MX2007001077A

MX2007001077A - Derivados de 3-ariltioindol-2-carboxamida y analogos de los mismos como inhibidores de caseina quinasa ie.

Info

Publication number: MX2007001077A
Application number: MX2007001077A
Authority: MX
Inventors: William Arthur Metz Jr
Original assignee: Aventis Pharma Inc
Priority date: 2004-08-19
Filing date: 2005-08-19
Publication date: 2007-04-17
Also published as: CN101039666A; KR20070045264A; BRPI0514397A; IL181155A0; PL1791537T3; WO2006023590A1; PT1791537E; DK1791537T3; CA2577511A1; JP2008510704A; DE602005017162D1; JP4931814B2; US8008340B2; ES2334927T3; RU2007109813A; EP1791537A1; ATE445396T1; SI1791537T1; EP1791537B1; RU2391098C2

Abstract

La presente invencion se refiere a metodos para tratar a un paciente que padece enfermedades o trastornos del sistema nervioso central asociados con la perturbacion del reloj circadiano humano que se mejoran mediante la inhibicion de la actividad de la caseina quinasa Ie tales como, por ejemplo, trastornos del estado de animo incluyendo trastornos depresivo mayor, trastorno I y trastorno bipolar II, y trastornos del sueno incluyendo trastornos del sueno del ritmo circadiano tales como, por ejemplo, trastorno de sueno por cambio de turno, sindrome de desfase horario, sindrome de la fase del sueno avanzada y sindrome de la fase del sueno retardada, que comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapeutica eficaz de un compuesto de formula I.

Description

- DERIVADOS DE 3-ARILTIOINDOL-2-CARBOXAMIDA Y ANÁLOGOS DE LOS MISMOS COMO INHIBIDORES DE CASEÍNA QUINASA le ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN 1. Campo de la Invención Esta invención se refiere a métodos de uso de 3-ariltioindol-2-carboxamidas, 3-ariltioindol-2-carboxamidas 5-sustituidas y análogos relacionados como inhibidores de la fosforilación de caseína quinasa le humana de la proteína del reloj humano Period (hPER) que, por lo tanto, son útiles como agentes farmacéuticos, especialmente en el tratamiento y/o prevención de enfermedades y trastornos asociados con el sistema nervioso central. 2. Descripción de la técnica Muchos organismos, que varían desde células sencillas hasta el ser humano, presentan variaciones rítmicas en el comportamiento. Cuando el ritmo persiste en condiciones constantes y tiene un periodo de aproximadamente un día, dependiendo un poco de la temperatura, el ritmo se denomina "circadiano" (Konopka, R.J. y Benzer, S. (1971 ) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 68, 2112-2116).

Los ritmos circadianos se generan por marcapasos biológicos endógenos (relojes circadianos) y están presentes en la mayoría de los - - organismos vivos, incluyendo seres humanos, hongos, insectos y bacterias (Dunlap, J.C. (1999) Cell 96, 271-290; Hastings, J.W. et al. Circadian Rhythms, The Physiology of Biological Timing. En: Prosser, C.L. ed. Neural and Integrative Animal Physiology, New York: Wiley-Liss (1991 ) 435-546; Aliada, R. et al. (1998) Cell 93, 791-804; Kondo et al. (1994) Science 266, 1233-1236; Crosthwaite, S.K. et al. (1997) Science 276, 763-769; Shearman, L.P. et al. (1997) Neuron, 19, 1261-1269). Los ritmos circadianos se automantienen y son constantes incluso en condiciones de oscuridad total, pero pueden sincronizarse (entrar) en un nuevo régimen día/noche por señales ambientales tales como ciclos de luz y temperatura (Pittendrigh, C.S. (1993) Annu. Rev. Physiol., 55, 16-54; Takahashi, J. S. (1995) Annu. Rev. Neurosci. 18, 531-553; Albrecht, U. et al. (1997) Cell, 91 , 1055-1064). Los relojes circadianos son esenciales para el mantenimiento de los ritmos biológicos y regulan una diversidad de comportamientos circadianos tales como fluctuaciones diurnas en el comportamiento, ingesta de alimentos y ciclo de sueño/vigilia, así como cambios fisiológicos tales como secreción de hormonas y fluctuaciones en la temperatura corporal (Hastings, M. (1997) Trends Neurosci. 20, 459-464; Reppert, S.M. y Weaver, D.R. (1997) Cell 89, 487-490).

Ciertos estudios genéticos y moleculares de la mosca de la fruta Drosophila melanogaster condujeron al esclarecimiento de algunos de los genes implicados en los ritmos circadianos. Estos estudios condujeron al - reconocimiento de una ruta que está muy auto-regulada y compuesta por un bucle de retroalimentación negativa basada en la transcripción/traducción (Dunlap, J.C. (1999) Cell, 96, 271-290; Dunlap, J.C. (1996) Annu. Rev. Genet. 30, 579-601 ; Hall, J.C. (1996) Neuron, 17, 799-802). Los elementos nucleares del oscilador circadiano en Drosophila comprenden dos proteínas estimuladoras dCLOCK/dBMAL (CICLE) y dos proteínas inhibidoras dPERIOD (dPER) y dTIMELESS (dTIM). dCLOCK y dBMAL heterodimerizan formando el factor de transcripción dCLOCK/dBMAL que promueve la expresión de dos genes que se denominan Drosophila Period (dper) y Drosophila Timeless (dtim). Finalmente, se transcriben los ARNm de estos genes para producir las proteínas dPER y dTIM, respectivamente. Durante varias horas, los productos proteicos dPER y dTIM se sintetizan y fosforilan en el citoplasma, alcanzan un nivel crítico y forman heterodímeros que se translocan al núcleo. Una vez en el núcleo, dPER y dTIM funcionan como reguladores negativos de su propia transcripción, disminuye la acumulación de dPER y dTIM y comienza de nuevo la activación de dper y dtim por dCLOCK/dBMAL (Zylka, M.J. et al. (1998) Neuron 20, 1103-1110; Lowrey, P.L. et al. (2000) 288, 483-491 ). Se ha demostrado que el gen dper es un elemento necesario para controlar los ritmos circadianos en el comportamiento de eclosión de adultos (la aparición de la mosca adulta desde la pupa) y la actividad locomotora (Konopka, R.J., & Benzer, S. (1971 ) Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 68, 2112-2116). Algunas mutaciones de sentido erróneo (missense) del gen per pueden acortar (perS) o alargar (perL) el periodo de ritmos circadianos, mientras que algunas - - mutaciones sin sentido (nonsense) (per0) producen una arrítmicidad en sus comportamientos (Hall, J.C. (1995) Trends Neurosci. 18, 230-240).

En mamíferos, los núcleos supraquiasmáticos (SCN) del hipotálamo anterior son el sitio de un reloj biológico principal (como revisión, véase Panda et al, (2002) Nature 417, 329 - 335; Reppert, S. M. y Weaver, D. R. (1997) Cell 89, 487-490). El reloj SCN se embarca en el día de 24 horas por el ciclo diario de luz-oscuridad, actuando la luz a través de rutas de retina a SCN tanto directas como indirectas (Klein, D.C. et al. (1991 ) Suprachiasmatic Nuclei: The Mind's Clock, Oxford Uníveristy Press, New York). En los SCN de roedores, se han identificado y clonado tres genes Per, y se denominan Perl de ratón (mPerl), mPer2 y mPer3. Los productos proteicos de estos genes de mamífero (mPER1 , mPER2, mPER3) comparten varias regiones de homología entre sí, y cada gen Per de mamífero codifica una proteína con un dominio de dimerización de proteínas denominado PAS (PAS es un acrónimo de las tres primeras proteínas PER, ARNT y SIM que se ha descubierto que comparten este dominio de dimerización funcionalmente importante) que es muy homólogo al dominio PAS de PER de insecto. Todos los niveles de proteína y de ARN mensajero (ARNm) de Per oscilan durante el día circadiano y están implicados íntimamente en la regulación tanto positiva como negativa del reloj biológico, pero sólo mPER1 y mPER2 oscilan en respuesta a la luz (Zylka, M.J. et al. (1998) Neuron 20, 1103-1110,; Albrecht, U. et al., (1997) Cell 91 , 1055-1064; Shearman, L.P. et al. (1997) Neuron 19, - - 1261-1269). Se clonó el homólogo de mamíferos del gen tim de Drosophila y se denominó mTim. Sin embargo, no hubo indicios de interacciones mPER-mTIM análogas a las observadas en Drosophila, y se sugirió que las interacciones PER-PER pueden haber reemplazado la función de dímeros PER-TIM en las tareas moleculares del reloj circadiano de mamíferos (Zylka, M.J. et al., (1998) Neuron 21 , 1115-1122). Otra posibilidad es que los ritmos en PER1 y PER2 forman bucles de retroalimentación negativa que regulan la actividad transcripcional de la proteína Clock (a través de sus dominios PAS) que, a su vez, dirige la expresión de uno o los dos genes Per (Shearman, L.P. et al. (1997) Neuron 19, 1261-1269).

El objeto de muchas investigaciones ha sido la comprensión de los papeles de los tres genes mPer en el reloj de mamífero. La homología estructural de las proteínas mPER con dPER condujo a la expectativa de que las proteínas mPER funcionaran como elementos negativos en el bucle de retroalimentación de mamíferos. Se cree que PER1 está implicada en la regulación negativa de su propia transcripción en el ciclo de retroalimentación, pero pruebas recientes indican que está implicada en la ruta de entrada (Hastings, M.H. et al. (1999) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 26, 15211-15216). PER2 es la proteína mejor caracterizada, y los ratones mutantes en mPER2 (mPer2Brdm1), que carecen de 87 restos en la porción carboxilo del dominio de dimerización PAS, tienen un ciclo circadiano acortado en situaciones normales de luz-oscuridad, pero muestran arritmicidad en la oscuridad completa. La - mutación también disminuye la expresión oscilante tanto de mPerl como de mPer2 en los SCN, indicando que mPer2 puede regular mPerl ¡n vivo (Zheng, B. et al. (1999) Nature 400, 169-173). Se ha demostrado que PER2 tiene una función doble en la regulación de los "engranajes" del reloj central (Shearman, L.P. et al. (2000) Science 288, 1013-1018). En ese estudio, se demostró que PER2 se unía a proteínas del criptocromo (CRY) y se translocaba al núcleo, donde CRY regulaba negativamente la transcripción dirigida por los complejos transcripcionales positivos CLOCK y BMAL1. Tras la entrada en el núcleo, PER2 iniciaba el brazo positivo del reloj regulando positivamente la transcripción de BMAL1 por un mecanismo aún no identificado. La función de la PER3 se comprende mal; sin embargo, en ratones en los que se ha inactivado mPer3, se observa un ligero efecto sobre la actividad circadiana y, por lo tanto, se ha sugerido que PER3 está implicada en las rutas de salida de control circadiano (Shearman, L.P. et al. (2000) Mol. Cell. Biol. 17, 6269-6275). Se ha notificado que las proteínas mPER interaccionan entre sí y que mPER3 puede servir como transportador de mPER1 y mPER2 para llevar estas proteínas al núcleo, lo cual es crítico para la generación de señales circadianas en el SNC (Kume, K. et al. (1999) Cell 98, 193-205; Takano, A. et al. (2000), FEBS Letters, 477, 106-112).

Se ha postulado que la fosforilación de los componentes del reloj circadíano regula la duración del ciclo. La primera prueba genética de que una proteína quinasa específica regula el ritmo circadiano de Drosophila fue el - - descubrimiento del nuevo gen doubletime (dbt), que codifica una proteína serina/treonina quinasa (DBT) (Price J.L. et al. (1998) Cell 94, 83-95; Kloss B. et al. (1998) Cell 94, 97-107). Las mutaciones de sentido erróneo en el dbt producen una alteración del ritmo circadiano. Los alelos Nuil de dbt producen una hipofosforilación de dPER y arritmia.

Las quinasas de mamífero más relacionadas con DBT son la caseína quinasa le (CKIe) y la caseína quinasa ld (CKld). Se ha demostrado que estas dos quinasas se unen a mPER1 , y varios estudios han demostrado que CKIe fosforila tanto la PER1 de ratón como la humana (Price J.L. et al. (1998) Cell 94, 83-95; Kloss B. et al. (1998) Cell 94, 97-107). En un estudio realizado con células de riñon embrionario humano 293T cotransfectadas con hCKIe de tipo silvestre, hPER1 mostró un aumento significativo en la fosforilación (demostrado por un cambio en la masa molecular). En este estudio, la hPER1 fosforilada tenía una vida media de aproximadamente doce horas, mientras que la hPER1 no fosforilada permanecía estable en la célula durante más de 24 horas, lo que sugería que la fosforilación de hPER1 conduce a una reducción de la estabilidad de la proteína (Kessier, G.A. et al. (2000) NeuroReport, 11 , 951-955). Otro estudio también demostró que las consecuencias de la fosforilación de PER1 por hCKIe incluyen tanto la retención citoplásmica como la inestabilidad de la proteína (Vielhaber, E. et al. (2000) Mol. Cell. Biol. 13, 4888-4899, Takano, A. et al. (2000) FEBS Letters 477, 106-112).

- - No ha habido ninguna razón bioquímica para elegir entre CKIe o CKld como posible regulador en mamíferos hasta que Lowery et al. [(2000) Science 288, 483-491] descubrieron que en el hámster dorado sirio, mutaciones semidominantes en CKIe (mutación tau, Ralph, M.R. y Menaker, M. (1988) Science 241 , 1225-1227) produjeron un acortamiento del día circadíano tanto en animales heterocigotos (22 h) como homocigotos (20 h). En este caso, los niveles reducidos de actividad CKIe dieron como resultado menor fosforilación de PER con niveles presumiblemente mayores de proteína PER cítoplásmica que conducían a una mayor entrada nuclear y una alteración de los ciclos circadianos. Más recientemente, se ha sugerido que CKld también puede estar implicada en la regulación de la ritmicidad circadiana por medio de la modificación postraduccional de las proteínas del reloj de los mamíferos hPER1 y hPER2 [Camacho, F. et al., (2001 ) FEBS Letters 489(2,3), 159-165]. De esta manera, los inhibidores, incluyendo inhibidores de molécula pequeña, de la CKIe y/o CKld de mamífero o de humano proporcionan un medio nuevo para el cambio de fase o para restablecer el ritmo circadiano. Como se describe más adelante, la alteración del ritmo circadiano puede encontrar utilidad para el tratamiento de trastornos del sueño o del estado de ánimo.

La patente de Estados Unidos 6.555.328 B1 describe métodos de selección en las células para identificar compuestos que alteran los ritmos - - circadianos basados en un compuesto de ensayo que altera la capacidad de la caseína quinasa 1e humana y/o la caseína quinasa 1d humana para fosforilar las proteínas del reloj humano hPER1 , hPER2 y hPER3, Por ejemplo, se cotransfectan células HEK293T con hCKIe y Perl o Per2. Para evaluar la relevancia de la inhibición de CKIe y de los inhibidores de CKIe en la biología circadiana, se desarrolló un ensayo celular de alta producción (33rd Annual Meeting, Soc. for Neurosci., 8-12 de noviembre de 2003, Abstract números 284.1 , 284.2, y 284.3) en el que podía controlarse el ritmo circadiano de una manera rutinaria. El ensayo consiste en fibroblastos Rat-1 que expresan de manera estable una construcción Mper1-luc, con lo que se permite la determinación de la activación rítmica del promotor de Mperl en células vivas por medio de la estimación repetida de la actividad lucíferasa a través del control de la producción de luz durante varios días. El formato de medición repetida del ensayo permite una evaluación precisa y reproducible de los efectos dependientes de la concentración de inhibidores de CKIe sobre el ritmo circadiano y proporciona el nexo para relacionar la inhibición de CKIe con la alteración del ritmo circadiano.

Los trastornos del sueño se han clasificado en cuatro categorías principales que incluyen trastornos del sueño primarios (disomnias y parasomnias), trastornos del sueño asociados con trastornos médicos/psiquiátricos y una categoría propuesta de trastornos del sueño que no pueden clasificarse debido a que no se dispone de suficientes datos. Se cree que los trastornos del sueño primarios se producen por anormalidades en los sistemas intrínsecos responsables de la generación de sueño-vigilia (sistema homeostático) o la temporización (sistema circadiano). Las disomnias son trastornos en el inicio o mantenimiento del sueño e incluyen insomnio primario, hipersomnia (somnolencia excesiva), narcolepsia, trastorno del sueño relacionado con la respiración, trastorno del sueño del ritmo circadiano y disomnias no especificadas de otra manera. El insomnio primario se caracteriza por la persistencia (>1 mes) en la dificultad de iniciar y mantener el sueño o de mantener un sueño reconstituyente. Las dificultades en el sueño asociadas con el insomnio primario ocasionan molestias o un malestar significativo, incluyendo irritabilidad durante el día, pérdida de atención y concentración, fatiga y malestar, y deterioro del estado de ánimo y la motivación. Los trastornos del sueño del ritmo circadiano incluyen síndrome de desfase horario, trastorno del sueño por cambio de turno, síndrome de la fase de sueño avanzada y síndrome de la fase de sueño retrasada (J.

Wagner, M.L. Wagner y W.A. Hening, Annals of Pharmacotherapy (1998) 32, 680-691 ). Los individuos en un paradigma de sueño forzado demuestran un gran desvelo, como un porcentaje del tiempo de sueño, a ciertos periodos del día circadiano (Dijk y Lockley, J. Appl. Physiol. (2002) 92, 852-862). Generalmente se ha aceptado que con la edad hay un avance en nuestro ritmo circadiano de sueño y a menudo esto tiene como resultado un sueño de menor calidad (Am J Physiol Endocrinol Metab. (2002) 282, E297-E303). De esta manera, el sueño que sucede fuera de la fase circadiana puede sufrir en - - términos cualitativos y cuantitativos, como se ilustra adicionalmente por alteraciones del sueño por cambio de turno y de desfase horario. La alteración del reloj circadiano humano puede causar trastornos del sueño y los agentes que modulan la ritmicidad circadiana, tales como un inhibidor de CKIe y/o CKld, pueden ser útiles para el tratamiento de trastornos del sueño y particularmente de trastornos del sueño del ritmo circadiano.

Los trastornos de los estados de ánimo se dividen en trastornos depresivos ("depresión unipolar"), trastornos bipolares, y dos trastornos basados en la etiología que incluyen el trastorno del estado de ánimo debido a un estado médico general y el trastorno del estado de ánimo inducido por sustancias. Los trastornos depresivos se subclasifican como trastorno depresivo mayor, trastorno distímico y trastorno depresivo no especificado de otra manera. Los trastornos bipolares se subclasifican como trastorno bipolar I y trastorno bipolar II. Se ha observado que el "modelo estacional" de especificación puede aplicarse a trastornos depresivos mayores que son recurrentes y al modelo de episodios depresivos mayores en el trastorno bipolar I y el trastorno bipolar II. Anergia importante, hipersomnio, comer con exceso, ganancia de peso y un deseo vehemente de hidratos de carbono a menudo caracterizan los episodios depresivos mayores que se producen con un patrón estacional. No está claro si un patrón estacional es más probable en un trastorno depresivo mayor que es recurrente o en trastornos bipolares. Sin embargo, entre los trastornos bipolares parece que un patrón estacional es - - más probable en trastornos bipolares II que en trastornos bipolares I. En algunos individuos, el inicio de episodios maníacos o hipomaníacos también parece estar asociado a una estación particular. El modelo estacional de tipo invernal parece variar con la latitud, la edad y el sexo. La prevalencia aumenta con latitudes mayores, las personas más jóvenes tienen mayor riesgo de padecer episodios depresivos invernales y las mujeres constituyen de 60% a 90% de las personas con el modelo estacional. El trastorno afectivo estacional (conocido generalmente como SAD por sus iniciales en inglés: seasonal affective disorder), un término utilizado generalmente en la bibliografía, es un subtipo de trastorno del estado de ánimo que en el Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders IV (DSM-IV) (American Psychiatric Association: "Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders\ Cuarta Edición, Text Revisión. Washington, DC, American Psychiatric Association, 2000) se denota por la expresión "con modelo estacional" cuando describe un modelo estacional de episodios depresivos mayores en el trastorno bipolar I, trastorno bipolar II o trastorno depresivo mayor recurrente (E. M. Tam et al., Can. J. Psychiatry (1995) 40, 457-466). En DSM-IV se describen las características y diagnóstico de los trastornos depresivos, trastorno depresivo mayor, episodio depresivo mayor, trastorno bipolar I, trastorno bipolar II y los efectos estacionales.

Los pacientes que sufren trastornos depresivos mayores, incluyendo SAD que se caracteriza por episodios depresivos recurrentes - - típicamente en invierno, han mostrado que responden positivamente a terapia con luz (Kripke, Journal of Affective Disorders (1998) 49(2), 109-117). El éxito del tratamiento con luz brillante en pacientes con SAD y depresión mayor produjo la propuesta de varias hipótesis para explicar el mecanismo subyacente de acción del efecto terapéutico de la luz. Estas hipótesis concluyeron con la "hipótesis del ritmo circadiano" que sugiere que el efecto antidepresivo de la luz brillante podría asociarse con un cambio de fase del marcapasos circadiano con respecto al sueño (E. M. Tam et al., Can. J. Psychiatry (1995) 40, 457-466). Confirmando la asociación entre la terapia luminosa y el ritmo círcadiano, la terapia luminosa clínicamente eficaz en los trastornos depresivos mayores produce un cambio concomitante en la fase circadiana y la eficacia clínica de la terapia luminosa parece depender de la capacidad de desplazamiento de fase de la terapia luminosa (Czeisler et al., The Journal of Physiology (2000) 526 (Parte 3), 683-694; Terman et al., Arch. Gen. Psychiatry (2001 ) 58, 69-75). Además, se ha demostrado que la terapia luminosa acelera y aumenta la eficacia del tratamiento farmacológico de trastornos depresivos mayores (Benedetti et al., J. Clin. Psychiatry (2003) 64, 648-653). De esta manera, sería de esperar que la inhibición de la caseína quinasa le y/o la caseína quinasa ld produjera un desplazamiento de fase circadiano y tal inhibición representa una monoterapia o terapia combinada potencial clínicamente eficaz para trastornos del estado de ánimo.

Se debe señalar que la perturbación del sueño es un síntoma de - - criterio para muchos trastornos psiquiátricos (W. V. McCall, J. Clin. Psychiatry (2001 ) 62 (supl. 10), 27-32). Las alteraciones del sueño son una característica común de los trastornos depresivos y el insomnio es una alteración del sueño notificada con frecuencia en caso de depresión, que se produce en más de 90% de los pacientes deprimidos (M.E. Thase, J. Clin. Psychiatry (1999) 60 (supl. 17), 28-31 ). La evidencia acumulada sostiene una patogénesis común para el insomnio primario y el trastorno depresivo mayor. Se ha propuesto la hipótesis de que la hiperactividad del factor de liberación de corticotropina (CRF) (debido a una predisposición genética o posiblemente estrés prematuro) y el estrés inducen un proceso que conduce a alteraciones del sueño exageradas y prolongadas, y finalmente a un insomnio primario. El ritmo circadiano en la secreción de CRF en condiciones no estresantes puede intervenir en la expresión normal de sueño-vigilia (G.S. Richardson y T. Roth, J. Clin Psychiatry (2001 ) 62 (supl. 10), 39-45). De esta manera, los agentes que modulan la ritmicidad circadiana, por ejemplo, por inhibición de la caseína quinasa le y/o la caseína quinasa ld, pueden ser útiles para el tratamiento de trastornos depresivos debido a los efectos sobre la secreción del CRF.

Todas las referencias mencionadas anteriormente en este documento se incorporan como referencia en su totalidad.

De esta manera, es un objeto de esta invención proporcionar métodos de uso de 3-ariltioindol-2-carboxamidas, 3-ariltioindol-2- - - carboxamidas 5-sustituidas y análogos relacionados como inhibidores de la fosforilación de caseína quinasa le humana de la proteína del reloj humano Period (hPER) que, por lo tanto, son útiles como agentes farmacéuticos, especialmente en el tratamiento y/o prevención de enfermedades y trastornos asociados con el sistema nervioso central. Este objetivo y otros objetivos se hacen evidentes a partir de la discusión detallada de la invención siguiente.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN Por lo tanto, de acuerdo con la práctica de esta invención, se proporcionan métodos para inhibir la actividad de la caseína quinasa le humana y la fosforilación de la proteína del reloj humano Period (hPER) para el tratamiento de enfermedades o trastornos del sistema nervioso central asociados con la alteración del reloj circadiano humano tales como, por ejemplo, trastornos del estado de ánimo incluyendo trastorno depresivo mayor, trastorno bipolar I y trastorno bipolar II, y trastornos del sueño incluyendo trastornos del sueño del ritmo circadiano tales como, por ejemplo, trastorno del sueño por cambios de turno, síndrome de desfase horario, síndrome de la fase del sueño avanzada y síndrome de la fase de sueño retrasada, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I.

Por consiguiente, una amplia modalidad de la invención se - - refiere a un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad o trastorno que mejora por la inhibición de la actividad de la caseína quinasa le que comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I: donde X es H, Cl, F, Br, NO2, CN, OR2, NR2R2, HNSO2-alquilo C1-3, o NHCO-alquilo C1-3; Y es -S(O)n- o -O- donde n es 0, 1 ó 2; R1 es 1 ) arilo, sin sustituir o sustituido con uno o más de: a) alcoxi C1-5, b) OH, c) halógeno, d) NR2R2, o e) alquilo C1.5, sin sustituir o sustituido con uno o más de: i) OH o ii) alcoxi C?-5; 2) heterociclo, sin sustituir o sustituido con uno o más de: a) alquilo C1-5, sin sustituir o sustituido con uno o más de: i) OH o ii) alcoxi C-?-5, b) alcoxi C1-5, c) OH, d) halógeno, 0 e) NR2R2; 3) alquilo C1.5, sin sustituir 0 sustituido con uno 0 más de: a) alquilo C?-5, b) alcoxi C1-5, c) OH, o d) arílo, sin sustituir 0 sustituido con uno 0 más de i) alquilo C1-5, ii) alcoxi C?-5, iii) OH, iv) halógeno, 0 v) NR2R2; Z es 1 ) C(=O)NR2R3 o 2) C(=O)R4; R2 es hidrógeno o alquilo C1-3; R3 es hidrógeno, alquilo C?_5, o cicloalquílo C3_6; - - R4 es 1 -piperidinilo, 1-pirrolidinilo, 1-piperazinilo o 4-morfolinilo, sin sustituir o sustituido con uno o más de: 1 ) alquilo C?-5, 2) alcoxi C?-5, 3) OH, 4) halógeno, o 5) NR2R2; o un estereoisómero, un enantiómero, un racemato o un tautómero de dicho compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Otra modalidad de la presente invención se refiere a un método para inhibir la actividad de la caseína quinasa le en un paciente que comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, un enantiómero, un racemato o un tautómero de dicho compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Como se usa en este documento, "estereoisómero" es un término general usado para todos los isómeros de moléculas individuales que únicamente difieren en la orientación de sus átomos en el espacio. El término estereoisómero incluye isómeros de imagen especular (enantiómeros), mezclas de isómeros de imagen especular (racematos, mezclas racémícas), - - ¡sómeros geométricos (cis/trans o E/Z) e isómeros de compuestos con más de un centro quiral que no son imágenes especulares entre sí (diastereoisómeros). Los compuestos de la presente invención pueden tener centros asimétricos y aparecer en forma de racematos, mezclas racémicas, diastereoisómeros individuales o enantiómeros, o pueden existir en forma de isómeros geométricos, incluyéndose todas las formas isoméricas de dichos compuestos en la presente invención.

Como se usa en este documento, "R" y "S" se usan como se usan comúnmente en la química orgánica para indicar una configuración específica de un centro quiral. El término "R" (rectus) se refiere a aquella configuración de un centro con una relación de las prioridades de los grupos en el sentido de las agujas del reloj (de mayor a menor) cuando se mira del enlace hacia el grupo de menor prioridad. El término "S" (siniestro) se refiere a aquella configuración de un centro quiral con una relación de prioridades de los grupos en el sentido contrario al de las agujas del reloj (de mayor a menor) cuando se ve desde el enlace hacia el grupo de menor prioridad. La prioridad de los grupos se basa en reglas de secuencia en las que la prioridad se basa en primer lugar en el número atómico (en orden de número atómico decreciente). Una lista y un análisis de las propiedades se incluye en Stereochemistry of Organic Compounds, Ernest L. Eliel, Samuel H. Wilen y Lewes N. Mander, editores, Wiley-lnterscience, John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, 1994.

Además del sistema (R)-(S), el sistema D-L más antiguo también puede utilizarse en este documento para indicar la configuración absoluta, en especial con respecto a los aminoácidos. En este sistema, una proyección Fischer de fórmula se orienta para que el carbono número 1 de la cadena principal esté arriba. El prefijo "D" se usa para representar la configuración absoluta del isómero en el que el grupo funcional (determinante) está en el lado derecho del carbono del centro quiral y "L" aquel del isómero sobre el que se encuentra a la izquierda.

Como se usa en este documento, el término "tautómero" o "tautomería" se refiere a la coexistencia de dos (o más) compuestos que difieren únicamente uno de otro en la posición de uno (o más) átomos móviles y en la distribución de los electrones, por ejemplo, tautómeros o tautomería ceto-enólíca.

Como se usa en este documento, el término "alquilo" se refiere a un grupo de hidrocarburo alifático, saturado, de cadena lineal o ramificada, que tiene de uno a cinco átomos de carbono, e incluye metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, terc-butilo y grupos similares.

Como se usa en este documento, el término "alcoxi" se refiere a un sustituyente monovalente que consiste en una cadena alquilo lineal o ramificada que tiene de uno a cinco átomos de carbono unida a través de un átomo de oxígeno del éter y que tiene su valencia libre unida desde el oxígeno del éter, e incluye metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxí, sec-butoxi, terc-butoxi y grupos similares.

Como se usa en este documento el término "cicloalquilo C3-6" se refiere a una estructura de anillos de hidrocarburo monocíclicos, saturados, que contiene de tres a seis átomos de carbono e incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciciohexilo y similares.

Como se usa en este documento, el término "arilo" o "Ar" se refiere a cualquier anillo de carbonos estable monocíclico, bicíclico o tricíclico de hasta siete miembros en cada anillo, donde al menos un anillo es aromático y está sin sustituir o sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados entre el grupo que consiste en hidroxi, alcoxi C?-5, halógeno, - NH2, -NH(alquilo C?-3), -N(alquilo 01.3)2, y alquilo C?- sin sustituir o sustituido con uno o más de OH o alcoxi C1.5. Los ejemplos de "arilo" o "Ar" incluyen fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo y bifenilo. El término "ahl-(alquilo C1-5)" incluye 4-metilfenilo, 2-metilfenilo, fenilmetil(bencilo), feniletilo, p-metoxíbencilo, p- fluorobencilo y p-clorobencilo.

Como se usa en este documento, el término "acilo" se refiere a un grupo de hidrocarburo alifático, saturado, lineal o ramificado, que tiene de - - uno a seis átomos de carbono unido a un resto carbonilo (C=O) y que tiene su valencia libre unida desde el resto carbonilo. El término "acilo" incluye acetilo, propionilo, butirilo, isobutirilo y similares.

Como se usa en este documento, el término "heterociclo" o "heterocíclico" se refiere a un anillo heterocíclico monocíclico estable de 5 a 7 miembros o bicíclico estable de 8 a 11 miembros que está saturado o insaturado, y que consiste en átomos de carbono y de uno a tres heteroátomos seleccionados entre el grupo que consiste en N, O y S, y donde los heteroátomos nitrógeno y azufre pueden estar opcionalmente oxidados, y el heteroátomo nitrógeno puede estar opcionalmente cuaternizado, e incluyendo cualquier grupo bicíclico en el que cualquiera de los anillos heterocíclicos mencionados anteriormente está condensado con un anillo de benceno. El anillo heterocíclico puede unirse en cualquier heteroátomo o átomo de carbono que dé como resultado la creación de una estructura estable. Los ejemplos de tales elementos heterocíclicos incluyen piperidinilo, piperazinilo, 2-oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, 2-oxopirrolídinilo, 2-oxoaze- pínilo, azepinilo, pirrolilo, pirrolidinilo, pirazolilo, pirazolidinilo, imidazolilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazínilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isoxazolilo, isoxazolídinilo, morfolinilo, tiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, quinuclidinílo, isotiazolidinilo, indolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, bencimidazolilo, tiadiazolilo, benzopiranilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, furilo, tetrahidrofurilo, benzofuranilo, tetrahidropiranílo, tienilo, - - benzotienilo, tiamorfolinilo, tiamorfolinilsulfóxido, tiamorfolinilsulfona y oxadiazolilo.

Como se usa en este documento, el término "halógeno", "hal" o "halo" se refiere a un miembro de la familia de flúor, cloro, bromo o yodo.

Cuando cualquier variable (por ejemplo, arilo, heterociclo, R1, R2, R3, R4, X, Y, Z, etc.) aparece más de una vez en cualquier constituyente o en la fórmula I de esta invención, su definición en cada caso es independiente de su definición en cualquier otro caso. Además, la combinaciones de los sustituyentes y/o variables se permiten únicamente si las tales combinaciones dan como resultado compuestos estables.

Como se usa en este documento, el término "tratar", "para tratar" o "tratamiento" se refiere a: (i) prevenir una enfermedad, trastorno o estado para que no se produzca en un paciente que pueda estar predispuesto a la enfermedad, trastorno y/o estado, pero que aún no se le ha diagnosticado que lo tenga; (ii) inhibir una enfermedad, trastorno o estado, es decir, detener su desarrollo; o (iii) aliviar la enfermedad, trastorno o estado, es decir, provocando la regresión de la enfermedad, trastorno y/o estado.

- Como se usa en este documento, el término "paciente" se refiere a un animal de sangre caliente tal como un mamífero que padece una enfermedad, trastorno o afección particular. Se entiende explícitamente que las cobayas, perros, gatos, ratas, ratones, caballos, vacas, ganado, ovejas y seres humanos son ejemplos de animales dentro del alcance del significado del término.

Como se usa en este documento, el término "enfermedad" se refiere a una dolencia, malestar o a una interrupción, suspensión o trastorno de funciones, sistemas u órganos corporales.

Como se usa en este documento, el término "trastorno" se refiere a una perturbación de la función, de la estructura o de las dos que se produce como resultado de un fallo genético o embriológico en el desarrollo, o de factores exógenos tales como intoxicación, lesión o enfermedad.

Como se usa en este documento, el término "estado" se refiere a un estado de existencia, salud o capacidad física.

Como se usa en este documento, el término "profilaxis" se refiere a la prevención de una enfermedad.

- - Como se usa en este documento, la expresión "trastorno del sueño", "trastornos del sueño" o "perturbaciones del sueño" se refiere a insomnio.

Como se usa en este documento, el término "insomnio" se refiere a la incapacidad de dormir en ausencia de impedimentos externos, tales como ruido, luz brillante, etc., durante el periodo en el que debería producirse normalmente el sueño, y la incapacidad de dormir puede variar en grado desde inquietud o sueño alterado a un acortamiento de la longitud normal del sueño o una vigilia absoluta. El término "insomnio" incluye insomnio primario, insomnio relacionado con un trastorno mental, insomnio inducido por sustancias e insomnio del ritmo circadiano que es el insomnio debido a un cambio en el programa normal de sueño-vigilia (cambios, trastorno del sueño por cambio de turno, desfase horario o síndrome de desfase horario, etc.).

Como se usa en este documento, la expresión "insomnio primario" significa dificultad para iniciar el sueño, para mantener el sueño o para tener un sueño reconstituyente, que no se debe a un trastorno mental o a los efectos fisiológicos de la administración o interrupción de ciertas sustancias (insomnio inducido por sustancias).

Como se usa en este documento, la expresión "trastorno del - - sueño del ritmo circadiano" incluye el desfase horario o síndrome de desfase horario, trastornos del sueño por cambios de turno, síndrome de la fase de sueño avanzada y síndrome de la fase de sueño retrasada.

Como se usa en este documento, la expresión "cantidad inhibidora eficaz de un compuesto" o "cantidad inhibidora eficaz de la caseína quínasa le de un compuesto" significa suficiente compuesto como para que esté biodisponible por medio de la vía de administración apropiada para tratar a un paciente que padece una enfermedad, trastorno o estado susceptible de dicho tratamiento.

Como se usa en este documento, la expresión "una cantidad terapéuticamente eficaz" significa una cantidad de un compuesto que es eficaz en el tratamiento de la enfermedad, trastorno o estado indicados.

Como se usa en este documento, la frase "alargamiento del periodo del ritmo circadiano" se refiere al aumento del intervalo entre acontecimientos seminales en un proceso que se produce regularmente con una frecuencia de aproximadamente una vez cada 24 horas.

Como se usa en este documento, la frase "acortamiento del periodo del ritmo circadiano" se refiere a la reducción del intervalo entre acontecimientos seminales en un proceso que se produce regularmente con - - una frecuencia de aproximadamente una vez cada 24 horas.

Como se usa en este documento, la expresión "sal farmacéuticamente aceptable" pretende aplicarse a cualquier sal, tanto si ya se conoce como si se descubre en el futuro, que se usa por un especialista en la técnica que es una sal de adición orgánica o inorgánica no tóxica que es adecuada para su uso como una sustancia farmacéutica. Las bases ilustrativas que forman sales adecuadas incluyen hídróxidos de metales alcalinos o alcalinotérreos tales como hidróxidos de sodio, potasio, calcio o magnesio; amoniaco y aminas alifáticas, cíclicas o aromáticas, tales como metilamina, dimetilamina, trietilamina, dietilamina, isopropildietilamina, piridina y picolina. Los ácidos ilustrativos que forman sales adecuadas incluyen ácidos inorgánicos tales como, por ejemplo, clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, fosfórico y similares, y ácidos carboxílicos orgánicos tales como, por ejemplo, acético, propiónico, glicólico, láctico, pirúvico, malónico, succínico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, maleico, hidroximaleico y dihidroximaleico, benzoico, fenilacético, 4-aminobenzoico, 4-hidroxibenzoíco, antranílico, cinámico, salicílíco, 4-aminosalicílico, 2-fenoxíbenzoico, 2-acetoxibenzoico, mandélico y ácidos similares, y ácidos sulfónicos orgánicos tales como metanosulfónico, p-toluenosulfónico, 1 -naftalenosulfónico, 2-naftalenosulfó- nico y ácidos similares.

Como se usa en este documento, la expresión "vehículo - - farmacéutico" o "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a excipientes farmacéuticos conocidos útiles en la formación de compuestos terapéuticamente activos para la administración, y que son sustancialmente no tóxicos e insensibles en las condiciones de uso. La proporción exacta de estos excipientes se determina por la solubilidad y propiedades químicas del compuesto activo, la vía de administración elegida, así como por la práctica farmacéutica convencional. En la práctica de los métodos de esta invención, el ingrediente activo preferiblemente se incorpora en una composición que contiene un vehículo farmacéutico, aunque los compuestos son eficaces y pueden administrarse en y por sí mismos. Es decir, la proporción de ingrediente activo puede variar de aproximadamente 5 a 90% en peso.

Otras abreviaturas que pueden aparecer en esta solicitud son las siguientes: Me (metilo), Et (etilo), Ph (fenilo), Et3N (trietilamina), p-TsOH (ácido para- toluenosulfónico), TsCI (cloruro de para-toluenosulfonilo), hept (heptano), DMF (dimetilformamida), NMP (1-metil-2-pirrolidinona o N-metil-2-pirrolidinona), IPA (isopropanol o alcohol isopropílico), TFA (ácido trifluoroacético), DBU (1 ,8- diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno), DBN (1 ,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno), ta o t.a. (temperatura ambiente), min o min. (minutos), h (hora u horas), UV (ultravioleta), LCMS (espectroscopia de masas por cromatografía líquida), t- Boc o Boc (terc-butoxicarbonilo), Bn (bencilo), t-Bu (butilo terciario), i-Pr - - (isopropilo), TFA (ácido trifluoroacético), HOAc (ácido acético), EtOAc (acetato de etilo), Et2O (éter dietílico), EtOH (etanol), g (gramo), mg (miligramo), µg (microgramo), ng (nanogramo), ml (mililitro), µl (microlítro), I (litro), HPLC (cromatografía líquida de alta resolución), TLC, tic o Tic (cromatografía de capa fina), g/l (gramos por litro), SiO2 (gel de sílice), l/min (litros por minuto), ml/min (mililitros por minuto), mmol (milimol), M (molar), mM (milimolar), µM (micromolar), nM (nanomolar), mCi (microCuñe), CPM (cuentas por minuto), rpm (revoluciones por minuto), mm (milímetro), µm (micrómetro), µ (miera), nm (nanómetro), ppm (partes por millón), psi (libras por pulgada cuadrada), eq. o equiv. (equivalente), TR (tiempo de retención), °C (grados centígrados) y K (Kelvin).

Por consiguiente, una modalidad amplia de la invención se refiere a un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad o trastorno que mejora por la inhibición de la actividad de la caseína quinasa le que comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, un enantiómero, un racemato o un tautómero de dicho compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, - donde: X es H, Cl, F, Br, NO2, CN, OR2, NR2R2, HNSO2-alquilo C?-3, o NHCO-alquilo C?-3; Y es -S(O)n- o -O- donde n es 0, 1 ó 2; R1 es 1 ) arilo, sin sustituir o sustituido con uno o más de alcoxi d-5, OH, halógeno, NR2R2, o alquilo C?-5 sin sustituir o sustituido con uno o más de OH o alcoxi C?_5, 2) heterociclo, sin sustituir o sustituido con uno o más de alquilo C?-5 sin sustituir o sustituido con uno o más de OH o alcoxi C1.5, alcoxi C1-5, OH, halógeno o NR2R2; 3) alquilo C?-5, sin sustituir o sustituido con uno o más de alquilo C?-5) alcoxi C?-5, OH, o arilo sin sustituir o sustituido con uno o más de alquilo C?-5, alcoxi C?-5, OH, halógeno o NR2R2; Z es C(=O)NR2R3 o C(=O)R4; R2 es hidrógeno o alquilo C?_3; R3 es hidrógeno, alquilo C?-5, o cicloalquilo C3_6; R4 es 1 -piperidinilo, 1 -pirrolidinilo, 1 -piperazinilo o 4-morfolinilo, sin sustituir o sustituido con uno o más de alquilo C1-5, alcoxi C?- , OH, halógeno o NR2R2.

Una segunda modalidad de la invención se refiere a un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad o trastorno que mejora - - por la inhibición de la actividad de la caseína quinasa le, donde dicha inhibición de la actividad de la caseína quinasa le provoca la prolongación del periodo del ritmo círcadiano.

Una tercera modalidad de la invención se refiere a un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad o trastorno que mejora por la inhibición de la actividad de la caseína quinasa le, donde la enfermedad o trastorno es un trastorno del estado de ánimo o un trastorno del sueño.

Una cuarta modalidad de la invención se refiere a un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad o trastorno que mejora por la inhibición de la actividad de la caseína quinasa le, donde el trastorno es un trastorno del estado de ánimo.

Una quinta modalidad de la invención se refiere a un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad o trastorno que mejora por la inhibición de la caseína quinasa le, donde la enfermedad o trastorno es un trastorno del estado de ánimo seleccionado entre el grupo que consiste en un trastorno depresivo y un trastorno bipolar.

Una sexta modalidad de la invención se refiere a un método para tratar a un paciente que padece un trastorno depresivo, donde dicho trastorno depresivo es trastorno depresivo mayor.

Una séptima modalidad de la invención se refiere a un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad o trastorno que mejora por la inhibición de la caseína quinasa le, donde el trastorno se selecciona entre el grupo que consiste en trastorno bipolar I y trastorno bipolar II.

Una octava modalidad de la invención se refiere a un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad o trastorno que mejora por la inhibición de la caseína quinasa le, donde el trastorno es un trastorno del sueño.

Una novena modalidad de la invención se refiere a un método para tratar a un paciente que padece un trastorno del sueño, donde dicho trastorno del sueño es un trastorno del sueño del ritmo circadiano.

Una décima modalidad de la invención se refiere a un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad o trastorno que mejora por la inhibición de la caseína quinasa le, donde la enfermedad o trastorno es un trastorno del sueño del ritmo circadiano seleccionado entre el grupo que consiste en trastorno del sueño por cambio de turno, síndrome de desfase horario, síndrome de la fase del sueño avanzada y síndrome de la fase del sueño retardada.

- - Una undécima modalidad de esta invención incluye un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad o trastorno que mejora por la inhibición de la actividad de la caseína quinasa le que comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I en la que Y es S(O)2, Z es C(=O)NH2 o C(=O)NHCH3, y R1 es fenilo o piridinilo.

Una clase de compuestos dentro de la undécima modalidad se limita adicionalmente a compuestos de fórmula I en la que Y es S(O)2, Z es C(=O)NH2, y R1 es fenilo. Los siguientes compuestos son ejemplos representativos dentro del alcance de esta modalidad: amida del ácido 3-bencenosulfonil-5-cloro-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-bencenosulfonil-1 H-indol-2-carboxílico.

Una segunda clase de compuestos dentro de la undécima modalidad se limita adicionalmente a compuestos de fórmula I en la que Y es S, Z es C(=O)NHCH3, y R1 es fenilo o piridinilo. Los siguientes compuestos son ejemplos representativos dentro del alcance de esta modalidad: metilamida del ácido 3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-carboxílico, y metilamida del ácido 3-(piridin-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-carboxílico.

Una duodécima modalidad de esta invención incluye un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad o trastorno que mejora por la inhibición de la actividad de la caseína quinasa le que comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I en la que Y es O, Z es C(=O)NH2, y R1 es fenilo, fenilo sustituido, alquilo C1-5 o alquilo C?-5 sustituido. Los siguientes compuestos son ejemplos representativos dentro del alcance de esta modalidad: amida del ácido 3-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-(4-metoxi-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-(4-fluoro-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílíco, amida del ácido 3-(2-fluoro-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-(4-cloro-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílíco, amida del ácido 3-metoxi-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-etoxi-1 H-indol-2-carboxílíco, amida del ácido 3-isopropoxi-1 H-indol-2-carboxílíco, amida del ácido 3-terc-butoxi-1 H-indol-2-carboxílico, y amida del ácido 3-benciloxi-1 H-indol-2-carboxílico.

Una decimotercera modalidad de esta invención incluye un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad o trastorno que mejora por la inhibición de la actividad de la caseína quinasa le que comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I en la que Y es S, S(O), o S(O)2, Z es C(=O)R4, y R4 es 1 -piperidinilo, 1 -pirrolídinilo, 1 -piperazinilo o 4-morfolinilo. Los - - siguientes compuestos son ejemplos representativos dentro del alcance de esta modalidad: (3-bencenosulfonil-5-cloro-1 H-indol-2-il)-morfolin-4-il-metanona, (5-fluoro-3-p-tolílsulfanil-1 H-indol-2-il)-pirrolidin-1-il-metanona, (3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-il)-pipeñdin-1 -il-metanona, (5-fluoro-3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-il)-pirrolidin-1-il-metanona, [3-(2-amino-fenilsulfanil)-1 H-indol-2-il]-pirrolidin-1 -il-metanona, [3-(2-amino-fenilsulfanil)-1 H-indol-2-il]-píperidin-1-¡l-metanona, [3-(2-amino-fenilsulfanil)-5-fluoro-1 H-indol-2-il]-piperidin-1-il-metanona, [5-fluoro-3-(p-tolueno-4-sulfinil)-1 H-indol-2-il]-pirrolid¡n-1-il-metanona, hidrocloruro de (3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-il)-piperazin-1 -il- metanona, [5-fluoro-3-(piridin-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-il]-pirrolidin-1 -il-metanona, [3-(piridin-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-il]-pirrolidin-1 -il-metanona, piperidin-1 -il-[3-(pirídin-2-¡lsulfanil)-1 H-indol-2-il]-metanona, y [5-fluoro-3-(piridin-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-il]-piperidin-1 -il- metanona.

Una decimocuarta modalidad de esta invención incluye un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad o trastorno que mejora por la inhibición de la actividad de la caseína quinasa le que - - comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I en la que Y es S, Z es C(=O)NH2, y R1 es piridinilo. El siguiente compuesto es un ejemplo representativo dentro del alcance de esta modalidad: amida del ácido 3-(piridin-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-carboxílico.

Una decimoquinta modalidad de esta invención incluye un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad o trastorno que mejora por la inhibición de la actividad de la caseína quinasa le que comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I en la que Y es S, Z es C(=O)NH2, y R1 es fenilo o fenilo sustituido. Los siguientes compuestos son ejemplos representativos dentro del alcance de esta modalidad: amida del ácido 3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 5-bromo-3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-(2-amino-fenilsulfanil)-5-metoxi-1 H-indol-2- carboxílico, amida del ácido 3-(3-fluoro-fenilsulfanil-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-(2-amino-fenilsulfanil)-5-bromo-1 H-indol-2- carboxílíco, y amida del ácido 3-(2-amino-fenilsulfanil)-1 H-indol-2-carboxílico.

Una decimosexta modalidad de esta invención se refiere a un método para inhibir la actividad de la caseína quinasa le en un paciente que comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, un enantiómero, un racemato o un tautómero del mismo, provocando una prolongación del periodo del ritmo circadiano.

Todas las diversas modalidades de la presente invención como se describen en este documento puede usarse como métodos para tratar diversas enfermedades y trastornos como se describe en este documento. Como se indica en este documento, los compuestos usados en el método de esta invención son capaces de inhibir los efectos de la caseína quinasa le. Un especialista en la técnica apreciará fácilmente que las enfermedades y trastornos indicados expresamente en este documento no pretenden ser limitantes, sino más bien ilustrar la eficacia de los compuestos de la presente invención. De esta manera, debe entenderse que los compuestos de la invención pueden usarse para tratar cualquier enfermedad o trastorno que mejore por la inhibición de la caseína quinasa le.

SÍNTESIS QUÍMICA Los compuestos de la invención se preparan por métodos bien conocidos por un especialista en la técnica. Específicamente, los compuestos de esta invención se describen en la Patente de Estados Unidos N° 5.527.819, y pueden prepararse de acuerdo con los procedimientos proporcionados en - - ese documento, que se incorpora en este documento como referencia en su totalidad. Aún más específicamente, las diversas síntesis que pueden emplearse para la preparación de los compuestos de esta invención se ilustran en los Esquemas 1 , 2 y 3, y la metodología se describe con detalle por los ejemplos que se muestran a continuación.

FORMULACIONES Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se preparan de manera bien conocida en las técnicas farmacéuticas. El vehículo o los excipientes pueden ser un material sólido, semisólido o líquido que puede servir como vehículo o medio para el ingrediente activo. Los vehículos o excipientes adecuados son bien conocidos en la técnica. La composición farmacéutica puede adaptarse para uso oral, por inhalación, parenteral o tópico, y puede administrarse al paciente en forma de comprimidos, cápsulas, suspensiones, jarabes, aerosoles, inhalantes, supositorios, pomadas, polvos, soluciones y similares. Como se usa en este documento, la expresión "vehículo farmacéutico" o "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a uno o más excipientes.

Para preparar composiciones farmacéuticas o formulaciones de los compuestos de la presente invención, debe tenerse cuidado de asegurar la biodisponibilídad de una cantidad terapéutica eficaz del compuesto o compuestos activos por medio de la vía de administración seleccionada, incluyendo las vías oral, parenteral y subcutánea. Por ejemplo, las vías de administración eficaces incluyen las vías subcutánea, intravenosa, transdérmica, intranasal, rectal, vaginal y vías similares incluyendo liberación desde implantes así como inyección directa del ingrediente activo y/o de la composición directamente en el tejido.

Para administración oral, los compuestos de la presente invención pueden formularse en preparaciones sólidas o líquidas, con o sin diluyentes inertes o vehículos comestibles, tales como cápsulas, pildoras, comprimidos, trociscos, polvos, soluciones, suspensiones o emulsiones. Las cápsulas, pildoras, comprimidos, trociscos y similares también pueden contener uno o más de los siguientes adyuvantes: aglutinantes tales como celulosa microcristalina o goma de tragacanto; excipientes tales como almidón o lactosa, agentes disgregantes tales como ácido algínico, almidón de maíz y similares; lubricantes, tales como ácido esteárico, estearato de magnesio, o Sterotex®, (Stokely-Van Camp Inc., Indinapolis, Indiana); ligandos, tales como dióxido de silicio coloidal; agentes edulcorantes, tales como sacarosa o sacarina; y agentes saporíferos, tales como menta, salicilato de metilo o saporíferos de fruta. Cuando la unidad de dosificación es una cápsula, también puede contener un vehículo líquido, tal como polietilenglicol o un aceite graso. Los materiales utilizados deben ser farmacéuticamente puros y no tóxicos en las cantidades utilizadas.

- - Para la administración parenteral, los compuestos de la presente invención pueden administrarse como dosificaciones inyectables de una solución o suspensión del compuesto en un diluyente fisiológicamente aceptable con un vehículo farmacéutico que puede ser un líquido estéril tal como agua en aceite o sin la adición de un tensioactivo y otros excipientes farmacéuticamente aceptables. Son aceites ilustrativos que pueden emplearse en las preparaciones los procedentes del petróleo, o de origen animal, vegetal o sintético tales como, por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de soja y aceite mineral. En general, se prefieren vehículos líquidos como agua, solución salina, soluciones acuosas de dextrosa u otros azúcares relacionados, etanol y glicoles, tales como propilenglicol, particularmente para las soluciones inyectables. La preparación parenteral se pueden encerrar en ampollas, jeringas desechables, o viales de dosis múltiples de plástico inerte o de vidrio.

Las soluciones o suspensiones descritas anteriormente también pueden incluir uno o más de los siguientes adyuvantes: diluyentes estériles, tales agua para inyección, solución salina, aceites no volátiles, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicoles u otros disolventes sintéticos; agentes antibacterianos, tales como ácido ascórbico o bisulfito de sodio; agentes quelantes, tales como ácido etilendiaminatetraacético; tampones tales como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para ajustar la tonicidad tales como cloruro sódico o dextrosa.

Los compuestos de la presente invención pueden administrarse en forma de un parche cutáneo, una inyección de depósito o una preparación de implante que pueda formularse de tal manera que permita la liberación sostenida del ingrediente activo. El ingrediente activo puede comprimirse en pequeñas bolas o pequeños cilindros e implantarse por vía subcutánea o por vía intramuscular como inyecciones de depósito o implantes. Los implantes pueden emplear materiales inertes, tales como polímeros biodegradables y siliconas sintéticas. Vehículos farmacéuticos adecuados y técnicas de formulación se encuentran en textos tales como Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edición, Volúmenes 1 y 2, 1995, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania, Estados Unidos, que se incorpora en este documento como referencia.

En el tratamiento de diversas enfermedades, trastornos y afecciones como los descritos en este documento, un nivel de dosificación adecuado es de aproximadamente 0,01 mg/kg por día a aproximadamente 250 mg/kg por día. Preferiblemente, de aproximadamente 0,05 mg/kg por día a aproximadamente 100 mg/kg por día, y especialmente de aproximadamente 0,05 mg/kg por día a aproximadamente 40 mg/kg por día. Los compuestos de la presente invención se pueden administrar en un régimen de 1 a 4 veces por día y se determina por la naturaleza de la enfermedad, trastorno o estado que se va a tratar.

A continuación se muestran los Esquemas 1 a 3 para preparar los compuestos de ejemplo de la invención. Las Tablas 1 y 2 ¡lustran los compuestos que pueden sintetizarse de acuerdo con los Esquemas 1 a 3 y los datos biológicos para la inhibición in vitro de la caseína quinasa le por los compuestos de ejemplo se resumen en la Tabla 3.

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos pretenden servir como ilustración de la invención con más detalle, sin restringir el alcance de la invención de manera alguna.

Métodos Sintéticos Generales A menos que se indique otra cosa, los materiales se obtuvieron de proveedores comerciales y se usaron sin purificación adicional. Todas las reacciones se realizaron en una atmósfera inerte tal como nitrógeno o argón con reactivos y disolventes anhidros. La cromatografía ultrarrápida se realizó usando gel de sílice 60 EM Science (40 - 63 mm) usando los sistemas de disolventes que se describen. La cromatografía de capa fina se realizó usando placas 60F-254 de 0,25 mm recubiertas con de gel de sílice (EM) y se visualizó usando vapor de yodo, luz UV o un reactivo de tinción tal como una solución de KMnO4. El espectro de infrarrojos (IR) se registró sobre un espectrómetro - - Nexus 670 FTIR (Nicolet) con muestras preparadas como se indica, y se proporcionan en números de onda (cm-1 ). El espectro de 1H RMN se registró sobre un espectrómetro Unidad Varian Gemini y/o mercury 300, Unity 400, o Unity plus y/o Inova 500 MHz, dándose los datos de los desplazamientos químicos (d) en ppm con respecto a tetrametilsilano (0,0 ppm) o cloroformo (CDCI3, 7,26 ppm) como referencia. Los espectros de 13C RMN se registraron sobre el instrumento Varian Unity (100,57 MHz, frecuencia 13C) proporcionándose desplazamientos químicos (d) en ppm con respecto a CDCI3 (77,0 ppm), a menos que se indique otra cosa. Los espectros de masas (MS) se obtuvieron sobre un Sistema Espectrómetro de Masas Finnigan MAT Model TSQ 700 por ionización química a 120 eV usando metano (Cl, 120 eV). La Espectrometría de Masas por Cromatografía Líquida (LCMS) se realizó sobre un Micromass LCT conectado con un manipulador de líquidos Gilson 215. El análisis espectrométrico de masas de alta resolución (espectro de masas exacto) se realizó en el modo ESI a una resolución de masa de 10.000 usando un espectrómetro de masas Micromass QTOF. Se determinaron los valores de masa exactos para los iones moleculares protonados (M + 1 ), donde M se refiere al ion molecular. 3-Ariltioindoles y Análogos Esquema 1 R1 3, R = OH a) K2CO3, MeOH; b) NH4OH/LiCI 0 NH3/MeOH/LiCI, o Me2NH/MeOH o Me2NH/H2O c) MeOH/H2O/NaOH y después HCl; d) carbonildiimidazol y NH4OH, o carbonildiímidazol y una amina primaria o secundaria; e) NaH, DMF, R1-S-S-R1 o Cs2CO3, DMF, R1-S-S-R1 (R1 = arilo); f) H2O2.

Procedimiento Sintético General I (trans-esterificación; Esquema I, etapa a) Añadir al indol-2-carboxilato de etilo 1 (42,3 mmol) en MeOH (50 ml), K2CO3 (1 ,20 equiv., 50,7 mmol) y agitar la suspensión con calentamiento a 55°C durante 1 h. Controlar la reacción por tic (éter/heptano) y cuando se complete concentrar la reacción al vacío, diluir con H2O y agitar durante 15 min. Recoger el sólido por filtración y secar al vacío a 65°C durante 3 h para producir el indol-2-carboxilato de metilo 2.

Procedimiento Sintético General II (amidación usando NH OH; Esquema I, etapa b) - - Agitar una suspensión de 1 ó 2 (40,0 mmol) en NH4OH (100 ml) y LiCl (1 ,0 equiv.) a ta durante 16 h. Filtrar el sólido de la mezcla de reacción, lavar con H2O y secar al aire para dar la amida primaria correspondiente 4.

Procedimiento Sintético General lll (amidación usando NH3/MeOH; Esquema I, etapa b) Agitar el indol-2-carboxilato de etilo 1 (X = H, 4,67 mmol) en NH3 7 N/MeOH (20 ml) y añadir LiCl (1 ,0 equiv., 4,67 mmol). Agitar la mezcla de reacción a ta durante 5 días controlando mediante análisis por tic (MeOH al 10%/CH2CI2). Concentrar la mezcla hasta obtener un volumen mínimo, diluir con H2O y recoger el sólido por filtración. Lavar la torta de filtro con H2O y secar al vacío a 60°C para proporcionar la amida primaria 4 (X = R2 = R3 = H), Rf de tic (gel de sílice, MeOH al 10%/CH2CI2): 1 (X = H) 0,95, 2 (X = H) 0,93, 4 (X = R2 = R3 = H) 0,40.

Procedimiento Sintético General IV (hidrólisis del éster metílico 2 para obtener el ácido carboxílico 3, Esquema I, etapa c). Añadir NaOH (82,0 mmol) al indol-2-carboxilato de metilo 2 (27,0 mmol) en forma de una suspensión en MeOH/H2O (3:1 , 160 ml). Agitar a ta durante 16 h, concentrar y acidificar con HCl. Recoger el precipitado por filtración, lavar con H2O y secar al vacío para producir el ácido indol-2- carboxílico 3.

Procedimiento Sintético General V (amidacíón del ácido 2-indolcarboxílico 3; Esquema I, etapa d). Añadir carbonildiimidazol (1 ,10 equív., 5,5 g, 34,0 mmol) a una solución del ácido indol-2-carboxílico 3 (31 ,0 mmol) y THF anhidro (50 ml). Agitar durante 1 h y añadir en una porción NH OH conc. (50 ml) para obtener la suspensión pegajosa. Agitar a ta y después de 16 h recoger el sólido por filtración, lavar con H2O y secar al vacío a 40°C para producir la indol-2-carboxamida 4 (R2 = R3 = H).

Procedimiento Sintético General Via (amidación del ácido 2-indolcarboxílico 3 con aminas primarias o secundarias; Esquema I, etapa d). Añadir carbonildiimidazol (1 ,5 equiv., 18,6 mmol) a una solución del ácido indol-2-carboxílico 3 (12,4 mmol) y THF anhidro (30 ml) y agitar durante 1 h. Después, añadir en una porción la amina (por ejemplo, metilamina, pirrolidina, piperídina, piperazina, bencilamina o morfolina, 3,0 equiv, 37,2 mmol)) y agitar la reacción a ta. Después de 16 h, interrumpir la reacción con agua, recoger el precipitado por filtración y secar al vacío para producir la indol-2-carboxamida N-sustituida 4.

Procedimiento Sintético General Vlb (amidacíón de indol-2- carboxílato de etilo o metilo con aminas primarias y secundarias, Esquema I, etapa b) Agitar el indol-2-carboxilato de etilo 1 (X = H, 4,67 mmol) o el - - indol-2-carboxilato de metilo 2 (X = H, 4,67 mmol) en Me2NH/H2O (50 ml, 40%). Agitar la mezcla de reacción a ta durante 16 h controlando mediante análisis por tic (MeOH al 10%/CH2CI2). Concentrar la mezcla hasta obtener un volumen mínimo, diluir con H2O y recoger el sólido por filtración. Lavar la torta de filtro con H2O y secar al vacío a 60°C para proporcionar la dimetilamida 4 (X = H, R2 = R3 = Me), Rf de tic = 0,65 (gel de sílice, MeOH al 10%/CH2CI2).

Procedimiento Sintético General Vlla (3-ariltioindoles usando NaH; Esquema I, etapa e) Añadir una solución de la indol-2-carboxiamída 4 (8,18 mmol) en DMF (5 ml) a una suspensión agitada de NaH (dispersión al 60% en aceite, 1 ,2 equiv., 9,8 mmol) en DMF (75 ml) en una atmósfera de N2 a ta. Después de 5 min, añadir en una porción el disulfuro de diarilo (1 ,0 equiv., 8,18 mmol) y calentar la reacción con agitación a 95°C durante 16 h. Continuar la reacción repartiendo una alícuota de la muestra entre EtOAc y H2O y analizar la fase orgánica de la alícuota por cromatografía de capa fina sobre gel de sílice con MeOH al 10%/CH2Cl2. Concentrar la reacción al vacío, diluir con H2O y agitar durante 30 min, filtrar y secar al aire. Cromatografiar el sólido bruto sobre gel de sílice eluyendo con 9:1 de CH2CI2/MeOH para proporcionar el indol 3- ariltio-sustituido I.

Procedimiento Sintético General Vllb (3-añltioindoles usando Cs2CO3; Esquema I, etapa e) - - Añadir Cs2CO3 (0,31 mmol) a una solución de la indol-2-carboxamida (0,418 mmol) y DMF (10 ml) y después añadir el disulfuro de diarilo (0,65 mmol). Calentar la reacción en una atmósfera de nitrógeno a 100°C durante aproximadamente 2,5 h (controlar medíante análisis por tlc/LC-MS para determinar cuándo se completa la reacción). Enfriar a ta, concentrar hasta obtener un volumen mínimo y repartir entre salmuera y EtOAc (3 ml). Extraer de nuevo con EtOAc, secar los extractos combinados (MgSO4), filtrar y concentrar el filtrado para proporcionar la 3-ariltioindol-2-carboxamida bruta. Purificar el producto bruto sobre una columna ISCO (4,0 g SiO2) para proporcionar la 3-ariltíoindol-2-carboxamida I.

Procedimiento Sintético General VI le (Esquema 1 , etapa opcional f) Tratar una solución de la 3-arilt¡oindol-2-carboxamida (1 mmol) con H2O2 (al 30% p/p, 2,5 mmol) y Na2CO3 (2,0 mmol). Agitar a ta durante 16 horas, inactivar con agua, extraer con EtOAc, lavar con salmuera, secar (MgSO4), filtrar y concentrar para producir la amida del ácido 3-arilsulfonil-1 H- indol-2-carboxílico I. amida del ácido 1 H-indol-2-carboxílico 4 (X = H)(a partir del éster etílico). Tratar el indol-2-carboxilato de etilo 1 (X = H, 2,0 g, 10,57 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General II para producir el - - compuesto del título (1,3 g, 76,9%) en forma de un polvo de color marfil: p.f. 233-234,5°C; 1H RMN (DMSO-d6) d 11,53 (s a, 1H), 7,95 (s a, 1H), 7,60 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,42 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,36 (s a, 1H), 7,17 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 7,11 (s, 1 H), 7,02 (t, 1 H, J = 8,1 Hz). amida del ácido 1H-indol-2-carboxilico 4 (X = H) (a partir del ácido indol-2-carboxílico). Tratar el ácido 1H-indol-2-carboxílico 3 (X = H, 1,0 g, 6,2 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General V para producir el compuesto del título (854 mg, 86,0%) en forma de un polvo amarillo: p.f.233- 234,5°C;1HRMN(DMSO-d6)d11,53(sa, 1H), 7,95 (s a, 1H), 7,60 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,42 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,36 (s a, 1H), 7,17 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 7,11 (s, 1H), 7,02 (t, 1H, J = 8,1 Hz). Anal. cale, para C9H8N2O: C, 67,50; H, 5,03; N, 17,50. Encontrado: C, 67,20; H, 4,95; N, 17,25.

Amida del ácido 3-bencenosulfonil-5-cloro-1H-indol-2-carboxílico í!a} Tratar la amida del ácido 3-fenilsulfanil-5-cloro-1H-indol-2- carboxílico (303 mg, 1,0 mmol) con H2O2 como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General VI le para dar el compuesto la (Tabla 1) en forma de un sólido blanco; MS obs.336 (M + 1).

Amida del ácido 3-bencenosulfonil-1H-indol-2-carboxílico (Ib) - - Tratar la amida del ácido 3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-carboxílico, (le. 268 mg, 1 ,0 mmol) con H2O2 como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vllc para dar el compuesto Ib en forma de un sólido blanco: p.f. 204°C (desc.); 1H RMN (DMSO-d6) d 12,9 (s a, 1 H), 8,5 (s a, 1 H), 8,2 (s a, 1 H), 8,0 (m, 3H), 7,6 (m, 4H), 7,3 (m, 2H); MS obs. 301 , 1 (M + 1 ); LC/MS: m/z = 301 (M + H).

Amida del ácido 3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-carboxílico (le) Tratar la amida del ácido 1 H-indol-2-carboxílico 4 (X = H, 320 mg, 2,0 mmol) con disulfuro de fenilo (1 ,0 equiv., 436 mg), como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla, para producir el compuesto del título (500 mg, 93,3%) en forma de un sólido de color marfil, p.f. 197-197,5°C. Anal. cale, para C15H12N2SO: C, 67,15; H, 4,51 ; N, 10,44. Encontrado: C, 66,03; H, 4,42; N, 10,18.

Amida del ácido 5-bromo-3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-carboxílico (Id Tratar el éster etílico del ácido 5-bromo-1 H-indol-2-carboxílico 1 (X = Br, 4,67 mmol) con NH3 7 N/MeOH como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General lll para producir la amida del ácido 5-bromo- 1 H-indol-2-carboxílico 4 (X = Br, R2 = R3 = H) en forma de un sólido de color marfil. Tratar la amida del ácido 5-bromo-1 H-indol-2-carboxílico (100 mg, 0,41 - - mmol) con disulfuro de difenilo (1 ,50 equiv., 141 mg, 0,65 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vllb para dar el compuesto del título Id (85 mg) en forma de un sólido de color marfil. 1H RMN (DMSO-d6) d 12,5 (s a, 1 H), 8,0 (s a, 1 H), 7,72 (s a, 1 H), 7,59-7,08 (m, 8H); LC/MS: m/z obs = 347 (M +1 ).

Amida del ácido 3-(2-amino-fenilsulfanil)-5-metoxi-1 H-indol-2-carboxílico (le) Tratar el ácido 5-metoxi-1 H-indol-2-carboxílico 1 (X = OCH3, 1 ,09 g, 5,71 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General V para producir la amida del ácido 5-metoxi-1 H-índol-2-carboxílico 4 (X = OCH3, R2 = R3 = H; 536 mg, 49%) en forma de un sólido amarillo, p.f. 204-205°C; 1H RMN (DMSO-d6) d 11 ,3 (s a, 1 H), 7,9 (s a, 1 H), 7,3 (d, 2H), 7,1 (d, 2H), 6,8 (d, 1 H). 3,8 (s, 3H) ; LC/MS: m/z obs = 191 (M +1 ). Tratar la amida del ácido 5-metoxi-1 H-indol-2-carboxílico (300 mg, 1 ,6 mmol) con disulfuro de 2-aminofenilo (1 ,4 equiv., 546 mg, 2,2 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para producir el compuesto del título le (321 mg, 65%) en forma de un sólido verde claro, p.f. 203°C (desc.); 1H RMN (DMSO-d6) d 12,0 (s a, 1 H), 8,0-7,8 (2 s a, 2H), 7,4 (d, 1 H), 7,1-6,9 (m, 4H), 6,8 (m, 1 H), 6,6 (m, 1 H), 5,5 (m, 2H), 3,8 (s, 3H); LC/MS: m/z obs = 314 (M +1 ). Amida del ácido 3-(3-fluoro-fenilsulfanil)-1 H-indol-2-carboxílico (lí) - - Tratar la amida del ácido 1 H-indol-2-carboxílico 4 (X = R2 = R3 = H; 225 mg, 1 ,4 mmol) con disulfuro de bis-3-fluorofenilo (1 ,5 equiv., 534 mg, 2,1 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para producir el compuesto del título If (322 mg, 80%) en forma de un sólido blanco: tic (gel de sílice) Rf = 0,1 (EtOAc al 40%/heptano). Amida del ácido 3-(2-amino-fenilsulfanil)-5-bromo-1 H-indol-2-carboxílico (Iq) Tratar la amida del ácido 5-bromo-1 H-indol-2-carboxílico 4 (X = Br, R2 = R3 = H; 100 mg, 0,418 mmol) con disulfuro de 2-aminofenílo (1 ,5 equiv., 161 mg, 0,65 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vllb para producir el compuesto del título Ig (1 13 mg) en forma de un sólido de color marfil. 1H RMN (DMSO-d6) d 12,25 (s a, 1 H), 8,01 (s a, 1 H), 7,9 (s a, 1 H), 7,7 (s, 1 H), 7,25-6,2 (m, 6H), 5,45 (s, 2H); LC/MS: m/z obs = 361 ,99 (M +1 ). Amida del ácido 3-(2-amino-fenilsulfanil)-1 H-indol-2-carboxílico (lh) Tratar la amida del ácido 1 H-indol-2-carboxílico 4 (X = R2 = R3 = H; 160 mg, 1 ,0 mmol) con disulfuro de 2-aminofenilo (1 ,4 equiv., 347 mg, 1 ,4 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para producir el compuesto del título Ih (135 mg, 37%) en forma de un sólido verde claro: 1H RMN (DMSO-d6) d 12,1 (s a, 1 H), 8,0 (s a, 1 H), 7,88 (s a, 1 H), 7,58 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 7,48 (d, 1 H, J = 8,7 Hz), 7,28-7,23 (m, 1 H), 7,12-7,10 (m, 1 H), 6,92-6,86 (m, 2H), 6,70-6,67 (m, 1 H), 6,44-6,39 (m, 1 H), 5,45 (s a, 2H); m/z obs = 284 (M +1 ). Amida del ácido 3-(pir¡dín-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-carboxílico (li) Tratar la amida del ácido 1 H-indol-2-carboxílico 4 (X = R2 = R3 = H; 80,0 mg, 0,5 mmol) con 2,2'-ditiopiridina (1 ,0 equív., 0,5 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para dar el compuesto del título li (71 ,0 mg, 53%) en forma de un sólido castaño: MS obs. 270,2 (M + 1 ). Metilamida del ácido 3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-carboxílico (li) Añadir carbonildiimidazol (1 ,10 equiv., 1 ,1 g, 6,83 mmol) a una solución del ácido 1 H-indol-2-carboxílico 3 (X = H, 1 ,0 g, 6,21 mmol) y THF anhidro (50 ml). Agitar durante 30 min a ta y después añadir en una porción MeNH2,HCI (1 ,30 equív., 541 mg, 8,07 mmol). Añadir DMF (10 ml) a la reacción y agitar a ta. Después de 2 h, verter la solución de reacción amarilla transparente en H2O. Recoger el precipitado por filtración y secar al vacío a 40°C para producir la metilamida del ácido 1 H-indol-2-carboxílico 4 (X = R2 = H, R3 = CH3; 860 mg, 80%) en forma de un sólido amarillo, p.f. 222-223°C; 1H RMN (DMSO-d6) d 11 ,6 (s a, 1 H), 8,45 (m, 1H), 7,60 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 7,44 (dd, 1 H, J = 1 ,05, 8,25 Hz), 7,20-7,14 (m, 1 H), 7,60-7,00 (m, 1 H), 2,82 (d, 3H, J = 4,2 Hz). m/z obs = 175 (M +1 ). Tratar la metilamida del ácido 1 H-indol-2- carboxílíco (174 mg, 1 ,0 mmol) con disulfuro de fenilo (1 ,1 equiv., 240 mg, 1 ,1 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para producir el compuesto del título Ij (140 mg, 50%) en forma de un sólido de color marfil, p.f. 201-204°C; 1H RMN (DMSO-d6) d 12,3 (s a, 1 H), 8,3 (m, 1 H), 7,48 (d, 1 H), 7,42 (d, 1 H), 7,3-7,0 (m, 7H), 2,9 (d, 3H).

Metilamida del ácido 3-(p¡ridin-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-carboxílico (Ik) Tratar la metilamida del ácido 1 H-indol-2-carboxílico 4 (X = R2 = H, R3 = CH3; 87 mg, 0,5 mmol) con 2,2'-ditiopiridina (1 ,3 equiv., 143 mg) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para producir el compuesto del título Ik (93 mg, 66%) en forma de un sólido blanco: 1H RMN (DMSO-d6) d 12,3 (s a, 1 H), 8,4 (m, 1 H), 8,3 (m, 1 H), 7,6 (m, 2H), 7,4 (m, 1 H), 7,3 (m, 1 H), 7,2 (m, 2H), 6,7 (d, 1 H), 2,9 (d, 3H); MS obs. 362 (M + 1 ).

Síntesis de Isósteros de Oxígeno de Indol (ll-lu) Esquema 2 Il-u a) NaN02, HOAc, CH2CI2, ta b) R1OH, Rh2(QAc)„, CICH2CH2CI, c) KOH, EtOH/H20 d) lm2CO, THF, NH„OH. - - Éster etílico del ácido 3-diazo-3H-indol-2-carboxílico (5) (Esquema 2, etapa a) Añadir gota a gota ácido acético glacial (6 ml) con agitación a ta durante 5 min a una solución del éster etílico del ácido indol-2-carboxílico (1 , X = H, 2,0 g, 10,6 mmol) y nitrito sódico (7,3 g, 106 mmol, 10 equiv.) en una atmósfera de N2 en CH2CI2 (20 ml). Después de aproximadamente 10 min, añadir CH2CI2 (100 ml) para facilitar la agitación de la suspensión resultante. Interrumpir la reacción después de 1 ,5 h con H2O, retirar la capa orgánica, y extraer la fase acuosa con CH2CI2. Lavar sucesivamente las fases orgánicas combinadas con NaHCO3 saturado y salmuera, secar (MgSO4), filtrar y concentrar para dar, después de la purificación, el compuesto 5 (1 ,62 g, 71 %) en forma de un sólido amarillo. (Kettle et al. Tetrahedron Lett. 2000, 6905-6907).

Procedimiento Sintético General VIII (para la reacción del compuesto de diazo 5 con alcoholes para proporcionar los esteres etílicos de indol 6; Esquema 2, etapa b). Hacer reaccionar el éster etílico del ácido 3-diazo-3H-indol-2- carboxílico 5 (0,9 mmol) con el alcohol de arilo o alquilo deseado (1 ,5 mmol) en 1 ,2-dicloroetano (10 ml) y una cantidad catalítica de Rh2(OAc)4 (0,08 equiv., 0,072 mmol, 32 mg) y calentar a 85°C durante 3 h. Diluir la mezcla de reacción con CH2CI2, filtrar a través de Celite® (tierra de diatomeas) y concentrar para dar el producto bruto. Purificar el material por cromatografía - ultrarrápida para producir los isósteros de oxígeno de indol deseados 6 en forma de los esteres etílicos.

Procedimiento Sintético General IX (hidrólisis de los 2-indolcarboxilatos de etilo 61-u para obtener los ácidos carboxílicos 71-u; Esquema II, etapa c). Añadir una solución de KOH (5,0 equiv., 2,5 mmol, 140 mg) y H2O (2,0 ml) a una suspensión del éster etílico del ácido indol-2-carboxílico 6 (0,50 mmol) en EtOH (10 ml). Agitar a ta durante 16 h, acidificar (HCl) a pH 1 y recoger el precipitado por filtración para producir el ácido carboxílico correspondiente 7.

Amida del ácido 3-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílico (II) Hacer reaccionar el éster etílico del ácido 3-díazo-3H-indol-2-carboxílico, 5, (300 mg, 1 ,38 mmol) con fenol (5,0 equiv., 650 mg, 6,90 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General VIII. Purificar por cromatografía ultrarrápida para producir el éster etílico del ácido 3-fenoxi-1 H- indol-2-carboxílico 6 (R1 = fenilo, 303 mg, 78%) en forma de un sólido amarillo. Hidrolizar el éster para obtener el ácido carboxílico 7 (R1 = fenilo) usando el Procedimiento Sintético General IX y después transformar el ácido carboxílico en la amida primaria correspondiente como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General V para producir el compuesto del título II en forma de un sólido de color púrpura claro, tic (gel de sílice) Rf = 0, 15.

- - Amida del ácido 3-(4-metoxi-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílico (Im) Hacer reaccionar el éster etílico del ácido 3-diazo-3H-indol-2-carboxílíco, 5, (231 mg, 1 ,10 mmol) con 4-metoxifenol (1 ,4 equiv., 186 mg, 1 ,5 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General VIII para producir el éster etílico del ácido 3-(4-metoxifenoxi-1 H-indol-2-carboxílico 6 (R1 = 4-metoxifenílo, 169 mg, 51%) en forma de un sólido de color marfil.

Hidrolizar el éster para obtener el ácido carboxílico 7 (R1 = 4-metoxifenilo) usando el Procedimiento Sintético General IX y después transformar el ácido carboxílico en la amida primaria correspondiente como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General V para producir el compuesto del título Im en forma de un aceite incoloro, tic (gel de sílice) Rf = 0,10.

Amida del ácido 3-(4-fluoro-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílico (In) Hacer reaccionar el éster etílico del ácido 3-diazo-3H-indol-2-carboxílico, 5, (220 mg, 1 ,0 mmol) con 4-fluorofenol (10,0 equiv., 1 ,1 g, 10,0 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General VIII para producir el éster etílico del ácido 3-(4-fluoro-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílico 6 (R1 = 4-fluorofenilo, 184 mg) en forma de un sólido blanco. Hídrolizar el éster para obtener el ácido carboxílico 7 (R1 = 4-fluorofenilo) usando el Procedimiento Sintético General IX y después transformar el ácido carboxílico en la amida primaria correspondiente como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General V para producir el compuesto del título In en forma de un sólido - - blanco (109 mg), tic (gel de sílice) Rf = 0,40.

Amida del ácido 3-(2-fluoro-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílico (lo) Hacer reaccionar el éster etílico del ácido 3-diazo-3H-indol-2-carboxílico, 5, (220 mg, 1 ,0 mmol) con 2-fluorofenol (10,0 equiv., 1 ,1 g, 10,0 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General VIII para producir el éster etílico del ácido 3-(2-fluoro-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílico 6 (R1 = 2-fluorofenilo, 100 mg) en forma de un sólido de color marfil. Hidrolízar el éster para obtener el ácido carboxílico 7 (R1 = 2-fluorofenilo) usando el Procedimiento Sintético General IX y después transformar el ácido carboxílico en la amida primaria correspondiente como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General V para producir el compuesto del título lo en forma de un sólido blanco (59 mg), tic (gel de sílice) Rf = 0,07.

Amida del ácido 3-(4-cloro-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílico (Ip) Hacer reaccionar el éster etílico del ácido 3-diazo-3H-indol-2- carboxílico, 5, (220 mg, 1 ,0 mmol) con 4-clorofenol (10,0 equiv., 1 ,3 g, 10,0 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General VIII para producir el éster etílico del ácido 3-(4-cloro-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílíco 6 (R1 = 4-clorofenilo, 90 mg) en forma de un sólido blanco. Hidrolizar el éster para obtener el ácido carboxílico 7 (R1 = 4-clorofenilo) usando el Procedimiento Sintético General IX y después transformar el ácido carboxílico en la amida primaria correspondiente como se ha descrito en el Procedimiento Sintético - - General V para producir el compuesto del título Ip en forma de un sólido de color marfil (50 mg), tic (gel de sílice) Rf = 0,09.

Amida del ácido 3-metoxi-1 H-indol-2-carboxílico (Iq) Hacer reaccionar el éster etílico del ácido 3-diazo-3H-indol-2-carboxílico, 5, (300 mg, 1 ,38 mmol) con metanol (5,0 equív., 0,3 ml, 6,91 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General VIII para producir el éster etílico del ácido 3-metoxi-1 H-indol-2-carboxílico 6 (R1 = metilo, 210 mg) en forma de un sólido blanco [tic (gel de sílice), Rf = 0,50]. Hidrolizar el éster para obtener el ácido carboxílico 7 (R1 = metilo) usando el Procedimiento Sintético General IX y después transformar el ácido carboxílico en la amida primaria correspondiente como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General V para producir el compuesto del título Iq en forma de un sólido castaño (40 mg), tic (gel de sílice) Rf = 0,03.

Amida del ácido 3-dtoxi-1 H-indol-2-carboxílico (Ir) Hacer reaccionar el éster etílico del ácido 3-diazo-3H-indol-2- carboxílíco, 5, (300 mg, 1 ,38 mmol) con etanol (5,0 equiv., 0,4 ml, 6,90 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General VIII para producir el éster etílico del ácido 3-etoxi-1 H-indol-2-carboxílico 6 (R1 = etilo) en forma de un sólido blanco. Hidrolizar el éster para obtener el ácido carboxílico 7 (R1 = etilo) usando el Procedimiento Sintético General IX y después transformar el ácido carboxílico en la amida primaria correspondiente como se ha descrito en - - el Procedimiento Sintético General V para producir el compuesto del título Ir en forma de un sólido castaño (124 mg), tic (gel de sílice) Rf = 0,07.

Amida del ácido 3-isopropoxi-1 H-indol-2-carboxílico (Is) Hacer reaccionar el éster etílico del ácido 3-diazo-3H-indol-2-carboxílico, 5, (300 mg, 1 ,38 mmol) con isopropanol (5,0 equiv., 0,53 mg, 6,90 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General VIII para producir el éster etílico del ácido 3-isopropoxi-1 H-indol-2-carboxílico 6 (R1 = isopropilo) en forma de un sólido blanco (33 mg); tic (gel de sílice) Rf = 0,45. Hidrolizar el éster para obtener el ácido carboxílico 7 (R1 = isopropilo) usando el Procedimiento Sintético General IX y después transformar el ácido carboxílíco en la amida primaria correspondiente como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General V para producir el compuesto del título Is en forma de un sólido castaño (126 mg), tic (gel de sílice) Rf = 0,10.

Amida del ácido 3-terc-butoxi-1 H-indol-2-carboxílico (It) Hacer reaccionar el éster etílico del ácido 3-diazo-3H-indol-2- carboxílico, 5, (220 mg, 1 ,0 mmol) con t-BuOH (10,0 equiv., 0,95 ml, 10,0 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General VIII para producir el éster etílico del ácido 3-t-butoxi-1 H-indol-2-carboxílico 6 (R1 = terc- butilo, 149 mg) en forma de un sólido blanco. Hidrolizar el éster para obtener el ácido carboxílico 7 (R1 = terc-butílo) usando el Procedimiento Sintético General IX y después transformar el ácido carboxílico en la amida primaría - - correspondiente como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General V para producir el compuesto del título It en forma de un sólido verde claro (39 mg), tic (gel de sílice) Rf = 0,09.

Amida del ácido 3-benciloxi-1 H-indol-2-carboxílico (lu) Hacer reaccionar el éster etílico del ácido 3-diazo-3H-indol-2-carboxílíco, 5, (305 mg, 1 ,4 mmol) con alcohol bencílico (5,0 equiv., 0,73 ml, 7,05 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General VIII para producir el éster etílico del ácido 3-benciloxi-1 H-indol-2-carboxílico 6 (R1 = bencilo) en forma de un sólido blanco [MS obs. = 296 (M+ 1 )]. Hidrolizar el éster para obtener el ácido carboxílico 7 (R1 = bencílo) usando el Procedimiento Sintético General IX y después transformar el ácido carboxílico en la amida primaría correspondiente como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General V para producir el compuesto del título lu en forma de un sólido castaño (115 mg), tic (gel de sílice) Rf = 0,1.

Síntesis de Amidas Secundarias Iv-lai - - a) carbonildiimidazol/THF y morfolina, piperidina, pirrolidina o N-(terc- butoxicarbonil)piperazina; b) NaH/DMF/R1-S-S-R1; c) CF3CO2H/HOAC para b) retirar el grupo protector de t-Boc cuando esté presente; d) H2O2. (3-Bencenosulfonil-5-cloro-1 H-indol-2-il)-morfolin-4-il-metanona M Tratar la 5-cloro-(1 H-indol-2-il)-morfolin-4-il-metanona 8 (X = Cl, R4 = morfolín-4-ilo) con disulfuro de fenilo como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para dar 3-fenilsulfanil-5-cloro-1 H-indol- 2-il)-morfolin-4-íl-metanona. Tratar la 3-fenilsulfanil-5-cloro-1 H-indol-2-il)-morfolin-4-il-metanona con H2O2 (al 30% p/v, 2,5 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vllc para dar el compuesto del título Iv en forma de un sólido blanco. (5-Fluoro-3-p-tolilsulfanil-1 H-indol-2-il)-pirrolidin-1 -il-metanona (Iw) Tratar el ácido 5-fluoro-1 H-indol-2-carboxílico 3 (X = F, 516 mg, 3,0 mmol) con pirrolidina (3,0 equiv., 0,76 ml, 9,0 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Via para producir la 5-fluoro-1 H-indol-2- ¡l-pirrolidin-1 -il-metanona 8 (X = F, R4 = pirrolidin-1 -ilo; 620 mg, 89%) en forma de un sólido blanco, p.f. 254-255°C. 1H RMN (DMSO-d6) d 11 ,7 (s a, 1 H), 7,5- 7,4 (m, 2H), 7,1 (td, 1H), 6,9 (s, 1 H), 3,8 (t, 2H), 3,5 (t, 2H), 2,0-1 ,9 (m, 4H).

Tratar la 5-fluoro-1 H-indol-2-íl-pirrolidin-1 -il-metanona (327 mg, 2,0 mmol) con - - disulfuro de p-tolilo (450 mg, 2,6 mmol, 1 ,3 equiv.) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para producir el compuesto del título Iw ( 334 mg, 47%) en forma de un sólido blanco amorfo: 1H RMN (DMSO-d6) d 12,2 (s a, 1 H), 7,5 (m, 1 H), 7,2-7,0 (m, 6H), 3,5 (m, 2H), 2,2 (s, 3H), 1 ,9-1 ,7 (m, 4H); m/z = 355 (M + 1 ). (3-Fenilsulfanil-1 H-¡ndol-2-il)-pipe?din-1 -il-metanona (Ix) Tratar el ácido 1 H-indol-2-carboxílico 3 (X = H, 750 mg, 4,66 mmol) con piperidina (3,0 equiv., 1 ,4 ml, 13,98 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Via para producir la 1 H-indol-2-il-piperidin- 1 -il-metanona 8 (X = H, R4 = piperídin-1-ilo; 979 mg, 92%) en forma de un sólido blanco, p.f. 161-162°C. 1H RMN (DMSO-d6) d 11 ,5 (s, 1 H), 7,6 (d, 1 H), 7,4 (d, 1 H), 7,2 (t, 1 H), 7,1 (t, 1 H), 6,7 (s, 1 H), 3,7 (m, 4H), 1 ,7-1 ,5 (m, 6H). Tratar la 1 H-indol-2-¡l-pipeñdin-1-íl-metanona (456 mg, 2,0 mmol) con disulfuro de fenilo (480 mg, 2,2 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para producir el compuesto del título Ix (440 mg, 65%) en forma de un aceite opaco. 1H RMN (DMSO-d6) d 12,1 (s a, 1 H), 7,5 (d, 1 H), 7,4 (d, 1 H), 7,3-7,1 (m, 3H), 7,1-7,0 (m, 4H), 6,7 (s, 1 H), 3,6 (m, 2H), 3,4 (s, 8H), 3,2 (m, 2H), 1 ,8 (m, 4H), 1 ,4 (m, 2H). m/z = 337 (M + 1 ). (5-Fluoro-3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-il)-pirrolidin-1 -il-metanona (Iv) Tratar el ácido 5-fluoro-1 H-indol-2-carboxílico 3 (X = F, 516 mg, 3,0 mmol) con pirrolidina (3,0 equiv., 0,76 ml, 9,0 mmol) como se ha descrito - - en el Procedimiento Sintético General Via para producir la 5-fluoro-1 H-indol-2-il-pirrolidin-1 -il-metanona 8 (X = F, R4 = pirrolidin-1-ilo; 620 mg, 89%) en forma de un sólido blanco, p.f. 254-255°C. 1H RMN (DMSO-d6) d 11 ,7 (s a, 1 H), 7,5-7,4 (m, 2H), 7,1 (td, 1 H), 6,9 (s, 1 H), 3,8 (t, 2H), 3,5 (t, 2H), 2,0-1 ,9 (m, 4H). Tratar la 5-fluoro-1 H-indol-2-il)-pirrolidin-1 -il-metanona (200 mg, 0,86 mmol) con disulfuro de fenilo (1 ,5 equiv., 281 mg, 1 ,29 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para producir el compuesto del título ly (220 mg, 75%) en forma de un sólido amarillo pálido, p.f. 184-186°C. 1H RMN (DMSO-d6) d 12,3 (s a, 1 H), 7,5 (m, 1 H), 7,2 (m, 2H), 7,1-7,0 (m, 5H), 3,5 (m, 2H), 1 ,9-1 ,7 (m, 4H); m/z = 341 (M + 1 ). [3-(2-Amino-fenilsulfanil)-1 H-indol-2-ill-pirrolidin-1 -il-metanona (Iz) Tratar el ácido 1 H-indol-2-carboxílico 3 (X = H, 2,0 g, 12,4 mmol) con pirrolidina (3,0 equiv., 3,1 ml, 37,2 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Via para producir la 1 H-indol-2-il-pirrolidín-1- il-metanona 8 (X = H, R4 = pirrolidin-1-ilo; 2,46 g, 93%) en forma de un sólido blanco, p.f. 213-214°C. 1H RMN (DMSO-d6) d 11 ,5 (s a, 1 H), 7,6 (d, 1 H, J = 8,1 Hz), 7,4 (d, 1 H, J = 8,1 Hz), 7,2 (m, 1 H), 7,1 (m, 1 H), 6,9 (m, 1 H), 3,8 (m, 2H), 3,5 (m, 2H), 1 ,9-1 ,8 (m, 4H). Tratar la 1 H-indol-2-il-pirrolidin-1-il- metanona (428 mg, 2,0 mmol) con disulfuro de 2-amino-fenilo (1 ,4 equiv., 694 mg, 2,8 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para producir el compuesto del título Iz (468 mg, 69%) en forma de un sólido blanco. 1H RMN (DMSO-d6) d 11 ,9 (s a, 1 H), 7,5 (d, 1 H), 7,4 (d, 1 H), 7,2 (m, - - H), 7,1 (m, 1 H), 7,0 (m, 1 H), 6,9 (d, 1 H), 6,7 (m, 1 H), 5,5 (s a, 2H), 3,5 (m, H), 1 ,9-1 ,7 (m, 4H); m/z = 338 (M + 1 ).

Hidrocloruro de [3-(2-amino-fenilsulfanil)-1 H-indol-2-ill-pírrolidin-1 -il-metanona (laa) Agitar la [3-(2-amino-fenilsulfanil)-1 H-indol-2-il]-pirrolidin-1 -il-metanona (Iz, 60 mg) en Et2O (5 ml) con HCl 1 N (1 ml) y recoger el precipitado por filtración. Lavar la torta de filtro con Et2O y secar para producir el compuesto del título laa (48 mg) en forma de un sólido blanco, p.f. 154-155°C; m/z = 338 (M + 1 ). [3-(2-Amino-fen¡lsulfan¡l)-1 H-indol-2-¡n-piperidin-1 -il-metanona (lab) Tratar el ácido 1 H-indol-2-carboxílico 3 (X = H, 750 mg, 4,66 mmol) con piperidina (3,0 equiv., 1 ,4 ml, 13,98 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Via para producir la 1 H-indol-2-il-piperidin-1 -il-metanona 8 (X = H, R4 = piperidin-1-ilo; 979 mg, 92%) en forma de un sólido blanco. Tratar la 1 H-indol-2-il-piperidin-1 -il-metanona (116 mg, 0,51 mmol) con disulfuro de 2-aminofenilo (347 mg, 1 ,4 equiv.) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para producir el compuesto del título lab (103 mg, 29%) en forma de un sólido castaño, m/z = 352 (M + 1 ). [3-(2-Amino-fenilsulfanil)-5-fluoro-1 H-indol-2-ill-piperidin-1-il- - - metanona (lac) Tratar el ácido 5-fluoro-1 H-indol-2-carboxílico 3 (X = F, 1 ,7 g, 9,5 mmol) con piperidina como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Via para producir la 5-fluoro-1 H-indol-2-il-piperidin-1 -il-metanona 8 (X = F, R4 = piperidin-1-ilo; 2,3 g, 100%) en forma de un sólido blanco. 1H RMN (DMSO-d6) d 11 ,7 (s a, 1 H), 7,5-7,3 (m, 2H), 7,1-7,0 (m, 1 H), 6,7 (s, 1 H), 3,7 (m, 4H), 1 ,7-1 ,5 (m, 6H). Tratar la 5-fluoro-1 H-indol-2-il-piperidin-1 -il-metanona (125 mg, 0,51 mmol) con disulfuro de 2-aminofenilo (347 mg, 1 ,4 equiv.) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para producir el compuesto del título lac (92 mg, 25%) en forma de un sólido de color marfil, m/z = 369 (M + 1 ). [5-Fluoro-3-(p-tolueno-4-sulfinil)-1 H-indol-2-ill-pirrolidin-1-il- metanona dad) Tratar el compuesto 1w (100 mg, 0,28 mmol) con H2O2 (5 ml) en MeCN (5 ml) y Na2CO3 (50 mg) para producir el compuesto del título lad (10 mg) en forma de un sólido blanco. 1H RMN (DMSO-d6) d 12,4 (s a, 1 H), 7,6 (d, 2H), 7,5 (m, 1 H), 7,3 (d, 2H), 7,1-7,0 (m, 2H), 3,6-3,5 (m, 4H), 2,3 (s, 3H), 1 ,9 (m, 4H); m/z = 371 (M + 1 ).

Hidrocloruro de (3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-il)-piperazín-1 -il- metanona (1ae) Tratar el ácido 1 H-indol-2-carboxílico 3 (X = H, 1 ,0 mg, 6,21 - - mmol) con N-(terc-butoxicarbonil)piperazína (1 ,10 equiv., 1 ,3 g, 6,83 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Via para producir el éster terc-butílico del ácido 4-(1 H-indol-2-carbonil)-piperazina-1 -carboxílico 8 (X = H, R4 = éster terc-butílico del ácido piperazín-4-il-1 -carboxílico; 2,0 g, 99%) en forma de un sólido blanco, p.f. 205-206°C. 1H RMN (DMSO-d6) d 11 ,6 (s a, 1 H), 7,6 (d, 1 H), 7,4 (d, 1 H), 7,2 (t, 1 H), 7,1 (t, 1 H0, 6,8 (s, 1 H), 3,8-3,7 (m, 4H), 3,5-3,4 (m, 4H), 1 ,4 (s, 9H); m/z = 330 (M + 1 ). Tratar el éster terc-butílico del ácido 4-(1 H-indol-2-carbonil)-piperazina-1 -carboxílico (329 g, 1 ,0 mmol) con disulfuro de fenilo (283 mg, 1 ,3 equiv., 1 ,3 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla y después tratar con ácido trifluoroacético (4 ml) en HOAc, para retirar el grupo protector de Boc, para producir (3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-il)-piperazín-1 -il-metanona. Disolver la (3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-il)-piperazin-1 -il-metanona en EtOAc y tratar con HCl 1 N/Et2O para proporcionar el compuesto del título lae (103 mg, 29%) en forma de un sólido castaño, p.f. 240°C (desc.); m/z = 338 (M + 1 ). [5-Fluoro-3-(pi din-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-ill-pirrolidin-1 -il- metanona (laf) Tratar el ácido 5-fluoro-1 H-indol-2-carboxílico 3 (X = F, 516 mg, 3,0 mmol) con pirrolidina (3,0 equiv., 0,76 ml, 9,0 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Via para producir la 5-fluoro-1 H-indol-2- il-pirrolidin-1 -il-metanona 8 (X = F, R4 = pirrolidin-1-ilo; 620 mg, 89%) en forma de un sólido blanco, p.f. 254-255°C. 1H RMN (DMSO-d6) d 11 ,7 (s a, 1 H), 7,5- - - 7,4 (m, 2H), 7,1 (td, 1H), 6,9 (s, 1H), 3,8 (t, 2H), 3,5 (t, 2H), 2,0-1,9 (m, 4H). Tratar la 5-fluoro-1H-indol-2-il-pirrolidin-1-il-metanona (464 mg, 2,0 mmol) con 2,2'-ditiopiridina (220 mg, 2,6 mmol, 1,3 equiv.) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para producir el compuesto del título laf ( 258 mg, 38%) en forma de un sólido blanco: p.f.204-206°C; 1H RMN (DMSO-d6) d 12,2 (s a, 1H), 7,5 (m, 1H), 7,2-7,0 (m, 6H), 3,5 (m, 2H), 2,2 (s, 3H), 1,9-1,7 (m, 4H);m/z = 355(M + 1). [3-(P¡ñdin-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-il1-pirrolidin-1 -il-metanona (laq) Tratar el ácido 1H-indol-2-carboxílico 3 (X = H, 2,0 g, 12,4 mmol) con pirrolidina (3,0 eguiv., 3,1 ml, 37,2 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Via para producir la 1H-índol-2-il-pirrolidin-1- il-metanona 8 (X = H, R4 = pirrolidín-1-ilo; 2,46 g, 93%) en forma de un sólido blanco, p.f.213-214°C.1H RMN (DMSO-d6) d 11,5 (s a, 1H), 7,6 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,4 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,2 (m, 1H), 7,1 (m, 1H), 6,9 (m, 1H), 3,8 (m, 2H), 3,5 (m, 2H), 1,9-1,8 (m, 4H). Tratar la 1H-indol-2-il-pirrolidin-1 -il- metanona (214 mg, 1,0 mmol) con 2,2'-ditiopiñdina (1,3 equiv., 286 mg, 1,3 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para producir el compuesto del título lag (200 mg, 69%) en forma de un sólido amarillo pálido, p.f.211-213°C.1H RMN (DMSO-d6) d 12,3 (s a, 1H), 8,4 (m, 1H), 7,5 (m, 2H), 7,2-7,0 (m, 3H), 6,7 (d, 1H), 1,9-1,7 (m, 4H); m/z = 342 (M + 1).

- - Piperidin-1 -il-[3-(piridin-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-ill-metanona (lah) Tratar el ácido 1 H-indol-2-carboxílico 3 (X = H, 750 mg, 4,66 mmol) con piperidina (3,0 equiv., 1 ,4 ml, 13,98 mmol) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Via para producir la 1 H-indol-2-il-piperidin-1 -il-metanona 8 (X = H, R4 = pipehdin-1-ilo; 979 mg, 92%) en forma de un sólido blanco. Tratar la 1 H-indol-2-il-piperidin-1 -il-metanona (114 mg, 0,50 mmol) con 2,2'-ditiopihdina (1 ,3 equiv., 143 mg) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para producir el compuesto del título lah (117 mg, 69%) en forma de un sólido amarillo pálido, m/z = 338 (M + 1 ). [5-Fluoro-3-(piridin-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-ill-piperidin-1 -il-metanona (lai) Tratar el ácido 5-fluoro-1 H-indol-2-carboxílico 3 (X = F, 1 ,7 g, 9,5 mmol) con piperidina como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Via para producir la 5-fluoro-1 H-indol-2-il-piperidin-1 -il-metanona 8 (X = F, R4 = piperidin-1-ilo; 2,3 g, 100%) en forma de un sólido blanco. 1H RMN (DMSO-d6) d 11 ,7 (s a, 1 H), 7,5-7,3 (m, 2H), 7,1-7,0 (m, 1 H), 6,7 (s, 1 H), 3,7 (m, 4H), 1 ,7-1 ,5 (m, 6H). Tratar la 5-fluoro-1 H-indol-2-il-pipeñdin-1 -il-metanona (123 mg, 0,50 mmol) con 2,2'-ditiopirídina (1 ,3 equiv., 143 mg) como se ha descrito en el Procedimiento Sintético General Vlla para producir el compuesto del título lai (120 mg, 68%) en forma de un sólido amarillo, m/z = 356 (M + 1 ).

Tabla 1 Tabla 2 - - MÉTODOS BIOLÓGICOS Ensayo en Placa de Filtro de 33P-ATP de Caseína Quinasa Épsilon para la Selección de Inhibidores de CK1e Propósito: Este ensayo mide el efecto de compuestos para inhibir la fosforilación del sustrato caseína por la enzima caseína quinasa 1e usando un ensayo de filtración de 33P-ATP in vitro. Los compuestos se ensayan a cinco concentraciones por duplicado con el fin de obtener los valores de CI50 o del porcentaje de inhibición a una concentración 10 micromolar que se han resumido en la tabla 4. Materiales: Equipo: Robot de Manipulación de Líquidos Beckman Biomek 2000 Pipeteador de 96 Canales Automático Beckman Multimek 96 Kit Básico de Colector de Vacío n° MAVM0960R Millipore Distribuidor de Líquidos Titertek Multidrop Contador de Centelleo de Líquidos Packard TopCount NXT Placas: Placa n° 9018 Costar EIA/RIA Placa de Poliestireno de fondo en U de 96 pocilios Falcon n° 353910 Placas de Filtración de 96 pocilios Millipore Multiscreen n° MAPHNOB50 Placas Adaptadoras Millipore Multiscreen TopCount nc SE3M203V6 Productos químicos: EGTA de SIGMA n° E-3889 Caseína (desfosforilada) de SIGMA n° C-4032 ATP de SIGMA n° A-7699 DTT de Fisher Bíotech n° BP1725 Ácido tricloroacético de SIGMA n° T-6399 ?-33P-ATP 1 mCi / 37MBq de Perkin Elmer Life Sciences n° NEG-602H Enzima: - - Caseína quinasa 1e a una concentración final de 0,58 mg/ml obtenida a partir de procesos de fermentación y purificación bien conocidos para los especialistas en la técnica. La enzima se almacena en forma de alícuotas de 100 ml a menos 80°C. Compuestos: Los compuestos para el ensayo se suministran en forma de solución madre congelada del compuesto 10 mM disuelto en DMSO al 100%. Condiciones de Ensayo: El volumen de ensayo total final por pocilio es igual a 50 µl obtenidos como se indica a continuación: 5 µl de solución madre de compuesto diluida (10, 1 , 0,1 , 0,01 0 0,001 mM), 5 µl de caseína desfosforilada a una concentración final de 0,2 µg/µl, 20 µl de CK1e a una concentración final de 3 ng/µl, y 20 µl de ?-33P-ATP a una concentración final de 0,02 µCi/µl mezclado con ATP frío (final 10 mM). Metodología: 1. Se preparan 500 ml de tampón de ensayo nuevo: Tris 50 mM pH 7,5, MgCI2 10 mM, DTT 2 mM y EGTA 1 mM 2. Los compuestos a evaluar se obtienen como 10 µl de solución madre 10 mM disuelta en SDMSO al 100%. Usando un robot de - manipulación de líquidos Biomek 2000, se realizan diluciones en serie para producir diluciones de compuesto finales 10, 1 , 0,1 , 0,01 y 0,001 µM añadidas como adiciones de 5 µl a placas Falcon de fondo en U. Típicamente se ensayan 8 compuestos por placa de 96 pocilios, sirviendo las columnas 1 y 12 como pocilios de control. Un ensayo de selección de rutina constará de 32 compuestos, es decir 4 placas de ensayo. 3. Los mapas de la placas de ensayo se establecen de acuerdo con el siguiente patrón CKIePlateMap.xls Una vez añadidos los 5 µl de compuesto como se indica, se añaden 5 µl de caseína desfosforilada (disuelta en H2O destilada)(0,2 µg/µl) y 20 µl de CK1e (3 ng/µl) a los pocilios apropiados. Finalmente, se añaden 20 µl de ?-33P-ATP (0,02 µCi/µl)/10 µM de ATP frío (equivale a aproximadamente 2 x 106 CPM por - - pocillo). 6. La placa de ensayo Falcon de fondo en U que contiene el volumen de reacción anterior de 50 µl se agita vorticialmente y después se incuba a temperatura ambiente durante 2 horas. 7. Después de las 2 horas, la reacción se interrumpe mediante la adición de 65 µl de ATP 2 mM enfriado con hielo (preparado en tampón de ensayo) a las placas de ensayo usando un Beckman Multimek 8. Al mismo tiempo, se añaden 25 µl de TCA enfriado con hielo al 100% preparado en H2O destilada a un número correspondiente de placas de filtro Millipore MAPH. 9. Usando un pipeteador portátil de 8 canales, se transfieren 100 µl de la mezcla de reacción desde la placa Falcon de fondo en U a las placas de filtro Millipore MAPH prehumedecidas con TCA. 10. Las placas de filtro Millipore MAPH se mezclan suavemente y se dejan a temperatura ambiente durante al menos 30 minutos para precipitar las proteínas. 11. Después de 30 minutos, las placas de filtro se ponen en un colector de vacío Millipore y se filtran a no más de 8 mm de Hg, ya que los filtros MAPH tienden a "retener aire" a altas potencias de vacío. 12. Las placas de filtro se lavan secuencialmente y se filtran con 2x150 µl de TCA al 20%, 2x150 µl de TCA al 10% y 2x150 µl de - TCA al 5% (total de 6 lavados por placa/900 µl por pocilio). 13. Las placas se dejan secar durante una noche a temperatura ambiente. Al día siguiente, se añaden 40 µl de líquido de centelleo Packard Microscint-20 por pocilio usando un distribuidor Titertek Multidrop; las placas se cierran herméticamente y se cuentan durante 2 minutos/pocilio en un contador de centelleo Packard Topcount NXT (se capturan los valores de CPM/pocillo). Cálculos: 1. Se capturan los datos de cuentas por minuto (CPM) y se importan en una base de datos de cálculo y archivo de datos patentada (Activity Base de IDBS versión 5.0). 2. La columna 1 para cada placa refleja una actividad de fosforilación total de la enzima en ausencia de cualquier compuesto inhibidor y, de esta manera, representa 100%. La columna 12 refleja cualquier actividad de fosforilación no específica/radiactividad retenida en ausencia de compuesto inhibidor y enzima. Típicamente, se observa aproximadamente 1 % de las CPM totales que son "no específicas". 3. Después de haber determinado las CPM "totales" y "no específicas" para cada placa, se puede determinar el porcentaje de inhibición de la capacidad de la enzima para fosforilar el sustrato para cada concentración de compuesto de ensayo.

Estos datos de porcentaje de inhibición se usan para calcular un valor de CI50 (concentración a la que un compuesto puede inhibir la actividad enzimática en 50%) para un compuesto usando un programa de ajuste de curva no lineal contenido con el protocolo de cálculo Activitybase (DG0027-CK1-D-BL) (Estudio: RESR0290). 4. Los estudios cinéticos han determinado que el valor de Km para ATP es 21 µM en este sistema de ensayo.

Ensayo en Placa con Membrana de Afinidad de Estreptavídina de la Caseína Quinasa 1d con respecto a Inhibidores CKld Propósito: Evaluar la actividad CKld de los compuestos de ensayo en Placas de Captura de Biotina con Membrana de Afinidad de Estreptavidina (Promega V7542) Suministros y reactivos HEPES Sigma n° H3375 PM = 238,3; ß-Glicerol fosfato Sigma n° G-9891 MW = 216,0; EDTA 0.5M, pH 8,0 GibcoBRL; Ortovanadato sódico ACROS n° 205330500 PM = 183,9; DTT (DL-ditiotreitol) Sigma n° D-5545 PM = 154,2; cloruro de magnesio ACROS n° 41341-5000 PM = 203,3; ATP Sigma n° A-7699 PM = 551 ,1 ; ?-33P ATP NEN n° NEG602H; Caseína quinasa 1d Sigma n° C4455; sustrato de caseína quinasa 1 New England Peptide Biotin-RRKDLHDDEEDEAMSITA PM = 2470 La disolución tampón de quinasa (KB, 100 ml) se prepara como sigue: HEPES 50 mM, pH 8,0 5 ml de solución madre 1 M MgCI 10 mM 1 ml de solución madre 1 M ß-glicerofosfato 10 mM 1 ml de solución madre 1 M EDTA 2,5 mM 500 µl de solución madre 500 mM ortovanadato sódico 1 mM 100 µl de solución madre 1 M DTT 1 mM 100 µl de solución madre 1 M agua 92,3 ml La mezcla principal de ATP se prepara como sigue: Se prepara 1 ml de la disolución de ATP 1 M en agua (solución madre de ATP 1 M). A 12 ml de tampón quínasa (KB): Añadir 12 µl de solución de ATP 1 M, después Añadir 12 µl de 33P ATP (10 µCi/µl), NEG602H, Perkin Elmer Se prepara la placa de reacción y se realiza el ensayo como sigue: 1. Añadir 10 µl de KB por pocilio con o sin el compuesto de ensayo inhibidor a los pocilios de la placa de reacción 2. Añadir 60 µl de KB por pocilio 3. Añadir 10 µl de sustrato peptídico 500 µM por pocilio 4. Llevar la placa hasta 37°C 5. Añadir 10 µl de dilución 1 :10 de CK1d por pocilio = 0,42 µg o 0,68 unidades 6. Iniciar la reacción con 10 µl de Mezcla Maestra de ATP por pocilio 7. Poner la placa de reacción en un incubador a 37°C durante 10 minutos. 8. Interrumpir la reacción con 10 µl de ATP 1 M. Transferir 20 µl a la placa SAM y dejar en reposo durante 10 minutos a temperatura ambiente. 9. Lavar tres veces con 100 µl de solución de NaCI 2 M, después tres veces con 100 µl de solución de NaCI 2 M y con solución de H3PO4 al 1% y después tres veces con 100 µl de agua en un colector de vacío. 10. Secar la placa de filtro bajo una lámpara durante 30 minutos. 11. Cerrar la parte inferior de la placa y añadir 20 µl de MicroScint 20 12. Medir en un TOPCOUNT.

Procedimientos experimentales de ensayo circadiano celular Cultivo celular: Los cultivos de fibroblastos Mper1-luc Rat-1 (P2C4) se repartieron cada 3-4 días (-10-20% de confluencia) en matraces de cultivo de tejidos de poliestireno ventilados de 150 cm2 (Falcon n° 35-5001 ) y se mantuvieron en medio de crecimiento [EMEM (Cellgro n° 10-010-CV); suero bovino fetal al 10% (FBS; Gibco n° 16000-044); y 50 U.l./ml de penicilina-estreptomicina (Cellgro N° 30-001 -C1 )] a 37°C y con 5% de CO2. Transfección estable: Se cotransfectaron cultivos de fibroblastos Rat-1 a una confluencia de 30-50% con vectores que contenían el marcador seleccionable de resistencia a Zeocin para la transfección estable y un gen indicador de lucíferasa dirigido por el promotor de mPer-1. Después de 24-48 horas, los cultivos se repartieron en placas de 96 pocilios y se mantuvieron en - - medio de crecimiento suplementado con 50-100 µg/ml de Zeocin (Invitrogen n° 45-0430) durante 10-14 días. En los transfectantes estables resistentes a Zeocin se evaluó la expresión del indicador suplementando el medio de crecimiento con luciferina 100 µM (Promega n° E1603) y ensayando la actividad luciferasa en un contador de centelleo TopCount (Packard Modelo n° C384V00). Los clones de Rat-1 que expresaban tanto resistencia a Zeocin como actividad luciferasa dirigida por mPerl se sincronizaron por choque con suero de caballo al 50% [HS (Gibco n° 16050-122)] y se evaluaron con respecto a la actividad indicadora circadiana. Para ensayar el compuesto se seleccionó el clon P2C4 de fibroblastos Mperl -luc Rat-1. Protocolo de sincronización: Se cultivaron fibroblastos Mper1-luc Rat-1 (P2C4) (40-50% de confluencia) en placas de cultivo de tejidos opacas de 96 pocilios (PerkinElmer n° 6005680) y se mantuvieron en medio de crecimiento suplementado con 100 µg/ml de Zeocin (Invitrogen n° 45-0430) hasta que los cultivos alcanzaron una confluencia de 100% (48-72 h). Los cultivos se sincronizaron con 100 µl de medio de sincronización [EMEM (Cellgro n° 10-010-CV); 100 U.l./ml de penicilina-estreptomicina (Cellgro n° 30- 001-Cl ); HS al 50% (Gibco n° 16050-122)] durante 2 horas a 37°C y con 5% de CO2, Después de la sincronización, los cultivos se aclararon con 100 µl de EMEM (Cellgro n° 10-010-CV) durante 10 minutos a temperatura ambiente.

Después del aclarado, el medio se reemplazó con 300 µl de medio independiente de CO2 [CO2l (Gibco n° 18045-088); L-glutamina 2 mM (Cellgro n° 25-005-C1 ); 100 U.l./ml de penicilina-estreptomicina (Cellgro n° 30-001 -C1 ); - - y luciferina 100 µM (Promega n° E1603)]. Los compuestos ensayados con respecto al ritmo circadiano se añadieron a medio independiente de CO2 en DMSO al 0,3% (concentración final). Los cultivos se sellaron inmediatamente con película TopSeal-A (Packard n° 6005185) y se transfirieron para medir la actividad luciferasa. Medición Automática del Indicador Circadiano: Después de la sincronización, las placas de ensayo se mantuvieron a 37°C en un incubador de cultivo de tejidos (Forma Scientific Model n° 3914). La actividad luciferasa in vivo se estimó midiendo la producción de luz relativa en un contador de centelleo TopCount (Packard Model n° C384V00). Las placas se transfirieron desde el incubador al lector usando un brazo robótico ORCA (Beckman Instruments) y el software de programación automática SAMI-NT (Versión 3.3; SAGIAN/Beckman Instruments). Análisis de los Datos: Se usaron Microsoft Excel y XLfit (Versión 2,0,9; IDBS) para importar manipular y representar los datos. El análisis del periodo se realizó determinando el intervalo entre el mínimo de producción de luz relativo durante varios días o por la Transformada de Fouríer. Los dos métodos produjeron estimaciones del periodo casi idénticas en una serie de periodos circadianos. La potencia se presenta como EC?t+,h, que se presenta como la concentración micromolar eficaz que indujo un alargamiento del periodo de 1 hora. Los datos se analizaron por ajuste de una curva hiperbólica a los datos expresados como cambio de periodo (eje y) frente a la concentración de compuesto de ensayo (eje x) en XLfit y a partir de esta curva - - se interpoló EC?t?h- ENSAYO DE LOS RITMOS CIRCADIANOS EN RATA Este ensayo proporciona una manera para evaluar el efecto de un compuesto de ensayo sobre el ritmo circadiano in vivo. Usar ratas Wistar macho (Charles River) con una masa corporal de partida de 200-250 g. Encerrar cada animal individualmente antes del ensayo en un medio controlado y mantener una temperatura ambiente termoneutra de 24-28°C con un ciclo de luz oscuridad de 12/12 horas (h) (la luz se enciende a las 06:00 h), y proporcionar pienso de laboratorio convencional y agua ad libítum. Implantar en cada rata un transmisor de biotelemetría íntra-abdominal (Minnimítter-VMFH, serie 4000, Sunriver, OR) para controlar la temperatura corporal central y la actividad general. Implantar cada transmisor según las recomendaciones del fabricante con anestesia general con ketamina/xilazina (78/13 mg kg-1 , ip) y dejar que los animales se recuperen durante 7-10 días.

Después del periodo de recuperación, establecer el ciclo circadiano interno de cada animal, poner los animales en un ciclo de oscuridad constante (ciclo de luz/oscuridad de 0/24 h) y dejar que los animales se muevan libremente durante 7-10 días antes de administrar los compuestos de ensayo. Durante el régimen de dosificación, los animales reciben vehículo o compuesto (ip, se, o po) a CT (Tiempos Circadianos) específicos durante un periodo de 48 horas. Controlar a los animales durante 5 a 7 días en un ciclo de oscuridad constante (ciclo de luz/oscuridad de 0/24 h) después de finalizar el régimen de - - dosificación. Para cada experimento, coger datos de temperatura abdominal y de actividad general a intervalos de 5 minutos. Para el análisis, usar el software VitalView y Actiview suministrado por Minimitter. Representar en un gráfico las temperaturas abdominales observadas obtenidas para cada rata el primer día en una línea horizontal. Alinear la línea de temperaturas abdominales observadas por debajo de la línea de las abscisas con el tiempo circadiano (eje x). Representar en un gráfico las temperaturas abdominales observadas para cada día sucesivo como líneas individuales de una manera similar para proporcionar la ordenada (eje y, en días). Conectar la elevación inicial de la temperatura corporal central que se produce cada día con una línea recta, lo cual permite usar múltiples días para estimar la fase circadiana en cualquier día dado para cada rata individual. Determinar el efecto del tratamiento sobre la fase usando la estimación de línea recta de múltiples días de la fase antes y después de la dosificación. El tratamiento con compuesto activo originará un mayor desplazamiento entre la línea recta que conecta la elevación diaria inicial de la temperatura corporal central antes del tratamiento con compuesto y la línea recta que conecta la elevación inicial de la temperatura corporal central después del tratamiento con compuesto frente a las líneas de control antes y después del tratamiento con vehículo. Calcular la diferencia entre las fases proyectadas en el día previo a la dosificación para los animales tratados. Usar ANOVA, junto con el ensayo t de Student, para comparar los desplazamientos circadianos de la temperatura media corporal en minutos entre grupos.

Tabla 3 Datos Biológicos* * indica el promedio de dos o más determinaciones; compuestos Iv-lai: Inhibición de CKIe Cl50 >10 µM

Claims

REIVINDICACIONES

1.- Un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad o trastorno que mejora por la inhibición de la actividad de la caseína quinasa le que comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, un enantiómero, un racemato o un tautómero de dicho compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde X es H, Cl, F, Br, NO2, CN, OR2, NR2R2, HNSO2-alquilo d-3, o NHCO-alquilo C^; Y es -S(O)n- o -O- donde n es 0, 1 ó 2; R1 es 1 ) arilo, sin sustituir o sustituido con uno o más de: a) alcoxi C?_5, bb)) OH, c) halógeno, ) NR2R2, e) alquilo C?-5, sin sustituir o sustituido con uno o más - de: i) OH o ii) alcoxi C-1.5; 2) heterociclo, sin sustituir o sustituido con uno o más de: a) alquilo C?-5, sin sustituir o sustituido con uno o más de: i) OH o ii) alcoxi C-?_5, b) alcoxi C-?-5, c) OH, d) halógeno, o e) NR2R2; 3) alquilo C1-5, sin sustituir o sustituido con uno o más de: a) alquilo C1-5, b) alcoxi C?_5, c) OH, o d) arilo, sin sustituir o sustituido con uno o más de: i) alquilo C1-5, ii) alcoxi C-?-5, iii) OH, ¡v) halógeno, o v) NR2R2; Z es 1 ) C(=O)NR2R3 o 2) C(=O)R4; R2 es hidrógeno o alquilo C1-3; R3 es hidrógeno, alquilo C1.5, o cicloalquilo C3-6; R4 es 1 -piperidinilo, 1-pirrolidinilo, 1 -piperazinilo o 4-morfolinilo, sin sustituir o sustituido con uno o más de: 1 ) alquilo C?-5, 2) alcoxi C-?-5, 3) OH, 4) halógeno, o 5) NR2R2.

2.- El método de acuerdo con la reivindicación 1 , en el que dicho inhibidor de la actividad de la caseína quinasa le produce un alargamiento del periodo del ritmo circadiano.

3.- El método de acuerdo con la reivindicación 1 , en el que la enfermedad o trastorno es un trastorno del estado de ánimo o un trastorno del sueno.

4.- El método de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el trastorno es un trastorno del estado de ánimo.

5.- El método de acuerdo con la reivindicación 4, en el que el trastorno del estado de ánimo se selecciona entre el grupo compuesto por un trastorno depresivo y un trastorno bipolar.

6.- El método de acuerdo con la reivindicación 5, en el que el trastorno depresivo es un trastorno depresivo mayor.

7.- El método de acuerdo con la reivindicación 5, en el que el trastorno bipolar se selecciona entre el grupo que consiste en trastorno bipolar I y trastorno bipolar II.

8.- El método de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el trastorno es trastorno del sueño.

9.- El método de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el trastorno del sueño es un trastorno del sueño del ritmo circadiano.

10.- El método de acuerdo con la reivindicación 9, en el que el trastorno del sueño del ritmo circadiano se selecciona entre el grupo compuesto por trastorno del sueño por cambio de turno, síndrome de desfase horario, síndrome de la fase del sueño avanzada y síndrome de la fase del sueño retardada. - -

11.- El método de la reivindicación 1 , en el que Y es S(O)2, Z es C(=O)NH2 o C(=O)NHCH3, y R1 es fenilo o piridinilo.

12.- El método de la reivindicación 11 , en el que Z es C(=O)NH2, y R1 es fenilo.

13.- El método de la reivindicación 12, en el que el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en: amida del ácido 3-bencenosulfonil-5-cloro-1 H-indol-2-carboxílico, y amida del ácido 3-bencenosulfonil-1 H-indol-2-carboxílico.

14.- El método de la reivindicación 11 , en el que Y es S, Z es C(=O)NHCH3, y R1 es fenilo o piridinilo.

15.- El método de la reivindicación 14, en el que el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en: metilamída del ácido 3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-carboxílico, y - - metilamida del ácido 3-(piridin-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-carboxílico.

16.- El método de la reivindicación 1 , en el que Y es O, Z es C(=O)NH2, y R1 es fenilo, fenilo sustituido, alquilo C?-5 o alquilo C-?-5 sustituido.

17.- El método de la reivindicación 16, en el que el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en: amida del ácido 3-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-(4-metoxi-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-(4-fluoro-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-(2-fluoro-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílíco, amida del ácido 3-(4-cloro-fenoxi-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-metoxi-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-etoxí-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-isopropoxi-1 H-índol-2-carboxílíco, amida del ácido 3-terc-butoxi-1 H-indol-2-carboxílico, y amida del ácido 3-benciloxi-1 H-indol-2-carboxílico.

18.- El método de la reivindicación 1 , en el que - Y es S, SO o S(O)2, Z es C(=O)R4, y R4 es 1 -piperidinilo, 1 -pírrolidinilo, 1 -piperazinilo o 4-morfolinilo.

19.- El método de la reivindicación 18, en el que el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en: (3-bencenosulfonil-5-cloro-1 H-índol-2-il)-morfolín-4-¡l-metanona, (5-fluoro-3-p-tolilsulfanil-1 H-indol-2-il)-pirrolidin-1 -il-metanona, (3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-il)-pipeñdin-1 -il-metanona, (5-fluoro-3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-il)-pirrolidin-1 -il-metanona, [3-(2-amino-fenilsulfanil)-1 H-indol-2-il]-pirrolidin-1 -il-metanona, [3-(2-amino-fenilsulfaníl)-1 H-indol-2-il]-piperidin-1-il-metanona, [3-(2-amino-fenilsulfanil)-5-fluoro-1 H-indol-2-il]-piperidin-1- il-metanona, [5-fluoro-3-(p-tolueno-4-sulfinil)-1 H-indol-2-¡l]-pirrolidin-1-il- metanona, hidrocloruro de (3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-il)-piperazin-1-íl- metanona, [5-fluoro-3-(p¡ñdin-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-il]-pirrolidin-1-il-metanona, [3-(piridin-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-il]-pirrolidin-1 -íl-metanona, piperidin-1-il-[3-(piridin-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-il]-metanona, y [5-fluoro-3-(piridin-2-ilsulfanil)-1 H-indol-2-il]-piperidin-1-il-metanona.

20.- El método de la reivindicación 1 , en el que Y es S, Z es C(=O)NH2, y R1 es piridinilo.

21.- El método de la reivindicación 20, en el que el compuesto es amida del ácido 3-(pi din-2-¡lsulfanil)-1 H-indol-2-carboxíl¡co.

22.- El método de la reivindicación 1 , en el que Y es S, Z es C(=O)NH2, y R1 es fenilo o fenilo sustituido. - -

23.- El método de la reivindicación 22, en el que el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en: amida del ácido 3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 5-bromo-3-fenilsulfanil-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-(2-amino-fenilsulfanil)-5-metoxi-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-(3-fluoro-fenilsulfanil-1 H-indol-2-carboxílico, amida del ácido 3-(2-amino-fenilsulfanil)-5-bromo-1 H-indol-2-carboxílíco, y amida del ácido 3-(2-amíno-fenilsulfanil)-1 H-índol-2-carboxílico.

24.- Un método para inhibir la actividad de la caseína quinasa le en un paciente que comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, un enantiómero, un racemato o un tautómero de dicho compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde - - X es H, Cl, F, Br, NO2, CN, OR2, NR2R2, HNSO2-alquilo C?_3, o NHCO-alquilo C1-3; Y es -S(O)n- o -O- donde n es 0, 1 ó 2; R1 es 1 ) arilo, sin sustituir o sustituido con uno o más de: a) alcoxi C?_5, b) OH, c) halógeno, d) NR2R2, e) alquilo C-?-5, sin sustituir o sustituido con uno o más de: i) OH o ¡i) alcoxi C1-5; 2) heterociclo, sin sustituir o sustituido con uno o más de: a) alquilo C1-5, sin sustituir o sustituido con uno o más de: i) OH o ii) alcoxi C-?-5, b) alcoxi C?_5, c) OH, d) halógeno, 0 e) NR2R2; 3) alquilo C-?-5, sin sustituir o sustituido con uno o más de: - a) alquilo C?_5, b) alcoxi C?-5, c) OH, o d) arilo, sin sustituir o sustituido con uno o más de: i) alquilo C?- , ii) alcoxi C-1.5, iii) OH, iv) halógeno, o v) NR2R2; Z es 1 ) C(=O)NR2R3 o 2) C(=O)R4; R2 es hidrógeno c ) alquilo C?_3; R3 es hidrógeno, ¡ alquilo C?-5, o cicloalquilo C3_6; R4 es 1 -piperidinilo, 1 -pirrolidinilo, 1 -piperazinilo o 4-morfolinilo, sin sustituir o sustituido con uno o más de: 1 ) alquilo C1- , 2) alcoxi C?_5, 3) OH, 4) halógeno, o 5) NR2R2.

25.- El método de acuerdo con la reivindicación 24, en el que - - dicho inhibidor de la actividad de la caseína quinasa le produce un alargamiento del periodo del ritmo círcadiano.