BR112020008488A2 - tratamento de doenças alérgicas mediadas por ige - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a métodos para tratar um distúrbio associado à imunoglobulina E (IgE) em um indivíduo com anticorpos capazes de se ligar ao domínio de C¿mx de uma IgE ligada à membrana. Pode-se administrar ao sujeito pelo menos duas doses do anticorpo, com um intervalo entre as duas doses de pelo menos três meses.

Description

“TRATAMENTO DE DOENÇAS ALÉRGICAS MEDIADAS POR IgE”

PEDIDO RELACIONADO

[001]Este pedido reivindica o benefício da data de depósito sob 35 USC 8119 do Pedido Provisório dos Estados Unidos Número de Série 62/579.416, depositado em 31 de outubro de 2017, cujo conteúdo inteiro é incorporado por referência neste documento.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002]A IgE desempenha um papel central na mediação de reações de hiper- sensibilidade tipo | responsáveis por causar doenças alérgicas, incluindo asma alér- gica, rinite alérgica, dermatite atópica e outras. As reações alérgicas são as respostas do sistema imunológico a substâncias ambientais inofensivas, como ácaros, pólen de árvores e grama, certos alimentos e fármacos e picadas de abelhas e formigas de fogo. Nessas reações, a ligação de um alergênio à IgE na superfície dos basófilos e mastócitos causa a reticulação da IgE e a agregação dos receptores subjacentes da IgE.Fc, os receptores IgE.Fc do tipo |, ou FceRI. Essa agregação de receptores ativa subsequentemente a via de sinalização que leva à exocitose de grânulos e à liberação de mediadores farmacológicos, como histamina, leucotrienos, triptase, citocinas e qui- miocinas. A liberação desses mediadores de mastócitos e basófilos causa as várias manifestações patológicas da alergia.

[003]Existem dois tipos de moléculas de IgE, IgE livre (ou solúvel) e IgE ligada à membrana (mIgE). Moléculas de IgE livres circulam no sangue e no líquido intersti- cial. A mIgE é expressa na superfície dos linfoblastos B e células B de memória. Acre- dita-se que o alvo de mIgE seja eficaz na inibição da produção de IgE específica de antígeno e, assim, suprima as respostas imunes medicadas por IgE.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[004]A presente divulgação é baseada na descoberta inesperada de que uma dose única de FB825, um anticorpo que tem como alvo o domínio CemX de mlgE em células linfocíticas B humanas, reduziu com sucesso o nível de IgE total em indivíduos humanos por pelo menos três meses.

[005] Consequentemente, um aspecto da presente divulgação fornece um mé- todo para o tratamento de um distúrbio associado à IgE, sendo que o método compre- ende administrar, a um sujeito em necessidade da mesma, uma primeira dose de um anticorpo que se liga a um domínio Cemx de uma IgE ligada à membrana; e adminis- trar ao sujeito uma segunda dose do anticorpo. A segunda dose é administrada pelo menos 8 semanas (por exemplo, pelo menos 10 semanas, 12 semanas ou 3 meses) após a primeira dose.

[006]Em qualquer um dos métodos aqui descritos, a primeira dose, a segunda dose ou ambas podem variar de 0,5 mg/kg a 15 mg/kg (por exemplo, 1 mg/kg a 15 mg/kg). Por exemplo, a primeira dose, a segunda dose ou ambas variam de 1 mg/kg a 8 mg/kg (por exemplo, 1,5 mg/kg a 10 mg/kg). A primeira dose, a segunda dose ou ambas podem ser administradas por injeção intravenosa.

[007]O sujeito a ser tratado pelo método aqui descrito pode ser um paciente humano com ou suspeita de ter o distúrbio associado à IgE, por exemplo, asma alér- gica, rinite alérgica, síndrome de hiper IgE ou dermatite atópica. Em algumas modali- dades, o distúrbio é urticária induzida pelo frio, urticária crônica, urticária colinérgica, rinossinusite crônica, mastocitose sistêmica, mastocitose cutânea, aspergilose bron- copulmonar alérgica, angioedema idiopático recorrente e cistite intersticial, distúrbios gastrointestinais associados a eosinófilos, uma alergia a alimentos ou uma alergia a fármacos.

[008]Em outro aspecto, a presente divulgação fornece um método de trata- mento de dermatite atópica, sendo que o método compreende administrar a um sujeito em necessidade da mesma uma primeira dose de um anticorpo que se liga a um do- mínio Cemx de uma IgE ligada à membrana; em que a primeira dose é de cerca de 1 mg/kg a 10 mg/kg (por exemplo, 3 mg/kg a 8 mg/kg, por exemplo, 5 mg/kg). O método pode ainda compreender administrar ao sujeito uma segunda dose do anticorpo cerca de 3 meses após a primeira dose se, no momento da segunda dose, a alteração do nível total de IgE no sujeito do nível total de IgE antes da primeira dose for inferior a 50%. Em alguns casos, a segunda dose pode ser idêntica à primeira dose, por exem- plo, 5 mg/kg. A primeira dose do anticorpo, a segunda dose do anticorpo ou ambas podem ser administradas por infusão intravenosa.

[009]Em qualquer dos métodos descritos acima, um hidratante é aplicado ao paciente pelo menos duas vezes por dia, durante pelo menos sete dias consecutivos antes da primeira dose. Alternativamente ou além disso, o método pode ainda com- preender administrar ao sujeito um corticosteroide tópico. Em alguns casos, o corti- costeroide tópico é aplicado a uma lesão ativa diariamente. Esse corticosteroide tópico pode ser um creme de propionato de fluticasona a 0,05%, um creme de furoato de monetasona a 0,1%, um valerato de betametasona a 0,06% ou uma pomada de hi- drocortisona a 1%. Em outros casos, o corticosteroide tópico pode ser um creme de fluocinonida a 0,05%, uma pomada de desoximetasona a 0,25% ou uma pomada de propionato de clobetaso! a 0,05%.

[010]Em algumas modalidades, o sujeito está livre de tratamento tópico com tacrolimo, tratamento tópico com pimecrolimo, tratamento sistêmico com corticosteroi- des, tratamento com inibidor de leucotrienos, imunoterapia com alergênios, um trata- mento envolvendo um agente imunossupressor ou imunomodulador, tratamento com vacina, um tratamento envolvendo um medicamento tradicional chinês, um procedi- mento cirúrgico, um procedimento ultravioleta ou bronzeamento.

[011]Em qualquer um dos métodos de tratamento aqui descritos, o anticorpo anti-CemX aqui descrito pode se (ligar ao fragmento de mlgE GLAGGSAQSQRAPDRVL (SEQ I|D NO: 1) ou ao fragmento de mIgE GLAGGSAQSQRA (SEQ ID NO: 7). Em alguns casos, o anticorpo se liga ao mesmo epítopo que o anticorpo 4B12 (FB825) ou compete contra o anticorpo FB825 pela ligação ao domínio Cemx de uma IgE ligada à membrana. Em alguns exemplos, o anticorpo compreende as mesmas regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada que o anticorpo FB825 e/ou as mesmas regiões determinantes de com- plementaridade de cadeia leve que o anticorpo FB825. Tal anticorpo pode ser um anticorpo humanizado de 4B12, por exemplo, FB825. O anticorpo pode compreender uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2 e/ou uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3. Qualquer um dos anticorpos utilizados em qualquer um dos métodos aqui descritos pode ser um anticorpo completo ou um seu fragmento de ligação a antígeno. O anticorpo pode ser um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo quimérico ou um anticorpo de cadeia única.

[012]Em qualquer um dos métodos aqui descritos, o anticorpo anti-CemX pode ser formulado em uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo, um tampão (por exemplo, um tampão compreendendo um aminoácido como histidina), um sal (por exemplo, cloreto de sódio) e um tensoativo não iônico (por exemplo, po- lissorbato 80). Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é uma solução aquosa com um pH de 5 a 8. Em alguns exemplos, o anticorpo na composição farma- cêutica é de cerca de 10 mg/ml a 30 mg/ml (por exemplo, cerca de 20 mg/ml), o tam- pão de histidina tem uma concentração de cerca de 10 a 30 mM (por exemplo, cerca de 20 mM), o cloreto de sódio tem uma concentração de cerca de 120 a 160 mM (por exemplo, cerca de 140 mM) e o polissorbato 80 tem uma concentração de cerca de 0,01 a 0,03% (por exemplo, cerca de 0,02%). Qualquer uma das composições farma- cêuticas aqui descritas também está dentro do escopo da presente divulgação.

[013]Em outro aspecto, é aqui fornecida uma formulação aquosa, compreen- dendo qualquer um dos anticorpos anti-CemX aqui descritos (por exemplo, FB825 ou uma variante funcional do mesmo) em uma concentração de 10 mg/ml a 30 mg/ml,

um tampão compreendendo um aminoácido (por exemplo, histidina) em uma concen- tração de cerca de 10 a 30 mM, um sal (por exemplo, cloreto de sódio) em uma con- centração de cerca de 120 a 160 mM e um tensoativo não iônico (por exemplo, polis- sorbato 80) em uma concentração de cerca de 0,01 a 0,03%, em que a formulação aquosa tem um pH de cerca de 5 a 8. Em um exemplo, a formulação aquosa compre- ende que o anticorpo está em uma concentração de cerca de 20 mg/ml, o tampão de histidina está em uma concentração de cerca de 20 mM, o cloreto de sódio está em uma concentração de cerca de 140 mM e o polissorbato 80 está em uma concentração de cerca de 0,02%, e em que a formulação aquosa tem um pH de cerca de 6,5.

[014] Também dentro do escopo da presente divulgação estão (i) uma compo- sição farmacêutica para uso no tratamento de distúrbios associados a IgE, como aqui descrito, em que a composição farmacêutica compreende um anticorpo anti-CemX e um carreador farmaceuticamente aceitável, e em que a composição farmacêutica é administrado a um sujeito em necessidade do tratamento por pelo menos duas doses, com pelo menos 8 semanas (por exemplo, pelo menos 10 semanas, 12 semanas ou três meses de intervalo ou intervalo de 12 semanas a 6 meses); e (ii) usos do anticorpo anti-CemX na fabricação de um medicamento para uso no tratamento do distúrbio as- sociado à IgE, em que o medicamento pode ser administrado a um sujeito em neces- sidade do tratamento por pelo menos duas doses, que são pelo menos três meses separados.

[015]Os detalhes de uma ou mais modalidades da invenção são apresentados na descrição abaixo. Outras características ou vantagens da presente invenção serão evidentes a partir dos desenhos a seguir e descrição detalhada de várias modalida- des, e também formam as reivindicações anexas.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[016]A Figura 1 é um diagrama que mostra a alteração média (t+ SD) da linha de base na IgE total ao longo do tempo em indivíduos humanos tratados com uma dose única de FB825. A IgE total foi determinada a partir de amostras de sangue. À linha de base foi definida como a última avaliação que não faltava (incluindo avalia- ções repetidas e não programadas) antes da administração do fármaco em estudo.

[017]A Figura 2 é um diagrama que mostra a variação percentual média (+ SD) da linha de base na IgE total ao longo do tempo em indivíduos humanos tratados com uma dose única de FB825. Os níveis totais de IgE em amostras de sangue obti- das de seres humanos foram determinados. A linha de base foi definida como a última avaliação que não faltava (incluindo avaliações repetidas e não programadas) antes da administração do fármaco em estudo.

[018]A Figura 3 é um diagrama que mostra a alteração média (t+ SD) da linha de base no anticorpo antidrogas (ADA) ao longo do tempo em indivíduos humanos tratados com uma dose única de FB825. ADA em amostras de sangue obtidas dos sujeitos foi determinada. A linha de base é definida como a última avaliação que não faltava (incluindo avaliações repetidas e não programadas) antes da administração de fármaco em estudo.

[019]A Figura 4 mostra o alinhamento de sequências de aminoácido do Vr e VL de anticorpo monoclonal 4B12 e anticorpo monoclonal FB825, o qual é um anti- corpo humanizado 4B12. Variações entre os dois anticorpos são destacadas. As regi- ões determinantes de complementaridade (CDRs) Vr e V.L estão em negrito e subli- nhadas. Vx de 4B12: SEQ ID NO: 4. V. de 4B12: SEQ ID NO: 5. Vx de FB825: SEQ ID NO: 2. V. de FB825: SEQ ID NO: 3.

[020]A Figura 5 é um diagrama que mostra a porcentagem de mudança da linha de base no Índice de Gravidade do Eczema por Área (EASI) nos dias 8, 15, 29, 57, 85, 92, 99, 113, 141 e 169 no Estudo Exploratório Aberto para Avaliar a Segurança e Eficácia do FB825 em Adultos com Dermatite Atópica.

[021]A Figura 6 é um diagrama que mostra a percentagem de mudança da linha de base na Avaliação Global do Investigador (IGA) nos dias 8, 15, 29, 57, 85, 92,

99, 113, 141 e 169 na Estudo Exploratório Aberto para Avaliar a Segurança e Eficácia do FB825 em Adultos com Dermatite Atópica.

[022]A Figura 7 é um diagrama que mostra a porcentagem de mudança da linha de base no Índice de Gravidade da Dermatite Atópica (SCORAD) nos dias 8, 15, 29, 57, 85, 92, 99, 113, 141 e 169 no Estudo Exploratório Aberto para Avaliar a Segu- rança e Eficácia do FB825 em Adultos com Dermatite Atópica.

[023]A Figura 8 é um diagrama que mostra a porcentagem de mudança da linha de base na Escala Analógica Visual Prurido (VAS) nos dias 8, 15, 29, 57, 85, 92, 99, 113, 141 e 169 no Estudo Exploratório Aberto para Avaliar a Segurança e Eficácia do FB825 em Adultos com Dermatite Atópica.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[024]Em indivíduos atópicos com risco aumentado de desenvolver alergias, a concentração de IgE no sistema circulatório pode atingir mais de 10 vezes o nível normal. A concentração de anticorpos IgE específicos para alergênios está intima- mente correlacionada com sintomas clínicos e pode ser 1.000 vezes maior em paci- entes com doenças alérgicas do que em indivíduos saudáveis. A imunoglobulina E sensibiliza células efetoras, como basófilos, mastócitos e eosinófilos ativados, ocu- pando o receptor IgE de alta afinidade, FceRI, no qual são expressos. Na hipersensi- bilidade do tipo |, os alergênios reticulam moléculas de IgE ligadas ao FceRI e subse- quentemente desencadeiam a degranulação de células efetoras, liberando mediado- res pró-inflamatórios, como histaminas e leucotrienos. A via alérgica mediada por IgE, que gera sintomas alérgicos relacionados a mediador, inicia atividades imunológicas local ou sistemicamente. Basófilos e mastócitos também liberam um amplo espectro de quimiocinas e citocinas inflamatórias que não apenas causam sintomas clínicos diretamente, mas também ativam e recrutam vários tipos de células para aumentar a situação inflamatória. Portanto, a terapia anti-|lgE pode atenuar a via mediada por IgE e as condições inflamatórias.

[025]Aqui, são descritos anticorpos anti-CemX para uso na redução do nível total de IgE e, portanto, no tratamento de distúrbios medicados com |g-E. Esses anti- corpos podem ser administrados a um sujeito com necessidade de tratamento em pelo menos duas doses, que podem ter pelo menos 8 semanas (por exemplo, 10 semanas, 12 semanas ou 3 meses) de diferença.

ANTICORPOS CAPAZES DE SE LIGAR A UM DOMÍNIO C e«MX DE UMA IgE

LIGADA À MEMBRANA

[026]CemX é um segmento de 52 aminoácidos localizado entre o domínio CH4 e o segmento de ancoragem à membrana C-terminal da cadeia e ligada à membrana humana (me). A sequência de aminoácidos de um fragmento CemX exemplar de mIlgE humana é fornecida abaixo (SEQ ID NO: 6):

GLAGGSAQSQ RAPDRVLCHS GQAQQGLPRAA GGSVPHPRCH CGAGRADWPG PP

[027]Os anticorpos aqui descritos podem ligar-se ao domínio CemX de uma mIgE, por exemplo, mIlgE expressa na superfície de células B. Tais anticorpos podem induzir a morte celular das células B que expressam mlIgE via, por exemplo, citotoxi- cidade celular dependente de anticorpo e/ou apoptose celular, eliminando assim as células B, o que levaria a uma produção reduzida de IgE livre. Por conseguinte, os anticorpos anti-CemX aqui descritos podem reduzir o nível de IgE total em um sujeito (por exemplo, um paciente humano) sendo tratado com o anticorpo.

[028]Um anticorpo (intercambiavelmente usado na forma plural) é uma molé- cula de imunoglobulina capaz de ligação específica a um alvo, como carboidrato, po- linucleotídeo, lipídio, polipeptídeo, etc., através de pelo menos um local de reconheci- mento de antígeno, localizado na região variável da molécula de imunoglobulina. Como usado aqui, o termo "anticorpo" abrange não apenas anticorpos policlonais ou monoclonais intactos (ou seja, de comprimento total), mas também seus fragmentos de ligação a antígeno (como Fab, Fab', F(ab')2, Fv), cadeia única (scFv), seus mutan- tes, proteínas de fusão que compreendem uma porção de anticorpo, anticorpos hu- manizados, anticorpos quiméricos, diabetes, anticorpos lineares, anticorpos de cadeia única, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos) e qualquer outra configuração modificada da molécula de imunoglobulina que compreende um local de reconhecimento de antígeno da especificidade necessária, incluindo variantes de glicosilação de anticorpos, variantes de sequência de aminoácidos de anticorpos e anticorpos modificados covalentemente. Um anticorpo inclui um anticorpo de qualquer classe, como IgD, IgE, IgG, IgA ou IgM (ou sua subclasse), e o anticorpo não precisa ser de nenhuma classe específica. Dependendo da sequência de aminoácidos do an- ticorpo do domínio constante de suas cadeias pesadas, as imunoglobulinas podem ser atribuídas a diferentes classes. Existem cinco classes principais de imunoglobuli- nas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, e várias delas podem ser divididas em subclasses (iso- tipos), por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2. Os domínios constantes de cadeia pesada que correspondem às diferentes classes de imunoglobulinas são cha- mados alfa, delta, épsilon, gama e mu, respectivamente. As estruturas das subunida- des e configurações tridimensionais de diferentes classes de imunoglobulinas são bem conhecidas.

[029]Os anticorpos a serem utilizados nos métodos aqui descritos podem ser murinos, de ratos, humanos ou qualquer outra origem (incluindo anticorpos quiméricos ou humanizados).

[030] Qualquer um dos anticorpos aqui descritos pode ser monoclonal ou poli- clonal. Um "anticorpo monocional" refere-se a uma população de anticorpos homogê- neos e um "anticorpo policlonal" refere-se a uma população de anticorpos heterogê- neos. Esses dois termos não limitam a fonte de um anticorpo ou a maneira como ele é produzido.

[031]Em um exemplo, o anticorpo usado nos métodos aqui descritos é um anticorpo humanizado. Anticorpos humanizados referem-se a formas de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos) que são imunoglobulinas quiméricas específi- cas, cadeias de imunoglobulina ou seus fragmentos de ligação a antígeno que contêm sequência mínima derivada da imunoglobulina não humana. Na maior parte, os anti- corpos humanizados são imunoglobulinas humanas (anticorpo receptor) nas quais os resíduos de uma região determinante de complementaridade (CDR) do receptor são substituídos por resíduos de uma CDR de uma espécie não humana (anticorpo doa- dor), como camundongo, rato, ou coelho com a especificidade, afinidade e capacidade desejadas. Em alguns casos, os resíduos da região estrutural Fv (FR) da imunoglo- bulina humana são substituídos pelos resíduos não humanos correspondentes. Além disso, o anticorpo humanizado pode compreender resíduos que não são encontrados no anticorpo receptor nem nas CDRs importadas ou nas sequências estruturais, mas são incluídas para refinar e otimizar ainda mais o desempenho do anticorpo. Em geral, o anticorpo humanizado compreenderá substancialmente todos os pelo menos um e, tipicamente dois, domínios variáveis, nos quais todas ou praticamente todas as regi- ões CDR correspondem àquelas de uma imunoglobulina não humana e todas ou substancialmente todas as regiões FR são aquelas de uma sequência de consenso de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado otimamente também compreen- derá pelo menos uma porção de uma região ou domínio constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente a de uma imunoglobulina humana. Os anticorpos podem ter regiões Fc modificadas como descrito em WO 99/58572. Outras formas de anticorpos huma- nizados têm uma ou mais CDRs (uma, duas, três, quatro, cinco, seis) que são altera- das em relação ao anticorpo original, que também são denominadas uma ou mais CDRs "derivadas" de uma ou mais CDRs do anticorpo original. Os anticorpos huma- nizados também podem envolver maturação por afinidade.

[032]Em outro exemplo, o anticorpo aqui descrito é um anticorpo quimérico, que pode incluir uma região constante pesada e uma região constante leve de um anticorpo humano. Anticorpos quiméricos referem-se a anticorpos que têm uma região variável ou parte de uma região variável de uma primeira espécie e uma região cons- tante de uma segunda espécie. Normalmente, nesses anticorpos quiméricos, a região variável de cadeias leves e pesadas imita as regiões variáveis de anticorpos derivados de uma espécie de mamífero (por exemplo, um mamífero não humano, como camun- dongo, coelho e rato), enquanto as porções constantes são homólogas às sequências de anticorpos derivados de outro mamífero como o humano. Em algumas modalida- des, modificações de aminoácidos podem ser feitas na região variável e/ou na região constante.

[033]Em alguns exemplos, o anticorpo aqui divulgado liga-se especificamente a um domínio Cemx de uma IgE ligada à membrana, que pode ser expressa na su- perfície de uma célula B. Um anticorpo que "se liga especificamente" (usado aqui de forma alternável) a um alvo ou epítopo é um termo bem entendido na técnica, e mé- todos para determinar essa ligação específica também são bem conhecidos na téc- nica. Diz-se que uma molécula exibe "ligação específica" se reagir ou se associar mais frequentemente, mais rapidamente, com maior duração e/ou com maior afinidade com um antígeno alvo específico do que com alvos alternativos. Um anticorpo "liga-se es- pecificamente" a um antígeno alvo se ele se liga com maior afinidade, avidez, mais prontamente e/ou com maior duração do que se liga a outras substâncias. Por exem- plo, um anticorpo que se liga especificamente (ou preferencialmente) a um epítopo do domínio CemX é um anticorpo que se liga a esse epítopo do domínio CeamX com maior afinidade, avidez, mais prontamente e/ou com maior duração do que se liga a outros epítopos do domínio CemX ou epítopos do domínio não CemX. Também é entendido lendo esta definição que, por exemplo, um anticorpo que se liga especificamente a um primeiro antígeno alvo pode ou não se ligar específica ou preferencialmente a um segundo antígeno alvo. Como tal, "ligação específica" ou "ligação preferencial" não requer necessariamente (embora possa incluir) ligação exclusiva. Geralmente, mas não necessariamente, referência a ligação significa ligação preferencial.

[034]A afinidade de ligação de um anticorpo anti-CemX aqui descrito pode ser inferior a cerca de 100 nM, por exemplo, inferior a cerca de 50 nM, cerca de 10 nM, cerca de 1 nM, cerca de 500 pM, cerca de 100 pM ou cerca de 50 pM a cerca de 2 PM. A afinidade de ligação pode ser expressa Kp ou constante de dissociação, e um aumento da afinidade de ligação corresponde a uma diminuição do Ko. Uma maneira de determinar a afinidade de ligação de anticorpos a CemX é medindo a afinidade de ligação de fragmentos Fab monofuncionais do anticorpo. Para obter fragmentos Fab monofuncionais, um anticorpo (por exemplo, IgG) pode ser clivado com papaína ou expresso de forma recombinante. A afinidade de um fragmento Fab anti-CemX de um anticorpo pode ser determinada por ressonância plasmônica de superfície (sistema BIAcore3000TM de ressonância plasmônica de superfície (SPR), BlAcore, INC, Pis- caway NJ). São obtidas taxas de associação cinética (Kassociação) e taxas de dissocia- ção cinética (Kdissociação) (geralmente medidas a 25 ºC.); e os valores de equilíbrio de dissociação constante (Kp) são calculadas como kdissociação/Kassociação.

[035]Em algumas modalidades, o anticorpo liga o domínio CemX de uma IgE humana e não liga significativamente uma IgE de outra espécie de mamífero. Em al- gumas modalidades, o anticorpo liga a IgE humana, bem como uma ou mais IgE de outra espécie de mamífero. O epítopo (ou epítopos) ligado pelo anticorpo pode ser contínuo ou descontínuo.

[036]Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CemX aqui descrito liga uma porção de terminal N do domínio CemX, por exemplo, GLAGGSAQSQRAPDRVL (SEQ ID NO: 1) ou GLAGGSAQSQRA (SEQ ID NO: 7). Esse anticorpo pode ter as mesmas CDRs de cadeia pesada e/ou cadeia leve que o anticorpo 4B12/FB825, como descrito na Figura 4. Ver também Patente U.S. nº 8.460.664, as divulgações relevan- tes na mesma são incorporadas por referência aqui. O anticorpo anti-CemX pode ser um anticorpo humanizado de 4B12 (por exemplo, FB825). Em alguns exemplos, o anticorpo anti-CemX para uso nos métodos aqui descritos é o FB825, que é um anti- corpo humanizado de 4B12 (Figura 4), ou uma variante funcional do mesmo. Ver tam- bém Patente U.S. nº 8.460.664, as divulgações relevantes na mesma são incorpora- das por referência aqui.

[037]Uma variante funcional (equivalente) do FB825 tem essencialmente a mesma especificidade de ligação a epítopo que o FB825 e exibe bioatividade subs- tancialmente semelhante à do FB825, incluindo a atividade de eliminar células B que expressam mIgE e reduzir o nível de IgE total em um sujeito. Em algumas modalida- des, uma variante funcional do FB825 contém as mesmas regiões/resíduos respon- sáveis pela ligação a antígeno que o FB825, como os mesmos resíduos determinantes da especificidade nas CDRs ou nas CDRs inteiras. Em outras modalidades, uma va- riante funcional de FB825 compreende uma cadeia Vr que inclui uma Vx CDR1, Vr CDR?2 e Vx CDR3 pelo menos 75% (por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98%) idêntica ao correspondente Vx CDR de FB825, e uma cadeia V. que inclui uma V.L CDR1, V. CDR2 e V. CDR3 pelo menos 75% (por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98%) idêntica aos correspondentes Vx CDRs de FB825. Por exemplo, uma variante funcional de FB825 pode compreender uma cadeia Vr que inclui até 5 (por exemplo, 1,2,3,4 ou 5) variações de resíduos de aminoácidos nas regiões Va CDR (Vx CDR1, CDR?2 e/ou CDR3 no total), em comparação com os Vr CDRs de mAb7E e/ou uma cadeia V. que inclui até 5 (por exemplo, 1, 2, 3, 4 ou 5) variações de resíduos de aminoácidos nas regiões V. CDR (V. CDR1, CDR2 e/ou CDR3 no total) em compara- ção com as Vx CDRs do mAb7E.

[038]Alternativamente, a variante funcional do FB825 compreende uma ca- deia Vx pelo menos 75% (por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98%) idêntica à cadeia Vnx de FB825 e uma cadeia V. pelo menos 75% (por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98%) idêntica ao da cadeia V. de FB825. As variações da sequência de ami- noácidos podem ocorrer apenas em uma ou mais das regiões estruturais Vx e/ou V..

[039]A “percentagem de identidade” das duas sequências de aminoácidos é determinada utilizando o algoritmo de Karlin e Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 87:

2.264 a 2.268, 1990, modificado como em Karlin e Altschul Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 90: 5.873 a 5.877, 1993. Esse algoritmo é incorporado aos programas NBLAST e XBLAST (versão 2.0) de Altschul, et al. J. Mol. Biol. 215: 403 a 410, 1990. As pesqui- sas de proteínas BLAST podem ser realizadas com o programa XBLAST, pontuação = 50, comprimento da palavra = 3, para obter sequências de aminoácidos homólogas às moléculas de proteína de interesse. Onde existem lacunas entre duas sequências, o Gapped BLAST pode ser utilizado como descrito em Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25 (17): 3.389 a 3.402, 1997. Ao utilizar os programas BLAST e Gapped BLAST, os parâmetros padrão dos respectivos programas (por exemplo, XBLAST e NBLAST) podem ser usados.

PREPARAÇÃO DE ANTICORPO

[040]Anticorpos capazes de se ligar a um domínio CemX de uma IgE ligada à membrana, tal como aqui descrito, podem ser feitos por qualquer método conhecido na técnica. Ver, por exemplo, Harlow e Lane, (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York.

[041]Em algumas modalidades, anticorpos específicos para um antígeno alvo (por exemplo, um domínio CemX de uma mIgE como uma mIgE humana) podem ser produzidos pela tecnologia de hibridoma convencional. O antígeno alvo de tamanho completo ou um fragmento do mesmo, opcionalmente acoplado a uma proteína trans- portadora como KLH, pode ser usado para imunizar um animal hospedeiro para gerar anticorpos que se ligam a esse antígeno. A via e o esquema de imunização do animal hospedeiro estão geralmente de acordo com as técnicas estabelecidas e convencio- nais para estimulação e produção de anticorpos, conforme descrito aqui mais adiante. Os procedimentos gerais para produção de anticorpos de camundongo, humanizados e humanos são conhecidas na técnica e são descritas aqui. Está contemplado que qualquer sujeito mamífero, incluindo humanos, ou células produtoras de anticorpos dos mesmos, possa ser manipulado para servir como base para a produção de linhas celulares de hibridoma de mamíferos, incluindo humanos. Tipicamente, o animal hos- pedeiro é inoculado por via intraperitoneal, intramuscular, oral, subcutânea, intraplan- tar e/ou intradérmica com uma quantidade de imunogênio, inclusive como aqui des- crito.

[042]Os hibridomas podem ser preparados a partir de linfócitos e células de mieloma imortalizadas usando a técnica geral de hibridação de células somáticas de Kohler, B. e Milstein, C. (1975) Nature 256: 495 a 497 ou como modificado por Buck, DW, et al., In Vitro, 18: 377 a 381 (1982). As linhas de mieloma disponíveis, incluindo, mas não se limitando a X63-Ag8.653 e as do Salk Institute, Cell Distribution Center, San Diego, Califórnia, EUA, podem ser usadas na hibridação. Geralmente, a técnica envolve a fusão de células de mieloma e células linfoides usando um fusogênio, como polietilenoglicol, ou por meios elétricos bem conhecidos dos versados na técnica. Após a fusão, as células são separadas do meio de fusão e crescidas em um meio de crescimento seletivo, como o meio hipoxantina-aminopterina-timidina (HAT), para eli- minar células-mãe não hibridizadas. Qualquer meio descrito aqui, suplementado com ou sem soro, pode ser usado para cultivar hibridomas que secretam anticorpos mo- noclonais. Como outra alternativa à técnica de fusão celular, células B imortalizadas por EBV podem ser usadas para produzir os anticorpos monoclonais anti-CemX da presente invenção. Os hibridomas são expandidos e subclonados, se desejado, e os sobrenadantes são analisados quanto à atividade anti-imunogênio por procedimentos convencionais de imunoensaio (por exemplo, radioimunoensaio, imunoensaio enzi- mático ou imunoensaio de fluorescência).

[043]Os hibridomas que podem ser usados como fonte de anticorpos abran- gem todas as células descendentes derivadas dos hibridomas parentais que produ- zem anticorpos monocionais capazes de se ligar ao domínio CemX. Os hibridomas que produzem tais anticorpos podem ser cultivados in vitro ou in vivo usando procedi- mentos conhecidos. Os anticorpos monoclonais podem ser isolados do meio de cul- tura ou fluidos corporais, por procedimentos convencionais de purificação de imuno- globulina, como precipitação com sulfato de amônio, eletroforese em gel, diálise, cro- matografia e ultrafiltração, se desejado. A atividade indesejada, se presente, pode ser removida, por exemplo, executando a preparação sobre adsorventes feitos do imuno- gênio ligado a uma fase sólida e eluindo ou liberando os anticorpos desejados do imunogênio. A imunização de um animal hospedeiro com um antígeno alvo ou um fragmento que contém a sequência de aminoácidos alvo conjugada a uma proteína imunogênica nas espécies a serem imunizadas, por exemplo, hemocianina de lapa (kKeyhole limpet hemocyanin), albumina sérica, tireoglobulina bovina ou inibidor de trip- sina de soja usando um agente bifuncional ou derivante, por exemplo, éster de malei- midobenzoil sulfossuccinimida (conjugação através de resíduos de cisteína), N-hidro- xissuccinimida (através de resíduos de lisina), glutaraldeído, anidrido succínico, SOCI ou RIN = C = NR, em que R e R1 são grupos alquila diferentes, pode produzir uma população de anticorpos (por exemplo, anticorpos monoclonais).

[044]Se desejado, um anticorpo (monoclonal ou policlonal) de interesse (por exemplo, produzido por um hibridoma) pode ser sequenciado e a sequência polinu- cleotídica pode então ser clonada em um vetor para expressão ou propagação. A se- quência que codifica o anticorpo de interesse pode ser mantida em vetor em uma célula hospedeira e a célula hospedeira pode então ser expandida e congelada para uso futuro. Em uma alternativa, a sequência polinucleotídica pode ser usada para ma- nipulação genética para "humanizar" o anticorpo ou para melhorar a afinidade (matu- ração por afinidade) ou outras características do anticorpo. Por exemplo, a região constante pode ser projetada para se parecer mais com as regiões constantes huma- nas para evitar a resposta imune se o anticorpo for usado em ensaios clínicos e trata- mentos em humanos. Pode ser desejável manipular geneticamente a sequência de anticorpos para obter maior afinidade com o antígeno alvo e maior eficácia na redução da IgE total. Será evidente para um versado na técnica que uma ou mais alterações polinucleotídicas podem ser feitas no anticorpo e ainda manter sua especificidade de ligação ao antígeno alvo.

[045]Em outras modalidades, anticorpos totalmente humanos podem ser ob- tidos usando camundongos disponíveis comercialmente que foram modificados para expressar proteínas específicas de imunoglobulina humana. Animais transgênicos que são projetados para produzir uma resposta imune mais desejável (por exemplo, anticorpos totalmente humanos) ou mais robustos também podem ser usados para geração de anticorpos humanizados ou humanos. Exemplos dessa tecnologia são o XenomouseRTM da Amgen, Inc. (Fremont, Califórnia) e HUMAb-MouseRTM e TC MouseTM junto à Medarex, Inc. (Princeton, N.J.). Em outra alternativa, os anticorpos podem ser produzidos recombinantemente pela tecnologia de apresentação em fagos. Veja, por exemplo, Pat. U.S. nº* 5.565.332; 5.580.717; 5.733.743; e 6.265.150; e Win- ter et al., (1994) Annu. Rev. Immunol. 12: 433 a 455. Alternativamente, a tecnologia de exibição de fagos (McCafferty et al., (1990) Nature 348: 552 a 553) pode ser usada para produzir anticorpos humanos e fragmentos de anticorpos in vitro, a partir de re- pertórios de genes de domínio variável de imunoglobulina (V) de doadores não imuni- zados.

[046]Fragmentos de ligação a antígeno de um anticorpo intacto (anticorpo completo) podem ser preparados por métodos de rotina. Por exemplo, os fragmentos F(ab')2 podem ser produzidos por digestão com pepsina de uma molécula de anti- corpo e os fragmentos Fab que podem ser gerados reduzindo as pontes dissulfeto dos fragmentos F(ab')2.

[047]Anticorpos geneticamente modificados, como anticorpos humanizados, anticorpos quiméricos, anticorpos de cadeia única e anticorpos biespecíficos, podem ser produzidos via, por exemplo, tecnologia recombinante convencional. Em um exemplo, o DNA que codifica um anticorpo monoclonal específico para um antígeno alvo pode ser facilmente isolado e sequenciado usando procedimentos convencionais (por exemplo, usando sondas oligonucleotídicas capazes de se ligar especificamente a genes que codificam as cadeias pesadas e leves dos anticorpos monoclionais). As células de hibridoma servem como uma fonte preferida desse DNA. Uma vez isolado, o DNA pode ser colocado em um ou mais vetores de expressão, que são transfecta- dos para células hospedeiras, como células E. coli, células COS símias, células de ovário de hamster chinês (CHO) ou células de mieloma que, de outra forma, não pro- duzem imunoglobulina para obter a síntese de anticorpos monoclonais nas células hospedeiras recombinantes. Ver, por exemplo, a Publicação PCT Nº WO 87/04462. O DNA pode então ser modificado, por exemplo, substituindo a sequência de codificação por domínios constantes de cadeia pesada e leve humana em vez das sequências murinas homólogas, Morrison et al., (1984) Proc. Nat. Acad. Sci. 81: 6.851, ou jun- tando-se covalentemente à sequência de codificação da imunoglobulina a totalidade ou parte da sequência de codificação para um polipeptídeo não imunoglobulina. Dessa maneira, anticorpos geneticamente modificados, como anticorpos "quiméricos" ou "híbridos"; podem ser preparados que tenham a especificidade de ligação de um antígeno alvo.

[048]As técnicas desenvolvidas para a produção de "anticorpos quiméricos" são bem conhecidas na técnica. Veja, por exemplo, Morrison et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 81, 6.851; Neuberger et al. (1984) Nature 312, 604; e Takeda et al. (1984) Nature 314: 452.

[049]Métodos para a construção de anticorpos humanizados também são bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA, 86:

10.029 a 10.033 (1989). Em um exemplo, regiões variáveis de Vx e VL de um anticorpo não humano parental são submetidas a análise de modelagem molecular tridimensio-

nal seguindo métodos conhecidos na técnica. Em seguida, os resíduos de aminoáci- dos estruturais previstos como importantes para a formação das estruturas CDR cor- retas são identificados usando a mesma análise de modelagem molecular. Paralela- mente, as cadeias Vx e VL humanas com sequências de aminoácidos homólogas às do anticorpo não humano original são identificadas a partir de qualquer banco de da- dos de genes de anticorpos usando as sequências Vr e VL originais como consultas de pesquisa. Os genes aceitadores Vx e VL humanos são então selecionados.

[050]As regiões CDR nos genes aceitadores humanos selecionados podem ser substituídas pelas regiões CDR a partir do anticorpo não humano parental ou de suas variantes funcionais. Quando necessário, os resíduos dentro das regiões estru- turais da cadeia parental que se prevê serem importantes na interação com as regiões CDR (ver descrição acima) podem ser usados para substituir os resíduos correspon- dentes nos genes humanos aceitadores.

[051]Um anticorpo de cadeia única pode ser preparado via tecnologia recom- binante que liga uma sequência de nucleotídeos que codifica para uma região variável de cadeia pesada e uma sequência de nucleotídeos que codifica para uma região variável de cadeia leve. De preferência, um ligante flexível é incorporado entre as duas regiões variáveis. Alternativamente, as técnicas descritas para a produção de anticor- pos de cadeia única (Patentes U.S. nº* 4.946.778 e 4.704.692) podem ser adaptadas para produzir uma biblioteca de fagos scFv e os clones de scFv específicos para IgE podem ser identificados a partir da biblioteca, seguindo procedimentos de rotina.

[052]Os anticorpos obtidos seguindo um método conhecido na técnica e des- crito aqui podem ser caracterizados usando métodos bem conhecidos na técnica. Por exemplo, um método é identificar o epítopo ao qual o antígeno se liga, ou "mapea- mento de epítopos". Existem muitos métodos conhecidos na técnica para mapear e caracterizar a localização de epítopos nas proteínas, incluindo a resolução da estru- tura cristalina de um complexo anticorpo-antígeno, ensaios de competição, ensaios de expressão de fragmentos de genes e ensaios sintéticos baseados em peptídeos, como descrito, por exemplo, no capítulo 11 de Harlow and Lane, Using Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.,

1999. Em um exemplo adicional, o mapeamento de epítopos pode ser usado para determinar a sequência à qual um anticorpo se liga. O epítopo pode ser um epítopo linear, isto é, contido em um único trecho de aminoácidos, ou um epítopo conformaci- onal formado por uma interação tridimensional de aminoácidos que pode não estar necessariamente contida em um único trecho (sequência linear da estrutura primária). Peptídeos de comprimentos variados (por exemplo, com pelo menos 4 a 6 aminoáci- dos de comprimento) podem ser isolados ou sintetizados (por exemplo, recombinan- temente) e usados para ensaios de ligação com um anticorpo. Em outro exemplo, o epítopo ao qual o anticorpo se liga pode ser determinado em uma triagem sistemática usando peptídeos sobrepostos derivados da sequência de antígeno alvo e determi- nando a ligação pelo anticorpo. De acordo com os ensaios de expressão de fragmen- tos de genes, o quadro de leitura aberto que codifica o antígeno alvo é fragmentado aleatoriamente ou por construções genéticas específicas e a reatividade dos fragmen- tos expressos do antígeno com o anticorpo a ser testado é determinada. Os fragmen- tos de genes podem, por exemplo, ser produzidos por PCR e depois transcritos e traduzidos em proteínas in vitro, na presença de aminoácidos radioativos. A ligação do anticorpo aos fragmentos de antígeno marcados radioativamente é então determi- nada por imunoprecipitação e eletroforese em gel. Certos epítopos também podem ser identificados usando grandes bibliotecas de sequências peptídicas aleatórias exi- bidas na superfície de partículas de fagos (bibliotecas de fagos). Alternativamente, uma biblioteca definida de fragmentos de peptídeo sobrepostos pode ser testada quanto à ligação ao anticorpo de teste em ensaios de ligação simples. Em um exemplo adicional, a mutagênese de um domínio de ligação a antígeno, experimentos de troca de domínio e mutagênese de varredura de alanina podem ser realizados para identi- ficar os resíduos necessários, suficientes e/ou necessários para a ligação a epítopo. Por exemplo, experimentos de troca de domínio podem ser realizados usando um mutante de um antígeno alvo no qual vários fragmentos do polipeptídeo IgE foram substituídos (trocados) por sequências de uma proteína intimamente relacionada, mas antigenicamente distinta (como outro membro da proteína da imunoglobulina família). Avaliando a ligação a anticorpo à imunoglobulina mutante, pode ser avaliada a impor- tância do fragmento de antígeno específico para a ligação a anticorpo.

[053]Alternativamente, os ensaios de competição podem ser realizados usando outros anticorpos conhecidos por se ligarem ao mesmo antígeno para deter- minar se um anticorpo se liga ao mesmo epítopo que os outros anticorpos. Os ensaios de competição são bem conhecidos dos versados na técnica.

COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS

[054]Um ou mais dos anticorpos anti-CemX descritos acima podem ser mistu- rados com um carreador (excipiente) farmaceuticamente aceitável, incluindo tampão, para formar uma composição farmacêutica para uso no tratamento de um distúrbio associado à IgE. "Aceitável" significa que o carreador deve ser compatível com o in- grediente ativo da composição (e preferencialmente, capaz de estabilizar o ingrediente ativo) e não prejudicial ao sujeito a ser tratado. Excipientes (carreadores) farmaceuti- camente aceitáveis, incluindo tampões, que são bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20º Ed. (2000) Lippincott Williams e Wilkins, Ed. K. E. Hoover. Em um exemplo, uma composição farmacêutica contém mais de um anticorpo anti-CemX que reconhece diferentes epítopos do antí- geno alvo.

[055]As composições farmacêuticas a serem usadas nos presentes métodos podem compreender carreadores, excipientes ou estabilizadores farmaceuticamente aceitáveis na forma de formulações liofilizadas ou soluções aquosas. Remington: The

Science and Practice of Pharmacy 20º Ed. (2000) Lippincott Williams e Wilkins, Ed. K. E. Hoover. Carreadores, excipientes ou estabilizadores aceitáveis não são tóxicos para os receptores nas dosagens e concentrações usadas e podem compreender tampões como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes, incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio; fenol, álcool butílico ou benzílico; alquil parabenos de alquila como parabeno de metila ou propila; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos de cerca de 10 resíduos); proteínas, como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos tais como polivinilpirrolidona; aminoácidos tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarí- deos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose ou dextranos; agentes quelantes tais como EDTA; açúcares tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contra-íons formadores de sal, como sódio; complexos metálicos (por exemplo, complexos de proteína Zn); e/ou tensoativos não iônicos, como TWEENTY, PLURONICSY ou polietilenoglicol (PEG). Excipientes farmaceuticamente aceitáveis são ainda descritos aqui.

[056]Em alguns exemplos, a composição farmacêutica aqui descrita compre- ende lipossomas contendo o anticorpo anti-CemX, que podem ser preparadas por mé- todos conhecidos na técnica, como descrito em Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 82: 3.688 (1985); Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 77: 4.030 (1980); e Pat. U.S. 4.485.045 e 4.544.545. Os lipossomas com tempo de circulação aumentado são divulgados na Pat. U.S. 5.013.556. Lipossomas particularmente úteis podem ser gerados pelo método de evaporação de fase reversa com uma composição lipídica compreendendo fosfatidilcolina, colesterol e fosfatidiletanolamina derivada de PEG (PEG-PE). Os lipossomas são extrudidos através de filtros de tamanho de poro defi- nido para produzir lipossomas com o diâmetro desejado.

[057]O anticorpo anti-CemX também pode ser aprisionado em microcápsulas preparadas, por exemplo, por técnicas de coacervação ou por polimerização interfa- cial, por exemplo, hidroximetilcelulose ou microcápsulas de gelatina e microcápsulas de poli-(metilmetacrilato), respectivamente, em sistemas de administração de fárma- cos coloidais (por exemplo, lipossomas, microesferas de albumina, microemulsões, nanopartículas e nanocápsulas) ou em macroemulsões. Tais técnicas são conhecidas na técnica, ver, por exemplo, Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20º Ed. Mack Publishing (2000).

[058]Em outros exemplos, a composição farmacêutica aqui descrita pode ser formulada em formato de liberação sustentada. Exemplos adequados de preparações de liberação sustentada incluem matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos contendo o anticorpo, cujas matrizes estão na forma de artigos moldados, por exemplo, filmes ou microcápsulas. Exemplos de matrizes de liberação sustentada in- cluem poliésteres, hidrogéis (por exemplo, poli(2-hidroxietilmetacrilato) ou poli(vinilál- cool)), poliláctidos (Patente U.S. nº 3.773.919), copolímeros de ácido L-glutâmico e 7 etil-L-glutamato, acetato de etileno-vinila não degradável, copolímeros de ácido lático degradável e ácido glicólico, como o LUPRON DEPOT'Y (microesferas injetáveis compostas por copolímero de ácido lático-ácido glicólico e acetato de leuprolida), isobutirato de acetato de sacarose e ácido poli-D-(-)-3-hidroxibutírico.

[059]Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreendendo o anticorpo anti-CemX aqui descrito, por exemplo, FB825 ou uma variante funcional do mesmo como também aqui descrito, pode ser uma formulação aquosa, que pode ainda compreender um tampão (que pode compreender um aminoácido como histi- dina ou arginina), um sal (por exemplo, cloreto de sódio) e/ou um tensoativo, como um tensoativo não iônico. Por exemplo, a formulação aquosa pode compreender o anticorpo em uma concentração de cerca de 10 a 30 mg/ml, um tampão que compre- ende um aminoácido (por exemplo, histidina ou arginina) em uma concentração de cerca de 10 a 30 mM, um tensoativo como o polissorbato 80 em uma concentração de cerca de 0,01 a 0,03% e/ou cloreto de sódio em uma concentração de cerca de 120 a 160 mM. Essa formulação aquosa pode ter um pH de cerca de 5 a 8. Em um exemplo particular, a formulação aquosa pode compreender o anticorpo FB825 em uma concentração de cerca de 20 mg/ml, L-histidina em uma concentração de cerca de 20 mM, cloreto de sódio em uma concentração de cerca de 140 mM, polissorbato 80 em uma concentração de cerca de 0,02% e um pH de cerca de 6,5.

[060]O termo “cerca de" ou "aproximadamente" significa dentro de uma faixa aceitável de erro para o valor específico determinado por um versado na técnica, o que dependerá em parte de como o valor é medido ou determinado, ou seja, das limitações do sistema de medida. Por exemplo, “cerca de" pode significar dentro de um desvio padrão aceitável, de acordo com a prática na técnica. Alternativamente, “cerca de" pode significar uma faixa de até + 20%, preferencialmente até + 10%, mais preferencialmente até + 5% e mais preferencialmente ainda até + 1% de um determi- nado valor. Alternativamente, particularmente no que diz respeito a sistemas ou pro- cessos biológicos, o termo pode significar dentro de uma ordem de grandeza, de pre- ferência dentro de 2 vezes, de um valor. Onde valores específicos são descritos no pedido e em reivindicações, a menos que seja indicado de outra forma, o termo “cerca de" está implícito e, neste contexto, significa dentro de um intervalo aceitável de erro para o valor específico.

[061]As composições farmacêuticas a serem usadas para administração in vivo devem ser estéreis. Isso é facilmente conseguido por, por exemplo, filtração atra- vés de membranas de filtração estéreis. As composições de anticorpos terapêuticos são geralmente colocadas em um recipiente com uma porta de acesso estéril, por exemplo, um saco ou frasco de solução intravenosa com uma rolha perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica.

[062]As composições farmacêuticas descritas neste documento podem estar em formas de dosagem unitária, como comprimidos, pílulas, cápsulas, pós, grânulos, soluções ou suspensões ou supositórios, para administração oral, parenteral ou retal, ou administração por inalação ou insuflação.

[063]Para preparar composições sólidas, como comprimidos, o principal in- grediente ativo pode ser misturado com um carreador farmacêutico, por exemplo, in- gredientes convencionais para comprimidos, como amido de milho, lactose, sacarose, sorbitol, talco, ácido esteárico, estearato de magnésio, fosfato dicálcico ou gomas, e outros diluentes farmacêuticos, por exemplo, água, para formar uma composição só- lida de pré-formulação contendo uma mistura homogênea de um composto da pre- sente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável não tóxico do mesmo. Quando se refere a estas composições de pré-formulação como homogêneas, entende-se que o ingrediente ativo é disperso uniformemente por toda a composição, de modo que a composição possa ser facilmente subdividida em formas de dosagem unitárias igual- mente eficazes, como comprimidos, pílulas e cápsulas. Esta composição de pré-for- mulação sólida é então subdividida em formas de dosagem unitárias do tipo descrito acima, contendo de 0,1 a cerca de 500 mg do ingrediente ativo da presente invenção. Os comprimidos ou pílulas da nova composição podem ser revestidos ou de outro modo compostos para proporcionar uma forma de dosagem que ofereça a vantagem de ação prolongada. Por exemplo, o comprimido ou pílula pode compreender um com- ponente de dosagem interna e de dosagem externa, estando o último na forma de um envelope sobre o anterior. Os dois componentes podem ser separados por uma ca- mada entérica que serve para resistir à desintegração no estômago e permite que o componente interno passe intacto para o duodeno ou seja retardado na liberação. Uma variedade de materiais pode ser utilizada para tais camadas ou revestimentos entéricos, tais materiais incluindo vários ácidos poliméricos e misturas de ácidos poli- méricos com materiais como gomar-laca, álcool cetílico e acetato de celulose.

[064]Agentes ativos de superfície adequados incluem, em particular, agentes não iônicos, como polioxietilenosorbitanos (por exemplo, TweenTY 20, 40, 60, 80 ou 85) e outros sorbitanos (por exemplo, Span'“Y 20, 40, 60, 80 ou 85). As composições com um agente ativo de superfície compreenderão convenientemente entre 0,05 e 5% de agente ativo de superfície e podem estar entre 0,1 e 2,5%. Será apreciado que outros ingredientes podem ser adicionados, por exemplo manitol ou outros veículos farmaceuticamente aceitáveis, se necessário.

[065]Emulsões adequadas podem ser preparadas usando emulsões de gor- dura disponíveis comercialmente, como Intralipid"Y, LiposynTY, Infonutrol"”, Lipofun- din'“ e Lipiphysan'Y. O ingrediente ativo pode ser dissolvido em uma composição de emulsão pré-misturada ou, alternativamente, pode ser dissolvido em um óleo (por exemplo, óleo de soja, óleo de açafrão, óleo de semente de algodão, óleo de gergelim, óleo de milho ou óleo de amêndoa) e uma emulsão formada após a mistura com um fosfolipídio (por exemplo, fosfolipídios de ovo, fosfolipídios de soja ou lecitina de soja) e água. Será apreciado que outros ingredientes podem ser adicionados, por exemplo, glicerol ou glicose, para ajustar a tonicidade da emulsão. Emulsões adequadas con- terão tipicamente até 20% de óleo, por exemplo, entre 5 e 20%.

[066]As composições de emulsão podem ser aquelas preparadas misturando um anticorpo anti-CemX com o Intralipid?Y ou seus componentes (óleo de soja, fosfo- lipídios de ovo, glicerol e água).

[067]As composições farmacêuticas para inalação ou insuflação incluem so- luções e suspensões em solventes aquosos ou orgânicos farmaceuticamente aceitá- veis, ou misturas dos mesmos, e pós. As composições líquidas ou sólidas podem con- ter excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados, como estabelecido acima. Em algumas modalidades, as composições são administradas pela via respiratória oral ou nasal para efeito local ou sistêmico.

[068] Composições em solventes farmaceuticamente aceitáveis preferencial- mente estéreis podem ser nebulizadas pelo uso de gases. As soluções nebulizadas podem ser respiradas diretamente do dispositivo de nebulização ou o dispositivo de nebulização pode ser conectado a uma máscara facial, barraca ou aparelho de respi- ração com pressão positiva intermitente. As composições de solução, suspensão ou pó podem ser administradas, preferencialmente por via oral ou nasal, a partir de dis- positivos que administram a formulação de maneira apropriada.

USO DE ANTICORPOS ANTI-CEMX NO TRATAMENTO DE DISTÚRBIOS ASSOCIADOS À IgE

[069]Para praticar o método divulgado neste documento, uma quantidade efi- caz da composição farmacêutica descrita acima pode ser administrada a um sujeito (por exemplo, um humano) que necessita do tratamento por uma via adequada, como administração intravenosa, por exemplo, em bolus ou por infusão contínua durante um período de tempo, por via intramuscular, intraperitoneal, intracerebrospinal, sub- cutânea, intra-articular, intrassinovial, intratecal, oral, inalatória ou tópica. Nebulizado- res comercialmente disponíveis para formulações líquidas, incluindo nebulizadores a jato e nebulizadores ultrassônicos, são úteis para administração. As formulações lí- quidas podem ser diretamente nebulizadas e o pó liofilizado pode ser nebulizado após a reconstituição. Alternativamente, os anticorpos anti-CemX podem ser aerossoliza- dos usando uma formulação de fluorocarboneto e um inalador de dose medida, ou inalados como um pó liofilizado e moído.

[070]O sujeito a ser tratado pelos métodos aqui descritos pode ser um mamí- fero, mais preferencialmente um humano. Os mamíferos incluem, entre outros, ani- mais de fazenda, animais esportivos, animais de estimação, primatas, cavalos, cães, gatos, camundongos e ratos. Um sujeito humano que precisa do tratamento pode ser um paciente humano com risco ou suspeita de ter um distúrbio associado à IgE (por exemplo, asma alérgica, bem como outros distúrbios conhecidos na técnica e/ou aqui divulgados). Um sujeito com um distúrbio associado à IgE, como asma alérgica, pode ser identificado por exames médicos de rotina, por exemplo, exames laboratoriais. Um sujeito suspeito de ter o distúrbio associado à IgE pode mostrar um ou mais sintomas do distúrbio, por exemplo, níveis elevados de IgE e/ou hiper-reatividade a um alergê- nio e/ou antígeno. Um sujeito em risco para o distúrbio pode ser um sujeito com um ou mais dos fatores de risco para esse distúrbio.

[07 1]Distúrbios associados à IgE exemplificativos incluem, mas não estão |li- mitados a, asma, rinite alérgica, síndrome de hiper IgE, dermatite atópica, urticária induzida pelo frio, urticária crônica, urticária colinérgica, rinossinusite crônica, masto- citose sistêmica, mastocitose cutânea, aspergilose broncopulmonar alérgica, angioe- dema idiopático recorrente e cistite intersticial, distúrbios gastrointestinais associados a eosinófilos, uma alergia a alimentos ou uma alergia a fármacos.

[072]"Uma quantidade eficaz", como aqui utilizado, refere-se à quantidade de cada agente ativo necessária para conferir efeito terapêutico ao sujeito, isoladamente ou em combinação com um ou mais outros agentes ativos. As quantidades efetivas variam, conforme reconhecido pelos versados na técnica, dependendo da afecção específica que está sendo tratada, da gravidade da afecção, dos parâmetros individu- ais do paciente, incluindo idade, condição física, tamanho, sexo e peso, duração do tratamento, natureza da terapia simultânea (se houver), a via específica de adminis- tração e fatores semelhantes dentro do conhecimento e experiência do profissional de saúde. Esses fatores são bem conhecidos dos versados na técnica e podem ser abor- dados com não mais que experimentação de rotina. É geralmente preferido que seja utilizada uma dose máxima dos componentes individuais ou combinações dos mes- mos, ou seja, a dose segura mais alta de acordo com um julgamento médico correto. Será entendido pelos versados na técnica, no entanto, que um paciente pode insistir em uma dose mais baixa ou tolerável por razões médicas, razões psicológicas ou virtualmente por qualquer outra razão.

[073]Considerações empíricas, como a meia-vida, geralmente contribuem para a determinação da dosagem. Por exemplo, anticorpos que são compatíveis com o sistema imunológico humano, como anticorpos humanizados ou anticorpos total- mente humanos, podem ser usados para prolongar a meia-vida do anticorpo e impedir que o anticorpo seja atacado pelo sistema imunológico do hospedeiro. A frequência da administração pode ser determinada e ajustada ao longo da terapia e, geralmente, mas não necessariamente, é baseada no tratamento e/ou supressão e/ou melhoria e/ou atraso de um distúrbio associado à IgE. Alternativamente, formulações de libera- ção contínua de um anticorpo anti-CemX podem ser apropriadas. Várias formulações e dispositivos para alcançar liberação sustentada são conhecidos na técnica.

[074]EmM um exemplo, as dosagens para um anticorpo anti-CemX, como aqui descrito, podem ser determinadas empiricamente, em indivíduos a quem foi adminis- trado uma ou mais administrações de um anticorpo anti-CemX. Os indivíduos recebem doses incrementais do anticorpo anti-CemX. Para avaliar a eficácia do anticorpo anti- CemX, pode ser seguido um indicador de um distúrbio associado à IgE (como níveis de IgE).

[075]Para os fins da presente divulgação, a dosagem apropriada de um anti- corpo anti-CemX dependerá do anticorpo (ou anticorpos) anti-CemX (ou composições do mesmo) empregado, do tipo e da gravidade do distúrbio associado à IgE, de se o anticorpo é administrado para fins preventivos ou terapêuticos, de terapia anterior, do histórico clínico do paciente e resposta ao anticorpo, e a critério do médico assistente. Tipicamente, o clínico administrará um anticorpo anti-CemX, como o FB825, até que seja alcançada uma dosagem que atinja o resultado desejado. A administração de um anticorpo anti-CemX pode ser contínua ou intermitente, dependendo, por exemplo, da condição fisiológica do destinatário, de se o objetivo da administração é terapêutico ou profilático, e de outros fatores conhecidos por profissionais especializados.

[076]Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CemX (por exemplo, FB825) aqui descrito é administrado a um sujeito em necessidade do tratamento em uma quantidade suficiente para reduzir o nível do nível total de IgE em pelo menos 20%

(por exemplo, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais).

[077]Como usado aqui, o termo "tratamento" refere-se à aplicação ou admi- nistração de uma composição que inclui um ou mais agentes ativos a um sujeito, que tem uma doença associada à IgE, um sintoma de uma doença associada à IgE ou uma predisposição para a doença, com o objetivo de curar, cicatrizar, aliviar, atenuar, alterar, remediar, melhorar, amenizar ou afetar o distúrbio, o sintoma da doença ou a predisposição para a doença.

[078]Aliviar uma doença associada à IgE inclui atrasar o desenvolvimento ou progressão da doença ou reduzir a gravidade da doença. Aliviar a doença não requer necessariamente resultados curativos. Como aqui utilizado, "atrasar" o desenvolvi- mento de uma doença (como uma doença associada à IgE) significa adiar, impedir, diminuir, retardar, estabilizar e/ou adiar a progressão da doença. Esse atraso pode ser de duração variável, dependendo do histórico da doença e/ou dos indivíduos em tratamento. Um método que "atrasa" ou alivia o desenvolvimento de uma doença, ou atrasa o início da doença, é um método que reduz a probabilidade de desenvolver um ou mais sintomas da doença em um determinado período de tempo e/ou reduz a ex- tensão dos sintomas em um determinado período de tempo, quando comparado a não usar o método. Tais comparações são tipicamente baseadas em estudos clínicos, usando um número de sujeitos suficiente para fornecer um resultado estatisticamente significativo.

[079]“Desenvolvimento" ou “progressão” de uma doença significa manifesta- ções iniciais e/ou progressão subsequente da doença. O desenvolvimento da doença pode ser detectável e avaliado usando técnicas clínicas padrão, bem conhecidas na técnica. No entanto, desenvolvimento também se refere à progressão que pode ser indetectável. Para os fins desta divulgação, desenvolvimento ou progressão refere-se ao curso biológico dos sintomas. "Desenvolvimento" inclui ocorrência, recorrência e início. Conforme usado neste documento, "início" ou "ocorrência" de uma doença as- sociada à IgE inclui início inicial e/ou recorrência.

[080]Para executar os métodos descritos aqui, qualquer um dos anticorpos anti-Cemx, como o FB825, pode ser administrado a um sujeito em necessidade do tratamento (por exemplo, um paciente humano) por uma dose única ou por doses múltiplas por meio de um método adequado via, por exemplo, infusão intravenosa ou injeção subcutânea. A dosagem do anticorpo anti-Cemx para cada administração pode variar de cerca de 0,5 mg/kg a cerca de 25 mg/kg (por exemplo, cerca de 1 mg/kg a cerca de 20 mg/kg, cerca de 5 mg/kg a cerca de 15 mg/kg, ou cerca de 10 mg/kg a cerca de 20 mg/kg), dependendo de vários fatores, incluindo os aqui descritos. Para administrações repetidas por vários dias ou mais, dependendo da afecção, o trata- mento é mantido até que ocorra uma supressão desejada dos sintomas ou até que sejam alcançados níveis terapêuticos suficientes para aliviar um distúrbio associado à IgE ou um sintoma do mesmo.

[081]A administração de um anticorpo anti-CemX (por exemplo, FB825) pode ser essencialmente contínua durante um período de tempo pré-selecionado ou pode estar em uma série de doses espaçadas, por exemplo, antes, durante ou após o de- senvolvimento de um distúrbio associado à IgE. Um regime de dosagem exemplar compreende a administração a um sujeito com necessidade de tratamento de uma primeira dose de um anticorpo anti-Cemx (por exemplo, a 3 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg, mg/kg, 20 mg/kg ou 25 mg/kg), seguido por uma segunda dose do anticorpo pelo menos 3 meses após a primeira dose (por exemplo, 4 meses, 5 meses ou 6 meses). A dosagem da segunda administração pode ser maior, igual ou menor que a primeira administração. Outros esquemas de dosagem podem ser úteis, dependendo do pa- drão de decaimento farmacocinético que o médico deseja alcançar.

[082]EmM algumas modalidades, um sujeito em necessidade do tratamento pode receber uma primeira dose do anticorpo em uma quantidade adequada (por exemplo, 3 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg ou 25 mg/kg). O sujeito é então monitorado periodicamente quanto a sintomas indicativos de um distúrbio asso- ciado à IgE, por exemplo, reações alérgicas e/ou um nível elevado de IgE total. Uma segunda dose do anticorpo pode ser administrada ao sujeito quando esse sintoma é observado.

[083] Também dentro do escopo da presente divulgação estão os tratamentos preventivos de um distúrbio associado à IgE com qualquer um dos anticorpos anti- Cemx para reduzir o risco de ocorrência de tal distúrbio. Os sujeitos adequados para esse tratamento preventivo podem ser pacientes humanos com histórico de um dis- túrbio associado a IgE e/ou histórico familiar de um distúrbio associado a IgE.

[084]Métodos convencionais, conhecidos pelos versados na técnica da medi- cina, podem ser usados para administrar a composição farmacêutica ao sujeito, de- pendendo do tipo de doença a ser tratada ou do local da doença. Esta composição também pode ser administrada por outras vias convencionais, por exemplo, adminis- trada por via oral, parentérica, por pulverização de inalação, topicamente, retal, nasal, bucal, vaginal ou via reservatório implantado. O termo "parenteral", conforme aqui uti- lizado, inclui técnicas de injeção ou infusão subcutânea, intracutânea, intravenosa, intramuscular, intra-articular, intra-arterial, intrassinovial, intrasternal, intratecal, intra- lesional e intracraniana. Além disso, pode ser administrado ao sujeito através de vias de administração de depósito injetável, como o uso de materiais e métodos injetáveis ou biodegradáveis de 1, 3 ou 6 meses em depósito.

[085]As composições injetáveis podem conter vários carreadores, como óleos vegetais, dimetilactamida, dimetilformamida, lactato de etila, carbonato de etila, miris- tato de isopropila, etanol e polióis (glicerol, propilenoglicol|, polietilenoglicol líquido e similares). Para injeção intravenosa, os anticorpos solúveis em água podem ser ad- ministrados pelo método de gotejamento, pelo qual uma formulação farmacêutica con- tendo o anticorpo e um excipiente fisiologicamente aceitável é infundida. Excipientes fisiologicamente aceitáveis podem incluir, por exemplo, 5% de dextrose, solução sa- lina a 0,9%, solução de Ringer ou outros excipientes adequados. Preparações intra- musculares, por exemplo, uma formulação estéril de uma forma de sal solúvel ade- quada do anticorpo, podem ser dissolvidas e administradas em um excipiente farma- cêutico, como Água para Injeção, solução salina a 0,9% ou solução de glicose a 5%.

[086]Em uma modalidade, um anticorpo anti-CemX é administrado através de técnicas de entrega local específicas ou direcionadas ao local. Exemplos de técnicas de entrega local específicas ou direcionadas ao local incluem várias fontes de depósito implantáveis do anticorpo anti-CemX ou cateteres de entrega local, como cateteres de infusão, cateter de permanência ou cateter de agulha, enxertos sintéticos, envoltórios adventícios, derivações e stents ou outros dispositivos implantáveis, carreadores es- pecíficos de local, injeção direta ou aplicação direta. Ver, por exemplo, a Publicação PCT nº WO 00/53211 e US Pat. nº 5.981.568.

[087]A distribuição direcionada de composições terapêuticas contendo um po- linucleotídeo antissenso, vetor de expressão ou polinucleotídeos subgenômicos tam- bém pode ser usada. As técnicas de entrega de DNA mediada por receptor são des- critas em, por exemplo, Findeis et al., Trends Biotechnol. (1993) 11: 202; Chiou et al., Gene Therapeutics: Methods And Applications Of Direct Gene Transfer (J.A. Wolff, ed.) (1994); Wu et al., J. Biol. Chem. (1988) 263: 621; Wu et al., J. Biol. Chem. (1994) 269: 542; Zenke et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA (1990) 87: 3.655; Wu et al., J. Biol. Chem. (1991) 266: 338. As composições terapêuticas contendo um polinucleotídeo são administradas em uma faixa de cerca de 100 ng a cerca de 200 mg de DNA para administração local em um protocolo de terapia genética. Em algumas modalidades, faixas de concentração de cerca de 500 ng a cerca de 50 mg, cerca de 1 ug a cerca de 2 mg, cerca de 5 ug a cerca de 500 ug e cerca de 20 ug a cerca de 100 ug de DNA ou mais também podem ser usadas durante um protocolo de terapia genética.

[088]Os polinucleotídeos e polipeptídeos terapêuticos descritos neste documento podem ser entregues usando veículos de entrega de genes. O veículo de entrega de genes pode ser de origem viral ou não viral (ver geralmente, Jolly, Cancer Gene Therapy (1994) 1:51; Kimura, Human Gene Therapy (1994) 5: 845; Connelly, Human Gene Therapy (1995) 1:185 e Kaplitt, Nature Genetics (1994) 6:148). À expressão de tais sequências de codificação pode ser induzida usando promotores e/ou intensificadores endógenos de mamíferos ou heterólogos. A expressão da sequência de codificação pode ser constitutiva ou regulada.

[089]Os vetores baseados em vírus para a entrega de um polinucleotídeo desejado e expressão em uma célula desejada são bem conhecidos na técnica. Veículos exemplares baseados em vírus incluem, mas não estão limitados a, retrovírus recombinantes (ver, por exemplo, Publicações PCT nº* WO 90/07936; WO 94/03622; WO 93/25698; WO 93/25234; WO 93/11230; WO 93/10218; WO 91/02805; Pat. U.S. nºº 5.219.740 e 4.777.127; Patente GB nº 2.200.651; e Patente EP nº 0 345 242), vetores baseados em alfavírus (por exemplo, vetores de vírus Sindbis, vírus da floresta Semliki (ATCC VR-67; ATCC VR-1247), vírus Ross River (ATCC VR-373; ATCC VR-1246) e vírus da encefalite equina venezuelana (ATCC VR-923; ATCC VR- 1250; ATCC VR 1249; ATCC VR-532)) e vetores de vírus adenoassociados (AAV) (ver, por exemplo, Publicações PCT nº* WO 94/12649, WO 93/03769; WO 93/19191; WO 94/28938; WO 95/11984 e WO 95/00655). A administração de DNA ligado ao adenovírus morto, como descrito em Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3:147 também pode ser empregada. Veículos e métodos de entrega não virais também podem ser empregados, incluindo, mas não se limitando a, DNA condensado policatiônico vinculado ou desvinculado apenas ao adenovírus morto (ver, por exemplo, Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3:147); ADN ligado a ligando (ver, por exemplo, Wu, J. Biol. Chem. (1989) 264:16.985); células de veículos de entrega de células eucarióticas (ver, por exemplo, Pat. U.S. Nos. 5.814.482; Publicações PCT Nos. WO 95/07994; WO 96/17072; WO 95/30763; e WO 97/42338) e neutralização de carga nucleica ou fusão com membranas de células. DNA nu também pode ser empregado. Métodos de introdução de DNA nu exemplares são descritos na publicação PCT No. WO 90/11092 e Pat. U.S. No. 5.580.859. Os lipossomas que podem atuar como veículos de entrega de genes são descritos na US Pat. nº 5.422.120; Publicações PCT nº* WO 95/13796; WO 94/23697; WO 91/14445; e Patente EP nº 0524968. Abordagens adicionais são descritas em Philip, Mol. Cell. Biol. (1994) 14:2.411, e em Woffendin, Proc. Natl. Acad. Sci. (1994) 91:1.581.

[090] Também é aparente que um vetor de expressão pode ser usado para direcionar a expressão de qualquer um dos anticorpos anti-CemX baseados em proteínas aqui descritos (por exemplo, FB825). Por exemplo, outros fragmentos de anticorpos anti-CemX que são capazes de ligar CemX e/ou uma atividade biológica de IgE são conhecidos na técnica.

[091]O regime de dosagem específico, isto é, dose, tempo e repetição, utilizado no método descrito neste documento, dependerá do sujeito em particular e do histórico médico desse sujeito. Qualquer um dos anticorpos anti-CemX aqui descritos pode ser usado em conjunto com outros agentes (por exemplo, outros agentes para o tratamento de distúrbios associados à IgE) que servem para melhorar e/ou complementar a eficácia dos agentes.

[092]Em algumas modalidades, um anticorpo anti-CemX como aqui descrito, por exemplo, FB825, é usado para o tratamento da dermatite atópica da seguinte forma. A dermatite atópica, também conhecida como eczema, é uma afecção crônica da pele caracterizada por vermelhidão e/ou coceira. É comum em crianças, mas pode ocorrer em qualquer idade. Um paciente que precisa do tratamento pode ser identificado pela prática médica de rotina como tendo um ou mais sintomas de dermatite atópica, incluindo pele seca, coceira, manchas vermelhas a cinza- acastanhadas, pequenas saliências elevadas, que podem vazar fluido e gerar crosta quando arranhadas, pele espessada, gretada, escamosa e/ou pele crua, sensível e inchada por arranhões. Em alguns casos, o nível total de IgE e o nível de IgE específico de alergênio de um sujeito candidato podem ser examinados através da prática de rotina. Se o nível de IgE do sujeito candidato (por exemplo, a IgE total, a IgE específica de alergênios ou ambos) for superior ao nível normal (representando o nível médio de IgE em indivíduos da mesma espécie, por exemplo, humanos, que são livres de dermatite atópica ou outros distúrbios alérgicos associados à IgE).

[093]Um paciente humano que precisa do tratamento pode receber uma primeira dose do anticorpo, que pode variar de 3 mg/kg a 8 mg/kg, por uma via convencional, como descrito aqui. Em alguns casos, a primeira dose é de 5 mg/kg. Após a primeira dose, o nível total de IgE do paciente pode ser monitorado. Se a redução do nível de IgE 3 a 4 semanas após a primeira dose for inferior a 50%, uma segunda dose do anticorpo pode ser administrada ao paciente 3 a 4 semanas após a primeira dose. A segunda dose pode ser idêntica à primeira dose ou menor que a primeira dose. Em alguns casos, a primeira e a segunda dose são 5 mg/kg e são administradas por infusão intravenosa em um período de 1 a 2 horas. Outros biomarcadores indicando eficácia e/ou segurança também podem ser monitorados durante o curso do tratamento. Tais biomarcadores incluem, entre outros, quimiocina regulada por timo e ativação (TARC), eotaxina-3, linfopoietina estromal do timo (TSLP), periostina, IL-1a, IL-4, IL-5, 11-13, IL- 16, 11L-31, M-CSF, ou uma combinação dos mesmos.

[094]O paciente humano sujeito ao tratamento acima mencionado pode ter dermatite atópica crônica por pelo menos 3 anos, conforme diagnosticado pela prática médica de rotina, por exemplo, definida pelos critérios revisados por Eishenfield de Hannifin e Rajka e apoiada por IgE específica para alergênios positivos. O paciente pode ter um ou mais dos seguintes recursos: (i) pontuação de Índice de Gravidade do Eczema por Área (EASI) maior que 14, (ii) pontuação na Avaliação Global do Investigador (IGA) maior que 3 (escala de 5 pontos), (iii) maior que 10% da área de superfície corporal (BSA), (iv) histórico de resposta inadequada a um regime estável de corticosteroides tópicos ou inibidores de calcineurina por pelo menos um mês ou pelo menos três meses antes do tratamento. Além disso, o paciente humano pode receber doses estáveis de emoliente duas vezes ao dia por pelo menos 7 dias antes do tratamento.

[095]JEmM alguns casos, o anticorpo anti-CeémX como descrito aqui (por exemplo, FB825) pode ser coutilizado com hidratantes (por exemplo, em doses estáveis, como pelo menos duas vezes por dia) e/ou corticosteroide tópico (TCS). Um TCS de média potência pode ser aplicado a áreas com lesões ativas e pode mudar para TCS de baixa potência depois que as lesões estiverem sob controle. Se as lesões voltarem a ocorrer, o tratamento com TCS de média potência pode retomar com uma abordagem gradual. Se as lesões persistirem ou piorarem após o tratamento o TCS de alta ou super alta potência pode ser usada, a menos qudiário com um TCS de média potência, um TCS de alta ou super alta potência pode ser usado, a menos que seja considerado inseguro. Um TCS de baixa potência pode ser usado em áreas de pele fina (por exemplo, face, pescoço, áreas intertriginosas, genitais ou áreas de atrofia da pele) ou em áreas onde o uso continuado de TCS de média potência é considerado inseguro.

[096]O TCS com potência baixa, média e alta ou super alta é bem conhecido na técnica. Exemplos de TCS de média potência incluem creme de propionato de fluticasona a 0,05%, creme de furoato de mometasona a 0,1% ou creme de valerato de betametasona a 0,06%. Exemplos de TCS de baixa potência incluem pomada de hidrocortisona a 1%. Exemplos de TCS de alta potência podem ser creme de fluocinonida a 0,05% ou pomada de desomimetasona a 0,25%. Exemplos de TCS de alta potência podem ser pomada de propionato de clobetasol| a 0,05%.

[097]EMm alguns casos, o paciente sujeito ao tratamento aqui descrito está livre de uma ou mais das seguintes terapias: (i) tacrolimo e pimecrolimo tópicos, (ii)

tratamento sistêmico de corticosteroides, (iii) inibidores de leucotrieno, (iv) imunoterapia de alergênios, (v) tratamento sistêmico de imunossupressores ou imunomoduladores (por exemplo, ciclosporina, micofenolato-mofetil, IFN-y, azatioprina, metotrexato ou biológicos), (vi) vacinas vivas (por exemplo, atenuadas) e/ou (vii) medicina chinesa tradicional. O paciente também pode estar livre de quaisquer procedimentos cirúrgicos e/ou procedimentos de UV.

[098] Qualquer um dos métodos aqui descritos pode ainda compreender a ocorrência de diminuição da hemoglobina, infecção do trato respiratório superior, infecção do trato urinário ou uma combinação dos mesmos no sujeito após a primeira dose. Se uma ou mais ocorrências forem observadas, a quantidade do anticorpo anti- Cemx (por exemplo, FB825) da segunda dose pode ser reduzida. Alternativamente, o tratamento pode ser interrompido.

KITS PARA USO NO TRATAMENTO DE DISTÚRBIOS ASSOCIADOS A IgE

[099]A presente divulgação também fornece kits para uso no tratamento de distúrbios associados a IgE. Tais kits podem incluir um ou mais recipientes que compreendem um anticorpo anti-Cemx como aqui descrito (como FB825).

[0100]Em algumas modalidades, o kit pode compreender instruções para uso de acordo com qualquer um dos métodos descritos neste documento. As instruções incluídas podem compreender uma descrição da administração do anticorpo anti- Cemx para tratar, retardar o início ou aliviar um distúrbio associado à IgE de acordo com qualquer um dos métodos aqui descritos. O kit pode ainda compreender uma descrição da seleção de um sujeito adequado para tratamento com base na identificação de se esse sujeito tem, é suspeito de ter ou está em risco para o distúrbio. Em ainda outras modalidades, as instruções compreendem uma descrição da administração de anticorpo anti-Cemx a um sujeito com necessidade de tratamento para reduzir o risco de desenvolver o distúrbio associado à IgE.

[0101]As instruções relacionadas ao uso de um anticorpo anti-Cemx geralmente incluem informações sobre dosagem, esquema de dosagem e via de administração para o tratamento pretendido. Os recipientes podem ser doses unitárias, embalagens a granel (por exemplo, embalagens com várias doses) ou doses subunitárias. As instruções fornecidas nos kits da invenção são tipicamente instruções escritas em uma etiqueta ou bula (por exemplo, uma folha de papel incluída no kit), mas instruções legíveis por máquina (por exemplo, instruções transportadas em um disco de armazenamento magnético ou óptico) também são aceitáveis.

[0102]A inserção de rótulo ou bula indica que a composição é usada para tratar, retardar o início e/ou aliviar um distúrbio associado à IgE. Podem ser fornecidas instruções para a prática de qualquer um dos métodos aqui descritos.

[0103]Os kits desta divulgação estão em embalagens adequadas. A embalagem adequada inclui, mas não se limita a, frascos, garrafas, jarras, embalagens flexíveis (por exemplo, Mylar selado ou sacos de plástico) e similares. Também são contempladas embalagens para uso em combinação com um dispositivo específico, como um inalador, um dispositivo de administração nasal (por exemplo, um atomizador) ou um dispositivo de infusão, como uma minibomba. Um kit pode ter uma porta de acesso estéril (por exemplo, o recipiente pode ser uma bolsa de solução intravenosa ou um frasco com uma rolha perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica). O recipiente também pode ter uma porta de acesso estéril (por exemplo, o recipiente pode ser um saco de solução intravenosa ou um frasco com uma rolha perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica). Pelo menos um agente ativo na composição é um anticorpo anti-Cemx, como FB825.

[0104]Os kits podem opcionalmente fornecer componentes adicionais, como tampões e informações interpretativas. Normalmente, o kit compreende uma inserção (ou inserções) de recipiente e uma etiqueta ou bula ou associados ao recipiente. Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece artigos de fabricação que compreendem o conteúdo dos kits descritos acima.

TÉCNICAS GERAIS

[0105]A prática da presente invenção empregará, a menos que seja indicado o contrário, técnicas convencionais de biologia molecular (incluindo técnicas recombinantes), microbiologia, biologia celular, bioquímica e imunologia, que estão dentro do conhecimento da técnica. Tais técnicas são explicadas completamente na literatura, como Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook, et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R. |. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather and P. E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J. B. Griffiths, and D. G. Newell, eds., 1993 a 1998) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller and M. P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel, et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis, et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C. A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988 e 1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds.,, Harwood Academic Publishers, 1995).

[0106]Sem mais elaboração, acredita-se que um versado na técnica possa, com base na descrição acima, utilizar a presente invenção em toda a sua extensão. As modalidades específicas a seguir devem, portanto, ser interpretadas como meramente ilustrativas e não limitativas do restante da divulgação de qualquer maneira. Todas as publicações citadas aqui são incorporadas por referência para os propósitos ou assuntos aqui mencionados.

EXEMPLO 1: ESTUDOS DE TOXICIDADE DE FB825 EM MACACO

CINOMOLGO MATERIAIS E MÉTODOS TESTES LABORATORIAIS

[0107]Amostras de sangue e urina para hematologia, coagulação, química sérica (incluindo testes de função hepática), testes de função tireoidiana e exame de urina foram coletadas e analisadas após testes laboratoriais clínicos de rotina.

[0108]Valores laboratoriais clínicos anormais foram marcados como altos ou baixos (ou normais ou anormais) com base nas faixas de referência para cada parâmetro do laboratório. Significância clínica foi definida como qualquer variação nos resultados que tenha relevância médica e possa ter resultado em uma alteração nos cuidados médicos (por exemplo, observação ativa, medidas de diagnóstico ou medidas terapêuticas). Se uma mudança clinicamente significativa da triagem tiver sido observada, o valor clinicamente significativo e a razão da significância clínica foram documentados. O macaco cinomolgo em tratamento continuou sendo monitorado com avaliações adicionais até que os valores atingissem o intervalo de referência ou os valores na triagem ou até o acompanhamento não ser mais necessário clinicamente.

AVALIAÇÕES FARMACODINÂMICAS

[0109]Amostras de sangue para a determinação do total de anticorpos IgE e antifármacos (ADA) foram coletadas usando tubos de coleta de sangue de 3,5 ml (Tubos de Separação de Soro BD Vacutainer&6 SST'Y), fornecidos por Vince and Associates Clinical Research. Uma amostra foi coletada para atingir um volume mínimo de sangue por tamanho do tubo de coleta de sangue. Um mínimo de 1,0 ml de soro foi coletado em cada momento. Após a obtenção da amostra de sangue, o tubo de coleta foi invertido 5 vezes e o sangue foi coagulado por 30 minutos em temperatura ambiente (19 ºC a 24 ºC). A amostra foi centrifugada a aproximadamente

2.200 rpm por 10 minutos à temperatura ambiente em uma centrífuga de balde giratório. Alíquotas séricas duplicadas de volume aproximadamente igual (mínimo de 500 ul por alíquota) foram transferidas, usando a técnica laboratorial padrão, para 2 tubos de armazenamento devidamente rotulados (criotubos de polipropileno de 2 ml) fornecidos por Vince and Associates Clinical Research.

[0110]As amostras de imunogenicidade para a medição da ADA foram analisadas usando um teste ELISA validado.

ASPARTATO SÉRICO AMINOTRANSFERASE E ALANINA AMINO TRANSFERASE

[0111]A função hepática em macacos cinomolgo tratados com FB825 foi monitorada medindo os níveis de aspartato aminotransferase (AST) e alanina amino transferase (ALT). As atividades dessas duas enzimas foram expressas em unidade por litro (u/l).

RESULTADOS ESTUDOS DE DOSE ÚNICA DE FB825 EM MACACOS CINOMOLGOS

[0112]A toxicidade de dose única de FB825 foi avaliada em estudos de toxicidade de dose única não GLP realizados em macacos cinomolgos. No primeiro estudo, os efeitos relacionados ao tratamento foram determinados em macacos cinomolgos que tiveram administrada uma única infusão intravenosa de 10 minutos de FB825. No segundo estudo, os efeitos relacionados ao tratamento foram determinados em macacos cinomolgos que tiveram administrada uma única injeção subcutânea de FB825.

[0113]Em um estudo de determinação do intervalo de doses de injeção |V, uma única infusão intravenosa de 10 minutos de FB825 foi bem tolerada em macacos cinomolgos machos e fêmeas a 30, 100 e 300 mg/kg. Não houve efeitos relacionados ao tratamento sobre parâmetros clínicos, consumo de alimentos, peso corporal ou mortalidade. Os efeitos relacionados ao FB825 foram limitados a aumentos mínimos de ALT e AST que haviam se recuperado no dia 57 e aumentos mínimos de interleucina-6 e interleucina-10 em 6 horas e/ou 1 hora após o recebimento de dosagem em animais que receberam administração de pelo menos 100 mg/kg de FB825. Com base nesses resultados, o nível de efeito adverso não observado (NOAEL) foi considerado como 300 mg/kg.

[0114]Em outro estudo de toxicologia de dose única, a administração de FB825 através de uma única injeção subcutânea foi bem tolerada em macacos cinomolgos a 300 mg/kg. Não foram observados sinais ou efeitos clínicos relacionados ao FB825 sobre pesos corporais ou parâmetros de patologia clínica (hematologia, coagulação e química clínica).

ESTUDOS DE DOSE REPETIDA DE FB825 EM MACACOS CINOMOLGOS

[0115]A toxicidade de dose repetida de FB825 foi avaliada em macacos cinomolgos. Os efeitos relacionados ao tratamento foram determinados em macacos cinomolgos, que tiveram administrada uma única infusão intravenosa de 10 minutos de FB825, uma vez por semana, durante um total de 4 doses.

[0116]A administração de FB825 por 10 minutos de infusão intravenosa uma vez por semana, para um total de 4 doses, foi bem tolerada em macacos cinomolgos a 30, 100 e 300 mg/kg. Os seguintes parâmetros e pontos finais foram avaliados neste estudo: sinais clínicos, peso corporal, consumo de alimentos, oftalmologia, eletrocardiologia, parâmetros de patologia clínica (hematologia, coagulação e química clínica), análises de bioanálise e toxicocinéticas, análise de anticorpos antiterapêuticos, citometria de fluxo, análise de IgE, níveis de hormônio tireoidiano, achados de necropsia macroscópica, peso de órgãos e exames histopatológicos.

[01 17]Não foram observados sinais ou efeitos clínicos relacionados ao FB825 sobre peso corporal, consumo de alimentos, exames oftalmológicos e eletrocardiográficos, parâmetros de coagulação e níveis de hormônio tireoidiano em ambos os sexos, em doses de até 300 mg/kg. Além disso, não houve achados macroscópicos notáveis relacionados ao FB825 em doses de até 300 mg/kg, inclusive.

[0118]Os efeitos relacionados ao FB825 foram limitados a aumentos marcantes reversíveis da ALT em doses maiores ou iguais a 100 mg/kg e aumentos leves reversíveis da AST, reduções mínimas parcialmente reversíveis nos níveis de albumina e as correspondentes taxas de albumina: globulina e reversíveis aumentos mínimos na contagem de monócitos na dose de 300 mg/kg de FB825. A magnitude dos aumentos nos níveis de ALT e AST em 300 mg/kg foi considerada adversa. Os efeitos nos órgãos-alvo foram observados em níveis > 30 mg/kg e consistiram na depleção de coloide folicular não adverso da tireoide e em menor peso da tireoide. No entanto, os pesos mais baixos da tireoide estavam dentro da faixa observada em macacos de controle histórico. Como a variação no padrão de coloração coloidal, a variação no tamanho dos folículos da tireoide e a degeneração vacuolar foram relatadas como achados espontâneos em macacos cinomolgos (Ishida 2000; Hatakeyama 2011) e porque não houve efeitos relacionados ao artigo de teste sobre os níveis de tireoxina e hormônios estimulantes da tireoide, os achados na tireoide foram considerados não adversos nas condições deste estudo.

[0119]Com base nos aumentos nos níveis de ALT e AST em 300 mg/kg, o NOAEL foi considerado como 100 mg/kg (Cmax de 5.330 pg/ml e AUC(0-168h) de 520 mgr-h/ml para o sexo masculino e Cmax de 5.220 pug/ml e AUC(0-168h) de 487 mg-h/ml para o sexo feminino).

EXEMPLO 2: ESTUDOS CLÍNICOS HUMANOS

[0120]O objetivo principal deste estudo foi avaliar a segurança e a tolerabilidade de doses únicas ascendentes de IV de FB825 em sujeitos normais e saudáveis. Os objetivos secundários deste estudo incluem determinar o perfil PK de doses únicas ascendentes de IV de FB825, explorar os efeitos na IgE total após doses únicas ascendentes de |V de FB825 e explorar a ocorrência de anticorpos anti-FB825 após doses únicas ascendentes de IV FB825.

DESIGN DE ESTUDO

[0121]Este foi um estudo de fase 1, primeiro em humano (FIH), randomizado, duplo-cego e controlado por placebo para avaliar a segurança, tolerabilidade, farmacocinética e imunogenicidade de doses únicas ascendentes de IV de FB825. Uma visão geral do cronograma de eventos realizados durante o estudo clínico em humanos do FB825 está descrita na Tabela 1. Os sujeitos que atenderam aos critérios de entrada no estudo foram designados para a coorte de dose atual e aleatoriamente designados para receber FB825 ou placebo (veículo). Todas as doses de FB825 foram administradas como uma infusão intravenosa de 1 hora.

[0122]Os dados de segurança de cada grupo de coorte de doses foram revisados antes da progressão para o próximo coorte de dose mais alta. A dosagem para a próxima coorte com a dose mais alta foi permitida somente após a confirmação da segurança. Um nível de dose pode ter sido ajustado ou repetido, conforme necessário. Os dados de PK cegos foram revisados ao mesmo tempo que os dados de segurança cegos.

[0123]O estudo incluiu 6 coortes e um total de aproximadamente 54 sujeitos normais e saudáveis (7 sujeitos cada [4 ativos: 3 placebo] nas Coortes A e B e 10 sujeitos cada [7 ativos: 3 placebo] nas Coortes C, D, E e F). A dose inicial de FB825 foi de 0,003 mg/kg IV, com aumentos planejados nas coortes subsequentes para 0,03, 0,3, 1,5, 5 € 10 mg/kg IV. O estudo consistiu em um período de triagem (dias -28 a — 2), check-in (Dia —1), período de tratamento/acompanhamento (Dias 1 a 140) e uma visita de final de estudo (Dia 140).

[0124]Os sujeitos fizeram check-in na clínica no dia -1 e os procedimentos de check-in foram realizados. Quando os procedimentos se sobrepuseram e estavam programados para ocorrer no mesmo momento, a ordem dos procedimentos era medições de sinais vitais, eletrocardiogramas e, em seguida, coleta de sangue farmacocinética.

[0125]Os sujeitos receberam fármaco de estudo ativo ou placebo no dia 1. Os 2 primeiros sujeitos das 2 coortes de doses mais baixas (coortes A e B) receberam placebo ou FB825 (ou seja, era necessário representar o placebo e o fármaco de estudo ativo). Os sujeitos restantes nessas coortes receberam dosagens 48 horas após a dosagem dos 2 primeiros sujeitos. Todos os sujeitos nas 4 coortes de doses mais altas receberam dosagens ao mesmo tempo. Houve um período mínimo de 14 dias entre o recebimento de dosagem do último sujeito em uma coorte antes de ser tomada a decisão de prosseguir com o recebimento de dosagem da próxima coorte. Os dados de segurança de cada coorte de dose foram revisados às cegas antes da progressão para a próxima coorte de dose mais alta. A dosagem na próxima coorte com a dose mais alta foi permitida somente após a confirmação de que era seguro fazê-lo. Os dados de PK cegos foram revisados ao mesmo tempo que os dados de segurança cegos.

[0126]Amostras de sangue para avaliações da farmacocinética foram coletadas no dia 1, 30 minutos (+ 5 minutos) antes do início da infusão; 30 minutos (+ 2 minutos) após o início da infusão; 1, 1,25 e 2 horas (+ 2 minutos) após o início da infusão; 4 e 8 horas (t+ 5 minutos) após o início da infusão; e em 24 e 48 horas (+ 10 minutos) após o início da infusão. Além disso, amostras de sangue únicas foram coletadas nos dias 5, 14, 29, 85 e 140 após a infusão. Amostras de sangue para avaliações de imunogenicidade foram coletadas no Dia 1 (30 minutos [+ 5 minutos] antes do início da infusão) e nos Dias 5, 14, 29, 85 e 140.

[0127]Os sujeitos foram confinados na clínica do Dia -1 até a alta no Dia 3 (48 horas após o recebimento de dosagem) e retornaram à clínica nos Dias 5, 14, 29, 85 e 140 para consultas ambulatoriais.

[0128]A duração do estudo, excluindo a triagem, foi de aproximadamente 140 dias.

POPULAÇÃO DE PACIENTES

[0129]Sujeitos do sexo feminino e masculino saudáveis, com idade entre 18 e 55 anos, inclusive, apresentavam peso corporal igual ou superior a 50 kg e índice de massa corporal de 18,0 a 30,0 kg/m2, inclusive, e forneceram consentimento informado por escrito. Um total de 54 sujeitos foram inscritos, 41 sujeitos (75,9%) completaram o estudo e 13 sujeitos (24,1%) foram descontinuados. Sete sujeitos (13,0%) descontinuaram devido à escolha dos sujeitos e incluíram 1 sujeito nos grupos de tratamento 0,3, 1,5, 5 e 10 mg/kg de FB825 e 3 indivíduos no grupo de tratamento com placebo. Seis sujeitos (11,1%) perderam o acompanhamento e incluíram 1 sujeito cada nos grupos de tratamento com 0,003, 0,3 e 1,5 mg/kg de FB825 e placebo e 2 indivíduos no grupo de tratamento com 10 mg/kg de FB825.

g gs é so. = DE <bee| | pe De D< x bh bb | a Ed 8 - Ss $£ É s s 18 E F sz be >< bx be bx be be be Ê =

É E $ < e z 3 e. E [>< >< x D< Dx be De s E > 2 E Ss 2) s Ss É = = Bs x ae <pebe| | De De x kkk e é S Fe TD RR A O bh TS 3 3 os E Fo é sê SE & ss s 283 Ê o E é 8 bebebel | be be be bc be Del |5 2º | g 3 3 8 alle sê ã 2) 35 O |ã| E ÉS é zZ||8| 233 Ê õ [ER S ES << Dx < < = õ E & er 11 | ppp bebe be be be be | | |> 9 ê </|s 8 = 8 Z je sã UI Ss) 7 ol IO| D< p<<<Ix x DD x x | x < < E | [Es é

EM S uu [E H el els << peixe] Debe x Dk < ai < ê < s Lx 8 o o ua s < Fi 2 .º EJ É : E EE e [ld çBEE 2 [E se.) [ls e [8 |,8 8. | [E lg8) 8 = 58,8 elê e| 38] [SSIS] 12 8 [68 88 | (51293) 5 (8 é 281,3 ze =|, sslglels/5] [8 | [ES 35 | e88 Ses e o 18988 Em fg gElSS Ne) fé .ols 2% 58 |gls|Gl& 8 5.8 |ã |O 532128 El [8/2 Ss = 8/7/2/8/5 Sle 18 és |oaslelees al9 3 |? [$gEÉ Elos sé S) E SE er8I8 2/8142 S/S 2/2 S 5/52 0/3 2/s/é 23 S 8/3 </2 813 Sl8/S às —SEsSSGessssss Es oss Eos dé E déss ss ds E) I16|o EEE ué oe SE So E se 2 Se << Sl< E 3) e) 2 o/<Jo ADMINISTRAÇÃO DO FB825

[0130]No Dia 1, os sujeitos receberam uma única infusão IV de FB825 (0,003,

0,03, 0,3, 1,5, 5 ou 10 mg/kg) ou placebo durante aproximadamente 1 hora.

[0131]Todas as doses foram administradas na manhã do dia da dosagem programada (Dia 1) como uma infusão intravenosa única de aproximadamente 1 hora após um jejum de aproximadamente 2 horas. Um café da manhã leve foi permitido 2 horas ou mais antes do recebimento da dosagem. A água era permitida a qualquer momento, exceto 1 hora antes e 1 hora após o recebimento de dosagem. As soluções de FB825 foram diluídas antes da administração.

[0132]Uma infusão intravenosa única de aproximadamente 1 hora de FB825 ou placebo foi administrada no Dia 1 às O hora. O progresso para o próximo nível de dose dependia da aprovação da Equipe de Revisão de Segurança. Os 2 primeiros sujeitos das 2 coortes de dose mais baixa (Coortes A e B) receberam placebo ou FB825 (ou seja, era necessário que ambos, placebo e ativo, fossem representados). Os sujeitos restantes nessas coortes receberam dosagens 48 horas após a dosagem dos 2 primeiros sujeitos. Todos os sujeitos nas 4 coortes de doses mais altas receberam dosagens ao mesmo tempo.

AVALIAÇÕES FARMACOCINÉTICAS (PK.

[0133]Amostras de sangue para análise PK de FB825 foram coletadas de todos os sujeitos nos seguintes pontos de tempo: no Dia 1, aos 30 minutos (+ 5 minutos) antes do início da infusão; aos 30 minutos (+ 2 minutos) após o início da infusão; 1, 1,25 e 2 horas (+ 2 minutos por 30 minutos a 2 horas após a dose) após o início da infusão; às 4 e 8 horas (t+ 5 minutos para 4 a 8 horas após dose) após o início da infusão; e às 24 e 48 horas (+ 10 minutos para 24 a 48 horas após dose) após o início da infusão. Além disso, amostras de sangue únicas foram coletadas nos dias 5, 14 (t+ 1 dia), 29 (t+ 2 dias), 85 (+ 3 dias) e 140 (+ 5 dias) após a infusão.

[0134]Os seguintes parâmetros de dose única de PK foram calculados para o FB825 a partir dos dados de concentração sérica de cada sujeito, usando métodos não compartimentais:

[0135]AUC0o: Área sob a curva de concentração-tempo no soro (AUC) do tempo O até a última concentração quantificável, calculada usando a regra linear trapezoidal

[0136]AUC0-nt AUC do tempo O extrapolado para o infinito, calculado usando a seguinte fórmula: AUC o-int = AUCo+ + Ci/Ke,, em que Cr foi a última concentração de soro mensurável, e Ke era a taxa de eliminação terminal constante. Se a área extrapolada (Ct/Ke) foi superior a 20% da AUCo-int, então AUCo-int e seus parâmetros associados (CL e Va) foram ajustados para ausente.

[0137]% de AUCex Porcentagem da área extrapolada para o cálculo da AUCo.- inf Cmax Concentração sérica máxima observada Tmax Tempo da concentração sérica máxima observada Ke Constante de velocidade de eliminação terminal, em que Ka foi a magnitude da inclinação da regressão linear da concentração logarítmica versus perfil de tempo durante a fase terminal. Ke só foi retido se R? 20,80 e 3 pontos na fase terminal não incluíram Cmax.

t12 Meia-vida terminal (sempre que possível), calculada como (In)2/Ke MRT Tempo médio de permanência, calculado como AUMC/AUC CL Depuração aparente, calculada como Dose/AUCo-nt Va Volume aparente de distribuição, calculado da seguinte forma: Dose/(AUC0o-int x Kel)

AMOSTRAS DE SANGUE FARMACOCINÉTICAS

[0138]Amostras de sangue para analisar o FB825 foram coletadas usando tubos de coleta de sangue de 3,5 ml! (BD Tubos de separação de soro Vacutainerº SSTY), fornecidos junto à Vince and Associates Clinical Research. Uma amostra foi coletada para atingir um volume mínimo de sangue por tamanho do tubo de coleta de sangue. Um mínimo de 1,0 ml de soro foi coletado em cada momento. Após a obtenção da amostra de sangue, o tubo de coleta foi invertido 5 vezes e o sangue foi coagulado por 30 minutos à temperatura ambiente (19 ºC a 24 ºC). A amostra foi centrifugada a aproximadamente 2.200 rpm por 10 minutos à temperatura ambiente em uma centrífuga de balde giratório. Alíquotas séricas duplicadas de volume aproximadamente igual (mínimo de 500 ul por alíquota), usando a técnica padrão de laboratório, foram transferidas para 2 tubos de armazenamento adequadamente rotulados (criotubos de polipropileno de 2 ml) fornecidos pela Vince and Associates Clinical Research. Uma etiqueta foi presa a cada tubo de armazenamento e continha as seguintes informações: Tipo de amostra: Soro humano Tipo de Ensaio: PK Protocolo: FB825CLCTO1 Número do sujeito: Número de randomização Ponto do tempo: consulte o protocolo Alíquota de soro: 1 ou 2

[0139]Dentro de 90 minutos após a colheita, ambas as amostras de alíquotas foram armazenadas na posição vertical, a -70 ºC + 10 “ºC. As determinações farmacocinéticas do FB825 foram realizadas usando um ELISA validado.

AVALIAÇÕES FARMACODINÂMICAS

[0140]Amostras de sangue para a determinação do total de anticorpos IgE e antidrogas (ADA) foram coletadas no dia 1 aos 30 minutos (+ 5 minutos) antes do início da infusão e nos dias 5, 14 (+ 1 dia), 29 (+ 2 dias), 85 (+ 3 dias) e 140 (t 5 dias) após a infusão ou no término precoce.

[0141]As amostras de sangue para análise dos níveis de ADA foram coletadas usando tubos de coleta de sangue de 3,5 ml (tubos de separação de soro BD VacutainerO SST'Y), fornecidos pela Vince and Associates Clinical Research. Uma amostra foi coletada para atingir um volume mínimo de sangue por tamanho do tubo de coleta de sangue. Um mínimo de 1,0 ml de soro foi coletado em cada momento. Após a obtenção da amostra de sangue, o tubo de coleta foi invertido 5 vezes e o sangue foi coagulado por 30 minutos em temperatura ambiente (19 ºC a 24 ºC). A amostra foi centrifugada a aproximadamente 2.200 rpm por 10 minutos à temperatura ambiente em uma centrífuga de balde giratório. Alíquotas séricas duplicadas de volume aproximadamente igual (mínimo de 500 ul por alíquota) foram transferidas, usando a técnica padrão de laboratório, para 2 tubos de armazenamento adequadamente rotulados (criotubo de polipropileno de 2 ml). As amostras de imunogenicidade para a medição da ADA foram analisadas usando um ELISA validado.

AVALIAÇÕES DE SEGURANÇA

[0142]A segurança e a tolerabilidade foram avaliadas pelo monitoramento e registro de EAs, resultados de testes clínicos laboratoriais (hematologia, coagulação, química sérica, incluindo testes de função hepática, testes de função tireoidiana e urinálise), medições de sinais vitais, resultados de ECG de 12 derivações, dados de telemetria cardíaca, e achados do exame físico.

TESTES CLÍNICOS DE LABORATÓRIO

[0143]Amostras de sangue e urina para hematologia, coagulação, química sérica (incluindo testes de função hepática), testes de função tireoidiana, exame de urina e exames toxicológicos foram coletados em condições de jejum (em jejum por aproximadamente 2 ou mais horas) nos pontos de tempo indicados no cronograma de eventos (Tabela 1). Testes clínicos de laboratório (hematologia, coagulação, química sérica [incluindo testes de função hepática] e exame de urina) foram realizados na triagem; check-in; no dia 1 antes do início da infusão e em 1 (final da infusão), 8 e 24 horas (+ 15 minutos) após o início da infusão; e em um único momento nos dias 3 (+ minutos para até 48 horas após a dose), 5, 14, 29, 85 e 140.

[0144]As amostras foram usadas para testes clínicos de laboratório, incluindo hematologia, coagulação, química sérica, função da tireoide e exame de urina.

[0145]Foi realizado um teste de gravidez sérico (gonadotrofina coriônica B- humana) em todos os sujeitos do sexo feminino no rastreamento, check-in, no dia 3 (48 horas após o recebimento de dosagem) e na visita de final de estudo (dia 140). Sujeitos do sexo feminino na pós-menopausa tiveram um teste sérico de FSH na triagem.

[0146]O antígeno de superfície da hepatite B, o anticorpo do vírus da hepatite Ce o anticorpo do vírus da imunodeficiência humana (tipos 1 ou 2) foram avaliados na triagem.

[0147]Uma triagem de drogas na urina foi realizada na triagem e no Dia -1 para álcool, anfetaminas, barbitúricos, benzodiazepínicos, metabólitos da cocaína, cotinina, metilenodioximetanfetamina, opiáceos, fenciclidina, propoxifeno e tetra- hidrocanabinol.

[0148]Os valores laboratoriais clínicos anormais foram marcados como alto ou baixo (ou normal ou anormal) com base nas faixas de referência para cada parâmetro de laboratório. Significância clínica foi definida como qualquer variação nos resultados que tenha relevância médica e possa ter resultado em uma alteração nos cuidados médicos (por exemplo, observação ativa, medidas de diagnóstico ou medidas terapêuticas). Se uma mudança clinicamente significativa da triagem tiver sido observada, o valor clinicamente significativo e o motivo da significância clínica foram documentados na página do AE no eCRF. Os sujeitos foram monitorados continuamente com avaliações adicionais até que os valores atingissem o intervalo de referência ou os valores na triagem ou até o acompanhamento não ser mais necessário clinicamente.

MEDIÇÕES DE SINAIS VITAIS

[0149]As medidas dos sinais vitais incluíam pressão arterial sistólica e diastólica, frequência cardíaca, frequência respiratória e temperatura corporal oral. O sujeito ficou sentado por pelo menos 5 minutos antes de todas as medições serem realizadas, com exceção das avaliações ortostáticas. Nos pontos de tempo das avaliações ortostáticas, após todas as medições com os sujeitos sentados, os sujeitos estavam em decúbito dorsal por 5 minutos antes de medir a pressão arterial e a frequência cardíaca; os sujeitos permaneceram em pé por 1 minuto antes de medir novamente a pressão arterial e a frequência cardíaca.

[0150]Os sinais vitais foram medidos nos pontos de tempo indicados no cronograma de eventos (Tabela 1).

[0151]As medidas dos sinais vitais (pressão arterial sistólica e diastólica, frequência cardíaca, frequência respiratória e temperatura corporal oral) foram obtidas na triagem; check-in; no dia 1 antes do início da infusão e em 1 (final da infusão), 2e 4 horas (+ 15 minutos) e 8 e 24 horas (+ 30 minutos) após o início da infusão; e nos dias 3 (+ 15 minutos para até 48 horas após a dose), 5, 14, 29, 85 e 140. Durante a infusão, as medições dos sinais vitais foram obtidas a cada 15 minutos (+ 5 minutos). Avaliações ortostáticas foram realizadas no check-in; no dia 1 antes do início da infusão e às 2, 4, 8 e 24 horas (+ 15 minutos) após o início da infusão; e no dia 5.

[01 52]Significância clínica foi definida como qualquer variação nos resultados que tenha relevância médica e possa ter resultado em uma alteração nos cuidados médicos (por exemplo, observação ativa, medidas de diagnóstico ou medidas terapêuticas). Se uma alteração clinicamente significativa da triagem tiver sido observada, o valor clinicamente significativo e a razão da significância clínica foram documentados na página do AE, no eCRF do sujeito. O sujeito pode ser monitorado continuamente com avaliações adicionais até que o valor atinja o intervalo de referência ou o valor na triagem ou até o acompanhamento não ser mais necessário clinicamente.

ELETROCARDIOGRAMA DE DOZE DERIVAÇÕES

[0153]ECG de 12 derivações únicos foram obtidos após o sujeito ter estado na posição supina durante pelo menos 5 minutos nos pontos de tempo indicados no cronograma de eventos (Tabela 1). Eletrocardiogramas de doze derivações foram obtidos na triagem; check-in; no Dia 1 dentro de 2 horas antes do início da infusão e em 1 (final da infusão), 8 e 24 horas (+ 15 minutos) após o início da infusão; e nos dias 3 (+ 15 minutos para até 48 horas após a dose), 5, 14 e 140.

[0154]As avaliações do eletrocardiograma incluíram comentários sobre se os traçados eram normais ou anormais, bem como o ritmo, presença de arritmia ou defeitos de condução, morfologia, evidência de infarto do miocárdio e anormalidades do segmento ST, onda T e onda U. Além disso, as medidas dos seguintes intervalos foram medidas e relatadas: intervalo RR, intervalo PR, largura ORS, intervalo QT e QTcF.

[0155]Significância clínica foi definida como qualquer variação nos resultados que tenha relevância médica e possa ter resultado em uma alteração nos cuidados médicos (por exemplo, observação ativa, medidas de diagnóstico ou medidas terapêuticas). Se uma alteração clinicamente significativa da triagem tiver sido observada, o valor clinicamente significativo e a razão da significância clínica foram documentados na página do AE no eCRF do sujeito. O sujeito foi monitorado continuamente com avaliações adicionais até que os valores atingissem o intervalo de referência ou os valores na triagem ou até o acompanhamento não ser mais necessário clinicamente.

TELEMETRIA CARDÍACA

[0156]A telemetria cardíaca foi realizada nos pontos de tempo indicados no cronograma de eventos (Tabela 1). O monitoramento da telemetria cardíaca começou no dia 1 (começando aproximadamente 30 minutos antes do início da infusão) e continuou por 4 horas após o final da infusão.

[0157]Significância clínica foi definida como qualquer variação nos resultados que tenha relevância médica e possa ter resultado em uma alteração nos cuidados médicos (por exemplo, observação ativa, medidas de diagnóstico ou medidas terapêuticas). Se uma alteração clinicamente significativa dos achados iniciais de telemetria no dia 1 (aproximadamente 30 minutos antes do início da infusão) tiver sido observada, o valor clinicamente significativo e o motivo da significância clínica foram documentados na página AE no eCRF do sujeito. O sujeito foi monitorado continuamente com avaliações adicionais até o acompanhamento não ser mais necessário clinicamente.

EXAME FÍSICO

[0158]Exames físicos completos e exames físicos breves foram realizados nos pontos de tempo indicados no cronograma de eventos (Tabela 1). Un exame físico completo (incluindo uma avaliação do eritema cutâneo) foi realizado na triagem e nos dias 3, 14 e 140. Um breve exame físico (incluindo uma avaliação do eritema cutâneo) foi realizado no check-in (dia -1) e nos dias 5, 29 e 85. O exame físico incluiu altura e peso na triagem e apenas peso em outros dias.

[0159]UmM exame físico completo incluiu avaliações da pele (incluindo quaisquer sinais de eritema cutâneo), cabeça, ouvidos, olhos, nariz, garganta, pescoço, tireoide, pulmões, coração, sistema cardiovascular, abdômen, linfonodos e sistema/extremidades músculo-esqueléticas. Exames físicos intermediários deveriam ser realizados para avaliar EAs ou anormalidades laboratoriais clínicas.

[0160]Um breve exame físico incluiu avaliações da pele (incluindo quaisquer sinais de eritema cutâneo), pulmões, sistema cardiovascular e abdômen (fígado, baço).

[0161]Altura e peso foram medidos e o índice de massa corporal foi calculado apenas na triagem.

[0162]O peso foi medido em todos os outros pontos de tempo do exame físico indicados no cronograma de eventos.

SELEÇÃO DE DOSES PARA ESTUDOS EM HUMANOS

[0163]A dose inicial neste estudo de Fase 1, FIH foi de 0,003 mg/kg, que foi determinada usando o NOAEL de um estudo toxicológico de dose repetida de quatro semanas em primatas não humanos, o modelo mais próximo e mais relevante para os seres humanos e aplicando um fator de segurança apropriado, bem como do cálculo do nível mínimo de efeito biológico previsto (MABEL) para o FB825, com base nos dados farmacológicos in vitro e in vivo e nos dados toxicocinéticos.

[0164]O NOAEL para FB825 no estudo de toxicologia com dose repetida de quatro semanas em macacos cinomolgos foi considerado como 100 mg/kg. A dose humana equivalente, calculada de acordo com as Food and Drug Administration (FDA) Guidance for Industry: Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers (julho de 2005), é de 38,8 mg/kg; após a aplicação de um fator de segurança adequado para este (isto é, 100 vezes), a dose máxima inicial recomendada em sujeitos humanos seria de aproximadamente 0,39 mg/kg.

[0165]O MABEL para FB825 foi estimado em 0,1 pg/ml. Foi estimado que uma dose única intravenosa em sujeitos humanos de 0,003 mg/kg resultaria em exposição sistêmica ao FB825 na faixa de 0,06 pg/ml a 0,09 pg/ml; assim, o MABEL não deve ser excedido durante o estudo. Considerando o valor mais alto desse intervalo, a concentração máxima de circulação esperada de FB825 com esta dose inicial seria aproximadamente 4,4 x 10º vezes menor que à Cmax de FB825 no nível de dose NOAEL (100 mg/Kkg/dia) em macacos cinomolgos aos quais foi administrada uma dose única IV de FB825 (Estudo 20031008). Isso fornece uma margem de segurança de 3,7 x 10º vezes em uma base de miligrama por quilograma, além da dose equivalente humana de 111,6 mg/kg no NOAEL (300 mg/kg).

RESULTADOS

[0166]Este estudo avaliou a segurança, tolerabilidade, farmacocinética e imunogenicidade de doses ascendentes únicas de FB825 por injeção IV em um estudo randomizado, controlado por placebo, duplo-cego em sujeitos humanos adultos saudáveis. O desenho e a escolha da população de estudo do estudo clínico de Fase 1 primeira em humano (FIH) foram baseados na necessidade de obter resultados iniciais de segurança, tolerabilidade, PK e imunologia para o FB825 para futuros estudos clínicos. Os dados foram obtidos de acordo com o cronograma de eventos apresentado na Tabela 1.

O FB825 FOI ADMINISTRADO COM SEGURANÇA A SUJEITOS HUMANOS

[0167]lInfusões únicas de 1 hora e IV de FB825 em doses de 0,003, 0,03, 0,3, 1,5, 56 10 mg/kg foram seguras e bem toleradas pelos sujeitos saudáveis no ensaio clínico. Não houve óbitos e nenhum sujeito foi descontinuado devido a um evento adverso emergente do tratamento (TEAE). Com exceção da diminuição da hemoglobina, infecção do trato respiratório superior, infecção do trato urinário e ferimento por arma de fogo, todos os TEAESs foram resolvidos ao final do estudo.

[0168]Não houve tendências aparentes relacionadas ao tratamento ou à dose nos resultados dos exames clínicos laboratoriais, nas medições dos sinais vitais, nos resultados de ECG de 12 derivações ou nos achados do exame físico.

IgE TOTAL REDUZIDA PELA ADMINISTRAÇÃO DE FB825

[0169]A IgE total foi reduzida em todos os pontos de tempo pós-dose nos grupos de tratamento de 1,5 e 10 mg/kg de FB825. Nas outras doses (0,003, 0,03, 0,3 e 5 mg/kg de FB825) e grupos de tratamento com placebo, a IgE total foi reduzida em alguns pontos de tempo pós-dose, mas não houve tendências gerais (Figura 1 e Figura 2).

[0170]Apenas 4 sujeitos (1 nos grupos de tratamento com 0,03, 0,3 e 5 mg/kg de FB825 e placebo) apresentaram ADA detectável, sendo que apenas 1 sujeito no grupo de tratamento com 0,03 mg/kg de FB825 apresentou ADA reativa (Figura 3).

EXEMPLO 3: UM ESTUDO EXPLORATÓRIO DE RÓTULO ABERTO PARA AVALIAR A SEGURANÇA E EFICÁCIA DO FB825 EM ADULTOS COM DERMATITE

ATÓPICA

[0171]O presente estudo foi projetado para avaliar a alteração da linha de base na IgE total e na IgE específica de alergênios em pacientes com dermatite atópica após a administração IV de FB825 e para avaliar a eficácia clínica desses pacientes. Este estudo também tem como objetivo avaliar a segurança do FB825 em pacientes tratados por esse meio, monitorar as alterações na hematologia clínica após a administração IV do FB825 e explorar as alterações da linha de base nos biomarcadores, incluindo quimiocina regulada por ativação e timo (TARC), Eotaxina- 3, linfopoietina estromal tímica (TSLP), periostina, IL-1a, IL, IL-5, I1L-13, 11-16, 11-31 e M-CSF após a administração |V de FB825.

[0172]O FB825 é uma imunoglobulina monoclonal humanizada G1 (IgG1) que tem como alvo o domínio CemX em células linfocíticas B humanas que expressam IgE ligada à membrana (mIgE). O FB825 pode bloquear a via biológica da síntese de IgE, beneficiando assim o tratamento de doenças alérgicas mediadas por IgE. O FB825 é formulado em uma solução aquosa e administrado a um paciente por meio de uma infusão intravenosa de 1 hora a 5 mg/kg.

PROCEDIMENTOS DE ESTUDO

[0173]Este é um estudo exploratório aberto para avaliar a segurança e a eficácia do FB825 em adultos com dermatite atópica (AD). Aproximadamente 12 pacientes humanos com dermatite atópica (AD), que atendem aos critérios de entrada no estudo, foram incluídos no estudo. Todos os pacientes elegíveis receberam FB825, mg/kg, por infusão intravenosa de 1 hora no Dia 1 e no Dia 85 (Tabela 2). Os sujeitos foram hospitalizados depois de receber FB825 no Dia 1 e Dia 85 e receberam alta do hospital no dia seguinte para observação de segurança (pelo menos 12 horas). Os pacientes retornaram ao centro de estudo nos Dias 8, 15, 29, 57, 85, 92, 99, 113, 141 e 169 para a segurança e eficácia, e avaliação de biomarcador (Tabela 2).

[0174]EMm alguns casos, os pacientes podem ser solicitados a visitar o local no Dia 78 para fazer a coleta de sangue. O objetivo da amostra de sangue é medir a IgE total para determinar se os sujeitos precisam da segunda dose de FB825. Os sujeitos com alteração da linha de base na IgE total inferior a 50% no dia 78 podem receber a segunda dose de FB825 (5 mg/kg). Sujeitos com alteração da linha de base no total de IgE 50% no dia 78 podem ter a visita de final de estudo no Dia 85 e concluir o estudo. Para pacientes que recebem a segunda dose de FB825, os dados coletados para a segunda dose podem ser analisados e resumidos iguais aos coletados para a primeira dose. Em alguns casos, os pacientes receberam a segunda dose de FB825, mg/kg, por infusão intravenosa de 1 hora no Dia 85. Esses pacientes foram hospitalizados antes de receber FB825 no dia 85 e receberam alta do hospital no dia seguinte para observação de segurança (pelo menos 12 horas). Os pacientes retornaram ao local do estudo nos dias 92, 99, 113, 141 e 169 para a avaliação de segurança e eficácia.

[0175]A IgE total sérica e a IgE específica do antígeno foram medidas em visitas agendadas e avaliadas para explorar as alterações desde o início após a administração intravenosa de 5 mg/kg de FB825.

[0176]Os pacientes foram examinados em busca de atividades de avaliação de eficácia clínica em visitas agendadas, incluindo Escala Visual Analógica de Prurido (VAS), Índice de Gravidade do Eczema por Área (EASI), Pontuação de Gravidade de Índice de Dermatite Atópica (SCORAD), Avaliação Global do Investigador (IGA) para AD e Área de Superfície Corporal (BSA) envolvidos nos sintomas da AD.

[0177]Os dados de segurança, incluindo EAs e testes de laboratório, foram revisados pelo Pl. A duração da participação do sujeito no estudo foi de aproximadamente 24 semanas.

SELEÇÃO DA POPULAÇÃO ESTUDADA

[0178]Sujeitos do sexo masculino ou do sexo feminino com dermatite atópica foram incluídos em um único local de estudo. Aproximadamente 15 sujeitos no total foram inscritos para atingir pelo menos 12 sujeitos avaliáveis.

CRITÉRIO DE SELEÇÃO i) PRINCIPAIS CRITÉRIOS DE INCLUSÃO e Sujeitos do sexo masculino ou do sexo feminino entre 20 e 65 anos, inclusive.

e O sujeito tem um diagnóstico confirmado pelo médico de dermatite atópica crônica com base em três anos de histórico de sintomas definidos pelos critérios revisados de Eichenfield de Hannifin e Rajka e apoiados por IgE específica de alergênio positiva na visita de triagem.

« Pontuação de Índice de Gravidade do Eczema por Área (EASI) 214 nas visitas de triagem e de linha de base.

e Pontuação da Avaliação Global do Investigador (IGA) 23 (escala de 5 pontos) nas visitas de triagem e de linha de base.

« 210% da área de superfície corporal (BSA) do envolvimento de AD nas visitas de triagem e de linha de base.

e Histórico de resposta inadequada a um regime estável (1 mês) de corticosteroides tópicos ou inibidores da calcineurina como tratamento para AD dentro de 3 meses antes da visita de triagem. (O regime de corticosteroides tópicos significa potência média a alta, aplicado por pelo menos 28 dias ou pela duração máxima recomendada pelas informações de prescrição do produto.).

e Os pacientes devem aplicar doses estáveis de emoliente fornecido para dermatite atópica duas vezes ao dia por pelo menos 7 dias antes da consulta inicial.

+ Os sujeitos do sexo feminino com potencial para engravidar devem usar pelo menos duas formas de controle de natalidade. Um deve ser a proteção de barreira (ou seja, preservativo ou preservativo feminino) e o outro é um dos métodos aceitáveis de controle da natalidade (ou seja, diafragma, dispositivo intrauterino, contraceptivos hormonais ou abstinência) durante todo o estudo. Sujeitos estéreis cirurgicamente

(isto é, histerectomia, ligação tubária bilateral ou ooforectomia bilateral) ou pós- menopausa (definida como amenorreia por 12 meses consecutivos e nível de hormônio estimulador de folículo sérico documentado> 40 mU/ml) serão considerados sem potencial para engravidar. Todos os sujeitos do sexo feminino devem ter um teste de gravidez sérico negativo antes do recebimento de dosagem. O sujeito deve usar o método contraceptivo mencionado acima durante o período do estudo e em 16 semanas ou 5 meias vidas após a última dose do FB825.

+ O sujeito tem um peso corporal de > 40 kg na triagem e um índice de massa corporal de 18,0 a 30,0 kg/m?, inclusive.

* O sujeito tem um eletrocardiograma de 12 derivações (ECG) normal, conforme determinado pelo investigador, com parâmetros normais de condução cardíaca: - Frequência cardíaca entre 45 e 100 bom; - Intervalo QT corrigido por Fridericia (QTCcF) < 450 milissegundos (homens) ou < 470 milissegundos (mulheres); e - Intervalo QRS menor que 120 milissegundos.

+ O sujeito é saudável, exceto doenças atópicas, conforme determinado pelo investigador, com base nos resultados dos testes clínicos laboratoriais realizados na triagem. Se os resultados estiverem fora dos intervalos de referência normais, o sujeito poderá ser incluído apenas se o investigador julgar que as anormalidades ou desvios do normal não são clinicamente significativos. Essa determinação deve ser registrada no documento de origem do sujeito e rubricada pelo investigador. Isso não se aplica às anormalidades laboratoriais listadas no critério de exclusão (usando os critérios da Divisão de Microbiologia e Doenças Infecciosas).

+ O sujeito é capaz de fornecer consentimento informado por escrito.

e O sujeito concorda em cumprir com todos os requisitos do protocolo.

ii) PRINCIPAIS CRITÉRIOS DE EXCLUSÃO e Sujeitos do sexo feminino que estão grávidas ou amamentando.

+ O sujeito está de dieta ou com pouca ingestão.

e O sujeito tem um histórico de arritmias cardíacas (qualquer clinicamente relevante).

+ O sujeito tem um resultado de teste positivo para antígeno de superfície da hepatite B, anticorpo do vírus da hepatite C ou anticorpos do vírus da imunodeficiência humana na triagem.

+ O sujeito tem um histórico de abuso de álcool ou drogas que prejudicaria ou arriscaria a participação total dos pacientes no estudo, na opinião do investigador.

* O sujeito está sob supervisão judicial ou curadoria.

* O sujeito tem uma doença atualmente ativa ou subjacente e clinicamente relevante do tipo cardiovascular, gastrointestinal, de sistema nervoso, psiquiátrica, metabólica, renal, hepática, respiratória (com exceção de rinite alérgica não complicada), inflamatória, imunológica, endócrina, diabetes ou doença infecciosa e é inelegível para participar do estudo julgado pelo investigador.

+ O sujeito tem histórico de uma reação anafilática anterior.

+ O sujeito tem qualquer afecção que, na opinião do investigador, comprometa o estudo ou o bem-estar do sujeito ou impeça o sujeito de atender ou executar os requisitos do estudo.

e O sujeito recebeu quaisquer produtos de imunoglobulina ou produtos sanguíneos dentro de 3 meses antes do recebimento de dosagem.

+ O sujeito recebeu um produto biológico: - O sujeito recebeu qualquer agente destruidor de células, não apenas limitado ao rituximabe, dentro de 6 meses antes do recebimento de dosagem ou antes que a contagem de linfócitos retorne ao normal, o que for mais longo.

- O sujeito recebeu outros produtos biológicos dentro de cinco meias-vidas (se conhecidas) ou 16 semanas, o que for mais longo, antes do recebimento de dosagem).

e O sujeito tem uma ou mais das seguintes anormalidades laboratoriais na triagem, conforme definido pela Tabela de Toxicidade para Adultos de Divisão de Microbiologia e Doenças Infecciosas, 2007 [Valores laboratoriais podem ser convertidos em unidades padrão equivalentes. O teste de valores laboratoriais anormais que podem levar à exclusão será permitido uma vez (sem a aprovação prévia do patrocinador). O novo teste será realizado durante uma visita não programada na fase de triagem (antes da linha de base)]: - Aspartato aminotransferase ou alanina aminotransferase (> 2 x limite superior do normal [LSN]) ou superior; - Bilirrubina total > 1,5 x ULN - Creatinina sérica > 1,6 x ULN - Qualquer outra anormalidade laboratorial maior ou igual ao grau 2, com exceção do nível de IgE, contagem de eosinófilos, proteína catiônica eosinofílica (ECP) e valores laboratoriais mencionados acima.

[0179]Os valores de laboratório podem ser convertidos em unidades padrão equivalentes. O novo teste de valores laboratoriais anormais que podem levar à exclusão pode ser permitido uma vez (sem a aprovação prévia do patrocinador). O novo teste pode ocorrer durante uma visita não programada na fase de triagem (antes da linha de base).

e O sujeito recebeu qualquer tratamento de imunoterapia aprovado ou não aprovado (isto é, em investigação) nos últimos 3 meses.

+ O sujeito usou qualquer uma das seguintes classes de medicação (sob prescrição ou venda sem receita): - Corticosteroide intranasal (por exemplo, propionato de fluticasona) dentro de dias antes do recebimento de dosagem.

- Corticosteroides sistêmicos (por exemplo, prednisona) dentro de 30 dias antes do recebimento de dosagem.

- Modificadores de leucotrieno (por exemplo, montelucaste) dentro de 30 dias antes do recebimento de dosagem.

- Imunossupressores (por exemplo, sais de ouro, metotrexato, azatioprina, ciclosporina) nos últimos 30 dias antes do recebimento de dosagem.

- Drogas imunomoduladoras (por exemplo, IFN-y) dentro dos últimos 30 dias antes do recebimento de dosagem.

- Anti-lgE (por exemplo, omalizumab) no último 1 ano antes do recebimento de dosagem.

- Imunoterapia com alergênios nos últimos 1 ano antes do recebimento de dosagem.

- Corticosteroides inalados por via oral (por exemplo, budesonida) nos últimos dias antes do recebimento de dosagem.

+ O sujeito recebeu fototerapia dentro de 4 semanas antes do recebimento de dosagem.

+ O sujeito recebeu vacina viva dentro de 12 semanas antes do recebimento de dosagem.

+ O sujeito tem histórico conhecido ou suspeita de imunossupressão, incluindo histórico de infecções oportunistas (por exemplo, TB) por julgamento do investigador.

+ O sujeito tem histórico de malignidade dentro de 5 anos antes do período de triagem.

«e Alto risco de infecção parasitária. Fatores de risco para doenças parasitárias (vivendo em uma área endêmica, sintomas gastrointestinais crônicos, viagem nos últimos 6 meses para regiões onde as infecções geo-helmínticas são endêmicas e/ou imunossupressão crônica) E evidências de colonização ou infecção parasitária na avaliação de fezes de óvulos e parasitas. A avaliação de óvulos e parasitas nas fezes somente será realizada em pacientes com fatores de risco e uma contagem de eosinófilos maior que o dobro do limite superior de sujeitos normais.

TRATAMENTOS DE ESTUDO i) DOSAGEM E ADMINISTRAÇÃO |V DO TRATAMENTO DO ESTUDO

[0180]Foram dadas duas doses de 5 mg/kg de FB825 a sujeitos com dermatite atópica. Os sujeitos receberam FB825 por infusão intravenosa de 1 hora pela manhã no dia 1 e no dia 85. Jejuar por pelo menos 2 horas foi necessário em alguns casos. A ingestão de água não é permitida dentro de 1 hora antes do recebimento de dosagem e 1 hora após o recebimento de dosagem. A quantidade administrada de FB825 pode ser ajustada com base no peso corporal do sujeito, a quantidade apropriada de fármaco foi diluída com 250 ml de solução de cloreto de sódio a 0,9%. O FB825 foi administrado por via IV durante 1 hora com o auxílio de um dispositivo de infusão volumétrica programável. O produto final diluído com cloreto de sódio a 0,9%, após reconstituição, deve ser utilizado o mais rapidamente possível e deve ser utilizado durante 8 horas. O FB825 reconstituído pode ser armazenado a 2 ºC a 25ºC durante um máximo de 8 horas, antes de ser utilizado.

ii) MEDICAMENTOS PRÉVIOS, CONCOMITANTES E PROIBIDOS * Medicamentos e terapias anteriores

[0181]As informações sobre medicamentos anteriores tomadas pelo sujeito nos 30 dias anteriores ao consentimento informado foram registradas no CRF do sujeito.

+ Medicamentos e Procedimentos Pré-tratamento/Concomitantes

[0182] Qualquer tratamento (incluindo suplementos nutricionais) ou procedimento administrado desde a assinatura do CIF até o final da visita de estudo é considerado concomitante e foi registrado na CRF. Isso inclui medicamentos permitidos em andamento no momento do consentimento.

[0183]A terapia basal AD durante o estudo descrito abaixo: - Todos os pacientes devem aplicar hidratantes pelo menos duas vezes ao dia durante pelo menos os 7 dias consecutivos anteriores ao recebimento de dosagem e continuar o tratamento ao longo do estudo. Todos os tipos de hidratantes são permitidos, mas os pacientes não podem iniciar o tratamento com hidratantes prescritos ou hidratantes contendo aditivos durante o período de triagem ou durante o estudo.

- Os pacientes podem continuar usando doses estáveis de hidratantes prescritos ou hidratantes contendo aditivos, se iniciados antes da visita de triagem. À partir do dia 1/linhha de base, todos os pacientes devem iniciar o tratamento com corticosteroide tópico (TCS) usando um regime padronizado de acordo com as seguintes diretrizes: - Aplicar TCS de média potência diariamente em áreas com lesões ativas. O TCS de baixa potência deve ser usado em áreas de pele fina (face, pescoço, áreas intertriginosas e genitais, áreas de atrofia da pele etc.) ou em áreas onde o tratamento continuado com TCS de média potência é considerado inseguro.

- Depois que as lesões estiverem sob controle (nítidas ou quase nítidas), mudar do TCS de média potência para baixa potência e tratar diariamente por 7 dias, depois parar.

- Se as lesões retornarem, reiniciar o tratamento com TCS de média potência, com a abordagem de redução descrita acima na resolução da lesão.

- Para lesões que persistem ou pioram sob tratamento diário com TCS de média potência, os pacientes podem ser tratados (resgatados) com TCS de alta ou super alta potência, a menos que TCSs de potência mais alta sejam considerados inseguros.

- Monitorar o paciente em busca de sinais de toxicidade local ou sistêmica do TCS e reduzir ou interromper o tratamento conforme necessário.

- O tipo e a quantidade de produtos tópicos utilizados durante o estudo foram registrados. A quantidade de TCS utilizada foi determinada pela pesagem do tubo em cada visita (consultar o manual de referência do estudo para obter detalhes).

- Recomenda-se que os pacientes usem creme de propionato de fluticasona a 0,05%, creme de mometasona furoato a 0,1% ou creme de valerato de betametasona a 0,06% como TCS de média potência e hidrocortisona 1% de pomada para TCS de baixa potência.

- Se for necessário o resgate com TCS, recomenda-se que os pacientes usem creme com fluocinonida 0,05%, pomada de desoximetasona 0,25% como TCS de alta potência e pomada de propionato de clobetasol 0,05% para TCS de alta potência.

- Não usar hidratantes e TCS nas mesmas áreas ao mesmo tempo durante o dia. Nas áreas não tratadas com TCS, os hidratantes serão aplicados duas vezes ao dia - manhã e noite.

[0184]Medicamentos/procedimentos pré-tratamento: medicações tomadas ou procedimentos realizados antes do recebimento de dosagem.

[0185]Medicamentos/procedimentos concomitantes: medicamentos tomados ou procedimentos realizados após a administração IV do fármaco do estudo através da visita à EOS.

e Medicamentos concomitantes proibidos: - Tacrolimo e pimecrolimo tropicais - Corticosteroides sistêmicos, a menos que os sujeitos estejam sob medicação de resgate.

- Inibidores do leucotrieno - Imunoterapia com alergênios - O tratamento sistêmico para a AD com uma substância imunossupressora/imunomoduladora (incluindo, mas não limitada a, ciclosporina, micofenolato-mofetila, IFN-y, azatioprina, metotrexato ou biológicos) - Tratamento com uma vacina viva (atenuada) - Medicina Chinesa Tradicional + Procedimentos concomitantes proibidos:

- Procedimentos cirúrgicos - Procedimentos ultravioleta (UV) concomitantes (fototerapia [NBUVB, UVB, UVA1 ou PUVA]) - Bronzeamento em uma cama/cabine não é permitido durante o estudo - Não é permitido aos pacientes mais de 2 banhos de alvejante por semana durante a participação no estudo (iii) MANUSEIO DE REAÇÃO RELACIONADA À INFUSÃO OU REAÇÃO

ALÉRGICA

[0186]A administração IV do fármaco do estudo deve ser realizada sob supervisão de uma equipe médica treinada e onde houver instalações para lidar com reações alérgicas. Se um sujeito experimenta uma reação relacionada à infusão, ele deve ser tratado de forma sintomática com cuidados de suporte, monitoramento adicional e terapia médica apropriada, que pode incluir anti-histamínicos e/ou corticosteroide, se necessário. A infusão do estudo pode ser interrompida e o sujeito deve ser seguido até o final do estudo. A quantidade infundida foi registrada. Se um sujeito apresentar sintomas típicos de uma reação alérgica (por exemplo, falta de ar, anafilaxia, urticária, angioedema), a administração IV de fármaco de estudo deve ser interrompida imediata e permanentemente.

[0187]A suspeita de anafilaxia deve ser avaliada de acordo com os critérios de diagnóstico clínico descritos pelo Instituto Nacional de Alergia e Doenças Infecciosas, fornecidos no Apêndice 12-2.

[0188]Por essas e outras circunstâncias, os sujeitos podem receber tratamento médico apropriado, a critério do investigador.

[0189]No caso de reações alérgicas, os pacientes podem ser resgatados com um medicamento ou procedimento proibido para tratar sintomas intoleráveis de AD.

- Se clinicamente necessário (ou seja, para controlar sintomas intoleráveis de AD), o tratamento de resgate com corticosteroides sistêmicos para AD em doses inferiores a 1 mg/kg/dia de prednisolona e não mais de 3 dias pode ser fornecido para estudar pacientes após a semana 2.

- Os pacientes foram submetidos a avaliações de eficácia e segurança (por exemplo, escores de gravidade da doença, laboratórios de segurança) imediatamente antes da administração de qualquer tratamento de resgate.

PROCEDIMENTOS DE ESTUDO E MÉTODOS DE AVALIAÇÃO

[0190]As seções a seguir descrevem os procedimentos e dados do estudo a serem coletados. Os sujeitos foram avaliados pelo mesmo pesquisador ou pessoal do local sempre que possível. O cronograma e a avaliação são fornecidos na Tabela 2. As características da linha de base são fornecidas na Tabela 3.

i) Pontos finais: + Ponto final (ou pontos finais) primário: - Alteração da linha de base na IgE total no Dia 85 e no dia 169/Fim do Estudo (EOS).

e Alteração da linha de base na IgE específica de alergênios no Dia 85 e no Dia 169/EOS.

e Pontos finais para o Biomarcador: - Alteração da linha de base na IgE total nos Dias 8, 15, 29, 57, 85, 92, 99, 113, 141 e 169.

- Alteração da linha de base na IgE específica de alergênios nos Dias 8, 15, 29 e 57, 85, 92, 99, 113, 141 e 169. Alteração da linha de base em biomarcadores, incluindo quimiocina regulada por ativação e timo (TARC), Eotaxina-3, linfopoietina estromal do timo (TSLP), periostina, IL-1a, IL-4, IL-5, 11-13, IL-16, 11-31 e M-CSF após administração IV de FB825 nos dias 8, 15, 29, 57, 85, 92, 99, 113, 141 e 169.

+ Pontos finais de eficácia: - Alterações da linha de base na Escala Visual Analógica de Prurido (VAS) nos Dias 8, 15, 29, 57, 85, 92, 99, 113, 141 e 169.

- Alterações da linha de base no Índice de Gravidade do Eczema por Área (EASI) nos Dias 8, 15, 29, 57, 85, 92, 99, 113, 141 e 169.

- Alterações da linha de base no Índice de Pontuação de Gravidade da Dermatite Atópica (SCORAD) nos dias 8, 15, 29, 57, 85, 92, 99, 113, 141 e 169.

- Alterações da linha de base na Avaliação Global do Investigador (IGA) para dermatite atópica nos dias 8, 15, 29, 57, 85, 92, 99, 113, 141 e 169.

- Alterações da linha de base na Área de Superfície Corporal (ASC) envolvida na dermatite atópica nos dias 8, 15, 29, 57, 85, 92, 99, 113, 141 e 169.

- Alteração da linha de base em biomarcadores, incluindo quimiocina regulada por ativação e timo (TARC), Eotaxina-3, linfopoietina estromal do timo (TSLP), periostina, IL-1a, IL-4, IL-5, 11-13, I1L-16, 11-31 e M-CSF após administração IV de FB825 nos dias 8, 15, 29, 57, 85, 92, 99, 113, 141 e 169.

- A segurança foi avaliada pelo monitoramento e registro de eventos adversos (AE) e evento adverso grave (SAEs); resultados do exame físico e medidas dos sinais vitais (pressão arterial sistólica e diastólica, frequência cardíaca, frequência respiratória e temperatura corporal), resultados de exames clínicos laboratoriais (hematologia, coagulação, química sérica [incluindo testes de função hepática, nível de glicose no sangue] e exame de urina); Resultados de ECG de 12 derivações.

(ii) Avaliações de biomarcadores

[0191]Amostras de sangue para a medição de IgE total, específica de alergênios, quimiocina regulada por timo e ativação (TARC), Eotaxina-3, linfopoietina estromal do timo (TSLP), periostina, IL-1a, IL-4, IL-5, 11-13, I1L-16, 11-31 e M-CSF foram analisados de acordo com a metodologia descrita em um relatório separado.

[0192]Amostras de sangue foram coletadas. O tempo real de coleta e os problemas de amostragem, se houver, foram registrados no CRF. Aproximadamente ml de amostra de sangue venoso por amostra foram coletados nos seguintes pontos de tempo:

e Imunoglobulina total/IgE específica para alergênios: - Período de triagem: a qualquer momento - Dia 1 e 85: (2 horas antes do início da infusão) - Dias 8, 15, 29, 57, 92, 99, 113 e 141 e 169 após a administração IV do FB825 a qualquer hora do dia.

+ TARC, Eotaxina-3, TSLP, periostina, IL-1a, IL-4, IL-5, 11-13, I1L-16, 11-31 e M-CSF: - Dias 1 e 85 em 2 horas antes do início da infusão e a qualquer momento nos Dias 8, 15, 29, 57, 92, 99, 113, 141 e 169.

ili) Avaliações de eficácia clínica + Escala Visual Analógica de Prurido (VAS).

[0193]A Escala Visual Analógica de Prurido (VAS) do SCORAD foi aplicada para a medição de prurido. Aos pacientes foi solicitado atribuir uma pontuação numérica representando a intensidade de seus sintomas em uma escala de 0 a 10, sendo O para ausência de sintomas e 10 para piores sintomas possíveis. Aos pacientes foi solicitado realizar a medição no rastreamento, Dias 1 e 85 antes do recebimento de dosagem, Dia 2 e Dia 86 antes da alta e a qualquer hora do Dia 8, 15, 29, 57, 92, 99, 113, 141 e 169.

+ Índice de Pontuação de Gravidade da Dermatite Atópica (SCORAD)

[0194]O SCORAD (Índice) é o sistema de pontuação validado na dermatite atópica (AD). Para medir a extensão da AD, a regra dos nove é aplicada em um desenho frontal/traseiro das lesões inflamatórias do paciente. A extensão pode ser classificada de O a 100. A parte de intensidade do SCORAD consiste em 6 itens: eritema, edema/papulação, escoriações, liquenificação, escorrendo/crostas e secura. Cada item pode ser classificado em uma escala de O (ausente) a 3 (grave). Os itens subjetivos incluem prurido diário e insônia. A fórmula do índice SCORAD é: A/5 + 7B/2 + C. Nesta fórmula, A é definida como a extensão (0 a 100), B é definida como a intensidade (0 a 18) e C é definida como os sintomas subjetivos. (O a 20). A pontuação máxima do Índice SCORAD é 103. Foi solicitado aos sujeitos que realizassem a medição no rastreamento, Dia 1 e 85 antes do recebimento de dosagem, Dia 2 e Dia 86 antes da alta e a qualquer hora do Dia 8, 15, 29, 57, 92, 99, 113, 141 e 169.

+ Índice de Gravidade do Eczema por Área (EASI)

[0195]O sistema de pontuação EAS| usa um processo definido para avaliar a gravidade dos sinais de eczema e a extensão afetada. A extensão e a gravidade dos sinais de eczema foram avaliadas em quatro regiões do corpo e a pontuação total é a soma das pontuações das quatro regiões ajustadas com multiplicadores. A pontuação do EASI varia de O a 72. Aos pacientes foi solicitado realizar a medição no rastreamento, Dias 1 e 85 antes do recebimento de dosagem, Dia 2 e Dia 86 antes da alta e a qualquer hora do Dia 8, 15, 29, 57, 92, 99, 113, 141 e 169.

+ Avaliação Global do Investigador (IGA) para AD

[0196]O IGA permite que os investigadores avaliem a gravidade geral da doença em um determinado momento e consiste em uma escala de gravidade de 5 pontos, de doença ausente a muito grave (O = ausente, | = quase ausente, 2 = doença leve, 3 = doença moderada, e 4 = doença grave). Foi solicitado aos sujeitos que realizassem a medição na triagem, Dias 1 e 85 antes do recebimento de dosagem, Dia 2 e Dia 86 antes da alta e a qualquer hora do Dia 8, 15, 29, 57, 92, 99, 113, 141 e

169.

e BSA envolvida em sintomas de AD

[0197]Foi medida como parte A (Extensão) do SCORAD. Foi solicitado aos sujeitos que realizassem a medição na triagem, Dias 1 e 85 antes do recebimento de dosagem, Dia 2 e Dia 86 antes da alta e a qualquer hora do Dia 8, 15, 29, 57, 92, 99, 113, 141 e 169.

iv) Avaliações de segurança

[0198]A segurança foi avaliada através do monitoramento e registro de

Eventos Adversos (AE), Evento Adverso Grave (SAE), achados do exame físico e medidas de sinais vitais (pressão arterial sistólica e diastólica, frequência cardíaca, frequência respiratória e temperatura corporal oral), teste laboratorial clínico resultados (hematologia, coagulação, química sérica [incluindo testes de função hepática] e exame de urina) e resultados de ECG de 12 derivações. O resumo geral do número de pacientes com eventos adversos durante o SAF - período de tratamento de 15 a 168 dias é apresentado na Tabela 4.

+ Eventos Adversos

[0199]A seção Evento Adverso (Seção 7) descreve o Evento Adverso (SAEs), Evento Adverso Sério (SAEs) e Eventos Adversos de Interesse Especial foram coletados durante o estudo.

+ Exames Físicos

[0200]Um exame físico completo foi realizado nos pontos de tempo indicados no cronograma de eventos.

[0201]Um exame físico completo inclui avaliação da pele (incluindo qualquer sinal de eritema cutâneo), cabeça, ouvidos, olhos, nariz, garganta, pescoço, tireoide, pulmões, — coração, sistema cardiovascular, — abdômen, linfonodos e sistema/extremidades músculo-esqueléticas. Exames físicos intermediários foram realizados a critério do investigador, se necessário, para avaliar EAs ou anormalidades laboratoriais clínicas. A altura e o peso foram medidos e o índice de massa corporal será calculado apenas na triagem. O peso também foi medido em todos os outros pontos de tempo do exame físico, conforme indicado nos horários dos eventos do estudo. O peso corporal foi registrado em quilogramas (kg) a 1 casa decimal em roupas de ambiente interno (sem casaco e sapatos) e a altura corporal (sem sapatos) foi medida em centímetros (cm) sem casas decimais.

e Medições de sinais vitais

[0202]As medições dos sinais vitais incluem pressão arterial sistólica e diastólica, frequência cardíaca, frequência respiratória e temperatura corporal. O sujeito ficou sentado por pelo menos 5 minutos antes de todas as medições serem realizadas. Os sinais vitais foram medidos nos pontos de tempo indicados no cronograma de eventos.

[0203] Quando os procedimentos se sobrepõem e ocorrem ao mesmo tempo, a ordem dos procedimentos deve ser medições de sinais vitais e, em seguida, ECGs.

[0204]O investigador pode determinar se alguma das medidas dos sinais vitais é clinicamente significativa ou não clinicamente significativa. Significância clínica é definida como qualquer variação nos resultados que tenha relevância médica e possa resultar em uma alteração nos cuidados médicos (por exemplo, observação ativa, medidas de diagnóstico ou medidas terapêuticas). Se for observada uma alteração clinicamente significativa dos valores de triagem, o valor clinicamente significativo e o motivo da significância clínica foram documentados na página de AE do CRF do sujeito. O investigador pode continuar a monitorar o sujeito com avaliações adicionais até que o valor atinja o intervalo de referência ou o valor na triagem ou até que o investigador determine que o acompanhamento não é mais necessário clinicamente.

+ Testes Clínicos de Laboratório

[0205]Testes clínicos de laboratório foram realizados por local. O sangue e a urina foram coletados em condições de jejum (em jejum por aproximadamente 2 ou mais horas) nos pontos de tempo indicados no cronograma de eventos.

[0206]Foram realizadas as seguintes avaliações de hematologia, coagulação, química sérica (incluindo testes da função hepática e da função tireoidiana) e análises de urina: - Hematologia: Hematócrito (Hct), hemoglobina (Hb) hemoglobina corpuscular média (MCH), concentração corpuscular média de hemoglobina (MCHC), volume corpuscular médio (MCV), contagem de plaquetas, contagem de glóbulos vermelhos (RBC) e leucócitos e contagem diferencial (absoluta e percentual).

- Coagulação: razão normalizada internacional (INR), tempo parcial de tromboplastina (PTT) e tempo de protrombina (PT)

[0207]- Soro Química: ALT, albumina, fosfatase alcalina, amilase, lacuna anião, AST, bicarbonato, bilirrubina (total e direta), nitrogênio da ureia no sangue (BUN), cálcio, dióxido de carbono, cloreto, colesterol (total, lipoproteína de alta densidade e lipoproteína de baixa densidade calculada), creatina fosfoquinase, creatinina, gama-glutamiltransferase (y-GT), globulina, glicose, lactato desidrogenase (LDH), lipase, magnésio, fósforo, potássio, sódio, proteína total, triglicerídeos, troponina | ou T e ácido úrico.

- Função da tireoide: T4 livre e hormônio estimulador da tireoide - Análise da urina: aparência, bilirrubina, cor, glicose, cetonas, esterase de leucócitos, microscopia (realizada se a vareta reagente for positiva; inclui bactérias, moldes, cristais, células epiteliais, glóbulos vermelhos e glóbulos brancos), nitritos, sangue oculto, pH, proteína, gravidade específica, turbidez e urobilinogênio

[0208]Um teste de gravidez sérico (gonadotrofina coriônica I-humana) será realizado em todos os sujeitos do sexo feminino com potencial para gravidez na triagem e o resultado é confirmado antes do recebimento de dosagem. Os testes de gravidez na urina foram realizados nos Dias 8, 15, 29, 57, 85, 92, 99, 113, 141 e 169. Para as mulheres que estavam na pós-menopausa, um teste sérico de hormônio folículo-estimulante foi realizado na triagem.

[0209]O antígeno de superfície da hepatite B, o anticorpo do vírus da hepatite C e o anticorpo do vírus da imunodeficiência humana serão avaliados na triagem.

[0210]Os valores laboratoriais clínicos anormais foram marcados como alto ou baixo (ou normal ou anormal) com base nas faixas de referência para cada parâmetro de laboratório. O investigador pode determinar se algum dos resultados anormalmente altos ou baixos é clinicamente significativo ou não clinicamente significativo. Significância clínica é definida como qualquer variação nos resultados que tenha relevância médica e possa resultar em uma alteração nos cuidados médicos (por exemplo, observação ativa, medidas de diagnóstico ou medidas terapêuticas). Se for observada uma alteração clinicamente significativa do valor da triagem, o valor clinicamente significativo e o motivo da significância clínica podem ser documentados na página de AE do CRF. O investigador pode continuar a monitorar o sujeito com avaliações adicionais até que os valores tenham atingido o intervalo de referência ou os valores na triagem ou até que o investigador determine que o acompanhamento não é mais necessário clinicamente.

[0211]Valores laboratoriais clinicamente significativos para sujeitos individuais foram listados. Um resumo para o número e a porcentagem de sujeitos com valores laboratoriais clinicamente significativos a qualquer momento foi apresentado.

+ Eletrocardiogramas

[0212]Os ECGs individuais de 12 derivações foram obtidos após o sujeito estar em decúbito dorsal por pelo menos 5 minutos nos pontos de tempo indicados no cronograma de eventos. As avaliações do eletrocardiograma incluem comentários sobre se os traçados são normais ou anormais, ritmo, presença de arritmia ou defeitos de condução, morfologia, qualquer evidência de infarto do miocárdio ou segmento ST, onda T e anormalidades da onda U. Além disso, as medidas dos seguintes intervalos serão medidas e relatadas: intervalo RR, intervalo PR, largura ORS, intervalo QT e QTcF.

Eventos Adversos

[0213]O resumo geral do número de pacientes com eventos adversos durante o período de tratamento de 15 a 168 dias - SAF é fornecido na Tabela 4.

i) Definições + Evento Adverso (AE)

[0214]UmM AE é definido como qualquer ocorrência médica indesejável associada ao uso de um fármaco em seres humanos, independentemente de ser ou não relacionada ao fármaco. Os sujeitos serão instruídos a entrar em contato com o investigador a qualquer momento durante o período do estudo se houver algum sintoma.

[0215]UmM TEAE é definido como qualquer evento não presente antes da exposição ao fármaco do estudo ou qualquer evento já presente que piora em intensidade ou frequência após a exposição.

[0216]Uma reação adversa é qualquer AE causado por um fármaco. As reações adversas são um subconjunto de todas as suspeitas de reações adversas pelas quais existem razões para concluir que o fármaco causou o evento.

[0217]Uma reação adversa suspeita é qualquer AE para o qual existe uma possibilidade razoável de que o medicamento do estudo tenha causado o AE. Para os fins dos relatórios de segurança de novos fármacos em investigação, “possibilidade razoável” significa que existem evidências que sugerem uma relação causal entre o fármaco do estudo e o AE. Uma suspeita de reação adversa implica em um grau menor de certeza sobre causalidade do que reação adversa, o que significa qualquer AE causado por um fármaco em estudo.

[0218]Um AE ou suspeita de reação adversa é considerado "inesperado" se não estiver listado no IB ou na especificidade ou gravidade observada com o fármaco em estudo sendo testado; ou, se um IB não for necessário ou disponível, não for consistente com as informações de risco descritas no plano geral de investigação ou em qualquer outro local do pedido atual. Por exemplo, sob esta definição, a necrose hepática seria inesperada (em virtude de maior gravidade) se o |B se referisse apenas a enzimas hepáticas elevadas ou hepatite. Da mesma forma, tromboembolismo cerebral e vasculite cerebral seriam inesperados (em virtude de maior especificidade) se o IB listasse apenas acidentes vasculares cerebrais. "Inesperado", conforme usado nesta definição, também se refere a EAs ou suspeitas de reações adversas mencionadas no IB como ocorrendo com uma classe de fármacos ou como antecipado pelas propriedades farmacológicas do fármaco, mas não especificamente mencionadas como ocorrendo com o fármaco específico sob investigação.

e Evento Adverso Grave (SAE)

[0219]Um AE ou suspeita de reação adversa é considerado SAE se, na visão do investigador ou patrocinador, resultar em um dos seguintes resultados: - Morte - AE com risco de morte - Internação hospitalar ou prolongamento da internação existente - Incapacidade persistente ou significativa ou interrupção substancial da capacidade de realizar funções normais da vida - Anomalia congênita ou defeito de nascimento

[0220]Eventos médicos importantes que podem não resultar em morte, com risco de vida ou que requerem hospitalização podem ser considerados graves quando, com base em julgamento médico apropriado, podem comprometer o sujeito e exigir intervenção médica ou cirúrgica para evitar um dos resultados listados nesta definição. Exemplos de tais eventos médicos incluem broncoespasmo alérgico que requer tratamento intensivo em uma sala de emergência ou em casa, discrasias ou convulsões sanguíneas que não resultam em internação hospitalar ou desenvolvimento de dependência ou abuso de drogas.

[0221]Um AE ou suspeita de reação adversa é considerada "fatal" se, na visão do investigador ou patrocinador, sua ocorrência coloca o sujeito em risco imediato de morte. Não inclui um AE ou suspeita de reação adversa que, se tivesse ocorrido de forma mais grave, poderia ter causado a morte.

+ Eventos adversos de interesse especial

[0222]Eventos adversos de interesse especial incluem os seguintes eventos: - Qualquer sujeito experimenta um AE emergente do tratamento (TEAE) de anafilaxia

- Qualquer sujeito experimenta uma SAE (Seção 7.1.2) - Qualquer sujeito experimenta um prolongamento persistente do intervalo QT (> 500 milissegundos ou 260 milissegundos alterados da linha de base) por pelo menos 30 minutos ou alterações isquêmicas nos ECGs repetidos ou arritmia sintomática persistente - Reações de hipersensibilidade, incluindo anafilaxia, anormalidades da tireoide, eritema cutâneo, trombocitopenia, anemia, hemólise, neutropenia, hepatotoxicidade e nefrotoxicidade.

- Os seguintes parâmetros laboratoriais são encontrados em qualquer sujeito individual: YALT ou AST 25 x ULN YBilirrubina 22 x ULN Y Contagem de plaquetas grau 1 <99,999 * 109/I YHemoglobina 105 g/l Y Contagem absoluta de neutrófilos grau 1 <1,5* 1091 YO nitrogênio da ureia no sangue ou a creatinina aumentam para> 2 x ULN (ii) Elicitação de Eventos Adversos

[0223]O investigador é responsável por garantir que todos os AEs e SAEs sejam registrados no CRF e reportados à Fountain. Os eventos adversos foram avaliados desde o período do rastreamento até a conclusão de todos os procedimentos do estudo e a alta do estudo.

[0224]EmM todas as visitas ou avaliações do estudo, os sujeitos eram questionados de maneira a obter quaisquer mudanças de aspecto médico ao seu bem-estar. Eles também foram questionados se haviam sido hospitalizados, sofreram acidentes, usaram novos medicamentos ou mudaram os regimes de medicamentos concomitantes (medicamentos prescritos e vendidos sem receita).

[0225]Além das observações do sujeito, os AEs foram documentados a partir de quaisquer dados coletados na página de AE do CRF (por exemplo, valores de laboratório, resultados do exame físico e alterações no ECG) ou outros documentos relevantes para a segurança do sujeito.

[0226]Avaliação da gravidade A gravidade (ou intensidade) de um AE usando os Critérios de Terminologia Comuns para Eventos Adversos (CTCAE) foi usada para a classificação da gravidade da reação à infusão.

- Grau 1 suave: desconforto leve ou transitório (<48 horas); nenhuma intervenção/terapia médica é necessária.

- Grau 2 moderado: Limitação leve a moderada da atividade - pode ser necessária alguma assistência; nenhuma ou mínima intervenção/terapia médica necessária.

- Grau 3 grave: Limitação acentuada da atividade, alguma assistência geralmente necessária; intervenção/terapia médica necessária, possibilidade de hospitalização.

- Grau 4 ameaça à vida: Limitação extrema na atividade, assistência significativa necessária; intervenção/terapia médica significativa necessária, provável hospitalização ou cuidados paliativos.

Alterações na gravidade de um AE devem ser documentadas para permitir uma avaliação da duração do evento em cada nível de intensidade a ser realizado. Um AE CARACTERIZADO como intermitente requer documentação de início e duração de cada episódio.

+ 7.3.2 Avaliação da causalidade

[0227]A avaliação do investigador sobre a relação de um AE com o fármaco em estudo faz parte do processo de documentação, mas não é um fator para determinar o que é ou não relatado no estudo.

[0228]O investigador avaliou a causalidade (ou seja, se existe uma possibilidade razoável de que o medicamento do estudo tenha causado o evento) para todos os AEs e SAEs. A relação foi caracterizada usando a seguinte classificação: - Não relacionado: essa relação sugere que não há associação entre o fármaco de estudo e o evento relatado.

- Possível: Essa relação é baseada em evidências sugerindo uma relação causal entre o medicamento do estudo e o AE, ou seja, existe uma possibilidade razoável de que o medicamento tenha causado o evento. O evento segue uma sequência temporal razoável desde o momento da administração do fármaco IV ou segue um padrão de resposta conhecido ao fármaco do estudo, mas também pode ter sido produzido por outros fatores.

- Provável: Essa relação sugere que existe uma sequência temporal razoável do evento com a administração do fármaco |V e, com base na ação farmacológica conhecida do fármaco, reações adversas conhecidas ou relatadas anteriormente ao medicamento ou classe de fármacos, ou julgamento com base na experiência clínica do investigador, a associação do evento com o fármaco do estudo parece provável.

- Definida: Essa relação sugere que existe uma relação causal definida entre a administração do fármaco IV e o AE, e outras afecções (doença concomitante, progressão/expressão do estado da doença ou reação medicamentosa concomitante) não parecem explicar o evento.

ANÁLISE ESTATÍSTICA i) Estatísticas Gerais

[0229]Detalhes de todas as análises estatísticas foram descritos em um plano de análise estatística. Todos os dados coletados foram apresentados em listagens de dados. Dados de sujeitos excluídos de uma população de análise foram apresentados nas listagens de dados, mas não incluídos no cálculo das estatísticas resumidas.

[0230]Para variáveis categóricas, foram apresentadas frequências e porcentagens. As variáveis contínuas foram resumidas por meio de estatística descritiva (número de sujeitos, média, mediana, SD, mínimo e máximo).

[0231]As variáveis demográficas e de fundo da linha de base foram resumidas por dose e no geral para todos os sujeitos. Foi apresentado o número de sujeitos que se inscreveram no estudo e o número e a porcentagem de sujeitos que concluíram o estudo. A frequência e a porcentagem de sujeitos que se retiraram ou foram descontinuados do estudo, e o motivo da retirada ou descontinuação, também foram resumidos. A análise deste estudo foi demonstrada com estatística descritiva para cada período e grupo. Nenhum teste de significância foi aplicado.

[0232]Um plano de análise estatística (SAP) foi elaborado para abordar o trabalho de análise estatística em detalhes. O bloqueio do banco de dados clínico pode ocorrer após todos os dados serem reconciliados (ou seja, "limpos") após o último paciente concluir o estudo.

ii) Cálculos do tamanho da amostra

[0233]Um total de aproximadamente 12 sujeitos avaliáveis foi planejado para este estudo. O tamanho da amostra para este estudo é baseado em considerações clínicas e práticas e não no cálculo formal do poder estatístico.

(iii) Conjuntos de análise

[0234]Conjunto completo de análise (SAF) é definido como sujeitos que receberam pelo menos 1 dose do fármaco do estudo. Toda avaliação de eficácia será realizada na população com SAF.

[0235]A população de segurança é definida como sujeitos que receberam pelo menos 1 dose do fármaco do estudo. Toda a avaliação de segurança será realizada na população de segurança.

iv) Análise Estatística + Análises de biomarcadores

[0236]A concentração e a mudança da linha de base na IgE total e específica de alergênios e biomarcadores listados como pontos finais foram resumidas por visita e apresentadas graficamente. A alteração da linha de base na IgE total e específica de alergênios foi resumida pela concentração total de IgE da linha de base (IgE sérica> 1.500 IU/ml ou IgE sérica < 1.500 IU/ml) e doses de FB825 fornecidas (1 dose ou 2 doses).

[0237]Nos sujeitos que receberam a segunda dose de FB825, os dados coletados para a segunda dose foram analisados e resumidos da mesma forma que os coletados para a primeira dose.

+ Análise de Eficácia Clínica

[0238]O índice de avaliação foi avaliado por PI ou co-PI durante cada visita para cada sujeito. Os desfechos clínicos foram analisados usando estatística descritiva (média de EAS|, SCORAD, IGA, VAS e BSA; SD, CV, número de sujeitos) por pontos de tempo de visita e com doses de FB825 (1 ou 2 doses).

[0239]A alteração do perfil do índice médio versus o horário das visitas programadas foi apresentada graficamente,

[0240]Em sujeitos que receberam a segunda dose de FB825, os dados coletados para a segunda dose foram analisados e resumidos da mesma forma que os coletados para a primeira dose.

e Análises de segurança

[0241]Os eventos adversos foram codificados por termo preferido e classe de órgão do sistema usando a versão mais recente do Dicionário Médico para Atividades Regulatórias e resumidos por tratamento, nível de dose e no geral. Os eventos adversos também foram resumidos por gravidade, relação com o fármaco em estudo, SAEs e AEs, levando à descontinuação do fármaco em estudo.

[0242]Os valores reais e as alterações da linha de base para resultados de testes clínicos de laboratório, medidas de sinais vitais e resultados de ECG de 12 derivações foram resumidos por tratamento e dose em cada momento usando estatística descritiva (número de sujeitos, média, SD, mediana, mínimo e máximo). Tabelas de mudança (shift tables) foram geradas para resultados de testes clínicos em laboratório. Dados clínicos laboratoriais, medidas de sinais vitais, resultados de ECG de 12 derivações e achados de exame físico foram apresentados na lista de dados.

(v) Tratamento de dados ausentes

[0243]As concentrações abaixo do limite de quantificação (BLQ) foram tratadas como zero para estatística descritiva. As concentrações médias de BLQ serão apresentadas como BLOQ, e o SD e o CV foram relatados como não aplicáveis. As concentrações ausentes serão excluídas dos cálculos.

[0244]A última observação levada à diante (LOCF) foi aplicada para lidar com os dados ausentes. Nenhuma imputação estará disponível para dados de segurança.

vi) Garantia da qualidade dos dados

[0245]Todos os aspectos do estudo foram monitorados quanto à conformidade com os regulamentos governamentais aplicáveis em relação à atual diretriz tripartida harmonizada E6 (R1) da Conferência Internacional de Harmonização (ICH): Boas Práticas Clínicas e procedimentos operacionais padrão atuais. Pode haver uma auditoria interna da revisão da qualidade dos dados e revisões adicionais pelo monitor clínico TABELA 2. PROGRAMAÇÃO DO EVENTO E AVALIAÇÃO sms e meme o [o peer A focas fue [06] no Dre [os [nbr fo o fee [ore Jorn Dão pese] x Do DO ssa [x PC ice sai BI DD [eo TT E e E EEE me = =) eleleteleieia PR | eiaranáriaS x x x | x | x/x| x Boca aca ca cx esse px x | | x x] | x | |x/x| || Eme cs cs] | | | | x | | | | ss FR FEFrFFEe EEE ps O SS esse FI IT EEE pgs | eae sao osssNNSSRASSAS err cr e e Eee EEE e CC TOITIRI IICT OU Me TABELA 3. CARACTERÍSTICAS DE LINHA DE BASE Faixa de|FB825 anta So | 5 mg/kg q12Ww + TCS (n=12 pontuação | Mediana (IQR)X/n (% | Sexo masculino, n (9%) [= eso | EAS], mediana (IQR 27,4 (17,9, 31 SRD: mediana | 1093 |Go,5(48,4,64,8) Pacientes com IGA = 4,n (%) 0ad4 8 (67) 3,7 Domínio de prurido SCORAD VAS, |0a10 4,95 (3,95, 6,1) 5,0 mediana (IQR Domínio — de sono SCORAD VAS, |0a10 4,5 (1,0, 5,9) 3,9 mediana (IQR & AR BSA, mediana | 210990 |42,5(27,5,55,8) IgE, mediana (IQR [-- "—— J2.8289(1.534,95,4.0294) |3.379,7 TABELA 4 . RESUMO GERAL DO NÚMERO DE PACIENTES COM EVENTOS ADVERSOS AO LONGO DO PERÍODO DE TRATAMENTO DE 15 A 168 DIAS — SAF

Lo des

EEE estudo de fármaco permanentemente | auaguermate a | [aviguerresas a | | qualquer TE SAE relacionado afámaco — o | mira estudo de fármaco permanentemente | auaiquer reae severo a

RESULTADOS

[0246]Este é um estudo exploratório aberto para avaliar a segurança e a eficácia do FB825 em adultos com dermatite atópica (AD). 12 pacientes humanos elegíveis com AD foram incluídos no estudo e receberam FB825, 5 mg/kg, por infusão intravenosa de 1 hora no dia 1 e no dia 85. Os pacientes foram programados para retornar aos locais do estudo de acordo com o cronograma de eventos apresentado na Tabela 2 para a avaliação de segurança e eficácia.

O FB825 FOI ADMINISTRADO COM SEGURANÇA A INDIVÍDUOS

HUMANOS COM AD

[0247]O FB825 foi administrado aos pacientes por infusão intravenosa durante 1 hora a 5 mg/kg nos dias 1 e 85. Não houve óbitos e nenhum sujeito foi descontinuado devido a um evento adverso emergente do tratamento (TEAE) ou evento adverso grave emergente do tratamento (TE SAE). Seis sujeitos desenvolveram TEAE, três dos quais possivelmente relacionados a fármaco. Cinco indivíduos desenvolveram infecção respiratória superior e dois indivíduos contraíram infecções virais por herpes. Foi relatado que apenas um sujeito desenvolveu um dos seguintes: conjuntivite, rinorréia, ataque de asma, febre, tosse ou QTC prolongado. (Tabela 4)

[0248]Não houve tendências aparentes ou relacionadas ao tratamento ou à dose nos resultados dos exames clínicos laboratoriais, medição dos sinais vitais, resultados de ECG de 12 derivações ou nos achados do exame físico.

EFICÁCIA

[0249]A eficácia do FB825 foi determinada pelo registro das alterações da linha de base no Índice de Gravidade do Eczema por Área (EASI), Avaliação Global do Investigador (IGA), Índice de Pontuação de Gravidade da Dermatite Atópica (SCORAD) e Escala Visual Analógica de Prurido (EVA) nos Dias 1 e 85 antes do recebimento de dosagem, Dia 2 e Dia 86 antes da alta e a qualquer hora do dia 8, 15, 29, 57, 92, 99, 113, 141 e 169. As variáveis demográficas e de fundo da linha de base serão resumidas por dose e no geral para todos os sujeitos na Tabela 3.

i) O EASI foi reduzido em comparação à linha de base pelo FB825

[0250]Os sujeitos mostraram EASI progressivamente reduzido após a administração de FB825 no Dia 1 até aproximadamente o Dia 55 (redução de aproximadamente 65%). A pontuação do EAS| começou a aumentar após o Dia 55 até a segunda administração do FB825 no Dia 85, mas ainda é aproximadamente 40% menor em comparação à linha de base. Os sujeitos mostraram redução adicional do

EASI para aproximadamente 70% de redução no Dia 113 e mantiveram o nível até o final do estudo (EOS). (Figura 5).

ii) A IGA foi reduzida em comparação à linha de base pelo FB825

[0251]Os sujeitos mostraram IGA progressivamente reduzido após a administração de FB825 no dia 1 até o dia 55 (redução de aproximadamente 30%). À pontuação da IGA começou a aumentar após o dia 55 até a segunda administração do FB825 no dia 85, mas ainda é aproximadamente 15% menor em comparação à lihha de base. Os sujeitos apresentaram redução adicional de IGA para aproximadamente 45% de redução no menor dia 113 e mantiveram o nível de redução de 35% em comparação com a linha de base até o final do estudo (EOS). (Figura 6).

ili) SCORAD foi reduzido em comparação à linha de base pelo FB825

[0252]Os sujeitos mostraram SCORAD progressivamente reduzido após a administração de FB825 no Dia 1 até aproximadamente o Dia 55 (redução de aproximadamente 45%). A pontuação do SCORAD começou a aumentar após o dia 55 até a segunda administração do FB825 no dia 85, mas ainda é aproximadamente 30% menor em comparação à linha de base. Os sujeitos mostraram redução adicional do SCORAD para aproximadamente 55% de redução no dia 113 e mantiveram o nível até o final do estudo (EOS). (Figura 7).

(iv) A VAS foi reduzida em comparação à linha de base pelo FB825

[0253]Os sujeitos apresentaram VAS progressivamente reduzida após a administração do FB825 no Dia 1 até aproximadamente o Dia 15 (redução de aproximadamente 45%). A pontuação do VAS começou a aumentar após o dia 15 e foi mantida com uma redução de 25% em comparação com a linha de base até a segunda administração do FB825 no dia 85. Os sujeitos mostraram redução adicional do VAS para aproximadamente 55% no dia 113 e mantiveram o nível até o final do estudo (EOS). (Figura 8).

OUTRAS MODALIDADES

[0254]Todos os recursos divulgados neste relatório descritivo podem ser combinados em qualquer combinação. Cada característica divulgada neste relatório descritivo pode ser substituída por uma característica alternativa que serve ao mesmo objetivo, equivalente ou similar. Assim, a menos que expressamente indicado de outra forma, cada característica divulgada é apenas um exemplo de uma série genérica de características equivalentes ou semelhantes.

[0255]A partir da descrição acima, um versado na técnica pode determinar facilmente as características essenciais da presente invenção e, sem se afastar do espírito e escopo, pode fazer várias alterações e modificações da invenção para adaptá-la a vários usos e condições. Assim, outras modalidades também estão dentro das reivindicações.

Claims (39)

REIVINDICAÇÕES

1. Método para tratar um distúrbio associado à imunoglobulina E (IgE), sendo que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: (i)administrar, a um sujeito em necessidade da mesma, uma primeira dose de um anticorpo que se liga a um domínio de Cemx de uma IgE ligada à membrana; e (li)administrar ao sujeito uma segunda dose do anticorpo; em que a segunda dose é administrada pelo menos 8 semanas após a primeira dose.

2.Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a segunda dose é administrada pelo menos 3 meses após a primeira dose.

3.Método, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de que a segunda dose é administrada cerca de 12 semanas a cerca de 6 meses após a primeira dose.

4.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADO pelo fato de que a primeira dose, a segunda dose ou ambas variam de 0,5 mg/kg a 15 mg/kg.

5.Método, de acordo com a reivindicação 5, CARACTERIZADO pelo fato de que a primeira dose, a segunda dose ou ambas variam de 1 mg/kg a 8 mg/kg.

6.Método para tratar a dermatite atópica, sendo que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar a um sujeito em necessidade da mesma uma primeira dose de um anticorpo que se liga a um domínio de Cemx de uma IgE ligada à membrana; em que a primeira dose é de cerca de 1 mg/kg a 10 mg/kg.

7.Método, de acordo com a reivindicação 6, CARACTERIZADO pelo fato de que a primeira dose do anticorpo é de 5 mg/kg.

8.Método, de acordo com a reivindicação 6 ou 7, sendo que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda administrar ao sujeito uma segunda dose de anticorpo cerca de 8 semanas após a primeira dose se, no momento da segunda dose, a mudança de nível de IgE total no sujeito do nível de IgE total antes da primeira dose for inferior a 50%.

9.Método, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que a segunda dose de anticorpo é cerca de 3 meses após a primeira dose.

10.Método, de acordo com a reivindicação 18, CARACTERIZADO pelo fato de que a segunda dose é de 5 mg/kg.

11.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, CARACTERIZADO pelo fato de que a primeira dose, a segunda dose, ou ambas, são administradas por injeção intravenosa.

12.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo se liga a GLAGGSAQSQRAPDRVL (SEQ ID NO: 1).

13.Método, de acordo com a reivindicação 12, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo se liga a GLAGGSAQSQORA (SEQ ID NO: 7).

14.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo se liga ao mesmo epítopo que o anticorpo FB825 ou compete com o anticorpo FB825 de ligação ao domínio de Ceamx de uma IgE ligada à membrana.

15.Método, de acordo com a reivindicação 14, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo compreende as mesmas regiões determinantes de complementaridade (CDRs) de cadeia pesada como anticorpo FB825; e/ou as mesmas regiões determinantes de complementaridade (CDRs) de cadeia leve que o anticorpo FB825.

16.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo humano ou um anticorpo humanizado.

17.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16,

CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo de comprimento completo ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo.

18.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada que tem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, e uma região variável de cadeia leve que possui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3.

19.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, CARACTERIZADO pelo fato de que o sujeito é um paciente humano que tem ou com suspeita de ter o distúrbio associado à IgE.

20.Método, de acordo com a reivindicação 19, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio associado à IgE é asma alérgica, rinite alérgica, dermatite atópica ou síndrome de hiper-lgE.

21.Método, de acordo com a reivindicação 20, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio é urticária induzida pelo frio, urticária crônica, urticária colinérgica, rinossinusite crônica, mastocitose sistêmica, mastocitose cutânea, aspergilose broncopulmonar alérgica, angioedema idiopático recorrente e cistite intersticial, distúrbios gastrointestinais associados a eosinófilos, uma alergia alimentar ou uma alergia a fármacos.

22.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações | a 21, CARACTERIZADO pelo fato de que um hidratante é aplicado ao sujeito pelo menos duas vezes ao dia durante pelo menos sete dias consecutivos antes da primeira dose.

23.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações | a 22, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda administrar ao sujeito um corticosteroide tópico.

24.Método, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato de que o corticosteroide tópico é aplicado a uma lesão ativa diária, e em que o corticosteroide tópico é um creme a 0,05% de propionato de fluticasona, um creme de furoato de monetasona a 0,1%, um valerato de betametasona a 0,06%, ou uma pomada de hidrocortisona a 1%.

25.Método, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato de que o corticosteroide tópico é um creme de fluocinonida a 0,05%, uma pomada de desoximetasona a 0,25% ou uma pomada de propionato de clobetasol a 0,05%.

26.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, CARACTERIZADO pelo fato de que o sujeito é livre de tratamento tópico de tacrolimo, tratamento com pimecrolimo tópico, tratamento com corticosteroides sistêmicos, tratamento com inibidor de leucotrieno, imunoterapia, um tratamento que envolve um agente imunossupressor ou imunomodulador, tratamento de vacina, um tratamento envolvendo um medicamento tradicional chinês, um procedimento cirúrgico, um procedimento ultravioleta ou bronzeamento.

27.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações | a 26, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo é formulado em uma composição farmacêutica que compreende o anticorpo, um tampão, um sal e um tensoativo não iônico.

28.Método, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que a composição farmacêutica é uma solução aquosa que tem um pH de 5a8.

29.Método, de acordo com a reivindicação 27 ou 28, CARACTERIZADO pelo fato de que o tampão é um tampão de histidina, o sal é cloreto de sódio e/ou o tensoativo não iônico é polissorbato 80.

30.Método, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo na composição farmacêutica é de cerca de 10 mg/ml a 30 mg/ml, o tampão de histidina tem uma concentração de cerca de 10 a 30 mM, o cloreto de sódio tem uma concentração de cerca de 120 a 160 mM, e o polissorbato 80 tem uma concentração de cerca de 0,01 a 0,03%.

31.Formulação aquosa CARACTERIZADA pelo fato de que compreende um anticorpo que se liga a um domínio de Cemx de uma IgE ligada à membrana, em uma concentração de cerca de 10 mg/ml a 30 mg/ml, um tampão que compreende um aminoácido em uma concentração de cerca de 10 a 30 mM, um sal em uma concentração de cerca de 120 a 160 mM e um tensoativo não iônico em uma concentração de cerca de 0,01 a 0,03%, em que a formulação aquosa tem um pH de cerca de 5a 8.

32.Formulação — aquosa, de acordo com a reivindicação 31, CARACTERIZADA pelo fato de que o anticorpo se liga a GLAGGSAQSARAPDRVL (SEQ ID NO: 1).

33.Formulação — aquosa, de acordo com a reivindicação 32, CARACTERIZADA pelo fato de que o anticorpo se liga a GLAGGSAQSQRA (SEQ ID NO: 7).

34.Formulação aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 33, CARACTERIZADA pelo fato de que o anticorpo se liga ao mesmo epítopo que o anticorpo FB825 ou compete com o anticorpo FB825 pela ligação ao domínio de Cemx de uma IgE ligada à membrana.

35.Formulação — aquosa, de acordo com a reivindicação 34, CARACTERIZADA pelo fato de que o anticorpo compreende as mesmas regiões determinantes de complementaridade (CDRs) de cadeia pesada que o anticorpo FB825; e/ou as mesmas regiões determinantes de complementaridade (CDRs) de cadeia leve que o anticorpo FB825.

36.Formulação — aquosa, de acordo com a reivindicação 35, CARACTERIZADA pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3.

37 .Formulação aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 36, CARACTERIZADA pelo fato de que o anticorpo é uma molécula de IgG.

38.Formulação aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 37, CARACTERIZADA pelo fato de que o tampão que compreende um aminoácido é um tampão de histidina, o sal é cloreto de sódio e/ou o tensoativo não iônico é polis- sorbato 80.

39.Formulação — aquosa, de acordo com a reivindicação 38, CARACTERIZADA pelo fato de que o anticorpo está em uma concentração de cerca de 20 mg/ml, o tampão de histidina está em uma concentração de cerca de 20 mM, o cloreto de sódio está em uma concentração de cerca de 140 mM e o polissorbato 80 está em uma concentração de cerca de 0,02% e em que a formulação aquosa tem um pH de cerca de 6,5.