MX2011003637A - Inhibidores de la integrasa del virus de inmunodeficiencia humana. - Google Patents

Inhibidores de la integrasa del virus de inmunodeficiencia humana.

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Abstract

Compuestos de Fórmula I (Ver fórmula (I)) son inhibidores de la integrasa del VIH e inhibidores de replicación del VIH: donde X1, X2, Y, R1A, R1B, R2 y R3 se definen en este documento; los compuestos son útiles para la profilaxis o tratamiento de una infección por el VIH y la profilaxis, tratamiento o retardo en la aparición o progresión del SIDA; los compuestos se emplean frente a una infección del VIH y SIDA como compuestos en sí mismos (o como hidratos o solvatos de los mismos) o en forma de sales farmacéuticamente aceptables; los compuestos y sus sales se pueden emplear como ingredientes en composiciones farmacéuticas, opcionalmente en combinación con otros antivirales, inmunomoduladores, antibióticos o vacunas.

Description

INHIBIDORES DE LA INTEGRASA DEL VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA REFERENCIA CRUZADA CON LAS SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reivindica la prioridad de la Solicitud Provisional de Estados Unidos N° 61/195.271 (presentada el 6 de octubre de 2008), cuya descripción se incorpora en este documento como referencia en su totalidad.
CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a determinados compuestos 2-{[(bencilo sustituido)amino]carbonil}-3-hidroxi-4-oxo-4, 6,7, 8,9,10-hexahidropirimidoIl ^-alazepin-I O-i -N.N'.N'-trialquiletanodiamida, determinados compuestos 2-{[(bencilo sustituido)amino]carbonil}-3-hidroxi-4-oxo-6,7,9, 10-tetrahidro-4H-pirimido[1 ,2-d][1 ,4]oxazepin-10-il)- N N' lT-trialquiletanodiamida y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, su síntesis y su uso como inhibidores de la enzima integrasa del VIH. Los compuestos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos de la presente invención son útiles en la profilaxis o tratamiento de una infección por VIH y en la profilaxis, el retardo en la aparición o progresión o tratamiento del SIDA.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Un retrovirus denominado virus de inmunodeficiencia humana (VIH), particularmente las cepas conocidas como virus de VIH de tipo-1 (VIH-1 ) y virus de tipo-2 (VIH-2), es el agente etiológico de la compleja enfermedad que incluye la destrucción progresiva del sistema inmune (síndrome de inmuno deficiencia adquirida; SIDA) y degeneración del sistema nervioso central y periférico. Este virus se conocía previamente como LAV, HTLV-III o ARV. Una característica común de la replicación de retrovirus es la inserción mediante la integrasa codificada por virus de ADN +proviral en el genoma de la célula hospedadora, un paso necesario en la replicación del VIH en células T-linfoides y monocitoides humanas. Se cree que la integración está mediada por la integrasa en tres pasos: ensamblaje de un complejo de nucleoproteína estable con secuencias de ADN viral; escisión de dos nucleótidos de los extremos 3' del ADN proviral lineal; unión covalente del extremo OH 3' con huecos del ADN proviral en un corte escalonado hecho en el sitio diana del hospedador. El cuarto paso en el proceso, síntesis de reparación del hueco resultante, se puede conseguir mediante enzimas celulares.
La secuenciación de nucleótidos del VIH muestra la presencia de un gen pol en una fase de lectura abierta [Ratner, L. et al., Nature, 313, 277(1985)]. La homología de secuencia de aminoácidos proporciona evidencia de que la secuencia pol codifica la transcriptasa inversa, la integrasa y una proteasa del VIH [Toh, H. et al., EMBO J. 4, 1267 (1985); Power, M. D. et al., Science, 231 , 1567 (1986); Pearl, L. H. et al., Nature, 329, 351 (1987)]. Las tres enzimas han demostrado ser imprescindibles para la replicación del VIH.
Se conoce que algunos compuestos antivirales que actúan como inhibidores de la replicación del VIH son agentes eficaces en el tratamiento del SIDA y enfermedades similares, incluyendo inhibidores de la transcriptasa inversa tales como azidotimidina (AZT) y efavirenz e inhibidores de la proteasa tales como indinavir y nelfinavir. Los compuestos de esta invención son inhibidores de la integrasa del VIH e inhibidores de la replicación del VIH. La inhibición de la integrasa in vitro y replicación del VIH en células es un resultado directo de inhibir la reacción de transferencia de cadena catalizada por la integrasa recombinante in vitro en células infectadas con VIH.
Las siguientes referencias son de interés como antecedentes: Kinzel et al., Tet. Letters 2007, 48(37): págs. 6552-6555 describe la síntesis de tetrahidropiridopirimidonas como un armazón para inhibidores de la integrasa del VIH-1.
Ferrara et al., Tet. Letters 2007, 48(37), págs. 8379-8382 describe la síntesis de un derivado de hexahidropirimido[1 ,2-a]azepina-2-carboxamida útil como un inhibidor de la integrasa del VIH.
Muraglia et al., J. Med. Chem. 2008, 51; 861-874 describe el diseño y la síntesis de pirimidinonas bicíclicas como inhibidores de la integrasa del VIH-1 potentes y biodisponibles por vía oral.
El documento US2004/229909 describe determinados compuestos que tienen actividad inhibidora de la integrasa.
Los documentos US 7232819 y US 2007/0083045 describen determinadas 5,6-dihidroxip¡rimidina-4-carboxamidas como inhibidores de la integrasa del VIH.
Los documentos US 7169780, US 7217713 y US 2007/0123524 describen determinadas 5-hidroxi-6-oxo-1 ,6-dihidropirtmidina-4-carboxamidas N-sustituidas como inhibidoras de la integrasa del VIH.
El documento US 7279487 describe determinadas hidroxinaftiridinona carboxamidas que son útiles como inhibidoras de la integrasa del VIH.
Los documentos US 7135467 y US 7037908 describen determinadas pirimidina carboxamidas que son útiles como inhibidores de la integrasa del VIH.
El documento US 7211572 describe determinados compuestos de anillo condensado de nitrógeno que son inhibidores de la integrasa del VIH.
El documento US 7414045 describe determinadas tetrahidro-4H-pirido[1 ,2-a]pirimidina carboxamidas, hexahidropirimido[1 ,2-a]azepina carboxamidas y compuestos relacionados que son útiles como inhibidores de la integrasa del VIH.
El documento WO 2006/103399 describe determinadas tetrahidro-4H-pirimidooxazepina carboxamidas, tetrahidropirazinopirimidina carboxamidas, hexahidropirimidodiazepina carboxamidas y compuestos relacionados que son útiles como inhibidores de la integrasa del VIH.
El documento US 2007/0142635 describe procesos para preparar hexahidropirimido[1 ,2-a]azepina-2-carboxilatos y compuestos relacionados.
El documento US 2007/0149556 describe determinados derivados de hidroxipirimidinona que tienen actividad inhibidora de la integrasa del VIH.
Diversos compuestos pirimidinona útiles como inhibidores de la integrasa del VIH también se describen en los documentos US 71 15601 , US 7157447, US 7173022, US 7176196, US 7192948, US 7273859 y US 7419969.
El documento US 2007/0111984 describe una serie de compuestos de pirimidinona bicíclicos útiles como inhibidores de la integrasa del VIH.
BREVE DESCRIPCION DE LA I NVENCION La presente invención se refiere a determinados compuestos de 2-{[(bencilo sustituido)amino]carbonil}-3-hidroxi-4-oxo-4,6,7,8,9,10-hexahidropirim¡do[1 ,2-a]azepin-10-il)-/N/,/V',/\/-trialquiletanodiamida y determinados compuestos de 2-{[(bencilo sustituido)amino]carbonil}-3-hidroxi-4-0X0-6,7,9, 10-tetrahidro-4H-pirimido[1 ,2-d][1 ,4]oxazepin-10-il)- N N' lP-trialquiletanodiamida. Estos compuestos (incluyendo hidratos y solvatos de los mismos), opcionalmente en forma de sales farmacéuticamente aceptables, son útiles en la inhibición de la integrasa del VIH, la prevención de una infección por VIH, el tratamiento de una infección por VIH y en la prevención, tratamiento y retardo en la aparición o progresión del SIDA y/o CRS, corno compuestos en sí mismos o como ingredientes de composición farmacéutica, en combinación o no con otros antivirales contra el VIH/SIDA, anti-infecciosos, inmunomoduladores, antibióticos o vacunas. Más particularmente, la presente invención incluye compuestos de Fórmula I y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos: CH3 )- donde: 1 cada X y X es independientemente H, halógeno, o alquilo C-, con la condición de que al menos uno de X1 y X2 sea distinto de H; Y es CH2 u O; R es H o alquilo C-,.3; 1 B R es H, alquilo C-,.3 u O-alquilo C1-4; 2 R es H o alquilo C,.3; y R es alquilo C1-3; y con la condición de que: (C) cuando Y es O, entonces R1A y R1B sean los dos sea alquilo C -3; y (D) cuando Y es CH2, entonces (¡) sea H, R sea alquilo y R sea alquilo C alquilo C^; R sea alquilo C _3 R sea H y R sea H; o 2 1A 1 B (¡ii) R sea H, R sea H y R sea O-alquilo C1-4 presente invención también incluye composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Además, la presente invención incluye métodos que comprenden compuestos de Fórmula I para el tratamiento del SIDA, el retraso en la aparición o progresión del SIDA, la profilaxis del SIDA, la profilaxis de la infección por VIH y el tratamiento de la infección por VIH.
Otras realizaciones, aspectos y características de la presente invención se describen adicionalmente o serán evidentes a partir de la siguiente descripción, ejemplos y reivindicaciones adjuntas.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es el patrón de difracción de polvos por rayos X para la forma cristalina del Compuesto 2A descrita en el Ejemplo 2.
La Figura 2 es el patrón de difracción de polvos por rayos X para la forma cristalina del Compuesto 4A descrita en el Ejemplo 4-1.
La Figura 3 es el patrón de difracción de polvos por rayos X para la Forma I cristalina del Compuesto 5A descrita en el Ejemplo 5-1.
La Figura 4 es el patrón de difracción de polvos por rayos X para la Forma II cristalina del Compuesto 5A descrita en el Ejemplo 5-1.
La Figura 5 es el patrón de difracción de polvos por rayos X para la forma cristalina del Compuesto 6a descrita en el ejemplo 6-1.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención incluye compuestos de la Fórmula I anterior (incluyendo hidratos y solvatos de los mismos) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Estos compuestos son inhibidores eficaces de la integrasa del VIH de tipo silvestre (por ejemplo, VIH-1 ) y cepas mutantes de la misma, como se ha demostrado a partir de los resultados que se muestran en los Ejemplos 7 a 9 a continuación. Algunos de los compuestos también mostraron farmacocinéticas ventajosas en modelos animales.
Una primera realización de la presente invención (referida como alternativa en este documento como "Realización E1") es un compuesto de Fórmula I (como alternativa y de forma más sencilla referido como "Compuesto I") o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; donde X1 es F o CH3; 2 X es H, F, o CH3, y con la condición de que: 1 2 (A) cuando X es F, entonces X es H o CH3, y 1 2 (B) cuando X es CH3, entonces X es F; Y es CH2 u O; 1 A R es H o CH3; R1B es H, CH3, o OCH3; R2 es H, CH3, o CH2CH3; y R3 es CH3 o CH2CH3; y con la condición de que: 1A 1B 2 (C) cuando Y es O, entonces R y R sean los dos H, R sea CH3 o CH2CH3, y R3 sea CH3; y (D) cuando Y es CH2, entonces (i) R es H, R es CH3, R es CH3 y R es CH3 u OCH3; (ii) R2 es CH3i R3 es CH3> R1A es H, y R B es H; o (iii) R2 es H, R3 es CH2CH3l R1A es H, y R1 B es OCH3 Una segunda realización de la presente invención (referida como alternativa en este documento como "Realización E2") es un compuesto de Fórmula II (como alternativa referido como "Compuesto M") o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: (II). donde: X1 es F o CH3; 2 X es H, F o CH3 y con la condición de que: 1 2 (A) cuando X es F, entonces X sea H o CH3 y 1 2 (B) cuando X es CH3, entonces X sea F; Y es CH2 u O; R1A es H o CH3; R1B es H, CH3 o OCH3; y R2 es H, CH3 o CH2CH3; y con la condición de que: 1A 1 B (C) cuando Y es O, entonces R y R sean los dos H y R es CH3 o CH2CH3; y (D) cuando Y es CH2, entonces (i) R2 sea H, R1A sea CH3 y R1B sea CH3 u OCH3> o ? 1A 1 R (ii) R sea CH3 y R sea H y R sea H.
Una tercera realización de la presente invención (Realización E2) es un compuesto de Fórmula III (o "Compuesto III") o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: donde: X1 es F o CH3; 2 X es H, F o CH3 y con la condición de que: 1 2 (A) cuando X es F, entonces X sea H o CH3 y 1 2 (B) cuando X es CH3, entonces X sea F; y R2 es H. 2 En un aspecto de la Realización E3, R es H.
Una cuarta realización de la presente invención (Realización E3) es un compuesto de Fórmula I (o "Compuesto I") o Compuesto II o Compuesto III, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, donde 1 2 X es F y X es H o CH3 y todas las demás variables son como se ha definido originalmente (es decir, como se define en el Sumario de la Invención) o como se define en la Realización E1 , en la Realización E2 o en la Realización E3.
En un aspecto de la Realización E4, X es F y X es H. En otro aspecto de la 1 2 Realización E4, X es F y X es CH3.
Una quinta realización de la presente invención (Realización E5) es un compuesto de Fórmula I o de Fórmula II o de Fórmula III o una sal 1 2 farmacéuticamente aceptable del mismo donde X es CH3 y X es F y todas las demás variables son como se ha definido originalmente o como se definen en la Realización E1 , en la Realización E2 o en la Realización E3.
Una sexta realización de la presente invención (Realización E6) es un compuesto de Fórmula II o una sal farmacéuticamente aceptable del 2 1A 1 B mismo, donde Y es CH2; R es H; R es CH3; y R es CH3 u OCH3; y todas las demás variables son como se definen en la Realización E2.
Una séptima realización de la presente invención (Realización E7) es un compuesto de Fórmula II o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde Y es CH2; R2 es CH3; R1A es H; R B es H; y todas las demás variables son como se definen en la Realización E2.
Una octava realización de la presente invención (Realización E8) es un compuesto de Fórmula II o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo donde Y es O; R A y R1 B son lo dos H; R2 es CH3 o CH2CH3; y todas las demás variables son como se definen en la Realización E2.
Una novena realización de la presente invención (Realización E9) es un compuesto de Fórmula I seleccionado entre el grupo que consiste en: y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Una décima realización de la presente invención (Realización E10) es un compuesto de Fórmula I o de Fórmula II o de Fórmula III, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde el compuesto es estereoméricamente puro.
Una undécima realización de la presente invención (Realización E11 ) es un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde el compuesto es un compuesto como se ha indicado en cualquiera de los Ejemplos 1 a 6, es decir, el compuesto es el Compuesto 1A, Compuesto 1 B, Compuesto 2A, Compuesto 2B, Compuesto 2C, Compuesto 2D, Compuesto 3A, Compuesto 3B, Compuesto 4A, Compuesto 4B, Compuesto 4C, Compuesto 4D, Compuesto 5A, Compuesto 5B, Compuesto 5C, Compuesto 5D, Compuesto 6A o Compuesto 6B.
Una duodécima realización de la presente invención (Realización E12) es un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde el compuesto es el Compuesto 1A, Compuesto 2A, Compuesto 2D, Compuesto 4A, Compuesto 4B, Compuesto 4C, Compuesto 5A, Compuesto 5B o Compuesto 6A. En un aspecto de esta realización, el compuesto es estereoméricamente puro. Cada uno de los compuestos precedentes es un aspecto distinto de la Realización E 2.
Una decimotercera realización de la presente invención (Realización E13) es un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que es: En un aspecto de esta realización, el compuesto Compuesto 6A: En una característica de este aspecto, el compuesto es estereoméricamente puro.
Una decimocuarta realización de la presente invención (Realización E14) es un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que es: En un aspecto de esta realización, el compuesto Compuesto 5A: En una característica de este aspecto, el compuesto es estereoméricamente puro.
Una decimoquinta realización de la presente invención (Realización E 5) es un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que es: En un aspecto de esta realización, el compuesto Compuesto 2A: En una característica de este aspecto, el compuesto es estereoméricamente puro.
Una decimosexta realización de la presente invención (Realización E16) es un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que es: En un aspecto de esta realización, el compuesto es el Compuesto 4A: O OH En una característica de este aspecto, el compuesto es estereoméricamente puro.
Como se usa en este documento y a menos que se indique otra cosa, la expresión "esterioméricamente puro" con respecto a un compuesto de la invención significa un estereoisómero de un compuesto que está sustancialmente libre de otros estereoisómeros de este compuesto. Por ejemplo, un compuesto estereoméricamente puro que tiene un centro quiral estará sustancialmente libre del enantiómero contrario del compuesto. Un compuesto estereoméricamente puro que tiene dos centros quirales estará sustancialmente libre de otros diastereómeros del compuesto. Un compuesto estereoméricamente puro comprende más de aproximadamente el 75% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos dé aproximadamente el 25% en peso de otros estereoisómeros (por ejemplo, más de aproximadamente el 80% de un estereoisómero y menos del 20% de los otros estereoisómeros) del compuesto, preferiblemente más de aproximadamente el 90% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente el 10% en peso de los otros estereoisómeros del compuesto I, más preferiblemente más de aproximadamente el 95% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente el 5% en peso de los otros estereoisómeros del compuesto y aún más preferiblemente más de aproximadamente el 97% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente el 3% en peso de los otros estereoisómeros (por ejemplo, más de aproximadamente el 99% de un estereoisómero y menos del 1 % de los otros estereoisómeros) del compuesto. El nivel de pureza de los compuestos y sales se puede determinar usando un método típico de análisis. Si se emplea más de un método de análisis y los métodos proporcionan diferencias experimentalmente significativas en el nivel de pureza esteriomérica determinado en una muestra dada, entonces prevalece el método que proporciona el nivel de pureza más alto.
Se entiende que todas las formas isoméricas de los compuestos de Fórmula I, tanto aisladas como en mezclas, están dentro del alcance de la presente invención. Los compuestos estereoméricamente puros representan sólo un aspecto de la presente invención.
Una decimoséptima realización de la presente invención (Realización E17) es una forma cristalina del Compuesto 2A donde la forma cristalina se caracteriza por los análisis de XRPD, DSC y TGA indicados en el Ejemplo 2 a continuación. En un aspecto de esta realización, el Compuesto 2A cristalino se caracteriza por un patrón de difracción de polvos por rayos X obtenido usando radiación de cobre Ka (es decir, la fuente de radiación es una combinación de radiación Cu Ka1 y Ka2) que comprende valores 2T (es decir, reflexiones a valores 2T) en grados de aproximadamente 8.5, 9.3, 13.3, 17,0, 18.8 y 20.8. En esta realización y en cualquiera de las realizaciones análogas que se muestran a continuación, se entiende que el término "aproximadamente" modifica a cada uno de los valores 2T. En otro aspecto de esta realización, el Compuesto cristalino 2A se caracteriza por un patrón de difracción de polvos por rayos X obtenido usando radiación de cobre KD que comprende valores 2T en grados de aproximadamente 5.7, 8.5, 8.9, 9.3, 11.6, 12.6, 13.3, 14.6, 15.9, 16.4, 17.0, 17.5, 18.4, 18.8, 19.7, 20.4, 20.8, 21.7, 23.3, 23.7, 24.5, 25.5, 25.7, 26.0, 26.3, 26.9, 27.9, 28.4, 29.3, 30.4, 30.6, 31.2, 32 3, 32.7, 34.2, 34.5, 34.8, 35.5, 36.4, 36.6, 38.6 y 39.3.
Una decimooctava realización de la presente invención (Realización E18) es la forma cristalina del Compuesto 2A donde la forma cristalina se caracteriza por la traza de PDF obtenida a partir de su patrón de difracción por rayos X mostrado en la Figura 1. La traza de PDF proporciona una huella dactilar de las distancias interatómicas que definen la forma cristalina. Una traza de PDF se puede obtener de la manera descrita en el documento WO2005/082050. En un aspecto de esta realización, la forma cristalina se caracteriza por las partes de la traza de PDF que corresponden a los valores 2T en grados de aproximadamente 8.5, 9.3, 13.3, 17.0, 18.8 y 20.8 en el XRPD. En otro aspecto de esta realización, la forma cristalina se caracteriza por las partes de la traza de PDF que corresponden a los valores 2T en grados de aproximadamente 5.7, 8.5, 8.9, 9.3, 11.6, 12.6, 13.3, 14.6, 15.9, 16.4, 17.0, 17.5, 18.4, 18.8, 19.7, 20.4, 20.8, 21.7, 23.3, 23.7, 24.5, 25.5, 25.7, 26.0, 26.3, 26.9, 27.9, 28.4, 29.3, 30.4, 30.6, 31.2, 32.3, 32.7, 34.2, 34.5, 34.8, 35.5, 36.4, 36.6, 38.6 y 39.3 en el XRPD.
Una decimonovena realización de la presente invención (Realización E19) es una forma cristalina del Compuesto 4A donde la forma cristalina se caracteriza por los análisis XRPD, DSC y TGA indicados en el Ejemplo 4-1 más adelante. En un aspecto de esta realización, el Compuesto 2A cristalino se caracteriza por un patrón de difracción de polvos por rayos X obtenido usando radiación de cobre KQ que comprende valores 2T en grados de aproximadamente 6.1 , 10.4, 12.9, 13.7, 19.4 y 22.9. En otro aspecto de esta realización, la forma cristalina del Compuesto 4A se caracteriza por un patrón de difracción de polvos por rayos X obtenido usando radiación de cobre KQ que comprende valores 2T en grados de aproximadamente 6.1 , 10.0, 10.3, 10.4, 12.2, 12.9, 13.7, 14.5, 15.1 , 15.5, 17.5, 17.7, 18.3, 18.6, 19.2, 19.4, 20.0, 20.6, 20.9, 21.7, 22.0, 22.3, 22.9, 23.5, 24.0, 25.6, 25.9, 26.5, 27.1 , 27.5, 28.5, 29.3, 30.2, 31 .1 , 31 .5, 32.4, 33.1 , 33.7, 34.1 , 35.8 y 37.4.
Una vigésima realización de la presente invención (Realización E20) es una primera forma cristalina del Compuesto 5A donde la forma cristalina se caracteriza por los análisis XRPD, DSC y TGA indicados en el Ejemplo 5-1 más adelante. En un aspecto de esta realización, la Forma I cristalina del Compuesto 5A se caracteriza por un patrón de difracción de polvos por rayos X obtenido usando radiación de cobre KA que comprende valores 2T en grados de aproximadamente 8.4, 8.6, 18.0, 20.5, 20.8, 25.2, 26.1 y 27.2. En otro aspecto de esta realización, la Forma I cristalina del Compuesto 5A se caracteriza por un patrón de difracción de polvos por rayos X obtenido usando radiación de cobre KQ que comprende valores 2T en grados de aproximadamente 8.4, 8.6, 10.4, 14.8, 16.0, 16.8, 18.0, 19.5, 20.5, 20.8, 23.0, 24.5, 25.2, 26.1 , y 27.2. En otro aspecto de esta realización, la Forma I cristalina del Compuesto 5A se caracteriza adicionalmente por un pico de temperatura de aproximadamente 149°C en una curva de DSC tomada en una atmósfera de nitrógeno a una velocidad de calentamiento de 10°C/minuto en un recipiente de aluminio cerrado.
Una vigésimo primera realización de la presente invención (Realización E21) es una segunda forma cristalina del Compuesto 5A donde la forma cristalina se caracteriza por los análisis XRPD, DSC y TGA indicados en el Ejemplo 5-1 más adelante. En un aspecto de esta realización, la Forma II cristalina del Compuesto 5A se caracteriza por un patrón de difracción de polvos por rayos X obtenido usando radiación de cobre KQ que comprende valores 2T en grados de aproximadamente 8.4, 8.6, 18.0, 20.4, 20.8, 25.9, 26.2 y 27.1. En otro aspecto de esta realización, la Forma II cristalina del Compuesto 5A se caracteriza por un patrón de difracción de polvos por rayos X obtenido usando radiación de cobre Ka que comprende valores 2T en grados de aproximadamente 8.4, 8.6, 10.3, 14.8, 16.0, 16.7, 18.0, 19.4, 20.4, 20.8, 23.0, 24.4, 25.1 , 25.9, 26.2 y 27.1. En otro aspecto de esta realización, la Forma II cristalina del Compuesto 5A se caracteriza adicionalmente por un pico de temperatura de aproximadamente 155°C en una curva de DSC tomada en una atmósfera de nitrógeno a una velocidad de calentamiento de 0°C/minuto en un recipiente de aluminio cerrado.
Una vigésimo segunda realización de la presente invención (Realización E22) es una forma cristalina del Compuesto 6A donde la forma cristalina se caracteriza por los análisis XRPD, DSC y TGA indicados en el Ejemplo 6-1 más adelante. En un aspecto de esta realización, el Compuesto cristalino 6A se caracteriza por un patrón de difracción de polvos por rayos X obtenido usando radiación de cobre Ka que comprende valores 2T en grados de aproximadamente 10.6, 14.2, 17.4, 18.8 y 20.4. En otro aspecto de esta realización, el Compuesto cristalino 6A se caracteriza por un patrón de difracción de polvos por rayos X obtenido usando radiación de cobre Ka que comprende valores 2T en grados de aproximadamente 5.6, 7.0, 9.9, 10.6, 12.8, 14.2, 15.0, 16.0, 16.2, 16.6, 17.4, 18.0, 18.4, 18.8, 19.8, 20.0, 20.4, 20.6, 21.2, 21.7, 22.1 , 22.7, 23.1 , 23.2, 24.1 , 24.8, 25.1 , 25.5, 26.1 , 26.2, 26.6, 27.9, 28.5, 29.2, 29.3, 30.1 , 30.6, 31.0, 31.5, 32.0, 32.3, 32.6, 33.1 , 33.9, 34.5, y 35.5.
Las Realizaciones E23 a E26 de la presente invención corresponden respectivamente al Compuesto cristalino 4A, la Forma I cristalina 5A, la Forma II cristalina 5A, y el Compuesto cristalino 6A como se indica en las Realizaciones E19 a E22, donde la forma cristalina se caracteriza por la traza de PDF derivada de su patrón de difracción por rayos X mostrado en las Figuras 2, 3, 4 y 5.
El término "aproximadamente", cuando modifica el valor de una propiedad física o similar, se refiere a la variación en la cantidad numérica que se puede producir, por ejemplo, a través de la medida típica y los procedimientos de manejo y muestreo implicados en la caracterización de la sustancia o composición; a través de un error inadvertido en estos procedimientos; a través de diferencias en la fabricación, fuente o pureza de los ingredientes empleados para preparar la sustancia o realizar los procedimientos y similares. En el caso particular de los valores 2T en grados en un XRPD descrito en este documento, el término "aproximadamente" significa típicamente el valor ± 0.1.
Otra realización de la presente invención es el compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido en cualquiera de las realizaciones o aspectos anteriores (por ejemplo, el Compuesto II en la Realización E2 o el Compuesto III en la Realización E3), donde el compuesto o su sal está en una forma sustancialmente pura. Como se usa en este documento, "sustancialmente puro" significa de forma adecuada que al menos aproximadamente el 75% en peso, típicamente al menos aproximadamente el 80% en peso, preferiblemente al menos aproximadamente el 90% en peso (por ejemplo, de aproximadamente el 90% en peso a aproximadamente el 99% en peso), más preferiblemente al menos aproximadamente el 95% en peso (por ejemplo, de aproximadamente el 95% en peso a aproximadamente el 99% en peso o de aproximadamente el 98% en peso al 100% en peso) y lo más preferiblemente al menos aproximadamente el 97% en peso (por ejemplo, de aproximadamente el 99% en peso al 100% en peso) de un producto que contiene un compuesto de Fórmula I o su sal (por ejemplo, el producto aislado a partir de una mezcla de reacción que produce el compuesto o la sal) consiste en el compuesto o sal. El nivel de pureza de los compuestos y sales se puede determinar usando un método de análisis típico tal como cromatografía de capa fina, electroforesis en gel, cromatografía líquida de alta eficacia y/o espectrometría de masas. Si se emplea más de un método de análisis y los métodos proporcionan diferencias experimentalmente significativas en el nivel de pureza determinado en una muestra dada, entonces prevalece el método que proporciona el nivel de pureza más alto. Un compuesto o sal con una pureza del 100% es uno que está libre de impurezas detectables cuando se determina por un método típico de análisis. Los compuestos de la invención tienen uno o dos centros asimétricos y por lo tanto pueden encontrarse como mezclas de estereoisómeros. Debe apreciarse que un compuesto sustancialmente puro puede ser tanto una mezcla sustancialmente pura de los estereoisómeros como un diastereómero o enantiómero individual sustancialmente puro. Un diastereómero o enantiómero individual sustancialmente puro también es estereoméricamente puro.
Otras realizaciones de la presente invención incluyen lo siguiente: (a) Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de Compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un transportador farmacéuticamente aceptable. (b) Una composición farmacéutica que comprende el producto preparado combinando (por ejemplo, mezclando) una cantidad eficaz de Compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un transportador farmacéuticamente aceptable. (c) La composición farmacéutica de (a) o (b), comprendiendo además una cantidad eficaz de un agente anti-VIH seleccionado entre el grupo que consiste en agentes antivirales contra el VIH, mmunomoduladores y agentes anti-infecciosos. (d) La composición farmacéutica de (c), en la que el agente anti-VIH es un antiviral seleccionado entre el grupo que consiste en inhibidores de la proteasa del VIH, inhibidores no nucleósidos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores nucleósidos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores de la integrasa del VIH, inhibidores de fusión del VIH e inhibidores de entrada del VIH. (e) A combinación que es (i) Compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y (ii) un agente anti-VIH seleccionado entre el grupo que consiste en agentes antivirales contra el VIH, inmunomoduladores y agentes anti-infecciosos; donde el compuesto de Fórmula I y el agente anti-VIH cada uno se emplea en una cantidad que vuelve a la combinación eficaz para la inhibición de la integrasa del VIH, para el tratamiento o profilaxis de una infección por el VIH o para el tratamiento, profilaxis o retardo en la aparición o progresión del SIDA. (f) La combinación de (e), donde el agente anti-VIH es un antiviral seleccionado entre el grupo que consiste en inhibidores de la proteasa del VIH, inhibidores no nucleósidos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores nucleósidos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores de la integrasa del VIH, inhibidores de fusión del VIH e inhibidores de entrada del VIH. (g) Un método de inhibición de la integrasa del VIH en un sujeto que necesita de los mismos que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de Compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. (h) Un método para el tratamiento o profilaxis de una infección por el VIH en un sujeto que necesita del mismo que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de Compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. (i) El método de (h), en el que el compuesto de Fórmula I se administra en combinación con una cantidad eficaz de al menos un antiviral seleccionado entre el grupo que consiste en inhibidores de la proteasa del VIH, inhibidores no nucleósidos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores nucleósidos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores de la integrasa del VIH, inhibidores de fusión del VIH e inhibidores de entrada del VIH. (j) Un método para el tratamiento, profilaxis o retardo en la aparición o progresión del SIDA en un sujeto que necesita del mismo que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de Compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. (k) El método de (j), en el que el compuesto se administra en combinación con una cantidad eficaz de al menos un antiviral seleccionado entre el grupo que consiste en inhibidores de la proteasa del VIH, inhibidores no nucleósidos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores nucleósidos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores de la integrasa del VIH, inhibidores de fusión del VIH e inhibidores de entrada del VIH.
(I) Un método de inhibición de la integrasa del VIH (por ejemplo, la integrasa del VIH-1) en un sujeto que necesita del mismo que comprende administrar al sujeto la composición farmacéutica de (a), (b), (c) o (d) o la combinación de (e) o (f). (m) Un método para el tratamiento o profilaxis de una infección por el VIH (por ejemplo, VIH-1 ) en un sujeto que necesita del mismo que comprende administrar al sujeto la composición farmacéutica de (a), (b), (c) o (d) o la combinación de (e) o (f). (n) Un método para el tratamiento, profilaxis o retardo en la aparición o progresión del SIDA (por ejemplo, SIDA debido al VIH-1 ) en un sujeto que necesita del mismo que comprende administrar al sujeto la composición farmacéutica de (a), (b), (c) o (d) o la combinación de (e) o (f).
La presente invención también incluye un compuesto de la presente invención o sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, (i) para uso en, (ii) para uso como un medicamento para o (iii) para uso en la preparación o fabricación de un medicamento para: (a) terapia (por ejemplo, del cuerpo humano), (b) medicina, (c) inhibición de la integrasa del VIH, (d) tratamiento o profilaxis de una infección por el VIH o (e) tratamiento, profilaxis de o retardo en la aparición o progresión del SIDA. En estos usos, los compuestos de la presente invención opcionalmente se pueden emplear en combinación con uno o más agentes anti-VIH seleccionados entre agentes antivirales contra el VIH, agentes anti-infecciosos e inmunomoduladores.
Realizaciones adicionales de la invención incluyen las composiciones, combinaciones y métodos farmacéuticos expuestos anteriormente en (a)-(n) y los usos (i)(a)-(e) a (iii)(a)-(e) expuestos en el párrafo precedente, donde el compuesto de la presente invención empleado en los mismos es un compuesto de una de las realizaciones (por ejemplo, Compuesto II en Realización E2 o Compuesto III en Realización E3) o un aspecto de los mismos, como se ha descrito anteriormente. En todas estas realizaciones etc., el compuesto se puede usar opcionalmente en forma de una sal farmacéuticamente aceptable.
Realizaciones adicionales de la presente invención incluyen cada una de las composiciones, combinaciones, métodos y usos farmacéuticos expuestos en los párrafos precedentes, donde el compuesto de la presente invención o su sal empleado en los mismos es sustancialmente puro. Con respecto a una composición farmacéutica que comprende Compuesto I o su sal y un transportador farmacéuticamente aceptable y opcionalmente uno o más excipientes, se aprecia que la expresión "sustancialmente puro" es en referencia a un compuesto de Fórmula I o su sal en sí misma.
Realizaciones adicionales de la presente invención incluyen las composiciones farmacéuticas, combinaciones y métodos expuestos en (a)-(n) anteriormente y los usos (i)(a)-(e) a (¡ii)(a)-(e) expuestos anteriormente, en las que el VIH de interés es VIH-1. Por tanto, por ejemplo, en la composición farmacéutica (d), el compuesto de Fórmula I se emplea en una cantidad eficaz frente al VIH-1 y el agente anti-VIH es un antiviral contra el VIH-1 seleccionado entre el grupo que consiste en inhibidores de la proteasa del VIH-1 , inhibidores de la transcriptasa inversa del VIH-1 , inhibidores de la integrasa del VIH-1 , inhibidores de entrada del VIH-1 e inhibidores de fusión del VIH-1.
Como reconocerá un especialista en la técnica, los compuestos de la presente invención pueden existir como tautomeros, tales como los siguientes: Todas las formas tautoméricas de los compuestos, asiladas o en mezclas, están dentro del alcance de la presente invención.
El especialista en la técnica también apreciará que los compuestos de la invención pueden formar hidratos y/o solvatos. Los hidratos y solvatos químicamente estables de compuestos abarcados por la Fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables están dentro del alcance de la presente invención.
El término "alquilo" se refiere a un radical hidrocarburo alifático, saturado, monovalente, de cadena lineal o ramificada, que tiene un número de átomos de carbono en el intervalo especificado. Por lo tanto, por ejemplo, "alquilo Ci-4" (o "alquilo CrC4") se refiere a n-, ¡so-, sec- y t-butilo, n- e isopropilo, etilo y metilo. Como otro ejemplo, "alquilo C -3" se refiere a n- e isopropilo, etilo y metilo.
El término "halógeno" (o "halo") se refiere a flúor, cloro, bromo y yodo (referido como alternativa como fluoro, cloro, bromo, y yodo).
Un compuesto "estable" es un compuesto que se puede preparar y aislar y cuya estructura y propiedades permaneces o se puede provocar que permanezcan básicamente sin cambios durante un periodo de tiempo suficiente para permitir uso del compuesto para los propósitos descritos en este documento.
Los compuestos de la presente invención son útiles en la inhibición de la ¡ntegrasa del VIH (por ejemplo, la integrasa de VIH-1 ), la profilaxis o tratamiento de una infección por el VIH y la profilaxis, tratamiento o el retardo en la aparición o progresión de procesos patológicos consiguientes tales como el SIDA. La profilaxis del SIDA, tratar el SIDA, retardar la aparición o progresión del SIDA, la profilaxis de una infección por el VIH o tratar una infección por VIH se define como que incluye, pero sin limitación, el tratamiento de un intervalo amplio de estados de una infección del VIH: SIDA, CRS (complejo relacionado con el SIDA), tanto sintomático como asintomático y exposición al VIH real o potencial. Por ejemplo, los compuestos de esta invención son útiles para tratar una infección por el VIH después de que se sospeche de exposición pasada al VIH por medios tales como transfusión sanguínea, intercambio de fluidos corporales, mordeduras, pinchazo accidental con aguja o exposición a sangre de un paciente durante cirugía.
Los compuestos de esta invención son útiles en la preparación y ejecución de ensayos de selección para compuestos antivirales. Por ejemplo, los compuestos de esta invención son útiles para aislar mutantes de enzimas, que son herramientas de selección excelentes para compuestos antivirales más potentes. Además, los compuestos de esta invención son útiles para establecer o determinar el sitio de unión de otros antivirales contra la integrasa del VIH, por ejemplo, por inhibición competitiva. Por tanto, los compuestos de esta invención pueden ser productos comerciales para comercializarse con estos propósitos.
Los compuestos de la presente invención se pueden administrar en forma de sales farmacéuticamente aceptables. La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sal que posee la eficacia del compuesto precursor y que no es indeseable biológicamente o de otra manera (por ejemplo, no es tóxico ni de otra manera dañino para el receptor de los mismos). Las sales adecuadas incluyen sales de adición acidas que, por ejemplo, se pueden formar mezclando una solución del compuesto de la presente invención con una solución de un ácido farmacéuticamente aceptable tal como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido acético o ácido benzoico. Los compuestos de la invención portan un resto ácido y, por tanto, las sales adecuadas farmacéuticamente aceptables de los mismos pueden incluir sales de metales alcalinos (por ejemplo, sales de sodio o potasio), sales de metales alcalinotérreos (por ejemplo, sales de calcio o magnesio) y sales formadas con ligandos orgánicos adecuados tales como sales de amonio cuaternario. También, en el caso de que esté presente un grupo ácido (-COOH) o alcohol, se pueden emplear ésteres farmacéuticamente aceptables para modificar las características de solubilidad o hidrólisis del compuesto.
El término "administración" y variantes del mismo (por ejemplo, "administrado" o "administrar") en referencia a un compuesto de la invención se refiere a proporcionar el compuesto o su sal (o un hidrato o solvato) al individuo que necesita tratamiento o profilaxis. Cuando se proporciona un compuesto de la invención en combinación con uno o más agentes activos diferentes (por ejemplo, agentes antivirales útiles para la profilaxis o tratamiento de una infección del VIH o el SIDA), se aprecia que cada uno de "administración" y sus variantes incluyen provisión del compuesto y otros agentes al mismo tiempo o en momentos diferentes. Cuando los agentes de una combinación se administran al mismo tiempo, los mismos se pueden administrar juntos en una composición única o los mismos se pueden administrar por separado.
Como se usa en la presente memoria, el término "composición" tiene por objeto abarcar un producto que comprende los ingredientes especificados, así como cualquier producto que se produzca como resultado, directamente o indirectamente, de la combinación de los ingredientes especificados.
"Farmacéuticamente aceptable" se refiere a que los ingredientes de la composición farmacéutica tienen que ser compatibles el uno con el otro y no dañinos para el receptor de los mismos.
El término "sujeto" (o, como alternativa, "paciente"), como se usa en la presente memoria, se refiere a un animal, preferiblemente un mamífero, más preferiblemente un ser humano, que ha sido el objeto de tratamiento, observación o experimento.
El término "cantidad eficaz" como se ha usado en este documento se refiere a esa cantidad de compuesto activo o agente farmacéutico que provoca la respuesta biológica o medicinal en un tejido, sistema, animal o ser human que se espera por un investigador, veterinario, médico u otro clínico. En una realización, la cantidad eficaz es una "cantidad terapéuticamente eficaz" para el alivio de los síntomas de la enfermedad o afección que se esté tratando. En otra realización, la cantidad eficaz es una "cantidad profilácticamente eficaz" para la profilaxis de los síntomas de la enfermedad o afección que se esté previniendo. El término también incluye en este documento la cantidad de compuesto activo suficiente para inhibir la integrasa del VIH y provocar de ese modo la respuesta que se esté buscando (es decir, una "cantidad eficaz de inhibición"). Cuando el compuesto activo (es decir, ingrediente activo) se administra como la sal, las referencias a la cantidad de ingrediente activo son a la forma de ácido libre o de base libre del compuesto.
Con el propósito de la inhibición de la integrasa del VIH, la profilaxis o tratamiento de una infección del VIH o la profilaxis o tratamiento o retardo en la aparición o progresión del SIDA, los compuestos de la presente invención, opcionalmente en forma de una sal (o hidrato o solvato), se pueden administrar por cualquier medio que produzca contacto del agente activo con el sitio de acción del agente. Los mismos se pueden administrar por cualquier medio convencionales disponible para uso junto con farmacéuticos, como agentes terapéuticos individuales o en una combinación de agentes terapéuticos. Los mismos se pueden administrar solos, pero típicamente se administran con un transportador farmacéutico seleccionado en base a la vía de administración elegida y práctica farmacéutica convencional. Los compuestos de la invención se pueden administrar, por ejemplo, por vía oral, por vía parenteral (incluyendo inyecciones subcutáneas, técnicas de inyección o infusión intravenosa, intramuscular, intrasternal), mediante pulverización de inhalación o por vía rectal, en forma de una dosis unitaria de una composición farmacéutica que contiene una cantidad eficaz del compuesto y transportadores, adyuvantes y vehículos convencionales no tóxicos farmacéuticamente aceptables. Las preparaciones líquidas adecuadas para administración oral (por ejemplo, suspensiones, jarabes, elíxires y similares) se pueden preparar de acuerdo con técnicas conocidas en el campo y pueden emplear cualquiera de los medios habituales tales como agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares. Las preparaciones sólidas adecuadas para administración oral (por ejemplo, polvos, pildoras, cápsulas y comprimidos) se pueden preparar de acuerdo con técnicas conocidas en el campo y pueden emplear excipientes sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares. Las composiciones parenterales se pueden preparar de acuerdo con técnicas conocidas en el campo y típicamente emplean agua estéril como un transportador y opcionalmente otros ingredientes, tales como un adyuvante de solubilidad. Se pueden preparar soluciones inyectables de acuerdo con métodos conocidos en la técnica en las que el transportador comprende una solución salina, una solución de glucosa o una solución que contiene una mezcla de solución salina y glucosa. Se proporciona descripción adicional de métodos adecuados para uso en la preparación de composiciones farmacéuticas de la presente invención y de ingredientes adecuados para uso en dichas composiciones en Reminqton's Pharmaceutical Sciences, 18a edición, editado por A. R. Gennaro, Mack Publishing Co., 1990 y en Remington - The Science and Practice of Pharmacy, 21a edición, Lippincott Williams & Wilkins, 2005.
Los compuestos de esta invención se pueden administrar por vía oral en un intervalo de dosis de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 1000 mg/kg de peso corporal de mamífero (por ejemplo, ser humano) por día en una dosis única o en dosis divididas. Un intervalo de dosis preferido es aproximadamente 0.01 a aproximadamente 500 mg/kg de peso corporal por día por vía oral en una dosis única o en dosis divididas. Otro intervalo de dosis preferido es aproximadamente 0.1 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día por vía oral en dosis única o dividida. Para administración oral, las composiciones se pueden proporcionar en forma de comprimidos o cápsulas que contienen aproximadamente 1.0 a aproximadamente 500 miligramos del ingrediente activo, particularmente 1 , 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 400 y 500 miligramos del ingrediente activo para el ajuste sintomático de las dosis al paciente que se tiene que tratar. En una realización, un compuesto de la presente invención se administra por vía oral a seres humanos adultos en una forma práctica (por ejemplo, en forma de una solución en metocel acuoso, o en forma de cápsulas o comprimidos) en una cantidad de desde aproximadamente 200 mg hasta aproximadamente 800 mg una vez al día o dos veces al día. El nivel de dosis y frecuencia de dosis específico para cualquier paciente particular se puede variar y dependerá de una diversidad de factores incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la estabilidad metabólica y longitud de acción de ese compuesto, la edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, modo y tiempo de administración, velocidad de excreción, combinación de fármacos, la gravedad de la afección particular y el hospedador que se está sometiendo a terapia.
Como se ha indicado anteriormente, la presente invención también se refiere a uso de los compuestos inhibidores de la integrasa del VIH de la presente invención con uno o más agentes anti-VIH útiles en el tratamiento de una infección del VIH o SIDA. Un "agente anti-VIH" es cualquier agente que es directamente o indirectamente eficaz en la inhibición de la integrasa del VIH u otra enzima necesaria para una replicación o infección del VIH, el tratamiento o profilaxis de una infección del VIH y/o el tratamiento, profilaxis o retardo en la aparición o progresión del SIDA. Se aprecia que un agente antí-VIH es eficaz para tratar, prevenir o retardar la aparición o progresión de una infección del VIH o SIDA y/o enfermedades o afecciones que se originan de las mismas o relacionadas con las mismas. Por ejemplo, los compuestos de esta invención se pueden administrar eficazmente, en periodos de pre-exposición y/o post-exposición, junto con cantidades eficaces de uno o más antivirales contra el VIH, inmunomoduladores, anti-infecciosos o vacunas útiles para tratar una infección del VIH o SIDA, tales como los descritos en el cuadro 1 del documento WO 01/38332 o en el cuadro en el documento WO 02/30930. Los antivirales contra el VIH adecuados para uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen, por ejemplo, los que se enumeran en el cuadro A de la forma siguiente: CUADRO A Nombre Tipo abacavir, ABC, Ziagen® InTI abacavir +lam¡vudina, Epzicom® InTI abacavir + lamivudina + zidovudina, Trizivir® InTI amprenavir, Agenerase® IP atazanavir, Reyataz® IP AZT, zidovudina, azidotimidina, Retrovir® InTI darunavir, Prezista® IP ddC, zalcitabina, dideoxicytidina, Hivid® InTI ddl, didanosina, dideoxiinosina, Videx® InTI ddl (recubrimiento entérico), Videx EC® InTI delavirdina, DLV, Rescriptor® InnTI efavirenz, EFV, Sustiva®, Stocrin® InnTI efavirenz + emtricitabina + tenofovir DF, Atripla® InnTI + InTI emtricitabina, FTC, Emtriva® InTI emtricitabina + tenofovir DF, Truvada® InTI emvirina, Coactinon® InnTI enfuvirtida, Fuzeon® IF didanosina con recubrimiento entérico, Videx EC® InTI etravirina, T C-125, Intelence® InnTI fosamprenavir calcio, Lexiva® IP indinavir, Crixivan® IP lamivudina, 3TC, Epivir® InTI lamivudina + zidovudine, Combivir® InTI lopinavir IP lopinavir + ritonavir, Kaletra® IP maraviroc, Selzentry® IE nelfinavir, Viracept® IP nevirapina, NVP, Viramune® InnTI PPL-100 (also known como PL-462) (Ambrilia) IP raltegravir, MK-0518, Isentress® Inl rilpivirina, TMC-278 nnRTI ritonavir, Norvir® IP saquinavir, Invirase®, Fortovase® IP estavudina, d4T,didehidrodeoxitimidina, Zerit® InTI tenofovir DF (DF = disoproxil fumarato), TDF, Viread® InTI tipranavir, Aptivus® IP IE = inhibidor de entrada; IF = inhibidor de fusión; Inl = inhibidor de la integrasa; IP = inhibidor de la proteasa; InTI = inhibidor nucleósido de la transcriptasa inversa; InnTI = inhibidor no nucleósido de la transcriptasa inversa. Algunos de los fármacos enumerados en el cuadro se usan en una forma de sal; por ejemplo, sulfato de abacavir, sulfato de indinavir, sulfato de atazanavir y mesilato de nelfinavir.
Se aprecia que el alcance de combinaciones de los compuestos de esta invención con agentes anti-VIH no se limita a los antivirales contra el VIH enumerados en el cuadro A y/o enumerados en los cuadros a los que se ha hecho referencia antenormente en los documentos WO 01/38332 y WO 02/30930, pero incluye en principio cualquier combinación con cualquier composición farmacéutica útil para el tratamiento o profilaxis de una infección del VIH o SIDA. Los agentes antivirales del VIH y otros agentes típicamente se emplearán en estas combinaciones en sus intervalos y regímenes de dosificación convencionales como se ha presentado en la técnica, incluyendo, por ejemplo, las dosis descritas en el Physicians' Desk Reference, Thomson PDR, Thomson PDR, 57a edición (2003), la 58a edición (2004), la 59a edición (2005) y ediciones posteriores de los mismos. Los intervalos de dosis para un compuesto de la invención en estas combinaciones son iguales a los que se han expuesto anteriormente.
Las abreviaturas incluyen las siguientes ACN = acetonitrilo; AcOH = ácido acético; Barg = bar-manométrico; Bn = bencilo; Boc = t-butiloxicarbonilo; (Boc)20 = carbonato de di-t-butilo; BOP = benzotriazol-1-iloxitris-(dimetilamino)fosfonio; DABCO = 1 ,4-diazabiciclo[2,2,2]octano; DBA (o dba) = dibencilidenoacetona; DBU = 1 ,8-d¡azabiciclo[5.4.0]undec-7-eno; DCC = diciclohexil carbodiimida; DCE = 1 ,2-dicloroetano; DCM = diclorometano; DMAC = ?,?-dimetilacetamida; DMAD = dimetilacetilenodicarboxilato; DMAP = 4-dimetilaminopiridina; DMF = N,N-dimetilformamida; DMPU = ?,?'-dimetilpropilenourea; DMSO = dimetilsulfóxido; EDC = 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida; ES MS = espectroscopia de masas por electronebulización; Et = etilo; EtNH2= etilamina; EtOAc = acetato de etilo; EtOH = etanol; FBS = suero bovino fetal; GC = cromatografía de gases; HDPE = polietileno de alta densidad; HMPA = hexametilfosforamida; HOAT = 1-hidroxi-7-azabenzotriazol; HPLC cromatografía líquida de alta resolución; HRMS = espectroscopia de masas de alta resolución; IPA = alcohol isopropílico; IPAc = acétate de isopropilo; LAH = hidruro de litio y aluminio; LC-MS = cromatografía liquida-espectroscopia de masas; LDA = diisopropilamida de litio; Me = metilo; MeOH = metanol; MeTHF = 2-metiltetrahidrofurano; MsCI = cloruro de metanosulfonilo (o mesilo); MTBE = metil terc-butil éter; NBD = norbornadina; NBS = N-bromosuccinimida; NMM = N-metilmorfolina; NMP = N-metilpirrolidona; RMN = resonancia magnética nuclear; NOE = Efecto Nuclear Overhouser; OBD = Densidad de Lecho Óptima (columna cromatográfica); PTSA = ácido p-toluenosulfónico; RB = (matraz) de fondo redondo; TBAF = fluoruro de tetrabutilamonio; TBSCI = cloruro de terc-butildimetilsililo; t-BuOK = terc-butóxido potásico; TEA = thetilamina; TEMPO = 2,2,6,6-tetrametil-1-piperidin-1-oxilo; Tf = triflato (= trifluorometanosulfonato); TFA = ácido trifluoroacético; TFE = 2,2,2-trifluoroetanol; THF = tetrahidrofurano; TLC = cromatografía de capa fina; UV = ultravioleta; XRPD = difracción en polvos por rayos X.
Los siguientes ejemplos sirven únicamente para ilustrar la invención y su práctica. Los ejemplos no deben interpretarse como limitaciones del alcance o del espíritu de la invención. En estos ejemplos, "temperatura ambiente" o "temperatura ambiental" se refiere a una temperatura en un intervalo de aproximadamente 20°C a aproximadamente 25°C. La estereoquímica relativa de cada uno de los productos del título en los Ejemplos 2-5 se determinó por estudios NOE comparativos de los isómeros.
EJEMPLO 1 N-((10R)-2-{r(4-fluoro-3-metilbencil)aminolcarbonil)-3-hidroxi-7,7-dimetil-4-oxo-4,6,7,8.9,10-hexahidropirimidori ,2-a1azepin-10-il)-N,N',N'-trimetiletanodiamida (Compuesto 1A). (1A) N-((10S)-2-(f(4-fluoro-3-metilbencil)amino1carbonil)-3-hidroxi-7.7-dimetil-4-oxo-4,6.7,8,9.10-hexahidropirimidon .2-alazepin-10-il)-N,N',N'-trimetiletanodiamida (Compuesto 1 B). (1 B) Paso 1 : 2,2-D¡metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)propanoato de metilo A una mezcla agitada de éster metílico del ácido hidroxipiválico (50.0 g, 378 mmol) y ácido p-toluenosulfónico monohidrato (1.439 g, 7.57 mmol) en 250 mi de metil terc-butil éter se le añadió lentamente dihidropirano (48.1 mi, 568 mmol) con refrigeración. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche, se añadieron 50 mi de NaHC03 saturado y la mezcla se agitó y se separó. La capa orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró. La purificación del residuo por cromatografía ultrarrápida usando una columna de 330 g, acetato de etilo del 0% al 5% en hexano dio 2,2-dimetil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)propanoato de metilo en forma de un aceite transparente: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 4.5 (s, 1 H), 3.8-3.6 (m, 2H), 3.6 (m, 3H), 3.4 (s, 1 H), 3.25 (m, 1 H), 1.7 (m, 1 H), 1.6-1.18 (m, 5H), 1.05 (m, 6H).
Paso 2: 2,2-Dimetil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)propan-1-ol A una solución de LiAIH4 (397 mi, 397 mmol) en THF (250 mi) enfriada en un baño de hielo a 0°C se le añadió 2,2-dimetil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)propanoato de metilo (82 g, 378 mmol) en THF (250 mi) mediante un embudo de adición manteniendo la temperatura interna por debajo de 6°C. Cuando se completó la adición, la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante una noche. La mezcla se enfrió en un baño de hielo y se interrumpió con H2O (16 mi, 888 mmol), después de 5 minutos con NaOH 10 N (16 mi, 160 mmol) y después de otros 15 minutos con H20 (48 mi, 2664 mmol). La mezcla se dejó en agitación durante 30 minutos y después se filtró aclarando con THF. El filtrado se concentró y se destiló azeotrópicamente con tolueno. El secado adicional al vacío dio 2,2-dimetil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)propan-1-ol en forma de un líquido incoloro: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 4.58 (m, 1 H), 3.85 (m, 1 H), 3.6 (d, 1 H), 3.5 (m, 2H), 3.4 (m, 1 H), 3.2 (d, 1 H), 2.8 (t, 1 H), 1.8 (m, 2H), 1.6 (m, 4H), 0.85 (s, 6H).
Paso 3: 2,2-Dimetil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)propanal A una solución agitada de 2,2-dimetil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)propan-1-ol (20 g, 106 mmol) y TEA (44.4 mi, 319 mmol) en diclorometano seco (300 mi) enfriada en un baño de hielo a 0°C ± 5°C se le añadió en una porción una solución de complejo de trióxido de azufre y piridina (50.7 g, 319 mmol) en DMSO anhidro (300 mi). Se produjo una exotermia a 27°C. El baño se retiró y la mezcla se dejó en agitación durante 20 minutos a temperatura ambiente, tiempo después del cual la conversión se completó tal como se determinó por TLC. La reacción se interrumpió con 225 mi de NaHC03 saturado, se concentró en el evaporador rotatorio para retirar el diclorometano y se extrajo con 3 x 200 mi de acetato de etilo. Los extractos combinados se lavaron una vez con 250 mi de ácido cítrico al 10%, se secaron sobre MgS04 y se concentraron. El secado al vacío dio 2,2-dimetil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)propanal en forma de un aceite. Contenía DMSO al -40% por RMN: H RMN (400 MHz, CDCI3) d 9.6 (s, 1 H), 4.6 (m, 1 H), 3.8 (d, 1 H) 3.5 (m, 1H), 3.38 (d, 1 H), 1.8-1.4 (m, 6H), 1.06 (s, 3H), 1.04 (s, 3H).
Paso 4: (2E)-4.4-Dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)pent-2-enoato de etilo A una suspensión de una mezcla de acetonitrilo (200 mi) y cloruro de litio (13.66 g, 322 mmol) en una atmósfera de nitrógeno a 25°C se le añadió fosfonoacetato de trietilo (64.5 mi, 322 mmol) y después DBU (32.4 mi, 215 mmol). Durante la adición, la temperatura de reacción aumentó hasta 33°C y después se volvió a enfriar a 25°C durante 30 minutos. La mezcla se agitó, se enfrió a 0°C y se añadió el Reactivo 1 (20 g, 107 mmol) con un aclarado de 5 mi de CH3CN. Después de agitar durante 1 hora a 0°C, la mezcla se dejó calentar, se agitó a 25°C durante 2 horas, después se diluyó con 250 mi de MTBE y 250 mi de agua, se separó y la capa orgánica se lavó con 100 mi de agua. Las capas acuosas combinadas se extrajeron con 100 mi de MTBE y los extractos orgánicos combinados se lavaron con 200 mi de salmuera, se secaron sobre MgS04 y después se concentraron. La purificación por cromatografía ultrarrápida eluyendo con EtOAc del 0% al 10% en hexano dio (2E)-4,4-dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)pent-2-enoato de etilo en forma de un aceite incoloro: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.0 (d, 1 H), 5.8 (d, 1 H), 4.58 (t, 1 H), 4.2 (c, 2H), 3.8 (m, 1 H), 3.6 (d, 1 H), 3.5 (m, 1 H), 3.16, (d, 1 H), 1.8-1.5 (m, 6H), 1.3 (t, 3H), 1.06 (s, 3H), 1.05 (s, 3H).
Paso 4: 4,4-Dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)pentanoato de etilo Una mezcla de (2E)-4,4-dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)pent-2-enoato de etilo (23 g, 90 mmol) y Pt al 5% sobre carbono (3 g, 14.65 mmol) en etanol (200 mi) se agitó en el hidrogenador Parr a 0.31 MPa de hidrógeno durante 5 días (conversión completa según se determinó por TLC: EtOAc al 10%/hexano-sin manchas UV activas). El catalizador se retiró por filtración y el filtrado se concentró. El secado al vacío dio 4,4-dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)pentanoato de etilo en forma de un aceite incoloro: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 4.7 (t, 1 H), 4.12 (c, 2H), 3.8 (m, 1 H), 3.5 (m, 1 H), 3.4 (d, 1 H), 3.0, (d, 1 H), 2.3 (m, 2H), 1.8 (m, 1 H), 1.7-1.5 (m, 6H), 1.9 (s, 3H), 1.88 (s, 3H).
Paso 5: 4,4-dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-¡loxi)pentanal A una solución de 4,4-dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)pentanoato de etilo (1 1.3 g, 43.7 mmol) en tolueno (300 mi) enfriada a -78°C en una atmósfera de nitrógeno se le añadió lentamente hidruro de düsobutilaluminio 1.0 M en heptano (53 mi, 52.5 mmol), manteniendo la temperatura interna por debajo de -70°C. La mezcla se dejó en agitación con refrigeración durante 15 minutos (TLC: EtOAc al 20% en hexano). La reacción se interrumpió con MeOH (3.00 mi, 161 mmol), se dejó calentar a -10°C y se diluyó con 500 mi de acetato de etilo y 500 mi de NaCI saturado. La mezcla se dejó calentar y en agitación durante 60 minutos, formando un gel. La mezcla gelatinosa se filtró a través de tierra de diatomeas y se lavó con 750 mi de acetato de etilo. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgS04 y se concentró. El secado al vacío dio 4,4-dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)pentanal en forma de un aceite transparente: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 9.8 (s, 1 H), 4.6 (t, 1 H), 3.8 (m, 1 H), 3.6 (m, 1 H), 3.5 (d, 1 H), 3.0, (d, 1 H), 2.4 (m, 2H), 1.8 (m, 1 H), 1.7-1.5 (m, 6H), 0.93 (s, 3H), 0.92 (s, 3H).
Paso 6j [1-Ciano-4,4-dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxQpentillmetilcarbamato de tere-butilo Una mezcla de 4,4-dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)pentanal en bruto, MTBE (15 mi), clorhidrato de metilamina (3.08 g, 45.7 mmol), cianuro sódico (1.399 mi, 45.7 mmol) y agua (15.0 mi) se agitó en un matraz tapado durante 24 horas. El análisis por TLC (AE al 10%/hexanos) indicó el consumo completo del material de partida. La mezcla se extrajo con 25 mi de acetato de etilo y se concentró en el evaporador rotatorio. El secado al vacío dio un aceite claro. El aminonitrilo en bruto se recogió en 25 mi de acetato de etilo y se le añadió dicarbonato de di-terc-butilo (10.49 mi, 45.7 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante el fin de semana, la mezcla se concentró. La purificación por cromatografía ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 10%/hexano produjo [1-ciano-4,4-dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)pentil]metilcarbamato de tere-butilo: H RMN (400 MHz, CDCI3) d 4.7 (dd, 1 H), 3.8 (t, 1 H), 3.6 (m, 1 H), 3.5 (dd, 1 H), 3.0, (dd, 1 H), 2.89, 2.88 (2s, 3H), 1.8 (m, 2H), 1.5 (m, 6H), 1.47 (s, 9H), 1.3 (m, 2H), 0.92 (s, 3H), 0.915 (s, 3H).
Paso 7: [1-[Amino(hidroxi¡mino)metil1-4,4-dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)pentil1metilcarbamato de tere-butilo A una solución agitada de [1-ciano-4,4-dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-¡loxi)pentil]metilcarbamato de tere-butilo (8.5 g, 23.98 mmol) en metanol (5 mi) se le añadió hidroxilamína al 50% (1.543 mi, 25.2 mmol). La mezcla se calentó a 60°C durante 3 horas (El análisis por LC-MS indicó la conversión completa) se enfrió y se concentró. La retirada del exceso de hidroxilamina azeotrópicamente con metanol dio [1-[(Z)-amino(hidroxiimino)metil]-4,4-dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)pentil]metilcarbamato de tere-butilo: MS (ES+): 388.26 (M+H).
Paso 8: (2-({[(1-Amino-2-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino1-5,5-dimetil-6-(tetrahidro-2H-p¡ran-2-iloxi)hexilideno1amino}oxi)but-2-enodioato de dimetilo A una solución agitada de [1-[amino(hidroxiimino)metil]-4,4-dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)pentil]metilcarbamato de tere-butilo en bruto (98 mmol) en MeOH (800 mi) enfriada a -10°C en una atmósfera de nitrógeno se le añadió lentamente acetilenodicarboxilato de dimetilo (12.09 mi, 98 mmol) manteniendo la temperatura interna a -10°C. Se dejó que la solución se desarrollara a o por debajo de -10°C (en el congelador) durante una noche y después se dejó calentar a 25°C y en agitación durante 30 horas. La mezcla se diluyó con 200 mi de tolueno y se concentró. El secado al vacío durante una noche dio un aceite fino de color pardo que contenía tolueno según se determinó por RMN y era una mezcla de isómeros. El producto en bruto se usó en el siguiente paso sin purificación adicional: MS (ES+): 530.2 (M+H).
Paso 9: 2-Í1 -[(terc-Butoxicarbonil)(metil)amino1-4,4-dimetil-5- (tetrahidro-2H-piran-2-ilox¡)pentill-5-hidroxi-6-oxo-1 ,6-dihidropirimidina-4-carboxilato de metilo El (2-({[1-amino-2-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]-5,5-d¡metil-6-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)hexilideno]amino}oxi)but-2-enodioato de dimetilo en bruto (40.6 g) se disolvió en o-xileno (100 mi) y se calentó a 115°C ± 5°C (baño de aceite a 120°C) durante 12 horas. La mezcla de reacción se volvió oscura rápidamente después de alcanzar 115°C. Los ensayos por TLC y LC-MS después de 48 horas indicaron que se había consumido un isómero, pero aproximadamente el 10% del otro (minoritario) isómero había permanecido. El calentamiento se continuó durante 48 horas más, momento en el que se observó la conversión completa tal como se determinó por LC-MS. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con 100 mi de EtOAc y se filtró a través de un elemento de filtro de 10 cm de gel de sílice eluyendo con EtOAc. El filtrado se concentró a presión reducida. El secado al vacío dio el producto del título en forma de una espuma de color pardo: MS (ES+): 498.1 (M+H).
Paso 10: 2-{1 -f(terc-Butoxicarbonil)(metil)aminol-5-hidroxi-4,4- dimetilpentil)-5-hidroxi-6-oxo-1 ,6-dihidropirimidina-4-carboxilato de metilo Una mezcla del 2-[1-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]-4,4- dimetil-5-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)pentil]-5-hidroxi-6-oxo-1 ,6- dihidropirimidina-4-carboxilato de metilo en bruto (32 g) y 1g de ácido p- toluenosulfónico monohidrato se disolvió en metanol (100 mi) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción se interrumpió con 3 mi de NaHC03 saturado y se concentró. El residuo se recogió en 500 mi de EtOAc, se lavó con NaHC03 saturado y se secó sobre Na2S04. La retirada de los disolventes a presión reducida dio el producto del título en forma de una espuma de color pardo: MS (ES+): 314.1 (M+H).
Paso 1 1 : [1-(4-{[(4-Fluoro-3-metilbencil)am 6-0X0-1 , 6-dihidropirimidin-2-il)-5-hidroxi-4,4-dimetilpentil1metilc de tere-butilo Una mezcla de 2-{1-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]-5-h¡droxi- 4,4-dimetilpentil}-5-hidroxi-6-oxo-1 ,6-dih¡dropir¡mid¡na-4-carbox¡lato de metilo (5.1 1 g, 12.36 mmol), 1-(4-fluoro-3-metilfenil)metanamina (2.064 g, 14.83 mmol) y TEA (3.45 mi, 24.72 mmol) en 2-propanol (80 mi) se calentó a 80°C ± 2°C en una atmósfera de nitrógeno (baño de aceite a 82°C) durante una noche. La mezcla se concentró y el residuo se recogió en 100 mi de iPrOAc, se lavó con 2 x 50 mi de HCI 1 N, 2 x 25 mi de agua y 25 mi de NaHC03 saturado y se secó sobre MgS04. La solución se diluyó con 50 mi de tolueno y se concentró. El secado al vacío dio una espuma de color castaño: MS (ES+): 521.19 (M+H). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 9.3 (s a, 1 H), 7.2 (m, 2H), 6.9 (t, 1 H), 5.4 (s a, 1 H), 4.8 (d, 1 H), 4.5 (m, 2H), 3.3 (m, 1 H), 3.0, (s, 3H), 2.2 (s, 3H), 2.0 (m, 1 H), 1.7 (m, 2H), 1.2 (s, 9H), 0.92 (s, 6H).
Paso 12: Metanosulfonato de 5-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino1-5-(4-([(4-fluoro-3-metilbencil)amino1carboni hidroxi-6-oxo-1 ,6-dihidropirimidin-2-il)-2,2-dimetilpentilo A una solución enfriada con hielo (T = 2°C ± 2°C) de (5.45 g , 10.47 mmol) se le añadió TEA (8.75 mi, 62.8 mmol) y después gota a gota MsCI (4.89 mi, 62.8 mmol) manteniendo la temperatura interna por debajo de 10°C. Se dejó que la suspensión resultante se desarrollara a 2°C ± 2°C durante 2.5 horas y después a la mezcla de reacción fría se le añadió lentamente NaOH 5 N (14.66 mi, 73.3 mmol). Después, la mezcla de reacción se calentó a 80°C ± 2°C (baño de aceite a 83°C) durante 20 horas. Después de enfriar a 50°C, se añadió gota a gota HCI 6 N (34.0 mi, 68.0 mmol) durante 1 hora hasta que el valor del pH fue de 2.5-3.0 (papel y tiras indicadoras de pH). El filtrado se diluyó con 100 mi de agua, el pH se ajustó a 2 (desde ~8) con HCI 2 N y se extrajo 3 veces con 500 mi de acetato de isopropilo. Los extractos se combinaron, se secaron sobre Na2S04 y se concentraron a presión reducida. El producto sólido de color castaño resultante se secó al vacío.
MS (ES+): 599.1 (M+H).
Paso 13: (2-([(4-Fluoro-3-metilbencil)amino1carbonil)-3-hidroxi- iDmetilcarbamato de tere-butilo Una mezcla de metanosulfonato de 5-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]-5-(4-{[(4-fluoro-3-metilbencil)amino]carbonil}-5-hidroxi-6-oxo-1 ,6-dihidropirimidin-2-il)-2,2-dimetilpentilo (7.8 g, 13.03 mmol), carbonato de cesio (11 g, 33.8 mmol) y 75 mi de dioxano se calentó a 80°C durante una noche. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con 100 mi de EtOAc, se lavó con agua (150 mi) y NaCI saturado (50 mi), se secó sobre Na2S04 y se concentró. El producto sólido de color castaño resultante se secó al vacio: S (ES+): 503.3 (M+H); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.8 (s a, 1 H), 7.6 (s a, 1 H), 7.17 (m, 2H), 7.0 (m, 1 H), 4.9 (m, 1 H), 4.5 (m, 2H), 3.3 (dd, 1 H), 2.8 (s, 3H), 2.3, (s, 3H), 1.6 (compleja m, 6H), 1.3 (s, 9H), 1.1 (s, 3H), 0.83 (s, 3H).
Paso 14: Clorhidrato de N-(4-fluoro-3-metilbenc¡l)-3-hidro dimet¡l-10-(metilamino)-4-oxo-4,6J,8,9,10-hexahidropirimido[1 ,2-alazepina-2-carboxamida El (2-{[(4-fluoro-3-metilbencil)amino]carbonil}-3-hidroxi-7,7-dimetil-4-oxo-4,67,8,9 0-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepin-10-il)metilcarbamato de tere-butilo (6,1 g, 12.14 mmol) se trató con HCI 4 N en dioxano (15.17 mi, 60.7 mmol). La mezcla se dejo en agitación a temperatura ambiente durante 1 .5 horas (conversión completa según se determinó por LC-MS) y después se concentró. El secado al vacío dio clorhidrato de N-(4-fluoro-3-metilbencil)-3-h¡droxi-7,7-dimetil-10-(metilamino)-4-oxo-4,6,7,8,9, 10-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepina-2-carboxamida en forma de un sólido cristalino de color castaño: MS (ES+): 403.2 (M+H).
Paso 15: N-(2-([(4-Fluoro-3-metilbencil)aminolcarbonil)-3-hidroxi-77-dimetil-4-oxo-4,6J,8,9 0-hexahidropirimido[1 ,2-a1azepin-10-il)-N,N',N'-trimetiletanodiamida A una mezcla de clorhidrato de N-(4-fluoro-3-metilbencil)-3-hidroxi-7,7-dimetil-10-(metilamino)-4-oxo-4,6,7,8,9,10-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepina-2-carboxamida (200 mg, 0.421 mmol), HOAt (68.7 mg, 0.5 mmol), ácido N.N-dimetiloxámico (74 mg, 0.631 mmol) y trietilamina (0.235 mi, 1.683 mmol) en diclorometano (5 mi) se le añadió EDC (224 mg, 1.262 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante una noche, se diluyó con 25 mi de EtOAc, se lavó con 10 mi de cada uno de una solución de NaHC03 saturado, H20 y salmuera y se secó sobre Na2S04. La conentración dio un producto del título en bruto que se purificó por cromatografía preparativa de fase inversa (gradiente de elución de AcOH al 0.1 % en agua/acetonitrilo) para dar el producto del título en forma de un sólido: HRMS (ES+): 502.2484 (M+H); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 9.35 (s a, 3H), 7.2 (m, 2H), 6.9 (t, J = 9 Hz, 1 H), 5.34 (s a, 1 H), 4.8 (d, J = 14 Hz, 1 H), 4.5 (m, 21 H), 4.5 (m, 2H), 3.3 (d, J = 14 Hz, 1 H), 3.0 (s, 3H), 2.98, (s, 3H), 2.96 (s, 3H), 2.2 (s, 3H), 2.0 (m, 2H), 1.9 (m, 1 H), 1.7 (s, 2H), 1.12 (s, 3H), 0.83 (s, 3H).
La resolución en una columna quiral dio: 1A. N-((10R)-2-{[(4-fluoro-3-metilbencil)amino]carbonil}-3-hidroxi- 7,7-dimetil-4-oxo-4,6,7,8,9,10-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepin-10-il)-N,N',N'-trimetiletanodiamida. [a]D23°C = +67.6° (c = 0.5, MeOH); HRMS (ES+): 502.2482 (M+H); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 9.35 (s a, 3H), 7.2 (m, 2H), 6.9 (t, J = 9 Hz, 1 H), 5.34 (s a, 1 H), 4.8 (d, J = 14 Hz, 1 H), 4.5 (m, 21 H), 4.5 (m, 2H), 3.3 (d, J = 14 Hz, 1 H), 3.0 (s, 3H), 2.98, (s, 3H), 2.96 (s, 3H), 2.2 (s, 3H), 2.0 (m, 2H), 1.9 (m, 1 H), 1.7 (s, 2H), 1.12 (s, 3H), 0.83 (s, 3H). 1 B. N-((10S)-2-{[(4-fluoro-3-metilbencil)amino]carbonil}-3-hidroxi-7,7-dimetil-4-oxo-4,6,7, 8,9,10-hexahidropirimido[1 , 2-a]azepin-10-il)-N,N',N'-trimetiletanodiamida. [a]D23°C = -72.4° (c = 0.5, MeOH); HRMS (ES+): 502.2481 (M+H); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 9.35 (s a, 3H), 7.2 (m, 2H), 6.9 (t, J = 9 Hz, 1 H), 5.34 (s a, 1 H), 4.8 (d, J = 14 Hz, 1 H), 4.5 (m, 21 H), 4.5 (m, 2H), 3.3 (d, J = 14 Hz, 1 H), 3.0 (s, 3H), 2.98, (s, 3H), 2.96 (s, 3H), 2.2 (s, 3H), 2.0 (m, 2H), 1.9 (m, 1 H), 1.7 (s, 2H), 1.12 (s, 3H), 0.83 (s, 3H).
EJEMPLO 2 Estereoisómeros aislados de A/-(2-(f(4-fluoro-3-metilbencinaminolcarbonil S-hidroxi-y-metoxi-y-metil^-oxo^.ej.S.g.lO- hexahidropirimidori^-alazepin-IO-in-yV.A .A/'-trimetiletanodiamida Paso 1 : 2- etoxi-2-metilpent-4-enoato de metilo A una solución de diisopropilamina (2.34 I, 16.4 mol) en THF (6 I) a -48°C se le añadió n-butillitio (5.78 I, 14.5 mol) mediante un embudo de adición durante 35 minutos y la mezcla resultante se calentó a -15°C durante 20 minutos, se mantuvo a -15°C durante 10 minutos y después se enfrió a -40°C. A esta solución se le añadió 2-metoxipropionato de metilo (1.85 kg, 12.4 mol) mediante un embudo de adición durante 1.75 horas. Después de agitar durante 30 minutos, se le añadió bromuro de alilo (1.4 I, 16.4 mol) mediante un embudo de adición. La solución resultante se agitó durante 30 minutos, se calentó a 0°C durante 1 hora, después se interrumpió con HCI 3 N (7 I) y se extrajo con MTBE (2 x 4 I). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo en bruto se usó en la siguiente reacción sin purificación adicional.
Paso 2: terc-Butil[(2-metoxi-2-metilpent-4-en-1-il)oxi1dimetilsilano A una suspensión de LAH (granulos, 251.4 g, 6.29 mol) en THF (6 I) a <10°C se le añadió 2-metoxi-2-metilpent-4-enoato de metilo (1.9 kg en bruto) mediante un embudo de adición mientras se mantenía la temperatura de reacción por debajo de 23°C. La mezcla resultante se agitó a ~5°C durante 1 hora; después se interrumpió con agua (250 mi, 13.9 mol), NaOH al 15% (250 mi, 12.4 mol) y agua (750 mi, 41.6 mol); después se diluyó con 8 I de MTBE; se secó sobre 500 g de MgSO4 durante una noche; y se filtró via filtración al vacío. La torta de filtro resultante se lavó con THF y MTBE. Los filtrados se combinaron y se concentraron al vacío para proporcionar el alcohol en bruto.
A una solución de TBS-CI (4.06 kg, 26.1 mol) en DCM (23 I) se le añadieron DMAP (74 g, 0.606 mol), el alcohol' en bruto (2.6 kg, 20.08 mol) y TEA (3.94 I, 28.1 mol). La mezcla resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente y se interrumpió con agua (6 I). La capa orgánica se recogió, se lavó con HCI 1 M (6 I) y con salmuera (4 I), después se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró al vacío. La cromatografía en columna ultrarrápida (Biotage 150 I, 5 kg de sílice) eluyendo con DCM proporcionó el derivado de TBS éter. El material se llevó al siguiente paso sin purificación adicional.
Paso 3: 5-{[terc-Butil(d¡metil)silil1oxi)-4-metoxi-4-metilpentan-1 -ol \ OMe HCL ^\ ^OTBS A una solución de rerc-butil[(2-metoxi-2-metilpent-4-en-1-il)oxi]dimetilsilano (2.45 kg, 10.04 mol) en THF (3.5 I) a <5°C se le añadió BH3 en THF (solución 1 M, 11.05 I, 1 1.05 mol) mediante un embudo mientras se mantenía la temperatura de reacción a <15°C. La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos y se interrumpió con agua (11.75 I, 652 mol). A la mezcla agitada se le añadió perborato sódico tetrahidrato (4.64 kg, 30.2 mol) y la mezcla se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Después, la mezcla de reacción se filtró y la torta de filtro se lavó con 14 I de MTBE. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera/agua (7 I/3 I). La capa acuosa se extrajo con MTBE (14 I). Las capas orgánicas combinadas se lavaron secuencialmente con 18.75 I de tiosulfato sódico acuoso al 5%/salmuera/agua (10 I/5 I/3.75 I) y después se concentraron al vacío paira proporcionar el material en bruto. La cromatografía en columna ultrarrápida (múltiples ensayos) eluyendo con DCM del 0% al 100% en heptano y después con EtOAc del 1 % al 50% en DCM proporcionó el alcohol deseado. 1H RMN (300 MHz, CDCI3): d 3.65-3.59 (m, 2 H); 3.47 (dd, J = 23.9, 10.1 Hz, 2 H); 3.24 (s, 3 H); 2.21-2.07 (m, 1 H); 1.63-1.54 (m, 4 H); 1.05-0.70 (m, 9 H)¡ 0.04 (s, 6H).
Paso 4: 5-{[terc-Butil(dimetil)silil1oxi)-4-metoxi-4-metilpentanal A una solución de bicarbonato sódico (627 g, 74.6 mol) y bromuro potásico (672 g, 56.5 mol) en agua (20 I) se le añadieron 5-{[ferc-butil(dimetil)silil]oxi}-4-metoxi-4-metilpentan-1-ol (3.5 kg, 1 1.2 mol), DCM (10 I) y TEMPO (17.6 g, 113 mol). La mezcla resultante se enfrió a <5°C y se añadió en porciones NaOCI (solución al 13%, total 6.7 I, 14.6 mol) mediante un embudo mientras se mantenía la temperatura de reacción <5°C. La mezcla se agitó durante 6 horas calentando a temperatura ambiente. La capa orgánica se recogió. La capa acuosa se extrajo con 4 I de DCM. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El material en bruto, 4.2 kg, se usó en el siguiente paso sin purificación adicional. 1H RMN (300 MHz, CDCI3): d 9.75 (t, J = 1.8 Hz, 1 H); 3.43 (c, J = 10.4 Hz, 2 H); 3.17 (s, 3H); 2.43 (t, J = 1.8 Hz, 2H); 2.02-1.65 (m, 2 H); 0.99-0.71 (s, 9H); 0.14 (s, 6H).
Paso 5: (5-{[terc-Butil(dimetil)silil1oxi)-1 -ciano-4-metoxi-4-metilpentiQmetilcarbamato de ferc-butilo A una solución de clorhidrato de metilamina (0.83 kg, 12.34 mol) en agua (14.66 I) se le añadieron dioxano (24.43 I), 5-{[fe/c-butil(dimetil)silil]oxi}-4-metoxi-4-metilpentanal (en bruto, 2.9 kg, 1 1.22 mol) y NaCN (0.605 kg, 12.34 mol) durante 10 minutos mientras se mantenía la temperatura de reacción a 15°C. La mezcla de reacción se agitó durante una noche, después se añadió NaCI (1.7 kg) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 4 I). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar 5.63 kg (>100%) del material en bruto. A una solución del residuo en bruto en EtOAc (20 I) a 6°C se le añadió dicarbonato de di-terc-butilo (2.57 kg, 1 1.78 mol) en 1.5 I de EtOAc mediante un embudo de adición durante 5 minutos. La mezcla de reacción se agitó a 15°C durante una noche y se concentró al vacio. La cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc del 0 al 30% en heptano proporcionó el producto deseado.
Paso 6; (5-(fterc-Butil(dimetil)silillox¡)-1- [(hidroxiamino)(imino)metil1-4-metoxi-4-metilpentil)metilcarbam de terc-butilo A una solución de (5-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-1-ciano-4-metoxi-4-metilpentil)metilcarbamato de terc-butilo (4.37 kg, 10.91 mol) en MeOH (28 I) a 30°C se le añadió hidroxilamina acuosa (al 50% en agua, 1.2 I, 19.63 mol). La mezcla resultante se calentó a 40°C durante una noche, después se enfrió y se concentró al vacío. El residuo en bruto se disolvió en 1.5 I de tolueno, se concentró a presión reducida y se secó al vacío. El material en bruto se usó en el siguiente paso sin purificación adicional.
LC-MS: 434.3.
Paso 7: 2-(1-[(terc-Butoxicarbonil)(metil)amino1-5-([terc-butil(dimetil)silinoxi)-4-metoxi-4-metilpentil)-5-hidroxi-6-oxo-1 ,6-dihidropirimidina-4-carboxilato de metilo A una solución de {5-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-1-[(hidroxiamino)(imino)metil]-4-metoxi-4-metilpentil}metilcarbamato de tere-butilo (4.17 kg, 96.18 mol) en MeOH (26 I) a 0°C se le añadió dicarboxilato de dimetilacetileno (1.3 I, 10.7 mol) durante 40 minutos mientras se mantenía la temperatura de reacción por debajo de 8°C. La mezcla de reacción se calentó a 30°C durante una noche. Además, se añadió dicarboxilato de dimetilacetileno (total 0.454 I, 3.7 mol). La mezcla de reacción se agitó a 30°C durante una noche, se enfrió, se concentró al vacío y se concentró en xileno para proporcionar el derivado de diéster deseado.
LC-MS: 576.2.
Una solución del derivado de diéster (4.15 kg, 7.21 mol) en xileno (24 I) se calentó a 140°C durante 20 horas, después se enfrió y la mezcla de reacción se diluyó con 4 I de heptano y se filtró a través de una capa de Celite 545. La cromatografía ultrarrápida (Biotage Flash Si 150 I, 5.0 kg de sílice) del filtrado eluyendo primero con heptano, después con EtOAc al 100% durante 60 minutos y finalmente con EtOAc con ácido acético al 1% proporcionó el producto del título.
LC-MS: 544.1.
Paso 8: [1-(4-{[(4-Fluoro-3-metilbencil)aminolcarbonil)-5-hidroxi- 6-OXO-1 , 6-dihidropirim¡din-2-il)-5-hidrox¡-4-metoxi-4-metilpentil1met¡lcarbamato de tere-butilo A una solución de 2-(1-[(rerc-butoxicarbonil)(metil)amino]-5-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-4-metoxi-4-metilpentil)-5-hidroxi-6-oxo-1 ,6-dihidropirimidina-4-carboxilato de metilo (1.73 kg, 5.11 mol) en 2-propanol (10.23 I) se le añadió 4-fluoro-3-metilbencilamina (0.854 kg, 6.14 mol). La mezcla resultante se calentó a 75°C durante una noche, después se enfrió y se concentró al vacío. El residuo se diluyó con EtOAc (8 I) y se lavó con ácido cítrico acuoso al 10% (5 I). El sólido de color blanco se retiró por filtración. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 2 I). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato sódico saturado al 50% (1 x 5 I) y salmuera (1 x 5 I), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron al vacío para proporcionar la amida en bruto.
LC-MS: 651.1.
A una solución de la amida en bruto (1.75 kg, 2.69 mol) en THF (0.75 I) a 25°C se le añadieron TBAF (1 M en THF, 7.26 I, 7.26 mol) y tamices moleculares de 3 A activados en polvo (500 g). La mezcla de reacción se calentó en el evaporador rotatorio a 25°C durante una noche, se concentró al vacío y después se añadieron más cantidad de TBAF (1 M en THF, 1.076 I, 1.076 mol) y tamices moleculares de 3 A activados en polvo (300 g). La mezcla de reacción se calentó en el evaporador rotatorio a 30°C durante una noche y después se filtró para retirar los tamices moleculares. La torta de filtro se lavó con MeOH (3 I) y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se disolvió en 6 I de DCM, se lavó con NaHC03 sat. al 30% (4 4 I), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró al vacío para dar el producto del título en bruto, que se usó en el siguiente paso sin purificación adicional.
LC-MS: 537.1.
Paso 9: (2-([(4-Fluoro-3-metilbencil)amino1carbonil)-3-hidroxi-7-metoxi-7-metil-4-oxo-4,6,7,8,9, 10-hexahidropirimidof 1 ,2-a1azepin-10-¡Dmetilcarbamato de ferc-butilo A una solución de [1-(4-{[(4-fluoro-3-metilbencil)amino]carbonil}-5-hidroxi-6-oxo-1 ,6-d¡hidropirimidin-2-¡l)-5-h¡droxi-4-metoxi-4-metilpentil]metilcarbamato de ferc-butilo (1.44 kg, 2.68 mol) en acetonitrilo anhidro (5.37 I) a 0°C se le añadieron gota a gota TEA (1.87 I, 13.42 mol) y cloruro de metanosulfonilo (0.836 I, 10.73 mol) durante 45 minutos mientras se mantenía la temperatura de reacción por debajo de 5°C. La mezcla resultante se agitó a 0°C durante 14 horas, se diluyó con NaHC03 saturado al 30% (10 I) y se extrajo con MTBE (4 2 I). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con ácido cítrico al 5% y salmuera, se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron al vacío para proporcionar el mesilato en bruto.
LC-MS: 670.1 (?+1-Boc).
A una solución del mesilato en bruto del paso anterior (1.53 kg, 1.985 mol) en DMF (7.94 I) se le añadió Cs2C03 (2.59 kg, 7.94 mol). La mezcla de reacción se calentó a 100°C durante 15 horas, después se enfrió y se concentró al vacío. El residuo se diluyó con EtOAc (4 I) y se acidificó a pH 4 con ácido cítrico al 10%. Las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 2 I). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera al 50% (10 I) y salmuera (5 I), se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron al vacío. El producto del titulo en bruto se usó en la siguiente reacción sin purificación adicional.
LC-MS: 519.1.
Paso 10; Metanosulfonato de 10-f(te/c-butoxicarbonil)(metil)amino1-2-{[(4-fluoro-3-metilbencil)aminolcarbonil|-7-metoxi-7-metil-4-oxo-4,6,7,8,9, 10-hexahidropirimidof 1 ,2-alazepin-3-ilo A una solución de (2-{[(4-fluoro-3-metilbencil)amino]carbonil}-3-hidroxi-7-metoxi-7-metil-4-oxo-4,6,7,8,9,10-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepin-10-il)metilcarbamato de íerc-butilo (1.029 kg, 1.98 mol) en acetonitrilo seco (8 I) a 15°C se le añadió MsCI (0.27 I, 3.47 mol). La mezcla de reacción se agitó a -60°C durante 1 hora y se diluyó con EtOAc (4 I), hidrogenosulfato potásico (1.08 kg, 7.94 mol, en 8 I H20), 4 I de salmuera y 6 I de EtOAc. La capa orgánica se recogió, se lavó con salmuera (2 x 5 I), se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró al vacío. El residuo en bruto se disolvió en DCM (1.5 I) y heptano (1 I) y los sólidos se retiraron por filtración. El filtrado se concentró y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (Biotage 150 I, 5 kg de sílice) eluyendo con heptano al 50% en DCM, después con DCM al 100% y finalmente con acetona al 12% en DCM, dando el mesilato deseado.
LC-MS: 597.2.
Paso 1 1 : A/-(2-(f(4-Fluoro-3-metilbencil)aminolcarbonil)-3-hidroxi-y-metoxi-y-metil^-oxo^.GJ.B.g. l O-hexahidropirímidofl ^-alazepin-IO-il)- A/./V./V-trimetiletanodiamida En una suspensión de metanosulfonato de 10-[(ferc-butoxicarbonil)(metil)amino]-2-{[(4-fluoro-3-metilbencil)amino]carbonil}-7-metoxi-7-metil-4-oxo-4,6,7,8,9,10-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepin-3-ilo (0.291 kg, 0.488 mol) en EtOAc (3.2 I) a 0°C se burbujeó HCI (g) hasta que se produjo la saturación. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora, se calentó a 15°C durante 15 minutos, después se enfrió a 0°C y se agitó a 0°C durante 2 horas. La mezcla de reacción se purgó con gas N2 durante 20 minutos y se concentró al vacío. El residuo se concentró dos veces en EtOAc (1.5 I) para retirar el HCI y se cristalizó con 1 I de EtOAc y 500 mi de MTBE. La filtración proporcionó un sólido de color castaño claro que se aclaró con 500 mi de 1 :1 de EtOAc/MTBE seguido de 1 I de MTBE. El sólido se secó al vacío a 50°C durante 30 minutos para producir una sal HCI. LC-MS: 497.1.
A una solución de la sal HCI (197.9 g, 371 mol) en DCM (2 I) a temperatura ambiente se le añadieron ácido N,N-dimetiloxámico (87 g, 743 mol), EDC (157 g, 817 mol) y HOAt (50.5 g, 371 mol). La mezcla de reacción se enfrió a 9°C. A la solución enfriada se le añadió N-metilmorfolina (0.204 I, 18.56 mol) durante 2 minutos. Se añadió más cantidad de ácido N,N-dimetiloxámico (21.74 g, 186 mol), EDC (36.6 g, 189 mol) y HOAT (25.3 g, 186 mol). La mezcla resultante se diluyó con H20 (2 I) y salmuera (1 I). Las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con DCM (1 I). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera al 50% (2 x 2 I), se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron al vacío. El producto se cristalizó en DCM. La cristalización mezcla se diluyó con acetato de iso-propilo. La filtración proporcionó un sólido de color blanco que se secó en una estufa de vacío a 30°C.
LC-MS: 596.2.
A una solución del producto mesilato (148.9 g, 250 mmol) en 2-propanol (1.5 I) se le añadió NaOH 1 M (375 mi, 375 mmol). La mezcla resultante se sónico sin calentamiento. Después de 3 horas, se le añadió adicionalmente NaOH 1 M (125 mi, 125 mmol) y la mezcla se sónico sin calentamiento durante 1 hora. La mezcla de reacción se filtró y se concentró al vacío. El material en bruto se cristalizó mediante la adición de HCI 1 M (500 mi, 500 mmol) y se filtró. La torta de filtro se lavó con EtOH al 50% /H2O y EtOH y después se secó al vacío a 50°C durante 18 horas. La mezcla se purificó por SFC quiral (columna AD-H, IPA al 40%, muestra disuelta a 60 mg/ml de 1 :1 de cloroformo: IPA, inyección de 1 mi, 50 ml/minuto, tiempo de ciclo: 3.5 minutos): Compuesto 2A - El segundo pico en eluir: 7-OMe es trans con respecto a la cadena lateral de 10-amida, determinación de la estereoquímica absoluta descrita más adelante, LC-MS: M + 1 = 518.2, HR MS ESI: M + 1 teórico 518.2409, observado 518.2436, 1H RMN (399 MHz, CDCI3): d 12.20 (s, 1 H); 9.45-9.31 (m, 1 H); 7.23 (dd, J = 7.5, 2.1 Hz, 1 H); 6.95-6.88 (m, 1 H); 5.17 (d, J = 14.1 Hz, 1 H); 4.56 (dd, J = 14.5, 6.6 Hz, 1 H); 4.46 (dd, J = 14.5, 6.3 Hz, 1 H); 3.39-3.29 (m, 4 H); 3.03 (s, 3 H); 3.00 (s, 3 H); 2.98 (s, 3 H); 2.24 (d, J = 1.9 Hz, 3 H); 2.22- 2.16 (m, 1 H); 2.00-1.90 (m, 3 H); 1.12 (s, 3 H).
Compuesto 2B - El tercer pico en eluir: 7-OMe es trans con respecto a la cadena lateral de 10-amida, estereoquímica absoluta descrita más adelante, LC-MS: M = 1 = 518.2, HR MS ESI: M + 1 teórico 518.2409, observado 518.2435, 1 H RMN es igual que el segundo pico en eluir.
Compuesto 2C - El cuarto pico en eluir: 7-OMe es cis con respecto a la cadena lateral de 10-amida, estereoquímica absoluta no determinada, LC-MS: M + 1 = 518.2, HR MS ESI: M + 1 teórico 518.2409, observado 518.2436, 1H RMN es igual que el primer pico en eluir.
Compuesto 2D - El primer pico en eluir: 7-OMe es cis con respecto a la cadena lateral de 10-amida, estereoquímica absoluta no determinada, LC-MS: M + 1 = 518.2, HR MS ESI: M + 1 teórico 518.2409, observado 518.2437, H RMN (399 MHz, CDCI3): d 12.10 (s, 1 H); 9.28 (s, 1 H); 7.22 (d, J = 7.5 Hz, 1 H); 6.97-6.87 (m, 1 H); 5.35 (s, 1 H); 5.27 (dd, J = 14.9, 2.0 Hz, 1 H); 4.58 (dd, J = 14.5, 6.6 Hz, 1 H); 4.49-4.40 (m, 1 H); 3.36 (d, J = 14.8 Hz, 1 H); 3.20 (s, 3 H); 3.04-2.97 (m, 10 H); 2.24 (s, 3 H); 2.16 (d, J = 15.0 Hz, 2 H); 1.88 (d, J = 13.2 Hz, 1 H)¡ 1.81-1.70 (m, 1 H); 1.46-1.24 (m, 3 H).
Compuesto cristalino 2A Preparación El material del Compuesto Amorfo 2A obtenido en la separación cromatográfica descrita anteriormente se disolvió en etanol absoluto en ebullición, la cantidad mínima requerida para la disolución completa, y se filtró a través de un papel de filtro estriado. La solución caliente se dejó enfriar lentamente a temperatura ambiente, tiempo durante el cual cristalizaron agujas finas en la solución. Se dejó que mezcla de cristalización enfriada se desarrollara durante 3 horas y el compuesto cristalino se aisló por filtración, se lavó con 10 mi de etanol absoluto enfriado con hielo y se secó al vacío.
Caracterización Se generó un patrón del compuesto cristalino 2A por difracción de polvos por rayos X (XRPD) en un Sistema de Difracción por Rayos X Philips Analytical X'Pert PRO con consola PW3050/60 usando una exploración continua de 4 a 40 grados 2T (2 teta). Como fuente se usó radiación de cobre K-Alfa 1 (Ka1) y K-Alfa 2 (Ka2). El experimento se realizó en condiciones ambientales. Las posiciones de los picos de difracción se referenciaron con respecto a silicio que tiene un valor 2T de 28.443 grados. El patrón de XRPD se muestra en la Figura 1. Los valores 20 y los espacios interplanares d correspondientes en el patrón de XRPD incluyen los siguientes: CUADRO 2A El Compuesto cristalino 2A se analizó también con un calorímetro de exploración diferencial TA Instruments DSC Q 1000 (DSC) a un velocidad de calentamiento de 10°C/minuto de 25°C a 350°C en un recipiente de aluminio abierto en una atmósfera de nitrógeno. La curva de DSC mostró una endotermia con una temperatura de aparición de 197°C y un pico de temperatura de 198°C. El cambio de entalpia fue de 84 J/g. Se cree que la endotermia se debe a la fusión.
Se realizó un análisis electrogravimétrico del compuesto cristalino (TGA) con un aparato TA Instruments TGA Q 500 en una atmósfera de nitrógeno a una velocidad de calentamiento de 10°C/minuto de 25°C a 350°C. La curva de TG mostró una pérdida de peso del 0.21 % en peso por encima de 100°C indicando la ausencia de agua de hidratación y de disolvente de solvatación.
Se realizó un estudio cristalográfico por rayos X del Compuesto 2A sobre el Compuesto cristalino 2A preparado como se ha descrito anteriormente. El estudio se realizó usando un difractrómetro basado en CCD de Oxford Diffraction (fuente de radiación: Enhance-Ultra Cu, modelo de detector: Ruby) controlado por el programa informático Oxford Diffraction CrysAlis Pro. La recogida de datos, usando radiación de Cu, se realizó a 100 K para limitar el movimiento térmico y el desorden dinámico así como para mejorar las mediciones de difracción. El cristal seleccionado era representativo de la muestra en su conjunto. Datos del cristal al K: a = 5.49010(12) A a = 90.00° V = 2467.40(1 1) A3 b = 20.4635(6) ß = 90.00 Grupo espacial = P212121, #19 c = 21.9624(6) ? = 90.00 Z = 4 Se midió un total de 20038 reflexiones a una resolución de 0.84 A"1 que produjeron 4297 reflexiones únicas. El refinado, usando el programa informático SHELXL, se completó con R-¡ = 5.04% y wR2 = 13.6% usando las 4297 reflexiones en su totalidad. Las configuraciones absolutas a 07 y C O (véase la estructura más adelantes) son las dos R según se determinó por la dispersión anómala que surge de los seis átomos de oxígeno en la molécula. El análisis del efecto de dispersión anómala se realizó usando el parámatro Flack refinado, -0.1 (2), y el parámetro Hooft -0.05(4), confirmando los dos la elección de la configuración absoluta. Por consiguiente, el Compuesto 2A es N-((7f?, 10f?)-2-{[(4-fluoro-3-metilbencil)amino]carbonil}-3-hidroxi-7-metoxi-7-metil-4-oxo-4,6,7,8,9, 10-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepin-10-¡l)-/V,/V,/V-trimetiletanodiamida.
En vista de la estereoquímica asignada al Compuesto 2A, mediante un proceso de eliminación, el Compuesto 2B es N-((7S, 10S)-2-{[(4-fluoro-3-metilbencil)amino]carbonil}-3-hidroxi-7-metoxi-7-metil-4-oxo-4,6,7,8,9, 10-hexahidropir¡mido[1 ,2-a]azepin-10-il^ EJEMPLO 3-1 frans-N-(2-(rí3-fluoro-4-metilbencil)amino1carbonil>-3-hidroxi-6-metil-4- oxo-4,6, 7,8,9, 10-hexahidropirimidoí1 ,2-alazepin-10-il)-N,N',N'- trimetiletanodiamida Racémico (Compuesto 3A) Paso 1 : 6-Metiltetrahidro-2H-piran-2-ol A una solución a -78°C de d-hexanolactona (40 g, 350 mmol) en cloruro de metileno (1000 mi) se le añadió lentamente una solución de hidruro de diisobutilaluminio en cloruro de metileno (1 M, 420 mi) durante 1 hora. La suspensión fina de color blanco resultante se dejó calentar gradualmente durante 2 horas, después de lo cual se consiguió una solución clara a -40°C. La mezcla de reacción se interrumpió cuidadosamente mediante la adición de metanol (105 mi) en baja proporcionalidad durante 30 minutos. Después, se agitó durante 15 minutos, después de lo cual se añadió tartrato de sodio y potasio acuoso saturado (350 mi). Después, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante una noche. La fase orgánica se retiró y se lavó con salmuera y después se secó sobre sulfato de magnesio. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo, después el extracto se lavó con salmuera y también se secó de forma similar. La filtración y la concentración dieron una mezcla de lactoles diastereoméricos en forma de un aceite incoloro: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) Diastereómero A, d 5.28 (s, 1 H), 4.07 (m, 1 H), 2.42 (m a, 1 H), 1.13-1.87 (m, 6H), 1.1 1 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
Diastereómero B, d 4.70 (m, 1 H), 3.56 (m, 1 H), 2.86 (m a, 1 H), 1.13-1.87 (m, 6H), 1.21 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
Paso 2: 6-Hidroxi-2-(metilamino)heptanonitrilo El 6-metiltetrahidro-2/-/-piran-2-ol (42 g, 350 mmol) se disolvió en dioxano (300 mi) y se trató con metilamina (al 40% en agua, 32 mi, 350 mmol) seguido de metilamina- HCI (19 g, 280 mmol) y después cianuro sódico (17 g, 350 mmol) seguido de agua (50 mi). Después de agitar a temperatura ambiente durante una noche, la fase orgánica se decantó y se concentró. El residuo se disolvió en acetato de etilo. A la suspensión acuosa inicial (que se había dejado atrás) se le añadió agua hasta que la disolución se completó, después de lo cual las dos fases se combinaron y se extrajeron. La fase orgánica obtenida de esta manera se concentró. La fase acuosa se extrajo dos veces más con acetato de etilo recién preparado y los extractos se concentraron. El residuo combinado se disolvió en éter y se filtró para retirar los sólidos restantes. La concentración dio el producto en forma de un aceite incoloro: H RMN (400 MHz, CDCI3) d 3.81 (m, 1 H), 3.46 (t, J = 7 Hz, 1 H), 2.53 (s, 3H), 1.76 (m, 2H), 1.34-1.65 (m, 4H), 1.19 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
Paso 3: (1-Ciano-5-hidroxihexil)metilcarbamato de tere-butilo Una solución de 6-hidroxi-2-(metilamino)heptanonitrilo (76 g) en acetato de isopropilo (350 mi) se calentó a 30°C y después se le añadió gota a gota una solución de dicarbonato de di-terc-butilo en acetato de isopropilo (150 mi). Cuando la temperatura interna de la reacción aumentó por encima de 35°C, el calentamiento se interrumpió o la velocidad de adición se ralentizó para mantener la temperatura interna dentro de unos grados de este punto de inicialización. El tiempo total de adición requerido fue de aproximadamente 1 hora. Después, se reanudó el calentamiento y la temperatura se mantuvo a 35°C durante una noche. Después, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se trató con cloruro de amonio (7 g), agua (50 mi) y amoniaco acuoso concentrado (13 g) y la mezcla resultante se dejó en agitación a temperatura ambiente durante una noche. Después, la mezcla de reacción se enfrió a 0°C y la fase orgánica se separó y se lavó con NaOH 1 M frío (0°C), después con cloruro de amonio al 10% y después con NaCI al 20 y después se secó sobre sulfato sódico. La filtración y la concentración dieron el producto en forma de un aceite opaco muy fino que contenía una cantidad indeterminada de t-butanol: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 5.20 (m, 1 H), 3.78 (s a, 1 H), 2.87 (s, 3H), 1.81 (m, 2H), 1.25-1.63 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.18 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
Paso 4: (1-[(Z)-Amino(hidroxi¡mino)met¡l1-5-hidroxihexillmetilcarbamato de tere-butilo El (1-ciano-5-hidroxihexil)metilcarbamato de tere-butilo (129 g) que contenía una cantidad indeterminada de t-butanol se disolvió en metanol (250 mi) y se trató con hidroxilamina acuosa al 50% (33 mi). Después, la mezcla se calentó a 60°C durante 3 horas. Después, la mezcla de reacción se enfrió y los disolventes se retiraron al vacío. El residuo se destiló azeotrópicamente dos veces con tolueno (200 mi cada vez) y se secó al vacío a 50°C para dar el producto en forma de un aceite claro muy fino que estaba contaminado con t-butanol: ES MS M+1 = 290.0.
Paso 5: (2E)-2-[«( 1 Z)-1 -amino-2-í(terc-butoxicarbonil)(metil)aminol-6-hidroxiheptilideno)amino)oxi1but-2-en de dimetilo El {1-[(Z)-amino(hidrox¡¡m¡no)metil]-5-hidroxihexil}metilcarbamato de tere-butilo (161 g, exceso) se disolvió en metanol (250 mi) y se enfrió a -10°C. Se añadió gota a gota DMAD (65 mi) sin dejar que la temperatura de reacción aumentara por encima de -5°C y después la mezcla de reacción se guardó en la nevera a -10°C durante 2 días. Después, la mezcla de reacción se concentró a sequedad. Se destiló azeotrópicamente dos veces con tolueno y se secó al vacio a 30°C hasta alcanzar un peso constante para producir el producto del titulo: ES MS M+1 = 431.9.
Paso 6: 2-{1 -[(terc-Butoxicarbonil)(metil)amino1-5-hidroxihexil)-5-hidroxi-6-oxo-1 ,6-dihidropirimidina-4-carboxilato de metilo Me El (2E)-2-[({(1Z)-1-Amino-2-[(terc-butoxicarbon¡l)(metil)amino]-6-hidroxiheptilideno}amino)oxi]but-2-enodioato de dimetilo (239 g, exceso) se disolvió en o-xileno (1000 mi) y la solución resultante se calentó a 120°C durante 48 horas. La solución resultante de color rojo vino oscuro se enfrió a temperatura ambiente y el disolvente se concentró al vacío. El residuo oscuro y fino se disolvió en acetato de etilo (400 mi) y diclorometano (100 mi), se enfrió en un baño de hielo y se trató con hidróxido sódico 1 M (400 mi). La mezcla se transfirió a un embudo de decantación pero fue difícil ver separación alguna debido a la naturaleza de color pardo oscuro de las dos capas. Por lo tanto, se retiraron 400 mi de la fase acuosa. La mezcla restante se lavó una vez con hidróxido sódico 1 M (100 mi) y después se retiraron 300 mi de líquido. Los extractos de 400 mi y 300 mi se combinaron y se extrajo con éter (300 mi). Ahora la separación entre las fases fue visible. La fase acuosa se separó y se enfrió en un baño de hielo y, mientras se agitaba rápidamente, se acidificó el mismo con HCI 6 M (85 mi). Después, la mezcla resultante se extrajo con cloruro de metileno y se secó sobre sulfato sódico. La concentración y el secado al vacio dieron el producto del título en forma de una esponja adherente de color pardo (140 g): ES MS M+1 = 399.8.
Paso 7j 2-{1-[(terc-butoxicarbonil)(metil)aminol-5- [(metilsulfonil)oxilhexil)-5,6-bis[(metilsulfonil)oxnpirimidina-4-carboxilato de metilo El 2-{1 -[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]-5-hidroxihexil}-í5-hidroxi-6-oxo-1 ,6-dihidropirimidina-4-carboxilato de metilo del Paso 6 se destiló azeotrópicamente con acetonitrilo (500 mi). La fina esponja gomosa resultante de color rojo vino (39 g) se disolvió de nuevo en acetonitrilo (500 mi) y se enfrió a 15-20°C. Se añadió gota a gota trietilamina (54 mi) seguido de cloruro de mesilo (27 mi) durante 30 minutos. Después de agitar a la misma temperatura durante 30 minutos más, se produjo la conversión completa en una mezcla 2:1 de tri-mesilato y di-mesilato según se determinó por LC-MS. La mezcla de reacción se filtró para retirar el hidrogenocloruro de trietilamina y la torta de filtro se lavó bien con cloruro de metileno. El filtrado se concentró y después se repartió entre cloruro de metileno y salmuera semisaturada. La fase orgánica se retiró y se secó sobre sulfato sódico. La filtración y la concentración dieron una espuma roja oscura que se destiló azeotrópicamente con acetonitrilo (500 mi) y dio una goma de color rojo vino que era el tri-mesilato.
Paso 8: trans-rac- 0-f (terc-Butoxicarbonil)(metil)aminol-6-metil-3-í(metilsulfonil)oxfl-4-oxo-4,6,7,8,9, 10-hexahidropirimido[1 ,2-a1azepina-2-carboxilato de metilo Una mezcla del 2-{1-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]-5-[(metilsulfonil)oxi]hexil}-5,6-bis[(metilsulfonil)oxi]pirimidina-4-carboxilato de metilo (62 g, 98 mmol) y carbonato de cesio (64 g, 196 mmol) en DMF (400 mi) se calentó a 100°C durante una noche. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y después se enfrió adicionalmente a 0°C. Se añadió más cantidad de carbonato de cesio (60 g) seguido de MsCI (10 mi) y la agitación se continuó durante 1 hora. La mezcla de reacción se filtró para retirar los sólidos y después los sólidos se lavaron con cloruro de metileno hasta que el filtrado salía claro. Después, el filtrado se separó y finalmente se puso a alto vacio a 35°C para retirar la DMF. El lodo fino residual de color rojo oscuro se diluyó con éter y se filtró. La torta de filtro se lavó con éter. El sólido de color crema resultante se disolvió en cloruro de metileno, se lavó una vez con salmuera semisaturada fría y la solución se secó sobre sulfato sódico. La filtración y la concentración dieron el diastereómero trans racémico según se determinó por RMN y LC-MS: H RMN (400 MHz, CDCI3) d 5.74 (m, 1 H), 5.41 (dd, J = 1.6, 13.5 Hz, 1 H), 3.92 (s, 3H), 3.50 (s, 3H), 2.95 (s, 3H), 1.60-2.94 (m, 6H), 1.57 (d, J = 7.3 Hz, 3H), 1.44 (s, 9H).
ES MS M+1 = 460.12.
Paso 9: rans-rac-6-metil-10-(metilamino)-3-í(metilsulfonil)oxil-4-oxo-4,6,7,8,9,10-hexahidropirimido[1 ,2-a1azep¡na-2-carboxilato de metilo A una solución del frans-rac-10-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]-6-metil-3-[(metilsulfonil)oxi]-4-oxo-4,6,7,8,9,10-hexahidropirímido[1 ,2-a]azepina-2-carboxilato de metilo (3.5 g) en dioxano (25 mi) a 0°C se le añadió HCI 4 M en dioxano (25 mi). Después de agitar durante 30 minutos, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó así durante 4 horas. El disolvente se destiló y el residuo se disolvió en agua y se trató con exceso de carbonato sódico. La mezcla resultante se extrajo con cloruro de metileno y después con cloroformo y se secó sobre sulfato sódico. La filtración y la concentración dieron la amina en forma de un aceite viscoso de color pardo.
Paso 10: 10-[[(Dimet¡lamino)(oxo)acetil1(metil)amino1-6-metil-3-[(metilsulfonil)ox¡1-4-oxo-4,6,7,8,9, 10-hexahidropirimidof 1 ,2-alazepina-2-carboxilato de frans-rac-metilo A una solución de ácido dimetiloxámico (0.49 g) en tetrahidrofurano (15 mi) a -15°C se le añadió cloroformiato de etilo (0.4 mi). Se añadió lentamente en porciones N-metilmorfolina (0.52 mi) mientras se mantenía la temperatura por debajo de -5°C. Según avanzaba la adición, la sal de amina precipitaba en forma de un sólido de color blanco. La agitación se continuó durante 90 minutos, después las sales se retiraron por filtración y la solución fría resultante se usó directamente. El írans-rac-6-metil-10- (metilamino)-3-[(metilsulfonil)oxi]-4-oxo-4,6 ,7,8,9,10-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepina-2-carboxilato de metilo del Paso 9 se disolvió en THF (5 mi) y se añadió al anhídrido mezclado como se ha preparado anteriormente mientras se enfriaba en un baño de agua fría. Cuando se completó la adición, la mezcla de reacción se dejó calentar gradualmente a temperatura ambiente, después de lo cual precipitó un sólido de color crema. El sólido precipitado se retiró por filtración, se lavó bien con éter y después se secó al vacío. El sólido de color blanco resultante era el compuesto del título deseado: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 5.69-5.79 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.51 (s, 3H), 3.12 (s, 3H), 3.03 (s, 3H), 3.00 (s, 3H), 1.82-2.14 (m, 6H), 1.61 (d, J = 7.3 Hz, 3H).
Paso 1 1 : frans-N-(2-{f(3-Fluoro-4-metilbenc¡l)aminolcarbonil}-3-hidroxi-6-metil-4-oxo-4,6,7,8,9,10-hexahidropirimido[1 ,2-a1azepin-10-il)-?,?',?'-trimetiletanodiamida racémica El 10-[[(dimetilamino)(oxo)acetil](metil)amino]-6-metil-3- [(metilsulfonil)oxi]-4-oxo-4,6,7,8,9, 10-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepina-2-carboxilato de frans-rac-metilo del Paso 10 (50 mg) se disolvió en DMSO (2 mi) y se le añadió 4-metil-3-fluorobencilamina (0.1 mi). La mezcla resultante se calentó a 100°C durante 30 minutos. Según se determinó por LC-MS, se completó la conversión en el producto, que se purificó por cromatografía de fase inversa Gilson: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 9.46 (s a, 1 H), 7.05 (m, 3H), 5.96 (m, 1 H), 5.56 (s a, 1 H), 4.47 (cd, J = 6.8, 14.5 Hz, 2H), 3.02 (s, 3H), 2.99 (s, 3H), 2.94 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.61 -2.24 (m, 6H), 1.47 (d, J = 7.5 Hz, 3H).
ES MS M+1 = 487.8.
EJEMPLO 3-2 Enantiómero cis aislado de N-(2-(f(3-fluoro-4- metilbencil)aminolcarbonil>-3-hidroxi-6-metil-4-oxo-4,6,7,8,9,10- hexahidropirimidof1 ,2-a1azepin-10-il)-N,N',N'-tr¡metiletanodiamida (Compuesto 3B) Paso 1 : c s-10-[(terc-Butoxicarbonil)(metil)amino1-6-metil-3-[(metilsulfonil)oxn-4-oxo-4,6,7,8,9, 10-hexahidropirimido[1 ,2-alazepina-2-carboxilato de metilo Este compuesto se preparó de acuerdo con el procedimiento que se ha descrito para el Ejemplo 3-1 , Paso 8, con la excepción de que en este caso la mezcla de reacción se calentó a 100°C durante 4 horas en lugar de durante una noche. Como resultado del reducido tiempo de reacción, el producto se aisló en forma de una mezcla racémica cis-trans de diastereómeros. Esta mezcla se separó en sus 4 componentes diaestereoméricamente puros por cromatografía quiral de fluidos supercríticos: H RMN (400 MHz, CDCI3) diastereómero cis de una configuración absoluta conocida, d 5.45 (m, 1 H), 4.77 (m, 1 H), 3.90 (s, 3H), 3.49 (s, 3H), 2.81 (s, 3H), 1.58-2.07 (m, 6H), 1.55 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.45 (s, 9H).
ES MS M+1 = 460.10.
Paso 2: c/s-N-(2-{[(3-fluoro-4-metilbencil)aminolcarbonil)-3-hidroxi-6-metil-4-oxo-4,6 ,7,8,9, 10-hexahidropirimidof1 ,2-alazepin-10-il)-?,?',?'-trimetiletanodiamida El c/'s-10-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]-6-metil-3-[(metilsulfonil)oxi]-4-oxo-4,6 ,8,9 0-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepina-2-carboxilato de metilo del Paso 1 se convirtió en el compuesto del título de acuerdo con los procedimientos que se han descrito para el Ejemplo 3-1 , Pasos 8-11. Estereoquímica absoluta - (6R.10S) o (6S.10R) - no determinada. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 9.66 (s a, 1 H), 7.05 (m, 3H), 5.67 (s a, 1 H), 5.00 (s a, 1 H), 4.54 (cd, J = 6.6, 14.5 Hz, 2H), 3.06 (s, 3H), 3.01 (s, 3H), 2.83 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.92-2.23 (m, 6H), 1.49 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
ES MS M+ = 488.11.
EJEMPLO 4-1 N-((6S,10S)-2-(r(4-fluoro-3-metilbencil)amino1carbonil)-3-hidroxi-6-metil- 4-oxo-6,7,9,10-tetrahidro-4H-pirimidori,2-diri.41oxazepin-10-il)-N,N',N'- trimetiletanodiamida (Compuesto 4A) (4A) N-((6S,10R)-2-([(4-fluoro-3-metilbencil)amino1carbonil)-3-hidroxi-6-metil-4-oxo-67,9 0-tetrahidro-4H-pir¡midof1 ,2-dl[1 ,4loxazepin-10-in-N,N',N'-trimetiletanodiamida (Compuesto 4B) (4B) Paso 1 : 2(f?)-1-(Aliloxi)propan-2-ol A una solución agitada de alcohol alílico (55.0 g, 947 mmol) en 300 mi de ?,?-dimetilformamida anhidra enfriada en un baño de hielo se le añadió en 4 porciones una dispersión de hidruro sódico al 60% en aceite (37.9 g, 947 mmol) durante 30 minutos. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y después de 30 minutos la mezcla se enfrió en un baño de hielo y se añadió lentamente (R)-1 ,2-epoxipropano (50 g, 861 mmol) durante 30 minutos. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 72 horas. La mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo, se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo (4 x). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (3 x) y salmuera (1 x) y se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro. La concentración a vacío reducido dio el producto en bruto en forma de un aceite que se usó en el siguiente paso sin purificación: H RMN (400 MHz, CDCI3): d 5.92 (ddt, J = 17.2, 10.4, 5.6 Hz, 1 H); 5.26 (de, J = 17.2, 1.6 Hz, 1 H); 5.20 (de, J = 10.3, 1.3 Hz, 1 H); 4.03 (dt, J = 5.6, 1.4 Hz, 2 H)¡ 3.95 (m, 1 H); 3.4-3.5 (m, 1 H); 3.24 (dd, J = 9.4, 8.2 Hz, 1 H); 2.4 (s a, 1 H); 1.15 (d, J = 6.4 Hz, 3 H).
Paso 2: 6(f?)-6-Metil-1 ,4-dioxan-2-ol: Se dispersó una corriente de ozono en una solución fría (T inicial = -78°C) agitada de 2(R)-1-(aliloxi)propan-2-ol (84 g, 723 mmol) en diclorometano (400 mi) hasta que permaneció un color azul (se requirieron 4 horas). La solución se purgó con nitrógeno hasta que se obtuvo una solución incolora transparente. Se añadieron sulfuro de dimetilo (134 mi, 1.8 mol) y trietilamina (302 mi, 2.17 mol). La mezcla agitada se dejó calentar a temperatura ambiente durante 60 minutos. Un ensayo para peróxido con papel de yoduro de almidón húmedo fue negativo. La mezcla se concentró a presión reducida a temperatura ambiente para proporcionar el producto del título en bruto que se usó directamente en el siguiente paso sin purificación.
Paso 3: (1-Ciano-2-{[(2)-2-hidroxipropilloxi)etil)met¡lcarbamato de tere-butilo: A una solución agitada de 6(f?)-6-metil-1 ,4-dioxan-2-ol (100 g, 847 mmol) en dioxano y agua (3:1 , 400 mi) se le añadieron clorhidrato de metilamina ( 14 g, 1.69 mol) y cianuro sódico (83 g, 1.69 mol). La solución se agitó durante 72 horas. El producto se extrajo en acetato de etilo (3 x) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico anhidro, se filtraron y el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo (100 mi) y a la solución se le añadió dicarbonato de di-terc-butilo (369 g, 1.69 mol). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas, se diluyó con acetato de etilo y se lavó con agua (1 x) y salmuera (1 x). Después del secado sobre sulfato sódico, la solución del producto en bruto se filtró y se concentró a presión reducida. La purificación por cromatografía a media presión sobre gel de sílice con un gradiente de acetato de etilo en hexano del 30 al 50% dio el producto del título. 1H RMN (399 MHz, CDCI3): d 5.5-5.1 (m a, 1 H); 3.9 (m, 1 H); 3.8 (m, 2 H); 3.53 (td, J =9.5, 3.0 Hz, 1 H); 3.34 (ddd, J = 14.1 , 9.5, 7.4 Hz, 1 H)¡ 2.96 (s, 1.5 H); 2.96 (s, 1.5 H); 1.48 (s, 9 H); 1.16 (d, J = 6.4 Hz, 3 H).
Paso 4: [(2)-2-Amino-1-((f(2 )-2-hidroxipropilloxi)metil)-2-(hidroxiimino)etill-metilcarbamato de tere-butilo: A una solución de (1-ciano-2-{[(2)-2-hidroxipropil]oxi}etil)metil-carbamato de tere-butilo (20 g, 77 mmol) en metanol (100 mi) se le añadió una solución acuosa al 50% de hidroxilamina (5.63 g, 85 mmol) y la mezcla se agitó a 40°C durante 18 horas. La solución se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía a media presión sobre gel de sílice con un gradiente de acetato de etilo del 10 al 90% en hexano para dar el producto del título en forma de un aceite de color amarillo.
ES MS = 292 Paso 5: (2)-2-{[((1 )-1-Amino-2-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]-3-{[(2R)-2-hidroxipropilloxi)propil¡deno)amino1oxi)but-2-enodioato de dimetilo A una solución agitada de [(2)-2-amino-1-({[(2f?)-2-hidroxipropil]oxi}metil)-2-(hidroxiimino)etil]-metilcarbamato de tere-butilo (123.5 g, 424 mmol) en metanol a 0°C se le añadió acetilendicarboxilato de dimetilo (52.4 mi, 424 mmol). Después de la adición, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. La agitación se continuó durante 18 horas. El disolvente se retiró a presión reducida. El producto en bruto se purificó por cromatografía a media presión sobre gel de sílice con un gradiente de acetato de etilo del 10 al 85% en hexano proporcionando el producto del título.
ES MS = 435.4 (M+1 ).
Paso 6: 2-(1-f(terc-Butoxicarbonil)(metil)aminol-2-{r(2R)-2-hidroxipropinoxi)et¡l)-5,6-dihidroxipirimidina-4-carboxilato de metilo Una solución de (2)-2-{[((1 )-1-amino-2-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]-3-{[(2R)-2-hidroxipropil]oxi}propilideno)amino]oxi}but-2-enodioato de dimetilo (140 g, 323 mol) en o-xileno (1000 mi) se calentó a 120°C durante 18 horas. Después, la temperatura de la solución se aumentó hasta 140°C durante 6 horas para convertir el resto del substrato. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía líquida a media presión sobre gel de sílice con acetato de etilo al 40% en hexano para retirar los componentes de baja polaridad y después el producto se eluyó con etanol al 10% en diclorometano, proporcionando el producto del título.
ES MS = 402.4 (M+1 ).
Paso 7: (1-(4-([(4-Fluoro-3-metilbencil)amino1carbonil|-5,6-dihidroxipirimidin-2-il)-2-(f(2)-2-hidroxi de tere-butilo A una solución agitada de 2-(1 -[(tercbutoxicarbonil)(metil)amino]-2-{[(2R)-2-hidroxipropil]oxi}etil)-5,6-dihidroxipirimidina-4-carboxilato de metilo (40 g, 100 mmol) 2-propanol (400 mi) se le añadió 4-fluoro-3-metilbencilamina (20.8 g, 149 mmol) en dos ejecuciones paralelas. Las mezclas se calentaron a 60°C durante 16 horas. Con algún sustrato éster restante como se determinó por LC-MS, las temperaturas de los baños de calentamiento se aumentaron a 80°C durante 3 horas. Las soluciones se enfriaron y se combinaron y el disolvente se retiró a presión reducida. El producto en bruto se disolvió en acetato de etilo y se lavó con ácido cítrico acuoso al 10% (2 x), bicarbonato sódico saturado (1 x) y salmuera (1 x). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y el disolvente se retiró a presión reducida. El producto en bruto se usó sin purificación adicional en el siguiente paso: ES MS = 509.5 (M+1).
Paso 8: ((6,10)-2-(r(4-Fluoro-3-metilbencil)amino1carbonil)-3-hidroxi-6-metil-4-oxo-6 ,7,9,10-tetrahidro-4-pirimido[1 ,2-1f1 ,41oxazepin-10-¡Dmetilcarbamato de (6S.10S) v (6S,10R)-terc-butilo Isómero Cis Isómero Trans (6S, 10S) (6S, 10R) Se disolvió (1-(4-{[(4-fluorobencil)amino]carbonil}-5,6-dihidroxipirimidin-2-il)-2-{[(2)-2-hidroxibutil]oxi}etil)metilcarbamato de tert-butilo (40 g, 79 mmol) en dos realizaciones paralelas en acetonitrilo seco (200 mi) y se enfrió en un baño de hielo en una atmósfera de nitrógeno. A la solución agitada se le añadió trietilamina (99 mi, 472 mmol) seguido de la adición gota a gota de cloruro de metanosulfonilo (36.8 mi, 472 mmol) en 73 mi de cloruro de metileno anhidro. Las mezclas se agitaron durante 30 minutos y después se trataron con agua desionizada. Las mezclas se combinaron y se extrajeron con cloroformo. La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se cromatografió en 2 realizaciones sobre un cartucho Biotage SNAP de 340 g con un gradiente de acetato de etilo del 10% al 90% en hexano para producir el trimesilato en bruto: ES MS: m/z = 743.5 (M+1).
Una solución agitada del trimesilato (25 g, 33.7 mmol) en dimetilacetamida (500 mi) se purgó con gas nitrógeno durante 10 minutos, se trató con carbonato de cesio (43.9 g, 135 mmol) y se agitó vigorosamente en un baño de aceite a 100°C durante 15 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua (3 x) y salmuera (1 x), se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El producto en bruto se suspendió en éter (200 mi), se agitó durante 30 minutos y el material oscuro insoluble se retiró por filtración. Este material se suspendió nuevamente en éter (600 mi), se agitó durante 48 horas y se filtró. Los filtrados combinados se concentraron a presión reducida para proporcionar el producto en bruto. El análsis por H RMN indicó una mezcla 1 :2 de diastereómeros cis:trans.
ES MS = 491.2 (M+1 ).
Paso 9: Clorhidrato de (6S.10S) v (6S.10R)-N-(4-fluoro-3-metilbencil)-3-hidrox¡-6-metil- 0-(metilamino)-4-oxo-6, 7,9,10-tetrahidro-4-pirimidoH ,2-l[1 ,41oxazepina-2-carboxamida La mezcla de diastereómeros c/'s y trans del paso anterior, ((6,10)-2-{[(4-fluoro-3-metilbencil)amino]carbonil}-3-hidroxi-6-metil-4-oxo- 6,7,9, 10-tetrahidro-4-pirimido[1 ,2-][1 ,4]oxazepin-10-il)metilcarbamato de (6S.10S) y (6S,10f?)-terc-butilo (13.5 g, 27.5 mmol) se disolvió en HCI 4 M en dioxano (206 mi). Después de 30 minutos, el sólido precipitado se recogió por filtración y se secó al vacío. El análisis por H RMN de este sólido dio como resultado una mezcla 3:2 de diastereómeros trans.cis del producto del título. Se descubrió que el filtrado contenía principalmente el isómero trans.
ES MS: m/z = 391.2 (M+1).
Paso 10: N-((6S.10S)-2-(r(4-fluoro-3-metilbencil)am¡nolcarbonil)-3-hidrox¡-6-metil-4-oxo-67,9 0-tetrahidro^H-pirimido[1 ,2-d1[1 ,41oxazepin- 0-in-N.N'.N'-trimetiletanodiamida (Compuesto 4A) y N-((6S.10R)-2-(r(4-fluoro-3-metilbencil)amino1carbonil)-3-hidroxi-6-metil-4-oxo-6,7,9,10-tetrahidro-4H-pirimidoH ,2-d1[1 ,41oxazepin- 0-il)-N,N',N'-trimetiletanodiamida (Compuesto 4B) Una solución de la mezcla de diastereómeros del paso anterior, clorhidrato de (6S.10S) y (6S, 0f?)-N-(4-fluoro-3-metilbencil)-3-hidroxi-6-metil-10-(metilamino)-4-oxo-6, 7,9,10-tetrahidro-4-pirimido[1 ,2-][1 ,4]oxazepina-2-carboxamida (3.5 g, 9,0 mmol), clorhidrato de etil-(dimetilaminopropil)carbodiimida (5.16 g, 26.9 mmol), 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (3.66 g, 26.9 mmol), ácido N,N-d¡metiloxalámico (1.58 g, 13.5 mmol) y trietilamina (2.56 mi, 44.8 mmol) se agitó en diclorometano seco (10 mi) a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla se lavó con agua (6 x) y con salmuera (1 x). Los lavados acuosos se extrajeron de nuevo con cloroformo (3 x) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó primero por HPLC preparativa de fase inversa en una columna Xterra (Waters) Prep MS C18 OBD 50X250 mm usando un gradiente de 45 minutos de CH3CN/H2O del 10 al 75% (TFA al 0.1 %) con un caudal de 85 ml/minuto. La concentración a presión reducida dio una mezcla 3:2 de diastereómeros trans.cis en forma de un sólido amorfo de color blanco. Este material se separó para dar los diastereómeros del título c/s-(6S,10S) y trans- (6S.10R) usando cromatografía de fluidos supercríticos sobre una columna OJ-H (Chiralcel) con etanol al 15% en dióxido de carbono como fase móvil. El primer pico en eluir fue el diastereómero trans y el segundo pico en eluir fue el diastereómero c/'s: Compuesto 4A - diastereómero cis (compuesto del título, (6S, 10S)): 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d 9.59 (t, J = 6.4 Hz, 1 H); 7.21 (dd, J = 7.5, 2.1 Hz, 1 H); 7.20-7.13 (m, 1 H); 6.91 (t, J = 9.0 Hz, 1 H); 5.81 (s, 1 H); 4.99-4.90 (m, 1 H); 4.51 (d, J = 6.5 Hz, 2 H); 4.46 (t, J = 10.6 Hz, 1 H); 4.31 (d, J = 14.1 Hz, 1 H); 4.15 (dd, J = 11.8, 2.5 Hz, 1 H); 4.05 (dd, J = 14.1 , 5.3 Hz, 1 H); 3.07 (s, 3 H); 3.02 (s, 3 H); 2.87-2.84 (m, 3 H); 2.28-2.21 (m, 3 H); 1.62 (d, J = 6.9 Hz, 3 H).
HR MS: ESI = 490.2086 (M+1); calculado 490.2096 (M+1).
Compuesto 4B - diastereómero trans (6S, 10R): 1 H RMN (aparece como una mezcla 2:1 de isómeros rotacionales) (400 MHz, CDCI3): d 12.6-12.2 (m a, 1 H); 9.7-9.5 (m, 1 H); 7.2 (m, 2 H); 6.9 (t, J = 9.0 Hz, 1 H); 5.8-5.7 (m, 2 H); 4.5-4.1 (m, 5 H); 3.8-3.6 (m, 2 H); 3.1 (s, 3 H); 3.1 (s, 3 H); 3.0-2.8 (m, 3 H); 2.2 (d, J = 1.8 Hz, 3 H); 1.6-1.5 (m, 2 H) HR MS: ESI = 490.2086 (M+1); calculado 490.2096 (M+1).
Procedimiento alternativo Paso 1 La mezcla de diastereómeros del Paso 8 se separó utilizando cromatografía líquida de fase inversa sobre en una columna Xterra (Waters) Prep MS C18 OBD 50X250 mm eluyendo con un gradiente de 45 minutos de CH3CN/H20 del 10 al 75% (TFA al 0.1 %) a un caudal de 85 ml/minuto. La liofilización de las fracciones que contenían el primer y segundo productos de elución dio los diastereómeros c/'s y trans, respectivamente, en forma de sólidos amorfos de color castaño: Diastereómero cis (6S, 10S): H RMN (400 MHz, CDCI3): d 12.2-1 1.8 (s a, 1 H), 7.77 (s a, 1 H); 7.12 (m, 2 H); 6.97 (t, J = 8.9 Hz, 1 H); 5.3-.5.0 (m a, 1 H); 4.90 (t, J = 6.5 Hz, 1 H); 4.51 (d, J = 6.4 Hz, 2 H); 4.36 (t, J = 9.5 Hz, 1 H); 4.12 (m, 2 H); 4.01 (dd, J = 13.9, 5.5 Hz, 1 H); 2.80 (s a, 3 H); 2.23 (d, J = 1.8 Hz, 3 H); 1.62 (d, J = 6.9 Hz, 3 H); 1.27 (s, 9 H): ES MS: m/z = 491.1 (M+1).
Diastereómero trans (6S, 10R): 1H RMN (aparece como una mezcla 2:1 de isómeros rotacionales) (400 MHz, CDCI3): d 12.2-1 1.8 (s a, 1 H), 7.83 (s a, 2/3 H); 7.59 (s a, 1/3 H); 7.14 (m, 2 H); 6.98 (m, 1 H); 5.65 (m, 4/3H); 5.38 (m, 2/3H); 4.47 (m, aproximadamente 2 H); 4.29-4.10 (m, aproximadamente 2 H); 3.59(d, J = 13.4 Hz, aproximadamente 2H); 2.79 (s) 2.76 (s) (3H); 2.26 (s, 3 H); 1.56 (d, J = 7.3 Hz, 1 H); 1.50 (d, J = 7.1 Hz, 2 H); 1.29 (s, 3H); 1.25 (s, 6H): ES MS = 491.2 (M+1 ).
Paso 2 El isómero cis del paso anterior, ((6, 10)-2-{[(4-fluoro-3-metilbencil)amino]carbon¡l}-3-hidroxi-6-metil-4-oxo-6, 7,9,10-tetrahidro-4-pirimido[1 ,2-][1 ,4]oxazepin-10-il)metilcarbamato de (6S,10S)-terc-butilo (1.7 g, 3.5 mmol) se disolvió en acetato de etilo (69 mi), se enfrió en un baño de hielo con agitación y la solución se saturó con gas HCI anhidro durante 5 minutos. La mezcla se agitó en un baño de hielo durante 1 hora y después se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió, se concentró dos veces más en acetato de etilo y después se secó al vacío para dar la sal del clorhidrato de (6S,10S)-N-(4-fluoro-3-metilbencil)-3-hidroxi-6-metil-10-(metilamino)-4-oxo-6, 7,9,10-tetrahidro-4-pirimido[1 ,2-][1 ,4]oxazepina-2-carboxamida en forma de un sólido.
H RMN (399 MHz, d6DMSO): d 12.45 (s, 1 H); 9.95 (t, J = 6.5 Hz, 1 H); 9.54 (d a, J = 24.7 Hz, 2 H); 7.21 (m, 2 H); 7.10 (t, J = 9.0 Hz, 1 H)¡ 5.03 (s, 1 H); 4.75 (td, J = 6.8, 2.7 Hz, 1 H); 4.47 (d, J = 6.4 Hz m, 2 H); 4.1 (m, 2 H)¡ 3.88 (m, 2 H); 2.65 (s, 3 H); 2.21 (d, J = 1 .6 Hz, 3 H); 1.53 (d, J = 6.8 Hz, 3 H): ES MS: m/z = 391.1 (M+1).
Paso 3 Una solución de (6S,10S)-N-(4-fluoro-3-metilbencil)-3-hidrox¡-6-metil-10-(metilamino)-4-oxo-6, clorhidrato de 7,9,10-tetrahidro-4-pirimido[1 ,2-][1 ,4]oxazepina-2-carboxamida (1.38 g, 3.2 mmol), clorhidrato de et.il-(dimetilaminopropil)carbodiimida (1.24 g, 6.5 mmol), 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (0.44 g, 3.2 mmol), ácido N,N-dimetiloxalám¡co (0.57 g, 4.9 mmol) y N-metilmorfolina (1.42 mi, 12.9 mmol) en N,N-dimetilformamida anhidra (32 mi) se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla se diluyó con acetato de etilo e hidrogenosulfato potásico acuoso al 5%. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (4 x). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa de fase inversa en una columna Xterra (Waters) Prep MS C18 OBD 50x250 mm eluyendo con un gradiente de 45 minutos de CH3CN/H2O del 10 al 75% (TFA al 0.1 %) a un caudal de 85 ml/minuto. Las fracciones del producto se combinaron y se liofilizaron durante una noche para dar el Compuesto 4A (diastereómero cis-(6S.10S)).
Cristalización del Compuesto 4A El Compuesto 4A amorfo preparado usando el procedimiento de separación cromatográfica descrito anteriormente se disolvió de nuevo en cloruro de metileno y se repartió con agua ajustada a un pH 3 con NaHC03.
La capa acuosa se extrajo 3 veces con cloruro de metileno. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2S04, se filtraron, y se concentraron a presión reducida. El sólido resultante se disolvió en MeOH templado, se filtró a través de un filtro de jeringa de nylon en un vial de vidrio. El vial de solución se dejó en reposo en un vaso de precipitados abierto que contenía EtOAc. Se formaron grandes cristales en el fondo del vial de MeOH durante una noche. El sólido se lavó con MeOH enfriado con hielo, y después con Et2O para dar el Compuesto 4A en forma de un sólido cristalino.
Caracterización. Se generó un patrón de XRPD del Compuesto 4A cristalino en un Sistema de Difracción por rayos X Philips Analytical X'Pert PRO con una consola PW3050760 usando una exploración continua de 4 a 40 grados 2T. Se usó radiación de cobre y como la fuente. El experimento se realizó en condiciones ambiente. Las posiciones de los picos de difracción se reverenciaron mediante silicio que tiene un valor 2T de 28.443 grados. En la Figura 2 se muestra el patrón de XRPD, los valores 2T y los espaciados interplanares d correspondientes en el patrón de XRPD incluyen lo siguiente: CUADRO 4A El Compuesto 4A cristalino se analizó también con un calorímetro de exploración diferencial TA Instruments DSC Q 1000 a una velocidad de calentamiento de 10°C/minuto de 25°C a 350°C en un recipiente de aluminio abierto en una atmósfera de nitrógeno. La curva de DSC mostró una endotermina con una temperatura inicial de 139°C y un pico de temperatura de 144°C. El cambio de entalpia fue de 67 J/g. Se cree que la endotermia se debe a la fusión.
El TGA del compuesto cristalino se realizó con un aparato TA Instruments TGA Q 500 en atmósfera de nitrógeno a una velocidad de calentamiento de 10°C/minuto de 25°C a 350°C. La curva de TG mostró una pérdida de peso del 0.03% en peso hasta 100°C, lo que indicaba la ausencia de agua de hidratación y de disolvente de solvatación.
EJEMPLO 4-2 N-((6R,10R)-2-(r(4-fluoro-3-metilbencil)amino1carbonil)-3-hidroxi-6-metil- 4-0X0-6,7.9,10-tetrah¡dro-4H-pirimidori ,2-d1M .41oxazepin-10-il)-N,N',N'- (4C) N-((6R 0S)-2-(r(4-fluoro-3-metilbencil)amino1carbonil)-3-hidroxi-6-metil-4-oxo-6J,9 0-tetrahidro-4H-pirimidori ,2-diri ,4loxazepin-10-in-N,N',N'-trimetiletanodiamida (Compuesto 4D) (4D) Los compuestos del título se prepararon usando los procedimientos que se han indicado en el Ejemplo 4-1 con la excepción de que se usó (S)-1 ,2-epoxipropano en lugar de (R)-1 ,2-epoxipropano en el Paso 1 .
Diastereómero cis (6R, 10R): 1H RMN (399 MHz, CDCI3): d 12.6-12.1 (s a, 1 H) 9.60 (t, J = 5.9 Hz, 1 H); 7.21 (d, J = 7.5, Hz, 1 H); 7.20-7.16 (m, 1 H); 6.91 (t, J = 9.0 Hz, 1 H); 5.81 (s, 1 H); 4.94 (m, 1 H); 4.51 (d, J = 6.4 Hz, 2 H), 4.45 (t, J = 10.7 Hz, 1 H); 4.31 (d, J = 14.1 Hz, 1 H); 4.15 (dd, J = 1 1.7. 2.4 Hz, 1 H); 4.04 (dd, J = 14.1 , 5.3 Hz, 1 H); 3.07 (s, 3 H); 3.02 (s, 3 H); 2.85 (s, 3 H); 2.24 (d, J = 1.5 Hz, 3 H); 1.62 (d, J = 6.8 Hz, 3 H).
HR MS: ESI = 490.2088 (M+1 ); calculado 490.2096 (M+1 ).
Diastereómero trans (6R, 10S): H RMN (aparece como una mezcla 2:1 de isómeros rotacionales) (399 MHz, CDCI3): d 9.7 (s a, 1/3 H); 9.54 (s a, 2/3 H); 7.21 (d, J = 7.3 Hz, 1 H)¡ 7.19-7.15 (m, 1 H); 6.91 (t, J = 8.9 Hz, 1 H); 5.80 (d a, J = 6.4 Hz 2/3 H) 5.69 (s a, 4/3 H)¡ 4.58-4.36 (m, aproximadamente 3 H); 4.27 (d, J = 11.7 Hz, aproximadamente 1 H); 4.15 (m, aproximadamente 1 H)¡ 3.78-3.60 (m, 2 H); 3.07 (s, 3 H); 3.02 (s, 3 H); 3.97-2.82 (m, 3 H); 2.24 (d, J = 1.8 Hz, 3 H); 1.56 (m, 2 H) HR MS: ESI = 490.2098(M+1); calculado 490.2096 (M+1).
EJEMPLO 5-1 A/-((6S,10S)-6-etil-2-(r(4-fluorobencil)amino1carbonil)-3-hidroxi-4-oxo- 6,7,9,10-tetrahidro-4-pir¡midoM .2-iri.41oxazepin-10-in-A/.A/'.A/ - trimetiletanodiamida (Compuesto 5A) (5A) Paso 1 : 2(ff)-1 -(Aliloxi)butan-2-ol A un matraz de fondo redondo secado al horno se le añadieron hidruro sódico (30.5 g, 763 mmol) y DMF (433 mi). La mezcla se enfrió en un baño de hielo y se le añadió gota a gota alcohol alílico (51 .9 mi, 763 mmol), manteniendo la temperatura por debajo de 6°C. Después de que se completara la adición, la mezcla de reacción se agitó mientras se mantenía en el baño de hielo durante 15 minutos y después a temperatura ambiente durante 45 minutos. Después, la mezcla se enfrió nuevamente en un baño de hielo y se añadió lentamente (R)-1 ,2-epoxibutano (50 g, 760 mmol) durante 30 minutos en forma de una solución en DMF (30 mi). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 72 horas. Después, la mezcla de reacción se enfrió y se diluyó con agua (500 mi) y éter (200 mi). Las capas se separaron y el producto se extrajo dos veces más de la capa acuosa con éter dietilico (200 mi). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro. La concentración dio un aceite de color amarillo. El producto en bruto se usó en el siguiente paso sin purificación: 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d 5.92 (ddt, J = 17.2, 10.4, 5.6 Hz, 1 H)¡ 5.28 (de, J = 17.2, 1.6 Hz, 1 H)¡ 5.20 (de, J = 10.4, 1.3 Hz, 1 H); 4.03 (dt, J = 5.6, 1.3 Hz, 2 H)¡ 3.76-3.68 (m, 1 H); 3.48 (dd, J = 9.5. 3.0 Hz, 1 H); 3.29 (dd, J = 9.5, 8.0 Hz, 1 H); 2.34 (d, J = 3.3 Hz, 1 H)¡ 1.56-1.41 (m, 2 H)¡ 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3 H).
Paso 2: 6(R)-6-Etil-1 ,4-dioxan-2-ol: Se dispersó una corriente de ozono en una solución agitada fría (T inicial = -78°C) de 2(ft)-1-(aliloxi)butan-2-ol (50 g, 384 mmol) en metanol (200 mi) hasta que persistió un color azul (se requirieron 2 horas). La solución se purgó durante 10 minutos con nitrógeno hasta que se obtuvo una solución incolora transparente. Se añadieron sulfuro de dimetilo (45.5 mi, 615 mmol) y trietilamina (30 mi). La mezcla agitada se dejó calentar a temperatura ambiente durante 60 minutos. (Un ensayo para peróxido con papel de yoduro de almidón húmedo fue negativo). La mezcla se concentró a presión reducida a temperatura ambiente para proporcionar el producto del título en bruto que se usó directamente en el siguiente paso sin purificación.
Paso 3: (1-Ciano-2-([(2)-2-hidroxibutil1oxi)etil)metilcarbamato de tere-butilo: A una solución agitada de 6(f?)-6-etil-1 ,4-dioxan-2-ol (50 g, 378 mmol) en metanol y agua (1 :1 , 300 mi) se le añadieron clorhidrato de metilamina (51 g, 757 mmol) y cianuro sódico (28 g, 568 mmol). La solución se agitó durante 24 horas. La solución se basificó (pH = 9) con solución de carbonato sódico saturado (50 mi). El producto se extrajo en acetato de etilo (3 x 200 mi). Las capas de acetato de etilo se combinaron, se lavaron con salmuera (100 mi) y se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se disolvió en diclorometano (300 mi) y se le añadió una solución agitada de dicarbonato de di-terc-butilo (83 g, 378 mmol). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas y después se acidificó con ácido clorhídrico (50 mi, 1 M). La capa orgánica se separó y se lavó con agua (50 mi) y con una solución de salmuera (50 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y el disolvente se retiró a presión reducida. La purificación por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (cartucho de 750 g) con un gradiente de acetato de etilo del 5 al 50% en hexano dio el producto deseado (Fr = 0.5, EtOAc al 40%/hexano).
H RMN (400 MHz, CDCI3): d 5.44-5.37 (m, 1 H); 3.77 (dd, J = 10.6, 10.5 Hz, 1 H); 3.76 (dd, J = 13.4, 6.6 Hz, 2 H); 3.61-3.53 (m, 1 H); 3.39 (ddd, J = 14.1 , 9.5, 7.4 Hz, 1 H); 2.96 (s, 3 H); 1.51-1.47 (m, 2 H), 1.48 (s, 9 H); 0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3 H).
ES MS = 273.3 (M+1).
Paso 4: f(2)-2-Amino-1-(fr(2R)-2-hidroxibutilloxi)metil)-2-(hidroxiimino)etill-metilcarbamato de tere-butilo: A una solución de (1-ciano-2-{[(2)-2-hidroxibutil]oxi}etil)metil-carbamato de tere-butilo (5.1 g, 18.7 mmol) en metanol (80 mi) se le añadió una solución acuosa al 50% de hidroxilamina (1.62 mi, 26.4 mmol) y la mezcla se agitó a 60°C durante 18 horas. La solución se concentró a presión reducida y se destiló azeotrópicamente con metanol (2 x 50 mi) para retirar las cantidades traza de hidroxilamina y agua. El producto en bruto se usó sin purificación en el siguiente paso: ES MS = 306.2 (M+1 ).
Paso 5: (2)-2-{[((1 )-1 -Amino-2-[(terc-butox¡carbonil)(metil)amino1- 3-([(2R)-2-hidroxibutilloxi|propil¡deno)amino1oxi)but-2-enodioato de dimetilo A una solución agitada de [(2)-2-amino-1-({[(2R)-2-hidroxibutil]oxi}metil)-2-(hidroxiimino)etil]-metilcarbamato de tere-butilo (5.7 g, 18.7 mmol) en metanol (100 mi) en una atmósfera de nitrógeno a -20°C se le añadió acetilenodicarboxilato de dimetilo (2.5 mi, 20.6 mmol). La mezcla de reacción se agitó a -20°C durante 2 horas y después se dejó calentar a temperatura ambiente con agitación durante 18 horas. El disolvente se retiró a presión reducida. El producto en bruto se destiló azeotrópicamente con tolueno (50 mi) y se usó sin purificación en el siguiente paso: ES S = 448 Paso 6: 2-(1-r(terc-Butoxicarbonil)(metil)aminol-2-U(2R)-2- hidroxibutilloxi)etil)-5,6-dihidroxipirimidina-4-carboxilato de metilo A una solución agitada de (2)-2-{[((1)-1-amino-2-[(terc- butoxicarbonil)(metil)amino]-3-{[(2R)-2- hidroxibutil]oxi}propilideno)amino]oxi}but-2-enodioato de dimetilo (8.4 g, 18.7 mol) en o-xileno (700 mi) en una atmósfera de nitrógeno se le añadió diisopropiletil amina (4.9 mi, 28 mmol). La mezcla se calentó a 120°C durante 24 horas. La solución se enfrió y se diluyó con EtOAc (500 mi), agua (100 mi) y ácido clorhídrico (30 mi, 1 M). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 mi). Las capas orgánicas se combinaron, se diluyeron con 50 mi de acetonitrilo para disolver la materia particulada, se secaron sobre sulfato sódico anhidro, se filtraron y los disolventes se retiraron a presión reducida. El producto en bruto se disolvió en éter y el producto precipitó mediante la adición de hexano. La filtración y el secado a presión reducida dieron un sólido de color rojo (7.4 g, 95%): ES MS = 416.2 (M+1).
Paso 7j (1-(4-([(4-Fluorobencil)amino1carb^ dihidroxipirimid¡n-2-il)-2-{[(2)-2-hidroxibutinoxi)etil)metilcarbam de tere-butilo A una solución agitada de 2-(1-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]-2-{[(2R)-2-hidroxibutil]oxi}etil)-5,6-dihidroxipirimidina-4-carboxilato de metilo (7.4 g, 18 mmol) 2-propanol (160 mi) se le añadió 4-fluorobencilamina (8.1 mi, 71 mmol). La mezcla se calentó a 60°C durante 24 horas. La solución se enfrió y el disolvente se retiró a presión reducida. El producto en bruto se recogió en acetato de etilo (150 mi) y se lavó con ácido clorhídrico acuoso (2 x 50 mi, 0.5 M) y salmuera (50 mi). La capa orgánica se separó, se secó con sulfato sódico anhidro, se filtró y el disolvente se retiró a presión reducida. El producto en bruto se usó sin purificación en el siguiente paso: ES MS = 509.1 (M+1 ).
Paso 8: ((6,10)-6-Etil-2-U(4-fluorobencil)amino1carbonil)-3-hidroxi-4-oxo-6,7,9.10-tetrahidro-4-pirimidof ,2-lf ,41oxazepin- 0-iQmetilcarbamato de (6S.10S) y (6S,10 )-terc-butilo Isómero Cis Isómero Trans (6S, 10S) (6S, 10R) El (1-(4-{[(4-fluorobencil)amino]carbonil}-5,6-dih¡drox¡pir¡m¡din-2-il)-2-{[(2)-2-hidroxibutil]oxi}etil)metilcarbamato de tere-butilo (7.7 g, 15 mmol) se disolvió en acetonitrilo seco (150 mi) y se enfrió en un baño de hielo en una atmósfera de nitrógeno. A la solución agitada se le añadió trietilamina (8.4 mi, 60 mmol) seguido de cloruro de metanosulfonilo (3.9 mi, 50 mmol). La mezcla se agitó durante 1 hora y después el disolvente se retiró a presión reducida. El producto en bruto se disolvió en acetato de etilo (200 mi) y se lavó con ácido clorhídrico acuoso (50 mi, 0.5 M), bicarbonato sódico acuoso (50 mi) y salmuera (50 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró. El residuo se agitó en tolueno (500 mi), que disolvió la mayor parte de este material. El sólido no disuelto se filtró aclarando con tolueno (2 x 100 mi). La solución de tolueno se concentró para dar el trimesilato en bruto: ES MS: m/z = 743.1 (M+1).
Una solución agitada del trimesilato (9.4 g, 12.6 mmol) en dimetilacetamida (190 mi) se purgó con gas nitrógeno. Esta solución se dividió entre 10 recipientes de reacción para microondas, cada uno de los cuales contenia carbonato potásico (615 mg, 4.5 mmol). Cada recipiente de reacción se agitó y se calentó a 140°C durante 7 minutos en un horno microondas. Las mezclas de reacción de los 10 recipientes de reacción se combinaron y se diluyeron con acetato de etilo (400 mi) y agua. La capa orgánica se lavó con ácido clorhídrico acuoso (2 x 100 mi, 0.5 M) y salmuera (50 mi), se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El producto en bruto se suspendió en éter (700 mi) y se agitó durante 18 horas. El precipitado de color negro se retiró por filtración. El disolvente filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por HPLC de fase inversa (C18. Xterra) con un gradiente de fase móvil de agua:acetonitrilo que contenía TFA al 0.1 % (acetonitrílo del 30 al 75% durante 40 minutos, 85 ml/minuto). La liofilización de las fracciones que contenían el primer y segundo productos de elución dio los diastereómeros c/'s y trans, respectivamente, en forma de sólidos amorfos de color blanco: Diastereómero c/'s (6S, 10S) H RMN (399 MHz, CDCI3): d 1 1.80 (s a, 1 H), 7.80 (s, 1 H); 7.31 (dd, J = 8.4, 5.3 Hz, 2 H); 7.04 (t, J = 8.4 Hz, 2 H); 5.25 (s a, 1 H); 4.62-4.54 (m, 3 H); 4.33 (m, 1 H); 4.16 (dd, J = 14.1 , 5.9 Hz, 1 H); 4.08 (dd, J = 12.2, 3.1 Hz, 1 H); 4.02 (d, J = 14.8 Hz, 1 H); 2.82-2.75 (m, 3 H); 2.17-1 ,80 (m, 2 H); 1.27 (m, 9 H); 1.12 (t, J = 7.4 Hz, 3 H): ES MS: m/z = 491.2 (M+1 ).
Diastereómero trans (6S, 10R) 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d 1 1.90 (s a, 1 H), 7.90-7.60 (m, 1 H); 7.33 (m, 2 H); 7.04 (m, 2 H); 5.50-5.30 (m, 2H); 4.55 (m, 2 H); 4.25 (m, 2 H); 3.55 (d, J = 13.3 Hz, 2 H); 2.75 (m, 3 H); 2.10-1.85 (m, 2 H); 1.28 (m, 9 H); 0.98 (m, 3 H).
ES MS = 491.2 (M+1 ) Paso 9: Clorhidrato de (6S.10S)-6-etil-(4-fluorobencil)-3-hidrox¡-10-(met¡lamino)-4-oxo-6,719, 10-tetrahidro-4-pirimidof 1 ,2-1f 1 ,41oxazepina-2-carboxamida El ((6, 10)-6-etil-2-{[(4-fluorobencil)am¡no]carbon¡l}-3-h¡drox¡-4-oxo-6,7,9, 10-tetrahidro-4-p¡rimido[1 ,2-][1 ,4]oxazepin-10-il)metilcarbamato de (6S,10S)-terc-but¡lo (1.8 g, 3.67 mmol) se disolvió en HCI-dioxano (50 mi, 4 M). Después de 3 horas, la solución se concentró a presión reducida y después se destiló azeotrópicamente con metanol y tolueno. El producto en bruto se secó a alto vacío y se usó sin purificación en el siguiente paso: ES MS: m/z = 391.2 (M+1).
Paso 10: A/-((6S,10S)-6-Etil-2-([(4-fluorobencil)amino1carbonil)-3-h¡drox¡-4-oxo-67,9 0-tetrahidro-4-pirimidof1.2-1f1 ,4loxazepin-10-il)-/V,/V trimetiletanodiamida.
A una solución agitada de clorhidrato de (6S,10S)-6-etil-(4-fluorobencil)-3-hidroxi-10-(metilamino)-4-oxo-6, 7,9, 0-tetrahidro-4-p¡rimido[1 ,2-][1 ,4]oxazepina-2-carboxamida (200 mg, 0.46 mmol) y EDC (99 mg, 0.51 mmol) en diclorometano seco (5 mi) en una atmósfera de nitrógeno se le añadieron HOAT (70 mg, 0.51 mmol), ácido N,N-dimetiloxalámico (82 mg, 0.71 mmol) y N-met¡lmorfolina (155 µ?, 1.4 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y después se interrumpió con HCI 1 M (5 mi). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 20 mi). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto en bruto se purificó por HPLC de fase inversa (C18, Xterra) usando un gradiente de fase móvil de agua:acetonitrilo que contenía TFA al 0.1 % (acetonitrilo del 20 al 70% durante 30 minutos, 50 ml/minuto). La concentración dio el producto deseado en forma de un sólido amorfo de color blanco: 1H RMN (399 MHz, CDCI3): d 1 1.90 (s a, 1 H); 9.62 (t, J = 6.2 Hz, 1 H); 7.37 (dd, J = 8.4, 5.5 Hz, 2 H)¡ 6.98 (d, J = 8.6 Hz, 2 H)¡ 5.83 (m, 1 H); 4.63 (m, 1 H); 4.54 (d, J = 6.4 Hz, 2 H)¡ 4.43 (t, J = 10.4 Hz, 1 H); 4.21 (d, J = 3.3 Hz, 2 H)¡ 4.13 (dd, J = 1 1.8, 2.8 Hz, 1 H); 3.07 (s, 3 H); 3.02 (s, 3 H); 2.84 (s, 3 H)¡ 2.07 (m, 1 H); 1.83 (m, 1 H); 1.14 (t, J = 7.3 Hz, 3 H).
HR MS: ESI = 490.2119 (M+1); calculado 490.2096 (M+1 ).
Cristalización de la Forma I del Compuesto 5A El Compuesto 5A amorfo, que puede obtenerse como se ha descrito anteriormente, disuelto en diclorometano se cambió de disolvente a isopropanol para proporcionar una mezcla que contenia aproximadamente 150-200 mg del Compuesto 5A por mi de isopropanol. Después, la mezcla se calentó a 60°C para formar una solución parda homogénea. Se permitió después que la solución caliente se enfriara a temperatura ambiente durante el tiempo en el que la solución forma una suspensión. La suspensión se filtró, los cristales resultantes se lavaron en primer lugar con una mezcla de isopropanol y n-heptano (1 : 1), después con n-heptano, y se secaron al vacio para proporcionar cristales de la Forma I del Compuesto 5A.
Caracterización Se generó un patrón de XRPD de la Forma I cristalina del Compuesto 5A en un Sistema de Difracción por rayos X Philips Analytical X'Pert PRO con consola PW3050/60 usando una exploración continua de 2 a 40 grados 2T. Se usó radiación de cobre Ka1 y como la fuente. El experimento se realizó en condiciones ambiente. Las posiciones de los picos de difracción se referenciaron con silicio que tiene un valor 2? de 28.443 grados. En la Figura 3 se muestra el patrón de XRPD, los valores 2? y los espaciados interplanares d correspondientes en el patrón de XRPD incluyen los siguientes: CUADRO 5A-1 La Forma I cristalina del Compuesto 5A se analizó con un calorímetro de exploración diferencial TA Instruments DSC 2920 a una velocidad de calentamiento de 10°C/minuto de 25°C a 350°C en un recipiente de aluminio cerrado en una atmósfera de nitrógeno. La curva de DSC mostró una endotermia con una temperatura inicial de 142°C y un pico de temperatura de 149°C. El cambio de entalpia fue de 52 J/g. Se cree que la endotermia se debe a la fusión.
El TGA del compuesto cristalino se realizó con un instrumento Perkin Elmer TGA 7 en una atmósfera de nitrógeno a una velocidad de calentamiento de 10°C/minuto de 25°C a 300°C. La curva de TG mostró una pérdida de peso del 0.3% en peso hasta 80°C y una segunda pérdida de 0.4% en peso hasta 174°C debido a la pérdida de isopropanol en el fundido.
Los resultados de DSC y TGA indicaban que la Forma I cristalina es anhidra.
Cristalización de la Forma II del Compuesto 5A El Compuesto 5A amorfo obtenido como se ha descrito anteriormente se disolvió de nuevo en cloruro de metileno y se repartió con agua ajusta a un pH de 3 con NaHC03. La capa acuosa se extrajo 3 veces con cloruro de metileno. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El sólido obtenido se disolvió en isopropanol caliente a una concentración de 70 mg/ml. La solución caliente se dejó enfriar lentamente a temperatura ambiente, tiempo durante el cual cristalizaron agujas finas en la solución. La mezcla de cristalización enfriada se dejó madurar durante una noche y el compuesto cristalino se aisló por filtración, se lavó con isopropanol, y se secó al vacío.
Caracterización. Se generó un patrón de XRPD de la Forma II cristalina del Compuesto 5A en un Sistema de Difracción por rayos X Philips Analytical X'Pert PRO con consola PW3050/60 usando una exploración continua de 2 a 40 grados 2T. Se usó radiación de cobre Ka1 y Ka2 como la fuente. El experimento se realizó en condiciones ambiente. Las posiciones de los picos de difracción se referenciaron con silicio que tiene un valor 2T de 28.443 grados. En la Figura 4 se muestra el patrón de XRPD, los valores 2T y los espaciados interplanares d correspondientes en el patrón de XRPD incluyen los siguientes: CUADRO 5A-2 La Forma II cristalina se analizó con un calorímetro de exploración diferencial TA Instruments DSC 2920 a una velocidad de calentamiento de 10°C/minuto de 25°C a 250°C en un recipiente de aluminio cerrado en una atmósfera de nitrógeno. La curva de DSC mostró una endotermia con una temperatura inicial de 149°C y un pico de temperatura de 155°C. El cambio de entalpia fue de 73 J/g. Se cree que la endotermia se debe a la fusión.
El TGA del compuesto cristalino se realizó con un instrumento Perkin Elmer TGA 7 en una atmósfera de nitrógeno a una velocidad de calentamiento de 10°C/minuto de 25°C a 300°C. La curva de TG mostró una pérdida de peso del 0.1 % en peso hasta 126°C y una segunda pérdida de peso de 0.1 % en peso hasta 171°C debido a la pérdida de isopropanol en el fundido.
Los resultados de DSC y TGA indicaban que la Forma II cristalina es anhidra.
EJEMPLO 5-2 A/-((6S.10R -6-etil-2-(r(4-fluorobencil)amino1carbonil)-3-hidroxi-4-oxo- 6J.9.10-tetrahidro-4H-pirimidori.2-diri.41oxazepin-10-il)-/V./V'.A/'- trimetiletanodiamida (Compuesto 5B) (5B) Siguiendo el procedimiento que se ha descrito en el Ejemplo 5-1 , Pasos 9 y 10, el uso del isómero ((6,10)-6-etil-2-{[(4-fluorobenci aminojcarbonilJ-S-hidrox -oxo-e ^ O-tetrahidro^-pirimidol ^!-][1 ,4]oxazepin-10-il)metilcarbamato de (6S, 10R)-terc-butilo del Ejemplo 5-1 , Paso 8 dio A/-((6S,10R)-6-etil-2-{[(4-fluorobencil)amino]carbonil}-3-hidroxi-4-oxo-ej.g.lO-tetrahidro^H-pirimidotl ^-djll ^joxazepin-IO-i -A/./V^A/'-trimetiletanodiamida: 1H RMN (399 MHz, CDCI3): d 11.90 (s a, 1 H); 9.82-9.55 (m, 1 H); 7.38 (dd, J = 8.4, 5.5 Hz, 2 H); 6.98 (t, J = 8.7 Hz, 2 H); 5.82-5.43 (m, 2 H); 4.62-4.20 (m, 4 H); 3.78-3.52 (m, 2 H); 3.06 (s, 3 H); 3.01 (s, 3 H)¡ 2.87 (m, 3 H)¡ 2.13-1.80 (m, 2 H); 0.99 (t, J = 7.5 Hz, 3 H).
HR MS: ESI = 490.2119 (M+1); calculado 490.2096 (M+1).
EJEMPLO 5-2A Procedimiento alternativo para preparar los Compuestos 5A y 5B El producto en bruto obtenido en el Paso 8 del Ejemplo 5-1 no se separó en los diastereómeros individuales cis y trans, sino que se llevó a través de los Pasos 9 y 10 como se ha descrito en el Ejemplo 5-1 como una mezcla de diastereómeros. En el Paso 9, la mezcla se trató con HCI 4 N en dioxano como se ha descrito previamente. Después de la finalización de la reacción tal como se determinó por LC-MS, se le añadió éter, lo que causó la precipitación de un sólido de color pardo. Este sólido se recogió por filtración y se agitó en 2:1 de MeOH-agua. El sólido de color castaño no disuelto se recogió por filtración y se secó al vacío para proporcionar una mezcla 3:2 de los diastereómeros trans is. Después, este sólido se acopló con ácido N,N-dimetiloxámico usando el procedimiento del Paso 10. La mezcla del producto se separó en una columna ChiralPak AD usando etanol con TFA al 0.1 % como fase móvil. El primer pico en eluir fue el diastereómero trans (Compuesto 5B) y el segundo pico en eluir fue el diastereómero cis (Compuesto 5A).
EJEMPLO 5-3 A/-((6 ?,10 ?)-6-etil-2-(r(4-fluorobencil)amino1carbonil>-3-hidroxi-4-oxo- 6J.9 0-tetrahidro-4H-pirimidoM .2-diri ,41oxazepin-10-il)-A/.A/'.yV'- trimetiletanodiamida (Compuesto 5C) (5C) El isómero (6R.10R) se sintetizó partiendo de (S)-1 ,2-epoxibutano utilizando los procedimientos que se han descrito para el Ejemplo 5-1. El intermedio cis (6R, 10R) correspondiente del Paso 8 del Ejemplo 5-1 se elaboró adicionalmente como en los Pasos 9 y 10 y dio el producto deseado.
HR MS: ESI = 490.2107 (M+1 ); calculado 490.2096 (M+1 ).
EJEMPLO 5-4 A/-((6 10S)-6-etil-2-(i(4-fluorobencil)aminolcarbonil)-3-hidroxi-4-oxo- 6J.9 0-tetrahidro-4H-pirimidori .2-diri.41oxazepin-10-il)-jV.A '.A/'- trimetiletanodiamida (Compuesto 5D) (5D) El isómero (6 ?,10S) se sintetizó partiendo de (S)-1 ,2-epoxibutano utilizando el procedimiento que se ha descrito para el Ejemplo 5-1. El correspondiente intermedio trans {QR, 0S) del Paso 8 del Ejemplo 5-1 se elaboró adicionalmente como en los Pasos 9 y 10 y dio el producto deseado.
HR MS: ESI = 490.2112 (M+1); calculado 490.2096 (M+1 ).
EJEMPLO 6-1 A/-etil-A -((7S,10 ?)-2-(r(4-fluorobencil)amino1carbonil)-3-hidroxi-7-metoxi- 4-oxo-4,6, 7, 8,9,10-hexahidropirimidof1,2-a1azepin-10-il)-/ ,A - dimetiletanodiamida (Compuesto 6A) Paso 1 : (2S)-1-(benciloxi)hex-5-en-2-ol A una solución de (2S)-2-[(benciloxi)metil]oxirano (50 g, 305 mmol) en THF (1500 mi) a 0°C se le añadió bromuro de cobre (4.37 g, 30.5 mmol). La solución resultante se agitó a 0°C durante 10 minutos y se le añadió bromuro de alilmagnesio (1 M en THF, 335 mi, 335 mmol). La reacción se agitó durante 2 horas a 0°C y después se interrumpió a 0°C con NH4CI acuoso saturado y se diluyó con DCM. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos y se filtró para retirar la materia insoluble. El filtrado se extrajo con DCM (3 x) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgS04l se filtraron y se concentraron al vacío. La cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc del 10 al 40%/hexanos proporcionó (2S)-1-(benciloxi)hex-5-en-2-ol.
H RMN (400 MHz, CDCI2): d 7.37-7.26 (m, 5 H); 5.88-5.74 (m, 1 H)¡ 5.08-4.93 (m, 2 H)¡ 4.54 (s, 2 H)¡ 3.83 (s, 2 H); 3.53-3.44 (m, 1 H)¡ 3.33 (dd, J = 9.1 , 8.2 Hz, 1 H); 2.49 (s, 1 H); 2.30-2.00 (m, 2 H); 1.64-1.39 (m, 2 H).
Paso 2: (([(2S)-2-metoxihex-5-en-1-illoxi)metil)benceno A una solución agitada de (2S)-1-(benciloxi)hex-5-en-2-ol (71 g, 344 mmol) en DMF (500 mi) a 0°C se le añadió en porciones hidruro sódico (16.52 g, 413 mmol) durante 30 minutos. La suspensión resultante se agitó a 0°C durante 15 minutos y después a temperatura ambiente durante 15 minutos. La mezcla se enfrió a 0°C y se añadió yoduro de metilo (43 mi, 688 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se enfrió a 0°C y se interrumpió con agua. La mezcla se extrajo con DCM (3 x). Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con agua (2 x), se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo en bruto se usó en la siguiente reacción sin purificación adicional. 1H RMN (400 MHz, CDCI2): d 7.34 (s, 5 H); 5.85-5.74 (m, 1 H); 5.06-4.89 (m, 2 H); 4.55 (s, 2 H); 3.49 (d, J = 4.7 Hz, 2 H); 3.41 (s, 3 H); 3.37 (m, 1 H); 2.16-2.04 (m, 2 H).
Paso 3: (4S)-5-(benciloxi)-4-metoxipentanal Se dispersó una corriente de ozono en una solución agitada fría (T inicial = -78°C) de ({[(2S)-2-metoxihex-5-en-1-il]oxi}metil)benceno (40 g, 182 mmol) en diclorometano (1800 mi) hasta que persitió un color azul. La solución se purgó con nitrógeno hasta que se obtuvo una solución incolora transparente. Se añadieron sulfuro de dimetilo (67.2 mi, 908 mmol) y trietilamina (76 mi, 545 mmol). La mezcla agitada se dejó calentar a temperatura ambiente durante 60 minutos. (Un ensayo para peróxido con papel de yodo de almidón fue negativo). La mezcla se concentró a presión reducida para proporcionar el producto del título en bruto que se usó en el siguiente paso sin purificación.
Paso 4: [(4S)-5-(benciloxi)-1-ciano-4-metoxipentilletilcarbamato de tere-butilo A una solución de (4S)-5-(benciloxi)-4-metoxipentanal (109 g, 490 mmol) en dioxano (500 mi) a temperatura ambiente se le añadieron EtNH2 HCI (60 g, 736 mmol), NaCN (36 g, 736 mmol) y H2O (500 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 2 días, después se diluyó con NaHC03 acuoso saturado y se extrajo con EtOAc (3 x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. A una solución del residuo en bruto en EtOAc (500 ml) se le añadió (Boc)2O (107 g, 492 mmol). La mezcla resultante se agitó a 40°C durante 2 días. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (3 x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. La cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc del 10 al 40% en hexanos proporcionó [(4S)-5-(benciloxi)-1 -ciano-4-metoxipentil]etilcarbamato de tere-butilo.
LC-MS: 377.4 (M+1 ).
Paso 5: 4S)-5-(benciloxi)-1-[(hidroxiamino)(imino)metill-4-metoxipentiDetilcarbamato de tere-butilo A una solución de [(4S)-5-(benciloxi)-1-ciano-4-metoxipentiljetilcarbamato de tere-butilo (74 g, 197 mmol) en EtOH (1000 ml) se le añadieron TEA (54.8 ml, 393 mmol) y NH2OH (al 50% en agua, 14.45 ml, 236 mmol). La solución resultante se agitó a 40°C durante una noche y después se concentró al vacío. El residuo se disolvió en MeOH y el disolvente se retiró a presión reducida (3 x) para retirar el agua. El residuo en bruto se usó en la siguiente reacción sin purificación adicional.
LC-MS: 410.5 (M+1).
Paso 6: 2-((4S)-5-(Benciloxi)-1-f(terc-butoxicarbonil)(etil)amino1-4-metoxipentil)-5-hidroxi-6-oxo-1 ,6-dihidropirimidina-4-carboxilato de metilo A una solución de {(4S)-5-(benciloxi)-1-[(hidroxiamino)(imino)metil]-4-metoxipentil}etilcarbamato de tere-butilo (72.6 g, 177 mmol) en MeOH (1773 mi) a 0°C se le añadió acetilendicarboxilato de dimetilo (26.3 mi, 213 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche y después se concentró al vacío. El residuo se disolvió en tolueno y se concentró al vacío (3 x) para retirar el MeOH. El producto en bruto se usó en la siguiente reacción sin purificación adicional.
LC-MS: 553.5 (M+1 ).
Una solución del material en bruto del paso anterior (104 g, 189 mmol) en o-xileno (500 mi) se calentó a reflujo durante 11 horas, después se enfrió y se concentró al vacío. El residuo en bruto se usó en el siguiente paso sin purificación adicional.
LC-MS: 520.5 (M+1).
Paso 7: 2-((4S)-1 -f (rerc-Butoxicarbonil)(etil)amino1-5-h¡droxi-4- metoxipentil)-5-hidroxi-6-oxo-1 ,6-dihidropirimid¡na-4-carboxilato de metilo A una solución de 2-{(4S)-5-(benciloxi)-1-[(íerc- butoxicarbonil)(etil)amino]-4-metoxipentil}-5-hidroxi-6-oxo-1 ,6- dihidropirimidina-4-carboxilato de metilo (13 g, 25.02 mmol) en EtOAc (30 mi) y MeOH (30 mi) se le añadieron ácido acético (20 mi) y paladio sobre carbono (Degussa, 10% en masa, 13 g, 122 mmol). La mezcla de reacción se agitó en un aparato hidrogenador Parr en una atmósfera de gas hidrógeno (0.34 MPa) durante 4 días y después se filtró a través de una capa de celite. La torta de filtro se lavó con MeOH. El filtrado se concentró al vacío. El residuo en bruto se usó en la siguiente reacción sin purificación adicional.
LC-MS: 429.89 (M+1 ).
Paso 8: Etil[(4S)-1 -(4-{[(4-fluorobencil)aminolcarbonil)-5-hidroxi-6-OXO-1 ,6-dihidropirimidin-2-il)-5-hidroxi-4-metoxipentil1carbamato de rere-butilo A una solución de 2-{(4S)-1-[(ferc-butoxicarbonil)(etil)amino]-5-hidroxi-4-metoxipentil}-5-hidroxi-6-oxo-1 ,6-dihidropirimidina-4-carboxilato de metilo (48 g, 112 mmol) en MeOH (11 18 mi) se le añadieron 4-fluoro-bencilamina (28 g, 224 mmol) y trietilamina (31.2 mi, 224 mmol). La mezcla resultante se cerró herméticamente y se calentó a 80°C durante una noche. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con ácido cítrico al 10% (-100 mi) y se extrajo con DCM (3 x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo en bruto se disolvió en acetonitrilo y se concentró a presión reducida (3 x) para retirar el MeOH. El residuo se secó a alto vacío durante 2 días y se usó en la siguiente reacción sin purificación.
LC-MS: 523.5 (M+1).
Paso 9: Dimetanosulfonato de 2-{(4S)-1-[(terc- butoxicarbonil)(et¡l)aminol-4-metoxi-5-[(metilsulfonil)oxi]pentil)-6-(f(4- fluorobencil)aminolcarbonil)pirimidina-4,5-diilo A una solución agitada de etil[(4S)-1-(4-{[(4- fluorobencil)amino]carbonil}-5-hidroxi-6-oxo-1 ,6-dihidropirimidin-2-il)-5-h 4-metoxipentil]carbamato de tere-butilo (30 g, 57.4 mmol) en AcCN (500 mi) a 0°C se le añadió TEA (48 mi, 344 mmol) seguido de la adición gota a gota de una solución de MsCI (22.37 mi, 287 mmol) en DCM (15 mi). La mezcla resultante se agitó a 0°C durante 30 minutos, después se diluyó con H20 (-100 mi) y se extrajo con EtOAc (3 x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron al vacio. El residuo en bruto se usó en el siguiente paso sin purificación adicional.
LC-MS: 757.5 (M+1).
Paso 10; Metanosulfonato de (7S)-10-[(terc-butoxicarbonil)(etil)aminol-2-([(4-fluorobencil)aminolcarbonilV7-metoxi-4-oxo-4, 6.7.8, 9.10-hexahidropirimidoí 1.2-alazepin-3-ilo A una solución del trismesilato del paso anterior (21.8 g, 28.8 mmol) en DMF (288 mi) se le añadió Cs2C03 (28.2 g, 86 mmol). La mezcla de reacción agitada se calentó a 100°C durante 1 hora, después se enfrió a 0°C, se añadió MsCI (6.73 mi, 86 mmol) y la mezcla se agitó a 0°C durante 20 minutos. La mezcla se diluyó con DCM y el material insoluble se retiró por filtración. El filtrado se concentró al vacío. El residuo se diluyó con agua y se extrajo con DCM (3 x). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron al vacío. Cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc del 30 al 70% en hexanos.
El primer pico en eluir: fue el isómero 7,10-trans: metanosulfonato de (7S,10S)-10-[(ferc-butoxicarbonil)(etil)amino]-2-{[(4-fluorobencil)amino]carbonil}-7-metoxi-4-oxo-4,6,7,8,9, 10-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepin-3-ilo (1.5 g), 1H RMN (599 MHz, DMSO, 50°C): d 8.34 (t, J = 6.1 Hz, 1 H); 7.35 (dd, J = 8.3, 5.5 Hz, 2 H); 7.13 (t, J = 8.7 Hz, 2 H); 5.17 (d, J = 10.0 Hz, 1 H); 4.96 (d, J = 14.0 Hz, 1 H); 4.50-4.35 (m, 2 H); 3.72-3.61 (m, 1 H); 3.49 (s, 3 H); 3.60-3,10 (m, 1 H); 3.22 (s, 3 H); 3.19-3.07 (m, 2 H); 2.09 (d, J = 11.3 Hz, 2 H); 2.02-1.93 (m, 1 H); 1.91-1.82 (m, 1 H); 1.27 (s, 9 H); 1.13-1.04 (m, 3 H).
El segundo pico en eluir fue el isómero 7, 0-cis: metanosulfonato de (7S,10f?)-10-[(íerc-butoxicarbonil)(etil)amino]-2-{[(4-fluorobencil)amino]carbonil}-7-metoxi-4-oxo-4,6,7,8,9, 10-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepin-3-ilo (935 mg).
H RMN (599 MHz, DMSO, 50°C): d 8.44 (t, J = 6.1 Hz, 1 H); 7.35-7.29 (m, 2 H); 7.13-7.04 (m, 2 H); 5.23 (dd, J = 15.0, 5.7 Hz, 1 H); 4.46-4.39 (m, 1 H); 4.35 (dd, J = 15.1 , 5.9 Hz, 1 H); 3.79 (d, J = 14.9 Hz, 1 H); 3.70-3.63 (m, 1 H); 3.43 (s, 3 H); 3.33-3.28 (m, 1 H); 3.18 (s, 3 H); 3.13-3.08 (m, 1 H); 1.98-1.85 (m, 3 H); 1.23 (s, 9 H); 1.10-1.04 (m, 3 H).
Paso 11 : Metanosulfonato de (7S,10 ?)-10-(etilamino)-2-(r(4-fluorobenciQaminolcarboniD^-metox -oxo^.ej.S.g, 10-hexahidropirimido[1 ,2-alazepin-3-ilo En una solución agitada del segundo componente de elución del paso anterior, metanosulfonato de (7S, 10R)-10-[(fere- butoxicarbon¡l)(et¡l)amino]-2-{[(4-fluorobencil)am¡no]carbon¡l}-7-metoxi-4-oxo-4,6,7,8,9,10-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepin-3-ilo (9 g, 15.45 mmol) en EtOAc (154 mi) a 0°C se burbujeó HCI (g) durante 5 minutos. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos y se concentró al vacio. El residuo se diluyó con NaHC03 acuoso saturado y se extrajo con DCM (3 x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04l se filtraron y se concentraron al vacío. La cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con MeOH del 0 al 7% en DCM proporcionó metanosulfonato de (7S,10/?)-10-(etilamino)-2-{[(4-fluorobencil)amino]carbonil}-7-metoxi-4-oxo-4,6,7,8,9,10-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepin-3-ilo.
LC-MS: 483.4 (M+1 ).
H RMN (599 MHz, CDCI3): d 7.84 (s, 1 H); 7.32 (dd, J = 13.0, 6.9 Hz, 2 H); 7.03 (t, J = 8.6 Hz, 2 H)¡ 5.26 (dd, J = 14.3, 6.9 Hz, 1 H); 4.62 (dd, J = 14.9, 6.3 Hz, 1 H); 4.52 (dd, J = 14.9, 5.6 Hz, 1 H); 4.00 (d, J = 14.3 Hz, 1 H); 3.81 (d, J = 8.1 Hz, 1 H); 3.54 (s, 3H); 3.46 (d, J = 7.8 Hz, 1 H); 3.35 (s, 3 H); 2.59 (c, J = 7.1 Hz, 2 H); 2.1 1-2.03 (m, 1 H)¡ 1.95-1.83 (m, 3H); 1.04 (t, J = 7.1 Hz, 3 H).
Paso 12: Metanosulfonato de (7S.10f?)-10-[[(dimetilamino)(oxo)acetill(etil)aminol-2-([(4-fluorob metox¡-4-oxo-4,6,7,8,9,10-hexahidropirimido[1 ,2-a1azepin-3-ilo A una solución del metanosulfonato de (7S,10f?)-10-(etilamino)- 2-{[(4-fluorobenc¡l)amino]carbonil}-7-metoxi-4-oxo-4,6,7,8,9,10-hexah¡drop¡rimido[1 ,2-a]azepin-3-ilo (4.8 g, 9.99 mmol) en DC (100 mi) a temperatura ambiente se le añadieron TEA (8.35 mi, 59.9 mmol), ácido N,N-dimetiloxámico (2.34 g, 19.98 mmol), EDC (5.74 g, 30 mmol) y HOAt (4.62 g, 30 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche, después se diluyó con H20 y se extrajo con DCM (3 x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron al vacío. A una solución del material en bruto (8 g, 15.89 mmol) en ACN (159 mi) a 0°C se le añadieron gota a gota TEA (6.64 mi, 47.7 mmol) y MsCI (3.64 g, 31.8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 20 min, después se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (3 x). Los extractos orgánicos combinados se concentraron al vacío y el residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con MeOH del 0 al 7% en DCM para proporcionar metanosulfonato de (7S, 10R)-10-[[(dimetilamino)(oxo)acetil](etil)amino]-2-{[(4-fluorobencil)amino]carbonil}-7-metoxi-4-oxo-4,6,7,8,9, 10-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepin-3-ilo, LC-MS: 582.5 (M+1 ).
Paso 13: A/-etil-/V-((7S, 10/?)-2-(r(4-fluorobencil)amino1carbonilV 3-hidroxi-7-metoxi-4-oxo-4,6,7,8,9, 10-hexahidropirimidof 1 ,2-a1azepin-1 ?-?ß-? ?/1-dimetiletanodiamida (Compuesto 6A) A una solución agitada de metanosulfonato de (7S,10R)-10-[[(dimetilamino)(oxo)acetil](etil)amino]-2-{[(4-fluorobencil)amino]carbonil}-7-metoxi-4-oxo-4,6,7,8,9,10-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepin-3-ilo (1 g, 1.72 mmol) en 2-propanol (17 mi) se le añadió NaOH 2 M (2.58 mi, 5.16 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, se interrumpió con HCI (1 M, 5.16 mi, 5.16 mmol) y se extrajo con EtOAc (3 x). Se realizaron tres reacciones paralelas adicionales. Las capas orgánicas combinadas de las cuatro reacciones se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por HPLC de fase inversa (columna C18 Sunfire) usando un gradiente de fase móvil de agua/acetonitrilo que contenía TFA al 0.5% o por precipitación en agua para proporcionar N-et¡l-/V-((7S, 10f?)-2-{[(4-fluorobencil)amino]carbonil}-3-hidroxi-7-metoxi-4-oxo-4,6,7,8,9, 10-hexahidropirimido[1 ,2-a]azepin-10-i -A/'./V-dimetiletanodiamida.
LC-MS: 504.5 (M+1). 1H RMN (599 MHz, DMSO, 50°C): d 11.89 (s, 1 H); 9.45 (s, 1 H); 7.37-7.30 (m, 2 H); 7.14-7.08 (m, 2 H); 5.22 (dd, J = 15.0, 5.4 Hz, 1 H); 4.93 (s a, 1 H); 4.50-4.42 (m, 2 H); 3.71-3.66 (m, 2 H); 2.92 (s, 3 H); 2.88 (s, 3 H); 2.05-1.99 (m, 1 H); 1.97-1.86 (m, 2 H); 1.08 (t, J = 7.1 Hz, 3 H).
LC-MS: HRMS: calculado: 504.2253, encontrado: 504.2273.
Recristalización del Compuesto 6A El material oleoso residual obtenido concentrando las fases orgánicas de la manera descrita en el Paso 13 justo anterior (es decir, antes de la purificación por HPLC de fase inversa) se disolvió en la cantidad mínima de metanol anhidro templado. La solución resultante se puso en el congelador y se mantuvo a -10°C durante varios días, y después se permitió que se calentara lentamente a temperatura ambiente. Las agujas cristalinas fijas obtenidas de esta manera se aislaron por filtración, se lavaron con metanol anhidro, y se secaron al vacío.
Caracterización. Se generó un patrón de XRPD del Compuesto 6A cristalino en un Sistema de Difracción por rayos X Philips Analytical X'Pert PRO con consola PW3050/60 usando una exploración continua de 4 a 40 grados 2T. Se usó radicación de cobre Ka1 y Ko2 como la fuente. El experimento se realizó en condiciones ambiente. Las posiciones de los picos de difracción se referenciaron con silicio que tiene un valor 2T de 28.443 grados. En la Figura 5 se muestra el patrón de XRPD, los valores 2T y los espaciados interplanares d correspondientes en el patrón de XRPD incluyen los siguientes: CUADRO 6A El Compuesto 6A cristalino se analizó también con un calorímetro de exploración diferencial TA Instruments DSC Q 1000 a una velocidad de calentamiento de 10°C/minuto de 25°C a 350°C en un recipiente de aluminio abierto en una atmósfera de nitrógeno. La curva de DSC mostró una endotermia con una temperatura inicial de 170°C y un pico de temperatura de 173°C. El cambio de entalpia fue de 84 J/g. Se cree que la endotermia se debe a la fusión.
El TGA del compuesto cristalino se realizó con un aparato TA Instruments TGA Q 500 en una atmósfera de nitrógeno a una velocidad de calentamiento de 10°C/minuto de 25°C a 350°C. La curva de TG mostró una pérdida de peso del 0.05% en peso hasta 100°C lo que indicaba la ausencia de agua de hidratación y de disolvente de solvatación.
EJEMPLO 6-2 A/-etil-A/-((7S,10S)-2-(r(4-fluorobencinamino1carbonil)-3-hidroxi-7-metoxi- 4-oxo-4.6,7,8.9,10-hexahidropir¡midon,2-a1azepin-10-il)-/V',A/'- dimetiletanodiamida (Compuesto 6B) El compuesto del titulo se preparó a partir del primer pico en eluir del Paso 10 del Ejemplo 6-1 usando los procedimientos dados en los Pasos 1 1-13 del Ejemplo 6-1. 1H RMN (599 MHz, DMSO, 50°C): d 12.45-1 1.65 (m, 1 H); 9.47 (s, 1 H); 7.39-7.31 (m, 2 H); 7.18-7.09 (m, 2 H); 5.05 (s a, 1 H)¡ 4.94 (d, J = 13.9 Hz, 1 H); 4.51-4.42 (m, 2 H); 3.58 (dd, J = 16.6, 11.1 Hz, 1 H); 3.44-3.26 (s, 3 H); 3.34-3.26 (m, 3 H); 3.19 (t, J = 9.7 Hz, 1 H); 2.95 (s, 3 H); 2.91 (s, 3 H); 2.30 (d, J = 13.7 Hz, 1 H); 2.23-2.18 (m, 1 H); 2.1 1 (d, J = 13.3 Hz, 1 H); 1.85-1.77 (m, 1 H); 1.10 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
LC-MS: HRMS: calculado: 504.2253, encontrado: 504.2271.
EJEMPLO 7 Ensayo de la Integrasa del VIH: Transferencia de Cadena Catalizada por la Integrasa Recombinante Se condujeron ensayos para determinar la actividad de transferencia de cadena de la integrasa de acuerdo con el documento WO 02/30930 de la integrasa recombinante. Compuestos representativos de la presente invención muestran inhibición de actividad de transferencia de cadena en este ensayo. Por ejemplo, los compuestos preparados en los Ejemplos 1 a 5 se ensayaron en el ensayo de la integrasa y se observó que tenían los valores de CI50 del cuadro B. (Los compuestos 6A y 6B no se ensayaron en este ensayo.) CUADRO B En Wolfe, A. L. et al., J. Virol. 1996, 70: 1424-1432, Hazuda et al., J. Virol. 1997, 71 : 7005-7011 ; Hazuda et al., Drug Design and Discovery 1997, 15: 17-24; y Hazuda et al., Science 2000, 287: 646-650 se encuentra descripción adicional para conducir el ensayo usando complejos pre-ensamblados.
EJEMPLO 8 Ensayo para la inhibición de la replicación del VIH Se condujeron ensayos para determinar la inhibición de una infección aguda del VIH en células linfoides T de acuerdo con Vacca, J. P. et al., Proc. Nati. Acad. Sci. EE.UU. 1994, 91 : 4096. Compuestos representativos de la presente invención muestran inhibición de la replicación del VIH en este ensayo (denominado también en este documento el "ensayo de proliferación"). Por ejemplo, los compuestos de los Ejemplos 1 a 6 se probaron en este ensayo y se observó que tenían los valores de CI95 del cuadro C.
CUADRO C Compuesto Cl95 (nM) en presencia de FBS al 10% isómero 1A - 10R 12 isómero 1 B - 10S 10 isómero trans 2A 14 isómero trans 2B 9 isómero cis 2C 9 isómero cis 2D 14 isómero trans racémico 3A 18 isómero cis 3B 41 isómero cis 4 - 6S, 10S 10 isómero trans 4B - 6S.10R 7 isómero cis 4C - 6R, 10R 10 isómero trans 4D - 6R.10S 6 isómero cis 5A - 6S.10S 12 isómero trans 5B - 6S.10R 10 isómero cis 5C - 6R.10R 14 isómero trans 5D - 6R.10S 20 isómero cis 6A - 7S, 10R 12 isómero trans 6B - 7S.10S 14 EJEMPLO 9 Ensayo de la inhibición de la replicación del virus VIH mutante de la integrasa Se condujo un ensayo para medir la inhibición de una infección aguda del VIH en células HeLa P4-2 en un ensayo de infectividad de ciclo único usando métodos descritos en Joyce et al., J. Biol. Chem. 2002, 277: 45811 , Hazuda et al., Science 2000, 287: 646 y Kimpton et al, J. Virol. 1992, 66: 2232. Se generaron plásmidos provirales que codifican virus que contienen mutaciones específicas en el gen de la integrasa (N155H, Q148R, Y143R, E92Q o G140S/Q148H) mediante mutagénesis dirigida y se produjeron virus transfectando células 293T con los plásmidos provirales apropiados. Compuestos representativos de la presente invención muestran inhibición de replicación del VIH en los ensayos de mutante. Por ejemplo, se observó que los compuestos de los Ejemplos 1 a 6 tenían los valores de CI50 en estos ensayos mostrados en el cuadro D.
CUADRO D 1 . Un número "k" en las columnas 3-7 en el cuadro donde k >1 significa que el compuesto es k- veces menos potente frente a! mutante en comparación con su potencia frente a! tipo silvestre, es decir, Cl50(mutante)/Cl50(tipo silvestre). 2. El compuesto V es (+) /V-(2-{[(4-fluorobencil)amino]carbonil}-3-hidroxi-4-oxo-6,7,9,10-tetrahidro-4h-pirimido[1 ,2-d][1 ,4]oxazepi^ (Compuesto 180 en el documento WO 2006/103399). 3. El compuesto W es (-)/\/-(2-{[(4-fluorobencil)amino]carbonil}-3-hidroxi-4-oxo-6,7,9,10-tetrahidro-4h-pirimido[1 ,2-c(][1 ,4]oxazepin-10-il)-A/,A/',/V'-trimetiletanodi (Compuesto 181 en el documento WO 2006/103399). 4. El compuesto X es raltegravir (Ejemplo 19 en el documento US 7169780). 5. El compuesto Y es (-)A/-(2-{[(4-fluorobencil)amino]carbonil}-3-hidroxi-4-oxo-4,6,7,8,9,10-hexahidropirimidofl ^-ajazepin-I O-i -^/V^/V-trimetiletanodiamida (Ejemplo 12 en el documento US 7414045). 6. El compuesto Z es /V-[(4-fluorofenil)metil]-3-hidroxi-9,9-dimetil-4-oxo-4,6,7,9-tetrahidro-6H-pirimido[2,1-c][1 ,4]oxazina-2-carboxamida (compuesto ilustrado en el documento WO 2007/064502 A1).
EJEMPLO 10 Citotoxicidad Se determinó la citotoxicidad mediante examen microscópico de las células en cada pocilio en el ensayo de proliferación, en el que un analista cualificado observó cada cultivo para determinar cualquiera de los siguientes cambios morfológicos en comparación con los cultivos de control: desequilibrio de pH, anormalidad celular, citostático, citopático o cristalización (es decir, el compuesto no es soluble o forma cristales en el pocilio). El valor de toxicidad asignado a un compuesto dado es la concentración más baja del compuesto a la que se observa uno de los cambios anteriores. Los compuestos representativos de la presente invención que se ensayaron en el ensayo de proliferación (véase el Ejemplo 8) se examinaron para determinar citotoxicidad hasta una concentración de 0.5 micromolar y no se mostró citotoxicidad. En particular, los compuestos expuestos en los Ejemplos 1 a 6 no mostraron citotoxicidad a concentraciones hasta 0.5 micromolar.
EJEMPLO 11 Preparación del Compuesto 4A Paso 1 : Reacción de Propargilación En un recipiente de 100 mi equipado con termopar, flujo de nitrógeno, baño de refrigeración y agitador situado en la parte superior se cargaron t-BuOK sólido (7.40 kg, 65.9 mol) y THF (44 I). La suspensión se agitó a temperatura ambiente hasta que todos los sólidos se disolvieron. La solución se enfrió a aproximadamente -20°C usando un baño de acetona/hielo seco. Se añadió lentamente solcetal (9.58 kg, 72.5 mol) mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de -10°C. Después de que la mezcla de reacción se dejara madurar durante 45 minutos a aproximadamente -20°C, se añadió lentamente bromuro de propargilo (7.31 I, solución al 80% en tolueno) durante 190 minutos mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de -10°C. Después de la adición del bromuro de propargilo, la mezcla de reacción se dejó madurar a aproximadamente -25°C durante 1 hora. Después, la acetona se drenó en el baño y la mezcla de reacción se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se completó después de que se dejara madurar durante una noche a temperatura ambiente según se determinó mediante análisis por TLC y GC. A la mezcla de reacción se le añadieron agua (24.5 I) y NaHCO3 acuoso saturado (24.5 I). La solución se transfirió a un reactor de 170 I y se extrajo con acetato de etilo (2 x 24.5 I). La capa orgánica combinada se lavó con más cantidad de agua (2 x 24.5 I) y salmuera (1 x 24.5 I; nota: la separación de fases fue lenta con los lavados de agua así que se usó más cantidad de salmuera (8.0 I) con cada lavado para acelerar la separación de las fases). La solución se concentró al vacío para proporcionar el producto propargilado deseado en forma de un aceite en bruto. El material se usó en el siguiente paso sin purificación adicional.
Paso 2: Desprotección de solcetal En un recipiente de 100 mi equipado con termopar, flujo de nitrógeno y agitador situado en la parte superior se cargaron el compuesto propargilado en bruto del Paso 1 (10.7 kg), MTBE (10.7 I), agua (32.1 I) y HCI 5.0 N (1.26 I). La reacción se completó después de un periodo de maduración de 6 horas a temperatura ambiente según se determinó mediante análisis por GC y TLC (EtOAc al 30%/hexano). Después de que se completara la reacción, se añadió más cantidad de MTBE (16.1 I) para un total de 26.8 I. Después de un periodo de maduración de 1 hora a temperatura ambiente, la solución se transfirió a un extractor de 100 I y las capas se separaron. La capa orgánica se extrajo con más cantidad de agua (1 x 32.1 I). El pH de la capa acuosa combinada se ajustó de pH = 1.2 a pH = 6.9 usando K3P04 sólido (1.0 kg). El rendimiento del ensayo por GC del diol deseado fue de 6.96 kg (85%).
Paso 3: Formación de Aldehido En un recipiente de 100 mi equipado con un termopar, entrada de nitrógeno, baño de refrigeración y agitador situado en la parte superior se cargaron una solución acuosa (pH ~ 7) del diol (3.42 kg, 26.3 mol) preparado en el Paso 2. La solución se enfrió a aproximadamente 10°C y a la solución fría se le añadió en cuatro porciones Nal04 (8.43 kg, 39.4 mol). Después de la adición de Nal04> la mezcla de reacción se calentó lentamente a temperatura ambiente. La reacción se completó después de 2 horas a temperatura ambiente según se determinó mediante análisis por TLC (EtOAc al 30%/hexano) y GC (< 1 % en A del diol de partida). Antes de la filtración, la suspensión se enfrió a aproximadamente 5°C y se dejó madurar durante 1 hora. La suspensión se filtró y la torta se aclaró con agua (1 x 3.4 I). La solución resultante del aldehido se usó directamente en el siguiente paso.
Paso 4: Formación de Cianohidrina En un recipiente de 100 I equipado con termopar, entrada de nitrógeno, baño de refrigeración, dos embudos de adición y agitador situado en la parte superior, se cargó una solución acuosa (pH ~ 4) del aldehido (2.25 kg, 22.94 mol) del Paso 3 y la solución se enfrió a aproximadamente 6°C. A la solución fría se le añadieron simultáneamente ácido acético (2.76 I, 48.2 mol) y 8.0 I de una solución acuosa de KCN (2.99 kg, 45.9 mol) mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de 15°C. Después de la adición de ácido acético y una solución acuosa de KCN, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se dejó madurar. La reacción se completó después de un periodo de maduración de 1 hora a temperatura ambiente según se determinó mediante análisis por TLC (EtOAc al 50%/hexano) y GC (1 % en A del aldehido de partida). La mezcla de reacción se enfrió a aproximadamente 10°C y se inactivo lentamente con NaHCC>3 saturado (1 1.5 I). Después de la adición, la extracción se calentó a temperatura ambiente y se dejó madurar durante 1 hora. La solución se transfirió a un extractor de 100 I y se extrajo con acetato de etilo (2 x 12 I). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera al 25% (6 x 12 I). La solución resultante de cianohidrina se usó directamente en el siguiente paso.
Paso 5: Reacción de Sililación En un recipiente de 100 I equipado con un termopar, baño de vapor y agitador situado en la parte superior, la solución de acetato de etilo de la cianohidrina del Paso 4 (cantidad teórica de cianohidrina de 2.87 kg asumiendo un rendimiento del 100% en el paso anterior) se concentró al vacío y se lavó abundantemente con más cantidad de acetato de etilo (54 I) hasta alcanzar un volumen final de 30 I. Después de la concentración, el baño de vapor se reemplazó por un baño de refrigeración y se acopló una entrada de nitrógeno. La solución se enfrió a aproximadamente 5°C y a la solución fría se le añadió en una porción TBS-CI (3.63 kg, 24.08 mol). Después, se añadió en dos porciones imidazol (observándose una exotermia de aproximadamente 8°C). La extracción se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se completó después de que se dejara madurar durante una noche a temperatura ambiente según se determinó mediante análisis por GC y TLC (EtOAc al 30%/hexano). La reacción se interrumpió lentamente con agua (6.0 I) y se transfirió a un extractor de 100 I. Se añadió más cantidad de agua (9.0 I) hasta un total de 15.0 I seguido de acetato de etilo (6.0 I). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con Na2C03 saturado (1 x 15 I) y agua (2 x 15 I). El sililoxi nitrilo deseado resultante se obtuvo con un rendimiento de ensayo 4.74 kg (85.8%) según se determinó mediante análisis por GC.
Se realizó una segunda extracción usando 2.95 kg de la cianohidrina para proporcionar el sililoxi nitrilo deseado con un rendimiento de ensayo de 4.79 kg (86.3%).
Paso 6: Preparación de Amidoxima Un matraz de 100 I se equipó con un agitador situado en la parte superior, un termopar, una línea de entrada con un filtro en linea y un concentrador de extracciones. Se cargó en su interior hidroxinitrilo sililado, en forma de una solución en acetato de etilo del paso anterior (37.1 mol; volumen total de 59.7 litros). Durante la concentración, se añadió metanol (60 I) y la extracción se concentró hasta alcanzar un volumen de aproximadamente 9 I (contenido de acetato de etilo de ~1.5% por RMN). Se añadió metanol (17.8 I). El concentrador de extracciones se retiró y se reemplazó por un condensador y una entrada de nitrógeno. Se añadió una solución de hidroxilamina (al 50% en agua, 2.96 I, 48.3 mol, 1.3 equiv.) durante 1 hora a una temperatura interna inicial de 18°C. Después de que se completara la adición, la temperatura de la reacción aumentó hasta 39°C. La agitación se continuó durante 30 minutos seguido de calentamiento durante 90 minutos a 50°C. La mezcla de reacción se transfirió a un extractor de 170 I que contenia MTBE (71 I) y agua (44 I).
Después de la repartición, la capa orgánica se lavó dos veces con agua (44 I cada vez). 1a pérdida acuosa = 0.29% (pH = 8), 2a pérdida acuosa = 0.07% (pH = 7), 3a pérdida acuosa = 0.08% (pH = 6). El rendimiento de ensayo del producto de amidoxima en la capa orgánica fue de 10.05 kg (99%), según se determinó mediante análisis por HPLC. La solución se usó directamente en la siguiente reacción.
Paso 7: Formación de Aducto de DMAD DABCO Xilenos -10°C En un recipiente de 100 I equipado con un termopar, baño de vapor y agitador situado en la parte superior se cargó la solución de amidoxima en MTBE (ensayo de 9.86 kg, 36.2 mol), se concentró al vacío y se lavó abundantemente con más cantidad de MTBE (54.0 I) para proporcionar el producto de amidoxima puro en forma de un líquido. Después de la concentración, el baño de vapor se reemplazó por baño de refrigeración y se acopló una entrada de nitrógeno. A la amidoxima pura se le añadieron xileno (29.6 I) y DABCO (41 g, 0.362 mol, 0.01 equiv.) y la solución se enfrió a aproximadamente -20°C usando un baño de acetona/hielo seco. A la solución fría se le añadió lentamente DMAD (5.14 kg) en forma de una solución en xileno (19.7 I) mientras se mantenía la temperatura de la extracción por debajo de -10°C. Después de un periodo de maduración de 1 hora a aproximadamente -10°C, quedaba 3.6% en A de la amidoxima de partida así que se añadió más cantidad de DMAD (0.05 equiv. = 257 g) pura (para un total de 5.40 kg de DMAD, 38.0 mol, 1.05 equiv.). La reacción se completó después de 1 hora más de maduración a aproximadamente -10°C según se determinó mediante análisis por HPLC. La extracción se calentó a aproximadamente -5°C y se inactivo lentamente con H3PO4 al 1 % (30 I). Después de un periodo de maduración de 1 hora, la extracción se transfirió a un extractor de 100 I, las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua (2 x 40 I). El aducto de DMAD deseado resultante se obtuvo con un rendimiento de ensayo de 15.0 kg (100%) con una relación 1 :5.2 en favor del isómero deseado. La HPLC no indicó ninguna pérdida de producto detectable en los lavados de agua.
Paso 8: Reacción de Ciclación Se cargó o-Xileno (30 I) en un recipiente de 100 I equipado con un termopar, flujo de nitrógeno, camisa calefactora, embudo de adición, aparato de destilación y agitador situado en la parte superior. El o-xileno se calentó a 135°C. A la solución de o-xileno caliente se le añadió el aducto de DMAD en forma de una solución en xileno (solución de 30 kg = 7.5 kg de aducto, 18.09 mol) a través del embudo de adición mientras se mantenía la temperatura interna por encima de 125°C. La reacción se completó después de 2 horas de maduración a aproximadamente 137°C según se determinó mediante análisis por HPLC. El calor se retiró y la extracción se dejó enfriar lentamente a temperatura ambiente. A aproximadamente 80°C, se añadió carbón vegetal Darco KB-G (2.1 kg, al .30% en peso) y la refrigeración se continuó a temperatura ambiente durante una noche. La solución se filtró a través de Solka Floc y la torta se aclaró con o-xileno (1 x 15 I). La solución se transfirió a un reactor de 170 I y a la solución se le añadieron agua (37.5 I), heptano (37.5 I) y trietilamina (7.6 I, 54.3 mol, 3.0 equiv ). Las capas se separaron y la capa orgánica se extrajo de nuevo con agua (1 x 22.5 I). Después, la capa acuosa combinada se lavó con MTBE (1 x 22.5 I). La capa acuosa (pH = 10.2) se diluyó con MTBE (37.5 I) y se acidificó con ácido fosfórico al 85% (2.0 I) a pH = 3.9. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con MTBE (1 x 22.5 I). No hubo ninguna pérdida significativa en la capa acuosa (<1 %). La solución orgánica se concentró al vacío y se lavó abundantemente con más cantidad de MTBE (72.0 I) hasta alcanzar un volumen final de aproximadamente 22.0 I. La solución se calentó a aproximadamente 53°C para disolver todos los sólidos y a la solución caliente se le añadió lentamente heptano (60.0 I). Después de la adición de heptano, la suspensión se enfrió lentamente a temperatura ambiente durante una noche. Antes de la filtración, la suspensión se enfrió a aproximadamente 5°C con hielo/agua y se dejó madurar durante 1 hora. La suspensión se filtró y la torta se lavó de la suspensión con una mezcla 1 :3 de MTBE:heptano (1 x 16.0 I) y heptano (1 x 16.0 I). La torta se secó en el recipiente de filtro en un barrido de nitrógeno y alto vacío a temperatura ambiente durante el fin de semana. La pirimidinona deseada resultante se obtuvo en 3.80 kg (54.9%) con 95.6% en peso y 97.3 de LCAP. La HPLC indicó una pérdida de producto de aproximadamente el 4.2% en las aguas madre y los lavados. Se realizó una segunda extracción usando 7.5 kg (solución de 30 kg) del aducto de DMAD para proporcionar la pirimidinona deseada en 4.06 kg (58.7%) con 94.7% en peso y 97.9 de LCAP.
Paso 9: Hidroaminación Preparación del catalizador: En un recipiente de FR de 3 bocas y de 5 I con un agitador situado en la parte superior se cargaron AuCI (63.9 g, 0.275 mol) y DCM (2.75 I). A la suspensión agitada se le añadió en una porción t-Butil-Xphos (es decir, 2-di-terc-butilfosfino-2',4',6'-triisopropilbifenilo) (1 17 g, 0.275 mol). La mezcla se agitó vigorosamente durante 1 hora para formar una solución de catalizador.
Preparación de solución de sal de Ag: En una botella de vidrio de 8 I con un agitador magnético se cargaron AgSbF6 (1 18 g, 0.343 mol) y DCE (4.3 I). La mezcla se agitó durante 30 minutos.
Reacción: En un matraz de 100 I equipado con un termopar, un agitador situado en la parte superior, un baño de vapor, un condensador con agua fría y barrido de nitrógeno se cargaron DCM (63 I) y pirimidinona (3.66 kg, ensayo de 3.5 kg, 9.15 mol). A la solución se le añadieron la solución de catalizador (2.75 I, 0.275 mol) y posteriormente la solución de AgSbF6 (4.3 I, 0.343 mol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 40°C y se dejó madurar a 40°C durante 5 horas. La reacción se controló por HPLC para confirmar que el material de partida se había consumido completamente. Después de enfriar a temperatura ambiente, el matraz se acopló a un concentrador de extracciones. La mezcla se concentró al vacío (~1 1°C, 22 en Hg). Después de la destilación de ~55 I de la mezcla disolvente, se cambió el disolvente de la mezcla a MeOH (se usaron un total de 24 I de MeOH, el volumen final fue de ~14 I). La solución de MeOH del producto (relación 40:1 de anillos de 7 a 8 miembros) se usó en el siguiente paso de reacción tal cual.
Paso 10: Desprotección de TBS La solución del material de partida (~3.5 kg, -9.15 mol) en MeOH (~14 I) de la reacción anterior se puso en un matraz de FR de 50 I con un agitador situado en la parte superior, un termopar, un baño de vapor y un condensador con agua fría. A la mezcla se le añadió HCI concentrado (83 mi, 1.01 mol) a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a 45°C y se dejó madurar a 45°C durante 6 horas. En el transcurso de la reacción, el producto precipitó para formar una suspensión. Después de 6 horas, el calentamiento se interrumpió. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se controló por HPLC para confirmar que el material de partida se había consumido (conversión del 99%). Después, a la mezcla se le añadió gota a gota IPA (6 I). L mezcla se dejó madurar a temperatura ambiente durante 3 horas. El sólido se filtró, se aclaró con MeOH-IPA (3:1 , 4 I) y después se secó con una corriente de N2 para producir el producto (2.29 kg puro, ensayo de 2.20 kg, 8.20 mol, rendimiento aislado del 90% en 2 pasos) en forma de un sólido de color blanquecino.
Paso 1 : Formación de Amida En un recipiente cilindrico con camisa calefactora de FR y de 30 I con un agitador situado en la parte superior, un termopar y un condensador con agua fría se cargaron el éster del material de partida (ensayo de 2.12 kg, 7.89 mol), MeOH (1 1 I), 3-metil-4-fluorobencilamina (1.428 kg, 10.26 mol) y después TEA (1.198 kg, 1 1.84 mol). La mezcla se calentó a 55~57°C durante una noche (~21 horas). La reacción se controló por HPLC para confirmar que el material de partida se había consumido (conversión del 98%). Después, la mezcla se filtró en caliente (~55°C) a través de un filtro en línea (tamaño de poros de 1 µ?t?) para retirar los precipitados en un matraz de FR de 50 I con un agitador situado en la parte superior, un termopar y un baño de vapor. La mezcla se calentó de nuevo a 45°C desde 38°C. Después, se añadió gota a gota ácido acético (0.904 I). La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, tiempo durante el cual se añadió gota a gota agua (9 I) durante 1.5 horas para cristalizar el producto. La mezcla se enfrió adicionalmente a temperatura ambiente. El sólido se filtró, se aclaró con MeOH-H20 (3:2, 7 I) y después se secó con una corriente de N2 para producir la amida (2.88 kg pura, ensayo de 2.79 kg, 7.43 mol, rendimiento aislado del 94%) en forma de un sólido de color blanquecino.
Paso 12: Protección de Bencenosulfonilo Un matraz de cuatro bocas y de 50 I se equipó con un agitador situado en la parte superior, termopar, embudo de adición y entrada de nitrógeno seguido de una carga con el sustrato alcohólico (2.698 kg, 6.96 mol). Se añadió DMF (8.1 I). La suspensión resultante se agitó a una temperatura interna de 21°C según se añadía fosfato potásico sólido (4.43 kg, 20.9 mol, 3 equiv.) durante 5 minutos, usando una atmósfera de nitrógeno para mantener el fosfato en forma de un sólido anhidro. La temperatura interna aumentó hasta 27°C durante la adición. La mezcla de reacción se enfrió a -10°C usando un baño de hielo seco/acetona. Después de alcanzar -10°C, se añadió gota a gota cloruro de bencenosulfonilo (897 mi) durante 1 hora, manteniendo una temperatura interna de -7°C durante toda la adición. Después de que se completara la adición, la reacción se agitó durante 20 minutos. El análisis por HPLC mostró un LCAP de 92 para el producto, 5 para el material de partida y 1 para el subproducto bis sulfonilado. Se realizó una carga adicional de cloruro de benceno sulfonilo (44 mi, total de 7.30 mol, 1.05 equiv.) y la agitación se continuó durante 40 minutos. El análisis por HPLC determinó que la reacción se había completado. La reacción se transfirió a un extractor de 100 I que contenía 48 I de H3PO4 1 N y 10 I de diclorometano. Se usó más cantidad de diclorometano (14.3 I) para completar la transferencia desde el recipiente de reacción. Después de la repartición, el pH de la fase acuosa era de 7. La capa orgánica se lavó con agua (3 x 48 I). Un matraz de 50 I se equipó con un termopar, una entrada con un filtro en línea de 0.45 micrómetros; un agitador situado en la parte superior y un concentrador de extracciones. La solución de diclorometano se introdujo en el matraz a través de la línea de filtro y se realizó una concentración de las extracciones hasta que quedaron aproximadamente 7 I. Se añadió metanol (10.8 I) y la concentración de las extracciones se continuó hasta que quedaron aproximadamente 10 I de metanol. Según sé agitaba la solución, se realizó el sembrado. La agitación se continuó durante 90 minutos, mientras se producía una suave exotermia (temperatura máxima = 27°C) y se desarrollaba la cristalización. Se usó un baño de agua enfriada con hielo para refrigerar la extracción a 5°C. La extracción se agitó durante una noche (14 horas) con calentamiento a 12°C. El análisis por HPLC para la pérdida de las aguas madre mostró un 3.3%. La extracción se enfrió a 5°C con un baño de agua enfriada con hielo y la extracción se filtró. La torta se lavó con 3.5 I de metanol frío (5°C). Las aguas madre y el lavado de la torta se analizaron para determinar la pérdida (2.1 % en las aguas madre y 0.64% en el lavado de la torta). La torta se secó en una atmósfera de nitrógeno mediante la aplicación de vacío durante 72 horas. Se recuperaron 3.60 kg (94%) en forma de un sólido de color blanquecino. El análisis por RMN indicó que se había formado un solvato de metanol (estaban presentes aproximadamente 0.9 equivalentes de metanol).
H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1.05 (1 H; s a); 2.27 (s, 3H); 3.49 (s, 2.9 solvato de metanol); 3.63-3.66 (m, 1 H); 3.98-4.06 (m, 2H); 4.18 (m, 1 H); 4.24-4.27 (d, 1 H); 4.55 (m, 2H); 4.87-4.92 (m, 1 H); 5.57 (s, 1 H); 5.93 (s, 1 H); 6.94-6.99 (t, 1 H J = 8.8 Hz); 7.11-7.15 (m, 1 H); 7.18-7.20 (d,1 H J = 7.2 ); 7.42 (m, 1 H)¡ 7.55-7.59 (t, 2H J = 7.9 Hz); 7.68-7.72 (t,1 H J = 7.4 Hz); 8.07-8.09 (d, 2H J = 7.9 Hz).
Paso 13: Hidrogenación Asimétrica En una caja de manipulación con guantes purgada con nitrógeno con O2 < 5 ppm, se añadieron tetrafluoroborato de bis(norbornadieno)rodio (I) (6.24 g, 16.68 mmol), (+)-1 ,2-bis((2R, 5ft)-2,5-diisopropilfosfolano)-benceno ((f?,f?)-iPr-DuPhos) (7.33 g, 17.52 mmol) y diclorometano (85 mi) a un matraz de fondo redondo de 250 mi. La mezcla de catalizador se agitó durante una hora y se transfirió mediante una cánula a un recipiente de acero inoxidable de 150 mi seguido de 15 mi de aclarado de diclorometano. Se añadieron 100 mi de metanol a un segundo recipiente de acero inoxidable de 150 mi, y el aparato de carga del catalizador se cerró herméticamente y se retiró de la caja de manipulación con guantes.
Una solución del material de partida (1.72 kg, 3.34 mol) se preparó en 8.5 I de diclorometano y después se extrajo con vacío en un autoclave agitado de 10 galones. Se cargaron 8.5 I de metanol en el autoclave de manera similar y el acople de carga de catalizador se adjuntó mediante un tubo flexible. El autoclave se volvió inerte con tres purgas de nitrógeno/vacío y el autoclave se puso a vacío parcial. La solución de catalizador se extrajo del autoclave seguido de aclarado con metanol. El autoclave se sometió a tres purgas con hidrógeno, ajustadas a una temperatura de 25°C, y se presurizó con gas hidrógeno a 100 psig. La mezcla de reacción se agitó a 600 rpm durante 18 h. El análisis por HPLC confirmó una conversión >99% en el producto deseado con un 96% de ee y una r.d. de ~1 :1. La suspensión resultante del producto se usó directamente en el siguiente paso. 1H RMN de la mezcla 1 :1 de diastereómeros (CDCI3, 400 MHz): 8.02-8.09 (m, 4H), 7.79 (t, J = 5.9 Hz, 1 H), 7.67-7.74 (m, 2H), 7.53-7.62 (m, 4H), 7.47 (t, J = 5.7 Hz, 1 H), 7.06-7.19 (m, 4H), 6.94 (td, J = 9.2, 4.3 Hz, 2H), 5.32-5.40 (m, 1 H), 5.01-5 09 (m, 1 H), 4.92 (dd, J = 10.3, 3.6 Hz, 1 H), 4.84 (d, J = 3.1 Hz, 1 H), 4.44-4.52 (m, 3H), 4.37 (dd, J = 14.7, 5.8 Hz, 1 H), 4.18 (dt, J = 12.5. 3.8 Hz, 2H), 4.13 (dd, J = 14.0, 3.8 Hz, 1 H), 4.05 (dd, J = 13.8, 3.6 Hz, 1 H), 3.65-3.73 (m, 2H), 3.59 (d, J = 13.7 Hz, 1 H), 3.41 (dd, J = 12.1 , 8.9 Hz, 1 H), 3.15 (s a, 2H), 2.26 (s, 6H), 1.62 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.48 (d, J = 7.3 Hz, 3H).
Paso 14: Mesilación Hj. Las dos extracciones del paso de hidrogenación anterior se combinaron junto con ~50 I de diclorometano (ensayo total 3.13 kg, 6.05 mol). La solución transparente resultante se concentró en un matraz de fondo redondo de 100 I usando 115 I de 2-metiltetrahidrofurano para reducir el nivel de MeOH a 4% en moles con respecto al material de partida por H RMN. El volumen final de la solución concentrada fue de -20 I. La solución se enfrió en un baño de hielo a +3°C. Se formó una suspensión fina. Se añadió TEA (1.26 I, 9.07 mol) durante ~5 minutos (exotermia de +2 a +4°C). Se añadió MsCI (0.566 I, 7.26 mol) durante 1 hora a +10°C. Después de 1 hora, la reacción se completó y la mezcla se inactivo con 2 I de agua (exotermia de +5 a +7°C). S>e añadió H3PO4 acuosa 1 M (9.4 I). La mezcla se transfirió a un extractor de 100 I aclarando con 15.5 I de Me-THF. Se añadieron 22 I más de agua y las fases se separaron. La capa orgánica se lavó con 31 I de agua. La capa orgánica contenía 3.57 kg de ensayo (99%) del producto y se usó directamente en el siguiente paso. 1 H RMN de la mezcla 1 :1 de diastereómeros (CDCI3, 400 MHz): 8.49 (t, J = 6.2 Hz, 1 H), 7.99-8.08 (m, 4H), 7.76 (t, J = 6.0 Hz, 1 H), 7.65-7.72 (m, 2H), 7.50-7.58 (m, 4H), 7.04-7.17 (m, 4H), 6.89-6.96 (m, 2H), 5.75 (dd, J = 10.0, 3.1 Hz, 1 H), 5.64 (d, J = 3.3 Hz, 1 H), 5.37-5.47 (m, 1 H), 5.08-5.18 (m, 1 H), 4.32-4.49 (m, 5H), 4.21 (dd, J = 12.1 , 3.1 Hz, 1 H), 4.13 (dd, J = 14.1 , 3.4 Hz, 1 H), 4.06 (dd, J = 13.9, 3.7 Hz, 1 H), 3.16 (s, 3H), 3.1 1 (s, 3H), 2.24 (s, 6H), 1.56 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.48 (d, J = 7.3 Hz, 3H).
Paso 15: Desplazamiento de Mesilato La solución de mesilato del paso anterior (r.d. de ~1 :1 , 3.45 kg, 5.79 mol) se concentró en un matraz de FR de 75 I con 35 I de 2-metiltetrahidrofurano hasta alcanzar un volumen de 6.9 I. Se añadió MeOH (24 I) (relación molar 13:1 de MeOH/MeTHF por H RMN). La suspensión resultante se enfrió a -15°C. Se añadió una solución al 33% de MeNH2 en EtOH (7.2 I, 57.9 mol) por debajo de -15°C durante 1 hora. La suspensión se agitó de -10 a -8°C durante 7 horas y después a +14°C durante 15 horas. La solución transparente resultante se concentró con 17.2 I de MeOH hasta alcanzar un volumen de ~10 I, se enfrió en un baño de hielo-agua y se trató con 3.5 I de agua y 6.9 I de MTBE. Se añadió H3PO4 acuoso 1 M (23.2 I) por debajo de +22°C. La mezcla se transfirió a un recipiente cilindrico de 100 I y se combinó con 24 I de MTBE y 4 I de agua. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo de nuevo con 31 I de MTBE. La fase acuosa se combinó con 31 I de diclorometano y se neutralizó con 4.3 I de KOH acuoso 5 M a pH 5-6 (ensayo de 2.04 kg o rendimiento del 90% de la base libre en la capa de diclorometano, r.d. 98:2). La fase de diclorometano se concentró en un matraz de 75 I con 20 I de MeOH hasta alcanzar un volumen de -13.5 I. La suspensión fina resultante se filtró para retirar 125 g de producto racémico y la torta se lavó con 2.3 I de MeOH. El filtrado se transfirió de nuevo al matraz de 75 I usando 2.3 I de MeOH. Se añadió una solución de 0.638 kg de ácido (-)-canfórico (3.19 mol) en 3.4 I de MeOH de 18 a 21°C durante 1 hora y la mezcla se pipeteó. Se añadieron 1.1 I más de MeOH y la agitación se continuó a +20°C durante 3 horas. La suspensión se filtró y la torta se lavó con 2 x 7.0 I de 1 :1 MeOH/agua y se secó en una atmósfera de nitrógeno para proporcionar 2.16 kg del producto (rendimiento del 76%) en forma de un polvo blanquecino, una sal 2:1 de acuerdo con la H RMN, r.d. 99.6:0.4 por HPLC, >99.8% de ee por HPLC quiral después de la derivatización como el API. 1 H RMN (CDCI3, 400 MHz): 7.88 (t a, J = 5.2 Hz, 1 H), 7.12-7.21 (m, 2H), 7.02 (t, J = 9.2 Hz, 1 H), 5.22-5.31 (m, 1 H), 4.63 (dd, J = 14.8, 6.6 Hz, 1 H), 4.51 (dd, J = 14.8, 5.9 Hz, 1 H), 4.13-4.22 (m, 2H), 3.84 (dd, J = 3.4. 1.2 Hz, 1 H), 3.63-3.73 (m, 2H), 2.87 (t, J = 9.2 Hz, 0.5H), 2.52-2.63 (m, 0.5H), 2.38 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.14-2.26 (m, 0.5H), 1.82-1.92 (m, 0.5H), 1.69 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.52-1.60 (m, 0.5H), 1.34 (s, 1.5H), 1.38 (s, 1.5H), 0.94 (s, 1.5H).
Paso 16: Acoplamiento Final En un recipiente cilindrico de 50 I visualmente limpio, se pusieron sal penultimato (1.95 kg, 3.98 mol), DCM (20 I) y tampón fosfato potásico 0.75 M a pH 6.8 (20 I). La mezcla se agitó durante 30 minutos para romper la sal y después se dejó que se sedimentara. La capa orgánica se separó y se transfirió de nuevo al recipiente, donde se puso el mismo tampón (20 I). La mezcla se agitó durante 10 minutos y después se dejó que se sedimentara. La capa orgánica se separó de la capa acuosa y se transfirió a un matraz de FR de 50 I de 4 bocas visualmente limpio con un agitador situado en la parte superior y un termopar. Se añadió ácido N,N-d¡metiloxámico (0.745 kg, 6.36 mol) y se agitó durante 10 minutos. A la mezcla se le añadió en porciones EDC (1.143 kg, 5.96 mol) (la temperatura interna se mantuvo por debajo de ~30°C) durante 10 minutos, seguido de la adición de otra porción de EDC (0.20 kg, 1.29 mol). Después de 25 minutos, la mezcla de reacción se controló por HPLC para confirmar que el material de partida se había consumido (conversión >99%). La mezcla se transfirió a un recipiente cilindrico de 50 I visualmente limpio, donde se puso GMP-agua (20 I). Después, el matraz se aclaró con DCM (1 I) y GMP-agua (1 I). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y después se dejó que se sedimentara. La capa orgánica se separó, se transfirió de nuevo al recipiente, se lavó de nuevo con agua (20 I) durante 30 minutos y se recogió en polijarras. Al día siguiente, la capa orgánica se aspiró en un matraz de FR de 50 I visualmente limpio equipado con un agitador situado en la parte superior, un concentrador de extracciones, un termopar y un baño de vapor mediante un filtro en línea para la concentración. La mezcla se sometió a concentración/intercambio del disolvente al vacío a EtOH (volumen final de EtOH, 10 I, total -12 I). A la mezcla se le añadieron cristales seminales a ~45°C. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se dejó madurar a temperatura ambiente durante una noche. El sólido se filtró, después se lavó con EtOH (5 I) y se secó con una corriente de N2 durante una noche para producir el producto deseado (1 .796 kg puro, 99% en peso, rendimiento aislado del 91 %) en forma de un sólido de color blanquecino.
H RMN (500 Hz, CDCI3, ppm): 12.35 (s a, 1 H), 9.60 (t, J = 6.3 Hz, 1 H), 7.22 (dd, J = 7.4, 1.9 Hz, 1 H), 7.20-7.16 (m, 1 H), 6.91 (dd, J = 9.5, 8.6 Hz 1 H), 5.81 (s a, 1 H), 4.96-4.91 (m, 1 H), 4.51 (d, J = 6.5 Hz, 2 H), 4.46 (t, J - 1 1 .1 Hz), 4.31 (d, J =14.1 Hz, 1 H), 4.15 (dd, J = 1 1 .8, 2.5 Hz, 1 H), 4.04 (dd, 14.1 . J = 5.4 Hz, 1 H), 3.07 (s, 3 H), 3.02 (s, 3 H), 2.86 (s, 3 H), 2.24 (d, J = 1 .9 Hz, H), 1.61 (d, J = 6.9 Hz, 3 H).
El producto se molió en húmedo usando un molino IKA hasta alcanzar un tamaño medio de partículas de aproximadamente 18 micrometros y un intervalo de tamaño de partículas de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 100 micrómetros, según se determinó usando un analizador de tamaño de partículas Microtrac con tecnología de difracción láser. El producto molido puede emplearse en estudios biológicos tales como la determinación de las farmacocinéticas de los compuestos en animales o seres humanos.
EJEMPLO 12 Preparación del Compuesto 5A Paso : Formación de éter de TBS matraz de FR de 3 bocas y de 75 I se cargó con THF (27.5 I) y t-BuOK (al 95% en peso, 6.10 kg, 51.6 mol) a temperatura ambiente para dar una suspensión de color blanco espesa pero fácil de agitar. Se añadió c s-2-buteno-1 ,4-diol (4.55 kg, 51.6 mol) en forma de un líquido puro durante 0.5 horas, manteniendo la temperatura por debajo de 20°C. La suspensión suelta resultante se dejó madurar a temperatura ambiente durante 30 minutos y se añadió TBS-CI (7.00 kg, 46.5 mol) disuelto en THF (3.5 I) durante 0.5 horas, manteniendo la temperatura por debajo de +30°C. La mezcla de reacción se dejó madurar a temperatura ambiente durante 1 -2 horas y se inactivo de forma inversa en un extractor que contenia agua (25 I) y MTBE (25 I). Las capas se separaron, la capa orgánica se lavó con NH4CI al 5% (18 I) y salmuera al 5% (2 x 8 I). La capa de MTBE se concentró a sequedad (aceite) y se lavó abundantemente con heptano (20 I) para producir el éter de TBS en forma de un aceite en bruto [>10 kg, que contenía aproximadamente 12% en A (=porcentaje en área por GC) bis-OTBS] que se usó sin purificación adicional en el siguiente paso.
Paso 2: Adición de Acrilonitrilo Un matraz de FR de 3 bocas y de 50 I se cargó con mono-TBS alcohol (9.187 kg, 45.4 mol), acrilonitrilo (68.1 moles, 4.46 I) y DBU (0.684 I, 4.54 mol) a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se calentó a +60°C durante 16 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con MTBE (25 I), se transfirió a un extractor de 100 I y se lavó con KH2PO4 acuoso al 5% (20 I). Las capas se separaron y los extractos orgánicos se lavaron con agua (2 x 18 I) y se concentraron. El disolvente de la solución se cambió a MeOH para producir el nitrilo acoplado (10.5 kg por ensayo) en forma de una solución en MeOH (volumen total de 30 I), que se usó tal cual en el siguiente paso.
Paso 3: Formación de Amidoxima Un matraz de FR de 3 bocas y de 75 mi se cargó con una solución del nitrito acoplado del Paso 2 (10.42 kg, 40.8 moles en 30 I de MeOH). Se añadió en una porción hidroxilamina (acuosa al 50%, 2.75 I, 44.9 mol) a temperatura ambiente y la solución resultante calentó a +60°C durante 6 horas (conversión de aproximadamente el 99.8% en A). La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se transfirió a un extractor que contenía MTBE (35 I) y agua (35 I). Las capas se separaron (pH ~9) y la fase orgánica se lavó con salmuera al 5% (2 x 18 I). La porción acuosa se extrajo de nuevo con MTBE (15 I). Las capas orgánicas combinadas se concentraron para dar un aceite y el disolvente se cambió a metanol (solución de aproximadamente 3 l/kg) para producir una solución de la amidoxima que se usó tal cual en el siguiente paso.
Pasos 4 y 5: Formación de Pirimidinona Un matraz de FR de 3 bocas y de 75 mi se cargó con la solución de amidoxima del Paso 3 (10.95 kg, 38 moles en 27 I de MeOH). La mezcla de reacción se enfrió a -20°C y se añadió DMAD (4.67 I, 38 mol) durante 45 minutos, manteniendo la temperatura por debajo de +5°C. La mezcla de reacción se concentró y el disolvente se cambió a o-xileno para hacer una solución al 50% en peso. Un matraz de FR de 3 bocas y de 100 I se cargó con o-xileno (55 I) y se calentó a 143-145°C (reflujo suave). A la solución de o-xileno caliente se le añadió aducto de DMAD en xileno (7.4 kg de ensayo, solución aprox. al 50% en peso de o-xileno) durante 2 horas. La mezcla de reacción se dejó madurar durante 3 horas más al final de la adición, se dejó enfriar ligeramente a aproximadamente +130°C y el o-xileno (15 I) se destiló a presión reducida parcial (temp. interna de aprox. 120-130°C). La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente para dar una suspensión de pirimidinona cristalizada. La suspensión se dejó madurar durante una noche a temperatura ambiente. Se añadió heptano (aprox. 45 I) durante 2 horas y después se dejó madurar durante 2 horas. La suspensión se filtró y la torta se lavó con 1/1 de tolueno/heptano (15 I) y después con heptano (10 I). La torta se secó al vacío y una corriente de nitrógeno durante 3 días a temperatura ambiente para dar la TBS-pirimidinona (3.75 kg, >97% en A, 85% en peso, rendimiento del 47%).
Paso 6: Besilación La TBS pirimidinona preparada como se ha descrito en los Pasos 4 y 5 (7.2 kg, ~85% en peso) se cargó en un matraz de FR de 100 I. Se añadió piridina (10.5 kg) a temperatura ambiente, seguido de la adición de cloruro de bencenosulfonilo (3.70 kg) durante 30 minutos, mientras se mantenía la temperatura a 25-30°C. La solución se agitó a 25-30°C durante 2 horas. La extracción se enfrió a 20°C y se añadió metanol (21 I) seguido de agua (17.5 I). La suspensión se agitó a 28-30°C durante 30 minutos. Se añadió agua (17.5 I) a 20-25°C. La suspensión se dejó madurar 30 minutos. La suspensión se filtró y la torta se lavó con MeOH/agua (3:5 v/v, 30 I). La torta se secó en una corriente de nitrógeno en el recipiente de filtro durante una noche para dar el TBS besilato (10.3 kg, 71 % en peso, rendimiento del 88%).
Paso 7: Des-TBS y formación de acetato-besilato El TBS besilato del Paso 6 (9.9 kg, 71 % en peso) se cargó en un matraz de FR de 50 I y se añadió acetonitrilo (18 I). Se añadió HCI conc. (95 mi) y la solución se agitó a 15-18°C durante 1 hora. La mezcla se lavó con heptano (2 9 I). La capa de acetonitrilo se cargó en un matraz de FR de 72 I y se añadió piridina (190 mi). La solución se concentró hasta aproximadamente 15 I y se lavó abundantemente con acetonitrilo (18 I). Se añadió anhídrido acético (4.5 kg) y la solución se calentó a 75°C durante 3 horas. Se añadió IPA (30 I) y la extracción se concentró a presión reducida (50°C) para retirar aproximadamente 20 I de disolvente. Se añadió IPA para obtener un volumen final de 55 I a 50°C. La solución se trató con DARCO-G60 (carbono activado, 900 g), se agitó a 50°C durante 1 hora y se filtró en caliente a través de una capa pequeña de solka-floc en un matraz de FR de 100 I. La torta se lavó con IPA (10 I) a 50°C. Los filtrados combinados se agitaron, se enfriaron a 30°C y se sembraron con el producto (1 g). La suspensión se dejó enfriar a 20°C durante 1 hora y después se enfrió a 2°C y se dejó madurar durante 1 hora. La suspensión se filtró y se lavó con IPA (10 I) y heptano (10 I). La torta se secó para dar el acetato-besilato (5.2 kg, >98% en peso, rendimiento del 86%) Paso 8: Alilación Intramolecular Una solución del acetato besilato del Paso 7 (2.50 kg) y bromuro de tetrabutilamonio (173 g) en DCM (20 I) se desgasificó con nitrógeno. Se añadió DCM desgasificado (6.8 I) a una mezcla de Pd2dba3 (37 g) y ligando (R.R)-Napthyl Trost (1 R,2R)-(+)-1 ,2-Diaminociclohexano-N,N'bis(2-difenilfosfino-1-naftoílo, N° de Registro de CAS 174810-09-4) (134 g). Después de agitar durante 10 minutos, la solución de catalizador se transfirió al recipiente de reacción agitado. La mezcla de reacción se dejó madurar durante aproximadamente 8 horas con toma de muestras periódica para determinar el final de la reacción. Se añadió Pd(OAc)2 sólido (60 g) para interrumpir la reacción. La solución resultante de producto aliliado se llevó a continuación al siguiente paso. Se obtuvieron dos extracciones en la misma escala.
Paso 9: Hidrogenación Se añadió Pd al 5% (S)/C ( 828 g) a la solución en DCM de producto alilado del Paso 8 (2.03 kg, asumiendo un rendimiento del 100%). La suspensión se cargó en un autoclave agitado de 10 galones. El recipiente de reacción se presurizó con hidrógeno a 310.26 kPa (45 psi) y se calentó a 30°C hasta que la captación de hidrógeno mostró que la conversión se había completado. Esto se repitió en una segunda extracción.
Las dos extracciones de hidrogenación se combinaron, se añadió MTBE (2.5 I) y después la mezcla se agitó con MgS04 (0.8 kg) y K2HP04 (0.8 kg) durante 30 minutos. La mezcla se filtró a través de sílice (6 kg). La capa de sílice se lavó con 9:1 de DCM/MTBE (25 I). Los filtrados combinados se concentraron y el disolvente se cambió a acetato de isopropilo (aprox. 13 I). La mezcla se enfrió a 22°C durante 1 hora. La suspensión resultante se filtró en una capa de sílice (0.25 kg) y la torta de filtro del racemato se lavó con ¡PrOAc (4 I) para dar, después del secado, la etil oxepanopirimidinona racémica (0.17 kg, 10-20% ee). Los filtrados se concentraron y el disolvente se cambió a IPA (13 I). La mezcla se trató con Darco G60 (0.3 kg) a 80°C durante 1 hora. La mezcla se filtró en caliente a través de una capa de Solkafloc y se lavó con IPA caliente (4 I) y acetona (1.3 I). Los filtrados combinados se sometieron a un cambio de disolvente a IPA a 60-80°C y se enfriaron a 23°C durante 3 horas. La suspensión se enfrió a 10°C durante 2 horas y se filtró. La torta se lavó con IPA (3 I) a 10°C. La torta se secó en una corriente de nitrógeno para dar la etil oxepanopirimidinona (3.186 kg, pureza del 95% en peso).
Paso 10: Bromación La etil oxepanopirimidinona del Paso 10 (4.08 kg, 10 mol) se suspendió en ácido acético (30 I) en un matraz de FR de 4 bocas y de 100 I. Se añadió NBS (5.3 kg, 30 mol) seguido de ácido nítrico concentrado (3 I). La mezcla se calentó a 75°C durante 30 minutos y la mezcla de color naranja homogénea resultante se mantuvo a 72-80°C durante 3 horas. Se desprendió una pequeña cantidad de vapor de bromo durante la reacción. La mezcla se concentró al vacio (50 Torr a 50°C) para retirar 5 I de destilado de color naranja, dejando una solución residual de color amarillo pálido. La mezcla se enfrió a 20°C y se añadieron DCM (15 I) y agua (20 I). La capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo de nuevo con DCM (5 I). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (20 I) y K2HPO4 acuoso 1.67 M (30 I). Los extractos de DCM combinados se secaron sobre MgS04 (100 g), se filtraron y se concentraron. El residuo se sometió a un cambio de disolvente a aprox. 10 I de THF con una mezcla 4:3 de productos di-bromo/mono-bromo, que se usó directamente en el siguiente paso.
Paso 11 : Formación de Mono-bromuro A la mezcla aprox. 4:3 de di-bromo/mono-bromo oxepanopirimidinonas (4.8 kg) del paso anterior se le añadieron MeOH (20 I), NMM (708 g, 7 mol) y fosfito de dietilo (967 g, 7 mol). La mezcla se agitó durante 1 hora a 25-40°C. Se añadió gota a gota agua (20 I) durante 2 horas mientras la mezcla se enfriaba gradualmente a 10°C. La suspensión resultante se filtró y la torta de filtro se lavó con 1 :1 de MeOH/agua (10 I) y se secó para proporcionar la mezcla diastereomérica de syn/anti-monobromuros. Monobromuro syn: 1H RMN (CD3CN 400 MHz) 7.94 (m, 2H), 7.78 (m, 1 H), 7.63 (m, 2H), 5.33 (dd, 1 H, J = 2.7, 1.6), 4.88 (m, 1 H), 4.25 (dd, 1 H, J = 14.3, 3.4), 4.14 (dd, 1 H, J = 14.3, 2.9), 4.07 (dd, 1 H, J = 14.3, 1.6), 3.73 (s, 3H), 3.70 (m, 1 HI), 2.39 (m, 1 H), 1.99 (m, 1 H), 0.87 (t, 2H, J = 14.9); Monobromuro anti H RMN (CD3CN 400 MHz) 7.94 (m, 2H), 7.78 (m, 1 H), 7.62 (m, 2H), 5.47 (dd, 1 H, J = 10.0, 2.8), 5.03 (m, 1 H), 4.36 (dd, 1 H, J = 12.4. 2.8), 4.07 (dd, 1 H, J = 14.0, 4.3), 3.82 (dd, 1 H, J = 12.4, 10.0), 3.74 (s, 3H), 3.72 (m, 1 H), 1.98 (m, 1 H), 1.86 (m, 1 H), 0.85 (t, 2H, J = 14.9).
Paso 12: Amidación Se cargó DCM (10.5 I) en un matraz de fondo redondo de 50 I. Se añadió 4-fluorobencilamina (578 g, 4.62 Mol) y la solución de color ligeramente amarillo se desgasificó con N2 durante aproximadamente 60 minutos. A la solución de bencilamina se le añadió lentamente ?ß3?? (2 M en hexanos, 2.3 I, 4.62 Mol) durante 60 minutos. La solución se dejó madurar a temperatura ambiente durante 75 minutos. A la solución de complejo de amina-Al se le añadió el producto de bromuro del Paso 1 1 (1.5 kg, 3.08 mol) disuelto en DCM (6 I) durante 20 minutos. La ligera exotermia se controló con un baño de hielo. La mezcla de reacción se dejó madurar a temperatura ambiente durante 60 minutos. Después de que se completara la reacción, la mezcla se bombeó en un recipiente cilindrico de 50 I que contenía HCI 1 N (15 I) a 10°C. La exotermia relativamente grande y el desprendimiento rápido de gas se controlaron mediante la adición lenta de la mezcla al HCI acuoso. Los extractos orgánicos se lavaron con HCI 1 N (2 x 15 I), NaHC03 saturado (15 I) y salmuera saturada (15 I) a temperatura ambiente. La capa orgánica que contenía el producto de amida (1.69 kg por ensayo de HPLC, 95%) se concentró y el disolvente se cambió a metanol. El volumen final de la solución de MeOH era de aproximadamente 25 I y la solución de la amida se usó en el siguiente paso sin purificación adicional.
LCMS: (M+H)+ = 582.0.
Se obtuvieron dos extracciones a la misma escala.
Paso 13: Desplazamiento de Metilamina Un recipiente cilindrico de 100 I equipado con camisa de refrigeración, agitador situado en la parte superior y sonda de temperatura, se cargó con la solución del material de partida en metanol (2.80 kg por HPLC). El volumen de la extracción fue de 28 I. La extracción se enfrió a 5°C. Se añadió una solución de metilamina (al 33% en peso, 8 M, 3.15 I) en etanol durante 15 minutos. Se observó una ligera exotermia y la temperatura de la extracción llegó a 11°C. Después de madurar durante 30 minutos, la extracción se calentó a 20°C durante 1 h. Por separado, se preparó una solución 1 M de PTSA mezclando p-TSA monohidrato (3.67 kg) y 16 I de agua. Esta solución se cargó en la extracción 4 horas después de la adición de metilamina. La temperatura de la extracción llegó a 28°C debido a la exotermia. La extracción se pipeteó. Después de agitar durante 3.5 horas, se formó una suspensión espesa. A la extracción se le añadió agua (45 I) durante 45 minutos. La extracción se dejó madurar a 20°C durante una noche (9 horas). El producto sólido se recogió por filtración y la tota húmeda se lavó con 2/1 de agua/MeOH (3 x 5 I) y agua (10 I). La torta húmeda se secó en el recipiente de filtro con un flujo de nitrógeno durante una noche y después en una estufa de vacío a 35-40°C con flujo de nitrógeno durante 3 días. El producto en bruto se suspendió en acetato de etilo (27 I), se agitó durante 2 horas y se filtró. La torta húmeda se lavó con acetato de etilo (13 I) y después se secó en el recipiente de filtro con flujo de nitrógeno y succión por vacío durante una noche para dar la sal p-TSA de amina (2.15 kg, 79%). El exceso diastereomérico fue de 97:3 en la reacción de desplazamiento y fue de 98.5/1.5 después del aislamiento en forma del tosilato.
LC-MS M+1 391 Datos de R N: 1H RMN (500.1 MHz, CD3OD) d (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.37 (m, 2H), 7.18 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.04 (m, 2H), 4.97 (t, J = 5.1 Hz, 1 H), 4.60 (m, 1 H), 4.54 (s, 2H), 4.13 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 4.06 (dd, J = 12.9, 7.8 Hz, 1 H), 3.84 (dd, J = 12.8, 3.0 Hz, 1 H), 2.85 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 2.19 (m, 1 H), 1.96 (m, 1 H), 1.07 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
Paso 14: Acilación Un matraz de 50 I se cargó con ácido dimetiloxámico (0.64 kg), DCM (16 I), y NMM (1.12 kg). La mezcla se enfrió a 15°C. Se añadió cloruro de pivaloílo (0.62 kg) y se dejó madurar durante 2 horas a temperatura ambiente. Se añadió en una porción la sal PTSA de amina del Paso 13 (2.01 kg) y se dejó madurar durante 2 horas. La mezcla se inactivo con agua (12 I) y HCI 5 M (0.21 I). La capa orgánica inferior se separó y se lavó con agua (2 x 12 I). La solución se concentró a bajo volumen y se añadió IPA (8 I). La solución se calentó a 55-60°C, se sembró (24 g Compuesto 5A, Forma cristalina II) y el cambio de disolvente se continuó a 55-60°C mediante la adición de IPA para mantener el volumen a aproximadamente 10 I. La suspensión se dejó madurar a 55-60°C durante 4.5 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. La torta se lavó con IPA/heptano (2 x 8 I) y heptano (2 x 4.5 I) y se secó al vacio a temperatura ambiente para producir el compuesto del título en forma de un sólido cristalino de color blanco (1.6 kg, pureza >98% en peso, rendimiento del 91 %).
LCMS: ( +H)+ 490.1 ; H RMN (500 MHz, CDCI3): d 12.32 (s a, 1 H); 9.63 (t, J = 6.1 Hz, 1 H); 7.40 (m, 2 H); 6.98 (m, 2 H); 5.85 (s a, 1 H); 4.64 (m, 1 H); 4.56 (d, J = 6.5 Hz, 2 H); 4.45 (t, J = 10.4 Hz, 1 H); 4.22 (d, J = 3.1 Hz, 2 H); 4.15 (dd, J = 1 1.8, 2.8 Hz, 1 H); 3.09 (s, 3 H); 3.04 (s, 3 H); 2.87 (s, 3 H); 2.08 (m, 1 H); 1.85 (m, 1 H); 1.16 (t, J = 7.3 Hz, 3 H).
El producto del título se molió en seco usando un molino de agujas hasta alcanzar un tamaño medio de partículas de aproximadamente 23 micrómetros y un intervalo medio de partículas de aproximadamente 0.9 a aproximadamente 160 micrómetros, determinado usando un analizador de tamaño de partículas Microtrac con tecnología de difracción láser. El producto molido puede emplearse en estudios biológicos tales como determinación de las farmacocinéticas de compuestos en animales o seres humanos.
EJEMPLO 13 Preparación del Compuesto 6A Paso 1 : Preparación del alcohol vinilico En un recipiente hastalloy de 400 I se cargó cloruro de vinil magnesio 1 M en THF (372 kg). El cloruro de vinil magnesio se transfirió a través de un filtro a un recipiente revestido de vidrio. El reactivo se enfrió a -10°C y después se añadió cloruro de cobre (I) (4.82 kg) en una atmósfera de nitrógeno.
En el recipiente revestido de vidrio se cargó (S)-(+)-bencil glicidal éter (40 kg), seguido de THF (177.8 kg) y la solución se enfrió a 0°C. Esta solución se añadió al cloruro de vinil magnesio durante un periodo de 3 horas mientras se mantenía la temperatura de reacción por debajo de 0°C. La mezcla se dejó madurar durante diez minutos, momento en el que la HPLC indicó que la reacción se había completado. Después, la mezcla de reacción se inactivo mediante la adición de metanol (19.5 kg) durante un periodo de 2 horas mientras se mantenía la temperatura por debajo de 25°C y a la vez se controlaban las emisiones de etileno. Después de la inactivación del metanol, se añadió HCI 2 N (412 kg) durante un periodo de 45 minutos, y después la extracción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Después, las capas acuosa y orgánica se separaron, la capa acuosa se extrajo de nuevo con MTBE (148 kg) y los extractos orgánicos combinados se lavaron secuencialmente con HCI 1 N (98 kg), agua (50 kg), Na2S203 (al 10% en 100 kg de agua) y agua (200 kg). Después, la extracción se concentró hasta alcanzar un volumen de 80 I y después se añadió DMAC (83 kg), seguido de heptano (800 I), y la solución se destiló a aproximadamente 170 I para producir una solución del alcohol (150 I en total; ensayo de 44.86 kg; rendimiento del 96%).
Paso 2: Metilación OH OMe sulfato de dimetilo La solución en DMAC del alcohol del Paso 1 más un aclarado de DMAC (50 kg) se cargaron en un recipiente revestido de vidrio y la solución se enfrió a 0°C. Se cargó en seis porciones terc-butóxido sódico (32.3 kg) y la mezcla se dejó madurar durante 15 minutos y después se enfrió de nuevo a 0°C. Después, se añadió sulfato de dimetilo (40.9 kg) durante 40 minutos mientras se mantenía una temperatura interna de menos de 25°C. Después, la mezcla de reacción se dejó madurar durante 30 minutos a 20°C. A la mezcla de reacción se le añadió HCI 2 N (145 kg de agua y 34.2 kg de HCI conc.) durante 30 minutos, seguido de MTBE (133.2 kg). La capa ácidas acuosa inferior se retiró y la capa orgánica se lavó dos veces con una solución al 5% en peso de LiCI (200 I seguido de 150 I), seguido de agua (150 kg). La capa orgánica se concentró hasta alcanzar un volumen de 50-60 I mientras se mantenía la temperatura interna a menos de 35°C. Después, se cargó heptano (200 I) y se concentró hasta alcanzar un volumen de 50-60 I mientras se mantenía la temperatura interna a menos de 35°C. La solución concentrada se diluyó con heptano (140 I) y se filtró a un tambor de acero limpio revestido con plástico (227 I en total; 47.02 kg de ensayo; rendimiento de ensayo del 96% y KF 79 ppm).
Paso 3: Hidroboración para dar el alcohol primario OMe El éter metílico del Paso 2 (23.5 kg, en heptano al 29.5% en peso) se cargó en un recipiente de acero revestido de vidrio en una atmósfera de gas inerte. La solución se enfrió a 0°C y después se cargó borano 1 M en THF (51.2 kg) durante un periodo de 30 minutos mientras se mantenía la temperatura por debajo de 20°C. Después, la mezcla se dejó madurar durante 15 minutos, después de lo cual el análisis por HPLC confirmó que la reacción se había completado. La reacción se interrumpió mediante la adición cuidadosa de NaOH 2 M (61.4 kg) durante 20 minutos mientras se mantenía la temperatura por debajo de 20°C. La extracción se enfrió de nuevo a 0°C y el espacio de la parte superior del reactor se purgó para retirar cualquier H2 residual.
Cuando se completó la inactivación, se cargó H202 ( 1.63 kg) durante 50 minutos mientras se mantenía la temperatura por debajo de 20°C, seguido de una hora de maduración. La extracción se enfrió de nuevo a 0°C y la reacción se interrumpió mediante la adición de Na2S203 al 10% (94 kg) durante un periodo de 1 hora mientras se mantenía la temperatura por debajo de 20°C. El espacio superior se purgó de nuevo para retirar cualquier cantidad residual de oxígeno.
Se dejó que la mezcla bifásica se sedimentara y la fase orgánica inferior se retiró. La fase acuosa se extrajo de nuevo dos veces con MTBE (89.4 kg). Los extractos orgánicos combinados se concentraron hasta alcanzar un volumen de 50 I. Se añadió heptano (100 kg) a los extractos orgánicos concentrados y la extracción se destiló de nuevo hasta alcanzar un volumen de 50 I. Se añadió DCM (67.5 kg) y la extracción se añadió gota a gota a un tambor limpio revestido de plástico. El recipiente se aclaró con DCM (67.5 kg), para dar una solución final de DCM:heptano del producto (169.8 kg; 23.41 kg de producto, 91 %).
Paso 4: Oxidación para dar el aldehido TEMPO, NaHC03, NaOCI, KBR, H2Q + Se cargaron NaHCO3 (3.07 kg) y KBr (1.86 kg) en un recipiente de acero revestido de vidrio. Después de purgar el recipiente con N2, se añadió agua (70 kg). En el recipiente se cargó el alcohol en DCM:heptano del Paso 3 (169.8 kg, 13.79% en peso) a través de un filtro y la mezcla se enfrió a 0°C. Después, se añadió TEMPO (0.49 kg), seguido de la adición de hipoclorito de Na (95 kg) durante un periodo de 1 hora mientras se mantenía la temperatura por debajo de 20°C. El análisis por HPLC indicó que la reacción no se había completado después de un periodo de maduración de 10 minutos, y se añadió más cantidad de hipoclorito de Na (20 kg) para completar la reacción. La reacción se interrumpió mediante la adición de una solución acuosa al 10% de Na2S203 (51.5 kg), que se añadió durante un periodo de 20 minutos mientras se mantenía la temperatura por debajo de 20°C. La fase orgánica inferior que contenía el producto se retiró y la capa acuosa se extrajo con MTBE (58.4 kg). Las corrientes orgánicas combinadas se cargaron en un tambor de acero limpio revestido de plástico (22.04 kg de producto, en forma de una solución en MTBE/DCM; al 9.87% en peso, 95%).
Paso 5: Preparación del aducto de bisulfito Se cargaron metabisulfito sódico (1 1.9 kg) y agua (55.1 kg) en un recipiente de acero revestido de vidrio, seguido de la adición del aldehido del Paso 4 (223.4 kg, 9.87% en peso) y después la mezcla se calentó a 28°C. Después de un periodo de maduración de diez minutos, el análisis por HPLC confirmó la formación del aducto de bisulfito. Se dejó que la mezcla bifásica se separara y la capa acuosa que contenía el producto se retiró. La capa orgánica se lavó con agua (55.2 kg) y después las dos fases acuosas se combinaron y se lavaron con MTBE (55.1 kg). La capa acuosa se puso en un tambor de acero limpio revestido de plástico (31.2 kg de aducto de bisulfito en agua; al 21.75% en peso).
Paso 6: Prep. del aducto de Strecker protegido con BOC Se cargaron Etilamina HCI (1 1.69 kg) y NaCN (7.03 kg) en un recipiente de acero revestido de vidrio de 400 I equipado con una torre de lavado que contenía NaOCI al 1% y NaOH 1 M (250 I). El recipiente se volvió inerte de nuevo usando un ciclo de vacío/N2> después de lo cual se añadió agua (106.1 kg), seguido de metanol (74.04 kg). La solución se agitó durante 5 minutos y después se cargó la solución de aducto de bisulfito en agua del Paso 5 (143.4 kg, 21.75% en peso). Después, se cargó TEA (29.22 kg) durante un periodo de 15 minutos mientras se mantenía la temperatura por debajo de 30°C. Después, la mezcla se dejó madurar durante un total de 3 horas. El análisis por HPLC indicó una reacción incompleta, así que se cargaron más cantidad de NaCN (0.703 kg, 0.15 equiv.) y etilamina-HCI (1.17 kg, 0.15 equiv.), seguido de TEA (2.9 kg, 0.3 equiv.). Después, a la mezcla de reacción se le añadió MTBE (69.4 kg). La fase acuosa que contenía restos de cianuro se eliminó y después la fase orgánica se lavó con una solución al 5% de NaHCO3 (93.6 kg).
Se cargó anhídrido de Boc (22.95 kg) en un recipiente de acero revestido de vidrio pre-calentado a 30°C. Después del ciclo de vacío/N2 en el recipiente, el anhídrido de BOC se disolvió en MTBE (46.24 kg), la solución resultante se enfrió a 25°C y la solución enfriada se añadió a la solución de aducto de Strecker durante un periodo de 10 minutos. Después, la extracción se dejó madurar durante un total de 48 horas a 25°C. El análisis por HPLC indicó una reacción incompleta, así que se realizó una carga más de BOC-anhídrido (13.72 kg, 1.3 equiv.), la mezcla se agitó a 25°C durante 16 horas y después la extracción se calentó a 50°C durante 5 horas. Después, se añadió una solución al 10% de NaHC03 (93.6 kg). La fase acuosa se retiró y los extractos orgánicos se concentraron hasta alcanzar un volumen de 63 I. Se añadió metanol (123.4 kg) y la extracción se concentró hasta alcanzar un volumen de 63 I. Se añadió metanol (123.4 kg) y la solución se puso en un tambor de acero limpio revestido de plástico (30.6 kg de aducto de BOC Strecker formado en forma de una solución en metanol; al 27.8% en peso, 90%).
Paso 7: Formación de Amidoxima La solución en metanol del nitrilo del Paso 6 (30.6 kg, 1 10 kg al 27.7% en peso), MeOH (47 kg) y agua (30 kg) se cargaron en un recipiente revestido de vidrio y la mezcla se agitó a 25°C. A la mezcla de reacción se le añadió hidroxilamina (10.7 kg) durante 30 minutos, mientras se mantenía la temperatura de la extracción a 40°C o menos. La solución agitada resultante se calentó a 50°C y se dejó madurar a esta temperatura durante 14 horas. Después, la mezcla de reacción se enfrió a 25°C y se añadió MTBE (89 kg). Se añadió AcOH acuoso (9.7 kg en 150 kg de agua) y la mezcla de reacción se agitó durante 15 minutos. La capa acuosa se retiró, seguido de la capa orgánica. La capa acuosa se extrajo de nuevo dos veces con MTBE (57 kg y después 77 kg). Los extractos orgánicos combinados se analizaron para determinar el contenido de hidroxilamina residual. La extracción se concentró, usando vacio parcial, hasta alcanzar un volumen de -200 I. La solución de MTBE de la amidoxima se almacenó en un tambor de acero revestido de plástico en una atmósfera de nitrógeno a 5°C para el uso posterior.
Paso 8: Formación de aducto de DMAD La solución de la amidoxima en MTBE del Paso 7 se cargó en un recipiente revestido de vidrio, seguido de la adición de MeOH (26 kg). La solución resultante se enfrió a 0°C y después se añadió DMAD (12.12 kg) durante 15 minutos, mientras se mantenía la temperatura a 10°C o menos. La solución se calentó a 20°C y se dejó madurar a esta temperatura durante 16 horas. A la extracción se le añadió aHC03 acuoso (6.6 kg en 132 kg de agua) y se agitó durante 15 minutos. La capa acuosa se retiró y la capa orgánica se lavó con agua (60 kg). La extracción se concentró, usando vacío parcial, hasta alcanzar un volumen de aproximadamente 80 I. A la extracción se le añadió tolueno (173 kg) y se concentró usando vacío parcial hasta alcanzar un volumen de aproximadamente 190 I. Esto produjo una solución al 24.3% en peso del aducto de DMAD (159.4 kg en total; 38.74 kg de ensayo; rendimiento del 87% en 2 pasos), que se almacenó en un tambor de acero revestido de plástico en una atmósfera de nitrógeno a 5°C para el uso posterior.
Paso 9: Formación de Pirimidinona La solución de aducto de DMAD en tolueno del Paso 8 (158.6 kg, al 24.46% en peso) se transfirió durante un periodo de 2 horas a un recipiente de acero revestido de vidrio que contenía xilenos a la temperatura de reflujo (137.6 kg, 160 I) a aproximadamente 140°C. Se dejó que el tolueno y el MeOH se retiraran por destilación durante la transferencia del aducto. Se realizó una segunda carga de xilenos (86 kg, 100 I) en el recipiente y la destilación continuó hasta que se alcanzó un volumen final de 260 I. La extracción se enfrió a 25°C durante un periodo de siete horas, después de lo cual el análisis por HPLC indicó que la reacción se había completado. La corriente de reacción se filtró y se lavó con xilenos (2 x 17.2 kg) para producir una solución al 15.67% en peso de la pirimidinona (148.7 kg en total; al 15.7% en peso, 23.3 kg de ensayo; 66%), que se almacenó en un tambor de acero revestido de plástico en una atmósfera de nitrógeno a 5°C para el uso posterior.
Paso 10: Formación de Amida La solución de xileno del éster metílico de pirimidinona del Paso 9 (23.3 kg en forma de una solución al 15.7% en peso en xilenos; 148.7 kg) se cargó en el recipiente revestido de vidrio equipado con una torre de lavado que contenía HCI 1 N (200 I). Después, la solución de xileno se concentró por destilación hasta alcanzar un volumen final de 50 I (2.15 vol). Después, se cargó metanol (184.5 kg) en el recipiente, seguido de TEA (9.08 kg) y 4-fluorobencilamina (7.5 kg). El contenido del recipiente se calentó a 63°C y se dejó madurar a esa temperatura durante un periodo de 16 horas. La extracción se enfrió a menos de 40°C y se cargó más cantidad de 4-fluorobencilamina (4.88 kg, 0.5 equiv.). La extracción se dejó a 62°C durante 16 horas más y después se enfrió a temperatura ambiente y se dejó madurar durante 48 horas más. Después, la extracción se calentó de nuevo a reflujo moderado durante 3 horas más. El contenido del recipiente se concentró hasta alcanzar un volumen final de 80 I y después se añadió MTBE (148 kg). La corriente orgánica se lavó secuencialmente con una solución al 5% de NaHC03 (100 kg), una solución al 10% de AcOH (100 kg), HCI 1 N (50 kg) y agua (100 kg). Los extractos orgánicos se concentraron hasta alcanzar un volumen final de 50 I. Se añadió etanol (78.9 kg) y la corriente orgánica se concentró hasta alcanzar un volumen final de 138 I. El contenido del recipiente se transfirió a un tambor de acero limpio revestido de plástico (al 18% en peso, 23.23 kg de amida, 90%).
Paso 1 1 : Desbencilación La solución de amida de partida (15.5 kg) en etanol (total 93.4 I; 86.2 kg + aclarado de etanol (10 I)) se añadió a un recipiente de reacción que contenía Pd al 20%/C (3.10 kg), seguido de la adición de HCI acuoso 1 N (3.1 I). El recipiente se evacuó y se purgó con nitrógeno y la mezcla se ajustó a una temperatura de aproximadamente 20°C. Después, el recipiente se evacuó y después se ajustó a una presión de hidrógeno de 4.1 Barg. La mezcla de reacción con agitación se calentó a 40°C hasta que cesó la captación de hidrógeno. Después, la mezcla de reacción se filtró a través de solka floc, se lavó con etanol (40.4 kg) y se recogió en un tambor de acero limpio revestido de plástico (137 I en total; 12.56 kg de ensayo; rendimiento de ensayo del 95%). Se realizó una segunda realización.
Las extracciones de alcohol en etanol de las dos realizaciones se combinaron (182.8 kg, al 10.28% en peso) y se cargaron en un recipiente revestido de vidrio y la solución se concentró hasta alcanzar un volumen final de 50 I. Se añadió MTBE (1 11.6 kg, 151 I), seguido de TEA (7.35 kg, 2 equiv.) y agua (150.7 kg). La mezcla resultante se agitó durante 15 minutos. La capa acuosa, que contenía el producto, se retiró, seguido de la capa orgánica. La capa acuosa se lavó con MTBE (2 x 41.8 kg). Los cortes de MTBE combinados se lavaron con una solución de TEA (0.73 kg, 0.2 equiv.) en agua (56.5 kg). La fase acuosa inferior se retiró y se combinó con la fase acuosa previa (ambas contenían producto). A la fase acuosa que contenía el producto se le añadió MTBE (112 kg), seguido de HCI 1 N (98 kg). La mezcla se agitó durante 30 minutos y después la capa acuosa inferior se retiró. La corriente orgánica, que contenía el producto, se concentró hasta alcanzar un volumen de 40 I, después se lavó abundantemente con THF (178 kg) y se concentró hasta alcanzar un volumen de 94 I. Esto produjo una solución en THF del alcohol (18.45 kg de ensayo; recuperación del 98%), que se almacenó en un tambor de acero revestido de plástico en una atmósfera de nitrógeno a 5°C para el uso posterior.
Paso 12: Mesilación y delación del anillo de siete miembros Una solución en THF del producto del Paso 1 1 se cargó en un recipiente revestido de vidrio y después se enfrió a 0°C, después de lo cual se añadió TEA (19.6 kg) durante 15 minutos, mientras se mantenía la temperatura a 10°C o menos. Se añadió MsCI (16 kg) durante 35 minutos, mientras se mantenía la temperatura a 10°C o menos. La solución se dejó madurar a 10°C durante 10 minutos. Después, se añadió agua (53 kg), seguido de HCI acuoso 2 N (3.85 kg en 50 kg de agua). Se añadió MTBE (11 1 kg, 150 I) y la extracción se agitó durante 15 minutos. La capa acuosa se retiró, seguido de la capa orgánica. El corte acuoso se extrajo de nuevo con MTBE (37 kg), y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (40 kg). La extracción se concentró, usando vacío parcial, hasta alcanzar un volumen de aproximadamente 80 I. A la extracción se le añadió tolueno (87 kg) y se concentró, usando vacío parcial, hasta alcanzar un volumen de aproximadamente 60 I (KF = 1437 ppm). Después, la solución de mesilato se diluyó con DMSO (58 kg) y se transfirió a un recipiente revestido de vidrio.
Se cargó NaHC03 (20.7 kg) en un recipiente separado revestido de vidrio, seguido de DMSO (1 17 kg), y la solución se calentó a 35°C, después de lo cual la solución de mesilato se transfirió al mismo durante 1 hora. La mezcla resultante se calentó a 80°C. La mezcla de reacción se calentó a 80°C durante 16 horas, momento en el que el análisis por HPLC mostró que la reacción se había completado. La extracción se enfrió a 25°C. A la extracción se le añadió EtOAc (89 kg), seguido de HCI acuoso 2 N (14 kg en 95 kg de agua). La capa acuosa se retiró, seguido de la capa orgánica. El corte acuoso se extrajo de nuevo con EtOAc (82 kg) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (90 kg). La extracción se concentró, usando vacío parcial, hasta alcanzar un volumen de -54 I (KF = 138 ppm) para producir una solución al 18.67% en peso del producto ciclado (83.7 kg en total; 15.63 kg de ensayo; rendimiento del 88% en 2 pasos), que se almacenó en un tambor de acero revestido de plástico en una atmósfera de nitrógeno a 5°C para el uso posterior.
Paso 13: Formación del besilato El fenol en acetato de etilo del Paso 12 (15.5 kg; 83.6 kg a 18.5% en peso) se cargó en un recipiente de acero revestido de vidrio, y la solución se enfrió a 5°C. Después, se añadió TEA (6.84 kg), seguido de cloruro de bencenosulfonilo (10.85 kg) durante un periodo de 10 minutos, mientras se mantenía la temperatura de la extracción a menos de 10°C. Después, la extracción se dejó madurar a una temperatura de menos de 10°C durante 1 hora, después se calentó a 20°C y después la extracción se agitó a esta temperatura durante 16 horas. Se añadió EtOAc (13.9 kg), seguido de agua (31 kg) y TEA (300 g, 0.1 equiv.). La mezcla se calentó a 50°C, se dejó madurar durante 2 horas, después se enfrió a 25°C y se añadió DCM (104.6 kg). Se añadió HCI 1 N (38.6 kg) y la mezcla se agitó durante 15 minutos. La fase orgánica se retiró y la capa acuosa se extrajo con DCM (21 kg). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con una solución al 5% de NaHC03 (129 kg) que después se extrajo de nuevo con DCM (21 kg). Los extractos orgánicos combinados se concentraron a vacío parcial hasta alcanzar un volumen de 120 I. Se añadió acetato de etilo (50 kg) y los extractos orgánicos se concentraron hasta alcanzar un volumen final de 170 I y se usaron directamente en el siguiente paso.
Paso 14: Boc-desprotección La solución de Boc-amina en EtOAc del Paso 13 (170 I, 16.8 kg) se cargó en un recipiente revestido de vidrio y la solución se enfrió a 15°C. Se añadió ácido metanosulfónico (7.51 kg) durante 20 minutos mientras se mantenía la temperatura por debajo de 30°C. La mezcla se calentó cuidadosamente a una temperatura interna de 60°C y se dejó madurar durante 3 horas. Después, la mezcla se enfrió a 10°C y se añadió una solución 1 M de K2C03 (K2CO3 [10.8 kg] en agua [78 kg]) mientras se mantenía la temperatura por debajo de 20°C. La capa acuosa se retiró, seguido de la capa orgánica. El corte acuoso se extrajo de nuevo con EtOAc (30.2 kg). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (56 kg) y después se concentraron hasta alcanzar un volumen final de 56 I. Se añadió EtOAc (89 kg) para diluir la solución a 140 I para producir una solución de la amina (140 I en total; 16.58 kg de ensayo; rendimiento del 99% en 2 pasos), que se almacenó en un tambor de acero revestido de plástico en una atmósfera de nitrógeno a 5°C para el uso posterior.
Paso 15: Formación de la enamina La solución de EtOAc de la amina del Paso 14 (140 I en total; 16.58 kg de ensayo) y f-butanol (1 .13 kg) se cargaron en un recipiente revestido de vidrio, seguido de la adición de t-butanol (1.13 kg). La solución resultante se enfrió a 5°C y después se añadió ácido acético (2.01 kg) durante 10 minutos, mientras se mantenía la temperatura a 10°C o menos. Se añadió hipoclorito sódico (40.9 kg) durante 40 minutos, mientras se mantenía la temperatura a 10°C o menos. La solución se dejó madurar a 5°C durante 20 minutos. Se realizó una carga adicional de hipoclorito sódico (1 1 kg, 0.3 equivalentes) y la extracción se dejó madurar durante 10 minutos. La extracción se calentó a 20°C y la agitación se interrumpió. La capa acuosa se retiró y la capa orgánica se lavó con NaCI acuoso al 5% (2.25 kg en 45 kg de agua). La extracción se enfrió a 5°C y después se añadió DBU (5.1 kg) durante 20 minutos, mientras se mantenía la temperatura a 10°C o menos. La extracción se dejó madurar a 10°C durante 20 minutos, momento en el que el análisis por HPLC mostró la reacción se había completado en >98% en la enamina.
A la extracción se le añadió agua (85 kg) y la mezcla se agitó durante 15 minutos. La capa acuosa se retiró, seguido de la capa orgánica. El corte acuoso se extrajo de nuevo con EtOAc (46 kg) y después los extractos orgánicos combinados se lavaron con sulfito sódico (1.92 kg en 16 kg de agua) y después con NaCI acuoso (1 kg en 51 kg de agua). La extracción se concentró, usando vacío parcial, hasta alcanzar un volumen de -50 I. A la extracción se le añadió MTBE (89 kg) durante 20 minutos y la suspensión se enfrió a 15°C y se dejó madurar durante una noche. La extracción se filtró, lavando la torta con MTBE (27 kg) y después se secó en el filtro usando una presión positiva de nitrógeno (rendimiento del ensayo de 74%).
Después, el sólido de enamina se cargó en un recipiente revestido de vidrio, seguido de ACN (59 kg) y la suspensión resultante se calentó a 50°C hasta que se disolvió todo el sólido. Después, a la extracción se le añadió agua (75 kg) durante 20 minutos. La extracción se enfrió a 5°C durante 1 hora, se filtró y la torta húmeda resultante se lavó tres veces con una mezcla 1 :1 de ACN (6 kg) y agua (8 kg), después se secó durante una noche en la estufa, al vacío, a 50°C para producir la enamina en forma de un sólido de color amarillo, 8.8 kg, 75% de la enamina en bruto. 1H RMN: (400 MHz, d6-DMSO): d 9.15 (1 H, t, J = 6.0 Hz), 7.94-7.91 (2H, m), 7.80 (1 H, t, J = 7.6 Hz), 7.65 (2H, t, J = 7.6 Hz), 7.35-7.30 (2H, m), 7.18-7.11 (2H, m), 5.15 (1 H, t, J = 5.4 Hz), 4.80 (1 H, t, J = 8.0 Hz), 4.35 (1 H, dd, J = 13.6, 3.6 Hz), 4.31 (2H, d, J = 6.0 Hz), 3.92-3.86 (1 H, m), 3.77 (1 H, dd, J = 13.6 Hz, 4.0 Hz), 3.26 (3H, s), 2.93-2.86 (2H, m), 2.32-2.25 (1 H, m), 1.90-1.82 (1 H, m), 1.15 (3H, t, J = 7.0 Hz).
Paso 16: Hidroqenación Asimétrica En una caja de manipulación con guantes purgada con nitrógeno con O2 < 5 ppm, se añadieron tetrafluoroborato de bis(norbornadieno)rodio (I) (345 mg, 0.922 mmol), (S)-1-[(R)-2-(di-2-furilfosfino)ferrocenil]etildi-terc-butilfosfina (505 mg, 0.968 mmol) y diclorometano (4.6 mi) a un vial de 20 mi. La mezcla del catalizador se agitó durante 30 minutos y se transfirió a un recipiente de acero inoxidable de 25 mi con la ayuda de 10 mi de 2,2,2-trifluoroetanol (TFE). Se añadieron 10 mi de TFE a un segundo recipiente de acero inoxidable de 25 mi y el aparato de carga de catalizador se cerró herméticamente y se retiró de la caja de manipulación con guantes.
Se preparó una solución de 12.16 mi (147 mmol) de ácido dicloroacético en 350 mi de TFE. Se añadieron lentamente 55 mi (184 mmol) de isopropóxido de titanio (IV) con agitación vigorosa y se agitó hasta que la mezcla fue homogénea. Se añadió la enamina de partida (100 g, 184 mmol) con la ayuda de 50 mi TFE y se agitó para dar una solución de color rojo oscuro-naranja. La solución se extrajo con vacío en un autoclave agitado de 1 I con la ayuda de 80 mi más de TFE. El acople de carga de catalizador se adjuntó mediante un tubo flexible. El autoclave se hizo inerte con tres purgas de nitrógeno/vacío y se puso a vacío parcial. La solución de catalizador se extrajo en el autoclave seguido del aclarado con TFE. El autoclave se sometió a tres purgas de hidrógeno, se ajustó a una temperatura de 25°C y se presurizó con gas hidrógeno a 100 psig. La mezcla de reacción se agitó a 1000 rpm durante 18 horas.
LC-MS: (M+H)+ = 545.0 La solución de reacción en bruto se diluyó con 1.5 I de IPAC y después se añadió glicolato potásico (1 I de una solución 5 M en agua) a temperatura ambiente, y la mezcla se dejó madurar durante 2 horas. Después, la mezcla de reacción se lavó con una solución acuosa al 5% en peso de NaHC03 y después con una solución acuosa al 5% de NaCI. La capa orgánica se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró hasta alcanzar un volumen de 0.5 I, y la capa orgánica concentrada se mezcló con PTSA monohidrato (30.3 g), ácido p-toluenosulfónico monohidrato en 0.9 I de IPAc en presencia de una siembra del 2% a 50-60°C. La suspensión se dejó madurar durante 12 horas a temperatura ambiente, se filtró, se lavó con 0.1 I de IPAC y después con 200 mi de IPAc/n-heptano (mezcla 1 :1 ) y el sólido se secó al vacío a temperatura ambiente para producir la sal PTSA de amina (105.9 g, al 92.2% en peso, rendimiento del 73%). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d 9.31 (s a, 1 H), 9.01 (s a, 1 H), 7.98-7.96 (m, 2 H), 7.68-7.65 (m, 1 H), 7.56-7.50 (m, 4H), 7.20 (dd, J = 8.3, 5.5 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.86 (t, J = 9.7 Hz, 2H), 5.25 (dd, J = 15.0, 5.7 Hz, 1 H), 4.51 (dd, J = 14.6, 6.4 Hz, 1 H), 4.37 (s a, 1 H), 4.23 (dd, J = 14.6, 5.8 Hz, 1 H), 3.55 (s a, 1 H), 3.37-3.26 (m, 2H), 3.18 (s, 3H), 3.14-3.09 (m, 1 H), 2.32 (s, 3 H), 2.28-2.20 (m, 1 H), 2.17-2.04 (m, 2H), 1.90 (s a, 1 H), 1.83-1.70 (m, 1 H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3 H).
La sal PTSA de amina puede tratarse después con la cantidad apropiada de base (por ejemplo, NaOH o metilamina) y la amina libre resultante puede acilarse después con ácido ?,?-dimetiloxámico de una manera similar a la descrita en el Paso 12 del Ejemplo 6-1 para proporcionar el Compuesto 6A que puede recristalizarse, por ejemplo, de la manera que se ha descrito al final del Ejemplo 6-1.
EJEMPLO 14 Preparación Alternativa de la Enamina en el Paso 15 del Ejemplo 13 Paso 1 : Formación de la cetona El material alcohólico de partida (4.1 g, 7.92 mmol) se disolvió en acetonitrilo (30 mi) y agua (15 mi) en un matraz de FR de 150 mi con un agitador situado en la parte superior. Se añadió tricloruro de rutenio trihidrato (0.041 g, 0.158 mmol), seguido de la adición en una porción de bromato sódico (0.7 g, 4.64 mmol) a temperatura ambiente, dando como resultado una exotermia moderada y gradual de 18°C hasta 25°C durante 10 minutos. La mezcla de reacción se dejó madurar a temperatura ambiente durante 1 hora, después se añadió agua (15 mi) y la suspensión se dejó madurar durante 30 minutos a temperatura ambiente. Después, la suspensión se filtró, se aclaró con 60/40 de agua/acetonitrilo (25 mi) y se secó a 45°C en una estufa de vacío durante 4 horas para producir la cetona deseada en forma de un sólido cristalino de color blanco (3.3 g, rendimiento del 83%).
Paso 2: Formación de la enamina Se añadió etilamina (2.0 M en THF, 2.91 mi) a una mezcla de sulfato sódico (331 mg) y ácido acético (384 mg) en MeCN (6 mi) y la suspensión resultante se dejó madurar durante 5 minutos, después de lo cual se añadió la cetona de partida (600 mg) en MeCN (6 mi). Después, la mezcla de reacción se dejó madurar a 35°C durante 3 horas, se enfrió a temperatura ambiente, se filtró y se concentró hasta alcanzar un volumen de 6 mi. La mezcla resultante se añadió a una solución acuosa 1 M de NaHC03 (40 mi) y el sólido se filtró, se lavó con agua y se secó al vacío a 35°C durante 12 horas para producir un sólido de color amarillo (530 mg, rendimiento del 82%). 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6): d 9.16 (t, J = 6.1 Hz, 1 H), 7.93-7.91 (m, 2H), 7.80 (t, J = 7.4 Hz, 1 H), 7.65 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.34-7.31 (dd, J = 8.6, 5.6 Hz, 2H), 7.18-7.1 1 (m, 2H), 5.15 (s a, 1 H), 4.79 (t, J = 7.7 Hz, 1 H), 4.36-4.33 (m, 1 H), 4.31 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.92-3.86 (m, 1 H), 3.77 (dd, J = 13.6 Hz, 4.0 Hz, 1 H), 3.26 (s, 3H), 2.90 (c, J = 7.0 Hz, 2H), 2.32-2.25 (m, 1 H), 1.89-1.84 (m, 1 H), 1.15 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
Aunque la memoria descriptiva anterior muestra los principios de la presente invención, con ejemplos proporcionados con el propósito de ilustración, la práctica de la invención abarca todas las variaciones, adaptaciones y/o modificaciones habituales que están dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones.

Claims (25)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES 1.- Un compuesto de Fórmula I: 1 p o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde: cada X y X es independientemente H, halógeno, o alquilo C1-3, con la condición de que al 1 2 1A menos uno de X y X sea distinto de H; Y es CH2 u O; R es H o alquilo C -3; 1 B 2 3 R es H, alquilo C1-3 u O-alquilo C1-4; R es H o alquilo 0·,_3; y R es alquilo 3; y con la condición de que: (C) cuando Y es O, entonces R1A y R1 B sean los 2 2 1A dos H, R sea alquilo C1-3¡ y (D) cuando Y es CH2, entonces (i) R sea H, R 1 B 2 sea alquilo C1-3 y R sea alquilo C1-3 u O-alquilo C1-4; (ii) R sea alquilo C1-3
1 A 1B 2 1A 1 B R sea H y R sea H; o (iii) R sea H, R sea H y R sea O-alquilo C^.
2 - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado además porque: X1 2 1 es F o CH3; X es H, F o CH3 y con la condición de que: (A) cuando X es F, 2 1 2 entonces X sea H o CH3 y (B) cuando X es CH3, entonces X sea F; Y es CH2 u O; R1A es H o CH3; R1B es H, CH3 u OCH3; R2 es H, CH o CH2CH3; y R3 es CH3 o CH2CH3; y con la condición de que: (C) cuando Y es O, entonces 1A 1B 2 3 R y R sean los dos H, R sea CH3 o CH2CH3 y R sea CH3¡ y (D) cuando Y 2 3 1A 1B es CH2, entonces (i) R sea H, R sea CH3> R sea CH3 y R sea CH3 u OCH3; (ii) R2 sea CH3 R3 sea CH3, R1A sea H y R1 B sea H; o (iii) R2 sea H, R3 sea CH2CH3, R1A sea H y R1B sea OCH3.
3.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado además porque el compuesto es un compuesto de Fórmula II: (II) 1 A 1 B con la condición de que: (C) cuando Y es O, entonces R y R sean los dos H y R2 sea CH3 o CH2CH3; y (D) cuando Y es CH2, entonces (i) R2 sea H, R A sea CH3 y R1 B sea CH3 u OCH3, o (ii) R2 sea CH3 y R A sea H y R1 B sea H.
4.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado además porque el compuesto es un compuesto de Fórmula III: (III). 2 donde R es H.
5. - El compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado además porque el compuesto es un compuesto estereoméricamente puro.
6. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado además porque el compuesto es el compuesto 1A, Compuesto 1 B, Compuesto 2A, Compuesto 2B, Compuesto 2C, Compuesto 2D, Compuesto 3A, Compuesto 3B, Compuesto 4A, Compuesto 4B, Compuesto 4C, Compuesto 4D, Compuesto 5A, Compuesto 5B, Compuesto 5C, Compuesto 5D, Compuesto 6A o Compuesto 6B.
7 - El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado además porque el compuesto es el Compuesto 1A, Compuesto 2A, Compuesto 2D, Compuesto 4A, Compuesto 4B, Compuesto 4C, Compuesto 5A, Compuesto 5B, o Compuesto 6A.
8.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado además porque el compuesto es el Compuesto 1A.
9.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado además porque el compuesto es el Compuesto 2A.
10. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 9 que es una forma cristalina del Compuesto 2A, caracterizado además porque el Compuesto cristalino 2A tiene un patrón de difracción de polvos por rayos X obtenido usando radiación de cobre KQ que comprende valores 2T en grados de aproximadamente 8.5, 9.3, 13.3, 17.0, 18.8 y 20.8. 1 1. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado además porque el compuesto es el Compuesto 2D. 12. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado además porque el compuesto es el Compuesto 4A. 13. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 12 que es una forma cristalina del Compuesto 4A, caracterizado además porque el Compuesto 4A cristalino tiene un patrón de difracción de polvos por rayos X obtenido usando radiación de cobre KQ que comprende valores 2T en grados de aproximadamente 6.1 , 10.4, 12.9, 13.7, 19.4 y 22.9. 14. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado además porque el compuesto es el Compuesto 4B. 15. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado además porque el compuesto es el Compuesto 4C. 16. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado además porque el compuesto es el Compuesto 5A. 17. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 16 que es una forma cristalina del Compuesto 5A, caracterizado además porque el Compuesto 5A cristalino tiene un patrón de difracción de polvos por rayos X obtenido usando radiación de cobre Ka que comprende valores 2T en grados de aproximadamente 8.4, 8.6, 18.0, 20.5, 20.8, 25.2, 26.1 y 27.2. 18. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 16 que es una forma cristalina del Compuesto 5A, caracterizado además porque el Compuesto 5A cristalino tiene un patrón de difracción de polvos por rayos X obtenido usando radiación de cobre Ka que comprende valores 2T en grados de aproximadamente 8.4, 8.6, 18.0, 20.4, 20.8, 25.9, 26.2 y 27.1. 19. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado además porque el compuesto es el Compuesto 5B. 20. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado además porque el compuesto es el Compuesto 6A. 21. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 20 que es una forma cristalina del Compuesto 6A, caracterizado además porque el Compuesto 6A cristalino tiene un patrón de difracción de polvos por rayos X obtenido usando radiación de cobre KQ que comprende valores 2T en grados de aproximadamente 10.6, 14.2, 17.4, 18.8 y 20.4. 22. - El compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 21 , caracterizado además porque el compuesto es estereoméricamente puro. 23. - Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un transportador farmacéuticamente aceptable. 24. - El uso del compuesto que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para preparar un medicamento para el tratamiento o profilaxis de una infección por el VIH o para el tratamiento, profilaxis o retardo en la aparición o progresión del SIDA en un sujeto. 25. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la preparación de un medicamento para la inhibición de la integrasa del VIH, para el tratamiento o profilaxis de una infección por el VIH o para el tratamiento, profilaxis o retardo en la aparición o progresión del SIDA en un sujeto que necesita del mismo.
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