MX2011004856A - Farmaco o composicion dermatologica que contiene un extracto peptidico de aguacate para el tratamiento y prevencion del prurito. - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a un fármaco o composición dermatológica que contiene un extracto peptídico de aguacate para tratar y/o prevenir prurito, en particular, prurito gravídico, prurito sine materia, prurito en recién nacidos, y prurito que se origina de un fármaco.

Description

FÁRMACO O COMPOSICIÓN DERMATOLÓGICA QUE CONTIENE UN EXTRACTO PEPTÍDICO DE AGUACATE PARA EL TRATAMIENTO Y PREVENCIÓN DEL PRURITO MEMORIA DESCRIPTIVA La presente invención se refiere a un fármaco o composición dermatológica que contiene un extracto peptídico de aguacate para el tratamiento del prurito y trastornos no infecciosos incluyendo a la picazón.

El uso de extractos peptídicos de aguacate en el tratamiento o la prevención de enfermedades relacionadas con una deficiencia del sistema inmunológico ya se han descrito en la solicitud de patente WO2005/105123. De hecho, se ha demostrado que los extractos peptídicos de aguacate son capaces de aumentar la producción de péptidos antimicrobianos, en particular -defensina-2 de humano (hBD-2). Por lo tanto, dichos extractos son particularmente adecuados para el tratamiento o la prevención de la piel inflamada o inmadura o la piel de individuos inmunodepnmidos. También se ha demostrado que dichos extractos peptídicos de aguacate no provocan reacciones inflamatorias, irritaciones o intolerancias.

Además de esta acción sobre la piel inflamada o inmadura o la piel de los individuos inmunodeprimidos, los inventores han descubierto ahora, de una manera sorprendente, que una composición que contiene un extracto peptidico de aguacate se puede utilizar para tratar o prevenir el prurito y los trastornos no infecciosos incluyendo la picazón.

El prurito es un signo funcional y se define como "una sensación que provoca el deseo de rascarse". Puede ser localizado, difuso o generalizado. Es particularmente especial en la piel y la semi-mucosa. El rascado hace que el prurito desaparezca por completo, pero sólo temporalmente. El rascado repetitivo, intenso puede dar lugar a lesiones cutáneas. En el contexto de la presente invención, el término "prurito" se refiere al prurito patológico que es una molestia para el paciente, incluso algunas veces es incapacitante. Puede ser lo suficientemente desagradable para que el paciente prefiera el dolor a la picazón, lo cual puede explicar las lesiones inducidas por el rascado.

La sensación cutánea comúnmente referida como prurito se puede considerar como una respuesta uniforme a una amplia variedad de estímulos físicos y químicos, endógenos o exógenos. Estos estímulos actúan sobre los receptores de las terminaciones nerviosas libres ubicadas en la unión dermo-epidérmica y aproximadamente los folículos del pelo. El principal agente responsable de la picazón es la histamina, una molécula química liberada en particular por los mastocitos. La histamina, cuando se libera, se une a los receptores nerviosos de la piel y causan el prurito. La sensación se transmite por las mismas fibras nerviosas que transmiten las sensaciones de dolor al cerebro.

Al igual que la histamina, la triptasa, una proteasa igualmente liberada por los mastocitos, también está muy involucrada en la fisiopatología del prurito: la triptasa induce la señal de prurito mediante la unión a los receptores de la proteasa (receptor-2 activado por proteasa, o PAR-2) en las fibras nerviosas.

El dolor, la temperatura y el tacto son todas sensaciones transmitidas por las mismas fibras nerviosas no mielinizadas libres que inervan la piel humana. La simulación a baja intensidad de estas fibras causará prurito, mientras que la estimulación más intensa dará lugar a una genuina sensación de dolor. A pesar de que se transmiten a través de las mismas fibras sensoriales, los impulsos neurales de picazón tienen una frecuencia mucho más baja que los impulsos de dolor, sin embargo, si el rascado sigue en respuesta al estímulo de prurito, la frecuencia del impulso nervio aumenta la con la intensidad de rascado y la sensación correspondiente cambia de picazón a dolor.

La comezón puede ser inducida por una amplia variedad de circunstancias, tanto fisiológicas como patológicas. En particular, cuando se generaliza y se asocia con lesiones cutáneas, tales como ampollas y pápulas, el prurito es a menudo el efecto de una enfermedad dermatológica primaria, en muchos casos, es el síntoma de diagnóstico fundamental. Por otro lado, en la ausencia de lesiones cutáneas (en piel sana), el prurito puede presentarse en muchos casos de trastornos sistémicos tales como, por ejemplo, las enfermedades neoplásicas, trastornos metabólicos, también reacciones alérgicas o de hipersensibilidad a ciertos fármacos, o en el embarazo. Por último, en otros casos, la picazón parece ser el único síntoma crónico dominante, sin la posibilidad de alguna aclaración sobre la etiopatogénesis de esta enfermedad. En estos casos, la picazón normalmente se indica por el prurito sine materia, es decir, representa un síntoma de origen desconocido que no es clasificable en la ausencia de cambios extracutáneos o cutáneos identificables. Los signos objetivos únicos, aunque secundarios, del trastorno en cuestión se limitan a las marcas de rascado, tales como excoriaciones lineales y, si la situación dura por un período de tiempo más largo, se presentan pequeñas pápulas secundaria (es decir, pápulas debidas a rascado) y signos de liquenificación con hiperpigmentación en los casos más crónicos.

La presente invención se refiere a un fármaco o composición dermatológica que contiene un extracto peptídíco de aguacate, que contiene 2% al 10% en peso de alfa-amino nitrógeno en relación con el peso de la materia seca del extracto peptídico, y un excipiente adecuado, para el uso del mismo para el tratamiento o prevención del prurito interno y los trastornos no infecciosos incluyendo la picazón.

Los trastornos no infecciosos incluyendo la picazón se refieren a la comezón inexplicable que no se debe a las infecciones.

El prurito se puede subdividir en dos tipos: prurito localizado (tales como picaduras de insectos, dermatitis seborréica, tina, candidiasis) y prurito difuso.

La invención se refiere al prurito difuso.

Dicho prurito difuso se puede subdividir en dos familias: la presencia de lesiones cutáneas específicas es característica de dermatosis pruriginosa, la ausencia de lesiones cutáneas específicas (a excepción de posibles lesiones por el rascado) es característica del prurito interno.

La invención se refiere al tratamiento y la prevención del prurito interno. Dicho prurito interno no es el resultado de cualquier dermatosis inflamatoria o una deficiencia del sistema inmune (en particular de la inmunidad innata).

Por lo tanto, la presente invención se relaciona con el tratamiento y la prevención del prurito asociado a diversas formas de picor cuya etiología no está en relación con las lesiones dermatológicas, en particular las lesiones alérgicas (eccema, urticaria, dermatitis atópica, dermatitis irritante o dermatitis por contacto, erupción polimórfica ligera, exantema, reacción alérgica) o lesiones infecciosas (parasitosis cutánea, dermatofitosis, ftiriasis del cuerpo y del cuero cabelludo, varicela, VIH, lepidopterismo). En particular, la expresión "prurito interno" no incluye la dermatitis irritante.

El prurito se selecciona ventajoso del grupo que comprende prurito gravidarum, prurito sine materia, prurito neonatal (relacionado con la xerosis) y prurito relacionado con los fármacos. Por lo tanto, la invención se refiere a un fármaco que contiene un extracto peptídico de aguacate, que contiene 2% al 10% en peso de alfa-amino nitrógeno en relación con el peso de la materia seca del extracto peptídico, y un excipiente adecuado, para tratar o prevenir un prurito seleccionado del grupo que comprende prurito gravidarum, prurito sine materia, prurito neonatal (relacionado con la xerosis) y prurito relacionado con los fármacos.

De conformidad con una variación ventajosa de la invención, el fármaco o composición dermatológica, que contiene el extracto peptídico de aguacate y por lo menos un excipiente, es para el tratamiento y prevención de prurito gravidarum.

De diez a veinte por ciento de los embarazos son complicados por prurito gravidarum, que en las mujeres embarazadas es un prurito difuso, sin lesiones cutáneas específicas de una dermatosis inflamatoria o alérgica.

Un ejemplo particular del prurito gravidarum es la colestasis obstétrica. Esta "colestasis del tercer trimestre" es la principal causa de ictericia durante el embarazo. Los estrógenos y la progesterona parecen jugar un papel esencial en este prurito. Un prurito aislado e intenso que provoca insomnio y lesiones por rascado es el primer síntoma de la colestasis obstétrica. La ictericia también puede estar presente.

El extracto peptídico de aguacate de conformidad con la invención también es activo en el tratamiento del prurito gravidarum, que podría ser secundario a la colestasis obstétrica y cuyos signos externos son una erupción de pequeñas pápulas pruriginosas.

De conformidad con una variación ventajosa de la invención, el fármaco o composición dermatológica, que contiene el extracto peptídico de aguacate y por lo menos un excipiente, es para el tratamiento y prevención del prurito sine materia.

El grupo de prurito sine materia incluye síntomas de picazón que aparece sin conexión con las lesiones orgánicas o con las enfermedades sistémicas o de la piel (lo que se refiere como prurito psicógeno) en las regiones genitales externas (tales como prurito vulvar y prurito del escroto) y en la región perianal (prurito anal), así como prurito de la piel envejecida (prurito senil).

El prurito psicógeno (prurito de origen psicológico) es un prurito relativamente frecuente.

El prurito psicógeno abarca: - parasitofobia en la que los pacientes, mayores de 40 años de edad, creyendo estar infestados por parásitos, proceden a la excavación repetida y mutilante de la piel; - trastorno ficticio que representa todas las lesiones causadas o agravadas por las distintas acciones del paciente, principalmente al cavar con las uñas.

El prurito senil es una afección generalizada, extendida entre las personas mayores de 65 años. Se sabe que tiene un componente psicógeno. El prurito senil se ve agravado por la desecación de la piel y la sequedad cutánea. La piel deshidratada, generalmente combinada con la exposición a las condiciones ambientales de baja humedad y temperatura, induce la formación de grietas finas y la descamación de la piel de los sujetos de edad avanzada, con picor persistente y difuso como una consecuencia.

De conformidad con una variación ventajosa de la invención, el fármaco o composición dermatológica, que contiene el extracto peptidico de aguacate y lo menos un excipiente, es para el tratamiento y prevención del prurito neonatal relacionado con la xerosis neonatal.

La estructura de la piel de un recién nacido a término es idéntica a la de un bebé. Sin embargo, la piel de un recién nacido a término tiene la característica distintiva de descamación fisiológica. Esta última afecta al 65% de los recién nacidos a término y es el cambio cutáneo neonatal más importante. Indica la existencia de xerosis cutánea significativa. Es más marcado en las manos, los tobillos y los pies, pero puede estar más extendido. Dicha descamación desaparece espontáneamente durante las dos primeras semanas de vida.

Los inventores han señalado con interés que el extracto peptidico de aguacate de conformidad con la invención hace que sea posible prevenir o tratar dicha xerosis en los recién nacidos a término, en particular para controlar rápidamente (antes de que la descamación desaparezca de forma natural) la descamación observada. El extracto peptidico de aguacate de conformidad con la invención también permite la hidratación y/o reabsorción de grasa de la piel de los recién nacidos y por lo tanto acelera la desaparición de la descamación observada.

De conformidad con una variación ventajosa de la invención, el fármaco o composición dermatológica, que contiene el extracto peptídico de aguacate y lo menos un excipiente, es para el tratamiento y prevención del prurito relacionado con fármaco.

El prurito relacionado con fármaco se debe al uso continuo o intermitente de ciertos fármacos (barbitúricos, antibióticos, aspirina, sulfonamidas, etc.).

Los ejemplos de moléculas que probablemente causan la aparición de prurito incluyen el ácido acetilsalicílico, antimalariales (cloroquina), antirretrovirales (inhibidores de la proteasa), inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (ACE), interferón, opiáceos (heroína), fenotiazinas, retinoides, tolbutamida y finalmente las vitaminas del grupo B. La aplicación en la piel de sustancias irritantes para uso cosmético (por ejemplo, exfoliantes) o para uso profesionales (por ejemplo, lana de vidrio) también pueden causar prurito, ya sea que dicho prurito esté o no asociado con lesiones cutáneas.

Durante el prurito intenso y crónico, la liquenificación de la piel, que es una forma particular de engrosamiento cutáneo, también puede aparecer. Cuando las le.siones de liquenificación adquieren un aspecto nodular, indican prúrigo. Además, estas lesiones de liquenificación son ellas mismas pruriginosas y como un resultado contribuyen al mantenimiento del prurito. El extracto peptídico de aguacate de conformidad con la invención también es adecuado para la prevención o tratamiento de dicha liquenificación.

Muy interesantemente, los inventores han observado que, además de sus efectos sobre la prevención o el tratamiento del prurito, el extracto peptídico de aguacate también tiene una actividad reabsorción de grasa o hidratante, lo que refuerza su acción sobre el prurito, en particular, el prurito senil o prurito neonatal. Por lo tanto, la invención además se refiere a un fármaco o composición dermatológica como se describió anteriormente, caracterizada porque tiene además una actividad hidratante y reabsorción de grasa.

El fármaco o composición dermatológica de conformidad con la invención es especialmente adecuada para el tratamiento del prurito interno, que puede estar asociado con la sequedad cutánea o descamación, en las mujeres embarazadas, los recién nacidos a término y los ancianos. Ventajosamente, el fármaco o composición dermatológica está indicada para mujeres embarazadas o recién nacidos a término.

En el contexto de la presente invención, la expresión " alfa-amino nitrógeno" se refiere al contenido de nitrógeno de los péptidos en la forma de grupos alfa-amino libres. La medición del contenido de alfa-amino nitrógeno de los péptidos permite evaluar el grado de hidrólisis de las proteínas, así como la masa molar promedio de los péptidos.

El extracto peptídico de aguacate se puede obtener directamente de cualquier parte del aguacate o árbol de aguacate, tales como la fruta, piel o semilla del aguacate o las hojas o raíces del árbol de aguacate. También es posible obtener el extracto peptídico de aguacate a partir de los subproductos de la industria procesadora de aguacate, incluyendo, pero no de manera exhaustiva: la pulpa fresca del aguacate, pulpa congelada, pulpa deshidratada, concentrados de aceite de aguacate derivados de los procesos de extracción del aceite (extracción mecánica y/o extracción por solventes utilizando fruta deshidratada de antemano), materia sólida sin aceite derivada de los procesos de extracción del aceite en húmedo (denominados procesos de centrifugación), materia sólida sin aceite derivada de los procesos enzimáticos de extracción del aceite de aguacate, aguacate en puré triturado (guacamole) y residuos sólidos de las unidades que fabrican dicho puré de aguacate. El extracto se obtiene de manera ventajosa a partir de la fruta fresca del árbol de aguacate. Los frutos se pueden seleccionar entre las variedades Hass, Fuerte, Ettinger, Bacon, Nabal, Anaheim, Lula, Reed, Zutano, Queen, Chola Selva, Mexicana Canta, Región Dschang, Hall, Booth, Peterson, y Collinson Red, de manera más ventajoso entre las variedades Hass, Fuerte y Reed. Preferiblemente, se seleccionarán las variedades Hass, Fuerte, Ettinger y Bacon, y más ventajosamente las variedades Hass y Fuerte.

El fruto del árbol de aguacate está compuesto principalmente de agua, pulpa, aceite y semilla. Las proporciones de estos componentes son, al igual que toda la materia natural y vegetal, muy variable. Sin embargo, generalmente se aceptan los datos de composición media presentados en el cuadro 1 a continuación, expresados en porcentajes de fruta fresca: CUADRO 1 En relación con la pulpa, las proteínas de aguacate representan del 1.5% al 2.5% (J.P. Gaillard, L'Avocatier, Edición G. P. Maisonneuve et Larose, 1987, pp 266-67). La distribución de los aminoácidos, expresada en porcentaje en peso en relación con el peso total de los aminoácidos, se presenta en el siguiente cuadro 2: CUADRO 2 Alanina 5-7 Arginina 3-5 Acido aspártico 8-12 Cistina-cisteína <1 Acido glutámico 11-13 Glicina 4-6 Histidina 4-6 Isoleucina 4-7 Leucina 8-11 Lisina 4-7 Metionina 1-3 Fenilalanina 4-6 Prolina 4-7 Serina 4-6 Treonina 4-6 Tirosina 3-6 Valina 4-7 Los principales aminoácidos son el ácido glutámico, ácido aspártico y leucina.

En comparación con los cultivos clásicos de producción de aceite y proteína tales como la soya, el girasol o la colza, el aguacate es claramente más bajo en contenido de proteínas. Además, el contenido en fibra relativamente alto del aguacate hace que sea muy difícil tener acceso a estas proteínas a través de las vías química o bioquímicas clásicas. Además, el carácter muy poco hidrosoluble de estas macromoléculas naturales sugiere la preparación de fracciones hidrolizadas de estas proteínas (péptidos), que muestran muy alta solubilidad en agua y mucho mejor biodisponibilidad. De esta forma, su potencial alergénico también se puede eliminar. La invención también se refiere a la preparación de un extracto peptídico de aguacate a través de una vía de síntesis controlada que no desnaturaliza las proteínas hidrolizadas El extracto peptídico de aguacate es ventajosamente un extracto acuoso sin lipidos. Dicho extracto acuoso sin lípidos ventajosamente lleva a cabo una hidrólisis enzimática. Las proteínas de aguacate se hidrolizan ventajosamente por proteasas. De conformidad con una variación ventajosa de la invención, los azúcares presentes en el extracto acuoso sin lípidos también están hidrolizados (en la presencia de glucanasas, por ejemplo).

Más particularmente, el extracto peptídico de aguacate se puede obtener por un método que comprende los siguientes pasos: - se obtiene un concentrado de aceite de aguacate, de forma ventajosa a partir de la fruta de aguacate, a través de secado y extracción del aceite (lipidos), tras lo cual - dicho concentrado de aceite se fragmenta en frío (criomolienda) y se eliminan los lipidos totalmente, luego se decanta, se centrifuga y se recolecta, tras lo cual - se lleva a cabo una primera hidrólisis en la presencia de glucanasas, seguido de centrifugación y la eliminación de la fracción soluble; - se lleva a cabo una segunda hidrólisis en la presencia de una o más proteasas, seguido de centrifugación y la eliminación de la pastilla, tras lo cual - la fase peptídica se concentra por nanofiltración; - se lleva a cabo la decoloración en la presencia de carbón activado, por ejemplo, seguido por filtración simple (10 pm), luego por ultrafiltración (límite de 10 kDa) y, finalmente, - si es necesario, microfiltración final por esterilización (0.2 pm), y adición de conservadores y envasado.

De conformidad con una variación ventajosa de la invención, el primer paso del método consiste en el secado, luego desaceitado de la fruta. Por lo tanto, después de que la fruta ha sido cortada en rebanadas finas, se puede secar por cualquiera de las técnicas conocidas por aquellas personas expertas en la técnica, entre las que se puede citar secado por aire caliente, liofilización o secado osmótico. En general, la temperatura durante esta etapa de secado se mantendrá de manera ventajosa en o por debajo de 80°C, independientemente de la técnica utilizada. En el contexto del presente método, por razones de fácil implementación y costo, se prefiere el secado en secaderos ventilados, en capa fina y bajo una corriente de aire caliente a una temperatura entre 70°C y 75°C. La duración de esta operación puede variar entre 5 horas y 72 horas.

Los lípidos de los frutos secos se extraen entonces ya sea mecánicamente en un concentrado, o químicamente con un solvente tal como el hexano en un extractor Soxhiet o en un extractor de cinta continua De Smet®, en particular notablemente, de conformidad con el método descrito en la Solicitud Francesa FR 2843027, o por un método que utiliza C02 supercrítico. Entre las principales ventajas del método, el subproducto oleoso se puede recuperar directamente de manera fácil. Por esta razón, se prefiere la extracción mecánica de lípidos.

Los frutos secos y sin aceite, también llamados un concentrado de aceite, se pueden someter entonces a los siguientes pasos: - criomolienda, - eliminación total de lípidos, sobre todo con un solvente grado alimento no tóxico tal como el etanol y/o acetona, - decantación y lavado del concentrado de aceite con agua, - centrifugación y recolección del concentrado de aceite, - una primera hidrólisis en la presencia de una o más glucanasas, - centrifugación y eliminación de la fracción soluble, - una segunda hidrólisis en la presencia de una o más proteasas, - centrifugación y eliminación de la pastilla, - concentración a través de nanofiltración, - decoloración en la presencia de carbón activado, - filtración simple (10 µ?t?), seguida por ultrafiltración (límite de 10 kDa), - adición de un conservador, esterilización final por microfiltración (0.2 pm) y envasado.

El extracto acuoso final puede contener del 1 % a 60% de materia seca en peso, o del 3% al 20% de materia seca en peso, preferiblemente del 5% al 6% de materia seca en peso. En relación con el peso de la materia seca, el contenido en peso de alfa-amino nitrógeno puede ser entre el 2% y el 10%, preferentemente entre el 5% y el 7%. El valor del pH de un 1.2% en peso de solución acuosa de extracto seco generalmente será de entre 3 y 6, más ventajosamente de entre 4 y 5. Los datos de la media analítica para un 1 .2% en peso de solución acuosa de extracto seco, como se obtiene por el método anteriormente descrito, se presentan en el siguiente cuadro 3: CUADRO 3 1Nx6.25 es el contenido total de nitrógeno (N) de una muestra multiplicado por un coeficiente específico para la proteína ensayada. Cuando el coeficiente de las proteínas ensayadas no se conoce con precisión, por convención se utiliza un coeficiente de 6.25.

El siguiente cuadro 4 presenta la composición media de aminoácidos del extracto peptídico como se obtiene por el método de conformidad con la invención, en donde los valores se expresan en peso porcentual en relación con el peso total de los aminoácidos ensayados. Los valores para el ácido aspártico y el ácido glutámico también incluyen los contenidos de asparagina y de glutamina, respectivamente.

CUADRO 4 El triptófano no se ensayó.

El extracto obtenido se puede liofilizar con el objeto de obtener un sólido en polvo (extracto seco), pero es totalmente hidrosoluble en comparación con las proteínas originales del aguacate.

De conformidad con una variación ventajosa de la invención, al menos el 50% de los péptidos del extracto están compuestos de 10 a 30 motivos de aminoácidos. Por lo tanto, estos péptidos son mucho menores en comparación con las proteínas nativas del aguacate. Como tal, estos péptidos tienen entonces una mucho mejor biodisponibilidad, sobre todo una biodisponibilidad cutánea.

De conformidad con una variación ventajosa de la invención, el fármaco o composición dermatológica comprende del 0.01 % al 20% en peso seco del extracto peptídico de aguacate, en relación con el peso total de dicho fármaco o composición dermatológica, incluso más ventajosamente del 0.1 % al 15% en peso seco del extracto peptídico de aguacate, incluso más ventajosamente del 0.5% al 10% en peso seco del extracto peptídico de aguacate, incluso más ventajosamente del 0.7% al 8% en peso seco del extracto peptídico de aguacate, e incluso más ventajosamente del 1 % al 5% en peso seco del extracto peptídico de aguacate.

El fármaco o composición dermatológica de conformidad con la invención puede comprender además al menos un compuesto seleccionado del grupo que comprende agentes anti-irritantes y/o relajantes y/o cicatrizantes y/o anti-envejecimiento y/o hidratantes.

Los agentes anti-irritantes y/o relajantes y/o cicatrizantes y/o antienvejecimiento y/o hidratantes que se pueden utilizar en el contexto de la presente invención en combinación con el extracto peptídico de aguacate son ventajosamente glicina, azúcares vegetales y/o péptidos incluyendo lupino, lupeol (FR 2822821 , FR 2857596), oxazolinas (WO 03/055463), oxazolidínonas (WO 2004/050052), ácido lipoico, alfa bisabolol, derivados de regaliz, enoxolona, ectoína, furanos del aguacate (en particular, Avocadofurane®: furanos del aguacate, que se pueden obtener por el método descrito en la Solicitud Internacional WO 01/21605), extractos de Centella asiática, en particular el ácido madecásico o ácido asiático, cafeína, retinol, retinal, retinoico, óxido de zinc, magnesio, silicio, cobre, zinc, manganeso, selenio, ácido hialurónico, ácido azeláico y sales o ésteres de los mismos, ácido salicílico y derivados del mismo, alfa-hidroxiácido (AHA), ésteres de AHA, ácido pirrolidona carboxílico y derivados del mismo, ceramidas, colesterol, escualeno, fosfolipidos, beta caroteno, vitamina A, vitamina E, vitamina C, vitamina B3 (niacinamida, nicotinamida), vitamina B5 (pantenol), vitamina B6, peróxido de benzoilo, urea, coenzima Q10, glucosamina y sales de los mismos, N-acetil glucosamina, aguas termales o de manantial (Avéne, Roche Posay, Saint-Gervais, Uriage, Gamarde), péptidos de soya y arabinogalactano (en particular el arabinogalactano se puede combinar con lupeol o péptidos de soya).

Las oxazolinas que se pueden utilizar en el contexto de la presente invención en combinación con el extracto peptídico de aguacate son ventajosamente oxazolinas seleccionadas del grupo que comprende 2-undecil-4-hidroximetil-4-metil-1 ,3-oxazolina, 2-undecil-4,4-dimetil-1 ,3-oxazolina, (E)-4,4-dimetil-2-heptadec-8-enil-1 ,3-oxazolina, 4-hidroximetil-4-metil-2-heptadecil-1 ,3-oxazolina, (E)-4-hidroximetil-4-metil-2-heptadec-8-enil-1 ,3-oxazolina y 2-undecil-4-etil-4-hidroximetil-1 ,3-oxazolina. De una manera aún más ventajosa, dicha oxazolina es 2-undecil-4,4-dimetil-1 ,3-oxazolina, denominada OX-100 o Cycloceramide®.

Además de dichos agentes activos, el extracto peptídico de aguacate de conformidad con la invención, solo o en combinación con los agentes activos anteriormente citados, se puede utilizar en combinación con agentes activos que proporcionan protección contra el sol, tales como los filtros solares para rayos UVB y/o UVA o los filtros, dichos filtros solares o filtros minerales y/u orgánicos se conocen por aquellos expertos en la técnica, quienes adaptarán la elección y las concentraciones de dichos filtros solares o filtros de conformidad con el grado de protección deseado.

Los ejemplos de agentes activos que ofrecen protección contra el sol incluyen en particular óxido de titanio, óxido de zinc, metileno bis-benzotriazolil tetrametilbutilfenol (nombre registrado: Tinosorb M) y bis-etilhexiloxifenol metoxifenil triazina (nombre registrado: Tinosorb S).

Además de estos agentes activos, el extracto peptidico de aguacate de conformidad con la invención, solo o en combinación con los agentes activos anteriormente citados, se puede utilizar en combinación con los azúcares del aguacate, los agentes de reestructuración de la barrera cutánea, los compuestos antifúngicos, los antisépticas conservadores y los compuestos que contienen aceite vegetal no saponificable, los péptidos de lupino, el aceite de aguacate, el butil avocadato, las cicloceramidas, la genisteína, los concentrados de colza o concentrados de maíz.

Los azúcares de aguacate son ventajosamente D-mannoheptulosa y/o perseitol. Los azúcares de aguacate son más ventajosamente el extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate descrito en la Solicitud WO 2005/1 542 .

Los agentes de reestructuración de la barrera cutánea, que estimulan la síntesis de los lípidos clave de la epidermis, que se pueden utilizar en el contexto de la presente invención en combinación con el extracto peptidico de aguacate son ventajosamente concentrados de girasol, incluso más ventajosamente concentrados de girasol linoléico tal como el agente activo comercializado por Laboratoires Expanscience, Soline® (véase la Solicitud Internacional WO 01/21 150), los aceites vegetales no saponificables tales como Avocadofurane® (véase la Solicitud Internacional WO 01/21150) o los agonistas de PPAR (rosiglitazona, pioglitazona).

Los compuestos antifúngicos que se pueden utilizar en el contexto de la presente invención en combinación con el extracto peptídico de aguacate son ventajosamente econazol y ketoconazol.

Los conservadores antisépticos que se pueden utilizar en el contexto de la presente invención en combinación con el extracto peptídico de aguacate son, por ejemplo, el triclosán, clorhexidina o amonios cuaternarios.

Los compuestos que contienen aceites vegetales insaponificables que se pueden utilizar en el contexto de la presente invención en combinación con el extracto peptídico de aguacate son ventajosamente seleccionados del grupo que comprende los lípidos furánicos del aguacate, no saponificables del aguacate, no saponificables de la soya, no saponificables del aguacate y de la soya, concentrados de aceite de lupino, concentrados de aceite de girasol y mezclas de los mismos.

Los lípidos furánicos del aguacate que se pueden utilizar en el contexto de la presente invención en combinación con el extracto peptídico de aguacate son ventajosamente 2-alquil furanos naturales, en particular, el agente activo Avocadofurane® comercializado por Laboratoires Expanscience, que se puede obtener por el método descrito en la Solicitud Internacional WO 01/21605.

Los no saponificares del aguacate y de la soya que se pueden utilizar en el contexto de la presente invención en combinación con el extracto peptídico de aguacate son ventajosamente una mezcla de no saponificables furánicos del aguacate y no saponificables de la soya en una proporción de aproximadamente 1 :3 a 2:3, respectivamente. Los no saponificables del aguacate y de la soya son incluso más ventajosamente el producto Piascledine®, comercializado por Laboratoires Expanscience.

Los concentrados de aceite de lupino que se pueden utilizar en el contexto de la presente invención en combinación con el extracto peptídico de aguacate son ventajosamente concentrados obtenidos por destilación molecular del aceite de lupino, ventajosamente aceite de lupino blanco dulce, tales como aquellos descritos en la Solicitud Internacional WO 98/47479. Ellos ventajosamente contienen aproximadamente 60% de no saponificables en peso.

Los concentrados de aceite de girasol que se pueden utilizar en el contexto de la presente invención en combinación con el extracto peptídico de aguacate son ventajosamente concentrados de linoléico de girasol, tal como el agente activo comercializado por Laboratoires Expanscience, Soline® (véase la Solicitud Internacional WO 01/21 150).

El fármaco o composición dermatológica de conformidad con la invención se puede formular en la forma de varias preparaciones adecuadas para la administración tópica. Preferiblemente las diversas preparaciones incluyen cremas, leches, lociones, aguas, aceites, parches, aerosoles o cualquier otro producto para aplicación externa.

Los modos óptimos de administración, esquemas de dosificación y formas de dosificación de los compuestos y composiciones de conformidad con la invención se pueden determinar de conformidad con los criterios generalmente tomados en cuenta en el establecimiento de un tratamiento farmacéutico, en particular, un tratamiento dermatológico, adaptado a un paciente para incluir, por ejemplo, la edad o peso del paciente, estado general, tolerancia al tratamiento, efectos secundarios observados y tipo de piel. El paciente es ventajosamente una mujer embarazada, un recién nacido a término o una persona de edad avanzada, más ventajosamente una mujer embarazada o un recién nacido a término.

De conformidad con el tipo de administración deseada, el fármaco y/o compuestos activos de conformidad con la invención pueden comprender además por lo menos un excipiente farmacéuticamente aceptable, en particular, por lo menos un excipiente dermatológicamente aceptable. Preferiblemente, se utiliza un excipiente adecuado para aplicación tópica externa. El fármaco o composición dermatológica de conformidad con la presente invención puede comprender además por lo menos un adyuvante farmacéutico conocido por aquellas personas expertas en la técnica seleccionado de espesantes, conservadores, fragancias, colorantes, filtros químicos o minerales, agentes hidratantes, aguas termales o de manantial, etc.

Considerando a los pacientes afectados, en particular a las mujeres embarazadas y recién nacidos a término, el fármacos o la composición dermatológica no comprenderá excipientes con efectos notorios, tales como alérgenos, jabones que contienen yodo, alcohol bencílico, vectores de penetración (glicol) y compuestos que son agentes carcinógenos de las categorías 1 , 2 ó 3, mutágenos o toxinas para la reproducción. Además, las fragancias opcionalmente contenidas en la formulación serán ventajosamente fragancias neutras.

Los siguientes ejemplos ilustran la invención sin limitar el alcance de la invención de ninguna manera.

EJEMPLO 1 Preparación de un extracto peptídico de aguacate Cincuenta kilos de aguacates frescos, de la variedad Hass, se cortaron en rebanadas finas de 2-5 mm de espesor, incluyendo la semilla, utilizando una rebanadora con una cuchilla circular. El aparato de secado es un horno de secado por flujo de aire caliente a temperatura controlada. Los aguacates rebanados se distribuyen a un espesor de 4-5 cm sobre bastidores apilados. El secado fue de 48 horas a una temperatura de 80°C. Una vez secos, los frutos se sometieron a prensado en frío. Esta operación se llevó a cabo en una prensa pequeña de laboratorio Komet®.

Cuatro kilogramos de frutas sin lípidos (concentrado con aceite) se presionaron en frío y luego se extrajeron a reflujo de la presencia de 25 litros de etanol. El polvo sin grasa se recuperó por filtración en un embudo Büchner y se secó en el horno a 50°C durante 5 horas.

El concentrado con aceite se lavó con agua desmineralizada (10 litros) y luego se separó por centrifugación. La fracción sólida se recogió en una solución acuosa, se acidificó con HCI (pH 5) y luego se mezcló con celulasa (2% en relación con la materia seca). La duración de la hidrólisis fue de 6 horas.

La mezcla se centrifugó entonces a 2000 g en la presencia de adyuvante (2.5% p/v). La pastilla recuperada se sometió entonces a una segunda hidrólisis a pH 8.0, en la presencia de 0.5% de proteasa, a una temperatura de 55°C durante 2 horas. La hidrólisis se mantuvo a un pH constante mediante la continua adición de sosa 2 M. La proteasa finalmente se desnaturalizó por calentamiento durante 10 minutos a 85°C.

La mezcla obtenida se centrifugó y el sobrenadante se filtró al pasarlo a través de una membrana de 7.5 pm. Luego se ultrafiltró sobre membranas con un límite de 10 kDa.

El extracto peptídico crudo obtenido (20% de materia seca) se decoloró en la presencia de 1 % de carbón activado y luego se filtró de nuevo a través de una membrana de 7.5 pm. El extracto decolorado se microfiltró entonces (0.2 µ??), se tituló al 5% de materia seca (MS), se suplemento con conservadores y, finalmente, se envasó después de la esterilización por filtración (0.2 pm).

Las características del extracto peptídico de aguacate hidrosoluble (5% de MS) obtenido por el presente método se proporcionan en el siguiente cuadro 5: CUADRO 5 El siguiente cuadro 6 presenta la distribución de masas moleculares en el extracto peptídico de aguacate obtenido por el presente método.

CUADRO 6 *Masas <10,000 g/mol.

Cabe señalar que al menos el 27% de los péptidos del extracto consisten de al menos 9 motivos de aminoácidos. En consecuencia, el tamaño de los péptidos del extracto es, pues, extremadamente pequeño en comparación con el de las proteínas nativas del aguacate. Por lo tanto, estos péptidos tienen una biodisponibilidad mucho mejor, en particular una biodisponibilidad cutánea.

EJEMPLO 2 Actividades del extracto peptídico de aguacate sobre el prurito El prurito se define como una sensación cutánea desagradable que provoca el deseo de rascarse. El "mensaje" del prurito se transmite por las terminaciones libres de las fibras C.

Los mastocitos parecen jugar un papel fundamental en el prurito de origen cutáneo. De hecho, muchas sustancias pruriginosas causan su desgranulación. Durante su degranulación, los mastocitos excretan diversos productos, incluyendo: - histamina, cuya liberación provoca la activación de los receptores H1 en las fibras nerviosas y, por tanto la inducción de la señal de prurito, - proteasas, en particular la triptasa, que inducen la señal de prurito mediante la unión a receptores de la proteasa (receptor-2 activado por proteasa, o PAR-2) en las fibras nerviosas.

La liberación de los mediadores pruriginosos por los mastocitos, que lleva a la transmisión de la señal nerviosa del prurito, también tiene otras consecuencias que amplifican el fenómeno: - por lo tanto, la activación de PAR-2 en las fibras nerviosas por la triptasa causa que estas fibras liberen neuropéptidos tales como la sustancia P y el péptido relacionado con el gen de la calcitonina (CGRP). La sustancia P es a su vez capaz de inducir la degranulación de los mastocitos.

CGRP y la sustancia P también actúan sobre las células endoteliales, por lo tanto induciendo así la vasodilatación, extravasación y reclutamiento de las células inflamatorias; - la histamina también es capaz de estimular la liberación por los nervios sensoriales de los neurotransmisores tales como la sustancia P y la neurocinina A, que pueden lleva a la degranulación de los mastocitos (y por lo tanto a la amplificación de la reacción); - la triptasa también puede activar e inducir la desgranulación de los mastocitos, que también tienen PAR-2; - del mismo modo, las células endoteliales pueden responder a la estimulación de la triptasa a través de PAR-2; - además, las células endoteliales también pueden responder a la estimulación de histamina; - por último, PAR-2 también se expresa por los queratinocitos epidérmicos en los que está involucrado en una reacción inflamatoria a través de la activación del factor de transcripción NFkB.

Los estudios que se presentan a continuación se llevaron a cabo en mastocitos peritoneales de rata. Estas células tienen las mismas características que los mastocitos cutáneos y por lo tanto constituyen un modelo experimental representativo de la piel humana.

I. Efecto del extracto peptídico de aguacate, sobre la liberación de triptasa por los mastocitos 1.1. Materiales y métodos: Los mastocitos peritoneales de rata (2x105 células/ml) se incubaron durante 30 minutos a 37°C en la presencia o ausencia de 0.005% (p/v) de extracto peptídico de aguacate (obtenido en el ejemplo 1 ) o quercetina 50 µ? (Sigma), el inhibidor de la liberación de triptasa de referencia. Las células se estimularon entonces durante 15 minutos mediante ionóforo de calcio A23187 (Millipore) 0.5 µ?. El ionóforo de calcio se utiliza para inducir la liberación de triptasa (éste induce un influjo y la movilización del calcio intracelular). La reacción se detuvo por centrifugación a 4°C.

La liberación de triptasa se evaluó analizando la triptasa en los sedimentos celulares y sobrenadantes por medio del kit de Ensayo de la Degranulación en Mastocito (Mast Cell Degranulation Assay Kit) (Millipore). Esta prueba se basa en la detección espectrofotométrica del cromóforo p-nitroanilina (pNA) después de la escisión del sustrato tosil-gly-pro-lys-pNA por la triptasa.

La ausencia de citotoxicidad del extracto peptidico de aguacate bajo las condiciones de prueba se confirmó mediante tinción con azul tripano.

I.2. Resultados: Como se muestra en el cuadro 7, el ionóforo de calcio A23187 indujo una liberación masiva de triptasa y la quercetina 50 mM inhibió significativamente esta liberación (-47%, p <0.01 ); estas condiciones validan la prueba.

CUADRO 7 Liberación de triptasa por los mastocitos **p<0.01 : Prueba t de Student El extracto peptídico de aguacate a una concentración de 0.005% (p/v) inhibió significativamente (-30%) la liberación de triptasa por los mastocitos inducida por el ionóforo de calcio.

II. Efecto del extracto peptídico de aguacate, sobre la liberación de histamina por los mastocitos 11.1. Materiales y métodos: Los mastocitos perifonéales de rata (10,000 células en suspensión/250 µ? de regulador de pH de Tyrode) se incubaron durante 30 minutos a 37°C en la presencia o ausencia de 0.05%, 0.5% y 1 % (p/v) del extracto peptídico de aguacate, obtenido en el ejemplo 1 , o 10 mM de calcio, utilizado como el inhibidor de referencia de la liberación de histamina.

Las células se estimularon entonces durante 10 minutos por 10 µ? de la sustancia P (Neosystem) en la presencia de calcio 0.3 mM.

La reacción se detuvo por centrifugación y los sobrenadantes y "sedimentos" celulares se recogieron en ácido perclorico 0.8 N con el fin de realizar la determinación de histamina utilizando el método espectrofluorométrico.

Las cantidades de histamina liberada se expresaron como un porcentaje de la liberación (cantidad en los sobrenadantes/cantidad total).

La ausencia de citotoxicidad del extracto peptídico de aguacate bajo las condiciones de ensayo fue confirmada por un ensayo con lactato deshidrogenasa (LDH).

II.2. Resultados: Como se muestra en el cuadro 8, la liberación de histamina fue estimulada fuertemente por la sustancia P, y el calcio 10 mM inhibió significativamente (-78%) esta liberación, estas condiciones validan la prueba.

CUADRO 8 Liberación de histamina por los mastocitos El extracto peptidico de aguacate a concentraciones de 0.05%, 0.5% y 1 % (p/v) dio lugar a una inhibición de la liberación de histamina significativa y dependiente de la dosis inducida por la sustancia P (-21 %, -19% y -53%, respectivamente).

III. Efecto del extracto peptidico de aguacate sobre la expresión génica de PAR-2 en la epidermis reconstruida III.1. Materiales y métodos: Las epidermis reconstruidas de diecisiete días (Skinethic) fueron tratadas sistémicamente con 0.04% (p/v) de extracto peptidico de aguacate (obtenido en el ejemplo 1) o ácido retinoico 1 µ? (Sigma, referencia positiva) durante 6 horas.

La expresión génica se analizó utilizando los arreglos estándares de ADN simplificados. Estos microarreglos involucran la colocación de puntos con marcadores específicos de ADN de interés sobre membranas de nylon. El análisis se llevó a cabo de conformidad con la tecnología adecuada en miniatura y optimizada basada en el uso del ARN mensajero y el marcado con 33p Cuando el cultivo se había completado, las epidermis se lavaron con solución salina con pH regulado con fosfato (PBS). El ARN total de las epidermis se extrajo estonces y se purificó utilizando el reactivo TRI (Sigma), de conformidad con un protocolo estandarizado. La cantidad y la calidad del ARN se evaluaron usando un bioanalizador Agilent 2100. El ARNm de cada cultivo se retro-transcribió utilizando oligo(dT) y desoxirribonucleótido trifosfato marcado con 33P. Se prepararon múltiples secuencias "blanco" de ADNc marcado para cada cultivo. Estos blancos se hibridaron a continuación, bajo condiciones óptimas, con las "sondas" de ADNc en exceso unidas a las membranas. Después del lavado, la cantidad relativa del blanco marcado se midió por conteo directo con un Phosphorlmager.

Las membranas se analizaron utilizando el software adecuado. Los datos resultantes demuestran la expresión diferencial de diversos genes después del tratamiento con el extracto peptídico de aguacate, en comparación con el control correspondiente.

III.2. Resultados: Como se muestra en el cuadro 9, la expresión del gen PAR-2 en las epidermis reconstruidas se inhibió (-29%) por el ácido retinoico, el control de la prueba.

CUADRO 9 Expresión del gen PAR-2 en epidermis reconstruidas El extracto peptídico de aguacate, a una concentración de 0.04% (p/v), indujo la inhibición de la expresión del gen PAR-2 (-52%).

IV. Conclusión Se ha demostrado que el extracto peptídico de aguacate es capaz de modular la liberación de histamina y de triptasa por los mastocitos. Por lo tanto, el extracto peptídico de aguacate tiene un efecto inhibidor sobre la degranulación de mastocitos en el origen de la inducción y el mantenimiento de la reacción de prurito.

Además, se observó un efecto inhibidor del extracto peptídico de aguacate sobre la expresión epidermal de PAR-2 (receptor-2 activado por proteasa).

El extracto peptídico puede prevenir así los efectos de la activación de PAR-2 en el desarrollo del prurito, más particularmente, el extracto peptídico de aguacate pueden modular los efectos de la triptasa sobre sus diversas células blanco puesto que la triptasa es un agonista endógeno de PAR-2.

EJEMPLO 3 Actividades hidratantes y reabsorción de grasa del extracto peptídico de aguacate La hidratación natural de la piel se debe principalmente a su contenido de glicosaminoglicanos (GAG), en particular, al ácido hialurónico.

Los glucosaminoglucanos diferentes al ácido hialurónico son moléculas compuestas de una porción peptídica y una porción de carbohidratos. Ellos están muy involucrados en la retención del agua en la dermis, contribuyendo así al mantenimiento de un nivel adecuado de hidratación.

El ácido hialurónico (HA) se compone exclusivamente de moléculas de carbohidrato. Es, sobre todo, un factor importante en el engrosamiento de la piel: al unirse fuertemente con el agua, forma una red viscoelástica densa y por lo tanto contribuye a la densidad de la piel, la cohesión, la hidratación y elasticidad. Con la edad, hay una disminución en el contenido de HA en la piel.

La síntesis de GAGs sulfatados y HA se estudió en los queratinocitos en cultivo después del tratamiento con el extracto peptídico de aguacate, de conformidad con el ejemplo 1 , con el fin de evaluar su actividad hidratante.

Una de las principales funciones de la piel es la de ser una barrera protectora contra el estrés ambiental y la pérdida de agua.

La barrera permeable de la piel se encuentra en la capa más extema de la piel, el estrato córneo. Los corneocitos (queratinocitos en un estado avanzado de diferenciación), las células constitutivas del estrato córneo, están incluidos en una matriz extracelular rica en lípidos. Es esta matriz rica en lípidos que se encuentra en el origen de la función de barrera permeable.

Los lípidos del estrato córneo se componen principalmente de ceramidas (50% de la masa total de los lípidos), colesterol (25%) y ácidos grasos libres (10%).

El contenido de estos tres lípidos clave del estrato córneo se reduce en el caso de la xerosis, esta disminución se podría producir por una caída en la actividad enzimática que limita las vías de síntesis de estos lípidos.

El efecto del extracto peptídico de aguacate sobre la neosíntesis de los lípidos epidérmicos se evaluó en un modelo de piel reconstruida, con un análisis separado de los fosfolípidos (membranas celulares) y lípidos neutros (incluyendo los lípidos "especiales" de la piel).

I. Efecto sobre la síntesis de qlicosaminoglicanos y ácido hialurónico por los queratinocitos (actividad hidratante) 1.1. Materiales y métodos: Los queratinocitos epidérmicos humanos normales (NHEK) fueron pre-cultivados durante 24 horas a 37°C y 5% de C02 en medio SFM bajo en calcio (0.09 mM) (Invitrogen) suplementado con 0.25 ng/ml de EGF (Invitrogen), 25 mg/ml de extracto de pituitaria (Invitrogen) y 25 pg/ml de gentamicina (Sigma).

Los queratinocitos se trataron entonces durante 72 horas con el extracto peptídico de aguacate (0.05% de MS y 0.005% de MS), de conformidad con el ejemplo 1 , o por las referencias: ácido retinoico 0.1 µ? (Sigma) o 1.5 mM de calcio (Prolabo). Se prepararon dos series idénticas con el fin de ensayar tanto la liberación/producción de ácido hialurónico como la incorporación de sulfuro en la fracción de los GAGs. El lote correspondiente al ensayo de los GAGs se complementó con 35S-sulfato (Amersham) después de 48 horas de cultivo (marcado durante las últimas 24 horas).

Al final del tratamiento, en el lote correspondiente al ensayo de los GAGs, la radiactividad incorporada se contó y por lo tanto, se analizó la variación en la síntesis de los GAGs en relación con el control.

En el lote correspondiente al ensayo del ácido hialurónico, al final del tratamiento, los sobrenadantes del cultivo se recogieron y el ácido hialurónico se analizó utilizando una prueba específico de ELISA modificado (Biogenic).

Las comparaciones intergrupo se realizaron mediante el análisis de varianza utilizando la prueba de comparaciones múltiples de Dunnett.

I.2. Resultados: 1.2.1. Efecto sobre la síntesis de GAGs: El calcio, utilizado como una referencia (efecto pro-diferenciación) estimula la incorporación de 35S-sulfato en la fracción de los GAGs; este resultado valida la prueba.

El tratamiento con ácido retinoico no modifica significativamente la síntesis de los GAGs por los queratinocitos.

El extracto peptídico de aguacate causa un aumento significativo en la síntesis de los GAGs (+30%, cuadro 10).

CUADRO 10 Síntesis de los GAGs por los queratinocitos *p<0.05, **p<0.01 : prueba de Dunnett.

I.2.2. Efecto sobre la síntesis/liberación de ácido hialurónico: El ácido retinoico, la prueba de referencia, aumentó significativamente la cantidad de ácido hialurónico presente en los sobrenadantes del cultivo de los queratinocitos. Sin efecto sobre la síntesis de los GAGs, el ácido retinoico estimuló específicamente la producción de ácido hialurónico.

El extracto peptídico de aguacate al 0.005% aumentó significativamente la producción de ácido hialurónico (+30%) (cuadro 1 1).

CUADRO 11 Síntesis/liberación de ácido hialuronico por ios queratinocitos *p<0.05, **p<0.01 : prueba de Dunnett.

II. Efecto sobre la neosíntesis de los lípidos epidérmicos (actividad de reabsorción de grasa) 11.1. Materiales: Las epidermis reconstruidas de cinco días (BlOalternatives) se cultivaron bajo las siguientes condiciones: - epidermis control (R): medio de diferenciación (BlOalternatives), - epidermis control (T): medio de diferenciación empobrecido, - extracto peptídico de aguacate (0.005% en MS y 0.05% en MS), de conformidad con el ejemplo 1 , en medio de diferenciación empobrecido (aplicación sistémica). 11.2. Métodos: Las epidermis se colocaron en placas de 12 pozos bajo las condiciones antenormente descritas (medio de diferenciación completo o empobrecido, que contiene o no contiene el extracto peptidico de aguacate).

Después de 24 horas, el medio de cultivo fue renovado y suplementado con 0.75 pCi/ml de 1 C-acetato (Amersham). Las epidermis se incubaron entonces durante 48 horas a 37°C y con 5% de C02.

Después del tratamiento, las epidermis se lavaron con PBS (Invitrogen), se disociaron de sus tejidos adicionales y se lisaron en 0.5 M de ácido perclórico sobre hielo.

Los lípidos se extrajeron entonces mediante una solución de metanol/cloroformo (2:1 ). La radiactividad incorporada (que corresponde a los lípidos totales) se cuantificó luego por centelleo líquido. Después de la cromatografía en capa fina, los lípidos se analizaron por separado por el ingreso directo de los datos de la radiactividad de los diversos puntos y la cuantificación utilizando un Phosphorlmager Cyclone (Packard).

II.3. Resultados: 11.3.1. Efecto sobre la síntesis de los lípidos totales: El medio de diferenciación completa (epidermis R) indujo un aumento no significativo en la incorporación del acetato en los lípidos totales.

El extracto peptídico de aguacate no afectó la síntesis de lípidos totales (cuadro 12).

CUADRO 12 Síntesis de lípidos totales en las epidermis reconstruidas NS: no significativo.

II.3.2. Análisis de los perfiles de neosíntesis de lípidos (cuadros 12 y 13): El medio de diferenciación completo (epidermis R) indujo un cambio en el perfil de fosfolipidos, en particular, con un aumento en los fosfolipidos (24% en relación con las epidermis T) y sulfato de colesterol (+-13%). La cantidad total de ceramidas/cerebrósidos no cambia, a pesar de que se observa un gran cambio en los perfiles de lípidos obtenidos: un aumento de las ceramidas/cerebrósidos más polares (38%) y una disminución en las ceramidas/cerebrósidos menor polares (-16%) (cuadro 13). Con respecto a los lípidos neutros, el medio de diferenciación completo indujo un aumento en el colesterol (+19%), ácidos grasos libres (+37%) y una disminución de los ácidos grasos esterificados (-38%) (cuadro 14).

CUADRO 13 Perfiles de lípidos en el sistema "fosfolípidos + esfingolípidos" (% de T control) El 0.005% de MS y el 0.05% de MS de extractos peptídicos de aguacate indujeron un incremento en las ceramidas/cerebrósidos más polares (+30% y +28% en relación con las epidermis T), una disminución en las ceramidas/cerebrósidos menos polares (-14% y -17%) (cuadro 13) y a 0.05% de MS un aumento de ácidos grasos libres (+32%) (cuadro 14). Estos efectos son similares a aquellos del medio de diferenciación completo.

CUADRO 14 Perfiles de lípidos en el sistema de "lípidos neutros + ácidos grasos" (% de T control) III. Conclusión general Se mostró un efecto hidratante y reabsorción de grasa del extracto peptídico de aguacate. De hecho, el extracto peptídico de aguacate estimula la síntesis de glicosaminoglicanos y ácido hialuronico, que están involucrados en el mantenimiento de un nivel adecuado de hidratacion de la piel. Además, el extracto peptídico de aguacate estimula la neosíntesis de lípidos epidérmicos, que están involucrados en la función de barrera de la epidermis.

EJEMPLO 4 Formulaciones cosméticas que contiene el extracto peptídico de aguacate Líquido de limpieza 1 Materia prima/nombre de marca Agua purificada B4 Csp 100% goma de biosacárido 1 % a 5% Butilen glicol 1 % al 5% Saponina purificada 0% a 1% Agua de rosas 0% a 1% extracto peptídico de aguacate 0% a 5% Conservadores 0% a 1% Alantoína 0% a 1% Ácido cítrico monohidrato 0% a 1% Trometamina 0% a 1% Líquido de limpieza 2 Materia prima/nombre de marca % Capriloil glicina 0% a 1% Lejía de sosa 0% a 1% Agua purificada 84 20% al 100% Secuestrante 0% a 1% Butilen glicol 1% al 5% Extracto peptídico de aguacate 0% a 5% Octanodiol 0% a 1% PEG-32 1 % al 5% PEG-7 palmcocoato 1 % al 5% Gluconato de zinc 0% a 1 % Monohidrato de ácido cítrico 0% a 1 % Agua purificada B4 csp 100% Fragancia 0% a 1 % Poloxámero 184 1 % al 5% D.S.B. C SP 1 % al 5% Emulsión de aqua-en-aceite Materia prima/nombre de marca % Isoparafina líquida 5% al 20% Isocetil estearato 5% a 20% Hidroxíestearato Al-Mg 5% al 20% ABIL WE 09 1% a 5% Glicerol 1% a 5% Aceite espeso de vaselina 1% al 5% Óxido de zinc micronizado 1 % al 5% Butilen glicol 1% al 5% extracto peptídico de aguacate 0% a 5% Isononilo isononanoato 1 % al 5% Cera blanca de abeja 1 % al 5% Tartrato de sodio 1 % a 5% Cloruro de sodio 0% a 5% Glicina 1 % al 5% Octanediol 0% a 1 % Colesterol 0% a 1 % Fitoesfingosina 0% a 1 % Acido tartárico 0% a 1 % Agua purificada B4 csp 100% Emusión de aceite-en-aqua Materia prima/nombre de marca % Polideceno hidrogenado 5% al 20% Lauril glucósido-gliestearato 1 % al 5% Carbonato de dicaprililo 1 % a 5% Glicerol 5% a 20% Carbopol ETD 2020 0% a 1 % Goma xantana 0% a 1 % extracto peptídico de aguacate 0% a 5% Lejía de sosa 0% a 1 % Conservadores 0% a 1 % Monohidrato de ácido cítrico 0% a 1 % Agua purificada B4 csp 100% Aceite Materia prima/nombre de marca % Solubilizante 0% a 1 % Aceite de almendras dulces 5% al 20% Caprilato/copra caprato csp 100% Aceite refinado de macadamia 5% al 20% Glicerol caprilocaprato 5% al 20% Alfa bisabolol nat 0% a 1 % Alfa tocoferol 0% a 1 % extracto peptídico de aguacate 0% a 5% Conservador 0% a 1 % Ester 0% a 1 % Leche Materia prima/nombre de marca % Aceite de almendras dulces 1% al 5% Aceite de maíz 1% al 5% Acido esteárico 1% al 5% Alcohol cetílico C16 C18 0% a 1 % Antiespumantes 70.414 0% a 1 % Lauril alcohol 11 oe 1 % al 5% Monolaurato de PEG 300 0% a 1 % Monooleato de glicerol 0% a 1 % Monoestearato de glicerol 1 % a 5% extracto peptídico de aguacate 0% a 5% Conservadores 0% a 1 % Monohidrato de ácido cítrico 0% a 1 % Citrato trisódico 0% a 1% Agua purificada csp 100% Fragancia 0% a 1 % Aceite de cacahuete 1% al 5% Hidrogenado de aceite de palma 1% al 5% Espuma Materia prima/nombre de marca % Agua purificada B4 csp 100% Lauroamfoacetato 5% al 20% Cocoglucósido 5% al 20% Oronal LCG 5% al 20% Hydriosul KMG 30 (2) 5% al 20% PEG 6000 diestearato 1 % al 5% Conservador 1 % al 5% extracto peptídico de aguacate 0% a 5% Extracto de manzanilla 1 % al 5% monohidrato de ácido cítrico 0% a 1% Secuestrante 0% a 1 % Cocoproteína de trigo 0% a 1 % Fragancia Mustiti 11/1 0% a 1 % Lejía de sosa 0% a 1% Aspersión Materia prima/nombre de marca % Agua purificada B4 csp 00% Trilaureth-4 fosfato 1% a 5% Carbonato de dicaprililo 1%a5% Butilen glicol 1 % al 5% Eritritiléster 1 % al 5% Aceite fluido de vaselina 1% al 5% Manteca de karité (líquida) 0% a 1% Puro de jojoba 0% a 1% Conservadores 0%a 1% Extracto peptídico de aguacate 0% a 5% Lejía de sosa 0% a 1% Fragancia Mustiti 10.03 0% a 1% Goma xantana 0% a 1% Carbopol 981 NF 0% a 1% Secuestrante 0% a 1% Monohidrato de ácido cítrico 0% a 1%

Claims (10)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un fármaco o composición dermatológica que contiene un extracto peptídico de aguacate, que contiene 2% al 10% en peso de alfa-amino nitrógeno en relación con el peso de la materia seca del extracto peptídico, y un excipiente adecuado, para el uso del mismo en el tratamiento o la prevención del prurito interno y trastornos no infecciosos con picazón.

2.- El fármaco o composición dermatológica de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el extracto peptídico de aguacate se obtiene por un método que abarca los siguientes pasos: - se obtiene un concentrado de aceite de aguacate, de forma ventajosa a base de frutas de aguacate, a través del secado y extracción del aceite, después de lo cual, - dicho concentrado de aceite se fragmenta en frío (criomolienda) y totalmente sin lípidos, luego se decanta, se centrifuga y se recoge, tras lo cual, - una primera hidrólisis se lleva a cabo en presencia de glucanasas, seguido por centrifugación y la eliminación de la fracción soluble; - una segunda hidrólisis se lleva a cabo en presencia de una o más proteasas, seguido de centrifugación y la eliminación del sedimentado, después de lo cual, - la fase peptídica se concentra por nanofiltración y, de ser necesario, se decolora en la presencia de carbón activado, seguido de, filtración simple (10 pm), a continuación, por ultrafiltración (límite de 10 kDa) y, finalmente, - en caso necesario, la adición de conservadores, la esterilización, final por microfiltración (0.2 pm) y el envasado.

3.- El fármaco o composición dermatológica de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado además porque el extracto peptídico de aguacate tiene la siguiente composición de aminoácidos, expresada como un porcentaje del peso en relación al peso total de los aminoácidos: Alanina 6.4-7.8 Arginina 4.7-5.7 Ácido aspártico 10.3-12.7 Cistina-cisteína 2.9-3.5 Ácido glutámico 13.0-15.8 Glicina 5.3-6.5 Histidina 2.2-2.6 Isoleucina 4.8-5.8 Leucina 7.6-9.4 Usina 3.0-3.8 Metionina 1.2-1.6 Fenilalanina 4.7-5.7 Prolina 4.1 -5.2 Serina 5.5-6.7 Treonina 4.6-5.6 Tirosina 3.6-4.4 Valina 5.8-7.2 o

4. - El fármaco o composición dermatológica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado además porque el 50% de los péptidos del extracto constan de 10 a 30 aminoácidos.

5. - El fármaco o composición dermatológica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado además porque se utiliza el mismo para el tratamiento o prevención del prurito seleccionado del grupo formado por prurito gravidarum, prurito sine materia, prurito neonatal y el prurito relacionado con el fármaco.

6. - El fármaco o composición dermatológica de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque el prurito gravidarum se selecciona del grupo que comprende colestasis obstétrica y prurito gravidarum.

7. - El fármaco o composición dermatológica de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque el prurito sine materia se selecciona del grupo formado por el prurito psicógeno y prurito senil.

8. - El fármaco o composición dermatológica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado además porque tiene además una actividad hidratante y reabsorción de grasa.

9. - El fármaco o composición dermatológica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado demás porque comprende de 0.01 % a 20% en peso seco del extracto peptídico de aguacate en relación con el peso total de dicho fármaco o composición dermatológica.

10. - El fármaco o composición dermatológica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado además porque comprende al menos un agente anti-irritante y/o relajante y/o cicatrizante y/o anti-envejecimiento y/o hidratante. 1 1. - El fármaco o composición dermatológica de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque el agente anti-irritante y/o relajante y/o cicatrizante y/o anti-envejecimiento y/o hidratante se selecciona del grupo que comprende glicina, azúcares vegetales y/o péptidos, lupeol, oxazolinas, oxazolidinonas, ácido lipóico, alfa bisabolol, derivados de regaliz, enoxolona, ectoína, furanos de aguacate, extractos de Centella asiática, cafeína, retinol, retinal, ácido retinóico, óxido de zinc, magnesio, silicio, cobre, zinc, manganeso, selenio, ácido hiaiurónico, ácido azeláico y sales o ésteres del mismo, ácido salicílico y derivados del mismo, ácido alfa-hidroxiácidos (AHA), ésteres de AHA, ácido pirrolidona carboxílico y derivados de los mismos, ceramidas, colesterol, escualeno, fosfolípidos, beta caroteno, vitamina A, vitamina E, vitamina C, vitamina B3, vitamina B5, vitamina B6, peróxido de benzoilo, urea, coenzima Q10, glucosamina, y sales de la misma, N-acetil glucosamina, aguas termales o de manantial, péptidos de la soya y arabinogalactano.