1 H), 7,10-7,03 (m, 2 H), 5,20 (s, 2 H), 4,94-4,86 (m, 4 H), 2,64-2,58 (m, 3 H); MS (ESI) m/z 481 ,31 , 483,30 (M+H).
Síntesis de S4-10-1.
A una solución de S4-9 (862 mg, 1 ,78 mmol, 1 equiv.) en 1 ,2-dimetoxietano (10 mi) se añadió DIEA (930 µ? , 5,34 mmol, 3 equiv.) e isopropilamina (152 µ?, 1 ,78 mmol, 1 equiv.). La reacción se cerró herméticamente y se calentó a 1 10°C durante 2,5 h. La solución se enfrió, se añadieron 85 µ? más de isopropilamina (0,99 mmol, 0,55 equiv.) y la reacción se reemplazó en el baño de calentamiento. Después de 15 h más, la solución se concentró a presión reducida. La purificación del aceite resultante por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (Biotage 100 g, gradiente de EtOAc del 5 al 40% en hexanos) proporcionó 696 mg de S4-10-1 (83%) en forma de un sólido de color blanco: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,42-7,29 (m, 7 H), 7,23-7,19 (m, 1 H), 7,00-6,96 (m, 2 H), 5,10 (s, 2 H), 4,13 (s, 2 H), 4,02 (s, 2 H), 2,81-2,72 (m, 1 H), 2,53-2,48 (m, 3 H), 1 ,17 (d, J = 6,1 Hz, 6 H): MS (ESI) m/z 468,39 (M-H).
Los siguientes compuestos se prepararon a partir de S4-9 y las aminas correspondientes aminas mediante métodos similares a aquellos descritos para S4-10-1.
Ejemplo 31. S4-10-2. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,45-7,32 (m, 7 H), 7,28-7,21 (m, 1 H), 5,13 (s, 2 H), 4,16 (m, 2 H), 4,05 (s, 2 H), 2,65-2,60 (s, 1 H), 2,53 (s, 3 H), 1 ,75-1 ,62 (m, 1 H), 1 ,51-1 ,40 (m, 1 H), 1 ,14 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,96 (t, J = 7,3 Hz, 3 H): MS (ESI) m/z 482,47 (M-H).
Ejemplo 32. S4-10-3.
H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,42-7,31 (m, 7 H), 7,29-7,21 (m, 1 H), 7,03-6,98 (m, 2 H), 5,13 (s, 2 H), 4,15 (s, 2 H), 4,05 (s, 2 H), 2,66-2,59 (m, 1 H), 2,53 (s, 3 H), 1 ,75-1 ,62 (m, 1 H), 1 ,51-1 ,40 (m, 1 H), 1 ,14 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,96 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 482,48 (M-H).
Ejemplo 33. S4-10-4.
H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,42-7,31 (m, 7 ?), 7,29-7,19 (m, 1 ?), 7,02-6,96 (m, 2 ?), 5,10 (s, 2 ?), 4,20 (s, 2 ?), 4,07 (s, 2 ?), 2,51 (s, 3 ?), 1 ,17 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 482,48 (M-H).
Ejemplo 34. S4-10-5. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,45-7,31 (m, 7 H), 7,28-7,19 (m, 1 H), 7,02-6,96 (m, 2 H), 5,13 (s, 2 H), 4,25 (s, 2 H), 4,19 (s, 2 H), 2,53 (s, 3 H), 2,07-1 ,98 (m, 1 H), 0,60-0,50 (m, 4 H); MS (ESI) m/z 466,43 (M-H).
Ejemplo 35. S4-10-6. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,45-7,31 (m, 7 H), 7,28-7,21 (m, 1 H), 7,02-6,97 (m, 2 H), 5,12 (s, 2 H), 4,11 (s, 2 H), 4,03 (s, 2 H), 2,68 (t, J = 8,6 Hz, 2 H), 2,53 (s, 3 H), 1 ,65-1 ,55 (m, 2 H), 0,99 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m z 481 ,28 (M-H).
Ejemplo 36. Preparación de 4-(benciloxi)-7-metoxi-6-metil-2-terc-pentilisoindolina-5-carboxilato de fenilo (S5-9-1 ).
Síntesis de S5-1.
Se añadió BBr3 (solución 1 ,0 M en CH2CI2, 28,0 mi, 28,0 mmol) a una solución del compuesto S3-5 (8,98 g, 28,0 mmol) en CH2CI2 (100 mi) a -78°C. La mezcla de reacción resultante se agitó a -78°C durante 20 min y a 0°C durante 15 min. Se añadió lentamente aHC03 (solución saturada acuosa, 120 mi). La mezcla resultante se agitó a ta durante 20 min y el CH2CI2 se evaporó. El residuo se extrajo con acetato de etilo (250 mi) y los extractos combinados se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material se purificó por recristalización en EtOAc/Hexanos para dar 6,76 g del producto deseado S5-1 en forma de un sólido de color blanco. Las aguas madre se concentraron y se purificaron por cromatografía en columna (gradiente de acetato de etilo al 2-10% en hexanos) para proporcionar 973 mg más de producto (rendimiento combinado del 90%). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 11 ,13 (s, 1 H), 7,47-7,43 (m, 2 H), 7,33-7,29 (m, 1 H), 7,19-7,16 (m, 2 H), 7,08 (d, J = 1 ,8 Hz, 1 H), 6,96 (d, J = 1 ,8 Hz, 1 H), 2,66 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 305,05, 307,05 (M-H).
Síntesis de S5-2.
Se añadió lentamente una solución de Phl(OAc)2 (3,77 g, 1 1 ,72 mmol) en metanol (20 mi) a una solución de S5-1 (1 ,71 g, 5,58 mmol) en una mezcla de metanol (30 mi) y 1 ,4-dioxano (10 mi) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a ta durante 17 h. A la mezcla de reacción se le añadió ácido acético (6 mi). Se añadió polvo de cinc (1 ,09 g, 16,74 mmol) (exotérmico) y la mezcla de reacción se agitó a ta durante 20 min. La mezcla de reacción se filtró a través de una capa de Celite y el Celite se lavó cuidadosamente con EtOAc (100 mi). El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se repartió entre EtOAc (120 mi) y solución sat. de NaHCOs/salmuera. La capa orgánica se separó y se secó (MgS04). La solución secada se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (gradiente de acetato de etilo del 0-4%-hexanos) para proporcionar 763 mg (41 %) del producto deseado S5-2. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 10,70 (s, 1 H), 7,47-7,43 (m, 2 H), 7,33-7,30 (m, 1 H), 7,20-7,17 (m, 2 H), 7,16 (s, 1 H), 3,75 (s, 3 H), 2,67 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 335,11 , 337,14 (M-H).
Síntesis de S5-3.
Se añadieron dicarbonato de di-terc-butilo (543 mg, 2,49 mmol) y 4-?/,?/-dimetilamino-piridina (28 mg, 0,226 mmol) a una solución de S5-2 (763 mg, 2,26 mmol) en CH2CI2 (20 mi). La mezcla resultante se agitó durante 20 min a ta y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (gradiente de acetato de etilo al 0-5%-hexanos) para proporcionar 783 mg (79%) del compuesto S5-3 en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,45-7,41 (m, 2 H), 7,38 (s, 1 H), 7,30-7,26 (m, 1 H), 7,24-7,22 (m, 2 H), 3,81 (s, 3 H), 2,47 (s, 3 H), 1 ,43 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 435,14, 437,15 (M-H).
Síntesis de S5-4.
Se añadieron gota a gota cloruro de isopropilmagnesio/cloruro de litio (Chemetall Foote Corporation, solución 1 ,2 M en THF, 0,547 mi, 0,657 mmol) a una solución del compuesto S5-3 (143,6 mg, 0,328 mmol) en THF (3,3 mi) a 0°C. La mezcla de reacción de color amarillo resultante se agitó después a 0°C durante 1 h. Se añadió DMF (0,127 mi, 1 ,64 mmol) y la mezcla resultante se agitó a 0°C durante 10 min y después a ta durante 20 min. Se añadieron NH4CI saturado acuoso y salmuera. La mezcla resultante se extrajo con EtOAc (50 mi), los orgánicos se secaron (MgSO- , se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto en bruto S5-4 se usó directamente en la siguiente etapa. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 10,38 (s, 1 H), 7,61 (s, 1 H), 7,46-7,42 (m, 2 H), 7,32-7,28 (m, 1 H), 7,26-7,24 (m, 2 H), 3,91 (s, 3 H), 2,46 (s, 3 H), 1 ,45 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 385,24 (M-H).
Síntesis de S5-5.
El compuesto S5-4 (3,09 g, 8 mmol) se disolvió en diclorometano seco (20 mi). Se añadió lentamente TFA (10 mi) a 0°C. La solución se agitó a 10°C durante 1 h. El análisis por LC-MS mostró el consumo completo del material de partida. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El material se disolvió en ácido acético (30 mi) y se añadió acetato sódico (1 ,31 g, 16,0 mmol). Se añadió bromo (0,49 mi, 9,6 mmol) mediante una jeringa a 10°C. Después de agitar a ta durante 10 min, el análisis por LC/MS indicó que el material de partida se había consumido. La mayor parte del ácido acético se retiró a presión reducida. El material se diluyó con EtOAc, se lavó con agua (3 x 50 mi) y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida, esto proporcionó 3,23 g (rendimiento en bruto del 1 10%) del compuesto S5-5 en forma de un aceite de color naranja. MS (ESI) m/z 363,19, 365,21 (M-H).
Síntesis de S5-6.
Se añadió carbonato potásico (2,21 g, 16,0 mmol) a una solución del compuesto S5-5 (3,23 g, 8,0 mmol) en DMF (20 mi) y la mezcla de reacción se enfrió a 0°C en un baño de hielo. Se añadió gota a gota bromuro de bencilo (1 ,14 mi, 9,6 mmol). Después de 1 hora, el análisis por LC/MS indicó que el material de partida se consumió completamente. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (100 mi), se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida. El material se disolvió en metanol (50 mi) y se enfrió a 0°C para la adición de NaBH4 (0,355 g, 9,6 mmol). La reacción se agitó a 0°C durante 30 min momento en el que el análisis por LC/MS indicó que el material de partida se consumió completamente. La reacción se interrumpió con agua, y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se secaron (sulfato sódico) y concentraron a presión reducida. La cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (10:1 a 4:1 de hexanos/EtOAc) proporcionó 3,52 g (96%, 4 etapas) de S5-6. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,52-7,48 (m, 2 H), 7,40-7,32 (m, 5 H), 7,27-7,22 (m, 1 H), 7,07-7,03 (m, 2 H), 5,10 (s, 2 H), 4,90 (s. 2 H), 3,85 (s, 3 H), 2,37 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 479,26, 481 ,25 (M+Na).
Síntesis de S5-7.
Se añadió cloruro de isopropilmagnesio/cloruro de litio (Chemetall Foote Corporation, solución 1 ,2 M en THF, 31 ,6 mi, 37,9 mmol) a una solución del compuesto S5-6 (3,47 g, 7,58 mmol) en THF (100 mi) en atmósfera de nitrógeno a 0°C. La solución resultante se calentó a ta y se agitó durante 30 min. Después de la solución se enfrió a 0°C, DMF (5,84 mi, 75,8 mmol) se añadió lentamente mediante una jeringa. La reacción se calentó a ta durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (200 mi), se lavó con agua y salmuera, y se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida. El material se disolvió en metanol (50 mi) y se enfrió a 0°C. NaBH4 (0,42 g, 1 1 ,4 mmol) se añadió, y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 30 min. La reacción se interrumpió con agua y se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados de EtOAc se secaron (sulfato sódico) y se concentraron a presión reducida para dar 3,02 g de S5-7 en bruto. El material se usó sin purificación adicional. MS (ESI) m/z 407,46 (M-H).
Síntesis de S5-8.
El compuesto S5-7 (961 mg, 2,35 mmol) se disolvió parcialmente en 1 ,2-dicloroetano (10 mi) y se añadió cloruro de tetrabutilamonio (64,0 mg, 0,23 mmol). Se añadió cloruro de tionilo (0,683 mi, 9,41 mmol) lentamente, formando una solución transparente. La mezcla de reacción se calentó a 80°C en un tubo cerrado herméticamente y se agitó durante 1 hora 30 min. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (50:1 a 20:1 de hexanos/EtOAc). Esto proporcionó 1 ,40 g (80%, 3 etapas) del compuesto S5-8, 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,50-7,43 (m, 2 H), 7,43-7,32 (m, 5 H), 7,29-7,22 (m, 1 H), 7,1 1 -7,06 (m, 2 H), 5,15 (s, 2 H), 4,89 (s, 2 H), 4,86 (s, 2 H), 3,89 (d, J = 0,72 Hz, 3 H), 2,43 (d, J = 0,92 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 467,35 (M+Na).
Síntesis de S5-9-1.
Se añadieron diisopropiletilamina (2,39 mi, 13,73 mmol) y t-amilamina (0,294 mi, 2,52 mmol) a una solución del compuesto S5-8 (1 ,02 g, 2,29 mmol) en 1 ,2-dimetoxietano (15 mi). La mezcla de reacción se calentó a 1 10°C durante una noche en a tubo sellado. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (20:1 a 1 :1 de hexanos/EtOAc), proporcionando 623 mg (59%) del compuesto S5-9-1. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,42-7,38 (m, 2 H), 7,37-7,30 (m, 5 H), 7,23-7,19 (m, 1 H), 7,06-7,02 (m, 2 H), 5,02 (s, 2 H), 4,10 (s, 2 H), 4,03 (s, 2 H), 3,76 (s, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 1 ,86 (c, J = 7,3 Hz, 2 H), 1 ,08 (s, 6 H), 0,91 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 460,45 (M+H).
Los siguientes compuestos se prepararon a partir de S5-8 y las aminas correspondientes mediante métodos similares a aquellos descritos para S5-9-1 .
Ejemplo 37. S5-9-2.
Rf = 0,20 en EtOAc al 33% en Hexano; MS (ESI) miz 432,48 (M+H).
Ejemplo 38. S5-9-3.
MS (ESI) nVz 446,45 (M Ejemplo 39. S5-9-4.
MS (ESI) m/z 446,48 (M Ejemplo 40. S5-9-5.
R = 0,25 en EtOAc al 33% en Hexano; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,42-7,38 (m, 2 H), 7,37-7,28 (m, 5 H), 7,23-7,19 (m, 1 H), 7,06-7,01 (m, 2 H), 5,02 (s, 2 H), 4,10 (s, 2 H), 4,04 (s, 2 H), 3,75 (s, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 1 ,16 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 446,48 (M+H).
Ejemplo 41. S5-9-6.
MS (ESI) m/z 432,48 (M+H).
Ejemplo 42. S5-9-7.
R, = 0,31 en EtOAc al 3 ESI) m/z 472,51 (M+H).
Ejemplo 43. S6-1-1. una solución de S3-13-2 (221 mg, 0,491 mmol, 1 equiv.) dioxano:metanol: HCI 0,5 N en metanol (1 :1 :1 , 4 mi) se añadió paladio sobre carbono (10%, 146 mg). El recipiente se evacuó y se rellenó con gas hidrógeno tres veces, después se desgasificó con hidrógeno burbujeante durante 4 min y se agitó a temperatura ambiente en un globo de hidrógeno. Después de 16,5 h, se añadieron 80 mg más de catalizador de paladio y el procedimiento de evacuación y desgasificación se repitieron. Después de 4 h más, la suspensión de reacción se filtró a través de Celite para retirar el catalizador de paladio y se condensó a presión reducida. La purificación el aceite en bruto resultante por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (Silicicle, 25 g, del 1 al 8% de metanol en gradiente de diclorometano) proporcionó 1 12,6 mg del compuesto S6-1-1 (70%) en forma de un sólido ceroso de color blanco: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 11 ,42-11 ,10 (s a, 1 H), 7,37 (t, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,28-7,20 (m, 1 H), 7,11 (d, J = 7,4 Hz, 2 H), 6,66 (s, 1 H), 4,43-4,32 (m, 4 H), 2,61 (s, 3 H), 1 ,35 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 326,94 (M+H).
Ejemplo 44. S6-2-1.
A una solución de S6-1-1 (113 mg, 0,346 mmol, 1 equiv.) en ácido trifluoroacético (4 mi) a 0°C se añadió nitrato potásico (67,4 mg, 0,667 mmol, 1 ,92 equiv.). La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente en cuyo punto la solución se volvió de color naranja. Después de 30 min, el disolvente se retiró a presión reducida. A una solución de este aceite en bruto en metanol:THF (1 :1 , 2,5 mi) se añadió formaldehído (37% ac, 64 µ?, 0,87 mmol, 2,5 equiv.) y paladio sobre carbono (10%, 101 mg). El recipiente de reacción se evacuó y se rellenó con gas hidrógeno tres veces y la solución se agitó a temperatura ambiente en un globo de hidrógeno. Después de 18 h, la mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se concentró a presión reducida. Este aceite en bruto se disolvió en dimetilformamida (2 mi) y se añadieron diisopropiletilamina (241 µ?, 1 ,38 mmol, 4 equiv.), di-terc-butilcarbonato (226 mg, 1 ,04 mmol, 3 equiv.) y una cantidad catalítica de dimetilaminopiridina. La mezcla de reacción se puso en nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente. Después de 2 h, la solución de reacción se diluyó con bicarbonato sódico saturado acuoso (10 mi) y agua (30 mi) y se extrajo con EtOAc (2 x 30 mi). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron (Na2S04), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La purificación del aceite en bruto resultante por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (Silicicle, 12 g, del 5 al 30% EtOAc en gradiente de hexano) proporcionó 72 mg de S6-2-1 (44%) en forma de un sólido de color blanco: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,45-7,38 (m, 2 H), 7,29-7,20 (m, 3 H), 4,15 (s, 2 H), 3,93 (s, 3 H), 2,73 (s, 6 H), 2,40 (s, 3 H), 1,42 (s, 9 H), 1 ,19 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 467,47 (M-H).
Los siguientes compuestos se prepararon mediante métodos similares a aquellos descritos para S6-2-1.
Ejemplo 45. S6-2-2. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,45-7,35 (m, 2 H), 7,28-7,20 (m, 3 H), 4,08 (s, 2 H), 3,86 (s, 2 H), 2,88-2,80 (7 H), 2,40 (s, 3 H), 1 ,41 (s, 9 H), 1 ,19 (d, J = 4,9 Hz, 6 H); MS (ESI) m/z 455,01 (M+H).
Ejemplo 46. S6-2-3. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,45-7,38 (m, 2 H), 7,29-7,20 (m, 3 H), 4,09 (s, 2 H), 3,87 (s, 2 H), 2,73 (s, 6 H), 2,64-2,54 (m, 1 H), 2,40 (s, 3 H), 1 ,78-1 ,60 (m, 2 H), 1 ,42 (s, 9 H), 1 ,14 (d, J = 8,0 Hz, 3 H), 0,94 (t, J = 7,6 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 467,51 (M-H).
Ejemplo 47. S6-2-4. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,45-7,38 (m, 2 H), 7,29-7,20 (m, 3 H), 4,09 (s, 2 H), 3,86 (s, 2 H), 2,73 (s, 6 H), 2,64-2,54 (m, 1 H), 2,39 (s, 3 H), 1 ,78-1 ,60 (m, 2 H), 1 ,42 (s, 9 H), 1 ,14 (d, J = 8,0 Hz, 3 H), 0,94 (t, J = 7,6 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 467,55 (M-H).
Ejemplo 48. S6-2-5. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,49-7,35 (m, 2 H), 7,29-7,20 (m, 3 H), 4,13 (s, 2 H), 3,91 (S, 2 H), 2,73 (s, 6 H), 2,40 (s, 3 H), 1 ,59-1 ,48 (m, 2 H), 1 ,42 (s, 9 H), 1 ,09 (s, 6 H), 0,92 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 481 ,48 (M-H).
Ejemplo 49. Compuesto 102 Síntesis de S7-2-1.
Se preparó diisopropilamida de litio a -40°C a partir de una solución de n-butillitio (solución 2,5 M en hexano, 0,118 mi, 0,294 mmol) y diisopropilamina (0,0416 mi, 0,294 mmol) en THF (5 mi). La mezcla de reacción se enfrió a -78°C y TMEDA (0,114 mi, 0,762 mmol) se añadió seguido de la adición gota a gota de una solución del compuesto S1-11-1 (66,5 mg, 0,153 mmol) en THF (2 mi). Esto dio como resultado una solución de color naranja-roja. Después de 5 min, se añadió una solución de enona S7-1 (61 ,3 mg, 0,127 mmol) en THF (1 mi). Después de que se completara la adición, la mezcla de reacción se dejó calentar a -20°C durante 1 h. La reacción se interrumpió mediante la adición de cloruro de amonio (solución saturada acuosa) y se extrajo con EtOAc (2 x). Los extractos combinados se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material se purificó sobre un sistema Waters Autopurification equipado con una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 µ??, 19x50 mm; caudal, 20 ml/min; Disolvente A: H20 con HC02H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HC02H al 0,1 %; gradiente: 20?100% B; recolección de fracciones dirigida a masas], proporcionando 17,2 mg (17%) del producto deseado S7-2-1 en forma de un sólido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 16,0 (s, 1 H), 7,52-7,44 (m, 2 H), 7,42-7,26 (m, 8 H), 5,35 (s, 2 H), 4,92 (s, 2 H), 4,32-4,20 (m, 2 H), 4,06-3,90 (m, 3 H), 3,21 (dd, J = 15,6, 4,6 Hz, 1 H), 3,03-2,91 (m, 1 H), 2,58-2,36 (m, 9 H), 2,13 (d, J = 14,6 Hz, 1 H), 1 ,18 (s, 9 H), 0,82 (s, 9 H), 0,27 (s, 3 H), 0,12 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 822,51 (M+H).
Síntesis del Compuesto 102.
Compuesto 102 Se añadió HF acuoso (0,4 mi, 48%) a una solución de S7-2-1 (17,2 mg, 0,0209 mmol) en 1 ,4-dioxano (0,8 mi) en un vial plástico. Después de 4 h, la mezcla de reacción se vertió en una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua (15 mi). La mezcla se extrajo con EtOAc (3 x). Los extractos combinados de EtOAc se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material se disolvió en etanol (1 mi), 1 ,4-dioxano (1 mi) y 0,5 M HCI en Metanol (0,5 mi) y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~5 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno y la mezcla de reacción se agitó durante 2 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró a presión reducida. El material se purificó sobre un sistema Waters Autopurification equipado con una columna Phenomenex Polymerx 10 µ RP 100A [10 pm, 30 x 21 ,20 mm; caudal, 20 ml/min; Disolvente A: 0.05N HCI en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0?70% B; recolección de fracciones dirigida a masas]. Las fracciones con el PM deseado se recogieron y se liofilizaron para producir 8,7 mg (69%, 2 etapas) del producto deseado Compuesto 102 en forma de un sólido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCI) d 4,85 (c, J = 15,1 Hz, 2 H), 4,73 (s, 2 H), 4,16 (s, 1 H), 3,22-2,95 (m, 9 H), 2,36-2,24 (m, 2 H), 1 ,72-1 ,56 (m, 1 H), 1 ,53 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 530,35 (M+H).
Los siguientes compuestos se prepararon mediante métodos similares a los del Compuesto 102, sustituyendo la isoindolina apropiada S1-11, S2-1, S3-13, S4-10, S5-9, oS6-2 para S1 -11-1.
Ejemplo 50. Compuesto 101.
Compuesto 101 Se preparó a partir de S2-1-1, sólido de color amarillo: 1H RMN (400 MHz, CD3ODcon 1 gota de DCI) d 5,17 (d, J= 14,7 Hz, 1 H), 5,08 (d, J= 14,2 Hz, 1 H), 4,81 (d, J = 14,7 Hz, 1 H), 4,67 (d, J = 14,2 Hz, 1 H), 4,15 (s, 1 H), 3,52 (s, 2 H), 3,34-2,95 (m, 9 H), 2,38-2,22 (m, 2 H), 1,61 (c, J= 12,5 Hz, 1 H), 1,19 (s, 9 H); MS (ESI) miz 544,35 (M+H).
Ejemplo 51. Compuesto 150.
Compuesto 150 Se preparó a partir de S3-13-1, sólido de color amarillo: 1H RMN (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCI) d 4,94-4,67 (m, 4 H), 4,18 (s, 1 H), 3,18-2,95 (m, 9 H), 2,40-2,26 (m, 2 H), 1,91 (c, J = 7,3 Hz, 2 H), 1,63 (c, J = 12,4 Hz, 1 H), 1,48 (s, 6 H), 1,08 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 560,26, 562,27 (M+H).
Ejemplo 52. Compuesto 144.
Compuesto 144 Se preparó a partir de S3-13-2, sólido de color amarillo: 1H RMN (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCI) d 4,90-4,73 (m, 4 H), 4,16 (s, 1 H), 3,17-2,95 (m, 9 H), 2,41-2,24 (m, 2 H), 1 ,68-1 ,56 (m, 1 H), 1 ,53 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 546,20, 548,29 (M+H).
Ejemplo 53. Compuesto 149.
Compuesto 149 Se preparó a partir de S3-13-3, sólido de color amarillo: H RMN (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCI) d 5,05-4,95 (m, 2 H), 4,71 (d, J = 15,1 Hz, 1 H), 4,62 (d, J = 14,2 Hz, 1 H), 4,16 (s, 1 H), 3,50-3,42 (m, 2 H), 3,17-2,94 (m, 9 H), 2,42-2,24 (m, 2 H), 1 ,94-1 ,82 (m, 2 H), 1 ,63 (c, J = 12,8 Hz, 1 H), 1 ,07 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 532,23, 534,20 (M+H).
Ejemplo 54. Compuesto 1 10.
Compuesto 110 Se preparó a partir de S3-13-4, sólido: 1H RMN (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCI) d 4,98-4,86 (m, 2 H), 4,78 (d, J = 16,0 Hz, 1 H), 4,70 (d, J = 14,2 Hz, 1 H), 4,15 (s, 1 H), 3,70-3,57 (m, 1 H), 3,17-2,92 (m, 9 H), 2,43-2,24 (m, 2 H), 2,08-1 ,96 (m, 1 H), 1 ,79-1 ,56 (m, 2 H), 1 ,50-1 ,42 (m, 3 H), 1 ,08 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 546,21 , 548,23 (M+H).
Ejemplo 55. Compuesto 117.
Compuesto 117 Se preparó a partir de S3-13-5, sólido de color amarillo: H RMN (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCI) d 4,98-4,88 (m, 2 H), 4,84-4,64 (m, 2 H), 4,15 (s, 1 H), 3,70-3,57 (m, 1 H), 3,15-2,94 (m, 9 H), 2,43-2,24 (m, 2 H), 2,09-1 ,96 (m, 1 H), 1 ,77-1 ,55 (m, 2 H), 1 ,45 (d. J = 6,4 Hz, 3 H), 1 ,07 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 546,48, 548,48 (M+H).
Ejemplo 56. Compuesto 119.
Compuesto 119 Se preparó a partir de S5-9-1 , sólido de color amarillo: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,87 (s, 2 H), 4,71 (s, 2 H), 4,08 (s, 1 H), 3,76 (d, J = 4,1 Hz, 3 H), 3,27-3,19 (m, 1 H), 3,03 (s, 3 H), 2,95 (s, 3 H), 3,06-2,92 (m, 2 H), 2,37-2,18 (m, 2 H), 1 ,88 (c, J = 7,3 Hz, 2 H), 1 ,70-1 ,58 (m, 1 H), 1 ,47 (s, 6 H), 1 ,08 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 556,53 (M+H).
Ejemplo 57. Compuesto 138.
Compuesto 138 Se preparó a partir de S5-9-2: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,87 (s, 2 H), 4,69 (s, 2 H), 4,09 (s, 1 H), 3,76 (d, J = 3,2 Hz, 3 H), 3,27-3,19 (m, 1 H), 3,04 (s, 3 H), 2,96 (s, 3 H), 3,10-2,91 (m, 4 H), 2,36-2,18 (m, 2 H), 2,09-1 ,97 (m, 1 H), 1 ,77-1 ,57 (m, 2 H), 1 ,08 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 528,51 (M+H).
Ejemplo 58. Compuesto 145.
Compuesto 145 Se preparó a partir de S5-9-3: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,00-4,76 (m, 2 H), 4,59 (d, J = 14,2 Hz, 1 H), 4,12 (d, J = 3,3 Hz, 1 H), 3,76 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 3,66-3,55 (m, 1 H), 3,28-3,20 (m, 1 H), 3,10-2,91 (m, 9 H), 2,35-2,19 (m, 2 H), 2,09-1 ,97 (m, 1 H), 1 ,77-1 ,57 (m, 2 H), 1 ,46 (d, J = 6,4 Hz, 3 H), 1 ,08 (t, J = 7,1 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 542,54 (M+H).
Ejemplo 59. Compuesto 148.
Se preparó a partir de S5-9-4: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,00-4,76 (m, 2 H), 4,58 (d, J = 14,2 Hz, 1 H), 4,10 (s, 1 H), 3,75 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 3,64-3,55 (m, 1 H), 3,27-3,19 (m, 1 H), 3,09-2,90 (m, 9 H), 2,35-2,19 (m, 2 H), 2,09-1 ,95 (m, 1 H), 1 ,77-1 ,57 (m, 2 H), 1 ,45 (dd, J = 6,4, 3,7 Hz, 3 H), 1 ,07 (t, J = 7,2 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 542,52 (M+H).
Ejemplo 60. Compuesto 125.
Se preparó a partir de S5-9-5: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,87 (s, 2 H), 4,70 (s, 2 H), 4,09 (s, 1 H), 3,76 (d, J = 3,2 Hz, 3 H), 3,27-3,19 (m, 1 H), 3,04 (s, 3 H), 2,96 (s, 3 H), 3,10-2,91 (m, 2 H), 2,36-2,18 (m, 2 H), 1 ,70-1 ,58 (m, 1 H), 1 ,53 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 542,56 (M+H).
Ejemplo 61. Compuesto 107.
Se preparó a partir de S1-11-2: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,99-4,94 (m, 1 H), 4,88-4,82 (m, 1 H), 4,10 (s, 1 H), 3,97-3,92 (m, 1 H), 3,90-3,85 (m, 1 H), 3,25-3,16 (m, 1 H), 3,15-2,92 (m, 11 H), 2,41-2,28 (m, 1 H), 2,28-2,17 (m, 1 H), 1 ,72-1,59 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 520,24 (M+H).
Ejemplo 62. Compuesto 134.
Compuesto 134 Se preparó a partir de S1-11-3: H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,07-4,92 (m, 1 H), 4,80-4,55 (m, 1 H), 4,10 (s, 1 H), 3,85-3,75 (m, 2 H), 3,75-3,65 (m, 2 H), 3,46 (s, 3 H), 3,23-3,14 (m, 1 H), 3,13-2,92 (m, 9 H), 2,39-2,19 (m , 2 H), 1 ,70-1 ,56 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 532,24 (M+H).
Ejemplo 63. Compuesto 121.
Compuesto 121 Se preparó a partir de S1-11-4: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,78-4,68 (m, 1 H), 4,63-4,51 (m, 1 H), 4,08 (s, 1 H), 3,38-3,34 (m, 2 H), 3,23-3,14 (m, 1 H), 3,14-2,89 (m, 10 H), 2,41-2,28 (m, 1 H), 2,25-2,13 (m, 2 H), 1 ,72-1 ,58 (m, 1 H), 1 ,11 (d, J = 6,7 Hz, 6 H); MS (ESI) m/z 530,19 (M+H).
Ejemplo 64. Compuesto 104.
Se preparó a partir de S1-11-5: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,08-4,70 (m, 3 H), 4,69-4,58 (m, 1 H), 4,37-4,27 (m, 1 H), 4,09 (s, 1 H), 4,01-3,92 (m, 1 H), 3,91-3,82 (m, 1 H), 3,67-3,57 (m, 1 H), 3,53-3,43 (m, 1 H), 3,23-3,14 (m, 1 H), 3,14-2,92 (m, 8 H), 2,40-2,27 (m, 1 H), 2,27-2,13 (m, 2 H), 2,05-1 ,92 (m, 2 H), 1 ,72-1 ,57 (m, 2 H); MS (ESI) m/z 558,26 (M+H).
Ejemplo 65. Compuesto 108.
Se preparó a partir de S1-11-6: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,07-4,70 (m, 3 H), 4,69-4,58 (m, 1 H), 4,37-4,27 (m, 1 H), 4,09 (s, 1 H), 4,01-3,92 (m, 1 H), 3,91-3,82 (m, 1 H), 3,67-3,57 (m, 1 H), 3,53-3,43 (m, 1 H), 3,23-3,14 (m, 1 H), 3,14-2,92 (m, 8 H), 2,40-2,27 (m, 1 H), 2,27-2,13 (m, 2 H), 2,05-1 ,92 (m, 2 H), 1 ,72-1,57 (m, 2 H); MS (ESI) m/z 558,21 (M+H).
Ejemplo 66. Compuesto 143.
Se preparó a partir de S1-1 1-7: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,05-4,81 (m, 2 H), 4,80-4,70 (m, 1 H), 4,68-4,55 (m, 1 H), 4,08 (s, 1 H), 3,85-3,72 (m, 1 H), 3,24-3,13 (m, 1 H), 3,13-2,90 (m, 8 H), 2,40-2,26 (m, 1 H), 2,25-2,16 (m, 1 H), 1 ,71-1 ,56 (m, 1 H), 1 ,47 (d, J = 6,7 Hz, 6 H); MS (ESI) m/z 516,32 (M+H).
Ejemplo 67. Compuesto 120.
Compuesto 120 Se preparó a partir de S1-11-8: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,10-4,74 (m, 3 H), 4,70-4,58 (m, 1 H), 4,09 (s, 1 H), 3,69-3,54 (m, 1 H), 3,24-2,88 (m, 9 H), 2,40-2,28 (m, 1 H), 2,28-2,19 (m, 1 H), 2,07-1 ,94 (m, 1 H), 1 ,77-1 ,57 (m, 2 H), 1 ,45 (d, J = 6,1 Hz, 3 H), 1 ,08 (t, J = 7,9 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 530,27 (M+H).
Ejemplo 68. Compuesto 130.
Compuesto 130 Se preparó a partir de S1-11-9: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,03-4,74 (m, 3 H), 4,68-4,58 (m, 1 H), 4,10 (s, 1 H), 3,67-3,55 (m, 1 H), 3,23-2,90 (m, 9 H), 2,37-2,18 (m, 2 H), 2,07-1 ,94 (m, 1 H), 1 ,76-1 ,56 (m, 2 H), 1 ,44 (d, J = 6,1 Hz, 3 H), 1 ,07 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 530,26 (M+H).
Ejemplo 69. Compuesto 123.
Compuesto 123 Se preparó a partir de S1-11-10: ? RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,05-4,73 (m, 3 H), 4,68-4,58 (m, 1 H), 4,09 (s, 1 H), 3,66-3,54 (m, 1 H), 3,23-2,91 (m, 9 H), 2,38-2,28 (m, 1 H), 2,28-2,19 (m, 1 H), 2,07-1 ,94 (m, 1 H), 1 ,75-1 ,57 (m, 2 H), 1 ,44 (d, J = 6,1 Hz, 3 H), 1 ,07 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 530,26 (M+H).
Ejemplo 70. Compuesto 137. ¦ Compuesto 137 Se preparó a partir de S1 -11-11 : 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,08-4,73 (m, 3 H), 4,72-4,52 (m, 1 H), 4,09 (s, 1 H), 3,67-3,55 (m, 1 H), 3,23-2,90 (m, 9 H), 2,44-2,27 (m, 2 H), 2,27-2,18 (m, 1 H), 1 ,70-1 ,57 (m, 1 H), 1 ,37 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 1 ,09 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 1 ,07-1 ,01 (m, 3 H); MS (ESI) m/z 544,32 (M+H).
Ejemplo 71. Compuesto 106.
Se preparó a partir de S1 -11-12: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,10-4,73 (m, 3 H), 4,72-4,58 (m, 1 H), 4,09 (s, 1 H), 3,66-3,56 (m, 1 H), 3,24-2,87 (m, 9 H), 2,45-2,29 (m, 2 H), 2,27-2,19 (m, 1 H), 1 ,71-1 ,58 (m, 1 H), 1 ,38 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 1 ,10 (d, J = 7,3 Hz, 3 H), 1 ,05 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 544,31 (M+H).
Ejemplo 72. Compuesto 100.
Se preparó a partir de S1-11-13: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,10-4,91 (m, 2 H), 4,78-4,69 (m, 1 H), 4,65-4,53 (m, 1 H), 4,10 (s, 1 H), 4,03-3,90 (m, 1 H), 3,24-2,90 (m, 9 H), 2,39-2,18 (m, 4 H), 1 ,98-1 ,70 (m, 6 H), 1 ,70-1 ,56 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 542,27 (M+H).
Ejemplo 73. Compuesto 140.
Compuesto 140 Se preparó a partir de S1-11-14: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 515-5,43 (ancho, 4 H), 4,41-4,33 (m, 1 H), 4,27-4,19 (m, 1 H), 4,17-4,10 (m, 1 H), 4,08 (s, 1 H), 3,90-3,83 (m, 1 H), 3,80-3,71 (m, 1 H), 3,23-3,14 (m, 1 H), 3,13-2,91 (m, 8 H), 2,57-2,44 (m, 1 H), 2,40-2,17 (m, 3 H), 1 ,71-1 ,57 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 544,21 (M+H).
Ejemplo 74. Compuesto 129.
Compuesto 129 Se preparó a partir de S1-11-15: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,96-4,63 (m, 4 H), 4,10 (s, 1 H), 3,28-2,85 (m, 9 H), 2,41-2,16 (m, 2 H), 1 ,92-1 ,82 (m, 2 H), 1 ,70-1 ,57 (m, 1 H), 1 ,46 (s, 6 H), 1 ,12-1 ,02 (m, 3 H); MS (ESI) m/z 569,26 (M+H).
Ejemplo 75. Compuesto 118.
Compuesto 118 Se preparó a partir de S1-11-16: H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,02-4,74 (m, 4 H), 4,09 (s, 1 H), 3,23-2,91 2,39-2,27 (m, 1 H), 2,27-2,18 (m, 1 H), 1 ,71-1 ,57 (m, 1 H), 1 ,37 (s, 6 H), 1 ,34-1 ,25 (m, 1 H), 0,78-0,68 (m, 2 H), 0.68-.061 (m, 2 H); MS (ESI) m/z 556,36 (M+H).
Ejemplo 76. Compuesto 133.
Compuesto 133 Se preparó a partir de S1-11-17: H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,99-4,79 (m, 2 H), 4,79-4,69 (m, 2 H), 4,10 (s, 1 H), 3,24-2,92 (m, 9 H), 2,39-2,27 (m, 1 H), 2,27-2,19 (m, 1 H), 1 ,86 (s, 2 H), 1 ,70-1 ,56 (m, 7 H), 1 ,13 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 586,38 (M+H).
Ejemplo 77. Compuesto 114.
Se preparó a partir de S1-11-18: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,09-4,80 (m, 4 H), 4,10 (s, 1 H), 3,28-2,94 (m, 10 H), 2,40-2,29 (m, 1 H), 2,28-2,21 (m, 1 H), 1,72-1,59 (m, 1 H), 1,20-1 ,28 (m, 2 H), 1,18-1 ,03 (m, 2 H); MS (ESI) m/z 514,47 (M+H).
Ejemplo 78. Compuesto 132.
Se preparó a partir de S1-11-19: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,04-4,84 (m, 2 H), 4,64-4,56 (m, 1 H), 4,53-4,42 (m, 1 H), 4,18-4,04 (m, 2 H), 3,22-3,15 (m, 1 H), 3,14-2,95 (m, 8 H), 2,50-2,29 (m, 5 H), 2,28-2,20 (m, 1 H), 2,05-1 ,85 (m, 2 H), 1 ,71-1 ,58 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 528,49 (M+H).
Ejemplo 79. Compuesto 136.
Se preparó a partir de S1 -11-20: H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,97-4,81 (m, 1 H), 4,80-4,65 (m, 3 H), 4,09 (s, 1 H), 3,69 (s, 2 H), 3,23-2,91 (m, 9 H), 2,39-2,27 (m, 1 H), 2,27-2,19 (m, 1 H), 1 ,70-1 ,57 (m, 1 H), 1 ,44 (s, 6 H); MS (ESI) m/z 546,33 (M+H).
Ejemplo 80. Compuesto 142.
Compuesto 142 Se preparó a partir de S1-11-21 : 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,08-4,81 (m, 2 H), 4,75-4,47 (m, 2 H), 4,08 (s, 1 H), 3,50-3,37 (m, 2 H), 3,21-2,84 (m, 9 H), 2,40-2,27 (m, 1 H), 2,26-2,17 (m, 1 H), 1 ,92-1 ,76 (m, 2 H), 1 ,71-1 ,57 (m, 1 H), 1 ,07 (t. J = 7,3 Hz, 3 H)¡ MS (ESI) m/z 516,24 (M+H).
Ejemplo 81. Compuesto 122.
Compuesto 122 Se preparó a partir de S1 -11-22: H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,96-4,82 (m, 4 H), 4,10 (s, 1 H), 3,89 (m, 1 H), 3,83 (m, 1 H), 3,23-3,15 (m, 1 H), 3,14-2,91 (m, 8 H), 2,40-2,29 (m, 1 H), 2,28-2,20 (m, 1 H), 1 ,72-1 ,54 (m, 7 H); MS (ESI) m/z 548,53 (M+H).
Ejemplo 82. Compuesto 146.
Compuesto 146 Se preparó a partir de S1 -11 -23: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,92-4,78 (m, 2 H), 4,78-4,66 (m, 2 H), 4,09 (s, 1 H), 3,98-3,85 (m, 2 H), 3,85-3,78 (m, 2 H), 3,22-3,12 (m, 1 H), 3,14-2,90 (m, 8 H), 2,40-2,27 (m, 1 H), 2,27-2,01 (m, 7 H), 1 ,74-1 ,56 (m, 7 H); MS (ESI) m/z 599,29 (M+H).
Ejemplo 83. Compuesto 126.
Compuesto 126 Se preparó a partir de S4-10-1 : 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,13-4,96 (m, 1 H), 4,64-4,51 (m, 1 H), 4,1 1 (s, 1 H), 3,86-3,74 (m, 1 H), 3,24-2,89 (m, 1 1 H), 2,66-2,52 (m, 1 H), 2,27-2,18 (m, 1 H), 1 ,69-1 ,59 (m, 1 H), 1 ,47 (s, 6 H); MS (ESI) m/z 566,26 (M+H).
Ejemplo 84. Compuesto 1 13.
Compuesto 113 Se preparó a partir de S4-10-2: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,08-4,93 (m, 1 H), 4,80-4,60 (m, 1 H), 4,12 (s, 1 H), 3,67-3,55 (m, 1 H), 3,27-3,17 (m, 1 H), 3,16-2,85 (m, 10 H), 2,65-2,52 (m, 1 H), 2,28-2,19 (m, 1 H), 2,08-1 ,95 (m, 1 H), 1 ,77-,58 (m, 2 H), 1 ,45 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 1 ,07 (t, J = 7,6 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 80,26 (M+H).
Ejemplo 85. Compuesto 128.
Compuesto 128 Se preparó a partir de S4-10-3: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,08-4,91 (m, H), 4,70-4,51 (m, 1 H), 4,13 (s, 1 H), 3,66-3,56 (m, 1 H), 3,26-3,17 (m, 1 H), 3,16-,86 (m, 10 H), 2,66-2,53 (m, 1 H), 2,28-2,19 (m, 1 H), 2,09-1 ,94 (m, 1 H), 1 ,77-,57 (m, 2 H), 1 ,45 (d, J = 6,1 Hz, 3 H), 1 ,07 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 80,26 (M+H).
Ejemplo 86. Compuesto 1 12.
Compuesto 112 Se preparó a partir de S4-10-4: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,98-4,86 (m, H), 4,78-4,66 (m, 1 H), 4,12 (s, 1 H), 3,25-2,89 (m, 12 H), 2,68-2,52 (m, 1 H), ,27-2,18 (m, 1 H), 1 ,72-1 ,59 (m, 1 H), 1 ,53 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 580,26 (M+H).
Ejemplo 87. Compuesto 1 16.
Compuesto 116 Se preparó a partir de S4-10-5: H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,17-5,01 (m, 2 H), 4,12 (s, 1 H), 3,27-3,19 (2 H), 3,16-2,84 (m, 10 H), 2,66-2,54 (m, 1 H), 2,27-2,19 (m, 1 H), 1 ,72-1 ,59 (m, 1 H), 1 ,20-1 ,13 (m, 2 H), 1 ,09-1 ,02 (m, 2 H); MS (ESI) m/z 564,17 (M+H).
Ejemplo 88. Compuesto 141.
Se preparó a partir de S4-10-6: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,20-5,07 (m, 1 H), 4,58-4,47 (m, 1 H), 4,13 (s, 1 H), 3,51-3,38 (m, 2 H), 3,28-3,17 (m, 1 H), 3,16-2,90 (m, 10 H), 2,67-2,51 (m, 1 H), 2,28-2,19 (m, 1 H), 1 ,94-1 ,80 (m, 2 H), 1 ,72-1 ,59 (m, 1 H), 1 ,08 (t, J = 7,4 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 566,26 (M+H).
Ejemplo 89. Compuesto 115.
Compuesto 115 Se preparó a partir de S6-2-1 : 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,16-4,96 (m, H), 4,78-4,62 (m, 2 H), 4,16 (s, 1 H), 3,28-2,92 (m, 15 H), 2,61-2,40 (m, 1 H), ,36-2,27 (m, 1 H), 1 ,75-1 ,53 (m, 10 H); MS (ESI) m/z 555,27 (M+H).
Ejemplo 90. Compuesto 135.
Se preparó a partir de S6-2-2: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,19-5,03 (m, 1 H), 4,60-4,46 (m, 1 H), 4,13 (s, 1 H), 3,88-3,75 (m, 1 H), 3,13-2,82 (m, 17 H), 2,48-2,21 (m, 2 H), 1 ,73-1 ,59 (m, 1 H), 1 ,57-1 ,44 (m, 6 H); MS (ESI) m/z 541 ,24 (M+H).
Ejemplo 91. Compuesto 124.
Compuesto 124 Se preparó a partir de S6-2-3: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,10-4,96 (m, 1 H), 4,58-4,46 (m, 1 H), 4,10 (s, 1 H), 3,68-3,55 (m, 1 H), 3,10-2,68 (m, 18 H), 2,40-2,18 (m, 1 H), 2,1 1 -1 ,98 (m, 1 H), 1 ,78-1 ,57 (m, 2 H), 1 ,46 (d, J = 6,1 Hz, 3 H), 1 ,09 (t, J = 6,7 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 555,33 (M+H).
Ejemplo 92. Compuesto 127.
Compuesto 127 Se preparó a partir de S6-2-4: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,14-4,96 (m, 1 H), 4,58-4,44 (m, 1 H), 4,16 (s, 1 H), 3,66-3,54 (m, 1 H), 3,10-2,69 (m, 18 H), 2,38-2,19 (m, 1 H), 2,14-1 ,99 (m, 1 H), 1 ,76-1 ,57 (m, 1 H), 1 ,53-1 ,40 (m, 3 H), 1 ,08 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 555,39 (M+H).
Ejemplo 93. Compuesto 103.
Compuesto 103 Se preparó a partir de S6-2-5: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,12-4,98 (m, 2 H), 4,71 (s, 2 H), 4,16 (s, 1 H), 3,25-2,91 (m, 15 H), 2,61-2,38 (m, 1 H), 2,35-2,25 (m, 1 H), 1 ,99-1 ,89 (m, 2 H), 1 ,73-1 ,60 (m, 1 H), 1 ,52 (s, 6 H), 1 ,10 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 569,26 (M+H).
Ejemplo 94. Compuesto 105 Síntesis de S8-1, A una solución de diisopropilamida de litio (1 ,8 M en hexanos, 446 µ?, 0,804 mmol, 2,2 equiv.) y TMEDA (328 µ?, 2,19 mmol, 6 equiv.) en THF (8 ml) a -78°C se añadió una solución del compuesto S1-11-21 (168 mg, 0,402 mmol, 1 ,1 equiv.) en THF (1 ml) mediante la adición de gota a gota. Esto da como resultado una solución de color rojo oscuro. Después de 30 min, se añadió una solución de enona S7-1 (175 mg, 0,362 mmol, 1 equiv.) en THF (1 ,2 ml). Después de que se completara la adición, la mezcla de reacción se dejó calentar a -15°C durante 1 h.
La reacción se interrumpió mediante la adición de cloruro de amonio (solución saturada acuosa, 15 mi) y se extrajo con EtOAc (2x30 mi). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron a presión reducida. La purificación del aceite resultante por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (Silicicle, 25 g, del 10 al de 25% EtOAc en gradiente de hexanos) proporcionó 208 mg de S8-1 (71 %) en forma de un sólido de color blanco: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 16,05 (s, 1 H), 7,53-7,43 (m, 2 H), 7,42-7,28 (m, 8 H), 5,95-5,79 (m, 1 H), 5,35 (s, 2 H), 5,27-5,12 (m, 2 H), 4,90 (c, J = 10,4 Hz, 2 H), 4,01 -3,74 (m, 4 H), 3,29 (d, J = 6,1 Hz, 1 H), 3,25-3,18 (m, 1 H), 3,03-2,92 (m, 1 H), 2,58-2,34 (m, 9 H), 2,13 (d, J = 14,7 Hz, 1 H), 0,82 (s, 9 H), 0,27 (s, 3 H), 0,12 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 806,38 (M+H).
Síntesis de S8-2.
Un vial secado a la llama se cargó con ácido A/./V-dimetilbarbitúrico (103 mg, 0,66 mmol, 2,6 equiv.) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (20,1 mg, 0,017 mmol, 0,07 equiv.). El vial se evacuó y se cargó de nuevo con nitrógeno tres veces. Una solución de S8-1 (205 mg, 0,254 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (desgasificado, 4 mi) en atmósfera de nitrógeno se transfirió mediante una jeringa al vial preparado. LA solución heterogénea resultante se puso en un bloque de calentamiento a 35°C. Después de 1 h, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. La purificación del aceite resultante por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (Silicicle, 12 g, del 20 al 60% de EtOAc en gradiente de hexanos) proporcionó 176 mg de S8-2 (90%) en forma de un sólido de color naranja: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 7,52-7,45 (m, 2 H), 7,41-7,28 (m, 8 H), 5,36 (s, 2 H), 4,91 (s, 2 H), 4,34-4,20 (m, 2 H), 4,19-3,99 (m, 2 H), 3,96 (d. J = 10,4 Hz, 1 H), 3,36-3,27 (m, 1 H), 3,23 (dd, J = 4,9, 15,2 Hz, 1 H), 3,04-2,93 (m, 1 H), 2,59-2,36 (m, 9 H), 2,14 (d, J = 14,7 Hz, 1 H), 0,82 (s, 9 H), 0,27 (s, 3 H), 0,13 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 766,33 (M+H). .
Síntesis del Compuesto 105.
Compuesto 105 A una solución de S8-2 (9,6 mg, 0,012 mmol, 1 equiv.) en 1 ,4-dioxano (1 mi) se añadió una solución acuosa de HF (50%, 150 µ?). Después de dos horas, la mezcla de reacción se vertió en una solución acuosa de K2HP04 (2,4 g en 25 mi) y se extrajo con EtOAc (2x30 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se añadió paladio sobre carbono (10%, 8 mg) a una solución de este aceite en bruto en dioxano:MeOH: HCI 0,5 N en metanol (5:4:1 , 1 mi). El matraz se equipó con un tapón de goma y se evacuó y se cargó de nuevo tres veces con gas hidrógeno y después la solución se desgasificó con hidrógeno burbujeante durante 3 minutos. La reacción se agitó en una atmósfera (globo) de gas hidrógeno durante 2 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite para retirar el catalizador de paladio y se concentró a presión reducida. La HPLC preparativa de fase inversa del aceite resultante se realizó sobre un sistema Waters Autopurification usando una columna Polymerx 10 µ RP-? 100 R [30 x 21 ,20 mm, 10 micrómetros, disolvente A:HCI 0,05 N en agua, disolvente B: Metanol; volumen de inyección:1 ,5 mi (HCI 0,05 N en agua); gradiente: 20?80% B durante 20 min; recolección de fracciones dirigida a masas]. Las fracciones con el PM deseado, eluyendo durante 6,75-7,5 min, se recogieron y se liofilizaron para proporcionar 2,0 mg del compuesto deseado Compuesto 105 (33%): 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,74 (s, 2 H), 4,64 (s, 2 H), 4,09 (s, 1 H), 3,25-3,14 (m, 1 H), 3,14-2,88 (m, 8 H), 2,40-2,28 (m, 1 H), 2,27-2,18 (m, 1 H), 1 ,71-1 ,59 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 474,13 (M+H).
Ejemplo 95. Compuesto 111 Síntesis de S8-4-1.
A una solución de S8-2 (30,3 mg, 0,040 mmol, 1 equiv.) en THF (1 mi) se añadió bromoacetllbromuro (3,6 µ?, 0,041 mmol, 1 ,05 equiv.). Después de 5 min, se añadieron 0,75 µ? de bromoacetllbromuro (0,008 mmol, 0,2 equiv.), seguido de ciclopentilamina (19,5 µ?, 0,197 mmol, 5 equiv.). Después de 1 h, la reacción se completó y la mezcla se concentró a presión reducida para producir S8-4-1 en bruto, que se usó sin purificación adicional Síntesis del Compuesto 111.
Compuesto 111 A una solución de este aceite en bruto en 1 ,4-dioxano (1 ,8 mi) se añadió una solución acuosa de HF (50%, 250 µ?). Después de 1 ,5 h, la mezcla de reacción se vertió en una solución acuosa de K2HP04 (3,6 g en 30 mi) y se extrajo con EtOAc (2 x 30 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se añadió paladio sobre carbono (10%, 15,1 mg) a una solución de este aceite en bruto en dioxano: eOH (1 :1 , 1 mi). El matraz se equipó con un tapón de goma y se evacuó y se cargó de nuevo tres veces con gas hidrógeno. La reacción se agitó en una atmósfera (globo) de gas hidrógeno durante 3 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite para retirar el catalizador de paladio y se concentró a presión reducida. La HPLC preparativa de fase inversa del aceite resultante se realizó sobre un sistema Waters Autopurification usando una columna Polymerx 10 µ RP-? 100 R [30 x 21 ,20 mm, 10 micrómetros, disolvente A: HCI 0,05 N en agua, disolvente B: CH3CN; volumen de inyección: 2,4 mi (HCI 0,05 N en agua); gradiente: 20?80% B durante 20 min; recolección de fracciones dirigida a masas]. Las fracciones con el PM deseado, eluyendo durante 1 1 ,0-12,5 min, se recogieron y se liofilizaron para proporcionar 2,4 mg del compuesto deseado Compuesto 1 1 1 (9%): 1H R N (400 MHz, CD3OD) d 5,04-4,75 (m, 4 H), 4,17-4,06 (m, 3 H), 3,68-3,56 (m, 1 H), 3,24- 290 (m, 9 H), 2,38-2,26 (m, 1 H), 2,26-2,04 (m, 3 H), 1 ,91-1 ,57 (m, 7 H); MS (ESI) m/z 599,28 (M+H).
Ejemplo 96. Compuesto 131.
Compuesto 131 A una solución de S8-2 (20,1 mg, 0,026 mmol, 1 equiv.) en THF (1 mi) se añadió clorhidrato de cloruro de dimetilaminoacetilo (85%, 7,4 mg, 0,039 mmol, 1 ,5 equiv.). Después de 2,5 h, la mezcla de reacción se diluyó con una solución de bicarbonato sódico (saturado, acuoso, 3 mi) y se extrajo con EtOAc (2x7 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 mi), se secaron (Na2S04), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir S8-4-2 (no mostrado). A una solución de este aceite en bruto en 1 ,4-dioxano (1 ,5 mi) se añadió una solución acuosa de HF (50%, 300 µ?). Después de 1 ,5 h, la mezcla de reacción se vertió en una solución K2HP04 (3,6 g en 30 mi) y se extrajo con EtOAc (2x25 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se añadió paladio sobre carbono (10%, 12 mg) a una solución de este aceite en bruto en dioxano:MeOH (1 :1 , 1 mi). El matraz se equipó con un tapón de goma y se evacuó y se cargó de nuevo tres veces con gas hidrógeno. La mezcla de reacción se agitó en una atmósfera (globo) de gas hidrógeno durante 2,5 h, después se filtró a través de Celite para retirar el catalizador de paladio y se concentró a presión reducida. La HPLC preparativa de fase inversa del aceite resultante se realizó sobre un sistema Waters Autopurification usando una columna Polymerx 10 µ RP-? 100 R [30 x 21 ,20 mm, 10 micrómetros, disolvente A: HCI 0,05 N en agua, disolvente B: etanol; volumen de inyección: 2,0 mi (metanol al 20% en HCI 0,05 N en agua); gradiente: 20?80% B durante 20 min; recolección de fracciones dirigida a masas]. Las fracciones con el PM deseado, eluyendo a 8,0-10,2 min, se recogieron y se liofilizaron para proporcionar 7,0 mg del compuesto deseado Compuesto 131 (42%): 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,99-4,73 (m, 4 H), 4,37-4,27 (m, 2 H), 4,09 (s, 1 H), 3,22-2,91 (m, 15 H), 2,37-2,16 (m, 2 H), 1 ,71-1 ,56 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 559,19 (M+H).
Ejemplo 97. Compuesto 139.
Compuesto 139 A una solución de S8-2 (21 ,0 mg, 0,027 mmol, 1 equiv.) en THF (1 mi) se añadió clorhidrato de pirrolidinaacetilcloruro (8,4 mg, 0,045 mmol, 1 ,7 equiv.). Después de 1 h, la mezcla de reacción se diluyó con una solución de bicarbonato sódico (saturada, acuosa, 3,5 mi) y se extrajo con EtOAc (2x7 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 mi), se secaron (Na2S04), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir S8-4-3 (no mostrado). A una solución de este aceite en bruto en 1 ,4-dioxano (1 ,7 mi) se añadió una solución acuosa de HF (50%, 300 µ?). Después de 1 ,5 h, la mezcla de reacción se vertió en una solución acuosa de K2HPO4 (3,6 g en 30 mi) y se extrajo con EtOAc (2 x 25 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se añadió paladio sobre carbono (10%, 15 mg) a una solución de este aceite en bruto en dioxano:MeOH (5:4, 0,90 mi). El matraz se equipó con un tapón de goma y se evacuó y se cagó de nuevo tres veces con gas hidrógeno. La mezcla de reacción se agitó en una atmósfera (globo) de gas hidrógeno durante 2,5 h, después se filtró a través de Celite para retirar el catalizador de paladio y se concentró a presión reducida. La HPLC preparativa de fase inversa del aceite resultante se realizó sobre un sistema Waters Autopurification usando una columna Polymerx 10 µ RP-? 100 R [30 x 21 ,20 mm, 10 micrómetros, disolvente A: HCI 0,05 N en agua, disolvente B: Metanol; volumen de inyección: 2,0 mi (20% Metanol en HCI 0,05 N en agua); gradiente: 20-?80% B durante 20 min; recolección de fracciones dirigida a masas]. Las fracciones con el PM deseado, eluyendo durante 9,4-11 ,1 min, se recogieron y se liofilizaron para proporcionar 3,5 mg del compuesto deseado Compuesto 139 (19%): 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,00-4,74 (m, 4 H), 4,43-4,35 (m, 2 H), 4,09 (s, 1 H), 3,84-3,73 (m, 2 H), 3,27-2,90 (m, 1 1 H), 2,37-2,00 (m, 6 H), 1 ,70-1 ,56 (m, 1 H); MS (ESI) miz 585,28 (M+H).
Ejemplo 98. Compuesto 147.
Compuesto 147 A una solución de S8-2 (33,0 mg, 0,043 mmol, 1 equiv.) en THF (1 mi) se añadió bromoacetilbromuro (4,1 µ?, 0,047 mmol, 1 ,1 equiv.). Después de 40 min, se añadió sal clorhidrato de (S)-(+)-3-fluoropirrolidina (15,6 mg, 0,124 mmol, 3 equiv.), seguido de trietilamina (18 µ?, 0,126 mmol, 3 equiv.). Después de 19 h más, se añadieron adicionalmente sal de pirrolidina (32 mg, 0,254 mmol, 6 equiv.) y trietilamina (54 µ?, 0,387 mmol, 9 equiv.). Después de 20 h, la mezcla se diluyó con salmuera (8 mi), agua (1 ,5 mi) y se extrajo con EtOAc (2x30 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir S8-4-4 (no mostrado). A una solución de este aceite en bruto en 1 ,4-dioxano (1 mi) se añadió una solución acuosa de HF (50%, 250 µ?). Después de 1 ,5 h, la mezcla de reacción se vertió en una solución acuosa de K2HP04 (3 g en 30 mi) y se extrajo con EtOAc (2 x 30 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se añadió paladio sobre carbono (10%, 16,5 mg) se añadió a una solución de este aceite en crudo en dioxano:MeOH (1 :1 , 1 mi). El matraz se equipó con un tapón de goma y se evacuó y se cargó de nuevo tres veces con gas hidrógeno. La reacción se agitó en una atmósfera (globo) de gas hidrógeno durante 2 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite para retirar el catalizador de paladio y se concentró a presión reducida. La HPLC preparativa de fase inversa del aceite resultante se realizó sobre un sistema Waters Autopurification usando una Polymerx 10 µ RP-? 100 R [30 x 21 ,20 mm, 10 micrómetros, disolvente A: HCI 0,05 N en agua, disolvente B: CH3CN; volumen de inyección: 2,4 mi (HCI 0,05 N en agua); gradiente: 10?60% B durante 15 min; recolección de fracciones dirigida a masas]. Las fracciones con el PM deseado, eluyendo durante 6,3-7,3 min, se recogieron y se liofilizaron para proporcionar 7,8 mg del compuesto deseado Compuesto 147 (27%): 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,61-5,34 (m, 1 H), 5,02-4,77 (m, 4 H), 4,58-4,38 (m, 2 H), 4,18-3,90 (m, 3 H), 3,74-3,38 (m, 2 H), 3,24-2,89 (m, 9 H), 2,59-2,28 (m, 4 H), 2,27-2,18 (m, 1 H), 1 ,71-1 ,58 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 603,35 (M+H).
Ejemplo 99. Compuesto 109.
Compuesto 109 El compuesto 150 (7,9 mg, 0,013 mmol) se disolvió en Metanol (1 mi) y 1 ,4-dioxano (1 mi) y HCI 0,5 M en metanol (0,2 mi) y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10% en peso, ~2 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno y la mezcla de reacción se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró a presión reducida. El material se disolvió en metanol (1 mi) y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, -20 mg). Se introdujo una atmósfera de hidrógeno y la mezcla de reacción se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró a presión reducida. El material se purificó sobre un sistema Waters Autopurification equipado con una columna Phenomenex Polymerx 10 µ RP 100A [10 µ??, 30 x 21 ,20 mm; caudal, 20 ml/min; Disolvente A: HCI 0.05N en agua; Disolvente B: Metanol; gradiente: 20?100% B; recolección de fracciones dirigida a masas]. Las fracciones con el PM deseado MW se recogieron y se liofilizaron para producir 1 ,2 mg (16%, 2 etapas) del producto deseado Compuesto 109 en forma de un sólido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCI) d 6,84 (s, 1 H), 4,85-4,65 (m, 4 H), 4,13 (s, 1 H), 3,15-2,88 (m, 9 H), 2,61-2,50 (m, 1 H), 2,28-2,20 (m, 1 H), 1,92-1 ,82 (m, 2 H), 1 ,65-1 ,50 (m, 1 H), 1 ,44 (s, 6 H), 1 ,06 (t, J = 7,3 Hz, 3 H) MS (ESI) m/z 526,30 (M+H).
Ejemplo 100. Compuesto 201 Síntesis de S10-1.
Se añadió cloruro de (metoximetil)trifenilfosfonio (1 ,55 g, 4,51 mmol) a una suspensión de f-butóxido de potásico (0,506 g, 4,51 mmol) en THF (15 mi), proporcionando una solución inmediata de color rojo. Después de 15 min, se añadió una solución del compuesto S1-7 (1 ,00 g, 2,26 mmol) en THF (5 mi). Después de 2 h, la mezcla de reacción se inactivo con agua y se extrajo con EtOAc (2 x). Los extractos combinados se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material se purificó por cromatografía en columna (columna Biotage 20 g, del 0 al 6% de EtOAc en gradiente de hexano), proporcionando 986 mg (93%) del compuesto S10-1 como una mezcla de dos isómeros. MS (ESI) m/z 493,04, 495,04 (M+Na).
Síntesis de S10-2.
Se añadió una solución de cloruro de i-propil magnesio/cloruro de litio (Chemetall Foote Corporation, solución 1 ,2 M en THF, 8,5 mi, 10,2 mmol) a una solución a -50°C del compuesto S10-1 (956 mg, 2,03 mmol) en THF (20 mi). La mezcla de reacción se dejó calentar a 0°C durante 1 h. Se añadió N,N-dimetilformamida (1 ,25 mi, 16,2 mmol) y la reacción se dejó calentar a ta. Después de 1 hora, la mezcla de reacción se inactivo con cloruro de amonio (solución saturada, acuosa) y se extrajo con EtOAc (2 x). Los extractos combinados se secaron sobre Na2S04> se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material se purificó por cromatografía en columna (columna Biotage 25 g, del 5 al 40% de EtOAc en gradiente de hexano), proporcionando 205 mg (24%) del compuesto S10-2. Rf = 0,23 en EtOAc al 20% en hexano; H RMN (400 MHz, CDCI3) d 10,3 (s, 1 H), 7,45-7,30 (m, 7 H), 7,28-7,24 (m, 1 H), 7,10-7,02 (m, 3 H), 6,67 (d, J = 12,8 Hz, 1 H), 5,09 (s, 2 H), 3,77 (s, 3 H), 2,43 (d, J = 4,6 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 443,18 (M+Na).
Síntesis de S 10-3-1.
Se añadió neopentilamina (0,077 mi, 0,66 mmol) a una solución del compuesto S10-2 (55,5 mg, 0,132 mmol) en CH2CI2 (5 mi) y ácido acético (0,038 mi, 0,66 mmol). Después de 5 min, se añadió triacetoxiborohidruro sódico (83,9 mg, 0,396 mmol). Después de 1 hora, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con NaHC03 (solución saturada, acuosa, 2 x). Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron a presión reducida, 5 proporcionando 53,3 mg (88% en bruto) del compuesto S10-3-1 , 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,46-7,30 (m, 7 H), 7,26-7,20 (m, 1 H), 7,10-7,04 (m, 2 H), 4,96 (s, 2 H), 3,72 (s, 2 H), 2,86-2,75 (m, 4 H), 2,35 (d, J = 1 ,8 Hz, 3 H), 2,23 (s, 2 H), 0,89 • (s, 9 H); MS (ESI) m/z 462,28 (M+H).
Síntesis de S 10-4-1.
Se preparó diisopropilamida de litio a -40°C a partir de n-butillitio (solución 2,5 M en hexano, 0,045 mi, 0,11 mmol) y diisopropilamina (0,016 mi, 0,11 mmol) en THF (2 mi). La mezcla de reacción se enfrió a -78°C y se añadió TMEDA (0,040 mi, 0,27 mmol) seguido de la adición gota a gota de una solución del compuesto 15 S10-3-1 (24,9 mg, 0,0539 mmol) en THF (1 mi). No se observó cambio de color, por lo que se añadió diisopropilamida de litio (solución 2,0 M en THF, 0,060 mi, 0,12 mmol) hasta que persistió una solución de color rojo intenso. Después de 15 min, se añadió una solución de enona S7-1 (21 ,7 mg, 0,045 mmol) en THF (0,5 mi). Después de que se completara la adición, la mezcla de reacción se dejó 0 calentar a -20°C durante 1 h. La reacción se interrumpió mediante la adición de cloruro de amonio (solución acuosa, saturada) y se extrajo con EtOAc (2 x). Los extractos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material se purificó sobre un sistema Waters Autopurification equipado con una columna Sunfire Prep C18 OBD [5 µ?t?, 19x50 mm; caudal, 20 ml/min; Disolvente A: H2O con HCO2H al 0,1 %; Disolvente B: CH3CN con HCO2H al 0,1 %; gradiente: 50?100% B; recolección de fracciones dirigida a masas], proporcionando 18,9 mg (49%) del producto deseado S10-4-1 en forma de un sólido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 16,0 (s, 1 H), 7,52-7,44 (m, 2 H), 7,40-7,28 (m, 8 H), 5,36 (s, 2 H), 4,94 (d, J = 11 ,0 Hz, 1 H), 4,78 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,10-3,89 (m, 3 H), 3,29-3,15 (m, 2 H), 3,06-2,96 (m, 2 H), 2,65-2,40 (m, 11 H), 2,15 (d, J = 14,6 Hz, 1 H), 0,98 (s, 9 H), 0,82 (s, 9 H), 0,27 (s, 3 H), 0,12 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 850,39 (M+H).
Síntesis del Compuesto 201.
Compuesto 201 Se añadió HF acuoso (0,4 mi, 48%) a una solución de S10-4-1 (18,9 mg, 0,022 mmol) en 1 ,4-dioxano (1 mi) en un vial plástico. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se vertió en una solución de K2HPO4 (4,8 g) en agua (15 mi). La mezcla se extrajo con EtOAc (3 x). Los extractos de EtOAc se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material se disolvió en metanol (2 mi), 1 ,4-dioxano (2 mi) y 0,5 M HCI en metanol (0,5 mi) y se añadió paladio sobre carbono (Degussa, 10 % en peso, ~5 mg). Se introdujo una atmósfera hidrógeno y la mezcla de reacción se agitó durante 2 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró a presión reducida. El material se purificó con un sistema Waters Autopurification equipado con una columna Phenomenex Polymerx 10 µ RP 100A [10 pm, 30 x 21 ,20 mm; caudal, 20 ml/min; Disolvente A: HCI 0.05N en agua; Disolvente B: CH3CN; gradiente: 0?70% B; recolección de fracciones dirigida a masas]. Las fracciones con el PM deseado se recogieron y se liofilizaron para producir 7,8 mg (57%, 2 etapas) del producto deseado Compuesto 201 en forma de un sólido de color amarillo. H RMN (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCI) d 4,60 (t, J = 14,4 Hz, 1 H), 4,32 (dd, J = 16,0, 7,8 Hz, 1 H), 4,15 (s, 1 H), 3,88-3,79 (m, 1 H), 3,62-3,50 (m, 1 H), 3,36-3,16 (m, 5 H), 3,15-2,96 (m, 8 H), 2,35-2,24 (m, 2 H). 1 ,61 (c, J = 12,7 Hz, 1 H), 1 ,20 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 558,26 (M+H).
Los siguientes compuestos se prepararon mediante métodos similares a los del Compuesto 201 , sustituyendo la tetrahidroisoquinolina apropiada para S10-3-1. Las tetrahidroisoquinolinas apropiadas se prepararon mediante métodos similares a lo de S10-3-1 , sustituyendo la amina apropiada para neopentilamina.
Ejemplo 101. Compuesto 200.
Compuesto 200 Sólido de color amarillo: 1H RMN (400 MHz, CD3OD con 1 gota de DCI) d 4,53 (t, J = 15,8 Hz, 1 H), 4,24 (dd, J = 16,0, 3,7 Hz, 1 H), 4,14 (s, 1 H), 4,04-3,96 (m, 1 H), 3,34-3,14 (m, 4 H), 3,14-2,90 (m, 8 H), 2,34-2,23 (m, 2 H), 1 ,69-1 ,52 (m, 10 H); MS (ESI) m/z 544,27 (M+H).
Se preparó a partir de S10-3-2, 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,45-7,30 (m, 7 H), 7,29-7,22 (m, 1 H), 7,12-7,08 (m, 2 H), 4,96 (s, 2 H), 3,70 (s, 2 H), 2,86-2,80 (m, 2 H), 2,78-2,72 (rn, 2 H), 2,33 (s, 3 H), 1 ,1 1 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 448,31 (M+H).
Ejemplo 102. Compuesto 202.
Sólido de color amarillo: 1H RMN (400 MHz, CD3OD con 1 gota DCI) d 4,59 (t, J = 15,3 Hz, 1 H), 4,22 (dd, J = 16,3, 5,7 Hz, 1 H), 4,14 (s, 1 H), 3,94-3,86 (m, 1 H), 3,86-3,75 (m, 1 H), 3,44-3,34 (m, 1 H), 3,33-2,96 (m, 1 1 H), 2,35-2,22 (m, 4 H), 2,00-1 ,84 (m, 4 H), 1 ,80-1 ,70 (m, 2 H), 1 ,68-1 ,55 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 556,26 (M+H).
Se preparó a partir de S10-3-3, 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,45-7,30 (m, 7 H), 7,29-7,22 (m, 1 H), 7,12-7,08 (m, 2 H), 4,96 (s, 2 H), 3,66 (s, 2 H), 2,90-2,83 (m, 2 H), 2,78-2,72 (m, 2 H), 2,71-2,62 (m, 1 H), 2,34 (d, J = 1 ,4 Hz, 3 H), 1 ,96- ,86 (m, 2 H), 1 ,76-1 ,64 (m, 2 H), 1 ,63-1 ,42 (m, 4 H); MS (ESI) m/z 460,54 (M+H).
Ejemplo 103. Preparación de 5-(benciloxi)-8-fluoro-7-metil-2-propil-1 , 2,3,4-tetrahidroisoquinolina-6-carboxilato de fenilo (S1 1-4-1 ) Síntesis de S11-1.
A una suspensión agitada del compuesto S1-7 (3,99 g, 8,99 mmol, 1 equiv.) en metanol (50 mi) se añadió borohidruro sódico (420 mg, 1 1 ,1 mmol, 1 ,3 equiv.). El desprendimiento de gas fue evidente; la solución fue homogénea después de 5 min. Después de 40 min la reacción se completó. La mezcla se vertió en una solución de NH4CI acuosa saturada (40 mi), agua (10 mi) y se extrajo con EtOAc (3 x 75 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto (2,13 g, 4,30 mmol, 1 equiv.) se destiló azeotrópicamente a partir de tolueno tres veces y se secó al vacío durante 2 h. A una solución de este bromuro en THF (90 mi) en N2 a -50°C se añadió complejo de cloruro de isopropil magnesio-cloruro litio (solución 1 ,2 M en THF, 37,4 mi, 44,9 mmol, 5 equiv.) gota a gota durante 10 minutos. La solución de color amarillo oscuro resultante se dejó calentar a 0°C durante 1 h. Se añadió gota a gota dimetilformamida (5,57 mi, 71 ,9 mmol, 8 equiv.), y la solución se calentó a 40°C durante 1 ,5 h. La solución de reacción se vertió en una solución de NH4CI saturada acuosa (45 mi), agua (20 mi) y se extrajo con EtOAc (2 x 100 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. MS (ESI) m/z 393,32 (M-H).
Síntesis de S11-2.
Un matraz secado a la llama se enfrió con nitrógeno y se cargó con terc-butóxido potásico (1 ,78 g, 15,8 mmol, 2 equiv.), se evacuó y se cargó de nuevo con N2, se cargó con THF (80 mi) y se enfrió a 0°C. A esta solución se añadió cloruro de (metoximetil)trifenilfosfonio (5,43 g, 15,8 mmol, 2 equiv.). La solución de color rojo resultante se dejó calentar a temperatura ambiente durante 30 min y se añadió lentamente una solución de S11 -1 (3,1 1 g, 7,88 mmol, 1 equiv.) en THF (15 mi). Después de 1 ,5 h, la reacción se diluyó con agua (45 mi) y se extrajo con EtOAc (2x75 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La purificación del aceite en bruto resultante por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (Redisep, 220 g, del 5 al 40% de EtOAc en gradiente de hexano) proporcionó 1 ,57 g y 949 mg de isómeros E y Z de S11 -2, respectivamente (75% total, 1 ,65:1 E:Z) en forma de un aceite de color amarillo: 1H RMN (isómero-E, 400 MHz, CDCI3) d 7,45-7,30 (m, 7 H), 7,28-7,20 (m, 1 H), 7,14-7,03 (m, 3 H), 5,88 (d, J = 13,4 Hz, 1 H), 5,05 (s, 2 H), 4,76 (s, 2 H), 3,63 (s, 3 H), 2,35 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 421 ,37 (E-isómero, M-H); 1H RMN (Z-isómero, 400 MHz, CDCI3) d 7,42-7,29 (m, 7 H), 7,04 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 6,31 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 5,48 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 4,97 (s, 2 H), 4,65 (s, 2 H), 3,70 (s, 3 H), 2,36 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 421 ,34 (Z-isómero, M-H).
Síntesis de S11 -3.
A una solución de S11 -2 (196 mg, 0,464 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (4,6 mi) se añadió peryodinano de Dess-Martin (239 mg, 0,563 mmol, 1 ,2 equiv.). Después de 1 h, la solución se diluyó con bicarbonato sódico saturado acuoso (25 mi) y se extrajo con EtOAc (2x30 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato sódico saturado acuoso (10 mi) y salmuera (20 mi), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material se usó inmediatamente en la siguiente reacción sin purificación o caracterización adicional.
Síntesis de S 11 -4-1.
Al compuesto crudo S11-3 (0,1 16 mmol) en diclorometano (1 ,5 mi) se añadieron ácido acético (33 µ?, 0,58 mmol, 5 equiv.) y propilamina (48 µ?, 0,58 mmol, 5 equiv.). Después de 50 min, la solución fue de color rojo intenso. Después de 2 h, se añadió triacetoxiborohidruro sódico (123 mg, 0,58 mmol, 5 equiv.) a la mezcla de reacción. El color de la solución se volvió amarillo. Después de 17,5 h más, la mezcla de reacción se diluyó con bicarbonato sódico saturado acuoso (4 mi) y se extrajo con EtOAc (2 x 8 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (3 mi), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La purificación del aceite en bruto resultante por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (Biotage, 10 g, del 2 al 20% de EtOAc en gradiente de hexano) proporcionó 29 mg de S11-4-1 (57%) en forma de un aceite transparente: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,47-7,40 (m, 2 H), 7,40-7,30 (m, 5 H), 7,27-7,21 (m, 1 H), 7,07 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 4,97 (s, 2 H), 3,66 (s, 2 H), 2,99-2,89 (m, 2 H), 2,76-2,63 (m, 2 H), 2,58-2,48 (m, 5 H), 2,38 (s, 3 H) 1 ,72-1 ,58 (m, 2 H), 0,97 (d, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 432,40 (M-H).
Los siguientes intermedios se prepararon de acuerdo con los métodos usados para sintetizar S11-4-1.
Ejemplo 104. S1 1-4-2. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,48-7,30 (m, 7 H), 7,28-7,21 (m, 1 H), 7,06 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 4,97 (s, 2 H), 3,66 (s, 2 H), 2,98-292 (m, 2 H), 2,73-2,60 (m, 4 H), 2,35 (s, 3 H) 1 ,21 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 418,41 (M-H).
Ejemplo 105. S1 1 -4-3. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,47-7,40 (m, 2 H), 7,40-7,30 (m, 5 H), 7,27-7,21 (m, 1 H), 7,07 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 4,98 (s, 2 H), 3,61 (s, 2 H), 2,96-2,85 (m, 2 H), 2,70-2,60 (m, 2 H), 2,38-2,25 (m, 5 H), 1 ,91 -1 ,85 (m, 1 H), 0,95 (d, J = 6,1 Hz, 6 H); MS (ESI) m/z 446,40 (M-H).
Ejemplo 106. S1 1 -4-4. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,45-7,40 (m, 2 H), 7,40-7,30 (m, 5 H), 7,28-7,22 (m, 1 H), 7,07 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 5,00 (s, 2 H), 3,73 (s, 2 H), 2,92-2,85 (m, 2 H), 2,79-2,70 (m, 2 H), 2,34 (s, 3 H), 2,28 (s, 2 H), 0,92 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 460,41 (M-H).
Ejemplo 107. S1 1 -4-5. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,48-7,29 (m, 7 H), 7,28-7,20 (m, 1 H), 7,06 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 4,97 (s, 2 H), 3,76 (s, 2 H), 3,04-2,87 (m, 3 H), 2,80-2,69 (m, 2 H), 2,35 (s, 3 H), 1 ,16 (d, J = 6,7 Hz, 6 H); MS (ESI) m/z 432,39 (M-H).
Ejemplo 108. S11-4-6.
H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,48-7,40 (m, 2 H), 7,40-7,29 (m, 5 H), 7,27-7,22 (m, 1 H), 7,07 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 4,97 (s, 2 H), 3,85-3,67 (m, 2 H), 3,00-2,85 (m, 2 H), 2,81-2,65 (m, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 1 ,75-1 ,60 (m, 1 H), 1 ,49-1 ,36 (m, 1 H), 1 ,09 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,95 (d, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 446,43 (M-H).
Ejemplo 109. S1 1-4-7. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,48-7,40 (m, 2 H), 7,40-7,29 (m, 5 H), 7,27-7,22 (m, 1 H), 7,07 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 4,97 (s, 2 H), 3,85-3,67 (m, 2 H), 3,00-2,85 (m, 2 H), 2,81-2,65 (m, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 1 ,75-1 ,60 (m, 1 H), 1 ,49-1 ,36 (m, 1 H), 1 ,09 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,95 (d, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 446,46 (M-H).
Ejemplo 1 10. S11 -4-8. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,48-7,40 (m, 2 H), 7,40-7,29 (m, 5 H), 7,27-7,22 (m, 1 H), 7,07 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 4,97 (s, 2 H), 3,85-3,67 (m, 2 H), 3,00-2,85 (m, 2 H), 2,81-2,65 (m, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 1 ,75-1 ,60 (m, 1 H), 1 ,49-1 ,36 (m, 1 H), 1 ,09 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,95 (d, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 446,46 (M-H).
Ejemplo 111. S11-4-9. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,47-7,40 (m, 2 H), 7,40-7,30 (m, 5 H), 7,28-7,22 (m, 1 H), 7,07 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 4,97 (s, 2 H), 3,00-2,92 (m, 2 H), 2,81-2,70 (m, 2 H), 2,34 (s, 3 H), 1 ,20 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 446,47 (M-H).
Ejemplo 112. Compuesto 304.
S//7fes/'s G'e S77-5-7.
A una solución de diisopropilamida de litio (1 ,8 M en hexanos, 73 µ?, 0,132 mmol, 2,4 equiv.) y T EDA (41 µ?, 0,275 mmol, 6 equiv.) en THF (2 mi) a -78°C se añadió una solución del compuesto S11-4-1 (29 mg, 0,065 mmol, 1 ,1 equiv.) en THF (400 µ?) mediante adición gota a gota. Esto dio como resultado una solución de color rojo oscuro. Después de 10 min, se añadió una solución de enona S7-1 (27 mg, 0,055 mmol, 1 equiv.) en THF (400 µ?). Después de que se completara la adición, la mezcla de reacción se dejó calentar a -20°C durante 1 h. La reacción se interrumpió mediante la adición de cloruro de amonio (solución saturada, acuosa, 800 µ?) y se extrajo con EtOAc (2x30 mi). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. La purificación del aceite resultante por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (Biotage, 10 g, del 5 al 40% de EtOAc en gradiente de hexanos) proporcionó 25 mg de S11-5-1 (55%): 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,51 -7,46 (m, 2 H), 7,46-7,41 (m, 2 H), 7,40-7,29 (m, 6 H), 5,35 (s, 2 H), 4,90-4,75 (m, 2 H), 3,96 (d, J = 1 1 ,0 Hz, 1 H), 3,80-3,42 (m, 2 H), 3,26-3,16 (m, 1 H), 3,02-2,64 (m, 3 H), 2,62-2,40 (m, 10 H), 2,14 (d, J = 14,0 Hz, 1 H), 0,97-0,92 (3 H), 0,89-0,77 (m, 10 H), 0,27 (s, 3 H), 0,12 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 820,71 (M-H).
Síntesis de Compuesto 304.
Compuesto 304 A una solución de S11-5-1 (25 mg, 0,030 mmol, 1 equiv.) en 1 ,4-dioxano (1 mi) se añadió una solución acuosa de HF (50%, 300 µ?). Después de 15,5 h, la mezcla de reacción se vertió en una solución acuosa de K2HPO4 (3,6 g en 30 mi) y se extrajo con EtOAc (2x30 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se añadió paladio sobre carbono (10%, 16 mg) a una solución de este aceite en bruto en dioxano:MeOH (1 :1 , 1 mi). El matraz se equipó con un tapón de goma y se evacuó y se cargó de nuevo tres veces con gas hidrógeno. La reacción se agitó en una atmósfera (globo) de gas hidrógeno durante 1 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite para retirar el catalizador de paladio y se concentró a presión reducida. La HPLC preparativa de fase inversa del aceite resultante se realizó con un sistema Waters Autopurification usando una columna Polymerx 10 µ RP-? 100 R [30 x 21 ,20 mm, 10 micrómetros, disolvente A: HCI 0,05 N en agua, disolvente B: metanol; volumen de inyección: 1 ,5 mi (HCI 0,05 N en agua); gradiente: 30?70% B durante 15 min; recolección de fracciones dirigida a masas]. Las fracciones con el PM deseado, eluyendo durante 6,0-8,3 min, se recogieron y se liofilizaron para proporcionar 8,4 mg del compuesto deseado Compuesto 304 (45%): 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,73-4,62 (m, 1 H), 4,41-4,27 (m, 1 H), 4,10 (s, 1 H), 3,93-3,81 (m, 1 H), 3,43-3,24 (m, 1 H), 3,24-2,88 (m, 13 H), 2,36-2,18 (m, 2 H), 1 ,97-1 ,83 (m, 2 H), 1 ,70-1 ,54 (m, 1 H), 1 ,07 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 530,34 (M-H).
Los siguientes compuestos de Fórmula IV se prepararon de acuerdo con los métodos del Compuesto 304, usando el intermedio de 5-(benciloxi)-8-fluoro-7-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-6-carboxilato de fenilo N-sustituido en lugar de S11-4-1 Ejemplo 113. Compuesto 307.
Compuesto 307 Se preparó a partir de S11-4-2: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,74-4,62 (m, 1 H), 4,37-4,26 (m, 1 H), 4,09 (s, 1 H), 3,92-3,83 (m, 1 H), 3,49-3,34 (m, 4 H), 3,23-2,92 (m, 10 H), 2,38-2,27 (m, 1 H), 2,26-2,18 (m, 1 H), 1 ,72-1 ,58 (m, 1 H), 1 ,48 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 516,31 (M-H).
Ejemplo 1 14. Compuesto 306.
Compuesto 306 Se preparó a partir de S11-4-3: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,72-4,61 (m, 1 H), 4,40-4,29 (m, 1 H), 4,08 (s, 1 H), 3,93-3,83 (m, 1 H), 3,42-3,30 (m, 1 H), 3,24-2,92 (m, 13 H), 2,37-2,26 (m, 3 H), 1 ,70-1 ,58 (m, 1 H), 1 ,10 (t, J = 6,7 Hz, 6 H); MS (ESI) miz 544,36 (M-H).
Ejemplo 1 15. Compuesto 306.
Compuesto 306 Se preparó a partir de S11-4-4: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,71-4,61 (m, 1 H), 4,51-4,40 (m, 1 H), 4,09 (s, 1 H), 3,91-3,82 (m, 1 H), 3,59-3,49 (m, 1 H), 3,27-2,92 (m, 12 H), 2,38-2,17 (m, 2 H), 1 ,71-1 ,59 (m, 1 H), 1 ,19 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 558,35 (M-H).
Ejemplo 116. Compuesto 300.
Compuesto 300 Se preparó a partir de S11-4-5: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,57-4,39 (m, 2 H0, 4,09 (s, 1 H), 3,88-3,75 (m, 2 H), 3,39-3,26 (m, 1 H), 3,24-2,92 (m, 11 H), 2,37-2,18 (m, 2 H), 1,70-1,58 (m, 1 H), 1,48 (d, 5,9 Hz, 6 H); MS (ESI) m/z 530,32 (M-H).
Ejemplo 117. Compuesto 301.
Compuesto 301 Se preparó a partir de S11-4-6: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,51-4,41 (m, 2 H), 4,09 (s, 1 H), 3,84-3,74 (m, 1 H), 3,61-3,49 (m, 1 H), 3,43-3,39 (m, 1 H), 3,24-2,89 (m, 11 H), 2,36-2,17 (m, 2 H), 2,06-1,92 (m, 1 H), 1,83-1,57 (m, 2 H), 1,48-1,41 (m, 3 H), 1,09 (t, J= 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 544,36 (M-H).
Ejemplo 118. Compuesto 305.
Compuesto 30S Se preparó a partir de S11-4-7: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,56-4,41 (m, H), 4,08 (s, 1 H), 3,84-3,74 (m, 1 H), 3,61-3,50 (m, 1 H), 3,43-3,39 (m, 1 H), 3,24- 2,89 (m, 11 H), 2,36-2,17 (m, 2 H), 2,04-1 ,90 (m, 1 H), 1 ,81-1 ,57 (m, 2 H), 1 ,48-1 ,40 (m, 3 H), 1 ,09 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 544,36 (M-H).
Ejemplo 1 19. Compuesto 302.
Compuesto 302 Se preparó a partir de S11-4-8: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,56-4,41 (m, 2 H), 4,08 (s, 1 H), 3,84-3,74 (m, 1 H), 3,61-3,52 (m, 1 H), 3,43-3,39 (m, 1 H), 3,24-2,92 (m, 11 H), 2,36-2,17 (m, 2 H), 2,04-1 ,91 (m, 1 H), 1 ,81-1 ,54 (m, 2 H), 1 ,48-1 ,40 (m, 3 H), 1 ,10 (t, J = 7,3 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 544,43 (M-H).
Ejemplo 120. Compuesto 308.
Compuesto 308 Se preparó a partir de S11-4-9: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,61-4,37 ( 2 H), 4,07-3,99 (m, 2 H), 3,27-2,91 (m, 12 H), 2,37-2,18 (m, 2 H), 1 ,72-1 ,49 (m, H); MS (ESI) m/z 544,3 (M-H).
Ejemplo 121. Compuesto 400.
Síntesis de S12-1.
S12-1 A una solución del compuesto S1 -7 (10 g, 22,60 mmol, 1 ,0 equiv.) en MeOH se añadió trimetilortoformiato (4,8 g, 45,20 mmol, 2,0 equiv.) y TsOH H20 (0,13 g, 0,68 mmol, 0,03 equiv.) a ta. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante una noche y se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con H20 y se extrajo cón EtOAc. La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico y se evaporó a sequedad. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: EtOAc desde 100:1 hasta 30:1 ) para proporcionar el compuesto S12-1 en forma de un sólido de color amarillo claro (10 g, 91 %): 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,41 -7,45 (m, 2 H), 7,25-7,35 (m, 5 H), 7,16-7,21 (m, 1 H), 6,98 (d, J = 8,0 Hz, 2 H), 5,71 (s, 1 H), 5,04 (s, 2 H), 3,46 (s, 6 H), 2,29 (d, J = 2,4 Hz, 3 H).
Síntesis de S12-2.
S12-2 A bromuro S12-1 (500 mg, 1 ,02 mmol, 1 equiv.) en 1 ,4-dioxan1 anhidro (5 mi) se añadió bencilamina (0,165 mi, 1 ,50 mmol, 1 ,5 equiv.), carbonato de cesio (0,585 g, 1 ,80 mmol, 1 ,8 equiv.), XantPhos (70 mg, 0,12 mmol, 0,12 equiv.) y Pd2(dba)3 (20 mg, 0,02 mmol, 0,02 equiv.). La mezcla se cerró herméticamente, se desgasificó burbujeando nitrógeno seco a través de durante 5 min con agitación suave y se calentó a 160°C en un reactor de microondas Biotage durante 25 min y se enfrió a temperatura ambiente. El análisis LC/MS indicó consumo completo del material de partida y la aparición de la amina secundaria deseada S12-2 como el producto principal.
Un total de 2,45 g de bromuro S12-1 se procesó en baños de 500 mg por el procedimiento anterior. Las mezclas de reacción se combinaron, se diluyeron con bicarbonato sódico saturado acuoso (100 mi) y se extrajeron con EtOAc (200 mi x 1 ,50 mi x 2). Los extractos de EtOAc se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida. La cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice usando EtOAc/hexano del 0% al 10% proporcionó el producto deseado S12-2 en forma de un aceite de color naranja (1 ,68 g, 65%): Rf 0,70 (20% EtOAc/hexano); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,20-7,45 (m, 13 H), 7,05 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 5,55 (s, 1 H), 5,24 (t a, J = 6,1 Hz, 1 H), 5,14 (s, 2 H), 4,43 (d, J = 6,1 Hz, 2 H), 3,37 (s, 6 H), 2,26 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 516,3 (M+H), cale, para C3iH3iFNO5 5 6,2.
Síntesis de S12-3.
S12"3 A la amina secundaria S12-1 (1 ,47 g, 2,85 mmol, 1 equiv.) en DMF anhidra (6 mi) se añadió NaH (250 mg, 60% en aceite mineral, 6,30 mmol, 2,2 equiv.). La suspensión de color amarillo se agitó a ta durante 30 min. Se añadieron Na I (43 mg, 0,28 mmol, 0,1 equiv.) y bromuro de bencilo (0,82 mi, 6,90 mmol, 2,4 equiv.). La reacción (naranja intenso) se agitó a ta durante 24 h, se diluyó con EtOAc (100 mi), se lavó con bicarbonato sódico saturado acuoso (100 mi x 2) y salmuera (50 mi x 1 ), se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida. La cromatografía en columna sobre gel de sílice usando EtOAc/hexano del 0% al 10% proporcionó la amina terciaria deseada S12-3 como un aceite de color pálido (1 ,16 g, 67%): Rf 0,33 (10% EtOAc/hexano); H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,20-7,40 (m, 18 H), 6,99 (d, J = 8,0 Hz, 2 H), 5,72 (s, 1 H), 4,68 (s, 2 H), 4,20-4,40 (m a, 4 H), 3,32 (s, 6 H), 2,34 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 606,3 (M+H), cale, para C38H37FNO5 606,3. El compuesto se contaminó con el éster bencílico correspondiente (en lugar de éster fenílico), que no se retiró antes de la siguiente etapa.
Síntesis de S12-4.
A la diisopropilamina (0,30 mi, 2,12 mmol, 1 ,1 equiv.) en THF anhidro (10 mi) a -78°C se añadió n-BuLi (1 ,33 mi, 1 ,6 M/hexano, 2,12 mmol, 1 ,1 equiv.) gota a gota. La solución pálida se agitó a 0°C durante 30 min y se enfrío -78°C. Se añadió TMEDA (0,35 mi, 2,33 mmol, 1 ,2 equiv.), seguido de la adición del compuesto S12-3 (1 ,16 g, 1 ,92 mmol, 1 equiv., en 30 mi de THF) gota a gota durante un periodo de 5 min. La solución de color rojo intenso se agitó a -78°C durante 30 min. Se añadió LHMDS (2,12 mi, 1 ,0 M/THF, 1 ,1 equiv.), seguido de la adición de enona S7-1 (0,96 g, 1 ,92 mmol, en 10 mi de THF) gota a gota durante un periodo de 2 min. La solución de color amarillo resultante se calentó lentamente hasta 0°C durante un periodo de 3 h, se diluyó con EtOAc (200 mi) y bicarbonato sódico saturado acuoso (100 mi). La capa de EtOAc se recogió. La capa acuosa se extrajo con más EtOAc (50 mi x 2). La solución de EtOAc combinada se secó sobre sulfato sódico y se concentró en a presión reducida. La cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice usando EtOAc/hexano del 0% al 15% proporcionó el producto deseado en forma de un sólido de color amarillo (0,77 g, 40%): Rf 0,50 (EtOAc al 20%/hexano); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 15,82 (s, 1 H), 7,00-7,50 (m, 20 H), 5,79 (s, 1 H), 5,38 (s, 2 H), 5,04 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,50 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,00-4,40 (m, 4 H), 3,95 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 3,35 (s, 3 H), 3,20-3,30 (m, 3 H), 3,13 (s, 3 H), 2,95-3,05 (m, 1 H), 2,55-2,65 (m, 1 H), 2,50 (s, 6 H), 2,15-2,20 (m, 1 H), 0,85 (s, 9 H), 0,30 (s,. 3 H), 0,14 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 994,5 (M+H), cale, para CseHesFNsOgSi 994,6.
También se recuperaron 0,52 g del compuesto S12-3.
Síntesis de S12-5.
Al compuesto S12-4 (0,77 g, 0,78 mmol, 1 equiv.) en THF (10 mi) se añadió HCI 3 N/agua (2 mi, final [HCI] = 0,5 M). La solución de color amarillo intenso se agitó a ta durante 2 h, se diluyó con EtOAc (100 mi), se lavó con bicarbonato sódico saturado acuoso (100 mi x 2) y salmuera (50 mi x 1 ), se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida para producir el producto en bruto en forma de un sólido de color naranja intenso (0,72 g, 97%): MS (ESI) m/z 948,4 (M+H), cale, para Cse^FNaOeSi 948,4.
Síntesis de S12-7-1.
Al aldehido S12-5 (95 mg, 0,10 mmol, 1 equiv.) en 1 ,2-dicloroetano (2 mi) se añadió glicina bencil éster (50 mg, sal TsOH, 0,15 mmol, 1 ,5 equiv.), trietilamina (0,022 mi, 0,16 mmol, 1 ,6 equiv.), HOAc (0,024 mi, 0,42 mmol, 4 equiv.) y Na(OAc)3-3H (32 mg, 0,15 mmol, 1 ,5 equiv.). La solución de color rojo intenso se volvió de color amarillo y se agitó a ta durante 1 h. Se añadieron isobutiraldehído (0,032 mi, 0,35 mmol, 3,5 equiv.) y Na(OAc)3BH (82 mg, 0,40 mmol, 4 equiv.). La reacción se agitó a ta durante 1 h, se diluyó con EtOAc (20 mi), se lavó con bicarbonato sódico saturado acuoso (10 mi x 1 ) y salmuera (10 mi x 1 ), se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida para producir el producto en bruto (S12-7-1 ) en forma de un residuo de color amarillo: MS (ESI) m/z 1 153,5 (M+H), cale, para C69H78FN4O9SÍ 1 153,6.
Síntesis de S 12-8-1.
El compuesto en bruto S12-7-1 se disolvió en THF (1 ,5 mi) y se añadió con HF/agua al 50% (0,5 mi). La solución amarilla se agitó a ta durante 2 h y se añadió en K2HP04/agua (5 g en 20 mi de agua) con agitación. La mezcla se extrajo con EtOAc (20 mi x 3). Los extractos de EtOAc se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico y e concentraron a presión reducida para producir el producto en bruto en forma de un residuo de color amarillo: MS (ESI) m/z 1039,5 (M+H), cale, para C63H63FN4O9 1038,5.
El producto en bruto que se ha indicado anteriormente (0,10 mmol, 1 equiv.) se disolvió en metanol (3 mi) y 1 ,4-dioxano (1 mi). Se añadieron Pd al 10%-C (21 mg, 0,01 mmol, 0,1 equiv.) y HCI 0,5 N/metanol (1 mi). La mezcla se purgó con hidrógeno y se agitó en 1 atmósfera de hidrógeno a ta durante 1 h. El catalizador se retiró por filtración con un lecho Celite pequeño y se lavó con metanol (2 mi x 3). La solución de metanol de color amarillo se concentró a presión reducida para proporcionar el producto en bruto, que se purificó con HPLC para producir el producto deseado S12-8-1 ) en forma de un sólido de color amarillo (26 mg, sal HCI, 37% global): 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,52 (s, 2 H), 4,08 (s, 1 H), 4,02 (s, 2 H), 2,90-3,50 (m, 8 H), 2,10-2,30 (m, 3 H), 1 ,55-1 ,70 (m, 1 H), 1 ,00 (d, J = 6,1 Hz, 6 H): MS (ESI) m/z 591 ,4 (M+H), cale, para C28H36FN4O9 591 ,3.
Síntesis de Compuesto 400.
El aminoácido anterior S12-8-1 (20 mg, sal HCI, 0,029 mmol, 1 equiv.) se disolvió en DMF anhidra (5 mi). Se añadieron DIEA (0,0067 mi, 0,039 mmol, 1 ,3 equiv.) y DCC (12 mg, 0,058 mmol, 2 equiv.). La reacción se agitó a ta durante 24 h. Se añadió 0,5 N HCI/metanol (0,5 mi). La mezcla de reacción se añadió gota a gota en éter (500 mi) con agitación vigorosa. Los precipitados de color amarillo se recogieron sobre un lecho Celite pequeño, se lavaron con más éter (10 mi x 3) y se eluyeron con metanol (10 mi x 3). La solución de metanol de color amarillo se concentró a presión reducida para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por HPLC para producir el producto deseado Compuesto 400 en forma de un sólido de color naranja (8 mg, 43%): 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,52 (s, 2 H), 4,10 (s, 1 H), 3,86 (s a, 2 H), 2,90-3,50 (m, 8 H), 2,37 (t, J = 14,6 Hz, 1 H), 2,15-2,30 (m, 2 H), 1 ,60-1 ,70 (m, 1 H), 1 ,08 (d, J = 6,7 Hz, 6 H); MS (ESI) m/z 573,5 (M+H), cale, para C^H^FN- } 573,2.
Los siguientes compuestos se prepararon de forma similar al Compuesto 400 usando el intermedio apropiado S12-6 o S12-7.
Ejemplo 122. Compuesto 426: Compuesto 426 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,43 (s, 2 H), 4,10 (s, 1 H), 3,80 (s, 2 H), 2,90-3,40 (m, 9 H), 2,31-2,41 (m, 1 H), 2,22-2,30 (m, 1 H), 1 ,60-1 ,72 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 517,4 (M+H), cale, para C24H26FN408 517,2.
Ejemplo 123. Compuesto 416: Compuesto 416 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,53 (s a, 2 H), 4,17 (s, 1 H), 3,87 (s a, 2 H), 2,90-3,30 (m, 12 H), 2,32-2,42 (m, 1 H), 2,23-2,30 (m, 1 H), 1 ,60-1 ,72 (m, 1 H); MS (ESI) miz 531 ,3 (M+H), cale, para C25H28FN408 531 ,2.
Ejemplo 124. Compuesto 403: Compuesto 403 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,65 (d, J = 14,4 Hz, 1 H), 4,05-4,15 (m, 2 H), 3,80 (dd, J = 4,3, 9,8 Hz, 1 H), 2,90-3,30 (m, 9 H), 2,32-2,42 (m, 1 H), 2,23-2,30 (m, 1 H), 2,10-2,20 (m, 1 H), 1 ,60-1 ,73 (m, 2 H), 1 ,38-1 ,45 (m, 1 H), 0,92 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,87 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 573,4 (M+H), cale, para C28H34FN408 573,2.
Ejemplo 125. Compuesto 411 : Compuesto 411 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,22 (s a, 1 H), 4,1 1 (s, 1 H), 3,96 (s a, 1 H), 2,95-3,45 (m, 12 H), 2,35-2,45 (m, 1 H), 2,20-2,30 (m, 2 H), 1 ,61 -1 ,72 (m, 1 H), 1 ,52-1 ,60 (m, 1 H), 1 ,42-1 ,50 (m, 1 H), 0,93 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,85 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 587,5 (M+H), calc. para C29H36FN4O8 587,2.
Ejemplo 126. Compuesto 419: Compuesto 419 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,66 (d, J = 14,0 Hz, 1 H), 4,1 1 (s, 1 H), 4,09 (d, J = 14,0 Hz, 1 H), 3,78 (dd, J = 4,3, 9,2 Hz, 1 H), 2,85-3,30 (m, 9 H), 2,30-2,42 (m, 1 H), 2,21 -2,30 (m, 1 H), 2,10-2,20 (m, 1 H), 1 ,58-1 ,70 (m, 2 H), 1 ,37-1 ,46 (m, 1 H), 0,91 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,85 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 573,3 (M+H), calc. para C28H34FN4O8 573,2.
Ejemplo 127. Compuesto 428: Compuesto 428 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,20 (s a, 1 H), 4,1 1 (s, 1 H), 3,85 (s a, 1 H), 2,95-3,30 (m, 12 H), 2,35-2,45 (m, 1 H), 2,20-2,30 (m, 2 H), 1 ,61 -1 ,72 (m, 1 H), 1 ,52-1 ,60 (m, 1 H), 1 ,43-1 ,51 (m, 1 H), 0,93 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,85 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 587,3 (M+H), cale, para C29H36FN408 587,2.
Ejemplo 128. Compuesto 410: Compuesto 410 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,58 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 4,40 (d, J = 14,4 Hz, 1 H), 4,12 (s, 1 H), 3,81 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 4,41 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 3,17-2,99 (m, 10 H), 2,43-2,35 (m, 1 H), 2,29-2,26 (m, 1 H), 2,05-1 ,89 ( m , 6 H), 1 ,69-1 ,65 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 571 ,1 (M+H), cale, para C20H32FN4O8 571 ,2.
Ejemplo 129. Compuesto 418: Compuesto 418 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,55 (d, J = 14,4 Hz, 1 H), 4,41 (d, J = 14,4 Hz, 1 H), 4,14 (s, 1 H), 3,83 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,41 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 3,13-2,98 (m, 10 H), 2,43-2,36 (m, 1 H), 2,29-2,26 (m, 1 H), 1 ,99-1 ,90 ( m , 6 H), 1 ,72-1,61 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 571 ,1 (M+H), calc. para C28H32FN408 571 ,2.
Ejemplo 130. Compuesto 401 : Compuesto 401 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,13 (s, 1 H), 3,86 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 3,22-2,99 (m, 13 H), 2,41-2,15 (m, 3 H), 1 ,68-1 ,62 (m, 1 H), 1 ,06 (d, J = 6,4 Hz,3 H), 0,99 (d, J = 4,4 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 573,0 (M+H), calc. para C2eH34FN Oe 573,2.
Ejemplo 131. Compuesto 402: Compuesto 402 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,58 (s, 2 H), 4,12 (s, 1 H), 3,21 -2,86 (m, 13 H), 2,42-2,34 (m, 1 H), 2,27-2,18 (m, 1 H), 1 ,74-1 ,62 (m, 1 H), 1 ,30 (s, 6 H); MS (ESI) m/z 559,1 (M+H), calc. para C27H32FN4O8 559,2.
Ejemplo 132. Compuesto 422: Compuesto 422 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,64-4,63 (m, 2 H), 4,12 (s, 1 H), 3,21-2,98 (m, 12 H), 2,40-2,33 (m, 1 H), 2,28-2,25 (m, 1 H), 1 ,71-1 ,62 (m, 1 H), 1 ,32-1 ,29 (m, 4 H); MS (ESI) m/z 557,0 (M+H), calc. para C27H30FN4O8 557,2.
Ejemplo 133. Compuesto 425: Compuesto 425 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,57 (s, 2 H), 4,11 (s, 1 H), 3,06-2,98 (m, 12 H), 2,43-2,25 (m, 3 H), 1 ,84-1 ,55 (m, 6 H), 1 ,32-1 ,29 (m, 2 H); MS (ESI) m/z 585,1 (M+H), calc. para C29H34FN4O8 585,2.
Ejemplo 134. Compuesto 407: Compuesto 407 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,12 (s, 1 H), 3,83 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 3,35-2,84 (m, 14 H), 2,40-2,33 (m, 3 H), 1 ,71-1 ,61 (m, 1 H), 1 ,07-1 ,06 (d, J = 6,4 Hz, 3 H), 0,99 (d, J = 6,4 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 573,0 (M+H), calc. para C ^F^Oe 573,2.
Ejemplo 135. Compuesto 413: Compuesto 413 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,1 1 (s, 1 H), 3,85 (d, J = 10,0 Hz, 1 H), 3,24-2,91 (m, 14 H), 2,40-2,16 (m, 3 H), 1 ,70-1 ,56 (m, 2 H), 1 ,07-1 ,06 (m, 1 H), 0,98-0,83 (m, 6 H); MS (ESI) m/z 587,1 (M+H), calc. para C29H36FN 08 581 ,2.
Ejemplo 136. Compuesto 424: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 7,26-7,25 (m, 5 H), 4,23-4,14 (m, 2 H), 4,09 (s, 1 H), 3,53 (t, J = 10,8 Hz, 1 H), 3,14-2,97 (m, 14 H), 2,39-2,23 (m, 2 H), 1 ,67-1 ,60 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 621 ,0 (M+H), calc. para C32H34FN4O8 621 ,2.
Ejemplo 137. Compuesto 421 : Compuesto 421 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,45 (s, 2 H), 4,02 (s, 1 H), 3,89 (s, 2 H), 3,04-2,87 (m, 9 H), 2,60-2,52 (m, 1 H), 2,31 -2,14 (m, 2 H), 1 ,49 (s, 9 H); MS (ESI) m/z 573,2 (M+H), calc. para C28H34FN4O8 573,2.
Ejemplo 138. Compuesto 415: Compuesto 415 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,1 1 (s, 1 H), 3,36-3,25 (m, 5 H), 3,05-2,97 (m, 9 H), 2,48-2,36 (m, 1 H), 2,27-2,24 (m, 1 H), 1 ,74-1 ,62 (m, 1 H), 1 ,48 (d, J = 6,0 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 545,0 (M+H), calc. para C26H30FN4O8 545,2.
Ejemplo 139. Compuesto 406: Compuesto 406 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,12 (s, 1 H), 3,25-2,86 (m, 14 H), 2,43-2,25 (m, 2 H), 1,71-1,61 (m, 1 H), 1,49 (d, J = 6,0 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 545,0 (M+H), cale, para C26H30 N4O8545,2.
Ejemplo 140. Compuesto 423: Compuesto 423 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4, 1 (s, 3 H),' 3,90 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 3,25-2,97 (m, 14 H), 2,41-2,25 (m, 2H), 1,71-1,61(m, 1H); MS (ESI) m/z 561,4 (M+H), cale, para C26H30FN4O9561 ,2.
Ejemplo 141. Compuesto 420: Compuesto 420 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,09 (s, 1 H), 3,85 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,19-2,95 (m, 12 H), 2,39-2,32 (m, 2 H), 2,24-2,19 (m, 1 H), 1,69-1,52 (m, 4 H), 1,51- 1,28 (m, 1 H), 1,16-1,14 (m, 2 H), 0,97-0,95 (m, 6 H); MS (ESI) m/z 587,3 (M+H), cale, para C29H36FN4O8587,2.
Ejemplo 42. Compuesto 409: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 7,26-7,25 (m, 5 H), 4,17-4,11 (m, 3 H), 3,53 (t, J= 10,8 Hz, 1 H), 3,15-2,97 (m, 14 H), 2,38-2,24 (m, 2H), 1,66-1,63 (m, 1H); MS (ESI) m/z 621 ,0 (M+H), cale, para C32H34FN4O8621 ,2.
Ejemplo 143. Compuesto 405: Compuesto 405 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,51 (d, J = 12,8 Hz, 1 H), 4,20 (d, J = 12,8 Hz, 1 H), 4,11 (s, 1 H), 3,84 (t, J = 11,2 Hz, 1 H), 3,21-2,81 (m, 11 H), 2,37-2,33 (m, 4 H), 2,06-2,04 (m, 2 H), 1,71-1,64 (m, 1H); MS (ESI) m/z 557,3 (M+H), cale, para C27H30FN4O8557,2.
Ejemplo 144. Compuesto 412: Compuesto 412 1H RMN (400 MHz, CD30D) d 4,48-4,46 (m, 1 H), 4,18 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 4,12 (s, 1 H), 3,86-3,83 (m, 1 H), 3,35-3,29 (m, 2 H), 3,24-2,97 (m, 9 H), 2,81 -2,77 (m, 2 H), 2,38-2,24 (m, 3 H), 2,12-2,01 (m, 2 H), ,66 (m, 1 H); MS (ESI) /z 557,0 (M+H), cale, para C27H3oFN408 557,2.
Ejemplo 145. Compuesto 404: Compuesto 404 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 5,52, 5,40 (m, 1 H Total), 4,63 (d, J =14,0 Hz, 1 H), 4,52 (d, J = 14,0 Hz, 1 H), 4,10 (s, 1 H), 4,06-3,97 (m, 1 H), 3,86-3,81 (m, 1 H), 3,04-2,96 (m, 10 H), 2,60-2,48 (m, 1 H), 2,49-2,26 (m, 3 H), 1 ,69-1 ,59 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 575,1 (M+H), cale, para C27H29F2N408 575,2.
Ejemplo 146. Compuesto 414: Compuesto 414 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,72-4,62 (m, 2 H), 4,28-4,17 (m, 1 H), 4,12 (s, 1 H), 3,75-3,67 (m, 1 H), 3,49-3,40 (m, 1 H), 3,28-2,94 (m, 10 H), 2,42-2,33 (m, 1 H), 2,31 -2,22 (m, 1 H), 2,09-1 ,99 (m, 1 H), 1 ,71 -1 ,60 (m, 1 H), 1 ,39-1 ,34 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 573,1 (M+H), cale, para C27H30F2N4O9 573,2.
Ejemplo 147. Compuesto 417: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4, Compuesto 417 72-4,62 (m, 2 H), 4,21 (d, J = 13,2 Hz, 1 H), 4,13 (s, 1 H), 3,72 (d, J = 13,2 Hz, 1 H), 3,49-3,40 (m, 1 H), 3,27-2,94 (m, 10 H), 2,40-2,22 (m, 2 H), 2,10-1 ,99 (m, 2 H), 1 ,71-1 ,60 (m, 1 H); MS (ESI) m/z 573,0 (M+H), cale, para C27H3oF2N409 573,2.
Ejemplo 148. Compuesto 427 Síntesis de S13-1.
A un matraz de fondo redondo de 250 mi se añadió el compuesto S1-4 (14,47 g, 56,30 mmol, 1 ,0 equiv, en bruto), bromuro de tetrabutilamonio (0,90 g, 2,80 mmol, 0,05 equiv.), 1 ,2-dicloroetano (60 mi) y agua (60 mi). La bi-capa transparente se enfrió a 20 °C en un baño de agua. Se añadió ácido nítrico (7,2 mi, 70% en peso, 1 12,60 mmol, 2,0 equiv.). Después de la adición, la temperatura de reacción se elevó lentamente hasta 26 °C. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche (19 h). El análisis por TLC (heptano/EtOAc = 9,5/0,5) mostró que la reacción se completó. La capa orgánica se separó, se lavó con agua (60 mi x 2) y salmuera, y se secó sobre sulfato sódico anhidro. El disolvente se retiró para dar el compuesto S13-1 en forma de un aceite pardo, que solidificó después de un periodo de reposo (17,71 g, cuantitativo). El producto en bruto se usó directamente para la siguiente etapa.
Síntesis de S13-2.
A un matraz de fondo redondo de 250 mi se añadió el compuesto S13-1 (17,7 g, 56,30 mmol 1 ,0 equiv.), acetona (177 mi), carbonato potásico anhidro (15,6 g, 113,00 mmol, 2,0 equiv.) y yoduro potásico (0,47 g, 2,80 mmol, 0,05 equiv.). A la suspensión agitada a temperatura ambiente se añadió bromuro de bencilo (7,03 mi, 59,10 mmol, 1 ,05 equiv.). La suspensión se calentó después a 56°C durante 4 h. El análisis por TLC (heptano/EtOAc = 9/1 ) mostró que la reacción se completó. El sólido se retiró por filtración y se lavó con acetona (30 mi). El filtrado se concentró para dar una pasta. La pasta se repartió entre metil t-butil éter (MTBE, 120 mi) y agua (80 mi). La capa orgánica se lavó con agua (80 mi) y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar el compuesto S13-2 en forma de un aceite pardo (21 ,09 g, 98%). El producto en bruto se usó directamente para la siguiente etapa.
Síntesis de S13-3 A un matraz de fondo redondo de 1 I se añadió el compuesto S13-2 (21 ,08 g, 55,40 mmol, 1 ,0 equiv.) y THF (230 ml). La solución se enfrió en un baño de agua fría a 10°C. A otro matraz de fondo redondo 500 ml que contiene agua (230 ml), hidrosulfito sódico (Na2S204, 56,7 g, 276,80 mmol, 5,0 equiv.) se añadió lentamente con agitación. La solución acuosa de hidrosulfito sódico se añadió a la solución de THF del compuesto S13-2. La temperatura se elevó rápidamente desde 10°C hasta 20,4°C después del a adición. La suspensión de .color amarillo se agitó mientras que el baño de agua fría se calentó lentamente hasta una temperatura ambiente durante una noche para dar una solución turbia de color naranja. La temperatura de reacción durante este periodo estuvo entre 15°C a 19°C. El análisis por TLC (heptano/EtOAc = 9/1 ) mostró que la reacción se completó. La solución turbia de color naranja se diluyó con EtOAc (460 ml). La capa orgánica se lavó con agua (150 ml x 2) y salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró a presión reducida para dar el producto en bruto en forma de un aceite pardo. El producto en bruto se purificó por columna de gel de sílice ultrarrápida con heptano/EtOAc 9/1 para producir el producto deseado S13-3 (15,83 g, 80%, 3 etapas).
Síntesis de S13-4.
Al compuesto S13-3 5,50 g, 16,65 mmol, 1 equiv. en DMF (30 ml) se añadió Boc20 (8,54 g, 39,13 mmol, 2,5 equiv.), DIEA (8,18 ml, 46,96 mmol, 3 equiv.) y DMAP (102 mg, 0,84 mmol, 0,05 equiv.). La solución de reacción se agitó a ta durante una noche, se diluyó con acetato de etilo (300 mi), se lavó con agua (500 mi), bicarbonato sódico saturado acuoso (100 mi) y salmuera (100 mi), se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida. La cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (0% ? 5% acetato de etilo/hexanos) proporcionó el producto deseado S13-4 en forma de un sólido de color blanco (6,12 g, 71 %): Rf 0,80 (acetato de etilo al 20%/hexanos); MS (electronebulización) m/z 574,3 (M+Na), cale, para C3iH34FNNaO7 574,2.
Síntesis de S13-5.
A diisopropilamina (1 ,70 mi, 12,00 mmol, 1 ,2 equiv.) en THF ( 0 mi) a -78°C se añadió gota a gota nBuLi (4,80 mi, 2,5 M/hexano, 12,00 mmol, 1 ,2 equiv.). La reacción se agitó a 0°C durante 10 min y se enfrío de nuevo a -78°C. El compuesto S13-4 (5,52 g, 10,00 mmol, 1 equiv.) en THF (10 mi) se añadió gota a gota durante un periodo de 5 min. La solución de color naranja intenso resultante se agitó a -78°C durante 30 min. Se añadió gota a gota DMF anhidro (0,98 mi, 12,50 mmol, 1 ,25 equiv.). La solución de color amarillo claro resultante se agitó a -78°C durante 30 min. Se añadió ácido acético (0,90 mi) a -78°C. La reacción se calentó a ta, se diluyó con bicarbonato sódico saturado acuosa (100 mi) y se extrajo con acetato de etilo (50 mi x 3). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida. La cromatografía en columna ultrarrápida con acetato de etilo/hexanos (0%? 10%) proporcionó el producto deseado S13-5 en forma de una espuma naranja (2,04 g, 43%): Rf 0,45 (acetato de etilo al 20%/hexano); MS (electronebulización) m/z 534,3 (M+CH3OH+Na), cale, para C^HaoFNNaOy 534,2.
Síntesis de S13-6-1.
Al compuesto S13-5 (1 ,00 g, 2,08 mmol, 1 equiv.) en 1 ,2-dicloroetano (10 mi) se añadió (R)-(-)-leucinol (0,27 g, 2,30 mmol, 1 ,1 equiv.), ácido acético (0,30 mi, 5,24 mmol, 2,5 equiv.) y triacetoxiborohidruro sódico (0,66 g, 3,1 1 mmol, 1 ,5 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 1 h, se diluyó con acetato de etilo (50 mi), se lavó con bicarbonato sódico saturado acuosa (50 mi) y salmuera (50 mi), se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida para dar el producto en bruto en forma de un sólido de color amarillo (cuantitativo): Rf 0,55 (acetato de etilo); MS (electronebulización) m/z 581 ,1 (M+H), cale, para C33H42FN206 581 ,3.
Síntesis de S13-7-1.
Al compuesto S13-6-1 (0,52 g, 0,90 mmol) en acetonitrilo (20 mi) se añadió bicarbonato sódico (0,16 g, 1 ,95 mmol, 2,2 equiv.), bromuro de alilo (0,15 mi, 1 ,80 mmol, 2,0 equiv.) y yoduro de tetrabutilamonio (33 mg, 0,09 mmol, 0,1 equiv.). La mezcla de reacción se calentó a 70°C durante 24 h, se enfrió a ta, se diluyó con agua (100 mi) y se extrajo con acetato de etilo (100 mi x 1 , 50 mi x 2). Los extractos de acetato de etilo se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida. La cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (0% ? 60% acetato de etilo/hexanos) proporcionó el producto deseado S13-7-1 en forma de un sólido de color blanco (0,37 g, 66%): Rf 0,60 (acetato de etilo al 30% /hexano); H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,25-7,35 (m, 8 H), 7,06 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 5,70-5,81 (m, 1 H), 5,18 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,10 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 5,00 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,85 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 3,45-3,80 (m, 4 H), 3,10-3,28 (m, 1 H), 2,99 (dd, J = 8,0, 14,0 Hz, 1 H), 2,80-2,90 (m, 1 H), 2,33 (d, J = 2,4 Hz, 3 H), 1 ,43 (s, 9 H), 1 ,35-1 ,60 (m, 2 H), 1 ,05-1 ,15 (m, 1 H), 0,90 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,87 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); MS (electronebulización) m/z 621 ,5 (M+H), cale, para C36H46FN206 621 ,3.
Síntesis de S 13-8-1.
Al compuesto S13-7-1 (0,35 g, 0,56 mmol, 1 equiv.) en cloruro de metileno (10 mi) se añadió trietilamina (0,16 mi, 1 ,15 mmol, 2 equiv.), DMAP (14 mg, 0,11 mmol, 0,2 equiv.) y cloruro de metanosulfonilo (65 µ?_, 0,84 mmol, 1 ,5 equiv.). La solución de reacción se agitó a ta durante 1 h, se diluyó con acetato de etilo (100 mi), se lavó con bicarbonato sódico saturado acuoso (50 mi x 2) y salmuera (50 mi), se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida. La cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (0%? 10% acetato de etilo/hexanos) proporcionó el producto deseado en forma de un aceite de color amarillo (0,36 g, 80%): Rf 0,60 (acetato de etilo al 20%/hexano); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,97, 7,83 (s a, 1 H, combinado), 7,20-7,50 (m, 8 H), 7,05 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 5,90-6,08 (m, 1 H), 5,19-5,20 (m, 2 H), 4,92-5,03 (m, 2 H), 3,94-4,02, 3,45-3,75, 3,15-3,30, 3,00-3,10, 2,55-2,80 (m, 7 H combinado), 2,33 (d, J = 1 ,8 Hz, 3 H), 1 ,30-1 ,90 (m, 3 H), 1 ,46 (s, 9 H), 0,80-0,92 (m, 6 H); MS (electronebulización) m/z 639,2 (M+H), cale, para C36H45CIFN205 639,3.
Síntesis de S13-9-1.
Al compuesto S13-8-1 (0,22 g, 0,34 mmol, 1 equiv.) en DMF anhidra (15 mi) se añadió yoduro de tetrabutilamonio (25 mg, 0,068 mmol, 0,2 equiv.) y hidruro sódico (27 mg, 60% en aceite mineral, 0,68 mmol, 2 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 5 h, se diluyó con acetato de etilo (200 mi), se lavó con bicarbonato sódico saturado acuoso (200 mi), agua (200 mi) y salmuera (100 mi), se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida. La cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (0% - 8% acetato de etilo/hexanos) proporcionó el producto deseado S13-9-1 en forma de un aceite incoloro (85 mg, 42%): Rf 0,75 (15% acetato de etilo/hexano); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) mezcla de tautómeros, complejo; MS (electronebulización) m/z 603,5 (M+H), cale, para C36H44FN2O5 603,3.
Síntesis de S13-10-1.
A diisopropilamina (44 µ?, 0,31 mmol, 2,2 equiv.) en THF anhidro (1 mi) a -78 °C se añadió gota a gota nBuLi (0,20 mi, 1 ,6 M/hexanos, 0,32 mmol, 2,2 equiv.). La solución de reacción se agitó a 0°C durante 10 min y se enfrió de nuevo a -78°C. Se añadió TMEDA (53 µ?, 0,35 mmol, 2,5 equiv.), seguido de la adición gota a gota del compuesto S13-9-1 (85 mg, 0,14 mmol, 1 equiv.) en THF anhidro (2 mi) durante un periodo de 3 min. La solución de color rojo intenso resultante se agitó a -78°C durante 30 min. Se añadió gota a gota enona S7-1 (68 mg, 0,14 mmol) en THF anhidro (2 mi). La solución de color marrón claro resultante se calentó gradualmente con agitación desde -78°C hasta -20°C durante un periodo de 1 h. Se añadió (0,1 mi). La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, se lavó con bicarbonato sódico saturado acuoso (50 mi) y salmuera (50 mi), se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida. La cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (0%? 20% acetato de etilo/hexanos) proporcionó el producto deseado S13-10-1 en forma de un aceite de color amarillo (103 mg, 74%): Rf 0,20 (acetato de etilo al 10% /hexano); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) mezcla de tautómeros, complejo; MS (electronebulización) m/z 991 ,8 (M+H), cale, para C56H72FN4OgSi 991 ,5.
Síntesis del Compuesto 427.
Compuesto 427 Al compuesto S13-10-1 (21 mg, 0,021 mmol) en THF (1 mi) se añadió HF acuoso al 48% (1 mi). Después de agitar a ta durante una noche, la solución de reacción de color amarillo se añadió lentamente a K2HPO4 acuoso al 25% (40 mi) con agitación rápida. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (20 mi x 3). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida para dar el producto en bruto en forma de un residuo de color amarillo: MS (electronebulización) m/z 117,6 (M+H), cale, para C56H72FN409Si 777,4.
Al intermedio en metanol que se ha indicado anteriormente (3 mi) y 1 ,4-dioxano (1 mi) se añadió HCI 0,5 M /metanol (1 mi) y Pd al 10%-C (9 mg, 0,004 mmol, 0,2 equiv.). La mezcla se purgó con hidrógeno y se agitó en 1 atm de hidrógeno a ta durante 2 h. El catalizador se retiró por filtración con un lecho Celite pequeño y se lavó con metanol (1 mi x 3). El filtrado se concentró a presión . reducida. La purificación por HPLC preparativa proporcionó el producto deseado Compuesto 427 en forma de un sólido de color amarillo claro (4,1 mg, 33% global): H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,83 (s, 1 H), 4,66 (s, 1 H), 4,08 (s, 1 H), 2,80-3,70 (m, 15 H), 2,05-2,30 (m, 1 H), 1 ,70-1 ,90 (m, 3 H), 1 ,45-1 ,75 (m, 1 H), 0,97-1 ,10 (m, 9 H); MS (electronebulización) m/z 601 ,5 (M+H), cale, para C31H42FN4O7 601 ,3.
Ejemplo 149. Compuesto 408.
Síntesis de S13-12-1.
Al compuesto S13-10-1 (80 mg, 0,081 mmol, 1 equiv.) en cloruro de metileno (2 mi) se añadió ácido /,/V-dimetilbarbitúrico (31 mg, 0,25 mmol, 3 equiv.) y Pd(PPh3)4 (4,7 mg, 0,004 mmol, 0,05 equiv.). La mezcla de reacción se desgasificó mediante nitrógeno burbujeante durante 2 min y se calentó a 40°C con agitación durante 24 h. La agitación continuó a ta durante 24 h más. Se añadió bicarbonato sódico saturado acuoso (10 mi). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (10 mi x 3). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida para producir el producto en bruto en forma de un sólido de color amarillo: MS (electronebulización) m/z 951 ,8 (M+H), cale, para C53H68FN4O9S1 951 ,5.
Síntesis del Compuesto 408.
Se preparó a partir del compuesto S13-12-1 (0,027 mmol) usando procedimientos similares para el Compuesto 427 (sólido de color naranja, 4,6 mg, 30% global): 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,56 (d, J = 15,9 Hz, 1 H), 4,36 (d, J = 15,9 Hz, 1 H), 4,08 (s, 1 H), 3,75 (dd, J = 3,6, 15,3 Hz, 1 H), 3,60-3,68 (m, 1 H), 2,85-3,15 (m, 11 H), 2,15-2,25 (m, 1 H), 1 ,50-1 ,85 (m, 4 H), 1 ,03 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 1 ,00 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); MS (electronebulización) m/z 559,5 (M+H), cale, para C28H36FN407 559,3.
Ejemplo 150 Compuesto 429.
Compuesto 429 Al compuesto S13-12-1 (0,054 mmol) en 1 ,2-dicloroetano (5 mi) se añadió ácido acético (10 µ?, 0,17 mmol, 3 equiv.), formaldehído (8 µ?, solución acuosa al 36,5%, 0,11 mmol, 2 equiv.) y triacetoxiborohidruro sódico (27 mg, 0,13 mmol, 2,5 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 4 h. Se añadió más cantidad de formaldehído (8 µ?, solución acuosa al 36,5%, 0,11 mmol, 2 equiv.) y triacetoxiborohidruro sódico (10 mg, 0,048 mmol, 0,9 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 20 min más. Se añadió bicarbonato sódico saturado acuoso (20 mi). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (20 mi x 3). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida para producir el producto en bruto en forma de un sólido de color amarillo: MS (electronebulización) miz 965,4 (M+H), cale, para C54H70FN4O9S1 965,5.
El intermedio que se ha indicado anteriormente se desprotegió después usando procedimientos similares para el Compuesto 427 para dar el producto deseado Compuesto 429 en forma de un sólido de color naranja (5,6 mg, 15% global): 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 4,55-5,00 (m, 2 H), 4,09 (s, 1 H), 3,45-3,85 (m, 4 H), 2,85-3,20 (m, 12 H), 2,05-2,30 (m, 2 H), 1 ,50-1 ,85 (m, 3 H), 1 ,00-1 ,10 (m, 6 H); MS (electronebulización) miz 573,5 (M+H), cale, para C29H38FN4O7 573,3.
Ejemplo 151 . Actividad Antibacteriana.
Las actividades antibacterianas para los compuestos de la invención se estudiaron de acuerdo con los siguientes protocolos.
Ensayo de Concentración Inhibidora Mínima (MIC) Se determinaron las MIC de acuerdo con las directrices del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI) (por ejemplo, CLSI. Performance standards for antimícrobial susceptibility testing, 19° complemento de información.
Document de CLSI M100-S19, CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898, Estados Unidos, 2009). En resumen se descongelaron cepas bacterianas congeladas y se subcultivaron en caldo de Mueller Hinton (MHB) u otro medio apropiado (Streptococcus requiere sangre y Haemophilus requiere hemina y NAD). Después de la incubación durante una noche, las cepas se subcultivaron en Agar de Mueller Hinton y se incubaron de nuevo durante una noche. Se observaron las colonias con respecto a la morfología de colonia apropiada y ausencia de contaminación. Se seleccionaron colonias aisladas para preparar un inoculo de partida equivalente a un patrón de 0,5 McFarland. El inoculo de partida se diluyó 1 :125 (este es el inoculo de trabajo) usando MHB para uso posterior. Los compuestos de ensayo se prepararon mediante dilución en agua estéril hasta una concentración final de 5,128 mg/ml. Los antibióticos (almacenados congelados, descongelados y usados en el intervalo de 3 horas desde la descongelación) y los compuestos se diluyeron opcionalmente hasta las concentraciones de trabajo deseadas.
. Los ensayos se realizaron del siguiente modo. Se añadieron cincuenta µ? de MHB a los pocilios 2-12 en una placa de 96 pocilios. Se añadieron cien µ? de antibióticos diluidos apropiadamente al pocilio 1. Se retiraron cincuenta µ? de antibióticos del pocilio 1 y se añadieron al pocilio 2 y los contenidos del pocilio 2 se mezclaron pipeteando hacia arriba y abajo cinco veces. Se retiraron cincuenta µ? de la mezcla en el pocilio 2 y se añadieron al pocilio 3 y se mezclaron como anteriormente. Se continuaron diluciones seriadas del mismo modo hasta el pocilio 12. Se retiraron cincuenta µ? del pocilio 12 de tal forma que todos contenían 50 µ?. Después se añadieron cincuenta µ? del inoculo de trabajo a todos los pocilios de ensayo. Se preparó un pocilio de control de crecimiento añadiendo 50 µ? del inoculo de trabajo y 50 µ? de MHB a un pocilio vacío. Después, las placas se incubaron a 37°C durante una noche, se retiraron del incubador y cada pocilio se leyó en un espejo de lectura de placa. Se registró la mínima concentración (MIC) de compuesto de ensayo que inhibió el desarrollo de las bacterias.
Ejemplo: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 [Abt] 32 16 8 4 2 1 0,5 0,25 0,125 0,06 0,03 0,015 Desarrollo + + + + + + + [abt] = concentración de antibiótico en el pocilio en µ???? Desarrollo = desarrollo bacteriano (turbidez) Interpretación: MIC = 2 µg/ml Protocolo para Determinar la Concentración de Inoculo (Recuento Viable) 50 µ? del inoculo se pipetearon en el pocilio 1. Noventa µ? de NaCI al 0,9% estéril se pipetearon en los pocilios 2-6 de una placa de microtitulacion de 96 pocilios. Se retiraron diez µ? del pocilio 1 y se añadieron al pocilio 2 seguido de mezcla. Se retiraron diez µ? del pocilio dos y se mezclaron con los contenidos del pocilio 3, etcétera, creando diluciones seriadas hasta el pocilio 6. Se retiraron diez µ? de cada pocilio y se aplicaron puntualmente sobre una placa de agar apropiada. La placa se puso en un incubador durante una noche. Las colonias en los puntos que contenían colonias distintas se contaron. Se calculó el recuento viable multiplicando el número de colonias por el factor de dilución.
Punto de 1 2 3 4 5 6 Pocilio Factor de 102 103 104 105 106 107 Dilución Cepas Bacterianas Se examinaron las siguientes cepas bacterianas, enumeradas a continuación, en ensayos de concentración inhibidora mínima (MIC). tetS; sensible a sulfonamidas *MDR, resistencia a múltiples fármacos; MRSA, S. aureus resistente a meticilina; MSSA, S. aureus sensible a meticilina; HA-MRSA, MRSA asociado a hospital; tet(K), mecanismo de flujo de salida de tetraciclina de gram positivo principal; tetiM), mecanismo de protección de ribosoma de tetraciclina de gram positivo principal; ESBL\ ß-lactamasa de espectro ampliado Resultados En las Tablas 5-7 se proporcionan los valores de la concentración inhibidora mínima (MIC) para los compuestos de la invención.
Tabla 5. Valores de MIC para los Compuestos de la Invención Comparados con Sanciclina, Minocidina y Tigeciclina. menor o igual a la menor MIC entre tres compuestos de control; B = mayor que la menor MIC entre tres compuesto control, pero menor que la mayor MIC entre tres compuestos de control; C = mayor que la MIC de los tres compuesto control. 15 Tabla 6. Valores de MIC para Compuestos de la Invención en Comparación con Sanciclina, Minociclina y Tigeciclina. menor o igual a la menor MIC entre tres compuestos de control; B = mayor que la menor MIC entre tres compuesto control, pero menor que la mayor MIC entre tres compuestos de control; C = mayor que la MIC de los tres compuesto control. 10 15 20 10 15 Tabla 7. Valores de MIC para Compuestos de la Invención en Comparación con Sanciclina, Minociclina y Tigeciclina. menor que o igual a la menor MIC entre tres compuestos de control; B = mayor que la menor MIC entre tres compuesto control, pero menor que la mayor MIC entre tres compuestos de control; C = mayor que la MIC de los tres compuesto control.
Ejemplo 152. Modelos In Vivo A. Protocolo de Infección Sistemica de Ratón Se exploraron compuestos con respecto a actividad antibacteriana in vivo en un modelo de infección sistémica (septicemia) de ratón. En el modelo se inyectó a ratones hembra CD-1 (18-22 gramos) IP con un inoculo de Smith de S. aureus que da como resultado el 0% de supervivencia en el intervalo de 24 a 48 horas. La dosis bacteriana requerida para conseguir este efecto se había establecido previamente mediante estudios de virulencia. Una hora post infección los ratones recibieron 3 mg/ml IV o 30 mg/ml PO. Típicamente se trataron seis ratones por grupo de dosis. La supervivencia animal se evaluó y registró durante 48 horas. Se registró el porcentaje de supervivencia a las 48 horas para cada compuesto de la Tabla 8.
Tabla 8. Porcentaje de supervivencia a las 48 horas para compuestos ensayados.
B. Modelos de infección respiratoria neutropénica para S. pneumoniae Se ensayaron compuestos en un modelo murino BALB/c neutropénlco de infección pulmonar expuesto a la cepa SP160 de S. pneumoniae tet(M) resistente a tetraciclina. Los ratones se hicieron neutropénicos mediante pre-tratamiento con ciclofosfamida y se infectaron con SP160 mediante administración intranasal. Los ratones se dosificación por vía oral con 30 mg/kg compuesto o IV con 10 mg/kg compuesto a las 2 y 12 horas post-infección. A las 24 horas después del inicio del tratamiento los ratones se sacrificaron y se cuantificó la reducción bacteriana en el pulmón sembrando homogeneizados de pulmón. Los datos se registraron como la reducción del log-io en unidades formadoras de colonias de pulmón frente a un grupo de control no tratado. Los resultados del ensayo se muestran en la FIGURA 1.
La FIGURA 1 muestra que los Compuestos 102 y 135 eran por vía oral tan eficaces (reducían la carga bacteriana en el pulmón) como linezolid en el modelo de pulmón de S. pneumoniae SP160; y los compuestos 143, 130 y 126 no redujeron significativamente la carga bacteriana en el pulmón cuando se administraron por vía oral. El compuesto 102 también fue eficaz cuando se administró por vía intravenosa (IV); el linezolid no redujo sustancialmente la carga bacteriana en el pulmón cuando se administró como un control a 5 mg/kg IV. La doxiciclina fue ineficaz ya que S. pneumoniae SP160 es resistente a tetraciclina, llevando un mecanismo de protección ribosómico tet(M).
C. Modelo de infección respiratoria no neutropénica para S. pneumoniae.
El compuesto 102 se ensayó en un modelo murino CD-1 inmunocompetente de infección pulmonar expuesto a la cepa SP514 de S. pneumoniae. Los ratones se infectaron con SP514 mediante administración intranasal y se dosificaron por vía oral con 30 mg/kg de compuesto a las 5, 24 y 36 horas post-infección. A las 48 horas después del inicio del tratamiento los ratones se sacrificaron y la reducción bacteriana en el pulmón se cuantificó sembrando homogeneizados de pulmón. Los datos se registraron como reducción de log-m en unidades formadoras de colonias de pulmón frente a un grupo de control no tratado.
En este modelo, el compuesto 102 dosificado por vía oral produjo una reducción del logio de 6,14 +/- 0,66 en las UFC frente al control no tratado de 48 horas (FIGURA 2). El linezolid como un comparador produjo una reducción de logio de 3,56 ± 0,63 (FIGURA 2).
D. Modelo de infección respiratoria neutropénica para MRSA Los compuestos se ensayaron en un modelo murino BALB/c neutropénico de Infección pulmonar, expuesto a una cepa SA191 de MRSA tet(M) resistente a tetraciclina infectada mediante administración intranasal. A las 2 y 12 horas los ratones se dosificaron por vía oral con 50 mg/kg de compuesto o mediante administración IV a 10 mg/kg. A las 24 horas después del inicio de tratamiento los ratones se sacrificaron y se cuantificó la reducción bacteriana en el pulmón sembrando homogeneizados de pulmón. Los datos se registraron como reducción del logio en unidades formadoras de colonias de pulmón frente a un grupo de control no tratado. Los resultados del ensayo se muestran en la FIGURA 3.
La FIGURA 3 muestra que los compuestos 102, 143 y 130 eran oralmente tan eficaces (reducían la carga bacteriana en el pulmón) como linezolid en el modelo de pulmón MRSA SA191. El compuesto 102 fue más eficaz cuando se administró por vía intravenosa (IV) de lo que fue el linezolid. La tetraciclina fue ineficaz ya que la cepa SA191 de MRSA es resistente a tetraciclina, llevando un mecanismo de protección ribosómico tet(M).
E. Modelo de infección respiratoria para H. influenzae El compuesto 102 se ensayó en una infección de pulmón de rata expuesta a H. influenzae mediante administración intratraqueal. A las 5, 24 y 48 horas las ratas se dosificaron por vía oral con 100 mg/kg de compuesto y se dosificó azitromicina a 50 mg/kg. Para la administración IV el compuesto 102 se dosificó a 25 mg/kg a las 5, 24 y 48 horas. A las 72 horas después del inicio del tratamiento las ratas se sacrificaron y se cuantificó la reducción bacteriana en el pulmón sembrando homogeneizados de pulmón. Los datos se registraron como reducción del logio en unidades formadoras de colonias de pulmón frente a un grupo de control no tratado. En este modelo el compuesto 102 administrado por vía oral produjo una reducción de log-i0 de 2,93 + 0,27 en las UFC frente al control no tratado de 72 horas (FIGURA 4). La azitromicina, dosificada por vía oral, produjo una reducción de 6,24 ± 0,03. Dosificado por la vía IV, el compuesto 102 produjo una reducción del log-?? de 3,40 ± 0,31 en las UFC frente al control no tratado de 72 horas.
F. Actividad In Vitro del Compuesto 102 para Patógenos Gram Positivos y Gram Negativos seleccionados La actividad in vitro (por MIC de microdilución de caldo de cultivo) del Compuesto 102 contra especies clínicamente importantes de patógenos Gram positivos y Gram negativos se estudió. Como parte de este estudio, se determinó la concentración bactericida mínima (MBC) contra un subconjunto de los aislados evaluados para determinar el modo de acción.
Métodos Todos los aislados eran aislados no duplicados, no consecutivos, clínicamente significativos y se ensayaron mediante microdilución en caldo de cultivo de acuerdo con CLSI M7-A8 (Véase Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically; approved standard - 8a ed. Documento de CLSI M/-A8. CLSI. Wayne, PA. Enero de 2009, las enseñanzas completas del cual se incorporan en este documento por referencia).
Se realizaron control de calidad e interpretaciones de resultados de acuerdo con CLIS M100-S20, cuando estuvieron disponibles (Véase Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing supplement. Documento de CLSI M100-S20. CLSI. Wayne, PA. Enero de 2010, las enseñanzas completas del cual se incorporan en este documento por referencia).
Se ensayó de forma simultánea un subconjunto de aislados con respecto a MBC de acuerdo con CLSI M26-A (Véase Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio. Methods for Determining Bactericidal Activity of Antimicrobial Agents; Approved Guideline. Documento de NCCLS M26-A [ISBN 1-56238-384-1].
NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087 Estados Unidos, 1999). Se evaluaron las MBC basándose en la cuantificación de crecimiento en pocilios más allá de la MIC para determinar el pocilio en el que se observó una reducción de 3-log en UFC en relación con el inoculo inicial.
Los resultados para todos los ensayos de MIC estaban dentro de los patrones aceptables basándose en los intervalos de QC recomendados por el CLSI para cada agente comparador evaluado y las cepas control de ATCC apropiadas con la excepción de colistina que se ensayó a una dilución inferior que los puntos de rotura de QC provisionales establecidos por CLSI para ATCC 25922 de E. coli y ATCC 27853 de P. aeruginosa.
Sumario de Resultados Los datos se presentan en las Tablas 9- 1. La Tabla 9 es la susceptibilidad antimicrobiana de todos los agentes ensayados contra todos los organismos Gram negativos y Gram positivos. La Tabla 10 es el perfil de la actividad del Compuesto 102, tigeciclina y tetraciclina por fenotipo de resistencia a tetraciclina. La Tabla 1 1 es un sumario de los resultados de MIC y MBC para el Compuesto 102 contra cepas seleccionadas.
Tabla 9. Susceptibilidad antimicrobiana de todos los agentes ensayados contra todos los organismos Gram negativos y Gram positivos MIC aig/ml) N Organismo Agente Total MlCgo MIC90 Escherichia colf* Compuesto 102 40 2 4 Tigeciclina6 0,5 2 Tetraciclina >8 >8 Ceftazidima 64 >64 Ceftazidima/clavulanato 4 32 Colistina 0,25 0,5 Ertapenemo <1 <1 Gentamicina 2 >8 Levofloxacina <0,25 >4 Piperacilina/ Tazobactam 8 >64 Klebsiella pneumoniae8 Compuesto 102 27 4 16 Tigeciclinab 2 4 Tetraciclina 8 >8 MIC ^g/ml) N Organismo Agente Total ICso MIC90 Ceftazidima >64 >64 Ceftazidima/clavulanato 16 >32 Colistina 0,25 0,5 Ertapenemo <1 8 Gentamicina >8 >8 Levofloxacina 1 >4 Piperacilina/ Tazobactam >64 >64 Klebsiella oxytoca Compuesto 102 30 1 4 Tigeciclina" 0,5 2 Tetraciclina 0,5 4 Ceftazidima <0,5 <0,5 Ceftazidima/clavulanato <0,25 0,5 Colistina <0,12 0,25 Ertapenemo <1 <1 Gentamicina 0,5 2 Levofloxacina <0,25 4 Piperacilina/ Tazobactam 2 8 Proteus vulgaris Compuesto 102 29 8 >16 Tigeciclina6 2 4 Tetraciclina 8 >8 Ceftazidima <0,5 >64 MIC ^g/ml) N Organismo Agente Total MIC50 MIC90 Ceftazidima/clavulanato <0,25 <0,25 Colistina >2 >2 Ertapenemo <1 <1 Gentamicina 1 >8 Levofloxacina <0,25 1 Piperacilina/ Tazobactam <0,5 2 Enterobacter aerogenes Compuesto 102 30 2 2 Tigeciclineb 0,5 0,5 Tetraciclina 1 2 Ceftazidima <0,5 16 Ceftazidima/clavulanato <0,25 16 Colistina <0,12 <0,12 Ertapenemo <1 <1 Gentamicina <0,25 0,5 Levofloxacina <0,25 <0,25 Piperacilina/ Tazobactam 2 16 Enterobacter cloacae Compuesto 102 29 4 8 Tigeciclinab 1 4 Tetraciclina 4 >8 Ceftazidima >64 >64 MIC (ng/ml) N Organismo Agente Total MICso MIC90 Ceftazidima/clavulanato >32 >32 Colistina <0,12 >2 Ertapenemo <1 >8 Gentamicina 0,5 >8 Levofloxacina 1 >4 Piperacilina/ Tazobactam >64 >64 Serratia marcescens Compuesto 102 30 4 8 Tigeciclinab 1 2 Tetraciclina >8 >8 Ceftazidima <0,5 <0,5 Ceftazidima/clavulanato <0,25 0,5 Colistina >2 >2 Ertapenemo <1 <1 Gentamicina 0,5 1 Levofloxacina <0,25 2 Piperacilina/ Tazobactam 2 8 Morganella morganii Compuesto 102 30 8 16 Tigeciclinab 2 4 Tetraciclina 2 >8 Ceftazidima <0,5 4 Ceftazidima/clavulanato 4 16 MIC ^g/ml) N Organismo Agente Total MIC50 MIC90 Colistina >2 >2 Ertapenemo <1 <1 Gentamicina 1 >8 Levofloxacina <0,25 4 Piperacilina/ Tazobactam <0,5 1 Especies de Salmonella Compuesto 102 30 2 2 Tigeciclineb 0,25 0,5 Tetraciclina 1 >8 Ceftazidima <0,5 <0,5 Ceftazidima/clavulanato <0,25 <0,25 Colistina <0,12 0,5 Ertapenemo <1 <1 Gentamicina 0,5 1 Levofloxacina <0,25 <0,25 Piperacilina/ Tazobactam 2 4 Especies de Shigella Compuesto 102 30 0,5 2 Tigeciclinab 0,25 0,5 Tetraciclina >8 >8 Ceftazidima <0,5 <0,5 Ceftazidima/clavulanato <0,25 <0,25 MIC ^g/ml) N Organismo Agente Total MICso MIC90 Colistina <0,12 <0,12 Ertapenemo <1 <1 Gentamicina 1 1 Levofloxacina <0,25 0,5 Piperacilina/ Tazobactam 2 2 Acinetobacter lwoffii Compuesto 102 29 0,12 0,5 Tigeciclina 0,12 0,5 Tetraciclina 0,5 4 Ceftazidima 1 16 Ceftazidima/clavulanato <0,25 4 Colistina <0,12 >2 Ertapenemo <1 4 • Gentamicina <0,25 1 Levofloxacina <0,25 <0,25 Piperacilina/ Tazobactam <0,5 8 Stenotrophomonas Compuesto 102 29 0,5 2 maltophilia Tigeciclina 0,5 2 Tetraciclina 8 >8 Ceftazidima 8 >64 MIC (ng/ml) N Organismo Agente Total MICso MIC90 Ceftazidima/clavulanato 32 >32 Colistina 0,25 >2 Ertapenemo >8 >8 Gentamicina >8 >8 Levofloxacina 0,5 >4 Piperacilina/ Tazobactam 32 >64 Staphylococcus aureus Compuesto 102 30 0,25 0,25 Tigeciclina" 0,12 0,12 Tetraciclina 0,25 0,25 Clindamicina 0,06 0,12 Daptomicina 0,5 1 Ertapenemo 4 8 Eritromicina >4 >4 Gentamicina 0,25 0,5 Levofloxacina 0,25 >2 Linezolid 1 2 Vancomicina 1 1 Staphylococcus aureus Compuesto 102 105 0,5 2 MRSA 0 Tigeciclina 0,13 0,25 MIC (ng/ml) N Organismo Agente Total MIC50 MIC90 Tetraciclina 0,25 >32 Levofloxacina >2 >2 Linezolid 2 4 Vancomicina 1 1 Streptococcus anginosus Compuesto 102 20 0,06 0,25 Tigeciclineb 0,03 0,06 Tetraciclina 0,12 >4 Clindamicina <0,015 0,03 Daptomicina 0,25 0,25 Ertapenemo 0,12 0,25 Eritromicina 0,03 >0,5 Levofloxacina 0,5 0,5 Linezolid 0,5 1 Penicilina <0,12 <0,12 Vancomicina 0,5 0,5 Streptococcus intermedius Compuesto 102 30 0,12 0,12 Tigeciclinab 0,03 0,12 Tetraciclina 0,25 >4 Clindamicina <0,015 0,06 Daptomicina 0,5 1 Ertapenemo 0,06 0,5 MIC (ng/ml) N Organismo Agente Total MICso MIC9o Eritromicina 0,06 >0,5 Levofloxacina 1 2 Linezolid 1 1 Penicilina <0,12 0,25 Vancomicina 0,5 0,5 Streptococcus mitis Compuesto 102 29 0,12 0,25 Tigeciclinab 0,03 0,12 Tetraciclina 0,5 >4 Clindamicina 0,03 0,06 Daptomicina 0,5 1 Ertapenemo 0,25 >1 Eritromicina >0,5 >0,5 Levofloxacina 1 2 Linezolid 1 1 Penicilina 0,25 2 Vancomicina 0,5 0,5 Streptococcus sanguis Compuesto 102 18 0,06 0,12 Tigeciclinab 0,03 0,06 T.etraciclina 0,25 >4 Clindamicina 0,03 0,06 Daptomicina 0,5 1 MIC (ng/ml) N Organismo Agente Total MIC50 MIC90 Ertapenemo 0,12 0,5 Eritromicina 0,03 >0,5 Levofloxacina 0,5 2 Linezolid 0,5 1 Penicilina <0,12 <0,12 Vancomicina 0,5 1 a37 E. coli y 24 K. pneumoniae genéticamente caracterizados para producción de beta-lactamasa se ensayaron en un laboratorio separado en los mismos paneles de estudio b Se aplicaron puntos de rotura FDA para Enterobacteriaceae: <2 µ9 ?t?? (S), 4 µ p\ (I),=8 µ9/??? (R); para S. aureus: <0,5 µ9/??? (S)¡ para Streptococcus spp. (distinto de S. pneumoniae: <0,25 µ9/??? (S) 0 Staphylococcus aureus MRSA incluye los datos del grupo de (MRSA PVL+) de Staphylococcus aureus.
Tabla 10. Perfil de actividad del Compuesto 102, tigeciclina y tetraciclina por fenotipo de resistencia a tetraciclina Organismo Agente Fenotipo N Total ICso MIC Enterobacteriaceae Compuesto 102 TET S 168 2 8 Compuesto 102 TET NS 137 4 16 Tigeciclina TET S 168 1 2 Organismo Agente Fenotipo N Total MICso MIC90 Tigeciclina TET NS 137 1 4 Tetraciclina TET S 168 1 4 Tetraciclina TET NS 137 >8 >8 S. maltophila Compuesto 102 TET S 10 0,5 0,5 Compuesto 102 TET NS 19 1 4 Tigeciclina TET S 10 0,25 0,5 Tigeciclina TET NS 19 0,5 2 Tetraciclina TET S 10 4 4 Tetraciclina TET NS 19 >8 >8 Estreptococos del grupo Viridans Compuesto 102 TET S 65 0,06 0,12 Compuesto 102 TET NS 32 0,12 0,25 Tigeciclina TET S 65 0,03 0,06 Tigeciclina TET NS 32 0,03 0,12 Tetraciclina TET S 65 0,25 0,5 Tetraciclina TET NS 32 >4 >4 TET S = Susceptible a tetraciclina; TET NS = No susceptible a Tetraciclina Tabla 11. Sumario de Resultados de MIC y MBC Compuesto 102 Organismo ID del Aislado del Estudio MIC MBC MBC:MIC Acinetobacter lwoffii 2919857 0,12 0,5 4 Acinetobacter Iwoffü 2919860 0,12 16 128 Acinetobacter lwoffii 2919873 0,25 0,25 1 Acinetobacter lwoffii 2919875 0,06 0,25 4 Organismo ID del Aislado del Estudio MIC MBC MBC:N Enterobacter aerogenes 2919897 2 4 2 Enterobacter aerogenes 2919900 1 8 8 Enterobacter aerogenes 2919909 2 8 4 Enterobacter aerogenes 2919913 1 16 16 Enterobacter cloacae 2920072 8 16 2 Enterobacter cloacae 2920082 2 8 4 Enterobacter cloacae 29201 19 2 2 1 Klebsiella oxytoca 2919956 1 8 8 Klebsiella oxytoca 2919964 1 4 4 Klebsiella oxytoca 2919972 2 4 2 Klebsiella oxytoca 2919983 1 8 8 Morganella morganii 2919931 4 >16 >4 Morganella morganii 2919935 4 >16 >4 Morganella morganii 2919945 8 >16 >2 Proieus vulgaris 2919822 16 >16 >1 Proteus vulgaris 2919827 8 >16 >2 Proteus vulgaris 2919835 4 >16 >4 Proteus vulgaris 2919836 2 8 4 Especies de Salmonella 2919986 2 8 4 Especies de Salmonella 2919990 2 8 4 Especies de Salmonella 2920006 2 8 4 Especies de Salmonella 2920008 2 8 4 Compuesto 102 Organismo ID del Aislado del Estudio MIC MBC MBC:MIC Serratia marcescens 2920092 4 16 4 Serratia marcescens 2920094 4 >16 >4 Serratia marcescens 2920100 8 16 2 Serratia marcescens 2920109 4 16 4 Especies de Shigella 2919892 1 4 4 Especies de Shigella 2919894 0,25 4 16 Especies de Shigella 2920018 0.25 0,5 2 Especies de Shigella 2920026 0,5 16 32 Especies de Shigella 2920028 0,5 4 8 Staphylococcus aureus 2919648 0,25 >4 >16 Staphylococcus aureus 2919649 0,25 >4 >16 Staphylococcus aureus 2919650 0,25 >4 >16 Stenotrophomonas maltophilia 2920035 2 >16 >8 Stenotrophomonas maltophilia 2920051 2 16 8 Streptococcus anginosus 2919722 0,25 2 8 Streptococcus anginosus 2919742 0,12 2 16 Streptococcus anginosus 2919797 0,25 2 8 Streptococcus intermedius 2919756 0,06 1 16 Streptococcus intermedius 2919759 0,03 2 64 Streptococcus intermedius 2919784 0,12 2 16 Streptococcus intermedius 2919819 0,25 1 4 Streptococcus mitis 2919763 0,12 0,5 4 Compuesto 102 Organismo ID del Aislado del Estudio MIC MBC MBC:MIC Streptococcus mitis 2919781 0, 12 0,12 1 Streptococcus mitis 2919798 0,06 0,06 1 Streptococcus mitis 2919803 0,12 1 8 Streptococcus sanguis 2919749 0,06 0,25 4 Streptococcus sanguis 2919752 0,25 0,5 2 Streptococcus sanguis 2919758 0,12 2 16 Escherichia coli 2921525 1 >16 >16 Escherichia coli 2921526 2 16 8 Klebsiella pneumonía 2921528 2 >16 >8 Klebsiella pneumoniae 2921529 2 >16 >8 Contra los patógenos Gram negativos y Gram positivos evaluados, las MIC del Compuesto 102 generalmente fueron 2-4 veces mayores que las de tigeciclina.
El Compuesto 102 tuvo MIC comparables en relación con tetraciclina contra el S. aureus evaluado y Enterobacteriaceae excluyendo Shigella spp. en las que el Compuesto 102 era más potente. El Compuesto 102 también tuvo MIC 2-4 veces menores que tetraciclina contra Acinetobacter lwoffii, S. maltophila, y estreptococos.
El Compuesto 102 fue más potente por MIC50/MIC90 contra patógenos Gram positivos en relación con patógenos Gram negativos.
Las MIC del Compuesto 102 y tigeciclina no se alteraron notablemente contra aislados evaluados resistentes a tetraciclina en relación con aislados susceptibles a tetraciclina y potencia mantenida por el Compuesto 102 contra Shigella spp., S. maltophila, y estreptococos resistentes a tetraciclina.
Las relaciones de MBC:MCI para el Compuesto 102 indicaron un modo bacteriostático de acción (relación >2 para 89,3% de los aislados evaluados).
G. Actividad In Vitro del Compuesto 102 para Patógenos Respiratorios seleccionados Se estudió la actividad in vitro (por MIC de microdilución de caldo de cultivo) del Compuesto 102 contra especies Gram positivas y Gram negativas clínicamente importantes que causan infecciones bacterianas agudas del tracto respiratorio o de la estructura de la piel y la piel.
Métodos Todos los aislados fueron aislados no duplicados, no consecutivos, clínicamente significativos y se ensayaron mediante microdilución de caldo de cultivo de acuerdo con CLSI M7-A8 (Véase Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically; approved standard - 8a ed. Documento de CLSI 7-A8. CLSI, Wayne, PA. Enero de 2009, las enseñanzas completas del cual se incorporan en este documento por referencia); CLSI M45-A (Véase Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio. Methods for antimicrobial dilution and disk susceptibility testing of infrequently isolated or fastidious bacteria; approved guideline. Documento de CLSI M45-A. CLSI, Wayne, PA. Mayo de 2006, las enseñanzas completas del cual se incorporan en este documento por referencia.
Se realizaron controles de calidad e interpretaciones de resultados de acuerdo con CLSIM100-S20 cuando estuvieron disponibles. (Véase Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; twentieth informational supplement. Documento de CLSI M100-S20. CLSI, Wayne, PA. Enero de 2010, las enseñanzas completas del cual se incorporan en este documento por referencia).
Los resultados para todos los ensayos de MIC estaban dentro de los patrones aceptables basándose en los intervalos de QC recomendados por el CLSI para cada agente comparador evaluado y las cepas control de ATCC apropiadas cada día de los ensayos.
Sumario de Resultados Los perfiles de actividad se presentan en las Tablas 12-14. La Tabla 12 es el perfil de actividad del Compuesto 102 y otros agentes comparadores contra patógenos Gram positivos evaluados. La Tabla 13 es el perfil de actividad del Compuesto 102 y otros agentes comparadores contra patógenos Gram negativos evaluados. La Tabla 14 es el perfil de actividad del Compuesto 102 y otros agentes comparadores contra el patógeno evaluado por fenotipo de tetraciclina.
Tabla 12. Perfil de actividad del Compuesto 102 y otros agentes comparadores contra patógenos Gram positivos evaluados MIC (mg/ml) Organismo Fenotipo Fármaco MICso MIC90 S. aureus (n MSSA (n=50)1 Compuesto 102 0,25 0,5 Tigeciclina3 0,12 0,25 Tetraciclina 0,25 0,5 Azitromicina 2 >4 Ceftriaxona 4 4 Clindamicina 0,12 0,12 Gentamicina 0,25 0,5 MIC (mg/ml) Organismo Fenotipo Fármaco MIC50 MIC90 Imipenemo <0,25 <0,25 Levofloxacina 0,25 1 Linazolid 2 4 Vancomicina 1 1 CoNS (n=52) MSCoNS (n=26)1 Compuesto 102 0,25 1 Tigeciclina 0,06 0,25 Tetraciclina 0,5 2 Azitromicina 0,25 >4 Ceftriaxona 1 2 Clindamicina 0,06 0,06 Gentamicina 0,12 0,25 Imipenemo <0,25 <0,25 Levofloxacina 0,25 >4 Linazolid 1 1 Vancomicina 2 2 MRCoNS (n=26)1 Compuesto 102 0,25 1 Tigeciclina 0,06 0,12 Tetraciclina 0,25 2 Azitromicina >4 >4 Ceftriaxona 16 >64 Clindamicina 0,12 >2 Gentamicina 0,25 >8 MIC (mg/ml) Organismo Fenotipo Fármaco MICso MIC90 Imipenemo 1 >8 Levofloxacina >4 >4 Linazolid <0,5 1 Vancomic'ina 1 2 S. saprophyticus Compuesto 102 0,25 0,5 (n=36) Tigeciclina 0,12 0,25 Tetraciclina 0,5 0,5 Azitromicina 1 >4 Ceftriaxona 8 16 Clindamicina 0,06 0,12 Gentamicina <0,06 <0,06 Imipenemo <0,25 <0,25 Levofloxacina 0,5 0,5 Linazolid 2 4 Vancomicina 1 1 S. pneumoniae PEN S (n=39)2 Compuesto 102 0,06 0,12 (n=100) Tigeciclina 0,06 0,06 Tetraciclina 0,12 0,5 Azitromicina 0,12 >4 Ceftriaxona <0,03 0,06 MIC (mg/ml) Organismo Fenotipo Fármaco MICso MIC90 Clindamicina 0,06 0,06 Imipenemo <0,015 <0,015 Levofloxacina 0,5 1 Linazolid 1 1 Penicilina (oral) <0,12 <0,12 Vancomicina 0,5 0,5 PEN I (n=11)2 Compuesto 102 0,12 0,25 Tigeciclina 0,06 0,06 Tetraciclina 8 32 Azitromicina >4 >4 Ceftriaxona 0,12 0,5 Clindamicina 0,06 >0,5 Imipenemo 0,03 0,25 Levofloxacina 0,5 1 Linazolid 1 1 Penicilina (oral) 0,25 1 Vancomicina 0,5 0,5 PEN R (n=50)2 Compuesto 102 0,06 0,12 Tigeciclina 0,06 0,06 Tetraciclina 16 16 Azitromicina >4 >4 Ceftriaxona 1 2 MIC (mg/ml) Organismo Fenotipo Fármaco ICso MlCgo Clindamicina >0,5 >0,5 Imipenemo 0,5 0,5 Levofloxacina 0,5 1 Linazolid 1 1 Penicilina (oral) 2 >2 Vancomicina 0,25 0,5 S. pyogenes (n=50) Compuesto 102 0,12 0,25 Tigeciclina 0,06 0,06 Tetraciclina 0,25 32 Azitromicina 0,12 >4 Ceftriaxona <0,03 <0,03 Clindamicina 0,06 0,06 Imipenemo <0,015 <0,015 Levofloxacina 0,5 0,5 Linazolid 1 1 Penicilina <0,12 <0,12 Vancomicina 0,5 0,5 S. agalactiae (n=50) Compuesto 102 0,5 0,5 Tigeciclina 0,12 0,12 Tetraciclina 32 >32 Azitromicina 0,06 >4 Ceftriaxona 0,06 0,06 MIC (mg/ml) Organismo Fenotipo Fármaco MIC50 MIC90 Clindamicina 0,06 >0,5 Imipenemo O.015 0,03 Levofloxacina 0,5 1 Linazolid 1 1 Penicilina <0,12 <0,12 Vancomicina 0,5 0,5 E. aeca//s (n=101 ) VAN S (n=53) Compuesto 102 0,5 0,5 Tigeciclina 0,12 0,12 Tetraciclina >32 >32 Azitromicina >4 >4 Ceftriaxona >64 >64 Clindamicina >2 >2 Gentamicina >8 >8 Imipenemo 1 1 Levofloxacina 1 >4 Linazolid 2 2 Vancomicina 1 2 VAN NS (n=48) Compuesto 102 0,5 1 Tigeciclina 0,06 0,12 Tetraciclina >32 >32 Azitromicina >4 >4 Ceftriaxona >64 >64 MIC (mg/ml) Organismo Fenotipo Fármaco MICso MIC90 Clindamicina >2 >2 Gentamicina >8 >8 Imipenemo 1 2 Levofloxacina >4 >4 Linazolid 2 2 Vancomicina >16 >16 E. faecium (n=100) VAN S (n=49) Compuesto 102 0,12 0,5 Tigeciclina 0,06 0,06 Tetraciclina 0,25 >32 Azitromicina >4 >4 Ceftriaxona >64 >64 Clindamicina >2 >2 Gentamicina 8 >8 Imipenemo >8 >8 Levofloxacina >4 >4 Linazolid 2 2 Vancomicina 0,5 1 VAN NS (n=51 ) Compuesto 102 0,12 0,5 Tigeciclina 0,06 0,12 Tetraciclina 0,25 >32 Azitromicina >4 >4 Ceftriaxona >64 >64 MIC (mg/ml) Organismo Fenotipo Fármaco MIC50 MIC90 Clindamicina >2 >2 Gentamicina 8 >8 Imipenemo >8 >8 Levofloxacina >4 >4 Linazolid 2 2 Vancomicina >16 >16 Cpmo no se ensayó oxacilina como parte del estudio actual, se basó el fenotipo de meticilina en ensayos de oxacilina anteriores realizados en estos aislados 2Se utilizaron las MIC de penicilina de ensayos anteriores para determinar el fenotipo de penicilina, puesto que la penicilina sólo se ensayó a una concentración tan baja como 0,12 mg/ml y los aislados con MIC de <0,12 mg/ml no pueden interpretarse como susceptibles o intermedios. 3Sin criterios de CLSI/FDA disponibles para interpretación de MIC MSSA: S. aureus susceptible a meticilina; MSCoNS: estafilococos negativos para coagulasa susceptibles a meticilina; MRCoNS: estafilococos negativos para coagulasa resistentes a meticilina PEN: penicilina; VAN: vancomicina; S: susceptible; I: intermedio; R: resistente; NS: no susceptible; NA: no aplicable Tabla 13. Perfil de actividad del Compuesto 102 y otros agentes comparadores contra patógenos Gram negativos evaluados MIC (mg/ml) Organismo Fármaco MIO MIC, 90 H. influenzae (n=50) Compuesto 102 0,5 1 Tigeciclina 0,12 0,25 MIC (mg/ml) Organismo Fármaco MIC50 MIC90 Tetraciclina 0,5 0,5 Ampicilina <0,5 8 Azitromicina 1 2 Ceftriaxona <0,03 <0,03 Imipenemo 1 2 Levofloxacina 0,03 0,03 M. catarrhalis (n=50) Compuesto 102 0,12 0,12 Tigeciclina 0,06 0,12 Tetraciclina 0,12 0,25 Azitromicina <0,12 <0,12 Ceftriaxona <0,5 <0,5 Clindamicina 1 2 Géntamicina 0,12 0,12 Imipenemo <0,25 <0,25 Levofloxacina 0,06 0,06 Tabla 14. Perfil de actividad del Compuesto 102 y otros agentes comparadores contra patógeno evaluado por fenotipo de tetraciclina Organismo Fármaco Fenotipo N MIC50 MIC90 S. pneumoniae Compuesto 102 TET S 54 0,06 0,12 TET NS 46 0,12 0,12 Tigeciclina TET S 54 0,06 0,06 Organismo Fármaco Fenotipo N MICso MICgo TET NS 46 0,06 0,06 Tetraciclina TETS 54 0,12 0,25 TET NS 46 16 32 S. pyogenes Compuesto 102 TETS 44 0,12 0,12 TET NS 6 0,25 NA Tigeciclina TETS 44 0,06 0,06 TET NS 6 0,06 NA Tetraciclina TETS 44 0,12 0,25 TET NS 6 32 NA S. agalactiae Compuesto 102 TETS 11 0,12 0,12 TET NS 39 0,5 0,5 Tigeciclina TETS 11 0,12 0,12 TET NS 39 0,12 0,12 Tetraciclina TETS 11 0,25 0,25 TET NS 39 32 >32 E. faecalis Compuesto 102 TETS 30 0,12 0,25 TET NS 71 0,5 1 Tigeciclina TETS 30 0,06 0,12 TET NS 71 0,12 0,12 Tetraciclina TETS 30 0,25 0,5 TET NS 71 >32 >32 E. faecium Compuesto 102 TETS Organismo Fármaco Fenotipo N MIC50 MIC90 TET NS 40 0,25 0,5 Tigeciclina TET S 60 0,06 0,06 TET NS 40 0,06 0,12 Tetraciclina TE S 60 0,25 0,25 TET NS 40" >32 >32 NA: NO aplicable; TET: tetraciclina; S: susceptible; NS: no susceptible Contra los patógenos aerobios Gram positivos evaluados, las MIC del Compuesto 102 eran comparables a las de tetraciclina contra estafilococos y fueron varias veces más bajas que las de tetraciclina contra neumococos y estreptococos beta-hemolíticos; las MIC del Compuesto 102 fueron generalmente 2-4 veces mayores que las de tigeciclina.
Contra los patógenos respiratorios Gram negativos, el Compuesto 102 tuvo MIC similares a las de tetraciclina; las MIC del Compuesto 102 fueron generalmente 2-4 veces mayores que las de tigeciclina.
Existió un mínimo impacto de resistencia a tetraciclina sobre el perfil de actividad global del Compuesto 102, puesto que las MIC del Compuesto 102 fueron como máximo 2-4 veces mayores contra aislados resistentes a tetraciclina en relación con aislados susceptibles a tetraciclina.
H. Actividad antibacteriana contra E. coli DH10B que expresa de forma recombinante genes de resistencia a tetraciclina.
Se amplificaron genes que codificaban tet(A), tet(B), tet(K), tet(M), tet(X), y ß-galactosidasa de E. coli (lacZ) como un control por PCR de aislados clínicos de los que se confirmó por secuenciación génica que tenían estos determinantes de resistencia a tetraciclina y se clonaron en un sistema de expresión inducible por L-arabinosa sin ningún marcador de afinidad (pBAD-Myc-His, Invitrogen, Carlsbad, CA). Se transformaron plásmidos y se expresaron en células E. coli DH10B (Invitrogen, Carlsbad, CA). Se secuenciaron los insertos clonados para verificar la secuencia del gen de resistencia de tetraciclina y se compararon con secuencias indicadas en GenBank (números de acceso: tet(A), AJ419171 ; tet(B), AP0961 ; tet(K), AJ888003; tet(M), X90939.1 ; tet(X), M37699 ). Se cultivaron las células en Caldo de Cultivo de Mueller Hinton que contenía ampicilina, 50 mg/ml, se preindujeron durante 30 minutos con arabinosa al 1 % (tet{A), tet{B), tet{M), tet X)) o arabinosa 0,1 % (tet(K)) a 30°C antes de usarse como inóculos en ensayos de MIC que contenían ampicilina, 50 mg/ml. Los ensayos de MIC se incubaron a 35°C y en lo demás se siguieron las directrices del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio y los datos resultantes se muestran en la Tabla 15.
Tabla 15. Valores de MIC para E. coli DH10B que expresan de forma recombinante genes de resistencia a tetraciclina EC971 EC1153 EC969 EC970 EC1082 EC1083 Compuesto LacZ Tet(X) TetM TetK TetA TetB Minociclina 0,5 4 64 1 8 16 Tetraciclina 2 >32 64 64 >128 >128 EC971 EC1153 EC969 EC970 EC1082 EC1083 Compuesto LacZ Tet(X) TetM TetK TetA TetB Tigeciclina 0,0625 2 0,125 0,0625 1 0,0625 Compuesto 102 2 4 1 0,5 2 1 Ceftriaxona 0,125 0,125 0,5 0,0625 0,0625 0,0625 tet(X) codifica una enzima inactivadora para muchas tetraciclinas llamada una monooxigenasa dependiente de flavina. tef(A) y tet(B) codifican bombas de flujo de salida específicas de tetraciclina habitualmente halladas en bacterias gram negativas. tet(K) codifica una bomba de flujo de salida específica de tetraciclina hallada predominantemente en bacterias gram positivas. tet(M) codifica un mecanismo de protección ribosomal específico de tetraciclina que está ampliamente extendido tanto en gram negativas como en gram positivas. /. Determinación de desarrollo de resistencia in vitro Para estimar el desarrollo de resistencia in vivo, se analizó el Compuesto 102 con respecto a la propensión para seleccionar resistencia in vitro. La frecuencia de resistencia espontánea se determinó sembrando suspensiones densas en placas de S. aureus SA101 y S. pneumoniae SP106 (~1010 unidades formadores de colonias (UFC) por siembra) en replicaciones en placas de agar Mueller Hinton que contenían compuesto a 5x la MIC. Las placas se complementaron con sangre de oveja desfibrinada 5% para ensayo de SP106. Las frecuencias de resistencia se calcularon por la división del número de colonias que crecían a una concentración de fármaco dada dividido por el número total de UFC sembradas. Para SA101 y SP106, las frecuencias de resistencia espontánea para el compuesto 102 fueron <2,2 x 10"10 y 1 x 108, respectivamente. Para SA101 y SP106, las frecuencias de resistencia espontánea para el control de levofloxacina (negativo) fueron <2,2 x 10"10 y <3,13 x 10"9, respectivamente. Para SA101 y SP106, las frecuencias de resistencia espontánea para el control de rifampina (positivo) fueron de 2,0 x 10"8 y 2,88 x 10"7, respectivamente. De este modo, ni S. aureus ni S. pneumoniae parecen tener grandes poblaciones pre-existentes que son no susceptibles al Compuesto 102.
J. Farmacocinética de Mono Sin GLP Como resultado de datos farmacocinéticos prometedores en ratas Sprague Dawley,3 Se evaluó el Compuesto 102 en 3 monos cynomolgus con tratamiento previo. Cada animal recibió una dosis IV única de 1 mg/kg y después de una eliminación de 7 días y recibieron una dosis PO única de 10 mg/kg. Se retiraron de nueve a diez muestras de plasma para cada vía de dosificación hasta 24 horas en tubos vacutainer recubiertos de heparina. Se verificaron las formulaciones de dosis con una curva de calibración de 5 puntos. La concentración en plasma del compuesto se cuantificó por LC/MS/MS usando un patrón interno. Se incluyeron muestras de control de calidad (QC) (bajas, medias, altas; mínimo de 6 patrones con LLOQ <3 ng/ml) y curvas patrón (por duplicado) en la ejecución bioanalítica. Se usó WinNonL para determinar parámetros PK individuales y medios ± desviación típica (F, Cmax, Tmax, T½, CL, Vss, AUC(O-t), AUC(O-oo) y MRT). Los resultados se presentan en la Tabla 16.
Tabla 16. Parámetros farmacocinéticos para el Compuesto 102 en monos cynomolgus con tratamiento previo A Dosificación IV B. Dosificación PO aEnsayos preliminares iniciales en ratas Sprague Dawley (n = 3) dieron como resultado una biodisponibilidad oral (%F) de 48,3 ± 31 ,2 K. Evaluación de fototoxicidad de mamíferos Para estimar su potencia para producir fototoxicidad in vivo, se ensayó el Compuesto 102 en modelos validados in vivo e in vitro de actividad fototóxica aguda en Charles River Laboratories (Véase Spielmann, H., et al., The second ECVAM workshop on phototoxicity testing. The report and recommendations of ECVAM workshop 42. Altern Lab Anim, 2000. 28(6): p. 777-814; y Peters, B. y H.G. Holzhutter, In vitro phototoxicity testing: development and validation ofa new concentration response analysis software and biostatistical analyses related to the use of various prediction models. Altern Lab Anim, 2002. 30(4): p. 415-32, las enseñanzas completas de ambos se incorporan en este documento por referencia. Los resultados mostraron que, a diferencia de doxiciclina, los hallazgos de Compuesto 102 in vitro en el ensayo de 3T3 de captación de rojo neutro no se tradujeron en un efecto fototóxico en el modelo in vivo, que se considera que es una mejor imitación de exposición a UVA clínicamente relevante de acumulación intradérmica de alto nivel del compuesto.
Para evaluación in vivo en el modelo de ratón desnudo Crl:SKH1-hr de fototoxicidad, se inyectó a los ratones (n=3 por grupo) por vía intracutánea a lo largo del lomo (dos sitios de inyección dorsales por ratón) el Compuesto 102 y compuestos de control (doxiciclina, minociclina, levofloxacina) a 0,0375 mg/ratón o 0,375 mg/ratón. Se inyectó a un grupo de control de vehículo solución salina normal. El pH de las formulaciones del compuesto se ajustó a 6,5 ± 0,5 antes de la inyección. Inmediatamente después de la administración, se anestesió ligeramente a los ratones mediante inyección intraperitoneal de hidrato de doral en agua desionizada y después se situaron en tubos de plástico con cinta de laboratorio. Se colocó una máscara de papel de aluminio con un agujero único de un diámetro de 1 ,3 cm (1 ,3 cm2) sobre el sitio de inyección dorsal medio antes de la exposición a UVA. El sitio de administración distal se protegió de exposición a UVA. Una dosis de UVA de no menos de 20,0 y no más de 20,1 J/cm2 a una intensidad de 5 ± 1 mW/cm2 al nivel del ratón se suministró durante el periodo de exposición. Se observaron los ratones antes de la administración de la formulación, después de la compleción de la administración, 60 + 10 minutos y 4 horas ± 30 después de la compleción de exposición a UVR y 1 , 2 y 3 días después de la exposición a UVR con respecto a apariencia general, observaciones clínicas y señales de respuestas cutáneas en el sitio de exposición a UVR y el sitio no expuesto a UVA. Los resultados mostraron que la administración del control positivo, doxiciclina, dio como resultado fototoxicidad dependiente de dosificación (eritema, edema) en el sitio de exposición a UVA, validando el ensayo. Minociclina, administrada como un control negativo, no produjo reacción cutánea en ninguna dosis. La administración de levofloxacina dio como resultado fototoxicidad dependiente de dosificación (eritema, edema, exfoliación) en el sitio de exposición a UVA. El Compuesto 102 a 0,0375 ó 0,375 mg/ratón no dio como resultado reacciones cutáneas indicativas de fototoxicidad el día de exposición a UVA o los siguientes tres días de observación. L. Estudio de Susceptibilidad In Mitro del Compuesto 102 en Legionella pneumophila Los organismos de Legionella con frecuencia se asocian con infecciones respiratorias y Legionella pneumophila da como resultado una mortalidad significativa a no ser que se trate de forma rápida y eficaz. En un taller reciente de la FDA sobre Diseño de Ensayos Clínicos para Neumonía Bacteriana Adquirida en la Comunidad (9 de diciembre de 2009), el panel votó incluir pacientes con L. pneumophila documentada en ensayos de neumonía bacteriana adquirida en comunidad no de inferioridad (CABP). Debido a que L. pneumophila puede dar como resultado una mortalidad de casos globales del 15%, era importante determinar su susceptibilidad a los compuestos de la invención, tales como Compuesto 102.
Métodos La actividad in vitro del Compuesto 102 se comparó con tetraciclina y eritromicina contra un total de 70 aislados de L. pneumophila (serogrupo 1 (n=20), (n=10), 3 (n=10), 4 (n=10), 5 (n=10) y 6 (n=10)) por dilución en agar convencional usando agar con extracto de levadura tamponado que contiene complemento de crecimiento BCYE (BYE).
Las cepas de Legionella pneumophila se aislaron del tracto respiratorio de 1992 a 2010 y se identificaron por métodos convencionales descritos por Murray et al., Manual of Clinical Microbiology, 9a ed., 2007, A.S.M., las enseñanzas completas del cual se incorporan en este documento por referencia. Se ensayaron aislados de seis serogrupos para un número total de 70 L pneumophila. Se usó extracto de Levadura tamponado (BYE) (con complemento de crecimiento BCYE de Legionella original) como el medio para ensayar las cepas de Legionella.
Se realizó un ensayo piloto para determinar si la actividad de tetraciclina y Compuesto 102 sufrieron un impacto artificial por complemento BCYE o hierro ensayando Staphylococcus aureus ATCC29213 en BYE (BYE Original), BYE sin pirofosfato férrico (BYE modificado) y agar de Mueller-Hinton con cationes ajustados (MH).
Determinación de Concentraciones Inhibidoras Mínimas (MIC) Se determinaron las MIC usando el método de dilución de agar de CLSI ((Véase Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; Decimoséptimo complemento de información; CLSI, M100-S17 VOL 27 número 1 , Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio, Wayne, Pa, enero de 2007, las enseñanzas del cual se incorporan en este documento por referencia; y Method for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically; estándar aprobado 17a edición, M7-A7, Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI), Wayne, PA, 2006), las enseñanzas completas del cual se incorporan en este documento por referencia)), con siembra en placas replicada de los organismos en una serie de placas de agar de concentraciones crecientes de compuesto de 0,004 mg/l a 64 µg/m\. Se obtuvieron eritromicina y tetraciclina de Sigma Chemicals, Mississauga, Ont.
Resultados Sólo el BYE original soportó el crecimiento de L. pneumophila. Los ensayos piloto indicaron que BYE dio como resultado un aumento de 16 a 64 veces en MIC en relación con MH para s. aureus ATCC29213 (Tablas 17 y 18). Estos resultados sugieren que los valores de MIC del Compuesto 102 obtenidos en BYE original para L. pneumophila se elevaron artificialmente debido a los efectos de los medios.
Tabla 17. Estudio Piloto con BYE original, BYE Modificado y medio Mueller Hinton con Cationes ajustados para L. pneumophila ATCC33152.
Medio Tiempo de Ensayo Compuesto usado Incubación N° Compuesto 102 Tetraciclina Eritromicina BYE Original 24 horas 1 se SC SC 2 se SC SC 48 horas 1 16 8 0,5 2 16 8 0,25 BYE Modificado 24 horas 1 SC SC SC 2 SC SC SC 48 horas 1 SC SC SC 2 SC SC SC Mueller- Hinton Con Cationes ajustados 24 horas 1 SC SC SC 2 SC SC SC Intervalo de MIC Esperado Desconocido Desconocido 0,25-0,5*** SC = sin crecimiento Tabla 18. Estudio Piloto con BYE original, BYE Modificado y medio Mueller Hinton con Cationes ajustados para Staphylococcus aureus ATCC29213.
Medio Tiempo de Ensayo Compuesto usado Incubación N° Compuesto 102 Tetraciclina Eritromicina BYE Original 24 horas 1 4 2 0,5 2 4 2 0,5 48 horas 1 >64 32 0,5 2 >64 32 0,5 BYE Modificado 24 horas 1 2 0,25 0,5 2 2 0,25 0,5 48 horas 1 8 0,5 0,5 Mueller- Hinton Con Cationes ajustados 24 horas 1 0,25 0,5 1 48 horas 1 0,25 0,5 1 Intervalo de MIC Esperado 0,25-1* 0,12-1** 0,25-1 SC= Sin Crecimiento * Intervalo de MIC Esperado con Mueller-Hinton con Cationes ajustados ** Intervalo de MIC Esperado con Mueller-Hinton Catiónico.
*** Intervalo de MIC Esperado con BYE original, datos obtenidos de estudios previos.
La actividad del Compuesto 102, tetraciclina y eritromicina contra todos los serogrupos de Legionella pneumophila se muestra en la Tabla 19. Los valores de MICgo para el Compuesto 102, tetraciclina y eritromicina contra cepas de todos los serogrupos de L. pneumophila fueron de 8, 8 y 0,5 mg/l, respectivamente, usando el medio BYE original.
Tabla 19. Susceptibilidad de todos los serogrupos de Legionella pneumophila en Medio BYE original Las enseñanzas de todas las patentes, solicitudes publicadas y referencias citadas en este documento se incorporan por referencia en su totalidad.
Aunque esta invención se ha mostrado y descrito particularmente con referencias a realizaciones ilustrativas de la misma, se entenderá por los expertos en la materia que se pueden realizar en la misma diversos cambios en forma y detalles sin apartarse del alcance de la invención abarcada por las reivindicaciones adjuntas.

Claims (53)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula estructural i: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: X se selecciona entre halo, -R, -OR, -SR, -S(O)mR, -N(R)2, -N(R)C(O)R, N(R)C(O)OR' y N(R)S(0)mR', en la que: cada R se selecciona independientemente entre H, alquilo (CrC6), carbociclilo o heterociclilo, o dos grupos R tomados junto con el átomo o átomos a los que están unidos forman un heterociclilo no aromático de 4-7 miembros; y R' es alquilo (CrC6), carbociclilo o heterociclilo; anillo A es un anillo heterocíclico no aromático de 5-7 miembros opcionalmente que contiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente entre N, S y O además del átomo de nitrógeno indicado, donde: R1 se selecciona entre hidrógeno, -alquilo (C Ce), -alquileno (Co-C6)-carbociclilo, -alquileno (C0-C6)-heterociclilo, -alquileno (Ci-C6)-O-alquilo (Ci-C6), -alquileno (C2-C6)-0-carbociclilo, -alquileno (C2-C6)-0-heterociclilo, -S(0)m-alquilo (C C6), -S(0)m-carbociclilo, -S(O)m-heterociclilo, -alquileno (C2-C4)-S(0)m-carbociclilo, -alquileno (C2-C4)-S(0)m-heterociclilo, -C(O)-[C(R4)(R )]0-4-N(R2)(R3), -C(0)-alquilo (C Ce), -C(O)-heterociclilo, -C(0)-carbociclilo, -S(O)m-[C(R4)(R4)]0-4-N(R2)(R3), y -S(0)m-alquileno (CrC4)-carbociclilo, -S(0)m-alquileno (C C4)-heterociclilo, o R1 tomado junto con un átomo de anillo adyacente al átomo de nitrógeno al que R1 está unido forma un anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A; cada uno de R2 y R3 se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo (C C8), -alquileno (C0-C6)-carbociclilo, -alquileno (Co-C6)-heterociclilo, -alquileno (C2-C6)-0-carbociclilo, -alquileno (C2-C6)-0-heterociclilo, -S(0)m-alquilo (C1-C6), -S(0)m-carbociclilo, -S(0)m-heterociclilo, -alquileno (C2-C4)-S(0)m-carbociclilo y -alquileno (C2-C4)-S(0)m-heterociclilo; o R2 y R3, tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo, donde el heterociclilo opcionalmente comprende de 1 a 4 heteroátomos adicionales seleccionados independientemente entre N, S y O; cada R4 se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo (C Ce), carbociclilo, heterociclilo o un resto de cadena lateral de aminoácidos de origen natural, o dos R4 tomados junto con un átomo de carbono común al que están unidos forman un carbociclo no aromático de 3-7 miembros o un heterociclilo no aromático de 4-7 miembros, donde el heterociclilo formado por dos R4 comprende de uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente entre N, S y O; cualquier átomo de carbono sustituido en el anillo A está opcionalmente: (i) sustituido con uno a dos sustituyentes seleccionados independientemente entre -alquilo (C C ) y -alquileno(C0-C4)-carbociclilo; o (ii) sustituido con =0; (iii) tomado junto con un átomo de anillo adyacente para formar un carbocíclico de 3-7 miembros o un anillo heterociclilo saturado de 4-7 miembros; o (iv) espirocondensado a un carbociclilo saturado de 3-7 miembros; cualquier heteroátomo de N adicional en el anillo A está sustituido con hidrógeno, alquilo C C6, carbociclilo o heterociclilo; cada alquilo o alquileno en la Fórmula Estructura I está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre halo, -OH, =O, -O-alquilo (C1-C4), -alquilo (C1-C4) fluoro-sustituido, -S(O)m-alquilo (C C4) y -N(R5)(R5); cada porción de carbociclilo o heterociclilo de un sustituyente del anillo A o el anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre halo, -alquilo (CrC4), -OH, =O, -O-alquilo (CrC4), -alquileno (C C4)-O-alquilo (CrC ), -alquilo (Ci-C ) halo-sustituido, -O-alquilo (C C4) halo-sustituido, -C(O)-alquilo (C C4), -C(O)-(alquilo (C C4) fluoro-sustituido), -S(O)m-alquilo (C C4), -N(R5)(R5) y CN; cada R5 se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo (C1-C4), donde cada alquilo en el grupo representado por R5 está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre -alquilo (C1-C4), cicloalquilo (C3-C6), halo, -O-alquilo (CrC4) y -alquileno (CrC4)-O-alquilo (C C4); y cada m es independientemente 1 ó 2. con la condición de que cuando X sea hidrógeno, el anillo A no sea un bivalente sin sustituir. o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: X se selecciona entre halo, -R, -OR, -SR, -S(O)mR, -N(R)2, -N(R)C(O)R, N(R)C(O)OR' y N(R)S(0)mR'. donde: cada R se selecciona independientemente entre H, alquilo (C1-C6), carbociclilo o heterociclilo, o dos grupos R tomados junto con el átomo o átomos a los que están unidos forman un heterociclilo no aromático de 4-7 miembros; y R' es alquilo (C1-C6), carbociclilo o heterociclilo; el anillo A es un anillo heterocíclico no aromático de 5-7 miembros que contiene opcionalmente 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente entre N, S y O además de átomo de nitrógeno indicado, en la que: R1 se selecciona entre hidrógeno, -alquilo (C C8), -alquileno (C0-C6)-carbociclilo, -alquileno (C0-C6)-heterociclilo, -alquileno (Ci-C6)-0-alquilo (CrC6), -alquileno (C2-C6)-0-carbociclilo, -alquileno (C2-C6)-0-heterociclilo, -S(0)m-alquilo (Ci-C6), -S(0)m-carbociclilo, -S(0)m-heterociclilo, -alquileno (C2-C4)-S(0)m-carbociclilo, -alquileno (C2-C4)-S(O)m-heterociclilo, -C(O)-[C(R4)(R )]0-4-N(R2)(R3), -C(0)-alquilo (C C6), -C(0)-heterociclilo, -C(0)-carbociclilo, -S(O)m-[C(R )(R4)]0-4-N(R2)(R3), y -S(0)m-alquileno (Ci-C4)-carbociclilo, -S(0)m-alquileno (Ci-C4)-heterociclilo, o R1 tomado junto con un átomo de anillo adyacente al átomo de nitrógeno al que R1 está unido forma un anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A; cada uno de R2 y R3 se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo (C-i-Ce), -alquileno (Co-C6)-carbociclilo, -alquileno (C0-C6)-heterociclilo, -alquileno (C2-C6)-O-carbociclilo, -alquileno (C2-C6)-O-heterociclilo, -S(0)m-alquilo (C1-C6), -S(0)m-carbociclilo, -S(0)m-heterociclilo, -alquileno (C2-C4)-S(0)m-carbociclilo, y -alquileno (C2-C4)-S(O)m-heterociclilo; o R2 y R3, tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo, en el que el heterociclilo opcionalmente comprende de 1 a 4 heteroátomos adicionales seleccionados independientemente entre N, S y O; cada R4 se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo (Ci-C6), carbociclilo, heterociclilo o un resto de cadena lateral aminoacídico de origen natural, o dos R4 tomados junto con un átomo de carbono común al que están unidos forman un carbociclilo no aromático de 3-7 miembros o un heterociclilo no aromático de 4-7 miembros, donde el heterociclilo formado por dos R4 comprende uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente entre N, S y O; cualquier átomo de carbono sustituible en el anillo A esta opcionalmente: (i) sustituido con uno a dos sustituyentes seleccionados independientemente entre -alquilo (C1-C4) y -alquileno (Co-C- -carbociclilo; o (ii) sustituido con =0; (iii) tomado junto con un átomo del anillo adyacente para formar un carbociclilo saturado de 3-7 miembros o un anillo heterociclilo saturado de 4-7 miembros; o (iv) espirocondensado a un carbociclilo saturado de 3-7 miembros; cualquier heteroátomo de N adicional en el anillo A está sustituido con hidrógeno, alquilo CrC6, carbociclilo o heterociclilo; cada alquilo o alquileno en la Fórmula Estructural I está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre halo, -OH, =O, -O-alquilo (C1-C4), -alquilo (C1-C4) fluoro-sustituido, -S(O)m-alquilo (C C4) y -N(R5)(R5); cada porción carbociclilo o heterociclilo de un sustituyente del anillo A o el anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre halo, -alquilo (C1-C4), -OH, =O, -O-alquilo (C1-C4), -alquileno (CrC4)-O-alquilo (C1-C4), -alquilo (C1-C4) halo-sustituido, -O-alquilo (C1-C4) halo-sustituido, -C(O)-alquilo (C C4), -C(O)-(alquilo (C C4) fluoro-sustituido), -S(O)m-alquilo (C1-C4), -N(R5)(R5) y CN; cada R5 se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo (C1-C4), donde cada alquilo en el grupo representado por R5 está opcional e independientemente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre -alquilo (C1-C-4), cicloalquilo (C3-C6), halo, -OH, -O-alquilo (C1-C4) y -alquileno (CrC4)-O-alquilo (C1-C4); y cada m es independientemente 1 ó
2.
3. El compuesto de la reivindicación 1 , en el que X se selecciona entre flúor, cloro, hidrógeno, metoxi, metilo, trifluorometilo, trifluorometoxi y dimetilamino.
4. El compuesto de la reivindicación 2, en el que X se selecciona entre flúor, cloro, metoxi, metilo, trifluorometilo, trifluorometoxi y dimetilamino.
5. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde R1 se selecciona entre hidrógeno, -alquilo (d-C-s), -alquileno (C2-C4)-O-alquilo (C1-C4), -alquileno (Co-C3)-(heterociclo saturado), -alquileno (Co-C3)-cicloalquilo (C3-C7), -C(O)-alquileno (CrC3)-N(R2)(R3), o R1 tomado junto con un átomo de anillo adyacente al átomo de nitrógeno al que R1 está unido forma un anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A; donde: cualquier porción alquilo o alquileno de R1 o el anillo heterocíclico saturado condensado al anillo A está opcionalmente sustituido con flúor o hidroxi; R2 se selecciona entre hidrógeno y alquilo (C1-C3); R3 se selecciona entre alquilo (C C3) y cicloalquilo (C3-C7), o R2 y R3, tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo saturado de 4-7 miembros, en el que el heterociclilo está opcionalmente sustituido con flúor.
6. El compuesto de la reivindicación 5, R1 se selecciona entre hidrógeno; alquilo (C1-C3) lineal opcionalmente sustituido con uno o más. de: 1 a 5 grupo metilo, un grupo hidroxi individual, un grupo metoxi individual, 1 a 3 grupos flúor, un heterociclo saturado individual y un grupo cicloalquilo (C3-C7) individual; cicloalquilo (C3-C7); tetrahidrofuranoilo; y -C(0)-CH2-N(R2)(R3), donde R2 y R3 son simultáneamente metilo; R2 es hidrógeno y R3 es cicloalquilo C3-C7; o R2 y R3, tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo pirrolidinilo opcionalmente sustituido con flúor, o R1 tomado junto con un átomo de anillo adyacente al átomo de nitrógeno al que R1 está unido forma un anillo pirrolidinilo o piperidinilo condensado al anillo A, donde el anillo pirrolidinilo o piperidinilo condensado al anillo A está opcionalmente sustituido con hidroxi o flúor.
7. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que: R se selecciona entre hidrógeno y metilo; y R6 se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C1-C4) opcionalmente sustituido con hidroxi o fenilo; o R6 tomado junto con R1 y el átomo de nitrógeno y el átomo de carbono al que están unidos respectivamente forman a anillo pirrolidinilo o piperidinilo condensado al anillo A, donde el anillo pirrolidinilo o piperidinilo está opcionalmente sustituido con -OH o -F; o R6 y R6a se toman junto con el átomo de carbono al que ambos están unidos para formar un anillo ciclopropilo; y cada uno de R7a y R7b es hidrógeno o se toman juntos para formar =0.
8. El compuesto de la reivindicación 1 , en el que: el anillo A es X se selecciona entre flúor, cloro, metoxi, trifluorometilo y dimetilamino; y R1 se selecciona entre etilo, propilo, alquilo (C3-C5) ramificado, cicloalquilo (C3-C5), alquileno (C C3)-ciclopropilo, -C(O)CH2NH-ciclopentilo y -C(0)CH2-pirrolidin-1-ilo, donde R1 está opcionalmente sustituido con flúor.
9. El compuesto de la reivindicación 8, en el que: X se selecciona entre flúor, cloro, metoxi, trifluorometilo y dimetilamino; y R1 se selecciona entre 3-fluoroetilo, propilo, isopropilo, sec-butilo, tere-butilo, cicloalquilo (C3.C5), -C(CH3)2-ciclopropilo, -C(0)CH2NH-ciclopentilo, -C(0)CH2-(3-fluoropirrolidin-1-ilo); y cuando X es metoxi o dimetilamino, R1 se selecciona adicional entre terc-pentilo.
10. El compuesto de la reivindicación 1 , en el que: el anillo A es X es flúor; y R se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C1-C4).
11. El compuesto de la reivindicación 10, en el que R1 se selecciona entre isopropilo, propilo o etilo.
12. El compuesto de la reivindicación 1 , en el que: X es flúor; R1 se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C1-C4); R6 se selecciona entre hidrógeno, (R)-alquilo (C1-C4), o -CH2-fenilo, o R1 y R6 tomados junto con el átomo de nitrógeno y el átomo de carbono al que están unidos respectivamente forman un anillo pirrolidinilo condensado al anillo A; cada uno de R7a y R7b es hidrógeno o se toman juntos para formar =0, donde al menos uno de R1, y R6 es distinto de hidrógeno.
13. El compuesto de la reivindicación 12, en el que: R se selecciona entre hidrógeno, metilo, isobutilo y tere-butilo; y R6 se selecciona entre hidrógeno, (ft)-metilo, (R)-isobutilo, (R)-sec-butilo, (R)-isopropilo y -CH2-fenilo, o R1 y R6 tomados junto con el átomo de nitrógeno y el átomo de carbono al que están unidos respectivamente forman un anillo pirrolidinilo condensado al anillo A.
14. Un compuesto seleccionado entre uno cualquiera de los Compuestos 100, 103, 110, 112, 1 13, 114, 115, 118, 119, 120, 121 , 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 132, 135, 138, 141 , 142, 143, 144, 145, 148 y 149 o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
15. Un compuesto seleccionado entre uno cualquiera de los Compuestos 300, 304 y 307 o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
16. Un compuesto seleccionado entre uno cualquiera de los Compuestos 400, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 412, 413, 416, 417, 419, 421 , 422, 423, 424, 427, 428 y 429 o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
17. Una composición farmacéutica que comprende un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable y un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-0.
18. Un método para tratar o prevenir una infección o colonización en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 -16 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
19. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo que se desarrolla intracelularmente como parte de su proceso de infección.
20. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo Gram-positivo.
21. El método de la reivindicación 20, en el que el organismo Gram-positivo se selecciona entre la clase Bacilli; filo Actinobacteria; y clase Clostridia.
22. El método de la reivindicación 21 , en el que el organismo de la clase Bacilli se selecciona entre Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Bacillus spp. y Listeria spp.
23. El método de la reivindicación 21 , en el que el organismo del filo Actinobacteria se selecciona entre Propionibacterium spp., Corynebacterium spp., Nocardia spp., and Actinobacteria spp.
24. El método de la reivindicación 21 , en el que el organismo de la clase Clostridia se selecciona entre Clostridium spp.
25. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo Gram-negativo.
26. El método de la reivindicación 22, en el que el organismo Gram-negativo se selecciona entre el grupo que consiste en Enterobactericeae, Bacteroidetes, Vibrionaceae, Pasteurellaceae, Pseudomonadaceae, Neisseriaceae, Rickettsiae, Moraxellaceae cualquier especie de Proteeae, Acinetobacter spp., Helicobacter spp., y Campylobacter spp.
27. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo seleccionado entre el orden Rickettsiales y el orden Chlamydiales.
28. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo seleccionado entre el filo Chlamydiae y el filo Spriochaetales.
29. El método de la reivindicación 28, en el que el organismo del filo Spriochaetales se selecciona entre Borrelia spp. y Treponema spp.
30. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo seleccionado entre la clase Mollicutes.
31. El método de la reivindicación 30, en el que el organismo de la clase Mollicutes se selecciona entre Mycoplasma spp.
32. El método de la reivindicación 31 , en el que Mycoplasma spp. es Mycoplasma pneumoniae.
33. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo seleccionado entre Legionella spp. y Mycobacterium spp.
34. El método de la reivindicación 33, en el que el Mycobacterium spp es Mycobacterium tuberculosis.
35. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por más de un organismo.
36. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo resistente a uno o más antibióticos.
37. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo resistente a tetraciclina o cualquier miembro de primera y segunda generación de antibióticos de tetraciclina.
38. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo resistente a meticilina o cualquier antibiótico en la clase de ß-lactama.
39. El método de la reivindicación 38, en el que la clase de ß-lactama se selecciona entre cefalosporinas de segunda, tercera y cuarta generación.
40. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo resistente a quinolona o fluoroquinolona.
41. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo resistente a tigeciclina.
42. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo resistente a tetraciclina.
43. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo resistente a meticilina.
44. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo resistente a vancomicina.
45. El método de la reivindicación 18, en el que la infección está causada por un organismo resistente a un péptido antimicrobiano o un tratamiento terapéutico biosimilar.
46. El método de la reivindicación 20, en el que el organismo Gram-positivo se selecciona entre S. aureus, CoÑS, S. pneumoniae, S. pyogenes, S. agalactiae, E. faecalis y E. faecium.
47. El método de la reivindicación 25, en el que el organismo Gram-negativo se selecciona entre H. influenza, M. catarrhalis y Legionella pneumophila.
48. Un método para tratar o prevenir la infección respiratoria en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-16 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o la composición farmacéutica de la reivindicación 17.
49. El método de la reivindicación 48, en el que la infección respiratoria es Neumonía Bacteriana Adquirida en Comunicad (CAPB).
50. El método de la reivindicación 49, en el que la infección respiratoria está causada por una bacteria seleccionada entre S. aureus, S. pneumoniae, S. pyrogenes, H. influenza, M. catarrhalis y Legionella pneumophila.
51. Un método para tratar o prevenir una infección cutánea en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-16 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o la composición farmacéutica de la reivindicación 17.
52. El método de la reivindicación 51 , en el que la infección cutánea es una infección bacteriana aguda de la piel y de la estructura cutánea (ABSSSI).
53. El método de la reivindicación 52, en el que la infección cutánea está causada por una bacteria seleccionada entre S. aureus, CoNS, S. pyrogenes, S. agalactiae, E. faecalis y E. faecium.
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