MX2007001798A

MX2007001798A - Cepas agrobacterium desarmadas, ri-plasmidos, y metodos de transformacion basados en los mismos.

Info

Publication number: MX2007001798A
Application number: MX2007001798A
Authority: MX
Inventors: Paula Olhoft; Luke Mankin; Dwight-Steven Hill; Effie Toren; Jeffrey A Brown; Liqun Xing; Huihua Fu; Lesley Ireland; Hongmei Jia; Hee-Sook Song; Allan Richard Wenck; Larry Nea
Original assignee: Basf Plant Science Gmbh
Priority date: 2004-09-02
Filing date: 2005-08-31
Publication date: 2007-04-27
Also published as: AU2005279359A1; EP1789562A2; BRPI0514832B1; JP2008511294A; WO2006024509A2; AR051018A1; ES2543086T3; ZA200702667B; IL181190A; JP4932719B2; AU2005279359B2; WO2006024509A3; BRPI0514832A; CA2575481A1; CA2575481C; USRE44750E1; IL181190A0; EP1789562B1; US20070292953A1; CN101010432A

Abstract

La presente invencion se refiere a variantes de cepa "desarmadas" de cepa de Agrobacterium K599 (NCPPB 2659), las variantes de plasmido "desarmadas" del Ri-plasmido pRi2659, y derivados de los mismos, y metodos que utilizan estas cepas y plasmidos en la transformacion de la planta.

Description

CEPAS AGROBACT?RIUM DESARMADAS, Rl -PLASMIDOS , Y MÉTODOS DE TRANSFORMACIÓN BASADOS EN LOS MISMOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a variantes de cepa "desarmadas" de cepa de Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) , las variantes del plásmido "desarmadas" de Ri-plásmido pRi2659, y derivados de las mismas, y métodos que utilizan estas cepas y plásmidos en la transformación de la planta. -ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El género Agrobacterium (para una revisión reciente ver Gelvin 2003) ha sido dividido en varias especies. Sin embargo, esta división ha reflejado, en su mayor parte, sintomatología de enfermedad y rango del anfitrión. El A. radiobacter es una especie "avirulenta", el A. tumefaciens causa enfermedad de hiél de corona, el A. rhizogenes causa enfermedad de raíz velluda, el A. rubi causa la enfermedad de hiél de tallo, y el A. vitis causa hiél en la uva y otras especies de planta (Otten 1984; Smith y Townsend 1907; Hildebrand 1934; para revisión de A. rhizogenes ver Nilsson y Olsson, 1997) . Aunque el Manual Bergey "Syste atic Bacteriology" aún refleja esta nomenclatura, la clasificación es compleja y confusa. La sintomatología de la enfermedad principalmente es debida a trasferencia, integración, y expresión en el genoma de célula de planta del A-DN (T-ADN) originado de plásmidos grandes denominados Ti plásmidos (que inducen tumor) y Ri (que inducen raíz) (Van Laerebeke 1974; Chilton 1977, 1982; Moore 1979; White 1982; Tepfer 1983; Nester 1984). El curado de un plásmido particular y el reemplazo de este plásmido con otro tipo de plásmido tumorigénico puede alterar los síntomas de la enfermedad. Por ejemplo, la infección de plantas con A. tumefaciens C58, conteniendo el Ti plásmido pTiC58 tipo nopalina, resulta en la formación de teratomas de hiél de corona. Cuando este plásmido es curado, la cepa se convierte en no patógena. La introducción de Ri plásmidos en la cepa curada "convierte" la bacteria en una cepa rizogénica (Lam 1984, White 1980). Además, se puede introducir un Ti (que induce tumor) plásmido de A. tumefaciens en el A. rhizogenes; la cepa resultante provoca tumores de morfología alterada en plantas Kalanchoe (Costantino 1980) . Así, debido a que pueden convertirse los A. tumefaciens simplemente en A. rhizogenes sustituyendo un tipo de plásmido oncogénico por otro, el término carece de sentido. Así, en los años recientes el método para distinguir las cepas de la bacteria por su hiél de corona o fenotipo de raíz velluda no parece ser apropiado actualmente, debido a que estos rasgos sólo ee vinculan al plásmido extra-cromosomático. El análisis de ADN genómico reveló que anteriormente algunas cepas clasificadas como A. rhizogenes se relacionan más al A. tumefaciens y viceversa. Un sistema de clasificación más significativo divide el género Agrobacterium en "biovars" basado en las características de crecimiento y metabólicas (Keane 1970) . Usando este sistema, la mayoría de las cepas A. tumefaciens y A. rubi (Tighe 2000) pertenecen al biovar I, la cepa A. rhizogenes encaja en el biovar II, y biovar III está representado por las cepas A. vitis. Más recientemente, aún se ha propuesto otro sistema de clasificación de taxonómica para el género Agrobacterium (Young 2001) . La reciente realización de la secuencia de ADN del genoma de A. tumefaciens C58 completa (la cual está compuesta de un cromosoma lineal y uno circular, un plásmido Ti , y otro plásmido grande (Goodner 1999, 2001; Wirawan 1996) puede proveer un punto de partida para reclasificación de cepas de Agrobacterium en verdaderas "especies." Una reciente clasificación basada en RAPD (ADN polimórfico amplificado al- azar) refleja las diferencias genómicas y provee un árbol "familiar" para varias cepas Agrobacterium (Llop 2003) . Un esquema de clasificación modificado fue propuesto por Sawada (Sawada 1993).- Aunque el antecedente genético de la Agrobacteria está poco explorado, ya existe el conocimiento adicional sobre la funcionalidad de sus Ti- o Ri-plásmidos en la infección de la planta. La movilización del T-ADN requiere que los productos de genes localizados en otra parte en el Ti o Ri plásmido, denominado colectivamente los genes vir, los que son activados por ciertos elicitores de células de planta heridas en trans para sintetizar y transferir una copia de una sola hebra del T-ADN (la hebra T) a la célula de planta (Zambryski 1992; Zupan 1995). La secuencia de T-ADN en el Ti plásmido está flanqueada por repeticiones directas cortas de 24 -bp (Yadav 1982) , las cuales se requieren para el reconocimiento del T-ADN (Wang 1984) . Las secuencias que rodean estos bordes parecen estar inmediatamente involucradas en la polaridad de síntesis de la hebra T que comienza en el borde derecho (Wang 1987) . El ADN foráneo flanqueado por T-ADN puede ser transferido a las secuencias de borde en células de la planta usando el A. tume'faciens como vector (Hernalsteens 1980) . La inactivación o eliminación de los genes del T-ADN nativo involucrados en la síntesis de la hormona producirían el A. tumefaciens incapaz de producir los síntomas de enfermedad hiél de corona. Este procedimiento de hacer inactivo o eliminar los genes responsable de los síntomas de enfermedad es denominado "desarmado." Los primeros métodos de ingeniería de A. tumefaciens involucra-ron el desarmado simultáneo e introducción del gen objetivo, debido a que el gen introducido reemplaza directamente los genes en el T-ADN. Por un método denominado "homogenotización" (Matzke y Chilton, 1981) , el T-ADN nativo del Ti plásmido es reemplazado con un gen objetivo para transformación. Otra estrategia desarrollada para el diseño de A. tumefaciens involucra la clonación del gen objetivo en un vector intermedio cointegrativo que contiene una sola región de homología de T-ADN y una sola secuencia de borde. En este sistema, las secuencias son recombinadas por un solo evento de superposición (Horsch 1985) , lo cual resulta en el vector completo, inc-luso el gen de interés, el cual está integrado. Los sistemas cointegradores se igualan en regiones de homología enere la región T-ADN del Ti plásmido y la secuencia de ADN en el vector integrador introducido. Un ejemplo de un plásmido cointegrador útil es el pGV3850, un Ti plásmido de una cepa nopalina (C58) cuya región T-ADN completa entre los bordes fue reemplazada con el pBR322, ofreciendo así un sitio de recombinación para cualquier constructo de gen que contiene homología del pBR322 (Zambryski 1983) . Por el descubrimiento que el T-ADN no tiene que estar en el mismo plásmido como los genes vir (de Framond 1983; Hoekema 1983, 1985), fue desarrollado el vector binario. Un vector binario se mantiene en el A. tumefaciens separado del Ti plásmido, y contiene el gen de interés y un gen marcador seleccionable de planta entre las secuencias de borde T-ADN. Estos vectores ofrecen un gran grado de flexibilidad, debido a que los mismos no requieren un Ti plásmido específicamente diseñado con un sitio de recombinación homólogo. Por esa razón, cualquier cepa A. tumefaciens desarmada puede ser usada para transferir los genes a cualquier vector binario. Debido a su versatilidad, los vectores binarios son actualmente los vectores intermedios preferidos para clonar genes destinados a la transformación rel-.cionada con Agrobacterium en las plantas. Sin embargo, cualquier cepa A. tumefaciens a ser usada con los vectores binarios debe tener su propio Ti plásmido desarmado, sobre todo si la especie de planta designada es transformada ineficazmente mediante el A. tumefaciens. Por otra parte, el gen objetivo del vector binario será cotransformado con los genes de fitohormona oncogénicos del T-ADN nativo de la bacteria, por lo cual reducie la eficacia de transformación del gen objetivo y también produce síntomas de enfermedad tumorgénica en muchas de las células objetivo y por lo tanto impide la diferenciación de estas células en plantas normales. Las cepas A. tumefaciens tipo nativo desarmadas para uso general con vectores binarj-os ha involucrado, en algunos casos, una forma de homogenotización. Un constructo intermedio que contiene un gen marcador flanqueado por secuencias de Ti plásmido que son homologas a regiones que quedan fuera del T-ADN, es introducido en el A. tumefaciens tipo nativo por conjugación bacterial (Hood 1986, 1993). Considerando que la cepa A. tumefaciens desarmada típicamente tiene sus secuencias de ADN completas eliminadas, también se ha demostrado que la movilización de T-ADN puede ser inactivada por eliminación de la secuencia de borde derecho: los informes del trabajo con cepas del tipo nopalina de A. tumefaciens demuestra que el borde derecho de T-ADN es necesario para transferencia del gen, considerando que el borde izquierdo no lo es (Jóos 1983; Peralto y Ream 985; S'haw 19-84; Wang 1984). El Agrobacterium tumefaciens tiene un rango de anfitrión dicot, y adicionalmente algunas familias monocot (De Cleene 1976; Smith 1995) . Hay varias cepas diferentes de A. tumefaciens, cada una clasificada en tipo octopina, tipo nopalina, y tipo L,L-succinamopina, denominada después del tipo opina sintetizado en las células de planta que infectan. Estas cepas tienen rangos del anfitrión comparables, aunque no idénticos, y las versiones desarmadas de muchos tipos de A. tumefaciens han sido usadas con éxito para la transferencia del gen en una variedad de especies de planta (van Wordragen 1992; Hood 1993).- Las cepas Agrobacterium rhizogenes son clasificadas de la misma manera que las cepas A. tumefaciens. Típicamente, las mismas son clasificadas por la opina que producen. Las cepas más comunes son las cepas tipo agropina (por ejemplo, caracterizadas por Ri-plásmido PRI A4), la cepa tipo mannopina (por ejemplo, caracterizada por Ri-plásmido pRi.8196) y cepas tipo cucumopina (por ejemplo, caracterizadas por Ri-plásmido pRi2659) . Algunas otras cepas son tipo miquimopina (por ejemplo, caracterizadas por Ri-plásmido pRil724) . Las miquimopina y cucumopina son estereoisómeros pero no se ha encontrado ninguna homología entre los mismos en el nivel de nucleótido (Suzuki 2001) . La soja (Glicine max, L. Merr.) ha demostrado ser muy difícil de transformar con A. tumefaciens, por lo menos en parte debido a que es refractaria a la infección por A. tumefaciens tipo nativo. Los estudios comparativos con varios cultivares de soja y cepas A. tumefaciens sugieren que la susceptibilidad de la soja al A. tumefaciens está limitada, y es dependiente tanto del cultivar y la cepa bacteriana (Bush 1991; Byrne 1987; Hood 1987) . Los problemas con la recalcitrante soja al A. tumefaciens son además complicados por la dificultad de trabajar con la soja en el cultivo de tejidos. A pesar de algunos adelantos en la actualidad, sin embargo, la transformación que involucra al Agrobacterium en la soja permanece ineficaz y de intensiva labor, y están buscándose métodos para mejorar la eficacia continuamente. Según lo indicado precedentemente, algunas cepas A. tumefaciens infectan la soja más rápidamente que otras. Una cepa, A281, es una cepa supe-rvirulenta, de ampli rango de anfitrión, A. tumefaciens tipo L,L-succinamopina con un t-ipo nopalina C58 de antecedente cromosomatico., conteniendo el plásmido Ti tipo L,L-succinamopina, pTiBó542 (Hood 1987) . Al desarmar esta cepa se produce EHA101 y EHA105, cepas ampliamente usadas ahora junto con la transformación de la soja (Hood 1986, 1987) . Se describen las varias de otras cepas de Agrobacterium desarmadas (A208, US 5.416.011; LBA 4404, WO 94/02620). Hood y' col. (1993) describen el desarmado de tres plásmidos Ti : uno cada uno de tipos de octopina, nopalina y L, L-succinamopina. Las cepas de Agrobacterium tumefaciens A281 y EHA101 se describen como capaces de transformar la soja. El derivado desarmado del plásmido pTiBo542 de la cepa A281 se describe y es objetivo pEHA105. Las plantas ri-transformadas con Agrobacterium rhizogenes de algunas especies plantas tienen un fenotipo característico, con internodos acortados, hojas arrugadas, y una masa de raíz abundante con ramificación lateral extensa (Tepfer 1984) . Los genes rol en el Ri-ADN inducen cambios en la sensibilidad a las hormonas de planta y/o en el metabolismo de hormonas de planta (Maurel 1994; Moritz y Schmillling 1998; Nilsson 1997; Shen 1988) . Además, la transformación de tejidos de planta por infección con A. rhizogenes aumenta la producción de ciertos metabolitos (Ermayanti 1994; Mano 1986; Sim 1994).- El Agrobacterium rhizogenes K599 (pRi2659) nativo, "armado" es capaz de inducir la formación de raíz velluda en una variedad de cultivares de soja que incluye Jack, Williams 82, Cartter, Fayette, Hartwig, Mandarín, Lee 68, Pekín, y PI437654 (Cho 2000) . En el caso de A. rhizogenes, el Ri plásmido mannopina de cepa 8196 posee una sola región T que no comparte la homología con cualquiera de los oncogenes de pTi T-ADN (Lahners 1984) . Esta observación sugiere que un nuevo mecanismo, diferente del debido a la expresión tms en el tmr Ti mutantes, es responsable de la inducción de la raíz por esta cepa. En el caso de la cepas agropina tal como A4 , se transfieren dos regiones distintas del Ri plásmido al genoma de la planta: región TL y región TR (Huffman 1984; Jouanin 1984; White 1985) . El tamaño del TL-ADN encontrado en plantas transformadas por la cepa A4 es bastante constante, mientras la longitud del TR-ADN es más variable. Las hibridaciones con regiones T de A. tumefaciens revelaron la homología en la región pRi TR con los genes de TR-ADN de Ti plásmidos octopina que están comprendidos en la síntesis de agropina. Entre los oncogenes pTi comunes, se encontró homología sólo con los sitios fm (Willmitzer 1982; Huffman 1984; Jouanin 1984) , haciendo pensar en un posible papel para TR-ADN que dirige la síntesis de auxina en la inducción de raíz, aún si los genes similares a tm no se encuentran en el genoma de todas las plantas transformadas regeneradas (Taylor 1985; Jouanin 1986a) . La región TL, en contraste, no se hace híbrida con los genes de pTi T-ADN (Jouanin 1984) . La secuencia TL-ADN establecida por Sluzom y col. (1986) confirma esta ausencia de homología al nivel de nucleótido. Sin embargo, el TL-ADN es altamente homólogo en la región T simple del pRi8196 mannopina y por consiguiente debe ser capaz de inducir las raíces transformadas . • Vilaine y col. (Vilaine 1987) haN demostrado que la transferencia de TL-ADN solo, así como la transferencia de TR-ADN solo, conducen a la inducción de raíz en los fragmentos de planta infectada, haciendo pensar en la existencia de dos mecanismos moleculares independientes para la inducción de la raíz en Ri plásmidos tipo agropina. Vilaine y col. Describe además el desarmado de cepa Agrobacterium rhizogenes A4RS tipo agropina anulando regiones de TL, TR, o TL y TR del Ri-plásmido pRiA4 que producen cepa A. rhizogenes RS (pRiB278b) . Se describe la conjugación de Ri plásmidos desarmados con cósmidos que llevan región TL o TR que "rescatan" -por esto el fenotipo de raíz velluda. Se describe que no fue usada para la transferencia del gen A. rhizogenes la cepa desarmada . Mientras la transformación de la planta que involucra Agrobacterium tumefaciens se ha convertido en una norma en industria de biotecnología de planta para muchas especies de plantas, el uso de Agrobacterium rhizogenes sólo se hace raramente. Hasta la actualidad, se emplearon sólo cepas de Agrobacterium rhizogenes armadas nativas para incorporar genes foráneos en las plantas (por ejemplo, Narayanan 1999; Kouchi 1999) . Debido a que A. rhizogenes también puede transferir el T-ADN de vectores binarios ' in trans ' , el Ri plásmido ha sido usado como un vector para la introducción de ADN foráneo en las especies de planta dicotiledónea (Bevan 1984; Simpson 1986; Hamill 1991). Sin embargo, las cepas de Agrobacterium rhizogenes empleadas en estos descubrimientos están armadas (comprendiendo su plásmidos Ri nativo) y todavía pueden causar el fenotipo de raíz velluda (ver por ejemplo, Narayanan 1999) . Aunque algunos de los problemas concatenados a la transformación de planta se han superado por los métodos descriptos en la técnica, todavía hay una necesidad significativa de mejora y procedimiento de alternativo. Aunque los adelantos significativos han sido realizados en el campo de métodos de transformación relacionados con Agrobacterium, continúa existiendo la necesidad de métodos mejorados para facilitar la simplicidad, velocidad y eficacia de tales métodos, especialmente también para la transformación de plantas monocotiledóneas y plantas dicotiledóneas que son pertinaces a la transformación con las cepas A. tumefaciens normales. Por consiguiente, el objetivo de la presente invención es el de proveer un método alternativo que ofrece una eficacia de transformación mejorada para una amplia variedad de especies de la planta. Este objetivo se resuelve por la presente invención. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN Esta invención utiliza variantes de cepa Agrobacterium K599 "desarmada" (NCPPB 2659) para la entrega del T-ADN en las células de las plantas. Más adelante en la presente la clasificación anterior como una cepa "A. rhizogenes" no es utilizada, porque además del fenotipo que induce raíz velluda (el cual es un resultado del plásmido Ri pero no el genoma bacteriano) la cepa parece sólo estar relacionada remotamente a otras cepas A. rhizogenes basándose en un análisis de comparación de secuencias de rADN ribosomal. Así, se considera que la cepa no es inequívocamente un único espécimen de una cepa tipo A. tumefaciens o A. rhizogenes. Una primera modalidad de realización de la invención se refiere a un método para producir una célula de planta transgénica que comprende las etapas de: a) proveer bacterias de una variante de cepa transgénica, no patógena de cepa Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) o de un derivado de dicha cepa, en donde dicha variante de cepa es capaz de infectar las células de la planta pero carece de las propiedades que inducen fenotipo de raíz velluda y en donde dicha variante de cepa comprende además un T-ADN transgénico, y b) cocultivar una célula de planta con las bacterias, y-c) aislar o seleccionar células de planta que comprenden dicho T-ADN transgénico integrado establemente en su genoma. Otra modalidad de realización de la invención se refiere a un método para producir una planta transgénica que comprende las etapas de: a) proveer bacterias de una variante de cepa no patógena, transgénica de Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) o de un derivado de dicha cepa, en donde dicha variante de cepa es capaz de infectar las células de planta pero carece de propiedades que inducen el fenotipo de raíz velluda y en donde dicha variante de cepa comprende además un T-ADN transgénico, y b) cocultivar una planta, célula de planta o tejido de planta con bacterias, y c) aislar o seleccionando y, opcionalmente, regenerar plantas lo cual comprende integrar establemente en su genoma el T-ADN transgénico. Los métodos de la invención pueden ser utilizados para transformar virtualmente todo tipo de plantas, preferentemence célula de planta, tejido de planta, o derivado de planta de una planta seleccionada del grupo de plantas monocotiledóneas, plantas dicotiledóneas, y plantas gimnospermas . Más preferentemente la planta es de un género seleccionado del grupo que consiste de Medicago, Lycopersicon, Brassica, Cucumis, Solanum, Juglans, Gossypium, Malus, Vitis, Antirrhinum, Populus, Fragaria, Arabidopsis, Picea, Capsicum, Chenopodium, Dendranthema, el Euredadera japonesa, Pinus, Pisum, Oryza, Zea, Triticum, Triticale, Sécale, Lolium, Hordeum, la Glycine, Pseudotsuga, Kalanchoe, Beta, Helianthus y Nicotiana. En una modalidad de realización preferida de la invención el T-ADN transgénico comprende por lo menos un gen marcador seleccionable expresable en planta. Otra modalidad de realización de la invención se relaciona a una variante de cepa no patógena de cepa de Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) o de un derivado de cepa (en adelante en la presente la variante de cepa "desarmada"), en donde dicha variante de cepa es capaz infectar las células de planta pero carece de las propiedades que inducen fenotipo de raíz velluda. Otra modalidad de realización de la invención se relaciona a una variante de cepa no patógena, transgénica, de cepa de Agrobacterium K599 (NCPP13 2659) o de un derivado de dicha cepa, en donde dicha variante de cepa es capaz de infectar las células de la planta pero carece de las propiedades que inducen fenotipo de raíz velluda y en donde dicha variante de cepa comprende además un T-ADN transgénico. En una modalidad de realización preferida de la invención, dicha variante de cepa no patógena de cepa de Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) (o de un derivado de dicha cepa) es capaz de infectar las células de planta, intervenir en la transferencia del T-ADN en las células de la planta, y participar en la inserción del T-ADN en el genoma de planta, pero carece de las propiedades que inducen el fenotipo de raíz velluda. Más preferentemente, esto se logra por la presencia de una variante de plásmido no patógena del Ri-plásmido pRi2659 (el Ri-plásmido natural en cepa Agrobacterium K599; NCPPB 2659) o un derivado de la misma. Dicha variante de plásmido no patógena preferentemente provee todas las funciones requeridas para la infección de célula de planta y la transformación pero carece de secuencias que causan el fenotipo de la raíz velluda.

El derivado de cepa de Agrobacterium K599 (NCPPB2659) es preferentemente una bacteria patógena de planta, nacida del suelo, caracterizada por una secuencia intergénica de rARN 16S-23S que comprende por lo menos un motivo de secuencia seleccionado del grupo que consiste de motivos de secuencia descriptos por SEQ ID NO,: 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, y 14. La variante de cepa no patógena puede comprender además una o más características seleccionadas del grupo que consiste de la presencia de genes virA o virG mutantes o quiméricos o la presencia de plásmidos supervirulentos . La variante de cepa no patógena de cepa de Agrobacterium K599 (NCPPB2659) puede comprender una variante de plásmido no patógena del plásmido pR12659 (como el definido más adelante) . Aún otra modalidad de realización de la invención se refiere a una variante de plásmido no patógena de pRi2659 (el Ri-plásmido natural en cepa Agrobacterium K599; NCPPB 2659) o un derivado del mismo, dicha variante del plásmido que provee las funciones requeridas para la infección celular y transformación de la planta, pero carentes de secuencias que causan el fenotipo de raíz velluda (en adelante la variante del plásmido "desarmado" ) . Preferentemente especialmente cuando es usado en combinación con un T-ADN transgénico comprendido en un vector (binario) separado - dicha variante del plásmido "desarmada" no comprende ningún elemento (como por ejemplo elementos de T-ADN) que puedan ser transferidos al genoma de la planta. Hay varios medios para proveer tal variante del plásmido "desarmada." Esto puede ser realizado produciendo bordes disfuncionales del T-ADN (por ejemplo, por mutagénesis) o, preferentemente, anulando el T-ADN completo del plásmido Ri . En una modalidad de realización especialmente preferida de la invención dicha variante de plásmido no patógena comprende por lo menos una secuencia seleccionada del grupo de secuencias descripto por a) secuencias que comprenden una secuencia descripta por SEQ ID NO: 25, o una secuencia de por lo menos 100 nucleótidos consecutivos de la secuencia descripta por SEQ ID NO: 24, y-b) secuencias que tienen una identidad de secuencia de por lo menos 90% respecto a una secuencia como la descripta por SEQ ID NO: 24 o una secuencia de por lo menos 1.000 nucleótidos consecutivos de la secuencia descripta por SEQ ID NO: 24, y, c) secuencias que de hibridación bajo condiciones equival-ente al enlace o hibridación a 68 °C en una solución que consiste de 5x SSPE, 1% SDS, reactivo de De hardt 5x y 1-00 µg/mL de ADN de esperma de salmón desnaturalizada seguido de lavado en una solución que comprende 0 , lx SSPE, y 0,1% SDS a 68°C a una sonda que consiste de por lo menos 100 nucleótidos consecutivos de una secuencia como -la descripta por SEQ ID NO: 24 ó la secuencia complementaria a la misma. La secuencia aislada de la versión desarmada de del plásmido pR12659 se provee en la presente. Así, una modalidad de realización preferida de la invención se refiere a una secuencia de nucleótido aislada seleccionada del grupo de secuencias descripto por a) secuencias que comprenden una secuencia descripta por SEQ ID NO: 24, o una secuencia de por lo menos 100 nucleótidos consecutivos de la secuencia descripta por SEQ ID NO: 24, y b) secuencias que tienen una identidad de secuencia de por lo menos 90% a una secuencia como la descripta por SEQ ID NO: 24 o una secuencia de por lo menos 1000 nucleótidos consecutivos de la secuencia descripta por SEQ ID NO: 24, y, c) secuencias de hibridación bajo condiciones equivalente a enlace o hibridación a 68 °C en una solución que consiste de 5x SSP?, 1% SDS, reactivo Denhardt 5x y 100 µg/mL ADN de esperma de salmón desnaturalizado seguido de lavado en una solución que comprende 0,lx SSP?, y 0,1% DESS a 68 °C a una sonda que consiste en por lo menos 100 nucleótidos consecutivos de una secuencia como la descripta por SEQ ID NO: 24 o una secuencia complementa a la misma.

Más preferentemente, dicha variante de plásmido no patógena se describe por. una secuencia de nucleótido que describe el plásmido pRi2659 desarmado o un derivado precedente (como el definido anteriormente) . Aún más preferiblemente o alternativamente, el derivado está codificando una proteína virD2 que tiene una equivalencia de secuencia de aminoácido de por lo menos 85% con la secuencia descripta por SEQ ID NO: 112. Dicha proteína virD2 se espera que sea un factor importante para la actuación mejorada en la transformación del plásmido pR12659 desarmado. Así otra modalidad de realización de la invención se refiere a un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de: a) la secuencia como la descripta por SEQ ID NO: 112 o secuencias de por lo menos 200 aminoácidos consecutivos de los mismos, b) secuencias que tiene-n una identidad de secuencia de por lo menos 85% (preferentemente por lo menos 90% o 92%, más preferentemente por lo menos 95% ó 98%, más preferentemente por lo menos 99%) con las secuencias descriptas por SEQ ID NO: 112. Sin embargo, también se considera que las otras proteínas codificadas por el plásmido pR12659 desarmado son útiles para la optimización de procedimientos de transformación, así otra modalidad de realización de la invención se refiere a un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de: a) la secuencia como la desc'ripta por cualquiera de SEQ ID NO: 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 126, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 136, 137, 139, 140, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151., 152, 154, 155, 156, 158, 159, 161, 162, 1-63, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, ó 187 o secuencias de por lo menos 200 aminoácidos consecutivos (preferentemente por lo menos 300 aminoácidos consecutivos, más preferentemente por lo menos 400 aminoácidos consecutivos, preferentemente todos los aminoácidos consecutivos) de la misma, b) secuencias que tienen una identidad de secuencia de por lo menos 85% (preferentemente por lo menos 90% ó 92%, más preferentemente por lo menos 95% ó 98%, más preferentemente por lo menos 99%) con una secuencia descripta por cualquiera de SEQ ID NO: 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 126, 128, 129, 130, 131, 132, 133., 134, 136, 137, 139, 140, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 154, 155, 156, 158, 159, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 133, 184, 185, 136, ó 187. Aún otra modalidad de realización de la invención se refiere a secuencias de ácido nucleico aisladas codificando dichos polipéptidos. Estas secuencias pueden ser secuencias naturales aisladas (como las comprendidas en el plásmido pR12659) u otras secuencias derivadas basadas en la degeneración del código genético. Consiguientemente una modalidad de realización preferida de la invención la misma se refiere a una variante de plásmido no patógena pRi2659 o un derivado, en donde dicha variante de plásmido compréndelas secuencias requeridas para la infección celular y transformación de la planta del pRi2659 patógeno nativo, o su derivado pero le falta el T-ADN, preferentemente la región descripta por la secuencia desde aproximadamente la base 538 hasta aproximadamente la base 15519 de la secuencia caracterizada por GenBank Acc.No. AJ271050 (SEQ ID NO: 4) o desde aproximadamente la base 3644 hasta aproximadamente la base 18577 de la secuencia caracterizada por SEQ ID NO: 26. Esta secuencia corresponde al T-ADN del original., Ri-plásmido 20 pRi2659 patógeno tal como el de cepa Agrobacterium K599 patógeno (NCPPB 2659) . Más preferentemente dicha va-ria-nte de plásm-ido no patógena es una secuencia de hibridación bajo condiciones de elevada rigurosidad (por ejemplo, equivalente a enlace o hibridación a 68°C en una solución que consiste en 5x SSPE, 1% SDS, reactivo de Denhardt 5x y 100 µg/mL de ADN de esperma de salmón desnaturalizado seguido de lavado en una solución que comprende 0,lx SSPE, y 0,1% SDS a 68°C) con el Ri-plásmido pRi2659 original, patógeno tal como la cepa de Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) patógeno, pero sin hibridación bajo condiciones de elevada rigurosidad con la secuencia desde aproximadamente la base 538 hasta aproximadamente la base 15519 de la secuencia caracterizada por GenBank Acc. -No. AJ271050 (SEQ ID NO: 4) o desde aproximadamente la base 3644 hasta aproximadamente la base 18577 de la secuencia caracterizada por SEQ ID NO: 26. Más preferentemente, el derivado de pRi2659 es un plásmido capaz participar en la transferencia del T-ADN de una bacteria nacida del suelo en una célula de planta caracterizada además por a) poseer una homología de por lo menos 90% con el ADN que codifica plásmido pRi2659 nativo (como comprendido en la cepa Agrobacterium K599 (NCPPB2659) o b) hibridación bajo condiciones de elevada rigurosidad equivalente al enlace o hibridación a 68°C en una solución que consiste en 5x SSPE, 1% SDS, reactivo de Denhardt 5x y 100 µg/mL de ADN de esperma de salmón desnaturalizado seguido de lava en una solución que comprende 0 , lx SSPE, y 0,1% SDS a 68°C con el plásmido pRi2659 nativo. Preferentemente, el T-ADN en dicha variante de cepa no patógena transgénica, de cepa de Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) o su derivado está comprendido en un plásmido de vector binario separado del plásmido que provee las características requeridas para la infección de la planta (tal como un Ti- ó Ri-plásmido que carece de sus propiedades de inducción neoplástica o de raíz velluda) . Preferentemente el T-ADN está flanqueado por lo menos con la secuencia de borde derecho (más preferentemente por la secuencia de borde izquierdo y el derecho) . Los preferibles son los bordes Ti y/o Ri . En una modalidad de realización preferida dicho T-ADN transgénico comprende por lo menos un cassette de expresión para conferir a la planta una característica agronómicamente valiosa. En otra modalidad de realización preferida dicho T-ADN comprende además por lo menos un gen marcador que permite la selección y/o identificación de plantas, células de planta o tejidos transformados. El borde T-ADN del plásmido pR12659 ha demostrado ser especialmente eficaz en la transferencia del T-ADN y así en generar plantas transgénicas (sobre todo la planta de soja transgénica) . Así otra modalidad de realización de la invención está relacionada A T-ADN transgénico flanqueado por lo menos con un borde T-ADN del Agrobacterium rhizogenes plásmido pRi2659, dicho T-ADN transgénico no comprende ninguna secuencia que cause un fenotipo de raíz velluda. Preferentemente por lo menos una de las secuencias de borde es descripta por SEQ ID NO: 18 ó 19. Más preferentemente dicho T-ADN transgénico comprende por lo menos un cassette de expresión para conferir a la planta una característica agronómicamente valiosa o por lo menos un gen marcador que permite la selección y/o identificación de plantas transformadas, células de planta o tejidos. Otro objeto de la invención se refiere a un vector transgénico que comprende dicho T-ADN transgénico de la invención. Otras modalidades de realización de la invención se refieren a células u organismos no humanos que comprenden una secuencia de nucleótido, una variante de plásmido no patógena, o un T-ADN transgénico de la invención. Preferentemente, dichas células u organismos no humanos son seleccionados del grupo que consiste de bacterias, levaduras, plantas, mamíferos, e insectos. En una modalidad de realización preferida dicha célula u organismo es una bacteria nacida naturalmente del género Rhizobiaseae . En otra modalidad de realización preferida dicha célula u organismo es una célula de planta u organismo de planta, más preferentemente seleccionados del grupo de plantas monocotiledóneas y dicotiledóneas. Otros objetos, ventajas, y características de la presente invención serán evidentes de la siguiente descripción. DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La fig. ÍA es un dendrograma que demuestra la relación de cepas de Agrobacteria determinada por RAPD (ADN polimórfico amplificado al azar) (figura 2 de Llob 2003) . Para la descripción de las diversas cepas ver Tabla 1 más adelante. La cepa Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) bajo estas condiciones forma conjuntos en un grupo distinto de cultivares separado de las cepas "Agrobacterium tumefaciens" tradicionales tal como C58 o Ach5 pero también de otra cepa "Agrobacterium rh-izogenes" tal como NCPPB 8196 o ATCC 15834. La fig. IB es un dendrograma que demuestra la relación de cepas Agrobacterium según lo determinado comparando el rAR? 16S. Se compilan las secuencias con el programa "Clustal W" (Saitou 1987) . Las cepas se describen por GenBank Acc.-?o. de su rAR? 16S respectivo. Las cepas siguientes fueron evaluadas: La fig. 1C es un dendrograma que demuestra la relación de cepas de Agrobacterium según lo determinado por la comparación de secuencia de aminoácido virD2. Se compilan las secuencias usando programa "Clustal W" (Saitou 1987) . Las cepas son descriptas por GenBank Acc . - No. de sus proteínas virD2 respectivas. Las cepas siguientes fueron evaluadas : La fig. 2 es un mapa de restricción física de la región del T-ADN de Agrobacterium plásmido pRi2659. Las flechas indican las regiones de borde derecho e izquierdo (de: Combard 1987). La fig. 3 es la expresión de GUS transitorio en la soja (5 días) de hoja axilar de meristemo de explantes después de 2 días de cocultivo tanto con AGL1 (pBPSMM192b) (I) como SHA016 (pBPSMM192b) (II) . El SHA016/pBPSMM192b es una a cepa variante de Agrobacterium K599 desarmada, transgénica. El AGLl/pBPSMM192b es una cepa de control. Las cepas Agrobacterium SHAOOl y SHA016 son cepas funcionalmente equivalentes de la cepa Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) (pRi2659?tet) , es decir comprenden al plásmido pRi2659?tet desarmado. La fig. 4 es una expresión de GUS estable en la soja a 35 días posteriores a la infección usando la hoja axilar de meristemo de explantes infectadas con Agrobacterium SHAOOl (pBPSEWOOd) (I, II, III: ejemplos para varias explantes) . El SHAOOl (pBPSEW008) es una variante de cepa Agrobacterium K599 (pRi2659?tet) desarmada, transgénica. La fig. 5 son plántulas de tomate transgénico (A) usando SHAOOl conteniendo recombinante pBPSMM192b y expresión GUS en hojas transgénica (B) . La SHAOOl (pBPSMM-192-b) es una variante de cepa Agrobacterium K599 (pRi2659?tet) desarmada, transgénica. La fig. 6 es una hibridación Southern de tetraciclina desarmada marcada con K599 (pRi2659?tet) . La pérdida de una banda de hibridación en eventos de cruce doble sobre, cuando se sondea con borde derecho indica la deleción de la región de T-ADN pRi2659 (Sur inferior) . La banda de hibridación en Southern superior indica presencia de ADN flanqueando fuera de la deleción del T-ADN. - RF = hibridación con sonda de flanco derecho. RB = hibridación con sonda de flanco izquierdo. WT = tipo salvaje. S = clon que es el resultado de recombinación de cruce simple resultante en una inserción que comprende los dos T-ADN tipo salvaje y T-ADN de deleción. CS = confirmado simple; clon que es el resultado de un cruce simple con modelo de banda coincidente con el tamaño de banda calculado (producto intermedio) . D = clon que es el resultado de recombinación de cruce doble resultante de la deleción de T-ADN intencional (producto final buscado) . La fig. 7 es un ensayo de raíz velluda en los cotiledones de soja.- [a] Infección con K599 desarmado no causa raíces velludas . [b] Infección con K599 tipo salvaje causa raíces velludas. La fig. 8 es la expresión GUS transitoria en las células de planta (para descripción de constructo ver ejemplos a continuación) . A: transformación de embrión de maíz. SHAOOl es una cepa variante Agrobacterium K599 desarmada. LBA4404 es una cepa de control. B: transformación de otros tejidos de planta con SHAOOl en combinación con varios vectores binarios (indicados debajo de las figuras; para descripción ver los ejemplos). I: Nodos soja axilares en arbolitos; II: Callo organógeno de soja; III: Cotiledones del tomate. La fig. 9: Arabidopsis transgénica TI estable seleccionada con AHAS . La transformación fue realizada con cepa Agrobacterium MP90 (cepa de control 1) , cepa Agrobacterium K599 tipo salvaje (cepa de control 2) , y cepa Agrobacterium K599 desarmada (SHAOOl) , cada uno comprendiendo cualquier plásmido binario pBPSEWOOd o pBPSMM192b, respectivamente.

La fig. 10 es el manchado GUS de Arabidopsis transgénica TI estable. La Arabidopsis transgénica TI estable seleccionada con AHAS . La transformación se llevó a cabo con cepa Agrobacterium MP90 (cepa de control 1) , cepa Agrobacterium K599 tipo salvaje (cepa de control 2) , y cepa Agrobacterium K599 desarmada (SHAOOl) , cada una comprendiendo cualquier plásmido binario pBPSEW008 o pBPSMM192b, respectivamente. La fig. 11 es un mapa de región de T-ADN de plásmido pRi2659 incluyendo regiones de flancos derecho e izquierdo. La fig. 12 es un diagrama de flujo que detalla los pasos para construir los cassettes de deleción de la cepa K599 desarmada. La fig. 13 A: Mapas de plásmido de vector pBPSMM192b y pBPSMM232 B: Mapa de plásmido de vector pBPSEW008 La fig. 14: A-E: alineación de varias regiones de secuencia intergénica rARN 16S-23S de bacterias nacida del suelo. K599: cepa Agrobacterium K599 (NCPPB 2659). AE008980: Agrobacterium tumefaciens C58. AE009348: Agrobacterium tumefaciens C58. AE008265: Agrobacterium tumefaciens C58.

A?007948: Agrobacterium tumefaciens C53. AE009201: Agrobacterium tumefaciens C5-8. U45329: Agrobacterium vitis NCPP33554.- -A?102735: Agrobacterium tumefaciens (Rhizobium radiobacter) MAFF301 001. La cepa Agrobacterium C58 tiene 4 operones del rARN. Éstos son las relaciones más semejantes conocidas a la secuencia intergénica de rARN 16S-23S de K599. Otra secuencia intergénica de rARN 16S-23S de otras cepas de Agrobacterium tiene baja homología y no se apila bien. Esto muestra que esta región exhibe una variabilidad suficiente para ser utilizada como una secuencia firma para diferenciar cepa Agrobacterium K599 de otras especies estrechamente relacionadas. La secuencia intergénica de rARN 16S-23S es una región entre rARN 16S y 23S que normalmente codifica para tARN (como por ejemplo, lie, Ala, Asp, Trp .) . La fig. 15 es hibridación Southern de soja TI y plantas TO transformadas con cepa Agrobacterium desarmada K599 (pRi2659A) . El ADN genómico fue digerido con Hindlll y sondeado con un gen gusINT. Un solo sitio de Hindlll está presente en el T-ADN. El marcador M=lkb; wt=ADN genómico no transformado; sendas 1-7, linea individual TI; senda 8, planta TO .

La fig. 16 es la alineación de varias secuencias de aminoácido de especien Agrobacterium. Mutaciones únicas distinguen la proteína virD2 codificada por el pR12659 (SEQ. ID NO: 112) sobre sus homólogos conocidos se marca con asteriscos. (*) .- TÍAB2/73: Agrobacterium tumefaciens- TiA6 : Agrobacterium tumefaciens- Ti-SUKURA: Agrobacterium tumefaciens. RÍA4 : Agrobacterium rhizogenes . - RÍ1724: Agrobacterium rhizogenes.- RÍ2659: cepa Agrobacterium K599. DEFINICIONES GENERALES Abreviaturas: BAP - 6-bencilaminopurina; 2,4-D -ácido 2 , 4 -diclorofenoxiacetico; MS - medio Mura-shige y Skoog; NAA - ácido 1-naftalenacético; MES - ácido 2- (N-morfolino-etansulfónico, IAA ácido indol acético; Kan: sulfato de canamicina; GA3 - ácido Giberélico; TimentinTM: ticarcilina de disodio/clavulanato de potasio. Será entendido que esta invención no se limita a una metodología particular, protocolos, líneas celulares, especies o géneros de planta, constructos, y reactivos descriptos tal como están. También será entendido que la terminología utilizada en la presente está con el propósito describir solamente las modalidades de realización particulares, y no intenta limitar el alcance de la presente invención la cual solamente estará limitada por reivindicaciones adjuntas. Debe notarse que tal como se utiliza en la presente y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "a", "y", y "el" incluyen la referencia plural a menos que el contexto lo dicte claramente de otra manera. Por ejemplo, la referencia a "un vector" es una referencia a uno o más vectores e incluye equivalentes de los mismos conocidos por los expertos en la técnica, y así sucesivamente. El término "aproximadamente" se utiliza para indicar, cerca de, casi, alrededor de, o en la región de. Cuando el término "aproximadamente" se utiliza junto con un rango numérico, modifica ese rango extendiendo los límites por sobre y debajo de los valores numéricos indicados. En general, el término "aproximadamente" se utiliza en la presente para modificar un valor numérico por sobre y debajo del valor declarado por una variación de 20 por ciento, preferentemente 10 por ciento, o inferior (superior o inferior) . • Tal como se utiliza en la presente, la palabra "o" significa cualquier miembro de una lista particular y también incluye cualquier combinación de miembros de esa lista. Por "característica agronómicamente valiosa" se incluye cualquier fenotipo en un organismo de planta que sea útil o ventajoso para producción de alimento o productos de alimento, incluso partes de planta y productos de planta. Los productos agrícolas no alimentarios tales como papel, etc. también se incluyen. Una lista parcial de características agronómicamente valiosas incluye resistencia a las plagas, vigor, tiempo de desarrollo (tiempo para cosechar) , contenido de nutrientes mejorado, modelos de crecimiento novedosos, sabores o colores, tolerancia a sal, calor, sequedad y frío, y lo similar. Preferentemente, las características agronómicamente valiosas no incluyen los genes marcadores seleccionables (por ejemplo, genes que codifican resistencia a herbicida o antibiótico solamente utilizados para facilitar la detección o selección de células transformadas) , genes de biosíntesis de hormona que conducen a la producción de una hormona de planta (por ejemplo, auxinas, giberlinas, citoquininas, ácido abscísico y etileno que sólo se usan para la selección) , o genes de reporte (por ejemplo luciferasa, glucuronidasa, tra-nsfe-rasa de acetil cloranfenicol (CAT, etc.). Tales características agronómicamente valiosas importantes pueden incluir mejora de resistencia a las plagas (por ejemplo, Melchers 2000) , vigor, tiempo de desarrollo (tiempo para cosechar) , contenido de nutriente mejorado, modelos de crecimiento novedosos, sabores o colores, tolerancia a sal, calor, sequedad, y frío (por ejemplo, Sakamoto 2000; Saijo 2000; Yeo 2000; Cushman 2000) , y lo similar. Los expertos en la técnica reconocerán que hay numerosos polinucleótidos de los cuales escoger para conferir éstas y otras características agronómicamente valiosas. El término "ácido nucleico" se refiere a desoxiribonucleótidos o ribonucleótidos y polímeros o híbridos de los mismos en cualquier forma de hebra simple o doble, sentido o antisentido. A menos que sea indicado de otra manera, una secuencia de ácido nucleico particular abarca también implícitamente las variantes conservadoramente modificadas del mismo (por ejemplo, las sustituciones de codon degeneradas) y secuencias complementarias, así como la secuencia indicada explícitamente. El término "ácido nucleico" se utiliza intercambiablemente en la presente con "gen", "cADN, "mARN", "oligonucleótido", y "polinucleótido" . - La frase "secuencia de ácido nucleico" se refiere a un polímero de hebra simple o doble de bases de desoxiribonucleótido o ribonucleótido leídas de los extremos 5'- al 3'-. Incluye ADN cromosomático, plásmidos autoreplicantes, polímeros infecciosos de ADN o ARN y ADN o ARN que realiza un papel principalmente estructural. La "secuencia de ácido nucleico" también se refiere a una lista consecutiva de abreviaturas, letras, caracteres o palabras que representan nucleótidos. En una modalidad de realización, un ácido nucleico puede ser una sonda que es un ácido nucleico relativamente corto, normalmente menos de 100 nucleótidos de longitud. A menudo una sonda de ácido nucleico es de aproximadamente 50 nucleótidos de longitud hasta aproximadamente 10 nucleótidos de longitud. Una "región objetivo" de un ácido nucleico es una parte de un ácido nucleico que es identificada por ser de interés. Una "región de código" de ácido nucleico es la parte del ácido nucleico que es transcripta y traducida de una manera del específica de secuencia para producir un polipéptido o proteína particular cuando es colocada bajo el control de secuencias reguladoras apropiadas. Se dice que la región de código codifica tal polipéptido o proteína. El término "secuencia de nucleótido de interés" se refiere a cualquier secuencia de nucleótido, cuya manipulación puede evaluerse como conveniente por cualquier razón (por ejemplo, conferir calidad mejorada) , por medio un experto de habilidad convencional en la técnica. Tales secuencias de nucleótido incluyen, pero no se limitan a, secuencias codificando genes estructurales (por ejemplo, genes de reporte, genes marcadores de selección, genes de resistencia a droga, factores de crecimiento, etc.), y secuencias reguladoras sin codificación que no codifican un mARN o producto de proteína, (por ejemplo, secuencia de promotor, secuencia de poliadenilación, secuencia de terminación, secuencia de mejorador, etc.). Una secuencia de ácido nucleico de interés puede codificar preferentemente para lograr una característica agronómicamente valiosa. - El término "antisentido" se entiende que significa un ácido nucleico que posee una secuencia complementaria a una secuencia objetivo, por ejemplo un ARN mensajero (mARN) la secuencia cuyo bloqueo de expresión se busca que sea comenzado por hibridación con la secuencia objetivo.- El término "sentido" se entiende que significa un ácido nucleico que posee una secuencia que es homologa o idéntica a una secuencia objetivo, por ejemplo una secuencia que enlaza a un factor de transcripción de proteína y el mismo está involucrado en la expresión de un gen determinado. Según una modalidad de realización preferida, el ácido nucleico comprende un gen de interés y elementos que permiten la expresión de dicho gen de interés. El término "gen" se refiere a una región de codificación unida operablemente a las secuencias reguladoras apropiadas capaz de regular la expresión del polipéptido de alguna manera. Un gen incluye el regiones reguladoras no traducidas de ADN (por ejemplo, promotores, mejoradores, represores, etc.) precedentes (corriente arriba) y posteriores (corriente abajo) a la región de codificación (marco de lectura abierto, ORF) así como también, cuando fueran aplicable, secuencias intermedias (es decir, intrones) entre las regiones de codificación individuales (es decir, exones) . El término "gen estructural" tal como se utiliza en -la presente se piensa que significa una secuencia de ADN que es transcripta en mARM el cual es traducido entonces en una secuencia de característica de aminoácido de un polipéptido específico. El término "genoma" o "ADN genómico" se refiere a la información genética heredable de un organismo anfitrión. Dicho ADN genómico comprende el ADN del núcleo (también llamado ADN cromosomático) pero también el ADN de plástidos (por ejemplo, cloroplastos) y otros órganos celulares (por ejemplo, mitocondria) . Preferentemente el término genoma o ADN genómico se refiere al ADN cromosomático del núcleo.- El término "ADN cromosomático" o "secuencia de ADN cromosomática" será entendido como ADN genómico del núcleo celular independiente del estado del ciclo celular. El ADN cromosomático podría ser organizado por consiguiente en cromosomas o cromátidos, los cuales podrían ser condensados o podrían ser desenrollados. Una inserción en el ADN cromosomático puede ser demostrada y puede ser analizada mediante diversos métodos conocidos en la técnica tal como por ejemplo, el análisis de reacción en cadena de polimerasa (PCR) , el análisis Southern Blot, la hibridación "in situ" de fluorescencia (FIS'H) , y PCR "in s-itu" . Tal como se utiliza en la presente el término "región de codificación" cuando es utilizado en referencia a un gen estructural se refiere a las secuencias de nucleótido que codifican los aminoácidos encontrados en el polipéptido naciente como un resultado de la traducción de una molécula de mARN. La región de código está limitada, en eucariotes, en el lado 5'- por triplete de nucleótido "ATG" que codifica el iniciador metionina y en el lado 3 ' - por una de las tres tripletes que especifican codones de detención (es decir, TAA, TAG, TGA) . Además de contener intrones, las formas genómicas de un gen también pueden incluir secuencias localizadas en ambos extremos 5 ' - y 3 ' - de las secuencias que están presentes en la transcripción de ARN . Estas secuencias son llamadas como secuencias o regiones "flanqueado" (estas secuencias de flanqueado se localizan a 5' o 3' de las secuencias no traducidas presentes en la transcripción del mAR?) . La región 5 ' -flanqueada puede contener secuencias reguladoras tales como promotores y mejoradores, los cuales controlan o influyen en la transcripción del gen. La región 3 ' -flanqueada puede contener secuencias que dirigen terminación de transcripción, hendidura postranscripcional y poliadeni1ación. Tal como se utiliza en la presente, el término que "secuencia de aminoácido" se refiere a una lista de abreviaturas, letras, caracteres o palabras que representan los residuos del aminoácido. Los aminoácidos pueden denominarse en la presente por sus símbolos de tres letras normalmente conocidos o por los símbolos de una letra recomendados por la Comisión de Nomenclatura Bioquímica IUPAC-IUB. Los nucleótidos, igualmente, pueden ser denominados por sus códigos de una sola letra normalmente aceptados. Se usan intercambiablemente en la presente los términos "polipéptido", "péptido", "oligopéptido", "polipéptido", "producto de gen", "producto de expresión" y "proteína" para referirse a un polímero u oligómero de residuos de aminoácido consecutivos. El término "aislado" tal como es utilizado en la presente significa que un material ha sido apartado de su ambiente original. Por ejemplo, un polinucleótido que aparece naturalmente o polipéptido que se presenta en un animal viviente no es aislado, pero el mismo polinucleótido o polipéptido, separado de algunos o todos los materiales coexistentes en el sistema natural, es aislado. Tales polinucleótidos pueden ser parte de un vector y/o tal polinucleótidos o polipéptidos podrían ser parte de una composición, y tal vector o composición sería aislado si no es parte de su ambiente original. Preferentemente, el término "aislado" cuando es utilizado respecto a un ácido nucleico, tal como en "una secuencia de ácido nucleico aislada" se refiere a una secuencia de ácido nucleico que es identificada y separada por lo menos de un ácido nucleico contaminante con el cual está normalmente asociada en su fuente natural . El ácido nucleico aislado es el ácido nucleico presente en una forma o composición que es diferente de la que se encuentra en la naturaleza. En contraste, los ácidos nucleicos no aislados son los ácidos nucleico tales como ADN y ARN que se encuentran en el estado en el cual los mismos existen en la naturaleza. Por ejemplo, una secuencia de ADN dada (por ejemplo, un gen) se encuentra en el cromosoma de la célula anfitrión en la proximidad a genes vecinos; ls secuencias de ARN, tal como una secuencia de mARN específica que codifica una proteína específica, se encuentra en la célula como una mezcla con otro mARN numerosos que codifican una 43 multitud de proteínas. Sin embargo, una secuencia de ácido nucleico aislada que ccmprende por ejemplo SEQ ID NO: 18 incluye, por vía de ejemplo, tales secuencias de ácido nucleico en células que nomalmente contienen SEQ ID NO: 18 en dónde la secuencia de ácido nucleico está en una ubicación cromosomática o extracromosomática diferente de las células naturales, o por otra parte está flanqueada por una secuencia de ácido nucleico diferente distinta a la encontrada en la naturaleza. La secuencia de ácido nucleico aislada puede estar presente en forma de una sola hebra o doble hebra. Cuando una secuencia de ácido nucleico aislada va a ser utilizada para expresar una proteína, la secuencia de ácido nucleico contendrá como mínimo por lo menos una parte del sentido o codificación de la hebra (es decir, la secuencia de ácido nucleico puede ser de una sola hebra) . Alternativamente, puede contener ambas hebras de sentido y antisentido (es decir, la secuencia de ácido nucleico puede ser de doble hebra) . Como se utiliza en la presente, el término "purificado" se refiere a las moléculas, secuencias de amino ácido o ácido nucleico que son extraídas, aisladas o separadas de su ambiente natural. Una "secuencia de ácido nucleico" aislada es por consiguiente una secuencia de ácido nucleico purificada. Las moléculas "sustancialmente purificadas" son por lo menos 60% libres, preferentemente por lo menos 75% libres, y más preferentemente por lo menos 90% libres de otros componentes con los cuales están naturalmente asociadas . El término "tipo salvaje", "natural" o "de origen natural" con respecto a un organismo, polipéptido, o secuencia de ácido nucleico significa que dicho organismo se está reproduendo naturalmente o está disponible por lo menos de un organismo que se reproduce naturalmente el cual no cambia, muta, o es manipulado de alguna otra manera por el hombre. Un "constructo de polinucleótido" se 'refiere a un ácido nucleico por lo menos parcialmente creado por métodos recombinantes. El término "constructo de ADN" se está refiriendo a un constructo de polinucleótido que consiste en desoxiribonucleótidos . El constructo puede ser de hebra simple o, preferentemente, de hebra doble. El constructo puede ser circular o lineal. El experto en la técnica está familiarizado con una variedad de maneras de obtener un constructo de ADN.

Pueden ser preparados los constructos por medio de recombinación acostumbrada y las técnicas de clonación se describen, por ejemplo, en Maniatis 1989, Silhavy 1984, y Ausubel 1987. Tal como se utiliza en la presente, las condiciones "complementarias" o de "complementariedad" se utilizan con referencia a secuencias de nucleótido relacionadas por reglas de apareamiento entre bases. Por ejemplo, la secuencia 5'-AGT-3' es complementaria a la secuencia 5'-ACT-3'. La complementariedad puede ser "parcial" o "total". La complementariedad "parcial" es cuando una o más bases de ácido nucleico no se equiparan según las reglas de apareamiento de base. La complementariedad "total" o "completa" entre los ácidos nucleicos se produce cuando cada y toda base de ácido nucleico se equipara con otra base bajo las reglas de apareamiento de base. El grado de complementariedad entre las hebras de ácido nucleico tiene efectos significativos en la eficacia y fuerza de hibridación entre las hebras de ácido nucleico. Un "complemento" de una secuencia de ácido nucleico tal como se utiliza en la presente se refiere a una secuencia de nucleótido cuyos ácidos nucleicos demuestran complementariedad total respecto a los ácidos nucleicos de la secuencia de ácido nucleico.- Los términos "homología" o "identidad" cuando son utilizados -respecto a los ácidos nucleico se refiere a un grado de complementariedad. Se entiende que la homología o identidad entre dos ácidos nucl-eico significa la identidad de la eecuencia de ácido nucleico en cada caso sobre la longitud completa de la secuencia, lo cual es calculado por comparación con ayuda del algoritmo de programa GAP (Paquete de Wisconsin Versión 10,0, Universidad de Wisconsin, "Genetics Computer Group" (GCG), Madison, E.U.A.) con parámetros que son determinados como sigue: Ponderación de Gap: 12 Ponderación de longitud: 4-Igualdad media: 2.912 Desigualdad media: 2.003. Por ejemplo, una secuencia por lo menos con 95% de homología (o identidad) a la secuencia SEQ ID NO: 20 al nivel de ácido nucleico se entiende que significa que la secuencia, la cual en comparación con la secuencia SEQ ID NO: 20 por el algoritmo del programa anterior con el parámetro anterior indicado, tiene por lo menos 95% de homología. Puede haber homología parcial (es decir, identidad parcial menor de 100%) o la homología es completa (es decir, identidad completa de 100%) .

Alternativamente, una secuencia parcialmente complementaria se entiende que es una que por lo menos inhibe parcialmente una secuencia completamente complementaria de hacer híbrido un ácido nucleico objetivo y se refiere a la utilización del término funcional "sustancialmente homólogo". La inhibición de hibridación de la secuencia completamente complementaria respecto a la secuencia objetivo puede ser examinada usando un ensayo de hibridación ("Southern" o "Northern Blot", solución hibridación de y lo similar) bajo condiciones de baja restricción. Una secuencia o sonda sustancialmente homologa (es decir, un oligonucleótido que es capaz de hacer híbrido a otro oligonucleótido de interés) competirá e inhibirá el enlace (es decir, la hibridación) de una secuencia completamente homologa respecto a un objetivo bajo las condiciones de baja restricción. Ésto no significa decir que las condiciones de baja restricción son tales que se permite el enlace no específico; las condiciones de baja restricción requieren que el enlace de dos secuencias sea una interacción específica entre si (es decir, selectiva) . La ausencia de enlace no específico puede ser probada por la utilización de un segundo objetivo que aún carece de un grado parcial de complementariedad (por ejemplo, menos de aproximadamente de 30% de identidad) ,- en ausencia de enlace no específico la sonda no hará híbrido al segundo objetivo no complementario. Cuando se utiliza en referencia a una secuencia de ácido nucleico de hebra doble tal como un clon cADN o genómico, el término "sustancialmente homólogo" se refiere a cualquier sonda tal como la que puede hacer híbrida a cualquier hebra o ambas hebras de la secuencia de ácido nucleico de hebra doble bajo las condiciones de baja restricción descriptas precedentemente. Cuando es usada en referencia a una secuencia de ácido nucleico de hebra simple, el término "sustancialmente homólogo" se refiere a cualquier sonda tal como que puede hacer híbrida a la secuencia de ácido nucleico de hebra simple bajo las condiciones de baja restricción descriptas precedentemente . El término "hibridación" tal como se utiliza en la presente incluye "cualquier procedimiento por el cual una hebra de ácido nucleico se une con una hebra complementaria a través de apareamiento de base" (Coomb 1994) . La hibridación y la intensidad de hibridación (es decir, la intensidad de asociación entre ácidos nucleico) es impactada por factores tales como el grado de complementariedad entre los ácidos nucleicos, la restricción de las condiciones involucradas, el Tm de híbrido formado, y la relación G:C dentro de los ácidos nucleicos. Tal como se utiliza en la presente, el término "Tm" se utiliza con referencia a "temperatura de fusión" . La temperatura de fusión es la temperatura a cual una población de moléculas de ácido nucleico de hebra doble se convierte en la mitad disociada en hebras simples. La ecuación para calcular la Tm de ácidos nucleicos es bien conocida en la técnica. Como se indica por las referencias convencionales, una estimación simple del valor de Tm puede ser calculado por la ecuación: Tm=81, 5+0,41 (% G+C), cuando un ácido nucleico está en una solución acuosa en ÍM NaCl [ver por ejemplo, Anderson y Young, "Quantitative Filter Hybridization" , in Nucleic Acid Hybridization" (1985) ] . Otras referencias incluyen cómputos más sofisticados que toman características estructurales, así como las de la secuencia, en cuenta para el cálculo de Tm. Las condiciones de restricción bajas cuando se utilizan con referencia a la hibridación del ácido nucleico comprenden las condiciones equivalente a enlace o hibridación a 68 °C. en una solución que consiste de 5x SSPE (43,8 g/L NaCl ; 6,9 g/L NaH2P04.H20 y 1,85 g/L EDTA, pH ajustado a 7,4 con NaOH), 1% SDS, reactivo de Denhardt 5x (Denhardt 50x contiene lo siguiente por 500 mL: 5g de "Ficoll" (Tipo 400, "Pharmacia"), 5 g BSA (Fragmento V; Sigma)] y 100 µg/mL de ADN de esperma de salmón desnaturalizado seguido de lavado en una solución que comprende 0,2x SSPE, y 0,1% SDS a la temperatura ambiente cuando se utiliza una sonda de ADN desde aproximadamente 100 hasta aproximadamente 1.000 nucleótidos de longitud. Las condiciones de restricción elevadas cuando se utilizan con referencia a la hibridación del ácido nucleico comprenden las condiciones equivalente a enlace o hibridación a 68°C. en una solución que consiste en 5x SSPE, 1% SDS, reactivo de Denhardt 5x y 100 µg/mL de ADN de esperma de salmón desnaturalizado seguido de lavado en una solución que comprende 0,lx SSPE, y 0,1% SDS a 68°C. cuando se utiliza una sonda desde aproximadamente 100 hasta aproximadamente 1.000 nucleótidos de longitud. El término "equivalente" cuando se hace referencia a una condición de hibridación como la relacionada a una condición de hibridación de interés significa que la condición de hibridación y la condición de hibridación de interés resulta en la hibridación de secuencias de ácido nucleico que tienen el mismo rango porcentual (%) de homología. Por ejemplo, si una condición de hibridación de interés resulta en la hibridación de una primera secuencia de ácido nucleico con otras secuencias de ácido nucleico que tienen de 80% a 90% de homología a la primera secuencia de ácido nucleico, entonces se dice que otra condición de hibridación es equivalente a la condición de hibridación de interés si ésta otra condición de hibridación también produce hibridación de primera secuencia de ácido nucleico con otras secuencias de ácido nucleico que tienen de 80% a 90% de homología respecto a la primera secuencia de ácido nucleico. Cuando se utiliza con referencia a hibridación de ácido nucleico los expertos en la técnica conocen bien que numerosas condiciones equivalentes pueden emplearse para comprender condiciones tanto de baja o elevada rigurosidad; los factores tales como longitud y naturaleza (ADN, ARN, composición de base) de la sonda y naturaleza del objetivo (ADN, ARN, composición de base, presente en la solucicn o inmovilizado, etc.) y se considera la concentración de las sales y otros componentes (por ejemplo, pre-sencia o ausencia de formamida, sulfato de dextran, polietilén glicol) y la solución de hibridación puede ser variada para generar condiciones de hibridación de baja o elevada rigurosidad diferente, pero equivalente a, las condiciones enumeradas precedentemente. Los expertos en la técnica saben que considerando que pueden ser preferibles restricciones más elevadas para reducir o eliminar el enlace no específico, las restricciones más bajas pueden preferirse para detectar un número más grande de secuencias de ácido nucleico que tienen homologías diferentes. - Por "Transgen", "transgénico" o "recombinante" se refiere a un polinucleótido manipulado por el hombre o una copia o complemento de un polinucleótido manipulado por el hombre. Por ejemplo, un cassette de expresión transgénica que comprende un promotor enlazado operablemente a un segundo polinucleótido puede incluir un promotor que es heterólogo al segundo polinucleótido como resultado de manipulación por el hombre (por ejemplo, por métodos descriptos en Sambrook 1989, o "Current Protocols in Molecular B-iology" Vol 1-3, John W-iley & Sons, Inc. (1994-1998)) de un ácido nucleico aislado que comprende el cassette de expresión. En otro ejemplo, un cassette de expresión recombinante puede comprender polinucleótidos combinados de manera tal que los polinucleótidos sean sumamente improbables de ser encontrados en la naturaleza. Por ejemplo, los sitios de restricción o secuencias de vector de plásmido manipuladas por el hombre pueden flanquear o pueden separar al promotor del segundo polinucleótido. Un experto reconocerá que los polinucleótidos pueden ser manipulados de muchas maneras y no pueden limitarse a los ejemplos anteriores. - El término "transgénico" o "recombinante" tal como se utiliza en la -presente (por ejemplo, con respecto a una célula de planta o planta) se piensa que se refiere a las células y/o plantas que contienen un transgen, o cuyo genoma ha sido alterado por la introducción de un transgen, o se le han incorporado genes o secuencias de ADN exógenos, incluyendo pero no limitado a genes o secuencias de ADN que quizás normalmente no están presentes, genes que no son normalmente transcriptos y traducidos ("expresados") en un tipo de célula determinado, o cualquier otros genes o secuencias de ADN que uno pretende introducir en la célula y/o planta no transformada, tal como genes que normalmente pueden estar presentes en la célula y/o planta no transformada pero uno busca tener la expresión alterada. Preferentemente, el término "recombinante" con respecto a los ácidos nucleico tal como se usa en la presente significa que el ácido nucleico está unido covalentemente y es adyacente a un ácido nucleico que no es adyacente en su ambiente natural. Las células, tejidos y plantas transgénicas pueden ser producidas por diversos .métodos que incluyen la introducción de un "transgen" que comprende ácido nucleico (normalmente ADN) en una célula objetivo o integración de transgen en un cromosoma de una célula objetivo por medio de la intervención humana, tal como por los métodos descriptos en la presente. El término "transgen" tal como se utiliza en la presente se refiere a cualquier secuencia de ácido nucleico que es introducida en el genoma de una célula por manipulaciones experimentales. Un transgen puede ser una "secuencia de ADN endógena", o un "heterólogo de secuencia de ADN" (es decir, "ADN foráneo"). El término que "secuencia de ADN endógena" se refiere a una secuencia de nucleótido que se encuentra naturalmente en la célula en la cual se introduce en tanto no contenga alguna modificación (por ejemplo, una mutación de punto, la presencia de un gen marcador seLeccionable, etc.) con relación a la secuencia que ee produce naturalmente . El término "transgen" o "transgénico" con respecto a, por ejemplo, una eecuencia de ácido nucleico (o un organismo, constructo de expresión o vector que comprende dicha secuencia de ácido nucleico) se refiere a todae aquellos constructos originados por manipulaciones experimentales en los cuales tanto a) dicha secuencia de ácido nucleico, o b) una secuencia de control genética enlazada operablemente a la secuencia de ácido nucleico a) , por ejemplo un promotor, o O (a) y (b) no ee localizan en eu ambiente genético natural o han sido modificadoe por manipulaciones experimentales, un ejemplo de una modificación es una euetitución, adición, deleción, invereión o inserción de uno o más residuos de nucleótido. El ambiente genético natural se refiere al eitio cromoeomático natural en el organismo de origen, o a la presencia en una biblioteca genómica. En el caso de una biblioteca genómica, el amb-i-ente genético natural de la secuencia de ácido nucleico es preferiblemente retenida, por lo menos en parte. El ambiente flanquea la secuencia de ácido nucleico por lo menos a un lado y tiene una secuencia de por lo menoe 50 bp, preferentemente por lo menoe 500 bp, eepecialmente preferentemente por lo menos 1.000 bp, muy especialmente preferentemente por lo menos 5.000 bp, de longitud. Un constructo de expresión que se produce naturalmente, por ejemplo la combinación que se produce naturalmente de un promotor con el gen correepondiente, ee convierte en un conetructo de expreeión tranegénica cuando ee modificado por los métodos "artificiales" de sintesis no naturales, como, por ejemplo, mutagenización. Tales métodos han eido deecriptoe (E.U.A. 5.565.350; WO 00/15815) . Loe términos "secuencia de ácido de heterólogo" o "ADN heterólogo" se utilizan para referirse a una secuencia de nucleótido que está ligada a, o es manipulada para hacerla ligada a, una secuencia de ácido nucleico a la cual no está ligada en la naturaleza, o a la cual está ligada en una ubicación diferente en la naturaleza. El ADN heterólogo no es endógeno a la célula en la cual se introduce, sino que se ha obtenido de otra célula. El ADN hete-rólogo también incluye una secuencia de ADN endógena que contiene alguna modificación. Generalmente, aunque no necesariamente, el ADN heterólogo codifica ARN y proteínas que normalmente no son producidas por la célula en' la cual se expresa. Los ejemplos de ADN heterólogo incluyen genes de reporte, secuenciae tranecripcionalee y de regulación de traelación, proteínas marcadoras seleccionablee (por ejemplo, proteínas que confieren reeistencia a droga), etc. Preferentemente, el término "transgénico" o "recombinante" con respecto a una secuencia de regulación (por ejemplo, un promotor de la invención) significa que dicha secuencia de regulación está unida covalentemente y es adyacente a un ácido nucleico a cual no ee adyacente en su ambiente natural . El término "gen foráneo" se refiere a cualquier ácido nucleico (por ejemplo, secuencia de gen) el cual es introducido en el genoma de una célula por manipulacionee experimentales y puede incluir secuencias de gen encontradas en esta célula en tanto el gen introducido contenga alguna modificación (por ejemplo, una mutación de punto, presencia de un gen marcador seleccionable, etc.) con relación al gen que es producido naturalmente. Los polipéptidos "recombinantes" o proteínas se refieren a polipéptidos o proteínas producidas por las técnicas de ADN recombinantes, es decir, producidos de células traneformadae por un conetructo de ADN recombinante exógeno que codifica el polipéptido o proteína deseado. Los ácidoe nucleicos y polipéptidos recombinantes también pueden comprender moléculas que no existen tal como están en la naturaleza pero son modificadas, cambiadas, mutadas o manipuladas de otra manera por el hombre. Preferentemente, un "polipéptido recombinante" es un polipéptido que no se produce naturalmente que difiere en la secuencia de un polipéptido que se produce naturalmente mediante por lo menos un residuo de aminoácido. Los métodos preferidos para producir dicho polipéptido y/o ácido nucleico recombinante pueden comprender mutagenesis dirigida o no dirigida, aleatorizado de ADN u otros métodos de recombinación recursiva. El término "organismo genéticamente modificado" o "GMO" se refiere a cualquier organismo que comprende ADN tranegénico. Loe organismos ejemplares incluyen plantas, animales y microorganismos. El término "célula" o "célula de planta" tal como se utiliza en la presente se refiere . a una sola célula. El término "células" se refieren a una población de células. La población puede ser una población pura que comprende un tipo de célula. Igualmente, la población puede comprender más de un tipo de célula. En la presente invención, no hay ningún límite en el número de tipos de célula que puede comprender una población celular. Las células pueden ser sincronizadae o no sincronizadas. Una célula de planta dentro de esta invención significa que puede ser aielada (por ejemplo, en el cultivo de suspensión) o comprendida en un tejido de planta, órgano de planta o planta en cualquier fase de desarrollo. El término "Órgano" con respecto a una planta (u "órgano de planta") significa partes de una planta y puede incluir (pero no debe estar limitado a) por ejemplo raíces, frutas, retoños, tallo, hojas, anteras, eépalos, pétalos, polen, semillas, etc. El término "tejido" con respecto a una planta (o "tejido de planta") significa una disposición de múltiples células de planta que incluye tejidos diferenciados y no diferenciados de plantas. Los tejidos de planta pueden constituir parte de un órgano de planta (por ejemplo, epidermis de una hoja de planta) pero también pueden constituir tejidos de tumor (por ejemplo, tejido de callo) y varios tipos de células en un cultivo (por ejemplo, células solas, protoplastos, embriones, calli, cuerpos similaree a prototubérculoe, etc.). El tejido de planta puede eetar en la planta, en el cultivo de órgano, cultivo del tejido, o el cultivo celular. El término planta tal como se utiliza en la presente se refiere a una pluralidad de células de planta que son principalmente diferenciadae en una eetructura que eetá preeente en cualquier fase de desarrollo de una planta. Tales estructurae incluyen una o máe órganos de planta que incluyen, pero no se limitan a, fruta, retoño, tallo, hoja, pétalo de flor, etc. Preferentemente, el término planta incluye las plantas enterae, órganos/estructuras de crecimiento vegetativo (por ejemplo hojae, tallos y tubérculos) , raíces, floree y órganoe/eetructurae florales (por ejemplo hoja de floración, sépalos, pétalos, estambree, carpelos, anteras y óvulos) , semillas (incluso embrión, endosperma, y revestimiento de la semilla) y frutas (ovario maduro), tejidos de planta (por ejemplo tejido vascular, tejido de tierra, y lo similar) y células (por ejemplo células de guarda, células huevo, tricomas y lo similar) , y la progenie de los mismos. La clase de plantas que pueden usarse en el método de la invención generalmente es tan amplia como la clase de plantas superior e inferior adaptable a las técnicas de transformación, incluso el angiospermas (plantas monocotiledóneas y dicotiledóneas ), gimnospermas, heléchos, y algas multicelulares. Incluye las plantas de una variedad de niveles de ploide, incluso aneuploide, poliploide, diploide, haploide y hemizigoe. Eetán incluidos dentro del alcance de la invención todos los géneros y especies de plantas superioree e inferioree del reino vegetal. Están incluidas además las plantas maduras, semillae, retoñoe y arbolilloe, y partes, material de propagación (por ejemplo semillae y frutos) y cultivos, por ejemplo cultivos celulares, derivadoe de de loe miemoe. Son preferidae lae plantae y materias vegetales de las familias de planta siguientes: Amaranthaceae, Braseicaceae, Carophyllaceae, Chenopodiaceae, Compoeitae, Cucurbitaceae, Labiatae, Leguminosae, Papilionoideae, Liliaceae, Linaceae, Malvaceae, Rosaceae, Saxifragaceae, Scrophulariaceae, Solanaceae, Tetragoniaceae . Son preferibles las plantas anual, perenne, monocotiledóneas y dicotiledóneas comom los organismos del anfitrión para la generación de plantas transgénicas . La utilización del sistema de recombinación, o método de acuerdo con la invención además es ventajoso en todas las plantas ornamentales, silvicultura, fruta, o árboles ornamentales, flores, flores cortadas, arbustos o césped. Dicha planta puede incluir, pero no está limitada a briofitos tales como, por ejemplo, Hepaticae (hepáticas) y Musci (muegoe) ; pteridofitoe talee como heléchos, cola de caballo y clubmosses; gimnospermae talee como coníferae, cicadas, ginkgo y Gnetaeae; algas tales como Chlorophyceae, Phaeophpyceae, Rhodophyceae, Myxophyceae, Xanthophyceae, Bacillariophyceae (diatomeas) y Euglenophyceae. Las plantas para los propósitos de la invención pueden comprender a las familias Roeáceae talee como rosa, Ericáceae talee como rododendroe y azaleas, í Euforbiáceas talee como poineettias y crotón, Cariofiláceas tales como rosas, Solanáceas tal como petunias, Geeneriáceae tal como la violeta africana, Baleamináceae como no-me-toquee, Orquideáceae tal como las orquídeas, Iridáceas tales como gladiolo, lirio, fresia y azafrán, Compositaceas tal como caléndula, Geraniáceas tal como geranios, Liliáceas tal como Drachaena, Moraceas tal como ficue, Araceas tal como el filodendron y muchas otras. La planta transgénica según la invención además se selecciona en particular entre las plantae de cultivo dicotiledóneae talee como, por ejemplo, las familias de Leguminosas tales como arveja, alfalfa y soja; la familia de Umbelíferas, particularmente el género Daucus (muy particularmente especie carota (zanahoria)) y Apium (muy particularmente la especie. la especia gaveolane var. dulce (apio)) y muchoe otroe; la familia Solanáceas, particularmente género Lycopersicon, muy particularmente especie esculentum (tomate) y el género Solanum, muy particularmente de la especie tuberosum (papa) y melongena (berenjena), tabaco y muchos otroe; y género Capsicum, muy particularmente de la especie annum (pimienta) y muchos otros; la familia Leguminosae, particularmente del género Glycine, muy particularmente de la eepecie max (eoja) y muchoe otroe; y la familia Cruciferas, particularmente el género Braesica, muy particularmente de la especie napue (colza) , campe-stris (remolacha) , olerácea cv "Taetie" (berza) , olerácea cv "Snowball Y" (coliflor) y olerácea cv cv "Emperor" (brócoli); y el género Arabidopeis, muy particularmente de la especie thaliana y muchos otros; la familia Compositas, particularmente género Lactuca, muy particularmente de la especie sativa (lechuga) y muchos otros. La planta transgénica según la invención se selecciona en particular entre las plantas de cultivo monocotiledóneas, tales como, por ejemplo, cereales como trigo, cebada, sorgo y mijo, centeno, triticale, maíz, arroz o avenas, y caña de azúcar. Son preferidos adicionalmente los árboles tales como manzana, pera, membrillo, ciruela, cereza, durazno, pelón, damasco, papaya, mango, y otras especies leñosae que incluyen los arbolee coníferoe y caducoe talee como álamo, pino, sequoia, cedro, roble, etc. Son especialmente preferibles los Arabidopsis thaliana., Nicotiana tabacum, colza, soja, maíz (maíz) , trigo, lino, papa y tagetes . La "eficacia de transformación" o "frecuencia de transformación" tal como se utiliza en la presente puede ser medida por el número de células transformadas (u organismoe transgénicos que crecen de las células individuales transformadas) que son recuperadas bajo las condiciones experimentales normales (-es decir estandarizadas o normalizadas con respecto a la cantidad de células puestas en contacto con ADN foráneo, la cantidad de ADN suministrado, tipo y condicionee de euministro de ADN, condiciones generales de cultivo, etc.). Por ejemplo, cuando se usan los pecíolos aislados como el material de comienzo para la transformación, puede expresaree la frecuencia de traneformación como el número de retoños transgénicos (o las líneas de planta fértiles resultantes) obtuenidos por el pecíolo transformado.- El término "expresión" se refiere a la biosíntesis de un producto de gen. Por ejemplo, en el caso de un gen eetructural, la expreeión involucra ls transcripción del gen estructural en mARN y, opcionalmente, la traducción subeiguiente de mARN en uno o máe polipéptidos. El término "caeeette de expreeión" o "constructo de expresión" tal como se utiliza en la presente se pretende que eignifique la combinación de cualquier secuencia de ácido nucleico a ser expresada en el enlace operable con una secuencia promotora y, opcionalmente, los elementos adicionales (como por ejemplo, secuencias de terminador y/o poliadenilación) - lo cual facilita la expresión de secuencia de ácido nucleico. El término "promotor", "elemento promotor", o "secuencia de promotor" tal como se utiliza en la presente, se refiere a una secuencia de ADN que cuando es ligada a una secuencia de nucleótido de interés es capaz de controlar la transcripción de la secuencia de nucleótido de interés en mARN . Un promotor está típicamente, aunque no necesariamente, localizado en 5' (ee decir, corriente arriba) de una secuencia de nucleótido de interés (por ejemplo, proximal al sitio de inicio transcripcional de un gen estructural) que controla la transcripción en mAR?, y provee un sitio para enlace específico por polimerasa AR? y otros factores de transcripción para la iniciación de la transcripción. Una secuencia de polinucleótido es "heteróloga a" un organismo o una segunda secuencia de polinucleótido si se origina de una especie foránea, o, si es de la misma especie, es modificada respecto de su forma original. Por ejemplo, un promotor enlazado operablemente a un heterólogo que codifica la secuencia se refiere a una secuencia de codificación de una especie diferente respecto de lo que el promotor fue derivado, o, si es de la misma especie, una secuencia de código que no está asociada naturalmente con el promotor (por ejemplo una secuencia de código genéticamente diseñada o un alelo de un ecotipo o variedad diferente) . Pueden derivarse promotores convenientes de plantas o patógenos de planta como por ejemplo, virus de planta. Si un promotor es un promotor inducible, entonces la relación de la transcripción aumenta en resputeeta a un agente de inducción. En contraete, la relación de tranecripción no ee regulada por un agente de inducción ei el promotor ee un promotor constitutivo. Además, el promotor puede ser regulado en una manera tejido específica o de tejido preferido de modo tal que sólo es activo para transcribir la región de código asociada en un tipo(s) de tejido específico tal como hojas, raíces o meristemo. El término "tejido específico" tal como se aplica a un promotor se refiere a un promotor que es capaz de conducir la expresión selectiva de una secuencia de nucleótido de interés a un tipo eepecífico de tejido (por ejemplo, pétaloe) en ausencia relativa de expresión de la misma secuencia de nucleótido de interés en un tipo diferente de tejido (por ejemplo, raíces). La eepecificidad del tejido de un promotor puede ser evaluada mediante, por ejemplo, enlazando operablemente un gen de reporte a la secuencia de promotor para generar un constructo de reporte, introduciendo el constructo de reporte en el genoma de una planta de manera tal que el constructo de reporte se integra en cada tejido de planta transgénico reeultante, y detecta la expresión del gen de reporte (por ejemplo, detector mARN, proteína, o actividad de una proteína codificada por el gen de reporte) en los tejidos diferentes de la planta transgénico. La detección de un nivel mayor de expresión del gen de reporte en uno o más de los tejidos relacionados al nivel de expresión del gen de reporte en otros tejidos demuestra que el promotor es específico para los tejidos en los cualee se detectaron niveles de expresión mayores. El término "específico de tipo de célula" tal como se aplica a un promotor se refiere a un promotor que es capaz de conducir la expresión selectiva de una secuencia de nucleótido de interés en un tipo específico de célula en ausencia relativa de expresión de la misma secuencia de nucleótido de interés en un tipo diferente de célula dentro del mismo tejido. El término "específico de tipo de célula" cuando es aplicado a un promotor también significa un promotor capaz de promover expresión selectiva de una secuencia de nucleótido de interés en una región dentro de un solo tejido. La especificidad del tipo de célula de un promotor puede ser evaluada usando métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, actividad de manchado GUS (como se describe' por ejemplo en el Ejemplo 7) o manchado inmunohistoquímico. Brevemente, las secciones de tejido son sumergidae en parafina, y se hacen reaccionar las secciones de parafina con un anticuerpo primario que es específico para el producto polipéptido codificado por la secuencia de nucleótido de interés cuya expresión es controlada por el promotor. Un anticuerpo secundario etiquetado, (por ejemplo, conjugado peroxidasa) que es eepecífico para el anticuerpo primario, se permite enlazar al tejido seccionado y el enlace específico es detectado (por ejemplo, con avidina/biotina) por microecopía. Los promotores pueden ser constitutivos o regulables. El término "constitutivo" cuando se utiliza en referencia a un promotor significa que el promotor es capaz de conducir la transcripción de una eecuencia de ácido nucleico enlazada operablemente en ausencia de un estímulo (por ejemplo, golpe de calor, químico, luz, etc.). Típicamente, los promotores constitutivos son capaces de conducir la expreeión de un transgen sustancialmente en cualquier célula y cualquier tejido. Por otra parte, un promotor de "regulables" es uno que es capaz de conducir un nivel de transcripción de los núcleos enlazados operablemente a la secuencia de ácido nucleico en presencia de un estímulo (por ejemplo, golpe de calor, químicos, luz, etc.) el cual es diferente del nivel de transcripción de la secuencia de ácido nucleico enlazada operablemente en ausencia del estímulo. Cuando se busca la expresión de un gen en todos los tejidos de una planta transgénica u otro organismo, uno puede usar un promotor "constitutivo" que es generalmente activo bajo la mayoría de lae condicionee ambientales y estados de desarrollo o diferenciación de la célula (Benfey 1989) . Los promotores útiles para las plantas también incluyen aquéllos obtenidos de Ti-o Ri-plásmidoe, de las células de planta, viruses de planta u otros organismoe cuyos promotoree ee encuentran que eon funcionalee en lae plantae . Loe promotores bacterianos que funcionan en las plantas, y así son convenientes para utilizar e-n los métodos de la invención incluyen al promotor de sintetasa de octopina, promotor de sintasa de nopalina, y promotor de sintetas de manopina. El promotor que controla la expresión del gen de característica y/o marcador de selección puede ser constitutivo. Los promotores constitutivos convenientes .para utilizar en las plantas incluyen, por ejemplo, virus mosaico de coliflor (CaMV) región de iniciación de transcripción 35S (Franck 1980; Odell 1985; Shewmaker 1985; Gardner 1986), la región de iniciación de transcripción 19S (E.U.A. 5.352.605 y WO 84/02913), y promotores de región VI, promotor 1'- ó 2'- derivado del T-ADN de Agrobacterium tumefaciens, y otros promotores activos en células de planta que son conocidos por los expertos de habilidad en la técnica. Otros promotores convenientes incluyen al promotor de transcripción de cuerpo del Figwort moeaico virus completo, promotores de actina (por ejemplo, promotor de actina del arroz; McElroy 1990) , promotoree de hietona, promotoree del tubulina, o promotor de sintaea mannopina (MAS) . Otroe promotoree de la planta conetitutivoe incluyen a varioe promotores de ubiquitina o poliubiquitina (Sun 1997; Christensen 1989, 1992; Bruce 1939; Holtorf 1995), los promotores de mas, Mac o DoubleMac (E.U.A. 5,106,739; Comai 1990) , el promotor de ubiquitina (Holtorf 1995) , promotor Rubisco pequeña subunidad (SSU) (E.U.A. 4,962,028), promotor de B legumin (GenBank Acc. No. X03677) , promotor de sintasa nopalina (NOS) de Agrobacterium, promotor TR dual., promotor sintaea octopina (OCS) de Agrobacterium, promotor de Smas, promotor deehidrogenasa cinamil alcohol (E.U.A. 5,683,439), los promotores vacuolares de subunidades de ATPasa, promotor pEMU (Last 1991) ; promotor MAS (Velten 1984) , promotor histona H3 de maíz (Lepetit 1992; Atanassova 1992), promotor a-conglicinina, promotor faseolina, promotor ADH, y promotores de golpe de calor, promotor de nitrilasa de Arabidopeie thaliana (WO 03/008596; GenBank Acc. No.: 038846, nucleótidos 3.862 a 5.325 o sino 5342), promotor de una proteína rica en prolina del trigo (WO 91/13991) , promotor de gen ptxA de Pieum sativum, y otras regiones de iniciación de transcripción de varios genee de planta conocidoe por loe expertoe en la técnica . Por eupueeto, loe promotores pueden regular la expreeión todo el tiempo en un único o algunos tejidos. Alternativamente, un promotor puede regular la expresión en todos los tejidos pero sólo en un punto de tiempo de desarrollo específico. Como se hab-rá notado anteriormente, el promotor de excisión (es decir, el promotor que se vincula al polinucleótido de segmentación de ADN específico de secuencia) generalmente no es constitutivo, pero en cambio es activo sólo para parte del ciclo de vida o por lo menos un tejido de organismo transgénico. Uno puede usar un promotor que conduce la expresión de un gen de interés en un tejido específico o está de otra manera bajo el control medioambiental o de deearrollo máe preciso. Los ejemplos de condiciones ambientales que pueden afectar la transcripción por promotores inducibles incluyen el ataque de patógeno, las condiciones anaerobiae, etileno o presencia de luz. Los promotores bajo control de desarrollo incluyen los promotores que inician la transcripción sólo en ciertos tejidos u órganos, tal como hojae, raíces, fruta, semillas, o flores, o parte de los mismoe. El funcionamiento de un promotor puede variar, dependiendo también de eu situación en el genoma. Aeí, un promotor inducible puede volverse totalmente o parcialmente constitutivo en ciertas situaciones. Los ejemplos de promotores de planta específicos de tejido bajo el control de desarrollo incluyen a los promotores cuya transcripción es iniciada sólo en ciertos tejidos, tales como fruta, semillas, flores, anteras, ovarios, polen, meristemoe, flo-res, hojas, tallos, raíces y semillas. El promotor ES específico de tejido del tomate es particularmente útil para conducir la expresión del gen para que un producto de gen objetivo sea localizado en frutas (ver, por ejemplo, Lincoln 1988; Deikman 1988, 1992) . Otros promotores específicos de semilla convenientes incluyen aquéllos derivados de los genes siguientes: MAC1 del maíz (Sheridan 1996) , Cat3 del maíz (GenBank No. L05934., Abbler 1993), gen que codifica oleosin 18kD del maíz (GenBank No. J05212, Lee 1994) vivíparo-1 de Arabidopsis (Genbank Acc. -No. U93215) , gen que codifica oleosina de Arabidopsis (Genbank Acc. -No. Z17657) , Atmycl de Arabidopsis (Urao 1996) , familia de gen de proteína de almacenamiento de semilla 2S de Arabidopsis (Conceicao 1994) gen que codifica oleosin 20kD de Braseica napue (GenBank No. M63985) , napin de Braeeica napus (GenBank No. J02798, Josefsson 1987), familia de gen napin (por ejemplo, Brassica napus; Sjodahl 1995), E.U.A. 5,608,152; Stalberg 1996), gen que codifica proteína 2S de almacenamiento del Brassica napus (Dasgupta 1993) , genes que codifican oleosin A (Genbank Acc. -No. 009118) y oleosin B (Genbank No. 009119) de la soja, gen que codifica la proteína de bajo peso molecular rica en azufre de la soja (Choi 1995), gen faseolin (E.U.A. 5,504,200, Bustos 1989; Murai 1983; Sengupta-Gopalan 1985), gen de albúmina 2S (Joseffeon 1987) , gen de legumin (Shirsat 1989) , el USP (proteína de semilla desconocida) gen (Báumlein 1991) , gen de proteína enlace a sacaroea (WO 00/26388) , gen legumina B4 (LeB4; Báumlein 1991a, b; 1992; Fiedler 1995), g Arabidopsis oleosin en (WO 98/45461) , gen de Braesica Bce4 (WO 91/13980) , genee que codifican "glutenina de alto peeo molecular" (HMWG) , gliadina, enzima de ramificación, pirofosfatasa de ADP-glucosa (AGPase) o sintasa de almidón. Adicionalmente los promotores preferidos son aquéllos que habilitan la expresión específica de semilla en monocotiledóneas tales como maíz, cebada, trigo, centeno, arroz y lo similar. Promotores que pueden ser utilizados ventajosamente son promotor de gen lpt2 o lptl (WO 95/15389, WO 95/23230) o promotores descriptos en WO 99/16890 (promotores de gen de hordeina, gen de glutelina, gen de orizina, gen de prolamina, gen de gliadina, gen de zeina, gen de casirina o gen de secalina) . ?s adicionalmente preferible un promotor específico de hoja y inducido por luz como de cab o Rubisco (Simpson 1985; Timko 1985); un promotor específico de antera tal como de LAT52 (Twell 1989b) ; un promotor específico de polen tal como Zml3 (Guerrero 1993) ; y un promotor preferido de microspora tal como de apg (Twell 1993) . Por ejemplo, ademáe loe promotoree convenientee son promotores específicoe para tubérculoe, raícee de almacenamiento o raicee talee como, por ejemplo, promotor de patatina clase I (1333) , promotor inhibidor de catepsina D de papa, promotor de sintasa de almidón (GBSS1) o promotor de esporamina, y los promotores específicos de fruta como, por ejemplo, promotor específico de fruto de tomate (EP-A 409 625) . Los promotores que son convenientes además son aquéllos que aseguran la expresión específica de hoja. Los promotores que pueden mencionarse son el promotor FBPase citoeólico de papa (WO 98/18940) , el Rubieco (carboxilasa del ribulosa-1, 5-bisfosfato) promotor SSU (subunidad pequeña) o el promotor ST-LSI de papa (Stockhaus 1989) . Otros promotores preferidos son aquélloe que gobiernan la expresión en semillae y embriones de planta. Por ejemplo, los promotores convenientes adicionales son los promotores específicos de maduración de fruta tales como, por ejemplo, el promotor específico de maduración de fruto del tomate (WO 94/21794) , promotores específico de flor como, por ejemplo, promotor de sintasa fitoeno (WO 92/16635) o el promotor del gen Pl-rr (WO 98/22593) u otro promotor específico de nodo como el descripto en EP-A 249676 puede ser usado ventajosamente. El promotor también puede ser un promotor específico de tejido esponjoeo, tal como el promotor aislado de un gen TrpA de planta como el descripto en WO 93/07278. Un promotor regulador de desarrollo, entre otros, se describe en (Baerson 1993) . Un caeeette de expresión también puede contener un promotor inducible químicamente (revisar artículo: Gatz 1997) por medio del cual la expresión del gen exógeno en la planta puede ser controlada en un punto de tiempo particular. Por ejemplo, promotores tales como el promotor PRP1 (Ward 1993), un promotor inducible por ácido salicílico (WO 95/19443) , un promotor inducible por bencenesulfonamida (EP 0 388 186) , un promotor inducibl por tetraciclina (Gatz 1991, 1992) , un promotor inducible por ácido abscísico EP 0 335 528) o un promotor inducible por etanolciclohexanona (WO 93/21334) igualmente puede ser usado. También es conveniente el promotor de gen II de isoforma de glutatión-S transferasa (GST-II-27) , el cual puede ser activado por aplicación exógena de resguardoe talee como, por ejemplo, N,N-dialil-2 , 2-dicloroacetamida (WO 93/01294) y el miemo es operable en un gran número de tejidos de monocotiledóneas y dicotiledóneas. Los promotores inducibles ejemplares adicionales que pueden ser utilizados en la presente invención incluyen los del sistema ACE1 que responde a cobre (Mett 1993); o el promotor ln2 de maíz que responde a resguardos de herbicida bencenesulfonamida (Herehey 1991; Gatz 1994) . Un promotor que reeponde a un agente de inducción al cual las plantas normalmente no responden puede ser utilizado. Un promotor inducible de ejemplo es el promotor de inducible de un gen de hormona esteroide, cuya actividad transcripcional es inducida por una hormona de glucocorticoesteroide (Schena 1991) . Otros promotores preferidos son los promotores inducidos por la cepa biótica o abíotica, tales como, por ejemplo, el promotor inducible por patógeno dei gen PRP1 (Ward 1993) , el promotor de hspSO inducible por calor en tomate (E.U.A. 5.187.267), el promotor alfa-amilasa la inducible por frío de la papa (WO 96/12814) o el promotor pinll inducido por corte (EP-A1 0 375 091) . Los promotores también pueden abarcar a promotores adicionales, elementos de promotor o promotores mínimos capaces de modificar las características específicae de expresión. Así, por ejemplo, la expresión específica de tejido puede ser producida como una función de ciertos factores de cepa, debido a secuencias de control genéticas. Por ejemplo, se describen tales elementos para la cepa de agua, ácido abscísico (Lam 1991) y cepa de calor (Schoffl 1989) . El término unión "operable" o "enlazada operablemente" será entendida como significando, por ejemplo, la disposición secuencial de un elemento regulador (por ejemplo un promotor) con una secuencia de ácido nucleico a ser expresada y, si fuera apropiado, además los elementos reguladores (como por ejemplo, un terminador) de manera tal que cada uno de los elementos reguladores puede cumplir su función indicada para permitir, modificar, facilitar o de otra manera influenciar la expresión de la secuencia de ácido nucleico. La expresión puede resultar dependiente respecto a la disposición de las secuencias de ácido nucleico en relación con ARN de sentido o antisentido. Con este fin, no se requiere necesariamente la unión directa en el sentido químico. Por ejemplo, las secuenciae de control genéticae tales como las secuencias de mejorador, también pueden ejercer su función en la secuencia objetivo de posiciones que están muy lejos, o debido a otras moléculas de ADN. Las dispoeicionee preferidas son aquéllas en las cuales la secuencia de ácido nucleico a ser expresada recombinantemente es posicionada detrás de la secuencia que actúa como promotor, para que las dos secuencias se unan covalentemente entre sí. La distancia entre la secuencia del promotor y la secuencia de ácido nucleico a ser expresado recombinantemente es preferentemente menor de 200 pares de base, especialmente preferentemente menos de 100 pares de base, muy especialmente preferentemente menos de 50 pares de base. El enlace operable, y un constructo de expresión, puede ser generado por medio de la recombinación de costumbre y las técnicas de clonación como las descriptae (por ejemplo, en Maniatie 1989; Silhavy 1984; Ausubel 1987; Gelvin 1990) . Sin embargo, las secuencias adicionales que, por ejemplo, actúan como un enlazador con los sitios de hendidura específicos para las enzimas de restricción, o como un péptido de eeñal, también pueden posicionarse entre las dos secuenciae. La inserción de secuencias también puede llevar a la expresión de proteínas de fusión. Preferentemente, el constructo de expresión, que consiste de un enlace de promotor y secuencia de ácido nucleico a ser expreeado, puede existir en una forma integrada a vector y puede ser insertada en un genoma de la planta, por ejemplo por transformación. El término "transformación" tal como se utiliza en la presente se refiere a la introducción de material genético (por ejemplo, un transgen) en una célula. La transformación de una célula puede ser estable o transitoria. El término "transformación transitoria" o "temporalmente traneformado" ee refiere a la introducción de uno o máe transgenes en una célula en ausencia de integración de transgen en el genoma de la célula anfitrión. La transformación transitoria puede ser detectada mediante, por ejemplo, el ensayo inmunosorbente enlazado a enzima (ELISA) el cual detecta la presencia de un polipéptido codificado por uno o más transgenes. Alternativamente, la transformación transitoria puede ser detctada detectando la actividad de la proteína (por ejemplo, P-glucuronidasa) puesta en código por el transgen (por ejemplo, el gen A uid) según lo demostrado en la presente [por ejemplo, ensayo histoquímico de actividad de enzima GUS por manchando con X-gluc el cual produce un precipitado azul con la presencia de la enzima GUS; y un ensayo quimioluminiscente de actividad de enzima GUS usando el equipo GUS-Light (Tropix) ] . El término "transformante transitorio" se refiere a una célula que ha incorporado uno o más transgenes temporalmente. En contraste, el término "transformación estable" o "establemente transformado" se refiere a la introducción e integración de uno o más transgenee en el genoma de una célula, produciendo preferiblemente una integración cromosomática y hereditabilidad estable preferentemente a través de la meiosie. La traneformación eetable de una célula puede eer detectada por hibridación de Southern Blot genómica de ADN de la célula con eecuenciae del ácido nucleico que son capaces de enlazarse a uno o más transgenes. Alternativamente, la transformación estable de una célula también puede ser detectada por la reacción en cadena de- polimerasa de ADN genómico de la célula para amplificar las secuencias del transgen. El término que "transformante estable" se refiere a una célula que ha integrado uno o más transgenes establemente en el ADN genómico. Así, un transformante estable es distinguido de un transformante transitorio en el cual,, considerando que el ADN genómico del transformante estable contiene uno o más transgenes, el ADN genómico del transformante transitorio no contiene ün transgen. La transformación también incluye por introducción de material genético en las células de la planta en forma de vectores virales de planta que involucran la repetición epicromosomal y expreeión del gen que pueden exhibir las propiedades variables con respecto a la estabilidad meyótica. Los términos "infectando" e "infección" con una bacteria se refieren a la coincubación de una muestra biológica objetivo, (por ejemplo, célula, tejido, etc.) con la bacteria bajo condiciones tales que las secuencias de ácido nucleico contenidas dentro de la bacteria son introducidas en una o más células de la muestra biológica objetivo. El término "meristemo" o "células meristemáticas" o "tejido meristemático" pueden ser usadas intercambiablemente y puede pensarse que significan el tejido de planta no diferenciado que se divide continuamente mientras forma las nu vas células, tal como el encontrado en la punta de un tallo o la raíz.- Se piensa que el término "nodo" -significa el punto en un tallo en donde una hoja está unida o ha sido unida. Se piensa que el término "inte-rnodo" significa la sección o parte entre dos nodos en un tallo. Se pretende que el término "pecíolo" signifique el tallo por el cual una hoja se une a un tallo, también denominado un tallo de hoja. El término que se pretede que signifique "brote axilar" lo que significa una protuberancia pequeña a lo largo de un tallo o ramificaciones, a veces adjuntó en las balanzas de protección y conteniendo un retoño subdesarrollado, hoja, o flor; también denominado un brote lateral . Se pretende que el término "hipocotiledón" signifique la parte de tallo entre las hojas de semilla (los cotiledones) y la raíz. Se piensa que el término "axila de hoja" significa el ángulo entre una hoja y el tallo que está afectado. El brote axilar ocurre en la axila de la hoja. Se piensa que el término "cotiledón" significa una hoja de embrión de una semilla de planta que está en germinación o permanece o surge en la semilla, se agranda, y se vuelve verde; también denominado una hoja de semilla. La semilla de soja consiste en dos mitades de semilla que son cotiledones u hojas de la semilla. Los dos cotiledones contienen el alimento y reservas de nutriente que nutren al arbolito hasta que se establezca. El color del cotiledón es verde en la vaina en vías de desarrollo pero en las variedades de grano presente, se vuelve amarillo a medida que maduran las plantas. El eje de embrión se localiza entre los cotiledones y está unido a los mismoe cerca del extremo más cercano al micropilo. El término "Agrobacterium" tal como se utiliza en la presente se refiere a una bacteria fitopatógena con forma de vara, nacida de la tierra, Gram-negativa. La Agrobacterium junto con Rhizobium, Sinorhizobium, y Allorhizobium son los géneros dentro de la familia bacteriana de Rhizobiáceas (Kersters y De Ley. 1984) loe cuales ha sido incluidos en la subclase alfa-2 de Proteobacteria en base a las características ribosomales (Willems y Collins. 1993). Los miembros de eeta familia son aerobios, Gram-negativos . Las células normalmente con forma de vara (0,6-1,0 Nm por 1,5-3,0 µm) , se presentan individualmente o en pares, sin endospora, y su motilidad es por uno a seis flagelos peritricos. El limo de polisacárido extracelular considerable es producido normalmente durante el crecimiento del medios que contiene hidrato de carbono. Las especies de Agrobacterium, Agrobacterium tumefaciens (syn. Agrobacterium radiobacter) , Agrobacterium rhizogenes, Agrobacterium rubi y Agrobacterium vitis, junto con Allorhizobium undicola, forman un grupo monofilético con todas las especies de Rhizobium, basado en los análisie rADN 16S comparativos (Sawada 1993, El Young 2003). Agrobacterium ee un género artificial que comprende lae eepeciee patógenae para lae plantas. La naturaleza monofilética del Agrobacterium, Allorhizobium y Rhizobium y su circunscripción genérica fenotípica común apoya su fusión en un solo género, Rhizobium. La clasificación y caracterización de cepas de Agrobacterium incluso la diferenciación de Agrobacterium tumefaciens y Agrobacterium rhizogenes y sus diversas clases de tipo opino son una práctica bien conocida en la técnica (ver por ejemplo "Laboratory guide for identification of plant pathogenic bacteria", 3o edición. (2001) N. W. Schaad, J. B. Jones, y W. Chun (eds.) ISBN 039T542635; por ejemplo el artículo de Moore y col. publicado en el mismo) . Los recientes análisie demueetran que la claeificación por eue propiedadee de patógeno de planta no eetá juetificada. Consiguientemente los métodos más avanzados basadoe en el análieie y comparación del genoma (tal como eecuenciación del rARN 16S; RFLP, Rep-PCR, etc.) empleadoe para elucidar la relación de lae divereae cepae (ver por ejemplo Young 2003, Farrand 2003, de Bruijn 1996, Vinueea 1998) . La Agrobacteria puede diferenciaree por lo menos en tree biovaree, correepondiendo a lae divisiones de la especie basadas en las pruebas bioquímicas y fisiológicas diferenciales. Las cepas patógenas de Agrobacterium comparten una característica común; las mismas contienen por lo menos un plásmido grande, el el plásmido que induce tumor o raíz (Ti y Ri , respectivamente) . La virulencia es determinada por las diferentes regiones del plásmido que incluye el ADN transferido (T-ADN) y los genes de virulencia (vir) . Los genes de virulencia intervienen en la transferencia de T-ADN en las células de planta infectadas, en donde se integra en el ADN de planta. Según la clasificación "tradicional", la Agrobacteria incluye, pero no se limita a, las cepas de Agrobacterium tumefaciens, (la cual por su plásmido de Ti natural, "armado" típicamente causa la bilis de corona en las plantas infectadas) , y Agrobacterium rhizogenes (la cual por su Ri-pláemido natural, "armado" causa la enfermedad de la raíz velluda en la planta anfitrión infectada) , Agrobacterium rubi (la cual en su forma natural, "armada" causa bilis de caña en Rubus) , Agrobacterium vitis, y Agrobacterium radiobacter (agrupamientos no patógenos de Agrobacteria) . Las relaciones filogenéticas de miembros del género Agrobacterium por dos métodos demuestran la relación de cepas Agrobacterium K599 se presentan en la Fig. ÍA (basado en RAPD (ADN polimórfico amplificado al azar); tomado de Llob 2003; figura 2) y IB (basado de secuenciado del rARN 16S) .

ATCC: Colección de.cultivo tipo americano USA; CFRP: Collection Francaise des Bacteries P ytopa- togénes, Francia; IVÍÁ: Instituto Valenciano de Investigaciones Agrarias,España;NCIB: Colección Nacional de Bacteria Industpal , Ing.: NCPPB: Colección Nacional de Bacterias Patógenas de Planta; Inglaterra ND: No determinado El término Ti-plásmido tal como se utiliza en la presente se refiere a un plásmido que es replicable en Agrobacterium y está en su forma natural, "armado" que interviene en la hiél de corona en las plantas infectadas con Agrobacterium. La infección de una célula de planta con un forma natural, "armada" de un Ti-plásmido de Agrobacterium generalmente resulta en la producción de opina (por ejemplo, nopalina, agropina, octopina, etc.) por la célula infectada. Así, la cepa Agrobacterium que causa producción de nopalina (por ejemplo, cepa LBA4301, C58, A208) es denominado Agrobacteria "tipo nopalina"; la cepa Agrobacterium que causa producción de octopina (por ejemplo, cepa LBA4404, Ach5, B6) es denominada como Agrobacteria tipo octopina; y la cepa Agrobacterium que causa producción de agropina (por ejemplo, cepa EHA105, EHA101, A281) es denominada del tipo Agrobacteria agropina. Un Ti-plásmido desarmado se entiende como un Ti-plásmido al que le faltan sus propiedades para producir hiél de corona pero mantiene las funciones distintas de la de infección de la planta. Preferentemente, la región de T-ADN de dicho plásmido "desarmado" fue modificada en cierto modo, tal que al lado de las secuenciae de borde ninguna secuencia Ti interna funcional puede ser transferida en el genoma de la planta. En una modalidad de realización preferida, cuando se utiliza con un sietema de vector binario, la región del T-ADN completa (incluso los bordes del T-ADN) es anulada. El término Ri-plásmido tal como se utiliza en la presente se refiere a un plásmido que es replicable en Agrobacterium y está en su forma natural, "armado" que interviene en la enfermedad de raíz velluda en las plantas infectadas con Agrobacterium. La infección de una célula de planta con un forma natural, "armada" de un Ri-plásmido de Agrobacterium generalmente resulta en la producción de opinas (derivados de azúcar amino específicoe producidoe en las células de la planta transformadas tal como por ejemplo, agropina, cucumopina, octopina, miquimopina etc.) por la célula infectada. Las cepas Agrobacterium rhizogenes son tradicionalmente distinguidas en la subclases de la misma manera que las cepas A. tumefaciens. Las cepas más comunes son las cepas del tipo agropina (por ejemplo, caracterizadas por el Ri-plásmido pRiA4) , cepas tipo mannopina (por ejemplo, caracterizada por el Ri-plásmido pRi8196) y cepas tipo cucumopina (por ejemplo, caracterizada por el Ri-plásmido pRi2659) .

Algunas otras cepas son tipo miquimopina (por ejemplo, caracterizada por el Ri-plásmido pRil724) . La M'iquimopina y cucumopina son estereoisómeros pero no se ha encontrado ninguna homología entre los plásmidos pRi en el nivel nucleótido (Suzuki 2001) . Un Ri-plásmido desarmado se entiende como un Ri-plásmido al cual le falta sue propiedades de producir enfermedad de raíz velluda pero mantiene las funciones distintas a de la infección de la planta. Preferentemente, la región de T-ADN de dicho Ri plásmido "desarmado" fue modificada en cierto modo, tal que al lado de las secuencias de borde ninguna secuencia Ri interna funcional puede ser transferida en el genoma de la planta. En una modalidad de realización preferida, cuando se la utiliza con un sistema de vector binario, la región de T-ADN completa (incluso los bordes de T-ADN) es anulada. Aunque los Ti y Ri plásmidoe varían considerablemente entre las cepas, la totalidad de los mismos llevan genes vir similaree. El término "secuencia intergénica de rARN 16S-23S" tal como se utiliza en la presente pretende significar la región genómica de ADN localizada entre las secuencias que codifican los rARN 16S y los rARN 23S. Dicha secuencia intergénica se puede solapar con las secuencias que codifican los rARN 16S y los rARN 23S. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Esta invención utiliza variantes de cepa "desarmada" de cepa Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) para el suministro del T-ADN en las células de las plantas. Más adelante en la presente la clasificación anterior de cepa K599 como la cepa "A. rhizogenes" no es utilizada, debido a que ademáe del fenotipo que induce la raíz velluda (el cual ee un reeultado del Ri plásmido pero no el genoma bacteriano) la cepa parece estar solamente remotamente relacionada a otras cepas A. rhizogenes basándose en un análisie de comparación de secuencias de rADN ribosomal. Así, se considera que la cepa es un único espécimen siendo inequívocamente un tipo de cepa A. tumefaciens o A. rhizogenes. Una primera modalidad de realización de la invención se refiere a un método para producir una célula de planta transgénica que comprende las etapas de: a) proveer bacterias de una variante de cepa Agrobacterium transgénica, no patógena K599 (NCPPB 2659) o de un derivado de dicha cepa, en donde dicha variante de cepa ee capaz de infectar las células de planta pero carece de las propiedades que inducen fenotipo de raíz velluda y en donde dicha variante de cepa comprende además un T-ADN transgénico, y b) cocultivar una célula de planta con las bacterias, y c) aislar o seleccionar células de la planta que comprende integrar establemente en su genoma dicho T-ADN transgénico. Otra modalidad de realización de la invención se refiere a un método para producir una planta transgénica que comprende las etapas de : a) proveer bacterias de una variante de cepa Agrobacterium transgénica, no patógena K599 (NCPPB 2659) o de un derivado de dicha cepa, en donde dicha variante de cepa es capaz de infectar las células de la planta pero carece de las propiedades que inducen fenotipo de raíz velluda y en donde dicha variante de cepa comprende además un T-ADN transgénico, y b) cocultivar una planta, célula de planta o tejido de planta con las bacterias, y c) aislar o seleccionar y, opcionalmente, regenerar plantas que comprenden al T-ADN transgénico establemente integrado en su genoma.

El método de la invención posee una o más de las ventajas siguientes sobre la técnica anterior: a) es muy eficaz pa-ra la transformación de especies de planta refractaria a transformación relacionada con la cepa Agrobacterium tumefaciens conocida en la técnica, especialmente poroto de soja y árboles como el álamo y castaño. Sorprendentemente, el derivado desarmado de Agrobacterium rhizogenes K599 (pRi2659? y pRi2659?tet, respectivamente) provisto en la presente demuestra una alta relación de infección para la soja y mantiene una mejora sobre las cepas convencionales de Agrobacterium para la transformación de la planta. b) Debido a sue propiedades infectivas vigorosas puede emplearse en una concentración mucho máe inferior que el Agrobacterium tumefaciene. Eeto permite lograr tej idoe objetivo que son muy seneiblee al cocultivo normal de Agrobacterium tumefaciene (como por ejemplo cigotos o embriones inmaduros de plantas como el trigo) . c) Adicionalmente el borde del T-ADN del plásmido pRi2659 es utilizado para crear un nuevo vector binario. Estas secuencias de borde ofrecen una ventaja sobre la secuencia de borde convencionalmente utilizada, especialmente en combinación con la cepa desarmada del Agrobacterium rhizogenes variante K599 (pRi2659?) . d) Finalmente, el método de la invención es compatible con otros sistemas de transformación de planta basados en Agrobacterium. Los métodos de la invención pueden ser utilizados para transformar virtualmente todos los tipos de plantas. Se enumeran las plantas preferidas anteriormente en la sección la DEFINICIÓN GENERAL. Los preferidos son la célula de planta, tejido de planta, o plantas derivadas de una planta seleccionada del grupo de plantas monocotiledóneas, plantas dicotiledóneas, y plantas gimnospermas . Más preferentemente la planta es de un género seleccionado del grupo que consiste de Medicago, Lycopersicon, Brassica, Cucumis, Solanum, Juglans, Goseypium, Malus, Vitis, Antirrhinum, Populus, Fragaria, Arabidopeis, Picea, Capsicum, Chenopodium, Dendranthema, Euredadera Pharbitie, Pinus, Pisum, Oryza, Zea, Triticum, Triticale, Sécale, Lolium, Hordeum, Glycine, Pseudotsuga, Kalanchoe, Beta, Helianthus y Nicotiana.

En una modalidad de realización preferida de la invención el T-ADN transgénico comprende por lo menos un cassette de expresión para conferir a la planta una característica agronómicamente valiosa o por lo menos un gen marcador que permite la selección y/o identificación de plantas, células de planta o tejidos transformados. Los genes marcadores preferidos se describen en la presente a continuación. 1. Cepa Agrobacterium "desarmada" cepan K599 (NCPPB2659) Otra modalidad de realización de la invención se refiere a una variante de cepa no patógena de cepa Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) o de un derivado de dicha cepa (más adelante en la presente variante de cepa "desarmada"), en donde dicha variante de cepa es capaz de infectar las células de la planta pero carece de las propiedades que inducen fenotipo de raíz velluda. El término "derivado" cuando se refiere a cepa Agrobacterium K599 (NCPPB2659) pretende significar una bacteria patógena de planta, nacida del suelo, caracterizada por una secuencia intergénica de rARN 16S-23S que comprende por lo menos un motivo de secuencia seleccionado del grupo que consiste de:. 1.5' -AATCGTCGATGCGAATTGTTG-3 * (Motivo Ml , SEQ ID NO . : 5 ) . 2.5' -GTTTTGTCCTGACGCTGTCGCGA-3 ' (Motivo M2 , SEQ ID NO . : 6 ) . 3.5" -TCTAACGATCGCTGCGCTCCGGA-3 ' (Motivo M3 , SEQ ID NO . : 7) 4.5 ' -CGCCACGAGGCGCGACGGA-3 ' (Motivo M4 , SEQ ID NO . : 8 ) . 5.5' -TTATGGGCGAATTGATCTGA-3 • (Motivo M5, SEQ ID NO . : 9) . 6.5' -GTCCTGCTAAGGATTGATGCCT-3' (Motivo M6, SEQ ID NO. :10) 7.5'-AGACCAGTCCTTGTGAAACC-3' (Motivo M7 , SEQ ID NO. :11) . 8.5' -CCTGGGCATTTTTGTTGTTGG-3 ' (Motivo M8 , SEQ ID NO. :12) . 9.5' -AATGGTATGGCTTCGAGGTG-3 ' (Motivo M9, SEQ ID NO. -.13) 10.5'-CTCAAAGAAGACCGTACCGACA-3* (Motivo MÍO, SEQ ID NO. : 14) . Preferentemente, el derivado de dicha cepa Agrobacterium K599 (NCPPB2659) se caracteriza por una secuencia intergénica de rARN 16S-23S que comprende por lo menos dos o tres motivos, preferentemente por lo menos cuatro o cinco motivos, más preferentemente por lo menos eeis o eiete motivoe, más preferentemente por lo menos ocho, nueve o diez motivos seleccionadoe del grupo de motivos descripto por SEQ ID NO-: 5, 6 , 7, 8, 9, 10, 11, 1-2, 13, y 14. Pueden identificarse motivos de secuencia característicos adicionales de alineación múltiple de la secuencia intergénica de rARN 16S-23S conocidas las regiones variables (se comparan las más similaree a la Agrobacterium K599 en la Fig. 14A-E) . Preferentemente, un derivado de Agrobacterium K599 se caracteriza por una secuencia intergénica de rARN 16S-23S que comprende una secuencia con una identidad de por lo menos 90%, más preferentemente por lo menos 95%, más preferentemente por lo menos 98% con una secuencia como la descripta por el par de base SEQ ID NO: 20 ó el complemento del mismo. Son especialmente preferidas las cepas que además se caracterizan por una secuencia de rARN 16S descripta por SEQ ID NO: 21. La variante de cepas no patógena puede comprender además una o más características seleccionadas del grupo que consiste de presencia de genes virA o virG mutantes o quiméricos o presencia de plásmidos supervirulentoe. La variante de cepa no patógena de cepa de Agrobacterium K599 (NCPPB2659) puede comprender una variante de plásmido no patógena del plásmido pR12659 (como se define más adelante) .

Otra modalidad de realización de la invención se refiere a una variante de cepa no patógena, transgénica, de cepa de Agrcbacterium K599 (NCPPB 2659) o de un derivado de dicha cepa, en donde dicha variante de cepa es capaz de infectar las células de planta pero carece de las propiedades que inducen fenotipo de raíz velluda y en donde dicha variante de cepa comprende además un T-ADN transgénico. En una modalidad de realización preferida de la invención el T-ADN transgénico comprende por lo menos un cassette de expresión para conferir a la planta una característica agronómicamente valiosa o por lo menos un gen marcador que permite la selección y/o identificación de plantas, células de planta o tejidos transformados. Los genes marcadores preferidos se describen en la presente más adelante. Los T-ADN preferidos se describen en la presente más adelante. En una modalidad de realización preferida de la invención, dicha variante de cepa no patógena de cepa de Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) (o de un derivado de dicha cepa) es capaz de infectar las células de planta, mediar la transferencia de T-ADN en las células de planta, y mediar la inserción del T-ADN en el genoma de planta, pero carece de las propiedades de inducir el fenotipo de raíz velluda. Más preferentemente, esto se logra por la presencia de una variante de plásmido no patógena de Ri-plásmido pRi-2659 (Ri-plá-smido natural en cepa Agrobacterium K599; NCPPB 2659) o un derivado del mismo (según lo definido más adelante) . Dicha variante de plásmi-do no patógena preferentemente provee todas las funciones requeridas para la infección celular y la transformación de la planta pero carece de secuencias que causan el fenotipo de raíz velluda. Las variantes de plásmido no patógenas preferidas de Ri-plásmido pRi2659 se describen en la presente más adelante. En otra modalidad de realización preferida de la invención, se modifican la cepa Agrobacterium no patógena de la invención para aumentar adicionalmente la eficacia de transformación, por alterar la expresión de gen vir y/o inducción del mismo. Esto puede comprenderse por ejemplo por la presencia de genes virA o virG quiméricos o mutantes (por ejemplo como se describe para Agrobacterium tumefaciens en Hansen 1994; Chen y Winans 1991; Scheeren-Groot y col., 1994). Son posiblee las combinaciones adicionales con plásmidos supervirulentos (por ejemplo, vectores basado en pTOK246; Ishida 1996) para generar las cepas llamadas supervirulentas . Las variantes de cepa supervirulentas también pueden ser generadas empleando los vectores derivados de plásmido de supervirulencia pSBl (Komari 1996) . 2. El pláemido pRi2659 "desarmado" La secuencia aislada de la versión desarmada del plásmido pR12659 se provee en la presente. Esta secuencia y la información de secuencia es útil en su totalidad pero también en parte. El plásmido se expresa en numerosas proteínas (ver Tabla 4), de las cuales algunas son nuevas en la técnic-a y más probablemente involucradas en la actuación de la transformación superior del plásmido pR12659. La secuencia e información de la secuencia también permiten diversos usos que incluyen pero no están limitados a a) aumentar el entendimiento de la actuación superior del plásmido, b) utilización de características aisladas (por ejemplo, proteínas) del plásmido para mejorar la actuación de otros métodos de transformación de planta (por ejemplo, basadoe en lae transformaciones basadae en Agrobacterium tumefaciene normal) , y c) dirigir cambioe y optimización de dicho pláemido.

Así, una modalidad de realización preferida de la invención se refiere a una secuencia de nucleótido aislada seleccionada del grupo de secuenciae deecripto por a) secuencias que comprenden una secuencia descripta por SEQ ID NO: 24, o una secuencia de por lo menos 100 nucleótidos consecutivoe (preferentemente por lo menoe 250 o 500 nucleótidos consecutivos, más preferentemente por lo menos 1000 o 2500 nucleótidos consecutivoe, aún más preferentemente por lo menos 5.000 o 10.000 nucleótidos consecutivoe, más preferentemente todos los nucleótidos consecutivos) de la secuencia descripta por SEQ ID NO: 24, y b) secuenciae que tienen una identidad de secuencia de por lo menos 90% (preferentemente por lo menos 92% o 95%, más preferentemente por lo menos 97% ó 98%, más preferentemente por lo menos 99%) a una secuencia como la descripta por SEQ ID NO: 24' o una secuencia de por lo menos 1.000 nucleótidos consecutivoe (preferentemente por lo menoe 2.000 o 4.000 nucleótidoe coneecutivoe, máe preferentemente por lo menoe 5.000 o 10.000 nucleótidos consecutivos, aún más preferentemente por lo menos 20.000 o 50.000 nucleótidos consecutivoe, máe preferentemente todos los nucleótidos consecutivo) de la secuencia descripta por SEQ ID NO: 24, y, c) secuencias de hibridación bajo condiciones equivalentes al enlace o hibridación a 68°C en una solución que consiste de 5x SSPE, 1% SDS, 5x reactivo de Denhardt y 100 µg/mL de ADN de esperma de salmón desnaturalizado seguido de lavado en una solución que comprende 0,lx SSPE, y 0,1% SDS a 68°C ena una sonda que consiete por lo menoe de 100 nucleótidos consecutivoe (preferentemente por lo menoe 250 o 500 nucleótidos consecutivos, más preferentemente por lo menos 1.000 o 2.500 nucleótidos consecutivos, aun más preferentemente por lo menos 5.000 o 10.000 nucleótidos consecutivoe, máe preferentemente todos los nucleótidos consecutivos) de una secuencia como la descripta por SEQ ID NO: 24 o una secuencia complementaria a la misma. Otra modalidad de realización de la invención se refiere a una variante no patógena de plásmido ("desarmado") pRi2659 (Ri-plásmido natural en cepa Agrobacterium K599; NCPPB 2659) o un derivado del mismo, dicha variante de plásmido provee las funciones requeridas para la infección celular y transformación de la planta, pero carece de secuencias que causan el fenotipo de raíz velluda (en adelante la variante del plásmido "desarmado"). Preferentemente, dicha variante de plásmido no patógena comprende las secuencias requeridas para la infección celular y transformación de la planta del pRi2659 nativo, patógeno o su derivado pero es carece de secuencias de T--ADN que inducen el fenotipo de raíz velluda. Preferentemente la variante de plásmido no patógena de pRi2659 o de su derivado no comprende ningún elemento (como por ejemplo elementos de T-ADN) los cuales puedan transferirse en el genoma de la planta. Esto ee especialmente ventajoso cuando se combina con un T-ADN transgénico comprendido en un vector binario. Hay varios medios para proveer tal variante de plásmido "desarmada". Por medio de ejemplo esto puede ser realizado por: 1. Producir bordes disfuncionales de T-ADN (por ejemplo, por mutagénesis) o 2. Anular el T-ADN completo del Ri plásmido, o 3. Filtrar para deleción natural o mutante no patógena, o- 4. Mutagenesis de la deleción (por ejemplo, empleando acetosiringona) induciendo rotura de ADN y excieión de T-ADN, o 5. Mutagenesis de transposon y filtrado para mutantes no patógenos o 6. Deleción dirigida y despecífica de genes pertinentes usando por ejemplo, estrategia de reemplazo de gen. Reemplazando las copias de -tipo salvaje de genes entre RB y LB con un reemplazo anulado, uno puede cortar exactamente sólo los genes que necesitan ser anulados. En una modalidad de realización especialmente preferida de la invención la variante de plásmido no patógena está comprendida por lo menos por una secuencia seleccionada del grupo de secuencias descripto por a) secuencias que comprenden una secuencia descripta por SEQ ID NO: 24, o una secuencia de por lo menos 100 nucleótidos consecutivos (preferentemente por lo menos 250 o 500 nucleótidos consecutivos, más preferentemente por lo menos 1.000 o 2.500 nucleótidos consecutivos, más aun preferentemente por lo menos 5.000 o 10.000 nucleótidos consecutivoe, máe preferentemente todoe loe nucleótidos consecutivos) de la secuencia descripta por SEQ ID NO: 24, y b) secuencias que tienen una identidad de secuencia de por lo menos 90% (preferentemente por lo menoe 92% o 95%, más preferentemente per lo menos 97% o 98%, más preferentemente por lo menos 99-%) a una secuencia como la descripta por S?Q ID NO: 24 o una secuencia de por lo menos 1.000 nucleótidos consecutivos (preferentemente por lo menos 2.000 o 4.000 nucleótidos consecutivos, más preferentemente por lo menos 5.000 o 10.000 nucleótidos consecutivos, aun más preferentemente por lo menos 20.000 o 50.000 nucleótidos consecutivoe, máe preferentemente todos los nucleótidos consecutivoe) de la secuencia descripta por SEQ ID NO: 24, y, c) secuencias de hibridación bajo condiciones equivalente al enlace o hibridación a 68 °C en una solución que consiste en 5x SSPE, 1% SDS, 5x reactivo de Denhardt y 100 µg/mL de ADN de esperma de salmón desnaturalizado seguido de lavado en una solución que comprende 0,lx SSPE, y 0,1% SDS a 68°C en una sonda que consiste en por lo menos de 100 nucleótidos consecutivos (preferentemente por lo menos de 250 o 500 nucleótidos consecutivoe, más preferentemente por lo menoe 1.000 o 2.500 nucleótidoe consecutivos, aun más preferentemente por lo menos 5.000 o 10.000 nucleótidos consecutivos, más preferentemente todos los nucleótidos consecutivos) de una secuencia como la descripta por S?Q ID NC : 24 o una secuencia complementaria a la misma. - Más preferentemente, dicha variante de plásmido no patógena se describe per una secuencia de nucleótido que describe el plásmido pRi2659 desarmado o un derivado precedente (como el definido anteriormente) . Aún más preferentemente o alternativamente, el derivado está codificando una proteína virD2 que tiene una equivalencia de secuencia de aminoácido de por lo menos 85% (preferentemente por lo menos 90% o 92%, más preferentemente por lo menos 95% o 98%, más preferentemente por lo menos 99%) con la secuencia descripta por SEQ ID No. 112. Dicha proteína virD2 se espera que sea un factor importante para la actuación mejorada en la transformación del plásmido pR12659 desarmado. Así otra modalidad de realización de la invención se refiere a un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácido seleccionado del grupo que consiete de : -a) la secuencia como la descripta por SEQ ID NO: 112 o secuencias de por lo menos 200 aminoácidos consecutivos (preferentemente por lo menos 300 aminoácidos consecutivos, más preferentemente por lo menos 400 aminoácidos consecutivos, preferentemente todoe los aminoácidos consecutivos) de la misma, b) secuenciae que tienen una identidad de eecuencia de por lo menoe 85% (preferentemente por lo menos 90% o 92%, más preferentemente por lo menos 95% o 93%, más preferentemente por lo menos 99%) con las eecuenciae descriptas por SEQ ID NO: 112. Sin embargo, también se considera que las otrae proteínae codificadae por el pláemido pR12659 deearmado eon útiles para la optimización de procesos de transformación, así otra modalidad de realización de la invención se refiere a un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácido seleccionado del grupo que consiete de: a) una secuencia como la descripta por cualquiera de SEQ ID NO: 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 126, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 136, 137, 139, 140, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 154, 155, 156, 158, 159, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, ó 187 o secuencias de por lo menos 200 aminoácidos consecutivos (preferentemente por lo menos 300 aminoácidos consecutivos, más preferentemente por lo menos 400 aminoácidos consecutivos, preferentemente los aminoácidos todo consecutivos) de la misma, b) secuenciae que tienen una identidad de secuencia de por lo menos 85% (preferentemente por lo menos 90% o 92%, más preferentemente por lo menos 95% o 98%, el más preferentemente por lo menos 99%) con una secuencia descripta por cualquiera de SEQ ID NO: 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103., 104, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 126, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 136, 137, 139, 140, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 154, 155, 156, 158, 159, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, o 187. Aún otra modalidad de realización de la invención se refiere a secuencias de ácido nucleico aislado codificando dichos polipéptidos. Estas secuencias pueden ser secuencias naturales aisladas (como comprendidas en el plásmido pR12659) u otras eecuencias derivadas basadas en la degeneración del código genético. Más preferentemente estae eecuenciae derivadas de proteína virD2 provistas en las mismas comprenden por lo menos un único residuo de aminoácido de proteína virD2 según lo especificado en la Fig. 16 (por los asteriscos (*) ) . Preferentemente, la variante de plásmido no patógena se obtiene anulando el T-ADN completo incluso los bordes del plásmido nativo. Más preferentemente, para la variante de plásmido no patógena de la invención el T-ADN anulado corresponde a la eecuencia deecripta por la eecuencia desde aproximadamente la base 538 hasta aproximadamente la base 15.519 de SEQ ID NO: 4 o desde aproximadamente la base 3.644 hasta aproximadamente la base 18.577 de SEQ ID NO: 26. Preferentemente, la totalidad del T-ADN del Ri plásmido es anulada (más preferentemente incluso la totalidad del borde derecho y el borde izquierdo) . La deleción de T-ADN completo incluye el RB y LB completo del Ri plásmido (por ejemplo pRi2659) es preferible, debido a que en los casos de Ti plásmidos desarmados en dónde una parte de cualquier borde quedaba intacto en el Ti plásmido, había la posibilidad de integración de ADN detrás de este borde y del plásmido binario. El método empleado en la modalidad de realización preferida de esta invención elimina la posibilidad de integración de ADN extraño. Consiguientemente, una modalidad de realización preferida de la invención la misma se refiere a una variante de plásmido no patógena de pRi2659 o un derivado de la misma, en donde dicha variante de plásmido comprende las secuencias requeridas para la infección celular y transformación de la planta del pRi2659 nativo, patógeno o su derivado pero carece del T-ADN, preferentemente la región descripta por la secuencia desde aproximadamente la base 538 hasta aproximadamente la base 15.519 de la secuencia caracterizada por GenBank Acc. -No. AJ271050 (SEQ ID NO: 4) o desde aproximadamente la base 3.644 hasta aproximadamente la base 18.577 de la secuencia caracterizada por SEQ ID NO: 26. Esta secuencia corresponde al T-ADN.del Ri-plásmido pRi2659 original, patógeno tal como el que se provee en la cepa Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) patógena. Más preferentemente dicha variante de plásmido no patógena es una secuencia de hibridación bajo las condiciones de elevada rigurosidad (por ejemplo, equivalente a enlace o hibridación a 68°C en una solución que consiste en 5x SSPÉ, 1% SDS, 5x reactivo de Denhardt y 100 µg/mL ADN de esperma de salmón desnaturalizado seguido de lavado en una solución que comprende 0,lx SSPE, y 0,1% SDS a 68°C) con el Ri-plásmido pRi2659 original (nativo) , patógeno tal como el que provee la cepa Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) patógena, pero sin hibridación bajo las condiciones de elevada rigurosidad con la secuencia desde aproximadamente la base 538 hasta aproximadamente la base 15.519 de la secuencia caracterizada por GenBank Acc. -No. AJ271050 (SEQ ID NO: 4) o desde aproximadamente la base 3.644 hasta aproximadamente la base 18.577 de la secuencia caracterizada por SEQ ID NO: 26. Más preferentemente, el derivado de pRi2659 es un pláemido capaz de inducir la traneferencia del T-ADN de una bacteria nacida del euelo en una célula de planta caracterizada ademáe por a) poseer una identidad de secuencia de por lo menos 90% (preferentemente por lo menos 91% o 92%, más preferentemente por lo menos 95% o 98%, más preferentemente por lo menos 99%) con el ADN que codifica el plásmido pRi2659 nativo (como el comprendido en la cepa Agrobacterium K599 (NCPPB2659) o b) hibridación bajo condiciones de elevada rigurosidad (por ejemplo, equivalente a enlace o hibridación a 68°C en una solución que consiste en 5x SSPE, 1% SDS, 5x reactivo de Denhardt y 100 ug/mL ADN de esperma de salmón desnaturalizado seguido de lavado en una solución que comprende 0,lx SSPE, y 0,1% SDS a 68 °C) con el plásmido pRi2659 nativo (como la descripta por SEQ ID NO: 111) . En una modalidad de realización preferida la variante de plásmido no patógena de la invención realiza la hibridación bajo condiciones de elevada rigurosidad con el Ri-plásmido pRi2659 entero, nativo, patógeno de la cepa Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) patógena, pero no realiza la hibridación bajo condiciones de elevada rigurosidad con la secuencia desde aproximadamente la base 538 hasta aproximadamente la base 15.519 de la secuencia caracterizada por SEQ ID NO: 4 o desde aproximadamente la base 3644 hasta aproximadamente la base 18577 de la secuencia caracterizada por SEQ ID NO: 26. El término "derivado" cuando se refiere al pRi2659 pretende significar un plásmido capaz de inducir la transferencia del T-ADN de una bacteria nacida del suelo en una célula de planta caracterizada además por-a) poseer una identidad de secuencia de por lo menos 90%, más preferentemente por lo menos 95%, el más preferentemente por lo menos 98% con el ADN que codifica el plásmido pRi2659 nativo (como el comprendido en la cepa Agrobacterium K599 (NCPPB2659) o b) hibridación bajo condiciones de elevada rigurosidad (como las definidas anteriormente) con el plásmido pRi2659 nativo. Más preferentemente, tal derivado de pRi2659 en su forma natural, patógena induce la síntesis de un fenotipo de opina del tipo cucumopina. 3. T-ADN transgénico Preferentemente, el T-ADN en dicha variante de cepa no patógena, transgénica de cepa de Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) o su derivado comprendido en un plásmido de vector binario separado del plásmido que provee las características requeridas para la infección de la planta (como un Ti o Ri-plásmido al que le faltan las propiedades que inducen neoplástica o raíz velluda) . Así, otra modalidad de realización de la invención se refiere a un T-ADN transgénico flanqueado por lo menos por un borde de T-ADN del plásmido pRi2659 de Agrobacterium rhizogenes, dicho T-ADN transgénico no comprende ninguna secuencia que cause un fenotipo de raíz velluda. Preferentemente el T-ADN está flanqueado por lo menos por la secuencia de borde derecho (más preferentemente por la secuencia de borde derecho e izquierdo). Son preferibles los bordes Ti y/o Ri . El borde de T-ADN es repite desde aproximadamente 25 bp, bien definido como se describe en la técnica (Zupan 2000) . Por la acción combinada de los genes denominados vir (la parte de Ti o Ri plásmido original) los bordes inducen la transferencia del T-ADN. En una modalidad de realización preferida dicho T-ADN transgénico comprende por lo menos un cassette de expresión para conferir a la planta una característica agronómicamente valiosa. En otra modalidad de realización preferida dicho T-ADN comprende ademáe por lo menoe un gen marcador que permite la eelección y/o identificación de plantae, célulae de planta o tejidos transformadoe . Los bordes T-ADN del plásmido pRI2659 se ha demostrado que son especialmente eficaces en transferir T-ADN y generar así las plantas transgénicas (especialmente la planta de soja transgénica). Así, preferentemente, el T-ADN comprende los bordes de T-ADN del plásmido pRi2659 (por ejemplo, incorporado en un vector binario) . El borde derecho tiene 16 repeticiones de una secuencia de 8 bp que es funcionalmente equivalente a una sobremultiplicación (Hansen 1992) . Estas secuenciae de borde ofrecen una ventaja eobre la eecuencia de borde ueada convencionalmente. Es especialmente preferible una combinación de la variante de cepa desarmada o derivado de cepa de Agrobacterium K599 (BCPPB2659) con un T-ADN transgénico que comprende los bordes de un Ri-plásmido, más preferentemente el plásmido de pRi2659, cuya combinación contribuye a una elevada eficacia de transformación por ejemplo, para la soja. Son especialmente preferibles las secuencias de borde izquierdo que comprenden una secuencia descriptas por SEQ ID NO: 18 representando la baee 538 a 561 de SEQ ID NO: 4 (región de T-ADN de pRi2659) : 5 ' -tggcaggata tattgtggtg taaa-3 ' (SEQ ID NO: 18) Son especialmente preferibles laas eecuenciae de borde derecho que comprenden una eecuencia descriptas por SEQ ID NO: 19 representand por bases 15.496 a 15.519 de SEQ ID NO: 4 (región del T-ADN de pRi2659) : 5 ' -tgacaggata tatccccttg tcta-3 ' (SEQ ID NO: 19). Así, otra modalidad de realización de la invención se refiere a un vector del plásmido que comprende un T-ADN tranegénico flanqueado por lo menoe por un borde T-ADN del pláemido pRi2659 de Agrobacterium rhizogenee. Preferentemente, estos bordes se deecriben por SEQ ID NO: 18 ó 19. Máe preferentemente, el plásmido está comprendiendo el borde derecho que comprende una secuencia como la descripta por SEQ ID NO: 19. Más preferentemente, el plásmido está comprendiendo las dos secuencias de borde, comprendiendo una secuencia como la descripta por SEQ ID NO: 18 y 19, respectivamente. Preferentemente, dicho plásmido no comprende ninguna secuencia que cause un fenotipo de raíz velluda, más preferentemente dicho plásmido no comprende ninguna 12^ secuencia que codifica proteína T-ADN interno, más pre-ferentemente dicho plásmido no comprende suetancialmente ninguna eecuencia de T-ADN interno. El término "interno" en este contexto significa el ADN flanqueado (pero excluyendo los bordes de T-ADN) . Los bordes de T-ADN se entienden como secuencias que comprende por lo menos las secuenciae como las descriptae por SEQ ID NO: 18 y 19, reepectivamente. El término "eubstancialmente" pretende significar que pueden ser incluidas algunas secuencias internas que no se vinculan a un fenotipo patógeno, preferentemente estas secuencias no son de más de 200 pares de base, preferentemente no más de 100 pares de base, más preferentemente no más de 50 pares de base, y preferentemente directamente consecutivas a las secuencias de borde.- El T-ADN a ser incorporado en el genoma de la planta por medio de la variante de cepa no patógena puede ser provisto en varias formas. El T-ADN puede ser provisto como un constructo de ADN, preferentemente puede integrarse en plásmidos específicoe, o en un vector intermedio, traneportador, o en un vector binario. La provieión se puede realizar por ejemplo (pero no está limitado ) por los medios siguientee : a) El T-ADN puede ser incorporado en el ADN cromoeomático de la va-riante de cepa no patógena. b) El T-ADN puede eer incorporado en el ADN de Ri-pláemido deearmado comprendido en la variante de cepa no patógena . c) El T-ADN puede eetar comprendido en la variante de cepa no patógena en la forma de plásmido separado del Ri plásmido desarmado. Preferentemente, el T-ADN en dicha variante de cepa no patógena está comprendido en un plásmido de vector binario separado del plásmido Ri desarmado. En otra modalidad de realización preferida dicho T-ADN comprende además por lo menos un gen marcador que permite la selección y/o identificación de plantas, células de planta o tejidos transformados. Otras modalidades de realización de la invención se refieren a células u organismos no humanos que comprenden una secuencia de nucleótido, una variante de plásmido no patógena, o un T-ADN transgénico de la invención. Preferentemente, dichas células u organismos no humanos son seleccionados del grupo que consiete de bacteriae, levadurae, plantas, mamíferos, e insectos. En una modalidad de realización preferida dicha célula u organismo es una bacteria nacida naturalmente del género Rhizobiaceae. En otra modalidad de realización preferida dicha célula u organismo es una célula de planta u organismo de planta, más preferentemente seleccionado del grupo de plantas monocotiledóneas y dicotiledóneas. Más preferiblemente son plantas seleccionadas del grupo que consiste de soja, maíz (maíz), trigo, colza (cañóla), tagetes, papa, arroz, cebada, y tomate. Otra modalidad de realización de la presente invención se refiere a un vector transgénico que comprende un T-ADN transgénico de la invención. Preferentemente, el T-ADN se provee en la forma de un vector binario. En los denominados "sistemae de vector binario", el T-ADN está físicamente separado de los otros elementos funcionales del Ri-plásmido (por ejemplo, los genes vir) , al ser incorporado en un vector transportador que permite una manipulación más fácil (para la descripción de los sietemae binarios basados en Ti-plásmido ver EP-A 120 516; E.U.A. 4.940.838). Estos vectores binarios comprenden (además del T-ADN desarmado con sus secuenciae de borde) , secuencias procarióticos para la replicación tanto en Agrobacterium y E. coli. En el caso de la presente cepa Agrobacterium rhizogenes desarmada empleada para la transformación comprende, además de su Ri plásmido de-'s-armado, un plásmido binario con el T-ADN a ser transferido, el cual, preferentemente, comprende un gen para la selección de células de Agrobacterium transformadas (generalmente fuera del T-ADN) , un marcador para la selección de células de planta transformadas, y la secuencia de ácido nucleico de interés a ser transferida (estas dos últimas generalmente están comprendidas dentro del T-ADN) . Los plásmidos binarios pueden transferirse en la cepa Agrobacterium rhizogenes desarmada por ejemplo mediante electroporación u otros métodos de transformación (Mozo 1991) . Los vectores binarios son capaces de replicación tanto en el E.coli y en Agrobacterium. Los mismos pueden transformarse directamente en Agrobacteria (por ejemplo, como se describe en Holstere 1978) . El Agrobacterium, que actúa como organismo anfitrión en este caso ya debe contener un plásmido con la región vir. El último se requiere para transferir el T-ADN a la célula de la planta. Un Agrobacterium transformado así puede ser utilizado para transformar las células de planta. Un marcador de selección que permite la selección de Agrobacteria traneformada, por ejemplo, es el gen nptl o nptll que confiere resistencia contra canamicina, c el gen aadA que confiere resistencia contra la estreptomicina, espectinomicina. Los varios marcadores (marcador de selección y genes de reporte) son convenientes para la identificación y/o selección o transformación de células de planta, tejidos o plantas (ver más adelante para detalles) . Las descripcionee de sistemas de vector Agrobacterium y métodos para la transformación inducida por Agrobacterium son conocidas en la técnica (Miki 1993; Gruber 1993; Moloney 1989) . Varios vectores binarios son conocidos, algunos de los cuale están comercialmente disponibles, por ejemplo, pBIN19 (Laboratorios "Clontech, Ine . " E.U.A.). Todos los vectores convenientes para transformación basados en Agrobacterium tumefaciens también pueden emplearse para el método de la invención. Los vectores binarios comunes eetán baeados en plásmidoe de " amplio rango de anfitrión" como el pRK252 (Bevan 1984) o pTJS75 (Watson 1985) derivado de plásmido tipo P RK2. La mayoría de estos vectores eon derivados de pBIN19 (Bevan 1984) . Los diversos vectores binarios son conocidos como algunos que están comercialmente disponibles, por ejemplo, pBI101.2 o pBIN19 (Laboratorios Clontech, Inc. E.U.A.). Se mejoraron los vectores adicionales con respecto al tamaño y conducción (por ejemplo el pPZP; Hajdukiewicz 1994) . También se describen los sistemae de vector mejorado en WO 02/00900. Un vector binario o cualquier otro vector puede eer modificado por lae técnicas de rec-ombinación de ADN comunes, multiplicadas en E. coli, y pueden ser introducidas en Agrobacterium por ejemplo, mediante electroporación u otras técnicas de transformación (Mozo 1991) . Así, otra modalidad de realización de la invención relacionada a una célula u organismo no humano comprende una variante de plásmido no patógena de la invención (como la especificada anteriormente) o un T-ADN transgénico o vector que comprende dicho T-ADN de la invención. Preferentemente, dicha célula u organismo no humano se selecciona del grupo que consiste de bacterias, levaduras, plantas, mamíferos, e insectos. Más preferentemente, dicha célula u organismo no humano es una bacteria nacida naturalmente del género Rhizobiaceae . Son especialmente preferibles las bacterias nacidas de la tierra tales como Sinorhizobium meliloti, Sinorhizobium medicae, Sinorhizobium fredii, Rhizobium sp. NGR234, Rhizobium sp . BR816, Rhizobium sp . N33, Rhizobium sp . GRH2 , Sinorhizobium saheli, Sinorhizobium terangae, Rhizobium leguminoearum biovar trifolii, Rhizobium leguminosarum biovar viciae, Rhizobium leguminosarum biovar phaseoli, Rhizobium tropici, Rhizobium etli, Rhizobium galegae, Rhizobium gallicum, Rhizobium giardinii, Rhizobium hainanense, Rhizobium mongolense, Rhizobium lupini, Mesorhizobium loti, huakuii Meeorhizobium, Meeorhizobium ciceri, Mesorhizobium mediterraneium, Mesorhizobium tianshanenee, Bradyrhizobium elkanni, Bradyrhizobium japonicum, Bradyrhizobium liaoningense, Azorhizobium caulinodans, Allobacterium undicola, Phyllobacterium yrsinacearum, Agrobacterium tumefaciens, Agrobacterium radiobacter, Agrobacterium rhizogenes, Agrobacterium vitis, y Agrobacterium rubi . - En una modalidad de realización preferida de la invención el T-ADN a ser integrado en el genoma de la planta por medio de la cepa Agrobacterium rhizogenes desarmada de la invención, comprende por lo menos un caseette de expresión para conferir a dicha planta una característica agronómicamente valiosa. En otra modalidad de realización preferida dicho T-ADN comprende además por lo menos un gen marcador que permite la selección y/o identificación de plantas, células de -planta o tejidos transformados. Así, el T-ADN insertado en el genoma de la planta objetivo comprende por lo menos un ca'seette de expreeión que puede, por ejemplo, facilitar la expr-eeión del gen marcador de eelección, genee de caracteríetica, ARN antieentido o AR? de hebra doble. Preferentemente dichos caseettee de expreeión comprenden una secuencia promotora funcional en las células de planta operativamente enlazadas a una secuencia de ácido nucleico la cual, por la expresión, confiere un fenotipo ventajoso para la planta transformada. La persona experta en la técnica es consciente que numerosas secuenciae pueden eer utilizadas en este contexto, por ejemplo, aumento de calidad de alimento y alimentación, producción de químicos, químicos finos o farmacéuticos (por ejemplo, vitaminas, aceites, hidratos de carbono; Dunwell 2000) , confrir resietencia a los herbicidas, o conferir esterilidad masculina. Además, el crecimiento, rendimiento, y puede ser mejorada la resietencia contra factoree de cepa abíoticos y bióticos (como por ejemplo, hongos, virus o ineectos) . Las propiedades ventajosas pueden ser conferidas tanto por las proteínas de eobreexpreeión o disminuyendo la expresión de •proteínas endógenas mediante por ejemplo, expresando un antisentido correepondiente (Sheehy 1988; E.U.A. 4.801.340; Mol 1990) o ARN de hebra doble (Matzke 2000; Fire 1998; Waterhouee 1993; WO 99/32619; WO 99/53050; WO 00/68374; WO 00/44914; WO 00/44895; WO 00/49035; WO 00/63364) . Para la expreeión en lae plantae, se prefieren los promotoree eepecíficoe de planta. El término el "promotor específico de planta" se entiende que significa, en principio, cualquier promotor que sea capaz de gobernar la expresión de genes, en particular los genee foráneoe, en plantas o partes de planta, células de planta, tejidos de planta o cultivos de la planta. En este contexto, la expresión puede ser, por ejemplo, constitutiva, inducible o dependiente del desarrollo (según lo definido y especificado anteriormente) . El componente genético y/o el caseette de expreeión pueden comprender secuencias de control genéticas adicionales además de un promotor. El término "secuenciae de control genéticas" será entendido en un amplio eentido y ee refiere a todae aquellae eecuenciae que afectan la fabricación o función de constructo de ADN de la invención o un caseette de expresión comprendido en el mimeo. Por ejemplo, las secuencias de control genéticas modifican la transcripción y traducción en organismos procarióticos u eucarióticos. Preferentemente, los caseettee de expreeión de acuerdo con la invención abarcan un promotor funcional en plantas 5' -corriente arriba de la secuencia de ácido nucleico en cuestión a ser expresado recombinantemente, y 3 ' -corriente debajo de una secuencia de terminador como la secuencia de control genética adicional y, si fuera apropiado, los elementos reguladores de costumbre adicionales, en cada caso enlazados operablemente a la secuencia de ácido nucleico a ser expresada recombinantemente . - Las secuencias de control genéticas, por ejemplo, se describen en "Goeddel; Gene Expresión Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990)" o "Gruber y Crosby, in: Methode in Plant Molecular Biología and Biotechnolgy, CRC Press, Boca Ratón, Florida, eds. : Glick y Thompson, Chap 7, 89-108" y las referencias citadas en los mismoe. Loe ejemplos de tales secuenciae de control son secuenciae a las cuales se enlazan inductores o represores y así regulan la expresión del ácido nucleico. Las secuenciae de control genéticae además abarcan también la región 5 ' -no traducida, intrones o la región de genes 3' no codificada, como, por ejemplo, intron actin-1, o Adhl-S intrones 1, 2 y 6 (referencia general: "The Maize Handbook" , Capítulo 116, Freeling y Walbot, Eds., Sp-ringer, Nueva York (1994)). Se ha demostrado que los miemoe pueden jugar un papel eignifi-cativo en la regulación de expreeión del gen. Aeí, se ha demostrado que secuenciae 5 ' -no traducidae eon capacee de mejorar la expreeión traneitoria de genes heterólogos. Los ejemplos de mejoradores de traducción que pueden mencionarse son secuencia 5 '-líder virus mosaico de tabaco (Gallie 1987) y lo eimilar. Además, los mismos pueden promover la especificidad del tejido (Rouster 1998).

•Recíprocamente, la región 5 ' -no traducida del gen opaco-2 suprime la expresión. La deleción de la región en cuestión conduce a una actividad de gen aumentada (Lohmer 1993) . Las secuencias de control genéticas también pueden abarcar secuencias de enlace ribosomal para comenzar la traducción. Esto se prefiere en particular cuando la secuencia de ácido nucleico a ser expresada no provee las secuencias convenientes o cuando las mismas no son compatibles con el sietema de expresión. El cassette de expresión puede comprender ventajosamente una o más secuenciae mejoradoras, operablemente unidas al promotor, lo cual hace posible una expresión recombinante aumentada de la secuencia de ácido nucleico. También pueden ser insertadae eecuenciae ventajoeae adicionalee, como elementos reguladores o terminadores, adicionales en el extremo 3 ' de las secuencias de ácido nucleico a ser expresado recombinantemente. La señal de poliadenilación que es conveniente como secuencia de control es la señal de poliadenilación de planta, preferentemente la que esencialmente corresponde a la señal de poliadenilación del T-ADN del Agrobacterium tumefaciens, en particular el terminador de sintasa octopina (OCS) y el terminador de sintaea nopalina (NOS) . Una o más copias de las secuencias del ácido nucleico a ser expresado recombinantemente pueden estar presentes en el constructo de gen. Las secuencias de control genéticas se entenderán más como significando secuenciae que codifican proteínae de fusión que coneiste en una señal de secuencia de péptido.

Las secuenciae de control ademáe eerán entendidas como las que permi-tien la eliminación de las secuencias insertadas desde el g.enoma. Los métodos basados en cre/lox (Sauer B 1998; Odell 1990; Dale 1991) , FLP/FRT (Lysnik 1993) , o sietema Ac/Ds (Wader 1987; E.U.A. 5.225.341; Baker 1987; Lawson 1994) permiten una .eliminación, si es específico de tejido y/o inducible apropiadamente, de una secuencia de ADN específica del genoma del organismo anfitrión. Lae eecuenciae de control en eete contexto pueden significar las secuenciae de flanqueado específicas (por ejemplo, secuencias lox) , las cuales después permiten la eliminación (por ejemplo, por medio del recombinasa cre) . El componente genético y/o cassette de expresión de la invención pueden comprender elementos funcionales adicionales. El término elemento funcional será entendido en un amplio sentido y se refiere a todos los elementos que tienen un efecto en la generación, amplificación o función del componente genético, cassettes de expresión o recombinante u organismos según la invención. Los elementos funcionales pueden incluir por ejemplo (pero no se limitan a) : , 1. Genee mseleccionables Loe genes marcadores seleccionablee eon útiles para seleccionar y separar con éxito las células recombmadas homologas o transformadas. Preferentemente, dentro del método de la invención un marcador puede ser utilizado para la selección en un anfitrión procariótico, mientras otro marcador puede ser utilizado para la selección en un anfitrión eucariótico, particularmente el anfitrión de especies de planta. Los marcadores pueden ser una protección contra un biocida, tal como antibióticos, toxinas, metales peeadoe, o lo eimilar, o puede funcionar por complementación, impartiendo prototrofiemo a un anfitrión auxotrofico. Loe genee marcadores seleccionables preferidos para las plantas pueden incluir pero están limitados a los eiguientee: 1.1 Marcadoree de eelección negativos Los marcadores de selección negativos confieren una resistencia a un compuesto biocida tal como un inhibidor metabólico (por ejemplo, 2-desoxiglucosa-6-fosfato, WO 98/45456) , antibióticos (por ejemplo, canamicina, G 418, bleomicina o higromicina) o herbicidas (por ejemplo, fosfinotricina o glifosato) . Loe marcadoree de eelección negativoe especialmente preferidos son aquéllos que confieren resietencia a los herbicidas. Los ejemplos que pueden mencionarse son: Fosfinotricin acetiitransferas (PAT; también denominado Bialofos; Bar; De Block 1987; EP 0 333 033; E.U.A. 4.975.374) 5-enolpiruvilshiquimáto-3 -fosfato sintaea (EPSPS; E.U.A. 5.633.435) o gen de oxidoreductaea de glifosato (E.U.A. 5.463.175) confiere resietencia a Glifoeato (N-foefonometil glicina) (Shah 1986) Enzimae degradantee de Glifoeato (Glifosato oxidoreductasa; gox) , Dalapon que vuelve inactivo la deehalogenasas (deh) - Sulfonilurea, acetolactato sintasa, que inactivan imidazolinona (por ejemplo las variantes de ALS mutadas con, por ejemplo, S4 y/o mutación de Hra Nitrilasas que degradan Bromoxinil (bxn) . genes de resistencia a Canamicina - o 6418 (NPTII; NPTI) codificando por ejemplo, para fosfotransferasas de neomicina (Fraley 1983) que expresa una enzima que confiere resistencia a la canamicina antibiótica y los antibióticos relacionados a neomicina, paromomicina, gentamicina, y G418, 2-Desoxiglucosa-6-fosfato foefataea (el producto DOGRl-gen; WO 98/45456; E-P 0 807 836) confiriendo resistencia contra 2 -desoxiglucosa (Randez-gil 1995) -Higromicin fosfotraneferaea (HPT) que induce la reeietencia a la higromicina (Vanden Elzen 1985) . Dihidrofolato reductaea (Eichholtz 1987) . Loe genee marcadores negativos sel-eccionables adicionales de origen bacteriano que confieren resistencia a los antibióticos incluyen el gen aadA que confiere resistencia al antibiótico espectinomicina, gentamicin acetil transferasa, estreptomicina fosfotransferaea (SPT) , aminoglicosido-3 -adenil traneferaea y el determinante de resistencia a bleomicina (Hayford 1988; Jones 1987; Svab 1990; Hille 1986) . Son especialmente preferibles los marcadores de selección negativos que confieren resistencia contra los efectos tóxicos impuestos por los ácidos D-amino como por ejemplo, D-alanina y D-serina (WO 03/060133) . Son especialmente preferidos como marcador de selección negativo en este contexto el gen daol (EC: 1.4. 3.3: GenBank Acc . -No . :U60066) de Rhodotorula gracilis de levadura (Rhodosporidiu toruloides) y el E. coli gen dsdA (D-serina deshidrataea (D-eerina desaminasa) [?C:4.3. 1.18; GenBank Acc . -No . : J01603).-1.2) Marcador de eelección poeitivo Los marcadores de selección positivos confieren una ventaja de crecimiento a una planta transformada comparada con una no transformada. Los genes como el isopenteniltransferasa del Agrobacterium tumefaciens (cepa:P022; Genbank Acc. -No.: AB025109) pueden, como una enzima importante de la bioeíntesis de cytoquinina, facilitar la regeneración de plantas transformadas (por ejemplo, por la selección en el medio libre de citoquinina) . Se describen los métodos de eelección correepondientee (Ebinuma 2000a, b) . Se deecriben marcadoree de selección positivos adicionales que confieren una ventaja de crecimiento a una planta transformada en comparación con una no transformada, por ejemplo, en EP-A 0 601 092. Los marcadores de selección de estímulo a crecimiento pueden incluir (pero no están limitados a) ß-Glucuronidaea (en combinación con. por ejemplo, glucuronida de citoquinina) , isomerasa ma osa-6-fosfato (en combinación con mañosa) , UDP-galactosa-4-epimerasa (en combinación con por ejemplo, galactosa) , en donde la manosa-6-fosfato isomeraea en combinación con mañosa es especialmente preferible. 1.2) Marcador de selección de contador Los marcadores de selección son especialmente convenientee para eeleccionar organiemos con secuencias definidas para deleción que comprenden dicho marcador (Koprek 1999) . Los ejemplos para el marcador de s-elección negativo comprende timidina quinaeas (TK) , citosina desaminasee (Gleave 1999; Perera 1993; Stougaard 1993), proteínae P450 citocromo (Koprek 1999) , haloalcano deehalogenaeae (Naeeted 1999) , productoe de gen iaaH (Sundaresan 1995) , de citosina desaminasa codA (Schlaman & Hooykaas 1997) , o productos de gen tms2 (Fedoroff & Smith 1993) . 2) Genes de reporte Los genes de reporte codifican proteínas cuantificables rápidamente y, por medio de su color o actividad de enzima, hacen posible una valoración de la eficacia de transformación, sitio de expresión o tiempo de expreeión. Son especialmente preferidos en este contexto los genes que codifican las proteínas de reporte (Schenborn 1999) tal como la proteína fluorescente verde (GFP) (Sheen 1995; Haseloff 1997; Reichel 1996; Tian 1997; WO 97/41228; Chui 1996; Leffel 1997), transferaea cloranfenicol, luciferasa (Ow 1986; Millar 1992), gen aequorin (Prasher 1985), ß-galactosidasa, gen de sitio R (codificando una proteína que regula la producción de pigmentos antocianina (colorante rojo) en e-1 tejido de planta y así hace posible el análisis directo de la actividad promotora sin el agregado de suetanciae auxiliares adicioales o suetratos cromogénicos (De11aporta 1988; Ludwig 1990) , siendo ß-glucuronidasa (GUS) especialmente prefirida (Jefferson 1987a, b) , la expresión de ß-glucuronidasa (GUS) es detectada por un color azul en la incubación del tejido con ácido 5-bromo-4-cloro-3-indolü-ß-D-glucurónico, la expresión de luciferasa bacteriana (LUX) es detectada por la emisión de luz; la expresión de luciferasa de luciérnaga (LUC) es detectada por la emisión de luz despuée de la incubación con luciferina; y la expresión de galactosidasa es detectada por un color azul luminoso después que el tejido es manchado con 5-bromo-4-cloro-3-indolil-ß-D-galactopiranosida. También pueden usarse genes de reporte como marcadores evaluables como alternativas a los marcadores de resietencia a loe antibióticoe . Se usan tales marcadores para detectar la presencia o medir el nivel de expresión del gen transferido. El uso de marcadores evaluables en las plantas para identificar o etiquetar genéticamente las células modificados funciona bien sólo cuando la eficacia de modificación de la célula es elevada. 3) Orígenes de replicación, que aseguran la amplificación de los caseettee de expresión o vectores según la invención por ejemplo, E. coli. Los ejemplos que pueden ser mencionados son ORÍ (origen de replicación de ADN) , pBR322 ori o P15A (Maniatis 1989) . Los ejemplos adicionales para los sistemas de replicación funcional en E. coli, ColEl, pSClOl, pACYC184, o lo similar. Además o en lugar de sistema de replicación de E. coli, un sietema de replicación de amplio rango de anfitrión puede ser utilizado, tal como los sietemae de replicación de plásmidos de incompatibilidad P-l; por ejemplo, pRK290. Estos plásmidos son particularmente eficaces con el armado y desarmado de Ti-plásmidos para la transferencia de T-ADN a la planta anfitrión. 4) Elementos que eon necesarios para la transformación inducida por Agrobacterium, tales como, por ejemplo, el borde derecho y/o, opcionalmente, el izquierdo del T-ADN o región vir. 5) Múltiples sitios de clonación (MCS) para habilitar y facilitar la inserción de una o más secuencias de ácido nucleico. Típicamente, los constructoe comprenden un T-ADN (o cualquier otro constructo de ADN empleado dentro del alcance de la presente invención) son preparados utilizando técnicas de expresión transgénicae . Lae técnicae de expreeión recombinantes involucran la construcción de ácidos nucleicos recombinantes y la expresión de genee en lae células transfectadae. Lae técnicae de clonación molecular para lograr eetos fines son conocidas en la técnica. Una amplia variedad de métodos de clonacipón y de amplificación "in vitro" convenientes para la construcción de ácidos nucleicos recombinantes son bien conocidas por las personae de habilidad en la técnica. Los ejemplos de estas técnicas e instrucciones son suficientes para guiar a las personas de habilidad convencional a través de muchos ejercicios de clonación que se encuentran en Berger y Kimmel (1987) , Maniatis 1989, Silhavy 1984, Ausubel 1998). Preferentemente, el constructo de ADN según la invención es generado uniendo los componentes esenciales indicados precedentemente para el constructo de ADN juntos en la secuencia indicada precedetemente usando las técnicas de recombinación y clonación con las cuales el experto está familiarizado. La construcción de constructos de polinucleótido requiere generalmente la utilización de vectores capaces de reproducir en bacterias. Una plétora de equipos está disponible comercialmente para la purificación de plásmidos de bacterias. Para su utilización apropiada, se deben seguir las instrucciones del fabricante (ver, por ejemplo, EaeyPrepMR, FlexiPrepMR, ambos de "Pharmacia Biotech"; StrataCleanMR, "Stratagene"; y, Sistema de expresión QIAexpressMR, "Qiagen") . Los plásmidos aislados y purificados pueden ser adicionalmente manipulados para producir otros plásmidoe, utilizadoe para transfectar células o ser incorporados en Agrobacterium tumefaciens para infectar y transformar las plantas. Cuando el medios de transformación es Agrobacterium, se construyen vectores transportadores . 4. El procedimiento de transformación Los métodos de la invención son útiles para obtener plantas, o células, partes, tejidos, material transgénico de cosechae derivadas de los mismos. Consiguientemente, otro objeto de la invención se refiere a plantas transgénicas o células de planta que comprenden en su genoma, preferentemente en eu ADN nuclear, cromosomático, el constructo de ADN según la invención (por ejemplo, el T-ADN que comprende loe bordes de Ri plásmido pRi2659) , y las células, cultivos celulares, tejidos, partes o material de propagación, tal como, por ejemplo, en el caso de hojas de organismos de planta, raíces, semillas, frutas, polen y lo similar, derivados de tales plantas. Otros aspectoe importantes de la invención incluyen la descendencia de las plantas transgénicas preparada por los métodos descriptos, así como las células derivadas de tal descendencia, y las semillae obtenidas de tal descendencia. Pueden excluirse las variedades de planta, variedades de planta particularmente inscribibles según los Derechos de Criadores de Planta. Se notará que una planta no necesita ser considerada una "variedad de planta" simplemente porque contiene establemente un transgen dentro de su genoma, introducido en una célula de la planta o un antepasado de la misma. Además de una planta, la presente invención provee cualquier clon de tal planta, semilla, autopolinizable o descendencia y descendientes híbridos, y cualquier parte o propágulo de cualquiera de éstos, tales como las cortes y eemillae que pueden usarse en reproducción o propagación sexual o asexual. También está abarcada por la invención una planta que se propaga sexualmente o asexualmente de progenie, clon o descendientee de tal planta, o cualquier parte o propágulo de planta, progenie,, clon o descendiente. Según la invención también pueden usarse plantas genéticamente modificadas que pueden ser consumidae por seres humanos o animales tal como comida o alimentos, por ejemplo directamente o en un procedimiento siguiente conocido en la técnica. El método de la invención puede ser utilizado virtualmente en todas las variedades de plantas, incluso las variedades de plantas monocotiledóneas y dicotiledóneae (como lo definido y eepecificado anteriormente) . Sorprendentemente, la cepa Agrobacterium rhizogenes desarmada de la invención produce elevada eficacia de transformación para las plantas monocotiledóneas similares por ejemplo, maíz (Zea mays) . Hay varioe métodoe para la traneformación de plantae monocotiledóneas. El bombardeo de partículas es a menudo favorecido, debido a su eficacia y ningún rango de limitación de anfitrión (Christou 1995; Jahne 1995) . Sin embargo, la estructura irregular y número de eventos de transformación (por ejemplo, las copias múltiples o fragmentadas) requieren filtrado y análisie detallado de un elevado número de tranegénicoe reeultantee (Hadi 1996; Trick 1997). Por otra parte, el eetablecimiento de un sistema para transformación de plantas monocotiledóneas inducidas por Agrobacterium había sido considerado difícil, debido a que la infección de plantas monocotiledóneas por Agrobacterium es un evento muy raro y podría lograrse una eficacia razonable sólo usando la cepa A. tumefaciens ' super-virulenta' y/o acetosiringona, un compuesto fenólico que induce expresión de genes vir en Ti-plásmido (Belarmino 2000; Eady 2000; Hiei 1994; Smith y Hood 1995; Wilmink 1992) . No hay antes de sin embargo, no hay informes anteriores a la presente invención de transformación de monocotiledóneas inducido por una cepa de A. rhizogenes desarmada. También los numerosos explantes, tejidos de planta, o cultivo de células de plantas que pueden emplearse como material objetivo para el procedimiento de cocultivo. Un experto reconocerá que después que el constructo de ADN está incorporado establemente en las plantas transgénicas y se ha confirmado que es ope-rable, puede ser introducido en otras plantas por cruce sexual. Cualquiera de las diversae técnicae de crianza normal pueden usarse, dependiendo de las especies a ser cruzadas. Para transferir el ADN a la célula de la planta, los expl.antes de la planta eon cocultivadoe con el Agrobacterium rhizogenee deearmado de la invención que comprende el T-ADN transgénico. Empezando de la materia vegetal infectada (por ejemplo la hoja, raíz o secciones de tallo, pero también protoplastoe o euepensiones de células de planta) , pueden ser regeneradas las plantas intactas usando un medio conveniente que puede contener, por ejemplo, antibióticos o biocidas para seleccionar las células transformadas. Las plantas obtenidas entonces pueden ser filtradas respecto a presencia de ADN introducido, en este caso el constructo de ADN según la invención. En cuanto el ADN se haya integrado en el genoma anfitrión, el genotipo en cuestión, como una regla, es estable y la inserción en cuestión también se encuentra en las generaciones subsiguientes. Preferentemente se selecciona la planta establemente transformada que utiliza un marcador de selección comprendido en el T-ADN transgénico. Pueden eultivareee las plantas obtenidas y pueden hacerse híbridas en la modalidad acostumbrada. Se deben hacer crecer dos o más generaciones para asegurar que la integración genómica es estable y hereditaria. Dive-ros tejidos son convenientes como material de comienzo (explante) para el procedimiento de transformación inducido por Agrobacterium que incluye pero no está limitado a callo (E.U.A. 5.591.616; EP-Al 604 662) , embriones inmaduros (EP-Al 672 752) , polen (E.U.A. 54.929.300), ápice de retoño (E.U.A. 5.164.310), o en la transformación de la planta (E.U.A. 5.994.624). Pueden ser combinados el método y material descriptos en la presente virtualmente con todos los métodos de transformación inducidos por Agrobacterium conocidos en la técnica. Las combinaciones preferidas incluyen, pero no se limitan, a los materiales de comienzo y métodos siguientes : La eficacia de transformación con Agrobacterium puede ser mejorada por otros métodos numerosos conocidos en la técnica como por ejemplo corte, infiltración en vacío (WO 00/58484) , golpe de calor y/o centrifugación, agregado de nitrato de plata, sonificación, etc. En una modalidad de realización preferida de la invención, el material de explante es cortado antes de a la inoculación (cocultivo) con Agrobacterium. Pueden usaree muchoe métodos de corte, incluyendo, por ejemplo, cortado, desgastado, agujereado, punzonado, penetración con partículas finas o fluidos presurizados, corte con plasma, aplicación de preeión hiperbárica, o eonificación. El corte puede ser realizarse con objetos tales como, pero no limitados a, escalpelos, tijeras, agujas, objetos abrasivoe, eopletes, partículas, pistolae de gen eléctricae, u ondae sonoras. Otra alternativa es la infiltración en vacío (EP-Al 1.141.356; EP-Al 1.171.618). Otros métodos para aumentar la eficacia de transformación de Agrobacterium conocidos en la técnica pueden ser combinados, incluyendo pero no limitados a sonificación (EP-Al 904.362) o disminución de peso del tejido objetivo (EP-Al 1.137.790). Las bacterias de Agrobacteria rhizogenes desarmadas de la invención se cultivan y son utilizadas de una manera conocida en la técnica. El vector que comprende la cepa de Agrobacterium, por ejemplo, se puede hacer crecer por 3 días en medio YEB (ver Ejemplo 2.6) complementado con un antibiótico apropiado (por ejemplo, espectinomicina de 50 mg/L) . Las bacterias son recolectadas con un lazo desde el medio sólido y son resuependidae . En una modalidad de realización preferida de la invención, los cultivos de Agrobacterium eon empezadas por el uso de alícuota helada a -80°C. Para el tratamiento con Agrobacterium de pecíolos aislados, las bacterias son resuependidae en el medio ueado para el cultivo del pecíolo. La concentración de Agrobacterium usada para la infección y cocultivo puede necesitar ser variada. Así, puede usaree un rango de concentracionee de Agrobacterium de 105 a 1010 cfu/mL y un rango de períodoe de cocultivo de unae horas a 7 días. El cocultivo de Agrobacterium con los pecíolos aislados se lleva a cabo en general por 1 a 5, preferentemente 2 a 4 díae. Loe explantes se inoculan entonces con el cultivo de Agrobacterium durante unos minutos a unas horas, típicamente aproximadamente 10 minutos a 3 horas, preferentemente aproximadamente 0,5 horas a 1 hora. El medio en exceso es drenado y los Agrobacterium se permiten cocultivar con el tejido objetivo durante varios días, típicamente tree díae en oecuridad. Durante esta etapa, el Agrobacterium transfiere el construco genético foráneo en algunas células del tejido objetivo. Normalmente ningún agente de selección está presente durante esta etapa. Es posible, aunque no necesario, emplear uno o más compuestoe fenolicoe en el medio antes o durante el cocultivo de Agrobacterium. Los "compuestos fenólicos de planta" o "fenólicos de planta" convenientes dentro del alcance de la invención son aquéllas moléculas fenólicas aisladae sustituidas que son capaces de inducir una respueeta quimiotactica positiva, particularmente aquéllae que eon capacee de inducir expresión de gen vir aumentada en un Ri-plásmido conteniendo Agrobacterium sp. El preferido es acetosiringona. Además, ciertos compuestos, como los osmoprotectores (por ejemplo L-prolina preferentemente a una concentración desde aproximadamente 700 mg/L o betaina) , fitohormonas (entre otros NAA) , opinas, o azúcares, se espera que actúen sinérgicamente cuando son agregados en combinación con los compuestos fenólicos de planta. El compuesto fenólico de planta, particularmente acetosiringona, puede agregarse al medio antes de poner en contacto los pecíolos aislados con Agrobacteria (por ejemplo, varias horas a un día) . Las posibles concentraciones de los compuestos fenólicos de planta en el medio están en el rango desde aproximadamente 25 µM a 700 µM. Sin embargo, para los métodos de la invención preferentemente no ee es empleada nada de acetosiringona. Las condiciones de inducción particularmente adecuadas para el Agr?bacterium tumefaciens han sido descriptas por V.ernade y col. (19-88). La suplementación del medio de cocultivo con antioxidantes (por ejemplo, ditiotreitol) , o compueeto tiol (por ejemplo, L-cieteína, Olhoft 2001) el cual puede diemi uir la necrosis del tejido debido a las respuestas de defensa de planta (similar a la oxidación fenólica) puede mejorar adicionalmente la eficacia de transformación inducida por Agrobacterium. Las etapas de cocultivo posteriores pueden ser incluidas para eliminar, suprimir el crecimiento o matar el Agrobacterium rhizogenes. Estas etapas pueden incluir una o más etapas de lavado. El medio empleado después de la etapa de cocultivo preferentemente contiene un bacteriocida (antibiótico) . Se piensa que esta etapa termina o por lo menos retarda el crecimiento de las células no transformada y mata las células de Agrobacterium restantee. Loe antibióticoe preferidoe a ser empleados son por ejemplo, carbenicilina (500 mg/L) o TimentinMR (GlaxoSmithKIine; una mezcla de ticarcilina disodio y clavulanato de potasio; 0,8 g de Timentin™ contiene 50 mg de ácido clavulánico con 750 mg de ticarcilina. Químicamente, la ticarcilina disodio es sal disodio de ácido N-(2-Carbox-i-3 , 3-dimetil-7-oxo-4-tia-l-azabiciclo [3.2.0] hept-6-il) -3-tio-fenemalonámico. Químicamente, el clavulanato de potasio ee (Z) - (2R, 5R) -3- (2-hidroxietiliden) -7-oxo-4-oxa-l-azabiciclo [3.2.0] heptan-2 -carboxilato de potaeio). Deepuée de la etapa de cocultivo loe explantee cocultivadoe ee incuban preferentemente en un medio de regeneración que comprende un factor de crecimiento de planta. El medio empleado puede contener además por lo menos un compuesto, el cual puede aplicarse en combinación con el gen marcador eeleccionable que permite la identificación y/o eelección de célulae de planta (por ejemplo, agente selectivo) . Sin embargo, se prefiere que sean incubados los explantes durante un cierto tiempo, preferentemente 5 a 14 días, después de la etapa de cocultivo en medio que carece de un compuesto de selección. El establecimiento de un nivel de resistencia confiable contra dichos compuestos de selección necesita de algún tiempo para prevenir el daño imprevisto incluso por el compuesto de selección aún a las células y tejido transformado. Las células traneformadas, es decir aquellas que comprenden el ADN integrado en el ADN de la célula anfitrión, pueden ser seleccionadae de célulae no transformadas usando preferentemente el método de selección de la invención. En cuanto una célula de planta transformada se haya generado, puede obtenerse una planta intacta usando métodos conocidos por el experto. -Por ejemplo, se usan cultivos de callo como material de comienzo. La formación de retoño y raíz puede ser inducido en el mismo todavía como biomasa celular no diferenciada aún en una modalidad conocida. Pueden ser plantados los retoños obtenidoe y pueden eer cultivadoe. Lae técnicas inducidas por Agrobacterium pueden producir típicamente el suministro del gen en un número limitado de células en el tejido objetivo. Por consiguiente, en una modalidad de realización preferida de la invención, un agente selectivo es aplicada posteriormente a la transformación para matar todas las células en los tejidos objetivo que no se han transformado o identificar las células transformadae a través de una ventaja selectiva. La longitud de cultivo depende, en parte, en la toxicidad del agente de selección respecto a las células no transformadae. El gen marcador eeleccionable y el compuesto dé selección correspondiente usadoe para la eelección o protección pueden eer cualquiera de una variedad de compuestos de selección bien conocidos, tales como los antibióticos, herbicidas, o D-amino ácidos (ver más adelante para detalles) . La longitud de esta etapa de cultivo es variable (dependiendo del compuesto de selección y su concentración, el gen marcador seleccionable) , extendiéndose desde un día hasta 120 días. La inserción de un gen marcador seleccionable y/o filtrable está comprendida dentro del alcance del método de la invención. Esto puede ser ventajoso por ejemplo, para el uso posterior como una característica resistencia a herbicida. Por ejemplo, con el gen de resistencia a canamicina (fosfotransferaea de neomicina, NPTII) como el marcador eelectivo, se puede incluir en el medio canamicina a una concentración desde aproximadamente 3 a 200 mg/L. Las concentraciones típicas para la selección son 5 a 50 mg/L. El tejido se hace crecer en este medio por un período de 1 a 3 semanas, preferentemente aproximadamente 7 días hasta que los retoños se hayan desarrollado. Por ejemplo, con el gen de resistencia a fosfinotricina (bar) como el marcador selectivo, puede ser incluida fosfinotricina a una concentración desde aproximadamente 3 a 200 mg/L en el medio. Las concentraciones típicas para la selección son 5 a 50 mg/L. El tejido se hace crecer en este medio por un período de 1 a 3 semanae, preferentemente aproximadamente 7 días hasta que los retoños se hayan desarrollado . Por ejemplo, con el gen daol como el marcador selectivo, puede ser incluida en el medio D-serina o D-alanina a una concentración desde aproximadamente 3 hasta 100 mg/L. Las concentraciones típicas para la selección son 20 a 40 mg/L. El tejido se hace crecer en este medio por un período de 1 a 3 semanas, preferentemente aproximadamente 7 días hasta que los retoños se hayan desarrollado. Pueden cultivarese célulae de planta traneformadae, derivadae por cualquiera de las técnicas de transformación anteriores, para regenerar una planta completa que posee el genotipo transformado y así el fenotipo adecuado. Tales técnicae de regeneración confían en la manipulación de ciertae fitohormonas en un medio de crecimiento para cultivo de tejido, típiccamente confiando en un biocida y/o marcador de herbicida que han sido introducidos junto con las secuencias de nucleótido adecuadas. La regeneración de plantas desde protoplastoe cultivadoe eetá descripta (Evans 1983; Binding, 1985). La regeneración también puede ser obtenida del callo de planta, explantes, embriones somáticos (Dandekar 1989; McGranahan 1990), órganos, o parte de los mismoe. Se deecriben talee técnicae de regeneración (generalmente en Klee 1987) . Se deecriben otras técnicas de regeneración disponiblee (Vasil 1984; Weissbach 1989) . Los medios como los empleados durante el método de la invención para la regeneración y/o selección pueden ser opcionalmente complementados además con uno o más reguladores de crecimiento de planta, tales como por ejemplo, compuesto citoquinina (por ejemplo, 6-bencilaminopurina) y/o compuesto auxina (por ejemplo, 2,4-D). El término "regulador de crecimiento planta" (PGR) tal como se utiliza en la presente significa compuestos que son producidos naturalmente o sintéticos (que no se producen naturalmente) que pueden regular el crecimiento y desarrollo de la planta. Los PGR pueden actuar individualmente o en conjuntamente entre si o con otros compuestos (por ejemplo, azúcares, aminoácidos) . El término "auxina" o los "compuestoe auxina" comprenden compueetoe que estimulan la elongación y división celular, diferenciación de tejido vascular, desarrollo de fruta, formación de raíces adventicias, producción de etileno, y, en concentraciones elevadas, inducen la desdiferenciación (formación de callo) . El compuesto aux-ina producido naturalmente más común es el ácido indolacético (IAA) el cual es transportado polarmente en las raíces y tallos. Se usan las auxinas sintéticas extensivamente en agricultura moderna. Los compuestoe de auxina comprenden al ácido indol-3-butírico (IBA) , ácido naftilacético (NAA), y ácido 2,4-diclorfenoxiacético (2,4-D). Los compuestoe que inducen la formación de retoño incluyen, pero no están limitados a, IAA, NAA, IBA, citoquininas, auxinas, quinetinas, glifosato, y tiadiazorun. El término "citoquinina" o el "compuesto de citoquinina" comprende compuestoe que eetimulan la división celular, la expansión de cotiledones, y crecimiento de brotes lateralee. Los mismos retardan la senescencia de hojas desprendidae y, en combinación con auxinas (por ejemplo IAA) , pueden influir en la formación de raíces y retoños. Por ejemplo, los compuestos de citoquinina comprenden 6-isopenteniladenina (IPA) y 6-benciladenina/6-bencilaminopurina (BAP) . Loe deecendientes .pueden ser generados por propagación sexual o no sexual. • La propagación no sexual puede ser realizada por la introducción de embriogénesie somático por técnicas conocidas en la técnica. Preferentemente, los descendientes son generados por propagación/fertilización sexual. La fertilización o puede realizada por autofertilización (autopolinización) o cruzando con otras plantas transgénicae o no transgénicas . Las plantas transgénicae de la invención pueden funcionar en la preeente o como la planta maternal o paternal . Loe descendientes pueden comprender uno o más copias del gen de característica agronómicamente valiosa.

Preferentemente, se aislan los descendientee que eólo comprenden una copia de gen de dicha característica. -- Todas las composiciones y métodos descriptos y descriptos en la presente pueden ser realizados y pueden ser ejecutados sin la experimentación debida a la luz de la presente deecripción. Mientrae ee han descripto las composiciones y métodos de esta invención en lo que se refiere a las modalidades de realización preferidas, será claro a los expertos en la técnica que pueden ser aplicadas variaciones a la composición, métodos y en las etapas o en la secuencia de etapas del método deecripto en la presente sin apartarse del concepto, espíritu y alcance de la invención. Máe específicamente, será claro que ciertos agentes que están química y fisiológicamente relacionados pueden ser sustituidos por los agentes descriptoe en la preeente mientras sean logrados los mismoe o similares resultadoe. La totalidad de talee suetitutoe y modificacionee eimilaree evidentee para los expertos en la técnica se pretende que se encuentren dentro del espíritu, alcance y concepto de la invención según lo definido por las reivindicaciones adjuntas. Todas lae publicaciones y solicitudes de patente mencionadas en esta descripción son indicativas del nivel de habilidad de los expertos en la técnica a la cual pertenece esta invención. Todas las publicaciones y peticiones de patente son incorporadas en la presente como referencia a la misma como si cada publicación individual o solicitud de patente fueran específica e individualmente indicadas para ser incorporadas por referencia. Se ilustrarán a continuación ciertos aspectos y modalidades de realización de la presente invención a modo de ejemplo y con referencia a las figuras descriptae más adelante. Secuencias - - . 1. SEQ ID NO: 1: Secuencia de ácido nucleico codificando secuencia de flanco derecho de pRI2659 2. SEQ ID NO: 2: Secuencia de ácido nucleico codificando secuencia de flanco izquierdo de pRI2-659. 3. SEQ ID NO: 3: Secuencia de ácido nucleico del vector de clonación pRL278 (GenBank Acc. -No.: L05083). 4. SEQ ID NO: 4: Secuencia de ácido nucleico que codifica región T-ADN de pR12659 (GenBank Acc. -No. AJ271050) . 5. SEQ ID NO: 5: secuencia intergénica rARN 16S-23S de cepa Agrobacterium K599 motivo MI: 5 ' -AATCGTCGATGCGAATTGTTG-3 ' 6. SEQ ID NO: 6: secuencia intergénica rARN 16S-23S de cepa Agrobacterium K599 motivo M2 : 5 ' GTTTTGTCCTGACGCTGTCGCGA-3 ' 7. SEQ ID NO: 7: secuencia intergénica rARN 16S-23S de cepa Agrobacterium K599 motivo M3 : 5 ' TCTAACGATCGCTGCGCTCCGGA-3 ' 8. SEQ ID NO: 8: secuencia intergénica rARN 16S-23S de cepa Agrobacterium K599 motivo M4 : 5 ' CGCCACGAGGCGCGACGGA-3 ' 9. SEQ ID NO: 9: eecuencia intergénica rARN 16S-23S de cepa Agrobacterium K599 motivo M5: 5 ' -TTATGGGCGAATTGATCTGA3 ' 10. SEQ ID NO: 10 eecuencia intergénica rARN 16S-23S de cepa Agrobaoterium K599 motivo M6 : 5 ' -GTCCTGCTAAGGATTGATGCCT-3 ' 11. SEQ ID NO: 11 eecuencia intergénica rARN 16S-23S de cepa Agrobacterium K599 motivo M7 : 5 ' -AGACCAGTCCTTGTGAAACC-3 ' 12. SEQ ID NO: 12 secuencia intergénica rARN 16S-23S de cepa Agrobacterium K599 motivo M8: 5'-CCTGGGCATTTTTGTTGTTGG-3 ' 13. SEQ ID NO: 13 secuencia intergénica rARN 16S-23S de cepa Agrobacterium K599 motivo M9: 5 ' -AATGGTATGGCTTCGAGGTG-3 ' 14. SEQ ID NO: 14 secuencia intergénica rARN 16S-23S de cepa Agrobacterium K599 motivo MÍO : 5 ' -CTCAAAGAAGACCGTACCGACA-3 ' 15. SEQ ID NO: 15 vector binario pBPSEW008 [p-NOS: :C-bar: : t-NOS pPcUBI :: c-gusINT :: t-NOS] 16. SEQ ID NO: 16 vector binario pBPSMM192b [p-AtAhas: :c-csrl-2: : tAtAHAS t-NOS: :C-gusINT: :p-SUPER] 17. SEQ ID NO: 17 vector JT-binario pBPSMM232. [p-ZmUbíl: :C-ZmAHASL/Xil2: :t-ZmAHAS t-NOS: :C-gusINT: :p-ZmUbil] pBPSMM232 es un vector que tal como está no es replicable en Agrobacterium pero sólo en Ecoli. La transformación en Agrobacterium que comprende el plásmido super-binario pSBl produce un plásmido quimérico (pSBl/pBPSMM232) por la fusión inducida por selección entre el pBPSMM232 y pSBl; Komari 1996) 18. SEQ ID NO: 18 secuencia de borde izquierdo de pRi2659 5-TGGCAGGATA TATTGTGGTG TAAA-3 19. SEQ ID NO: 19 secuencia de borde derecho de pRi2659 5 ' -TGACAGGATA TATCCCCTTG TCTA-3 20. SEQ ID NO: 20 secuencia intergénica de rARN 16S-23S de cepa de Agrobacterium K599 21. SEQ ID NO: 21 ADN genómico codificando rARN 16S de cepa Agrobacterium K599 22. SEQ ID NO: 22 vector de deleción pBPSSH009 23. SEQ ID NO: 23 vector de deleción pRL278 LF/RF (también denominado pBPSSH009b) 24. SEQ ID NO: 24 secuencia de ácido nucleico codificando pRI2659A (no comprende el marcador de selección de tetraciclina (tet) ) 25. SEQ ID NO: 25: Secuencia de aminoácido codificada por rcorfl, similar a mll6374, integrasa/recombinaea [Meeorhizobium loti MAFF303099] 26. SEQ ID NO: 26 eecuencia de aminoácido codificada por rcorfl3, débilmente similar a riorf22 en pRil724, similar a la proteína hipotética Bcep02OOO337 [Burkholderia fungorum LB400] 27. SEQ ID NO: 27 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl4, probable gen traneportador de cucumbopina, eimilar a riorf37 en pRil724, un probable traneportador de miquimopina 28. SEQ ID NO: 28: Secuencia de aminoácido codificada por rcorfld, eimilar a SMa2205 Sinorhizobium meliloti 1021 (cepa: 1021), un COG1176 [E] sistema de transporte espermidina/putrescina de tipo ABC, componente permeasa I 29. SEQ ID NO: 29 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl9, similar a hutl, imidazolona-5-propionato hidrolasa [Agrobacterium tumefaciens str. C58] , menos similar al riorf39 en pRil724, trayecto KEGG: metabolismo histidina 00340. 30. SEQ ID NO: 30 secuencia de aminoácido codificada por rcorf20, similar al riorf41 en pRil724, una proteína hipotética 31. SEQ ID NO: 31 secuencia de aminoácido codificada por rcorf21, eimilar al riorf42 en pRil724, un homólogo de gen hutU, un urocanaea, número EC 4.2.1.49. 32. SEQ ID NO: 32 eecuencia de aminoácido codificada por rcorf22, eimilar a proteína de función deeconocida DUF886 [Meeorhizobium ep. BNC1] y menoe eimilar al riorf43 en pRil724, eimilar al gen desconocido al lado del gen hutR en Pseudomonas putida. 33. SEQ ID NO: 33 secuencia de aminoácido codificada por rcorf23, similar a C-term similar a la familiar •transposasa IS30. 34. SEQ ID NO: 34 secuencia de aminoácido codificada por rcorf32, eimilar a riorf60 en pRil724, eimilar al gen gatA-1 [Glutamil-tARN amidotransferase, subunidad A (gatA-1) de Sulfolobus solfataricus P2] 35. SEQ ID NO: 35 secuencia de aminoácido codificada por rcorf34, similar al riorf62 en pRil724, gen transportador ABC hipotético eimilar al gen agaB, permeasa ácido agropínico, pfam00528: BPD_transp_l ; componente de la membrana interna de eietema de traneporte dependiente del enlace a proteína. 36. SEQ ID NO: 36 secuencia de aminoácido codificada por rcorf35, similar al riorf63 en pRil724, gen de transportador ABC hipotético similar al gen dppC, pfam-00528: BPD_transp_l ; componente de membrana interno de sistema de transporte dependiente de enlace a proteína 37. SEQ ID NO: 37 secuencia de aminoácido codificada por rcorf36, similar al riorf64 en pRil724, gen de transportador ABC hipotético similar al gen moaD, permeasa ácido mannopínico, COG1123 : componentes de ATPasa de varios sietemas de transporte de tipo ABC. 38. SEQ ID NO: 38 secuencia de aminoácido codificada por rcorf37, similar al riorf66 en pRil724, similar al gen amaB, N-carbamoil-beta-alanina amidohidrolasa. 39. SEQ ID NO: 39 secuencia de aminoácido codificada por rcorf39, similar al riorf68 en pRil724, débilmente similar al gen pck, pfam01633: colina_quinasa; Colina/etanolamina quinasa 40. SEQ ID NO: 40 secuencia de aminoácido codificada por rcorf40, similar al riorf69 en pRil724, similar a MLCB1779.29 (probable gen monofosfatasa) en Mycobacterium leprae, cd01641: Bacterial_IMPasa_similar_l; familia predominantemente bacteriana de fosfatasae dependiente de Mg++, relacionadas a inositol monofoefataeae 41. SEQ ID NO: 41 eecuencia de aminoácido codificada por rcorf41, eimilar a riorf71 en pRil724, gen quimioreceptor hipotético similar al gen orf2 en pTil5955 42. S?Q ID NO: 42 secuencia de aminoácido codificada por rcorf44, similar al riorf74, similar a gen teuB (proteína de enlace a azúcar periplásmica) , COG1879: RbeB; sistema de transporte de azúcar tipo ABC, componente periplásmico [transporte del Hidrato de carbono y metabolismo] . 43. SEQ ID NO: 43 secuencia de aminoácido codificada por rcorf45, similar al riorf75 en el pRil724, similar al teuA (transportador de ABC de azúcar de enlace a ATP) gen, gen transportador ABC hipotético, COG1129, : MglA; sietema de traneporte de azúcar tipo ABC , componente ATPaea [traneporte de hidrato de carbono y metaboliemo] . 44. SEQ ID NO: 44 secuencia de aminoácido codificada por rcorf46, eimilar al riorf76 en pRil724, similar al gen teuCl (transporte de azúcar permeasa ABC) , un gen transportador ABC hipotético, pfam02653: BPD_transp_2 ; sietema de traneporte de aminoácido de cadena ramificada / componente de permeasa. 45. SEQ ID NO: 45 secuencia de aminoácido codificada por rcorf47, similar al riorf77 en pRil724, similar al gen teuC2 (transporte de azúcar permeasa ABC) , un gen transportador ABC hipotético, pfam02653: BPD_transp_2 ,-eietema de traneporte de aminoácido de cadena ramificada / componente permeaea. 46. SEQ ID NO: 46 eecuencia de aminoácido codificada por rcorf48, eimilar a riorf78 en pRil724, un COG2755 [E] Lieofoefolipasa Ll y relacionado a esterasas. 47. SEQ ID NO: 47 secuencia de aminoácido codificada por rcorf50, similar al riorfdO de pRil724, un homólogo de gen glpD, glicerol-3-fosfato deshidrogenasa [Agrobacterium tumefaciens str. C58] . 48. SEQ ID NO: 48 secuencia de aminoácido codificada por rcorf51, similar a riorfdl en pRil724, un homólogo de gen acs (acetil-CoA) sintetasa, CEE 6.2.1.1. 49. SEQ ID NO: 49 secuencia de aminoácido codificada por rcorf52, similar a riorf82 de pRil724, un homólogo de gen adk, pfam00406: ADK; quinasa Adenilato, EC 2.7.4.3. 50. SEQ ID NO: 50 secuencia de aminoácido codificada por rcorf53, similar a riorf83 en pRil724, un gen quimioreceptor hipotético similar al gen orf2 en pTil5955. 51. SEQ ID NO: 51 secuencia de aminoácido codificada por rcorf54, similar a riorf84, un homólogo de gen cbbF, un cd00354: FBPasa; Fructoea-1 , 6-biefosfatasa, una enzima que cataliza la hidrólisis de fructosa-1 , 6-bifosfato en fructosa-6-fosfato y ee crítica en el trayecto gluconeogéneeie . 52. SEQ ID NO: 52 secuencia de aminoácido codificada por rcorf55, homólogo de gen cbbA, un cd00947: TBP_aldolasa_IIB; Tagatosa-1, 6-bisfosfato (TBP) aldolaea y relacionada a aldolaeas Tipo B Clase II 53. SEQ ID NO: 53 secuencia de aminoácido codificada por rcorf56, similar a pdb Cadena A, Triosefoefato Ieomeraea de levadura (tril) . 54. SEQ ID NO: 54 secuencia de aminoácido codificada por rcorf57, similar a riorfdd en pRil724 y al gen phrR, proteína de enlace a ADN, hélice-vuelta-hélice familia XRE. 55. SEQ ID NO: 55 secuencia de aminoácido codificada por rcorf58, similar a riorf89 en pRil724 y al gen thcR, dominio conservado, HTH_ARAC; hélice-vuelta-hélice, proteína de control operón de arabinosa. 56. SEQ ID NO: 56 secuencia de aminoácido codificada por rcorf59, similar a riorf90 en pRil724 y Atu6096 en pTiC58, conservada en especies de Mesorhizobium y Agrobacterium. 57. SEQ ID NO: 57 secuencia de aminoácido codificada por rcorf60, similar a rionf91 en pR11724, también similar a varias proteínas hipotéticas en especiee de Agrobacterium, Mesorhizobium y Nitrobacter. 58. EL S?Q ID NO: 58 secuencia de aminoácido codificada por rcorfdl, similar a riorf92 en pRil724, proteína hipotética conservada en varias cepas de Agrobacterium y Mesorhizobium. 59. SEQ ID NO: 59 secuencia de aminoácido codificada por rcorf62, similar a riorf93, similar a gen jhp0928 en Helicobacter pylori, un COG0827; ADN de metilasa específico de adenina [replicación, recombinación, y reparación de ADN] . 60. SEQ ID NO: 60 secuencia de aminoácido codificada por rcorf63, similar a AGR_pTi_191 proteína de partición de Agrobacterium tumefaciens str. C58, proteína de partición, COG1475 [K] reguladores transcripcionales predecidos. 61. SEQ ID NO: 61 secuencia de aminoácido codificada por rcorf64, similar a proteína hipotética MesoDRAFT 1041 [Meeorhizobium ep. BNC1] , coneervada en eepeices de Agrobacterium, Mesorhizobium, y Nitrobacter. 62. SEQ ID NO: 62 secuencia de aminoácido codificada por rcorf66, similar a la proteína hipotética MesoDRAFT 1043 [sp de Mesorhizobium. BNC1] , coneervada en Agrobacterium, Mesorhizobium, y especies de Nitrobacter. 63. SEQ ID NO: 63 secuencia de aminoácido codificada por rcorf67, similar a riorf96 en pRil724, una proteína hipotética débilmente similar a la región corriente abajo de gen hydL en Thiocapsa roeeopereicina . 64. SEQ ID NO: 64 eecuencia de aminoácido codificada por rcorf68, eimilar a AGR_pTi_204 [Agrobacterium tumefaciene str. C58] y argG, sintasa argininosuccinato, de Streptomyces clavuligerus . 65. SEQ ID NO: 65 eecuencia de aminoácido codificada por rcorf69, eimilar a riorflOO en pRil724, eimilar al gen ardC en pSa (pláemido IncW) COG4227, proteína traneferencia conjugal probable (proteína de antirestricción) . 66. SEQ ID NO: 66 secuencia de aminoácido codificada por rcorf70, similar a riorflOl en pR11724, similar al mll9093 aspartato 1-descarboxilasa [Mesorhizobium loti MAFF303099] y gen pgi en Xanthomonas citri, COG0853 [H] Aspartato 1-descarboxilasa. 67. SEQ ID NO: 67 secuencia de aminoácido codificada por rcorf71, similar a riorfl06 en pRÜ724, similar a un gen teuB en pRtrCFN299a, un COG1879: RbsB; sistema de transporte de azúcar tipo ABC, componente periplásmico [transporte del hidrato de carbono y metabolismo] . 68. S?Q ID NO: 68 secuencia de aminoácido codificada por rcorf72, similar a riorfl07 en pRil724, similar al mcpC (gen mcpC er- Rhizobium) gen en Rhizobium leguminosarum, un smart00283: MA; Metilo-aceptando dominioe eimilaree a quimiotaxie (traneductor eeneorio a quimiotaxie) . 69. SEQ ID NO: 69 secuencia de aminoácido codificada por rcorf77, gen traA probable, similar a riorfll2 en pRil724, COG0507: RecD; exoADNsa dependiente de ATP (exonucleaea V) , eubunidad alfa - miembro de superfamilia helicasa I [replicación, recombinación, y reparación de ADN] . 70. SEQ ID NO: 70 secuencia de aminoácido codificada por rcorf79, gen traB probable, similar a riorfll4 en pRil724. 71. SEQ ID NO: 71 secuencia de aminoácido codificada por rcorfdO, similar a riorfll5 en pRil724, una proteína hipotética de Agrobacterium rhizogenes (cepa: MAFF03-01724) 72. SEQ ID NO: 72 secuencia de aminoácido codificada por rcorf82, probable gen traM similar al riorflld en pRil724, antagonista de TraR. 73. S?Q ID NO: 73 secuencia de aminoácido codificada por rcorf96, probable gen repA similar a riorfl32 Agrobac'terium rhizogenes (cepa: MAFF0301724) , un cd00550: ArsA ATPaee,- ATPaea tranelocando oxianion (ArsA) y cd00592 : HTH_ME-RR; regulador de transcripción de Hélice-vuelta-hélice MERR, dominio del N-término. 74. SEQ ID NO: 74 secuencia de aminoácido codificada por rcorf97, gen repB probable similar al riorfl33 en pRil724, un smart00470: ParB; proteína dominio nucleasa Pa-rB. 75. SEQ ID NO: 75 secuencia de aminoácido codificada por rcorf9d, probable gen repC similar a riorfl34 en pRil724, esencial para replicación vegetativa. 76. SEQ ID NO: 76 secuencia de aminoácido codificada por rcorf99, similar a riorfl35 en pRil724, débilmente similar a gen y4aO en pNGR234a. 77. SEQ ID NO: 77 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl03, similar a gen riorfl37 en pRil724 y gen orf4 en pTiA6NC. 7d. SEQ ID NO: 78 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl05, eimilar a riorfl39 en pRil724, eimilar a la región no caracterizada entre loe genee y4jF e y4jG en pNGR234a. 79. SEQ ID NO: 79 eecuencia de aminoácido codificada -por rcorflOd, similar a riorfl40 en pRil724 y al gen orf300 en Escherichia coli, un pfam00004: AAA; familia ATPasa asociada con diversae actividadee celulares (AAA) . 80. SEQ ID NO: 80 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl07, similar a N-término de riorfl41 en pRil724, una proteína hipotética. 81. SEQ ID NO: 81 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl09, débilmente similar al SERP1653 Estafilococos epidermidis RP62A (cepa: RP62A) , una proteína hipotética. 82. SEQ ID NO: 82 secuencia de aminoácido codificada por rcorfllO, similar a riorfl42 en pRil724, eimilar al gen para el exon 6 de proteína de enlace luminal en Arabidopeie thaliana. 83. SEQ ID NO: 83 eecuencia de aminoácido codificada por rcorflll, similar a riorfl43 en pRil724 y al gen spdB3 en pSG5. 84. SEQ ID NO: 84 secuencia de aminoácido codificada por rcorfll2, similar a riorfl44 en PRi 1724. 85. SEQ ID NO: 85 secuencia de aminoácido codificada por rcorfll4, gen virF putativo, similar a riorfl46 en pR11724 y tiorfl33 en pTiSAKURA. 86. SEQ ID NO: 86 secuencia de aminoácido codificada por rcorfll7, similar a ríorfl49 en pRil724, similar al N-término. aatA (atu2196) aminótransferasa aspartato A [Agrobacterium tumefaciens str. C58] . 87. S?Q ID NO: 87 secuencia de aminoácido codificada por rcorfll9, probable virH, similar a riorfl51 en pRil724, oxidasa de tipo P450 citocromo, probablemente proteína tipo IV secretada vía virB/D4. 88. SEQ ID NO: 88 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl20, probable virA, similar a riorfl52 en pRil724, receptor en sistema regulador de dos componentes virA/G. 89. SEQ ID NO: 89 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl21, probable virBl, similar a riorfl53 en pRil724, sistema de secreción tipo IV requerido para la transferencia de T-complejo. 90. SEQ ID NO: 90 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl23, probable virB3, similar a riorfl55 en pRil724, sistema de eecreción tipo IV requerido para la transferencia de T-complejo. 9i. SEQ ID NO: 91 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl25, probable virB5, similar a riorfl57 en pRil724, sistema de secreción tipo IV requerido para la transferencia de T-complejo. 92. SEQ ID NO: 92 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl2-6, probable v-irB6, similar a riorfl5-8 en pRil724, sistema de secreción tipo IV, requerido para la transferencia de T-complejo. 93. SEQ ID NO: 93 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl27, probable virB7, similar a riorfl59 en pRil724, sistema de secreción tipo IV requerido para la transferencia de T-complejo.- 94. SEQ ID NO: 94 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl29, probable virB9, similar a riorflßl en pRil724, sietema de eecreción tipo IV requerido para la transferencia de T-complejo. 95. SEQ ID NO: 95 eecuencia de aminoácido codificada por rcorfl31, probable virBll, similar a riorfl63 en pRil724, sietema de eecreción tipo IV requerido para la traneferencia T-complejo. 96. SEQ ID NO: 96 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl32, probable virG, similar a riorfl64 en pRil724, activador en sistema regulador de dos componentee virA/G. 97. SEQ ID NO: 97 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl33, proteína hipotética, similar al aal-103 pf ISBml transpoeasa orfB [Brucella suis 1330] (NP 697552) . 98. SEQ ID NO: 98 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl37, probable virDl, similar al riorfl67 en pRil724, una proteína adicional endonucleasa de borde T-ADN regulada por virA/G. 99. SEQ ID NO: 99 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl38, probable virD2, similar a riorfl68 en pRil724, borde T-ADN endonucleasa regulada por virA/G. 100. SEQ ID NO: 100 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl40, probable virD4, similar a riorfl70 en pRil724, componente regulado por virA/G de sistema de secreción Tipo IV virB/D4. 101. SEQ ID NO: 101 secuencia de aminoácido codificada por rcorl'142, probable virF, similar a riorfl72 en pRil724, y menos similar a tiorfl33 en pTiSAKURA, una proteína de secreción tipo IV vía complejo virB/D4. 102. SEQ ID NO: 102 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl43, probable virE3, similar a riorfl73 en pRil724 y virE3 en pRiA6NC, actúa recíprocamente con virE2 e IMPA1 (AtKAP-alfa) en A. tumefaciens, proteína secretada virB/D4 tipo IV. 103. SEQ ID NO: 103 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl44, similar a Mesorhizobium loti mlrl626 MAFF303099, isomerasA manoeA-6-foefato predecida. 104. SEQ ID NO: 104 secuencia de aminoácido codificada por rcorf145, similar a fago integrasa 105. SEQ ID NO: 10-5 secuencia de ácido nucleico que codifica región RF::tet::LF pRi2659?tet (comprendiendo el marcador de selección de tetraciclina (tet) ) 106. SEQ ID NO: 106 secuencia de ácido nucleico que codifica pRi2659 107. SEQ ID NO: 107 cebador de PCR dentro de virG CDS. 5 • -TACTTCCTCC TCACGCACTC-3 ' lOd. SEQ ID NO: lOd cebador de PCR dentro operón virB. 5 ' -GCCAGCAATG ATCAAGAATT TGTTT-3 ' 109. SEQ ID NO: 109 cebador directo PCR 6109 5 ' -TTGGTGCGAC AACTCCTCGG CG-3 ' 110. SEQ ID NO: 110 cebador inverso PCR 6112 5 ' -GGTGAGCTCG ATCAGCTTCG GC-3 ' 111. SEQ ID NO: 111 secuencia de ácido nucleico que codifica virD2 de pRi2659 112. SEQ ID NO: 112 secuencia de aminoácido para la proteína virD2 de pRi2659, también conocido como rcorf138 113. SEQ ID NO: 113 secuencia de ácido nucleico complementaria de pRi2659 que contiene rcorf2 a través de rcorf12 .. . . 114. SEQ ID NO: 114 secuencia de aminoácido codificada por rcorf12, débilmente similar a riorf20 en pRil724, similar a proteína hipotética Bcep02ÓOO338 [Burkholderia fungorum LB400] . 115. SE-Q ID NO: 115 secuencia de aminoácido codificada por rcorf11, similar a riorf40 en pRil724, un homólogo de gen hutH, un cd01441,: HAL; Histidina amonio-liasa (HAL) cataliza el- primer estado en la degradación de histidina a glutamato 116. SEQ ID NO: 116 secuencia de aminoácido codificada por rcorf10, similar a la proteína reguladora transcripcional [Bradyrhizobium japonicum USDA 110] , represor transcripcional operón gluconato hélice-vuelta-hélice 117. SEQ ID NO: 117 secuencia de aminoácido codificada por rcorf9, similar a proteína hyuA de utilización de hidantoina de A. tumefaciens C58 118. SEQ ID NO: 118 secuencia de aminoácido codificada por rcorf8, similar a la proteína hyuB de utilización de hidantoina de A. tumefaciens C58. 119. SEQ ID NO: 119 secuencia de aminoácido codificada por rcorf7, similar a COG0834 Burkholderia fungorum LB400 COG0834, similar a STH1060, la proteína de enlace a suetrato traneportador ABC de glutamina [Symbiobacterium thermophilum IAM 14863] . 120. SEQ ID NO: 120 secuencia de aminoácido codificada por rcorf6, similar a COG0765 [Burkholderia fungorum LB400] , similar a PSPT05181, tranporte ABC de cistina, proteína permeaea, putativa [Pseudomonas eyringae pv. str. de tomate DC3000] 121. SEQ ID NO: 121 secuencia de aminoácido codificada por rcorf5, similar a Bcep02OOO339 [Burkholderia fungorum LB400] , similar a bir3310, COG0765: proteína traneportadora ABC de permeaea [Bradyrhizobium japonicum USDA 110]-122. SEQ ID NO: 122 secuencia de aminoácido codificada por rcorf4, N-término similar a STH1062, similar a la proteína de enlace a ATP transportadora ABC de glutamina [Symbiobacterium thermophilum IAM 14S63] ; C-término similar a bll6362, proteína hipotética en Bradyrhizobium japonicum USDA 110, COG2079 [R] proteína no caracterizada involucrada en el catabolismo de propionato. 123. SEQ ID NO: 123 secuencia de aminoácido codificada por rcorf3, débilmente similar a mlr6097, proteína de control de asimilación de nitrógeno [Mesorhizobium loti MAFF303099] , COG0563 [K] regulador transcriptional- 124. SEQ ID NO: 124 secuencia de aminoácido codificada por rcorf2, similar a riorfl en pRil724, homólogo de gen orf3 en IS66 12-5. S?Q ID NO: 125 secuencia de ácido nucleico complementaria de pRi2659 que contiene rcorf18 126. SEQ ID NO: 126 secuencia de aminoácido codificada por rcorf18, similar a la proteína hipotética AGR_L_1821 [Agrobacterium tumefaciens str. C58] , un homólogo de gen sdeB, cd01298: Similar a ATZ_TRZ; familia de TRZ/ATZ que contiene enzimae de trayecto de degradación de atrazina y relacionada a hidrolaeae. 127. SEQ ID NO: 127 secuencia de ácido nucleico complementaria de pRi2659 que contiene rcorf24 a través de rcorf31 128. SEQ ID NO: 128 secuencia de aminoácido codificada por rcorf31, similar a riorf59 en pRil724, similar al gen orf3 en el Methylobacterium extorquens, COG3931 [E] predecido N-formilglutamato. 129. SEQ ID NO: 129 secuencia de aminoácido codificada por rcorf30, similar a riorf58 en pRil724, un homolog de eutB, cadena pesada de etanolamina amonio-liasa. 130. SEQ ID NO: 130 secuencia de aminoácido codificada por rcorf28, probable gen GALLS, similar a riorf55 en pRil724, complementa virE2, mecanismo desconocido, requerido para transformación de planta estable eficaz. 131. SEQ ID NO: 131 secuencia de aminoácido codificada por rcorf27, probable trans-zeatina sintaea, similar a riorf54 en pRil724, EC 2.5.1.-. 132. SEQ ID NO: 132 secuencia de aminoácido codificada por rcorf26, gen idi probable, similar a riorf53 en pRil724, similar a idi, isopentenil-difosfato delta-ieomeraea [Mycobacterium tuberculosis CDC1551] EC 5.3.3.2. 133. SEQ ID NO: 133 secuencia de aminoácido codificada por rcorf25, similar a riorf52 en pRil724, proteína de familia decarboxilasa similar a MCA2182 [Methylococcus capeulatue str. Bath] 134. SEQ ID NO: 134 secuencia de aminoácido codificada por rcorf24, similar al riorf51 en pRil724, débilmente similar al gen mtrR de la familia reguladora bacteriana tetR. 135. SEQ ID NO: 135 secuencia de ácido nucleico complementaria de pRi2659 que contiene rcorf42 a través de rcorf43. 136. SEQ ID NO: 136 secuencia de aminoácido codificada por rcorf43, similar a riorf73 en pR11724, similar a SMa2002 [Sinorhizobium meliloti 1021] , COG2755 [E] Lisofoefolipaea Ll y esterasas relacionadas. 137. SEQ ID NO: 137 eecuencia de aminoácido codificada por rcorf42, similar a riorf73 en pRil724, gen repressor hipotético, similar a SMa2004 [Sinorhizobium meliloti 1021] , regulador transcripcional familia ROK putativo. 138. S?Q ID NO: 138 secuencia de ácido nucleico complementaria de pRi2659 que contiene rcorf74 a través de rcorf76. 139. SEQ ID NO: 139 secuencia de aminoácido codificada por rcorf76, probable gen traC, Ti plásmido conjugal procesando ADN, similar a riorflll en pRil724. 140. SEQ ID NO: 140 secuencia de aminoácido codificada por rcorf74, probable gen traG, similar a riorfl09 en pRil724, un cd01126: TraG VirD4; familia de TraG/TraD/VirD4 so proteínas de conjugación bacterial. 141. SEQ ID NO: 141 secuencia de ácido nucleico complementaria de pRi2659 que contiene rcorf83 a través del rcorf 5. 142. SEQ ID NO: 142 eecuencia de aminoácido codificada por rcorf95, probable gen tral similar al riorfl31 en pRil724, reguladores detectando quorum del tipo Luxl, sintetiza 3-oxooctanoilhomoserina lactona, un pfam00765: Autoind_synth; Autoinductor sintetasa. 143. SEQ ID NO: 143 secuencia de aminoácido codificada por rcorf94, probable gen trbB similar al riorfl30 en pRil724, sietema de traneferencia Tipo IV requerido para la conjugación de Ri/Ti plásmido. 144. SEQ ID NO: 144 eecuencia de aminoácido codificada por rcorf93, probable gen trbC eimilar al riorfl29 en pRil724, Sietema de transferencia Tipo IV requerido para la conjugación de Ri/Ti plásmido. 145. SEQ TD NO: 145 secuencia de aminoácido codificada por rcorf91, probable gen trbE similar al riorfl27 en pRil724, Sistema de transferencia Tipo IV requerido para la conjugación de Ri/Ti plásmido. 146. SEQ ID NO: 146 secuencia de aminoácido codificada por rcorf89, homólogo de gen trbK similar al riorfl25 en pRil724, Sistema de transferencia Tipo IV requerido para la conjugación de Ri/Ti plásmido. 147. SEQ ID NO: 147 secuencia de aminoácido codificada por rcorf88, probable gen trbF similar al riorfl23 en pRil724, Sistema de transferencia Tipo IV requerido para la conjugación de Ri/Ti plásmido. 148. SEQ ID NO: 148 eecuencia de aminoácido codificada por rcorf87, probable gen trbF eimilar al riorfl23 en pRil724, Sistema de transferencia Tipo IV requerido para la conjugación de Ri/Ti plásmido. 149. SEQ ID NO: 149 secuencia de aminoácido codificada por rcorf86, probable gen trbG similar al riorfl22 en pRil724, sietema de tranef rencia Tipo IV requerido para la conjugación de Ri/Ti pláemido. 150. SEQ ID NO: 150 eecuencia de aminoácido codificada por rcorfd5, probable gen trbH similar al riorfl21 en pRil724, Sistema de transferencia Tipo IV requerido para la conjugación de Ri/Ti plásmido. 151. SEQ ID NO: 151 secuencia de aminoácido codificada por rcorf84, probable gen trbl similar al riorfl20 en pRil724, un pfam03743: Tr-bl ; proteína similar Trbl para conjugación bacteriana. 152. SEQ ID NO: 152 secuencia de aminoácido codificada por rcorf83, probable gen traR similar al riorfll9 en pRil724 y traR/AGR pTi 249 en pTiC58. 153. SEQ ID NO: 153 secuencia de ácido nucleico complementaria de pRi2659 que contiene rcorflOO a través del rcorf102. 154. SEQ ID NO: 154 secuencia de aminoácido codificada por rcorf102, similar a gen orf2 de integrasa hipotético (similar a gen similar a integrasa de Pseudomonas) en pTiA6NC. 155. SEQ ID NO: 155 secuencia de aminoácido codificada por rcorf101, similar al N-término, fragmento de pAT 22 Agrobacterium tumefaciens str. C58 (cepa: C58, aislado: Cereon) , un COG0582 [L] proteína de Integrasa . 156. SEQ ID NO: 156 secuencia de aminoácido codificada por rcorf100, similar a C-término de pAT 22 Agrobacterium tumefaciens str. C58 (cepa: C58, aislado: Cereon), un COG0582 [L] proteína de Integrasa. 157. SEQ ID NO: 157 eecuencia de ácido nucleico complementaria de pRi2659 que contiene rcorfll5 a través del rcorflld 158. SEQ ID NO: 158 secuencia de aminoácido codificada por rcorf116, probable proteína de captación de potasio, similar al Atu0711 de iAgrobacterium tumefaciens str. C58 y riorfl48 en pRil724 y a gen kup, un pfam02705: K_trans,- proteína traneportadora de potasio K+ . 159. SEQ ID NO: 159 secuencia de aminoácido codificada por rcorf115, similar al riorfl47 en pRil724 y gen y4mC en homólogo del pNGR234a, un gen inducido por vir. 160. SEQ ID NO: 160 secuencia de ácido nucleico complementaria de pRi2659 que contiene rcorfl34 a través del rcorf136. 161. SEQ ID NO: 161 secuencia de aminoácido codificada por rcorf136, probable virCl, similar al riorfl66 en pRil724, proteína reguladora virulencia virA/G, AGR_pTi_18p; VirCl; enlaza a la secuencia de sobremultiplicación adyacente para corregir borde de T-ADN; aumenta el nivel de proceeo del T-ADN. 162. SEQ ID No: 162 secuencia de aminoácido codificada por rcorf135, probable virC2, similar al riorfl65 en pRil724, proteína reguladora de virulencia virA/G que procesa T-ADN. 163. SEQ ID NO: 163 secuencia de aminoácido codificada por rcorf134, proteína hipotética, similar al aa4-122/142 de ISBml transposaea orfA [Brucella euis 1330] (NP 697551) . 164. SEQ ID NO: 164 secuencia de aminoácido codificada por rcorf15, similar a SMa2207, un transportador.de ABC putativo, proteína de enlace ATP [Sinorhizobium meliloti 1021], un COG3842: PotA; sistemas de transporte espermidina/putrescina tipo ABC, componentes de ATPasa [transporte de aminoácido y metabolismo] . 165. SEQ ID NO: 165 secuencia de aminoácido codificada por rcorf17, probable transportador de cucumbopina, similar al riorf34, una proteína hipotética [Agrobacterium rhizogenes] de probable gen transportador de miquimopina. 166. S?Q ID NO: 166 eecuencia de aminoácido codificada por rcorf29, eimilar a riorf57 en pRil724, un homólogo de eutC, cadena ligera amonio-liaea etanolamina. 167. SEQ ID NO: 167 eecuencia de aminoácido codificada por rcorf33, similar al riorfdl en pRil724, hipotético gen de transporte ABC similar a PH0807, pfam00496: SBP_bac_5; proteínas de enlace a soluto extracelular Bacterianas, familia 5. 168. SEQ ID NO: 168 eecuencia de aminoácido codificada por rcorf38, similar al riorf67 en el pR11724, débilmente similar a gen pck, smart00587: CHK; ZnF_C4 dominio abd de HLH que contiene dominio de quinaeae 169. SEQ ID NO: 169 secuencia de aminoácido codificada por rcorf49, similar al riorf79 en pRil724, un homólogo de gen glpK (quinasa de glicerol) , EC 2.7.1.30. 170. SEQ ID NO: 170 secuencia de aminoácido codificada por rcorf65, similar riorf95 en pR11724, eimilar a la región corriente abajo de gen nylA en pOAD2. 171. SEQ ID NO: 171 secuencia de aminoácido codificada por rcorf73, similar a AGR_pTi_225 nucleasa [Agrobacterium tumefaciens str. C58] , un homólogo COG1525 [L] nucleasa de Micrococo (termonucleasa) . 172. S?Q ID NO: 172 secuencia de aminoácido codificada por rcorf75, probable gen traD, proteína de transferencia conjugal similar al riorfllO en PRÍ1724. 173. S?Q ID NO: 173 secuencia de aminoácido codificada por rcorf78, probable gen traF, similar al riorfll3 en pRil724, COG4959: TraF; trayecto secretorio Tipo IV, proteaea TraF [modificación poettranslacional, producción de proteína, trafico y secreción de chaperones / intracelular] . 174. S?Q ID NO: 174 secuencia de aminoácido codificada por rcorfdl, similar al riorfll7 en pRil724, una proteína hipotética o Agrobacterium rhizogenes (cepa: MAFF03-01724) , un cd00093 : HTH_XRE ; Hélice-vuelta-hélice proteínas similares a familia XRE. 175. SEQ ID NO: secuencia de aminoácido codificada por rcorf90, probable gen trbJ similar al riorfl26 en pRil724, Sistema de transferencia Tipo IV requerido para la conjugación de Ri/Ti plásmido, COG5314; la proteína de exclusión de transfer/entrada Conjugal [tráfico intracelular y de eecreción] . 176. SEQ ID NO: 176 eecuencia de aminoácido codificada por rcorf92, probable gen trbD similar al riorfl28 en pRil724; sistema de transferencia Tipo IV requeridp para la conjugación Ri/Ti plásmido. 177. S?Q ID NO: 177 secuencia de aminoácido codificada por rcorf104, similar al riorfl38 en pRil724 y gen gvpl en pHHl, un pfam04079: DUF387; proteína reguladora transcripcional putativa (similar Ypuh) . 178. SEQ ID NO: 178 secuencia de aminoácido codificada por rcorflOd, similar al C-término de riorfl41 en pRil724, una proteína hipotética. 179. SEQ ID NO: 179 secuencia de aminoácido codificada por rcorf113, débilmente similar eobre 79 aa de blr8180 de Bradyrhizobium japonicum USDA 110 (cepa: USDA 110), un COG1760 [E] L-eerina deeaminasa. 180. SEQ ID NO: 180 secuencia de aminoácido codificada por rcorf118, similar a riorfl50 en pRil724, homólogo gen aatA en Rhizobium leguminosarum, pseudogen hipotético que es dividido por desplazamiento de marco. 181. SEQ ID NO: 181 secuencia de aminoácido codificada por rcorf122, probable virB2, similar a riorfl54 en pRil724, sistema de secreción tipo IV requerido para la transferencia T-compleja. 182. SEQ ID NO: 162 secuencia de aminoácido codificada por rcorf124, probable virB4, similar a riorfl56 en pRil724, sistema de secreción tipo IV requerido para la transferencia T-compleja. 183. S?Q ID NO: 183 secuencia de aminoácido codificada por rcorf128, probable vir-B8, similar a riorfl60 en P-RÍ1724, sietema de secreción tipo IV requerido .para la transferencia T-compleja.- 184. SBQ ID NO: 184 secuencia de aminoácido codificada por rcorf130, probable virBIO, similar a riorfl62 en pRil724, sietema de eecreción tipo IV requerida para la transferencia T-compleja. 185. SEQ ID NO: 185 secuencia de aminoácido codificada por rcorf139, probable virD3, similar a riorfl69 en pRil724, regulador virA/G, no requerido para la virulencia, posible factor de rango de anfitrión. 186. SEQ ID NO: 186 secuencia de aminoácido codificada por rcorf141, probable virD5, similar al riorfl71 en pRil724, componente regulado por virA/G de sistema de secreción Tipo IV de virB/D4. 187. SEQ ID NO: 187 secuencia de aminoácido codificada por rcorfl46, similar a Y4rB Rhizobium sp. NGR234. 188. SEQ ID NO: 188 secuencia de nucleótido que codifica cepa Agrobacterium K599 secuencia de flanco T-ADN izquierdo. EJEMPLOS A menos que sea indicada de otra manera, se obtienen los compuestos químicos y reactivos en los Ejemplos se obtienen de "Sigma Chemical Company" (St . Louis, MO) , las endonucleasas de reetricción son de "New England Biolabs" (Beverly, MA) o Roche (Indianapolis, EN), los oligonucleótidos fueron sintetizados por "MWG Biotech Inc." (High Point, NC) , y otras enzimas modificadorae o equipos con respecto a los compuestos bioquímicos y los eneayos biológicos moleculares son de "Clontech" (Palo Alto, CA) , "Pharmacia Biotech" (Piscataway, NJ) , "Promega Corporation" (Madison, Wl) , o "Stratagene" (La Jolla, CA) . Se obtienen materiales para los medios de cultivo de célula de "Gibco/BRL" (Gaithersburg, MD) o "DIFCO" (Detroit, MI) . Las etapas de clonación realizadas para los propósitos de la presente invención, tales como, por ejemplo, hendiduras de restricción, electroforesis en gel de agarosa, purificación de fragmentos de ADN, transferencia de ácidos nucleicos a las membranas de nitrocelulosa y nailon, fragmentos de ADN de enlace, transformación de células E. coli, crecimiento de bacterias, multiplicando de fagos y análisis de secuencia de ADN recombinante, se realizan según lo descripto por Sambrook (1989) . La secuenciación de moléculas de ADN recombinantes es realizada utilizando la secuenciador de ADN por fluoreecencia láser AB? que sigue el método de Sanger (Sanger 1977) a menos que se indique de por otra manera. Los ejemplos siguientes se ofrecen a manera de ilustración y no a modo de limitación. Ejemplo 1: Desarmado de Agrobacterium cepa K599 La cepa Agrobacterium K599 es una bacteria de la tierra que causa la enfermedad de la raíz velluda en muchas plantae dicotiledóneae inclueive la soja. La cepa K599 ha demostrado ser altamente infectiva en las raíces de la soja. La cepa Agrobacterium K599 (depositada bajo número de Acceso NCPPB2659 en el centro británico de almacenamiento NCPPB; www.ncppb.com "National Collection of Plant Pathogenio Bacteria Central Science Laboratory" , Sand Hutton, York Y041 1 LZ Inglaterra) se hizo crecer en el cultivo líquido (medio LB) a 28°C y se realizaron protocolos de extracción de ADN modificados para purificar pRi plásmidos usando el equipo de contructo Grande de "Qiagen" No. de catálogo 12462 para enriquecer la preparación de ADN para el plásmido pRi2659. Las hibridaciones Southern usando sondae del borde derecho (285 bp) o el borde izquierdo (240 bp) se hicieron para verificar la exactitud del mapa de restricción físico de la región de T-ADN de pRi2659 (ver Fig. 6) . Fue determinado que la enzima de restricción Sphi produjo fragmentos aceptables (más grandee que 2 kb de flanco) para uear como regionee homologas para un vector de deleción. Un banco de clon eubgenómico K599 pRi2659 de los fragmentos de Sphl se construyó en pUC19. El ADN enriquecido aislado de cepa Agrobacterium K599 para el plásmido pR12659 fue digerido con Sphl y recorre un 0,d% de gel de agarosa. Las regiones de fragmentos que representan un fragmento de 2.905 bp que contiene el ADN de flanco derecho y un fragmento de 7.498 que contiene el ADN de flanco izquierdo fueron cortadas del gel de agarosa y fueron purificados usando un equipo de extracción de gel QIAquick de Qiagen catálogo No. 28706. Estoe fragmentos de gel purificados fueron ligados en pUC19 para generar un banco de clon subgenómico. La colonia tomada del banco de clones fue sondeada con los fragmentos de borde derecho o borde izquierdo para identificar el clon conteniendo ADN de flanco. Se identificaron dos clones: un fragmento de 2.905 pb que contiene el flanco derecho de ADN y un fragmento de 7.498 pb que contiene el flanco izquierdo de ADN. Cada uno de estos clones fue subclonado y secuenciado adicionalmente usan los cebadores directos e inversos convencionales (SEQ ID NO: 1 y 2, respectivamente) . El caseette de deleción de Agrobacterium usando fragmentos de 2.1 kb fue construido de cada uno de los clones de flanco. Las regiones homologas proveen un amplio espacio para que se produzca la recombinación homologa doble. Un caseette similar fue construido conteniendo el gen de reeietencia a tetraciclina entre los fragmentos RF y LF (ver Fig. 12 para el diagrama de flujo) . Estos constructoe fueron verificadoe en su secue-nc-ia. Se clonaron los cassettes RF/LF y de RF/Tet/LF en una versión modificada de enlazador de pRL278 (SEQ ID NO: 3; Peter Wolk, Universidad Estatal de Michigan) produciendo el vector de plásmido pRL278LF/RF (SEQ ID NO: 23; sin cassette Tet) y vector de plásmido pBPSSH009 (SEQ ID NO: 22; con caseette Tet) , reepectivamente. Eetos vectores permiten una selección eficaz de recombinantes homólogos dobles por la utilización del gen sacB. El agregado de sacarosa a los medios de crecimiento que contienen recombinantes homólogos solamente produce el compuesto tóxico levan. Este compuesto actúa como una selección contadora contra cepas que contienen el plásmido, mientras forzando un cruzamiento doble sobre la resolución del fenotipo de tipo salvaje o la deleción deseada. Los pBPSSH009 -y p-RL278LF/RF, reepectivamente, fueron introducidoe por electroporación en la cepa K599 y fueron eeleccionadoe ueando canamicina 100 µg/mL. Los cruzamientos simples que contienen el plásmido de deleción que se ha integrado en el Ri plásmido fueron recuperados y la selección contadora en sacaroea fue realizada. La eelección de Sacaroea/eacB fue realizada de la manera siguiente: Confirmado (por hibridación Southern) eventos de cruzamiento simples que contienen el vector de resietencia a canamicina con sacB y constructo de deleción se hicieron crecer de noche sin selección para permitir que se produzca la recombinación. Una dilución serie del cultivo fue colocada en placa en medio de selección contador de agar LB que contienen 5% v/v de eacarosa. Despuée de 2 días las colonias que aparecían se hicieron crecer y fue aislado el ADN genómico y fue confirmada la deleción de la región de T-ADN por hibridación Southern. Se aislaron los cruces dobles y la confirmación molecular de la deleción de T-ADN fue confirmada por hibridación Southern (Fig. 6) . La sonda ueada en la hibridación Southern fue la misma que se usó para aislar el fragmento que contiene la región de flanco derecho de pRi2659 anteriormente. Es un fragmento de 200 pb que contiene el borde derecho y la secuencia de flanco corriente arriba y corriente abajo del borde. Para la Southern Blot genómica se digirieron las muestrae de ADN con Sphl y recorren en 0,8% gel de agarosa. Las cepas obtenidas fueron nombradas de la manera siguiente: - cepas Agrobacterium K599 [pRi2659?tet] : Se desarman cepa Agrobacterium K599 SHAOOl y SHA016 a las que les falta su región T-ADN que comprende un cassette de expresión de tetraciclina (tet) (obtenido usando el pBPSSH009) . La cepa Agrobacterium SHAOOl y SHA016 son ambas cepas funcionalmente equivalentes de los tipos resistente a tetraciclina, desarmadoe, ee decir que comprenden el pláemido pRi2659Atet . • - cepa Agrobacterium K599 [pRi2659?] : SHA017 es una cepa Agrobacterium K599 desarmada a la que le falta su región de T-ADN (obtenida usando pRL278LF/RF, también conocido como pBPSSH009b) . Las pruebas funcionales para el síndrome de raíz velluda en los cotiledones de soja (ver más adelante, ?j emplo 2) confirman la pérdida del fenotipo de la enfermedad. Los experimentos de transformación de planta, se realizaron en soja, maíz, tomate y Arabidopsie (ver más adelante) y propiedades no efectivas de planta fueron confirmadas de la cepa desarmada. En todas las especies de planta, la expresión de Beta-glucuronidasa transitoria (GUS) fue detectada. Además, la expresión de GUS estable fue detectada en las diversas especiee de planta incluyendo eoja, maíz y tejidos de tomate. Las plantas de PursuitMR eetable y Arabidopeie reeietente a glufoeinato también fueron recuperadae . El pláemido pSBl supervirulento (Komari 1996) ha sido movilizado en la cepa K599 desarmada y se ha probado su eficacia en la transformación del maíz. Ejemplo 2: Ensayos de raíz velluda. Las semillas de soja (cultivar Williams 82) fueron utilizadas para el ensayo 1 eiguiente. Unos 6 días antes de la inoculación, se esterilizan las semillas de soja. Las semillas sin cortes/fisuras en la superficie son colocadas en una copa estéril. Unas 30 semillas para cada cepa Agrobacterium a ser evaluada fueron utilizadas y cubiertas con 95% de etanol durante un minuto. El etanol fue eliminado y las semillae fueron tratadas con 10% de lava-ndina con 0,0005% Trito?X-10-0 preparados recientemente por 10 min. La lava-ndina se cambia cada 3 minutos. Después la lava-ndina se vierte y las semillas se lavan en agua estéril 4 veces. Unas 10 semillas con colocadas en una placa con 1% agar, fue sellado con ParafilmMR y colocado a 25°C, 16 hr/día de iluminación (70-100 µE/ms) . Inoculación de Agrobacterium para ensayo de raíz velluda: Antes de la inoculación, los porotos de soja germinados fueron colocados bajo una capucha laminar. Un cultivo nuevo de Agrobacterium de noche fue separado del agitador y fue determinado el OD650. Una alícuota de 1 mL fue colocada en un tubo de microfuga eetéril y la Agrobacteria ee precipita a 12.000 rpm durante 3 minutos. El sobrenadante fue eliminado y la Agrobacteria fue resuspendida con los medios de infección (lx salee MS, 3,6% glucosa, 6,9% sacarosa, 100 mg/L mio-inositol , 1,5 mg/L 2,4-D, 1 mg/L de aminoácidos cas, 1 mg/L de tiamina HCl, 0,5 mg/L ácido nicotínico, 0,5 mg/L piridoxina HCl) . El OD65o se ajusta a 1,0. La Agrobacteria fue incubada en los medios de infección por 1 hora antes de la infección para inducir la cascada de gen vir. Sólo los cotiledones verdes fueron cortados de las plantitas y el lado adaxial fue cortado con un escalpelo. Los cotiledones fueron colocados en placa de agar con el lado abaxial para arriba. La superficie cortada de cada cotiledón se inocula con 17 a 20 µL de Agrobacteria. Las placas se sellan con Parafilm y se colocaron a 25°C, con la condición de iluminación 16 hr/día (70-100 µE/m2e) para cocultivo. Tree días después de la inoculación, los cotiledones se transfieren a los medios de selección (lx salee MS, lx vitaminae B5 Gamborgs, 3% sacaroea, lOOmg/L carbinicilina, pH 6,2 con KOH). Las placas fueron selladas y colocadas nuevamente en la misma condición de cultivo. Después de dos semanae pueden deterctarse raíces velludae y pueden ser cosechadas aquellas están creciendo en la superficie de los medios (para las cepas que inducen raíz velluda) . Se colocan las raíces cosechadae en los medios de selección. Despuée de dos a tres semanas adicionales, las líneas de la raíz que están creciendo en los medios de selección son subcultivadae eobre medioe que no comprenden al agente de selección. Las mismae deben eer eubcultivadae cada 4 semanas. Deben cultivareee lae raícee en la oscuridad. Ejemplo 3: crecimiento y preparación de Agrobacterium para transformación de la planta Lae cultivos de Agrobacterium son preparados reuniendo las bacterias que llevan el vector binario adecuado sobre el medio de crecimiento YEP sólido e incubando a 25 °C hasta que las colonias aparezcan (aproximadamente 2 días) . Dependiendo de los genes marcadores seleccionables presentes en el Ri plásmido, el vector binario, y los cromosomas bacterianos, pueden usaree agentes seleccionablee diferentes para la selección del A. tumefaciens y rhizogenes en el medio YEP sólido y líquido. Después desde aproximadamente dos días, una sola colonia es aislada (con un palito estéril) e inoculada en 50 ml de YEP líquido con antibióticos bajo agitación (175 rpm, 25 °C) hasta que se alcanza un OD6so entre 0,8 a 1,0 (aproximadamente 2 días) . Fue preparado y almacenado el abastecimiento de glicerol (15%) para la transformación como un ml de Agrobacterium almacenado en tubos de Eppendorf de 1,5 mL a -70°C. Medio de crecimiento YEP (medio de Agrobacterium) : 10 g/L Bacto-peptona, 5g/L extracto de levadura, 5g/L NaCl, 12g/L agar (Difco), antibióticos apropiados; pH 7,0. ?l día antes de la inoculación del explante, 200 mL de Y?? fueron inoculado con abastecimiento de 5 µL a 3 m-L Agrobac-terium en un frasco de Erlenmeyer de 500 mL. Fue agitado el frasco de noche a 25°C hasta que el ODS50 esté entre 0,8 y 1,0. La Agrobacteria fue noduliz'ada por centrifugación por 10 min en 5.500xg antes de preparar explantes de soja, a 20°C. El nodulo fue resuspendido en el medio CCM líquido a la densidad deseada (OD65o 0,5 a 0,8) y fue colocado a la temperatura ambiente por lo menos durante 30 minutos antes del uso. Medio de CCM líquido (=medio de Cocultivo) : 1/10° salee B5, 1/10° suministro de hierro MS, 3% sacarosa, 20 mM MES, IX vitaminas B5, 200 µM acetosiringona, 0,7 µM de ácido giberélico, 7,5 µM 6-bencil-aminopurina; pH 5,4. Ejemplo 4: Transformación de planta Ejemplo 4a: Transformación de la soja Preparación de plantita y Agrobacterium- Lae eemillae de eoja de varioe cultivaree se esterilizan durante 24 a 48 horas en un gas cloro agregando 3,5 mL de HCl a 100 mL de lavandina (5,25% hipoclorito de sodio) en un desecador con una tapa asegurada firmemente. Después de la esterilización, las semillas fueron extraídas y fueron colocadas en placa aproximadamente 20 semillas sobre el medio de germinación [IX salee mayores B5, IX salee menores B5, IX hierro MSIII, 2% Sacarosa, IX vitaminas B5 , 0 a 5 µM BAP, 0,8% Agar Purificado (Sigma); pH 5,8] en los recipientes de PlarítCon. Las plantitas se hacen crecer en la luz (150 µm2s) hasta que los cotiledones sean verdes, el revestimiendo de la eemilla se ha dividido, y el epicotiledón se ha extendido hasta aproximadamente 0,5 cm de longitud (aproximadamente 7 días) para explantes de hoja y 1 a 4 cm para explantes de plantita. Las cepas Agrobacterium desarmadas K599 (pRi2659?tet) o cepa A. tumefaciensn AGL1 que llevan el vector binario pBPSEW008 [p-PcUBI :: c-gusINT: : t-NOS del pNOS: :c-bar: : t-NOS] (SEQ ID NO: 15) o pBPSMM192b [pAtAhas: :C-csrl-2: :t-AtAHAS t-NOS: :cgusINT: :p-SUPER] (SEQ ID NO: 16) fueron intercalados sobre YEP sólido [10 g/L Bactopeptona (Difco; Becton, Dickinson, y Co., Cockeysville, MD, E.U.A) , 5 g/L extracto de levadura (Difco), 5 g/L NaCl, 50 mg/L canamicina, 1,2% agar granulada (Difco) eólida eólamente, pH 7,0] y se incubó a 25°C durante 2 días. Una sola colonia se escogió con un palito estéril y fue colocada en 50 mL de Y?P líquido con los antibióticos y fue agitada (175 rom) a 25°C por 16 h. Después de alcanzar un OD65o 0,d a 1,0, se realiza y almacena un acumulado de 15% glicerol a menos de 60°C. Un día antes de la inoculación del explante, el acumulado (depende del crecimiento y concentración de Agrobacterium, en cualquier parte se agregaron entre 5 µL a 50 µL de cepa de Agrobacterium más 50mg/L canamicina a medio líquido YEP en un frasco de Erlenmeyer. Los frascoe ee agitaron toda la noche a 25°C haeta que el OD650 alcanzara 0,8. El Agrobacterium fue nodulizado por centrifugación por 10 min en 5.500 xg antee de preparar explantes de soja, a 20°C y resuependido en medio de cocultivo líquido [1/10X salee mayoree B5, 1/10X ealee menoree B5, 1/10X hierro MSIII, IX vitaminae de B5, 3% sacarosa, 20 mM MES, 200 µM acetosiringona, 0,72 µM GA3, 7,5 µM BAP; pH 5,4] a la densidad deseada (por ejemplo OD6so 0,5) e incubada a la temperatura ambiente por 30 min. Preparación e inoculación de explante El explante de hoja: El cotiledón y epicotiledón fueron alejados del hipocotiledón 2 mm debajo del nodo cotiledonario. Para exponer el epicotiledón y hojas unifoliatoe, los cotiledones fueron separadoe entre ei y entoncee el epicotiledón fue separado sobre el nodo cotiledona-rio. Las hojas primarias que cons-ieten en la lámina, pecíolo, y estipulos fueron separadas en el primer nodo cortando cuidadosamente en la base de los estípulos de manera tal que loe merietemos axilares fueran incluidos en el explante. El explante fue seccionado cortando el área entre los estípuloe con un eecalpelo afilado 3 a 5 vecee y todos retoños preformados fureon separdos. Explante de plantita: Los explantes se preparan quitando la mayoría de las raíces en la unión del hipocotiledón/epicotiledón o anteriormente en el hipocotiledón (si el hipocotiledón es muy largo) , un cotiledón y cualquier crecimiento de tejido axilar en este nodo, el epicotiledón justo sobre el nodo primario inclusive la punta apical, y todas las hojas preformadas de primer nodo. El primer nodo es cortado entonces punzando la punta del epicotiledón en dónde los merietemos axilares ee encuentran usando un escalpelo afilado 5 a 10 veces. Despuée de la preparación del explante, loe explantee fueron sumergidos completamente en la suspensión de Agrobacteria por 30 min. Después de la incubación, se mancharon los explantes de hoja sobre el papel de filtro estéril para quitar el exceso de cultivo de Agrobacterium y fueron colocados con el lado cortado en contacto con un papel de filtro de 7 cm redondo que recubre el medio de cocultivo sólido [1/10° X sales mayores B5, 1/10° X sales menores B5, 1/10X hierro MSIII, IX vitaminas B5, 3% Sacarosa, 20 mM MES, 200 µM AS, 0,72 µM GA3, 7,5 µM BAP, (0,825 a 8,25 mM L-cisteína, Sigma, 0 a 1 mM de ditiotrietol , 0 a 1 mM tiosulfato de sodio), 0,5% Agar Purificada; pH 5,4]. Los explantes de plantita fueron transferidos sobre papel de filtro que recubre el medio de cocultivo sin manchar. Este papel de filtro previene el crecimiento excesivo de Agrobacterium en explantes de soja. Se envolvieron cinco placas con Parafilm "M" (American National Can, Chicago, Illinois, E.U.A.). Los explantes de hoja se incubaron por dos días y los explantes de plantita durante 5 días en la oscuridad a 25°C. Selección y regeneración de planta Despuée de la incubación, el Agrobacterium exceeivo fue eeparado lavando los explantes en medio de inducción de retoño líquido [IX sales mayores B5, IX sales menores B5, IX hierro MSIII, IX vitaminas B5, 3% sacaroea, 3 mM MES, 1,0 µM (explante de arbolillo) o 2,5 µM BAP (explante de hoja), 5 µM "Kinetin", 250 mg/l tica-rcilina; pH 5,6] y se eecaron las manchas de explantes de hojas en papel de filtro -estéril para prevenir el daño del agua, sobre todo en la lámina. Luego, se transfirieron aproximadamente 10 explantes de hoja y 5 explantes de plantita sobre el medio de inducción de retoño sólido [0,8% agar purificada (Sigma)] sin selección de glufoeinato durante 7 días. Los explantes de hoja se colocaron en el medio de manera tal la hoja se encuentra perpendicular a la superficie del medio con el pecíolo insertado en el medio y la lámina fuera del medio y los explantes de plantita con el epicotiledón entero en contacto con el medio. Se envolvieron las placas con cinta adhesiva ventilada (3M, St. Paul, Minnesota, E.U.A.) y fueron colocados en una cámara de crecimiento con una temperatura que promedia 25°C bajo ciclo 18 h de luz/6 h oscuridad a 70-100 µE/m2s . Despuée de 7 días, los explantes de hoja fueron transferidos a medio de inducción de retoño con 3,0 mg/L glufosinato y explantes de plantita medio de inducción de brote con 5.0 glufosinate del mg/L. En eete momento, fue coneiderado el deearrollo de nuevo del retoño aen la base del pecíolo en explantes de hoja y en la punta del epicotiledón en el primer nodo en explantes de plantita. Después de 2 eemanae en el medio de inducción de retoño con eelección, loe explantee de hoja fueron tra-neferidoe a medio de elongación de retoño [IX eales mayoree MS, IX eales menores MS, IX hierro MSIII, IX vitaminas B5, 3% sacarosa, 3mM MES, 0,378 mM L-asparígina, 0,775 mM ácido L-piroglutámico, 0,057 µM IAA, 1,44 µM GA3, 2,85 µM trans-zeatin ribosida, 250 mg/L ticarcilina, 0,8% agar purificada (Sigma); pH 5,6] con selección de 3 mg/L de glufosinato para estimular el alargamiento del retoño de parte del retoño. Para explantes de plantita, la paleta del retoño es separada del explante de la punta de epicotiledón y transferida al mismo medio de alargamiento de retoño. Los explantes se transfirieron entonces en el medio SEM fresco cada 3 semanae hasta que los troqueles de explante o los retoños saludables se alargaron. Durante la transferencia, los retoños muertos fueron extraídos y la base del explante en dónde las formas de tejido de callo fueron cortadas para ayudar a facilitar la transferencia de nutriente y agua a los retoños anteriores. Se transfirieron los retoñoe alargados entonces a medio de enraizado ( X sal B5, 1/2X hierro MS, 2% sacaroea, 3 mM MES, 5 µM indol-ácido butírico, 250 mg/L Time-ntin, 0,8% agar Noble; pH 5,6) hasta que las raíces se formaron. El retoño enraizado fue transferido para entonces a suelo (1:1 (p/p) tierra Carolina: mezcla Metro-) en una cámara de crecimiento bajo 20 horae de luz hasta que los terceros trifoliatos ee extendieron. Las plantas se hicieron crecer entonces a la madurez en un invernadero bajo un régimen 1.6 horas de luz/8 horas oscuridad. Ensayo GUS hietoquimico Se evaluaron los explantes de hoja para actividad GUS colocándolos en el manchado histoquímico de GUS [60 mM Na2HP04 (pH 6,0), 8 mM Na2EDTA, 0,8% (v/v) Tritón-x, 1,6% (v/v) dimetiisulfóxido, 20% (v/v) metanol, 0,38 mM K4Fe(CN)6, 1 mM sal X-glucuro CHA (Inalco, Milán, Italia)] durante 1 día a 37°C después que el tejido de hoja fue lavado en 70% (v/v) etanol y clarificado en 95% etanol (Jefferson 1987; Kosugi 1990) . Diseño experimental Para un experimento, se prepararon 40 explantes para inoculación con AGL1 o SHAO16 llevando el pBPSMM192b binario (SEQ ID NO: 16) y se ensayó para la expresión de GUS transitoria 5 días deepuée de cocultivo. ?n un eegu?do experimento con 3 repeticiones, la regeneración de retoño fue probada en un total de 120 explantes inoculados con concentraciones diferentes (ODS5o: 0; 0,125; 0,25; 0,5) de Agrobacte-rium AGLl o SHAO16, ambos pBPSEWOOd de transporte (SEQ ID NO: 15) . En un tercer experimento, se prepararon 120 explantes para inoculación con SHA016 o AGLl, ambos pBPSEWOOS de transporte (S?Q ID NO: 15) , y un subconjunto fue manchada para la expresión de GUS estable 36 días despuée del cocultivo. Las frecuencias de transformación putativas fueron determinadas en un cuarto experimento de ensayado histológico de GUS que mancha en alargar los retoños de explantes de plantita transformados con cepa Agrobacterium SHA01 7 (pSBl) o AGLl, ambos pBPS?OOd de transporte (SEQ ID NO: 15) . Este experimento consistió en 5 fechas de inoculación diferentes. En el primer experimento, ambos A. tumefaciens AGLl y cepan Agrobacterium K599 desarmadas (SHA016) tuvieron éxito transfiriendo T-ADN en el pecíolo del explante de hoja (Fig. 3) . Cuarenta y dos y medio por ciento de explantes infectados con AGLl demostraron focoe GUS+ en las áreas objetivo, mientras SHA016 demostró focos GUS+ en 10% de las áreas objetivo (Tabla 1) . La reducción en expresión de GUS transitoria en estos explantes infectados con SHA016 era principalmente resultado de la muerte de tejido durante el cocultivo. Tabla 1. Capacidad de cepas de Agrobacterium AGLl y SHA016 para infectar explantes de hoja.

En el segundo experimento, la regeneración potencial de explantes inoculados con las diferentes concentraciones de K599 desarmado no difiere significativamente entre si en este estudio. Tabla 2. Regeneración potencial de explantes inoculados con diferentes concentraciones de K599 desarmado.

En el tercer experimento, todos los explantes que se sacrificaron a manchado histoquímico de GUS después de 35 días posterioree a inoculación demoetraron una expreeión de GUS estable en explantes de hoja (Fig. 4) . Un total de 900 explantes de plantita fue preparado en el cuarto experimento en el que se inocularon 288 con AGLl (pBPSEWOOd) y se inocularon 612 con SHA017 (pSBl, pBPSEW008) (Tabla 3) . Bn este estudio, un retoño GUS+ (0,35%) fue identificado como explantes inoculados con AGL y 25 retoños GUS+ independientes (4,1%) fueron identificados como explantes inoculados con SHA017. De éstos, diez de los retoños de tratamiento de SHA017 desarrollaron en plantas TO maduras. ?l análisie Southern de lae diez plantas T0 confirmaron que cada planta era un evento de transformación independiente basado en los modelos de integración de T-ADN en el genoma de planta. La herencia del T-ADN en las descendencias Ti de una línea, 21-2, también fueron confirmadas por la hibridación Southern de ADN genómico de planta a las sondas gus y genes bar (Fig. 15) . • Tabla 3. Producción de retoños gus+ alargados y plantas de explantes de plantita inoculados con cepa de Agrobacterium AGLl o SHA017.

Ejemplo 4b: Transformación de Arabidopsie thaliana. La planta Arabidopsie thaliana (ecotipe Col-0) ee hizo crecer en la tierra haeta que florecieran y se quitaron los tallos primarias para aumentar las flores en los tallos secundarios. La cepa Agrobacterium MP90 (GV3101 (pMP90) ; Koncz y Schell 1966) , SHAOOl y K599 tipo salvaje fueron transformados con los constructoe pBPSEWOOd de interés (SEQ ID NO: 15) y pBPSMM192b (SEQ ID NO: 16) y crecieron en 250 mL de medio líquido LB (lOg/L triptona, 5g/L extracto de levadura, lOg/L NaCl (EM Science) ) hasta que el cultivo alcanza un OD650 de 1,2. Las células bacterianas fueron cosechadas centrifugación (15 minutos, 4.000xg) y fueron resuspendidas en la solución de infiltración (5% sacarosa, 0,05% SILWET L-77 [Lehle Seeds, Cat. No. VIS-02], 0,217% Sales MS [Sigma M5524] ) a un OD650 de 0,8-0,9.

Lae plantae A. thaliana florecientes fueron transformadae entor-cee por el método de inmersión floral (Clough y Bent 1998) con la cepa Agrobacterium transgénica que contiene el vector descripto precedentemente por inmersión durante 10-20 segundoe en la eolución de Agrobacterium. Deepuée lae plantas se guardaron en la cámara de crecimiento hasta que pudieran ser cosechadas las semillas. Las semillae tranegénicae fueron eeleccionadas colocando en la superficie de una placa las semillae eeterilizadas en el medio de crecimiento (4,4g/L sal MS [Sigma-Aldrich] , lg/L MES [Duchefa] , 20g/L sacaroea, 6g/L Phytagar complementado con 5 mg/L glufosinato para las plantas que llevan el marcador de resietencia bar, lOOnM Pursuit para plantas que comprenden un cassette de expresión para el gen AtAHAS, 50 mg/L canamicina para las plantas que llevan marcador de resietencia de nptll, o 0,3 a 30 mM de D-aminoácidos (como se describemás adelante) para plantae que comprenden un caeeette de expresión para gen daol de Rhodotorula gracilis. Se transfirieron las plantas supervivientee a la tierra y crecieron en el invernadero. Una mueetra de plantae eupervivientee fue manchada usando la solución de ensayo GUS (Jefferson 1987) (0,4M NaH2P04-H20 pH7,0, 0,5M EDTA, 0,01% TritonX-100, 250mg/L X-glucuronidasa (Fermentas)) de noche a 37°C y fue observada la expresión de GUS (Fig. 10). Las líneas que contienen un solo sitio de inserción de T-ADN son seleccionadas por análisis estadíetico de eegregación de T-ADN en la población de T2 que germinó en medio que comprende al agente de eelección apropiado. Lae plantae con un solo sitio de T-ADN insertado se hacen crecer y autofertilizan. Los grupos de semillae T3 homozigotos fueron identificados por análisis de segregación de T-ADN en las descendenciae de T3 y fue confirmado por eetar expresando el gen introducido por los análisis del northern blot . Ejemplo 4c : Transformación de Braeeica napus inducida por Agrobacterium. La cepa Agrobacterium K599 desarmada (pRi2659?) transformada con el plásmido de interés (como el pBPSMM192b) se hace crecer en 50 mL del medio YEB (ver Ejemplo 4a) a 28 °C toda la noche. La solución de Agrobacterium fue mezclada con el medio de cocultivo líquido (sal MSB5 concentrada doble (Duchefa) , 30 g /L sacaroea (Duchefa), 3,75 mg/L BAP (6-bencilamino purina, Duchefa), 0,5 g/L MES (Duchefa), 0,5 mg/L GA3 (Ácido Giberélico, Duchefa); pH5,2) hasta que se alcanza un OD650 de 0,5. Los pecíolos de plantas de 4 días de edad de Braseica napue cv. Weetar crecieron en el medio de crecimiento B (sal MSB5 (Duchefa) , 3% sacarosa (Duchefa), 0,8% oxoidagar (Oxoid GmbH); pH 5,-8) fueron cortados. Se sumergen los peciolos durante 2-3 segundos en la solución de Agrobacterium y despuée fueron colocados en el medio sólido para cocultivo (medio de cocultivo complementado con 1,6% Oxoidagar). El cocultivo dura 3 días (a 24 °C y aproximadamente 50 µMol/m2s de intensidad de luz) . Después se transfieren los pecíolos a medio de cocultivo complementado con agente de selección apropiado (18 mg/L canamicina (Duchefa) para plantas que comprende el marcador nptll de canamicina para las plantas que llevan el marcador de resistencia de nptll, o 0,3 a 30 nM de D-aminoácidoe ; como ee deecribe más adelante) para plantas que comprenden un cassette de expresión para gen daol de Rhodotorula gracilis) y 300 mg/L Timentin (Duchefa) . Se incuban los pecíolos transformadoe en el medio de eelección durante cuatro eemanae a 24 °C. Esta etapa fue repetida hasta que los retoños aparezcan. Se transfieren los retoños al medio A6 (sal MS (Sigma Aldrich) , 20 g/L sacarosa, 100 mg/L mio-inositol (Duchefa) , 40 mg/L adeninsulfato (Sigma Aldrich) , 500 mg/L MES, 0,0025 mg/L BAP (Sigma), 5 g/L oxoidagar (Oxoid GmbH), 150 mg/L timetin (Duchefa), 0,1 mg/L IBA (indol ácido butírico, Duchefa); pH 5,8) complementado con agente de selección apropiado (18 mg/L canamicina (Duchefa) para plantas que comprenden marcador de nptll de canamicina para las plantas que llevan el marcador de resietencia de nptll, o 0,3 a 30 mM D-aminoácidoe; como se describe más adelante) hasta que los mismos se alargaran. Los retoños largos son cultivados en el medio A7 (medio de A6 sin BAP) para enraizamiento. Se transfieren las plantas enraizadas a la tierra y se hacen crecer en el invernadero. Ejemplo 4d: Transformación de tomate inducida por Agrobacterium. Germinación de semilla in vitro Se esterilizan las semillae del tomate en 10% de CloroxMR (5,25% hipoclorito de sodio) conteniendo 0,1% Tween 20 por 15 con arremolinamiento. Las semillas esterilizadas se enjuagan 4-5 veces con agua destilada estéril. Deepués de la esterilización, las semillas se tranefieren sobre el medio de germinación [0,25X MS, 7,5 g/L Sacarosa, 0,7% Agar Purificada (Sigma), pH 5,6] en placas Petri 25 x lOOmm. La placa Petri que contiene las semillas fue colocada en la oscuridad durante 2-3 días para conseguir crecimientos uniformes y fue transferida al cuarto de cultivo bajo luz en el cuarto de cultivo (25°C, fotoperíodo de 16/8 horas, intensidad de luz de 70 µE/m2s) . Se uean cotiledonee de plantae de aproximadamente 8 díae de edad para la traneformación inducida por Agrobacterium. Preparación de Agrobacterium Lae cepae Agrobacterium K599 deear adas (SHAOOl) llevando el vector binario pBPSEWOOd [p-PcUBI::c-gusINT: : t-NOS p-NOS :: C-bar :: t-NOS] (SEQ ID NO: 15) o pBPSMM192b [p-AtAhas : : c-csrl-2 : : t-AtAHASpA tNOS::C-guelNT: :p-SUPER] (S?Q ID NO: 16) fueron introducidas sobre YEP sólido [10 g/L Bacto-peptona (Difco; Becton, Dickinson, y Cía., Cockeysville, MD, E.U.A.), 5 g/L de extracto de levadura (Difco) , 5 g/L NaCl, 50 mg/L canamicina, 1,2% agar granulada (Difco) sólido solamente; pH 7,0] y fueron incubadas a 25°C durante 2 días. Una sola colonia fue escogida con un palito estéril y colocada en 50 mL de YEP líquido con los antibióticos y fue agitada (175 rpm) a 25°C por 16 h. Despuée de alcanzar un OD650 0,6 a 1,0, fueron realizadoe grupo de 15% glicerol y almacenaron a menos 80°C. Un día antes de la inoculación del explante, loe grupoe (depende del crecimiento y grupo de concentración de Agrobacte-rium, en cualquier parte entre 5 µL a 50 µL de Agrobacterium máe 50mg/L canamicina ee agregaron a medio YEP líquido en un fraeco de Erlenmeyer. Loe fraecoe ee agitaron toda la noche a 25°C hasta que el OD650 alcanzara 0,8. El Agrobacterium fue nodulizado por centrifugación por 10 min en 5.500 xg antes de preparar explantes de tomate, a 20 °C y resuspendido en medio de cocultivo líquido [1/10X salee mayores B5, 1/10X salee menoree B5, 1/10X hierro MSIII, IX vitaminae B5, 3% eacarosa, 20 mM MES, 200 µM acetosiringona, 0,72 µM GA3, 7,5 µM BAP; pH 5,4] a la densidad deseada (por ejemplo (OD650 0,5) y se incubó a la temperatura ambiente por 30 min.-Preparación de explante Los cotiledones fueron extraídass desde plantas de aproximadamente 8 días de edad y fueron colocados sobre disco Petri estéril. Ambos extremos de los cotiledones fueron extraídos y cortados en la mitad transversalmente, fueron transferidos sobre el papel de filtro estéril hacia abajo el lado adaxial, y colocados hacia el medio precultivado [sal MS y vitaminas, 16 g/L de glucosa, 0,1 mg/L NAA, 1 mg/L BA?, 0,7% agar purificada, pH 5,6] durante dos días en oscuridad a 22°C. -Co-cultivo . El papel de filtro con explantes fue colocado sobre el medio de cocultivo [sal MS y vitaminas, 16 g/L glucosa, 0,1 mg/L NAA, 1 mg/L BAP, 0,7% agar purificada, 150 µM acetosiringona, pH 5,8] y se inoculó con suspensión de Agrobacterium (0,3-0,5 a OD650) durante dos a tres días en la oscuridad a 22 °C-Selección y regeneración de planta. Al fin del tercer día, los explantes fueron colocados hacia debajo el lateral abaxial en el medio de recuperación (IX sal MS y vitaminas, 16 g/L glucosa, 2mg/L zeatina, 0,7% agar purificada, 200 mg/L timentin) durante una semana a 25°C en el cuarto de cultivo (70 µE/m2s) . Deepués de la recuperación, los explantes se transfieren sobre el medio de selección/regeneración (IX sal MS y vitaminas, 30 g/L sacarosa, 2mg/L zeatin, 0,7% agar purificada, 200 mg/L timentin, 50-100 nM Pursuit, pH 5,6) durante 2,5 eemanae. Se cortan brotes de retoño en el callo de los cotiledones y fueron transferidos sobre el medio de alargamiento (IX sal MS y vitaminas, 20 g/L sacaroea, 0,5 mg/L zeatin o 0,25 mg/L IBA, 0,7% agar purificada, 200 mg/L timentin y 50-100 nM Pursuit) durante 2-3 semanae. Los retoños alargados fueron cortados del callo y fueron colocados sobr-e el medio para enraizamiento (IX sal MS y vitaminas, 20 g/L sacaroea, 0,25 mg/L IBA, 0,7% agar purificada, 100 mg/L timentin, 50 nM Pursuit, pH 5,8) durante 2-3 eemanas haeta que loe plántulas están listas para trasplantar a la tierra. Ensayo his'toquímico GUS.- Se evaluaron los explantes de hoja para actividad GUS colocándolos en manchado histoquímico GUS [dO mM Na2HP04 (pH 6,0), d mM Na2EDTAJ 0,8% (v/v) Tritón-X, 1,6% (v/v) dimetiisulfóxido, 20% (v/v) metanol, 0,38 mM K4Fe(CN)6, 1 mM sal X-glucuro CHA (Inalco, Milán, Italia)] durante 1 día a 37°C despuée de lo cual el tejido de la hoja fue lavado en 70% (v/v) etanol y fue clarificado en 95% etanol (Jeffereon y col. 1987, Koeugi y col. 1990). Se obtuvieron lae plántulas de tomate transgénico usando Agrobacterium desarmado cepa K599 (SHAOOl) conteniendo pBPSMM192b (SEQ ID NO: 16) (ver Fig. 5) . Ejemplo 4e: Transformación de Zea mays inducida ppr Agrobacterium. Las semillas de cierto maíz produjeron líneas germinandas o líneas de maíz híbridas, enraizadas, y ee hicieron crecer adicionalmente en invernaderos. Fueron cosechadas las orejas de las plantas de maíz 8 a 14. (promedio 10) días después de la polinización (DA-P) y se aislaron los embriones inmaduros de los mismos. El tiempo para la cosecha varía, dependiendo de las condiciones de crecimiento y variedad de maíz. La longitud óptima de los embriones inmaduros para la transformación es de aproximadamente 1 a 1,5 mm, incluso la longitud del escutelo. El embrión debe ser translúcido, no opaco. Los embriones cortados son recolectados en medio líquido basado en MS (comprendiendo 1,5 mg/L de 2,4-D). La acetosiringona (50 a 100 µM) se agregaron al medio en el mismo momento de la inoculación con Agrobacterium o justo antes del uso para infección de Agrobacterium. Preparación de Agrobacterium: cepa Agrobacterium SHA017 (K599 [pRi2659A] ) transformada con plásmido de interés (pSBl/pBPSMM232 ; este plásmido es un plásmido quimérico que es el resultado de la fusión de pBPSMM232 (SEQ ID NO: 17 [p-ZmUbil : : c-ZmAHASL/Xil2 : : t-ZmAHAS t-NOS: :c-gusINT: :p-ZmUbil] con pSBl (Komari) se hizo crecer en el medio YEP. La suspensión de Agrobacterium fue agitada arremolinadamente en el medio indicado anteriormente (comprendiendo 100 µM medio acetoeiringona preferentemente por 1-2 horae antes de la infección) . - Inoculación / Cocultivo: La suspeneión bacteriana ee agrega al microtubo (placa) conteniendo loe embrionee inmaduros preempapados y permanece a la temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 a 30 minutoe. La suspensión bacteriana en exceso fue eliminada y los embriones inmaduros y bacterias en el medio de residuo fueron transferidoe a un placa Petri. Los embriones inmaduros fueron colocados en el medio de cocultivo con el lado plano hacia abajo (escutelo hacia arriba) . La placa es sellada, e incubada en la oscuridad a 22 °C durante 2-3 días. (Medio de cocultivo: base MS, 1,5 mg/L 2,4-D, 15 µM AgN03, 100 µM acetosíringona) . Alternativamente, loe embriones inmaduros cortados son colocados directamente en el medio de cocultivo con el lado plano (escutelo hacia arriba) . La suspensión celular de Agrobacterium diluida se agrega a cada embrión inmaduro. La placa fue sellada, e incubada en la oecuridad a 22 °C durante 2-3 días. Recuperación: Despuée de cocultivo loe embriones fueron transferidos a los medios de recuperación (basados en MS comprenden 1,5 mg/L 2,4-D, 150 mg/L Timentin) , y se incubaron las placas en la oscuridad a 27°C durant-e aproximadamente 5 a 7 días con el lado escutelo hacia arriba. Selección de callo transformado: Los embriones inmaduros fueron transferidos a los medios de selección (medio de recuperación que comprende además al agente selectivo por ejemplo, D-alanina en una concentración de 0,3 a 30 mM) (escutelo arriba) e incubado en la oscuridad a 27°C durante 10-14 días (Primera selección) . Todos los embriones inmaduros que producen callo variable son subcultivadoe a 2 -3a medio de eelección. En eeta faee, cualquier raíz que ee hubiera formado es eliminada. La incubación ocurre durante 2 semanae bajo lae miemae condicionee para la primera eelección (Segunda selección) . El callo regenerable es cortado del escutelo (el callo regenerable es blanquecino en color, compacto, no turbio y puede tener algunas estructuras como embrión) y fue transferido a 2-3 a medio de selección fresco. Se envuelven las placas e incuban en la oscuridad a 27 °C durante 2 semanas (3a selección puede no ser necesaria para la mayoría de los genotipos, los callos regenerables pueden eer transferidos al medio de regeneración) .

Regeneración de plantas transformadas: El callo prolif-erado (blanquecino formado con estructuras embrionarias) fue cortado de la misma man -ra como la 2a/3 selección y fue transferido a loe medioe de regeneración (como el medio de selección pero sin 2,4-D) . Se envuelven las placas y colocadas en la luz (aproximadamente 2.000 lux) a 25 o 27°C durante 2 semanas, o hasta las estructurae como retoños eetán vieiblee. Ee realizada la transferencia a los medios de regeneración frescoe ei es necesario. Las secciones de callos con retoños regenerados o estructuras como retoños fueron transferidae a un "Phytatray" que contiene medio de enraizamiento y fueron incubadas durante 2 semanas bajo la misma condición como la etapa precedente, o hasta que las plántulas enraizados se desarrollaran. Despuée de 2 a 4 semanas en medio de enraizamiento (medio MS concentrado a la mitad, sin 2,4-D, ningún agente selectivo), loe callos que todavía tienen regiones verdes (pero que no han regenerado las plantitas) se transfieren a "Phytatrays" de enraizamiento freeco. Se tranefieren las plantas enraizadas a tierra Metromix en invernadero y son cubiertas cada una con un domo plástico durante por lo menos 1 semana, hasta que las plantitae ee hubieran establecido. Cuando las plantas alcanan la fase de 3-4 hojas, las mismas se fertilizan con "Oemocote" y entoncee eon rociadae con el agente selectivo (por ejemplo, D-alanina o D-serina) , y se hacen crecer en el invernadero durante otras dos semanas. Las plantas no transgénicas deben desarrollar los síntomae del herbicida o deben morir en eete tiempo. Se trasplantan lae plantae eobrevivientes a macetas de 25,4 cm con MetroMix y 1 cucharita de Osmocote. Ejemplo 5: Purificación, secuenciación y anotación de plásmido pRi2569A. La cepa Agrobacterium SHA017 (Agrobacterium K599 desarmada [pRi2659?] ) se hizo crecer toda la noche en 5 litros de caldo LB a 28°C. El ADN total fue extraído según un protocolo de lisis alcalino normal seguido por extracción de fenol -cloroformo (Sambrook y col. 1989) . El ADN de plásmido pRi2659? fue aislado del ADN total usando electroforesis de gel de campo pulsado (PFGE) , con una disposición CHEFF-DRIII (Bio-Rad. Cat#: 170-3695). El ADN total fue cargado en un gel 1% agarosa certificado por campo pulsado (Bio-Rad Cat . # : 162-0137) en 0,5x solución amortiguadora de TBE (45 mM Tris-borato, 1 mM EDTA) seguido por PFGE a 6 V/cm, con tiempo de conmutación inicial de 1 eegundo y tiempo de conmutación final de 25 eegundoe a 14 °C por 24hrs. Después de electroforesis, las tiras de gel conteniendo la senda de marcador molecular y el borde de senda de muestra de ambos lados del gel fueron cortado, manchado con bromuro de etidio (Sigma) y graficados. Una banda visible resuelta estaba en las tiras de gel y el resto de ADN permaneció en la hendidura. La única banda fue cortada y recuperada usando electroelución según Fu y Dooner (2000) . El ADN recuperado fue utilizado como una plantilla para la amplificación de PCR con cebadores específicos de pRi para confirmar la recuperación de pRi ADN. Se diseñaron los cebadores dentro de las regiones de gen vir conservadae de pRil724 (Acceso de GenBank #AP002086).-cebador virG directo: 5 ' -TACTTCCTCC TCACGCACTC-3 (SEQ ID NO 27) cebador virB inverso: 5' -GCCAGCAATG ATCAAGAATT TGTTT-3 (SBQ ID NO 28) Podrían ser generados fragmentos de pRi por medio de métodos conocidos por los expertos en la técnica, tales como la clonación de disparo. El Ri plásmido prep podría ser digerido individualmente con las diversas enzimas de restricción disponibles comercialmente, tales como BamHl, Sphl, ?coRl , Hindlll (todas disponiblee de New ?ngland Biolabe, Beverly, MA) , y subclonadas en u-n vector tipo pUC y digeridas semejantemente, como pBlueScript (Stratagene, La Jolla, CA) . Entonces, los clones individuales podrían ser secuenciados, y las secuencias individuales armadas en contiguo para generar el mapa de secuencia completo como se describe más adelante. El pRi2659A purificado fue secuenciado según Margulies y col. (2005) y Sanger (1977). La secuencia del vector fue enmascarada usando "crose_match" (Green ® 1994-1999) y loe datoe de eecuencia en bruto limpios fueron ensamblados según Margulies y col. (2005) y CAP3 (Huang y Madan 1999) . El espacio de secuencia restante fue llenado por amplificación de PCR y la secuenciación subeiguiente ueando loe cebadoree siguientes: -cebador directo PCR 6109:-5 ' -TTGGTGCGAC AACTCCTCGG CG-31 (SEQ ID NO 29) cebador inverso PCR 6112: 5 ' -GGTGAGCTCG ATCAGCTTCG GC-3 (SEQ ID NO 30) Se realizaron las reacciones de secuenciación en loe productoe de PCR eegún Sanger (1977) . Pora pulido final, la secuencia del proyecto fue dividida en 100 fragmentoe con cada fragmento que poeee un traslapado de 50 bases que se extienden a su fragmento de conjunción; la secuencia en bruto que es registrada como altamente idéntica a cada fragmento fue agrupada y reensamblada con CAP3 a una elevada rigurosidad. Éstas secuencias ensambladas de acuerdo con cada fragmento fueron ensambladae de nuevo con CAP3 para generar mapas de secuencia pRi2659A (SEQ ID NO: 24) , pRi2659?tet (SEQ ID NO: 25), y pRÍ2659 (SEQ ID NO: 26) en el vector NTI (Invitrogen, Carlsbad CA) . La nueva secuencia pRi2659 fue anotada usando BLASTx a e-10 (Altschul y col. 1997) y datos de proteína GenBank Genpept de versión de realización 148. Ejemplo 6: Proteínas codificadas por pRi2659A La tabla siguiente (Tabla 4) enumera lae proteínae codificadae similarment abrendo marcos de lectura en plásmido pRi2659A (SEQ ID NO: 24) . Se enumeran las proteínas SEQ ID NO (SINo) y una descripción detallada del aminoácido codificado.

Tabla 4: marcos de lectura PRÍ2659? y su proteína S?Q ID NO ('SINo) R?F?R?NCIAS Las referencias enumeradas a continuación y todas las referencias citadas en la presente se incorporan en la presente por referencia hasta la extensión en la cual las miemas complementan, expliquen, provean un antecedente para, o enseñen metodología, técnicas, y/o composiciones utilizadae en la preeente. 1. Abler y col. (1993) "Plant Mol Biol" 22:1031-1038. 2. Atanaesova y col. (1992) "Plant J" 2(3): 291-300. 3. Altschul y col. (1997) "Nucí. Acids Ree . " 1997 25: 3389-3402. 4. Aueubel y col. (1987) "Current Protocols in Molecular Biology", Greene Publishing Assoc. y Wiley Interscience .

. Baerson y La ppa (1993) "Plant Mol Biol" 22 (2) :255-67. 6. Baker y col. (1987) "EMBO J" 6: 1547-1554. 7. Baumlein y col. (1992) "Pla-nt J" 2 (2) : 233 -239 ,-8. Baumlein y col. (1991 a) "Mol Gen Genet" 225 (3) :459-467.- 9. Baumlein y col. (1991 b) "Mol Gen Genet" 225:121-128. 10. Belarmino y col. (2000) "Plant Cell. Rep ." 19:435442. 11. Benfey y col. (1989) "EMBO J." 8:2195-2202. 12. Berger y Kimmel (1987) "Guide to Molecular Cloning Techniquee, Methods in Enzymology", Vol. 152, Academic Prese, hic, San Diego, CA (Berger).-13. Bevan y col. (1984) "Nucí Acid Res" 12,8711-8720. 14. Binding (1985) "Regeneration of Plants, Plant Protoplasts" , págs.21-73, CRC Press, Boca Ratón.- 15. Bruce y col. (1989) "Proc Nati Acad Sci USA" 86:9692-9696. 16. Bueh y Pueppke (1991) "Appl. Environ. Microbiol." 57 (9) : 2468-2472. 17. Bustos y col. (1989) "Plant Cell" 1 (9) : 839-53. - 18. Byrne y col. (1987) "Plant Cell Tiss. Org. Cult." 8: 3-15.-19. Chen y Winans (1991,) "J. Bacteriol ." 173: 1139-1144. 20. Chilton (1977) Cell 11: 263-271. 21. Chilton y col. (1982) "Nature" 295: 432-434. 22. Cho y col. (2000) Planta 210: 195-204. 23. Choi y col. (1995) "Mol Gen Genet" 246:266-268.- 24. Chrietensen y col. (1989) "Plant Mol. Biol . " 12: 619-632 25. Christeneen y col. (1992) "Plant Mol Biol" 18:675-689 2-6. Christou (1995) "?uphytica" 85: 13-27. 27. Chui y col. (1996) "Curr Biol" 6:325-330.- 28. Clough y Bent (1998) "Plant J." 16, 735-743. 29. Comai y col. (1990) "Plant Mol Biol" 15:373381. 30. Combará y col. (1987) "Plasmid" 18, 70-75.- 31. Conceicao y col. (1994) "Plant" 5:493-505.- 32. Costantino y col. (1980) "Gene" 11 (1-2) : 7987. 33. Cushman y col. (2000) "Curr Opin Plant Biol" 3 (2) : 117.24.-34. Dale y Ow (1991) "Proc Nat'l Acad Sci USA" 88:10558-10562. 35. Dandekar y col. (1989) "J Tissue Cult Meth" 12:145.- 36. Dasgupta y col. (1993) "Gene" 133: 301-302. 37. de Block y col. (1937) "EMBO J" 6:2513-2518.- 38. de Bruijn y col. (1996) "Rep-PCR Genomic Fingerprinting of Plant-Aseociated Bacteria and Computer-Assieted Phylogenetic Analyses In: Biology of Plant-Microbe Interaction" ; "Proceedinge of the 8th International Congreee of Molecular PlantMicrobe Interactione" (G. Stacey, B. Mullin y P. Greeehoff, Ede.) APS Preee, 497-502.- 39. De Cleene y De Layk (1976) "Bot. Rev." 42 (4): 389-466. 40. de Framond y col. (1983) "Bio/Technol . " 1: 262-269 41. Deikman y col. (1988) "EMBO J" 7:3315-3320. 42. Deikman y col. (1992) "Plant Physiol" 100:2013-2017. 43. Dellaporta y col. (1988) "In: Chromosome Structure and Function: Impact of New Concepts, 18th Stadler Genetics Symposium", 11:263-282. 44. Dunwell (2000) "J Exp Bot 51 Spec" N?:487-96. 45. Eady y col. (2000) "Plant Cell. Rep." 19: 376381. 46. Ebinuma y col. (2000a) "Proc Nati Acad Sci USA" 94:2117-2121. 47. Ebinuma y col. (2000b) "Selection of Marker-free transgenic plants using the oncogenes (ipt, rol A, B, C) of Agrobacterium as eelectable markers, In Molecular Biology of Woody Plants". Kluwer Academic Publishers. - 48. Eichholtz y col. (1987) "Somatic Cell and Molecular Genetics" 13, 67-76. 49. EP-Al 0 120 516. 50. EP-Al 0 270 615. 51. EP-A1 0 333 033. 52. E-P-Al 0 335 528. 53. EP-Al 0 375 091. - 54. EP-Al 0 388 186.- 55. EP-Al 0 409 625. 56. EP-Al 0 807 836. 57. Ermayanti y col. (1994) "Phytochemistry" 36: 313-317. 58. Evans y col. (1983) "Protoplaete Ieolation and Culture, Handbook of Plant Cell Culture", págs. 124-176, Macmillian Publiehing Company, Nueva York. 59. Farrand y col. (2003) "Int. J. Systematic & Evolutionary Microbiology" 53:1681-1687.- 60. Fedoroff y Smith (1993) "Plant J" 3:273-289. 61. Fiedler y col. (1995) "Biotechnology" (NY) 13 (10) :10901093. 62. Fire y col. (1998) "Nature" 391:806-811. 63. Fraley y col. (1983) "Proc Nati Acad Sci USA" 80:4803.- 64. Franck y col. (1980) "Cell" 21:285-294. 65. Fu y Dooner (2000) "Genome Research" 10:866-873. 66. Gallie y col. (1987) "Nucí Acids Res" 15:8693-8711. 67. Gardner y col. (1986) "Plant Mol Biol" 6:221-228 68. Gatz y col. (1991) "Mol Gen Genetics" 227:229-237 69. Gatz y col. (1994) "Mol Gen Genetice" 243:3238. 70. Gatz y col. (1997) "Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol" 48:89-108. 71. Gelvin y col. (Eds) (1990) "Plant Molecular Biology Manual"; Kluwer Academic Pub-lisher, Dordrecht, Holanda. 72. Gelvin (2003) "Microbiol Mol Biol Rev" 67(1) :16- 37. 73. GenBank Acc. No. AP002086. 74. GenBank Acc. No. J02798. 75. GenBank Acc. No. J05212. 76. GenBank Acc. No. L05934. 77. GenBank Acc. No. M63985. 78. GenBank Acc. No. 009118. 79. GenBank Acc. No. 009119. 80. GenBank Acc. No. 038846, nucleótidos 3862 a 5325 o si nó 5342. •81. GenBank Acc. No. 093215. 82. GenBank Acc. No. X03677. 83. GenBank Acc. No. 217657. 84. Gleave y col. (1999) "Plant Mol Biol." 40(2): 223-35. 85. Goodner y col. (2001) "Science" 294-2323-2328. 86. Goodner y col. (1999) "J. Bacteriol . " 181:5160-5166. 87. Gruber y col. (1993) "Vectors for P.lant Transformation, in METHODS IN PLANT MOLECULAR BIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY"; págs.89-119. 88. Guerrero y col. (1993) "Mol Gen Genet" 224:161- 168. 89. Hadi y col. (1996) "Plant Cell Reports" 15:500- 505. 90. Hajdukiewicz y col. (1994) "Plant Mol Biol" 25:989-994. 91. Hamill y col. (1991) "Plant Cell. Rep." 10: 221-224. 92. Hansen y col. (1994) "Proc. Nati. Acad. Sci. USA" 91:7603-7607. 93. Haseloff y col. (1997) "Proc. Nati. Acad. Sci. USA" 94 (6) -2122-2127;-94. Hayford y col. (1988) "Plant Physiol." 86:1216. 95. Hemalsteens y col. (1980) "Nature" 287:654-656. 96. Hershey y col. (1991) "Mol Gen Genetics" 227:229-237. 97. Hiei y col. (1994) "Plant J" 6: 271-282. 98. Hildebrand (1934) "J Agrie Res" 48: 857-885. 99. Hille y col. (1986) "Plant Mol. Biol." 7:171 (1986) . 100. Hoekema (1985) "In: The Binary Plant Vector System", Offsetdrukkerij Kantere B.V., Al-blaeeerdam, Capítulo V. 101. Hoekema y col. (1983) "Nature" 303:179-181. 102. Holeters y col. (1978) "Mol Gen Genet" 163:181-187. 103. Holtorf y col. (1995) "Plant Mol Biol" 29:637-649. 104. Hood y col. (1986) "J. Bacteriol" 168:1291-1301.- 105. Hood y col. (1993) "Transgenic Res." 2: 208-218,- 106. Hood y col., (1986) "J. Bacteriol . " 168(3): 1283-1290. 107. Hood y col. (1987) "Plant Phyeiol . " 83: 529-534.- 108. Horech y col. (1985) "Science" 227: 1229-1231. 109. Huang y Madan (1999) "Genome Reeearch" , 9: 868-877. 110. Huffman y col. (1984) "J Bacteriol." 157(1) :269-76. 111. Iehida y col. (1996) "Nature Biotech" 745-750. 112. Jahne y col. (1995). "Euphytica" 85: 35-44. 113. Jeffereon (1987b) "Plant Mol. Bio. Rep.", 5:387-405. 114. Jeffereon y col. (1987) "BMBO J" 6:3901-3907. 115. Jones y col. (1987) "Mol. Gen. Genet . " 210:86.- 116. Jóos y col. (1983) "Cell" 32: 1057-1067. 117. Joseffson y col. (1987) "J Biol Chem" 262:12196-12201. 118. Jouanin (1984) "Plasmid" 12:91-102. 119. Jouanin (1986) "Plasmid" 6:124-1 34. 120. Kado (1991) "Crit Rev Plant Sci" 10:1 121. Keane y col. (1970) "Aust. J. Biol. Sci." 23:585-595.- 122. Klee y col. (1987) "Ann Rev Plant Physiol" 38:467-486. 123. Komari y col. (1996) "The Plant Journal" 10 (1) :165-174. 124. Koncz y Schell (1986) "Mol Gen Genet" 204:383-396. 125. Koprek y col. (1999) "Plant J" 19(6): 719-726. 126. Kosugi y col. (1990) "Plant Sci" 70:133-140. 127. Kouchi y col. (1999) "Plant J" 18(2) 121-129. 128. Lahnere (1984) "Plaemid" 11:130-140. 129. Lam and Chua (1991) "J Biol Chem" 266 (26) : 17131-17135. 130. Lam y col. (1984) "Plant Sci. Left." 34:345-352.-131. Last y col. (1991) "Theor. Appl. Genet . " 81, 581- 588. 132. Lawson y col. (1994) "Mol Gen Genet" 245:608-615. 133. Lee y col. (1994) "Plant Mol -Biol" 26:1981-1987.- 134. Leffel y col. (1997) Biotechniques. 23 (5) : 912-8. -135. Lepetit y col. (1992) "Mol. Gen. Genet" 231: 276- 285. 136. Lincoln y col. (1988) "Proc Nati Acad Sci USA" 84:2793-2797. 137. Ling y col. (1998) "Plant Cell Reports" 17: 843-847.- 138. Llob y col. (2003) "Europ J Plant Pathol" 109:381-389. 139. Lohmer y col. (1993) "Plant Cell" 5:65-73. 140. Ludwig y col. (1990) "Science" 247:449. 141. Lysnik y col. (1993) NAR 21:969-975. 142. Maniatis T, Fritsch EF y Sambrook J (1989) "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", 2nd Ed.. Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor (NY) . 143. Marguliee y col. (2005) "Nature" (publicación adelantada en línea) "doi: 10.1038/nature03959 " . 144. Matzke y Chilton (1981) "J. Mol. Appl. Genet." 1: 39-49.-145. Matzke y col. (2000) "Plant Mol Biol" 43:401-415- 146. McCormick y col. (1986) Cell Reporte", 5: 8184.-- 147. McElroy y col. (1990) "Plant Cell 2: 163171 148. McGranahan y col. (1990) "Plant Cell Rep" 8:512. 149. Melchere y col. (2000) "Curr Opin Plant Biol" 3 (2) :147-52. 150. Mett y col. PNAS 90: 4567-4571 (1993). 151. Miki y col. (1993) "Procedures for Introducing Foreign DNA into Plants in METHODS IN PLANT MOLECULAR BIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY"; págs.67-88,-152. Millar y col. (1992) "Plant Mol Biol" Rep 10:324-414. 153. Mol y col. (1990) "FEBS Left" 268 (2) : 427-430. 154. Moloney y col. (1989) "Plant Cell Reports" 8: 238. 155. Moorey col. (1979) "Plaemid" 2(4):617-26. 156. Mozo y Hooykaae (1991) "Plant Mol. Biol . " 16:917-918. 157. Mural y col. (1983) "Science" 23: 476-482. 158. Muraehige y Skoog (1962) "Phyeiol. Plant . " 15, 472-497. (472/473) , 159. -Naested (1999) "Plant J" 18:571-576. 160. Narayanan y col. (1999) "Crop Sci" 39:1680-1686; 161. Neeter (1984) "Ann Rev Plant Physiol" 35:387-413. 162. Nilseon y Oleson (1997) "Phys. Plantarium" 100, 4-63-473. 163. Odell y col. (1985) "Nature" 313:810-812. 164. Odell y col. (1990) "Mol Gen Genet" 223:369-378.- 165. Olhoft y Somers (2001) "Plants Cell Reports" 20:706-711. 166. Often y col. (1984) "Mol. Gen. Genet" 195:159-163. 167. Ow y col. (1986) "Science" 234:856-859. 168. Peralto y Ream (1985) "Proc. Nati. Acad. Sci. (USA)". 169. Perera y col. (1993) "Plant Mol. Biol" 23(4): 793-799. 170. Prasher y col. (1985) "Biochem Biophys Res Commun" 126 (3) : 1259-1268. 171. RandezGil y col. (1995) "Yeaet" 11:1233-1240. 172. Reichel y col. (1996) "Proc Nati Acad Sci USA" 93 (12) :5888-5893.- 173. Rouster y col. (1998) "Plant J" 15:435-440. 174. Saijo y col. (2000) "Plant J" 23(3): 319-327.-175. Saitou y col. (1987) "Mol Biol. Evol" 4: 406-425. 176. Sakamoto y col. (2000) "J Exp Bot" 51 (342) : 81-8. - 177. Sambrook y col. (1989) "Cold Spring Harbor Laboratory Preee; ISBN 0-87969-309-6". 178. Sanger y col. (1977) "Proc Nati Acad Sci USA" 74:5463-5467. 179. Sauer (1998) "Methode" 14 (4) : 381-92. 180. Sawada y col. (1993) "International Journal of Syetematic Bacteriology" 43 (4) : 694-702. 181. Scheeren-Groot y col. (1994) "J. Bacteriol" 176: 6418-6426.- 182. Schena y col. (1991) "Proc Nat'l Acad Sci USA" 88:10421. 183. Schenborn y Groekreutz (1999) "Mol Biotechnol" 13 (1) :29-44. 184. Schlaman y Hooykaas (1997) "Plant J" 11:1377-1385.- 185. Schoffl y col. (1989) "Molecular & General Genetics" 217 (2-3) :246-53. • 186. Sengupta-Gopalan y col. (1985) "Proc. Nat'l Acad. Sci. USA" 82: 3320-3324 (1985). 187. Shah y col. (1986) "Science" 233: 478. 188. Shaw y col. (1984) Nucleic Acide Ree., 12: 6031-6041. 1-89. Sheehy y col. (1983) "Proc Nati Acad Sci USA" 85: 8805-8809.- 190. She'en y col. (1995) ''-Plant J" 8 (5) : 777784 ; 191. She-ridan y col. (1996) "Genetice" 142:1009-1020. 192. Shewmaker y col. (1985) "Virology" 140:281-28-8. 193. Shireat y col. (1989) "Mol Gen Genet" 215(2) :326-331. 194. Silhavy y col. (1984) "Experimente with Gene Fusione-, Cold Spring Harbor Laboratory", Cold Spring Harbor (NY) . 195. Simpeon y col. (1985) "EMBO J" 4:2723-2729. 196. Simpeon y col. (1986) "Plant Molecular Biology" 6:403-415. 197. Sjodahl y col. (1995) Planta 197:264-271. 198. Slightom (1986) "J Biol Chem" 261 : 108-121. 199. Smith y Hood (1995) "Crop Sci." 35(2): 301-309. 200. Smith y Towneend (19071 "Science" 25:671-673. 201. Stalberg y col. (1996) Planta 199:515-519. 202. Stockhaue y col. (1989) "EMBO J" 8 (9) : 2445-2451. -203. Stougaard (1993) "Plant J" 3:755-761. 204. Sun y Callis (1997) "Plant J" 11(5): 1017-1027. 205. Sundaresan y col. (1995) "Gene Develop" 9: 1797-1810. 206. Suzuki (2001) "Gene. Jan" 24 ; 263 (1-2) : 49-58. -207. Svab y col. (1990) "Plant Mol. Biol . " 14:197. 208. Taylor y col. (1985) "Mol Gen Genet" 201:554557.- 209. Tepfer (1984) "Cell" 37:959-967.- 210. Tepfer (1953) "The biology of generic transformaticn of higher plante by Agrobacterium rhizogenee. In: Puhler (ed) Molecular Genetice of the BacteriaPlant Interaction" , páge .248-258. 211. "The Maize Handbook", Capítulo 116, Freeling y Walbot, Ede . , Springer, Nueva York (1994). 212. Tian y col. (1997) "Plant Cell Rep" 16:267-271;-- 213. Tighe y col. (2000) "Int. J. Syst. Evol. Microbiol." 50:787-801. 214. Ti ko y col. (1985) "Nature" 318: 579-582.- 215. Trick y col. (1997) "Plant Tise Cult Biotech" 3:90. 216. Twell y col. (1983) "Sex. Plant Reprod." 6: 217-224. 217. Twell y col. (1989b) "Mol Gen Genet" 217:240-245. 218. Urao y col. (1996) "Plant Mol Biol" 32:571-576. 219. US 4.801.340. 220. US 4.962.028. 221. US 4.975.374. 222. US 4.940.838. 223. US 5.106.739. -224. US 5.187.267. 225. US 5.225.341. 226. US 5.352.605. 227. US 5.416.011. 228. US 5.463.175. 229. US 5.504.200. 230. US 5.565.350. 231. US 5.608.152. 232. US 5.633.435. 233. US 5.683.439. 234. Van Laerebeke y col. (1974) "Nature" 252,169-170. 235. van Wordragen y col. (1992) "Plant Mol. Biol. Rep." 10: 12-36. 236. Vanden Elzen y col. (1985) "Plant Mol Biol." :299- 237. Vasil y col. (1984) "Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, Vol I, II, and III, Laboratory Procedures and Their Applicatione" , Academic Press.-238. Velten y col. (1984) "EMBO J. " 3(12): 2723-2730.- 239. Vemade y col. (1988) "J. Bacteriol. 170: 5822-5829.- 240. Vilaine y col. ("Mol Gen Genet" (1987) 206:17-23)) . 241. Vinueea y col. (1998) "Appl. Envir. Microbiol." 64:2096-2104. 242. Wader y col. (1987) en "TOMATO TECHNOLOGY" 189-198 (Alan R. Liee, Inc.). 243. Wang y col. (1984) "Cell" 38: 455-462. 244. Wang y col. (1987) "Mol. Gen. Genet" 210: 338346. 245. Ward y col. (1993) "Plant Mol Biol" 22:361-366. 246. Waterhouee y col. (1998) "Proc Nati Acad Sci USA" 95:13959-64. 247. Wateon y col. (1985) "?MBO J" 4 (2) : 277-284. 248. Weissbach y Weissbach (1989) "Methods for Plant Molecular Biology", Academic Prese. 249. White y Nester. (1980) "J Bacteriol." 144(2): 710-20. 250. White (1982) "Proc Nati Acad Sci USA" 79:3193-3197. 251. White (1983) "Nature" 301:348-350. 252. White (1985) "J Bacteriol" 164:33-44. 253. White y col. (1980) "J. Bacteriol." 141:1134-1141 254. Willmitzer (1982) "Mol Gen Genet" 186:16-22. 255. Wilmink y col. (1992) "Plant Cell Rep" 11:76-80.- 256. Wilmink y col. (1992) "Plant Cell Rep." 11:76-80. 257. Wirawan IGP y ' M Kojima (1996) "Biosci. Biotechnol. Biochem. 60:50-53.- . 259. WO 00/26388.! 260. WO 00/44395. 261. WO 00/44914. 262. WO 00/49035; 263. WO 00/58484. 264. WO 00/63364. 265. WO 00/68374; 266. WO 02/00900. 267. WO 03/0601331 268. WO 03/08596.! 269. WO 84/02913.- 270. WO 91/13980. 271. WO 91/13991J 272. WO 92/16635. 273. WO 93/01294.- 274. WO 93/07278. 275. WO 93/21334. 276. WO 93/21334. 277. WO 94/02620. 278. WO 94/21794. 279. WO 95/15389. 280. WO 95/19443. 281. WO 95/23230. . 283. WO 97/41228; 284. WO 98/18940. 285. WO 98/22593. 286. WO 98/45456. 287. WO 98/45461. 288. WO 99/16890., 289. WO 99/32619.1 290. WO 99/53050; 291. WO 00/26388, 292. WO 84/02913. l 293. WO 92/16635 J 294. WO 95/15389.' 295. Yadav y col. (1982) "Proc. Nati. Acad. Sci. USA" 79:6322-6326., 296. Yeo y col. (2000) "Mol Celle" 10(3):263-8. 297. Young y col. (2001) "Int. J. Sys. Evol. Microbiol." 51:89-103. 298. Young y col. (2003) "Int. J. Systematic & Evolutionary Microbiology" 51:89-103. • 299. Zambryski (1992) "Ann. Rev. Plant. Phyeiol. Plant Mol. Biol." 43: 465-490, 300. Zambryeki y col. (1983) "EMBO J." 2(12): 2143-2150, I 301. Zupan y Za bryeki (1995) "Pla-nt P.hyeiol ." 107 1041-1047. 302. Zupan y col. (2000) "Plant J" 23 (1) : 11-28.'

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un método para producir una célula de planta tranegénica caracterizado por que comprende lae etapas de : * a) proveer bacterias de una variante de cepa no patógena, transgénica de Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) o de un derivado de dicha cepa, en donde dicha variante de cepa es capaz de infectar células de planta pero carece de lae propiedadee que inducen fenotipo de raíz velluda y en donde dicha variante de cepa comprende además un T-ADN transgénico, y b) cocultivar una célula de planta con las bacterias, y; ' c) aislar o seleccionar células de planta que comprenden integrado establemente en su genoma dicho
T-ADN transgénico.! 2. Un método para producir una planta transgénica caracterizado por que comprende las etapae de:" . a) proveer bacterias de una variante de cepa no patógena, tranegénica de Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) o de un derivado de dicha cepa, en donde dicha variante de cepa es capaz infectar las células de planta pero carece de las propiedades que inducen fenotipo de raíz velluda y en donde dicha variante de cepa comprende además un T-ADN transgénico, y-b) cocultivar una planta, célula de planta o tejido de planta con las bacterias, y-c) aislar o seleccionar y, opcionalmente, regenerar plantas que comprenden integrado establemente en su genoma al T-ADN transgénico. -
3. El método de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2 , caracterizado por que dichas variantes de cepa no patógena son capaces infectar células de planta, inducir la transferencia del T-ADN en las células de planta, e inducir la ineerción de T-ADN en el genoma de la planta, pero carecen de lae propiedadee que inducen fenotipo de raíz velluda.
4. El método de acuerdo con cualquiera de reivindicación 1 a 3, en donde el derivado de cepa de Agrobacterium K599 (NCPPB2659) es una bacteria patógena de planta, nacida de la tierra, caracterizada por que posee una secuencia intergénica rARN 16S-23S que comprende por lo menos un motivo de secuencia seleccionado del grupo que consiste de motivoe de eecuencia deecriptoe por SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, y 14.
5. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que dicha variante de cepa no patógena comprende una variante de plásmido no patógeno de Ri-plásmido pRi2659 o de un derivado de dicho plásmido.
6. El método de acuerdo con la reivindicación 5, caracterizado por que la variante de plásmido no patógena comprende por lo menos una secuencia seleccionada del grupo de secuencias descripto por-a) secuencias que comprenden una secuencia descripta por SEQ ID NO: 24, o una secuencia de por lo menos 100 nucleótidos consecutivoe de la secuencia descripta por SEQ ID NO: 24, y-b) eecuencias que tienen una identidad de secuencia de por lo menos 90% respecto a una secuencia como la deecripta por SEQ ID NO: 24 o una eecuencia de por- lo menoe 1000 nucleótidoe consecutivos de la secuencia descripta por SEQ ID NO: 24, y, c) secuencias que producen hibridación bajo las condiciones equivalentes a enlace o hibridación a 68 °C en una solución que coneiste en 5x SSPE, 1% SDS, 5x reactivo de Denhardt y 100 µg/mL de ADN de esperma de salmón denaturalizado seguido por lavado en una solución que comprende 0,1 x SSPE, y 0,1% SDS a 68°C a una sonda que consiste en por lo menos 100 nucleótidos consecutivoe de un eecuencia como la descripta por S?Q ID NO: 24 o una secuencia complementaria a la miema. --
7. ?l método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado por que dicha célula de planta, tejido de planta, o planta se deriva de una planta seleccionada del grupo de plantas monocotiledóneas, plantas dicotiledóneas, y plantas gimnospermae .
8. ?l método de acuerdo con la reivindicación 7, caracterizado por que dicha planta es de un género seleccionado del grupo que consiete de Medicago, Lycopereicon, Braeeica, Cucumie, Solanum, Juglane, Gossypium, Malue, Vitie, Antirrhinum, Populus, Fragaria, Arabidopsis, Picea, Capsicum, Chenopodium, Dendranthema, Pharbitis, Pinus, Pisum, Oryza, Zea, Triticum, Triticale, Sécale, Lolium, Hordeum, Glycine, Pseudoteuga, Kalanchoe, Beta, Helianthue y Nicotiana. -
9. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicacionee 1 a 8, caracterizado por que dicho T-ADN tranegénico comprende por lo menoe un gen marcador eeleccionable expreeable en planta.
10. Una eecuencia de nucleótido aielada seleccionada del grupo de secuencias descrito por-a) secuencias que comprenden una secuencia descripta por S?Q ID NO: 24, o una eecuencia de por lo menoe 100 nucleótidos consecutivos de la secuencia descripta por S?Q ID NO: 24, y-b) secuencias que tienen una identidad de eecuencia de por lo menoe 90% reepecto a una secuencia como la descripta por SEQ ID NO: 24 o una secuencia de por lo menoe 1.000 nucleótidos consecutivos de la secuencia descripta por SEQ ID NO: 24, y, c) eecuenciae de hibridación bajo lae condiciones equivalentes a enlace o hibridación a 68 °C en una solución que coneiste en 5x SSPE, 1% SDS, 5x reactivo de Denhardt y 100 µg/mL de ADN de esperma de salmón denaturalizado eeguido por lavado en una eolución que comprende 0,1 x SSPE, y 0,1% SDS a 68°C a una eonda que coneiste en por lo menos 100 nucleótidos c'onsecutivoe de una secuencia como la descripta por SEQ ID NO: 24 o una secuencia complementaria a la misma.
11. Una variante de no patógena de plásmido pRi2659 o de un derivado de dicho Ri-plásmido, caracterizada por que dicha variante de plásmido provee las funciones requeridas para la infección de célula y la transformación de la planta, pero carece de las secuencias que causan el fenotipo de raíz velluda.
12. La variante de pláemido no patógena de acuerdo con la reivindicación 11, caracterizada por que ee descripta por una secuencia de nucleótido de acuerdo con la reivindicación 10.
13. La variante de plásmido no patógena de acuerdo con la reivindicación 11 ó 12, caracterizada por que el derivado codificando una proteína virD2 posee una secuencia de aminoácido identificada por lo menoe en 85% con la eecuencia descripta por S?Q ID NO 112.
14. La variante de pláemido no patógena de acuerdo con la reivindicación 11 ó 13, caracterizada por que dicha variante comprende las secuencias requeridas para la infección de célula de planta y transformación del pRi2659 nativo, patógeno o su derivado pero carence de secuencias de T-ADN que inducen el fenotipo de raíz velluda. -
15. La variante de plásmido no patógena de acuerdo con cualquiera de lae reivindicaciones 11 a 14, caracterizada por que la totalidad del T-ADN inclueive loe bordee es anulado del plásmido nativo.
16. La variante de plásmido no patógena de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15, caracterizada por que el T-ADN anulado corresponde a la secuencia deecripta por la eecuencia deede aproximadamente la base 538 hasta aproximadamente la baee 15.519 de la SEQ ID NO: 4 o desde aproximadamente la base 3.644 hasta aproximadamente la base 18.577 de la SEQ ID NO: 26.
17. La variante de plásmido no patógena de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 11 a 16, caracterizada por que dicha variante de plásmido induce hibridación bajo condiciones de elevada rigurosidad equivalentes a enlace o hibridación a 68 °C en una solución que consiete en 5x SSPE, 1% SDS, 5x reactivo de Denhardt y 100 µg/mL de ADN de eeperma de ealmón denaturalizado seguido por lavado en una solución que comprende 0,lx SSPE, y 0,1% SDS a 68°C con la totalidad del Ri-plásmido pRi2659, nativo, patógeno de la cepa Agrobacterium K599 patógena (NCPPB 2659) , pero no induce hibridación bajo condiciones de elevada rigurosidad con la eecuencia deede aproximadamente la baee 538 hasta aproximadamente la baee 15.519 de la eecuencia deecripta por SEQ ID NO: 4 o deede aproximadamente la base 3644 hasta aproximadamente 18577 base de la secuencia deecripta por SEQ ID NO: 26.
18. La variante de plásmido no patógena de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17, en donde el derivado de un plásmido pRi2659 puede inducir transferencia de T-ADN deede una bacteria nacida de la tierra a una célula de planta caracterizada por que además a) posee una identidad de secuencia de por lo menos 90% con el ADN que codifica al plásmido nativo pRi2659, comprendido en cepa Agrobacterium K599 (NCPPB2659) o' i b) hibridación bajo condiciones de elevada riguroeidad equivalentee a enlace o hibridación a 68 °C en una solución que consiete en 5x SSPE, 1% SDS, 5x reactivo de Denhardt y 100 µg/mL de ADN de esperma de ealmón denaturalizado eeguido de lavado en una solución que comprende 0 , lx SSPE, y 0,1% SDS a 68°C con el plásmido pRi2659 nativo. ¡
19. Un T-ADN transgénico flanqueado por lo menos por un borde de T-ADN del plásmido pRi2659 de Agrobacterium rhizogenes, caracterizado por que dicho T-ADN transgénico no comprende ninguna secuencia que cause un fenotipo de raíz velluda.
20. El T-ADN transgénico de acuerdo con la reivindicación 19, caracterizada por que dicha secuencia de borde es descripta por la SEQ ID NO: 18 ó 19.
21. El T-ADN tranegénico de acuerdo con la reivindicación 19 ó 20, caracterizado por que dicho- T-ADN transgénico comprende por lo menos un cassette de expresión para conferir a la planta una característica agronómicamente valiosa o por lo menos un gen marcador que permite la eelección y/o identificación de plantae, célulae de planta o tejidoe transformados.1
22. Un vector transgénico caracterizado por que comprende un T-ADN transgénico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21.*
23. Una célula u organismo no humano caracterizado por que comprende una secuencia ' de nucleótido de acuerdo con la reivindicación 10, una variante de plásmido no patógena de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 11 a 18, un T-ADN transgénico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21, o un vector transgénico de acuerdo con la reivindicación 22.!
24. La célula u organismo no humano de acuerdo con la reivindicación 23, caracterizada por que dicha célula u organismo se selecciona del grupo que consiete de bacteriae, levadurae, plantas, mamíferos, e insectoe.
25. La célula u organismo no humano de acuerdo con la reivindicación 23 o 24, caracterizada por que dicha célula u organismo es una bacteria nacida naturalmente del género Rhizobiaceae .
26. Una variante de cepa no patógena de cepa Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) o un derivado de la misma, caracterizada por que dicha variante de cepa es capaz de infectar las células de planta pero carece de las propiedades que inducen fenotipo de raíz velluda. -
27. Una variante de cepa transgénica,, no patógena de Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) o de un derivado de dicha cepa, caracterizada por que dicha variante de cepa es capaz infectar las células de planta pero carece de las propiedades que inducen fenotipo de raíz velluda y en donde dicha variante de cepa comprende además un T-ADN transgénico.1
28. La variante de cepa no patógena de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 26 o 27, caracterizada por que dicha variante de cepa no patógena es capaz de infectar células de planta, inducir la transferencia de T-ADN en las células de planta, e inducir la ineerción del T-ADN en el genoma de la planta, pero carece de las propiedades que inducen fenotipo de raíz velluda.
29. La variante de cepa no patógena de acuerdo con cualquiera de lae reivindicacior.es 26 a 28, en donde el derivado de cepa Agrobacterium K599 (NCPPB2659 ) es una bacteria patógena de planta, nacida de la tierra, caracterizada por que posee una secuencia intergénica de rAR? 16S-23S que comprende por lo menos un motivo de secuencia seleccionado del grupo que consiste de motivos de secuencia descriptoe por lae SEQ ID ?O : 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, y 14.: i
30. La variante de cepa no patógena de acuerdo con cualquiera de lae reivindicacionee 26 a 29, caracterizada por que dicha variante de cepa comprende una variante de pláemido no patógena del Ri-pláemido pRi2659 o de un derivado del mismo.'
31. La variante de cepa no patógena de acuerdo con la reivindicación 30, caracterizada por que la variante de plásmido no patógena es igual a la definida en cualquiera de las reivindicaciones 11 a 18. :
32. La variante de cepa no patógena de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 25 a 31, caracterizada por que además comprende una o más ca-racterísticae seleccionadas del grupo que consiste de presencia de genes virA o virG mutantes o quiméricos o la presencia de plásmidos supervirulentos .
33. Un polipéptido caracterizado por que comprende una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiete de: , I a) una eecuencia como la deecripta por SEQ ID NO: 112 o eecuencias de por lo menos 200 aminoácidoe coneecutivos de la misma/ b) secuenciae que tienen una identidad de secuencia de por lo menos 85% con respecto a la secuencia descriptae por SEQ ID NO: 112.
34. Un polipéptido caracterizado por que comprende una eecuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiete de :¡ , a) una eecuencia como la deecripta por cualquiera de SEQ ID NO: 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 126, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 136, 137, 139, 140, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 154, 155, 156, 158, 159, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 16'8, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, o 187 o secuencias de por lo menos 200 aminoácidos consecutivoe de la miema, b) eecuenciae que tienen una identidad de eecuencia de por lo menoe 85% con reepecto a una secuencia descripta por cualquiera de SEQ ID NO: 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 126, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 136, 137, 139, 140, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 154, 155, 156, 158, 159, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, ó 187.
35. Una secuencia de nucleótido caracterizada por que comprende una secuencia que codifica un polipéptido de acuerdo con la reivindicación 33 ó 34.-Nota de T. : Siguen 675 páginas de listado de secuencia. Lo que antecede es traducción fiel al idioma español de la solicitud de patente en idioma inglés que tuve a la vista y a la cual me remito, en la ciudad de Buenos Aires, a los días del mes de septiembre de 2005. RESUM?N La presente invención se refiere a variantes de cepa "desarmadas" de cepa de Agrobacterium K599 (NCPPB 2659) , las variantes de plásmido "desarmadas" del Ri-plásmido pRi2659, y derivados de los mismos, y métodos que utilizan estas cepas y plásmidos en la transformación de la planta.