BRPI0612220A2 - composição farmacêutica, uso de uma calcitonina e um glucocorticóide, kit de partes que compreendem uma calcitonina e um glucocorticóide e kit de partes que compreendem uma calcitonina, um glucocorticóide e uma droga anti-reumática - Google Patents

Abstract

COMPOSIçãO FARMACêUTICA, USO DE UMA CALCITONINA E UM GLUCOCORTICóIDE, KIT DE PARTES QUE COMPREENDEM UMA CALCITONINA E UM GLUCOCORTICóIDE E KIT DE PARTES QUE COMPREENDEM UMA CALCITONINA, UM GLUCOCORTICóIDE E UMA DROGA ANTI-REUMáTICA. Trata-se do uso de uma calcitonina na preparação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou uma condição inflamatória. A calcitonina pode ser selecionada do grupo que consiste em calcitonina humana, de salmões, de enguias, de suínos, de bovinos, ou de galinhas ou um derivado, um fragmento ou uma variante da mesma. A doença ou a condição inflamatória podem ser a artrite reumatóide (RA), a artrite reumatóide juvenil (JRA), a osteodistrofia, a psoríase, a artrite psoriática, a espondilite de anquilose (AS), o lupus eritematoso, a esclerose múltipla (MS), a asma, ou a terapia imuno-supressiva (por exemplo, a cirurgia pós transplante). O tratamento também pode compreender a administração de um glucocorticóide, uma droga anti-reumática, ou um anti-corpo.

Description

COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, USO DE UMA CALCITONINA EUM GLUCOCORTICÓIDE, KIT DE PARTES QUE COMPREENDEM UMACALCITONINA E UM GLUCOCORTICÓIDE E KIT DE PARTES QUECOMPREENDEM UMA CALCITONINA, UM GLUCOCORTICÓIDE E UMA DROGAANTI-REUMÁTICA

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se ao uso da calcitoninacomo uma terapia combinada de tratamento para o gerenciamentode patologias inflamatórias e artrites.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

As drogas glucocorticóides (GCs) são potentesagentes imunosupressores e anti-inflamatórios que sãoutilizados terapeuticamente em várias patologiasinflamatórias. A terapia de longa duração com GCs éfreqüentemente necessária para controlar os sintomas daartrite reumatóide e outras condições reumáticas. A evidênciarecente mostra que os GCs podem ter um efeito modificador dedoença além de suas ações anti-inflamatórias bemdocumentadas. No entanto, o gerenciamento terapêutico depatologias de longa duração com GC é freqüentemente associadoa uma série de efeitos colaterais indesejados, envolvendo oeixo hipotálamo-pituitária-adrenal, o sistema cardiovascular,bem como o metabolismo da gordura e dos ossos.Particularmente, a osteoporose secundária é um dos problemasprincipais associados com a terapia de GC de longa duração empacientes com artrite reumatóide. Vários mecanismos sãoimplicados na perda óssea induzida por GC, incluindo efeitosdiretos nas células de tecidos do osso e a modulação daprodução de citocina e do fator do crescimento.

A calcitonina (CT ou Ct) é um hormônio peptídicomelhor conhecido pela sua atividade anti-osteoclástica, e éum membro de uma família de proteínas com homólogosidentificados na maioria das espécies estudadas até apresente data. As calcitoninas (Cts) são hormônios peptídicosde 32 resíduos de aminoácidos que são conhecidosprincipalmente pelo seu efeito hipocalcêmico e a inibição daressorção do osso. As calcitoninas são utilizadasterapeuticamente para o tratamento da osteoporose e outrascom doenças relacionadas com distúrbios ósseos. A Ct desalmão (sCt) demonstrou ter a maior atividade farmacêutica notratamento de condições de doenças humanas, ao passo que ohormônio humano (hCt) tem um potência fortemente reduzidaquando administrado em um enfoque terapêutico. Emconseqüência disto, a calcitonina de salmão (sCt) é aprincipal Ct a ser aplicada terapeuticamente até a presentedata. No entanto, há somente uma homologia de seqüência de50% entre a sCt e o hCt, que é a causa das reaçõesimunogênicas nos seres humanos quando tratados com a sCt.

O estado atual da terapia da artrite reumatóide foimelhorado drasticamente pelo uso de terapias biológicas maisnovas que têm reduzido a dependência de esteróides e agentesnão-esteroidais. Um dos usos mais amplos destas terapias, porexemplo, é Enbrel™, um construto de receptor de TNF-aacoplado à imunoglobulina. Embora sejam bastante eficazes, asterapias biológicas mais novas não suprimiram completamentemas apenas modificaram significativamente os sintomas. Alémdisso, essas drogas novas são muito caras.

Por esses motivos, os glucocorticóides (GC) aindasão amplamente utilizados como potentes agentes imuno-supressores e anti-inflamatórios em todas as formas deinflamação crônica, incluindo a artrite reumatóide. Noentanto, conforme indicado acima, as terapias de longaduração com GC são associadas com a osteoporose secundária, edesse modo, a ação anti-inflamatória benéfica do GC pode serprejudicada por um efeito exacerbador na erosão do osso.

DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃODe acordo com um primeiro aspecto da invenção, éapresentado o uso de uma calcitonina na preparação de ummedicamento para o tratamento de uma doença ou uma condiçãoinflamatória.

A calcitonina pode ser de qualquer fonteconveniente, incluindo ambas as formas naturais isoladas dohormônio, ou sintética, por exemplo, de uma fonterecombinante. 0 peptídeo da calcitonina pode ser selecionadodo grupo que consiste em calcitonina humana de salmões, desuínos, de bovinos, de enguias ou de galinhas, ou umfragmento ou um derivado ativo da mesma. Os peptídeos decalcitonina incluem, mas sem ficar a eles limitados, ospeptídeos das seguintes fontes:

Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Ser-Ala-Tyr-Trp-Arg-Asn-Leu-Asn-Asn-Phe-His-Arg-Phe-Ser-Gly-Met-Gly-Phe-Gly-Pro-Glu-Thr-Pro (Suíno)

Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Ser-Ala-Tyr-Trp-Lys-Asp-Leu-Asn-Asn-Tyr-His-Arg-Phe-Ser-Gly-Met-Gly-Phe-Gly-Pro-Glu-Thr-Pro (Bovino)

Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro (Salmão)

Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Pro (Enguia)

Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Leu-Gly-Val-Gly-Ala-Pro (Humano)

Cys-Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Pro (Galinha)As calcitoninas utilizadas de acordo com a presenteinvenção também incluem variantes, fragmentos e/ou derivadosde um peptideo de calcitonina.

Um exemplo de uma variante da presente invenção éuma proteína de fusão que compreende um peptideo decalcitonina tal como definido acima, aparte da substituiçãode um ou mais aminoácidos por um ou mais outros aminoácidos.

O elemento versado na técnica está ciente que váriosaminoácidos têm propriedades similares. Um ou mais de taisaminoácidos de uma substância podem ser freqüentementesubstituídos por um ou mais de tais outros aminoácidos semeliminar uma atividade desejada dessa substância.

Desse modo, os aminoácidos glicina, alanina,valina, leucina e isoleucina podem ser freqüentementesubstituídos uns pelos outros (os aminoácidos que têm cadeiaslaterais alifáticas). Destas substituições possíveis, épreferível que a glicina e a alanina sejam utilizadas parasubstituir uma pela outra (uma vez que elas tenham cadeiaslaterais relativamente curtas) e que a valina, a leucina e aisoleucina sejam utilizadas para substituir umas pelas outras(uma vez que elas tenham cadeia laterais alifáticas maioresque são hidrofóbicas). Outros aminoácidos que podem serfreqüentemente substituídos uns pelos outros incluem:fenilalanina, tirosina e triptofano (aminoácidos que têmcadeia laterais aromáticas); lisina, arginina e histidina(aminoácidos que têm cadeia laterais básicas); aspartato eglutamato (aminoácidos que têm cadeia laterais ácidas);asparagina e glutamina (aminoácidos que têm cadeia lateraisde amida); e cisteína e metionina (aminoácidos que têmcadeias laterais que contêm enxofre).

As substituições desta natureza são freqüentementeindicadas como substituições de aminoácidos "conservadoras"ou "semi-conservadoras".As supressões ou as inserções de aminoácidos tambémpodem ser feitas em relação à seqüência de aminoácido para aproteína de fusão mencionada acima. Desse modo, por exemplo,os aminoácidos que não têm um efeito substancial na atividadede polipeptídeo, ou pelo menos que não eliminam talatividade, podem ser suprimidos. Tais supressões podem servantajosas, uma vez que o comprimento total e o pesomolecular de um polipeptídeo podem ser reduzidos enquantoainda é mantida a atividade. Isto pode permitir que aquantidade de polipeptídeo requerida para uma finalidadeparticular seja reduzida - por exemplo, os níveis de dosagempodem ser reduzidos.

As inserções de aminoácidos em relação à seqüênciade proteína de fusão acima também podem ser feitas. Isto podeser feito para alterar as propriedades de uma substância dapresente invenção (por exemplo, para ajudar na identificação,na purificação ou na expressão, tal como explicado acima comrelação às proteínas de fusão).

As mudanças de aminoácidos em relação à seqüênciafornecida acima podem ser feitas utilizando qualquer técnicaapropriada, por exemplo, utilizando a mutagênese dirigida asítio ou a síntese de estado sólido.

Deve ser apreciado que as substituições ou asinserções de aminoácidos dentro do âmbito da presenteinvenção podem ser feitas utilizando aminoácidos que ocorremnaturalmente ou que não ocorrem naturalmente. Se aminoácidosnão-naturais ou sintéticos forem ou não utilizados, épreferível que somente L-aminoácidos estejam presentes.

Algumas substituições preferidas podem ser pararesíduos de aminoácidos básicos e/ou ácidos com resíduos deaminoácidos neutros. Outras substituições podem ser asubstituição do resíduo de C-terminal por homoserina (Hse) .Os exemplos dos derivados incluem, mas sem ficar aelas limitados, a formação de ligações de bissulfetointramoleculares entre os resíduos de cisteína no peptídeo ououtras modificações de modo a formar uma estrutura cíclica ouem forma de anel. Outras modificações pós-translacionaistambém podem ser feitas, tais como a fosforilação, aglicosilação, a amidação de N-terminal, etc. A glicosilaçãopode ser a adição de um resíduo de açúcar, tal como a porçãode N-acetil-D-glucosamina.

Os fragmentos de peptídeo de calcitonina incluempeptídeos de calcitonina que são truncados pela supressão dosresíduos de aminoácidos 1 a 9. No entanto, pode serpreferível que os resíduos 17 a 21 estejam pelo menospresentes no fragmento de calcitonina.

As seqüências dos fragmentos truncados pelasupressão dos resíduos 1 a 9 são tal como segue:Ser-Ala-Tyr-Trp-Arg-Asn-Leu-Asn-Asn-Phe-His-Arg-Phe-Ser-Gly-Met-Gly-Phe-Gly-Pro-Glu-Thr-Pro (Suíno)

Ser-Ala-Tyr-Trp-Lys-Asp-Leu-Asn-Asn-Tyr-His-Arg-Phe-Ser-Gly-Met-Gly-Phe-Gly-Pro-Glu-Thr-Pro (Bovino)

Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro (Salmão)

Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Pro (Enguia)

Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Leu-Gly-Val-Gly-Ala-Pro (Humano)

Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Pro (Galinha)

Os peptídeos preferidos para o uso de acordo com apresente invenção são a calcitonina de salmão (sCt), acalcitonina de enguia (eCt) e a calcitonina humano (hCt), dasfontes tanto naturais quanto recombinantes, ou um fragmentoativo, por exemplo, um (1-9)fragmento tal como descritoacima.

O tratamento da doença ou da condição inflamatóriapode incluir a profilaxia bem como o tratamento da doença. 0tratamento pode ser de um indivíduo humano ou de um indivíduonão-humano.

A doença ou a condição inflamatória pode incluir aartrite reumatóide (RA), a artrite reumatóide juvenil (JRA),a osteodistrofia, a psoríase, a artrite psoriática, aespondilite de anquilose (AS), o lupus eritematoso, aesclerose múltipla (MS), a asma, a terapia imuno-supressora(por exemplo, a cirurgia pós-transplante).

A calcitonina utilizada de acordo com este aspectoda invenção pode ser formulada para ser utilizada porqualquer via conveniente. O medicamento será geralmentefornecido como parte de uma composição farmacêutica estérilque inclui normalmente um veículo farmaceuticamenteaceitável. Essa composição farmacêutica pode estar emqualquer forma apropriada, (dependendo do método desejado deadministração a um paciente).

Ela pode ser fornecida na forma de dosagemunitária, será geralmente fornecida em um recipiente lacradoe pode ser fornecida como parte de um kit. Tal kit devenormalmente (embora não necessariamente) incluir asinstruções para o uso. Ele pode incluir uma pluralidade dasditas formas de dosagem unitária.

A composição farmacêutica pode ser adaptada para aadministração por qualquer via apropriada, por exemplo, pelavia oral (inclusive bucal ou sublingual) , retal, nasal,tópica (inclusive bucal, sublingual ou transdermal) , vaginalou parenteral (inclusive subcutânea, intramuscular,intravenosa ou intradermal). Tais composições podem serpreparadas por qualquer método conhecido no estado da técnicade farmácia, por exemplo, ao misturar o ingrediente ativo como(s) veículo(s) ou o(s) excipiente(s) sob condições estéreis.

As composições farmacêuticas adaptadas para aadministração oral podem ser apresentadas como unidadesdiscretas tais como cápsulas ou comprimidos; como pós ougrânulos; como soluções, xaropes ou suspensões (em líquidosaquoso ou não-aquosos; ou como espumas ou cremes comestíveis;ou como emulsões).

Os excipientes apropriados para comprimidos oucápsulas de gelatina dura incluem a lactose, o amido de milhoou os derivados destes, ácido esteárico ou os seus sais.

Os excipientes apropriados para serem utilizadoscom cápsulas de gelatina mole incluem, por exemplo, óleosvegetais, ceras, gorduras, semi-sólidos, ou polióis líquidos,etc.

Para a preparação das soluções e dos xaropes, osexcipientes que podem ser utilizados incluem, por exemplo, aágua, polióis e açúcares. Para a preparação das suspensões,óleos (por exemplo, óleos vegetais) podem ser utilizados paraformar suspensões do tipo óleo-em-água ou do tipo água-em-óleo.

As composições farmacêuticas adaptadas para aadministração transdermal podem ser apresentadas comoadesivos discretos destinados a permanecer em contato íntimocom a epiderme do receptor por um período de tempoprolongado. Por exemplo, o ingrediente ativo pode seraplicado do adesivo através de iontoforese, tal como descritogeralmente em Pharmaceutical Research, 3(6):318 (1986).

As composições farmacêuticas adaptadas para aadministração tópica podem ser formuladas como pomadas,cremes, suspensões, loções, pós, soluções, pastas, géis,sprays, aerossóis ou óleos. Para infecções do olho ou deoutros tecidos externos, por exemplo, da boca e da pele, ascomposições são aplicadas de preferência como uma pomada ouum creme tópico. Quando formulado em uma pomada, oingrediente ativo pode ser empregado com uma base parafinicaou então pomada miscivel em água. Alternativamente, oingrediente ativo pode ser formulado em um creme com uma basede creme do tipo óleo-em-água ou uma base do tipo água-em-óleo. As composições farmacêuticas adaptadas para aadministração tópica ao olho incluem colírios em que oingrediente ativo é dissolvido ou suspenso em um veículoapropriado, especialmente um solvente aquoso. As composiçõesfarmacêuticas adaptadas para a administração tópica na bocaincluem losangos, pastilhas e líquidos para bochechar.

As composições farmacêuticas adaptadas para aadministração retal podem ser apresentadas como supositóriosou enemas.

As composições farmacêutica adaptadas para aadministração nasal em que o veículo é um sólido incluem umpó espesso que tem um tamanho de partícula, por exemplo, nafaixa de 20 a 500 micra, que é administrado na maneira em queé feita uma aspiração, isto é, pela inalação rápida atravésda passagem nasal de um recipiente do pó mantido próximo donariz. As composições apropriadas em que o veículo é umlíquido, para a administração como um spray nasal ou comogotas nasais, incluem soluções aquosas ou de óleo doingrediente ativo.

As composições farmacêuticas adaptadas para aadministração por inalação incluem pós ou névoas departículas finas que podem ser gerados por meio de váriostipos de aerossóis pressurizados, nebulizadores ouinsufladores de doses medidas.

As composições farmacêuticas adaptadas para aadministração vaginal podem ser apresentadas como pessários,tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou formulações deaspersão.

As composições farmacêuticas adaptadas para aadministração parenteral incluem solução de injeção estérilaquosa e não-aguosa que pode conter anti-oxidantes, agentestampão, bacterióstatos e solutos que tornam a formulaçãosubstancialmente isotônica com o sangue do receptorpretendido; e suspensões estéreis aquosas e não-aquosas quepodem incluir agentes de suspensão e agentes espessantes. Osexcipientes que podem ser utilizados para soluções injetáveisincluem a água, álcoois, polióis, glicerina e óleos vegetais,por exemplo. As composições podem ser apresentadas emrecipientes de uma única dose ou de múltiplas doses, porexemplo, ampolas e frascos lacrados, e podem ser armazenadasem uma condição secada por congelamento (Iiofilizada) querequer somente a adição do líquido estéril carregado, porexemplo, água para injeções, imediatamente antes do uso. Assoluções de injeção e as suspensões extemporâneas podem serpreparadas a partir de pós, grânulos e comprimidos estéreis.

As composições farmacêuticas podem conter agentesconservantes, agentes solubilizantes, agentes estabilizantes,agentes umectantes, emulsificantes, adoçantes, corantes,odorantes, sais (as próprias substâncias da presente invençãopodem ser fornecidas na forma de um sal farmaceuticamenteaceitável), tampões, agentes de revestimento ou anti-oxidantes. Elas também podem conter agentes terapeuticamenteativos além da substância da presente invenção.

As dosagens da substância da presente invençãopodem variar entre limites amplos, dependendo da doença ou dodistúrbio a ser tratado, da idade e da condição do indivíduoa ser tratado, etc., e um médico irá determinar finalmente asdosagens apropriadas a serem utilizadas.Essa dosagem pode ser repetida tão freqüentementequanto apropriado. Se forem gerados efeitos colaterais, aquantidade e/ou a freqüência de dosagem podem ser reduzidas,de acordo com a prática clínica normal.

As realizações de acordo com este aspecto dainvenção se estendem, portanto, a um método de tratamentopara uma doença ou condição inflamatória, o qual compreende aadministração, a um indivíduo com necessidade do mesmo, deuma quantidade terapeuticamente eficaz de uma calcitonina aodito indivíduo.

De acordo com um segundo aspecto da invenção, éapresentado o uso de uma calcitonina e um glucocorticóide napreparação de um medicamento para o tratamento de uma doençaou uma condição inflamatória.

O glucocorticóide pode ser a prednisona,prednisolona, dexametasona, metilprednisolona, budesonida,hidrocortisona, betametasona, triamcinolona oufludrocoritisona. Um glucocorticóide preferido pode ser aprednisolona.

Uma vantagem deste aspecto da invenção é que elepermite uma redução da dose de glucocorticóide (desse modoreduzindo o efeito da osteoporose secundária). A calcitoninapode agir eficazmente como um antagonista funcional da perdade osso induzida por glucocorticóide. A combinação de umacalcitonina e de um glucocorticóide no tratamento de umadoença ou uma condição inflamatória resulta em um efeitosinergístico em relação ao tratamento convencional utilizandoapenas um glucocorticóide.

As realizações de acordo com este aspecto dainvenção se estendem, portanto, a um método de tratamentopara uma doença ou uma condição inflamatória, o qualcompreende a administração, a um indivíduo com necessidade domesmo, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de umacalcitonina e de um glucocorticóide ao dito indivíduo.

Este aspecto da invenção, portanto, também seestende a um kit de partes, opcionalmente contendo instruçõespara o uso, o qual compreende uma calcitonina e umglucocorticóide para a administração separada, simultânea ouseqüencial a um indivíduo com necessidade do mesmo.

De acordo com um terceiro aspecto da invenção, éapresentado um uso de acordo com o primeiro ou o segundoaspecto da invenção, em que o medicamento também compreendeuma droga anti-reumática.

A droga anti-reumática pode ser methotrexate ousulfasalazine.

As realizações de acordo com este aspecto dainvenção se estendem, portanto, a um método de tratamentopara uma doença ou uma condição inf lamatõria, o qualcompreende a administração, a um indivíduo com necessidade domesmo, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de umacalcitonina, um glucocorticóide e uma droga anti-reumática aodito indivíduo.

Este aspecto da invenção, portanto, também seestende a um kit de partes, opcionalmente contendo asinstruções para o uso, o qual compreende uma calcitonina, umglucocorticóide e uma droga anti-reumática para aadministração separada, simultânea ou seqüencial a umindivíduo com necessidade do mesmo.

De acordo com um quarto aspecto da invenção, éapresentado um uso de acordo com o primeiro ou o segundoaspecto da invenção, em que o medicamento também compreendeum anti-corpo.

O anti-corpo pode ser monoclonal ou policlonal. Osanti-corpos podem ser de uma fonte humana ou não-humana. Osanti-corpos humanizados ou totalmente humanos podem serpreferíveis de acordo com realização da invenção, onde oindivíduo a ser tratado é um ser humano.

Os anti-corpos policlonais podem ser obtidos aoestimular a sua produção em um hospedeiro animal apropriado(por exemplo, um camundongo, um rato, um porquinho-da-índia,um coelho, um carneiro, uma cabra ou um macaco) quando umhapteno apropriado é injetado no animal. Se for necessário,um adjuvante pode ser administrado junto com a substância dapresente invenção. Os anti-corpos podem então ser purificadosem virtude de sua ligação a uma substância da presenteinvenção.

Apropriadamente, o hapteno é uma substânciaassociada com o surgimento ou a progressão de uma doença ouuma condição inflamatória, tal como, por exemplo, o receptorde TNF (TNF-R).

Os anti-corpos monoclonais podem ser produzidos apartir de hibridomas. Estes podem ser formados ao fundir ascélulas de mieloma e as células do baço que produzem o anti-corpo desejado a fim de formar uma linhagem de célulasimortais. Esta é a técnica bem conhecida de Kohler & Milstein(Nature 256 52-55 (1975) ) . As técnicas para a produção deanti-corpos monoclonais e policlonais que se ligam a umaproteína particular estão agora bem desenvolvidas no estadoda técnica. Elas são discutidas em livros de textos deimunologia padrão, por exemplo, em Roitt et al. , Immunology,segunda edição (1989), Churchill Livingstone, Londres.Alternativamente, a tecnologia de exibição de fago pode serutilizada (McCafferty et al. , Nature 348: 552-554 (1990); etal como descrito no pedido de patente WO 92/01047).

Além dos anti-corpos integrais, o termo anti-corpoestende-se às partes do mesmo que podem se ligar aoshaptenos. Desse modo, a presente invenção inclui fragmentosde anti-corpo e construtos sintéticos. Os exemplos defragmentos de anti-corpo e de construtos sintéticos sãofornecidos por Dougall et al. em Tibtech 12 372-379 (1994).

Os fragmentos de anti-corpo incluem, por exemplo,fragmentos de Fab, de F(ab')2 e de Fv (consultar Roitt et al.[supra]). Os fragmentos de Fv podem ser modificados paraproduzir um construto sintético conhecido como uma moléculade cadeia simples de Fv (scFv), um fragmento de anti-corpo decadeia simples (scAb) ou um diacorpo que compreende umdomínio variável de cadeia (Vh) pesada conectado a um domíniovariável de cadeia (Vl) leve que pode ser bivalente oubiespecífico. Tais fragmentos podem, portanto, incluir umligador de peptídeo que une covalentemente as regiões de Vh ede Vl que contribuem para a estabilidade da molécula. Osfragmentos de peptídeos menores do domínio de Vh e do domíniode Vl também podem ser utilizados.

Outros construtos sintéticos incluem peptídeos CDR.Estes são peptídeos sintéticos que compreendem determinantesde ligação de antígeno. Simulações de peptídeos também podemser utilizadas. Essas moléculas são geralmente anéisorgânicos conformacionalmente restritos que imitam aestrutura de um laço de CDR e que incluem cadeias lateraisinterativas com antígenos.

Os construtos sintéticos incluem moléculasquiméricas. Desse modo, por exemplo, anti-corpos humanizados(ou primatizados) ou os derivados destes estão dentro doâmbito da presente invenção. Um exemplo de um anti-corpohumanizado é um anti-corpo que tem regiões de estruturahumana, mas regiões hipervariáveis de roedor. Os construtossintéticos também incluem as moléculas que compreendem umaporção covalentemente ligada que confere à molécula algumapropriedade desejável além da ligação do antígeno. Porexemplo, a porção pode ser uma etiqueta (por exemplo, umaetiqueta fluorescente ou radioativa) ou ura agentefarraaceuticamente ativo.

Em uma realização preferida, o anti-corpo éetanercept. Etanercept (ENBREL®) é uma proteína de fusãodimérica que consiste na porção de ligação de ligandoextracelular do receptor de fator de necrose de tumor de 75quiIodaitons humano (p75) (TNFR) ligado à porção Fc de IgGlhumano. 0 componente Fc de etanercept contém o domínio CH2, odomínio CH3 e a região de articulação, mas não o domínio CHlde IgGl. 0 etanercept é produzido pela tecnologia de DNArecombinante em um sistema de expressão de células demamífero de ovário de hamster chinês (CHO). Ele consiste em934 aminoácidos e tem um peso molecular aparente deaproximadamente 150 quilodaltons.

O etanercept foi descrito nos documentos EP 939121,EP 418014, EP 471701, EP 464533, EP 1132471, EP 417563, EP620739, EP 670730, EP 1239043, WO 91/03553, WO 3094/06476, WO 93/19777 e US 5605690.

As realizações de acordo com este aspecto dainvenção se estendem, portanto, a um método de tratamentopara uma doença ou uma condição inf lamatória, o qualcompreende a administração, a um indivíduo com necessidade domesmo, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de umacalcitonina, um glucocorticóide e um anti-corpo ao ditoindivíduo.

Este aspecto da invenção, portanto, também seestende a um kit de partes, opcionalmente contendo asinstruções para o uso, o qual compreende uma calcitonina, umglucocorticóide e um anti-corpo para a administraçãoseparada, simultânea ou seqüencial a um indivíduo comnecessidade do mesmo.

De acordo com uma realização preferida da invenção,é apresentado um uso tal como descrito acima, de umacalcitonina na preparação de um agente para o tratamento deuma doença ou uma condição inflamatória, em que a calcitoninaé calcitonina de salmão ou calcitonina de enguia, e omedicamento também compreende um glucocorticóide,apropriadamente a prednisolona, no tratamento da artritereumatóide.

A presente invenção apresenta, portanto, aadministração e a exploração de um efeito anti-inflamatórioda calcitonina não reconhecido até o presente momento. Acalcitonina é anti-inflamatória como um único agente mas éainda mais drasticamente eficaz com outros agentes anti-inf lamatórios , tais como glucocorticóides. A calcitonina agesinergisticamente com a prednisolona. Este último efeito ésuficientemente forte para reduzir a dose requerida deprednisolona pelo menos em cinco vezes, desse modo evitandopotencialmente os efeitos colaterais prejudiciais deesteróides a uma dose elevada (por exemplo, a osteoporoseinduzida por glucocorticóide (GC)).

Os testes foram realizados tal como descrito abaixocom a administração da calcitonina em um modelo animal deartrite reumatóide em combinação com a prednisolona, otratamento padrão neste modelo. 0 foco da calcitoninaconsistia na redução da ressorção osteoclástica aumentado noosso periarticular que é associada com a artrite reumatóidegrave. Inesperadamente, no entanto, foi verificado que acalcitonina tem um efeito anti- inflamatório profundo nestemodelo, especialmente quando co-administrada com aprednisolona, onde a calcitonina potencializou o efeito anti-inf lamatório da prednisolona a uma baixa dose.

As características preferidas para o segundoaspecto e os aspectos subseqüentes da invenção são as mesmasque para o primeiro aspecto mutatis mutandis.

EXEMPLOSA presente invenção será ainda descrita agora parafins de ilustração apenas com referência aos seguintesexemplos, que não devem ser interpretados como limitadores nainvenção. Nos exemplos, também é feita referência a um númerode desenhos, nos quais:

a FIGURA 1 mostra a relação entre CIA e oinchamento da pata (sintoma físico associado com o rompimentode junta);

a FIGURA 2 mostra o efeito do peso do corpo notratamento;

a FIGURA 3 mostra a contagem clínica;a FIGURA 4 mostra o grau de incidência da doença emgrupos diferentes;

as FIGURAS 5 e 6 mostram os mesmos dados dasFIGURAS 1 e 3, mostrando apenas os grupos CT e Pred+CT;

a FIGURA 7 mostra a atividade anti-inflamatória dacalcitonina apenas.

Experiência 1: Estudo do efeito do protocolo de tratamento naartrite experimentalmente induzida

Artrite induzida por colãgeno II (CIA). Ratos Lewis fêmeas(peso do corpo de 150 ± 20 g; Harlan UK Ltd, Bicester,Oxfordshire, Inglaterra) foram alimentados em uma dietapadrão de pelotas para mastigar e tiveram acesso livre à águae mantidos em ciclos de luz/escuridão de doze horas. 0trabalho animal foi realizado sob a licença do Home Office deacordo com a Lei de Animais (Procedimentos Científicos),1986. Colágeno II nasal de bovino (4 mg/ml; Sigma-AldrichLtd, Poole, Reino Unido) foi dissolvido em ácido acético(0,01 M) e em seguida emulsionado com o mesmo volume deadjuvante incompleto de Freund gelado (Sigma-Aldrich). No dia0, os ratos foram anestesiados com halothane, a base da caudafoi raspada, e injetados intradermalmente com suspensão decolágeno II/adjuvante (400 pg de colágeno II por rato). Osprimeiros sinais da artrite ficaram evidentes entre os dias11 e 13, com a inflamação máxima observado nos dias 18-21.

A inflamação induzida por CIA foi confinada àsjuntas dos tornozelos e às patas das pernas traseiras (comenvolvimento de dígito em casos graves). Os tornozelostraseiros foram marcados clinicamente em uma escalaarbitrária, variando de 0 (nenhuma inflamação) a três(inflamação grave, envolvendo os tornozelos, patas edígitos) . Além disso, entre os dias 0 e 18 os volumes daspatas traseiras foram medidos utilizando um pletismômetro(Ugo Basile, Milão, Itália) e os valores foram calculados namédia para obter uma medição da inflamação para cada animal.

CT de salmão foi dissolvida em PBS com 0,1% de BSAe administrado diariamente a uma dose de 2 pg/kg por rato.Prednisolona (21-hemisuccinato de prednisolona, sal de sódio)foi dissolvida em PBS com 0,1% de BSA e o i.p. foiadministrado em doses de 0,6 e 3 mg/kg (que correspondem a1,2 e 6,2 pmol/kg), sozinho ou com a CT. Os tratamentos decontrole consistiam em PBS com 0,1% de BSA.

A Figura 1 mostra que o CIA foi caracterizado porum aumento marcante no inchamento da pata (sintoma físicoassociado com o rompimento de junta) . 0 tratamento com a CT(ou com uma baixa dose de prednisolona (Pred) ) não modificouo inchamento da pata. No entanto, a combinação de CT +prednisolona a uma baixa dose resultou em uma atenuaçãomarcante do inchamento da pata (losangos azuis). Este efeitonão era mais evidente quando uma dose anti- inflamatóriatotal de GC foi aplicada. Os efeitos descritos na Figura 1não eram secundários à alteração no estado de saúde dosanimais, uma vez que o peso do corpo não era diferenteatravés dos tratamentos diferentes (Figura 2) . A Figura 3mostra que as mudanças no inchamento da pata também foramrefletidas nas alterações na contagem clínica. Finalmente, afigura 4 ilustra ο grau de incidência da doença era gruposdiferentes. Outra vez, o efeito protetor da CT + prednisolonaa uma baixa dose é notável. Em todas essas figuras, osvalores são a média ± o erro padrão médio de η = 10 ratos porgrupo. A diferença estatística para um valor de P menor doque 0,05 foi obtida pelos dois grupos com a prednisolona auma dose elevada (com ou sem a CT), bem como pelo grupo de CT+ prednisolona a uma baixa dose (losangos azuis). As Figuras5 e 6 relatam os mesmos dados das Figuras 1 e 3, mostrandoapenas os grupos de CT e Pred+CT.

Em experiências mais antigas precedentes, otratamento com calcitonina (0,5 pg/rato) produziu uma açãoanti-inflamatória suave por si mesmo (vide a Figura 7).

Conclusão

Estes resultados mostram que o tratamento combinadoda calcitonina com um GC tem propriedades anti- inflamatóriano modelo de artrite induzida por colágeno e deve permitirque a redução da dose de GC seja eficaz. Também vale a penaobservar os efeitos anti-inflamatórios produzidos por essadose de CT que inibiu entre 5 e 20% da resposta artrítica.

Claims (20)

1. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, caracterizada pelofato de compreender uma calcitonina, um glucocorticóide e umveículo farmaceuticamente aceitável.

2. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com areivindicação 1, caracterizada pelo fato de que oglucocorticóide é selecionado do grupo que consiste emprednisolona, dexametasona, metil prednisolona, budesonida,hidrocortisone, betametasona, triamcinolona efludrocoritisona prednisolona.

3. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com areivindicação 1 ou a reivindicação 2, caracterizada pelo fatode compreender adicionalmente mais uma droga anti-reumática.

4. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com areivindicação 3, caracterizada pelo fato de que a droga anti-reumática é metotrexate.

5. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo comqualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelofato de compreender adicionalmente um anticorpo ou umfragmento ou um derivado do mesmo.

6. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com areivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o anticorpo éelevado contra TNF-receptor (TNF-R).

7. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com areivindicação 5 ou a reivindicação 6, caracterizada pelo fatode que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.

8. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com areivindicação 7, caracterizada pelo fato de que o anticorpomonoclonal é etanercept.

9. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo comqualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelofato de servir para o uso na medicina.

10. USO DE UMA CALCITONINA E UM GLUCOCORTICÓIDE,caracterizada pelo fato de servir na preparação de ummedicamento para o tratamento de uma doença ou condiçãoinflamatória.

11. USO, de acordo com a reivindicação 10,caracterizada pelo fato de que o glucocorticóide éselecionado do grupo que consiste em prednisolona,dexametasona, metilprednisolona, budesonida, hidrocortisona,betametasona, triamcinolona e fludrocoritisona prednisolona.

12. USO, de acordo com a reivindicação 10 ou areivindicação 11, caracterizada pelo fato de que omedicamento compreende adicionalmente uma droga anti-reumática.

13. USO, de acordo com a reivindicação 12,caracterizada pelo fato de que a droga anti-reumática émetotrexate.

14. USO, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 10 a 13, caracterizada pelo fato de que omedicamento compreende adicionalmente um anticorpo ou umfragmento ou um derivado do mesmo.

15. USO, de acordo com a reivindicação 14,caracterizada pelo fato de que o anticorpo ê elevado contraTNF-Receptor (TNF-R).

16. USO, de acordo com a reivindicação 14 ou areivindicação 15, caracterizada pelo fato de que o anticorpoé um anticorpo monoclonal.

17. USO, de acordo com a reivindicação 16,caracterizada pelo fato de que o anticorpo monoclonal é umaproteína de fusão de anticorpo monoclonal.

18. USO, de acordo com a reivindicação 17,caracterizada pelo fato de que a proteína de fusão deanticorpo monoclonal é etanercept.

19. KIT DE PARTES QUE COMPREENDEM UMA CALCITONINAE UM GLUCOCORTICÓIDE, caracterizada pelo fato de servir paraa administração separada, simultânea ou seqüencial a umindivíduo com necessidade dos mesmos.

20. KIT DE PARTES QUE COMPREENDEM UMA CALCITONINA,UM GLUCOCORTICÓIDE E UMA DROGA ANTI-REUMÁTICA, caracterizadapelo fato de servir para a administração separada, simultâneaou seqüencial a um indivíduo com necessidade dos mesmos.