ES2626639T3 - Medicamento o composición dermatológica que contiene un extracto peptídico de aguacate destinado al tratamiento y a la prevención del prurito interno - Google Patents
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Abstract
Extracto peptídico de aguacate, que comprende de 2 al 10% en peso de nitrógeno alfa-aminado con respecto al peso de la materia seca del extracto peptídico, y caracterizado por que por lo menos el 50% de los péptidos del extracto están constituidos por 10 a 30 aminoácidos para su utilización en el tratamiento o la prevención del prurito interno en un medicamento o composición dermatológica que comprende dicho extracto y un excipiente apropiado.
Description
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PAR-2;
-Asimismo, las células endoteliales pueden responder a una estimulación por triptasa a través del receptor PAR-2;
-Por otra parte, las células endoteliales también pueden responder a una estimulación por histamina;
-Por último, el PAR-2 también es expresado por los queratinocitos epidérmicos en los que está implicado en una reacción inflamatoria a través de la activación del factor de transcripción NFκB.
Los estudios presentados a continuación se llevaron a cabo en mastocitos peritoneales de rata. Estas células tienen las mismas características que los mastocitos cutáneos y por lo tanto constituyen un modelo experimental representativo de la piel humana.
I. Efecto del extracto peptídico de aguacat sobre la liberación de triptasa por mastocitos
Se incubaron unos mastocitos peritoneales de rata (2·105 células/ml) durante 30 minutos a 37ºC en presencia, o no, del extracto peptídico de aguacate (obtenido en el ejemplo 1) al 0,005% (p/v) o de quercetina (Sigma) 50 µM, inhibidor de referencia de la liberación de triptasa. Las células se estimularon entonces durante 15 minutos mediante calcio ionóforo A23187 (Millipore) 0,5 µM. El calcio ionóforo se utiliza como inductor de la liberación de triptasa (induce una entrada y una movilización del calcio intracelular). La reacción se detuvo por centrifugación a 4ºC.
La liberación de triptasa se evaluó por dosificación de la triptasa en los residuos celulares y en los sobrenadantes por medio del kit "Mast Cell Degranulation Assay Kit" (Millipore). Esta prueba se basa en la detección espectrofotométrica del cromóforo p-nitroanilina (pNA) después de la escisión del sustrato tosil-gly-pro-lys-pNA por la triptasa.
La ausencia de citotoxicidad del extracto peptídico de aguacate en las condiciones del ensayo se confirmó mediante tinción con azul tripano.
Como se muestra en la tabla 7, el calcio ionóforo A23187 indujo una liberación masiva de triptasa y la quercetina 50 µM inhibió significativamente esta liberación (-47%, p <0,01); estas condiciones validan el ensayo.
Tabla 7: Liberación de triptasa por los mastocitos
- Triptasa (ng/ml)
- Media
- Desviación estándar Porcentaje de inhibición
- Control no estimulado
- 2 1
- Control estimulado (Ca ionóforo)
- 83 5
- Quercetina 50 µM
- 44 2 -47%**
- Extracto peptídico de aguacate 0,005%
- 58 7 -30%**
**p<0,01: Ensayo t de Student
El extracto peptídico de aguacate a una concentración de 0,005% (p/v) inhibió significativamente (-30%) la liberación de triptasa por unos mastocitos inducida por el calcio ionóforo.
II. Efecto del extracto peptídico de aguacate sobre la liberación de histamina por mastocitos
II.1. Material y procedimiento:
Se incubaron unos mastocitos peritoneales de rata (10000 células/250 µl de tampón Tyrode) durante 30 minutos a 37ºC en presencia, o no, del extracto peptídico de aguacate, obtenido en el ejemplo 1, al 0,05%, 0,5% y 1% (p/v) o de calcio 10 mM, utilizado como referencia inhibidora de la liberación de histamina.
Las células se estimularon a continuación durante 10 minutos por la sustancia P 10 µM (Neosystem) en presencia 0,3 mM de calcio.
La reacción se detuvo por centrifugación y los sobrenadantes y residuos celulares se recogieron con ácido perclórico 0,8 N con el fin de realizar la dosificación de la histamina mediante el procedimiento
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