WO2024002046A1 - Oligonucleotide delivery enhancing compounds, pharmaceutical compositions and methods using the same - Google Patents

Oligonucleotide delivery enhancing compounds, pharmaceutical compositions and methods using the same Download PDF

Info

Publication number
WO2024002046A1
WO2024002046A1 PCT/CN2023/102623 CN2023102623W WO2024002046A1 WO 2024002046 A1 WO2024002046 A1 WO 2024002046A1 CN 2023102623 W CN2023102623 W CN 2023102623W WO 2024002046 A1 WO2024002046 A1 WO 2024002046A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
alkylene
alkyl
arylene
cycloalkylene
group
Prior art date
Application number
PCT/CN2023/102623
Other languages
French (fr)
Inventor
Zubao GAN
Longcheng Li
Original Assignee
Ractigen Therapeutics
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ractigen Therapeutics filed Critical Ractigen Therapeutics
Priority to AU2023300752A priority Critical patent/AU2023300752A1/en
Publication of WO2024002046A1 publication Critical patent/WO2024002046A1/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/12—Oxygen or sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D235/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings
    • C07D235/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D235/04—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles
    • C07D235/06—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
    • C07D235/08—Radicals containing only hydrogen and carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D235/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings
    • C07D235/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D235/04—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles
    • C07D235/06—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
    • C07D235/12—Radicals substituted by oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/26—Acyclic or carbocyclic radicals, substituted by hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2207/00—Modified animals
    • A01K2207/15—Humanized animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A01K2267/0306—Animal model for genetic diseases
    • A01K2267/0318—Animal model for neurodegenerative disease, e.g. non- Alzheimer's
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/318—Chemical structure of the backbone where the PO2 is completely replaced, e.g. MMI or formacetal
    • C12N2310/3183—Diol linkers, e.g. glycols or propanediols
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C12N2310/3341—5-Methylcytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific

Definitions

  • the present disclosure relates to the technical field of genetic modulation, and in particular to unique compounds useful for enhancing delivery efficiency of oligonucleotides both in vitro and in vivo.
  • Oligonucleotide-based therapeutics has been an emerging technology as its mechanisms of action provide expression regulation on almost unlimited target genes.
  • the administration of oligonucleotides to patients, organs, tissues or cells may elicit or impact various biochemical reactions and thus achieve functions such as silencing, inhibiting, activating, and modulation of gene expression.
  • the opportunity to use oligonucleotide-based therapy holds significant promise, providing solutions to medical problems that could not be addressed with traditional medicines.
  • one of the major obstacles for the commercialization of oligonucleotide-based medicine is a lack of effective methods for delivering it to the right organ, tissue, or cell.
  • Oligonucleotide therapeutics typically have a molecular weight ranging from 7 kDa to 14 kDa and comprise strong negative charge due to the inclusion of phosphodiester or phosphorothioate in the backbone thereof.
  • the relatively large molecular weight and the high negative charge density restrain the transmission of oligonucleotides across cell membranes.
  • Many strategies have been exploited for promoting the oligonucleotide delivery and yet, the delivery efficiency remains challenging.
  • the present disclosure provides an oligonucleotide delivery enhancing compound (DEC) comprising a nitrogen-containing five membered heterocyclic ring moiety, the DEC can be directly or indirectly attached to an oligonucleotide so as to be used to enhance the delivery efficiency of oligonucleotides to a subject both in vitro and in vivo.
  • the DEC has a structure represented by Formula AI or Formula AII
  • the oligonucleotide delivery enhancing compound comprises a moiety represented by Formula BI
  • the oligonucleotide delivery enhancing compound a structure represented by Formula BII
  • an oligonucleotide delivery agent comprising a DEC moiety derived from the DEC of the present disclosure and at least one oligonucleotide, wherein the DEC moiety is directly or indirectly linked to the oligonucleotide via at least one linking moiety.
  • the oligonucleotide can be antisense oligonucleotide (ASO) , antisense RNA, short interfering RNA (siRNA) , micro-RNA (miRNA) , small activating RNA (saRNA) , double-stranded RNA (dsRNA) , and small guide RNA (sgRNA) .
  • composition comprising the DEC of the present disclosure
  • the pharmaceutical composition may optionally comprise additional ingredients, such as pharmaceutically acceptable carrier, excipient, solvent, diluent, stabilizer, dispersant, buffer, compatibilizer, preservative agent and combinations thereof.
  • Also provided herein is method of modulating the expression of a target gene in a subject in vitro or in vivo, wherein the method comprises the step of administrating the pharmaceutical composition of the present disclosure to a subject in the case of in vivo assays or therapeutic treatment, or contacting the pharmaceutical composition with a cell in the case of in vitro assays.
  • FIG. 1 shows the knockdown activity of delivery enhancing compound conjugated siRNA (i.e., DEC-conjugated siRNA or DEC-siRNA) on mouse Factor VII (mFVII) mRNA expression in primary mouse hepatocytes (PMH) cells.
  • PMH cells were transfected via lipofectamine TM RNAiMax with each of the indicated DEC-conjugated oligonucleotide (DCOs) (i.e., RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712) at 0.1 nM and 1.0 nM for 24 hours.
  • DCOs DEC-conjugated oligonucleotide
  • dsCon2 served as a non-specific duplex control.
  • mFVII mRNA levels were quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set.
  • Tbp was amplified as an internal reference. Shown are the mean values of mFVII mRNA in the cells relative to Mock treatment after normalizing to Tbp [mean ⁇ Standard Error of the Mean (SEM) of two replicated wells] .
  • FIG. 2. shows the knockdown activity of DEC-conjugated siRNA on mouse FVII mRNA expression by free uptake in PMH cells.
  • the indicated DCOs i.e., RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712, as described in FIG. 1.
  • DCOs were directly added to PMH cell culture media at 0.01, 0.05, 0.20, 0.78, 3.13, 12.50, 50 and 200 nM for 24 hours.
  • Mock treatment was transfected in absence of oligonucleotide (not shown) .
  • dsCon2 duplex served as a non-specific duplex control (not shown) .
  • mFVII mRNA levels were quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set. Tbp was amplified as an internal reference. Shown are the mean values of mFVII mRNA in the cells relative to Mock treatment after normalizing to Tbp (mean ⁇ SEM of two replicated wells) .
  • FIG. 3. shows the in vivo knockdown activity of DEC-conjugated siRNAs on mouse FVII mRNA expression via subcutaneous injection (SC) injection in C57BL/6J mice.
  • the indicated DCOs i.e., RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712, as described in FIG. 1.
  • PND postnatal day
  • Saline was injected as a vehicle control to establish the baseline of mFVII mRNA expression.
  • mice were sacrificed on 3 days post dosing and mFVII mRNA levels were quantified in total RNA isolated from liver tissue preps via RT-qPCR using a gene specific primer set. Tbp was amplified as an internal reference. Mean mFVII mRNA levels in liver tissue of each treatment group are shown relative to saline group after normalizing to Tbp (mean ⁇ SEM of 3 animals per group) .
  • FIG. 4. shows the in vivo knockdown activity of DEC-conjugated siRNA on mouse FVII protein expression via SC injection in C57BL/6J mice.
  • the indicated DCOs i.e., RD-12339, RD-12585 and RD-12586, as described in FIG. 1.
  • Saline was injected as a vehicle control to establish the baseline of mFVII protein expression.
  • Mice were sacrificed on day 3 following treatment and mFVII protein level was quantified in mice plasma by ELISA assay.
  • FIG. 5. shows the duration of DEC-conjugated siRNA knockdown activity on mouse FVII protein expression via SC injection in C57BL/6J mice.
  • the indicated DCOs i.e., RD-12710 and RD-12712
  • RD-11706 was injected at 3 mg/kg and served as a control.
  • Saline was injected as a vehicle control to establish the baseline of mFVII protein expression.
  • Mouse plasmas were collected on day 10, 31, 54, 61, 80 and 89 following treatment and mFVII protein level was quantified in mouse plasma by ELISA assay.
  • Mean mFVII protein levels in mouse plasma by detecting the OD values of 3 animals at each time point of per group are shown relative to saline group (mean ⁇ SEM of 3 animals at each time point of each group) .
  • FIGs. 6A-6B show in vitro knockdown activity of DEC-siRNAs on mouse Sod1 (Sod1) mRNA expression by free uptake in PMH cells.
  • DEC-siRNAs i.e., RD-13110, RD-13115 and RD-13118
  • concentration gradient i.e. 1.56, 6.25, 25, 100, 400 and 1600 nM
  • Sod1 mRNA levels were quantified via RT-qPCR using a gene specific primer set following RNA isolation and RT reactions. Tbp was amplified as an internal reference.
  • Treatment with RD-12556 served as a non-conjugate control for comparison of dose dependent knockdown in absence DEC conjugation was shown in FIG. 6B (mean ⁇ SEM of two replicated wells) .
  • FIG. 7 shows in vivo knockdown activity of different DEC-siRNAs on Sod1 mRNA expression via intracerebroventricular (ICV) injection in adult C57BL/6J mice.
  • the indicated DEC-siRNAs i.e., RD-13110, RD-13115 and RD-13118
  • ICV intracerebroventricular
  • mice were sacrificed on 7 days post dosing and Sod1 mRNA knockdown was quantified in brain (i.e., brain-frontal cortex, cerebrum and brain-cerebellum) , spinal cord (i.e., cervical, thoracic and lumbar) and peripheral tissue (i.e., liver) via RT-qPCR using a gene specific primer set after RNA isolation and RT reaction.
  • Tbp was amplified as an internal reference.
  • Mean Sod1 mRNA levels are shown in each of the indicated tissues relative to mRNA levels in the saline group after normalizing to Tbp (mean ⁇ SEM of 2-3 animals per group) .
  • FIG. 8 shows in vivo activity of different DEC-siRNAs on knocking down Sod1 mRNA expression following intravenous (IV) injection into the lateral tail vein of adult C57BL/6J mice.
  • the indicated DEC-siRNAs i.e., RD-13110, RD-13115 and RD-13118
  • Saline was injected as a vehicle control to establish the baseline.
  • RD-12556 was injected at 20 mg/kg as a non-conjugate control.
  • mice were sacrificed on day 7 following treatment and Sod1 mRNA knockdown was quantified in select peripheral tissues (i.e., heart, liver, spleen, lung, kidney and bladder) via RT-qPCR using a gene specific primer set after RNA isolation and RT reaction.
  • Tbp was amplified as an internal reference. Mean Sod1 mRNA levels are shown in each of the indicated tissues relative to mRNA levels in the saline group after normalizing to Tbp (mean ⁇ SEM of 3 animals per group) .
  • FIG. 9 shows in vivo knockdown activity of different DEC-siRNAs on Sod1 mRNA expression following IV injection into adult C57BL/6J mice.
  • the indicated DEC-siRNAs i.e., RD-13110, RD-13115 and RD-13118
  • Saline was injected as a vehicle control to establish the baseline.
  • RD-12556 was injected at 20 mg/kg as a non-conjugate control.
  • Sod1 mRNA levels were quantified in skeletal muscle tissue from different locations (i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus) via RT-qPCR using a gene specific primer set after RNA isolation and RT reaction.
  • Tbp was amplified as an internal reference for RNA loading.
  • Mean Sod1 mRNA levels in skeletal muscle tissue of 3 animals per group are shown relative to mRNA levels in the saline group after normalizing to Tbp (mean ⁇ SEM of 3 animals per group) .
  • FIG. 10 shows knockdown activity of different DEC-siRNAs on rat Sod1 mRNA expression via intravitreal (IVT) injection in adult SD rats.
  • the indicated DEC-siRNAs i.e., RD-13115 and RD-13118
  • IVT injection 30 ⁇ g per left eye.
  • the right eye of each rat served as a non-injected naive eye.
  • Saline was injected as a vehicle control to establish the baseline.
  • RD-12556 was injected as a non-conjugate control.
  • Rats were sacrificed on day 14 following treatment and Sod1 mRNA levels were quantified in eyes via RT-qPCR using a rat gene specific primer set after RNA isolation and RT reaction.
  • Geometric mean of the mRNA levels of Hprt1 and Hmbs were used as an internal reference for RNA loading.
  • Mean Sod1 mRNA levels in retina tissue of 3 animalsfor each group are shown relative to mRNA levels in the saline group after normalizing to Hprt1 and Hmbs.
  • the data represents mean ⁇ SEM of 3 mice per group.
  • FIG. 11 shows the saRNA concentration of DEC-saRNA in adult C57BL/6J mice bladder after intravesical bladder (IVB) instillation.
  • the indicated DEC-saRNA i.e., RD-13520
  • RD-10773 was injected as a non-conjugate saRNA control (i.e., in absence of DEC) .
  • mice were sacrificed on 2-, 6-, 12-hour, day-1 and day-4 following treatment and the concentrations of RD-13520 and RD-10773 were quantified in bladder tissue via stem-loop RT-qPCR using a gene specific primer set (R1- 40-AS-SL-RT, R1-40-AS-SL-F1 and SL-RT-qPCR-Uni-R2, see Table 13) .
  • FIGs. 12A-12C show body weight change of and Sod1 knockdown activity of DEC-siRNAs via IV injection in adult C57BL/6J mice.
  • the indicated siRNAs i.e., RD-15135, RD-15136, RD-15137 and RD-15138
  • RD-15135 served as a non-conjugate control.
  • RD-15136 was a lipid (i.e., C16) conjugated siRNA.
  • RD-15137 with a typical DEC structure i.e., C5X5 served as a typical DEC-siRNA.
  • FIG. 12A shows the body weight change of C57BL/6J mice out to day 28 post treatment.
  • FIG. 12B shows the remaining mouse Sod1 mRNA on 14 days post dosing as quantified in tissues from periphery (i.e., heart, liver, kidney, fat tissues, pancreas, diaphragm) , blood vessel (i.e., thoracic aorta with vein) and skeletal muscle (i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus) via RT-qPCR using a gene specific primer set.
  • periphery i.e., heart, liver, kidney, fat tissues, pancreas, diaphragm
  • blood vessel i.e., thoracic aorta with vein
  • skeletal muscle i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus
  • FIG. 12C shows the remaining mouse Sod1 mRNA on 28 days post dosing as quantified in tissues from periphery (i.e., heart, liver, kidney, fat tissues, pancreas, diaphragm) , blood vessel (i.e., thoracic aorta with vein) and skeletal muscle (i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus) via RT-qPCR using a gene specific primer set.
  • Rpl13a was amplified as an internal reference.
  • Mean Sod1 mRNA levels in the selected mouse tissues are shown relative saline control after normalized to Rpl13a. The data represents mean ⁇ SEM of 3 mice per group.
  • FIGs. 13A-13C show body weight change of and Sod1 knockdown activity of DEC-siRNAs via intrathecal (IT) injection in adult SD female rats.
  • the indicated siRNAs i.e., RD-15135, RD-15136, RD-15137 and RD-15138
  • RD-15136 was administered into C57BL/6J mice at 0.9 mg.RD-15135 served as a non-conjugate control.
  • RD-15136 was a lipid (i.e., C16) conjugated siRNA.
  • RD-15137 with a typical DEC structure i.e., C5X5 served as a typical DEC-siRNA.
  • aCSF cerebrospinal fluid
  • FIG. 13B shows the remaining rat Sod1 mRNA on 14 days post dosing as quantified in tissues from brain (i.e., frontal cortex, cerebellum and cerebrum) , spinal cord (i.e., cervical, thoracic and lumbar) and periphery (i.e., liver and kidney) via RT-qPCR using a gene specific primer set.
  • FIG. 13C shows the remaining rat Sod1 mRNA on 28 days post dosing as quantifiedin tissues from brain (i.e., frontal cortex, cerebellum and brainstem) , spinal cord (i.e., cervical, thoracic and lumbar) and periphery (i.e., liver and kidney) .
  • FIGs. 14A-14B show the in vitro knockdown activity of DEC-siRNA with accessory oligonucleotide (i.e., DEC-siRNA-ACO) on human SOD1 (i.e., SOD1) mRNA expression in SK-N-AS and T98G cells.
  • the indicated DEC-siRNA-ACOs i.e., RD-16149, RD-16099, RD-16100, RD-16101, RD-16150, RD-16103, RD-16104 and RD-16105
  • RD-16106 was transfected and served as a siRNA-ACO control. Mock treatments were transfected in absence of oligonucleotide (not shown) . SOD1 mRNA levels were quantified via RT-qPCR using a gene specific primer set following RNA isolation and RT reactions. B2M was amplified as an internal reference. Shown are the mean values of remaining SOD1 mRNA in the cells relative to Mock treatment after normalizing to B2M (mean ⁇ SEM of two replicated wells) .
  • FIGs. 15A-15B show SOD1 knockdown activity and tissue concentration of siRNAs via ICV injection in adult hSOD1 G93A mice.
  • the indicated siRNAs i.e., RD-14851, RD-12500, RD-16145 and RD-16334.
  • RD-14851, RD-12500 and RD-16145 were administered as siRNA-ACOs.
  • RD-16334 with a DEC structure i.e., L17
  • Treatment with aCSF alone was used as a vehicle control to establish baseline expression.
  • FIG. 15A shows the remaining SOD1 mRNA on 30 days post dosing as quantified in tissues from brain (i.e., frontal cortex, cerebellum and cerebrum) , spinal cord and periphery (i.e., liver) via RT-qPCR using a gene specific primer set.
  • Rpl13a was amplified as an internal reference.
  • Mean SOD1 mRNA levels in the selected mouse tissues are shown relative to mRNA levels in the aCSF group after normalized to Rpl13a.
  • 15B shows the concentration of the antisense strand of each siRNA in tissues from brain (i.e., frontal cortex, cerebellum and cerebrum) , spinal cord and periphery (i.e., liver) via stem-loop RT-qPCR using a gene specific primer set (R17-02-AS-SL-RT, R17-02-AS-SL-F3 and SL-RT-qPCR-Uni-R1, see Table 13) 30 days posting dosing.
  • FIGs. 16A-16B show splicing activity of “saRNA-ASO” DEC conjugated dual acting oligonucleotides (DEC-DAO) structure at converting SMN2 pre-mRNA to SMN2FL over the SMN2 ⁇ 7 mRNA isoform in GM03813 cells.
  • DEC-DAO dual acting oligonucleotides
  • DEC-DAO linkage with L21 linker i.e., RD-16939 and RD-16940
  • DEC-saSMN2 i.e., RD-1642
  • DEC-antisense oligonucleotide i.e., RD-14644
  • FIGs. 16A-16B show the mRNA levels of SMN2FL and SMN2 ⁇ 7 as quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set in each of the PCR reactions.
  • SDHA was amplified as an internal reference used to normalize expression data. Data represents mean expression levels of SMN2FL or SMN2 ⁇ 7 relative to Mock treatment after normalized to SDHA (mean ⁇ SEM of two replicated transfection wells) .
  • FIGs. 17A-17C show the effect of “saRNA-siRNA” DEC-DAO structure targeting two different human genes (SMN2 and SOD1) on the expression of SMN2 (SMN2FL and SMN2 ⁇ 7) and SOD1 in GM03813 cells.
  • the indicated DEC-DAO linkage with L21 linker (i.e., RD-16941) , DEC-saSMN2 (i.e., RD-16424) and DEC-siSOD1 (i.e., RD-13115) were transfected into GM03813 cells at indicated concentrations (i.e., 0.1, 1 and 10 nM) for 3 days.
  • FIGs. 17A-17B show the mRNA levels of SMN2FL and SMN2 ⁇ 7 as quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set in each of the PCR reactions.
  • 17C shows remaining SOD1 mRNA levels as quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set in each of the PCR reactions.
  • SDHA was amplified as an internal reference used to normalize expression data. Data represents mean expression levels of SMN2FL, SMN2 ⁇ 7 or SOD1 relative to Mock treatment after normalized to SDHA (mean ⁇ SEM of two replicated transfection wells) .
  • FIGs. 18A-18B show knockdown activity of “siRNA-siRNA” DEC-DAO structure targeting two different mouse genes (Sod1 and Ppig) on the expression of mouse Sod1 and mouse Ppig in mouse myoblast cell line (C2C12) .
  • the indicated DEC-DAO linkage with L21 linker (i.e., RD-16942) , DEC-siSod1 (i.e., RD-13115) and DEC-siPpig (i.e., RD-14672) were transfected into C2C12 cells at indicated concentrations (i.e., 0.01, 0.1 and 1 nM) for 24 hours. Mock treatments were transfected in the absence of an oligonucleotide.
  • RD-16381 was transfected as a non-specific DEC control.
  • Combo treatment i.e., RD-13115+RD-14672
  • combo treatment control i.e., RD-16381+RD-13115, RD-16381+RD-14672 were also transfected into C2C12 cells at indicated concentrations (i.e., 0.01, 0.1 and 1 nM) for 24 hours.
  • FIG. 18A shows remaining mouse Sod1 mRNA levels as quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set in each of the PCR reactions.
  • FIG. 18B shows the remaining mouse Ppig mRNA levels as quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set in each of the PCR reactions.
  • Mouse Rpl13a was amplified as an internal reference used to normalize expression data. Data represents mean expression levels of Sod1 and Ppig relative to Mock treatment after normalized to Rpl13a (mean ⁇ SEM of two replicated transfection wells) .
  • FIG. 19 shows knockdown activity of “siRNA-siRNA” DEC-DAO structure targeting two different mouse genes (Sod1 and Ppig) on the expression of mouse Sod1 and mouse Ppig in adult C57BL/6J mice.
  • the indicated DEC-DAO linkage with L21 linker (i.e., RD-16942) , DEC-siSod1 (i.e., RD-13115) and DEC-siPpig (i.e., RD-14672) were administered into C57BL/6J mice via IV injection at 10 mg/kg.
  • Combo treatment i.e., RD-13115+RD-14672 was administered via IV injection at 10 mg/kg.
  • Treatment with saline alone was used as a vehicle control to establish baseline expression.
  • Remaining mouse Sod1 mRNA on 14 days post dosing were quantified in tissues from periphery (i.e., heart, liver, kidney, fat tissues, diaphragm) , blood vessel (i.e., thoracic aorta with vein) and skeletal muscle (i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus) via RT-qPCR using a gene specific primer set.
  • Tbp was amplified as an internal reference used to normalize expression data.
  • Mean Sod1 mRNA levels in the selected mouse tissues are shown relative to mRNA levels in the saline group after normalized to Tbp. The data represents mean ⁇ SEM of 3-4 mice per group.
  • FIGs. 20A-20B compares the oligonucleotide concentration of DEC-saRNA to non- conjugated saRNA in retina and vitreous humor of adult SD rat after intravitreal (IVT) injection.
  • the indicated DEC-saRNA (i.e., RD-16447) and non-conjugated saRNA (i.e., RD-12173) were administered via IVT injection at 0.03 mg.
  • the rats were sacrificed on 1-hour, day-1, -3, -7, -14 and -28 following treatment and the concentrations of RD-16447 and RD-12173 were quantified in retina and vitreous humor via stem-loop RT-qPCR using a gene specific primer set of (R1C-0M4-AS-SL-RT, R1C-0M4-AS-SL-F4 and SL-RT-qPCR-Uni-R1, see Table 13) .
  • Mean values of oligonucleotide concentrations of each group are shown (mean ⁇ SEM of 3 animals per group) .
  • FIG. 21 shows the in vitro knockdown activity of DEC-siRNA on SOD1 mRNA expression in T98G cells.
  • the indicated DEC-siRNA i.e., RD-17138
  • RD-11566 was transfected and served as a non-specific duplex control.
  • Mock treatments were transfected in absence of oligonucleotide.
  • SOD1 mRNA levels were quantified via RT-qPCR using a gene specific primer set following RNA isolation and RT reactions.
  • B2M was amplified as an internal reference used to normalize expression data. Shown are the mean values of remaining SOD1 mRNA in the cells relative to Mock treatment after normalizing to B2M (mean ⁇ SEM of four replicated wells) .
  • the newly developed oligonucleotide delivery agent enables more efficient delivery of desired amount or higher level of the oligonucleotides, as compared to the oligonucleotide delivery technologies of the prior art, at the above indicated target tissues, and thus may improve bioactive and pharmacological properties (e.g., biodistribution, bioavailability, pharmacokinetics, activity, potency, etc. ) .
  • bioactive and pharmacological properties e.g., biodistribution, bioavailability, pharmacokinetics, activity, potency, etc.
  • the improvement of bioactive properties may cause improved cell uptake, higher potency, and longer duration/half-life.
  • the improvement of pharmacological properties may also lead to lower toxicity, lower dose, less frequent administrations, and less undesired immune responses.
  • the present oligonucleotide delivery agent involves a simpler synthesis process and thus has better processibility in manufacturing.
  • the present oligonucleotide delivery agent possesses inherent pharmacological properties of a free benzimidazole or a benzimidazole derivative which targets proton pump (as reversible and irreversible proton pump inhibitors, PPI) , dopamine receptor (DRD) , angiotensin II type 1 receptor (AT1) , histamine receptor (HRH) , dual specific mitogen activated protein kinase (MEK) and/or cyclin dependent kinase (CDK) , etc.
  • the inherent pharmacological properties enable the present oligonucleotide delivery agent to be potentially used in drugs including peptic ulcer, hypertension, schizophrenia, parasitic infection, bacterial infection, virus infection, and cancer, etc.
  • the newly developed oligonucleotide delivery agent disclosed herein can facilitate delivery of an effective amount of oligonucleotides to achieve and function at target tissues or cells, e.g., in central nervous system (e.g., brain and spinal cord) , liver, lung, kidney, intestine, pancreas, cholecyst, heart, lymph nodes, spleen, stomach, bladder, muscle and bone.
  • the oligonucleotide delivery agent s modulating activities, e.g., up-regulating or down-regulating, the expression of a target gene in the cells can be improved as compared to the technologies of the prior art.
  • oligonucleotide delivery agent as described herein may facilitate improved bio-distribution of therapeutic oligonucleotides in various target (s) or cells as stated above for preventing, treating and/or delaying on-set of various diseases, disorders and/or conditions.
  • any numerical ranges include any numerical values in the range (including the upper and lower values) , and also any sub-ranges in the range.
  • the range from 1 to 3 may include any of the numerical values 1, 2 and 3, as well as sub-ranges from 1 to 2 and from 2 to 3.
  • oligonucleotide refers to polymers of nucleotides, and includes, but is not limited to, single-stranded, double-stranded or partial double-stranded nucleic acid molecules of DNA, RNA, or DNA/RNA hybrid, oligonucleotide strands containing regularly and irregularly alternating deoxyribosyl portions and ribosyl portions, as well as modified and naturally or unnaturally existing frameworks for such oligonucleotides.
  • the oligonucleotide can be selected from the group consisting of antisense oligonucleotide (ASO) , antisense RNA, short interfering RNA (siRNA) , micro-RNA (miRNA) , small activating RNA (saRNA) , dsRNA, and small guide RNA (sgRNA) .
  • ASO antisense oligonucleotide
  • siRNA short interfering RNA
  • miRNA micro-RNA
  • saRNA small activating RNA
  • dsRNA small guide RNA
  • oligonucleotide strand , “strand” and “oligonucleotide sequence” as used herein can be used interchangeably and refer to a generic term for short nucleotide sequences having less than 50 bases, such as less than 45, less than 40, less than 35 bases, such as 2-50 bases, or 5-45 bases, or 10-40 bases, or 15-35 bases, or 20-30 bases (including nucleotides in deoxyribonucleic acid (DNA) or ribonucleic acid (RNA) ) .
  • DNA deoxyribonucleic acid
  • RNA ribonucleic acid
  • the length of a strand can be any length from 5 to 50 nucleotides, 10 to 40 nucleotides, 15 to 35 nucleotides, 18 to 30 nucleotides or 20 to 25 nucleotides.
  • target gene can refer to nucleic acid sequences, transgenes, viral or bacterial sequences, chromosomes or extrachromosomal genes that are naturally present in organisms, and/or can be transiently or stably transfected or incorporated into cells and/or chromatins thereof.
  • the target gene can be a protein-coding gene or a non-protein-coding gene such as a microRNA gene and a long non-coding RNA gene.
  • one target gene is SOD1.
  • target sequence is a sequence fragment to which the sense strand or antisense oligonucleotide of the siRNA or saRNA is homologous or complementary.
  • a SOD1 siRNA is homologous or complementary to a target select sequence within human SOD1 transcript.
  • the term “guide strand” or “G strand” refers to a strand in a small RNA duplex that assembles with the Argonaute (AGO) protein.
  • the other strand partially or completely complementary to the guide strand is called “passenger strand” or “P strand” .
  • the strand carrying the complementary sequence to the target is the antisense strand and, if properly designed, will be preferentially chosen to be the guide strand.
  • the passenger strand is the sense strand.
  • the sense strand can be selected as the guide strand, resultant in an antisense passenger strand.
  • LNA refers to a locked nucleic acid in which the 2’ -oxygen and 4’ -carbon atoms are joined by an extra bridge.
  • BNA refers to a 2′-O and 4′-aminoethylene bridged nucleic acid that can contain a five-membered or six-membered bridged structure with an N-O linkage.
  • PNA refers to a nucleic acid mimic with a pseudopeptide backbone composed of N- (2-aminoethyl) glycine units with the nucleobases attached to the glycine nitrogen via carbonyl methylene linkers.
  • antisense oligonucleotide refers to a single strand oligonucleotide or the like having, comprising, or consisting of a sequence of bases or the like which allow the oligonucleotide or the like to hybridize to a target molecule, such as another nucleic acid, modified nucleic acid or nucleic acid analog, e.g., by base-pairing, such as Watson-Crick base-pairing or non-Watson-Crick base pairing.
  • a target molecule such as another nucleic acid, modified nucleic acid or nucleic acid analog, e.g., by base-pairing, such as Watson-Crick base-pairing or non-Watson-Crick base pairing.
  • an antisense oligonucleotide is fully complementary or nearly fully complementary to the target molecule.
  • any oligonucleotide of any type described herein or known in the art can be used as an antisense oligonucleotide.
  • an antisense oligonucleotide can perform or participate in any of various biological functions, including RNA interference, RNase H-mediated cleavage, exon skipping, the prevention of exon skipping, the enhancement or blocking of an agent (e.g., a protein, RNA, protein-RNA complex, or any other molecule) from binding to another nucleic acid, or any other biological function performed by an antisense oligonucleotide, as described herein or known in the art.
  • an agent e.g., a protein, RNA, protein-RNA complex, or any other molecule
  • small interfering RNA can be used interchangeably and refer to a ribonucleic acid molecule that can down-regulate, knockdown, or silence target gene expression. It can be a double-stranded nucleic acid molecule. It interferes with the expression of specific genes with complementary nucleotide sequences by degrading mRNA after transcription, preventing translation. siRNA binds to target mRNA mainly in the cytoplasm to down-regulate gene expression post-transcriptionally via the RNA interference (RNAi) mechanism.
  • RNAi RNA interference
  • siRNAs may be designed to target a gene’s mRNA sequence to silence its expression via the RNAi mechanism, such as SOD1, for maximizing treatment outcomes, e.g., for ALS patients.
  • siRNAs are molecules having endogenous RNA bases or chemically modified nucleotides. The modifications do not abolish cellular activity, but rather impart increased stability and/or increased cellular potency. Examples of chemical modifications include phosphorothioate groups, 2′-deoxynucleotide, 2′-OCH 3 -containing ribonucleotides, 2′-F-ribonucleotides, 2′-methoxyethyl ribonucleotides, combinations thereof and the like.
  • the siRNA can have varying lengths (e.g., 10-200 bps) and structures (e.g., hairpins, single/double/partial-double strands, bulges, nicks/gaps, mismatches) and are processed in cells to provide active gene silencing.
  • a double-stranded siRNA can have the same number of nucleotides on each strand (blunt ends) or asymmetric ends (overhangs) .
  • An overhang of 1-2 nucleotides, for example, can be present on the sense and/or the antisense strand, as well as present on the 5′-and/or the 3′-ends of a given strand.
  • the length of the siRNA molecule is typically about 10 to about 60, about 10 to about 50, about 15 to about 30, about 17 to about 29, about 18 to about 28, about 19 to about 27, about 20 to about 26, about 21 to about 25, and about 22 to about 24 base pairs, and typically about 15, about 16, about 17, about 18, about 19, about 20, about 21, about 23, about 25, about 30, about 40, or about 50 base pairs.
  • the terms “small interfering RNA” , “silencing RNA” and “siRNA” also contain nucleic acids other than the ribonucleotide, including, but not limited to, modified nucleotides or analogues.
  • small activating RNA As used herein, the terms “small activating RNA” , “saRNA” and “small activating ribonucleic acid” can be used interchangeably and refer to a ribonucleic acid molecule that can up-regulate target gene expression. It can be a double-stranded nucleic acid molecule composed of a first nucleic acid strand containing a ribonucleotide sequence with sequence homology with the non-coding nucleic acid sequence (such as a promoter and an enhancer) of a target gene and a second nucleic acid strand containing a nucleotide sequence complementary with the first strand.
  • a ribonucleic acid molecule that can up-regulate target gene expression. It can be a double-stranded nucleic acid molecule composed of a first nucleic acid strand containing a ribonucleotide sequence with sequence homology with the non-coding nucleic acid sequence (such as a promoter and an
  • the saRNA can also be comprised of a synthesized or vector-expressed single-stranded RNA molecule that prone to form a hairpin structure by two complementary regions within the molecule, wherein the first region contains a ribonucleotide sequence having sequence homology with the target sequence of a promoter of a gene, and a ribonucleotide sequence contained in the second region is complementary with the first region.
  • the length of the duplex region of the saRNA molecule is typically about 10 to about 60, about 10 to about 50, about 10 to about 40, about 12 to about 30, about 14 to about 28, about 16 to about 26, about 18 to about 24, and about 20 to about 22 base pairs, and typically about 10, about 13, about 15, about 17, about 18, about 19, about 20, about 21, about 22, about 25, about 30, about 40, about 50, or about 60 base pairs.
  • the terms “small activating RNA” , “saRNA” and “small activating ribonucleic acid” also contain nucleic acids other than the ribonucleotide, including, but not limited to, modified nucleotides or analogues.
  • ODV oligonucleotide delivery vehicle
  • oligonucleotide delivery vehicle refers to an oligonucleotide molecule comprising a duplex or double-stranded RNA (e.g., siRNA or saRNA) and an accessory oligonucleotide (ACO) which is covalently linked to the duplex RNA via a linker.
  • RNA e.g., siRNA or saRNA
  • ACO accessory oligonucleotide
  • delivery enhancing compound and “DEC” are used interchangeably and refer to the compound of the present disclosure.
  • DEC-conjugated oligonucleotide and “DCO” can be used interchangeably and refer to a combination in which at least one moiety derived from the DEC has been attached, e.g. covalently, to at least one oligonucleotide. Additionally, the DCO may further comprising at least one targeting moiety which helps the oligonucleotide in targeting to, accumulating in, or accessing to target site in a cell.
  • administration refers to ordinary enteral administration, topical administration, and especially, injection administration, and may include, without limitation, intravenous, intramuscular, intraarterial, intrathecal, intracapsular, intraorbital, intracardiac, intradermal, intraperitoneal, transtracheal, subcutaneous, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subarachnoid, intraspinal, and intrasternal injection and infusion.
  • the term “pharmaceutical composition” refers to an active agent, optionally formulated together with one or more pharmaceutically acceptable carriers and other additives.
  • active agent is present in unit dose amount appropriate for administration in a therapeutic regimen that shows a statistically significant probability of achieving a predetermined therapeutic effect when administered to a relevant population.
  • compositions may be specially formulated for administration in solid or liquid form, including those adapted for the following: oral administration, for example, drenches (aqueous or non-aqueous solutions or suspensions) , tablets, e.g., those targeted for buccal, sublingual, and systemic absorption, boluses, powders, granules, pastes for application to the tongue; parenteral administration, for example, by subcutaneous, intramuscular, intravenous or epidural injection as, for example, a sterile solution or suspension, or sustained-release formulation; topical application, for example, as a cream, ointment, or a controlled-release patch or spray applied to the skin, lungs, or oral cavity; intravaginally or intrarectally, for example, as a pessary, cream, or foam; sublingually; ocularly; transdermally; or nasally, pulmonary, and to other mucosal surfaces.
  • oral administration for example, drenches (aqueous or non-aqueous solutions
  • the term “pharmaceutically acceptable carrier” means a pharmaceutically acceptable material, composition or vehicle, such as a liquid or solid filler, diluent, excipient, or solvent encapsulating material, involved in carrying or transporting the subject compound from one organ, or portion of the body, to another organ, or portion of the body.
  • a pharmaceutically acceptable material, composition or vehicle such as a liquid or solid filler, diluent, excipient, or solvent encapsulating material, involved in carrying or transporting the subject compound from one organ, or portion of the body, to another organ, or portion of the body.
  • Each carrier must be “acceptable” in the sense of being compatible with the other ingredients of the formulation and not injurious to the patient.
  • materials which can serve as pharmaceutically-acceptable carriers include: sugars, such as lactose, glucose and sucrose; starches, such as corn starch and potato starch; cellulose, and its derivatives, such as sodium carboxymethyl cellulose, ethyl cellulose and cellulose acetate; powdered tragacanth; malt; gelatin; talc; excipients, such as cocoa butter and suppository waxes; oils, such as peanut oil, cottonseed oil, safflower oil, sesame oil, olive oil, corn oil and soybean oil; glycols, such as propylene glycol; polyols, such as glycerin, sorbitol, mannitol and polyethylene glycol; esters, such as ethyl oleate and ethyl laurate; agar; buffering agents, such as magnesium hydroxide and aluminum hydroxide; alginic acid; pyrogen-free water; isotonic saline; Ring
  • the term “subject” , “test subject” and related terms, as used herein, refer to any organism to which a provided compound or composition is administered in accordance with the present invention e.g., for experimental, diagnostic, prophylactic, and/or therapeutic purposes. Typical subjects include animals (e.g., mammals such as mice, rats, rabbits, non-human primates, and humans; fishes; birds; insects; worms; etc. ) and plants. In some embodiments, a subject may be suffering from, and/or susceptible to a disease, disorder, and/or condition. In some embodiments, a subject is a human being or other mammal. In some embodiments, a subject can be male or female.
  • the animal is a vertebrate such as a primate, rodent, domestic animal or game animal.
  • primates include chimpanzees, cynomolgus monkeys, spider monkeys, and macaques, e.g., Rhesus.
  • Rodents include mice, rats, woodchucks, ferrets, rabbits and hamsters.
  • domestic and game animals include cows, horses, pigs, deer, bison, buffalo, feline species, e.g., domestic cat, canine species, e.g., dog, fox, wolf, avian species, e.g., chicken, emu, ostrich, and fish, e.g., trout, catfish and salmon.
  • the subject is a mammal, e.g., a primate, e.g., a human.
  • the mammal can be a human, non-human primate, mouse, rat, dog, cat, horse, or cow, but are not limited to these examples.
  • a mammal other than a human can be advantageously used as subjects that represent animal models of disorders associated with autoimmune disease or inflammation.
  • a method and composition described herein can be used to treat domesticated animals and/or pets.
  • a “therapeutically effective amount” of a composition is an amount sufficient to achieve a desired therapeutic effect, and therefore does not require cure or complete remission.
  • therapeutic efficacy is an improvement in any of the disease indicators, and a therapeutically effective amount is sufficient to cause an improvement in a clinically significant condition/symptom in the treated individual.
  • the phrases “therapeutically effective amount” and “effective amount” are used herein to mean an amount sufficient to reduce by at least about 15 percent, preferably by at least 50 percent, more preferably by at least 90 percent, or to increase at least about 50 percent, at least about 100 percent, at least about 200 percent, more preferable at least about 500 percent and can prevent a clinically significant deficit in the activity, function and response of the individual being treated.
  • the effective amount may vary depending on such factors as the size and weight of the subject, the type of illness, or the particular agents of the application. For example, the choice of the agent of the application could affect what constitutes an “effective amount” .
  • One of ordinary skill in the art would be able to study the factors contained herein and make the determination regarding the effective amount of the agents of the application without undue experimentation.
  • the regime of administration may affect what constitutes an effective amount.
  • the agent of the application can be administered to the subject either prior to or after the disease diagnosis or condition. Further, several divided dosages, as well as staggered dosages, can be administered daily or sequentially, or the dose can be continuously infused, or can be a bolus injection. Further, the dosages of the agent (s) of the application could be proportionally increased or decreased as indicated by the exigencies of the therapeutic or prophylactic situation.
  • treat, ” “treated, ” “treating” , or “treatment” as used herein have the meanings commonly understood in the medical arts, and therefore do not require cure or complete remission, and include any beneficial or desired clinical results.
  • beneficial or desired clinical results are prolonging survival as compared to expected survival without treatment, reduced symptoms including one or more of the followings: weakness and atrophy of proximal skeletal muscles, inability to sit or walk independently, difficulties in swallowing, breathing, etc.
  • preventing or “delaying” a disease refers to inhibiting the full development of a disease.
  • the present disclosure is based on an unexpected discovery that a compound having a specific structure comprising a nitrogen-containing five membered heterocyclic ring moiety may be directly or indirectly bonded to at least one oligonucleotide so as to aid the delivery of the oligonucleotide to a subject and thus achieving improved modulation of a target gene both in vitro and/or in vivo.
  • the compound as disclosed herein may remarkably enhance oligonucleotide delivery efficiency to liver, combine endosomal escape and nuclear translocation design, without the need of a delivery vector or formulation.
  • the nitrogen-containing five membered heterocyclic ring moiety may have a core structure shown by any of the following formulae, with all the chemical bonds, atoms and substituents attached to the ring atoms of the core structure omitted for the sake of simplicity:
  • the above indicated core structures comprise different ring atoms, and the fused ring core structures may be either electrically neutral or locally charged in the form of e.g., sulphonium or quaternary ammonium. It can be seen that one or more unsaturated double bonds may shift in the fused ring core structure due to the delocalized ⁇ -electronic conjugation effect, and all the substituents, including the presence/absence of any substituents, may vary depending on the categories and valences of each ring atom to which the substituents are attached. For example, an additional substituent may be attached to a sulphonium or quaternary ammonium ion which is present as a ring atom of the fused ring core structure. All of these variations are within the concept of the present disclosure.
  • the compound of the present disclosure comprises structure of Formula BI, wherein X′ is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; each of F′, G′, H′ and I′ is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of the asterisks refers to a site optionally linked to at least one substituent or an oligonucleotide directly or indirectly.
  • the compound of the present disclosure has a structure represented by Formula AI or Formula AII:
  • X on each occurrence, is an atom selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur
  • each of F, G, H and I is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur.
  • n is an integer of 1, 2 or 3
  • m+n 4.
  • C on each occurrence, is either absent or selected from the group consisting of hydrogen; halogen atom, such as fluorine, chlorine, bromine or iodine; hydroxyl; (C 1 -C 25 ) alkyl, such as - (C 2 -C 22 ) alkyl, or - (C 2 -C 19 ) alkyl, or - (C 3 -C 18 ) alkyl, or - (C 4 -C 16 ) alkyl, or - (C 6 -C 12 ) alkyl, or - (C 8 -C 10 ) alkyl; (C 1 -C 20 ) alkoxy, such as - (C 2 -C 19 ) alkoxy, or - (C 3 -C 18 ) alkoxy, or - (C 4 -C 16 ) alkoxy, or - (C 6 -C 12 ) alkoxy; halogenated (C 1 -C 20 ) alkyl
  • each B is attached to any one of F, G, H and I, while C is attached to the rest of F, G, H and I.
  • B is attached to H and three C’s are separately attached to each of F, G and I.
  • B is attached to G and three C’s are separately attached to each of F, H and I.
  • B is attached to F and three C’s are separately attached to each of G, H and I.
  • B is attached to I and three C’s are separately attached to each of F, G and H.
  • two B’s are separately attached to G and H, and two C’s are separately attached to each of F and I.
  • B on each occurrence, is independently selected from the group consisting of hydroxyl; -C (O) OH; -P (O) 2 -OH; -P (O) -OH; -P (O) (S) -OH; -CN; - (C 1 -C 22 ) alkyl, such as - (C 2 -C 20 ) alkyl, or - (C 3 -C 16 ) alkyl, or - (C 6 -C 12 ) alkyl; -O- (C 1 -C 22 ) alkyl, such as -O- (C 2 -C 20 ) alkyl, or -O- (C 3 -C 16 ) alkyl, or -O- (C 6 -C 12 ) alkyl; - (C 1 -C 22 ) alkenyl, such as - (C 2 -C 20 ) alkenyl, or - (C 3 -C 16 ) alken
  • Each of the (C 1 -C 22 ) alkyl or (C 1 -C 22 ) alkylene included in B can be an alkyl or alkylene comprising from 1 to 22 carbon atoms, or from 2 to 20 carbon atoms, or from 3 to 16 carbon atoms, or from 4 to 12 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms, or from 8 to 10 carbon atoms.
  • each of A 1 , A 2 and A 3 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, -O-R 1 , -SH, - (C 1 -C 25 ) alkyl, halogenated - (C 1 -C 25 ) alkyl, - (C 2 -C 22 ) alkenyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, - (C 3 -C 22 ) cycloalkenyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene- (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene-R 1 , - (C 1 -C 22 ) alkylene-O-R 1 , - (C 1 -C 22 ) alkylene-COOR 1 , -C (O) O-R
  • Y is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of P, Q, S and T is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and the asterisk refers to the site wherein the substituent represented by Formula III is linked with the structure represented by Formula I or Formula II;
  • each of R 3 , R 4 and R 5 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, -O-R 1 , -SH, - (C 1 -C 25 ) alkyl, halogenated - (C 1 -C 25 ) alkyl, - (C 2 -C 22 ) alkenyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, - (C 3 -C 22 ) cycloalkenyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene- (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene-R 1 , - (C 1 -C 22 ) alkylene-O-R 1 , - (C 1 -C 22 ) alkylene-COOR 1 , -C (O) O-R
  • R 7 on each occurrence, is attached to any one of P, Q, S and T, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C 1 -C 20 ) alkyl, (C 1 -C 20 ) alkoxy, halogenated (C 1 -C 20 ) alkyl and halogenated (C 1 -C 20 ) alkoxy.
  • M is an integer of 0, 1, 2 or 3.
  • R 6 is attached to any one of P, Q, S and T, and is selected from the group consisting of direct bond, -O-, -C (O) O-, -O-C (O) -, -P (O) 2 -O-, -O-P (O) 2 -O-, -P (O) (S) -O-, -O-P (O) (S) -O-, -O-P (O) -O-, - (C 1 -C 22 ) alkylene-, - (C 1 -C 22 ) alkylene-O-, -O- (C 1 -C 22 ) alkylene-, - (C 1 -C 22 ) alkylene-NH-, -NH- (C 1 -C 22 ) alkylene-, -C (O) - (C 1 -C 22 ) alkylene-, - (C 1 -C 22 ) alkylene-C (O)
  • R 1 on each occurrence, is independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, - (C 1 -C 22 ) alkyl, - (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, - (C 6 -C 22 ) aryl, - (C 1 -C 22 ) alkoxy, - (C 3 -C 22 ) cycloalkoxy, - (C 6 -C 22 ) aryloxy, -C (O) - (C 1 -C 22 ) alkyl, -OC (O) (C 1 -C 22 ) alkyl, -C (O) -O- (C 1 -C 22 ) alkyl, -C (O) - (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, -OC (O) - (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, -OC (O) - (C 3 -C 22 ) cycloalkyl,
  • R 2 on each occurrence, is independently selected from the group consisting of a halogen atom, a (C 1 -C 12 ) alkyl, a (C 1 -C 12 ) alkoxy, a (C 1 -C 12 ) alkoxycarbonyl, a (C 6 -C 16 ) aryl or a (C 6 -C 16 ) aryloxycarbonyl.
  • one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group, nitrile group and phosphoric acid group contained in A 1 , A 2 , A 3 , B, C, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 7 can be protected with a terminal protective group R P selected from the group consisting of (C 1 -C 22 ) alkyl, (C 1 -C 22 ) alkoxy, (C 1 -C 22 ) alkylcarbonyl, (C 1 -C 22 ) alkoxycarbonyl, (C 6 -C 22 ) aryl, (C 6 -C 22 ) aryloxy, (C 6 -C 22 ) arylcarbonyl, (C 6 -C 22 ) aryloxycarbonyl, tri ( (C 1 -C 22 ) alkyl) silyl and tri ( (C 1 -C 22 ) alkoxy) silyl, wherein the (C 1 -C 22 ) alky
  • a 1 , A 2 and A 3 are not simultaneously hydrogen and R 3 , R 4 and R 5 are not simultaneously hydrogen.
  • X is carbon, and all of A 1 , A 2 and A 3 are present.
  • X is nitrogen, both A 1 and A 2 are present and A 3 is absent.
  • X is nitrogen with positive charge (i.e. quaternary ammonium) , and all of A 1 , A 2 and A 3 are present.
  • X is sulfur or oxygen, both A 1 and A 3 are absent and A 2 is present.
  • X is sulfur with positive charge (i.e. sulfonium) , both A 2 and A 3 are present and A 1 is absent.
  • each of the (C 1 -C 22 ) alkyl or (C 1 -C 22 ) alkylene included in A 1 , A 2 , A 3 , R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 and R 7 can be an alkyl or alkylene comprising from 1 to 22 carbon atoms, or from 2 to 20 carbon atoms, or from 3 to 16 carbon atoms, or from 4 to 12 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms, or from 8 to 10 carbon atoms.
  • one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group, nitrile group and phosphoric acid group contained in A 1 , A 2 , A 3 , B, C, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 7 can be linked with a support material selected from the group consisting of silica, silica gel, glass, ceramic, polymer, cellulose, and combinations thereof.
  • the solid material is in the form of a bead.
  • the bead may be made of any material including, without limitation, magnetic bead, paramagnetic bead, silica bead, an agarose bead, etc.
  • the compound of the present disclosure may have a structure represented by any of Formula AIV to Formula AXIII,
  • a 1 , A 2 , A 3 , B, C, F, G, H, I, m and n are as defined above.
  • the compound of the present disclosure has a structure represented by Formula BII
  • X′ is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of F′, G′, H′ and I′ is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur.
  • each of A 1 ′, A 2 ′ and A 3 ′ is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -R 1 ′, -O-R 1 ′, -S-R 1 ′, -C (O) -R 1 ′, -C (O) O-R 1 ′, -O-C (O) -R 1 ′, -C (O) NH-R 1 ′, -C (O) NR 2 ′-R 1 ′, -NH-C (O) -R 1 ′, -NR 2 ′-C (O) -R 1 ′, -O-P (O) 2 -O-R 1 ′, -OP (O) (S) -O-R 1 ′, -O-P (O) -O-R 1 ′, -NH-R 1 ′, -NR 2 ′-R 1 ′, - (CH 2 ) r′
  • Each of the (C 1 -C 22 ) alkylene included in A 1 ′, A 2 ′ and A 3 ′ can be (C 2 -C 20 ) alkylene, (C 3 -C 16 ) alkylene, (C 4 -C 14 ) alkylene, (C 6 -C 12 ) alkylene, or (C 8 -C 10 ) alkylene.
  • R 1 ′ and R 3 ′ is independently selected from the group consisting of hydrogen; hydroxyl; - (C 1 -C 30 ) alkyl, such as - (C 2 -C 25 ) alkyl, or - (C 2 -C 22 ) alkyl, or - (C 3 -C 18 ) alkyl, or - (C 4 -C 16 ) alkyl, or - (C 6 -C 12 ) alkyl, or - (C 8 -C 10 ) alkyl; - (C 3 -C 50 ) cycloalkyl, such as - (C 4 -C 40 ) cycloalkyl, or - (C 5 -C 30 ) cycloalkyl, or - (C 6 -C 20 cycloalkyl, or - (C 6 -C 16 ) cycloalkyl; - (C 6 -C 50 ) aryl, such as - (C 6
  • one or more of the substituents A 1 ′, A 2 ′ and A 3 ′ contain at least one targeting moiety.
  • targeting moiety refers to a part or segment of a molecule acting as a chemical signal that binds to a molecule or complex on a particular area of a cell, tissue, or organ.
  • targeting moiety modifies one or more properties of the attached oligonucleotide of the invention including but not limited to pharmacodynamic, pharmacokinetic, binding, absorption, cellular distribution, cellular uptake, charge and clearance.
  • Targeting moieties are routinely used in the arts and are linked directly or via an optional linking moiety to a parent compound such as an oligomeric compound.
  • a targeting moiety is selected from one or more of a ligand, a peptide, nucleic acid, oligonucleotide, aptamer, small molecule, a polyethylene glycol, an amino acid, a cholesterol, a carbohydrate (e.g. glucose, galactosamine or N-acetyl galactosamine) , an antibody or antibody fragment, and localization signal such as a nuclear localization signal or a mitochondrial localization signal.
  • a ligand e.g., a peptide, nucleic acid, oligonucleotide, aptamer, small molecule, a polyethylene glycol, an amino acid, a cholesterol, a carbohydrate (e.g. glucose, galactosamine or N-acetyl galactosamine) , an antibody or antibody fragment, and localization signal such as a nuclear localization signal or a mitochondrial localization signal.
  • a targeting moiety is selected from the group consisting of intercalators, reporter molecules, polyamines, polyamides, vitamin moieties, polyethylene glycols, thioethers, polyethers, thiocholesterols, cholic acid moieties, folate, lipids, fatty acids, phospholipids, biotin, phenazine, phenanthridine, anthraquinone, adamantane, acridine, fluoresceins, rhodamines, coumarins, fluorophores, luminescent proteins and dyes.
  • the targeting moiety is a fluorophore, any fluorophore deemed useful may be utilized.
  • Non-limiting examples of useful fluorescent proteins include but are not limited to GFP, EBFP, Azurite, Cerulean, mCFP, , Turquoise, ECFP, mKeima-Red, TagCFP, AmCyan, mTFP, TurboGFP, TagGFP, EGFP, TagYFP, EYFP, Topaz, Venus, mCitrine, TurboYFP, mOrange, TurboRFP, tdTomato, TagRFP, dsRed2, mRFP, mCherry, mPlum mRaspberry, mScarlet, etc.
  • luminescent proteins include without limitation, Cypridinia luciferase, Gaussia luciferase, Renilla luciferase, Phontinus luciferase, Luciola luciferase, Pyrophorus luciferase, Phrixothrix luciferase, etc.
  • a targeting moiety is selected from: a cell-penetrating peptide, polyethylene glycol, an alkaloid, a tryptamine, a benzimidazole, a quinolone, an amino acid, a cholesterol, carbohydrate, and ligand.
  • a targeting moiety is a carbohydrate.
  • the carbohydrate can be selected from the group consisting of monosaccharides, disaccharides, trisaccharides, and polysaccharides.
  • the carbohydrate is a monosaccharide selected from the group consisting of dextrose, glucose, galactose, mannitol, D-mannose, sorbitol, and sorbose.
  • the carbohydrate is a disaccharide selected from the group consisting of lactose, maltose, sucrose, and trehalose.
  • a targeting moiety is a polysaccharide.
  • a targeting moiety is a N-acetyl galactosamine.
  • a targeting moiety is an amino acid.
  • the amino acid is a hydrophobic amino acid.
  • the hydrophobic amino acid is selected from the group consisting of alanine, isoleucine, leucine, methionine, phenylalanine, proline, tryptophan, and valine.
  • the amino acid is a polar amino acid.
  • the amino acid is selected from the group consisting of arginine, histidine, lysine, cysteine, glycine, glutamine, serine, threonine, tyrosine, aspartic acid and glutamic acid.
  • a targeting moiety is selected from the group consisting of human serum albumin, ⁇ -lactalbumin, trypsinogen, and polyalanine.
  • the targeting moiety comprises an active drug substance, for example, aspirin, warfarin, phenylbutazone, ibuprofen, suprofen, fen-bufen, ketoprofen, (S) - (+) -pranoprofen, carprofen, dansylsarcosine, 2, 3, 5-triiodobenzoic acid, fingolimod, flufenamic acid, folinic acid, a benzothiadiazide, chlorothiazide, a diazepine, indo-methicin, a barbiturate, a cephalosporin, a sulfa drug, an antidiabetic, an antibacterial or an antibiotic.
  • an active drug substance for example, aspirin, warfarin, phenylbutazone, ibuprofen, suprofen, fen-bufen, ketoprofen, (S) - (+) -pranoprofen, carpro
  • the targeting moieties disclosed herein can be used to increase uptake, introduce, delivery and target uptake of oligonucleotide to particular cell or tissue types, e.g., cells or tissues in central nervous system (e.g., brain and spinal cord) , liver, lung, kidney, intestine, pancreas, cholecyst, heart, lymph nodes, spleen, stomach, bladder, muscle and bone.
  • Preferred targeting moieties include those specifically provided in the Examples.
  • R 1 ′ and R 3 ′ is the targeting moiety.
  • all of the R 1 ′s contained in the A 1 ′, A 2 ′ and A 3 ′ are the targeting moiety as stated above;
  • all of the R 3 ′ contained in the A 1 ′, A 2 ′ and A 3 ′ are the targeting moiety as stated above;
  • all of the R 1 ′ and R 3 ′ contained in the A 1 ′, A 2 ′ and A 3 ′ are the targeting moiety as stated above.
  • one or more hydroxyl group, carboxyl group and amino group contained in each of R 1 ′ and R 3 ′ can be optionally protected, e.g. with a terminal protection group R P selected from the group consisting of (C 1 -C 22 ) alkyl, (C 1 -C 22 ) alkoxy, (C 1 -C 22 ) alkylcarbonyl, (C 1 -C 22 ) alkoxycarbonyl, (C 6 -C 22 ) aryl, (C 6 -C 22 ) aryloxy, (C 6 - C 22 ) arylcarbonyl, (C 6 -C 22 ) aryloxycarbonyl, tri ( (C 1 -C 22 ) alkyl) silyl and tri ( (C 1 -C 22 ) alkoxy) silyl, wherein the (C 1 -C 22 ) alkyl contained in the protection group R p can be an alkyl comprising from 1 to 22 carbon atoms,
  • each of R 2 ′, R 4 ′, R 5 ′ and R 6 ′ is independently a halogen atom, such as fluorine, chlorine, bromine or iodine; a (C 1 -C 12 ) alkyl, such as (C 1 -C 10 ) alkyl, or (C 2 -C 8 ) alkyl, or (C 3 -C 6 ) alkyl, or (C 4 -C 5 ) alkyl; a (C 1 -C 12 ) alkoxy, such as (C 1 -C 10 ) alkoxy, or (C 2 -C 8 ) alkoxy, or (C 3 -C 6 ) alkoxy, or (C 4 -C 5 ) alkoxy; a (C 1 -C 12 ) alkoxycarbonyl, such as (C 1 -C 10 ) alkoxycarbonyl, or (C 2 -C 8 ) alkoxycarbonyl, or (C 3 halogen atom
  • each of r′, s′, p′ and q′ is an integer from 1 to 22, such as an integer from 2 to 20, or an integer from 3 to 18, an integer from 4 to 16, an integer from 6 to 12, an integer from 8 to 10.
  • a 3 ′ is absent when X′ is oxygen, and A 1 ′, A 2 ′ and A 3 ′ are not simultaneously hydrogen.
  • X′ is carbon, and all of A 1 ′, A 2 ′ and A 3 ′ are present.
  • X′ is nitrogen, both A 1 ′ and A 2 ′ are present and A 3 ′ is absent.
  • X′ is nitrogen with positive charge (i.e. quaternary ammonium) , and all of A 1 ′, A 2 ′ and A 3 ′ are present.
  • X′ is sulfur or oxygen, both A 1 ′ and A 3 ′ are absent and A 2 ′ is present.
  • X′ is sulfur with positive charge (i.e. sulfonium) , both A 2 ′ and A 3 ′ are present and A 1 ′ is absent.
  • each C′ is attached to any one of F′, G′, H′ and I′, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen; halogen atom, such as fluorine, chlorine, bromine or iodine; hydroxyl; - (C 1 -C 20 ) alkyl, such as - (C 2 -C 19 ) alkyl, or - (C 3 -C 18 ) alkyl, or - (C 4 -C 16 ) alkyl, or - (C 6 -C 12 ) alkyl, or - (C 8 -C 10 ) alkyl; - (C 1 -C 20 ) alkoxy, such as - (C 2 -C 19 ) alkoxy, or - (C 3 -C 18 ) alkoxy, or - (C 4 -C 16 ) alkoxy, or - (C 6 -C 12 ) alkoxy; halogenated (C 1 -C 20 )
  • m′ is an integer of 1, 2 or 3
  • n′ is an integer of 1, 2 or 3
  • m′+n′ 4.
  • each B′ is attached to any one of F′, G′, H′ and I′, while C′ is attached to the rest of F′, G′, H′ and I′.
  • B′ is attached to H′ and three C′s are separately attached to each of F′, G′ and I′.
  • B′ is attached to G′ and three C′s are separately attached to each of F′, H′ and I′.
  • B′ is attached to F′ and three C′s are separately attached to each of G′, H′ and I′.
  • B′ is attached to I and three C′s are separately attached to each of F′, G′ and H′.
  • two B′s are separately attached to G′ and H′, and two C′s are separately attached to each of F′ and I′.
  • each of B′ is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, - (C 1 -C 30 ) alkoxy, -P (O) 2 -OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C 1 -C 30 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-OH, -C (O) -NH- [ (C 1 -C 30 ) alkylene-O] r′ -H (wherein r′ is an integer of 1 to 22) , -C (O) -NH- [ (C 1 -C 30 ) alkylene-O] r′ - (C 1 -C 30 ) alkylene-C (O) -OH (wherein r′ is an integer of 1 to 22) , -C (O)
  • Y′ is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of P′, Q′, S′ and T′ is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and the asterisk refers to the site wherein the substituent represented by Formula BIII is linked with any one of F′, G′, H′ and I′ of Formula BII.
  • R 7 ′ is selected from the group consisting of -O-, -C (O) O-, -O-C (O) -, -P (O) 2 -O-, -O-P (O) 2 -O-, -P (O) (S) -O-, -O-P (O) (S) -O-, -O-P (O) -O-, - (C 1 -C 30 ) alkylene-, - (C 1 -C 30 ) alkylene-O-, -O- (C 1 -C 30 ) alkylene-, - (C 1 -C 30 ) alkylene-NH-, -NH- (C 1 -C 30 ) alkylene-, -C (O) - (C 1 -C 30 ) alkylene-, - (C 1 -C 30 ) alkylene-, - (C 1 -C 30 ) alkylene-, - (C 1
  • each of R 8 ′ and R 9 ′ is either absent or is a substituent independently selected from the group consisting of -H, hydroxyl, - (C 1 -C 30 ) alkyl, - (C 3 -C 50 ) cycloalkyl, - (C 6 -C 50 ) aryl, - (C 1 -C 30 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-OH, - (C 1 -C 30 ) alkylene-C (O) OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-C (O) OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-C (O) OH, - (C 1 -C 30 ) alkylene-NH 2 , - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-NH 2 , -
  • R 8 ′ and R 9 ′ are optionally protected, e.g. with the protection group R P as defined herein.
  • R 8 ′ and R 9 ′ can be linked together so that R 8 ′, R 9 ′, the carbon atom linked with R 8 ′ and the Y′ atom linked with R 9 ′ form an unsubstituted or substituted heterocyclic ring.
  • R 9 ′ is absent when Y′ is oxygen.
  • each R 10 ′ is attached to any one of P′, Q′, S′ and T′, and is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, -P (O) 2 -OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C 1 -C 30 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-OH, - (C 5 -C 50 ) heteroarylene-OH, - (C 1 -C 30 ) alkylene-C (O) OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-C (O) OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-C (O) OH, - (C 5 -C 50 ) heteroarylene-C (O) OH, -C (O) OH
  • the - (C 1 -C 30 ) alkylene-contained in B′, R 7 ′ R 8 ′, R 9 ′ and R 10 ′ may include - (C 1 -C 28 ) alkylene-, or - (C 1 -C 26 ) alkylene-, or - (C 1 -C 24 ) alkylene-, or - (C 2 -C 22 ) alkylene-, or - (C 3 -C 20 ) alkylene-, or - (C 4 -C 18 ) alkylene-, or - (C 5 -C 17 ) alkylene-, or - (C 6 -C 16 ) alkylene-, or - (C 7 -C 14 ) alkylene-, or - (C 8 -C 12 ) alkylene-.
  • the - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-contained in B′, R 7 ′ R 8 ′, R 9 ′ and R 10 ′ may include - (C 3 -C 40 ) cycloalkylene-, or - (C 3 -C 30 ) cycloalkylene-, or - (C 3 -C 22 ) cycloalkylene-, or - (C 4 -C 20 ) cycloalkylene-, or - (C 5 -C 18 ) cycloalkylene-, or - (C 6 -C 16 ) cycloalkylene-, or - (C 7 -C 14 ) cycloalkylene-, or - (C 8 -C 12 ) cycloalkylene-.
  • the - (C 6 -C 50 ) arylene-contained in B′, R 7 ′ R 8 ′, R 9 ′ and R 10 ′ may include - (C 6 -C 40 ) arylene-, or - (C 6 -C 30 ) arylene-, or - (C 6 -C 22 ) arylene-, or - (C 6 -C 20 ) arylene-, or - (C 6 -C 18 ) arylene-, or - (C 6 -C 16 ) arylene-, or - (C 6 -C 12 ) arylene-.
  • the - (C 5 -C 50 ) heteroarylene-contained in B′, R 7 ′ R 8 ′, R 9 ′ and R 10 ′ may include - (C 5 -C 40 ) heteroarylene-, or - (C 5 -C 30 ) heteroarylene-, or - (C 5 -C 22 ) heteroarylene-, or - (C 5 -C 18 ) heteroarylene-, or - (C 6 -C 16 ) heteroarylene-.
  • the term “- (C 1 -C 30 ) alkyl” may include - (C 2 -C 22 ) alkyl, or - (C 3 -C 18 ) alkyl, or - (C 4 -C 16 ) alkyl, or - (C 6 -C 12 ) alkyl, or - (C 8 -C 10 ) alkyl;
  • the term “- (C 3 -C 50 ) cycloalkyl” may include - (C 4 -C 40 ) cycloalkyl, or - (C 5 -C 30 ) cycloalkyl, or - (C 6 -C 20 ) cycloalkyl, or - (C 6 -C 16 ) cycloalkyl;
  • the term “- (C 6 -C 50 ) aryl” may include - (C 6 -C 40 ) aryl, or - (C 6
  • each R 11 ′ is attached to any one of P′, Q′, S′ and T′, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen; hydroxyl; halogen atom, such as fluorine, chlorine, bromine or iodine; - (C 1 -C 20 ) alkyl, such as - (C 2 -C 19 ) alkyl, or - (C 3 -C 18 ) alkyl, or - (C 4 -C 16 ) alkyl, or - (C 6 -C 12 ) alkyl, or - (C 8 -C 10 ) alkyl; - (C 1 -C 20 ) alkoxy, such as - (C 2 -C 19 ) alkoxy, or - (C 3 -C 18 ) alkoxy, or - (C 4 -C 16 ) alkoxy, or - (C 6 -C 12 ) alkoxy; (C 1 -C 20 ) alk
  • R 9 ′ is absent when Y′ is oxygen.
  • Y′ is carbon, and both of R 8 ′ and R 9 ′ are present.
  • Y′ is nitrogen, R 8 ′ is present and R 9 ′ is absent.
  • Y′ is nitrogen with positive charge (i.e., quaternary ammonium) , both R 8 ′ and R 9 ′ are present.
  • Y′ is sulfur or oxygen, and R 9 ′ is absent.
  • Y′ is sulfur with positive charge (i.e., sulfonium) , and R 9 ′ is present.
  • M′ is an integer of 1, 2 or 3
  • N′ is an integer of 1, 2 or 3
  • M′+N′ 4.
  • each R 10 ′ is attached to any one of P′, Q′, S′ and T′, while R 11 ′ is attached to the rest of P′, Q′, S′ and T′.
  • R 10 ′ is attached to S′ and three R 11 ′ are separately attached to each of P′, Q′ and T′.
  • R 10 ′ is attached to Q′ and three R 11 ′ are separately attached to each of P′, S′ and T′.
  • R 10 ′ is attached to P′ and three R 11 ′ are separately attached to each of Q′, S′ and T′.
  • R 10 ′ is attached to T′ and three R 11 ′ are separately attached to each of P′, Q′ and S′.
  • two R 10 ′ are separately attached to Q′ and S′, and two R 11 ′ are separately attached to each of P′ and T′.
  • one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group and phosphoric acid group contained in each of R 8 ′, R 9 ′ and R 10 ′ are optionally protected with a terminal protection group R P selected from the group consisting of (C 1 -C 22 ) alkyl, (C 1 -C 22 ) alkoxy, (C 1 -C 22 ) alkylcarbonyl, (C 1 -C 22 ) alkoxycarbonyl, (C 6 -C 22 ) aryl, (C 6 -C 22 ) aryloxy, (C 6 -C 22 ) arylcarbonyl, (C 6 -C 22 ) aryloxycarbonyl, tri ( (C 1 -C 22 ) alkyl) silyl and tri ( (C 1 -C 22 ) alkoxy) silyl, wherein the (C 1 -C 22 ) alkyl contained in the protection group R p can be an alkyl comprising from 1 to 22
  • the support material attached to R 10 ′ can be selected from the group consisting of silica, silica gel, glass, ceramic, polymer, cellulose, and combinations thereof.
  • the solid material is in the form of a bead.
  • the bead may be made out of any material including, without limitation, magnetic bead, paramagnetic bead, silica bead, an agarose bead, etc.
  • the compound of the present disclosure may have a structure represented by any of Formula BIV to Formula BXIV,
  • a 1 ′, A 2 ′, A 3 ′, B′, C′, F′, G′, H′, I′, R 7 ′, R 8 ′, R 10 ′, R 11 ′, P′, Q′, S′, T′, m′, n′, M′ and N′ are as defined herein.
  • the RING I can be formed by linking A 1 ′ and A 2 ′ together and thus may consist of the nitrogen atom to which A 1 ′ is attached, the carbon atom to which A 2 ′ is attached, at least part of A 1 ′ and at least part of A 2 ′.
  • the RING I can be a 4, 5, 6, 7, 8 or 9 member ring, in particular a ring fused to the core structure.
  • the RING I may consist of a nitrogen atom, a carbon atom from the core structure and 2, 3, 4, 5, 6 or 7 additional ring atoms derived from A 1 ′ and A 2 ′, wherein each of the additional ring atoms may be selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen, sulfur, and combinations thereof.
  • all of the additional ring atoms may be carbon atoms.
  • a 4 ′ can be a substituent attached to any atom of RING I, and each of A 4 ′, A 5 ′ and A 6 ′ is independently selected from the group consisting of -R 1 ′, -O-R 1 ′, -S-R 1 ′, -C (O) -R 1 ′, -C (O) O-R 1 ′, -O-C (O) -R 1 ′, -C (O) NH-R 1 ′, -C (O) NR 2 ′-R 1 ′, -NH-C (O) -R 1 ′, -NR 2 ′-C (O) -R 1 ′, -O-P (O) 2 -O-R 1 ′, -OP (O) (S) -O-R 1 ′, -O-P (O) -O-R 1 ′, -NH-R 1 ′, -NR 2 ′-R 1 ′, - (CH
  • the RING II can be formed by linking R 8 ′ and R 9 ′ together and thus may consist of the nitrogen atom to which R 9 ′ is attached, the carbon atom to which R 8 ′ is attached, at least part of R 8 ′ and at least part of R 9 ′.
  • the RING II can be a 4, 5, 6, 7, 8 or 9 member ring, in particular a ring fused to the core structure of the substituent B′.
  • the RING II may consist of a nitrogen atom, a carbon atom from the core structure of the substituent B′ and 2, 3, 4, 5, 6 or 7 additional ring atoms derived from R 8 ′ and R 9 ′, wherein each of the additional ring atoms may be selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen, sulfur, and combinations thereof. In another exemplary embodiment, all of the additional ring atoms may be carbon atoms.
  • R 12 ′ is attached to any atom of RING II and is selected from the group consisting of -H, hydroxyl, - (C 1 -C 30 ) alkyl, - (C 3 -C 50 ) cycloalkyl, - (C 6 -C 50 ) aryl, - (C 1 -C 30 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-OH, - (C 1 -C 30 ) alkylene-C (O) OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-C (O) OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-C (O) OH, - (C 1 -C 30 ) alkylene-NH 2 , - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-NH 2 , - (C 6 -C 50 )
  • one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group and phosporic acid group contained in R 12 ′ are optionally protected, e.g. with a terminal protection group R P selected from the group consisting of (C 1 -C 22 ) alkyl, (C 1 -C 22 ) alkoxy, (C 1 -C 22 ) alkylcarbonyl, (C 1 -C 22 ) alkoxycarbonyl, (C 6 -C 22 ) aryl, (C 6 -C 22 ) aryloxy, (C 6 -C 22 ) arylcarbonyl, (C 6 -C 22 ) aryloxycarbonyl, tri ( (C 1 -C 22 ) alkyl) silyl and tri ( (C 1 -C 22 ) alkoxy) silyl, wherein the (C 1 -C 22 ) alkyl contained in the protection group R p can be an alkyl comprising from 1 to 22 carbon atoms, such as
  • the protection group R P can be selected from the group consisting of benzyloxycarbonyl (Cbz) , tert-butyldimethylsilyl (TBS) , 4, 4′-dimethoxytrityl (DMTr) , t-butyloxy carbonyl (Boc) , benzyl (Bn) and benzyloxy (BnO) .
  • the compound of Formula BI or Formula BII may have one or more chiral centers, and each of the chiral centers can be independently R chiral, S chiral, mesomeric or racemic form.
  • a 1 ′, A 2 ′ and A 3 ′ is selected from -CH (- (CH 2 ) r′ -NH-C (O) - (CH 2 ) s′ -R 1 ′) (-NH-C (O) - (CH 2 ) q′ -R 3 ′) , -CH (- (CH 2 ) r′ -C (O) -NH- (CH 2 ) s′ -R 1 ′) (-C (O) -NH- (CH 2 ) q′ -R 3 ′) , -N (- (CH 2 ) r′ -NH-C (O) - (CH 2 ) s′ -R 1 ′) (-NH-C (O)
  • the compound of the present disclosure has a structure represented by any one of Formula BXV to Formula BXX:
  • each of the double bond and the atoms or moieties attached to the same may be in E form or Z form.
  • the compound of the present disclosure has a structure represented by any of the following molecular formulae:
  • an oligonucleotide delivery agent comprising a DEC compound disclosed by the present application and at least one oligonucleotide. It can be fully understood that when the DEC is directly linked with the oligonucleotide or indirectly linked with the oligonucleotide via at least one linking moiety, one or more terminal atoms (such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc. ) or terminal groups (such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether group, acyl group, etc. ) of the DEC may be detached so as to provide an active site linkable to the linking moiety or the oligonucleotide.
  • terminal atoms such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc.
  • terminal groups such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether group, acyl group, etc.
  • the linking moieties when present, can be selected from the group consisting of -O-, -S-, -C (O) -, -NH-, -N ( (C 1 -C 12 ) alkyl) -, -N ( (C 1 -C 12 ) alkyl) -C (O) -O-, -O-C (O) -, -C (O) -O-, -O-C (O) -O-, -C (O) -NH-, -OP (O) 2 O-, -P (O) (O - ) O-, -OP (O) O-, -OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2 -O-, -S (O) 2 -O-, -S (O) -O-, - (C 1 -C 22 ) alkylene-, - (C 1 -C 22 ) alkylene-NH
  • Another embodiment of the present disclosure provides a delivery enhancing compound (DEC) conjugated oligonucleotide comprising a structure represented by Formula AA, which can more efficiently deliver the oligonucleotide both in vitro and in vivo.
  • DEC delivery enhancing compound
  • the Pdelivery enhancing compound moiety” shown in Formula AA is derived from any one of the above stated DEC compounds of the present disclosure. It can be understood that one or more terminal atoms (such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc. ) or terminal groups (such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether group, acyl group, etc. ) of the inventive compound have be detached so as to provide an active site linkable to the targeting moiety or the oligonucleotide, hence the “delivery enhancing compound” of Formula BA can be considered as a moiety obtained by subtracting said one or more atoms or terminal groups from the inventive compounds.
  • terminal atoms such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc.
  • terminal groups such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether group, acyl group, etc.
  • the delivery enhancing compound (DEC) conjugated oligonucleotide has a structure represented by Formula BB,
  • each of A 1 ′, A 2 ′, A 3 ′, X′, F′, G′H′, I′, C′, m′ and n′ is as defined above.
  • at least one of A 1 ′, A 2 ′ and A 3 ′ comprises one or more targeting moieties
  • the DEC is attached to at least one oligonucleotide via the B′′ group.
  • the B′′ group can be derived by detaching one or more terminal atoms (such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc. ) or one or more terminal groups (such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether group, acyl group, etc. ) from the B′′ group contained in Formula BII.
  • the delivery enhancing compound (DEC) conjugated oligonucleotide has a structure represented by Formula BC,
  • each of A 1 ′, A 2 ′, A 3 ′, R 7 ′, R 9 ′, R 10 ′, R 11 ′, X′, Y′, F′, G′, H′, I′, C′, R′, Q′, S′, T′, m′, n′, M′ and N′ is as defined above.
  • at least one of A 1 ′, A 2 ′ and A 3 ′ comprises one or more targeting moieties, and the DEC is attached to at least one oligonucleotide via the R 8 ′′ group.
  • the R 8 ′′ group can be derived by detaching one or more terminal atoms (such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc. ) or one or more terminal groups (such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether group, acyl group, etc. ) from the R 8 ′ group contained in Formula BIII.
  • one or more terminal atoms such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc.
  • terminal groups such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether group, acyl group, etc.
  • the delivery enhancing compound (DEC) conjugated oligonucleotide has a structure represented by any one of Formulae E1 to E15,
  • each of A 1 ′, A 2 ′, R 7 ′ and R 10 ′ is as defined above.
  • at least one of A 1 ′ and A 2 ′ comprises one or more targeting moieties, or A 2 ′ comprises one or more targeting moieties; and the DEC is attached to at least one oligonucleotide via the B′′ group or the R 8 ′′ group.
  • the R 8 ′′ group can be derived by detaching one or more terminal atoms (such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc. ) or one or more terminal groups (such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether group, acyl group, etc.
  • the B′′ group can be derived by detaching one or more terminal atoms (such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc. ) or one or more terminal groups (such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether group, acyl group, etc. ) from the B′ group.
  • one or more terminal atoms such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc.
  • terminal groups such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether group, acyl group, etc.
  • the targeting moiety is contained in the molecular structure of the DEC compound, such as being as part of the A 1 ′, A 2 ′ or A 3 ′, and preferably being the R 1 ′ or R 3 ′ group.
  • the targeting moiety is independent of the DEC compound and is additionally added after or during the synthesis of the DEC compound.
  • the targeting moiety and the delivery enhancing compound moiety can be linked with each other by a first linking moiety.
  • the delivery enhancing compound moiety and the oligonucleotide can be linked by a second linking moiety.
  • Each of the first and second linking moieties can be selected from the group consisting of direct bond, -O-, -S-, -C (O) -, -NH-, -N ( (C 1 -C 12 ) alkyl) -, -N ( (C 1 -C 12 ) alkyl) -C (O) -O-, -O-C (O) -, -C (O) -O-, -O-C (O) -O-, -C (O) -O-, -C (O) -NH-, -OP (O) 2 O-, -OP (O) O-, -OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2 -O-,
  • the delivery enhancing compound moiety in delivery enhancing compound (DEC) conjugated oligonucleotide of Formula A, is directly linked with the oligonucleotide when the linking moiety is a direct bond. In one embodiment, in the delivery enhancing compound (DEC) conjugated oligonucleotide of Formula BA, the targeting moiety is directly linked with the delivery enhancing compound moiety when the linking moiety is a direct bond.
  • the oligonucleotide may include those disclosed above, and particularly can be selected from the group consisting of antisense oligonucleotide (ASO) , antisense RNA, short interfering RNA (siRNA) , microRNA (miRNA) , saRNA, dsRNA, scRNA, sgRNA or any other oligonucleotide targeting at least one nucleic acid sequence.
  • ASO antisense oligonucleotide
  • siRNA short interfering RNA
  • miRNA microRNA
  • saRNA saRNA
  • dsRNA dsRNA
  • scRNA sgRNA
  • any other oligonucleotide targeting at least one nucleic acid sequence any other oligonucleotide targeting at least one nucleic acid sequence.
  • nucleotides of the oligonucleotides described herein may be natural, i.e., non-chemically modified, nucleotides or at least one nucleotide may be a chemically modified nucleotide.
  • Non-limiting examples of the chemical modification include one or more of a combination of the following:
  • At least one nucleotide in the oligonucleotide sequence being a locked nucleic acid
  • oligonucleotide sequence being a deoxyribonucleotide (DNA) .
  • modifications of nucleotides or oligonucleotides in the present disclosure are well known to those skilled in the art, and modifications of the phosphodiester bond refer to modifications of oxygen in the phosphodiester bond, including phosphorothioate modifications and boronated phosphate modifications.
  • the modifications disclosed herein stabilize an oligonucleotide structure, maintaining high specificity and high affinity for base pairing.
  • the modifications disclosed herein also stabilize a nucleic acid structure and maintain its delivering accessory properties including bioavailability, biodistribution, and/or cellular uptake of the oligonucleotide agent in various tissues prefrontal cortex, cerebellum, spinal cord (e.g., cervical, thoracic, lumber) , muscle, liver, and kidney.
  • the chemical modification is to substitute the phosphodiester bond with phosphorothioate (PS) bond on the backbone of the oligonucleotide disclosed herein.
  • the oligonucleotide disclosed herein comprises at least one PS backbone modification in one oligonucleotide strand.
  • the oligonucleotide comprises at least 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 24, 28, 32, or 40 PS backbone modifications in one oligonucleotide strand.
  • the nucleotides or oligonucleotides of the present application includes at least one chemically modified nucleotide which is modified at 2′-OH in pentose of a nucleotide, i.e., the introduction of certain substituents at the hydroxyl position of the ribose, such as 2′-fluoro modification, 2′-oxymethyl modification, 2′-oxyethylidene methoxy modification, 2, 4′-dinitrophenol modification, locked nucleic acid (LNA) , 2′-amino modification or 2′-deoxy modification, e.g., a 2’-deoxy-2’-fluoro modified nucleotide, a 2’-deoxy-modified nucleotide.
  • LNA locked nucleic acid
  • the nucleotides or oligonucleotides of the present application includes at least one chemically modified nucleotide which is modified at the base of the nucleotide, e.g., 5 ′-bromouracil modification, 5’-iodouracil modification, N-methyluracil modification, or 2, 6-diaminopurine modification.
  • the chemical modification of the nucleotides or oligonucleotides in the present application is an addition of a (E) -vinylphosphonate moiety at the 5’ end of the sense or antisense sequence.
  • the chemical modification of the at least one chemically modified nucleotide is an addition of a 5′-methyl cytosine moiety at the 5’ end of the sense or antisense sequence.
  • the oligonucleotides used in the present disclosure may be commercially available from various vendors, or synthesized in a lab scale or industrial scale.
  • the oligonucleotides can be synthesized by using a commercialized synthesizer or a particularly customized synthesizer, such as a K&ADNA synthesizer purchased from K&ALaborgeraete GbR, Schaafheim, Germany, by using ordinary synthesis procedures, e.g. a solid phase synthesis technique comprising the steps of sequentially adding batches of raw materials (e.g. phosphoramidite monomers including various linkers and conjugates) onto a solid support known in the art and subjecting each base addition to a preparation cycle consisted of four chemical reactions of detritylation, coupling, oxidation/thiolation and capping, so as to produce the oligonucleotides with desired full-length.
  • a solid phase synthesis technique comprising the steps of sequentially adding batches of raw materials (e.g. phosphoramidite monomers including various linkers and conjugates) onto a solid support known in the art and subjecting each base addition to a preparation cycle consisted of four chemical reactions of de
  • the oligonucleotide delivery agent may comprise one, two, three, four, five, six or even more oligonucleotides separately linked with one, two, three, four, five, six or even more of the delivery enhancing compounds via one, two, three, four, five, six or even more linking moieties.
  • the oligonucleotide delivery agent may have a structure represented by any of the following formulae AAI to AAXXIV:
  • L represents the linking moiety
  • the symbol epresents a double strand oligonucleotide, either symmetric or asymmetric independently on each of the ends; presents a single strand oligonucleotide, and each of a, b and c is independently an integer from 1 to 50, such as an integer from 2 to 45, or an integer from 3 to 40, or an integer from 4 to 35, or an integer from 5 to 30, or an integer from 10 to 20.
  • Each of the linking moiety, and thus the delivery enhancing compound may be linked at 3’ end, 5’ end or any internal position, such as the n th nucleotide, of the double or single strand oligonucleotide.
  • one or more of the substituents A 1 , A 2 , A 3 , B, C, A 1 ′, A 2 ′, A 3 ′, B′ and C′ of the delivery enhancing compound can be linked with the linking moiety or with the oligonucleotide (when the linking moiety is a direct bond) .
  • the linking moiety is a direct bond
  • either one of A 1 , A 2 , A 3 , B, A 1 ′, A 2 ′, A 3 ′ R 8 ′, R 12 ′and B′ preferably A 2 A 2 ′, B, B′, R 8 ′ or R 12 ′ is linked with the linking moiety or the oligonucleotide.
  • one or more terminal groups of the above said substituents may be cleavaged or hydrolyzed to decap an active site (such as a - (C 1 -C 22 ) alkylene-OH group) which is then linked with the oligonucleotide via a linking moiety (such as -P (O) (O - ) O-) .
  • an active site such as a - (C 1 -C 22 ) alkylene-OH group
  • a linking moiety such as -P (O) (O - ) O-
  • exemplary structures of the oligonucleotide delivery agents include O1 to O25 as illustrated below:
  • J represents O or S.
  • the delivery enhancing compounds are linked with double-stranded RNA (dsRNA) duplexes (including but not limited to siRNA or saRNA) and/or single-stranded antisense oligonucleotides (ASOs) at the 3’-terminus or 5’-terminus their passenger (P) strand via a linking moiety, such as -OP (O) 2 O- (-P (O) (O - ) -O-) , wherein P is passenger strand and G is guide strand; and electron rearrangement may also occur.
  • dsRNA duplexes including but not limited to siRNA or saRNA
  • ASOs single-stranded antisense oligonucleotides
  • At least one hydrogen atom (i.e. H) contained in the delivery enhancing compound, the delivery enhancing compound moiety, the linking moiety and/or the oligonucleotide is substituted with deuterium atom (i.e. D) .
  • at least one of the delivery enhancing compound, the delivery enhancing compound moiety, the linking moiety and the oligonucleotide comprises one to twenty, such as one to fifteen, or one to twelve, or one to ten, or one to eight, or one to six, or one to three, or one to two deuterium atoms.
  • 1%to 100%, or 2%to 90%, or 5%to 80%, or 10%to 70%, or 20%to 60%, or 30%to 50%, or 40%to 45%by mole of the hydrogen atom contained in the the delivery enhancing compound, the delivery enhancing compound moiety, the linking moiety and/or the oligonucleotide is substituted with deuterium atom.
  • the deuterium substitution rate can be within a numerical range obtained by combining any two of the above said end point values.
  • compositions comprising the oligonucleotide delivery agent.
  • the pharmaceutical composition may comprise one or more additional ingredients, such as pharmaceutically acceptable carrier, excipient, solvent, diluent, stabilizer, dispersant, buffer, compatibilizer, preservative agent and combinations thereof.
  • Another embodiment of the present disclosure provides a method of modulating the expression of a target gene in vitro or in vivo, comprising the step of administrating the pharmaceutical composition to a subject, or contacting the pharmaceutical composition with cells of the subject.
  • the oligonucleotide delivery agent and pharmaceutical composition can be applied in various organs, tissues and cells, such as liver, lung, kidney, intestine, pancreas, cholecyst, heart, lymp nodes, spleen, stomach, bladder, muscle, bone, central nervous system (CNS) , and modulate the expression of one or more target genes in the cell thereof.
  • the present disclosure provides an oligonucleotide delivery enhancing compound comprising a nitrogen-containing five membered heterocyclic ring moiety and at least one substituent directly or indirectly attachable to an oligonucleotide.
  • the oligonucleotide delivery enhancing compound has a structure represented by Formula AI or Formula AII
  • X on each occurrence, is an atom selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur
  • each of F, G, H and I is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur
  • C on each occurrence, is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C 1 -C 20 ) alkyl, (C 1 -C 20 ) alkoxy, halogenated (C 1 -C 20 ) alkyl and halogenated (C 1 -C 20 ) alkoxy;
  • B on each occurrence, is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, -P (O) 2 -OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C 1 -C 22 ) alkyl, - (C 1 -C 22 ) alkenyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 22 ) cycloalkylene-OH, - (C 6 -C 22 ) arylene-OH, - (C 6 -C 22 ) heteroarylene-OH, - (C 1 -C 22 ) alkylene-C (O) OH, - (C 3 -C 22 ) cycloalkylene-C (O) OH, - (C 6 -C 22 ) arylene-C (O) OH, - (C 5 -C 22 ) heteroarylene-
  • each of A 1 , A 2 and A 3 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, -O-R 1 , -SH, - (C 1 -C 25 ) alkyl, halogenated - (C 1 -C 25 ) alkyl, - (C 2 -C 22 ) alkenyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, - (C 3 -C 22 ) cycloalkenyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene- (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene-R 1 , - (C 1 -C 22 ) alkylene-O-R 1 , - (C 1 -C 22 ) alkylene-COOR 1 , -C (O) O-R 1 ,
  • Y is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of P, Q, S and T is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and the asterisk refers to the site wherein the substituent represented by Formula AIII is linked with the structure represented by Formula AI or Formula AII;
  • each of R 3 , R 4 and R 5 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, -O-R 1 , -SH, - (C 1 -C 25 ) alkyl, halogenated - (C 1 -C 25 ) alkyl, - (C 2 -C 22 ) alkenyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, - (C 3 -C 22 ) cycloalkenyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene- (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene-R 1 , - (C 1 -C 22 ) alkylene-O-R 1 , - (C 1 -C 22 ) alkylene-COOR 1 , -C (O) O-R 1 ,
  • R 7 on each occurrence, is attached to any one of P, Q, S and T, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C 1 -C 20 ) alkyl, (C 1 -C 20 ) alkoxy, halogenated (C 1 -C 20 ) alkyl and halogenated (C 1 -C 20 ) alkoxy;
  • M is an integer of 0, 1, 2 or 3;
  • R 6 is attached to any one of P, Q, S and T, and is selected from the group consisting of direct bond, -O-, -C (O) O-, -O-C (O) -, -P (O) 2 -O-, -O-P (O) 2 -O-, -P (O) (S) -O-, -O-P (O) (S) -O-, -O-P (O) -O-, - (C 1 -C 22 ) alkylene-, - (C 1 -C 22 ) alkylene-O-, -O- (C 1 -C 22 ) alkylene-, - (C 1 -C 22 ) alkylene-NH-, -NH- (C 1 -C 22 ) alkylene-, -C (O) - (C 1 -C 22 ) alkylene-, - (C 1 -C 22 ) alkylene-C (O) - (
  • R 1 on each occurrence, is independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, - (C 1 -C 22 ) alkyl, - (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, - (C 6 -C 22 ) aryl, - (C 1 -C 22 ) alkoxy, - (C 3 -C 22 ) cycloalkoxy, - (C 6 -C 22 ) aryloxy, -C (O) - (C 1 -C 22 ) alkyl, -OC (O) (C 1 -C 22 ) alkyl, -C (O) -O- (C 1 -C 22 ) alkyl, -C (O) - (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, -OC (O) - (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, -OC (O) - (C 3 -C 22 ) cycloalkyl,
  • R 2 on each occurrence, is independently selected from the group consisting of a halogen atom, a (C 1 -C 12 ) alkyl, a (C 1 -C 12 ) alkoxy, a (C 1 -C 12 ) alkoxycarbonyl, a (C 6 -C 16 ) aryl or a (C 6 -C 16 ) aryloxycarbonyl;
  • the oligonucleotide delivery enhancing compound according to claim 1 comprising a moiety represented by Formula BI and at least one substituent directly or indirectly attachable to an oligonucleotide,
  • X′ is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; each of F′, G′, H′ and I′ is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of the asterisks refers to a site optionally linked to at least one substituent or an oligonucleotide directly or indirectly.
  • the oligonucleotide delivery enhancing compound has a structure represented by Formula BII
  • X′ is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of F′, G′, H′ and I′ is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur;
  • each of A 1 ′, A 2 ′ and A 3 ′ is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -R 1 ′, -O-R 1 ′, -S-R 1 ′, -C (O) -R 1 ′, -C (O) O-R 1 ′, -O-C (O) -R 1 ′, -C (O) NH-R 1 ′, -C (O) NR 2 ′-R 1 ′, -NH-C (O) -R 1 ′, -NR 2 ′-C (O) -R 1 ′, -O-P (O) 2 -O-R 1 ′, -OP (O) (S) -O-R 1 ′, -O-P (O) -O-R 1 ′, -NH-R 1 ′, -NR 2 ′-R 1 ′, - (CH 2 ) r′ -NH
  • each C′ is attached to any one of F′, G′, H′ and I′, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C 1 -C 20 ) alkyl, (C 1 -C 20 ) alkoxy, halogenated (C 1 -C 20 ) alkyl and halogenated (C 1 -C 20 ) alkoxy;
  • n′ is an integer of 1, 2 or 3
  • m′+n′ 4;
  • each B′ is attached to any one of F′, G′, H′ and I′, and is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, - (C 1 -C 30 ) alkoxy, -P (O) 2 -OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C 1 -C 30 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-OH, - (C 5 -C 50 ) heteroarylene-OH, - (C 1 -C 30 ) alkylene-C (O) OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-C (O) OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-C (O) OH, - (C 5 -C 50 ) heteroarylene-OH,
  • Y′ is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of P′, Q′, S′ and T′ is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and the asterisk refers to the site wherein the substituent represented by Formula BIII is linked with any one of F′, G′, H′ and I′ of Formula BII;
  • R 7 ′ is selected from the group consisting of -O-, -C (O) O-, -O-C (O) -, -P (O) 2 -O-, -O-P (O) 2 -O-, -P (O) (S) -O-, -O-P (O) (S) -O-, -O-P (O) -O-, - (C 1 -C 30 ) alkylene-, - (C 1 -C 30 ) alkylene-O-, -O- (C 1 -C 30 ) alkylene-, - (C 1 -C 30 ) alkylene-NH-, -NH- (C 1 -C 30 ) alkylene-, -C (O) - (C 1 -C 30 ) alkylene-, - (C 1 -C 30 ) alkylene-, - (C 1 -C 30 ) alkylene-, - (C 1
  • each R 10 ′ is attached to any one of P′, Q′, S′ and T′, and is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, -P (O) 2 -OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C 1 -C 30 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-OH, - (C 5 -C 50 ) heteroarylene-OH, - (C 1 -C 30 ) alkylene-C (O) OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-C (O) OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-C (O) OH, - (C 5 -C 50 ) heteroarylene- C (O) OH, -C (O) -
  • each R 11 ′ is attached to any one of P′, Q′, S′ and T′, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C 1 -C 20 ) alkyl, (C 1 -C 20 ) alkoxy, (C 1 -C 20 ) alkoxycarbonyl, halogenated (C 1 -C 20 ) alkyl and halogenated (C 1 -C 20 ) alkoxycarbonyl; and
  • M′ is an integer of 1, 2 or 3
  • N′ is an integer of 1, 2 or 3
  • M′+N′ 4.
  • one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group, nitrile group and phosphoric acid group contained in each of A 1 , A 2 , A 3 , B, C, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 1 ′, R 2 ′, R 3 ′, R 4 ′, R 5 ′, R 6 ′, R 7 ′, R 8 ′, R 9 ′, R 10 ′ and R 11 ′ are optionally protected with a terminal protection group R P selected from the group consisting of (C 1 -C 22 ) alkyl, (C 1 -C 22 ) alkoxy, (C 1 -C 22 ) alkylcarbonyl, (C 1 -C 22 ) alkoxycarbonyl, (C 6 -C 22 ) aryl, (C 6 -C 22 ) aryloxy, (C 6 -C 22 ) arylcarbonyl, (C 6 -
  • the support material is selected from the group consisting of silica, silica gel, glass, ceramic, polymer, cellulose, and combinations thereof.
  • the oligonucleotide delivery enhancing compound has a structure represented by any of Formula AIV to Formula AXIII and Formula BIV to BXIV,
  • a 1 , A 2 , A 3 , A 4 , F, G, H, I, B, C, P, Q, S, T, R 6 , R 7 , m, n and M are as defined herein,
  • each of RING I and RING II is a 4, 5, 6, 7, 8 or 9 member ring;
  • a 4 ′ is attached to any atom of RING I, and each of A 4 ′, A 5 ′ and A 6 ′ is independently selected from the group consisting of -R 1 ′, -O-R 1 ′, -S-R 1 ′, -C (O) -R 1 ′, -C (O) O-R 1 ′, -O-C (O) -R 1 ′, -C (O) NH-R 1 ′, -C (O) NR 2 ′-R 1 ′, -NH-C (O) -R 1 ′, -NR 2 ′-C (O) -R 1 ′, -O-P (O) 2 -O-R 1 ′, -OP (O) (S) -O-R 1 ′, -O-P (O) -O-R 1 ′, -NH-R 1 ′, -NR 2 ′-R 1 ′, - (CH 2 )
  • R 12 ′ is attached to any atom of RING II and is selected from the group consisting of -H, hydroxyl, - (C 1 -C 30 ) alkyl, - (C 3 -C 50 ) cycloalkyl, - (C 6 -C 50 ) aryl, - (C 1 -C 30 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-OH, - (C 1 -C 30 ) alkylene-C (O) OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-C (O) OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-C (O) OH, - (C 1 -C 30 ) alkylene-NH 2 , - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-NH 2 , - (C 6 -C 50 )
  • each of F, G, H and I is carbon, m is 1 and n is 3, B is attached to G or H, each of P, Q, S and T is carbon, R 6 is attached to any one of Q and S;
  • protection group R P is selected from the group consisting of benzyloxycarbonyl (Cbz) , tert-butyldimethylsilyl (TBS) , 4, 4′-dimethoxytrityl (DMTr) , t-butyloxy carbonyl (Boc) , benzyl (Bn) and benzyloxy (BnO) ;
  • C on each occurrence, is selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C 1 -C 12 ) alkyl, (C 1 -C 12 ) alkoxy, halogenated (C 1 -C 12 ) alkyl and halogenated (C 1 -C 12 ) alkoxy;
  • B on each occurrence, is selected from the group consisting of - (C 1 -C 22 ) alkylene-OH, -O-C (O) - (C 1 -C 16 ) alkylene-C (O) NH 2 , - (C 1 -C 16 ) alkylene-O-C (O) - (C 1 -C 16 ) alkylene-C (O) NH 2 , -O-C (O) - (C 1 -C 16 ) alkylene-C (O) OH, - (C 1 -C 16 ) alkylene-O-C (O) - (C 1 -C 16 ) alkylene-C (O) OH, -C (O) - (C 1 -C 16 ) alkylene-C (O) NH 2 , - (C 1 -C 16 ) alkylene-C (O) - (C 1 -C 16 ) alkylene-C (O) NH 2 ,
  • each of A 1 , A 2 and A 3 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, linear or branched - (C 6 -C 22 ) alkyl, linear or branched - (C 2 -C 22 ) alkenyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, - (C 3 -C 22 ) cycloalkenyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene- (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene-R 1 , - (C 1 -C 22 ) alkylene-O-R 1 , - (C 1 -C 22 ) alkylene-COOR 1 , -O- (C 1 -C 22 ) alkyl, - (C 6 -C 22 ) alkylene-CO
  • Y is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of P, Q, S and T is carbon;
  • each of R 3 , R 4 and R 5 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, linear or branched - (C 6 -C 22 ) alkyl, linear or branched - (C 2 -C 22 ) alkenyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, - (C 3 -C 22 ) cycloalkenyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene- (C 3 -C 22 ) cycloalkyl, - (C 1 -C 22 ) alkylene-R 1 , - (C 1 -C 22 ) alkylene-O-R 1 , - (C 1 -C 22 ) alkylene-COOR 1 , -O- (C 1 -C 22 ) alkyl, - (C 6 -C 22 ) alkylene-CO
  • R 7 on each occurrence, is attached to any one of P, Q, S and T, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C 1 -C 20 ) alkyl, (C 1 -C 20 ) alkoxy, halogenated (C 1 -C 20 ) alkyl and halogenated (C 1 -C 20 ) alkoxy;
  • M is an integer of 0, 1, 2 or 3;
  • R 6 is attached to any one of P, Q, S and T, and is selected from the group consisting of - (C 1 -C 16 ) alkylene-, - (C 1 -C 16 ) alkylene-O-, -O- (C 1 -C 16 ) alkylene-, - (C 1 -C 16 ) alkylene-NH-, -NH- (C 1 -C 16 ) alkylene-, -C (O) - (C 1 -C 16 ) alkylene-, - (C 1 -C 16 ) alkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C 1 -C 16 ) alkylene-, - (C 1 -C16) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C 1 -C 16 ) alkylene-, -C (O) - NH- (C 1 -C 16 ) alkylene-,
  • the oligonucleotide delivery enhancing compound has a structure represented by any one of Formula BXV to Formula BXXIX,
  • each of A 1 ′ and A 2 ′ is a substituent independently selected from the group consisting of -R 1 ′, -O-R 1 ′, -S-R 1 ′, -C (O) -R 1 ′, -C (O) O-R 1 ′, -O-C (O) -R 1 ′, -C (O) NH-R 1 ′, -C (O) NR 2 ′-R 1 ′, -NH-C (O) -R 1 ′, -NR 2 ′-C (O) -R 1 ′, -O-P (O) 2 -O-R 1 ′, -OP (O) (S) -O-R 1 ′, -O-P (O) -O-R 1 ′, -NH-R 1 ′, -NR 2 ′-R 1 ′, - (CH 2 ) r′ -NH-R 1 ′, - (CH 2 )
  • n′ is an integer of 1, 2 or 3
  • m′+n′ 4;
  • each B′ is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, - (C 1 -C 30 ) alkoxy, -P (O) 2 -OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C 1 -C 30 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-OH, - (C 5 -C 50 ) heteroarylene-OH, - (C 1 -C 30 ) alkylene-C (O) OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-C (O) OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-C (O) OH, - (C 5 -C 50 ) heteroarylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C 1
  • each R 7 ′ is selected from the group consisting of -O-, -C (O) O-, -O-C (O) -, -P (O) 2 -O-, -O-P (O) 2 -O-, -P (O) (S) -O-, -O-P (O) (S) -O-, -O-P (O) -O-, - (C 1 -C 30 ) alkylene-, - (C 1 -C 30 ) alkylene-O-, -O- (C 1 -C 30 ) alkylene-, - (C 1 -C 30 ) alkylene-NH-, -NH- (C 1 -C 30 ) alkylene-, -C (O) - (C 1 -C 30 ) alkylene-, - (C 1 -C 30 ) alkylene-, - (C 1 -C 30 ) alkylene-, - (C 1
  • each R 10 ′ is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, -P (O) 2 -OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C 1 -C 30 ) alkylene-OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-OH, - (C 5 -C 50 ) heteroarylene-OH, - (C 1 -C 30 ) alkylene-C (O) OH, - (C 3 -C 50 ) cycloalkylene-C (O) OH, - (C 6 -C 50 ) arylene-C (O) OH, - (C 5 -C 50 ) heteroarylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C 1 -C 30 ) alkylene-OH, -
  • the oligonucleotide delivery enhancing compound has a structure of
  • At least one hydrogen atom contained in the oligonucleotide delivery enhancing compound is substituted with deuterium atom.
  • the present disclosure provides an oligonucleotide delivery agent, comprising a delivery enhancing compound (DEC) moiety derivable from the oligonucleotide delivery enhancing compound as indicated herein and at least one oligonucleotide.
  • DEC delivery enhancing compound
  • the oligonucleotide delivery enhancing compound moiety is linked with the oligonucleotide via at least one linking moiety selected from the group consisting of direct bond, -O-, -S-, -C (O) -, -NH-, -N ( (C 1 -C 12 ) alkyl) -, -N ( (C 1 -C 12 ) alkyl) -C (O) -O-, -O-C (O) -, -C (O) -O-, -O-C (O) -O-, -C (O) -NH-, -OP (O) 2 O-, -P (O) (O - ) O-, -OP (O) O-, -OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2 -O-, -S (O) 2 -O-, -S (O) -O-, - (C 1
  • the oligonucleotide is selected from the group consisting of antisense oligonucleotide (ASO) , antisense RNA, short interfering RNA (siRNA) , micro-RNA (miRNA) , small activating RNA (saRNA) , double-stranded RNA (dsRNA) , and small guide RNA (sgRNA) .
  • ASO antisense oligonucleotide
  • siRNA short interfering RNA
  • miRNA micro-RNA
  • saRNA small activating RNA
  • dsRNA double-stranded RNA
  • sgRNA small guide RNA
  • the oligonucleotide comprises at least part of the sequence as set forth in SEQ ID NO 1 to 53.
  • the oligonucleotide delivery agent comprises a structure represented by Formula AA
  • the delivery enhancing compound (DEC) moiety is derived from the oligonucleotide delivery enhancing compound according to any one of claims 1 to 9 and is linked to at least one oligonucleotide directly or indirectly.
  • the DEC is linked with the oligonucleotide via at least one first linking moiety.
  • the TM is linked with the DEC via at least one second linking moiety.
  • each of the first linking moiety and the second linking moiety is independently selected from the group consisting of direct bond, -O-, -S-, -C (O) -, -NH-, -N ( (C 1 -C 12 ) alkyl) -, -N ( (C 1 -C 12 ) alkyl) -C (O) -O-, -O-C (O) -, -C (O) -O-, -O-C (O) -O-, -C (O) -NH-, -OP (O) 2 O-, -OP (O) O-, -OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2 -O-, -S (O) 2 -O-, -S (O) -O-, - (C 1 -C 22 ) alkylene-, - (C 1 -C 22 ) alkylene-, -NH- (
  • oligonucleotide is selected from the group consisting of short interfering RNA (siRNA) , small activating RNA (saRNA) , microRNA (miRNA) , antisense oligonucleotide (ASO) and small guide RNA (sgRNA) .
  • siRNA short interfering RNA
  • siRNA small activating RNA
  • miRNA microRNA
  • ASO antisense oligonucleotide
  • sgRNA small guide RNA
  • the targeting moiety is one or more selected from the group consisting of ligands, peptides, nucleic acids, oligonucleotides, aptamers, lipids, fatty acids, small molecules, polyethylene glycols, amino acids, cholesterols, carbohydrates, and antibodies or antibody fragments.
  • the oligonucleotide delivery agent has a structure represented by any of the formulae AAI to AAXXIV:
  • L represents the linking moiety
  • ⁇ represents the oligonucleotide delivery enhancing compound
  • the symbol adouble strand oligonucleotide in which each of the strands represents interchangeably a sense strand or an antisense strand, either symmetric or asymmetric independently on each of the ends
  • the symbol represents a single strand oligonucleotide
  • each of a, b and c is independently an integer from 1 to 50.
  • At least one hydrogen atom contained in the delivery enhancing compound moiety, the linking moiety, the targeting moiety and/or the oligonucleotide is substituted with deuterium atom.
  • the present disclosure provides a pharmaceutical composition, the composition comprising: a) the oligonucleotide delivery agent as indicated herein; and b) optionally, one or more ingredients selected from the group consisting of pharmaceutically acceptable carrier, excipient, solvent, diluent, stabilizer, dispersant, buffer, compatibilizer, preservative agent and combinations thereof.
  • the present disclosure provides a method of modulating the expression of a target gene in a subject, the method comprising the step of administrating the pharmaceutical composition as indicated herein to a subject.
  • the oligonucleotide or the target gene comprises at least part of the sequence as set forth in at least part of the sequence as set forth in SEQ ID NO 1 to 53.
  • the pharmaceutical composition increases the expression of the target gene. In another specific embodiment, the pharmaceutical composition decreases the expression of the target gene.
  • the subject is a mammal. In another specific embodiment, the mammal is a rodent. In another specific embodiment, the rodent is a mouse. In another specific embodiment, the rodent is a rat. In another specific embodiment, the mammal is a non-human primate. In another specific embodiment, the mammal is a human. In another specific embodiment, the target gene is associated with a disease or disorder.
  • the target gene is associated with a disease or disorder in the central nervous system (CNS) , brain, spinal cord, liver, lung, kidney, intestine, pancreas, cholecyst, heart, lymph nodes, spleen, stomach, bladder, muscle or bone.
  • the disease is cancer.
  • the present disclosure provides a method of modulating the expression of a target gene, the method comprising contacting a cell with the pharmaceutical composition as indicated herein.
  • the oligonucleotide or the target gene comprises at least part of the sequence as set forth in at least part of the sequence as set forth in SEQ ID NO: 1 to 53.
  • the pharmaceutical composition increases the expression of the target gene. In another specific embodiment, the pharmaceutical composition decreases the expression of the target gene.
  • the cell is a mammalian cell. In another specific embodiment, the mammalian cell is a mouse cell. In another specific embodiment, the mammalian cell is a rat cell. In another specific embodiment, the mammalian cell is a non-human primate cell. In another specific embodiment, the mammalian cell is a human cell. In another specific embodiment, the target gene is associated with a disease or disorder.
  • the target gene is associated with a disease or disorder in the central nervous system (CNS) , brain, spinal cord, liver, lung, kidney, intestine, pancreas, cholecyst, heart, lymph nodes, spleen, stomach, bladder, muscle or bone.
  • the disease is cancer.
  • Standard abbreviations may be used, e.g., bp, base pair (s) ; kb, kilobase (s) ; nM, nanomolar (s) ; s or sec, second (s) ; min, minute (s) ; h or hr, hour (s) ; aa, amino acid (s) ; nt, nucleotide (s) ; i. m., intramuscular (ly) ; i. p., intraperitoneal (ly) ; s. c., subcutaneous (ly) ; ivt or IVT, intravitreal; iv or IV, tail vein, intravenous; i. c. v. or icv or ICV, intracerebroventricular and the like.
  • reaction products were purchased from commercial sources and used as received unless stated otherwise. Purification of reaction products was performed with a column chromatography comprising a silica gel (200-300 mesh) and eluting agents of hexane/ethyl acetate, DCM/MeOH. Thin layer chromatography (TLC) was carried out using pre-coated silica Gel GF plates and visualized using KMnO 4 stains. 1 H-NMR spectra were recorded at 400 or 500 MHz (Varian) using CDCl 3 with TMS.
  • TLC Thin layer chromatography
  • High-resolution mass spectra were recorded on LC/MS (Agilent Technologies 1260 Infinity II/6120 Quadrupole) and a time-of-flight mass spectrometer by ESI or matrix assisted laser desorption/ionization (MALDI) .
  • Example 1 The preparation of compound A1 of the present disclosure
  • Compound A1 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • Example 2 The preparation of compound A2 of the present disclosure
  • Compound A2 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h, after concentrated under reduced pressure, the resultant residue was purified by flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A74 (4.1 g, 60%yield) as yellow solid.
  • the product was characterized with mass spectrometry and 1 H NMR. MW calc.: 713.31; MW Found: 303.17 [DMT] -, 412.36 [DMT off + H] + .
  • Example 3 The preparation of Compound A3 of the present disclosure.
  • the Compound A3 of the present disclosure was prepared in this Example by using the following procedures.
  • reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h, after which it was concentrated under reduced pressure.
  • the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-3%of MeOH/DCM) to provide compound A89 (8.1 g, 61%yield) as yellow solid.
  • the product was characterized with mass spectrometry and 1 H NMR. MW calc.: 760.48; MW. Found: 761.8 [M + H] + .
  • the crude product (300 mg, 0.41 mmol, 1.0 eq) was dissolved in DCM (10 mL) , then DMAP (175 g, 1.44 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (123 mg, 1.23 mmol, 3.0 eq) were added under nitrogen atmosphere.
  • the reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H 2 O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*20 mL) and the organic phase was combined, dried over Na 2 SO 4 , and concentrated.
  • the resultant residue was purified with flash chromatography.
  • the crude product (300 mg, 0.41 mmol, 1.0 eq) was dissolved in anhydrous DCM (5 mL) then DIPEA (204 ⁇ L, 1.23 mmol, 3.0 eq) , 3- ( (chloro (diisopropylamino) phosphanyl) oxy) propanenitrile (274 ⁇ L, 1.23 mmol, 3.0 eq. ) were added under nitrogen atmosphere at 25°C. The reaction mixture was stirred for 1 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na 2 SO 4 .
  • Example 5 The preparation of compound A6 of the present disclosure
  • Compound A6 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h, after which it was concentrated under reduced pressure.
  • the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A93 (6.23 g, 74%yield) as yellow solid.
  • the product was characterized with mass spectrometry, 1 H NMR and 13 C NMR. MW calc.: 741.34; MW. Found: 303.11 [DMT] -, 440.14 [DMT off + H] + .
  • Example 6 The preparation of compound A7 of the present disclosure
  • Compound A7 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • the resultant residue (1.0 g, 2.25 mol, 1.0 eq) was dissolved in 10 mL DCM, and Et 3 N (0.47 mL, 3.37 mmol, 1.5 eq) , DMTrCl (915 mg, 2.7 mmol, 1.2 eq) were added therein.
  • the reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h, after which it was concentrated under reduced pressure.
  • the resultant residue compound was directly used in the next step without further purification.
  • the product A102 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 746.47; MW. Found: 303.2 [DMT] - .
  • the crude product (500 mg, 0.70 mmol, 1.0 eq) was dissolved in DCM (10 mL) , then DMAP (298 mg, 2.45 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (140 mg, 1.40 mmol, 2.0 eq) were added therein under nitrogen atmosphere.
  • the reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H 2 O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) and the organic phase was combined, dried over Na 2 SO 4 , and concentrated.
  • the resultant residue was purified with flash chromatography.
  • Example 7 The preparation of compound A8 of the present disclosure
  • Compound A8 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • the resultant residue (1.0 g, 2.12 mol, 1.0 eq) was dissolved in 10 mL DCM, and Et 3 N (0.44 mL, 3.17 mmol, 1.5 eq) , DMTrCl (860 mg, 2.54 mmol, 1.2 eq) were added therein.
  • the reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h, after which it was concentrated under reduced pressure.
  • the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A107 (1.27 g, 77%yield) as yellow solid.
  • the product was characterized with mass spectrometry and 1 H NMR. MW calc.: 774.50; MW.
  • the crude product (500 mg, 0.67 mmol, 1.0 eq) was dissolved in DCM (10 mL) , then DMAP (286 mg, 2.34 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (134 mg, 1.34 mmol, 2.0 eq) were added therein under nitrogen atmosphere.
  • the reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H 2 O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) and the organic phase was combined, dried over Na 2 SO 4 , and concentrated.
  • the resultant residue was purified with flash chromatography.
  • Example 8 The preparation of compound A9 of the present disclosure
  • Compound A9 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • the resultant residue (1.5 g, 3.0 mol, 1.0 eq) was dissolved in 10 mL DCM, and Et 3 N (0.625 mL, 4.5 mmol, 1.5 eq) , DMTrCl (1.2 g, 3.6 mmol, 1.2 eq) were added therein.
  • the reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h, after which it was concentrated under reduced pressure.
  • the resultant residue compound was directly used in the next step without further purification.
  • the product A112 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 802.53; MW. Found: 303.2 [DMT] - .
  • the crude product (500 mg, 0.65 mmol, 1.0 eq) was dissolved in DCM (10 mL) , then DMAP (276 mg, 2.27 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (129 mg, 1.29 mmol, 2.0 eq) were added therein under nitrogen atmosphere.
  • the reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H 2 O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) and the organic phase was combined, dried over Na 2 SO 4 , and concentrated.
  • the resultant residue was purified with flash chromatography.
  • Example 9 The preparation of compound A10 and A13 of the present disclosure
  • Example 10 The preparation of compounds A11 and A15 of the present disclosure
  • reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H 2 O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) and the organic phase was combined, dried over Na 2 SO 4 , and concentrated.
  • the resultant residue was purified with flash chromatography.
  • the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound A124 (126 mg, 55%yield) as colorless oil.
  • the product was characterized with mass spectrometry and 1 H NMR. MW calc.: 1204.66; MW Found: 303.2 [DMT] - .
  • Example 11 The preparation of compound A12 of the present disclosure
  • Compound A12 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • the reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H 2 O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) and the organic phase was combined, dried over Na 2 SO 4 , and concentrated.
  • the resultant residue was purified with flash chromatography.
  • the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound A127 (120 mg, 45%yield) as colorless oil.
  • the product was characterized with mass spectrometry and 1 H NMR. MW calc.: 917.56; MW Found: 303.2 [DMT] - .
  • Example 12 The preparation of compound A14 of the present disclosure
  • Compound A14 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • Example 13 The preparation of compound B1 of the present disclosure
  • Compound B1 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • the compound B15 (20 g, 27.5 mmol, 1.0 eq) was added into AcOH (100 mL) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 95°C for 4 h. Then saturated NaHCO 3 solution (100 mL) was added therein, the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with saturated NaHCO 3 solution (3*100 mL) , dried over Na 2 SO 4 , and concentrated. The resultant residue was purified by flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-50%of EA/Hexane) to provide compound B16 (8.78 g, 45%yield) as white solid.
  • the compound B17 was prepared by using the start material of (2S, 3R, 4R, 5R, 6R) -3-acetamido-6- (acetoxymethyl) tetrahydro-2H-pyran-2, 4, 5-triyl triacetate.
  • Example 14 The preparation of compound B2 of the present disclosure
  • Compound B2 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • This step comprises the preparation of compound B38 from methyl 4-fluoro-3-nitrobenzoate.
  • the resultant residue (compound B40) was directly used in the next step without further purification.
  • the compound B40 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 525.27; MW. Found: 526.59 [M+H] + .
  • Controlled Pore Glass CPG
  • DIPEA N, N-Diisopropylethylamine
  • HBTU O- (1H-Benzotriazol-1-yl) -N, N, N′, N′-tetramethyluronium hexafluorophosphate
  • Example 15 The preparation of Compound B3 of the present disclosure.
  • the Compound B3 of the present disclosure was prepared in this Example by using the following procedures.
  • the compound B39 was originated from the steps (1) - (2) of Example 14.
  • Example 16 The preparation of Compound B4 of the present disclosure.
  • the Compound B4 of the present disclosure was prepared in this Example by using the following procedures.
  • Compound B17 was originated from the step (6) of Example 13.
  • Example 17 The preparation of Compound B5 of the present disclosure.
  • the Compound B5 of the present disclosure was prepared in this Example by using the following procedures.
  • Compound B46 was originated from the steps (3) - (5) of Example 15.
  • Example 18 The preparation of compound B6 of the present disclosure.
  • the compound B6 of the present disclosure was prepared in this Example by using the following procedures.
  • Example 19 The preparation of compound tC2 of the present disclosure.
  • the dicarboxylic acid (20 g, 86.8 mmol) was dissolved/suspended in dry CH 2 Cl 2 (100 mL) . Then oxalyl chloride (16.2 mL, 190.96 mmol) and DMF (5 drops) were added to the solution. The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 h, then concentrated under reduced pressure to provide crude compound C2, which was directly used in the next step without further purification.
  • CPG Controlled Pore Glass
  • DIPEA N, N-Diisopropylethylamine
  • HBTU 208 mg, 0.55 mmol, 2.0 eq
  • Compound D1 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • the compound 39 (2.3 g, 4.18 mmol, 1.0 eq) and Diisoropyl ammonium tetrazolide (2.15 g, 12.54 mmol, 3.0 eq) were dissolved in anhydrous DCM (40 mL) under nitrogen atmosphere was added 3- ( (Bis (diisopropylamino) phosphino) oxy) propanenitrile (3.78 g, 12.54 mmol, 3.0 eq) at room temperature. The reaction mixture was stirred for 6 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na 2 SO 4 .
  • Example 21 The preparation of compound D2 of the present disclosure
  • Compound D2 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • the compound 40 (1.1 g, 1.67 mmol, 1.0 eq) and Diisoropyl ammonium tetrazolide (858 mg, 5.01 mmol, 3.0 eq) were dissolved in anhydrous DCM (15 mL) under nitrogen atmosphere was added 3- ( (Bis (diisopropylamino) phosphino) oxy) propanenitrile (1.51 g, 5.01 mmol, 3.0 eq) at room temperature. The reaction mixture was stirred for 6 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na 2 SO 4 .
  • Example 22 The preparation of compound D3 of the present disclosure
  • Compound D3 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • the compound 41 (2 g, 3.63 mmol, 1.0 eq) and Diisoropyl ammonium tetrazolide (1.86 g, 10.89 mmol, 3.0 eq) were dissolved in anhydrous DCM (20 mL) under nitrogen atmosphere was added 3- ( (Bis (diisopropylamino) phosphino) oxy) propanenitrile (3.28 g, 10.89 mmol, 3.0 eq) at room temperature. The reaction mixture was stirred for 6 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na 2 SO 4 .
  • Example 23 The preparation of compound D4 of the present disclosure
  • Compound D4 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • the compound 22 (2 g, 3.14 mmol, 1.0 eq) and Diisoropyl ammonium tetrazolide (1.61 g, 9.43 mmol, 3.0 eq) were dissolved in anhydrous DCM (20 mL) under nitrogen atmosphere was added 3- ( (Bis (diisopropylamino) phosphino) oxy) propanenitrile (2.85 g, 9.43 mmol, 3.0 eq) at room temperature. The reaction mixture was stirred for 6 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na 2 SO 4 .
  • Example 24 The preparation of compound D5 of the present disclosure
  • Compound D5 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • the resultant residue was dissolved in 10 mL THF, then 1 M TBAF THF solution (3.39 mL, 3.39 mmol, 1.5 eq) was added under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 h, then H 2 O (20 mL) was added. The mixture was extracted three times by ethyl acetate, then washed one time by brine, dried by anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated under reduced pressure. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound 43 (0.8 g, 46%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1 H NMR.
  • the compound 43 (800 mg, 1.05 mmol, 1.0 eq) and Diisoropyl ammonium tetrazolide (360 mg, 2.1 mmol, 2.0 eq) were dissolved in anhydrous DCM (10 mL) under nitrogen atmosphere was added 3- ( (Bis (diisopropylamino) phosphino) oxy) propanenitrile (634 mg, 2.1 mmol, 2.0 eq) at room temperature. The reaction mixture was stirred for 6 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na 2 SO 4 .
  • Compound D6 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • Example 26 The preparation of compound D7 of the present disclosure
  • Compound D7 was prepared in this Example by using the following procedures.
  • Compound F69 was prepared in this example by using the following procedures.
  • the resultant residue compound was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 10-40%of ethyl acetate/petroleum ether) to provide compound 47 (1.5 g, 22%yield) as light-yellow oil.
  • the product was characterized with mass spectrometry and 1 H NMR. MW calc.: 598.99; MW. Found: 599.72 [M + H] + .
  • Oligonucleotide sequences used for cell or animal treatments in the following examples are listed in Table 1.
  • Example 29 Characterization of the in vitro knockdown activity of DEC-conjugated siRNAs for mouse FVII gene.
  • PMH cells were transfected with each of the indicated DCOs (i.e., RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712) at 0.1 nM and 1 nM with Lipofectamine TM RNAiMAX (Thermofisher) for 24 hours according to the manufacturer’s instructions was shown in FIG. 1.
  • DCOs i.e., RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712
  • Mock treatment was transfection in the absence of oligonucleotide.
  • dsCon2 served as a non-specific duplex control.
  • Mouse FVII mRNA levels were quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set.
  • Tbp was amplified as an internal reference for RNA loading. The mean expression values of FVII mRNA relative to Mock treatment are normalized to Tbp.
  • transfection of RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712 reduced FVII mRNA expression by 94%, 85%, 91%, 80%, 78%and 84%at 0.1 nM and 98%, 96%, 97%, 89%, 91%and 89%at 1 nM treatment, respectively. All tested DCOs achieved comparable knockdown activities in a dose-dependent manner with RD-12339, RD-12585 and RD-12586 having slightly greater maximal activities.
  • RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712 were added to the culture media of PMH cells at escalating concentrations (i.e., 0.01, 0.05, 0.20, 0.78, 3.13, 12.50, 50 and 200 nM) for 24 hours.
  • concentrations i.e., 0.01, 0.05, 0.20, 0.78, 3.13, 12.50, 50 and 200 nM
  • Example 30 Characterization of in vivo knockdown activity of DEC-conjugated siRNAs for mouse FVII gene expression.
  • DCOs i.e., RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712
  • mice were sacrificed on 3 days post dosing and FVII mRNA level was quantified in liver tissue after RNA isolation and RT reaction via RT-qPCR using gene specific primer sets.
  • RD-12339, RD-12586, RD-12710 and RD-12712 exhibited over 60%knockdown activity with RD-12339 having the greatest knockdown activity.
  • RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712 caused an 81%, 82%, 89%, 80%, 81%and 89%knockdown of FVII mRNA.
  • FVII protein expression levels in the plasma of the treated mice were detected by ELISA assay.
  • 3 DCOs i.e., RD-12339, RD-12585 and RD-12586
  • RD-12339, RD-12585 and RD-12586 at medium dose (1 mg/kg) reduced FVII protein expression by 67%, 51%and 65%, respectively.
  • knockdown activity was similar for all tested DCOs with RD-12339, RD-12585 and RD-12586 providing 89%, 87%and 93%reductions in FVII protein levels, respectively.
  • Example 31 Potent and durable knockdown of DEC-conjugated siRNAs on mouse FVII protein in plasma of C57BL/6J mice
  • the indicated DCOs i.e., RD-12710 and RD-12712
  • RD-11706 was injected at 3 mg/kg and served as a control.
  • Saline was injected as a vehicle control to establish the baseline of mFVII protein expression.
  • Mouse plasmas were collected on 10, 31, 54, 61, 80 and 89 days post dosing and mFVII protein level was quantified in mouse plasma by ELISA assay. The results of potent and durable knockdown of DEC-siRNAs on mouse FVII protein in plasma are shown in FIG. 5.
  • Example 32 In vitro knockdown activity of DEC-siRNA in PMH cells via free uptake.
  • exemplary DEC-siRNAs i.e., RD-13110, RD-13115, and RD-13118
  • PMH cells were treated at escalating concentrations (i.e., 1.56, 6.25, 25, 100, 400 and 1600 nM) in absence of any additional delivery system (i.e., free uptake) for 72 hours.
  • Sod1 levels were assessed via RT-qPCR to generate dose response curves and estimate potency.
  • potency dotted line
  • Example 33 In vivo knockdown of DEC-siRNA on Sod1 mRNA level in CNS tissues
  • mice were sacrificed on 7 days post dosing and CNS tissues from the brain (i.e., frontal cortex, cerebellum, and cerebrum) , spinal cord (i.e., cervical, thoracic, and lumbar) , and periphery (i.e., liver) were harvested for mRNA expression analysis via RT-qPCR.
  • CNS tissues i.e., frontal cortex, cerebellum, and cerebrum
  • spinal cord i.e., cervical, thoracic, and lumbar
  • periphery i.e., liver
  • RD-13115 and RD-13118 had improved knockdown across all tissues at the 200 ⁇ g dose indicating the C5x5 conjugates had better in vivo potency via ICV injection compared to the non-conjugated control (i.e., RD-12556) and C5x1 variant RD-13110.
  • Analysis in periphery tissue (i.e., liver) also revealed that activity of the C5x5 conjugates (i.e., RD-13115 and RD-13118) were not well retained within the CNS in which systemic exposure via CNS drainage provided knockdown in the liver at levels similar to the CNS tissues.
  • both RD-12556 and RD-13110 activity was selectively enriched across the CNS providing only an approximate 11%and 3%knockdown in the liver, respectively.
  • the C5x5 conjugates have improved activity and biodistribution across all CNS tissues.
  • C5x1 would be more ideal compared to other lipids (e.g., C5x5) .
  • Example 34 In vivo knockdown of DEC-siRNA on Sod1 mRNA level following systemic administration
  • mice were administered with DEC-siRNAs (i.e., RD-13110, RD-13115 and RD-13118) or non-conjugate control (i.e., RD-12556) at a 20 mg/kg dose via IV injection.
  • Mice were sacrificed on day 7 after treatment and Sod1 knockdown was quantified via RT-qPCR in select organs (i.e., heart, liver, spleen, lung, kidney, and bladder) .
  • RD-12556 only provided substantial knockdown in the kidney reducing Sod1 levels by 56%, whereas RD-13110 also had activity selectively enriched in the spleen.
  • RD-13115 and RD-13118 both had broad activity across all tissues except bladder in which only RD-13118 was capable of reducing Sod1 levels by roughly 21%.
  • C5x1 conjugation may have unique delivery functions via systemic administration offering selective targeting to the spleen, whereas C5x5 can provide knockdown to a broader spectrum of tissues.
  • inclusion of ACO in RD-13118 was the only DEC-siRNA to provide measurable knockdown in the bladder indicating combining the DEC technology with ODV-siRNA may also have further delivery benefits when used in combination in vivo.
  • Example 35 In vivo knockdown of DEC-siSOD1 on Sod1 mRNA level in skeletal muscle
  • mice were treated with DEC-siRNAs (i.e., RD-13110, RD-13115 and RD-13118) or non-conjugate control (i.e., RD-12556) at a 20 mg/kg dose via IV injection.
  • Mice were sacrificed on 7 days post dosing and Sod1 mRNA level was quantified via RT-qPCR in muscle tissues (i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus) .
  • RD-12556 provided no significant knockdown in any muscle tissue compared to the saline treatment group.
  • RD-13110 had modest activity in select tissues yet did not exceed 25%reductions in Sod1 mRNA levels at the 20 mg/kg dose.
  • RD-13115 reduced Sod1 mRNA levels by 82%, 84%, 78%, and 76%in bicep, semitendinosus, platysma and gluteus tissues, respectively.
  • RD-13118 reduced Sod1 mRNA levels by 76%, 84%, 61%, and 67%in bicep, semitendinosus, platysma and gluteus tissues, respectively.
  • DEC conjugation provides knockdown in muscle tissue via IV injection; however, C5x5 conjugates (i.e., RD-13115 and RD-13118) enabled siRNA knockdown at a 20 mg/kg dose that has been otherwise unobtainable by conventional delivery technologies (i.e., LNP and GalNAc) .
  • C5x5 conjugates i.e., RD-13115 and RD-13118
  • siRNA knockdown at a 20 mg/kg dose that has been otherwise unobtainable by conventional delivery technologies (i.e., LNP and GalNAc) .
  • Example 36 In vivo knockdown activity of DEC-siSOD1 on Sod1 mRNA level in retinal tissue
  • DEC-siRNAs i.e., RD-13115 and RD-13118
  • non-conjugate control i.e., RD-12556
  • Rats were sacrificed on 14 days post dosing and Sod1 mRNA level was quantified via RT-qPCR in retinal tissue.
  • RD-12556 provided only a 39%knockdown
  • RD-13115 and RD-13118 reduced Sod1 mRNA levels by 74%and 71%, respectively.
  • DEC-siRNA i.e., RD-13115 and RD-13118
  • RD-12556 non-conjugated control
  • Example 37 Pharmacokinetics of DEC-saRNA in bladder tissue from adult C57BL/6J mice following DEC-saRNA treatment via IVB instillation
  • RD-13520 (DEC-saRNA) and RD-10773 (non-DEC-saRNA) via IVB instillation and bladder tissues were harvested on 2-, 6-, 12-hour, day-1 and day-4 after treatment.
  • RD-10773 and RD-13520 were detected in the bladder tissue preps by stem-loop RT-qPCR.
  • the concentrations of RD-13520 and RD-10773 in bladder were plotted in FIG. 11 to evaluate pharmacokinetics (PK) and summarized in Table 4.
  • Example 38 Potent and durable knockdown of mouse Sod1 mRNA by DEC-conjugated siRNAs in C57BL/6J mice
  • RD-15135 served as a non-conjugate control.
  • RD-15136 was a lipid (i.e., C16) conjugated siRNA.
  • RD-15137 with a typical DEC structure i.e., C5X5 served as a typical DEC-siRNA.
  • FIG. 12A shows the body weight change of C57BL/6J mice out to day 28 post treatment.
  • Sod1 mRNA expressions on 14 and 28 days post dosing in tissues from periphery i.e., heart, liver, kidney, fat tissues, pancreas, diaphragm
  • tissues from periphery i.e., heart, liver, kidney, fat tissues, pancreas, diaphragm
  • blood vessel i.e., thoracic aorta with vein
  • skeletal muscle i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus
  • Example 39 Potent and durable knockdown of rat Sod1 mRNA in SD rats by DEC-conjugated siRNAs
  • RD-15135 served as a non-conjugate control.
  • RD-15136 was a lipid (i.e., C16) conjugated siRNA.
  • RD-15137 with a typical DEC structure i.e., C5X5 served as a typical DEC-siRNA.
  • aCSF alone was used as a vehicle control to establish baseline expression.
  • FIG. 13A shows the body weight change of SD rats out to day 28 post treatment.
  • Sod1 mRNA expressions on 14 days post dosing in tissues from brain i.e., frontal cortex, cerebellum and cerebrum
  • spinal cord i.e., cervical, thoracic and lumbar
  • periphery i.e., liver and kidney
  • FIG. 13B Sod1 mRNA on 28 days post dosing in tissues from brain (i.e., frontal cortex, cerebellum and brainstem) , spinal cord (i.e., cervical, thoracic and lumbar) and periphery (i.e., liver and kidney) were shown in FIG. 13C.
  • Example 40 Delivery enhancing compound (DEC) of siRNA-ACO provides consistent and potent knockdown on SOD1 mRNA in SK-N-AS and T98G cells.
  • DEC-siRNA-ACOs i.e., RD-16149, RD-16099, RD-16100, RD-16101, RD-16150, RD-16103, RD-16104 and RD-16105
  • concentrations i.e., 1.56, 6.25, 25, 100, 400 and 1600 nM
  • RD-16106 was transfected and served as a siRNA-ACO control. Mock treatments were transfected in absence of oligonucleotide (not shown) .
  • SOD1 mRNA levels were quantified via RT-qPCR using a gene specific primer set.
  • the remaining human SOD1 mRNA levels in SK-N-AS and T98G cells were plotted in FIG. 14A-14B.
  • the EC 50 values were summarized in Table 5.
  • Example 41 Knockdown activity and tissue concentration of siRNAs via ICV injection in adult hSOD1 G93A mice.
  • siRNAs i.e., RD-14851, RD-12500, RD-16145 and RD-16334.
  • RD-16334 with a DEC structure i.e., L17
  • Treatment with aCSF alone was used as a vehicle control to establish baseline expression.
  • FIG. 15A shows the remaining SOD1 mRNA on 30 days post dosing as quantified in tissues from brain (i.e., frontal cortex, cerebellum and cerebrum) , spinal cord and periphery (i.e., liver) via RT-qPCR using a gene specific primer set.
  • FIG. 15B shows the concentration on 30 days post dosing as in tissues from brain (i.e., frontal cortex, cerebellum and cerebrum) , spinal cord and periphery (i.e., liver) via stem-loop RT-qPCR using a gene specific primer set.
  • Serum chemistry i.e., glutamic-pyruvic transaminase (ALT) , glutamic oxalacetic transaminase (AST) , total bilirubin (TBIL) and creatinine (CRE)
  • completed blood count i.e., white blood cell (WBC) , red blood cell (RBC) , blood platelet (PLT) etc.
  • Example 42 Splicing activity of “saRNA-ASO” DEC-DAO structure in GM03813 cells.
  • DEC-DAO DEC-DAO linkage with L21 linker (i.e., RD-16939 and RD-16940) , DEC-saSMN2 (i.e., RD-16424) and DEC-antisense oligonucleotide (DEC-ASO) (i.e., RD-14644) were transfected into GM03813 cells at indicated concentrations (i.e., 0.1, 1 and 10 nM) for 3 days.
  • RD-16381 was transfected as a non-specific DEC control.
  • Combo treatment i.e., RD-16424+RD-14644
  • combo treatment control i.e., RD-16381+RD-16424, RD-16381+RD-14644
  • concentrations i.e., 0.1, 1 and 10 nM
  • saRNA-ASO DEC-DAO structure provides potent splicing activity on mRNA levels of SMN2FL and SMN2 ⁇ 7, indicating that combining a saRNA with a ASO into a DAO can largely retain and even increase the activity of both saRNA and ASO units.
  • Example 43 Effect of “saRNA-siRNA” DEC-DAO structure targeting two different human genes (SMN2 and SOD1) on the expression of SMN2 (SMN2FL and SMN2 ⁇ 7) and pOD1 in GM03813 cells.
  • DEC-DAO linkage with L21 linker i.e., RD-16941
  • DEC-saSMN2 i.e., RD-16424
  • DEC-siSOD1 i.e., RD-13115
  • RD-16381 was transfected as a non-specific DEC control.
  • FIGs. 17A-17B shows mRNA levels of SMN2FL and SMN2 ⁇ 7 and FIG. 17C shows remaining SOD1 mRNA levels.
  • “saRNA-siRNA” DEC-DAO structure provides the potent gene induction on expression of SMN2FL and knockdown on SOD1 mRNA, respectively. This result indicates that combining a saRNA with a siRNA into a DAO can largely retain the activity for each unit and enhance the activity of the saRNA unit.
  • Example 44 Effect of “siRNA-siRNA” DEC-DAO structure targeting two different genes (mouse Sod1 and Ppig) on the expression of mouse Sod1 and Ppig in C2C12 cells.
  • DEC-DAO structure targeting two different genes was transfected into C2C12 cells at indicated concentrations (i.e., 0.01, 0.1 and 1 nM) for 24 hours.
  • RD-16381 was transfected as a non-specific DEC control.
  • Combo treatment i.e., RD-13115+RD-14672
  • combo treatment control i.e., RD-16381+RD-13115, RD-16381+RD-14672
  • concentrations i.e., 0.01, 0.1 and 1 nM
  • siRNA-siRNA DEC-DAO structure provides potent knockdown activity on mouse Sod1 and Ppig mRNA levels, respectively. This result indicates that combining two siRNAs targeting different genes into a DAO can largely retain the activity for each siRNA unit and even enhance the activity of both siRNA units.
  • Example 45 Effect of “siRNA-siRNA” DEC-DAO structure targeting two different genes (mouse Sod1 and Ppig) on the expression of mouse Sod1 and Ppig in vivo.
  • Remaining mouse Sod1 mRNA on 14 days post dosing were quantified in tissues from periphery (i.e., heart, liver, kidney, fat tissues, diaphragm, thoracic aorta with vein) , and skeletal muscle (i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus) via RT-qPCR using a gene specific primer set.
  • periphery i.e., heart, liver, kidney, fat tissues, diaphragm, thoracic aorta with vein
  • skeletal muscle i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus
  • Example 46 Pharmacokinetics of DEC-saRNA in retina and vitreous humor of adult SD rat following DEC-saRNA treatment via IVT injection
  • DEC-saRNA i.e., RD-16447
  • non-conjugated saRNA i.e., RD-12173
  • the rats were sacrificed on 1-hour, day-1, -3, -7, -14 and -28 following treatment and the concentrations of RD-16447 and RD-12173 were quantified in retina and vitreous humor via stem-loop RT-qPCR. Concentrations of RD-16447 and RD-12173 in retina and vitreous humor were plotted in FIG. 20A-20B. Mean concentrations of oligonucleotide in retina and vitreous humor were summarized in Table 7.
  • Example 47 Knockdown activity of DEC-siRNA targeting SOD1 in T98G cells.
  • a new DEC structure (i.e., C5x34) was designed and conjugated to a siRNA targeting SOD1 gene, resulting in a new DEC-siRNA (i.e., RD-17138) .
  • the indicated DEC-siRNA i.e., RD-17138
  • T98G cell 0.1 nM and 1 nM for 24 hours.
  • RD-11566 was transfected and served as a non-specific duplex control.
  • Mock treatments were transfected in absence of oligonucleotide.
  • SOD1 mRNA levels were quantified via RT-qPCR. As shown in FIG.
  • RD-17138 showed a knockdown activity on SOD1 mRNA expression greater than 90%at 0.1 nM and 1 nM, suggesting the new DEC structure C5x34 can enhance the knockdown activity of siRNA on SOD1 mRNA level in vitro.
  • oligonucleotides used in the following examples were synthesized via the following general method.
  • the single strand oligonucleotide was synthesized on a K&ADNA synthesizer (K&A Laborgeraete GbR, chaafheim, Germany) by a solid phase synthesis technique.
  • the starting material was universal solid support or special solid support commercially available or synthesis as disclosure in previous context.
  • phosphoramidite monomers including various linkers and conjugates were added sequentially onto a solid support in the DNA synthesizer to generate the desired full-length oligonucleotides.
  • each cycle of amidite addition consisted of four chemical reactions including detritylation, coupling, oxidation/thiolation and capping.
  • detritylation was performed by using 3%dichloroacetic acid (TCA) in DCM for 45 seconds.
  • the second step Phosphoramidite coupling was conducted for 6 minutes for all amidites by 12 eq.;
  • oxidation was performed by using 0.02 M iodine in THF: pyridine: water (70: 20: 10, v/v/v) for 1 minute; if phosphorothioate modification needed then replace oxidation by thiolation which was carried out with 0.1 M solution of xanthane hydride in pyridine: ACN (50: 50, v/v) for 3 minutes;
  • the capping was performed by using a THF: acetic anhydride: Pyridine (80: 10: 10, v/v/v) (CAP A) and N-methylimidazole: THF (10: 90, v/v) , (CAP B) for 20 seconds.
  • the Cycles of four chemical reaction will be depended by the length of single of oligonucleotide.
  • Deprotection I (Nucleobase Deprotection): After completion of the synthesis, the solid support was transferred to a screw-cap microcentrifuge tube. For a 1 ⁇ mol synthesis scale, 1 ml of a mixture of methylamine and ammonium hydroxide was added. The tube containing the solid support was then heated in an oven at 60°C to 65°C for 15 min and then allowed to cool to room temperature. The cleavage solution was collected and evaporated to dryness in a speedvac to provide crude single strand of oligonucleotide.
  • Deprotection II Removal of 2’-TBDMS Group: If The crude RNA oligonucleotide, still carrying the 2’-TBDMS groups, then dissolved in 0.1 ml of DMSO. After adding 1 ml of Triethylamine trihydrofluoride, the tube was capped, and the mixture was shaken vigorously to ensure complete dissolution and then heated in an oven at 65°C for 15 minutes. The tube was removed from the oven and cooled down to room temperature. The solution containing the completely desilylated oligonucleotide was cooled on dry ice.
  • oligonucleotides The purification of oligonucleotides was performed on an AKTA explorer 10 equipped with a Source 15Q 4.6/100 PE column using the following conditions: buffer A: (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 7.5) , B: (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 2M NaCl, pH 7.5) , gradient: 10%B to 60%B in 25 min, flow rate: 1 ml/min.
  • buffer A (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 7.5
  • B (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 2M NaCl, pH 7.5)
  • gradient 10%B to 60%B in 25 min
  • flow rate 1 ml/min.
  • the pure oligonucleotides were collected and desalting by a HiPrep 26/10 Desalting column.
  • sense strand passenger strand
  • antisense strand guide strand
  • PMH Primary mouse hepatocytes
  • T98G cells (Cobioer, Cat#CBP60301) were cultured under the conditions of 5%CO2 and 37°C in modified MEM medium (Gibco, Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA) supplemented with 10%bovine calf serum (Sigma-Aldrich) and 1%penicillin/streptomycin.
  • modified MEM medium Gibco, Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA
  • 10%bovine calf serum Sigma-Aldrich
  • SK-N-AS Procell, Wuhan, China, Cat#CL-0621
  • C2C12 CBP60252, Cobioer, China
  • SMA patient derived fibroblasts GM03813 cells were obtained from Coriell Institute (Camden, NJ, USA) and cultured at 5%CO2 and 37°C in modified MEM medium supplemented with 15%bovine calf serum, 1%NEAA and 1%penicillin/streptomycin. Transfection was carried out using Lipofectamine RNAiMax (ThermoFisher, Waltham, MA, USA) in growth media without antibiotics according to the manufacturer’s protocol. Free uptake was carried out by directly adding oligonucleotides into culture medium containing the PMH cells.
  • C57BL/6J mice (B204, Beijing, China) were anesthetized with isoflurane and perfused by initial flushing reagent and digestion reagent successively.
  • the liver was placed into a 10 cm dish and torn apart using forceps in culture medium.
  • the cell suspension was collected by filtering through a 70-75-micron membrane in 50 mL conical tube, followed by centrifuging at 4°C for 2 minutes at 100 ⁇ g in a swinging-arm centrifuge. Cells were washed with 20 mL cold PBS after removing the supernatant (Repeat this step twice) . Cells with at least 80%viability were allowed to proceed with the assay. Appropriate number of cells were seeded to the cell culture plates which were pre-coated with collagen I 4-12 hrs in advance to yield a final confluence of 90-95%prior to the start of the assay.
  • mice All animal procedures were conducted by certified laboratory personnel using protocols consistent with local and state regulations and approved by the Institutional Animal Care and Use Committee.
  • C57BL/6J mice (4-6 weeks old) purchased from SPF Biotechnology Co., LTD (B204, Beijing, China) .
  • Sprague-Dawley female rats (A102, SPF, China) were purchased from SPF (Suzhou) Biotechnology Co., LTD.
  • Parental transgenic hSOD1 G93A mice (Strain ID #004435) were purchased from the Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA) and imported into China via Nantong University (Nantong City, Jiangsu province, China) .
  • Formulations for in vivo studies were prepared fresh prior to use by dissolving aliquots of lyophilized oligonucleotide into saline or aCSF to create stock solutions for dilution to the intended treatment concentrations. Animals were randomly allocated into study groups based on body weight and sex.
  • Avertin (1.2%) was prepared fresh and sterilized via 0.2-micron filter. Mice were dosed at 0.30-0.35 ml per 10 g body weight via intraperitoneal (IP) injection in a stereotaxic apparatus to rapidly induce anesthesia for up to 30 minutes. An approximate 11.5 mm incision was made in the animal’s scalp and a 25-gauge needle attached to a Hamilton syringe containing the appropriate siRNA formulation was placed at bregma level. The needle was moved to the appropriate anterior/posterior and medial/lateral coordinates (0.2 mm anterior/posterior and 1 mm to the right medial/lateral) . A total of 10 ⁇ L was injected into the lateral ventricle at an approximate rate of 1 ⁇ L/s. Following treatment, the needle was slowly withdrawn, and the wound sutured close.
  • IP intraperitoneal
  • Anesthesia was administered via 3.0%isoflurane in an induction chamber for continuous 10 mins. Hair was shaved around the injection site at the base of the tail and cleaned with 75%ethanol. The space between the L5-L6 spinous processes was identified and a 30-gauge needle attached to a microliter syringe containing the appropriate drug formulations was slowly inserted into the intradural space until a tail flick was observed. The needle position was subsequently secured in which 30 ⁇ L total volume of solution was injected over the course of 1 min.
  • mice were exposed to an infrared lamp for 2-3 min to dilate the veins, and then held in the restrainer to straighten the tail.
  • the tail was wiped with 75%alcohol and the needle was inserted 2 to 4 mm parallel to the tail vein into the lumen, keeping the bevel of the needle upwards.
  • the preformed solution was injected slowly and should be free of resistance if administered correctly.
  • the recommended injection volume for test article is 200 ⁇ L and the injection rate don’t exceed 5 ml/min.
  • the injection site is pressed firmly with a cotton swab or finger to prevent backflow of the administration solution and/or blood.
  • IVTT Intravitreal
  • SD rats were housed in animal facility of Ractigen (Nantong, Jiangsu, China) and fed for at least three days prior to the intravitreal (IVT) injection of compounds.
  • SD rats were anesthetized in an isoflurane (RWD, R510-22-16) induction chamber (5%isoflurane in 100%medical oxygen, 2 L/min) until they had no response to toe pinches.
  • SD rats were transferred to the experimental operating platform and positioned for delivery of isoflurane (2%isoflurane in 100%medical oxygen, 1.5 L/min) using a homemade face mask during the procedure of IVT injection. Before the IVT injection of compounds, one drop of 0.5%alcaine as topical anesthetics was applied to the injected eye (left eye) .
  • An anterior chamber paracentesis was performed using a 30-gauge needle, followed by approximately 5 ⁇ L aqueous humor were outflowed.
  • Each compound for corresponding group was dissolved in 4 ⁇ L normal saline and loaded into a 30-gauge needle for IVT injection.
  • the compounds were administered by inserting at a 45° angle of the needle through the sclera into the vitreous body, then injected into the posterior chamber keeping for 5 seconds to avoid the leaking.
  • the injected eye was administered with antibiotics to prevent infection after the IVT injection.
  • IVB Intravesical bladder
  • mice were anesthetized and placed on a temperature-controlled pad at 28-31°C. Each mouse will be excreted urine from the bladder by urinary catheterization and to wash the bladder with saline before IVB instillation. A 2 cm catheter attached to a 1 ml syringe containing compound solution was intubated into bladder via urinary meatus. A total of 50 ⁇ L solution was injected into the bladder through an indwelling urinary catheterization at ⁇ 1.5 hours.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Disclosed is a compound having a specific structure, which can substantially enhance the delivery efficiency of oligonucleotides to various subjects both in vitro and in vivo, and thus achieving improved expression regulation of target genes. A pharmaceutical composition comprising the compound and a method of modulating the expression of a target gene by using the same are also disclosed.

Description

OLIGONUCLEOTIDE DELIVERY ENHANCING COMPOUNDS, PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS AND METHODS USING THE SAME FIELD OF THE INVENTION
The present disclosure relates to the technical field of genetic modulation, and in particular to unique compounds useful for enhancing delivery efficiency of oligonucleotides both in vitro and in vivo.
BACKGROUND OF THE INVENTION
Oligonucleotide-based therapeutics has been an emerging technology as its mechanisms of action provide expression regulation on almost unlimited target genes. The administration of oligonucleotides to patients, organs, tissues or cells may elicit or impact various biochemical reactions and thus achieve functions such as silencing, inhibiting, activating, and modulation of gene expression. The opportunity to use oligonucleotide-based therapy holds significant promise, providing solutions to medical problems that could not be addressed with traditional medicines. However, one of the major obstacles for the commercialization of oligonucleotide-based medicine is a lack of effective methods for delivering it to the right organ, tissue, or cell. Oligonucleotide therapeutics typically have a molecular weight ranging from 7 kDa to 14 kDa and comprise strong negative charge due to the inclusion of phosphodiester or phosphorothioate in the backbone thereof. The relatively large molecular weight and the high negative charge density restrain the transmission of oligonucleotides across cell membranes. Many strategies have been exploited for promoting the oligonucleotide delivery and yet, the delivery efficiency remains challenging.
Therefore, there continues to be a longstanding need for development of unique technologies that can deliver oligonucleotides with superior efficiency and to a wider range of organs, tissues and cells, especially to organs, tissues and cells where oligonucleotides are barely attainable in the prior art.
After persistent exploration, we have developed unique delivery enhancing compounds which can achieve the above targets.
SUMMARY OF THE INVENTION
The present disclosure provides an oligonucleotide delivery enhancing compound (DEC) comprising a nitrogen-containing five membered heterocyclic ring moiety, the DEC can be directly or indirectly attached to an oligonucleotide so as to be used to enhance the delivery efficiency of oligonucleotides to a subject both in vitro and in vivo. In a specific embodiment, the DEC has a structure represented by Formula AI or Formula AII
In another specific embodiment, the oligonucleotide delivery enhancing compound comprises a moiety represented by Formula BI
In another specific embodiment, the oligonucleotide delivery enhancing compound a structure represented by Formula BII
Also provided herein is an oligonucleotide delivery agent comprising a DEC moiety derived from the DEC of the present disclosure and at least one oligonucleotide, wherein the DEC moiety is directly or indirectly linked to the oligonucleotide via at least one linking moiety. The oligonucleotide can be antisense oligonucleotide (ASO) , antisense RNA, short interfering RNA (siRNA) , micro-RNA (miRNA) , small activating RNA (saRNA) , double-stranded RNA (dsRNA) , and small guide RNA (sgRNA) .
Also provided herein is a pharmaceutical composition comprising the DEC of the  present disclosure, the pharmaceutical composition may optionally comprise additional ingredients, such as pharmaceutically acceptable carrier, excipient, solvent, diluent, stabilizer, dispersant, buffer, compatibilizer, preservative agent and combinations thereof.
Also provided herein is method of modulating the expression of a target gene in a subject in vitro or in vivo, wherein the method comprises the step of administrating the pharmaceutical composition of the present disclosure to a subject in the case of in vivo assays or therapeutic treatment, or contacting the pharmaceutical composition with a cell in the case of in vitro assays.
It is to be understood that both the foregoing general description and the following detailed description are exemplary and explanatory only and are not restrictive of the invention, as claimed.
BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS
A better understanding of the features and advantages of the present invention will be obtained with reference to the following detailed description that sets forth illustrative embodiments, in which the principles of the invention are utilized, and the accompanying drawings of which:
FIG. 1. shows the knockdown activity of delivery enhancing compound conjugated siRNA (i.e., DEC-conjugated siRNA or DEC-siRNA) on mouse Factor VII (mFVII) mRNA expression in primary mouse hepatocytes (PMH) cells. PMH cells were transfected via lipofectamineTM RNAiMax with each of the indicated DEC-conjugated oligonucleotide (DCOs) (i.e., RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712) at 0.1 nM and 1.0 nM for 24 hours. Mock treatments were transfected in absence of oligonucleotide. dsCon2 served as a non-specific duplex control. mFVII mRNA levels were quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set. Tbp was amplified as an internal reference. Shown are the mean values of mFVII mRNA in the cells relative to Mock treatment after normalizing to Tbp [mean ± Standard Error of the Mean (SEM) of two replicated wells] .
FIG. 2. shows the knockdown activity of DEC-conjugated siRNA on mouse FVII mRNA expression by free uptake in PMH cells. The indicated DCOs (i.e., RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712, as described in FIG. 1. ) were directly added to PMH cell culture media at 0.01, 0.05, 0.20, 0.78, 3.13, 12.50, 50 and 200 nM  for 24 hours. Mock treatment was transfected in absence of oligonucleotide (not shown) . dsCon2 duplex served as a non-specific duplex control (not shown) . mFVII mRNA levels were quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set. Tbp was amplified as an internal reference. Shown are the mean values of mFVII mRNA in the cells relative to Mock treatment after normalizing to Tbp (mean ± SEM of two replicated wells) .
FIG. 3. shows the in vivo knockdown activity of DEC-conjugated siRNAs on mouse FVII mRNA expression via subcutaneous injection (SC) injection in C57BL/6J mice. The indicated DCOs (i.e., RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712, as described in FIG. 1. ) were administered via SC injection into C57BL/6J mice on postnatal day (PND) 40 at 0.2, 1 and 5 mg/kg doses. Saline was injected as a vehicle control to establish the baseline of mFVII mRNA expression. Mice were sacrificed on 3 days post dosing and mFVII mRNA levels were quantified in total RNA isolated from liver tissue preps via RT-qPCR using a gene specific primer set. Tbp was amplified as an internal reference. Mean mFVII mRNA levels in liver tissue of each treatment group are shown relative to saline group after normalizing to Tbp (mean ± SEM of 3 animals per group) .
FIG. 4. shows the in vivo knockdown activity of DEC-conjugated siRNA on mouse FVII protein expression via SC injection in C57BL/6J mice. The indicated DCOs (i.e., RD-12339, RD-12585 and RD-12586, as described in FIG. 1. ) were administered via SC injection into C57BL/6J mice on PND 40 at 0.2, 1 and 5 mg/kg doses. Saline was injected as a vehicle control to establish the baseline of mFVII protein expression. Mice were sacrificed on day 3 following treatment and mFVII protein level was quantified in mice plasma by ELISA assay. Mean mFVII protein levels in mice plasma by detecting the OD values of each treatment group are shown relative to saline group (mean ± SEM of 3 animals per group) . *represents p ＜ 0.05; **represents p ＜ 0.01; ***represents p ＜ 0.001; and ****represents p ＜ 0.0001.
FIG. 5. shows the duration of DEC-conjugated siRNA knockdown activity on mouse FVII protein expression via SC injection in C57BL/6J mice. The indicated DCOs (i.e., RD-12710 and RD-12712) were administered via SC injection into C57BL/6J mice on PND 40 at 3 mg/kg for 89 days. RD-11706 was injected at 3 mg/kg and served as a control. Saline was injected as a vehicle control to establish the baseline of mFVII protein expression. Mouse plasmas were collected on day 10, 31, 54, 61, 80 and 89 following treatment and mFVII protein level was quantified in mouse plasma by ELISA assay. Mean mFVII protein levels in  mouse plasma by detecting the OD values of 3 animals at each time point of per group are shown relative to saline group (mean ± SEM of 3 animals at each time point of each group) .
FIGs. 6A-6B show in vitro knockdown activity of DEC-siRNAs on mouse Sod1 (Sod1) mRNA expression by free uptake in PMH cells. DEC-siRNAs (i.e., RD-13110, RD-13115 and RD-13118) were added into PMH cell culture medium at the indicated concentration gradient (i.e., 1.56, 6.25, 25, 100, 400 and 1600 nM) to generate dose response curves as shown in FIG. 6A. Treatments in absence of oligonucleotide were used to normalize expression data. Sod1 mRNA levels were quantified via RT-qPCR using a gene specific primer set following RNA isolation and RT reactions. Tbp was amplified as an internal reference. Treatment with RD-12556 served as a non-conjugate control for comparison of dose dependent knockdown in absence DEC conjugation was shown in FIG. 6B (mean ± SEM of two replicated wells) .
FIG. 7 shows in vivo knockdown activity of different DEC-siRNAs on Sod1 mRNA expression via intracerebroventricular (ICV) injection in adult C57BL/6J mice. The indicated DEC-siRNAs (i.e., RD-13110, RD-13115 and RD-13118) were administered via unilateral ICV injection at 200 μg. Saline was injected as a vehicle control to establish the baseline. RD-12556 was injected at 200 μg as a non-conjugate control. Mice were sacrificed on 7 days post dosing and Sod1 mRNA knockdown was quantified in brain (i.e., brain-frontal cortex, cerebrum and brain-cerebellum) , spinal cord (i.e., cervical, thoracic and lumbar) and peripheral tissue (i.e., liver) via RT-qPCR using a gene specific primer set after RNA isolation and RT reaction. Tbp was amplified as an internal reference. Mean Sod1 mRNA levels are shown in each of the indicated tissues relative to mRNA levels in the saline group after normalizing to Tbp (mean ± SEM of 2-3 animals per group) .
FIG. 8 shows in vivo activity of different DEC-siRNAs on knocking down Sod1 mRNA expression following intravenous (IV) injection into the lateral tail vein of adult C57BL/6J mice. The indicated DEC-siRNAs (i.e., RD-13110, RD-13115 and RD-13118) were administered via IV injection at 20 mg/kg. Saline was injected as a vehicle control to establish the baseline. RD-12556 was injected at 20 mg/kg as a non-conjugate control. Mice were sacrificed on day 7 following treatment and Sod1 mRNA knockdown was quantified in select peripheral tissues (i.e., heart, liver, spleen, lung, kidney and bladder) via RT-qPCR using a gene specific primer set after RNA isolation and RT reaction. Tbp was amplified as an internal  reference. Mean Sod1 mRNA levels are shown in each of the indicated tissues relative to mRNA levels in the saline group after normalizing to Tbp (mean ± SEM of 3 animals per group) .
FIG. 9 shows in vivo knockdown activity of different DEC-siRNAs on Sod1 mRNA expression following IV injection into adult C57BL/6J mice. The indicated DEC-siRNAs (i.e., RD-13110, RD-13115 and RD-13118) were administered via IV injection at 20 mg/kg. Saline was injected as a vehicle control to establish the baseline. RD-12556 was injected at 20 mg/kg as a non-conjugate control. Mice were sacrificed on 7 days post dosing and Sod1 mRNA levels were quantified in skeletal muscle tissue from different locations (i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus) via RT-qPCR using a gene specific primer set after RNA isolation and RT reaction. Tbp was amplified as an internal reference for RNA loading. Mean Sod1 mRNA levels in skeletal muscle tissue of 3 animals per group are shown relative to mRNA levels in the saline group after normalizing to Tbp (mean ± SEM of 3 animals per group) .
FIG. 10 shows knockdown activity of different DEC-siRNAs on rat Sod1 mRNA expression via intravitreal (IVT) injection in adult SD rats. The indicated DEC-siRNAs (i.e., RD-13115 and RD-13118) were administered via IVT injection at 30 μg per left eye. The right eye of each rat served as a non-injected naive eye. Saline was injected as a vehicle control to establish the baseline. RD-12556 was injected as a non-conjugate control. Rats were sacrificed on day 14 following treatment and Sod1 mRNA levels were quantified in eyes via RT-qPCR using a rat gene specific primer set after RNA isolation and RT reaction. Geometric mean of the mRNA levels of Hprt1 and Hmbs were used as an internal reference for RNA loading. Mean Sod1 mRNA levels in retina tissue of 3 animalsfor each group are shown relative to mRNA levels in the saline group after normalizing to Hprt1 and Hmbs. The data represents mean ± SEM of 3 mice per group.
FIG. 11 shows the saRNA concentration of DEC-saRNA in adult C57BL/6J mice bladder after intravesical bladder (IVB) instillation. The indicated DEC-saRNA (i.e., RD-13520) was administered via IVB injection at 3 mg. RD-10773 was injected as a non-conjugate saRNA control (i.e., in absence of DEC) . The mice were sacrificed on 2-, 6-, 12-hour, day-1 and day-4 following treatment and the concentrations of RD-13520 and RD-10773 were quantified in bladder tissue via stem-loop RT-qPCR using a gene specific primer set (R1- 40-AS-SL-RT, R1-40-AS-SL-F1 and SL-RT-qPCR-Uni-R2, see Table 13) . Mean concentration (ng/g) for both saRNAs in mouse bladder tissue samples from 2 animals (n=2) are shown at the indicated time points (mean ± SEM) .
FIGs. 12A-12C show body weight change of and Sod1 knockdown activity of DEC-siRNAs via IV injection in adult C57BL/6J mice. The indicated siRNAs (i.e., RD-15135, RD-15136, RD-15137 and RD-15138) were administered into C57BL/6J mice at 10 mg/kg. RD-15135 served as a non-conjugate control. RD-15136 was a lipid (i.e., C16) conjugated siRNA. RD-15137 with a typical DEC structure (i.e., C5X5) served as a typical DEC-siRNA. RD-15138 with a typical DEC structure (i.e., C5X5) and a lipid (i.e., C16) served as a combo siRNA (i.e., DEC-C16-siRNA) . Treatment with saline alone was used as a vehicle control to establish baseline expression. FIG. 12A shows the body weight change of C57BL/6J mice out to day 28 post treatment. FIG. 12B shows the remaining mouse Sod1 mRNA on 14 days post dosing as quantified in tissues from periphery (i.e., heart, liver, kidney, fat tissues, pancreas, diaphragm) , blood vessel (i.e., thoracic aorta with vein) and skeletal muscle (i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus) via RT-qPCR using a gene specific primer set. FIG. 12C shows the remaining mouse Sod1 mRNA on 28 days post dosing as quantified in tissues from periphery (i.e., heart, liver, kidney, fat tissues, pancreas, diaphragm) , blood vessel (i.e., thoracic aorta with vein) and skeletal muscle (i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus) via RT-qPCR using a gene specific primer set. Rpl13a was amplified as an internal reference. Mean Sod1 mRNA levels in the selected mouse tissues are shown relative saline control after normalized to Rpl13a. The data represents mean ± SEM of 3 mice per group.
FIGs. 13A-13C show body weight change of and Sod1 knockdown activity of DEC-siRNAs via intrathecal (IT) injection in adult SD female rats. The indicated siRNAs (i.e., RD-15135, RD-15136, RD-15137 and RD-15138) were administered into C57BL/6J mice at 0.9 mg.RD-15135 served as a non-conjugate control. RD-15136 was a lipid (i.e., C16) conjugated siRNA. RD-15137 with a typical DEC structure (i.e., C5X5) served as a typical DEC-siRNA. RD-15138 with a typical DEC structure (i.e., C5X5) and a lipid (i.e., C16) served as a combo siRNA (i.e., DEC-C16-siRNA) . Treatment with artificial cerebrospinal fluid (aCSF) alone was used as a vehicle control to establish baseline expression. FIG. 13A shows the body weight change of SD rats out to day 28 post treatment. FIG. 13B shows the remaining rat Sod1 mRNA on 14 days post dosing as quantified in tissues from brain (i.e., frontal cortex, cerebellum and  cerebrum) , spinal cord (i.e., cervical, thoracic and lumbar) and periphery (i.e., liver and kidney) via RT-qPCR using a gene specific primer set. FIG. 13C shows the remaining rat Sod1 mRNA on 28 days post dosing as quantifiedin tissues from brain (i.e., frontal cortex, cerebellum and brainstem) , spinal cord (i.e., cervical, thoracic and lumbar) and periphery (i.e., liver and kidney) . Geometric mean of the mRNA levels of Actb and B2m were used as an internal reference for RNA loading. Mean Sod1 mRNA levels in the selected rat tissues are shown relative to mRNA levels in the aCSF group after normalized to Actb and B2m. The data represents mean ± SEM of 3 mice per group.
FIGs. 14A-14B show the in vitro knockdown activity of DEC-siRNA with accessory oligonucleotide (i.e., DEC-siRNA-ACO) on human SOD1 (i.e., SOD1) mRNA expression in SK-N-AS and T98G cells. The indicated DEC-siRNA-ACOs (i.e., RD-16149, RD-16099, RD-16100, RD-16101, RD-16150, RD-16103, RD-16104 and RD-16105) were transfected into SK-N-AS and T98G cell at the indicated concentrations (i.e., 1.56, 6.25, 25, 100, 400 and 1600 nM) to generate dose response curves as shown in FIG. 14A-14B. RD-16106 was transfected and served as a siRNA-ACO control. Mock treatments were transfected in absence of oligonucleotide (not shown) . SOD1 mRNA levels were quantified via RT-qPCR using a gene specific primer set following RNA isolation and RT reactions. B2M was amplified as an internal reference. Shown are the mean values of remaining SOD1 mRNA in the cells relative to Mock treatment after normalizing to B2M (mean ± SEM of two replicated wells) .
FIGs. 15A-15B show SOD1 knockdown activity and tissue concentration of siRNAs via ICV injection in adult hSOD1G93A mice. The indicated siRNAs (i.e., RD-14851, RD-12500, RD-16145 and RD-16334) were administered into hSOD1G93A mice at 200 μg. RD-14851, RD-12500 and RD-16145 were administered as siRNA-ACOs. RD-16334 with a DEC structure (i.e., L17) was administered and served as a DEC-siRNA-ACO. Treatment with aCSF alone was used as a vehicle control to establish baseline expression. FIG. 15A shows the remaining SOD1 mRNA on 30 days post dosing as quantified in tissues from brain (i.e., frontal cortex, cerebellum and cerebrum) , spinal cord and periphery (i.e., liver) via RT-qPCR using a gene specific primer set. Rpl13a was amplified as an internal reference. Mean SOD1 mRNA levels in the selected mouse tissues are shown relative to mRNA levels in the aCSF group after normalized to Rpl13a. FIG. 15B shows the concentration of the antisense strand of each siRNA in tissues from brain (i.e., frontal cortex, cerebellum and cerebrum) , spinal cord  and periphery (i.e., liver) via stem-loop RT-qPCR using a gene specific primer set (R17-02-AS-SL-RT, R17-02-AS-SL-F3 and SL-RT-qPCR-Uni-R1, see Table 13) 30 days posting dosing. Mean values of siRNA concentrations from 5 animals (n=5) are shown in each treatment. The data represents mean ± SEM of 5 mice per group.
FIGs. 16A-16B show splicing activity of “saRNA-ASO” DEC conjugated dual acting oligonucleotides (DEC-DAO) structure at converting SMN2 pre-mRNA to SMN2FL over the SMN2Δ7 mRNA isoform in GM03813 cells. The indicated DEC-DAO linkage with L21 linker (i.e., RD-16939 and RD-16940) , DEC-saSMN2 (i.e., RD-16424) and DEC-antisense oligonucleotide (DEC-ASO) (i.e., RD-14644) were transfected into GM03813 cells at the indicated concentrations (0.1, 1 and 10 nM) for 3 days. Mock treatments were transfected in the absence of an oligonucleotide. RD-16381 was transfected as a non-specific DEC control. Combo treatment (i.e., RD-16424+RD-14644) and combo treatment control (i.e., RD-16381+RD-16424, RD-16381+RD-14644) were also transfected into GM03813 cells. FIGs. 16A-16B show the mRNA levels of SMN2FL and SMN2Δ7 as quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set in each of the PCR reactions. SDHA was amplified as an internal reference used to normalize expression data. Data represents mean expression levels of SMN2FL or SMN2Δ7 relative to Mock treatment after normalized to SDHA (mean ± SEM of two replicated transfection wells) .
FIGs. 17A-17C show the effect of “saRNA-siRNA” DEC-DAO structure targeting two different human genes (SMN2 and SOD1) on the expression of SMN2 (SMN2FL and SMN2Δ7) and SOD1 in GM03813 cells. The indicated DEC-DAO linkage with L21 linker (i.e., RD-16941) , DEC-saSMN2 (i.e., RD-16424) and DEC-siSOD1 (i.e., RD-13115) were transfected into GM03813 cells at indicated concentrations (i.e., 0.1, 1 and 10 nM) for 3 days. Mock treatments were transfected in the absence of an oligonucleotide. RD-16381 was transfected as a non-specific DEC control. Combo treatment (i.e., RD-16424+RD-13115) and combo treatment control (i.e., RD-16381+RD-16424, RD-16381+RD-13115) also were transfected into GM03813 cells at indicated concentrations (i.e., 0.1, 1 and 10 nM) for 3 days. FIGs. 17A-17B show the mRNA levels of SMN2FL and SMN2Δ7 as quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set in each of the PCR reactions. FIG. 17C shows remaining SOD1 mRNA levels as quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set in each of the PCR reactions. SDHA was amplified as an internal reference used to normalize expression data. Data  represents mean expression levels of SMN2FL, SMN2Δ7 or SOD1 relative to Mock treatment after normalized to SDHA (mean ± SEM of two replicated transfection wells) .
FIGs. 18A-18B show knockdown activity of “siRNA-siRNA” DEC-DAO structure targeting two different mouse genes (Sod1 and Ppig) on the expression of mouse Sod1 and mouse Ppig in mouse myoblast cell line (C2C12) . The indicated DEC-DAO linkage with L21 linker (i.e., RD-16942) , DEC-siSod1 (i.e., RD-13115) and DEC-siPpig (i.e., RD-14672) were transfected into C2C12 cells at indicated concentrations (i.e., 0.01, 0.1 and 1 nM) for 24 hours. Mock treatments were transfected in the absence of an oligonucleotide. RD-16381 was transfected as a non-specific DEC control. Combo treatment (i.e., RD-13115+RD-14672) and combo treatment control (i.e., RD-16381+RD-13115, RD-16381+RD-14672) were also transfected into C2C12 cells at indicated concentrations (i.e., 0.01, 0.1 and 1 nM) for 24 hours. FIG. 18A shows remaining mouse Sod1 mRNA levels as quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set in each of the PCR reactions. FIG. 18B shows the remaining mouse Ppig mRNA levels as quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set in each of the PCR reactions. Mouse Rpl13a was amplified as an internal reference used to normalize expression data. Data represents mean expression levels of Sod1 and Ppig relative to Mock treatment after normalized to Rpl13a (mean ± SEM of two replicated transfection wells) .
FIG. 19 shows knockdown activity of “siRNA-siRNA” DEC-DAO structure targeting two different mouse genes (Sod1 and Ppig) on the expression of mouse Sod1 and mouse Ppig in adult C57BL/6J mice. The indicated DEC-DAO linkage with L21 linker (i.e., RD-16942) , DEC-siSod1 (i.e., RD-13115) and DEC-siPpig (i.e., RD-14672) were administered into C57BL/6J mice via IV injection at 10 mg/kg. Combo treatment (i.e., RD-13115+RD-14672) was administered via IV injection at 10 mg/kg. Treatment with saline alone was used as a vehicle control to establish baseline expression. Remaining mouse Sod1 mRNA on 14 days post dosing were quantified in tissues from periphery (i.e., heart, liver, kidney, fat tissues, diaphragm) , blood vessel (i.e., thoracic aorta with vein) and skeletal muscle (i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus) via RT-qPCR using a gene specific primer set. Tbp was amplified as an internal reference used to normalize expression data. Mean Sod1 mRNA levels in the selected mouse tissues are shown relative to mRNA levels in the saline group after normalized to Tbp. The data represents mean ± SEM of 3-4 mice per group.
FIGs. 20A-20B compares the oligonucleotide concentration of DEC-saRNA to non- conjugated saRNA in retina and vitreous humor of adult SD rat after intravitreal (IVT) injection. The indicated DEC-saRNA (i.e., RD-16447) and non-conjugated saRNA (i.e., RD-12173) were administered via IVT injection at 0.03 mg. The rats were sacrificed on 1-hour, day-1, -3, -7, -14 and -28 following treatment and the concentrations of RD-16447 and RD-12173 were quantified in retina and vitreous humor via stem-loop RT-qPCR using a gene specific primer set of (R1C-0M4-AS-SL-RT, R1C-0M4-AS-SL-F4 and SL-RT-qPCR-Uni-R1, see Table 13) . Mean values of oligonucleotide concentrations of each group are shown (mean ± SEM of 3 animals per group) .
FIG. 21 shows the in vitro knockdown activity of DEC-siRNA on SOD1 mRNA expression in T98G cells. The indicated DEC-siRNA (i.e., RD-17138) were transfected into T98G cell at 0.1 nM and 1 nM for 24 hours. RD-11566 was transfected and served as a non-specific duplex control. Mock treatments were transfected in absence of oligonucleotide. SOD1 mRNA levels were quantified via RT-qPCR using a gene specific primer set following RNA isolation and RT reactions. B2M was amplified as an internal reference used to normalize expression data. Shown are the mean values of remaining SOD1 mRNA in the cells relative to Mock treatment after normalizing to B2M (mean ± SEM of four replicated wells) .
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The newly developed oligonucleotide delivery agent enables more efficient delivery of desired amount or higher level of the oligonucleotides, as compared to the oligonucleotide delivery technologies of the prior art, at the above indicated target tissues, and thus may improve bioactive and pharmacological properties (e.g., biodistribution, bioavailability, pharmacokinetics, activity, potency, etc. ) . In some embodiments, the improvement of bioactive properties may cause improved cell uptake, higher potency, and longer duration/half-life. In some embodiments, the improvement of pharmacological properties may also lead to lower toxicity, lower dose, less frequent administrations, and less undesired immune responses. In some embodiments, the present oligonucleotide delivery agent involves a simpler synthesis process and thus has better processibility in manufacturing. In some embodiments, the present oligonucleotide delivery agent possesses inherent pharmacological properties of a free benzimidazole or a benzimidazole derivative which targets proton pump (as reversible and  irreversible proton pump inhibitors, PPI) , dopamine receptor (DRD) , angiotensin II type 1 receptor (AT1) , histamine receptor (HRH) , dual specific mitogen activated protein kinase (MEK) and/or cyclin dependent kinase (CDK) , etc. In some embodiments, the inherent pharmacological properties enable the present oligonucleotide delivery agent to be potentially used in drugs including peptic ulcer, hypertension, schizophrenia, parasitic infection, bacterial infection, virus infection, and cancer, etc.
In some embodiments, the newly developed oligonucleotide delivery agent disclosed herein can facilitate delivery of an effective amount of oligonucleotides to achieve and function at target tissues or cells, e.g., in central nervous system (e.g., brain and spinal cord) , liver, lung, kidney, intestine, pancreas, cholecyst, heart, lymph nodes, spleen, stomach, bladder, muscle and bone. In some embodiments, the oligonucleotide delivery agent’s modulating activities, e.g., up-regulating or down-regulating, the expression of a target gene in the cells can be improved as compared to the technologies of the prior art. Therefore, in light of the findings provided herein, those skilled in the art will appreciate that use of the oligonucleotide delivery agent as described herein may facilitate improved bio-distribution of therapeutic oligonucleotides in various target (s) or cells as stated above for preventing, treating and/or delaying on-set of various diseases, disorders and/or conditions.
Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which the invention belongs. Also, all publications, patent applications, patents, and other references mentioned herein are incorporated by reference.
As disclosed herein, singular forms, such as “a” and “this” , include plural objects, unless otherwise specified clearly in the context.
As disclosed herein, the terms “approximately, ” “about, ” “substantially” , and similar terms are intended to have a broad meaning in harmony with the common and accepted usage by those of ordinary skill in the art to which the subject matter of this disclosure pertains.
As disclosed herein, “and/or” means “and, or as an alternative” . If any numerical ranges are provided, the ranges include any numerical values in the range (including the upper and lower values) , and also any sub-ranges in the range. For example, the range from 1 to 3 may include any of the numerical values 1, 2 and 3, as well as sub-ranges from 1 to 2 and from 2 to 3.
The terms “oligonucleotide” , “polynucleotide” or “oligo” can be used interchangeably, and refer to polymers of nucleotides, and includes, but is not limited to, single-stranded, double-stranded or partial double-stranded nucleic acid molecules of DNA, RNA, or DNA/RNA hybrid, oligonucleotide strands containing regularly and irregularly alternating deoxyribosyl portions and ribosyl portions, as well as modified and naturally or unnaturally existing frameworks for such oligonucleotides. In an embodiment, the oligonucleotide can be selected from the group consisting of antisense oligonucleotide (ASO) , antisense RNA, short interfering RNA (siRNA) , micro-RNA (miRNA) , small activating RNA (saRNA) , dsRNA, and small guide RNA (sgRNA) .
The terms “oligonucleotide strand” , “strand” and “oligonucleotide sequence” as used herein can be used interchangeably and refer to a generic term for short nucleotide sequences having less than 50 bases, such as less than 45, less than 40, less than 35 bases, such as 2-50 bases, or 5-45 bases, or 10-40 bases, or 15-35 bases, or 20-30 bases (including nucleotides in deoxyribonucleic acid (DNA) or ribonucleic acid (RNA) ) . In some non-limiting examples, the length of a strand can be any length from 5 to 50 nucleotides, 10 to 40 nucleotides, 15 to 35 nucleotides, 18 to 30 nucleotides or 20 to 25 nucleotides.
The term “target gene” as used herein can refer to nucleic acid sequences, transgenes, viral or bacterial sequences, chromosomes or extrachromosomal genes that are naturally present in organisms, and/or can be transiently or stably transfected or incorporated into cells and/or chromatins thereof. The target gene can be a protein-coding gene or a non-protein-coding gene such as a microRNA gene and a long non-coding RNA gene.
In embodiments of the present application, one target gene is SOD1. By definition, “target sequence” is a sequence fragment to which the sense strand or antisense oligonucleotide of the siRNA or saRNA is homologous or complementary. For example, in certain embodiments, a SOD1 siRNA is homologous or complementary to a target select sequence within human SOD1 transcript.
As used herein, the term “guide strand” or “G strand” refers to a strand in a small RNA duplex that assembles with the Argonaute (AGO) protein. The other strand partially or completely complementary to the guide strand is called “passenger strand” or “P strand” . Without being limited to any specific theory, the strand carrying the complementary sequence to the target is the antisense strand and, if properly designed, will be preferentially chosen to  be the guide strand. In this case, the passenger strand is the sense strand. However, one cannot state that a strand is the guide strand until the 5’ end of the strand has been captured within the MID domain of AGO2. Accordingly, the sense strand can be selected as the guide strand, resultant in an antisense passenger strand.
As used herein, the term “LNA” refers to a locked nucleic acid in which the 2’ -oxygen and 4’ -carbon atoms are joined by an extra bridge. As used herein, the term “BNA” refers to a 2′-O and 4′-aminoethylene bridged nucleic acid that can contain a five-membered or six-membered bridged structure with an N-O linkage. As used herein, the term “PNA” refers to a nucleic acid mimic with a pseudopeptide backbone composed of N- (2-aminoethyl) glycine units with the nucleobases attached to the glycine nitrogen via carbonyl methylene linkers.
The terms “antisense oligonucleotide” or “ASO” , as used herein, refer to a single strand oligonucleotide or the like having, comprising, or consisting of a sequence of bases or the like which allow the oligonucleotide or the like to hybridize to a target molecule, such as another nucleic acid, modified nucleic acid or nucleic acid analog, e.g., by base-pairing, such as Watson-Crick base-pairing or non-Watson-Crick base pairing. In some embodiments, an antisense oligonucleotide is fully complementary or nearly fully complementary to the target molecule. In some embodiments, any oligonucleotide of any type described herein or known in the art can be used as an antisense oligonucleotide. In various embodiments, an antisense oligonucleotide can perform or participate in any of various biological functions, including RNA interference, RNase H-mediated cleavage, exon skipping, the prevention of exon skipping, the enhancement or blocking of an agent (e.g., a protein, RNA, protein-RNA complex, or any other molecule) from binding to another nucleic acid, or any other biological function performed by an antisense oligonucleotide, as described herein or known in the art.
As used herein, the terms “small interfering RNA” , “siRNA” and “inhibitory RNA (iRNA) ” can be used interchangeably and refer to a ribonucleic acid molecule that can down-regulate, knockdown, or silence target gene expression. It can be a double-stranded nucleic acid molecule. It interferes with the expression of specific genes with complementary nucleotide sequences by degrading mRNA after transcription, preventing translation. siRNA binds to target mRNA mainly in the cytoplasm to down-regulate gene expression post-transcriptionally via the RNA interference (RNAi) mechanism. siRNAs may be designed to target a gene’s mRNA sequence to silence its expression via the RNAi mechanism, such as  SOD1, for maximizing treatment outcomes, e.g., for ALS patients. siRNAs are molecules having endogenous RNA bases or chemically modified nucleotides. The modifications do not abolish cellular activity, but rather impart increased stability and/or increased cellular potency. Examples of chemical modifications include phosphorothioate groups, 2′-deoxynucleotide, 2′-OCH3-containing ribonucleotides, 2′-F-ribonucleotides, 2′-methoxyethyl ribonucleotides, combinations thereof and the like. The siRNA can have varying lengths (e.g., 10-200 bps) and structures (e.g., hairpins, single/double/partial-double strands, bulges, nicks/gaps, mismatches) and are processed in cells to provide active gene silencing. A double-stranded siRNA can have the same number of nucleotides on each strand (blunt ends) or asymmetric ends (overhangs) . An overhang of 1-2 nucleotides, for example, can be present on the sense and/or the antisense strand, as well as present on the 5′-and/or the 3′-ends of a given strand. The length of the siRNA molecule is typically about 10 to about 60, about 10 to about 50, about 15 to about 30, about 17 to about 29, about 18 to about 28, about 19 to about 27, about 20 to about 26, about 21 to about 25, and about 22 to about 24 base pairs, and typically about 15, about 16, about 17, about 18, about 19, about 20, about 21, about 23, about 25, about 30, about 40, or about 50 base pairs. In addition, the terms “small interfering RNA” , “silencing RNA” and “siRNA” also contain nucleic acids other than the ribonucleotide, including, but not limited to, modified nucleotides or analogues.
As used herein, the terms “small activating RNA” , “saRNA” and “small activating ribonucleic acid” can be used interchangeably and refer to a ribonucleic acid molecule that can up-regulate target gene expression. It can be a double-stranded nucleic acid molecule composed of a first nucleic acid strand containing a ribonucleotide sequence with sequence homology with the non-coding nucleic acid sequence (such as a promoter and an enhancer) of a target gene and a second nucleic acid strand containing a nucleotide sequence complementary with the first strand. The saRNA can also be comprised of a synthesized or vector-expressed single-stranded RNA molecule that prone to form a hairpin structure by two complementary regions within the molecule, wherein the first region contains a ribonucleotide sequence having sequence homology with the target sequence of a promoter of a gene, and a ribonucleotide sequence contained in the second region is complementary with the first region. The length of the duplex region of the saRNA molecule is typically about 10 to about 60, about 10 to about 50, about 10 to about 40, about 12 to about 30, about 14 to about 28, about  16 to about 26, about 18 to about 24, and about 20 to about 22 base pairs, and typically about 10, about 13, about 15, about 17, about 18, about 19, about 20, about 21, about 22, about 25, about 30, about 40, about 50, or about 60 base pairs. In addition, the terms “small activating RNA” , “saRNA” and “small activating ribonucleic acid” also contain nucleic acids other than the ribonucleotide, including, but not limited to, modified nucleotides or analogues.
As used herein, “ODV” and “oligonucleotide delivery vehicle” are used interchangeably, which refer to an oligonucleotide molecule comprising a duplex or double-stranded RNA (e.g., siRNA or saRNA) and an accessory oligonucleotide (ACO) which is covalently linked to the duplex RNA via a linker.
As used herein, the terms “delivery enhancing compound” and “DEC” are used interchangeably and refer to the compound of the present disclosure.
As used herein, the terms “DEC-conjugated oligonucleotide” and “DCO” can be used interchangeably and refer to a combination in which at least one moiety derived from the DEC has been attached, e.g. covalently, to at least one oligonucleotide. Additionally, the DCO may further comprising at least one targeting moiety which helps the oligonucleotide in targeting to, accumulating in, or accessing to target site in a cell.
The phrases “administration” , “parenteral administration” , “administrated” and “administered parenterally” as used herein have their art-understood meaning referring to ordinary enteral administration, topical administration, and especially, injection administration, and may include, without limitation, intravenous, intramuscular, intraarterial, intrathecal, intracapsular, intraorbital, intracardiac, intradermal, intraperitoneal, transtracheal, subcutaneous, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subarachnoid, intraspinal, and intrasternal injection and infusion.
As used herein, the term “pharmaceutical composition” refers to an active agent, optionally formulated together with one or more pharmaceutically acceptable carriers and other additives. In some embodiments, active agent is present in unit dose amount appropriate for administration in a therapeutic regimen that shows a statistically significant probability of achieving a predetermined therapeutic effect when administered to a relevant population. In some embodiments, pharmaceutical compositions may be specially formulated for administration in solid or liquid form, including those adapted for the following: oral administration, for example, drenches (aqueous or non-aqueous solutions or suspensions) ,  tablets, e.g., those targeted for buccal, sublingual, and systemic absorption, boluses, powders, granules, pastes for application to the tongue; parenteral administration, for example, by subcutaneous, intramuscular, intravenous or epidural injection as, for example, a sterile solution or suspension, or sustained-release formulation; topical application, for example, as a cream, ointment, or a controlled-release patch or spray applied to the skin, lungs, or oral cavity; intravaginally or intrarectally, for example, as a pessary, cream, or foam; sublingually; ocularly; transdermally; or nasally, pulmonary, and to other mucosal surfaces.
As used herein, the term “pharmaceutically acceptable carrier” means a pharmaceutically acceptable material, composition or vehicle, such as a liquid or solid filler, diluent, excipient, or solvent encapsulating material, involved in carrying or transporting the subject compound from one organ, or portion of the body, to another organ, or portion of the body. Each carrier must be “acceptable” in the sense of being compatible with the other ingredients of the formulation and not injurious to the patient. Some examples of materials which can serve as pharmaceutically-acceptable carriers include: sugars, such as lactose, glucose and sucrose; starches, such as corn starch and potato starch; cellulose, and its derivatives, such as sodium carboxymethyl cellulose, ethyl cellulose and cellulose acetate; powdered tragacanth; malt; gelatin; talc; excipients, such as cocoa butter and suppository waxes; oils, such as peanut oil, cottonseed oil, safflower oil, sesame oil, olive oil, corn oil and soybean oil; glycols, such as propylene glycol; polyols, such as glycerin, sorbitol, mannitol and polyethylene glycol; esters, such as ethyl oleate and ethyl laurate; agar; buffering agents, such as magnesium hydroxide and aluminum hydroxide; alginic acid; pyrogen-free water; isotonic saline; Ringer′s solution; ethyl alcohol; pH buffered solutions; polyesters, polycarbonates and/or polyanhydrides; and other non-toxic compatible substances employed in pharmaceutical formulations.
As used herein, the term “subject” , “test subject” and related terms, as used herein, refer to any organism to which a provided compound or composition is administered in accordance with the present invention e.g., for experimental, diagnostic, prophylactic, and/or therapeutic purposes. Typical subjects include animals (e.g., mammals such as mice, rats, rabbits, non-human primates, and humans; fishes; birds; insects; worms; etc. ) and plants. In some embodiments, a subject may be suffering from, and/or susceptible to a disease, disorder, and/or condition. In some embodiments, a subject is a human being or other mammal. In some  embodiments, a subject can be male or female. In non-limiting examples, the animal is a vertebrate such as a primate, rodent, domestic animal or game animal. In non-limiting examples, primates include chimpanzees, cynomolgus monkeys, spider monkeys, and macaques, e.g., Rhesus. Rodents include mice, rats, woodchucks, ferrets, rabbits and hamsters. In non-limiting examples, domestic and game animals include cows, horses, pigs, deer, bison, buffalo, feline species, e.g., domestic cat, canine species, e.g., dog, fox, wolf, avian species, e.g., chicken, emu, ostrich, and fish, e.g., trout, catfish and salmon. In certain embodiments of the aspects described herein, the subject is a mammal, e.g., a primate, e.g., a human. In non-limiting examples, the mammal can be a human, non-human primate, mouse, rat, dog, cat, horse, or cow, but are not limited to these examples. In some embodiments, a mammal other than a human can be advantageously used as subjects that represent animal models of disorders associated with autoimmune disease or inflammation. In some embodiments, a method and composition described herein can be used to treat domesticated animals and/or pets.
A “therapeutically effective amount” of a composition is an amount sufficient to achieve a desired therapeutic effect, and therefore does not require cure or complete remission. In embodiments of the present application, therapeutic efficacy is an improvement in any of the disease indicators, and a therapeutically effective amount is sufficient to cause an improvement in a clinically significant condition/symptom in the treated individual. The phrases “therapeutically effective amount” and “effective amount” are used herein to mean an amount sufficient to reduce by at least about 15 percent, preferably by at least 50 percent, more preferably by at least 90 percent, or to increase at least about 50 percent, at least about 100 percent, at least about 200 percent, more preferable at least about 500 percent and can prevent a clinically significant deficit in the activity, function and response of the individual being treated. The effective amount may vary depending on such factors as the size and weight of the subject, the type of illness, or the particular agents of the application. For example, the choice of the agent of the application could affect what constitutes an “effective amount” . One of ordinary skill in the art would be able to study the factors contained herein and make the determination regarding the effective amount of the agents of the application without undue experimentation.
The regime of administration may affect what constitutes an effective amount. The  agent of the application can be administered to the subject either prior to or after the disease diagnosis or condition. Further, several divided dosages, as well as staggered dosages, can be administered daily or sequentially, or the dose can be continuously infused, or can be a bolus injection. Further, the dosages of the agent (s) of the application could be proportionally increased or decreased as indicated by the exigencies of the therapeutic or prophylactic situation.
The terms “treat, ” “treated, ” “treating” , or “treatment” as used herein have the meanings commonly understood in the medical arts, and therefore do not require cure or complete remission, and include any beneficial or desired clinical results. Non-limiting examples of such beneficial or desired clinical results are prolonging survival as compared to expected survival without treatment, reduced symptoms including one or more of the followings: weakness and atrophy of proximal skeletal muscles, inability to sit or walk independently, difficulties in swallowing, breathing, etc.
As used herein, “preventing” or “delaying” a disease refers to inhibiting the full development of a disease.
The present disclosure is based on an unexpected discovery that a compound having a specific structure comprising a nitrogen-containing five membered heterocyclic ring moiety may be directly or indirectly bonded to at least one oligonucleotide so as to aid the delivery of the oligonucleotide to a subject and thus achieving improved modulation of a target gene both in vitro and/or in vivo. In an exemplary embodiment, the compound as disclosed herein may remarkably enhance oligonucleotide delivery efficiency to liver, combine endosomal escape and nuclear translocation design, without the need of a delivery vector or formulation.
In exemplary embodiments, the nitrogen-containing five membered heterocyclic ring moiety may have a core structure shown by any of the following formulae, with all the chemical bonds, atoms and substituents attached to the ring atoms of the core structure omitted for the sake of simplicity:

The above indicated core structures comprise different ring atoms, and the fused ring core structures may be either electrically neutral or locally charged in the form of e.g., sulphonium or quaternary ammonium. It can be seen that one or more unsaturated double bonds may shift in the fused ring core structure due to the delocalized π-electronic conjugation effect, and all the substituents, including the presence/absence of any substituents, may vary depending on the categories and valences of each ring atom to which the substituents are attached. For example, an additional substituent may be attached to a sulphonium or quaternary ammonium ion which is present as a ring atom of the fused ring core structure. All of these variations are within the concept of the present disclosure.
In an embodiment, the compound of the present disclosure comprises structure of Formula BI, wherein X′ is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; each of F′, G′, H′ and I′ is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of the asterisks refers to a site optionally linked to at least one substituent or an oligonucleotide directly or indirectly.
In an embodiment, the compound of the present disclosure has a structure represented by Formula AI or Formula AII:
wherein each independently represents a covalent single or double bond; X, on each occurrence, is an atom selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; each of F, G, H and I is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur.
In an embodiment, m is an integer of 1, 2 or 3, n is an integer of 1, 2 or 3, and m+n=4. In some exemplary embodiments, m=1 and n=3; or m=2 and n=2; or m=3 and n=1.
In an embodiment, C, on each occurrence, is either absent or selected from the group consisting of hydrogen; halogen atom, such as fluorine, chlorine, bromine or iodine; hydroxyl; (C1-C25) alkyl, such as - (C2-C22) alkyl, or - (C2-C19) alkyl, or - (C3-C18) alkyl, or - (C4-C16) alkyl, or - (C6-C12) alkyl, or - (C8-C10) alkyl; (C1-C20) alkoxy, such as - (C2-C19) alkoxy, or - (C3-C18) alkoxy, or - (C4-C16) alkoxy, or - (C6-C12) alkoxy; halogenated (C1-C20) alkyl, such as halogenated (C2-C19) alkyl, or halogenated (C3-C18) alkyl, or halogenated (C4-C16) alkyl, or halogenated (C6-C12) alkyl, or halogenated (C8-C10) alkyl; and halogenated (C1-C20) alkoxy, such as halogenated (C1-C20) alkoxy, such as halogenated (C2-C19) alkoxy, or halogenated (C3-C18) alkoxy, or halogenated (C4-C16) alkoxy, or halogenated (C6-C12) alkoxy, or halogenated (C8-C10) alkoxy; wherein “halogenated” can be fluorinated, chlorinated, brominated, iodinated, or combinations thereof. In an embodiment, in the structure represented by Formula I, each B is attached to any one of F, G, H and I, while C is attached to the rest of F, G, H and I. In an embodiment, B is  attached to H and three C’s are separately attached to each of F, G and I. In another embodiment, B is attached to G and three C’s are separately attached to each of F, H and I. In another embodiment, B is attached to F and three C’s are separately attached to each of G, H and I. In another embodiment, B is attached to I and three C’s are separately attached to each of F, G and H. In another embodiment, two B’s are separately attached to G and H, and two C’s are separately attached to each of F and I.
In an embodiment, B, on each occurrence, is independently selected from the group consisting of hydroxyl; -C (O) OH; -P (O) 2-OH; -P (O) -OH; -P (O) (S) -OH; -CN; - (C1-C22) alkyl, such as - (C2-C20) alkyl, or - (C3-C16) alkyl, or - (C6-C12) alkyl; -O- (C1-C22) alkyl, such as -O- (C2-C20) alkyl, or -O- (C3-C16) alkyl, or -O- (C6-C12) alkyl; - (C1-C22) alkenyl, such as - (C2-C20) alkenyl, or - (C3-C16) alkenyl, or - (C6-C12) alkenyl; - (C1-C22) alkylene-OH, such as - (C2-C20) alkylene-OH, or - (C3-C16) alkylene-OH, or - (C6-C12) alkylene-OH; - (C3-C22) cycloalkylene-OH, such as - (C5-C16) cycloalkylene-OH, or - (C6-C12) cycloalkylene-OH, or - (C6-C10) cycloalkylene-OH; - (C6-C22) arylene-OH; - (C6-C22) heteroarylene-OH; - (C1-C22) alkylene-C (O) OH, such as - (C2-C18) alkylene-C (O) OH, or - (C3-C16) alkylene-C (O) OH, or - (C6-C12) alkylene-C (O) OH; - (C3-C22) cycloalkylene-C (O) OH; - (C6-C22) arylene-C (O) OH; - (C5-C22) heteroarylene-C (O) OH; -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) NH2, such as -O-C (O) - (C2-C18) alkylene-C (O) NH2, or -O-C (O) - (C3-C16) alkylene-C (O) NH2, or -O-C (O) - (C6-C12) alkylene-C (O) NH2; - (C1-C22) alkylene-O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) NH2, such as - (C2-C18) alkylene-O-C (O) - (C2-C18) alkylene-C (O) NH2, or - (C3-C16) alkylene-O-C (O) - (C3-C16) alkylene-C (O) NH2, or - (C6-C12) alkylene-O-C (O) - (C6-C12) alkylene-C (O) NH2; -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) OH; - (C1-C22) alkylene-O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) OH; -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) NH2; - (C1-C22) alkylene-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) NH2; -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-OH; -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) OH; - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) OH; - (C1-C30) alkylene-P (O) 2-OH; - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, such as - (C2-C18) alkylene-O-P (-N (C2-C18 alkyl) 2) -O- (C2-C18) alkylene-CN, or - (C3-C16) alkylene-O-P (-N (C3-C16 alkyl) 2) -O- (C3-C16) alkylene-CN, or - (C6-C12) alkylene-O-P (-N (C6-C12 alkyl) 2) -O- (C6-C12) alkylene-CN; - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH; - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2; - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH; -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN; -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1- C22) alkylene-OH; -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH; -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2; - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN; -(C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH; - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH; - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2; - (C1-C22) alkylene -P (O) -OH; - (C1-C22) alkylene-P (O) (S) -OH and - (C1-C22) alkylene-CN. Each of the (C1-C22) alkyl or (C1-C22) alkylene included in B can be an alkyl or alkylene comprising from 1 to 22 carbon atoms, or from 2 to 20 carbon atoms, or from 3 to 16 carbon atoms, or from 4 to 12 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms, or from 8 to 10 carbon atoms.
In an embodiment, each of A1, A2 and A3 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, -O-R1, -SH, - (C1-C25) alkyl, halogenated - (C1-C25) alkyl, - (C2-C22) alkenyl, - (C1-C22) alkylene-OH, - (C3-C22) cycloalkyl, - (C3-C22) cycloalkenyl, - (C1-C22) alkylene- (C3-C22) cycloalkyl, - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-R1, - (C1-C22) alkylene-COOR1, -C (O) O-R1, -O- (C1-C22) alkyl, -S- (C1-C22) alkyl, -C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkyl, -O-C (O) - (C1-C22) alkyl, -O-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-O-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NR2-R1, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-OH, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, -adamantyl, - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -O-adamantly, -C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -halogenated (C1-C22) alkyl, -CH (NH-CO- (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-C [- (C1-C22) alkylene-O- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl] 3, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-C [- (C1-C22) alkylene-O- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1] 3, -CH (NH-CO-halogenated (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -halogenated (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene- (C1-C6 alkylene oxide) (1-20) -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -C (O) NH- (C1-C22) alkyl, -C (O) NH-R1, -C (O) NR2-R1, -C (O) NH- (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) NH- (C1-C22) alkylene-COOH, -NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, -NH- C (O) -R1, -NR2-C (O) -R1, -O-P (O) 2-O-R1, -OP (O) (S) -O-R1, -O-P (O) -O-R1, -NH-R1, -NR2-R1, - (C1-C22) alkylene-NH-R1, - (C1-C22) alkylene-NR2-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) O-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene -P (O) -OH, - (C1-C22) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C22) alkylene-CN, substituted or unsubstituted pyrrole, substituted or unsubstituted pyrroline, substituted or unsubstituted pyrrolidine, substituted or unsubstituted pyrazole, substituted or unsubstituted pyrazoline, substituted or unsubstituted pyrazolidine, substituted or unsubstituted imidazole, substituted or unsubstituted oxazole, substituted or unsubstituted thiazole, substituted or unsubstituted benzopyrrole, substituted or unsubstituted benzopyrroline, substituted or unsubstituted benzopyrrolidine, substituted or unsubstituted benzopyrazole, substituted or unsubstituted benzopyrazoline, substituted or unsubstituted benzopyrazolidine, substituted or unsubstituted benzoimidazole, substituted or unsubstituted benzooxazole, substituted or unsubstituted benzothiazole, wherein when the above indicated rings are substituted, the substituents may include hydroxyl, halogen atom (such as fluorine, chlorine, bromine or iodine) , (C1-C16) alkyl, (C1-C12) alkoxy; and a substituent represented by Formula III,
In an embodiment, Y is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of P, Q, S and T is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and the asterisk refers to the site wherein the substituent represented by Formula III is linked with the structure represented by Formula I or Formula II; 
In an embodiment, each of R3, R4 and R5 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, -O-R1, -SH, - (C1-C25) alkyl, halogenated - (C1-C25) alkyl, - (C2-C22) alkenyl, - (C1-C22) alkylene-OH, - (C3-C22) cycloalkyl, - (C3-C22) cycloalkenyl, - (C1-C22) alkylene- (C3-C22) cycloalkyl, - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-R1, - (C1-C22) alkylene-COOR1, -C (O) O-R1, -O- (C1-C22) alkyl, -S- (C1-C22) alkyl, -C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkyl, -O-C (O) - (C1-C22) alkyl, -O-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-O-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NR2-R1, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-OH, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, -adamantyl, - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -O-adamantly, -C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -halogenated (C1-C22) alkyl, -CH (NH-CO- (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-C [- (C1-C22) alkylene-O- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl] 3, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-C [- (C1-C22) alkylene-O- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1] 3, -CH (NH-CO-halogenated (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -halogenated (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene- (C1-C6 alkylene oxide) (1-20) -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -C (O) NH- (C1-C22) alkyl, -C (O) NH-R1, -C (O) NR2-R1, -C (O) NH- (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) NH- (C1-C22) alkylene-COOH, -NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, -NH-C (O) -R1, -NR2-C (O) -R1, -O-P (O) 2-O-R1, -OP (O) (S) -O-R1, -O-P (O) -O-R1, -NH-R1, -NR2-R1, - (C1- C22) alkylene-NH-R1, - (C1-C22) alkylene-NR2-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) O-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene -P (O) -OH, - (C1-C22) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C22) alkylene-CN, substituted or unsubstituted pyrrole, substituted or unsubstituted pyrroline, substituted or unsubstituted pyrrolidine, substituted or unsubstituted pyrazole, substituted or unsubstituted pyrazoline, substituted or unsubstituted pyrazolidine, substituted or unsubstituted imidazole, substituted or unsubstituted oxazole, substituted or unsubstituted thiazole, substituted or unsubstituted benzopyrrole, substituted or unsubstituted benzopyrroline, substituted or unsubstituted benzopyrrolidine, substituted or unsubstituted benzopyrazole, substituted or unsubstituted benzopyrazoline, substituted or unsubstituted benzopyrazolidine, substituted or unsubstituted benzoimidazole, substituted or unsubstituted benzooxazole, and substituted or unsubstituted benzothiazole, wherein when the above indicated rings are substituted, the substituents may include hydroxyl, halogen atom (such as fluorine, chlorine, bromine or iodine) , (C1-C16) alkyl, (C1-C12) alkoxy.
In an embodiment, R7, on each occurrence, is attached to any one of P, Q, S and T, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl,  (C1-C20) alkyl, (C1-C20) alkoxy, halogenated (C1-C20) alkyl and halogenated (C1-C20) alkoxy.
In an embodiment, M is an integer of 0, 1, 2 or 3.
In an embodiment, R6 is attached to any one of P, Q, S and T, and is selected from the group consisting of direct bond, -O-, -C (O) O-, -O-C (O) -, -P (O) 2-O-, -O-P (O) 2-O-, -P (O) (S) -O-, -O-P (O) (S) -O-, -O-P (O) -O-, - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-O-, -O- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-C (O) -, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-O-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-O-, -N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) - (C1-C22) alkylene-, -N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) - (C1-C22) alkylene-O-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, -N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) - (C1-C22) alkylene-N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) - (C1-C22) alkylene-, -N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) - (C1-C22) alkylene-N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) -, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene -P (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-O-P (O) 2-O-, - (C3-C22) cycloalkylene-, - (C3-C22) cycloalkylene-O-, -O- (C3-C22) cycloalkylene-, - (C6-C22) arylene-, - (C6-C22) arylene-O-, -O- (C6-C22) arylene-, - (C6-C22) arylene-NH-, -NH- (C6-C22) arylene-, -C (O) - (C6-C22) arylene-, - (C6-C22) arylene-C (O) -, -C (O) -O- (C6-C22) arylene-, - (C6-C22) arylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C6-C22) arylene-and -C (O) -NH- (C6-C22) arylene-C (O) -O-.
In an embodiment, R1, on each occurrence, is independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, - (C1-C22) alkyl, - (C3-C22) cycloalkyl, - (C6-C22) aryl, - (C1-C22) alkoxy, - (C3-C22) cycloalkoxy, - (C6-C22) aryloxy, -C (O) - (C1-C22) alkyl, -OC (O) (C1-C22) alkyl, -C (O) -O- (C1-C22) alkyl, -C (O) - (C3-C22) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C22) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C22) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C22) aryloxy, -OC (O) - (C6-C22) aryloxy, -C (O) -O- (C6- C22) aryloxy, -C (O) -phosphate ester group, phosphodiester group, phosphoramidite group, saturated fatty acid group, unsaturated fatty acid group, glucosyl, acetamide glucosyl, acetylglucosamine, lipid, PEG, steroid, lipophile, carbohydrate, cholesterol, adamantane, amino acid, peptide, chloroquine and alkaloid.
In an embodiment, R2, on each occurrence, is independently selected from the group consisting of a halogen atom, a (C1-C12) alkyl, a (C1-C12) alkoxy, a (C1-C12) alkoxycarbonyl, a (C6-C16) aryl or a (C6-C16) aryloxycarbonyl.
In an embodiment, one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group, nitrile group and phosphoric acid group contained in A1, A2, A3, B, C, R1, R2, R3, R4, R5 and R7 can be protected with a terminal protective group RP selected from the group consisting of (C1-C22) alkyl, (C1-C22) alkoxy, (C1-C22) alkylcarbonyl, (C1-C22) alkoxycarbonyl, (C6-C22) aryl, (C6-C22) aryloxy, (C6-C22) arylcarbonyl, (C6-C22) aryloxycarbonyl, tri ( (C1-C22) alkyl) silyl and tri ( (C1-C22) alkoxy) silyl, wherein the (C1-C22) alkyl contained in the protection group Rp can be an alkyl comprising from 1 to 22 carbon atoms, such as from 2 to 20 carbon atoms, or from 3 to 18 carbon atoms, or from 4 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms; the (C1-C22) alkoxy contained in Rp can be an alkoxy comprising from 1 to 22 carbon atoms, such as from 2 to 20 carbon atoms, or from 3 to 18 carbon atoms, or from 4 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms; the (C6-C22) aryl contained in Rp can be an aryl comprising from 6 to 22 carbon atoms, such as from 6 to 20 carbon atoms, or from 6 to 18 carbon atoms, or from 6 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms, or from 8-10 atoms; and the (C6-C22) aryloxy contained in Rp can be an aryloxy comprising from 6 to 22 carbon atoms, such as from 6 to 20 carbon atoms, or from 6 to 18 carbon atoms, or from 6 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms, or from 8-10 atoms.
In an embodiment, A1, A2 and A3 are not simultaneously hydrogen and R3, R4 and R5 are not simultaneously hydrogen. In an exemplary embodiment, X is carbon, and all of A1, A2 and A3 are present. In another embodiment, X is nitrogen, both A1 and A2 are present and A3 is absent. In another embodiment, X is nitrogen with positive charge (i.e. quaternary ammonium) , and all of A1, A2 and A3 are present. In another embodiment, X is sulfur or oxygen, both A1 and A3 are absent and A2 is present. In another embodiment, X is sulfur with positive charge (i.e. sulfonium) , both A2 and A3 are present and A1 is absent.
In an embodiment, each of the (C1-C22) alkyl or (C1-C22) alkylene included in A1, A2, A3,  R1, R2, R3, R4, R5, R6 and R7 can be an alkyl or alkylene comprising from 1 to 22 carbon atoms, or from 2 to 20 carbon atoms, or from 3 to 16 carbon atoms, or from 4 to 12 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms, or from 8 to 10 carbon atoms.
In an embodiment, one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group, nitrile group and phosphoric acid group contained in A1, A2, A3, B, C, R1, R2, R3, R4, R5 and R7 can be linked with a support material selected from the group consisting of silica, silica gel, glass, ceramic, polymer, cellulose, and combinations thereof. In some embodiments, the solid material is in the form of a bead. The bead may be made of any material including, without limitation, magnetic bead, paramagnetic bead, silica bead, an agarose bead, etc.
In another embodiment, the compound of the present disclosure may have a structure represented by any of Formula AIV to Formula AXIII,
wherein A1, A2, A3, B, C, F, G, H, I, m and n are as defined above.
In an embodiment, the compound of the present disclosure has a structure represented by Formula BII
wherein X′ is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of F′, G′, H′ and I′ is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur.
In another embodiment, each of A1′, A2′ and A3′ is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -R1′, -O-R1′, -S-R1′, -C (O) -R1′, -C (O) O-R1′, -O-C (O) -R1′, -C (O) NH-R1′, -C (O) NR2′-R1′, -NH-C (O) -R1′, -NR2′-C (O) -R1′, -O-P (O) 2-O-R1′, -OP (O) (S) -O-R1′, -O-P (O) -O-R1′, -NH-R1′, -NR2′-R1′, - (CH2) r′-NH-R1′, - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NH-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) O-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-C (O) -R1′, - (CH2) r′-C (O) -R1′; - (CH2) r′-C (O) O-R1′; - (CH2) r′-O-C (O) -R1′, - (CH2) r′-R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-NR2′-C (O) - (CH2) s′-R1′, -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′) (-C (O) -NH- (CH2) q′-R3′) , -N (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , or A1′ and A2′ can be linked together so that A1′, A2′, the nitrogen atom linked with A1′ and the carbon atom linked with A2′ form a unsubstituted or substituted heterocyclic ring. Each of the (C1-C22) alkylene included in A1′, A2′ and A3′ can be (C2-C20) alkylene, (C3-C16) alkylene, (C4-C14) alkylene, (C6-C12) alkylene, or (C8-C10) alkylene. Each of R1′ and R3′ is independently selected from the group consisting of hydrogen; hydroxyl;  - (C1-C30) alkyl, such as - (C2-C25) alkyl, or - (C2-C22) alkyl, or - (C3-C18) alkyl, or - (C4-C16) alkyl, or - (C6-C12) alkyl, or - (C8-C10) alkyl; - (C3-C50) cycloalkyl, such as - (C4-C40) cycloalkyl, or - (C5-C30) cycloalkyl, or - (C6-C20) cycloalkyl, or - (C6-C16) cycloalkyl; - (C6-C50) aryl, such as - (C6-C40) aryl, or - (C6-C30) aryl, or - (C6-C25) aryl, or - (C6-C22) aryl, or - (C6-C16) aryl, or - (C6-C12) aryl; - (C1-C30) alkoxy, such as - (C2-C22) alkoxy, or - (C3-C20) alkoxy, or - (C4-C16) alkoxy, or - (C6-C12) alkoxy; - (C3-C50) cycloalkoxy, such as - (C4-C40) cycloalkoxy, or - (C5-C30) cycloalkoxy, or - (C6-C20) cycloalkoxy, or - (C6-C16) cycloalkoxy; - (C6-C50) aryloxy, such as - (C6-C40) aryloxy, or - (C6-C30) aryloxy, or - (C6-C25) aryloxy, or - (C6-C22) aryloxy, or - (C6-C16) aryloxy, or - (C6-C12) aryloxy; -C (O) - (C1-C30) alkyl, such as -C (O) - (C2-C22) alkyl, or -C (O) - (C3-C18) alkyl, or -C (O) - (C4-C16) alkyl, or -C (O) - (C6-C12) alkyl, or -C (O) - (C8-C10) alkyl; -OC (O) (C1-C30) alkyl, such as -OC (O) (C2-C22) alkyl, or -OC (O) (C3-C18) alkyl, or -OC (O) (C4-C16) alkyl, or -OC (O) (C6-C12) alkyl, or -OC (O) (C8-C10) alkyl; -C (O) -O- (C1-C30) alkyl, such as -C (O) -O- (C2-C22) alkyl, or -C (O) -O- (C3-C18) alkyl, or -C (O) -O- (C4-C16) alkyl, or -C (O) -O- (C6-C12) alkyl, or -C (O) -O- (C8-C10) alkyl; -C (O) - (C3-C50) cycloalkyl, such as -C (O) - (C4-C40) cycloalkyl, or -C (O) - (C5-C30) cycloalkyl, or -C (O) - (C6-C20) cycloalkyl, or -C (O) - (C6-C16) cycloalkyl; -OC (O) - (C3-C50) cycloalkyl, such as -OC (O) - (C4-C40) cycloalkyl, or -OC (O) - (C5-C30) cycloalkyl, or -OC (O) - (C6-C20) cycloalkyl, or -OC (O) - (C6-C16) cycloalkyl; -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkyl, such as -C (O) -O- (C4-C40) cycloalkyl, or -C (O) -O- (C5-C30) cycloalkyl, or -C (O) -O- (C6-C20) cycloalkyl, or -C (O) -O- (C6-C16) cycloalkyl; -C (O) - (C6-C50) aryloxy, such as -C (O) - (C6-C40) aryloxy, or -C (O) - (C6-C30) aryloxy, or -C (O) - (C6-C25) aryloxy, or -C (O) - (C6-C22) aryloxy, or -C (O) - (C6-C16) aryloxy, or -C (O) - (C6-C12) aryloxy; -OC (O) - (C6-C50) aryloxy, such as -OC (O) - (C6-C40) aryloxy, or -OC (O) - (C6-C30) aryloxy, or -OC (O) - (C6-C25) aryloxy, or -OC (O) - (C6-C22) aryloxy, or -OC (O) - (C6-C16) aryloxy, or -OC (O) - (C6-C12) aryloxy; -C (O) -O- (C6-C50) aryloxy, such as -C (O) -O- (C6-C40) aryloxy, or -C (O) -O- (C6-C30) aryloxy, or -C (O) -O- (C6-C25) aryloxy, or -C (O) -O- (C6-C22) aryloxy, or -C (O) -O- (C6-C16) aryloxy, or - (C6-C12) aryloxy; -C (O) -phosphate ester group, phosphodiester group, phosphoramidite group, saturated fatty acid group, unsaturated fatty acid group, glucosyl, N- acetamide glucosyl, acetyl galactosamine, lipid, PEG, steroid, lipophile, carbohydrate, cholesterol, adamantane, amino acid, peptide, ligand, nucleic acid, oligonucleotide, aptamer, small molecule, antibody, antibody fragment, chloroquine, alkaloid and the targeting moiety as stated herein.
In some embodiments, one or more of the substituents A1′, A2′ and A3′ contain at least  one targeting moiety. The term “targeting moiety” used herein refers to a part or segment of a molecule acting as a chemical signal that binds to a molecule or complex on a particular area of a cell, tissue, or organ. In general, targeting moiety modifies one or more properties of the attached oligonucleotide of the invention including but not limited to pharmacodynamic, pharmacokinetic, binding, absorption, cellular distribution, cellular uptake, charge and clearance. Targeting moieties are routinely used in the arts and are linked directly or via an optional linking moiety to a parent compound such as an oligomeric compound.
In certain embodiments, a targeting moiety is selected from one or more of a ligand, a peptide, nucleic acid, oligonucleotide, aptamer, small molecule, a polyethylene glycol, an amino acid, a cholesterol, a carbohydrate (e.g. glucose, galactosamine or N-acetyl galactosamine) , an antibody or antibody fragment, and localization signal such as a nuclear localization signal or a mitochondrial localization signal. In certain embodiments, a targeting moiety is selected from the group consisting of intercalators, reporter molecules, polyamines, polyamides, vitamin moieties, polyethylene glycols, thioethers, polyethers, thiocholesterols, cholic acid moieties, folate, lipids, fatty acids, phospholipids, biotin, phenazine, phenanthridine, anthraquinone, adamantane, acridine, fluoresceins, rhodamines, coumarins, fluorophores, luminescent proteins and dyes. When the targeting moiety is a fluorophore, any fluorophore deemed useful may be utilized. Non-limiting examples of useful fluorescent proteins include but are not limited to GFP, EBFP, Azurite, Cerulean, mCFP, , Turquoise, ECFP, mKeima-Red, TagCFP, AmCyan, mTFP, TurboGFP, TagGFP, EGFP, TagYFP, EYFP, Topaz, Venus, mCitrine, TurboYFP, mOrange, TurboRFP, tdTomato, TagRFP, dsRed2, mRFP, mCherry, mPlum mRaspberry, mScarlet, etc. Examples of luminescent proteins, include without limitation, Cypridinia luciferase, Gaussia luciferase, Renilla luciferase, Phontinus luciferase, Luciola luciferase, Pyrophorus luciferase, Phrixothrix luciferase, etc.
In certain embodiments, a targeting moiety is selected from: a cell-penetrating peptide, polyethylene glycol, an alkaloid, a tryptamine, a benzimidazole, a quinolone, an amino acid, a cholesterol, carbohydrate, and ligand.
In one embodiment, a targeting moiety is a carbohydrate. The carbohydrate can be selected from the group consisting of monosaccharides, disaccharides, trisaccharides, and polysaccharides. In some embodiments, the carbohydrate is a monosaccharide selected from the group consisting of dextrose, glucose, galactose, mannitol, D-mannose, sorbitol, and  sorbose. In another embodiment the carbohydrate is a disaccharide selected from the group consisting of lactose, maltose, sucrose, and trehalose. In one embodiment, a targeting moiety is a polysaccharide. In one embodiment, a targeting moiety is a N-acetyl galactosamine.
In another embodiment, a targeting moiety is an amino acid. In one embodiment, the amino acid is a hydrophobic amino acid. In some embodiments, the hydrophobic amino acid is selected from the group consisting of alanine, isoleucine, leucine, methionine, phenylalanine, proline, tryptophan, and valine. In yet another embodiment, the amino acid is a polar amino acid. In some embodiments, the amino acid is selected from the group consisting of arginine, histidine, lysine, cysteine, glycine, glutamine, serine, threonine, tyrosine, aspartic acid and glutamic acid.
In one embodiment, a targeting moiety is selected from the group consisting of human serum albumin, α-lactalbumin, trypsinogen, and polyalanine.
In certain embodiments, the targeting moiety comprises an active drug substance, for example, aspirin, warfarin, phenylbutazone, ibuprofen, suprofen, fen-bufen, ketoprofen, (S) - (+) -pranoprofen, carprofen, dansylsarcosine, 2, 3, 5-triiodobenzoic acid, fingolimod, flufenamic acid, folinic acid, a benzothiadiazide, chlorothiazide, a diazepine, indo-methicin, a barbiturate, a cephalosporin, a sulfa drug, an antidiabetic, an antibacterial or an antibiotic.
The targeting moieties disclosed herein can be used to increase uptake, introduce, delivery and target uptake of oligonucleotide to particular cell or tissue types, e.g., cells or tissues in central nervous system (e.g., brain and spinal cord) , liver, lung, kidney, intestine, pancreas, cholecyst, heart, lymph nodes, spleen, stomach, bladder, muscle and bone. Preferred targeting moieties include those specifically provided in the Examples.
In an embodiment, at least one of R1′ and R3′ is the targeting moiety. In an embodiment, all of the R1′s contained in the A1′, A2′ and A3′ are the targeting moiety as stated above; In another embodiment, all of the R3′ contained in the A1′, A2′ and A3′ are the targeting moiety as stated above; In an embodiment, all of the R1′ and R3′ contained in the A1′, A2′ and A3′ are the targeting moiety as stated above.
In some embodiments, one or more hydroxyl group, carboxyl group and amino group contained in each of R1′ and R3′ can be optionally protected, e.g. with a terminal protection group RP selected from the group consisting of (C1-C22) alkyl, (C1-C22) alkoxy, (C1-C22) alkylcarbonyl, (C1-C22) alkoxycarbonyl, (C6-C22) aryl, (C6-C22) aryloxy, (C6- C22) arylcarbonyl, (C6-C22) aryloxycarbonyl, tri ( (C1-C22) alkyl) silyl and tri ( (C1-C22) alkoxy) silyl, wherein the (C1-C22) alkyl contained in the protection group Rp can be an alkyl comprising from 1 to 22 carbon atoms, such as from 2 to 20 carbon atoms, or from 3 to 18 carbon atoms, or from 4 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms; the (C1-C22) alkoxy contained in Rp can be an alkoxy comprising from 1 to 22 carbon atoms, such as from 2 to 20 carbon atoms, or from 3 to 18 carbon atoms, or from 4 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms; the (C6-C22) aryl contained in Rp can be an aryl comprising from 6 to 22 carbon atoms, such as from 6 to 20 carbon atoms, or from 6 to 18 carbon atoms, or from 6 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms, or from 8-10 atoms; and the (C6-C22) aryloxy contained in Rp can be an aryloxy comprising from 6 to 22 carbon atoms, such as from 6 to 20 carbon atoms, or from 6 to 18 carbon atoms, or from 6 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms, or from 8-10 atoms.
In some embodiments, each of R2′, R4′, R5′ and R6′ is independently a halogen atom, such as fluorine, chlorine, bromine or iodine; a (C1-C12) alkyl, such as (C1-C10) alkyl, or (C2-C8) alkyl, or (C3-C6) alkyl, or (C4-C5) alkyl; a (C1-C12) alkoxy, such as (C1-C10) alkoxy, or (C2-C8) alkoxy, or (C3-C6) alkoxy, or (C4-C5) alkoxy; a (C1-C12) alkoxycarbonyl, such as (C1-C10) alkoxycarbonyl, or (C2-C8) alkoxycarbonyl, or (C3-C6) alkoxycarbonyl, or (C4-C5) alkoxycarbonyl; a (C6-C16) aryl, such as - (C6-C12) aryl, or - (C6-C10) aryl; or a (C6-C16) aryloxycarbonyl, such as (C6-C12) aryloxycarbonyl, or (C6-C10) aryloxycarbonyl, or (C6-C8) aryloxycarbonyl.
In some embodiments, each of r′, s′, p′ and q′ is an integer from 1 to 22, such as an integer from 2 to 20, or an integer from 3 to 18, an integer from 4 to 16, an integer from 6 to 12, an integer from 8 to 10.
In another embodiment, A3′ is absent when X′ is oxygen, and A1′, A2′ and A3′ are not simultaneously hydrogen. In an exemplary embodiment, X′ is carbon, and all of A1′, A2′ and A3′ are present. In another embodiment, X′ is nitrogen, both A1′ and A2′ are present and A3′ is absent. In another embodiment, X′ is nitrogen with positive charge (i.e. quaternary ammonium) , and all of A1′, A2′ and A3′ are present. In another embodiment, X′ is sulfur or oxygen, both A1′ and A3′ are absent and A2′ is present. In another embodiment, X′ is sulfur with positive charge (i.e. sulfonium) , both A2′ and A3′ are present and A1′ is absent.
In another embodiment, each C′ is attached to any one of F′, G′, H′ and I′, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen; halogen atom, such as fluorine, chlorine, bromine or iodine; hydroxyl; - (C1-C20) alkyl, such as - (C2-C19) alkyl, or - (C3-C18) alkyl, or - (C4-C16) alkyl, or - (C6-C12) alkyl, or - (C8-C10) alkyl; - (C1-C20) alkoxy, such as - (C2-C19) alkoxy, or - (C3-C18) alkoxy, or - (C4-C16) alkoxy, or - (C6-C12) alkoxy; halogenated (C1-C20) alkyl, such as halogenated (C2-C19) alkyl, or halogenated (C3-C18) alkyl, or halogenated (C4-C16) alkyl, or halogenated (C6-C12) alkyl, or halogenated (C8-C10) alkyl; and halogenated (C1-C20) alkoxy, such as halogenated (C1-C20) alkoxy, such as halogenated (C2-C19) alkoxy, or halogenated (C3-C18) alkoxy, or halogenated (C4-C16) alkoxy, or halogenated (C6-C12) alkoxy, or halogenated (C8-C10) alkoxy; wherein “halogenated” can be fluorinated, chlorinated, brominated, iodinated, or combinations thereof.
In an embodiment, m′ is an integer of 1, 2 or 3, n′ is an integer of 1, 2 or 3, and m′+n′=4. In some exemplary embodiments, m′=1 and n′=3; or m′=2 and n′=2; or m′=3 and n′=1.
In an embodiment, each B′ is attached to any one of F′, G′, H′ and I′, while C′ is attached to the rest of F′, G′, H′ and I′. In an embodiment, B′ is attached to H′ and three C′s are separately attached to each of F′, G′ and I′. In another embodiment, B′ is attached to G′ and three C′s are separately attached to each of F′, H′ and I′. In another embodiment, B′ is attached to F′ and three C′s are separately attached to each of G′, H′ and I′. In another embodiment, B′ is attached to I and three C′s are separately attached to each of F′, G′ and H′. In another embodiment, two B′s are separately attached to G′ and H′, and two C′s are separately attached to each of F′ and I′.
In another embodiment, each of B′ is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, - (C1-C30) alkoxy, -P (O) 2-OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, -C (O) -NH- [ (C1-C30) alkylene-O] r′-H (wherein r′ is an integer of 1 to 22) , -C (O) -NH- [ (C1-C30) alkylene-O] r′- (C1-C30) alkylene-C (O) -OH (wherein r′ is an integer of 1 to 22) , - (C5-C50) heteroarylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene- (C6-C50) arylene- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-OH, -C (O) -NH-  (C6-C50) arylene-OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) 2-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) 2-OH, - (C6-C50) arylene-P (O) 2-OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) 2-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene -P (O) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) -OH, - (C5-C50) -heteroarylene-P (O) -OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) (S) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) (S) -OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C30) alkylene-CN, - (C3-C50) cycloalkylene-CN, - (C6-C50) arylene-CN, - (C5-C50) heteroarylene-CN, lipid, PEG, steroid, lipophile, carbohydrate, cholesterol, adamantane, amino acid, peptide, chloroquine, alkaloid and a substituent represented by Formula BIII:
wherein Y′ is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of P′, Q′, S′ and T′ is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and the asterisk refers to the site wherein the substituent represented by Formula BIII is linked with any one of F′, G′, H′ and I′ of Formula BII.
In some embodiments, R7′ is selected from the group consisting of -O-, -C (O) O-, -O-C (O) -, -P (O) 2-O-, -O-P (O) 2-O-, -P (O) (S) -O-, -O-P (O) (S) -O-, -O-P (O) -O-, - (C1-C30) alkylene-,  - (C1-C30) alkylene-O-, -O- (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-NH-, -NH- (C1-C30) alkylene-, -C (O) - (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-C (O) -, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-O-, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-O-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) -, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) -, - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C30) alkylene -P (O) 2-O-, - (C1-C30) alkylene-O-P (O) 2-O-, - (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-O-, -O- (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-NH-, -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) - (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-O-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH-, - (C3-C50) cycloalkylene -P (O) 2-O-, - (C3-C50) cycloalkylene-O-P (O) 2-O-, - (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-O-, -O- (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-NH-, -NH- (C6-C50) arylene-, -C (O) - (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-C (O) -, -C (O) -O- (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-C (O) -O-, - C (O) -NH- (C6-C50) arylene-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-O-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH-, - (C6-C50) arylene -P (O) 2-O-, - (C6-C50) arylene-O-P (O) 2-O-, - (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-O-, -O- (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-NH-, -NH- (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) - (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -, -C (O) -O- (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-O-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH-, - (C5-C50) heteroarylene -P (O) 2-O-and - (C5-C50) heteroarylene-O-P (O) 2-O-.
In some embodiments, each of R8′ and R9′ is either absent or is a substituent independently selected from the group consisting of -H, hydroxyl, - (C1-C30) alkyl, - (C3-C50) cycloalkyl, - (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-NH2, - (C3-C50) cycloalkylene-NH2, - (C6-C50) arylene-NH2, - (C1-C30) alkoxy, - (C3-C50) cycloalkoxy, - (C6-C50) aryloxy, -C (O) - (C1-C30) alkyl, -OC (O) (C1-C30) alkyl, -C (O) -O- (C1-C30) alkyl, -C (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C50) aryloxy, -OC (O) - (C6-C50) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C50) aryloxy, -C (O) -NH- (C1-C30) alkyl, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -NH- (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-phosphoric acid, - (C3-C50) cycloalkylene-phosphoric acid, - (C6-C50) arylene-phosporic acid. In some embodiments, one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group and phosporic acid group contained in each of R8′ and R9′ are optionally protected, e.g. with the protection group RP as defined herein. In an embodiment, R8′ and R9′  can be linked together so that R8′, R9′, the carbon atom linked with R8′ and the Y′ atom linked with R9′ form an unsubstituted or substituted heterocyclic ring. In another embodiment, R9′ is absent when Y′ is oxygen.
In an embodiment, each R10′ is attached to any one of P′, Q′, S′ and T′, and is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, -P (O) 2-OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C5-C50) heteroarylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) NH2, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) 2-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) 2-OH, - (C6-C50) arylene-P (O) 2-OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) 2-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene -P (O) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) -OH, - (C5-C50) -heteroarylene-P (O) -OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) (S) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) (S) -OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C30) alkylene-CN, - (C3-C50) cycloalkylene-CN, - (C6-C50) arylene-CN, - (C5-C50) heteroarylene-CN, wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group, nitrile group and phosporic acid group contained in R10′is optionally  protected with the Rp as defined herein or linked to a support material. 
In an embodiment, the - (C1-C30) alkylene-contained in B′, R7′ R8′, R9′ and R10′ may include - (C1-C28) alkylene-, or - (C1-C26) alkylene-, or - (C1-C24) alkylene-, or - (C2-C22) alkylene-, or - (C3-C20) alkylene-, or - (C4-C18) alkylene-, or - (C5-C17) alkylene-, or - (C6-C16) alkylene-, or - (C7-C14) alkylene-, or - (C8-C12) alkylene-. In another embodiment, the - (C3-C50) cycloalkylene-contained in B′, R7′ R8′, R9′ and R10′ may include - (C3-C40) cycloalkylene-, or - (C3-C30) cycloalkylene-, or - (C3-C22) cycloalkylene-, or - (C4-C20) cycloalkylene-, or - (C5-C18) cycloalkylene-, or - (C6-C16) cycloalkylene-, or - (C7-C14) cycloalkylene-, or - (C8-C12) cycloalkylene-. In another embodiment, the - (C6-C50) arylene-contained in B′, R7′ R8′, R9′ and R10′ may include - (C6-C40) arylene-, or - (C6-C30) arylene-, or - (C6-C22) arylene-, or - (C6-C20) arylene-, or - (C6-C18) arylene-, or - (C6-C16) arylene-, or - (C6-C12) arylene-. In another embodiment, the - (C5-C50) heteroarylene-contained in B′, R7′ R8′, R9′ and R10′ may include - (C5-C40) heteroarylene-, or - (C5-C30) heteroarylene-, or - (C5-C22) heteroarylene-, or - (C5-C18) heteroarylene-, or - (C6-C16) heteroarylene-. In another embodiment, in each of the substituent R8′ and R9′, the term “- (C1-C30) alkyl” may include - (C2-C22) alkyl, or - (C3-C18) alkyl, or - (C4-C16) alkyl, or - (C6-C12) alkyl, or - (C8-C10) alkyl; the term “- (C3-C50) cycloalkyl” may include - (C4-C40) cycloalkyl, or - (C5-C30) cycloalkyl, or - (C6-C20) cycloalkyl, or - (C6-C16) cycloalkyl; the term “- (C6-C50) aryl” may include - (C6-C40) aryl, or - (C6-C30) aryl, or - (C6-C25) aryl, or - (C6-C22) aryl, or - (C6-C16) aryl, or - (C6-C12) aryl; and the term “- (C6-C50) aryloxy” may include - (C6-C40) aryloxy, or - (C6-C30) aryloxy, or - (C6-C25) aryloxy, or - (C6-C22) aryloxy, or - (C6-C16) aryloxy, or - (C6-C12) aryloxy.
In another embodiment, each R11′ is attached to any one of P′, Q′, S′ and T′, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen; hydroxyl; halogen atom, such as fluorine, chlorine, bromine or iodine; - (C1-C20) alkyl, such as - (C2-C19) alkyl, or - (C3-C18) alkyl, or - (C4-C16) alkyl, or - (C6-C12) alkyl, or - (C8-C10) alkyl; - (C1-C20) alkoxy, such as - (C2-C19) alkoxy, or - (C3-C18) alkoxy, or - (C4-C16) alkoxy, or - (C6-C12) alkoxy; (C1-C20) alkoxycarbonyl, such as (C1-C16) alkoxycarbonyl, or (C2-C12) alkoxycarbonyl, or (C3-C8) alkoxycarbonyl, or (C4-C6) alkoxycarbonyl; halogenated (C1-C20) alkyl, such as halogenated (C2-C19) alkyl, or halogenated (C3-C18) alkyl, or halogenated (C4-C16) alkyl, or halogenated (C6-C12) alkyl, or halogenated (C8-C10) alkyl; halogenated (C1-C20) alkoxy, such as halogenated (C2-C19) alkoxy, or halogenated (C3-C18) alkoxy, or halogenated (C4-C16) alkoxy, or halogenated  (C6-C12) alkoxy, or halogenated (C8-C10) alkoxy; and halogenated (C1-C20) alkoxycarbonyl, such as halogenated (C2-C19) alkoxycarbonyl, or halogenated (C3-C18) alkoxycarbonyl, or halogenated (C4-C16) alkoxycarbonyl, or halogenated (C6-C12) alkoxycarbonyl, or halogenated (C8-C10) alkoxycarbonyl; wherein “halogenated” can be fluorinated, chlorinated, brominated, iodinated, or combinations thereof.
In another embodiment, R9′ is absent when Y′ is oxygen. In an exemplary embodiment, Y′ is carbon, and both of R8′ and R9′ are present. In another embodiment, Y′ is nitrogen, R8′ is present and R9′ is absent. In another embodiment, Y′ is nitrogen with positive charge (i.e., quaternary ammonium) , both R8′ and R9′ are present. In another embodiment, Y′ is sulfur or oxygen, and R9′ is absent. In another embodiment, Y′ is sulfur with positive charge (i.e., sulfonium) , and R9′ is present.
In an embodiment, M′ is an integer of 1, 2 or 3, N′ is an integer of 1, 2 or 3, and M′+N′=4. In some exemplary embodiments, M′=1 and N′=3; or M′=2 and N′=2; or M′=3 and N′=1.
In an embodiment, each R10′ is attached to any one of P′, Q′, S′ and T′, while R11′ is attached to the rest of P′, Q′, S′ and T′. In an embodiment, R10′ is attached to S′ and three R11′ are separately attached to each of P′, Q′ and T′. In another embodiment, R10′ is attached to Q′ and three R11′ are separately attached to each of P′, S′ and T′. In another embodiment, R10′ is attached to P′ and three R11′ are separately attached to each of Q′, S′ and T′. In another embodiment, R10′ is attached to T′ and three R11′ are separately attached to each of P′, Q′ and S′. In another embodiment, two R10′ are separately attached to Q′ and S′, and two R11′ are separately attached to each of P′ and T′.
In a specific embodiment, one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group and phosphoric acid group contained in each of R8′, R9′ and R10′ are optionally protected with a terminal protection group RP selected from the group consisting of (C1-C22) alkyl, (C1-C22) alkoxy, (C1-C22) alkylcarbonyl, (C1-C22) alkoxycarbonyl, (C6-C22) aryl, (C6-C22) aryloxy, (C6-C22) arylcarbonyl, (C6-C22) aryloxycarbonyl, tri ( (C1-C22) alkyl) silyl and tri ( (C1-C22) alkoxy) silyl, wherein the (C1-C22) alkyl contained in the protection group Rp can be an alkyl comprising from 1 to 22 carbon atoms, such as from 2 to 20 carbon atoms, or from 3 to 18 carbon atoms, or from 4 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms; the (C1- C22) alkoxy contained in Rp can be an alkoxy comprising from 1 to 22 carbon atoms, such as from 2 to 20 carbon atoms, or from 3 to 18 carbon atoms, or from 4 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms; the (C6-C22) aryl contained in Rp can be an aryl comprising from 6 to 22 carbon atoms, such as from 6 to 20 carbon atoms, or from 6 to 18 carbon atoms, or from 6 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms, or from 8-10 atoms; and the (C6-C22) aryloxy contained in Rp can be an aryloxy comprising from 6 to 22 carbon atoms, such as from 6 to 20 carbon atoms, or from 6 to 18 carbon atoms, or from 6 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms, or from 8-10 atoms.
In an exemplary embodiment, the support material attached to R10′can be selected from the group consisting of silica, silica gel, glass, ceramic, polymer, cellulose, and combinations thereof. In some embodiments, the solid material is in the form of a bead. The bead may be made out of any material including, without limitation, magnetic bead, paramagnetic bead, silica bead, an agarose bead, etc.
In another embodiment, the compound of the present disclosure may have a structure represented by any of Formula BIV to Formula BXIV,

wherein A1′, A2′, A3′, B′, C′, F′, G′, H′, I′, R7′, R8′, R10′, R11′, P′, Q′, S′, T′, m′, n′, M′ and N′ are as defined herein.
In an embodiment, the RING I can be formed by linking A1′ and A2′ together and thus may consist of the nitrogen atom to which A1′ is attached, the carbon atom to which A2′ is attached, at least part of A1′ and at least part of A2′. The RING I can be a 4, 5, 6, 7, 8 or 9 member ring, in particular a ring fused to the core structure. For example, the RING I may consist of a nitrogen atom, a carbon atom from the core structure and 2, 3, 4, 5, 6 or 7 additional ring atoms derived from A1′ and A2′, wherein each of the additional ring atoms may be selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen, sulfur, and combinations thereof. In another exemplary embodiment, all of the additional ring atoms may be carbon atoms.
A4′ can be a substituent attached to any atom of RING I, and each of A4′, A5′ and A6′ is independently selected from the group consisting of -R1′, -O-R1′, -S-R1′, -C (O) -R1′, -C (O) O-R1′, -O-C (O) -R1′, -C (O) NH-R1′, -C (O) NR2′-R1′, -NH-C (O) -R1′, -NR2′-C (O) -R1′, -O-P (O) 2-O-R1′, -OP (O) (S) -O-R1′, -O-P (O) -O-R1′, -NH-R1′, -NR2′-R1′, - (CH2) r′-NH-R1′, - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NH-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) O-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-C (O) -R1′, - (CH2) r′-C (O) -R1′; - (CH2) r′-C (O) O-R1′; - (CH2) r′-O-C (O) -R1′, - (CH2) r′-R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-NR2′-C (O) - (CH2) s′-R1′, -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -N (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′- R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) ; wherein each of R1′, R2′, R3′, R4′, R5′, R6′, r′, s′, p′ and q′ are as defined herein.
In an embodiment, the RING II can be formed by linking R8′ and R9′ together and thus may consist of the nitrogen atom to which R9′ is attached, the carbon atom to which R8′ is attached, at least part of R8′ and at least part of R9′. The RING II can be a 4, 5, 6, 7, 8 or 9 member ring, in particular a ring fused to the core structure of the substituent B′. For example, the RING II may consist of a nitrogen atom, a carbon atom from the core structure of the substituent B′ and 2, 3, 4, 5, 6 or 7 additional ring atoms derived from R8′ and R9′, wherein each of the additional ring atoms may be selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen, sulfur, and combinations thereof. In another exemplary embodiment, all of the additional ring atoms may be carbon atoms.
In an embodiment, R12′ is attached to any atom of RING II and is selected from the group consisting of -H, hydroxyl, - (C1-C30) alkyl, - (C3-C50) cycloalkyl, - (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-NH2, - (C3-C50) cycloalkylene-NH2, - (C6-C50) arylene-NH2, - (C1-C30) alkoxy, - (C3-C50) cycloalkoxy, - (C6-C50) aryloxy, -C (O) - (C1-C30) alkyl, -OC (O) (C1-C30) alkyl, -C (O) -O- (C1-C30) alkyl, -C (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C50) aryloxy, -OC (O) - (C6-C50) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C50) aryloxy, -C (O) -NH- (C1-C30) alkyl, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -NH- (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-phosporic acid, - (C3-C50) cycloalkylene-phosporic acid, - (C6-C50) arylene-phosporic acid; wherein each - (C1-C30) alkyl contained in R12′ may comprise - (C2-C22) alkyl, or - (C3-C18) alkyl, or - (C4-C16) alkyl, or - (C6-C12) alkyl, or - (C8-C10) alkyl; wherein each - (C3-C50) cycloalkyl contained in R12′ may comprise - (C4-C40) cycloalkyl, or - (C5-C30) cycloalkyl, or - (C6-C20) cycloalkyl, or - (C6-C16) cycloalkyl; each - (C6-C50) aryl contained in R12′ may comprise - (C6-C40) aryl, or - (C6-C30) aryl, or - (C6-C25) aryl, or - (C6-C22) aryl, or - (C6-C16) aryl, or - (C6-C12) aryl; each - (C1-C30) alkoxy contained in R12′ may comprise - (C2-C22) alkoxy, or - (C3-C20) alkoxy, or - (C4-C16) alkoxy, or - (C6-C12) alkoxy; each - (C3-C50) cycloalkoxy contained in R12′ may comprise -(C4-C40) cycloalkoxy, or - (C5-C30) cycloalkoxy, or - (C6-C20) cycloalkoxy, or - (C6- C16) cycloalkoxy; each - (C6-C50) aryloxy contained in R12′ may comprise - (C6-C40) aryloxy, or - (C6-C30) aryloxy, or - (C6-C25) aryloxy, or - (C6-C22) aryloxy, or - (C6-C16) aryloxy, or - (C6-C12) aryloxy; each - (C1-C30) alkylene-contained in R12′ may comprise - (C1-C28) alkylene-, or - (C1-C26) alkylene-, or - (C1-C24) alkylene-, or - (C2-C22) alkylene-, or - (C3-C20) alkylene-, or - (C4-C18) alkylene-, or - (C5-C17) alkylene-, or - (C6-C16) alkylene-, or - (C7-C14) alkylene-, or - (C8-C12) alkylene-; the - (C3-C50) cycloalkylene- contained in R12′ may include - (C3-C40) cycloalkylene-, or - (C3-C30) cycloalkylene-, or - (C3-C22) cycloalkylene-, or - (C4-C20) cycloalkylene-, or - (C5-C18) cycloalkylene-, or - (C6-C16) cycloalkylene-, or - (C7-C14) cycloalkylene-, or - (C8-C12) cycloalkylene-; the - (C6-C50) arylene-contained in R12′ may include - (C6-C40) arylene-, or - (C6-C30) arylene-, or - (C6-C22) arylene-, or - (C6-C20) arylene-, or - (C6-C18) arylene-, or - (C6-C16) arylene-, or - (C6-C12) arylene-.
In an embodiment, one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group and phosporic acid group contained in R12′ are optionally protected, e.g. with a terminal protection group RP selected from the group consisting of (C1-C22) alkyl, (C1-C22) alkoxy, (C1-C22) alkylcarbonyl, (C1-C22) alkoxycarbonyl, (C6-C22) aryl, (C6-C22) aryloxy, (C6-C22) arylcarbonyl, (C6-C22) aryloxycarbonyl, tri ( (C1-C22) alkyl) silyl and tri ( (C1-C22) alkoxy) silyl, wherein the (C1-C22) alkyl contained in the protection group Rp can be an alkyl comprising from 1 to 22 carbon atoms, such as from 2 to 20 carbon atoms, or from 3 to 18 carbon atoms, or from 4 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms; the (C1-C22) alkoxy contained in Rp can be an alkoxy comprising from 1 to 22 carbon atoms, such as from 2 to 20 carbon atoms, or from 3 to 18 carbon atoms, or from 4 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms; the (C6-C22) aryl contained in Rp can be an aryl comprising from 6 to 22 carbon atoms, such as from 6 to 20 carbon atoms, or from 6 to 18 carbon atoms, or from 6 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms, or from 8-10 atoms; and the (C6-C22) aryloxy contained in Rp can be an aryloxy comprising from 6 to 22 carbon atoms, such as from 6 to 20 carbon atoms, or from 6 to 18 carbon atoms, or from 6 to 16 carbon atoms, or from 6 to 12 carbon atoms, or from 8-10 atoms. In a specific embodiment, the protection group RP can be selected from the group consisting of benzyloxycarbonyl (Cbz) , tert-butyldimethylsilyl (TBS) , 4, 4′-dimethoxytrityl (DMTr) , t-butyloxy carbonyl (Boc) , benzyl (Bn) and benzyloxy (BnO) .
In an embodiment, the compound of Formula BI or Formula BII may have one or more chiral centers, and each of the chiral centers can be independently R chiral, S chiral,  mesomeric or racemic form. For example, when one or more of A1′, A2′ and A3′ is selected from -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′) (-C (O) -NH- (CH2) q′-R3′) , -N (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , the central carbon atoms contained therein can be chiral centers.
In some embodiments, the compound of the present disclosure has a structure represented by any one of Formula BXV to Formula BXX:

wherein each of A1′, A2′, B′, R7′, R8′ and R10′ are as defined herein.
In another embodiment, when any one or more of the above indicated substituents comprise at least one double bond, each of the double bond and the atoms or moieties attached to the same may be in E form or Z form.
In an exemplary embodiment, the compound of the present disclosure has a structure represented by any of the following molecular formulae:

















wherein represents a support material as defined above.
Another embodiment of the present disclosure provides an oligonucleotide delivery agent comprising a DEC compound disclosed by the present application and at least one oligonucleotide. It can be fully understood that when the DEC is directly linked with the oligonucleotide or indirectly linked with the oligonucleotide via at least one linking moiety, one or more terminal atoms (such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc. ) or terminal groups (such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether group, acyl group, etc. ) of the DEC may be detached so as to provide an active site linkable to the linking moiety or the oligonucleotide.
In an embodiment, the linking moieties, when present, can be selected from the group consisting of -O-, -S-, -C (O) -, -NH-, -N ( (C1-C12) alkyl) -, -N ( (C1-C12) alkyl) -C (O) -O-, -O-C (O) -, -C (O) -O-, -O-C (O) -O-, -C (O) -NH-, -OP (O) 2O-, -P (O) (O-) O-, -OP (O) O-, -OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2-O-, -S (O) 2-O-, -S (O) -O-, - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) - O-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH-(C1-C22) alkylene-NH-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) O-, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -O- (C1-C22) alkylene-O-C (O) -, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) (O-) O-, - (C1-C22) alkylene-OP(O) (O-) O- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) (S) O-, - (C1-C22) alkylene-O-S (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-S (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-S (O) -O-, -O-P (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, -O-P (O) -O- (C1-C22) alkylene-OP (O) O-, -OP (O) (S) O- (C1-C22) alkylene-OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-O-S (O) 2-O-, -S (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-S (O) 2-O-and -O-S (O) - (C1-C22) alkylene-S (O) -O-; wherein the - (C1-C22) alkylene-contained in the linking moiety can be an alkylene group comprising from 1 to 22 carbon atoms, such as from 2 to 20 carbon atoms, or from 3 to 18 carbon atoms, or from 4 to 16 carbon atoms, or from 5 to 12 carbon atoms, or from 6 to 10 carbon atoms. In one embodiment, the delivery enhancing compound is directly linked with the oligonucleotide when the linking moiety is a direct bond.
Another embodiment of the present disclosure provides a delivery enhancing compound (DEC) conjugated oligonucleotide comprising a structure represented by Formula AA, which can more efficiently deliver the oligonucleotide both in vitro and in vivo.
The Pdelivery enhancing compound moiety” shown in Formula AA is derived from any one of the above stated DEC compounds of the present disclosure. It can be understood that one or more terminal atoms (such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc. ) or terminal groups (such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether group, acyl group, etc. ) of the inventive compound have be detached so as to provide an active site linkable to the targeting moiety or the oligonucleotide, hence the “delivery enhancing compound” of Formula BA can be considered as a moiety obtained by subtracting said one or more atoms or terminal groups from the inventive compounds.
In an embodiment of the present disclosure, the delivery enhancing compound (DEC) conjugated oligonucleotide has a structure represented by Formula BB,
wherein each of A1′, A2′, A3′, X′, F′, G′H′, I′, C′, m′ and n′ is as defined above. In an embodiment, at least one of A1′, A2′ and A3′ comprises one or more targeting moieties, and the DEC is attached to at least one oligonucleotide via the B″ group. As stated above, the B″ group can be derived by detaching one or more terminal atoms (such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc. ) or one or more terminal groups (such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether group, acyl group, etc. ) from the B″ group contained in Formula BII.
In another embodiment of the present disclosure, the delivery enhancing compound (DEC) conjugated oligonucleotide has a structure represented by Formula BC, 
wherein each of A1′, A2′, A3′, R7′, R9′, R10′, R11′, X′, Y′, F′, G′, H′, I′, C′, R′, Q′, S′, T′, m′, n′, M′ and N′ is as defined above. In an embodiment, at least one of A1′, A2′ and A3′ comprises one or more targeting moieties, and the DEC is attached to at least one oligonucleotide via the R8″ group. As stated above, the R8″ group can be derived by detaching one or more terminal atoms (such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc. ) or one or more terminal groups (such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether  group, acyl group, etc. ) from the R8′ group contained in Formula BIII.
In some embodiments of the present disclosure, the delivery enhancing compound (DEC) conjugated oligonucleotide has a structure represented by any one of Formulae E1 to E15,

wherein each of A1′, A2′, R7′ and R10′ is as defined above. In an embodiment, at least one of A1′ and A2′ comprises one or more targeting moieties, or A2′ comprises one or more targeting moieties; and the DEC is attached to at least one oligonucleotide via the B″ group or the R8″ group. As stated above, the R8″ group can be derived by detaching one or more terminal atoms (such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc. ) or one or more terminal groups (such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether group, acyl group, etc. ) from the R8 group, and the B″ group can be derived by detaching one or more terminal atoms (such as hydrogen, halogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus, etc. ) or one or more terminal groups (such as hydroxyl group, amino group, ester group, ether group, acyl group, etc. ) from the B′ group.
In an embodiment, the targeting moiety is contained in the molecular structure of the DEC compound, such as being as part of the A1′, A2′ or A3′, and preferably being the R1′ or R3′ group. In another embodiment, the targeting moiety is independent of the DEC compound and  is additionally added after or during the synthesis of the DEC compound.
In an embodiment, the targeting moiety and the delivery enhancing compound moiety can be linked with each other by a first linking moiety. In an embodiment, the delivery enhancing compound moiety and the oligonucleotide can be linked by a second linking moiety. Each of the first and second linking moieties can be selected from the group consisting of direct bond, -O-, -S-, -C (O) -, -NH-, -N ( (C1-C12) alkyl) -, -N ( (C1-C12) alkyl) -C (O) -O-, -O-C (O) -, -C (O) -O-, -O-C (O) -O-, -C (O) -NH-, -OP (O) 2O-, -OP (O) O-, -OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2-O-, -S (O) 2-O-, -S (O) -O-, - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH- (C1-C22) alkylene-NH-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) O-, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -O- (C1-C22) alkylene-O-C (O) -, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, -NH- (C1-C22) alkylene-CH ( (C1-C22) alkylene-OH) -OP (O) 2O-, -NH- (C1-C22) alkylene-CH ( (C1-C22) alkylene-OH) - (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) (S) O-, - (C1-C22) alkylene-O-S (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-S (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-S (O) -O-, -O-P (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, -O-P (O) -O- (C1-C22) alkylene-OP (O) O-, -OP (O) (S) O- (C1-C22) alkylene-OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-O-S (O) 2-O-, -S (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-S (O) 2-O-and -O-S (O) - (C1-C22) alkylene-S (O) -O-; wherein the - (C1-C22) alkylene-contained in the linking moiety can be - (C1-C20) alkylene-, or - (C1-C18) alkylene-, or - (C1-C16) alkylene-, or - (C2-C12) alkylene-, or - (C3-C10) alkylene-, or - (C4-C8) alkylene-, or - (C5-C6) alkylene-. In one embodiment, in delivery enhancing compound (DEC) conjugated oligonucleotide of Formula A, the delivery enhancing compound moiety is directly linked with the oligonucleotide when the linking moiety is a direct bond. In one embodiment, in the delivery enhancing compound (DEC) conjugated oligonucleotide of Formula BA, the targeting moiety is directly linked with the delivery enhancing compound moiety when the linking moiety is a direct bond.
The oligonucleotide may include those disclosed above, and particularly can be selected from the group consisting of antisense oligonucleotide (ASO) , antisense RNA, short  interfering RNA (siRNA) , microRNA (miRNA) , saRNA, dsRNA, scRNA, sgRNA or any other oligonucleotide targeting at least one nucleic acid sequence.
All nucleotides of the oligonucleotides described herein may be natural, i.e., non-chemically modified, nucleotides or at least one nucleotide may be a chemically modified nucleotide. Non-limiting examples of the chemical modification include one or more of a combination of the following:
1) modification of a phosphodiester bond of nucleotides in the oligonucleotide sequence;
2) modification of 2′-OH of the ribose in the nucleotide;
3) modification of a base in the nucleotide;
4) at least one nucleotide in the oligonucleotide sequence being a locked nucleic acid, and 
5) at least one nucleotide in the oligonucleotide sequence being a deoxyribonucleotide (DNA) .
Chemical modifications of nucleotides or oligonucleotides in the present disclosure are well known to those skilled in the art, and modifications of the phosphodiester bond refer to modifications of oxygen in the phosphodiester bond, including phosphorothioate modifications and boronated phosphate modifications. The modifications disclosed herein stabilize an oligonucleotide structure, maintaining high specificity and high affinity for base pairing. The modifications disclosed herein also stabilize a nucleic acid structure and maintain its delivering accessory properties including bioavailability, biodistribution, and/or cellular uptake of the oligonucleotide agent in various tissues prefrontal cortex, cerebellum, spinal cord (e.g., cervical, thoracic, lumber) , muscle, liver, and kidney.
In some embodiments, the chemical modification is to substitute the phosphodiester bond with phosphorothioate (PS) bond on the backbone of the oligonucleotide disclosed herein. In some embodiments, the oligonucleotide disclosed herein comprises at least one PS backbone modification in one oligonucleotide strand. In some embodiments, the oligonucleotide comprises at least 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 24, 28, 32, or 40 PS backbone modifications in one oligonucleotide strand.
In some embodiments, the nucleotides or oligonucleotides of the present application includes at least one chemically modified nucleotide which is modified at 2′-OH in pentose of a nucleotide, i.e., the introduction of certain substituents at the hydroxyl position of the ribose, such as 2′-fluoro modification, 2′-oxymethyl modification, 2′-oxyethylidene methoxy  modification, 2, 4′-dinitrophenol modification, locked nucleic acid (LNA) , 2′-amino modification or 2′-deoxy modification, e.g., a 2’-deoxy-2’-fluoro modified nucleotide, a 2’-deoxy-modified nucleotide.
In some embodiments, the nucleotides or oligonucleotides of the present application includes at least one chemically modified nucleotide which is modified at the base of the nucleotide, e.g., 5 ′-bromouracil modification, 5’-iodouracil modification, N-methyluracil modification, or 2, 6-diaminopurine modification.
In some embodiments, the chemical modification of the nucleotides or oligonucleotides in the present application is an addition of a (E) -vinylphosphonate moiety at the 5’ end of the sense or antisense sequence. In some embodiments, the chemical modification of the at least one chemically modified nucleotide is an addition of a 5′-methyl cytosine moiety at the 5’ end of the sense or antisense sequence. The oligonucleotides used in the present disclosure may be commercially available from various vendors, or synthesized in a lab scale or industrial scale. In an exemplary embodiment, the oligonucleotides can be synthesized by using a commercialized synthesizer or a particularly customized synthesizer, such as a K&ADNA synthesizer purchased from K&ALaborgeraete GbR, Schaafheim, Germany, by using ordinary synthesis procedures, e.g. a solid phase synthesis technique comprising the steps of sequentially adding batches of raw materials (e.g. phosphoramidite monomers including various linkers and conjugates) onto a solid support known in the art and subjecting each base addition to a preparation cycle consisted of four chemical reactions of detritylation, coupling, oxidation/thiolation and capping, so as to produce the oligonucleotides with desired full-length.
The oligonucleotide delivery agent may comprise one, two, three, four, five, six or even more oligonucleotides separately linked with one, two, three, four, five, six or even more of the delivery enhancing compounds via one, two, three, four, five, six or even more linking moieties. For example, the oligonucleotide delivery agent may have a structure represented by any of the following formulae AAI to AAXXIV:


wherein L represents the linking moiety, represents the oligonucleotide delivery enhancing compound, the symbol epresents a double strand oligonucleotide, either symmetric or asymmetric independently on each of the ends; presents a single strand oligonucleotide, and each of a, b and c is independently an integer from 1 to 50, such as an integer from 2 to 45, or an integer from 3 to 40, or an integer from 4 to 35, or an integer from 5 to 30, or an integer from 10 to 20. Each of the linking moiety, and thus the delivery enhancing compound, may be linked at 3’ end, 5’ end or any internal position, such as the nth nucleotide, of the double or single strand oligonucleotide.
In one embodiment, one or more of the substituents A1, A2, A3, B, C, A1′, A2′, A3′, B′ and C′ of the delivery enhancing compound can be linked with the linking moiety or with the oligonucleotide (when the linking moiety is a direct bond) . For example, either one of A1, A2, A3, B, A1′, A2′, A3′ R8′, R12′and B′, preferably A2 A2′, B, B′, R8′ or R12′ is linked with the linking moiety or the oligonucleotide. Without being limited to any theory, one or more terminal groups of the above said substituents (such as DMTrO-C1-C22 alkylene-or - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN) , may be cleavaged or hydrolyzed to decap an active site (such as a - (C1-C22) alkylene-OH group) which is then linked with the oligonucleotide via a linking moiety (such as -P (O) (O-) O-) . For example, exemplary structures of the oligonucleotide delivery agents include O1 to O25 as illustrated  below:
Compound O1 (RD-13110, derived from Compound A1)
Compound O2 (RD-13115, RD-13118, RD-13520, RD-15137, RD-15138, RD-16424, RD-14644, RD-14672, RD-16447, RD-16381, derived from Compound A5)
Compound O3 (derived from Compound A7)
Compound O4 (derived from Compound A8)
Compound O5 (derived from Compound A9)
Compound O6 (derived from Compound A10)
Compound O7 (derived from Compound A11)
Compound O8 (derived from Compound A12)
Compound O9 (derived from Compound A13)
Compound O10 (derived from Compound A14)
Compound O11 (derived from Compound A15)
Compound O12 (derived from Compound A16)
Compound O13 (derived from Compound A6)



wherein J represents O or S.
It can be seen that in all the structures O1 to O25, the delivery enhancing compounds are linked with double-stranded RNA (dsRNA) duplexes (including but not limited to siRNA or saRNA) and/or single-stranded antisense oligonucleotides (ASOs) at the 3’-terminus or 5’-terminus their passenger (P) strand via a linking moiety, such as -OP (O) 2O- (-P (O) (O-) -O-) , wherein P is passenger strand and G is guide strand; and electron rearrangement may also occur.
In some embodiments, at least one hydrogen atom (i.e. H) contained in the delivery enhancing compound, the delivery enhancing compound moiety, the linking moiety and/or the oligonucleotide is substituted with deuterium atom (i.e. D) . In an exemplary embodiment, at least one of the delivery enhancing compound, the delivery enhancing compound moiety, the linking moiety and the oligonucleotide comprises one to twenty, such as one to fifteen, or one to twelve, or one to ten, or one to eight, or one to six, or one to three, or one to two deuterium atoms. In an exemplary embodiment, 1%to 100%, or 2%to 90%, or 5%to 80%, or 10%to 70%, or 20%to 60%, or 30%to 50%, or 40%to 45%by mole of the hydrogen atom contained in the the delivery enhancing compound, the delivery enhancing compound moiety, the linking moiety and/or the oligonucleotide is substituted with deuterium atom. In another exemplary embodiment, the deuterium substitution rate can be within a numerical range obtained by combining any two of the above said end point values.
Another embodiment of the present disclosure provides a pharmaceutical composition comprising the oligonucleotide delivery agent. In another embodiment, the pharmaceutical composition may comprise one or more additional ingredients, such as pharmaceutically acceptable carrier, excipient, solvent, diluent, stabilizer, dispersant, buffer, compatibilizer, preservative agent and combinations thereof.
Another embodiment of the present disclosure provides a method of modulating the expression of a target gene in vitro or in vivo, comprising the step of administrating the pharmaceutical composition to a subject, or contacting the pharmaceutical composition with cells of the subject. For example, it is estimated that the oligonucleotide delivery agent and pharmaceutical composition can be applied in various organs, tissues and cells, such as liver, lung, kidney, intestine, pancreas, cholecyst, heart, lymp nodes, spleen, stomach, bladder, muscle, bone, central nervous system (CNS) , and modulate the expression of one or more target genes in the cell thereof.
Particular embodiments
In a specific embodiment, the present disclosure provides an oligonucleotide delivery enhancing compound comprising a nitrogen-containing five membered heterocyclic ring moiety and at least one substituent directly or indirectly attachable to an oligonucleotide.
In another specific embodiment, the oligonucleotide delivery enhancing compound has a structure represented by Formula AI or Formula AII
wherein eachindependently represents a covalent single or double bond; X, on each occurrence, is an atom selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; each of F, G, H and I is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur;
wherein m is an integer of 1, 2 or 3, n is an integer of 1, 2 or 3, and m+n=4;
wherein C, on each occurrence, is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C1-C20) alkyl, (C1-C20) alkoxy, halogenated (C1-C20) alkyl and halogenated (C1-C20) alkoxy;
wherein B, on each occurrence, is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, -P (O) 2-OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkenyl, - (C1-C22) alkylene-OH, - (C3-C22) cycloalkylene-OH, - (C6-C22) arylene-OH, - (C6-C22) heteroarylene-OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C3-C22) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C22) arylene-C (O) OH, - (C5-C22) heteroarylene-C (O) OH, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) NH2, - (C1-C22) alkylene-O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) NH2, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C1-C22) alkylene-O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) OH, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) NH2, - (C1-C22) alkylene-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) NH2, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) 2-OH, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-O-P (- N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene -P (O) -OH, - (C1-C22) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C22) alkylene-CN,
wherein each of A1, A2 and A3 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, -O-R1, -SH, - (C1-C25) alkyl, halogenated - (C1-C25) alkyl, - (C2-C22) alkenyl, - (C1-C22) alkylene-OH, - (C3-C22) cycloalkyl, - (C3-C22) cycloalkenyl, - (C1-C22) alkylene- (C3-C22) cycloalkyl, - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-R1, - (C1-C22) alkylene-COOR1, -C (O) O-R1, -O- (C1-C22) alkyl, -S- (C1-C22) alkyl, -C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkyl, -O-C (O) - (C1-C22) alkyl, -O-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-O-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NR2-R1, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-OH, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, -adamantyl, - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -O-adamantly, -C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -halogenated (C1-C22) alkyl, -CH (NH-CO- (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-C [- (C1-C22) alkylene-O- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl] 3, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-C [- (C1-C22) alkylene-O- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1] 3, -CH (NH-CO-halogenated (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -halogenated (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene- (C1-C6 alkylene oxide) (1-20) -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -C (O) NH- (C1-C22) alkyl, -C (O) NH-R1, -C (O) NR2-R1, -C (O) NH- (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) NH- (C1-C22) alkylene-COOH, -NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, -NH-C (O) -R1, -NR2-C (O) -R1, -O-P (O) 2-O-R1, -OP (O) (S) -O-R1, -O-P (O) -O-R1, -NH-R1, -NR2-R1, - (C1- C22) alkylene-NH-R1, - (C1-C22) alkylene-NR2-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) O-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene -P (O) -OH, - (C1-C22) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C22) alkylene-CN, substituted or unsubstituted pyrrole, substituted or unsubstituted pyrroline, substituted or unsubstituted pyrrolidine, substituted or unsubstituted pyrazole, substituted or unsubstituted pyrazoline, substituted or unsubstituted pyrazolidine, substituted or unsubstituted imidazole, substituted or unsubstituted oxazole, substituted or unsubstituted thiazole, substituted or unsubstituted benzopyrrole, substituted or unsubstituted benzopyrroline, substituted or unsubstituted benzopyrrolidine, substituted or unsubstituted benzopyrazole, substituted or unsubstituted benzopyrazoline, substituted or unsubstituted benzopyrazolidine, substituted or unsubstituted benzoimidazole, substituted or unsubstituted benzooxazole, substituted or unsubstituted benzothiazole, and a substituent represented by Formula AIII,
wherein Y is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of P, Q, S and T is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and the asterisk refers to the site wherein the substituent represented by Formula AIII is linked with the structure represented by Formula AI or Formula AII;
wherein each of R3, R4 and R5 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, -O-R1, -SH, - (C1-C25) alkyl, halogenated - (C1-C25) alkyl, - (C2-C22) alkenyl, - (C1-C22) alkylene-OH, - (C3-C22) cycloalkyl, - (C3-C22) cycloalkenyl, - (C1-C22) alkylene- (C3-C22) cycloalkyl, - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-R1, - (C1-C22) alkylene-COOR1, -C (O) O-R1, -O- (C1-C22) alkyl, -S- (C1-C22) alkyl, -C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkyl, -O-C (O) - (C1-C22) alkyl, -O-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-O-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NR2-R1, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-OH, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, -adamantyl, - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -O-adamantly, -C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -halogenated (C1-C22) alkyl, -CH (NH-CO- (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-C [- (C1-C22) alkylene-O- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl] 3, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-C [- (C1-C22) alkylene-O- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1] 3, -CH (NH-CO-halogenated (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -halogenated (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene- (C1-C6 alkylene oxide) (1-20) -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -C (O) NH- (C1-C22) alkyl, -C (O) NH-R1, -C (O) NR2-R1, -C (O) NH- (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) NH- (C1-C22) alkylene-COOH, -NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, -NH-C (O) - R1, -NR2-C (O) -R1, -O-P (O) 2-O-R1, -OP (O) (S) -O-R1, -O-P (O) -O-R1, -NH-R1, -NR2-R1, - (C1-C22) alkylene-NH-R1, - (C1-C22) alkylene-NR2-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) O-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene -P (O) -OH, - (C1-C22) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C22) alkylene-CN, substituted or unsubstituted pyrrole, substituted or unsubstituted pyrroline, substituted or unsubstituted pyrrolidine, substituted or unsubstituted pyrazole, substituted or unsubstituted pyrazoline, substituted or unsubstituted pyrazolidine, substituted or unsubstituted imidazole, substituted or unsubstituted oxazole, substituted or unsubstituted thiazole, substituted or unsubstituted benzopyrrole, substituted or unsubstituted benzopyrroline, substituted or unsubstituted benzopyrrolidine, substituted or unsubstituted benzopyrazole, substituted or unsubstituted benzopyrazoline, substituted or unsubstituted benzopyrazolidine, substituted or unsubstituted benzoimidazole, substituted or unsubstituted benzooxazole, and substituted or unsubstituted benzothiazole,
wherein R7, on each occurrence, is attached to any one of P, Q, S and T, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C1-C20) alkyl, (C1-C20) alkoxy, halogenated (C1-C20) alkyl and halogenated (C1-C20) alkoxy;
wherein M is an integer of 0, 1, 2 or 3;
wherein R6 is attached to any one of P, Q, S and T, and is selected from the group consisting of direct bond, -O-, -C (O) O-, -O-C (O) -, -P (O) 2-O-, -O-P (O) 2-O-, -P (O) (S) -O-, -O-P (O) (S) -O-, -O-P (O) -O-, - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-O-, -O- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH-(C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-C (O) -, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-O-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-O-, -N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) - (C1-C22) alkylene-, -N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) - (C1-C22) alkylene-O-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, -N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) - (C1-C22) alkylene-N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) - (C1-C22) alkylene-, -N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) - (C1-C22) alkylene-N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) -, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene -P (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-O-P (O) 2-O-, - (C3-C22) cycloalkylene-, - (C3-C22) cycloalkylene-O-, -O- (C3-C22) cycloalkylene-, - (C6-C22) arylene-, - (C6-C22) arylene-O-, -O- (C6-C22) arylene-, - (C6-C22) arylene-NH-, -NH- (C6-C22) arylene-, -C (O) - (C6-C22) arylene-, - (C6-C22) arylene-C (O) -, -C (O) -O- (C6-C22) arylene-, - (C6-C22) arylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C6-C22) arylene-and -C (O) -NH- (C6-C22) arylene-C (O) -O-;
wherein R1, on each occurrence, is independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, - (C1-C22) alkyl, - (C3-C22) cycloalkyl, - (C6-C22) aryl, - (C1-C22) alkoxy, - (C3-C22) cycloalkoxy, - (C6-C22) aryloxy, -C (O) - (C1-C22) alkyl, -OC (O) (C1-C22) alkyl, -C (O) -O- (C1-C22) alkyl, -C (O) - (C3-C22) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C22) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C22) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C22) aryloxy, -OC (O) - (C6-C22) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C22) aryloxy, -C (O) -phosphate ester group, phosphodiester group, phosphoramidite group, saturated fatty  acid group, unsaturated fatty acid group, glucosyl, acetamide glucosyl, galactosamine, N-acetyl galactosamine, lipid, PEG, steroid, lipophile, carbohydrate, cholesterol, adamantane, amino acid, peptide, chloroquine and alkaloid,
wherein R2, on each occurrence, is independently selected from the group consisting of a halogen atom, a (C1-C12) alkyl, a (C1-C12) alkoxy, a (C1-C12) alkoxycarbonyl, a (C6-C16) aryl or a (C6-C16) aryloxycarbonyl;
wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group, nitrile group and phosphoric acid group contained in A1, A2, A3, B, C, R1, R2, R3, R4, R5 and R6 are optionally linked to a support material or protected with a terminal protective group; and
with the proviso that A1, A2 and A3 are not simultaneously hydrogen and R3, R4 and R5 are not simultaneously hydrogen.
In another specific embodiment, the oligonucleotide delivery enhancing compound according to claim 1, comprising a moiety represented by Formula BI and at least one substituent directly or indirectly attachable to an oligonucleotide,
wherein X′ is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; each of F′, G′, H′ and I′ is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of the asterisks refers to a site optionally linked to at least one substituent or an oligonucleotide directly or indirectly.
In another specific embodiment, the oligonucleotide delivery enhancing compound has a structure represented by Formula BII
wherein X′ is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of F′, G′, H′ and I′ is independently selected from the group consisting of carbon,  nitrogen, oxygen and sulfur;
wherein each of A1′, A2′ and A3′ is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -R1′, -O-R1′, -S-R1′, -C (O) -R1′, -C (O) O-R1′, -O-C (O) -R1′, -C (O) NH-R1′, -C (O) NR2′-R1′, -NH-C (O) -R1′, -NR2′-C (O) -R1′, -O-P (O) 2-O-R1′, -OP (O) (S) -O-R1′, -O-P (O) -O-R1′, -NH-R1′, -NR2′-R1′, - (CH2) r′-NH-R1′, - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NH-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) O-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-C (O) -R1′, - (CH2) r′-C (O) -R1′; - (CH2) r′-C (O) O-R1′; - (CH2) r′-O-C (O) -R1′, - (CH2) r′-R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-NR2′-C (O) - (CH2) s′-R1′, -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′) (-C (O) -NH- (CH2) q′-R3′) , -N (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , or A1′ and A2′ are linked together so that A1′, A2′, the nitrogen atom linked with A1′ and the carbon atom linked with A2′ form a unsubstituted or substituted heterocyclic ring; wherein each of R1′ and R3′ is independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, - (C1-C30) alkyl, - (C3-C50) cycloalkyl, - (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkoxy, - (C3-C50) cycloalkoxy, - (C6-C50) aryloxy, -C (O) - (C1-C30) alkyl, -OC (O) (C1-C30) alkyl, -C (O) -O- (C1-C30) alkyl, -C (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C50) aryloxy, -OC (O) - (C6-C50) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C50) aryloxy, -C (O) -phosphate ester group, phosphodiester group, phosphoramidite group, saturated fatty acid group, unsaturated fatty acid group, glucosyl, acetamide glucosyl, galactosamine, N-acetyl galactosamine, lipid, PEG, steroid, lipophile, carbohydrate, cholesterol, adamantane, amino acid, peptide, ligand, nucleic acid, oligonucleotide, aptamer, small molecule, antibody, antibody fragment, chloroquine, alkaloid and targeting moiety, wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group and amino  group contained in each of R1′ and R3′ are optionally protected; wherein each of R2′, R4′, R5′ and R6′ is independently a halogen atom, a (C1-C12) alkyl, a (C1-C12) alkoxy, a (C1-C12) alkoxycarbonyl, a (C6-C16) aryl or a (C6-C16) aryloxycarbonyl; wherein each of r′, s′, p′ and q′ is an integer from 1 to 22; and with the proviso that A3′ is absent when X′ is oxygen, and A1′, A2′ and A3′ are not simultaneously hydrogen;
wherein each C′ is attached to any one of F′, G′, H′ and I′, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C1-C20) alkyl, (C1-C20) alkoxy, halogenated (C1-C20) alkyl and halogenated (C1-C20) alkoxy;
wherein m′ is an integer of 1, 2 or 3, n′ is an integer of 1, 2 or 3, and m′+n′=4;
wherein each B′ is attached to any one of F′, G′, H′ and I′, and is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, - (C1-C30) alkoxy, -P (O) 2-OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C5-C50) heteroarylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- [ (C1-C30) alkylene-O] r′-H (wherein r′ is an integer of 1 to 22) , -C (O) -NH- [ (C1-C30) alkylene-O] r′- (C1-C30) alkylene-C (O) -OH (wherein r′ is an integer of 1 to 22) , -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene- (C6-C50) arylene- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) 2-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) 2-OH, - (C6-C50) arylene-P (O) 2-OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) 2-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1- C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene -P (O) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) -OH, - (C5-C50) -heteroarylene-P (O) -OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) (S) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) (S) -OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C30) alkylene-CN, - (C3-C50) cycloalkylene-CN, - (C6-C50) arylene-CN, - (C5-C50) heteroarylene-CN, lipid, PEG, steroid, lipophile, carbohydrate, cholesterol, adamantane, amino acid, peptide, chloroquine, alkaloid and a substituent represented by Formula BIII:
wherein Y′ is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of P′, Q′, S′ and T′ is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and the asterisk refers to the site wherein the substituent represented by Formula BIII is linked with any one of F′, G′, H′ and I′ of Formula BII;
where R7′ is selected from the group consisting of -O-, -C (O) O-, -O-C (O) -, -P (O) 2-O-, -O-P (O) 2-O-, -P (O) (S) -O-, -O-P (O) (S) -O-, -O-P (O) -O-, - (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-O-, -O- (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-NH-, -NH- (C1-C30) alkylene-, -C (O) - (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-C (O) -, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-O-, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-O-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) -, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-N ( (C1-C20) alkyl) - C (O) - (C1-C30) alkylene-, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) -, - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C30) alkylene -P (O) 2-O-, - (C1-C30) alkylene-O-P (O) 2-O-, - (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-O-, -O- (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-NH-, -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) - (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-O-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH-, - (C3-C50) cycloalkylene -P (O) 2-O-, - (C3-C50) cycloalkylene-O-P (O) 2-O-, - (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-O-, -O- (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-NH-, -NH- (C6-C50) arylene-, -C (O) - (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-C (O) -, -C (O) -O- (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-O-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH-, - (C6-C50) arylene -P (O) 2-O-, - (C6-C50) arylene-O-P (O) 2-O-, - (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-O-, -O- (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-NH-, -NH- (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) - (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -, -C (O) -O- (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-O-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5- C50) heteroarylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH-, - (C5-C50) heteroarylene -P (O) 2-O-, - (C5-C50) heteroarylene-O-P (O) 2-O-; wherein each of R8′ and R9′ is either absent or is a substituent independently selected from the group consisting of -H, hydroxyl, - (C1-C30) alkyl, - (C3-C50) cycloalkyl, - (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-NH2, - (C3-C50) cycloalkylene-NH2, - (C6-C50) arylene-NH2, - (C1-C30) alkoxy, - (C3-C50) cycloalkoxy, - (C6-C50) aryloxy, -C (O) - (C1-C30) alkyl, -OC (O) (C1-C30) alkyl, -C (O) -O- (C1-C30) alkyl, -C (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C50) aryloxy, -OC (O) - (C6-C50) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C50) aryloxy, -C (O) -NH- (C1-C30) alkyl, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -NH- (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-phosphoric acid, - (C3-C50) cycloalkylene-phosphoric acid, - (C6-C50) arylene-phosporic acid; wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group and phosporic acid group contained in each of R8′ and R9′ are optionally protected with a terminal protective group; or R8′ and R9′ are linked together so that R8′, R9′, the carbon atom linked with R8′ and the Y′ atom linked with R9′ form a unsubstituted or substituted heterocyclic ring; with the proviso that R9′ is absent when Y′ is oxygen or sulfur;
each R10′ is attached to any one of P′, Q′, S′ and T′, and is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, -P (O) 2-OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C5-C50) heteroarylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C5-C50) heteroarylene- C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) NH2, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) 2-OH, - (C3- C50) cycloalkylene-P (O) 2-OH, - (C6-C50) arylene-P (O) 2-OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) 2-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene -P (O) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) -OH, - (C5-C50) -heteroarylene-P (O) -OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) (S) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) (S) -OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C30) alkylene-CN, - (C3-C50) cycloalkylene-CN, - (C6-C50) arylene-CN, - (C5-C50) heteroarylene-CN, wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group, nitrile group and phosporic acid group contained in R10′ is optionally linked to a support material or protected with a terminal protective group;
wherein each R11′ is attached to any one of P′, Q′, S′ and T′, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C1-C20) alkyl, (C1-C20) alkoxy, (C1-C20) alkoxycarbonyl, halogenated (C1-C20) alkyl and halogenated (C1-C20) alkoxycarbonyl; and 
wherein M′ is an integer of 1, 2 or 3, N′ is an integer of 1, 2 or 3, and M′+N′=4.
In another specific embodiment, one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group, nitrile group and phosphoric acid group contained in each of A1, A2, A3, B, C, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R1′, R2′, R3′, R4′, R5′, R6′, R7′, R8′, R9′, R10′ and R11′ are optionally protected with a terminal protection group RP selected from the group consisting of (C1-C22) alkyl, (C1-C22) alkoxy, (C1-C22) alkylcarbonyl, (C1-C22) alkoxycarbonyl, (C6-C22) aryl, (C6-C22) aryloxy, (C6-C22) arylcarbonyl, (C6-C22) aryloxycarbonyl, glucosyl, acetamide glucosyl, galactosamine, N-acetyl galactosamine, tri ( (C1-C22) alkyl) silyl and tri ( (C1-C22) alkoxy) silyl; and 
wherein the support material is selected from the group consisting of silica, silica gel, glass, ceramic, polymer, cellulose, and combinations thereof.
In another specific embodiment, the oligonucleotide delivery enhancing compound has a structure represented by any of Formula AIV to Formula AXIII and Formula BIV to BXIV,

wherein A1, A2, A3, A4, F, G, H, I, B, C, P, Q, S, T, R6, R7, m, n and M are as defined herein,
wherein each of RING I and RING II is a 4, 5, 6, 7, 8 or 9 member ring;
wherein A4′ is attached to any atom of RING I, and each of A4′, A5′ and A6′ is independently selected from the group consisting of -R1′, -O-R1′, -S-R1′, -C (O) -R1′, -C (O) O-R1′, -O-C (O) -R1′, -C (O) NH-R1′, -C (O) NR2′-R1′, -NH-C (O) -R1′, -NR2′-C (O) -R1′, -O-P (O) 2-O-R1′, -OP (O) (S) -O-R1′, -O-P (O) -O-R1′, -NH-R1′, -NR2′-R1′, - (CH2) r′-NH-R1′, - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NH-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) O-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-C (O) -R1′, - (CH2) r′-C (O) -R1′; - (CH2) r′-C (O) O-R1′; - (CH2) r′-O-C (O) -R1′, - (CH2) r′-R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-NR2′-C (O) - (CH2) s′-R1′, -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -N (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) ; wherein each of R1′ and R3′ is independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, - (C1-C30) alkyl, - (C3-C50) cycloalkyl, - (C6-C50) aryl, - (C1- C30) alkoxy, - (C3-C50) cycloalkoxy, - (C6-C50) aryloxy, -C (O) - (C1-C30) alkyl, -OC (O) (C1-C30) alkyl, -C (O) -O- (C1-C30) alkyl, -C (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C50) aryloxy, -OC (O) - (C6-C50) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C50) aryloxy, -C (O) -phosphate ester group, phosphodiester group, phosphoramidite group, saturated fatty acid group, unsaturated fatty acid group, lipid, PEG, steroid, lipophile, carbohydrate, cholesterol, adamantane, amino acid, peptide, ligand, nucleic acid, oligonucleotide, aptamer, small molecule, antibody, antibody fragment, polyethylene glycol, carbohydrate, antibody, antibody fragment, chloroquine, alkaloid and targeting moiety, wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group and amino group contained in each of R1′ and R3′ are optionally protected; wherein each of R2′, R4′, R5′ and R6′ is independently a halogen atom, a (C1-C12) alkyl, a (C1-C12) alkoxy, a (C6-C16) aryl or a (C6-C16) aryloxy; wherein each of r′, s′, p′ and q′ is an integer from 1 to 22; and
wherein R12′ is attached to any atom of RING II and is selected from the group consisting of -H, hydroxyl, - (C1-C30) alkyl, - (C3-C50) cycloalkyl, - (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-NH2, - (C3-C50) cycloalkylene-NH2, - (C6-C50) arylene-NH2, - (C1-C30) alkoxy, - (C3-C50) cycloalkoxy, - (C6-C50) aryloxy, -C (O) - (C1-C30) alkyl, -OC (O) (C1-C30) alkyl, -C (O) -O- (C1-C30) alkyl, -C (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C50) aryloxy, -OC (O) - (C6-C50) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C50) aryloxy, -C (O) -NH- (C1-C30) alkyl, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -NH- (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-phosporic acid, - (C3-C50) cycloalkylene-phosporic acid, - (C6-C50) arylene-phosporic acid; wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group and phosporic acid group contained in R12′ are optionally protected.
In another specific embodiment, each of F, G, H and I is carbon, m is 1 and n is 3, B is attached to G or H, each of P, Q, S and T is carbon, R6 is attached to any one of Q and S;
wherein the protection group RP is selected from the group consisting of benzyloxycarbonyl (Cbz) , tert-butyldimethylsilyl (TBS) , 4, 4′-dimethoxytrityl (DMTr) , t-butyloxy carbonyl (Boc) , benzyl (Bn) and benzyloxy (BnO) ;
wherein C, on each occurrence, is selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C1-C12) alkyl, (C1-C12) alkoxy, halogenated (C1-C12) alkyl and  halogenated (C1-C12) alkoxy;
wherein B, on each occurrence, is selected from the group consisting of - (C1-C22) alkylene-OH, -O-C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) NH2, - (C1-C16) alkylene-O-C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) NH2, -O-C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) OH, - (C1-C16) alkylene-O-C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) OH, -C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) NH2, - (C1-C16) alkylene-C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) NH2, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-C (O) OH, - (C1-C16) alkylene-C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-C (O) OH, - (C1-C16) alkylene-O-P (-N (C1-C16 alkyl) 2) -O- (C1-C16) alkylene-CN, - (C1-C16) alkylene-O-P (-N (C1-C16 alkyl) 2) -O- (C1-C16) alkylene-OH, - (C1-C16) alkylene-O-P (-N (C1-C16 alkyl) 2) -O- (C1-C16) alkylene-NH2, - (C1-C16) alkylene-O-P (-N (C1-C16 alkyl) 2) -O- (C1-C16) alkylene-C (O) OH, and -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-O-P (-N (C1-C16 alkyl) 2) -O- (C1-C16) alkylene-CN, 
wherein each of A1, A2 and A3 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, linear or branched - (C6-C22) alkyl, linear or branched - (C2-C22) alkenyl, - (C1-C22) alkylene-OH, - (C3-C22) cycloalkyl, - (C3-C22) cycloalkenyl, - (C1-C22) alkylene- (C3-C22) cycloalkyl, - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-R1, - (C1-C22) alkylene-COOR1, -O- (C1-C22) alkyl, - (C6-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene- (C1-C6 alkylene oxide) (1-20) -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -C (O) NH-R1, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, substituted or unsubstituted pyrrole, substituted or unsubstituted pyrroline, substituted or unsubstituted pyrrolidine, substituted or unsubstituted pyrazole, substituted or unsubstituted pyrazoline, substituted or unsubstituted pyrazolidine, substituted or unsubstituted imidazole, substituted or unsubstituted oxazole, substituted or unsubstituted thiazole, substituted or unsubstituted benzopyrrole, substituted or unsubstituted benzopyrroline, substituted or unsubstituted benzopyrrolidine, substituted or unsubstituted benzopyrazole, substituted or unsubstituted benzopyrazoline, substituted or unsubstituted benzopyrazolidine, substituted or unsubstituted benzoimidazole, substituted or unsubstituted benzooxazole, substituted or unsubstituted benzothiazole, and a  substituent represented by Formula AIII,
wherein Y is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of P, Q, S and T is carbon;
wherein each of R3, R4 and R5 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, linear or branched - (C6-C22) alkyl, linear or branched - (C2-C22) alkenyl, - (C1-C22) alkylene-OH, - (C3-C22) cycloalkyl, - (C3-C22) cycloalkenyl, - (C1-C22) alkylene- (C3-C22) cycloalkyl, - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-R1, - (C1-C22) alkylene-COOR1, -O- (C1-C22) alkyl, - (C6-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene- (C1-C6 alkylene oxide) (1-20) -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -C (O) NH-R1, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, substituted or unsubstituted pyrrole, substituted or unsubstituted pyrroline, substituted or unsubstituted pyrrolidine, substituted or unsubstituted pyrazole, substituted or unsubstituted pyrazoline, substituted or unsubstituted pyrazolidine, substituted or unsubstituted imidazole, substituted or unsubstituted oxazole, substituted or unsubstituted thiazole, substituted or unsubstituted benzopyrrole, substituted or unsubstituted benzopyrroline, substituted or unsubstituted benzopyrrolidine, substituted or unsubstituted benzopyrazole, substituted or unsubstituted benzopyrazoline, substituted or unsubstituted benzopyrazolidine, substituted or unsubstituted benzoimidazole, substituted or unsubstituted benzooxazole, and substituted or unsubstituted benzothiazole, 
wherein R7, on each occurrence, is attached to any one of P, Q, S and T, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C1-C20) alkyl, (C1-C20) alkoxy, halogenated (C1-C20) alkyl and halogenated (C1-C20) alkoxy;
wherein M is an integer of 0, 1, 2 or 3;
wherein R6 is attached to any one of P, Q, S and T, and is selected from the group consisting of - (C1-C16) alkylene-, - (C1-C16) alkylene-O-, -O- (C1-C16) alkylene-, - (C1-C16) alkylene-NH-, -NH- (C1-C16) alkylene-, -C (O) - (C1-C16) alkylene-, - (C1-C16) alkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C1-C16) alkylene-, - (C1-C16) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-, -C (O) - NH- (C1-C16) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-O-C (O) -, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-O-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C16) alkyl) - (C1-C16) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C16) alkyl) - (C1-C16) alkylene-O-, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C16) alkyl) - (C1-C16) alkylene-C (O) -N ( (C1-C16) alkyl) - (C1-C16) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C16) alkyl) - (C1-C16) alkylene-C (O) -N ( (C1-C16) alkyl) -, - (C1-C16) alkylene-C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-, - (C1-C16) alkylene-C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-C (O) -NH-, -NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) -O-, -NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-O-, -N ( (C1-C16) alkyl) -C (O) - (C1-C16) alkylene-, -N ( (C1-C16) alkyl) -C (O) - (C1-C16) alkylene-O-, -NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-NH-C (O) -, -N ( (C1-C16) alkyl) -C (O) - (C1-C16) alkylene-N ( (C1-C16) alkyl) -C (O) - (C1-C16) alkylene-, -N ( (C1-C16) alkyl) -C (O) - (C1-C16) alkylene-N ( (C1-C16) alkyl) -C (O) -, - (C1-C16) alkylene-NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-, - (C1-C16) alkylene-NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-NH-C (O) -.
In another specific embodiment, the oligonucleotide delivery enhancing compound has a structure represented by any one of Formula BXV to Formula BXXIX,

wherein each of A1′ and A2′ is a substituent independently selected from the group consisting of -R1′, -O-R1′, -S-R1′, -C (O) -R1′, -C (O) O-R1′, -O-C (O) -R1′, -C (O) NH-R1′, -C (O) NR2′-R1′, -NH-C (O) -R1′, -NR2′-C (O) -R1′, -O-P (O) 2-O-R1′, -OP (O) (S) -O-R1′, -O-P (O) -O-R1′, -NH-R1′, -NR2′-R1′, - (CH2) r′-NH-R1′, - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NH-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) O-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-C (O) -R1′, - (CH2) r′-C (O) -R1′; - (CH2) r′-C (O) O-R1′; - (CH2) r′-O-C (O) -R1′, - (CH2) r′-R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-C (O) - NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-NR2′-C (O) - (CH2) s′-R1′, -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′) (-C (O) -NH- (CH2) q′-R3′) , -N (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′- R1′) (- (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , and -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) ; wherein each of R1′ and R3′ is independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, - (C1-C30) alkyl, - (C3-C50) cycloalkyl, - (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkoxy, - (C3-C50) cycloalkoxy, - (C6-C50) aryloxy, -C (O) - (C1-C30) alkyl, -OC (O) (C1-C30) alkyl, -C (O) -O- (C1-C30) alkyl, -C (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C50) aryloxy, -OC (O) - (C6-C50) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C50) aryloxy, -C (O) -phosphate ester group, phosphodiester group, phosphoramidite group, saturated fatty acid group, unsaturated fatty acid group, lipid, PEG, steroid, lipophile, carbohydrate, cholesterol, adamantane, amino acid, peptide, ligand, nucleic acid, oligonucleotide, aptamer, small molecule, antibody, antibody fragment, polyethylene glycol, antibody, antibody fragment, chloroquine, alkaloid and targeting moiety, wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group and amino group contained in each of R1′ and R3′ are optionally protected; wherein each of R2′, R4′, R5′ and R6′ is independently a halogen atom, a (C1-C12) alkyl, a (C1-C12) alkoxy, a (C1-C12) alkoxycarbonyl, a (C6-C16) aryl or a (C6-C16) aryloxycarbonyl; wherein each of r′, s′, p′ and q′ is an integer from 1 to 22;
wherein m′ is an integer of 1, 2 or 3, n′ is an integer of 1, 2 or 3, and m′+n′=4;
wherein each B′ is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, - (C1-C30) alkoxy, -P (O) 2-OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C5-C50) heteroarylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- [ (C1-C30) alkylene-O] r′-H (wherein r′ is an integer of 1 to 22) , -C (O) -NH- [ (C1-C30) alkylene-O] r′- (C1-C30) alkylene-C (O) -OH (wherein r′ is an integer of 1 to 22) , -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene- (C6-C50) arylene- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1- C30) alkylene-P (O) 2-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) 2-OH, - (C6-C50) arylene-P (O) 2-OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) 2-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene -P (O) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) -OH, - (C5-C50) -heteroarylene-P (O) -OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) (S) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) (S) -OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C30) alkylene-CN, - (C3-C50) cycloalkylene-CN, - (C6-C50) arylene-CN, - (C5-C50) heteroarylene-CN, lipid, PEG, steroid, lipophile, carbohydrate, cholesterol, adamantane, amino acid, peptide, chloroquine and alkaloid;
where each R7′ is selected from the group consisting of -O-, -C (O) O-, -O-C (O) -, -P (O) 2-O-, -O-P (O) 2-O-, -P (O) (S) -O-, -O-P (O) (S) -O-, -O-P (O) -O-, - (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-O-, -O- (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-NH-, -NH- (C1-C30) alkylene-, -C (O) - (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-C (O) -, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-O-, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-O-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) -, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-N ( (C1-C20) alkyl) - C (O) - (C1-C30) alkylene-, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) -, - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C30) alkylene -P (O) 2-O-, - (C1-C30) alkylene-O-P (O) 2-O-, - (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-O-, -O- (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-NH-, -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) - (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-O-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH-, - (C3-C50) cycloalkylene -P (O) 2-O-, - (C3-C50) cycloalkylene-O-P (O) 2-O-, - (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-O-, -O- (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-NH-, -NH- (C6-C50) arylene-, -C (O) - (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-C (O) -, -C (O) -O- (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-O-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH-, - (C6-C50) arylene -P (O) 2-O-, - (C6-C50) arylene-O-P (O) 2-O-, - (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-O-, -O- (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-NH-, -NH- (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) - (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -, -C (O) -O- (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-O-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5- C50) heteroarylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH-, - (C5-C50) heteroarylene -P (O) 2-O-, - (C5-C50) heteroarylene-O-P (O) 2-O-; wherein each R8′ is a substituent independently selected from the group consisting of -H, hydroxyl, - (C1-C30) alkyl, - (C3-C50) cycloalkyl, - (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-NH2, - (C3-C50) cycloalkylene-NH2, - (C6-C50) arylene-NH2, - (C1-C30) alkoxy, - (C3-C50) cycloalkoxy, - (C6-C50) aryloxy, -C (O) - (C1-C30) alkyl, -OC (O) (C1-C30) alkyl, -C (O) -O- (C1-C30) alkyl, -C (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C50) aryloxy, -OC (O) - (C6-C50) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C50) aryloxy, -C (O) -NH- (C1-C30) alkyl, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -NH- (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-phosphoric acid, - (C3-C50) cycloalkylene-phosphoric acid, - (C6-C50) arylene-phosporic acid; wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group and phosporic acid group contained in each of R8′ are optionally protected with a terminal protective group; and
wherein each R10′ is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, -P (O) 2-OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C5-C50) heteroarylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) NH2, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene- NH2, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) 2-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) 2-OH, - (C6-C50) arylene-P (O) 2-OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) 2-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O- P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene -P (O) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) -OH, - (C5-C50) -heteroarylene-P (O) -OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) (S) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) (S) -OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C30) alkylene-CN, - (C3-C50) cycloalkylene-CN, - (C6-C50) arylene-CN, - (C5-C50) heteroarylene-CN, wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group, nitrile group and phosporic acid group contained in R10′ is optionally linked to a support material or protected with a terminal protective group.
In another specific embodiment, the oligonucleotide delivery enhancing compound has a structure of

















wherein represents a support material.
In another specific embodiment, at least one hydrogen atom contained in the oligonucleotide delivery enhancing compound is substituted with deuterium atom.
In another specific embodiment, the present disclosure provides an oligonucleotide delivery agent, comprising a delivery enhancing compound (DEC) moiety derivable from the oligonucleotide delivery enhancing compound as indicated herein and at least one oligonucleotide.
In another specific embodiment, the oligonucleotide delivery enhancing compound moiety is linked with the oligonucleotide via at least one linking moiety selected from the group consisting of direct bond, -O-, -S-, -C (O) -, -NH-, -N ( (C1-C12) alkyl) -, -N ( (C1-C12) alkyl) -C (O) -O-, -O-C (O) -, -C (O) -O-, -O-C (O) -O-, -C (O) -NH-, -OP (O) 2O-, -P (O) (O-) O-, -OP (O) O-, -OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2-O-, -S (O) 2-O-, -S (O) -O-, - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH- (C1-C22) alkylene-NH-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) O-, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -O- (C1-C22) alkylene-O-C (O) -, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) (O-) O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) (O-) O- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) (S) O-, - (C1-C22) alkylene-O-S (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-S (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-S (O) -O-, -O-P (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, -O-P (O) -O- (C1-C22) alkylene-OP (O) O-, -OP (O) (S) O- (C1-C22) alkylene-OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-O-S (O) 2- O-, -S (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-S (O) 2-O-and -O-S (O) - (C1-C22) alkylene-S (O) -O-; and
the oligonucleotide is selected from the group consisting of antisense oligonucleotide (ASO) , antisense RNA, short interfering RNA (siRNA) , micro-RNA (miRNA) , small activating RNA (saRNA) , double-stranded RNA (dsRNA) , and small guide RNA (sgRNA) .
In another specific embodiment, the oligonucleotide comprises at least part of the sequence as set forth in SEQ ID NO 1 to 53.
In another specific embodiment, the oligonucleotide delivery agent comprises a structure represented by Formula AA
wherein the delivery enhancing compound (DEC) moiety is derived from the oligonucleotide delivery enhancing compound according to any one of claims 1 to 9 and is linked to at least one oligonucleotide directly or indirectly.
In another specific embodiment, the DEC is linked with the oligonucleotide via at least one first linking moiety.
In another specific embodiment, the TM is linked with the DEC via at least one second linking moiety.
In another specific embodiment, each of the first linking moiety and the second linking moiety is independently selected from the group consisting of direct bond, -O-, -S-, -C (O) -, -NH-, -N ( (C1-C12) alkyl) -, -N ( (C1-C12) alkyl) -C (O) -O-, -O-C (O) -, -C (O) -O-, -O-C (O) -O-, -C (O) -NH-, -OP (O) 2O-, -OP (O) O-, -OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2-O-, -S (O) 2-O-, -S (O) -O-, - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH- (C1-C22) alkylene-NH-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) O-, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -O- (C1-C22) alkylene-O-C (O) -, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, -NH- (C1-C22) alkylene-CH ( (C1-C22) alkylene-OH) -OP (O) 2O-, -NH- (C1-C22) alkylene-CH ( (C1-C22) alkylene-OH) - (C1- C22) alkylene-OP (O) 2O-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) (S) O-, - (C1-C22) alkylene-O-S (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-S (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-S (O) -O-, -O-P (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, -O-P (O) -O- (C1-C22) alkylene-OP (O) O-, -OP (O) (S) O- (C1-C22) alkylene-OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-O-S (O) 2-O-, -S (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-S (O) 2-O-and -O-S (O) - (C1-C22) alkylene-S (O) -O-; and/or 
wherein the oligonucleotide is selected from the group consisting of short interfering RNA (siRNA) , small activating RNA (saRNA) , microRNA (miRNA) , antisense oligonucleotide (ASO) and small guide RNA (sgRNA) .
In another specific embodiment, the targeting moiety is one or more selected from the group consisting of ligands, peptides, nucleic acids, oligonucleotides, aptamers, lipids, fatty acids, small molecules, polyethylene glycols, amino acids, cholesterols, carbohydrates, and antibodies or antibody fragments.
In another specific embodiment, the oligonucleotide delivery agent has a structure represented by any of the formulae AAI to AAXXIV:


wherein L represents the linking moiety, ☆ represents the oligonucleotide delivery enhancing compound, the symbol adouble strand oligonucleotide in which each of the strands represents interchangeably a sense strand or an antisense strand, either symmetric or asymmetric independently on each of the ends; the symbol represents a single strand oligonucleotide, and each of a, b and c is independently an integer from 1 to 50.
In another specific embodiment, at least one hydrogen atom contained in the delivery enhancing compound moiety, the linking moiety, the targeting moiety and/or the oligonucleotide is substituted with deuterium atom.
In another specific embodiment, the present disclosure provides a pharmaceutical composition, the composition comprising: a) the oligonucleotide delivery agent as indicated herein; and b) optionally, one or more ingredients selected from the group consisting of pharmaceutically acceptable carrier, excipient, solvent, diluent, stabilizer, dispersant, buffer, compatibilizer, preservative agent and combinations thereof.
In another specific embodiment, the present disclosure provides a method of modulating the expression of a target gene in a subject, the method comprising the step of administrating the pharmaceutical composition as indicated herein to a subject.
In another specific embodiment, the oligonucleotide or the target gene comprises at least part of the sequence as set forth in at least part of the sequence as set forth in SEQ ID NO 1 to 53.
In another specific embodiment, the pharmaceutical composition increases the expression of the target gene. In another specific embodiment, the pharmaceutical composition decreases the expression of the target gene. In another specific embodiment, the subject is a mammal. In another specific embodiment, the mammal is a rodent. In another specific embodiment, the rodent is a mouse. In another specific embodiment, the rodent is a rat. In another specific embodiment, the mammal is a non-human primate. In another specific  embodiment, the mammal is a human. In another specific embodiment, the target gene is associated with a disease or disorder. In another specific embodiment, the target gene is associated with a disease or disorder in the central nervous system (CNS) , brain, spinal cord, liver, lung, kidney, intestine, pancreas, cholecyst, heart, lymph nodes, spleen, stomach, bladder, muscle or bone. In another specific embodiment, the disease is cancer.
In another specific embodiment, the present disclosure provides a method of modulating the expression of a target gene, the method comprising contacting a cell with the pharmaceutical composition as indicated herein.
In another specific embodiment, the oligonucleotide or the target gene comprises at least part of the sequence as set forth in at least part of the sequence as set forth in SEQ ID NO: 1 to 53.
In another specific embodiment, the pharmaceutical composition increases the expression of the target gene. In another specific embodiment, the pharmaceutical composition decreases the expression of the target gene. In another specific embodiment, the cell is a mammalian cell. In another specific embodiment, the mammalian cell is a mouse cell. In another specific embodiment, the mammalian cell is a rat cell. In another specific embodiment, the mammalian cell is a non-human primate cell. In another specific embodiment, the mammalian cell is a human cell. In another specific embodiment, the target gene is associated with a disease or disorder. In another specific embodiment, the target gene is associated with a disease or disorder in the central nervous system (CNS) , brain, spinal cord, liver, lung, kidney, intestine, pancreas, cholecyst, heart, lymph nodes, spleen, stomach, bladder, muscle or bone. In another specific embodiment, the disease is cancer.
EXAMPLES
Some embodiments of the invention will now be described in the following Examples, wherein all parts and percentages are by weight unless otherwise specified. However, the scope of the present disclosure is not, of course, limited to the formulations set forth in these examples. Rather, the Examples are merely inventive of the disclosure.
The following examples are set forth so as to provide those of ordinary skill in the art with a complete disclosure and description of how to make and use the present invention and are not intended to limit the scope of what the inventors regard as their invention nor are they  intended to represent that the experiments below are all or the only experiments performed. Efforts have been made to ensure accuracy with respect to numbers used (e.g., amounts, temperature, etc. ) but some experimental errors and deviations should be accounted for. Unless indicated otherwise, parts are parts by weight, molecular weight is weight average molecular weight, temperature is in degrees Celsius, and pressure is at or near atmospheric. Standard abbreviations may be used, e.g., bp, base pair (s) ; kb, kilobase (s) ; nM, nanomolar (s) ; s or sec, second (s) ; min, minute (s) ; h or hr, hour (s) ; aa, amino acid (s) ; nt, nucleotide (s) ; i. m., intramuscular (ly) ; i. p., intraperitoneal (ly) ; s. c., subcutaneous (ly) ; ivt or IVT, intravitreal; iv or IV, tail vein, intravenous; i. c. v. or icv or ICV, intracerebroventricular and the like.
All the starting materials, reagents and solvents used hereafter were purchased from commercial sources and used as received unless stated otherwise. Purification of reaction products was performed with a column chromatography comprising a silica gel (200-300 mesh) and eluting agents of hexane/ethyl acetate, DCM/MeOH. Thin layer chromatography (TLC) was carried out using pre-coated silica Gel GF plates and visualized using KMnO4 stains. 1H-NMR spectra were recorded at 400 or 500 MHz (Varian) using CDCl3 with TMS. High-resolution mass spectra (HRMS) were recorded on LC/MS (Agilent Technologies 1260 Infinity II/6120 Quadrupole) and a time-of-flight mass spectrometer by ESI or matrix assisted laser desorption/ionization (MALDI) .
Example 1. The preparation of compound A1 of the present disclosure
Compound A1 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound A62
To a solution of Fmoc-L-hydroxyproline A61 (13.3 g, 37.6 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (250 mL) , was added borane-methyl sulfide complex (8.0 mL of 10 M in THF, 80 mmol,  2.1 eq) slowly at room temperature. The reaction mixture was stirred for 5 min at room temperature and then heated to reflux for about 1 h. Methanol (15 mL) was carefully added to the reaction mixture, which was refluxed for 15 min. After that, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. Then the crude products were evaporated three times with methanol (100 mL each) . The crude product A62 was directly used in the next step without further purification.
(2) The preparation of compound A63
To a solution of compound A62 (37.6 mmol, 1.0 eq) in anhydrous pyridine (200 mL) , was added DMTrCl (14 g, 41.4 mmol, 1.1 eq) slowly at ice bath. The reaction was stirred under nitrogen atmosphere overnight and then concentrated under reduced pressure. The crude product was dissolved in dry MeCN (300 mL) then the mixture was added Et3N (15.6 mL, 113 mmol, 3.0 eq) and heated to 60 ℃ for 4 h. After concentrated under reduced pressure, the resulting residue was purified by flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-8%of MeOH/DCM) to provide the desired product A63 (7.57 g, 48%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 419.21; MW Found: 303.2 [DMT] -. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.41 (d, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.30 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 7.28 -7.22 (m, 2H) , 7.18 (t, J = 7.2 Hz, 1H) , 6.80 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 4.34 (s, 1H) , 3.75 (d, J = 11.1 Hz, 6H) , 3.60 (dd, J = 12.7, 6.7 Hz, 1H) , 3.10 -2.92 (m, 5H) , 2.86 (d, J = 11.5 Hz, 1H) , 1.85 (dd, J = 13.5, 7.1 Hz, 1H) , 1.63 (ddd, J = 13.7, 7.9, 5.9 Hz, 1H) .
(3) The preparation of compound A66
To a solution of compound A64 (1.4 g, 7.2 mmol, 2.0 eq) in DCM (30 mL) , was added compound A65 (1.0 g, 3.6 mmol, 1.0 eq) , O-Benzotriazol-1-yl-N, N, N', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU) (2.7 g, 7.2 mmol, 2.0 eq) and N, N-Diisopropylethylamine  (DIPEA) (0.93 g, 7.2 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then 30 mL H2O was added into the reaction mixture, and the mixture was extracted with DCM (3*30 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified by using flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A66 (1.7 g, 94%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 453.31; MW Found: 454.29 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.69 -3.61 (m, 5H) , 3.59 -3.53 (m, 8H) , 3.48 (t, J = 5.2 Hz, 2H) , 3.35 (dd, J = 10.7, 5.3 Hz, 2H) , 3.15 (qd, J = 7.4, 4.4 Hz, 3H) , 2.43 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 1.92 -1.85 (m, 5H) , 1.54 -1.52 (m, 4H) , 1.37 (s, 12H) .
(4) The preparation of compound A67
To a solution of compound A66 (0.8 g, 1.7 mmol, 1.0 eq) in DCM (10 mL) , was added HCl/Dioxane (4M, 10 mL) . The reaction mixture was stirred for 3 h at room temperature, then concentrated under reduced pressure to provide crude product as yellow oil. The crude product was dissolved in DCM (10 mL) then added compound A63 (583 mg, 1.7 mmol, 1.0 eq) , HBTU (1.28 g, 3.4 mmol, 2.0 eq) and DIPEA (439 mg, 3.4 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then 10 mL H2O was added into the reaction mixture, and the mixture was extracted with DCM (3*20 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified by using flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 10%of MeOH/DCM) to provide compound A67 (261 mg, 21%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 798.45; MW Found: 303.31 [DMT] -, 519.62 [DMT off + Na] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36 (d, J = 7.7 Hz, 2H) , 7.26 -7.23 (m, 6H) , 7.17 (t, J = 7.0 Hz, 1H) , 6.81 (dd, J = 11.4, 5.1 Hz, 4H) , 3.85 -3.81 (m, 1H) , 3.77 (s, 6H) ,  3.62 -3.56 (m, 8H) , 3.53 (dd, J = 9.1, 4.5 Hz, 2H) , 3.44 -3.32 (m, 4H) , 2.73 (q, J = 7.2 Hz, 6H) , 2.45 -2.33 (m, 1H) , 2.26 -2.16 (m, 1H) , 2.15 -2.02 (m, 1H) , 1.99 -1.90 (m, 5H) , 1.72 -1.66 (m, 3H) , 1.63 -1.58 (m, 9H) .
(5) The preparation of compound A68
To a solution of compound A67 (666 mg, 0.92 mmol, 1.0 eq) , DMAP (393 mg, 3.22 mmol, 3.5 eq) in DCM (6 mL) , succinic anhydride (282 mg, 2.76 mmol, 3.0 eq) were added under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight, and then H2O (10 mL) was added into the reaction. The mixture was extracted with DCM (3*10 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound A68 (447 mg, 59%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 898.46; MW Found: 303.15 [DMT] -, 597.98 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36 -7.32 (m, 2H) , 7.27 -7.25 (m, 6H) , 7.19 -7.16 (m, 1H) , 6.85 -6.76 (m, 4H) , 5.46 -5.32 (m, 1H) , 3.82 (d, J = 6.3 Hz, 1H) , 3.77 (s, 6H) , 3.60 (dd, J = 9.3, 4.5 Hz, 8H) , 3.53 (t, J = 5.0 Hz, 2H) , 3.44 -3.40 (m, 2H) , 3.14 (dd, J = 9.2, 2.9 Hz, 1H) , 2.99 -2.93 (m, 6H) , 2.62 -2.45 (m, 5H) , 2.34 -2.28 (m, 1H) , 2.19 -2.04 (m, 1H) , 1.96 -1.92 (m, 5H) , 1.69 -1.66 (m, 3H) , 1.62 -1.58 (m, 9H) .
(6) The preparation of compound A1
To a solution of compound A68 (200 mg, 0.223 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (3.9 g) , DIPEA (111 μL, 0.669 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (30 mL) was added HBTU (169 mg, 0.446 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at  25 ℃ overnight and then sequentially washed with DCM and ethyl ether to produce the crude solid support. To a solution of acetic anhydride (12 mL) , pyridine (28 mL) , NEt3 (401 μL) in acetonitrile (18 mL) was added the crude solid support under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25℃ overnight and then sequentially washed with DCM and ethyl ether to produce Compound A1 of the present disclosure (3.67 g) .
Example 2. The preparation of compound A2 of the present disclosure
Compound A2 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound A70
To a solution of methyl 4-fluoro-3-nitrobenzoate A69 (8.0 g, 40.2 mmol, 1.0 eq) and K2CO3 (5.5 g, 40.2 mmol) in anhydrous DMF (100 mL) , under nitrogen atmosphere, was added benzyl (3-aminopropyl) carbamate (8.3 g, 40.2 mmol, 1.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 6 h, then cold water (100 mL) was added. The mixture was extracted 3 times by ethyl acetate, then the organic phase was washed three times by saturated LiCl solution and one time by brine. Then dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form yellow solid compound A70 which was directly used in the next step without further purification.
(2) The preparation of compound A72
To a solution of compound A70 (10 g, 25.84 mmol, 1.0 eq) in THF/H2O (9: 1, 100 mL) , under ice bath, was added HCOONH4 (9.78 g, 155.04 mmol, 6.0 eq) and Zn powder (10.14 g, 155.04 mmol, 6.0 eq) . After 10 minutes, the reaction mixture was moved to room temperature and stirred overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (100 mL) was added into the mixture, then extracted three times by ethyl acetate, the organic phase was washed one time by brine. After dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the light red solid compound A72 formed then was directly used in the next step without further purification.
(3) The preparation of compound A73.
To a solution of compound A72 (8.0 g, 22.5 mmol, 1.0 eq) in EtOH (200 mL) under nitrogen atmosphere, was added 3- ( (tert-butyldimethylsilyl) oxy) propanal (4.2 g, 22.5 mmol, 1.0 eq) and AcOH (5.1 mL, 90 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80℃ overnight, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (100 mL) was added, the mixture was extracted three times by ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue compound A73 was directly used in the next step without further purification. The compound A73 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 525.27; MW. Found: 526.59 [M+H] +.
(4) The preparation of compound A74
To a solution of compound A73 (5.0 g, 9.5 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (50 mL) , under nitrogen atmosphere, was added 1 M TBAF THF solution (14.25 mL, 14.25 mmol, 1.5 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, and then concentrated under  reduced pressure. Then water (100 mL) was added, the mixture was extracted three times by DCM, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was dissolved in 50 mL pyridine, and DMTrCl (3.86 g, 11.4 mmol, 1.2 eq) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h, after concentrated under reduced pressure, the resultant residue was purified by flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A74 (4.1 g, 60%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 713.31; MW Found: 303.17 [DMT] -, 412.36 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.39 (d, J = 1.1 Hz, 1H) , 7.96 (dd, J = 8.5, 1.3 Hz, 1H) , 7.38 -7.27 (m, 8H) , 7.20 (dq, J = 6.7, 2.5 Hz, 7H) , 6.76 -6.70 (m, 4H) , 5.10 (s, 2H) , 4.19 (t, J = 7.3 Hz, 2H) , 3.94 (s, 3H) , 3.74 (s, 6H) , 3.65 (t, J = 6.6 Hz, 2H) , 3.20 (d, J = 6.3 Hz, 2H) , 3.09 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 2.00 -1.90 (m, 2H) .
(5) The preparation of compound A75
To a solution of compound A74 (4.0 g, 5.6 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (50 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (319 mg, 8.4 mmol, 1.5 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (30 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with Et2O, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was dissolved in 50 mL DMF, then imidazole (572 mg, 8.4 mmol, 1.5 eq) and TBSCl (1.27 g, 8.4 mmol, 1.5 eq) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, after concentrated under reduced pressure, the resultant residue was purified by flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A75 (4.03 g, 90%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 799.40; MW. Found: 303.17 [DMT] . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.65 (s, 1H) , 7.38 -7.29 (m, 7H) , 7.19 (ddd, J = 8.4, 7.9, 3.7 Hz, 9H) , 6.78 -6.71 (m, 4H) , 5.10 (s, 2H) , 4.84 (s, 2H) , 4.16 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.75 (s, 6H) , 3.61  (t, J = 6.8 Hz, 2H) , 3.18 (d, J = 6.3 Hz, 2H) , 3.07 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 2.95 (s, 1H) , 2.88 (s, 1H) , 0.94 (s, 9H) , 0.10 (s, 6H) .
(6) The preparation of compound A78
To a solution of compound A75 (220 mg, 0.276 mmol, 1.0 eq) in MeOH (8 mL) , was added Pd/C (22 mg) under nitrogen atmosphere slowly. Then the reaction atmosphere was replaced with hydrogen three times. After that, the reaction mixture was stirred by purging with a hydrogen balloon at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure to provide crude product. The crude product was dissolved in DCM (8 mL) , then compound A77 (64 mg, 0.33 mmol, 1.2 eq) , HBTU (209 mg, 0.552 mmol, 2.0 eq) and DIPEA (155 μL, 0.938 mmol, 3.4 eq) were added into the reaction mixture under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then H2O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A78 (199 mg, 86%yield) as yellow oil. The product was characterized by mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 841.48; MW Found: 303.2 [DMT] -, 540.3 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.64 (d, J = 6.5 Hz, 1H) , 7.34 -7.27 (m, 4H) , 7.22 -7.17 (m, 6H) , 6.83 (dd, J = 8.1, 2.7 Hz, 1H) , 6.81 -6.65 (m, 4H) , 4.84 (d, J = 3.3 Hz, 2H) , 4.23 -4.15 (m, 2H) , 3.87 -3.78 (m, 2H) , 3.77 (s, 6H) , 3.72 -3.48 (m, 2H) , 3.29 -3.19 (m, 2H) , 3.17 -3.06 (m, 2H) , 1.87 -1.81 (m, 6H) , 1.68 -1.57 (m, 11H) , 0.95 (s, 9H) , 0.11 (s, 6H) .
(7) The preparation of compound A79
To a solution of compound A78 (165 mg, 0.196 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (5 mL) , under nitrogen atmosphere, was added 1 M TBAF THF solution (1.18 mL, 1.18 mmol, 6.0 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, and then concentrated under reduced pressure to provide crude product. The crude product was dissolved in DCM (8 mL) , then DMAP (84 mg, 0.686 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (39 mg, 0.392 mmol, 2.0 eq) were added under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H2O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) and the organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-8%of MeOH/DCM) to provide compound A79 (97 mg, 60%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 827.41; MW Found: 303.2 [DMT] -, 527.3 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.66 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 7.33 -7.29 (m, 2H) , 7.24 (s, 2H) , 7.23 -7.14 (m, 7H) , 6.75 (dd, J = 8.1, 5.6 Hz, 4H) , 5.22 (s, 2H) , 4.18 (s, 2H) , 3.75 (s, 6H) , 3.61 (t, J = 6.7 Hz, 2H) , 3.23 (s, 2H) , 3.08 (d, J = 13.2 Hz, 2H) , 2.95 (dd, J = 14.6, 7.3 Hz, 2H) , 2.71 -2.55 (m, 4H) , 1.98 -1.92 (m, 4H) , 1.85 (d, J = 3.6 Hz, 2H) , 1.70 -1.59 (m, 6H) , 1.33 -1.16 (m, 5H) .
(8) The preparation of compound A2
To a solution of the compound A79 (85 mg, 0.103 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (1.8 g) , DIPEA (51 μL, 0.31 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (14 mL) was added HBTU (78 mg, 0.206 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to generate crude solid support. To a solution of acetic anhydride (6.2 mL) , pyridine (12 mL) , NEt3 (186  μL) in acetonitrile (7.9 mL) was added the crude solid support under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to produce the Compound A2 of the present disclosure (1.62 g) .
Example 3. The preparation of Compound A3 of the present disclosure.
The Compound A3 of the present disclosure was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound A81
To a solution of compound A75 (1.44 g, 1.8 mmol, 1.0 eq) in MeOH (30 mL) , was added Pd/C (144 mg) under nitrogen atmosphere slowly. Then the reaction atmosphere was replaced with hydrogen three times. After that, the reaction mixture was stirred by purging with a hydrogen balloon at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure to provide crude product. The crude product was dissolved in DCM (40 mL) , then palmitic acid (508 mg, 1.98 mmol, 1.1 eq) , HBTU (1.36 g, 3.6 mmol, 2.0 eq) and DIPEA (1.01 mL, 6.12 mmol, 3.4 eq) were added into the reaction mixture under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then H2O (30 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*40 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A81 (1.43 g, 88%yield) as yellow oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 903.59; MW Found: 303.2 [DMT] -, 488.4 [DMT and TBS off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.62 (d, J = 4.7 Hz, 1H) , 7.33 -7.27 (m, 4H) , 7.22 -7.16 (m, 7H) , 6.74 (dd, J = 8.1, 5.6 Hz, 4H) , 4.83 (s, 2H) ,  4.23 -4.16 (m, 2H) , 3.76 (s, 6H) , 3.62 (dd, J = 11.9, 5.3 Hz, 2H) , 3.27 -3.21 (m, 2H) , 3.15 (d, J = 6.9 Hz, 2H) , 2.11 -2.05 (m, 2H) , 2.03 -1.90 (m, 2H) , 1.34 -1.25 (m, 29H) , 0.95 (s, 9H) , 0.11 (s, 6H) .
(2) The preparation of compound A82
To a solution of compound A81 (1.4 g, 1.55 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (30 mL) , under nitrogen atmosphere, was added 1 M TBAF THF solution (4.65 mL, 4.65 mmol, 3.0 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, and then concentrated under reduced pressure to provide crude product. The crude product was dissolved in DCM (40 mL) , then DMAP (660 mg, 5.4 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (465 mg, 4.65 mmol, 3.0 eq) were added therein under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H2O (30 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*30 mL) and the organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-8%of MeOH/DCM) to provide compound A82 (827 mg, 60%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 889.52; MW Found: 303.1 [DMT] -, 588.3 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.65 (d, J = 4.5 Hz, 1H) , 7.34 -7.28 (m, 2H) , 7.25 -7.14 (m, 9H) , 6.74 (dd, J = 8.1, 5.5 Hz, 4H) , 5.21 (s, 2H) , 4.34 -3.90 (m, 2H) , 3.74 (s, 6H) , 3.60 (dd, J = 12.1, 5.4 Hz, 2H) , 3.22 -3.16 (m, 2H) , 3.09 -3.04 (m, 2H) , 2.63 -2.60 (m, 4H) , 2.16 -2.01 (m, 2H) , 1.97 -1.84 (m, 2H) , 1.33 -1.23 (m, 26H) , 0.87 (t, J = 6.7 Hz, 3H) .
(3) The preparation of compound A3
To a solution of the compound A82 (120 mg, 0.13 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (2.29 g) , DIPEA (65 μL, 0.39 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (15 mL) was added HBTU (99 mg, 0.26 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to generate crude solid support. To a solution of acetic anhydride (7.8 mL) , pyridine (15 mL) , NEt3 (234 μL) in acetonitrile (10 mL) was added the crude solid support under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to produce the Compound A3 of the present disclosure (2.1 g) .
Example 4. The preparation of compound A4 and compound A5 of the present disclosure 
Compound A4 and compound A5 were prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound A85
To a solution of methyl 2- (4-fluoro-3-nitrophenyl) acetate A84 (17.3 g, 81 mmol, 1.0 eq) and K2CO3 (11.2 g, 81 mmol) in anhydrous DMF (200 mL) , under nitrogen atmosphere, was added compound A83 (19.56 g, 81 mmol, 1.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 55 ℃ for 6 h, then cold water (100 mL) was added. The mixture was extracted three times by ethyl acetate, then the organic phase was washed three times by saturated LiCl solution and one time by brine. Then dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form yellow oil compound A85 which was directly used in the next step without further purification.
(2) The preparation of compound A86
To a solution of compound A85 (35.18 g, 81 mmol, 1.0 eq) in THF/H2O (9: 1, 280 mL) , under ice bath, was added HCOONH4 (30.67 g, 486 mmol, 6.0 eq) and Zn powder (31.78 g, 486 mmol, 6.0 eq) . After 10 minutes, the reaction mixture was moved to room temperature and stirred overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (200 mL) was added into the mixture, then extracted three times by ethyl acetate, the organic phase was washed one time by brine. After dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the product A86 formed then was directly used in the next step without further purification. The compound A86 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 404.34; MW. Found: 405.3 [M+H] +.
(3) The preparation of compound A88
To a solution of compound A86 (19.36 g, 48 mmol, 1.0 eq) in EtOH (200 mL) under nitrogen atmosphere, was added 3- ( (tert-butyldimethylsilyl) oxy) propanal A87 (9.0 g, 48 mmol, 1.0 eq) and AcOH (11 mL, 192 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80℃  overnight, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (100 mL) was added, the mixture was extracted three times by ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue compound A88 was directly used in the next step without further purification.
(4) The preparation of compound A89
To a solution of compound A88 (10 g, 17.5 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (50 mL) under nitrogen atmosphere, was added 1 M TBAF THF solution (26.3 mL, 26.3 mmol, 1.5 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, and then concentrated under reduced pressure. Then water (100 mL) was added, the mixture was extracted three times with DCM, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was dissolved in 50 mL pyridine, and DMTrCl (7.12 g, 21 mmol, 1.2 eq) was added therein. The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h, after which it was concentrated under reduced pressure. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-3%of MeOH/DCM) to provide compound A89 (8.1 g, 61%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 760.48; MW. Found: 761.8 [M + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.59 -7.53 (m, 1H) , 7.38 -7.31 (m, 2H) , 7.23 -7.19 (m, 6H) , 7.18 -7.14 (m, 3H) , 6.76 (dd, J = 7.8, 5.6 Hz, 4H) , 4.17 -4.02 (m, 2H) , 3.76 (s, 6H) , 3.73 (s, 2H) , 3.67 (s, 3H) , 3.59 (t, J = 7.0 Hz, 2H) , 3.19 -3.05 (m, 2H) , 1.29 -1.25 (m, 28H) , 0.88 (t, J = 6.5 Hz, 3H) .
(5) The preparation of compound A90
To a solution of compound A89 (2.7 g, 3.55 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (20 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (202 mg, 5.33 mmol, 1.5 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction  was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (20 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with Et2O, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The crude product (300 mg, 0.41 mmol, 1.0 eq) was dissolved in DCM (10 mL) , then DMAP (175 g, 1.44 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (123 mg, 1.23 mmol, 3.0 eq) were added under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H2O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*20 mL) and the organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound A90 (113 mg, 33%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 832.50; MW Found: 303.2 [DMT] -, 531.3 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.63 (s, 1H) , 7.31 (dd, J = 7.6, 4.1 Hz, 2H) , 7.28 -7.11 (m, 9H) , 6.74 (dd, J = 7.9, 5.6 Hz, 4H) , 4.35 -4.32 (m, 2H) , 4.12 -4.08 (m, 2H) , 3.75 (s, 6H) , 3.59 (dd, J = 11.8, 5.1 Hz, 2H) , 3.24 -3.10 (m, 2H) , 3.09 -2.96 (m, 2H) , 2.63 (dd, J = 7.2, 3.0 Hz, 4H) , 1.37 -1.25 (m, 28H) , 0.88 (t, J = 6.5 Hz, 3H) .
(6) The preparation of compound A4
To a solution of the compound A90 (90 mg, 0.108 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (1.89 g) , DIPEA (54 μL, 0.324 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (14 mL) was added HBTU (82 mg, 0.216 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to generate crude solid support. To a solution of acetic anhydride (6.5 mL) , pyridine (12.6 mL) , NEt3 (195 μL) in acetonitrile (8.3 mL) was added the crude solid support under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to produce the Compound A4 of the present disclosure (1.7 g) .
(7) The preparation of compound A5
To a solution of compound A89 (2.7 g, 3.55 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (20 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (202 mg, 5.33 mmol, 1.5 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (20 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with Et2O, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The crude product (300 mg, 0.41 mmol, 1.0 eq) was dissolved in anhydrous DCM (5 mL) then DIPEA (204 μL, 1.23 mmol, 3.0 eq) , 3- ( (chloro (diisopropylamino) phosphanyl) oxy) propanenitrile (274 μL, 1.23 mmol, 3.0 eq. ) were added under nitrogen atmosphere at 25℃. The reaction mixture was stirred for 1 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM, 1%Et3N) to provide compound A5 (299 mg, 78%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 946.61; MW Found: 303.2 [DMT] -. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.62 (s, 1H) , 7.32 (dd, J = 7.6, 4.1 Hz, 2H) , 7.27 -7.11 (m, 9H) , 6.73 (dd, J = 7.9, 5.6 Hz, 4H) , 4.34 -4.31 (m, 2H) , 4.10 -4.06 (m, 2H) , 3.75 (s, 6H) , 3.64 -3.61 (m, 2H) , 3.58 (dd, J = 11.8, 5.1 Hz, 2H) , 3.24 -3.18 (m, 2H) , 3.09 -2.88 (m, 4H) , 2.65 -2.55 (m, 4H) , 1.37 -1.28 (m, 28H) , 1.22 (dd, J = 6.8, 3.2 Hz, 12H) , 0.88 (t, J = 6.5 Hz, 3H) .
Example 5. The preparation of compound A6 of the present disclosure
Compound A6 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound A92
To a solution of compound A72 (8.87 g, 24.84 mmol, 1.0 eq) in EtOH (220 mL) under nitrogen atmosphere, was added 5- ( (tert-butyldimethylsilyl) oxy) pentanal A91 (5.4 g, 24.84 mmol, 1.0 eq) and AcOH (5.73 mL, 99.36 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80℃ overnight, and then concentrated under reduced pressure. Then saturated NaHCO3 solution (100 mL) was added therein, the mixture was extracted three times with ethyl acetate. The organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide the compound A92 (6.3 g, 46%yield) as red solid. The product was characterized with mass spectrometry, 1H NMR and 13C NMR. MW calc.: 553.30; MW Found: 554.29 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.42 (d, J = 0.8 Hz, 1H) , 7.95 (dd, J = 8.5, 1.1 Hz, 1H) , 7.44 -7.28 (m, 5H) , 7.26 (d, J = 6.8 Hz, 1H) , 5.12 (s, 2H) , 4.16 (dd, J = 12.6, 5.3 Hz, 2H) , 3.93 (s, 3H) , 3.67 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 3.28 (d, J = 6.2 Hz, 2H) , 2.87 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 2.04 -1.88 (m, 4H) , 1.67 (dd, J = 14.7, 6.6 Hz, 2H) , 0.88 (s, 9H) , 0.04 (s, 6H) . 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 167.72, 156.63, 142.35, 138.19, 136.30, 128.60, 128.24, 124.10, 123.87, 121.63, 108.66, 66.96, 62.71, 60.41, 52.06, 41.31, 38.57, 32.46, 30.43, 27.30, 25.97, 24.15, 21.07, 18.34, 14.21.
(2) The preparation of compound A93
To a solution of compound A92 (6.3 g, 11.4 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (50 mL)  under nitrogen atmosphere, was added 1 M TBAF THF solution (17.1 mL, 17.1 mmol, 1.5 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, and then concentrated under reduced pressure. Then water (100 mL) was added, the mixture was extracted three times with DCM, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was dissolved in 50 mL pyridine, and DMTrCl (4.6 g, 13.68 mmol, 1.2 eq) was added therein. The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h, after which it was concentrated under reduced pressure. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A93 (6.23 g, 74%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry, 1H NMR and 13C NMR. MW calc.: 741.34; MW. Found: 303.11 [DMT] -, 440.14 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.63 (dd, J = 5.7, 1.5 Hz, 1H) , 8.43 (d, J = 1.0 Hz, 1H) , 7.97 (dd, J = 8.5, 1.1 Hz, 1H) , 7.45 (d, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.37 -7.28 (m, 11H) , 7.21 (dd, J = 8.1, 6.1 Hz, 1H) , 6.83 (t, J = 5.9 Hz, 4H) , 5.13 (s, 2H) , 4.12 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.95 (s, 3H) , 3.79 (s, 6H) , 3.24 (d, J = 6.2 Hz, 2H) , 3.14 (t, J = 6.2 Hz, 2H) , 2.83 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 2.01 (dd, J = 16.0, 8.5 Hz, 4H) , 1.79 (dd, J = 14.1, 6.6 Hz, 2H) . 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 167.81, 158.43, 156.64, 149.95, 145.34, 142.43, 138.26, 136.57, 136.05, 130.11, 128.69, 128.39, 128.26, 128.23, 127.84, 126.75, 124.17, 123.89, 121.70, 113.11, 108.75, 85.93, 67.02, 62.90, 55.31, 52.16, 41.37, 38.64, 30.50, 29.76, 27.30, 24.53.
(3) The preparation of compound A94
To a solution of compound A93 (5.0 g, 6.74 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (60 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (384 mg, 10.11 mmol, 1.5 eq) . The mixture was then transferred to room temperature after 10 minutes and stirred for about 1 h. Then the reaction was transferred to ice bath, and saturated potassium sodium tartrate solution (30 mL) was added slowly into the mixture. After reacting for 30 minutes, the reaction was extracted three times with Et2O, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was dissolved in 20 mL DMF, then  imidazole (688 mg, 10.11 mmol, 1.5 eq) and TBSCl (1.524 g, 10.11 mmol, 1.5 eq) were added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h. After being concentrated under reduced pressure, the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A94 (4.78 g, 86%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry, 1H NMR and 13C NMR. MW calc.: 827.43; MW. Found: 303.16 [DMT] -, 526.50 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.69 (s, 1H) , 7.47 -7.42 (m, 2H) , 7.40 -7.28 (m, 11H) , 7.22 (t, J = 3.5 Hz, 3H) , 6.86 -6.80 (m, 4H) , 5.13 (s, 2H) , 4.86 (s, 2H) , 4.15 (dd, J = 14.3, 7.2 Hz, 2H) , 3.79 (s, 6H) , 3.13 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 2.82 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 2.05 -1.94 (m, 4H) , 1.81 -1.74 (m, 2H) , 1.29 (t, J = 7.1 Hz, 2H) , 0.97 (s, 9H) , 0.13 (s, 6H) . 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 171.27, 158.45, 156.60, 154.95, 145.40, 142.93, 136.66, 135.52, 134.14, 130.14, 128.70, 128.37, 128.28, 127.85, 126.74, 120.93, 117.18, 113.13, 108.73, 85.93, 67.00, 65.53, 63.00, 60.51, 55.32, 53.55, 41.19, 38.74, 30.51, 29.85, 27.33, 26.14, 24.78, 21.17, 18.57, 14.33.
(4) The preparation of compound A96
To a solution of compound A94 (264 mg, 0.319 mmol, 1.0 eq) in MeOH (5 mL) , was added Pd/C (16 mg) under nitrogen atmosphere slowly. Then the reaction atmosphere was replaced with hydrogen three times. After that, the reaction mixture was stirred by purging with a hydrogen balloon at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure to provide crude product. The crude product was dissolved in DCM (8 mL) , then compound A77 (74 mg, 0.38 mmol, 1.2 eq) , HBTU (242 mg, 0.64 mmol, 2.0 eq) and DIPEA (179 μL, 1.08 mmol, 3.4 eq) were added into the reaction mixture under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then H2O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The  resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A96 (236 mg, 85%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 869.52; MW. Found: 303.2 [DMT] -, 568.4 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.67 (s, 1H) , 7.44 -7.39 (m, 2H) , 7.32 -7.27 (m, 5H) , 7.26 -7.14 (m, 4H) , 6.83 -6.78 (m, 4H) , 4.83 (s, 2H) , 4.11 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 3.78 (s, 6H) , 3.25 (dd, J = 13.2, 6.7 Hz, 2H) , 3.10 (t, J = 6.2 Hz, 2H) , 2.86 (dd, J = 9.5, 5.9 Hz, 2H) , 1.97 (d, J = 13.0 Hz, 6H) , 1.85 (s, 2H) , 1.74 -1.65 (m, 6H) , 1.59 (dd, J = 13.7, 7.1 Hz, 9H) , 0.94 (s, 9H) , 0.10 (s, 6H) .
(5) The preparation of compound A97
To a solution of compound A96 (223 mg, 0.26 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (7 mL) , under nitrogen atmosphere, was added 1 M TBAF THF solution (1.54 mL, 1.54 mmol, 6.0 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, and then concentrated under reduced pressure to provide crude product. The crude product was dissolved in DCM (10 mL) , then DMAP (110 mg, 0.90 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (52 mg, 0.52 mmol, 2.0 eq) were added therein under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H2O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) and the organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound A97 (116 mg, 53%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 855.45; MW. Found: 303.2 [DMT] -, 554.3 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.62 (s, 1H) , 7.42 (dd, J = 7.0, 1.5 Hz, 2H) , 7.37 (s, 1H) , 7.32 -7.26 (m, 6H) , 7.18 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 6.82 -6.79 (m, 4H) , 5.19 (s, 2H) , 4.28 -4.12 (m, 2H) , 3.78 (s, 6H) , 3.24 (s, 2H) , 3.09 (t, J = 6.2 Hz, 2H) , 2.88 -2.83 (m, 2H) , 2.64 (t, J = 3.9 Hz, 4H) , 1.96 (d, J = 13.0 Hz, 6H) , 1.84 (s, 2H) , 1.73 -1.66 (m, 6H) , 1.57 (dd, J = 13.7, 7.1 Hz, 9H) .
(6) The preparation of compound A6
To a solution of the compound A97 (100 mg, 0.117 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (2.05 g) , DIPEA (58 μL, 0.35 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (16 mL) was added HBTU (89 mg, 0.234 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to generate crude solid support. To a solution of acetic anhydride (7.02 mL) , pyridine (13.5 mL) , NEt3 (211 μL) in acetonitrile (9 mL) was added the crude solid support under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to produce the Compound A6 of the present disclosure (1.76 g) .
Example 6. The preparation of compound A7 of the present disclosure
Compound A7 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound A99
To a solution of methyl 4-fluoro-3-nitrobenzoate A69 (8.0 g, 40.2 mmol, 1.0 eq) and K2CO3 (5.5 g, 40.2 mmol, 1.0 eq) in anhydrous DMF (100 mL) , under nitrogen atmosphere, was added compound A98 (8.57 g, 40.2 mmol, 1.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 6 h, then cold water (100 mL) was added. The mixture was extracted three times by  ethyl acetate, then the organic phase was washed three times by saturated LiCl solution and one time by brine. Then dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form brown oil compound A99 which was directly used in the next step without further purification.
(2) The preparation of compound A100
To a solution of compound A99 (15.76 g, 40.17 mmol, 1.0 eq) in THF/H2O (9: 1, 165 mL) , under ice bath, was added HCOONH4 (15.21 g, 241 mmol, 6.0 eq) and Zn powder (15.76 g, 241 mmol, 6.0 eq) . After 10 minutes, the reaction mixture was moved to room temperature and stirred overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (100 mL) was added into the mixture, then extracted three times by ethyl acetate, the organic phase was washed one time by brine. After dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the brown solid compound A100 formed then was directly used in the next step without further purification. The compound was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 362.29; MW. Found: 363.4 [M+H] +.
(3) The preparation of compound A102
To a solution of compound A100 (6.0 g, 16.56 mmol, 1.0 eq) in EtOH (100 mL) under nitrogen atmosphere, was added compound A101 (1.69 g, 16.56 mmol, 1.0 eq) and AcOH (3.8 mL, 66.24 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80℃ overnight, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (100 mL) was added, the mixture was extracted three times by ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue compound was directly used in the next step without further purification. The compound was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 444.34; MW. Found: 445.4 [M+H] +.
The resultant residue (1.0 g, 2.25 mol, 1.0 eq) was dissolved in 10 mL DCM, and Et3N (0.47 mL, 3.37 mmol, 1.5 eq) , DMTrCl (915 mg, 2.7 mmol, 1.2 eq) were added therein. The  reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h, after which it was concentrated under reduced pressure. The resultant residue compound was directly used in the next step without further purification. The product A102 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 746.47; MW. Found: 303.2 [DMT] -.
(4) The preparation of compound A103
To a solution of compound A102 (1.6 g, 2.16 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (13 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (123 mg, 3.24 mmol, 1.5 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (10 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with Et2O, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The crude product (500 mg, 0.70 mmol, 1.0 eq) was dissolved in DCM (10 mL) , then DMAP (298 mg, 2.45 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (140 mg, 1.40 mmol, 2.0 eq) were added therein under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H2O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) and the organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound A103 (285 mg, 53%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 818.49; MW. Found: 303.2 [DMT] -, 517.4 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.81 (s, 1H) , 7.41 (d, J = 7.6 Hz, 2H) , 7.30 (d, J = 8.8 Hz, 5H) , 7.25 -7.15 (m, 4H) , 6.80 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 5.26 (s, 2H) , 4.04 (d, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.77 (s, 6H) , 3.11 (t, J = 6.1 Hz, 2H) , 2.90 (t, J = 7.7 Hz, 2H) , 2.69 (dd, J = 8.4, 4.5 Hz, 4H) , 2.02 -1.95 (m, 2H) , 1.74 (dd, J = 13.4, 6.9 Hz, 4H) , 1.28 -1.24 (m, 22H) , 0.87 (t, J = 6.7 Hz, 3H) .
(5) The preparation of compound A7
To a solution of the compound A103 (124 mg, 0.15 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (2.66 g) , DIPEA (75 μL, 0.45 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (20 mL) was added HBTU (115 mg, 0.30 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to generate crude solid support. To a solution of acetic anhydride (9.06 mL) , pyridine (17.4 mL) , NEt3 (272 μL) in acetonitrile (11.6 mL) was added the crude solid support under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to produce the Compound A7 of the present disclosure (2.4 g) .
Example 7. The preparation of compound A8 of the present disclosure
Compound A8 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound A105
To a solution of methyl 4-fluoro-3-nitrobenzoate A104 (15 g, 75.3 mmol, 1.0 eq) and K2CO3 (10.4 g, 75.3 mmol, 1.0 eq) in anhydrous DMF (240 mL) , under nitrogen atmosphere, was added compound 69 (18.18 g, 75.3 mmol, 1.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 6 h, then cold water (100 mL) was added. The mixture was extracted three times by ethyl acetate, then the organic phase was washed three times by saturated LiCl solution and one time by brine. Then dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form brown oil compound A105 which was directly used in the next step without further  purification.
(2) The preparation of compound A106
To a solution of compound A105 (31.65 g, 75.3 mmol, 1.0 eq) in THF/H2O (9∶1, 300 mL) , under ice bath, was added HCOONH4 (28.5 g, 451.8 mmol, 6.0 eq) and Zn powder (29.5 g, 451.8 mmol, 6.0 eq) . After 10 minutes, the reaction mixture was moved to room temperature and stirred overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (100 mL) was added into the mixture, then extracted three times by ethyl acetate, the organic phase was washed one time by brine. After dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the brown solid compound A106 formed then was directly used in the next step without further purification.
(3) The preparation of compound A107
To a solution of compound A106 (6.0 g, 15.4 mmol, 1.0 eq) in EtOH (90 mL) under nitrogen atmosphere, was added compound A101 (1.57 g, 15.4 mmol, 1.0 eq) and AcOH (3.54 mL, 61.6 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80℃ overnight, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (80 mL) was added, the mixture was extracted three times by ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was directly used in the next step without further purification. The resultant residue was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 472.37; MW. Found: 473.4 [M+H] +.
The resultant residue (1.0 g, 2.12 mol, 1.0 eq) was dissolved in 10 mL DCM, and Et3N (0.44 mL, 3.17 mmol, 1.5 eq) , DMTrCl (860 mg, 2.54 mmol, 1.2 eq) were added therein. The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h, after which it was concentrated under reduced pressure. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A107 (1.27 g, 77%yield) as  yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 774.50; MW. Found: 303.2 [DMT] -, 473.4 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.42 (d, J = 0.9 Hz, 1H) , 7.97 (dd, J = 8.5, 1.4 Hz, 1H) , 7.42 (d, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.33 -7.28 (m, 5H) , 7.25 (d, J = 6.8 Hz, 2H) , 7.19 (t, J = 7.3 Hz, 1H) , 6.80 (dd, J = 9.4, 2.4 Hz, 4H) , 4.05 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 3.93 (s, 3H) , 3.78 (s, 6H) , 3.12 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 2.92 -2.80 (m, 2H) , 2.07 -1.97 (m, 2H) , 1.82 -1.71 (m, 4H) , 1.28 -1.24 (m, 26H) , 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .
(4) The preparation of compound A108
To a solution of compound A107 (1.27 g, 1.64 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (10 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (93 mg, 2.46 mmol, 1.5 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (10 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with Et2O, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The crude product (500 mg, 0.67 mmol, 1.0 eq) was dissolved in DCM (10 mL) , then DMAP (286 mg, 2.34 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (134 mg, 1.34 mmol, 2.0 eq) were added therein under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H2O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) and the organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound A108 (425 mg, 62%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 846.52; MW. Found: 303.2 [DMT] -, 545.4 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.81 (s, 1H) , 7.42 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.30 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 7.25 (d, J = 7.6 Hz, 3H) , 7.19 (dd, J = 14.9, 7.9 Hz, 2H) , 6.80 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 5.26 (s, 2H) , 4.03 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 3.77 (s, 6H) , 3.11 (t, J = 6.1 Hz, 2H) , 2.90 (t, J = 7.7 Hz, 2H) , 2.73 -2.66 (m, 4H) , 1.99 (dt, J = 15.3, 7.7 Hz, 2H) , 1.74 (dd, J =  13.5, 6.9 Hz, 4H) , 1.29 -1.25 (m, 26H) , 0.87 (t, J = 6.7 Hz, 3H) .
(5) The preparation of compound A8
To a solution of the compound A108 (114 mg, 0.134 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (2.36 g) , DIPEA (67 μL, 0.4 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (18 mL) was added HBTU (102 mg, 0.268 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to generate crude solid support. To a solution of acetic anhydride (8.04 mL) , pyridine (15.5 mL) , NEt3 (241 μL) in acetonitrile (10 mL) was added the crude solid support under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to produce the Compound A8 of the present disclosure (2.2 g) .
Example 8. The preparation of compound A9 of the present disclosure
Compound A9 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound A110
To a solution of methyl 4-fluoro-3-nitrobenzoate A69 (8.0 g, 40.2 mmol, 1.0 eq) and  K2CO3 (5.55 g, 40.2 mmol) in anhydrous DMF (128 mL) , under nitrogen atmosphere, was added compound A109 (10.83 g, 40.2 mmol, 1.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 6 h, then cold water (100 mL) was added. The mixture was extracted three times by ethyl acetate, then the organic phase was washed three times by saturated LiCl solution and one time by brine. Then dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form brown oil compound A110 which was directly used in the next step without further purification.
(2) The preparation of compound A111
To a solution of compound A110 (13 g, 29 mmol, 1.0 eq) in THF/H2O (9∶1, 120 mL) , under ice bath, was added HCOONH4 (10.98 g, 174 mmol, 6.0 eq) and Zn powder (11.38 g, 174 mmol, 6.0 eq) . After 10 minutes, the reaction mixture was moved to room temperature and stirred overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (100 mL) was added into the mixture, then extracted three times by ethyl acetate, the organic phase was washed one time by brine. After dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the brown solid compound A111 formed then was directly used in the next step without further purification.
(3) The preparation of compound A112
To a solution of compound A111 (6.0 g, 14.34 mmol, 1.0 eq) in EtOH (80 mL) under nitrogen atmosphere, was added compound A101 (1.46 g, 14.34 mmol, 1.0 eq) and AcOH (3.3 mL, 57.36 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80℃ overnight, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (80 mL) was added, the mixture was extracted three times by ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was directly used in the next step without further purification. The resultant residue was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 500.40; MW. Found: 501.4 [M+H] +.
The resultant residue (1.5 g, 3.0 mol, 1.0 eq) was dissolved in 10 mL DCM, and Et3N  (0.625 mL, 4.5 mmol, 1.5 eq) , DMTrCl (1.2 g, 3.6 mmol, 1.2 eq) were added therein. The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h, after which it was concentrated under reduced pressure. The resultant residue compound was directly used in the next step without further purification. The product A112 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 802.53; MW. Found: 303.2 [DMT] -.
(4) The preparation of compound A113
To a solution of compound A112 (1.7 g, 2.12 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (15 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (121 mg, 3.18 mmol, 1.5 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (10 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with Et2O, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The crude product (500 mg, 0.65 mmol, 1.0 eq) was dissolved in DCM (10 mL) , then DMAP (276 mg, 2.27 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (129 mg, 1.29 mmol, 2.0 eq) were added therein under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H2O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) and the organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound A113 (340 mg, 60%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 874.55; MW. Found: 303.2 [DMT] -, 573.4 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.79 (s, 1H) , 7.42 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.30 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 7.26 -7.22 (m, 4H) , 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 6.81 (t, J = 5.8 Hz, 4H) , 5.26 (s, 2H) , 4.02 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 3.77 (s, 6H) , 3.11 (t, J = 6.1 Hz, 2H) , 2.88 (t, J = 7.7 Hz, 2H) , 2.69 (dt, J = 10.5, 5.3 Hz, 4H) , 1.97 (dd, J = 15.0, 7.6 Hz, 2H) , 1.74 (dd, J = 13.5, 6.9 Hz, 4H) , 1.28 -1.25 (m, 30H) , 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .
(5) The preparation of compound A9
To a solution of the compound A113 (100 mg, 0.114 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (2.0 g) , DIPEA (57 μL, 0.342 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (15 mL) was added HBTU (86 mg, 0.228 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to generate crude solid support. To a solution of acetic anhydride (6.8 mL) , pyridine (13 mL) , NEt3 (210 μL) in acetonitrile (9 mL) was added the crude solid support under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to produce the compound A9 of the present disclosure (1.87 g) .
Example 9. The preparation of compound A10 and A13 of the present disclosure
Compounds A10 and A13 were prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound A115
To a solution of compound A106 (2.0 g, 5.12 mmol, 1.0 eq) in EtOH (30 mL) under nitrogen atmosphere, was added compound A114 (790 mg, 5.12 mmol, 1.0 eq) and AcOH (1.18 mL, 20.48 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80℃ overnight, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (20 mL) was added, the mixture was extracted three times by ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-25%of EA/Hexane) to provide compound A115 (1.46 g, 54%yield) as yellow oil. The product was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 524.43; MW Found: 525.5 [M+H] +.
(2) The preparation of compound A116
To a solution of compound A115 (500 mg, 0.95 mmol, 1.0 eq) in MeOH (18 mL) at room temperature, was added 18 mL 0.5 M NaOH aqueous solution. The mixture was stirred overnight. Then the reaction was acidified by 2M HCl and extracted three times with Et2O, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The organic layer was concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A116 of the present disclosure (400 mg, 82%yield) as white solid. The product was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 510.42; MW Found: 511.4 [M + H] +.
(3) The preparation of compound A117
To a solution of compound A94 (298 mg, 0.36 mmol, 1.0 eq) in MeOH (5 mL) , was added Pd/C (30 mg) under nitrogen atmosphere slowly. Then the reaction atmosphere was replaced with hydrogen three times. After that, the reaction mixture was stirred by purging with a hydrogen balloon at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure to provide crude product A95. The crude product A95 was dissolved in DCM (5mL) , then compound A116 (220 mg, 0.432 mmol, 1.2 eq) , HBTU (273 mg, 0.72 mmol, 2.0 eq) and DIPEA (203 μL, 1.224 mmol, 3.4 eq) were added into the reaction mixture under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then H2O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A117 (400 mg, 94%yield) as yellow oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 1185.80; MW. Found: 303.2 [DMT] -. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05 (d, J = 1.3 Hz, 1H) , 7.43 -7.40 (m, 2H) , 7.32 -7.26 (m, 8H) , 7.23 (dd, J = 11.0, 4.3 Hz, 3H) , 7.18 (dd, J = 7.9, 1.8 Hz, 1H) , 6.81 -6.78 (m, 4H) , 6.38 (t, J = 5.8 Hz, 1H) , 5.09 (t, J = 7.0 Hz, 1H) , 4.83 (s, 2H) , 4.18 (t, J = 7.3 Hz, 2H) , 4.11 -4.07 (m, 2H) , 3.76 (s, 6H) , 3.49 (dd, J = 13.0, 6.6 Hz, 2H) , 3.09 (t, J = 6.2 Hz, 2H) , 2.91 -2.83 (m, 4H) , 2.14 -2.01 (m, 5H) , 1.80 -1.73 (m, 4H) , 1.67 (s, 3H) , 1.59 (s, 3H) , 1.32 -1.25 (m, 30H) , 0.99 (d, J = 6.6 Hz, 3H) , 0.94 (s, 9H) , 0.87 (d, J = 4.6 Hz, 3H) , 0.10 (s, 6H) .
(4) The preparation of compound A118
To a solution of compound A117 (400 mg, 0.337 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (8 mL) , under nitrogen atmosphere, was added 1M TBAF THF solution (2.02 mL, 2.02 mmol, 6.0 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, and then concentrated under reduced pressure to provide crude product. The crude product was dissolved in DCM (10 mL) , then DMAP (144 mg, 1.18 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (67 mg, 0.674 mmol, 2.0 eq) were added therein under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H2O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*20 mL) and the organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound A118 (235 mg, 60%yield) as white solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 1171.73; MW Found: 303.2 [DMT] -, 871.3 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.11 (s, 1H) , 7.65 (s, 1H) , 7.41 (d, J = 7.6 Hz, 2H) , 7.31 -7.24 (m, 9H) , 7.18 (dd, J = 7.9, 5.6 Hz, 2H) , 6.80 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 5.20 (s, 2H) , 5.07 (d, J = 6.3 Hz, 1H) , 4.13 (dt, J = 15.1, 7.1 Hz, 4H) , 3.76 (s, 6H) , 3.33 (dd, J = 11.3, 5.6 Hz, 4H) , 3.09 (t, J = 6.2 Hz, 2H) , 2.83 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 2.72 -2.68 (m, 4H) , 2.15 -2.04 (m, 5H) , 1.76 (dd, J = 15.1, 7.9 Hz, 4H) , 1.67 (s, 3H) , 1.60 (s, 3H) , 1.31 -1.26 (m, 30H) , 0.96 (s, 3H) , 0.87 (d, J = 7.0 Hz, 3H) .
(5) The preparation of compound A10
To a solution of the compound A118 (170 mg, 0.145 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (2.54 g) , DIPEA (72 μL, 0.435 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (15 mL) was added HBTU (110 mg, 0.29 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to generate crude solid support. To a solution of acetic anhydride (8.67 mL) , pyridine (16.8 mL) , NEt3 (260 μL) in acetonitrile (11 mL) was added the crude solid support under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to produce the Compound A10 of the present disclosure (2.38 g) .
(6) The preparation of compound A13
To a solution of compound A116 (400 mg, 0.76 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (5 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (43 mg, 1.14 mmol, 1.5 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (10 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with Et2O, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated to generate crude product. To a solution of crude compound and DIPEA (378 μL, 2.28 mmol, 3.0 eq) in anhydrous DCM (5 mL) under nitrogen atmosphere, was added 3- ( (chloro (diisopropylamino) phosphanyl) oxy) propanenitrile (540 mg, 2.28 mmol, 3.0 eq. ) at 25℃. The reaction mixture was stirred for 1 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was  concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM, 1%NEt3) to provide compound A13 (397 mg, 75%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 696.55; MW Found: 614.4 [M -diisopropylamine + 2H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.68 (s, 1H) , 7.25 (dd, J = 8.6, 3.9 Hz, 2H) , 4.85 (dd, J = 11.9, 8.3 Hz, 1H) , 4.75 (dd, J = 11.9, 9.0 Hz, 1H) , 4.10 -4.04 (m, 2H) , 3.90 -3.78 (m, 2H) , 3.73 -3.60 (m, 2H) , 2.73 (d, J = 7.2 Hz, 2H) , 2.61 (td, J = 6.5, 1.4 Hz, 2H) , 1.98 -1.92 (m, 1H) , 1.88 -1.52 (m, 8H) , 1.36 -1.23 (m, 31H) , 1.21 (dd, J = 6.8, 0.7 Hz, 12H) , 1.15 -0.98 (m, 3H) , 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .
Example 10. The preparation of compounds A11 and A15 of the present disclosure
Compounds A11 and A15 were prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound A120
To a solution of compound A106 (2.0 g, 5.12 mmol, 1.0 eq) in EtOH (30 mL) under nitrogen atmosphere, was added compound A119 (958 mg, 5.12 mmol, 1.0 eq) and AcOH  (1.18 mL, 20.48 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80℃ overnight, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (30 mL) was added, the mixture was extracted three times by ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue compound A120 was directly used in the next step without further purification. The compound A120 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 557.36; MW. Found: 558.4 [M + H] +.
(2) The preparation of compound A122
To a solution of compound A121 (500 mg, 0.9 mmol, 1.0 eq) in MeOH (18 mL) at room temperature, was added 18 mL 0.5 M NaOH aqueous solution. The mixture was stirred overnight. Then the reaction was acidified by 2M HCl and extracted three times with Et2O, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The organic layer was concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A122 of the present disclosure (330 mg, 68%yield) as white solid. The product was characterized by mass spectrometry. MW calc.: 543.35; MW. Found: 544.5 [M + H] +.
(3) The preparation of compound A123
To a solution of compound A94 (273 mg, 0.33 mmol, 1.0 eq) in MeOH (5 mL) , was added Pd/C (27 mg) under nitrogen atmosphere slowly. Then the reaction atmosphere was replaced with hydrogen three times. After that, the reaction mixture was stirred by purging with a hydrogen balloon at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure to provide crude product A95. The crude product  A95 was dissolved in DCM (5mL) , then compound A122 (229 mg, 0.33 mmol, 1.0 eq) , HBTU (250 mg, 0.66 mmol, 2.0 eq) and DIPEA (186 μL, 1.12 mmol, 3.4 eq) were added into the reaction mixture under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then H2O (5 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A123 (249 mg, 62%yield) as white solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 1218.73; MW Found: 303.2 [DMT] -. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.19 (s, 1H) , 8.28 (s, 1H) , 7.73 -7.69 (m, 2H) , 7.56 (s, 1H) , 7.29 (d, J = 7.0 Hz, 3H) , 7.18 -7.15 (m, 6H) , 7.07 (dt, J = 9.2, 8.5 Hz, 6H) , 6.67 (d, J = 8.9 Hz, 4H) , 4.72 (s, 2H) , 4.12 -4.05 (m, 2H) , 3.96 (t, J = 7.0 Hz, 2H) , 3.64 (s, 6H) , 3.12 (d, J = 6.4 Hz, 2H) , 2.95 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 2.70 -2.63 (m, 7H) , 1.82 (dd, J = 17.3, 10.5 Hz, 4H) , 1.59 (dd, J = 12.8, 6.9 Hz, 4H) , 1.18 -1.04 (m, 24H) , 0.83 (s, 9H) , 0.75 (d, J = 7.0 Hz, 3H) , 0.03 (s, 6H) .
(4) The preparation of compound A124
To a solution of compound A123 (230 mg, 0.19 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (5 mL) , under nitrogen atmosphere, was added 1M TBAF THF solution (1.13 mL, 1.13 mmol, 6.0 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, and then concentrated under reduced pressure to provide crude product. The crude product was dissolved in DCM (6 mL) , then DMAP (81 mg, 0.66 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (38 mg, 0.38 mmol, 2.0 eq) were added therein under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H2O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) and the organic phase was combined, dried over Na2SO4, and  concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound A124 (126 mg, 55%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 1204.66; MW Found: 303.2 [DMT] -. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.55 (s, 1H) , 8.07 (d, J = 8.2 Hz, 2H) , 7.73 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 7.63 (d, J = 10.8 Hz, 2H) , 7.38 (d, J = 11.5 Hz, 4H) , 7.28 (t, J = 8.1 Hz, 6H) , 7.16 (t, J = 6.8 Hz, 4H) , 6.79 (d, J = 8.7 Hz, 4H) , 5.16 (s, 2H) , 4.30 -4.20 (m, 4H) , 3.75 (s, 6H) , 3.58 (d, J = 5.1 Hz, 2H) , 3.43 -3.41 (m, 7H) , 3.07 (s, 2H) , 2.86 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 2.61 (d, J = 3.4 Hz, 4H) , 2.21 -2.15 (m, 2H) , 1.98 -1.93 (m, 2H) , 1.27 -1.20 (m, 26H) , 0.86 (d, J = 7.0 Hz, 3H) .
(5) The preparation of compound A11
To a solution of the compound A124 (126 mg, 0.104 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (1.83 g) , DIPEA (52 μL, 0.312 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (12 mL) was added HBTU (79 mg, 0.208 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to generate crude solid support. To a solution of acetic anhydride (6.2 mL) , pyridine (12 mL) , NEt3 (186 μL) in acetonitrile (7.9 mL) was added the crude solid support under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to produce the Compound A11 of the present disclosure (1.7 g) .
(6) The preparation of compound A15
To a solution of compound A121 (300 mg, 0.538 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (5 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (31 mg, 0.8 mmol, 1.5 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (5 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with Et2O, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated to generate crude product. To a solution of crude compound and DIPEA (265 μL, 1.6 mmol, 3.0 eq) in anhydrous DCM (5 mL) under nitrogen atmosphere, was added 3- ( (chloro (diisopropylamino) phosphanyl) oxy) propanenitrile (379 mg, 1.6 mmol, 3.0 eq. ) at 25℃. The reaction mixture was stirred for 1 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM, 1%NEt3) to provide compound A15 (274 mg, 70%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 729.47; MW Found: 669.5 [M -diisopropylamine + Na] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.28 (s, 1H) , 7.73 -7.68 (m, 2H) , 7.56 (s, 1H) , 7.18 -7.15 (m, 4H) , 4.72 (s, 2H) , 4.12 -4.05 (m, 4H) , 2.70 -2.63 (m, 7H) , 1.92 -1.88 (m, 2H) , 1.27 -1.23 (m, 26H) , 1.21 (dd, J = 6.8, 0.7 Hz, 12H) , 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .
Example 11. The preparation of compound A12 of the present disclosure
Compound A12 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound A126
To a solution of compound A94 (298 mg, 0.36 mmol, 1.0 eq) in MeOH (5 mL) , was added Pd/C (30 mg) under nitrogen atmosphere slowly. Then the reaction atmosphere was replaced with hydrogen three times. After that, the reaction mixture was stirred by purging with a hydrogen balloon at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure to provide crude product A95. The crude product A95 was dissolved in DCM (5mL) , then compound A125 (111 mg, 0.43 mmol, 1.2 eq) , HBTU (273 mg, 0.72 mmol, 2.0 eq) and DIPEA (203 μL, 1.22 mmol, 3.4 eq) were added into the reaction mixture under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then H2O (5 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound A126 (295 mg, 88%yield) as yellow oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 931.63; MW Found: 303.2 [DMT] -. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.68 (s, 1H) , 7.47 -7.39 (m, 2H) , 7.32 -7.23 (m, 9H) , 6.83 -6.77 (m, 4H) , 4.83 (s, 2H) , 4.10 (t, J = 7.3 Hz, 2H) , 3.78 (s, 6H) , 3.24 (dd, J = 13.2, 6.7 Hz, 2H) , 3.11 (t, J = 6.2 Hz, 2H) , 2.06 (dd, J = 12.4, 4.5 Hz, 2H) , 2.02 -1.93 (m, 4H) , 1.79 -1.72 (m, 2H) , 1.56 (d, J = 7.0 Hz, 2H) , 1.29 -1.23 (m, 26H) , 0.94 (s, 9H) , 0.87 (d, J = 7.0 Hz, 3H) , 0.10 (s, 6H) .
(2) The preparation of compound A127
To a solution of compound A126 (270 mg, 0.29 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (6 mL) , under nitrogen atmosphere, was added 1M TBAF THF solution (1.74 mL, 1.74 mmol, 6.0 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, and then concentrated under reduced pressure to provide crude product. The crude product was dissolved in DCM (10 mL) , then DMAP (124 mg, 1.02 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (58 mg, 0.58 mmol, 2.0 eq) were added therein under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H2O (10 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*10 mL) and the organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound A127 (120 mg, 45%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 917.56; MW Found: 303.2 [DMT] -. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.64 (s, 1H) , 7.46 -7.40 (m, 3H) , 7.31 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 7.25 (d, J = 7.8 Hz, 2H) , 7.20 (t, J = 7.7 Hz, 2H) , 6.80 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 5.18 (s, 2H) , 4.31 -4.18 (m, 2H) , 3.78 (s, 6H) , 3.42 -3.40 (m, 4H) , 3.09 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 2.87 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 2.67 -2.62 (m, 4H) , 2.34 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 2.05 -1.92 (m, 4H) , 1.29 -1.23 (m, 26H) , 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .
(3) The preparation of compound A12
To a solution of the compound A127 (120 mg, 0.13 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (2.29 g) , DIPEA (65 μL, 0.39 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (15 mL) was added  HBTU (99 mg, 0.26 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to generate crude solid support. To a solution of acetic anhydride (7.8 mL) , pyridine (15 mL) , NEt3 (234 μL) in acetonitrile (10 mL) was added the crude solid support under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to produce the Compound A12 of the present disclosure (2.1 g) .
Example 12. The preparation of compound A14 of the present disclosure
Compound A14 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound A129.
To a solution of compound A106 (1.55 g, 3.96 mmol, 1.0 eq) in EtOH (20 mL) under nitrogen atmosphere, was added compound A128 (500 mg, 3.96 mmol, 1.0 eq) and AcOH (913 μL, 15.84 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80℃ overnight, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (20 mL) was added, the mixture was extracted three times by ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue compound A129 was directly used in the next step without further purification. The compound A129 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 496.40; MW. Found: 497.5 [M+H] +.
(2) The preparation of compound A14
To a solution of compound A129 (400 mg, 0.806 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (5 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (46 mg, 1.2 mmol, 1.5 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (5 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with Et2O, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated to generate crude product. To a solution of crude compound and DIPEA (401 μL, 2.42 mmol, 3.0 eq) in anhydrous DCM (5 mL) under nitrogen atmosphere, was added 3- ( (chloro (diisopropylamino) phosphanyl) oxy) propanenitrile (573 mg, 2.42 mmol, 3.0 eq. ) at 25℃. The reaction mixture was stirred for 1 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-3%of MeOH/DCM, 1%NEt3) to provide compound A14 (339 mg, 63%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 668.52; MW Found: 607.4 [M -diisopropylamine + Na] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.62 (s, 1H) , 7.19 (dd, J = 6.9, 2.8 Hz, 2H) , 5.03 (t, J = 7.0 Hz, 1H) , 4.81 -4.79 (m, 1H) , 4.71 -4.66 (m, 1H) , 4.04 -3.98 (m, 2H) , 3.79 (dd, J = 6.9, 2.8 Hz, 1H) , 3.60 (ddd, J = 13.6, 6.8, 3.4 Hz, 2H) , 2.82 -2.78 (m, 1H) , 2.61 -2.53 (m, 3H) , 1.63 -1.60 (m, 3H) , 1.54 -1.52 (m, 3H) , 1.33 -1.17 (m, 30H) , 1.14 (dd, J = 6.8, 2.0 Hz, 12H) , 0.92 (d, J = 6.6 Hz, 3H) , 0.82 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .
Example 13. The preparation of compound B1 of the present disclosure
Compound B1 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) Preparation of compound B12 from 4-fluoro-3-nitrobenzoic acid.
To a solution of 4-fluoro-3-nitrobenzoic acid (35 g, 189.1 mmol, 1.0 eq) and Na2CO3 (30.6 g, 283.6 mmol, 1.5 eq) in anhydrous DMF (500 mL) under nitrogen atmosphere, was added benzyl bromide (35.6 g, 207.98 mmol, 1.1 eq) slowly. The reaction mixture was stirred at 45℃ for 3 h, then cold water (200 mL) was added therein. The mixture was extracted 3 times with ethyl acetate, then the organic phase was washed 3 times with saturated LiCl solution and 1 time with brine. Then the organic phase was dried with anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form a yellow oil (compound B12) which was directly used in the next step without further purification.
(2) Preparation of compound B13 from compound B12 by SNAr reaction of tert-butyl (3-aminopropyl) carbamate.
To a solution of compound B12 (52 g, 189.1 mmol, 1.0 eq) and K2CO3 (26.13 g, 189.1 mmol, 1.0 eq) in anhydrous DMF (500 mL) under nitrogen atmosphere, was added tert-butyl (3-aminopropyl) carbamate (32.9 g, 189.1 mmol, 1.0 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 h, then cold water (200 mL) was added. The mixture was extracted 3 times by ethyl acetate, then the organic phase was washed 3 times by saturated LiCl solution and 1 time by brine. After dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the yellow solid B13 was formed and then directly used in the next step without further purification.
(3) Compound B14 was generated by reduction of compound B13.
To a solution of compound B13 (81.16 g, 189.1 mmol, 1.0 eq) in THF/H2O (9: 1, 666 mL) under ice bath, was added HCOONH4 (71.58 g, 1.134 mol, 6.0 eq) and Zn powder (74.19 g, 1.134 mol, 6.0 eq) . After 10 minutes, the reaction mixture was moved to room temperature and stirred overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (200 mL) was added into the mixture, then the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate, the organic phase was washed 1 time with brine. The organic brine was dried with anhydrous NaSO4 and concentrated under reduced pressure, a light red solid (compound B14) was formed and was directly used in the next step without further purification.
(4) Compound B15 was generated by acylation of compound B14 with N2, N6-bis (tert-butoxycarbonyl) -L-lysine.
To a solution of compound B14 (16.8 g, 42 mmol, 1.0 eq) in DCM (300 mL) , was added N2, N6-bis (tert-butoxycarbonyl) -L-lysine (21.82 g, 63 mmol, 1.5 eq) , EDCI (12.08 g, 63 mmol, 1.5 eq) and DMAP (2.565 g, 21 mmol, 0.5 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then 200 mL H2O was added into the reaction mixture, and the mixture was extracted with DCM (3*100 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified by using flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-50%of EA/Hexane) to provide compound 15 (27.5 g, 90%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 727.42; MW Found: 728.47 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.88 (dd, J = 8.6, 1.9 Hz, 1H) , 7.79 (s, 1H) , 7.35 (ddt, J = 9.8, 7.1, 5.5 Hz, 5H) , 6.62 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 5.29 (s, 2H) , 4.16 (s, 1H) , 3.37 -2.97 (m, 6H) , 1.78 (d, J = 25.4 Hz, 4H) , 1.51 (s, 2H) , 1.48 -1.35 (m, 27H) , 1.36 -1.13 (m, 2H) .
(5) The compound B16, which comprises a benzimidazole structure was prepared from compound B15.
The compound B15 (20 g, 27.5 mmol, 1.0 eq) was added into AcOH (100 mL) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 95℃ for 4 h. Then saturated NaHCO3 solution (100 mL) was added therein, the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with saturated NaHCO3 solution (3*100 mL) , dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified by flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-50%of EA/Hexane) to provide compound B16 (8.78 g, 45%yield) as white solid. The product was characterized with mass spectrometry and  1H NMR. MW calc.: 709.41; MW Found: 710.57 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.50 (s, 1H) , 8.04 (dd, J = 8.5, 1.4 Hz, 1H) , 7.46 (d, J = 7.0 Hz, 2H) , 7.41 (s, 1H) , 7.38 -7.34 (m, 3H) , 5.39 (s, 2H) , 5.02 (dd, J = 15.8, 7.7 Hz, 1H) , 3.20 -3.10 (m, 6H) , 2.08 -1.96 (m, 4H) , 1.57 -1.48 (m, 4H) , 1.41 (d, J = 8.6 Hz, 27H) .
(6) The compound B17 was prepared by using the start material of (2S, 3R, 4R, 5R, 6R) -3-acetamido-6- (acetoxymethyl) tetrahydro-2H-pyran-2, 4, 5-triyl triacetate.
To a solution of (2S, 3R, 4R, 5R, 6R) -3-acetamido-6- (acetoxymethyl) tetrahydro-2H-pyran-2, 4, 5-triyl triacetate (30 g, 77 mmol, 1.0 eq) in DCM (300 mL) , was added TMSOTf (15.3 mL, 84.7 mmol, 1.1 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h. Then NaHCO3 solution (21 g NaHCO3 in 200 mL water) was added under ice bath and the reaction was transferred to room temperature. After 30 minutes of stirring, the mixture was extracted 3 times with DCM, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-50%of EA/Hexane) to provide compound B17 (19.8 g, 78%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 329.11; MW Found: 330.33 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.97 (d, J = 9.5 Hz, 1H) , 5.39 (s, 1H) , 5.26 (dd, J = 11.4, 3.2 Hz, 1H) , 4.53 (td, J = 11.4, 3.4 Hz, 1H) , 4.43 (t, J = 6.5 Hz, 1H) , 4.27 (s, 1H) , 4.11 -4.08 (m, 1H) , 2.17 (s, 3H) , 2.05 (s, 3H) , 2.00 (d, J = 7.3 Hz, 6H) .
(7) An alkoxy group terminated with vinyl group was attached to compound B17.
To a solution of compound B17 (15 g, 45.6 mmol, 1.0 eq) in DCE (200 mL) , was added dec-9-en-1-ol (8.5 g, 54.7 mmol, 1.2 eq) and TMSOTf (1.6 mL, 9.1 mmol, 0.2 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h. Then  saturated NaHCO3 solution (100 mL) was added therein, the mixture was extracted 3 times with DCM, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound B20 (19.6 g, 89%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 485.26; MW Found: 486.48 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.84 -5.74 (m, 1H) , 5.49 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 5.35 (d, J = 2.7 Hz, 1H) , 5.33 -5.25 (m, 2H) , 5.01 -4.88 (m, 2H) , 4.70 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 4.20 -4.07 (m, 2H) , 3.94 -3.80 (m, 3H) , 3.47 (dt, J = 9.5, 6.9 Hz, 1H) , 2.13 (s, 3H) , 2.03 (s, 3H) , 1.98 (d, J = 9.7 Hz, 3H) , 1.95 (d, J = 10.1 Hz, 3H) , 1.56 (d, J = 6.4 Hz, 2H) , 1.35 (d, J = 6.7 Hz, 2H) , 1.27 (s, 8H) .
(8) The terminal vinyl group of compound B20 was oxidized to a carboxyl group.
To a solution of the compound B20 (19.6 g, 40.4 mmol, 1.0 eq) in ACN/DCM/H2O (50mL/50mL/60mL) under ice bath, was added NaIO4 (34.6 g, 161.6 mol, 4.0 eq) and RuCl3·3H2O (1.66 g, 8.0 mol, 0.2 eq) . After 10 minutes, the reaction mixture was transferred to room temperature and stirred overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (50 mL) was added into the mixture, then the mixture extracted 3 times with DCM, the organic phase was washed 1 time with brine. After being dried with anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-8%of MeOH/DCM) to provide compound B21 (17 g, 84%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 503.24; MW Found: 504.49 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.65 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 5.35 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 5.31 (d, J = 6.1 Hz, 1H) , 4.68 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 4.18 -4.12 (m, 2H) , 3.91 (dd, J = 11.8, 5.4 Hz, 2H) , 3.48 (dd, J = 9.7, 6.7 Hz, 1H) , 2.35 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 2.15 (s, 3H) , 2.05 (s, 3H) , 2.01 (s, 3H) , 1.96 (s, 3H) , 1.63 (s, 2H) , 1.32 (s, 10H) .
(9) The compounds B16 and B21 were linked together.
To a solution of compound B16 (4.56 g, 6.4 mmol, 1.0 eq) in DCM (10 mL) , was added HCl/Dioxane (4M, 30 mL) . The reaction mixture was stirred for 3 h at room temperature, then concentrated under reduced pressure to provide a crude product as yellow solid. The crude product was dissolved in 50 mL DCM, then compound 21 (9.66 g, 19.2 mmol, 3.0 eq) , HBTU (8.49 g, 22.4 mmol, 3.5 eq) and DIPEA (12.72 mL, 76.8 mmol, 12.0 eq) were added into the reaction mixture under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then 50 mL H2O was added into the reaction mixture, the mixture was extracted with DCM (3*50 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-8%of MeOH/DCM) to provide compound B22 (10.4 g, 87%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR.  MW calc.: 1864.93; MW Found: 1895.54 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.45 (s, 1H) , 8.04 (dd, J = 8.5, 1.4 Hz, 1H) , 7.46 (d, J = 7.1 Hz, 2H) , 7.36 (dd, J = 13.2, 7.3 Hz, 4H) , 5.39 (s, 2H) , 5.35 (d, J = 3.2 Hz, 4H) , 5.29 (s, 6H) , 4.75 J 4.63 (m, 4H) , 4.14 (qd, J = 11.1, 6.8 Hz, 9H) , 3.92 (dd, J = 13.0, 6.4 Hz, 6H) , 3.64 (dd, J = 13.0, 6.6 Hz, 4H) , 3.49 -3.42 (m, 4H) , 3.12 -3.06 (m, 3H) , 2.19 (dd, J = 11.6, 7.5 Hz, 6H) , 2.13 (s, 9H) , 2.03 (s, 9H) , 1.99 (s, 9H) , 1.93 (d, J = 2.6 Hz, 9H) , 1.54 -1.50 (m, 12H) , 1.45 (s, 6H) , 1.25 (s, 18H) .
(10) The compound B22 was reduced to produce compound B1 of the present disclosure.
To a solution of the compound B22 (1.4 g, 0.75 mmol, 1.0 eq) in MeOH (25 mL) , was added Pd/C (100 mg) under nitrogen atmosphere slowly. Then the reaction atmosphere was replaced with hydrogen gas for three times. After that, the reaction mixture was stirred by purging with a hydrogen balloon at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure, the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-15%of MeOH/DCM) to provide compound B1 (1.2 g, 90%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 1774.88; MW Found: 1775.32 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.73 (s, 1H) , 8.18 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.55 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 5.36 -5.27 (m, 6H) , 4.69 (d, J = 7.9 Hz, 2H) , 4.56 -4.37 (m, 2H) , 4.17 -4.08 (m, 6H) , 4.00 -3.88 (m, 6H) , 3.88 -3.77 (m, 3H) , 3.65 (dd, J = 13.3, 6.6 Hz, 2H) , 3.50 -3.39 (m, 4H) , 3.11 -3.03 (m, 2H) , 2.20 (dd, J = 17.0, 9.2 Hz, 8H) , 2.13 (d, J = 1.5 Hz, 9H) , 2.04 -2.02 (m, 9H) , 1.98 (d, J = 1.9 Hz, 9H) , 1.94 -1.89 (m, 9H) , 1.60 -1.52 (m, 16H) , 1.44 (d, J = 6.4 Hz, 6H) , 1.31 -1.20 (m, 24H) .
Example 14. The preparation of compound B2 of the present disclosure
Compound B2 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) This step comprises the preparation of compound B38 from methyl 4-fluoro-3-nitrobenzoate.
To a solution of methyl 4-fluoro-3-nitrobenzoate (8.0 g, 40.2 mmol, 1.0 eq) and K2CO3 (5.5 g, 40.2 mmol) in anhydrous DMF (100 mL) , under nitrogen atmosphere, was added benzyl (3-aminopropyl) carbamate (8.3 g, 40.2 mmol, 1.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 25 ℃ for 6 h, then cold water (100 mL) was added. The mixture was extracted 3 times by ethyl acetate, then the organic phase was washed 3 times by saturated LiCl solution and 1 time by brine. Then dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form yellow solid (compound B38) which was directly used in the next step without further purification.
(2) The compound B38 was converted to compound B39.
To a solution of compound B38 (10 g, 25.84 mmol, 1.0 eq) in THF/H2O (9: 1, 100 mL) , under ice bath, was added HCOONH4 (9.78 g, 155.04 mmol, 6.0 eq) and Zn powder (10.14 g, 155.04 mmol, 6.0 eq) . After 10 minutes, the reaction mixture was moved to room temperature and stirred overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (100 mL) was added into the mixture, then extracted 3 times by ethyl acetate, the organic phase was washed 1 time by brine. After dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the light red solid (compound B39) formed then was directly used in the next step without further purification.
(3) The compound B40, which comprises a benzimidazole structure was prepared from compound B39.
To a solution of compound B39 (8.0 g, 22.5 mmol, 1.0 eq) in EtOH (200 mL) under nitrogen atmosphere, was added 3- ( (tert-butyldimethylsilyl) oxy) propanal (4.2 g, 22.5 mmol, 1.0 eq) and AcOH (5.1 mL, 90 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80℃ overnight, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (100 mL) was added, the mixture was extracted 3 times by ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue (compound B40) was directly used in the next step without further purification. The compound B40 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 525.27; MW. Found: 526.59 [M+H] +.
(4) The tert-butyldimethylsilyl (TBS) protectinggroup contained in compound B40 was replaced with 4, 4′-dimethoxytrityl (DMT) group.
To a solution of compound B40 (5.0 g, 9.5 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (50 mL) , under nitrogen atmosphere, was added 1 M TBAF THF solution (14.25 mL, 14.25 mmol, 1.5 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for about 1 h, and then concentrated under reduced pressure. Then water (100 mL) was added, the mixture was extracted 3 times by DCM, then the organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was dissolved in 50 mL pyridine, and DMTrCl (3.86 g, 11.4 mmol, 1.2 eq) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h, after concentrated under reduced pressure, the resultant residue was purified by flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound B41 (4.1 g, 60%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 713.31; MW Found: 303.17 [DMT] -, 412.36 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.39 (d, J = 1.1 Hz, 1H) , 7.96 (dd, J = 8.5, 1.3 Hz, 1H) , 7.38 -7.27 (m, 8H) , 7.20 (dq, J = 6.7, 2.5 Hz, 7H) , 6.76 -6.70 (m, 4H) , 5.10 (s, 2H) , 4.19 (t, J = 7.3 Hz, 2H) , 3.94 (s, 3H) , 3.74 (s, 6H) , 3.65 (t, J = 6.6 Hz, 2H) , 3.20 (d, J = 6.3 Hz, 2H) , 3.09 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 2.00 -1.90 (m, 2H) .
(5) The carbonyloxy group contained in compound B41 was reduced to methylene-oxy group so as to produce compound B42.
To a solution of compound B41 (4.0 g, 5.6 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (50 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (319 mg, 8.4 mmol, 1.5 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (30 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted 3 times with Et2O, then the  organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was dissolved in 50 mL DMF, then imidazole (572 mg, 8.4 mmol, 1.5 eq) and TBSCl (1.27 g, 8.4 mmol, 1.5 eq) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, after concentrated under reduced pressure, the resultant residue was purified by flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound B42 (4.03 g, 90%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 799.40; MW. Found: 303.17 [DMT] . 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.65 (s, 1H) , 7.38 -7.29 (m, 7H) , 7.19 (ddd, J = 8.4, 7.9, 3.7 Hz, 9H) , 6.78 -6.71 (m, 4H) , 5.10 (s, 2H) , 4.84 (s, 2H) , 4.16 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.75 (s, 6H) , 3.61 (t, J = 6.8 Hz, 2H) , 3.18 (d, J = 6.3 Hz, 2H) , 3.07 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 2.95 (s, 1H) , 2.88 (s, 1H) , 0.94 (s, 9H) , 0.10 (s, 6H) .
(6) The compound B22 was originated from the steps (1) - (9) of Example 13
(7) Compound B43 originated from reduction of compound B42 was linked with compound B22.
To a solution of compound B22 (1.36 g, 0.732 mmol, 1.1 eq) in MeOH (15 mL) , was added Pd/C (136 mg) under nitrogen atmosphere slowly. Then the reaction atmosphere was replaced with hydrogen three times. After that, the reaction mixture was stirred by purging with a hydrogen balloon at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure to provide crude product. The crude product was dissolved in DCM (15mL) , then HBTU (508 mg, 1.34 mmol, 2.0 eq) and DIPEA (375 μL, 2.28 mmol, 3.4 eq) were added into the reaction mixture under nitrogen atmosphere. Five minutes later, compound B43 (446 mg, 0.67 mmol, 1.0eq) , which was produced by reducing compound B42, was added into the reaction. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then H2O (20 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*50 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound B24 (1.5 g, 93%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 2422.23; MW Found: 1212.47 [M+2] /2. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.96 (s, 1H) , 8.81 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 8.13 (s, 1H) , 8.02 (d, J = 7.9 Hz, 2H) , 7.63 (d, J = 7.6 Hz, 2H) , 7.54 (t, J = 7.1 Hz, 2H) , 7.29 (s, 2H) , 7.18 (s, 4H) , 6.72 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 5.35 (s, 2H) , 5.29 (d, J = 11.0 Hz, 3H) , 4.83 (s, 2H) , 4.70 -4.67 (m, 2H) , 4.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H) , 4.17 -4.09 (m, 6H) , 3.94 -3.80 (m, 8H) , 3.74 (s, 6H) , 3.70 -3.57 (m, 8H) , 3.46 (d, J = 4.9 Hz, 4H) , 3.12 -3.06 (m, 4H) , 2.78 -2.65 (m, 3H) , 2.20 (d, J = 8.1 Hz, 3H) , 2.14 (d, J = 14.6 Hz, 6H) , 2.12 (s, 9H) , 2.02 (s, 9H) , 1.98 (s, 9H) , 1.92 (s, 9H) , 1.54 -1.50 (m, 12H) , 1.28 (s, 6H) , 1.22 -1.16 (m, 24H) , 0.93 (s, 9H) , 0.10 (s, 6H) .
(8) Compound B25 was generated by deprotecting TBS group of compound B24 then acylated with succinic anhydride.
To a solution of compound B24 (1.5 g, 0.62 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (35 mL) , under nitrogen atmosphere, was added 1 M TBAF THF solution (1.87 mL, 1.87 mmol, 3.0 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, and then concentrated under reduced pressure to provide crude product. The crude product was dissolved in DCM (15 mL) , then DMAP (265 mg, 2.17 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (124 mg, 1.24 mmol, 2.0 eq) were added therein under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight then H2O (20 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*50 mL) and the organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound B25 (794 mg, 53%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 2408.12; MW Found: 1205.60 [M+2] /2. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.30 (s, 1H) , 7.92 -7.84 (m, 2H) , 7.59 (s, 2H) , 7.31 (d, J = 6.9 Hz, 2H) , 7.22 -7.14 (m, 8H) , 6.74 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 5.32 -5.25 (m, 3H) , 5.20 (s, 2H) , 4.77 -4.71 (m, 2H) , 4.28 (s, 2H) , 4.13 (dd, J = 9.6, 4.8 Hz, 6H) , 4.01 (dd, J  = 8.7, 6.2 Hz, 3H) , 3.92 (d, J = 6.6 Hz, 3H) , 3.88 -3.83 (m, 2H) , 3.75 (s, 6H) , 3.61 (t, J = 6.7 Hz, 2H) , 3.39 -3.30 (m, 14H) , 3.13 (d, J = 6.1 Hz, 4H) , 2.70 (dd, J = 19.6, 12.8 Hz, 4H) , 2.34 -2.20 (m, 6H) , 2.12 (s, 9H) , 2.02 (s, 9H) , 1.98 (s, 9H) , 1.93 (s, 9H) , 1.68 (dd, J = 10.1, 6.1 Hz, 12H) , 1.48 -1.43 (m, 12H) , 1.31 -1.22 (m, 24H) .
(9) The compound B25 was linked with a solid support, Controlled Pore Glass (CPG) , to produce Compound B2 of the present disclosure.
To a solution of the compound B25 (754 mg, 0.33 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (5.58 g) , N, N-Diisopropylethylamine (DIPEA) (160 uL, 0.99 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (40 mL) was added O- (1H-Benzotriazol-1-yl) -N, N, N′, N′-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU) (250 mg, 0.66 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to generate crude solid support. To a solution of acetic anhydride (17.7 mL) , pyridine (40 mL) , NEt3 (580 μL) in acetonitrile (26.2 mL) was added the crude solid support under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then subsequently washed with DCM and ethyl ether to produce the Compound B2 of the present  disclosure (5.3 g) .
Example 15. The preparation of Compound B3 of the present disclosure.
The Compound B3 of the present disclosure was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The compound B39 was originated from the steps (1) - (2) of Example 14.
(2) The compound B44, which comprises a benzimidazole structure was prepared from the compound B39.
To a solution of compound B39 (8.87 g, 24.84 mmol, 1.0 eq) in EtOH (220 mL) under nitrogen atmosphere, was added 5- ( (tert-butyldimethylsilyl) oxy) pentanal B11 (5.4 g, 24.84 mmol, 1.0 eq) and AcOH (5.73 mL, 99.36 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80℃ overnight, and then concentrated under reduced pressure. Then saturated NaHCO3 solution (100 mL) was added therein, the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate. The organic phase was combined and washed by brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide the compound B44 (6.3 g, 46%yield) as red solid. The product  was characterized with mass spectrometry, 1H NMR and 13C NMR. MW calc.: 553.30; MW Found: 554.29 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.42 (d, J = 0.8 Hz, 1H) , 7.95 (dd, J = 8.5, 1.1 Hz, 1H) , 7.44 -7.28 (m, 5H) , 7.26 (d, J = 6.8 Hz, 1H) , 5.12 (s, 2H) , 4.16 (dd, J = 12.6, 5.3 Hz, 2H) , 3.93 (s, 3H) , 3.67 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 3.28 (d, J = 6.2 Hz, 2H) , 2.87 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 2.04 -1.88 (m, 4H) , 1.67 (dd, J = 14.7, 6.6 Hz, 2H) , 0.88 (s, 9H) , 0.04 (s, 6H) . 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 167.72, 156.63, 142.35, 138.19, 136.30, 128.60, 128.24, 124.10, 123.87, 121.63, 108.66, 66.96, 62.71, 60.41, 52.06, 41.31, 38.57, 32.46, 30.43, 27.30, 25.97, 24.15, 21.07, 18.34, 14.21.
(3) The tert-butyldimethylsilyl (TBS) protecting group contained in compound B44 was replaced with 4, 4′-dimethoxytrityl (DMT) group.
To a solution of compound B44 (6.3 g, 11.4 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (50 mL) under nitrogen atmosphere, was added 1 M TBAF THF solution (17.1 mL, 17.1 mmol, 1.5 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, and then concentrated under reduced pressure. Then water (100 mL) was added, the mixture was extracted 3 times with DCM, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was dissolved in 50 mL pyridine, and DMTrCl (4.6 g, 13.68 mmol, 1.2 eq) was added therein. The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h, after which it was concentrated under reduced pressure. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound B45 (6.23 g, 74%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry, 1H NMR and 13C NMR. MW calc.: 741.34; MW. Found: 303.11 [DMT] -, 440.14 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.63 (dd, J = 5.7, 1.5 Hz, 1H) , 8.43 (d, J = 1.0 Hz, 1H) , 7.97 (dd, J = 8.5, 1.1 Hz, 1H) , 7.45 (d, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.37 -7.28 (m, 11H) , 7.21 (dd, J = 8.1, 6.1 Hz, 1H) , 6.83 (t, J = 5.9 Hz, 4H) , 5.13 (s, 2H) , 4.12 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.95 (s, 3H) , 3.79 (s, 6H) , 3.24 (d, J = 6.2 Hz, 2H) , 3.14 (t, J = 6.2 Hz, 2H) , 2.83 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 2.01 (dd, J = 16.0, 8.5 Hz, 4H) , 1.79 (dd, J = 14.1, 6.6 Hz, 2H) . 13C NMR (100  MHz, CDCl3) δ 167.81, 158.43, 156.64, 149.95, 145.34, 142.43, 138.26, 136.57, 136.05, 130.11, 128.69, 128.39, 128.26, 128.23, 127.84, 126.75, 124.17, 123.89, 121.70, 113.11, 108.75, 85.93, 67.02, 62.90, 55.31, 52.16, 41.37, 38.64, 30.50, 29.76, 27.30, 24.53.
(4) The carbonyloxy group contained in compound B45 was reduced to methylene-oxy group so as to produce compound B46.
To a solution of compound B45 (5.0 g, 6.74 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (60 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (384 mg, 10.11 mmol, 1.5 eq) . The mixture was then transferred to room temperature after 10 minutes and stirred for about 1 h. Then the reaction was transferred to ice bath, and saturated potassium sodium tartrate solution (30 mL) was added slowly into the mixture. After reacting for 30 minutes, the reaction was extracted 3 times with Et2O, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was dissolved in 20 mL DMF, then imidazole (688 mg, 10.11 mmol, 1.5 eq) and TBSCl (1.524 g, 10.11 mmol, 1.5 eq) were added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h. After being concentrated under reduced pressure, the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound B46 (4.78 g, 86%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry, 1H NMR and 13C NMR. MW calc.: 827.43; MW. Found: 303.16 [DMT] -, 526.50 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.69 (s, 1H) , 7.47 -7.42 (m, 2H) , 7.40 -7.28 (m, 11H) , 7.22 (t, J = 3.5 Hz, 3H) , 6.86 -6.80 (m, 4H) , 5.13 (s, 2H) , 4.86 (s, 2H) , 4.15 (dd, J = 14.3, 7.2 Hz, 2H) , 3.79 (s, 6H) , 3.13 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 2.82 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 2.05 -1.94 (m, 4H) , 1.81 -1.74 (m, 2H) , 1.29 (t, J = 7.1 Hz, 2H) , 0.97 (s, 9H) , 0.13 (s, 6H) . 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 171.27, 158.45, 156.60, 154.95, 145.40, 142.93, 136.66, 135.52, 134.14, 130.14, 128.70, 128.37, 128.28, 127.85, 126.74, 120.93, 117.18, 113.13, 108.73, 85.93, 67.00, 65.53, 63.00, 60.51, 55.32, 53.55, 41.19, 38.74, 30.51, 29.85, 27.33, 26.14, 24.78, 21.17, 18.57, 14.33.
(5) The compound B22 was originated from the steps (1) - (9) of Example 13.
(6) The compound B22 was linked with compound B47, which was derived from compound B46, to form compound B27.
To a solution of compound B22 (2.24 g, 1.2 mmol, 1.0 eq) in MeOH (20 mL) , was added Pd/C (224 mg) under nitrogen atmosphere slowly. Then the reaction atmosphere was replaced with hydrogen gas for three times. After that, the reaction mixture was stirred by purging with a hydrogen balloon at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure to provide crude product. The crude product was dissolved in DCM (20 mL) , then HBTU (910 mg, 2.4 mmol, 2.0) and DIPEA (676 μL, 4.08 mmol, 3.4 eq) were added into the reaction under nitrogen atmosphere. Five minutes later, compound B47 (849 mg, 1.2 mmol) , which was produced by reducing compound B46, was added into the reaction. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then H2O (20 mL) was added into the reaction, and the mixture was extracted with DCM (3*50 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-8%of MeOH/DCM) to provide compound B27 (1.48 g, 50%yield) as white  solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 2450.26; MW. Found: 1074.76 [DMT off] -/2. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 (s, 1H) , 7.73 -7.59 (m, 2H) , 7.39 (t, J = 10.1 Hz, 3H) , 7.29 (d, J = 8.6 Hz, 5H) , 7.25 -7.15 (m, 4H) , 6.78 (t, J = 8.2 Hz, 4H) , 5.42 -5.16 (m, 9H) , 4.83 (s, 2H) , 4.68 (d, J = 7.6 Hz, 2H) , 4.42 -4.25 (m, 2H) , 4.22 -4.06 (m, 8H) , 4.02 -3.79 (m, 10H) , 3.80 -3.74 (m, 6H) , 3.70 -3.30 (m, 8H) , 3.21 (s, 2H) , 3.09 (t, J = 5.9 Hz, 2H) , 2.86 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 2.31 -2.14 (m, 10H) , 2.12 (s, 9H) , 2.05 -2.02 (m, 9H) , 1.99 (s, 9H) , 1.93 (s, 9H) , 1.75 (d, J = 6.8 Hz, 2H) , 1.60 -1.50 (m, 12H) , 1.26 (d, J = 12.4 Hz, 24H) , 0.93 (s, 9H) , 0.10 (s, 6H) .
(7) Compound B28 was generated by deprotecting TBS group of compound B27 then acylated with succinic anhydride.
To a solution of compound B27 (1.22 g, 0.5 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (10 mL) under nitrogen atmosphere, was added 1 M TBAF THF solution (1.5 mL, 1.5 mmol, 3 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, and then concentrated under reduced pressure to provide crude product. The crude product was dissolved in DCM (10 mL) then DMAP (212 mg, 1.75 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (150 mg, 1.5 mmol, 3.0 eq) were added therein under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight and then H2O (10 mL) was added into the reaction. The mixture was  extracted with DCM (3*20 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resulting residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound B28 (380 mg, 31%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 2436.19; MW. Found: 1067.52 [DMT off] -/2.
(8) The compound B28 was linked with a solid support, Controlled Pore Glass (CPG) , to produce Compound B3 of the present disclosure.
To a solution of compound B28 (250 mg, 0.103 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (1.8 g) , N, N-Diisopropylethylamine (DIPEA) (51 μL, 0.309 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (14 mL) was added HBTU (78 mg, 0.206 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then sequentially washed with DCM and ethyl ether to produce the crude solid support. To a solution of acetic anhydride (6.2 mL) , pyridine (12 mL) , NEt3 (186 uL) in acetonitrile (7.9 mL) was added the crude solid support under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25℃ overnight and then sequentially washed with DCM and ethyl ether to produce Compound B3  of the present disclosure (1.84 g) .
Example 16: The preparation of Compound B4 of the present disclosure.
The Compound B4 of the present disclosure was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) Compound B17 was originated from the step (6) of Example 13.
(2) An alkoxy group terminated with vinyl group was attached to compound B17.
To a solution of compound B17 (19.7 g, 59.8 mmol, 1.0 eq) in DCE (260 mL) , was added hex-5-en-1-ol (7.2 g, 71.8 mmol, 1.2 eq) and TMSOTf (2.2 mL, 12 mmol, 0.2 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h. Then saturated NaHCO3 solution (100 mL) was added, the mixture was extracted 3 times with DCM. The organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound B18 (18.7 g, 73%yield) .
(3) The terminal vinyl group of compound B18 was oxidized to a carboxyl group.
To a solution of compound B18 (18.7g, 43.6 mmol, 1.0 eq) in ACN/DCM/H2O (140mL/140mL/210mL) under ice bath, was added NaIO4 (37.3 g, 174.4 mol, 4.0 eq) and RuCl3·3H2O (1.8 g, 8.72 mol, 0.2 eq) . After 10 minutes, the reaction mixture was transferred to room temperature and stirred overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (100 mL) was added into the mixture, then the mixture was extracted 3 times with DCM, the organic phase was washed 1 time with brine. After being dried with anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-8%of MeOH/DCM) to provide compound B19 (19 g, 97%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 447.17; MW Found: 448.36 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.15 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 5.33 (d, J = 3.0 Hz, 1H) , 5.29 -5.26 (m, 1H) , 4.66 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 4.13 (dd, J = 9.3, 6.8 Hz, 2H) , 3.92 (dd, J = 8.4, 5.4 Hz, 2H) , 3.50 (dd, J = 5.7, 4.0 Hz, 1H) , 2.35 (dd, J = 14.3, 7.0 Hz, 2H) , 2.13 (s, 3H) , 2.03 (s, 3H) , 1.98 (s, 3H) , 1.95 (s, 3H) , 1.69 -1.61 (m, 4H) .
(4) Compound B16 was originated from the steps (1) - (5) of Example 13.
(5) The compound B16 was linked with compound B19 to produce compound B30.
To a solution of compound B16 (1.8 g, 2.54 mmol, 1.0 eq) in DCM (10 mL) , was added HCl/Dioxane (4M, 20 mL) . The reaction mixture was stirred for 3 h at room temperature, then concentrated under reduced pressure to provide crude product as yellow  solid. After that, the crude product was dissolved in 25 mL DCM, then compound B19 (3.4 g, 7.62 mmol, 3.0 eq) , HBTU (3.37 g, 8.89 mmol, 3.5 eq) and DIPEA (5.05 mL, 30.48 mmol, 12.0 eq) were added into the reaction under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then 20 mL H2O was added into the reaction mixture. The mixture was extracted with DCM (3*30 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-8%of MeOH/DCM) to provide compound B30 (3.67 g, 85%yield) as yellow solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 1697.80; MW Found: 1698.53 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.41 (d, J = 22.5 Hz, 1H) , 8.04 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.44 (d, J = 7.0 Hz, 2H) , 7.40 -7.31 (m, 4H) , 5.42 -5.26 (m, 7H) , 5.19 (td, J = 11.0, 3.3 Hz, 2H) , 4.64 -4.55 (m, 2H) , 4.24 -3.99 (m, 10H) , 3.94 -3.75 (m, 6H) , 3.68 -3.62 (m, 1H) , 3.35 -3.16 (m, 4H) , 3.11 -3.06 (m, 1H) , 2.35 -2.26 (m, 3H) , 2.23 -2.15 (m, 6H) , 2.12 (d, J = 6.9 Hz, 9H) , 2.03 (s, 9H) , 1.99 (s, 9H) , 1.92 (dd, J = 11.6, 5.2 Hz, 9H) , 1.78 (s, 2H) , 1.71 -1.61 (m, 6H) , 1.51 (dd, J = 12.6, 6.5 Hz, 8H) , 1.42 (d, J = 6.6 Hz, 4H) .
(6) Compound B47 was originated from the steps (3) - (5) of Example 15.
(7) The compound B30 was linked with compound B47, which was derived from compound B46, to form compound B31.
To a solution of compound B30 (1.85 g, 1.09 mmol, 1.0 eq) in MeOH (20 mL) , was added Pd/C (185 mg) under nitrogen atmosphere slowly. Then the reaction atmosphere was replaced with hydrogen gas for three times. After that, the reaction mixture was stirred by purging with a hydrogen balloon at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure to provide crude product.
The crude product was dissolved in DCM (20 mL) , then HBTU (826 mg, 2.18 mmol, 2.0 eq) and DIPEA (614 μL, 3.7 mmol, 3.4 eq) were added into the reaction under nitrogen atmosphere. Five minutes later, compound 47 (849 mg, 1.2 mmol, 1.1 eq) , which was produced by reducing compound B46, was added into the reaction mixture. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then H2O (20 mL) was added into the reaction, the mixture was extracted with DCM (3*50 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-8%of MeOH/DCM) to provide compound B31 (1.8 g, 72%yield) as white solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 2282.08; MW Found: 1142.33 [M+2H] +/2. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.08 (s, 1H) , 7.64 (s, 1H) , 7.38 (dd, J = 12.7, 8.1 Hz, 4H) , 7.28 (d, J = 8.8 Hz, 5H) , 7.23 (d, J  = 7.8 Hz, 2H) , 7.20 -7.15 (m, 2H) , 6.78 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 5.33 (s, 3H) , 5.23 -5.11 (m, 2H) , 4.81 (s, 2H) , 4.58 (dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 2H) , 4.18 (d, J = 10.6 Hz, 3H) , 4.17 -4.04 (m, 8H) , 3.96 -3.80 (m, 6H) , 3.75 (s, 6H) , 3.63 (dd, J = 13.3, 6.6 Hz, 1H) , 3.57 -3.40 (m, 5H) , 3.22 (s, 3H) , 3.07 (dd, J = 10.9, 4.7 Hz, 2H) , 2.85 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 2.42 (s, 6H) , 2.20 (dd, J = 34.7, 6.1 Hz, 8H) , 2.10 (d, J = 7.6 Hz, 9H) , 2.06 (d, J = 9.1 Hz, 2H) , 2.01 (d, J = 3.3 Hz, 9H) , 1.97 (dd, J = 7.5, 2.4 Hz, 9H) , 1.89 (dd, J = 28.9, 13.9 Hz, 9H) , 1.80 -1.64 (m, 6H) , 1.62 -1.46 (m, 12H) , 1.40 (d, J = 6.0 Hz, 3H) , 0.92 (s, 9H) , 0.08 (s, 6H) .
(8) Compound B32 was generated by deprotecting TBS group of compound B31 then acylated with succinic anhydride.
To a solution of compound B31 (1.57 g, 0.687 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (10 mL) under nitrogen atmosphere, was added 1 M TBAF THF solution (2.06 mL, 2.06 mmol, 3.0 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, and then concentrated under reduced pressure to produce the crude product.
The crude product was dissolved in DCM (15 mL) then DMAP (587 mg, 4.8 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (137 mg, 1.374 mmol, 2.0 eq) were added under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight, then H2O (20 mL) was added into the reaction mixture. The mixture was extracted with DCM (3*50 mL) . The  organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound B32 (1.0 g, 64%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 2268.01; MW Found: 1135.22 [M+2H] +/2. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.17 (d, J = 6.6 Hz, 2H) , 7.40 (d, J = 7.6 Hz, 2H) , 7.30 -7.26 (m, 5H) , 7.24 (s, 2H) , 7.18 (d, J = 6.8 Hz, 2H) , 6.79 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 6.50 (s, 2H) , 5.32 (s, 2H) , 5.29 (s, 5H) , 5.25 -5.12 (m, 4H) , 4.60 (dd, J = 15.7, 8.3 Hz, 2H) , 4.17 (d, J = 10.0 Hz, 2H) , 4.14 -3.96 (m, 8H) , 3.87 (dd, J = 15.1, 6.5 Hz, 5H) , 3.76 (s, 6H) , 3.45 (s, 6H) , 3.19 (d, J = 8.7 Hz, 2H) , 3.08 (t, J = 6.0 Hz, 2H) , 3.01 (s, 10H) , 2.90 -2.77 (m, 2H) , 2.63 (d, J = 17.4 Hz, 4H) , 2.19 (dd, J = 24.8, 17.2 Hz, 9H) , 2.12 -2.08 (m, 9H) , 2.01 (d, J = 3.7 Hz, 9H) , 1.98 -1.94 (m, 9H) , 1.87 (dd, J = 24.8, 13.3 Hz, 9H) , 1.76 -1.62 (m, 6H) , 1.55 (d, J = 15.4 Hz, 12H) .
(9) The compound B32 was linked with a solid support, Controlled Pore Glass (CPG) , to produce Compound B4 of the present disclosure.
To a solution of compound B32 (233 mg, 0.103 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (1.8 g) , N, N-diisopropylethylamine (DIPEA) (51 μL, 0.309 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (14 mL) was added HBTU (78 mg, 0.206 mmol, 2.0 eq) under nitrogen  atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then washed with DCM and ethyl ether to generate crude solid support.
To a solution of acetic anhydride (6.2 mL) , pyridine (12 mL) , NEt3 (186 uL) in acetonitrile (7.9 mL) was added the crude solid support under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then washed with DCM and ethyl ether to produce Compound B4 of the present disclosure (1.84 g) .
Example 17: The preparation of Compound B5 of the present disclosure.
The Compound B5 of the present disclosure was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) Compound B46 was originated from the steps (3) - (5) of Example 15.
(2) Compound B48 was generated by reduction of compound B46 then acylation with 6- ( ( (benzyloxy) carbonyl) amino) hexanoic acid. 
To a solution of compound B46 (1.0 g, 1.2 mmol, 1.0 eq) in MeOH (30 mL) , was added Pd/C (100 mg) under nitrogen atmosphere slowly. Then the reaction atmosphere was replaced with hydrogen for three times. After that, the reaction mixture was stirred by purging with a hydrogen balloon at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered  and concentrated under reduced pressure to provide crude product. After that, the crude product was dissolved in 20 mL DCM, then 6- ( ( (benzyloxy) carbonyl) amino) hexanoic acid (350 mg, 1.32 mmol, 1.1 eq) , HBTU (682 mg, 1.8 mmol, 1.5 eq) and DIPEA (675 μL, 4.08 mmol, 3.4 eq) were added into the reaction mixture under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then 20 mL H2O was added into the reaction mixture, the mixture was extracted with DCM (3*50 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound B48 (1.0 g, 88%yield) as yellow oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 940.52; MW. Found: 303.29 [DMT] -, 639.64 [DMT off + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.62 (d, J = 4.0 Hz, 1H) , 7.40 (dd, J = 5.3, 3.3 Hz, 2H) , 7.29 (dtd, J = 7.8, 4.7, 2.2 Hz, 14H) , 6.80 (dt, J = 9.0, 5.7 Hz, 4H) , 5.06 (s, 2H) , 4.81 (s, 2H) , 4.11 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 3.77 (s, 6H) , 3.18 -3.08 (m, 4H) , 2.88 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 2.09 -1.92 (m, 6H) , 1.60 -1.25 (m, 10H) , 0.93 (s, 9H) , 0.10 (s, 6H) .
(3) Compound B22 was originated from the steps (1) - (9) of Example 13.
(4) Compound B22 was linked with compound B49, which was derived from compound B48, to form compound B34.
To a solution of compound B22 (2.4 g, 1.28 mmol) in MeOH (20 mL) , was added Pd/C (240 mg) under nitrogen atmosphere slowly. Then the reaction atmosphere was replaced with hydrogen gas for three times. After that, the reaction mixture was stirred by purging with a hydrogen balloon at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure to provide crude product.
The crude product was dissolved in DCM (20 mL) , then HBTU (971 mg, 2.56 mmol, 2.0 eq) and DIPEA (721 μL, 4.352 mmol, 3.4 eq) were added into the reaction under nitrogen atmosphere. After five minutes, the compound B49 (1.04 g, 1.27 mmol, 1.0 eq) , which was obtained by reducing the compound B48, was added into the reaction mixture. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then H2O (20 mL) was added into the reaction mixture. The mixture was extracted with DCM (3*30 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-8%of MeOH/DCM) to provide compound B34 (1.07 g, 33%yield) as white solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 2563.35; MW Found: 1283.20 [M+2H] +/2. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.10 (s, 1H) , 7.73 (t, J = 7.7 Hz, 1H) , 7.62 (s, 1H) , 7.39 (d, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.28 (d, J = 8.9  Hz, 5H) , 7.25 -7.21 (m, 3H) , 7.19 -7.15 (m, 2H) , 6.78 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 5.34 (s, 4H) , 5.29 (s, 2H) , 5.27 (s, 2H) , 4.80 (s, 2H) , 4.68 (t, J = 7.5 Hz, 3H) , 4.13 (dt, J = 17.5, 10.8 Hz, 9H) , 4.03 -3.96 (m, 3H) , 3.92 (d, J = 6.2 Hz, 4H) , 3.76 (s, 6H) , 3.67 -3.63 (m, 2H) , 3.44 (d, J = 5.4 Hz, 6H) , 3.08 (t, J = 6.1 Hz, 3H) , 2.79 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 2.15 (d, J = 7.7 Hz, 12H) , 2.12 (s, 9H) , 2.07 (s, 3H) , 2.02 (d, J = 3.1 Hz, 9H) , 1.98 (d, J = 1.8 Hz, 9H) , 1.97 (s, 5H) , 1.91 (s, 9H) , 1.56 -1.49 (m, 18H) , 1.42 (d, J = 6.6 Hz, 6H) , 1.24 (d, J = 15.2 Hz, 24H) , 0.92 (s, 9H) , 0.08 (s, 6H) .
(5) Compound B35 was generated by deprotecting TBS group of compound B34 then acylated with succinic anhydride.
To a solution of compound B34 (873 mg, 0.346 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (10 mL) under nitrogen atmosphere, was added 1 M TBAF THF solution (2.07 mL, 2.07 mmol, 6.0 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h, and then concentrated under reduced pressure to generate the crude product.
The crude product was dissolved in DCM (10 mL) then DMAP (148 mg, 1.21 mmol, 3.5 eq) , succinic anhydride (104 mg, 1.038 mmol, 3.0 eq) were added under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight, and then H2O (20 mL) was added into the reaction. The mixture was extracted with DCM (3*30 mL) . The  organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound B35 (293 mg, 33%yield) as colorless oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 2549.28; MW Found: 1276.36 [M+2H] +/2. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.10 (d, J = 7.1 Hz, 2H) , 7.39 (d, J = 7.5 Hz, 2H) , 7.28 (s, 4H) , 7.25 -7.10 (m, 5H) , 6.78 (d, J = 8.6 Hz, 4H) , 6.70 (d, J = 7.3 Hz, 2H) , 5.33 (s, 2H) , 5.29 (s, 6H) , 4.70 (d, J = 6.1 Hz, 3H) , 4.17 -3.98 (m, 11H) , 3.87 (d, J = 35.7 Hz, 6H) , 3.75 (s, 6H) , 3.46 (s, 4H) , 3.31 -3.24 (m, 2H) , 3.20 (s, 8H) , 3.07 (s, 4H) , 2.72 (d, J = 51.3 Hz, 4H) , 2.14 (s, 6H) , 2.09 (d, J = 16.8 Hz, 12H) , 2.01 (s, 9H) , 1.96 (s, 12H) , 1.92 (s, 9H) , 1.67 (dd, J = 16.4, 7.7 Hz, 6H) , 1.61 -1.40 (m, 18H) , 1.37 -1.03 (m, 30H) .
(6) The compound B35 was linked with a solid support, Controlled Pore Glass (CPG) , to produce compound B5 of the present disclosure.
To a solution of compound B35 (262 mg, 0.103 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (1.8 g) , N, N-Diisopropylethylamine (DIPEA) (51 μL, 0.309 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (14 mL) was added HBTU (78 mg, 0.206 mmol, 2.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then washed with DCM and ethyl ether to produce crude solid support.
To a solution of acetic anhydride (6.2 mL) , pyridine (12 mL) , NEt3 (186 μL) in acetonitrile (7.9 mL) was added the crude solid support under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at 25 ℃ overnight and then washed with DCM and ethyl ether to produce compound B5 of the present disclosure (1.78 g) .
Example 18: The preparation of compound B6 of the present disclosure.
The compound B6 of the present disclosure was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) Compound B22 was originated from the steps (1) - (9) of Example 13.
(2) Compound B37 was generated by reduction of compound B22 and then acylation with 6-aminohexan-1-ol
To a solution of compound B22 (1.0 g, 0.54 mmol, 1.0 eq) in MeOH (25 mL) , was added Pd/C (100 mg) under nitrogen atmosphere slowly. Then the reaction atmosphere was  replaced with hydrogen gas for three times. After that, the reaction mixture was stirred by purging with a hydrogen balloon at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure to provide a crude product.
The crude product was dissolved in DCM (20 mL) , then HBTU (410 mg, 1.08 mmol, 2.0 eq) and DIPEA (305 μL, 1.84 mmol, 3.4 eq) were added into the reaction mixture under nitrogen atmosphere. Five minutes later, 6-aminohexan-1-ol (70 mg, 0.594 mmol, 1.1 eq) was added into the reaction mixture. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then H2O (20 mL) was added into the reaction mixture, and the mixture was extracted with DCM (3*50 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound B37 (0.9 g, 90%yield) as white solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 1873.98; MW Found: 1874.16 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.11 (s, 1H) , 7.76 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 5.39 -5.26 (m, 9H) , 4.73 -4.66 (m, 3H) , 4.14 (dt, J = 18.0, 11.1 Hz, 8H) , 3.95 -3.88 (m, 4H) , 3.64 (d, J = 4.4 Hz, 4H) , 3.47 (dd, J = 14.8, 8.0 Hz, 6H) , 3.25 (dd, J = 13.8, 6.8 Hz, 6H) , 2.14 (s, 9H) , 2.04 (d, J = 3.4 Hz, 9H) , 2.00 -1.98 (m, 9H) , 1.93 (s, 9H) , 1.68 (s, 10H) , 1.60 -1.53 (m, 14H) , 1.44 (s, 8H) , 1.27 (d, J = 12.4 Hz, 24H) .
(3) The compound B6 of the present disclosure was prepared with compound B37.
To a solution of compound B37 (0.9 g, 0.48 mmol, 1.0 eq) and DIPEA (238 μL, 1.44 mmol, 3.0 eq) in anhydrous DCM (10 mL) under nitrogen atmosphere, was added 3- ( (chloro (diisopropylamino) phosphanyl) oxy) propanenitrile (341 mg, 1.44 mmol, 3.0 eq. ) at 25℃. The reaction mixture was stirred for 1 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was  concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-8%of MeOH/DCM, 1%Et3N) to provide compound B6 of the present disclosure (495 mg, 50%yield) as white solid. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 2074.09; MW Found: 987.54 [M -diisopropylamine] /2. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.11 (s, 1H) , 7.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.40 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 5.38 -5.18 (m, 8H) , 4.74 -4.63 (m, 3H) , 4.23 -4.06 (m, 8H) , 4.05 -3.94 (m, 4H) , 3.95 -3.88 (m, 4H) , 3.87 -3.73 (m, 5H) , 3.64 -3.54 (m, 4H) , 3.47 (dd, J = 13.8, 6.6 Hz, 5H) , 2.64 (t, J = 6.4 Hz, 6H) , 2.17 (d, J = 5.8 Hz, 6H) , 2.13 (s, 9H) , 2.03 (d, J = 2.9 Hz, 9H) , 2.00 -1.98 (m, 9H) , 1.93 (s, 9H) , 1.56 (dd, J = 26.2, 20.3 Hz, 16H) , 1.42 (d, J = 7.3 Hz, 6H) , 1.27 (d, J = 11.1 Hz, 24H) , 1.18 (d, J = 2.3 Hz, 6H) , 1.16 (d, J = 2.3 Hz, 6H) , 1.10 (t, J = 7.1 Hz, 6H) .
Example 19: The preparation of compound tC2 of the present disclosure.
(1) Compound C3 was prepared according to the following procedures:
The dicarboxylic acid (20 g, 86.8 mmol) was dissolved/suspended in dry CH2Cl2 (100 mL) . Then oxalyl chloride (16.2 mL, 190.96 mmol) and DMF (5 drops) were added to the solution. The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 h, then concentrated under reduced pressure to provide crude compound C2, which was directly used in the next step without further purification.
A solution of benzyl alcohol (9.39 g, 86.8 mmol) and Et3N (12 mL, 86.8 mmol) in THF (200 mL) was added dropwise to an ice-cold solution of compound C2 (86.8 mmol) in THF (100 mL) over 2 hours. Then the solution was warmed to room temperature and stirred overnight. A mixture of H2O (80 mL) , Et3N (12 mL, 86.8 mmol) and THF (80 mL) was added slowly to the solution over 1 hour, and the stirring was continued for 2 hours. THF was then removed and 20 mL H2O was added to the residue. The mixture was extracted by ethyl ether (3*100 mL) and the organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. Ethyl acetate (20 mL) was added to the residue and the suspension was filtered to remove dodecanedioic acid. Concentration of the filtrate followed by chromatography (Hexane: Ethyl  acetate = 4 : 1 to 2: 1) afforded 12.5 g (45%yield) compound C3 as white solid. MW calc.: 320.20; MW Found: 319.02 [M-H] -.
(2) Compound C6 was synthesized by the following procedures:
To a solution of Fmoc-L-hydroxyproline compound C4 (13.3 g, 37.6 mmol) in anhydrous THF (250 mL) , was added borane-methyl sulfide complex (6.16 g, 80 mmol) slowly at room temperature. The reaction mixture was stirred for 5 min at room temperature and then heated to reflux for about 1 h. Methanol (15 mL) was carefully added to the reaction mixture, after which the substance in the vessel was refluxed for 15 min. After that, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. Then the crude products were evaporated three times with methanol (100 mL each) to remove boron-related impurity. The obtained crude product compound C5 was directly used in the next step without further purification.
To a solution of compound C5 (37.6 mmol) in anhydrous pyridine (200 mL) , was added DMTrCl (14 g, 41.4 mmol) slowly at ice bath. The reaction mixture was stirred at nitrogen atmosphere overnight and then concentrated under reduced pressure. The crude product was dissolved in dry MeCN (300 mL) , after that, Et3N (112.8 mmol, 15.6 mL) was added into the mixture and then the reaction mixture was heated to 60 ℃ and kept at that temperature for 4 h. After concentrated under reduced pressure, the resulting residue was purified by flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-8%of MeOH/DCM) to provide compound C6 (7.57 g, 48%yield) as yellow solid. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.41 (d, J = 7.4 Hz, 2H) , 7.30 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 7.28 -7.22 (m, 2H) , 7.18 (t, J = 7.2 Hz, 1H) , 6.80 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 4.34 (s, 1H) , 3.75 (d, J = 11.1 Hz, 6H) , 3.60 (dd, J = 12.7, 6.7 Hz, 1H) , 3.10 -2.92 (m, 5H) , 2.86 (d, J = 11.5 Hz, 1H) , 1.85 (dd, J = 13.5, 7.1 Hz, 1H) , 1.63 (ddd, J = 13.7, 7.9, 5.9 Hz, 1H) .
(3) The compound C9 was prepared by the following procedures:
To a solution of 2-amino-2- (hydroxymethyl) propane-1, 3-diol compound C7 (25 g, 206 mmol) in DMSO (50 mL) , was added sodium hydroxide solution (0.83 g NaOH in 4 mL H2O) slowly. Then the 3- (tert-butoxy) -3-oxoprop-1-en-1-ylium (90 g, 700 mmol) was added slowly under nitrogen. The reaction was stirred at room temperature for 2 days. Then 100 mL H2O was added into the reaction, the mixture was extracted by ethyl acetate (3*150 mL) and the organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resulting residue was purified by flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound C9 (42 g, 40%yield) as colorless oil.
(4) The Compound C10 was prepared by the following procedures:
To a solution of 12- (benzyloxy) -12-oxododecanoic acid compound C3 (3.3 g, 10.3 mmol) in DCM (50 mL) , was added HBTU (7.81 g, 20.6 mmol) and DIPEA (5.1 mL, 30.9 mmol) under nitrogen atmosphere. 5 minutes later, compound C9 (7.8 g, 15.45 mmol) was added into the reaction system. After that, the reaction mixture was stirred at room temperature for 4 h. Then 50 mL H2O was added into the reaction system, the mixture was extracted with DCM (3*100 mL) and the organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resulting residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-30%of EA/HX) to provide compound C10 (7.16 g, 86%yield) as colorless oil. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.42 -7.27 (m, 5H) , 6.00 (s, 1H) , 5.11 (s, 2H) , 3.70 (s, 6H) , 3.64 (t, J = 6.3 Hz, 6H) ,  2.44 (t, J = 6.3 Hz, 6H) , 2.34 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 2.17 -2.09 (m, 2H) , 1.59 (d, J = 11.6 Hz, 4H) , 1.45 (s, 27H) , 1.26 (s, 12H) .
(5) The compound 12 was prepared by the following procedures:
To a solution of compound C10 (7.0 g, 8.67 mmol) in DCM (100 mL) , was added CF3COOH (50 mL) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature, then concentrated under reduced pressure to provide crude product as colorless oil. After that, the colorless oil was dissolved in 100 mL DCM, then HBTU (19.73 g, 52.02 mmol) and DIPEA (13 mL, 78.03 mmol) were added into the reaction system under nitrogen atmosphere. After Five minutes, tert-butyl (3-aminopropyl) carbamate compound C11 (6.8 g, 39 mmol) was added into the reaction system. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then 50 mL H2O was added into the reaction system, the mixture was extracted with DCM (3*100 mL) and the organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resulting residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-8%of MeOH/DCM) to provide compound C12 (6.7 g, 70%yield) as colorless oil.
(6) The compound C14 was prepared by using the following procedures:
To a solution of the compound C12 (1.0 g, 0.9 mmol, 1.0 eq) in DCM (8 mL) , was added HCl/Dioxane (4M, 8 mL) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 h, then concentrated under reduced pressure to provide crude product as yellow solid. After that, the crude product was dissolved in 15 mL DCM, then compound C13 (1.81 g, 4.05 mmol, 4.5 eq) , HBTU (1.53 g, 4.05 mmol, 4.5 eq) and DIPEA (1.79 mL, 10.8 mmol, 12.0 eq) were added into the reaction system under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then 10 mL H2O was added into the reaction mixture. The mixture was extracted with DCM (3*20 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-8%of MeOH/DCM) to provide compound C14 (0.99 g, 52%yield) as white solid. The product was characterized with 1H NMR. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 -7.32 (m, 5H) , 5.34 (d, J = 2.9 Hz, 3H) , 5.29 (s, 2H) , 5.19 (dd, J = 11.2, 3.2 Hz, 3H) , 5.10 (s, 2H) , 4.59 (d, J = 8.4 Hz, 3H) , 4.12 (dd, J = 13.4, 5.8 Hz, 6H) , 3.90 (d, J = 6.2 Hz, 4H) , 3.67 (s, 12H) , 3.47 (s, 6H) , 3.26 (d, J = 5.3 Hz, 10H) , 3.06 (q, J = 7.4 Hz, 4H) , 2.42 (t, J = 5.4 Hz, 6H) , 2.34 (t, J = 7.5 Hz, 3H) , 2.22 (dd, J = 16.2, 7.7 Hz, 5H) , 2.13 (s, 9H) , 2.03 (s, 9H) , 1.98 (s, 9H) , 1.94 (s, 9H) , 1.40 -1.35 (m, 22H) , 1.27 -1.22 (m, 12H) .
(7) The compound C15 was prepared by using the following procedures:
To a solution of compound C14 (0.98 g, 0.47 mmol) in MeOH (10 mL) , was added Pd/C (98 mg) under nitrogen atmosphere slowly. Then the reaction atmosphere was replaced with hydrogen gas for three times. After that, the reaction mixture was stirred by purging with a hydrogen balloon at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and  concentrated under reduced pressure to provide crude product. The crude product was dissolved in DCM (20 mL) , then HBTU (267 mg, 0.705 mmol, 1.5 eq) and DIPEA (265 μL, 1.598 mmol, 3.4 eq) were added into the reaction system under nitrogen atmosphere. After five minutes, compound C6 (236 mg, 0.564 mmol, 1.2 eq) was added into the reaction mixture. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature. Then H2O (10 mL) was added into the reaction mixture. The mixture was extracted with DCM (3*20 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-10%of MeOH/DCM) to provide compound C15 (0.79 g, 69%yield) as yellow solid. The product was characterized with 1H NMR. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.34 (d, J = 8.5 Hz, 2H) , 7.25 -7.20 (m, 5H) , 6.97 -6.89 (m, 2H) , 6.80 (t, J = 8.6 Hz, 4H) , 5.33 (s, 3H) , 5.17 (ddd, J = 11.0, 7.7, 3.2 Hz, 3H) , 4.60 (t, J = 9.1 Hz, 3H) , 4.19 -4.06 (m, 9H) , 3.95 -3.85 (m, 6H) , 3.78 (d, J = 3.5 Hz, 6H) , 3.67 (s, 12H) , 3.48 (t, J = 10.8 Hz, 4H) , 3.26 (s, 12H) , 2.42 (t, J = 5.2 Hz, 6H) , 2.24 (dd, J = 26.4, 11.2 Hz, 11H) , 2.14 (s, 9H) , 2.03 (s, 9H) , 1.98 (s, 9H) , 1.93 (s, 9H) , 1.72 -1.51 (m, 22H) , 1.38 -1.31 (m, 6H) , 1.27 (d, J = 8.6 Hz, 12H) .
(8) The compound C16 was prepared by using the following procedures:
To a solution of compound C15 (780 mg, 0.324 mmol, 1.0 eq) in anhydrous DCM (6 mL) were added DMAP (138 mg, 1.13 mmol, 3.5 eq) and succinic anhydride (97 mg, 0.97 mmol, 3.0 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight, and then H2O (10 mL) was added into the reaction system. The mixture was extracted with DCM (3*20 mL) . The organic phase was combined, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel,  gradient eluent: 1-15%of MeOH/DCM) to provide compound C16 (690 mg, 85%yield) as white solid. The product was characterized with 1H NMR. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38 -7.31 (m, 4H) , 7.21 -7.12 (m, 5H) , 6.80 (dd, J = 13.7, 5.2 Hz, 4H) , 5.33 (d, J = 2.7 Hz, 3H) , 5.19 (d, J = 11.2 Hz, 3H) , 4.63 (dd, J = 8.2, 4.9 Hz, 3H) , 4.16 -4.07 (m, 9H) , 3.78 (s, 6H) , 3.77 (s, 6H) , 3.67 (s, 12H) , 3.51 -3.45 (m, 4H) , 3.25 (s, 12H) , 2.58 (d, J = 7.7 Hz, 4H) , 2.43 (t, J = 5.2 Hz, 6H) , 2.25 (td, J = 15.1, 7.7 Hz, 11H) , 2.13 (s, 9H) , 2.03 (s, 9H) , 1.97 (s, 9H) , 1.94 (s, 9H) , 1.83 -1.51 (m, 24H) , 1.46 -1.29 (m, 6H) , 1.26 (d, J = 12.0 Hz, 12H) .
(9) The compound tC2 was prepared by using the following procedures:
To a solution of compound C16 (690 mg, 0.275 mmol, 1.0 eq) , Controlled Pore Glass (CPG) (Code: C3006-1000, Hebei DNA chem Biotechnology Co., Ltd, China) (4.8 g) , N, N-Diisopropylethylamine (DIPEA) (137 μL, 0.825 mmol, 3.0 eq) in acetonitrile (40 mL) and HBTU (208 mg, 0.55 mmol, 2.0 eq) were added under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was shaked at 25 ℃ overnight and then washed with DCM and ethyl ether to produce crude support material. To a solution of acetic anhydride (15 mL) , pyridine (34 mL) , NEt3 (500 μL) in acetonitrile (22 mL) was added the crude support material under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was shaked at 25 ℃ 1h and then washed with DCM and ethyl ether in sequence to produce Compound tC2 of the present disclosure (4.7 g) .
Example 20. The preparation of compound D1 of the present disclosure
Compound D1 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound 2
To a solution of methyl 2- (4-fluoro-3-nitrophenyl) acetate 1 (5 g, 23.4 mmol, 1.0 eq) and K2CO3 (4.85 g, 35.1 mmol, 1.5 eq) in anhydrous DMF (40 mL) , under nitrogen atmosphere, was added 25 wt%methylamine in water (4.36 mL, 35.1 mmol, 1.5 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 h, then cold water (80 mL) was added. The mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was washed three times with saturated LiCl solution and one time with brine. Then the organic phase was dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form compound 2 as red solid which was directly used in the next step without further purification. The compound 2 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 224.08; MW Found: 225.17 [M+H] +.
(2) The preparation of compound 3
To a solution of compound 2 (23.4 mmol, 1.0 eq) in THF/H2O (9: 1, 111 mL) , under ice bath, was added HCOONH4 (8.86 g, 140.4 mmol, 6.0 eq) and Zn powder (9.18 g, 140.4 mmol, 6.0 eq) . After stirred for 10 minutes, the reaction mixture was moved from the ice bath and stirred at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (100 mL) was added into the mixture, then the mixture was extracted three times with ethyl acetate, the organic phase was washed one time with brine. After dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the product 3 formed then was directly used in the next step without further purification. The  compound 3 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 194.11; MW Found: 195.26 [M+H] +.
(3) The preparation of compound 5
To a solution of compound 3 (23.4 mmol, 1.0 eq) in EtOH (50 mL) under nitrogen atmosphere, was added compound 4 (2.39 g, 23.4 mmol, 1.0 eq) and AcOH (5.39 mL, 93.6 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80℃ overnight, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (50 mL) was added, the mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound 5 (2.64 g, 41%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 276.15; MW Found: 277.25 [M + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.58 (s, 1H) , 7.30 -7.20 (m, 1H) , 7.17 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 3.73 (s, 2H) , 3.70 -3.63 (m, 8H) , 2.90 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 2.09 -1.94 (m, 2H) , 1.71 (dt, J = 13.0, 6.3 Hz, 2H) .
(4) The preparation of compound 6
To a solution of compound 5 (2.6 g, 9.41 mmol, 1.0 eq) and triethylamine (TEA, 1.43 g, 14.12 mmol, 1.5 eq) in DCM (20 mL) under nitrogen atmosphere, was added DMTrCl (3.5 g, 10.35 mmol, 1.1 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature overnight, after which it was concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (50 mL) was added, the mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue 6 was directly used in the next step without further purification. The product was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 578.28; MW. Found: 579.30 [M + H] +.
(5) The preparation of compound 39
To a solution of compound 6 (9.41 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (50 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (536 mg, 14.12 mmol, 1.5 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (10 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound 39 (2.4 g, 46%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 550.28; MW Found: 551.63 [M + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54 (s, 1H) , 7.46 -7.40 (m, 2H) , 7.34 -7.28 (m, 4H) , 7.25 (dd, J = 8.3, 5.7 Hz, 2H) , 7.19 (d, J = 8.4 Hz, 2H) , 7.10 (dd, J = 8.2, 1.3 Hz, 1H) , 6.84 -6.76 (m, 4H) , 3.87 (t, J = 6.7 Hz, 2H) , 3.76 (s, 6H) , 3.62 (s, 3H) , 3.11 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 2.96 (t, J = 6.7 Hz, 2H) , 2.87 -2.80 (m, 2H) , 1.99 -1.89 (m, 2H) , 1.83 -1.70 (m, 2H) .
(6) The preparation of compound D1
The compound 39 (2.3 g, 4.18 mmol, 1.0 eq) and Diisoropyl ammonium tetrazolide (2.15 g, 12.54 mmol, 3.0 eq) were dissolved in anhydrous DCM (40 mL) under nitrogen atmosphere was added 3- ( (Bis (diisopropylamino) phosphino) oxy) propanenitrile (3.78 g, 12.54 mmol, 3.0 eq) at room temperature. The reaction mixture was stirred for 6 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM, 1%Et3N) to  provide compound D1 (2.9 g, 91%yield) as yellow oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 750.39; MW Found: 303.22 [DMT] -. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.52 (s, 1H) , 7.46 -7.40 (m, 2H) , 7.34 -7.29 (m, 4H) , 7.28 -7.23 (m, 2H) , 7.22 -7.16 (m, 2H) , 7.11 (dd, J = 8.2, 1.4 Hz, 1H) , 6.83 -6.77 (m, 4H) , 3.78 (s, 6H) , 3.76 -3.72 (m, 2H) , 3.64 (s, 3H) , 3.61 -3.48 (m, 4H) , 3.11 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 3.04 (t, J = 7.3 Hz, 2H) , 2.87 -2.80 (m, 2H) , 2.57 -2.47 (m, 2H) , 2.03 -1.90 (m, 2H) , 1.79 -1.72 (m, 2H) , 1.19 (s, 3H) , 1.18 (s, 3H) , 1.16 (s, 3H) , 1.14 (s, 3H) .
Example 21. The preparation of compound D2 of the present disclosure
Compound D2 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound 8
To a solution of methyl 2- (4-fluoro-3-nitrophenyl) acetate 1 (5 g, 23.4 mmol, 1.0 eq) and K2CO3 (3.56 g, 25.74 mmol, 1.1 eq) in anhydrous DMF (40 mL) , under nitrogen atmosphere, was added compound 7 (3.58 g, 25.74 mmol, 1.1 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature overnight, then cold water (100 mL) was added. The mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was washed three times with saturated LiCl solution and one time with brine. Then the organic phase was dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form compound 8 as yellow oil which was directly used in the next step without further purification. The product was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 332.15; MW Found: 333.22 [M + H] +.
(2) The preparation of compound 9
To a solution of compound 8 (23.4 mmol, 1.0 eq) in THF/H2O (9: 1, 111 mL) , under ice bath, was added HCOONH4 (8.86 g, 140.4 mmol, 6.0 eq) and Zn powder (9.18 g, 140.4 mmol, 6.0 eq) . After stirred for 10 minutes, the reaction mixture was moved from the ice bath and stirred at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (200 mL) was added into the mixture, then the mixture was extracted three times with ethyl acetate, the organic phase was washed one time with brine. After dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the product 9 formed then was directly used in the next step without further purification. The compound 9 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 302.17; MW Found: 303.22 [M + H] +.
(3) The preparation of compound 10
To a solution of compound 9 (23.4 mmol, 1.0 eq) in EtOH (50 mL) under nitrogen atmosphere, was added 5-Hydroxypentanal 4 (2.39 g, 23.4 mmol, 1.0 eq) and AcOH (5.39 mL, 93.6 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80℃ for 4 h, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (100 mL) was added, the mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The product 10 formed then was directly used in the next step without further purification. The product was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 384.22; MW Found: 385.30 [M + H] +.
(4) The preparation of compound 11
To a solution of compound 10 (8.27 mmol, 1.0 eq) and triethylamine (TEA, 1.26 g, 12.41 mmol, 1.5 eq) in DCM (20 mL) under nitrogen atmosphere, was added DMTrCl (3.36 g, 9.92 mmol, 1.2 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 h, after which it was concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (50 mL) was added, the mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue 11 was directly used in the next step without further purification. The product was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 686.35; MW. Found: 385.27 [M -DMT + H] +.
(5) The preparation of compound 40
To a solution of compound 11 (8.27 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (40 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (471 mg, 12.4 mmol, 1.5 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (20 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-8%of MeOH/DCM) to provide compound 40 (1.15 g, 21%yield) . The  product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 658.35; MW Found: 357.27 [M -DMT + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.56 (s, 1H) , 7.44 -7.40 (m, 2H) , 7.32 -7.28 (m, 4H) , 7.26 (s, 2H) , 7.19 (dd, J = 7.8, 3.7 Hz, 1H) , 7.10 (dd, J = 8.2, 1.4 Hz, 1H) , 7.01 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 6.95 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 6.82 -6.78 (m, 4H) , 6.77 (d, J = 1.3 Hz, 1H) , 4.07 -4.00 (m, 2H) , 3.88 (t, J = 6.6 Hz, 2H) , 3.81 (d, J = 7.0 Hz, 2H) , 3.77 (s, 6H) , 3.11 (t, J = 6.2 Hz, 2H) , 2.97 (t, J = 6.6 Hz, 2H) , 2.78 -2.70 (m, 2H) , 2.25 (s, 3H) , 2.22 -2.15 (m, 2H) , 1.98 (dd, J = 15.2, 7.4 Hz, 2H) , 1.80 -1.70 (m, 2H) .
(6) The preparation of compound D2
The compound 40 (1.1 g, 1.67 mmol, 1.0 eq) and Diisoropyl ammonium tetrazolide (858 mg, 5.01 mmol, 3.0 eq) were dissolved in anhydrous DCM (15 mL) under nitrogen atmosphere was added 3- ( (Bis (diisopropylamino) phosphino) oxy) propanenitrile (1.51 g, 5.01 mmol, 3.0 eq) at room temperature. The reaction mixture was stirred for 6 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM, 1%Et3N) to provide compound D2 (1.15 g, 80%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 858.46; MW Found: 303.22 [DMT] -. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54 (s, 1H) , 7.45 -7.39 (m, 2H) , 7.33 -7.28 (m, 4H) , 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.22 -7.17 (m, 1H) , 7.10 (dd, J = 8.2, 1.4 Hz, 1H) , 7.02 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 6.95 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 6.85 -6.78 (m, 4H) , 6.78 (d, J = 1.3 Hz, 1H) , 4.21 -4.11 (m, 2H) , 4.07 -4.00 (m, 2H) , 3.81 (d, J = 7.0 Hz, 2H) , 3.78 (s, 6H) , 3.57 -3.51 (m, 2H) , 3.11 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 3.03 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 2.79 -2.72 (m, 4H) , 2.61 -2.51 (m, 2H) , 2.26 (s, 3H) , 2.22 -2.13 (m, 2H) , 2.02 -1.95 (m, 2H) , 1.80 -1.69 (m, 2H) , 1.19 -1.11 (m, 12H) .
Example 22. The preparation of compound D3 of the present disclosure
Compound D3 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound 13
To a solution of methyl 2- (4-fluoro-3-nitrophenyl) acetate 1 (5 g, 23.4 mmol, 1.0 eq) and K2CO3 (3.56 g, 25.74 mmol, 1.1 eq) in anhydrous DMF (40 mL) , under nitrogen atmosphere, was added compound 12 (2.65 g, 25.74 mmol, 1.1 eq) . The reaction mixture was stirred at 50 ℃ overnight, then cold water (100 mL) was added. The mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was washed three times with saturated LiCl solution and one time with brine. Then the organic phase was dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form compound 13 as yellow oil which was directly used in the next step without further purification. The product was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 296.14; MW Found: 297.77 [M + H] +.
(2) The preparation of compound 14
To a solution of compound 47 (23.4 mmol, 1.0 eq) and triethylamine (TEA, 3.55 g, 35.1 mmol, 1.5 eq) in DCM (50 mL) under nitrogen atmosphere, was added DMTrCl (8.72 g, 25.74 mmol, 1.1 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 h, after which it was concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (50 mL) was added, the mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue 14 was directly used in the next step without further purification. The product was  characterized with mass spectrometry. MW calc.: 598.27; MW. Found: 303.12 [DMT] -.
(3) The preparation of compound 15
To a solution of compound 14 (23.4 mmol, 1.0 eq) in THF/H2O (9: 1, 111 mL) , under ice bath, was added HCOONH4 (8.86 g, 140.4 mmol, 6.0 eq) and Zn powder (9.18 g, 140.4 mmol, 6.0 eq) . After stirred for 10 minutes, the reaction mixture was moved from the ice bath and stirred at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (100 mL) was added into the mixture, then the mixture was extracted three times with ethyl acetate, the organic phase was washed one time with brine. After dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the product 15 formed then was directly used in the next step without further purification. The compound 15 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 568.29; MW Found: 267.19 [M -DMT + H] +.
(4) The preparation of compound 16
To a solution of compound 15 (23.4 mmol, 1.0 eq) in EtOH (50 mL) under nitrogen atmosphere, was added Paraformaldehyde (2.1 g, 23.4 mmol, 1.0 eq) and AcOH (5.4 mL, 93.6 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80 ℃ for 3 h, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (50 mL) was added, the mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound 16 (6.6 g, 49%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 578.28; MW Found: 579.40 [M + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.83 (s, 1H) , 7.69 (s, 1H) , 7.44 -7.37 (m, 2H) , 7.34 -7.24 (m, 7H) , 7.23 -7.17 (m, 2H) , 6.84 -6.77 (m, 4H) ,  4.10 (d, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.78 (s, 6H) , 3.75 (s, 2H) , 3.68 (s, 3H) , 3.04 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 1.88 -1.78 (m, 2H) , 1.69 -1.58 (m, 2H) , 1.50 -1.36 (m, 2H) .
(5) The preparation of compound 41
To a solution of compound 16 (6.6 g, 9.32 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (50 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (531 mg, 14 mmol, 1.5 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (20 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound 41 (5.72 g, 90%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 550.28; MW Found: 551.46 [M + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.82 (s, 1H) , 7.65 (d, J = 0.7 Hz, 1H) , 7.40 (dd, J = 8.3, 3.3 Hz, 2H) , 7.30 -7.24 (m, 7H) , 7.22 -7.12 (m, 2H) , 6.84 -6.77 (m, 4H) , 4.12 (t, J = 7.1 Hz, 2H) , 3.90 (t, J = 6.5 Hz, 2H) , 3.78 (s, 6H) , 3.02 (dt, J = 16.5, 6.5 Hz, 4H) , 1.84 (dt, J = 15.0, 7.3 Hz, 2H) , 1.63 (dd, J = 14.4, 6.8 Hz, 2H) , 1.49 -1.35 (m, 2H) .
(6) The preparation of compound D3
The compound 41 (2 g, 3.63 mmol, 1.0 eq) and Diisoropyl ammonium tetrazolide (1.86 g, 10.89 mmol, 3.0 eq) were dissolved in anhydrous DCM (20 mL) under nitrogen atmosphere  was added 3- ( (Bis (diisopropylamino) phosphino) oxy) propanenitrile (3.28 g, 10.89 mmol, 3.0 eq) at room temperature. The reaction mixture was stirred for 6 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM, 1%Et3N) to provide compound D3 (2.48 g, 91%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 750.39; MW Found: 303.21 [DMT] -. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.82 (s, 1H) , 7.63 (s, 1H) , 7.42 -7.38 (m, 2H) , 7.30 -7.26 (m, 7H) , 7.20 (dd, J = 7.8, 3.7 Hz, 1H) , 7.17 -7.13 (m, 1H) , 6.83 -6.78 (m, 4H) , 4.11 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.78 (s, 6H) , 3.60 -3.50 (m, 4H) , 3.04 (t, J = 6.5 Hz, 4H) , 2.75 (td, J = 6.3, 2.0 Hz, 1H) , 2.55 (td, J = 6.6, 3.5 Hz, 2H) , 1.84 (dt, J = 15.0, 7.4 Hz, 3H) , 1.69 -1.58 (m, 2H) , 1.50 -1.37 (m, 2H) , 1.18 -1.13 (m, 12H) .
Example 23. The preparation of compound D4 of the present disclosure
Compound D4 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound 18
To a solution of compound 17 (5 g, 25.12 mmol, 1.0 eq) and K2CO3 (3.8 g, 27.6 mmol, 1.1 eq) in anhydrous DMF (40 mL) , under nitrogen atmosphere, was added compound 12 (2.84 g, 27.6 mmol, 1.1 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature overnight, then cold water (100 mL) was added. The mixture was extracted three times with ethyl acetate,  then the organic phase was washed three times with saturated LiCl solution and one time with brine. Then the organic phase was dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form compound 18 as yellow oil which was directly used in the next step without further purification. The product was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 282.12; MW Found: 283.86 [M + H] +.
(2) The preparation of compound 19
To a solution of compound 18 (25.12 mmol, 1.0 eq) and triethylamine (TEA, 3.81 g, 37.68 mmol, 1.5 eq) in DCM (50 mL) under nitrogen atmosphere, was added DMTrCl (8.51 g, 27.63 mmol, 1.1 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 4 h, after which it was concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (50 mL) was added, the mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue 19 was directly used in the next step without further purification. The product was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 584.25; MW. Found: 303.12 [DMT] -.
(3) The preparation of compound 20
To a solution of compound 19 (25.12 mmol, 1.0 eq) in THF/H2O (9: 1, 111 mL) , under ice bath, was added HCOONH4 (9.51 g, 150.72 mmol, 6.0 eq) and Zn powder (9.86 g, 150.72 mmol, 6.0 eq) . After stirred for 10 minutes, the reaction mixture was moved from the ice bath and stirred at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (100 mL) was added into the mixture, then the mixture was extracted three times with ethyl acetate, the organic phase was washed one time with brine. After dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the product 20 formed then was directly used in the next step without further purification. The compound 20 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 554.28;  MW Found: 253.19 [M -DMT + H] +.
(4) The preparation of compound 22
To a solution of compound 20 (25.12 mmol, 1.0 eq) in EtOH (140 mL) under nitrogen atmosphere, was added 5-Hydroxypentanal 4 (2.57 g, 25.12 mmol, 1.0 eq) and AcOH (5.8 mL, 100.48 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80 ℃ for 6 h, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (100 mL) was added, the mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound 22 (9.4 g, 60%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 636.32; MW Found: 637.51 [M + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.41 (d, J = 1.2 Hz, 1H) , 7.94 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H) , 7.43 -7.37 (m, 2H) , 7.30 -7.25 (m, 6H) , 7.24 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 7.22 -7.16 (m, 1H) , 6.83 -6.78 (m, 4H) , 4.08 (dd, J = 10.1, 4.7 Hz, 2H) , 3.92 (s, 3H) , 3.77 (s, 6H) , 3.67 (t, J = 6.1 Hz, 2H) , 3.04 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 2.88 (t, J = 7.2 Hz, 2H) , 1.78 -1.70 (m, 4H) , 1.66 -1.61 (m, 2H) , 1.53 -1.41 (m, 2H) , 1.25 (t, J = 7.1 Hz, 2H) .
(5) The preparation of compound D4
The compound 22 (2 g, 3.14 mmol, 1.0 eq) and Diisoropyl ammonium tetrazolide (1.61 g, 9.43 mmol, 3.0 eq) were dissolved in anhydrous DCM (20 mL) under nitrogen atmosphere was added 3- ( (Bis (diisopropylamino) phosphino) oxy) propanenitrile (2.85 g, 9.43 mmol, 3.0 eq)  at room temperature. The reaction mixture was stirred for 6 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM, 1%Et3N) to provide compound D4 (2.4 g, 93%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 836.43; MW Found: 303.70 [DMT] -. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.41 (d, J = 1.2 Hz, 1H) , 7.94 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H) , 7.42 -7.37 (m, 2H) , 7.30 -7.26 (m, 7H) , 7.23 -7.16 (m, 1H) , 6.83 -6.78 (m, 4H) , 4.10 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 3.93 (s, 3H) , 3.78 (s, 6H) , 3.64 -3.49 (m, 5H) , 3.04 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 2.91 -2.85 (m, 2H) , 2.65 -2.55 (m, 3H) , 2.00 (dt, J = 15.3, 7.6 Hz, 2H) , 1.82 -1.76 (m, 4H) , 1.64 (dd, J = 14.2, 6.7 Hz, 2H) , 1.51 -1.44 (m, 2H) , 1.17 -1.13 (m, 12H) .
Example 24. The preparation of compound D5 of the present disclosure
Compound D5 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound 24
To a solution of compound 1 (50.77 g, 238.3 mmol, 1.0 eq) and K2CO3 (32.9 g, 238.3 mmol, 1.0 eq) in anhydrous DMF (700 mL) , under nitrogen atmosphere, was added compound 23 (57.5 g, 238.3 mmol, 1.0 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature overnight, then cold water (500 mL) was added. The mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was washed three times with saturated LiCl solution and one time with brine. Then the organic phase was dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form compound 24 as yellow oil which was directly  used in the next step without further purification.
(2) The preparation of compound 25
To a solution of compound 24 (15.6 g, 35.87 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (160 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (1.36 g, 35.87 mmol, 1.0 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (50 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated.
The resultant residue was dissolved in 140 mL DMF, then imidazole (3.66 g, 53.8 mmol, 1.5 eq) and TBSCl (6.5 g, 43.04 mmol, 1.0 eq) were added under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 h, then H2O (100 mL) was added. The mixture was extracted three times by ethyl acetate, then the organic phase was washed three times by saturated LiCl solution and one time by brine and then dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form compound 25 as yellow oil which was directly used in the next step without further purification. The product was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 520.41; MW Found: 521.31 [M + H] +.
(3) The preparation of compound 26
To a solution of compound 25 (35.87 mmol, 1.0 eq) in THF/H2O (9: 1, 178 mL) , under ice bath, was added HCOONH4 (13.58 g, 215.22 mmol, 6.0 eq) and Zn powder (14.1 g, 215.22 mmol, 6.0 eq) . After stirred for 10 minutes, the reaction mixture was moved from the ice bath and stirred at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (150 mL) was added into the mixture, then the mixture was extracted three times with ethyl acetate, the organic phase was washed one time with brine. After dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the product 26 formed then was directly used in the next step without further purification. The compound 26 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 490.43;  MW Found: 491.40 [M + H] +.
(4) The preparation of compound 42
To a solution of compound 26 (2.0 g, 4.08 mmol, 1.0 eq) in EtOH (20 mL) under nitrogen atmosphere, was added 5-Hydroxypentanal 4 (417 mg, 6.12 mmol, 1.0 eq) and AcOH (0.94 mL, 16.32 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80 ℃ for 6 h, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (50 mL) was added, the mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound 42 (1.3 g, 56%yield) . The product was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 572.47; MW Found: 573.31 [M + H] +.
(5) The preparation of compound 43
To a solution of compound 42 (1.3 g, 2.26 mmol, 1.0 eq) and triethylamine (TEA, 343 mg, 3.39 mmol, 1.5 eq) in DCM (15 mL) under nitrogen atmosphere, was added DMTrCl (919 mg, 2.71 mmol, 1.2 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature overnight, after which it was concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (30 mL) was added, the mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated.
The resultant residue was dissolved in 10 mL THF, then 1 M TBAF THF solution (3.39 mL, 3.39 mmol, 1.5 eq) was added under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 h, then H2O (20 mL) was added. The mixture was extracted three times by ethyl acetate, then washed one time by brine, dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound 43 (0.8 g, 46%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 760.52; MW Found: 303.05 [DMT] -. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.55 (s, 1H) , 7.42 (d,  J = 7.3 Hz, 2H) , 7.33 -7.29 (m, 4H) , 7.26 -7.26 (m, 2H) , 7.24 (d, J = 3.4 Hz, 1H) , 7.21 (d, J = 3.0 Hz, 1H) , 7.09 (dd, J = 8.3, 1.4 Hz, 1H) , 6.80 (d, J = 8.9 Hz, 4H) , 4.05 -3.99 (m, 2H) , 3.92 -3.85 (m, 2H) , 3.78 (s, 6H) , 3.11 (t, J = 6.3 Hz, 2H) , 2.98 (t, J = 6.5 Hz, 2H) , 2.85 -2.79 (m, 2H) , 2.04 -1.94 (m, 2H) , 1.76 (dd, J = 13.9, 7.1 Hz, 4H) , 1.30 -1.25 (m, 27H) , 0.89 -0.85 (m, 3H) .
(6) The preparation of compound D5
The compound 43 (800 mg, 1.05 mmol, 1.0 eq) and Diisoropyl ammonium tetrazolide (360 mg, 2.1 mmol, 2.0 eq) were dissolved in anhydrous DCM (10 mL) under nitrogen atmosphere was added 3- ( (Bis (diisopropylamino) phosphino) oxy) propanenitrile (634 mg, 2.1 mmol, 2.0 eq) at room temperature. The reaction mixture was stirred for 6 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM, 1%Et3N) to provide compound D5 (660 mg, 65%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 960.63; MW Found: 303.04 [DMT] -. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.52 (s, 1H) , 7.46 -7.40 (m, 2H) , 7.34 -7.28 (m, 4H) , 7.26 (s, 2H) , 7.19 (t, J = 7.3 Hz, 2H) , 7.11 -7.05 (m, 1H) , 6.85 -6.75 (m, 4H) , 4.22 -4.12 (m, 2H) , 4.01 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 3.78 (s, 6H) , 3.61 -3.48 (m, 4H) , 3.11 (t, J = 6.2 Hz, 2H) , 2.85 -2.79 (m, 2H) , 2.76 (td, J = 6.3, 2.0 Hz, 2H) , 2.56 (td, J = 6.6, 3.7 Hz, 1H) , 1.98 (dt, J = 15.3, 7.7 Hz, 2H) , 1.83 -1.67 (m, 4H) , 1.27 -1.21 (m, 27H) , 1.20 -1.13 (m, 12H) , 0.90 -0.84 (m, 3H) .
Example 25. The preparation of compound D6 
Compound D6 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) Preparation of compound 5
To a solution of methyl 2- (4-fluoro-3-nitrophenyl) acetate 4 (9.9 g, 46.4 mmol, 1.0 eq) and K2CO3 (6.4 g, 46.4 mmol, 1.0 eq) in anhydrous DMF (80 mL) , under nitrogen atmosphere, was added compound 3 (11.2 g, 46.4 mmol, 1.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 55 ℃ for 8 h, then cold water (100 mL) was added. The mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was washed three times with saturated LiCl solution and one time with brine. Then the organic phase was dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form compound 5 as yellow oil which was directly used in the next step without further purification.
(2) Preparation of compound 16
To a solution of compound 5 (15.58 g, 35.87 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (160 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (1.36 g, 35.87 mmol, 1.0 eq) slowly. The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (30 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with EtOAc, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The crude residue was then dissolved in anhydrous DMF (140 mL) . Then imidazole (3.66 g, 53.8 mmol, 1.5 eq) and TBSCl (6.5 g, 43.04 mmol, 1.2 eq) were added under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 h, then  H2O (100 mL) was added. The mixture was extracted three times by ethyl acetate, then the organic phase was washed three times by saturated LiCl solution and one time by brine and then dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure. The resultant residue 16 was directly used in the next step without further purification. The product was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 520.41; MW Found: 521.4 [M + H] +.
(3) Preparation of compound 17
To a solution of compound 16 (35.87 mmol, 1.0 eq) in THF/H2O (9: 1, 178 mL) , under ice bath, was added HCOONH4 (13.58 g, 215.2 mmol, 6.0 eq) and Zn powder (14.1 g, 215.2 mmol, 6.0 eq) . After stirred for 10 minutes, the reaction mixture was moved from the ice bath and stirred at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (200 mL) was added into the mixture, then the mixture was extracted three times with ethyl acetate, the organic phase was washed one time with brine. After dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the product 17 formed then was directly used in the next step without further purification. The compound 17 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 490.43; MW Found: 491.40 [M+H] +.
(4) Preparation of compound 18
To a solution of compound 17 (5 g, 10.2 mmol, 1.0 eq) in EtOH (25 mL) under nitrogen atmosphere, was added 5-Hydroxypentanal (1.04 g, 10.2 mmol, 1.0 eq) and AcOH (2.35 mL, 40.8 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80℃ overnight, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (25 mL) was added, the mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound 18 (1.9 g, 33%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 572.47; MW Found: 573.61 [M + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.53 (s, 1H) , 7.21 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.11 (dd, J = 8.2, 1.4 Hz, 1H) , 4.07 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 3.84 (dd, J = 9.3,  5.6 Hz, 2H) , 3.69 (t, J = 6.1 Hz, 2H) , 2.93 (dt, J = 19.8, 7.3 Hz, 4H) , 2.13 -2.03 (m, 2H) , 1.84 -1.70 (m, 4H) , 1.40 -1.21 (m, 26H) , 0.93 -0.85 (m, 12H) , 0.03 (s, 6H) .
(5) Preparation of compound 19
To a solution of compound 18 (1.9 g, 3.32 mmol, 1.0 eq) in DCM (10 mL) , was added Dess-Martin periodinane (DMP) (1.69 g, 3.98 mmol, 1.2 eq) under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred for 6 h. After reaction, NaHCO3 solution (20 mL) was added into the mixture and the mixture was stirred for 30 min. The mixture was extracted three times by DCM and then the organic phase was washed one time by brine. After dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound 19 (619 mg, 33%yield) as brown oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 570.46; MW Found: 571.61 [M + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.98 (s, 1H) , 7.35 (d, J = 8.2 Hz, 2H) , 7.30 (s, 1H) , 4.25 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 3.89 (t, J = 6.9 Hz, 2H) , 3.18 -3.12 (m, 2H) , 3.01 (t, J = 6.8 Hz, 2H) , 2.55 -2.50 (m, 2H) , 2.32 -2.24 (m, 2H) , 1.85 (dd, J = 14.3, 7.2 Hz, 2H) , 1.36 -1.28 (m, 26H) , 0.93 -0.86 (m, 12H) , 0.03 (s, 6H) .
(6) Preparation of compound 20
To a solution of compound 8 (733 mg, 1.16 mmol, 1.2 eq) in anhydrous THF (5 mL) under nitrogen atmosphere at ice bath, was added NaH (60%dispersion in mineral oil, 77 mg, 1.93 mmol, 2.0 eq) . The reaction mixture was stirred at ice bath for 15 min, and then compound 19 (550 mg, 0.964 mmol, 1.0 eq) was added to the reaction mixture. The mixture was stirred at room temperature for 2 h and then the reaction was moved to ice bath, saturated ammonium chloride (5 mL) was added slowly into the mixture. After 5 minutes, the reaction was extracted two times with ethyl acetate, the organic phase was washed one time by brine. Then dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure. The resultant  residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound 20 (699 mg, 81%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 876.58; MW. Found: 877.96 [M + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54 (s, 1H) , 7.22 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.15 -7.10 (m, 1H) , 6.97 -6.84 (m, 1H) , 5.73 -5.65 (m, 5H) , 4.07 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 3.85 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 2.96 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 2.88 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 2.18 -2.06 (m, 2H) , 1.85 -1.70 (m, 3H) , 1.33 -1.18 (m, 48H) , 0.90 (s, 9H) , 0.03 (s, 6H) .
(7) Preparation of compound 21
To a solution of compound 20 (690 mg, 0.77 mmol, 1.0 eq) in THF (2 mL) was added 2 M HCl (2 mL) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 4 h. 5 mL H2O was added into the reaction. Then the mixture was extracted two times with ethyl acetate, washed with brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-5%of MeOH/DCM) to provide compound 21 (488 mg, 82%yield) . The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 762.49; MW Found: 763.76 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.72 (s, 1H) , 7.33 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 6.87 -6.74 (m, 1H) , 5.75 -5.59 (m, 5H) , 4.14 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 3.91 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 3.09 -2.95 (m, 4H) , 2.46 (d, J = 6.8 Hz, 2H) , 2.17 (dt, J = 14.4, 7.3 Hz, 2H) , 1.87 -1.75 (m, 3H) , 1.31 -1.17 (m, 44H) , 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .
(8) Preparation of compound D6
To a solution of compound 21 (480 mg, 0.62 mmol, 1.0 eq) and Diisoropyl ammonium tetrazolide (212 mg, 1.24 mmol, 2.0 eq) in anhydrous DCM (5 mL) under nitrogen atmosphere  was added 3- ( (Bis (diisopropylamino) phosphino) oxy) propanenitrile (374 mg, 1.24 mmol, 2.0 eq) at room temperature. The reaction mixture was stirred for 4 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 1-3%of MeOH/DCM, 1%Et3N) to provide compound D6 (514 mg, 84%yield) as yellow oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 962.60; MW Found: 880.82 [M -83+ H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.53 (s, 1H) , 7.22 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.11 (d, J = 8.2, 1H) , 6.95 -6.82 (m, 1H) , 5.83 -5.59 (m, 5H) , 4.05 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 3.83 -3.73 (m, 2H) , 3.51 -3.46 (m, 2H) , 3.04 (t, J = 7.3 Hz, 2H) , 2.86 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 2.76 (td, J = 6.2, 1.9 Hz, 5H) , 2.10 (dd, J = 15.1, 7.6 Hz, 2H) , 1.81 -1.72 (m, 3H) , 1.26 -1.24 (m, 26H) , 1.21 (s, 18H) , 1.18 -1.34 (m, 12H) , 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .
Example 26. The preparation of compound D7 of the present disclosure
Compound D7 was prepared in this Example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound 24
To a solution of compound 1 (2.24 g, 10.50 mmol, 0.9 eq) and K2CO3 (4.84 g, 35.01 mmol, 3.0 eq) in anhydrous DMF (40 mL) , under nitrogen atmosphere, was added compound 27 (3.8 g, 11.67 mmol, 1.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 60 ℃ overnight, then cold water (120 mL) was added. The mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the  organic phase was washed three times with saturated LiCl solution and one time with brine. Then the organic phase was dried with anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form compound 28 as yellow oil which was directly used in the next step without further purification.
(2) The preparation of compound 29
To a solution of compound 28 (6.15 g, 11.96 mmol) in MeOH (60 mL) under was added 10%Pd/C (615 mg) . The reaction mixture was stirred room temperature under hydrogen atmosphere for 16 h, and then filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure. The resultant residue 29 was directly used in next step without further purification. The resultant residue 29 was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 488.43; MW. Found: 489.54 [M + H] +.
(3) The preparation of compound 31
To a solution of compound 29 (5.79 g, 11.86 mmol, 1.0 eq) in EtOH (59 mL) under nitrogen atmosphere, was added 30 (2.23 g, 11.86 mmol, 1.0 eq) and AcOH (2.73 mL, 47.44 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80 ℃ for 2 h, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (100 mL) was added, the mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried with anhydrous Na2SO4, and concentrated. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 10-50%of ethyl acetate/petroleum ether) to provide compound 31 (1.8 g, 26%yield) . The product was characterized with mass spectrometry. MW calc.: 656.53; MW Found: 657.70 [M + H] +.
(4) The preparation of compound 32
To a solution of compound 31 (1.80 g, 2.74 mmol, 1.0 eq) in THF (14 mL) under nitrogen atmosphere, was added 1 M TBAF THF solution (4.11 mL, 4.11 mmol, 1.5 eq) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 h, then H2O (20 mL) was added. The mixture was extracted three times by ethyl acetate, then washed one time by brine, dried by anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure.
The resultant residue and triethylamine (TEA, 0.57 mL, 4.11 mmol, 1.5 eq) in DCM (14 mL) under nitrogen atmosphere, was added DMTrCl (1.11 g, 3.29 mmol, 1.2 eq) . The reaction mixture was stirred for 6 h at room temperature. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with NaHCO3, brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 10-50%of ethyl acetate/petroleum ether) to provide compound 32 (1.44 g, 62%yield) . The product was characterized with 1H NMR. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.56 (s, 1H) , 7.37 -7.32 (m, 2H) , 7.27 -7.22 (m, 6H) , 7.21 -7.13 (m, 3H) , 6.78 -6.72 (m, 4H) , 4.14 -4.06 (m, 2H) , 3.76 (s, 6H) , 3.73 (s, 2H) , 3.67 (s, 3H) , 3.59 (t, J = 6.9 Hz, 2H) , 3.11 (t, J = 7.0 Hz, 2H) , 1.77 -1.68 (m, 2H) , 1.30 -1.20 (m, 38H) , 0.87 (t, 3H) .
(5) The preparation of compound 43
To a solution of compound 32 (1.34 g, 1.59 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (8 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (90 mg, 2.38 mmol, 1.5 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (10 mL) was added slowly  into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried anhydrous Na2SO4, and concentrated.
The crude product and Diisoropyl ammonium tetrazolide (817 mg, 4.77 mmol, 3.0 eq) were dissolved in anhydrous DCM (8 mL) under nitrogen atmosphere was added 3- ( (Bis (diisopropylamino) phosphino) oxy) propanenitrile (1.44 g, 4.77 mmol, 3.0 eq) at room temperature. The reaction mixture was stirred for 6 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 10-50%of ethyl acetate/petroleum ether, 1%Et3N) to provide compound D7 (1.45 g, 90%yield) as light-yellow oil. The product was characterized with 1H NMR. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.50 (s, 1H) , 7.37 -7.31 (m, 2H) , 7.29 -7.21 (m, 6H) , 7.18 (d, J = 11.0 Hz, 2H) , 7.12 -7.07 (m, 1H) , 6.78 -6.71 (m, 4H) , 4.16 -4.05 (m, 4H) , 3.76 (s, 6H) , 3.62 -3.56 (m, 4H) , 3.11 (t, J = 7.0 Hz, 2H) , 3.03 (t, J = 7.4 Hz, 2H) , 2.61 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 2.57 -2.49 (m, 2H) , 1.74 -1.68 (m, 2H) , 1.27 -1.23 (m, 38H) , 1.18 -1.16 (m, 12H) , 0.88 (t, J = 6.7 Hz, 3H) .
Example 27. Preparation of compound F69
Compound F69 was prepared in this example by using the following procedures.
(1) The preparation of compound 45
To a solution of methyl 2- (4-fluoro-3-nitrophenyl) acetate 4 (5 g, 23.5 mmol, 1.0 eq) and K2CO3 (4.9 g, 35.3 mmol, 1.5 eq) in anhydrous DMF (80 mL) , under nitrogen atmosphere, was added compound 51 (6.9 g, 25.8 mmol, 1.1 eq) . The reaction mixture was stirred at 55 ℃ for 6 h, then cold water (200 mL) was added. The mixture was extracted three times with ethyl  acetate, then the organic phase was washed three times with saturated LiCl solution and one time with brine. Then the organic phase was dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure to form compound 45 as yellow oil which was directly used in the next step without further purification.
(2) The preparation of compound 46
To a solution of compound 45 (10.8 g, 23.5 mmol, 1.0 eq) in THF/H2O (9: 1, 130 mL) , under ice bath, was added HCOONH4 (8.9 g, 141 mmol, 6.0 eq) and Zn powder (9.2 g, 141 mmol, 6.0 eq) . After stirred for 10 minutes, the reaction mixture was moved from the ice bath and stirred at room temperature overnight. Then the reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. After that, water (200 mL) was added into the mixture, then the mixture was extracted three times with ethyl acetate, the organic phase was washed one time with brine. After dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure, the product 46 formed then was directly used in the next step without further purification.
(3) The preparation of compound 47
To a solution of compound 46 (5 g, 11.6 mmol, 1.0 eq) in EtOH (60 mL) under nitrogen atmosphere, was added 3- ( (tert-butyldimethylsilyl) oxy) propanal 7 (3.3 g, 17.4 mmol, 1.5 eq) and AcOH (2.7 mL, 46.4 mmol, 4.0 eq) . The reaction mixture was stirred at 80℃ overnight, and then concentrated under reduced pressure. Then a saturated NaHCO3 solution (100 mL) was added, the mixture was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The resultant residue compound was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 10-40%of ethyl acetate/petroleum ether) to provide compound 47 (1.5 g, 22%yield) as light-yellow oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 598.99; MW. Found: 599.72 [M + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.59 (s, 1H) , 7.24 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.16 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 5.40 -5.31 (m, 2H) , 4.17 -4.09 (m, 4H) , 3.74 (s, 2H) , 3.68 (s, 3H) , 3.09 (t, J = 6.9 Hz, 2H) , 2.06 -1.92 (m, 4H) , 1.81 -1.72 (m, 2H) , 1.39 -1.19 (m,  22H) , 0.88 (t, J = 6.5 Hz, 3H) , 0.86 (s, 9H) , 0.01 (s, 6H) .
(4) The preparation of compound 48
To a solution of compound 47 (1.5 g, 2.5 mmol, 1.0 eq) in THF (10 mL) under nitrogen atmosphere, was added 2 M HCl solution (10 mL) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 h. 20 mL saturated NaHCO3 solution was added into the reaction. Then the mixture was extracted two times with ethyl acetate, washed with brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was concentrated under reduced pressure. The resultant residue was dissolved in DCM (10 mL) , triethylamine (0.4 g, 3.8 mmol, 1.5 eq) and DMTrCl (1.1 g, 3.3 mmol, 1.3 eq) was added therein. The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 h, after which it was concentrated under reduced pressure. The resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 20-50%of ethyl acetate/petroleum ether) to provide compound 48 (1.5 g, 76%yield) as light-yellow oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 787.1; MW. Found: 788.1 [M + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.56 (s, 1H) , 7.34 (d, J = 7.1 Hz, 2H) , 7.25 -7.13 (m, 9H) , 6.75 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 5.41 -5.30 (m, 2H) , 4.13 -4.07 (m, 2H) , 3.76 (s, 6H) , 3.73 (s, 2H) , 3.67 (s, 3H) , 3.60 (t, J = 7.0 Hz, 2H) , 3.11 (t, J = 6.9 Hz, 2H) , 1.99 (t, J = 15.9 Hz, 4H) , 1.77 -1.65 (m, 2H) , 1.33 -1.23 (m, 22H) , 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .
(5) The preparation of compound F69
To a solution of compound 48 (1.5 g, 1.9 mmol, 1.0 eq) in anhydrous THF (20 mL) under nitrogen atmosphere and ice bath, was added LiAlH4 (73 mg, 1.9 mmol, 1.0 eq) . The mixture was moved to room temperature after 10 minutes and stirred for 1 h. Then the reaction was moved to ice bath, saturated potassium sodium tartrate solution (10 mL) was added slowly into the mixture. After 30 minutes, the reaction was extracted three times with ethyl acetate, then the organic phase was combined and washed with brine, dried over Na2SO4, and concentrated. The crude product (1.3 g, 1.7 mmol, 1.0 eq) and Diisoropyl ammonium  tetrazolide (587 mg, 3.4 mmol, 2 eq) were dissolved in anhydrous DCM (10 mL) under nitrogen atmosphere was added 3- ( (Bis (diisopropylamino) phosphino) oxy) propanenitrile (1.0 g, 3.4 mmol, 2 eq) at room temperature. The reaction mixture was stirred for 6 h. The mixture was extracted two times with DCM, then washed with brine and dried with anhydrous Na2SO4. The organic layer was concentrated under reduced pressure and the resultant residue was purified with flash chromatography (silica gel, gradient eluent: 10-30%of ethyl acetate/petroleum ether, 1%Et3N) to provide compound F69 (1.2 g, 78%yield) as light-yellow oil. The product was characterized with mass spectrometry and 1H NMR. MW calc.: 959.31; MW Found: 876.75 [M-diisopropyl + H] +. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.50 (s, 1H) , 7.34 (d, J = 7.2 Hz, 2H) , 7.25 -7.14 (m, 8H) , 7.09 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 6.75 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 5.41 -5.31 (m, 2H) , 4.13 -4.05 (m, 2H) , 3.93 -3.83 (m, 1H) , 3.81 -3.70 (m, 9H) , 3.64 -3.54 (m, 4H) , 3.11 (t, J = 7.0 Hz, 2H) , 3.03 (t, J = 7.3 Hz, 2H) , 2.57 -2.47 (m, 2H) , 2.07 -1.92 (m, 4H) , 1.77 -1.66 (m, 2H) , 1.34 -1.24 (m, 22H) , 1.18 -1.12 (m, 12H) , 0.87 (t, J = 6.7 Hz, 3H) .
Example 28. Design and synthesis of oligonucleotides
Oligonucleotide sequences used for cell or animal treatments in the following examples are listed in Table 1.
Example 29. Characterization of the in vitro knockdown activity of DEC-conjugated siRNAs for mouse FVII gene.
In vitro knockdown activity of DEC-conjugated siRNAs (i.e., RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712) for mouse FVII mRNA was characterized in this Example.
PMH cells were transfected with each of the indicated DCOs (i.e., RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712) at 0.1 nM and 1 nM with LipofectamineTM RNAiMAX (Thermofisher) for 24 hours according to the manufacturer’s instructions was shown in FIG. 1. DCOs (i.e., RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712) were also directly added into culture medium containing PMH cells at 0.01, 0.05, 0.20, 0.78, 3.13, 12.50, 50 and 200 nM was shown in FIG. 2. Mock treatment was transfection in the absence of oligonucleotide. dsCon2 served as a non-specific duplex control. Mouse FVII mRNA levels were quantified by RT-qPCR using a gene specific primer set. Tbp was amplified as an internal reference for RNA loading. The mean expression values of FVII mRNA relative to Mock treatment are normalized to Tbp.
As shown in FIG. 1, transfection of RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712 reduced FVII mRNA expression by 94%, 85%, 91%, 80%, 78%and 84%at 0.1 nM and 98%, 96%, 97%, 89%, 91%and 89%at 1 nM treatment, respectively. All tested DCOs achieved comparable knockdown activities in a dose-dependent manner with RD-12339, RD-12585 and RD-12586 having slightly greater maximal activities.
For free uptake in absence of lipofectamine, RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712 were added to the culture media of PMH cells at escalating concentrations (i.e., 0.01, 0.05, 0.20, 0.78, 3.13, 12.50, 50 and 200 nM) for 24 hours. The treated cells were harvested to isolated total cellular RNA which was used to detect FVII mRNA expression by RT-qPCR after cDNA conversion by reverse transcription (RT) reaction. As shown in FIG. 2, all the DCOs caused a dose-dependent knockdown on FVII mRNA level with a calculated IC50 ranging from 0.2308 to 0.6005 nM and RD-12585 having the lowest IC50 at 0.2308 nM were summarized in Table 2.
Table 2. DCO IC50 values for FVII mRNA knockdown in PMH cells

Overall, these results indicate that the DCOs have in vitro target gene knockdown activity with and without lipofectamineTM RNAiMax in PMH cells.
Example 30. Characterization of in vivo knockdown activity of DEC-conjugated siRNAs for mouse FVII gene expression.
To characterize the in vivo delivery efficiency (knockdown activity) of DEC-conjugated siRNAs in liver tissue, the indicated DCOs (i.e., RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712) were administered via SC injection into adult C57BL/6J mouse on PND 40 at 0.2, 1 and 5 mg/kg. All test DCOs were dissolved in saline. Saline alone was injected as a vehicle control to establish baseline expression in liver tissues. Mice were sacrificed on 3 days post dosing and FVII mRNA level was quantified in liver tissue after RNA isolation and RT reaction via RT-qPCR using gene specific primer sets.
As shown in FIG. 3, treatments of RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712 at low dose (0.2 mg/kg) reduced FVII mRNA levels by 25%, 0%, 2%, 22%, 0%and 0%, among which only RD-12339 and RD-12710 showed knockdown activity. At medium dose (1 mg/kg) , all siRNA conjugates exhibited substantial knockdown of FVII mRNA. RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712 caused a 67%, 47%, 64%, 60%, 43%and 62%knockdown of FVII mRNA, respectively. RD-12339, RD-12586, RD-12710 and RD-12712 exhibited over 60%knockdown activity with RD-12339 having the greatest knockdown activity. At high dose (5 mg/kg) , RD-12339, RD-12585, RD-12586, RD-12710, RD-12711 and RD-12712 caused an 81%, 82%, 89%, 80%, 81%and 89%knockdown of FVII mRNA.
Further, FVII protein expression levels in the plasma of the treated mice were detected by ELISA assay. As shown in FIG. 4, 3 DCOs (i.e., RD-12339, RD-12585 and RD-12586) at low dose (0.2 mg/kg) reduced FVII protein expression by 44%, 3%and 21%, respectively. RD-12339, RD-12585 and RD-12586 at medium dose (1 mg/kg) reduced FVII protein  expression by 67%, 51%and 65%, respectively. At the high dose (5 mg/kg) , knockdown activity was similar for all tested DCOs with RD-12339, RD-12585 and RD-12586 providing 89%, 87%and 93%reductions in FVII protein levels, respectively.
Overall, the data indicates that DCOs can be successfully delivered to the liver and cause significant knockdown of target gene FVII mRNA and protein expression in a dose-dependent manner.
Example 31. Potent and durable knockdown of DEC-conjugated siRNAs on mouse FVII protein in plasma of C57BL/6J mice
The indicated DCOs (i.e., RD-12710 and RD-12712) were administered via SC injection into C57BL/6J mice on PND 40 at 3 mg/kg for 89 days. RD-11706 was injected at 3 mg/kg and served as a control. Saline was injected as a vehicle control to establish the baseline of mFVII protein expression. Mouse plasmas were collected on 10, 31, 54, 61, 80 and 89 days post dosing and mFVII protein level was quantified in mouse plasma by ELISA assay. The results of potent and durable knockdown of DEC-siRNAs on mouse FVII protein in plasma are shown in FIG. 5.
Example 32. In vitro knockdown activity of DEC-siRNA in PMH cells via free uptake.
To test in vitro knockdown activity of exemplary DEC-siRNAs (i.e., RD-13110, RD-13115, and RD-13118) , PMH cells were treated at escalating concentrations (i.e., 1.56, 6.25, 25, 100, 400 and 1600 nM) in absence of any additional delivery system (i.e., free uptake) for 72 hours. Sod1 levels were assessed via RT-qPCR to generate dose response curves and estimate potency. As shown in FIG. 6A, all DEC-siRNAs demonstrated dose dependent knockdown in which potency (dotted line) is depicted at concentrations associated with 50%Sod1 levels relative to basal expression. In comparison, treatment with non-conjugate control (i.e., RD-12556) did not demonstrate knockdown until the highest tested dose in which activity did not exceed 50%reductions in Sod1 levels (FIG. 6B) . Table 3 summarizes both potency and knockdown activity at the highest tested dose for each test article. In general, all DEC-siRNAs (i.e., RD-13110, RD-13115, and RD-13118) regardless of conjugate had better potencies than the non-conjugate control RD-12556. C5x5 conjugates (i.e., RD-13115 and RD-13118) provided knockdown at potencies roughly 11-fold lower than the C5x1 variant RD-13110. Inclusion of ACO in RD-13118 also provided an approximate 2.5-fold improvement in potency indicating combining the DEC technology with ODV-siRNA  (PCT/CN2022/104037) may have delivery benefits when used in combination.
Table 3. The knockdown activity of DEC-siRNA in PMH cells via free uptake

*ND; not detected (knockdown did not exceed 50%Sod1)
Example 33. In vivo knockdown of DEC-siRNA on Sod1 mRNA level in CNS tissues
To test the in vivo knockdown activity of DEC-siRNAs (i.e., RD-13110, RD-13115 and RD-13118) in comparison to non-conjugate control (i.e., RD-12556) , adult C57BL/6J mice were administered at a 200 μg total dose via unilateral ICV injection. All test articles were formulated in saline in which treatment with saline alone functioned as a procedural control to establish baseline expression in CNS tissues. Mice were sacrificed on 7 days post dosing and CNS tissues from the brain (i.e., frontal cortex, cerebellum, and cerebrum) , spinal cord (i.e., cervical, thoracic, and lumbar) , and periphery (i.e., liver) were harvested for mRNA expression analysis via RT-qPCR. As shown in FIG. 7, RD-12556 and RD-13110 had similar activities in the indicated CNS tissues ranging between 43-73%and 40-63%knockdown, respectively. Whereas RD-13115 and RD-13118 had improved knockdown across all tissues at the 200 μg dose indicating the C5x5 conjugates had better in vivo potency via ICV injection compared to the non-conjugated control (i.e., RD-12556) and C5x1 variant RD-13110. Analysis in periphery tissue (i.e., liver) also revealed that activity of the C5x5 conjugates (i.e., RD-13115 and RD-13118) were not well retained within the CNS in which systemic exposure via CNS drainage provided knockdown in the liver at levels similar to the CNS tissues. In comparison, both RD-12556 and RD-13110 activity was selectively enriched across the CNS providing only an approximate 11%and 3%knockdown in the liver, respectively. Overall, the C5x5 conjugates have improved activity and biodistribution across all CNS tissues. For indication in which confinement to the CNS may be important to limit systemic toxicities, C5x1 would be more ideal compared to other lipids (e.g., C5x5) .
Example 34. In vivo knockdown of DEC-siRNA on Sod1 mRNA level following systemic administration
To test in vivo knockdown following systemic exposure, adult C57BL/6J mice were administered with DEC-siRNAs (i.e., RD-13110, RD-13115 and RD-13118) or non-conjugate control (i.e., RD-12556) at a 20 mg/kg dose via IV injection. Mice were sacrificed on day 7 after treatment and Sod1 knockdown was quantified via RT-qPCR in select organs (i.e., heart, liver, spleen, lung, kidney, and bladder) . As shown in FIG. 8, RD-12556 only provided substantial knockdown in the kidney reducing Sod1 levels by 56%, whereas RD-13110 also had activity selectively enriched in the spleen. RD-13115 and RD-13118 both had broad activity across all tissues except bladder in which only RD-13118 was capable of reducing Sod1 levels by roughly 21%. Overall, these results indicate that C5x1 conjugation may have unique delivery functions via systemic administration offering selective targeting to the spleen, whereas C5x5 can provide knockdown to a broader spectrum of tissues. Notably, inclusion of ACO in RD-13118 was the only DEC-siRNA to provide measurable knockdown in the bladder indicating combining the DEC technology with ODV-siRNA may also have further delivery benefits when used in combination in vivo.
Example 35. In vivo knockdown of DEC-siSOD1 on Sod1 mRNA level in skeletal muscle 
To test in vivo knockdown activity in skeletal muscle tissues, adult C57BL/6J mice were treated with DEC-siRNAs (i.e., RD-13110, RD-13115 and RD-13118) or non-conjugate control (i.e., RD-12556) at a 20 mg/kg dose via IV injection. Mice were sacrificed on 7 days post dosing and Sod1 mRNA level was quantified via RT-qPCR in muscle tissues (i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus) . As shown in FIG. 9, RD-12556 provided no significant knockdown in any muscle tissue compared to the saline treatment group. RD-13110 had modest activity in select tissues yet did not exceed 25%reductions in Sod1 mRNA levels at the 20 mg/kg dose. In contrast, RD-13115 reduced Sod1 mRNA levels by 82%, 84%, 78%, and 76%in bicep, semitendinosus, platysma and gluteus tissues, respectively. Similarly, RD-13118 reduced Sod1 mRNA levels by 76%, 84%, 61%, and 67%in bicep, semitendinosus, platysma and gluteus tissues, respectively. In general, DEC conjugation provides knockdown in muscle tissue via IV injection; however, C5x5 conjugates (i.e., RD-13115 and RD-13118)  enabled siRNA knockdown at a 20 mg/kg dose that has been otherwise unobtainable by conventional delivery technologies (i.e., LNP and GalNAc) .
Example 36. In vivo knockdown activity of DEC-siSOD1 on Sod1 mRNA level in retinal tissue 
To test in vivo knockdown activity of DEC-siRNAs in the eye, adult SD rats were treated with DEC-siRNAs (i.e., RD-13115 and RD-13118) or non-conjugate control (i.e., RD-12556) at a 30 μg dose via local IVT injection into the eye. Rats were sacrificed on 14 days post dosing and Sod1 mRNA level was quantified via RT-qPCR in retinal tissue. As shown in FIG. 10, RD-12556 provided only a 39%knockdown, whereas RD-13115 and RD-13118 reduced Sod1 mRNA levels by 74%and 71%, respectively. DEC-siRNA (i.e., RD-13115 and RD-13118) provided nearly twice the knockdown activity at a 30 μg dose compared to non-conjugated control (i.e., RD-12556) indicating the DEC technology has benefit for delivering oligonucleotides to the eye to manipulate gene expression.
Example 37. Pharmacokinetics of DEC-saRNA in bladder tissue from adult C57BL/6J mice following DEC-saRNA treatment via IVB instillation
Adult C57BL/6J mice were treated with 3 mg RD-13520 (DEC-saRNA) and RD-10773 (non-DEC-saRNA) via IVB instillation and bladder tissues were harvested on 2-, 6-, 12-hour, day-1 and day-4 after treatment. RD-10773 and RD-13520 were detected in the bladder tissue preps by stem-loop RT-qPCR. The concentrations of RD-13520 and RD-10773 in bladder were plotted in FIG. 11 to evaluate pharmacokinetics (PK) and summarized in Table 4.
Table 4. Mean saRNA concentration in bladder tissue of C57BL/6J mice
Example 38. Potent and durable knockdown of mouse Sod1 mRNA by DEC-conjugated siRNAs in C57BL/6J mice
To further assess knockdown durability of DEC-siRNA in comparison to C16-siRNA, the indicated siRNAs (i.e., RD-15135, RD-15136, RD-15137 and RD-15138) were administered into C57BL/6J mice at 10 mg/kg. RD-15135 served as a non-conjugate control. RD-15136 was a lipid (i.e., C16) conjugated siRNA. RD-15137 with a typical DEC structure (i.e., C5X5) served as a typical DEC-siRNA. RD-15138 with a typical DEC structure (i.e., C5X5) and a lipid (i.e., C16) served as a combo siRNA (i.e., DEC-C16-siRNA) . Treatment with saline alone was used as a vehicle control to establish baseline expression. Mouse Sod1 mRNA levels on 14 and 28 days post dosing were quantified via RT-qPCR using a gene specific primer set, respectively. FIG. 12A shows the body weight change of C57BL/6J mice out to day 28 post treatment. Sod1 mRNA expressions on 14 and 28 days post dosing in tissues from periphery (i.e., heart, liver, kidney, fat tissues, pancreas, diaphragm) , blood vessel (i.e., thoracic aorta with vein) and skeletal muscle (i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus) were shown in FIG. 12B-12C.
Example 39. Potent and durable knockdown of rat Sod1 mRNA in SD rats by DEC-conjugated siRNAs
To further assess knockdown durability of DEC-siRNA in comparison to C16-siRNA, the indicated siRNAs (i.e., RD-15135, RD-15136, RD-15137 and RD-15138) were administered into adult SD female rats at 0.9 mg. RD-15135 served as a non-conjugate control. RD-15136 was a lipid (i.e., C16) conjugated siRNA. RD-15137 with a typical DEC structure (i.e., C5X5) served as a typical DEC-siRNA. RD-15138 with a typical DEC structure (i.e., C5X5) and a lipid (i.e., C16) served as a combo siRNA (i.e., DEC-C16-siRNA) . Treatment with aCSF alone was used as a vehicle control to establish baseline expression. Rat Sod1 mRNA levels on 14 and 28 days post dosing were quantified via RT-qPCR using a gene specific primer set, respectively. FIG. 13A shows the body weight change of SD rats out to day 28 post treatment. Sod1 mRNA expressions on 14 days post dosing in tissues from brain (i.e., frontal cortex, cerebellum and cerebrum) , spinal cord (i.e., cervical, thoracic and lumbar) and periphery (i.e., liver and kidney) were shown in FIG. 13B. Sod1 mRNA on 28 days post dosing in tissues from brain (i.e., frontal cortex, cerebellum and brainstem) , spinal cord (i.e., cervical, thoracic and lumbar) and periphery (i.e., liver and kidney) were shown in FIG. 13C.
Example 40. Delivery enhancing compound (DEC) of siRNA-ACO provides  consistent and potent knockdown on SOD1 mRNA in SK-N-AS and T98G cells.
To assess in vitro knockdown activity of DEC-siRNA-ACOs, the indicated DEC-siRNA-ACOs (i.e., RD-16149, RD-16099, RD-16100, RD-16101, RD-16150, RD-16103, RD-16104 and RD-16105) were transfected into SK-N-AS and T98G cell at the indicated concentrations (i.e., 1.56, 6.25, 25, 100, 400 and 1600 nM) to generate dose response curves. RD-16106 was transfected and served as a siRNA-ACO control. Mock treatments were transfected in absence of oligonucleotide (not shown) . SOD1 mRNA levels were quantified via RT-qPCR using a gene specific primer set. The remaining human SOD1 mRNA levels in SK-N-AS and T98G cells were plotted in FIG. 14A-14B. The EC50 values were summarized in Table 5.
Table 5. EC50 values for SOD1 knockdown by DEC-siRNA-ACOs in SK-N-AS and T98G cells.
Example 41. Knockdown activity and tissue concentration of siRNAs via ICV injection in adult hSOD1G93A mice.
To assess the knockdown activity and pharmacokinetics of siRNAs and, the indicated siRNAs (i.e., RD-14851, RD-12500, RD-16145 and RD-16334) were administered into hSOD1G93A mice at 200 μg. RD-14851, RD-12500 and RD-16145 were administered as siRNA-ACOs. RD-16334 with a DEC structure (i.e., L17) was administered and served as a DEC-siRNA-ACO. Treatment with aCSF alone was used as a vehicle control to establish baseline expression. FIG. 15A shows the remaining SOD1 mRNA on 30 days post dosing as quantified in tissues from brain (i.e., frontal cortex, cerebellum and cerebrum) , spinal cord and periphery (i.e., liver) via RT-qPCR using a gene specific primer set. FIG. 15B shows the  concentration on 30 days post dosing as in tissues from brain (i.e., frontal cortex, cerebellum and cerebrum) , spinal cord and periphery (i.e., liver) via stem-loop RT-qPCR using a gene specific primer set. Mean concentration in tissues from frontal cortex, cerebellum, cerebrum, spinal cord and liver to evaluate pharmacokinetics and are summarized in Table 6. Serum chemistry [i.e., glutamic-pyruvic transaminase (ALT) , glutamic oxalacetic transaminase (AST) , total bilirubin (TBIL) and creatinine (CRE) ] and completed blood count [i.e., white blood cell (WBC) , red blood cell (RBC) , blood platelet (PLT) etc. ] were detected and demonstrated safety.
Table 6. Mean concentration of siRNA in hSOD1G93A mouse tissues by ICV injection
Example 42. Splicing activity of “saRNA-ASO” DEC-DAO structure in GM03813 cells.
To assess the splicing activity of “saRNA-ASO” DEC-DAO structure at converting SMN2 pre-mRNA to SMN2FL over the SMN2Δ7 mRNA isoform in GM03813 cells. The indicated DEC-DAO linkage with L21 linker (i.e., RD-16939 and RD-16940) , DEC-saSMN2 (i.e., RD-16424) and DEC-antisense oligonucleotide (DEC-ASO) (i.e., RD-14644) were transfected into GM03813 cells at indicated concentrations (i.e., 0.1, 1 and 10 nM) for 3 days. RD-16381 was transfected as a non-specific DEC control. Combo treatment (i.e., RD-16424+RD-14644) and combo treatment control (i.e., RD-16381+RD-16424, RD-16381+RD-14644) were also transfected into GM03813 cells at indicated concentrations (i.e., 0.1, 1 and 10 nM) for 3 days. As shown in FIGs. 16A-16B, “saRNA-ASO” DEC-DAO structure provides potent splicing activity on mRNA levels of SMN2FL and SMN2Δ7, indicating that combining a saRNA with a ASO into a DAO can largely retain and even increase the activity of both saRNA and ASO units.
Example 43. Effect of “saRNA-siRNA” DEC-DAO structure targeting two different human genes (SMN2 and SOD1) on the expression of SMN2 (SMN2FL and SMN2Δ7) and pOD1 in GM03813 cells.
To assess the effect of “saRNA-siRNA” DEC-DAO structure targeting two different genes, the indicated DEC-DAO linkage with L21 linker (i.e., RD-16941) , DEC-saSMN2 (i.e., RD-16424) and DEC-siSOD1 (i.e., RD-13115) were transfected into GM03813 cells at indicated concentrations (i.e., 0.1, 1 and 10 nM) for 3 days. RD-16381 was transfected as a non-specific DEC control. Combo treatment (i.e., RD-16424+RD-13115) and combo treatment control (i.e., RD-16381+RD-16424, RD-16381+RD-13115) also were transfected into GM03813 cells at indicated concentrations (i.e., 0.1, 1 and 10 nM) for 3 days. FIGs. 17A-17B shows mRNA levels of SMN2FL and SMN2Δ7 and FIG. 17C shows remaining SOD1 mRNA levels. As shown FIGs. 17A-17C, “saRNA-siRNA” DEC-DAO structure provides the potent gene induction on expression of SMN2FL and knockdown on SOD1 mRNA, respectively. This result indicates that combining a saRNA with a siRNA into a DAO can largely retain the activity for each unit and enhance the activity of the saRNA unit.
Example 44. Effect of “siRNA-siRNA” DEC-DAO structure targeting two different genes (mouse Sod1 and Ppig) on the expression of mouse Sod1 and Ppig in C2C12 cells.
To assess the effect of “siRNA-siRNA” DEC-DAO structure targeting two different genes (mouse Sod1 and Ppig) , the indicated DEC-DAO linkage with L21 linker (i.e., RD-16942) , DEC-siSod1 (i.e., RD-13115) and DEC-siPpig (i.e., RD-14672) were transfected into C2C12 cells at indicated concentrations (i.e., 0.01, 0.1 and 1 nM) for 24 hours. RD-16381 was transfected as a non-specific DEC control. Combo treatment (i.e., RD-13115+RD-14672) and combo treatment control (i.e., RD-16381+RD-13115, RD-16381+RD-14672) were also transfected into C2C12 cells at indicated concentrations (i.e., 0.01, 0.1 and 1 nM) for 24 hours. As shown in FIG. 18A-18B, “siRNA-siRNA” DEC-DAO structure provides potent knockdown activity on mouse Sod1 and Ppig mRNA levels, respectively. This result indicates that combining two siRNAs targeting different genes into a DAO can largely retain the activity for each siRNA unit and even enhance the activity of both siRNA units.
Example 45. Effect of “siRNA-siRNA” DEC-DAO structure targeting two different  genes (mouse Sod1 and Ppig) on the expression of mouse Sod1 and Ppig in vivo.
To assess the in vivo effect of “siRNA-siRNA” DEC-DAO structure targeting two different genes (mouse Sod1 and Ppig) , the indicated DEC-DAO linkage with L21 linker (i.e., RD-16942) , DEC-siSod1 (i.e., RD-13115) and DEC-siPpig (i.e., RD-14672) were administered into C57BL/6J mice via IV injection at 10 mg/kg. Combo treatment (i.e., RD-13115+RD-14672) was administered via IV injection at 10 mg/kg. Treatment with saline alone was used as a vehicle control to establish baseline expression. Remaining mouse Sod1 mRNA on 14 days post dosing were quantified in tissues from periphery (i.e., heart, liver, kidney, fat tissues, diaphragm, thoracic aorta with vein) , and skeletal muscle (i.e., bicep, semitendinosus, platysma and gluteus) via RT-qPCR using a gene specific primer set. As shown in FIG. 19, “siRNA-siRNA” DEC-DAO structure (i.e., RD-16942) presented similar knockdown activity on Sod1 mRNA expression. This result indicates that combining two siRNAs targeting different genes into a DAO structure can retain the knockdown activity of the units used as single entity in peripheral and skeletal muscle tissues.
Example 46. Pharmacokinetics of DEC-saRNA in retina and vitreous humor of adult SD rat following DEC-saRNA treatment via IVT injection
To assess the pharmacokinetics of DEC-saRNA, adult SD rats were administered with 0.03 mg DEC-saRNA (i.e., RD-16447) and non-conjugated saRNA (i.e., RD-12173) via IVT injection. The rats were sacrificed on 1-hour, day-1, -3, -7, -14 and -28 following treatment and the concentrations of RD-16447 and RD-12173 were quantified in retina and vitreous humor via stem-loop RT-qPCR. Concentrations of RD-16447 and RD-12173 in retina and vitreous humor were plotted in FIG. 20A-20B. Mean concentrations of oligonucleotide in retina and vitreous humor were summarized in Table 7.
Table 7. Mean oligonucleotide concentration in retina and vitreous humor of SD rats
Example 47. Knockdown activity of DEC-siRNA targeting SOD1 in T98G cells.
A new DEC structure (i.e., C5x34) was designed and conjugated to a siRNA targeting SOD1 gene, resulting in a new DEC-siRNA (i.e., RD-17138) . To assess in vitro knockdown activity of DEC-siRNA, the indicated DEC-siRNA (i.e., RD-17138) were transfected into T98G cell at 0.1 nM and 1 nM for 24 hours. RD-11566 was transfected and served as a non-specific duplex control. Mock treatments were transfected in absence of oligonucleotide. SOD1 mRNA levels were quantified via RT-qPCR. As shown in FIG. 21, RD-17138 showed a knockdown activity on SOD1 mRNA expression greater than 90%at 0.1 nM and 1 nM, suggesting the new DEC structure C5x34 can enhance the knockdown activity of siRNA on SOD1 mRNA level in vitro.
Materials and Methods
General synthesis method of oligonucleotides
The oligonucleotides used in the following examples were synthesized via the following general method.
Single strand synthesis method
The single strand oligonucleotide was synthesized on a K&ADNA synthesizer (K&A Laborgeraete GbR, chaafheim, Germany) by a solid phase synthesis technique.
The starting material was universal solid support or special solid support commercially available or synthesis as disclosure in previous context. In general, phosphoramidite monomers including various linkers and conjugates (0.1M in acetonitrile or dichloromethane) , were added sequentially onto a solid support in the DNA synthesizer to generate the desired full-length oligonucleotides.
Amidite addition: each cycle of amidite addition consisted of four chemical reactions including detritylation, coupling, oxidation/thiolation and capping. In first step, the detritylation was performed by using 3%dichloroacetic acid (TCA) in DCM for 45 seconds. In the second step, Phosphoramidite coupling was conducted for 6 minutes for all amidites by 12 eq.; In the third step, oxidation was performed by using 0.02 M iodine in THF: pyridine: water (70: 20: 10, v/v/v) for 1 minute; if phosphorothioate modification needed then replace oxidation by thiolation which was carried out with 0.1 M solution of xanthane hydride in pyridine: ACN (50: 50, v/v) for 3 minutes; In the fourth step, the capping was  performed by using a THF: acetic anhydride: Pyridine (80: 10: 10, v/v/v) (CAP A) and N-methylimidazole: THF (10: 90, v/v) , (CAP B) for 20 seconds. The Cycles of four chemical reaction will be depended by the length of single of oligonucleotide.
Deprotection I (Nucleobase Deprotection) : After completion of the synthesis, the solid support was transferred to a screw-cap microcentrifuge tube. For a 1 μmol synthesis scale, 1 ml of a mixture of methylamine and ammonium hydroxide was added. The tube containing the solid support was then heated in an oven at 60℃ to 65℃ for 15 min and then allowed to cool to room temperature. The cleavage solution was collected and evaporated to dryness in a speedvac to provide crude single strand of oligonucleotide.
Deprotection II (Removal of 2’-TBDMS Group) : If The crude RNA oligonucleotide, still carrying the 2’-TBDMS groups, then dissolved in 0.1 ml of DMSO. After adding 1 ml of Triethylamine trihydrofluoride, the tube was capped, and the mixture was shaken vigorously to ensure complete dissolution and then heated in an oven at 65℃ for 15 minutes. The tube was removed from the oven and cooled down to room temperature. The solution containing the completely desilylated oligonucleotide was cooled on dry ice. 2 ml of ice-cold n-butanol (-20℃) were carefully added in 0.5 ml portions to precipitate the oligonucleotides. The precipitate was filtered, washed with 1 ml ice-cold n-butanol, and subsequently dissolved in 0.01 M Tris (hydroxymethyl) aminomethanol hydrochloride buffer.
(2) Single strand purification
The purification of oligonucleotides was performed on an AKTA explorer 10 equipped with a Source 15Q 4.6/100 PE column using the following conditions: buffer A: (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 7.5) , B: (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 2M NaCl, pH 7.5) , gradient: 10%B to 60%B in 25 min, flow rate: 1 ml/min. The pure oligonucleotides were collected and desalting by a HiPrep 26/10 Desalting column.
(3) Annealing to form duplex
For duplex, after the generation of desalted purified single strand solutions, sense strand (passenger strand) and antisense strand (guide strand) were mixed by equal volumes at equimolar concentration in the tube. Place the tube in a heat block at 95℃ for 5 min and then cool to room temperature then were subsequently lyophilized to powder.
Cell culture and treatment
Primary mouse hepatocytes (PMH) were isolated from the liver of C57BL/6J mice (Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. ) and cultured under the conditions of 5%CO2 and 37℃ in modified Willian’s Medium E (WME) medium (A12176-01, Gibco, Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA) supplemented with 1%Insulin (S6955, Selleck, US) and 1%penicillin/streptomycin (Gibco) . T98G cells (Cobioer, Cat#CBP60301) were cultured under the conditions of 5%CO2 and 37℃ in modified MEM medium (Gibco, Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA) supplemented with 10%bovine calf serum (Sigma-Aldrich) and 1%penicillin/streptomycin. SK-N-AS (Procell, Wuhan, China, Cat#CL-0621) and C2C12 (CBP60252, Cobioer, China) cells were maintained in DMEM medium supplemented with 10%FBS, and 1%penicillin/streptomycin. SMA patient derived fibroblasts GM03813 cells were obtained from Coriell Institute (Camden, NJ, USA) and cultured at 5%CO2 and 37℃ in modified MEM medium supplemented with 15%bovine calf serum, 1%NEAA and 1%penicillin/streptomycin. Transfection was carried out using Lipofectamine RNAiMax (ThermoFisher, Waltham, MA, USA) in growth media without antibiotics according to the manufacturer’s protocol. Free uptake was carried out by directly adding oligonucleotides into culture medium containing the PMH cells.
Primary mouse hepatocyte (PMH) isolation
C57BL/6J mice (B204, Beijing, China) were anesthetized with isoflurane and perfused by initial flushing reagent and digestion reagent successively. The liver was placed into a 10 cm dish and torn apart using forceps in culture medium. The cell suspension was collected by filtering through a 70-75-micron membrane in 50 mL conical tube, followed by centrifuging at 4℃ for 2 minutes at 100 × g in a swinging-arm centrifuge. Cells were washed with 20 mL cold PBS after removing the supernatant (Repeat this step twice) . Cells with at least 80%viability were allowed to proceed with the assay. Appropriate number of cells were seeded to the cell culture plates which were pre-coated with collagen I 4-12 hrs in advance to yield a final confluence of 90-95%prior to the start of the assay.
Animal studies
All animal procedures were conducted by certified laboratory personnel using protocols consistent with local and state regulations and approved by the Institutional Animal Care and Use Committee. C57BL/6J mice (4-6 weeks old) purchased from SPF Biotechnology Co., LTD (B204, Beijing, China) . Sprague-Dawley female rats (A102, SPF, China) were  purchased from SPF (Suzhou) Biotechnology Co., LTD. Parental transgenic hSOD1G93A mice (Strain ID #004435) were purchased from the Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA) and imported into China via Nantong University (Nantong City, Jiangsu Province, China) . Formulations for in vivo studies were prepared fresh prior to use by dissolving aliquots of lyophilized oligonucleotide into saline or aCSF to create stock solutions for dilution to the intended treatment concentrations. Animals were randomly allocated into study groups based on body weight and sex.
Intracerebroventricular (ICV) injection
Avertin (1.2%) was prepared fresh and sterilized via 0.2-micron filter. Mice were dosed at 0.30-0.35 ml per 10 g body weight via intraperitoneal (IP) injection in a stereotaxic apparatus to rapidly induce anesthesia for up to 30 minutes. An approximate 11.5 mm incision was made in the animal’s scalp and a 25-gauge needle attached to a Hamilton syringe containing the appropriate siRNA formulation was placed at bregma level. The needle was moved to the appropriate anterior/posterior and medial/lateral coordinates (0.2 mm anterior/posterior and 1 mm to the right medial/lateral) . A total of 10 μL was injected into the lateral ventricle at an approximate rate of 1 μL/s. Following treatment, the needle was slowly withdrawn, and the wound sutured close.
Intrathecal (IT) injection
Anesthesia was administered via 3.0%isoflurane in an induction chamber for continuous 10 mins. Hair was shaved around the injection site at the base of the tail and cleaned with 75%ethanol. The space between the L5-L6 spinous processes was identified and a 30-gauge needle attached to a microliter syringe containing the appropriate drug formulations was slowly inserted into the intradural space until a tail flick was observed. The needle position was subsequently secured in which 30 μL total volume of solution was injected over the course of 1 min.
Intravenous (IV) injection into the tail vein
Mice were exposed to an infrared lamp for 2-3 min to dilate the veins, and then held in the restrainer to straighten the tail. The tail was wiped with 75%alcohol and the needle was inserted 2 to 4 mm parallel to the tail vein into the lumen, keeping the bevel of the needle upwards. The preformed solution was injected slowly and should be free of resistance if administered correctly. The recommended injection volume for test article is 200 μL and the  injection rate don’t exceed 5 ml/min. At the end of administration, the injection site is pressed firmly with a cotton swab or finger to prevent backflow of the administration solution and/or blood.
Intravitreal (IVT) injection
SD rats were housed in animal facility of Ractigen (Nantong, Jiangsu, China) and fed for at least three days prior to the intravitreal (IVT) injection of compounds. SD rats were anesthetized in an isoflurane (RWD, R510-22-16) induction chamber (5%isoflurane in 100%medical oxygen, 2 L/min) until they had no response to toe pinches. SD rats were transferred to the experimental operating platform and positioned for delivery of isoflurane (2%isoflurane in 100%medical oxygen, 1.5 L/min) using a homemade face mask during the procedure of IVT injection. Before the IVT injection of compounds, one drop of 0.5%alcaine as topical anesthetics was applied to the injected eye (left eye) . An anterior chamber paracentesis was performed using a 30-gauge needle, followed by approximately 5 μL aqueous humor were outflowed. Each compound for corresponding group was dissolved in 4 μL normal saline and loaded into a 30-gauge needle for IVT injection. The compounds were administered by inserting at a 45° angle of the needle through the sclera into the vitreous body, then injected into the posterior chamber keeping for 5 seconds to avoid the leaking. At the end of administration, the injected eye was administered with antibiotics to prevent infection after the IVT injection.
Intravesical bladder (IVB) instillation
Mice were anesthetized and placed on a temperature-controlled pad at 28-31℃. Each mouse will be excreted urine from the bladder by urinary catheterization and to wash the bladder with saline before IVB instillation. A 2 cm catheter attached to a 1 ml syringe containing compound solution was intubated into bladder via urinary meatus. A total of 50 μL solution was injected into the bladder through an indwelling urinary catheterization at ～1.5 hours.
RNA Isolation and reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR)
Total cellular RNA was isolated from cell culture using the RNeasy Plus Mini kit (Qiagen, Hilden, Germany) according to the manufacturer’s protocol. Animal tissues were stored in RNAlaterTM (AM7021, Thermo Fisher, Carlsbad, CA, USA) prior to sample  processing in which total RNA samples were isolated using the MagPure Total RNA Micro LQ kit (Magen, R6621, Guangzhou, Guangdong, China) in conjunction with the auto-pure96 machine (ALLSHENG, Hangzhou, Zhejiang, China) . The resultant RNA (1 μg) was reverse transcribed into cDNA by using a PrimeScript RT kit containing gDNA Eraser (Takara, Shlga, Japan) . The resultant cDNA was amplified in a Roche LightCycler 480 Multiwell Plate 384 (Roche, ref: 4729749001, US) using SYBR Premix Ex Taq II (Takara, Shlga, Japan) reagents and primers specific for amplifying target genes of interest. Melting curves were performed after amplification to confirm primer specificity. Reaction conditions were as follows: Reverse transcription reaction (stage 1) : 42℃ for 5 min, 95℃ for 10 sec; PCR reaction (stage 2) : 95℃ for 5 sec, 60℃ for 30 sec, 72℃ for 10 sec; 40 cycles of amplification; Melting curve (stage 3) . PCR reaction conditions are shown in Table 8 and Table 9. Primer sequences are listed in Table 10.
Table 8: RT reaction

Table 9: RT-qPCR reaction

Table 10. Primer sequences for RT-qPCR assay
One reference gene
To calculate the expression level (Erel) of target gene mRNA in an siRNA-and saRNA-transfected sample relative to control treatment (Mock) , the averaged Ct values of the target gene and the internal reference gene were substituted into the following Formula
Erel= 2 (CtTm-CtTs) /2 (CtRm-CtRs)
wherein CtTm was the Ct value of the target gene from the mock-treated sample; CtTs was the Ct value of the target gene from the siRNA-treated sample; CtRm was the Ct value of the internal reference gene from the mock-treated sample; CtRs was the Ct value of the internal reference gene from the siRNA-treated sample.
Two reference genes
To calculate the expression level (Erel) of target gene mRNA in an siRNA-and saRNA-transfected sample relative to control treatment (Mock) , the Ct values of the target gene and the two internal reference genes were substituted into the following Formula
Erel=2 (CtTm-CtTs) / ( (2 (CtR1m-CtR1s) *2 (CtR2m-CtR2s) ) (1/2) )
wherein CtTm was the Ct value of the target gene from the mock-treated sample; CtTs was the Ct value of the target gene from the siRNA-treated sample; CtR1m was the Ct value of the internal reference gene 1 from the mock-treated sample; CtR1s was the Ct value of the internal reference gene 1 from the siRNA-treated sample; CtR2m was the Ct value of the internal reference gene 2 from the mock-treated sample; and CtR2s was the Ct value of the internal reference gene 2 from the siRNA-treated sample.
Stem-loop RT-qPCR
To quantify oligonucleotides in biological samples, animal tissues were harvested using Heat-Lysis method and stored lysate at -80℃. Duplex, antisense strand and formulated saRNAs were used for the preparation of serial 10-fold dilutions into 95℃ boiled tissue (100 mg/mL) or plasma (1: 10 diluted) in 1x lysis buffer. saRNA concentrations in nM were converted to ng/g using the corresponding molecular weights. Two non-template controls were included in all experiments. The first control contains the water used to prepare the transcription master mix and the second contains the lysis buffer used as diluent for samples and standards.
Reverse transcription reactions were performed using a Takara Reverse Transcription kit (Takara, RR037A) . A total of 4 μL of cDNA (1: 40 dilution) from the previous step was added into the PCR amplification reaction mix (0.5 μM forward primer, 0.5 μM reverse primer, 2 × TG Green premix Ex Taq II) . The qPCR reaction was run with the option ‘Standard Curve’ in a Light cycler 480. Stem-loop RT-qPCR reaction conditions are shown in Table 11 and Table 12. Stem-loop primer sequences are listed in Table 13.
Table 11. Stem-loop RT reaction
Table 12. Stem-loop RT-qPCR reaction
Table 13. Primer sequences for stem-loop RT-qPCR assay
ELISA assay
Plasma was prepared by collecting 225 μL blood per mouse into 1.5 mL EP tube with 25 μL 3.2%citrate as an anticoagulant, followed by mixing and centrifuging 15 min at 2500 g within 30 minutes of collection. The samples were tested immediately or aliquoted and stored at -80℃ without repeated freeze-thaw cycles. A suggested 1000-fold dilution was diluted with Tris-BSA buffer (Cord: 221304, BioMed, France) , mixed well and started assay. FVII Standard (Normal Mouse Plasma) was prepared by taking one tube of pool plasma which is made by pooling plasma samples of five normal mice (C57BL/6J) , stored at -80℃ and was used as an initiation of a standard plasma. 20 μL pool plasma was pipetted to 480 μL Tris-BSA buffer (R4) to obtain a 1: 25 Solution A in a 1.5 mL tube. Then 50 μL Solution A was pipetted to 950 μL Tris-BSA buffer to obtain a 1: 500 stock solution. This stock solution was used to produce a dilution series of standard plasma. Each tube was mixed thoroughly before the next transfer.
In this assay, a standard plasma dilution of 1: 1000 was assigned value of 100 %FVII activity. By definition, the stock solution was assigned 200%FVII activity. The dynamic range was from 0 to 200%FVII activity. The stock solution (i.e., 200%FVII activity) was served as the high value standard. Tris-BSA buffer (R4) was served as the zero-value standard. FVII protein expression levels were detected by the OD values using BIOPHEN FVII ELISA kits (Cord : 221304, BioMed, France) following the instructions provided by the manufacturer of the kits.
Statistical analysis
Differences between groups of continuous variables were compared using one-way analysis of variance (ANOVA) followed by Dunnett’s multiple comparisons. A P value of less than 0.05 was considered statistically significant between two groups. *represents p ＜ 0.05, **represents p ＜ 0.01, ***represents p ＜ 0.001, ****represents p ＜ 0.0001.
While the invention has been particularly shown and described with reference to a preferred embodiment and various alternate embodiments, it is understood by persons skilled in the relevant art that various changes in form and details can be made therein without departing from the spirit and scope of the invention.

Claims (46)

  1. An oligonucleotide delivery enhancing compound comprising a nitrogen-containing five membered heterocyclic ring moiety and at least one substituent directly or indirectly attachable to an oligonucleotide.
  2. The oligonucleotide delivery enhancing compound according to claim 1, having a structure represented by Formula AI or Formula AII
    wherein each independently represents a covalent single or double bond; X, on each occurrence, is an atom selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; each of F, G, H and I is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur;
    wherein m is an integer of 1, 2 or 3, n is an integer of 1, 2 or 3, and m+n=4;
    wherein C, on each occurrence, is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C1-C20) alkyl, (C1-C20) alkoxy, halogenated (C1-C20) alkyl and halogenated (C1-C20) alkoxy;
    wherein B, on each occurrence, is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, -P (O) 2-OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkenyl, - (C1-C22) alkylene-OH, - (C3-C22) cycloalkylene-OH, - (C6-C22) arylene-OH, - (C6-C22) heteroarylene-OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C3-C22) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C22) arylene-C (O) OH, - (C5-C22) heteroarylene-C (O) OH, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) NH2, - (C1-C22) alkylene-O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) NH2, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C1-C22) alkylene-O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) OH, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) NH2, - (C1-C22) alkylene-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) NH2, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C1- C30) alkylene-P (O) 2-OH, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-(C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene -P (O) -OH, - (C1-C22) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C22) alkylene-CN,
    wherein each of A1, A2 and A3 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, -O-R1, -SH, - (C1-C25) alkyl, halogenated - (C1-C25) alkyl, - (C2-C22) alkenyl, - (C1-C22) alkylene-OH, - (C3-C22) cycloalkyl, - (C3-C22) cycloalkenyl, - (C1-C22) alkylene- (C3-C22) cycloalkyl, - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-R1, - (C1-C22) alkylene-COOR1, -C (O) O-R1, -O- (C1-C22) alkyl, -S- (C1-C22) alkyl, -C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkyl, -O-C (O) - (C1-C22) alkyl, -O-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-O-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NR2-R1, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-OH, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, -adamantyl, - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -O-adamantly, -C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -halogenated (C1-C22) alkyl, -CH (NH-CO- (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-C [- (C1-C22) alkylene-O- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl] 3, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-C [- (C1-C22) alkylene-O- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1] 3, -CH (NH-CO-halogenated (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -halogenated (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene- (C1-C6 alkylene oxide) (1-20) -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -C (O) NH- (C1-C22) alkyl, -C (O) NH-R1, -C (O) NR2-R1, -C (O) NH- (C1- C22) alkylene-OH, -C (O) NH- (C1-C22) alkylene-COOH, -NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, -NH-C (O) -R1, -NR2-C (O) -R1, -O-P (O) 2-O-R1, -OP (O) (S) -O-R1, -O-P (O) -O-R1, -NH-R1, -NR2-R1, - (C1-C22) alkylene-NH-R1, - (C1-C22) alkylene-NR2-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) O-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene -P (O) -OH, - (C1-C22) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C22) alkylene-CN, substituted or unsubstituted pyrrole, substituted or unsubstituted pyrroline, substituted or unsubstituted pyrrolidine, substituted or unsubstituted pyrazole, substituted or unsubstituted pyrazoline, substituted or unsubstituted pyrazolidine, substituted or unsubstituted imidazole, substituted or unsubstituted oxazole, substituted or unsubstituted thiazole, substituted or unsubstituted benzopyrrole, substituted or unsubstituted benzopyrroline, substituted or unsubstituted benzopyrrolidine, substituted or unsubstituted benzopyrazole, substituted or unsubstituted benzopyrazoline, substituted or unsubstituted benzopyrazolidine, substituted or unsubstituted benzoimidazole, substituted or unsubstituted benzooxazole, substituted or unsubstituted benzothiazole, and a substituent represented by Formula AIII,
    wherein Y is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of P, Q, S and T is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and the asterisk refers to the site wherein the substituent represented by Formula AIII is linked with the structure represented by Formula AI or Formula AII;
    wherein each of R3, R4 and R5 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, -O-R1, -SH, - (C1-C25) alkyl, halogenated - (C1-C25) alkyl, - (C2-C22) alkenyl, - (C1-C22) alkylene-OH, - (C3-C22) cycloalkyl, - (C3-C22) cycloalkenyl, - (C1-C22) alkylene- (C3-C22) cycloalkyl, - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-R1, - (C1-C22) alkylene-COOR1, -C (O) O-R1, -O- (C1-C22) alkyl, -S- (C1-C22) alkyl, -C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkyl, -O-C (O) - (C1-C22) alkyl, -O-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-O-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NR2-R1, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-OH, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, -adamantyl, - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -O-adamantly, -C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -halogenated (C1-C22) alkyl, -CH (NH-CO- (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-C [- (C1-C22) alkylene-O- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl] 3, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-C [- (C1-C22) alkylene-O- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1] 3, -CH (NH-CO-halogenated (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -halogenated (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene- (C1-C6 alkylene oxide) (1-20) -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -C (O) NH- (C1-C22) alkyl, -C (O) NH-R1, -C (O) NR2-R1, -C (O) NH- (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) NH- (C1-C22) alkylene-COOH, -NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, -NH-C (O) - R1, -NR2-C (O) -R1, -O-P (O) 2-O-R1, -OP (O) (S) -O-R1, -O-P (O) -O-R1, -NH-R1, -NR2-R1, - (C1-C22) alkylene-NH-R1, - (C1-C22) alkylene-NR2-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) O-R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -R1, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-(C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene -P (O) -OH, - (C1-C22) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C22) alkylene-CN, substituted or unsubstituted pyrrole, substituted or unsubstituted pyrroline, substituted or unsubstituted pyrrolidine, substituted or unsubstituted pyrazole, substituted or unsubstituted pyrazoline, substituted or unsubstituted pyrazolidine, substituted or unsubstituted imidazole, substituted or unsubstituted oxazole, substituted or unsubstituted thiazole, substituted or unsubstituted benzopyrrole, substituted or unsubstituted benzopyrroline, substituted or unsubstituted benzopyrrolidine, substituted or unsubstituted benzopyrazole, substituted or unsubstituted benzopyrazoline, substituted or unsubstituted benzopyrazolidine, substituted or unsubstituted benzoimidazole, substituted or unsubstituted benzooxazole, and substituted or unsubstituted benzothiazole,
    wherein R7, on each occurrence, is attached to any one of P, Q, S and T, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C1-C20) alkyl, (C1-C20) alkoxy, halogenated (C1-C20) alkyl and halogenated (C1-C20) alkoxy;
    wherein M is an integer of 0, 1, 2 or 3;
    wherein R6 is attached to any one of P, Q, S and T, and is selected from the group consisting of direct bond, -O-, -C (O) O-, -O-C (O) -, -P (O) 2-O-, -O-P (O) 2-O-, -P (O) (S) -O-, -O-P (O) (S) -O-, -O-P (O) -O-, - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-O-, -O- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH-(C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-C (O) -, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-O-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) - (C1-C22) alkylene-C (O) -N ( (C1-C22) alkyl) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-O-, -N ((C1-C22) alkyl) -C (O) - (C1-C22) alkylene-, -N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) - (C1-C22) alkylene-O-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, -N ((C1-C22) alkyl) -C (O) - (C1-C22) alkylene-N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) - (C1-C22) alkylene-, -N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) - (C1-C22) alkylene-N ( (C1-C22) alkyl) -C (O) -, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene -P (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-O-P (O) 2-O-, - (C3-C22) cycloalkylene-, - (C3-C22) cycloalkylene-O-, -O- (C3-C22) cycloalkylene-, - (C6-C22) arylene-, - (C6-C22) arylene-O-, -O- (C6-C22) arylene-, - (C6-C22) arylene-NH-, -NH- (C6-C22) arylene-, -C (O) - (C6-C22) arylene-, - (C6-C22) arylene-C (O) -, -C (O) -O- (C6-C22) arylene-, - (C6-C22) arylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C6-C22) arylene-and -C (O) -NH- (C6-C22) arylene-C (O) -O-;
    wherein R1, on each occurrence, is independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, - (C1-C22) alkyl, - (C3-C22) cycloalkyl, - (C6-C22) aryl, - (C1-C22) alkoxy, - (C3-C22) cycloalkoxy, - (C6-C22) aryloxy, -C (O) - (C1-C22) alkyl, -OC (O) (C1-C22) alkyl, -C (O) -O- (C1-C22) alkyl, -C (O) - (C3-C22) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C22) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C22) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C22) aryloxy, -OC (O) - (C6-C22) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C22) aryloxy, -C (O) -phosphate ester group, phosphodiester group, phosphoramidite group, saturated fatty  acid group, unsaturated fatty acid group, glucosyl, acetamide glucosyl, galactosamine, N-acetyl galactosamine, lipid, PEG, steroid, lipophile, carbohydrate, cholesterol, adamantane, amino acid, peptide, chloroquine and alkaloid,
    wherein R2, on each occurrence, is independently selected from the group consisting of a halogen atom, a (C1-C12) alkyl, a (C1-C12) alkoxy, a (C1-C12) alkoxycarbonyl, a (C6-C16) aryl or a (C6-C16) aryloxycarbonyl;
    wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group, nitrile group and phosphoric acid group contained in A1, A2, A3, B, C, R1, R2, R3, R4, R5 and R6 are optionally linked to a support material or protected with a terminal protective group; and
    with the proviso that A1, A2 and A3 are not simultaneously hydrogen and R3, R4 and R5 are not simultaneously hydrogen.
  3. The oligonucleotide delivery enhancing compound according to claim 1, comprising a moiety represented by Formula BI and at least one substituent directly or indirectly attachable to an oligonucleotide,
    wherein X′ is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; each of F′, G′, H′ and I′ is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of the asterisks refers to a site optionally linked to at least one substituent or an oligonucleotide directly or indirectly.
  4. The oligonucleotide delivery enhancing compound according to claim 3, having a structure represented by Formula BII
    wherein X′ is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of F′, G′, H′ and I′ is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur;
    wherein each of A1′, A2′ and A3′ is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -R1′, -O-R1′, -S-R1′, -C (O) -R1′, -C (O) O-R1′, -O-C (O) -R1′, -C (O) NH-R1′, -C (O) NR2′-R1′, -NH-C (O) -R1′, -NR2′-C (O) -R1′, -O-P (O) 2-O-R1′, -OP (O) (S) -O-R1′, -O-P (O) -O-R1′, -NH-R1′, -NR2′-R1′, - (CH2) r′-NH-R1′, - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NH-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) O-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-C (O) -R1′, - (CH2) r′-C (O) -R1′; - (CH2) r′-C (O) O-R1′; - (CH2) r′-O-C (O) -R1′, - (CH2) r′-R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-NR2′-C (O) - (CH2) s′-R1′, -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′) (-C (O) -NH- (CH2) q′-R3′) , -N (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , or A1′ and A2′ are linked together so that A1′, A2′, the nitrogen atom linked with A1′ and the carbon atom linked with A2′ form a unsubstituted or substituted heterocyclic ring; wherein each of R1′ and R3′ is independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, - (C1-C30) alkyl, - (C3-C50) cycloalkyl, - (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkoxy, - (C3-C50) cycloalkoxy, - (C6-C50) aryloxy, -C (O) - (C1-C30) alkyl, -OC (O) (C1-C30) alkyl, -C (O) -O- (C1-C30) alkyl, -C (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C50) aryloxy, -OC (O) - (C6-C50) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C50) aryloxy, -C (O) -phosphate ester group, phosphodiester group, phosphoramidite group, saturated fatty acid group, unsaturated fatty acid group, glucosyl, acetamide glucosyl, galactosamine, N-acetyl galactosamine, lipid, PEG, steroid, lipophile, carbohydrate, cholesterol, adamantane, amino acid, peptide, ligand, nucleic  acid, oligonucleotide, aptamer, small molecule, antibody, antibody fragment, chloroquine, alkaloid and targeting moiety, wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group and amino group contained in each of R1′ and R3′ are optionally protected; wherein each of R2′, R4′, R5′ and R6′ is independently a halogen atom, a (C1-C12) alkyl, a (C1-C12) alkoxy, a (C1-C12) alkoxycarbonyl, a (C6-C16) aryl or a (C6-C16) aryloxycarbonyl; wherein each of r′, s′, p′ and q′ is an integer from 1 to 22; and with the proviso that A3′ is absent when X′ is oxygen, and A1′, A2′ and A3′ are not simultaneously hydrogen;
    wherein each C′ is attached to any one of F′, G′, H′ and I′, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C1-C20) alkyl, (C1-C20) alkoxy, halogenated (C1-C20) alkyl and halogenated (C1-C20) alkoxy;
    wherein m′ is an integer of 1, 2 or 3, n′ is an integer of 1, 2 or 3, and m′+n′=4;
    wherein each B′ is attached to any one of F′, G′, H′ and I′, and is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, - (C1-C30) alkoxy, -P (O) 2-OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C5-C50) heteroarylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- [ (C1-C30) alkylene-O] r′-H (wherein r′ is an integer of 1 to 22) , -C (O) -NH- [ (C1-C30) alkylene-O] r′- (C1-C30) alkylene-C (O) -OH (wherein r′ is an integer of 1 to 22) , -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene- (C6-C50) arylene- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) 2-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) 2-OH, - (C6-C50) arylene-P (O) 2-OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) 2-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O-  (C1-C30) alkylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene -P (O) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) -OH, - (C5-C50) -heteroarylene-P (O) -OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) (S) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) (S) -OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C30) alkylene-CN, - (C3-C50) cycloalkylene-CN, - (C6-C50) arylene-CN, - (C5-C50) heteroarylene-CN, lipid, PEG, steroid, lipophile, carbohydrate, cholesterol, adamantane, amino acid, peptide, chloroquine, alkaloid and a substituent represented by Formula BIII:
    wherein Y′ is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of P′, Q′, S′ and T′ is independently selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and the asterisk refers to the site wherein the substituent represented by Formula BIII is linked with any one of F′, G′, H′and I′ of Formula BII;
    where R7′ is selected from the group consisting of -O-, -C (O) O-, -O-C (O) -, -P (O) 2-O-, -O-P (O) 2-O-, -P (O) (S) -O-, -O-P (O) (S) -O-, -O-P (O) -O-, - (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-O-, -O- (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-NH-, -NH- (C1-C30) alkylene-, -C (O) - (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-C (O) -, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH-(C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-O-, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-, -N ( (C1-C20) alkyl) - C (O) - (C1-C30) alkylene-O-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) -, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) -, - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C30) alkylene -P (O) 2-O-, - (C1-C30) alkylene-O-P (O) 2-O-, - (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-O-, -O- (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-NH-, -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) - (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-O-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH-, - (C3-C50) cycloalkylene -P (O) 2-O-, - (C3-C50) cycloalkylene-O-P (O) 2-O-, - (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-O-, -O- (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-NH-, -NH- (C6-C50) arylene-, -C (O) - (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-C (O) -, -C (O) -O- (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-O-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH-, - (C6-C50) arylene -P (O) 2-O-, - (C6-C50) arylene-O-P (O) 2-O-, - (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-O-, -O- (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-NH-, -NH- (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) - (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -, -C (O) -O- (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-O-, -C (O) -NH- (C5- C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH-, - (C5-C50) heteroarylene -P (O) 2-O-, - (C5-C50) heteroarylene-O-P (O) 2-O-; wherein each of R8′ and R9′ is either absent or is a substituent independently selected from the group consisting of -H, hydroxyl, - (C1-C30) alkyl, - (C3-C50) cycloalkyl, - (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-NH2, - (C3-C50) cycloalkylene-NH2, - (C6-C50) arylene-NH2, - (C1-C30) alkoxy, - (C3-C50) cycloalkoxy, - (C6-C50) aryloxy, -C (O) - (C1-C30) alkyl, -OC (O) (C1-C30) alkyl, -C (O) -O- (C1-C30) alkyl, -C (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C50) aryloxy, -OC (O) - (C6-C50) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C50) aryloxy, -C (O) -NH- (C1-C30) alkyl, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -NH- (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-phosphoric acid, - (C3-C50) cycloalkylene-phosphoric acid, - (C6-C50) arylene-phosporic acid; wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group and phosporic acid group contained in each of R8′ and R9′ are optionally protected with a terminal protective group; or R8′ and R9′ are linked together so that R8′, R9′, the carbon atom linked with R8′ and the Y′ atom linked with R9′ form a unsubstituted or substituted heterocyclic ring; with the proviso that R9′ is absent when Y′ is oxygen or sulfur;
    each R10′ is attached to any one of P′, Q′, S′ and T′, and is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, -P (O) 2-OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C5-C50) heteroarylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C5-C50) heteroarylene- C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH-(C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) NH2, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C3- C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) 2-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) 2-OH, - (C6-C50) arylene-P (O) 2-OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) 2-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene -P (O) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) -OH, - (C5-C50) -heteroarylene-P (O) -OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) (S) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) (S) -OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C30) alkylene-CN, - (C3-C50) cycloalkylene-CN, - (C6-C50) arylene-CN, - (C5-C50) heteroarylene-CN, wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group, nitrile group and phosporic acid group contained in R10′ is optionally linked to a support material or protected with a terminal protective group;
    wherein each R11′ is attached to any one of P′, Q′, S′ and T′, and is either absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C1-C20) alkyl, (C1-C20) alkoxy, (C1-C20) alkoxycarbonyl, halogenated (C1-C20) alkyl and halogenated (C1-C20) alkoxycarbonyl; and
    wherein M′ is an integer of 1, 2 or 3, N′ is an integer of 1, 2 or 3, and M′+N′=4.
  5. The oligonucleotide delivery enhancing compound according to claim 2 or 4, wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group, nitrile group and phosphoric acid group contained in each of A1, A2, A3, B, C, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R1′, R2′, R3′, R4′, R5′, R6′, R7′, R8′, R9′, R10′ and R11′ are optionally protected with a terminal protection group RP selected from the group consisting of (C1-C22) alkyl, (C1-C22) alkoxy, (C1-C22) alkylcarbonyl, (C1-C22) alkoxycarbonyl, (C6-C22) aryl, (C6-C22) aryloxy, (C6-C22) arylcarbonyl, (C6-C22) aryloxycarbonyl, glucosyl, acetamide glucosyl, galactosamine, N-acetyl galactosamine, tri ( (C1-C22) alkyl) silyl and tri ( (C1-C22) alkoxy) silyl; and
    wherein the support material is selected from the group consisting of silica, silica gel, glass, ceramic, polymer, cellulose, and combinations thereof.
  6. The oligonucleotide delivery enhancing compound according to claim 2 or 4, having a structure represented by any of Formula AIV to Formula AXIII and Formula BIV to BXIV,

    wherein A1, A2, A3, A4, F, G, H, I, B, C, P, Q, S, T, R6, R7, m, n and M are as defined in claim 2,
    wherein each of RING I and RING II is a 4, 5, 6, 7, 8 or 9 member ring;
    wherein A4′ is attached to any atom of RING I, and each of A4′, A5′ and A6′ is independently selected from the group consisting of -R1′, -O-R1′, -S-R1′, -C (O) -R1′, -C (O) O-R1′, -O-C (O) -R1′, -C (O) NH-R1′, -C (O) NR2′-R1′, -NH-C (O) -R1′, -NR2′-C (O) -R1′, -O-P (O) 2-O-R1′, -OP (O) (S) -O-R1′, -O-P (O) -O-R1′, -NH-R1′, -NR2′-R1′, - (CH2) r′-NH-R1′, - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NH-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) O-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-C (O) -R1′, - (CH2) r′-C (O) -R1′; - (CH2) r′-C (O) O-R1′; - (CH2) r′-O-C (O) -R1′, - (CH2) r′-R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-NR2′-C (O) - (CH2) s′-R1′, -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -N (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) -  (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) ; wherein each of R1′ and R3′ is independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, - (C1-C30) alkyl, - (C3-C50) cycloalkyl, - (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkoxy, - (C3-C50) cycloalkoxy, - (C6-C50) aryloxy, -C (O) - (C1-C30) alkyl, -OC (O) (C1-C30) alkyl, -C (O) -O- (C1-C30) alkyl, -C (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C50) aryloxy, -OC (O) - (C6-C50) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C50) aryloxy, -C (O) -phosphate ester group, phosphodiester group, phosphoramidite group, saturated fatty acid group, unsaturated fatty acid group, lipid, PEG, steroid, lipophile, carbohydrate, cholesterol, adamantane, amino acid, peptide, ligand, nucleic acid, oligonucleotide, aptamer, small molecule, antibody, antibody fragment, polyethylene glycol, carbohydrate, antibody, antibody fragment, chloroquine, alkaloid and targeting moiety, wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group and amino group contained in each of R1′ and R3′ are optionally protected; wherein each of R2′, R4′, R5′ and R6′ is independently a halogen atom, a (C1-C12) alkyl, a (C1-C12) alkoxy, a (C6-C16) aryl or a (C6-C16) aryloxy; wherein each of r′, s′, p′ and q′ is an integer from 1 to 22; and
    wherein R12′ is attached to any atom of RING II and is selected from the group consisting of -H, hydroxyl, - (C1-C30) alkyl, - (C3-C50) cycloalkyl, - (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-NH2, - (C3-C50) cycloalkylene-NH2, - (C6-C50) arylene-NH2, - (C1-C30) alkoxy, - (C3-C50) cycloalkoxy, - (C6-C50) aryloxy, -C (O) - (C1-C30) alkyl, -OC (O) (C1-C30) alkyl, -C (O) -O- (C1-C30) alkyl, -C (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C50) aryloxy, -OC (O) - (C6-C50) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C50) aryloxy, -C (O) -NH- (C1-C30) alkyl, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -NH- (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-phosporic acid, - (C3-C50) cycloalkylene-phosporic acid, - (C6-C50) arylene-phosporic acid; wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group and phosporic acid group contained in R12′ are optionally protected.
  7. The oligonucleotide delivery enhancing compound according to claim 2, wherein  each of F, G, H and I is carbon, m is 1 and n is 3, B is attached to G or H, each of P, Q, S and T is carbon, R6 is attached to any one of Q and S;
    wherein the protection group RP is selected from the group consisting of benzyloxycarbonyl (Cbz) , tert-butyldimethylsilyl (TBS) , 4, 4′-dimethoxytrityl (DMTr) , t-butyloxy carbonyl (Boc) , benzyl (Bn) and benzyloxy (BnO) ;
    wherein C, on each occurrence, is selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C1-C12) alkyl, (C1-C12) alkoxy, halogenated (C1-C12) alkyl and halogenated (C1-C12) alkoxy;
    wherein B, on each occurrence, is selected from the group consisting of - (C1-C22) alkylene-OH, -O-C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) NH2, - (C1-C16) alkylene-O-C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) NH2, -O-C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) OH, - (C1-C16) alkylene-O-C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) OH, -C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) NH2, - (C1-C16) alkylene-C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) NH2, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-C (O) OH, - (C1-C16) alkylene-C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-C (O) OH, - (C1-C16) alkylene-O-P (-N (C1-C16 alkyl) 2) -O- (C1-C16) alkylene-CN, - (C1-C16) alkylene-O-P (-N (C1-C16 alkyl) 2) -O- (C1-C16) alkylene-OH, - (C1-C16) alkylene-O-P (-N (C1-C16 alkyl) 2) -O- (C1-C16) alkylene-NH2, - (C1-C16) alkylene-O-P (-N (C1-C16 alkyl) 2) -O- (C1-C16) alkylene-C (O) OH, and -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-O-P (-N (C1-C16 alkyl) 2) -O- (C1-C16) alkylene-CN,
    wherein each of A1, A2 and A3 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, linear or branched - (C6-C22) alkyl, linear or branched - (C2-C22) alkenyl, - (C1-C22) alkylene-OH, - (C3-C22) cycloalkyl, - (C3-C22) cycloalkenyl, - (C1-C22) alkylene- (C3-C22) cycloalkyl, - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-R1, - (C1-C22) alkylene-COOR1, -O- (C1-C22) alkyl, - (C6-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene- (C1-C6 alkylene oxide) (1-20) -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -C (O) NH-R1, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, substituted or unsubstituted pyrrole, substituted or unsubstituted pyrroline, substituted or unsubstituted pyrrolidine,  substituted or unsubstituted pyrazole, substituted or unsubstituted pyrazoline, substituted or unsubstituted pyrazolidine, substituted or unsubstituted imidazole, substituted or unsubstituted oxazole, substituted or unsubstituted thiazole, substituted or unsubstituted benzopyrrole, substituted or unsubstituted benzopyrroline, substituted or unsubstituted benzopyrrolidine, substituted or unsubstituted benzopyrazole, substituted or unsubstituted benzopyrazoline, substituted or unsubstituted benzopyrazolidine, substituted or unsubstituted benzoimidazole, substituted or unsubstituted benzooxazole, substituted or unsubstituted benzothiazole, and a substituent represented by Formula AIII,
    wherein Y is selected from the group consisting of carbon, nitrogen, oxygen and sulfur; and each of P, Q, S and T is carbon;
    wherein each of R3, R4 and R5 is either absent or a substituent independently selected from the group consisting of -H, -OH, linear or branched - (C6-C22) alkyl, linear or branched - (C2-C22) alkenyl, - (C1-C22) alkylene-OH, - (C3-C22) cycloalkyl, - (C3-C22) cycloalkenyl, - (C1-C22) alkylene- (C3-C22) cycloalkyl, - (C1-C22) alkylene-R1, - (C1-C22) alkylene-O-R1, - (C1-C22) alkylene-COOR1, -O- (C1-C22) alkyl, - (C6-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkyl, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene-NR2-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, - (C1-C22) alkylene- (C1-C6 alkylene oxide) (1-20) -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-adamantyl, -C (O) NH-R1, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-OH, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-NH2, - (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-O-P (-N (C1-C22 alkyl) 2) -O- (C1-C22) alkylene-CN, substituted or unsubstituted pyrrole, substituted or unsubstituted pyrroline, substituted or unsubstituted pyrrolidine, substituted or unsubstituted pyrazole, substituted or unsubstituted pyrazoline, substituted or unsubstituted pyrazolidine, substituted or unsubstituted imidazole, substituted or unsubstituted oxazole, substituted or unsubstituted thiazole, substituted or unsubstituted benzopyrrole, substituted or unsubstituted benzopyrroline, substituted or unsubstituted benzopyrrolidine, substituted or unsubstituted benzopyrazole, substituted or unsubstituted benzopyrazoline, substituted or unsubstituted benzopyrazolidine, substituted or unsubstituted benzoimidazole, substituted or unsubstituted benzooxazole, and substituted or unsubstituted benzothiazole,
    wherein R7, on each occurrence, is attached to any one of P, Q, S and T, and is either  absent or selected from the group consisting of hydrogen, halogen atom, hydroxyl, (C1-C20) alkyl, (C1-C20) alkoxy, halogenated (C1-C20) alkyl and halogenated (C1-C20) alkoxy;
    wherein M is an integer of 0, 1, 2 or 3;
    wherein R6 is attached to any one of P, Q, S and T, and is selected from the group consisting of - (C1-C16) alkylene-, - (C1-C16) alkylene-O-, -O- (C1-C16) alkylene-, - (C1-C16) alkylene-NH-, -NH- (C1-C16) alkylene-, -C (O) - (C1-C16) alkylene-, - (C1-C16) alkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C1-C16) alkylene-, - (C1-C16) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-, -C (O) -NH-(C1-C16) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-O-C (O) -, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-O-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C16) alkyl) - (C1-C16) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C16) alkyl) - (C1-C16) alkylene-O-, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C16) alkyl) - (C1-C16) alkylene-C (O) -N ( (C1-C16) alkyl) - (C1-C16) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C16) alkyl) - (C1-C16) alkylene-C (O) -N ( (C1-C16) alkyl) -, - (C1-C16) alkylene-C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-, - (C1-C16) alkylene-C (O) -NH- (C1-C16) alkylene-C (O) -NH-, -NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) -O-, -NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-O-, -N ((C1-C16) alkyl) -C (O) - (C1-C16) alkylene-, -N ( (C1-C16) alkyl) -C (O) - (C1-C16) alkylene-O-, -NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-NH-C (O) -, -N ((C1-C16) alkyl) -C (O) - (C1-C16) alkylene-N ( (C1-C16) alkyl) -C (O) - (C1-C16) alkylene-, -N ( (C1-C16) alkyl) -C (O) - (C1-C16) alkylene-N ( (C1-C16) alkyl) -C (O) -, - (C1-C16) alkylene-NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-, - (C1-C16) alkylene-NH-C (O) - (C1-C16) alkylene-NH-C (O) -.
  8. The oligonucleotide delivery enhancing compound according to claim 4, having a structure represented by any one of Formula BXV to Formula BXXIX,

    wherein each of A1′ and A2′ is a substituent independently selected from the group consisting of -R1′, -O-R1′, -S-R1′, -C (O) -R1′, -C (O) O-R1′, -O-C (O) -R1′, -C (O) NH-R1′, -C (O) NR2′-R1′, -NH-C (O) -R1′, -NR2′-C (O) -R1′, -O-P (O) 2-O-R1′, -OP (O) (S) -O-R1′, -O-P (O) -O-R1′, -NH-R1′, -NR2′-R1′, - (CH2) r′-NH-R1′, - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NH-R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-C (O) O-R1′, -C (O) -  (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, -C (O) - (CH2) r′-NR2′-C (O) -R1′, - (CH2) r′-C (O) -R1′; - (CH2) r′-C (O) O-R1′; - (CH2) r′-O-C (O) -R1′, - (CH2) r′-R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) -R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-C (O) - NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′, - (CH2) r′-NR2′-C (O) - (CH2) s′-R1′, -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-C (O) -NH- (CH2) s′-R1′) (-C (O) -NH- (CH2) q′-R3′) , -N (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ (- (CH2) r′-NH-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NH-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CH (- (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) (- (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) , and -CR4′ ( (CH2) r′-NR5′-C (O) - (CH2) s′-R1′) ( (CH2) p′-NR6′-C (O) - (CH2) q′-R3′) ; wherein each of R1′ and R3′ is independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, - (C1-C30) alkyl, - (C3-C50) cycloalkyl, - (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkoxy, - (C3-C50) cycloalkoxy, - (C6-C50) aryloxy, -C (O) - (C1-C30) alkyl, -OC (O) (C1-C30) alkyl, -C (O) -O- (C1-C30) alkyl, -C (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C50) aryloxy, -OC (O) - (C6-C50) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C50) aryloxy, -C (O) -phosphate ester group, phosphodiester group, phosphoramidite group, saturated fatty acid group, unsaturated fatty acid group, lipid, PEG, steroid, lipophile, carbohydrate, cholesterol, adamantane, amino acid, peptide, ligand, nucleic acid, oligonucleotide, aptamer, small molecule, antibody, antibody fragment, polyethylene glycol, antibody, antibody fragment, chloroquine, alkaloid and targeting moiety, wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group and amino group contained in each of R1′ and R3′ are optionally protected; wherein each of R2′, R4′, R5′ and R6′ is independently a halogen atom, a (C1-C12) alkyl, a (C1-C12) alkoxy, a (C1-C12) alkoxycarbonyl, a (C6-C16) aryl or a (C6-C16) aryloxycarbonyl; wherein each of r′, s′, p′ and q′ is an integer from 1 to 22;
    wherein m′ is an integer of 1, 2 or 3, n′ is an integer of 1, 2 or 3, and m′+n′=4;
    wherein each B′ is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, - (C1-C30) alkoxy, -P (O) 2-OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C5-C50) heteroarylene-OH, - (C1- C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- [ (C1-C30) alkylene-O] r′-H (wherein r′ is an integer of 1 to 22) , -C (O) -NH- [ (C1-C30) alkylene-O] r′- (C1-C30) alkylene-C (O) -OH (wherein r′ is an integer of 1 to 22) , -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-OH, -C (O) -NH-(C6-C50) arylene-OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene- (C6-C50) arylene- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) 2-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) 2-OH, - (C6-C50) arylene-P (O) 2-OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) 2-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene -P (O) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) -OH, - (C5-C50) -heteroarylene-P (O) -OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) (S) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) (S) -OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C30) alkylene-CN, - (C3-C50) cycloalkylene-CN, - (C6-C50) arylene-CN, - (C5-C50) heteroarylene-CN, lipid, PEG, steroid, lipophile, carbohydrate, cholesterol, adamantane, amino acid, peptide, chloroquine and alkaloid;
    where each R7′ is selected from the group consisting of -O-, -C (O) O-, -O-C (O) -, -P (O) 2-O-, -O-P (O) 2-O-, -P (O) (S) -O-, -O-P (O) (S) -O-, -O-P (O) -O-, - (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-O-, -O- (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-NH-, -NH- (C1-C30) alkylene-, -C (O) - (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-C (O) -, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene- O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-O-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C1-C30) alkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) -NH-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) -O-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-O-, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-O-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) -, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-, -N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) - (C1-C30) alkylene-N ( (C1-C20) alkyl) -C (O) -, - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-, - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) - (C1-C30) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C30) alkylene -P (O) 2-O-, - (C1-C30) alkylene-O-P (O) 2-O-, - (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-O-, -O- (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-NH-, -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) - (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-O-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) -NH-, - (C3-C50) cycloalkylene -P (O) 2-O-, - (C3-C50) cycloalkylene-O-P (O) 2-O-, - (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-O-, -O- (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-NH-, -NH- (C6-C50) arylene-, -C (O) - (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-C (O) -, -C (O) -O- (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-O-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C6-C50) arylene- C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-, - (C6-C50) arylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) -NH-, - (C6-C50) arylene -P (O) 2-O-, - (C6-C50) arylene-O-P (O) 2-O-, - (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-O-, -O- (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-NH-, -NH- (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) - (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -, -C (O) -O- (C5-C50) heteroarylene-, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -O-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-O-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-O-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-, -C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -N ( (C1-C20) alkyl) -, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) -NH-, - (C5-C50) heteroarylene -P (O) 2-O-, - (C5-C50) heteroarylene-O-P (O) 2-O-; wherein each R8′ is a substituent independently selected from the group consisting of -H, hydroxyl, - (C1-C30) alkyl, - (C3-C50) cycloalkyl, - (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-NH2, - (C3-C50) cycloalkylene-NH2, - (C6-C50) arylene-NH2, - (C1-C30) alkoxy, - (C3-C50) cycloalkoxy, - (C6-C50) aryloxy, -C (O) - (C1-C30) alkyl, -OC (O) (C1-C30) alkyl, -C (O) -O- (C1-C30) alkyl, -C (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -OC (O) - (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -O- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) - (C6-C50) aryloxy, -OC (O) - (C6-C50) aryloxy, -C (O) -O- (C6-C50) aryloxy, -C (O) -NH- (C1-C30) alkyl, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkyl, -C (O) -NH- (C6-C50) aryl, - (C1-C30) alkylene-phosphoric acid, - (C3-C50) cycloalkylene-phosphoric acid, - (C6-C50) arylene-phosporic acid; wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group and phosporic acid group contained in each of R8′ are optionally protected with a terminal protective group; and
    wherein each R10′ is independently selected from the group consisting of hydroxyl, -C (O) OH, -P (O) 2-OH, -P (O) -OH, -P (O) (S) -OH, -CN, - (C1-C30) alkylene-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-OH, - (C6-C50) arylene-OH, - (C5-C50) heteroarylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene- C (O) OH, -C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) NH2, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene- NH2, - (C1-C30) alkylene-O-C (O) - (C1-C30) alkylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C3-C50) cycloalkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C6-C50) arylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C5-C50) heteroarylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) 2-OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) 2-OH, - (C6-C50) arylene-P (O) 2-OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) 2-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, -C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-CN, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-C (O) OH, - (C1-C30) alkylene-C (O) -NH- (C1-C30) alkylene-O-P (-N (C1-C16alkyl) 2) -O- (C1-C30) alkylene-NH2, - (C1-C30) alkylene -P (O) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) -OH, - (C5-C50) -heteroarylene-P (O) -OH, - (C1-C30) alkylene-P (O) (S) -OH, - (C3-C50) cycloalkylene-P (O) (S) -OH, - (C6-C50) arylene-P (O) (S) -OH, - (C5-C50) heteroarylene-P (O) (S) -OH, - (C1-C30) alkylene-CN, - (C3-C50) cycloalkylene-CN, - (C6-C50) arylene-CN, - (C5-C50) heteroarylene-CN, wherein one or more hydroxyl group, carboxyl group, amino group, nitrile group and phosporic acid group contained in R10′ is optionally linked to a support material or protected with a terminal protective group.
  9. The oligonucleotide delivery enhancing compound according to claim 2 or claim 4, having a structure of
















    wherein represents a support material.
  10. The oligonucleotide delivery enhancing compound according to any of claims 1 to 9, wherein at least one hydrogen atom contained in the oligonucleotide delivery enhancing compound is substituted with deuterium atom.
  11. An oligonucleotide delivery agent, comprising a delivery enhancing compound (DEC) moiety derivable from the oligonucleotide delivery enhancing compound according to any of claims 1 to 10 and at least one oligonucleotide.
  12. The oligonucleotide delivery agent according to claim 11, wherein the oligonucleotide delivery enhancing compound moiety is linked with the oligonucleotide via at least one linking moiety selected from the group consisting of direct bond, -O-, -S-, -C (O) -, -NH-, -N ( (C1-C12) alkyl) -, -N ( (C1-C12) alkyl) -C (O) -O-, -O-C (O) -, -C (O) -O-, -O-C (O) -O-, -C (O) -NH-, -OP (O) 2O-, -P (O) (O-) O-, -OP (O) O-, -OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2-O-, -S (O) 2-O-, -S (O) - O-, - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH- (C1-C22) alkylene-NH-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) O-, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -O- (C1-C22) alkylene-O-C (O) -, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) (O-) O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) (O-) O- (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) (S) O-, - (C1-C22) alkylene-O-S (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-S (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-S (O) -O-, -O-P (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, -O-P (O) -O- (C1-C22) alkylene-OP (O) O-, -OP (O) (S) O- (C1-C22) alkylene-OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-O-S (O) 2-O-, -S (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-S (O) 2-O- and -O-S (O) - (C1-C22) alkylene-S (O) -O-; and
    the oligonucleotide is selected from the group consisting of antisense oligonucleotide (ASO) , antisense RNA, short interfering RNA (siRNA) , micro-RNA (miRNA) , small activating RNA (saRNA) , double-stranded RNA (dsRNA) , and small guide RNA (sgRNA) .
  13. The oligonucleotide delivery agent according to claim 11, wherein the oligonucleotide comprises at least part of the sequence as set forth in SEQ ID NO 1 to 53.
  14. The oligonucleotide delivery agent according to claim 11, comprising a structure represented by Formula AA
    wherein the delivery enhancing compound (DEC) moiety is derived from the oligonucleotide delivery enhancing compound according to any one of claims 1 to 9 and is linked to at least one oligonucleotide directly or indirectly.
  15. The oligonucleotide delivery agent according to claim 14, wherein the DEC is  linked with the oligonucleotide via at least one first linking moiety.
  16. The oligonucleotide delivery agent according to claim 14, wherein the TM is linked with the DEC via at least one second linking moiety.
  17. The oligonucleotide delivery agent according to any one of claims 14-16, wherein each of the first linking moiety and the second linking moiety is independently selected from the group consisting of direct bond, -O-, -S-, -C (O) -, -NH-, -N ( (C1-C12) alkyl) -, -N ( (C1-C12) alkyl) -C (O) -O-, -O-C (O) -, -C (O) -O-, -O-C (O) -O-, -C (O) -NH-, -OP (O) 2O-, -OP (O) O-, -OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2-O-, -S (O) 2-O-, -S (O) -O-, - (C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH-(C1-C22) alkylene-, - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-C (O) -, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH- (C1-C22) alkylene-NH-, -C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) O-, -O-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -O-, -C (O) -O- (C1-C22) alkylene-O-C (O) -, -C (O) - (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -, -NH-C (O) - (C1-C22) alkylene-C (O) -NH-, -NH- (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, -NH- (C1-C22) alkylene-CH ( (C1-C22) alkylene-OH) -OP (O) 2O-, -NH- (C1-C22) alkylene-CH ( (C1-C22) alkylene-OH) - (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, -C (O) -NH- (C1-C22) alkylene-NH-C (O) -, - (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) O-, - (C1-C22) alkylene-OP (O) (S) O-, - (C1-C22) alkylene-O-S (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-S (O) 2-O-, - (C1-C22) alkylene-S (O) -O-, -O-P (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-OP (O) 2O-, -O-P (O) -O- (C1-C22) alkylene-OP (O) O-, -OP (O) (S) O- (C1-C22) alkylene-OP (O) (S) O-, -O-S (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-O-S (O) 2-O-, -S (O) 2-O- (C1-C22) alkylene-S (O) 2-O-and -O-S (O) - (C1-C22) alkylene-S (O) -O-; and/or 
    wherein the oligonucleotide is selected from the group consisting of short interfering RNA (siRNA) , small activating RNA (saRNA) , microRNA (miRNA) , antisense oligonucleotide (ASO) and small guide RNA (sgRNA) .
  18. The oligonucleotide delivery agent according to any of claims 14-16, the targeting moiety is one or more selected from the group consisting of ligands, peptides, nucleic acids, oligonucleotides, aptamers, lipids, fatty acids, small molecules, polyethylene glycols, amino acids, cholesterols, carbohydrates, and antibodies or antibody fragments.
  19. The oligonucleotide delivery agent according to claim 13, having a structure represented by any of the formulae AAI to AAXXIV:

    wherein L represents the linking moiety, represents the oligonucleotide delivery enhancing compound, the symbolepresents a double strand oligonucleotide in which each of the strands represents interchangeably a sense strand or an antisense strand, either symmetric or asymmetric independently on each of the ends; the symbolrepresents a single strand oligonucleotide, and each of a, b and c is independently an integer from 1 to 50.
  20. The oligonucleotide delivery agent according to any of claims 11 to 19, wherein at least one hydrogen atom contained in the delivery enhancing compound moiety, the linking moiety, the targeting moiety and/or the oligonucleotide is substituted with deuterium atom.
  21. A pharmaceutical composition, the composition comprising:
    a) the oligonucleotide delivery agent according to any of claims 11 to 20; and
    b) optionally, one or more ingredients selected from the group consisting of pharmaceutically acceptable carrier, excipient, solvent, diluent, stabilizer, dispersant, buffer, compatibilizer, preservative agent and combinations thereof.
  22. A method of modulating the expression of a target gene in a subject, the method comprising the step of administrating the pharmaceutical composition according to claim 21 to a subject.
  23. The method of claim 22, wherein the oligonucleotide or the target gene comprises at least part of the sequence as set forth in at least part of the sequence as set forth in SEQ ID NO 1 to 53.
  24. The method of claim 22, wherein the pharmaceutical composition increases the expression of the target gene.
  25. The method of claim 22, wherein the pharmaceutical composition decreases the expression of the target gene.
  26. The method of any of claims 22-24, wherein the subject is a mammal.
  27. The method of claim 26, wherein the mammal is a rodent.
  28. The method of claim 27, wherein the rodent is a mouse.
  29. The method of claim 27, wherein the rodent is a rat.
  30. The method of claim 26, wherein the mammal is a non-human primate.
  31. The method of claim 26, wherein the mammal is a human.
  32. The method of any of claims 22-24, wherein the target gene is associated with a disease or disorder.
  33. The method of claim 32, wherein the target gene is associated with a disease or disorder in the central nervous system (CNS) , brain, spinal cord, liver, lung, kidney, intestine, pancreas, cholecyst, heart, lymph nodes, spleen, stomach, bladder, muscle or bone.
  34. The method of claim 33, wherein the disease is cancer.
  35. A method of modulating the expression of a target gene, the method comprising contacting a cell with the pharmaceutical composition of claim 21.
  36. The method of claim 35, wherein the oligonucleotide or the target gene comprises at least part of the sequence as set forth in at least part of the sequence as set forth in SEQ ID NO: 1 to 53.
  37. The method of claim 35, wherein the pharmaceutical composition increases the expression of the target gene.
  38. The method of claim 35, wherein the pharmaceutical composition decreases the expression of the target gene.
  39. The method of claim 35, wherein the cell is a mammalian cell.
  40. The method of claim 39, wherein the mammalian cell is a mouse cell.
  41. The method of claim 39, wherein the mammalian cell is a rat cell.
  42. The method of claim 39, wherein the mammalian cell is a non-human primate cell.
  43. The method of claim 39, wherein the mammalian cell is a human cell.
  44. The method of any of claims 35-43, wherein the target gene is associated with a disease or disorder.
  45. The method of claim 44, wherein the target gene is associated with a disease or disorder in the central nervous system (CNS) , brain, spinal cord, liver, lung, kidney, intestine, pancreas, cholecyst, heart, lymph nodes, spleen, stomach, bladder, muscle or bone.
  46. The method of claim 44, wherein the disease is cancer.
PCT/CN2023/102623 2022-06-27 2023-06-27 Oligonucleotide delivery enhancing compounds, pharmaceutical compositions and methods using the same WO2024002046A1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2023300752A AU2023300752A1 (en) 2022-06-27 2023-06-27 Oligonucleotide delivery enhancing compounds, pharmaceutical compositions and methods using the same

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNPCT/CN2022/101636 2022-06-27
CN2022101636 2022-06-27
CN2022111702 2022-08-11
CNPCT/CN2022/111702 2022-08-11

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2024002046A1 true WO2024002046A1 (en) 2024-01-04

Family

ID=89382932

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2023/072927 WO2024001172A1 (en) 2022-06-27 2023-01-18 Oligonucleotide modulators activating complement factor h expression
PCT/CN2023/102623 WO2024002046A1 (en) 2022-06-27 2023-06-27 Oligonucleotide delivery enhancing compounds, pharmaceutical compositions and methods using the same

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2023/072927 WO2024001172A1 (en) 2022-06-27 2023-01-18 Oligonucleotide modulators activating complement factor h expression

Country Status (3)

Country Link
AU (1) AU2023300752A1 (en)
TW (1) TW202400190A (en)
WO (2) WO2024001172A1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118290282A (en) * 2024-03-20 2024-07-05 北京剂泰医药科技有限公司 Ionizable lipid compound, preparation method and application thereof

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105392488A (en) * 2013-05-01 2016-03-09 Isis制药公司 Compositions and methods for modulating apolipoprotein c-iii expression
US20160376585A1 (en) * 2013-07-11 2016-12-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide-ligand conjugates and process for their preparation
CN106459969A (en) * 2014-05-01 2017-02-22 Ionis制药公司 Compositions and methods for modulating growth hormone receptor expression
CN112400018A (en) * 2018-05-07 2021-02-23 阿尔尼拉姆医药品有限公司 Extrahepatic delivery

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009519710A (en) * 2005-12-16 2009-05-21 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー Functional arrays for high-throughput characterization of gene expression regulatory elements
WO2016170348A2 (en) * 2015-04-22 2016-10-27 Mina Therapeutics Limited Sarna compositions and methods of use
US20200208152A1 (en) * 2017-09-08 2020-07-02 Mina Therapeutics Limited Stabilized sarna compositions and methods of use
EP3679138B1 (en) * 2017-09-08 2023-03-22 MiNA Therapeutics Limited Hnf4a sarna compositions and methods of use
CN116121246A (en) * 2018-04-10 2023-05-16 中美瑞康核酸技术(南通)研究院有限公司 Novel small activated RNA
WO2021026476A1 (en) * 2019-08-08 2021-02-11 Mpeg La, L.L.C. Complement targeting with multimeric oligonucleotides

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105392488A (en) * 2013-05-01 2016-03-09 Isis制药公司 Compositions and methods for modulating apolipoprotein c-iii expression
US20160376585A1 (en) * 2013-07-11 2016-12-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide-ligand conjugates and process for their preparation
CN106459969A (en) * 2014-05-01 2017-02-22 Ionis制药公司 Compositions and methods for modulating growth hormone receptor expression
CN112400018A (en) * 2018-05-07 2021-02-23 阿尔尼拉姆医药品有限公司 Extrahepatic delivery

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118290282A (en) * 2024-03-20 2024-07-05 北京剂泰医药科技有限公司 Ionizable lipid compound, preparation method and application thereof

Also Published As

Publication number Publication date
TW202400190A (en) 2024-01-01
AU2023300752A1 (en) 2025-02-13
WO2024001172A1 (en) 2024-01-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7606954B2 (en) Oligonucleotide compositions and methods thereof
AU2016334232B2 (en) Oligonucleotide compositions and methods thereof
US10724035B2 (en) Oligonucleotide compositions and methods thereof
EP3010514B1 (en) Double-stranded antisense nucleic acid with exon-skipping effect
US20230203484A1 (en) Double stranded oligonucleotide compositions and methods relating thereto
JP2022519019A (en) Oligonucleotide composition and its method
US20230277675A1 (en) Systemic delivery of oligonucleotides
JP6808710B2 (en) A composition that stably contains a nucleic acid molecule
KR20100106314A (en) Lipid-modified stranded rna having potent rna interference effect
KR20170098914A (en) Native miRNAs for gene expression control and uses thereof
CN114761557A (en) Chemical modification of small interfering RNA with minimal fluorine content
WO2024002046A1 (en) Oligonucleotide delivery enhancing compounds, pharmaceutical compositions and methods using the same
JP2023509870A (en) Pharmaceutical combinations of therapeutic oligonucleotides targeting HBV and TLR7 agonists for the treatment of HBV
JP2024505035A (en) Compositions and methods for inhibiting gene expression in the central nervous system
US20230392137A1 (en) Oligonucleotide compositions and methods thereof
US20240026358A1 (en) Oligonucleotide compositions and methods thereof
WO2021113851A2 (en) Peptide docking vehicle for targeted nucleic acid delivery
JP2023509872A (en) Pharmaceutical combinations of antiviral agents targeting HBV and/or immunomodulatory agents for the treatment of HBV
TW202406576A (en) Oligonucleotide delivery enhancing compounds, pharmaceutical compositions and methods using the same
WO2024002045A1 (en) Oligonucleotide delivery agents, pharmaceutical compositions and methods using the same
CN119487000A (en) Oligonucleotide delivery enhancing compounds, pharmaceutical compositions and methods of use thereof
WO2025026124A1 (en) C4b gene inhibitor composition and use thereof
US20230220390A1 (en) Nucleic acid molecule having improved stability, and use thereof
RU2797833C1 (en) Oligonucleotide compositions and methods related to them
TW202417049A (en) Oligonucleotide delivery agents, pharmaceutical compositions and methods using the same

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 23830223

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 202547005890

Country of ref document: IN

Ref document number: AU2023300752

Country of ref document: AU

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2023830223

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2023830223

Country of ref document: EP

Effective date: 20250127

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112024027352

Country of ref document: BR