MX2012001182A - Composiciones novedosas de biopesticidas y metodos de aislamiento y caracterizacion de las mismas. - Google Patents

Abstract

La presente invención describe el aislamiento y caracterización de las composiciones novedosas de biopesticidas y/o formulaciones de biopesticidas obtenidas a partir de la especies Eucalyptus capaz de servir como agentes de control biológico efectivos y/o agentes de control de plagas; la invención se enfoca en el aislamiento de estas composiciones y formulaciones de biopesticidas que se sabe que poseen propiedades pesticidas y son derivados de fuentes naturales que tienen origen biológico; la invención describe más particularmente el aislamiento y caracterización, incluyendo pero no limitado a, las composiciones de biopesticidas novedosos que poseen atributos pesticidas junto con otros atributos farmacéuticamente importantes de manera que funcionen también como agentes de control biológico eficaces.

Description

COMPOSICIONES NOVEDOSAS DE BIOPESTICIDAS Y MÉTODOS AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE LAS MISMAS CAMPO DE LA INVENCION Esta invención se refiere por lo general al campo de las composiciones y métodos para el control de las plagas y las poblaciones de plagas que son conocidos por tener un efecto perjudicial en la vida humana y las actividades humanas. La invención se centra en el aislamiento de estas composiciones y formulaciones de biopesticidas que se sabe que poseen propiedades pesticidas y que son derivadas de fuentes naturales que tienen origen biológico. La invención describe más particularmente el aislamiento y la caracterización, incluyendo pero no limitado a, las composiciones de biopesticidas novedosas que poseen atributos pesticidas junto con otros atributos farmacéuticamente importantes para que funcionen también como agentes efectivos de de control biológico.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Existe una gran actividad en el campo general de los biopesticidas derivados de fuentes naturales y que tiene un origen esencialmente biológico y su posible explotación en el campo del control biológico. El estado de la técnica anterior tiene con un gran número de inventos patentados y de la literatura técnica sobre el tema en cuestión.

El género Eucalyptus de la familia (Myrtaceae) , debido a la presencia de aceites y compuestos farmacológicamente importantes, asi como las sustancias que tienen atributos conocidos como pesticidas y controles biológicos han despertado el interés de la comunidad científica para investigar la naturaleza, el mecanismo de trabajo y la química de estos compuestos. El género Eucalyptus (Familia Myrtaceae) muestra una distribución bastante amplia en varias regiones del mundo, con cerca de 300 especies conocidas. Se trata de un nativo de la región de Australia, sin embargo, la distribución actual es bastante amplia en varias partes de Europa, África del Sur, África del Norte, Estados Unidos e incluso países tropicales como la India. El árbol de eucalipto tiene su origen en Australia. Las hojas de y el aceite del Eucalyptus se han utilizado tradicionalmente por los aborígenes como remedio una amplia gama de enfermedades. Actualmente, los extractos del Eucalyptus son ampliamente utilizados en todo el mundo en forma de pildoras, líquidos, inhaladores y pomadas para curar varias enfermedades que son de carácter general.

Es un hecho bien conocido hoy que las plantas están sujetas al ataque de un gran número de plagas. Estos insectos pueden ser, por ejemplo, bacterias, hongos o nematodos. Los compuestos pesticidas se han utilizado por mucho tiempo para aumentar el rendimiento y las capacidades de producción agrícola en nuevas áreas. También han sido herramientas muy importantes para perfeccionar las diferencias en estación a estación en el rendimiento y calidad causadas por las variaciones impulsadas por el clima en la presión de plagas.

El aspecto de la demanda mundial de nuevos medios eficaces, ecológicos y seguros para controlar las plagas que dañan la agricultura daños o que sirven como vectores de la enfermedad no es nuevo en el mundo de hoy. De acuerdo con uno. de los informes recientes, solamente en Estados Unidos, los costos incurridos en agricultura debido a las plagas superan los miles de millones de dólares anuales en los rendimientos de los cultivos disminuidos, la calidad de la cosecha reducida, el aumento de los costos de cosecha, los costos de aplicación de pesticidas, y el impacto ecológico negativo. Además de las plagas agrícolas, muchos insectos se alimentan de sangre y las cucarachas son vectores de microorganismos patógenos que amenazan la salud humana y animal, o son molestos, por lo menos. Como en el caso de las plagas agrícolas, los costos directos e intangibles incurridos por plagas que se alimentan de sangre y plagas caseras presentan riesgos de seguridad para personas y animales, para la bioacumulación y el medio ambiente, así como para los costos de síntesis y aplicación.

También es de conocimiento común que hoy en día casi todos los cultivos, plantas de vivero y de horticultura, las áreas comerciales de agricultura son susceptibles al ataque de una o más plagas. Los ejemplos notables que pueden ser citados incluyen las plagas de coleópteros y lepidópteros que son especialmente problemáticas. Un ejemplo de una plaga de lepidópteros es la larva del gusano cornudo Manduca sexta, y un ejemplo de una plaga de coleópteros es el escarabajo de patata de Colorado, Leptinotarsa decemlineata . Los vegetales y cultivos de coles, lentejas, vegetales de hojas verdes, melones, pimientos, patatas y tubérculos relacionados, los tomates, los pepinos y los cultivos relacionados con la vid, asi como una variedad de especies son sensibles a la infestación por una o más plagas, incluidos los gusanos medidores, orugas, larvas de la polilla, gusanos de abeto, gusanos tejedores, gusanos de oído, comedores de hojas, barrenadores, gusanos de trébol, gusanos de melón, enrolladores de hojas, orugas diversas, gusanos de la fruta, gusanos cornudos, y los oxiuros Del mismo modo, los cultivos de pastos y heno de alfalfa, pastos y gramíneas forrajeras y el ensilaje son atacados a menudo por una variedad de plagas, incluyendo orugas cogolleras, orugas de la alfalfa, la oruga Europea, una gran variedad de gusanos medidores y gusano tejedor, así como gusanos de rayas amarillas.

Las plagas de los cultivos relacionados con las plantas de algodón han constituido una de las áreas de manejo de plagas ampliamente estudiada. Por ejemplo, en el caso de las plagas manchadotas del algodón es bien sabido que las ninfas de tamaño medio a grande y los adultos se alimentan de semillas en las bagas de algodón en desarrollo. La manchadota de algodón deriva su nombre de su hábito de manchar el algodón con un color amarillo pardo indeleble. De acuerdo con una publicación, fue un agricultor en Hawthorne, Florida, quien en 1902 desmotó 1,000 pacas de algodón de fibra larga, de las cuales cerca de 200 pacas fueron clasificadas como manchadas. El D. suturellus perfora y chupa las bagas jóvenes, lo que les impide llegar a la madurez.

Este insecto también ha sido una plaga grave de naranjas en algunas ocasiones. En la perforación de una naranja, un manchador de algodón a menudo inserta todo su pico sin dejar ninguna herida visible, sin embargo, una sola punción puede provocar que la naranja caiga a las pocas horas del árbol y que se pudra en uno o dos días. Hay informes antiguos de árboles de naranja muy enrojecidos con manchadores de algodón en donde las cosechas enteras se perdieron .

Algunos otros huéspedes del D. suturellus incluyen mandarinas, las vainas de okra, fruto maduro de la papaya, las vainas y las flores de adelfa, vainas de semillas de canela de Jamaica {Hibiscus sabdariffa) , hibisco de árbol (H. syriacus) , turkscap, Sida espinosa {Sida sp.), la Hierba de César o Cadilla Española {Urena lobata) , la Aguja Española {Bidens pilosa), la Majagua de mar o Árbol de Portia {Thespesia populnea) , retoños y flores de rosas, la berenjena, dulcamara y guayaba.

Los anfitriones de las otras especies del Dysdercus son esencialmente los mismos que para el suturellus. La División de Industria de Plantas tiene un registro de la Ponciana Real que fueron gravemente dañados por D. Andreas. Las actividades de alimentación del manchador de algodón producen una mancha en la pelusa que reduce su valor. Unas pocas autoridades han informado de que la mancha proviene de los excrementos de los insectos. Sin embargo, la mayoría han declarado que la mancha sobre todo es el resultado de la perforación de las semillas en las cápsulas de desarrollo causando que un jugo que exuda deje una mancha indeleble. La alimentación al perforar los retoños o las bagas de algodón jóvenes por lo general causa la reducción de tamaño o que el cuerpo de la fruta se aborte y caiga al suelo.

Los cultivos de frutas (incluidos los cítricos), nueces, y la vid son susceptibles al ataque de una variedad de plagas, incluyendo larvas de la polilla esfinge, gusanos cortadores, moscas skippers, gusanos de fuego gusanos enrolladores, gusano cancro, gusanos de la fruta, girdlers, gusanos tejedores, dobladores de hojas, esqueletonizadores, skeletonizers, gusanos peludos, gusanos soldado, gusanos medidores, gusanos de naranja, tortrix, barrenador de ramitas, barrenadores, oruga del follaje, oruga militar, y una variedad de gusanos y orugas.

Las cosechas del campo son objetivos de la infestación por insectos como orugas, los barrenadores asiáticos del maíz y otros, una variedad de larvas y orugas de la polilla, gusanos de bagas, gusanos medidores, gusanos de la raiz, perforadores de hojas, gusanos de trébol, gusanos de cabeza, gusanos del la col, enrolladotes de hojas, gusanos eloteros, gusanos cortadores, orugas, gusanos cornudos, y similares. Las plagas con frecuencia se alimentan también con plantas ornamentales, flores, plantas ornamentales, hortalizas, contenedores de reserva, bosques, frutas, ornamentales, arbustos y otras plantas de vivero. Incluso el césped es atacado por una variedad de plagas como el gusano barrenador y gusano tejedor del césped.

Durante los últimos 50 años los productores, los funcionarios de salud, y el público han dependido de pesticidas químicos para controlar una variedad de plagas. Sin embargo, los expertos en medio ambiente, las autoridades de salud y público en general se han preocupado por la cantidad de residuos químicos en los alimentos, el agua subterránea, y en otras partes del medio ambiente. Las agencias reguladoras de todo el mundo están restringiendo y/o prohibiendo el uso de muchos plaguicidas sintéticos, particularmente aquellos que son persistentes en el medio ambiente y que entran en la cadena alimenticia. Nuevas restricciones estrictas en el uso de pesticidas y la eliminación de algunos pesticidas efectivos en el mercado podrían limitar las opciones económicas y efectivas . para control costoso de las plaga. Algunos de los pesticidas químicos sintéticos envenenan el suelo y los mantos acuíferos subyacentes, contaminan las aguas superficiales como el resultado de la escorrentía, y destruir otras de formas de vida. Estos agentes químicos sintéticos de control de plagas tienen la desventaja adicional de que presenten riesgos de seguridad pública cuando se aplican en áreas donde las mascotas, animales de granja, o los niños pueden entrar en contacto con ellos. También pueden suponer riesgos para la salud, de las personas que los aplican, especialmente si no se siguen las técnicas de aplicación indicadas. Debido a que los cultivos de interés comercial son a menudo el blanco de las plagas, los métodos ambientalmente sensibles para controlar o erradicar las infestaciones de plagas son deseables en muchos casos. Esto es particularmente cierto para los agricultores, horticultores, cultivadores y las áreas comerciales y residenciales que tratan de controlar las poblaciones de plagas utilizando composiciones con el amigables con el medio ambiente.

Por lo tanto, una inferencia racional en este contexto se puede extraer el sentido de que el futuro papel de los plaguicidas en la agricultura está cada vez más amenazado por varios factores, tales como: el desarrollo de plagas resistentes, que incrementa la preocupación sobre la seguridad alimentaria y la acumulación de compuestos tóxicos en el medio ambiente. Como los plaguicidas más antiguos son eliminados del mercado debido a los cambios normativos, y los como cada vez es más caro su registro, hay una creciente necesidad de encontrar maneras de utilizar más sabiamente el resto de los pesticidas que son más seguros. Esto es particularmente cierto para la mayoría de las combinaciones de cultivos/enfermedad que no representan mercados suficientemente grandes para pagar el costo del registro del nuevo compuesto. El uso más sabio uso de los pesticidas incluyen formas de reducir las tasas de aplicación (y por lo tanto los posibles residuos) , encontrar maneras de ampliar los registros para nuevos cultivos, y la identificación de nuevas composiciones y tratamientos para combatir el desarrollo de resistencia a las plagas.

Se sabe bien que los plaguicidas químicos han proporcionado un método efectivo de control, sin embargo, el público se ha preocupado por la cantidad de residuos químicos que puedan encontrarse en los alimentos, el agua subterránea y el medio ambiente. Las nuevas y estrictas restricciones en el uso de productos químicos y la eliminación de algunos plaguicidas en vigor en el mercado podrían limitar las opciones económicas y efectivas para controlar las plagas. Además, el uso regular de productos químicos tóxicos para el control de organismos no deseados se puede seleccionar cepas resistentes .

Las estrategias alternativas para la aplicación de plaguicidas son necesarias para el control de plagas de importancia agrícola. Dichas estrategias atenderán la preocupación pública con respecto a la contaminación por pesticidas, así como la percepción de que los residuos de pesticidas en los alimentos representan una amenaza para la salud humana.

Existen reportes generalizados en el sentido de que las plagas de hecho son muy per udiciales para los seres humanos. Las plagas son organismos patógenos que infectan mamíferos y plantas, tales como los que infestan o se alimentan de plantas y animales, por lo tanto, causan pérdidas económicas o la disminución de los cultivos de plantas, productos vegetales y animales. Por ejemplo, la chicharrita de alas cristalinas es una plaga que se alimenta de las vides de uva, lo que disminuye el cultivo para la producción de vino. Otras plagas pueden infestar estructuras tales como viviendas, residencias, hospitales y establecimientos comerciales, como restaurantes y tiendas minoristas. Estas plagas pueden ser perjudiciales para la estructura, como las termitas se alimentan de las vigas de madera, o simplemente ser una molestia para las personas que visitan o viven en edificios infestados. Además, algunas plagas son vectores de algunas enfermedades que dañan a los seres humanos los daños y animales, incluyendo mascotas y ganado .

Los recientes avances en el campo de la investigación científica y técnica han demostrado que la transmisión de enfermedades transmitidas por vectores a través de las plagas es un problema en todo el mundo y se controla mejor a través del control de dichos vectores. Por ejemplo, la garrapata del venado (Lxodes scapularis) puede transmitir la enfermedad de Lyme a un huésped cuando se alimentan de la sangre del huésped al pasar un agente infeccioso (Borrelia burgdorferi) , que vive en el intestino medio de la garrapata, hacia torrente sanguíneo del huésped. Un mosquito {Aedes aegypti) , que prevalece en muchas regiones tropicales y subtropicales del mundo, pueden transmitir los virus del dengue, la fiebre amarilla, la encefalitis o virus al huésped en el que se alimenta. La pulga de la rata (Xenopsylla cheopis) es un vector de los microbios {Yersinia pestis) que causa la peste.

Por lo tanto, en el escenario actual, la realización entre los investigadores es que a pesar de que el control de plagas es a menudo difícil de alcanzar sigue siendo la necesidad más urgente. Muchos pesticidas son tóxicos para los seres humanos y animales y puede contaminar el medio ambiente. Por lo tanto, una serie de plaguicidas de uso común, tales como los , han sido restringidos o comercialmente no disponibles. Biopesticidas derivados de fuentes naturales, tales como plantas, hongos u otros productos naturales, ofrece una alternativa más segura a los pesticidas de síntesis química.

Los biopesticidas generalmente tienen menos efectos sobre la salud y pueden ser mejores para el medio ambiente, pero muchos biopesticidas ofrecen un control de plagas sustancialmente más débil, o controlan sólo una gama limitada de plagas, mientras que otros biopesticidas pueden tóxicos para el medio ambiente tóxico. Por ejemplo, las piretrinas pesticidas a partir del extracto de la planta de crisantemo controlan una amplia variedad de plagas, pero son muy tóxicos para el pescado, como la mojarra de agallas azules y la trucha de lago. Además, las plagas se vuelven resistentes a ciertos compuestos después del uso continuo, por ejemplo, la resistencia de los insectos a las piretrinas ya se ha observado. Por lo tanto, los nuevos agentes de control de plagas, en particular los derivados de fuentes naturales, tienen un origen esencialmente biológico que ofrecen una alternativa a los pesticidas de uso común y connotan el futuro en el ámbito de biocontrol.

Con la rápida aparición de la resistencia de las plagas de insectos a los insecticidas químicos disponibles en el mercado/pesticidas, los biopesticidas son cada vez más importantes para la aplicación del manejo integrado de plagas. Las plantas producen compuestos que pueden causar plagas o tienen el potencial de alterar su comportamiento de alimentación, crecimiento, desarrollo, proceso de muda o incluso puede ser capaz de interrumpir su apareamiento y la oviposición con el fin de ofrecer una opción en cuanto a su utilización en los programas de manejo de plagas.

En la actualidad existen varios enfoques para el desarrollo de composiciones de biopesticidas y formulaciones de biopesticidas, así como el aislamiento, la elucidación química y la caracterización de estas composiciones de biopesticidas de origen natural, en general, y particularmente del género Eucalyptus . Sin embargo, el aislamiento y caracterización de las composiciones de biopesticidas y las formulaciones de biopesticidas a partir de las especies de Eucalyptus, que son capaces de conferir la actividad anti-plagas para servir como un agente eficaz de control biológico, es hasta el momento no se ha reportado y el perfil de la técnica no indica la existencia o uso de estas composiciones de biopesticidas y las formulaciones de biopesticidas para el uso en la investigación y/o en la industria .

De esta manera, las composiciones de biopesticidas y las formulaciones de biopesticidas a partir de las especies de Eucalyptus, utilizadas de forma aislada o en combinación unos con otros o en combinación con los ingredientes y/o compuestos/sustancias de origen orgánico e inorgánico, obtenido de acuerdo con la presente invención tienen el potencial de explotación, no sólo en el campo del control biológico y la gestión eficaz de control de plagas, sino también en varias áreas tan diversas como biomarcadores , herramientas y estuches de diagnóstico, asi como los biopesticidas y/o bioinsecticidas y también formulaciones terapéuticas para las plantas, humanos, y el uso en el ganado .

El perfil de la técnica anterior indica la existencia de numerosos biopesticidas composiciones y formulaciones de biopesticidas obtenidos de diversas fuentes, pero las composiciones de biopesticidas y las formulaciones de biopesticidas capaces de servir como agentes eficaces de lucha contra plagas y control biológico de origen biológico natural son el aspecto más novedoso de esta invención, y los mismos se desconocen hasta el momento.

La Patente No. 7,018,641 de los Estados Unidos expedida a favor de Momol et al describe una invención que incluye materiales y métodos para el control de patógenos de plantas. La invención proporciona además que los aceites esenciales que pueden ser utilizados para el control de patógenos de plantas. Ventajosamente, la presente invención proporciona fumigantes que ofrecen una alternativa al bromuro de metilo y otros fumigantes pre-planta. De acuerdo con la presente invención, en una modalidad preferida los aceites esenciales pueden ser usados para el control de enfermedades bacterianas y fúngicas iniciadas en el suelo de hortalizas, plantas ornamentales y otras plantas. Se ejemplifican específicamente en este documento los aceites esenciales de las plantas siguientes: palmarosa (Cymbopogon martini) , árbol del té (Melaleuca alternifolia) , limoncillo {Cymbopogon flexuosus) y Eucalipto citriodora. Además, el timol, que es una fracción del aceite de tomillo (Thymus vulgaris) fue eficaz para controlar enfermedades de las plantas. En la modalidad específica de la presente invención, el geraniol, que es una fracción de palmarosa, se puede utilizar para controlar de forma efectiva los patógenos de plantas. Se ejemplifica específicamente en este documento es el uso o geraniol y/o aceite de palmarosa contra el patógeno de la marchitez bacteriana. Los aceites esenciales de la presente invención y sus derivados son altamente ventajosos para su uso como pesticida debido a que ocurren comúnmente en la naturaleza, tienen poca toxicidad para los mamíferos, son compatibles con otras estrategias de control biológico y se descomponen fácilmente como componentes inocuos.

La Patente No. 7,230,033 de Estados Unidos expedida a favor de Dolan et al describe una invención que comprende composiciones y métodos para el control de una plagas de población de artrópodos que incluye un agente de control de plagas de eremophilanos y sesquiterpenos (como por ejemplo, nootkatona o 13-hidroxi-valenceno ) y un agente de control de plagas de fenol sustituido por un dilaquilo (por ejemplo, carvacrol) . Los compuestos presentes en las composiciones pueden ser aisladas de fuentes naturales, semi-sintesis de compuestos de origen natural o sintetizadas por completo. Las composiciones de control de plagas se pueden aplicar directamente a una plaga o el lugar de una plaga, y actúan como toxinas plagas tópicas o ingeridas.

La Patente No. 6,37,211 de Estados Unidos expedida a favor de Issac et al describe una invención que describe composiciones y métodos para el control de insectos mediante la co-expresión de un aminoácido de oxidasa y una segunda enzima que proporciona la actividad insecticida cuando está presente en una mezcla con el aminoácido de oxidasa descrito. También se describen las secuencias de ADN y proteínas, y se transforman los microorganismos y las plantas útiles para lograr el control de dichos insectos.

La Patente No. 6,455,079 de Estados Unidos expedida a favor de Khanu a et al describe una nueva composición de insecticida que comprende extracto (s), obtenido de la planta de Albizzia lebbeck y endotoxina delta de Bacillus thuringiensis , útil en el control efectivo de los daños de los cultivos por insectos lepidópteros . La invención también proporciona un proceso para la preparación de dicha composición y un método para la aplicación de la composición.

La Patente de Estados Unidos No. 6,545,043 expedida a favor de Coats et al describe un método para la supresión de plagas, que comprende la exposición de las plagas a una cantidad efectiva de biopesticidas de una composición, la composición que comprende un vehículo y un producto de degradación de glucosinolatos purificada con un grupo hidroxilo unido , en donde un material de partida para el producto purificado glucosinolatos de desglose es aislado de una planta crambe o planta de la mostaza, en donde se dan a conocer las plagas objetivo podrían ser, hongos, bacterias o nemátodos del nudo de la raíz. Los métodos para la supresión de plagas, sin limitación en cuanto a los materiales de partida, se describen también en donde las plagas están expuestas a una cantidad efectiva de biopesticidas de una composición que comprende un portador, o bien un análogo o un derivado de un producto de degradación de glucosinolatos purificada que tiene un grupo de hidroxilo unido.

La Patente de Estados Unidos No. 6,231,865 emitida a favor de Hsu et al se refiere a un pesticida natural y describe un efecto sinérgico cuando el aceite o extracto de ajo se combina con aceites esenciales lo que se traduce en una mejora del insecticida/fungicida que es natural y que no contiene productos aditivos químicos. Los aceites esenciales se definen en la presente solicitud para ser los líquidos volátiles obtenidos de plantas y semillas, incluidas las de aceite de semilla de algodón, aceite de soja, aceite de canela, aceite de maíz, aceite de cedro, aceite de ricino, aceite de clavo, aceite de geranio, aceite de hierba de limón, aceite de linaza, aceite de menta, aceite de sésamo, aceite de tomillo, aceite de romero, aceite de anís aceite de albahaca, aceite de alcanfor, aceite de citronela, aceite de eucalipto, aceite de hinojo, aceite de jengibre, aceite de pomelo, aceite de limón, mandarina, aceite de naranja, aceite de pino, aceite de pimienta, rosa, aceite de mandarina, aceite de árbol de té, té de aceite de semillas, aceite mineral y aceite de pescado.

La Patente de Estados Unidos No. 6,207,705 expedida a favor de Coats et al describe biopesticidas novedosos que pueden sustituir a los pesticidas comerciales y biopesticidas que han sido prohibidos, restringidos, o se están eliminando gradualmente, incluyendo pero no limitado a, la cloropicrina, el diclorvos y el bromuro de metilo. Muchos de los biopesticidas de la presente invención son excelentes fumigantes, que poseen una acción rápida y volatilidad, mientras que representan menos riesgos para los seres humanos y el medio ambiente que los ' plaguicidas utilizados actualmente. Los biopesticidas de la presente invención son naturales y estrechamente relacionados con los derivados sintéticos o análogos relacionados con dos tipos de compuestos naturales, es decir, los glucosinolatos y monoterpenoides .

La Patente de Estados Unidos No. 6,133,196 expedida a favor de Ocamb et corresponde al control biológico de enfermedades de las plantas y describe una invención en la cual las semillas o plántulas de coniferas nacientes están en contacto con una composición que comprende una mezcla de dos géneros de microorganismos, es decir, uno biológicamente puro el cultivo de un hongo ectomicorricico capaz de colonizar las raices de una conifera, y un cultivo biológicamente puro de un inhibidor de control de agente bacteriano para el crecimiento de Fusarium ssp. Esta composición puede ser aplicada a las semillas antes de sembrar, o para las plantas jóvenes sometidas a un trasplante. La invención, por lo tanto, proporciona un método para reducir la incidencia de infección por Fusarium en plantas de coniferas procedentes de semillas de coniferas. Este es un avance importante en el arte de la técnica ya que las infestaciones de Fusarium en los viveros pueden arrasar las poblaciones de coniferas, y reducir la supervivencia de las plántulas más maduras que deben ser adelgazadas y trasplantadas. En un método alternativo, las semillas de coniferas son los primeros recubiertas con un cultivo del agente de control biológico de bacterias. El residuo se deja secar para formar una capa protectora al momento del plantado, la región del medio que rodea la semilla se impregna con un cultivo de hongo ectomicorrizal . Otra modalidad consiste en el primer revestimiento de la semilla con el agente de control biológico, y más tarde, después de que la semilla ha germinado, se aplica un tratamiento posterior la raíz naciente con una cultivo incipiente de ectomicorrizas en el trasplante, o se añade al medio de crecimiento vegetal en cantidad suficiente para saturar la región que rodea la rizosfera. Debido a que las principales manifestaciones de la infección por Fusarium son la formación de pudrición de la raíz y el marchitamiento de los tallos de plantas, los métodos de la invención resultan en la reducción de la incidencia de la pudrición de la raíz y el marchitamiento.

El estado de la técnica anteriormente citada no proporciona una referencia de las composiciones de biopesticidas y/o formulaciones de biopesticidas obtenidos a partir de especies de Eucalyptus capaz de servir como agentes de control biológico efectivo y/o agente de administración de control de plagas.

En consecuencia, existe una necesidad de proporcionar composición de biopesticidas y las formulaciones de biopesticidas novedosos para el control eficaz de plagas y administración de control biológico capaces de controlar (por ejemplo, repeler o exterminar a) una variedad de plagas, incluido pero no limitado a los insectos, hongos, bacterias, asi como los vectores de la enfermedad, mismas composiciones de biopesticidas que son relativamente seguras para los seres humanos, animales, plantas, y el medio ambiente.

También sigue habiendo una necesidad emergente para los métodos de control de plagas y métodos de control biológico, que son más compatibles con la necesidad de un control de la enfermedad, asequible y eficaz, con un alto grado de seguridad alimentaria, y el mínimo impacto ambiental .

En vista de las desventajas inherentes al estado de la técnica antes mencionada, el propósito general de la presente invención es la siguiente: proporcionar una combinación mejorada de la conveniencia y utilidad, incluir todas las ventajas del estado de la técnica anterior, tratar de superar las principales desventajas/inconvenientes del estado de la técnica anterior, y proporcionar nuevas composiciones de biopesticidas y formulaciones de biopesticidas capaces de servir como agentes eficaces de lucha contra plagas y control biológico .

SUMARIO DE LA INVENCION La presente invención proporciona nuevas composiciones y formulaciones de biopesticidas novedosas capaces de servir como agentes eficaces de lucha contra plagas y control biológico.

La presente invención describe el aislamiento y caracterización de las composiciones de biopesticidas y/o formulaciones de biopesticidas novedosas obtenidas a partir de Eucalyptus capaces de servir como agentes de controles biológicos efectivos y/o agentes de administración de control de plagas.

La invención también describe el aislamiento, la elucidación de la estructura y la evaluación de pesticidas, propiedades biológicas, control biológico, etnobotánica, asi como las propiedades terapéuticas de estas composiciones de biopesticidas y/o formulaciones de biopesticidas obtenidos a partir de especies de Eucalyptus capaces de servir como agentes de control biológico efectivo y/o agentes de administración de control de plagas.

Es un objeto de la presente invención proporcionar una composición de pesticidas y/o formulaciones de biopesticidas capaces de servir como un agente de control biológico eficaz.

Otro de los objetivos de la presente invención es proporcionar composiciones de pesticidas biológicos y/o formulaciones de biopesticidas capaces de actuar con eficacia contra una variedad de plagas y vectores.

Otro de los objetivos de la presente invención es proporcionar nuevas composiciones de biopesticidas y/o formulaciones de biopesticidas, que también puede servir como biomarcadores en, campos afines de investigación y estudios de investigación.

Para una mejor comprensión de la invención, sus ventajas operativas y de los objetos específicos alcanzados por el usuario, se debe hacer referencia a los dibujos y la materia descriptiva en donde se ilustran las modalidades de la invención.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS Para una mejor comprensión de la naturaleza de la presente invención, se debe hacer referencia a la descripción detallada tomada en conjunto con los dibujos adjuntos en los que : La Figura 1 es una representación esquemática del diagrama de flujo simplificado para el aislamiento de las composiciones de biopesticidas.

La Figura 2 es una representación esquemática del efecto pesticida de las composiciones de biopesticidas .

La Figura 3 es una representación de bloque del efecto biopesticidas de composiciones biopesticidas de la presente invención.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Los ejemplos de las modalidades se describen detalladamente en este documento con fines ilustrativos que están sujetas a numerosas variaciones. Se entiende que diversas omisiones, sustituciones o equivalentes se contemplan como circunstancias si asi lo sugieren o lo hacen conveniente, pero tienen la intención de cubrir la aplicación o ejecución, sin apartarse del espíritu o el alcance de la invención .

La Figura 1 es una representación esquemática del diagrama de flujo simplificado para el aislamiento de las composiciones de biopesticidas.

La Figura 2 es una representación esquemática de efecto pesticida de las composiciones de biopesticidas de la presente invención.

La Figura 3 es una representación de bloque del efecto insecticida de las composiciones biopesticidas de la presente invención.

En la modalidad preferida de la invención, el mejor modo de trabajo de la invención implica el aislamiento de las composiciones de biopesticidas y/o formulaciones de biopesticidas obtenidos a partir de especies de Eucalyptus capaces de servir como agentes de control biológico efectivo y/o agente de administración de control de plagas.

EJEMPLO 1 Selección de Especies de Plantas Las plantas comunes de la familia Myrtaceae generalmente incluyen Eucalyptus camaldulensis , Syzygium aromaticum , cu inii S. , fruiticosum S. , S. jambos, malaccense S., Psidium guajava, Pimiento officinalis, Myrtus communis, Callistemon rigidus, communis Melaleuca y Leucadendron M.

El estudio de la literatura reveló que la selección inicial del extracto de especies de Eucalyptus constató que trabaja como regulador del crecimiento de insectos en el control de la reproducción del salta hoja de arroz {Nilaparvata lugens) (Shanthi y Janarthan, 1995) . Se encontró que más repelente que el extracto de Neem y Datura contra la polilla del arroz {Cocyra cephalonica) (Devraj y Srilatha, 1993) . El extracto de E. globulus tuvo actividad larvicida contra el mosquito Aedes aegypti y Culex quinquetasciatus (Monzón et al 1994) . El extracto de C. lanceolatus resultó ser larvicida y contra la oviposición de C. quinquefasiatus (Mohsen et al. 1990). El extracto de Zyzygium aromaticum se encuentra como activo contra las plagas de granos almacenados Tribolium castaneum (Ho et al. 1995).

Dado que el estudio de la literatura mostró al Eucalyptus, Callistemon y Syzygium como géneros potenciales para ser explorados por sus propiedades pesticidas, ya que también se cultivan ampliamente en la India, tres especies de plantas pertenecientes a estos géneros fueron seleccionados para el estudio de sus propiedades pesticidas.

EJEMPLO 2 Selección de especies de plagas de insectos para realizar bioensayos .

El gusano del algodón (Helicoverpa armígera) es una de las plagas más destructivas de muchos cultivos en la India, asi como otros territorios geográficos. Su supervivencia se reporta en casi 181 especies de plantas huésoed (Reed y Pawar, 1982) . Se sabe que ataca muchas especies de los cultivos de importancia económica tales como algodón, guandú, garbanzo, tomate, girasol, etc. En la actualidad es una de las especies más difíciles de controlar debido a la aparición de resistencia a los insecticidas disponibles en el mercado.

Por ser polífago en su naturaleza, su control es muy importante. Las tasas más altas de resistencia a los insecticidas comerciales se han registrado en H. armígera de diferentes partes de la India. Los altos niveles de resistencia al DDT en Helicoverpa armígera (Hübner) se registraron en las larvas recogidas de garbanzo y el guandú en el Instituto Internacional de Investigación de Cultivos para las Zonas Tropicales Semiáridas (ICRISAT), Patancheru, AP entre 1986 y 1987.

De acuerdo con un informe registrado en la India, el pobre control de H. armígera con piretroides sintéticos se registró por primera vez en el guisante verde en Guntur, AP en el año 1986. El mal control no fue evidente en el algodón cultivado en esa zona, tal vez debido a la baja población durante ese año. Luego, en 1987, un control muy pobre de H. armígera se registró a gran escala en las áreas algodoneras con un importante crecimiento de Andhra Pradesh. Para hacer frente a esta situación, muchos agricultores de esta zona utilizaron los piretroides sintéticos, endosulfán, los insecticidas organofosforados y, a veces una mezcla a intervalos de 2-3 días durante el periodo critico. Durante ese año, los agricultores no pudieron obtener un control efectivo a pesar de rociar sus cultivos de algodón 30 veces durante la temporada (en comparación con el 10.9 rocíos recomendados) .

Del total de insecticidas aplicados, los piretroides sintéticos contados fueron un 50-70%. Como resultado de un mal control de la H. el rendimiento promedio del algodón de los distritos algodoneros con mayor crecimiento de Andhra Pradesh, Krishna, Guntur y Prakasam se redujo de 436 kg ha-1 en 1986 - 87 a 168 kg ha-1 en 1987-88.

En el año 1989, los altos niveles de resistencia a la cipermetrina se registraron en las cepas de algodón en las regiones de cultivo de algodón Guntur, AP. y Coimbatore, Tamil Nadu y de guandú cerca de Hyderabad. En 1990-1991, la encuesta indicó que las poblaciones resistentes a piretroides estuvieron presentes en gran parte de Andhra Pradesh. La tolerancia a quinalfos había aumentado ligeramente en 1990-1991, mientras que la resistencia a metomilo había aumentado considerablemente, especialmente en el área de cultivo de algodón Guntur. En el año 1997, H. armígera había devastado los cultivos de algodón todo en Andhra Pradesh. Estos hechos reflejan la gravedad del problema Helicoverpa . Por 1o tanto, la Helicoverpa armígera fue seleccionada como una especie de plaga para probar la actividad plaguicida de estas especies de plantas.

EJEMPLO 3 Recolección del material de la hoja El material de la hoja de la planta de tres especies a saber: Eucalyptus camaldulensis, Syzygium cuminii y Callistemon rigidus perteneciente a la familia Myrtaceae, fueron recogidos de un territorio geográfico identificado para la realización de bioensayos y preparación de extractos. Las hojas se secaron a la sombra y se trituraron en polvo en un molino mezclador para los estudios de bioensayo y la preparación de extractos. Los árboles fueron marcados para que el material de la hoja se pueda recoger, cuando sea necesario .

EJEMPLO 4 Preparación del Cultivo de Insectos El cultivo de Helicoverpa armigera fue criado en la dieta artificial según lo descrito por Singh y Rembold (1992) (Tabla 1) . La parte I y II parte de la dieta se pesan por separado. Parte III se prepara por fusión de agar en agua hirviendo. La parte I de la dieta se mezcla inmediatamente en la parte III y el II parte se mezcla cuando la mezcla se enfria a 60-70°C. El contenido se mezcla vigorosamente y se transfiere a las bandejas de plexiglás pequeñas. Después de enfriar, la dieta se mantiene a 4°C. La dieta fue preparada habitualmente para la cria de insectos. El cultivo se mantuvo en una DBO de 27 +/- 2 °C, 70% HR y fotoperiodo 10:14 LD. Las larvas se criaron en los distintos tubos de vidrio Borosil tapados con tapones de algodón y fueron alimentados con una pequeña cantidad de la dieta que se ha sustituido si la dieta se deshidrata.

Las pupas formadas se separaron y se transfirieron a frascos limpios siempre con un pedazo de papel de filtro para facilitar la emergencia de la polilla y se observaron diariamente para la emergencia de adultos. Después de salir de las mariposas, los machos y las hembras se mantuvieron por separado en frascos de vidrio y se alimenta con una solución de miel al 10%. Las polillas se emparejaron en la jaula de apareamiento (20x15 cm) fabricada en plexiglás a los 3 días de la emergencia según lo sugerido por Singh y Rembold (1988) . A las polillas se les proporcionó hisopo de algodón empapado en una solución de miel al 10% como alimento y los hisopos se recargan a diario con una solución fresca. La jaula estaba siempre con forro de papel de algodón/tejido. Las capas de algodón/papel de seda que contienen los huevos fueron trasladadas a los tarros de cristal que se proporcionan con un hisopo de algodón húmedo para mantener la humedad alta, Los recién nacidos fueron trasladados a las escamas de garbanzo en la dieta del día de incubación inicialmente en las cajas de plástico, y después de 3-4 días fueron trasladados de forma individual en los frascos de vidrio. Las debidas precauciones fueron tomadas durante el mantenimiento del cultivo y la población de laboratorio se complementa con las larvas de campo recogidas después de 3-4 generaciones con el fin de cumplir con la disponibilidad de larvas durante todo el periodo experimental.

EJEMPLO 5 Actividad de Prueba Biológica Bioensayo de alimentación crónica El material de ensayo se mezcló con la parte seca de la dieta artificial. Para los experimentos del bioensayo, 10 repeticiones con 10 larvas por réplica fueron tomadas. Las primeras larvas fueron liberadas en la dieta tratada. Cada larva se cria de forma individual en tubos Borosil tapados con tapones de algodón. Las larvas fueron criadas en dieta de prueba desde el primer estadio de la etapa de pupa. La tasa de supervivencia (la supervivencia en el tiempo), el tiempo de desarrollo (número promedio de días necesarios para llegar a un estadio dado) , los trastornos de la muda, el peso de larvas en 7° día y el peso pupal fueron registrados como variables de desempeño. Los tubos fueron inspeccionados diariamente para reemplazar los alimentos, registro de muda larval y la mortalidad, y para el registro de las pupas iniciales. El análisis estadístico estándar se realizó para calcular el porcentaje de supervivencia, el período de desarrollo y el crecimiento relativo de las larvas.

Para llevar a cabo los bioensayos de las fracciones de la dieta, se ha estandarizado el método de recubrimiento. Las modificaciones necesarias en la concentración de agar se hicieron para facilitar el vaciado de la dieta a través de microtitulación . La cantidad de la dieta que se vierte y la cantidad de solución del material de prueba fue estandarizada. En consecuencia, 750 u de la dieta normal se vertió en los frasco de vidrio de Borosilo (25 x 60 / 25 x 100 mm) con la ayuda de una pipeta repetidora. La dieta se recubrió entonces con 200 ? I de la solución tópica con una pipeta y se dejó secar. Las larvas de primer estadio fueron puestas en libertad en esta dieta para observar el efecto de la solución de prueba en el crecimiento y la supervivencia. Por otra parte, la dieta puede ser vertida en una placa de microtitulación y luego cubierta con la solución de prueba.

Bioensayo de actividad de contacto La toxicidad por contacto directo de formulaciones de Eucalyptus y Callistemon (10% CE) se determinó por el método de aplicación tópica para el tercer y quinto estadio las larvas de H. armígera, mientras que la toxicidad contra el segundo estadio las larvas fue evaluado mediante pulverización emulsiones acuosas utilizando la torre de Potter .

Para las aplicaciones tópicas, las formulaciones de prueba (a base de agua) en dosis de 5 u I fueron aplicadas en el dorso del tercer y quinto estadio larval de HA armígera mediante una micropipeta fina. Larvas tratadas fueron criadas en una dieta artificial y observaciones en el recuento de mortalidad se registraron cada 24 horas en un intervalo máximo de 3 días. Larvas moribundas fueron consideradas como muertas. Los datos fueron sometidos a análisis probit (Finney, 1971) para determinar la concentración efectiva (CE) sobre la base de los valores de las lineas de regresión calculada .

Para la aplicación de rocío, diez larvas se colocaron en cada placa de Petri de vidrio (Borosil de 5 cm de radio) y se rocía bajo la torre de Potter con 1 mi de material de prueba. Inmediatamente después del tratamiento, las larvas se secaron bajo condiciones ambientales y trasladaron a placas Petri de plástico (2. .5 cm de radio) que contiene un disco de hoja de col (12.5 cm cuadrados) , que fueron tratados con las formulaciones de prueba después del método de inmersión durante 5 segundos. El conteo para el registro de la mortalidad fue tomado 24 horas después del tratamiento y los datos fueron sometidos a análisis probit 24 horas después del tratamiento y de los registros de mortalidad, las larvas vivas fueron trasladadas de forma individual en los frascos de vidrio (25xl00mm, Borosil) , donde se proporcionaron 50% de las larvas con hojas de col tratada (inmersión de la hoja durante 5 segundos) , mientras que el otro 50% fueron puestas en libertad en hojas de col sin tratar para cada una de la concentraciones de ensayo y la formulación de prueba. Las observaciones sobre los estadios de larva y la mortalidad posterior, de existir, se registraron por otros 7 días para cada uno de los tratamientos. En el último día de tratamiento (7° día), los pesos de larvas de la col tratada y no tratada se registraron por separado para cada una de las concentraciones de prueba para observar el efecto inhibidor del crecimiento contra las larvas de H. armígera.

Bioensayos de inhibición de alimentación La acción de inhibición de alimentación de las formulaciones de Eucalyptus y Callistemon (10% CE) se determinaron en contra del quinto estadio de la larva H. armígera de pre-muerta de hambre (4 horas), utilizando el método de inmersión de fruta okra para las condiciones de prueba con elección y sin elección. Las frutas okra (Bhindi) adquiridas se sumergieron durante 5 segundos y se dejaron secar durante 1 hora.

Por las condiciones de ensayos sin elección, se colocó una fruta tratada en cada placa de Petri de vidrio (5 cm de radio, Borosil) y el quinto estadio de la larva se liberó de forma individual para cada uno de los grupos de tratamiento. En prueba de elección, la superficie de la placa de Petri de vidrio se dividió en dos mitades iguales con una marca de pluma para vidrio para proporcionar la opción de doble de alimentación. Las frutas tratadas y no tratadas se colocaron en las mitades izquierda y derecha de la placa de Petri, respectivamente, y se permitió a las larvas del quinto estadio que se alimentaran de forma individual. Para el tratamiento de control, las emulsiones acuosas de (sistema de solventes, 5,0%) del Blanco se consideraron como el control tratado y frutas tratadas con agua como control no tratado o puro .

Observaciones sobre el consumo de alimentación se registraron diariamente durante 3 días con intervalo de 24 horas manteniendo 5 réplicas para cada tratamiento (n = 5) . Para el registro de datos, un escala de seis niveles (0-5) fue diseñada para convertirse posteriormente en puntos numéricos para el análisis de datos.

Los datos de puntos se utilizaron para el análisis estadístico y se sometieron al Análisis de Varianza (ANOVA) con el fin de elaborar un tratamiento eficaz para cada uno de las formulaciones.

EJEMPLO 6 Bioensayos con polvo de la hoja Los bioensayos preliminares se llevaron a cabo utilizando el método de alimentación crónica mezclando el polvo de la hoja cruda en la dieta de insectos que se realizaron por separado con E. camaldulensis, S. cuminii y C. rigidus, con el fin de seleccionar una especie promisoria. E. camaldulensis se encontró como la especie más prometedora.

Más del ochenta por ciento de inhibición del crecimiento con un lento crecimiento y el desarrollo de las larvas se observó con el tratamiento de Eucalyptus . Ninguna de las larvas pudo sobrevivir más allá de la tercera etapa del estadio, dando como resultado cien por ciento de mortalidad. Las larvas, que sobrevivieron hasta el 7° día en la segunda etapa de estadio, eran de tamaño muy pequeño y no pudieron convertirse en pupas. Los periodos de desarrollo del primer y segundo estadio se prolongaron hasta 10-15 días en comparación con 3.2 días con una dieta normal.

En el caso de C. rigidus se registró un noventa por ciento de mortalidad. En el 10% de la población restante pupas y adultos altamente deformadas fueron registradas. La máxima mortalidad se observó durante la transición del segundo al tercero estadio. Los periodos de larvarios fueron prolongados en comparación con el control. El S. cuminii no tuvo ningún efecto sobre el crecimiento, la supervivencia y el desarrollo de H. armígera .

El experimento se repitió dos veces con el fin de confirmar los resultados. Otros experimentos bioeficacia fueron realizados con diferentes niveles de hoja en polvo de E camaldulensis y C. rigidus (2% y 1%) en la dieta artificial para comprobar si el efecto fue dosis dependiente o no . El lento crecimiento y el desarrollo de las larvas se observó tanto en ambos niveles de E. camaldulensis con efectos distinto de los niveles de concentración. Las larvas no pudieron sobrevivir más allá de la etapa L3 en el nivel del 2% de polvo de hojas de eucalipto, mientras que en el caso de Callistemon en el nivel del 2% el porcentaje de supervivencia fue del 20% en la etapa pre-pupa con sólo el 10% de la formación de adultos con un alto grado de deformidad. El periodo de desarrollo y crecimiento también pudieron ser afectados hasta el nivel del 2%.

Con base en los resultados preliminares de los bioensayos. E. camaldulensis y C. han demostrado ser prometedores, mientras que la especie S. cuminii ha demostrado ser ineficaz. Por lo tanto, se realizaron más estudios a E. camaldulensis y C.rigidus.

EJEMPLO 7 Preparación de extractos crudos y sus bioensayos.

Los extractos fueron obtenidos con E. camaldulensis y C. rigidus, desde su polvo de hoja en n-hexano, etanol y acetona en el aparato de soxhlet. Los solventes se evaporaron en el evaporador rotativo al vacio y los extractos secos se mantuvieron a 4°C para la realización de estudios de bioensayo. El aceite esencial de las hojas de E camaldulensis y C. rigidus sps se extrajeron también por el método de destilación por vapor en un aparato de clevenger para la realización de bioensayos. Los extractos de agua que quedan después de la extracción de aceite también se concentraron para la realización de bioensayos.

Las dietas semi-sintéticas que tienen un 5% de los extractos/aceites se prepararon para realizar el bioensayo. Las larvas del primer estadio fueron puestas en libertad y las observaciones fueron tomadas para evaluar el comportamiento de los insectos en estas dietas. Los extractos polares exhiben una mayor actividad que los extractos no polares. El extracto de etanol se encontró con la máxima actividad a nivel de prueba de 5% en los extractos de etanol, hexano, acetona, agua y aceite teniendo un 90% de inhibición del crecimiento. La segunda actividad más alta se registró en el extracto de acetona seguida de la extracción de agua. El lento crecimiento resultó en una alta mortalidad en el etanol y los extractos de acetona. Sin embargo, los extractos no polares de hexano y aceites mostraron una actividad muy bajo y un nivel de inhibición de crecimiento del 50% con aceite esencial y 60% con el extracto de hexano. Además se llevaron a cabo bioensayos con menores concentraciones de los extractos de etanol de Eucalyptus y Callistemon para determinar los valores de S ED50. Para el extracto de eucalipto de alcohol ED50 fue encontrado en un 0.3%, mientras que con Callistemon fue del 1.2%. Estas concentraciones de actividad con el extracto crudo son muy prometedoras. La representación fotográfica del efecto de inhibición del crecimiento de varios extractos de Eucalyptus y Callistemon en Helicoverpa armígera también fueron registrados.

EJEMPLO 8 Fraccionamiento de los extractos y bioensayos de las fracciones .

El fraccionamiento de los extractos crudos de etano de Eucalyptus y Callistemon fue realizado por dos métodos. En un método de partición fue realizado con solventes con polaridad variable y otro fraccionamiento de enfoque fue realizado en la cromatografía en columna de gel de sílice utilizando diferentes solventes y mezclas de solventes como eluyentes. Las fracciones fueron monitoreadas a través de cromatografía capa fina. Fracciones similares se agruparon y se sometieron a ensayos biológicos. Con base en los resultados de los bioensayos, las fracciones activas fueron identificadas .

EJEMPLO 9 Metodología de Extracción y Fraccionamiento El protocolo de aislamiento desarrollado y estandarizado, la purificación y caracterización se enumeran y describen a continuación.

Preparaciones de extractos crudos El material en polvo (50 g) fue empacado en un dedal hecho de papel de filtro Whatman No. 1 y se extrajo con 500 mi de solvente polar utilizando un aparato de extracción Soxhlet durante 48 horas hasta que el disolvente extraído no tuviera color. El extracto se concentró bajo presión reducida utilizando un evaporador rotativo de vacío para obtener el extracto crudo. La solución viscosa de extracto se obtuvo a partir del evaporador rotativo al vacío.

Fraccionamiento de los extractos crudos Los extractos concentrados polares/etanol del Eucalyptus se fraccionaron a través de particionamiento con una combinación de solventes de polaridades diferentes. Además de esto, el etanol / extracto polar también se sometió a cromatografía de columna.

Los pasos seguidos para el fraccionamiento del extracto se presentan a continuación. El extracto crudo (10 g) se disolvió en acetato de etilo (250 mi x 4) . Los extractos de acetato de etilo se combinaron y se concentraron con evaporador rotativo al vacío para producir un polvo color marrón oscuro y verde (II a) . El agua de acetato de etilo insoluble (II b) fue rechazada. Este polvo se volvió a disolver en 500 mi de acetona, 70% (acuoso) y se sometió a filtración. El polvo insolubles verde se obtuvo en la filtración (II c) . El sobrante color marrón rojizo de agua filtrada (II d) en la evaporación de acetona se dividió en dos partes iguales (75 mi cada uno) . El primer filtrado agua filtrada de color marrón rojizo (75 mi) se sometió a extracción con n-butanol (250 mi x 3) separando el n-butanol y la capa de agua. Los extractos solubles de n-butanol se combinaron y se concentraron al vacio con evaporador rotatorio produciendo un semisólido marrón viscoso (II e) . El bisulfito de sodio (1,5 g) como se sugiere para la extracción de los taninos de alta pureza (Anónimo, 1952) se agregó a la segunda fracción de agua (75 mi) y se mantuvo durante la toda la noche. Los sedimentos fueron retirados por centrifugación a 10,000 rpm durante 5 minutos como sólido marrón (II f ) . La hidrólisis de la fracción restante de agua de color marrón rojizo, se hizo con HCI 2N, colocado en un baño de agua a 80°C y se neutralizó con una solución acuosa al 30% de Na2C03 (w / v) . Después de la neutralización, 3 g de bisulfito de sodio se añadieron de nuevo y se mantuvieron durante toda la noche. La sedimentación fue recogida por centrifugación como cristales de color roj izo-violeta (II g) .

Los taninos también se extrajeron directamente del polvo de la hoja con el método tradicional (Foo y Porter, 1980) . El polvo de hoja (50 g) se sometió a una acetona acuosa al 70% (500 mi) en un aparato Soxhlet durante 48 h. La acetona acuosa soluble al 70% se filtra y se somete a evaporador rotativo al vacio para la evaporación del disolvente. La fracción restante de agua fue extraída con n-butanol (500 mi x 3) en un embudo de separación. Los extractos de n-butanol-extractos se combinaron y concentraron en el evaporador rotativo al vacío. Esto llevó a la producción de polvo de color marrón sólido denominado como taninos crudos (IV).

Extracción de taninos por el procedimiento recomendado por la QMS Las hojas de Eucalyptus se secaron a la sombra seca y se molieron hasta un polvo fino en un molino mezclador. La cantidad conocida (25 g) de material en polvo fue tomada en un frasco cónico de 150 mi de agua que se añadió la mezcla y se calentó en un baño de agua hirviendo durante 30 minutos. Después del calentamiento y enfriamiento posteriores, la mezcla se transfirió a un matraz aforado de 250 mi y se diluyó a volumen con agua, la mezcla se dejó reposar. El líquido se filtró a través de un papel de filtro, desechando los primeros 50 mi del filtrado. De este filtrado, 50 mi de extracto soluble en agua, se concentraron en un evaporador rotatorio seguido de secado baño de agua. El residuo se secó en un horno a 105°C durante 4 horas y se pesó con exactitud (TI) . Del restante del filtrado, 80 mi del extracto del material vegetal fueron tomados en un matraz cónico separado a los cuales se agregaron 6 g de polvo de cuero. La mezcla se dejó agitar durante 60 min El líquido entonces fue filtrado. A continuación, 50 mi del filtrado claro se llevaron a sequedad. El residuo se secó en un horno a 105°C durante 4 horas y pesó con exactitud (T2) .

Al terminar esto, 6 g de polvo de piel fueron colocados en un matraz cónico por separado, se agregaron 80 mi de agua y se dejaron agitar durante 60 min. La mezcla se filtró y 50 mi del filtrado se llevaron a sequedad según el método descrito anteriormente. El residuo seco se pesó con exactitud (A) .

Confirmación de Taninos Los taninos así producidos, es decir, el polvo sólido marrón (II f) y los cristales de color roj izo-violeta (II g) , la capa de n-butanol (IV) y según el procedimiento recomendado por la OMS, fueron sometidos a pruebas estándar para la confirmación adicional con base en algunas de sus reacciones químicas reacciones según lo sugerido por Mukherjee (2002). En consecuencia, las siguientes reacciones de color se realizaron tomando el ácido tánico como el estándar para la clase de taninos de los compuestos. (1.) Prueba de cloruro férrico: una pequeña cantidad de cloruro férrico (5 mg) cuando se añade a una solución acuosa de los taninos (0,1 g en 10 mi' de agua) produce una coloración verde azulada después de la reacción. (2). Precipitación por alcaloides: Una pequeña cantidad de alcaloides (extraído de T. indica) cuando se añade a una solución acuosa (0,1 g en 10 mi) de taninos, produjo un precipitado blanco pálido después de 3 horas, que no fue disuelto en la agitación (3). Precipitación por metales pesados: Una pequeña cantidad de acetato de plomo (5 mg) cuando se añade a una solución acuosa de los taninos (0,1 g en 10 mi de agua) produjo un color amarillo pálido después de la reacción.

El rendimiento de los taninos obtenidos con los diferentes procedimientos se comparó para la eficacia de los procedimientos de extracción.

Cromatografía de columna El extracto etanólico crudo fue sometido a cromatografía en columna para identificar a la fracción activa que no sean los taninos. La preparación de la columna y la carga de la parte esencial del aparato consistió en un tubo de vidrio largo y estrecho (100 cm de largo y 3.5 cm de diámetro) con una capacidad para columna de material de empaque de 200 g. El gel de sílice activado (malla 60-120) se utilizó como material de empaque para este fin. La activación se realiza calentando el gel de sílice en un horno a 120°C durante 60 min. La suspensión de gel de sílice se preparó en hexano para introducir la mezcla en la columna. La suspensión se vierte a través del embudo en una columna limpia y seca sujetada verticalmente y se permitió que el absorbente reposara uniformemente durante 48 h. Con el fin de obtener empaquetamiento uniforme, suaves golpes a la columna se hicieron con una varilla de madera. Se permitió que se eluyera el solvente y se agregó más suspensión hasta que se obtuvo la longitud requerida de la columna. Se permitió fluir al solvente fresco a través de la columna bajo la presión hidrostática para eliminar las burbujas de aire, de existir, y para evitar la formación de grietas y canales, ya que puede conducir a una distorsión de las bandas de absorción. 20 g de extracto crudo de etanol recién preparados se evaporaron a sequedad bajo presión reducida, se volvió a disolver en 25 mi de solvente de etanol agregando absorbente de columna a 3 veces su peso (60 g de gel de sílice) . La solución de extracto fue absorbida de manera uniforme sobre el gel de sílice y permitió que el solvente se evaporara por completo. El absorbente . cargado con extracto crudo fue agregado a la parte superior de la columna y se empacó en una capa uniforme. Después de la introducción del extracto de la columna, la absorción inicial se llevó a cabo con rapidez y por lo tanto, considera apto para el desarrollo cromatograma.

Elución de la Columna El extracto crudo de etanol se sometió a cromatografía en gel de sílice (malla 60-120) . La elución en columna, se llevó a cabo con la polaridad incrementada de mezcla de solvente hexano y etanol en la proporción de 100:0, 90: 10, 80: 20, 70: 30, 60:40, 50: 50, 40: 60, 30: 70, 20: 80, 10, 90, 0: 100, respectivamente. En total, once mezclas de solventes fueron utilizadas. Ciento diez fracciones (cada una de 45 mi) se recogieron durante el desarrollo del croraatograma completo. Estas fracciones se agruparon en 28 fracciones con base en el modelo de TLC y luego se examinaron individualmente para su acción contra la inhibición del crecimiento de larvas de H. armígera por el método de incorporación en la dieta. Estas fracciones se concentraron a presión reducida en un evaporador rotatorio al vacío. El peso de cada fracción fue registrado.

Las fracciones así obtenidas fueron fraccionadas posteriormente utilizando medios sucesivos de cromatografía de presión de líquidos (MPLC) en gel de sílice para obtener compuestos puros. La combinación de experimentos de espectroscopia de 2D RMN de campo alto y masa fueron utilizados para la caracterización estructural.

En otra modalidad preferida de la presente invención, se visualiza para utilizar la composición pesticidas biológico / formulación de pesticidas de la presente invención para sintetizar un agente de control biológico eficaz que consiste en una mezcla de las composiciones de biopesticida / formulación de biopesticida de la presente invención utilizados junto con insecticidas tales como el Spinosad, Novalurón, indoxacarb, Thiomethoxam, acetamiprid, Imidocloprid, clorpirifós, Avermectin (vertimec) .

En otra modalidad preferida de la presente invención, se conceptualiza a utilizar la composición de la composición del biopesticida / formulación de biopesticidas de la presente invención para sintetizar un agente de control biológico eficaz que consiste en una mezcla de la composición de biopesticidas / formulación de biopesticidas de la presente invención utilizados junto con fungicidas como Carbendazim, Mancozeb, Ridomil, Dithane M-45 Chlorothalanil y Propaconazole .

En otra modalidad preferida de la presente invención se conceptualiza a utilizar la composición del biopesticida / formulación de biopesticida de la presente invención para sintetizar un agente de control biológico eficaz que consiste en una mezcla de la composición del biopesticida / formulación del biopesticida de la presente invención que se utiliza junto con microbios biopesticidas derivados, tales como Bacillus thuringiensis - larvicida/ insecticida con base en Kurstakii, insecticida basado en Beauveria bassiana insecticida basado en Verticillium lecanii, nematicida basado en insecticidaa Paceliomyce, insecticida basado en HaNPV, patógeno de insectos Spodoptera fungicida basado en Pseudpmonas fluorescens, fungicida con base en Trichoderma viridae y fungicida con base en Trichoderma harzianum.

En otra modalidad preferida de la presente invención se conceptualiza el uso de la composición del biopesticida / formulación de biopesticidas de la presente invención para sintetizar un agente de control biológico eficaz consiste en una mezcla de la composición de biopesticidas / formulación de biopesticida de la presente invención utilizada junto con al menos un miembro de un conjunto de pesticidas que incluyen 2 , 4-diclorofenoxiacético ácido acético, acefato, acetamiprid, alaclor, aletrina. alfacipermetrina, alfanaphtil ácido acético, fosfuro de aluminio, anilofos, atrazina, aureofungina, azadiractina (productos de neem) , azoxistrobina, bacillus thuringiensis (bt) , bacillus thuringiensis (bs) , carbonato de bario, beauveria bassiana, bendiocarb benfuracarb, benomil, bensulfurón, beta-ciflutrina . bifenazato, bifentrina. bitertanol. bromadiolona, buprofezin, butaclor, captano. carbaril, carbendazim, carbofuran, carbosulfán, carboxin, carfentazona etílico. carpropamid, clorhidrato de cartap, clorofenvinfos . Clorfenapir, clorimurón de etilo, cloruro de clormequat (CCC) , clorotalonil, clorpirifós. clorpirifos-metilo, cinmetileno, clodinafop-propargilo (piroxofop-propargilo) , clomazona clothianidina, hidróxido de cobre, oxicloruro de cobre, sulfato de cobre, coumachlor, óxido cumatetralilo, cuproso, ciflutrina, cihalofopbutilo, cimoxanil, cipermetrina , cifenotrina, dazomet, deltametrina (decametrina) , diazinon, difenil-dicloro difenil-tricloroetano (ddt), dicloropropeno y mezcla de dicloropropano (mezcla dd mixure) , diclorvos (ddvp) , diclofop-metilo, dicofol, difenocenazola, difentiuron, diflubenzurón, dimetoato, dimetomorfo, dinocap, ditianón, diurón, dodina, d-trans aletrina, edifenfos, benzoato de emamectina, endosulfán, etefón, etión, etofenprox (etofenprox) , etoxisulfurón, dibromuro de etileno y tetracloruro de carbono en mezcla (mezcla edct 3:1), fenamidona, fenarimol, fenazaquina, fenitrotión, fenobucarb (BPMC) , fenoxaprop-p-etilo . fenpropatrin, fentión fenpiroximato, fenvalerato, fipronil, flubendiamida, fluchloralin, flufenacet. flufenoxuron, flufenzina, flusilazola, fluvalinato. forclorfenurón, fosetil-al, ácido giberélico, glufosinato de amonio, glifosato, hexaconazola, hexazinote, hexitiazox, hidrógeno cianamida, imazetapir midacloprid, imiprotrina indoxacarb, iprobenfos (kitazin), Ipfodione isoprotiolano, isoproturon, kasugamicina, lambdacihalotrina, cal de azufre, lindano, linurón, lufenuron, magnesio placas de fosfuro, malatión, mancozeb, cloruro de mepiquate, mesosulfurón-metil + yodosulfurón de sodio metilo, metalaxil, metalaxil-M , metaldehído, metabenztiazurón, metomilo. metoxi etil cloruro de mercurio ( EMC) , bromuro de metilo, metil clorofenoxi ácido acético (MCPA) , metil-paratión, metiram, metolacloro, metribuzina, metsulfurón metilo, milbemectina, monocrotofos , miclobutanil, novalurón, virus polihiderosis nuclear de Helicoverpa armígera, virus polihiderosis nuclear de spodoptera litura, oxadiargilo, oxadiazón, oxicarboxina, oxidemetón-metilo, oxifluorfen, paclobutrazole, dicloruro de paraquat, penconazol, pencicuron pendimetalina, permetrina, fentoato, forato fosalona, fosfamidón, praletrin, pretilaclor, primifos-metilo, profenofos. propatil, propergita, propetamfos, propiconazol, propineb, propoxur, piraclostrobina, piretrinas (pelitre) , piridalil, piriproxifen, sodio piritiobac, quinalfos, quizalofop de etilo, quizalofop-p-tefuril, s-bioaletrina, sirmato, cianuro de sodio, espinosad, estreptomicina + tetraciclina, sulfosulfurón, azufre, tebuconazol, temefos, tiacloprid, tifluzamida, tiobencarb (bentiocarb) , tiodicarb, tiometoxaina, tiometón, tiofanato-metil, tiram, transflutrina, triacontanol , triadimefon, trialato, triazofos, triclorofon, trichoderma viride, triciclazol, tridemorf, trifluralina, validamicina, verticillium lecanii, fosfuro de zinc, zineb y ziram.

Asimismo, también se contempla utilizar la composición del biopesticida / formulación de biopesticidas de la presente invención para desarrollar y sintetizar un agente de control biológico eficaz que consiste en una mezcla de la composición de biopesticidasformulación de biopesticidas de la presente invención para ser utilizado en combinación con otros principios activos conocidos, y la invención pretende abarcar y prever todas las variantes conceptualizadas .

Sin embargo, una modalidad particular ejemplar de la invención ha sido descrita en detalle para fines ilustrativos, que será reconocida por los expertos en el arte de la técnica que numerosas variaciones o modificaciones de la invención divulgada, incluyendo la reorganización de la configuración molecular de las composiciones de biopesticidas y/o formulaciones de biopesticidas de la presente invención, asi como su modo de empleo, es susceptible de modificaciones a causa de una aplicación en diversos campos, tales como control biológico, control de plagas y la administración eficaz del control de plagas, terapéuticas y/o herramientas de diagnóstico, asi como la formulación de bioplaguicidas con base en los biomarcadores son posibles.

En consecuencia, la invención tiene por objeto abarcar todas las alteraciones, modificaciones y variaciones que caigan dentro del espíritu y alcance de la presente invención .

Claims (51)

NOVEDAD DE LA INVENCION Habiendo descrito el presente invento, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como prioridad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES

1. - Una composición de biopesticida / formulación de biopesticidas novedoso aislado de partes de la planta / extractos basados en parte de plantas que pertenecen a un grupo de plantas que comprenden determinadas plantas de Eucalyptus .

2. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque dichas plantas de eucalipto seleccionadas incluyen Eucalyptus camaldulensis .

3. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque dichas plantas de Eucalyptus seleccionadas incluyen Eucalyptus globus, Eucalyptus citrodora , Eucalyptus terraticornis , Eucalyptus hybrid, Eucalyptus globulus , Eucalyptus gummifera , Eucalyptus marginta , Eucalyptus regnans, Eucalyptus oblique, Eucalyptus calophyla , Eucalyptus sideroxylon , Eucalyptus leucoxylon , Eucalyptus dives, Eucalyptus macarthuri y Eucalyptus citrodion macúlate .

4. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la composición posee atributos de pesticida .

5. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la composición posee atributos de biocontrol .

6. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque los atributos de pesticida son eficaces contra grupos objetivo seleccionados a partir de hongos, bacterias, nematodos, insectos y vectores.

7. - Una composición de biopesticida / formulación de biopesticida novedosa aislada de las partes de la planta / extractos basados en plantas pertenecientes a un grupo de plantas que comprende una combinación de plantas Eucalyptus seleccionadas y al menos un miembro del consorcio de plantas seleccionado .

8. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque dicho consorcio de plantas seleccionado incluye la Acacia, Aleurites , Alphitonia , Alyxia Anogeissus , Arbutus, Betula, Bixa, Caesalpinia , Castanea , Coriaria , Cornus, Callistemon , Arctostaphylos, Dillenia , Diospyros ; Elaeagnus, Ephedra , Euphorbia , Eurya acuminata DC, Fragaria, Geranium y Heimia.

9. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque dicha composición de plantas seleccionadas incluye Juglans, Lagerstroe ia , Lemaireocereus, Liquidambar, Lycopus europeus L, L Lythrum salicaria , Menyanthes, Nuytsia, Oenothera, Phyllanthus , Platanus, Polygonum, Psidium, Psophocarpus , Púnica, Quercus, Ricinus, Rubus, Neem, Rotenae, Tylophora, Cymopogone, Aspergillus, VAM fungí, Chaetomium and Solanum.

10. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque dichas plantas de Eucalyptus seleccionadas incluyen Eucalyptus camaldulensis .

11. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque dichas plantas de Eucalyptus seleccionadas incluyen Eucalyptus globus.

12. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con las reivindicaciones 7 u 8 o 9, caracterizada porque dicha composición posee atributos de pesticidas.

13. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con las reivindicaciones 7 u 8 o 9, caracterizada porque dicha composición posee atributos de biocontrol .

14. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque dichos atributos pesticidas son efectivos contra grupos objetivo seleccionados desde hongo, bacterias, insectos, nemátodos y vectores.

15. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque dicha composición posee atributos de insecticida .

16. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con las reivindicaciones 7 u 8 o 9, caracterizada porque dicha composición posee atributos de insecticida.

17. - Una composición de biocontrol que comprende una mezcla de la composición de biopesticidas / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 1 que se utiliza junto con insecticidas como el Spinosad, Novalurón, Indoxacarb, Thiomethoxam, Acetamiprid, Imidocloprid, clorpirifós, Avermectin (Vertimec) .

18. - Una composición de biocontrol que comprende una mezcla de la composición de biopesticidas / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 1 que se utiliza junto con fungicidas como el Dazomety el nematicida con base en Paceliomyce.

19. - Una composición de biocontrol que comprende una mezcla de la composición de biopesticidas / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 1 que se utiliza junto con fungicidas como el Carbendazim, Mancozeb, Ridomil, Dithane M-45, Chorotalanil y Propaconazola .

20. - Una composición de biocontrol que comprende una mezcla de la composición de biopesticidas / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 1 que se utiliza junto con biopesticidas derivados de microbios tales como Kurstakii, insecticida basado en Beauveria Bastiana , insecticida basado en Verticillium lecanii, nematicida basado en Paceliomyce, insecticida basado en HaNPV, patógeno de insectos Spodoptera fungicida basado en Pseudpmonas fluorescens, fungicida con base en Trichoderma viride y fungicida basado en Trichoderma harzianum .

21. - La composición del pesticida biológico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el extracto de la planta en donde dicha composición biopesticida es aislada, es más inclusiva de los taninos, compuestos de polifenoles, compuestos de floroglucinol, aceite de eucalipto contienen compuestos de terpenos y compuestos triterpeniodes .

22.- La composición del biopesticida de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque los compuestos polifenólicos además incluyen ácido gálico y del ácido elágico .

23.- La composición del biopesticida de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque dichos compuestos de floroglucinol deberían estar en la forma de compuestos de floroglucinol formilados.

24. - La composición del biopesticida de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque dichos compuestos de floroglucinol formilados incluyen además: (a) Ensamble euglobal; (b) Ensamble macrocarpal ; (c) Ensamble de eucaliptona; (d) Ensamble sideroxinal ; (e) Ensamble grandinal; (f) Ensamble jensenal; y (g) Ensamble de Eucaliptina.

25. - La composición del biopesticida de conformidad con la reivindicación 24, caracterizada porque dicho ensamble Euglobal incluye además euglobal I A 1, euglobal-IB, euglobal-IC, euglobal-IIA, euglobal-IIB, euglobal-IIC, euglobal-III, euglobal IV-B, euglobal-VII y euglobal-IA2.

26. - La composición del biopesticida de conformidad con la reivindicación 24, caracterizada porque dicho ensamble Macrocarpal además incluye Macrocarpal A, Macrocarpal B, Macrocarpal C, Macrocarpal D, Macrocarpal E, Macrocarpal F y Macrocarpal G.

27. - La composición del biopesticida de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque dicho aceite de eucalipto que contiene compuestos de terpeno además incluye 1,8-cineol, acetato de terpineol, aromandrena, globulol y alcohol de sesquiterpeno .

28. - La composición del biopesticida de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque dichos compuestos triterpenoides incluyen además lactona de ácido ursólico, ácido botulinico, ácido oleanólico y ácido amirinico de triterpenoide .

29.- Una composición de biocontrol que comprende una composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 1 junto con cualquier insecticida basado en neem.

30.- La composición del biopesticida de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque dicho extracto de planta de la cual dicha composición de biopesticida es aislada, además incluye 1,8-ci.neol, 11 ,12-dehidroursolactona-acetato , 3-isopropiliden-l-acetil-5-ciclopenteno, 3-ometilellagic-ácido 4'ramnoside, alo-aromadendrina, alfa aromadendrena, planta de alfa-eudesmol, alfa-felandreno, alfa-pineno, aromadendreno, beta-dicetona, beta eudesmol-, beta-pineno butiraldehído, ácido cafeico, canfeno. Caproaldehido, carvona, ácido clorogénico, citriodorol, cuminaldehído, d-catecol, d-linalol, d-mirtenal, d-mirtenol, d-verbenona, ácido elágico, epiglobulol y eucaliptina .

31. - La composición del biopesticida de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque dicho extracto de planta de la cual dicha composición de biopesticida es aislada, incluye además ácido ferúlico, ácido gálico, gama-terpineno, ácido gentisico, globulol, i-terpineol isoamyl-alcohol, ledol, p-cimeno, parafina, pineno, pinocarveol, pinocarvona, ácido protocatéquico, quercetina, quercetol, quercetol-3-glucósido, quercetrina, quercitrina, rutina, trans-pinocarveol, tritriacontane-16 ,18-diona, valeraldehido y viridiflorol .

32. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque dichos atributos de biocontrol son efectivos contra un huésped de insectos de prueba.

33. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 32, caracterizada porque dichos insectos de prueba incluyen Sitophilus oryzae, Sitophilus granarius , Acanthoscelides obtectus , Corcira cephalonica , chinensis Callasobruchus , Tribolium confusum, Rhyzopertha dominica , Phthorimaea opercullela , Callasobruchus maculatus, Tribolium castaneum, Ephestia kuehniella , Trialeurodes aporariorum, Thaumetopoea pityocampa , Henosepilachna vigintioctopunctata , Nilparvata lugens , Tyrophagous putrescentiae, Arrora jacobsani, Tecia solanivora, Aproaerema modicella , Scirtothips dorsal, Myzus persicae, Coptotermes formosanus, Helicoverpa armígera , Anopheles spp. Imicola Culicoides , Culicoides sonorensis, Anophele gambiae, Anophele darlingi y Culex pipiens pallens.

34. - La composición de biocontrol de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque dicha composición está equipada para ser efectiva contra un huésped de los insectos de prueba.

35. - La composición de biocontrol de conformidad con la reivindicación 34, caracterizada porque dichos insectos de prueba incluyen Sitophilus oryzae, Sitophilus granarius, Acanthoscelides obtectus , Corcira cephalonica , chinensis Callasobruchus , Tribolium confusum, Rhyzopertha dominica , Phthorimaea opercullela , Callasobruchus maculatus , Tribolium castaneum, Ephestia kuehniella , Trialeurodes aporariorum , Thaumetopoea pityocampa, Henosepilachna vigintioctopunctata, Nilparvata lugens, Tyrophagous putrescentiae, Arrora jacobsani , Tecia solanivora , Aproaerema modicella , Scirtothips dorsal, Myzus persicae, Coptotermes formosanus , Helicoverpa armígera , Anopheles spp. Imicola Culicoides, Culicoides sonorensis , Anophele gambiae, Anophele darlingi y Culex pipiens pallens.

36. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque dichos grupos objetivo contra dichos atributos de pesticida son efectivos, son inclusivos de el complejo del gusano de baga, complejo spodeptera, Platella xylostella, mientras las moscas, moscas blancas e insectos harinosos .

37. - La composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 36, caracterizada porque el complejo del gusano de baga también incluye Helicoverpa , Pectinora y Earias.

38. - Una composición de biocontrol que comprende una mezcla de mezcla de composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 1 utilizada junto con los aceites vegetales seleccionados .

39. - La composición de biocontrol de conformidad con la reivindicación 38, caracterizada porque dichos aceites vegetales pueden incluir linaza, mostaza, aceite de castor y j atropa .

40. - Una composición de biocontrol que comprende una mezcla de la mezcla de composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 1 utilizada junto con un ensamble de pesticida derivado de una fuente seleccionada.

41. - La composición de biocontrol de conformidad con la reivindicación 40, caracterizada porque dicha fuente seleccionada podría incluir un origen químico como biológico.

42. - La composición de biocontrol de conformidad con la reivindicación 40, caracterizada porque dicho ensamble de pesticida incluye: ácido 2 , 4-diclorofenoxiacético acético, acefato, acetamiprida, alaclor, aletrina, alfacipermetrina, alfanaphtil ácido acético, fosfuro de aluminio, anilofos, atrazina, aureofungina, azadiractina (productos de neem) , azoxistrobina, bacillus thuringiensis (bt) , bacillus thuringiensis (bs) , carbonato de bario, beauveria bassiana, bendiocarb benfuracarb, benomil, bensulfurón, beta-ciflutrina, bifenazato, bifentrina, bitertanol, bromadiolona, buprofezin, butaclor, captano, carbaril, carbendazim, carbofuran, carbosulfán, carboxin, carfentazona etílico, carpropamida, clorhidrato de cartap, clorofenvinfos, clorfenapir, clorimurón de etilo, cloruro de clormequat (CCC) , clorotalonil, clorpirifós, clorpirifos-metilo, cinmetileno, clodinafop-propargilo (piroxofop-propargilo) , clomazona clothianidina , hidróxido de cobre, oxicloruro de cobre, sulfato de cobre, coumachlor, óxido cumatetralilo, cuproso, ciflutrina, cihalofopbutilo, cimoxanil, cipermetrina, cifenotrina, dazomet, deltaraetrina (decametrina) , diazinon, difenil-dicloro difenil-tricloroetano (ddt) , dicloropropeno y mezcla de dicloropropano (mezcla dd mixure) , diclorvos (ddvp) , diclofop-metilo, dicofol, difenocenazola, difentiuron, diflubenzurón, dimetoato, dimetomorfo, dinocap, ditianón, diurón, dodina, d-trans aletrina, edifenfos, benzoato de emamectina, endosulfán, etefón, etión, etofenprox (etofenprox) , etoxisulfurón, dibromuro de etileno y tetracloruro de carbono en mezcla (mezcla edct 3:1), fenamidona, fenarimol, fenazaquina, fenitrotión, fenobucarb (BPMC) , fenoxaprop-p-etilo. fenpropatrin, fentión fenpiroximato, fenvalerato, fipronil, flubendiamida, fluchloralin, flufenacet. flufenoxuron, flufenzina, flusilazola, fluvalinato, forclorfenurón, fosetil-al, ácido giberélico, glufosinato de amonio, glifosato, hexaconazola, hexazinote, hexitiazox, hidrógeno' cianamida, imazetapir midacloprid, imiprotrina indoxacarb, iprobenfos (kitazin), Ipfodione isoprotiolano, isoproturon, kasugamicina, lambdacihalotrina, cal de azufre, lindano, linurón, lufenuron, magnesio placas de fosfuro, malatión, mancozeb, cloruro de mepiquate, mesosulfurón-metil + yodosulfurón de sodio metilo, metalaxil, metalaxil-M , metaldehido, metabenztiazurón, metomilo, metoxi etil cloruro de mercurio (ME C) , bromuro de metilo, metil clorofenoxi ácido acético (MCPA) , metil-paratión, raetiram, metolacloro, metribuzina, metsulfurón metilo, milbemectina, monocrotofos , miclobutanil, novalurón, virus polihiderosis nuclear de Helicoverpa armígera, virus polihiderosis nuclear de spodoptera litura, oxadiargilo, oxadiazón, oxicarboxina , oxidemetón-metilo, oxifluorfen, paclobutrazole, dicloruro de paraquat, penconazol, pencicuron pendimetalina, permetrina, fentoato, forato fosalona, fosfamidón, praletrin, pretilaclor, primifos-metilo, profenofos. propatil, propergita, propetamfos, propiconazol, propineb, propoxur, piraclostrobina, piretrinas (pelitre) , piridalil, piriproxifen, sodio piritiobac, quinalfos, quizalofop de etilo, quizalofop-p-tefuril, s-bioaletrina, sirmato, cianuro de sodio, espinosad, estreptomicina + tetraciclina, sulfosulfurón, azufre, tebuconazol, temefos, tiacloprid, tifluzamida, tiobencarb (bentiocarb) , tiodicarb, tiometoxaina, tiometón, tiofanato-metil , tiram, transílutrina , triacontanol , triadimefon, trialato, triazofos, triclorofon, trichoderma viride, triciclazol, tridemorf, trifluralina, validamicina , verticillium lecanii, fosfuro de zinc, zineb y ziram.

43.- Una composición de biocontrol que comprende una mezcla de la mezcla de la composición de biopesticida / formulación de biopesticidas de conformidad con la reivindicación 1 utilizada junto con al menos un miembro de un ensamble de ingrediente activo derivado de una fuente seleccionada .

44.- La composición de biocontrol de conformidad con la reivindicación 43, caracterizada porque dicha fuente seleccionada puede incluir un tipo de origen tanto químico como biológico.

45.- La composición de biocontrol de conformidad con la reivindicación 43, caracterizada porque dicho ingrediente activo incluye: ácido acético, agrobacterium radiobacter, allium sativum (ajo) , alilo (mostaza, el aceite de) de isotiocianato, alternaría destruens, clorhidrato de aminoetoxivinilglicina, bicarbonato de amonio, nonanoato de amonio, ampelomyces quisqualis, anagrapha falcifera nucleopolyhedrosis virus (VAN) , aceite de anís, anthraquinone, aspergillus flavus, azadiractina . cereus, bacillus licheniformis, mycoides bacillus aislado, esporas de bacillus popilliae, pumilus bacilo bacillus sphaericus, bacillus subtilis, bacilo subtilis var. amiloliquefaciens , bacillus thuringiensis subsp, endotoxinas en mató pseudomonas fluorescens muertas, bacillus thuringiensis var. aizawai (inserto del plásmido phpl2537), bacillus thuringiensis subsp. israelensis, bacillus thuringiensis subsp., kurstaki. delta-endotoxina kurstaki pseudomonas fluorescens muertas, bacillus thuringiensis subsp. kurstaki bacillus thuringiensis subsp. delta-endotoxina san diego Pseudomonas fluorescens muertas bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, bálsamo de abeto, bacteriófagos de Pseudomonas syringae pv. tomate, beauveria bassiana, aceite de bergamota, aceite de pimienta negra, burkholderia cepacia, oleophila candida aislar, cañóla, aceite de ricino, aceite de hierba gatera, aceite de madera de cedro, chenopodium ambrosioides, chenopodium quinoa, saponinas, quitina, quitosano, purpureum chondrostereum, purpureum chondrostereum cinamaldehido, dis-7 , 8-epoxi-metilotadecano, aceite de citronela, citronelol, colletotrichum gloeosporioides f.sp. aeschynomene, coniothyrium minitans, harina de gluten de maiz, orina de coyote, cuelure (4 - [p-acetoxifenil ] -2 - butanona) , cydia pomonella virus granulosis (GV) , ácido ciclohexanecarboxílico, citoquininas , ácido decanoico monoéster con 1, 2 - diol, monoéster de ácido decanoico con glicerol, sulfuros dialilo, monoéster de ácido dodecanoico con 1 ,2-diol, monoéster de ácido dodecanoico con fosfato dipotásico glicerol, polilla de las matas de hierba douglas, sangre seca y óxido de hierbas de manchadores (hierbas de cadenas puccinia thlaspeos) .

46.- La composición de biocontrol de conformidad con la reivindicación 43, caracterizada porque el ingrediente activo también incluye: etilo (2E, 4E 7s , ) -trimetil-2 , 4-dodecadienoato, etileno, eugenol aceite de eucalipto, monoésteres de ácidos grasos con glicerina o aceite de propanodiol, pescado, ácido fórmico, ácido gama aminobutirico (gaba) , geraniol, ácido giberélico, ácido giberélico, sal monopotásica , giberelinas A4 mezcladas con giberelinas al, gliocladio catenulatum, gliocladium virens g-21, monocaprato glicerol, glicerol monocaprilato, monolaurato de glicerol, tallos de tierra de sésamo, polilla gitana npv, proteínas harpin ab, proteínas harpin, helicoverpa zea npv (antes hehothis zea npv) , peróxido de hidrógeno, polilla india de la harina, granulovirus (plodia interpunctella gv) , indol, indol-3- ácido butírico, ionona, alfa, fosfato de hierro (fosfato férrico), isopropilo (2E, 4E) -llmetoxi-3 ,7,11-trimetil-2-4 dodecadienoato (metopreno) , isopropilo (2e, el 7 4e, ) -llmetoxi- 3 , 7 , ll-trimetil-2-4 dodecadienoato, aceite de jojoba, caolín, kihetin (n- ( 2-furanilmetil ) -l-h-purin-6-amina) .

47.- La composición de biocontrol de conformidad con la reivindicación 43, caracterizada porque el ingrediente activo también incluye: etilo (2E, 4E 7s , ) -trimetil-2 ,4-dodecadienoato, etileno, eugenol aceite de eucalipto, monoésteres de ácidos grasos con glicerina o aceite de propanodiol, pescado, ácido fórmico, ácido gama aminobuti ico (gaba) , geraniol, ácido giberélico, ácido giberélico, sal monopotásica, giberelinas A4 mezcladas con giberelinas a7, gliocladio catenulatum, gliocladium virens g-21, monocaprato glicerol, glicerol monocaprilato, monolaurato de glicerol, tallos de tierra de sésamo, polilla gitana npv, proteínas harpin ab, proteínas harpin, helicoverpa zea npv (antes hehothis zea npv) , peróxido de hidrógeno, polilla india de la harina, granulovirus (plodia interpunctella gv) , indol, indol-3- ácido butírico, ionona, alfa, fosfato de hierro (fosfato férrico), isopropilo (2E, 4E) -llmetoxi-3 ,7,11-trimetil-2-4 dodecadienoato (metopreno) , isopropilo (2e, el 7 4e, ) -llmetoxi- 3, 7, ll-trimetil-2-4 dodecadienoato, aceite de jojoba, caolín, kihetin (n- ( 2-furanilmetil ) -l-h-purin-6-amina) .

48.- La composición de biocontrol de conformidad con la reivindicación 43, caracterizada porque dicho ingrediente activo también incluye: ácido L-glutámico, lagenidium giganteum, alcohol de laurilo, aceite de lavandina, aceite de hierba de limón, linalol, lisofosfatidiletanolamina (ipe) , mamestra configurata npv, lactona de arce, harina de carne, metarhizium anisopliae esfl, metarhizium anisopliae, metopreno, antranilato de metilo, metil eugenol (me) , metilciclopropeno (MCP) , salicilato de metilo, aceite de menta, cry modificado de 3a maíz bt, mono y di-sales de potasio del ácido fosfórico, muscodor albus qst . , aceite de mostaza, alcohol mirístico, myrothecium verrucaria, sólidos solubles secos de fermentación y aceite de neem, nitrógeno líquido clarificado hidrofóbico, nosema locustae, ?ß-benciladenina, monoéster con ácido octanoico 1 ,2-diol, monoéster de ácido octanoico con glicerol, octenol, aceite de naranja, oxipurinol.

49.- La composición de biocontrol de conformidad con la reivindicación 43, caracterizada porque dicho ingrediente activo también incluye: p-mentan-3 ,8-diol, pantoea agglomerans, pantoea agglomerans, paecilomyces fumosoroseus , paecilomyces lilacinus, ácido pelargónico, ácido fosfórico y es de amonio, sodio y sales de potasio, phytophthora pajmivora, piperina, extractos de plantas, aceites vegetales, sal de zinc polioxina d, bicarbonato de potasio, fosfato dihidrógeno, silicato de potasio, virus enrollamiento de la hoja de papa (plrv) proteina de replicasa producida en plantas de patata, propilenglicol monocaprato, propilenglicol monocaprilato, propileno monolaurato, pseudomonas chlororaphis, pseudomonas aureofaciens, pseudomonas fluorescens, pseudomonas syringae, pseudomonas syringae pv, tomate, pseudozyma flocculosa, cepa pastel de puccinia thlaspeos (óxido de pastel tintorero) , sólidos putrefactos de huevo entero, pythium oligandrum, pimiento rojo, reynoutria sachalinensis , ramnolipidos biosurfactantes .

50.- La composición de biocontrol de conformidad con la reivindicación 43, caracterizada porque dicho ingrediente activo también incluye: s-hidropreno, s-kinopreno, s-metopreno, saponinas de chenopodium quinoa, tallos de sésamo, nitrato de plata, sodio al 5-nitroguaiacolato, bicarbonato de sodio, carbonato de sodio peroxihidratado, sulfato de laurilo de sodio, sodio o-nitrofenolato de sodio, p-nitrofenolato, octanoato de sorbitol, aceite de soja, ésteres de sacarosa octanoato, spodoptera exigua, streptomyces griseoviridis , streptomyces lydicus, tomillo (hierba), timol ( 5-metil-2-isopropil-l-fenol) , trichoderrna harzianum, trichoderma polysporum, tripsina factor de modulación de ostático, verbenona, verticillium aislado, xantina, xanthomonas campestris pv. vesicatoria, extracto de levadura hidrolizado, mosaico amarillo del calabacín virus- cepa débil pv cepa vesicatoria .

51.- Un método para obtener la composición de biopesticida / formulación de biopesticida novedosa desde las partes de la planta que pertenecen a un grupo incluyendo especies de Eucalyptus, dicho método comprende los siguientes pasos : (a) aislar un extracto crudo de partes de planta; (b) refinar dicho extracto crudo obtenido del Paso (a) ; (c) caracterizar dicho extracto refinado del Paso (b) / y (d) realizar la elucidación de dicho extracto caracterizado del Paso (c) .