USO DE CALCITONINA COMO TERAPIA DE TRATAMIENTO COMBINADO PARA EL MANEJO DE CONDICIONES DE ENFERMEDAD INFLAMATORIA
CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere al uso de calcitonina como terapia de tratamiento combinado para el manejo de patologías inflamatorias y artritis. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los fármacos glucocorticoides (GCs) son potentes agentes anti-inflamatorios e inmunosupresores que se utilizan terapéuticamente en diversas patologías inflamatorias. La terapia a largo plazo con GCs frecuentemente es necesaria para controlar los síntomas de artritis reumatoide y otras condiciones reumáticas. Evidencia reciente demuestra que los GCs pueden tener un efecto modificador de la enfermedad además de sus acciones anti-inflamatorias bien documentadas. Sin embargo, el manejo terapéutico de las patologías a largo plazo con GC se une frecuentemente a una serie de efectos secundarios no deseados, incluyendo el eje hipotálamo-pituitaria-adrenal, el sistema cardiovascular así como también la grasa y el metabolismo óseo. En particular, la osteoporosis secundaria es uno de los problemas principales asociados con la terapia GC a largo plazo en pacientes con artritis reumatoide. Diversos mecanismos se implican en la pérdida ósea inducida por GC incluyendo los efectos directos
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sobre las células de tejido óseo y la modulación de citocina y la producción del factor de crecimiento. La calcitonina (CT o Ct) es una hormona peptídica mejor conocida por su actividad anti-osteoclástica y es un miembro de una familia de proteínas con homólogos identificados en la mayoría de las especies estudiadas hasta la fecha. Las calcitoninas (Cts) son hormonas peptídicas de 32 residuos de aminoácidos que se han conocido principalmente por su efecto hipocalcémico y la inhibición de resorción ósea. Las calcitoninas se utilizan terapéuticamente para el tratamiento de osteoporosis y otras enfermedades relacionadas a trastornos óseos. Se ha demostrado que la Ct de salmón
(sCt) tiene la actividad farmacéutica más grande en el tratamiento de condiciones de enfermedad humana, mientras que la hormona humana (hCt) tiene una potencia fuertemente reducida cuando se administra en una preparación terapéutica. Como resultado, la calcitonina de salmón (sCt) es la Ct principal a aplicarse terapéuticamente hasta la fecha. Sin embargo, existe solamente un 50% de homología de secuencia entre sCt y hCt, la cual es la causa para reacciones inmunogénicas en humanos cuando se tratan con sCt . El estado actual de la terapia de artritis reumatoide se ha mejorado dramáticamente por el uso de terapias biológicas más recientes que han reducido la dependencia de esteroides y agentes no esteroidales. Una de
las más ampliamente utilizadas de estas terapias, por ejemplo, es Enbrel™, una construcción del receptor TNF-a acoplado a la inmunoglobulina. A pesar de ser bastante efectivas las terapias biológicas más recientes no han suprimido completamente sino únicamente modificado de manera importante los síntomas. Además estos nuevos fármacos son muy caros. Por estas razones los glucocorticoides (GC) todavía se utilizan ampliamente como potentes agentes anti-inflamatorios e inmunosupresores en todas las formas de inflamación crónica, incluyendo artritis reumatoide. Sin embargo, según se establece arriba, las terapias a largo plazo con GC se asocian con osteoporosis secundaria, de allí, la acción anti-inflamatoria benéfica de GC puede deteriorarse por un efecto agravante en la erosión ósea.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN De acuerdo a un primer aspecto de la invención, se proporciona el uso de una calcitonina en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o condición inflamatoria . La calcitonina puede ser de cualquier fuente conveniente, incluyendo tanto formas naturales aisladas de la hormona o sintéticas, e.g., de una fuente recombinante. El péptido de calcitonina puede seleccionarse del grupo que
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consiste de calcitonina de humano, salmón, porcino, bovino, anguila o pollo o un derivado o un fragmento de las mismas. Los péptidos de calcitonina incluyen pero no se limitan a los péptidos de las siguientes fuentes:
ys-SCT-As-^ u^er-Thr s?W A -Fhc-S^^ly.Met-Gly-Pe,Gly-P -G3E-Thr«Po (Porcino)
Arg-I^e-Sßr-Oly'Ntet-GIy-Ptie-ory-Pro-GI'iiTIitvPm (Bovino)
Th-r-T^-I^o-Ai -T r-Aap-Tl?r-Gly.S&r-Ob'-Th-«-Pra (Salmón)
Tfií.Tyr-Pr^Arg-Te^?sp-Vál-Gly-AIa-Gly-Tlir-Pío (Anguila)
Tl^?l-^P? G]??-Tl?r-A!ß Bu-CI-Val-GlyAI*.Ph) (Humano)
Cys-A!la-$CT-I^.Ser-lT3r-Cys?>*! ^^ Tr-Tyr-Pp .fg.Tlir?sp-Val-Gly-AIa.Gly-T --Pro (Pollo)
Las calcitoninas utilizadas de acuerdo a la presente invención también incluyen variantes, fragmentos y/o derivados de un péptido de calcitonina. Un ejemplo de una variante de la presente invención es una proteína de fusión que comprende un péptido de calcitonina según se define anteriormente, aparte de la sustitución de uno o más aminoácidos con uno u otros más
aminoácidos. El experto está conciente de que diversos aminoácidos tienen propiedades similares. Uno o más de tales aminoácidos de una sustancia pueden sustituirse frecuentemente por uno u otros más de tales aminoácidos sin eliminar una actividad deseada de esa sustancia. De esta manera, los aminoácidos glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina frecuentemente pueden sustituirse por otro (aminoácidos que tienen cadenas laterales alifáticas). De estas posibles sustituciones se prefiere que la glicina y la alanina se utilicen para sustituirse por otro (ya que tienen cadenas laterales relativamente cortas) y que la valina, leucina e isoleucina se utilicen para sustituirse por otros (ya que tienen cadenas laterales alifáticas más grandes que son hidrofóbicas) . Otros aminoácidos que frecuentemente pueden sustituirse por otros incluyen: fenilalanina, tirosina y triptofan (aminoácidos que tienen cadenas laterales aromáticas); lisina, arginina e histidina (aminoácidos que tienen cadenas laterales básicas); aspartate y glutamato (aminoácidos que tienen cadenas laterales acídicas) ; asparagina y glutamina (aminoácidos que tienen cadenas laterales de amida) ; y cisteína y metionina (aminoácidos que tienen cadenas laterales que contienen azufre) . Las sustituciones de esta naturaleza frecuentemente se refieren en cuanto a sustituciones de aminoácido
"conservadoras" o "semi-conservadoras" . Las inserciones o supresiones de aminoácido también pueden hacerse en relación a la secuencia aminoácida para la proteína de fusión referida anteriormente. De esta manera, por ejemplo, los aminoácidos que no tienen un efecto sustancial en la actividad del polipéptido, o al menos que no eliminan tal actividad, pueden suprimirse. Tales supresiones pueden ser ventajosas ya que la longitud global y el peso molecular de un polipéptido puede reducirse mientras que todavía se retiene la actividad. Esto puede permitir que la cantidad de polipéptido requerida para un propósito particular se reduzca-por ejemplo, pueden reducirse los niveles de dosificación. Las inserciones de aminoácido en relación a la secuencia de la proteína de fusión anterior también pueden hacerse. Esto puede hacerse para alterar las propiedades de una sustancia de la presente invención (e.g., para ayudar en la identificación, purificación o expresión, según se explica anteriormente en relación a las proteínas de fusión) . Los cambios de aminoácido en relación a la secuencia anteriormente dada pueden hacerse utilizando cualquier técnica adecuada, e.g., al utilizar mutagénesis dirigida por sitio o síntesis de estado sólido. Debería apreciarse que las sustituciones o inserciones de aminoácidos dentro del alcance de la presente
invención pueden hacerse utilizando aminoácidos que se presentan naturalmente o que no se presentan naturalmente. Sea que o sea que no se utilicen aminoácidos sintéticos o naturales, se prefiere que solamente se presenten los L-aminoácidos. Algunas sustituciones preferidas pueden ser para residuos de aminoácido acídico y/o básico con residuos de aminoácido neutral. Otras sustituciones pueden ser el reemplazo del residuo de terminal C con homoserina (Hse) . Los ejemplos de derivados incluyen pero no se limitan a la formación de enlaces de disulfuro intramolecular entre residuos de cisteína en el péptido u otras modificaciones a fin de formar una estructura en forma anular o cíclica. Otras modificaciones post-translacionales también pueden hacerse tales como la fosforilación, glicosilación, amidación de terminal N etc. La glicosilación puede ser la adición de un residuo de azúcar tal como residuo N-acetil-D-glucosamina . Los fragmentos del péptido de calcitonina incluyen péptidos de calcitonina que se truncan por supresión de los residuos de aminoácido 1 a 9. Sin embargo, puede preferirse que los residuos 17 a 21 al menos se presenten en el fragmento de calcitonina. Las secuencias de los fragmentos truncados por supresión de residuos 1 a 9 son como sigue:
Gia-Thi-Pto (Porcino)
Ser.Ala-Tyr-T -Lys-As -Lcu-Asn-AKn-Tyr-His-.Afg-Pte-Se?-€.Sy-Met-Gly-PlKi-GJy-P^ CHu-Ttir-Pro (Bovino)
Giy4_ys u-Sßr-GJí s]u*Leu íí£-Ly5- Gly-Thr-Pra (Salmón)
Qí -L - Le^SCT-GlprCrlu-Leu-Hi^^ Gíy.Thr-Pro (Anguila)
Gty«Thr-1 ?-Tlar .lB-Asp-Phe-A^ Gty-Aía-Pro (Humano)
Gly-Lys-Le?*«Sef-Gl?i"Glu-l-e?^His-Lys-Lcu^n-T^ Gly-Thr-ft© (Pollo)
Los péptidos preferidos para utilizarse de acuerdo a la presente invención son calcitonina de salmón (sCt), calcitonina de anguila (eCt) y calcitonina de humano (hCt) ya sea de fuentes recombinantes o naturales, o un fragmento activo de las mismas, por ejemplo, un fragmento (1-9) según se describe anteriormente. El tratamiento de la enfermedad o condición inflamatoria puede incluir profilaxis así como también el tratamiento de la enfermedad. El tratamiento puede ser de un humano o un sujeto no humano. La enfermedad o condición inflamatoria puede incluir artritis reumatoide (RA) , artritis reumatoide juvenil
( JRA) , osteoartritis, psoriasis, artritis psoriática, espondilitis anquilosante (AS) , lupus eritematoso, esclerosis múltiple (MS) , asma o terapia inmunosupresora ( e . g. , postcirugía de transplante) . La calcitonina utilizada de acuerdo con este aspecto de la invención puede formularse para utilizarse por cualquier vía conveniente. El medicamento usualmente se suministrará como parte de de una composición estéril, farmacéutica que normalmente incluirá un portador farmacéuticamente aceptable. Esta composición farmacéutica puede ser en cualquier forma adecuada, (dependiendo del método deseado para administrarla a un paciente) . Puede proporcionarse en forma de dosis de unidad, generalmente se proporcionará en un contenedor sellado y puede proporcionarse como parte de un equipo. Tal equipo podría normalmente (a pesar de no necesariamente) incluir instrucciones para utilizarse. Puede incluir una pluralidad de dichas formas de dosis de unidad. La composición farmacéutica puede adaptarse para la administración por cualquier vía adecuada, por ejemplo por la vía oral (incluyendo bucal o sublingual), rectal, nasal, local (incluyendo bucal, sublingual o transdérmica), vagina o parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa o intradérmica) . Tales composiciones pueden prepararse por cualquier método conocido en la materia de farmacia, por
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ejemplo al mezclar el ingrediente activo con el (los) portador (es) o excipiente (s) bajo condiciones estériles. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración oral pueden presentarse como unidades discretas tales como cápsulas o tabletas; como polvos o granulos; como soluciones, jarabes o suspensiones (en líquidos acuosos o no acuosos; o como espumas o batidos comestibles; o como emulsiones). Los excipientes adecuados para tabletas o cápsulas de gelatina dura incluyen lactosa, almidón de maíz o derivados del mismo, ácido esteárico o sales del mismo. Los excipientes adecuados para utilizarse con cápsulas de gelatina suave incluyen por ejemplo aceites vegetales, ceras, grasas, polioles semi-sólidos, o líquidos etc. Para la preparación de soluciones y jarabes, los excipientes que pueden utilizarse incluyen por ejemplo agua, polioles y azúcares. Para la preparación de aceites de suspensión (e.g., aceites vegetales) pueden utilizarse para proporcionar suspensiones de aceite en agua o agua en aceite. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración transdérmica pueden presentarse como parches discretos pretendidos para permanecer en contacto íntimo con la epidermis del recipiente por un período prolongado de tiempo. Por ejemplo, el ingrediente activo puede
suministrarse del parche por iontoforesis según se describe generalmente en Pharmaceuti cal Research, 3(6):318 (1986). Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración local pueden formularse como ungüentos, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, rociadores, aerosoles o aceites. Para infecciones del ojo u otros tejidos externos, por ejemplo boca y piel, las composiciones se aplican preferentemente como un ungüento o crema local. Cuando se formula en un ungüento, el ingrediente activo puede emplearse ya sea con base de ungüento miscible en agua o parafínico. Alternativamente, el ingrediente activo puede formularse en una crema con una base de crema de aceite en agua o una base de agua en aceite. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración local para el ojo incluyen gotas para ojos en donde el ingrediente activo se disuelve o se suspende en un portador adecuado, especialmente en un solvente acuoso. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración local en la boca incluyen grageas, pastillas y enjuagues bucales. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración rectal pueden presentarse como supositorios o enemas . Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración nasal cuando el portador es un sólido incluyen
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un polvo grueso que tiene un tamaño de partícula, por ejemplo, en el rango 20 a 500 mieras el cual se administra en la manera en la cual se toma el olfateo, es decir, por inhalación rápida a través del paso nasal de un contendor del polvo sostenido cercano hacia arriba a la nariz. Las composiciones adecuadas en donde el portador es un líquido, para la administración como un rociador nasal o como gotas nasales, incluyen soluciones aceitosas o acuosas del ingrediente activo. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración por inhalación incluyen polvos o vapores de partícula fina, los cuales pueden generarse por medio de diversos tipos de aerosoles, nebulizadores o insufladores presurizados por dosis medida. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración vaginal pueden presentarse como formulaciones de pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o rociadores . Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración parenteral incluyen solución de inyección estéril acuosa y no acuosa, la cual puede contener antioxidantes, reguladores, bacterioestatos y solutos que convierten la formulación sustancialmente isotónica con la sangre del recipiente pretendido; y las suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de
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suspensión y agente espesantes. Los excipientes que pueden utilizarse para soluciones inyectables incluyen agua, alcoholes, polioles, glicerina y aceites vegetales, por ejemplo. Las composiciones pueden presentarse en contenedores de dosis de unidad o múltiples dosis, por ejemplo, ampolletas o frascos sellados, y pueden almacenarse en una condición secada por congelación (liofilizada) que requiere solamente la adición del líquido estéril portado, por ejemplo agua para inyecciones, inmediatamente antes de utilizarse. Las soluciones y suspensiones de inyección extemporáneas pueden prepararse de polvos estériles, granulos y tabletas. Las composiciones farmacéuticas pueden contener agentes conservadores, agentes solubilizadores, agentes estabilizadores, agentes humectantes, emulsificadores, edulcorantes, colorantes, odorantes, sales (sustancias de la presente invención pueden proporcionarse por sí mismas en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable), reguladores, agentes de revestimiento o antioxidantes. Pueden también contener agentes terapéuticamente activos además de la sustancia de la presente invención. Las dosis de la sustancia de la presente invención pueden variar entre amplios límites, dependiendo de la enfermedad o trastorno a tratar, la edad y la condición del individuo a tratar, etc., y un médico determinará al último
las dosis adecuadas a utilizar. Esta dosis puede repetirse tan frecuentemente sea adecuado. Si se desarrollan efectos secundarios la cantidad y/o frecuencia de la dosis puede reducirse, de acuerdo con la práctica clínica normal. Las modalidades de acuerdo con este aspecto de la invención por lo tanto se extienden a un método de tratamiento para una enfermedad o condición inflamatoria, que comprende administrar a un sujeto con necesidad del mismo de una cantidad terapéuticamente efectiva de una calcitonina a dicho sujeto. De acuerdo a un segundo aspecto de la invención, se proporciona el uso de una calcitonina, un glucocorticoide en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o condición inflamatoria. El glucocorticoide puede ser prednisona, prednisolona, dexametasona, metilprednisolona, budesonida, hidrocortisona, betametasona, triamcinolona o fludrocoritisona. Un glucocorticoide preferido puede ser prednisolona. Una ventaja de este aspecto de la invención es que permite una reducción de la dosis de glucocorticoide
(reduciendo de esta manera el efecto de la osteoporosis secundaria) . La calcitonina puede actuar efectivamente como un antagonista funcional de pérdida ósea inducida por
- glucocorticoide. La combinación de una calcitonina y un glucocorticoide en el tratamiento de una enfermedad o condición inflamatoria proporciona un efecto sinergístico sobre el tratamiento convencional utilizando un glucocorticoide solo. Las modalidades de acuerdo con este aspecto de la invención por lo tanto se extienden a un método de tratamiento para una enfermedad o condición inflamatoria, que comprende la administración a un sujeto con necesidad del mismo de una cantidad terapéuticamente efectiva de una calcitonina y de un glucocorticoide a dicho sujeto. Este aspecto de la invención, por lo tanto también se extiende a un equipo en partes, opcionalmente que contiene instrucciones para utilizarse, comprendiendo una calcitonina y un glucocorticoide para la administración por separado, simultánea o secuencial a un sujeto con necesidad del mismo. De acuerdo a un tercer aspecto de la invención, se proporciona un uso de acuerdo a la primera o al segundo aspecto de la invención, en el cual el medicamento además comprende un fármaco anti-reumático. El fármaco anti-reumático puede ser metotrexato, o sulfasalazina . Las modalidades de acuerdo con este aspecto de la invención por lo tanto se extienden a un método de tratamiento para una enfermedad o condición inflamatoria, que
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comprende la administración a un sujeto con necesidad del mismo de una cantidad terapéuticamente efectiva de una calcitonina, un glucocorticoide y un fármaco anti-reumático a dicho sujeto. Este aspecto de la invención, por lo tanto también se extiende a un equipo en partes, opcionalmente que contiene instrucciones para utilizarse, comprendiendo una calcitonina, un glucocorticoide y un fármaco anti-reumático para la administración por separado, simultánea, o secuencial a un sujeto con necesidad del mismo. De acuerdo a un cuarto aspecto de la invención, se proporciona un uso de acuerdo al primer o al segundo aspecto de la invención, en el cual el medicamento además comprende un anticuerpo. El anticuerpo puede ser monoclonal o policlonal.
Los anticuerpos pueden ser humanos o de una fuente no humana. Los anticuerpos humanizados o completamente humanos pueden ser preferibles de acuerdo a las modalidades de la invención, en donde el sujeto a tratar es humano. Los anticuerpos policlonales pueden aumentarse al estimular su producción en un huésped animal adecuado (por ejemplo, un ratón, rata, conejillo de indias, conejo, oveja, cabra o mono) cuando un hapteno adecuado se inyecta en el animal. Si es necesario puede administrarse un adyuvante junto con la sustancia de la presente invención. Los
anticuerpos pueden purificarse así por virtud de su unión a una sustancia de la presente invención. De manera adecuada, el hapteno es una sustancia asociada con el inicio o avance de una enfermedad o condición inflamatoria, tal como por ejemplo del Receptor TNF (TNF-R) . Los anticuerpos monoclonales pueden producirse de hibridomas. Estos pueden formarse al fusionar células de mieloma y células de bazo que producen el anticuerpo deseado a fin de formar una línea celular inmortal. Esta es la técnica bien conocida Kohier & Milstein ( Na ture 256 52-55 (1975)). Las técnicas para producir anticuerpos monoclonales y policlonales que se unen a una proteína particular ahora se desarrollan bien en la técnica. Se discuten en los textos de inmunología estándar, por ejemplo en Roitt et al . , Immunology segunda edición (1989), Churchill Livingstone, Londres. Alternativamente, la tecnología de representación de fago puede utilizarse (McCafferty et al . , Na ture 348: 552-554 (1990); y según se describe en WO 92/01047). Además de los anticuerpos completos, el término anticuerpo se extiende a partes del mismo que son capaces de unirse a haptenos. De esta manera, la presente invención incluye fragmentos de anticuerpo y construcciones sintéticas. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpo y construcciones sintéticas se dan por Dougall et al . en Tibtech 12 372-379 (1994) .
Los fragmentos de anticuerpo incluyen, por ejemplo, fragmentos Fab, F(ab')2r y Fv (véase Roitt et a l . [ supra ] ) . Los fragmentos Fv pueden modificarse para producir una construcción sintética conocida como una molécula Fv de cadena única (scFv) , un fragmento de anticuerpo de cadena única (scAb) o un diacuerpo que comprende un dominio variable de cadena pesada (VH) conectado a un dominio variable de cadena ligera (VL) que pueden ser bivalentes o biespecíficos. Tales fragmentos pueden por lo tanto incluir un enlazador de péptido que une directamente las regiones VH y VL que contribuyen a la estabilidad de la molécula. Los fragmentos de péptido más pequeños del dominio VH y el dominio V también pueden utilizarse. Otras construcciones sintéticas incluyen los péptidos CDR. Estos son péptidos sintéticos que comprenden determinantes de unión de antígeno. También pueden utilizarse miméticos de péptido. Estas moléculas usualmente son anillos orgánicos conformativamente restringidos que imitan la estructura de un bucle CDR y que incluyen cadenas laterales interactivas por antígeno. Las construcciones sintéticas incluyen moléculas quiméricas. De esta manera, por ejemplo, los anticuerpos humanizados (o primatizados) o derivados de los mismos se encuentran dentro del alcance de la presente invención. Un ejemplo de un anticuerpo humanizado es un anticuerpo que
tiene regiones de estructura humana, pero regiones hipervariables de roedores. Las construcciones sintéticas también incluyen moléculas que comprenden un residuo covalentemente unido que proporciona la molécula con alguna propiedad deseable además de la unión de antígeno. Por ejemplo, el residuo puede ser una marca (e.g., marca fluorescente o radioactiva) o un agente farmacéuticamente aceptable . En una modalidad preferida, el anticuerpo es etanercept. Etanercept (ENBREL®) es una proteína de fusión dimérica que consiste de la parte de unión de ligando extracelular del receptor de factor de necrosis tumoral de 75 kilodaltones (p75) humano (TNFR) unido a la parte Fc de IgGl humano. El componente Fc de etanercept contiene el dominio CH2, el dominio CH3 y la región de articulación, pero no el dominio CH1 de IgGl. Etanercept se produce por la tecnología de ADN recombinante en un sistema de expresión de célula de mamífero de ovario de hámster chino (CHO) . Consiste de 934 aminoácidos y tiene un peso molecular aparente de aproximadamente 150 kilodaltonas . Etanercept se ha descrito en EP 939121, EP 418014, EP 471701, EP 464533, EP 1132471, EP 417563, EP 620739, EP 670730, EP 1239043, WO 91/03553, WO 94/06476, WO 93/19777 y US 5605690. Las modalidades de acuerdo con este aspecto de la
invención por lo tanto se extienden a un método de tratamiento para una enfermedad o condición inflamatoria, que comprende la administración a un sujeto con necesidad del mismo de una cantidad terapéuticamente efectiva de una calcitonina, un glucocorticoide y un anticuerpo a dicho sujeto. Este aspecto de la invención, por lo tanto se extiende a un equipo en partes, opcionalmente que contiene instrucciones para utilizarse, comprendiendo una calcitonina, un glucocorticoide y un anticuerpo para la administración por separado, simultánea o secuencial a un sujeto con necesidad de los mismos. De acuerdo a una modalidad preferida de la invención, se proporciona un uso según se describe anteriormente, de una calcitonina en la preparación de un agente para el tratamiento de una enfermedad o condición inflamatoria, en la cual la calcitonina es calcitonina de salmón o calcitonina de anguila y el medicamento además comprende un glucocorticoide, adecuadamente prednisolona en el tratamiento de artritis reumatoide. La presente invención por lo tanto proporciona la administración y explotación de un efecto anti-inflamatorio de calcitonina no reconocido hasta ahora. La calcitonina es anti-inflamatoria como un agente único pero es aún más dramáticamente efectiva con otros agentes anti-inflamatorios,
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tales como glucocorticoides. La calcitonina actúa sinergísticamente con la prednisolona. El último efecto es lo suficientemente fuerte para disminuir la dosis requerida de prednisolona por al menos cinco veces evitando potencialmente debido a eso los efectos secundarios suprimidos de altas dosis de esteroides (e.g., osteoporosis inducida por glucocorticoide (GC) ) . Las pruebas se realizan según se describe abajo con la administración de calcitonina en un modelo animal de artritis reumatoide en combinación con la prednisolona, el tratamiento estándar en este modelo. El foco de la calcitonina era reducir la resorción osteoclástica aumentada en el hueso periarticular que se asocia con la artritis reumatoide severa. Sin embargo, inesperadamente, se encontró que la calcitonina tenía un efecto anti-inflamatorio profundo en este modelo especialmente cuando se co-administró con la prednisolona, donde la calcitonina potenció el efecto antiinflamatorio de la baja dosis de predinisolona . Las características preferidas para el segundo y subsecuentes aspectos de la invención son como para el primer aspecto muta tis mutandis . EJEMPLOS La presente invención ahora se describirá más a manera de ilustración solamente con referencia a los siguientes Ejemplos, los cuales no se interpretarán como que
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son limitantes en la invención. En los Ejemplos, también se hace referencia a un número de dibujos en los cuales: FIGURA 1 demuestra la relación entre CÍA y síntoma de hinchazón de garra asociado con la ruptura de articulación) . FIGURA 2 demuestra el efecto del peso corporal en el tratamiento. FIGURA 3 demuestra el registro clínico. FIGURA 4 demuestra el grado de incidencia de enfermedad en los diferentes grupos. FIGURA 5 Y 6 reportan los mismos datos de la Figura 1 y 3, mostrando solamente los grupos CT y Pred+CT. FIGURA 7 demuestra la actividad anti-inflamatoria de calcitonina sola. Experimento 1 : Estudio del efecto de protocolo de tratamiento en artritis experimentalmente inducida Artri tis inducida por Colágeno II (CÍA) . Las ratas hembra Lewis (150 + 20 g de peso corporal; Harían UK Ltd Bicester, Oxfordshire, Inglaterra) se alimentaron con una dieta de pastilla masticable estándar y tuvieron libre acceso al agua y se mantuvieron en ciclos de 12 h de luz/oscuridad. El trabajo animal se llevó a cabo bajo licencia de la Oficina Local de acuerdo con el Acta Para Animales (Procedimientos Científicos), 1986. El colágeno II nasal bovino (4 mg/ml; Sigma-Aldrich Ltd., Poole, UK) se disolvió en ácido acético
(0.01 M) después se emulsifico con el mismo volumen de adyuvante incompleto de Freund frío (Sigma-Aldrich) . En el día 0, las ratas se anestesiaron con halotano, la base de la cola se cortó y se inyectó intradérmicamente con suspensión de colágeno II/adyuvante (400 µq de colágeno II por rata). Las primeras señales de artritis fueron evidentes entre los días 11 y 13, con máxima inflamación observada en el día 18-21. La inflamación inducida por CÍA se confinó a articulaciones de tobillo y carnosidad de la pata de las patas traseras (con inclusión de dedos en diversos casos).
Los tobillos traseros se registraron clínicamente en una escala arbitraria, variando de 0 (no inflamación) a tres
(inflamación severa que incluye tobillos, carnosidades de las patas, y dedos) . Además, entre el día 0 y 18 los volúmenes de la pata trasera se midieron utilizando un pletismómetro (Ugo Basile, Milán, Italia) y los valores se promediaron para dar una medición de inflamación para cada animal. La CT de salmón se disolvió en PBS con 0.1% de BSA y se dio diariamente en la dosis de 2 µg/kg por rata. La prednisolona (prednisolona 21-hemisuccinato, sal sódica) fue PBS disuelta con 0.1% de BSA y se da i.p. en dosis de 0.6 y 3 mg/kg (correspondiente a 1.2 y 6.2 mol/kg) , solo o con CT . Los tratamientos de control consistieron en PBS con 0.1% de BSA.
La Figura 1 muestra que la CÍA se caracterizó por aumento marcado en la hinchazón de pata (síntoma físico asociado con la ruptura de articulación) . El tratamiento con CT (o con la baja dosis de prednisolona (Pred), no modificó la hinchazón de la pata. Sin embargo, la combinación CT + baja dosis de prednisolona dio como resultado la atenuación marcada de la hinchazón de pata (diamantes azules). Este efecto no fue más evidente cuando se aplicó una dosis antiinflamatoria completa del GC) . Los efectos descritos en la Figura 1 no fueron secundarios para la alteración en el estado de saludo de los animales, a medida que el peso corporal no fue diferente a través de los diferentes tratamientos (Figura 2) . La Figura 3 muestra que los cambios en la hinchazón de la pata también se reflejaron en alteraciones en el registro clínico. Finalmente, la Figura 4 ilustra el grado de incidencia de enfermedad en los diferentes grupos. Nuevamente, el efecto protector de la CT + baja dosis de prednisolona es notable. En todas estas figuras, los valores son promedio + s.e. promedio de n=10 ratas por grupos. La diferencia estadística a un valor P menor a 0.05 se logró por los dos grupos con la alta dosis de prednisolona (con o sin CT) así como también por el grupo CT + baja dosis de prednisolona (diamantes azules) . La Figura 5 y 6 reportan los mismos datos de la Figura 1 y 3, demostrando únicamente los grupos CT y Pred+CT.
En los previos experimentos más viejos, el tratamiento con calcitonina (0.5 //g/rata) produjo una acción anti-inflamatoria media por su cuenta (véase Figura 7). Conclusión Estos resultados demuestran que el tratamiento combinado de calcitonina con un GC tiene propiedades antiinflamatorias en el modelo de artritis inducida por colágeno y permitiría que la reducción de la dosis del GC sea efectiva. También vale notar los efectos anti-inflamatorios producidos por esta dosis de CT que se inhibieron entre 5 y 20% de la respuesta artrítica.