MX2010011845A - Agonistas del receptor y2 y/o y4 de larga accion. - Google Patents

Agonistas del receptor y2 y/o y4 de larga accion.

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Abstract

La presente invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo derivado con una o más cadenas laterales de unión a albúmina de suero humano que comprenden un grupo tetrazol o ácido carboxílico distal. Además la invención se refiere a composiciones de la presente y a métodos de tratamiento de afecciones que respondan a modulación del receptor Y.

Description

AGONISTAS DEL RECEPTOR Y2 Y/O Y4 DE LARGA ACCION Campo de la Invención Esta invención se refiere al campo de péptidos terapéuticos, es decir, a nuevos derivados de péptidos prolongados tales como derivados de Péptido YY (PYY) y Polipéptido Pancreático (PP) .
Antecedentes de la Invención PYY es liberado durante una comida de células L en el intestino delgado distal y el colon. PYY activa los subtipos de receptores Yl , Y2 y Y5. Se sabe que el péptido PYY tiene efectos periféricos en el tracto gastrointestinal (GI) y que también actúa centralmente como una señal de saciedad. PYY es liberado como PYY(l-36) pero es cortado a PYY(3-36) que constituye aproximadamente 50% del PYY circulante. La enzima responsable de la degradación es dipeptidil peptidasa IV (DPPIV) . PYY(3-36) presenta selectividad para el receptor Y2 sobre los receptores Yl, Y4 y Y5.
PP es una hormona seleccionada de las células endocrinas en isletas pancreáticas y su liberación es estimulada por consumo de alimento. Actúa preferentemente como un agonista del receptor Y4 pero también presenta cierta afinidad para el receptor Y5. Se sabe que el PP reduce el consumo de alimento e incrementa potencialmente el gasto de REF . : 214875 energía. Se considera que los subtipos de receptor Y2 y Y4 son reguladores importantes de consumo de alimento.
Los agonistas que son selectivos sólo para Y2 o Y2 sobre los receptores Yl y Y5 o agonistas que son selectivos para receptores tanto Y2 como Y4 sobre los receptores Yl y Y5 se consideran benéficos para el tratamiento de afecciones tales como obesidad. En el diseño de estos fármacos péptidos es importante que el efecto agonista en el Yl sea relativamente bajo, toda vez que esto llevará a efectos secundarios no deseados (por ejemplo, presión sanguínea incrementada) . Además, la activación del receptor Y5 no se desea toda vez que incrementará el consumo de alimento. Sin embargo, el receptor Y5 es expresado en áreas del SNC en donde péptidos circulantes no se espera que obtengan acceso.
En consecuencia, PYY y PP no son óptimos para usarse como fármacos farmacéuticos debido a la especificidad de unión a receptor relativamente amplia. PYY actuará en los receptores Yl y Y5 además del receptor Y2 y PP actuará con el receptor Y5 además del receptor Y4. Aparte, tanto PYY (3 -36) como PP son rápidamente degradados y presentan propiedades farmacocinéticas sub-óptimas, de esta manera los péptidos tienen que ser administrados al menos una vez al día o dos veces al día. La vida media de PYY (3 -36) se ha reportado que es de < 30 minutos en cerdos (Ito T et al., Journal of Endocrinology (2006), 191, pág. 113-119) y la vida media de PP se ha reportado que es de 7 minutos en hombre (Adrián T.E., et al., Gut (1978), 19, pág . 907-909).
Para el tratamiento de afecciones, tales como obesidad, que responden a la modulación del receptor Y, sería atractivo usar análogos de PYY o PP que fueran específicos para los subtipos Y2 o Y4 del receptor Y únicamente, y análogos que actuaran tanto en los subtipos de receptor Y2 como Y4 simultáneamente y en forma importante que presenten también propiedades farmacocinéticas prolongadas y de esta manera puedan usarse en un régimen de dosificación con frecuencia de administración más baja que los péptidos PYY, PYY (3-36) o PP humanos.
Breve Descripción de la Invención La presente invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo, en donde al menos un residuo de aminoácido y/o el extremo N y/o C de la estructura de base del péptido es derivado con una cadena lateral de unión a albúmina de suero definida por A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C- , o A-C-, en donde en donde p se selecciona del grupo que consiste de 10, 11, 12, 13, 14, 15 y 16 y d se selecciona del grupo que consiste en 0, l, 2, 3, 4 y 5, y -B- se selecciona del grupo que consiste en en donde x se selecciona del grupo que consiste en 0 , 1, 2, 3 y 4 , y y se selecciona del grupo que consiste en 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12; o A- es en donde n se selecciona del grupo que consiste en 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 y 19, y -B- se selecciona del grupo que consiste en en donde x se selecciona del grupo que consiste en 0 , 1, 2, 3 y 4; y -C- se selecciona del grupo que consiste en en donde b y e se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en 0, l y 2, y c y f se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en 0 , 1 y 2 con la condición de que cuando c sea 0 b sea 1 ó 2, c sea 1 ó 2 b sea 0, f sea 0 e sea 1 ó 2 , f sea 1 ó 2 e sea 0, y con la condición de que cuando A- sea -C- puede ser eliminado; y -D- sea fijado al residuo de aminoácido y sea un separador .
En un aspecto la invención s se refiere a una composición que comprende un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo como el definido en la presente y uno o más excipientes farmacéuticos.
En un aspecto la invención se refiere a un método para el tratamiento de una afección que responda a la modulación del receptor Y de entre la administración de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo como el definido en cualquiera de las modalidades anteriores.
En un aspecto la invención se refiere al uso de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo como el definido en la presente en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una afección que responda a la modulación del receptor Y, tal como obesidad o enfermedades relacionadas con obesidad, por ejemplo, reducción de consumo de alimento y/o incremento en gasto de energía.
En un aspecto,, la invención se refiere al uso de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo como el definido en la presente para su administración en un mamífero, en donde el derivado muestra propiedades prolongadas en comparación con los compuestos de PP y PYY humanos .
Breve Dscripción de las Figuras La figura 1A muestra el efecto en el consumo de alimento (BioDAQ) en ratones C57BL después de la administración de análogos de PYY (3-36) y PYY. Los compuestos probados son vehículo, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4. La dosis fue 1 µp???/kg s.c. oid.
La figura IB muestra el efecto en consumo de alimento (BióDAQ) en ratones C57BL después de la administración de análogos de PYY como se describió para la figura 1A pero representado usando un método estadístico diferente.
La figura 2 muestra el efecto en consumo de alimento (BioDAQ) en ratones C57BL magros después de la administración de SEQ ID NO: 2 (hPP(l-36)) y los análogos de PP SEQ ID NO: 29 y SEQ ID NO: 30 a una dosis de 1 µt???/kg s.c.
La figura 3 muestra el efecto en el consumo de alimento (BioDAQ) en ratones C57BL después de la administración de SEQ ID NO: 43 a una dosis de 0.03 y 0.1 mol/kg s.c.
La figura 4 muestra el efecto en el consumo de alimentos (BioDAQ) en ratones C57BL magros después de la administración de SEQ ID NO: 23 a una dosis de 0.3 y 1.0 mol/kg s.c.
La figura 5 muestra el efecto en el consumo de alimento (BioDAQ) en ratones C57BL magros después de la administración de SEQ ID NO: 40 a una dosis de 0.1, 0.3 y 1.0 µt???/kg s.c.
La figura 6 muestra el cambio en peso corporal en ratones ob/ob después de la administración de SEQ ID NO : 3 a una dosis de 0.3 y 1.0 mol/kg s.c.
La figura 7 muestra el cambio de porcentaje de peso a partir de la línea de base en ratones ob/ob el día 14 del tratamiento con SEQ ID NO : 3 a una dosis de 0.3 y 1.0 µt???/kg s . c .
La figura 8 muestra la determinación del perfil farmacocinético en mini -cerdos. El compuesto es probado en SEQ ID NO: 3. La dosis fue de 6 nmol/kg i.v.
La figura 9 muestra el efecto en el consumo de alimento (BioDAQ) en ratones C57BL magros después de la administración de SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58 y SEQ ID NO: 59 a una dosis de 1.0 s.c.
La figura 10 muestra el efecto en el consumo de alimento (BioDAQ) en ratones C57BL magros después de la administración de SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO : 45 y SEQ ID NO: 55 a una dosis de 1.0 µt???/kg s.c.
La figura 11 muestra el efecto en el consumo de alimentos después de una sola administración s.c. de SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58 y SEQ ID NO: 59 a una dosis de 1.0 µt???/kg en ratas magras antes del inicio de la oscuridad.
Descripción Detallada de la Invención Las propiedades farmacocinéticas prolongadas pueden lograrse al fijar el fármaco de péptido de interés a albúmina de suero in vivo. Esta fijación puede ser ya sea covalente o no covalente. Al fijar ácidos grasos o análogos de los mismos al péptido de interés puede unirse de manera no covalente a albúmina. Esta invención describe el diseño de péptidos con cadenas laterales nuevas unidas que se unen fuertemente a albúmina y prolongan la duración de acción del fármaco de péptido con el resultado de que el fármaco de péptido sólo tiene que ser dosificado una vez al día o como alternativa una vez por semana.
Los aglutinantes de albúmina de ácido graso descritos en la presente son estructuralmente diferentes en comparación con aglutinantes de albúmina de ácido graso publicados previamente toda vez que éstos nuevos análogos de ácido graso presentan un grupo carboxílico distal o un grupo tetrazol . Esto incrementa la unión a albúmina más de 10 veces en comparación con los ácidos grasos que presentan un grupo metilo. Esto lleva a análogos de péptidos que son considerablemente más prolongados y presentará perfil de dosificación una vez por semana.
Los péptidos acilados han sido descritos previamente, tales como Levemir* ( O 95/07931) y Liraglutide ( O 98/08871) . Sin embargo, los análogos de PYY o PP adecuados para su administración con frecuencia más baja que administración una vez al día requerirían que la unión a albúmina de suero fuera más alta que la ejemplificada con la proteína y péptido mencionados arriba.
En un aspecto la invención proporciona un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo con unperfil PK mejorado. En un aspecto, la invención proporciona un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo con una cadena lateral de unión a albúmina, unido opcionalmente por medio de un separador adecuado, que presenta propiedades prolongadas que lo hacen adecuado para su administración con una frecuencia de una vez al día o menos, tal como en un régimen de dosificación de una vez por semana, dos veces al mes o una vez al mes . El asa de unión a albúmina de esta invención tiene un grupo de ácido carboxílico o tetrazol distal. En un aspecto el asa de unión a albúmina comprende un diácido graso. En un aspecto el asa de unión a albúmina es un diácido graso.
En un aspecto la invención proporciona un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo con efecto de unión a albúmina de alta afinidad. En un aspecto, el efecto de unión a albúmina de alta afinidad se define como al menos 10 veces, tal como al menos 20 veces, al menos 50 veces o al menos 100 veces más alto que la unión a albúmina del péptido especial de acuerdo con la invención en relación a PYY humano, PYY (3-36) , o péptido PP o análogos no acilados del mismo.
En un aspecto la invención proporciona un derivado de péptido PYY o PP con biodisponibilidad mejorada en comparación con otros análogos descritos en cualquier lado en la literatura, tal como péptido PYY, PYY(3-36) o PP humano o análogos del mismo. En un aspecto la invención proporciona un derivado de péptido PYY o PP con biodisponibilidad oral mejorada a diferencia de otros análogos descritos en cualquier lado en la literatura, tales como péptido PYY, PYY(3-36), o péptido PP o análogos no acilados del mismo.
En un aspecto la invención proporciona un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo con estabilidad enzimática mejorada a diferencia de otros análogos descritos en cualquiera lado en la literatura, tales como péptido PYY, PYY(3-36) humano, o péptido PP o análogos no acilados del mismo .
El término "agonista" significa cualquier compuesto que activa un receptor objetivo y desarrolla uno o más de los efectos in vivo o in vitro desarrollados por el agonista endógeno para el receptor.
Las "propiedades prolongadas" de un péptido es acción prolongada de duración del péptido que se traduce en dosis con menos frecuencia, por ejemplo, dosis una vez al día o como alternativa una vez por semana. Las propiedades prolongadas de los derivados del péptido PYY o PP o análogos del mismo de acuerdo con la invención se podrían manifestar como vida media én plasma prolongada o actividad biológica prolongada en comparación con el péptido PYY, PYY (3-36) humano, o péptido PP o análogos no acilados del mismo. En un aspecto la prolongación de los compuestos de la invención se determina al monitorear la concentración de los mismos en plasma después de administración s.c. o i.v. a animales, tales como cerdos saludables, usando métodos como los descritos en la presente, tales como el ensayo PK de mini-cerdos. Para comparación también se sigue la concentración en plasma de péptido PYY, PYY (3-36) humano, o péptido PP o análogos no acilados del mismo después de administración s.c. o i.v.. La prolongación de otros compuestos PYY, PYY (3-36) humano, o PP de la invención puede determinarse de la misma manera. En un aspecto la prolongación de los compuestos de la invención se determina al monitorear la duración del efecto de los compuestos en un ensayo biológico tal como un ensayo para consumo de alimento en ratones, por ejemplo, ensayo de realimentación inducida en ayunas, después de administración s.c. de los compuestos. Para comparación también se sigue la duración del efecto de péptido PYY (3-36) humano, péptido PP o análogos no acilados del mismo después de administración s.c.
Los términos "PYY humano" y "hPYY" o "PP humano" y "hPP" intentan significar PYY (1-36) de acuerdo con SEQ ID NO: 1, o como alternativa PYY (3 -36) de acuerdo con SEQ ID NO: 1 y con una supresión de los aminoácidos del extremo N en la posición 1 y 2, y PP(l-36) de acuerdo con SEQ ID NO: 2, respectivamente. En un aspecto el término PYY intenta referirse a PYY humano. En un aspecto el término PP intenta referirse a PP humano.
Péptido YY (PYY) y péptido pancreático (PP) Péptido YY (PYY) y péptido pancreático (PP) pertenecen ambos a un grupo de péptidos de la familia de doblez PP a los cuales pertenece también el neuropéptido Y (NPY) . Son todos homólogos y secretados naturalmente como péptidos de 36 aminoácidos con una amida del extremo C. Se caracterizan por un doblez tridimensional común, el doblez PP, el cual se considera como una estructura muy estable. La secuencia de aminoácidos de PYY(l-36) y PP(l-36) humano se muestra en SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2, respectivamente.
Los determinantes para especificidad de PYY hacia el receptor Y2 se ubican principalmente en la parte del extremo C del péptido. Los determinantes para especificidad de PYY hacia el receptor Yl se ubican tanto en el extremo N como C. El péptido PYY (3-36) que es de origen natural es relativamente selectivo hacia Y2 a diferencia de Yl y este péptido está actualmente en pruebas clínicas.
PP es selectivo hacia el receptor Y4 y los determinantes para esta especificidad se ubican principalmente en la parte del extremo N. La parte del extremo C de PP difiere principalmente por un residuo importante en comparación con PYY. En PP la posición 34 es un residuo de prolina (Pro34) mientras que en PYY este residuo es un Gln (Gln34) . Se sabe que al mutar el Pro34 a un Gln34, PP se vuelve selectivo de Y2 además de especificidad para Y4 (J. Jorgensen et al, 1990, Eur. J. Pharm 186, 105-114) . Este mecanismo de doble acción ha mostrado dar efectos benéficos en la regulación del apetito y es de esta manera un tratamiento potencial de obesidad.
Receptores de péptidos de doblez PP En un aspecto esta invención se refiere a derivados de péptido PYY o PP o análogos del mismo que son selectivos para el receptor Y4 sobre los receptores Yl, Y 2 y Y5 y tienen propiedades farmacocinéticas prolongadas. En un aspecto esta invención se refiere a derivados de péptidos PYY o PP o análogos del mismo los cuales son selectivos para el receptor Y2 sobre los receptores Yl, Y4 y Y5 y tienen propiedades farmacocinéticas prolongadas. En un aspecto, esta invención se refiere a derivados de péptido PYY o PP o análogos del mismo que son selectivos para los receptores Y2 y Y4 sobre los receptores Yl y Y5 y tienen propiedades farmacocinéticas prolongadas.
En un aspecto que los péptidos que sean "selectivos" para receptores específicos sobre otros receptores se refiere a péptidos que presentan al menos 10 veces, tal como al menos 20 veces, al menos 50 veces o al menos 100 veces más alta potencia para un receptor Y sobre los otros receptores Y según se mide in vitro en un ensayo para función de receptor, tal como un ensayo para movilización de calcio, y se compara por valores EC50.
Los péptidos de doblez PP o análogos de los mismos han sido sugeridos para usarse en el tratamiento de obesidad y enfermedades asociadas con base en los efectos demostrados de ciertos de estos péptidos en modelos animales y en el hombre y con base en el hecho de que personas obesas tienen bajos niveles básales de PP y PYY así como respuestas a alimento más bajas de estos péptidos. Más aún, los agonistas tanto de Y2 como de Y4 han demostrado tener efectos anti-secretores y pro-absorbentes en el tracto gastrointestinal (GI) . Se ha sugerido el uso potencial de agonistas de Y2 y Y4 en el tratamiento de un número de trastornos gastrointestinales .
Para el tratamiento de afecciones que responden a la modulación del receptor Y4 , tales como obesidad e hipersecreción intestinal, sería deseable usar agonistas selectivos del receptor Y4 prolongados. La vida media relativamente corta de PP limita el uso terapéutico de este péptido ya que un nivel de exposición uniforme requeriría de dosificación frecuente lo cual sería altamente inconveniente para los pacientes. Ya que la activación del receptor Yl puede causar efectos secundarios cardiovasculares y la activación del receptor Y2 puede causar náusea y vómito limitadores de dosis, sería deseable conservar la selectividad para el receptor Y4 del PP.
Para el tratamiento dé afecciones que responden a la modulación del receptor Y2 tales como obesidad e hipersecreción intestinal, sería deseable usar agonistas selectivos del receptor Y2 prolongados. La vida media relativamente corta de PYY(3-36) limita el uso terapéutico de este péptido ya que un nivel de exposición uniforme requeriría de dosificación frecuente lo cual sería altamente inconveniente para los pacientes. Ya que la activación del receptor Yl y Y5 puede causar efectos secundarios cardiovasculares y la activación de receptor Y4 podría causar efectos secundarios hasta el momento desconocidos sería deseable conservar la selectividad para el receptor Y2 de PYYO-36) .
Para el tratamiento de afecciones que responden a modulación de receptor tanto Y2 como Y4 , tales como obesidad e hipersecreción intestinal, sería deseable usar agonistas selectivos del receptor Y2 y Y4 de doble acción prolongados ya que un efecto aditivo podría obtenerse de la activación simultánea de los receptores Y2 y Y4 en comparación con la activación de los receptores Y2 o Y4 solos.
Análogos de péptido PYY o PP El término "análogo" según se usa en la presente en referencia a un péptido significa un péptido modificado en el que uno o más residuos de aminoácido del péptido han sido sustituidos por otros residuos de aminoácido y/o en donde uno o más residuos de aminoácido han sido suprimidos del péptido y/o en donde uno o más de residuos de aminoácidos han sido añadidos al péptido y/o en donde uno o más residuos de aminoácido del péptido han sido modificados. Esta adición o supresión de residuos de aminoácido puede tener lugar en el extremo N del péptido y/o en el extremo C del péptido. Una nomenclatura simple se usa para describir los compuestos de acuerdo con la invención, por ejemplo, [Gln34] hPP (2 -36 ) designa un análogo del PP humano, en el que la prolina de origen natural en la posición 34 ha sido sustituida con Gln y la alanina de origen natural en la posición 1 ha sido suprimida. El péptido puede derivarse de vertebrados tales como humanos, ratón, borregos, cabras, vacas o caballos. El término "vertebrado" significa miembros del subfilo Vertebrata, una división primaria del filo Chordata que incluye los peces, anfibios, reptiles, aves y mamíferos, todos los cuales se caracterizan por una columna espinal segmentada y una cabeza distinta bien diferenciada. El término "mamífero" significa humanos así como todos los demás miembros de sangre caliente del reino animal que poseen un mecanismo homeostático en la clase Mammalia, por ejemplo, mamíferos de compañía, mamíferos de zoológico y mamíferos de fuente alimenticia. Algunos ejemplos de mamíferos de compañía son caninos (por ejemplo, perros) , felinos (por ejemplo, gatos) y caballos; algunos ejemplos de mamíferos de fuente alimenticia son cerdos, ganado, borregos y similares.
En un aspecto el mamífero es un humano o mamífero de compañía. En un aspecto el mamífero es un humano, masculino o femenino .
El término "polipéptido" o "péptido" según se usa en la presente significa un compuesto que está compuesto de al menos cinco aminoácidos constituyentes conectados por enlaces péptidos. Todos los aminoácidos para los cuales el isómero óptico no es indicado se entiende que significan el isómero L. Sin embargo, también se contempla dentro del alcance de la invención los residuos de D-aminoácido de uno o más de los aminoácidos .
Los aminoácidos constituyentes de los péptidos de acuerdo con la invención pueden provenir del grupo de los aminoácidos codificados por el código genético y pueden ser aminoácidos naturales que no sean codificados por el código genético, así como aminoácidos sintéticos. Los aminoácidos naturales que no son codificados por el código genético son por ejemplo, ?-carboxiglutamato, ' ornitina, fosfoserina, D-alanina y D-glutamina. Los aminoácidos sintéticos comprenden aminoácidos fabricados por síntesis química, es decir, isómeros D de los aminoácidos codificados por el código genético tales como D-alanina y D-leucina, Aib (ácido 0C-aminoisobutírico) , Abu (ácido a-aminobutírico) , Tle (ter-butilglicina) , ß-alanina, ácido 3 -aminometilbenzoico, ácido antranílico .
Los 22 aminoácidos proteinogénicos son: alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, cistina, glutamina, ácido glutámico, glicina, histidina, hidroxipirrolina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina , prolina, serina, treonina, triptofan, tirosina, valina.
De esta manera, un aminoácido no proteinogénico es una porción que puede ser incorporada en un péptido por medio de enlaces péptidos pero no es un aminoácido proteogénico . Ejemplos son ?-carboxiglutamato, ornitina, fosfoserina, los D-aminoácidos tales como D-alanina y D-glutamina. Los aminoácidos no proteogénicos sintéticos comprenden aminoácidos fabricados mediante síntesis química, es decir, isómeros D de los aminoácidos codificados por el código genético tales como D-alanina y D-leucina, Aib (ácido oc-aminoisobutírico) , Abu (ácido oc-aminobutírico) , Tle (ter-butilglicina) , ácido 4 -aminometilbenzoico, ácido antranílico, des-amino-histidina, los análogos beta de aminoácidos tales como ß-alanina etc., D-histidina, desa-mino-histidina , 2-amino-histidina, ß-hidroxi-histidina, homohistidina , Noc-acetil-histidina, a- fluorometil -histidina , a-metil-histidina, 3 -piridilalanina, 2 -piridilalanina o 4 -piridilalanina , ácido (1-aminociclopropil) carboxílico, ácido (1-aminociclobutil ) carboxílico, ácido (1-aminociclopentil ) carboxílico, ácido (1- aminociclohexil) carboxilico, ácido (1-aminocicloheptil ) carboxilico o ácido (1-aminociclooctil ) carboxilico.
Los aminoácidos no naturales para usarse en la invención incluyen, por ejemplo, tiotirosina, ornitina, 3-mercaptofenilalanina , 3- o 4-aminofenilalanina, 3 ó 4-acetilfenilalanina, 2 ó 3 -hidroxifenilalanina (o- o m-tirosina) , hidroximetil -glicina , aminoetilglicina, 1-metil-l-mercaptoetilglicina, aminoetiltioetilglicina y mercaptoetilglicina . Muchos de los aminoácidos no naturales útiles en la presente invención están disponibles comercialmente . Otros pueden prepararse mediante métodos conocidos en la técnica.
En un aspecto, los péptidos de la invención tienen al menos 34 aminoácidos de largo. En otras modalidades, los péptidos pueden tener al menos 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32 ó 33 aminoácidos de largo. Además, en un aspecto, los péptidos de la invención incluyen sólo residuos de L-aminoácido naturales y/o residuos de L-aminoácido naturales modificados. Como alternativa, en un aspecto, los péptidos de la invención incluyen residuos de aminoácido no naturales.
En modalidades de la invención un máximo de 17 aminoácidos han sido modificados en comparación con PYY (SEQ ID N0:1) o PP (SEQ ID N0:2). En modalidades de la invención un máximo de 15 aminoácidos han sido modificados en comparación con PYY (SEQ ID N0:1) o PP (SEQ ID N0:3). En modalidades de la invención un máximo de 10 aminoácidos han sido modificados en comparación con PYY (SEQ ID N0:1) o PP (SEQ ID NO: 2) . En modalidades de la invención un máximo de 8 aminoácidos han sido modificados en comparación con PYY (SEQ ID NO: 1) o PP (SEQ ID NO: 2) . En modalidades de la invención un máximo de 7 aminoácidos han sido modificados en comparación con PYY (SEQ ID NO: 1) o PP (SEQ ID NO: 2). En modalidades de la invención un máximo de 6 aminoácidos han sido modificados en comparación con PYY (SEQ ID NO: 1) o PP (SEQ ID NO: 2) . En modalidades de la invención un máximo de 5 aminoácidos han sido modificados en comparación con PYY (SEQ ID NO: 1) o PP (SEQ ID NO : 2) . En modalidades de la invención un máximo de 4 aminoácidos han sido modificados en comparación con PYY (SEQ ID NO : 1) o PP (SEQ ID NO : 2) . En modalidades de la invención un máximo de 3 aminoácidos han sido modificados en comparación con PYY (SEQ ID NO : 1) o PP (SEQ ID NO: 2) . En modalidades de la invención un máximo de 2 aminoácidos han sido modificados en comparación con PYY (SEQ ID NO: 1) o PP (SEQ ID NO: 2) . En modalidades de la invención un máximo de 1 aminoácidos han sido modificados en comparación con PYY (SEQ ID NO : 1) o PP (SEQ ID NO: 2) .
En otra modalidad, los péptidos de la invención pueden exhibir al menos 60%, 65%, 70%, 80% o 90% de identidad de secuencia con un PYY(l-36), PYY(3-36) o PP(l-36) sobre la longitud completa del PYY(l-36), PYY(3-36) o PP(l-36) respectivamente. En otra modalidad más, los péptidos de la invención pueden exhibir al menos 50%, 60%, 65%, 70%, 80% o 90% de identidad de secuencia con un NPY. Como un ejemplo de un método para la determinación de identidad de secuencia entre dos análogos los dos péptidos [Gln34] PP (1-36) y PP(1-36) son alineados. La identidad de secuencia del análogo Gln34 en relación con PP(l-36) se da por el número de residuos idénticos alineados menos el número de residuos diferentes dividido entre el número total de residuos en PP(l-36). En consecuencia, en ese ejemplo la identidad de secuencia es (36-1) /36.
En un aspecto, la presente invención se refiere a péptidos que comprenden al menos dos motivos de doblez PP, en donde los por lo menos dos motivos de doblez PP incluyen al menos el motivo de doblez PP de poliprolina del extremo N y el motivo de doblez PP de cola del extremo C, y el péptido de doblez PP no incluye ningún residuo de aminoácido no natural.
En un aspecto, los péptidos de la invención incluyen derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos. En un aspecto de la invención, los péptidos de la invención incluyen péptidos que quiméricos de doblez PP que comprenden un fragmento de un péptido PP, PYY o NPY unido covalentemente a por lo menos un fragmento adicional de un péptido PP, PYY o NPY, en donde cada fragmento de PP, PYY o NPY incluye un motivo de doblez PP .
Más particularmente, en un aspecto, la presente invención se refiere a derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos que incluyen una o más modificaciones de secuencia de aminoácidos. Estas modificaciones incluyen sustituciones, inserciones y/o supresiones, solas o en combinación. En un aspecto específico, los derivados de péptidos PYY o PP o análogos de los mismos de la invención incluyen una o más modificaciones de un residuo de aminoácido "no esencial". En el contexto de la invención, un residuo de aminoácido "no esencial" es un residuo que puede ser alterado, es decir, suprimido o sustituido, en la secuencia de aminoácidos de PYY o PP humano sin abolir o reducir sustancialmente la actividad del derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo del análogo de péptido PYY o PP, respectivamente .
En un aspecto de la invención, el extremo C del derivado de acuerdo con la invención puede ser terminado ya sea como un ácido o amida. En un aspecto específico, el extremo C del derivado de la invención es una amida.
Sustituciones . En un aspecto, los derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos de la invención pueden tener una o más sustituciones en la secuencia de aminoácidos de PYY o PP humano, respectivamente, solos o en combinación con una o más inserciones o supresiones. En un aspecto, la sustitución no abóle o reduce sustancialmente la actividad del derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo del péptido o análogo de PYY o PP, respectivamente. En un aspecto, la presente invención se refiere a derivados de péptidos PYY o PP o análogos de los mismos que tienen una sola sustitución, o una sustitución consecutiva o no consecutiva de más de un residuo de aminoácido en la secuencia de aminoácidos de PYY o PP humano, respectivamente. En un aspecto, los derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos de la invención incluye una, dos o tres sustituciones de aminoácido.
En un aspecto, los residuos de aminoácido de PYY humano en la región del extremo C helicoidal de PYY (por ejemplo, residuos 20, 24, 25, 27 y 29), los residuos del extremo de cola (32-36) y/o las prolinas del extremo N en la posición 5 y 8 no son sustituidos. En un aspecto, los residuos de aminoácido no son sustituidos en las posiciones 32 a 36 de PYY humano. En un aspecto, residuos de aminoácido de PYY humano no son sustituidos en una o más posiciones de secuencia de aminoácido seleccionadas de: 5, 7, 8, 20, 24, 25, 27, 29, 32, 33, 34, 35, 36 y cualquier combinación de las mismas .
En un aspecto los aminoácidos pueden ser sustituidos por sustitución conservadora. El término "sustitución conservadora" según se usa en la presente indica que uno o más aminoácidos son reemplazados por otro residuo biológicamente similar. Ejemplos incluyen la sustitución de residuos de aminoácido con características similares, por ejemplo, aminoácidos pequeños, aminoácidos ácidos, aminoácidos polares, aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos y aminoácidos aromáticos. Por ejemplo, en una modalidad preferida de la invención residuos de Met son sustituidos con norleucina (Nle) o con leucina, isoleucina o valina, los cuales -a diferencia de Met- no son fácilmente oxidados. Otro ejemplo de una sustitución conservadora con un residuo que normalmente no se encuentra en péptidos y proteínas de mamífero endógenos sería la sustitución conservadora de Arg o Lys por ejemplo con ornitina, canavanina, aminoetilcisteína u otro aminoácido básico. Para información adicional con respecto a sustituciones fenotípicamente silenciosas en péptidos y proteínas véase, por ejemplo, Bowie et al., Science 247, 1306-1310, 1990. Los análogos sustituidos conservadoramente de la invención pueden tener, por ejemplo, hasta diez sustituciones conservadoras, o en un aspecto hasta cinco, o en otra modalidad más tres o menos .
En un aspecto, los derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos de la invención pueden incluir sustituciones de uno o más no aminoácidos o aminoácidos no naturales por ejemplo, miméticos de aminoácido, en la secuencia de PYY o PP, respectivamente. En una modalidad preferida, los no aminoácidos insertados en la secuencia de PYY o PP pueden ser miméticos de doblez beta o moléculas enlazadoras, tales como -NH-X-CO-, en donde X = (CH2)n (en donde n puede ser 2-20) o -NH-CH2CH2 ( -0-CH2CH2 -0- ) m-CH-CO- (en donde m = 1-5) . Las moléculas enlazadoras preferidas incluyen aminocapropilo ("Acá"), beta-alanilo y 8-amino-3,6-dioxaoctanoilo, los miméticos de doblez beta están disponibles comercialmente (BioQuadrant Inc, Quebec, Canadá) y han sido descritos en la literatura (Hanessian et al, Tetrahedron 12789-854 (1997); Gu et al., Tetrahedron Letters 44: 5863-6 (2003); Bourguet et al., Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 13:1561-4 (2003); Grieco et al., Tetrahedron Letters 43: 6297-9 (2002); Souers et al., Tetrahedron 57: 7431-48 (2001); Tsai et al., Bioorganic and Medicinal Chemistry 7: 29-38 (1999); Virgilio et al., Tetrahedron 53:6635-44 (1997)).
Supresiones y truncamientos. En un aspecto, los derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos de la invención pueden tener uno o más residuos de aminoácido suprimidos en la secuencia de aminoácidos de PYY o PP humano, respectivamente, solos o en combinación con una o más inserciones o sustituciones. En un aspecto, los derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos de la invención pueden tener uno o más residuos de aminoácido suprimidos del extremo N o el extremo C de PYY o PP humano, respectivamente. En un aspecto, los derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos de la invención pueden tener uno o más residuos de aminoácido suprimidos en posiciones de aminoácido 2 a 35 de PYY o PP humano, respectivamente. Estas supresiones pueden tener más de una supresión consecutiva o no consecutiva en posiciones de aminoácido 2 a 35 de PYY o PP humano. En una modalidad preferida, los residuos de aminoácido en las posiciones 24 a 36 de PYY humano o PP no son suprimidos .
En un aspecto, los péptidos de doblez PP de la invención pueden incluir truncamientos en el extremo N o C, o supresiones internas en las posiciones de aminoácido 2 a 35 siempre y cuando al menos la actividad biológica de un péptido de doblez PP nativo se conserve. En modalidades preferidas, los residuos de aminoácido en las posiciones 5 a 8 y 24 a 36, más específicamente 5 a 8 y 32 a 35 no son suprimidas .
Inserciones . En un aspecto, los derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos de la invención pueden tener uno o más residuos de aminoácido insertados en las secuencia de aminoácidos de PYY o PP humano, respectivamente, solo o en combinación con una o más supresiones o sustituciones. En un aspecto, la presente invención se refiere a derivados de péptidos PYY o PP o análogos de los mismos que tienen una sola inserción, o inserciones consecutivas o no consecutivas de más de un residuo de aminoácido en la secuencia de aminoácidos de PYY o PP humano. En una modalidad más, uno o más aminoácidos pueden ser insertados en el extremo N o C del análogo de péptido. En otra modalidad más, residuos de aminoácido no son insertados en las posiciones 24 a 36 de PYY o PP humano, respectivamente.
En un aspecto, los derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos de la invención pueden incluir inserciones de uno o más aminoácidos no naturales y/o no aminoácidos en la secuencia de PYY o PP, respectivamente. En otra modalidad más, los aminoácidos no naturales insertados en la secuencia de PYY o PP humano pueden ser miméticos de doblez beta o moléculas enlazadoras . Ejemplos de moléculas enlazadoras incluyen aminocapropilo ("Acá"), beta-alanilo y 8 -amino-3 , 6 -dioxaoctanoilo .
En un aspecto la invención se refiere a miméticos de PYY o PP caracterizados por una supresión de los residuos 5-24 que son sustituidos por un enlazador tal como pero no restringido a: aminocaproilo ("Acá"), beta-alanilo y 8-amino-3 , 6 -dioxaoctanoilo . Además, estos miméticos son establecidos, por ejemplo, por un S-S mediante Cys en la posición 2 y un D-Cys en la posición 27.
En otra modalidad más, los péptidos de doblez PP son establecidos por un puente de lactama entre un Lys y un Glu. Como un ejemplo, pero no restringido al mismo, es un Lys en la posición 28 y Glu en la posición 32. En un aspecto de la invención, el análogo de péptido PYY o PP incluye combinaciones de las modificaciones descritas arriba, es decir, supresión, truncamiento, inserción y sustitución. En un aspecto de la invención, el análogo de un péptido PYY o PP incluye una, dos ó tres sustituciones de aminoácido.
En la secuencia de PP, AsplO es particularmente propenso a ciclización en solución para formar un imidato cíclico el cual abre su anillo para formar mezclas del alfa y beta-aspartato con la mezcla concomitante de estereoquímica. Pares de péptidos (v) , (vi) y (viii) de la invención ese residuo ha sido reemplazado por Glu. Esta sustitución conserva la distribución potencial electrostática espacial dentro de los péptidos y de esta manera la estabilidad total del péptido así como su solubilidad. Ya que Glu en la posición 10 no sufre la ciclización/apertura de anillo de análogos para formar gamma-Glu tiene el efecto benéfico de mejorar el grueso y la estabilidad en solución del péptido como un agente farmacéutico en comparación con sus contrapartes Asp 10. Estabilidad de solución mejorada lleva a rendimientos sintéticos incrementados y reduce el requerimiento de purificación de producción de residuos costosa y problemática del producto deseado a partir de la impureza de beta-Asp estrechamente emparentada. En un aspecto un asa de unión a albúmina de acuerdo con la invención puede ser fijada a AsplO en la secuencia de PP.
En los péptidos PYY o PP de esta invención, Met puede ser sustituido con un residuo que no sea propenso a esta alteración. Por ejemplo, los residuos Met 17 y Met 30 en la secuencia de péptido humano pueden sufrir potencialmente oxidación después de almacenamiento en solución. Específicamente, Met puede ser sustituido con Nle lo cual impida la oxidación en esta . posición y conserve la estructura de la cadena lateral alifática ya que Nle es un bio-isóstero para Met en los péptidos PYY o PP de esta invención. También se pueden usar Leu, lie y Val como isósteros para Met. Además, los aminoácidos de promoción de hélice alfa alifáticos ácido 1-aminociclohexil) carboxílico o ácido 1-aminociclopentil ) carboxílico pueden ser usados como un sustituto para Met.
En un aspecto de la invención la degradación enzimática de PP humano se impide mediante la remoción de Alai de la secuencia de PP, es decir, formando el análogo PP(2-36), con lo cual mejora la estabilidad de péptido tanto en solución como en liofilizados y por lo tanto mejorar sus propiedades como farmacéuticos. Como alternativa, el Ala2 de la secuencia de PP puede ser sustituido con el Aib estrechamente emparentado mejorando también la estabilidad contra el corte enzimático por DPPIV.
Las diferentes modificaciones mej oradoras de estabilidad presentadas arriba, tomadas individualmente o juntas representan un avance significativo en las propiedades farmacéuticas de estos péptidos. Estabilidad mejorada tanto durante la síntesis, que lleva a rendimientos más altos como menos purificación, como una vida útil prolongada del liofilizado y las soluciones de estos péptidos reduce significativamente la carga ambiental de la producción (y reduce la necesidad de la remanufactura) de péptidos de esta invención al reducir el uso de materia prima, solventes, instalaciones y por lo tanto también la producción de productos residuales.
El término "protegido contra DPP-IV" según se usa en la presente en referencia a un polipéptido significa un polipéptido que ha sido modificado químicamente para hacer al derivado resistente a la peptidasa plasmática dipeptidilaminopeptidasa-4 (DPP-IV) . La enzima DPP-IV en plasma se sabe que está implicada en la degradación de varias hormonas péptidas, por ejemplo, PYY, PP, etc. De esta manera, un esfuerzo considerable se está haciendo para desarrollar análogos y derivados de los polipéptidos susceptibles a hidrólisis mediada por DPP-IV para de esta manera reducir la velocidad de degradación por DPP-IV.
En un aspecto de la invención, el derivado de PYY o PP es un derivado de PYY o PP protegido contra DPPIV. En un aspecto de la invención, el derivado de PYY o PP es estabilizado contra la degradación contra DPP- IV en relación a la estabilidad de PYY o PP. En un aspecto un derivado de acuerdo con la invención es un derivado protegido contra DPPIV que es más resistente a DPP- IV que PYY o PP.
La resistencia de un péptido a la degradación por dipeptidil aminopeptidasa IV se determina por el siguiente ensayo de degradación: Alícuotas de péptido (5 mmoles) son incubadas a 37 °C con 1 µ? de dipeptidil aminopeptidasa IV purificada que corresponde a una actividad enzimática de 5 mU durante 10-180 minutos en 100 µ? de regulador de pH de clorhidrato de trietilamina 0.1 M, pH 7.4. Las reacciones enzimáticas son concluidas por la adición de 5 µ? de ácido trifluoroacético al 10%, y los productos de degradación péptida son separados y cuantificados usando análisis HPLC. Un método para llevar a cabo este análisis es: las mezclas se aplican en una columna de poro ancho Vydac C18 (poros de 30 nm, partículas de 5 µ??) de 250 x 4.6 mm y se eluyen a una velocidad de flujo de 1 ml/min con gradientes graduales lineales de acetonitrilo en ácido trifluoroacético al 0.1% (0% de acetonitrilo durante 3 minutos, 0-24% de acetonitrilo durante 17minutos, 24-48% de acetonitrilo durante 1 minutos) de acuerdo con Siegel et al., Regul. Pept . 1999;79:93-102 y Mentlein et al . , Eur. J. Biochem. 1993; 214:829-35. Los péptidos y sus productos de degradación pueden ser monitoreados por su absorbancia a 220 nm (enlaces péptidos) o 280 nm (aminoácidos aromáticos) , y son cuantificados por la integración de sus áreas pico en relación con aquellas de los estándares. La velocidad de hidrólisis de un péptido por dipeptidil aminopeptidasa IV se estima a tiempos de incubación que resultan en menos de 10% del péptido siendo hidrolizado.
Como alternativa, la resistencia de un péptido a la degradación por dipeptidil aminopeptidasa IV se determina por el siguiente ensayo de degradación: alícutos del péptido (4 nmoles) son incubadas a 37°C con 10.9 mU de dipeptidil aminopeptidasa IV purificada durante 22 horas en 40 µ? del regulador de pH de Tris-HCl 0.085 M, pH 8.0, en presencia o ausencia de 1.6% de albúmina de suero humana. Después de 0, 4 y 22 horas muestras de 10 µ? son tomadas y las reacciones enzimáticas son concluidas al mezclar con 100 µ? de ácido trifluoroacético al 1%. Los productos de degradación péptida se usa son separados y cuantificados usando análisis HPLC. Un método para llevar a cabo este análisis es: las mezclas se aplican sobre una columna Agilent Zorbax 300SB-C18 (partículas de 5 µp?) columna de 150x2.1 mm y son eluidas a una velocidad de flujo de 0.5 ml/min con un gradiente lineal de ácido trifluoroacético al 0.1% a 100% de acetonitrilo con 0.07% de TFA durante 30 minutos. Los péptidos y sus productos de degradación son monitoreados por su absorbancia a 214 nm, y se cuantifican mediante la integración de sus áreas pico. La estabilidad de un péptido contra dipeptidil aminopeptidasa IV se determina como el área pico del péptido intacto en relación a la suma de las áreas pico del péptido intacto y el producto de degradación que carece de los dos aminoácidos del extremo amino después del corte.
Derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos El término "derivado" según se usa en la presente en relación a un péptido significa un péptido químicamente modificado o un análogo del mismo, en donde al menos un sustituyente no está presente en el péptido no modificado o un análogo del mismo, es decir un péptido que ha sido modificado covalentemente . Las modificaciones típicas son amidas, carbohidratos, grupos alquilo, grupos acilo, ásteres y similares. En un aspecto los derivados de PYY o PP se derivan de un vertebrado o análogo de los mismos como se describe en la presente modificados con un asa de unión a albúmina. El asa de unión a albúmina puede ocurrir singularmente en el extremo N o C o en las cadenas laterales de los residuos de aminoácido dentro de la secuencia de los derivados del péptido PYY o PP o análogos de los mismos. Como alternativa, pueden haber varios sitios de derivación a lo largo del péptido análogo PYY o PP. La sustitución de uno o más aminoácidos con lisina, ácido aspártico, ácido glutámico o cisteína puede proporcionar sitios adicionales para derivación. Como alternativa, los derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos pueden ser conjugados a una, dos o tres moléculas de asa de unión a albúmina.
Cualquier posición de aminoácido en el péptido PYY o PP o análogo del mismo puede ser derivada. En un aspecto de la invención, el residuo de aminoácido que es derivado comprende un grupo amino. En un aspecto, el residuo de aminoácido derivado comprende un grupo amino. En un aspecto, el residuo de aminoácido derivado comprende un grupo amino primario en una cadena lateral. En un aspecto, el residuo de aminoácido derivado es lisina. En un aspecto de la invención, el residuo de aminoácido derivado es cisteína. En un aspecto de la invención, un residuo de aminoácido es derivado. En otro aspecto más de la invención, el derivado de acuerdo con la invención sólo es derivado en una posición, por ejemplo, sólo un residuo de aminoácido es derivado.
En un aspecto la posición amino terminal del péptido PP o un análogo del mismo puede ser derivada, en donde esa posición es en relación al péptido PP(l-36) . En un aspecto la posición amino terminal del péptido PP o un análogo del mismo puede ser acilada, en donde esa posición sea en relación al péptido PP(l-36). En un aspecto la posición amino terminal del péptido PP o un análogo del mismo puede ser derivada con un grupo de unión a albúmina que comprenda CH3 (CH2) rC0- , en donde r es 16 ó 18, en donde la posición es en relación al péptido PP(l-36).
En un aspecto la posición 18 del péptido PP o un análogo del mismo puede ser derivada, en donde esa posición sea en relación al péptido PP(l-36) . En un aspecto la posición 18 del péptido PP o un análogo del mismo puede ser acilada, en donde esa posición es en relación al péptido PP(l-36) . En un aspecto la posición 18 del péptido PP o un análogo del mismo puede ser derivada con un grupo de unión a albúmina que comprenda CH3 (CH2) rC0- , en donde r es 16 ó 18, en donde esa posición es en relación al péptido PP(l-36).
En un aspecto la posición amino terminal del péptido PYY o un análogo del mismo puede ser derivada. En un aspecto la posición amino terminal del péptido PYY o un análogo del mismo puede ser acilada. En un aspecto la posición amino terminal del péptido PYY o un análogo del mismo puede ser derivada con un grupo de unión a albúmina que comprenda CH3 (CH2) rCO- , en donde r es 16 ó 18. En un aspecto la posición amino terminal de PYY (3-36) o un análogo del mismo puede ser derivada con un grupo de unión a albúmina que comprenda CH3 (CH2) rC0- , en donde r es 16 ó 18.
En un aspecto la posición 18 del péptido PYY o un análogo del mismo puede ser derivada, en donde la posición es en relación al péptido PYY(l-36) . En un aspecto la posición 18 del péptido PYY o un análogo del mismo puede ser acilada, en donde la posición es en relación al péptido PYY(l-36). En un aspecto la posición 18 del péptido PYY o un análogo del mismo puede ser derivada con un grupo de unión a albúmina que comprenda CH3 (CH2) rC0- , en donde r es 16 ó 18, en donde la posición es en relación al péptido PYY(l-36) .
En un aspecto la posición 19 del péptido PYY o un análogo del mismo puede ser derivada, en donde la posición es en relación al péptido PYY(l-36). En un aspecto la posición 19 del péptido PYY o un análogo del mismo puede ser acilada, en donde la posición es en relación al péptido PYY (1-36) . En un aspecto la posición 19 del péptido PYY o un análogo del mismo puede ser derivada con un grupo de unión a albúmina que comprenda CH3 (CH2) rC0- , en donde r es 16 ó 18, en donde la posición es en relación al péptido PYY (1-36) .
En un aspecto la posición 22 del péptido PYY o un análogo del mismo puede ser derivada, en donde la posición es en relación al péptido PYY (1-36) . En un aspecto la posición 22 del péptido PYY o un análogo del mismo puede ser acilada, en donde la posición es en relación al péptido PYY(l-36). En un aspecto la posición 22 del péptido PYY o un análogo del mismo puede ser derivada con un grupo de unión a albúmina que comprenda CH3 (CH2) rCO- , en donde r es 16 ó 18, en donde la posición es en relación al péptido PYY(l-36) .
En un aspecto la posición 23 del péptido PYY o un análogo del mismo puede ser derivada, en donde la posición es en relación al péptido PYY (1-36) . En un aspecto la posición 23 del péptido PYY o un análogo del mismo puede ser acilada, en donde la posición es en relación al péptido PYY(l-36). En un aspecto la posición 23 del péptido PYY o un análogo del mismo puede ser derivada con un grupo de unión a albúmina que comprenda CH3 (CH2) rC0- , en donde r es 16 ó 18, en donde la posición es en relación al péptido PYY (1-36) .
Ejemplos de residuos de aminoácido que comprenden un grupo amino son licina, ornitina, Épsilon-N-lisina alquilada tal como Épsilon-N metil lisina, O-aminoetilserina , O-aminopropilserina o serinas O-alquiladas más largas que contengan un grupo amino primario o secundario en la cadena lateral. En un aspecto de la invención, el residuo de aminoácidos derivado comprende un grupo amino primario en una cadena lateral. Ejemplos de residuos de aminoácido que comprenden el grupo amino primario son lisina, ornitina, 0-aminoetilserina, O-aminopropilserina o serinas O-alquiladas más largas que contengan un grupo amino primario en la cadena lateral .
Un ejemplo de un método para la determinación de la unión a albúmina es el siguiente: la unión a albúmina de suero puede ser medida usando columnas con albúmina de suero inmovilizada de humanos u otras especies. La afinidad de un péptido dado puede ser medida por un tiempo de elución alterado a partir de la columna y las afinidades relativas entre diferentes péptidos de unión a albúmina pueden ser establecidas al comparar los perfiles de tiempos de elución. En otro método péptidos de albúmina de suero pueden ser biotinilados y la unión del péptido puede ser determinada por técnica de inmunoensayo ligado a enzimas (ELISA) usando una placa de microtitulación con albúmina inmovilizada. La visualización de la unión se lleva a cabo usando avidina o estreptavidina conjugada a otra peroxidasa de rábano o fosfatasa alcalina. Las afinidades relativas de diferentes péptidos de unión a albúmina pueden ser medidas. Otros experimentos de afinidad que se pueden usar en la medición de la unión a albúmina incluyen análisis Biacore o microcalorimetría .
En un aspecto de la invención, el residuo de unión a albúmina es un residuo lipófilo. En un aspecto, el residuo lipófilo es fijado a un residuo de lisina opcionalmente por un separador mediante química de conjugación tal como por alquilación, acilación, formación de éster o formación de amida, o a un residuo de cisteína por acoplamiento de maleimida. El término "separador" según se usa en la presente significa una unidad molecular que separa un péptido y un asa de unión a albúmina. En un aspecto el término "separador" según se usa en la presente significa un separador que separa un péptido y un residuo de unión a albúmina con una porción química que comprende al menos 5 átomos que no son de hidrógeno en donde 30-50% de éstos son ya sea N u 0.
En un aspecto de la invención, el residuo de unión a albúmina es cargado negativamente a pH fisiológico. En un aspecto de la invención, el residuo de unión a albúmina comprende un grupo que puede ser cargado negativamente. Un grupo preferido que puede ser cargado negativamente es un grupo de ácido carboxílico.
En un aspecto de la invención, el residuo de unión a albúmina se selecciona del grupo que consiste en un grupo alquilo de cadena recta, un grupo alquilo ramificado, un grupo que tiene un grupo de ácido ?-carboxílico y un esqueleto de ciclopentanofenantreno parcial o completamente hidrogenado .
En un aspecto de la invención, el residuo de unión a albúmina es un residuo de cibacronilo.
En un aspecto de la invención, el residuo de unión a albúmina tiene de 6 a 40 átomos de carbono, de 8 a 26 átomos de carbono o de 8 a 20 átomos de carbono.
En un aspecto de la invención, el residuo de unión a albúmina es un grupo acilo seleccionado del grupo que comprende CH3 (CH2) rCO- , en donde r es un entero de 4 a 38, específicamente un entero de 4 a 24, muy preferiblemente seleccionado del grupo que comprende CH3 (CH2) 6C0- , CH3(CH2)8CO- CH3(CH2)10CO-, CH3(CH2)12CO-, CH3 (CH2) 14C0- , CH3 (CH2) 16C0- , CH3(CH2)18CO-, CH3(CH2)20CO- y CH3 (CH2) 22CO- .
En un aspecto de la invención, el residuo de unión a albúmina es un grupo acilo de un alcano de cadena recta o ramificada, ácido a, ?-dicarboxílico .
En un aspecto de la invención, un derivado de péptido que comprende un péptido en el que al menos un residuo de aminoácido, tal como lisina y/o el extremo N y/o C de la estructura de base del péptido es derivado ya sea con A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, o A-C-, en donde en donde p se selecciona del grupo que consiste en 10, 11, 12, 13, 14, 15 y 16 y d se selecciona del grupo que consiste en O, 1, 2, 3, 4 y 5, y -B- se selecciona del grupo que consiste en en donde x se selecciona del grupo que consiste en y 4, y y se selecciona del grupo que consiste en 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12; o A- es en donde n se selecciona del grupo que consiste en 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 y 19, y -B- se selecciona del grupo que consiste en en donde x se selecciona del grupo que consiste en 0 , 1, 2, 3 y 4; y -C- se selecciona del grupo que consiste en y en donde b y e se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en O, l y 2, y c y f se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en 0 , 1 y 2 con la condición de que cuando c sea 0 b sea 1 ó 2, c sea 1 ó 2 b sea O, f sea O e sea 1 ó 2 , f sea 1 ó 2 e sea 0; y -D- está unido al residuo de aminoácido y es un separador.
En un aspecto la invención se refiere, a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde el péptido se selecciona del grupo que consiste en un análogo de PP de acuerdo con la fórmula I Z-Ala-Pro-Leu-Glu-Pro-Val-Tyr-Pro-Gly-Xaaxo-Xaan-Xaa^-Xaa^- Xaa25-Xaa26- aa27- aa28- aa29- Xaa30 -Xaa3i-Thr-Arg-Xaa34-Arg-Xaa36 (I) , en donde Z es la cadena lateral A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, o A-C- unida al grupo N-aminoterminal , o no presente cuando A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, A-C- está unido a la cadena lateral de un aminoácido, Ala en posición 1 puede ser suprimido, Xaai0 es Asp, Asn, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina o Lys, Xaan es Asp, Asn, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai2 es Ala, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina o Lys, Xaai3 es Thr, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai4 es Pro o hidroxiprolina, Xaai5 es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai6 es Gln, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai7 es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (l-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil ) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaaia es Ala, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai9 es Gln, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa2o es Tyr, Phe, o 3 -piridilalanina , Xaa2i es Ala, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa22 es Ala, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa23 es Asp, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa2 es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (l-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, .
Xaa25 es Arg, ácido 2 , 3-diarainopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, - ornitina, o Lys, Xaa26 es Arg, His, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa27 es Tyr, Phe, homoPhe, o 3 -piridilalanina, Xaa2a es lie, Val, Leu, homoleucina, norleucina, ácido (l-aminociclopentil) carboxilico, ácido (1-aminociclohexil ) carboxilico o ácido 1-aminobutírico, Xaa29 es Asn, Gln o Lys, Xaa30 es Met, Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxilico, Xaa3i es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido ( 1-aminociclopentil) carboxilico, ácido (1-aminociclohexil) carboxilico, o ácido 1-aminobutírico, Arg en la posición 33 puede ser sustituido con Lys, Xaa34 es Gln, Asn o His, Arg en la posición 35 puede ser sustituido con Lys, Xaa36 es Tyr, 3 -piridilalanina ; un análogo de PYY de acuerdo con la fórmula II 2-Tyr-Pro-Xaa3-Xaa4-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Xaai0-Xaa11-Xaa12-Xaai3-Xaai4 -Xaai5 -Xaai6 -X ai -Xa ie -X 20 -Xaa2i-Xaa22 -Xaa23 -Xaa24 -Xaa25 -Xaa26-Xaa27-Xaa28-Xaa29-Xaa3o-Xaa3i-Thr-Arg-Xaa34-Arg-Xaa36 (II) , en donde Z es la cadena lateral A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, o A-C- unida al grupo amino N-terminal o no está presente cuando A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, A-C- está unido a la cadena lateral de un aminoácido, Tyr-Pro en la posición 1 y 2 pueden ser suprimidos, Tyr en la posición 1 puede ser sustituido con Ala o ser suprimido, Xaa3 es lie, Val, Leu ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaa4 es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Glu en la posición 6 puede ser sustituido con Val, Ala en la posición 7 puede ser sustituido con Tyr, Xaai0 es Glu, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaan es Asp, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai2 es Ser, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai4 es Pro, hidroxiprolina, o Lys, Xaais es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai6 es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa17 es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopent.il) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaaie es Asn, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaaig es Arg, 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2,4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa20 es Tyr, Phe, 3-piridilalanina, ácido 2,3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa21 es Tyr, Phe, 3-piridilalanina, ácido diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa22 es Asp, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa23 es Ala, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa24 es Leu, lie, Val, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido 1-aminobutírico, o Lys, Xaa25 es Arg, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa26 es His, Arg, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa27 es tyr, Phe, homoPhe, o 3-piridilalanina, Xaa28 es lie, Val, Leu, homoleucina, norleucina, ácido ( 1-aminociclopentil) carboxilico, ácido (1-aminociclohexil) carboxilico, ácido 1-aminobutírico, o Lys, Xaa2g es Asn, Gln, o Lys, Xaa30 es Met, Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxilico, ácido (1-aminociclohexil) carboxilico, ácido 1-aminobutírico, o Lys, Xaa3i es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxilico, ácido (1-aminociclohexil) carboxilico, ácido 1-aminobutírico, o Lys, Thr en la posición 32 puede ser sustituido con Lys, Xaa34 es Gln, Asn, o His, Xaa36 es Tyr, 3 -piridilalanina, o Lys; en donde el compuesto se modifica con una cadena lateral de unión a albúmina de suero que comprende un grupo de ácido carboxilico o tetrazol distal.
En un aspecto el extremo N es un grupo amino y/o el extremo C es un grupo de ácido carboxilico.
En un aspecto de la invención -D- es un separador que proporciona distancia de las asas de albúmina al péptido y se puede seleccionar del grupo que consiste en una o más moléculas de PG consecutivas, uno o más residuos de glicina consecutivos u otros residuos polares pequeños. En un aspecto el separador puede ser una o más moléculas de ácido 8-amino-3 , 6 -dioxaoctanoico (Oeg) consecutivas u otros separadores del tipo PEG. En un aspecto el separador puede un péptido y puede ser una o más moléculas de Gly consecutivas que formen un polímero de glicina. En un aspecto el separador puede estar compuesto de varios aminoácidos polares o hidrófilos. Como un ejemplo pero no restringido a éste es (Ser-Gly) en donde n es un entero; n=l-20 ó 1-10 ó 1-5. En un aspecto el separador puede estar compuesto de no alfa aminoácidos tales como beta-alanina y ácido 8-amino-caprílico o combinaciones de los mismos.
En un aspecto, D se selecciona del grupo que consiste en y en donde k se selecciona del grupo que consiste en 0 , 1, 2, 3, 4, 5, 11 y 27, y m se selecciona del grupo que consiste en 0, 1, 2, 3, 4, 5 y 6.
En un aspecto, A-B-C-D- se selecciona y se combina a partir de A- -B- -c- -D- En un aspecto, A-B-C-D- se selecciona y se combina partir de ?? ?? En un aspecto, la invención se refiere a un análogo de PYY o PP o derivado del mismo, en donde A-B-C-D- es 2- (2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-ca boxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi}etoxi) acetilo. En un aspecto, la invención se refiere a un análogo de PYY o PP o derivado del mismo, en donde A-B-C-D- es 2 - (2 - { 2 - [2 - ( 2 - { 2 - [ (S) -4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) -acetilamino] etoxi } etoxi ) acetilo . En un aspecto, la invención se refiere a un análogo de PYY o PP o derivado del mismo, en donde A-B-C-D- es [4- (16- (lH-tetrazol-5-il ) hexadecanoilsulfamoil) butiril] etoxi } etoxi ) acetilamino] etox i }etoxi) acetilo] .
En un aspecto, la invención se refiere a un análogo de PYY o PP o derivado del mismo, en donde por lo menos un residuo de aminoácido y/o el grupo amino N-terminal del esqueleto del péptido se deriva con A-B-C-D-, y en donde el derivado se une a albúmina .
En un aspecto, A-B-C-D está compuesto de un fragmento de unión a albúmina A-B-C- y un separador hidrófilo, D.
Fijar diácidos grasos, por ejemplo, ácido hexadecanodioico, ácido octadecanodioico o ácido dodecanodioico introduce una carga negativa adicional en el extremo distal del ácido graso. Esto incrementa la afinidad a albúmina de suero. El diácido puede ser fijado a un separador tal como un aminoácido cargado negativamente, por ejemplo, L-gamma-glutamato pero no restringido al mismo como tal. El diácido graso también puede ser fijado a un separador hidrófobo tal como ácido tranexámico y ácido isonipecotínico, pero no restringido a éstos.
En un aspecto el diácido (A-B-C- o A-C-) y separador (-D-) combinados pueden ser separados con uno o más separadores consecutivos tales como ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico (Oeg) .
En un aspecto, los derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos de la invención conservan al menos aproximadamente 25%, específicamente alrededor de 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% o 99% de la actividad biológica de PYY o PP humano, respectivamente, con respecto a la reducción de consumo de alimento, el efecto en peso corporal, vaciado gástrico, cambio en cociente respiratorio y/o el efecto en la secreción de electrolitos intestinales. En un aspecto, los derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos de la invención exhiben actividad mejorada de derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo, respectivamente. En un aspecto, los derivados de péptidos PYY o PP o análogos de los mismos de la invención exhiben al menos aproximadamente 110%, 125%, 130%, 140%, 150%, 200%, o más de la actividad biológica de PYY o PP humano, respectivamente, con respecto a la reducción de consumo de alimento, el efecto en peso corporal, vaciado gástrico, cambio en cociente respiratorio y/o el efecto de secreción de electrolitos intestinales. Los métodos para medir los efectos biológicos se proporcionan en secciones posteriores de este documento. En un aspecto los análogos de péptido PYY o PP o derivados de los mismos tienen una potencia en uno de los ensayos descritos en la presente (tales como consumo de alimento, el efecto en peso corporal, vaciado gástrico, cambio en cociente respiratorio y/o el efecto en secreción de electrolitos intestinales) que es igual a o mayor que la potencia de PYY o PP humano en ese mismo ensayo. Como alternativa, los análogos de péptido PYY o PP o derivados de los mismos pueden exhibir facilidad de fabricación, estabilidad y/o facilidad de formulación mejoradas, en comparación con PYY o PP humano.
En un aspecto, los análogos de péptido PYY o PP o análogos derivados exhiben propiedades prolongadas mejoradas in vivo en comparación con PYY o PP humano.
El asa de unión a albúmina puede ser enlazada a un grupo amino, carboxilo o tiol, o puede ser enlazada por los términos N o C, o en las cadenas laterales de lisina, ácido aspártico, ácido glutámico o cisteína. Como alternativa, el asa de unión a albúmina puede ser enlazada con grupos de diamina y dicarboxílicos .
Los derivados de péptidos PYY o PP o análogos de los mismos de la invención incluyen también derivados de péptidos PYY o PP o análogos de los mismos con alteraciones químicas en uno o más residuos de aminoácido. Estas alteraciones químicas incluyen amidación, glicosidación, acilación, sulfatación, fosforilación, acetilación, y ciclización. Las alteraciones químicas pueden ocurrir singularmente en el extremo N o C o en las cadenas laterales de residuos de aminoácido dentro de la secuencia de los derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos. En un aspecto, el extremo C de estos péptidos puede tener un grupo -OH o -NH2 libre. En un aspecto, el extremo N-terminal puede ser tapado con un grupo isobutiloxicarbonilo, un grupo isopropiloxicarbonilo, un grupo n-butiloxicarbonilo, un grupo etoxicarbonilo, un grupo isocaproilo (isocap), un grupo octanilo, un gruipo octil glicina (G(Oct)), un grupo ácido 8-aminooctanoico o un grupo Fmoc . En un aspecto, la ciclización puede ser a través de la formación de puentes de disulfuro o un puente de lactama entre un Lys y Glu o un Lys y Asp. Como alternativa, puede haber varios sitios de alteración química a lo largo del péptido análogo de PYY o PP.
En un aspecto, la presente invención se refiere a un derivado de PYY o PP o análogo del mismo que tiene vida media terminal mejorada sustancialmente en un modelo de roedor y en un modelo no de roedor en relación con cualquiera de PYY, PYY (3-36), o PP .
En un aspecto de esta invención, la vida media terminal en modelo de roedor o no de roedor es mejorada al menos tres veces en relación con cualquiera de PYY, PYY (3-36), o PP. En un aspecto de esta invención, la vida media terminal en un modelo no de roedor es mejorada al menos 6 veces en relación con cualquiera de PYY, PYY(3-36) , o PP. En un aspecto de esta invención, la vida media terminal en un modelo no de roedor es mejorada al menos 10 veces en relación con cualquiera de PYY, PYY (3 -36), o PP. En un aspecto de esta invención, la vida media terminal en un modelo no de roedor es mejorada al menos 50 veces en relación con cualquiera de PYY, PYY (3-36) , o PP. En un aspecto la presente invención se refiere a un derivado de PYY o PP o análogo del mismo, en donde el derivado o análogo muestra una mejora en vida media terminal en comparación con PYY (3-36) humano en la escala de 5-500, tal como 10-500, 20-500, 50-500, 10-400, 20-400, 50-400, 100-500, 100-400 ó 200-500 veces determinado in vivo usando un modelo no de roedor. En un aspecto la presente invención se refiere a un derivado de PYY o PP o análogo del mismo, en donde el derivado muestra una mejora de la vida media terminal en comparación con PP humano en la escala de 50-5000, tal como 100-5000, 200-5000, 500-5000, 100-4000, 200-4000, 500-4000, 1000-5000, 1000-4000 ó 2000-5000 veces determinado in vivo usando un modelo no de roedor .
En un aspecto, la presente invención se refiere a un derivado de PYY o PP o análogo del mismo que tiene vida media terminal mejorada sustancialmente en un modelo no de roedor en relación con cualquiera de PYY, PYY(3-36), o PP y en donde la unión a los receptores Y2 y/o Y4 tiene al menos el mismo nivel de potencia que cualquiera de PYY, PYY(3-36) , o PP. En un aspecto, la presente invención se refiere a un derivado de PYY o PP o análogo del mismo que tiene vida media terminal mejorada sustancialmente en un modelo no de roedor en relación con cualquiera de PYY, PYY (3-36) , o PP y en donde la unión a los receptores Y2 y/o Y4 tiene al menos 50%, tal como 60%, 70%, 80% u 80% potencia como cualquiera de PYY, PYY (3-36) , o PP.
En un aspecto, la presente invención se refiere a un derivado de PYY o PP o análogo del mismo que tiene una vida media in vivo de al menos 10 horas después de administración i.v. a ratas.
En un aspecto, la presente invención se refiere a un derivado de PYY o PP o análogo del mismo que tiene una vida media in vivo de al menos 10 horas, tal como al menos 20 horas, al menos 30 horas, al menos 40 horas, al menos 50 horas, al menos 100 horas, al menos 150 horas, al menos 200 horas, al menos 250 horas, al menos 300 horas, o al menos 350 horas después de administración s.c. o i.v. a mini-cerdos, y como alternativa una vida media in vi o de al menos 80 horas después de administración s.c. o i.v. a mini-cerdos.
En un aspecto, la presente invención se refiere a un derivado de PYY o PP o análogo del mismo que puede formularse en partículas adecuadas para administración pulmona .
En un aspecto, la presente invención se refiere a un derivado de PYY o PP o análogo del mismo que es química y físicamente estable a pH neutro, más específicamente en la escala de 6-8.
En modalidades de la invención se logra una combinación de las características anteriores.
Una gama de residuos de unión a albúmina se conocen entre moléculas lipófilas lineales y ramificadas que contienen 4-40 átomos de carbono que tienen un grupo ácido distal .
En las fórmulas de la presente los enlaces punteados terminales de los grupos fijados, A, B, C y D se deben considerar como enlaces de fijación y no concluyendo en grupos metileno a menos que se indique. En los compuestos de acuerdo con la invención los grupos A, B, C y/o D son unidos unos a otros por enlaces de amida.
En un aspecto la invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención, en donde el péptido puede ser truncado por supresión de una secuencia consecutiva de uno o más aminoácidos a partir del extremo N-terminal. En un aspecto, en el derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo, la secuencia consecutiva de uno o más aminoácidos se selecciona de la posición 1 a 25 en PYY o la posición 1 a 2 en PP .
En un aspecto la invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención, en donde la cadena lateral de unión a albúmina de suero es unida a la cadena lateral de un aminoácido de la estructura de base del péptido.
En un aspecto la invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención, en donde la cadena lateral de unión a albúmina en suero está unido a un grupo amino de la cadena lateral de un aminoácido de la estructura de base del péptido.
En un aspecto la invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención, en donde la cadena lateral de unión a albúmina en suero se une a un grupo amino de la cadena lateral de un aminoácido de la estructura de base del péptido seleccionado del grupo que consiste en ácido 2,3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina y Lys .
En un aspecto la invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención, en donde el separador, -D-, comprende una o más moléculas de ácido 3 , 6 -dioxaoctanoico (Oeg) .
En un aspecto la . invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención, en donde el derivado se selecciona para los receptores Y2 y/o Y4 sobre el receptor Yl .
En un aspecto la invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención, en donde el derivado es selectivo para los receptores Y2 y/o Y4 sobre el receptor Y5.
En un aspecto la invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención, en donde el derivado es adecuado para su administración en un régimen de dosificación de una vez al día .
En un aspecto la invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención, en donde el derivado es adecuado para su administración en un régimen de dosificación una vez por semana .
En un aspecto la invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención, en donde el derivado es adecuado para su administración en un régimen de dosificación dos veces al mes .
En un aspecto la invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención, en donde el derivado es adecuado para su administración en un régimen de dosificación una vez al mes .
En un aspecto la invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención, en donde el derivado muestra perfil PK mejorada en comparación con PYY o PP humano.
En un aspecto la invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención, en donde el derivado muestra propiedades prolongadas en comparación con PYY o PP humano.
En un aspecto la invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención, en donde el derivado muestra vida media in vivo mejorada en comparación con PYY o PP humano.
En un aspecto la invención se refiere a un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención, en donde una dosis terapéuticamente efectiva del derivado causa menos efectos secundarios en comparación con PYY o PP humano.
En un aspecto los derivados de péptido PYY o PP de acuerdo con la invención pueden seleccionarse del grupo que consiste en compuestos mostrados en la tabla A, con la condición de que el compuesto no sea SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 73. En la tabla A, SEQ ID NO: 1 es PYY(3-36) humano, SEQ ID NO: 2 es PP/1-36) humano y SEQ ID NO: 73 es [Leul7 , Leu30] hPP (2-36 ) .
Tabla A Lista de compuestos SEQ ID NO: 1 Nombre: hPYY(3-36) Estructura : IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY SEQ ID NO: 2 Nombre: hPP(l-36) Estructura: APLEPVYPGDNATPEQMAQYAADLRRYINMLTRPRY SEQ ID NO: 3 Nombre : N-épsilonl3- [2 - ( 2 - { 2 - [2 - ( 2 - { 2 - [ (S) -4 -carboxi-4- ({trans-4- [ (19-carboxinonadecanoi lamino ) me t i 1 ] c ic lohexancarboni 1 } -amino ) but iri lamino] -e toxi } e toxi ) acet i lamino] e toxi } e toxi ) acet i 1 ] [Lysl3]hPY Y (3-36) Estructura: SEQ ID NO: 4 Nombre: N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4 carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) buti] ilamino] -etoxijetoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetilo] [Lysl3 , Leul7 , Leu30, Gln34] hPP (1-36) Estructura: SEQ ID NO: 5 Nombre: N-épsilonl3- [2- (2- {2- [2- (2-{2- [ (S) -4 carboxi - 4 - (17-carboxihep t de canoi lamino ) but iri lamino ] etoxijetoxi) - acet i lamino] etoxijetoxi) acetil] [Lysl3] hPYY (3-36) Estructura: SEQ ID NO: 6 Nombre: N-épsilonlO [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] etoxi}etoxi) acetilamino] toxi}etoxi) acetil] [LyslO , Leul 7 , Leu30] hPP2-36 Estructura: SEQ ID NO: 7 Nombre: N-épsilonlO- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) buririlamino] etoxi}etoxi) acetilamin ] -etoxi}etoxi) acetil] [LyslO , Leul7 , Leu30] hPP2- Estructura: SEQ ID NO: 8 Nombre: N-épsilonll- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( { trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) utir ilamino] etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Lysll] hPY Y(3-36) Estructura : SEQ ID NO: 9 Nombre: N-épsilonll- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxijetoxi) acetilamin o] -etoxijetoxi) acetil] [Lysll] hPYY (3-36) Estructura: SEQ ID NO: 10 Nombre: N-épsilonl3 - [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( { trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil} amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Lysl3 , Leul7 , le30 ,Gln34]hPP(l-36) Estructura: SEQ ID NO: 11 Nombre: N-épsilonl3- [2- (2 - {2 - [2 - (2-{2 - [ (S) -4-carboxi - 4 - ( { trans-4 -[(19-carboxinonadecanoi lamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) b utirilamino] -etoxi } etoxi ) acet i lamino] etoxi } etoxi ) acet il ] [Lysl3 ] hPPY2 -36 Estructura : SEQ ID NO: 12 Nombre: N-épsilon4- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoi1amino) meti1] ciclohexancarboni1 } amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetil] hPYY (3 -36) Estructura: SEQ ID NO: 13 Nombre: N-épsilon4- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi }etoxi) acetilamin ] -etoxi}etoxi) acetil] hPYY (3-36) Estructura: SEQ ID NO: 14 Nombre: N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( { trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [AsnlO , Aspll , Lysl3 ,Leul7,Leu30,Val31]hPP(l-36) Estructura: SEQ ID NO: 15 Nombre: N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] etoxi }etoxi) acetilamino] etoxi Jetoxi) acetil] [Lysl3 , Leu 17, Leu28, Val30,Gln34] hPP(l-36) Estructura: SEQ ID NO: 16 Nombre: N-épi3Ílonl3 - [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4-carboxi-4- ( { trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi }etoxi) acetil] [Lysl3 , Leul7 , Val28 ,Leu30,Gln34] hPP (1-36) Estructura: SEQ ID NO: 17 Nombre: N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( { trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi} etoxi) acetil] [Lysl3 , Leul7 , Val30 ,Gln34]hPP(l-36) Estructura : SEQ ID NO: 18 Nombre: N-épsilonl3- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4-carboxi -4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi }etoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Lysl3 , Leul7 , Gln29 , Leu30] hPP (1-36) Estructura: SEQ ID NO: 19 Nombre: N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxijetoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Lysl3 , Arg26] hPYY ( 3-36) Estructura : SEQ ID NO: 20 Nombre: N-épsilonl3 - [2 - ( 2 - { 2 - [2 - ( 2 - { 2 - [ (S ) -4 -carboxi-4- ( {trans-4- [ (19- Carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi } etoxi) acetil] [Alal , Leu3 , Glu4 , Va l6,Tyr7, Lysl3, Arg26] hPYY(l-36) Estructura: SEQ ID NO: 21 Nombre: N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi -4 - ( { trans -4 - [ ( 19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] - etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetil] [Alai , Glu , Lysl3 , A rg26] hPYY(l-36) Estructura : SEQ ID NO: 22 Nombre: N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] etoxi}etoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Alal,Glu4 , Tyr7, Lysl3 , Arg26] hPYY(l-36) Estructura : SEQ ID NO: 23 Nombre : N-alfa-[2-(2-{2-[2- (2-{2-[(S)-4-ca boxi-4- ({trans-4- [ (19-carboxinonadecanoi lamino ) met il ] c iclohexancarboni 1 } ami no)butirilamino] etoxi] etoxi) acetilamino] toxi } etoxi ) ac etil] hPYY(3- Estructura : SEQ ID NO: 24 Nombre: N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamin o] etoxi }etoxi) acetil] [Lysl3] hPP (1-36) Estructura : SEQ ID NO: 25 Nombre: N-épsilon4 - [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamin o] -etoxi}etoxi) acetil] [Lys4 ] hPYY (3 -36 ) Estructura: SEQ ID NO: 26 Nombre: N-épsilonl3 - [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4- arboxi-4- (17- arboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi }etoxi) acetilamin ] -etoxi } etoxi ) acetil] [Lysl3 , Gln34] hPP (1-36) Estructura: SEQ ID NO: 27 Nombre: N-épsilonll- [2- (2- {2- [2- (2- {2- [ (S) -4- arboxi-4- (17- arboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi}etoxi) acetilamin ] -etoxi}etoxi) acetil] [lysll] hPYY(3-36) Estructura: SEQ ID NO: 28 Nombre: N-épsilonll- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4- arboxi-4- ( {trans-4- [ (19- arboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetil] [Lysll] hPYY (3 -36 ) Estructura: SEQ ID NO: 29 Nombre: N-épsilonll- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi} etoxi) acetilamino] etoxi } etoxi) acetil] [Lysll , Leul7 , Leu30 ]hPP2-36 Estructura : SEQ ID NO: 30 Nombre: N-épsilonll- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi}etoxi) acetilamin o] -etoxi}etoxi) acetil] [Lysll , Leul7 , Leu30] hPP2-36 Estructura: SEQ ID NO: 31 Nombre: N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamin o] -etoxijetoxi) acetil] [Lysl3] hPP (1-36) Estructura: SEQ ID NO: 32 Nombre: N-épsilonl8- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamin -etoxi} etoxi) acetil] [Lysl8 , Leul7 , Leu30] hPP2 -36 Estructura : SEQ ID NO: 33 Nombre: N-alfa- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi -4 - ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi }etoxi) acetil] hPYY18-36 Estructura : SEQ ID NO: 34 Nombre: N-épsilon25- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4- carboxi-4- ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] - etoxijetoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Lys25] hPYY (3-36) Estructura : Nombre: N-épsilon24- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi }etoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Lys24] hPYY (3-36) Estructura : SEQ ID NO: 36 Nombre: N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( (trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] - etoxi }etoxi) acetilamino] etoxi) acetil] [Lysl3 , Leul7 , Leu30] hPP (1 -36) Estructura : SEQ ID NO: 37 Nombre: N-épsilon25- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi} etoxi) acetilamino] etoxi } etoxi) acetil] [Leul7 , Lys25 , Leu30 ]hPP(l-36) Estructura: SEQ ID NO: 38 Nombre: N-épsilonl5- [2- (2- {2- [2- (2- {2- [ (S) -4-carboxi-4- ({trans-4- [(19-carboxinonadecanoilamino)metil] ciclohexancarbonil}amino)butirilamino] -etoxijetoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Lysl5, Leul7, Leu30] hPP (1-36) Estructura: SEQ ID NO: 39 Noribre: N-épsilcmlO- [2- (2-{2- [2- (2- {2- [ (S) -4-carbcxi-4- ({trans- 4-[(19- (.arbaxincmdecanoilanuxio)metil] ciclchexarK-arbordlJanujx)) -etoxijetoxi) acetilamino]etoxijetoxi) acetil] [LyslO,Lsul7,Leu30,Glii34]hPP2-36 Estructura : SEQ ID NO: 40 Nombre: N-épsilonl9- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4- carboxi-4- ( { trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] - etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Lysl9] hPYY (3 -36 ) Estructura: -l SEQ ID NO: 41 Nombre: N-épsilon33- [2- (2- {2- [2- (2- {2- [ (S) -4- carboxi-4- (17- carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamin o] -etoxi }etoxi) acetil] [Leul7 , Leu30 , Lys33 ] hPP2 -36 Estructura: SEQ ID NO: 42 Nombre: N-épsilon33- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4-carboxi-4- ( { trans-4- [ (19-carboxinonadecanbilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Leul7, Leu 30, Lys33] hPP2-36 Estructura : SEQ ID NO: 43 Nombre : N-épsilonl8- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoi1amino) meti1] ciclohexancarboni1 } amino) butir ilamino] -etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Leul7 , Lysl8 , Leu30 ] hPP2-36 Estructura : Nombre: N-épsilon29- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4- carboxi-4- ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] - etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetil] [Leul7 , Lys29 , Leu30 ] hPP2-36 Estructura : Nombre: N-épsilon26- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4- carboxi-4- ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] - etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi} etoxi) acetil] [Leul7 , Lys26 , Leu30 ] hPP2-36 Estructura : SEQ ID NO: 46 Nombre: N- éps i lon26 - [2 - ( 2 - { 2 - [2 - ( 2 - { 2 - [ ( S ) - 4 - carboxi - 4 - (17-carboxihept adecanoi lamino ) but irilamino] etoxi }etoxi) ac etilamino] -etoxijetoxi) cetil] [Leul7, Lys26, Leu30] hPP2-36 Estructura : SEQ ID NO: 47 Nombre: N-épsilon35- [2 - (2 - {2- [2 - (2-{2 - [ (S) -4-carboxi - 4 - (17-carboxihpe t adecanoi lamino ) but irilamino] etoxi } etoxi ) ac e t i 1 amino] -etoxijetoxi) acetil] [Leul 7 , Leu30 , Lys 35 ] hPP2 - 36 Estructura : -P L E P V Y P G D N A T P E Q SEQ ID NO: 48 Nombre: N-épsilon35- [2- (2 - {2- [2 - (2- {2 - [ (S) - 4-carboxi-4- ({trans-4- [ (19-carboxinonadecano i 1 amino ) metil] cicl ohe ancarboni 1 } ami no ) but i r i 1 amino] - etoxi}etoxi) acetil amino] etoxi } etoxi ) acetil] [Leul7 , Leu 30 , Lys35] hPP2-36 Es truc tura : -PLEPVYPGDNATPEQLAQYAADLRRY I N L L SEQ ID NO: 49 Nombre: N-épsilon25 - [2 - (2 - {2 - [2 - (2- {2 - [ (S) - 4-carboxi - 4 - (17-carboxiheptadecanoilamino) but i i lamino] etoxi } etoxi ) ac et ilamino] -etoxi } etoxi ) acet il ] [Leul7 , Lys25 , Leu30] hPP2 -36 Estructura : SEQ ID NO: 50 Nombre: N-épsilon25 - [2 - (2-{2 - [2 - (2-{2 - [ (S) -4-carboxi-4- ({trans-4- [ (19-carboxinonadecanoi lamino ) metil] cic 1 ohexancarboni 1 } ami no ) but i r i lamino] - eto i}etoxi) acetil amino] etoxi }etoxi) acetil] [Leul7,Lys 25 , Leu30] hPP2-36 Estructura : SEQ ID NO: 51 Nombre: N-épsilonl3- [4- (16- (lH-tetrazol-5-il) hexadecanoilsulfamoil) butiril] etoxi}etoxi) acetilamino] etox i}etoxi) acetil] [Lysl3 ] PYY ( 3-36 ) Estructura : SEQ ID NO: 52 Nombre: N-épsilon25- [4- (16- ( 1H-tetrazol - 1) hexadecanoilsulfamoil) butiril] etoxi}etoxi) acetilamino] et i}etoxi) acetil] [Lys25] PYY (3-36] Estructura : SEQ ID NO: 53 Nombre: N-alfa- [4- (16- ( 1H- tetrazol-5- 1 ) hexadecanoilsulfamoil ) butiril] etoxi } etoxi ) acetilamino] etox }etoxi)acetil] PYY(3-36) Estructura : Nombre: N-alfa- [4- (16- (lH-tetrazol-5-il) hexadecanoilsulfamoil ) butiril] etoxi}etoxi) acetilamino] etox i}etoxi) acetil] PYY(3-36) Estructura: N SEQ ID NO: 55 Nombre: N-alfa- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- (17- carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamin o] -etoxi}etoxi) acetil] [Leul7 , Leu30] hPP2 -36 Estructura: SEQ ID NO: 56 Nombre: N-alfa- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4 ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) buti ilamino] - etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetil] [Leul7 , Leu30] hPP2 Estructura : SEQ ID NO Nombre: N-épsilonl8- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxijetoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Lysl8] hPPY3 -36 Estructura: SEQ ID NO: 58 Nombre: N-épsilon22- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] -etoxijetoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Lys22] hPYY3-36 Estructura : SEQ ID NO: 59 Nombre: N-épsilon26- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4- carboxi-4- ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] - etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi) acetil] [Lys26] hPYY3 -36 SEQ ID NO: 60 Nombre: N-épsilon29- [2- (2- {2- [2- (2- {2- [ (S) -4- carboxi-4- ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] - etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Lys29] hPYY3-36 Estructura: SEQ ID NO: 61 Nombre: N-épsilon36- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4- carboxi-4- ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetil] [Lys36] hPY Y3-36 Estructura: — I K P E A P G E D A S P E SEQ ID NO: 62 Nombre: N-épsilon21- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino [etoxi } etoxi ) acetilamin o] -etoxi}etoxi) acetil] [Lys21] hPYY3-36 Estructura : SEQ ID NO: 63 Nombre: N-épsilon30- [2-(2-{2-[2-(2-{2- [(S)-4- carboxi - 4 - ( 17 - carboxihe t adecanoi 1 amino) butiri lamino ] e t oxi } et oxi ) ac etilamino] - e toxi } e toxi ) acet i 1 ] [ Lys 30 ] hPYY3 - 36 Estructura: SEQ ID NO: 64 Nombre: N-épsilon31- [2 - (2 - {2 - [2 - (2 - {2 - [ (S).-4- carboxi - 4 - ( 17 - carbo ihe tadecanoilamino) but irilamino] etoxi } etoxi ) ac etilamino] -etoxi }etoxi ) acetil] [ Lys 31 ] hPYY3 - 36 Es truc tura : SEQ ID NO: 65 Nombre: N-épsilonl4 - [2 - (2-{2 - [2 - (2-{2 - [(S) - 4- carboxi - 4 - (17- carboxihept adecanoi lamino ) but ir i 1 amino ] etoxi } etoxi ) ac etilamino] - etoxi } etoxi ) acet i 1 ] [Lysl4] hPYY3 -36 Estructura: SEQ ID NO: 66 Nombre: N-épsilonl5- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi }etoxi) acetilamin o] -etoxijetoxi) acetil] [Lysl5] hPYY3-36 Estructura: SEQ ID NO: 67 Nombre: N-épsilonl6- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- (17-carboxihpetadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamin o] -etoxijetoxi) acetil] [Lysl6] hPYY3-36 Estructura: SEQ ID NO: 68 Nombre: N-épsilon20- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4- carboxi-4- (17- carboxihpetadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamin o] -etoxi}etoxi) acetil] [Lys20] hPYY3-36 Estructura : SEQ ID NO: 69 Nombre: N-épsilon28- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4- craboxi-4- (17- carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi }etoxi) acetilamin o] -etoxi}etoxi) acetil] [Lys28] hPYY3-36 Estructura: SEQ ID NO: 70 Nombre: N-épsilon32- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4- carboxi-4- (17- carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamin ] -etoxi} etoxi) acetil] [Lys32 ] hPYY3 - 36 Estructura: SEQ ID NO: 71 Nombre: N-épsilon25- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( { trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) meti1] ciclohexancarboni1 } amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetil] [Leul7 , Lys25 , Leu30 ] hPPl-36 Estructura: SEQ ID NO: 72 Nombre: N-épsilonl5- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] - etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi) acetil] [Leul7 , Lysl5 , Leu30 ] hPPl-36 Estructura: SEQ ID NO: 73 Nombre: [Leul7 , Leu30 ] hPP2 - 36 Estructura : H-P L E P V Y P G D N A T P E Q L A Q Y A A D L R R Y I N L L T R P SEQ ID NO: 74 Nombre: ácido N-épsilonl3- [2- (2- {2- [2- (2- {2- [ (S) -4-carboxi-4- ( { trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi} etoxi) acetil] [Leul7 , Lysl3 , Leu30 ,Gln34] hPPl-36 Estructura: SEQ ID NO: 75 Nombre: N-alfa- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi-4 - ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi) acetil] [Leul7 , Leu 30]hPPl-36 Estructura: En un aspecto, los derivados de péptido PYY o PP de acuerdo con la invención se seleccionan del grupo que consiste en SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 6.3, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69 y SEQ ID NO: 70. En un aspecto, los derivados de péptido PYY o PP de acuerdo con la invención se seleccionan del grupo que consiste en SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO : 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75. En un aspecto, los derivados PYY o PP de acuerdo con la invención se seleccionan del grupo que consiste en SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO : 43, y SEQ ID NO: 55.
Indicaciones clínicas La presente invención proporciona un método para tratar una enfermedad, afección o trastorno modulado por un agonista del receptor Y2 y/o Y4 en mamíferos, el cual comprende administrar periféricamente a un mamífero que requiera este tratamiento una cantidad terapéuticamente efectiva de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de la invención. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de la invención se puede usar solo o en combinación con por lo menos un agente farmacéutico adicional que sea útil en el tratamiento de una enfermedad, afección o trastorno o una co-morbidez de la enfermedad, afección o trastorno. Las enfermedades, afecciones o trastornos modulados por un agonista del receptor Y2 y/o Y4 en mamíferos incluyen obesidad y sobrepeso. Las co-morbideces de estas enfermedades, afecciones o trastornos probablemente serían mejoradas accidentalmente por el tratamiento de estas enfermedades, afecciones o trastornos. Se proporciona además un método para tratar obesidad en un mamífero que requiera de este tratamiento, el cual comprende administrar periféricamente al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de la presente invención.
Según se usa en la presente, el término "cantidad terapéuticamente efectiva" de un compuesto se refiere a una cantidad suficiente para curar, aliviar o detener parcialmente las manifestaciones clínicas de una enfermedad dada y/o sus complicaciones con respecto a valores de control adecuados determinados antes del tratamiento o en un grupo tratado con vehículo. Una cantidad adecuada para lograr esto se define como una "cantidad terapéuticamente efectiva" . Las cantidades efectivas para cada propósito dependerán de la severidad de la enfermedad o lesión, así como del peso y estado general del sujeto. Se entenderá que la determinación de una dosis adecuada puede lograrse usando experimentación de rutina, al construir una matriz de valores y probar diferentes puntos en la matriz, todo lo cual está dentro del nivel de capacidad ordinaria de un médico o veterinario entrenado .
Los términos "tratamiento" , "tratar" y otras variantes de los mismos según se usan en la presente se refieren al manejo y cuidado de un paciente con el propósito de combatir una afección, tal como una enfermedad o un trastorno. Los términos intentan incluir el espectro completo de tratamientos para una afección dada de la cual sufra el paciente, tales como administración de los compuestos activos en cuestión para aliviar síntomas o complicaciones del mismo, para retrasar la progresión de la enfermedad, trastorno o afección, para curar o eliminar la enfermedad, trastorno o afección y/o para evitar la afección, ya que la prevención se va a entender como el manejo y cuidado de un paciente con el propósito de combatir la enfermedad, afección o trastorno, e incluye la administración de los compuestos activos en cuestión para prevenir el inicio de síntomas o complicaciones. Los términos "tratando", "tratar" o "tratamiento" abarcan tratamiento tanto preventivo, es decir, profiláctico como paliativo. Se proporciona también un método para reducir peso o promover pérdida de peso (incluyendo prevenir o inhibir ganancia de peso) en un mamífero, el cual comprende administrar periféricamente al mamífero una cantidad controladora de peso o reductora de peso de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de la presente invención.
Se proporciona también un método para reducir el consumo de alimentos en un mamífero, que comprende administrar periféricamente al mamífero una cantidad reductora de consumo de alimentos de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de la presente invención.
Se proporciona también un método para inducir saciedad en un mamífero que comprende administrar periféricamente al mamífero una cantidad inductora de saciedad de un péptido especial de la invención.
Se proporciona también un método para reducir el consumo calórico en un mamífero, que comprende administrar periféricamente al mamífero una cantidad reductora de consumo calórico de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de la invención.
Se proporciona también un método para reducir la disponibilidad de nutrientes mediante la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de la presente invención. En un aspecto, un método de inhibición de consumo de alimentos, que hace más lento el vaciado gástrico, inhibición de secreción de ácidos gástricos e inhibición de secreción de enzimas pancreáticas mediante la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de la presente invención es provisto. En un aspecto, se proporciona un método para tratar o prevenir enfermedades metabólicas tales como diabetes tipo 1, tipo 2 o diabetes mellitus gestacional, obesidad y otras manifestaciones de síndromes de resistencia a insulina (síndrome X) mediante la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de la presente invención.
En un aspecto, se describe en la presente un método para alterar el metabolismo energético en un sujeto. El método incluye administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de la invención al sujeto, alterando de esta manera el gasto de energía. La energía se quema en todos los procesos fisiológicos. El cuerpo puede alterar la velocidad de gasto de energía directamente, al modular la eficiencia de esos procesos, o cambiando el número y naturaleza de procesos que están ocurriendo. Por ejemplo, durante la digestión el cuerpo gasta energía al mover el alimento a través del intestino, y digerir el alimento, y dentro de las células, la eficiencia del metabolismo celular puede ser alterada para producir más o menos calor. En un aspecto se describe un método en la presente para cualquiera y todas las manipulaciones de los circuitos precisos descritos en esta solicitud, los cuales alteran el consumo de alimentos en forma coordinada y alteran recíprocamente el gasto de energía. El gasto de energía es un resultado del metabolismo celular, síntesis de proteínas, velocidad metabólica y utilización de calorías. Así, en esta modalidad, la administración periférica se traduce en ' un gasto de energía incrementado, y eficiencia reducida de la utilización de calorías. En un aspecto, una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista receptor de acuerdo con la invención se administra a un sujeto, de esta manera incrementando el gasto de energía.
En un aspecto de la invención, se proporcionan métodos para tratar o prevenir obesidad, en donde el método comprende administrar una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo a un sujeto que lo requiera. En una modalidad preferida, el sujeto es un sujeto obeso o con sobrepeso. Aunque "obesidad" se define generalmente como un índice de masa corporal de más de 30, para los propósitos de esta invención, cualquier sujeto, incluyendo aquellos con un índice de masa corporal de menos de 30, que requiera o desee reducir peso está incluido en el alcance de "obeso" . Los sujetos que son resistentes a insulina, intolerantes a glucosa o tienen cualquier forma de diabetes mellitus (por ejemplo, diabetes tipo 1, 2 o gestacional) pueden beneficiarse de este método. En un aspecto de la invención, se proporcionan métodos para reducir el consumo de alimentos, reducir la disponibilidad de nutrientes, causar pérdida de peso, afectar la composición corporal y alterar el contenido de energía corporal o incrementar el gasto de energía, tratar diabetes mellitus y mejorar perfil de lípidos (incluyendo reducir colesterol LDL y niveles de triglicéridos y/o cambiar niveles de colesterol HDL) , en donde los métodos comprenden administrar a un sujeto una cantidad efectiva de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de la invención. En una modalidad preferida, los métodos de la invención se usan para tratar o prevenir afecciones o trastornos que pueden ser aliviados al reducir la disponibilidad de nutrientes en un sujeto que lo requiera, que comprenden administrar al sujeto una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de la invención. Estas afecciones y trastornos incluyen, pero no están limitados a, hipertensión, dislipidemia, enfermedad cardiovascular, trastornos de alimentación, resistencia a insulina, obesidad y diabetes mellitus de cualquier tipo.
Sin intentar ser limitados por teoría, se cree que los efectos del derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de la presente invención administrado periféricamente en la reducción de consumo de alimento, en el retraso de vaciado gástrico, en la reducción de disponibilidad de nutrientes y en causar pérdida de peso se determinan por interacciones con una o más clases de receptores únicos en, o similares a, aquellos en la familia PP. Más particularmente, parece que un receptor o receptores similares a los receptores que prefieren PYY (o Y7) están implicados.
Ensayos adicionales útiles para la invención incluyen aquellos que pueden determinar el efecto de los compuestos de doblez PP, tales como derivados de péptidos PYY o PP o análogos de los mismos, en el peso corporal y/o composición corporal. Un ensayo ejemplar puede ser uno que incluya la utilización de un modelo de ratón obeso inducido por dieta (DIO) para enfermedad metabólica: 125 ratones CBA hembra pueden ser pedidos de Charles River, Japón. A las 5 semanas de edad llegan en Unidad Animal, Novo Nordisk. Los ratones están en ciclo invertido de día/noche. Los ratones #1-100 tienen acceso ad libitum a una dieta alta en grasas D12309, Research Diet (60% de Kcal de grasa) . Esta dieta ha mostrado previamente ser efectiva para inducir obesidad en ratones CBA. En una primera modalidad los ratones #101-125 son alimentados con dieta de control (D12310) que contiene 11% de Kcal de grasa. En una segunda modalidad los ratones #101-125 son alimentados con dieta de control (D12450B) que contiene 10% de Kcal de grasa. Los ratones son pesados semanalmente . Cuando los ratones alimentados con alto contenido de grasa (D12492 o D12309) han ganado suficiente peso en comparación con los ratones de la dieta baja en grasa (aproximadamente 15-20% de sobrepeso) se usan en el estudio. Con base en el peso corporal, se remueven los mantos y los ratones restantes se dividen en grupos intentando obtener pesos corporales similares en los grupos. Antes de empezar el estudio todos los ratones son escaneados para composición corporal (barrido de RMN) . Una semana antes de empezar el estudio los ratones son pesados diariamente para obtener una línea de base estable y para aclimatarlos al procedimiento. Los ratones se dividen en grupos como sigue: Grupo 1 (n=10) : dosificación s.c. de análogo PYY (dosis 0.3 umol/kg, 10 ml/kg) Grupo 2 (n=10) : dosificación s.c. de análogo PYY (dosis 1 µp???/kg, 10 ml/kg) Grupo 3 (n=10) : dosificación s.c. de análogo PP (dosis 0.3 µp???/kg, 10 ml/kg) Grupo 4 (n=10) : dosificación s.c. de análogo PP (dosis 1 µt???/kg, 10 ml/kg) Grupo 5 (n=10) : dosificación s.c. PYY(3-36) humano (dosis 1 µt???/kg, 10 ml/kg) Grupo 6 (n=10) : dosificación s.c. de PP humano (dosis 1 µp???/kg, 10 ml/kg) Grupo 7 (n=10) : dosificación s.c. de vehículo Grupi 8 (n=10) : grupo de bajo contenido de grasa como referencia.
Uno o más derivados de PYY o PP o análogos de los mismos así como compuestos de control, tales como PYY humano, PYY (3-36) y PP humano, se disuelven en 50 mM de NaH2P04, 165 mM de NaCl, pH = 7.4. La dosificación se lleva a cabo una vez al día en el mismo punto de tiempo cada día, justo antes de apagar la luz. Como una alternativa a la administración ,s.c. algunos o todos los compuestos pueden suministrarse por medio de minibombas osmóticas Alzet. Las bombas pueden ajustarse para suministrar cualquier cantidad de los compuestos, por ejemplo, 1 mol/kg/24 horas. Los ratones se dosifican durante 3 semanas. Se registra el peso corporal de todos los ratones diariamente en combinación con la dosificación. Después de 1 semana y 3 semanas de tratamiento, los ratones son escaneados para composición corporal usando un sistema QNMR (Echo Medical Systems, Houston, Texas) . Posteriormente los ratones son sometidos a eutanasia con dislocación cervical. Se analizan los datos en Graph Pad Prism. El significado estadístico se evalúa al comparar los grupos con ANOVA seguido por la prueba post-hoc de Tukey. Un valor p <0.05 se considera estadísticamente significativo .
En otro ensayo ratones ob/ob se usan para analizar el efecto de compuestos de la invención en peso corporal y composición corporal. Este ensayo es similar al ensayo descrito arriba para ratones DIO excepto que ratones ob/ob (Taconic, Hudson, NY) son usados. Estos ratones se mantienen en una dieta regular (Altromin 1324, Brogaarden, Dinamarca) .
El cociente respiratorio (RQ, definido como producción de C02 dividido entre consumo de 02) e índice metabólico pueden determinarse usando calorimetría indirecta animal completa (Oxymax, Columbus Instruments, Columbus, OH) . Los ratones pueden ser sometidos a eutanasia mediante sobredosis de isoflurano, y un índice de adiposidad (peso de almohadilla de grasa epididima bilateral) medirse. En los métodos de la invención, los péptidos de doblez PP que se prefieren de la invención son aquellos que tienen una potencia en uno de los ensayos descritos en la presente (específicamente consumo de alimento, vaciado gástrico, secreción pancreática, reducción de peso o ensayos de composición corporal) .
Ensayos adicionales útiles para determinar el efecto de péptidos de doblez PP son ensayos que miden consumo de alimento agudo, tales como el ensayo de realimentación inducido por ayuno: Ensayo de alimentación agudo en ratones: ratones hembra C57BL magros se obtienen de Charles River, Japón. Se les mantiene en un ciclo de luz: oscuridad de 12:12 (se apagan las luces a las 10:00 a.m., se encienden las luces a las 10:00 p.m.)( se les alimenta con dieta para roedores D12450B granulada (Research Diets, Inc., New Brunswick, NJ) , y se les deja acceso a agua libre. Los ratones llegan a las 7-8 semanas de edad y se aclimatan en el sistema BioDAQ un mínimo d dos semanas antes del estudio. El día del estudio, ratones tienen 9-12 semanas de edad. Son ayunados durante la noche (20-24 horas) con acceso libre a agua. El día del estudio, los ratones son dosificados con inyección s.c. (volumen de dosis = 10 mL/kg) , regresados a su jaula y el alimento pre-pesado se coloca inmediatamente en la jaula. El vehículo de dosificación usado puede ser: 50 mM de 2HP04 , 0.05% de tween 80, pH=8.0 y la dosis se calcula para el compuesto de prueba sobre una base molar. Diseño del ensayo: · Los ratones son ayunados desde las 2:00 p.m. el día antes de la dosificación • Los ratones son pesados y dosificados 30 minutos antes de que se apague la luz a las 10:00 a.m.
• Los ratones son dosificados con 10 ml/kg s.c.
· Los ratones son dosificados una vez y el consumo de alimento se monitorea usando el sistema BioDAQ (Research Diets, Inc., New Brunswick, NJ) durante 24 horas.
El sistema BioDAQ consiste en 32 cajas para ratones que cada una tienen una bandeja de alimento con una báscula sensible. Cuando los ratones comen se registra la reducción de peso del contenido de la bandeja de alimento. Se registran los datos cada vez que hay un cambio en el peso de la bandeja de alimento individual. El consumo de alimento acumulativo se calcula al restar el peso del alimento en cada punto de tiempo del peso de alimento inicial.
Consumo de alimento agudo en ratas: ratas Sprague Dawley macho magras (-180 g) son obtenidas de Taconic, Europa. Inmediatamente después de la llegada y dos semanas antes de la dosificación las ratas se alojan en un ciclo de luz invertida (oscuridad de 10 am a 10 pm, 2 en cada jaula) . Las ratas son alimentadas con dieta regular (Altromin 1324, Brogaarden, Dinamarca) . Una semana antes de la dosificación, las ratas son pasadas al sistema FeedWin, en donde las ratas se ponen en jaulas individuales - para aclimatación. El sistema FeedWin (Ellegárds Systems, Faaborg, Dinamarca) contiene 32 estaciones para registro individual y continuo de consumo de alimento y agua. Una estación se define por 1 jaula con una tapa metálica más 2 escalas, una para consumo de alimento y una para consumo de agua. El consumo de alimento y agua se calcula por mediciones de la desaparición de cantidades precargadas de alimento y agua que se colocan en las dos escalas sobre cada lado de la jaula. El día del estudio las ratas son dosificadas antes del inicio de oscuridad con una inyección s.c. (volumen de dosis = 1-2 mL/kg) y regresadas a su jaula. Después de la dosificación el consumo de agua y alimento se registrará por el sistema FeedWin. Los datos pueden ser recabados cada 15 minutos durante 48 horas. Los consumos de alimento para cada grupo se calculan durante los periodos solicitados.
Consumo de alimento agudo en cerdos : Cerdos Landrace Yorkshire Duroc hembra jóvenes se obtienen de Gundsoegaard, Dinamarca. Los animales son alojados en un grupo durante una semana durante la aclimatación. A los animales se les alimenta ad libitum con dieta para cerdos (Prima Antonio) en todo momento tanto durante la aclimatación como en el periodo experimental. Para la medición del consumo de alimento individual, los animales son puestos en corrales individuales. El consumo de alimento se monitorea en línea al ingresar el peso del alimento cada 15 minutos usando el sistema Mpigwin (Ellegárds Systems, Faaborg, Dinamarca) . El primer día del estudio (lunes por la mañana) los cerdos son dosificados con una inyección s.c. (volumen de dosis = 0.025-0.04 mL/kg) y el consumo de alimento se monitorea durante 5 días hasta el final del estudio (viernes por la tarde) . Los consumos de alimento para cada grupo se calculan durante los periodos solicitados.
Un ensayo útil para medir PK de los compuestos de la invención es el ensayo PK de mini-cerdos. Cinco mini-cerdos Gottingen hembra cinco que pesan aproximadamente 18 a 22 kg de Ellegaard Gottingen Minipigs A/S, Dinamarca fueron incluidos en el estudio. A los mini-cerdos se les insertaron dos catéteres venosos centrales los cuales se usaron para dosificación intravenosa (i.v.) y toma de muestras de sangre. El compuesto se disuelve en 50 mM de K2HP04 , 0.05% de tween 80, pH=8.0 hasta una concentración de 180 nmol/ml. Los cerdos fueron 'dosificados con 6 nmol de compuesto/kg de peso corporal. Se tomaron muestras de sangre en los siguientes puntos de tiempo: pre-dosis, 30 minutos, 1, 2, 4, 8, 24, 48, 72, 96, 120, 168 y 240 horas después de la dosificación. Las muestras de sangre se tomaron en tubos de ensayo que contenían regulador de pH EDTA para estabilización y se mantuvieron sobre hielo durante máximo 20 minutos antes de la centrifugación. El procedimiento de centrifugación para separar plasma fue: 4°C, 3000 rpm durante 10 minutos. Los plasmas fueron recogidos e inmediatamente transferidos a tubos Micronic almacenados a -20°C hasta el ensayo.
Un ensayo de PK en mini -cerdos adicional se usó para medir PK de los compuestos de la invención. Mini-cerdos que pesaban 15 a 35 kg de Ellegaard Góttingen Minipigs A/S fueron incluidos en los estudios. A los animales se les insertaron dos catéteres venosos centrales que se usaron para dosificación intravenosa (i.v.) y toma de muestras de sangre. Los compuestos fueron disueltos en 10 mM de Na2HP04 , 150 mM de NaCl, 0.01% de tween 80, pH=4.0 hasta concentraciones en la escala de 40 nmol/ml a 200 nmol/ml. Los mini-cerdos fueron dosificados i.v. con 10 nmol de compuesto/kg de peso corporal, ocasionalmente otras dosis tales como 4 nmol/kg, 30 nmol/kg o 50 nmol/kg fueron administradas. Cada compuesto fue dosificado a 3 ó 4 mini-cerdos, y dos compuestos pueden ser datos simultáneamente al mismo animal. Se tomaron muestras de sangre antes de la dosis. y 12 veces durante las primeras 10 horas después de la dosis. La sangre fue tomada además una vez al día hasta 13 días después de la dosis. Las muestras de sangre se recogieron en tubos de ensayo que contenían regulador de pH EDTA, trasilol y Val-Pyr para estabilización y se mantuvieron sobre hielo durante máximo 20 minutos. Las muestras fueron centrifugadas a 4°C, 2000G durante 10 minutos para separar plasma. El plasma fuer recogido e inmediatamente transferido a tubos Micronic almacenados a -20°C hasta el ensayo.
Las muestras de plasma fueron ensayadas mediante LC-MS en un LTQ-Orbitrap (ThermoFisher Scientific, Bremen) al cual bombas Accela HPLC y un automuestreador fueron conectados (ambos de ThermoFisher) . El espectrómetro de masas fue equipado con una interfaz de electroaspersión, la cual se operó en modo de ionización positiva. El análisis se llevó a cabo en modo de monitoreo iónico seleccionado a m/z 829.8 ± 1.5 Da. El compuesto se detectó a 829.4529 Da, lo cual correspondía a [M + 6H] 6+ con una precisión de 3.6 ppm. Para propósitos de cuantificación, los seis picos isotópicos más intensos fueron extraídos con una precisión de 5 ppm. HPLC se llevó a cabo en una columna Júpiter Proteo (4 µ) 90A (50 x 2.0 mm DI). Las fases móviles consistían en A. ácido fórmico al 0.1% y B. ácido fórmico al 0.1% en acetonitrilo . Se corrió un gradiente de 10% a 20% de B de 0 a 0.2 minutos y luego de 20% de B a 34% de B de 0.2 minutos a 6 minutos. La velocidad de flujo fue 0.3 ml/min. Para el análisis de muestras de plasma, 30 µ? de plasma se precipitaron en 90 µ? de etanol. A 100 µ? del sobrenadante, 20 µ? de acetonitrilo al 95% (que contenía 5% de ácido fórmico) y 200 µ? de heptano fueron añadidos . La fase de heptano se removió después de 5 minutos y la solución restante se analizó mediante LC-MS como se describió arriba. Para la construcción de estándares de plasma, el compuesto fue salpicado a plasma (mini-cerdo) a las siguientes concentraciones: 1 nM, 2 nM, 5 nM, 10 nM, 20 nM, 50 nM, 100 nM, 200 nM. Los estándares de plasma fueron tratados como las muestras. El límite inferior de cuantificación se calculó a 2 nM.
Análisis no compartimental (NCA) : Perfiles de tiempo de concentración en plasma fueron analizados mediante el análisis de farmacocinética no compartimental (NCA) usando WinNonlin Professional 5.0 (Pharsight Inc., Mountain View, CA, E.U.A.). NCA se llevó a cabo usando los perfiles de tiempo de concentración de plasma individuales de cada animal .
Un ensayo ejemplar para la medición del vaciado gástrico se describe en la sección de materiales y métodos, página 1326 bajo el título "Vaciado Gástrico" en (Asakawa A et al, Characterization of the effects of pancreatic polypeptide in the regulation of energy balance, Gastroenterology, 2003-124, 1325-1336).
El apetito puede medirse mediante cualquier medio conocido por alguien capacitado en la técnica. Por ejemplo, en humanos, apetito reducido puede evaluarse por una prueba psicológica. En esta modalidad, la administración del agonista de receptor se traduce en un cambio en el hambre, saciedad y/o llenura percibidas. El hambre puede evaluarse por cualquier medio conocido por alguien de capacidad en la técnica. En un aspecto, el hambre se evalúa usando ensayos psicológicos, tales como por una evaluación de sensaciones de hambre y percepción sensorial usando por ejemplo un cuestionario.
Además de la reducción de hipertensión en sujetos que lo requieran como resultado de un consumo de alimentos reducido, pérdida de peso o tratamiento de obesidad, los compuestos de la invención pueden usarse para tratar hipotensión .
Los compuestos de la invención también pueden ser útiles para potenciar, inducir, incrementar o restablecer la respuesta a glucosa en isletas o células pancreáticas. Estas acciones pueden ser útiles para tratar o prevenir afecciones asociadas con trastornos metabólicos tales como aquellos descritos arriba y en la solicitud de patente de E.U.A. No. US20040228846. Los ensayos para determinar esta actividad se conocen en la técnica. Por ejemplo, en la solicitud de patente publicada No. US20040228846 (incorporada a manera de referencia en su totalidad) , se describen ensayos para el aislamiento de isletas y cultivo así como para determinar maduración de isletas fetales. En los ejemplos de la solicitud de patente US20040228846 , péptidos hormonales derivados de intestino incluyendo péptido pancreático (PP) , neuropéptido Y (NPY) , neuropéptido K (NPK) , PYY, secretina, péptido 1 tipo glicagón (GLP-1) y bombesina se compraron de Sigma. Colagenasa tipo XI fue obtenida de Sigma. Medio de cultivo RPMI 1640 y suero bovino fetal se obtuvieron de Gibco. Un kit de radioinmunoensayo que contenía anticuerpo anti-insulina (kit
[1251] -RIA) se compró de Lineo, St . Louis. Isletas de ratas posparto fueron obtenidas de ratas de P-02 años de edad. Isletas de ratas adultas se obtuvieron de ratas de 6-8 semanas de edad. Las isletas de ratas fetales se obtuvieron como sigue. Ratas hembra preñadas fueron sacrificadas en el día e21 de preñez. Los fetos fueron retirados del útero. 10-14 Páncreas fueron diseccionados de cada carnada y se lavaron dos veces en regulador de pH de Hanks . Los páncreas fueron agrupados, suspendidos en 6 mi de 1 mg/ml de colagenasa (tipo XI, Sigma) y se incubaron a 37°C durante 8-10 minutos con agitación constante. La digestión fue detenida al añadir 10 volúmenes de regulador de pH de Hanks helado seguidos por tres lavados con regulador de pH de Hanks. Las isletas fueron después purificadas mediante gradiente Ficoll y cultivadas en 10% de suero bovino fetal (FBS) /medio RPMI con o sin la adición de 1 µ? de IBMX. Al final de cinco días, 20 isletas fueron recogidas con la mano en cada tubo y ensayadas para liberación de insulina estática. Generalmente, las isletas fueron primero lavadas con regulador de pH KRP y luego incubadas con 1 mi de regulador de pH KRP que contenía 3 mM (bajo) de glucosa durante 30 minutos a 37 grados centígrados con agitación constante. Después se recogió el sobrenadante, las isletas fueron incubadas con 17 mM (alto) de glucosa durante una hora a 37 grados centígrados. La insulina liberada de la estimulación de alta o baja glucosa se ensayó mediante radioinmunoensayo (RIA) usando el kit
[1251] -RIA. Isletas fetales E21 fueron cultivadas durante 5 días en presencia de 200 ng/ml de PYY, PP, CCK, NP , NPY, secretina, GLP-I o bombesina .
Un ensayo in vivo ejemplar también se proporciona usando la rata macho Grasa Diabética Zucker (ZDF) , un modelo de rata consanguíneo ( >Generaciones F30) que expresa espontáneamente diabetes en machos fa/fa que son alimentados con una dieta para roedores estándar Purina 5008. En hembras fa-fa ZDF la hiperglucemia empieza a desarrollarse aproximadamente a las siete semanas de edad y los niveles de glucosa (alimentados) alcanzan típicamente 500 mg/DL de 10 a 11 semanas de edad. Los niveles de insulina (alimentados) son altos durante el desarrollo de diabetes. Sin embargo, a las 19 semanas de edad la insulina cae a aproximadamente el nivel de los compañeros de carnada de control magros. Los niveles de triglicéridos y colesterol de ratas obesas normalmente son más altos que aquellos de las magras. En el ensayo, tres grupos de ratas ZDF de 7 semanas de edad, con 6 ratas por grupo, recibieron el tratamiento de infusión mediante bomba Alzet durante 14 días:' 1) control de vehículo, 2) y -3) , PYY con dos dosis diferentes, 100 pmol/kg/h y 500 pmol/kg/h respectivamente. Se tomaron cuatro mediciones antes de la infusión y después de la infusión en el día 7 y día 14: 1) nivel de glucosa en plasma, 2) nivel de insulina en plasma y 3) nivel de triglicéridos (TG) en plasma, así como prueba de tolerancia a glucosa oral (OGTT) . En consecuencia, estos ensayos pueden usarse con compuestos de la invención para probar actividad deseada.
Los compuestos de la invención se pueden usar en el tratamiento de ansiedad. Un método para medir un efecto de un péptido administrado en comportamiento tipo ansiedad mediante la prueba de laberinto plus elevado se describe en la sección de materiales y métodos de la página 1327 bajo el título "Administraciones Repetidas" en (Asakawa A et al, Characterization of the effects of pancreatic polypeptide in the regulation of energy balance, Gastroenterology, 2003, 124, 1325-1336) .
Compuestos de la invención pueden usarse en el tratamiento de rinitis de cualquier origen. Un método para medir un efecto de un péptido administrado en el flujo sanguíneo nasal con marcador de rinitis se describe en la página 1725, línea 11 de (Cervin A et al, Functional effects of neuropeptide Y receptor son blood flow and nitric oxide levéis in the human nose. Am J Respir Crit Care Med. 1999 Nov; 160 (5 Pt 1): 1724-8).
Los compuestos de la invención pueden ser útiles para promover sanación de heridas. Los compuestos de la invención pueden ser útiles para reducir el tiempo de recreación después dé cirugía de cualquier tipo incluyendo a, pero no limitada a, cirugía dental y cirugía cosmética. Los compuestos de la invención pueden ser útiles para promover arteriogénesis en el tratamiento de enfermedades en las que esto sea deseable, incluyendo, pero no limitadas a, enfermedad arterial periférica.
Los compuestos de la invención exhiben una amplia gama de actividades biológicas, algunas relacionadas con sus propiedades anti-secretoras y anti-motilidad. Los compuestos pueden suprimir las secreciones gastrointestinales mediante interacción directa con células epiteliales o, tal vez, al inhibir la secreción de hormonas o neurotransmisores que estimulan secreción intestinal. Las propiedades antisecretoras incluyen inhibición de secreciones gástricas y/o pancreáticas y- pueden ser útiles en el tratamiento o prevención de enfermedades o trastornos incluyendo gastritis, pancreatitis aguda, esófago de Barrett y enfermedad de reflujo gastroesofágico .
Los compuestos de la invención son útiles en el tratamiento de cualquier número de trastornos gastrointestinales (véase, por ejemplo, Harrison Principies of Internal Medicine, McGraw-Hill Inco, Nueva York, 12a edición) que estén asociados con exceso de electrolitos intestinales y secreción de agua así como absorción reducida, por ejemplo, diarrea infecciosa, diarrea inflamatoria, síndrome del intestino corto o la diarrea que ocurre típicamente después de procedimientos quirúrgicos, por ejemplo, ileostomía. Ejemplos de diarrea infecciosa incluyen, sin limitación, diarrea viral aguda, diarrea bacteriana aguda (por ejemplo, salmonella, Campylobac er y Clostridium o debido a infecciones por protozoario) , o diarrea del viajero (por ejemplo, virus de Norwalk o rotavirus) . Ejemplos de diarrea inflamatoria incluyen, sin limitación, síndrome de mala absorción, esprue tropical, pancreatitis crónica, enfermedad de Crohn, diarrea y síndrome del intestino irritable. También se ha descubierto que los péptidos de la invención pueden usarse para tratar una situación de emergencia o que amenace la vida que incluya un trastorno gastrointestinal, por ejemplo, después de cirugía o debido a cólera. Un método para medir la secreción de electrolitos intestinales se describe en la página 1250 de (Etc B et al Comparison of the antisecretory effect of endogenous forms of peptide YY on fed and fasted rat jejunum. Peptides. 1997 ; 18 (8) : 1249-55) .
Los compuestos de la invención también pueden ser útiles para tratar o prevenir daño intestinal a diferencia de simplemente tratar los síntomas asociados con el daño intestinal (por ejemplo, diarrea) . Este daño al intestino puede ser, o resultar de, diarrea inducida por quimioterapia, colitis ulcerosa, enfermedad inflamatoria del intestino, atrofia intestinal, pérdida de mucosa intestinal y/o pérdida de función de mucosa intestinal (véase WO 03/105763, incorporada en la presente a manera de referencia en su totalidad) . Los ensayos para esta actividad, según se describe en WO 03/105763, incluyen ratas HSD macho de 11 semanas de edad, que varían de 250-300 gramos alojadas en un ciclo de luz : oscuridad de 12:12 y que se les permite acceso libre a dieta para roedores estándar (Teklad LM 485, Madison, WI) y agua. Los animales fueron ayunados durante 24 horas antes del experimento. Un modelo de rata simple y reproducible de inflamación colónica crónica ha sido descrito previamente por Morris GP, et al., "Hapten-induced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon" . Gastroenterology, 1989; 96:795-803. Exhibe una duración de inflamación y ulceración relativamente larga, brindando una oportunidad para estudiar la patofisiología de enfermedad inflamatoria colónica en una forma específicamente controlada, y para evaluar nuevos tratamientos potencialmente aplicables a enfermedad inflamatoria del intestino en humanos. Las ratas fueron anestesiadas con 3% de isofluorano y puestas en un conjunto de almohadillas de calentamiento reguladas a 37°C. Se insertó una aguja de alimentación forzada rectalmente en el colon 7 cm. El hapteno ácido trinitrobencensulfónico (TNBS) disuelto en 50% de etanol (v/v) fue suministrado al lumen del colon a través de la aguja de alimentación forzada a una dosis de 30 mg/kg, en un volumen total de 0 0.4-0.6 mL, según se describe en Mazelin, et al., "Protective role of vagal afferentes in experimentally- induced colitis in rats" . Juton Nerv Syst . 1998/73:38 45. Los grupos de control recibieron solución salina (NaCl 0.9%) intracolónicamente . Cuatro días después de la inducción de colitis, el colon fue reseccionado de ratas anestesiadas, las cuales fueron después sometidas a eutanasia por decapitación. Los pesos de colon y bazo extirpados fueron medidos, y los colones se fotografiaron para graduar el daño morfológico bruto. La inflamación se definió como regiones de hiperemia y engrosamiento de pared intestinal .
Los agonistas selectivos del receptor Y4 de la invención son de valor en el tratamiento de constipación. La frecuencia de movimientos intestinales, una medida de constipación, puede medirse mediante cualquier medio conocido por alguien experto en la técnica.
Los agonistas selectivos de Y4 también son de valor en el tratamiento de diarrea o hipersecreción de estomia intestinal, y en el tratamiento de náusea o emesis, o como agentes antináusaea o antieméticos o co-tratamiento con fármacos propensos a causar náusea y/o emesis.
Los compuestos selectivos de Y4 de la presente invención, y el propio PP, también son útiles para el tratamiento o protección contra emesis y náusea.
En un aspecto de la invención se puede llevar a cabo una prueba aguda en donde un compuesto de la invención se administre para asegurar que estos compuestos tengan el efecto deseado en el sujeto que será tratado antes de que se inicie un tratamiento crónico. A través de estos medios se asegura que sólo los sujetos que sean susceptibles a tratamiento con un compuesto de la invención sean tratados con estos compuestos.
En un aspecto, la invención se refiere a un método del tratamiento de una afección que responde a modulación del receptor Y mediante la administración de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo como el definido en la presente. En un aspecto de la invención, en el método de tratamiento, la condición que responde a modulación de receptor Y es obesidad. En un aspecto de la invención, en el método de tratamiento, la afección es enfermedades relacionadas con obesidad, tales como reducción de consumo alimenticio, síndrome X (síndrome metabólico). , diabetes, diabetes mellitus tipo 2 o Diabetes Mellitus No Insulinodependiente (NIDDM) , hiperglucemia, resistencia a insulina, tolerancia a glucosa afectada, enfermedad cardiovascular, hipertensión, aterosclerosis , enfermedad de arteria coronaria, infarto de miocardio, enfermedad vascular periférica, apoplejía, enfermedades tromboembólicas , hipercolesterolemia, hiperlipidemia, enfermedad de vesícula biliar, osteoartritis , apnea del sueño, trastornos reproductivos tales como síndrome de ovarios poliquísticos o cáncer del seno, próstata o colon. En un aspecto de la invención, en el método de tratamiento, la afección es una enfermedad asociada con exceso de electrolitos intestinales y secreción de agua o absorción reducida, por ejemplo, diarrea infecciosa, diarrea inflamatoria, síndrome del intestino corto o la diarrea que típicamente ocurre después de procedimientos quirúrgicos, por ejemplo, ileostomía. Ejemplos de diarrea infecciosa incluyen, sin limitación, diarrea viral aguda, diarrea bacteriana aguda (por ejemplo, salmonella, Campylobacter y Clostridium o debido a infecciones por protozoarios) , o diarrea del viajero (por ejemplo, virus de Norwalk o rotavirus) . Ejemplos de diarrea inflamatoria incluyen, sin limitación, síndrome de mala absorción, esprue tropical, pancreatitis crónica, enfermedad de Crohn, diarrea y síndrome del intestino irritable. En un aspecto de la invención, en el método de tratamiento, la afección es una afección caracterizada por daño al intestino tal como diarrea inducida por quimioterapia, colitis ulcerosa, enfermedad inflamatoria del intestino, atrofia intestinal, pérdida de mucosa intestinal y/o pérdida de función de mucosa intestinal. En una aspecto de la invención, en el método de tratamiento, la afección es una afección inflamatoria intestinal tal como colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn o síndrome del intestino irritable. En un aspecto de la invención, en el método de tratamiento, la afección es rinitis alérgica o no alérgica. En un aspecto de la invención, en el método de tratamiento, la afección que responde es ansiedad. En un aspecto de la invención, en el método de tratamiento, el régimen de administración se selecciona del grupo que consiste en una vez al día, una vez por semana, dos veces al mes o una vez al mes. En un aspecto de la invención, en el método de tratamiento, el derivado muestra perfil PK mejorado en comparación con PYY humano, ,PYY(3-36), o PP. En un aspecto de la invención, en el método de tratamiento, el derivado muestra propiedades prolongadas en comparación con PYY humano, PYY(3-36), o PP. En un aspecto de la invención, en el método de tratamiento, el derivado muestra vida media mejorada in vivo en comparación con PYY humano, PYY (3-36) o PP. En un aspecto de la invención, en el método de tratamiento, una dosis terapéuticamente efectiva del derivado causa menos efectos secundarios en comparación con PYY humano, PYY(3-36), o PP .
En un aspecto, la invención se refiere al uso de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo como el definido en la presente en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una afección que responda a modulación del receptor Y, tal como obesidad o enfermedades relacionadas con obesidad, por ejemplo, reducción de consumo alimenticio.
En un aspecto, el derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo proporciona una reducción de consumo de alimento de por lo menos 5%, tal como al menos 10%, 15%, 20%, 25% o 30% en comparación con vehículo. En un aspecto, el derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo proporciona reducción de consumo de alimento en la escala de 5-30%, tal como al menos 5-20%, 5-15% o 10-20% en comparación con vehículo.
En un aspecto, el derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo proporciona una reducción de peso corporal de al menos 5%, tal como al menos 10%, 15%, 20%, 25% o 30% en comparación con vehículo. En un aspecto, el derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo proporciona una reducción de peso corporal en la escala de 5-30%, tal como al menos 5-20%, 5-15% o 10-20% en comparación con vehículo.
En un aspecto la invención se refiere al uso de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo como el definido en la presente para su administración en un mamífero, en donde el derivado muestra propiedades prolongadas en comparación con los compuestos PP y PYY humanos .
Medición del efecto in vi tro de péptidos de doblez PP en la actividad del receptor Y Medición de movilización de calcio usando células que co-expresan receptor Y y una proteína G quimérica La potencia y los compuestos de prueba en los receptores Y humanos se determina al llevar a cabo experimentos de respuesta a dosis en células CHO transíectadas establemente con receptor Y humano así como una proteína G promiscua, Gqi5, lo cual asegura que el receptor Y se acopla a través de una vía Gq llevando a un incremento en movilización de calcio que se mide usando un FLIPR (FLIPRtetra de Molecular Devices, CA, E.U.A.).
?. Preparación de células 1. Células CHO de receptor Y adherentes y doble estables a Gqi5 mantenidas en DMEM-F12 con antibióticos adecuados se colocan en microplacas recubiertas con poly-D-lisina de 96 pocilios hasta casi confluencia y se cultivan durante la noche .
B. Preparación de reactivos 2. Una solución de 250 mM (100X) de ácido probenecid (Invitrogen #P36400) se hace y se disuelve en 1 mi de regulador de pH de ensayo. 3. La solución de carga de colorante se prepara (para una microplaca) : solución de abastecimiento de 10 mi de regulador de pH de ensayo y 100 µ? de ácido probenecid (concentración final: 2.5 mM) se añade a un vial de mezcla de carga colorante (proporcionada en el kit) . Se somete a vórtice rigorosamente.
C. Ensayo 4. Cien microlitros de · la solución de carga de colorante se añade a cada pocilio de una placa de 96 pocilios que contiene células en 100 µ? de medio (u otros reguladores de pH dependiendo del ligando que será probado) .
Las células se colocan en la incubadora a 37°C/5% de C02. Las células se incuban durante 1 hora antes del ensayo . 5. Durante la incubación de las células se mezcla colorante, se prepara una solución de agonista de receptor (5X) en HBSS/HEPES: Solución Salina Balanceada de Hank (IX) con 20 mM de HEPES, 0.01% de NaN3, pH 7.4 (con 0.1% de BSA si se usa péptido como ligando) . Se hace una dilución en serie en una placa de 96 pocilios (VWR #62409-108, NU C, fondo en V) . 6. Una hora después de la adición de la mezcla colorante a las células, se mide la fluorescencia usando un FLIPR (FLIPRtetra form Molecular Devices, CA, E.U.A.).
Las determinaciones se hacen por triplicado. Los valores EC50 se calculan usando un software de manejo de datos farmacológicos estándar, Prism 5.0 (graphPad Sofware, San Diego, E .U.A. ) .
Medición de la actividad del receptor Y2 o Y4 usando ensayo FLIPR a base de ACTOne : ACTOne™ es una plataforma HTS biosensora de cAMP fácilmente escalable para la medición de la señalización de receptor 7TM acoplado a Gs y Gi de BD Biosciences (San José, CA) . Las células expresan un biosensor revelado alrededor de un canal de calcio regulado por nucleótidos cíclicos olfativos de rata modificado (CNG) - un canal iónico que no discrimina y el cual corresponde a cAMP y cGMP . El CNG ha sido diseñado para ser selectivo' de cAMP y de esta manera funcionar como un biosensor sensible a cAMP que señalice a través de colorantes que responden a potenciales de calcio o membrana. Células HEK-293 ACTOne que expresan al receptor Y2 o Y4 se obtienen de BD Biosciences. Las células son cargadas con un colorante sensible a calcio que sólo se distribuyen en citoplasma. Probenecid, un inhibidor del transportador aniónico orgánico se añade para evitar que el colorante deje la célula. Se añade un inhibidor de fosfodiesterasa para evitar que cAMP formateado sea degradado. Isoproterenol (un agonista de ß?/ß2) es añadido para activar la adenilato ciclasa. Cuando se añade un agonista del receptor Y2 o Y4 , se inactiva la adenilato ciclasa. La concentración de calcio reducida en el citoplasma se detecta después como un incremento en fluorescencia. Junto con la sustancia de prueba, isoproterenol a una concentración que iguala EC30, se añade a todos los pocilios.
· Las células se sacan en placas de 384 pocilios Greiner. 25 µ? de suspensión celular que contiene 560 células por µ? se añaden a todos los pocilios usando el Multidrop™ (384-Multidrop de Labsystems, Finlandia) .
• Las placas de células son luego incubadas en la incubadora durante la noche a 37°C con 5% de C02 pilas de hasta 9 placas .
• Las placas celulares se cargan con 25 µ? de sonda del kit FLIPR calcio4 (Molecular Devices, CA, E.U.A.) usando el Multidrop™.
· Las placas con células se regresan a la incubadora y se incuban durante 60 minutos a 37°C en pilas de hasta 9 placas .
• Las placas celulares se dejan después a temperatura ambiente durante 60 minutos, antes de usar, con apilado de las placas. Las placas se cubren con un papel delgado de estaño para evitar la luz (el colorante puede ser excitado por la luz diurna, lo cual se traduce en línea de base y variación más altas) .
• El FLIPR (FLIPRtetra de Molecular Devices, CA, E.U.A.) añade una muestra de 1 µ? y 1 µ? de isoproterenol (concentración final de 0.05 µ?) al mismo tiempo.
• La señal de fluorescencia de los pocilios se mide 330 segundos después de la adición de la muestra en el FLIPR.
Administración y composiciones farmacéuticas Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una formulación farmacéutica que comprenda un derivado de acuerdo con la presente invención el cual esté presente a una concentración de 0.1 mg/ml a 25 mg/ml , y en donde la formulación tenga un pH de 3.0 a 9.0. La formulación puede comprender además un sistema de regulación de pH, conservadores, agentes de tonicidad, agentes quelantes, estabilizadores y agentes tensioactivos . El término "composición farmacéutica" según se usa en la presente significa un producto que comprende un derivado activo de acuerdo con la invención junto con excipientes farmacéuticos tales como regulador de pH, conservador y opcionalmente un modificador de tonicidad y/o un estabilizador. De esta manera una composición farmacéutica se conoce también en la técnica como una formulación farmacéutica .
En un aspecto la invención se refiere a una composición que comprende un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo como el definido en la presente y uno o más excipientes farmacéuticos.
En un aspecto de la invención, la formulación farmacéutica es una formulación acuosa, es decir, una formulación que comprende agua. Esta formulación es típicamente una solución o una suspensión. En un aspecto de la invención, la formulación farmacéutica es una solución acuosa. El término "formulación acuosa" se define como una formulación que comprende al menos 50% p/p de agua. Asimismo, el término "solución acuosa" se define como una solución que comprende al menos 50% p/p de agua, y el término "suspensión acuosa" se define como una suspensión que comprende al menos 50% p/p de agua.
En un aspecto, la formulación farmacéutica es una formulación liofilizada, a la cual se le añaden el médico o el paciente solventes y/o diluyentes antes de usar.
En un aspecto, la formulación farmacéutica es una formulación seca (por ejemplo, liofilizada o secada por aspersión) lista para usarse sin ninguna disolución anterior.
En un aspecto, la invención se refiere a una formulación farmacéutica que comprende una solución acuosa de un derivado de acuerdo con la presente invención, y un regulador de pH, en donde el derivado está presente a una concentración de 0.1 mg/ml o más, y en donde la formulación tiene un pH de alrededor de 3.0 a aproximadamente 9.0.
En un aspecto, el pH de la formulación es de aproximadamente 7.0 a alrededor de 9.5. En un aspecto, el pH de la formulación es de aproximadamente 3.0 a alrededor de 7.0. En un aspecto, el pH de la formulación es de aproximadamente 5.0 a alrededor de 7.5. En un aspecto, el pH de la formulación es de aproximadamente 7.0 a alrededor de 9.5. En un aspecto, el pH de la formulación es de aproximadamente 7.5 a alrededor de 9.0. En un aspecto, el pH de la formulación es de aproximadamente 7.5 a alrededor de 8.5. En un aspecto, el pH de la formulación es de aproximadamente 6.0 a alrededor de 7.5. En un aspecto, el pH de la formulación es de aproximadamente 6.0 a alrededor de 7.0. En un aspecto, la formulación farmacéutica es de 8.0 a 8.5.
En un aspecto de la invención, cada dosis administrada contiene de 0.01 mg-10 mg del derivado activo. En un aspecto, la dosis administrada contiene más de 0.05 mg del derivado activo. En un aspecto, la dosis administrada contiene más de 0.1 mg de derivado activo. En un aspecto, la dosis administrada contiene hasta 10 mg de derivado activo. En un aspecto, la dosis administrada contiene hasta 9 mg de derivado activo. En un aspecto, la dosis administrada contiene hasta 8 mg de derivado activo. En un aspecto, la dosis administrada contiene hasta 7 mg de derivado activo. En un aspecto, la dosis administrada contiene hasta 5 mg de derivado activo. En un aspecto, la dosis administrada contiene de 0.2 mg a 5 mg de derivado activo.
En un aspecto de la invención, el regulador de pH se selecciona del grupo que consiste en acetato de sodio, carbonato de sodio, citrato, glicilglicina , histidina, glicina, lisina, arginina, fosfato diácido de sodio, fosfato ácido disódico, fosfato de sodio y tris (hidroximetil) -aminometano, bicina, tricina, ácido málico, succinato, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido aspártico o mezclas de los mismos. Cada uno de estos reguladores de pH específicos constituye un aspecto alternativo de la invención .
En un aspecto de la invención, la formulación comprende además un conservador farmacéuticamente aceptable. En un aspecto de la invención el conservador se selecciona del grupo que consiste en fenol, o-cresol, m-cresol, p-cresol, p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, 2-fenoxietanol, p-hidroxibenzoato de butilo, 2- feniletanol, alcohol bencílico, clorobutanol y tiomerosal, bronopol, ácido benzoico, imidurea, clorohexidina, deshidroacetato de sodio, clorocresol, p-hidroxibenzoato de etilo, cloruro de bencetonio, clorfenesina (3p-clorfenoxipropano-1 , 2-diol) o mezclas de los mismos. En un aspecto, el conservador es fenol o m-cresol. En un aspecto de la invención, el conservador está presente a una concentración de 0.1 mg/ml a 20 mg/ml . En un aspecto de la invención, el conservador está presente a una concentración de 0.1 mg/ml a 5 mg/ml. En un aspecto de la invención, el conservador está presente a una concentración de 5 mg/ml a 10 mg/ml. En un aspecto de la invención, el conservador está presente a una concentración de 10 mg/ml a 20 mg/ml. Cada uno de estos conservadores específicos constituyen aspecto alternativo de la invención. El uso de un conservador en composiciones farmacéuticas se conoce bien por la persona capacitada. Para conveniencia se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edición, 1995.
En un aspecto de la invención, la formulación comprende además un agente isotónico. En un aspecto de la invención, el agente isotónico se selecciona del grupo que consiste en una sal (por ejemplo, cloruro de sodio) , un azúcar o alcohol de azúcar, un aminoácido (por ejemplo, L-glicina, L-histidina, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptófano, treonina) , un alditol (por ejemplo, glicerol (glicerina) , 1 , 2-propanodiol (propilenglicol) , 1,3-propanodioí, 1 , 3 -butanodiol) polietilenglicol (por ejemplo, PEG400) , o mezclas de los mismos. En un aspecto, el agente de isotonicidad es propilenglicol. Cualquier azúcar tal como mono-, di- o polisacáridos , o glucanos hidrosolubles , incluyendo por ejemplo fructosa, glucosa, mañosa, sorbosa, xilosa, maltosa, lactosa, sucrosa, trehalosa, dextrano, pululano, dextrina, ciclodextrina , alfa y beta HPCD, almidón soluble, hidroxietil almidón y carboximetilcelulosa de sodio pueden ser usados. En un aspecto, el aditivo de azúcar es sucrosa. Alcohol de azúcar se define como un hidrocarburo de C4-C8 que tiene al menos un grupo -OH e incluye, por ejemplo, manitol, sorbitol, inositol, galactitol, dulcitol, xilitol y arabitol . En un aspecto, el aditivo de alcohol de azúcar es manitol. Los azúcares o alcoholes de azúcar mencionados arriba pueden usarse individualmente o en combinación. No hay un límite fijo en la cantidad usada, siempre y cuando el azúcar o alcohol de azúcar sea soluble en la preparación líquida y no afecte adversamente los efectos estabilizadores logrados usando los métodos de la invención. En un aspecto, la concentración de azúcar o alcohol de azúcar es de entre aproximadamente 1 mg/ml y alrededor de 150 mg/ml. En un aspecto de la invención, el agente isotónico está presente a una concentración de 1 mg/ml a 50 mg/ml. En un aspecto de la invención, el agente isotónico está presente a una concentración de 1 mg/ml a 7 mg/ml. En un aspecto de la invención, el agente isotónico está presente a una concentración de 5 mg/ml a 7 mg/ml. En un aspecto de la invención, el agente isotónico está presente a una concentración de 8 mg/ml a 24 mg/ml. En un aspecto de la invención, el agente isotónico está presente a una concentración de 25 mg/ml a 50 mg/ml. Cada uno de estos agentes isotónicos específicos constituye un aspecto alternativo de la invención. El uso de un agente isotónico en composiciones farmacéuticas se conoce bien por la persona capacitada. Para conveniencia se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edición, 1995.
En un aspecto de la invención, la formulación comprende además un agente quelante. En un aspecto de la invención el agente quelante se selecciona de sales de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) , ácido cítrico, y ácido aspártico, y mezclas de los mismos. En un aspecto de la invención el agente quelante está presente a una concentración de 0.1 mg/ml a 5 mg/ml. En un aspecto de la invención el agente quelante está presente a una concentración de 0.1 mg/ml a 2 mg/ml. En un aspecto de la invención el agente quelante está presente a una concentración de 2 mg/ml a 5 mg/ml. Cada uno de estos agentes quelantes específicos constituye un aspecto alternativo de la invención. El uso de un agente quelante en composiciones farmacéuticas se conoce bien por la persona experta. Para conveniencia se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edición, 1995.
En un aspecto de la invención, la formulación comprende además un estabilizador. . - El uso de un estabilizador en composiciones farmacéuticas se conoce bien por la persona capacitada. Para conveniencia se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edición, 1995.
Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden comprender además una cantidad de una base de aminoácidos suficiente para reducir la formación de agregados por el polipéptido durante el almacenamiento de la composición. Por "base de aminoácidos" se intenta decir un aminoácido o combinación de aminoácidos, en donde cualquier aminoácido dado está presente ya sea en su forma de base libre o en su forma de sal. Cuando se usa una combinación de aminoácidos, todos los aminoácidos pueden estar presentes en sus formas de base libre, todos pueden estar presentes en sus formas de sal o algunos pueden estar presentes en sus formas de base libre mientras que otros estén presentes en sus formas de sal. En un aspecto, los aminoácidos para usarse en la preparación de las composiciones de la invención son aquellos que portan una "cadena lateral cargada, tales como arginina, lisina, ácido aspártico y ácido glutámico. Cualquier estereoisómero (es decir, L, D o una mezcla de los mismos) de un aminoácido particular (por ejemplo metionina, histidina, imidazol, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptófano, treonina y mezclas de los mismos) o combinaciones de estos estereoisómeros , puede esta presente en las composiciones farmacéuticas de la invención' siempre y cuando el aminoácido particular esté presente ya sea en su forma de base libre o en su forma de sal. En un aspecto el L-estreoisómero es usado. Las composiciones de la invención también se pueden formular con análogos de estos aminoácidos. Por "análogo de aminoácido" se intenta decir un derivado del aminoácido de origen natural que ocasiona el efecto deseado de reducir la formación de agregados por el polipéptido durante el almacenamiento de las composiciones farmacéuticas líquidas de la invención. Los análogos de arginina adecuados incluyen, por ejemplo, aminoguanidina, ornitina y N-monoetil-L-arginina, los análogos de metionina adecuados incluyen etionina y butionina y los análogos de cisteína adecuados incluyen S-metil -L-cisteína . Al igual que con los demás aminoácidos, los análogos de aminoácido son incorporados en las composiciones ya sea en forma de base libre o en su forma de sal. En un aspecto de la invención, los aminoácidos o análogos de aminoácido se usan a una concentración, la cual es suficiente para evitar o retrasar la agregación de la proteína.
En un aspecto de la invención, se puede añadir metionina (u otros aminoácidos o análogos de aminoácido sulfúrico) para inhibir la oxidación de residuos de metionina a sulfóxido de metionina cuando el polipéptido que actúe como el agente terapéutico sea un polipéptido que comprenda al menos un residuo de metionina susceptible a esta oxidación. Por "inhibir" se intenta decir una acumulación mínima de especies oxidadas por metionina con el tiempo. Inhibir la oxidación de metionina se traduce en una mayor retención del polipéptido en su forma molecular adecuada. Puede usarse cualquier estereoisómero de metionina (L o D) o combinaciones de los mismos. La cantidad que se añadirá debe ser una cantidad suficiente para inhibir la oxidación de los residuos de metionina de tal manera que la cantidad de sulfóxido de metionina sea aceptable para las agencias reguladoras. Típicamente, esto significa que la composición contiene no más de aproximadamente 10% a alrededor de 30% de sulfóxido de metionina. Generalmente, esto se puede lograr al añadir metionina de tal manera que la relación de metionina añadida a residuos de metionina varíe de alrededor de 1:1 a alrededor de 1000:1, tal como 10:1 a aproximadamente 100:1.
En un aspecto de la invención, la formulación comprende además un estabilizador seleccionado del grupo de polímeros de alto peso molecular o compuestos de bajo peso molecular .
En un aspecto de la invención el estabilizador se selecciona de polietilenglicol (por ejemplo, PEG 3350) , alcohol polivinílico (PVA) , polivinilpirrolidona, carboxi-/hidroxietilcelulosa o derivados de la misma (por ejemplo HPC, HPC-SL, HPC-L y HPMC) , ciclodextrinas, sustancias que contengan azufre tales como monotioglicerol , ácido tioglicólico y 2 -metiltioetanol , y diferentes sales (por ejemplo, cloruro . de sodio) . Cada uno de estos estabilizadores específicos constituye un aspecto alternativo de la invención.
Las composiciones farmacéuticas también pueden comprender agentes estabilizadores adicionales, los cuales incrementen más la estabilidad de un polipéptido terapéuticamente activo en la misma.
Los agentes estabilizadores de interés particular para la presente invención incluyen, pero no están limitados a, metionina y EDTA, los cuales protegen al polipéptido contra la oxidación por metionina, y un agente tensioactivo no iónico, el cual protege al polipéptido contra la agregación asociada con congelación-descongelación o corte mecánico .
En un aspecto de la invención, la formulación comprende además un agente tensioactivo. En un aspecto de la invención, la composición farmacéutica comprende dos agentes tensioactivos diferentes. El término "agente tensioactivo" según se usa en la presente se refiere a cualquier molécula o ión que comprenda una parte hidrosoluble (hidrófila) , la cabeza y un segmento soluble en grasas (lipófilo) . Los agentes tensioactivos se acumulan específicamente en interfaces, a las cuales la parte hidró ila es orientada hacia el agua (fase hidrófila) y la parte lipófila hacia la fase de aceite o hidrófoba (es decir, vidrio, aire, aceite, etc.). La concentración a la cual los agentes tensioactivos empiezan a formar micelas se conoce como la concentración micelar crítica o CMC. Además, los agentes tensioactivos reducen la tensión superficial de un líquido. Los agentes tensioactivos también se conocen como compuestos anfifáticos. El término "detergente" es un sinónimo usado para agentes tensioactivos en general.
Los agentes tensioactivos aniónicos pueden seleccionarse del grupo de: ácido quenodesoxicólico, sal sodio de ácido quenodesoxicólico, ácido cólico, ácido deshidrocólico, ácido desoxicólico, éster metílico de ácido desoxicólico, digitonina, digitoxigenina, N, N-dimetildodecilamina N-óxido, docusato de sodio, ácido glicochenodesoxicólico de sodio, ácido glicocólico hidratado, monohidrato de ácido glicodesoxicólico, sal sodio de ácido glicodesoxicólico, sal sodio de ácido glicodesoxicólico, sal disódica de 3-sulfato de ácido glicolitocólico, éster etílico de ácido glicolitocólico, sal sodio de N-lauroilsarcosina, sal sodio de N-lauroilsarcosina, N-lauroilsarcosina, N-lauroilsarcosina, dodecilsulfato de litio, lugol, sal sodio de ácido 1-octanosulfónico, sal sodio de ácido 1-octanosulfónico, 1-butansulfonato de sodio, 1-decanosulfonato de sodio, l-dodecanosulfonato de sodio, 1-heptanosulfonato de sodio, 1-heptanosulfonato de sodio, 1-nonanosulfonato de sodio, 1-propanosulfonato de sodio monohidratado, 2-bromoetansulfonato de sodio, hidrato de colato de sodio, bilis de buey o borrego, colato de sodio hidratado, coleato de sodio, desoxicolato de sodio, dodecilsulfato de sodio, dodecilsulfato de sodio, hexansulfonato de sodio, octilsulfato de sodio, pentanosulfato de sodio, taurocolato de sodio, sal sodio de ácido tauroquenodesoxicólico, sal sodio de ácido taurodesoxicólico monohidratado, sal disódica de 3-sulfato de ácido taurolitocólico, sal sodio de ácido tauroursodesoxicólico, dodecilsulfato Trizmae, DSS (docusato sódico, número de registro CAS [577-11-7] ) , docusato de calcio, No. de registro CAS [128-49-4]), docusato de potasio, No. de registro CAS [7491-09-0]), SDS (dodecilsulfato de sodio o laurilsulfato de sodio) , dodecilfosfocolina (FOS-Colina-12) , decilfosfocolina (FOS-colina-10) , nonilfosfocolina (FOS-colina-9) , ácido dipalmitoil fosfatídico, caprilato de sodio y/o ácido ursodesocicólico.
Los agentes tensioactivos catiónicos pueden seleccionarse de: bromuro de alquiltrimetilamonio, cloruro de benzalconio, cloruro de benzalconio, cloruro de bencildimetilhexadecilamonio, cloruro de bencildimetiltetradecilamonio, tetracloroyodato de benciltrimetilamonio, bromuro de dimetildioctadecilamonio, bromuro de dodeciletildimetilamonio, bromuro de dodeciltrimetilamonio, bromuro de dodeciltrimetilamonio, bromuro de etilhexadecildimetilamonio, bromuro de hexadeciltrimetilamonio, bromuro de hexadeciltrimetilamonio, polioxietileno (10) -N-cebo-1, 3 -diaminopropano, bromuro de tonzonio y/o bromuro de trimetil (tetradecil ) amonio .
Los agentes tensioactivos no iónicos pueden seleccionarse del grupo de: BigCHAP, bis (polietilenglicol bis [imidazoilcarbonilo] ) , copolímeros de bloque tales como copolímeros de bloque de óxido de polioxietileno/óxido de polipropileno, tales como poloxámeros, poloxámero 188 y poloxámero 407, Brij® 35, Brij® 56, Brij® 72, Brij^ 76, Brij® 92V, Brij® 97, Brij® 58P, Cremophore EL, éter monododecílico de decaetilenglicol, N-decanoil-N-metilglucamina, alquil-poliglucósidos , aceite de ricino etoxilado, éter monodecílico de heptaetilenglicol , éter monododecílico de heptaetilenglicol , éter monotetradecílico de heptaetilenglicol , éter monododecílico de hexaetilenglicol , éter monohexadecíclico de hexaetilenglicol, éter monooctadecílico de hexaetilenglicol , éter monotetradecílico de hexaetilenglicol, Igepal CA-630, Igepal CA-630, metil-6-0-(N-heptilcarbamoil) -beta-D-glucopiranósido, éter monododecílico de nonaetilenglicol , N-nonanoil-N-metilglucamina, éter monodecílico de octaetilenglicol , éter monododecílico de octaetilenglicol, éter monohexadecílico de octaetilenglicol, éter monooctadecílico de octaetilenglicol, éter monotetradecílico de octaetilenglicol, ß-D-glucopiranósido de octilo, éter monodecílico de pentaetilenglicol , éter monododecílico de pentaetilenglicol , éter monohexadecílico de pentaetilenglicol, éter monohexílico de pentaetilenglicol, éter monooctadecílico de pentaetilenglicol, éter monooctílico de pentaetilenglicol, éter diglicidílico de polietilenglicol , éter polietilenglicólico W-l, éter tridecílico de polioxietileno 10, estearato de polioxietileno 100, éter isohexadecílico de polioxietileno 20, éter oleílico de polioxietileno 20, estearato de polioxietileno 40, estearato de polioxietileno 50, estearato de polioxietileno 8, polioxietileno bis ( imidazolilcarbonilo) , polioxietileno 20 estearato de propilenglicol , saponina de corteza, Span* 20, Span* 40, Span* 60, Span® 65, Span® 80, Span® 85, Tergitol, type 15-S-12, Tergitol, Type 15-S-30, Tergitol, Type 15-S-5, Tergitol, type 15-S-7, Tergitol, Type 15-S-9, Tergitol, Type NP-10, Tergitol, Type NP-4, Tergitol, Type NP-40, Tergitol, Type NP- 7, Tergitol, Type NP-9, Tetradecil^-D-maltósido, éter monodecílico de tetraetilenglicol , éter monododecílico de tetraetilenglicol , éter monotetradecílico de tetraetilenglicol, éter monodecílico de trietilenglicol , éter monododecílico de trietilenglicol, éter monohexadecílico de trietilenglicol, éter monooctílico de trietilenglicol, éter monotetradecílico de tetraeitlénglicol , Tritón CF-21, Tritón CF-32, Tritón DF-12, Tritón DF-16, Tritón GR-5M, Tritón QS-15, Tritón QS-44, Tritón X-100, Tritón X-102, Tritón X-15, Tritón X-151, Tritón X-200, Tritón X-207, Tritón® X-100, Tritón*8 X-114, Tritón* X-165 solución, Tritón® X-305 solución, Tritón® X-405, Tritón® X-45, Tritón® X-705-70, TWEEN® 20, TWEEN® 40, TWEEN® 60, TWEE S 6, TWEEN® 65, TWEEN® 80, TWEEN® 81, T EEN® 85, - Tiloxapol, esfingofosfolípidos (esfingomielina) y esfingoglicolípidos (ceramidas, gangliósidos) , fosfolípidos y/o ß-D-glucopiranósido de n-undecilo .
Los agentes tensioactivos zwitteriónicos pueden seleccionarse del grupo de: CHPAS, CHAPSO, sal interior de 3- (decildimetilamonio) propansulfonato, sal interior de 3- (dodecildimetilamonio) -propansulfonato, sal interior de 3- (dodecildimetilamonio) propansulfonato, 3- (N,N-dimetilmiristilamonio) propansulfonato, 3- (N,N-dimetiloctadecilamonio) -propansulfonato, sal interior de 3- (N, N-dimetiloctilamonio) propansulfonato, 3-(N,N- dimetilpalmitilamonio) propansulfonato, N-alquil-N, N-dimetilamonio- 1 -propansulfonatos , 3 -colamido- 1 -propiIdimeti lamonio- 1 -propansulfonato, dodecilfosfocolina , miristoil lisofosfatidilcolina, Zwittergent 3-12 (N-dodecil-N, lV-dimetil- 3 -amonio- 1-propansulfonato) , Zwittergent 3-10 (sal interior de 3 - (decildimetil-amonio) propansulfonato) , glicerofosfolípidos (lecitinas, cefalinas, fosfatidilserina) , gliceroglicolípidos (galactopiranósido) , derivados alquilo, alcoxilo (éster alquílico) , alcoxi (éter alquílico) de lisofosfatidil y fosfatidilcolinas , por ejemplo, derivados lauroilo y miristoilo de lisofosfatidilcolina, dipalmitoilfosfatidilcolina y modificaciones del grupo de cabeza polar, es decir colinas, etanolaminas , ácido fosfatídico, serinas, treoninas, glicerol, inositol, lisofosfatidilserina y lisofosfatidiltreonina , acilcarnitinas y derivados, derivados Nbeta-acilados de lisina, arginina o histidina, o derivados acilados en cadena lateral de lisina o arginina, derivados Nbeta-acilados de dipéptidos que comprenden cualquier combinación de lisina, arginina o histidina y un aminoácido neutro o ácido, derivado Nbeta-acilado de un tripéptido que comprende cualquier combinación de un aminoácido neutro y dos aminoácidos cargados, o el agente tensioactivo puede seleccionarse del grupo de derivados de imidazolina, ácidos grasos de cadena larga y sales de los mismos C6-Ci2 (por ejemplo, ácido oleico y ácido caprílico) , N-hexadecil-N,N-dimetil-3-amonio-l-propansulfonato, agentes tensioactivos monovalentes aniónicos (alquil-aril-sulfonatos) , palmitoil lisofosfatidil-L-serina, lisofosfolípiods (por ejemplo, ásteres l-acil-sn-glicero-3-fosfato de etanolamina, colina, serina o treonina) , o mezclas de los mismos.
El término "alquil-poliglucósidos" según se usa en la presente se refiere a cadena alquilo, alquenilo o alquinilo de C5-2o recta o ramificada que es sustituida por una o más porciones de glucósido tales como maltósido, sacárido, etc. En un aspecto estos alquil-poliglucósidos incluyen alquil-poliglucósidos de C6-i8- En un aspecto estos alquil-poliglucósidos incluyen las cadenas de carbono de números impares tales como cadena alquilo de C6, C8, Ci0, C12, 1 , C16, C18 y C20- En un aspecto, las porciones de glucósido incluyen piranósido, copiranósido, maltósido, maltotriósido y sucrosa. En un aspecto de la invención, menos de 6 porciones de glucósido son unidas al grupo alquilo. En un aspecto de la invención, menos de 5 porciones de glucósido son unidas al grupo alquilo. En un aspecto de la invención, menos de 4 porciones de glucósido son unidas al grupo alquilo. En un aspecto de la invención, menos de 3 porciones de glucósido son unidas al grupo alquilo. En un aspecto de la invención, menos de 2 porciones de glucósido son unidas al grupo alquilo. En un aspecto, los alquil-poliglucósidos son alquilglucósidos tales como n-decil- -D-glucopiranósido, ß-D-maltopiranósido de decilo, ß-D-glucopiranósido de dodecilo, ß-D-maltósido de n-dodecilo, ß-D-maltósido de n-dodecilo, ß-D-maltósido de n-dodecilo, ß-D-glucopiranósido de tetradecilo, ß-D-maltósido de decilo, ß-D-maltósido de hexadecilo, ß-D-maltotriósido de decilo, ß-D-maltotriósido de dodecilo, ß-D-maltotriósido de tetradecilo, ß-D-maltotriósido de hexadecilo, n-dodecil-sucrosa, n-decil-sucrosa, monocaprato de sucrosa, monolaurato de sucrosa, monomiristato de sucrosa y monopalmitato de sucrosa.
El uso de un agente tensioactivo en composiciones farmacéuticas se conoce bien por la persona capacitada. Para conveniencia se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edición, 1995.
En un aspecto de la invención, la formulación comprende además inhibidores de proteasa tales como EDTA (ácido etilendiamina tetraacético) y. clorhidrato de benzamidina, pero otros inhibidores de proteasa disponibles comercialmente también pueden ser usados. El uso de un inhibidor de proteasa es particularmente útil en composiciones farmacéuticas que comprenden zimógenos de proteasas para inhibir autocatálisis .
Es posible que otros ingredientes puedan estar presentes en la formulación farmacéutica de péptidos de la presente invención. Estos ingredientes adicionales pueden incluir agentes humectantes, emulsionantes, antioxidantes, agentes de volumen, modificadores de tonicidad, agentes quelantes, iones de metal, vehículos oleaginosos, proteínas (por ejemplo, albúmina de suero humano, gelatina o proteínas) y un zwitterión (por ejemplo, un aminoácido tal como betaína, taurina, arginina, glicina, lisina e histidina) . Estos ingredientes adicionales, por supuesto, no deben afectar adversamente la estabilidad general de la formulación farmacéutica de la presente invención.
Las composiciones farmacéuticas que contienen un derivado de acuerdo con la presente invención pueden administrarse a un paciente que requiera de este tratamiento en varios sitios, por ejemplo, en sitios tóxicos, por ejemplo, piel y sitios de mucosas, en sitios que deriven absorción, por ejemplo, administración en una arteria, en una vena, en el corazón y en sitios que incluyan absorción, por ejemplo, administración en la piel, bajo la piel, en un músculo o en el abdomen.
La administración de las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención puede ser a través de varias rutas de administración, por ejemplo, lingual, sublingual, bucal, en la boca, oral, en el estómago e intestino, nasal, pulmonar, por ejemplo, a través de los bronquiolos y alveolos o una combinación de los mismos, epidérmica, dérmica, transdérmica, vaginal, rectal, ocular, por ejemplo a través de la conjuntiva, uretral y parenteral a pacientes que requieren de este tratamiento.
Las composiciones de la presente invención pueden administrarse en varias formas de dosificación, por ejemplo, como soluciones, suspensiones, emulsiones, microemulsiones , emusión múltiple, espumas, ungüentos, pastas, emplastos, pomadas, tabletas, tabletas recubiertas, goma de mascar, enjuagues, cápsulas, por ejemplo, cápsulas de gelatina dura y cápsulas de gelatina suave, supositorios, cápsulas rectales, gotas, geles, sprays, polvo, aerosoles, inhalantes, gotas para ojo, pomadas oftálmicas, enjuagues oftálmicos, pesarios vaginales, aros vaginales, pomadas vaginales, solución para inyección, soluciones de transformación in si tu, por ejemplo gelificación in situ, endurecimiento in situ, precipitación in situ, cristalización in situ, solución para infusión e implantes.
Las composiciones de la invención se pueden mezclar además en, o fijarse a, por ejemplo a través de interacciones covalentes, hidrófobas y electroéstáticas , un portador de fármaco, sistema de suministro de fármaco y sistema de suministro de fármaco avanzado para poder incrementar más la estabilidad del derivado de la presente invención, incrementar la biodisponibilidad, incrementar la solubilidad, reducir efectos adversos, lograr cronoterapia bien conocida por aquellos expertos en la técnica e incrementar la cooperación del paciente o cualquier combinación de los mismos. Ejemplos de portadores, sistema de suministro de fármacos y sistemas de suministro de fármaco avanzados incluyen, pero no están limitados a, polímeros, por ejemplo celulosa y derivados, polisacáridos , por ejemplo dextrano y derivados, almidón y derivados, alcohol polivinílico, polímeros de acrilato y metacrilato, ácido poliláctico y poliglicólico y copolímeros de bloque de los mismos, polietilenglicoles , proteínas portadoras por ejemplo albúmina, geles, por ejemplo, sistemas de termogelificación, por ejemplo sistemas copoliméricos de bloques bien conocidos por los expertos en la técnica, micelas, liposimas, microesferas , nanoparticulados , cristales líquidos y dispersiones de los mismos, fase L2 y dispersones de los mismos, bien conocidos por aquellos expertos en la técnica del comportamiento de fases en sistemas lípidos-agua, micelas poliméricas, emulsiones múltiples, auto-emulsionantes, auto-microemulsionantes , ciclodextrinas y derivados de los mismos, y dendrímeros .
Las composiciones de la presente invención son útiles en la formulación de sólidos, semisólidos, polvos y soluciones para administración de derivados de la presente invención, usando opcionalmente un dispositivo bien conocido por los expertos en la técnica.
Las composiciones de la presente invención son especialmente útiles en la formulación de sistemas de suministro de fármaco de liberación prolongada, controlada, lenta, retardada. Más específicamente, pero no limitados a composiciones son útiles en la formulación de sistemas de liberación controlada parenteral y prolongada (ambos sistemas llevan a una reducción de varias veces en el número de administraciones) , bien conocidos por aquellos expertos en la técnica. Aún más específicamente, los sistemas de liberación controlada y liberación prolongada administrados subcutáneamente. Sin limitar el alcance de la invención, ejemplos de un sistema de liberación controlada útil y composiciones son hidrogeles, geles oleaginosos, cristales líquidos, micelas poliméricas, microesferas y nanopartículas .
Los métodos para producir sistemas de liberación controlada útiles para las composiciones de la presente invención incluyen, pero no están limitados a, cristalización, condensación, co-cristalización, precipitación, co-precipitación, emulsificación, dispersión, homogeneización a alta presión, encapsulación, secado por aspersión, microencapsulación, coacervado, separación de fases, evaporación con solvente para producir microesferas, procesos de extrusión y fluido supercrítico . Se hace referencia general a Handbook of Pharmaceutical Controlled Reléase (Wise, D.L., ed. Marcel Dekker, Nueva York, 2000) y Drug and the Pharmaceutical Sciences vol . 99: Protein Formulation and Delivery (MacNally, E.J., ed. Marcel Dekker, Nueva York, 2000) .
La administración parenteral se puede llevar a cabo mediante inyección subcutánea, intramuscular, intraperitoneal o intravenosa por medio de una jeringa, opcionalmente una jeringa tipo pluma. Como alternativa, la administración parenteral se puede llevar a cabo por medio de una bomba de infusión. Una opción más es una composición que puede ser una solución o suspensión o un polvo para la administración del derivado de la presente invención en forma de un líquido nasal o pulmonar o espray en polvo. Como una opción adicional, las composiciones farmacéuticas que contienen el derivado de la invención también se pueden adaptar a administración transdérmica , por ejemplo, mediante inyección libre de aguja o desde un parche, opcionalmente un parche iontoforético, o administración transmucosal , por ejemplo, bucal .
El término "formulación estabilizada" se refiere a una formulación con estabilidad física incrementada, estabilidad química incrementada o estabilidad física y química incrementada.
El término "estabilidad física" de la formulación de proteína según se usa en la presente se refiere a la tendencia de la proteína a formar agregados biológicamente inactivos y/o insolubles de la proteína como resultado de la exposición de la proteína a estreses termo-mecánicos y/o interacción con interfaces y superficies que sean desestabilizantes, tales como superficies e interfaces hidrófobas. La estabilidad física de las formulaciones de proteína acuosas se evalúa por medio de inspección visual y/o mediciones de turbidez después de exponer la formulación rellena en recipientes adecuados (por ejemplo cartuchos o viales) a estrés mecánico/físico (por ejemplo agitación) a diferentes temperaturas durante varios periodos de tiempo. La inspección visual de las formulaciones se lleva a cabo en una luz enfocada aguda con un fondo oscuro. La turbidez de la formulación se caracteriza por - una puntuación visual que clasifica el grado de turbidez por ejemplo en una escala de 0 a 3 (una formulación que no muestra turbidez corresponde a una puntuación visual de 0, y una formulación que muestra turbidez visual en luz de día corresponde a una puntuación visual de 3). Una formulación se clasifica físicamente inestable con respecto a agregación de proteínas, cuando muestra turbidez visual en luz de día. Como alternativa, la turbidez de la formulación puede ser evaluada mediante mediciones de turbidez simples bien conocidas por la persona capacitada. La estabilidad física de las formulaciones de proteínas acuosas también se puede evaluar al usar un agente estereoscópico o sonda del estado conformacional de la proteína. La sonda es específicamente una molécula pequeña que de preferencia se une a un conformador no nativo de la proteína. Un ejemplo de una sonda espectroscópica molecular pequeña de estructura proteínica es tioflavina T. La tioflavina T es un colorante fluorescente que ha sido ampliamente usado para la detección de fibrillas amiloides. En presencia de fibrillas, y tal vez de otras configuraciones de proteínas también, la tioflavina T da origen a un nuevo máximo de excitación a aproximadamente 450 nm y emisión incrementada a alrededor de 482 nm cuando se une a una forma de proteína en fibrilla. La tioflavina T no unida es esencialmente no fluorescente a las longitudes de onda.
Otras moléculas pequeñas pueden usarse como sondas de los cambios en la estructura proteínica de estados nativos o no nativos. Por ejemplo las sondas de "parche hidrófobo" que se unen de preferencia a parches hidrófobos expuestos de una proteína. Los parches hidrófobos son generalmente enterrados dentro de la estructura terciaria de una proteína en su estado nativo, pero se vuelven expuestos al empezar a desdoblarse o desnaturalizarse una proteína. Ejemplos de estas sondas espectroscópicas moleculares pequeñas son colorantes aromáticos e hidrófobos, tales como antraceno, acridina, fenantrolina o similares. Otras sondas espectroscópicas son complejos de metales-aminoácidos, tales como complejos de metal de cobalto de aminoácidos hidrófobos, tales como fenilalanina , leucina, isoleucina, metionina y valina, o similares.
El término "estabilidad química" de la formulación de proteínas según se usa en la presente se refiere a cambios covalentes químicos en la estructura de la proteína que llevan a la formación de productos de degradación química con potencialmente menos potencia biológica y/o propiedades inmunogénicas potenciales incrementadas en comparación con la estructura de proteína nativa. Varios productos de degradación químicos pueden formarse dependiendo del tipo y naturaleza de la proteína nativa y del ambiente al cual sea expuesta la proteína. La eliminación de la degradación química puede muy probablemente no ser evitada completamente y cantidades cada vez mayores de productos de degradación química se ven comúnmente durante el almacenamiento y uso de la formulación de proteínas como se conoce bien por la persona capacitada en la técnica. La mayoría de las proteínas son propensas a desamidación, un proceso en el cual el grupo amida de la cadena lateral en residuos de glutaminilo o asparaginilo es hidrolizado para formar un ácido carboxílico libre. Otras vías de degradación incluyen la formación de productos de transformación de alto peso molecular en los que dos o más moléculas de proteína se unen covalentemente unas a otras a través de interacciones de transamidación y/o disulfuro que llevan a la formación de productos de degradación de dímeros, oligómeros y polímeros unidos covalentemente {Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. T.J. & Manning M.C., Plenum Press, Nueva York, 1992) . La oxidación (por ejemplo de residuos de metionina) puede mencionarse como otra variante de degradación química. La estabilidad química de la formulación de proteínas puede evaluarse al medir la cantidad de los productos de degradación química en varios puntos de tiempo después de su exposición a diferentes condiciones ambientales (la formación de productos de degradación comúnmente puede ser acelerada mediante por ejemplo el incremento en la temperatura) . La cantidad de cada producto de degradación individual se determina comúnmente por la separación de los productos de degradación dependiendo del tamaño de la molécula y/o carga usando varias técnicas de cromatografía (por ejemplo SEC-HPLC y/o RP-HPLC) .
Por consiguiente, como se delineó arriba, una "formulación estabilizada" se refiere a una formulación con estabilidad física incrementada, estabilidad química incrementada o estabilidad física y química incrementada. En general, una formulación debe ser estable durante uso y almacenamiento (cumpliendo con condiciones de uso y almacenamiento recomendadas) hasta que se alcance la fecha de caducidad.
En un aspecto de la invención, la formulación farmacéutica que comprende el derivado de la presente invención es estable durante más de 6 semanas de uso y durante más de tres años de almacenamiento.
En un aspecto de la invención, la formulación farmacéutica que comprende el derivado de la presente invención es estable durante más de 4 semanas de uso y durante más de 3 años de almacenamiento.
En un aspecto de la invención, la formulación farmacéutica que comprende el derivado de la presente invención es estable durante más de 4 semanas de uso y durante más de 2 años de almacenamiento.
En un aspecto de la invención, la formulación farmacéutica que comprende el derivado de la presente invención es estable durante más de 2 semanas de uso y durante más de 2 años de almacenamiento.
El tratamiento con un derivado de acuerdo con la presente invención también se puede combinar con una segunda o más sustancias farmacológicamente activas, por ejemplo, seleccionadas de agentes antidiabéticos, agentes antiobesidad, agentes reguladores de apetito, agentes antihipertensivos , agentes para el tratamiento y/o prevención de complicaciones que resulten de o asociadas con diabetes y agentes para el tratamiento y/o prevención de complicaciones o trastornos que resulten de o asociados con obesidad. Ejemplos de estas sustancias farmacológicamente activas son: insulina, sulfonilureas , biguanidas, meglitinidas , inhibidores de glucosidasa, antagonistas de glucagón, inhibidores de DPP-IV (dipeptidil peptidasa IV) , inhibidores de enzimas hepáticas implicadas en la estimulación de gluconeogénesis y/o glucogenólisis , moduladores de absorción de glucosa, compuestos que modifiquen el metabolismo de lípidos tales como agentes anti-hiperlipidémicos, inhibidores de HMG CoA (estatinas) , polipéptidos inhibidores gástricos (análogos de GIP) , compuestos que reduzcan el consumo de alimento, agonistas de RXR y agentes que actúen en el canal de potasio dependiente de ATP de las células ß; colestiramina, colestipol, clofibrato, gemfibrozil, lovastatina, pravastatina, simvastatina , probucol, dextrotiroxina, neteglinida, repaglinida ; ß-bloqueadores tales como alprenolol, atenolol, timólo, pindolol, propr nolol y metoprolol, inhibidores de ACE (enzima convertidora de angiotensina) tales como benazepril, captopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, alatriopril, quinapril y ramipril, bloqueadores de canal de calcio tales como nifedipino, felodipino, nicardipino, isradipino, nimodipino, diltiazem y verapamilo, y oc-bloqueadores tales como doxazosina, urapidilo, prazosina y terazosina; agonistas de CART (transcripto regulado por cocaína anfetamina) , antagonistas de NPY (neuropéptido Y) , agonistas de PYY, agonistas del receptor Y2 , agonistas del receptor Y4 , agonistas de receptor Y2/Y4 mixto, agonistas del receptor de péptido 1 tipo glucagón (GLP-1) , agonistas del receptor de amilina, agonistas de MC4 (melanocortina 4), antagonistas de orexina o agonistas, agonistas de TNF (factor de necrosis tumoral) , agonistas de CRF (factor liberador de corticotropina) , antagonistas de CRF BP (proteína de unión a factor liberador de corticotropina) , agonistas de urocortina, agonistas de ß3, o intomodulina y análogos, agonistas de MSH (hormona estimuladora de melanocitos) , antagonistas de MCH (hormona concentradora de melanocitos) , agonistas de CCK (colecistoquinina) , inhibidores de reabsorción de serotonina, inhibidores de reabsorción de serotonina y noradrenalina , compuestos de serotonina y noradrenérgicos mixtos, agonistas de 5HT (serotonina) , agonistas de bombesina, antagonistas de galanina, hormona de crecimiento, compuestos liberadores de hormona de crecimiento, agonistas de TRH (hormona liberadora de tireotropina) , moduladores de UCP 2 ó 3 (proteína de desacoplamiento 2 ó 3), agonistas de leptina, agonistas de DA (bromocriptina, doprexina) , inhibidores de lipasa/amilasa, moduladores de RXR (receptor X retinoide) , agonistas de TR ß ; antagonistas de histamina H3 , agonistas o antagonistas de polipéptido inhibidor gástrico (análogos de GIP) , análogos de gastrina y gastrina.
Se debe entender que cualquier combinación adecuada de los derivados de acuerdo con la invención con uno o más de los compuestos mencionados arriba y opcionalmente una o más sustancias farmacológicamente activas adicionales se considera dentro del alcance de la presente invención.
El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo así como composiciones de acuerdo con la invención se puede administrar mediante cualquier ruta, incluyendo la ruta enteral (por ejemplo administración oral) o parenteral. En un aspecto, la ruta parenteral se prefiere e incluye inyección e infusión intraarticular, intraperitoneal , subcutánea, intramuscular e intraesternal así como la administración por la ruta sublingual, transdérmica, tópica, transmucosal incluyendo nasal, o por inhalación tal como, por ejemplo, inhalación pulmonar. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo puede administrarse a un animal incluyendo un mamífero, tal como, por ejemplo, un humano, mediante cualquier ruta de administración conveniente, tal como, por ejemplo, la ruta oral, bucal, nasal, ocular, pulmonar, tópica, transdérmica, vaginal, rectal, ocular, parenteral (incluyendo entre otras subcutánea, intramuscular e intravenosa, véase arriba) , en una dosis que sea efectiva para los propósitos individuales. Una persona experta en la técnica sabrá cómo seleccionar una ruta de administración adecuada. En un aspecto, la administración es por medio de la ruta de administración parenteral. En un aspecto, el derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo se administra subcutáneamente y/o nasalmente . Se sabe bien en la técnica que las inyecciones subcutáneas pueden ser auto-administradas fácilmente.
El término "administración periférica" significa administración fuera del sistema nervioso central. La administración periférica no incluye administración directa al cerebro. La administración periférica incluye, pero no está limitada a administración intravenosa, intramuscular, intravascular, subcutánea, pulmonar, oral, sublingual, enteral, rectal, transdérmica o intranasal .
Según se usa en la presente, el término "solvato" se refiere a un complejo de estequiometría definida formado entre un soluto (in casu, un compuesto de acuerdo con la presente invención) y un solvente. Los solventes pueden incluir, a manera de ejemplo, agua, etanol o ácido acético.
El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo puede administrarse tal cual disperso en un vehículo adecuado o puede administrarse en forma de una composición adecuada. Estas composiciones también están dentro del alcance de la invención. A continuación se describen composiciones farmacéuticas adecuadas.
El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención puede estar en forma de una composición farmacéutica que comprenda el derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo junto con uno o más excipientes fisiológica o farmacéuticamente aceptables.
El término "farmacéuticamente aceptables" según se usa en la presente significa adecuado para aplicaciones farmacéuticas normales, es decir, que no da origen a serios eventos adversos en pacientes, etc.
El término "excipiente" según se usa en la presente significa los compuestos químicos que normalmente se añaden a las composiciones farmacéuticas, por ejemplo, reguladores de pH, agentes de tonicidad, conservadores y similares.
La composición farmacéutica que comprende un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención puede estar en forma de un sólido, semisólido o composición fluida.
Las composiciones fluidas, las cuales son soluciones o dispersiones estériles se pueden usar por ejemplo mediante inyección o infusión intravenosa, intramuscular, intratecal, epidural, intraperitoneal o subcutánea. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo puede prepararse también como una composición sólida estéril, la cual puede ser disuelta o dispersa antes o en el momento de su administración usando por ejemplo agua estéril, solución salina u otro medio inyectable estéril adecuado. La forma fluida de la composición puede ser una solución, una emulsión incluyendo nanoemulsiones , una suspensión, una dispersión, una composición liposómica, una mezcla, un espray, o un aerosol (los dos últimos tipos son especialmente relevantes para administración nasal) .
Los medios adecuados para soluciones o dispersiones normalmente se basan en agua o solventes farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, tales como un aceite (por ejemplo, aceite de ajonjolí o cacahuate) o un solvente orgánico tal como, por ejemplo, propanol o isopropanol. Una composición de acuerdo con la invención puede comprender excipientes farmacéuticamente aceptables adicionales tales como, por ejemplo, agentes de ajuste de pH, agentes osmóticamente activos, por ejemplo para ajustar la isotonicidad de la composición a niveles fisiológicamente aceptables, agentes de ajuste de viscosidad, agentes de suspensión, emulsionantes, estabilizadores, conservadores, antioxidantes, etc. En un aspecto, el medio es agua.
Las composiciones para administración nasal también pueden contener vehículos no irritantes adecuados tales como, por ejemplo, polietilenglicoles , glicofurol, etc., así como potenciadores de absorción bien conocidos por una persona experta en la técnica (por ejemplo, con referencia a Remington' s Pharmaceutical Science) .
Para administración parenteral, en un aspecto el derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo puede formularse generalmente al mezclarlo al grado deseado de pureza, en una forma inyectable de dosis única (solución, suspensión o emulsión) , con un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable, es decir, uno que no sea tóxico para los receptores a las dosis y concentraciones empleadas y sea compatible con los demás ingredientes de la composición.
Generalmente, las formulaciones se preparan al poner en contacto el derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo uniformemente e íntimamente con vehículos líquidos o con portadores sólidos finamente divididos o ambos. Luego, si es necesario, el producto se configura en la formulación deseada. Específicamente, el portador es un portador parenteral, más específicamente una solución que es isotónica con la sangre del receptor. Ejemplos de estos vehículos portadores incluyen agua, solución salina, solución de Ringer y solución de dextrosa. Los vehículos no acuosos tales como aceites fijos y oleato de etilo también son útiles en la presente, así como liposomas. Gracias a la naturaleza anfifática del derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo descrito en la presente las formas adecuadas incluyen también formulaciones micelares, liposomas y otros tipos de formulaciones que comprenden uno o más lípidos adecuados tales como, por ejemplo, fosfolípidos y similares. En un aspecto, son suspendidos en un portador acuoso, por ejemplo, en una solución reguladora de pH isotónica a un pH de aproximadamente 3.0 a alrededor de 8.0, específicamente un pH de alrededor de 3.5 a aproximadamente 7.4, 3.5 a 6.0 ó 3.5 a aproximadamente 5.
Las composiciones también pueden ser diseñadas para suministro controlado o prolongado del derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo después de su administración para de esta manera obtener un régimen de administración menos frecuente. Normalmente un régimen de dosificación que incluye 1-2 administraciones diarias se considera adecuado, pero dentro del alcance de la presente invención también se incluyen otros regímenes de administración tales como, por ejemplo, más frecuentes y menos frecuentes. Para lograr un suministro prolongado del derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo, un vehículo adecuado incluyendo, por ejemplo, lípidos o aceites puede emplearse para de esta manera formar un depósito en el sitio de administración del cual el agonista del receptor sea liberado lentamente al sistema circulatorio, o un implante puede ser usado. Composiciones adecuadas a este respecto incluyen liposomas y partículas biodegradables en las cuales el agonista de receptor haya sido incorporado.
En aquellas situaciones en las que se requieran composiciones sólidas, la composición sólida puede estar en forma de tabletas tales como, por ejemplo, tabletas convencionales, tabletas efervescentes, tabletas recubiertas, tabletas fundidas o tabletas sublinguales, gránulos, polvos, pellas, granulados, material en partículas, dispersiones sólidas o soluciones sólidas. Una forma semisólida de la composición puede ser una goma de mascar, una pomada, una crema, un linimento, una pasta, un gel o un hidrogel. Otras formas de dosificación adecuadas de las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención pueden ser vagitorios, supositorios, emplastos, parches, tabletas, cápsulas, sobres, trociscos, dispositivos, etc. La forma de dosificación puede diseñarse para liberar el compuesto libremente o de una manera controlada, por ejemplo, con respecto a tabletas por recubrimientos adecuados .
La composición farmacéutica puede comprender una cantidad terapéuticamente efectiva de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la invención. El contenido de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de la invención en una composición farmacéutica de la invención es por ejemplo de alrededor de 0.1 a aproximadamente 100% p/p de la composición farmacéutica.
Las composiciones farmacéuticas pueden prepararse mediante cualquiera de los métodos bien conocidos por una persona capacitada en formulación farmacéutica.
En composiciones farmacéuticas, el derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo se combina normalmente con un excipiente farmacéutico, es decir, una sustancia o portador terapéuticamente inerte. El portador puede tener una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de dosificación y ruta de administración deseadas. Los excipientes farmacéuticamente aceptables pueden ser por ejemplo cargas, aglutinantes, desintegrantes, diluyentes, deslizantes, solventes, agentes emulsionantes, agentes de suspensión, estabilizadores, potenciadores , saborizantes , colorantes, agentes de ajuste de pH, agentes de retraso, agentes humectantes, agentes tensioactivos, conservadores, antioxidantes, etc. Detalles pueden encontrarse en libros de texto farmacéuticos tales como, por ejemplo, Remington' s Pharmaceutical Science o Pharmaceutical Excipient Handbook.
En un aspecto las composiciones de acuerdo con esta invención influenciarán el estado físico, estabilidad, velocidad de liberación in vivo y velocidad de depuración in vivo de los presentes péptidos de análogo PYY. Véase, por ejemplo, Remington' s Pharmaceutical Sciences 1435-712, 18a edición, Mack Publishing Co . , Easton, Pensilvania (1990).
Más particularmente, la administración de las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente invención puede ser por medio de cualquier ruta común siempre y cuando el tejido objetivo esté disponible por medio de esa ruta. En un aspecto, las composiciones farmacéuticas pueden ser introducidas en el sujeto mediante cualquier método periférico convencional, por ejemplo, mediante suministro intravenoso, intradérmico, intramuscular, intramamario, intraperitoneal , intratecal, retrovulvar, intrapulmonar (por ejemplo, liberación por término); mediante suministro oral, sublingual, nasal, anal, vaginal o transdérmico, o mediante implantación quirúrgica en un sitio particular. El tratamiento puede consistir en una sola dosis o en una pluralidad de dosis durante un periodo de tiempo. También se contempla la liberación continua controlada de las composiciones de la presente invención.
La formulación puede ser líquida o puede ser sólida, tal como liofilizada, para reconstitución. Las composiciones acuosas de la presente invención comprenden una cantidad efectiva del derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo, disuelta o dispersa en un portador farmacéuticamente aceptable o medio acuoso. El uso de estos medios o agentes para sustancias farmacéuticamente activas se conoce bien en la técnica. Excepto en la medida en que cualquier medio o agente convencional sea incompatible con el ingrediente activo, su uso en composiciones terapéuticas se contempla. Los agentes activos complementarios también pueden incorporarse en las composiciones.
El derivado de. péptido PYY o PP o análogo del mismo de la invención puede prepararse para administración como soluciones de base libre, o sales farmacológicamente aceptables en agua mezcladas adecuadamente con agentes tensioactivos (por ejemplo, monooleato de sorbitán, monolaurato de polioxietilensorbitan (Tween 20) , monooleato de polioxietilensorbitan (Tween 80) , lecitina, copolímeros de polioxietilo-polioxipropileno (Pluronics) , hidroxipropilcelulosa) o agentes de formación de complejos (por ejemplo, hidroxipropil-b-ciclodextrina, sulfobutiléter-b-ciclodextrina (Captisol) , polivinilpirrolidona) . Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales de adición con ácidos (formadas como los grupos amino libres de la proteína) y las cuales se forman con ácidos inorgánicos tales como, por ejemplo, ácidos clorhídricos o fosfóricos, o ácidos orgánicos tales como ácido acético, oxálico, tartárico, mandélico y similares. Las sales formadas o los grupos carboxilo libres también pueden derivarse de bases inorgánicas tales como, por ejemplo, hidróxidos de sodio, potasio, amonio, calcio o férrico, y bases orgánicas tales como isopropilamina, trimetilamina, histidina, procaína y similares. Estos productos se preparan fácilmente mediante procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica. Dispersiones también se pueden preparar en glicerol, polietilenglicoles líquidos y mezclas de los mismos y en aceites. Bajo condiciones ordinarias de almacenamiento y uso, estas preparaciones contienen un conservador para evitar el crecimiento de microorganismos.
En un aspecto, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se formulan para ser adecuadas para administración parenteral, por ejemplo, mediante inyección o infusión. En un aspecto, el derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo es suspendido en un portador acuoso, por ejemplo, en una solución reguladora de pH a un pH de alrededor de 3.0 a aproximadamente 8.0, específicamente a un pH de alrededor de 3.5 a aproximadamente 7.4, alrededor de 3.5 a aproximadamente 6.0, alrededor de 3.5 a aproximadamente 5.0 o alrededor de 3.7 a aproximadamente 4.7. Los reguladores de pH útiles incluyen acetato de sodio y/o ácido acético, lactato de sodio/ácido láctico, ácido ascórbico, citrato de sodio/ácido cítrico, bicarbonato de sodio/ácido carbónico, succinato de sodio/ácido succínico, histidina, benzoato de sodio/ácido benzoico y fosfatos de sodio, y tris (hidroximetil ) aminometano . Una forma de repositorio o preparación de liberación lenta de "depósito" se puede usar de tal manera que cantidades terapéuticamente efectivas de la preparación se suministren al torrente sanguíneo durante muchas horas o días después de la inyección o suministro transdérmico .
Las composiciones farmacéuticas adecuadas para uso inyectable incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. En todos los casos, la forma debe ser estéril y debe ser fluida al grado de que sea fácilmente inyectable. También es deseable que el derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de la invención sea estable bajo las condiciones de elaboración y almacenamiento y debe conservarse contra la acción contaminadora de microorganismos, tales como bacterias y hongos . El portador puede ser un solvente o medio de dispersión que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, sorbitol, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido, y similares) , dimetilacetamida, cremophor EL, mezclas adecuadas de los mismos y aceites (por ejemplo, soya, ajonjolí, ricino, semilla de algodón, oleato de etilo, miristato de isopropilo, glcofurol, maíz). La fluidez adecuada puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento, tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersión y mediante el uso de agentes tensioactivos . La prevención de la acción de microorganismos puede causarse mediante varios agentes antibacterianos y antimicóticos , por ejemplo, meta-cresol, alcohol bencílico, parabenos (metilo, propilo, butilo), clorobutanol , fenol, sales fenilmercúricas (acetato, borato, nitrato) , ácido sórbico, timerosal y similares. En muchos casos, será benéfico incluir agentes de tonicidad (por ejemplo, azúcares, cloruro de sodio) . La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede ocasionarse mediante el uso en las composiciones de agentes que retrasen la absorción (por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina) .
Las soluciones inyectables estériles pueden prepararse al incorporar los compuestos activos en la cantidad requerida en el solvente adecuado con varios otros ingredientes enumerados arriba, según se requiera, seguidas por esterilización filtrada. Generalmente, se preparan dispersiones al incorporar los diferentes ingredientes activos esterilizados en un vehículo estéril que contenga el medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de aquellos enumerados arriba. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos de preparación que se prefieren son secado al vacío y técnicas de liofilización que producen un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional a partir de una solución filtrada estéril previamente en el mismo. En general, el derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo puede formularse en una composición farmacéutica segura y estable para su administración a un paciente. Las formulaciones farmacéuticas contempladas para usarse en los métodos de la invención pueden comprender aproximadamente 0.01 a 20% (p/v) , específicamente 0.05 a 10%, del derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo puede estar en un regulador de pH de acetato, fosfato, citrato o glutamato que permita un pH de la composición final de aproximadamente 3.0 a alrededor de 7.0 que contenga carbohidratos o alcohol polihídrico como modificador de tonicidad y, opcionalmente , aproximadamente 0.005 a 5.0% (p/v) de un conservador seleccionado del grupo que consiste en m-cresol, alcohol bencílico, metil, etil, propil y butilparabenos y fenol. Este conservador está incluido generalmente en el péptido formulado para incluirse en un producto de usos múltiples.
En un aspecto de la presente invención, una formulación farmacéutica de la presente invención puede contener una gama de concentraciones de derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo, por ejemplo, entre alrededor de 0.01% a aproximadamente 98% p/p, o entre alrededor de 1 a aproximadamente 98% p/p, o específicamente entre 80% y 90% en p/p, o específicamente entre alrededor de 0.01% a aproximadamente 50% p/p, o más específicamente entre alrededor de 10% a aproximadamente 25% p/p en este aspecto. Una cantidad suficiente de agua para inyección se puede usar para obtener la concentración deseada de solución. Las formulaciones farmacéuticas descritas en la presente pueden ser liofilizadas .
En general, , una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva del derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo se determinará por la edad, peso y condición o severidad de las enfermedades o condiciones metabólicas o trastornos del receptor. Véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences 697-773. Véase también Wang y Hanson, Parenteral Formulations of Proteins and Peptides: Stability and Stabilizers, Journal of Parenteral Science and Technology, Technical Report No. 10, Supp. 42: 2S (1988) . Típicamente, se puede usar una dosis de entre alrededor de 0.001 ug/kg de peso corporal/día a alrededor de 1,000 µg/kg de peso corporal/día, pero se puede usar más o menos, según lo reconozca un practicante capacitado. La dosificación puede ser una, dos, tres, cuatro o más veces al día, o menos frecuentemente, tal como una vez por semana, una vez al mes, o una vez por trimestre, dependiendo de la formulación, y puede ser en conjunto con otras composiciones, las descritas en la presente. Debe notarse que la presente invención no está limitada a las dosis descritas aquí.
Las dosis adecuadas pueden evaluarse a través del uso de ensayos establecidos para determinar el nivel de afecciones o trastornos metabólicos en conjunto con datos de respuesta a dosis relevantes. El régimen de dosificación final será determinado por el médico que atienda, considerando factores que modifiquen la acción de los fármacos, por ejemplo, la actividad específica del fármaco, severidad del daño y la respuesta del paciente, la edad, condición, peso corporal, sexo y dieta del paciente, la severidad de cualquier infección, tiempo de administración y otros factores clínicos. Al llevarse a cabo estudios, emergerá más información con respecto a los niveles de dosificación adecuados y duración del tratamiento de enfermedades y afecciones específicas.
La frecuencia de dosificación dependerá de los parámetros farmacocinéticos de los agentes y de las rutas de administración. La formulación farmacéutica óptima se determinará por alguien de capacidad en la técnica dependiendo de la ruta de administración y la dosis deseada. Véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, citado arriba, páginas 1435-1712. Estas formulaciones pueden influenciar el estado físico, estabilidad, velocidad de liberación in vivo y velocidad de depuración in vivo de los agentes administrados. Dependiendo de la ruta de administración, una dosis adecuada puede calcularse de acuerdo con el peso corporal, áreas de superficie corporal y tamaño de órganos. Una refinación adicional de los cálculos necesarios para determinar la dosis de tratamiento adecuada se hace rutinariamente por aquellos de capacidad ordinaria en la técnica sin experimentación indebida, especialmente en vista de la información de dosificación y ensayos descritos en la presente, así como de los datos farmacocinéticos observados en pruebas clínicas en animales o humanos.
Se apreciará que las composiciones farmacéuticas y métodos de tratamiento de la invención pueden ser útiles en campos de medicina humana y medicina veterinaria. De esta manera el sujeto que será tratado puede ser un mamífero, específicamente humano u otro animal. Para propósitos veterinarios, los sujetos incluyen por ejemplo, animales de granja incluyendo vacas, borregos, cerdos, caballos y cabras, animales de compañía tales como perros y gatos, animales exóticos y/o de zoológico, animales de laboratorio incluyendo ratones, ratas, conejos, cobayos y hámsteres; y aves de corral tales como pollos, pavos, patos y gansos.
Los presentes derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos y composiciones que los contienen también son útiles en la elaboración de un medicamento para las aplicaciones terapéuticas mencionadas en la presente.
En un aspecto, la presente invención se refiere al uso de un derivado de acuerdo con la invención en la preparación de un medicamento.
Síntesis Los derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos de la invención pueden ser sintetizados mediante síntesis de péptidos en fase sólida (SPPS) estándar, usando ya sea un sintetizador de péptidos automático o síntesis en banca tradicional. El soporte sólido puede ser, por ejemplo, Tentagel S RAM, clorotritilo (CI) o resina de Wang (OH) , todos los cuales están disponibles comercialmente en forma fácil. Los grupos amino o hidroxilo activos de esas resinas reaccionan fácilmente con el grupo carboxilo. de un N-Fmoc aminoácido, de esta manera uniéndolo covalentemente al polímero por medio de un enlace a un enlazador fijado a la resina. El Fmoc-aminoácido unido a resina puede ser desprotegido mediante exposición a una mezcla de 20% de piperidina en N-metilpirrolidinona ( MP) la cual corta fácilmente el grupo Fmoc . El aminoácido subsecuente es acoplado usando un reactivo de acoplamiento y seguido por otra desprotección del grupo Fmoc. Ejemplos de reactivos que faciliten el acoplamiento de los aminoácidos de legada a la cadena de aminoácidos unida a resina son: diisoprorpilcarbodiimida (DIC) , hexafluorofosfato de tetra-metiluronio (HATU) , hexafluorofosfato de 0- (1 H-benzotriazol-l-il) -?,?,?/?' -tetrametiluronio (HBTU) , tetrafluoroborato de O- (1 H-benzotriazol-l-il) -?,?,?' ,?' -tetrametiluronio (TBTU) , 1 H-hidroxibenzotriazol (HOBt) .
El SPPS se continúa de una manera gradual hasta que la secuencia deseada sea obtenida. Al final de la síntesis, el péptido protegido unido a resina es desprotegido cortando los grupos de protección en las cadenas laterales y cortando también el péptido de la resina. Esto se hace con depuradores que contienen ácido trifluoroacético (TFA) tales como triisopropilsilano (TIPS) . El péptido es luego precipitado en éter dietílico y aislado. La síntesi de péptidos mediante química de solución en lugar de química de fase sólida también es viable.
Puede ser deseable purificar los péptidos de doblez PP generados por la presente invención. Técnicas de purificación de péptido se conocen bien por aquellos expertos en la técnica. Estas técnicas incluyen, a un nivel, el fraccionado en crudo del medio celular para proporcionar fracciones de péptidos y no péptidos. Habiendo separado al péptido de las demás proteínas, el péptido de interés puede purificarse más usando técnicas cromatográficas y electroforáticas para lograr purificación parcial o completa (o purificación a homogeneidad) . Los métodos analíticos particularmente adecuados para la preparación de un péptido puro son cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de exclusión, electroforesis en gel de poliacrilamida y enfoque isoeléctrico. Un método particularmente eficiente para purificar péptidos es HPLC de fase inversa, seguido por caracterización de producto purificado mediante cromatografía de líquidos/espectrometría de masas (LC/MS) y espectrometría de masas de Ionización por Desorción Láser Asistida en Matriz (MALDI) . La confirmación adicional de la pureza se obtiene al determinar análisis de aminoácidos.
En un aspecto la presente invención se refiere a la purificación, y en un aspecto, la purificación sustancial, de un derivado péptido de acuerdo con la invención. El término "péptido purificado" según se usa en la presente, intenta referirse a una composición, que puede aislarse de otros componentes, en donde el péptido se purifica a cualquier grado en relación a su estado que puede obtenerse naturalmente. Un péptido purificado por lo tanto también se refiere a un péptido, libre del ambiente en el cual puede ocurrir naturalmente. En general, "purificado" se referirá a una composición de péptidos que ha sido sujeta a fraccionado para remover varios otros componentes, y composición que conserva sustancialmente su actividad biológica expresada. Cuando se usa el término "purificado sustancialmente", esta designación se referirá a una composición en la cual el péptido forma un componente principal de la composición, tal como constituyendo alrededor de 50%, aproximadamente 60%, alrededor de 70%, aproximadamente 80%, alrededor de 90%, aproximadamente 95% o más de los péptidos en la composición.
Varias técnicas adecuadas para usarse en la purificación de péptidos se conocerán bien por aquellos expertos en la técnica. Estas incluyen, por ejemplo, precipitación con sulfato de amonio, PEG, anticuerpos y similares, desnaturalización con calor, seguida por centrifugación; etapas de cromatografía tales como cromatografía de intercambio iónico, filtración en gel, fase inversa, hidroxiapatita y afinidad; enfoque isoeléctrico; electroforesis en gel y combinaciones de éstas y otras técnicas. Como se conoce generalmente en la técnica, se cree que el orden de llevar a cabo las diferentes etapas de purificación puede ser cambiado, o que ciertas etapas pueden ser omitidas, y aún dar como resultado un método adecuado para la preparación de una proteína o péptido purificado sustancialmente .
No hay un requerimiento general de que los péptidos siempre sean provistos en su estado más purificado. De hecho, se contempla que productos menos sustancialmente purificados tendrán utilidad en ciertos aspectos. La purificación parcial puede lograrse usando menos etapas de purificación en combinación, o utilizando diferentes rutinas del mismo esquema de purificación general. Por ejemplo, se aprecia que una cromatografía en columna de intercambio catiónico llevada a cabo, utilizando un aparato HPLC, generalmente se traducirá en una purificación de más "veces" que la misma técnica utilizando un sistema de cromatografía de baja presión. Los métodos que exhiben un grado más bajo de purificación relativa pueden tener ventajas en la recuperación total del producto de proteína, o en mantener la actividad de una proteína expresada.
Opcionalmente se puede purificar y aislar estos péptidos PYY o PP de acuerdo con la invención a partir de otros componentes obtenidos en el proceso. Los métodos para purificar un péptido pueden encontrarse en la patente de E.U.A. No. 5,849,883. Estos documentos describen métodos ejemplares específicos para el aislamiento y purificación de composiciones G-CSF que pueden ser útiles para aislar y purificar péptidos PYY o PP de acuerdo con la invención.
Dada la descripción de estas patentes, es evidente que alguien de capacidad en la técnica estará consiente de las numerosas técnicas de purificación que se pueden usar para purificar los péptidos PYY o PP de acuerdo con la invención a partir de una fuente dada.
Se contempla también que una combinación de cromatografía de intercambio aniónico e inmunoafinidad puede emplearse para producir las composiciones de péptidos de doblez PP purificadas de la presente invención.
Modalidades de la invención 1. Un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo, en donde al menos un residuo de aminoácido y/o el extremo N y/o C de la estructura de base de péptido se deriva con una cadena lateral de unión a albúmina de suero definida por A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C- o A-C-, en donde A- es en donde p se selecciona del grupo que consiste en 10, 11, 12, 13, 14, 15 y 16 y d se selecciona del grupo que consiste en 0, l, 2, 3, 4 y 5, y -B- se selecciona del. grupo que consiste en en donde x se selecciona del grupo que consiste en 0, 1, 2, 3 y 4, y y se selecciona del grupo que consiste en 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12; o A- es en donde n se selecciona del grupo que consiste en 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 y 19, y -B- se selecciona del grupo que consiste en en donde x se selecciona del grupo que consiste en 0, 1, 2, 3 y 4; y -C- se selecciona del grupo que consiste en en donde b y e son cada uno independientemente seleccionados del grupo que consiste en 0, 1 y 2, y e y f se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en 0, 1 y 2 con la condición de que cuando c sea 0 b sea l ó 2, c sea l ó 2 b sea 0, f sea 0 e sea 1 ó 2 , f sea 1 ó 2, e sea 0, y con la condición de que cuando A- sea -C- puede ser eliminado; y -D- está unido al residuo de aminoácido y es un separador. 2. Un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo, en donde al menos un residuo de aminoácido y/o el extremo N y/o C de la estructura de base del péptido se deriva con una cadena lateral de unión a albúmina de suero definida por A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C- o A-C-, en donde A- es en donde p se selecciona del grupo que consiste en 10, 11, 12, 13, 14, 15 y 16 y d se selecciona del grupo que consiste en 0, 1, 2, 3, 4 y 5, y B- se selecciona del grupo que consiste en en donde x se selecciona del grupo que consiste en 0, 1, 2, 3 y 4, y y se selecciona del grupo que consiste en l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12; o A- es en donde n se selecciona del grupo que consiste en 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 y 19, y -B- se selecciona del grupo que consiste en en donde x se selecciona del grupo que consiste en 0, 1, 2, 3 y 4; y -C- se selecciona del grupo que consiste en en donde b y e son cada uno independientemente seleccionados del grupo que consiste en O, l y 2, y c y f se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en 0 , 1 y 2 con la condición de que cuando c sea 0 b sea 1 ó 2, c sea 1 ó 2 b sea 0, f sea 0 e sea 1 ó 2, f sea 1 ó 2 , e sea 0 , y -D- está unido al residuo de aminoácido y es un separador . 3. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde el péptido se deriva de un vertebrado. 4. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde el péptido se selecciona del grupo que consiste en un análogo de PP de acuerdo con la fórmula I Z-Ala-Pro-Leu-Glu-Pro-Val-Tyr-Pro-Gly-Xaa10-Xaa1i-Xaai2-Xaai3- Xaa25-Xaa26-Xaa27-Xaa28- aa29- Xaa30-Xaa31-Thr-Arg-Xaa34-Arg- aa36 (I) , en donde Z es la cadena lateral A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, o A-C- unida al grupo amino N-terminal o no está presente cuando A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, A-C- está unido a la cadena lateral de un aminoácido, Ala en la posición 1 puede ser suprimido, Xaa10 es Asp, Asn, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico , ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina o Lys, Xaan es Asp, Asn, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico , ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa12 es Ala, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina o Lys, Xaai3 es Thr, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa14 es Pro o hidroxiprolina , Xaai5 es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, XaaX6 es Gln, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa17 es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido ( l-aminociclopentil) carboxilico, ácido (1-aminociclohexil ) carboxilico o ácido 1-aminobutírico, Xaa18 es Ala, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , -diaminobu írico , ornitina, o Lys, Xaaig es Gln, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa20 es Tyr, Phe, o 3 -piridilalanina , Xaa2i es Ala, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa22 es Ala, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa23 es Asp, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa24 es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido ( l-aminociclopentil) carboxilico, ácido (1-aminociclohexil) carboxilico o ácido 1-aminobutírico, Xaa25 es Arg, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa26 es Arg, His, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa27 es Tyr, Phe, homoPhe, o 3 -piridilalanina , Xaa28 es lie, Val, Leu, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil ) carboxílico o ácido 1-aminobut írico, Xaa30 es Met, Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, Xaa3i es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, o ácido 1-aminobutírico, Arg en la posición 33 puede ser sustituido con Lys, Xaa34 es Gln, Asn o His, Arg en la posición 35 puede ser sustituido con Lys, Xaa36 es Tyr, 3-piridilalanina; un análogo de PYY de acuerdo con la fórmula II Z-Tyr-Pro-Xaa3-Xaa4-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Xaaio-Xaaii-Xaai2-Xaai3-Xa i4 -Xaa15 -Xaai6 -Xaai7 -X ais - Xaa2o -Xaa2i -Xaa22 -Xa£i23 -Xa-a-24 -Xaa2s -Xaa26-Xaa27-Xaa28-Xaa29-Xaa30-Xaa3i-Thr-Arg-Xaa34-Arg-Xaa36 (II) , en donde Z es la cadena lateral A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, o A-C- unida al grupo amino N-terminal o no está presente cuando A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, A-C- está unido a la cadena lateral de un aminoácido, Tyr-Pro en la posición 1 y 2 pueden ser suprimidos, Tyr en la posición 1 puede ser sustituido con Ala o ser suprimido, Xaa3 es lie, Val, Leu ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaa4 es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Glu en la posición 6 puede ser sustituido con Val, Ala en la posición 7 puede ser sustituido con Tyr, Xaaio es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaan es Asp, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai2 es Ser, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai4 es Pro, hidroxiprolina , o Lys, Xaa15 es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai6 es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa1 es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaaia es Asn, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa19 es Arg, 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2,4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa20 ' es Tyr, Phe, 3-piridilalanina, ácido 2,3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa2i es Tyr, Phe, 3-piridilalanina, ácido 2,3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys , Xaa22 es Asp, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa23 es Ala, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa24 es Leu, lie, Val, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxilico, ácido (1-aminociclohexil) carboxilico, ácido 1-aminobutírico, o Lys, Xaa2s es Arg, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa26 es His, Arg, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa27 es tyr, Phe, homoPhe, o 3-piridilalanina, Xaa28 es lie, Val, Leu, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxilico, ácido (1-aminociclohexil) carboxilico, ácido 1-aminobutírico, o Lys, Xaa29 es Asn, Gln, o Lys, Xaa30 es Met, Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxilico, ácido (1-aminociclohexil) carboxilico, ácido 1-aminobutírico, o Lys, Xaa3i es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido 1-aminobutírico, o Lys, Thr en la posición 32 puede ser sustituido con Lys, Xaa34 es Gln, Asn, o His, Xaa36 es Tyr, 3 -piridilalanina , o Lys; en donde el compuesto se modifica con una cadena lateral de unión a albúmina de suero que comprende un grupo de ácido carboxílico o tetrazol distal. 5. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde el péptido se selecciona del grupo que consiste en un análogo de PP de acuerdo con la fórmula I Z-Ala-Pro-Leu-Glu-Pro-Val-Tyr-Pro-Gly-Xaaio-Xaaii-Xaai2-Xaai3-X i4 _X i5 -X ig -Xa i7-Xa ie _X a^g -Xaa2o - a.c. 1 -X¾¾22 - 9-9- 3 -Xaa24 -Xaa25-Xaa26-Xaa27-Xaa28-Xaa-29-Xaa30-Xaa31-Thr-Arg-Xaa3 -A g-Xaa36 (I) , en donde Z es la cadena lateral A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, o A-C- unida al grupo amino N-terminal o no está presente cuando A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, A-C- está unido a la cadena lateral de un aminoácido, Xaaio es Asp, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico , ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina o Lys, Xaalx es Asn, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai2 es Ala, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina o Lys, Xaai3 es Thr, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai4 es Pro o hidroxiprolina, Xaai5 es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico , ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa16 es Gln, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai7 es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido ( 1-aminociclopentil ) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil ) carboxílico o ácido 1-aminobutírico , Xaais es Ala, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaaig es Gln, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa20 es Tyr, Phe, o 3 -piridilalanina , Xaa2i es Ala, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa22 es Ala, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa23 es Asp, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa24 es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaa25 e?3 Arg, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa26 es Arg, His, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa27 es Tyr, Phe, homoPhe, o 3 -piridilalanina , Xaa28 es lie, Val, Leu, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil ) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaa29 es Asn o Gln, Xaa30 es Met, Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido ( 1-aminociclopentil ) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaa3i es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido ( 1 -aminociclopentil ) carboxílico , ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, o ácido 1-aminobutírico, Xaa34 es Gln, Asn o His, Xaa36 es Tyr, 3 -piridilalanina ; un análogo de PYY de acuerdo con la fórmula II Z-Tyr-Pro-Xaa3-Xaa4-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Xaai0-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaai4 -Xaai7-Xaais - sa2o - a¾2i ~~Xs¾22 -Xaa23 -Xaa24 -X 25 -Xaa26-Xaa27-Xaa28-Xaa29-Xaa3o-Xaa3i-Thr-Arg-Xaa34-Arg-Xaa36 (II) , en donde Z es la cadena lateral A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, o A-C- unida al grupo amino N-terminal o no está presente cuando A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, A-C- está unido a la cadena lateral de un aminoácido, Tyr-Pro en la posición 1 y 2 pueden ser suprimidos, Xaa3 es lie, Val, Leu ácido (1-aminociclopentil ) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil ) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaa4 es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai0 es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaan es Asp, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai2 es Ala, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai3 es Ser, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina o Lys, Xaai4 es Pro o hidroxiprolina , Xaai5 es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai6 es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai7 es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxíl ico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaais es Asn, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaaig es Arg, 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2,4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa2o es Tyr, Phe , 3 -piridilalanina , ácido 2,3-diaminopropiónico , ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa2i es Tyr, Phe, 3 -piridilalanina, ácido 2,3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa22 es Asp, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa23 es Ala, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa24 es Leu, lie, Val, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil ) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaa25 es Arg, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa26 es His, Arg, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa27 es tyr, Phe, homoPhe, o 3 -piridilalanina, Xaa28 es lie, Val, Leu, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaa2g es Asn o Gln, Xaa30 es Met, Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil ) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaa3i es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil ) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaa34 es Gln, Asn, o His, Xaa36 es Tyr o 3-piridilalanina, en donde el compuesto se modifica con una cadena lateral de unión a albúmina de suero que comprende un grupo de ácido carboxílico o tetrazol distal. 6. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde el péptido puede ser truncado por supresión de una secuencia consecutiva de uno o más aminoácidos a partir del extremo N-terminal. 7. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la modalidad 6, en donde la secuencia consecutiva de uno o más aminoácidos se selecciona del grupo que consiste en la posición 1 a 25 en PYY o la posición 1 a 2 en PP. 8. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la modalidad 6, en donde la secuencia consecutiva de uno o más aminoácidos se selecciona del grupo que consiste en posición 1, posición 1 2 y posición 1 a 17 en PYY. 9. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con la modalidad 6, en donde la secuencia consecutiva de uno o más aminoácidos se selecciona del grupo que consiste en la posición 1 en PP. 10. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde la cadena lateral de unión a albúmina de suero está unida a la cadena lateral de un aminoácido en la estructura de base del péptido. 11. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde la cadena lateral de unión, a albúmina de suero está unida a un grupo amino en la cadena lateral de un aminoácido de la estructura de base del péptido. 12. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con las modalidades anteriores, en donde la cadena lateral de unión a albúmina de suero está unida a la posición amino terminal o posición 18 de PP. 13. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con las modalidades anteriores, en donde la cadena lateral de unión a albúmina de suero está unida a la posición amino terminal, posición 18 o posición 22 de PYY. 14. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con las modalidades anteriores, en donde la cadena lateral de unión a albúmina de suero está unida a un grupo amino de la cadena lateral de un aminoácido de la estructura de base en péptido seleccionada del grupo que consiste en ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2,4-diaminobutírico , ornitina y Lys . 15. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con las modalidades anteriores, en donde el separador -D- comprende una o más moléculas de ácido 3-amino-3 , 6 -dioxaoctanoico (Oeg) , tales como dos moléculas de ácido 3 , 6-dioxaoctanoico (Oeg). 16. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde A-B-C-D- se selecciona del grupo que consiste en [2 - (2 - { 2- [2 - (2 - { 2 - [ (S) -4 -carboxi-4 - (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamin o] -etoxi} etoxi) acetilo] , [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi-4 - ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] -etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetilo] y [4- (16- (lH-tetrazol-5-il) hexadecanoilsulfamoil) butiril] etoxi}etoxi) acetilamino] etox i } etoxi ) acetilo] . 17. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde el derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo se selecciona del grupo que consiste en SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 43 y SEQ ID NO: 55. 18. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde el derivado se selecciona para los receptores Y2 y/o Y4 sobre el receptor Yl . 19. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera . de las modalidades anteriores, en donde el derivado es selectivo para los receptores Y2 y/o Y4 sobre el receptor Y5. 20. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde el derivado es adecuado para su administración en un régimen de dosificación de una vez al día . 21. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde el derivado es adecuado para su administración en un régimen de dosificación una vez por semana . 22. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde el derivado es adecuado para su administración en un régimen de dosificación dos veces al mes . 23. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde el derivado es adecuado para su administración en un régimen de dosificación una vez al mes. 24. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde el derivado muestra perfil PK mejorado en comparación con PYY humano, PYY (3-36) o PP. 25. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde el derivado muestra propiedades prolongadas en comparación con PYY humano, PYY (3-36) , o PP. 26. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde el derivado muestra vida media mejorada in vivo en comparación con PYY humano, PYY(3-36), o PP . 27. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, en donde una dosis terapéuticamente efectiva del derivado causa menos efectos secundarios en comparación con PYY humano, PYY(3-36), o PP. 28. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de _ acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, que se selecciona del grupo que consiste en SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO : 4, SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO : 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID O: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 y SEQ ID NO: 13. 29. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores , el cual se selecciona del grupo que consiste en SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO ': , SEQ ID NO : 5, SEQ > ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO : 8, SEQ ID NO : 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20 , SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48 : SEQ IDNO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55 y SEQ ID NO: 56.
. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores, el cual se selecciona del grupo que consiste en SEQ ID NO: 3 a SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 74 y SEQ ID NO: 75. 31. Una composición que comprende un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo como el definido en cualquiera de las modalidades anteriores y uno o más excipientes farmacéuticos. 32. Un método para el tratamiento de una afección que responda a modulación del receptor Y mediante la administración de un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo como el definido en cualquiera de las modalidades 1-30. 33. El método de tratamiento de acuerdo con la modalidad 32, en donde la afección que responde a la modulación del receptor Y es obesidad. 34. El método de tratamiento de acuerdo con la modalidad 32 ó 33, en donde la afección que responde a modulación del receptor Y es enfermedades relacionadas con obesidad, tales como reducción de consumo de alimentos, síndrome X (síndrome metabólico) , diabetes, diabetes mellitus tipo 2 o Diabetes Mellitus No Insulinodependiente (NIDDM) , hiperglucemia, resistencia a insulina o tolerancia a glucosa afectada . 35. El método de tratamiento de acuerdo con la modalidad 32 ó 33, en donde la afección que responde a modulación del receptor Y es una enfermedad cardiovascular relacionada con obesidad tal como hipertensión, aterosclerosis , enfermedad de arterias coronarias, infarto de miocardio, enfermedad vascular periférica, apoplejía, enfermedades tromboembólicas , hipercolesterolemia o hiperlipidemia . 36. El método de tratamiento de acuerdo con la modalidad 32, en donde la afección que responde a modulación del receptor Y es diarrea tal como diarrea infecciosa, diarrea inflamatoria, diarrea inducida por quimioterapia, síndrome del intestino corto o la diarrea que ocurre típicamente después de procedimientos quirúrgicos, por ejemplo, ileostomía. 37. El método de tratamiento de acuerdo con la modalidad 32, en donde la afección que responde a modulación del receptor Y es una afección caracterizada por daño al intestino tal como diarrea inducida por quimioterapia, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, atrofia intestinal, pérdida de mucosa intestinal y/o pérdida de función de mucosa intestinal . 38. El método de tratamiento de acuerdo con la modalidad 32, en donde la afección que responde a modulación del receptor Y es una afección inflamatoria intestinal tal como colitis ulcerosa o enfermedad de Crohn. 39. El método de tratamiento de acuerdo con la modalidad 32, en donde la afección que responde a modulación de receptor Y es rinitis alérgica o no alérgica. 40. El método de tratamiento de acuerdo con la modalidad 32, en donde la afección que responde a modulación del receptor Y es ansiedad. 41. El método de tratamiento de acuerdo con cualquiera de las modalidades 32-40, en donde el régimen de administración se selecciona del grupo que consiste en una vez al día, una vez por semana, dos veces al mes o una vez al mes . 42. El método de tratamiento de acuerdo con cualquiera de las modalidades 32-41, en donde el derivado muestra perfil PK mejorado en comparación con PYY humano, PYY(3-36) , o PP. 43. El método de tratamiento de acuerdo con cualquiera de las modalidades 32-42, en donde el derivado muestra propiedades prolongadas en comparación con PYY humano, PYY(3-36) o PP . 44. El método de tratamiento de acuerdo con cualquiera de las modalidades 32-43, en donde el derivado muestra vida media mejorada in vivo en comparación con PYY humano, PYY (3-36) o PP. 45. El método de tratamiento de acuerdo con cualquiera de las modalidades 32-44, en donde una dosis terapéuticamente efectiva del derivado causa menos efectos secundarios en comparación con PYY humano, PYY(3-36), o PP. 46. Uso del derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo como el definido en cualquiera de las modalidades 1-30, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una afección que responde a modulación del receptor Y, tal como obesidad, enfermedades relacionadas con obesidad, por ejemplo, reducción de consumo de alimentos. 47. Uso del derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo como el definido en cualquiera de las modalidades 1-30 para su administración en un mamífero, en donde el derivado muestra propiedades prolongadas en comparación con PYY humano, PYY (3-36) o PP.
Ej emplos Abreviaturas usadas : r.t. temperatura ambiente AcCN: acetonitrilo DIPEA: diisopropiletilamina H20 : agua CH3CN: acetonitrilo DMF: N, N-dimetilformamida HBTU: hexafluorofosfato de 2- (lH-benzotriazol-1- il ) -1 , 1 , 3 , 3 -tetrametiluronio Fmoc : 9-H-fluoren- 9 - ilmetoxicarbonilo Boc : ter-butiloxicarbonilo OtBu: éster ter-butílico tBu: ter-butilo Trt : trifenilmetilo Pmc : 2,2,5,7, 8-pewntametil-croman-6-sulfonilo Dde : 1- (4 , 4-dimetil-2 , 6 -dioxociclohexiliden) etilo HFIP: hexafluoroisopropanol ivDde : 1- (4 , 4-dimtil-2 , 6 -dioxociclohexiliden) -3 - metilbutilo Mtt : 4-metiltritilo Mmt : 4 -metoxitritilo DCM: diclorometano TIPS: triisopropilsilano TFA: ácido trifluoroacético Et20: éter dietílico NMP: l-metil-pirrolidin-2-ona DIPEA: diisopropiletilamina HOAc : ácido acético HOAt : l-hidroxi-7-azabenzotriazol HOBt : 1-hidroxibenzotriazol DIC: diisopropilcarbodiimida M : peso molecular Síntesis de péptido unido a resina Método SPPS I La resina peptidilo protegida fue sintetizada de acuerdo con la estrategia Fmoc en un Advanced ChemTech Synthesiser (APEX 348) escala 0.25 mmoles usando los protocolos suministrados por el fabricante que emplea acoplamientos mediados por DIC (diciclohexilcarbodiimida) y HOBt (1-hidroxibenzotriazol) en NMP (N-metilpirrolidona) . La resina de partida usada para la síntesis de las amidas péptidas fue Tentagel RAM (Rapp Polymere, Alemania), resina Rink amid ChemMatrix (Matrix Innovation, Canadá) , resina Rink-Amide (Merck/Novabiochem) ya sea en resina de ang o clorotritilo se usó para los péptidos con un extremo C-carboxi . Los derivados de aminoácido protegidos usados fueron Fmoc-aminoácidos estándares (suministrados por ejemplo de Advanced Chemtech, o Novabiochem. El grupo épsilon amino de lisina que será derivado fue protegido con Mtt. La síntesis de los péptidos en algunos casos puede ser mejorada mediante el uso de dipéptidos, por ejemplo, pseudoproplinas de Novabiochem, Fmoc-Ser (tbu) -^/Ser (Me, Me) -CE, véase, por ejemplo, catálogo de Novobiochem 2002/2003 o versión más reciente, o W.R. Sampson (1999), J. Pep. Sci. 5, 403.
Método de SPPS II La resina peptidilo protegida fue sintetizada de acuerdo con la estrategia Fmoc en un Liberty de CEM Corporation, E.U.A.. Se usó una escala ya sea de 0.25 mmoles o 0.5 mmoles usando los protocolos suministrados por el fabricante que emplea acoplamientos mediados por DIC (diciclohexilcarbodiimida) y HOBt (1-hidroxibenzotriazol) en NMP (N-metilpirrolidona) . La resina de partida usada para la síntesis de las amidas péptidas fue Tentagel RAM (Rapp Polymere, Alemania), resina Rink amid ChemMatrix (Matrix Innovation, Canadá) o resina Rink-Amide (Merck/Novabiochem) y ya sea resina de Wang o clorotritilo se usó para los péptidos con un carboxi C-terminal . Los derivados de aminoácido protegidos usados fueron Fmoc-aminoácidos estándares (suministrados por ejemplo de Advanced Chemtech, o Novabiochem. El grupo épsilon amino de lisina en la posición 13 fue protegido con Mtt. La síntesis de los péptidos en algunos casos puede ser mejorada mediante el uso de dipéptidos, por ejemplo, pseudoprol inas de Novabiochem, Fmoc-Ser (tbu) -i(jSer (Me , Me ) -OH , véase, por ejemplo, catálogo de Novobiochem 2002/2003 o versión más reciente, o W.R. Sampson (1999), J. Pep . Sci . 5, 403.
Procedimiento para la remoción de protección con Mtt : La resina se puso en una jeringa y se trató con hexafluoroisopropanol durante 2 x 10 minutos para remover el grupo Mtt. La resina se lavó después con DCM y NMP como se describió arriba y se neutralizó con 5% de DIPEA en NMP antes del acoplamiento a las asas de albúmina.
Procedimiento para fijación de cadenas laterales a residuos de lisina: El residuo de unión a albúmina A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, o A-B- puede ser unido al péptido ya sea mediante acilación gradual a péptido unido a resina o acilación en solución al péptido no protegido usando reactivo de acilación estándar tal como pero no limitado a DIC, HOBt/DIC, HOAt/DIC, o HBTU.
Método en fase sólida III La resina de peptidilo protegida fue sintetizada en un Prelude (Protein technologies ) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Típicamente, 300 mg de resina (Tentagel S Ram, Rapp Polymere) se usaron en el recipiente de reacción de 10 mi o 1 gramo de resina Tentage S RAM se usó en el recipiente de reacción de 40 mi de acuerdo con el fabricante. El ensamble gradual del péptido se llevó a cabo usando estrategia de Fmoc/t-Bu estándar de acuerdo con la fabricación de Prelude.
Síntesis manual de resina de peptidilo Un gramo de Tentagel S Ram 0.25 mmoles/g (Rapp Polymere, Alemania) se hinchó en NMP durante 30 minutos en una jeringa de 50 mi con frita de polipropileno. Después la resina se desprotegió con 20% de piperidina en NMP durante 20 minutos y se lavó con aproximadamente con NMP (sic) . Después el aminoácido 5 mmoles Fmoc-Tyr(tbu)-OH se solubilizó en 10 mi de HOAt 0.5M en NMP y se añadió a la resina. Fue seguido después por la adición de 5 mmoles de DIC y 1 mmol de colidina y acoplado durante 30 minutos. Después se removió el exceso de aminoácido al lavar con NMP y el grupo Fmoc fue removido mediante 20% de piperidina en NMP durante 15 minutos. Después la piperidina se removió al lavar con NMP y la resina estaba . lista para el siguiente aminoácido. Los aminoácidos fueron añadidos de una manera gradual de acuerdo con el método de síntesis SPPS descrito previamente para dar la secuencia de péptidos final. Finalmente, el N-alfa amino se protegió con un grupo Boc . Opcionalmente , para PYY ( 3 -36) en posición 13 de la Ser fue reemplazada por una Lys(Mtt) en la cual se unieron las asas de albúmina.
Síntesis de asas de albúmina en péptido La resina protegida con peptidilo fue hinchada en hexa luoroisopropanol concentrado (HFIP) aproximadamente 30 mi durante 2 minutos seguida por otra adición de HFIP y se dejó reposar durante 5 minutos. Se llevó a cabo una tercera adición y se dejó reposar durante 20 minutos. Después la resina se lavó con NMP y brevemente con 20% de piperidina en NMP y de nuevo con NMP para remover piperidina. Luego se añadió Fmoc-Oeg (NeoMPS) 3 mmoles en 6 mi de solución HOAt 0.5M en NMP y 3 mmoles de DIC se añadieron y se dejaron reposar durante 2 horas. Luego se lavaron y desprotegieron con 20% de piperidina en NMP y se lavaron seguidos por otra adición de Fmoc-Oeg como se mencionó arriba. Después luego de la desprotección y lavado se añadieron 3 mmoles de Fmoc-L-Glu-tBu ( IRIS -Biotech, Alemania) en 6 mi de solución HOAt 0.5 M en NMP seguidos por la adición de 3 mmoles de DIC y se dejaron reposar durante aproximadamente 19 horas. Después de remover el grupo Fmoc , se añadieron 3 mmoles del residuo ácido Fmoc - tranexámico (NeoMPS) en 6 mi de solución HOAt 0.5M seguidos por 3 mmoles de DICV y se dejaron reposar durante >2 horas. Luego del acoplamiento la resina se lavó y se removió Fmoc por 20% de piperidina en NMP y después lavado con NMP 3 mmoles de ácido raono-ter-butil-dodecanodioico en 6 mi -de solución HOAt 0.5M se añadió seguido por 3 mmoles de DIC y se dejó reposar durante más de 16 horas . La resina se lavó con NMP y éter dietílico y se secó.
Desprotección y aislamiento finales Los grupos de protección de péptidos y cadenas laterales fueron removidos por la adición de 30 mi de TFA al 92%, TIPS al 5% y 3% de etanol durante alrededor de 2 horas . Luego se recogió TFA y se concentró por una corriente de argón y se añadió éter dietílico para precipitar el péptido. El péptido se lavó cinco veces con éter y se secó.
Análisis HPLC Método de análisis HPLC I : Regulador de pH A: 0.1% de TFA en agua Regulador de pH B: 0.1% en AcCN Gradiente: 0% de regulador de pH B a 90% de regulador de pH B en 50 min.
Flujo: 0.5 ml/min Columna: Jubitor Proteo C12, 4.6 x 250 mm, Temperatura de la columna: 42°C Método de análisis PLC II Regulador de pH A: bicarbonato de amonio 0.5M en 90% de agua/10% de AcCN Regulador de pH B : 70% de AcCN/30% de agua Gradiente: 25% de regulador de pH B al 55% en 16 min.
Flujo: 0.4 ml/min Columna:' Acquity UPLC HSS T3 , 1.8 um, 2.1 x 150 mm Temperatura de la columna: 30°C Ejemplo 1 Síntesis manual de SEQ ID NO; 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO; 13 Las síntesis se llevaron a cabo usando los métodos mencionados arriba "síntesis de resina de peptidilo", "síntesis de asas de albúmina en péptido" y "desprotección final y aislamiento" .
Datos anal ít icos SEQ ID NO: 1 Tiempo de retención en método HPLC I: 25.9 min Tiempo de retención en método HPLC II: 5.6 min Peso molecular calculado: 4049.6 g/mol MALDI MS: 4046.4 g/mol SEQ ID NO: 3 Tiempo de retención en método HPLC I: 33.1 min Tiempo de retención en método HPLC II: 11.5 mm Peso molecular calculado: 4973.8 g/mol MALDI MS : 4972.3 g/mol SEQ ID NO: 13 Tiempo de retención en método HPLC I: 34.0 min Tiempo de retención en método HPLC II: 10.2 mm Peso molecular calculado: 4932.7 g/mol MALDI MS : 4931.7 g/mol Ejemplo 2 Síntesis automática de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO; 6, SEQ ID NO; 7, SEQ ID NO : 8 y SEQ ID NO : 9 Las síntesis se llevaron a cabo como se describió en el método SPPS II usando 0.5 g de resina Tentagel HL RAM (Rapp Polymere, Alemania) en un sintetizador de péptidos Liberty. Después de las síntesis en el aparato Liberty, la resina se transformó en una jeringa de 50 mi con frita de filtro. Las asas de albúmina fueron sintetizadas usando el método mencionado arriba "síntesis de asas de albúmina en péptido" . La resina se trató después con 90% de TFA, 5% de TIPS y 5% de agua y se precipitó en Et20 como se describió arriba.
Ensayos biológicos La unidad de los derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos de la presente invención como agentes farmacéuticamente activos en la reducción de ganancia de peso y tratamiento de obesidad en mamíferos (tales como humanos), puede demostrarse por la actividad de los agonistas en ensayos convencionales y en los ensayos in vitro e in vivo descritos abajo.
Estos ensayos proporcionan también un medio con el cual las actividades de los derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos de esta invención pueden compararse con las actividades de compuestos conocidos.
Ejemplo 3 Potencia receptora de los análogos de PYY y PP La potencia receptora de derivados de péptido PYY o PP o análogos de los mismos se determina usando el método "Medición de la Actividad del Receptor Y2 o Y4 Usando Ensayo FLIPR a Base de ACTOne" como el descrito en la presente. Los resultados se muestran en la tabla 1 y tabla 2.
Tabla 1 Actividad de los análogos de PYY en ensayos ACTOne de receptores Y2 y Y4 como una función de la posición de acilación y tipo de asa de albúmina. ND = No determinado Compuesto Posición de Y2 cAMP Y4 cAMP acilación, EC50 (n ) EC50 (nM) longitud de cadena de ácido graso SEQ ID NO: 1 Ninguna 0.7 500 SEQ ID NO: 3 K13,C20 24 >1000 SEQ ID NO: 12 K4,C20 10 235 SEQ ID NO: 19 K13,C20 9 67 SEQ ID NO: 20 K13,C20 118 25 SEQ ID NO: 21 K13,20 42 53 SEQ ID NO: 22 K13 , C20 79 9 SEQ ID NO: 23 Nalfa, C20 1 80 SEQ ID NO: 27 K11,C18 6 >1000 SEQ ID NO: 28 K11,C20 24 >1000 SEQ ID NO: 33 Nalfa, C20 97 >1000 SEQ ID NO: 34 K25,C20 46 ND SEQ ID NO: 35 K24 , C20 12 ND SEQ ID NO: 40 K19, C20 4 690 SEQ ID NO: 51 K13 , tetrazol 29 >1000 SEQ ID NO: 52 K25 , tetrazol 71 >1000 SEQ ID NO: 53 Nalfa, tetrazol 1.2 >1000 SEQ ID NO: 54 K19 , tetrazol 2 >1000 SEQ ID NO: 57 K18, C20 4.3 100 SEQ ID NO: 58 K22,C20 5 >1000 SEQ ID NO: 59 K26,C20 19 >1000 SEQ ID NO: 60 K29,C20 >1000 >1000 SEQ ID NO: 61 K36,C20 >1000 >1000 SEQ ID NO: 62 K21, C20 5.2 >1000 SEQ ID NO: 63 K30,C20 5.8 53 SEQ ID NO: 64 K31, C20 7.1 >1000 SEQ ID NO: 66 K15,C18 14 >1000 SEQ ID NO: 67 K16,C18 12 >1000 SEQ ID NO: 68 K20,C18 16 >1000 SEQ ID NO: 69 K21,C18 21 >1000 SEQ ID NO: 70 K32,C18 49 >1000 Tabla 2 Actividad de análogos PP en los ensayos ACTOne del receptor Y2 y Y4 como una función de la posición de acilación y tipo de asa de albúmina. ND = no determinado Compuesto Posición de Y2 cAMP Y4 CAMP acilación, EC50 (nM) EC50 (nM) longitud de cadena de ácido graso SEQ ID NO: 2 Ninguna >1000 0.6 SEQ ID NO: 4 K13,C20 54 18 SEQ ID NO: 15 K13,C20 73 7 SEQ ID NO: 16 K13,C20 63 65 SEQ ID NO: 17 K13,C20 130 7 SEQ ID NO: 14 K13 , C20 92 18 SEQ ID NO: 18 K13 , C20 >1000 130 SEQ ID NO: 24 K13, C18 32 2 SEQ ID NO: 29 K11,C20 >1000 2 SEQ ID NO: 30 Kll, C18 >1000 1 SEQ ID NO: 31 K13, C18 >1000 4 SEQ ID NO: 32 K18, C18 >1000 0.4 SEQ ID NO: 39 K10,C20 25 ND SEQ ID NO: 41 K33, C18 >1000 >1000 SEQ ID NO: 4'2 K33, C20 >1000 >1000 SEQ ID NO: 43 K18,C20 >1000 0.8 SEQ ID NO: 44 K29, C20 >1000 >890 SEQ ID NO: 45 K26,C20 >1000 7 SEQ ID NO: 46 K26, C18 >1000 5 SEQ ID NO: 47 K35, C18 >1000 >1000 SEQ ID NO: 48 K35,C20 >1000 >1000 SEQ ID NO: 49 K25, C18 >1000 >1000 SEQ ID NO: 50 K25,C20 >1000 >1000 SEQ ID NO: 55 Nalfa, C18 >1000 1 SEQ ID NO: 56 Nalfa, C20 >1000 4 SEQ ID NO: 73 Ninguna >1000 0.9 SEQ ID NO: 74 K13, C20 29 11 SEQ ID NO: 75 Nalfa, C20 >1000 3.2 nM Ejemplo 4 Ensayo cuantitativo para muestras de plasma Para la determinación de la concentración en plasma del derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo se usaron los siguientes métodos 1-4. La tabla 3 muestra qué método se usó para qué compuesto .
Tabla 3 Compuesto Método usado para la determinación de la concentración en plasma SEQ ID NO: 1 Método 1 SEQ ID NO: 3 Método 4 SEQ ID NO: 12 Método 2 SEQ ID NO: 23 Método 2 SEQ ID NO: 27 Método 2 SEQ ID NO: 28 Método 2 SEQ ID NO: 34 Método 3 SEQ ID NO: 35 Método 3 SEQ ID NO: 40 Método 2 SEQ ID NO: 51 Método 2 SEQ ID NO: 52 Método 2 SEQ ID NO: 53 Método 2 SEQ ID NO: 54 Método 2 SEQ ID NO: 57 Método 3 SEQ ID NO: 58 Método 3 SEQ ID NO: 59 Método 3 SEQ ID NO: 2 Método 4 SEQ ID NO: 24 Método 2 SEQ ID NO: 29 Método 2 SEQ ID NO: 30 Método 2 SEQ ID NO: 32 Método 3 SEQ ID NO: 39 Método 3 SEQ ID NO: 41 Método 3 SEQ ID NO: 42 Método 3 SEQ ID NO: 43 Método 2 SEQ ID NO: 44 Método 3 SEQ ID NO: 45 Método 2 SEQ ID NO: 46 Método 2 SEQ ID NO: 47 Método 2 SEQ ID NO: 48 Método 2 SEQ ID NO: 49 Método 2 SEQ ID NO: 50 Método 2 SEQ ID NO: 55 Método 2 SEQ ID NO: 56 Método 2 SEQ ID NO: 71 Método 2 SEQ ID NO: 72 Método 2 SEQ ID NO: 73 Método 2 SEQ ID NO: 74 Método 2 SEQ ID NO: 75 Método 2 Método 1 Muestras de plasma se analizaron mediante LC-MS en un LTQ-Orbitrap (ThermoFisher Scientific, Bremen) al cual bombas Accela HPLC y un automuestreador se le conectaron (ambas de ThermoFisher) . El espectrómetro de masas estuvo equipado con una interfaz de electroaspersión, la cual fue operada en modo de ionización positiva. El análisis se llevó a cabo en modo de monitoreo de iones seleccionado a m/z 829.8 ± 1.5 Da. El compuesto se detectó a 829.4529 Da, lo cual correspondía a [M + 6H] 6+ con una precisión de 3.6 ppm. Para propósitos de cuantificación, los seis picos de isotipos más intensos fueron extraídos con una precisión de 5 ppm. HPLC se llevó a cabo en una columna Júpiter Proteo (4µ) 90A (50 x 2.0 mm ID). Las fases móviles consistieron en A. ácido fórmico al 0.1% y B. ácido fórmico al 0.1% en acetonitrilo . Se corrió un gradiente de 10% de B a 20% de B de 0 a 0.2 minutos y luego de 20% de B a 34% de B de 0.2 minutos a 6 minutos. La velocidad de flujo fue de 0.3 ml/min. Para el análisis de las muestras de plasma, 30 µ? de plasma se precipitaron con 90 µ? de etanol . A 100 µ? del sobrenadante, se le añadieron 20 µ? de acetonitrilo al 95% (que contenía 5% de ácido fórmico) y 200 µ? de heptano. La fase de heptano se removió después de 5 minutos y la solución restante se analizó mediante LC-MS como se describió arriba. Para la construcción de estándares de plasma, el compuesto se agregó a plasma (mini-cerdos) a las siguientes concentraciones: InM, 2nM, 5nM, ????, 20nM, 50 nM, ?????, 200nM. Los estándares de plasma se trataron como las muestras. El límite inferior de cuantificación se estimó a 2 nM.
Método 2 Las sustancias de prueba (varios compuestos PYY y PP) fueron ensayados en plasma mediante Cromatografía de Flujo Turbulento Acoplada a Cromatografía de Líquidos con Detección Espectrométrica de Masas Tanden (TFC/LC/MS/MS) subsecuente. La ionización en modo positivo y Monitoreo de Reacción Múltiple (MRM) de una especie protonada múltiple fragmentada a un ión individualmente cargado se empleó para selectividad. La selectividad del método permite que se cuantifiquen hasta cuatro compuestos en una muestra, por ejemplo, dosificación de cásete hasta cuatro por animal.
Las concentraciones de la sustancia de prueba en muestras desconocidas se calcularon usando el área pico como una función de cantidad. Gráficas de calibración a base de muestras de plasma a las que se le añadió el analito fueron construidas mediante análisis de regresión. La escala dinámica típica para el ensayo estándar fue 1-2,000 nmoles/1. El rendimiento del método se logró al co-ensayar muestras de control de calidad (QC) por duplicado a tres niveles de concentración.
Soluciones de abastecimiento y trabajo de analitos fueron preparadas en plasma e incubadas a 37°C durante 1 hora .
Preparación de las muestras: 40.0 µ? de EDTA-plasma se añadieron a 160 µ? de 50% de metanol, 1% de ácido fórmico, luego se centrifugaron a 14,300 rpm (16457 g) a 4°C durante 20 minutos. El sobrenadante se transfirió a una placa de 96 pocilios, las placas se incubaron con 0.4% de BSA, 37°C durante ½ hora. El volumen de inyección fue 25 µ? .
El análisis se llevó a cabo en un espectrómetro de masas Sciex API 3000 (MDS/Sciex, Concord, ON, Canadá) usando una interfaz TurboIonSpray . El sistema TFC/LC consistió en dos bombas cuaternarias Flux Rheos 2000, un módulo Cohesive VI (Cohesive Technologies, Franklin, MA, E.U.A.) y un auto-muestreador CTC LC/PAL (CTC Analytics, Zingen, Suiza) . Para la depuración de las muestras una columna TurboFlow C8 (0.5 x 50 rara) (Thermo Scientific, Franklin, MA, E.U.A.) se usó y la separación LC se llevó a cabo en una columna Proteo de 4 µ?? (2.0 x 50 mm) (Phenomenex, Torrance, CA, E.U.A.) . Los eluyentes fueron combinaciones isocráticas y gradientes de metanol, acetonitrilo, agua Milli-Q y ácido fórmico.
Método 3 Las sustancias de prueba (varios compuestos PYY y PP) se ensayaron en plasma mediante Cromatografía de Flujo Turbulenta acoplada a Cromatografía de Líquidos con Detección Espectrométrica de Masas Orbitrap (TFC/LC/MS) subsecuente. La ionización en modo positivo y adquisición de masa precisa de una especie protonada múltiple se empleó para selectividad. La selectividad del método permite que se cuantifiquen hasta cuatro compuestos en una muestra, por ejemplo la dosificación de cásete de hasta cuatro por animal.
Las concentraciones de la sustancia de prueba en muestras desconocidas se calcularon usando el área pico como una función de cantidad. Gráficas de calibración con base en muestras de plasma a las que se les añadió el analito se construyeron mediante análisis de regresión. La escala dinámica típica para el ensayo estándar fue 1-2,000 nmoles/ml. El rendimiento del método se logró al co-ensayar muestras de control de calidad (QC) por duplicado a tres niveles de concentración.
Soluciones de abastecimiento y trabajo de analitos se prepararon en plasma y se incubaron a 37 °C durante 1 hora.
Preparación de las muestras: 40.0 µ? de EDTA-plasma se añadieron a 160 µ? de metanol al 50%, 1% de ácido fórmico, luego se vortexearon y centrifugaron a 14,300 rpm (16457 g) a 4°C durante 20 minutos. El sobrenadante se transfirió a una placa de 96 pocilios, las placas se incubaron con 0.4% de BSA, 37°C durante ½ hora. El volumen de inyección fue de 25 µ?.
El análisis se llevó a cabo en un espectrómetro de masas LTQ Orbitrap Discovery (Thermo Scientific, Bremen, Alemania) usando interfaz de electroaspersión con bomba calentada. El sistema de TFC/LC consistió en dos bombas cuaternarias Flux Rheos Allegro, un módulo VIM y un automuestreador CTC LC/PAL (CTC Analytics, Zingen, Suiza) . Para la depuración de la muestra se usó una columna Turboflow C8 (0.5 x 50 mm) (Thermo Scientific, Franklin, MA, E.U.A.) y la separación LC se llevó a cabo en una columna Proteo 4 µ?? (2.0 x 50 mm) (Phenomenex, Torrance, CA, E.U.A.) . Los eluyentes fueron combinaciones isocráticas y gradientes de metanol, acetonitrilo, agua Milli-Q y ácido fórmico.
Método 4 Muestras de plasma se analizaron mediante LC-MS en un LTQ-Orbitrap (ThermoFisher Scientific, Bremen) al cual se le conectaron bombas Accela HPLC y un auto-muestreador . El espectrómetro de masas fue equipado con una interfaz de electroaspersión que se operó en modo de ionización positiva. El análisis se llevó a cabo en modo de monitoreo iónico seleccionado en una ventana de 5 Da desde del ión más intenso. Para propósitos de cuantificación, los picos de isotipo más intensos fueron extraídos con una precisión de 5 ppm. HPLCs se llevó a cabo en una columna Júpiter Proteo (4µ) 90A (50 x 2.0 mm ID) . Las fases móviles consistieron en A. ácido fórmico al 0.1% y B. ácido fórmico al 0.1% en acetonitrilo . Se corrió un gradiente de 5% de B a 30% de B (o 35% de B) de 0.6 minutos. La velocidad de flujo fue de 0.3 ml/min. Para el análisis de las muestras de plasma, 30 µ? de plasma se precipitaron con 60 µ? de acetonitrilo que contenía ácido fórmico al 1%. Para la construcción de las normas de plasma, el compuesto se salpicó a plasma (mini-cerdos) a las siguientes concentraciones: InM, 2nM, 5nM, ????, 20nM, 50nM, lOOnM, 200nM. Las normas de plasma se trataron como las muestras. El límite inferior de cuantificación se estimó a aproximadamente 1-2 nM.
Ejemplo 5 Estudios en ratones El efecto de consumo de alimento de vehículo, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO : 3, SEQ ID NO : 4 se monitoreó en ratones C57BL/6 ayunados- realimentados magros. Los ratones fueron transferidos a una sola dosis de los péptidos (1 µp???/kg s.c.) 30 minutos antes de retorno de alimento y el consumo de alimento acumulativo se midió durante 24 horas. Los resultados se muestran en la tabla 4, figura 1A y IB. Como se puede ver en la tabla 4, figura 1A y IB el efecto de análogos de PYY(3-36) y PP prolongados en la reducción de consumo de alimentos es prolongado en comparación con el efecto de PYY(3-36) humano no modificado. Específicamente, el efecto de SEQ ID NO : 3 y SEQ ID NO : 4 (análogos de PYY(3-36) y PP prolongados, respectivamente) en reducir el consumo de alimentos se prolonga en comparación con el efecto de PYY(3-36) humano no modificado (SEQ ID NO:l). Mientras que el efecto de PYY(3-36) humano no modificado en reducir el consumo de alimento desapareció 6 horas después de la administración, el efecto de los análogos de PYY(3-36) y PP prolongados persiste 24 horas después de la administración de los péptidos. Además, un retraso aparente en el inicio de efecto se observa para los análogos de PYY(3-36) y PP prolongados en comparación con PYY(3-36) humano no modificado lo cual puede estar de acuerdo con un perfil farmacocinético diferente para los péptidos prolongados. ANOVA de una vía se llevó a cabo para cada punto de tiempo usando el software Graph-Pad Prism, versión 5.0. El método estadístico usado para los datos en la figura 1A fue una prueba t no apareada usando el software Graph-Pad Prism, versión 5.0. El método estadístico usado para los datos en la figura IB y tabla 4 fue ANOVA, post hoc de Dunnett . Empieza en la figura 1A y IB indicando significado contra el grupo de vehículo*) p<0.05, **) p<0.01, ***) p<0.001.
Tabla 4 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 (ANOVA, post hoc de Dunnett) Ejemplo 6 Estudios en ratones; agudo Se llevaron a cabo estudios para evaluar los efectos agudos de análogos de PP y PYY en el consumo de alimento en comparación con vehículo. Ratones C57BL/6 magros ayunados fueron administrados con una sola inyección subcutánea de vehículo a péptido aproximadamente 30 minutos antes del retorno del alimento y el consumo de alimento acumulativo se midió subsecuentemente. ANOVA de una vía se llevó a cabo para cada punto de tiempo usando el software Graph-Pad Prism, versión 5.0.
Estudio 6A Los ratones fueron administrados con vehículo, hPP(l-36) o uno de los dos análogos PP SEQ ID NO: 29 y SEQ ID NO: 50. La dosis de péptido fue (1.0 . Los resultados se muestran en la tabla 5 y en la figura 2.. Como se ve en la tabla 6 y en la figura 2, el efecto de los análogos de PP prolongados en reducir el consumo de alimento se prolonga en comparación con el efecto de PP(1-36) humano no modificado SEQ ID NO : 2. Mientras que el efecto de PP humano no modificado en reducir consumo de alimento ha desaparecido dos horas después de la administración, el efecto de los análogos de PP prolongados persiste 36 horas después de la administración de los péptidos .
Tabla 5 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 (ANOVA, post hoc de Dunnett) Estudio 6B Se administró a los ratones vehículo o el análogo de PP SEQ ID NO: 43 en dos dosis diferentes (0.03 y 0.1 µ????/kg) . Los resultados se muestran en la tabla 6 y en la figura 3. Como se ve en la tabla 6 figura 3, el análogo de PP prolongado SEQ ID NO: 43 reduce la dosis de consumo de alimento dependientemente dando como resultado consumo de alimento acumulativo reducido 4-12 horas después de la inyección. . Sin embargo, sólo la dosis más alta (0.1 µp???/kg) alcanzó significado estadístico.
Tabla 6 *p<0.05, **p<0.01 (ANO A , post hoc de Dunnett) Estudio 6C Se administró a los ratones vehículo o el análogo de PP prolongado SEQ ID NO: 23 en dos dosis diferentes (0.3 µ?/kg y 1.0 iamol/kg) . Los resultados se muestran en la tabla 7 y en la figura 4. Como se ve en la tabla 7 y figura 4, la dosis de análogo de PYY SEQ ID NO: 23 reduce dependientemente el consumo de alimento dando como resultado un consumo de alimento acumulativo reducido estadísticamente significativo durante hasta 96 horas después de la inyección.
Tabla 7 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 (ANOVA, post hoc de Dunnett ) Estudio 6D Se administró a ratones vehículos o al análogo de PYY SEQ ID NO: 40 en tres dosis diferentes (0.1, 0.3 µmoles/kg y 1.0 µt???/kg) . Los resultados se muestran en la tabla 8 y en la figura 5 como se ve en la tabla 8 y la figura 5, el análogo de PYY SEQ ID NO : 40 redujo de manera efectiva el consumo de alimento en todas las tres dosis.
Tabla 8 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 (ANOVA, post hoc Dunnett) Estudio 6E Se administró a los ratones vehículo (n=8) o uno de los análogos de PYY SEQ ID NO: 57 (n=8) , SEQ ID NO: 58 (n=7) y SEQ ID NO: 59 (n=8). La dosis de péptido fue de 1.0 pmol/kg. Los resultados se muestran en la tabla 9 y la figura 9, como se puede ver ahí el análogo de PYY SEQ ID NO: 57 y SEQ ID NO: 58 redujeron de manera efectiva el consumo de alimento dando como resultado un consumo de alimento acumulativo reducido estadísticamente significativo 1-48 horas después de la inyección. El efecto del análogo SEQ ID NO: 59 fue menos pronunciado dando como resultado consumo de alimento acumulativo reducido estadísticamente significativo 6-36 horas después de la inyección.
Tabla 9 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 (ANOVA, post hoc de Dunnett) Estudio 6F Se administró a ratones vehículo (n=8) o uno de los análogos de PP SEQ ID NO: 43 (n=8) , SEQ ID NO: 46 (n=7) y SEQ ID NO: 55 (n=8) . La dosis de péptido fue de 1.0 µG???/kg. Los resultados se muestran en la tabla 10 y en la figura 10, como se ve ahí el análogo de PP prolongado SEQ ID NO: 43 y SEQ ID NO: 55 redujo de manera efectiva el consumo de alimento dando como resultado un consumo de alimento acumulativo o reducido estadísticamente significativo 1-12 horas y 1-48 horas después de la inyección. El efecto del análogo SEQ ID NO: 46 fue menos pronunciado dando como resultado consumo de alimento' acumulativo reducido estadísticamente significativo 4 horas después de la inyección Tabla 10 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 (ANOVA, post hoc de Dunnett ) Ejemplo 7 Estudios en ratones; crónico Se llevó a cabo un estudio crónico para determinar el efecto de SEQ ID NO: 3 en peso corporal (0.3 y 1.0 µ????/kg) en peso corporal. Ratones ob/ob fueron tratados con una inyección subcutánea diaria durante dos semanas. Los resultados se muestran en las figuras 6 y 7. Como se puede ver en la figura 6, el peso corporal redujo la dosis de manera dependiente durante el periodo de estudio. Después de dos semanas el peso corporal se redujo en forma estadísticamente significativa con 4.5% y 8.5% para animales tratados con 0.3 y 1.0 moles/kg, respectivamente (figura 7). El peso corporal en animales tratados con vehículo se incrementó en 2.8% durante el periodo de estudio (figura 7) .
Ejemplo 8 Estudios en ratas; agudo Estudio 8A Se llevó a cabo un estudio para evaluar los efectos agudos de hPYY(3-36) (SEQ ID NO: 1) y un análogo de PYY (SEQ ID NO: 3) en consumo de alimentos en comparación con vehículo. Ratas magras fueron dosificadas con una sola inyección subcutánea de vehículo o péptido aproximadamente 30 minutos antes de que la luz se apagara y el consumo de alimento acumulativo se midió subsecuentemente. Los resultados se muestran en la tabla 11. Como se ve en la tabla 11, el tratamiento con el análogo de PYY SEQ ID NO: 3 dio como resultado una reducción estadísticamente significativa en el consumo de alimento agudo en ratas magras. En contraste, el efecto de hPYY(3-36) no fue estadísticamente significativo.
Tabla 11 Consumo de alimento acumulativo medio ***p<0.001 (ANOVA, post hoc de Dunnett) Estudio 8B Se llevó a cabo un estudio para evaluar el efecto agudo de PYY 3-36 nativo (SEQ ID NO: 1, n=5) y los análogos de PYY SEQ ID NO: 57 (n=6) , SEQ ID NO: 58 (n=5) y SEQ ID NO: 59 (n=5) en consumo de alimento en comparación con vehículo (n=7) . Ratas magras fueron dosificadas con una sola inyección subcutánea de vehículo o péptido aproximadamente 30 minutos antes de que la luz se apagara y el consumo de alimento acumulativo se midió subsecuentemente. Los resultados se muestran en la tabla 12 y figura 11, como se puede ver aquí el tratamiento con PYY nativo (SEQ ID NO: 1) no tuvo efecto en el consumo de alimento en ratas magras. En contraste, el tratamiento con los análogos de PYY SEQ ID NO: 57 y SEQ ID NO: 58 se tradujo en reducciones estadísticamente significativas en el consumo de alimento agudo. El consumo de alimento acumulativo se redujo en 6-24 horas y en 6-48 horas después de la dosificación de SEQ ID NO: 57 y SEQ ID NO: 58 respectivamente. El efecto del análogo SEQ ID NO: 59 fue menos pronunciado dando como resultado consumo de alimento acumulativo reducido estadísticamente significativo 24 horas después de la inyección.
Tabla 12 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 (ANOVA, post hoc de Dunnett) Ejemplo 9 Estudios en cerdos; agudos Se llevó a cabo un estudio para evaluar el efecto agudo de SEQ ID NO: 23 en el consumo de alimento en cerdos. A los cerdos se les dosificó una sola inyección subcutánea de vehículo (n=3) o péptido (n=4) y el consumo de alimento acumulativo se midió subsecuentemente. Los resultados se muestran en la tabla 13, como se puede ver ahí el tratamiento con 30 nmol/kg de SEQ ID NO: 23 dio como resultado una reducción estadísticamente significativa en el consumo de alimento acumulativo 12 horas después de la dosificación.
Tabla 13 Ejemplo 10 Determinación del perfil PK de SEQ ID NO: 3 en mini-cerdos. Cinco mini-cerdos Góttingen fueron administrados en una sola dosis de bolo i.v. de SEQ ID NO: 3; se tomaron muestras de sangre en los puntos de tiempo indicados y la concentración de plasma de SEQ ID NO: 3 se determinó mediante LC/MS como se describe en la presente. La vida media en plasma terminal media (t½) de SEQ ID NO : 3 se calculó como de 12±4 horas mediante análisis de no compartimiento de los perfiles del tiempo de concentración de plasma como los descritos en la presente. Los resultados se muestran en la figura 8. De esta manera, la vida media de SEQ ID NO: 3 es prolongada considerablemente en comparación con la vida media reportada de <30 minutos para PYY(3-36) no modificada en cerdos (Ito T et al, Journal of Endocrinology (2006), 191, págs. 113-119).
Ejemplo 11 Un ensayo útil para medir PK de los compuestos de la invención es el ensayo PK de mini -cerdos. Minicerdos Góttingen macho (n>3) que pesaban aproximadamente 15 a 35 kg de Ellegaard Gottingen Minipigs A/S, Dinamarca fueron incluidos en el estudio. A los mino-cerdos se les insertaron dos catéteres venosos centrales que se usaron para dosificación intravenosa (i.v.) y toma de muestras de sangre. El compuesto se disolvió 50 mM de K2HP04, 0.05% de Tween 80, pH = 8.0 hasta una concentración adecuada (por ejemplo, 25-500 nmoles/mL) . Los cerdos fueron dosificados intravenosamente (i.v.) o subcutáneamente (s.c.) con entre 1 y 30 nmoles de compuesto/kg de peso corporal. Se tomaron muestras de sangre en los siguientes puntos de tiempo adecuados, tal como antes de dosis, 30 minutos, 1, 2, 4, 8, 24, 48, 72, 96, 120, 168, 240 y 288 horas después de la dosis. Las muestras de sangre se recogieron en tubos de ensayo que contenían regulador de pH EDTA (con aprotinina 15000 KIE/mL y Val-Pyr 0.30 nM) para estabilización y se mantuvieron en hielo durante máximo 20 minutos antes de la centrifugación. El procedimiento de centrifugación para separar plasma fue 4°C, 3,000 rpm durante 10 minutos. Se recogió el plasma y se transfirió inmediatamente a tubos Micronic almacenados a -20°C hasta el ensayo.
Un ensayo PK en mini -cerdos adicional se usó para medir PK de los compuestos de la invención. Mini -cerdos que pesaban 15 a 35 kg de Ellegaard Gottingen Minipigs A/S fueron incluidos en los estudios. A los animales se les insertaron dos catéteres venosos centrales que se usaron para dosificación intravenosa (i.v.) y toma de muestras de sangre. Los compuestos se disolvieron en 10 mM de Na2HP04 , 150 mM de NaCl, 0.01% de tween 80, pH = 4.0 hasta concentraciones en la escala de 40 nmoles/ml a 200 nmoles/ml. Los mini-cerdos fueron dosificados i.v. con 10 nmoles de compuesto/kg de peso corporal, ocasionalmente otras dosis tales como 4 nmoles/kg, 30 nmoles/kg o 50 nmoles/kg fueron administradas. Cada compuesto se dosificó a 3 ó 4 mini-cerdos, y dos compuestos pueden darse simultáneamente al mismo animal. Se tomaron muestras de sangre antes de la dosis y 12 veces durante las primeras 10 horas después de la dosis. La sangre además fue tomada una vez al día hasta 13 días después de la dosis. Las muestras de sangre se recogieron en tubos de ensayo que contenían regulador de pH EDTA, trasilol y Val-Pyr para la estabilización y se mantuvieron en hielo durante máximo 20 minutos. Las muestras fueron centrifugadas a 4°C, 2000 G durante 10 minutos para separar plasma. El plasma se recogió y se transfirió inmediatamente a tubos Micronic almacenados a -20°C hasta el ensayo.
Los resultados se muestran en la tabla 14 para análogos de PYY o derivados de los mismos.
Los resultados se muestran en la tabla 15 para los análogos de PP o derivados de los mismos.
Tabla 14 Vida media (t½) de los análogos de PYY o derivados de los mismos probados en mini-cerdos como una función de la posición de acilación y tipo de asa de albúmina Compuesto Posición de RoA1 n Dosis TA acilación, (nmol/kg) (hora) longitud de cadena de ácido graso SEQ ID NO: 1 Nativo (3- i .V. 4 16 0.20 · 36) i .V. 3 47 0.49 SEQ ID NO: 3 K13, C20 i . V . 5 6 13 s . c . 4 25 23 SEQ ID NO: K4, C20 i .V. 3 8 8.0 12 SEQ ID NO: 23 Na, C20 i . V . 3 9.4 8.5 s . c . 4 28 30 SEQ ID NO: 27 Kll, C18 i . V . 3 5.6 4.3 SEQ ID NO: Kll, C20 i . V . 3 5.6 2.0 28 SEQ ID NO K25, C20 i .V. 4 4 45 34 i . V . 4 31 66 SEQ ID NO K24, C20 i .V. 4 4 50 35 SEQ ID NO K19, C20 i .V. 4 29 27 40 SEQ ID NO K13, i .V. 3 10 18 51 tetrazol SEQ ID NO K25, i .V. 3 10 65 52 tetrazol SEQ ID NO 53 Na, tetrazol i .V. 3 10 11 SEQ ID NO K19, i .V. 3 10 30 54 tetrazol SEQ ID NO K18, C20 i . V . 4 10 22 57 SEQ ID NO K22, C20 i . V . ' 4 10 34 58 SEQ ID NO K2S , C20 i . V . 4 10 30 59 Tabla 15 Vida media (t½) de los análogos de PP o derivados de los mismos probados en mini- cerdos como una función de la posición de acilación y tipo de asa de albúmina SEQ ID NO: K35, C18 i .V. 4 10 78 47 SEQ ID NO: K35, C20 i .V. 3 10 93 48 SEQ ID NO: K25, C18 i . v . 3 10 88 49 SEQ ID NO: K25, C20 1. v . 3 10 82 50 SEQ ID NO: Na, C18 i . v . 4 7 29 55 SEQ ID NO: Na, C20 i .V. 1 6 22 56 SEQ ID NO: Na, C20 i .V. 3 10 48 75 1) RoA: Ruta de administración 2) LoQ: Límite de cuantificación Todas las referencias, incluyendo publicaciones, solicitudes de patente y patentes, citadas en la presente se incorporan en la presente a manera de referencia en su totalidad y al mismo grado a que si cada referencia estuviera indicada individual y específicamente como incorporada a manera de referencia y se mostrara en su totalidad en la presente (al máximo grado permitido por la ley) .
Todos los títulos y subtítulos se usan en la presente por conveniencia únicamente y no se deben considerar como limitativos de la invención de ninguna manera.
El uso de cualquiera y todos los ejemplos, o lenguaje ejemplar (por ejemplo, "tal como") provisto en la presente, simplemente intenta iluminar mejor la invención y no presentar una limitación en el alcance de la invención a menos que se reclame de otra manera. Ningún lenguaje en la descripción debe considerarse como indicando cualquier elemento no reclamado como esencial para la práctica de la invención.
La citación e incorporación de documentos de patente en la presente se hace por conveniencia únicamente y no refleja ninguna vista de la validez, patentabilidad y/o aplicación de estos documentos de patente.
Esta invención incluye todas las modificaciones y equivalentes de la materia descrita en las reivindicaciones anexas a la misma permitidos por la ley aplicable.
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (15)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :
1. Un derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo, caracterizado porque al menos un residuo de aminoácido y/o el extremo N y/o C de la estructura de base de péptido se deriva con una cadena lateral de unión a albúmina de suero definida por A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C- o A-C-, en donde A- es en donde p se selecciona del grupo que consiste en 10, 11, 12, 13, 14, 15 y 16 y d se selecciona del grupo que consiste en O, 1, 2, 3, 4 y 5, y -B- se selecciona del grupo que consiste en en donde x se selecciona del grupo que consiste en 0, 1, 2, 3 y 4, y y se selecciona del grupo que consiste en 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12; o A- es en donde n se selecciona del grupo que consiste en 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 y 19, y -B- se selecciona del grupo que consiste en en donde x se selecciona del grupo que consiste en 0 , 1, 2, 3 y 4; y -C- se selecciona del grupo que consiste en en donde b y e son cada uno independientemente seleccionados del grupo que consiste en O, l y 2, y c y f se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en 0 , 1 y 2 con la condición de que cuando c sea 0 b sea 1 ó 2, c sea 1 ó 2 b sea 0, f sea O e sea 1 ó 2 , f sea 1 ó 2, e sea O, y con la condición de que cuando A- -C- puede ser eliminado; y -D- está unido al residuo de aminoácido y es un separador .
2. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el péptido se selecciona del grupo que consiste en un análogo de PP de acuerdo con la fórmula I Z-Ala-Pro-Leu-Glu-Pro-Val-Tyr-Pro-Gly-Xaai0-Xaa11-Xaai2-Xaai3-Xa i4 _X i5 -Xaai6 - X ai7 -Xa is -Xaai9 -X¾^2o ~Xa.a.21 - aa22 -X9.ci.23 - aa2 -Xaa25-X a26-Xaa27-Xaa28-Xaa29- aa30-X 31-Thr-Arg-Xaa34-Arg-Xaa3s (I) , en donde Z es la cadena lateral A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, o A-C- unida al grupo amino N-terminal o no está presente cuando A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, A-C- está unido a la cadena lateral de un aminoácido, Ala en la posición 1 puede ser suprimido, Xaa10 es Asp, Asn, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina o Lys, Xaan es Asp, Asn, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai2 es Ala, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico , ornitina o Lys, Xaa13 es Thr, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai4 es Pro o hidroxiprolina, Xaai5 es Glu, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2, -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai6 es Gln, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico , ornitina, o Lys, Xaai7 es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil ) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaais es Ala, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa19 es Gln, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa o es Tyr, Phe, o 3 -piridilalanina , Xaa2i es Ala, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico , ornitina, o Lys, Xaa22 es Ala, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa23 es Asp, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa24 es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaa25 es Arg, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa26 es Arg, His, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa27 es Tyr, Phe, homoPhe, o 3 -piridilalanina , Xaa28 es lie, Val, Leu, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil ) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaa29 es Asn, Gln o Lys, Xaa30 es Met, Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, Xaa3i es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil ) carboxílico, o ácido 1-aminobutírico, Arg en la posición 33 puede ser sustituido con Lys, Xaa3 es Gln, Asn o His, Arg en la posición 35 puede ser sustituido con Lys, Xaa36 es Tyr, 3-piridilalanina; un análogo de PYY de acuerdo con la fórmula II Z-Tyr-Pro-Xaa3-Xaa -Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Xaaio -Xaaii-Xaai2-Xaai3 - aa.14 -Xaai5 -Xaai6-Xaa17 - X ie -Xa 2o - 2i-Xa -Xaa23 -X 24 -Xa 25 -Xaa26- aa27 - Xaa28-Xaa29-xaa3o-Xaa3i- hr-Arg-Xaa34-Arg-Xaa36 (II) , en donde Z es la cadena lateral A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, o A-C- unida al grupo amino N-terminal o no está presente cuando A-B-C-D-, A-C-D-, A-B-C-, A-C- está unido a la cadena lateral de un aminoácido, Tyr-Pro en la posición 1 y 2 pueden ser suprimidos, Tyr en la posición 1 puede ser sustituido con Ala o ser suprimido, Xaa3 es lie, Val, Leu ácido (1-aminociclopentil ) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaa4 es Glu, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Glu en la posición 6 puede ser sustituido con Val, Ala en la posición 7 puede ser sustituido con Tyr, Xaaio es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico , ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaan es Asp, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai2 es Ser, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai4 es Pro, hidroxiprolina, o Lys, Xaai5 es Glu, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai6 es Glu, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai7 es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico o ácido 1-aminobutírico, Xaaia es Asn, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaai9 es Arg, 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2,4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa2o es Tyr, Phe, 3 -piridilalanina , ácido 2,3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa2i es Tyr, Phe, 3 -piridilalanina, ácido 2,3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa22 es Asp, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa23 es Ala, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa24 es Leu, lie, Val, homoleucina, norleucina, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido 1-aminobutírico, o Lys, Xaa25 es Arg, ácido 2 , 3 -diaminopropiónico, ácido 2 , 4-diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa26 es His, Arg, ácido 2 , 3-diaminopropiónico, ácido 2 , -diaminobutírico, ornitina, o Lys, Xaa27 es tyr, Phe, homoPhe, o 3 -piridilalanina , Xaa2s es lie, Val, Leu, homoleucina, norleucina, ácido (l-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido 1-aminobutírico, o Lys, Xaa29 es Asn, Gln, o Lys, Xaa30 es Met, Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (l-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil ) carboxílico, ácido 1-aminobutírico, o Lys, Xaa3i es Leu, Val, lie, homoleucina, norleucina, ácido (l-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido 1-aminobutírico, o Lys, Thr en la posición 32 puede ser sustituido con Lys, Xaa34 es Gln, Asn, o His, Xaa36 es Tyr, 3 -piridilalanina, o Lys; en donde el compuesto se modifica con una cadena lateral de unión a albúmina de suero que comprende un grupo de ácido carboxílico o tetrazol distal.
3. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la cadena lateral de unión a albúmina en suero se une a un grupo amino de la cadena lateral de un aminoácido de la estructura de base del péptido seleccionado del grupo que consiste en ácido 2,3-diaminopropiónico, ácido 2 , 4 -diaminobutírico , ornitina y Lys .
4. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el separador, -D-, comprende una o más moléculas de ácido 8 -amino-3 , 6 -dioxaoctanoico (Oeg) .
5. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el derivado se selecciona para los receptores Y2 y/o Y4 sobre el receptor Yl .
6. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el derivado es selectivo para los receptores Y2 y/o Y4 sobre el receptor Y5.
7. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el derivado muestra perfil PK mejorado en comparación con PYY humano, PYY (3-36) o PP.
8. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el derivado muestra propiedades prolongadas en comparación con PYY humano, PYY (3- 36) , o PP.
9. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el derivado muestra vida media mejorada in vivo en comparación con PYY humano, PYY (3-36) , o PP.
10. El derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste en N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } -amino) butirilamino] -etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetil] [Lysl3 ] hPYY ( 3 -36 ) - (SEQ ID NO: 3) ; N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] - etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Lysl3 , Leul7 , Leu30 <Gln34]hPP(l-36) N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi} etoxi) -acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Lysl3] hPYY(3-36) (SEQ ID NO: 5) ; N-épsilonlO [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi -4 - ({trans-4- [ (197 carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] etoxi } etoxi) acetilamino] toxi } etoxi) acetil] [LyslO , Leul 7,Leu30]hPP2-36 (SEQ ID NO: 6) ; N-épsilonlO- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi -4¦ (17-carboxiheptadecanoilamino) buririlamino] etoxi } etoxi ) acetila mino] -etoxijetoxi) acetil] [LyslO , Leul7 , Leu30] hPP2-36 (SEQ ID NO: 7) ; N-épsilonll- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] etoxijetoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Lysll] hPY Y(3-36) (SEQ ID NO: 8) ; N-épsilonll- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi-4 - (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxijetoxi) acetilamin ] -etoxi} etoxi) acetil] [Lysll] hPYY (3-36) (SEQ ID NO: 9) ; N-épsilonl3- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4 -carboxi -4 - ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi }etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetil] [Lysl3 , Leul7 , Nle30 ,Gln34]hPP(l-36) (SEQ ID NO: 10) ; N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi -4 - ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] - etoxijetoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Lysl3] hPPY2- (SEQ ID NO: 11) ; N-épsilon4- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetil] hPYY ( 3 - 36) (SEQ ID NO: 12) ; N-épsilon4- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi-4 - (17- carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamin o] -etoxijetoxi) acetil] hPYY (3-36) (SEQ ID NO: 13) ; N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi-4 - ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] - etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi } etoxi) acetil] [AsnlO , Aspll , Lysl3 , Leul7, Leu30, Val31] hPP (1-36) (SEQ ID NO: 14) ; N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi-4- ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Lysl3 , Leu 17,Leu28, Val30,Gln34] hPP(l-36) (SEQ ID NO: 15) ; N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi-4- ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi }etoxi) acetilamino] etoxi }etoxi) acetil] [Lysl3 , Leul7 , Val28 ,Leu30,Gln34]hPP(l-36) (SEQ ID NO: 16) ; N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi -4 - ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi ) acet ilamino] etoxi } etoxi) acetil] [Lysl3 , Leul7 , Val30 ,Gln34]hPP(l-36) «—A P (SEQ ID NO: 17) ; N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi -4 - ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoi lamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] - etoxi}etoxi) acet i lamino] etoxi}etoxi)acetil] [Lysl3,Leul7 , Gln29, Leu30] hPP (1-36) (SEQ ID NO : 18 ) ; N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoi lamino) met il ] ciclohexancarboni 1 } amino ) butirilamino] -etoxi } etoxi ) acet i lamino] etoxi } etoxi ) acet i 1 ] [Lys 13 , Arg26 ] hPYY (3 -36 ) (SEQ ID NO : 19) ; N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19- Carbo inonadecanoi lamino) metil] ciclohexancarbonil } amino ) butirilamino] - etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetil] [Alal,Leu3,G lu4 , Va16 , Tyr7 , Lysl3 , Arg26] hPYY ( 1-36 ) (SEQ ID NO: 20) ; N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi-4 - ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetil] [Alai , Glu4 , Lysl3 ,A rg26] hPYY(l-36) (SEQ ID NO: 21) ; N-épsilonl3 - [2 - (2-{2 - [2 - (2-{2 - [ (S) -4 -carboxi -4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ci c lohexanca boni 1 } ami no) butirilamino] etoxi}etoxi) acetilamino] etoxijetoxi) a cetil] [Alai , Glu4 , Tyr7 , Lysl3 , Arg26] hPYY (1-36 (SEQ ID NO: 22) ; N-alfa- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- ( {trans- 4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] etoxi] etoxi) acetilamino] toxi}etoxi) acetil] hPYY(3-36) (SEQ ID NO: 23) ; N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi}etoxi) acetilamin o] etoxijetoxi) acetil] [Lysl3] hPP (1-36) O°Y° o H-A P L E P V Y P G D N A-N Ti P E Q M A Q Y A A D L R R Y I N M L T R Q R Y-N O (SEQ ID NO: 24) ; N-épsilon4- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi-4 - (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi }etoxi) acetilamin ] -etoxi}etoxi) acetil] [Lys4] hPYY(3-36) (SEQ ID NO: 25) ; N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi -4 - (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamin o] -etoxi}etoxi) acetil] [Lysl3 , Gln34] hPP (1-36) (SEQ ID NO: 26) ; N-épsilonll- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi -4 - (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamin o] -etoxi}etoxi) acetil] [Lysll] hPYY (3-36) (SEQ ID NO: 27) ; N-épsilonll- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4 -carboxi -4 -( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) buti ilamino] -etoxijetoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Lysll] hPYY (3-36) (SEQ ID NO: 28) ; N-épsilonll- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi }etoxi) acetil] [Lysll , Leul7 , Leu30 ] hPP2-36 (SEQ ID NO: 29) ; N-épsilonll- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi }etoxi) acetilamin o] -etoxi } etoxi ) acetil] [Lysll , Leul7 , Leu30] hPP2-36 (SEQ ID NO: 30) ; N-épsilonl3- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4 -carboxi -4 - (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi }etoxi) acetilamin o] -etoxi}etoxi) acetil] [Lysl3] hPP (1-36) N-épsilonÍ8- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4-carboxi-4- (17- arboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamin ] -etoxi} etoxi) acetil] [Lysl8 , Leul7 , Leu30] hPP2-36 (SEQ ID NO: 32) ; N-alfa- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi -4 - ({trans- 4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] etoxi}etoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] hPYY18-36 (SEQ ID NO: 33) ; N-épsilon25- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetil] [Lys25] hPYY ( 3 -36 ) (SEQ ID NO: 34) ; N-épsilon24- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- ({trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] - etoxi} etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Lys24] hPYY (3-36) (SEQ ID NO: 35) ; N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi-4 - ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] -etoxi }etoxi) acetilamino] etoxi) acetil] [Lysl3 , Leul7 , Leu30] hPP (1 -36) (SEQ ID NO: 36) ; N-épsilon25- [2-(2-{.2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi-4 - ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] - etoxi}etoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Leul7, Lys25, Leu30 ]hPP(l-36) (SEQ ID NO: 37) ; N-épsilonl5- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4-carboxi-4- ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] - etoxijetoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Lysl5 , Leul7 , Leu30 ] hPP (1-36) (SEQ ID NO: 38) N-épsilonlO- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [(S) -4 -carboxi-4 - ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi) aeetilamino] etoxi } etoxi ) acetil] [LyslO , Leul7 , Leu30 ,Gln34]hPP2-36 (SEQ ID NO: 39) ; N-épsilonl9- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4 - ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Lysl9] hPYY (3-36) "-I (SEQ ID NO: 40) ; N-épsilon33- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) - -carboxi-4 - (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamin -etoxi}etoxi) acetil] [Leul7 , Leu30 , Lys33] hPP2-36 (SEQ ID NO: 41) ; N-épsilon33- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi -4 -( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] etoxi }etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Leul7 , Leu 30,Lys33] hPP2-36 (SEQ ID NO: 42) ; N-épsilonl8- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi-4 - ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] -etoxi }etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Leul7 , Lysl8 , Leu30 ] hPP2-36 (SEQ ID NO: 43) ; N-épsilon29- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4 -carboxi-4 -( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi } etoxi) acetil] [Leul7 , Lys29 , Leu30 ] hPP2-36 (SEQ ID NO: 44) ; N-épsilon26- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi -4 - ' ( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil Jamino) butir ilamino] -etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi) acetil] [Leul7 , Lys26 , Leu30 ]hPP2-36 (SEQ ID NO: 45) ; N-épsilon26- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi -4 - (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi Jetoxi ) acetilamin ] -etoxi} etoxi) acetil] [Leul7 , Lys26 , Leu30] hPP2-36 (SEQ ID NO: 46) ; N-épsilon35- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- (17-carboxihpetadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamin o] -etoxi}etoxi) acetil] [Leul7 , Leu30 , Lys35] hPP2-36 (SEQ ID NO: 47) ; N-épsilon35- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4-( {trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil }amino) butir ilamino] -etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetil] [Leul7 , Leu30 , Lys35 ] hPP2-36 O H_P LEPVYPGDNATPEQLAQYAADLRRY I N L LTRPN — YN (SEQ ID NO: 48) ; N-épsilon25- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- (17 carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamin o] -etoxijetoxi) acetil] [Leul7 , Lys25 , Leu30] hPP2-36 (SEQ ID NO: 49) ; N-épsilon25- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4-carboxi-4- ( {trans-4- [(19-carboxinonadecanoilamino)metil] ciclohexancarbonilJamino) butirilamino] -etoxijetoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Leul7, Lys25, Leu30] hPP2-36 (SEQ ID NO: 50) ; N-épsilonl3- [4- (16- (lH-tetrazol-5-il) hexadecanoilsulfamoil) butiril] etoxijetoxi) acetilamino] etox ijetoxi) acetil] [Lysl3] PYY (3-36) f (SEQ ID NO : 51) ; N-épsilon25 - [4- (16- (lH-tetrazol-5-il) hexadecanoilsul famoi 1 )butiril] etoxijetoxi) acet ino] etoxi}etoxi) acetil] [Lys25] PYY (3-36) (SEQ ID NO : 52) ; N-alfa- [4- (16- (lH-tetrazol-5-il) hexadecanoi 1 sul famoi 1 ) but iri 1 ] etoxi }etoxi) acetilam ino] etoxijetoxi) acetil] PYY (3-36) (SEQ ID NO : 53 ) ; N-alfa - [4- (16- ( 1H -tetrazol-5-il) hexadecanoilsulf amoi 1 )butiril] etoxijetoxi) acetilam ino]etoxi}etoxi)acetil] PYY ( 3 - 36 ) (SEQ ID NO: 54) ; N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) - 4 - carboxi - 4 - (17-carbo ihe tadecano i 1 amino ) but i ri 1 araino ] etoxi } etoxi ) ac etilamino] - etoxi } etoxi ) acet i 1 ] [ Leul 7 , Leu30 ] hPP2 - 36 (SEQ ID NO: 55) ; N-alfa- [2 - (2-{2 - [2- (2- {2 - [ (S) - 4 - carboxi - 4 - ( {trans-4- [ (19- carboxinonadecanoi lamino ) metil] ciclohexancarbonil }ami no ) but i ri lamino] - etoxi } etoxi ) acet i lamino] etoxi } etoxi ) acet i 1 ] [Leul7,Leu 0] hPP2 -36 (SEQ ID NO: 56) ; N-épsilonl8- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi -4 - ( {trans-4- [ (19- carboxinonade.canoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] - etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Lysl8] PPY3-36 (SEQ ID NO: 57) ; N-épsilon22- [2-(2-{2-[2-{2-{2-[(S) -4 -carboxi -4- ( {trans-4- [ ( 19 - carboxinonadec ano i lamino ) metil] ciclohexancarbonil } ami no ) but i r i 1 amino ] - e t oxi } e toxi ) ace t i 1 amino] e t oxi } e t oxi ) acet i 1 ] [Lys22] PYY3-36 (SEQ ID NO: 58) ; N-épsilon26- [2- (2- {2- [2- (2- {2- [ (S) -4-carboxi-4- ({trans-4- [(19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil}amino) butirilamino] etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil] [Lys26] PYY3-36 (SEQ ID NO: 59) ; N-épsilon29- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4-carboxi-4- ( {trans [(19- carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil}amino) butirilamino] - etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Lys29] PYY3-36 (SEQ ID NO: 60) ; N-épsilon36- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi- 4- ( { trans-4- [ (19- carboxinonadecanoi lamino) met il] ciclohexancarbonil } ami no ) but i ri lamino] etoxi } etoxi ) acet i lamino] etoxi } etoxi ) a cetil] [Lys36] PYY3-36 (SEQ ID NO : 61) ; N-épsilon21- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi- 4- (17- carboxiheptadecanoi lamino ) but i ri lamino [etoxi } e toxi ) ac etilamino] -etoxijetoxi) acetil] [Lys21PYY3 - 36 (SEQ ID NO : 62 ) ; N-épsilon30- [2 - (2 - { 2 - [2 - (2 - { 2 - [ (S) - 4 - carbox carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) ac etilamino] -etoxi} etoxi ) acetil] [Lys30] PYY3 - 36 (SEQ ID NO: 63) ; N-épsilon31- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamin o] -etoxi}etoxi) acetil] [Lys31] PYY3-36 (SEQ ID NO: 64) ; N-épsilonl4- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi }etoxi) acetilamin o] -etoxijetoxi) acetil] [Lysl4] PYY3-36 (SEQ ID NO: 65) ; N-épsilonl5- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi -4 - (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi}etoxi) acetilamin -etoxi}etoxi) acetil] [Lysl5] PYY3- (SEQ ID NO: 66) ; N-épsilonl6- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi -4 - (17-carboxihpetadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamin o] -etoxi}etoxi) acetil] [Lysl6] PYY3-36 (SEQ ID NO: 67) ; N-épsilon20- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -carboxi-4- (17-carboxihpetadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamin o] -etoxi}etoxi) acetil] [Lys20] PYY3-36 (SEQ ID NO: 68) ; N-épsilon28- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4 -craboxi-4 - (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi} etoxi) acetilamin o] -etoxijetoxi) acetil] [Lys28] PYY3-36 (SEQ ID NO: 69) ; N-épsilon32- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- (17-carboxiheptadecanoilamino) butirilamino] etoxi }etoxi) acetilamin o] -etoxijetoxi) acetil] [Lys32] PYY3-36 (SEQ ID NO: 70) ; N-épsilon25- [2- (2- {2- [2- (2-{2- [(S) -4-carboxi-4- ( {trans-4- [(19-carboxinonadecanoilamino)metil] ciclohexancarbonil}amino)butirilamino] etoxijetoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Leul7, Lys25, Leu30] PPl-36 (SEQ ID NO: 71) ; N-épsilonl5- [2- (2- {2- [2- (2-{2- [(S) -4-carboxi-4- ( {trans- 4- [(19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil}amino)butirilami no] -etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Leul7, Lysl5, Leu30] PPl-36 ácido N-épsilonl3- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-carboxi-4- ({trans-4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] -etoxi} etoxi) acetilamino] etoxi }etoxi) acetil] [Leul7 , Lysl3 , Leu30 , Gln34] PPl-36 (SEQ ID NO: 74) ; y N-alfa- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4 -carboxi-4 - ({trans- 4- [ (19-carboxinonadecanoilamino) metil] ciclohexancarbonil } amino) butir ilamino] etoxijetoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Leul7, Leu 30] PP1-36 (SEQ ID NO: 75) .
11. Una composición caracterizada porque comprende el derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, y uno o más excipientes farmacéuticos.
12. Uso del derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, para la manufactúa de un medicamento para el tratamiento de una afección que responda a modulación del receptor Y.
13. Uso de conformidad con la reivindicación 12, en donde la afección que responde a la modulación del receptor Y es obesidad.
14. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 12 ó 13, en donde el régimen de administración se selecciona del grupo que consiste en una vez al día, una vez por semana, dos veces al mes o una vez al mes .
15. Uso del derivado de péptido PYY o PP o análogo del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de una afección que responda a modulación del receptor Y, tal como obesidad o enfermedades relacionadas con obesidad, por ejemplo, reducción de consumo de alimento.
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