MX2011010154A - Derivados de indol triciclico como ligandos pbr. - Google Patents

Abstract

En la presente invención se proporciona un agente de generación de imagen in vivo a base de indol que enlaza con alta afinidad a PBR, tiene buena captación en el cerebro después de la administración, y tiene un buen enlace selectivo a PBR. La presente invención también incluye un compuesto precursor útil en la síntesis de un agente de generación de imagen in vivo de la presente invención, así como un método para la síntesis del agente de generación de imagen in vivo, en donde el método comprende el uso del compuesto precursor, y un equipo para llevar a cabo el método. También se proporciona un cartucho para la síntesis automática del agente de generación de imagen in vivo. Los aspectos adicionales de la presente invención incluyen una composición radiofarmacéutica que comprende el agente de generación de imagen in vivo de la presente invención, y métodos para el uso de dicho agente de generación de imagen in vivo.

Description

DERIVADOS DE INDOL TRICÍCLICO COMO LIGAN DOS PBR Campo de la Invención La presente invención se refiere a la generación de imagen in vivo y en particular a la generación de imagen in vivo del receptor de benzodiazepina periférico (PBR). Se proporciona un agente de generación de imagen in vivo a base de indol que enlaza con alta afinidad a PBR, tiene buena captación en el cerebro después de la administración, y tiene buen enlace selectivo a PBR. La presente invención también proporciona un compuesto precursor útil en la síntesis del agente de generación de imagen in vivo de la presente invención, así como un método para la síntesis del compuesto precursor. Otros aspectos de la presente invención incluyen un método para la síntesis del agente de generación de imagen in vivo de la presente invención, en donde el método comprende el uso de un compuesto precursor de la presente invención, un equipo para llevar a cabo un método, y un cartucho para llevar a cabo una versión automatizada del método. Además, la presente invención proporciona una composición radiofarmacéutica que comprende el agente de generación de imagen in vivo de la presente invención, así como métodos para el uso del agente de generación de imagen in vivo.

Antecedentes de la Invención El receptor de benzodiazepina periférica (PBR) es conocido por estar localizado principalmente en los tejidos periféricos y células gliales, aunque su función fisiológica permanece sin estar aclarada. En forma subcelular, PBR se conoce por localizarse en la membrana mitocondrial externa, lo que indica un desempeño potencial en la modulación dé la función mitocondrial en el sistema inmune. Además se ha postulado que PBR está implicado en la proliferación celular, esteroidogeinosis, flujo de calcio y respiración celular.

La expresión PBR anormal ha estado asociada con estados de enfermedad inflamatorios del sistema nervioso central (CNS), que incluyen esclerosis múltiple (Banati y asociados 2001 Neuroreport; 12(16): 3439-42; Debruyne y asociados 2002 Acta Neurol Belg; 102(3): 127-35), encefalitis de Rasmeussen (Banati y asociados 1999 Neurology; 53(9): 2199-203) vasculitis cerebral (Goerres y asociados 2001 Am J Roentgenol; 176(4): 1016-8), encefalitis por herpes (Cagnin y asociados 2001 Brain; 124(Pt 10): 2014-27), y demencia asociada con AIDS (Hammoud y asociados 2005 J Neurovirol; 11(4): 346-55).

Asimismo, en el CNS, se ha documentado un enlace con PBR en enfermedades degenerativas tales como enfermedad de Parkinson (Gerhard y asociados 2006 Neurobiol Dis; 21(2): 404-12; Ouchi y asociados 2005 Ann Neurol, 57(2): 161-2), degeneración corticobasal (Gerhard y asociados 2004 Mov Disord; 19(10): 1221-6), parálisis supranuclear progresiva (Gerhard y asociados 2006 Neurobiol Dis; 21(2): 404-12), atrofia de sistema múltiple (Gerhard y asociados 2003 Neurology; 61(5): 686-9), enfermedad de Huntington (Pavese y asociados 2006 Neurology; 66(11 ): 1638-43; Tai y asociados 2007 Brain Res Bu 11 ; 72(2-3): 148-51), esclerosis lateral amiotrófica (Turner y asociados 2004 Neurobiol Dis; 15(3): 601-9), y enfermedad de Alzheimer (Cagnin y asociados 2001 Lancet; 358(9283): 766; Yasuno y asociados 2008 Biol Psychiatry; 64(10): 835-41 ).

Una cantidad de condiciones isquémicas CNS han mostrado estar relacionadas con la expresión PBR anormal, incluyendo: ataque isquémico (Gerhard y asociados 2005 Neuroimage; 24(2): 591-5), lesión de nervios periféricos (Banati y asociados 2001 Neuroreport; 12(16):3439-42), epilepsia (Sauvageau 2002 Metab Brain Dis; 17(1): 3-11, Kumar y asociados 2008 Pediatr Neurol; 38(6)). PBR ha sido postulado como un biomarcador para determinar el grado de daño en lesión cerebral traumática (Toyama y asociados 2008 Ann Nucí Med; 22(5): 417-24), con un incremento en expresión PBR reportada en un modelo animal de lesión cerebral traumática (Venneti y asociados 2007 Exp Neurol; 207(1 ): 118-27). En forma interesante, la tensión aguda ha estado correlacionada con un incremento en la expresión PBR en el cerebro, en donde la tensión crónica ha estado correlacionada con una desactivación de PBR (Lehmann y asociados 1999 Brain Res; 851 (1-2): 141-7). El perfilado de los bordes de glioma ha sido reportado como posible utilizando [ 1C]PK11195 para generar la imagen de PBR (Junck y asociados 1989 Ann Neurol; 26(6): 752-8). PBR también ha estado asociado con dolor neuropático, habiendo observado Tsuda y asociados microglia activada en sujetos con dolor neuropático (2005 TINS 28(2) pp101-7).

En la periferia, la expresión de PBR ha estado enlazada con inflamación pulmonar (Branley y asociados 2008 Nucí. Med. Biol; 35(8): 901-9), enfermedad pulmonar obstructiva crónica y asma (Jones y asociados 2003 Eur Respir J; 21(4): 567-73), enfermedad inflamatoria del intestino (Ostuni y asociados Inflamm Bowel Dis; 2010 online publication), artritis reumatoide (van der Laken y asociados 2008 Arthritis Rheum; 58(11): 3350-5), fibromialgia primaria (Faggioli y asociados 2004 Rheumatology; 43(10): 1224-1225), lesión de nervios (Durrenberger y asociados 2004 J Peripher Nerv Syst; 9(1): 15-25), ateroesclerosis (Fujimura y asociados 2008 Atherosclerosis; 201(1): 108-111 ), cáncer de colon, próstata y seno (Deane y asociados 2007 Mol Cáncer Res; 5(4): 341-9; Miettinen y asociados 1995 Cáncer Res; 55(12): 2691-5; Han y asociados 2003 J Recept Signal Transduct Res; 23(2-3): 225-38), inflamación de riñon (Tam y asociados 1999 Nephrol Dial Transplant; 14(7): 1658-66; Cook y asociados 1999 Kidney Int; 55(4): 1319-26), y lesión por reperfusión-isquemia (Zhang y asociados 2006 J Am Coll Surg; 203(3): 353-64).

La generación de imagen de tomografía de emisión de positrones (PET) que utiliza el ligando selectivo PBR, (R)-[11C]PK11195, proporciona un indicador genérico de una inflamación del sistema nervioso central (CNS). Sin embargo, (R)-[ 1C]PK11195 es conocido por tener un enlace de proteína de alto nivel, y con baja especificidad para un enlace no específico. Además, el desempeño de sus metabolitos radioetiquetados no es conocido, y la cuantif icación del enlace requiere modelado complejo.

Los compuestos de indol tricíclico son conocidos en la técnica. Davies y asociados (J. Med. Chem. 1998; 41(4): 451-67) enseñan una clase de compuestos de indol tricíclico y los caracterizan como agonistas y antagonistas de melatonina. Napper y asociados (J. Med. Chem. 2005; 48: 8045-54) enseña y describe la relación de actividad-estructura para una clase de compuestos de indol tricíclico dentro del contexto de la inhibición selectiva de la enzima SIRT1, un miembro de la familia de enzimas que elimina los grupos acetilo de los residuos de lisina en histonas y otras proteínas. Otra clase de compuestos de indol tricíclico se describen en la Patente Norteamericana No. US 6451795, y se describen como útiles en el tratamiento de estados de enfermedad relacionados con PBR. US 6451795 describe valores IC50 para la mayoría de los compuestos activos de entre 0.2nM y 5.0nM, y manifiesta que los compuestos son útiles para la prevención o tratamiento de neuropatías periféricas y para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas centrales.

Okubu y asociados (Bioorganic & Medicinal Chemistry 2004 12 3569-80) describe el diseño, la síntesis y estructura de un grupo de compuestos de indol tetracíclico, así como su afinidad para PBR (valores de IC50 tan bajos como aproximadamente 0.4nM). La Publicación Internacional WO 2007/057705, asignada al solicitante de la presente invención, describe derivados de indol tetracíclicos etiquetados con un rango de porciones de generación de imagen in vivo. Las porciones de generación de imagen in vivo preferidas descritas en la Publicación Internacional WO 2007/057705, son aquellas que son adecuadas para generación de imagen con tomografía de emisión de positrón (PET) o tomografía de emisión de fotón simple (SPECT), más preferentemente PET.

Además, la solicitud de patente PCT/EP2009/062827 también pendiente, describe agentes de generación de imagen in vivo derivados de indol tetracíclico similares a los de la Publicación Internacional WO 2007/057705.

Los derivados de indol tetracíclico descritos en WO 2007/057705 y en la Solicitud de Patente PCT/EP2009/062827 también pendiente, tienen buena afinidad para el receptor PBR, y una alta proporción de radioactividad en el cerebro a los 60 minutos posteriores a la inyección que representa el agente de generación de imagen in vivo de origen. Aunque estos derivados de indol tetracíclico también logran una concentración inicial razonable en el cerebro en estudios de biodistribución, la captación es aún relativamente baja y puede ser mejorada. Los inventores de la presente invención también han descubierto que la retención relativa del bulbo olfativo (la región del cerebro que tiene la concentración más alta de receptor PBR) de los derivados de indol tetracíclico de la técnica anterior, no es tan alta como es deseable para la generación de imagen in vivo. Por consiguiente existe un amplio alcance para un agente de generación de imagen in vivo PBR que retiene las propiedades convenientes de los agentes de generación de imagen in vivo de indol tetracíclico de la técnica anterior descritos anteriormente, pero tiene captación en el cerebro mejorada y enlace específico mejorado para el receptor PBR.

Breve Descripción de la Invención La presente invención proporciona un compuesto de indol tricíclico novedoso adecuado para utilizarse como un agente de generación de imagen in vivo. La presente invención también proporciona un compuesto precursor útil en la síntesis del agente de generación de imagen in vivo de la presente invención, así como un método para síntesis del compuesto precursor. También se proporciona un método para la preparación del agente de generación de imagen in vivo que comprende el uso del compuesto precursor de la presente invención. Una composición farmacéutica que comprende el agente de generación de imagen in vivo de la presente invención se proporciona adicionalmente, además de un equipo adecuado para la fácil preparación de la composición farmacéutica. En un aspecto adicional, se proporciona el uso del agente de generación de imagen in vivo para la generación de imagen in vivo de una condición asociada con la expresión PBR anormal. El agente de generación de imagen in vivo dé la presente invención, retiene las propiedades convenientes de los agentes de generación de imagen in vivo tetracíclicos conocidos, junto con la captación de cerebro mejorada y especificidad para el receptor de benzodiazepina periférico.

Descripción Detallada de la Invención Agente de Generación de Imagen En un aspecto, la presente invención proporciona un agente de generación de imagen in vivo de la fórmula I: en donde: R1 es C1-3 alquilo o Ci-3 fluoroalquilo; R2 es hidrógeno, hidroxilo, halo, ciano, C1-3 alquilo, Ci-3 alcoxi, Ci-3 fluoroalquilo, o Ci-3 fluoroalcoxi; R3 y R4 son independientemente d-3 alquilo, C7-i0 aralquilo, o R3 y R4, junto con el nitrógeno al cual se adhieren, forman un anillo C4-6 alifático que contiene nitrógeno, que comprende opcionalmente 1 heteroátomo adicional seleccionado de nitrógeno, oxígeno y azufre; Y1 es O, S, SO, S02 o CH2; y, Y2 es CH2, CH2-CH2, CH(CH3)-CH2 o CH2-CH2-CH2; y en donde la fórmula I tal como se define, comprende un átomo el cual es radioisótopo adecuado para generación de imagen in vivo.

Un "agente de generación de imagen in vivo" dentro del contexto de la presente invención, es un compuesto radioetiquetado adecuado para la generación de imagen in vivo. El término "generación de imagen in vivo" tal como se utiliza en la presente invención se refiere a las técnicas que producen imágenes en forma no invasiva de todo, o parte del aspecto interno de un sujeto.

A menos que se especifique de otra manera, el término "alquilo" solo o en combinación, significa un radical alquilo de cadena recta o cadena ramificada que contiene preferentemente de 1 a 3 átomos de carbono. Los ejemplos de dichos radicales incluyen metilo, etilo y propilo.

A menos que se especifique de otra manera, el término "alcoxi" significa un radical alquilo tal como se definió anteriormente, que comprende una ligadura de éter, y el término "ligadura de éter" se refiere al grupo -C-O-C-. Los ejemplos de radicales de éter alquilo adecuados incluyen, metoxi, etoxi y propoxi .

El término "halógeno" o "halo-" significa un sustituyente seleccionado de fluoro, cloro, bromo o yodo. "Haloalquilo" y "haloalcoxi" son grupos alquilo y alcoxi, respectivamente, tal como se define anteriormente sustituido con uno o más halógenos. En forma adecuada en el caso de sustituyentes de haloalquilo o haloalcoxi, el halógeno reemplaza un hidrógeno en el extremo terminal del radical, es decir, -alquileno-halógeno o -alcoxileno-halógeno. El término "alquileno" se refiere a un grupo bivalente -(CH2)n-, en donde n es 1 a 3, y el término "alcoxileno" se refiere a un grupo alquileno que comprende una ligadura de éter, en donde una ligadura de éter es tal como se definió anteriormente.

El término "ciano" se refiere al grupo -CN.

El término "hidroxilo" se refiere al grupo -OH.

El término "aralquilo" se refiere al grupo de -alquileno-fenilo en donde el alquileno es tal como se definió anteriormente.

Un "anillo C -e alifático que contiene nitrógeno" es un anillo C4-6 alquilo saturado que comprende un heteroátomo de nitrógeno. Los ejemplos incluyen anillos de pirrolídinilo, piperidinilo y morfolinilo.

El término "comprende un átomo que es un radioisótopo adecuado para generación de imágenes in vivo" significa qué en la fórmula I tal como se define anteriormente, la forma isotópica de uno de los átomos es un radioisótopo adecuado para generación de imagen in vivo. Con el objeto de ser adecuado para generación de imagen in vivo, el radioisótopo es detectado en forma externa después de la administración al sujeto.

Si está presente un centro quirálico u otra forma de centro isomérico en un agente de generación de imagen in vivo de acuerdo con la presente invención, todas las formas de dicho isómero, incluyendo enantiómeros y diastereómeros están comprendidos en la presente invención. Los agentes de generación de imagen in vivo de la presente invención que contienen un centro quirálico, se pueden utilizar como una mezcla racémica o como una mezcla enriquecida en forma enantiomérica, o la mezcla racémica puede ser separada utilizando técnicas bien conocidas y se puede utilizar sólo un enantiómero individual.

Agentes de Generación de Imagen Preferidos R1 es preferentemente metilo o C2-3 fluoroalquilo, y lo más preferentemente -etileno-F (por ejemplo -CH2-CH2-F).

R2 es preferentemente hidrógeno, halo, C1-3 alcoxi o Ci-3 f luoroalcoxi . R2 es lo más preferentemente hidrógeno, halo o C-i. 3 alcoxi, y más especialmente es preferentemente hidrógeno, fluoro o metoxi. Cuando R2 es un sustituyente, está preferentemente en la posición 5 ó 6, y es seleccionado más preferentemente de 5-metox¡, 6-metoxi, 5-fluoro y 6-fluoro.

R3 y R4 son preferentemente independientemente metilo, etilo o bencilo, y lo más preferentemente ambos etilo.

Como alternativa preferentemente, R3 y R4, junto con el nitrógeno al cual se adhieren, forman un anillo alifático Cs-6 que contiene nitrógeno.

Y1 es preferentemente CH2.

Para los agentes de generación de imagen in vivo más preferidos de la presente invención, Y2 es CH2-CH2.

Un agente de generación de imagen in vivo preferido de la presente invención es adecuado para generación de imágenes utilizando tomografía computarizada mediante emisión de fotón simple (SPECT) o tomografía de emisión de positrón (PET). Para SPECT, un radioisótopo adecuado es un halógeno radiactivo de emisión gamma. Los ejemplos de halógenos radiactivos de emisión gamma adecuados para utilizarse en la presente invención son 123l, 131l y 77Br. El halógeno radiactivo de emisión gamma preferido es 123l. Cuando el radioisótopo del agente de generación de imagen in vivo es 123l, se prefiere que R2 sea 23l. Para PET, un radioisótopo adecuado es un no metal radiactivo de emisión de positrón. Los ejemplos de un no metal radiactivo de emisión de positrón adecuados para utilizarse en la presente invención son C, 18F y 124l. Los no metales radiactivos de emisión de positrón preferidos son 11C y 18F. En el caso de 1C, se prefiere que R1, sea 11C metilo. Cuando el radioisótopo es 18F, se prefiere que R sea C2-3 [18-F]fluoroalquilo, más preferentemente -etileno-18F.

Se prefiere que el agente de generación de imagen in vivo de la presente invención sea adecuado para generación de imagen PET, y 18F es un radioisótopo preferido adecuado para generación de imagen PET. La presencia de PET en el método de la presente invención, se debe a su excelente sensibilidad y resolución, de modo que incluso se pueden observar con el tiempo cambios relativamente pequeños en una lesión. Los escáneres PET miden en forma rutinaria concentraciones de radioactividad en el rango picomolar. Los escáneres Micro-PET alcanzan ahora una resolución espacial de aproximadamente 1 mm, y los escáneres clínicos de aproximadamente 4 a 5 mm.

Un agente de generación de imagen in vivo preferido de la fórmula I es fórmula la: (la) en donde: R2a es hidrógeno, halo o d-3 alcoxi; R3a y R4a son independientemente metilo, etilo o bencilo, o junto con el nitrógeno al cual se adhieren forman un anillo de pirrolidinilo, piperidinilo, azepanilo o morfolinilo; Y2a es CH2, CH2-CH2, CH(CH3)-CH2l o CH2-CH2-CH2; y; n es 1 , 2 ó 3.

En la fórmula la, R3a y R4a son preferentemente ambos etilo, o R3a es metilo y R a es bencilo, o junto con el nitrógeno al cual se adhieren forman un anillo de azepanilo.

R2a es preferentemente hidrógeno, metoxi o fluoro.

Y2a es preferentemente CH2-CH2 o CH(CH3)-CH2. n es preferentemente 2.

En un agente de generación de imagen in vivo preferido de la fórmula la: R3a y R a ambos son etilo, o R3a es metilo y R4a es bencilo, o junto con el nitrógeno al cual se adhieren forman un azepanilo; R2a es hidrógeno, metoxi o fluoro; Y a es CH2-CH2 o CH(CH3)-CH2; y, n es 2.

Los ejemplos no limitantes de agentes de generación de imagen in vivo de la fórmula I son como se indican a continuación: <> ^ 10 11 De los agentes de generación de imagen /'n v/Vo del 1 al 11 anteriores, los agentes de generación de imagen in vivo 5, 6, 7, 9, 10 y 11 son los preferidos, los agentes de generación de imagen in vivo 5 y 10 son los más preferidos, y el agente de generación de imagen in vivo 5 es especialmente preferido. Para cualquier agente de generación de imagen in vivo de la presente invención, se prefiere particularmente la forma enantioméricamente pura.

Compuesto Precursor En otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto precursor para la preparación de un agente de generación de imagen in vivo de la presente invención, en donde el compuesto precursor es de la fórmula II: en donde R 1 y R12 comprende un grupo químico que reacciona con una fuente adecuada del radioisótopo tal como se definió anteriormente para el agente de generación de imagen in vivo de la presente invención, de modo que un agente de generación de imagen in vivo de la presente invención es formado al momento de la reacción del compuesto precursor con la fuente adecuada del radioisótopo, y el otro R 1 y R12 es tal como se define en la presente invención para R1 y R2, respectivamente, y comprende opcionalmente un grupo de protección; y pi3-i4 ? ?-?-12 son tg| como se define en la presente invención para R3"4 y Y1"2, respectivamente, y opcionalmente cada uno comprende en forma adicional un grupo de protección.

Un "compuesto precursor" comprende un derivado no radiactivo en un compuesto radioetiquetado, diseñado de modo que la reacción química con una forma química conveniente de la etiqueta detectable ocurra en forma específica en el sitio; se puede llevar a cabo en el número mínimo de pasos (idealmente un paso simple); y sin la necesidad de purificación significativa (idealmente sin purificación adicional), para proporcionar el agente de generación de imagen in vivo deseado. Dichos compuestos precursores son sintéticos y pueden ser obtenidos convenientemente con una buena pureza química.

Por el término "grupo de protección" se entiende un grupo que inhibe o suprime reacciones químicas indeseables, pero que está diseñado para ser lo suficientemente reactivo de modo que pueda ser disociado del grupo funcional en cuestión, para obtener el producto deseado bajo condiciones lo suficientemente leves de modo que no se modifique el resto de la molécula. Los grupos de protección son bien conocidos para los expertos en la técnica y se describen en la Publicación de "Grupos Protectores en Síntesis Orgánica", Theorodora W., Greene y Peter G. M. Wuts, (Tercera Edición, John Wiley & Sons, 1999).

El término "una fuente adecuada de un radioisótopo" significa que el radioisótopo en una forma química es reactivo con un sustituyente del compuesto precursor, de modo que el radioisótopo queda covalentemente adherido al compuesto precursor. Para cada radiosótopo particular presentado en la siguiente sección, se describen una o más fuentes adecuadas del radioisótopo. Los expertos en la técnica de los agentes de generación de imagen in vivo estarán familiarizados con éstas y otras fuentes de radioisótopos, que son adecuadas para la aplicación en la presente invención. esquema 1 que se encuentra a continuación esquema de reacción genérico que muestra como obtener compuestos que por sí mismos pueden ser utilizados como compuestos precursores, o pueden convertirse en compuestos precursores con un número similar de pasos adicionales. R11"14 y Y11 12 del Esquema 1 son tal como se define anteriormente para la fórmula 11.

Como alternativa, cuando R12 del compuesto precursor está en la posición superior en el anillo, la ruta sintética general ilustrada en el esquema la que se encuentra a continuación podrá ser utilizada: Trietilamina Diclorometano a En el Esquema 1a anterior, -R11a-PG representa un grupo R11 protegido en donde R11 es tal como se define de manera adecuada y preferente en la presente invención. Cuando R11 es hidroxi -R 1a-PG, por ejemplo puede ser -O-bencilo. R 2-1 y Y11" 12 se proporcionan en forma adecuada y preferente para la fórmula II anterior, siempre que R12 no sea cloro, En esta ruta sintética, el cloro en la posición inferior del anillo fuerza que tenga lugar el reciclado sólo en una forma, de modo que se produce únicamente un isómero. Se describe un método similar en la Publicación Internacional WO 2003/014082. Sin embargo, cuando los inventores de la presente invención aplicaron las enseñanzas de la Publicación Internacional WO 2003/014082 para obtener compuestos precursores de la presente invención, el rendimiento fue bajo (ver Ejemplo 2(d)). Este problema se superó cambiando el sistema de solvente utilizado para el paso de reciclado. En la Publicación Internacional WO 2003/014082, el paso de reciclado se lleva a cabo en tolueno, en tanto que los inventores de la presente invención descubrieron que se obtuvieron rendimientos óptimos cuando se utilizó éter dietílico en lugar de tolueno. El producto del paso de reciclado se disuelve en éter dietílico, mientras que el compuesto de partida no reciclado no se disuelve. El compuesto de partida no reciclado permanece por consiguiente con el ZnCI2 en la parte inferior del envase de reacción, y el producto reciclado se mueve en éter dietílico en la parte superior del envase de reacción .

Por consiguiente en un aspecto separado, la presente invención proporciona un método para la preparación de un compuesto precursor de la fórmula llb: en donde: R11b es tal como se describe en el Esquema la para R1 a; Ri2b-i4b son tg| como se def¡ne para R12" 4 de la fórmula II, siempre que R12b no sea cloro; y Ynb-i2b es ta) como se define para ?11-12 de la fórmula II; en donde el método comprende reacción con ZnCI2 de un compuesto de la fórmula Me: en donde R12c, Y1 c y Y 2c son tal como se definen de manera adecuada y preferente en la presente invención para R12 ??? y ??2 respectivamente, y PGC es un grupo protección ; para formar un compuesto de la fórmula lid: en donde R12d, Y1 d y PGd son tal como se define para Ri2c ???? y pGc reSpectivamente; en donde la reacción se lleva a cabo en un sistema solvente que comprende éter dietílico.

Preferentemente, el grupo de protección PGC, PGd es -bencilo. El compuesto precursor de la llb representa un compuesto precursor preferido de la fórmula II.

Cuando el radioisótopo en el agente de generación de imagen in vivo es 18F, el etiquetado con 18F se puede lograr mediante desplazamiento nucleofílico de un grupo de partida desde un compuesto precursor.

Los grupos de partida adecuados incluyen Cl, Br, I, tosilato (OTs), mesilato (OMs) y triflato (OTf). Otra estrategia puede ser tener un grupo de partida adecuado colocado en un grupo alquilamida presente en el compuesto precursor. En ambos casos, el compuesto precursor puede ser etiquetado en un paso mediante reacción con una fuente adecuada de un ión de [18F]-fluoruro (18F"), el cual se obtiene normalmente como una solución acuosa de la reacción nuclear 180(p,n)18F y se hace reactivo mediante la adición de un contraión catiónico y la eliminación de agua subsecuente. 18F también se puede introducir mediante O-alquilación de los grupos hidroxilo en el compuesto precursor con 18F(CH2)3-LG, en donde LG representa un grupo de partida tal como se definió anteriormente. Como alternativa, el átomo de radiofluoro puede unirse a través de un enlace covalente directo a un anillo aromático tal como un anillo de benceno. Para sistemas arilo, el desplazamiento nucleofílico de 8F-fluoruro de una sal de diazonio de arilo, el compuesto nitro de arilo o la sal de amonio cuaternario de arilo son rutas adecuadas para los derivados de a r i I - 18 F .

Ya sea el Esquema 1 o el esquema 1a anterior, pueden continuar hasta llegar a los compuestos precursores adecuados para obtener agentes de generación de imagen in vivo 18F de la presente invención, tal como se ilustra en el Esquema 2 que se encuentra a continuación: Los compuestos de partida y los intermediarios están comercialmente disponibles o son conocidos por documentos científicos publicados por ejemplo Napper y asociados J Med Chem 2005; 48: 8045-54; Davies y asociados J Med Chem 1998; 41: 451-467.

Un compuesto precursor preferido de la fórmula II para obtener un agente generación de imagen in vivo que comprende 8F, R1 es C alquileno-LG, en donde LG representa un grupo de partida. Uno de los compuestos precursores más preferido es de la fórmula lia: en donde: LG se selecciona de mesilato, tosilato y triflato; y Ri 2a-i4a yi 2a y m SQn ta] como se define de manera adecuada y preferible anteriormente para R2a"4a, Y2a y n, respectivamente de la fórmula la.

Los ejemplos no limitantes de los compuestos precursores preferidos de la fórmula lia son tal como se indica a continuación: De los compuestos precursores 1 al 11 anteriores, se prefieren los compuestos precursores 5, 6, 7, 9, 10 y 11, los compuestos precursores 5 y 10 son los más preferidos, y el compuesto precursor 5 es el especialmente preferido.

Los compuestos de residuo PET etiquetado-11C pueden ser sintetizados haciendo reaccionar un compuesto precursor con yoduro de metilo 11C. Ya que la vida media de 11C es únicamente de 20.4 minutos, es importante que el intermediario de yoduro de metilo 1 C, tenga una actividad específica de alto nivel, y en consecuencia, se produzca utilizando un proceso de reacción que sea lo más rápido posible. Se puede encontrar una revisión profunda de dichas técnicas de etiquetado 1C en la Publicación de Antoni y asociados "Aspectos de la Síntesis de Compuestos Etiquetados 1C" en el Manual de Radiofarmacéuticos, Ed. MJ. Welch y CS. Redvanly (2003, John Wiley y Sons).

Los agentes de generación de imagen in vivo etiquetados- 11C de la presente invención se pueden obtener mediante la continuación del esquema 1 anterior tal como se ilustra en el Esquema 3 que se encuentra a continuación: Cuando la porción de generación de imagen es radioyodo, los compuestos precursores preferidos son aquellos que comprenden un derivado, el cual pase por yodinado electrofílico. Los ejemplos de éstos son derivados organometálicos tales como trialquilestanano (por ejemplo, trimetilestanilo o tri buti lesta n i lo ), o un trialquilsilano (por ejemplo, trimetilsililo) o un compuesto de organoboro (por ejemplo, ésteres de boronato u organotrifluoroboratos).

Para radioyodinado electrofílico, el compuesto precursor comprende preferentemente: un compuesto precursor organometálico activado (por ejemplo, un compuesto de trialquilestaño, trialquisililo u organoboro). Los compuestos precursores y métodos para introducir radioyodo en moléculas orgánicas se describen en la Publicación de Bolton (J. Lab. Comp. Radiopharm. 2002; 45: 485-528). Los compuestos de organoboro de éster de boronato adecuados y su preparación son descritos por Kabalaka y asociados (Nucí. Med. Biol, 2002; 29: 841-843 y 2003; 30: 369-373). Los organotrifluoroboratos adecuados y su preparación se describen en la Publicación de Kabalaka y asociados (Nucí. Med. Biol., 2004; 31; 935-938). Los compuestos precursores preferidos para radioyodinado comprenden un compuesto precursor organometálico, más preferentemente un trialquilestaño.

Los agentes de generación de imagen in vivo etiquetados con radioyodo de la presente invención se pueden obtener continuando con el Esquema 1 anterior, tal como se ilustra en el esquema 4 que se encuentra a continuación: El radiobrominado se puede lograr a través de métodos similares a los descritos anteriormente para el radioyodinado. Kabalka y Varma han revisado diversos métodos para la síntesis de compuestos radiohalogenados, incluyendo compuestos radiobrominados (Tetrahedron 1989; 45(21): 6601-21).

El compuesto precursor de la presente invención se proporciona idealmente en una forma apirogénica, estéril. El compuesto precursor por consiguiente puede ser utilizado para la preparación de una composición farmacéutica que comprende el agente de generación de imagen in vivo con un transportador biocompatible adecuado para administración a mamíferos. El compuesto precursor también es adecuado para inclusión como un componente en un equipo o cartucho para la preparación de una composición farmacéutica. Estos aspectos se describen con mayor detalle más adelante.

En otra modalidad preferida, el compuesto precursor se enlaza a una fase sólida. El compuesto precursor es suministrado preferentemente adherido en forma covalente a una matriz de soporte sólida. De esta forma, el producto deseado se forma en la solución, tanto que las cantidades de partida y las impurezas permanecen enlazados a la fase sólida. Como un ejemplo de dicho sistema, los compuestos precursores para el fluorinado electrofílico de fase sólida con 18F-fluoruro se describen en la Publicación Internacional WO 03/002489, y los compuestos precursores para el fluorinado nucleofílico de fase sólida con fluoruro-18F se describen en la Publicación Internacional WO 03/002157.

Método de Preparación En un cuarto aspecto, la presente invención proporciona un método para la preparación de un agente de generación de imagen in vivo de la presente invención, en donde el método comprende: (i) proporcionar un compuesto precursor de la presente invención; (ii) proporcionar una fuente adecuada del radioisótopo tal como se define en la presente invención; (iii) hacer reaccionar el compuesto precursor del paso (i) con el radioisótopo del paso (ii), para obtener el agente de generación de imagen in vivo de la presente invención.

En el paso (i), el compuesto precursor puede ser proporcionado en una solución en un equipo o en un cartucho adecuado para utilizarse con un aparato de síntesis automatizado, o adherirse en forma alternativa a un soporte sólido, tal como se describe anteriormente en la descripción del compuesto precursor. El equipo y el cartucho forman aspectos adicionales de la presente invención, y se describirán con mayor detalle más adelante.

El paso de "hacer reaccionar" el compuesto precursor con el radioisótopo implica poner los dos reactivos juntos bajo condiciones de reacción adecuadas para la formación del agente de generación de imagen in vivo deseado Con un rendimiento radioquímico (RCY) tan alto como sea posible.

Algunas rutas sintéticas particulares para obtener agentes de la presente invención, se presentan en la sección experimental que se encuentra más adelante.

Para el método de preparación de la presente invención, las modalidades adecuadas y preferidas del agente de generación de imagen in vivo, el compuesto precursor y el radioisótopo son tal como se proporcionan en la presente invención.

Equipo y cartucho En un aspecto aún adicional, la presente invención proporciona un equipo para la preparación de un agente de generación de imagen in vivo de la presente invención, en donde el equipo comprende un compuesto precursor de la presente invención, de modo que la reacción con una fuente estéril de un radioisótopo proporcione el agente de generación de imagen in vivo deseado con el número mínimo de manipulaciones. Dichas consideraciones son particularmente importantes cuando el radioisótopo tiene una vida media relativamente corta, y para la facilidad de manejo y por lo tanto la dosis de radiación reducida para el radiofarmacéutico. El compuesto precursor está presente preferentemente en el equipo en forma liofilizada, y el medio de reacción para reconstitución de dichos equipos es preferentemente un transportador biocompatible.

El "transportador biocompatible" es un fluido, especialmente un líquido, en el cual el agente de generación de imagen in vivo es suspendido o disuelto, de modo que la composición sea fisiológicamente tolerable, por ejemplo, se puede administrar al cuerpo del mamífero sin toxicidad o incomodidad indebida. El transportador biocompatible es en forma adecuada un líquido o transportador inyectable tal como agua estéril, libre de pirógeno para inyección; una solución acuosa tal como solución salina (la cual puede equilibrarse en forma conveniente de modo que el producto final para inyección sea isotónico o no hipotónico); una solución acuosa dé una o más sustancias que ajustan la tonicidad (por ejemplo, sales de cationes de plasma con contraiones biocompatible), azúcares (por ejemplo, glucosa o sacarosa), alcoholes de azúcar (por ejemplo, sorbitol o manitol), glicoles (por ejemplo, glicerol), u otros materiales de poliol no iónicos (por ejemplo polietilenglicoles, propilenglicoles y similares). El transportador biocompatible también pueden comprender solventes orgánicos biocompatibles tales como etanol. Dichos solventes orgánicos son útiles para solubilizar compuestos o formulaciones más lipofílicas. Preferentemente, el transportador biocompatible es agua libre de pirógenos para inyección, solución salina isotónica o una solución de etanol acuosa. El pH de transportador biocompatible para inyección intravenosa es en forma adecuada dentro del rango de 4.0 a 10.5.

En el equipo de la presente invención, el compuesto precursor se presenta preferentemente en un contenedor sellado que permite el mantenimiento de la integridad estéril y/o seguridad radioactiva, más, opcionalmente, un gas de espacio superior inerte (por ejemplo, nitrógeno o argón), permitiendo al mismo tiempo la adición y extracción de soluciones mediante jeringa. Un contenedor sellado preferido es un frasco sellado con septo, en donde el cierre a prueba de gas es alechugado con un sobresello (normalmente de aluminio). Dichos contenedores sellados tienen la ventaja adicional de que el cierre pueda soportar el vacío si se desea, por ejemplo, para cambiar el gas del espacio superior o las soluciones de extracción de gas.

Las modalidades preferidas del compuesto precursor cuando se emplean en el equipo son tal como se describieron anteriormente.

El compuesto precursor para utilizarse en el equipo puede ser empleado bajo condiciones de fabricación aséptica para proporcionar el material no pirogénico, estéril, deseado. El compuesto precursor puede ser empleado alternativamente bajo condiciones no estériles, seguido de esterilización terminal utilizando por ejemplo radiación-gamma, autoclave, calor seco o tratamiento químico (por ejemplo, con óxido de etileno). Preferentemente, el compuesto precursor se proporciona en una forma estéril, no pirogénica. Más preferentemente, el compuesto precursor no pirogénico, estéril se proporciona en el contenedor sellado tal como se describió anteriormente.

Preferentemente, todos los componentes del equipo son desechables para minimizar las posibilidades de contaminación entre corridas y para asegurar la esterilidad y asegurar la calidad.

Los radiotrazadores [ 8F] en particular con frecuencia son preparados actualmente de manera conveniente en un aparato de radiosíntesis automático. Existen varios ejemplos comercialmente disponibles de dicho aparato, incluyendo Tracerlab™ y Fastlab™ (GE Healthcare Ltd). Dichos aparatos comprenden comúnmente un "cartucho", con frecuencia desechable, en el cual la radioquímica se lleva a cabo, que se adapta al aparato con el objeto de llevar a cabo una radiosíntesis. El cartucho normalmente incluye trayectorias de fluido, un envase de reacción y puertas para recibir los frascos de reactivo, así como cualesquiera cartuchos de extracción de fase sólida utilizados en pasos de limpieza post-radiosintéticos. La presente invención proporciona por lo tanto en otro aspecto un cartucho para la síntesis automática de un agente de generación de imagen in vivo tal como se define en la presente invención, que comprende: (i) un envase que contiene un compuesto precursor tal como se define en la presente invención; y (ii) medios para eluir el envase con una fuente adecuada del radioisótopo adecuado para la generación de imagen in vivo tal como aquí se define.

Para el cartucho de la presente invención, las modalidades adecuadas y preferidas del compuesto precursor y la fuente adecuada del radioisótopo son tal como se definió anteriormente.

El cartucho puede comprender adicionalmente: (iii) un cartucho de intercambio de iones para eliminación de un radioisótopo en exceso; y opcionalmente. (iv) cuando el compuesto comprende uno o más grupos de protección, un cartucho para desprotección del producto radioetiquetado resultante forma un agente de generación de imagen in vivo tal como aquí se define.

Composición Radio farmacéutica En otro aspecto adicional, la presente invención proporciona una "composición radiofarmacéutica" que es una composición que comprende el agente de generación de imagen in vivo de la presente invención, junto con un transportador biocompatible en una forma adecuada para administración a mamíferos. El transportador biocompatible es tal como se define anteriormente en relación con el equipo de la presente invención. Para la composición radiofarmacéutica de la presente invención, las modalidades adecuadas y preferidas del agente de generación de imagen in vivo son tal como se define anteriormente en la especificación.

La composición radiofarmacéutica puede administrarse en forma parenteral, por ejemplo, mediante inyección, y es más preferentemente una solución acuosa. Dicha composición puede contener opcionalmente ingredientes adicionales tales como amortiguadores; solubilizadores farmacéuticamente aceptables (por ejemplo, ciclodextrinas o tensoactivos tales como Pluronic, Tween o fosfolípidos); estabilizadores o antioxidantes farmacéuticamente aceptables (tales como ácido ascórbico, ácido gentísico o ácido para-aminobenzoico). Cuando el agente de generación de imagen in vivo de la presente invención es proporcionado en la forma de una composición radiofarmacéutica, el método de preparación del agente de generación de imagen in vivo puede comprender además los pasos requeridos para obtener una composición radiofarmacéutica, por ejemplo, eliminación del solvente orgánico, la adición de un amortiguador biocompatible y cualesquiera ingredientes opcionales adicionales. Para administración parenteral, también se necesitan tomar pasos para asegurar que la composición radiofarmacéutica sea estéril y apirogénica.

Métodos de uso En un aspecto aún adicional, la presente invención proporciona un método de generación de imágenes in vivo para determinar la distribución y/o el grado de expresión PBR en un sujeto, en donde el método comprende: (i) administrar al sujeto un agente de generación de imagen in vivo de la presente invención; (ii) permitir que el agente de generación de imagen se enlace a PBR en el sujeto. (iii) detectar a través de un procedimiento de generación de imágenes in vivo, señales emitidas para el radioisótopo del agente de generación de imagen in vivo; (iv) generar una imagen representativa de la ubicación y/o cantidad de las señales; y (v) determinar la distribución y grado de expresión PBR en el sujeto, en donde la expresión está correlacionada directamente con las señales emitidas por el agente de generación de imagen in vivo.

Para el método de generación de imágenes in vivo de la presente invención, las modalidades adecuadas y preferidas del agente de generación de imagen in vivo son tal como se define anteriormente en la especificación.

La "administración" del agente de generación de imagen in vivo se lleva a cabo preferentemente en forma parenteral y lo más preferentemente en forma intravenosa.

La ruta intravenosa representa la forma más eficiente de suministrar el agente in vivo en el cuerpo del sujeto, y por consiguiente también a través de la barrera de sangre-cerebro (BBB) y en contacto con PBR expresado en el sistema nervioso central (CNS) del sujeto. Además, la administración intravenosa no representa una intervención física sustancial o un riesgo de salud sustancial. El agente in vivo de la presente invención se administra preferentemente como la composición farmacéutica de la misma, tal como aquí se define. El método de generación de imagen in vivo de la presente invención también se entiende como que comprende los pasos (ii) a (v) definidos anteriormente, llevados a cabo en un sujeto a quien se ha administrado previamente agente de generación de imagen in vivo de la presente invención.

Después del paso de administración y antes del paso de detección, el agente de generación de imagen in vivo se deja enlazar a PBR. Por ejemplo, cuando el sujeto es un mamífero intacto, el agente de generación de imagen in vivo se moverá en forma dinámica a través del cuerpo del mamífero, quedando en contacto con los diversos tejidos en el mismo. Una vez que el agente de generación de imagen in vivo queda en contacto con PBR, tiene lugar una interacción específica de modo que el despeje del agente de generación de imagen in vivo del tejido con PBR, tome más tiempo que del tejido sin, o con menos PBR. Se alcanzará un cierto punto en el tiempo cuando la detección del agente de generación de imagen in vivo enlazado específicamente a PBR sea permitida como un resultado de la proporción entre el agente de generación de imagen in vivo enlazado al tejido con PBR, versus el enlazado en el tejido sin, o con menos PBR. Una proporción ideal es de aproximadamente 2:1.

El paso "detección" del método de la presente invención, implicar detectar señales emitidas mediante el radioisótopo, por medio de un detector sensible a las señales. Este paso de detección también puede entenderse como la adquisición de los datos de señal. La tomografía de emisión de fotones simple (SPECT) y la tomografía de emisión de positrones (PET) son los procedimientos de generación de imagen in vivo más adecuados para utilizarse en el método de la presente invención. PET es un procedimiento de generación de imagen in vivo preferido para utilizarse en el método de la presente invención.

El paso de "generación" del método de la presente invención, se lleva a cabo a través de una computadora que aplica un algoritmo de reconstrucción a los datos de señal adquiridos para producir un conjunto de datos. Este conjunto de datos posteriormente es manipulado para generar imágenes que muestran la ubicación y/o cantidad de señales emitidas por el radioisótopo. Las señales emitidas se relacionan directamente con la expresión de PBR, de modo que se pueda llevar a cabo el paso de "determinación" evaluando la imagen generada.

El "sujeto" de la presente invención puede ser cualquier sujeto humano o animal. Preferentemente el sujeto de la presente invención es un mamífero. Más preferentemente, el sujeto es un cuerpo de mamífero intacto in vivo. En una modalidad especialmente preferida, el sujeto de la presente invención es un humano. El método de generación de imagen in vivo puede ser utilizado para estudiar PBR en sujetos saludables, o en sujetos que se sabe o se sospecha tienen una condición patológica asociada con la expresión anormal de PBR (en lo sucesivo "condición PBR"). Preferentemente, el método se relaciona con la generación de imagen in vivo de un sujeto que se sabe o se sospecha tiene una condición PBR, y por consiguiente, tiene utilidad en un método para el diagnóstico de dicha condición.

Los ejemplos de dichas condiciones PBR, en donde la generación de imágenes in vivo pueden ser útiles incluyen esclerosis múltiple, encefalitis Rasmeussen, vasculitis cerebral, encefalitis por herpes, demencia asociada con AIDS, enfermedad de Parkinson, degeneración corticobasal , parálisis supranuclear progresiva, atrofia de sistema múltiple, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Alzheimer, ataque isquémico, lesión de nervios periféricos, epilepsia, lesión de cerebro traumática, tensión aguda, tensión crónica, dolor neuropático, inflamación de pulmón, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma, enfermedad inflamatoria de intestino, artritis reumatoide, fibromialgia primaria, lesión de nervios, ateroesclerosis, inflamación de riñon, lesión por reperfusión-isquemia y cáncer, en particular cáncer del colon, próstata o seno. Los agentes in vivo de la presente invención son particularmente adecuados para generación de imagen in vivo del CNS debido a su buena captación del cerebro.

En una modalidad alternativa, el método de generación in vivo de la presente invención se puede llevar a cabo en forma repetida durante el curso de un régimen de tratamiento para el sujeto, comprendiendo el régimen la administración de un fármaco para combatir una condición PBR. Por ejemplo, el método de generación in vivo de la presente invención se puede llevar a cabo antes, durante o después del tratamiento con un fármaco para combatir una condición PBR. En esta forma, el efecto del tratamiento puede ser monitoreado con el tiempo. Preferentemente, para esta modalidad, el procedimiento de in vivo es PET. PET tiene excelente sensibilidad y resolución, de modo que incluso se pueden observar con el tiempo cambios relativamente pequeños en una lesión, lo cual es particularmente conveniente para monitorear el tratamiento.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un método para diagnóstico en una condición PBR. El método de diagnóstico de la presente invención comprende el método de la generación de imagen in vivo tal como se definió anteriormente, junto con un paso adicional (vi) para atribuir la distribución y grado de expresión PBR a una imagen clínica particular, es decir, la fase de decisión médica deductiva.

En otro aspecto, la presente invención proporciona el agente de generación de imagen in vivo tal como aquí se define, para utilizarse en el método de diagnostico tal como aquí se define.

En un aspecto aún adicional, la presente invención proporciona el agente de generación de imagen in vivo tal como aquí se define para utilizarse en la fabricación de una composición radiofarmacéutica tal como aquí se define para utilizarse en el método de diagnóstico tal como aquí se define.

La presente invención se ilustra a continuación a través de una serie de ejemplos no limitantes.

Breve Descripción de los Ejemplos El ejemplo 1 describe la síntesis del compuesto precursor 5 y el agente de generación de imagen 5.

El ejemplo 2 describe la síntesis de un análogo no radioactivo del agente de generación de imagen 5.

El ejemplo 3 describe la síntesis del compuesto precursor 6 y el agente de generación de imagen 6.

El ejemplo 4 describe la síntesis de un análogo no radioactivo del agente de generación de imagen 6.

El ejemplo 5 describe la síntesis del compuesto precursor 7 y el agente de generación de imagen 7.

El ejemplo 6 describe la síntesis de un análogo no radioactivo del agente de generación de imagen 7.

El ejemplo 7 describe la síntesis del compuesto precursor 9 y el agente de generación de imagen 9.

El ejemplo 8 describe la síntesis de un análogo no radioactivo del agente de generación de imagen 9.

El ejemplo 9 describe la síntesis del compuesto precursor 10 y el agente de generación de imagen 10.

El ejemplo 10 describe la síntesis de un análogo no radioactivo del agente de generación de imagen 10.

El ejemplo 11 describe la síntesis del compuesto precursor 11 y el agente de generación de imagen 11.

El ejemplo 12 describe la síntesis de un análogo no radioactivo del agente de generación de imagen 11.

El ejemplo 13 describe la separación enantiomérica del compuesto precursor 5.

El ejemplo 14 describe la separación enantiomérica del agente no radioactivo de generación de imagen 5.

El ejemplo 15 describe un ensayo de potencia in vitro que fue utilizado para probar la afinidad para PBR.

El ejemplo 16 describe un método de biodistribución que fue utilizado para revisar el desempeño de los agentes de generación de imagen in vivo de la presente invención.

El ejemplo 17 describe la síntesis de un análogo no radioactivo de un agente de generación de imagen de indol tetracíclico previo.

El ejemplo 18 describe la síntesis de un agente de generación de imagen de indol tetracíclico previo.

Lista de abreviaturas utilizadas en los Ejemplos aq acuoso DCM diclorometano D AP 4-Dimetilaminopiridina D F dimetilformamida EDC Clorhidrato dimetilaminopropil]carbodümida EOS final de la síntesis EtOAc acetato de etilo IPA alcohol isopropílico LC-MS cromatografía liquida-espectrometría de masa RMN resonancia magnética nuclear OBn benciloxi OMs mesilato OTs tosilato RT temperatura ambiente TLC cromatografía de capa delgada Tol tolueno Ejemplos Ejemplo 1: Síntesis de éster 2-(4-dietilcarbamil-5-metoxi- 1.2.3.4-tetrah id ro-carbazol-9-il) etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 5) v dietilam ida de ácido 9-(2-r18FlFluoro-etil)-5-metoxi-2.3.4.9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen 5) Ejemplo 1(b): cloruro de acetil benciloxi (1) Al ácido benciloxiacético (10.0 g, 60.0 mmol, 8.6 mL) en diclorometano (50 mL) se le agregó cloruro de oxalilo (9.1 g, 72.0 mmol, 6.0 mL) y DMF (30.0 mg, 0.4 mmol, 32.0 \iL) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Inicialmente hubo una evolución rápida del gas conforme procedió la reacción, aunque la evolución termino conforme se completo la reacción. Se concentró la solución de diclorometano in vacuo para proporcionar una goma. Esta goma se trató con más cloruro de oxalilo (4.5 g, 35.7 mmol, 3.0 ml_), diclorometano (50 ml_), y una gota de DMF. Hubo una rápida evolución del gas y la reacción se agitó durante 2 horas adicionales. La reacción posteriormente se concentró in vacuo para producir 11.0 g (cuantitativo) de cloruro de acetilbenciloxi (1) en la forma de una goma. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3) óc 73.6, 74.8, 128.1, 128.4, 128.6, 130.0, y 171.9. Ejemplo 1(b): acetamida de 2-cenciloxi-N-(2-cloro-5-metoxi-fenil) (2) Se agitó cloruro de acetil benciloxi (1) (11.0 g, 60.0 mmol) y clorhidrato de 2-cloro-5-metoxianilina (11.7 g, 60.2 mmol) en diclorometano (100 mL) a una temperatura de 0°C, y se agregó lentamente en 15 minutos trietilamina (13.0 g 126.0 mmol, 18.0 mL). La reacción agitada se dejo templar a temperatura ambiente durante 18 horas. Hubo una precipitación pesada del clorhidrato de trietilamina. La solución de diclorometano se lavó con carbonato de potasio acuoso al 10% (50 mL), se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró in vacuo para proporcionar 18.9 g (cuantitativo) de acetamida de 2-benciloxi-N-(2-cloro-5-metoxi-fenil) (2) en la forma de una goma. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 5C 55.6, 69.6, 73.6, 106.2, 111.1, 114.1, 127.7, 128.3, 128.6, 129.2, 134.6, 136.5, 158.9, y 167.7.

Ejemplo 1(c). amina de (2-benciloxi-etil)-(2-cloro-5-metoxifénil) [3± Se agitó acetamida de 2-benciloxi-N-(2-cloro-5-metox¡-fenil) (2) (18.9 g, 62.0 mmol) en THF (100 mL) y se agregó lentamente en 15 minutos hidruro de aluminio de litio (4.9 g, 130.0 mmol). Hubo una rápida evolución del gas de hidrógeno conforme se agregó el primer hidruro de aluminio de litio. La reacción se calentó posteriormente a reflujo durante 4 horas y se dejo asentar a temperatura ambiente durante el fin de semana. Posteriormente la reacción se extinguió mediante la adición en forma de gotas de agua (50 mL) a la solución agitada. Hubo una evolución violenta del hidrógeno originando el reflujo de la mezcla de reacción. Posteriormente la reacción se concentró al vacío hasta obtener una pasta. Se agregaron agua (200 mL) y acetato de etilo (200 mL) y la mezcla se agitó vigorosamente. Posteriormente la reacción se filtró a través de celita para eliminar el hidróxido de aluminio precipitado y se separó la solución de acetato de etilo, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró in vacuo para producir 18.4 g (cuantitativo) de amina de (2-benciloxi-etil)-(2-cloro-5-metoxifenil) (3) en la forma de una goma. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3) óc 43.3, 55.3, 68.2, 73.0, 98.1, 101.8, 111.6, 127.6, 127.7, 128.4, 129.3, 137.9, 144.8, y 159.5.

Ejemplo 1(d): éster etílico de ácido 3-bromo-2-hidroxi-ciclohex-1 -enocarboxílico (4) Se disolvió 2-oxociclohexanocarboxilato de etilo (30 g, 176 mmol, 28 mL) en éter dietílico (30 mL) y se enfrió a una temperatura de 0°C bajo nitrógeno. Se agregó en forma de gotas en 15 minutos bromo (28 g, 176 mmol, 9.0 mL) y la mezcla de reacción se dejo templar a temperatura ambiente durante 90 minutos. La mezcla se vertió lentamente en carbonato de potasio acuoso saturado enfriado con hielo (250 mL) y se extractó con acetato de etilo (3 x 200 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron, se concentraron in vacuo y se secaron en la línea de vacío durante 18 horas para producir 41.4 g (94%) de éster etílico de ácido 3-bromo-2-hidroxi-1 -enocarboxílico (4) en la forma de un aceite amarillo. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3): óc 14.1, 17.7, 21.8, 32.0, 60.0, 60.8, 99.7, 1663, y 172.8.

Ejemplo 1 (e): éster etílico de ácido 3f(2-benciloxi-etil)-(2-cloro-5-metoxi-fenil)-amino]-2-hidrox¡- ciclohex-1 -eno ca rboxílico (5) Se agitó amina de (2-benciloxi-etil)-(2-cloro-5-metoxifenil) (3) (10.0 g, 34.2 mmol) en THF seco (100 mL) a una temperatura de -40°C bajo nitrógeno y se agregó en 30 minutos bis(trimetilsilil) amida de potasio (143.0 mL de una solución 0.5 M en tolueno, 72.0 mmol). Posteriormente se agregó éster etílico de ácido 3-bromo-2-hidroxiciclohex-1 -enecarboxílico (4) (8.5 g, 34.2 mmol) en THF seco (10 mL) y se dejo templar a temperatura ambiente durante un período de 1.5 horas. Se agregó ácido acético (10.0 g, 166 mmol, 10.0 mL) y se concentró in vacuo para eliminar el THF. Se agregó acetato de etilo (200 mL) y carbonato de potasio acuoso al 10% (100 mL) y la mezcla se agitó vigorosamente. Se separó la solución de acetato de etilo, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró in vacuo para producir 16.5 g (cuantitativo) de éster etílico de ácido 3[(2-benciloxi-etil)-(2-cloro-5-metoxi-fenil)-amino]-2-hidroxi-ciclohex-1 -eno carboxílico (5) en la forma de una goma la cual se utilizó cruda en el siguiente paso. HPLC (Gemini 150 x 4.6 mm, 50-95% metanol/agua en 20 minutos) de la mezcla de reacción cruda, 18.9 minutos (38%), 19.2 minutos (25%), 23.1 minutos (28%).

Se aisló un componente de la reacción 13C RMN (75 MHz, CDCI3) óc 14.3, 20.6, 21.8, 26.4, 38.6, 43.0, 55.8, 60.5, 68.7, 73.3, 93,4, 106.3, 108.2, 119.3, 121.5, 127.5, 127.6, 128.3, 135.7, 137.0, 137.9, 155.7, y 175.0.

Ejemplo 1 (f). éster etílico de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-8-cloro-5-metoxi-2,3,4,9,-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (6) Se agregó cloruro de zinc (7.1 g, 52.0 mmol) a éster etílico de ácido 3[(2-benciloxi-etil)-(2-cloro-5-metoxi-fenil)-amino]-2-hidroxi-ciclohex-1 -eno carboxílico (5) (8.0 g, 17.0 mmol) en éter dietílico seco (150 mL) bajo nitrógeno y se calentó a reflujo durante 5.5 horas. Conforme la reacción se sometió a reflujo se formó en la reacción un aceite benzo color café grueso. La reacción posteriormente se enfrió y se decantó el sobrenadante de éter dietílico, se agregó acetato de etilo (100 mL), se lavó con 2 N HCI (50 mL) y con carbonato de potasio acuoso al 10% (50 mL). Se separó la capa de éter dietílico, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró in vacuo para producir un aceite (2.0 g). El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A): acetato de etilo (B) (10-40% (B), 340 g, 22 CV, 150 mL/min) para producir 1.8 g de éster etílico de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-8-cloro-5-metoxi-2,3,4,9,-tetrah¡dro-1H-carbazol-4-carboxílico (6). La capa café densa gruesa, se trató con acetato de etilo (100 mL) y 2 N HCI (50 mL). Se separó la solución de acetato de etilo, se lavó con carbonato de potasio acuoso al 10% (50 mL), se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró in vacuo para proporcionar un aceite (5.2 g). Se agregaron éter dietílico (100 mL) y cloruro de zinc anhidro (7.0 g). La mezcla se calentó a reflujo durante 5 días adicionales. Se decanto la capa de éter de la goma oscura, se lavó con 2 N HCI (50 mL), se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró in vacuo para proporcionar una goma (2.8 g). Esta goma se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A): acetato de etilo (B) (5-35% (B), 340 g, 150 mL/min) para producir 2.1 g de éster etílico de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-8-cloro-5-metoxi-2,3,4,9,-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (6). El material obtenido fue 4.1 g (50%) de éster etílico de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-8-cloro-5-metoxi-2,3,4,9,-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (6). La estructura se confirmó medíante 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 5C 14.4, 20.5, 22.3, 27.5, 40.2, 43.9, 55.0, 60.2, 70.7, 73.3, 100.2, 107.5, 108.4, 120.1, 122.8, 127.4, 127.5, 128.2, 132.0, 137.4, 138.1, 152.6, y 175.8. Ejemplo 1 (a); ácido 9-(2-benciloxi-etil)-8-cloro-5-metoxi-2.3.4.9.-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (7) Al éster etílico de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-8-cloro-5-metoxi-2,3,4,9,-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (6) (2.0 g, 4.1 mmol) en etanol (50 ml_) se le agregó hidróxido de sodio (1.1 g, 27.1 mmol) y agua (5 ml_) y se calentó a una temperatura de 80°C durante 18 horas. Posteriormente se eliminó el etanol mediante evaporación y el residuo se dividió entre éter dietílico (50 ml_) y agua (50 mL). Se separó la capa de éter dietílico, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró in vacuo para proporcionar una goma (71.0 mg). La capa acuosa se acidificó a pH 1 con 2N HCI (20 mL) y se extractó con diclorometano (2 x 100 mL). La capa de diclorometano se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró in vacuo para producir 1.6 g (87%) de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-8-cloro-5-metoxi-2,3,4,9,-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (7) en la forma de una espuma. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz; CDCI3): d0 20.2, 22.2, 27.1, 39.7, 44.0, 55.1, 70.7, 73.3, 1006, 106.3, 108.9, 123.0, 127.4, 127.5, 128.3, 132.0, 138.0, y 152.0.

Ejemplo 1 (i), cloruro de 9-(2-bencHoxi-et¡l)-8-cloro-5-metoxi-2.3.4.9.-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carbonilo (8) Se disolvió ácido 9-(2-benciloxi-etil)-8-cloro-5-metoxi-2,3,4,9,-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (7) (1.5 g, 3.7 mmol) en diclorometano (50 mL) y se agregaron cloruro de oxalilo (700 mg, 5.5 mmol, 470 µ?_) y DMF (1 gota) y la reacción se agitó a una temperatura de 20°C durante 2 horas. Hubo una evolución moderada del gas durante aproximadamente 30 minutos conforme la reacción procedió. La reacción se concentró posteriormente in vacuo para proporcionar cloruro de 9-(2-benciloxi-etil)-8-cloro-5-metoxi-2,3,4,9,-tetrahidro-1H-carbazol-4-carbonilo (8) en la forma de una goma la cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz; CDCI3): 5C 20.8, 22.1, 26.4, 44.2, 51.8, 55.1, 70.7, 73.3, 100.7, 106.0, 108.6, 119.5, 123.4, 127.3, 127.7, 128.3, 131.9, 138.0, 138.2, 152.0. y 176.3. Ejemplo 1 (i): dietilamida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-8-cloro-5-metoxi-2,3.4.9-tetrahidro- 1 H-carbazol-4-carboxílico (9) Posteriormente se disolvió cloruro de 9-(2-benciloxi-etil)-8-cloro-5-metoxi-2,3,4,9,-tetrahidro-1H-carbazol-4-carbonilo (8) (1.6 g, 3.7 mmol) en diclorometano (50 mL), se enfrió a una temperatura de 0°C, se agitó y se agregó en forma de gotas dietilamina (810 mg, 11.0 mmol, 1.1 ml_). La reacción se dejo templar a temperatura ambiente durante un período de 18 horas. Posteriormente la mezcla se reacción se lavó con carbonato de potasio acuoso al 10% (50 ml_), se separó^ se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró in vacuo para obtener una goma. El material crudo se cristalizó a partir de éter dietílico para producir 1.2 g (71%) dietilamida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-8-cloro-5-metoxi-2,3,4,9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (9) en la forma de un sólido cristalino color blanco. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz; CDCI3): 6C 13.0, 14.5, 19.8, 22.2, 27.9, 36.4, 40.4, 41.9, 43.8, 55.0, 70.8, 73.3, 100.2, 108.5, 108.6, 119.9, 122.5, 127.4, 127.5, 128.3, 131.5, 137.8, 138.2, 152.4, y 174.5.

Ejemplo 1(¡): dietilamina de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-5-metoxi-2,3,4, 9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (10) Se agitó dietilamida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-8-cloro-5-metoxi-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (9) (1.0 g, 2.1 mmol) en metanol (100 mi) con paladio sobre carbono al 10% (1.0 g), trietilamina (2.9 mg, 2.9 mmol, 4 µ?_) bajo una atmósfera de gas de hidrógeno durante 18 horas a una temperatura de 55°C. La reacción posteriormente se filtró a través de una almohadilla de celita y el filtrado se concentró in vacuo para proporcionar una goma (908 mg). La goma posteriormente se tomó en diclorometano (100 mi) y se lavó con una solución de carbonato de potasio acuosa 5% (50 mi). La solución de diclorometano posteriormente se separó, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró in vacuo para producir una goma. Posteriormente la goma se cristalizó a partir de éter dietílico (50 mi) y los cristales se recolectaron mediante filtración para producir 523 mg (57%) de dietilamina de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-5-metoxi-2,3,4,9-tetrahidro-1 H -car bazo I -4-carboxílico (10). La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz; CDCI3): 5C 13.1, 14.6, 20.1, 22.0, 28.1, 36.4, 40.5, 42.0, 43.0, 54.7, 68.8, 73.3, 99.4, 102.4, 107.8, 116.4, 121.2, 127.6,127.6, 128.3, 135.6, 137.8, 138.0 153.6, y 175.0.

Ejemplo 1 (k): dietilamina de ácido 9-(2-hidroxietil)-5-metoxi-2,3,4, 9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (11) Se agitó dietilamina de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-5-metoxi-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (10) (1.0 g, 2.1 mmol) en metanol (50 mi) con paladio sobre carbono al 10% (300 mg), y un exceso de gas de hidrógeno durante 18 horas a una temperatura de 55°C. Posteriormente la reacción se filtró a través de una almohadilla de celita y el filtrado se concentró in vacuo para proporcionar 578 mg (100%) de dietilamina de ácido 9-(2-hidroxietil)-5-metoxi-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (11) en la forma de una espuma. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz; CDCI3): 6C 13.0, 14.4, 20.0, 22.0, 28.0, 36.4, 40.6, 42.0, 54.7, 60.6, 99.2, 1026, 107.0, 116.7, 121.1, 136.1, 137.5, 138.0 153.5, y 175.7.

Ejemplo 1(1): éster 2-(4-dietilcarbamil-5-metoxi-1 ,2,3,4- tetrahidro-carbazol-9-il)etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 5) Se enfrió a una temperatura de 0°C dietilamina de ácido 9-(2-hidroxietil)-5-metoxi-2,3,4,9-tetrah¡dro-1H-carbazol-4-carboxilico (11) (478 mg, 1.4 mmol) en diclorometanp (30 mi) y se agregaron cloruro de metanosulfonilo (477 mg, 4.2 mmol, 324 µ?_) y trietilamina (420 mg, 4.2 mmol, 578 µ?_) y se dejo templar durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se lavó con una solución de carbonato de potasio acuosa al 5%. Las capas se separaron. Los orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron in vacuo para proporcionar una goma (696 mg). El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A): acetato de etilo (B) (75-100% B, 22 CV, 120 g, 85 mL/min) para proporcionar éster 2-(4-dietilcarbamil-5-metoxi- ,2,3,4-tetrahidro-carbazol-9-il)etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 5) en la forma de una goma que se cristalizó a partir de éter dietílico para proporcionar 346 mg (59%) de un sólido incoloro. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz; CDCI3): 6C 13.1, 14.5, 20.0, 21.9, 28.0, 36.3, 36.7, 40.3, 41.8, 41.9, 54.7, 68.1, 100.0, 102.0, 109.0, 116.4, 122.0 135.1, 137.3, 153.8, y 174.6.

Ejemplo Km): dietilamida de ácido 9-(2-[18F]Fluoro-etil)-5-metoxi-2.3.4, 9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen 5) Se suministró [18F]fluoruro procedente de GE Healtcare en un cilcotron GE PETrace. Se agregó Kryptofix 2.2.2 (2 mg, 5 µ????), bicarbonato de potasio (0.1 mol dm"3, 0.1 mi, 5 mg, 5 µ????) y acetonitrilo (0.5 mi) a [ 8F]F7H20 (ca. 400 MBq, 0.1-0.3 mi) en un envase de reacción COC. La mezcla se secó calentando a una temperatura de 100°C bajo una corriente de nitrógeno durante 20 a 25 minutos. Después de secarse y sin enfriarse, se agregó el compuesto precursor 5 (0.5 a 1mg, 1.2 a 2.4 µ????) en acetonitrilo (1 mi) al envase de reacción COC y se calentó a una temperatura de 100°C durante 10 minutos. Después de enfriarse, la mezcla de reacción se eliminó y el envase de reacción COC se enjuago con agua (1.5 mi) y se agregó a la reacción cruda principal.

Después de esto, el producto crudo se aplicó a una columna HPLC: HICHROM de semi-preparación ACE 5 C18 (100 x 10 mm i.d.), tamaño de partícula 5 µ?t?; fase móvil A. Agua, fase móvil B: Metanol; gradiente de flujo: 3ml/min; 0 a 1 minutos 40 %B; 1 a 20 minutos 40-95 %B; Longitud de onda 254 nm; íR agente de generación de imagen 5 16 minutos. Se diluyó el pico purificado con HPLC del agente de generación de imagen 5 a un volumen de 10 mi con agua y se absorbió en un cartucho tC18 Sep-Pak (lite). El cartucho se lavó con agua (2 mi), y se eluyó con etanol anhidro (0.5 mi) seguido de solución salina amortiguada con fosfato de Dulbecco (4.5 mi). Rendimiento radioquímico 30±7% (n = 4) corregido sin decaimiento, tiempo 90 a 120 minutos, pureza radioquímica >99%.

HPLC Analítico: Columna Phenomenex Luna C18 (150 x 4.6 mm i.d.), tamaño de partícula 5 µ?t?; fase móvil A. Agua, fase móvil B: Metanol; gradiente de flujo: 1 ml/min; 0 a 1 minutos 40 %B; 1 a 20 minutos 40-95 %B; Longitud de onda 230 nm; íR agente de generación de imagen 5 16 minutos. La figura 1 muestra la elución conjunta del agente de generación de imagen 5 y agente de generación de imagen 5 no readioacti o.

Ejemplo 2: Síntesis de dietilamida de ácido 9-(2-fluoro-etil)-5-metoxi-2, 3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen no radioactivo 5) Eiemolo 2 (a), tosilato de fluoroetilo (12) Se disolvió 2-fluoroetanol (640 mg, 10 mmol, 0.6 mL) en piridina (10 mL) bajo nitrógeno. La solución se agitó a una temperatura de 0°C y se agregó en porciones cloruro de tósilo (4.2 g, 21.8 mmol) a la solución durante un período dé 30 minutos, manteniendo una temperatura de bajo de 5°C. La reacción se agitó a una temperatura de 0°C durante 3 horas. Se agregó lentamente hielo seguido de agua (20 mL). La mezcla de reacción se extractó en acetato de etilo y se lavó con agua. Se eliminó la piridina en exceso lavando con una solución 1 N HCI hasta que la capa acuosa se volvió ácida. Se eliminó el cloruro de tosilo en exceso lavando con carbonato de sodio acuoso 1 M. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró in vacuo para proporcionar 2.1 g (98%) de tosilato de fluoroetilo (12) en la forma de un aceite incoloro. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3): óe. 21.6 (CCH3), 68.5 (o1, JCF = 173 Hz, OCH2CH2F), 80.6 (d, JCF = 173 Hz, OCH2CH2F), 128.0, 129.9, 132.6, y 145.1.

Ejemplo 2(b): amina de 2-cloro-5-metoxi-fenil) (2-fluoroetil) (13) Se disolvió clorhidrato de 2-cloro-5-metoxianilina (5.0 g, 26.0 mmol) en DMF (50 mL) y se agregó hidruro de sodio (2.3 g, 60% en aceite, 57.0 mmol). La reacción se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente bajo nitrógeno. Se agregó en forma de gotas tosilato de fluoroetilo (12) (6.7 g, 31.0 mmol) en DMF (5 mL) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción se calentó posteriormente a una temperatura de 100°C durante 18 horas. La reacción se dejo enfriar y el solvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo (100 mL) y se lavó con agua (2 x 100 mL). Los orgánicos se recolectaron, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron in vacuo para proporcionar un aceite color café el cual se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A): acetato de etilo (B) (5% a 30% (B), 330 g, 18.1 CV, 120 mL/min) para producir 1.3 g (25%) amina de 2-cloro-5-metoxi-fenil)(2-fluoroetil) (13) en la forma de un aceite amarillo. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz; CDCI3): 5C 43.8 (d, JCF = 23 Hz), 55.3, 82.0 (d, JCF = 165 Hz), 98.1, 102.2, 111.6, 129.5, 144.1, y 159.5.

Ejemplo 2(c): éster etílico de ácido 3-í(2-cloro-5-metoxi-fenil)-(2-t luoroeti Da mi nol-2-hidroxi-ciclohexil-1 -enocarboxílico (14) Se enfrió una solución de amina de 2-cloro-5-metoxi-fenil) (2-fluoroetil) (13) (6.1 g, 30.0 mmol) en THF (170 mL) a una temperatura de -40°C. Se agregó en forma de gotas bis(trimetilsilil)amida de potasio (126.0 mL de una solución 0.5 M en tolueno, 63.0 mmol) y la reacción se agitó durante 30 minutos a una temperatura de -40°C). Se agregó en forma der gotas a una temperatura de 40°C éster etílico de ácido 3-bromo-2-hidroxi-ciclohex-1 -enecarboxílico (4; preparado de acuerdo con el Ejemplo 1(d)) (7.4 g, 30.0 mmol) en THF (30 mL). Se eliminó el baño de enfriamiento y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La reacción se extinguió con salmuera (300 mL) y se extractó en acetato de etilo (2 x 400 mL), se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró in vacuo para proporcionar 12.0 g (cuantitativo) de éster etílico de ácido 3-[(2-cloro-5-metoxi-fenil)-(2-fluoroetil) amino]-2-hidroxi-ciclohexil-1 -enocarboxílico (14) en la forma de un aceite color café la cual se utilizó crudo en el siguiente paso. La estructura en la forma de una mezcla de isómeros se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3): d? 1 08 (0.8H, t, J = 9 Hz, C02CH2CH3), 1.22-1.33 (2.2 H, m, C02CH2CH_3), 1.40-2.60 (7H, m, 4-, 5-, y 6-CH2, CJHN), 3.20-4.50 (10H, m, NCH_2CH2F, NCHzCHzF, OCH3, CH.CO2CH2CH3), 6.50-6.70 (1 H, m, CHC(OCH3)CHCH), 6.95 (0.5H, dd, J = 3 y 6 Hz, CHC(OCH3)CHCH), 7.08 (0.5H, d, J = 3 Hz, CHC(OCH3)CHCH_), y 7.20-7.30 (1 H, m, CHC(OCH3)CHCH). Ejemplo 2(d) éster- etílico de ácido 8-cloro-9-(2-fluoroetil)-5-metoxi-2.3.4.9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxilico (15) Se inició la síntesis de éster etílico de ácido 8-cloro-9-(2-fluoro-etil)-5-metoxi-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (15), intentando utilizar las condiciones descritas en la Publicación Internacional WO 2003/014082. Se enfrió una solución de amina 2-cloro-5-metoxi-fenil)(2-fluoroetil) (13; preparado de acuerdo con el Ejemplo 2(b)) (600 mg, 3.8 mmol) en THF seco (20 mL) en un baño de hielo seco y se trató con bis(trimetilsilil)amida de potasio (16 mL de una solución 0.5 M en tolueno, 8.0 mmol). Después de 30 minutos, se agregó éster etílico de ácido 3-bromo-2-hidroxi-ciclohex-1 -enocarboxílico (4; preparado de acuerdo con el Ejemplo 1(d)) (1.04 g, 4.2 mmol) en THF (4 mL) y la reacción se dejo templar a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción se extinguió con una solución de cloruro de amonio saturado y se extractó dos veces con éter. Los extractos se lavaron con agua, salmuera, se secaron y concentraron in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (2.5% a 50% B, 50 g, 25 CV, 40 mL/min). La mancha principal fue una mezcla de tres compuestos. Esta mezcla se sometió a reflujo en tolueno (20 mL) con cloruro de zinc seco (1.7 g, 12.6 mmol) durante la noche. La reacción se concentró in vacuo y el residuo se dividió entre 1N HCL (25 mL) y acetato de etilo (25 mL) y posteriormente se extractó una vez más con acetato de etilo. Las capas orgánicas se lavaron con agua y salmuera, se secaron y concentraron in vacuo para producir un aceite color café. 1H RMN indicó que hubo una mezcla de varios compuestos. TLC sobre sílice en un rango de solventes no pudo separar esta mezcla en manchas separadas. La comparación de 1H RMN de la mezcla con una muestra auténtica indicó que la mezcla contenía un estimado de 25% de éster etílico de ácido 8-cloro-9-(2-fluoro-etil)-5-metox¡-2,3,4,9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (15).

Posteriormente se llevó a cabo un método modificado. Se disolvió éster etílico de ácido 3-[(2-cloro-5-metoxi-fenil)-(2-fluoroetil)amino]-2-hidroxi-ciclohexil- -enocarboxílico (14) (12.2 g, 30.0 mmol) en éter dietílico (250 mL) y se agregó cloruro de zinc (16.4 g, 120.0 mmol). La reacción se calentó a reflujo durante 16 horas. Se agregó acetato de etilo (500 mL) para disolver cualquier cosa y se lavó con 2N HCI (200 mL), agua (200 mL), carbonato de potasio acuoso al 10% (200 mL), se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A): acetato de etilo (B) (5-20% B, 12 CV, 10 g, 100 mL/min) para producir 5.3 g (50% en 2 pasos) de éster etílico de ácido 8-cloro-9-(2-fluoroetil)-5-metox¡-2,3,4,9- tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (15) en la forma de un sólido color amarillo. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3): óc 14.4, 20.4, 22.2, 27.4, 40.1, 44.2 {d, JCF = 23 Hz), 55.1, 60.2, 83.9 (d, JCF = 173 Hz), 100.6, 107.9, 108.2, 119.8, 123.1, 131.9, 137.2, 152.7, y 175.7.

Ejemplo 2(e): éster etílico de ácido 9-(2-fluoroetil)-5-metoxi-2,3,4.9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (16) Se disolvió éster etílico de ácido 8-cloro-9-(2-fluoroetil)-5-metoxi-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (15) (5.3 g, 15.0 mmol) en metanol (180 mL) y se agregaron trietilamina (1.8 g, 18.0 mmol, 2.5 mL) y 10% Pd/C (2 g en metanol (20 mL)). La mezcla se colocó en un hidrogenador Parr y se agitó durante 18 horas bajo una atmósfera de hidrógeno. La reacción se filtró a través de una almohadilla de celita, se lavó con metanol y el solvente se eliminó in vacuo. El residuo se disolvió en acetato de etilo (300 mL) y se lavó con carbonato de potasio acuoso al 10% (200 mL), se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró in vacuo para proporcionar 4.2 g (88%) de éster etílico de ácido 9-(2-fluoroetil)-5-metoxi-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (16) en la forma de un sólido color café claro. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 5c 14.3, 20.6, 21.8, 27.6, 40.3, 43.3 (d, JCF= 23 Hz), 54.9, 60.1, 82.0 (d, JCF= 165 Hz), 99.8, 102.1, 107.3, 117.2, 121.8, 134.9, 137.6, 153.8, y 176.0.

HPLC (Gemini 150 x 4.6 mm, 50-95% metanol/agua en 20 minutos) 13.6 minutos (94%).

Ejemplo 2(f). ácido 9-(2-fluoroetil)-5-metoxi-2.3.4.9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (17) Se disolvió éster etílico de ácido 8-cloro-9-(2-Fluoroetil)-5-metoxi-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (16) (380 mg, 1.2 mmol) en etanol (4 ml_). Se agregó una solución de hidróxido de sodio (580 mg, 14.5 mmol) disuelto en 6 ml_ de agua. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante la noche. El solvente se eliminó in vacuo y la mezcla cruda se diluyó con agua, se acidificó con 2 N HCI hasta hacerse ácida, y se lavó con diclorometano. Los orgánicos se combinaron y secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron in vacuo para proporcionar 347 mg (cuantitativo) de ácido 9-(2-fluoroetil)-5-metoxi-2,3,4,9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (17) en la forma de un sólido color crema el cual se utilizó crudo en el siguiente paso. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz; CDCI3): óc 20.4, 21.9, 27.2, 39.9, 43.3 (d, JCF = 23 HZ), 55.1, 81.9 (d, JCF = 173 Hz), 100.3, 102.8, 106.2, 117.1, 122.2, 135.6, 137.8, 153.3, y 180.8.

Ejemplo 2(g): cloruro de 9-(2-fluoroetil)-5-metoxi-2.3.4.9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carbonilo (18) Se agitó bajo nitrógeno una solución de ácido 9-(2-fluoroetil)-5-metoxi-2,3,4,9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carbóxílico (17) (347 mg, 1.2 mmol) en diclorometano seco (2 mL). Se agregó cloruro de oxalilo (453 mg, 3.6 mmol, 300 pL) seguido de una gota de DMF. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante 2 horas posteriormente se evaporó in vacuo para proporcionar 371 mg (cuantitativo) de cloruro de 9-(2-fluoroetil)-5-metoxi-2, 3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carbonilo en la forma de una goma, la cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 5C 20.2, 21 7, 26.4, 43.3 (o*, JCF = 23 Hz), 54.9, 80.5, 83.1, 100.2, 102.2, 105.8, 116.7, 122.4, 135.5, 137.4, 153.5, y 176.6.

Ejemplo 2(h): dietilamida de ácido 9-(2-fluoroetil)-5-metoxi- 2.3.4.9-tetrahidro- 1 H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen no readioactivo 5) Se disolvió cloruro de 9-(2-fluoroetil)-5-metox¡-2, 3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carbonilo (18) (371 mg, 1.2 mmol) en diclorometano (2 mL) y se enfrió a una temperatura de 0°C. Posteriormente se agregó dietilamina (177 mg, 2.4 mmol, 250 pL) y la reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se extinguió con carbonato de potasio acuoso al 10% (2 mL). La capa de diclorometano se recolectó a través de un separador de fase, posteriormente se concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A): acetato de etilo (B) (50% a 100% (B), 50 g, 35.2 CV, 40 mL/min) para producir un sólido amarillo pálido. El sólido se trituró posteriormente con una cantidad mínima de éter dietílico para producir 240 mg (58%) de amida de dietilo de ácido 9-(2-fluoroetil)-5-metoxi-2, 3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen no radioactivo 5). La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3): d0 13.0, 14.6, 19.9, 21.9, 28.0, 36.3, 40.5, 41.9, 43.1 (cf, JCF = 23 Hz), 54.7, 82.0 (d, JCF = 173 Hz), 99.7, 102.1, 108.3, 117.0, 121.5, 135.3, 137.4, 153.3, y 174.8.

Ejemplo 3: Síntesis de éster 2-f4-(piperidina-1 -carbonil)- 1 ,2,3,4-tetrahidro-carbazol-9-ill-etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 6) y Í9-Í2-r18FlFluoro-etil)-2.3.4.9-tetrahidro-1H-carbazol-4-ill-piperidin-1 -il-metanona (agente de generación de imagen 6) Ejemplo 3(a): 2-(P¡peridina-1 -carboniD-ciclohexanona (19) Se calentaron a reflujo durante 4 días 2-oxociclohexano-carboxilato de etilo (5.3 g, 31 mmol, 5.0 ml_) DMAP (1.05 g, 9.4 mmol) y piperidina (5.3 g, 63 mmol, 6.2 ml_) en tolueno (100 ml_). La reacción se dejo enfriar y la reacción se concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (20% a 80% (B), 100 g, 8 CV, 85 mL/min) para producir 6.26 g (96%) de 2-(piperidina-1 -carbonil)-ciclohexanona (19) en la forma de un sólido color blanco. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3) dc 23.5, 24.5, 25.5, 26.2, 27.1, 30.4, 41.9, 42.9, 46.8, 54.2, 167.6, 207.6.

Eiemolo 3(b): 2-B rom o- 6- ( pipe ridin a- 1 -carbón il)-cicloh ex a non a (201 Se disolvió 2-(piperidina-1 -carbonil)-ciclohexanona (19) (4.0 g, 19 mmol) en éter dietílico (5 mL) y se enfrió a una temperatura de 0°C bajo N2. Se agregó bromo (5.9 g, 19 mmol, 1.0 mL) en forma de gotas durante 15 minutos y la mezcla de reacción se dejo templar a temperatura ambiente sobre 90 minutos. El sólido se recolectó mediante filtración para proporcionar 5.86 g (cuantitativo) de 2-bromo-6-(piperidina-1 -carbonil)-ciclohexanona (20) en la forma de un sólido color blanco el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, D SO-d6) 6c 17.3, 24.2, 25.3, 25.8, 32.5, 44.0, 51.6, 1083, 145.5, 167.8. Ejemplo 3(c): (2-benciloxi-et¡l)-fenH-amina (21) En un frasco de fondo redondo se combinaron anilina (2.0 g, 21.5 mmol, 2.0 mL), 2,6-lutidina (2.30 g, 21.5 mmol) y éter bencil de 2-bromoetílico (4.6 g, 21.5 mmol, 3.4 mL) en DMF (10 mL) y se agitó a una temperatura de 100°C durante la noche. La reacción se dejo enfriar y posteriormente se diluyó con acetato de etilo (50 mL). Esto se lavó con agua (3 x 20 mL) y los orgánicos se secaron y concentraron in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (0% a 50% B, 100 g, 19.5 CV, 85 mL/min) para producir 2.22 g (37%) de (2-benciloxi-etil)-fenil-amina (21) en la forma de un aceite color amarillo. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3) óc 43.6, 68.6, 73.2, 113.1, 117.5, 127.5, 127.7, 128.4, 129.1, 138.2, 148.1.

Ejemplo 3(d). [9-(2-benciloxi-etil)-2.3.4.9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-illpiDeridin-1-il-metanona (22) Una mezcla de 2-bromo-6-(piperidina-1 -carbonil)-ciclohexanona (20) (1.5 g, 5.2 mmol) y (2-benciloxi-etil)-fenil-amina (21) (3.2 g, 10.4 mmol) se agitó bajo N2 a una temperatura de 50°C durante 3 horas y la reacción se volvió café. La mezcla resultante se disolvió en propan-2-ol (5 mL) y se agregó cloruro de zinc seco (2.13 g, 15.6 mmol). La mezcla se calentó a reflujo bajo N2 durante 16 horas y posteriormente se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en acetato de etilo (100 mL) y se lavó con 2 N HCI (30 mL), agua (2 x 30 mL) y una solución de carbonato de potasio acuosa (2 x 30 mL) posteriormente se secó y concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante un cartucho SCX y posteriormente cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (30% a 100% B, 12 g, 41 CV, 30 mL/min) para producir 600 mg (27%) de [9-(2-benciloxi-etil)-2, 3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-il]-píperidin-1 -il-metanona (22) en la forma de un aceite. La estructura se confirmó mediante 3C RMN (75 MHz, CDCI3) 5C 21.5, 21.7, 24.5, 25..7, 26.3, 273, 37.7, 42.8, 43.1, 46.7, 60.2, 68.7, 73.1, 108.2, 108.7, 117.8, 118.9, 120.5, 126.4, 127.3, 127.4, 128.1, 136.2, 137.8, 172.9.

Ejemplo 3(e): [9-(2-Hidroxi-etil)-2.3.4.9-tetrahidro-1H-carbazol-4-ill-pipe ridin -1 -il-metanona (23) A una solución de [9-(2-benciloxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-¡l]-piperidin-1 -il-metanona (22) (600 mg, 1.4 mmol) en metanol (15 mL) se le agregó una pasta de Pd/C (200 mg) en metanol (10 mL). La mezcla se colocó en el hidrogenador Parr y se agitó durante 24 horas bajo una atmósfera de hidrógeno. La reacción se filtró a través de una almohadilla de celita, se lavó con metanol y se concentró in vacuo. El material crudo se trituró para producir 332 mg (71%) de [9-(2-h¡droxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-il]-piperidin-1 -il-metanona (23) en la forma de un sólido color blanco. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 6c 21.2, 21.9, 24.7, 27.4, 36.4, 43.4, 45.0, 47.0, 60.9, 107.8, 109.0, 117.7, 119.0, 120.7, 126.6, 136.2, 137.2, 173.5 Ejemplo 3(f). éster 2-f4-(piper¡dina-1 -carbonil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-carbazol-9-ill-etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 6) A una solución de [9-(2-hidroxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-il]-piperidin-1 -il-metanona (23) (260 mg, 0.8 mmol) en diclorometano (15 mL) se le agregó piridina (633 mg, 8.0 mmol, 0.65 mL). La reacción se enfrió a una temperatura de 0°C y se agregó cloruro de metanosulfonilo (458 mg, 4.0 mmol, 0.31 mL). La reacción se dejo templar a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se lavó con 2 N HCI (2 x 50 mL) y agua (2 x 50 ml_), se secó y concentró in vacuo. El material crudo se trituró con éter dietílico para producir 263 mg (82%) de éster 2-[4-(piperidina-1-carbonil)-1,2,3,4-tetrahidro-carbazol-9-il]-etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 6) en la forma de un sólido color blanco. La estructura se confirmó mediante 3C RMN (75 MHz, CDCI3) 5C 21.4, 21.8, 24.7, 25.9, 26.9, 27.4, 36.6, 36.8, 41.7, 43.3, 47.0, 67.9, 108.5, 109.5, 118.4, 119.7, 121.3, 126.9, 136.2, 172.7.

Ejemplo 3(g): f9-(2-f18FlFluoro-etil)-2, 3.4.9-tetrahidro- 1 H-carbazol-4-H1-piperidin-1 -il-metanona (agente de generación de imagen 6) Se llevó a cabo el etiquetado del compuesto precursor 6 con 18F tal como se describe en el Ejemplo 1(f).

HPLC de semi-preparación: columna HICHROM ACE 5 C18 (100 x 10 mm i.d.), tamaño de partícula 5 µ?t?; fase móvil A. Agua, fase móvil B: Metanol; gradiente de flujo: 3 ml/min; 0 a 1 minutos 50% B; 1-20 minutos 50% a 95% B; Longitud de onda 254 nm; fR agente de generación de imagen 6, 17 minutos.

HPLC Analítico: Columna Phenomenex Luna C18 (150 x 4.6 mm i.d.), tamaño de partícula 5 pm; fase móvil A. Agua, fase móvil B: Metanol; gradiente de flujo: 1 ml/min; 0 a 1 minutos 50%B; 1 a 20 minutos 50-95 %B; Longitud de onda 230 nm; tR agente de generación de imagen 6 16 minutos. Rendimiento radioquímico 23±2% (n = 3) sin decaimiento corregido, tiempo 90 a 120 minutos, pureza radioquímica >99%.

La figura 2 muestra una elución conjunta del agente de generación de imagen 6 y el agente de generación de imagen no radioactivo 6.

Ejemplo 4: Síntesis de f9-(2-Fluoro-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-carbazol-4-il1-piperidin-1-H-metanona (análogo no radioactivo agente de generación de imagen 6) Ejemplo 4 (a): (2-Fluoro-etil)-fenil-amina (24) En un frasco de fondo redondo se combinaron anilina (0.5 g, 5.4 mmol), 2,6-lutidina (0.58 g, 5.4 mmol) y tosilato de 2-fluoroetilo (12; preparado de acuerdo con el Ejemplo 2(a)) (1.17 g, 5.4 mmol) en DMF (2.5 ml_) y se agitó a una temperatura de 100°C durante la noche. La reacción se dejo enfriar y posteriormente se diluyó con acetato de etilo (50 mL). Esto se lavó con agua (3 x 20 mL) y los orgánicos se secaron y concentraron in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (100 g, 0% a 100% B, 18 CV, 85 mL/min) para proporcionar 435 mg (60%) de (2-fluoro-etil)-fenil-amina (24) en la forma de un aceite amarillo. La estructura se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 3.41 (1H, t, J= 3 Hz, NChbCHsF), 3.50 (1H, f, J= 3 Hz, NCJI2CH2F), 3.93 (1H, s, br), 4.54 (1H, t, J= 3 Hz, NCH_2CH2F), 4.71 (1H, t, J= 3 Hz, NCH2CJI2F), 6.65-6.82 (3H, m, 2 x NCCH, NCCHCHCH.). 7.14-7.28 (2H, m, 2 x NCCHCHCH).

Ejemplo 4(b). f9-(2-Fluoro-etil)-2.3.4.9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-Hl-piperidin-1 -il-metanona (agente de generación de imagen no radioactivo 6) Una mezcla de 2-bromo-6-(piperidina-1-carbonil)-ciciohexanona (20; preparado de acuerdo con el ejemplo 3(b)) (500 mg, 1.7 mmol) y (2-fluoro-etil)-fenil-amina (24) (890 mg, 3.5 mmol) se agitó bajo N2 a una temperatura de 50°C durante 3 horas y la reacción se volvió café. La mezcla resultante se disolvió en propan-2-ol (2 mL) y se agregó cloruro de zinc seco (682 mg, 5 mmol). La mezcla se calentó a reflujo bajo N2 durante 16 horas y posteriormente se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en acetato de etilo (50 mL) y se lavó con 2 N HCI (20 mL), agua (2 x 20 mL) y una solución de carbonato de potasio acuoso (2 x 20 mL), posteriormente se secó y concentró in vacuo. El material crudo se trituró con éter dietílico para producir 151 mg (27%) de [9-(2-fluoro-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-il]-piperidin- -il-metanona (agente de generación de imagen no radioactivo 6) en la forma de un sólido color blanco. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3) d0 21.6, 21.8, 24.7, 26.5, 26.9, 27.4, 37.3, 43.1 (d, JCF = 45 Hz), 47.0, 82.1 (d, JCF = 173 Hz), 108.5, 108.9, 118.6, 119.4, 121.0, 126.8, 136.2, 172.7.

Ejemplo 5: Síntesis de éster 2-[4-(bencil-met¡l-carbamoil)- 1 ,2,3.4-tetrahidro-carbazol-9-il]-etílico de ácido metanosul fónico (compuesto precursor 7) y bencil-metil- amida de ácido 9-(2-ri18Flfluoro-etil)-2.3.4-9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxilico (agente de generación de imagen 7) Ejemplo 5 (a): éster etílico de ácido 9-(2-benciloxi-etH)-2, 3, 4<9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (25) Una mezcla de (2-benciloxi-etil)-fenil-am¡na (21, preparado de acuerdo con el Ejemplo 3(c)) (8.0 g, 26 mmol) y éster etílico de ácido 3-bromo-2-hidroxi-ciclohex-1 -enecarboxílico (4; preparado de acuerdo con el Ejemplo 1(d)) (3.2 g, 13 mmol) se agitó bajo N2 a una temperatura de 50°C durante 3 horas y la reacción se volvió café. La mezcla resultante se disolvió en propan-2-ol (30 mL) y se agregó cloruro de zinc seco (10.6 g, 78 mmol). La mezcla se calentó a reflujo bajo N2 durante 16 horas y posteriormente se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en acetato de etilo (300 mL) y se lavó con 2 N HCI (100 mL), agua (2 x 100 mL) y una solución de carbonato de potasio acuoso (2 x 100 mL) posteriormente se secó y concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (2.5% a 40% B, 17 CV, 330 g, 100 mL/min) para proporcionar 3.49 g (72%) de éster etílico de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (25) en la forma de un aceite. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3) 5C 14.2, 20.5, 21.8, 26.5, 38.6, 42.9, 60.4, 68.7, 73.2, 106.4, 108.8, 118.7, 120.7, 127.4, 127.5, 128.3, 136.2, 136.9, 137.8, 175.0.

Eiemolo 5(b): ácido 9-(2-benciloxi-etil)-2.3.4.9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (26) Se disolvió éster etílico de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (25) (35 g, 9.3 mmol) en etanol (9 mL) y posteriormente se agregó NaOH (1.56 g) en agua (15 mL). La reacción se calentó a reflujo durante 2 horas. La reacción se concentró in vacuo y el residuo se diluyó con agua y se lavó con diclorometano (2 x 150 mL). La capa acuosa se agregó en forma de gotas a 2 N HCI (150 mL) y posteriormente se extractó en diclorometano (3 x 150 mL). Los orgánicos se secaron y concentraron in vacuo para producir 2.48 g (92%) de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (26) en la forma de un sólido color amarillo el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3) 5C 20.4, 21.8, 26.4, 38.3, 42.9, 68.7, 73.3, 105.7, 108.8, 118.7, 119.3, 102.9, 127.4, 127.6, 128.3, 136.2, 137.1, 137.8, 108.9. Ejemplo 5(c): bencil-metil-amida de ácido 9-(2-benciloxi-etiD-2,3,4, 9-tetrahidro-lH-carbazol-4-carboxílico (27) Se disolvió ácido 9-(2-benciloxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (26) (600 mg, 1.7 mmol) se disolvió en DCM seco (8 mL) bajo nitrógeno y se agregó cloruro de oxalilo (393 mg, 3.1 mmol, 0.26 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y hubo una evolución de gas vigorosa. La reacción se concentró in vacuo y posteriormente se volvió a disolver en diclorometano (8 mL) y se enfrió a una temperatura de 0°C y se agregó N-bencilmetilamina (412 mg, 3.4 mmol, 0.44 mL). La reacción se templó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se lavó con una solución de carbonato de potasio acuosa al 5%, se secó y concentró in vacuo para proporcionar un aceite color café. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (30% B, 10 g) para producir 246 mg (64%) de bencil-metil-amida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (27) en la forma de un aceite amarillo. La estructura se confirmó mediante 1H RMN (CDCI3) d? 1.60-2.30 (4H, m, CHCH_2CH2CH2), 2.70-2.90 (2H, m, CHCH2CH2CIH2), 3.10 (1.5H, s, N(CH.3)CH2Ph), 3.13 (1.5H, s, N(CH.3)CH2Ph), 3.73 (2H, t, J= 6 Hz, NCH2CH20), 4.10-4.30 (3H, m, NCHzCHzO, CHCH2CH2CH2), 4.42 (1H, s, OChhPh), 4.44 (1H, s, OCHj.Ph), 4.80 (1H, s, N(CH3)CH2Ph), 4.81 (1H, s, N(CH3)Ci±2Ph), 6.90-7.50 (14H, m).

Ejemplo 5(d): bencil-metil-amida de ácido 9-(2-hidroxi-etil)-2.3.4.9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (28) A una solución bencil-metil-amida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (27) (246 mg, 0.5 mmol) en metanol (15 mL) se le agregó a una pasta de Pd/C (200 mg) en metanol (10 mL). La mezcla se colocó en un hidrogenador Parr y se agitó durante 24 horas bajo una atmósfera de hidrógeno. La reacción se filtró a través de una almohadilla de celita, se lavó con metanol y concentró in vacuo para proporcionar 36 mg (20%) de bencil-metil-amida de ácido 9-(2-hidroxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (28) en la forma de un aceite color verde el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. La estructura se confirmó mediante 1H RMN (CDCI3) d? 1.80-2.20 (4H, m), 2.70-3.00 (2H, m), 3.20-4.30 (10 H, m), 6.90-7.50 (9H, m).

Ejemplo 5(e) éster 2-í4-(bencil-metil-carbamoil)-1 ,2,3.4-tetrahidro- carbazol-9-ill-etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 7) A una solución de bencil-metil-amida de ácido 9-(2-hidroxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (28) (36 mg, 0.1 mmol) en diclorometano (2 mL) se le agregó piridina (7.91 g, 1.0 mmol, 8.1 mL). La reacción se enfrió a una temperatura de 0°C y se agregó cloruro de metanosulfonilo (57 mg, 0.5 mmol, 0.04 mL). La reacción se dejo templar a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se lavó con 2 N HCI (2 x 10 mL) y agua (2 x 10 mL), se secó y concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (20% a 80% B, 4 g, 45 CV, 18 mL/min) para producir 14 mg (32%) de éster 2-[4-(bencil-metil-carbamoil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-carbazol-9-il]-etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 7) en la forma de un aceite amarillo. La estructura sé confirmó mediante 1H RMN (CDCI3) d? 1.10-2.40 (5H, m), 2.51 (1.5H, s, OSO2CH3), 2.54 (1.5H, s, OS02CH3), 2.70-2.90 (2H, m), 3.08 (1.5H, s, NCH3), 3.15 (1.5H, s, NCH3), 3.40-3.70 (1 H, m), 4.10-4.80 (4H, m), 7.00- 7.50 (9H, m).

Ejemplo 5(f). bencil-metil-amida de ácido 9-(2-íl8Flfluoro-etil)- 2,3,4, 9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen 7) Se llevó a cabo el etiquetado del compuesto precursor 7 con 18F tal como se describe en el Ejemplo 1(f). HPLC de Semi-preparación: Columna HICHROM ACE 5 C18 (100 x 10 mm Ld.), tamaño de partícula 5 pm; fase móvil A: Agua, fase móvil B: etanol; gradiente de flujo: 3 ml/min; 0 a 1 minutos 50% B; 1 a 20 minutos 50% a 95%B; Longitud de onda 254 nm; fR agente de generación de imagen 7, 17 minutos.

HPLC Analítico: Columna Phenomenex Luna C18 (150 x 4.6 mm i.d.), tamaño de partícula 5 pm; fase móvil A: Agua, fase móvil B: Metanol; gradiente de flujo: 1 ml/min; 0 a 1 minutos 50% B; 1 a 20 minutos 50% a 95%B; Longitud de onda 230 nm; rR agente de generación de imagen 7 16 minutos.

Rendimiento radioquímico 23±2% (n = 3) sin decaimiento corregido, tiempo 90 a 120 minutos, pureza radioquímica >99%. La figura 3 muestra la elución conjunta del agente de generación de imagen 7 y el agente de generación de imagen no radioactivo 7, Ejemplo 6: bencil-metil-amida de ácido 9-(2-(fluoro-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (agenté de generación de imagen no radioactivo 7) Ejemplo 6(a): éster etílico de ácido 3-bromo-2-hidroxi-ciclohex-1 -enocarboxílico (29) Se disolvió 2-oxociclohexanocarboxilato de etilo (5.0 g, 29 mmol, 4.7 mL) en éter dietílico (5 mL) y se enfrió a una temperatura de 0°C bajo N2. Se agregó bromo (4.6 g, 29 mmol, 4.2 mL) en forma de gotas durante 15 minutos y la mezcla de reacción se dejo templar a temperatura ambiente durante 90 minutos. La mezcla se vertió lentamente en la solución de carbonato de sodio acuosa saturada enfriada con hielo (40 mL) y se extractó con acetato de etilo (3 x 40 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron y concentraron in vacuo para producir 5.96 g (81%) de éster etílico de ácido 3-bromo-2-hidroxi-ciclohex-1 -enocarboxílico (29) en la forma de un aceite amarillo pálido el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, DMSO-d6) 5c 14.14, 17.65, 21.77, 32.02, 59.95, 60.83, 99.70, 166.33, 172.81.

Ejemplo 6(b) éster etílico de ácido 9-(2-fluoro-etil)-2.3A.9-tetrahidro- 1 H-carbazol-4-carboxílico (30) Una mezcla de (2-fluoro-etil)-fenil-amina (24; preparado de acuerdo con el Ejemplo 4(a)) (560 mg, 4.0 mmol) y éster etílico de ácido 3-bromo-2-hidroxi-ciclohex-1 -enocarboxílico (29) (500 mg, 2.0 mmol) se agitó bajo N2 a una temperatura de 50°C durante 3 horas y la reacción se volvió color café. La mezcla resultante se disolvió en propan-2-ol (4 mL) y se disolvió en cloruro de zinc seco (820 mg, 6 mmol). La mezcla se calentó a reflujo bajo N2 durante 16 horas y posteriormente se concentró in vacuo. El producto se disolvió en acetato de etilo/éter (30 mL/150 mL) y se lavó con 2 N HCI (40 mL), agua (2 x 100 mL) y una solución de carbonato de potasio acuosa (2 x 100 mL) posteriormente se secó y concentró para producir 447 mg (91%) del éster etílico de ácido 9-(2-fluoro-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (30) en la forma de un aceite amarillo el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3) 5C 14.3, 20.4, 21.7, 26.4, 38.5, 43.1 (d, JCF = 15 Hz), 60.6, 76.6, 77.0, 77.4, 82.1 (d, JCF = 173 Hz), 106.9, 108.5, 118.9, 119.4, 121 1, 127.1, 136.2, 136.7, 174.9.

Ejemplo 6(c): ácido 9-(2-fluoro-etil)-2.3.4.9-tetrahidro- 1 H-carbazol-4-carboxílico (31) Se disolvió éster etílico de ácido 9-(2-fluoro-etil)-2, 3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (30) (380 mg, 1.3 mmol) en etanol (3 mL) y posteriormente se agregó NaOH (520 mg) en agua (5 mL). La reacción se calentó a reflujo durante 2 horas. La reacción se concentró in vacuo y el residuo se diluyó con agua y se lavó con diclorometano (2 x 50 mL). La capa acuosa se agregó en forma de gotas a 2 N HCI (50 mL) y posteriormente se extractó en diclorometano (3 x 50 mL). Los orgánicos se secaron y concentraron in vacuo para producir 130 mg (37%) de ácido 9-(2-fluoro-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (31)en la forma de un sólido color amarillo el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional. La estructura se confirmó mediante 1H RMN (300 Hz, CDCI3) d 1.90-2.42 (4H, m, 2- y 3-Chb), 2.60-2.91 (2H, m, 1-ChU), 3.94 (1H, t, J = 6 Hz, 4-CHJ, 4.30 (1H, t, J= 6Hz, NCi±2CH2F), 4.37 ( 1 H , t, J = 6 Hz, NCH_2CH2F), 4.59 (1H, t, J = 6 Hz, NCH2CH2F), 4.74 (1H, t, J = 6 Hz, NCH2CH_2F), 7.05-7.26 (3H, m, ArHJ, 7.59 (1H, d, J = 9 Hz, ArH).

Ejemplo 6(d). cloruro de 9-(2-fluoro-etil)-2.3.4.9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carbonilo (32) Se agitó ácido 9-(2-fluoro-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (31) (0.5 g, 1.91 mmol) en diclorometano seco (6 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente con cloruro de oxalilo (490 mg, 3.8 mmol, 0.34 mL) y una gota de DMF. La reacción se concentró in vacuo para producir 545 mg (cuantitativo) de cloruro de 9-(2-fl uoro-eti I )-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carbonil (32) el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3) 6C 20.2, 21.6, 26.7, 43.1, 43.4, 50.6, 80.9, 83.1, 105.3, 108.8, 118.3, 120.0, 121.6, 126.5, 136.2, 137.5, 176.1.

Ejemplo 6(e) bencil-metil-amida de ácido 9-(2-fluoro-etil)- 2, 3.4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen no radioactivo 7) Se disolvió cloruro de 9-(2-fluoro-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carbonilo (32) (110 mg, 0.4 mmol) en diclorometano (1 ml_) y se enfrió a una temperatura de 0°C. Se agregó N-bencilmetilamina (92 mg, 0.8 mmol, 98 L) y la reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se extinguió con una solución de carbonato de potasio acuosa al 10% (2 ml_). La capa de diclorometano se recolectó a través de un separador de fase, posteriormente se concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (20% a 100% B, 12 g, 30 CV, 30 mL/min) para producir 39 mg (28%) de bencil-metil-amida de ácido 9-(2-fluoro-etil)-2, 3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen no radioactivo 7). La estructura se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 1 75-2.32, (4H, m, 2- y 3- Ch ). 2.68-2.86 (2H, m, I-CH2), 3.10 (1H, s, NCH3), 3.14 (2H, s, NCH3), 4.17-4.39 (3H, m , NCh CH2F y 4-Ch ), 4.52-4.87 (4H, m, NChbP y NCH2CI±2F), 6.96-7.42 (9H, m, ArH).

Ejemplo 7: Síntesis de éster 2-(4-dietilcarbamoil-6-fluoro- 1 ,2.3,4-tetrah id ro-carbazol-9-il) -etílico de ácido metanosul fónico (compuesto precursor 9) v dietilamida de ácido 6-fluoro-9-(2-riaFlfluoro-etil)-2.3.4.9-tetrahidro-1H- carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen 9) Ejemplo 7 (a): 2-benciloxi-N-(4-fluoro-fenil)-acetamida (33) A una solución de ácido benciloxiacético (4.6 g, 28.0 mmol, 4.0 mL) en DCM (52 mL) se le agregó cloruro de oxalilo (7.7 g, 61 mmol, 5.3 mL) y una gota de DMF. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Se eliminó el exceso de cloruro de oxalilo in vacuo para proporcionar benciloxi-cloruro de acetilo. El cloruro de acilo crudo se diluyó en DCM (100 mL) y se agregó trietilamina (5.3 mL, 41.6 mmol, 4.2 g) seguido de 4-fluoroanilina (3.5 g, 32 mmol, 3.0 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción posteriormente se extinguió con HCI acuoso 1 M (100 mL), se secó y concentró in vacuo para proporcionar 7.1 g (95%) de 2-benciloxi-N-(4-fluoro-fenil)-acetamida (33) en la forma de un aceite amarillo el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3) 5C 69.2, 73.5, 115.4 (d, JCF = 22 Hz), 121.4 (d, JCF 7 Hz), 127.9, 128.2, 128.5, 132.5 (d, JCF = 3 Hz), 136.3, 157.6, 160.8, y 167.5.

Ejemplo 7(b): (2-benciloxi-etil)-(4-fluoro-fenil)-amina (34) A una suspensión de LAH (1.25 g, 27 mmol) en éter dietílico seco (100 mL) se le agregó en forma de gotas una solución de 2-benciloxi-N-(4-fluoro-fenil)-acetamida (33) (6.9 g, 27 mmol) en éter dietílico seco (100 mL). La adición fue de modo que se mantuviera un reflujo. Una vez que se completó la adición, la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 4 horas, posteriormente se vertió en agua-hielo y se agregó DCM. Con el objeto de romper la sal de aluminio, se agregó una solución de acuoso hidróxido de sodio acuosa 2M hasta que se obtuvo un pH básico fuerte. Las capas se separaron y la capa acuosa se lavó con DCM, se secó y concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (5% a 50% B, 100 g, 12 CV, 60 mL/min) para proporcionar 5.5 g (84%) de (2-benciloxi-etil)-(4-fluoro-fenil)-amina (34) en la forma de un aceite amarillo. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3) óc 44.0, 68.3, 72.8, 113.7 (d, JCF = 7 Hz), 115.3 (d, JCF = 22 Hz), 127.5, 127.6 (d, JCF = 3 Hz), 128.3, 137.8, 144.5, 154.1, y 157.2.

Ejemplo 7(c). dietilamida de ácido 3-bromo-2-oxo-ciclohexanocarboxílico (35) Se calentaron 2-ciclohexona-carboxilato de etilo (7.50 mL, 47.0 mmol), DMAP (1 72 g, 14.1 mmol) y dietilamina (9.77 mL, 94.0 mmol) a reflujo durante 72 horas en tolueno (100 mL). La reacción se dejo enfriar y el tolueno se eliminó bajo presión reducida. El aceite crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (1:1, 100 g, Si02) para proporcionar 6.8 g (73%) de dietilamina de ácido 2-oxo-ciclohexanocarboxílico en la forma de un aceite color naranja. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (CDCI3) d 11.1, 12.7, 21.3, 24.9, 28.5, 39.4, 39.6, 51.7, 166.5, 205.9.

Se disolvió dietilamina de ácido 2-oxo-ciclohexanocarboxílico (3.56 mL, 19.3 mmol) en éter dietílico (5 mL) y se enfrió con agitación a una temperatura de 0°C bajo N2. Se agrego en forma de gotas bromo (0.99 mL, 19.3 mmol) durante 15 minutos y la mezcla de reacción se dejo templar a temperatura ambiente sobre 3 horas. Un sólido se precipitó de la reacción. Se recolectó mediante filtración y se lavó con éter para proporcionar 5.85 g (109%) de dietilamida de ácido 3-bromo-2-oxo-ciclohexanocarboxílico (35) en la forma de un sólido color amarillo pálido. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (CDCI3) d 11.2, 12.8, 22.7, 28.8, 37.6, 37.9, 39.4, 51.0, 55.7, 165.5, 197.2.

Ejemplo 7(d). dietilamida de ácido 9-(2-bencHoxi-etil)-6-fluoro-2.3.4.9-tetrahidro-1 H-carbazol-4- carboxílico (36) Una mezcla de 2-benciloxi-N-(4-fluoro-fenil)-acetamida (33) (5.3 g, 22 mmol) y dietilamida de ácido 3-bromo-2-oxo-ciclohexanocarboxílico (35) (3.0 g, 13 mmol)) se agitó bajo N2 a una temperatura de 50°C durante 3 horas y la reacción se volvió color café. La mezcla resultante se disolvió en propan-2-ol (30 mL) y se agregó cloruro de zinc seco (9.0 g, 66 mmol). La mezcla se calentó a reflujo bajo N2 durante 16 horas y posteriormente se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en acetato de etilo (300 mL) y se lavó con 2 N HCI (100 mL), agua (2 x 100 mL) y una solución de carbonato de potasio acuosa (2 x 100 mL) posteriormente se secó y concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (10% a 50% B, 100 g) para proporcionar 196 mg (11%) de dietilamida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-6-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (36) en la forma de un sólido color blanco La estructura se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 1.14 (3H, t, J = 7 Hz, N(CH2CH3)2), 1.30 (3H, t, J= 7 Hz, N(CH2CH3)2), 1.60-2.60 (4H, m, 2- y 3-CH2), 2.70-2.85 (2H, m, I-CJI2), 3.10-3.65 (4H, m, N(CH2CH3)2 y NCH2CH2OBn), 3.66-3.75 (1H, m, 4-CHJ, 4.00-4.25 (2H, m, NCH2CH_20Bn), 4.41 (2H, s, OChbPn), 6.75-6.95 (2H, m, NCCHCHCFCH), 7.05-7.15 (1H, m, NCCHCHCFCH.), y 7.16-7.25 (5H, m, Ph).

Ejemplo 7(d). dietilamida de ácido 6-fluoro-9-(2-hidroxi-etil)-2, 3,4,9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (37) A una solución de dietilamida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-6-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (36) (600 mg, 1.4 mmol) en metanol (40 mL) se le agregó una pasta de Pd/C (100 mg) en metanol (5 mL). La mezcla se colocó en un hidrogenador Parr y se agitó durante 24 horas bajo una atmósfera de hidrógeno. La reacción se filtró a través de una almohadilla de celita, se lavó con metanol y se concentró in vacuo para proporcionar 460 mg (80%) de dietilamida de ácido 6-fluoro-9-(2-hidroxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4- carboxílico (37) en la forma de un aceite amarillo el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. La estructura se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, MeOD-d3) d? 1.18 (3H, t, J= 9 Hz, N(CH2CH3)2), 1.35 (3H, t, J= 9 Hz, N(CH2CH3)2), 1.80-2.20 (4H, m, 2- y 3-CHi), 2.69-3.88 (2H, m, I-CH2). 3.40-3.86 (6H, m, N(CH_2CH3)2 y NChUCHzOH), 4.03-4.22 (3H, m, NCH2CH20H y 4-CH), 6.75-6.95 (2H, m, NCCHCHCFCH), y 7.05-7.15 (1H, m, NCCHCHCFCH.

Ejemplo 7(e) éster 2-(4-dietilcarbamoH-6-fluoro-1 ,2,3,4-tetrahidro-carbazol-9-il)-etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 9) A una solución de dietilamida de ácido 6-f luoro-9-(2-hidroxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H- ca rb a zol-4 -carboxílico (37) (460 mg, 1.4 mmol) en diclorometano (20 ml_) se le agregó piridina (1.11 g, 14.0 mmol, 1.1 ml_). La reacción se enfrió a una temperatura de 0°C y se agregó cloruro de metanosulfonilo (722 mg, 6.3 mmol, 0.5 mL). La reacción se dejo templar a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se lavó con 2 N HCI (2 x 30 mL) y agua (2 x 30 mL), se secó y concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (0% a 100% (B), 10 g, 45 CV, 30 mL/min) posteriormente se trituró con éter dietílico para producir 166 mg (30%) de éster 2-(4-dietilcarbamoil-6-fluoro-1,2,3,4-tetrahidro-carbazol-9-il)-etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 9) en la forma de un sólido color blanco. La estructura se confirmó mediante 3C RMN (75 MHz, CDCI3) 6C 12.9, 15.0, 21.1, 27.7, 36.1, 36.7, 40.6, 41.7, 67.8, 103.3 (d, JCF = 23 Hz), 108.7, 109.0, 109.1, 109.4 (d, Jc = 5 Hz), 126.9 {d, JCF = 10 Hz), 132.4, 138.4, 156.1, 159.2, y 173.3.

Ejemplo 7(f): dietilamida de ácido 6-fluoro-9-(2-t18 Flfluoro-etil)- 2,3,4, 9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen 9) El etiquetado del compuesto precursor 9 con 18F, se llevó a cabo tal como se describe en el Ejemplo 1(f).

HPLC de Semi-preparación: Columna HICHROM ACE 5 C18 (100 x 10 mm Ld.), tamaño de partícula 5 pm; fase móvil A: Agua, fase móvil B: Metanol; gradiente de flujo: 3 ml/min; 0 a 1 minutos 40 % B; 1 a 20 minutos 40% a 95%B¡ Longitud de onda 254 nm; rR agente de generación de imagen 9 15 minutos.

HPLC-Analítico: Columna Phenomenex Luna C18 (150 x 4.6 mm Ld.), tamaño de partícula 5 µ??; fase móvil A: Agua, fase móvil B: Metanol; gradiente de flujo: 1 ml/min; 0 a 1 minutos 50% B; 1 a 20 minutos 50% a 95%B; Longitud de onda 230 nm; fR agente de generación de imagen 9 14 minutos.

Rendimiento radioquímico 26±8% (n = 4) sin decaimiento corregido, tiempo 90 a 120 minutos, pureza radioquímica >99%. La figura 4 muestra la elución conjunta del agente de generación de imagen 9 y el agente de generación de imagen no radioactivo 9.

Ejemplo 8: Síntesis de dietilamida de ácido 6-fluoro-9-(2-fluoro-etil)-2,3,4.9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen no radioactivo 9) Ejemplo 8 fa): (2-Fluoro-etil)-(4-fluoro-feniD-amina (38) En un frasco de fondo redondo se combinaron 4-fluoroanilina (1.3 g, 11.6 mmol, 1.6 ml_) 2,6-lutidina (1.24 g, 11.6 mmol) y tosilato de 2-fluoroetilo (12; preparado de acuerdo con el Ejemplo 2(a)) (2.5 g, 11.6 mmol) en DMF (5 ml_) y se agitaron a una temperatura de 100°C durante la noche. La reacción se dejo templar y posteriormente se diluyó con acetato de etilo (100 ml_). Esto se lavó con agua (3 x 40 ml_) y los orgánicos se secaron y concentraron in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (10% B, 100 g, 12 CV, 60 mL/min) para proporcionar 383 mg (20%) de (2-fluoro-etil)-(4-fluoro-fenil)-amina (38) en la forma de un aceite color amarillo. La estructura se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 3.30-3.35 (1H, m, NCH2CH2F), 3.40-3.45 (1H, m, NChbCHsF), 3.90 (1H, s, br, NJH), 4.53 (1H, t, J = 3 Hz, NCH2CH_2F), 4.69 (1H, t, J= 3 Hz, NCH2CH_2F), 6.51-6.72 (2H, m, 2 x NCCHJ, 6.85-7.05 (2H, m, 2 x NCCHCHJ.

Ejemplo 8(b): dietilamida de ácido 6-fluoro-9-(2-fluoro-etil)- 2.3.4,-tetrahidro- 1H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen no radioactivo 9) Una mezcla de dietilamida de ácido 3-bromo-2-oxo- ciclohexanocarboxílico (35; preparado de acuerdo con el Ejemplo 7(c)) (336 mg, 1.2 mmol) y (2-fiuoro-etil)-(4-fluoro-fen¡l)-amina (38) (383 mg, 2.4 mmol) se agitó bajo N2 a una temperatura de 50°C durante 3 horas y la reacción se volvió color café. La mezcla resultante se disolvió en propan-2-ol (2 ml_) y se agregó cloruro de zinc seco (491 mg, 3.6 mmol). La mezcla se calentó a reflujo bajo N2 durante 16 horas y posteriormente se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en acetato de etilo (20 mL) y se lavó con 2 N HCI (10 mL), agua (2 x 10 mL) y una solución de carbonato de potasio acuoso (2 x 5 mL) posteriormente se secó y concentró in vacuo. El material crudo se trituró con éter dietílico para producir 40 mg (10%) de dietilamida de ácido 6-fluoro-9-(2-fluoro-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen no radioactivo 9) en la forma de un sólido color blanco. La estructura se confirmó mediante 1H RMN (300 Hz, CDCI3) d? 1.13 (3H, t, J = 9 Hz, N(CH2CH_3)2), 1-30 (3H, t, J = 9 Hz, N(CH2CH3)2), 1.55-2.14 (4H, m, 2- y 3-Chb), 2.78-2.86 (2H, m, 1-Chb), 3.36-3.67 (4H, m, N(CJ±2CH3)2), 4.00-4.10 (1H, m, 4-CIH), 4.30 (2H, dm, J= 21 Hz, NCH2CH2F), 4.60 (2H, dm, J= 41 Hz, NCH2CH2F), 6.75-6.95 (2H, m, NCCH.CHCFCH), y 7.05-7.15 (1H, m, NCCHCHCFCH..

Ejemplo 9: Síntesis de éster 2-(4-dietilcarbamoil-5-fluoro- 1.2.3.4-tetrahidro-carbazol-9-il) -etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 10) y dietilamida de ácido 5-fluoro-9-(2-r8Flfluoro-etin-2.3.4.-9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen 10) Ejemplo 9 (a). 2-benciloxi-N-(3-fluoro-fenil)-acetamida (39) A una solución de ácido benciloxiacético (4.65 g, 28 mmol, 4.0 mL) en DCM (52 mL) se le agregó cloruro de oxalilo (7.7 g, 61 mmol, 5.3 mL) y una gota de DMF. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Se eliminó el exceso de cloruro de oxalilo se eliminó in vacuo y el cloruro de acilo crudo se diluyó en DCM (100 mL) y se agregó trietilamina (5.3 mL, 41.6 mmol, 4.2 g) seguido de 3-fluoroanilina (3.5 g, 32 mmol, 3.0 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Posteriormente la reacción se extinguió con HCI acuoso 1 M (100 mL), se secó y concentró in vacuo para producir 7.10 g (95%) de 2-benciloxi-N-(3-fluoro-fenil)-acetamida (39) en la forma de un aceite amarillo el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3) 5C 69.2, 73.5, 106.9, 107.2, 111.0 (d, JCF = 24 Hz), 114.9 (d, JCF = 3 Hz), 127.8, 128.2, 128.5, 129.7 (d, JCF = 9 Hz), 136.2, y 167.6.

Ejemplo 9(b): (2-benciloxi-etil)-(3-fluoro-fenil)-amina (40) A una suspensión de LAH (1.25 g, 27 mmol) en éter dietílico seco (100 mL) se le agregó en forma de gotas una solución de 2-benciloxi-N-(3-fluoro-fenil)-acetamida (39) (7.0 g, 27 mmol) en éter dietílico seco (100 mL). La adición fue de modo que se mantuviera un reflujo. Una vez que se completó la adición, la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 4 horas, posteriormente se vertió en agua-hielo y se agregó DCM. Con el objeto de romper la sal de aluminio, se agregó una solución de hidróxido de sodio acuosa 2M hasta que se obtuvo un pH base fuerte. Las capas se separaron y la capa acuosa de lavó con DCM, se secó y concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (5% a 50% B, 100 g, 12 CV, 60 mL/min) para producir 4.1 g (84%) de (2-benciloxi-etil)-(3-fluoro-fenil)-amina (40) en la forma de un aceite color amarillo. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDC ): óc 43.3, 68.2, 73.0, 99.4 {d, JCF = 24 Hz), 103.5, 103.8, 108.8, 127.4 [d, JCF = 3 Hz), 127.6, 128.4, 130.0 (d, JCF = 9 Hz), y 138.8.

Ejemplo 9(c): dietilamida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-5-fluoro-2, 3,4,9-tetrahidro- 1 H-carbazol-4-carboxílico (41 ) Una mezcla de dietilamida de ácido 3-bromo-2-oxo-ciclohexanocarboxílico (35; preparado de acuerdo con el Ejemplo 7(c)) (2.3 g, 10 mmol) y (2-benciloxi-etil)-(3-fluoro-fenil)-amina (40) (4.1 g, 17 mmol) se agitó bajo N2 a una temperatura de 50°C durante 3 horas y la reacción se volvió color café. La mezcla resultante se disolvió en propan-2-ol (10 mL) y se agregó cloruro de zinc seco (4.09 g, 30 mmol). La mezcla se calentó a reflujo bajo N2 durante 16 horas y posteriormente se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en acetato de etilo (200 mL) y lavó con 2 N HCI (50 mL), agua (2 x 50 mL) y una solución de carbonato de potasio acuoso (2 x 50 mL) posteriormente se secó y concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (5% a 100% B, 100 g, 28 CV, 60 mL/min) para proporcionar 1.3 g (30%) de dietilamida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-5-fluoro-2, 3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (41) junto con el isómero de dietilamida de ácido 9-(2-benciloxi-et¡l)-7-fluoro-2, 3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico en la forma de una mezcla, la cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. La estructura de dietilamida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-5-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (41) fue confirmada mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 1.10-1.40 (6H, m, N(CH2CH3)2), 1.60-2.60 (4H, m, 2- y 3-CK2), 2.70-2.85 (2H, m, I-CH2), 3.10-3.65 (4H, m, N(CH_2CH3)2 y ChhCHzOBn), 4.00-4.30 (3H, m , CH2C]±20Bn y 4-CH], 4.43 (2H, s, OChbPh), 6.55-6.65 (1H, m, NCCHCHCHCF), 6.90-7.05 (1H, m, NCCHCHCHCF), 7.05-7.15 (1H, m, NCCH.CHCHCF), y 7.16-7.25 (5H, m, Ph).

La estructura de la dietilamida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-7-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 1.10-1.40 (6H, m, N(CH2CH3)2), 1.60-2.60 (4H, m , 2- y 3-C ¿), 2.70-2.85 (2H, m, I-CH2), 3.10-3.65 (4H, m, N(CJ±2CH3)2 y NCH2CH2OBn), 4.00-4.30 (3H, m, NCH2CJ±20bn y 4-CH), 4.55 (2H, s, OCH^Ph), 6.70- 6.80 (1H, m, NCCHCFCHCH), y 7.00-7.40 (7H, m, NCCHCFCHCH y Ph).

Ejemplo 9(d): dietilamida de ácido 5-fluoro-9-(2-hidroxi-etil)-2, 3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (42) A una solución de la mezcla de dietilamida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-5-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxilico (41) y dietilamida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-7-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (1.3 g, 3.0 mmol) en metanol (75 mL) se le agregó una pasta de Pd/C (200 mg) en metanol (10 mL). La mezcla se colocó en un hidrogenador Parr y se agitó durante 24 horas bajo una atmósfera de hidrógeno. La reacción se filtró a través de una almohadilla de celita, se lavó con metanol y se concentró in vacuo para proporcionar 743 mg (80%) de una mezcla de dietilamida de ácido 5-fluoro-9-(2-hidroxi-etil)-2, 3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (42) y dietilamida de ácido 7-fluoro-9-(2-hidroxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico en la forma de un aceite amarillo la cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. La estructura dietilamida de ácido 5-fluoro-9-(2-hidroxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (55) se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 1.10-1.40 (6H, m, N(CH2CH3)2), 1.60-2.60 (4H, m, 2- y 3-Ch ). 2.70-2.85 (2H, m, 1-Chb), 3.10-3.65 (4H, m, N(CH2CH3)2 y ChbCHzOH), 4.00-4.30 (3H, m, CH2CH_20H, 4-CH), 6.55-6.65 (1H, m, NCCHCHCHCF), 6.90-7.05 (1 H, m, NCCHCHCHCF), y 7.05-7.15 (1H, m, NCCHCHCHCF).

La estructura de la dietilamida de ácido 7-fluoro-9-(2-hidroxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 1.10-1.40 (6H, m, N(CH2CH3)2), 1.60-2.60 (4H, m, 2- y 3-CHU), 2.70-2.85 (2H, m, 1-CH_2), 3.10-3.65 (4H, m, N(CH_2CH3)2 y CH2CH2OH), 4.00-4.30 (3H, m, NCH2CJ±20H, 4-CJH), 6.70-6.80 (1H, m, NCCHCFCHCH), y 7.00-7.40 (2H, m, CCHCFCHCH).

Ejemplo 9(e). éster 2-(4-dietilcarbamoil-5-fluoro-1 ,2,3.4-tetrahidro-carbazol-9-H)-etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 10) A una solución de una mezcla de dietilamida de ácido 5-fluoro-9-(2-hidroxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H -car bazo I -4-carboxílico (42) y dietilamida de ácido 7-fluoro-9-(2-hidroxi-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (743 mg, 2.2 mmol) en diclorometano (30 mL) se le agregó piridina (1.74 g, 22.0 mmol, 1.8 mL). La reacción se enfrió a una temperatura de 0°C y se agregó cloruro de metanosulfonilo (1.01 g, 8.8 mmol, 0.7 mL). La reacción se dejo templar a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se lavó con 2 N HCI (2 x 50 mL) y agua (2 x 50 mL), se secó y concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante HPLC de semi-preparación eluyendo con agua (A) y metanol (B) (Gemini 5u, C18, 110A, 150 x 21 mm, 50-95% B durante 20 minutos, 21 mL/min) para producir 10 mg (1 %) de éster 2-(4-dietilcarbamoil-7-fluoro- ,2,3,4- tetrah¡dro-carbazol-9-M)-etílico de ácido metanosulfónico en la forma de un sólido color blanco y 30 mg (9%) de una mezcla de éster 2-(4-dietilcarbamoil-7-fluoro-1,2,3,4-tetrahidro-carbazol-9-i I )-et í I i co de ácido metanosulfónico y éster 2-(4-dietilcarbamoil-5-fluoro-1 ,2,3,4-tetrahidro-carbazol-9-il)-etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 10) en la forma de un sólido color blanco. Utilizando estas condiciones de purificación, el éster 2-(4-diet¡lcarbamoil-5-fluoro-1 ,2,3,4-tetrahidro-carbazol-9-il)-etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 10) no puede ser aislado en la forma de un componente simple. La estructura del éster 2-(4-dietilcarbamoil-7-fluoro-1,2,3,4-tetrahidro-carbazol-9-il)-etílico de ácido metanosulfónico se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 1-18 (3H, f, J = 7 Hz, N(CH2CH3)Z), 1.39 (3H, t, J = 7 Hz, N(CH2CH3)2) 1.70-2.30 (4H, m, 2- y 3-CH2), 2.58 (3H, s, OSO2CH.3), 2.60-2.80 (2H, m, 1-Chb), 3.40-3.65 (4H, m, N(CH_2CH3)2), 4.02 (1H, í, J= 6 Hz, 4-CH), 4.20 (2H, t, J = 7 Hz, NCH2CH2OMs), 4.35 (2H, t, J = 7 Hz, NCH^tbOMs), 6.70-6.85 (1H, m, NCCHCFCHCH), 6.90-7.00 (1H, m, NCCHCFCHCH), y 7.05-7.15 (2H, m, NCCHCFCHCH).

La estructura del éster 2-(4-dietilcarbamoil-5-fluoro- ,2,3,4-tetrahidro-carbazol-9-¡l)- etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 10) se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 1.18 (3H, t, J = 7 Hz, N(CH2CH_3)2), 1.39 (3H, t, J = 7 Hz, N(CH2CH3)2) 1.70-2.30 (4H, m, 2- y 3-CH2), 2.58 (3H, s, OS02CH_3), 2.60-2.80 (2H, m, 1-CH_2), 3.40-3.65 (4H, m, NiCHjCHa ), 4.15 (1H, m, 4-CH), 4.20 (2H, t, J= 7 Hz, NChbCHzOMs), 4.35 (2H, t, J= 7 Hz, NCH2CH2OMS), 6.55-6.65 (1H, m, NCCHCHCHCF), 6.90-7.05 (1H, m, NCCHCHCHCF), y 7.05-7.15 (1H, m, NCCHCHCHCF). Ejemplo 9(f). dietilamida de ácido 5-fluoro-9-(2-[18Flfluoro-etil)- 2,3,4, 9-tetrahidro- 1H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de ¡mapen 10) La mezcla del compuesto precursor 10 y éster 2-(4-d¡et¡lcarbamo¡l-7-fluoro-1,2,3,4-tetrahidro-carbazol-9-¡l)-étíl¡co de ácido metanosulfónico se utilizó en la reacción de radioetiquetado. El radioetiquetado con 18F se llevó a cabo tal como se describe en el Ejemplo 1(f). Se obtuvieron dietilamida de ácido 7-f luoro-9-(2-[18F]fluoro-etil)-2, 3,4, 9-tetrahidro- 1 H-carbazol-4-carboxílico, agente de generación de imagen 10.

HPLC de Semi-preparación: Columna HICHROM ACE 5 C18 (100 x 10 mm i.d), tamaño de partícula 5 pm; fase móvil A. Agua, fase móvil B: Metanol; gradiente de flujo: 3ml/min; 0 a 1 minutos 50% B; 1 a 20 minutos 50% a 95%B; Longitud de onda 254 nm; tR agente de generación de imagen 10, 15 minutos; fR dietilamida de ácido 7-fluoro-9-(2-[ 8F]fluoro-etil)-2, 3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico 14 minutos.

HPLC Analítico: columna Phenomenex Luna C18 (150 x 4.6 mm i.d.), tamaño de partícula 5 pm; fase móvil A: Agua, fase móvil B: Metanol; gradiente de flujo: 1 ml/min; 0 a 1 minutos 50% B; 1 a 20 minutos 50% a 95%B; Longitud de onda 230 nm; rK agente de generación de imagen 10, 16 minutos; rR dietilamida de ácido 7-fluoro-9-(2-[18F]fluoro-etil)-2, 3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico 14 minutos. Rendimiento radioquímico del agente de generación de imagen 10, 8.7±1% (n = 3) sin decaimiento no corregido, tiempo 90 a 120 minutos, pureza radioquímica >99%. La figura 5 muestra el agente de generación de imagen 10 (superior) y dietilamida de ácido 7-fluoro-9-(2-[18F]fluoro-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (parte media) y dietilamida de ácido 7-fluoro-9-(2-[l9F]fluoro-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxilico (parte inferior).

Ejemplo 10: Síntesis de dietilamida de ácido 5-f luoro-9-(2-f luoro-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol -4 -carboxílico (agente de generación de imagen no radiactivo 10) Ejemplo 10(a): (2-fluoro-etil)-(3-fluoro-fenil)-amina (43) Se agitaron 3-fluoroanilina (1.4 g, 11.6 mmol,1.2 mL) y tosilato de 2-fluoroetilo (12; preparado de acuerdo con el Ejemplo 2(a)) (2.5 g, 11.6 mmol) y lutidina (1.24g, 11.6mmol) y se calentaron en DMF (5 mL) a una temperatura de 100°C durante la noche. La reacción se dejo enfriar y posteriormente se diluyó con acetato de etilo (100 mL). Esto se lavó con agua (3 x 40 mL) y los orgánicos se secaron y concentraron ¡n vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (10% B, 100 g, 12 CV, 60 mL/min) para producir 184 mg (10%) de (2-fluoro-etil)-(3-fluoro-fenil)-amina (43) en la forma de un aceite amarillo. La estructura se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 3.37 (1H, q, J = 6 Hz, NCH2CH2F), 3.46 (1H, q, J = 6 Hz, NCH2CH2F), 4.12 (1H, s, br, NH), 4.54 (1H, t, J= 3 Hz, NCH2CH_2F), 4.69 (1H, t, J= 3 Hz, NCHJCHJF), 6.3 1-6.50 (3H, m, NCCH_CH_CH_), 7.10-7.25 (1H, m, NCCHCF).

Ejemplo 10(b): dietilamida de ácido 5-fluoro-9-(2-fluoro-etil)-2,3,4.9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen no radioactivo 10) Una mezcla de dietilamida de ácido 3-bromo-2-oxo-ciclohexanocarboxílico (35; preparado de acuerdo con el Ejemplo 7(c)) (161 mg, 0.6 mmol) y (2-fiuoro-etil)-(3-flüoro-fenil)-amina (43) (184 mg, 1.2 mmol) se agitó bajo N2 a una temperatura de 50°C durante 3 horas y la reacción se volvió color café. La mezcla resultante se disolvió en propan-2-ol (1 mL) y se agregó cloruro de zinc seco (245 mg, 1.8 mmol). La mezcla se calentó a reflujo bajo N2 durante 16 horas y posteriormente se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en acetato de etilo (10 mL) y se lavó con 2 N HCI (5 mL), agua (2 x 5 mL) y una solución de carbonato de potasio acuoso (2 x 5 mL) posteriormente se secó y concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante HPLC de semi-preparación eluyendo con agua (A) y metanol (B) (Gemini 5u, C18, HOA, 150 x 21mm, 50% a 95% B durante 20 minutos, 21 mL/min) para producir 20 mg (6%) de dietilamida de ácido 7-fluoro-9-(2-fluoro-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico en la forma de un sólido color blanco y 10 mg (3 %) de dietilamida de ácido 5-fluoró-9-(2-fluoro-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen no radioactivo 10) en la forma de un sólido color blanco. La estructura de dietilamida de ácido 7-fluoro-9-(2-fluoro-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico se confirmó mediante H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 1.14 (3H, t, J = 7 Hz, N(CH2CH3)2), 1.33 (3H, t, J= 7Hz, N(CH2CH3)2), 1.80- 2.15 (4H, m, 2-y 3-Ch ), 2.70-2.80 (2H, m, 1-CJ±2), 3.50-3.80 (4H, m, N(CH_2CH3)2), 4.20-4.35 (1 H, m, 4-CH), 4.40 (2H, dm, J = 21 Hz, NCH_2CH2F), 4.60 (2H, dm, J= 41 Hz, NCH2CH_2F), 6.70-6.80 (1 H, m, NCCHCFCHCH), y 7.00-7.10 (2H, m, NCCHCFCH.CH).

La estructura de dietilamida de ácido 5-fluoro-9-(2-fluoro-etil)-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen no radioactivo 10) se confirmó mediante H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 1.14 (3H, t, J= 7 Hz, N(CH2CH3)2), 1.33 (3H, t, J= 7 Hz, N(CH2CH3)2), 1.80-2.15 (4H, m, 2- y 3-Ch ), 2.70-2.80 (2H, m, 1-CH2), 3.50-3.80 (4H, m, N(CH_2CH3)2), 4.20-4.35 (1H, m, 4-CH), 4.40 (2H, dm, J = 21 Hz, NCH2CH2F), 4.60 (2H, dm, J= 41 Hz, NCH2CH_2F), 6.55-6.65 (1H, m, NCCHCHCHCF), 6.90-7.05 (1H, m, NCCHCHCHCF), y 7.05-7.15 (1H, m, NCCHCHCHCF).

Ejemplo 11: éster 2-(4-dietilcarbamoil-2-metil-1.2.3.4-tetrahidro-carbazol-9-il)-etílico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 11) v dietilamida de ácido 9-(2-r18FlFluoro-etil)-2-metil-2.3.4.9-tetrahidro-1H-carbazol--4-carboxílico (agente de peneración de imagen 11) Ejemplo 11(a) 4-(4-Metil-ciclohex-1 -enil)-morfolina (44) En un frasco equipado con una trampa DEAN STARK, se sometieron a reflujo una solución de 4-metilciclohexanona (20.1 g, 179.3 mmol, 22 ml_) y morfolina (31.3 g, 359.0 mmol, 31.4 ml_) en benceno (55 ml_) durante 26 horas. El benceno se eliminó bajo vacío y el producto crudo se purificó mediante destilado bajo presión reducida para producir 23 g (70%) de 4-(4-metil ciclohex-1 -enil)-morfolina (44) en la forma de un aceite (p.b. 120°C en 10 mmHg). La estructura se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3): d? 0.94 (3H, d, J= 6.0 Hz, CH3), 1.15-1.35 (1H, m, Ch CH = CN), 1.50-1.80 (3H, m, CH2CH2CHCH3), 2.00-2.25 (4H, m, CH_2CH = CN y ChbCl-hCHCHa), 2.65-2.95 (4H, m, OCHzNChb), 3.73 (4H, t, J = 6.0 Hz, OCH2NCH2), y 4.60-4.65 (1H, m, CH2CIH = CN).

Ejemplo 1(b): éster etílico de ácido 5-metil-2-oxo-ciclohexanocarboxílico (45) A una solución de 4-(4-metil-ciclohex-1 -enil)-morfolina (44) (23 g, 127.0 mmol) en benceno (55 ml_), se le agregó cloroformato de etilo (7.5 g, 69.0 mmol, 6.6 ml_) bajo nitrógeno, en tanto que la solución de enamina se agitó rápidamente.

Después de someterse a reflujo durante 18 horas, la solución se enfrió y se filtró. El precipitado de clorhidrato de enamina se lavó con éter seco. El filtrado y los lavados se regresaron al frasco de reacción y se agregó HCI acuoso al 10% (40 mL). La mezcla se agitó vigorosamente durante 15 a 30 minutos. Las capas se separaron, la capa acuosa se extractó con acetato de etilo (2 x 100 mL) y las capas orgánicas combinadas se concentraron in vacuo. El material crudo se purificó mediante destilado bajo presión reducida para producir 12.5 g (53%) de éster etílico de ácido 5-metil-2-oxo-ciclohexanocarboxílico (45) en la forma de un aceite (p.b. 85°C a 90°C en 10 mmHg). La estructura se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3): d? 0.85-0.95 (3H, m, CJ±3), 1 17 (3H, t, J= 7 Hz, OCH2CH.3), 1.25-2.00 (5H, m, 5-CH, 4- y 6-C±z), 2.15-2.40 (3H, m, -CH y 3-CH2), y 4.00-4.20 (2H, m, OCH2CH3).

Ejemplo 11(c): dietilamida de ácido 5-metil-2-oxo-ciclohexanocarboxllico (46) Se calentaron a reflujo durante 4 días éster etílico de ácido 5-metil-2-oxo-ciclohexanocarboxílico (45) (5.9 g, 32 mmol), DMAP (1.12 g, 10 mmol) y dietilamina (4.7 g, 65 mmol, 6.7 mL) en tolueno (90 mL). La reacción se dejo enfriar y se eliminó el tolueno bajo presión reducida para proporcionar un aceite color amarillo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (20% a 50% B, 80 g) para proporcionar 4.4 g (65%) de dietilamida de ácido 5-metil-2-oxo-ciclohexanocarboxílico (46) en la forma de un aceite amarillo. La estructura se confirmó 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 0.8-1.05 (9H, m, CH_3 y N(CH2CH3)2), 1.05-2.10 (5H, m, 5-CH y 4- y 6-CH2), 2.15-2.80 (2H, m, 3-CH2), 2.95-3.55 (5H, m, 1-CH y N(CH2CH3)2).

Ejemplo 1(d): dietilamida de ácido 3-bromo-2-hidroxi-5-metil-ciclohex-1-enocarboxílico (47) Se disolvió dietilamida de ácido 5-metil-2-oxo-ciclohexanocarboxílico (46) (4.4 g, 21 mmol) en éter dietílico (5 mL) y se enfrió a una temperatura de 0°C bajo N2- Se agregó en forma de gotas bromo (3.32 g, 21 mmol, 11 mL) durante 15 minutos y la mezcla de reacción se dejo templar a temperatura ambiente sobre 90 minutos. La mezcla se vertió lentamente en una solución de carbonato de sodio acuosa saturada, enfriada con hielo (40 mL) y se extractó con acetato de etilo (3 x 40 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron y concentraron in vacuo para producir 6.1 g (cuantitativo) de dietilamida de ácido 3-bromo-2-hidroxi-5-metil-ciclohex- -enocarboxílico (47) en la forma de un sólido color crema. La estructura se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 0.8-1.20 (9H, m, CH_3 y N(CH2CH3)2), 1.80-2.40 (5H, m, 3.15-3.55 (4H, m, N(CH2CH3)2), 4.65-4.74 (1 H, m, C H_B r ) , y 12.04 (1H, s, OH).

Ejemplo 11 (e) dietilamida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-2-metil-2.3.4.9-tetrahidro-1 H-carbazol-4 carboxílico (48) Se agitó una mezcla de dietilamida de ácido 3-bromó-2-hidroxi-5-metil-ciclohex-1 -enocarboxílico (47) (4.0 g, 14 mmol) y (2-benciloxi-etil)-fen¡l-amina (21; preparado de acuerdo con el Ejemplo 3(c)) (6.3 g, 28 mmol) bajo N2 a una temperatura de 50°C durante 3 horas y la reacción se volvió color café. La mezcla resultante se disolvió en propan-2-ol (14 mL) y se agregó cloruro de zinc seco (5.72 g, 42 mmol). La mezcla se calentó a reflujo bajo N2 durante 16 horas y posteriormente se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en acetato de etilo (200 mL) y se lavó con 2 N HCI (50 mL), agua (2 x 50 mL) y una solución de carbonato de potasio acuoso (2 x 50 mL) posteriormente se secó y concentró in vacuo. La mezcla cruda se purificó mediante un cartucho SCX (40 mL) y posteriormente cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (10% a 50% B, 100 g, 12 CV, 85 mL/min) para producir 467 mg (8%) de dietilamida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-2-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (48) en la forma de un sólido color blanco. La estructura se confirmó mediante H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 1.20-1.40 (9H, m, CH3 y N(CH2CH3)2), 1.90-2.20 (3H, m, 2-CH y 3- CH2), 2.35-2.45 (1 H, m, 1-CH2), 2.85-2.95 (1 H, m, 1-CH2), 3.40-3.70 (4H, m, N(CH2CH3)2), 3.70-3.80 (1 H, m, 4-CH), 4.10-4.30 (4H, m, NCH2CH2OBn), 4.43 (2H, s, OCH2Ph), y 7.00-7.30 (9H, m, CHCHCHCH y Ph).

Ejemplo 11(f): dietilamida de ácido 9-(2-hidroxi-etil)-2-metil-2.3,4.9-tetrahidro-1 H-carbazol-4- carboxílico (49) A una solución de dietilamida de ácido 9-(2-benciloxi-etil)-2-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (48) (460 mg, 1.1 mmol) en metanol (25 ml_) se le agregó una pasta de Pd/C (100 mg) en metanol (5 ml_). La mezcla se colocó en el hidrogenador Parr y se agitó durante 24 horas bajo una atmósfera de hidrógeno. La reacción se filtró a través de una almohadilla de celita, se lavó con metanol y se concentró in vacuo para proporcionar 250 mg (79%) de dietilamida de ácido 9-(2-hidroxi-etil)-2-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1 H -car bazo I -4-carboxílico (49) en la forma de un aceite color amarillo el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. La estructura se confirmó mediante H RMN (300 IVIHz, CDCI3) d? 1.20-1.40 (9H, m, CH3 y N(CH2CH3)2), 1.90-2.20 (3H, , 2-CH y 3-CH¿), 2.35-2.45 (1H, m, 1-CH_2), 2.85-2.95 (1 H, m, -CJÍ2), 3.40-3.70 (4H, m, N(Ch CH3)2), 3.70-3.80 (1 H, m, 4-CH_), 4.10-4.30 (4H, m, NCHaCh OH), 6.91 (1H, t, J= 7 Hz, NCCHCHCHCH), 7.00 (1H, /, J= 7 Hz, NCCHCHCHCH), 7.12 (1H, d, J= 7 Hz, NCCHCHCHCH.), y 7.15 (1H, d, J= 7 Hz, NCCHCHCHCH).

Ejemplo 1 (p): éster 2-(4-d¡etilcarbamoil-2-metil- 1 , 2, 3, 4-tetrahidro-carbazol-9-il)-et!lico de ácido metanosulfónico (compuesto precursor 11) A una solución de dietilamida de ácido 9-(2-hidroxi-etil)-2-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxílico (49) (250 mg, 0.8 mmol) en diclorometano (10 mL) se le agregó piridiha (633 mg, 8.0 mmol, 0.6 mL). La reacción se enfrió a una temperatura de 0°C y se agregó cloruro de metanosulfonilo (367 mg, 3.2 mmol, 0.2 mL). La reacción se dejo templar a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se lavó con 2 N HCI (2 x 20 mL) y agua (2 x 20 mL), se secó y concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (0% a 100% B, 10 g, 34 CV, 30 mL/min) posteriormente se trituró con éter dietílico para producir 250 mg (80%) de éster 2-(4-dietilcarbamoil-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-carbazol-9-il)-etílico de ácido metanosulfonico (compuesto precursor 11) en la forma de un sólido color blanco. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, CDCI3) 6C 12.9, 13.0, 15.2, 22.0, 29.7, 30.2, 36.7, 36.8, 40.8, 41.6, 42.0, 67.8, 108.6, 109.5, 118.6, 119.6, 121.2, 126.4, 136 2, 136.4, 173.7.

Ejemplo 11(h): dietilamida de ácido 9-(2-í18 Flfluoro-etil)-2-metH- 2,3,4, 9-tetrahidro-1H-carbazol-4-carboxllico (agente de generación de imagen 11) Se llevó a cabo el etiquetado del compuesto precursor 11 con 18F tal como se describe en el Ejemplo 1(f).

HPLC de Semi-preparación: Columna HICHROM ACE 5 C18 (100 x 10 mm i.d.), tamaño de partícula 5 pm; fase móvil A: Agua, fase móvil B: Metanol; gradiente de flujo: 3 ml/min; 0 a 26 minutos 50% B; Longitud de onda 254 nm; rR agente de generación de imagen 11 15 minutos.

HPLC Analítico: Columna Phenomenex Luna C18 (150 x 4.6 mm i.d.), tamaño de partícula 5 m; fase móvil A: Agua, fase móvil B: Metanol, gradiente de flujo: 1 ml/min; 0 a 1 minutos 40 % B; 1 a 20 minutos 40% a 95 %B; Longitud de onda 230 nm; fR agente de generación de imagen 11 17 minutos.

Rendimiento radioquímico 14 ± 13 % (n = 3) sin decaimiento corregido, tiempo 90 a 120 minutos, pureza radioquímica >99%. La figura 6 muestra una elución conjunta del agente de generación de imagen Hand y el agente de generación de imagen no radioactivo 11.

Ejemplo 12: Síntesis de dietilamida de ácido 9-(2-fluoro-etil)-2-metil-2.3,4,9-tetrahidro-1 H-carbazol-4-carboxíHco (agente de generación de imagen no radioactivo 11) Una mezcla de dietilamida de ácido 3-bromo-2-hÍdroxi-5-metil-ciclohex- 1 -enecarboxílico (47; preparado de acuerdo con el Ejemplo 11 (d)) (2.0 g, 7 mmol) y (2-fluoro-etil)-fenil-amina (24; preparado de acuerdo con el Ejemplo 4(a)) (1.9 g, 14 mmol) se agitó bajo N2 a una temperatura de 50°C durante 3 horas y la reacción se volvió color café. La mezcla resultante se disolvió en propan-2-ol (7 mL) y se agregó cloruro de zinc seco (2.86 g, 21 mmol). La mezcla se calentó a reflujo bajo N2 durante 16 horas y posteriormente se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en acetato de etilo (100 mL) y se lavó con 2 N HCI (30 mL), agua (2 x 30 mL) y posteriormente la solución de carbonato de potasio acuosa (2 x 30 mL) se secó y concentró in vacuo. La mezcla cruda se purificó mediante cartucho SCX (40 mL) y posteriormente cromatografía de gel de sílice eluyendo con petrol (A) y acetato de etilo (B) (0% a 100% B, 100 g, 12 CV, 85 mL/min) para proporcionar 400 mg (17%) de dietilamida de ácido 9-(2-fluoro-etil)-2-metil-2,3,4,9-tetrah¡dro-1 H-carbazol-4-carboxílico (agente de generación de imagen no radioactivo 11) en la forma de un sólido color blanco. La estructura se confirmó mediante 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d? 1.10-1.35 (9H, m, CH3 y N(CH2CH3)2), 1.95-2.10 (2H, m, 3-CH2), 2.30-2.50 (1H, m, 2-CHJ, 2.70-2.80 (2H, m, 1-Chb), 3.40-3.70 (4H, m, N(CH2CH3)2), 4.05-4.15 (1H, m, 4-CH), 4.30 (2H, dm, J= 21 Hz, NC CHsF), 4.65 (2H, dm, J = 41 Hz, NCH2CH2F), y 7.00- 7.30 (4H, m, NCCHCHCHCH.

Ejemplo 13: Separación Enantiómerica del Compuesto 5 Se separó el compuesto precursor 5 (obtenido tal como se describe en el Ejemplo 1) en sus enantiómeros utilizando cromatografía de fluido supercrítico quirálico (C02) en una columna Kromasil Amycoat, 250 x 10 mm, 5 µ? , 100 A utilizando 30% de IPA a una temperatura de 40°C en 13 mi un minuto con un tiempo de corrida de 6 minutos. Se disolvió el compuesto precursor 5 (60 mg) en 1.4-dioxana (2 mi) y se inyectó en una sola vez hasta 200 µ? para cada corrida. Se logró la separación de línea de base entre los dos enantiómeros. La determinación HPLC analítica de la pureza enantiomérica de los dos enantiómeros separados en un IC Chiral Technologies, 250x4.6 mm, 5 pm, corrida isocrática, 80:20 - MeOH: IPA a 0.5 ml/minutos y a temperatura ambiente, indicó una pureza enantiomérica de 99.5% de cada uno de los enantiómeros.

Ejemplo 14: Separación Enantiomérica del Agente de Generación de Imagen no Reactivo 5 Enantiómero 1 Enantiómero 2 Se separó el agente de generación de imagen no radioactivo 5 (obtenido tal como se describe en el Ejemplo 2) en sus enantiómeros utilizando cromatografía de fluido supercrítico quirálico (CO2) en una columna Kromasil Amycoat, 250x10 mm, 5 pm, 100 A 20% BPA a una temperatura de 40°C en 14 mi un minuto con un tiempo de corrida de 6 minutos. Se disolvió el compuesto 5 (100 mg) en 1.4-dioxana (2.5 mi) y se inyectó hasta 200 µ? en una sola vez para cada corrida. Las fracciones se cortaron con el tiempo para asegurar que no se recolectaron fracciones mezcladas. La determinación HPLC analítica de la pureza enantiomérica de los dos enantióméros separados en una IC Chiral Technologies, 250x4.6 mm, 5 pm, corrida ¡socrática, 80:20 - MeOH: IPA a 0.5 ml/minutos y a temperatura ambiente, indicó una pureza enantiomérica de 99.5% de cada uno de los enantióméros.

Ejemplo 15: Ensayo de Potencia In Vitro Se clasificó la afinidad para PBR utilizando un método adaptado de Le Fur y asociados (Life Sci. 1983; USA 33: 449-57). Se probaron análogos no radioactivos de agentes de generación de imagen in vivo de la presente invención, junto con un análogo en un radioactivo de un agente de generación de imagen de indol tetracíclico previo (de la Solicitud de Patente PCT/EP2009/062827 también pendiente; la síntesis se describe en el Ejemplo 17 que se encuentra más adelante): Cada compuesto de prueba (disuelto en 50 mM Tris-HCI, pH 7.4, 10 mM MgCI2 que contiene 1%DMSO) compitió para enlazar PBR de corazón de rata Wistar contra 0.3 nM [3H] PK-11195. La reacción se llevó a cabo en 50 mM Tris-HCI, pH 7.4 10 mM MgCI2 durante 15 minutos a una temperatura de 25°C. Cada compuesto de prueba se clasificó en 6 diferentes concentraciones en un rango de 300 veces de concentración alrededor de K¡ estimado. Se observaron los siguientes datos: Ejemplo 16: Método de Biodistribución In Vivo Los agentes de la generación de imagen de la presente invención se probaron en un modelo de biodistribución in vivo junto con un agente de generación de imagen tetracíclico (de la solicitud de patente también pendiente PCT/EP2009/062827; síntesis descrita en el Ejemplo 18 que se encuentra más adelante).

Se inyectaron ratas Wistar macho adultas (200 a 300 g) con compuesto de prueba a través de la vena de lateral de la cola 1 a 3 MBq. A los 2, 10, 30 o 60 minutos (n = 3) después de la inyección, las ratas fueron eutanizadas y se mostraron tejidos o fluidos para medida radioactiva en un contador gamma.

Se observaron los siguientes datos: Las figuras 7 a 13 ilustran el perfil de biodistribucion en el cerebro del agente de generación de imagen tetracíclico y los agentes de generación de imagen 5 a 7 y 9 a 11, respectivamente. Se puede apreciar que los agentes de generación de imagen in vivo de la presente invención, tienen buena captación en el cerebro y una captación específica mejorada en tejidos que expresan PBR en comparación con el agente de generación de imagen tetracíclico.

Ejemplo 17: Preparación de díetilamida de ácido (+-)-11-(2-fluoroetil)-8-metoxi-6.11 -di h idro-5-tia-11-aza-benzofalfl uoreno-6-carboxílico (agente de generación de imagen de indol tetracíclico no radioactivo) 17 (a): díetilamida de ácido (+-)-4-oxo-tiocroman-2-carboxílico (501 El ácido ( + -)-4-oxo-tiocroman-2-carboxílico (10.4 g, 50 mmol), se preparó tal como se describe en la Publicación de T. Okubo y asociados (Bioorg. Med. Chem. 2004; 12: 3569-3580), en DCM seco (100 mi) se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente con cloruro de oxalilo (12.6 g, 100 mmol) y una gota de DMF durante 18 horas. Posteriormente la reacción se evaporó in vacuo hasta obtener una goma y posteriormente se volvió a disolver en DCM (100 mi), se enfrió a una temperatura de 0°C sobre un baño de hielo, se agitó y trató en forma de gotas con dietilamina (8.03 g, 110 mmol) en DCM (20 mi) durante un período de 1 hora. La reacción se dejó templar a temperatura ambiente durante 1 hora y se agregó una solución de carbonato de potasio acuosa al 10% (100 mi) y la mezcla de reacción se agitó en forma vigorosa. La solución DCM fue separada. La solución acuosa se extractó con dos lotes adicionales de DCM (100 mi) y los extractos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio. La solución DCM se concentró in vacuo para proporcionar un aceite color verde oscuro que se cristalizó al momento de asentarse. El sólido cristalino se trituró con éter dietílico (50 mi) y se filtró para proporcionar el compuesto del título (50) (8.57 g, 65%) en la forma de un sólido color verde pálido. La estructura fue confirmada mediante 'H RMN (300 MHz, CDCI3) d 1.06 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.23 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 3.0-3.5 (m, 6H), 4.25 (m, 1H), 7.15-7.21 (m, 2H), 7.32-7.39 (m, 1H), 8.10-8.14 (m,1H). 17(b): dietilamida de ácido ( + -)-8-metoxi-6.11 -dihidro-5-tia-11 -aza-benzofalfluorenc-6-carboxílico (51 ) A una solución de dietilamida de ácido ( + -)-4-oxo-tiocroman-2-carboxílico (50) (1.32 g, 5.0 mmol) y clorhidrato de hidrazina de 4-metoxifen ilo (0.87 g, 5.0 mmol) en etanol (10 mi), se le agregó ácido sulfúrico concentrado (0.73 mi, 1.35 g, 13.8 mmol) bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se calentó bajo reflujo durante 24 horas. Después de enfriarse, la mezcla de reacción de filtró, el sólido se lavó con etanol, se secó in vacuo (45 C) para proporcionar el compuesto del título (51) (1.05 g, 57%) en la forma de un sólido amarillo pálido. La estructura se confirmó mediante 13C RMN (75 MHz, DMSO-d6) d 10.5, 12.7, 32.7, 37.9, 39.5, 53.0, 97.6, 103.3, 109.87, 109.92, 120.3, 123.5, 123.8, 124.3, 124.7, 124.9, 127.8, 129.4, 131.8, 151.3, 166.2. 17 (c): dietilamida de ácido ( + -)- 11 -(2-fluoroetiD-8-metoxi-6.11 -dihidro-5-tia-11 -aza-benzoíalfluoreno- 6-carboxílico (análogo no radioactivo del agente de generación de imagen de indol tetracíclico anterior) A una solución de dietilamida de ácido ( + -)-8-metoxi-6, 11 -dihidro-5-tia-11 -aza-benzo[a]fluoreno-6-carboxílico (51) (150 mg, 0.41 mmol; preparado de acuerdo con el Ejemplo 17(b)) en DMF anhidro (4 mi) se le agregó tosilato de 2-fluoroetilo (166 mg, 0.82 mmol), preparado tal como se describe en la Publicación de L. Cronin y asociados (J. Org. Chem. 2004; 69: 5934-5946) seguido de una dispersión de hidruro de sodio al 60% en aceite mineral (34 mg, 0.82 mmol) bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se calentó a una temperatura de 80°C durante 1 hora. Después de enfriarse, los solventes se eliminaron in vacuo, el residuo se extinguió con agua (30 mi), se extractó con DCM (2 x 30 mi), se secó (MgS0 ) y los solventes se eliminaron in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna sobre sílice, eluyendo con 5% a 10% EtOAc/CH2CI2- El sólido crudo se extinguió con éter/pet. alcohol, se filtró, se secó in vacuo (45°C) para proporcionar el compuesto del título (agente de generación de imagen indol no radioactivo tetracíclico) (77 mg, 46%) en la forma de un sólido color café pálido. La estructura se confirmó mediante H RMN (300 MHz, CDCI3) d 1.12 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.36 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 3.25-3.70 (m, 4H), 3.83 (s, 3H), 4.45-4.70 (m, 2H), 4.80 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.96 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 5.09 (s, 1H), 6.84-6.93 (m, 2H), 7.13-7.32 (m, 3H), 7.46 (m, 1 H), 7.58 (d, J = 8.0 Hz, 1 H).

Ejemplo 18: Síntesis de dietilamida de ácido 1 -(2-r18Flfluoroetil)-8-metoxi-6.11 -dihidro-5-tia-11-aza-benzofalfluoreno-6-carboxíHco {agente de generación de imagen indol tetracíclico) Se agregó 18F/agua a K222 (4 mg), K2C03 acuoso (50 µ? de una solución molar 0.1) y acetonitrilo (500 µ?) en un envase de reacción y se secó durante 20 a 30 minutos a una temperatura de 100°C bajo una corriente de nitrógeno. Se agregó etil-1 ,2-ditosilato (4 mg) en acetonitrilo (1000 ul) y se calentó a una temperatura de 100°C durante 10 minutos. La mezcla de reacción se enfrió y purificó mediante HPLC de semi-preparación y se recolectó la fracción que contiene el tosilato de 18F-fluoroetilo. Esta fracción se diluyó hasta un volumen de ca.20 mi con H20, cargado en un paquete sep t-C18 ligero acondicionado y se enjuagó con H20 (1 x 2 mi). El paquete sep se secó en la línea N2 con flujo de alto nivel, durante 20minutos. El tosilato de 18F fluoroetilo se diluyó posteriormente con DMF (500 µ?).

Se agregó el compuesto precursor dietilamida de ácido ( + -)-8-metoxi-6,11-dihidro-5-tia-11-aza-benzo[a]fluoreno-6-carboxílico (51; preparado de acuerdo con el Ejemplo 17(b)) (13 mg) en DMF (250 ul) a un segundo envase de reacción, y se purgó con N2 durante 5 minutos. Posteriormente se agregó NaH (1.3 mg) en DMF(2 x 250 ul) bajo nitrógeno y el envase de reacción se calentó a una temperatura de 45°C durante 0.5 a 1 hora. A esto se le agregó posteriormente el tosilato 18F fluoroetilo en DMF preparado anteriormente y se calentó a una temperatura de 100°C durante 10 minutos en el envase de reacción purgado con N2. La reacción se enfrió y se lavó a partir del envase de reacción con agua (1 mi). La solución se filtró a través de un filtro de jeringa y se purificó en un HPLC de preparación. Se recolectó la fracción que contiene el pico radioactivo principal. Esto se diluyó hasta un volumen de ca.10 mi con H20, y se cargó en un paquete sep C18 ligero acondicionado, se enjuago con H20 (1 x 2ml), y se eluyó con EtOH (0.5 mi) en un frasco P6 y se agregó Solución Salina Amortiguada con Fosfato (5 mi).

Claims (28)

REIVINDICACIONES

1. Un agente de generación de imagen in vivo rmu la I : en donde: R1 es Ci-3 alquilo o C1-3 fluoroalquilo; R2 es hidrógeno, hidroxilo, halo, ciano, Ci-3 alquilo, Ci-3 alcoxi, C1-3 fluoroalquilo, o C1-3 fluoroalcoxi; R3 y R4 son independientemente C -3 alquilo, C7-10 aralquilo, o R3 y R4, junto con el nitrógeno al cual se adhieren, forman un anillo alifático C4-6 que contiene nitrógeno que comprende opcionalmente 1 heteroátomo adicional seleccionado de nitrógeno, oxígeno y azufre; Y1 es O, S, SO, S02 o CH2; y, Y2 es CH2, CH2-CH2, CH(CH3)-CH2 o CH2-CH2-CH2; y en donde la fórmula I tal como se define, comprende un átomo el cual es un radioisótopo adecuado para generación de imagen in vivo.

2. El agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en la reivindicación 1, caracterizado porque el radioisótopo adecuado para la generación de imagen in vivo se selecciona de 1C, 18F y 123l.

3. El agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque R1 es metilo o C2-3 fluoroalquilo.

4. El agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 3, caracterizado porque R2 es hidrógeno, halo, C1.3 alcoxi o d-3 f luoroalcoxi .

5. El agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 4, caracterizado porque R3 y R4 son independientemente metilo, etilo o bencilo.

6. El agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 4, caracterizado porque R3 y R4, junto con el nitrógeno al cual se adhieren, forman un anillo Cs.6 alifático que contiene nitrógeno.

7. El agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 6, caracterizado porque Y1 es CH2.

8. El agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 6, caracterizado porque Y2 es CH2-CH2.

9. El agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en la reivindicación 1.caracterizado porque es de la fórmula la: en donde: R2a es hidrógeno, halo o Ci-3 alcoxi; p3a y p4a son ¡ n d e p e n d ¡ e n t e m e n t e metilo, etilo o bencilo, o junto con el nitrógeno al cual se adhieren forman un anillo pirrolidinilo, piperidinilo, azepanilo, o morfolinilo; Y2a es CH2, CH2-CH2, CH(CH3)-CH2, o CH2-CH2-CH2; y; n es 1 , 2 ó 3.

10. El agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en la reivindicación 9, caracterizado porque: R3a y R4a ambos son etilo, o R3a es metilo y R4a es bencilo, o junto con el nitrógeno al cual se adhieren forman un anillo de azepanilo; R2a es hidrógeno, metoxi o fluoro; Y2a es CH2-CH2 o CH(CH3)-CH2; y, n es 2.

11. El agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en la reivindicación 10, caracterizado porque es de la siguiente estructura química:

12. Un compuesto precursor para la preparación del agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 11, caracterizado porque compuesto precursor es de la fórmula II: en donde uno de R1 y R12 comprende un grupo químico que reacciona con una fuente adecuada de radioisótopo tal como se describe en la reivindicación 1 o reivindicación 2, de modo que el agente de generación de imagen in vivo se forme al momento de la reacción del compuesto precursor con la fuente adecuada del radioisótopo, y el otro de R11 y R12 sea tal como se describe en la reivindicación 1, para R1 y R2, respectivamente, y comprende opcionalmente un grupo de protección, y R13-1 y ???-?2 son ta| como se define para R3"4 y Y1"2, respectivamente, en cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 8, y opcionalmente comprende cada uno en forma adicional un grupo de protección.

13. El compuesto precursor tal como se describe en la reivindicación 12, caracterizado porque R1 es Ci-3 alquileno-LG en donde LG es un grupo de partida seleccionado de mesilato, tosilato, y triflato.

14. El compuesto precursor tal como se describe en la reivindicación 13, caracterizado porque es un compuesto de la fórmula lia: en donde: LG es tal como se describe en la reivindicación 13; y, Ri2a-i4a Yi2a y m SQn tg) como se describe en la reivindicación 9 ó 10 para R2a"4a, Y2a y n respectivamente.

15. El compuesto precursor tal como se describe en la reivindicación 12, caracterizado porque R12 es trimetilestaño.

16. El compuesto precursor tal como se describe en la reivindicación 12, caracterizado porque es un compuesto de la fórmula llb: en donde: R11b es un grupo químico que reacciona con una fuente adecuada del radioisótopo tal como se define en la reivindicación 1 ó 2; R12 1 b es tal como se define para R12"14 en la reivindicación 12, siempre y cuando R12b es sea cloro; y, Y 1b 12b son tal como se define para ?11 12 en la reivindicación 12.

17. Un método para la preparación de un compuesto precursor de la fórmula llb tal como se describe en la reivindicación 16, caracterizado porque el método comprende la reacción con ZnCh de un compuesto de la fórmula Me: en R12c, Y11c y Y12c son tal como se describe en reivindicación 12 para R12, Y11 y Y12, respectivamente, y PG° es un grupo de protección; para formar un compuesto de la fórmula lid: en R 2d, Y 1d, Y12d y PGd son tal como se define para R12c, Y c, Y12c y PGC, respectivamente; en donde la reacción se lleva a cabo en el sistema de solvente que comprende éter dietílico.

18. Un método para la preparación del agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 11 caracterizado porque comprende: (i) proporcionar un compuesto precursor tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 12 a la 16; (ii) proporcionar una fuente adecuada del radioisótopo tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones 1 ó 2; (iii) hacer reaccionar el compuesto precursor del paso (i) con un radioisótopo (ii) para obtener el agente de generación de imagen in vivo.

19. El método tal como se describe en la reivindicación 18, caracterizado porque es automático.

20. Un equipo para llevar a cabo el método tal como se describe en la reivindicación 18, caracterizado porque comprende el precursor tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 12 a la 16.

21. Un cartucho para llevar a cabo el método tal como se describe en la reivindicación 19, caracterizado porque comprende: (i) un envase que contiene el compuesto precursor tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 12 a la 16; y, (ii) medios para eluir el envase tal como se describe en el paso (i) con una fuente adecuada de un radioisótopo adecuado para la generación de imagen in vivo tal como se describe en la reivindicación 1 o reivindicación 2.

22. El cartucho tal como se describe en la reivindicación 21, caracterizado porque comprende adicionalmente: (iii) un cartucho de intercambio de iones para la eliminación del radioisótopo en exceso; y opcionalmente, (iv) en donde el compuesto precursor comprende uno o más grupos de protección, un cartucho para desprotección del producto radioetiquetado resultante para formar un agente de generación de imagen in vivo tal como aquí se define en la presente invención.

23. Una composición radiofarmacéutica que comprende el agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 11, junto con un transportador biocompatible en una forma adecuada para administración a mamíferos.

24. Un método de generación de imagen in vivo para determinar la distribución y/o el grado de expresión PBR en un sujeto, en donde el método comprende: (i) administrar al sujeto un agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 11; (¡i) permitir que el agente de generación de imagen in vivo se enlace a PBR en dicho sujeto; (iii) detectar a través de un procedimiento de generación de imagen in vivo, señales emitidas por el radioisótopo del agente de generación de imagen in vivo; (iv) generar una imagen representativa de la ubicación y/o cantidad de las señales; y (v) determinar la distribución y grado de expresión PBR en el sujeto, en donde la expresión se correlaciona directamente con las señales emitidas por el agente de generación de imagen in vivo.

25. El método de generación de imagen in vivo tal como se describe en la reivindicación 24, caracterizado porque se lleva a cabo en forma repetida durante curso de un régimen de tratamiento para dicho sujeto, en donde el régimen comprende administración de un fármaco para combatir una condición PBR.

26. Un método para el diagnóstico de una condición eh la cual PBR se activa, en donde el método comprende una generación de imagen in vivo tal como se describe en la reivindicación 24, junto con un paso adicional (vi) de atribuir la distribución y grado de expresión PBR a una imagen clínica particular.

27. El agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 11, para utilizarse en el método para el diagnóstico tal como se describe en la reivindicación 26.

28. El agente de generación de imagen in vivo tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 11 para utilizarse en la fabricación de una composición radiofarmacéutica tal como se describe en la reivindicación 21, para utilizarse en el método de diagnóstico tal como se describe en la reivindicación 26.