MX2007010456A - Inhibidores de enzima. - Google Patents

Inhibidores de enzima.

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MX2007010456A
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MX2007010456A
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Stephen John Davies
Alan Hornsby Davidson
Sanjay Ratilal Patel
Francesca Ann Mazzei
Alan Hastings Drummond
David Festus Charles Moffat
Kenneth William John Baker
Alistair David Graham Donald
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Chroma Therapeutics Ltd
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Abstract

Los compuestos de la formula (I) son inhibidores de la actividad de histona desacetilasa, y son utiles en el tratamiento de, por ejemplo, canceres: (ver formula (I)) en donde R1 es un grupo de acido carboxilico (-COOH), o un grupo ester que es hidrolizable mediante una o mas enzimas de carboxilesterasa intracelulares para un grupo de acido carboxilico; R2 es la cadena lateral de un aminoacido alfa natural o no natural; Y es un enlace, -C(=O)-, -S(=O)2-, -C(=O)O-, -C(=O)NR3-, -C(=S)-NR3, -C(=NH)NR3 o -S(=O)2NR3- en donde R3 es hidrogeno o alquilo de C1-C6 opcionalmente sustituido; L1 es un radical divalente de la formula -(Alk1)m(Q)m(Alk2)p- en donde m, n y p son independientemente 0 o 1, Q es (i) un radical carbociclico o heterociclico mono- o biciclico divalente opcionalmente sustituido que tiene de 5 a 13 miembros de anillo, o (ii) en el caso en donde tanto m como p son 0, un radical divalente de la formula -X2-Q1- o -Q1-X2-, en donde X2 es -O-, S- o NR4-, en donde RA es hidrogeno o alquilo de C1-C3 opcionalmente sustituido, y Q1 es un radical carbociclico o heterociclico mono- o biciclico divalente opcionalmente sustituido que tiene de 5 a 13 miembros de anillo, Alq1 y Alq2 independientemente representan radicales cicloalquilo de C3-C7 divalentes opcionalmente sustituidos, o alquileno de C1-C6 de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido, alquileno de C2-C6 o radicales alquinileno de C2-C6 que pueden opcionalmente contener o terminar en un enlace eter (-O-), tioeter (-S-) o amino (-NRA-) en donde RA es hidrogeno o alquilo de C1-C3 opcionalmente sustituido, X1 representa un enlace, -C(=O); o -S(=O)2-; -NR4C(=O)-, -C(=O)NR4-, -NR4C(=O)NR5-, -NR4S(=O)2-, o -S(=O)2NR4- en donde R4 y R5 son independientemente hidrogeno o alquilo de C1-C6 opcionalmente sustituido; z es 0 o 1; A representa un sistema de anillo carbociclico o heterociclico mono-, bi- o tri- ciclico opcionalmente sustituido en donde los radicales R1R2NH-Y-L1-[CH2]2- y HONHCO-[ENLAZADOR]- estan unidos a diferentes atomos de anillo; y -[Enlazador]- representa un radical enlazador divalente que enlaza un atomo de anillo en A con el grupo del acido hidroxamico -CONHOH, la longitud del radical enlazador, a partir del atomo terminal enlazado al atomo de anillo de A al atomo terminal enlazado al grupo del acido hidroxamico, es equivalente a aquel de una cadena de hidrocarburo saturad no ramificada de 3 a 10 atomos de carbono.

Description

INHIBIDORES DE ENZIMA CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a compuestos que inhiben miembros de la familia de histona desacetilasa de enzimas y su uso en el tratamiento de enfermedades proliferativas celulares, incluyendo cánceres, enfermedades de poliglutamina, por ejemplo la enfermedad de Huntingdon, enfermedades neurodegenerativas por ejemplo la enfermedad de Alzheimer, enfermedad autoinmune por ejemplo artritis reumatoide y rechazo de trasplante de órganos, diabetes, trastornos hematológicos, enfermedad inflamatoria, enfermedad cardiovascular, ateroesclerosis, y la secuela inflamatoria de infección . ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN En las células eucarióticas el ADN se empaca con histonas, para formar cromatina. Aproximadamente 150 pares de bases de ADN se envuelven dos veces alrededor del octámero de histonas (dos en cada una de las histonas 2A, 2B, 3 y 4) para formar un nucleosoma, la unidad básica de cromatina. La estructura ordenada de cromatina necesita modificarse con el fin de permitir la trascripción de los genes asociados. La regulación trascripcional es clave para la diferenciación, la proliferación y la apoptosis, y está, por consiguiente, estrictamente controlada. El control de los cambios en la estructura de cromatina (y por lo tanto la trascripción) está Ref. 184907 mediada por modificaciones covalentes para histonas, más notablemente las colas N-terminal. Las modificaciones covalentes (por ejemplo mutilación, acetilación, fosforilación y ubiquitinación) en las cadenas laterales de aminoácidos están enzimáticamente mediadas (una revisión de las modificaciones covalentes de histonas y su papel en la regulación trascripción se puede encontrar en Berger SL 2001 Oncogene 20, 3007-3013; ver Grunstein, M 1997 Nature 389, 349-352; Wolffe AP 1986 Science 272, 371-372; y Wade PA y otros 1997 Trends Biochem Sci 22, 128-132 para revisiones de acetilación y trascripción de histona) . La acetilación de las histonas está asociada con áreas de cromatina que están trascripcionalmente activas, mientras los nucleosomas con niveles bajos de acetilación son, típicamente, trascripcionalmente silenciosos. El estado de acetilación de las histonas está controlado a través de dos clases de enzimas de actividades opuestas; las histona acetiltransferasas (HAT) y histona diacetilasas (HDAC) . En las células transformadas se cree que la expresión inapropiada de HDAC da como resultado la silenciación de los genes supresores de tumor (para una revisión de los papeles potenciales de HDAC en la formación de tumores ver Gray SG y Teh BT 2001 Curr Mol Med 1, 401-429) . Los inhibidores de enzimas HDAC han sido descritos en la literatura y han demostrado que inducen la reactivación trascripcional de ciertos genes dando como resultado la inhibición de la proliferación celular cancerosa, la inducción de apoptosis y la inhibición del crecimiento de tumor en animales (para un revisión ver Kelly, WK y otros 2002 Expert Opin Investig Drugs 11, 1695-1713). Dichos hallazgos sugieren que los inhibidores HDAC tienen un potencial terapéutico en el tratamiento de enfermedades proliferativas tales como cáncer (Kramer, OH y otros 2001 Trends Endocrinol 12, 294-300, Vigushin DM y Coombes RC 2002 Anticancer Drugs 13, 1-13) . Además, otros han propuesto que la actividad HDAC aberrante o la acetilación de histona está implicada en las siguientes enfermedades y trastornos; enfermedad de poliglutamina, por ejemplo en la enfermedad de Huntingdon (Hughes RE 2002 Curr Biol 12, R141-R143; Me Campbell A y otros 2001 Proc Soc Nati Acad Sci 98, 15179-15184; Hockly E y otros 2003 Proc Soc Nati Acad Sci 100, 2041-2046), otras enfermedades neurodegenerativas, por ejemplo la enfermedad de Alzheimer (Hempen B and Brion JP 1996, J Neuropathol Exp Neurol 55, 964-972), enfermedades autoinmunes y rechazo al trasplante de órganos (Skov S y otros 2003 Blod 101, 14 30-1438; Mishra N y otros 2003 J Clin Invest 111, 539-552), diabetes (Mosley AL y Ozcan S 2003 J Biol Chem 278, 19660-19666) y complicaciones diabéticas, infección (incluyendo infección por protozoarios (Darwin-Rattray, SJ y otros 1996 Proc Soc Nati Acad Sci 93, 13143-13147)) y trastornos hematológicos incluyendo talasemia (Witt 0 y otros 2003 Blood 101, 2001-2007). Las observaciones contenidas en estos manuscritos sugieren que la inhibición de HDAC debería tener un beneficio terapéutico en éstas, y otras enfermedades relacionadas. Se han sugerido muchos tipos de compuestos inhibidores de HDCA, y varios de estos compuestos están siendo actualmente clínicamente evaluados, para el tratamiento de cánceres. Por ejemplo, las siguientes publicaciones de patente describen dichos compuestos: US 5,369,108 y WO WO 03/076395 WO 04/110989 01/18171 WO 03/076400 WO 04/092115 US 4,254,220 WO 03/076401 WO 04/0224991 WO 01/70675 WO 03/076421 WO 05/ 014588 WO 01/38322 WO 03/076430 WO 05/018578 WO 02/30879 WO 03/076422 WO 05/019174 WO 02/26703 WO 03/082288 WO 05/004861 WO 02/069947 WO 03/087057 WO 05/007091 WO 02/26696 WO 03/092686 WO 05/030704 WO 03/082288 WO 03/066579 WO 05/013958 WO 02/22577 WO 03/011851 WO 05/028447 WO 03/075929 WO 04/013130 WO 05/026907 Muchos de los inhibidores HDAC conocidos en la técnica tienen una plantilla estructural, que pueda representarse como en la fórmula (A) : en donde el anillo A es un sistema de anillo carbocíclico o heterocíclico con sustituyentes R opcionales, y [Enlazador] es un radical enlazador de varios tipos. Las funciones del grupo hidroxamato como un grupo de enlace metálico, interactúan con el ion metálico en el sitio activo de la enzima HDAC, que yace en la base de un bolsillo en la estructura de enzima plegada. El anillo o el sistema de anillo A yacen dentro o en la entrada del bolsillo que contiene el ion metálico, con el radical -[Enlazador]- que se extiende más profundo dentro del bolsillo de enlace A al grupo de ácido hidroxámico de enlace metálico. En la técnica, y ocasionalmente aquí, el anillo o el sistema de anillo A algunas veces es informalmente referido como el "grupo principal" del inhibidor. El uso de profármacos para mejorar la distribución de órganos y tejidos objetivo, o para superar las pobres propiedades farmacocinéticas del medicamento precursor, es un método químico de medicina bien conocido. La administración de los profármacos de éster, por ejemplo, que se hidrolizan a través de carboxilesterasas de suero in vivo a los ácidos padre activos, puede dar como resultado niveles de sueros más altos del ácido padre que la administración del ácido mismo. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención se basa en el hallazgo de que la introducción de un éster de aminoácido alfa que se agrupa en la plantilla molecular del inhibidor HDAC (A) anterior facilita la penetración del agente a través de la membrana celular, y por lo tanto permite la actividad de carboxilesterasa intracelular para hidrolizar el éster para liberar el ácido padre. Siendo cargado, el ácido no es fácilmente transportado fuera de la célula, en donde por lo tanto se acumula para incrementar la concentración intracelular del inhibidor HDAC activo. Esto conduce a incrementos en potencia y duración de acción. La invención por lo tanto hace disponible una clase de compuestos cuyas estructuras se caracterizan por tener una porción de éster de aminoácido alfa que es un sustrato para la carboxilesterasa intracelular (también referida aquí como una "motivo de esterasa") covalentemente enlazado a una plantilla molecular del inhibidor HDAC, y a lo ácidos padre desesterificados correspondientes, dichos compuestos teniendo una utilidad farmacéutica en el tratamiento de enfermedades tales como cánceres que se benefician de la inhibición intracelular de HDAC. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN De acuerdo con la presente invención se provee un compuesto de la fórmula (I) o una sal, N-óxido, hidrato o solvato del mismo: en donde Ri es un grupo de ácido carboxílico (-COOH) , o un grupo éster que es hidrolizable mediante una o más enzimas de carboxilesterasa intracelulares para un grupo de ácido carboxílico; R2 es la cadena lateral de un aminoácido alfa natural o no natural; Y es un enlace, -C(=0)-, -S(=0)2-, -C(=0)0-, C(=0)NR3-, -C(=S)-NR3, -C(=NH)NR3 o -S(=0)2NR3- en donde R3 es hidrógeno o alquilo de C?-C6 opcionalmente sustituido; L1 es un radical divalente de la fórmula - (Alk1) m (Q) m (Alk2) p- en donde m, n y p son independientemente 0 ó 1, Q es (i) un radical carbocíclico o heterocíclico mono- o bicíclico divalente opcionalmente sustituido que tiene de 5 a 13 miembros de anillo, o (ii) en el caso en donde tanto m como p son 0, un radical divalente de la fórmula -X2-Qx- o -Qx-X2-, en donde X2 es -O-, S- o NR4-, en donde RA es hidrógeno o alquilo de C?~C3 opcionalmente sustituido, y Q1 es un radical carbocíclico o heterocíclico mono- o bicíclico divalente opcionalmente sustituido que tiene de 5 a 13 miembros de anillo, Alq1 y Alq2 independientemente representan radicales cicloalquilo de C3-C7 divalentes opcionalmente sustituidos, o alquileno de C?-C6 de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido, alquileno de C2-C6 o radicales alquinileno de C2-C6 que pueden opcionalmente contener o terminar en un enlace éter (-0-) , tioéter (-S-) o amino (-NRA-) en donde RA es hidrógeno o alquilo de C?-C3 opcionalmente sustituido; X1 representa un enlace; -C(=0); o -S(=0)2-; -NR4C(=0)-, -C(=0)NR4-, -NR4C(=0)NR5-, -NR4S(=0)2-, o -S(=0)2NR4- en donde R4 y R5 son independientemente hidrógeno o alquilo de C?-C6 opcionalmente sustituido; z es 0 ó 1; A representa un sistema de anillo carbocíclico o heterocíclico mono-, bi- o tri-cíclico opcionalmente sustituido en donde los radicales R1R2NH-Y-L1- [CH2] z- y HONHCO- [ENLAZADOR]- están unidos a diferentes átomos de anillo; y -[Enlazador]- representa un radical enlazador divalente que enlaza un átomo de anillo en A con el grupo del ácido hidroxámico -CONHOH, la longitud del radical enlazador, a partir del átomo terminal enlazado al átomo de anillo de A al átomo terminal enlazado al grupo del ácido hidroxámico, es equivalente a aquel de una cadena de hidrocarburo saturada no ramificada de 3 a 10 átomos de carbono. Aunque la definición anterior potencialmente incluye moléculas de alto peso molecular, se prefiere, en línea con los principios generales de la práctica química médica, que los compuestos concernientes a esta invención deberían tener pesos moleculares de no más de 600. En otro amplio aspecto la invención provee el uso del compuesto de la fórmula (I) como se define anteriormente, o un N-óxido, sal, hidrato o solvato del mismo en la preparación de una composición para inhibir la actividad de la enzima HDAC. Los compuestos correspondientes a la presente invención se pueden utilizar para la inhibición de la actividad de HDAC, particularmente en la actividad de HDAC1, ex vivo o in vivo . En un aspecto de la invención, los compuestos de la invención se pueden utilizar en la preparación de una composición para el tratamiento de la enfermedad de proliferación celular, por ejemplo, proliferación de células cancerosas, enfermedades de poliglutamina por ejemplo la enfermedad de Huntingdon, enfermedades neurodegenerativas por ejemplo la enfermedad de Alzheimer, enfermedad autoinmune por ejemplo artritis reumatoide, y rechazo de trasplante de órganos, diabetes, trastornos hematológicos, infección (incluyendo pero no limitándose a protozoarios y hongos), enfermedad inflamatoria, y enfermedad cardiovascular, incluyendo aterosclerosis. En otro aspecto, la invención provee un método para el tratamiento de los tipos de enfermedades anteriores, que comprende la administración de un sujeto que sufre de dicha enfermedad una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula (I) como se definió anteriormente. El término "éster" o "grupo carboxilo esterificado" significa un grupo R90(C=0)- en donde R9 es el grupo que caracteriza el éster, idealmente derivado del alcohol R9OH . Como se utiliza aquí, el término "alquilo de Ca-Cb" en donde a y b son números enteros se refiere a un radical alquilo de cadena recta o ramificada que tiene de a a b átomos de carbono. De esta forma cuando a es 1 y b es 6, por ejemplo, el término incluye metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, n-pentilo y n-hexilo. Como se utiliza aquí el término "radical alquileno de Ca-Cb divalente" en donde a y b son números enteros se refiere a una cadena de hidrocarburo saturada que tiene de a a b átomos de carbono y dos valencias insatisfechas. Como se utiliza aquí el término "alquenilo de Ca-Cb" en donde a y b son números enteros se refiere a una porción alquenilo de cadena recta o ramificada que tiene de a a b átomos de carbono que tienen por lo menos un enlace doble de estereoquímica E o Z cuando es aplicable. El término incluye, por ejemplo, vinilo, alilo, 1- y 2-butenilo y 2-metil-2-propenilo. Como se utiliza aquí el término "radical alquileno de Ca-Cb divalente" significa una cadena hidrocarburo que tiene de a a b átomos de carbono, por lo menos un enlace doble, y dos valencias insatisfechas. Como se utiliza aquí el término "alquinilo de Ca-Cb" en donde a y b son números enteros se refiere a grupos hidrocarburo de cadena recta o ramificada que tiene de 2 a 6 átomos de carbono y que tienen además un enlace triple. Este término podría incluir por ejemplo, etinilo, 1-propinilo, 1-y 2-butinilo, 2-metil-2-propinilo, 2-pentinilo, 3-pentinilo, 4-pentinilo, 2-hexinilo, 3-hexinilo, 4-hexinilo y 5-hexinilo. Como se utiliza aquí el término "radical alquinileno de Ca-Cb divalente" en donde a y b son números enteros se refiere a una cadena de hidrocarburo divalente que tiene de 2 a 6 átomos de carbono, y por lo menos un enlace triple. Como se utiliza el término "carbocíclico" se refiere a un radical mono-, bi- o tricíclico que tiene hasta 16 átomos de carbono, los cuales son carbono, e incluyen arilo y cicloalquilo. Como se utiliza aquí el término "cicloalquilo" se refiere a un radical carbocíclico saturado monocíclico que tiene de 3-8 átomos de carbono e incluye por ejemplo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciciohexilo, cicioheptilo y ciclooctilo. Como se utiliza aquí el término no calificado "arilo" se refiere a un radical aromático mono-, bi- o tricíclico carbocíclico e incluye radicales que tienen dos anillos aromáticos carbocíclicos monocíclicos que están directamente enlazados a través de un enlace covalente. Los ejemplos de dichos radicales son fenilo, bifenilo y naftilo. Como se utiliza aquí el término no calificado "heteroarilo" se refiere a un radical aromático mono-, bi-, o tri-cíclico que tiene de 1 o más heteroátomos seleccionados de S, N y O, e incluye radicales que tiene dos anillos monocíclicos, o un anillo monocíclico y un anillo de arilo monocíclico, que están directamente enlazados a través de un enlace covalente. Los ejemplos de dichos radicales son tienilo, benztienilo, furilo, benzfurilo, pirrolilo, imidazolilo, bencimidazolilo, tiazolilo, benztiazolilo, isotiazolilo, bencisotiazolilo, pirazolilo, oxazolilo, benzooxazolilo, isoxazolilo, bencisoxazolilo, isotiazolilo, triazolilo, benztriazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, indolilo, y indazolilo. Como se utiliza aquí el término no calificado "heterociclilo" o "heterocíclico" incluye "heteroarilo" como se definió anteriormente, y en su significado no aromático se refiere a un radical no aromático mono-, di-, o tri-cíclico que contiene uno o más heteroátomos seleccionados de S, N y 0, de grupos que consisten de un radical no aromático monocíclico que contiene uno o más de dichos heteroátomos que se enlazan covalentemente a otro radical o un radical carbocíclico monocíclico. Los ejemplos de dichos radicales son los grupos pirrolilo, furanilo, tienilo, piperidinilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, pirazolilo, piridinilo, pirrolidinilo, pirimidinilo, morfolinilo, piperazinilo, indolilo, morfolinilo, benzfuranilo, piranilo, isoxazolilo, bencimidazolilo, metilendioxifenilo, etilendioxifenilo, maleimido y succinimido . A menos que se especifique lo contrario en el contexto en donde ocurre, el término "sustituido" como se aplica a cualquier porción aquí significa sustituido con hasta cuatro sustituyentes compatibles, cada uno de los cuales independientemente puede ser, alquilo de C?-C6, alcoxi de Ci-Ce, hidroxi, hidroxi-alquilo de C?-C6, mercapto, mercapto-alquilo de Ci-Cd, alquiltio de Ci-Ce, fenilo, halo (incluyendo fluoro, bromo y cloro), trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, nitrilo (-CN) , oxo, -COOH, -C00RA, -C0RA, -S02RA, -CONH2, -S02NH2, -C0NHRA, -S02NHRA, -CONRARB, - S02NRARB , -NH2 , -NHRA, -NRARB , -OCONH2 , -OCONHRA , -0C0NRARB , -NHCORA, -NHC00RA, -NRBCOORA, -NHS02ORA, -NRBS02OH, -NRBS020RA, -NHCONH2, -NRACONH2, -NHCONHRB, -NRACONHRB, -NHCONRARB, o -NRACONRARB en donde RA y RB son independientemente alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, fenilo o heteroarilo monocíclico que tienen de 5 a 6 átomos de anillo. Un "sustituyentes opcional" puede ser uno de los grupos sustituyentes anteriores . El término "cadena lateral de un aminoácido alfa natural o no natural" se refiere al grupo R1 en un aminoácido natural o no natural de la fórmula NH2-CH (R1) -COOH . Los ejemplos de cadenas laterales de aminoácidos alfa naturales incluyen aquellos de alanita, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, cistina, ácido glutámico, histidina, 5-hidroxillisina, 4-hidroxiprolina, isoleucina, leucina, licina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina, valina, ácido a-aminoadípico, ácido a-amino-n-butírico, 3,4-dihidrofenilalanina, homoserina, a-metilserina, ornitina, ácido pipecólico, y tiroxina. Los aminoácidos alfa naturales que contienen sustituyentes funcionales, por ejemplo amino, carboxilo, hidroxi, mercapto, guanidilo, imidazolilo, o grupos indolilo en sus cadenas laterales características incluyen arginina, lisina, ácido glutámico, ácido aspártico, triptófano, histidina, serina, trionina, tirosina, y cisteína. Cuando R2 en el compuesto de la invención es una de esas cadenas laterales, el sustituyente funcional puede opcionalmente estar protegido. El término "protegido" cuando se utiliza con relación a un sustituyente funcional en una cadena lateral de un aminoácido alfa natural significa un derivado de dicho sustituyente que es sustancialmente no funcional. Por ejemplo, los grupos carboxilo pueden esterificarse (por ejemplo, como un éster de alquilo de C?-C6) , los grupos amino pueden convertirse en amidas (por ejemplo, una alquilamida NHCOC?-C6) o carbamatos (por ejemplo un NHC (=0)0 alquilo de C?-C6 o NHC (=0) 0CH2Ph carbamato), los grupos hidroxilo pueden convertirse en éteres (por ejemplo, O-alquilo de C?-C6, o un 0- (alquilo de C?-C6) fenil éter) o esteres (por ejemplo el éster 0C(=0) alquilo de C?-C6) y los grupos tioles pueden convertirse en tioéteres (por ejemplo, el tioéter de terbutilo o bencilo) o tioésteres (por ejemplo un tioéster SC(=0) alquilo de Ci-Ce) . Los ejemplos de cadenas naturales de aminoácidos alfa no naturales incluyen aquellos referidos a continuación en la explicación de los R2 adecuados para uso en compuestos de la presente invención. Como se utiliza aquí el término "sal" incluye sales de adición de base, de adición de ácido y cuaternaria. Los compuestos de la invención que son ácidos pueden formar sales, incluyendo sales farmacéuticamente aceptables, con bases tales como hidróxidos de metal alcalino, por ejemplo, hidróxido de sodio y de potasio; hidróxidos de metal alcalinotérreo, por ejemplo, hidróxidos de calcio, bario y magnesio; bases orgánicas por ejemplo N-metil-D-glucamina, colina tris (hidroximetil) amino-metano, L-arginina, L-lisina, N-etilpiperidina, dibencilamina y similares. Esos compuestos (I) que son básicos pueden formar sales, incluyendo sales farmacéuticamente aceptables con ácidos inorgánicos, por ejemplo, con ácidos hidrohálicos tales como clorhídrico o ácidos bromhídricos, ácido sulfúrico, ácido nítrico o ácido fosfórico y similares, y con ácidos orgánicos, por ejemplo ácido acético, tartárico, succínico, fumárico, maleico, málico, salicílico, cítrico, metansulfónico, p-toluensulfónico, benzoico, bencensulfónico, glutámico, láctico y mandélico y similares. Los compuestos de la invención que contienen uno o más centros quirales actuales o potenciales, debido a la presencia de átomos de carbono asimétricos, pueden existir como un número de diaestereoisómeros con estereoquímica R o S en cada centro quiral. La invención incluye todos los diaestereoisómeros y las mezclas de los mismos. Como se manifestó anteriormente, los esteres de la invención son principalmente profármacos de los ácidos carboxílicos correspondientes a los cuales se convierten a través de carboxilesterasas intracelulares. Sin embargo, mientras permanezcan sin hidrolizar, los esteres pueden tener actividad inhibidora HDAC en su propio derecho. Los compuestos de la invención incluyen no solamente el éster, sino también los productos de hidrólisis de ácido carboxílico correspondientes . El grupo hidroxamato -C(=0)NHOH En los compuestos de la invención, el grupo hidroxamato funciona como un grupo de enlace de metal, que interactúa con el ion metálico en el sitio activo de la enzima HDAC, que yace en la base de un bolsillo en la estructura de la enzima doblada. El anillo o sistema de anillo A El anillo o sistema de anillo A es un sistema de anillo carbocíclico o heterocíclico mono-, bi- o tri-cíclico, opcionalmente sustituido. Los compuestos de la invención, cuando están enlazados al sitio activo de la enzima HDAC, el anillo o el sistema de anillo A yace dentro o en la entrada del bolsillo que contiene el ion metálico, con el radical -[Enlazador]- que se extiende más profundo dentro del bolsillo enlazando A el grupo ácido hidroxámico de unión de metal. En la técnica, el anillo o el sistema de anillo A algunas veces es referido informalmente como el "grupo principal" del inhibidor. Los ejemplos de sistemas de anillo A incluyen los siguientes: en donde Rio es hidrógeno o alquilo de C?-C6 opcionalmente sustituido, el enlace entrecruzado por la línea ondulada que se conecta con el radical enlazador en el compuesto (I), y en donde el grupo R?R2CHNHYL? [CH2] z en los compuestos (I) está enlazado a cualquier átomo de anillo conveniente del sistema de anillo mostrado.
El radical - [Enlazador] - El -[Enlazador]- representa un radical enlazador divalente que emplaza un átomo de anillo en A con el grupo ácido hidroxámico CONHOH, la longitud del radical enlazador, desde el átomo terminal enlazado al átomo de anillo de A al átomo de terminal enlazado al grupo de ácido hidroxámico, siendo equivalente a aquel de una cadena de hidrocarburo saturada no ramificada de 3 a 10 átomos de carbono. Una cadena de hidrocarburo saturada no ramificada de 3 átomos de carbono tiene una longitud de aproximadamente 2.5 angstroms, y de 1 a 10 átomos de carbono tiene una longitud de aproximadamente 11.3 angstroms. La longitud de cualquier radical -[Enlazador]- se puede determinar a partir de los átomos del radio atómico y las longitudes del enlace en la literatura, o se puede determinar utilizando el software de modelación de estructura química tal como DS ViewerPro (Accelrys, Ine) . La longitud definida del radical -[Enlazador]- refleja el hecho de que el grupo principal A puede yacer en la entrada de, o dentro de, el bolsillo que contiene el ion metálico en el sitio activo de la enzima, y por lo tanto está holgadamente relacionado con la profundidad del bolsillo. En muchos casos, la longitud den enlazador será equivalente a aquel de la cadena hidrocarburo saturada no ramificada de 4 a 9 átomos de carbono, por ejemplo, 5, 6 o 7 átomos de carbono. Los tipos generales específicos del radical -[Enlazador]- son aquellos explicados a continuación como enlazadores "Tipo 1", "Tipo 2", y "Tipo". Enlazadores de Tipo 1 En este tipo, -[Enlazador]- representa un radical divalente de la fórmula - (CH2) X-Z-L2- en donde x es 0 ó 1 ; Z es un enlace, -NR3-, -NR3C(=0)-, -C(=0)NR3-, -NRC(=0) -NR3-, -C(=S)-NR3, -C (=N) -NR3-NR3S (=0) 2-, ? -S(=0)2NR3-en donde R3 es hidrógeno o alquilo de Ci-Ce; -C(=0); o -S(=0)2-; y L2 representa radicales de alquileno C4-C7, alquenileno C -C6 o alquileno C4-C6 rectos o ramificados, opcionalmente sustituidos que pueden opcionalmente contener o terminar en un enlace éter (-0-) , tioéter (-S-) o amino (-NR4-) , en donde RA es hidrógeno o alquilo de C?~C3 opcionalmente sustituido. En una sub-clase de este tipo de enlazador, en cualquier combinación compatible, x es 0; Z es -NH-, -C(=0)-, -NHC(=0)- o -C(=0)NH- y L2 es -(CH2)5-, "(CH2)6-, o -(CH2)7-. Enlazadores de Tipo 2 En este tipo, -[Enlazador]- representa un radical divalente de la fórmula - (CH2) X-L3-Ar1-L4- en donde x es 0 ó 1 ; L3 es Z o L2 o Z-L2 en donde Z es como se definió con relación a los enlazadores del Tipo 1 y L2 es un enlace o un radical alquileno de C?-C3 divalente opcionalmente sustituido; Ar1 es un radical fenilo divalente o un radical heteroarilo mono- o bi-cíclico que tiene de 5 a 13 miembros de anillo, y L es un enlace o -CH2- opcionalmente sustituido o -CH=CH-. En una sub-clase de este tipo de enlazador, en cualquier combinación compatible, x es 0 ó 1 ; L3 es Z o Z-L2, en donde Z es -NH-, -NHS(=0)2-, -S(=0)2NH- o -S(=0)2-; L2 es -CH2-L4 es un enlace o -CH2-; y Ar1 es un radical divalente seleccionado de lo siguiente: en donde X es 0, S o NH. De los radicales Ar1 anteriores, el radical benzo [b]tiofen-6-ilo es un ejemplo particular. En otra sub-clase de este tipo de enlazador, en cualquier combinación compatible, x es 0; L3 es L2, en donde L2 es un radical alquileno de C3-C5 de cadena recta que puede opcionalmente contener un enlace éter (-0-), tioéter (-S-) o amino (-NRA-) en donde RA es hidrógeno o alquilo de C?-C3 opcionalmente sustituido, por ejemplo hidroxietilo; y Ar1 es un radical divalente seleccionado de aquellos listados en el párrafo anterior. En aún otra subclase de este tipo, x es 0, L3 y L4 están enlazados, y Ar1 es un radical fenilo divalente o un radical heteroarilo bicíclico divalente que tiene de 9 a 13 miembros de anillo, por ejemplo seleccionados de los siguientes : en donde X se selecciona de O, S y NH y P, Q, y U son independientemente seleccionados de N y CH; y el enlace marcado ** está enlazado al grupo CONHOH; y el enlace marcado como * está enlazado al anillo o el sistema de anillo A. Enlazadores de Tipo 3 En este tipo, -[Enlazador]- representa un radical divalente de la fórmula - (CH2) X-L3-B-Ar1-L4- en donde x, Ar1, L3 y L4 son como se explicaron con referencia a los enlazadores de Tipo 2 anteriores; y B es un sistema de anillo heterocíclico mono- o bi-cíclico. En una subclase de este tipo de enlazador B es uno de los siguientes: en donde X es N y W es NH , O o S . El grupo éster Rx El grupo Ri puede ser uno en donde el compuesto de la invención es hidrolizable a través de uno o más enzimas de carboxilesterasa intracelulares a un grupo ácido carbocíclico. Las enzimas de carboxilesterasa intracelulares capaces de hidrolizar el grupo éster de un compuesto de la invención al ácido correspondiente incluyen los tres isotipos de enzima humano conocidos hCE-1, hCE-2 y hCE-3. Aunque se consideran como siendo enzimas principales, otras enzimas tales como bifenilhidrolasa (BPH) también pueden tener un papel en la hidrólisis del éster. En general, si la carboxilesterasa hidroliza el éster de aminoácido libre al ácido padre se someterá a la dependencia N-carbonil y hCE-2 y hCE-3 explicado a continuación, también hidroliza el motivo éster cuando está covalentemente conjugado al inhibidor HDAC. Por lo tanto, el ensayo de célula separada descrito aquí provee una primera clasificación recta rápida y simple para esteres que tienen el perfil de hidrólisis requerido. Los motivos de éster seleccionados en esa forma entonces pueden volverse a ensayar en el mismo ensayo de carboxilesterasa cuando se conjugan con el modulador a través de la selección de la química de conjugación, para confirmar que aún existe un sustrato de carboxilesterasa en el fondo. Sujeto al requerimiento de que se debe hidrolizar a través de enzimas de carboxilesterasa intracelulares, los ejemplos de grupos Ri de éster particulares, incluyen aquellos de la fórmula -(C=0)0R9 en donde Rg es (i) RR8CH- en donde R7 es alquilo de C?~C3- (Z1) a-alquilo-de C?-C3 opcionalmente sustituido o alquenilo de C2-C3- (Z1) ¿¡-alquilo de Cx-C3- en donde a es 0 ó 1 y Z1 es -O-, -S-, o -NH-, y R8 es hidrógeno o alquilo de C?-C3 o R7 y R8 tomados juntos con el átomo de carbono al cual están unidos forman un anillo cicloalquilo de C3-C opcionalmente sustituido o un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido de 5 ó 6 átomos de anillo; o (ii) fenilo opcionalmente sustituido o heterociclo monocíclico que tiene de 5 a 6 átomos de carbono. Dentro de estas clases, Rg puede ser, por ejemplo, metilo, etilo, n- o iso-propilo, n- o sec-butilo, ciciohexilo, alilo, fenilo, bencilo, 2-, 3- o 4-piridilmetilo, N-metilpiperidin-4-ilo, tetrahidrofuran-3-ilo o metoxietilo. Los actualmente preferidos son en donde Rg es ciclopentilo. Se sabe que los macrófagos juegan un papel clave en los trastornos inflamatorios a través de la liberación de citocinas en TNFa particular e IL-1 (van Roon y otros Artritis and Rheumatism, 2003, 1229-1238) . En la artritis reumatoide son contribuyentes principales para el mantenimiento de la inflamación de las articulaciones y destrucción de la articulación. Los macrófagos también están involucrados en el crecimiento y desarrollo del tumor (Naldini and Carrazo Curr Drug Targets Inflamm Allergy, 2005, 3-8) . Por lo tanto los agentes que selectivamente activan la proliferación celular de macrófago podrían ser valiosos en el tratamiento de cáncer y enfermedades autoinmunes. La activación de tipos de célula específicos podría esperarse que conduzca a efectos laterales reducidos. Los inventores han descubierto un método para activar inhibidores HDAC para macrófagos que se basen en la observación en la forma en que los motivos de esterasa están enlazados al inhibidor HDCA que determina si está hidrolizado y por lo tanto si o no se acumula en diferentes tipos de célula. Específicamente se ha encontrado que los macrófagos contienen carboxilesterasa humana hCE-1 mientras los otros tipos de célula no. En la fórmula general (I) cuando el nitrógeno del motivo de esterasa R1R2 CHNH- no está directamente enlazado a un carbonilo (-C(=0)-), es decir cuando Y no es un radical -C(=0), -C(=0)0- o -C(=0)NR3-, el éster solamente será hidrolizable a través de hCE-1 y por lo tanto los inhibidores HDAC solamente se acumularán en los macrófagos. Aquí, a menos que se especifique el "monolito" o "monolitos", el término macrófago o macrófagos se utilizará para denotar macrófagos (incluyendo macrófagos asociados con tumor) y/o monolitos. Cadena lateral de aminoácido R Sujeto al requerimiento del grupo éster Ri sea hidrolizable a través de enzimas carboxilesterasa intracelulares, la identidad del grupo de cadena lateral R2 no es crítica. Ejemplos de cadenas laterales de aminoácido incluyen: grupos alquilo de Ci-Cd, fenilo, 2-, 3-, o 4-hidroxifenilo, 2-, 3-, o 4-metoxifenilo, 2-, 3-, o 4-piridilmetilo, bencilo, feniletilo, 2-, 3-, o 4-hidroxibencilo, 2-, 3-, o 4-benciloxibencilo, 2-, 3-, o 4- alcoxibencilo de Cx-C6, y benciloxi (alquilo de C?-C6) ; el grupo de caracterización de un aminoácido a natural, en donde cualquier grupo funcional puede estar protegido; los grupos -[Alq]nR6 en donde Alq es un alquilo de C?-C6 o grupo alquenilo de C2-C6 opcionalmente interrumpido por uno o más átomos -0-, o -S-, o grupos -N(R7)- [en donde R7 es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo de C?-C6] , n es 0 ó 1, y Re es un grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido o cicloalquenilo; un grupo bencilo sustituido en el anillo fenilo a través de un grupo de la fórmula -OCH2COR8 en donde R8 es hidroxilo, amino, alcoxi de Ci-Ce, fenil-alcoxi de Ci-Cß, alquilamino de C?-C6, di (alquilamino de Ci-Ce) amino, fenil-alquilamino de C?-C6, el residuo de un aminoácido o haluro ácido, éter o derivado de amina del mismo, dicho residuo estando enlazado a través de un enlace de amida, dicho aminoácido siendo seleccionado de glicina, a o ß alanita, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptófano, serina, treonina, cisteína, metionina, asparagina, glutamina, lisina, histidina, arginina, ácido glutámico, y ácido aspártico; un grupo heterocíclico-alquilo de Ci-Cß, ya sea estando sustituido o mono-, o di-sustituido en el anillo heterocíclico con halo, nitro, carboxi, alcoxi de Ci-Ce, ciano, alcanoilo de C?-C6, trifluorometil-alquilo de C?-C6, hidroxi, formilo, amino, alquilamino de Ci-Ce, dialquilamino de C?-C6, mercapto, alquiltio de C?-C6, hidroxi-alquilo de C?~ C6, mercapto-alquilo de C?-C6, o alquilfenilmetilo de C?-C6; y un grupo -CRaRbRc en donde: cada uno de Ra, Rb y Rc es independientemente hidrógeno, alquilo de C?-C6, alquenilo de C2-Cd, alquinilo de C2-C6, fenil-alquilo de C?-C6, cicloalquilo de C3-C8; o Rc es hidrógeno y Ra y Rb son independientemente fenilo o heteroarilo tal como piridilo; o Rc es hidrógeno, alquilo de Ci-Cg, alquenilo de C2- C6, alquinilo de C2-C6, fenil-alquilo de C?-C6 o cicloalquilo de C3-C8, y Ra y Rb junto con el átomos de carbono al cual están unidos forman un cicloalquilo de 3 a 8 miembros o un anillo heterocíclico de 5 a 6 miembros; o Ra/ Rb y Rc junto con el átomo de carbono al cual están unidos forman un anillo tricíclico (por ejemplo adamantilo) ; o Ra y Rb son cada uno independientemente alquilo de C?-C6, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, fenil-alquilo de Ci-Cd, o un grupo como se define para Rc a continuación diferente de hidrógeno, o Ra y Rb junto con el átomo de carbono al cual están unidos forman un anillo cicloalquilo o heterocíclico, y Rc es hidrógeno, -OH, -SH, halógeno, -CN, -C02H, perfluoroalquilo de C?-C4, -CH2OH, -C02OH, -C02 (Ci- C6)alquilo, -O (d-C6) alquilo, -0 (C2-C6) alquenilo, -S (Ci-C6)alquilo, -SO (C?-C6) alquilo, -S02 (C?-C6) alquilo, -S (C2-C6) alquenilo, -SO (C2-C6) alquenilo, -S02 (C2-C6) alquenilo o un grupo -Q-W en donde Q representa un enlace o -0-, -S-, -SO- o -S02- y W representa un fenilo, fenilalquilo, cicloalquilo de C3-C8, cicloalquilalquilo de C3-C8, cicloalquenilo de C4-C8, cicloalquenialquilo de C4-C8, heteroarilo o heteroarilalquilo, cuyo grupo W puede opcionalmente estar sustituido por uno o más sustituyentes independientemente seleccionados de hidroxilo, halógeno, -CN, -C02H, -C02 (C?-C6) alquilo, -C0NH2, -CONH (C?-C6) alquilo, -CONH (alquilo de C1-C6)2, -CHO, -CH20H, perfluoroalquilo de C?-C4, -0 (C?-C6) alquilo, -S (Ci-Cß) alquilo, -SO (C?-C6) alquilo, -S02 (C?-C6) alquilo, -N02, -NH2, -NH(C?~ C6) alquilo, -N ( (C?-C6) alquilo) 2, -NHCO (C?~C6) alquilo, (alquilo de Ci-Ce, alquenilo de C?-C6, alquinilo de C2-C6, cicloalquilo de C3-C8, cicloalquenilo de C4-C8, fenilo o bencilo. Ejemplos de grupos R2 incluyen hidrógeno (la "cadena lateral" de glicina) , bencilo, fenilo, ciclohexilmetilo, ciciohexilo, piridin-3-ilmetilo, ter-butoximetilo, iso-butilo, sec-butilo, ter-butilo, 1-benciltio-1-metiletilo, 1-metiltio-l-metiletilo, 1-mercapto-1-metiletilo, y feniletilo. Los grupos R2 actualmente preferidos incluyen fenilo, bencilo, e iso-butilo. Para los compuestos de la invención que se van a administrar sistémicamente, los esteres con una velocidad baja de división de carboxilesterasa son preferidos, ya que éstos son menos susceptibles al metabolismo pre-sistémico. Su habilidad para alcanzar su tejido objetivo intacto por consiguiente se incrementa, y éster puede convertirse dentro de las células del tejido objetivo en un producto ácido. Sin embargo, para administración local, cuando el éster se aplica ya sea directamente al tejido objetivo o directamente ahí, por ejemplo, inhalación, por lo general puede ser deseable el éster tenga una velocidad rápida de división de esterasa, para minimizar la exposición sistémica y los efectos secundarios indeseados consecuentes. En los compuestos de esta invención, si el carbono adyacente al carbono alfa del éster de aminoácido alfa está mono-sustituido, es decir, R2 es CH2RZ (Rz siendo el mono-sustituyente) después el éster tiende a dividirse más rápidamente que si el carbono está di-o tri-sustituido, como en el caso en donde R2 es, por ejemplo, fenilo o ciciohexilo. El radical -Y-L^X1- [CH2] z~ Este radical (o enlace) surge del estrategia química particular seleccionada para enlazar el motivo del éster de aminoácido R?CH(R2)NH- al grupo principal A del inhibidor. Claramente la estrategia química para este acoplamiento puede variar ampliamente, y de esta forma son posibles muchas combinaciones de las variables Y, L1, X1 y z . Sin embargo, como se mencionó anteriormente, cuando el inhibidor está enlazado a la enzima HDAC en su sitio activo, el grupo principal A está localizado en la parte de su parte superior de, o dentro de, el bolsillo que contiene el ion metálico de la enzima, de esta forma al enlazar el motivo del éster de aminoácido al grupo principal generalmente se extiende en una dirección lejos del bolsillo, y de esta forma minimiza o evita la interferencia con el modo de enlace de la plantilla del inhibidor A- [Enlazador] -CONHOH. Por lo tanto, la precisa combinación de la formación variable de la química de enlace entre el motivo del éster de aminoácido y el grupo principal A por lo general será irrelevante al modo de enlace principal del compuesto como todo. Por el otro lado, la química de enlace puede en algunos casos recoger interacciones de enlace adicionales con la enzima en la parte superior de, o adyacente a, el bolsillo que contiene el ion metálico, por lo tanto mejorando el enlace. También debe observarse que los beneficios del motivo del éster de aminoácido descrito anteriormente (entrada fácil en la célula, hidrólisis de carboxilesterasa dentro de la célula, y acumulación dentro de la célula del producto de hidrólisis de ácido carboxílico activo) se logran mejor cuando el enlace entre el motivo del éster de aminoácido y el grupo principal no es un sustrato para la actividad de peptidasa dentro de la célula, lo cual podría dar como resultado la división del aminoácido de la molécula.
Por supuesto, la estabilidad de las peptidasas intracelulares fácilmente se prueban a través de la incubación del compuesto con contenidos celulares interrumpidos, y analizando cualquiera de dichas divisiones. Con las observaciones generales anteriores en mente, tomando las variables que forman el radical -Y-L1-X1-[CH2] z-, a su vez : z puede ser 0 ó 1, de tal forma que el radical metileno enlazado al grupo principal A es opcional; Los ejemplos preferidos específicos de Y cuando no es requerida la selectividad del macrófago incluyen -(C=0)-, -(C=0)NH-, y -(C=0)0-; en donde la selectividad del macrófago es requerida en cualquiera de las opciones para Y, incluyendo el caso en donde Y es un enlace, son apropiadas. En el radical L1, los ejemplos de los radicales Alq1 y Alq2, cuando están presentes, incluyen -CH2-, -CH CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2-, -CH=CH-, -CH=CHCH2-, -CH2CH=CH-, CH2CH=CHCH2-C=C-, -C=CCH2-, CH2C=C-, y CH2C=CCH2. Los ejemplos adicionales de Alq1 y Alq2 incluyen -CH2W-, -CH2CH2W--CH2CH2WCH2-, -CH2CH2WCH(CH3) -, -CH2WCH2CH2-, -CH2WCH2CH2WCH2-, y -WCH2CH2- en donde W es -0-, -S-, -NH-, -N(CH3)-, o -CH2CH2N (CH2CH2OH) CH2-. Los ejemplos adicionales de Alq1 y Alq2 incluyen radicales ciclopropilo, ciclopentilo y ciciohexilo divalentes . En L1, cuando n es 0, el radical es una cadena de hidrocarburo (opcionalmente sustituido y quizás teniendo un enlace de éter, tioéter o amino) . Actualmente se prefiere que no existan sustituyentes opcionales en L1. Cuando tanto m como p son 0, L1 es un radical carbocíclico heterocíclico mono-, o bicíclico divalente con 5-13 átomos de anillo (opcionalmente sustituido) . Cuando n es 1 y por lo menos uno de n y p es 1, L1 es un radical divalente que incluye cadena o cadenas de hidrocarburo y un radical carbocíclico o heterocíclico mono- o bicíclico con 5-13 átomos de anillo (opcionalmente sustituido) . Cuando está presente, Q puede ser, por ejemplo, un radical fenilo, naftilo, ciclopropilo, ciclopentilo, o ciciohexilo divalente, o un radical heterocíclico mono- o bicíclico que tiene de 5 a 13 miembros, tal como piperidinilo, piperazinilo, indolilo, piridilo, tienilo o pirrolilo, pero 1,4-fenileno es actualmente preferido. Específicamente, en algunas modalidades de la invención, L1, m y p pueden ser 0 con n siendo 1. En otras modalidades, n y p pueden ser 0 con m siendo 1. En otras modalidades, m, n y p pueden 0. En aún otras modalidades m puede ser 0, n puede ser 1 con Q siendo un radical heterocíclico monocíclico y p puede ser 0 o 1. Alq1 y Alq2, cuando están presentes, se pueden seleccionar de -CH2-, -CH2CH2-, y -CH2CH2CH2- y Q puede ser 1, 4-fenileno . Los ejemplos específicos del radical -Y-L1-X1-[CH2]Z- incluyen -C (=0) - y -C(=0)NH- así como -(CH2)V-, -(CH2)v0-, -C(=0)-(CH2)v-. -C(=0)-(CH2)v0-, -C (=0) -NH- (CH2) w-, -C(=0)-NH-(CH2)w0- en donde v es 1, 2, 3 o 4, y w es 1, 2 o 3, tal como -CH2-, -CH20-, -C(=0)-CH2-, -c (=0) -CH20-, -C (=0) -NH-CH2-, y -C(=0)-NH-CH20-. Los ejemplos se subgrupos particulares de compuestos de la invención incluyen aquellos de la fórmula (IA) a (IM) : (IB) R HN \ L* (IG) en donde z, Ri, R2, R3, L1 y X1 e Y son como definieron con relación a la fórmula (I) y como se explican a continuación, incluyendo las preferencias de las mismas. Los ejemplos de compuestos específicos de la invención incluyen los siguientes: éster ciclopentílico de ácido (S)-[4-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -fenil-acético éster ciclopentílico de ácido (S)-2-[3-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -4-fenil-butírico éster ciclopentílico de ácido (S)-[3-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -fenil-acético éster ciclopentílico de ácido (S)-2-[3-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -4-metil-pentanoico éster ciclopentílico de ácido (S) -{2- [ 3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -fenil] etilamino}-fenilacético éster ciclopentílico de ácido (S) -2-{3- [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -fenoxi] propilamino}-3-fenil-propiónico éster ciclopentílico de ácido (S) -2- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetil) -amino] -metil}-bencilamino) -3- ( 4-hidroxi-fenil) -propiónico éster ciclopentílico de ácido (S) -3-ter-butoxi-2- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetil) -amino] -metil}-bencilamino) -propiónico éster ciclopentílico de ácido (S) -1- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetil) -amino] -metil}-bencil-pirrolidin-2-carboxílico (S) -2- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetil) -amino] -metilj-bencilamino) -propiónico (S) -2- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetil) -amino] -metil}-bencilamino) -propiónico (4-{ [ (-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetil) -amino] -metil}-bencilamino) -acético Los compuestos de la invención se pueden preparar, por ejemplo, a través de los métodos descritos a continuación y en los ejemplos de la presente. Por ejemplo, los compuestos de la invención se pueden preparar a partir de los ácidos carboxílicos correspondientes (II) [Enlazador]- :OOH ID a través de la reacción de un derivado activado del mismo, tal como cloruro ácido, con hidroxilamina o una versión protegida de hidroxilamina. Alternativamente, un precursor N- u O- protegido o N,0- desprotegido del compuesto deseado (I) se puede desproteger. En una versión útil de éste método la 0-protección se provee a través del soporte de resina, a partir del cual el ácido hidroxámico deseado (I) se puede dividir, por ejemplo, a través de hidrólisis acida. Los derivados protegidos carboxilo de los compuestos (II), o derivados soportados por resina 0-enlazados de los compuestos (II) de la invención se pueden sintetizar en etapas a través de métodos de la literatura, seleccionados de acuerdo con la estructura particular del compuesto deseado. En esa conexión las publicaciones de patentes listadas a continuación proveen información sobre la síntesis de los inhibidores HDAC que son estructuralmente similares a aquellos de la presente invención. En un método, adecuado para los compuestos (I) en donde Z es un radical sulfonamido, -NHS02-, una amina (III) (lll) se puede hacer reaccionar con un derivado activado, por ejemplo el cloruro ácido, de un ácido sulfónico HOS02-L2-Z2 en donde Z2 es un grupo carboxilo protegido, tal como éster divisible, o un grupo ácido hidroxámico soportado por resina O-enlazada . En otro método adecuado para los compuestos (I) en donde Z es un radical amida NHC(=0)-, o una amina (III) puede reaccionarse con ácido carboxílico HOC (=0) -L-Z2, Z2 que es como define en el párrafo anterior, en la presencia de un agente de acoplamiento de carbodiimida. El caso de los compuestos (I) en donde el anillo o sistema de anillo A está enlazado a la porción -Enlazador- CONHOH a través de un nitrógeno de anillo, y Z es - (C=0) - o -SO2-, el N-heterociclo (IV) apropiado (IV) puede reaccionarse con el ácido carboxílico o sulfónico correspondiente (es decir HOOC-L2-Z2 o HOS02-L2-Z2 en donde Z2 es como se definió anteriormente) , ya sea como un derivado activado del mismo tal como cloruro, o en la presencia de un agente de acoplamiento de carbodiimida. A manera de ilustración del uso de los métodos de la literatura para la síntesis de los compuestos dentro del alcance de la fórmula (I) anterior, se presentas los siguientes esquemas de reacción 1-6. En estos esquemas de reacción el grupo R representa el radical N—Y— L'—X'—[CH2]-— H presente en los compuestos de la invención, o representa un grupo funcional sobre el cual el radical se puede construir utilizando los métodos de la literatura. También, en los esquemas de reacción, el símbolo IÍ representa un soporte de resina de fase sólida.
Esquema de reacción 1 Esquema de reacción 2 25 15 20 25 Esquema de reacción 4 Esquema de reacción 5 EDC. DMAP HjNOTHP Como se mencionó anteriormente, los compuestos correspondientes a la invención son inhibidores HDAC, y por consiquiente se utilizan en el tratamiento de enfermedades proliferativas celulares, tales como cáncer, en seres humanos y otros mamíferos. Se entenderá que el nivel de dosis específica para cualquier paciente particular dependerá de la variedad de factores incluyendo la actividad del compuesto específico utilizado, la edad, el peso corporal, la salud general el sexo, la dieta, el tiempo y la administración, la ruta de administración, la velocidad de excreción, la combinación del fármaco y la severidad de la enfermedad que experimenta el tratamiento. Los niveles de dosis óptimos y la frecuencia de dosificación se determinarán a través del ensayo clínico. Los compuestos correspondientes a la invención se pueden preparar para administración a través de cualquier ruta consistente con sus propiedades farmacocinéticas. Las composiciones administrables oralmente pueden estar en la forma de tabletas, cápsulas, polvos, granulos, grajeas, líquidos o preparaciones de gel, tales como soluciones o suspensiones orales, tópicas o estériles parenterales. Las tabletas y cápsulas para administración oral pueden estar en una forma de presentación de dosis unitaria, y pueden contener excipientes convencionales tales como agentes aglutinantes, por ejemplo, jarabe, acacia, gelatina, sorbitol, tragacanto, o polivinilpirrolidona; rellenos por ejemplo lactosa, azúcar, almidón de maíz, fosfato de calcio, sorbitol o glicina; lubricante de tableta, por ejemplo estearato de magnesio, talco, polietilenglicol o sílice; disgregantes por ejemplo almidón de papa, o agentes de humectación aceptables tales como lauril sulfato de sodio. Las tabletas se pueden recubrir de acuerdo con los métodos bien conocidos en la práctica farmacéutica normal. Las preparaciones líquidas orales pueden estar en la forma de, por ejemplo, suspensiones, soluciones, emulsiones, jarabes o elíxires acuosas u oleosas, o pueden presentarse como un producto seco para reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes de uso. Dichas preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes de suspensión, por ejemplo, sorbitol, jarabe, metilcelulosa, jarabe de glucosa, ácidos comestibles hidrogenados de gelatina; agentes de emulsificación, por ejemplo, lecitina, monooleato de sorbitán, o acacia; vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles), por ejemplo aceite de almendra, aceite de coco fraccionado, esteres oleosos tales como glicerina, propilenglicol, o alcohol etílico; conservadores, por ejemplo, p-hidrobenzoato de metilo o propilo o ácido sórbico, y si se desea agentes saborizantes o de color convencionales. Para aplicación tópica a la piel, el fármaco se puede formar en una crema, loción o ungüento. Las formulaciones de crema o ungüento que pueden utilizarse para el fármaco son formulaciones convencionales bien conocidas en la técnica, por ejemplo, como se describe en los libros de texto o estándares de farmacéuticos tales como British Pharmacopoeia. Para aplicación tópica a través de inhalación, el fármaco se puede formular para distribución en aerosol por ejemplo, a través de atomizadores de chorro conducidos por presión o atomizadores ultrasónicos, o preferiblemente a través de aerosoles controlados conducidos por propulsores o administración libre de propulsor de polvos micronizados, por ejemplo, cápsulas de inhalación u otros sistemas de distribución "de polvo seco". Excipientes, tales como, por ejemplo, propulsores (por ejemplo Frigen en el caso de aerosoles controlados) sustancias activas de superficie, emulsificadores, estabilizadores, conservadores, saborizantes, y rellenos (por ejemplo, lactosa en el caso de inhaladores de polvo) pueden estar presentes en dichas formulaciones inhaladas. Para los propósitos de inhalación, están disponibles un gran número de aparatos con los cuales se pueden generar y administrar los tamaños de partícula óptimos, utilizando una técnica de inhalación que es apropiada para el paciente. Además del uso de adaptadores (separadores y expandidotes) y contenedores pre-configurados (por ejemplo, Nebulator®, Volumatic®) , y dispositivos automáticos que emiten una aspersión de soplado (Autohaler®) , para aerosoles controlados, en particular en el caso de inhaladores de polvo, están disponibles un número de soluciones técnicas (por ejemplo, Diskhaler®, Rotadisk®, Turbohaler® o los inhaladores por ejemplo, como se describen en la solicitud de patente Europea EP 0 505 321) . Para aplicación tópica al ojo, el fármaco puede estar formado en una solución o suspensión en un vehículo acuoso o no acuoso estéril adecuado. Los aditivos, por ejemplo reguladores de pH tales como metadisulfito de sodio o edeato disódico; conservadores incluyendo agentes bactericidas o fungicidas, tales como acetato mercúrico de fenilo o nitrato, cloruro de benzalconio o clorhexidina, y agentes de adelgazamiento tales como hipromelosa también pueden incluirse. El ingrediente activo también se administrar parenteralmente en un medio estéril. Dependiendo del vehículo y la concentración utilizada, el fármaco puede ser ya sea suspendido o disuelto en el vehículo. Ventajosamente, los adyuvantes tales como anestésicos locales, conservadores y agentes reguladores de pH se pueden disolver en el vehículo. Los siguientes Ejemplos ilustran la preparación de compuestos específicos de la invención, y las propiedades inhibidoras de HDAC del mismo: En los Ejemplos: Los reactivos y solventes comercialmente disponibles (de grado HPLC) se utilizaron sin purificación adicional . La irradiación de microondas se llevó a cabo utilizando un rector de microondas enfocado CEM Discover. Los solventes se removieron utilizando GeneVac de Serie I sin calentamiento o un Genevac de Serie II con VacRamp a 30°C o un evaporador giratorio Buche. La purificación de los compuestos a través de columna de cromatografía de vaporización instantánea se llevó a cabo utilizando gel de sílice, tamaño de partícula 40-63 µm (230-400 mallas) obtenido de Silicycle. La purificación de los compuestos de HPLC preparativa se llevó a cabo sobre sistemas Wilson utilizando columnas C18 ThermoHypersil-Keystone Hyperprep HS de fase inversa (12 µm, 100 X 21.2 mm) , gradiente 20-100% B (A=agua/0.1% de TFA, B=acetonitrilo/0.1% de TFA) durante 9.5 minutos, flujo = 30 ml/minuto, y solvente de inyección 2:1 de DMSO: acetonitrilo (1.6 ml) , detección UV a 215 nm . El espectro 1H RMN se registró en un espectrómetro Broker 400 MHz AV en solventes deuterado. Los intercambios químicos (d) están en partes por millón. El análisis de cromatografía de capa delgada (TLC) se llevó a cabo con placas Kieselgel 60 F25 (Merck) y se visualizó utilizando luz UV. El HPLCMS analítico se llevó a cabo sobre sistemas Agilient HP1000, utilizando columnas C18 Hypersil BDS de fase inversa (5 µm, 2.1 X 50 mm) , un gradiente de 0-95% de B (A=agua/0.1% TFA, B=acetonitrilo/0.1% TFA) durante 2.10 minutos, flujo=1.0 ml/minuto. El espectro UV se registró a 215 nm utilizando un detector de arreglo de diodos ilson G1315A, un detector de UV de longitud de onda individual G1214A, un detector de UV de longitud de onda dual Waters 2487, un detector de UV de longitud de onda dual Waters 2488, o detector de UV de arreglo de diodos Waters 2996. El espectro de masa se obtuvo sobre un intervalo m/z 150 a 850 a una velocidad de muestreo de dos exploraciones por segundo o una exploración por 1.2 segundos utilizando Micromass LCT con una interfase de aspersión Z o Micromass LCT con aspersión Z o interfase MUX. Los datos se integraron y se reportaron utilizando el software del navegador OpenLyns y OpenLynx. Se han utilizado las siguientes abreviaturas: MeOH = metanol EtOH = etanol EtOAc = acetato de etilo Boc = ter-butoxicarbonilo Cbz = carbobenciloxi DCM = diclorometano DCE = dicloroetano DMF = dimetilformamida DMSO = sulfóxido de dimetilo TFA = ácido trifluoroacético THF = tetrahidrofurano Na2C0 = carbonato sódico HCl = ácido clorhídrico DIPEA = diisopropiletilamina NaH = hidruro de sodio NaOH = hidróxido de sodio NaHC03 = carbonato de hidrógeno de sodio Pd/C = paladio sobre carbono TBME = éter metílico de ter-butilo DMPA = 4-dimetilaminopiridina N2 = nitrógeno PyBop = hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio Na2S04 = sulfato sódico Et3N = trietilamina NH3 = amoníaco TMSCI = trimetilclorosilano NH4C1 = cloruro de amonio LiALH4 = hidruro de aluminio de litio pyBrOP = fosfoniohexafluorofosfato de bromo-tris-pirrolidino MgS04 = sulfato de magnesio Mn02 = dióxido de magnesio "BuLi = n-butil-litio C02 = dióxido de carbono EDCl = clorhidrato de N- (3-dimetilaminopropil) -N-etilcarbodiimida Et20 = éter dietílico LiOH = hidróxido de litio HOBt = 1-hidroxibenzotriazol DIAD = azodicarboxilato de diisopropilo HATU = hexafluorofosfato de 0- (7-azabenzotriazol-l-il-N,N,N' ,N' -tetrametiluronio ELS = Dispersión de Luz Evaporativa TLC = cromatografía de capa delgada ml = mililitro g = gramo (s) mg = miligramo (s) mol = moles mmoles = milimol (es) equivalentes = equivalente de mol LCMS = cromatografía líquida de alto rendimiento/espectrometría de masa NMR = resonancia magnética nuclear t.r. = temperatura ambiente Procedimiento de lavado estándar para química de resina La resina se lavó en la siguiente secuencia: DMF, MeOH, DMF, MeOH, DCM, MeOH, DCM, MeOH x 2, TBME x 2.
División de prueba de resina Se trató una pequeña cantidad de resina de 2-clorotritilo de hidroxilamina funcionar i zada (aproximadamente 0.3 ml de mezcla de reacción, aproximadamente 10 mg de resina) con 2% de TFA/DCM (0.5 ml) durante 10 minutos a temperatura ambiente. La resina se filtró y el filtrado se concentró a través de soplado con una corriente de gas N2. Se obtuvo la LCMS del residuo. (Nota: para la división de prueba de resina Wang de hidroxilamina funcionarizada se llevó a cabo utilizando 50% TFA/DCM. Preparación de Resina de 3-Clorotritilo de Hidroxilamina Der i a i zada de Acido Subérico Etapa 1 - Inmovilización de la resina de 2-clorotritil-0-NH2 A un matraz de fondo redondo cargado con la resina 2-clorotritil-0-NH2 (6 g, carga de 1.14 mmoles/g, 6.84 mmoles) y DCM (60 ml) se agregó diisopropiletilamina (5.30, 41.0 mmoles, 6 equivalentes) . Se agregó lentamente 8-cloro-8-oxooctanoato de metilo (4.2 g, 20.5 mmoles, 3 equivalentes) a la mezcla de reacción con agitación orbital y la mezcla de reacción se agitó por 48 horas . La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. La pureza LCMS se determinó a través de detección ELS, 100%, m/z 204 [M++H] +. Etapa 2- saponificación A un matraz de fondo redondo cargado con la resina de la Etapa 1 (4 g, carga de 1.14 mmoles/g, 4.56 mmoles) se agregó THF (16 ml) y MeOH (16 ml) . A la reacción se agregó una solución de NaOH (0.91 g, 22.8 mmoles, 5 equivalentes) en agua (16 ml) . La mezcla de reacción se agitó por 48 horas . La resina se filtró y se lavó con agua x 2, MeOH x 2, seguido por el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. La pureza LCMS se determinó a través de detección ELS, 100% m/z 190 [M++H] + . Preparación de Esteres de Ciclopentilo Los esteres se prepararon de acuerdo con uno de los siguientes métodos . Método A- Sintesis de éster ciclopentílico de ácido (S) -2-Amino-3-ter-butoxi-propiónico Etapa 1: éster ciclopentílico de ácido (S)-Benciloxicarbonilamino-3-ter-butoxi-propiónico Se disolvió ácido (S) -2-Benciloxicarbonilamino-3-ter-butoxi-propiónico (4g, 0.014 moles) en DMF (40 ml). Se agregó ciclopentanol (2.54 ml, 0.027 moles) y dimetilaminopiridina (0.165 g, 0.014 moles) . La solución se enfrió a 0°C utilizando un baño de hielo y a esto se agregó clorhidrato de N- (3-dimetiloaminopropil) -N ,-etilcarbodiimida (2.73 g, 0.014 moles, 1.05 equivalentes.). La mezcla se agitó a 0°C por 10 minutos y después se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó por 18 horas más. A la mezcla de reacción se agregó agua (20-30 ml) seguido por EtOAc (40 ml) . Las capas se separaron y la capa acuosa se volvió a extraer con EtOAc (15 ml) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (4 x 20 ml) , se secaron (MgS04) y el solvente se removió al vacío para dar un residuo. La purificación mediante cromatografía de columna (1:1 EtOAc / heptano) dio el producto como un aceite incoloro (3.82 g, 78% de rendimiento). XH RMN (300 MHz, CDC13) , d: 1.15 (9H, s, CH3 x 3), 1.50-1.90 (8H, m, CH2 x A ) , 3.57 (1H, dd, J = 7.4, 1.2Hz, CH) , 3.85 (ÍH, dd, J = 7.4, 1.2Hz, CH) , 4.45 (ÍH, m, CH) , 5.15 (2H, s, CH2) , 5.25 (ÍH, m, CH) , 5.65 (1 H, d, CH, J = 7.6Hz), 7.30-7.50 (5H, m, ArH x 5). Etapa 2: éster ciclopentílico de ácido (S)-2-Amino-3-ter-butoxipropiónico Se disolvió éster ciclopentílico de ácido (S)-2-Benciloxicarbonilamino-3-ter-butoxi-propiónico (3.82 g, 0.011 moles) En EtOH (50 ml) . Se agregó 20% en peso de hidróxido de paladio (húmedo) cuidadosamente a la solución. El sistema se evacuó y se puso bajo una atmósfera de hidrógeno por 4 horas. El sistema se evacuó y los residuos de paladio se filtraron a través de Celite. El celite se lavó vigorosamente con EtOH (3 x 5 ml) . El solvente del filtrado se removió al vacío para dar el producto como un aceite incoloro (2.41 g, 100% de rendimiento). XH RMN (300 MHz, CDC13) , d: 1.15 (9H, s, CH3 x 3), 1.50- 1.90 (10H, m, CH2X 4, NH2), 3.50-3.70 (3H, m, CH2, CH) , 5.22 (1 H, s, CH) . Método B- Síntesis de éster ciclopentilico de ácido (S) -Amino-ciclohexil-acético Etapa 1: éster ciclopentílico de ácido (S)-ter-Butoxicarbónilamino-ciciohexil-acético Este se preparó en la misma forma que el éster ciclopentílico de ácido (S) -2-Benciloxicarbonilamino-3-ter-butoxi-propiónico (Método A, Etapa 1) pero a partir de ácido (S) -ter-butoxicarbonilamino-ciclohexil acético. H RMN (300 MHz, CDC13) , d: 1.00-1.40 (10H, m, CH x 10), 1.45 (9H, s, C(CH2)3), 1.60-2.00 (8H, m, 4 x CH2) , 4.15 (ÍH, m, CH) , 5.05 (ÍH, d, NH, J = 7.6Hz), 5.25 (ÍH, m, CH) . Etapa 2: éster ciclopentílico de ácido (S)-Amino-ciclohexil-acético Se disolvió éster ciclopentílico de ácido ( (S)-ter-butoxicarbonilamino-ciclohexil-acético 1.17 g, 3.60 mmoles) en una mezcla de TFA / DCM (1:1 , 10 ml) a 0°C. La solución se agitó por 90 minutos, el solvente se removió al vacío. El residuo se azeotropó con una mezcla de DCM / heptano (2x) para dar una goma. La goma se volvió a disolver en DCM (10 ml) y se lavó con una solución acuosa saturada de NaHC03 (3 x 10 ml), se secó (MgS04) y se filtró. El solvente del filtrado se removió al vacío para dar el producto como un aceite (0.780 g, 78% de rendimiento). XH RMN (300 MHz, CDC13) , d: 1.00-1.40 (10H, m, CH x 10), 1.50-2.00 (8H, m, CH x 8), 3.25 (1 H, d, CH1 J = 7.2Hz), 5.20 (ÍH, m, CH) . Método C- Sintesis de éster ciclopentílico de ácido (S) -2-Amino-4-metilo-pentanoicoo Etapa 1: ácido toluen-4-sulfonico del éster ciclopentílico de ácido (S) -2-Amino-4-metilo-pentanoico toluene-4-sulfónico A una suspensión de (S) -leucina (15 g, 0.11 moles) en ciciohexano (400 ml) se agregó ciclopentanol (103.78 ml, 1.14 mmoles) y ácido p-toluensulfónico (23.93 g, 0.13 moles). La suspensión se calentó a reflujo para efectuar la solvatación. Después de llevar a reflujo la solución por 16 horas se enfrió para dar una suspensión blanca. Se agregó heptano (500 ml) a la mezcla y la suspensión se filtró para dar el producto como un sólido blanco (35 g, 85% de rendimiento). XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.01 (6H, t, CH3X 2, J = 5.8Hz), 1.54-2.03 (11 Hl m, 11 x CH) , 2.39 (3H, s, CH3) , 3.96 (1 H, t, CH, J = 6.5Hz), 5.26-5.36 (1 H, m, CH) , 7.25 (2H, d, ArH x 2, J = 7.9Hz), 7.72 (2H, d, ArH x 2, J = 8.3Hz) . Etapa 2: Síntesis de éster ciclopentílico de ácido (S) -2-Amino-4-metilo-pentanoicoo Una solución de ácido toluen-4-sulfónico del éster ciclopentílico de ácido (S) -2-amino-4-metilo-pentanoicoo (2.57 g, 0.013 moles) en DCM (5 ml) se lavó con una solución acuosa saturada de NaHC03 (2 x 3 ml) . Las capas acuosas combinadas se volvieron a extraer con DCM (3 x 4 ml) . Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgS04) , y el solvente se removió al vacío para dar a aceite incoloro (1.10 g, 80% de rendimiento). XH RMN (300 MHz, CDC13) , d: 0.90 (6H, t, CH3X 2, J = 6.4Hz), 1.23-1.94 (11 H, m, 5 x CH2, CH) , 3.38 (1 H, dd, CH, J = 8.4, 5.9 Hz), 5.11-5.22 (ÍH, m, CH) . Método D- Síntesis de éster ciclopentílico de ácido (S) -2-Amino-3-ter-butilsulfanil-propiónico Etapa 1: éster ciclopentílico de ácido (S) -3-ter-butilsulfanil-2- ( 9H-fluoren-9-ilmetoxicarbónilamino) -propiónico Este se preparó en la misma forma que el éster ciclopentílico de ácido (S) -2-Benciloxicarbonilamino-3-ter-butoxi-propiónico (Método A, Etapa 1) pero a partir de ácido (S) -3-ter-butilsulfanil-2- ( 9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino) -propiónico. 1H RMN (300 MHz, CDC13) , d: 1.30 (9H, s, (CH3)3), 1.55-1.95 (8H, m, CH2 X A ) , 3.05 (2H, d, CH2, J = 4.8Hz), 4.20-4.30 (1 H, m, CH) , 4.40 (2H, d, CH2, J = 7.5Hz), 4.65 (1 H, m, CH) , 5.25 (ÍH, m, CH) , 5.70 (1H1 d, NH, J = 7.8Hz), 7.30-7.50 (4H, m, ArH x 4), 7.65 (2H, d, J = 7.5Hz, ArH x 2), 7.80 (2H, d, J = 7.5Hzl ArH x 2). Etapa 2: éster ciclopentílico de ácido (S) -2-Amino-3-ter-butilsulfanil-propiónico Se disolvió éster ciclopentílico de ácido (S)-3-ter-butilsulfanil-2- ( 9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino) - propiónico (1.63 g, 3.50 mmoles) en CH3CN (25 ml) a 0°C. Se agregó piperidina (21 ml) a la solución. Después de agitar por 30 minutos, el solvente se removió al vacío para dar un residuo. La purificación mediante cromatografía de columna (solución de agotamiento EtOAc) dio el producto como un aceite incoloro (628 mg, 73% de rendimiento) . 1H RMN (300 MHz, CDC13) , d: 1.30 (9H, s, (CH3)3), 1.55-1.95 (8H, m, CH2 X 4), 2.75 (ÍH, dd, CH, J = 7.2, 12.3Hz), 2.95 (ÍH, dd, CH, J = 4.8, 12.3Hz), 5.25 (ÍH, m, CH) . Los siguientes aminoácidos protegidos con N-Cfoz se convirtieron en esteres de ciclopentilo de acuerdo con el Método A (anterior) Éster 4-ter-butílico de ácido (S)-2-Benciloxicarboni lamino- succínico Ácido S) -2-Benciloxicarbonilamino-succinámico Ácido (S) -2-Benciloxicarbonilamino-4-carbamoil-butírico Ácido (S) -2-Benciloxicarbonilamino-3- (4-ter-butoxi-fenil) -propiónico Ácido (S) -2-Benciloxicarbonilamino-3-hidroxi-butírico Ácido (S) -Benciloxicarbonilamino-3, 3-dimetil-butírico Ácido (S) -2~Benciloxicarbonilamino-3- (lH-indol-2-il) -propiónico Ácido (S) -2-Benciloxicarbonilamino-6-ter- butoxicarbónilamino-hexanoico Los siguientes aminoácidos protegidos con N-Boc se convirtieron en esteres de ciclopentilo de acuerdo con el Método B (anterior) Ácido ter-Butoxicarbonilamino-acético . Ácido (S) -2-ter-Butoxicarbonilamino-3-metil-pentanoicoo Éster ter-butílico de ácido (S) -pirrolidin-1, 2-dicarboxílico Ácido (S) -2-ter-Butoxicarbonilamino-3-metil-butyric Ácido (S) -2-ter-Butoxicarbonilamino-4-metilosulfanyl-butírico Los siguientes amino ácidos libres se convirtieron en esteres de ciclopentilo de acuerdo con el Método C (anterior) Ácido (S) -Amino-fenil-acético Ácido (S) -2-Amino-3-fenil-propiónico Ácido (S) -2-Amino-propiónico Ácido (S) -2-Amino-4-metil-pentanoicoo Preparación de (1-isobutoxi-etoxi) amida de ácido 6-formil-benzo [b[ iofen-2-carboxílico La Síntesis se detalla a continuación en el Esquema de Reacción 7. Se pueden encontrar referencias de la literatura adicionales relacionadas con esta ruta en Tetrahedron Letters, 35, 2, 219-222 & WO 05/034880 Esquema de Reacción 7 Etapa 1: éster metílico de ácido 4- (2-dimetiloamino-vinil) -3-nitrobenzoico Se disolvió 4-metil-3-nitrobenzoato de metilo (5 g, 25.6 mmoles) en DMF (25 ml, 5 vol) y a esto se agregó N,N-dimetilformamida dimetilacetal (4.4 ml, 33.3 mmoles). La mezcla se dejó en agitación a 140 °C por 3 h. La solución roja oscura se dejó enfriar y se concentró bajo vacío. El residuo se trituró con metanol y se filtró. El filtrado se lavó con metanol y se secó en un sinterizador para dar éster metílico de ácido 4- (2-dimetilamino-vinil) -3-nitrobenzoico (5.2 g, 80%). XH RMN (300 MHz, DMSO), d: 2.98 (6H, s, 2 x CH3), 3.87 (3H, s, CH3), 5.58 (1 H, m, CH) , 7.72 - 7.83 (3H, , ArH) , 8.32 (1 H, m, CH) . Etapa 2: éster metílico de ácido 4-Formil-3-nitrobenzoico A una solución de enamina (5 g, 20.0 mmoles) en THF (50 ml, 10 vol) y agua (50 ml, 10 vol) se agregó periodato de sodio (12.8 g, 60.0 mmoles) y la mezcla se dejó en agitación por 2 h. La mezcla se filtró y los sólidos resultantes se lavaron con EtOAc (500 ml) . La capa orgánica se aisló, se lavó con NaHC03 (3 x 100 ml) y se secó (MgS04) . La concentración bajo vacío dio éster metílico de ácido 4-formil-3-nitrobenzoico (3.9 g, 93%). LCMS m/z 210 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, DMSO), d: 3.96 (3H, s, OMe), 8.01 (1 Hl d, ArH), 8.39 (ÍH, d, ArH), 8.54 (ÍH, S, ArH), 10.31 (ÍH, s, CHO) .
Etapa 3: Éster 6-metílico de éster 2-etílico de ácido Benzo [b] tiofen-2, 6-dicarboxílico Una mezcla de éster metílico de ácido 4-formil-3-nitrobenzoico (3.9 g, 18.7 mmoles), éster etílico de ácido mercapto-acético (2.2 ml, 20.4 mmoles) y K2C03 (3.3 g, 24 mmoles) en DMF (40 ml, 10 vol) se calentó a 50°C durante la noche. Después de enfriar temperatura ambiente la mezcla se vació sobre agua helada (250 ml) y la mezcla resultante se agitó por 40 min. El sólido formado se aisló mediante filtración, se lavó con agua (4 x 50 ml) y se secó bajo vacío para dar el compuesto del título (3.9 g, 80%). LCMS m/z 265 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, CDC13) d: 1.40 (3H1 1 J = 6.8 Hz, CH3), 3.95 (3H, s, OMe), 4.40 (2H, q J = 7.2 Hz, CH2) , 7.88 (1 H, d J = 8.0 Hz, ArH), 7.97 - 8.09 (2H, m. ArH), 8.56 (1 H, s, ArH) . Etapa 4: Éster 2-etílico de ácido Benzo [b] tiofen-2, 6-dicarboxílico Una mezcla de éster 6- metílico de éster-2 etílico de ácido benzo [b] tiofen-2 , 6-dicarboxílico (3.9 g, 14.77 mmoles) y yoduro de litio (10 g, 74.6 mmoles) en piridina anhidra (30 ml, 9 vol) se agitó a reflujo por 16 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se agregó (ya sea como fusión o en pedazos) en 2N de HCl helado (200 ml) . El sólido formado se aisló mediante filtración y se lavó con agua (3 x 50 ml) . El producto se purificó mediante recristalización de metanol para dar el compuesto del título (1.8 g, 49%). LCMS m/z 251 [M++H]+ , XH RMN (300 MHz, DMSO), d: 1.35 (3H, t J=6.9 Hz, CH3), 4.38 (2H, q J=7.1 Hz, CH2) , 7.99 (ÍH, d J=8.3 Hz, ArH), 8.12 (ÍH, d J=8.3 Hz, ArH), 8.27 (ÍH, s, ArH), 8.70 (1 H, SI ArH). Etapa 5: Éster etílico de ácido 6-hidromextil-benzo [b] tiofen-2-carboxílico Una solución de éster 2-etílico de ácido benzo [b] tiofen-2, 6-dicarboxílico (1.6 g, 6.4 mmoles) en THF anhidro (40 ml, 25 vol) se enfrió a 0 °C. A esto se agregó lentamente BH3 (ÍM en THF, 30 ml, 30.0 mmoles). La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó por 3 h. La solución después se enfrió a 0 °C y se extinguió utilizando ÍN HCl (7.5 ml) . La mezcla de reacción se concentró bajo vacío para remover todo el THF y el sólido resultante se aisló mediante filtración y se secó bajo vacío para dar éster etílico de ácido 6-hidroximetil- benzo [b] tiof en-2-carboxílico (1.3 g, 87%). LCMS m/z 237 [M++H] \ XH RMN (300 MHz, DMSO), d: 1.34 (3H, t J=6.9 Hz, CH3), 4.35 (2H1 q J=7.1 Hz, CH2) , 4.65 (2H, s, CH2) , 6.53 (ÍH, br s, OH), 7.42 (ÍH, d J=9.4 Hz) , 7.98 (3H, m, ArH), 8.18 (ÍH, s, ArH) . Etapa 6: Ácido 6-hidromextil-benzo [b] tiof en-2-carboxílico Se disolvió éster etílico de ácido 6-hidromextil-benzo [b] tiofen-2-carboxílico (2.4 g, 9.6 mmoles, 1 equivalentes) en THF (10 ml, 4 vol) y se agregó agua (10 ml) junto con LiOH (0.69 g, 28.8 mmoles) . La mezcla de reacción se agitó a 50°C por 3 h y después se concentró a sequedad y se llevó al siguiente paso sin purificación adicional. Etapa 7: (1-isobutoxi-etoxi) amida de ácido 6-hidroximetil-benzo [b] tiofen-2-carboxílico A una solución de ácido 6-hidroximetil-benzo [b] tiofen-2-carboxílico (1.76 g, 8.4 mmoles, 1 equivalentes) en DMF se agregó PyBrOP (4.3 g, 9.2 mmoles), 0- (isobutoxi-etil) -hidroxilamina (11.5 ml, 84.0 mmoles) (preparada mediante el procedimiento en WO0160785) y DIPEA (2.9 ml, 16.7 mmoles). La mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente por 2 h después se diluyó con agua (40 ml) y EtOAc (40 ml) . La capa orgánica se aisló, se lavó con salmuera (50 ml) y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc / heptano (1:1) para dar el compuesto del título (1.8g, 67% en dos pasos). LCMS m/z 322 [M+-H]\ XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 0.83 (6H, d J = 6.6Hz, 2 x CH3), 1.32 (3H, d J= 5.9 Hz, CH3) , 1.75 (ÍH, m, CH) , 3.38 (2H, m, CH2), 4.63 (2H, s, CH2) , 4.95 (ÍH, m, CH) , 7.32 (ÍH, d J = 8.2Hz, ArH), 7.77 (3H, m, ArH). Etapa 8: ( 1-isobutoxi-etoxi) amida de ácido 6-formil-benzo [b] tiofen-2-carboxílico A una solución de ( 1-isobutoxi- etoxi) amida de ácido 6-hidroxmetil-benzo [b] tiofen-2-carboxílico (600 mg, 1.86 mmoles) en DCM (3 ml) se agregó Mn02 (2.1 g, 24.1 mmoles) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente por 30 min y después se filtró a través celite. El filtrado se concentró para dar el compuesto del título (435 mg, 82%) . LCMS m/z 320 [M+-H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 0.94 (6H, d J = 6.7 Hz, 2 x CH3), 1.45 (3H, d J = 5.3 Hz, CH3) , 1.87 (ÍH, m, CH) , 3.40 (2H, m, CH2), 5.08 (1 H, dd J = 5.2, 10.6 Hz, CH) , 7.89-8.09 (3H, m, ArH), 8.55 (1 H, s, ArH), 10.11 (1H1 s, CHO).
Síntesis de los siguientes compuestos como se Ejemplifican por el Compuesto (1) y el Compuesto (2) R=ddopentilo3 R=H 4 R=ddopen1iloi7 R= etilo 19 R= H 18 Preparación de los Componentes A-G Componentes A y B Se calentó bajo reflujo ácido N-Boc-D-tetrahidro-beta-carbolín-3-carboxílico (5.0 g, 15.8 mmoles) y TMSCI (20 ml, 158 mmoles) en MeOH (50 ml) por 2 h. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad para producir éster metílico de ácido (R) -2 , 3, 4 , 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-3-carboxílico (componente A). La pureza LCMS 100%. m/z 231 [M++H]+, 461 [2M++H] + . El componente A se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo éster metílico de ácido (S) -2, 3,4,9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-3-carboxílico (componente B) mediante el mismo procedimiento que el bloque A utilizando ácido N-boc-L-tetrahidro-beta-carbolín-3-carboxílico .
B Componente C Etapa 1: Una solución de ácido glioxílico monohidratado (1.51 g, 16.4 mmoles) en agua (10 ml) se agregó por goteo a una solución agitada de triptamina. HCl (3.0 g, 15.3 mmoles) en agua (200 ml). Se agregó KOH (0.827 g, 14.7 mmoles) en agua (10 ml) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 1 h después de lo cual ocurrió la precipitación. Después de la filtración bajo presión reducida se recolectó ácido tetrahidro-beta-carbolín-1-carboxílico y se lavó con agua. Rendimiento 1.9g (58%); m/z 217 [M++H]+. Etapa 2: Una solución de ácido tetrahidro-beta-carbolín-1-carboxílico (7.4 g) en MeOH (250 ml) se saturó con HCl gas por 20 min. La mezcla de reacción se agitó lentamente a temperatura ambiente por 18 h. y se observó una conversión de aproximadamente 80%. La mezcla de reacción se volvió a tratar con HCl gas y se dejó en agitación durante otras 18 h. Después de la finalización de la reacción la mezcla se concentró al vacío para producir éster metílico de ácido 2,3,4, 9-tetrahidro-IH-beta-carbolín-l-carboxílico (componente C) , pureza LCMS 95%, m/z 231 [M++H] + . El producto se utilizó sin purificación adicional.
Componente D Se obtuvo el éster metílico de ácido 6-Metoxi?SA [Theta] -tetrahidro-IH-beta-carbolín-1-carboxílico (componente D) de la esterificación de ácido 6-metoxi-tetrahidro-beta-carbolín-1-carboxílico utilizando el procedimiento para el componente C. Componente D: Pureza LCMS 98%, m/z 261 [M++H]+. El componente D se utilizó sin purificación adicional. Componente E Se saturó una solución de 4-piperazin-l-il-benzonitrilo (1.5 g, 0.8 mmoles) en MeOH (150 ml) con HCl gas. Se agregó agua (0.17 ml) y la mezcla se calentó bajo reflujo por 18 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se volvió a saturar con HCl gas. Esto se llevó a reflujo por 24 h más. La mezcla se concentró bajo presión reducida produciendo éster metílico de ácido 4-Piperazin-l-il-benzoico (componente E) . La pureza LCMS 90%, m/z 221 [M++H]+. El Componente E se utilizó sin purificación adicional.
Componente F Se preparó éster metílico de ácido 1,2,3,4-tetrahidro-isoquinolín7-carboxílico (componente F) siguiendo el mismo procedimiento que para el componente E. La pureza LCMS 89%. m/z 193 [M++H] + . Este producto se utilizó sin purificación adicional. Componente G El éster metílico de ácido 4-Amino-benzoico ¡componente G) estuvo comercialmente disponible. Síntesis de los Compuestos (1) y el Compuesto (2) Etapa 1: Acoplamiento con el componente Se dilató la resina de 2-clorotritil hidroxilamina derivatizada con ácido subérico (4.6 g, carga de 1.14 mmoles, 5.24 mmoles) en DCM anhidro (50 ml). El componente A (4.76 g, 15.72 mmoles) se agregó, seguido por pyBOP (8.18 g, 15.72 mmoles, 3 equivalentes) y DIPEA (6.77 g, 52.4 mmoles, 10 equivalentes) . La reacción se agitó por 18 h, se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. Nota: Para el componente G, el acoplamiento utilizando la condición anterior dio aproximadamente 10% de conversión. De esta forma se utilizó una condición adicional: la resina de la Etapa 2 (1.0 g, carga de 1.14 mmoles) se dilató en DCM anhidro (100 ml) . Se agregó 1-Cloro-N, N-2-trimetilpropenilamina (reactivo Ghosez)1 (7.53 ml, 57.0 mmoles, 50 equivalentes) a 0 °C bajo la atmósfera de N2. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó lentamente por 1-2 h. El componente anilina G (8.6 g, 57.0 mmoles, 50 equivalentes) se agregó en porciones durante 20 min. Se agregó Et3N (8.0 ml, 57.0 mmoles, 50 equivalentes). La mezcla se agitó por 18h. LCMS después de una división de prueba mostró 70% de conversión, m/z 323 [M++H]+, 645 [2M++H] + . La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacio , Etapa 2: Saponificación Se suspendió la resina de etapa 1 (4.8 g, carga de 1.14 mmoles, 5.47 mmoles) en MeOH (17.5 ml) y THF (17.5 ml). Se agregó una solución de NaOH (l.lg, 27.5 mmoles, 5eq) en agua (17.5 ml) . La mezcla se agitó por 18 h. LCMS de la división de prueba confirmó la finalización de la reacción, m/z 388 [M++H]+, 775 [2M++H]+. La resina se filtró y se lavó con agua x 2, MeOH x 2, seguido por el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. Nota: Para el componente E, la saponificación se realizó utilizando 10 equivalentes, de 2.7 M de NaOH y se agitó por 72 h. Etapa 3: Acoplamiento con Éster ciclopentílico de L-fenilglicma Se suspendió la resina de la Etapa 2 (2.4 g, carga de 1.14 mmoles, 2.7 mmoles) en DCM anhidro (30 ml) . Se agregó la sal de éster ciclopentílico de tosilo de L-fenilglicina (3.2 g, 8.1 mmoles, 3 equivalentes), seguido por pyBOP (4.2 g, 8.1 mmoles, 3 equivalentes) y DIPEA (3.5 g, 27.0 mmoles, 10 equivalentes) . La mezcla se agitó por 18 h. La LCMS de la división de prueba (es decir se lavó una pequeña cantidad de La resina utilizando el procedimiento de lavado estándar, se secó, y se dividió en 2% TFA/DCM. La resina se filtró y el filtrado se concentró a sequedad. La LCMS obtenida confirmó la finalización de la reacción, m/z 589 [M++H] + . La muestra completa de La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío . Nota. Para los compuestos 5-8, se utilizó el éster etílico de L-fenilalanina (3 equivalentes.). Para el compuesto 19, se utilizó el éster t-butílico de L-fenilglicina (3 equivalentes). Etapa 4: éster ciclopentílico de ácido (S)-{[(R)-2- (7-Hidroxycarbamoil-heptanoil) -2, 3, 4 , 9-tetrahidro-l H-beta-carbolín-3-carbonyl] -amino} -fenil-acético (1) Se agitó delicadamente la resina de la Etapa 3 (1.0 g, carga de 1.14 mmoles) en 2% de TFA/DCM (10 ml) por 20 minutos. La resina se filtró. El filtrado se recolectó y se evaporó bajo presión reducida a temperatura ambiente. La resina se volvió a tratar con 2% de TFA/DCM (10 ml) y después de 20 minutos. Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad bajo presión reducida a temperatura ambiente, el residuo (aproximadamente 300 mg) se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (1), m/z 589 [M++H]+; XH RMN (400 MHz, CD30D) d: 1.3-1.7(16 H, m, CH2) , 2.1-2.3 (2 H, m, CH2), 2.5 (2 Hl m, CH2) , 3.0-3.5 (2 H, m, CH2) , 4.5-4.8 (2 H, m, CH2), 5.1 (1 H, m, C02CH) , 5.2 (1 H, dd, CH2CHNCO) , 5.5-5.9 (1 H, d, CONHCHPh) , 7.0-7.5 (9 H, m, Ar) . El ácido carboxílico correspondiente se obtuvo a través del siguiente procedimiento. Etapa 5: Saponificación mmoles) se suspendió en MeOH (4 ml) y THF (4 ml) . Se agregó una solución de NaOH (0.23 g, 5.7 mmoles) en agua (4 ml). La mezcla se agitó por 18 h. LCMS de la división de prueba confirmó la finalización de la reacción, m/z 521 [M+H-H]+. La resina se filtró y se lavó con agua x 2, MeOH x 2, seguido por el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. Etapa 6: ácido (S) - { [ (R) -2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-3-carbonil] -amino} -fenil-acético (2) La resina de la Etapa 5 (1.0 g, carga de 1.14 mmoles) se dividió utilizando el procedimiento descrito para la Etapa 6 produciendo el compuesto (2), m/z 521 [M++H]+; 1H RMN (400 MHz, CD30D) , d: 1.3- 1.5 (4 H, 2 x CH2) , 1.6-1.8 (4 H, 2 x CH2), 2.1-2.2 (2 H, m, CH2) , 2.4-2.7 (2 H, m, CH2) , 3.0-3.2 (1 H, m) , 3.5 (1 H, m) , 4.55 (m) , 4.9 (m) , 5.1- 5.35 (2 H, m) , (2 H, m, CH2NCO) , 5.75-5.8 (1 H, 2 x d, NHCHPh) , 7.0-7.5 (9 H, m, Ar) , 7.6 (d) , 7.7 (d) , 8.35 (d) , 8.95 (s), 9.05 (s) . Los siguientes compuestos se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito para el Compuesto (1) y el Compuesto (2) Éster ciclopentílico de ácido (S) -{ [ (S) -2- (7-Hidroxicarbamoil-heptanoil) -2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-3-carbonil] -amino} -fenil-acético (3) Componente B utilizado Pureza LCMS 98%, m/z 589 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.20-1.40 (8 H, m, 4 x CH2) , 1.40-1.80 (8 H, m, 4 x CH2) , 2.10 (2 H, m, CH2) , 3.45 (2 H, m, CH2) , 5.0 (2 H, m, CH2 traslapes con D20 pico), 5.25-5.45 (2 H, m, 2 x CH) , 5.50 (1 H, s, CONHCHPh) , 7.00-7.50 (9 H, m, Ar) . Ácido (S) -{ [ (S) -2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) - 2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta- carbolín-3-carbonil] -amino} -fenil-acético (4) Componente B utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 521 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d 1.30-1.50 (4 H, m, 2 x CH2), 1.55-1.80 (4 H, m, 2 x CH2), 2.15 (2 H, m, CH2) , 2.60 (2 H, m, CH2) , 3.00 - 3.25 (2 H, m, CH2) , 3.40-3.55 (2 H, m, CH2) , 5.20-5.30 (1 H, m, CHCON), 5.35 (1 H, s, NHCHPh) , 7.05-7.50 (9 H, m, Ar). Éster etílico de ácido (S) -2-{ [ (R) -2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta-carboIine-3-carbonil] -amino} -3-fenil-propiónico (5) Componente A utilizado Pureza LCMS 100% m/z 563 [M++H] \ XH RMN (400 MHz, MeOD), d 1.00 (3 H, t, CH3), 1.20-1.24 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.50-1.70 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.00 (2 H, m, CH2) , 2.30- 2.50 (2 H, m, CH2), 2.80-3.00 (2 H, m, CH2) , 4.05 (2 H, q, C02CH2) , 4.35-4.50 (1 H, m, CH) , 4.80-5.05 (2 H, m, CH2) , 5.40 (1 H, s, NHPhCO) , 6.80-7.30 (9 H, m, Ar) . Ácido (S) -2-{ [ (R) -2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -2 ,3, 4, 9-tetrahidro-lH-beta- carbolín-3-carbonil] -amino} -3-fenil-propiónico (6) Componente A utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 534 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d 1.30-1.50 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.60-1.80 (4 H, m, 2 X CH2), 2.15 (2 H, m, CH2) , 2.50 (2 H, m, CH2) , 3.00 (2 H, m, CH2) , 3.20 (2 H, m, CH2), 4.30-4.80 (2 H, m, CH2) , 5.15 (1 H, m, CH) , 6.90-7.50 (9 H, m, Ar) . Éster etílico de ácido (S) -2-{ [ (S) -2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-3-carbonil] -amino} -3-fenil-propiónico (7) Componente B utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 563 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d 1.00 (3 H, t, CH3) , 1.30-1.50 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.60-1.70 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.10 (2 H, m, CH2) , 2.30- 2.65 (2 H, m, CH2), 2.95-3.20 (2 H, rn, CH2) , 3.45 (1 H, m, CH) , 4.05 (2 H, q, C02CH2), 4.35-4.50 (1 H, m, CH) , 4.80-5.05 (2 H, m, CH2), 5.50 (1 H, s, NHPhCO), 6.90-7.50 (9 H, m, Ar) . Ácido (S) -2-{ [ (S) -2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta- carbolín-3-carbonil] -amino} -3-fenil-propiónico (8) Componente B utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 534 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d 1.30-1.50 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.60-1.80 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.15 (2 H, m, CH2) , 2.50 (2 H, m, CH2) , 2.95- 3.15 (2 H, m, CH2), 3.20-3.50 (2 H, m, CH2) , 4.30-4.50 (2 H, m, 2 x CH) , 4.80-5.20 (2 H, m, CH2) , 6.90-7.50 (9 H, m, Ar) . Éster ciclopentílico de ácido (S)-{[2-(7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-1-carbonil] -amino} -fenil-acético (9) Componente C utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 589 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, CDC13) , d 1.30-1.80 (16 H, m, 8 x CH2) , 2.15 (2 H, m, CH2) , 2.45-2.70 (2 H, m, CH2) , 2.95 (2 H, m, CH2) , 3.55 (1 H, m, CH) , 4.35 (1 H, m, CH) , 5.15 (1 H, m, C02CH) , 5.45 (1 H, m, CH) , 6.20 (1 H, d, PhCHNH) 7.00-7.80 (9 H, m, Ar) , 8.80-9.20 (1 H, amplio m, CHNHOH) . Ácido (S) -{ [2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) - 2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-l-carbonil] -amino} - enilacético (10) Componente C utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 521 [M++Hf, XH RMN (400 MHz, MeOD), d 1.30-1.50 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.60-1.80 ( 4 H, m, 2 x CH2) , 2.15 (2 H, m, CH2) , 2.50-2.65 (2 H, m, CH2) , 2.95 (2 H, m, CH2) , 3.70 (1 H, dd, CH) , 4.30 (1 H, dd, CH) , 5.50 (1 H, m, CH) , 6.10 y 6.20 (0.5 H cada uno, s, PhCHNH) 7.00-7.50 (9 H, m, Ar) . Éster ciclopentílico de ácido (S)-{[2-(7-hidroxicarbamoil-h [beta]ptanoil) -6-metoxi-2 ,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta- carbolín-1-carbonil] -amino} -fenil-acético (11) Componente D utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 619 [M++H] \ XH RMN (400 MHz, CDC13), d 1.30-1.80 (16 H, m, 8 x CH2) , 2.15 (2 H, m, CH2) , 2.50-2.65 (2 H, m, CH2) , 2.85 (2 H, m, CH2) , 3.70 (1 H, dd, CH) , 3.80 (3 H, s, OMe), 4.30 (1 H, dd, CH) , 5.20 (1 H, m, C02CH), 5.30-5.50 (1 H, m, CH) , 6.15-6.20 (1 H, d, PhCHNH) 6.80-7.80 (8 H, m, Ar) , 8.80-9.00 (1 H, m, CONHOH). Ácido (S) -{ [2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -6-metoxi-2 ,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta- carbolín-1-carbonil] -amino} -fenil-acético (12) Componente D utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 551 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d 1.30-1.60 (8 H, m, 4 x CH2) , 2.05 (2 H, m, CH2) , 2.50-2.65 (2 H, m, CH2) , 2.80 (2 H, m, CH2) , 3.55 (1 H, dd, CH) , 3.70 (3 H, s, OMe) , 4.30 (1 Hl dd, CH) , 5.30-5.50 (1 H, m, CH) , 5.90-6.10 (0.5 H cada uno, s, PhCHNH), 6.65 (1 H, m, Ar) , 6.80 (1 H, m, Ar) , 7.10 (1 H, m, Ar) , 7.35 (5 H, m, Ar) . Éster ciclopentílico de ácido (S)-{[2-(7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -6-metoxi-2 ,3,4, 9-tetrahidro-lH beta-carbolín-1-carbonil] -amino} -fenil-acético (13) Componente E utilizado Pureza LCMS 95%, m/z 579 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, CDC13) , d 1.40-1.90 (16 H, m, 8 x CH2) , 2.15 (2 H, m, CH2) , 2.45 (2 H, m, CH2) , 3.40 (4 H, m, 2 x CH2N) , 3.60-3.80 (4 H, m, 2 x CH2N) , 5.30 (1 H, m, C02CH) , 5.70 (1 H, d, PhCHNH) , 6.90 (2 H, d, Ar), 7.30-7.50 (6 H, m, Ar) , 7.80 (2 H, d, Ar) . Ácido (S) -{ [2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -6-metoxi-2 ,3,4, 9-tetrahidro-lH -beta-carbolin-1-carbonil] -amino} -fenil-acético (14) Componente E utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 511 [M++H]+, *H RMN (400 MHz, MeOD), d 1.30 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.50 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.00 (2 H, t, CH2), 2.35 (2 H, t, CH2) , 3.30 (4 H, m, 2 x CH2N) , 3.70 (4 H, m, 2 x CH2N), 5.55 (1 H, s, PhCHNH), 6.90 (2 H, d, Ar) , 7.30 (3 H, m, Ar) , 7.40 (2 H, m, Ar) , 7.70 (2 H, d, Ar) . Ester ciclopentílico de ácido (S)-{[2-(7-hidroxicarbamoil-h[ heta]ptanoil) -1,2,3, 4-tetrahidro-isoquinolín7- carbonil] -amino} -fenil-acético (15) Componente F utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 550 [M++H]+, xñ RMN (400 MHz, CDCI3) , d 1.30-1.80 (16 H, m, 8 x CH2) , 2.15 (2 H, m, CH2) , 2.45 (2 H, m, CH2) , 2.95 (2 H, m, 2 x CH2) , 3.70-3.90 (2 H, m, 2 x CH2) , 4.60-4.70 (2 H, m, CH2) , 5.25 (1 H, m, C02CH) , 5.70 (1 H, m, PhCHNH), 7.20-7.70 (8 H, m, Ar) . Ácido (S) -{ [2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -1,2,3, 4-tetrahidro-isoquinolin-7-carbonil] -amino}-fenil-acético (16) Componente F utilizado Pureza LCMS 87%, m/z 482 [M++H]+, ? RMN (400 MHz, MeOD), d 1.30-1.50 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.60-1.70 (4 H, m, 2 x CH2), 2.15 (2 H, m, CH2) , 2.50 (2 H, m, CH2) , 2.95 (2 H, m, 2 x CH2) , 3.70 (2 H, m, CH2) , 4.80 (2 Hl m, CH2) , 5.70 (1 H, s, PhCHNH), 7.20- 7.80 (8 H, m, Ar) . Éster ciclopentílico de ácido (S)-[4-(7-hidroxicarbamoil-heptanoylamino) -benzoylamino] -fenil-acético (17) Componente G utilizado Pureza LCMS 94%, m/z 510 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d 1.30-1.80 (16 H, m, 8 x CH2) , 2.00-2.20 (4 H, m, 2 x CH2) , 5.10-5.30 (1 H, m, C02CH) , 5.70 (1 H, m, PhCHNH), 7.30-7.80 (9 H, m, Ar) . Ácido (S) - [4- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -benzoilamino] -fenil-acético (18) Componente G utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 442 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d 1.30-1.40 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.50-1.70 (4 H, m, 2 x CH2), 2.20 (2 H, t, CH2), 2.35 (2 H, t, CH2) , 5.70 (1 H, s, PhCHNH), 7.25-7.40 (3 H, m, Ar) , 7.50 (2 H, d, Ar) , 7.65 (2 H, d, Ar) , 7.80 (2 H, d, Ar) . Éster ter-butílico de ácido (S) -{ [ (R) -2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-3-carbonil] -amino} -fenil-acético (19) Componente A utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 577 [M++H]+, 1ti RMN (400 MHz, CDC13) , d 1.20-1.40 (17 Hl m, 4 x CH2 y C(CH2)3), 2.10 (2 H, m, CH2), 2.45 (2 H, m, CH2) , 3.15-3.60 (2 H, m, CH2) , 4.75 (2 H, m, CH2), 5.35 (2 H, m, PhCHNH y CH) , 6.90-7.50 (9 H, m, Ar) . Síntesis del Compuesto (20) y el Compuesto (21) 20 21 Etapa 1: Éster ciclopentílico de ácido (S) - (4-Nitro-benzyIamino) -fenil-acético Una mezcla de bromuro de 4-nitrobencilo (15 g, 69.4 mmoles), sal de tosil ciclopentiléster de L-fenilglicina (27.1 g, 60.4 mmoles) y carbonato de potasio (19.6 g, 138.8 mmoles) en DMF (250 ml) se agitó a temperatura ambiente por 18 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (300 ml) y se lavó con agua (3 x 200 ml) . La capa de EtOAc se aisló, se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró a sequedad produciendo un aceite de color naranja. Se aisló un peso crudo de 21 g. Pureza LCMS 81%, m/z 355 [M++H]+. Este producto se utilizó sin purificación adicional. Etapa 2: éster ciclopentílico de ácido (S) - [ter-Butoxicarbonil- (4-nitro-bencil) -amino] -fenil-acético A una solución del producto de la Etapa 1 (15 g, 42.37 mmoles) en THF (150 ml) se agregó K2C03 (6.9 g, 50.8 mmoles), seguido por di-t-butildicarbonato (22.2 g, 101.7 mmoles) . Se agregó agua (150 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente por 36 h. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad. El residuo se volvió a disolver en EtOAc (300 ml), se lavó consecutivamente con 0.1 M HCl (150 ml), ac. sat. de NaHC03 y agua (150 ml) . La capa de EtOAc se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró a sequedad produciendo a aceite amarillo. Después de la purificación mediante cromatografía de columna (10% EtOAc/ hexano) el producto el producto se obtuvo como un aceite amarillo transparente (12 g, 62% de rendimiento). Pureza LCMS 95%, m/z 455 [M++H]+, 496 [M++H+41] + . Etapa 3: Éster ciclopentílico de ácido (S)-[(4-Amino-bencil) -ter-butoxicarbonil-amino] -fenil-acético
[0393] Una mezcla del producto de la Etapa 2 (12 g, 26.4 mmoles) y 10% de Pd/C (2.0 g) en EtOAc (350 ml) se hidrogenó a temperatura ambiente por 18 h. El catalizador Pd/C se filtró a través una almohadilla de celite. El filtrado se concentró bajo presión reducida para producir un sólido blanco (10.1 g, 90% de rendimiento). Pureza LCMS 100%, m/z 425 [M++H]+ 466 [M++H+41] + . Etapa 4 : Acoplamiento de la anilina de la Etapa 3 Se dilató la resina 2-clorotritil hidroxilamina derivatizada con ácido subérico (1.0 g, carga de 0.94 mmoles) en DCM anhidro (100 ml). Se agregó 1-Cloro-N, N-2-trimetilopropenilamina (reactivo Ghosez)1 (0.373 ml, 2.82 mmoles, 3 equivalentes) a 0 °C bajo la atmósfera de N2. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó lentamente por 1-2 h. La anilina de la Etapa 3 (1.2 g, 2.82 mmoles, 3 equivalentes) se agregó en porciones durante 20 min. Se agregó Et3N (0.53 ml, 3.76 mmoles, 4 equivalentes). La mezcla se agitó por lh. LCMS después de la división de prueba mostró 70% de conversión, m/z 596 [M++H]+. La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. Etapa 5: éster ciclopentílico de ácido (S)-[4-(7-hidroxicarbamoil-heptanoylamino) -bencilamino] -fenil-acético 20 La resina de Etapa 4 (1.5 g, carga de 0.94 mmoles) se agitó delicadamente en 2% de TFA/DCM (10 ml) por 20 minutos. La resina se filtró. El filtrado se recolectó y se evaporó bajo presión reducida a temperatura ambiente. La resina se volvió a tratar con 2% de TFA/DCM (10 ml) y después de 20 minutos se filtró. Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad bajo presión reducida a temperatura ambiente para dar un residuo. El residuo se dejó reposar en 20% TFA/DCM por 40 minutos. Después de la evaporación a sequedad, también bajo presión reducida a temperatura ambiente, el residuo se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (20) como la sal de TFA, Pureza LCMS 95%, m/z 496 [M++H]+, ?H RMN (400 MHz, DMSO), d: 1.30-1.50 (6 H, m, 3 x CH2) , 1.50-1.70 (8 H, m, 4 x CH2) , 1.80 (2 H, m, CH2) , 2.10 (2 H, t, CH2) , 2.45 (2 H, t, CH2) , 4.1 (2 H, dd, CH2NH) , 5.25 (1 H, m, CHOCO), 5.35 (1 H, m, OCOCHPh) , 7.45 (2 H, d, Ar) , 7.60 (5 H, m, Ar) , 7.80 (2 H, d, Ar) , 10.00-10.10 (2 H, br s), 10.50 (1 Hl S) . Etapa 6: Saponificación de éster ciclopentílico La resina de la Etapa 4 (2.5 g, carga de, 0.94 mmoles, 2.35 mmoles) se suspendió en MeOH (8.7 ml) y THF (8.7 ml) . Se agregó una solución acuosa de 2.7N de NaOH (8.8 ml, 10 equivalentes, 23.5 mmoles) . La mezcla se agitó por 36 h. La LCMS de la división de prueba confirmó la finalización de la reacción, m/z 528 [M++H] + . La resina se filtró y se lavó con agua x 2, MeOH x 2, seguido por el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. Etapa 7: ácido (S) - [4- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -fenil-acético (21) 21 La resina de la Etapa 6 (2.5 g, carga de 0.94 mmoles, 2.35 mmoles) se dividió y se protegió con boc utilizando el procedimiento descrito para la Etapa 5. El producto crudo (0.40 g) se purificó mediante HPLC preparativa dando el compuesto (21) como la sal de TFA. Pureza LCMS 100%, m/z 428 [M++H], lH RMN (400 MHz, CD30D) 7 d: 1.30 (4 H, 2 x CH2) , 1.55 (4 H, 2 x CH2) , 2.00 (2 H, t, CH2) , 2.30 (2 H, t, CH2), 3.90 (1 H, s, NHCH2), 4.05 (2 H, dd, NHCH2), 4.95 (1 H, s, CHPh) , 7.35 (2 H, d, Ar) , 7.40 (5 H, m, Ar) , 7.55 (2 H, d, Ar) . Síntesis del Compuesto (22) y el Compuesto (23) 22 23 Etapa 1: ácido (S) - (4-Nitro-bencensulfonilamino) fenil-acético A una solución de L-fenilglicina (0.227 g, 1.5 mmoles) en agua (5 ml) y dioxano (5 ml) se agregó trietilamina (0.42 ml, 3.0 mmoles) seguido por la lenta adición de cloruro de 4-nitrobencen sulfonilo (0.5 g, 2.3 mmoles) en dioxano (5 ml) a 0°C. Después de agitar por 45 minutos la mezcla de reacción se evaporó a sequedad, se volvió a disolver en EtOAc y se lavó con solución saturada de NaHC03 (2 x 20 ml) y agua (10 ml) . La capa de EtOAc se secó sobre Na2S04, se filtró y se evaporó a sequedad. Pureza LCMS 75%, (no se observó ningún ion molecular) rendimiento 0.58 g, (76%). Este material se utilizó sin ninguna purificación. Etapa 2: éster ciclopentílico de ácido (S)-(4-Nitro-bencensulfonilamino) -fenil-acético A una solución del ácido de la Etapa 1 (4.32 g, 12.8 mmoles) en ciclopentanol (60 ml) at 0°C se agregó lentamente cloruro de tionilo (9.3 ml, 128 mmoles). La mezcla de reacción se agitó y se calentó bajo reflujo a 70°C por 2 horas. El exceso de cloruro de tionilo se removió por evaporación al vacío, la mezcla de reacción se extrajo en EtOAc y se lavó con solución saturada de NaHC03 y se secó sobre Na2S0 , se filtró y se evaporó a sequedad. La purificación con cromatografía de columna con DCM dio el producto requerido (3.6 g, 70% de rendimiento). Pureza LCMS of 100%, (no se observó ningún ion molecular) .
Etapa 3: éster ciclopentílico de ácido (S) - (4-Amino-bencensulfonilamino) -fenil-acético Una mezcla de éster ciclopentílico de ácido (S)-(4-Nitro-bencensulfonilamino) -fenil-acético (5.29 g, 13.1 mmoles) y 10% Pd/C (5.0 g) en EtOAc (350 ml) se hidrogenó bajo presión de balón a temperatura ambiente por 24 h. El catalizador de Pd/C se filtró a través de una almohadilla de celite. El filtrado se concentró bajo presión reducida para producir el producto requerido (4.54 g, 92% de rendimiento). Pureza LCMS 100%, m/z 375 [M++H]+. Etapa 4 : Acoplamiento de anilina La resina de 2-clorotritil hidroxilamina derivatizada con ácido subérico (0.39 g, carga de 1.14 mmoles/g) se dilató en DCM anhidro (25 ml) y a 0°C bajo una atmósfera de N2, se agregó por goteo 1-cloro-N, N, 2-trimetilopropenilamina (0.175 ml, 1.33 mmoles). La mezcla de reacción se agitó por 1.5 horas. Una solución de la anilina de la Etapa 3 (0.5 g, 1.33 mmoles) en DCM (25 ml) se agregó seguido por trietilamina (0.25 ml, 1.76 mmoles) . La mezcla de reacción se agitó por 10 minutos más. La LCMS después de la división de prueba mostró 61% de conversión, m/z 546 [M++H]+. La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío y se utilizó en el siguiente paso. Etapa 5: éster ciclopentílico de ácido (S)-[4-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencensulfonilamino] - fenil-acético (22) La resina de la Etapa 4 (1.12 g, carga de 1.14 mmoles/ g) se agitó delicadamente en 2% de TFA/DCM (10 ml) por 20 minutos. La resina se filtró. El filtrado se recolectó y se evaporó bajo presión reducida a temperatura ambiente. La resina se volvió a tratar con 2% de TFA/DCM (10 ml) y después de 20 minutos se filtró. Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad bajo presión reducida a temperatura ambiente para dar un residuo. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (22) . Pureza LCMS 93%, m/z 546 [M++H]+, ?H RMN (400 MHz, DMSO), d: 1.20-1.68 (16 H, m, 8 x CH2) , 1.93 (2 H, t, CH2) , 2.33 (2H, t, CH2) , 4.80 (1 H, m, CHOCO), 4.81 (1 H, d, OCOCHPh) , 7.27 (5 H, m, Ar) , 7.65 (2 H, d, Ar) , 7.71 (2 H, d, Ar) , 8.67 (1 H, br s), 8.75 (1 H, d) , 10.24 (1 H, s) , 10.34 (1 H, s) . Etapa 6: Saponificación de éster ciclopentílico La resina de la Etapa 4 (1.2 g, carga de 1.14 mmoles/ g) se suspendió en THF (8 ml) y metanol (8 ml) y se agregó 2.7M de hidróxido de sodio (5.1 ml, 13.68 mmoles) . La mezcla se agitó por 48 h. La LCMS de la división de prueba confirmó la finalización de la reacción, m/z 478 [M++H]+. La resina se filtró y se lavó con agua x 2, MeOH x 2, seguido por el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. Etapa 7: ácido (S) - [4- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencensulfonilamino] -fenil-acético (23) La resina de la Etapa 6 (1.2 g, carga de 1.14 mmoles/g) se agitó delicadamente en 2% de TFA/DCM (10 ml) por 20 minutos. La resina se filtró. El filtrado se recolectó y se evaporó bajo presión reducida a temperatura ambiente. La resina se volvió a tratar con 2% de TFA/DCM (10 ml) y después de 20 minutos se filtró. Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad bajo presión reducida a temperatura ambiente para dar un residuo. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (23) . Pureza LCMS 91%, m/z 478 [M+H-H]+, lH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.44 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.62-1.74 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.12 (2 H, t, CH2) , 2.34 (1 H, m, OCOCHPh) , 2.41 (2 H, t, CH2) , 7.25 (5 H, m, Ar) , 7.69 (2 H, d, Ar) , 7.72 (2 H, d, Ar) . Síntesis de los Compuestos (24) y el Compuesto (25) 24 25 Etapa 1: éster metílico de ácido (2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta~carbolín-6-iloxi) -acético Una mezcla de 5-carboximetoxi triptamina (1.24 g, 4.56 mmoles), 36% formaldehido acuoso y MeOH (25 ml) se calentó bajo reflujo por 1.5 h. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad. Se agregó secuencialmente MeOH (50 ml) y TMSCI (1.24 ml) . El reflujo continuó por 1 h. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad y se utilizó en la siguiente Etapa sin purificación. Etapa 2: Amidación Se suspendió La resina de 2-clorotritil hidroxilamina derivatizada con ácido subérico (2.0 g, carga de 1.14 mmoles/g, 2.28 mmoles) en DCM (40 ml) . Se agregó pyBOP (3.56 g) seguido por una solución de DCM (40 ml) de la amina de la Etapa 1 (4.56 mmoles) y DIPEA (3.9 ml, 22.8 mmoles). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 18 h. La LCMS después de la división de prueba confirmó la finalización de la reacción. La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar y se secó vigorosamente. Etapa 3: Saponificación de éster metílico La resina de la Etapa 2 (2.0 g, 1.14 mmoles/g, 2.28 mmoles) se suspendió en una mezcla de THF (10 ml) y MeOH (10 ml) . Se agregó 1.4 M de NaOH (10 ml) durante 5 min. La mezcla se agitó por 18 h. La LCMS después de la división de prueba confirmó la finalización de la reacción. La resina se filtró y se lavó utili zando el procedimiento de lavado estándar . Etapa 4 : Acoplamiento con éster ciclopentílico de La resina de la Etapa 3 (2.0 g, carga de 1.14 mmoles/ g, 2.28 mmoles) se suspendió en DCM (30 ml) . Se agregó pyBOP (3.56 g, 6.84 mmoles), seguido por éster ciclopentílico de L-fenilglicina (2.59 g, 6.84 mmoles) y DIPEA (3.9 ml, 22.8 mmoles). La mezcla se agitó por 18 h. LCMS después de la división de prueba confirmó la terminación de la reacción. La resina se filtró, se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar y se secó bajo vacío. Etapa 5: éster ciclopentílico de ácido (S)-{2-[2-(7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-6-iloxi] -acetilamino}-fenil-acético (24) mmoles/ g, 0.91 mmoles) se dividió utilizando 2% de TFA/ DCM (3 x 10 ml) . El filtrado se evaporó a sequedad a temperatura ambiente bajo presión reducida para dar un residuo oleoso (200 mg) que se purificó mediante HPLC preparativa para dar el compuesto (24) como la sal de TFA. Pureza LCMS 95%, m/z 619 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, DMSO), d: 1.05-1.66 (16 H, m, 8 x CH2) , 1.79 (2 H, m, CH2) , 2.16-2.31 (2 H, m, 2.41-2.56 (2 H, m, CH2) , 3.60 (2 Hl m, CH2) , 4.42 (2 H, s, CH2) , 4.49 (2 H, s, CH2), 4.93 (1 H, m, CHOCO), 5.28 (1 H, m, OCOCHPh), 6.59 (1 H, d, Ar), 6.65 (1 H, s, Ar) , 7.04 (1 H, d, Ar) , 7.21 (5 H, m, Ar) , 8.57 (1 H, m), 10.17 (1 H, s) , 10.58 (1 H, s, Ar) . Etapa 6: Saponificación de éster ciclopentílico La resina de la Etapa 4 (1.0 g, carga de 1.14 mmoles/g, 1.14 mmoles) se saponificó de acuerdo con el procedimiento descrito en la Etapa 3. Etapa 7: éster ciclopentílico de ácido (S)-{2-[2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-6-iloxi] -acetilamino} -fenil-acético (25) La resina de la Etapa 6 (1.0 g, carga de 1.14 mmoles/g, 1.14 mmoles) se dividió y purificó utilizando el procedimiento detallado en la Etapa 5. Compuesto (25) : Pureza LCMS 97%, m/z 551 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.33-1.49 (4 H, m, 2 X CH2) , 1.58- 1.75 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.06-2.17 (2 H, m, CH2) , 2.51-2.60 (2 H, m, CH2), 2.70-2.83 (2 Hl m, CH2) , 3.85-3.96 (2 H, m, CH2) , 4.61 (2 H, m, CH2), 4.78 (2 H, m, CH2) , 5.56 (1 H, s, OCOCHPh), 6.89 (1 H, m, Ar) , 7.00 (1 H, s, Ar), 7.26 (1 H, m, Ar) , 7.35 (5 H, m, Ar) . Síntesis de los siguientes compuestos como se Ejemplifica en el Compuesto (26) y el Compuesto (27) R_etüo 26 R_etilo 29 R= H 27 R= ciclopentilo 28 R= H 30 R= ciclopeníilo 31 R_etilo 32 R_etilo 35 R= H 33 R= H 36 R= ciclopentilo 34 R= ciclopentilo 37 R= H 38 R= ciclopent-lo 39 Síntesis del Compuesto (26) y el Compuesto (27) 26 27 Etapa 1: éster etílico de ácido ;S) -2- (3-Nitro-bencilamino) -3-fenil-propiónico Se disolvió 3-Nitrobencil bromuro (10.0 g, 46 mmoles) en DMF (180 ml) y se agregó carbonato de potasio (12.7 g, 92 mmoles), seguido por clorhidrato de éster etílico de L-fenilalanina de (10.6 g, 46 mmoles). La reacción se agitó por 17 h a temperatura ambiente antes de evaporar a sequedad. El residuo se volvió a disolver en EtOAc (150 ml) y se lavó con agua (3X80 ml) , se secó (Na2S04) se filtró y se concentró a sequedad. Después de la purificación mediante cromatografía de vaporización instantánea (30% EtOAc/ hexano) El producto se obtuvo (3.7 g, 24% de rendimiento). Pureza LCMS 86%, m/z 329 [M++H]+.
Etapa 2: éster etílico de ácido [ S ) -2- [ter-Butoxicarbonil- (3-nitro-bencil) -amino] -3-fenil-propionico Se disolvió la amina de la Etapa 1 (13.4 g, 40.9 mmoles) en THF (250 ml) antes de la adición de carbonato de potasio (8.46 g, 61.4 mmoles) y agua (150 ml). Se agregó Di-tbutil-dicarbonato (35.6. 163 mmoles) y la mezcla de reacción se calentó a 50°C por 18 h. Se agregó DCM, la mezcla resultante se lavó consecutivamente con 0.1 M de HCl (150 ml), NaHC03 ac. sat. y agua (150 ml) . La capa de DCM se secó (Na2S0 ) , se filtró y se concentró a sequedad. Después de la purificación mediante cromatografía de vaporización instantánea (5% EtOAc/ hexano) el producto se aisló (9.4 g, 54% de rendimiento). Pureza LCMS 95%, m/z 428 [M++H]+. Etapa 3: éster etílico de ácido (S) -2- [ (3-Amino-bencil) -ter-butoxicarbonil-amino] -3-fenil-propiónico Se disolvió 1 Carbamato de la Etapa 2 (4.92 g, 11.5 mmoles) en EtOAc (150 ml) antes de la adición del catalizador Pd/C (10% de humedad) (0.8 g) y se hidrogenó bajo presión de balón a temperatura ambiente por 18 h. La mezcla de reacción se filtró a través una almohadilla de celite y se evaporó a sequedad para dar un sólido rojo (4.0 g, 89% de rendimiento) . Pureza LCMS 100%, m/z 399 [M++H]+. Etapa 4 : Acoplamiento a La resina Se dilató la resina 2-clorotritil hidroxilamina derivatizada con ácido subérico (1.0 g, carga de 0.83 mmoles/ g) en DMF (15 ml) y se agregó PyBOP (1.36 g, 2.61 mmoles), seguido por DIPEA (1.5 ml, 8.7 mmoles). La anilina de la Etapa 3 (1.04 g, 2.61 mmoles) se disolvió en DCM (15 ml) y se agregó a la mezcla de reacción. La reacción se agitó por 24 h a temperatura ambiente. LCMS después de la división de prueba indicó 86% de conversión, m/z 570 [M++H] +. La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. Etapa 5: éster etílico de ácido (S)-2-[3-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -3-fenil-propiónico (26) La resina de la Etapa 4 (1.3 g, carga de 0.83 mmoles) se agitó delicadamente en 2% de TFA/DCM (10 ml) por 20 minutos. La resina se filtró. El filtrado se evaporó bajo presión reducida a temperatura ambiente. La resina se volvió a tratar con 2% de TFA/DCM (10 ml) y se filtró después de 20 minutos. Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad bajo presión reducida a temperatura ambiente para dar un residuo oleoso. El residuo se dejó en reposo en 20% de TFA/DCM por 40 minutos. Después de la evaporación a sequedad, también bajo presión reducida a temperatura ambiente, el producto crudo se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (26) . Pureza LCMS 100%, m/z 470 [M++H]+ H RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.08 (3 Hl 1, CH3), 1.35-1.45 (4 H, m, 2 x CH2), 1.60-1.80 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.10 (2 H, t, CH2), 2.40 (2 H, t, CH2), 3.13 (1 H, dd, PhCHH), 3.40 (1 H, dd, PhCHH), 4.11 (2 H, q, CH2CH3), 4.14-4.22 (3 H, m) , 7.20- 7.48 (8 H, m, Ar) , 7.92 (1 H, s, Ar) . Etapa 6: Saponificación La resina de la Etapa 4 (1.4 g, carga de 0.83 mmoles) se suspendió en THF (8.6 ml) y metanol (8.6 ml) y se agregó 1.4M de solución de hidróxido de sodio (8.6 ml, 5.98 mmoles) . La mezcla se agitó por 24 horas antes de que la prueba de división revelará 83% de conversión al ácido requerido, m/z 541 [M++H] . La resina se filtró y se lavó con agua x 2, MeOH x 2, seguido por el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. Etapa 7: ácido (S) -2- [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -3-fenil-propiónico (27) La resina de la Etapa 6 (1.44 g, carga de 0.83 mmoles) se agitó delicadamente en 2% de TFA/DCM (10 ml) por 20 minutos. La resina se filtró. El filtrado se evaporó bajo presión reducida a temperatura ambiente. La resina se volvió a tratar con 2% de TFA/DCM (10 ml) y se filtró después de 20 minutos. Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad bajo presión reducida a temperatura ambiente para dar un residuo oleoso. El residuo se dejó reposar en 20% de TFA/DCM por 40 minutos. Después de la evaporación a sequedad, bajo presión reducida a temperatura ambiente, el producto crudo se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (27). Pureza LCMS 100%, m/z 442 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.35-1.48 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.60-1.78 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.10 (2 H, t, CH2) , 2.40 (2 H, t, CH2) , 3.20 (1 H, dd, PhCHH), 3.28 (1 H, dd, PhCHH), 3.90 (1 H, t, OCOCH) , 4.14 (2 H, m) , 7.15 (1 H, d, Ar) , 7.26 (6 H, m, Ar) , 7.51 (1 H, d, Ar) , 7.73 (1 H s, Ar) .
Los siguientes compuestos se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito para el compuesto (26) y el compuesto (27) Éster ciclopentílico de ácido (S)-2-[3-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -3-fenil-propiónico (28) Pureza LCMS 100%, m/z 510 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.00-1.61 (16 H, m, 8 x CH2) , 1.90 (2 H, t, CH2) , 2.20 (2 H, d, CH2), 2.90 (1 H, dd, PhCHH), 3.20 (1 H, dd, PhCHH), 4.00-4.11 (3 H, m) , 4.91 (1 H, m) , 7.00-7.25 (8 H, m, Ar) , 7.75 (1 H, s, Ar) . Ester etílico de ácido (S)-2-[3-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -4-fenil-butírico (29) Pureza LCMS 100%, m/z 484 [M++H]+ XH RMN (400MHz, MeOD), d: 1.23-1.29 (7 H, m, CH3, 2 x CH2) , 1.53 (2 H, t, CH2) , 1.62 (2 H, t, CH2) , 1.99 (2 H, t, CH2) , 2.11-2.16 (2 H, m, CH2) , 2.28 (2 H, t, CH2) , 2.53-2.61 (1 H, m, CH) , 2.65-2.76 (1 H, m, CH) , 3.80-3.90, (1 H, m, CHC02Et), 4.05 (2H, s, CH2) , 4.21 (2 H, q, CH2), 7.05-7.15 (4 H, m, Ar) , 7.15- 7.22 (2 H, m, Ar), 7.25-7.39 (2 H, m, Ar) , 7.75 (1 H, s, Ar) . Ácido (S) -2- [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -4-fenil-butírico (30) Pureza LCMS 100%, m/z 456 [M++H]+, ?H RMN (400MHzl MeOD), d: 1.27-1.32 (4 H, m, 2 x CH2), 1.53 (2 H, t, CH2) , 1.62 (2 H, t, CH2), 1.99 (2 H, t, CH2) , 2.11-2.16 (2 H, m, CH2), 2.29 (2 H, t, CH2), 2.57-2.64 (1 H, m, CH) , 2.69-2.77 (1 H, m, CH), 3.84-3.87 (1 H, m, CJHC02H), 4.12 (2 H, q, CH2) , 7.09-7.11 (4 H, m, Ar) , 7.16-7.20 (2 H, m, Ar) , 7.27-7.35 (2 H, m, Ar) , 7.78 (1 H, s, Ar) . Éster ciclopentílico de ácido (S)-2-[3-(7-hidroxicarbamoil- eptanoilamino) -bencilamino] -4-fenil-butírico (31) Pureza LCMS 100%, m/z 524 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD) , d: 1.20-1.35 (4 H, m) , 1.45-1.62 (10 H, m) , 1.85 (2 H, m) , 2.00 (2 H, t, CH2), 2.10 (2 H, m) , 2.28 (2 H, t, CH2) , 2.55 (1 H, m) , 2.68 (1 H, m) , 3.88 (1 H, t, OCOCHNH) , 4.11 (2 H, s, CH2Ph), 5.24 (1 H, m) 7.02-7.12 (4 H, m, Ar) , 7.18 (2 H, m, Ar) , 7.30 (2 H, m, Ar) , 7.80 (1 H, s, Ar) . Éster etílico de ácido (S) -3-ter-Butoxi-2- [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -propiónico (32) Pureza LCMS 90%, m/z 466 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.25 (9 H, s, C(CH3)3), 1.35 (3 H, t, CH2CH3) , 1.35- 1.45 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.62-1.76 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.12 (2 H, t, CH2), 2.40 (2 H, t, CH2) , 3.89 (1 H, m) , 3.98 (1 H, m) , 4.20-4.40 (5 H, m) , 7.25 (1 H, d, Ar) , 7.39-7.50 (2 H, m, Ar) , 7.90 (1 H, s, Ar) . Ácido (S) -3-ter-Butoxi-2- [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -propiónico (33) Pureza LCMS 86%, m/z 438 [M++H]+, t RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.20 (9 H, s, C(CH3)3), 1-38 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.57-1.75 (4 H, m ,2 x CH2) , 2.10 (2 H, t, CH2) , 2.39 (2 H, t, CH2), 3.78-3.85 (3 H, m) , 4.26 (2 H, s, CH2Ph) , 7.21 (1 H, d, Ar), 7.39 (1 H, t, Ar) , 7.50 (1 H, d, Ar) , 7.80 (1 H, s, Ar) . Éster ciclopentílico de ácido (S) -3-ter-Butoxi-2- [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -propiónico (34) Pureza LCMS 94%, m/z 506 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.25 (9 H, s, C(CH2)3), 1.33-1.50 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.60-2.00 (12 H, m), 2.13 (2 H, t, CH2) , 2.42 (2 H, t, CH2) , 3.83-4.00 (2 H, m) , 4.18 (1 H, m), 4.28 (2 H, s, CH2Ph) , 5.35 (1 H, m) , 7.25 (1 H, m, Ar) , 7.45 (2 H, m, Ar) , 7.90 (1 H, s, Ar) . Éster ter-butílico de ácido (S)-[3-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -fenil-acético (35) Pureza LCMS 97%, m/z 484 [M++H]+, ?ti RMN (400 MHz, MeOD) , d: 1.30 (13 H, m, 2 x CH2, C(CH3)3), 1.45-1.65 (4 H, m, CH2 x 2) , 1.93-2.05 (2 H, m, CH2) , 2.20-2.40 (2 H, m, CH2) , 3.99 (2 H, q, CH2) , 4.65-4.95 (1 H, m, CH, señal enmascarada) 7.05 (1 H, d, Ar), 7.25-7.33 (2 H, m, Ar) , 7.35-7.50 (5 H, m, Ar) , 7.75 (1 H, s, Ar) . Éster ciclopentílico de ácido (S) - [3- ( 7 -Hidroxica rbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -fenil-acético (36) Pureza LCMS 100%, m/z 496 [M++H]+, XH RMN (400MHz, MeOD), d: 1.30-1.70 (16 H, m, 8 x CH2) , 2.00 (2 H, t, CH2) , 2.30 (2 H, t, CH2) , 4.05 (2 H, dd, CH2NH) , 5.00 (1 H, m, OCOCHPh), 5.15 (1 H, m, CIHOCO) , 7.05 (1 H, m, Ar) , 7.30 (2 H, m, Ar) , 7.40 (5 H, ITil Ar) , 7.75 (1 H, m, Ar) . Ácido (S) - [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -fenil-acético (37) Pureza LCMS 100%, m/z 428 [M++H]+, XH RMN (400MHz, MeOD), d: 1.20-1.35 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.50-1.65 (4 H, m, 2 x CH2), 2.00 (2 H, m, CH2) , 2.30 (2 H, m, CH2) , 4.00 (2 - H, dd, CH2NH) , 4.90 (1 H, m, OCOCHPh), 7.05 (1 H, m, Ar) , 7.25-7.50 (7 H, m, Ar) , 7.70 (1 H, m, Ar) . Ácido (S) -2- [3- (7-Hidroxycarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -4-metil-pentanoicoo (38) Pureza LCMS 91 %, m/z 408 [M++H]+, 1H RMN (400 MHz, MeOD), d: 0.78 (3 H, d, J = 6.6 Hz, CH3), 0.84 Hz (3 H, d, J = 6.6 Hz, CH3), 1.26 - 1.40 (6 H, m, alquilo), 1.49 - 1.70 (5 H, m, CH + 2 x CH2) , 1.95 (2 H, t, J = 7.32, CH2) , 2.25 (2 H, t, J = 7.36, CH2) , 3.00 (1 H, t, J = 6.88 Hz, NHCHCO) , 3.42 (1 H, d, J = 12.7 Hz, CH) , 3.68 (1 H, d, J = 12.5 Hz, CH) , 7.00 (1 H, d, J = 7.6 Hz, Ar) , 7.15 (1 H, t, J = 7.8 Hz, Ar) , 7.30 (1 H, s. Ar) , 7.47 (1 H, br d, Ar) Éster ciclopentílico de ácido (S)-2-[3-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -4-metil-pentanoicoo (39) Pureza LCMS 100%, m/z 476 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 0.85 - 0.95 (6 Hl 2 x d, 2 x CH3) , 1.30 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.50 - 1.70 (13 H, m, alquilo) , 1.75 (2 H, m, CH2) , 2.00 (2 H, t, CH2) , 2.30 (2 H, t, CH2) , 3.90 (1 H, NHCHCO) , 4.10 (2 H, q, CH2) , 5.25, (1 H, m, CH) , 7.10 (1 H, d, Ar) , 7.30 (2 H, m) , 7.80 (1 H, s, Ar) Síntesis del Compuesto (40) y el Compuesto (41) 40 41 Etapa éster ciclopentílico de ácido (S) - (2-Nitro-bencilamino) -fenil-acético Una mezcla de 2-nitrobencil bromuro (15 g, 69.4 mmoles), sal de tosilo del éster ciclopentílico de L-fenilglicina (27.2 g, 69.4 mmoles) y carbonato de potasio (19.2 g, 138.8 mmoles) en DMF (300 ml) se agitó a temperatura ambiente por 18 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (300 ml) y se lavó con agua (3 x 200 ml) . La capa de EtOAc se aisló, se secó (Na2S0 ) , se filtró y se concentró a sequedad produciendo un aceite de color naranja. Se aisló un peso crudo de 24 g. Pureza LCMS 81%, m/z 355 [M++H]+. Este producto se utilizó sin purificación adicional Etapa 2: éster ciclopentílico de ácido (S)-[ter-Butoxicarbonil- (2-nitro-bencil) -amino] -fenil-acético A una solución de éster ciclopentílico de ácido (S) - (2-Nitro-bencilamino) -fenil-acético (24.4 g, 69.1 mmoles) en THF (150 ml) se agregó K2C03 (7.6 g, 69.1 mmoles), seguido por dicarbonato de di-ter-butilo (30.1 g, 138.1 mmoles) . se agregó agua (150 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente por 8 días con más dicarbonato de di-ter-butilo (45. lg, 206.6 mmoles) . La mezcla de reacción se evaporó a sequedad. El residuo de volvió a disolver en EtOAc (300 ml) , se lavó con 0.1 M HCl (150 ml), NaHC03 sat. ac. y agua (150 ml) . La capa de EtOAc se secó (Na2S04), se filtró y se concentró a sequedad produciendo a aceite amarillo. Después de la purificación mediante cromatografía de columna (20% EtOAc/ hexano) El producto se obtuvo como un aceite amarillo claro (15 g, 48% de rendimiento) . Etapa 3: éster ciclopentílico de ácido (S)-[(2- Amino-bencil) -ter-butoxicarbonil-amino] -fenil-acético Una mezcla del carbamato de la de Etapa 2 (4.44 g, 9.78 mmoles) y 10% Pd/C (0.7 g) en EtOAc (130 ml) se hidrogenó a temperatura ambiente por 18 h bajo presión de balón. El catalizador Pd/C se filtró a través una almohadilla de celite. El filtrado se concentró bajo presión reducida para producir un sólido blanco (4.25 g) . Pureza LCMS 100%, m/z 425 [M++H]+ Etapa 4: Acoplamiento de la anilina de la Etapa 3 Se dilató 2-clorotritil hidroxilamina La resina derivatizada con ácido subérico (1.6 g, carga de 0.83 mmoles) en DCM anhidro (100 ml) . 1-Cloro-N, N-2-trimetilopropenilamina (reactivo Ghosez)1 (0.56 ml, 3.3 mmoles, 3 equivalentes) se agregó a 0 °C bajo la atmósfera de N2. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó lentamente por 1-2 h. La anilina de la Etapa 3 (1.4 g, 3.3 mmoles, 3 equivalentes) se agregó en porciones durante 20 min. Et3N (0.76 ml, 4.4 mmoles, 4eq) se agregó. La mezcla se agitó por lh. LCMS después de la división de prueba muestra 97% de conversión, m/z 596 [M++H]+. La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. 1. Ghosez y otros, J. C. S. Chem. Comm., 1979, 1180. Etapa 5: éster ciclopentílico de ácido (S)-[2-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -fenil-acético La resina de la Etapa 4 (1.34 g, carga de 0.83 mmoles) se agitó delicadamente en 2% de TFA/DCM (10 ml ) por 20 minutos. La resina se filtró. El filtrado se recolectó y se evaporó bajo presión reducida a temperatura ambiente. La resina se volvió a tratar con 2% de TFA/DCM (10 ml) y después de 20 minutos se filtró. Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad bajo presión reducida a temperatura ambiente para dar un residuo. El residuo se dejó reposar en 20% de TFA/DCM por 40mins. Después de la evaporación a sequedad, también bajo presión reducida a temperatura ambiente, el residuo se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto 40 como la sal de TFA, Pureza LCMS 100%, m/z 496 [M++H]+, XH RMN (400MHz, MeOD), d: 1.40-2.00 (16 H, m, 8 x CH2), 2.15 (2 H, m, CH2) , 2.45 (2 H, m, CH2) , 3.95 (1 H, d, CH2NH) , 4.20 (1 H, d, CH2NH) , 5.20 (1 H, m, OCOCHPh), 5.35 (1 H, m, CHOCO), 7.25 (1 H, m, Ar) , 7.40 (1 H, m, Ar) , 7.50-7.60 (7 H, m, Ar) .
Etapa 6: Saponificación La resina de la Etapa 4 (2.0 g, carga de, 0.83 mmoles, 2.35 mmoles) se suspendió en MeOH (6.1) y THF (6.1 ml) . Se agregaron 2.7 N NaOH (ac, 6.1 ml). La mezcla se agitó por 5 días. LCMS de la división de prueba confirmó la finalización de la reacción, m/z 528 [M++H] + . La resina se filtró y se lavó con agua x 2, MeOH x 2, seguido por el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío . Etapa 7: compuesto de ácido (S)-[2-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -fenil-acético (41) Se div la resina de la Etapa 6 (2.0 g, carga de 0.83 mmoles) y protegidas con boc utilizando el procedimiento descrito para la Etapa 5. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto (41) como la sal de TFA. Pureza LCMS 98%, m/z 428 [M++H]+, XH RMN (400MHz, MeOD), d: 1.25-1.35 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.50-1.65 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.00 (2 H, m, CH2) , 2.30 (2 H, m, CH2) , 3.80 (1 H, d, CJH2NH), 4.10 (1 H, d, CH2NH) , 5.00 (1 H, m, OCOCHPh), 7.10 (1 H, m, Ar) , 7.30 (1 H, m, Ar) , 7.40-7.50 (7 H, m, Ar) . Síntesis del Compuesto (42) y el Compuesto (43) Etapa 1: Éster bencílico de ácido 1,3,4,9-tetrahidro-beta-carbolín-1, 2-dicarboxílico Una solución de ácido 1, 2 , 3, 4-tetrahidrocarbolín-l-carboxílico (5 g, 23.1 mmoles) en dioxano (25 ml) y 2M NaOH (23 ml, 46 mmoles) se enfrió a 0°C. Se agregó Bencil cloroformiato (3.95 ml, 27 mmoles) lentamente. Después de agitar a temperatura ambiente por 1 h adicional se agregó bencil cloroformiato (1.4 ml, 9.5 mmoles). Después de 2.5 h la mezcla de reacción se lavó con éter. La capa acuosa se acidificó a un pH de 2 y se extrajo con DCM, se secó (MgS04) , se filtró y se evaporó a sequedad produciendo una primera cosecha del material como un sólido amarillo con una pureza LCMS de 79%, m/z 351 [M++H]+. La cosecha inicial se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo una segunda cosecha del material después de la concentración de las capas de éter para dar un producto crudo adicional. El material crudo se purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea eluyendo con DCM a 20% 2M de NH3 metanólico, 80% de DCM produciendo el compuesto adicional protegido con Cbz (rendimiento 49%) a una Pureza LCMS de 82%, m/z 351 [M++H]+. Etapa 2: Éster bencílico de ácido 1- (Metoxi-metil-carbanmoil) -1,3,4, 9-tetrahidro-beta-carbolín-2-carboxílico Se disolvió éster 2-bencílico de ácido 1,3,4,9-tetrahidro-beta-carbolín-1-dicarboxílico (3 g, 8.4 mmoles) en DCM anhidro (30 ml) y se agregó trietilamina (5.22 ml, 37.8 mmoles) . A esta solución se agregó HOBt (2.848 g, 21.4 mmoles), EDCl (4.08 g, 21.4 mmoles) clorhidrato y N,0-dimetilhidroxilamina (1.86 g, 19.1.mmoles) . Después de agitar a temperatura ambiente por 2 h la mezcla de reacción se evaporó a sequedad, se volvió a disolver en EtOAc y se lavó con solución de NaHC03 saturada (2 X 100 ml) y agua (50 ml) .
La capa de EtOAc se secó (Na2S04) , se filtró y se evaporó a sequedad. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando DCM a 3%de metanol/DCM dio la amida Weinreb requerida (rendimiento 40%). Pureza LCMS 85%, m/z 394 [M++H]+ Etapa 3: éster bencílico de ácido 1-Formil-l, 3, 4 , 9-tetrahidro-beta-carbolín-2-carboxílico Una solución de éster bencílico de ácido 1,3,4,9-tetrahidro-beta-carbolín-1-dicarboxílico (3.7 mg, 9.4 mmoles) en THF (100 ml) bajo N2 se enfrió a -78°C. Se agregó 1.5M de DIBAL en solución de tolueno (31.2 ml, 47 mmoles) durante 2 horas. Después de agitar por 4 horas la mezcla de reacción se extinguió con metanol y agua, se extrajo en EtOAc y se lavó con HCl acuoso diluido. La capa orgánica se secó sobre Na2S04, se filtró y se evaporó a sequedad. Pureza LCMS 50%, m/z 335 [M+H] +. El material se utilizó en la siguiente Etapa sin purificación adicional . Etapa 4: éster bencílico de ácido 1-{[((S)-Ciclopentiloxicarbonil-fenil-metilo) -amino] -metil }-l, 3,4,9- tetrahidro-beta-carbolín-2-carboxílico Una mezcla de éster bencílico de ácido 1-Formil-1, 3, 4 , 9-tetrahidro-beta-carbolín-2-carboxílico (1 g, 3 mmoles), acetato de sodio (0.68 g, 87.4 mmoles), sal de tosilo de éster ciclopentílico de L-fenilglicina (1.16 g, 3 mmoles), cianoborohidruro de sodio (0.26 g, 4.2 mmoles) y tamices moleculares en IPA (100 ml) se agitó a temperatura ambiente por 1 hora. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad, se volvió a disolver en EtOAc y se lavó secuencialmente con solución saturada de NaHC03 y salmuera. La capa de EtOAc se secó sobre MgS04, se filtró y se evaporó a sequedad. Pureza LCMS of 39%, m/z 538 [M++H]+. El material crudo se llevó a la siguiente Etapa sin purificación adicional . Etapa 5: éster bencílico de ácido l-{[ter-Butoxicarbonil- ( (S) -ciclopentiloxicarbonil-fenil-metilo) -amino] -metil } -1, 3, 4 , 9-tetrahidro-beta-carbolín-2-carboxílico A una solución agitada de la amina de la Etapa 4 (1.08 g, 2.0 mmoles), en THF (20 ml) se agregó carbonato de potasio (0.42 g, 3.0 mmoles) y decarbonato de di-ter-butilo (1.75 g, 8.0 mmoles) . La mezcla de reacción se agitó a 50°C por 96 horas y se enfrió temperatura ambiente, se diluyó con DCM (50 ml) y se lavó con solución de 0.1 M HCl (25 ml) , solución de NaHC03 saturada (2 X 25 ml) y agua (15 ml) . La capa de DCM se secó, Na2S04, se filtró y se evaporó a sequedad. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando 10% EtOAc/ heptano dio el producto (0.89 g 70% de rendimiento). Pureza LCMS of 79%, m/z 638 [M++H]+. Etapa 6: éster ciclopentílico de ácido (S) - [ter-Butoxicarbonil- (2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-1-ilmetilo) -amino] -fenil-acético Una solución del dicarbamato de la Etapa 5 (0.5 g, 0.78 mmoles) en etanol (40 ml) se agitó bajo la atmósfera de hidrógeno en la presencia de 10% Pd/C (0.4 g) por 2 h bajo presión de balón. La mezcla de reacción se filtró a través una almohadilla de celite y se evaporó a sequedad produciendo el producto requerido (0.35 g, 90%), 91% de pureza mediante LCMS, m/z 504 [M++H]+. Etapa 7 : Acoplamiento de la amina de Etapa 6 Se dilató 2-clorotritil hidroxilamina La resina derivatizada con ácido subérico (703 mg, carga de 0.83 mmoles/g) en DCM (12 ml). PyBOP (912mg, 1.75 mmoles) se agregó, seguido por la amina de la Etapa 6 (325mg, 0.64 mmoles) y DIPEA (1.01 ml, 5.8 mmoles) . La mezcla de reacción se agitó por 18 horas. La LCMS del material después de la prueba de separación indicó 80% de conversión m/z 675 [M++H]+. La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. Etapa 8: éster ciclopentílico de ácido (S)-{[2-(7-hidroxicarbamoi1-heptanoi1) -2,3,4, 9-tetrahidro-iH-beta-carbolín-1-ilmetilo] -amino } -fenil-acético (42) La resina de la Etapa 7 (135 mg, carga de 0.83 mmoles) se agitó delicadamente en 2% de TFA/DCM (10 ml) por 20 minutos. La resina se filtró. El filtrado se evaporó bajo presión reducida a temperatura ambiente. La resina se volvió a tratar con 2% de TFA/DCM (10 ml) y se filtró después de 20 minutos. Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad bajo presión reducida a temperatura ambiente para dar un residuo oleoso. El residuo se dejó reposar en 20% de TFA/DCM por 40 minutos. Después de la evaporación a sequedad, también bajo presión reducida a temperatura ambiente, el producto crudo se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (42) como la sal de TFA, Pureza LCMS 91%, m/z 575 [M++H]+, XH RMN (400MHz, MeOD), d: 1.30-1.70 (16 H, m, 8 x CH2) , 2.00 (2 H, m, CH2) , 2.50 (2 H, m, CH2) , 2.75 (2 H, m, CH2) , 3.30-3.50 (2 H, m, CH2) , 4.15 (1 H, m, CH2CH) , 4.80 (2 H, m, CH2NH, señal enmascarada), 5.25 (1 H, m, CHOCO), 6.00 (1 H, m, OCOCHPh), 6.90 (1 H, m, Ar) , 7.00 (1 H, m, Ar) , 7.20 (1 H, m, Ar), 7.30 (1 H, m, Ar) , 7.45 (5 H, m, Ar) . Etapa 9: Saponificación del éster ciclopentílico La resina de la Etapa 7 (395 mg, carga de 0.83 mmoles) se suspendió en THF (1.5 ml) y metanol (1.5 ml) y se agregó 1.4 M de solución de hidróxido de sodio (ac.) (1.17 ml, 1.6 mmoles) . La mezcla se agitó por 8 días. La separación de prueba indicó 86% de conversión al ácido, m/z 607 [M++H] . La resina se filtró y se lavó con agua x 2, MeOH x 2, seguido por el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío.
Etapa 10: ácido (S) - { [2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-l-ilmetilo] -amino} -fenil-acético (43) La resina de la Etapa 9 (lOOmg, carga de 0.83 mmoles) se dividió y se desprotegió con boc utilizando el procedimiento descrito para la el compuesto (42) . La purificación a través de HPLC preparativa dio el compuesto (43) como la sal de TFA, Pureza LCMS 96%, m/z 507 [M++H]+, XH RMN (400MHz, MeOD), d: 1.25-1.40 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.50-1.65 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.00 (2 H, m, CH2) , 2.50 (2 H, m, CH2) , 2.70 (2 H, m, CH2) , 3.40 (2 H, m, CH2), 4.15 (1 H, m, CH2CjH), 4.80 (2 H, m, CH2NH, señal enmascarada) , 6.00 (1 H, m, OCOCHPh) , 6.90 (1 H, m, Ar) , 7.00 (1 H, m, Ar) , 7.20 (1 H, m, Ar) , 7.30-7.50 (6 H, m, Ar) .
Síntesis de los siguientes compuestos como se Ejemplifica a través de el Compuesto (44) y el Compuesto (45) R= ciclopentilo 44 R= etilo 47 R= H 45 R= ciclopentilo 48 R= Et 46 R= H 49 R = = etilo 55 R= : ciclopentilo 56 R= etilo 58 R= = H 57 R= H 59 R= aclopentilo 60 R= actopentílo 62 R= H 61 R= H 63 R= ciclopentilo 64 R= H 65 Preparación de los Componentes H-L Componente H Se llevaron juntos a reflujo ácido (S)-l, 2,3,4-tetrahidroisoquinolin-3-carboxílico (10 g, 56 mmoles), TMSCI (39 ml, 310 mmoles) y metanol (500 ml) (a 70°C) por 2 horas.
La mezcla de reacción se evaporó a sequedad y el análisis LCMS indicó 100% de conversión al Componente de éster metílico de ácido (S) -1, 2 , 3, 4-tetrahidro-isoquinolín-3-carboxílico, m/z 192 [M++H]+.
Componente I Se llevaron a reflujo juntos DL-Prolina (10 g, 87 mmoles), TMSCI (51 ml, 430 mmoles) y metanol (500 ml) (a 70°C) por 2 horas. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad y El análisis LCMS indicó 100% de conversión al producto deseado de éster metílico de ácido pirrolidín-2-carboxílico, m/z 130 [M++H] + . Componente J etapa 1 etapa 2 Etapa 1 y Etapa 2 Se agregó ácido (R) -2-Ftaoc-l,2,3,4-tetrahidronorharmano-S-carboxílico (2. 0 g, 9.25 mmoles) a una solución de TMSCI (6 ml, 47.17 mmoles) en metanol (100 ml) y se calentó bajo reflujo por 2 horas. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad para dar 1.7 g de producto (100% de conversión a través de LCMS, m/z 453 [M++H]+) . El éster del a Etapa 1 (1.7 g) se trató con 20% de piperidina en DCM (100 ml) por 30 minutos para efectuar la remoción de fmoc. La mezcla de reacción cruda se evaporó a sequedad, se disolvió en DCM y se lavó con solución de NaHC03 saturada. La capa de DCM se aisló, se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró a sequedad. La purificación mediante cromatografía de columna se realizó utilizando 3% de MeOH/DCM para dar éster metílico de ácido (S) -2, 3, , 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-4-carboxílico. LCMS 100%, m/z 231 [M++H]+. Componente K Se obtuvo Metil-3-aminobenzoato de fuentes comerciales. Componente Etapa 1 Una solución de ácido glioxílico monohidratado (1.51g, 16.4 mmoles) en agua (10 ml) se agregó por goteo a una solución agitada de triptamina. HCl (3.0 g, 15.3 mmoles) en agua (200 ml) . Se agregó KOH (0.827 g, 14.7 mmoles) en agua (10 ml) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 1 h después de lo cual ocurrió la precipitación. Después de la filtración bajo presión reducida el precipitado blanco se recolectó y se lavó con agua para formar ácido 2,3,4,9-tetrahidro-IH-beta-carbolín-i-carboxílico Rendimiento 1.9 g (58%); m/z 217 [M++H] +. Etapa 2 Una solución de 1, 2, 3, 4-tetrahidro-beta-carbolín-i-carboxílico ácido (7 . 4 g) en MeOH (250 ml) se saturó con gas HCl por 20 min. La mezcla de reacción se agitó lentamente a temperatura ambiente por 18 h. La mezcla de reacción se volvió a tratar con gas HCl y se dejó en agitación por 18 h más . Después de la finalización de la reacción la mezcla se concentró al vacío para producir el componente L, Pureza LCMS 95%, m/z 231 [M++H] + . El producto éster metílico de ácido (2, 3, 4 , 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-l-carboxílico) se utilizó sin purificación adicional . Síntesis de los siguientes Compuestos Ejemplificados a través de el Compuesto ( 44 , R = ciclopentilo) y el compuesto ( 45 , R = H) Etapa 1: Carga de la amina sobre la resina Se dilató la resina 2-clorotritil hidroxilamina derivatizada con ácido subérico (6.6 g, carga de 0.83 mmoles) en DCM anhidro (65 ml) . Se agregó PyBOP (8.6 g, 16.43 mmoles), el componente A de amina (3.7 g, 16.43 mmoles) y DIPEA (9.5 ml, 58.4 mmoles) . La reacción se agitó por 24 horas a temperatura ambiente. La LCMS de la separación de prueba del material indicó la finalización de la reacción. La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. Etapa 2: Saponificación de éster metílico La resina enlazada al éster de la Etapa 1 (6.95 g, carga de 0.83 mmoles/ g) se suspendió en THF (25 ml) y metanol (25 ml). Se agregó Hidróxido de sodio, 1. M solución acuosa (25 ml) . La mezcla se agitó por 48 horas y además se agregó hidróxido de sodio (25 ml) después de 24 horas. La LCMS de la división de prueba del material indicó 65% de conversión al ácido m/z 349 [M++H]+. La resina se filtró y se lavó con agua x 2, MeOH x 2, seguido por el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío.
Etapa 3: Acoplamiento con éster ciclopentílico de L-fenilglicina Se dilató la resina enlazada a ácido carboxílico de la Etapa 2 (2.2 g, carga de 0.83 mmoles/ g) en DCM anhidro (25 ml). Se agregó PyBOP (2.85 g, 5.48 mmoles), sal de tosilo de éster ciclopentílico de L-fenilglicina (2.14 g, 5.48 mmoles) y DIPEA (3.17 ml, 18.3 mmoles). La mezcla se agitó por 24 horas a temperatura ambiente. La LCMS después de la prueba de división reveló 52% de conversión, m/z 550 [M++H]+. La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío Etapa 4: éster ciclopentílico de ácido (S)-{[(S)-2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -1,2,3, 4-tetrahidro-isoquinolín 3-carbonil] -amino } -fenil-acético (44) 44 La resina de la Etapa 3 (2.2 g, carga de 0.83 mmoles) se agitó delicadamente en 2% de TFA/DCM (10 ml) por 20 minutos. La resina se filtró. El filtrado se recolectó y se evaporó bajo presión reducida a temperatura ambiente. La resina se volvió a tratar con 2% TFA/DCM (10 ml) y después de 20 minutos se filtró. Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad bajo presión reducida a temperatura ambiente para dar un residuo. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (44) como la sal de TFA. Pureza LCMS 95%, m/z 550 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.12-1.75 (16 H, m, 8 x CH2) , 1.92-2.02 (2 H, m, CH2) , 2.09-2.30 (1 H, m) , 2.48 (1 H, m) , 3.10 (2 H, m, CH2) , 4.58-4.66 (2 H, m, CH2) , 4.82 (1 H, m) , 5.04 (1 H, m) , 5.20 (1 H, s, OCOCHPh), 6.95-7.20 (9 H, m, Ar) . Etapa 5- Saponificación de éster ciclopentílico La resina de la Etapa 3 (1.3 g, 1.13 mmoles) se suspendió en THF (4.6 ml) y metanol (4.6 ml). Se agregó Hidróxido de sodio como una solución acuosa de 1.4M (4.6 ml) . La mezcla se agitó por 24 horas. LCMS de la división de prueba de material confirmó la conversión al ácido requerido. La resina se filtró y se lavó con agua x 2, MeOH x 2, seguido por el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. Etapa 6: ácido (S) - { [ (S) -2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -1,2,3, 4-tetrahidro-isoquinolín-3-carbonil] -amino} -fenil-acético La resina de la Etapa 5 (1.3 g, carga de 0.83 mmoles) se agitó delicadamente en 2% de TFA/DCM (10 ml) por 20 minutos. La resina se filtró. El filtrado se recolectó y se evaporó bajo presión reducida a temperatura ambiente. La resina se volvió a tratar con 2% TFA/DCM (10 ml) y después de 20 minutos se filtró. Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad bajo presión reducida a temperatura ambiente para dar un residuo. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (45) . Pureza LCMS 96%, m/z 482 [M++H]+, *H RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.12-1.38 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.45-1.61 ( 4 H, m, CH2) , 1.98 (2 H, m, CH2) , 2.10-2.58 (2 H, m, CH2) , 3.04-3.20 (2 H, m, CH2) , 4.48- 4.65 (2 H, m) , 4.85 (1 H, m) , 5.20 ( 1 H, m) , 6.92-7.25 (9 H, m, Ar) . Los siguientes compuestos se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito para el compuesto (44) y el compuesto (45) Éster etílico de ácido (S) -{ [ (S) -2- (7-hidroxicarbamoil- eptanoil) -1,2,3, 4-tetra idro-isoquinolin-3-carbonil] -amino} -fenil-acético (46) Componente H utilizado Pureza LCMS 97%, m/z 510 [M+H-H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD) , d: 1.19 (3 H, t, CH3), 1.32-1.48 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.54-1.73 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.02-2.15 (2 H, m, CH2) , 2.50-2.70 (2 H, m, CH2) , 3.10-3.30 (2 H, m, CH2) , 4.10 (2 H, m, CH2), 4.70 (2 H, m) , 4.95 (1 H, m) , 5.35 (1 H, s, OCOCHPh) , 7.10-7.40 (9 H, m, Ar) . Éster etílico de ácido (S) -2-{ [ (S) -2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -1,2,3, 4-tetrahidro-isoquinolin-3-carbonil] -amino} -3-fenil-propiónico (47) Componente H utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 524 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.20 (3 H, m, CH3), 1.30-1.49 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.55-1.70 (4 H, m, CH2), 2.10 (2 H, m, CH2) , 2.60 (2 H, m) , 2.88-3.25 (4 H, m) , 4.08-4.20 (2 H, m, CH2) , 4.45-4.62 (2 H, m) , 4.75 (1 H, m) , 5.03 (1 H, m) , 7.09-7.32 (9 H, m, Ar) . Ácido (S) -2- { [ (S) -2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -1,2,3, 4-tetrahidro-isoquinolín-3-carbonil] -amino} -3-fenil-propiónico (48) Componente H utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 564 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.25-1.85 (16 H, m, 8 x CH2) , 2.10 (2 H, m, CH2) , 2.55 (2 H, t, CH2) , 2.85-3.20 (4 H, m) , 4.40-4.60 (2 H, m) , 4.75 (1 H, m) , 4.95-5.15 (2 H, m) , 7.05-7.30 (9 H, m, Ar) . Ácido (S) -2-{ [ (S) -2- (7-Hidroxicarbamoil-heptanoil) -1,2,3, 4-tetrahidro-isoquinolín-3-carbonil] -amino} -3-fenil-propiónico (49) Componente H utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 496 [M++H]+, H RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.10-1.31 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.40-1.55 (4 H, m, 2 x CH2), 1.98 (2 H, m, CH2) , 2.43 (2 H, m, CH2) , 2.75- 3.10 (4 H, m) , 4.30-4.75 (3 H, m) , 4.90 (1 H, m) , 6.90-7.15 (9 H, m, Ar) . Ester etílico de ácido (S) -2-{ [ (S) -2- (7-Hidroxicarbamoil-heptanoil) -1,2,3, 4-tetrahidro-isoquinolín-3-carbonil] -amino} -4-metil-pentanoico (50) Componente H utilizado Pureza LCMS 98%, m/z 490 [M++H]+, XH RMN (400MHz, MeOD), d: 0.60 (1 H, m, CH) , 0.70-0.85 (6 H, m, 2 x CH3) , 1.25 (3 H, t, CH2CH3), 1.38-1.65 (10 H, m, 5 x CH2) , 2.10 (2 H, m, CH2) , 2.60 (2 H, m, CH2) , 3.20 (2 H, m, CH2) , 4.10 (2 H, q, CH2CH3), 4.35 (1 H, m, CH) , 4.70-4.80 (2 H, m, CH2) , 4.95 (1 H, m, CH) , 7.23-7.25 (4 H, m, Ar). Éster ciclopentílico de ácido (S) -2-{ [ (S) -2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -1,2,3, 4-tetrahidro-isoquinolín-3-carbonil] -amino }-4-metil-pentanoico (51) Componente H utilizado Pureza LCMS 96%, m/z 530 [M+H-H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 0.75 (3 H, d, CH3), 0.88 (3 H, d, CH3), 1.30-1.90 (19 H, m) , 2.10 (2 H, t, CH2) , 2.60 (2 H, m, CH2) , 3.15- 3.30 (2 H, m, CH2), 4.30 (1 H, m) , 4.65-4.85 (2 H, m) , 4.95 (1 H, m) , 5.10 (1 H, m) , 7.15-7.28 (4 Hl m, Ar) . Éster etílico de ácido (S) -2-{ [ (S) -2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -1,2,3, 4-tetrahidro-isoquinolín-3-carbonil] -amino} -4-metil-pentanoicoo (52) Componente H utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 462 [M++H]+, :H RMN (400MHz, MeOD), d: 0.60 (1 H, m, CH) , 0.70-0.85 (6 H, m, 2 x CH3) , 1.38-1.65 (10 H, m, 5 x CH2) , 2.10 (2 H, m, CH2) , 2.40- 2.60 (2 H, m, CH2), 3.20 (2 H, m, CH2) , 4.35 (1 H, m, CH) , 4.70-4.80 (2 H, m, CH2) , 4.95 (1 H, m, CH, señal enmascarada), 7.23-7.25 (4 H, m, Ar) . Éster ciclopentílico de ácido (S)-{[l-(7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -pirrolidín-2-carbonil] -amino} -fenil-acético (53) Componente I utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 488 [M++H]+, ?H RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.30-2.45 (24 H, m) , 3.50-3.70 (2 H, m, CH2) , 4.55 (1 H, m, CH) , 5.18 (1 H, m, CH) , 5.40 (1 H, m, CH) , 7.40 (5 H, m, Ar) . Ácido (S) -{ [1- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -pirrolidín-2-carbonil] -amino}- fenil-acético (54) Componente I utilizado Pureza LCMS 90%, m/z 420 [M++H]+, 1H RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.20-1.20 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.45-1.56 (4 H, m, CH2), 1.75-2.35 (8 H, m) , 3.35-3.60 (2 H, m) , 4.45 (1 H, m) , 5.35 (1 H, m) , 7.18-7.35 (5 H, m, Ar) . Ester etílico de ácido (S) -2-{ [1- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -pirrolidín-2-carbonil] -amino} -3-fenil-propiónico (55) Componente I utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 462 [M++H]+, 1ti RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.20-2.20 (19 H, m) , 2.94-3.20 (2 H, m, CH2Ph) , 3.48-3.69 (2 H, m, CH2N), 4.10-4.25 (2 H, m, CH2CH3) , 4.33-4.49 (1 H, m) , 4.60-4.79 (1 H, m) , 7.20-7.35 (5 H, m, Ar) . Éster ciclopentílico de ácido (S) -2-{ [1- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -pirrolidín-2-carbonil] -amino} -3-fenil-propiónico (56) Componente I utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 502 [M++H]+, XH RMN (400MHz, MeOD), d: 1.27-2.23 (22 H, m, 11 x CH2) , 2.35 (2 H, m, CH2) , 2.97-3.27 (2 H, m, CjH2Ph), 3.53-3.63 (2 H, m, CH2) , 4.35-4.45 (1 H, m, CH) , 4.60-4.70 (1 H, m, CHCH2Ph) , 5.10-5.20 (1 H, m, CHOCO), 7.23-7.30 (5 H, m, Ar) . Ácido (S) -2-{ [1- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -pirrolidín-2-carbonil] -amino}-3- fenil-propiónico (57) Componente I utilizado Pureza LCMS 90%, m/z 434 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.30-1.41 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.55-1.69 (4 H, m, 2 x CH2), 1.80-1.90 (8 H, m) , 2.91-3.26 (2 H, m) , 3.45- 3.70 (2 H, m) , 4.40 (1 H, m) , 4.72 (1 H, m) , 7.16-7.30 (5 H, m, Ar) . Éster ciclopentílico de ácido (S) -2-{ [ (S) -2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-4-carbonil] -amino} -3-fenil-propiónico (58) Componente J utilizado Pureza LCMS of 100%, m/z 563 [M++H]+, 1H RMN (400 MHz MeOD), d: 1.10-1.30 (3H, m, CH3), 1.35-1.80 (8H, m, 4 X CH2), 2.15 (2H, m, CH2) , 2.4-2.65 (2H, m, CH2) , 2.95- 3.20 (3H1 m) , 4.0-4.2 (2H, m CH20) , 4.3-5.0 (4H1 m señal enmascarada), 5.05-5.20 (1 H, m CHOCO), 6.90-7.50 (9H, m, Ar) . Ácido (S) -2-{ [ (S) -2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín-4-carbonil] -amino} -3-fenil-propiónico (59) Componente J utilizado Pureza LCMS of 100%, m/z 535 [M++H]+, XH RMN (400 MHz MeOD), d: 1.20-1.40 (4H1 m, 2 X CH2) , 1.45-1.65 (4H, m, 2 X CH2), 1.90-2.10 (2H, m, CH2) , 2.30-2.50 (2H, m, CH2) , 2.70- 3.15 (3H, m) , 4.2-4.9 (4H, m señal enmascarada), 5.00 (1 H, m CHOCO), 6.75- 7.40 (9H, m, Ar) . Éster ciclopentílico de ácido (S)-[3-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -benzoylaminoj -fenil-acético (60) Componente K utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 510 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.28 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.40-1.80 (12 H, m, 6 x CH2) , 1-98 (2 H, t, CH2), 2.27 (2 H, t, CH2) , 5.12 (1 H, m) , 5.50 (1 H, s, OCOCHPh), 7.21-7.32 (4 H, m, Ar) , 7.36 (2 H, m, Ar) , 7.45 (1 H, d, Ar) , 7.61 (1 H, d, Ar) , 7.90 (1 H, s, Ar) . Ácido (S) - [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -benzoylamino] -fenil-acético (61) Componente K utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 442[M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.21-1.34 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.48-1.63 (4 H, m, 2 X CH2), 1.98 (2 H, t, CH2), 2.26 (2 H, t, CH2) , 5.55 (1 H, s, OCOCHPh), 7.20-7.32 (4 H, m, Ar) , 7.40 (2 H, d, Ar), 7.48 (1 H, d, Ar), 7.64 (1 H, d, Ar) , 7.89 (1 H, s, Ar) . Éster ciclopentílico de ácido (S)-2-[3-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -benzoylamino] -4-metil-pentanoico (62) Componente K utilizado Pureza LCMS 93%, m/z 490 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD) , d: 0.84 (3 H, d, CH(CIH2) ) , 0.88 (3 H, d, CH(CH2) ) , 1.20-1.40 (4 H, m, 2 X CH2) , 1.40-1.85 (15 H, m, 6 x CH2, CH(CH2)2, CH2CH(CH2)2) , 2.00 (2 H, t, CH2) , 2.25 (2 H, t, CH2) , 4.45 (1 H, m, OCOCHCH2), 5.10 (1 H, m, CHOCO), 7.25 (1 H, m Ar) , 7.40 (1 H, d, Ar) , 7.60 (1 H, d, Ar) , 7.90 (1 H, s, Ar) . Ácido (S) -2- [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -benzoylamino] -4-metil- pentanoico (63) Componente K utilizado Pureza LCMS 97%, m/z 422 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.03 (3 H, d, CH(CH2)), 1.06 (3 H, d, CH(CH2)), 1.40-1.55 (4 H, m, 2 X CH2) , 1.65-1.95 (7 H, m, 2 x CH2, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2) , 2.15 (2 H, t, CH2), 2.45 (2 H, t, CH2), 4.70 (1 H, m, OCOCHCH2), 7.45 (1 Hl m, Ar) , 7.60 (1 H, d, Ar) , 7.80 (1 H, d, Ar) , 8.05 (1 H, s, Ar) . Éster ciclopentílico de ácido (S) -2-{ [2- (7--hidroxicarbamoil-heptanoil) -2,3,4, 9-lH-beta-carbolín-l-carbonil] -amino} -3-fenil-propiónico (64) Componente L utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 603 [M++H]+, 1H RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.18-1.71 (16 H, m, 8 x CH2) , 2.00 (2 H, t, CH2) , 2.45 (2 H, m) , 2.70 (2 H, m) , 2.90-3.11 (2 H, m) , 3.40 (1 H, m) , 4.10 (1 H, m) , 4.50 (1 H, m) , 5.00 (1 H, m) , 5.95 (1 H, m) , 6.90-7.11 (7 H, m, Ar) , 7.25 (1 H, d, Ar) , 7.34 (1 H, d, Ar) . Ácido (S) -2-{ [2- (7-hidroxicarbamoil-heptanoil) -2,3,4, 9-tetrahidro-lH-beta-carbolín- 1-carbonil] -amino} -3-fenil-propiónico (65) Componente L utilizado Pureza LCMS 91 %, m/z 535 [M++H]+, 1H RMN (400 MHz, MeOD d: 1.15-1.32 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.40-1.60 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.98 (2 H, t, CH2), 2.41 (2 H, m) , 2.69 (2 H, m) , 2.90-3.11 (2 H, m) , 3.30 (1 H, m) , 4.06 (1 H, m) , 4.60 ( 1 H, m) , 5.92 (1 H, m) , 6.84 (7 H, m, Ar) , 7.20 (1 H, d, Ar) , 7.31 (1 H, d, Ar) . Síntesis del Compuesto (66) y el Compuesto (67) Etapa 1: éster metílico de ácido 5-Amino-nicotínico Se suspendió ácido 5-Aminonicotínico (1 g, 7.2mmmoles) en metanol (100 ml) y se agregó por goteo cloruro de tionilo (4.22 ml, 57.9 mmoles) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 18 h. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad y aceite amarillo resultante se volvió a disolver en metanol/éter (1:1) y dio cristales amarillos (Sal de HCl) que se recolectaron mediante filtración, rendimiento 1.2 g (85%). Pureza LCMS 91%, m/z 153 [M++H]+, Etapa 2: ( 5-Amino-piridin-3-il) -metanol Se disolvió éster metílico de ácido 5-Amino-nicotínico (5.7 g, 30.2 mmoles) en THF (150 ml) y se agregó lentamente LÍAIH4 (1 M en solución de THF 133 ml, 133 mmoles) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 21 h. La mezcla de reacción se extinguió y se acidificó a un pH de 3 utilizando HCl diluido, y se hizo básica (pH 8) utilizando Na2C03 sólido. Los solventes se removieron bajo presión reducida. El residuo se filtró a través gel de sílice utilizando 20% de MeOH/DCM produciendo 3.8 g del producto, (100%) con Pureza LCMS 97%, m/z 125 [M++H]+, a través de ELS. Etapa 3: Acoplamiento del ácido de la Etapa 2 sobre La resina Se dilató La resina de Hidroxilamina-2-clorotritiloderivatizada con ácido subérico (0.49 g, 0.86 mmoles/ g, 0.42 mmoles) en DCM anhidro (6 ml) y se agregó PyBOP (0.67 g, 1.3 mmoles). La anilina de la Etapa 2| (0.16 g, 1.3 mmoles) se agregó en DMF (6 ml) seguido por DIPEA (0.75 ml, 4.2 mmoles). La LCMS después de la separación de prueba indicó 27% de conversión, m/z 296 [M++H]+. La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. Etapa 4: Mesilación La resina enlazada al alcohol de la Etapa 3 (1.8 g, 1.57 mmoles) se dilató en DCM anhidro (30 ml) y se agregó DIPEA (1.62 ml, 9.42 mmoles) a 0°C seguido por cloruro de mesilo (0.23 ml, 3.14 mmoles) . La mezcla de reacción se agitó a 0°C por 30 minutos. La LCMS después de la separación de prueba indicó 21% de conversión, m/z 374 [M++H]+ y 9% de subproducto derivado de mesilato m/z 314 [M++H] + . La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. Etapa 5: Desplazamiento del mesilato con éster etílico de L-fenilalanina La resina enlazada al producto de la Etapa 4 (0.5 g, 0.43 mmoles) se dilató en DMF anhidro (4 ml) y se agregó yoduro de sodio (0.05 g, 10% p/v). Se agregó la sal de clorhidrato del éster etílico L-Fenilalanina (0.3 g, 1.29 mmoles) en DMF anhidro (4 ml) seguido por DIPEA (0.75 ml, 4.3 mmoles) . Después de agitar por 3 horas la LCMS de la prueba del material separado indicó 35% de conversión, m/z 471 [M++H] + . La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. Etapa 6: éster etílico de ácido (S) -2- { [5- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -piridin-3-ilmetilo] -amino } -3-fenil-propiónico (66) La resina de la Etapa 5 (2 g, carga de 0.87 mmoles) se agitó delicadamente en 2% TFA/DCM (20 ml) por 20 minutos. La resina se filtró. El filtrado se recolectó y se evaporó bajo presión reducida a temperatura ambiente. La resina se volvió a tratar con 2% de TFA/DCM (20 ml) y se filtró después de 10 minutos. Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad bajo presión reducida a temperatura ambiente para dar un producto crudo. El crudo se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (66) como la sal de TFA. Pureza LCMS 100%, m/z 471 [M++H]+, XH RMN (400MHz, MeOD) , d: 1.10 (3H, t, C02CH2CH3) , 1.31- 1.50 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.58-1.80 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.05-2.15 (1 H, m, CH) , 2.24-2.38 (1 H, m, CH) , 2.45 (2 H, t, CH2) , 3.10-3.20 (1 H, m, CH) , 3.38-3.49 (1 H, m, CH) , 4.12 (2 H, q, CH2) , 4.35 (3H, m, CH2, CH) 7.20-7.40 (5 Hl m, Ar) , 8.30-9.00 (3 H, m, Ar) . Etapa 7: ácido (S) -2- { [5- (7-hidroxicarbamoil-heptañoilamino) -piridin-3-ilmetilo] -amino } -3-fenil-propiónico A una solución del producto de la Etapa 6 (30 mg, carga de 1.8 mmoles/g) en THF (1 ml) se agregó 1.4M de hidróxido de sodio (1 ml) . La mezcla de reacción se agitó por 30 minutos. LCMS mostró 75% de conversión, m/z 442[M++H]+.
La mezcla de reacción se evaporó a sequedad y se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto deseado como la sal de TFA, el compuesto (67). Pureza LCMS 100%, m/z 443 [M++H] + . ?H RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.30 (4 H, m, 2 x CH2), 1.50-1.70 (4 H, m, 2 X CH2) , 2.00 (2 H, t, CH2) , 2.30 (2 H, t, CH2) , 3.20 (2 H, m, CH2Ph, señal enmascarada) , 4.20 (3 H, m) , 7.20 (5 H, m, Ar) , 8.30 (1 H, br s, Ar) , 8.40 (1 H, s, Ar) , 8.65 (1 H, br s, Ar) .
Síntesis del Compuesto (68) Éster ter-butílico de ácido (S) -2- { [5- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -piridin-3-ilmetilo] -amino} -3-fenil-propiónico (68) (se preparó utilizando el procedimiento descrito para la Preparación del compuesto (66): Pureza LCMS 100%, m/z 499 [M++H]+, xti RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.20 (9 H, s, C(CH3)3), 1.25-1.35 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.49-1.65 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.00 (2 H, t, CH2) , 2.35 (3 H, t, CH2) , 3.00 (1 H, m) , 3.32 (1 H, m) , 4.15- 4.30 (3 H, m) , 7.15-7.30 (5 H, m, Ar) , 8.30 (1 H, br s, Ar) , 8.45 (1 H, s, Ar) , 8.65 (1 H, br s, Ar) . Síntesis del Compuesto (69) y el Compuesto (70) 69 70 Etapa 1 : Carga de ácido caproico Fmoc sobre la resma A una mezcla de la resina de hidroxilamina 2- clorotritilo (2.5 g, carga de 0.94 mmoles/g) en DCM anhidro (10 ml) se agregó una solución de 1, 3-diisopropilcarbodiimida (1.1 ml, 7.05 mmoles) y ácido 6- (Fmoc-amino) caproico (2.5 g, 7.05 mmoles) en DCM anhidro (10 ml). Se agregó DMF (5 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente por 1 h. La separación de prueba reveló 96% de conversión al producto requerido. La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío . Etapa 2: Desprotección Fmoc La resina de la amina protegida con Fmoc de la Etapa 1 (2.0 g, carga de 0.94 mmoles/g) se disolvió en una solución de 20% de piperidina en DMF (25 ml, exceso) y se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos. La separación de prueba indicó la completa conversión a través de LCMS, 100% (detección ELS) . La resina se filtró, se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar y se secó bajo vacío. Etapa 3: Reacción de acoplamiento A la resina enlazada a la amina de la Etapa 2 (2.0 g, carga de 0.94 mmoles/g) en DCM anhidro (10 ml) y DMF (10 ml) se agregó DIC (0.71 ml, 5.64 mmoles) y ácido 3- (clorometil) benzoico (0.96 g, 5.64 mmoles). La mezcla se agitó por 1 hora antes de la separación de prueba revelara 49% de conversión a través de LCMS, m/z 219 [M++H]+. La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío. Etapa 4: Desplazamiento de cloro con éster ciclopentílico de L-fenilglicina Se agregó a la resina enlazada al cloro de la Etapa 3 (0.5 g, 0.47 mmoles) en DMF anhidro (5 ml) la sal de tosilo del éster ciclopentílico de L-fenilglicina (0.57 g, 1.41 mmoles), DIPEA (0.24 ml, 1.41 mmoles) y una cantidad catalítica de yoduro de sodio. La mezcla de reacción se calentó a 60 °C por 1 hora. La LCMS después de la prueba de división reveló 45% de conversión, m/z 482 [M++H] + . La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío.
Etapa 5: éster ciclopentílico de ácido (S)-[3-(5-hidroxicarbamoil-pentilcarbanmoil) -bencilamino] -fenil-acético 69 La resina de la Etapa 4 (1.0 g, carga de 0.94 mmoles/g) se agitó delicadamente en 2% TFA/DCM (10 ml) por 20 minutos. La resina se filtró. El filtrado se recolectó y se evaporó bajo presión reducida a temperatura ambiente. La resina se volvió a tratar con 2% de TFA/DCM (10 ml) y después de 20 minutos se filtró. Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad bajo presión reducida a temperatura ambiente para dar un residuo. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (69) . Pureza LCMS 89%, m/z 482 [M++H]+, ?ti RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.24-1.82 (14 H, m, 7 x CH2) , 2.03 (2 H, t, CH2) , 3.30 (2 H, t, CH2) , 4.08 (1 H, d, CHHPh) , 2.20 (1 H, d, CHHPh) , 5.09 (1 H, s, OCOCHPh), 5.18 (1 H, m, CHOCO), 7.39-7.54 (7 H, m, Ar) , 7.77 (2 H, m, Ar) . Etapa 6: Saponificación de éster ciclopentílico La resina de la Etapa 4 (1.35 g, carga de 0.94 mmoles/g) se suspendió en THF (4.7 ml) y metanol (4.7 ml) . Se agregó 1.4M hidróxido de sodio (9.4 ml, 12.66 mmoles). La mezcla se agitó por 48h. LCMS de la división de prueba mostró 49% de conversión al ácido, m/z 414 [M++H] + . La resina se filtró y se lavó con agua x 2, MeOH x 2, seguido por el procedimiento de lavado estándar. La resina se secó bajo vacío . Etapa 7: ácido (S) - [3- (5-hidroxicarbamoil-pentilcarbanmoil) -bencilamino] -fenil-acético (70) 70 La resina de la Etapa 6 (1.35 g, carga de 0.94 mmoles/g) se agitó delicadamente en 2% TFA/DCM (10 ml) por 20 minutos. La resina se filtró. El filtrado se recolectó y se evaporó bajo presión reducida a temperatura ambiente. La resina se volvió a tratar con 2% TFA/DCM (10 ml) y después de 20 minutos se filtró. Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad bajo presión reducida a temperatura ambiente para dar un residuo. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (70) . Pureza LCMS 100%, m/z 414 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.30 (2 H, m, CH2), 1-57 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.20 (2 H, t, CH2) , 3.30 (2 H, t, CH2) , 4.05 (1 H, d, CHHPh), 4.18 (1 H, d, CHHPh), 4.90 (1 H, s, OCOCHPh), 7.35-7.52 (7 H, m, Ar) , 7.78 (2 H, m, Ar) . Síntesis de los siguientes compuestos Ejemplificados a través de el Compuesto (71) y el Compuesto R ciclopentil 71 R=H 72 R ciclopentil 73 R=H 74 R ciclopentil 75 R=H 76 R ciclopentil 77 R=H 78 Preparación de componentes M,N,0 Componente M Etapa 1 48% ac HBr . Etapa 2 Componente M Etapa 1: 2- ( 3-Amino-fenil ) -etanol Una mezcla de alcohol nitro fenetílico (8.0 g, 0.047 moles) y 10% Pd/C (0.6 g) en etanol (100 ml) se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno (presión de balón) por 18 h. La mezcla de reacción se filtró a través una almohadilla de celite y se removió el catalizador Pd/C. El filtrado se concentró bajo presión reducida para producir un sólido café claro 6.1 g (95% de rendimiento). Pureza LCMS 98%, m/z 138 [M+H]+. Etapa 2: 3- (2-Bromo-etil) -fenilamina Una solución de 2- (3-Amino-fenil) -etanol (2.0 g) en 48% HBr ac. (20 ml) se calentó a 90 °C por 18 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, y el precipitado formado se recolectó mediante filtración. El sólido se secó al vacío produciendo el Componente M, 1.8 g (61% de rendimiento).
Pureza LCMS 90%, m/z 200/202 [M+H]+. Componente N Etapa 1 H2 10% Pd/C > Etapa 2 Componente N Etapa 1: 2- (3-Nitro-fenoxi) -etanol A una solución de 3-nitrofenol (10 g, 71.9 mmoles) en DMF (40 ml) se agregaron granulos de NaOH (3.16 g, 79.1 mmoles) y 2-bromoetanol (5.6 ml, 79.1 mmoles). La mezcla de reacción se calentó a 60 °C por 18 h. LCMS indicó 65% de conversión al producto requerido. La mezcla de reacción se diluyó con agua (10 ml) y se neutralizó lentamente con 2M HCl. La mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (50 ml) y se lavó con agua (50 ml) . La capa de EtOAc se secó (Na2S0 ) , se filtró y se evaporó a sequedad. La purificación con cromatografía de columna eluyendo con 30% EtOAc/ heptano dio el producto requerido (8.2 g, 62% de rendimiento). Pureza LCMS 100%, m/z 184 [M+H]+.
Etapa 2: 2- (3-Amino-fenoxi) -etanol La reducción se realizó utilizando el procedimiento descrito para la Componente M. Etapa 3: 3- (2-Bromo-etoxi) -fenilamina La brominación se realizó utilizando el procedimiento descrito para Componente M. Componente O Etapa 1 H2 10% Pd/C Etapa 2 El Componente O se preparó como se describe para el Componente G con 3-bromo-l-propanol utilizado en lugar de 2-bromoetanol . Síntesis de los siguientes Compuestos Ejemplificados por el Compuesto (71, R = ciclopentilo) y el Compuesto (72, R =H) Etapa 1: Acoplamiento del derivado de anilina a la resina funcionalizada de ácido carboxílico A una suspensión de la resina de hidroxilamina 2-clorotritilo derivatizada con ácido subérico (1.0 g, 0.94 mmoles, carga de 0.94 mmoles) en DCM/DMF (10 ml/10 ml) se agregó DIPEA (1.75 ml) seguido por componente M, 0.8 g, 2.82 mmoles. Se agregó PyBrOP (0.53 g, 3.76 mmoles) y la suspensión se agitó por 18 h. La resina se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar y se secó vigorosamente. Etapa 2: Desplazamiento de bromuro con éster ciclopentílico de L-fenilglicina A una suspensión de la resina de etapa 1 (0.4 g, 0.38 mmoles) en DMF (4 ml) en a vial, se agregó sal de tosilo de éster ciclopentílico de L-fenilglicina (0.44 g, 1.12 mmoles) y DIPEA (0.67 ml, 3.76 mmoles) seguido por Nal (50 mg) . La reacción se dejó reposar a 65 °C por 8 h. La resina se lavó vigorosamente utilizando el procedimiento de lavado estándar . Etapa 3: éster ciclopentílico de ácido (S)-{2-[3-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -fenil] -etilamino}-fenil-acético (71) La resina de la Etapa 2 se dividió con 2% de TFA/ DCM (10 ml x 3) . El filtrado se concentró a sequedad y el residuo purificó a través de HPLC preparativa para dar el compuesto (71) como la sal de TFA. Rendimiento 21 mg (11% en total), Pureza LCMS 99%, m/z 510 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.35-1.95 (16 H, m 8 x CH2) , 2.10 (2 H, t, CH2) , 2.38 (2 H, t, CH2), 2.91-3.29 (4 H, m) , 5.18 (1 H, s, OCOCHPh), 5.32 (1 H, m, CHOCO), 6.98 (1 H, m, Ar) , 7.30 (2 H, m, Ar) , 7.47-7.56 (5 H, m, Ar) , 7.62 (1 H, s, Ar) . Etapa 4: Saponificación La resina de la Etapa 2 (1.2 g, 1.12 mmoles) se suspendió en THF/ MeOH (12 ml/12 ml). Se agregó 2.7M de solución de NaOH y la mezcla se agitó por 18 h a temperatura ambiente. Después de la finalización de la reacción la resina se lavó vigorosamente (procedimiento de lavado estándar) . Etapa 5: ácido (S) - { 2- [3- (7-h?drox?carbamo?l-heptanoilamino) -fenil] -etilammo } -fenil-acético (72) La resina de la Etapa 4 (0.8 g, 0.76 mmoles) se dividió con 2% TFA/ DCM (10 ml x 3) . El filtrado se concentró a sequedad y el residuo purificó a través de HPLC preparativa para dar el compuesto (72) como una sal de TFA, de rendimiento 40 mg (10% en total) . Pureza LCMS of 100%, m/z 442 [M++H]+, XH RMN (400 MHz MeOD), d: 1.20-1.35 (4 H, m, 2 x CH2), 1.45-1.70 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.95 (2 H, t, CH2) , 2.25 (2 H, t, CH2) , 2.80-3.20 (4 H, m C]H2NH, CpH2Ph) , 5.00 (1 H, s, CHCOOH) , 6.85 (1 H, m, Ar) , 7.15 (2 H, m, Ar) , 7.40 (5 H, s, Ar) , 7.50 (1 H, s, Ar) . Los siguientes el compuestos se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito para el compuestos (71) y el compuesto (72) Ester ciclopentílico de ácido (S) -2-{2- [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -fenoxi] -etilamino} -3- fenil-propiónico (73) Componente N utilizado Pureza LCMS 94%, m/z 540 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.26-1.82 (16 H, m, 8 x CH2) , 2.11 (2 H, t, CH2) , 2.39 (2 H, t, CH2), 3.15 (1 H, dd, CHHPh), 3.44 (1 H, dd, CHHPh), 3.56 (2 H, m, CH2) , 4.30 (2 H, t, CH2) , 4.40 (1 H, m) , 5.13 (1 H, m, CHOCO), 6.76 (1 H, d, Ar) , 7.00 (1 H, d, Ar) , 7.24-7.41 (6 H, m, Ar) , 7.57 (1 H, s, Ar) . ácido (S) -2- {2- [3- (7-Hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -fenoxi] -etilamino} -3- fenil-propiónico (74) Componente N utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 472 [M++H]+, ?ti RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.35-1.46 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.61-1.77 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.11 (2 H, t, CH2) , 2.40 (2 H, t, CH2) , 3.28- 3.40 (2 H, m, CH2, señal enmascarada), 3.53 (2 H, t, CH2) , 4.29 (2 Hl 1, CH2), 4.38 (1 H, t, OCOCHCH2), 6.75 (1 H, d, Ar) , 7.00 (1 H, d, Ar) , 7.25 (1 H, t, Ar) , 7.30-7.41 (5 H, m, Ar) , 7.53 (1 H, s, Ar) . Éster ciclopentílico de ácido (S) -2-{3- [3- (7- idroxicarbamoil-heptanoilamino) -fenoxi] -propilamino} -3-fenil-propiónico (75) Componente O utilizado Pureza LCMS 100%, m/z 554 [M++H]\ XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.29-1.87 (16 H, m, 8 x CH2) , 2.10 (2 H, t, CH2) , 2.21 (2 H, m, CH2) , 2.37 (2 H, t, CH2) , 3.12 (1 H, dd, CHHPh), 3.25-3.43 (3 H, m, CHHPh, CH2) , 4.11 (2 H, t, CH2) , 4.33 (1 H, m, OCOCHCH2), 5.18 (1 H, m, CHOCO), 6.78 (1 H, d, Ar) , 7.00 (1 H, d, Ar) , 7.22 (1 H, t, Ar) , 7.24-7.39 (5 H, m, Ar) , 7.44 (1 H, s, Ar) . Ácido (S) -2- {3- [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -fenoxi] -propilamino} -3- fenil-propiónico (76) Componente O utilizado Pureza LCMS 100%, m/z486 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.34-1.47 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.60-1.75 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.10 (2 H, t, CH2), 2.19 (2 H, m, CH2) , 2.38 (2 H, t, CH2) , 3.25-3.40 (4 H, m, 2 x CH2, señal enmascarada), 4.09 (2 H, t, CH2) , 4.35 (1 H, 0C0CHCH2), 6.75 (1 H, d, Ar) , 6.98 (1 H, d, Ar) , 7.20 (1 H, t, Ar) , 7.28-7.39 (5 H, m, Ar) , 7.41 (1 H, s, Ar) . Éster ciclopentílico de ácido (S) -{3- [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -fenoxi] -propilamino} -fenilacético (77) Componente O utilizado Pureza LCMS of 100%, m/z 540 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.20-1.50 (8 H, m, 4 x CH2) , 1.50-1.80 (8 H, m, 4 x CH2) , 1.80-1.90 (2 H, m, NHCH2CH2), 2.00 (2 H, t, CH2) , 2.25 (2 H, t, CH2) , 2.55-2.70 (2 H, m, NHCH2), 3.90 (2 H, t, CH2CH20) , 4.25 (1 H, s, OCOCHPh), 5.05 (1 H, m, CHOCO), 6.55 (1 H, m, Ar) , 6.95 (1 H, m, Ar) , 7.00- 7.10 (1 H, m, Ar) , 6.15-6.35 (6 H, m, Ar) Éster ciclopentílico de ácido (S) -{3- [3- (7-Hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -fenoxi] -propilamino}-fenilacético (78) Componente O utilizado Pureza LCMS of 100%, m/z 472 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, DMSO), d: 1.20-1.40 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.45-1.65 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.90 (2 H, m, NHCH2CH2), 2.00-2.20 (2 H, m, CH2) , 2.20-2.35 (2 H, m, CH2) , 2.80-3.10 (2 H, m, NHCH2 señal enmascarada), 3.90- 4.00 (2 H, m, CH2CH20) , 4.60-4.85 (1 H, br s, OCOCHPh), 6.55 (1 H, d, Ar) , 7.05 (1 H, d, Ar) , 7.15 (1 H, m, Ar) , 7.30-7.60 (6 H, m, Ar) , 8.50-8.85 (1 H, br s) , 9.85 (1 H, s) , 10.35 (1 H, s) . Síntesis de los siguientes compuestos Ejemplificados a través del Compuesto 79 y el Compuesto 80 R = cidopentilo 79 R - H 80 R = ciclopentilo 81 R = H 82 Síntesis del Compuesto 79 (R = ciclopentilo) y el Compuesto 80 (R = H) Se disolvió bromuro de 3-nitrobencilo (10 g, 46.3 mmoles) en etanol (200 ml) y se agitó a temperatura ambiente Se agregó una solución de NH3 conc. (ac) (200 ml) en etanol (300 ml) por goteo a la reacción durante 30 minutos. La reacción se agitó por 18 h a temperatura ambiente antes de evaporar a sequedad. Se agregó agua (350 ml) al residuo y la solución de se lavó con EtOAc (2x 200 ml) . La capa acuosa se hizo básica con 1 M NaOH y se extrajo con EtOAc (2x 200 ml) . Los extractos orgánicos de la capa básica se combinaron, se secaron (Na2S0 ) y se evaporaron a sequedad. El producto se obtuvo como un aceite de color naranja (4.6 g, 65% de rendimiento). Pureza LCMS 100%, m/z 153 [M++H]+. Etapa 2: l-Isocianatometil-3-nitro-benceno Se disolvió 3-Nitro-bencilamina (2.3 g, 15.1 mmoles) en dioxano anhidro (50 ml) bajo atmósfera de N2. Se agregó difosgeno (2.2 ml, 18.2 mmoles), y se formó un precipitado que se disolvió después de calentar a 75°C. La reacción se agitó a 75°C por 3 h, se enfrió y se evaporó a sequedad dando 3.4 g del material crudo que se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional. Etapa 3: éster ciclopentílico de ácido (S)-[3-(3-Nitro-bencil) -ureido] -fenil-acético Se disolvió sal de tosilo de éster ciclopentílico de L-fenilglicina (7.47 g, 19.1 mmoles) en DMF (70 ml). Se agregó Trietilamina (5.8 ml, 42.0 mmoles) y la mezcla se enfrió a 0°C. Se agregó una solución de l-isocianatometil-3-nitro-benceno (3.4 g, 19.1 mmoles en 30 ml of DMF) lentamente a la mezcla de reacción bajo una atmósfera de N2. La agitación continuó por 18 h permitiendo que la reacción se calentara a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con agua (200 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 200 ml) . Los extractos orgánicos se lavaron con agua (3x 100 ml) y salmuera (100 ml), se secaron (Na2S04) y se evaporaron a sequedad. El urea cruda se purificó mediante cromatografía de columna (1% de MeOH/ DCM) para producir un aceite amarillo pálido (4.6 g, 65% de rendimiento). Pureza LCMS 85%, m/z 398 [M++H ] + . Etapa 4 : éster ciclopentílico de ácido ( S ) - [ 3- ( 3-Amino-bencil ) -ureido ] -fenil-acético Se disolvió éster ciclopentílico de ácido (S)-[3-(3-Nitro-bencil) -ureido] -fenil-acético (3.6 g, 9.0 mmoles) en etanol (50 ml ) se agregó el catalizador Pd/C (10% de humedad) (100 mg) y la mezcla se agitó bajo una atmósfera de H2 (presión de balón) por 18 h. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de celite y se evaporó a sequedad para dar un aceite de color púrpura (2.34 g, 71% de rendimiento). Pureza LCMS 90%, m/z 368 [M++H] + . Etapa 5: Acoplamiento a la resina Se dilató la resina de 2-clorotritil hidroxilamina derivatizada con ácido subérico (1.5 g, carga de 0.94 mmoles/g) en DMF (15 ml) y se agregó PyBOP (2.2 g, 4.23 mmoles), seguido por DIPEA (2.4 ml, 14.1 mmoles). La anilina de la Etapa 4 (1.3 g, 3.53 mmoles) se disolvió en DCM (15 ml) y se agregó a la mezcla de reacción. La reacción se agitó por 42 h a temperatura ambiente del lavado y secado estándar de la resina. Etapa 6: éster ciclopentílico de ácido (S)-{3-[3-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencil] -ureido} -fenilacético 79 La resina de la Etapa 5 enlazada al éster ciclopentílico (1.75 g) se agitó con 2% de TFA/ DCM (15 ml) por 10 min antes de filtrar la resina y la evaporación del solvente bajo presión reducida a temperatura ambiente. Este procedimiento se repitió (x3) y el producto crudo combinado se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (79). Pureza LCMS 100%, m/z 539 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.34-1.90 (16 H, m, 8 x CH2) , 2.11 (2 H, t, CH2) , 2.38 (2 H, t, CH2) , 4.30 (2 H, S, CH2) , 5.18 (1 H, m, CHOCO), 5.30 (1 H, s, OCOCHPh), 7.05 (1 H, d, Ar) , 7.26 (1 H, t, Ar) , 7.34-7.40 (5 H, m, Ar) , 7.47 (2 H, m, Ar) .
Etapa 7: ácido (S) - { 3- [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencil] -ureido}-fenil-acético (80) 80 El Compuesto (79) (75 mg) Se disolvió en THF (1 ml) y se agregó 2M de NaOH (ac.,1 ml) . La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 h. El THF se removió bajo una corriente de N2 y la capa acuosa (~1 ml) se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (80). Pureza LCMS 99%, m/z 471 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.20-1.35 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.45-1.65 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.00 (2 H, t, CH2), 2.25 (2 H, t, CH2) , 4.20 (2 H, s CH2NH) , 5.25 (1 H, s CHPh), 6.90 (1 H, d, Ar) , 7.10 (1 H, t, Ar) , 7.15-7.40 (7 H, m, Ar) . Los siguientes el compuestos se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito para el compuestos (79) y el compuesto (80) Éster ciclopentílico de ácido (S) -2-{3- [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoylamino) -bencil] -ureido} -3-f enil-propiónico (81) Pureza LCMS 95%, m/z 553 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.20-1.40 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.40-1.80 (12 H, m, 6 x CH2) , 2.00 (2 H, t, CH2) , 2.25 (2 H, t, CH2) , 2.90 (2 H, m, CHCH2Ph) , 4.15 (2 H, s CH2NH) , 4.40 (1 H, m, OCOCHCH2) , 5.00 (1 Hl m, CHOCO) , 6.85 (1 H, d, Ar) , 7.00-7.25 (6 H, m, Ar) , 1 7.35 (2 H, br S, Ar) . Ácido (S) -2- (3- [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencil] -ureido} -3-fenil-propiónico (82) Pureza LCMS 94%, m/z 485 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d: 1.30-1.50 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.60-1.80 (4 H, m, 2 x CH2), 2.10 (2 H, t, CH2) , 2.35 (2 H, t, CH2) , 2.95-3.25 (2 H, m, CHCH2Ph) , 4.25 (2 H, s, CH2NH) , 4.60 (1 H , m OCOCHCH2), 7.00 (1 H, d, Ar) , 7.15-7.35 (6 H, m, Ar) , 7.45 (2 H, m, Ar) Síntesis de los siguientes Compuestos y Ejemplificados a través del Compuesto (83) y el Compuesto (84) Re cictopentüo 83 a céclopepfflo 85 R= H 84 R=¡ ciclopentto 86 R= ctcíopßnteo 88 Ra H 87 R= cictopsntilo 89 R= cictopenlilo 91 R= H 90 Etapa 1: éster metílico de ácido 7- ( 1-isobutoxi-etoxicarbamoil) -heptanoico Se disolvió suberato de monometilo (25.0 g, 13.3 mmoles, 1.0 equivalentes) en THF (300 ml) y DCM (300 ml). Se agregó EDC. HCl (25.46 g, 13.3 mmoles, 1.0 equivalentes) a la solución agitada, seguido por HOBt (17.95 g, 13.3 mmoles, 1.0 equivalentes) y trietilamina (48.5 ml, 34.5 mmoles, 2.6 equivalentes). Se agregó O- ( 1-isobutoxi-etil) -hidroxilamina (21.9 ml, 15.9 mmoles, 1.2 equivalentes) a la solución viscosa y la reacción se dejó en agitación durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró bajo vacío, DCM (350 ml) se agregó y se lavó con agua (250 ml) y salmuera (200 ml) . La capa orgánica se aisló, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró al vacío. El producto se obtuvo como un sólido blanco (36.6 g, 91% de rendimiento) Pureza LCMS 88%, m/z 302 (M++H)+. Esto se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional. Etapa 2: ácido 7- (1-lsobutoxi-etoxicarbamoil) -heptanoico Se agitó éster metílico de ácido 7- (1-lsobutoxi- etoxicarbamoil) -heptanoico (36.6 g, 12.1 mmoles, 1.0 equivalentes) en THF (200 ml) y agua (200 ml) en la presencia de hidróxido de litio (8.68 g, 36.2 mmoles, 3.0 equivalentes) por 3 h a 50°C. El THF se evaporó bajo vacío y a la mezcla se agregó agua (100 ml) y acetato de etilo (200 ml) . La mezcla se hizo acida cuidadosamente a un pH de 3 a través de la adición de 1 N HCl. La fase orgánica se aisló y la capa acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo (150 ml) . La fase orgánicas se combinaron, se secaron (MgS04), se filtraron y se concentraron al vacío. El producto se obtuvo como un sólido blanco (29.0 g, 83% de rendimiento), m/z 288 [M++H]+ y se utilizó en Etapa 4 sin purificación adicional. Etapa 3: 4-Trimetilsilaniloximetil-fenilamina A una solución agitada de alcohol 4-amino bencílico (16.0 g, 13.0 mmoles, 1.0 equivalentes) en THF (400 ml), se agregó trietilamina (18.9 ml, 13.6 mmoles, 1.05 equivalentes) seguido por trimetiloclorosilano (17.2 ml, 13.6 mmoles, 1.05 equivalentes). La mezcla de reacción se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno durante la noche a temperatura ambiente. El THF se evaporó bajo vacío y la mezcla se dividió con acetato de etilo (300 ml) y agua (300 ml) . La fase orgánica se aisló y la capa acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo (2 x 100 ml) . Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 150 ml), se secaron (MgS04), se filtraron y se concentraron al vacío. El producto se obtuvo as a aceite amarillo (24.0 g, 95% de rendimiento) y utilizado en Etapa 4 sin purificación adicional . Etapa 4: ( 1-isobutoxietoxi) -amida de (4-hidroximetil-fenil) -amida de ácido octanodioico Ácido 7- ( 1-isobutoxi-etoxicarbamoil) -heptanoico (5.0 g, 1.72 mmoles, 1.0 equivalentes) y 4-trimetilosilaniloximetil-fenilamina (3.38 g, 1.72 mmoles, 1.0 equivalentes) se agitaron juntos en DMF (140 ml) . A la mezcla se agregó PyBroP (10.5 g, 2.25 mmoles, 1.3 equivalentes) y DiPEA (3.9 ml, 2.25 mmoles, 1.3 equivalentes) . La reacción se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó acetato de etilo (200 ml) y agua (200 ml) . La fase acuosa se aisló y se volvió a extraer con acetato de etilo (2 x 100 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (2 x 50 ml) y salmuera (50 ml), después se secó (MgS04), se filtró y se concentró al vacío. El producto crudo se disolvió en un mínimo acetato de etilo y se purificó haciéndolo pasar a través de una almohadilla de sílice. El producto se lavó a través de sílice utilizando acetato de etilo y recolectando en frascos cónicos de 100 ml hasta que cesó la elución a través de análisis LCMS. La purificación dio un aceite amarillo (3.59 g, 53% de rendimiento). Pureza LCMS 61%, m/z 417 [M++Na]+ Etapa 5: (1-isobutoxi-etoxi) -amida de (4-formil-fenil) -amida de ácido Octandioico Se disolvió 1 - i sobutoxiet oxi ) -amida de (4-hidroximet il-fenil ) -amida de ácido octandioico (1 (100 mg, 0.025 mmoles, 1.0 equivalentes) en DCM (5 ml) . A la mezcla de reacción, se agregó Mn02 (286 mg, 0.33 mmoles, 13.0 equivalentes) y se agitó a temperatura ambiente por 1.5 h. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se lavó a través con DCM, seguido por evaporación del solvente para dar un aceite amarillo (78.6 mg, 79% de rendimiento) Pureza LCMS 53%, m/z 415 [M++Na]+. El producto se utilizó en los pasos subsiguientes sin purificación adicional.
Etapa 6: éster ciclopentílico de ácido (R)-{4-[7-(1-lsobutoxi-etoxicarbamoil) -heptanoilamino] -bencilamino}-fenil-acético Se agitó (1-isobutoxi-etoxi) -amida de (4-formil-fenil) -amida de ácido octandioico (276 mg, 0.70 mmoles, 1.0 equivalentes) y éster ciclopentílico de D-fenilglicina (170 mg, 0.77 mmoles, 1.1 equivalentes) en DCE (15 ml) por 10 min. Se agregó ácido acético (65 µl) y se agitó por 2 min. Se introdujo triacetoxiborohidruro de sodio (448 mg, 0.21 mmoles, 3.0 equivalentes) y la mezcla de reacción se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno, a temperatura ambiente por 1 h. Se agregó carbonato ácido de sodio para extinguir la reacción. Después se agregó DCM y se aisló la fase orgánica. La fase acuosa se volvió a extraer con DCM, las capas orgánicas combinadas, se secaron (MgS04), se filtraron y se concentraron al vacío para dar el producto crudo (100 mg, 24%) Pureza LCMS 94.0%, m/z 496 [M++H]+ que se tomó sin purificación adicional.
Paso 7: éster ciclopentílico de ácido (R)-[4-hidroxicarbamoil-heptañoilamino) -bencilaminol-fenil-acético 83 Se disolvió éster ciclopentílico de ácido (R)-{4-[7- (1-lsobutoxi-etoxicarbamoil) -heptanoilamino] -bencilamino}-fenil-acético (50 mg, 0.08 mmoles, 1 equivalentes) en DCM (0.5 ml) y se agitó con 4M HCl en dioxano (0.2 ml) por 30 min. La sal resultante se concentró, se disolvió en metanol y purificó a través de HPLC preparativa para producir el compuesto (83). Pureza LCMS 94%, m/z 496 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.41-1.95 (16H, m, 8 x CH2) , 2.15-2.17 (2H, m, CH2) , 2.40 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2) , 4.16 (2H, q, J = 13.5 Hz, CH2) , 5.12 (1 H, s, CH), 5.27-5.30 (1 H, m, CH) , 7.40 (2H, d, J = 8.7 Hz, Ar-H), 7.50-7.56 (5H, m, Ar-H), 7.67 (2H, d, J = 8.7 Hz, Ar-H). Etapa 8: ácido (R) - [4- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -fenil-acético (84) A una solución de CHR-003644 ( 50 mg, 0 . 008 mmoles , 1.0 equivalentes) en THF (2 ml) y agua (2 ml) , se agregó LiOH (8.0 mg, 0.033 mmoles, 4.0 equivalentes). La reacción se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno a 40°C durante la noche. El THF se evaporó bajo vacío y el solvente de reacción acuoso restante se lavó con acetato de etilo. La solución se acidificó a un pH 3 y el producto se concentró al vacío. La sal resultante se disolvió en metanol y el producto purificó a través de HPLC preparativa para producir el compuesto (84). Pureza LCMS 97%, m/z 428 [M++H]+, X RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.39-1.41 (4H, m, 2 x CH2) , 1.62-1.74 (4H, m, 2 x CH2) , 2.13-2.15 (2H, m, CH2) , 2.40 (2H1 1, J = 7.5 Hz, CH2), 4.14 (2H, q, J = 12.9 Hz, CH2), 5.06 (1 H, s, CH) , 7.39 (2H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H), 7.54 (5H, s, Ar-H), 7.67 (2H, d, J = 8.7 Hz, Ar-H) Los siguientes compuestos se prepararon en una forma similar al Compuesto (83) y el Compuesto (84) utilizando los intermediarios apropiados . Éster ciclopentílico de ácido (S)-2-[4-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -4-metil-pentanoico (85) Pureza LCMS 97%, m/z 476 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), 5:0.98-1.03 (6H, m, 2 x CH3) , 1.41-1.42 (4H, m, 2 x CH2) , 1.71-1.96 (14H, m, 7 x CH2) , 2.10-2.15 (2H, m, CH2) , 2.40 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2) , 3.96-4.01 (1 H, m, CH) , 4.15-4.26 (2H, m, CH2) , 4.81 (1 H, s, CH) , 5.31-5.34 (1 H, m, CH) , 7.44 (2H, d, J = 8.7 Hz, Ar-H), 7.70 (2H, d, J = 8.7 Hz, Ar-H). Ácido (S) -ciciohexil- [4- (7-hidroxicarbamoil-hep taño i lamí no) -bencilamino] -acético (87) Pureza LCMS 95%, m/z 434 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), 5:1.23-1.96 (18H, m, 9 x CH2) , 2.10-2.15 (2H, m, CH2) , 2.39 (2H, m, CH2), 3.71 (1 H, m, CH) , 4.12 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2) , 4.80 (1 H, s, CH), 7.43 (2H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H), 7.68 (2H, d, J = 8.7 Hz, Ar-H). Éster ciclopentílico de ácido (S) -3-ter-Butoxi-2- [4- (7-hidroxica-d-jamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -butírico (88) Pureza LCMS 83%, m/z 520 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), 5:1.19 (9H1 s, 3 x CH3) , 1.29 (3H, d, J = 7.8 Hz, CH3) , 1.37-1.41 (4H, m, CH2), 1.64-1.89 (12H1 m, CH2) , 2.09-2.15 (2H, m, CH2) , 2.40 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2), 3.36-3.37 (1 H, m, CH) , 3.70- 3.71 (1 H, m, CH) , 4.24-4.27 (2H, m, CH2) , 5.17-5.19 (1 H, m, CH) , 7.42 (2H, d, J = 6.9 Hz, Ar-H), 7.68 (2H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H). Ester ciclspentílico de ácido (S) -3-ter-Butaxi-2- [4- (7-hidroxica-daamoil-heptanoilamino) -bencilamino] - prcpiónico (89) Pureza LCMS 95%, m/z 506 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), 5:1.23 (9H, s, C(CH2)3), 1.36-2.09 (16H, m, 8 x CH2) , 1.66 (2H, t, J=7.7Hz, CH2), 1.75 (2H, t, J=7.4Hz, CH2) , 2.11 (2H1 1, J=7.4Hz, CH2) , 2.40 (2H, t, J=7.3Hz, CH2) , 3.92 (2H, m, CH2) , 4.16 (1 H, m, CH) , 4.26 (2H, s, CH2), 5.32 (1 H, m, CH) , 7.45 (2H, d, J=8.5Hz, ArH), 7.67 (2H, dd, J=3.2, 8.3Hz, ArH) . Ácido (S) -3-ter-Butoxi-2- [4- (7-hidroxicarbamoil-hept-anoilapiino) -benzylamino] -propiónico (90) Pureza LCMS 95%, m/z 438 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.25 (9H, s, C(CH2)3), 1.39-1.42 (4H, m, 2 x CH2) , 1.62-1.69 (4H, m, 2 x CH2), 2.08-2.17 (2H, m, CH2) , 2.40 (2H, t, J = 7.5 Hz, CH2) , 3.85-3.96 (2H, m, CH2), 4.01-4.04 (1 H, m, CH) , 4.26 (2H, s, CH2) , 7.46 (2H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H), 7.68 (2H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H). Éster ciclopentílico de ácido (S) -2- [4- (7-hidro->ri.cazbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -3-fenil- propiónico (91) Pureza LCMS 95%, m/z 510 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), d:1.17- 2.43 (22H, m, 11 x CH2) , 4.19- 4.30 (2H, m, CH2) , 5.08 (1 H, s, CH), 5.20- 5.26 (1 H, m, CH) , 7.24 - 7.71 (9H, m, Ar-H) El Compuesto (86) se preparó mediante Metodología alternativa, las condiciones modificadas se detallan a continuación Paso 6b: éster ciclopentílico de ácido (S)-ciclohexil- { 4- [7- (1-isobutoxi-etoxicarbamoil) -heptañoilamino] -bencilamino} -acético Se agitó (1-isobutoxi-etoxi) -amida de (4-formil-fenil) -amida de ácido octandioico (220 mg, 0.056 mmoles, 1.0 equivalentes) y éster ciclopentílico de L-ciclohexil-glicina (138.9 mg, 0.062 mmoles, 1.1 equivalentes) en metanol (8 ml) durante la noche a temperatura ambiente. Se introdujo borohidruro de sodio (31.8 mg, 0.084 mmoles, 1.5 equivalentes) y la mezcla de reacción se agitó por 15 min. La mezcla de reacción se transfirió a un baño de hielo y se agregaron dos gotas de hidróxido de sodio (2M) . Se agregó éter dietílico y se aisló la fase orgánica. La capa acuosa se volvió a extraer con éter dietílico, las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera. La fase orgánica después se secó (MgS0 ) , se filtró y se concentró al vacío para dar el material crudo que se tomo en el siguiente paso sin purificación adicional. Paso 7b: éster ciclopentílico de ácido (S)-ciclohexil- [4- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -bencilamino] -acético (86) El material del paso 6b (50 mg, 0.083 mmoles, 1 equivalentes) se disolvió en DCM/metanol (2 ml : 2 ml) y se agitó con TFA (1.0 ml) por 2 h. La sal resultante se concentró, se disolvió en metanol y purificó a través de HPLC preparativa para producir el compuesto (86) . Pureza LCMS 100%, m/z 502 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.28-1.98 (26H, m, 13 x CH2) , 2.10-2.15 (2H, m, CH2) , 2.40 (2H, t, J = 7.8 Hz, CH2) , 3.81 (ÍH, d, J = 3.9 Hz, CH) , 4.21 (2H, m, CH2) , 5.01 (ÍH, s, CH) , 5.23-5.25 (1 H, m, CH) , 7.43 (2H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H) , 7.68 (2H, d, J = 8.7 Hzl Ar-H) Síntesis de 92 y 93 R = ciclopentilo 92 R=H 93 Etapa 1: éster metílico de ácido l-(3-nitro-fenoxi) -butírico A una solución de 3-nitrofenol (8.35 g, 60 mmoles), en DMF (50 ml) se agregó K2C03 (16.56 g, 120 mmoles) y 1,4-bromobutirato de metilo (11.95 g, 66 mmoles). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 16 h. La reacción se diluyó con acetato de etilo y agua. La fase orgánica se separó y se lavó con agua (2 x 200 ml) . La fase orgánica se secó con Na2S04 y se concentró al vacío. El éter requerido se aisló después de la cromatografía (acetato de etilo : heptano, 1:9) como un sólido amarillo pálido (12.2 g, 85% de rendimiento). Pureza LCMS 100%, m/z 240 [M++H] + .
Etapa 2: éster metílico de ácido 4- (3-Amino-fenoxi) -butírico
[0853] Se disolvió el éster de la Etapa 1 nitro (250 mg, 1 mmol) en etanol (3 ml) . Se agregó Pd/carbono (40mg) y la reacción se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno (presión de balón) por 16 h. La mezcla de reacción se filtró a través celite. La almohadilla de celite se lavó con etanol y las fracciones orgánicas combinadas se concentraron al vacío para dar el producto requerido como un aceite de color naranja (210mg, 100% de rendimiento) . Pureza LCMS 89%, m/z 210 [M++H] + . La anilina se utilizó en la siguiente Etapa sin purificación adicional. Etapa 3: Acoplamiento a la resina Se dilató la resina de 2-clorotritil hidroxilamina derivatizada de ácido subérico (8 g, 7.52 mmoles, carga de, 0.94 mmoles/g) en DCM/DMF (80 ml/80 ml). Se agregó PyBOP (11.8 g, 22.6 mmoles) y diisopropiletilamina (13.1 ml, 75.2 17 mmoles) al frasco seguido por éster metílico de ácido 4- (3-amino-fenoxi) -butírico (4.73 g, 22.6 mmoles). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 72 h antes del lavado y secado estándar. Etapa 4: Hidrólisis del éster La resina de la Etapa 3 (9.5 g) , se suspendió en THF/MeOH (34 ml/34 ml). Se agregó NaOH (1.4 M, ac, 34 ml) y la reacción se agitó por 16 h a temperatura ambiente. La resina se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar antes del secado con aire. Etapa 5: acoplamiento de éster de aminoácido La resina de la Etapa 4 (2.1g), se suspendió en DCM/DMF (20 ml/20 ml). Se agregó PyBOP (3.1g, 5.92 mmoles), éster ciclopentílico de N-fenilglicina (2.4 g, 5.92 mmoles) y diisopropiletilamina (3.4 ml, 19.7 mmoles) secuencialmente y la reacción se agitó a temperatura ambiente por 72 horas. La resina se sometió a lavado estándar y se secó.
Etapa 6: éster ciclopentílico de ácido (S)-{4-[3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -fenoxi] -butirilamino} -fenil-acético (92) 92 La resina de la Etapa 5 enlazada a éster ciclopentílico (1.1 q) se agitó con 2% de TFA/DCM (10 ml) por 10 minutos antes de filtrar la resina y evaporar el solvente bajo presión reducida a temperatura ambiente. El procedimiento se repitió (x3) y el producto crudo combinado se purificó a través de HPLC preparativa para producir el compuesto (92) (114 mg) . Pureza LCMS 99%, m/z 568 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d:1.40 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.45 - 1.90 (13 H, m, alquil), 2.10 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.40 (2 H, t, CH2) , 2.50 (2 H, m, CH2), 4.00 (2 H, m, CH2) , 5.15 (1 H, m, ), 5.40 (1 H, s, NHCHCO) , 6.65 (1 H, m, Ar) 7.15 (1 H, m, Ar) , 7.20 (1 H, t, Ar) , 7.30 (1 H, s, Ar) , 7.40 (5 H, s, Ar) . Etapa 7: ácido (S) - { 4- [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -fenoxi] -butyrylamino} -fenil-acético (93) 17 La resina de éster ciclopentílico de la Etapa 6 (500 mg) se suspendió en THF (15 ml) . A la suspensión se agregó NaOH (1.4M ac, 1.6 ml) y la reacción se agitó por 16 hr a temperatura ambiente. El filtrado se removió y la resina se lavó y se secó antes de la separación. La separación se efectuó a través de agitación con 2% de TFA/DCM (5 ml) por 10 minutos antes de filtrar la resina y evaporar el solvente bajo presión reducida a temperatura ambiente. El procedimiento se repitió (x3) y el producto crudo combinado se purificó a través de HPLC preparativa para producir el compuesto (93) (62mg) . Pureza LCMS 99%, m/z 500 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d:1.40 (4 H, m, 2 x CH2), 1.60 - 1.80 (4 H, m, alquilo), 2.10 (4 H, m, 2 x CH2) , 2.40 (2 H, t, CH2) , 2.50 (2 H, t, CH2), 4.00 (2 H, m, CH2) , 5.45 (1 H, s, NHCHCO) , 6.65 (1 H, d, Ar) 7.10 (1 H, m, Ar) , 7.20 (1 H, t, Ar) , 7.25 (1 H, s, Ar) , 7.30-7.45 (5 H, m, Ar) . Síntesis de 94 y 95 R = ciclopentilo 94 R = H 95 Etapa 1: Formación de 3-nitro-bencil-cloroformiato A una solución de alcohol 3-nitro bencílico (10 g, 65 mmoles), en dioxano (anhidro, 100 ml) se agregó cloroformiato de triclorometilo (9.47 ml, 78 mmoles). La reacción se calentó a 75°C bajo nitrógeno por 16 h. El solvente se evaporó y el residuo se volvió a suspender en dioxano y se evaporó. El procedimiento se repitió (x 3) . El cloroformiato crudo se utilizó en la siguiente Etapa sin purificación adicional. Etapa 2: éster ciclopentílico de ácido (S)-2-(3-Nitro-benciloxicarbonilamino) -3-fenil-propiónico Se suspendió L-Phe-éster ciclopentílico . sal de TsOH (9.42 g, 23 mmoles) en DCM (40 ml) . Se agregó Trietilamina (6.5 ml, 47 mmoles) y la reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 min. Se agregó el cloroformiato de la Etapa 1 (5 g, 23 moles) disuelto en DCM (10 ml) a la mezcla de reacción por goteo con enfriamiento (baño de hielo) . La reacción se agitó por 16 h a temperatura ambiente. El solvente se removió y el residuo se disolvió en EtOAc (100 ml) se lavó con agua (50 ml x 3) y se secó (Na2S04) antes de la concentración al vacío. El material crudo se purificó a través de cromatografía (EtOAc : heptano, 1: 9) para dar el carbamato requerido (6.4 g, 67% de rendimiento), m/z 413 [M++H]+ Etapa 3: éster ciclopentílico de ácido (S) -2- ( 3-Amino-benciloxicarbonilamino) -3-fenil-propiónico El nitro carbamato de la Etapa 2 (6.4 g, 15.5 mmoles) se disolvió en etanol (64 ml) . Se agregó Cloruro de estaño deshidratado (17.5 g, 77 mmoles) y la reacción se agitó por 16 h a temperatura ambiente. El solvente se evaporó y el residuo se disolvió en EtOAc (60 ml) . Se agregó Una solución saturada de tartrato de potasio de sodio (60 ml) seguido por una solución de carbonato ácido de sodio saturado (120 ml) . La solución bifásica de se agitó por 15 min. La capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (60 ml xl) . Las capas orgánicas se combinaron, se secaron y el solvente se evaporó para dar el producto crudo el cual se purificó a través de cromatografía (EtOAc: heptano 1:3 -> 1:1). El producto requerido se aisló (3.5 g, 59% de rendimiento). Pureza LCMS 100%, m/z 383 [M++H]+. Etapa 4: Acoplamiento a la resina La resina 2-clorotritilo hidroxilamina derivatizada con ácido subérico (2.0 g, 1.88 mmoles, carga de, 0.94 mmoles/g) se dilató en DMF (20 ml) . se agregó PyBOP (2.93 g, 5.64 mmoles) y diisopropil etilamina (3.25 ml, 18.8 mmoles). El carbamato anilino de la Etapa 3 (1.8 g, 4.7 mmoles) disuelto en DCM (20 ml) se agregó y la reacción se agitó por 4 d antes de la remoción del filtrado y lavado estándar de la resina que se secó con aire. Etapa 5: éster ciclopentílico de ácido (S)-2-[3-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -benciloxicarbonilamino] -3-fenil-propiónico (94) 94 El éster ciclopentílico enlazado a resina de la Etapa 4 (2 g) se agitó con 2% de TFA/DCM (15 ml) por 10 minutos antes de filtrar la resina y evaporar el solvente bajo presión reducida a temperatura ambiente. El procedimiento se repitió (x3) y el producto crudo combinado se purificó a través de HPLC preparativa para producir el compuesto (94). Pureza LCMS 95%, m/z 554 [M++H]+, 1U RMN (400 MHz, MeOD), d:1.30 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.40 - 1.90 (13 H, m, alquilo), 2.00 (2 H, t, CH2) , 2.30 (2 H, t, CH2) , 2.90 (2 H, ddd, CH2) , 3.80 (1 H, m) , 4.25 (1 H, dd, NHCHCO) , 4.90 (2 H, s, CH2), 5.05 (1 H, m) , 5.35 (1 H, m) , 6.95 (1 H, d, Ar) 7.05-7.25 (6 H, m, Ar) , 7.35 -7.75 (2 H, m, Ar) . Etapa 6: ácido (S) -2- [3- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -benciloxicarbonilamino] -3-fenil-propiónico 95 El Compuesto (94) (100 mg, 0.18 mmoles) se disolvió en THF (1 ml) y se agregó 2M de NaOH (1 ml) . El recipiente de la reacción se agitó por 4 h antes de la remoción del THF mediante una corriente de nitrógeno. El residuo acuoso se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (95) (62 mg) . Pureza LCMS 95%, m/z 486 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d:1.35 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.55 - 1.75 (4 H, m, alquilo), 2.10 (2 H, t, CH2) , 2.35 (2 H, t, CH2) , 2.95 (2 H, dd, CH) , 3.20 (1 H, dd, CH) , 4.45 (1 H, dd, NHCHCO), 5.00 (2 H, s, CH2) , 7.05 (1 H, d, Ar) , 7.20-7.35 (6 H, m, Ar) , 7.55 (2 H, m, Ar) . Síntesis del Compuesto (96) y el Compuesto (97) R = ciclopentilo 96 R = H 97 Etapa 1: ácido ;S) -7-Nitro-l,2, 3, 4-tetrahidro-isoquinolin-3-carboxílico Preparado como se describe en Tett Letts 42, 2001, 3507. Etapa 2: éster 2-ter-butílico de ácido (S)-7-Nitro-3, 4-dihidro-lH-isoquinolín-2, 3-dicarboxílico Se disolvió ácido (S) -7-Nitro-l, 2, 3, 4-tetrahidro-isoquinolín-3-carboxílico (7 g, 31.5 mmoles) en THF:agua (1:1, 350 ml ) . Se agregó K2C03 (5.2 g, 37 mmoles) seguido por el anhídrido boc (13.7 g, 63 mmoles) y la solución se calentó a 40°C por 1 h. El THF se removió a través de evaporación y la capa acuosa se ajustó a un pH = 7 antes de la extracción con EtOAc. La capa orgánica se lavó 0.1 M HCl (x3) y se secó sobre Na2S04 antes de la concentración al vacío. El producto N-protegido requerido se obtuvo después de la cromatografía de columna (EtOAc : heptano 2 : 3 -> EtOAc), (7.5 g, 74%), Pureza LCMS 92%, no se observó ningún ion molecular. Etapa 3: éster ter-butílico de ácido (S) -3- ( (S) -1-Ciclopentiloxicarbonil-3-metil-butilcarbamoil) -7-nitro-3, 4-dihidro-1H-isoquinolín-2-carboxílico Se disolvió éster 2-ter-butílico de ácido (S)-7-Nitro-3, 4-dihidro-lH-isoquinolín-2 , 3-dicarboxílico (2.5 g, 7.76 mmoles) en DCM (100 ml). Se agregó HOBt (1.16 g, 8.53 mmoles), se agregó éster ciclopentílico de L-leucina (3.19 g, 8.53 mmoles) seguido por trietilamina (2.38 ml, 17.1 mmoles). EDCl. Se agregó HCl (1.46 g, 8.5 mmoles) y la reacción se agitó a temperatura ambiente por 16 h. A la reacción se agregó DCM (100 ml) y la capa orgánica se lavó con agua (3 x 300 ml), se secó con Na2S04 y el solvente se removió al vacío.
El producto crudo se purificó a través de cromatografía (EtOAc : heptano 1: 2 -> EtOAc) para dar el producto requerido 3.14 g (82% de rendimiento), Pureza LCMS 100%, m/z 504 [M++H]+. Etapa 4: éster ter-butílico de ácido (S) -7-Amino-3- ( (S) -l-ciclopentiloxicarbonil-3-metil-butilcarbamoil) -3, 4-dihidro-lH-isoquinolín-2-carboxílico Éster ter-butílico de ácido (S) -3- ( (S) -1-Ciclopentiloxicarbonil-3-metil-butilcarbamoil) -7-nitro-3, 4-dihidro-lH-isoquinolín-2-carboxílico (3.14 g, 6.24 mmoles) y Pd/carbono (0.4 g) se suspendieron en EtOAc (20 ml) . La reacción se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno (presión de balón) por 16 h. La solución de se filtró a través de una almohadilla de celite y el solvente se removió. El producto crudo (3.04 g) se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional. Pureza LCMS 83%, m/z 474 [M++H]+ Etapa 5: Acoplamiento a la resina La resina de 2-clorotritil hidroxilamina derivatizada con ácido subérico (2.2 g, carga de, 0.94 mmoles/g) se dilató en DCM/DMF (1:1, 80 ml) . Se agregó PyBOP (3.20 g, 6.15 mmoles) y diisopropiletilamina (3.54 ml, 20.7 mmoles) . La anilino amida de la Etapa 3 (3.04 g, 6.43 mmoles) se disolvió en DMF (40 ml) se agregó y la reacción se agitó por 3 días antes de la remoción del filtrado y lavado estándar de la resina que se secó con aire. Etapa 6: éster ciclopentílico de ácido (S)-2-{[(S)-7- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -1,2,3, 4-tetrahidro-isoquinolin-3-carbonil] -amino} -4-metil-pentanoico (96) El éster ciclopentílico de la Etapa enlazado a la resina de la Etapa 5 (600 mg) se agitó con 2% de TFA/DCM (8 ml) por 30 minutos antes de filtrar la resina y evaporar el solvente bajo presión reducida a temperatura ambiente. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativa para producir éster ciclopentílico de ácido (S) -2- { [ (S) -7- (7-hidroxicarbamoil-heptañoilamino) -1,2,3, 4-tetrahidro-isoquinolín-3-carbonil] -amino} -4-metil-pentanoico (17.5 mg) . El grupo boc se removió además de la separación de la resina. Pureza LCMS 98%, m/z 545 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d:0.85 - 0.88 (6 H, 2 x d, J = 6.4 Hz, J = 6.5 Hz, 2 x CH3) , 1.30 (4 H, m, alquilo) , 1.50 - 1.65 (13 H, m, alquilo) , 1.80 (2 H, m, CH2) , 1.95 (2 H, t, CH2) , 2.25 (2 H, t, CH2) , 3.00 (ÍH, m, CH) , 3.25 (ÍH, m, CH) , 4.10 (1 H, m, CH) , 4.25 (2H, s, CH2) , 4.29 (1 H, m, CH) , 5.10 (1 Hl m, CH) , 7.11 (1 Hl d, J = 8.4 Hz, Ar) , 7.25 (1 Hl d, J = 8.3 Hz, Ar ), 7.55 (2H, m, Ar) . Etapa 7: ácido (S) -2-{ [ (S) -7- (7-hidroxicarbamoil-hept ano i lamino) -1,2,3, 4-tetrahidro-isoquinolín-3-carbonil] -amino} -4-metil-pentanoico (96) La resina del éster ciclopentílico de la Etapa 5 (1.55 g) se suspendió en THF/MeOH (10 ml /10 ml) . A la suspensión se agregó NaOH (1.4 M ac, 5 ml) y la reacción se agitó por 16 hr a temperatura ambiente. El filtrado se removió y la resina se lavó (estándar) y se secó antes de la separación. La separación (600 mg de la resina) se efectuó a través de agitación con 2% de TFA/DCM (8 ml) por 30 minutos antes de filtrar la resina y evaporar el solvente bajo presión reducida a temperatura ambiente. El producto crudo purificó a través de HPLC preparativa para producir el Compuesto (97) (73.4mg). El grupo boc se removió además de la separación de la resina. Pureza LCMS 96%, m/z 477 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d:0.98 - 1.02 (6 H, 2 x d, J = 6 Hz, J = 6.1 Hz, 2 x CH3), 1.40 (4 H, m, alquilo), 1.60 - 1.80 (7 H, m, alquilo), 2.10 (2 H, t, J = 7.4 Hz, CH2) , 2.39 (2 H, t, 7.6 Hz, CH2) , 3.15 (1 H, dd, J = 12.5 Hz, J = 16.6 Hz, CH) , 3.45 (1 H, dd, J = 4.9 Hz, J = 17 Hz, CH) 4.00 (1 H, s, CH) , 4.20 (1 H, dd, J = 4.7 Hz, J = 12.2 Hz, CH) , 4.40 (2 H, m, CH2), 4.55 (1 H, dd, J = 4.7 Hz, J = 10 Hz, CH) , 7.25 (1 H, d, J = 8.4 Hz, Ar) , 7.25 (1 H, d, J = 8 Hz, Ar ), 7.55 (1 H, J = 7 Hz, Ar) . Síntesis del Compuesto (98) y el Compuesto (99) R = ciclopentilo gs R = H 99 Etapa 1: éster ciclopentílico de ácido (S)-4-Metilo-2- ( 4-nitro-benzoilamino) -pentanoico Se disolvió éster ciclopentílico de L-leucina . sal de TsOH (7.98 g, 21.51 mmoles) en THF (40 ml) y se agregó trietilamina (6 ml, 21.5 mmoles). Se agregó cloruro de 4- Nitrobenzoilo (4 g, 21.5 mmoles) en porciones con enfriamiento, baño de hielo. La reacción se agitó a temperatura ambiente por 16 h antes de la evaporación a sequedad. El residuo Se disolvió en DCM (100 ml) y se lavó con carbonato ácido de sodio saturado (3x100 ml) , 1 M HCl (3x100 ml) y salmuera, se secó (Na2S04) , y el solvente se removió al vacío, para dar el producto requerido 5.25 g (70% de rendimiento) el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional, Pureza LCMS 100%, m/z 349 [M++H]+ Etapa 2: éster ciclopentílico de ácido (S) -2- (4-Amino-benzoilamino) -4-metil-pentanoico Se disolvió la nitro amida de la Etapa 1 (5.25 g, 15.1 mmoles) en etanol (100 ml) . Se agregó Pd/carbono (200mg) y la reacción se agitó por 16 h a temperatura ambiente bajo hidrógeno (presión de balón) . La mezcla de reacción se filtró a través celite y se evaporó para dar la amida de amina requerida, 3.9 g (81% de rendimiento) la cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional, Pureza LCMS 100%, m/z 319 [M++H] + Etapa 3: Acoplamiento a la resina La resina de hidroxilamina Wang derivatizada con ácido (1.6 g, carga de 1.8 mmoles/g) se dilató en DCM (anhidro, 20 ml) . Se agregó 1-Cloro-N, N-2-trimetilopropenilamina (1.15 ml, 8.64 mmoles) por goteo antes de agitar a temperatura ambiente por 1 h. Se agregó éster ciclopentílico de ácido (S) -2- (4-Amino-benzoilamino) -4-metil-pentanoico (2.75 g, 8.64 mmoles) seguido por trietilamina (2.4 ml, 17.63 mmoles) y la reacción se agitó a temperatura ambiente por 16 h. La resina se lavó (estándar) y se secó con aire. Etapa 4: éster ciclopentílico de ácido (S)-2-[4-(7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -benzoilamino] -4-metil-pentanoico (98) El éster ciclopentílico enlazado a la resina de la Etapa 3 se agitó con 2% de TFA/DCM (10 ml) por 10 minutos antes de filtrar la resina y evaporar el solvente bajo presión reducida a temperatura ambiente. El procedimiento se repitió (x3) y el producto crudo combinado purificó a través de HPLC preparativa para producir el compuesto (98) (36 mg) . Pureza LCMS 91%, m/z 490 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d:0.80 - 0.95 (6 H, 2 x CH3) , 1.25 (4 H, m, alquilo), 1.40 -1.85 (15 H, m, alquilo), 2.00 (2 H, t, CH2) , 2.30 (2 H, t, CH2) , 4.45 (1 H, m, CH) , 5.05 (1 H, m, CH) , 7.60 (2 Hl d, Ar) , 7.75 (2 H, d, Ar) . Etapa 5: ácido (S) -2- [4- (7-hidroxicarbamoil-heptanoilamino) -benzoilamino] -4-metil-pentanoico (99) El Compuesto (98) (21 mg, 0.043 mmoles) se disolvió en THF (1 ml) y se agregó 2M de NaOH (1 ml) . La reacción vial se agitó por 16 h antes de la remoción de THF a través del soplado de una corriente de gas N2 en la superficie de la solución. El residuo acuoso se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (99) (5.2mg). Pureza LCMS 92%, m/z 422 [M++H] \ XH RMN (400 MHz, MeOD), d:0.95 -1.05 (6 H, m, 2 x CH3), 1.30 - 1.50 (4 H, m, alquilo), 1.55 - 1.85 (7 H, m, alquilo), 2.10 (2 H, t, CH2) , 2.40 (2 H, t, CH2) , 4.65 (1 H, m, CH) , 7.65 (2 H, d, Ar) , 7.80 (2 H, d, Ar) . Síntesis del Compuesto (100) y el Compuesto (101) R = ciclopentilo 100 R - H 101 Etapa 1: ácido 5- ( (E) -2-Etoxicarbonil-vinil) -1H-indole-2-carboxílico Se agregó ácido 5-Bromoindole-2-carboxílico (400 mg, 1.66 mmoles) y tri-O-tolil fosfina (96 mg, 0.32 mmoles) a un tubo de microondas. Se agregó etil acrilato (0.56 ml, 5.6 mmoles), Et3N (0.92 ml, 6.6 mmoles), acetonitrilo (2.5 ml) y Pd(OAc)2 (40 mg, 0.18 mmoles). La reacción se colocó en un microondas CEM a 150 W, 90°C por 30 minutos con un tiempo de rampa de 5 min. Se agregó EtOAc y la mezcla de reacción se filtró a través celite. Esta almohadilla de celite se lavó con DCM y las fracciones orgánicas combinadas se removieron para dar un sólido amarillo. Este sólido se volvió a disolver en DCM y se extrajo en carbonato ácido de sodio saturado. La capa acuosa se lavó con DCM y éter dietílico. La capa básica acuosa se hizo acida con 2M de HCl (pH=5) y el producto se extrajo en EtOAc. El solvente se removió para dar el producto requerido (370 mg, 86% de rendimiento) . Pureza LCMS 86%, m/z 260 [M++H]+ Etapa 2 : ácido 5- [ E) -2-Etoxicarbonil-vinil) -1H-indol-2-carboxílico Se disolvió ácido 5- ( ( E) -2-Etoxicarbonil-vinil ) -1H-indole-2-carboxílico (430 mg, 1. 66 mmoles) en EtOAc (100 ml) . Se agregó Pd/carbono (lOOmg) y la reacción se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno (presión de balón) por 18 h. La mezcla de reacción se filtró a través una almohadilla de celite y se lavó con EtOAc. El solvente se removió para dar el producto requerido el cual se utilizado en el siguiente paso sin purificación adicional (0.47 g) . Pureza LCMS 92%, m/z 262 [M++H] + Etapa 3 : éster etílico de ácido 3- { 2- [ 6- ( tetrahidro-piran-2-iloxicarbanmoil ) -hexilcarbanmoil ] -ÍH- indol- 5-il } -propiónico Se disolvió ácido 5- ( (E) -2-Etoxicarbonil-vinil) -1H-indol-2-carboxílico (0.427 g, 1.6 mmoles) en DMF anhidro (20 ml) . Se agregó EDCl. HCl (0.38 g, 2 mmoles), Et3N (0.59 ml, 4.3 mmoles), HOBt (0.27 g, 2 mmoles) y (tetrahidropiran-2-iloxi) amida de 7 ácido amino heptanoico* (0.4 g, 1.6 mmoles en DMF anhidro 20 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente por 16 h bajo nitrógeno. Se agregó agua, la mezcla de reacción se acidificó a un pH = 6-7 (10% de ácido cítrico) y se extrajo con DCM. La capa orgánica se lavó con 10% ácido cítrico y carbonato ácido de sodio saturado (x2) . El solvente se removió al vacío para dar el producto crudo el cual se purificó a través de cromatografía (EtOAc: hexano 1:2 -> EtOAc) para dar el producto requerido as un sólido amarillo (550 mg, 69% de rendimiento). Pureza LCMS 93%, m/z 488 [M++H] + Etapa 4: ácido 3- { 2- [6- (tetrahidro-piran-2-iloxicarbanmoil) -hexilcarbanmoil] -lH-indol-5-il } -propiónico Se disolvió éster etílico de ácido 3-{2-[6- (tetrahidro-piran-2-iloxicarbanmoil) -hexilcarbanmoil] -1H-indol-5-il}-propiónico (550 mg, 1.13 mmoles) en THF/metanol (50 ml/ 25 ml) . Se agregó 1.4 M de solución de NaOH de (50 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente por 4 h.
El solvente se redujo a aproximadamente el 50% del volumen y se agregó 1 M de HCl a un pH 6-7. La mezcla se extrajo con DCM y además se extrajo con EtOAc. La capa orgánica combinada se secó Na2S0 y el solvente se removió al vacío para dar el producto requerido 357mg (69% de rendimiento) como un polvo amarillo el cual se utilizado en el siguiente paso sin purificación adicional. Pureza LCMS 94%, m/z 460 [M++H]+ Etapa 5: éster ciclopentílico de ácido (S)-3-Fenil-2-(3-{2-[6- (tetrahidro-piran-2-iloxicarbanmoil) -hexil-carbanmoil] -ÍH-indol-5-il } -propioniamino) -propiónico Se disolvió ácido S3-{ 2- [6- (tetrahidro-piran-2-iloxicarbamoil-hexilcarbamoil] -lH-indol-5-il] -propiónico (0.357 g, 0.78 mmoles) en DCM/DMF (20 ml/20 ml) . Se agregó EDCl. HCl (0.163 mg, 0.86 mmoles), trietilamina (0.24 ml, 1.7 mmoles), HOBt (0.116 mg, 0.88 mmoles) y éster ciclopentílico de L-fenilalanina . sal de TsOH (0.346 mg, 0.88 mmoles) y la mezcla de reacción se agitó por 16 h a temperatura ambiente bajo nitrógeno. El volumen del solvente se redujo (~10 ml) , se agregó DCM y la capa orgánica se lavó con agua (x3) . La capa orgánica se secó (Na2S04) y el solvente se removió para dar el producto requerido (500 mg, 95% de rendimiento) que se utilizó sin purificación adicional. Pureza LCMS 77%, m/z 675 [M++H]+ Etapa 6: éster ciclopentílico de ácido (S)-2-{3-[2-( 6-hidroxicarbamoil-hexilcarbamoil) -lH-indol-5-il] - 100 Éster ciclopentílico de ácido (S) -3-Fenil-2- ( 3- { 2- [6- (tetrahidro-piran-2-iloxicarbanmoil) -hexil-carbanmoil] -1H-indol-5-il } -propionilamino) -propiónico (200 mg, 0.297 mmoles) se agitó a temperatura ambiente por 3.5 h en TFA/DCM/MeOH (1.5 ml/15 ml/15 ml). Se agregó más TFA (0.3 ml) y la reacción se agitó por 30 minutos más. La solución se concentró al vacío, se volvió a suspender en DCM y el solvente se removió (x3) . El crudo material se purificó a través de HPLC preparativa para dar el compuesto puro (100) (19.3 mg) , Pureza LCMS 100%, m/z 591 [M++H]+, X RMN (400 MHz, MeOD), 5:1.27 - 1.70 (16 H, m, alquilo), 1.97 (2 H, t, CH2) , 2.40 (2 H, t, J = 7.84 Hz, CH2) , 2.76 - 2.85 (4 H, m, 2 x CH2), 3.25 (2 H, t, J = 7 Hz, CH2) , 4.41 (1 H, m, NHCHCO, 4.95 (1 H, m, CH) , 6.85 (1 H, s, CH) , 6.95 (3 H, m, Ar) , 7.05 (3 H, m, Ar) , 7.20 - 7.26 (2 H, s + d, J = 8.5 Hz, Ar) Etapa 7: ácido (S) -2-{ 3- [2- ( 6-hidroxicarbamoil-hexilcarbamoil) -lH-indol-5-il] -propionilamino} -3-fenil-propiónico (101) 101 Se disolvió el Compuesto (100) (80 mg, 0.14 mmoles) en THF/MeOH (1 ml/ 0.5 ml) y se agregó 1.4 M NaOH (0.5 ml) . La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 h. El THF se removió a través del soplado de una corriente de gas N2 en la superficie de la solución y el material residual purificó a través de HPLC preparativa para dar el compuesto (101) (34.9 mg) , Pureza LCMS 95%, m/z 523 [M++H]+, XH RMN (400 MHz, MeOD), d:1.35 - 1.50 (4 H, m, alquilo), 1.60 - 1.75 (4 H, m, alquilo), 2.15 (2 H, br t, CH2) , 2.55 (2 H, br t, CH2) , 2.95 (3 H, m, CH + CH2), 3.10 (1 Hl dd, CH) , 4.65, (1 H, m, NHCHCO), 7.00 - 7.15 (7 H, m, Ar), 7.35 - 7.41 ( 2 H, m, Ar) ^Preparación de (tetrahidropiran-2-iloxi) amida de ácido 7 amino heptanoico Etapa 1: éster 9H-fluoren-9-ilmetílico de ácido 6-tetrahidro-piran-2-iloxicarbamoil-hexil] -carbámico
[0957] A una solución de ácido 7- (9H-fluoren-9-iloxicarbonilamino) heptanoico (1 g, 2.72 mmoles) en DCM anhidro/THF (15 ml/15 ml) se agregó EDCl. HCl (627 mg, 3.27 mmoles), HOBt (442 mg, 3.27 mmoles) y 0- (tetrahidro-piran-2-il) -hidroxilamina (383 mg, 3.27 mmoles) que se agitó bajo nitrógeno por 48 h. Se agregó EDCl. HCl (260 mg, 1.36 mmoles), HOBt (184 mg, 1.36 mmoles) y O- (tetrahidro-piran-2-il) -hidroxilamina (159 mg, 1.36 mmoles) y la reacción continuó por 24 h más. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (100 ml) , se lavó con agua (3 x 100 ml) , salmuera (10OmI)l se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró al vacío. La purificación a través de cromatografía (MeOH: DCM 2:98) dio un sólido blanco (1.03 g, 81%) . Etapa 2: éster tetrahidro-piran-2-il de ácido 7-Amino-heptanoico Se disolvió 9H-fluoren-9-iléster metílico de ácido 6- (tetrahidro-piran-2-iloxicarbanmoil) -hexil] -carbámico (300mg, 0.644 mmoles) en 20% de piperidina/DCM (30 ml) y la reacción se agitó por 0.5 h. La reacción se evaporó a sequedad, se volvió a disolver en DCM y se evaporó (x3) . El producto requerido se obtuvo después de la cromatografía (MeOH : DCM : NH3), 120mg. Pureza LCMS 98%, m/z 245 [M++H]+.
Síntesis del Compuesto (102) y el Compuesto (103) R *** ciclopentilo 102 R *** H 103 Etapa 1: Carga de la resina La resina de hidroxilamina Wang (3.72 g, 1.8 mmoles/g) se dilató en DMF (50 ml) . HATU (7.5 g, 19.7 mmoles), se agregó ácido 5-nitro-i-benzotiofen-2-carboxílico (3 g, 13.45 mmoles, disuelto en DMF 150 ml) y diisopropiletilamina (4.65 ml, 26.7 mmoles) y la resina se agitó a temperatura ambiente por 4 d. La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar y se secó con aire. Etapa 2: Reducción nitro La resina de etapa 1 (4.9 g, 1.8 mmoles/g), se dilató en DMF (200 ml) y se agregó cloruro de estaño deshidratado (19.9 g, 88 mmoles). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 16 h. La resina se filtró y se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar y se secó con aire. Etapa 3: éster metílico de ácido 4- (4-Benciloxicarbonilmetil-fenoxi) -butírico Se disolvió 4-hidroxifenil acetato de bencilo (9 g, 37 mmoles) en DMF (300 ml) . Se agregó hidróxido de sodio molido (2.23 g, 56 mmoles) y bromo buritato de 4-metilo (6.4 ml, 56 mmoles) y la reacción se calentó a 60 °C por 16 h. Se agregó agua a la mezcla de reacción enfriada y la solución se acidificó (pH = 5/6) con 1 M HCl. La capa acuosa se extrajo con EtOAc y la capa orgánica se lavó con agua (x2), se secó sobre Na2S04, se filtró y se evaporó a sequedad. El diéster requerido se obtuvo después de la cromatografía (EtOAc ¡heptano 1:2), (9.56 g, 75%) Pureza LCMS 90%, m/z 343 [M++H]+.
Etapa 4: éster metílico de ácido 4- (4-Carboximetil-fenoxi) -butírico Se disolvió éster metílico de ácido 4- (4-Benciloxicarbonilmetil-fenoxi) -butírico (1.4 g, 4.09 mmoles) en EtOAc (60 ml). Se agregó Pd/carbono (100 mg) y la reacción se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno (balón) por 16 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró a través una almohadilla de celite y la almohadilla se lavó con EtOAc. El filtrado se evaporó a sequedad para dar un sólido blanco (1.03 g, 100% de rendimiento). Pureza LCMS 93%, m/z 253 [M++H]+. Etapa 5: Acoplamiento a la resina La resina de la Etapa 2 (0.18 g, 1.8 mmoles/g) se dilató en DMF (5 ml). HATU (0.37 g, 0.96 mmoles), se agregó éster metílico de ácido 4- (4-Carboximetil-fenoxi) -butírico (0.247 g, 0.96 mmoles disuelto en DMF - 10 ml) y diisopropilamina (0.56 ml, 3.3 mmoles) y la reacción se agitó a temperatura ambiente por 16 h. La reacción se filtró y La resina se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar y se secó con aire. Etapa 6: Hidrólisis del éster El éster metílico de la Etapa 5 (280 mg, 1.8 mmoles/g) se disolvió en THF/MeOH (4 ml/ 4 ml) y se agregó 1.4 M de NaOH (8 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 16 h. La resina se filtró y se lavó utilizando el lavado estándar y se secó con aire. Etapa 7 : Acoplamiento del aminoácido La resina de la Etapa 6 (1.6 g, 1.8 mmoles/g) se dilató en DMF anhidro (120 ml) . Se agregó HATU (3.3 g, 8.6 mmoles), éster ciclopentílico de L-fenilalanina. sal de TsOH (3.4 g, 8.6 mmoles) y diisopropilamina (5 ml, 2.9 mmoles) y la reacción se agitó a temperatura ambiente por 16 h. La reacción se filtró y La resina se lavó utilizando el procedimiento de lavado estándar y se secó con aire.
Etapa 8: éster ciclopentílico de ácido (S)-2-(4-{4-[ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-5-ylcarbanmoil) -metilo] -fenoxi } -butirilamino) -3-fenil-propiónico (102) El éster ciclopentílico enlazado a la resina de la Etapa 7 se agitó con 2% de TFA/DCM (10 ml) por 10 minutos antes de filtrar la resina y evaporar el solvente bajo presión reducida a temperatura ambiente. El procedimiento se repitió (x3) y el producto crudo combinado purificó a través de HPLC preparativa para producir el compuesto (102) (22.5mg). Pureza LCMS 99%, m/z 644 [M++H]+, Hi RMN (400 MHz, MeOD), d:1.45 - 1.80 (6 H, m, alquilo), 1.95 (2 H, pent, CH2) , 2.34 (2 H, t, J = 7.3 Hz, CH2) , 2.90 (1 H, dd, CH) , 3.04 (1 H, dd, CH) , 3.62 (2 H, s, CH2), 3.86, (2 H, m, CH2) , 4.55 (1 H, m, NHCHCO), 5.07 (1 H, br s, CH), 6.83 (2 H, d, J = 8.3 Hz, Ar) , 7.14 - 7.18 (5 H, m, Ar) , 7.25 (2 H, d, J = 8 Hz, Ar) , 7.47 (1 H, d, J = 9 Hz, Ar) , 7.73 (1 H, s, Ar), 7.81 (1 H, d, J = 8.8 Hz) , 8.25 (1 H, s, Ar) Etapa 9: ácido (S) -2- (4- { 4- [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-5-ylcarbanmoil) -metilo] -fenoxi } -butirilamino) -3-fenil-propiónico (103) La resina de éster ciclopentílico de la Etapa 7 (200mg) se dilató en THF/MeOH (2 ml/2 ml) y 1.4 M NaOH (2 ml ) se agregó. La reacción se agitó a temperatura ambiente por 16 h. La resina se filtró y se lavó utilizando el lavado estándar. El ácido carboxílico enlazado a la resina se agitó con 2% de TFA/DCM (3 ml) por 10 minutos antes de filtrar la resina y evaporar el solvente bajo presión reducida a temperatura ambiente. El procedimiento se repitió (x3) y el producto crudo combinado purificó a través de HPLC preparativa para producir el compuesto (103) (33.7mg) . Pureza LCMS 88%, m/z 576 [M++H]+, 1U RMN (400 MHz, d6-DMSO) , d:1.93 (2 H, m, CH2), 2.30 (2 H, m, CH2), 2.91 (1 H, dd, J = 9.9 Hz, J = 13.8 Hz, CH), 3.13 (1 H, dd, J = 4.8 Hz, J = 13.9 Hz, CH), 3.67 (2 H, s, CH2), 3.91 , (2 H, m, CH2), 4.50 (1 H, m, NHCHCO), 6.92 (2 H, d, J = 8.7 Hz, Ar), 7.24 - 7.34 (7 H, m, Ar), 7.61 (1 H, m), 7.92 (1 H, br s, Ar), 8.00 (1 H, d, J = 8.8 Hz, Ar), 8.31 (1 H, d, J = 8.1 Hz, Ar) , 8.39 (1 H, s) , 9.36 (1 H, br s) , 10.36 (1 H, s) , 11.52 (1 H, s) , 12.76 (1 H, br s) Síntesis de los siguientes compuestos como Ejemplificados por el Compuesto 5) 108 109 R= ddopßntilo 124 R=H 125 Paso 1: ácido 4- (ter-Butoxicarbonilamino-metilo) benzoico Se saturó alcohol 4-Aminometilobencílico (1.0 g, 6.60 mmoles) en una mezcla de THF (10 ml) y agua (10 ml) . Se agregó una solución de carbonato ácido de sodio saturado hasta que el pH de la solución fue de >pH 9. La mezcla se enfrió a 0 °C y se agregó di-ter-butildicarbonato (2.89 g, 13.23 mmoles). La reacción se dejó en agitación durante la noche después THF se removió bajo vacío. La mezcla acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml) y después se acidificó a un pH 3 a través de la adición de 1 N HCl. Esto se extrajo con EtOAc (2 x 10 ml), Las capas orgánicas combinada se secó (MgS04) y se evaporó a sequedad para dar el producto deseado (1.60 g, 97%) . m/z 252 [M++H]+ Paso 2: éster ter-butílico de ácido ( 4-hidromextil-bencil) -carbámico Se saturó LiAI (227 mg, 5.97 mmoles) en una mezcla de THF (5 ml) y dioxano (5 ml) y se enfrió a 0°C bajo una atmósfera de N2. Se disolvió ácido 4- (ter-Butoxicarbonilamino-metilo) -benzoico en una mezcla de THF (5 ml) y dioxano (5 ml) y se aqregó solución enfriada por goteo sobre 15 min. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó por 16 h. Se agregó agua (1 ml) a la mezcla de reacción el cual se después se filtró a través celite. El filtrado se evaporó a sequedad y el residuo se dividió entre EtOAc (25 ml) y agua (25 ml) . La capa acuosa se extrajo con EtOAC (2 x 25 ml) , las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2S04) y se evaporaron a sequedad para dar el producto deseado (460 mg, 100%). m/z 260 [M++Na]+ Paso 3: éster ter-butílico de ácido (4-Formil-bencil) -carbámico Se disolvió éster ter-butílico de ácido 4-hidromextil-bencil) -carbámico (480 mg, 0.71 mmoles) en DCM (3 ml) y se enfrió a -78 °C (hielo seco/acetona) . Se agregó periodinano Dess-Martin (331 mg, 0.78 mmoles) a la reacción la cual se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó por 3 h. Se agregó una solución de 1:1 bicarbonato de sodio saturado y sulfito de sodio (20 ml) y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente por 15 min. La capa orgánica se aisló, se lavó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml), se secó (Na2S04) y se evaporó a sequedad para dar el compuesto deseado (480 mg, 100%). m/z 258 [M++Na] + Paso 4: éster ciclopentílico de ácido (S) -2- [4- (ter-Butoxicarbonilamino-metilo) -bencilamino] -3-fenil-propiónico Se disolvió éster ter-butílico de ácido (4-Formil-bencil) -carbámico (200 mg, 0.85 mmoles) en DCE (10 ml) y a esto se agregó éster ciclopentílico de fenilalanina (214 mg, 0.94 mmoles) . La reacción se agitó a temperatura ambiente por 15 min. Se agregó Triacetoxiborohidruro de sodio (538 mg, 2.55 mmoles) y acético ácido (60 ul) y la reacción se agitó por durante 1 h más. Se agregó Bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y la solución se diluyó con DCM (20 ml) . La capa orgánica se aisló y se concentró para dar el producto deseado el cual se tomó el siguiente paso sin purificación adicional, m/z 453 [M++H+ Paso 5: éster ciclopentílico de ácido (S)-2-(4-Aminometil-bencilamino) -3-fenil-propiónico Se trató éster ciclopentílico de ácido (S)-2-[4' (ter-Butoxicarbonilamino-metilo) -bencilamino] -3-fenil- propiónico con 4M HCl en dioxano (1 ml, 0.25 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente por 1 h. La mezcla se evaporó a sequedad y se dividió entre EtOAc (20 ml) y agua (20 ml) . Se agregó Bicarbonato de sodio saturado (20 ml) a la capa acuosa la cual se después se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml) . Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2S04) y se evaporaron a sequedad para dar el producto deseado (263 mg, 79% en dos pasos), m/z 353 [M++H]+ Paso 6: éster ciclopentílico de ácido (S)-2-[4- ( { [2- ( 1-isobutoxi-etoxicarbamoil) -benzo [b] tiofen-6-ilmetil] -amino } -metilo) -bencilamino] -3-fenil-propiónico Se disolvió (1-isobutoxi-etoxi) amida de ácido 6-formil-benzo [b] tiofen-2-carboxílico (Esquema de reacción 7) (220 mg, 0.68 mmoles) y éster ciclopentílico de ácido (S)-2- (4-Aminometil-bencilamino) -3-fenil-propiónico (263 mg, 0.75 mmoles) en DCE (10 ml) bajo una atmósfera de N2. Se agregó Triacetoxiborohidruro de sodio (430 mg, 2.04 mmoles) y acético ácido (50 l) y la reacción se agitó a temperatura ambiente por 3 h. Se agregó carbonato ácido de sodio (20 ml) y la mezcla de reacción se extrajo con diclorometano (3 x 50 ml) . Las capas orgánicas se combinaron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna (50%-100% EtOAc/heptano) para dar el compuesto protegido (80 mg, 21%) . m/z 658 [M++H]+ Paso 7: éster ciclopentílico de ácido (S)-2-(4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil } -bencilamino) -3-fenil-propiónico (104 ) 104 Se disolvió éster ciclopentílico de ácido (S)-2-[4- ( { [2- ( 1-1sobutoxi-etoxicarbamoil) -benzo [b] tiofen-6-ilmetilo] -amino } -metil) -bencilamino] -3-fenil-propiónico en DCM (2 ml) y MeOH (2 ml) y se trató con TFA (1 ml) . La mezcla se agitó por 1 h a temperatura ambiente después se concentró a sequedad y se agregó DCM (5 ml) y heptano (5 ml) . La mezcla se evaporó a sequedad. Este procedimiento se repitió tres veces para producir el compuesto (104) (20 mg, 59%) como un aceite. Pureza LCMS 95%, m/z 558 [M++H] \ 1 H RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.25-1.91 (8H, m, 4xCH2), 3.12-3.47 (2H, m, CH2) , 4.26 (1 H, m, CH) , 4.33 (2H, d, J=5.5 Hz, CH2) , 4.36 (2H, s, CH2), 4.43 (1 H, s, CH2), 5.16 (1 H, s, CH) , 5.13 (ÍH, m, CH) , 7.25-7.37 (6H, m, ArH), 7.54-7.63 (4H, m, ArH), 7.94 (2H,m, ArH) , 8.09 (1 Hl SI ArH) .
Paso 8: ácido (S) -2- [4- ( { [2- ( 1-lsobutoxi-etoxicarbamoil) -benzo [b] tiofen-6-ilmetil] -amino} -metilo) -bencilamino] -3-fenil-propiónico Se disolvió éster ciclopentílico de ácido (S) -2- [4- ( { [2-( 1-1sobutoxi-etoxicarbamoi1) -benzo [b] tiofen-6-ilmetilo] -amino } -metil) -bencilamino] -3-fenil-propiónico (40 mg, 0.06 mmoles) en THF (2 ml) y agua (2 ml) . Se agregó LiOH (8 mg, 0.30 mmoles) y la mezcla de reacción se calentó a 50 °C por 36 h. El THF se removió a través de evaporación y el residuo se dividió entre agua (10 ml) y EtOAc (10 ml) . La capa acuosa se aisló y el pH se ajustó a 3 a través de la adición de 1 M de HCl. Esto se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml) . Las capas orgánicas se combinaron y se evaporaron a sequedad. Paso 9: (S) -2- (4- { [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil } -bencilamino) -3-fenil-propiónico (105) 105 Se disolvió ácido (S) -2- [4- ( { [2- (1-lsobutoxi-etoxicarbamoil) -benzo [b] tiofen- 6-ilmetilo] -amino} -metil) -bencilamino] -3-fenil-propiónico en MeOH (2 ml) y THF (2 ml) . Se agregó TFA (1 ml) a la mezcla y se agitó por 1 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró a sequedad y se agregó DCM (5 ml) y heptano (5 ml) . La mezcla se evaporó a sequedad. Este procedimiento se repitió tres veces para producir el compuesto (105) (17 mg, 57%) como un sólido de color rosa. Pureza LCMS 90%, m/z 490 [M++H]+, ÍH RMN (300 MHz, MeOD), d: 3.33 (2H, m, CH2) , 4.19 (1 H, m, CH2) , 4.29 (2H, s, CH2) , 4.35 (2H, S, CH2) , 4.42(2H, S, CH2) , 7.29-7.39 (5H, m, ArH), 7.54-7.72 (5H, m, ArH), 7.88 (1 H, s, ArH), 8.00 (1 Hl d J=8.0Hz, ArH), 8.08 (1 H, s, ArH) Los siguientes el compuestos se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito para el compuesto (104) y el compuesto (105) Éster ciclopentílico de ácido (S) -2- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil }-bencilamino) -3- (4-hidroxi-fenil) -propiónico (106) Pureza LCMS 98%, m/z 574 [M++H] \ XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.30-1.87 (8H, m, 4 x CH2) , 2.97-3.35 (2H, m, CH2) , 4.17 (1 H, m, CH) , 4.31 (2H, d, J = 5.4 Hz, CH2) , 4.36 (2H, s, CH2) , 4.42 (2H, s, CH2) , 5.11-5.16 (1 H, m, CH) , 6.77 (2H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H), 7.06 (2H1 d, J = 8.4 Hz, Ar-H), 7.54-7.65 (5H, m, Ar-H), 7.87 (1 H, s, Ar-H), 7.99 (1 H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H), 8.08 (1 H, s, Ar-H) Ácido (S) -2- (4-{ [ (2-Hidroxicarbamoil-benzo[b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil} -bencilamino) -3- (4-hidroxi-fenil) -propiónico (107) Pureza LCMS 90%, m/z 505 [M++H]+, X RMN (300 MHz, MeOD), d: 3.09-3.27 (2H, m, CH2) , 4.03 (1 H, m, CH) , 4.24 (2H, s , CH2) , 4.34 (2H, s, CH2) , 4.42 (2H, s, CH2) , 6.76 (2H, d J = 8.3 Hzl Ar-H), 7.11 (2H, d J = 8.5 Hz, Ar-H), 7.56-7.59 (5H, m, Ar-H), 7.89 (1 H, s, Ar-H), 8.02 (1 H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H), 8.08 (1 H, s, Ar-H) Éster ciclopentílico de ácido (S) -3-ter-Butoxi-2- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoyI-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) - amino] -metil} -bencilamino) -butírico (108) Pureza LCMS 99%, m/z 568 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.20 (9H, s, 3 x CH3) , 1.29 (3H, d, J = 6.6 Hz, CH3) , 1.67-1.94 (8H, m, 4 x CH2) , 3.75 (ÍH, d, J = 2.7 Hz, CH) , 4.29-4.32 (1H1 m, CH) , 4.36 (4H, d, J = 2.4 Hz, 2 x CH2) , 4.43 (2H, s, CH2) , 5.22-5.25 (1 H, m, CH) , 7.54-7.65 (5H, m, Ar-H), 7.88 (ÍH, s, Ar-H), 8.01 (1 H, d, J = 8.1 Hz, Ar-H), 8.08 (ÍH, s, Ar-H) Éster ciclopentílico de ácido (S) -3-ter-Butoxi-2- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) - amino] -metil} -bencilamino) -propiónico (109) Pureza LCMS 95%, m/z 554 [M++H] \ XU RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.23 (9H, s, 3x CH3) , 1.67-1.98 (8H, m, 4 x CH2) , 3.87-3.98 (2H, m, CH2) , 4.19-4.22 (1 H, m, CH) , 4.34-4.36 (4H, m, 2xCH2), 4.42 (2H, s, CH2) , 5.31-5.35 (1H1 m, CH) , 7.54-7.62 (5H, m, Ar-H), 7.87 (1 H, s, Ar-H), 8.00 (ÍH, d, J = 8.1 Hz, Ar-H), 8.08 (ÍH, s, Ar-H) Ester ciclopentílico de ácido (S) -2- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil } -bencilamino) -4-metilosulfanil-butírico (110) Pureza LCMS 90%, m/z 541 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.70-1.98 (8H, m, 4 x CH2) , 2.11 (3H, s, CH3), 2.17-2.34 (2H, m, CH2) , 2.54-2.73 (2H, m, CH2) , 4.19-4.23 (1 H, m, CH) , 4.27-4.42 (6H, m, 3 x CH2) , 5.35-5.39 (1 H, m, CH) , 7.54-7.63 (5H, m, Ar- H) , 7.87 (1 H, s, Ar-H), 7.97-8.00 (1 H, m, Ar-H), 8.08 (1 H, s, Ar-H) Éster ciclopentílico de ácido (S) -1- (4-{ [ (2-Hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil } -bencil) -pirrolidin-2-carboxílico (111) Pureza LCMS 96%, m/z 508 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.66-2.29 (12H, m, 6 x CH2) , 3.59-3.67 (2H, m, CH2) , 4.38-4.46 (6H, m, 3 x CH2) , 4.62 (1 H, d, J = 12.3 Hz, CH) , 5.21 (1 H, m, CH) , 7.61-7.68 (5H, m, Ar-H), 7.88 (1 H, s, Ar- H) , 8.00-8.02 (1 H, m, Ar-H), 8.13 (1 H, s, Ar-H) Ácido (S) -1- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil} -bencil) -pirrolidín- 2-carboxílico (112) Pureza LCMS 100%, m/z 440 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.96-2.09 (2H, m, CH2) , 2.14-2.23 (2H, m, CH2) , 2.52-2.65 (1 H, m, CH2) , 3.56-3.67 (1 H, m, CH2) , 4.19- 4.25 (1 H, m, CH), 4.36-4.57 (6H, m, 3 x CH2) , 7.55-7.64 (5H, m, Ar-H), 7.88 (1 H, s, Ar-H), 7.99-8.01 (1 H, m, Ar-H), 8.09 (1 H, s, Ar-H) Ester ciclopentílico de ácido (R) -3-ter- ButilsuIfanil-2- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil} -bencilamino) -propiónico (113) Pureza LCMS 97%, m/z 570 [M+H]+, XH RMN (300MHz, MeOD), d: 1.36(9H, s), 1.79 (8H1 m) , 3.16 (2H, d,5.3Hz), 4.25(2H, t, J=5.6Hz), 4.31 (2H, s), 4.36(2H,s), 4.42(2H, s), 5.34(1 H, m) , 7.56(1 H, d, J=8.1 Hz) , 7.62 ( 4H, s) , 7.89(1 H, s), 8.09 (1 H, s), 8.51 (1 H, d, J=8.1 Hz), Ácido (R) -3-ter-butilsulfanil-2- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil } -bencilamino) -propiónico (114) Pureza LCMS 97%, m/z 502 [M]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.35 (9H, s, 3 x CH3), 3.09 (2H, m, CH2) , 3.22 (2H, m, CH2) , 3.83 (1 H, t, J = 8.8 Hz, CH) , 4.34 (2H, s, CH2) , 4.42 (2H, s, CH2), 7.57 (1 H, d, J = 10.0 Hz, ArH), 7.62 (4H, s, ArH x 4), 7.89 (1 H, s, ArH), 8.02 (1 H, d, J = 8.1 Hz, ArH) , 8.09 (ÍH, s, ArH) . Éster ciclopentílico de ácido (S) -2- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil}-bencilamino) -3 , 3-dimetil-butírico (115) Pureza LCMS 94%, m/z 546 [M+Na]+, ?H RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.08 (9H, s, 3 x CH3), 1.80 (8H, m, 4 x CH2) , 3.49 (1 H, s, CH) , 4.29 (2H, d, J = 13.5 Hz, CH2) , 4.29 (2H, d, J = 13.5 Hz, CH2), 4.36 (2H, s, CH2) , 4.44 (2H, s, CH2) , 5.19 (1 H, t, J = 5.7Hz), 7.59 (5H, m, ArH x 5), 7.88 (1 H, ArH), 8.00 (1 H, d, J = 8.3Hz), 8.09 (1 H, s, ArH) . Éster ciclopentílico de ácido (S) -ciciohexil- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil} -bencilamino) -acético (116) Pureza LCMS 100%, m/z 550 [M+H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 0.86-1.95 (18H, m, 9xCH2), 3.73 (1 H, m, CH) , 4.11 (1 H, d J = 5.7 Hz, CH) , 4.19 (2H, s, CH2) , 4.26 (2H, s, CH2), 4.36 (2H, s, CH2) , 7.53 (5H, m, ArH), 7.77 (1 H, s, CH) , 7.82 (ÍH, d J = 11.6 Hz, ArH), 8.02 (1 H, s, ArH) Ácido (S) -Ciciohexil- (4-{ [ (hidroxicarbamoil-benzoIbltiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil} -bencilamino) -acético (117) Pureza LCMS 100%, m/z 482 [M+H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD)l d: 0.72-1.60 (10H, m, 9xCH2), 3.89 (1 H, m, CH) , 4.11 (3H, m, CH) , 4.23 (2H, s, CH2) ,. 4.31 (2H, s, CH2) , 7.48 (5H, m, ArH), 7.76 (1 H, s, CH) , 7.88 (1 H, d J = 11.6 Hz, ArH), 7.98 (1 H, s, ArH) . Éster ciclopentílico de ácido (S) -2- (4-{ [ (2-Hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil } -bencilamino) -4-metil-pentanoico (122) Pureza LCMS 94%, m/z 524 [M++H]+, 1 H RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.01 (6H1 s, 2xCH3) , 1.28 (1 H, m, CH) , 1.56-1.95 (10H, m, 4xCH2, CH2) , 4.00 - 4.43 (6H, m, 3xCH2), 4.88 (1 H, m, CH) , 5.36 (1 H, br s, CH) , 7.47-7.62 (5H, m, ArH), 7.94 (2H, t, ArH), 8.08 (1 H, SI ArH). Ácido (S) -2- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo[b] tiofen-6-ylmetil) -amino] -metil} -bencilamino) -4-metil-pentanoico (123) Pureza LCMS 98%, m/z 456 [M++H]+, ÍH RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.00 (6H, m, 2xCH3), 1.86 (2H, m , CH2) , 3.86 (ÍH, m, CH) , 4.29 (2H, s, CH2) , 4.36 (2H, s, CH2) , 4.43 (2H, s, CH2) , 7.56 (1 H, m, ArH), 7.89 (ÍH, s, CH) , 8.02 (ÍH, d J=8.2 Hz, ArH), 8.09 (1 Hl Si ArH). Éster ciclopentílico de ácido (S)-(4-{[(2-Hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil } -bencilamino) -fenil-acético (124) Pureza LCMS 90%, m/z 544 [M++H]+, 1 H RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.31-1.91 (10H, m, 4xCH2, CH2) , 4.22 (2H, dd J=13.1 Hz, CH2), 4.35 (2H, s, CH2), 4.42 (1 H, s, CH2) , 5.16 (1 H, s, CH) , 5.30 (1 H, m, CH) , 7.47-7.62 (9H, m, ArH), 7.94 (2H,m, ArH), 8.08 (1H1 SI ArH). Ácido (S) - (4- { [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] iofen-6-ilmetilo) -amino] -metil}- bencilamino) -fenil-acético (125) Pureza LCMS 100%, m/z 476 [M++H]+, 1 H RMN (300 MHz, MeOD), d: 4.08 - 4.24 (3H, m, CH, CH2) , 4.35 (2H, s, CH2) , 4.43 (ÍH, s, CH2) , 7.46-7.75 (10H, m, ArH), 7.89 (1 H, s, ArH), 8.01 (1 H, d J=7.9 Hz, ArH), 8.09 (1 H, s, ArH) Los siguientes el compuestos se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito para el compuesto (104) y el compuesto (105) utilizando alternativas para el paso 3 y 4 como se describe a continuación. Paso 3b: éster ter-butílico de ácido (4-Bromometil-bencil) -carbámico Se disolvió N-Bromosuccinimida (5.13 g, 28.8 mmoles) en DCM (80 ml) y se enfrió a 0°C. Se preparó una solución de trifenilfosfina (7.18 g, 27.0 mmoles) en DCM (20 ml) y se agregó a una solución enfriada por piridina (1.0 ml, 1.26 mmoles) . El material del paso 2 (2.14 g, 9.0 mmoles) se disolvió en DCM (20 ml) y se agregó y la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó por 16 h. La mezcla se concentró y el residuo purificó mediante cromatografía de columna (50%/50% EtOAc/heptano) para dar el compuesto deseado (864 mg, 32%). m/z 301 [M++Na]+ Paso 4b: éster ciclopentílico de ácido (S) -2- [4- (ter-Butoxicarbonilamino-metilo) -bencilamino] -propiónico Se disolvió éster ciclopentílico de L-Alanina (463 mg, 1.41 mmoles) en DMF (9 ml) y a esto se agregó DIPEA (0.74 ml, 4.24 mmoles) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente por 15 min y después una solución del material del paso 3b (212 mg, 0.706 mmoles) en DMF (5 ml) se agregó goteo durante 1 hr. La reacción después se dejó en agitación a temperatura ambiente por 16 hr y después se diluyó con agua (50 ml) y EtOAc (50 ml) . La capa orgánica se lavó con salmuera (2 x 50 ml) , se secó y se concentró para dar material crudo (0.26 g, 100%) el cual se tomó en el siguiente paso sin purificación adicional, m/z 377 [M++Na]+ Los pasos 5 - 9 son como se describieron para el compuesto (104) y el compuesto (105) Éster ciclopentílico de ácido (S) -2- (4-{ [ (2-Hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil}-bencilamino) -propiónico (118) Pureza LCMS 95%, m/z 482 [M++H]+, X RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.61 (3H, d, J = 7.2 Hz, CH3) , 1.71-1.97 (8H, m, 4 x CH2), 4.13 (ÍH, q, J = 7.2 Hz, CH) , 4.30 (2H, s, CH2) , 4.36 (2H1 s, CH2) , 4.43 (2H, s, CH2) , 5.33-5.36 (1 H, m, CH) , 7.54-7.63 (5H, m, Ar-H), 7.88 (1 H, s, Ar-H), 8.00 (ÍH, d, J = 8.1 Hz, Ar-H), 8.08 (1 H, s, Ar-H) Acido (S) -2- (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil} -bencilamino) -propiónico (119) Pureza LCMS 95%, m/z 414 [M++H]+, ? RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.64 (3H, d, J = 7.1 HzlCH3) , 4.06 - 4.14(1 H, m, CH) , 4.31 (2H, S1CH2), 4.36 (2H, s, CH2) , 4.43 (2H1 s, CH2) , 7.55-7.63 (5H1 m, Ar-H), 7.88 (1H1 s, Ar-H), 8.00 (1 Hl d, J = 8.1 Hz, Ar-H)l 8.09 (1 Hl SI Ar-H) Los siguientes compuestos se prepararon de acuerdo con los procedimientos descritos para el compuesto (118) y el compuesto (119) incorporando los siguientes pasos alternativos/adicionales. Paso 4b: éster ciclopentílico de ácido [4- (ter-Butoxicarbonilamino-metilo) -bencilamino] -acético Procedimiento igual al paso 4a (utilizando la Sal de HCl del éster ciclopentílico) producto: m/z 363 [M++H]+ Paso 4c: éster ciclopentílico de ácido [ [4- (ter-Butoxicarbonilamino-metilo) -bencil] - ( 9H-fluoren-9- ilmetoxi- carbonil) -amino] -acético A una solución de éster ciclopentílico de ácido [ 4 -( ter-Butoxicarbonilamino-metil ) -bencilamino ] -acético ( 0 . 2 g, 0.55 mmoles) y 1 M Na2C03 (1.1 ml, 1.1 mmoles) en DCM (2 ml) , se agregó lentamente con agitación y enfriamiento con baño de hielo, una solución de cloroformiato de 9-Fluorenilmetilo (0.14 g, 0.55 mmoles) en dioxano (1.4 ml) . La mezcla se agitó en el baño de hielo por 4 h y a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se vació agua (90 ml) y se extrajo con éter dietílico. Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron (MgS04) y se evaporaron a sequedad para dar el producto deseado (0.32 g, 100%) . m/z 607 [M++Na] + Paso 5a : éster ciclopentílico de ácido [ ( 4- Aminometil-bencil ) - ( 9H-f luoren-9-ilmetoxicarbonil ) -amino] -acético Procedimiento como se describe en el paso 5, Producto m/z 485 [M++H]+ Paso 6a: éster ciclopentílico de ácido { (9H-Fluoren-9-ilmetoxicarbonil) - [4- ( { [2- (1-isobutoxi-etoxicarbamoil) -benzo [b] tiofen-6-ilmetilo] -amino} -metilo) -bencil] -amino } -acético Procedimiento como se describe en el paso 6. Producto m/z 790 [M++H]+ Paso 7a: éster ciclopentílico de ácido (4-{[(2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil } -bencilamino) -acético (120) 120 Se disolvió éster ciclopentílico de ácido { (9H-Fluoren-9-ilmetoxicarbonil) - [4- ( { [2- ( 1-isobutoxi-etoxicarbamoil) -benzo [b] tiofen-6-ilmetilo] -amino) -metil) -bencil] -amino} acético (0.11 g, 0.14 mmoles) en acetonitrilo (3 ml) y a esto se agregó piperidina (1.5 ml) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente por 1 h. El solvente se evaporó a sequedad y el producto se separó en 2 porciones. Una porción se tomó a través de hidrólisis de éster ciclopentílico, mientras la segunda porción se disolvió en DCM (1.5 ml) y se agitó con 4M HCl en dioxano (1.0 ml) por 2 h. El solvente se evaporó a sequedad y el producto purificó a través de HPLC preparativa para dar el producto deseado como una sal de TFA. Pureza LCMS 99%, m/z 468 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 8.09 (1 H, s, ArH), 8.00 (1 H, d, J = 8.3 Hz, ArH), 7.88 (1 H, s, ArH), 7.54-7.65 (5H, m, ArH), 5.31-5.35 (1 H, m, CH) , 4.43 (2H, s, CH2) , 4.35 (2H, s, CH2) , 4.31 (2H, s, CH2) , 3.96 (2H, s, CH2) , 1.65-1.93 (8H, m, 4 x CH2) Paso 9a: ácido ( 4- { [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil } -bencilamino) -acético (121) 121 Procedimiento como se describe en el paso 9. Pureza LCMS 99%, m/z 400 [M++H]+, XU RMN (300 MHz, MeOD) , d: 8.09 (ÍH, s, ArH) , 8.00 (1 H, d, J = 8.3 Hz, ArH) , 7.89 (1 Hl s, ArH)l 7.54-7.62 (5H, m, ArH) , 4.43 (2H, s, CH2) , 4.35 (2H, s, CH2) , 4.32 (2H, S, CH2) , 3.93 (2H, S, CH2) Síntesis de los siguientes compuestos Ejemplificados a través de el Compuesto (126) y el Compuesto (127) R= ciclopentilo 126 -sciclopßntilo 128 R= H 127 R= H 129 Etapa 1: ácido A- (ter-Butoxicarbonilamino-metil-ciclohexancarboxílico Una solución de ácido trans-4- ( aminometilo) ciclohexan carboxílico (lg, 6.4 mmoles) e hidróxido de sodio (256mg, 6.4 mmoles) en 40 ml de dioxano y 40 ml de agua se enfrió en un baño de agua helada con agitación. Se agregó dicarbonato Di-ter-butilo (1.39 g, 6.4 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 5 horas y se dejó en reposo durante la noche. La solución se concentró al vacío y se hizo acida con 2N HCl a un pH 2. La capa acuosa acidificada se extrajo 3 veces con EtOAc. Las capas orgánicas se agruparon y se lavaron con salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. El producto se obtuvo como un sólido blanco (l.lg, 64% de rendimiento). XH RMN (300 MHz, CDC13) , d: 0.86 - 1.07 (2 H, m, CH2) , 1.34 - 1.53 (11 H, m, boc y CH2) , 1.84 (2 Hl dd, J=13.0, 2.3 Hz, CH2) , 2.05 (2 H, dd, CH2) , 2.18 - 2.35 (1 H, m, CHCH2), 2.99 (2 H, t, J=6.3 Hz, CH2NH) , 4.59 (1 H, br, s, CHCOOH) , 11.0 (1 H, br, s, COOH). Etapa 2: éster ter-butílico de ácido (4-hidromextil-ciclohexilmetilo) -carbámico Se suspendió Hidruro de litio-aluminio (465 mg, 12.2 mmoles) en THF anhidro (10 ml) y se enfrió a 0°C bajo atmósfera de N2. Se agregó lentamente una solución de ácido 4- (ter-butoxi-carbonil-amino-metil-ciclohexancarboxílico (1.1 g, 4.1 mmoles) en THF y dioxano (10 ml, 1:1) y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. El exceso hidruro de litio-aluminio se extinguió a través de la adición de agua por goteo. La torta se filtró y se lavó con THF (10 ml) y MeOH (10 ml) . El filtrado se concentró al vacío y acidificó con 1 N HCl a un pH 2. La acuosa se extrajo dos veces con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó a sequedad para producir 964mg of Producto (97% de rendimiento) . XH RMN (300 MHz, CDC13) , d: 0.81-1.08 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.33-1.60 (10 H, m, boc y CH) , 1.82 (4 H, d, J=5.7 Hz, 2 x CH2 ), 2.98 (2 H, t, J=6.4 Hz, CH2NH ), 3.46 (2 H, d, J=6.4 Hz, CH50H) , 4.60 (1 H, br, s, CH) Etapa 3: éster ter-butílico de ácido (4-Formil-ciclohexilmetilo) -carbámico Se disolvió éster ter-butílico de ácido (4-hidromextil-ciclohexilmetilo) -carbámico (965 mg, 4.0 mmoles) en DCM (20 ml) y se enfrió a -78°C. Se disolvió el reactivo Dess Martin (2.52 g, 4.0 mmoles) en DCM (30 ml) y se agregó lentamente a la solución de alcohol de la Etapa 2. La mezcla de reacción después se agitó a temperatura ambiente por 3 h. La solución resultante después se vació en una solución vigorosamente agitada de NaHC03 y de Na2S203 (1:1, 100 ml) . La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó a sequedad para producir el producto (786 mg, 82% de rendimiento) . XH RMN (300 MHz, CDC13) , d: 0.83 - 1.01 (2 H, m, CH2) , 1.15 - 1.24 (2 H, m, CH2) , 1.34 (9 H, s, Boc), 1.75 - 1.88 (2 H, m, CH2) , 1.90 - 2.00 (2 Hl m, CH2) , 2.05 - 2.18 (1 H, m, CH) , 2.93 (2 H, t, J=6.4 Hz, CH2NH) , 4.53 (1 H, br, s, CHCHO) , 9.55 (1 H, s, CHO) Etapa 4: éster ciclopentílico de ácido (S)-{[4-(ter-Butoxicarbonilamino-metil) -ciclohexilmetil] -amino} -fenil-acético Se agitó éster ter-butílico de ácido (4-Formil-ciclohexilmetilo) -carbámico (390 mg, 1.8 mmoles) y éster ciclopentílico de ácido (S) -amino-fenil-acético (394 mg, 1.8 mmoles) en DCE (6 ml) a temperatura ambiente por 25 min. Se agregó ácido acético (9.6 ul, 0.16 mmoles) y triacetoxi borohidruro de sodio (1.0 g, 4.8 mmoles) y la mezcla resultante se agitó por 1 h 30 a temperatura ambiente, se agregó DCM (10 ml) y una solución saturada de NaHC03 (10 ml) y las fases se separaron. La acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 10 ml) , los orgánicos se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron a sequedad. El producto crudo se purificó mediante cromatografía de columna (8:2 heptano / EtOAc) para producir 223 mg de la amina pura (31% de rendimiento). Pureza LCMS 100%, m/z 445 [M++H]+. 28 Etapa 5: éster ciclopentílico de ácido (S) - [ (4-Aminometil-ciclohexilmetilo) -amino] -fenil-acético Se agitó éster ciclopentílico de ácido (S)-{[4-(ter-Butoxicarbónilamino-metilo) -ciclohexilmetil] -amino} -fenil-acético (223 mg, 0.5 mmoles) en DCM (4 ml), se agregó TFA (1 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente, por 2 h. La solución se concentró al vacío, se absorbió en DCM, se lavó dos veces con una solución saturada de NaHC03 y una vez con una solución saturada de salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó para producir la amina esperada como un aceite amarillo (130 mg, 75% de rendimiento). Pureza LCMS 100%, m/z 345 [M++H]+. Etapa 6: éster ciclopentílico de ácido (S)-[(4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil }-ciclohexilmetil) -amino] -fenil-acético (126) 126 La amina de la Etapa 5 (130 mg, 0.38 mmoles) se agitó con (1-isobutoxi-etoxi) amida de ácido 6-formil- benzo [b] tiofen-2-carboxílico (Esquema de reacción 7) (110 mg, 0.34 mmoles) en DCE por 30 min a temperatura ambiente. Se agregó Ácido acético (2.1 ul, 0.03 mmoles) y triacetoxiborohidruro de sodio (218 mg, 1.0 mmoles) y la mezcla resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla se concentró al vacío, se absorbió en EtOAc, se lavó con una solución saturada de NaHC03 (10 ml) y salmuera (10 ml) . Los orgánicos se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron a sequedad. El producto crudo (167 mg) se purificó mediante HPLC preparativa para producir el compuesto (126) como un sólido rosa claro. Pureza LCMS 86%, m/z 550 [M++H]+, aproximadamente 10% carboxílico ácido. XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.08 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.76 (14 H, m, 6 x CH2 y 2 x CH) , 2.81 (4 H, m, 2 x CH2NH) , 4.35 (2 H, s, CH2NH) , 5.12 (1 H, s, CHNH), 5.30 (1 H, m, OCH), 7.51 (6 H, m, Ar), 7.85 (1 Hl s, Ar) , 7.96 (1 H, d, Ar) , 8.08 (1 H, s, Ar) . Síntesis de ácido ( (S) - [ (4-{ [ (2-Hidroxicarbamoil-benzo[b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil}-ciclohexilmetilo) -amino] -fenil-acético (127) 127 Etapa 1: éster ter-butílico de ácido (S) -{ [4- (ter-Butoxicarbonilamino-metil) -ciclohexilmetil] -amino} -fenil- acético Se agitó éster ter-butílico de ácido (4-Formil-ciclohexilmetilo) -carbámico (899mg, 3.7 mmoles) y éster (S) ter-butílico de fenilglicina (850 mg, 4.1 mmoles) en DCE (20 ml) por 30 min. Se agregó ácido acético (20 ul, 0.37 mmoles) y triacetoxiborohidruro de sodio (2.37 g, 11.1 mmoles) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 3 h. se agregó DCM (10 ml) y una solución saturada de NaHC03 (20 ml) y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml) . Los orgánicos se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron bajo vacío. El producto crudo (2.4 g) se purificó en cromatografía de columna (7:3 heptano / EtOAc) para producir el producto esperado (385 mg, 24% de rendimiento). Pureza LCMS 100%, m/z 433 [M++H]+.
Etapa 2: éster ter-butílico de ácido (S) -{ [4- (tert-Butoxicarbonilamino-metil)—ciclohexilmetil] -amino}-fenil- acético Se agitó éster ter-butílico de ácido (S) -{ [4- (ter-Butoxicarbonilamino-metilo) -ciclohexilmetil] -amino} -fenil-acético (385 mg, 0.9 mmoles) en DCM (5 ml) y TFA (2 ml) se agregó y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 30 min. La solución de se concentró al vacío, se absorbió en EtOAc (5 ml) , se lavó dos veces con una solución saturada de NaHC03 (2 x 5 ml) y una vez con una solución saturada de salmuera (5 ml) . La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó para producir la amina esperada como un aceite amarillo (290mg, 97% de rendimiento). Pureza LCMS 100%, m/z 333 [M'+H] . Etapa 3: éster ter-butílico de ácido (S)-{ [4-({ [2- (1-Isobutoxi-etoxicarbamoil) -benzo [b] tio fen- 6-ilmetilo] -amino} -metilo) -ciclohexilmetil] -amino} - fenil -acético Se agitó éster ter-butílico de ácido (S) - { [4- (ter- Butoxicarbónilamino-metilo) -ciclohexilmetil] -amino} -fenilacético (290 mg, 0.9 mmoles) y (1-isobutoxi-etoxi) amida de ácido 6-formil-benzo [b] tiofen-2-carboxílico (Esquema de reacción 7) (255 mg, 0.8 mmoles) en DCE (8 ml) por 30 min. se agregó ácido acético (4 ul, 0.08 mmoles) y triacetoxiborohidruro de sodio (504 mg, 2.4 mmoles) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 1 h 30. Se agregó DCM (5 ml) y una solución saturada de NaHC03 (10 ml) y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (15 ml) . Los orgánicos se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron bajo vacío. El producto crudo (543mg) se purificó sobre cromatografía de columna (5 a 10% MeOH en DCM) para producir el producto puro esperado (172 mg, 34% de rendimiento) . Pureza LCMS 100%, m/z 638 [M++H] + . Etapa 4: éster ter-butílico de ácido (S) - { [4- ( { [2- ( 1-Isobutoxi-etoxicarbamoil) -benzo [b] tiofen-6-ilmetilo] -amino} -metilo) -ciclohexilmetil] -amino} -fenil-acético (127) 127 Se agitó éster ter-butílico de ácido (S) -{ [4- ( { [2- 1-lsobutoxi-etoxicarbamoil) -benzo [b] tiofen-6-ilmetilo] - amino}- metilo) -ciclohexilmetil] -amino} -fenil-acético (172 mg, 0.27 mmoles) en 4M HCl en solución de dioxano (2 ml) a temperatura ambiente por 30 min. La solución de se evaporó a sequedad para producir el compuesto (127) como un sólido beige (123 mg, 95% de rendimiento) . Pureza LCMS 98%, m/z 482 [M++H]\ ?U RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.10 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.80 (6 H, m, 2 X CH2 y 2 x CH) , 2.88 (2 H, dd, CH2NH) , 2.94 (2 H, d, CH2NH) , 4.36 (2 H, s, CH2NH) , 5.07 (1 H, s, CH) , 7.53 (6 H, m, Ar), 7.87 (1 H, s, Ar) , 7.97 (1 H, d, Ar) , 8.12 (1 H, s, Ar) . Los siguientes el compuestos se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito para el Compuesto (126) y el Compuesto (127) Éster ciclopentílico de ácido (S) -2- [ (4-{ [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -metil} -ciclohexilmetilo) -amino] -4-metil-pentanoico (128) Pureza LCMS 86%, m/z 530 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 0.99 (6 H, t, J= 6Hz, 2 x CH3) , 1.11 (4 H, t, J= 8.1 Hz, 2 x CH2), 1.76 (20 H, m, 2 x CH y 9 x CH2) , 2.80 (1 H, m, CH) , 2.97 (4 H, m, 2 x CH2NH) , 3.95 (1 H, m, CH) , 4.35 (2 H, s, CH2NH) , 5.32 (1 H, m, OCH), 7.54 (1 H, d, J= 6 Hz, Ar) , 7.84 (1 H, s, Ar) , 7.94 (1 H, d, J=9 Hz, Ar) , 8.08 (1 H, s, Ar) .
Acido (S) -2- [ (4- { [ (2-hidroxicarbamoil-benzo[b] tiofen-6-ilmetil) -amino] -metil}-ciclohexilmetilo) -amino] -4-metil-pentanoico (129) Pureza LCMS 95%, m/z 462 [M++H]+, XH RMN (300 MHz, MeOD), d: 1.00 (6 H, t, J=6.3 Hz, 2 x CH3), 1.10 (4 H, m, 2 x CH2) , 1.85 (8 H, m, 2 x CH y 3 x CH2) , 2.94 (4 H, m, 2 x CH2NH) , 3.91 (1 H, m, CHNH), 4.36 (2 H, s, CH2NH) , 7.54 (1 H, d, J=7.8 Hz, Ar) , 7.85 (1 H, s, Ar) , 7.95 (1H, d, J=8.1 Hz, Ar) , 8.08 (1 H, s) . Síntesis de los siguientes compuestos como Ejemplificados por el Compuesto (130) 131 130 133 132 Etapa 1: éster ciclopentílico de ácido (S)-[(3-nitro-bencil) -amino] -fenil-acético A una solución de sal de ácido tósico del éster ciclopentílico de fenilglicina (3.08 g, 7.8 mmoles) en DCE (120 ml) se agregó 3-nitrobenzaldehido (1.01 g, 6.7 mmoles) después triacetoxi-borohidruro de sodio (3.03 g) . La mezcla se agitó por 3.5 h, después se extinguió a través de la adición de solución bicarbonato de sodio saturado de (200 ml) . El producto se extrajo con DCM (250 ml) y el extracto orgánico se secó (MgS04) . El producto llevó al siguiente paso sin purificación adicional. Etapa 2: éster ciclopentílico de ácido (S)-[(3-nitro-bencil) -ter-butoxicarbonil-amino] -fenil-acético A la mezcla cruda de éster ciclopentílico de ácido (S) -[ (3-nitro-bencil) -amino] -fenil-acético en DCM (50 ml) se agregó dicarbonato di-ter-butilo (3.38 g, 15.6 mmoles). La mezcla se calentó a 50°C durante la noche, después se enfrió a temperatura ambiente. Después se agregó N,N,N'-trimetiletileno diamina (2 ml) y la mezcla se agitó por 2 h. La mezcla después se vació en acetato de etilo (150 ml) y se lavó con 1 M de HCl (3 veces 50 ml) , se secó (MgS0 ) y se concentró para producir el producto deseado como un aceite incoloro (1.509 g, 42% de rendimiento). Pureza LCMS 98%, m/z 477 (M+Na+) . XH RMN (300MHz, d6-DMSO) , d: 7.97 (1 Hl dd, J=2.1 , 9 Hz), 7.15-7.45 (8H, m) , 5.60-6.00 (1 Hl m) , 5.20-5.35 (1 H, m) , 4.65-4.82 (1 H, m) , 4.21 (1 H, d, J=16 Hz), 1.30-1.95 (17H, m) Etapa 3: éster ciclopentílico de ácido (S)-[(3-Amino-bencil) -ter-butoxicarbonil-amino] -fenil-acético A una solución de éster ciclopentílico de ácido (S) - [ (3-nitro-bencil) -ter-butoxicarbonil-amino] -fenil-acético (1.509 g, 3.32 mmoles) en etanol (10 ml) se agregó paladio sobre carbono (10%, 0.38 g, 0.36 mmoles). El matraz se evacuó y se volvió a rellenar con gas hidrógeno. La mezcla se agitó durante la noche, después se filtró a través Celite, se lavó con etanol (150 ml) y después se concentró para producir el producto deseado como un aceite incoloro (1.351 g, 96% de rendimiento). 1H RMN (300 MHz, CDC13) , 5:7.19-7.42 (5H, m) , 6.97 (1 H, t, J=7.5 Hz), 6.46 (2H, dd, J=8.1 , 16.5 Hz), 6.29 (ÍH, br s), 5.58 (1 H,br s) , 5.29 (1 H, br s) , 4.69 (1 H, br s) , 4.00 (1 H, d, J=15.9 Hz) , 3.74 (ÍH, q, J=6.9 Hz) , 3.51 (2H, br s) , 1.20-2.00 (17H, m) Etapa 4: éster ciclopentílico de ácido (S) - [ter-Butoxicarbonil- (3-{ [2- (1-isobutoxi-etoxicarbamoil) -benzo [b] -tiofen-6-ilmetilo] -amino} -bencil) -amino] -fenilacético A éster ciclopentílico de ácido (S) - [ (3--Amino-bencil) -ter-butoxicarbonil-amino] -fenil-acético (0.317 g, 0.75 mmoles) se agregó ( i-isobutoxi-etoxi) -amida de ácido 6-Formil-benzo [b] tiofen-2-carboxílico (Esquema de reacción 7) (0.210 g, 0.65 mmoles) en DCE (8 ml) . Se agregaron 2 gotas de ácido acético glacial, y después triacetoxiborohidruro de sodio (0.170 g, 0.8 mmoles). La mezcla se agitó por 2 h y después se vació en DCM (150 ml) . La solución de se lavó con bicarbonato de sodio saturado (50 ml) , después se secó (MgS04), se concentró y purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea para producir el producto deseado como una espuma amarilla pálida (0.346 g, 73% de rendimiento). XH RMN (300 MHz, CDC13) , d: 8.35-8.43 (ÍH, m) , 7.56-8.05 (2H, m) , 7.01-7.41 (8H, m) , 6.90-7.01 (ÍH, m) , 6.42 (ÍH, dd, J=2.6, 7.9 Hz), 5.25-5.31 (1 H, m) , 5.12 (1 Hl q, J=5.2 Hz), 4.40 (1 H, d, J 5.4 Hz) , 4.00 (1 H, dd, J=3.1 , 15.8 Hz), 3.60-3.70 (1 H, m) , 3.35-3.40 (1 H, m) , 1.33-1.94 (21 H, m) , 0.98 (3H, d, J=6.6 Hz) , 0.97 (3H, d, J=6.6 Hz) Etapa 5: éster ciclopentílico de ácido (S)-{3-[(2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -bencilamino} -fenil-acético (130) A una solución de éster ciclopentílico de ácido (S) - [ter-Butoxicarbonil- (3-{ [2- (1-isobutoxi-etoxicarbamoil) -benzotiofen [b] -6-ilmetil] -amino } -bencil) -amino] -fenil-acético (0.100 g, 0.14 mmoles) en DCM/MeOH (1 ml : 1 ml) se agregó TFA (8 ml) . La solución se agitó por 2 h, después se diluyó con DCM (200 ml) . La solución de se lavó con bicarbonato de sodio saturado (100 ml) . La solución de se secó (Na2S04) , se concentró y purificó a través de HPLC de fase inversa para producir el producto deseado (8.1 mg, 11% de rendimiento). Pureza LCMS 98%, m/z 531 (M+H)+ 300 MHz, DMSO, 5:1.26-1.85 (8H, m) , 3.47 (2H, s), 4.21 (1 H, s) , 4.38 (2H, d, J 5.8 Hz), 5.02-5.07 (1 H, ) , 6.32 (1 H, t, J 6.0 Hz), 6.45 (2H, d, J 7.9 Hz), 6.57 (1 H, s), 6.97 (1 H, t, J 7.8 Hz) , 7.23-7.35 (5H, m) , 7.42 (1 H, dd, J 1.2, 8.3 Hz), 7.84 (1 H, s) , 7.87 (1 H, s), 7.93 (1 H, s) , 9.23 (1 H, br s), 11.4 (1 H, br s) Los siguientes compuestos se prepararon de acuerdo con los procedimientos descritos para el compuesto (130) Éster ciclopentílico de ácido (S)-{3-[(2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -bencilamino }-ciclohexil-acético (131) Pureza LCMS >98%, m/z 536.25 (M+H)+, XH RMN (300 MHz, d6-DMSO) , d: 0.7-1.25 (8H, m) , 1.50-1.95 (14H, m) , 3.69 (1 H, br s), 3.98 (2H, br s) , 4.43 (2H, br s), 5.14 (1 H, t, J 5.4 Hz), 6.60-6.71 (2H, m) , 7.05-7.28 (3H, m) , 7.43 (ÍH, d, J 8.5 Hz), 7.83-7.98 (2H, m) , 9.25 (1 H, br s), 11.45 (1 Hl br s) Éster ciclopentílico de ácido (S) -3-ter-Butoxi-2-{3- [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -bencilamino} -propiónico (132) Pureza LCMS >98%, m/z 540.25 (M+H)+, XU RMN (300 MHz, d6-DMSO) , d: 1.05 (9H, s), 1.50-1.78 (8H, m) , 3.15-3.67 (5H, m) , 4.38 (2H, d, J 5.8 Hz), 5.05-5.15 (1 H, m) , 6.31 (ÍH, t, J 5.9 Hz) , 6.40-6.48 (2H, m) , 6.56 (ÍH, s) , 6.96 (1 H, t, J 7.8 Hz), 7.42 (1H1. d, J 8.2 Hz) , 7.87 (1 H, s) , 7.93 (1 H, s), 9.24 (1 H, br s), 11.43 (1 H, br s) Éster ciclopentílico de ácido (S) -2-{3- [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -bencillamino}-4-metil-pentanoico (133) Pureza LCMS 98%, m/z 510.25 (M+H)+, XH RMN (300 MHz, d6-DMSO) , d: 0.87 (6H, d, J 6.4 Hz), 1.50-1.94 (10H, m) , 3.57-4.20 (3H, m) , 4.44 (2H, s) , 5.20 (1 H, t, J 5.8 Hz), 6.58-6.74 (3H, m) , 7.11 (1 H, t, J 7.7 Hz), 7.43 (1 H, d J 8.3 Hz), 7.85-7.96 (3H, m) , 9.38 (2H, br s), 11.46 (1 H, br s) Éster ciclopentílico de ácido (S) -3-ter-Butoxi-2- {4- [ (2-hidroxicarbamoil-benzo [b] tiofen-6-ilmetilo) -amino] -bencilamino} -propiónico (134) Pureza LCMS 98%, m/z 540.25 (M+H)+ , XH RMN (300 MHz, d4-MeOD) , d: 7.64-7.77 (2H, m) , 7.28 (ÍH, d, J=7.2 Hz), 6.99 (2H, d, J=6.6 Hz), 6.53 (2H, d, J=6.6 Hz), 5.06- 5.08 (1 H, m) , 4.35 (2H, s), 3.40-3.75 (5H, m) , 1.50-1.82 (8H, m) , 1.04 (9H, s) Medición de las actividades biológicas Actividad de histona desacetilasa La habilidad de los compuestos para inhibir las actividades de histona desacetilasa se midió utilizando el ensayo de actividad fluorescente HDAC comercialmente disponible de Biomol. Brevemente, el sustrato de Fl uor de Lys™, una lisina con una acetilación épsilon-amino, se incubó con la fuente de la actividad de histona desacetilasa (extracto nuclear HeLa) en la presencia o ausencia del inhibidor. La desacetilación del sustrato sensibiliza el sustrato para el productor de Ly™, que genera un fluoróforo. De esta forma, la incubación del sustrato con una fuente de actividad HDAC da como resultado un incremento en la señal que se disminuye en la presencia de un inhibidor HDCA. Los datos se expresan como porcentaje del control, medidos en la ausencia del inhibidor, con una señal de fondo que se sustrae de todas las muestras, como sigue: % de actividad = ( (Sx-B) / (S°-B) ) x 100 en donde S1 es la señal en la presencia del sustrato, enzima e inhibidor, S° es la señal en la presencia del sustrato, enzima y el vehículo en el cual el inhibidor se disuelve, y B es la señal de fondo medida en la ausencia de la enzima. Los valores IC50 se determinaron a través de análisis de regresión no lineal, después de ajustar los resultados de ocho puntos de datos a la ecuación para la respuesta de dosis sigmoidea con un declive variable (% de actividad contra la concentración log del compuesto) , utilizando el software Graphpad Prism. La actividad de histona desacetilasa del extracto nuclear derivado de las células HeLa se utilizó para clasificación. La preparación, comprada de 4C (Seneffe, Bélgica) , se prepare de células HeLa cosechadas mientras estaban en crecimiento exponencial. El extracto nuclear se preparó de acuerdo con el Dignam JD1983 Nucí. Acid. Res. 11, 1475-1489, congeladas instantáneamente en nitrógeno liquid y se almacenaron al -80 °C. La composición reguladora de pH final fue de 20 mM de Hepes, 100 mM de KCl, 0.2 mM de EDTA, 0.5 mM de DTT, 0.2 mM de PMSF y 20% (v/v) glicerol. Los resultados IC50 se asignaron a uno de los tres intervalos como sigue: Intervalo A: IC50<100 nM, Intervalo B: IC50 de 101 nM a 1000' nM; Intervalo C: IC5O1001 nM. NT = no probado Los resultados de la prueba de los compuestos de los ejemplos en este ensayo se dan en la segunda columna de la Tabla siguiente. Ensayos de inhibición de célula Se cosecharon las líneas celulares cancerosas correspondientes (HeLa, U937 y HUT) cultivadas en la fase log y se sembraron a 1000 células/cavidad (20° ul de volumen final) en placas de cultivo de tejido de 96 cavidades. Después de 24 horas de cultivo de células, las células se trataron con los compuestos (concentración final de 20 uM) . Las placas después se volvieron a incubar durante 72 horas más antes de conducir un ensayo de viabilidad de célula B de sulforodamina (SRB) de acuerdo con Skehan 1990 J Nati Cañe Inst 82, 1107-1112. Los datos se expresaron como porcentaje de inhibición de control, medido en la ausencia del inhibidor, como sigue: % de inhibición = 100- ( (SVS° ) lOO) en donde S1 es la señal en la presencia del inhibidor y S° es la señal en la presencia de DMSO. Los valores IC50 se determinaron a través de análisis de regresión no lineal, después de ajustar los resultados de ocho puntos de datos para la ecuación para respuesta de dosis sigmoidea con un declive variable (% de actividad contra concentración log del compuesto) , utilizando el software Graphpad Prism. Los resultados IC50 se asignaron a uno de los tres intervalos como sigue: Intervalo A: IC50<330 nM, Intervalo B: IC50 de 330 nM a 3300 nM; Intervalo C: IC5O3301 nM. NT= no probado Los resultados de la prueba de los compuestos de los ejemplos en este ensayo se dan en la tercera-quinta columnas de la tabla siguiente.
TABLA 10 15 20 25 Ensayo de Carboxiesterasa de célula dividida Preparación del extracto celular Las células U937 o Het 116 de tumor (aprox. 109 se lavaron en 4 volúmenes de PCB Dulbecco (aprox. 1 litro) y se comprimieron a 160 g durante 20 minutos a 4°C. Esto se repitió dos veces y la comprimido de celular final después se volvió a suspender en 35 ml de regulador de pH de homogenización frío (Trizma 10 mM , NaCI 130 mM, CaCl2 0.5 mM PH 7.0) a 25°C. Los homogenatos se prepararon a través de cavitación con nitrógeno (700 psi por 50 min a 4°C) . El homogenato se mantuvo en hielo y se suplemento con un cóctel de inhibidores designados para dar concentraciones finales de Leupeptina 1 µM Aprotinina 0.1 µM E64 8 µM Pepstatina 1.5 µM Bestatina 162 µM Quimioestatina 33 µM Después de la clarificación del homogenizado celular a través de centrifugación a 360 rpm por 10 min, el sobrenadante resultante se utilizó como una fuente de la actividad de esterasa que podría almacenarse a -80°C hasta que fuera requerida. Medición de la separación del éster La hidrólisis del éster al ácido carboxílico correspondiente se puede medir utilizando este extracto celular. Por esta razón el extracto celular (~30 ug/ volumen de ensayo total de 0.5 ml) se incubó a 37°C en un regulador de pH de Tris-HCl 25 mM, 125 mM de NaCl, pH 7.5 a 25°C. Después se agregó en el tiempo cero un éster relevante (sustrato), a una concentración final de 2.5µM y las muestras se incubaron a 37°C durante el tiempo apropiado (usualmente cero u 80 minutos) . Las reacciones se detuvieron a través de la adición de 3x volúmenes de Acetonitrilo. Para las muestras del tiempo cero el acetonitrilo se agregó antes del compuesto éster. Después de la centrifugación a 12000 g por 5 minutos, las muestras se analizaron para el éster progenitor y su ácido carboxílico correspondiente a temperatura ambiente a través de LCMS (Sciex API 3000, bomba binaria HP1100, CTC PAL) . Las condiciones cromatográficas utilizadas se basaron en una columna AceCN (75*2.1 mm) y una fase móvil de 5-95% de acetonitrilo en agua/0.1% ácido fórmico. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (47)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :
1. Un compuesto de la fórmula (I) o una sal, N-óxido, hidrato o solvato del mismo caracterizado porque Ri es un grupo de ácido carboxílico (-COOH) , o un grupo éster que es hidrolizable mediante una o más enzimas de carboxilesterasa intracelulares para un grupo de ácido carboxílico; R2 es la cadena lateral de un aminoácido alfa natural o no natural; Y es un enlace, -C(=0)-, -S(=0)2-, -C(=0)0-, C(=0)NR3-, -C( =S)-NR3, -C(=NH)NR3 o -S(=0)2NR3- en donde R3 es hidrógeno o alquilo de C?-C6 opcionalmente sustituido; L1 es un radical divalente de la fórmula - (Alk1)m(Q)m(Alk2) p- en donde m, n y p son independientemente 0 ó 1, Q es (i) un radical carbocíclico o heterocíclico mono- o bicíclico divalente opcionalmente sustituido que tiene de 5 a 13 miembros de anillo, o (ii) en el caso en donde tanto m como p son 0, un radical divalente de la fórmula -X2-©.1- o -Qx-X2-, en donde X2 es -O-, S- o NR4-, en donde RA es hidrógeno o alquilo de C?~C3 opcionalmente sustituido, y Q1 es un radical carbocíclico o heterocíclico mono- o bicíclico divalente opcionalmente sustituido que tiene de 5 a 13 miembros de anillo, Alq1 y Alq2 independientemente representan radicales cicloalquilo de C3-C7 divalentes opcionalmente sustituidos, o alquileno de C?-C6 de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido, alquileno de C2-Ce o radicales alquinileno de C2-C6 que pueden opcionalmente contener o terminar en un enlace éter (-0-) , tioéter (-S-) o amino (-NRA-) en donde RA es hidrógeno o alquilo de C?-C3 opcionalmente sustituido; X1 representa un enlace; -C (=0) ; o -S(=0)2-; -NR4C(=0)-, -C(=0)NR4-, -NR4C(=0)NR5-, -NR4S(=0)2-, o -S(=0)2NR4- en donde R4 y R5 son independientemente hidrógeno o alquilo de Ci-C? opcionalmente sustituido; z es 0 ó 1; A representa un sistema de anillo carbocíclico o heterocíclico mono-, bi- o tri-cíclico opcionalmente sustituido en donde los radicales RiR?NH-Y-L1- [CH2] z- y HONHCO- [ENLAZADOR]- están unidos a diferentes átomos de anillo; y -[Enlazador]- representa un radical enlazador divalente que enlaza un átomo de anillo en A con el grupo del ácido hidroxámico -CONHOH, la longitud del radical enlazador, a partir del átomo terminal enlazado al átomo de anillo de A al átomo terminal enlazado al grupo del ácido hidroxámico, es equivalente a aquel de una cadena de hidrocarburo saturada no ramificada de 3 a 10 átomos de carbono.
2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la longitud del radical enlazador es equivalente a la de la cadena de hidrocarburo no ramificada saturada de 4 a 9 átomos de carbono.
3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o reivindicación 2 caracterizado porque el - [Enlazador]- representa un radical divalente de la fórmula - (CH2)X-Z-L2 en donde x es 0 ó 1; Z es un enlace, -NR3-, -NR3C(=0)-, -C(=0)NR3-, -NR4C(=0)-NR3-, -C(=S)-NR3, -C (=N) -NR3-NR3S (=0) 2-, o -S(=0)2NR3-en donde R3 es hidrógeno o alquilo de Ci-Cß; -C(=0); o -S(=0)2-; y L2 representa radicales de alquileno C -C , alquenileno C4-C6 o alquileno C4-C6 rectos o ramificados, opcionalmente sustituidos que pueden opcionalmente contener o terminar en un enlace éter (-0-), tioéter (-S-) o amino (-NR4-), en donde RA es hidrógeno o alquilo de Cj.-C3 opcionalmente sustituido.
4. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 2 o la reivindicación 3 caracterizado porque x es 0. 5. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 caracterizado porque Z es -C(=0)-,
-NHC(=0)- o -C(=0)NH-.
6. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5 caracterizado porque L2 es -(CH2)5-, -(CH2)6-, o (CH2)7-.
7. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el - [Enlazador] -representa un radical divalente de la fórmula -(CH2)X- L3-Ar1-L4- en donde x es 0 ó 1 ; L3 es Z o L2 o Z-L2 en donde Z es como se definió en la reivindicación 3 y L2 es un enlace o un radical alquileno de C?~C3 divalente opcionalmente sustituido; Ar1 es un radical fenilo divalente o un radical heteroarilo mono- o bi-cíclico que tiene de 5 a 13 miembros de anillo, y L4 es un enlace o -CH2- opcionalmente sustituido o -CH=CH-.
8. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque x es 0.
9. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 7, o reivindicación 8 caracterizado porque L es Z o Z-L2, en donde Z es -NH-, -NHS(=0)2-, -S(=0)2NH- o -S(=0)2-; L2 es -CH2-L4 es un enlace o -CH2-.
10. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 7, o reivindicación 8 caracterizado porque L3 es L2, en donde L2 es un radical alquileno de C3-Cs de cadena recta que puede opcionalmente contener un enlace éter (-0-) , tioéter (-S-) o amino (-NRA-) en donde RA es hidrógeno o alquilo de C¡-C3 opcionalmente sustituido, por ejemplo hidroxietilo.
11. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, caracterizado porque L4 es -CH=CH-.
12. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, caracterizado porque L4 es -CH2-.
13. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 12, caracterizado porque Ar1 es un radical divalente seleccionado de lo siguiente: en donde X es O, S o NH,
14. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque x es 0, L3 y L4 son enlaces, y Ar1 es un radical fenilo divalente o un radical heteroarilo bicíclico divalente que tiene de 9 a 13 miembros de anillo.
15. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque Ar1 es un radical fenilo divalente o un radical benzo [b] tiofenilo divalente de la fórmula:
16. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracteri zado porque el - [ Enla zador] -representa un radical divalente de la fórmula - ( CH2 ) X-L3-B-Ar1-L4 , en donde x, Ar1 , L3 y L4 son como se definieron en cualquiera de las reivindicaciones 7 a 13 ; y B es un sistema de anillo heterocíclico mono- o bi-cíclico .
17 . Un compuesto de conformidad con la reivindicación 16 , caracteri zado porque B se selecciona de los siguiente :
18. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque A es uno de los siguientes, opcionalmente sustituido: en donde Rio es hidrógeno o alquilo de C?~C6 opcionalmente sustituido, el enlace intersectado por las líneas onduladas mostradas como conectadas a un átomo fijo que se conecta al radical Enlazador en los compuestos (I), y el otro enlace mostrado como enlaces flotantes de cualquier átomo de anillo conveniente del sistema anular mostrado para el aqrupamiento RxRzCHNHYL^1 [CH2] z.
19. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque z es 0.
20. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque Y es -S(=0)2-, -C(=S)-NR3, -C(=NH)NR3 o -S(=0)2NR3- en donde R3 es hidrógeno o alquilo de C?-C6.
21. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 caracterizado porque Y es un enlace .
22. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque en el radical L1, Alq1 y Alq2, cuando están presentes, se seleccionan de -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, y radicales ciclopropilo, ciclopentilo o ciciohexilo divalentes.
23. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque en el radical L1, Q es un radical fenilo divalente o un radical heteroarilo mono- o bicíclico que tiene de 5 a 13 miembros de anillo.
24. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque Q es un 1, 4-fenileno .
25. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque en el radical L1, m y p son 0.
26. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24, caracterizado porque en el radical L1, n y p son 0 y m es 1.
27. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24, caracterizado porque en el radical L1, m, n y p son 0.
28. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque el radical -Y-L^X1- [CH2] z- se selecciona de -C(=0)- , -C(=0)NH-, -(CH2)V-, -(CH2)vO-, -C(=0)-(CH2)v-, -C(=0)-(CH2)vO-, -C(=0)-NH- (CH2)W-, -C(=0)-NH-(CH2)wO- en donde v es 1, 2, 3 o 4, y w es 1, 2 o 3.
29. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, caracterizado porque el radical -Y-L1-X1-[CH2]Z- es -CH2-, -CH20-, -C(=0)-CH2-, -C (=0) -CH20-, -C(=0)-NH-CH2-, y -C (=0) -NH-CH20- .
30. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque Ri es un grupo éster de la fórmula -(C=0)OR9 en donde R9 es (i) ) R7R8CH- en donde R7 es alquilo de C?-C3-(Z1)a-alquilo-de C?~C3 opcionalmente sustituido o alquenilo de C -C3-(Z1) a-alquilo de C?-C3- en donde a es 0 ó 1 y Z1 es -O-, -S-, o -NH-, y R8 es hidrógeno o alquilo de C?~C3 o R7 y R8 tomados juntos con el átomo de carbono al cual están unidos forman un anillo cicloalquilo de C3-C opcionalmente sustituido o un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido de 5 ó 6 átomos de anillo; o (ii) fenilo opcionalmente sustituido o heterociclo monocíclico que tiene de 5 a 6 átomos en el anillo.
31. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque Rg es metilo, etilo, n- o iso-propilo, n- o sec-butilo, ciciohexilo, alquilo, fenilo, bencilo, 2-, 3- o 4-piridilmetilo, N-metilpiperdin-4-ilo, tetrahidrofuran-3-ilo, o metoxietilo.
32. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque R9 es ciclopentilo.
33. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque R2 es ciclohexilmetilo, ciciohexilo, piridin-3-ilmetilo, secbutilo, ter-butilo, 1-benciltio-l-metiletilo, 1-metiltio-l-metiletilo, o 1-mercapto-l-metiletilo .
34. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 32 caracterizado porque R2 es hidrógeno .
35. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 32 caracterizado porque R2 es fenilo, bencilo, feniletilo, ter-butoximetilo o iso-butilo.
36. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la estructura de cualquiera de los compuestos de los Ejemplos específicos en la presente.
37. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
38. El uso de un compuesto de la fórmula (I) de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 36 para la preparación de una composición para inhibir la actividad de una enzima HDAC.
39. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 38 para la inhibición de la actividad de HDAC1, ex vivo o in vivo .
40. Un método para inhibir la actividad de una enzima HDAC caracterizado porque comprende poner el contacto la enzima con una cantidad de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 36 efectiva para la inhibición.
41. Un método par la inhibición selectiva de la actividad de una enzima HDAC en macrófagos y/o monocitos con relación a otros tipos de células, caracterizado porque comprende poner el contacto la enzima con una cantidad, efectiva para la inhibición, de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 36 en donde Y es un enlace, -S(=0)2 o -S(=0)2NR3- en donde R3 es hidrógeno o alquilo de C?-C6 opcionalmente sustituido.
42. Un método de conformidad con la reivindicación 40 o la reivindicación 41, caracterizado porque es para la inhibición de la actividad de HDAC1, ex vivo o in vivo .
43. Un método para el tratamiento de la enfermedad de la proliferación celular, enfermedad de poliglutamina, enfermedad neurodegenerativa, enfermedad autoinmune, enfermedad inflamatoria, rechazo al trasplante de órgano, diabetes, trastornos hematológicos e infección, caracterizado porque comprende la administración de una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula (I) de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 36.
44. Un método de conformidad con la reivindicación 43, caracterizada porque es para el tratamiento de proliferación celular cancerosa, enfermedad de Huntington, o enfermedad de Alzheimer.
45. Un método de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque es para el tratamiento de de artritis reumatoide.
46. Un método para la inhibición selectiva de la actividad de una enzima de aurora cinasa en macrófagos y/o monocitos con relación a otros tipos de células, caracterizado porque comprende poner en contacto la enzima con una cantidad, efectiva para tal inhibición, de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 36 en donde Y es un enlace, -S(=0)2 o -S(=0)2NR3, en donde R3 es hidrógeno o alquilo de Ci-Cß opcionalmente sustituido.
47. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 37, caracterizada porque está adaptada para la administración tópica, y en donde, en el compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 36, R2 está enlazado al átomo de carbono al cual está unido a través de un radical metileno -CH2- . RESUMEN DE LA INVENCIÓN Los compuestos de la fórmula (I) son inhibidores de la actividad de histona desacetilasa, y son útiles en el tratamiento de, por ejemplo, cánceres: en donde Ri es un grupo de ácido carboxílico (-COOH) , o un grupo éster que es hidrolizable mediante una o más enzimas de carboxilesterasa intracelulares para un grupo de ácido carboxílico; R2 es la cadena lateral de un aminoácido alfa natural o no natural; Y es un enlace, -C(=0)-, -S(=0)2-, -C(=0)0-, -C(=0)NR3-, -C(=S)-NR3, -C(=NH)NR3 o -S(=0)2NR3- en donde R3 es hidrógeno o alquilo de C?~C6 opcionalmente sustituido; L1 es un radical divalente de la fórmula - (Alk1) m (Q) m (Alk2) p- en donde m, n y p son independientemente 0 ó 1, es (i) un radical carbocíclico o heterocíclico mono- o bicíclico divalente opcionalmente sustituido que tiene de 5 a 13 miembros de anillo, o (ii) en el caso en donde tanto m como p son 0, un radical divalente de la fórmula -X2-Q1- o -Qx-X2-, en donde X2 es -O-, S- o NR4-, en donde RA es hidrógeno o alquilo de C?~C3 opcionalmente sustituido, y Q1 es un radical carbocíclico o heterocíclico mono- o bicíclico divalente opcionalmente sustituido que tiene de 5 a 13 miembros de anillo, Alq1 y Alq2 independientemente representan radicales cicloalquilo de C3-C7 divalentes opcionalmente sustituidos, o alquileno de Ci-Cß de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido, alquileno de C2-Cd o radicales alquinileno de C2-Ce que pueden opcionalmente contener o terminar en un enlace éter (-0-), tioéter (-S-) o amino (-NRA-) en donde RA es hidrógeno o alquilo de C?-C3 opcionalmente sustituido; X1 representa un enlace; -C(=0); o -S(=0)2-; -NR4C(=0)-, -C(=0)NR4-, -NRC(=0)NR5-, -NR4S(=0)2-, o -S(=0)2NR4- en donde R4 y R5 son independientemente hidrógeno o alquilo de C?~C6 opcionalmente sustituido; z es 0 ó 1; A representa un sistema de anillo carbocíclico o heterocíclico mono-, bi- o tricíclico opcionalmente sustituido en donde los radicales RiR2NH-Y-L1- [CH2]2- y HONHCO- [ENLAZADOR] - están unidos a diferentes átomos de anillo; y -[Enlazador]- representa un radical enlazador divalente que enlaza un átomo de anillo en A con el grupo del ácido hidroxámico -CONHOH, la longitud del radical enlazador, a partir del átomo terminal enlazado al átomo de anillo de A al átomo terminal enlazado al grupo del ácido hidroxámico, es equivalente a aquel de una cadena de hidrocarburo saturada no ramificada de 3 a 10 átomos de carbono .
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