MX2007014717A

MX2007014717A - Metodos de purificacion de tigeciclina.

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Publication number: MX2007014717A
Application number: MX2007014717A
Authority: MX
Inventors: Lalitha Krishnan; Sylvain Daigneault; Anthony Scott Pilcher; Phaik-Eng Sum; Jeffrey Marshall Horne; Adam Joseph Tuper; Joseph James Mccauley Iii; Adam P Michaud; Michael Bernatchez
Original assignee: Wyeth Corp
Priority date: 2005-05-27
Filing date: 2006-05-25
Publication date: 2008-02-15
Also published as: RU2007143158A; CN101228114A; US20070049561A1; KR20080016892A; WO2006130431A1; JP2008545702A; CR9542A; IL187361A0; GT200600224A; NO20075997L; EP1890997A1; CA2609307A1; ZA200710174B; PE20070318A1; BRPI0610057A2; AU2006252796A1; PA8676401A1; AR057034A1; NI200700302A; TW200716516A

Abstract

Se describen metodos para preparar y purificar tetraciclinas, tales como tigeciclina. Tambien se describen composiciones de tetraciclilna, tales como composiciones de tigeciclina, preparadas por estos metodos.

Description

MÉTODOS DE PURIFICACIÓN DE TIGECICLINA DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Se describen en la presente métodos para preparar al menos un compuesto de la fórmula 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (d-C6) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forma un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?-C4) de cadena lineal y ramificada; y n está en el rango desde 1-4. En una modalidad, Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, R es -NR3R4 donde R3 es metilo y R4 es metilo, y n es 1, por ejemplo, tigeciclina. La tigeciclina, (9-(t-butil-glicilamido) -minociclina, TBA-MINO) , (4S, 4aS, 5aR, 12aS) -9- [2- (tert-butilamino) acetamido] -4 , 7-bis (dimetilamino) -1,4, 4a, 5, 5a, 6, 11, 12a-octahidro-3, 10, 12, 12a-tetrahidroxi-l, 11-dioxo-2-naftacencarboxamida, donde Rx es hidrógeno, R2 es t- Ref.: 187868 butilo, R3 es metilo, R4 es metilo, y n es 1. La tigeciclina es un antibiótico de glicilciclina y un análogo de la tetraciclina monosintética, minociclina. La tigeciclina es un derivado de 9-t-butilglicilamido de minociclina, como se muestra en la estructura de abajo: Tigeciclina La tigeciclina se desarrolló en respuesta a la amenza mundial de la resistencia emergente a los antibióticos. La tigeciclina tiene una actividad antibacterial de amplio espectro expandida tanto in vitro como in vivo. Los antibióticos de glicilciclina, como los antibióticos de tetraciclina, actúan al inhibir la traducción de proteínas en las bacterias. La tigeciclina es un antibót'ico conocido en la familia de tetraciclina y un análogo químico de minociclina. Puede usarse como un tratamiento contra bacterias resistentes al fármaco, y se muestra que trabaja donde otros antibióticos han fallado. Por ejemplo, es activa con Staphylococcus aureus resistente a la meticilina, Streptococcus pneumoniae resistente a la penicilina, enterococos resistentes a la vancomicina (D.J. Beidenbach et . al., Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 40:173-177 (2001); H.W. Boucher et . al., Antimicrobial Agents & Chemotherapy 44:2225-2229 (2000); P.A. Bradford Clin. Microbiol. Newslett. 26:163-168 (2004); D. Milatovic et . al., Antimicrob. Agents Chemother. 47:400-404 (2003); R. Patel et . al., Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 38:177-179 (2000); P.J. Petersen et . al., Antimicrob. Agents Chemother. 46:2595- 2601 (2002); y PJ. Petersen et . al., Antimicrob. Agents Chemother. 43:738-744(1999), y contra organismos que portan cualquiera de las dos formas principales de resistencia de tetraciclina: eflujo y protección ribosomal (C. Betriu et. al., Antimicrob. Agents Chemother. 48:323-325 (2004); T. Hirata et . al. Antimicrob. Agents Chemother. 48:2179-2184 (2004); y PJ. Petersen et. al., Antimicrob. Agents Chemother. 43:738-744(1999). La tigeciclina puede usarse en el tratamiento de muchas infecciones bacterianas, tales como infecciones intra-abdominales complicadas (cIAI, por sus siglas en inglés), infecciones de la piel y de la estructura de la piel complicada (cSSSI, por sus siglas en inglés) , Pneumonía Adquirida en Comunidad (CAP, por sus siglas en inglés) , y Pneumonía Adquirida en Hospital (HAP, por sus siglas en inglés), que pueden causarse por patógenos gram negativos y gram positivos, anaeróbicos, y cepas resistentes a la meticilina y susceptibles a la meticilina de Staphylococcus aureus (MSSA y MRSA) . Adicionalmente, la tigeciclina puede usarse para tratar o controlar infecciones bacterianas en animales de sangre caliente causadas por bacterias que tienen las determinantes resistentes a TetM y TetK. También, la tigeciclina puede usarse para tratar infeciones de huesos y articulaciones, neutropenia relacionada con catéter, infecciones obstétricas y ginecológicas, o para tratar otros patógenos resistentes, tales como micobacterias VRE, ESBL, entéricas, de rápido crecimiento, y los similares. La tigeciclina sufre de algunas desventajas en que puede degradarse por epimerización. La epimerización es una trayectoria de degradación conocida en tetraciclinas generalmente, no obstante que la relación de degradación puede variar dependiendo de la tetraciclina. En comparación, la relación de epimerización de tigeciclina puede ser rápida, aún por ejemplo, bajo condiciones medianamente acidas y/o temperaturas medianamente elevadas. La literatura de tetraciclina reporta varios métodos científicos usados para tratar y minimizar la formación de epimero en tetraciclinas. En algunos métodos, la formación de sales de metal de calcio, magnesio, zinc o aluminio con tetraciclinas limita la formación de epimero cuando se da a pH básicos en soluciones no acuosas. (Gordon, P.N, Stephens Jr, C.R., Noseworthy, M. M., Teare, F.W., Patente R.U. No. 901,107). En otros métodos, (Tobkes, Patente E.U.A. No. 4,038,315) la formación de un complejo de metal se realiza a un pH ácido y una forma sólida estable del fármaco se prepara posteriormente. La tigeciclina difiere estructuralmente de su epimero sólo en un aspecto.

FORMULA I FORMULAD En la tigeciclina, el grupo N-dimetilo en el carbono 4 es cis para el hidrógeno adyacente como se muestra arriba en la fórmula I, mientras que el epimero (esto es, el epimero C4) , fórmula II, son trans uno del otro en la manera indicada. No obstante que el epimero de tigeciclina se considera que no es tóxico, bajo ciertas condiciones puede carecer de eficacia anti-bacterial de tigeciclina y puede, por lo tanto, ser un producto de degradación indeseable. Por otro lado, la cantidad de epimerización puede magnificarse cuando se sintetiza tigeciclina a gran escala. Otros métodos para reducir la formación de epimero incluyen mantener los pH de más de alrededor de 6.0 durante el procesamiento; evitando el contacto con conjugados de ácidos débiles tales como formiatos, acetatos, fosfatos, o boronatos; y evitando el contacto con humedad incluyendo soluciones basadas en agua. Con respecto a la protección a la humedad, Noseworthy and Spiegel (Patente E.U.A. No. 3,026,248) y Nash and Haeger, (Patente E.U.A. No. 3,219,529) han propuesto formular análogos de tetraciclina en vehículos no acuosos para mejorar la estabilidad .del fármaco. Sin embargo, la mayoría de los vehículos en estas descripciones son más apropiados para uso tópico que parenteral. La epimerización de tetraciclina también se conoce por ser dependiente de la temperatura de manera que la producción y almacenamiento de tetraciclinas a temperaturas bajas también puede reducir la relación de formación de epimero (Yuen, P. H., Sokoloski, T.D., J. Pharm. Sci. 66: 1648-1650,1977; Pawelczyk, E., Matlak, B, Pol. J. Pharmacol. Pharm. 34: 409-421, 1982) . Varios de estos métodos se han intentado con tigeciclina pero aparentemente ninguno ha tenido éxito en reducir tanto la formación como la degradación oxidante del epimero mientras no se introducen degradantes adicionales. La formación en complejo de metal, por ejemplo, se ha encontrado que afecta poco en ya sea la formación o degradación de epimero generalmente a pH básico. No obstante que el uso de soluciones amortiguadoras de fosfato, acetato, y citrato mejoran la estabilidad en estado de solución, se aprecia que aceleran la degradación de tigeciclina en el estado liofilizado. Aún sin una solución amortiguadora, sin embargo, la epimerización es un problema más serio con tigeciclina que con otras tetraciclinas tales como minociclina. Además del epimero C otras impurezas incluyen subproductos de oxidación. Algunos de estos sub-productos se obtienen por la oxidación del anillo D de la molécula, que es un aminofenol . Los compuestos de la fórmula 3 (ver Esquema de Reacción I abajo) pueden oxidarse fácilmente en las posiciones C-ll y C12a. El aislamiento de los compuestos de la fórmula 3 por precipitación con un no solvente puede tener el problema de que los sub-productos de oxidación y sales de metal se coprecipitan con el producto, resultando en purezas muy bajas. La oxidación y degradación de los núcleos de los compuestos de la fórmula 3 puede ser más pronunciada bajo condiciones de reacción básicas y más aún en operaciones a gran escala ya que los tiempos de procesamiento típicamente son más largos y los compuestos están en contacto con la base por un tiempo mayor. Por otro lado, los productos de degradación pueden obtenerse durante cada una de las diferentes etapas sintéticas de un esquema de reacción, y separar el compuesto requerido de estos productos de degradación puede ser tedioso. Por ejemplo, las técnicas de purificación convencional, tales como cromatografia en gel de silice o CLAR preparativa no se usan para purificar estos compuestos fácilmente, debido a sus propiedades quelantes. No obstante que algunas tetraciclinas se han purificado por cromatografia de división usando columnas hechas de tierra diatomácea impregnada con fases estacionarias amortiguadas que contienen agentes secuestrantes tipo EDTA, estas técnicas pueden sufrir de muy baja resolución, capacidad de reproducción y capacidad. Estas desventajas pueden dificultar una síntesis a gran escala. La CLAR también se ha usado para purificación, pero la resolución adecuada de los diversos componentes en las columnas CLAR requiere la presencia de agentes de emparejamiento de iones en la fase móvil. La separación del producto final de los agentes secuestrantes y de apareamiento de iones en la fase móvil, puede dificultarse. Aunque en una escala pequeña los compuestos impuros obtenidos por precipitación pueden purificarse por CLAR de fase inversa preparativa, la purificación por cromatografia liquida de fase inversa puede ser ineficiente y cara cuando se trata con cantidades en kilogramos de material. En consecuencia, queda la necesidad de obtener al menos un compuesto de la fórmula 1 en una forma más purificada que la previamente alcanzada. También queda la necesidad para una nueva síntesis para minimizar el uso de cromatografia por purificación. Se describen en la presente métodos para producir tetraciclinas, tal como tigeciclina, como se ilustra genéricamente en el Esquema de Reacción I abajo: 4 1 Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (C?-C6) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forman un heterociclo; y R es -NR3R4, donde R3 y R son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C1-C4 ) de cadena lineal y ramificada; y n está en el rango desde 1-4. El compuesto de la fórmula 2 también se conoce como una minociclina o un derivado de minociclina. La reacción del compuesto de la fórmula 2 con al menos un agente nitrante resulta en un substituyente -N02 para formar el compuesto de la fórmula 3. El substituyente -N02 en la fórmula 3 puede reducirse posteriormente a un amino, tal como por hidrogenación, para formar el compuesto de la fórmula 4. Finalmente, la acilación del compuesto de la fórmula 4 genera el compuesto de la fórmula 1. Se describen en la presente métodos para realizar reacciones para producir el compuesto de la fórmula 1, por ejemplo, reacciones de nitración, reducción, y acilación. También se describen métodos para purificar el compuesto de la fórmula 1. Los métodos descritos en la presente pueden formar el producto deseado mientras reduce la cantidad de al menos una impureza presente en el producto final, tal como formación de epimero, la presencia de reactivos de partida, y sub-productos de oxidación. Tal reducción en impurezas puede alcanzarse durante al menos una etapa de la síntesis, esto es, durante una cualesquiera de las reacciones de nitración, reducción, y acilación. Los métodos descritos en la presente también facilitan la síntesis a gran escala con purezas apropiadas de los productos finales. La Fig. 1 describe un esquema de reacción ejemplar para preparar tigeciclina. La Fig. 2 describe un esquema de reacción ejemplar para preparar tigeciclina. La Fig. 3 describe un esquema de reacción ejemplar para preparar tigeciclina.

Definiciones Se deberá notar que, como se usa en esta especificación y las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular "un", "uno", y "el" incluyen los referentes en plural salvo que el contenido dictamine claramente otra cosa. De esta manera, por ejemplo, la referencia hecha a una composición que contiene "un compuesto" incluye una mezcla de dos o más compuestos. Deberá también notarse que el término "o" se emplea generalmetne en este sentido incluyendo "y/o" salvo que el contenido dictamine claramente otra cosa. "Tigeciclina" como se usa en la presente incluye tigeciclina en forma de base libre y formas de sal, tales como cualquier sal, enantiómeros, y epimeros farmacéuticamente aceptables. La tigeciclina, como se usa en la presente, puede formularse de conformidad con métodos conocidos en la técnica. "Compuesto" como se usa en la presente se refiere a un compuesto neutro (por ejemplo, una base libre). El compuesto puede existir en forma anhidra, o como un hidrato, o como un solvato. El compuesto puede presentarse como estereoisómeros (por ejemplo, enantiómeros y diaestereómeros), y pueden aislarse como enantiómeros, mezclas racémicas, diaestereómeros, y mezclas de los mismos. El compuesto en forma sólida puede existir en varias formas cristalinas y amorfa. "Farmacéuticamente aceptable" como se usa en la presente se refiere a aquellos compuestos, materiales, composiciones, y/o formas de dosis que son, dentro del alcance del juicio médico sólido, apropiados para usarse en contacto con los tejidos de pacientes sin toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación excesiva en proporción con una relación riesgo/beneficio razonable. "Cicloalquilo" como se usa en la presente se refiere a un sistema de anillo carbociclico saturado que tiene 3 hasta 6 miembros en el anillo. "Heterociclo" como se usa en la presente se refiere a un grupo heterociclo monociclico que contiene al menos un miembro en el anillo de nitrógeno y que tiene 3 hasta 6 miembros en el anillo en cada anillo en donde cada anillo está saturado y no de otra manera susbtituido.

Nitración Una modalidad describe un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 1, 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (Ci-Cß) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forman un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?~C4) de cadena lineal y ramificada; y n está en el rango desde 1-4. Una modalidad describe una reacción de nitración donde el producto de la nitración no es aisla. En consecuencia, en una modalidad, el método comprende: (a) hacer reaccionar al menos un agente nitrante con al menos un compuesto de la fórmula 2, o una sal del mismo, para producir una mezcla de reacción que comprende un intermediario; y (b) hacer reaccionar además el intermediario para formar al menos un compuesto de la fórmula 1. En una modalidad, el intermediario no es aisla de la mezcla de reacción. El al menos un compuesto de la fórmula 2 puede proprocionarse como la base libre o como la sal. En una modalidad, al menos un compuesto de la fórmula 2 es una sal. "Sales" como se usa en la presente pueden prepararse in situ o en forma separada al hacer reaccionar una base libre con un ácido apropiado. Las sales ejemplares incluyen, pero no se limitan a, sales de clorohidrato, bromohidrato, yodohidrato, fosfórico, nítrico, sulfúrico, acético, benzoico, cítrico, cisteina, fumárico, glicólico, maléico, succinico, tartárico, sulfato, y clorobencensulfonato. En otra modalidad, la sal puede elegirse de sales alquilsulfónicas y arilsulfónicas . En una modalidad, al menos un compuesto de la fórmula 2 se proporciona como una sal de clorohidrato, o como una sal de sulfato. "Agente nitrante" como se usa en la presente se refiere a un reactivo que puede agregar un substituyente -N02 a un compuesto, o transformar un substituyente existente a un substituyente -N02. Los reactivos nitrantes ejemplares incluyen ácido nítrico y sales de nitrato, tales como sales de metal alcalino, por ejemplo, KN03. Donde el agente nitrante es un ácido nítrico, el ácido nítrico puede tener una concentración de al menos 80%, tal como una concentración de 85%, 88%, 90%, 95%, 99%, o aún 100%. El agente nitrante puede reaccionar con al menos un compuesto de la fórmula 2 en cualquier solvente considerado apropiado por alguien de habilidad ordinaria en la técnica. En una modalidad, la reacción se realiza en presencia de ácido sulfúrico y/o sales de sulfato. En una modalidad, el ácido sulfúrico usado es ácido sulfúrico concentrado, por ejemplo, una concentración de al menos 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, o al menos 95%. En una modalidad, al menos un agente nitrante se proporciona en un exceso molar con relación a al menos un compuesto de la fórmula 2. El exceso molar apropiado puede determinarse por alguien de habilidad ordinaria en la técnica y pueden incluir, pero no se limitan a, valores tales como al menos 1.05, por ejemplo, un exceso molar en el rango desde 1.05 hasta 1.75 equivalentes, tal como un exceso molar en el rango desde 1.05 hasta 1.5, o desde 1.05 hasta 1.25, o desde 1.05 hasta 1.1 equivalentes. En otra modalidad, el exceso molar es 1.05, 1.1, 1.2, 1.3, o 1.4 equivalentes. En una modalidad, al menos un agente nitrante se hace reaccionar con al menos un compuesto de la fórmula 2 al agregar el al menos un agente nitrante durante un periodo de tiempo. Alguien de habilidad ordinaria en la técnica puede determinar un periodo de tiempo durante el cual la cantidad total del agente nitrante se agrega para optimizar las condiciones de reacción. Por ejemplo, la adición del reactivo de nitración puede monitorearse mediante, por ejemplo, CLAR, para controlar la cantidad de al menos un agente nitrante usado. En una modalidad, la cantidad total de al menos un agente nitrante se agrega durante un periodo de tiempo de al menos 1 h, tal como un periodo de tiempo de al menos 2 h, al menos 3 h, al menos 5 h, al menos 10 h, al menos 24 h, o un periodo de tiempo en el rango desde 1 h hasta 1 sema, en el rango desde 1 h hasta 48 h, en el rango desde 1 h hasta 24 h, o en el rango desde 1 h hasta 12 h. El al menos un agente nitrante puede agregarse continuamente . En una modalidad, el agente nitrante puede hacerse reaccionar con al menos un compuesto de la fórmula 2 a una temperatura en el rango desde 0 hasta 25°C, tal como una temperatura en el rango desde 5 hasta 15°C, desde 5 hasta 10°C, o desde 10 hasta 15°C. Un "intermediario" como se usa en la presente se refiere a un compuesto que se forma como un producto intermediario entr.e el material de partida y el producto final. En una modalidad, el intermediario es un producto de la nitración de al menos un compuesto de la fórmula 2. Por ejemplo, el intermediario puede ser al menos un compuesto de la fórmula 3 o una sal del mismo, El intermediario puede existir como la base libre o como la sal, tal como cualesquiera de las sales descritas en la presente. En una modalidad, el intermediario es una sal de sulfato. En una modalidad, el intermediario no es aisla de la mezcla de reacción. "Mezcla de reacción" como se usa en la presente se refiere a una solución o mezcla espesa que comprende al menos un producto de una reacción química entre reactivos, asi como subproductos, por ejemplo, impurezas (incluyendo compuestos con estereoquímicas indeseables), solventes, y cualesquiera reactivos restantes, tales como materiales de partida. En una modalidad, el intermediario es el producto de la nitración y está presente en la mezcla de reacción, que también puede contener reactivos de partida (tal como el agente nitrante y/o al menos un compuesto de la fórmula 2) , subproductos (tal como el epimero C4 de cualesquiera de la fórmula 2 o fórmula 3) . En una modalidad, la mezcla de reacción es una mezcla espesa, donde la mezcla espesa puede ser una composición que comprende al menos un sólido y al menos un liquido (tal como agua, ácido, o un solvente) , por ejemplo, una suspensión o una dispersión de sólidos . En una modalidad, la reacción de nitración produce el intermediario mientras genera una cantidad inferior del correspondiente epimero C . Por ejemplo, donde el intermediario es al menos un compuesto de la fórmula 3, la nitración resulta en la formación del epimero C-4 de la fórmula 3 en una cantidad menor al 10%, como se determina por cromatografia liquida de alta resolución (CLAR) . En otra modalidad, el epimero C está presente en una cantidad menor al 5%, menos que 3%, menos que 2%, menos que 1%, o menos que 0.5%. Los parámetros CLAR para cada etapa, esto es, nitración, reducción, y acilación, se proporcionan en la sección de Ejemplos . En una modalidad, la nitración se realiza de tal manera que la cantidad de material de partida, por ejemplo, al menos un compuesto de la fórmula 2, es inferior. En una modalidad, al menos un compuesto de la fórmula 2 está presente en el producto de nitración en una cantidad menor al 10%, como se determina por CLAR, o menos que 5%, menos que 3%, menos que 2%, menos que 1%, o menos que 0.5%. En una modalidad, la nitración puede realizarse en a gran escala. En una modalidad, "gran escala" se refiere al uso de al menos 1 gramo del compuesto de acuerdo con la fórmula 2, tal como el uso de al menos 2 gramos, al menos 5 gramos, al menos 10 gramos, al menos 25 gramos, al menos 50 gramos, al menos 100 gramos, al menos 500 g, al menos 1 kg, al menos 5 kg, al menos 10 kg, al menos 25 kg, al menos 50 kg, o al menos 100 kg. En una modalidad, las formas reducen al menos un compuesto de la fórmula 4, o una sal del mismo. En una modalidad, el hacer reaccionar además en (b) comprende reducir el intermediario. En otra modalidad, el método comprende además acilar el intermediario reducido . Otra modalidad descrita en la presente es un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, R es -NR3R4 donde R3 es metilo y R4 es metilo, y n es 1, que comprende : (a) hacer reaccionar al menos un agente nitrante con al menos un compuesto de la fórmula 2, o una sal del mismo, para producir una mezcla de reacción que comprende un intermediario; y (b) hacer reaccionar además el intermediario para formar al menos un compuesto de la fórmula 1. En una modalidad, el intermediario no es aisla de la mezcla de reacción. En una modalidad, el al menos un compuesto de la fórmula 1 es tigeciclina. Otra modalidad descrita en la presente es un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (Ci-Cß) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forma un heterociclo; R es -NR3R , donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?-C4) de cadena lineal y ramificada; y n está en el rango desde 1-4, que comprende : (a) hacer reaccionar al menos un agente nitrante con al menos un compuesto de la fórmula 2, o una sal del mismo, para producir una mezcla espesa; y (b) hacer reaccionar además la mezcla espesa para formar al menos un compuesto de la fórmula 1. En una modalidad, Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, R es - NR3R4 donde R3 es metilo y R es metilo, y n es 1. En otra modalidad, al menos un compuesto de la fórmula 1 es tigeciclina . Otra modalidad descrita en la presente es un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 3 o una sal del mismo, 3 en donde R es -NR3R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?-C ) de cadena lineal y ramificada, que comprende: hacer reaccionar al menos un agente nitrante con al menos un compuesto de la fórmula 2 o una sal del mismo, en donde el hacer reaccionar se realiza a una temperatura en el rango desde 5 hasta 15°C. Otra modalidad descrita en la presente es un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 1, 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (Ci-Cß) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forma un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?-C4) de cadena lineal y ramificada; y n está en el rango desde 1-4, que comprende: (a) hacer reaccionar al menos un agente nitrante con al menos un compuesto de la fórmula 2 o una sal del mismo para producir una mezcla de reacción que comprende un intermediario; y (b) hacer reaccionar además el intermediario para formar al menos un compuesto de la fórmula 1 en donde el hacer reaccionar en (a) se realiza a una temperatura en el rango desde 5 hasta 15°C. En una modalidad, Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, R3 es metilo, R4 es metilo, y n es 1.

REDUCCIÓN Una modalidad describe un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 4, o una sal del mismo, en donde R = -NR3R , donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?-C4) de cadena lineal y ramificada, que comprende: combinar al menos un agente reductor con una mezcla de reacción, tal como una mezcla espesa de reacción, que comprende un intermediario preparado a partir de un reacción entre al menos un agente nitrante y al menos un compuesto de la fórmula 2, o una sal del mismo. En una modalidad, el método describe un proceso de "un lote", donde las etapas de nitración y reducción se realizan sin aislar los productos de la nitración de la mezcla de reacción de nitración. En una modalidad, Rj. es hidrógeno, R2 es t-butilo, R3 es metilo, R4 es metilo, y n es 1. "Agente reductor" como se usa en la presente se refiere a un agente químico que agrega hidrógeno a un compuesto. En una modalidad, el agente reductor es hidrógeno. La reducción puede realizarse bajo una atmósfera de hidrógeno a una presión apropiada como se determina por alguien de habilidad ordinaria en la técnica. En una modalidad, el hidrógeno se proporciona a una presión en el rango desde 1 hasta 75 psi (0.07-5.27 Kg/cm2), tal como a pressure en el rango desde 1 to 50 psi (0.07-3.51 Kg/cm2), o a pressure en el rango desde 1 to 40 psi (0.07-2.81 Kg/cm2). En otra modalidad, el agente reductor se proporciona en presencia de al menos un catalizador. Los catalizadores ejemplares incluyen, pero no se limitan a, óxidos de metales de tierras raras, catalizadores que contienen metales del Grupo VIII, y sales de catalizadores que contienen metales del Grupo VIII. Un ejemplo de un catalizador que contiene metales del Grupo VIII es paladio, tal como paladio en carbono . Donde el catalizador es paladio en carbono, en una modalidad, el catalizador está presente en una cantidad en el rango desde 0.1 partes hasta 1 parte, con relación a la cantidad de al menos un compuesto de la fórmula 2 presente antes de la reacción con al menos un agente nitrante. En una modalidad, el intermediario es al menos un compuesto de la fórmula 3. En una modalidad, en el compuesto de la fórmula 3, Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, R3 es metilo, R4 es metilo, y n es 1. Alguien de habilidad ordinaria en la técnica puede determinar un solvente apropiado para la reacción de reducción. En una modalidad, antes de la combinación, por ejemplo, antes de la reducción, la mezcla de reacción se combina con un solvente que comprende al menos un alcohol (Ci-Cs) alcohol. Al menos un alcohol (C?-C8) puede elegirse, por ejemplo, de metanol y etanol. Alguien de habilidad ordinaria en la técnica puede determinar una temperatura apropiada para la reacción de reducción. En una modalidad, la combianción, por ejemplo, la reducción, se realiza a una temperatura en el rango desde 0°C hasta 50°C, tal como una temperatura en el rango desde 20°C hasta 40°C, o una temperatura en el rango desde 26°C hasta 28°C. En una modalidad, después de la combinación, por ejemplo, después de la reducción, la mezcla de reacción resultante se agrega a o se combina con un sistema solvente que comprende un alcohol de cadena ramificada (C?-C8) y un hidrocarburo (C?-C8) . En una modalidad, el alcohol de cadena ramificada (C?-C8) es isopropanol. En una modalidad, el hidrocarburo (Ci-Cs) se elige de hexano, heptano, y octano. En una modalidad, después de la combinación, por ejemplo, después de la reducción, la mezcla de reacción resultante se agrega al sistema solvente a una temperatura en el rango desde 0°C hasta 50 °C, tal como una temperatura en el rango desde 0°C hasta 10°C. En una modalidad, el método comprende además aislar al menos un compuesto de la fórmula 4 como un sólido, o como una composición sólida. En una modalidad, al menos un compuesto de la fórmula 4 se precipita o aisla como una sal, tal como cualesquiera de las sales descritas en la presente. En una modalidad, la composición sólida comprende un epimero C4 de la fórmula 4 en una cantidad menor al 10% como se determina por cromatografia liquida de alta resolución. En otra modalidad, el epimero C4 está presente en una cantidad menos que 5%, menos que 3%, menos que 2%, menos que 1%, o menos que 0.5%. En una modalidad, la composición sólida comprende al menos un compuesto de la fórmula 2 en una cantidad menor al 2%, tal como una cantidad menor al 1%, o menos que 0.5%, como se determina por cromatografia liquida de alta resolución. En una modalidad, la reducción puede realizarse a gran escala. En una modalidad, "gran escala" se refiere al uso de al menos 1 gramo del compuesto de acuerdo con la fórmula 2, tal como el uso de al menos 2 gramos, al menos 5 gramos, al menos 10 gramos, al menos 25 gram, al menos 50 gramos, al menos 100 gramos, al menos 500 g, al menos 1 kg, al menos 5 kg, al menos 10 kg, al menos 25 kg, al menos 50 kg, o al menos 100 kg. Otra modalidad descrita en la presente es un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (Ci-Cß) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forma un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (Ci-C4) de cadena lineal y ramificada; y n está en el rango desde 1-4, que comprende: (a) combinar al menos un agente reductor con una mezcla de reacción, tal como una mezcla espesa de reacción, que comprende un intermediario preparado a partir de un reacción entre al menos un agente nitrante y al menos un compuesto de la fórmula 2, o una sal del mismo, para formar un segundo intermediario; y (b) hacer reaccionar además el segundo intermediario en la mezcla de reacción para preparar al menos un compuesto de la fórmula 1. En una modalidad, Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, R3 es metilo, j es metilo, y n es 1. En una modalidad, el intermediario es al menos un compuesto de la fórmula 3 o sal del mismo, y el segundo intermediario es al menos un compuesto de la fórmula 4, o una sal del mismo. En una modalidad, el hacer reaccionar además en (b) comprende acilar el segundo intermediario. En una modalidad, antes de el acilado, el segundo intermediario puede precipitarse o aislarse como una sal. Otra modalidad descrita en la presente es un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 4 o una sal del mismo, en donde R = -NR3R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?~C ) de cadena lineal y ramificada, que comprende: reducir un intermediario de la fórmula 3 o una sal del mismo, En una modalidad, el intermediario de la fórmula 3 puede estar presente en una mezcla espesa de reacción. En una modalidad, el reducir comprende combinar al menos un agente reductor conla mezcla de reacción. Otra modalidad descrita en la presente es un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (Ci-Ce) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Rl y R2, junto con N, forman un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?~C4) de cadena lineal y ramificada; y n está en el rango desde 1-4, que comprende: (a) hacer reaccionar al menos un agente nitrante con al menos un compuesto de la fórmula 2 o una sal del mismo para preparar a mezcla de reacción, (b) sin aislar o precipitar ninguno sólido de la mezcla de reacción, combinar al menos un agente reductor con la mezcla de reacción para preparar un intermediario; y (c) preparar al menos un compuesto de la fórmula 1 a partir del intermediario. Otra modalidad descrita en la presente es un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (Ci-Cß) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forman un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?-C ) de cadena lineal y ramificada; y n está en el rango desde 1-4, que comprende: (a) combinar al menos un catalizador que contiene metales del Grupo VIII en presencia de hidrógeno con una mezcla de reacción, tal como una mezcla espesa de reacción, preparado a partir de un reacción entre al menos un agente nitrante y al menos un compuesto de la fórmula 2 o una sal del mismo, En una modalidad, el al menos un catalizador que contiene metales del Grupo VIII está presente en una cantidad en el rango desde 0.1 partes hasta 1 parte con relación a la cantidad de al menos un compuesto de la fórmula 2 presente antes de la reacción con al menos un agente nitrante. Otra modalidad descrita en la presente es una composición que comprende: al menos un compuesto de la fórmula 4, 4 o una sal del mismo, en donde R es -NR3R3, donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?~C4) de cadena lineal y ramificada, en donde el epimero C4 de la fórmula 4 está presente en una cantidad menor al 10%, como se determina por cromatografia liquida de alta resolución. En una modalidad, Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, R3 es metilo, R4 es metilo, y n es 1.

ACILACION Una modalidad de la presente descripción proporciona un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 1: 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo , en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (C?-C6) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, tal como cicloalquilo (C3-C6) , o Ri y R2, junto con N, forman un heterociclo, tal como un anillo de 5 miembros; R es - NR3Rj, donde R3 y P^ son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (Ci-C4) recto y ramificado; y n está en el rango desde 1-4, que comprende hacer reaccionar al menos un compuesto de la fórmula 4 : o una sal del mismo , con al menos un compuesto de aminoacilo en un medio de reacción . En una modalidad, el medio de reacción puede elegirse de un medio acuoso , y al menos un solvente básico en ausencia de una base reactiva . En una modalidad, el método para preparar un compuesto de la fórmula I. es un método para preparar tigeciclina : Tigeciclina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una modalidad, la variable n es 1, Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, y R3 y R4 son cada uno metilo. En otra modalidad, la variable n es 1, Ri y R2, junto con N, forman un grupo pirrolidinilo, y R3 y R son cada uno metilo. La sal de al menos un compuesto de la fórmula 4 puede ser una sal halogenada, tal como una sal de clorohidrato. El medio de reacción puede ser un solvente elegido de un solvente aprótico polar o mezcla de solventes del mismo. En una modalidad, el solvente aprótico polar se elige de acetonitrilo, 1, 2-dimetoxietano, dimetilacetamida, dimetilformamida, hexametilfosforamida, N,N'-dimetiletilenurea, N, N' -dimetilpropilenurea, cloruro de metileno, N-metilpirrolidinona, tetrahidrofurano, y mezclas de los mismos. En otra modalidad, el solvente aprótico polar se elige de acetonitrilo, dimetilformamida, N,N'-dimetilpropilenurea, N-metilpirrolidinona, tetrahidrofurano, y mezclas de los mismos. El al menos un solvente básico puede ser una mezcla de acetonitrilo y N,N' -dimetilpropilenurea. En otra modalidad, al menos un solvente básico puede ser una mezcla de agua y N,N' -dimetilpropilenurea . En una modalidad adicional, al menos un solvente básico es N,N'-dimetilpropilenurea . El medio de reacción puede ser un medio acuoso. En una modalidad adicional, al menos un solvente básico en ausencia de una base es agua en ausencia de una base. En otra modalidad, el medio de reacción puede ser al menos un solvente básico en ausencia de una base reactiva. Un solvente básico es un solvente capaz de aceptar, ya sea parcialmente o completamente, un protón. Una base reactiva se refiere a una base que se agrega al inicio de la reacción, ya sea concurrentemente o secuencialmente con al menos un compuesto de la fórmula 4 y al menos un compuesto de aminoacilo y es capaz de aceptar, ya sea parcialmente o completamente, un protón. Una base reactiva también se refiere a una base que se agrega durante la reacción. El al menos un compuesto de aminoacilo puede elegirse de haluros de aminoacilo, anhídridos de aminoacilo, y anhídridos de aminoacilo mezclados. En una modalidad, el compuesto de aminoacilo es al menos un haluro de aminoacilo de la fórmula 6 o una sal del mismo, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (C?-C6) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, juntos con N, forma un heterociclo; n está en el rango desde 1-4; y en donde Q es un halógeno elegido de fluoruro, bromuro, cloruro, y yoduro. En una modalidad adicional, Q es cloruro. La sal del compuesto de la fórmula 6 puede elegirse de una sal halogenada. La sal halogenada se refiere en cualquier sal formada a partir de la interacción con un anión halógeno, tal como una sal de clorohidrato, una sal de bromohidrato, y una sal yodohidrica. En una modalidad, la sal halogenada es una sal de clorohidrato. El al menos un haluro de aminoacilo de la fórmula 6 puede obtenerse por un método que comprende: A) hacer reaccionar al menos un éster de la fórmula 7: o una sal del mismo, con al menos una amina, R?R2NH, para preparar al menos un ácido carboxilico, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (C?-C6) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forma un heterociclo; X es un halógeno elegido de bromuro, cloruro, fluoruro y yoduro; A es -OR6, donde Rß se elige alquilo (C?-C6) recto o ramificado y arilalquilo, tal como arilalquilo (C?-C6) , por ejemplo, donde arilo es fenilo; n está en el rango desde 1-4; y B) hacer reaccionar al menos un ácido carboxilico con al menos un agente de cloración para dar al menos un compuesto de aminoacilo de la fórmula 6 o una sal del mismo. En una modalidad, Ri y R6 puede cada uno ser t-butilo. En otra modalidad, Ri y R2, junto con N, puede formar un heterociclo, tal como pirrolidina, y Rß puede ser arilalquilo, tal como bencilo. En otra modalidad, n es uno.

En una modalidad adicional, X es bromuro. En otra modalidad, al menos un éster de la fórmula 7 es una sal de clorohidrato. Un exceso de amina R?R2NH comparado con el éster de la fórmula 7 puede estar presente en la reacción para preparar al menos un ácido carboxilico. En una modalidad, al menos un agente de cloración puede ser cloruro de tionilo. En otra modalidad, la reacción de al menos un ácido carboxilico con al menos un agente de cloración incluye la adición de una cantidad catalítica de dimetilformamida. Un exceso de agente de cloración con relación a al menos un ácido carboxilico puede estar presente en la reacción para dar al menos un compuesto de aminoacilo de la fórmula 6. Cuando R6 es arilalquilo, el arilalquilo de al menos un compuesto de la fórmula 7 puede dividirse por hidrogenación después de la reacción con al menos una amina para dar al menos un ácido carboxilico. La reacción de al menos un ácido carboxilico con un agente de cloración puede realizarse a una temperatura en el rango desde 55°C hasta 85°C, tal como desde 80°C hasta 85°C, y además tal como 55°C. En una modalidad, una cantidad adicional de agente de cloración puede agregarse a la reacción para efectuar el completado, tal como alcanzar un nivel de menos que 4% ácido carboxilico. Después de hacer reaccionar al menos un ácido carboxilico con al menos un agente de cloración, la suspensión resultante puede filtrarse para remover las sales, tal como sales de clorohidrato de t-butilamina. El haluro de aminoacilo de la fórmula 6 puede aislarse como sal HCl o tratarse con un ácido inorgánico, tal como ácido clorhídrico, para preparar una sal de haluro de aminoacilo. En otra modalidad, al menos un haluro de aminoacilo de la fórmula 6 se obtiene por un método que comprende: hacer reaccionar al menos un ácido carboxilico de la fórmula o una sal del mismo, en donde R5 se elige de alquilo (Ci-Cß) recto o ramificado, y n está en el rango desde 1 hasta 4, y con al menos un agente de cloración para dar al menos un haluro de aminoacilo de la fórmula 6 o una sal del mismo. En otra modalidad, al menos un ácido carboxilico de la fórmula 8 es una sal halogenada, tal como una sal de clorohidrato. El periodo de tiempo para hacer reaccionar al menos un compuesto de la fórmula 8 con al menos un agente de cloración puede estar en el rango desde 1 hasta 50 horas, tal como desde 2 hasta 45 horas, y además tal como 1 hasta 3 horas. Al menos un ácido carboxilico de la fórmula 8 puede tener un tamaño de partícula de menos que 150 micrones, tal como menos que 110 micrones, y además tal como en el rango desde 50 hasta 100 micrones. Un compuesto de la fórmula 8 que tiene un tamaño de partícula puede alcanzarse al moler el compuesto . El hacer reaccionar al menos un compuesto de la fórmula 4 con al menos un compuesto de aminoacilo puede conducirse a una temperatura en el rango desde 0°C hasta 30°C, tal como desde 20°C hasta 25°C, tal como desde 10°C hasta 17°C, tal como desde 0°C hasta 6°C, y además tal como desde 2°C hasta 8°C. El periodo de tiempo para la reacción puede estar en el rango desde 1 hora hasta 24 horas, tal como desde 0.5 hora hasta 4 horas, y además tal como desde 2 horas hasta 8 horas. Un exceso de compuesto de aminoacilo con relación a la cantidad de un compuesto de la fórmula 4 que puede ser usado en la reacción. En una modalidad, el exceso puede ser 3 equivalentes del compuesto de aminoacilo hasta 1 equivalente de al menos un compuesto de la fórmula 4. En otra modalidad, la relación de medio acuoso a al menos un compuesto de la fórmula 4 puede ser 6:1 p/p o 5:1 volumen. En una modalidad, el compuesto de aminoacilo se agrega a o se combina con una solución de al menos un compuesto de la fórmula 4 en un medio acuoso. En una modalidad, donde el medio de reacción es un medio acuoso, el pH del medio acuoso puede ajustarse hasta un pH en el rango desde 4 hasta 9, tal como desde 5 hasta 7.5, tal como desde 6.3 hasta 6.7, tal como desde 7.0 hasta 7.5, además tal como 6.5, y todavía además tal como 7.2. El agua puede agregarse antes de ajustar el pH. Ajustar el pH puede involucrar la adición de una base, que incluye pero no se limita a hidróxido de amonio. La concentración de hidróxido de amonio puede estar en el rango desde 25% hasta 30%. En otra modalidad, un ácido, tal como ácido clorhídrico, puede usarse para ajustarse el pH. El medio de reacción durante el ajuste del pH puede estar a una temperatura en el rango desde -5°C hasta 25°C, tal como desde 5°C hasta 8°C, y además tal como desde 0°C hasta 5°C. Después de ajustar el pH, al menos un solvente orgánico o mezcla de solventes puede agregarse al medio acuoso. En una modalidad, al menos una mezcla de solventes orgánica puede comprender metanol y cloruro de metileno. La concentración de metanol puede estar en el rango desde 5% hasta 30%, que incluye pero no se limita a 20% y 30%. En otra modalidad, al menos un solvente orgánico o mezcla de solventes comprende tetrahidrofurano. La temperatura de la mezcla puede estar en el rango desde 15°C hasta 25°C.

En una modalidad, el medio acuoso puede extraerse con una mezcla de al menos un solvente prótico polar y al menos un solvente aprótico polar. En una modalidad, al menos un solvente aprótico polar comprende cloruro de metileno y al menos un solvente prótico polar comprende metanol. En otra modalidad, el medio acuoso se extrae con al menos un solvente aprótico polar, tal como cloruro de metileno. La extracción puede conducirse a una temperatura en el rango desde -5°C hasta 25°C, además tal como desde 0°C hasta 5°C. En una modalidad adicional, el pH del medio acuoso se ajusta hasta un rango desde 7.0 hasta 7.5, tal como 7.2, después de cada extracción. El proceso de extracción puede repetirse, por ejemplo, hasta 10 veces. En una modalidad, los extractos orgánicos combinados pueden tratarse con un agente secante, tal como sulfato de sodio. Los extractos orgánicos también pueden tratarse con carbón vegetal, tal como Norit CA-1. Los sólidos se remueven por filtración para dar una solución. En una modalidad, la solución puede concentrarse para proporcionar el compuesto de la fórmula 1. El compuesto de la fórmula 1 obtenido de la reacción puede cristalizarse en al menos un solvente orgánico or mezcla de solventes. En una modalidad, la mezcla de solventes orgánica comprende metanol y cloruro de metileno. La cristalización puede, por ejemplo, presentarse a una temperatura en el rango desde -15°C hasta 155°C, tal como desde 0°C hasta 15°C, y además tal como desde 2°C hasta 5°C.

En otra modalidad, después de la extracción, la mezcla orgánica resultante de al menos un solvente prótico polar y al menos un solvente aprótico polar puede concentrarse para dar una mezcla espesa y filtrarse para dar al menos un compuesto de la fórmula 1. La concentración y filtración pueden, por ejemplo, presentarse a 0°C hasta 5°C. Un método para preparar un compuesto de la fórmula 1 puede realizarse usando más de 5 gramos de la amina de la fórmula 4, tal como más de 10 gramos, tal como más de 50 gramos, tal como más de 100 gramos, tal como más de 500 gramos, tal como más de 1 kilogramos, y además tal como más de 10 kilogramos. Una modalidad describe un compuesto preparado por cualesquiera de los métodos descritos en la presente, incluyendo pero no limitado a un compuesto de la fórmula 1, un compuesto de la fórmula 4, un compuesto de la fórmula 6, un compuesto de la fórmula 7, un compuesto de la fórmula 8, y sales de los mismos. Otra modalidad includes una composición que comprende un compuesto preparado por cualesquiera de los métodos descritos en la presente. La composición puede además comprender un portador farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, la composición puede comprender al menos un compuesto de la fórmula 1: Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde n es 1, Ri y R2, junto con N, forman un grupo t-butilo, y R3 y R4 son cada uno metilo. En otra modalidad, la composición puede comprender al menos un compuesto de la fórmula 1: Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (Ci-Ce) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forman un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C1-C4 ) recto y ramificado; y n está en el rango desde 1-4, y menos que 0.5% del epimero C-4 de al menos un compuesto de la fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En una modalidad adicional, la composición puede comprender Tigeciclina: Tigeciclina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y menos que 0.5% del epimero C-4 de Tigeciclina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En una modalidad, el compuesto de la fórmula 1 preparado por cualesquiera de los métodos descritos en la presente contiene menos que 10.0% de impurezas como se determina por cromatografia liquida de alta resolución, tal como menos que 5% de impurezas, tal como menos que 2% de impurezas, y además tal como 1-1.4% de impurezas. En una modalidad adicional, el compuesto de la fórmula 1 contiene un epimero C-4 en una cantidad menor al 1.0% como se determina por cromatografia liquida de alta resolución, tal como menos que 0.5% del epimero C4, y además tal como menos que 0.2% del epimero C4. En una modalidad, el compuesto de la fórmula 1 contiene menos del 1% de minociclina como se determina por cromatografia liquida de alta resolución, tal como menos que 0.6% minociclina. En otra modalidad, el compuesto de la fórmula 1 contiene menos que 5% diclorometano, tal como menos que 2-3% diclorometano. Una modalidad de la descripción incluye un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 1: Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (Ci-Ce) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o R¡ y R2, junto con N, forman un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?-C4) recto y ramificado; y n está en el rango desde 1-4, que comprende: A) hacer reaccionar al menos un agente nitrante con al menos un compuesto de la fórmula 2: Fórmula 2 o una sal del mismo, para preparar una mezcla espesa de reacción que comprende al menos un compuesto de la fórmula 3: Fórmula 3 o una sal del mismo, B) combinar al menos un agente reductor con la mezcla espesa de reacción para preparar al menos un compuesto de la fórmula 4, Fórmula 4 o una sal del mismo, y C) hacer reaccionar al menos un compuesto de la fórmula 4 con al menos un compuesto de aminoacilo en un medio de reacción elegido de un medio acuoso, y al menos un solvente básico en ausencia de una base reactiva. El compuesto de la fórmula I preparado por este método puede ser tigecilina. Otra modalidad de la presente descripción incluye un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 1: Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (C?~C6) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forman un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?~C4) recto y ramificado; y n está en el rango desde 1-4, que comprende: A) combinar al menos un agente reductor con una mezcla espesa de reacción que comprende al menos un compuesto de la fórmula 3: Fórmula 3 o una sal del mismo, para preparar al menos un compuesto de la fórmula 4 Fórmula 4 o una sal del mismo, y B) hacer reaccionar al menos un compuesto de la fórmula 4 con al menos un compuesto de aminoacilo en un medio de reacción elegido de un medio acuoso, y al menos un solvente básico en ausencia de una base reactiva. En otra modalidad, el compuesto de la fórmula I preparado por el método anterior puede ser tigecilina.

PURIFICACIÓN Una modalidad de la presente descripción proporciona un método para purificar al menos un compuesto de la fórmula 1: Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (C?~C6) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forma un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?-C ) recto y ramificado; y n está en el rango desde 1 -4, que comprende: A) combinar al menos un compuesto de la fórmula 1 con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar para dar una primera mezcla, B) mezclar la primer mezcla durante al menos un periodo de tiempo tal como desde 15 minutos hasta 2 horas a una temperatura en el rango desde 0°C hasta 40°C, y C) obtener al menos un compuesto de la fórmula 1. Como se usa en la presente, el término "obtener" se refiere a aislar un compuesto a un nivel útil de pureza, que incluye pero no se limita a niveles de pureza más de 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, y 99%. El nivel de pureza puede determinarse por cromatografia liquida de alta presión. En una modalidad, el método para purificar al menos un compuesto de la fórmula 1 involucra las etapas de: A) combinar al menos un compuesto de la fórmula 1 con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar para dar una primera mezcla, B) mezclar la primer mezcla durante un periodo de tiempo a una temperatura en el rango desde 30°C hasta 40°C, C) enfriar la primer mezcla hasta una temperatura en el rango desde 15°C hasta 25°C y permitir que la mezcla repose sin mezclado durante un segundo periodo de tiempo, D) enfriar la primer mezcla hasta una temperatura en el rango desde 0°C hasta 6°C y permitir que la mezcla repose sin mezclado durante un tercer periodo de tiempo, y E) obtener al menos un compuesto de la fórmula 1. En una modalidad, el método puede incluir al menos un compuesto de la fórmula 1 donde n es 1, Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, y R3 y R4 son cada uno metilo. Otra modalidad incluye al menos un compuesto de la fórmula 1, donde n es 1, Pi y R2r junto con N, forman un grupo pirrolidinilo, y R3 y R4 son cada uno metilo. Al menos un compuesto de la fórmula 1 que se combina con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar puede proprocionarse en una forma elegida de un sólido, una mezcla espesa, a suspensión, y una solución. En una modalidad, al menos un solvente aprótico polar puede elegirse de acetona, 1, 2-dicloroetano, acetato de metilo, metil etil cetona, metil isobutil cetona, cloruro de metileno, y acetato de etilo. En una modalidad adicional, al menos un solvente aprótico polar puede elegirse de acetona y cloruro de metileno. En otra modalidad, al menos un solvente prótico polar puede elegirse de metanol, etanol, isopropanol, y t-butanol. En una modalidad adicional, al menos un solvente prótico polar puede ser metanol. La combinación de al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar puede incluir acetona y metanol. Otra modalidad proporciona una combinación de al menos un solvente aprótico polar, cloruro de metileno, y al menos un solvente prótico polar, metanol. En una modalidad adicional, la combinación de al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar puede incluir acetato de metilo y metanol. El compuesto de la fórmula 1 puede, por ejemplo, combinarse con volúmenes iguales de al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar. En una modalidad, la primer mezcla puede, por ejemplo, mezclarse durante un primer periodo de tiempo en el rango desde 30 minutos hasta 2 horas donde los rangos de temperatura desde 15°C hasta 25°C, luego durante un segundo periodo de tiempo en el rango desde 30 minutos hasta 2 horas, donde los rangos de temperatura desde 0°C hasta 2°C. En una modalidad, el primer periodo de tiempo y el segundo periodo de tiempo son cada uno de 1 hora. En otra modalidad, el método puede comprender mezclar la primer mezcla durante al menos un periodo de tiempo en el rango desde 30 minutos hasta 2 horas a una temperatura en el rango desde 15°C hasta 25°C, luego filtrar la primer mezcla para obtener un sólido. El método puede comprender además combinar el sólido con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar, tal como a volúmenes iguales, durante un primer periodo de tiempo en el rango desde 30 minutos hasta 2 horas a una temperatura en el rango desde 15°C hasta 25°C, y filtrar para obtener un segundo sólido. En una modalidad adicional, estas etapas de combinar y filtrar puede ser repetidas dos hasta quince veces. El método para purificar un compuesto de la fórmula 1 puede comprender además obtener un sólido de la primer mezcla, y combinar el sólido con al menos un solvente prótico polar y al menos un solvente aprótico polar para obtener una segunda mezcla. La segunda mezcla puede, por ejemplo, comprender metanol y cloruro de metileno en una relación en volumen en el rango desde 1:5 hasta 1:15 metanol : cloruro de metileno. En una modalidad, la segunda mezcla puede mezclarse a una temperatura en el rango desde 30°C hasta 36°C y luego se filtra para obtener una solución. En una modalidad adicional, la concentración del solvente prótico polar en la solución puede reducirse hasta un nivel debajo de 5%, y la solución puede mezclarse, por ejemplo, a una temperatura en el rango desde 0°C hasta 6°C, durante un periodo de tiempo, por ejemplo, en el rango desde 30 minutos hasta 2 horas antes de filtrar. En una modalidad, mezclar la primer mezcla puede presentarse durante un periodo de tiempo en el rango desde 10 hasta 20 minutos, tal como 15 minutos. En una modalidad, enfriar la primer mezcla hasta una temperatura en el rango desde 15°C hasta 25°C y permitir que la mezcla repose sin mezclado puede presentarse durante un segundo periodo de tiempo en el rango desde 30 minutos hasta 3 horas, tal como desde 1 hora hasta 2 horas. La primer mezcla puede además enfriarse hasta una temperatura en el rango desde 0°C hasta 6°C y permitir que repose sin mezclado durante un tercer periodo de tiempo en el rango desde 30 minutos hasta 2 horas, tal como 1 hora. Obtener el compuesto de la fórmula 1 puede incluir filtrar cualquier mezcla descrita en la presente a través de al menos un filtro seleccionado de filtros que reducen los pirógenos y filtros clarificantes. Como se describe en la presente, el mezclado puede llevarse a cabo al usar un dispositivo de mezclado mecánico, por ejemplo, un agitador o mezclador. El mezclado también puede efectuarse al solubilizar del compuesto que tiene Fórmula 1 en el sistema de solvente. Incrementar la temperatura puede incrementar la solubilidad. En una modalidad, cuando al menos un compuesto de la fórmula 1 se combina con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar, al menos un compuesto de la fórmula 1 puede usarse en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Donde al menos un compuesto de la fórmula 1 se obtiene como el producto del método de la invención, al menos un compuesto de la fórmula 1 puede recuperarse en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra modalidad, donde un compuesto de la fórmula 1 se obtiene por el método de conformidad con la invención, el compuesto puede convertirse en una sal farmacéuticamente aceptable del mismo por la adición de un ácido. En una modalidad, al menos un compuesto de la fórmula 1 puede ser [4S- (4a, 12aa) ] -4 , 7-Bis (dimetilamino) -9- [ [ (t-butilamino) acetil] amino] -1,4, a, 5, 5a, 6, 11, 12a-octahidro- 3, 10, 12, 12a-tetrahidroxi-l, ll-dioxo-2-naftacen-carboxamida, tal como sales farmacéuticamente aceptable tal como asles de HCl. En otra modalidad, al menos un compuesto de la fórmula 1 puede ser [4S- (4a, 12aa) ] -4, 7-Bis (dimetilamino) -9-[ [ (pirrolidinil) acetil] amino] -1,4, 4a, 5, 5a, 6, 11, 12a-octahidro-3, 10, 12, 12a-tetrahidroxi-l, ll-dioxo-2-naftacen-carboxamida, tal como sales farmacéuticamente aceptable tal como sales HCl. Un método para purificar al menos un compuesto de la fórmula 1 puede ser un método para purificar tigeciclina, que comprende : A) combinar tigeciclina con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar para dar una primera mezcla, B) mezclar la primer mezcla durante al menos un periodo de tiempo, por ejemplo, en el rango desde 15 minutos hasta 2 horas y a una temperatura en el rango desde 0°C hasta 40°C, y C) obtener tigeciclina. La tigeciclina que se combina con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar puede proporcionarse en una forma elegida de un sólido, una mezcla espesa, a suspensión, y una solución. En una modalidad, la tigeciclina obtenida del método puede contener menos que 1% del epimero C-4 de tigeciclina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como se determina por cromatografia liquida de alta presión (CLAR) . Al menos un compuesto de la fórmula 1 obtenido del método puede contener menos que 3.0% de impurezas como se determina por CLAR, tal como menos que 1.0% de impurezas, tal como menos que 0.7% de impurezas. En otra modalidad, al menos un compuesto de la fórmula 1 puede contener menos que 2% del epimero C-4 del compuesto de la fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se determina por CLAR, tal como menos que 1% del epimero C-4, tal como menos que 0.5% del epimero C-4. El método puede realizarse en más de 5 gramos de al menos un compuesto de la fórmula 1, tal como más de 50 gramos, tal como más de 100 gramos, tal como más de 500 gramos, tal como más de 1 kilogramo, y además tal como más de 10 kilogramos. Una modalidad describe un compuesto preparado por cualesquiera de los métodos descritos en la presente, incluyendo pero no limitado a un compuesto de la fórmula 1 y tigeciclina. Otra modalidad incluye una composición que comprende un compuesto preparado por cualesquiera de los métodos descritos en la presente. La composición puede además comprender un portador farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, la composición puede comprender al menos un compuesto de la fórmula 1 : Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde n es 1, Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, y R3 y R4 son cada uno metilo. Una modalidad de la descripción incluye un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 1: Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (Ci-Ce) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forman un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?~C4) recto y ramificado; y n está en el rango desde 1-4, que comprende: A) hacer reaccionar al menos un agente nitrante con al menos un compuesto de la fórmula 2: Fórmula 2 o una sal del mismo, para preparar una mezcla de reacción, tal como una mezcla espesa de reacción, que comprende un intermediario, tal como al menos un compuesto de la fórmula 3: Fórmula 3 o una sal del mismo, B) combinar al menos un agente reductor con la mezcla espesa de reacción para preparar un segundo intermediario, tal como al menos un compuesto de la fórmula 4, Fórmula 4 o una sal del mismo, C) hacer reaccionar el segundo intermediario con al menos un compuesto de aminoacilo en un medio de reacción para obtener al menos un compuesto de la fórmula I. En una modalidad, el medio de reacción se elige de un medio acuoso, y al menos un solvente básico en ausencia de una base reactiva. Las etapas adicionales puede incluir, por ejemplo al menos una de: D) combinar al menos un compuesto de la fórmula 1 con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar para dar una primera mezcla, E) mezclar la primer mezcla durante al menos un periodo de tiempo, tal como en el rango desde 15 minutos hasta 2 horas, a una temperatura, tal como en el rango desde 0°C hasta 40°C, y F) obtener al menos un compuesto de la fórmula 1. En una modalidad, cualesquiera de los intermediarios de los métodos descritos puede aislarse o precipitarse. En otra modalidad, dos o más etapas de cualesquiera de los métodos descritos son procedimiento de "un lote". Otra modalidad de la descripción incluye un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 1: Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (C?-C6) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forman un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?-C ) recto y ramificado; y n está en el rango desde 1-4, que comprende: A) combinar al menos un agente reductor con una mezcla de reacción, tal como una mezcla espesa de reacción, que comprende al menos un compuesto de la fórmula 3: Fórmula 3 o una sal del mismo, para preparar al menos un intermediario, tal como un compuesto de la fórmula 4, Fórmula 4 o una sal del mismo, B) hacer reaccionar el intermediario con al menos un compuesto de aminoacilo en un medio de reacción elegido de un medio acuoso para obtener el compuesto de la fórmula 1. En una modalidad, el medio de reacción puede elegirse de al menos un solvente básico en ausencia de una base reactiva. Las etapas adicionales puede incluir, por ejemplo, al menos una de : C) combinar al menos un compuesto de la fórmula 1 con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar para dar una primera mezcla, D) mezclar la primer mezcla durante al menos un periodo de tiempo, tal como en el rango desde 15 minutos hasta 2 horas, a una temperatura, tal como en el rango desde 0°C hasta 40°C, y E) obtener al menos un compuesto de la fórmula 1. Una modalidad adicional de la descripción incluye un método para preparar al menos un compuesto de la fórmula 1: Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, alquilo (Ci-Ce) de cadena lineal y ramificada, y cicloalquilo, o Rx y R2, junto con N, forman un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R4 son cada uno independientemente elegidos de hidrógeno, y alquilo (C?~C4) recto y ramificado; y n está en el rango desde 1-4, que comprende: A) hacer reaccionar al menos un compuesto de la fórmula : Fórmula 4 o una sal del mismo, con al menos un compuesto de aminoacilo en un medio de reacción, por ejemplo, elegido de un medio acuoso, y al menos un solvente básico en ausencia de una base reactiva para obtener el compuesto de la fórmula 1. Las etapas adicionales puede incluir al menos una de: B) combinar al menos un compuesto de la fórmula 1 con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar para dar una primera mezcla, C) mezclar la primer mezcla durante al menos un periodo de tiempo, tal como en el rango desde 15 minutos hasta 2 horas, a una temperatura, tal como en el rango desde 0°C hasta 40°C, y D) obtener al menos un compuesto de la fórmula 1. Cualesquiera de estos métodos descritos para preparar un compuesto de la fórmula 1 puede ser un método para preparar un compuesto de la fórmula 1, donde n es 1, Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, y R3 y R4 son cada uno metilo.

COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS "Composición farmacéutica" como se usa en la presente es una composición medicinal. La composición farmacéutica puede contener al menos un portador farmacéuticamente aceptable. "Excipiente farmacéuticamente aceptable" tal como se usa en la presente se refiere a vehículos o portadores farmacéuticamente adecuados para la administración de los compuestos proporcionados en la invención, que incluyen cualesquiera de tales portadores conocidos por aquellos expertos en la materia que consideran adecuados para el modo particular de administración. Por ejemplo, las soluciones o suspensiones usadas para aplicación parenteral, intradérmica, subcutánea o tópica pueden incluir un diluyente estéril (por ejemplo, agua para inyección, solución salina, aceite fijo o similares); una aceite vegetal que se presenta naturalmente (por ejemplo, aceite de ajonjolí, aceite de coco, aceite de cacahuate, aceite de semilla de algodón y similares) ; un vehículo graso sintético (por ejemplo, oleato de etilo, polietilen glicol, glicerina, propilen glicol y similares, incluyendo otros solventes sintéticos) ; agentes antimicrobianos (por ejemplo, alcohol bencílico, metil parabenos y similares); antioxidantes (por ejemplo, ácido ascórbico, bisulfito de sodio y similares) ; agentes quelantes (por ejemplo, ácido etilendiaminatetracético (EDTA) y similares) ; soluciones amortiguadoras (por ejemplo, acetatos, citratos, fosfato y similares) ; y/o agentes para el ajuste de la tonicidad (por ejemplo, cloruro de sodio, dextrosa y similares) o mezclas de los mismos. A modo de ejemplo adicional, cuando la administración es intravenosa, los portadores adecuados incluyen solución salina fisiológica, solución salina amortiguada con fosfato (PBS) y soluciones que contienen agentes espesantes y solubilizantes tales como glucosa, polietilenglicol, polipropilenglicol y similares y sus mezclas. A modo de ejemplo no limitante, la tigeciclina se puede combinar opcionalmente con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables y se pueden administrar oralmente en formas tales como tabletas, cápsulas, polvos dispersables, granulos o suspensiones que contienen, por ejemplo, desde alrededor de 0.05% a 5% del agente de suspensión, jarabes que contienen, por ejemplo desde alrededor de 10% a 50% de azúcar, y elixires que contienen, por ejemplo, de 20% a 50% de etanol y similares, o parenteralmente en forma de soluciones o suspensiones inyectables estériles que contienen desde alrededor de 0.05% a 5% de agente de suspensión en un medio isotónico. Tales preparaciones farmacéuticas pueden contener, por ejemplo, desde alrededor de 25% a 90% del ingrediente activo en combinación con el portador, más usualmente entre alrededor de 5% y 60% en peso. Otras formulaciones se discuten en las Patentes E.U.A. Nos. 5,494,903 y 5,529,990, que se incorporan para referencia. El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales de adición acidas o sales de adición bases de los compuestos de la presente descripción. Una sal farmacéuticamente aceptable es cualquier sal que mantiene la actividad del compuesto precursor y que no imparte ningún efecto nocivo o indeseable al sujeto a quien se le administra el compuesto y en el contexto en el que se administra. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen complejos de metal y sales de ácidos inorgánicos y orgánicos. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales metálicas tales como sales de aluminio, calcio, hierro, magnesio, manganeso y en complejo. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de ácido acético, aspártico, alquilsulfónico, arilsulfónico, axetilico, bencensulfónico, benzoico, bicarbónico, bisulfúrico, bitartárico, butírico, de edetato de calcio, camsilico, carbónico, clorobenzoico, cilexetilico, cítrico, edético, edisilico, estólico, esilico, esilico, fórmico, fumárico, glucéptico, glucónico, glutámico, glicólico, glicolilarsanilico, hexámico, hexilresorcinoico, hidrabámico, bromhidrico, clorhídrico, yodhidrico, hidroxinaftoico, isetiónico, láctico, lactobiónico, maleico, málico, malónico, mandélico, metansulfónico, metilnitrico, metilsulfúrico, múcico, mucónico, napsilico, nítrico, oxálico, p-nitrometansulfónico, pamoico, pantoténico, fosfórico, monoácido fosfórico, diácido fosfórico, itálico, poligalactourónico, propiónico, salicilico, esteárico, succinico, sulfámico, sulfanilico, sulfónico, sulfúrico, estañoso, tartárico, teóclico, toluensulfónico y similares. Las sales farmacéuticamente aceptables pueden derivarse de aminoácidos, que incluyen pero no se limitan a, cisteina. Se pueden hallar otras sales aceptables, por ejemplo, en Stahl et al., Pharmaceutical Sal ts : Properties, Selection , and Use, Wiley-VCH; Io edición (15 de junio de 2002) . A excepción de los ejemplos, y donde se indica lo contrario, todos los números usados en la especificación y reivindicaciones deben interpretarse como modificados en todos los casos por el término "alrededor de". En consecuencia, a menos que se indique lo contrario, los parámetros numéricos indicados en esta especificación y reivindicaciones anexas son aproximaciones que pueden variar dependiendo de las propiedades buscadas que se pretenden lograr por medio de la presente invención. Por último, y sin intenciones de limitar la aplicación de la doctrina de los equivalentes al alcance de las reivindicaciones, cada parámetro numérico deberla interpretarse considerando el número de dígitos significativos y las técnicas de redondeo habituales . A pesar de que los rangos y parámetros numéricos que constituyen el amplio alcance de la descripción son aproximaciones, los valores numéricos expresados en los ejemplos específicos son lo más precisos posible. Sin embargo, todo valor numérico contiene inherentemente ciertos errores que provienen, esencialmente, de la desviación estándar de las respectivas mediciones de las pruebas. Los siguientes ejemplos tienen por objetivo ilustrar la invención de una manera no limitante.

EJEMPLOS NITRACION La minociclina se preparó de acuerdo con el método descrito en la Patente E.U.A. No. 3,226,436. Los análisis por CLAR se realizaron en las siguientes condiciones : Ejemplo Comparativo 1: Preparación de 9-nitrominociclina Este ejemplo describe la nitración de minociclina donde el producto de la nitración se aisló. Se agregaron 13.44 gramos de p-clorobencensulfonato de minociclina (es decir, p-clorobencensulfonato de [4S- (4alfa, 12aalfa) ] -4, 7-bis (dimetilamino) -1,4, 4a, 5, 5a, 6, 11, 12a-octahidro-3, 10, 12, 12a-tetrahidroxi-l, ll-dioxo-2-naftacenecarboxamida) , lentamente con agitación, a 50 mi de ácido sulfúrico concentrado. La solución se enfrió a 0-15°C. Se agregó ácido nítrico (90%, 0.6 mi) lentamente y se agitó la solución a 0-15°C durante 1-2 horas hasta que la reacción se completó, según lo determinado por CLAR. La solución que contenia el sulfato de 9-nitrominociclina intermedio (es decir, sulfato de 4S- (4alfa, 12aalfa) -9-nitro] -4, 7-bis (dimetilamino) -1, 4, 4a, 5, 5a, 6, 11, 12a-octahidro-3, 10, 12, 12a-tetrahidroxi-1, ll-dioxo-2-naftacenecarboxamida) se transfirió agitando a 300 g de hielo y agua durante 20 minutos. El pH del apagado se ajustó a 5.0-5.5 con 28% de hidróxido de amonio acuoso mientras se mantuvo la temperatura en 0-8°C. Se filtró el precipitado y se lavó con agua (2 x 10 mi) . El sólido se secó al vacio bajo una corriente de nitrógeno y se obtuvo 9 g de sulfato de 9-nitrominociclina crudo. El análisis (% de área) por CLAR muestra una pureza del 90% con un contenido de epimero C4 de 1.5%. EM(FAB): m/z 503 (M+H) , 502 (M+) . El producto se aisló por precipitación en su punto isoeléctrico a partir de una solución acuosa. El rendimiento molar del sulfato crudo fue de 45%. La Tabla 1 abajo enlista los datos de otros procesos de nitración: Tabla 1 Se observa que el aislado de 9-nitrominociclina resulta una gran cantidad de impurezas.

Ejemplo Comparativo 2 : Preparación de 9-nitrominociclina Este ejemplo describe la nitración de minociclina donde se aisla el producto de la nitración. Un matraz de múltiples cuellos de 2 L se equipó con un agitador mecánico, un termopar, un tubo para adición de líquidos, una sonda de nitrógeno y una salida de gases a un tanque lavador cáustico al 30% (en peso) . El matraz se cargó con ácido sulfúrico 66° Be (1.507 g, 819 mi, 15 moles). La solución se enfrió a 0-2°C. Se le agregó HCl.minociclina (clorhidrato de minociclina) (92.7% de potencia, 311 g, 0.58 moles) al ácido sulfúrico durante 0.7 horas a 0-14°C, con agitación. Después de la adición, la mezcla se agitó a 0°C durante 0.5 horas para obtener una solución amarilla. Se agregó ácido nítrico (95.9% de contenido de nitrato, 48 g, 32 mi, 0.73 moles, 1.25 equivalentes de mol) durante 3 horas mientras se mantiene la mezcla a 0-2°C. La mezcla se agitó a 0°C durante 0.3 horas (solución de color rojo oscuro/negro). El análisis (% del área) por CLAR muestra: 0% de minociclina, 75,6% de 9-nitrominociclina, 8,2% de impureza individual mayor (LSI); tiempo relativo de retención para la minociclina (RRT) = 2.08. Se equipó un matraz de vidrio de múltiples cuellos de 22 L con un agitador mecánico, termopar y un condensador con protección de nitrógeno. El matraz se cargó con 6.704 g (8.540 mi) de isopropanol (IPA) y 1.026 g (1.500 mi) de heptanos. La solución se enfrió entonces a 0-5°C. La mezcla de reacción de 9-nitrominociclina se transfirió al matraz de 22 L durante 2 horas a 0-39°C para proporcioanr una mezcla espesa amarilla. La temperatura de la mezcla espesa se mantuvo a 34-39°C durante 2 horas y luego se enfria a 20-34°C y se agita a 20-34°C durante 14.6 horas. Se preparó una solución de isopropanol 3.028 g (3.857 mi) y heptanos 660 g (965 mi) y se la mantuvo a 20-25°C (IPA:heptanos 4:1 en volumen) . La mezcla espesa se filtró en un embudo Büchner de 30 cm de diámetro con papel filtro hatman # 1 bajo vacio y con protección de nitrógeno. La torta húmeda resultante se transfirió a un matraz Erlenmeyer de vidrio de 4 L, equipado con un agitador mecánico y protección de nitrógeno. La torta se hizo en mezcla espesa al agregar 1.608 mi de la solución preparada de IPA/heptanos durante 0.5 horas a 23-26°C. La mezcla espesa se filtró nuevamente como describe arriba. La torta húmeda se volvió a hacer en mezcla espesa dos veces más como anteriormente (un total de tres vuelta a hacer en mezcla espesas) . Después de la última filtración, la torta se mantuvo al vacio bajo protección de nitrógeno durante 0.2 horas. El producto se secó a 40°C bajo un vacio de 23-11 mmHg durante 48 horas hasta una pérdida del valor de secado (PVS, 80°C, 1 hora, > 49 mmHG de vacio) de 1.54. El peso del sulfato de 9-nitrominociclina obtenido fue de 380.10 g, concentradion CLAR = 76,3% (como sal de disulfato), total de impurezas = 34,6%, impureza individual mayor (LSI) 9.46% (RRT= 0.94). Rendimiento del HCl.minociclina = 86%. Rendimiento corregido a la concentraciion del producto y el material de partida: = 71%. Se observa que el aislado del compuesto de 9-nitrominociclina resulta en un producto que tiene un gran porcentaje de impurezas.

Ejemplo 1 La tabla 2 a continuación muestra los experimentos de nitración realizados usando el procedimiento resumido en el Ejemplo Comparativo 2, donde se modificaron las siguientes variables: tiempo de adición de ácido nítrico; temperatura de reacción, equivalentes molares del ácido nítrico (con respecto al HCl de minociclina) y relación de agitación. De acuerdo con los métodos descritos en la presente, ninguna de estas reacciones se apagó o se trabajó para aislar el producto. La única herramienta analítica usada fue análisis por CLAR.

Tabla 2 1Sólo se monitoreó la temperatura del baño en estas reacciones debido al tamaño del recipiente. 2 La reacción fue a 50% en peso de la concentración de minociclina original. 3 La agitación fue vigorosa en comparación con el todos los otros experimentos. 4 Se agregó HN03 al 50% en peso en H2S04. Se puede observar que a pesar de las varias condiciones usadas, la cantidad de minociclina se presentó en una cantidad menor a 10% y bajo ciertas condiciones, se removió substancialmente.

Ejemplo 2 También se realizaron experimentos que modifican la reacción de nitración, el apagado de la reacción, y el trabajo de la reacción de nitración. Los experimentos se condujeron usando el procedimiento detallado en el Ejemplo Comparativo 2, pero con modificaciones en las siguientes variables: tiempo de adición del ácido nítrico, temperatura de reacción, equivalentes molares del ácido nítrico (con respecto al HCl de minociclina) , temperatura del apagado, composición de la solución de apagado, tiempo de adición de la mezcla de reacción a la solución de apagado; y método de lavado de la torta aislada. Los datos se muestran a continuación en la Tabla 3. La única herramienta analítica usada fue análisis por CLAR.

Tabla 3 1Sólo se monitoreó la temperatura del baño en estas reacciones debido al tamaño del recipiente. 2 Cuando se usó IPA como el apagado, se agregaron luego los heptanos para obtener la composición de la mezcla de apagado original. 3 Método de lavado 1: la torta húmeda se lavó en el filtro con 4:1 IPA: heptanos (vol.). Método de lavado 2: la torta húmeda se hizo en mezcla espesa tres veces con IPA: heptanos 4:1 (vol.). El método de lavado # 2 usó 20% más solución de lavado que el método # 1. E1 rendimiento se corrigió por la concentraciion del producto y el material de partida. 5 Se inició el apagado a 0°C, luego se calentó de inmediato a 34 °C y se mantiene a 34 °C durante el resto del apagado. Se puede observar de los datos de la Tabla 3 que el rendimiento fue de al menos 50%.

Ejemplo 3 Este Ejemplo describe los resultados de la variación de la cantidad de ácido nítrico (en equivalentes) necesaria para la etapa de nitración. El ácido nítrico se tituló a 89.5% y la cantidad usada se corrige en consecuencia. Se realizaron tres ensayos. El ensayo 1 usa un equivalente de 1.25 de ácido nítrico, en el Ensayo 2, un equivalente de 1.09 y en el Ensayo 3 se usó un equivalente de 1.00 de ácido nítrico.

El análisis de finalización por CLAR del Ensayo 1 no muestra señal de minociclina, mientras que el análisis del Ensayo 2 muestra un 2.5% de material de partida sin reaccionar. Ambas reacciones se hidrogenaron y luego se convirtieron a la sal de clorohidrato de aminominociclina usando el procedimiento SLP. El producto hidrogenado 1 (del Ensayo 1) muestra un contenido de minociclina de 0.37%; Concentraciion = 83.0%, total de impurezas = 3.20%, impurezas individuales = 0.52%, contenido de epimeros = 1.1%. El producto hidrogenado 2 (del Ensayo 2) mostró un contenido de minociclina de 1.6%; Concentración = 84.2%, total de impurezas = 4.00%, impurezas individuales = 0.35%, contenido de epimeros = 1.0%. Ensayo 3: Concentración = 83,0%; total de impurezas = 5.0%; Impurezas individuales = 2.7%; contenido de epimeros = 1.1%.

REDUCCIÓN Los análisis por CLAR se realizaron en las siguientes condiciones : Ejemplo 1 Este Ejemplo describe una reacción de hidrogenación donde el intermediario de 9-nitrominociclina no se aisló.

Se agregaron 10.1 gramos de p-clorobencensulfonato de minociclina lentamente y con agitación a 27 mi de ácido sulfúrico concentrado. La solución se enfrió a 0-2°C. Se agregó ácido nítrico (90%, 0.6 mi) lentamente y se agitó la solución a 0-2°C durante 1-2 horas hasta que la reacción se completó, como se determina por CLAR. Una vez completa la nitración, la solución que contenia el sulfato de 9-nitrominociclina intermedio se transfirió con agitación a 150 mL de isopropanol y 1200 mL de metanol mientras se mantiene la temperatura por debajo de los 10-15°C. La solución se hidrogenó a 26-28°C a 40 psi (2.81 kg/cm2) durante 3 horas en presencia de catalizador de Pd sobre carbono al 10%, que tenia una humedad de 50%. Después de la hidrogenación, el catalizador se filtró completamente y la solución se vació lentamente en 250 mL de isopropanol con agitación a 0-5°C. El sólido (3.4 g) se filtró completamente. El análisis por CLAR mostró un pureza cruda de 90 % (% de área) . El epimero C4 se presentó en una cantidad de 0.9%. EM(FAB): m/z 473 (M+H), 472 (M+) .

Ejemplo 2 Este Ejemplo describe una reacción de hidrogenación donde el intermediario de a 9-nitrominociclina no se aisló. Se agregó 84.3 gramos de p-clorobencensulfonato de minociclina lentamente con agitación a 368 gramos de ácido sulfúrico concentrado. La solución se enfrió a 10-15°C. Lentamente se le agregó ácido nítrico (6 mi, fumante). La solución se agitó a 10-15°C durante 1 a 2 horas, hasta que se completó la reacción, como se determina por CLAR. Después de que se completa la nitración, la solución que contiene el sulfato de 9-nitrominociclina intermedio se transfirió con agitación a 0,3 kg de metanol mientras se mantiene la temperatura por debajo de los 10-15°C. La solución se hidrogenó a 26-28°C a 50 psi (3.51 kg/cm2) durante 2-3 horas en presencia de catalizador de Pd en carbono al 10%, que tenia una humedad de 50%. Después de que la hidrogenación se completó, el catalizador se filtró completamente y la solución se vació lentamente en 0.65 kg de isopropanol y 0.3 kg de n-heptano agitando a 0-5°C. El sólido se filtró completamente. El sólido húmedo se disolvió en 100 gramos de agua a 0-5°C. La mezcla se agitó y la fase orgánica se separó y se desechó. Se le agregó a la fase acuosa 14.4 gramos de HCl concentrado. El pH de la solución se ajustó a 4,0 ± 0,2 con hidróxido de amonio. Se agregó 100 mg de sulfito de sodio y la solución se sembró con 100 mg de 9-aminociclina. La mezcla se agitó durante 4 horas a 0-5°C y el producto se filtró y se secó para dar 28.5 gramos de sólido. La pureza por CLAR (% de área) fue de 96.5%, con 0.9% de epimero de C . EM(FAB): m/z 473 (M+H), 472 (M+) . Rendimiento: 54.2%.

Ejemplo Comparativo 1 Este Ejemplo describe una reacción de hidrogenación donde se aisló el intermediario de 9-nitrominociclina . Se cargaron 52.0 kg de HCl de minociclina (92.4% de potencia) en 4.8 partes de ácido sulfúrico a 66° Be a 0 hasta 15°C en un recipiente de 300 galones (1,135.5 litros) y se agita para eliminar el HCl. Después de 3 horas y 20 minutos, se cargaron 7.48 kg de ácido nítrico, 100% fumante (95.9% de contenido de nitrato, 1.26 equivalente). El análisis CLAR indica un restante de minociclina >1%. En consecuencia, 0.31 kg de ácido nítrico, fumante 100% (95.5 contenido de nitrato, 0.05 equivalentes) se agregaron. El análisis por CLAR todavía indica un restante de minociclina >1%. Otro 0.74 kg de ácido nítrico, fumante 100% (95.5 contenido de nitrato, 0.12 equivalentes) se agregó. Como la CLAR probada nuevamente indica un resto de minociclina >1%, otro 1.11 kg de ácido nítrico, fumante 100% (95.5 % contenido de nitrato, 0.19 equivalentes) se agregó, después de lo cual el resto de minociclina fue <1%. La mezcla de reacción de nitración se transfirió a una solución de 21,5 partes de IPA/3,3 partes de heptano (1120 kg IPA/171 kg de heptano) a 0-36°C. Se filtró la mezcla espesa (tiempo de filtración prolongado) , se lavó con IPA/heptano 4:1 y se secó a no más de (NMT) 40°C hasta una pérdida durante el secado (LOD) de no más de 6%, proporcionando 70.9 kg de sal sulfato (rendimiento crudo de 97%) para usarse en la reacción de reacción.

Ejemplo 3 Este Ejemplo describe una reacción de hidrogenación donde el intermediario 9-nitrominociclina no se aisló. Se colocaron 25,0 kg de HCl de minociclina (94.4% de potencia) en 7.3 partes de ácido sulfúrico (183 kg) a 66° Be a 5 a 15°C en un recipiente de 100 galones (378.5 litros) y se agitó para eliminar el HCl. Se agregaron 2.5015 kg de ácido nítrico, 85% (86.6% de contenido de nitrato, 1.25 equivalentes) al recipiente durante 78 minutos a 9-15°C. El análisis por CLAR indicó un resto de minociclina de >1%. Otros 0.261 kg de ácido nítrico, 85% (86.6% de contenido de nitrato, 0.13 equivalentes) se agregaron. Dado que la CLAR volvió a indicar un resto de minociclina de >1%, se agregaron otros 0.261 kg de ácido nítrico, 85% (86.6% de contenido de nitrato, 0.13 equivalentes). Dado que la CLAR todavía volvió a indicar un resto de minociclina de >1%, se agregó otro 0.174 kg de ácido nítrico, 85% (86.6% de contenido de nitrato, 0.09 equivalentes), después de lo cual parece que la reacción alcanza un asentamiento con 1.7% del material de partida de minociclina. La mezcla de reacción de nitración se transfirió a 4.2 partes (106 kg) de metanol a -20 hasta 10°C. El lote apagado se ajustó a 4-10°C y se usó de esta manera en la reacción de reducción.

Ejemplo Comparativo 2 Este Ejemplo describe una reacción de hidrogenación donde se aisló el intermediario de a 9-nitrominociclina. Se colocaron 104 kg de HCl de minociclina (potencia de 90.3%) en 4.8 partes de ácido sulfúrico (502 kg) a 66°Be a una temperatura de 0-10°C en un recipiente de 300 galones (1,135 litros) y se agitó para eliminar el HCl. Se cargó 15.2 kg de ácido nítrico fumante (100.4%, 1.25 equivalentes) durante 3 horas a 0-6°C, 100 rpm. Dado que la CLAR probada mostró un resto de minociclina de >1%, se volvió a agregar 0.69 kg de ácido nítrico (100.4% contenido de nitrato, 0.06 equivalentes), después lo cual la minociclina fue <1%. La mezcla de nitración se transfirió a una solución de 21.5 partes de IPA/ 3,3 partes de heptano a 0-36°C. La mezcla espesa se filtró (tiempo de filtración prolongado), se lavó con IPA/heptano 4:1 y se secó a no más de 40°C para obtener una LOD de no más de 6%, lo cual proporcionó 140 kg de sal sulfato (95% rendimiento crudo) para usar en la reacción de reducción.

Ejemplo 4 Este Ejemplo describe una reacción de hidrogenación donde el intermediario de 9-nitrominociclina no se aisló. Se cargan 104 kg de HCl de minociclina (potencia de 90%) a 7.3 partes de ácido sulfúrico (763 kg) a 66°Be a de 5-15°C y se agitó para efectuar la remoción del HCl. Se cargó 14.9 kg de ácido nítrico fumante (100%, 1.25 equivalentes) durante 1 hora a 5-15°C, 120 rpm. Dado que el análisis CLAR indica un resto de minociclina de >1%, se agregó 0.69 kg de ácido nítrico fumante (100%, 0.06 equivalentes), después lo cual el resto de minociclina fue <1%. La mezcla de nitración se colocó en 4.2 partes (440 kg) de metanol a -10 a 20°C. El lote apagado se ajustó hasta 4 a 10°C y se usó de esta manera en la reacción de reducción.

Ejemplo Comparativo 3 Este Ejemplo describe una reacción de hidrogenación donde se aisló el intermediario de 9-nitrominociclina . Las proporciones de solventes/reactivos están relacionadas con la carga inicial de minociclina antes de la reacción de nitración. La mezcla de reacción de sulfato de 9-nitrominociclina del Ejemplo Comparativo 4 se apagó en 2240 kg (21.5 partes) de isopropanol y 342 kg (3.3 partes) de heptano, durante 1 hora, mientras se mantenía la temperatura del lote a 0 a 36°C. La suspensión resultante se agitó a 30 a 36°C durante 2 horas, luego se enfrió y se agitó a 19 a 25°C durante 1 hora.

La mitad de la mezcla espesa se filtró, se lavó con 3 x 205 kg de IPA/ heptano (4:1) v/v y se secó a no más de 40°C para obtener una pérdida durante el secado de no más de 6%. El filtrado y el secado duraron 16 dias (durante 7 dias de estos dias la torta húmeda se dejó bajo nitrógeno durante un cierre de planta programado) y se obtuvieron 58 kg de sal de sulfato. La otra mitad de la mezcla espesa se agitó en un tambor y se enfrió a la espera de la disponibilidad del filtro. Se refrigeró durante 12 dias, luego se cargó nuevamente en el recipiente y se agitó en un rango de temperatura de 0 a 6°C durante 2 dias, luego se ajustó a 19 a 25°C, se filtró, se lavó con 3 x 205 kg de IPA/ heptano (4:1) v/v y se secó a no más de 40°C con una pérdida durante el secado de no más de 6%. La filtración y el secado duraron 6 dias y se obtuvieron 82 kg de la sal de sulfato. Ambos sub-lotes de sulfato de 9-nitrominociclina se disolvieron en 672 kg (6.5 partes de metanol y 8.4 kg (0,08 partes) de agua para inyección, USP a 19-25°C y se redujo a sulfato de 9-aminominociclina usando 70 psig (4.92 Kg/cm2) de gas de hidrógeno y 2.74 kg (0.026 partes de paladio sobre carbono, húmedo al 10% (p/p) . La reacción de hidrogenación duró 10,5 horas y no dejó rastros detectables de material de partida . La mezcla de reacción de sulfato de 9-aminominociclina se filtró para eliminar el catalizador y se apagó en una solución de 1660 kg (16 partes) de IPA/ 710 (6.8 partes) de heptano a 0 a 27°C durante una hora. La mezcla resultante se ajustó a 19-25°C y se agitó durante 1 hora. La mezcla espesa de sulfato de 9-aminominociclina se filtró con un filtro Nutsche, se lavó con 2 x 162 kg (1.5 partes cada uno) de IPA/ heptano (4:1) v/v y se secó a 40°C para obtener una pérdida durante el secado de menos de 4%. La filtración, el lavado y el secado duraron 10 dias y dio 94.0 kg de sulfato de aminominociclina. Después de la filtración, se observaron sólidos en los licores madre. Se filtraron, se lavaron con 113 kg de IPA/heptanos (4:1) v/v y se secaron a 40°C con una pérdida durante el secado de menos de 4%. Se recuperaron 24.1 kg y se conservaron como un lote separado. El rendimiento crudo total de sulfato de 9-aminominociclina a partir de minociclina fue de 84%. Los 94.0 kg de la "primera cosecha" del sulfato de 9-aminominociclina seca y 0.084 kg (0.0008 partes) de sulfito de sodio se disolvieron en 538 kg (5,17 partes) de agua para inyección, USP y se enfriaron a 0-6°C. Se necesitó 0 kg de ácido clorhídrico, 20°Be, para llevar el pH de la solución de sulfato de 9-aminominociclina a 1.1 +/- 0.1 debido a que el pH inicial fue de 1.16. Se agregaron 48.3 kg (0.46 partes) de ácido clorhídrico, reactivo, a la solución de 9-aminominociclina, formando el HCl de 9-aminominociclina . Se agregaron 56 kg (0.54 partes) de hidróxido de amonio, 28% y 4.0 kg (0.039 partes) de ácido clorhídrico, reactivo a la solución para obtener un lote con pH de 4.0 +/- 0.2. El lote se agitó entonces durante 90 minutos a 0 hasta 6°C, asegurándose que el pH se mantuviera a 4.0 +/- 0.2. El pH final leído fue de 4.5 unidades de pH. El lote se filtró sobre con un filtro Nutsche, se lavó con 2 x 33 kg (0.3 partes de cada uno) de agua para inyección (con un pH llevado a 4.0) preenfriada a 2 a 8°C seguido por 2 x 26.1 kg (0.25 partes de acetona (preenfriada a 2 a 8°C) y se secó a no más de 40°C hasta un contenido de humedad resultante de no más de 7.0%. Se aislaron 43.2 kg de HCl de 9-aminominociclina, con un 40% de rendimiento de HCl de minociclina. El proceso de 24.1 kg de "la segunda cosecha" de sulfato de 9-aminominociclina seca a través del cambio de sal se realizó similarmente al proceso como se describe en los cuatro párrafos previos, usando cantidades proporcionales de reactivos. Se recuperó una cantidad adicional de 9.9 kg de HCl de 9-aminominociclina lo cual representa un rendimiento adicional incrementado de 9.2%. El rendimiento total del lote de ambas cosechas fue de 53.1%.

Ejemplo 5 Este Ejemplo describe una reacción de hidrogenación donde el intermediario de 9-nitrominociclina no se aisló. Las proporciones de solventes/reactivos están relacionadas con la carga inicial de minociclina antes de la reacción de nitración . La mezcla de reacción de sulfato de 9-nitrominociclina del Ejemplo 7 se transfirió en 440 kg (4.2 partes) de metanol, durante 90 minutos, mientras se mantiene la temperatura del lote a -20°C a -10°C y la relación de agitación a 130 rpm. El lote apagado se ajustó a 4-10°C y se redujo a sulfato de 9-aminominociclina usando 50 psig (3.51 kg/cm2) de gas de hidrógeno y 52 kg (0.5 partes) de paladio' sobre carbono, humedad del 10% (p/p) . La reacción de hidrogenación duró 5 horas y no dejó rastros detectables de material de partida. La mezcla de reacción de sulfato de 9-aminominociclina se filtró para eliminar el catalizador y se apagó en una solución de 1.241 kg (12 partes) de IPA/ 537 kg (5.2 partes) de heptano a 17 a 23°C durante 30 minutos. La mezcla resultante se enfrió a -18°C a-12°C y se agitó durante 1 hora. La mezcla espesa resultante de sulfato de 9-aminominociclina se filtró en dos porciones en un filtro Nutsche y se lavó con un total de 3.6 partes de IPA/heptano (2:1) v/v preenfriadas a 0-6°C y 506kg (4.9 partes) de heptano frió. La filtración y el lavado duraron 99 horas para ambas porciones (filtradas en dos porciones debido a la limitación de tamaño del filtro) . Las tortas húmedas de sulfato de 9-aminominociclina se disolvieron en 150 kg (1.4 partes) de agua para inyección, USP a 0-6°C y la capa orgánica superior se separó completamente como desecho. Se agregaron 25.7 kg (0.3 partes) de ácido clorhídrico a la solución de sulfato de 9-aminominociclina a 0-6°C para la conversión a HCl de 9-aminominociclina . Se agregó hidróxido de amonio al 28% a la mezcla de reacción para obtener un lote con pH de 4.0 +/- 0.2; esto toma lugar a 49.5 kg (0.48 partes). Se agregaron 0.15 kg de sulfito de sodio (0.0014 partes) a la mezcla de reacción. El lote se sembró con 5 g de HCl de 9-aminominociclina y se agitó durante 3 horas mientras se mantiene el pH a 4.0 +/-0.2 usando hidróxido de amonio, 28% (0.05 partes). El lote se filtró en un filtro Nutsche, se lavó con 1 parte de agua para inyección (pH llevado a 4.0) preenfriado a 2 a 8°C, y seguido por 0.2 partes de isopropanol (preenfriado a 2 a 8°C) y se secó a no más de 50°C, con una pérdida durante el secado (LOD) de no más de 10.0% y un contenido de humedad de no más de 8.0%. Se aisló 63.1 kg de HCl de 9-aminominociclina, con un 59% de rendimiento de HCl de minociclina. La Tabla 4 a continuación muestra los Datos Comparativos .

Tabla 4 1 ciclo de tiempo desde HCl de minociclina a HCl de 9-aminociclina . 2 rendimiento combinado de la Io y 2° cosecha 3 No se incluye el cierre de la planta de 7 dias que se presenta durante el proceso, si incluye el tiempo para procesar la segunda cosecha. La tabla 4 indica que la hidrogenación de una mezcla de reacción sin aislamiento resulta en un producto con una cantidad menor de impurezas y epimero de C .

ACILACION Los análisis por CLAR se realizaron bajo las siguientes condiciones : Ejemplo 1 Clorhidrato de N-t-butilglicina A una mezcla de t-butil amina (1.57 1) y tolueno (1.35 1) a 45-50°C se le agrega bromoacetato de t-butilo (420 mi) . La mezcla se agitó durante 1 hora a 50-60°C, la temperatura subió a 75°C durante una hora. Después de 2 horas a 75°C, la mezcla se enfrió a -12±3°C y se dejó reposar durante 1 hora. El sólido se recogió mediante filtración, y el filtrado se concentró por destilación (30-40°C, 25-35 mm Hg) a un volumen de 825 mL. El concentrado resultante se enfrió a 20-25°C y se agregó 6N de HCl (1.45 kg) . Después de 3 horas, las fases se separaron y la fase acuosa se concentró por destilación (30-40°C, 25-35 mm Hg) hasta un volumen de 590 mL . Se agregó isopropanol (2.4 L) y la mezcla se concentró por destilación (15-20°C, 10-35 mm Hg) hasta un volumen de 990 mL. La suspensión resultante se enfrió a -12±3°C durante 30 minutos y se deja reposar durante una hora. El sólido se colecta por filtración, se lava con i-PrOH, y se seca (45±3 °C, 10 mm Hg) durante 24 horas para proporcionar (407.9 g, 86%) del producto deseado.

Ejemplo 2 Clorhidrato de cloruro ácido de N-t-butilglicina A una mezcla de clorhidrato de N-t-butilglicina molido (250.0 g) , tolueno (1.14 L) y DMF (7.1 g) se le agregó cloruro de tionilo (143 mi) durante 20 min. La mezcla se llevó a 80-85 °C y se calentó agitando durante 3 horas. Después de enfriarla a 20°C, el sólido se recogió por filtración bajo N2, se lavó con tolueno, y se secó (40°C, 10 mm Hg) durante 16 horas para proporcionar producto deseado (260.4 g, 93.8%). Pureza por % de área CLAR: 98.12% Ejemplo 3 Tigeciclina A una mezcla de HCl de 9-aminominocilina (140.0 g) y agua fría (0-4°C) (840 mi) se le agregó clorohidrato de cloruro de ácido de N-t-butilglicina (154,0 g) después de 15 min con agitación. La mezcla se agitó a 0-4 °C durante 1-3 horas. Se le agrega hidróxido de amonio (126 g, 30%) para llevar el pH hasta 7.2 mientras se mantiene la temperatura a 0-10 °C. Se agregó metanol (930 mL) y CH2C12 (840 mL) y la mezcla se agitó a 20-25°C durante 1 hora, mientras el pH se mantiene a 7.2 al agregar hidróxido de aluminio (13.5 g, 30%) . Las fases se separaron, y los sólidos se combinaron con la capa orgánica. La capa acuosa se extrajo con CH2C12 (1 x 840 mi, 3 x 420 mi) y el pH de la mezcla se ajusta a 7.2 durante cada extracción. A las capas orgánicas combinadas se les agregó metanol (200 mi) para proporcionar una solución. La solución se lavó con agua (2x140 mi), luego se secó sobre sulfato de sodio (140 g) con agitación durante 30 minutos. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró por destilación (20°C, 15-25 mm Hg) hasta un volumen de 425 mL . A esta mezcla se le agrega CH2C12 (1.4 L) y la destilación se repite dos veces. La suspensión resultante se enfria a 0-2°C y se agita durante 1 hora. El sólido se colecta por filtración, se lava con CH2C12 a 0-5°C (2 x 150 mL) y se seca (65-70°C, 10 mm Hg) durante 24 horas para proporcionar el producto deseado (120.0 g, 75%). Pureza por % de área CLAR: 98.9% y 0.12% de epimero de C-4 Ejemplo 3A Tigeciclina A una mezcla de HCl de 9-aminominocilina (100.0 g) y agua fría (0-4°C) (600 mL) se le agregó clorohidrato de cloruro de ácido de N-t-butilglicina (110.0 g) después de 50 min con agitación. La mezcla se agitó bien a 0-4 °C durante 1.5 hora. Se le agregó hidróxido de amonio (112 g, 28%) para llevar el pH a 7.2 mientras se mantiene la temperatura a 0-5°C. Se agregó cloruro de metanol (600 mL) , luego metanol (440 mL) y la mezcla se agitó a 0-5°C durante 30 minutos, mientras el pH se mantiene a 7.2 al agregar hidróxido de aluminio (10.0 g, 28%) . La mezcla se calentó a 20-25°C durante 15 minutos. Se le agregó metanol (244 mL) y las fases se separaron. La capa acuosa se extrajo con CH C12 (1 x 600 mi, 3 x 300 mi) y el pH de la mezcla se ajustó a 7.2 durante cada extracción. A las capas orgánicas combinadas se les agregó metanol (144 mi) para proporcionar la solución. La solución se lavó con agua (2x100 mL), luego se seca sobre sulfato de sodio (100 g) con agitación durante 30 minutos. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró por destilación (20°C, 80-120 mm Hg) hasta un volumen de 400 mL . A esta mezcla se le agregó CH2C12 (1.0 L) y la destilación se repitió dos veces. La suspensión resultante se enfrió a 0-2°C y se agitó durante 1 hora. El sólido se colectó por filtración, se lavó con 0-5 °C CH2C12 (2 x 110 mi) y se secó (65-70°C, 20 mm Hg) durante 18 horas, luego 3-5 mm Hg durante 16 horas) para proporcionar el producto deseado (82.4 g, 71.7%). Pureza por % de área CLAR: 98.5% y 0.28% de epimero de C-4.

Ejemplo 4 Clorhidrato de cloruro ácido de N-t-butilglicina Se disolvió t-butilamina (88 g) en 300 mL de tolueno. La mezcla se calentó a 45-50°C y se agregaron 117.5 g de t-butilbromoacetato durante 1 hora mientras que se mantenía la temperatura a 50-60°C. La mezcla se calentó a 75°C durante 2 horas. La mezcla resultante se enfrió a 12-15°C y se agitó durante 1 hora. Los sólidos se filtraron completamente y se lavaron con tolueno frió. El sólido que fue bromohidrato de t-butilamina se descartó. El filtrado se enfrió a 10-12°C y se burbujeó gas de HCl durante 0.5 horas. La mezcla se agitó durante 3 horas a 10-12°C, luego el producto se recogió por filtración y se lavó con tolueno frió. El producto se secó al vacio a 40-50°C para dar 107 g del clorhidrato de N-t-butilglicina. EM : m/z 187 (M+) Se agregó clorhidrato de N-t-butilglicina (7 gramos) del material preparado como se describió arriba a 35 mL de tolueno. Se agregó cloruro de tionilo (11,6 mi) y la mezcla espesa se calentó a 75-80°C durante 1 hora. La suspensión se enfria hasta 20°C y el sólido se colecta por filtración y se lava con 2 x 15 mi de tolueno. El sólido resultante se secó al vacio a 40°C para proporcionar 4.4 g (65% de rendimiento) del producto, que está protegido contra la humedad y que se usa de inmediato en la siguiente etapa.

Ejemplo 5 Tigeciclina Se agregó en porciones 9-aminominociclina (10.00 g) a 60 mL de agua a 0-5°C. Se agregó en porciones clorhidrato de cloruro de ácido de t-but ilglicina (10.98 g) , manteniendo la temperatura a 0-5°C. Después de agitar durante 40-60 minutos, se agregó en porciones hidróxido de amonio al 30% a la mezcla de reacción mientras se mantenía la temperatura a 0-5°C para ajustar el pH a 7.2. A la solución se le agregó 83 mL de metano seguido por 60 mL de cloruro de metileno. Después de agitar 15 minutos, las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con cloruro de metileno 4 X 40ml, con el pH ajustado a 7.2 antes de cada extracción. A los orgánicos combinados se les agregaron 10 mL de metanol, y la solución se secó con sulfato de sodio. Después del filtrado, la solución se concentró para dar una suspensión (peso neto 51 g) . La suspensión se agitó a 5-10°C durante 1 hora y luego se filtró. El sólido se lavó con 2 X 10 mi de cloruro de metileno frió, luego se secó para dar 8.80 g del producto (76.8% de rendimiento). Pureza por % de área CLAR: 98.4% y 0.1% de epimero de C-4. EM(FAB): m/z 586 (M+H); 585 (M+) .

Ejemplo 6 Clorhidrato de cloruro ácido de N-t-butilglicina Se disolvió t-butilamina (1.5 kg) en 1.35 L de tolueno. La mezcla se calentó a 45-50°C, y se agrega 548 g de t-butilbromoacetato durante 1 hora mientras se mantiene la temperatura a 50-60°C. La mezcla se calentó a 75°C durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió entonces hasta 12-15°C y se agitó durante 1 hora. Los sólidos se filtraron completamente y se lavaron con tolueno frió. El sólido que fue bromohidrato de t-butilamina se descartó. El filtrado se concentró hasta ~800 mL destilando completamente el solvente. El concentrado se enfrió a 25°C y se agregaron 900 mL de 6N de HCl a la mezcla. Después de agitar durante 3 horas a 20-25°C, las fases se separaron. La fase orgánica se descartó y la fase acuosa se concentró a un volumen de 600 mL . Se agregó isopropanol (2.4 L) al concentrado. La mezcla espesa se enfrió a -12 hasta -9°C y se mantiene durante 0.5 hora. El producto se colectó por filtración, se lavó con isopropanol frió, luego se seca bajo vacio a 40-50°C para dar 408 g de sólido. La pureza por RMN fue >95%. EM: m/z 187 (M+) . El clorhidrato de N-t-butilglicina (250 gramos) del material preparado como se describe arriba se agregó a 1.3 L de tolueno y 7.5 mL de DMF. Se agregó cloruro de tionilo (143 mL) y la mezcla espesa se calentó a 80-85°C durante 3-4 horas. La suspensión se enfrió a 20°C y el sólido se recogió por filtración y se lavó con 2 x 250 mi de tolueno. El sólido se secó al vacio a 40°C para proporcionar 260 g (82 % de rendimiento) del producto. Pureza por % de área CLAR: 98.2%.

Ejemplo 7 Tigeciclina Se agregó HCl de 9-aminominocilina (140.0 g) en porciones a 840 mL de agua a 0-4°C. Se le agregó clorohidrato de cloruro de ácido de t-butilglicina (154 g) durante 15 minutos con buena agitación mientras se mantiene la temperatura a 0-4°C. La solución se agitó durante 1-3 horas. El pH de la mezcla se ajustó a 7.2±0.2 con 30% de hidróxido de amonio mientras se mantiene la temperatura a 0-10°C. Se agregaron a la solución metanol (930 mL) y 840 mL de cloruro de metileno, que se agitó durante 1 hora a 20-25°C. Las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con 3X600 mi de cloruro de metileno, y las fases orgánicas se combinaron, se secaron y se concentraron hasta un volumen de 500 mL aproximadamente. La suspensión resultante se enfrió a 0-2°C durante 1 hora. El sólido se filtró y se secó para dar 120 g del producto (75% de rendimiento). Pureza por % de área CLAR: 98%, 0.1% de epimero de C4. EM(FAB): m/z 586 (M+H); 585 (M+) • Ejemplo 8 Clorohidrato de ácido Pirrolidinilacético La pirrolidina (14.2 g) se disolvió en 40 mi de metil t-butil éter. La solución se enfrió a 0 hasta -5°C. El bromoacetato de bencilo (22.9 g) se agregó gota a gota con agitación. La mezcla espesa blanca resultante se agitó durante 0.5 h a 0-5°C. El sólido se filtró completamente y se lavó con metil t-butil éter. El filtrado se concentró para dar 21.3 g de acetato de pirrolidinilbencilo . El éster de bencilo (21.0 g) se disolvió en 200 mi de metanol y 4.0 g de 10% Pd/C catalizado (50% de humedad) se agregó. La solución se hidrogenó a 40 psi (2.812 kg/cm2) durante 6 h. El catalizador se filtró completamente y se lavó con metanol. El filtrado se concentró para dar 11.8 g de ácido pirrolidinil acético como un aceite incoloro. 15.8 g ácido pirrolidinil acético se hizo mezcla espesa en 15 mi de metil t-butil éter. Acetonitrilo (15 mi) se agregó y la suspensión se enfria a 0-5°C. HCl etéreo (120 mi, 1.0 M) se agregó con agitación. El precipitado blanco resultante se filtró, se lavó con metil t-butil éter, y se secó para dar 15 g de clorohidrato del ácido pirrolidinil acético. Pureza por % de área GC/EM: 98%. EM: m/z 129 (M+) .

Ejemplo 9 [4S-(4 ,12a )]-4, 7-Bis (dimetilamino) -9- [ (pirrolidinil) acetil] amino] -1,4, 4a, 5, 5a, 6, 11, 12a-octahidro- 3, 10, 12, 12a-tetrahidroxi-l, ll-dioxo-2-naftaceno-carboxamida El ácido pirrolidinilacético (7.7 g) se suspendió en 7 mi de acetonitrilo. Después de enfriarse a 0-5°C, 5.3 mi de cloruro de tionilo se agregó lentamente con agitación. La suspensión se calentó a 55°C. La solución oscura se mantuvo a 55°C durante 0.5 h y luego se enfrió a temperatura ambiente para proporcionar clorohidrato de cloruro de pirrolidinilacetilo. El clorohidrato de 9-Aminominociclina (5.0 g) , preparado como se describe en el ejemplo 4 de arriba, se suspendió en 5.0 mL de agua. La suspensión se enfrió a -15°C. A esta suspensión se agregó gota a gota la solución de clorohidrato de cloruro pirrolidinilacetilo preparado como se describe arriba, manteniendo la temperatura de bajo de 22°C. La mezcla de reacción oscura se agitó a 22-25°C durante 3 h. El agua (2 mL) se agregó a la mezcla, y el pH se ajustó hasta 6.510.2 con 30% hidróxido de amonio. La solución se extrajo con 6X15 mi de CH2C12. Los extractos orgánicos se agruparon y se concentraron a 40°C. El etanol anhidro (10 mi) se agregó al concentrado, y la mezcla espesa se agitó a 5-7°C durante 1 h. El sólido se filtró y se secó in vacuo a 40°C para proporcionar 3.5 g del producto. Pureza por % de área CLAR: 98.7 %, epimero C-4 0.4%. EM (FAB): m/z 586 (M+H); 585 (M+) .

Ejemplo 10 Tigeciclina La 9-Aminominociclina (4.0 g) se agregó en porciones a mi de acetonitrilo y 5 mL de DMPU a 10-15°C. El clorohidrato de cloruro del ácido t-Butilglicina (4.4 g) se agregó en porciones para mantener la temperatura a 10-15°C.

Después de agitarse durante 2 h, 10 mL MeOH y 17 mL de agua se agregó lentamente a la mezcla de reacción manteniendo la temperatura entre 10-17°C. Hidróxido de amonio (30%) se agregó gota a gota a la mezcla de reacción, se mantuvo la temperatura a 5-8°C, hasta ajustar el pH a 7.2. A la solución se agregó 15 mL cloruro de metileno. Después de agitarse durante 15 min., las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con 2X20 mL de cloruro de metileno, se ajustó el pH hasta 7.2 antes de cada extracción. A los orgánicos combinados se agregaron 700 mg de Norit CA-1 (carbón vegetal) y 10 g sulfato de sodio, luego la mezcla se filtró. La torta filtro se lavó con 2X20 mL de cloruro de metileno. La solución se concentró y la suspensión resultante se agitó a 5-8°C durante 16 h. Después de filtrarse, el sólido se lavó con 2 X 10 mL cloruro de metileno frió, luego se secó para dar 2.3 g del producto (50% rendimiento). Pureza por % de área CLAR: 95.2%, Epimero C-4: 0.5%. EM (FAB): m/z 586 (M+H); 585 (M+) .

Ejemplos 11-19 Tigeciclma Los ejemplos 11-19 siguen el procedimiento del Ejemplo 10 con la modificación del solvente como se indica a continuación. 1 Pureza evaluada por área CLAR. Sm= material de partida de 9-aminominociclina 2 La mezcla de reacción se apagó con isopropanol-acetatode etilo, luego se dividió entre agua y CH2C12. Se concentró la fase orgánica, luego se diluyó con tolueno previo al aislamiento del producto Ejemplo 20 Clorohidrato de cloruro del ácido N-t-Butilglicina A un matraz de multi-cuellos de 5L con un agitador mecánico, termopar, condensador con una linea de nitrógeno en un 30% (humedad) limpiador cáustico, y un embudo de adición ecualizador de presión de 250 mi se agregó el clorohidrato de N-t-butilglicina molido (436 g, 2.60 moles, d(0.5) = 103 µm) , tolueno (1,958 g, 2,263 mi), y N, N-dimetilformamida (13.6 g, 14.4 mi, 0.19 moles). Cloruro de tionilo (405 g, 248 mL, 3.40 moles) se agregó a la mezcla de reacción blanca opaca, usando 250-mL del embudo de adición durante 33 min a 20-23°C. La mezcla espesa se calentó lentamente a 80°C durante 1 hora, luego se agitó a 80°C durante 3 horas. Después de 3 horas la reacción se completó por cromatografia de capa delgada (< 2% material de partida). La suspensión anaranjada-amarilla se enfrió a 20°C durante 32 min., luego se agitó a 15-20°C durante 32 min. El sólido se colectó por filtración al vacio en un embudo Büchner de 15 cm usando un papel #42 hat an. La torta filtro se lavó con tres porciones de tolueno (272 g, 314 mi cada lavado) a 20-25°C. La torta filtro húmeda se secó con succión durante 20 minutos bajo protección de nitrógeno. El producto luego se secó en un horno con un vacio de 23 mm Hg y 38 °C durante 21.2 horas para proporcionar una perdida en el secado de 1.23%. El peso del HCl cloruro de t-butilaminoacetilo obtenido = 462 g, Concentraciion GC = 91.0%, Identificación IR = positiva. Rendimiento de HCl ácido t-butilaminoacético = 96%. Rendimiento correcto para la concentraciion del producto y material de partida = 87%.

Ejemplo 21 Clorohidrato del cloruro ácido de N-t-Butilglicina A un matraz de multi-cuellos de 5L con un agitador mecánico, termopar, condensador con una linea de nitrógeno en un 25% (humedad) limpiador cáustico, y un embudo de adición ecualizador de presión de 250 mi se agregó el clorohidrato de N-t-butilglicina molido (450 g, 2.68 moles, d(0.5) = 664 µm) , tolueno (2,863 g, 3,310mL), y N, N-dimetilformamida (15 g, 15 mi, 0.21 moles). Cloruro de tionilo (422 g, 259 mL, 3.54 moles) se agregó a la mezcla espesa blanca, usando el embudo de adición de 250 mi durante 19 min a 19-22°C. La mezcla espesa se calentó lentamente a 79°C durante 7.1 horas, luego se agitó a 79-82°C durante 44 horas. La reacción se revisó cada 3 horas y se encontró incompleto por cromatografia de capa delgada (TLC). 26 mL (42 g, 0.35 moles) adicionales del cloruro de tionilo se agregó. Después de un total de 27 horas, la reacción fue todavía incompleta por CCD y 26 mL adicionales (42 g, 0.35 moles) de cloruro de tionilo se agregó. Después de un total de 44 horas, a 79-82°C, la reacción se completó por CCD (< 4% partiendo con HCl ácido t-butilaminoacético) . La suspensión café oscura se enfrió a 25°C durante 17 min., luego se agitó a 21-25°C durante 37 min. El sólido se colectó por filtración al vacio en un embudo sinterizado de vidrio grueso de 2L. La torta filtro se lavó con seis porciones de tolueno (282 g, 325 mL cada lavado) a 20-25°C. La torta filtro húmeda se secó con succión durante 16 minutos bajo protección de nitrógeno. El producto luego se secó en un horno con un vacio de 23 mmHg y 38°C durante 26.1 horas para proporcionar una perdida en secado de 0.75%. El peso de HCl cloruro de t-butilaminoacetilo obtenido = 395 g, Concentraciion GC = 89.5%, Identificación IR = positiva. Rendimiento de HCl ácido t-butilaminoacético = 79%. Rendimiento correcto para la concentraciion del producto y material de partida = 71%.

Ejemplo 22 Tigeciclina La 9-Aminominociclina HCl (43.0 kg) se disolvió en 258 kg (6.0 partes de agua) por inyección a 0 hasta 6°C. El cloruro de ácido N-t-butilglicina HCl (47.3 kg, 1.1 partes, 3.01 equivalentes) se agregó a la solución de lote lentamente mientras se mantuvo la temperatura de lote a 0 hasta 6°C. La mezcla de reacción se agitó durante 1 h y se determinó que tiene 0.2% material de partida (Cloruro de ácido N-t-butilglicina HCl adicional no se requiere) . La mezcla de reacción GAR-936 luego se llevó hasta pH 7.2 +/- 0.2 usando 32 kg (0.7 partes) de hidróxido de amonio, 28%, y 2 kg del reactivo de ácido clorhídrico (para reajustar el refuerzo) . El pH inicial igual a 0.42 y el pH final igual a 7.34. cloruro de metileno (342 kg, 8 partes) y 148 kg (3.4 partes) metanol se agregaron a la mezcla de reacción a 0 hasta 7°C. Ya que el pH fue 7.09, no se requirió ajustar. El lote se calentó hasta 19 hasta 25°C. El metanol (83 kg, 1.9 partes) se agregó y la fase orgánica inferior se dividió completamente. El producto restante en la fase acuosa luego se extrajo en la fase orgánica usando 1 x 342 kg (8 partes) y 3 x 172 kg (4 partes) cloruro de metileno mientras se mantuvo el pH a 7.2 +/- 0.2 con hidróxido de amonio, 28%. Metanol (49 kg, 1.14 partes) se agregó a la solución de cloruro de metileno/metanol resultante, la cual se lavó con 2 x 43 kg (1 parte) agua por inyección antes se secó con 43 kg (1 parte) sulfato de sodio. Las tres destilaciones al vacio luego se llevaron a cabo para remover el metanol con cajas de 568 kg (13.2 partes) cloruro de metileno agregado antes de la segunda y tercera destilación. El nivel residual del metanol en el licor madre fue de 0.21%. El lote se filtró, se lavó con 2 x 60 kg (1.4 partes) (0 hasta 6°C) de cloruro de metileno pre-enfriado. El material crudo resultante no se secó, pero se aisló como una torta filtró húmeda (72.5 kg, 38.2 kg en peso del seco como se calcula a partir del menos seco) , proporciono un 77% de rendimiento de 9-aminominociclina HCl. Los resultados analíticos de la torta filtro húmeda: minociclina = 1.26%, impureza grande sencilla = 0.37%, Epimero C-4 = 0.50%.

Ejemplo 23 Tigeciclina La 9 -Aminominoci cl ina HCl ( 61 . 0 kg ) se di solvió en 258 kg (6.0 partes de agua) por inyección a 0 hasta 6°C. El cloruro del ácido N-t-but ilglicina HCl (67.1 kg, 1.1 partes, 3.01 equivalentes) se agregó a la solución de lote lentamente mientras se mantuvo la temperatura de lote a 0 hasta 6°C. La mezcla de reacción se agitó durante 3.5 h y se determinó que tiene 0.13% material del partida (Cloruro de ácido N-t-butilglicina HCl adiciona no se requiere) . La mezcla de reacción luego se llevó hasta pH 7.2 +/- 0.2 usando 45 kg (0.7 partes) de hidróxido de amonio, 28%. El pH inicial igual a 0.82 y el pH final igual a 7.07. El cloruro de metileno (485 kg, 8 partes) y 210 kg (3.4 partes) metanol se agregaron a la mezcla de reacción a 0 hasta 6°C. Ya que el pH estuvo todavía en el rango (7.04), no se requirió ajustar. El lote se calentó hasta 19 hasta 25°C. Metanol (118 kg, 1.9 partes) se agregó y la fase orgánica inferior se dividió completamente. El producto restante en la fase acuosa luego se extrajo en la fase orgánica usando 1 x 485 kg (8 partes) y 3 x 244 kg (4 partes) cloruro de metileno mientras se mantuvo el pH a 7.2 +/- 0.2 con hidróxido de amonio, 28%. Metanol (70 kg, 1.14 partes) se agregó a la solución de cloruro de metileno/metanol resultante, la cual luego se lavó con 2 x 61 kg (1 parte) agua por inyección antes se secó con 61 kg (1 parte) sulfato de sodio. Las tres destilaciones al vacio luego se llevaron a cabo para remover el metanol con cajas de 805 kg (13.2 partes) cloruro de metileno se agrega antes de la segunda y tercera destilación. El nivel residual del metanol en el licor madre fue de 0.05%. El lote se filtró y se lavó con 2 x 85 kg (1.4 partes) (0 hasta 6°C) de cloruro de metileno pre-enfriado . El material crudo resultante no se secó, pero se aisló como una torta filtró húmeda (103 kg, 53.4 kg peso seco como se calcula del menos seco), proporcionando un 76% rendimiento de la 9-aminominociclina HCl.

Ejemplo comparativo 24 Monoclorohidrato de Tigeciclina Ejemplo 24A: 9-cloroacetamidominociclina El cloruro de metileno (1.3 L) se enfrió a 0-2°C en un matraz de fondo redondo de 3 L equipado con un agitador mecánico, un termómetro y un embudo de adición de 1L. El clorohidrato de 9-aminominociclina recristalizado (400 g) se agregó en porciones con agitación. La Trietilamina (428 mL) se agregó durante 10 minutos mientras se mantiene la temperatura entre 0-2°C. La mezcla de reacción se agitó durante 10 minutos y luego se enfrió a -22°C. Una solución de 280 g de anhidrido cloroacético en 540 mi de cloruro de metileno luego se agregó a tal rango que la temperatura no se elevó arriba de 5°C. 132 mi adicionales de cloruro de metileno se usó para enjuagar el embudo de adición. La mezcla de reacción se probó por CLAR 15 min después del comienzo de la adición anhídrida. Cuando la cantidad del presente material de partida fue menos que 2%, la reacción se apagó con 680 mL de 0.05M solución de bicarbonato de sodio. La mezcla se agitó durante 15 min, luego se transfirió a un embudo de separación de 5L. Las fases se permitieron separar. La fase de cloruro de metileno se separó y se lavó con 680 mL adicional de 0.05M solución de bicarbonato de sodio. La solución de cloruro de metileno lavada se agregó gota a gota en 17 L de una mezcla 10:1 de n-heptano y isopropanol (15.4 L de n-heptano y 1.54 L de isopropanol). La mezcla espesa se agitó durante 5 minutos y luego se permite colocar durante 10 min. El sobrenadante se decantó completamente y el precipitado se filtró a través de embudo poroso con porosidad gruesa. El sólido se lavó con 2 L de 10:1 n-heptano : isopropanol . El sólido se secó a 40°C bajo vacio para proporcionar 550 g del producto crudo.

Ejemplo 24B: Tigeciclina La 9-cloroacetamidominociclina cruda (100 g) se agregó a temperatura ambiente (25-28°C) lentamente con agitación eficiente hasta 500 mL de t-butilamina en un matraz de fondo redondo de dos cuellos de 1L equipado con un agitador y termómetro. Yoduro de sodio (10 g) se agregó y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 7.5 h. La reacción se monitoreó por CLAR y cuando <2% material de partida restante, 100 mi del metanol se agregó y el solvente se despojó completamente en un evaporador rotatorio a 40°C. Al residuo se agregó 420 mi del metanol y 680 mL de agua. La solución se enfrió a 0-2°C y se ajustó hasta pH 7.2 con HCl concentrado (91 mi) para dar un volumen de la mezcla de reacción de 1300 mL. Esto se diluyó hasta 6.5 L con agua y el pH se ajustó hasta 4.0-4.2 con HCl concentrado (12 mL) . Amberchrom® lavado (CGlßlcd) (860 g) se agregó a la solución y la mezcla se agitó durante 30 min., se ajusta el pH hasta 4.0-4.2. La resina se filtró completamente y la solución acuosa consumida se probó por CLAR para el producto y se almacenó a 4-8°C. La resina se hizo mezcla espesa en 4.8 L de 20% metanol en agua (4 L metanol + 16 L agua) . La suspensión se agitó durante 15 min., se ajusta el pH 4.0-4.2. La resina se filtró completamente y el filtrado se probó por el producto. La extracción de la resina se repitió 3 veces más con 4.8 L de 20% metanol en agua. Todos los extractos de la resina y la solución acuosa consumida a partir de arriba se agruparon y el pH se ajustó hasta 7.0-7.2 con 30% hidróxido de amonio. La solución acuosa se extrajo con 6X2.8 L de cloruro de metileno, se ajustó el pH hasta 7.0-7.2 entre las extracciones. El extracto de cloruro de metileno agrupado se filtró a través de 250 g de sulfato de sodio anhidro, se concentró hasta 500 mL y se enfrió hasta 0-3°C. Después de que el producto se cristalizó, la mezcla espesa se agitó durante 1 h a 0-3°C. Los sólidos se filtraron, se lavaron con 2X 50 mL de cloruro de metileno frió y se secaron a 40°C bajo vacio para proporcionar 26 g del sólido.

Ejemplo 24C: Monoclorohidrato de Tigeciclina La Tigeciclina (49 g, 0.084 mole) se disolvió en porciones en 500 mL de agua por inyección con agitación. La solución se filtró a través de un embudo de porosidad media y se lavó con 420 mL de agua por inyección. La solución se enfrió a 0-2°C y 5.6 mL de HCl concentrado se agregó gota a gota mientras se mantuvo la temperatura entre 0-2°C. El pH inicial fue 8.0 y el pH final fue 6.0. La solución se liofilizó por congelar la muestra a -30°C y se liofilizó a - 15°C. La misma temperatura se elevó a 21°C durante 2 h. El sólido resultante (49.6 g) se agrupo y se almacenó a 4-5°C.

Análisis elemental: C (52.92% teoria, 51.75% encontrado); H (6.73% teoria, 6.75% encontrado); N (10.65% teoria, 10.32% encontrado); Cl (5.4% teoria, 5.5% encontrado).

Ejemplo comparativo 25 Monoclorohidrato de Tigeciclina Ejemplo 25A: 9-cloroacetamidominociclina El cloruro de metileno (325 mi) se enfrió a -5 hasta 0°C y clorohidrato de 9-Aminominociclina (100 g) se agregó en porciones durante 10 min. Trietilamina (77.6 g) se agregó mientras se mantuvo la temperatura a -10 hasta -5°C. Una solución de 97% anhídrido cloroacético (70 g) en cloruro de metileno (133 mi) se preparó por agitación a 20-25°C y se agregó a la mezcla de reacción durante 45 minutos mientras se mantuvo la temperatura de la mezcla a -10 hasta -2°C. El matraz que contiene la solución de anhídrido cloroacético se enjuagó con 31 mL cloruro de metileno y el enjuagado se agregó a la mezcla de reacción. Después de agitarse durante 30 min., la reacción se probó por CLAR para determinar si la reacción se completó. Bicarbonato de sodio acuoso (185 mL, 0.05M) se agregó durante 30 minutos mientras se mantuvo la temperatura de la mezcla de reacción a 0 hasta 5°C. Después de agitarse durante 10 min., las capas se separaron y sulfato de sodio (15 g) se agregó a la capa orgánica. La mezcla se agitó durante 15 minutos a 0 hasta 5°C y se filtró. La torta filtro resultante se enjuagó con cloruro de metileno (2 x 38 mL) y los filtrados combinados se transfirieron en 4.19 L de 10:1 heptano : isopropanol durante 20 min, seguido por un enjuague de 15 mL cloruro de metileno del matraz filtrado. La suspensión resultante se agitó durante 15 min a 20 hasta 25°C, luego se filtra. La torta filtro se enjuagó con 680 mL de 10:1 heptano: isopropanol y se secó durante 24 h a 37 hasta 40°C (5-10 mm Hg) . Pureza por % de área CLAR: 78.1.

Ejemplo 25B: Tigeciclina La 9-Cloroacetamidominociclina (100 g) se agregó con agitación vigorosa hasta 483 mL de t-butilamina a 0-10°C en un matraz de fondo redondo de multi-cuellos de 2L equipado conun agitador, termómetro y condensador. Yoduro de sodio (16 g) se agregó y la mezcla de reacción se agitó a 33-38°C durante 4 h. La mezcla de reacción se probó por CLAR para completarse, luego se enfrió hasta 5-10°C. Metanol (300 mL) se agregó durante 10 min., luego la solución de reacción se concentró por destilación (10-17°C, 68 mm Hg) hasta 350 mL . Una segunda porción del metanol (600 mL) se agregó al concentrado, y la mezcla se concentró por destilación hasta 350 mi. Metanol (46 mi) y agua fria (565 mi) se agregaron mientras se mantuvo la temperatura de reacción de bajo de 30°C. La solución se enfrió a 0-5°C y el pH se ajustó hasta 4.0 con 100 mi de HCl 20°Be. La solución se transfirió a un matraz de multi-cuellos de 5L con un enjuague de agua de 500 mi, luego se diluyó con 1 L de agua. Después de agitarse durante 1 h a 0-5°C, resina de Amberchrom® (CG161 ) lavada3 se agregó y la suspensión resultante se agitó durante 30 min. a 20-25°C. La suspensión se filtró y la torta húmeda resultante se agregó a 340 mL de una solución 5:1 de agua :metanol . El filtrado se agrupo a parte. Después de agitarse durante 30 min. a 20-25°C, la suspensión se filtró y la torta húmeda resultante se agregó a una segunda porción de 340 mL de una solución 5:1 agua: metanol. Este segundo filtrado se agrupo a parte. Esta suspensión se filtró y la torta húmeda resultante se agregó a una tercera porción de 340 mL de una solución 5:1 de agua ¡metanol . Después de filtrarse, el tercer filtrado se combinó con el primero y segundo filtrado y se enfrió a 0-5°C. El pH se ajustó hasta 7.0 con 11 mL de 28% hidróxido de amonio. La solución se agitó a 0-5°C durante 16 h, ajusfando el pH hasta 7.0 como sea necesario, y a 22-25°C durante 1 h, ajusfando el pH hasta 7.0 como sea necesario. La solución acuosa se extrajo con cloruro de metileno (5 X 980 L) , ajusfando el pH hasta 7.0 para cada extracción. Las fases orgánicas combinadas se transfirieron a un embudo de separación y la capa acuosa se separó. La capa orgánica se combinó con 100 g sulfato de sodio y se agitó durante 1 h a 20-25°C. La suspensión se filtró a través de una almohadilla y la torta filtro se enjuagó con 250 mL de cloruro de metileno. El filtrado se concentró por destilación (-5 hasta 5°C, 150 mm Hg) hasta 150 mL, luego se enfrió hasta 0-5°C durante 1 h. La suspensión resultante se filtró y la torta filtro se lavó con cloruro de metileno a 0-5°C (2 x 30 mL) . La torta húmeda se agitó en cloruro de metileno (335 mL) y metanol (37 mL) a 26-32°C hasta que una solución se obtiene. La solución se filtró a través de celite, se enjuagó el celite con cloruro de metileno (2 x 15 mL) , y se concentró por destilación (-5 hasta 5°C, 150 mm Hg) hasta 54 mL . El procedimiento de concentración se repitió dos veces, primero agregando 335 mi cloruro de metileno y reducir el volumen hasta 55-70 mL, luego se agregó 254 mL cloruro de metileno y se redujo el volumen hasta 90-105 mL . La suspensión resultante se agitó durante 1 h a 0-5°C, luego se filtró y se lavó con cloruro de metileno a -10°C (2 x 25 mL) . El sólido se secó a 35-40°C durante 16 h, luego a 45-50°C durante 27 h. Pureza por % de área CLAR: 97.7%, Epimero C-4 1.23%. 3 La resina Amberchrom® (CG161M) lavada se preparó al agregar 183 g del filtrado, la resina Amberchrom® (CG161M) homogenizada hasta 340 mL de una solución 5:1 de agua ¡metanol . Después de agitarse durante 1 h a 22-25°C, la suspensión se filtró para dar una torta filtro húmeda que se secó por succión. La torta húmeda se agitó en 340 mL de una solución 5:1 de agua ¡metanol durante 1 hr a 20°C, luego se filtró. El proceso se repitió una vez más para proporcionar la resina lavada.

PURIFICACIÓN Ejemplo 1 Tigeciclina Una me zcla de t igeci cl ina cruda ( 110 . 0 g ) y acetato de metilo (1.65 L) se agitó y se calentó a 30-35°C y metanol (550 mL) se agregó durante 15 min. Después de mantenerse a 30-35°C, la solución caliente se filtró sobre tierra infusoria (36 g) y la torta filtro se lavó con acetato de metilo (2 x 106 g) . El filtrado se concentró por destilación (20°C, 150 mm Hg) hasta 550 mL . Acetato de metilo (1.1 L) se agregó y la suspensión resultante se concentró por destilación (20°C, 150 mm Hg) hasta 550 mL . Esta etapa se repitió, luego el concentrado se enfrió a 0-4°C durante 1 h. El sólido resultante se colectó por filtración y se lavó con 0-5°C acetato de metilo (2 x 150 mL) . El sólido se secó bajo vacio (65- 70°C, 10 mm Hg) durante 100 h hasta proporcionar 98.0 g (89.1% rendimiento) del producto deseado. Pureza por % de área CLAR: 98.8% y Epimero C-4 0.55%.

Ejemplo 2 Tigeciclina La 9-Aminominocilina»HCl (140.0 g) se agregó en porciones a 840 mL de agua a 0-4°C. El clorohidrato de cloruro de t-Butilglicina (154 g) se agregó durante 15 min con buena agitación mientras se mantuvo la temperatura a 0-4°C. La solución se agitó durante 1-3 h.

El pH de la mezcla se ajustó hasta 7.2+0.2 con 30% hidróxido de amonio mientras se mantuvo la temperatura a 0-10°C. Metanol (930 mL) y 840 mL de cloruro de metileno se agregaron a la solución, la cual se agitó durante 1 h a 20-25°C. Las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con 3X600 mL de cloruro de metileno, y las fases orgánicas se combinaron, se secaron y se concentraron hasta un volumen de aproximadamente 500 mL . La suspensión resultante se enfrió a 0-2°C durante 1 h. El sólido se filtró y se secó para dar 120 g del producto (75% rendimiento) . Pureza por % de área CLAR: 98%, Epimero C-4 0.1 %. EM (FAB): m/z 586 (M+H); 585 (M+) .

Ejemplo 3 Tigeciclina La Tigeciclina (15.00 g) preparada como se describe en el ejemplo 2 se agregó a 113 mL de acetona y 113 mL del metanol. La suspensión se agitó a 20-25°C durante 1 h, luego se enfrió a 0-2°C. Después de agitarse durante 1 h, la suspensión se filtró y se lavó para dar 12.55 g del producto (83.7% rendimiento). Pureza por % de área CLAR >99 %, Epimero C-4 0.4%.

Ejemplo 4 Tigeciclina La Tigeciclina (105 g) preparada como se describe en el ejemplo 2 se agregó a 800 mL de acetona y 800 mL del metanol.

La suspensión se agitó y se calentó a 30-35°C durante 15 min, luego se enfrió a 20-25°C. Después de mantenerse a 20-25°C durante 1 h, la suspensión se enfrió a 0-4 °C y se mantuvo durante 1 h. El sólido se filtró, se lavó y se secó para dar 83 g del producto (79% rendimiento) . Pureza por % de área CLAR: >99 %, Epimero C-4: 0.4%.

Ejemplo 5 Tigeciclina A un matraz de multi-cuellos de 1L, equipado con un agitador mecánico y protección de nitrógeno, se agregó 94.3 g de la tigeciclina cruda húmeda,4 metanol (305 g, 386 mL) , y acetona (291 g, 368 mL) . La mezcla se agitó a 16-23°C durante 4 horas. La mezcla espesa se filtró en un embudo Büchner de 9 cm con papel #1 Whatman. La torta húmeda se lavó con metanol (87 g, 110 mL) a 20-25°C. La torta húmeda se secó con succión y protección de nitrógeno durante 0.1 h. La torta húmeda (75.3 g) se volvió a transferir a un matraz de multi-cuellos de 1L y una solución de metanol (233 g, 295 mL) y acetona (244 g, 309 mL) se agregó. La mezcla espesa se agitó a 15-20°C durante 5.5 horas. La mezcla espesa se filtró en un embudo Büchner de 9 cm con un papel #1 Whatman. La torta húmeda se lavó con metanol (70 g, 88 mL) a 18-24°C. La torta húmeda se secó con succión y protección de nitrógeno durante 0.1 h. La torta húmeda (59.0 g) se volvió a transferir al matraz de multi-cuellos de 1L y una solución del metanol (195 g, 247 mL) y acetona (187 g, 236 mL) se agregó. La mezcla espesa se agitó a 18-24°C durante 3 horas. La mezcla espesa se filtró en un embudo Büchner de 9 cm con papel #1 Whatman. La torta húmeda se lavó con metanol (55 g, 70 mL) a 20-25°C. La torta húmeda se secó con succión y protección de nitrógeno durante 0.1 h. La torta húmeda (48.9 g) se mostró por análisis (CLAR) de cromatografia liquida de alta presión (impurezas totales = 0.62%, minociclina = 0.17%, Epimero C-4 = 0.35%, más grande que otra impureza sencilla = 0.05%). 4La tigeciclina cruda se preparó a partir de la minociclina*HCl obtenida del distribuidor Interchem. La torta húmeda (48.9 g) se transfirió a un matraz de multi-cuellos de 2L con una destilación al vacio colocada. A la torta húmeda se agregó una solución premezclada del metanol (90 g, 114 mL) y diclorometano (1 ,023 g, 772 mL) . La mezcla espesa se agitó a 15-20°C para obtener una solución roja. La solución se destiló hasta 160 mL a 13-17°C con un vacio de 330 mmHg durante 0.8 h para proporcionar una mezcla espesa anaranjada. Al matraz de 2L se agregó diclorometano (818 g, 617 mL) y la mezcla espesa se volvió a destilar a 183mL a 6-13°C con un vacio de 817 mmHg durante 0.7 h. Diclorometano (635 g, 479 mL) se agregó y la mezcla espesa se volvió a destilar a 183 mL a 6-7°C con un vacio de 817 mmHg durante 0.6 horas. La mezcla espesa anaranjada resultante se enfrió a 0-5°C y se mantuvo a 0-5°C, con agitación, durante 2 horas. La mezcla espesa se filtró en un embudo Buchner de 7 cm con un papel #1 Whatman. La torta húmeda se lavó con dos porciones 69 g (52 mL) de diclorometano a 0°C. La torta húmeda se secó con succión, bajo protección de nitrógeno, durante 5 min. Una muestra de la torta húmeda (48.7 g) se sometió por análisis CLAR (impurezas totales = 0.49%, minociclina = 0.12%, Epimero C-4 = 0.32%, otras impurezas = 0%.) La torta húmeda luego se secó a 25°C con un vacio de < 10 mmHg durante 57.5 horas hasta un nivel de diclorometano de 2.2%, dio 32.3 g de tigeciclina (34.2% rendimiento). En procedimiento se llevo a cabo usando la Tigeciclina cruda que se prepara de la Minociclina*HCl a partir de los distribuidores Hoviona y Nippon Kayaku. Una comparación de las impurezas presentes en la Tigecilina obtenida de los procesos de arriba usando cada fuente de los materiales de partida Minociclina*HCl se dan en las tablas 1 y 2. Estas tablas indican que los procesos proporcionan un buen rendimiento de la Tigeciclina con un bajo nivel de impurezas.

TABLA 1 TABLA 2 1. En una base anhidra, el solvente libre. 2. excluyendo el epimero. 3. La impureza sencilla más grande (LSI) excluyendo el Epimero C-4 y Minociclina. Tiempo de retención relativo (TRR) con relación a GAR-936. 4. brl: limite reportado a continuación, 0.05% por CLAR. 5. brl de 0.0005%. 6. brl de 0.0003%. 7. brl de 0.0030% (muestra sencilla). 8. brl de 2 ppm. 9. brl de 63 ppm. 10. Corregido por la concentraciion del material de partida y producto.

Ejemplo 6 Tigeciclina La torta filtro húmeda de Tigeciclina cruda (72.5 kg , 38.2 kg peso seco5) se agitó y se hizo mezcla espesa en 191 kg (5 partes) acetona y 191 kg (5 partes) metanol. La mezcla espesa luego se calentó a 30 hasta 36°C, inmediatamente se enfrió a 19 hasta 25°C, y se mantuvo a 19 hasta 25°C durante dos horas. La mezcla espesa luego se enfrió a 0 hasta 6°C, y se mantuvo a 0 hasta 6°C durante 1 hora. Después de filtrarse y lavarse con 2 x 34 kg (0.9 partes) acetona/metanol (1 :1), la torta húmeda luego se probó por minociclina (0.23%), 9-aminominociclina (0%) , y para la impureza sencilla más grande del Epimero C-4 (0.09%). El contenido del Epimero C-4 fue 1.12%. Basado en los datos analíticos, una mezcla espesa resultante adicional no se llevo a cabo. A la torta filtro húmeda se agregó 440 kg (11.5 partes) de cloruro de metileno y 39.3 kg (1.0 partes) metanol y la mezcla se calentó a 30 hasta 36°C para disolverse. La solución del lote se filtró a través de filtros que clarifican 0.2-micrones y que reduce el pirógeno 0.3-micrones . Las tres destilaciones al vacio luego se llevaron a cabo para remover el metanol, con cajas de cloruro de metileno (440 kg y 339 kg, respectivamente) antes de la segunda y tercera destilación. El nivel del residuo de metanol fue 0.3%. El lote se enfrió a 0 hasta 6°C y se agitó durante 1 hora. El lote se filtró, se lavó con 2 x 42.1 kg (1.1 partes) de (-13 hasta -7°C) cloruro de metileno pre-enfriado y se secó a no más 60°C hasta una perdida en el secado de <2.5%. El material se molió para dar 22.3 kg de Tigeciclina (58% rendimiento). Pureza por % de área CLAR: 98.2%, Epimero C-4: 1.55%, Minociclina 0.1%, 9-aminominociclina 0%, otra impureza más grande sencilla = 0.08%.

Ejemplo 7 Tigeciclina La torta filtro húmeda de la Tigeciclina cruda (103.5 kg, 53.4 kg peso seco6) se agitó y se hizo mezcla espesa en 191 kg (5.1 partes) acetona y 191 kg (5.1 partes) metanol. 5Forma de peso seco calculado pérdida en los datos de secado 6Forma de peso seco calculado pérdida en los datos de secado La mezcla espesa luego se calentó hasta 30 hasta 36°C, inmediatamente se enfrió a 19 hasta 25°C, y se mantuvo a 19 hasta 25°C durante dos horas. La mezcla espesa luego se enfrió a 0 hasta 6°C, y se mantuvo a 0 hasta 6°C durante 1 hora. Después de filtrarse y lavarse con 2 x 34 kg (0.9 partes) acetona/metanol (1:1), la torta húmeda luego se probó por minociclina (0.12%), 9-aminominociclina (0%), y para la impureza sencilla más grande diferente del Epimero C-4 (0.13%). El contenido Epimero C-4 fue 0.37%. Basado en los datos analíticos, una mezcla espesa adicional no se llevo a cabo. A la torta húmeda se agregó 440 kg (11.7 partes) de cloruro de metileno y 55.7 kg (1.0 partes) metanol y la mezcla se calentó a 30 hasta 36°C para disolverse. La solución del lote se filtró a través de filtros que clarifican 0.2-micrones y que reduce el pirógeno 0.3-micrones . Las tres destilaciones al vacio luego se llevaron a cabo para remover el metanol, con cajas de cloruro de metileno (624 kg y 481 kg, respectivamente) antes de la segunda y tercera destilaciones. El nivel de los residuos de metanol fue 1.07%. El lote se enfrió a 0 hasta 6°C y se agitó durante 1 hora. El lote se filtró, se lavó con 3 x 59.7 kg (1.1 partes cada uno) de (-13 hasta -7°C) cloruro de metileno pre-enfriado y se secó a no más de 60°C a una perdida en el secado de <2.5%. El material se molió para dar 31.7 kg de Tigeciclina como una primera gota. Una segunda gota consiste del producto residual en el cristalizador proporcionando 2.5 kg adicionales. Ambas gotas representa un 64% rendimiento de la Tigeciclina cruda.

Aunque la invención se describe para discusión de las modalidades de la invención y los ejemplos no limitativos de los mismos, alguien de habilidad en la técnica puede, al leer las especificación y las reivindicaciones, vislumbrar otras modalidades y variaciones las cuales también están dentro del alcance de la invención y por lo tanto el alcance de la invención deberá solamente construirse y definirse por el alcance de las reivindicaciones anexas. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones . 1. Un método para la purificación de al menos un compuesto de Formula 1;
Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque Ri y R2 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, alquilo (Ci-Cß) de cadena lineal o ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forman un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, y alquilo (C?~C ) de cadena lineal o ramificada; y n está en el rango desde 1 -4, que comprende: A) combinar el al menos un compuesto de Fórmula 1 con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar, B) mezclar por al menos un periodo de tiempo en el intervalo desde 15 minutos a 2 horas a una temperatura en el intervalo desde 0 °C a 40 °C para dar una primera mezcla, y C) obtener el al menos un compuesto de Fórmula 1. 2. Un método para la purificación de al menos un compuesto de Fórmula 1:
Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, alquilo (Ci-Ce) de cadena lineal o ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forman un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, y alquilo (Cj.-C ) de cadena lineal o ramificada; y n está en el rango desde 1-4, caracterizado porque comprende: A) combinar el al menos un compuesto de Fórmula 1 con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar, B) mezclar por un periodo de tiempo a una temperatura en el intervalo desde 30°C a 40°C para dar una primera mezcla, C) enfriar la primera mezcla a una temperatura en el intervalo desde 15 °C a 25 °C y permitir que la mezcla repose sin mezclar por un segundo periodo de tiempo, D) enfriar la primera mezcla a una temperatura en el intervalo desde 0 °C a 6 °C y permitir que la mezcla repose sin mezclar por un tercer periodo de tiempo, y E) obtener el al menos un compuesto de Fórmula 1. 3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque n es 1, Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, y R3 y R son cada uno metilo.
4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque n es 1, Ri y R2, junto con N, forman un grupo pirrolidinilo, y R3 y R4 son cada uno metilo.
5. El método de conformidad con la reivindicación 1, 3, o 4 caracterizado porque el al menos un compuesto de Fórmula 1 que se combina con el al menos un solvente aprótico polar y el al menos un solvente prótico polar se proporciona en una forma elegida de un sólido, una solución espesa, una suspensión, y una solución.
6. El método de conformidad con la reivindicación 1, 3, 4 o 5, caracterizado porque el al menos un compuesto de Fórmula 1 obtenido del método contiene menos del 1% del epimero C-4 del compuesto de Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
7. El método de conformidad con la reivindicación 1, 3, 4, 5 o 6, caracterizado porque el al menos un solvente aprótico polar se escoge de acetona, 1, 2-dicloroetano, acetato de metilo, metil etil cetona, metil isobutil cetona, cloruro de metileno, y acetato de etilo.
8. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el al menos un solvente aprótico polar se escoge de acetona y cloruro de metileno.
9. El método de conformidad con la reivindicación 1, 3, 4, 5, 6, 7 u 8, caracterizado porque el al menos un solvente prótico polar se escoge de metanol, etanol, isopropanol, y t-butanol .
10. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el al menos un solvente prótico polar es metanol .
11. El método de conformidad con la reivindicación 1, 3, 4, 5, o 6, caracterizado porque el al menos un solvente aprótico polar comprende acetona y al menos un solvente prótico polar comprende metanol.
12. El método de conformidad con la reivindicación 1, 3, 4, 5, o 6, caracterizado porque el al menos un solvente aprótico polar comprende cloruro de metileno y al menos un solvente prótico polar comprende metanol.
13. El método de conformidad con la reivindicación 1, 3, 4, 5, o 6 caracterizado porque el al menos un solvente aprótico polar comprende acetato de metilo y al menos un solvente prótico polar comprende metanol.
14. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 13, caracterizado porque el compuesto de Fórmula 1 se combina con volúmenes iguales de el al menos un solvente aprótico polar y el al menos un solvente prótico polar.
15. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 14, caracterizado porque la primera mezcla se mezcla por un primer periodo de tiempo en el intervalo desde 30 minutos a 2 horas a una temperatura en el intervalo desde 15°C a 25°C, luego por un segundo periodo de tiempo en el intervalo desde 30 minutos a 2 horas a una temperatura en el intervalo desde 0°C a 2°C.
16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el primer periodo de tiempo y el segundo periodo de tiempo son cada uno de 1 hora.
17. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 14, caracterizado porque el al menos un periodo de tiempo está en el rango desde 30 minutos a 2 horas y la temperatura está en el rango desde 15°C a 25°C, y que comprende además filtrar la primera mezcla después del mezclado para obtener un sólido.
18. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque comprende además las etapas de A) combinar el sólido con volúmenes iguales de al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar por un primer periodo de tiempo en el intervalo desde 30 minutos a 2 horas a una temperatura en el intervalo desde 15°C a 25°C, y B) filtrar para obtener un segundo sólido.
19. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque A y B se repiten de dos a quince veces.
20. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 14, caracterizado porque además comprende obtener un sólido de la primera mezcla, y combinar el sólido con al menos un solvente prótico polar y al menos un solvente aprótico polar para obtener una combinación.
21. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque la combinación comprende metanol y cloruro de metileno en una relación en volumen en el intervalo desde 1:5 a 1:15 de metanol : cloruro de metileno.
22. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque comprende además mezclar la segunda mezcla a una temperatura en el intervalo desde 30°C a 36°C y luego filtrar para obtener una solución.
23. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque comprende además reducir la concentración del solvente prótico polar en la solución a un nivel debajo de 5%, y mezclar a una temperatura en el intervalo desde 0°C a 6°C por un periodo de tiempo en el intervalo desde 30 minutos a 2 horas previo al filtrado.
24. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el periodo de tiempo está en el rango desde 10 a 20 minutos.
25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el periodo de tiempo es de 15 minutos.
26. El método de conformidad con la reivindicación 2, 24 o 25, caracterizado porque el segundo periodo de tiempo está en el intervalo desde 30 minutos a 3 horas.
27. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el segundo periodo de tiempo está en el intervalo desde 1 hora a 2 horas.
28. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 2 y 24 a 27, caracterizado porque el tercer periodo de tiempo está en el rango desde 30 minutos a 2 horas .
29. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el tercer periodo de tiempo es 1 hora.
30. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto de Fórmula 1 es [4S-(4a, 12aa) ] -4, 7-Bis (dimetilamino) -9- [ [ (t-butiloamino) acetil] amino] - 1,4, 4a, 5, 5a, 6, 11, 12a-octah?dro-3, 10, 12, 12a-tetrahidroxi-l, ll-dioxo-2-naftaceno-carboxamida o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
31. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto de Fórmula 1 es [4S-(4 , 12aa) ] -4, 7-Bis (dimetilamino) -9- [ [ (pirrolidinil) acetil] amino] -1,4, 4a, 5, 5a, 6, 11, 12a-octahidro-3, 10, 12, 12a-tetrahidroxi-l, 11 -dioxo-2-naftaceno-carboxamida o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
32. Un método para la purificación de tigeciclina: tigeciclina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque comprende: A) combinar Tigeciclina con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar, B) mezclar por al menos un periodo de tiempo en el intervalo desde 15 minutos a 2 horas a una temperatura en el intervalo desde 0°C a 40°C para dar una primera mezcla, y C) obtener tigeciclina.
33. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la tigeciclina que se combina con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar se proporciona en una forma escogida de un sólido, una solución espesa, una suspensión, y una solución.
34. El método de conformidad con la reivindicación 32 o 33, caracterizado porque la tigeciclina obtenida del método contiene menos de 1% del epimero C-4 del compuesto de Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
35. El método de conformidad con la reivindicación 32, 33 o 34, caracterizado porque el al menos un solvente aprótico polar comprende acetona y al menos un solvente prótico polar comprende metanol.
36. El método de conformidad con la reivindicación 32, 33 o 34, caracterizado porque el al menos un solvente aprótico polar comprende cloruro de metileno y al menos un solvente prótico polar comprende metanol.
37. Un compuesto caracterizado porque se prepara por el método de conformidad con la reivindicación 1.
38. Una composición caracterizada porque comprende al menos un compuesto de conformidad con la reivindicación 1.
39. La composición de conformidad con la reivindicación 38, caracterizada porque comprende además al menos un portador farmacéuticamente aceptable.
40. La composición de conformidad con la reivindicación 38, caracterizada porque el al menos un compuesto de la reivindicación 1 es al menos un compuesto de Fórmula 1: Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde n es 1 , Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, y R3 y R4 son cada uno metilo.
41. Un método para la preparación de al menos un compuesto de Fórmula 1: Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, alquilo (Ci-Cß) de cadena lineal o ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forman un heterociclo; R es -NR3R , donde R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, y alquilo (C?~C ) de cadena lineal o ramificada; y n está en el rango desde 1-4, caracterizado porque comprende: A) reaccionar al menos un agente de nitración con al menos un compuesto de Fórmula 2 : Fórmula 2 o una sal del mismo, para preparar una solución espesa de una mezcla de reacción que comprende al menos un compuesto de Fórmula 3: Fórmula 3 o una sal del mismo, B) combinar al menos un agente reductor con la solución espesa de una mezcla de reacción para preparar al menos un compuesto de Fórmula 4, 4 Fórmula 4 o una sal del mismo, C) reaccionar el al menos un compuesto de Fórmula 4 con al menos un compuesto de aminoacilo en un medio de reacción elegido de un medio acuoso, y al menos un solvente básico en ausencia de una base de reactivo, para obtener al menos un compuesto de Fórmula 1, D) combinar el al menos un compuesto de Fórmula 1 con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar, E) mezclar por al menos un periodo de tiempo en el intervalo desde 15 minutos a 2 horas a una temperatura en el intervalo desde 0°C a 40 °C para dar una primera mezcla, y F) obtener al menos un compuesto de Fórmula 1.
42. Un método para la preparación de al menos un compuesto de Fórmula 1: Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque Ri y R se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, alquilo (Ci-Ce) de cadena lineal o ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forman un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, y alquilo (C?-C4) de cadena lineal o ramificada; y n está en el rango desde 1-4, que comprende: A) combinar al menos un agente reductor con una solución espesa de una mezcla de reacción que comprende al menos un compuesto de Fórmula 3: 3 Fórmula 3 o una sal del mismo, para preparar al menos un compuesto de Fórmula 4, o una sal del mismo, B) reaccionar el al menos un compuesto de Fórmula 4 con al menos un compuesto de aminoacilo en un medio de reacción elegido de un medio acuoso, y al menos un solvente básico en ausencia de una base de reactivos, para obtener el compuesto de Fórmula 1, C) combinar el al menos un compuesto de Fórmula 1 con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar, D) mezclar por al menos un periodo de tiempo en el intervalo desde 15 minutos a 2 horas a una temperatura en el intervalo desde 0°C a 40°C para dar una primera mezcla, y E) obtener al menos un compuesto de Fórmula 1.
43. Un método para la preparación de al menos un compuesto Fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ri y R2 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, alquilo (C?-C6) de cadena lineal o ramificada, y cicloalquilo, o Ri y R2, junto con N, forman un heterociclo; R es -NR3R4, donde R3 y R se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, y alquilo (C?-C ) de cadena lineal o ramificada; y n está en el rango desde 1-4, caracterizado porque comprende: A) reaccionar al menos un compuesto de Fórmula 4 : Fórmula 4 o una sal del mismo, con al menos un compuesto de aminoacilo en un medio de reacción escogido de un medio acuoso, y al menos un solvente básico en la ausencia de una base de reactivo para obtener el compuesto de Fórmula 1 , B) combinar el al menos un compuesto de Fórmula 1 con al menos un solvente aprótico polar y al menos un solvente prótico polar, C) mezclar por al menos un periodo de tiempo en el intervalo desde 15 minutos a 2 horas a una temperatura en el intervalo desde 0°C a 40°C para dar una primera mezcla, y D) obtener al menos un compuesto de Fórmula 1.
44. El método de conformidad con la reivindicación 41, caracterizado porque n es 1, Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, y R3 y R4 son cada uno metilo.
45. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque n es 1, Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, y R3 y R4 son cada uno metilo.
46. El método de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque n es 1, Ri es hidrógeno, R2 es t-butilo, y R3 y R4 son cada uno metilo.
47. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el compuesto de Fórmula 1 es clorohidrato de [4S- (4a, 12aa) ] -4 , 7-Bis (dimetilamino) -9- [[ (t-butiloamino) acetil] amino] -1,4, 4a, 5, 5a, 6, 11, 12a-octahidro-3, 10, 12, 12a-tetrahidroxi-l, ll-dioxo-2-naftaceno-carboxamida .
48. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la tigeciclina es clorohidrato de tigeciclina .
49. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 2 y 24 a 29, caracterizado porque el al menos un solvente aprótico polar se escoge de acetona, 1,2-dicloroetano, acetato de metilo, metil etil cetona, metil isobutil cetona, cloruro de metileno, y acetato de etilo.
50. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 2, 24 a 29 y 49, caracterizado porque el al menos un solvente prótico polar se escoge de metanol, etanol, isopropanol, y t-butanol.