ES2547333T3

ES2547333T3 - Métodos para tratar enfermedades autoinmunes

Info

Publication number: ES2547333T3
Application number: ES11157101.4T
Authority: ES
Inventors: Johanne Kaplan; John M. Mcpherson
Original assignee: Genzyme Corp
Current assignee: Genzyme Corp
Priority date: 2006-04-12
Filing date: 2007-04-11
Publication date: 2015-10-05
Anticipated expiration: 2027-04-11
Also published as: PL2012814T3; US20100183541A1; ES2423481T3; EP2380585B1; EP2380585A1; CA2649440A1; DK2380585T3; JP5857373B2; EP2012814A1; US20170165360A9; JP2013216677A; DK2012814T3; US9744233B2; US20150044164A1; JP5541915B2; JP2009533470A; PT2012814E; US20170326203A1; PL2380585T3; WO2007121233A1

Abstract

Uso de TGF-α latente y/u otro agente que promueve la expansión de células T reguladoras para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad autoinmune en un mamífero seleccionada del grupo que consiste en lupus eritematoso sistémico y esclerosis múltiple, en el que el tratamiento comprende: (a) agotar los linfocitos T en circulación en el mamífero, (b) permitir que los linfocitos comiencen a repoblarse, y (c) durante la fase de repoblación de (b), administrar el medicamento al mamífero, y en el que el agente que promueve la expansión de células T reguladoras es rapamicina o uno o más agentes escogidos del grupo que consiste en (1) IL-10, (2) IL-4, (3) IFN-α, (4) vitamina D3, (5) dexametasona, y (6) micofenolato mofetilo.

Description

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intraarticular, intramuscular o intraperitoneal), rectal, tópica, transdérmica, u oral (por ejemplo, en cápsulas, suspensiones, o comprimidos). La administración a un individuo se puede producir en una sola dosis o en administraciones repetidas, y en cualquiera de una variedad de formas salinas fisiológicamente aceptables, y/o con un vehículo y/o aditivo farmacéuticamente aceptable como parte de una composición farmacéutica. Las formas salinas fisiológicamente aceptables y los excipientes y técnicas de formulación farmacéutica estándares son bien conocidos por las personas expertas en la técnica (véase, p. ej., Physicians’ Desk Reference (PDR®) 2005, 59a ed., Medical Economics Company, 2004; y Remington: The Science and Practice of Pharmacy, ed. Gennado et al. 21a ed., Lippincott, Williams & Wilkins, 2005).

TGF- latente también se puede administrar mediante terapia génica (es decir, administrando en un vector apropiado un ADN que codifica TGF-), por ejemplo como se describe en Kitani et al., J. Exp. Med., 192(1):41-52 (2000).

Las dosis eficaces apropiadas para el TGF- latente, los agentes que promueven Tregs, y los agentes de agotamiento de linfocitos se elegirán por un médico al cargo del tratamiento y oscilarán aproximadamente desde 0,01 g/kg hasta 25 mg/kg, desde 0,1 g/kg hasta 10 mg/kg, desde 1 g/kg hasta 1 mg/kg, 10 g/kg hasta 1 mg/kg, desde 10 g/kg y 100 g/kg, desde 100 g/kg hasta 1 mg/kg, y desde 500 g/kg hasta 5 mg/kg. Adicionalmente, las dosis específicas indicadas en los Ejemplos o en el PDR® 2005 y ediciones posteriores pueden usarse para lograr la dosificación deseada. Por ejemplo, los usos actualmente aprobados de Thymoglobulin® en los Estados Unidos de América incluyen el trasplante (de 1 mg/kg a 2,5 mg/kg durante 2-14 días) y anemia aplásica (de 2,5 mg/kg a 3,5 mg/kg durante 5 días).

Las dosis eficaces logradas en un animal pueden convertirse para uso en otro animal, incluyendo seres humanos, usando factores de conversión conocidos en la técnica. Véase, p. ej., Freireich et al., Cancer Chemother. Reports, 50(4):219-244 (1966) y la Tabla 4 para factores de dosis de área superficial equivalente. Los ejemplos de modelos de enfermedades autoinmunes y métodos apropiados pueden encontrarse, p. ej., en Cohen et al. (ed.) Autoimmune Disease Models, Academic Press, 2005.

Tabla 4

A:: De: Ratón (20 g) Rata (150 g) Mono (3,5 kg) Perro (8 kg) Ser humano (60 kg)

Ratón: 1 0,5 0,25 0,17 0,08

Rata: 2 1 0,5 0,25 0,14

Mono: 4 2 1 0,6 0,33

Perro: 6 4 1,7 1 0,5

Ser humano: 12 7 3 2 1

Los siguientes Ejemplos se proporcionan con fines ilustrativos, y no pretenden ser limitativos.

EJEMPLOS

Evaluación de la potencia de TGF-1 activado

Se produjo TGF-1 latente humana recombinante en células CHO (Genzyme, Framingham, MA). La alteración de LAP de TGF-1 latente se logró mediante acidificación. LAP-TGF-1 se diluyó hasta 200 ng/ml en medio de ensayo (DMEM más aminoácidos no esenciales, L-glutamina, pen-strep, y FBS al 10%). Se activaron quinientos microlitros de la muestra diluida añadiendo 100 l de HCI 1 N e incubando a temperatura ambiente durante 20 minutos. Posteriormente, la muestra se neutralizó con 100 l de NaOH 1,2 N/HEPES 0,5M.

La muestra de TGF-1 activado se analizó usando el Ensayo de Potencia Celular A549, y se evaluó la actividad en comparación con un control de TGF-2 recombinante humano (Genzyme, Framingham, MA). El ensayo de potencia A549 se basa en la liberación inducida por TGF-1 de IL-11 por la línea de células epiteliales de pulmón humano, A549, y se describe en Wang et al., Am. J. Physiol., 276:L175-L185 (1999). La liberación de IL-11 a partir de las células A549 en respuesta a TGF-1 se midió usando un procedimiento de ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MN).

Modelo de lupus murino

Animales y Reactivos -Se obtuvieron ratones hembra MRL/lpr de Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) y se recibieron con una edad de 5-6 semanas. ATG se generó mediante inmunización de conejos con timocitos de

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ratones Balb/c como se indica a continuación. Los conejos se inmunizaron subcutáneamente con 5 x 107 timocitos recientes en el día 0 y se revacunaron intravenosamente con 5 x 107 timocitos recientes en el día 14. Se reunió suero recolectado en los días 20, 22 y 25, y la fracción de IgG se aisló mediante cromatografía y precipitación con sulfato sódico. Como control negativo se usó una preparación comercial de IgG de conejos no sometidos a tratamiento previo (Sigma, St. Louis, MO). TGF-1 latente humana recombinante se produjo en células CHO (Genzyme, Framingham, MA). La ciclofosfamida se adquirió de WVR Scientific Products (West Chester, PA).

Tratamiento -Los animales se monitorizaron para determinar proteinuria, albuminuria y los títulos de anticuerpos IgG para ADN bicatenario (ADNdc) cada tres semanas (véase más abajo). El tratamiento terapéutico se inició cuando los animales comenzaron a desarrollar anticuerpos para ADNdc y/o una proteinuria elevada a las 12-13 semanas de edad. El tratamiento con ATG o con IgG de conejo de control consistió en dos inyecciones intraperitoneales (i.p.) de 500 g (25 mg/kg) administradas con tres días de diferencia (días 0 y 3). El TGF-1 se administró a partir de los días 14-25 como doce inyecciones i.p. diarias de 4 g por ratón. Una dosis de 4 g de TGF-1 latente corresponde a una dosis de 1 g (0,05 mg/kg) de la porción activa (madura, no asociada a LAP) de la molécula. Como control positivo se usó ciclofosfamida, y se suministró i.p. semanalmente a una dosis de 100 mg/kg a partir de las 12-13 semanas de edad hasta el final del estudio a las 24-25 semanas de edad. Los grupos de tratamiento consistieron en IgG de conejo de control, IgG de conejo de control + TGF-1 latente, ATG, ATG + TGF-1 latente, o ciclofosfamida, con diez animales por grupo.

Proteinuria y albuminuria -Los niveles de proteína en la orina de ratones individuales se midieron usando un ensayo colorimétrico diseñado para medir la concentración de proteína total. Los niveles de albúmina en la orina se evaluaron con un ensayo ELISA cuantitativo.

Se llevó a cabo una recogida de orina durante 24 horas cada tres semanas colocando los ratones en jaulas metabólicas individuales. La proteinuria se midió usando el kit Microprotein-PR™ de Sigma (St. Louis, MO) siguiendo las instrucciones del fabricante. Brevemente, se añadió orina a una disolución de reactivo que contenía complejo de rojo de pirogalol-molibdato. La mezcla se incubó a 37ºC durante diez minutos para permitir la unión del reactivo a grupos amino básicos en las proteínas, lo que conduce a un desplazamiento de la absorbancia a 600 nm. El incremento de la densidad óptica (O.D.) a 600 nm es directamente proporcional a la concentración de proteína, y se usó un patrón de referencia para calcular la concentración de proteína de las muestras de ensayo según la siguiente fórmula:

OD

muestra

x Concpatrón x Dilución  Concmuestra (mg / dl)OD

patrón

Los niveles de albúmina en la orina se evaluaron usando un kit de ELISA competitivo indirecto, según las instrucciones del fabricante (Albuwell M de Exocell Inc, Filadelfia, PA). Brevemente, se añadieron diluciones de dos veces en serie de muestras de orina a pocillos duplicados de una placa de ELISA revestida con albúmina de ratón. A continuación se añadió anticuerpo anti-albúmina de ratón de conejo a los pocillos, permitiendo la competición entre la unión del anticuerpo a la albúmina de la muestra y la albúmina unida al pocillo. A esto le siguió la adición de inmunoglobulina anti-conejo conjugada con peroxidasa de rábano picante (HRP) y sustrato de HRP para detectar la cantidad de anticuerpo anti-albúmina de ratón de conejo unido al pocillo. La O.D. a 450 nm fue inversamente proporcional al logaritmo de la cantidad de albúmina en la muestra de orina. La concentración de albúmina en las muestras de orina se obtuvo a partir de una curva patrón obtenida con concentraciones conocidas de albúmina murina.

ELISA anti-ADNdc -Los títulos de anticuerpos IgG para ADNdc en muestras de suero de ratones individuales se midieron mediante ELISA.

Se recogieron muestras de suero de ratones individuales cada tres semanas. Los títulos de anticuerpos para ADNdc se evaluaron mediante ELISA. Se digirió ADN bicatenario de ratón (The Jackson Laboratory) con nucleasa S1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) para eliminar cualquier ADN monocatenario, y a continuación se usó para revestir los pocillos de una placa de ELISA de 96 pocillos (100 l/pocillo de 1 g/ml de ADNdc) toda la noche a 4ºC. Las placas se pretrataron con sulfato de protamina al 0,01% en agua (150 l/pocillo durante 90 minutos a temperatura ambiente) para facilitar la adhesión del ADN. Tras el revestimiento, las placas se incubaron con tampón de bloqueo de BSA al 2,5% durante una hora a 37ºC y se lavaron. A continuación se añadieron cien microlitros de diluciones de dos veces en serie de suero a pocillos duplicados y se incubaron a 37ºC durante una hora. Las placas se lavaron y se añadió IgG anti-ratón de cabra conjugada a HRP (Pierce, Rockford, IL) para detectar anticuerpos unidos a ADNdc (37ºC durante una hora). Tras lavar, el sustrato de HRP se añadió durante 30 minutos a temperatura ambiente, y la

O.D. del producto colorimétrico se leyó a 490 nm con una longitud de onda de referencia de 650 nm en un lector de placas de longitud de onda dual (Molecular Devices, Sunnyvale, CA). El título de anticuerpos se definió como el inverso de la dilución de suero que da una O.D. mayor o igual a 0,1. Se usó suero de ratón normal como control negativo (título <200, la dilución más baja evaluada) y suero de ratones MRL/lpr con lupus envejecidos como control positivo (título de 6400-25600).

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Histología -Los riñones se recogieron para el análisis histológico en el momento del sacrificio programado o durante el transcurso del estudio para animales moribundos que requirieron eutanasia. Los riñones se cortaron en láminas longitudinalmente y se fijaron en formalina tamponada neutra. Secciones de aproximadamente 5 m se tiñeron con hematoxilina y eosina (H&E) y colorante de ácido peryódico-Schiff (PAS). Los patólogos adjudicaron una puntuación a los cortes en láminas para la morfología glomerular, la inflamación intersticial y los moldes de proteínas según los sistemas de puntuación descritos en las Tablas 5A y 5B.

Tabla 5A

Glomérulos

0: Sin lesiones significativas (comparable a OMS clase I)

1: Enfermedad mínima a leve, caracterizada por depósitos mesangiales (comparable a OMS clase IIA)

2: Enfermedad leve a moderada, caracterizada por hipercelularidad con o sin depósitos mesangiales (comparable a OMS clase IIB)

3: Enfermedad moderada a grave, caracterizada por glomerulopatía mesangioproliferativa y capilares de “bucle de alambre” con o sin necrosis fibrinoide de los bucles capilares, ruptura de la cápsula de Bowman e inflamación periglomerular y fibrosis (formación “de media luna”) que afecta a menos del 25% de los glomérulos. A menudo está presente una sinequiación focal de penacho glomerular al epitelio capsular de Bowman, y puede ser el único hallazgo destacable; si la sinequiación es el único hallazgo, se asignará una puntuación de 3 si están afectados menos del 75% de los penachos glomerulares.

4: Enfermedad moderada a grave con las mismas características de la puntuación 3, pero que afecta al 25-50% de los penachos glomerulares

5: Enfermedad grave con las mismas características de la puntuación 3, pero que afecta al 50-75% de los penachos glomerulares

6: Enfermedad grave con las mismas características de la puntuación 3, pero que afecta a más del 75% de los penachos glomerulares

Las puntuaciones 3-6 dividen las puntuaciones de OMS III y IV en cuatro subcategorías

Tabla 5B

Inflamación intersticial

0: Sin lesiones significativas

1: Inflamación y fibrosis mínimas a leves

2: Inflamación y fibrosis leves a moderadas

3: Inflamación y fibrosis moderadas a graves

4: Inflamación y fibrosis graves y difusas

Puntuaciones 0-4, basadas en la densidad de la inflamación crónica (linfocitos, células plasmáticas, y macrófagos) con fibrosis dentro del intersticio y rodeando los vasos sanguíneos renales.

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Estadística -Se llevó a cabo un análisis estadístico usando ensayos de comparación múltiple de Tukey para determinar si existieron diferencias significativas entre los grupos de tratamiento. Los valores de P iguales o menores que 0,05 se aceptaron como estadísticamente significativos.

Proteinuria y Albuminuria -El tratamiento con ATG o TGF-1 latente solo (Ig de control + TGF-1) falló

15 estrepitosamente a la hora de inhibir el desarrollo de proteinuria (Figura 2), aunque al final del estudio se redujo ligeramente la incidencia de proteinuria grave (>500 mg/dl/día) en estos grupos de tratamiento de agente individual

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en comparación con los ratones tratados con Ig de control (60-67% frente a 90%, respectivamente) (Figura 3). Por el contrario, el tratamiento con una combinación de ATG y TGF-1 latente dio como resultado la inhibición en la incidencia (30% frente a 90%) y la gravedad de la proteinuria, lo que sugiere un efecto sinérgico entre estos dos agentes (Figuras 2 y 3).

La reducción observada en los niveles de proteína total en la orina de ratones tratados con la combinación de ATG y TGF-1 latente también se vio reflejada en las medidas de los niveles de albúmina en orina (Figuras 4 y 5). La cuantificación mediante ELISA indicó que la incidencia y la gravedad de la albuminuria se vio reducida considerablemente en ratones tratados con la terapia de combinación, en comparación con el grupo de Ig de control negativo o los grupos de terapia de agente individual (ATG, Ig de control + TGF1).

Anticuerpos para ADNdc -La mayoría de los ratones del grupo de control negativo (Ig de conejo normal), así como de los grupos tratados con TGF-1 latente + Ig de control y ATG, desarrollaron gradualmente títulos crecientes de anticuerpos IgG contra ADNdc con cinéticas comparables. A modo de comparación, se produjo un retraso considerable en la aparición de títulos anti-ADNdc en el grupo tratado con la combinación de ATG y TGF-1 latente (Figura 6). Se cree que la deposición de los complejos inmunes (complejos ADN-anti-ADN) en los gromérulos desempeña un papel importante en la inflamación y la patología renal característica del lupus. Sin embargo, la inhibición aparente en el desarrollo de anticuerpos para ADNdc en el grupo de tratamiento de combinación no pudo atribuirse completamente a la conservación de la función del riñón, ya que existía una mala correlación entre los títulos de anticuerpos y el grado de proteinuria al final del estudio.

Supervivencia -La dosificación con ATG y/o TGF-1 latente fue bien tolerada y no dio lugar a ningún episodio adverso obvio. Todas las muertes, excepto la de un animal del grupo de TGF-1 latente + Ig de control, estaban asociadas a niveles muy elevados de proteinuria y presumiblemente fueron consecuencia de un fallo renal. Todos los grupos de tratamiento mostraron una mejoría general en la supervivencia cuando se compararon con el grupo tratado con Ig de conejo de control negativo (Figura 7). El grado más elevado de supervivencia (100%) se observó en los grupos de tratamiento con ciclofosfamida y de tratamiento de combinación con ATG/TGF-1 latente, seguido de los grupos de tratamiento con ATG (90%) y TGF-1 latente + Ig de control (70%). El grupo de Ig de control negativo tuvo solamente un 40% de tasa de supervivencia al final del estudio.

Histología -Los resultados de los análisis histológicos se presentan en la Tabla 6. Los ratones tratados con ATG y TGF-1 latente exhibieron grados menores de glomerulopatía en comparación con los ratones de control o ratones que recibieron ATG solamente o TGF-1 latente e Ig de control. Estos descubrimientos histológicos se correlacionan con los hallazgos clínicos de proteinuria/albuminuria reducidas y de mejoría de la supervivencia en los animales tratados con la combinación.

Se observó una disminución mínima en las puntuaciones de inflamación en los grupos tratados con ATG, TGF-1 latente + Ig de control, y la combinación de ATG y TGF-1 latente, en comparación con el grupo tratado con IgG de conejo de control solamente.

Tabla 6

Grupo de tratamiento: Puntuación de glomérulos Puntuación de inflamación

IgG de conejo de control: 4,3 ± 1,4 2,8 ± 0,4

TGF-1 latente: 3,1 ± 0,8 2,6 ± 0,5

ATG: 2,7 ± 0,5 2,4 ± 0,5

ATG + TGF-1 latente: 2,3 ±0,7 2,7 ± 0,5

Ciclofosfamida: 1,0 ± 0,7 1,3 ± 0,5

Se llevó a cabo un estudio repetido con ratones MRL/MPJ-Tnfrs6lpr siguiendo el mismo régimen de tratamiento como se describe anteriormente. En este caso, el estudio se extendió hasta las 40 semanas de edad (en lugar de las 24 semanas en el primer estudio) para evaluar la durabilidad del efecto del tratamiento transitorio con ATG + TGF-1 latente. Los resultados mostraron un beneficio de supervivencia a largo plazo. Se observó una tasa de supervivencia del 90% en ratones tratados con ATG y TGF-1 latente, en comparación con un 30% de supervivencia en ratones que recibieron Ig de conejo de control, y un 10% de supervivencia en el grupo tratado con ATG. Esto se compara favorablemente con la ciclofosfamida, que proporcionó un 100% de supervivencia pero requirió inyecciones semanales crónicas en lugar de un único curso temporal de tratamiento con ATG + TGF-1 latente (Figura 8).

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Puntuación de gravedad: Patología general

2: Eritema e hinchamiento leve que se extiende desde el tobillo hacia la parte media de la pata

3: Eritema e hinchamiento moderado que se extiende desde el tobillo hacia las articulaciones metatarsales

4: Eritema e hinchamiento grave que abarca el tobillo, el pie y los dedos

Cada pata se analiza individualmente, y la puntuación artrítica para un ratón dado es la suma de las puntuaciones para todas las patas (puntuación máxima de 16)

El tratamiento con ATG sola dio como resultado una reducción en las puntuaciones de enfermedad, y la adición de TGF-1 latente no pareció proporcionar un beneficio adicional en las condiciones evaluadas. Los resultados se muestran en la tabla 8.

Tabla 8

Puntuación artrítica (Media ± SEM)

Día: Ig de conejo Ig de conejo + TGF-1 latente ATG ATG + TGF-1 latente

22: 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0

26: 2,7 ± 2,3 3,7 ± 2,5 2,8 ±2,6 5,0 ± 3,5

29: 10,0 ± 4,2 10,1 ± 4,3 3,4 ± 4,9 5,8 ± 5,3

32: 10,5 ± 4,4 11,6 ± 3,0 5,5 ± 6,0 6,6 ± 5,1

35: 10,5 ± 4,4 12,0 ± 2,7 6,5 ± 5,9 7,6 ± 4,3

39: 10,9 ± 3,9 12,9 ± 2,0 7,0 ± 5,5 8,1 ± 3,3

41: 11,0 + 4,1 12,5 ± 2,8 7,3 + 5,2 8,8 + 3,6

43: 11,7 ± 3,7 13,4 ± 1,8 7,5 ± 5,4 8,9 ± 3,8

46: 11,5 ± 4,5 13,4 ± 2,8 9,5 ± 5,1 9,1 ± 3,5

50: 12,7 ± 3,0 13,5 ± 2,1 9,5 ± 4,9 9,0 ± 3,7

53: 12,4 ± 4,0 13,8 ± 2,1 9,6 ± 4,8 9,3 ± 3,7

57: 12,4 ± 4,0 13,8 ± 2,1 9,6 ± 4,8 9,3 ± 3,7

La artritis inducida por colágeno es un modelo animal de corto plazo, en el que el tratamiento tiene lugar en una escala temporal de semanas, en lugar de meses como en el modelo de lupus. Esta escala de tiempo más corta

10 podría ser insuficiente para observar el beneficio añadido de administrar TGF-1 con la ATG, que se observa en el modelo de lupus. De este modo, diferentes regímenes de dosificación o una evaluación adicional de modelos animales adicionales pueden demostrar los beneficios de la administración combinada de ATG y TGF- latente.

Modelo murino de uveítis

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El efecto de ATG +/-TGF-1 se evaluó en un modelo de ratón de uveítis. Para inducir la enfermedad, se inmunizaron ratones B10.RIII (Jackson Laboratory) subcutáneamente en el día 0 con 100 g de los aminoácidos 161-180 de la proteína de unión retinoide interfotorreceptora (IRBP161-180) (síntesis a medida, New England Peptide) en adyuvante completo de Freund en dos sitios (entre los omoplatos y en la región pélvica). Comenzando en el día 5 10, se llevaron a cabo exámenes de fondo de ojos en ratones individuales y se asignó una puntuación de enfermedad. Para llevar a cabo el examen, se dilataron los ojos de los ratones usando una o dos gotas de Mydriacyl™ 1% (nº de cat. 1120, JA Webster), y se dejaron reposar en una habitación a oscuras durante aproximadamente cinco minutos. Los ratones fueron sujetados manualmente y se visualizaron las retinas de ambos ojos usando un oftalmoscopio indirecto con una lente de 78 dioptrías. Se asignó una puntuación para inflamación a

10 los ojos usando un sistema de puntuación progresiva entre 0 y 5, como se describe en la Tabla 9.

Tabla 9

Puntuación: Patología general

0: Retina normal

1: Inflamación vascular próxima al nervio óptico

2: >10 lesiones inflamatorias confinadas en un cuadrante del ojo

3: >10 lesiones inflamatorias en más de un cuadrante del ojo

4: Las lesiones inflamatorias están contiguas

5: Desprendimiento de retina

El tratamiento con ATG o IgG de conejo de control se inició al comienzo de la enfermedad (puntuación de 1) y

consistió en dos inyecciones i.p. de 500 g(25 mg/kg) administradas con cuatro días de diferencia (días 10 y 14). 15 TGF-1 latente se administró a partir de los días 15-27 como trece inyecciones i.p. diarias de 4 g por ratón. Una

dosis de 4 g de TGF-1 latente corresponde a una dosis de 1 g(0,05 mg/kg) de la porción activa (madura, no

asociada a LAP) de la molécula. Los grupos de tratamiento incluyeron (1) control de disolución salina tamponada

con fosfato (PBS), (2) IgG de conejo de control, (3) IgG de conejo de control + TGF-1 latente, (4) ATG, y (5) ATG +

TGF-1 latente, con seis animales por grupo. El tratamiento con ATG sola dio como resultado una reducción en las 20 puntuaciones de enfermedad, y la adición de TGF-1 latente no proporcionó un beneficio adicional en las

condiciones evaluadas. Los resultados se muestran en la Tabla 10.

Tabla 10

Puntuación de uveítis (Media ± SEM)

Día: PBS Ig de conejo Ig de conejo + TGF-1 latente ATG ATG + TGF-1 latente

8 10 14 17 21 24 29: 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 1,25 ± 0,16 1,22 ± 0,15 4,00 ± 0,00 3,17 ± 0,32 3,81 ± 0,10 3,00 ± 0,35 3,81 ± 0,10 2,58 ± 0,34 3,94 ± 0,06 2,58 ± 0,42 3,75 ± 0,11 2,27 ± 0,47 0,00 ± 0,00 1,29 ± 0,18 3,67 ± 0,22 3,58 ± 0,29 3,33 ± 0,33 3,50 ± 0,34 3,33 ± 0,33 0,00 ± 0,00 1,13 ± 0,13 2,10 ± 0,48 1,75 ± 0,37 1,92 ± 0,42 2,00 ± 0,41 2,08 ± 0,42 0,00 ± 0,00 1,13 ± 0,23 2,17 ± 0,34 2,00 ± 0,37 2,08 ± 0,31 1,92 ± 0,36 2,00 ± 0,40

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El modelo de uveítis es un modelo animal de corto plazo, en el que el tratamiento tiene lugar en una escala temporal de semanas, en lugar de meses como en el modelo de lupus. Esta escala de tiempo más corta podría ser insuficiente para observar el beneficio añadido de administrar TGF-1 con la ATG, que se observa en el modelo de lupus. De este modo, diferentes regímenes de dosificación o una evaluación adicional de modelos animales pueden mostrar los beneficios de la administración combinada de ATG y TGF- latente.

Otros casos de la presente descripción se describen a continuación, y se denominan como E1 a E21.

E1. Un método para tratar un mamífero con una enfermedad autoinmune, comprendiendo el método:

(a): agotar los linfocitos en circulación en el mamífero,

(b): permitir que los linfocitos comiencen a repoblarse, y

(c) durante la fase de repoblación de (b), administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de TGF- latente y/o otro agente que promueva la expansión de células T reguladoras. E2. El método de E1, en el que el mamífero es un ser humano. E3. El método de E2, en el que la enfermedad autoinmune es lupus eritematoso sistémico. E4. El método de E2, en el que la enfermedad autoinmune es esclerosis múltiple.

E5. El método de E1, en el que los linfocitos agotados son predominantemente células T. E6. El método de E1, en el que los linfocitos se agotan administrando un agente escogido del grupo que consiste en anticuerpo antitimocítico, anticuerpo anti-CD52, y anticuerpo anti-CD3.

E7. El método de E6, en el que el anticuerpo antitimocítico se escoge del grupo que consiste en Thymoglobulin®, Atgam™, Fresenius™, y Tecelac™. E8. El método de E1, en el que las células T reguladoras son células T CD4+ CD25+. E9. El método de E1, en el que TGF- latente comprente TGF- maduro y uno o ambos de los siguientes:

(a) péptido asociado a la latencia (LAP); y

(b) proteína de unión a TGF- latente (LTBP). E10. El método de E1, en el que TGF- latente es TGF-1. E11. El método de E1, en el que TGF- latente se administra sistémicamente. E12. El método de E1, en el que el agente que promueve la expansión de células T reguladoras es uno o más

agentes escogidos del grupo que consiste en:

(1): IL-10,

(2): IL-4,

(3): IFN-,

(4): vitamina D3,

(5): dexametasona, y

(6) micofenolato mofetilo. E13. El método de E1, en el que el agente que promueve la expansión de células T reguladoras es rapamicina.

Claims

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