MX2012003779A - Combinacion. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un método de tratamiento del cáncer en un mamífero, y a combinaciones farmacéuticas útiles en dicho tratamiento; en particular, el método se refiere a una combinación novedosa que comprende el inhibidor de MEK: N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2 ,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1(2H)-il]fen il}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y el inhibidor de la cinasa PI3: 2,4-difluoro-N-{2-(meti loxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinil}bencenosulfo namida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; composiciones farmacéuticas que comprenden las mismas, y métodos de uso de dichas combinaciones en el tratamiento del cáncer.

Description

COMBINACIÓN CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un método de tratamiento del cáncer en un mamífero y a combinaciones útiles en dicho tratamiento. En particular, el método se refiere a una combinación novedosa que comprende el inhibidor de MEK: /V-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrah¡d^ acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y el inhibidor de PI3K: 2,4-difluoro-/S/-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazin¡l)-6-quinolinil]-3-piridinil}bencenosulfonamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, composiciones farmacéuticas que comprenden las mismas, y métodos de uso de dichas combinaciones en el tratamiento del cáncer.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El tratamiento eficaz de los trastornos hiperproliferativos que incluyen el cáncer es un objetivo continuo en el campo de la oncología. En general, el cáncer se origina del descontrol de los procesos normales que regulan la división celular, la diferenciación y la muerte celular apoptótica. La apoptosis (muerte celular programada) desempeña una función esencial en el desarrollo embrionario y la patogénesis de varias enfermedades, tales como las enfermedades neuronales degenerativas, enfermedades cardiovasculares y cáncer. Una de las rutas estudiadas más comúnmente, que incluye la regulación por cinasa de la apoptosis, es la señalización celular de los receptores del factor de crecimiento en la superficie celular al núcleo (Crews y Erikson, Cell, 74:215-17, 1993).

Una familia grande e importante de enzimas es la familia de enzimas de cinasa de proteína. Actualmente se conocen aproximadamente 500 cinasas de proteína diferentes. Las cinasas de proteína sirven para catalizar la fosforilación de una cadena lateral de aminoácido en varias proteínas mediante la transferencia del ?-fosfato del complejo ATP-Mg2+ a dicha cadena lateral de aminoácido. Estas enzimas controlan la mayoría de los procesos de señalización dentro de las células, gobernando con ello la función, crecimiento, diferenciación y destrucción (apoptosis) de la célula por medio de fosforilación reversible de los grupos hidroxilo de los residuos de serina, treonina y tirosina en las proteínas. Los estudios han mostrado que las cinasas de proteína son reguladores clave de muchas funciones celulares que incluyen la transducción de señal, la regulación de transcripción, la motilidad celular y la división celular. También se ha observado que varios oncogenes codifican cinasas de proteína sugiriendo que las cinasas desempeñan una función en la oncogénesis. Estos procesos están muy regulados, frecuentemente por rutas entrelazadas complejas en donde cada cinasa misma es regulada por una o más cinasas. Consecuentemente, la actividad aberrante o inapropiada de la cinasas de proteína puede contribuir al surgimiento de enfermedades asociadas con esta actividad aberrante de cinasa, incluso trastornos proliferativos benignos y malignos, y también enfermedades que se originan de la activación inapropiada de los sistemas inmune y nervioso. Debido a su relevancia fisiológica, variedad y ubicuidad, las cinasas de proteína se han convertido en una de las familias de enzimas más importantes y ampliamente estudiadas en la investigación bioquímica y médica.

La familia de enzimas de cinasas de proteína normalmente se clasifica en dos subfamilias principales: tirosina cinasas de proteína y serina/treonina cinasas de proteína, basándose en el residuo de aminoácido que fosforilan. Las serina/treonina cinasas de proteína (PSTK) incluyen proteína cinasas dependientes de AMP cíclico y GMP cíclico, proteína cinasa dependiente de calcio y fosfolípido, proteína cinasas dependientes de calcio y calmodulina, caseína cinasas, proteína cinasas del ciclo de división celular, y otras. Usualmente estas cinasas son citoplásmicas o están asociadas con las fracciones de partículas de las células, posiblemente por medio de proteínas de anclaje. La actividad aberrante de serina/treonina cinasas de proteína se ha implicado, o se ha sospechado en varias enfermedades tales como la artritis reumatoide, psoriasis, choque séptico, pérdida de hueso, muchos tipos de cáncer y otras enfermedades proliferativas. Por consiguiente, las serina/treonina cinasas y las rutas de transducción de señal de las que son parte, son blancos importantes para el diseño de fármacos. Las tirosina cinasas fosforilan residuos de tirosina. Las tirosina cinasas desempeñan una función igualmente importante en la regulación celular. Estas cinasas incluyen varios receptores para moléculas tales como factores de crecimiento y hormonas, que incluyen el receptor del factor de crecimiento epidérmico, receptor de insulina, receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas, y otros. Los estudios han indicado que muchas tirosina cinasas son proteínas de transmembrana con sus dominios receptores localizados en el exterior de la célula y sus dominios de cinasa en el interior. También está en marcha mucha investigación para identificar moduladores de tirosina cinasas.

Se sabe que la proteína cinasa activada por mitógeno (MAPK) /cinasa extracelular regulada por señal (ERK) (en adelante referidas como MEK) está implicada en la regulación de muchos procesos celulares. La familia Raf (B-Raf, C-Raf, etc.) activa la familia MEK (MEK-1 , MEK-2, etc.), y la familia MEK activa la familia ERK (ERK-1 y ERK-2). Ampliamente, la actividad de señalización de la ruta RAF/MEK/ERK controla la traducción de ARNm. Esto incluye genes relacionados con el ciclo celular. Por lo tanto, la hiperactivación de esta ruta puede producir proliferación celular descontrolada. El descontrol de la ruta RAF/MEK/ERK por hiperactivación de ERK es observado en aproximadamente el 30% de todas las malignidades humanas (Alien, LF, et al. Semin. Oncol. 2003, 30 (5 Supl. 16): 105-16). La RAS, que puede señalizar por medio de PI3K/AKT y RAF/MEK/ERK, tiene una proteína oncogénica mutada en el 15% de todos los tipos de cáncer (Davies, H. et al. Nature, 2002, 417:949-54). También, se han identificado mutaciones de BRAF activadoras con una frecuencia alta en tipos específicos de tumor (por ejemplo los melanomas) (Davies, H. et al. Nature, 2002, 417:949-54). Aunque la activación de mutaciones en MEK por sí sola no parece ocurrir frecuentemente en el cáncer humano, se piensa que MEK es un blanco farmacológico importante para el tratamiento del cáncer humano debido a su función central en la ruta de ERK. Además, la actividad inhibitoria de MEK induce eficientemente la inhibición de la actividad de ERK1/2 y la supresión de la proliferación celular (The Journal of Biological Chemistry, vol. 276, No. 4, p. 2686-2692, 2001), y se espera que el compuesto inhibidor muestre efectos sobre enfermedades causadas por la proliferación celular indeseable, como en la génesis de tumor y/o cáncer.

La ruta de fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K) está entre las rutas más comúnmente activadas en el cáncer humano. La función e importancia de esta ruta en la tumorigénesis y avance de tumor están bien establecidas (Samuels y Ericson, Curr. Opp in Oncology, 2006. 18: 77-82). La señalización de PI3K-AKT parece ser un modulador pivotante de la supervivencia, proliferación y metabolismo de la célula. Esto incluye la activación del blanco de rapamicina del mamífero (mTOR), un miembro de la familia de proteínas PI3K y regulador directo del crecimiento celular y la traducción. De esta manera, el descontrol de la señalización de PI3K/AKT/mTOR en los tumores contribuye a un fenotipo celular que muestra muchas marcas distintivas de malignidades, que incluyen potencial reproductor ilimitado y evasión de la apoptosis (Hanahan y Weinberg, Cell, 2000. 100:57-70).

La familia de PI3K consiste en 15 proteínas que comparten homología de secuencia, particularmente dentro de sus dominios de cinasa; sin embargo, tienen especificidades de substrato y modos de regulación distintos (Vivanco y Sawyers, Nal Rev. Cáncer, 2002, 2:489-501). Las PI3-cinasas de clase I fosforilan lípidos que contienen inositol, conocidos como fosfatidilinositoles (Ptdlns), en la posición 3. El substrato principal de los miembros de la familia de clase I, Ptdlns-4, 5-P2 (PIP2) es convertido a Ptdlns-3, 4, 5-P3 (PIP3) por estas cinasas. La PIP3 es un segundo mensajero crítico que recluta proteínas que contienen dominios de homología pleckstrin hacia la membrana celular, en donde son activadas. La más estudiada de estas proteínas es la AKT, que promueve la supervivencia, crecimiento y proliferación celular. Después de la activación, la AKT se traslada al citoplasma y el núcleo en donde fosforila muchos substratos que incluyen mTOR (TORC1 ). Además de AKT, la PI3K activa otras rutas que están implicadas en la carcinogénesis, tales como PDK1 , CDC42 y RAC1 (Samuels y Ericson, Curr. Opp in Oncology, 2006. 18: 77-82).

En el estudio de tumores humanos, la activación de la ruta de señalización PI3K/AKT/mTOR puede ocurrir mediante muchos mecanismos. El descontrol genético de la ruta es común y puede ocurrir de varias maneras (revisado por Samuels y Ericson, Curr. Opp ¡n Oncology, 2006, 18: 77-82). La activación de mutaciones del gen PIK3CA (que codifica la subunidad catalítica p110a de PI3K) ocurre en un porcentaje significativo de tumores humanos que incluyen cáncer mamario, ovárico, endometrial y colorrectal. La activación de amplificaciones de ADN de este gen también ocurre menos frecuentemente en varios tipos diferentes de tumor. Las mutaciones en la subunidad reguladora p85a de PI3K (PIK3R1), que se piensa que interrumpen la interacción C2-ÍSH2 entre PIK3R1 y PIK3CA, ocurren en el cáncer del ovario, glioblastoma y cáncer colorrectal. Comúnmente, el supresor de tumor PTEN, que desfosforila PIP3 para generar PIP2 y que actúa así como un inhibidor de la ruta PI3K, es mutado, suprimido o silenciado epigenéticamente. Finalmente, la ruta también puede ser activada genéticamente después de PI3K por amplificación de ADN o mutación de AKT; sin embargo, estos eventos genéticos ocurren mucho menos frecuentemente en el cáncer humano. Se sabe que la inhibición de las isoformas de PI3K, particularmente PI3Ka, es útil en el tratamiento del cáncer (véase, por ejemplo, WO 05/121 142, WO 08/144463, WO 08/144464, WO 07/136940).

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Una modalidad de esta invención provee una combinación que comprende: (i) un compuesto de la estructura (I): (i) A/-{3-[3-c¡clopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-d¡metil-2,47-trioxo-3,4,67-tetrahidropindo[4,3-c/]pirimidin-1 (2/- -il]fenil}acetamida (en adelante el compuesto A), o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y (ii) un compuesto de la estructura (II): (II) 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridiniljbencenosulfonamida (en adelante el compuesto B), o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

Una modalidad de esta invención provee un método de tratamiento del cáncer en un humano en necesidad del mismo, que comprende la administración in vivo a dicho humano de una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación del compuesto A, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, convenientemente el solvato de sulfóxido de dimetilo, y el compuesto B o una sal o farmacéuticamente aceptable del mismo.

Una modalidad de esta invención provee un método de tratamiento del cáncer en un humano en necesidad del mismo, que comprende la administración in vivo a dicho humano de una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación del compuesto A, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, convenientemente el solvato de sulfóxido de dimetilo, y el compuesto B o una sal o farmacéuticamente aceptable del mismo; en donde la combinación se administra dentro de un periodo especificado; y en donde la combinación se administra durante un tiempo.

Una modalidad de esta invención provee un método de tratamiento del cáncer en un humano en necesidad del mismo, que comprende la administración in vivo a dicho humano de una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación del compuesto A, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, convenientemente el solvato de sulfóxido de dimetilo, y el compuesto B o una sal o farmacéuticamente aceptable del mismo; en donde los compuestos A y B se administran secuencialmente.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a combinaciones que presentan actividad antiproliferativa. Convenientemente, el método se refiere a métodos de tratamiento del cáncer mediante la coadministración de W-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido-[4,3-c]pirimidin-1 (2/-/)-il]fenil}acetamida (compuesto A), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, convenientemente el solvato de sulfóxido de dimetilo, dicho compuesto está representado por la estructura I: (l) y 2,4-difluoro-A/-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridiniljbencenosulfonamida (compuesto B) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, dicho compuesto está representado por la siguiente estructura: (II) El compuesto A, conocido también como N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro^-yodo-fenilaminoJ-e.e-dimetil- ^.y-trioxo-S^.ej-tetrahidro^H-pirido[4,3-d]pirimidin-1-il]fenil}acetamida, se describe y se reclama junto con sus sales y solvatos farmacéuticamente aceptables, como inhibidores útiles de la actividad de MEK, particularmente en el tratamiento del cáncer, en la solicitud internacional No. PCT/JP2005/011082, con fecha de presentación internacional del 10 de junio de 2005; la publicación internacional No. WO 2005/121 142 con fecha de publicación internacional del 22 de diciembre de 2005, la descripción completa de las cuales se incorpora en la presente como referencia; el compuesto A es el compuesto del ejemplo 4-1. El compuesto A se puede preparar como se describe en la solicitud internacional No. PCT/JP2005/01 1082. El compuesto A se puede preparar como se describe en la publicación de patente de EE. UU. No. US 2006/0014768, publicada el 19 de enero de 2006, cuya descripción completa se incorpora en la presente como referencia.

Convenientemente, el compuesto A está en forma de un solvato de sulfóxido de dimetilo. Convenientemente, el compuesto A está en forma de una sal de sodio. Convenientemente, el compuesto A está en forma de un solvato seleccionado de: hidrato, solvato de ácido acético, etanol, nitrometano, clorobenceno, -pentanol, alcohol isopropílico, etilenglicol y 3-metil-1-butanol. Estos solvatos y formas de sal pueden ser preparadas por el experto en la materia partiendo de la descripción de la solicitud internacional No. PCT/JP2005/011082, o la publicación de patente de Estados Unidos No. US 2006/0014768.

El compuesto B se describe y se reclama, junto con sus sales farmacéuticamente aceptables, como inhibidores útiles de la actividad de PI3K, particularmente en el tratamiento del cáncer, en la solicitud internacional No. PCT/US2008/063819, que tiene una fecha de presentación internacional del 16 de mayo de 2008; la publicación internacional No. WO 2008/144463, con fecha de publicación internacional del 27 de noviembre de 2008, cuyas descripciones completas se incorporan en la presente como referencia. El compuesto B es el compuesto del ejemplo 345. El compuesto B se puede preparar como se describe en la solicitud internacional No. PCT/US2008/0638 9.

Convenientemente el compuesto B está en forma de base libre. Los compuestos de la invención pueden formar un solvato, que se entiende que es un complejo de estequiometría variable formado por un soluto (en esta invención el compuesto A o una sal del mismo, y/o el compuesto B o una sal del mismo) y un disolvente. Para los propósitos de la invención un disolvente de este tipo no afecta la actividad biológica del soluto. Los ejemplos de disolventes adecuados incluyen, sin limitación, agua, metanol, sulfóxido de dimetilo, etanol y ácido acético. Convenientemente el disolvente utilizado es un disolvente farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos de disolventes farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen, sin limitación, agua, sulfóxido de dimetilo, etanol y ácido acético. Convenientemente el disolvente utilizado es agua.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la invención pueden ser preparadas fácilmente por los expertos en la materia.

Con el término "tratamiento" y derivados del mismo, como se usa aquí, se entiende terapia terapéutica. Con respecto a una afección particular, tratamiento significa: (1) mejorar o prevenir una o más de las manifestaciones biológicas de la afección; (2) alterar (a) uno o más puntos de la cascada biológica que conduce a la afección o que es responsable de la misma, o (b) una o más de las manifestaciones biológicas de la afección; (3) aliviar uno o más de los síntomas, efectos o efectos secundarios asociados con la afección o el tratamiento de la misma; o (4) retardar el avance de la afección o una o más de las manifestaciones biológicas de la afección. También se contempla la terapia profiláctica. El experto en la materia apreciará que la "prevención" no es un término absoluto. En medicina, se entiende que "prevención" se refiere a la administración profiláctica de un fármaco para disminuir sustancialmente la probabilidad o severidad de una afección o manifestación biológica de la misma, o para retrasar el inicio de dicha afección o manifestación biológica de la misma. La terapia profiláctica es apropiada, por ejemplo, cuando se considera que un sujeto está en alto riesgo de desarrollar cáncer, por ejemplo cuando el sujeto tiene una fuerte historia de cáncer familiar, o cuando el sujeto ha estado expuesto a un carcinógeno.

Con el término "administración periódica" o variaciones del mismo se entiende que el fármaco no se administra al humano en intervalos de descanso. Un intervalo de descanso (también llamado algunas veces descanso farmacológico, descanso de medicamento, interrupción estructurada de tratamiento o interrupción estratégica de tratamiento), es cuando el paciente deja de tomar el medicamento durante un periodo que puede ser de algunos días a varios meses.

Como se usa aquí, el término "cantidad eficaz" significa aquella cantidad de fármaco o agente farmacéutico que provocará la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal, o humano, que es buscada, por ejemplo, por un investigador o médico. Además, el término "cantidad terapéuticamente eficaz" significa cualquier cantidad que, en comparación con un sujeto correspondiente que no ha recibido dicha cantidad, resulta en un mejoramiento del tratamiento, curación, prevención o alivio de una enfermedad, trastorno o efecto secundario, o una disminución en la tasa de avance de una enfermedad o trastorno. El término también incluye dentro de su alcance las cantidades eficaces para mejorar la función fisiológica normal.

Como se usa aquí, el término "combinación" y sus derivados significan la administración simultánea o cualquier clase de administración secuencial separada de una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto A, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y el compuesto B o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Preferiblemente, si la administración no es simultánea, los compuestos se administran en un tiempo muy cercano uno de otro. Además, no importa si los compuestos se administran en la misma forma farmacéutica, por ejemplo un compuesto se puede administrar tópicamente y el otro compuesto se puede administrar oralmente. Convenientemente, ambos compuestos se administran oralmente.

Como se usa aquí, el término "kit de combinación" significa la composición o composiciones farmacéuticas que se usan para administrar el compuesto A, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y el compuesto B, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de acuerdo con la invención. Cuando ambos compuestos se administran simultáneamente, el kit de combinación puede contener el compuesto A, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y el compuesto B, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en una sola composición farmacéutica, tal como por ejemplo una tableta, o en composiciones farmacéuticas separadas. Cuando los compuestos no se administran simultáneamente, el kit de combinación contendrá el compuesto A, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y el compuesto B, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en composiciones farmacéuticas separadas. El kit de combinación puede comprender el compuesto A o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y el compuesto B o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en composiciones farmacéuticas separadas en un solo envase, o en composiciones farmacéuticas separadas en envases separados.

En un aspecto se provee un kit de combinación que comprende los siguientes componentes: el compuesto A, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable; y el compuesto B, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En una modalidad de la invención, el kit de combinación comprende los siguientes componentes: el compuesto A, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable; y el compuesto B, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable; en donde los componentes se proveen en una forma que es adecuada para su administración secuencial, separada y/o simultánea.

En una modalidad, el kit de combinación comprende: un primer recipiente que comprende el compuesto A o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable, y un segundo recipiente que comprende el compuesto B o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable, y medios de recipiente para contener dicho primer y segundo recipiente.

El "kit de combinación" también se puede proveer con instructivo, por ejemplo con instrucciones de dosis y administración. Dichas instrucciones de dosis y administración pueden ser del tipo provisto a un doctor, por ejemplo una etiqueta de producto medicinal, o pueden ser del tipo provisto por un doctor, tal como por ejemplo las instrucciones para el paciente.

Como se usa aquí, el término cáncer de mama "triple negativo" significa cualquier cáncer de mama que no expresa los genes del receptor de estrógeno (ER), receptor de progesterona (PR) o Her2/neu. Este subtipo de cáncer de mama se caracteriza clínicamente por ser más agresivo y menos sensible al tratamiento estándar, y se asocia con un pronóstico general más malo para un paciente. Se diagnostica más frecuentemente en las mujeres más jóvenes, mujeres con mutaciones de BRCA1 y las que pertenecen a los grupos étnicos afroamericanos e hispanos, y las que tienen un parto reciente.

Un tumor de mama de tipo basal es un subtipo de cáncer de mama agresivo que tiene un tiempo de recaída corto. Las mujeres afroamericanas que son premenopáusicas están en un riesgo promedio mayor de desarrollar tumores de mama de tipo basal, que usualmente son triples negativos para los receptores de estrógeno, progesterona y HER2. Los tumores de mama de tipo basal pueden ser de grado alto y ser diagnosticados en una etapa tardía, requiriendo regímenes quimioterapéuticos potentes.

Como se usa aquí, el término "compuesto A2" significa el compuesto A o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

Como se usa aquí, el término "B2" significa el compuesto B o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Convenientemente, las combinaciones de esta invención se administran dentro de un "periodo especificado".

Como se usa aquí, el término "periodo especificado" y sus derivados significan el intervalo de tiempo entre la administración de uno del compuesto A2 y el compuesto B2, y el otro del compuesto A2 y el compuesto B2. A menos que se defina de otra manera, el periodo especificado puede incluir la administración simultánea. A menos que se defina de otra manera, el periodo especificado se refiere a la administración del compuesto A2 y el compuesto B2 durante un solo día.

Convenientemente, si los compuestos se administran dentro de un "periodo especificado" y no se administran simultáneamente, ambos se administran dentro de aproximadamente 24 horas uno de otro -en este caso, el periodo especificado será de aproximadamente 24 horas; convenientemente los dos se administrarán dentro de aproximadamente 12 horas uno de otro -en este caso, el periodo especificado será de aproximadamente 12 horas; convenientemente los dos se administrarán dentro de aproximadamente 1 horas uno de otro -en este caso, el periodo especificado será de aproximadamente 1 1 horas; convenientemente los dos se administrarán dentro de aproximadamente 10 horas uno de otro -en este caso, el periodo especificado será de aproximadamente 10 horas; convenientemente los dos se administrarán dentro de aproximadamente 9 horas uno de otro -en este caso, el periodo especificado será de aproximadamente 9 horas; convenientemente los dos se administrarán dentro de aproximadamente 8 horas uno de otro -en este caso, el periodo especificado será de aproximadamente 8 horas; convenientemente los dos se administrarán dentro de aproximadamente 7 horas uno de otro -en este caso, el periodo especificado será de aproximadamente 7 horas; convenientemente los dos se administrarán dentro de aproximadamente 6 horas uno de otro -en este caso, el periodo especificado será de aproximadamente 6 horas; convenientemente los dos se administrarán dentro de aproximadamente 5 horas uno de otro -en este caso, el periodo especificado será de aproximadamente 5 horas; convenientemente los dos se administrarán dentro de aproximadamente 4 horas uno de otro -en este caso, el periodo especificado será de aproximadamente 4 horas; convenientemente los dos se administrarán dentro de aproximadamente 3 horas uno de otro -en este caso, el periodo especificado será de aproximadamente 3 horas; convenientemente se administrarán dentro de aproximadamente 2 horas uno de otro -en este caso, el periodo especificado será de aproximadamente 2 horas; convenientemente los dos se administrarán dentro de aproximadamente 1 hora uno de otro -en este caso, el periodo especificado será de aproximadamente 1 hora. Como se usa aquí, la administración del compuesto A2 y el compuesto B2 con menos de aproximadamente 45 minutos de separación se considera administración simultánea.

Convenientemente, cuando la combinación de la invención se administra durante un "periodo especificado", los compuestos serán coadministrados "durante un tiempo".

Como se usa aquí, el término "durante un tiempo" y sus derivados, significa que los dos compuestos de la invención se administran durante el número indicado de días consecutivos. A menos que se defina de otra manera, el número de días consecutivos no tiene que comenzar con el inicio del tratamiento o terminar con el fin del tratamiento, solamente se requiere que ocurra el número de días consecutivos en algún punto durante el curso del tratamiento.

Con respecto a la administración en un "periodo especificado": Convenientemente, los dos compuestos se administrarán dentro de un periodo especificado durante por lo menos un día -en este caso, la duración será de por lo menos un día; convenientemente, durante el curso del tratamiento, los dos compuestos se administrarán dentro de un periodo especificado durante por lo menos 3 días consecutivos -en este caso, la duración será de por lo menos 3 días; convenientemente, durante el curso del tratamiento, los dos compuestos se administrarán dentro de un periodo especificado durante por lo menos 5 días consecutivos -en este caso, la duración será de por lo menos 5 días; convenientemente, durante el curso del tratamiento, los dos compuestos se administrarán dentro de un periodo especificado durante por lo menos 7 días consecutivos -en este caso, la duración será de por lo menos 7 días; convenientemente, durante el curso del tratamiento, los dos compuestos se administrarán dentro de un periodo especificado durante por lo menos 14 días consecutivos -en este caso, la duración será de por lo menos 14 días; convenientemente, durante el curso del tratamiento, los dos compuestos se administrarán dentro de un periodo especificado durante por lo menos 30 días consecutivos -en este caso, la duración será de por lo menos 30 días.

Convenientemente, si los compuestos no se administran durante un "periodo especificado", se administran secuencialmente. Como se usa aquí, el término "administración secuencial" y sus derivados significan que uno del compuesto A2 y el compuesto B2 se administra una vez al día durante dos o más días consecutivos, y el otro del compuesto A2 y el compuesto B2 se administra subsiguientemente una vez al día durante dos o más días consecutivos. También se contempla en la presente un intervalo de descanso entre la administración secuencial de uno del compuesto A2 y el compuesto B2, y el otro del compuesto A2 y el compuesto B2. Como se usa aquí, un intervalo de descanso es un periodo de días después de la administración secuencial de uno del compuesto A2 y el compuesto B2 y antes de la administración del otro del compuesto A2 y el compuesto B2, en donde no se administra ni el compuesto A2 ni el compuesto B2. Convenientemente, el intervalo de descanso será un periodo de días seleccionado de: 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días, 8 días, 9 días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días y 14 días.

Con respecto a la administración secuencial: Convenientemente, uno del compuesto A2 y el compuesto B2 se administra durante 2 a 30 días consecutivos, seguidos por un intervalo de descanso opcional, seguido por la administración del otro del compuesto A2 y el compuesto B2 durante 2 a 30 días consecutivos. Convenientemente, uno del compuesto A2 y el compuesto B2 se administra durante 2 a 21 días consecutivos, seguidos por un intervalo de descanso opcional, seguido por la administración del otro del compuesto A2 y el compuesto B2 durante 2 a 21 días consecutivos. Convenientemente, uno del compuesto A2 y el compuesto B2 se administra durante 2 a 14 días consecutivos, seguidos por un intervalo de descanso de 1 a 14 días, seguidos por la administración del otro del compuesto A2 y el compuesto B2 durante 2 a 14 días consecutivos. Convenientemente, uno del compuesto A2 y el compuesto B2 se administra durante 3 a 7 días consecutivos, seguidos por un intervalo de descanso de 3 a 10 días, seguidos por la administración del otro del compuesto A2 y el compuesto B2 durante 3 a 7 días consecutivos.

Convenientemente, el compuesto B2 se administrará en primer lugar en la secuencia, seguido por un intervalo de descanso opcional, seguido por la administración del compuesto A2. Convenientemente, el compuesto B2 se administra durante 3 a 21 días consecutivos, seguidos por un intervalo de descanso opcional, seguido por la administración del compuesto A2 durante 3 a 21 días consecutivos. Convenientemente, el compuesto B2 se administra durante 3 a 21 días consecutivos, seguidos por un intervalo de descanso de 1 a 14 días, seguidos por la administración del compuesto A2 durante 3 a 21 días consecutivos. Convenientemente, el compuesto B2 se administra durante 3 a 21 días consecutivos, seguidos por un intervalo de descanso de 3 a 14 días, seguidos por la administración del compuesto A2 durante 3 a 21 días consecutivos. Convenientemente, el compuesto B2 se administra durante 21 días consecutivos, seguidos por un intervalo de descanso opcional, seguido por la administración del compuesto A2 durante 14 días consecutivos. Convenientemente, el compuesto B2 se administra durante 14 días consecutivos, seguidos por un intervalo de descanso de 1 a 14 días, seguidos por la administración del compuesto A2 durante 14 días consecutivos. Convenientemente, el compuesto B2 se administra durante 7 días consecutivos, seguidos por un intervalo de descanso de 3 a 10 días, seguidos por la administración del compuesto A2 durante 7 días consecutivos. Convenientemente, el compuesto B2 se administra durante 3 días consecutivos, seguidos por un intervalo de descanso de 3 a 14 días, seguidos por la administración del compuesto A2 durante 7 días consecutivos. Convenientemente, el compuesto B2 se administra durante 3 días consecutivos, seguidos por un intervalo de descanso de 3 a 10 días, seguidos por la administración del compuesto A2 durante 3 días consecutivos.

Se entiende que una administración en el "periodo especificado" y una administración "secuencial" pueden ir seguidas por administración repetida, o pueden ir seguidas por un protocolo de administración alternativo, y que un intervalo de descanso puede preceder la administración repetida o el protocolo de administración alternativo.

Convenientemente, la cantidad administrada del compuesto A2 como parte de la combinación de acuerdo con la presente invención, será una cantidad seleccionada de aproximadamente 0.125 mg a aproximadamente 10 mg; convenientemente, la cantidad será seleccionada de aproximadamente 0.25 mg a aproximadamente 9 mg; convenientemente, la cantidad será seleccionada de aproximadamente 0.25 mg a aproximadamente 8 mg; convenientemente, la cantidad será seleccionada de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 8 mg; convenientemente, la cantidad será seleccionada de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 7 mg; convenientemente, la cantidad será seleccionada de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 7 mg; convenientemente, la cantidad será de aproximadamente 5 mg. Por consiguiente, la cantidad administrada del compuesto A como parte de la combinación de acuerdo con la presente invención, será una cantidad seleccionada de aproximadamente 0.125 mg a aproximadamente 10 mg. Por ejemplo, la cantidad administrada del compuesto A2 como parte de la combinación de acuerdo con la presente invención, puede ser de 0.125 mg, 0.25 mg, 0.5 mg, 0.75 mg, 1 mg, 1.5 mg, 2 mg, 2.5 mg, 3 mg, 3.5 mg, 4 mg, 4.5 mg, 5 mg, 5.5 mg, 6 mg, 6.5 mg, 7 mg, 7.5 mg, 8 mg, 8.5 mg, 9 mg, 9.5 mg, 10 mg.

Convenientemente, la cantidad administrada del compuesto B2 como parte de la combinación de acuerdo con la presente invención será una cantidad seleccionada de aproximadamente 0.25 mg a aproximadamente 75 mg; convenientemente, la cantidad será seleccionada de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 50 mg; convenientemente, la cantidad será seleccionada de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 25 mg; convenientemente, la cantidad será seleccionada de aproximadamente 2 mg a aproximadamente 20 mg; convenientemente, la cantidad será seleccionada de aproximadamente 4 mg a aproximadamente 16 mg; convenientemente, la cantidad será seleccionada de aproximadamente 6 mg a aproximadamente 12 mg; convenientemente, la cantidad será de aproximadamente 10 mg. Por consiguiente, la cantidad administrada del compuesto B2 como parte de la combinación de acuerdo con la presente invención será una cantidad seleccionada de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 50 mg. Por ejemplo, la cantidad administrada del compuesto B2 como parte de la combinación de acuerdo con la presente invención puede ser de 0.5 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 1 1 mg, 12 mg, 13 mg, 14 mg, 15 mg, 16 mg, 17 mg, 18 mg, 20 mg, 21 mg, 22 mg, 23 mg, 25 mg, 26 mg, 27 mg, 28 mg, 29 mg, 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, o 50 mg.

Como se usan aquí, todas las cantidades especificadas para el compuesto A2 y el compuesto B2 están indicadas como la cantidad administrada del compuesto libre o no solvatado ni en forma de sal, por dosis.

El método de la presente invención también se puede utilizar con otros métodos terapéuticos de tratamiento del cáncer.

Para usarse en la terapia, aunque es posible administrar las cantidades terapéuticamente eficaces de las combinaciones de la presente invención como las sustancias químicas crudas, es preferible presentar las combinaciones como composiciones farmacéuticas. Por consiguiente, la invención también provee composiciones farmacéuticas que incluyen el compuesto A2 y/o el compuesto B2, y uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables. Las combinaciones de la presente invención son como se describe arriba. Los vehículos deben ser aceptables en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación, susceptibles de formularse en composiciones farmacéuticas, y no deben ser nocivos para el receptor de los mismos. De acuerdo con otro aspecto de la invención, también se provee un procedimiento de preparación de una formulación farmacéutica que incluye mezclar el compuesto A2 y/o el compuesto B2 con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables. Como se indicó arriba, tales elementos de la combinación farmacéutica utilizada se pueden presentar en composiciones farmacéuticas separadas o se pueden formular juntos en una formulación farmacéutica.

Las formulaciones farmacéuticas se pueden presentar en formas de dosis unitarias que contienen una cantidad predeterminada del ingrediente activo por dosis unitaria. Como es conocido para los expertos en la materia, la cantidad del ingrediente activo por dosis dependerá de la afección tratada, la vía de administración y la edad, peso y condición del paciente. Las formulaciones de dosis unitarias preferidas son las que contienen una dosis o subdosis diaria, o una fracción apropiada de la misma, de un ingrediente activo. Además, tales formulaciones farmacéuticas se pueden preparar mediante cualquiera de los métodos bien conocidos en las ciencias farmacéuticas.

El compuesto A2 y el compuesto B2 se pueden administrar por cualquier vía apropiada. Las rutas adecuadas incluyen oral, rectal, nasal, tópica (que incluye bucal y sublingual), vaginal y parenteral (que incluye subcutánea, intramuscular, intravenosa, intradérmica, intratecal y epidural). Se apreciará que la ruta preferida puede variar, por ejemplo, con la condición del receptor de la combinación y el cáncer por tratar. También se apreciará que cada uno de los agentes administrados se puede administrar por las mismas vías o por diferentes, y que el compuesto A2 y el compuesto B2 se pueden combinar en una composición/formulación farmacéutica.

Los compuestos o combinaciones de la presente invención se incorporan en formas farmacéuticas convenientes, tales como cápsulas, tabletas o preparados inyectables. Se utilizan vehículos farmacéuticos sólidos o líquidos. Los vehículos sólidos incluyen almidón, lactosa, sulfato de calcio dihidratado, caolín, sacarosa, talco, gelatina, agar, pectina, acacia, estearato de magnesio y ácido esteárico. Los vehículos líquidos incluyen jarabe, aceite de cacahuate, aceite de oliva, solución salina y agua. Similarmente, el vehículo puede incluir un material de liberación prolongada, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo, solo o con una cera. La cantidad de vehículo sólido varía ampliamente pero preferiblemente será de aproximadamente 25 mg a aproximadamente 1 g por dosis unitaria. Cuando se usa un vehículo líquido, el preparado estará convenientemente en forma de un jarabe, elíxir, emulsión, cápsula de gelatina blanda, líquido inyectable estéril, tal como una ampolleta, o una suspensión líquida acuosa o no acuosa.

Por ejemplo, para administración oral en forma de una tableta o cápsula, el componente activo se puede combinar con un vehículo farmacéuticamente aceptable inerte, inocuo para uso oral, tal como etanol, glicerol, agua, etc. Los polvos se preparan moliendo el compuesto a un tamaño fino adecuado y mezclándolo con un vehículo farmacéutico molido símilarmente, tal como un carbohidrato comestible, tal como por ejemplo almidón o manitol. También pueden estar presentes agentes saborizantes, conservadores, dispersantes y colorantes.

Se debe entender que, además de los ingredientes anteriormente mencionados, las formulaciones pueden incluir otros agentes convencionales tomando en cuenta el tipo de formulación en cuestión; por ejemplo, las que son adecuadas para administración oral pueden incluir agentes saborizantes.

Como se indica, cantidades terapéuticamente eficaces de las combinaciones de la invención (compuesto A2 en combinación con el compuesto B2) se administran a un humano. Normalmente la cantidad terapéuticamente eficaz de los agentes administrados de la presente invención dependerá de varios factores que incluyen, por ejemplo, la edad y peso del sujeto, la afección precisa que requiere tratamiento, la severidad de la afección, la naturaleza de la formulación y la vía de administración. Finalmente, la cantidad terapéuticamente eficaz será a criterio del médico a cargo.

Las combinaciones de la presente invención se analizan para determinar su eficacia, ventajas y propiedades sinérgicas de acuerdo con los procedimientos conocidos. Convenientemente, las combinaciones de la invención se analizan para determinar su eficacia, ventajas y propiedades sinérgicas generalmente de acuerdo con las siguientes pruebas de proliferación celular de la combinación. Las células se depositan en placas de 96 o 384 pocilios en medio de cultivo apropiado para cada tipo de célula, suplementado con 10% de FBS y 1 % de penicilina/estreptomicina, y se incuban durante la noche a 37°C, 5% de C02. Las células se tratan en forma de cuadrícula con dilución del compuesto A2 (10 diluciones, incluyendo sin compuesto, con diluciones de 3 veces empezando desde 0.250-20 µ? dependiendo del compuesto), y también se tratan con el compuesto B2 (10 diluciones, incluyendo sin compuesto, con diluciones de 3 veces empezando desde 0. 50-20 µ? dependiendo del compuesto), y se incuban como antes durante 72 horas adicionales. En algunos casos los compuestos se agregan de manera escalonada y el tiempo de incubación se puede prolongar hasta 7 días. El crecimiento celular se mide usando el reactivo CelITiter-Glo® de acuerdo con el protocolo del fabricante, y las señales se leen en una lectora PerkinElmer EnVision™ puesta en modo de luminiscencia, con una lectura de 0.5 segundos. Los datos se analizan como se describe más abajo.

Los resultados se expresan como el porcentaje del valor de t=0 y se grafican contra la concentración del compuesto. El valor de t=0 se normaliza a 100% y representa el número de células presentes en el momento de la adición del compuesto. La respuesta celular se determina para cada compuesto y/o combinación de compuestos usando un ajuste de curva de 4 o 6 parámetros de viabilidad celular contra la concentración, usando el software IDBS XLfit plug-in para Microsoft Excel, y determinando la concentración requerida para el 50% de inhibición del crecimiento celular (gICso). La corrección de fondo se hace por substracción de los valores de los pocilios que no contienen células. Para cada combinación de fármaco se calcula un índice de Combinación (Cl), Exceso Más Alto Sobre el Agente Solo (EOHSA) y Exceso Sobre Bliss (EOBIiss), de acuerdo con los métodos conocidos, como los descritos por Chou y Talalay (1984), Advances in Enzyme Regulation, 22, 37 a 55; y Berenbaum, MC (1981) Adv. Cáncer Research, 35, 269-335.

Como las combinaciones de la presente invención son activas en las pruebas anteriores, presentan utilidad terapéutica ventajosa en el tratamiento del cáncer.

Convenientemente, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento o disminución de la severidad de un cáncer seleccionado de: cáncer del cerebro (gliomas), glioblastomas, síndrome e Bannayan-Zonana, enfermedad de Cowden, enfermedad de Lhermitte-Duclos, cáncer de la mama, cáncer inflamatorio de la mama, tumor de Wilm, sarcoma de Ewing, rabdomiosarcoma, ependimoma, meduloblastoma, cáncer del colon, cáncer de la cabeza y el cuello, cáncer del riñon, cáncer del pulmón, cáncer del hígado, melanoma, cáncer del ovario, cáncer del páncreas, cáncer de la próstata, sarcoma, osteosarcoma, tumor de hueso de células gigantes, cáncer de la tiroides, leucemia linfoblástica de células T, leucemia mielógena crónica, leucemia linfocítica crónica, leucemia de células pilosas, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielógena aguda, leucemia neutrofílica crónica, leucemia linfoblástica aguda de células T, plasmacitoma, leucemia inmunoblástica de células grandes, leucemia de células de manto, mieloma múltiple, leucemia megacariocítica aguda, leucemia promielocítica, eritroleucemia, linfoma maligno, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma linfoblástico de células T, linfoma de Burkitt, linfoma folicular, neuroblastoma, cáncer de la vejiga, cáncer urotelial, cáncer del pulmón, cáncer vulvar, cáncer cervical, cáncer endometrial, cáncer renal, mesotelioma, cáncer esofágico, cáncer de glándulas salivales, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico, cáncer nasofaríngeo, cáncer bucal, cáncer de la boca, GIST (tumor estromal gastrointestinal) y cáncer testicular.

Convenientemente, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento o disminución de la severidad de un cáncer seleccionado de: cáncer del cerebro (gliomas), glioblastomas, síndrome de Bannayan-Zonana, enfermedad de Cowden, enfermedad de Lhermitte-Duclos, cáncer de la mama, cáncer del colon, cáncer de la cabeza y el cuello, cáncer del riñon, cáncer del pulmón, cáncer del hígado, melanoma, cáncer ovárico, cáncer pancreático, cáncer prostático, sarcoma y cáncer de la tiroides.

Convenientemente, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento o disminución de la severidad de un cáncer seleccionado de cáncer del ovario, hígado, colon, mama, páncreas y próstata.

Convenientemente, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento o disminución de la severidad de un cáncer seleccionado de cáncer de la mama, hígado, pulmón, páncreas y colon.

Convenientemente, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento o disminución de la severidad de un cáncer que es de tipo silvestre o mutante para ciertos biomarcadores.

El término "tipo silvestre" como se entiende en la técnica, se refiere a una secuencia de polipéptido o polinucleótido que ocurre en una población nativa sin modificación genética. También se entiende que un "mutante" incluye una secuencia de polipéptido o polinucleótido que tiene por lo menos una modificación de un aminoácido o ácido nucleico en comparación con el aminoácido o ácido nucleico correspondiente encontrado en un polipéptido o polinucleótido de tipo silvestre, respectivamente. En el término mutante se incluye el polimorfismo de un solo nucleótido (SNP) en donde existe una distinción de un solo par de bases en la secuencia de una cadena de ácido nucleico, en comparación con la cadena de ácido nucleico encontrado más predominantemente (de tipo silvestre).

El cáncer que es de tipo silvestre o mutante para biomarcadores, y de tipo silvestre o mutante para PI3K/Pten se identifica mediante los métodos conocidos.

El homólogo del oncogen viral de sarcoma de rata V-Ki-ras2 Kirsten, también conocido como KRAS, es una proteína que en humanos es codificada por el gen KRAS. Como otros miembros de la familia Ras, la proteína KRAS es una GTPasa y es un mediador temprano en muchas rutas de transducción de señal. Usualmente la KRAS es encadenada a las membranas celulares debido a la presencia de un grupo isoprenilo en su extremo C. Cuando está mutado, KRAS es un oncogen. El producto de proteína del gen KRAS normal realiza una función esencial en la señalización en tejido normal, y la mutación de un gen KRAS es un paso esencial en el desarrollo de muchos tipos de cáncer.

El oncogen N-ras es un miembro de la familia de genes RAS. Está localizado en el cromosoma 1 y es activado en HL60, una linea de leucemia promielocítica. El orden de los genes cercanos es el siguiente: cen-CD2--NGFB-NRAS--tel. La familia de genes ras de mamífero consiste en los genes ras harvey y kirsten (c-Hras1 y c-Kras2), un pseudogen inactivo de cada uno (c-Hras2 y c-Kras1 ) y el gen N-ras. Difieren significativamente solo en los 40 aminoácidos C-terminales. Estos genes ras tienen unión de GTP/GDP y actividad de GTPasa, y su función normal puede ser como proteínas reguladoras de tipo G implicadas en el control normal del crecimiento celular. Las mutaciones que cambian los residuos de aminoácido 12, 13 o 61 activan el potencial de N-ras para transformar células cultivadas, y están implicadas en una variedad de tumores humanos. El gen N-ras especifica dos transcritos principales, de 2 Kb y 4.3 Kb. La diferencia entre los dos transcritos es una extensión simple a través del sitio de terminación del transcrito de 2 Kb. El gen N-ras consiste en siete exones (-1, I, II, III, IV, V, VI). El transcrito más pequeño de 2 Kb contiene el exón Vía, y el transcrito más grande de 4.3 Kb contiene el exón Vlb que solo es una forma más grande del exón Vía. Ambos transcritos codifican proteínas idénticas ya que difieren solo en la región 3' no traducida. La secuencia del transcrito más corto de 2 Kb se presenta aquí. La secuencia del transcrito de 4.3 Kb no está disponible.

Las células de tumor de Ras/Raf o PI3K/PTEN de tipo silvestre o muíante se pueden identificar por medio de técnicas de amplificación y secuenciación de ADN, técnicas de detección de ADN y ARN que incluyen, sin limitación, Northern y Southern blot, respectivamente, y/o varias técnicas de biochip y arreglo. Esto puede incluir aberraciones citogenéticas y abundancia de transcrito. Los polipéptidos de tipo silvestre y mutantes se pueden detectar mediante una variedad de técnicas que incluyen, sin limitación, técnicas inmunodiagnósticas tales como ELISA, Western blot o inmunocítoquímica.

Esta invención provee una combinación que comprende N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofen¡l)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3, 4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1(2H)-il]fentl}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinil}bencenosulfonamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

Esta invención también provee una combinación que comprende N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6, 7-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinil}bencenosulfonamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para usarse en terapia.

Esta invención también provee una combinación que comprende N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y 2,4-difluoro-A/-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinil}bencenosulfonam¡da, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para usarse en el tratamiento del cáncer.

Esta invención también provee una composición farmacéutica que comprende una combinación de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirim¡din-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridiniljbencenosulfonamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

Esta invención también provee un kit de combinación que comprende N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y 2,4-difluoro-/V-{2-(metilox¡)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinil}bencenosulfonamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

Esta invención también provee el uso de una combinación que comprende N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4^iridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinil}bencenosulfonamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, en la fabricación de un medicamento.

Esta invención también provee el uso de una combinación que comprende N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidrop¡rido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinil}bencenosulfonamida, o una sal farmacéuticamente aceptable . de la misma, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer.

Esta invención también provee un método de tratamiento del cáncer, que comprende administrar una combinación de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido-[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridin¡l}bencenosulfonamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, a un sujeto en necesidad del mismo.

Esta invención también se refiere a un método de tratamiento del cáncer, que comprende administrar una combinación de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido-[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinil}bencenosulfonamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, a un sujeto en necesidad del mismo, en donde la cantidad de N-{3-[3-c¡clopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida o sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma se selecciona de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 3 mg, y la cantidad de 2,4-difluoro-A/-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinil}-bencenosulfonamida o sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma se selecciona de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 3 mg.

Los siguientes ejemplos tienen fines únicamente ilustrativos y se considera que no limitan el alcance de la invención en modo alguno.

Detalles experimentales Preparación de inhibidores de MEK Los inhibidores de MEK que son adecuados para usarse en las presentes combinaciones, particularmente el dimetilsulfóxido de N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7- tetrahidro-2H-pindo[4,3-d]pinmidin-1-il]fenil}acetamida: se puede preparar de acuerdo con la publicación de patente internacional No. WO2005/121142.

Los inhibidores de PI3K que son adecuados para usarse en las presentes combinaciones, particularmente 2,4-difluoro-N-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-pir¡dinil}bencenosulfonamida: se puede preparar de acuerdo con la publicación de patente internacional No. WO08/144463 (ejemplo 345).

El compuesto A que se describe en la sección experimental se refiere al solvato de sulfóxido de dimetilo de N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenilaminoJ-e.e-dimetil^^.y-trioxo-S^.ej-tetrahidro^H-pirido^.S-d]-pirimidin-1-il]fen¡l}acetamida.

Inhibición del crecimiento celular in vitro e inducción de apoptosis por el compuesto A, compuesto B y su combinación, en líneas de células de tumor Estudio No. 1. Líneas de células de cáncer de colon, pulmón y páncreas.

Preparación experimental: Se hicieron pruebas de combinación de fármaco con los compuestos A y B usando un panel de líneas de células de cáncer de colon humano (n=26), cáncer de pulmón (n=14) y cáncer de páncreas (n=6) (cuadro 1 ). Las líneas celulares se compraron [ATCC (Manassas, VA, EE. UU.) o DSMZ (Braunschweig, Alemania)] y se desarrollaron en RPMI-1640 suplementado con glutamina 2 mM, piruvato de sodio 1 mM y 10% de suero fetal bovino (excepto para Capan-1 y HuP-T4, que se desarrollaron con 20% de suero fetal bovino) y se mantuvieron a 37°C y 5% de C02 en una incubadora húmeda.

Protocolo experimental.

Prueba de combinación de fármacos en proporción fija: En la figura 1 se puede ver el diseño de dilución de la prueba de combinación de fármacos en proporción fija. En primer lugar, los compuestos de prueba se prepararon como soluciones de reserva 10 mM en sulfóxido de dimetilo 100% (DMSO). Se hicieron diluciones adicionales de los compuestos con DMSO. El primer compuesto de prueba (designado como compuesto A) se diluyó horizontalmente en una placa de microtitulación de 96 pocilios en las filas B-E, usando una serie de dilución de 3 veces para 10 puntos de dilución. Un segundo compuesto de prueba (designado como el compuesto B) se diluyó horizontalmente en una placa de microtitulación separada de 96 pocilios en las filas D-G, usando una serie de dilución de 3 veces para 10 puntos de dilución. Los dos compuestos se combinaron usando volúmenes iguales de cada placa de fármaco en medio de cultivo celular. Esto resulta en una dilución 1 :50 de los fármacos en el medio de cultivo celular. El compuesto A se tituló individualmente en las filas B y C, mientras que en las filas F y G de la placa se dosificó solo el compuesto B. Se hizo una dilución adicional 1 :10 de los fármacos en el medio de cultivo celular antes de agregarlos a las células. La adición de los fármacos a las células resulta en una dilución adicional 1 :2 de los fármacos. La dilución total de la placa de fármaco a las células es de 1 :1000. La escala de concentración final del compuesto B fue de 0.008-150.0 nM y del compuesto A fue de 0.013-250.0 nM. El control positivo consistió en medio de cultivo con DMSO al 0.1% y células sin fármaco. El control negativo consistió en medio de cultivo con solución de DMSO al 0.1 %.

Las pruebas se hicieron en placas de microtitulación de 96 pocilios con densidades de siembra apropiadas calculadas de estudios previos de cada línea celular. Después de la dosificación, las líneas celulares se incubaron a 37 °C, 5% de CO2, en aire húmedo durante 72 horas. La proliferación celular se midió usando el reactivo CellTiter Glo (Promega Corporation, Madison, Wl, EE. UU.) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Las placas se trataron con solución CellTiter Glo y se analizaron para determinar RLU (unidades relativas de luz) usando una lectora de placa Molecular Devices SpectraMax M5 (Sunnyvale, CA, EE. UU.).

Análisis de datos: Se usaron tres métricas independientes para analizar los efectos combinatorios sobre la inhibición del crecimiento del compuesto B y el compuesto A. 1. Exceso Más Alto Sobre el Agente Solo (EOHSA)- Un criterio estándar para medir los efectos combinatorios de fármacos es analizar los efectos sobre la inhibición del crecimiento celular en términos absolutos. En este caso, la combinación de fármacos se compara con el más responsivo de los dos tratamientos individuales (un solo agente). Para cada experimento de combinación se genera el porcentaje de efecto con respecto al agente solo más potente para cada dosis a lo largo de la curva. Esta medida del "Exceso Más Alto Sobre el Agente Solo (EOHSA)" es uno de los criterios usados para evaluar la sinergia de las combinaciones de fármacos (Borisy AA Elliott PJ, Hurst NW, Lee MS, Lehar J, Price ER, Serbedzija G, Zimmermann GR, Foley MA, Stockwell BR, Keith CT, "Systematic discovery of multicomponent therapeutics", Proc Nati Acad Sc¡ U S A, 24 de junio de 2003; 100(13):7977-82). 2. Sinergia de Bliss. Un segundo criterio usado frecuentemente para determinar la sinergia de una combinación es evaluar el exceso de inhibición sobre la independencia de Bliss o "aditividad" (Bliss, C.l, México, DF, "The Toxicity of Poisons Applied Jointly", Annals of Applied Biology 1939, Vol 26, edición 3, agosto de 1939). El modelo asume una respuesta combinada de los dos compuestos independientemente usando lo siguiente: Puntuación = Ea +Eb - (Ea * Eb) en donde Eg es el efecto (o porcentaje de inhibición) del compuesto A, y Eb es el efecto del compuesto B. El efecto resultante de la combinación de los dos compuestos se compara con su aditividad predecida según Bliss, y se genera una puntuación de sinergia para cada dosis a lo largo de la curva de respuesta. 3. Indice de Combinación (CP. Un tercer criterio para evaluar la sinergia es el índice de combinación (Cl) derivado de Chou y Talalay (Chou TC, Talalay P. "Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of múltiple drugs or enzyme inhibitors", Adv Enzyme RegulA 98A; 22:27 '-55). La siguiente ecuación es un modelo usado para los compuestos que se comportan con diferentes mecanismos de acción (fórmula mutuamente no exclusiva).

D en a . b Dhena : b (D ena : b){D. er¡a : b) Indice de Combinación =— +—5 + i-¾ ^- ^ 50(a) ^ 50(b) 50(a) !r C 50(b) ) A menor Cl será mayor la sinergia que tiene potencialmente la combinación. Un Cl mayor de 1 sugiere que la combinación estudiada puede ser antagónica. También se generan puntuaciones de Cl para concentraciones inhibitorias de 25% (IC25) y 75% (IC75) reemplazando la IC50 en la fórmula anterior para cada compuesto con la concentración inhibitoria respectiva.

Los valores de porcentaje de intensidad se usaron en el modelo 205 de XLfit en Microsoft Excel para calcular los valores de gICso usando un ajuste logístico de 4 parámetros. El punto medio de la ventana de crecimiento (el gICso) está a la mitad entre el número de células en el momento de la adición de compuesto (T=0) y el crecimiento de células de control tratadas con DMSO a las 72 h. El número de células al tiempo cero (T0) se divide del valor de intensidad en la parte inferior de la curva de respuesta (Ym¡n) para generar una medida de la muerte celular (Ym¡n/T0). Un valor menor de 1 para Ym¡r To indica potencia mayor con el tratamiento en comparación con los valores más altos.

Para EOHSA y Bliss se debe ver una puntuación de sinergia en ambas replicaciones técnicas dentro de un experimento, para hacer una designación apropiada (sinergia, sinergia modesta, etc.). Cada experimento de combinación contiene una réplica para los dos compuestos como agentes solos y también una réplica técnica para la combinación.

Las puntuaciones de sinergia para EOHSA y Bliss, a concentraciones muy bajas (por ejemplo dosis 1 , dosis 2) están sujetas a una variación más alta y generalmente se excluyen del análisis. Inversamente, las puntuaciones de sinergia a las concentraciones más altas (dosis 10) caen fuera de la escala de dosis terapéuticas y generalmente se excluyen del análisis puesto que los efectos observados son más susceptibles de eventos fuera de blanco.

Para mediciones de sinergia de EOHSA y Bliss se genera una puntuación para cada dosis a lo largo de la curva de respuesta. Las puntuaciones se clasifican como "antagonismo" (< -10), "aditividad" (- 0 - 10), "sinergia modesta" (10 - 20) o "sinergia (>20). Estas puntuaciones reflejan el porcentaje sobre el agente más potente o el porcentaje mayor que la aditividad de Bliss, dependiendo del modelo que se interpreta.

Para el índice de combinación, a menor Cl será mayor la sinergia que tiene potencialmente la combinación. Las puntuaciones entre 0 y 0.7 se consideran sinergísticas, mientras que las puntuaciones entre 0.7 y 0.9 se consideran de sinergia modesta. Todas las otras puntuaciones no indican sinergia para el índice de combinación.

Para las lineas celulares en donde nunca se alcanzó una concentración inhibitoria de 25% con uno de los compuestos de la combinación, no puede ser calculado un valor de Cl y se anota "NA" para el Cl.

Datos de mutación de línea celular: Se recolectaron datos de mutación para el estatus del gen KRAS. La fuente de datos son los datos de examen de mutación de línea celular de cáncer, publicados como parte de la base de datos Catálogo de Mutaciones Somáticas en el Cáncer (COSMIC) (Bamford S. et al. Br. J. Cáncer, 2004, 91 :355-58). Para asegurar que la identidad de las líneas celulares usadas en la prueba de proliferación fuera igual que en la base de datos COSMIC, se hizo una comparación de genotipo entre las líneas celulares en el examen de sensibilidad y el de COSMIC. Específicamente, esto abarcó: 1. Calcular los genotipos para cada línea celular usando el Affymetrix 500K 'SNP Chip' (Affymetrix, Inc., Sunnyvale, CA) y el algoritmo RLMM (Rabbee y Speed, Bioinformatics, 2006. 22: 7-12). 2. Identificar las coincidencias de genotipo de cada línea celular con las precalculadas para cada línea celular que tiene perfiles de mutación en COSMIC. 3. Asignar el estatus de mutación de cada línea celular basándose en las coincidencias de genotipo.

Resultados Se hizo una clasificación extensa del grado de sinergia en cada linea celular tratada con la combinación del inhibidor de PI3K, compuesto B, e inhibidor de MEK, compuesto A. Se consideró que había sinergia en las líneas celulares cuando por lo menos una métrica fue calificada como sinérgica. En los cuadros 1-4 se presentan datos de sinergia para líneas celulares de colon, páncreas y pulmón. En el apéndice A, cuadros 7-9, se pueden ver datos de los cálculos de la línea celular pancreática.

CUADRO 1 Puntuaciones en el panel de líneas celulares de páncreas, colon y pulmón usadas en los estudios de combinación CUADRO 1 (Continuación) Llave del cuadro 1 Línea celular = Nombre de la línea de células Sitio u órgano = órgano del cual se derivan las células Diagnóstico/Histología = Diagnóstico patológico del tejido KRAS = Estatus de mutación WT = Tipo silvestre CUADRO 2 Mediciones básicas e indicaciones de sinergia para todas las líneas celulares de colon CUADRO 2 (Continuación) Llave de los cuadros 2-7: Linea celular = Linea de células derivadas de tumor glC50 = Concentración del compuesto (nM) requerida para causar 50% de inhibición de crecimiento Ymin = Crecimiento celular mínimo en presencia del compuesto B (con respecto al control de DMSO) medido como % a T=0 (número de células en el momento de la adición del compuesto B). Un número negativo indica una pérdida neta de células con respecto al T=0 YmirÁo = Valor de Ym¡n dividido entre el valor de T0 en donde Ymin se deriva de la curva de concentración-respuesta y el valor de T0 representa el número de células en el momento de la adición del compuesto (medición de CTG) EOHSA = Determinación del exceso más alto sobre un solo agente BLISS = Determinación de la sinergia Bliss Indice comb. = Puntuación del índice de combinación CUADRO 3 Mediciones básicas e indicaciones de sinergia para todas las líneas celulares de pulmón CUADRO 4 Mediciones básicas e indicaciones de sinergia para todas las líneas celulares de páncreas Estudio No. 2. Líneas de células de cáncer de mama analizadas por receptor de estrógeno.

Preparación experimental: Se hicieron pruebas de combinación de fármaco con el inhibidor de MEK (compuesto A) y el inhibidor de PI3K (compuesto B) usando un panel de líneas de células de cáncer de mama humano (n=10) (cuadro 1 ). Las líneas celulares se compraron [ATCC (Manassas, VA, EE. UU.) o DSMZ (Braunschweig, Alemania)] y se desarrollaron en RPMI-1640 suplementado con glutamina 2 mM, piruvato de sodio 1 mM y 10% de suero fetal bovino, y se mantuvieron a 37°C y 5% de C02 en una incubadora húmeda.

Protocolo experimental.

Prueba de combinación de fármacos en proporción fija: En la figura 1 se puede ver el diseño de dilución de la prueba de combinación de fármacos en proporción fija. En primer lugar, los compuestos de prueba se prepararon como soluciones de reserva 10 mM en sulfóxido de dimetilo 100% (DMSO). Se hicieron diluciones adicionales de los compuestos con DMSO. El primer compuesto de prueba (designado como compuesto 1) se diluyó horizontalmente en una placa de microtitulación de 96 pocilios en las filas B-E, usando una serie de dilución de 3 veces para 10 puntos de dilución. Un segundo compuesto de prueba (designado como el compuesto 2) se diluyó horizontalmente en una placa de microtitulación separada de 96 pocilios en las filas D-G, usando una serie de dilución de 3 veces para 10 puntos de dilución. Los dos compuestos se combinaron usando volúmenes iguales de cada placa de fármaco en medio de cultivo celular. Esto resulta en una dilución 1 :50 de los fármacos en el medio de cultivo celular. El compuesto 1 se tituló individualmente en las filas B y C, mientras que en las filas F y G de la placa se dosificó solo el compuesto 2. Se hizo una dilución adicional 1 : 10 de los fármacos en el medio de cultivo celular antes de agregarlos a las células. La adición de los fármacos a las células resulta en una dilución adicional 1 :2 de los fármacos. La dilución total de la placa de fármaco a las células es de 1 :1000. La escala de concentración final de GSK2126458A fue de 0.008-150.0 nM y de GSK1 120212B fue de 0.013-250.0 nM. El control positivo consistió en medio de cultivo con DMSO al 0.1 % y células sin fármaco. El control negativo consistió en medio de cultivo con solución de DMSO al 0.1 %.

Las pruebas se hicieron en placas de microtitulación de 96 pocilios con densidades de siembra apropiadas calculadas de estudios previos de cada línea celular. Después de la dosificación, las líneas celulares se incubaron a 37 °C, 5% de CO2, en aire húmedo durante 72 horas. La proliferación celular se midió usando el reactivo CelITiter Glo (Promega Corporation, Madison, Wl, EE. UU.) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Las placas se trataron con solución CelITiter Glo y se analizaron para determinar RLU (unidades relativas de luz) usando una lectora de placa Molecular Devices SpectraMax M5 (Sunnyvale, CA, EE. UU.).

Análisis de datos: Los valores de porcentaje de identidad se usaron en el modelo 205 de XLfit de Microsoft Excel para usar un ajuste logístico de 4 parámetros para calcular las métricas de respuesta, incluyendo el punto medio de la ventana de crecimiento glC5o, número de células al tiempo cero (T0), y el valor de intensidad en la parte inferior de la curva de respuesta Ym¡n. Cada experimento de combinación contiene una réplica para los dos compuestos como agentes solos y también una réplica técnica para la combinación. Para análisis subsiguientes se usaron los valores promedio.

Se usaron tres métricas independientes para analizar los efectos combinatorios sobre la inhibición del crecimiento del compuesto A y el compuesto B. Estas incluyen: (i) Exceso Más Alto Sobre el Agente Solo (EOHSA; Borisy et al, 2003; FDA 21 CFR 300.50), (ii) Sinergia de Bliss, y (iii) índice de Combinación (Cl)). Las descripciones de estas tres métricas y los métodos para calcularlas se describen arriba. También se encuentran arriba los criterios usados para determinar el grado de sinergia por medio de cada métrica. Para EOHSA y Bliss se debe observar una puntuación de sinergia en ambas replicaciones técnicas dentro de un experimento para hacer una designación apropiada (sinergia, sinergia modesta, etc.). Brevemente, se consideró que había sinergia en una línea celular cuando por lo menos una de las tres métricas (Cl, Sinergia Bliss, EOHSA) fue calificada dentro de la escala sinérgica como se indica arriba.

La abundancia de transcrito de receptor de estrógeno (ER) y receptor de progesterona (PR) se midió para todas las líneas celulares usando el Affymetrix U133 Plus2 GeneChips por triplicado. La abundancia de transcrito se calculó normalizando todas las intensidades de señal de sonda a un valor de 150, usando el algoritmo mas5 de Affymetrix Microarray Analysis Suite 5.0. Se eligió una sonda representativa para análisis subsiguiente y se usó la intensidad promedio de la sonda por triplicado.

Resultados Se hizo una clasificación extensa del grado de sinergia para cada línea celular tratada con la combinación de los compuestos A y B.

CUADRO 5 Puntuaciones en el panel de líneas celulares de mama usadas en los estudios de combinación CUADRO 6 Mediciones básicas e indicaciones de sinergia para todas las líneas celulares de cáncer de mama CUADRO 7 Panel de líneas celulares de mama (n=10), mediciones de abundancia de transcrito de ER/PR usadas en los experimentos de combinación para el compuesto B y el compuesto A Estudio No. 3. Inhibición del crecimiento celular in vitro e inducción de apoptosis por los compuestos A y B en un panel de líneas celulares de carcinoma hepatocelular, y un panel de líneas celulares de cáncer de mama, analizados por los cambios del número de copias de ADN de Her2.

Líneas celulares y condiciones de crecimiento: Las líneas de células de tumor humanas de carcinoma hepatocelular (HCC), C3A, Hep3B, HepG2, PLC/PRF/5, SNU182, SNU387, SNU398, SNU423, SNU449 y SNU475 se le compraron a ATCC. Las líneas de células de tumor de mama de humano, HCC2218, HCC1419, BT-474, SK-BR-3, UACC893, JIMT-1 , MDA- B-361 , HCC202, MDA-MB-175-VII, HCC1569, HCC1937, HCC38, MDA-MB-157, HCC1954, HCC1500, BT483, KPL-1 , SUM225 y ZR-75-1 de ATCC, SUM52 y SUM190 de Asterand, PLC (Detroit MI), se cultivaron en medio RPMI 1640 que contenía 10% de FBS; SKBR3-W13 y BT-474-J4 se cultivaron en medio RPMI 1640 que contenía 10% de FBS y lapatinib 1 µ?; la línea KPL4 fue provista generosamente por el Dr Junichi Kurebayashi (Escuela de Medicina de Kawasaki, Okayama, Japón) y se cultivaron en DMEM que contenía 5% de FBS. La JIMT-1 de la Colección Europea de Cultivos de Células (Reino Unido), es una línea derivada de un paciente clínicamente resistente a trastuzumab (Herceptin®). SK-BR-3-W13 es un clon de una sola célula aislado por medio de un cilindro de clonación después de un solo tratamiento de células SK-BR-3 con lapatinib 0.5 µ?. La BT-474-J4 es un clon de una sola célula derivado de un conjunto de células BT-474 que fueron seleccionadas para crecer en lapatinib a una concentración de 3 µ?.

Prueba de inhibición del crecimiento celular y análisis de los datos de la combinación: Las células se sembraron en una placa de cultivo de tejido de 96 pocilios (NUNC 136102) de medio RPMI que contenía 10% de FBS a 500-2000 células por pocilio. Aproximadamente 24 horas después de depositar en las placas, las células se expusieron a 10 diluciones seriadas de dos veces o tres veces del compuesto A o B, o la combinación de los dos agentes, a una proporción molar de 2: 1 (compuesto A y B, respectivamente). En algunos casos, las células se desarrollaron en medio RPMI que contenía 10% de FBS y en presencia o ausencia de 2 ng/ml de factor de crecimiento de hepatocito (HGF). Las células se incubaron en presencia de los compuestos durante 3 días. La concentración de ATP se determinó agregando Cell Titer Glo® (Promega) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Brevemente, se agregó a cada placa Cell Titer Glo®, se incubó 20 minutos y después se leyó la señal luminiscente en la lectora de placa SpectraMax L con un tiempo de integración de 0.5 segundos. Todas las pruebas se corrieron por duplicado.

La inhibición del crecimiento celular se calculó después del tratamiento con el compuesto o combinación de compuestos durante tres días, y se comparó con la señal de células tratadas con vehículo (DMSO). El crecimiento celular se calculó con respecto a los pocilios de control tratados con vehículo (DMSO). La concentración de compuesto que inhibe el 50% del crecimiento celular de control (IC50) se re-interpoló cuando y = 50% de los pocilios de control tratados con DMSO, usando regresión no lineal con la ecuación: en donde A es la respuesta mínima (ym¡n), B es la respuesta máxima (ymax), C es el punto de inflexión de la curva (EC50) y D es el coeficiente de Hill.

Los efectos de la combinación sobre la potencia se evaluaron usando los métodos del índice de Combinación (Cl) y el Exceso Más Alto Sobre el Agente Solo (EOHSA).

En este estudio, la coadministración de los compuestos A y B produce una interacción sinérgica en una línea celular específica sobre la potencia o sobre la escala de respuesta, si el Cl <0.9 o el EOHSATD >0.

Pruebas de apoptosis celular -Activación de caspasa 3/7 y fragmentación de ADN: Para investigar la inducción de la apoptosis, todas las líneas celulares se depositaron a 5,000 células por pocilio en una placa de cultivo de tejido de 96 pocilios, y se dejaron adherir durante aproximadamente 24 horas. Después, las células se trataron con los compuestos como se describe arriba. Veinticuatro horas después del tratamiento con el compuesto se determinó la concentración de caspasa 3 y caspasa 7 activas con Caspase Glo™ 3/7 (Promega, cat. G8093), de acuerdo con las instrucciones provistas por el fabricante. Cuarenta y ocho horas después del tratamiento con el compuesto, se calculó la magnitud de la apoptosis usando la prueba Cell Death ELISA de Roche (Roche, Inc., Basilea, Suiza; Cat. No. 1 774 425 001 ), siguiendo las instrucciones provistas por el fabricante.

Para fines de caracterización molecular de las líneas celulares seleccionadas se determinó la concentración de varias proteínas clave por medio de Western blot. Estas proteínas incluyeron E-cadherina (CDH- ), vimentina (VIM), HER3 STAT3, MET, AKT y ERK1/2. La actina se usó como control en cada caso.

Número de copias de ADN: Se recopilaron datos sobre el número de copias de ADN en el gen HER2 de todas las líneas de células de cáncer de mama usando el chip Affymetrix 500K (Affymetrix Inc, Sunnyvale, CA). Brevemente, se extrajo ADN de cada línea, se digirió con la enzima de restricción Nsp o Sty, se ligó a un adaptador, y se amplificó por PCR. Después de la PCR, el ADN se fragmentó, se marcó, se desnaturalizó, y se hibridó con el chip Affymetrix 500K. Al terminar la hibridación, cada prueba se lavó y se tiñó. Se adquirieron datos de las imágenes. Se usaron datos recopilados similarmente de un panel de 10 líneas de células linfoblásticas no tumorigénicas diploides para calcular el número de copias de ADN. Todas las imágenes 'SNP Chip' ('archivos CEL') se extrajeron, se leyeron y se normalizaron usando el paquete de software dChip (Lin et al. 2004, Bioinformatics, 20:1233-40). Para todas las líneas de cáncer se calcularon las 'relaciones del número de copias' tipo SNP (escala log2) usando el panel de referencia linfoblástica, y se analizaron por medio de segmentación binaria circular para reducir el ruido (Olshen et al. 2004, Biostatistics, 5:557-72). Las líneas celulares con relaciones de log2 de HER2 > 0.65 se consideraron HER2+.

Resultados Efectos de la inhibición del crecimiento celular y apoptosis sobre líneas celulares de carcinoma hepatocelular con la combinación del compuesto A y el compuesto B En la figura 2 se muestran los fondos genéticos y la expresión de proteína analizada por Western blot en 10 líneas de células de carcinoma hepatocelular (HCC). Las líneas celulares C3A, Hep3B, HepG2, PLC/PRF/5 y SNU182 expresan cantidades altas de CDH-1 y cantidades bajas a muy bajas de VIM, mientras que las líneas celulares SNU387, SNU398, SNU423, SNU449 y SNU475 expresan cantidades relativamente altas de VIM y cantidades muy bajas de CDH-1 . Las cantidades altas de CDH-1 y bajas o inexistentes de VIM son una característica de las células epiteliales, mientras que las cantidades altas de VIM y bajas de CDH-1 son una característica de las células mesenquémicas. Por lo tanto, C3A, Hep3B, HepG2, PLC/PRF/5 y SNU182 se definen como células de tipo epitelial, y SNU387, SNU398, SNU423, SNU449 y SNU475 como células de tipo mesenquémico. Esto es consistente con el hecho de que HER3 es expresado en cantidades altas en las líneas HCC de tipo epitelial, y AXL es expresado en cantidades altas en las células de tipo mesenquémico (datos mostrados en el cuadro A). STAT3, AKT y ERK1/2 (proteína total) fueron expresadas en cantidades similares en las líneas celulares de tipo epitelial y de tipo mesenquémico, mientras que la expresión de MET fue variable, pero no asociada diferencialmente con ningún grupo de células. La fosforilación/activación de AKT se observa preferentemente en líneas celulares de tipo mesenquémico, con cantidades más altas de pAKT-S473 que de pAKT-T308. En las células de tipo mesenquémico también estuvo presente pERK1/2 diferencialmente, aunque no exclusivamente.

CUADRO A Estatus de mutación genética en líneas de células HCC * Mutaciones para genes de cáncer seleccionados Los efectos de la inhibición del crecimiento celular con el compuesto A, el compuesto B y su combinación se determinaron en 10 líneas de células HCC. En el cuadro 8 se resumen los valores medios de IC5o (de por lo menos dos experimentos independientes) y los efectos de la combinación a las CI50. Tres líneas de células HCC de tipo epitelial (HepG2, C3A y Hep3B) fueron fuertemente sensibles a la inhibición del crecimiento celular con el compuesto A (IC5o < 37 nM), y las líneas celulares de tipo epitelial SNU 182 y PLC/PRF/5 fueron débilmente sensibles al compuesto A (IC50= 1.2-2.8 µ?). Dos líneas de células HCC de tipo mesenquémico (SNU387 y SNU423) fueron moderadamente sensibles a la inhibición del crecimiento celular con el compuesto A (ICso=74-577 nM), mientras que tres líneas celulares de tipo mesenquémico (SNU398, SNU449 y SNU475) no fueron sensibles a la inhibición del crecimiento celular con el compuesto A. Las 10 lineas HCC fueron sensibles a la inhibición del crecimiento celular con el compuesto B (IC50 <103 nM). Además, el tratamiento combinado con el compuesto A y el compuesto B (proporción 1 :2) resultó en una fuerte sinergia, como lo demuestran los valores del índice de combinación que varían de 0.22 a 0.78 o más que el mejor agente solo según el análisis EOHSATD (5-20 ppt) y el análisis EOHSA (12-27 ppt) en 8 de 10 líneas de células HCC. La presencia de HGF no tuvo un efecto consistente sobre la sensibilidad a cualquier fármaco solo o combinado.

Estas 10 líneas de células HCC se evaluaron adicionalmente para determinar la capacidad del compuesto A, el compuesto B, o la combinación de compuesto A y compuesto B, para inducir apoptosis determinada por medio de la actividad de caspasa 3/7. La activación de caspasa 3 es una marca distintiva de inducción de apoptosis. En la figura 3 se proveen curvas de actividad de caspasa 3/7 representativas para estas células. Todas las líneas celulares, excepto SNU182, mostraron un fuerte incremento de la apoptosis con el tratamiento combinado del compuesto A y compuesto B con respecto al tratamiento con un solo agente, el compuesto A o el compuesto B. Las células SNU182 mostraron un incremento moderado de la apoptosis con el tratamiento combinado del compuesto A y el compuesto B, con respecto al tratamiento con un solo agente.

Efectos de la combinación del compuesto A y el compuesto B sobre la inhibición del crecimiento celular en líneas de células de tumor de mama humanas, medido por tas concentraciones de Her2 El análisis de las alteraciones del número de copias en el gen HER2 identificó 14 líneas de tumor de mama HER2 positivas (HER2+). Estas fueron BT474, BT474-J4, HCC1419, HCC1954, HCC202, HCC2218, JIMT-1 , KPL-4, MDA-MB-361 , SK-BR-3, SK-BR-3-W 3, SUM 90, SUM225 y UACC893. Un total de 10 se consideraron HER2 negativas (HER2-). Estas incluyen BT483, HCC1500, HCC1569, HCC1937, HCC38, KPL- , MDA-MB-157, MDA-MB-175-VII, ZR-75-1 y SUM52.

Los efectos del compuesto A, el compuesto B y su combinación sobre la inhibición del crecimiento celular se determinaron en estas 25 líneas celulares. En el cuadro 9 se resumen los valores medios de IC50 (de por lo menos dos experimentos independientes) y los efectos de la combinación a los valores de ICso- Las líneas celulares SUM52 y MDA-MB-175II son sensibles al compuesto A con valores de IC50 menores o iguales que 0.099 µ?. En contraste, todas las líneas son sensibles al compuesto B con IC50 < 0.1 µ?, excepto HCC1937, SK-Br-3-W13 y MDA-MB-157. La combinación del compuesto A y el compuesto B mostró sinergia con valores de índice de combinación (Cl) entre 0.48 y 0.83, y mayores que en el análisis del agente solo más activo (EOSHA) de entre 15 y 25 ppts en las líneas celulares SUM52, HCC1954 (HER2+) y MDA-MB-175II (HER2-). La combinación del compuesto A y el compuesto B también mostró un beneficio mayor que en el análisis del agente solo más activo (EOSHA) de entre 10 y 15 ppts en un subconjunto de las líneas HER2+ (SUM190, HCC202) y HER2- (MDA-MB-157, HCC1937). En el resto de las líneas, la combinación del compuesto A y el compuesto B mostró un efecto comparable al agente solo más activo. La puntuación media de EOHSA para las líneas Her2+ (n = 14) fue de 9.1 (± 7.4), mientras que la puntuación media para las líneas Her2- (n = 10) fue de 6.9 (± 7.2). Estas puntuaciones de EOHSA no difieren significativamente entre los grupos (p = 0.45; prueba t).

CUADRO 8 Inhibición del crecimiento celular con el compuesto A, el compuesto B y su combinación, en líneas celulares de tumor de carcinoma hepatocelular humano Llave del cuadro 8: HGF: Factor de crecimiento de hepatocito; '+' = en presencia; '-' = en ausencia IC50: La concentración de compuesto que reduce el crecimiento celular en 50% Cl: Índice de combinación; NA = no aplicable EOHSATD: Exceso más alto sobre el agente solo a la dosis total, medido como porcentaje EOHSAT: Exceso más alto sobre el agente solo, medido como porcentaje CUADRO 9 Inhibición del crecimiento celular con el compuesto A, compuesto B y su combinación en líneas celulares de tumor de mama Llave del cuadro 9: HER2: HER2+ = HER2 positivo, relaciones de log2 del número de copias de ADN de HER2 >0.65; HER2- = HER2 negativo, relaciones de log2 del número de copias de ADN de HER2 <0.65 *IC5o: Concentración del compuesto A en presencia de una cantidad equimolar del compuesto B que reduce el crecimiento celular en 50% Cl: Indice de combinación; NA = no aplicable; EOHSA: Exceso más alto sobre el agente solo, medido como porcentaje EJEMPLO 1 Composición de cápsula Una forma farmacéutica oral para administrar una combinación de la presente invención se produce llenando una cápsula de gelatina dura estándar de dos piezas, con los ingredientes en las proporciones mostradas en el cuadro I siguiente.

CUADRO I INGREDIENTES CANTIDADES Dimetilsulfóxido de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4- 5 mg yodofen¡l)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7- tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1(2H)-il]fenil}acetamida (el solvato de sulfóxido de dimetilo del compuesto A) 2,4-Difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinol 10 mg piridinil}bencenosulfonamida (compuesto B) Manitol 50 mg Talco 25 mg Estearato de magnesio 2 mg EJEMPLO 2 Composición de cápsula Una forma farmacéutica oral para administrar uno de los compuestos de la presente invención se produce llenando una cápsula de gelatina dura estándar de dos piezas, con los ingredientes en las proporciones mostradas en el cuadro II siguiente.

CUADRO II INGREDIENTES CANTIDADES Dimetilsulfóxido de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4- 5 mg yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3, 4,6,7- tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida (el solvato de sulfóxido de dimetilo del compuesto A) Manitol 55 mg Talco 16 mg Estearato de magnesio 4 mg EJEMPLO 3 Composición de cápsula Una forma farmacéutica oral para administrar uno de los compuestos de la presente invención se produce llenando una cápsula de gelatina dura estándar de dos piezas, con los ingredientes en las proporciones mostradas en el cuadro III siguiente.

CUADRO III INGREDIENTES CANTIDADES 2,4-D¡fluoro-A/-{2-(metilox¡)-5-[4-(4-p¡ridazin¡l)-6-quinolin¡l]-3- 10 mg piridinil}bencenosulfonamida (compuesto B) Manitol 50 mg Talco 25 mg Estearato de magnesio 2 mg EJEMPLO 4 Composición de tableta La sacarosa, celulosa microcristalina y los compuestos de la combinación de la invención, como se muestra más abajo en el cuadro IV, se mezclan y se granulan en las proporciones mostradas con una solución de gelatina al 10%. El granulado húmedo se tamiza, se seca, se mezcla con el almidón, talco y ácido esteárico, y luego se tamiza y se comprime para formar una tableta.

CUADRO IV INGREDIENTES CANTIDADES Dimetilsulfóxido de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4- 5 mg yodofenil)am¡no]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7- tetrahidropirido[4,3-d]pirim¡d¡n-1 (2H)-il]fenil}acetamida (el solvato de sulfóxido de dimetilo del compuesto A) 2,4-Difluoro-A/-{2-(metilox¡)-5-[4-(4-piridazinil)-6-qu¡nolinil]-3- 10 mg piridinil}bencenosulfonamida (compuesto B) Celulosa microcristalina 60 mg Sacarosa 5 mg Almidón 10 mg Talco 5 mg Acido esteárico 2 mg EJEMPLO 5 Composición de tableta La sacarosa, celulosa microcristalina y uno de los compuestos de la combinación de la invención, como se muestra más abajo en el cuadro V, se mezclan y se granulan en las proporciones mostradas con una solución de gelatina al 10%. El granulado húmedo se tamiza, se seca, se mezcla con el almidón, talco y ácido esteárico, y luego se tamiza y se comprime para formar una tableta.

CUADRO V INGREDIENTES CANTIDADES Dimetilsulfóxido de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4- 5 mg yodofen¡l)am¡no]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7- tetrahidrop¡rido[4,3-d]pir¡m¡din-1 (2H)-¡l]fen¡l}acetamida (el solvato de sulfóxido de dimetilo del compuesto A) Celulosa microcristalina 30 mg Sacarosa 4 mg Almidón 2 mg Talco 1 mg Acido esteárico 0.5 mg EJEMPLO 6 Composición de tableta La sacarosa, celulosa microcristalina y uno de los compuestos de la combinación de la invención, como se muestra más abajo en el cuadro VI, se mezclan y se granulan en las proporciones mostradas con una solución de gelatina al 10%. El granulado húmedo se tamiza, se seca, se mezcla con el almidón, talco y ácido esteárico, y luego se tamiza y se comprime para formar una tableta.

CUADRO VI INGREDIENTES CANTIDADES 2,4-D¡fluoro-/\/-{2-(metilox¡)-5-[4-(4-piridazin¡l)-6-quinol¡nil]-3- 10 mg piridiniljbencenosulfonamida (compuesto B) Celulosa microcristalina 60 mg Sacarosa 5 mg Almidón 10 mg Talco 5 mg Acido esteárico 2 mg Aunque con lo anterior se han ilustrado las modalidades preferidas de la invención, se entiende que la invención no está limitada a las instrucciones precisas descritas en la presente, y que el derecho a todas las modificaciones que entran dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones queda reservado.

Claims (34)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1.- Una combinación que comprende: (i) un primer compuesto seleccionado de la estructura (I): o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) un segundo compuesto que está representado por la estructura (II): o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

2.- La combinación de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el compuesto de la estructura (I) es el hidrato.

3. - La combinación de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el compuesto de la estructura (I) es un solvato seleccionado del grupo que consiste en: un solvato de ácido acético, etanol, nitrometano, clorobenceno, 1-pentanol, alcohol isopropílico, etilenglicol, 3-metil-2-butanol y sulfóxido de dimetilo.

4. - La combinación de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el compuesto de la estructura (I) es el solvato de sulfóxido de dimetilo.

5. - Un kit de combinación que comprende una combinación de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables.

6. - La combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada además porque la cantidad del compuesto de la estructura (I) o su solvato se selecciona de 0.125 mg a 10 mg, y la cantidad del compuesto de la estructura (II) es una cantidad seleccionada de 0.05 mg a 10 mg.

7. - El uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, y 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinil}bencenosulfonamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma para preparar un medicamento para tratar el cáncer en un humano en necesidad del mismo, en donde el medicamento es administrable dentro de un periodo especificado, y en donde el medicamento es administrable durante un tiempo.

8.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 7, en donde la cantidad de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable, se selecciona de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 4 mg, y la cantidad de 2,4-difluoro-A/-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinilj-bencenosulfonamida, o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable, se selecciona de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 5 mg.

9 - El uso como el que se reclama en la reivindicación 7, en donde la cantidad de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable, se selecciona de aproximadamente 0.125 mg a aproximadamente 3 mg, y la cantidad de 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinilj-bencenosulfonamida, o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable, se selecciona de aproximadamente 0.05 mg a aproximadamente 3 mg.

10.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 7, en donde la N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable, y la cantidad de 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinil}bencenosulfonamida, o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable, son administrables dentro de 12 horas una de otra, todos los días durante un periodo de por lo menos 7 días consecutivos, seguidos opcionalmente por uno o más ciclos de administración repetida.

1 1. - El método que se reclama en la reivindicación 7, en donde la N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirim¡din-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable, y la cantidad de 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinil}bencenosulfonamida, o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable, se administran dentro de 24 horas una de otra, todos los días durante un periodo de por lo menos 7 días consecutivos, seguidos opcionalmente por uno o más ciclos de administración repetida.

12. - El uso de aproximadamente 0.125 mg a 10 mg de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma para preparar un medicamento para tratar el cáncer en un humano en necesidad del mismo, en donde el medicamento es administrable una vez al día, del día 1 al día 30, seguido opcionalmente por uno o más ciclos de repetición; y en donde el medicamento está adaptado para ser administrable periódicamente con una cantidad de aproximadamente de 0.05 mg a 10 mg de 2,4-difluoro-/V-{2-(met¡loxi)-5-[4-(4-piridaz¡nil)-6-quinolinil]-3-piridinil}bencenosulfonamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, del día 1 al día 30, opcionalmente seguido por uno o más ciclos de repetición.

13.- El uso de aproximadamente 0.5 mg a 4 mg de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma para preparar un medicamento para tratar el cáncer en un humano en necesidad del mismo, en donde el medicamento es administrable una vez al día, del día 1 al día 30, seguido opcionalmente por uno o más ciclos de repetición; y en donde el medicamento está adaptado para ser administrable periódicamente con una cantidad de aproximadamente de 0.5 mg a 5 mg de 2,4-difluoro-A/-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinil}bencenosulfonamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, del día 1 al día 30, seguido opcionalmente por uno o más cíelos de repetición.

14.- El uso de aproximadamente de 0.05 mg a 10 mg de 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridiniljbencenosulfonamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma para preparar un medicamento para tratar el cáncer en un humano en necesidad del mismo, en donde el medicamento es administrable una o dos veces al día, del día 1 al día 30, seguido opcionalmente por uno o más ciclos de repetición; y en donde el medicamento está adaptado para ser administrable periódicamente con una cantidad de aproximadamente de 0.125 mg a 10 mg de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,47-trioxo-3,4,67-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, del día 1 al día 30, seguido opcionalmente por uno o más ciclos de repetición.

15.- El uso de aproximadamente de 0.5 mg a 5 mg de 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridiniljbencenosulfonamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma para preparar un medicamento para tratar el cáncer en un humano en necesidad del mismo, en donde el medicamento es administrable una o dos veces al día, del día 1 al día 30, seguido opcionalmente por uno o más ciclos de repetición; y en donde el medicamento está adaptado para ser administrable periódicamente con una cantidad de aproximadamente de 0.5 mg a 4 mg de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, del día 1 al día 30, seguido opcionalmente por uno o más ciclos de repetición.

16.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 12 o 13, en donde la 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-pihdazinil)-6-quinolinil]-3-piridinilj-bencenosulfonamida es administrable una vez cada 2-4 días, seguidos opcionalmente por uno o más ciclos de repetición.

17.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 12 o 13, en donde la 2,4-difluoro-A/-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinil}-bencenosulfonamida es administrable una vez cada 5-7 días, seguidos opcionalmente por uno o más ciclos de repetición.

18.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 12 o 13, en donde la 2,4-difluoro-/V-{2-(metiloxi)-5-[4-(4-piridazinil)-6-quinolinil]-3-piridinilj-bencenosulfonamida es administrable una vez cada 8-15 días, seguidos opcionalmente por uno o más ciclos de repetición.

19. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 14 o 15, en donde el dimetilsulfóxido de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)am¡no]-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7 etrahidropir¡do[4,3-d]pirirnidin-1 (2H)-il]fenil}-acetamida es administrable una vez cada 2-4 días, seguidos opcionalmente por uno o más ciclos de repetición.

20. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 14 o 15, en donde el dimetilsulfóxido de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2,4,7-tr¡oxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-1 (2H)-il]fenil}-acetamida es administrable una vez cada 5-7 días, seguidos opcionalmente por uno o más ciclos de repetición.

21. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 14 o 15, en donde el dimetilsulfóxido de N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetil-2^,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido[4,3-d]pirirnidin-1 (2H)-il]fenil}-acetamida es administrable una vez cada 8-15 días, seguidos opcionalmente por uno o más ciclos de repetición.

22. - El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 12-21 , en donde dicho cáncer es el cáncer del colon, pulmón, hígado, páncreas o mama.

23. - El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 12 y 14, en donde dicho cáncer es el cáncer del páncreas, colon o pulmón.

24. - El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 13 y 15, en donde dicho cáncer es el cáncer de la mama.

25. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 23, en donde dicho cáncer es un muíante de KRAS.

26. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 22, en donde dicho cáncer de mama es un cáncer de mama ER negativo.

27. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 22, en donde dicho cáncer de mama es un cáncer de mama de tipo basal.

28.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 22, en donde dicho cáncer de mama es un cáncer triple negativo.

29. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 22, en donde dicho cáncer es el cáncer del hígado.

30. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 22, en donde dicho cáncer es el cáncer del páncreas.

31. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 24, en donde dicho cáncer es un cáncer HER2 negativo, ER negativo y PR negativo.

32. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 29, en donde dicho cáncer del hígado es un mutante de NRAS.

33. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 22, en donde dicho cáncer es un cáncer de mama HER2 positivo.

34. - El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 7-15, en donde la N-{3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofeni aminol-e^-dimetil^^J-trioxo-S^^J-tetrahidropirido^^-dlpirimidin-1 (2H)-il]fenil}acetamida es administrable en forma de su solvato de sulfóxido de dimetilo.