MX2010014087A - Portador de farmaco. - Google Patents

Abstract

Un portador de fármaco caracterizado por contener principalmente un fosfolípido modificado con polietilenglicol y un lípido catiónico que contiene el fosfolípido modificado con polietilenglicol en una concentración dentro de un intervalo específico. El portador de fármaco, que es del tipo de residencia en sangre, se caracteriza por comprender un fosfolípido modificado con polietilenglicol representado por la siguiente fórmula general (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: (ver fórmula (I)) [en donde X representa los siguientes (II) o (III); y n es un número entero de 30 a 150] (ver fórmulas) [en donde R1 representa un residuo de ácido graso C17-22 lineal, saturado y 2-O-(2-dietilaminoetil)carbamoil-1,3-O-dioleilglilcerol . Además, se caracteriza en que el fosfolípido modificado como polietilenglicol representado por la fórmula general (I) está contenido en una cantidad de 30-50 % en peso en base a la cantidad total de los lípidos en el portador de fármaco.

Description

PORTADOR DE FARMACO Campo de la Invención La presente invención se refiere a u dor de fármaco de circulación prolongada.

Antecedentes de la Invención j Recientemente se ha enfocado la ate iñas de ácido nucleico 'tal como un AR sint I hebra (tal como poli (|I ) -poli (C) ) , un ARN c ferencia (ARNsi) que utiliza interferencia ) , un ARNmicro (ARNmi) , un ARN corto de h h) , un ADN antisentido, y un ARN antisentido, qu i i iado de forma activa. Esta medicina de acido nuc istra difícilmente a un te Ijido con una lesión au medicina se administrej sistemáticamente d I endiente en el cuerpo a través de, por ejem trada) , y un liposoma eatiónico (más adelant nte referido como "Liposoma de compue ene 2-0- (2 -dietilaminoetil) carbamoi oilglicerol (más adelante en la presente refer uesto A") y un fosfolípido como componentes es , por ejemplo, Documento 1 de patente) . Puesto q omas catiónicos tienden a acumularse fácilment o y bazo cuando se administran sistemáticame lo a través de una vena, se espera aplicar los 1 I nicos como un agente terapéutico para cáncer de itis al incorpora una medicina de ácido nucleic somas catiónicos. Actualmente, se reporta que un iposoma del Compuesto A con un ARN sintético tal como poli ( I ) -poli (C)¡ es efectivo en el tra áncer de hígado o hepatitis (ver, por ejemplo, D patente, Documento 3 de patente, Documento ituye un liposoma modificado con polietilengl I me la captación en el sistema reticuloendotelia I anto, se mejora la propiedad en circulación e , por ejemplo, Documento 3 no de patente) .

Sin embargo, el lípido modificad tilenglicol puede disminuir la eficiencia 1 iña incorporada en el liposoma con un incremen nido del lípido. De esta¡ manera es importante a ípido en una cantidad mínima capaz de tener la p irculación prolongada (ver, por ejemplo, Docume I te) . , Se reporta que la diestearoil-fofatidil-eta i ficada con polietilenglicol como un component I soma hace más prolongado el tiempo de circulació i idad de aproximadamente 4! % en mol en los lípidos i constituyen el liposoma (yer, por ejemplo, Docume I 4 ngación en el tiempo de circulación o en el sión de la eficiencia del fármaco.

Documento 1 de patente: O 94/19314 Al Documento 2 de patente: WO 99/20283 Al I Documento 3 de patente: WO 99/48531 Al Documento 4 de patente: WO 2005/051351 A2 Documento 5 de patenté: WO 2006/074546 Al I Documento 6 de patenté: WO 2006/007712 Al I Documento 7 de patente: WO 2005/120152 A2 Documento 8 de patente: CA 2271582 Al Documento 9 de patente: US 2004/0166150 Al Documento 1 no de patente : Kazuko Hirabayashi , r Research, 1999, Vol. 59, ¡pp. 4325-4333 Documento 2 no de patente: Kazuko Hirabayashi, ! ogy Research, 1999, Vol. 11, pp.497-504 Documento 3 no de patente: Tatsuhiro Ishida, a composición farmacéutica que contiene el por I I có que incorpora una medicina. s para Solucionar los Problemas Después de que los presentes inventores I ios intensivos, encontraron que un portador de fá I ene un fosfolípido modificado con polietilenglicol estructura específica y el Compuesto A, como co I íales, el fosfolípido modificado con polietilenglic dor de fármaco una propiedad de circulación prolo lta concentración de 30 a 50 % en peso en el peso I I ípidos en el portador de fármaco, y también permite iña contenida en el portador de fármaco exhiba in encia.

Como resultado, se ha : completado la presente i La presente invención incluye, por ejem entes invenciones descritas en 1 y 2. donde X representa los siguientes (II) o (II senta un número entero de 30 a 150] , donde R1 representa un residuo de ácido graso, ado que tiene de 17 ai 22 átomos de carbon esto A, en donde el fpsfolípido modificado sentado por la fórmula general (I) anteri nido en una cantidad dentro de un intervalo de 3 peso en el peso total de los lípidos en el por co (referido más adelante en la presente c dor de la presente invención") .

I 2. Una composición farmacéutica, que comp roilo. ! n es un número entero dentro de un interva ¦* ! I , de manera preferente ün número entero dentr valo de 30 a 100, de manera más preferente u I I o dentro de un intervalo de 30 a 65.

El fosfolípido modificado con PEG se pu ! un ácido libre como tal, sin embargo se puede f rma de una sal farmacéuticamente aceptable por u ncional y usarse.

La sal farmacéuticamente aceptable no se l a particular, pero, los ejemplos de la misma de sodio y sal de j I potasio. Entre ést cularmente preferible la sal de sodio.

Los ejemplos preferibles del fosfolípido mo PEG incluyen 1, 3-diestearoilglicero-2-fosfa xi-polietilen-glicol-succinil) etanolamina y La Figura 3 muestra el cambio dependie o en la propiedad de circulación en plasma. cal representa la relación de distribución (% de eje horizontal representa el período de tiemp i és de la administración. i La Figura 4 muestra la propiedad en circul a a las 24 horas después de la administración. cal representa la relación de distribución (% de i eje horizontal representa el contenido (% en p lípido modificado con PEG', usado.

! La Figura 5 muestra la propiedad en circul I I a a las 24 horas después de la administración. ical representa la relación de distribución (% de eje horizontal representa el contenido (% en p I olípido modificado con PEG, usado.

La Figura 6 muestra' la propiedad en circul La Figura 8 muestra la propiedad de distrib o. El eje vertical representa la relac ibución (% de dosis) , y el eje horizontal repre I do de tiempo (horas) después de la administraci sición farmacéutica.

I La Figura 9 muestra la propiedad de distrib . El eje vertical representa la relación de dist e dosis) , y el eje horizpntal representa el pe o (horas) después de la administración de la coi céutica.

La Figura 10 muestra la propiedad de dist pulmón. El eje vertical representa la rela i ibución '(% de dosis), y él eje horizontal repre do de tiempo (horas) después de la administraci sición farmacéutica.

! La Figura 11 muestra la propiedad de dist La Figura 13 muestra la propiedad de distri cancerosos. El eje vertical representa la conce ) del portador de fármaco, y el eje ho senta el período de tiempo (horas) después istración de la composición farmacéutica.

La Figura 14 muestra la propiedad de dist lasma. El eje vertical; representa -la conce L) del portador de fármaco, y el eje ho senta el período de tiempo (horas) después istración de la composición farmacéutica.

La Figura 15 muestra el efecto anti-tumor, ical representa el volumen del tumor (mm3) , y zontal representa el período de tiempo (día) de plantación de las células de cáncer.

La Figura 16 muestra : Iel efecto antitumor en la administración continua de la composición as de cáncer.

La Figura 18 muestra el efecto anti-tumor. cal representa la proporciion de supervivencia ( horizontal representa el período de supervivenc és de la implantación de células de cáncer.

La Figura 19 muestra el efecto antitumor. ical representa el peso- del páncreas (g) .

Descripción Detallada de la Invención todo para Producir Fosfolípido Modificado con PE Un fosfolípido (la) modificado con PEG, en la fórmula (II) anterior, se puede producir cionar un derivado de amina representado por la s i ía general (la) con un derivado de PEG represen iguiente fórmula general (2) en la presencia de iada.

Un solvente que se ya a usar en la reacció ratura de reacción. En general, el tiempo de apropiadamente dentro de un intervalo de 1 o .

C 1 a ) (I a) ? 1 a fórmula, n y R son los mismos como se define anteriorm Un fosfolípido (Ib) modificado con PEG, en el cua la (III) anterior, se puede producir al desproteger ctor (R2) por un grupo amino y un grupo protector (R3) ¦i i I i etonitrilo de trietilamina; una solución acuosa en dioxa ridina-2-carboxaldoxima y N1, |,N3,N3-tetrametilguanidina; omo ácido trifluoroacético, ácido acético, y ácido clorhí Un solvente que se va a !usar en la reacción con el G representado por la fórmula general (2) no se limita cular a menos que esté comprendido en la reacción, y los iismo incluyen diclorometano, dimetoxietano, y un líquid s mismos. Los ejemplos de la base incluyen trietilamina, solución acuosa de carbonato ácido de sodio. La tempe I I ión está apropiadamente dentro de un intervalo de 0°C a o de reacción varía dependiendo del tipo de materia pri usar y de la temperatura de reacción. En general, el ??? está apropiadamente dentro de un intervalo de 1 . El grupo protector no se limita de manera par s ejemplos del mismo incluyen ter-butiloxica iloxicarbonilo . R3 representa un grupo protec o fosfórico. El grupo protector no se limita d icular, y los ejemplos | del mismo incluyen oetilo y ter-butilo. ! I I El derivado de amina representado por la ral (la) anterior se puede producir de acuerdo a rito en el documento (J. Am. Chem. Soc . , 1993, 7-10491) usando fosfatidilcolina representada íente fórmula general (3), aminoetanol represen iguiente fórmula general (4), y fosfolipasa D.

Los ejemplos del agente activador incluyen fenil-lH-tetrazol . Los ejemplos del agente yen una solución j de yodo (yodo rahidrofurano rpiridina : agua = 7:1:2) y una sol peróxido de ter-butilo. La temperatura de reacc iadamente dentro de un ¡intervalo de 0°C a 5 i nte que se va a usar no sé limita de manera part que esté comprendido en la reacción, y los ejem incluyen acetonitrilo ? diclorometano . El ti ión varía dependiendo del tipo de materia prim usar y de la temperatura de reacción. En gen o de reacción está apropiadamente dentro de un i ¡ hora a 30 horas. j U u 0 sentado por la siguiente fórmula general (7) ta en la presencia de un agente activador apropi Los ejemplos del | agente activador zolido de diisopropilamonio, tetrazol, 5- f zol, y diisopropiletilamina . Los ejemplos de un se va a usar en la conversión en una amidita , N-diisopropilamino) cianoetilfosf ito, 2-cianoe propilclorofosforoamidita, isopropilfosforoamidita . Ün solvente que se va a I imita de manera particular a menos que esté com reacción, y los ejemplos del mismo ! nitrilo y diclorometano . La temperatura de reacc iadamente dentro de un dntervalo de 0°C a i o de reacción varía dependiendo del tipo de que se va a usar y de la temperatura de reac ¡ I al, el tiempo de reacción! está apropiadamente d rito en el documento (por ejemplo, The Journal of istry, 1970, vol . 35, pp . 2082-2083) usando d roxiacetona (8) . Los ejemplos de un agente con yen N, ' -diciclohexiljcarbodiimida, 1-et tilaminopropil ) carbodiimida , y l-hidroxibenzotria i los de un agente reductor incluyen borohidruro d ( 8 ) ( 9 ) ( la fórmula, R1 es el mismo como se define anterio El Portador de la Presente Invención i El portador de la presente invención con olípido modificado con PEG y el Compuesto onentes esenciales. Específicamente, el portado so, de manera preferente dentro de un intervalo I so a 50 % en peso en el peso total de los lípid dor de la presente invención.

Con respecto a la relación de mezclado lípido modificado con PEG y el Compuesto A en el i a presente invención, la relación del Compuesto iadamente dentro de un intervalo de 0.2 a 20 p por 1 parte en peso del fosfolípido modificado I anera preferente dentro dé un intervalo de 15 s en peso, de manera más preferente dentro valo de 0.7 a 1.3 partes en peso. i Al portador de la presente invención, s I ionar adicionalmente un1 fosfolípido difere lípido modificado con PEG y el Compuesto A que I nentes esenciales. El fosfolípido no se limita d icular en cuanto a 1 que sea un fos En el caso de adicionar este fosfolípi cto a la relación de m Iezclado entre el fos icado con PEG y el fosfolípido en el portado nte invención, el fosfolípido está apropiadament n intervalo de 0.03 a 100; partes en peso por 1 del fosfolípido modificado con PEG de manera pr o de un intervalo de 0.05, a 20 partes en peso, d ¡ rente dentro de un intervalo de 0.2 a 1.1 p I .

I Al portador de la presente invención, s ionar colesterol diferente ¡ del fosfolípido modifi y el Compuesto A que son los componentes esenci aso de adicionar colesterol, con respecto a la ezclado entre el fosfolípido modificado con P terol en el portador de la presente inven terol está apropiadamente dentro de un intervalo solución acuosa de acuerdo a un método convenci dimiento de dispersión se puede llevare a cab I to apropiado tal como! un aparato de di sónica o un aparato de dispersión por emulsionam La Composición de la Presente Invención El tamaño de partícula del portador de la I ción que contiene una medicina, portador q enido en la composición de la presente invenció ta de manera particular, y está apropiadamente d ntervalo de, por ejemplo, 50 nm a 200 nm, d erente dentro de un intervalo de 60 nm a 150 nm.

Los ejemplos de la "medicina" que se pueden ! I omposición de la presente! invención incluyen co icos solubles en agua, agentes anti-tumor, agent ies, y antibióticos. Los, ejemplos específicos os inclu en ácidos acéticos tal como ARN d al (TNF) , levamisol, pestatina, ácido retino ouracilo (5-FU) , citosina-arabinosido (Ara-C) , nosido (Ara-A) , cisplatína (CDDP) , ciclofosfa I timidina (AZT) .

Los ejemplos del ÁR sintético de dobl I yen aquellos descritos más adelante . 1. complejos homopolímero-homopolímero Ácido poliinosínico-ácido policitidílico Ácido poliinosínico-poli (ácido 5 -bromocitid Ácido poliinosínico-poli (ácido 2 -tiocitidíl Poli (ácido 7 -desazainosínico) -ácido policit Poli (ácido 7-desazainosínico) -poli (ácid citidílico) Poli (ácido 2 ' -azidoinosínico) -ácido policit Ácido poli inosínico-poli (ácido citi sfórico 4. Otros Ácido poliinosínico-poli (ácido 1-vinilcitid . Los ejemplos del ácido oligonucleico inclu I y compuestos de los mismos, que tienen de 10 obases, de manera preferente 15 a 2000 nucleob ra preferente de 18 a 1000 nucleobases por moléc lo, ARNsi, ARNmi, RNAsh, AR no codificant sentido, ARN antisentido, ' enzimas de DNA, ribo eros . i El ácido oligonucleico no se limita I rales, y al menos una parte de una azúcar, una es osfato o similar que constituye un nucleótidos de I I uede modificar para mejorar la estabilidad in resistencia a nucleasas. Los ejemplos ficación incluyen modificaciones de ribosa en la incluyen alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de i jemplos específicos del mismo incluyen metilo, e lo, isopropilo, n-butilq, isobutilo, sec-butil o, n-pentilo, isopentilo, neopentilo, ter-pent o, y isohexilo. El alquilo puede estar sustituid I 3 sustituyentes que incluyen, por ejemplo, h I ilo, alcoxi, ciano y nitro. Los ejemplos del yen flúor, cloro, bromo y yodo. Los ejemplos del yen los mismos grupos como se describe en el ior. El alcoxi no se limita de manera particul I de cadena lineal o ramificada, los ejemplos d I yen alcoxi que tienen de 1 a 6 átomos de carb los específicos de los mismos incluyen metoxi, e xi , isopropoxi, n-butoxi, isobutoxi, sec-buto i, n-pentiloxi, isopentiloxi , n-hexiloxi, y isoh éstos, alcoxi que tiene de 1 a 3 átomos de ca I I I 24 yen metileno, etileno,j trimetileno, tetram metileno, hexametileno, ; 2- (etil) trimetileno, il ) tetrametileno . i posiciones incluyen 4 ' -t^io-modificaciones . Los as modificaciones de la estructura de fosfato ficaciones de fosforotioato, modificacion i roditioato, modificaciones de alquilfosofo ficaciones de fosforoamidato .

I I La relación en pesó (el portador de la ción/la medicina) del portador de la presente i medicina que está contenida en la composició ente invención varía dependiendo del tipo de la m I elación de mezclado del fosfolípido modificado c mpuesto A en el portador de la presente invenció sivamente. La relación en 'peso está apropiadament iña, mencionados anteriormente, se puede rme se necesite un aditivo farmacéuticamente ac ejemplos del aditivo , incluyen agentes a ionantes (tal como ácido's grasos que tienen de S de carbono y sales farmacéuticamente aceptable s , albúmina y dextrano) , estabilizadores (t terol y ácido fosfatídico) , agentes de tonici cloruro de sodio, glucosa, maltosa, lactosa, sa losa) , y agentes ajustadores de pH (tal co I ídrico, ácido sulfúrico, i ácido fosfórico, ácido I xido de sodio, hidróxido de potasio, y trietano s se pueden usar de manera individual o en combin i más de los mismos.

La composición de !la presente invención arar al adicionar una medicina o una dispers ador de la presente invención y al agitar d da, la concentración del portador de la I ción contenido en la , composición de la I ción está apropiadamente ¡dentro de un intervalo a 50 % p/v, de manera preferente dentro de un i I .01 % p/v a 25 % p/v, de manera más preferente d I tervalo de 0.1 % p/v a 10, % p/v.

I La preparación liofilizada se puede pre er la composición de la 1 presente , invención en I a preparación líquida a ¡un tratamiento de liofi acuerdo a un método convencional. Por ejem I amiento de liofilización se puede realizar com és de que se esteriliza de manera aprop osición de la presente invención en la forma i aración líquida, un volumen determinado de la ¡ ribuye a un frasco, segúido por congelación pr 1 condiciones de aproximadamente -40°C a -20°C nte invención se puede usar en general al adic ión apropiada (solución , para re-disolución) p ver la preparación. Los ejemplos de la solución ución incluyen agua para inyección, solución lógica y otras infusiones generales. El volumen I a solución para re-disolúción varía dependiendo I mismo y demás, y no se limita de manera partícul I en líquido de la solución es apropiadamente de S el volumen líquido de ¡ la composición de la I ción antes de la liofilización o 500 mL o menos.

I Una enfermedad a ¡la cual se puede api osición de la presente invención no se limita d I icular, los ejemplos "de la misma incluyen rmedades virales, ! enfermedades inflam rmedades metabolicas, y enfermedades neurológicas La ruta de administración de la composici istración intraocular, atlministracion intracere i istración intratorácica .1 Entre éstas, se pref i a particular administración intravenosa, admini dérmica y administración, mucosa. La forma de I de la composición de la ,presente invención no s i anera particular, los ejemplos de la misma s inyecciones, agentes orales, infusiones, inhal para ojos, ungüentos, lociones y supositorios.

La dosis de la composición de la presente i una medicina se ajus(tan de manera prefer ideración del tipo y de la forma de dosis de la m as condiciones del paciente tal como la edad i ral, de la ruta de administración, y de la natu I idad de la enfermedad. En general, la dosis est ¡ n intervalo de 0.01 mgi a 10 g/humano/día, d í rente dentro de un de 0.1 mg a 5 g/humano/día cíente cuando está por jabajo del intervalo riormente. En algunos casos, se puede necesi I s por arriba del intervalo descrito anteriorme I La dosis se puede administrar una vez a as veces al día o se puede administrar en in n día a varios días . plos Más adelante en ! la presente, la nción se ilustrará en más detalle con refer plos de producción, ejemplos comparativos y I rueba, sin embargo, la presente invención ta al alcance descrito más adelante. i plo 1 de Producción: Síntesis de oligo-RNA Usando un sintetízador automático de eicos (Expedite 8909, fabricado por ystems, Inc.)/ se sintetizaron un oligo-RNA q i ieron por escisión en OPG usando un líquido I idróxido de amonio concentrado y etanol ionalmente por una reacción en la misma sol durante 18 horas. De manera subsiguiente, e I lo en la posición 2' se¡ desprotegió por una emperatura ambiente durante 20 horas usa ción de tetrahidrofurano 1M de fluor I abut ilamonio . El oligo-RNA resultante se puri ! atografía de fase inversa. Adicionalmente, e i toxitritilo de la posición 5' se desprotegió ción a temperatura ambiente durante 30 minuto i solución acuosa al 80 % i de ácido acético, y l o-RNA resultante se1 purificó nuevamen atografía de intercambio iónico. Las concent oligo-RNA obtenido que tiene una secue eótidos representada por SEQ ID NO: 1, el o ío 2 de Producción: Síntesis de oligo-RNA de Dob do con Tritio ' I Se sintetizaron un oligo-RNA de doble hebra ma O que comprende un oligo-RNA que tiene una secu I ótidos representada por SEQ! ID NO: 1 y un oligo-RNA I ecuencia de nucleótidos representada por SEQ ID NO: 2 I corporación de una sal de .amonio de [2, 5' , 8-3H] aden sfato marcada con tritio (producida por Amersham Bio I usando el equipo Transcription T7 in vitro (prod I a-Bio Co., Ltd.) . í Subsiguientemente, se removieron las prote I -RNA de doble hebra usando una solución mez /cloroformo, y adicionalmente, se removieron los moñó I ¡ ionar usando una columna G-25 espin (producida por P . La concentración del oligo-RNA de doble hebra, obte .07 mg/mL. Adicionalmente, ( la radioactividad especí ? ilaminopropil) carbodiimida, y 10.8 g ilaminopiridina se agitaron en 100 mL de diclo te la noche a temperatura ambiente . A la sol ión, se adicionaron 0.5 L de metanol y e I tante se recuperó por filtración, se lavó con me co. Seis gramos del polvo obtenido se suspendier i Ído mezclado de 400 mL de¦ tetrahidrofurano y 20 m ión acuosa al 10 % de ácido acético. A la su itante, se adicionaron l.-l g de borohidruro de ñas porciones a 0°C. Después de que la mezcla re I gitó a temperatura ambiente durante 6 horas, la I eacción se vertió en un Ia solución acuosa sat rbonato de sodio, y se realizó un procedimi acción usando acetato de jetilo. La capa orgánica ego se concentró bajo' presión reducida. El I I itante se purificó por cromatografía en columna d ¡ 33 ¡ I 3: Síntesis de 1 , 3 -diestearoilglicerol-2 -O- ( 2 -ci iisopropilfosforoamidita) i 1.39 g de 1 , 3-diestearoilglicerol obtenid 1 anterior en un líquido mezclado de 30 nitrilo y 10 mL de ; diclorometano, y 456 zolido de diisopropilamina obtenido en el I rior y 1 g de bis (N, N-diisopropilamina) cianoeti dicionaron a esto, y la mezcla resultante se agit te 1.5 horas. La solución de reacción se s i ración, y el filtrado se concentró. El residuo re \ urificó por cromatografía en columna de gel de ! lo que se obtuvieron 800 mg del producto propuest I 31P (202 MHz, CDC13/ d) : 152.283 I 4: Síntesis de 1, 3 -diestearoilglicerol -2 -0- (2-ci r-butoxicarbonilaminoetil'fosfato) 700 mg de 1, 3-diestearoilglicerol-2-0- (2-ci ezcla resultante se agitó adicionalmente a tem nte durante 20 minutos. La solución de reac ió a filtración, y al filtrado, se adicionó una a saturada de tiosulf to , de sodio hasta que des olor del yodo. Entonces, 'se realizó un procedim cción usando acetato de etilo. La capa orgánica I ego se concentró bajo presión reducida. El i tante se purificó por cromatografía en columna d i e, por lo que se obtuvieron 700 mg del ! esto. ! 1P (202 Hz, CDC13, d) : ¡0.12453 Masa MALDI-TOF 64 ([M+Na]+) | I 5 : Síntesis de , 1 , 3 -diestearoilglicerol etilfosfato) ¦ Se adicionaron 15 ¡ mL de un líquido mez tante se disolvió en 5 ^ mL de dielorómetaño, trifluoroacético se adicionaron a esto 0°C, y l tante se agitó a temperatura ambiente dur I os . Después de que la solución de reacción se c presión reducida, se rea'lizó la destilación aze i iclorometano tres veces, por lo que se obtuviero roducto propuesto. RM -31P (202 MHz , CDC13, d) : - I 6: Síntesis de 1, 3 -diestearoilglicero-2-fosfa xi -polietilen-glicol-succinil) etanolamina I Se adicionaron 40 mL de dimetoxietano, 4 I rometano, y 10 mL de una solución acuosa sat i rbonato de sodio a 400 mg1 de 1 , 3 -diestearoilglice I inoetil - fosfato) obtenido en el paso 5 anterior -succinimidiloxisuccinil -?-metoxi -poliox RIGHT (marca comercial 'registrada) E-020CS, p OF Corporation] , y la mezcla resultante se agitó minó por espectrometría 1 de masa usando el m I ación de electro-rociado. Como resultado, ra en la Figura 1, el producto obtenido ti ibución de peso molecuíar dentro de un ínte I O a 3 , 800. lo 4 de Producción: ¡Preparación de Disper dor de Fármaco Se disolvieron 60 mg del Compuesto A, 8 lípido modificado con PEG sintetizado en el Ejei cción, y 92 mg de l-palmitoil-2 -oleil -sn-gl i ocolina (producida por NOF Corporation, más ade ca la misma) en 2 mL de cloroformo en un frasco, urgó gas nitrógeno para ¡remover el cloroformo, i ste modo una película delgada en la pared del i és de que el frasco se deja reposar durante presión reducida, al frasco se adicionaron 1,0 eriormente, el volumen ¡de la dispersión se L con agua para inyecciOn. plo 5 de Producción: Preparación de Disper I ador de Fármaco ¡ Se preparó una dispersión de un port aco de la misma manera como en el Ejempl ucción usando 60 mg del Compuesto A, 16 olípido modificado con PEG, sintetizado en el e Producción, y 84 m;g de 1 -palmitoil - 2 -o ero- 3 - fosfocolina . ?? 6 de Producción: Preparación de Disper ador de Fármaco ¡ 1 Se preparó una dispersión de un port aco de la misma manera como en el Ejempl ucción usando 60 mg del Compuesto A, 32 olípido modificado con PEG sintetizado en el I i ero- 3 - fosfocol ina . I lo 8 de Producción: ¡Preparación de Disper dor de Fármaco 1 I Se preparó una dispérsión de un portador de misma manera como en el Ejemplo 4 de Producció j del Compuesto A, 64 mg, del fosfolípido modifi intetizado en el Ejemplo, 3 de Producción, y 36 toil-2-oleil-sn-glicero-3 -fosfocolina . lo 9 de Producción: 'Preparación de Disper I dor de Fármaco j I I Se preparó una dispersión de un portador de ¡ a misma manera como en el Ejemplo 4 de Prod o 60 mg del Compuesto A, 80 mg del fos I r icado con PEG sintetizado en el Ejemplo 3 de Pr 0 mg de l-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfoc lo 10 de Producción: ; Preparación de Disper misma manera como en el1 Ejemplo 4 de Producció del Compuesto A y 100 mg del fosfolípido modifi I intetizado en el Ejemplo; 3 de Producción. lo 12 de Producción: ¡ reparación de Disper I dor de Fármaco Se preparó una disp sión de un portador de a misma manera como en el Ejemplo 4 de Producció g del Compuesto A, 32 mg ; de N- (metoxi-polietilen inil) diestearoilfosfatidiletanolamina [SUNBRIGHT I cial registrada) DS^E-020C, producida p ration, más adelante en la presente se apli ] (referida más adelante1 en la presente como "C y 20 mg de l-palmitoil-2 -oleoil-sn-gl colina. j De paso, se determinó el peso molecu esto B usado mediante espectrometría de masa u toil-2-oleil-sn-glicero-3 -fosfocolina . lo 14 de Producción: ¡Preparación de Disper dor de Fármaco j Se preparó una dispersión de un portador de misma manera como en el! Ejemplo 4 de Producció del Compuesto A, 80 mg del Compuesto B, y 20 toil-2-oleoil-sn-glicero-!3-fosfocolina . lo 15 de Producción: ¡Preparación de Disper dor de Fármaco ^ Se preparó una dispersión de un portador de misma manera as in Ejemplo 4 de Producción usan Compuesto A, 88 mg del Compuesto B, y 12 m itoil -2 -oleOil-sn-glicero-¡3 -fosfocolina lo 16 de Producción: Preparación de Disper dor de Fármaco Se preparó una dispersión de un portador de ar 36 iL del oligo-RNA de doble hebra marcado co I tizado en el Ejemplo 2 de Producción, 1.50 mL del iene una secuencia de nucleótidos representada po I sintetizado en el Ejemplo 1 de Producción, 1.4 I -RNA que tiene una secuencia de nucleótidos rep I EQ ID NO: 2 sintetizado en el Ejemplo 1 de Produ mL de agua para inyección., I I reparación de composición , farmacéutica Se adicionaron 5 mL| de la dispersión de un rmaco preparado en el Ejemplo 4 de Producción a la de la solución de ácido nucleico preparada e ior, y se realizó el tratamiento con ultrasonido os. Después de que la solución resultante se cent rpm durante 20 minutos y se filtró a través de 22 µ?t?, se preparó de este i modo una composición far mg/mL. ¡ article Sizing Systems, Inc., más adelante en la lica al mismo] al ajusta el índice de refracción scosidad a 1.333, y el período de tiempo de medi os. Como resultado, el tamaño promedio de partí I dor de fármaco en la composición farmacéutica fue ío 18 de Producción:; Preparación de Co céutica reparación de solución de ácido nucleico I Se preparó una solución de ácido nucleico de a como en el Ejemplo 17 (1;) de Producción. reparación de composición farmacéutica Se preparó una composición farmacéutica a 1 a misma manera como en el Ejemplo 17 (2) de P o la cantidad total de ¡ la solución de ácido Í i rada en el (1) anterior ¡y 5 mL de la dispersi manera como en el Ejemplo 17 (1) de Producción. reparación de composición farmacéutica Se preparó una composición farmacéutica a 1 i a misma manera como en el Ejemplo 17 (2) u dad total de la solución de ácido nucleico prep I 1) anterior y 5 mL de la dispersión de un por co preparado en el Ejemplo 6 de Producción.

De paso, se midió el tamaño promedio de p ¡ portador de fármaco en la: composición farmacéuti i manera con en el Ejemplo 17 (3) de Producci tró que es de 103.4 nm. lo 20 de Producción:; Preparación de Com céutica i reparación de solución de ácido nucleico Se preparó una solución de ácido nucleic manera como en el Ejemplo 17 (1) de Producción.

I tró que es de 102.5 nm. ¡ lo 21 de Producción:; Preparación de Cou i céutica reparación de solución de ácido nucleico Se preparó una sol Iución de ácido nucleic manera como en el Ejemplo 17 (1) de Producción.

Preparación de composición farmacéutica Se preparó una composición farmacéutica a 1 a misma manera como en el Ejemplo 17 (2) de Pr do la cantidad total de la solución de la sol ¡ o nucleico preparada en' el (1) anterior y 5 m ersión de un portador de ! fármaco preparado en el Producción. i ¡ De paso, se midió el tamaño promedio de p portador de fármaco en la composición farmacéuti a manera como en el E emplo 17 (3) de Produce ntidad total de la solución de ácido nucleico prepar nterior y 5 mL de la dispersión de un portador d rado en el Ejemplo 9 de Producción.

I De paso, se midió el! tamaño promedio de part dor de fármaco en la composición farmacéutica de a como en el Ejemplo 17 (3) de Producción y se enc 91.6 nm ío 23 de Producción: Preparación de Composición Farma reparación de solución de ácido nucleico Se preparó una solución de ácido nucleico de I I a como en el Ejemplo 17 (l) de Producción. reparación de composición farmacéutica Se preparó una composición farmacéutica a 1.0 sma manera como en el Ejemp Ilo 17 (2) de Producción I dad total de la solución cíe ácido nucleico prepara anterior y 5 mL de la dispersión de un portador reparación de composición farmacéutica Se preparó una composición farmacéutica a 1 a misma manera como en él Ejemplo 17 (2) de Pr o la cantidad total de la solución de ácido rada en el (1) anterior : y 5 mL de la dispersi dor de fármaco preparado ¡en el Ejemplo 11 de Pro I De paso, se midió el tamaño promedio de p portador de fármaco en la- composición farmacéuti manera como en el Ejemplo 17 (3) de Producci I tró que es de 63.5 nm. j lo 25 de Producción: Preparación de Coi céutica I reparación de solución de ácido nucleico Se preparó una solución de ácido nucleic manera como en el Ejemplo 17 (1) de Producción. i reparación de composición farmacéutica tró que es de 97.3 nm. ío de Producción 26 : Preparación de Corc céutica ! reparación de solución de, ácido nucleico Se preparó una solución de ácido nucleic í manera como en el Ejemplo 17 (1) de Producción. ! reparación de composición, farmacéutica Se preparó una composición farmacéutica a 1 i a misma manera como en el Ejemplo 17 (2) de Pr o la cantidad total de la solución de ácido rada en el (1) anterior y 5 mL de la dispersi I dor de fármaco preparado en el Ejemplo 13 de Pro De paso, se midió el tamaño promedio de p I portador de fármaco en la ¡ composición farmacéuti manera como en el Ejemplo 17 (3) de Producei I tró que es de 97.7 nm. i I '48 I rada en el (1) anterior j y 5 mL de la dispersi i dor de fármaco preparada >en el Ejemplo 14 de Pro I De paso, se midió el tamaño promedio de p 1 ortador de fármaco en la¡ composición farmacéuti manera con en el Ejemplo 17 (3) de Producei tró que es de 98.0 nm. ^ lo 28 de Producción:' Preparación de Com I céutica ' I reparación de solución de1 ácido nucleico I Se preparó una solu Ición de ácido nucleic I manera como en el Ejempló 17 (1) de Producción.

I reparación de composición! farmacéutica Se preparó una composición farmacéutica a 1 i a misma manera como en el Ejemplo 17 (2) de Pr I o la cantidad total de Ila solución de ácido rada en el (1) anterior y 5 mL de la dispersi manera como en el Ejemplo 17 (1) de Producción. reparación de composición farmacéutica Se preparó una composición farmacéutica a 1 i a misma manera como en el Ejemplo 17 (2) de Pr o la cantidad total de 1 la solución de ácido I ¦ 1 rada en el (1) anterior !y 5 mL de la dispersi i dor de fármaco preparada en el Ejemplo 16 de Pro De paso, se midió l tamaño promedio de p portador de fármaco en la i composición farmacéuti i manera como en el Ejemplo 17 (3) de Producci tró que es de 92.7 nm. ' i lo 30 de Producción: 1 Preparación de Coi céut ica ¡ Í Preparación de solución de ácido nucleico Se preparó una solución de ácido nucleic manera con en el Ejemplo ¡ 17 (1) de Producción. tró que es de 84.9 nm. i I lo 31 de Producción:! Preparación de Cot I céutica ¡ I I reparación de solución d ácido nucleico i Se preparó una solución de ácido nucl i ar 0.50 mL del oligo-RÑA que tiene una secu ótidos representada por SEQ ID NO: 3 sintetiza lo 1 de Producción, 0.50 'mL del oligo-RNA que t I ncia de nucleótidos representada por SEQ I i tizado en el Ejemplo 1 dé Producción, y 4.0 mL I inyección. ! Preparación de la composición de la presente inve Se preparó una composición farmacéutica a 1 a misma manera como en el Ejemplo 17 (2) de Pr ¡ o la cantidad total de la solución de ácido arada en el (1) anterior y 5.0 mL de la dispersi es un oligo-RNA de doble hebra que tiene una itoria en la expresión de Bcl-2 (ver O 2004/106511) i ío Comparativo 1: Preparación de Dispersión de Po có como Control Comparativo Se preparó una dispersión de un portador de I un control comparativo de la misma manera como en e Producción usando 60 mg del Compuesto A y 100 mg de ¡ ma de huevo. ! ío Comparativo 2: Preparación de Dispersión de Po có como Control Comparativo' Se preparó una dispersión de un portador de i un control comparativo usándo LIPOFECTINA (marca trada) (producida por Invitrogen, Inc.) por el m I racion instruido por la compañía de suministro.

I ío Comparativo 3 : Preparación de Dispersión de Po có como Control Comparativo I ?52 reparación de composición como control comparati Se preparó una composición farmacéutica ol comparativo a 1.0 mg/mL de la misma manera co lo 17 (2) de Producción ; usando la cantidad tot ión de ácido nucleico préparada en el (1) anteri I la dispersión de un portador de fármaco prepara lo Comparativo 1. I De paso, se midió él tamaño promedio de p portador de fármaco en la composición farmacéut I ¡ ontrol comparativo de la misma manera como en el 3) de Producción y se encontró que es de 148.1 nm lo 5 Comparativo: l Preparación de Com ¡ acéutica como Control Comparativo I Preparación de solución de ácido nucleico Se preparó una solución de ácido nucleic a manera como en el Ejemplo 17 (1) de Producción. portador de fármaco en la composición farmacéut ntrol comparativo de la misma manera como en el I ) de Producción y se encontró que es de 168.9 nm i lo 6 Comparativo: ' Preparación de Cor ¡ I céutica como Control Comparativo I reparación de solución de ácido nucleico Se preparó una solución de ácido nucleic i manera como en el Ejemplp 31 (1) de Producción. reparación de composición, como control comparati Se preparo una composición farmacéutica j ol comparativo a 1.0 mg/mL de la misma manera co lo 31 (2) de Producción u I sando la cantidad tot ión de ácido nucleico preparada en el (1) anteri e la dispersión de un portador de fármaco prepara lo Comparativo 1. 1 De paso, se midió el tamaño promedio de p dor de fármaco como un índice . í étodo Experimental ' i Cada una de las composiciones farma radas en los Ejemplos de 17 a 24 de Produc i istraron de manera intravenosa a un rató I L/6J, 6 semanas de edad, ¡preparado por CLEA Japa avés de la vena de la cola a 2.5 mg/kg (cont nucleico) . A las 2 horas, 8 horas, y 24 horas I a administración, la sangre entera se recolect abdominal del ratón bajo anestesia de Etran o el plasma. Se usó heparina como un i oagulante para obtener el plasma. La administr j izó a una dosis de 10 mL/kg en todos los casos. S I o ratones por grupo. 1 Se adicionaron 10 mL de un agente escint I ic-Fluor, producido por PerkinElmer, Inc. Más ?? 3 de Producción estuvo dentro de un intervalo so a 50 % en peso. ' I lo 2 de Prueba: Evaluación de Propiedad en Cir I ngre ! La propiedad en circulación en sangre dor de fármaco que contiene el Compuesto B s i o la radioactividad de un! ácido nucleico conteni dor de fármaco como un índice.

I étodo experimental ¡ I Cada una de lasj composiciones farma radas en los Ejemplos 1 25 a 28 de Produc i istra de manera intravenosa a un ratón macho (C i manas de edad, preparado por CLEA Japan, Inc.) la vena de la cola 2.5 mg/kg (contenido d eico) . A las 24 horas después de la administra ¡ lectó la sangre entera de la aorta abdominal d co.

I esultados experimentales ! Como-~.se muestra en¡ la Figura 5, el por I co tiene un tiempo prolongado de circulación c nido del Compuesto B fue 'de 30 % en peso o más.

I I lo 3 de Prueba: Evaluación de la Biodistribu I dor de la Presente Invención La biodistribución ¡ del portador de la ¡ ción se evaluó usando la radioactividad de " I ico contenido en el portador de fármaco como un j étodo experimental La composición farmacéutica preparada en el i e Producción o el Ejemplo i 4 Comparativo se admin ra intravenosa a un ratón; macho (C57BL/6J, 6 se , preparado por CLEA Japan!, Inc.) a través de la I ola a 2.5 mg/kg (contenido de ácido nucleico). del plasma y se mezclaron entre sí, y luego, adioactividad de cada muestra usando un cont I t ilación líquida. De los resultados, se calcu ! ión · de distribución (% de dosis), el vol I ibución (L/kg) , vida media de eliminación (hora i la concentración de plasma { xg . horas/mL) , y de ras.kg) del portador de fármaco en el plasma. esultados experimentales ' oncentración en plasma I Como se muestra en la Figura 6, el portad nte invención en la composición de la presente i ¡ Ejemplo 29 de producción tiene un tiempo más pr i irculación en plasma que el portador de fármaco I I ol comparativo en la composición farmacéutica ol comparativo del Ejemplo Comparativo 4.

Parámetro farmacocinético ¡ i 58 I í có como un control comparativo. 1 ' I lo 4 de Prueba: Evaluación de la Biodistribu i dor de la Presente Invención Se evaluó la biodistribución del portado nte invención usando la ¡ radioactividad de u 1 I ico contenido en el portádor de fármaco como un i I étodo experimental a. Se usó heparina como1 un agente anticoagula er el plasma. Adicionalmente , concurrentemente, ección de sangre, se diseccionaron el hígado, i y riñon y se pesaron los pesos húmedos de los ctivamente. La administración se realizó a una I I L/kg en todos los casos. Se usaron tres o I es por grupo. , Cada uno de los órga'nos se disolvió en un f ionar 1 mL de un solub'ilizador de tejido (S I cida por PerkinElmer, 'inc.) y se agitó la itante a 40°C durante dos noches. i Se adicionaron 10 mL de un agente escintig muestra en la cual se disolvieron de 50 a 200 mg ! o y se mezclaron entre sí, y luego, se I oactividad de cada muesitra usando un cont ntilación líquida. De los resultados, se cal ¡60 I i ntrol comparativo en la composición farmacéutica i ol comparativo del Ejemplo Comparativo 4. i ra en las Figuras 8 y 9,' la relación de distrit I o y bazo del portador de la presente invenció I sición de la presente ! invención del Ejemplo cción fue menor que aquella del portador de fárm i ntrol comparativo en la composición farmacéutica ol comparativo del Ejemplo Comparativo 4. i ra en las Figuras 10 y 111, no hubo diferenci ión de distribución en ¡el pulmón y riñon e adores de fármaco en las composiciones farma i jemplo 29 de Producción y ¡el Ejemplo Comparativo I lo 5 de Prueba: Evaluación de la Biodistribu ador de la Presente Invención en Ratón Implan ias de Cáncer 1 ¡ Se evaluó la biodistribución del portado ntación. i étodo experimental 1 La composición farmacéutica preparado en el I e Producción o Ejemplo Comparativo 5 se admin a intravenosa al ratón preparado en el (1) an I s de la vena de la cola la 10 mg/kg (contenido i ico) . A las 8 horas, 24 horas, y 72 horas despu I istración, se recolectó j la sangre entera de inal de ratón bajo anestesia de Etrano, y se o a. Se usó heparina como | un agente anticoagula er el plasma. Adicionalmente , concurrentemente i lección de sangre, se! diseccionaron los I f ricos de cáncer y nodulos cancerosos y se ob I pesos húmedos de los mismos, respectivame istración se realizó a una dosis de 10 mL/kg casos. Se usaron tres ratones por grupo. ia del portador de fármaco como un control com a composición farmacéutic Ia como un control com jemplo Comparativa 5. Por otra parte, como se mu i Figura 13, no hubo diferencia en la rela ibución en los nodulos cancerosos entre los po I I ármaco en las composiciones farmacéuticas del Ej I i roducción y el Ejemplo Comparativo 5. De paso, I I ra en la Figura 14, la relación de distribu dor de la presente invención en la composició i nte invención del Ejemplo; 30 de Producción en e ayor que aquella del portador de fármaco como un I rativo en la composición, farmacéutica como un rativo del Ejemplo Comparativo 5. lo 6 de Prueba: Evaluación de Propiedad Hemolí dor de la Presente Invención étodo experimental I I ees, la mezcla resultante se centrifugó I durante 5 minutos . Este procedimiento se I veces más. La suspensión obtenida de erit i iluyó a 1 x 109 células/mL con solución ológica para inyección. i Cada una de las dispersiones de un p ármaco preparado en eli Ejemplo 16 de Produ I I plos Comparativos 1 a ¡3 se diluyó con mal o, "o concentración deseada dentro rvalo de 0.3 yg/ L a 30 mg/µ?.. Después de ncubaron a 37°C durante 10 minutos 285 p i ersión diluida de un ¡ portador de fárma ionaron a esto 15 ;µ?? de la suspens rocitos y se mezclaron entre sí, y la ltante se incubó a 37j°C durante 30 minu I ción de reacción se 1 centrifugó a 3,0 i 1 i s i s . esultados experimentales i Como se muestra en la Tabla 2, la concentra I dor de la presente invención del Ejemplo I cción que provoca 50 % de hemolisis fue ma llas de los portadores de fármaco como c rativos de los Ejemplos Comparativos 1 a 3.

Concentración que provoca 50 i hemolisis ^g/mL) emplo 16 de Producción j 11900 Ejemplo Comparativo 1 i 50.8 Ejemplo Comparativo 2 ; 1.0 1 Ejemplo Comparativo 3 1.6 1 lo 7 de Prueba: Evaluación de Citotoxicidad del a Presente Invención étodo ex erimental ??? a cada concavidad en una cIantidad de un décimo del v i de cultivo en la misma. Después de cultivar durante 72 ron las células viables usando el Equipo-8 de conteo cel oducido por Dojin Chemical Cp. , Ltd.), y del valor obt ló una concentración inhibitoria al 50 % del crecimient so, en el cultivo de las células endoteliales de vena a, se usó un medio de cultivo M199 (producido p i aceutical Co., Ltd.). 1 esultados experimentales \ I Como se muestra en la Tabla 3, la concentración i I % del crecimiento celular del portador de la presente jemplo 16 de Producción fue mayor que aquellas de los rmaco como controles comparativos de los Ejemplos Compar a 3 Concentración inhibitoria al 5 ir la coagulación, se , mezcló Inyección de i a (producida por Aj inomoto Co . , Ltd.) en la I cantidad de 1 mL por lp mL de la sangre. A onó un volumen igual de solución salina amo i fosfato (más adelante en la presente referi I ") y la sangre en una cantidad de 10 mL por i 11-Paque PLUS (producido por GE Healthcare BioS i ) se colocó cuidadosamente en la misma i rbar la entrecara. ' I Entonces, se real I rifugación a 400 x g durante 30 minutos a tem I ente, por lo que se obtuvieron células mononucl i re periférica. Las células mononucleares , obten i re periférica, se lavaron1 dos veces con PBS y ! endieron en un medio de ¡ cultivo RPMI 1640 (p i Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) que contien i no fetal al 10 % (producido por JRH BioSciences composición farmacéutica preparada en los Eje y 31 de Producción y Ejemplo Comparativ onaron al medio de cultivo una concentración plos 17 a 24 de Producción: 100 nM, Ejempl cción y Ejemplo Comparativo 6: 30, 100, y 300 as se cultivaron durante 24 horas después I ión de la composición ; farmacéutica, y enton nadante de cultivo se recuperó y se realizó u idio el IFN-a usando de ELISA de ínte o (producido por B e, Inc.) de acu ocolo anexo al mismo. i Resultados experimentales Como se muestra en la Tabla 4, la induc FN-a de las composicione's farmacéuticas de los a 19 de Producción fue mayor que aquella osiciones farmacéuticas de los Ejemplos 20 4 Concentración de IFN-a (pg/ emplo 17 de Producción 310 1 emplo 18 de Producción ! 494 emplo 19 de Producción 431 emplo 20 de Producción i 1 25 1 emplo 21 de Producción ¡ n.d. emplo 22 de Producción n.d. 1 emplo 23 de Producción n.d. i emplo 24 de Producción n.d. 5 Concentración de Concentración tratamiento (pg/mL) 1 30 nM n.d.

Ejemplo 31 de 100 nM n.d. Producción 300 nM n . d 30 nM 58 Ej emplo 100 nM 230 Método experimental i La composición ¡de la presente i arado en el Ejemplo 3l! de Producción se adm anera intravenosa al i ratón preparado en rior a través de la vena de la cola a 1 tenido de ácido nucleico) una vez al día du consecutivos iniciando desde el día 10 des mplantación. Adicionalmente, la composició enté invención se administró de la misma ¡ nte 5 días consecutivos iniciando desde el ués de la implantación. La administrac izó a una dosis de 10 mL/kg en todos los ca on seis ratones por grupo. De paso, un ratón nistración de maltosa 1 al 10 % se usó ! rol negativo. I ¡ Se determinó el volumen tumoral al me I 70 lo 10 de Prueba: Evaluación de Eficiencia de Fá ! mposición de la Presente ¡ Invención odelo de ratón de implantación de células de cán I Se preparó un ratón implantado con cél i r al implantar de manera intraperitoneal 7 x 105 (células de cáncer de ovario humano) en un ratón ! a (BALB/cA Jcl-nu, 6 semanas de edad, preparado , Inc . ) . . étodo experimental ! Se realizó la evaluación para el caso sición de la presente invención se administró d inua y el caso donde lia composición de la ción se administró de manera intermitente.

I rama de administración continua, la composició i nte invención preparada én el Ejemplo 31 de Pr ministró una vez al día en el día 3 al día 7 y e un ratón con la administración de maltosa al omo un control negativo. 1 I esultados experimentales i i Como se muestra en las Figuras 16 y 1 i istrar la composición de ¡la presente invención p i Ejemplo 31 de Producción, se prolongó la propo i vivencia. I I lo 11 de Prueba: Evaluación de Eficiencia de Fá mposicion de la Presente Invención.

I Preparación de ratón que ' tiene metástasis de h i as de cáncer ! Se preparó un ratón !que tiene metástasis d i élulas de cáncer al implantar 1 x 106 célul I er de pulmón humano de células no pequeñas) en ratón desnudo macho (BALB/cA Jcl-nu, 6 semanas rado por CLEA Japan, Inc.) y al extirpar istró de la misma maner ¡a durante 5 días cons ! ando desde el día 14 después de la implanta i istración se realizó una( dosis de 10 mL/kg en t . Se usaron seis ratones, por grupo. De paso, s I con la administración I de maltosa al 10 % I ol negativo. ; esultados experimentales , I Como se muestra en la Figura 18, al admini I sición de la presente invención preparada en el i Producción, se prolongó la proporción de superv i lo 12 de Prueba: Evaluación de Eficiencia de Fá mposición de la Presente Invención odelo de ratón de implantación de células de cán Se preparó un ratón implantado con cél er al implantar 1 x 106 células HPAC (células d reático humano) en el páncreas de un ratón desnu ez al día en el día 6 al 10 y en el día 13 a í és de la implantación. Después de 29 días i ntación, se diseccionó el ratón, se midió el eas, y se evaluó el efecto anti-tumor. De I n 8 ratones por grupo. Adicionalmente , se usó I la administración de maltosa al 10 % como un i ivo. I I esultados experimentales ¡ Como se muestra en la Figura 19, al admini I sición de la presente invención preparada en el e Producción, se suprimió un incremento en el I eas . ! i I Se hace constar que 1 con relación a esta f método conocido por la] solicitante para llev ica la presente invención, es el que resulta cla a descripción de la invención.

Claims (5)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito! Ia invención como ante ma como propiedad lo j contenido en las si ndicaciones : I

1. Portador de fármaco de circulación pro terizado porque comprende un fosfolípido modifi tilenglicol , representado por la siguiente al (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del donde X representa lo ¡siguiente (II) o (II esenta un número entero de 30 a 150] , o de un intervalo de 30 % en peso a 50 % en peso de los lípidos del portador de fármaco.

2. Portador de fármaco de circulación p nformidad con la reivindicación 1, caracterizado lípido modificado con poli^tilenglicol es 1,3- earoilglicero-2-fosfatidil-N- (metoxi-polietilen-gl nil) etanolamina o N- (metoxi-polietilenglicol - nil) diestearoilfosfatidiletanolamin .

3. Portador de fármaco de circulación p ¡ I onformidad con cualquiera de las reivindicacione terizado porque además comprende un fosfolípido.

4. Composición farmacéutica, caracterizad ende un portador de fármaco de circulación prolo rmidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 pora una medicina.

5. Composición farmacéutica de conformida