PRODUCTO ESTABILIZADO DE P NCREAS Campo de la Invención La presente invención proporciona un producto estabilizado de páncreas, útil, por ejemplo, como un aditivo de alimentación animal. Antecedentes de la Invención Los animales enfrentan períodos de utilización subóptima de alimentación, por ejemplo, durante períodos de cambio en producción, tal como la transición de una fuente o ración de alimentación a una fuente o ración de alimento diferente. Estos cambios frecuentemente resultan en la baja utilización de nutrientes dietéticos, y resultan en producción menos eficiente y costos de alimentación aumentados. Por ejemplo, la industria del puerco reconoce que la nutrición y utilización máxima de alimentación son importantes ya que los cerdos generalmente crecen mucho más rápido en proporción con su peso corporal que los animales más grandes. Ver Ensminger, Animal Science, 9a Ed. Interstate Publishers, Inc., Danville, Illinois (1991). Para promover el crecimiento eficiente, los cerdos se pueden alimentar con una ración elevada en energía que es baja en fibras. Sin embargo, los cerdos difieren en la clase y cantidades de nutrientes necesarios de acuerdo con un número de factores, incluyendo edad, función, estado de
enfermedad, interacción de nutriente, y ambiente. Ver, por ejemplo, Hill y col., Tri-State S ine Nutrition Guide,
Bull. No. 869-98, The Ohio State Univ., Columbus, Ohio
(1998); y National Research Council, Nutrient Requierements of Swine, 10a Ed., Nati. Acad. Press, Washington, D.C.
(1998) . Para llenar estas necesidades diferentes, los productores de cerdos pueden formular la ración de alimentación de base de una amplia gama de ingredientes, incluyendo, pero no limitado a, concentrados de grano, alimentos de proteína, pastura, forrajes secos, ensilados, y cosechas caldas. Además, se pueden usar suplementos para asegurar que la ración proporcione los requerimientos nutricionales necesarios. Debido a que cada uno de estos ingredientes varía en disponibilidad, precio, y cantidad o calidad de nutrientes contenidos, los productores de cerdos cambian las formulaciones de ración de alimentación de vez en cuando. Por ejemplo, un productor de cerdos puede seguir un programa complejo de diferentes raciones basado en las necesidades nutricionales de cada etapa de la vida del cerdo, el impacto de factores ambientales en esas necesidades nutricionales, y la disponibilidad de ingredientes de dieta específicos. La transición de destetado, ese periodo durante el que los cerdos se destetan de la puerca a raciones, involucra algunos de los cambios nutricionales y
ambientales más profundos de cualquier etapa de vida. Ver, v.gr., Efird y col., J. Anim. Sci. 55:1370 (1982). Como resultado, el estancamiento de crecimiento, comúnmente llamado como retraso después de destetado, se observa f ecuentemente en los cerdos en destete. Durante el retraso después de destetado, los cerdos pueden fallan en ganar, y aún pueden perder, peso. El retraso después del destetado puede ocasionar pérdidas significativas en la industria de cerdos en donde los costos de alimentación se elevan en aproximadamente sesenta y cinco a setenta y cinco por ciento de los costos totales de producción. Los productores de cerdos tratan de reducir al mínimo el período de retraso después de destetado a través del uso de fuentes de alimentos especializados y suplementos alimenticios, tales como plasma y proteína derivada de sangre, productos lácteos, y concentrado de soya, para alimentar a cerdos destetados en un programa de alimentación de fase. Estas fuentes de alimentos y suplementos se hacen especiales estrechamente a las necesidades nutricionales de un cerdo destetado y, como tales, pueden aumentar significativamente el costo de la ración de alimentación final. De esta manera, el período de destetado y el retraso después de destetado impactan significativamente la eficiencia y costo de producción de cerdos.
Aún cuando un número grande de agentes psíquicos agresivos ambientales pueden contribuir a la duración del periodo de retraso después del destetado, se cree que los factores predominantes son el cambio en forma de alimentación (de leche de cerda a ración) y ajuste a nuevos ingredientes dietéticos. Ver McCrackn y col., J. Nutr. 125:2838 (1995); y Pierzynowski y col., P. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 16:287 (1993). Durante la transición de destete, los cerdos se deben adaptar de una dieta a base de líquido que consiste en leche de puerca a una dieta de base sólida que consiste en raciones animales formuladas. Este cambio en dieta y nutrientes dietéticos, que pueden ocurrir abruptamente, con frecuencia induce respuestas fisiológicas significativas en cerdos destetados, incluyendo cambios en la morfología del intestino delgado y función de páncreas exócrina, Cera y col., J. Anim. Sci. 66:574 81988); Cera y col., J. Anim. Sci. 68:384 (1990), y cambios cuantitativos y cualitativos en función de páncreas exócrina, Lindemann y col., J. Anim. Sci. 62:1298 (1986). Fisiología y Función del Páncreas. El páncreas es un órgano accesorio de digestión significativo que funciona como ambos, una glándula endocrina y como una glándula secretoria exócrina. Ver, v.gr., Currie, Structure and Function Of Domestic Animáis, Butterworth Pub., Boston, Massachusetts (1988). Ubicado en la cavidad
abdominal en el mesenterio, el páncreas secreta enzimas digestivas que pasan a través de uno o más conductos pancreáticos al intestino delgado. Una disposición diversa de enzimas pancreáticas se conocen, y estas enzimas son generalmente responsables por el procesamiento hidrolítico de nutrientes dietéticos en unidades capaces de ser absorbidas por el intestino delgado. El páncreas secreta enzimas capaces de procesas cada una de las clases nutrientes principales - carbohidratos, lípidos y proteínas. Los ejemplos de enzimas para procesar cada una de estas clases de nutrientes se conocen respectivamente como amilasas, lipasas y proteasas. Los niveles de enzimas pancreáticas cambian cuantitativa y cualitativamente a través de la vida del cerdo basados en la cantidad y composición de los nutrientes dietéticos del puerco. Ethridge y col., J. Anim. Sci. 58:1396 (1984). En un estado no patógeno, las células pancreáticas acino producen formas inactivas de estas enzimas digestivas. Estas formas se conocen como cimógenos o proenzimas. Las enzimas digestivas inactivas se secuestran dentro de granulos de cimógeno, y se activan por la división proteolítica, principalmente por la enzima tripsina, una vez que se secretan hacia el intestino delgado. La activación de tripsina, a su vez, se orquesta mediante inhibidores de tripsina, presentes en secciones
acinares y de ducto, y enterocinasa de duodeno, una enzima generalmente presente sólo en porciones del intestino delgado. El efecto combinado de esta regulación asegura que las enzimas pancreáticas se activen solamente cuando se necesitan para efectuar el procesamiento hidrolítico de nutrientes dietéticos. Función Pancreática Durante Períodos de Cambios Mayores de Producción. Varios investigadores han documentado el desarrollo de la capacidad digestiva de cerdos jóvenes y el efecto de la edad de un cero, peso, y ración sobre la función de páncreas oxícrino. Por ejemplo, Pierzynowski y col., J. Pediatr. Gastroenterol Nutr. 16:287 (1993) , reportaron que la maduración de la función de páncreas exócrino es más dependiente del destetado que de la edad. Inicialmente, la actividad digestiva de enzimas pancreáticas en cerdos destetados se disminuye en comparación con cerdos en lactancia. Sin embargo, tanto los niveles básales como postprandiales de amilasas, lipasas, proteasas, y secreciones exócrinas pancreáticas totales aumentaron con el tiempo en cerdos destetados. Estos cambios se correlacionan fuertemente con cambios en la dieta del cerdo destetado pero no con la edad. Límites de Terapia de Enzima Exógena. Algunos productores de cerdos han cambiado a enzimas exógenas como aditivos de alimentación. La investigación y la
explotación comercial de estas enzimas se ha hecho disponible solo recientemente a través del uso de tecnología de ADN recombinante avanzada y expresión exógena de enzimas en sistemas bacterias y otros microbianos. Sin embargo, hay diversos factores que limitan la utilidad de enzimas exógenas en alimentación animal. Primero, aquellos expertos en el ramo han reconocido desde hace tiempo que las enzimas exógenas no se necesitan para ayudar a la digestión en animales sanos. Por ejemplo, Holden y col., Life Cycle Swine Nutrition, PM-489, 17a Rev., Iowa State Univ., Ames, Iowa (2000), manifiesta que los cerdos "producen cantidades adecuadas de enzimas digestivas para digestión de las proteínas, carbohidratos, y lipidos que son capaces de digerir." En su lugar, aquellos expertos en el ramo utilizan enzimas exógenas a fin de ayudar a la digestión de substancias que los animales son intrínsecamente incapaces de digerir. Por ejemplo, la cebada contiene ?-glucanos, o carbohidratos solubles en agua, que son poco digeridos por el cerdo, y aquellos expertos en el ramo han reconocida que raciones de alimentación que contienen jff-glucanasa pueden ayudar en la digestión de cebada cuando se usa como un ingrediente de nutrición. En segundo lugar, cada enzima exógena generalmente se dirige solamente a una escala estrecha de
substratos. De esta manera, el uso de enzimas exógenas para ayudar en la digestión de una ración de alimentación en general requeriría del mezclado complejo de ración de alimentación que contiene combinaciones específicas de substratos enzimáticos y enzimas exógenas. Dicho emparejamiento requeriría un conocimiento significati o de preparaciones de enzima exógena disponibles, sus especificidades de substrato específico, y la formulación de ración de alimentación apropiada y condiciones de almacenamiento. Los productores de cerdo que usan enzimas exógenas para este propósito, por lo tanto, tendrían que hacer selecciones detalladas de formulación de ración, aumentando de esta manera los costos de producción. En tercer lugar, la eficacia de preparaciones de enzima exógena se altera significativamente durante el procesamiento y formulación comercial de la ración de alimentación. El procesamiento comercial de alimentación de animal f ecuentemente incluye calentamiento, extrusión y granulación. El procesamiento comercial agresivo de enzimas exógenas destruye substancialmente la actividad de enzima. Además, las enzimas exógenas generalmente se auto degradan o catalizan la degradación de ingredientes de alimento una vez que se formula la ración de alimentación. Ambos de estos eventos reducen significativamente el tiempo durante el que una ración de alimentación que contiene
enzima se puede almacenar. Además, el propio sistema digestivo proporciona un reto significativo al uso de enzimas exógenas como aditivos de alimentación. La alimentación de animales no rumiantes, tales como cerdos, deben pasar a través de los confines altamente ácidos del estómago en donde la digestión de proteínas se inicia. El quimo del estómago luego pasa el píloro hacia el lumen del intestino delgado. Aún cuando todavía altamente ácido, el quimo se neutraliza rápidamente y se hace ligeramente alcalino. Como tal, la mayoría de las enzimas digestivas tienen pH óptimos a o por encima de neutralidad. De esta manera, las características intrínsecas del propio sistema digestivo requieren que las enzimas exógenas permanezcan estables en condiciones altamente acidas, todavía funcionen de manera óptima en condiciones ligeramente alcalinas. Pancreatina. La pancreatina es un producto derivado del páncreas que se prepara secando e hidrolizando páncreas de cerdo. Ver, v.gr., Patente de EUA 3,956,483 ("Preparando Pancreatina") . La pancreatina se hace de páncreas desgrasado, seco. Se prepara de páncreas fresco o fresco congelado. Normalmente las glándulas de páncreas se cortan y trituran con el duodeno, que se añade para activar las enzimas proteolí icas o cimógenos en el páncreas. Alternativamente, la actividad proteolitica en ocasiones se
establece en la preparación de pancreatina mediante la adición de tripsina activa. La mezcla luego se somete a activación de las enzimas. A continuación, el páncreas se desgrasa y seca, generalmente mediante secado al vacío a temperatura ambiente. La pancreatina se ha usado en la industria animal principalmente para tratar perturbaciones digestivas. Ver, v.gr., Patente de EUA 5,112,624 ("Prevención de perturbaciones digestivas en herbívoros") ; ver también la Patente rusa No. 829,115 ("Desorden gastrointestinal en becerros") . La pancreatina también se ha propuesto como un aditivo de alimentación. Por ejemplo, Cortamira y col., Proc. Of the 7th Int. Symp on Digestive Physiology in Pigs, Univ. Alberta, Edmonton, Alberta (1997), investigaron el uso de pancreatina procesada al 0.01 a 0.03 por ciento en alimentación para cerdos. Ver también la Patente de EUA 2,878,123 ("Uso de Enzimas Proteolíticas en Alimentación de Aves") . Hasta ahora no ha habido un aditivo de alimentación practicable basado en un producto de páncreas estabilizado. Por ejemplo, la Patente de E.U.A. Número 3,313,705 describe un proceso de baja temperatura para hacer un medicamento a base de páncreas liofilizado. Ver col. 1, líneas 65 a 69. Sin embargo, el proceso es molesto e impráctico de duplicar a una escala comercial para
alimentación animal. Ver col. 2, líneas 16-51. Adicionalmente, el producto descrito se somete a autolisis bajo condiciones atmosféricas y requiere procedimientos especiales de almacenamiento (v.gr., el uso de un tope de deshidratación). Ver col. 3, líneas 27-39. Por lo tanto, existe una fuerte necesidad de un producto de páncreas estabilizado practicable que se pueda usar, por ejemplo, como un aditivo de alimentación. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con productos de páncreas estabilizados, aditivos de alimentación que comprenden productos de páncreas estabilizados, métodos para producir, y métodos para usar productos de páncreas estabilizados. En una modalidad, la invención se relaciona con un producto de páncreas comprendido de una o más enzimas pancreáticas en su forma de cimógeno. En otras modalidades, la invención se relaciona con productos de páncreas estabilizados con actividad específica de amilasa o proteasa. En otra modalidad, la invención se relaciona con aditivos de alimentación que comprenden productos de páncreas estabilizados. En otras modalidades, la invención se relaciona con raciones de alimentación que comprenden un aditivo de alimentación de producto de páncreas estabilizado. En otras modalidades, la presente invención está
dirigida a métodos para suplementar raciones de alimentación animal con productos de alimentación estabilizados. Algunas modalidades abarcan un método para suplementar raciones de alimentación animal con productos de alimentación estabilizados antes, durante y después de períodos de cambio de producción. En algunas modalidades, el período de cambio de producción es transición de una primera fuente de alimento a una segunda fuente de alimento, la transición de una fuente de alimento líquido a una sólida, o el destetado del animal joven de la madre. En otras modalidades, la presente invención está dirigida a métodos para hacer productos de páncreas estabilizados. En una modalidad, la presente invención proporciona un método para hacer un producto de páncreas estabilizado que comprende los pasos de emulsionar glándulas de páncreas y mezclar el páncreas emulsionado con un acidificador. En otra modalidad, la invención proporciona un método para hacer un producto de páncreas estabilizado mezclando páncreas emulsionado con un portador apropiado, y extruir la mezcla. En todavía otra modalidad, la invención se relaciona con un método para hacer un producto de páncreas estabilizado que comprende los pasos de atomizar páncreas emulsionadas, y recoger el páncreas atomizado. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
La presente invención está basada en el descubrimiento sorprendente e inesperado de un producto de páncreas estabilizado que se puede hacer en cantidades en volumen, que es sencillo de almacenar y procesar, y que es útil, por ejemplo, como un aditivo de alimentación animal para aumentar la utilización de nutrientes en animales que están sufriendo cambios de producción. La presente invención es ampliamente aplicable a una gama de industrias agrícolas y alimenticias, incluyendo la industria de acuicultura, industrias de ganado de res y lechero, industria de alimento para mascota comercial, industria de la caballería, industria de aves, e industria de cerdos. Producto Estabilizado de Páncreas Una modalidad de la presente invención proporciona un producto estabilizado de páncreas que es útil, por ejemplo, como un aditivo de alimento. Como se utiliza en la presente, "producto estabilizado de páncreas" se refiere a una composición derivada de glándulas de páncreas substancialmente completas. Estas glándulas se pueden liberar de las capas de mesenterio o se pueden liberar substancialmente del tejido areolar superficial. Alternativamente, las glándulas se pueden presentar como cortadas sin remoción del tejido de mesenterio superficial y grasa. En cualquier caso, no es necesario remover los lipidos de los productos estabilizados de páncreas de la
invención. Como se utiliza en la presente, "estabilizado" se refiere a ciertas cualidades del producto de páncreas, tales como resistencia a hidrólisis degradante de enzima, resistencia a daño microbiano y fungal, y resistencia a oxidación de grasa. Como tales, los productos estabilizados de páncreas de la invención son resistentes a hidrólisis degradante de enzima, resistentes a daño microbiano y fungal y resistentes a oxidación de grasa. Consecuentemente, los productos estabilizados de páncreas de la invención permanecen estables y resisten la autolisis o degradación durante exposición a aire o agua. Además, debido a estas cualidades, los productos estabilizados de páncreas de la invención no requieren remoción de grasas o lípidos o liofilización. En una modalidad, un producto estabilizado de páncreas de conformidad con la invención comprende páncreas que no se ha hidrolizado, sino más bien se ha procesado para estabilizar las enzimas pancreáticas. Una modalidad más específica abarca un producto estabilizado de páncreas que comprende enzimas pancreáticas en forma de cimógeno. Como se utiliza en la presente, "cimógeno" y "forma de cimógeno" se refieren a los percursores inactivos o casi inactivos de una enzima. Las enzimas sintetizadas como cimógenos se pueden activar subsecuentemente mediante
división de uno o más de enlaces de péptido específicos. Esta división ocurre, por ejemplo, cuando el precursor de la tripsina de enzima proteolítica, tripsinógeno, se hidroliza mediante enteropeptidasa de enzima. Ver, v.gr., Berg y col. (Eds.), Biochemistry, 5a Ed., W. H. Freeman and Co., New York, (2002) . Un producto estabilizado de páncreas de conformidad con la invención comprende enzimas pancreáticas que no se someten a degradación enzimática durante el almacenamiento. En una modalidad, un producto estabilizado de páncreas retiene cuando menos aproximadamente 75 por ciento de sus niveles originales de actividad de enzima. En otras modalidades, un producto estabilizado de páncreas retiene cuando menos aproximadamente 80 por ciento de sus niveles originales de actividad de enzima; cuando menos alrededor de 85 por ciento de sus niveles originales de actividad de enzima; cuando menos aproximadamente 90 por ciento de sus niveles originales de actividad de enzima; o cuando menos aproximadamente 95 por ciento de sus niveles originales de actividad de enzima. En otra modalidad, el producto estabilizado de páncreas comprende enzimas pancreáticas que no se someten a degradación enzimática significativa durante el almacenamiento por un período de no menos de 2 días. En otras modalidades, el producto estabilizado de páncreas
comprende enzimas pancreáticas que no se someten a degradación enzimática significativa durante almacenamiento por periodos de menos de 10 y 30 días respectivamente. En todavía otra modalidad, el producto estabilizado de páncreas comprende enzimas pancreáticas que no se someten a degradación enzimática significativa durante almacenamiento por un período de no menos de un año. El producto estabilizado de páncreas de la invención se proporciona en ambas formas húmeda y seca. En una modalidad, la invención está dirigid a productos estabilizados de páncreas secos. Modalidades más específicas abarcan productos estabilizados de páncreas secos que varían de alrededor de 1 por ciento a alrededor de 20 por ciento de contenido de humedad. En otras modalidades, la invención está dirigida a productos estabilizados de páncreas húmedos. Las modalidades más específicas abarcan productos estabilizados de páncreas húmedos que varían de alrededor de 20 por ciento a alrededor de 95 por ciento de contenido de humedad. En otras modalidades, el producto estabilizado de páncreas comprende un perfil de enzima activada particular. Como se utiliza en la presente, "perfil de enzima activada" se refiere a los niveles de actividad enzimática exhibidos por el producto estabilizado de páncreas cuando el producto se activa apropiadamente. Varias enzimas pancreáticas
pueden ser de interés a aquellos expertos en el ramo, tal como las clases de enzima pancreática actualmente enumerada como aprobada para uso en ganado vivo por la Association of American Feed Control Officials ("AAFCO") . Estas clases de enzima pancreática aprobada incluyen, entre otras, a -amilasa, lipasa y tripsina. Aquellos expertos en el ramo reconocerían, por ejemplo que los cimógenos de proteasa se pueden activar incubando los productos estabilizados de páncreas con, entre otras cosas, los contenidos del intestino delgado. Otras enzimas se pueden activar como es sabido en el ramo. Los productos estabilizados de páncreas de la invención pueden exhibir una variedad de perfiles de enzima activada. En una modalidad, un producto estabilizado de páncreas exhibe actividad de amilasa y proteasa. Como se utiliza en la presente, la "actividad de amilasa" se puede medir usando técnicas bien conocidas en el ramo, tal como aquellas descritas en Cesca y col., Clin. Chim. Acta 26:437-44 81969), y Von Worthington (Ed.), Worthington enzyme manual: enzymes and related biochemicals 399, Worthington Chemicals, Lakewood, New Jersey 81993) . Brevemente, una unidad de actividad de a-amilasa es equivalente a la cantidad de enzima que cataliza un micromol ( 1M) de enlaces glicosídicos en un minuto bajo un juego de condiciones prescritas. En un método, una prueba
de substrato apropiada se puede conducir usando tabletas de prueba de Amilasa Phadebas(R) (Pharmacia Diagnostics AB, Uppsala, Suecia) de conformidad con las instrucciones suministradas por el fabricante. Primero una alícuota de una muestra de prueba se diluye en solución de reactivo. La alícuota se calienta a 37 grados Celsius y se añade la tableta de prueba de amilasa. La solución se incuba durante una cantidad de tiempo prescrita y la reacción se detiene mediante la adición de una solución de hidróxido de sodio. La solución de clarifica ya sea por centrifugación o filtración, y su absorción se mide contra un molde de reactivo. La absorción de la muestra es proporcional a su actividad de a-amilasa. Adicionalmente, otras técnicas y métodos para determinarla actividad de amilasa son bien conocidos en el ramo. Estos métodos se pueden usar cuando los niveles de actividades de amilasa se comparan con los niveles de enzima de pancreatina y expresados como un porcentaje. Como se utiliza en la presente, la "actividad de proteasa" se puede medir usando técnicas bien conocidas en el ramo, tales como Gessesse A y BA Gashe, Biotechnol. Lett. 19(5):479-81 81997). Una unidad de actividad de proteasa es equivalente a la cantidad de enzima que libera del substrato un microgramo de compuesto fenólico, como se expresa por equivalentes de tirosina, en un minuto bajo un
juego de condiciones prescritas. En un método, las muestras se activan mediante incubación de contenidos intestinales o una suspensión de tejido recogida del intestino delgado. Una vez activadas, las muestras se extraen en una solución de cloruro de sodio y se preparan diluciones filtradas apropiadas. Después de que se equilibran las temperaturas de las diluciones y reactivos de prueba, una solución que contiene Ma marsten Casin (Merck KGaA, Darmstadt, Alemania) se mezcla completamente con las muestras diluidas y se incuba. Después de un período de tiempo prescrito, una solución de ácido tricloroacético se añade, y las muestran continúan incubándose. Después de la incubación, las muestras se filtran o someten a centrifugación y se mide su absorción contra un molde de reactivo y una curva convencional de soluciones de material de L-tirosina. Adicionalmente, otras técnicas y métodos para determinar la actividad de proteasa son bien conocidos en el ramo. Estos métodos se pueden usar cuando los niveles de actividades de proteasa se comparan con los niveles de enzima de pancreatina y se expresan como un porcentaje. Asimismo, aquellos expertos en el ramo pueden usar técnicas de ensayo conocidas para comparar el nivel de actividad de enzima de una enzima pancreática particular de interés en el producto estabilizado de páncreas con el
nivel de actividad de enzima exhibido en pancreatina. Los niveles de actividad de tripsina y quimotripsina, por ejemplo, se pueden comparar usando el protocolo de ensayo descrito por Erlanger y col., Arch. Biochem. Biophys. 95:271-78 (1961). En otra modalidad, los niveles de actividad de lipasa se comparan de conformidad con los protocolos descritos en I.G. Borlongan, Chanos Chanos Acuaculture 89:315-25 (1990), Gupta y col., Biotechnol. Appl. Biochem. 37:63-71 (2003), o Jahic y col., J. Biotechnol. 102:45-53 (2003). Como se utiliza en la presente, la pancreatina se conforma a la descripción promulgada por la United States Pharmacopeial Convention, Inc. (Rockville, Maryland) . Una pancreatina de ejemplo para uso como una linea de base comparativa, por ejemplo, se puede obtener de Sigma-Aldrich, Inc. (St. Louis, Missouri), como número de catálogo P-7545. Una modalidad del producto estabilizado de páncreas de la invención comprende un perfil de enzima activada particular. En algunas modalidades, los productos estabilizados de páncreas comprenden perfiles de enzima activada, en comparación sobre una base seca a pancreatina, por lo menos alrededor de 0 por ciento de actividad de amilasa, por lo menos alrededor de 3 por ciento de actividad de amilasa, por lo menos alrededor de 5 por
ciento de actividad de amilasa, por lo menos alrededor de 10 por ciento de actividad de amilasa, por lo menos alrededor de 15 por ciento de actividad de amilasa, por lo menos alrededor de 20 por ciento de actividad de amilasa, por lo menos alrededor de 60 por ciento de actividad de amilasa, por lo menos alrededor de 70 por ciento de actividad de amilasa, por lo menos alrededor de 77 por ciento de actividad de amilasa, por lo menos alrededor de 80 por ciento de actividad de amilasa, por lo menos alrededor de 90 por ciento de actividad de amilasa, por lo menos alrededor de 100 por ciento de actividad de amilasa, por lo menos alrededor de 105 por ciento de actividad de amilasa, por lo menos alrededor de 110 por ciento de actividad de amilasa, o por lo menos alrededor de 120 por ciento de actividad de amilasa. En otras modalidades, el producto estabilizado de páncreas de la invención tiene un perfil de enzima activada, en comparación con una base de materia seca a pancreatina, de cuando menos alrededor de 20 por ciento de actividad de proteasa, por lo menos alrededor de 30 por ciento de actividad de proteasa, por lo menos alrededor de 40 por ciento de actividad de proteasa, por lo menos alrededor de 70 por ciento de actividad de proteasa, por lo menos alrededor de 80 por ciento de actividad de proteasa, por lo menos alrededor de 90 por ciento de actividad de
proteasa, por lo menos alrededor de 100 por ciento de actividad de proteasa, por lo menos alrededor de 110 por ciento de actividad de proteasa, por lo menos alrededor de 120 por ciento de actividad de proteasa, por lo menos alrededor de 130 por ciento de actividad de proteasa, por lo menos alrededor de 140 por ciento de actividad de proteasa, por lo menos alrededor de 180 por ciento de actividad de proteasa, por lo menos alrededor de 190 por ciento de actividad de proteasa, por lo menos alrededor de 200 por ciento de actividad de proteasa, por lo menos alrededor de 210 por ciento de actividad de proteasa, o por lo menos alrededor de 220 por ciento de actividad de proteasa. En otras modalidades, el producto de páncreas estabilizado de la invención tiene un perfil de enzima activada, en comparación en una base de materia seca a pancreatina, de cuando menos alrededor de 20 por ciento de actividad de lipasa, por lo menos alrededor de 30 por ciento de actividad de lipasa, por lo menos alrededor de 40 por ciento de actividad de lipasa, por lo menos alrededor de 70 por ciento de actividad de lipasa, por lo menos alrededor de 80 por ciento de actividad de lipasa, por lo menos alrededor de 90 por ciento de actividad de lipasa, por lo menos alrededor de 100 por ciento de actividad de lipasa, por lo menos alrededor de 110 por ciento de
actividad de lipasa, por lo menos alrededor de 120 por ciento de actividad de lipasa, por lo menos alrededor de 130 por ciento de actividad de lipasa, por lo menos alrededor de 140 por ciento de actividad de lipasa, por lo menos alrededor de 180 por ciento de actividad de lipasa, por lo menos alrededor de 190 por ciento de actividad de lipasa, por lo menos alrededor de 200 por ciento de actividad de lipasa, por lo menos alrededor de 210 por ciento de actividad de lipasa, o por lo menos alrededor de 220 por ciento de actividad de lipasa. En otras modalidades, la invención incluye un producto de páncreas estabilizado que tiene un perfil de enzima activada que comprende una combinación de cualquiera de los niveles anteriores de actividad de amilasa, proteasa y lipasa. Producción de Producto Estabilizado de Páncreas La invención también incluye métodos para producir un producto estabilizado de páncreas para glándulas de páncreas de animal. En cada método, el propósito de procesar es estabilizar las enzimas pancreáticas, es decir, proteger el producto resultante de hidrólisis degradante de enzima, daño microbiano y/o fungal, y/u oxidación de grasa. Cada uno de los siguientes procesos de producción proporciona un medio diferente para estabilizar el producto de páncreas de la invención.
Las glándulas de páncreas de animal se pueden obtener de una variedad de fuentes, tal como asadura de la matanza de animales. En una modalidad, las glándulas de páncreas se recogen de los cerdos. En otra modalidad, las glándulas de páncreas se recogen de ganado. Aquellos expertos en el ramo también reconocerían que las glándulas de páncreas de muchas especies de animal adicionales se pueden obtener de animales sacrificados en mataderos y rastros locales. Sin embargo, la invención no está limitada por la fuente de las glándulas de páncreas. En una modalidad, el producto estabilizado de páncreas se produce de glándulas de páncreas emulsionadas. Las glándulas de páncreas se pueden emulsionar por cualesquiera medios conocidos en el ramo. Por ejemplo, la emulsificación se puede lograr utilizando una moledora de placa o instrumento similar, con o sin la adición de agua. Como resultado, el páncreas emulsionado puede contener de alrededor de 5 por ciento a alrededor de 95 por ciento de materia seca. Aquellos expertos en el ramo reconocerán que el contenido de materia seca del páncreas emulsionado puede variar de acuerdo con el proceso de producción seleccionado. Por ejemplo, un proceso de secado por aspersión puede requerir un páncreas emulsionado con de alrededor de 5 por ciento a alrededor de 50 por ciento de materia seca.
Una modalidad de la presente invención proporciona un método para hacer un producto de páncreas estabilizado usando un proceso de extrusión. Brevemente, el páncreas emulsionado se mezcla con un portador. Hay muchos portadores apropiados, por ejemplo, los ingredientes de alimentación, granos o fuentes de fibra incluyendo sus productos secundarios respectivos. Más particularmente, los portadores apropiados incluyen maíz y/o cascaras de soya. Opcionalmente, una fuente de fibra o producto secundario de la misma, tal como fibra de cascara, fibra de cotiledón, , fibra de salvado, fibra de raíz vegetal, o una combinación de las mismas, también se puede añadir a la mezcla. Más particularmente, las cascaras de soya se pueden añadir a la mezcla como una fuente de fibra. Otras fuentes de fibra apropiadas o productos secundarios incluyen, pero no están limitados a, fibra de cascara de arroz, fibra de salvado de arroz, fibra de cascara de avena, pulpa de remolacha, fibra de cascara de girasol, fibra de cascara de maíz, y fibra de cotiledón de soya. La mezcla se seca, por ejemplo, a medida que pasa rápidamente a través de una serie de esclusas calentadas bajo presión. La mezcla luego se rocía hacia un aparato de recolección. Opcionalmente, el producto de páncreas estabilizado extruido se puede secar adicionalmente con enfriadores y/o transportadores de evaporación.
En otra modalidad, los productos de páncreas estabilizados de la invención se producen mediante secado por aspersión. Cualquier secador por aspersión conocido en el ramo se puede usar, incluyendo secadores por aspersión con boquillas tales como atomizadores giratorios y dos atomizadores de fluido. En una modalidad, el páncreas emulsionado con de alrededor de 5 por ciento a alrededor de 50 por ciento de materia seca se usa en el proceso de producción de secado por aspersión. Ayudas de flujo pulverizadas se pueden añadir opcionalmente al páncreas emulsionado para mejorar el proceso de secado por aspersión. Durante este proceso de producción, el páncreas emulsionado se puede calentar a una temperatura de retención de líquido de aproximadamente 50 grados Celsius a aproximadamente 80 grados Celsius, dependiendo de la cantidad de materia seca en el páncreas emulsionado. El páncreas emulsionado puede ser forzado bajo presión a través de una boquilla de atomización hacia una cámara de secado. El producto de páncreas estabilizado puede comprender de alrededor de 80 por ciento a alrededor de 100 por ciento de materia seca. En todavía otra modalidad, los productos estabilizados de páncreas se producen mezclando con un acidificador para lograr la estabilización microbiológica y enzimáticamente. De conformidad con este método de
producción, las glándulas de páncreas, u opcionalmente páncreas emulsionado, se pueden mezclar con una fuente de fibra apropiada o producto secundario, tal como las cascaras de soya, u otras fuentes de fibra de planta arriba descritas. La mezcla se estabiliza con un acidificador que reduce el pH de mezcla a una escala de entre ya sea alrededor de 7.5 a alrededor de 3.5, alrededor de 7.0 a alrededor de 4.0, alrededor de 6.5 a alrededor de 4.0, o alrededor de 6 a alrededor de 4.5. El ácido propriónico es un acidificador de ejemplo, y una amplia variedad de ácidos inorgánicos y orgánicos, incluyen do ácido acético, se pueden usar. Este proceso de estabilización de pH produce un producto estabilizado de páncreas con una escala de contenido de materia seca de alrededor de 5 por ciento a alrededor de 95 por ciento. Sorprendentemente, este producto de páncreas estabilizado de pH es excepcionalmente resistente a la hidrólisis degradante de enzima, resistente a daño microbiano y fungal, y resistente a oxidación de grasa. Como tal, un producto de páncreas estabilizado de pH húmedo se puede almacenar y usar similar a un forraje, v.gr., como pastura de heno. Los productos estabilizados de páncreas de la invención están listos para usarse como aditivos de alimentación. Sin embargo, los productos estabilizados de páncreas se pueden procesar adicionalmente por diversos
medios conocidos por aquellos expertos en el ramo. En otras modalidades, los productos estabilizados de páncreas de la invención comprenden de alrededor de 5 por ciento de materia seca a alrededor de 95 por ciento de materia seca. En algunas modalidades, los productos estabilizados de páncreas secos pueden comprender de alrededor de 70 por ciento a alrededor de 95 por ciento de materia seca. En otras modalidades, los productos de páncreas estabilizados húmedos pueden comprender de alrededor de 5 por ciento a alrededor de 30 por ciento de materia seca. En otra modalidad, los productos estabilizados de páncreas pueden estar en la forma de una masa de alimentación mixta o como un aderezo superior. Alternativamente, los productos estabilizados de páncreas pueden ser un polvo seco. En una modalidad, el producto estabilizado de páncreas es un polvo seco que contiene menos de alrededor de 20 por ciento de humedad. Además, los productos estabilizados de páncreas de la invención se pueden procesar adicionalmente y usar como un componente de una ración de alimentación formulada. Uso de Producto Estabilizado de Páncreas Otra modalidad de la invención proporciona un aditivo de alimentación que comprende el producto de páncreas estabilizado. En una modalidad, el aditivo de
alimentación se mezcla o formula para formar una ración de alimentación completa que se administra oralmente al animal. En otra modalidad, el aditivo de alimentación se mezcla o formula con uno o más componentes de una dieta .de elección libre. En todavía otra modalidad, el aditivo de alimentación se aplica a la ración de alimentación, por ejemplo, (1) mediante mezclado completo antes de la alimentación, (2) rociando hacia la ración de alimentación utilizando dispositivos tales como aplicadores de aspersión, o (3) como un aderezo superior sobre la ración de alimentación. En otra modalidad, el aditivo de alimentación se administra en conjunción con la administración de suplementos de alimentación, v.gr., bloques minerales. En otra modalidad, una ración de alimentación que comprende un producto estabilizado de páncreas puede ser de forma sólida o líquida. Una ración de alimentación sólida de ejemplo se puede formular para contener alrededor de 0.1 por ciento (p/p) de aditivo de alimentación de producto estabilizado de páncreas. En otras modalidades, las raciones de alimentación sólidas se pueden formular para contener de alrededor de 0.001 por ciento a alrededor de 1 por ciento de aditivo de alimentación de producto estabilizado de páncreas. Una ración de alimentación liquida de ejemplo se puede formular para contener
alrededor de 0.1 por ciento (p/p) de aditivo de alimentación de producto de páncreas estabilizado. En otras modalidades, las raciones de alimentación líquidas se pueden formular para contener de alrededor de 0.001 por ciento a alrededor de 1 por ciento de aditivo de alimentación de producto estabilizado de páncreas. La ración de alimentación se puede preparar de una amplia gama de ingredientes dietéticos. Por ejemplo, aquellos expertos en el ramo reconocen que un componente de energía de ración de alimentación se puede basar en granos y sus productos secundarios, tales como maíz, sorgo, avena, cebada, trigo y centeno. Asimismo, un componente de proteína de ración de alimentación se puede basar en proteína ya sea animal o de planta, tal como frijoles de soya enteros tratados con calor, proteína de plasma secada por aspersión, y leche delgada o suero seco. Un componente de lípido de ración de alimentación se puede obtener de fuentes de grasas y aceites de grado de alimentación incluyendo animal (grasa, cebo) , vegetal (aceite de maíz y aceite de soya) y productos secundarios de restaurante y procesamiento ) mezclas de grasas y aceites). Una ración de alimentación también puede contener forraje y fuentes de fibra de no forraje y/o sus productos secundarios respectivos. Además, la ración de alimentación se puede equilibrar usando suplementos
alimenticios, tales como vitaminas y minerales. La ración de alimentación puede incluir otros componentes de conformidad con las necesidades dietéticas nutricionales y/o médicas del animal. Las raciones de alimentación de la presente invención se pueden preparar mediante cualquier método conocido en el ramo, tal como molienda o laminación, granulación y/o procesamiento térmico. En una modalidad, la ración de alimentación se forma en granulos. Ver, por ejemplo, Patente de E.U.A. 4,183,675 ("Método y aparato de conservación de energía para granular alimentación de animal en partículas") . Brevemente, los granulos se pueden formar por pasos de separación de lotes, mezclado y granulado llevados a cabo en equipo comercial conocido. Este equipo se puede combinaren una instalación que consiste de una mezcladora que descarga hacia una tolva de pulsaciones, que a su vez descarga hacia un molino de granulos que consiste de un alimentador de velocidad variable, una cámara de acondicionamiento de vapor, y un conjunto de troquel/rodillo. La masa fluye desde el alimentador a través del acondicionador, que descarga hacia el conjunto de troquel/rodillo en donde el producto estabilizado de páncreas se extruye para formar granulos. Los granulos luego se descargan del rodillo de granulos. Una cámara de acondicionamiento de vapor no es esencial en este proceso
de ejemplo y se puede omitir opcionalmente. Cambios de Producción En una modalidad, la presente invención proporciona métodos para usar un producto estabilizado de páncreas como un aditivo de alimentación antes, durante, o después de cualquier período de cambio de producción. Como se utiliza en la presente, "cambio de producción" es un término conocido en el ramo para denotar un cambio de una alimentación a otra o un cambio en ambiente. Los cambios de producción pueden estar asociados con la etapa de vida del animal tal como el destetado de la madre, el principio y duración de preñez, o el acabado acelerado de animales. En otra modalidad, el producto estabilizado de páncreas se usa como un aditivo de alimentación durante tiempos de cambio de producción ocasionados por otros factores, tales como factores ambientales. Los factores ambientales pueden incluir cambios en la temperatura o clima al que está expuesto un animal, cambios en el alojamiento del animal, y cambios en el grupo social del animal. En otras modalidades, el producto estabilizado de páncreas se usa como un aditivo de alimentación antes, durante, o después de un cambio de producción que ocurre durante una transición de una fuente de alimento a otra, tal como ocurre, por ejemplo, cuando un nuevo lote de ración se usa, cuando la cantidad relativa y/o tipo de
componentes de ración se cambia, cuando un animal se alimenta con una ración que está mezclada o formulada usando diferentes fuentes de alimento que la ración anterior, o en cualquier cambio de una ración de alimentación a una ración de alimentación diferente. En otra modalidad, un producto estabilizado de páncreas se usa antes, durante o después de un periodo de cambio de producción en un animal que se está sometiendo a un período de crecimiento de compensación. Un período de crecimiento de compensación sigue un período de restricción de nutriente de alimentación en la mayoría de los animales, y se puede referir por aquellos expertos en el ramo como crecimiento fuera de ciclo. Otra modalidad de la invención se relaciona con métodos para usar un producto estabilizado de páncreas para aumentar una producción endógena del animal de enzimas pancreáticas. Los métodos de la invención son útiles durante períodos de producción de cambio en donde la producción de enzima pancreática no es suficiente para llenar las demandas establecidas por cantidad de substrato en el intestino delgado. Como se utiliza en la presente, "antes de un cambio de producción", denota horas a días antes del cambio de producción. En una modalidad, la invención se relaciona con métodos para usar un producto estabilizado de páncreas
de alrededor de 1 hora a alrededor de 5 horas, hasta alrededor de 1 día, antes de un cambio de producción. En otra modalidad, la invención se relaciona con métodos para usar un producto estabilizado de páncreas de alrededor de 1 día a alrededor de 2 días, hasta alrededor de 1 semana, antes de un cambio de producción. En una tercera modalidad, la invención se relaciona con métodos para usar un producto estabilizado de páncreas que empieza alrededor de 1 semana o más antes del cambio de producción. Como se utiliza en la presente, "durante un cambio de producción" se refiere a las horas y dias durante las que puede ocurrir un cambio de producción. Se refiere a una longitud de tiempo variable que empieza con un cambio de producción y se puede prolongar durante horas y días dependiendo de la naturaleza y calidad del cambio de producción. Por ejemplo, esto puede ocurrir durante el curso de horas en donde un animal está expuesto a cambios en la temperatura ambiente, o días si el animal está siendo transportado distancias largas. En otra modalidad, esto puede ocurrir en un dia en donde un animal está sujeto a una transición de una fuente de alimento a otra fuente de alimento. Otras longitudes de tiempo pueden ser aparentes a aquellos expertos en el ramo basados en la naturaleza y calidad del cambio de producción. Como se utiliza en la presente, "después de un
cambio de producción" se refiere a las horas y días subsecuentes al cambio de producción. En una modalidad, la invención se relaciona con métodos para usar páncreas estabilizado de alrededor de 1 día a alrededor de 2 días, hasta alrededor de 1 semana, después de un cambio de producción. En otra modalidad, la invención se relaciona con métodos para usar un producto de páncreas estabilizado de alrededor de 1 semana a alrededor de 2 semanas, o más, después de un cambio de producción. Los métodos para usar un producto de páncreas estabilizado de la invención se pueden practicar en cualquier animal que posea un páncreas o produzca enzimas digestivas. Los métodos de la invención se relacionan con cualquier animal que produce enzimas digestivas de las clases de enzimas normalmente excretadas por el páncreas
(es decir, proteasas, amilasas, lipasas) . Modalidades específicas de la invención se relacionan con cambios de producción de gato, ganado, venado, perro, pez, cabra, caballo, llama, cerdo, aves, conejo y borrego. La invención también incluye métodos para usar producto de páncreas estabilizado a cambios de producción específicos de una industria agrícola determinada. Por ejemplo, diferentes industrias agrícolas pueden tener períodos específicos de cambio de producción basado en los métodos de producción pasados, actuales y futuros de las
industrias. Los ejemplos se exponen abajo. Acuicultura. Un cambio de producción en la industria de acuicultura ocurre guando madura el intestino del pez hasta funcionalidad completa. Otros cambios de producción pueden incluir, pero no se limitan a, cambios mayores de temperatura y aireación del agua circundante. El producto de páncreas estabilizado de la presente invención es apropiado para uso en raciones de alimentación de acuicultura mientras que los productos anteriores no lo eran debido a que las enzimas pancreáticas activadas en los productos del ramo anterior se someten a autolisis rápidamente una vez que se exponen a agua. De esta manera, la presente invención proporciona una ración que comprende producto de páncreas estabilizado que es apropiado para administración a peces y otros animales acuáticos. En una modalidad, el producto de páncreas estabilizado comprende enzimas pancreáticas en su forma de cimógeno. En otra modalidad, el producto de páncreas estabilizado es suficientemente estable cuando se sumerge en agua de manera de evitar la disolución uy autolisis de las enzimas. Ganado. En el ganado, los períodos de cambio de producción pueden incluir, pero no están limitados a, la transición de lecha a alimentación sólidas en becerros; la transición de raciones de alimentación que contienen
proporciones elevadas de forraje y proporciones bajas de concentrado a relaciones de alimentación que contienen proporciones bajas de forraje y proporciones elevadas de concentrado; la transición a raciones de alimentación que contienen niveles elevadas de almidón; y la transición de pastura a raciones de alimentación que contienen niveles elevados de grano en ganado que se está sometiendo a acabado de lote de alimentación. Venado. Los períodos de cambio de producción en venado, tal como venado de manchas, corzo, venado rojo y silka y alce, incluyen la transición de leche a alimento sólido en becerros. Caballos. En caballos, los cambios de producción debidos a cambios en dieta, tal como la transición de una fuente de alimentación o ración a una fuente o ración de alimento diferente, es particularmente frecuente ya que los caballos frecuentemente cambias de dieta a base de heno a dieta a base de pastura. Asimismo, un cambio de producción ocurre cuando un cabello hace transición de un suplemento a base de grano a otro suplemento a base de grano. Adicionalmente, el período de cambios de producción ocurre durante el periodo de esfuerzo en que la función digestiva es insuficiente para impedir el pasaje de almidón hacia el intestino grueso y ciego. Cerdo. En los cerdos, los períodos de cambio de
producción pueden incluir, pero no están limitados a, el período de transición después del destetado, inundación, gestación, el principio de lactación en puercas, y fase de acabado acelerado en cerdos que terminan de crecer. Aves. En las aves, un período particularmente crucial de cambio de producción ocurre a medida que los pollos se exponen a un alimento seco por la primera vez después de su nacimiento. Otros períodos de cambio de producción incluyen, pero no están limitados a, períodos de muda de pluma en gallinas en postura, y acabado acelerado en pollos y pavos. El producto de páncreas estabilizado se puede usar co o un aditivo de alimentación durante o después de períodos de cambio de producción, y/o antes del principio de dichos períodos en anticipación de los mismos. El uso prospectivo del producto de páncreas estabilizado puede prevenir complicaciones que se suscitan de períodos de cambio de producción o de las consecuencias naturales de cualquier cambio en la dieta del animal. En una modalidad, el producto estabilizado de páncreas se mezcla con una fuente de alimento, tal como un reemplazo de lecho y/o alimentación de inicio, para ganado joven a fin de prevenir el principio de diarreas u otras consecuencias naturales de la transición de leche materna a una ración de alimentación sólida. En otra modalidad, el
producto estabilizado de páncreas se mezcla con las raciones de alimentación de animales compañeros, tales como gatos y perros, para prevenir o mejorar las consecuencias naturales de su dieta y hábitos. En una modalidad, los gatos se alimentan con una ración que comprende producto de páncreas estabilizado para prevenir o mejorar la acumulación de bolas de cabello o tricobezoarios gástricos e intestinales. Ejemplos Los siguientes ejemplos son ilustrativos de la presente invención y no se pretende que sean limitaciones sobre la misma. Ejemplo 1. Glándulas de Páncreas Las glándulas de páncreas porcinas se obtienen de asaduras de mataderos, rastros o instalación similar. Las glándulas de páncreas se pueden almacenar refrigerados o emulsionar inmediatamente. Las glándulas luego se emulsionan usando una moledora de placa con agua de modo que el páncreas emulsionado contenga aproximadamente 25 por ciento de materia seca. Opcionalmente, las glándulas de páncreas frescas se pueden congelar y moler en un momento posterior. Ejemplo 2. Extrusión. Un producto de páncreas estabilizado se produjo mediante extrusión. El páncreas emulsionado se mezcló con
cascaras de soya preparadas a una proporción de 35 por ciento de páncreas emulsionado a 65 por ciento de cascaras de soya. La mezcla se formó a través de un aparato extrusor que consiste de una serie de esclusas de vapor con una temperatura de superficie de metal de 300 grados Celsius. La mezcla se pasa a través del aparato en aproximadamente 20 segundos y se roció hacia un aparato de recolección. Ejemplo 3. Secado por Aspersión Uh producto de páncreas estabilizado se produjo mediante secado por aspersión. El páncreas emulsionado que contiene aproximadamente 62 por ciento de humedad se alimentó a través de un número de boquillas de atomización calentadas, montadas en una cámara de secado giratoria. El aire calentado se alimentó simultáneamente a la cámara de secado. El producto de páncreas atomizado se dejó caer al piso de la cámara de secado en donde se recogió. Ejemplo 4. Estabilización de pH Un producto de páncreas estabilizado se produjo mediante un proceso de estabilización de pH. El páncreas emulsionado se obtuvo con aproximadamente 75 por ciento de contenido de humedad. Se añadió ácido propiónico al páncreas emulsionado hasta que se alcanzó un pH de 4.5. Después de la adición del ácido, el producto de páncreas estabilizado se hizo gris y poseía una viscosidad
ligeramente fluida a semejante a caucho. En otro ejemplo, el páncreas emulsionado se obtuvo como arriba y se mezcló con cascaras de soya preparadas. El páncreas mezclado consistió de aproximadamente 35 por ciento de páncreas emulsionado y 65 por ciento de cascaras de soya preparadas. Se añadió ácido propiónico a un régimen de 4.536 kilogramos (10 libras) por tonelada a la mezcla de páncreas emulsionado hasta que se alcanzó un pH de 4.5. Ejemplo 5. Formulación de Acuicultura Una ración de alimentación apropiada para uso en acuicultura se puede formular usando el producto de páncreas estabilizado. Una formulación de ejemplo para una ración de camarón es: Ingrediente Por ciento (p/p) de Formulación
Harina de Trigo 28.00 Harina de Frijol de Soya 35.50 Harina de Pescado 20.00 Harina de Calamar 4.00 Lecitina 2.00 Harina de Gluten de Maíz 6.00 Aceite de Pescado 2.50 Div. Vitaminas y Minerales 1.00 Aglutinante 0.90
Producto de Páncreas Estabilizado 0.10 Una formulación de ejemplo para una ración de tilapia es: Ingrediente Por ciento (p/p) de Formulación Harina de Trigo 27.00 Harina de Frijol de Soya 35.00 Maíz 5.90 Salvado de Arroz 10.00 Harina de Pescado 12.00 Div. Vitaminas y Minerales 1.00 Harina de Gluten de Maíz 9.00 Producto de Páncreas Estabilizado 0.10 Ejemplo 6. Formulación para Ganado Una ración de alimentación apropiada para uso en ganado se puede formular usando el producto de páncreas estabilizado. Una formulación de ejemplo para un reemplazo de leche que comprende un producto de páncreas estabilizado es: Ingrediente Por ciento (como está) de Formulación
Concentrados de Proteína de Suero 33.00 Suero Seco 31.73 Grasa seca (7.7% proteina cruda/ 60.3% de grasa cruda) 31.00
Carbonato de Calcio 0.55 Fosfato de Dicalcio 0.40 Div. Vitaminas, Minerales, y Aditivos 2.00 Producto de Páncreas Estabilizado 0.32 Aminoácidos 1.00 Ejemplo 7. Formulación para Venado Una ración de alimentación apropiado para uso en venado se puede formular utilizando el producto de páncreas estabilizado. Una formulación de ejemplo para una ración para venado es: Ingrediente Por ciento (p/p) de Formulación
Maíz Molido Fino 0.60 Medios de Trigo 30.00 Cascaras de Soya 15.00 Brotes de Malta 10.00 Sal 17.00 Alfalfa Deshidratada 3.00 Carbonato de Calcio 3.00 Granos de Destiladores con Solubles 21.00 Harina de Cánola 0.25 Mineral de Vestigio 0.05 Producto de Páncreas Estabilizado 0.10 Ejemplo 8. Formulación para Caballo
Una ración de alimentación apropiada para uso en caballos se puede formular usando el producto de páncreas estabilizado . Una formulación de ejemplo para una ración de equino es: Ingrediente Por Ciento (p/p) de Formulación
Maíz Molido 11.00 Avena Molida 23.00 Medios de Trigo 30.55 Harina de Frijol de Soya 0.25 Sal 0.60 Alfalfa Deshidratada 4.00 Carbonato de Calcio 2.40 Granos de Destiladores con Solubles 20.00 Aceite 2.5 Div. Vitaminas, Minerales y Aditivos 5.25 Producto de Páncreas Estabilizado 0.10 Aminoácidos 0.35 Ejemplo 9. Formulación para Aves Una ración de alimentación apropiada para uso en aves se puede formular utilizando el producto de páncreas estabilizado. Una formulación de ejemplo para una ración de
pavo domesticado es: Ingredientes Por Ciento (p/p) de Formulación
Maiz Finamente Molido 53.71 Medios de Trigo 11.54 Harina de Carne y Hueso 8.00 Harina de Pluma 5.00 Brotes de Malta 10.00 Harina de Frijol de Soya 6.40 Sal 0.15 Carbonato de calcio 0.44 Finos de cereal 4.10 Div. Vitaminas, Minerales, y Aditivos 0.42 Producto de Páncreas Estabilizado 0.10 Aminoácidos 0.14 Ejemplo 10. Formulación para Cerdo Una ración de alimentación apropiada para uso en cerdos se puede formular usando el producto de páncreas estabilizado. Una formulación de ejemplo para una ración para cerdo es: Ingrediente Por Ciento (p/p) de Formulación
Maíz Molido 40.53 Suero Seco 25.00 Harina de Frijol de Soya 22.00
Sal 0.05 Grasa 5. . 00 Carbonato de Calcio 0 . . 22 Fosfato de Dicalcio 0 . . 90 Productos de Proteína Animal 5. . 50 Div. Vitaminas, minerales, y Aditivos 0.70 Producto de Páncreas Estabilizado 0.10 Ejemplo 11. Niveles de Enzima en Producto de Páncreas Estabilizado Este ejemplo compara la actividad enzimática de diversas preparaciones de producto de páncreas estabilizado. El contenido de humedad, actividad de proteasa, y actividad de amilasa se determinaron para productos de páncreas estabilizado secado por aspersión, secado por congelación, extruido y pH. El Cuadro 1 expone los diversos niveles de actividad de proteasa y amilasa de productos estabilizados de páncreas de la presente invención. Para cada preparación, la actividad de enzima de pancreatina se usa como una línea de base comparativa. En el Cuadro 1, "secado por aspersión" se refiere al procedimiento descrito en el Ejemplo 3; "secado por congelación" se refiere a glándulas de páncreas liofilizadas preparadas mediante métodos conocidos en el
ramo; "extrusión" se refiere al procedimiento descrito en el Ejemplo 2, y ,?H estabilizado" se refiere a producto de páncreas estabilizado mezclado con un portador de cascaras de soya como se describe en el Ejemplo 4. Todas las muestras se almacenaron bajo las condiciones indicadas en el Cuadro 1 durante 6 días. Para cada preparación, 1 parte de producto de páncreas estabilizado se mezcló con 4 partes de contenido de intestino delgado de cerdo maduro a temperatura ambiente durante 2 minutos. Las alícuotas de cada preparación se diluyeron y examinaron para determinar los niveles de actividad de proteasa. Los niveles de actividad de proteasa se determinaron corno sigue. Para muestras con menos de aproximadamente 1000 U/G, 10 g de muestras se mezclaron en alrededor de 80 mL de solución de cloruro de sodio al 2 por ciento durante aproximadamente 30 minutos. El volumen de solución se aumentó a 10 0 mL con solución de cloruro de sodio al 2 por ciento y se filtró a través del papel de filtro de fibra de vidrio (Glass Microfibre GF/A. Whatman pie. Florham Park, New Jersey). 1 mL de solución de muestra y reactivos se equilibraron a 40 grados Celsius. 5 L de solución de muestra y reactivos se equilibraron a 40 grados Celsius. 5 mL de .substrato de caseína al 0.6 por ciento (p/v) (Hammarten Casein, Merck & Co., Inc.,
Whitehouse Station, New Jersey) se añadieron a cada muestra y se incubaron a 40 grados Celsius durante alrededor de 30 minutos. 5 mL de reactivo de precipitación (18.8 g de ácido tricloroacético, 18.1 g de acetato de sodio anhidro, y 18.8 g de ácido acético en agua destilada a un volumen de 1000 mL) se añadió. Las muestras luego se incubaron a 40 grados Celsius durante alrededor de 30 minutos. Las muestras se filtraron luego inmediatamente a través del papel de filtro cualitativo de laboratorio (Whatman Grade 1, Whatman pie, Florham Park, New Jersey) , enfriado a temperatura ambiente y medido para absorción a 660 nm. Las absorciones de muestra se midieron contra modelos de enzima y una curva convencional de soluciones de tirosina liberadas por reactivo de fenol Folin-Ciocalteau. Los niveles de actividad de o_amilasa se determinaron como sigue. La solución de reactivo (9 g de cloruro de sodio, 2 g de albúmina de suero bovino, y 2.2 g de cloruro de calcio en agua destilada a un volumen de 1000 mL) y 0.5 M de solución de hidróxido de sodio se prepararon. Las muestras se prepararon mediante dilución hacia 204 mL de solución de reactivo, y se equilibró a 37 grados Celsius. Un substrato de Phadebas Amylase Test Tablet (Pharmacia Diagnostics, Uppsala, Suecia) se añadió a cada muestra, y se mezcló vigorosamente durante 10 segundos. Las muestras luego se incubaron durante 15.
minutos. 1 mL de 0.5 M de solución de peróxido de sodio se añadió, y la solución se centrifugó inmediatamente a 3500 rpm durante 10 minutos. La absorbencia de muestra se midió a 620 nm contra un molde de reactivo, y la actividad de a-amilasa se determinó de conformidad con las instrucciones del fabricante. Cuadro 1. Niveles de Enzima en Productos de Páncreas Estabilizados. Muestra Alma- Hume- Proteasa Amilasa cena- dad (Base Materia (Base Materia mien— Seca) Seca) to U/g Por Cien- U/g Por Cien to de Ac- to de Ac tividad tividad
Pancreatina -20°C 3.60 415,243 100 18,174 100
Secado por Congelación #1 -80°C 4.68 335,742 ¡1 19,167 105
Secado por Congelación #2 4°C 4.92 387,137 93 19,215 106
* Secado por Congelación -80°C 6.32 732,891 177 14,854 82 Mezclado con Cascaras de Soya * pH estabiTemp. 25.27 856,423 307 13,932 77 lizado Amb- * * EExxttrruuiiddoo T Teemmpp.. 1 166..5577 5 54455,,333344 132 603 Ara . Secado por Temp. Aspersión Amb- 1-98 138,981 34 33 8 * La proteína contenida en cascaras de soya mezcladas no se
consideró, de esta manera, la actividad de proteasa puede exceder aquella de la pancreatina. Consecuentemente, los productos estabilizados de páncreas mostrados en el cuadro 1 retienen niveles de actividad de proteasa similares, si no superiores, en comparación con la pancreatina. Además, los productos estabilizados de páncreas mostrados en el cuadro 1 retienen niveles de actividad de amilasa similares, o reducidos en comparación con la pancreatina. Estos resultados son particularmente sorprendentes considerando el almacenamiento de los productos estabilizados de páncreas a temperaturas ambientales durante un período de 6 días. Estos resultados ejemplifican la estabilidad de los productos de la invención. Ejemplo 12. Prueba de Alimentación de Cerdos Destetados En este ejemplo, se condujo una prueba de alimentación para investigar la eficacia del páncreas secado por congelación al reducir el retraso después de destetado en cerdos. Seis grupos de tratamiento se alimentaron con raciones que contienen (1) ninguna pancreatina ni producto estabilizado de páncreas; (2) 0.2 por ciento (p/p) de pancreatina; (3) 0.2 por ciento (p/p) de pancreatina; (4) 0.1 por ciento de producto estabilizado de páncreas, (5) 0.2 por ciento de producto estabilizado de páncreas, y (6) 0.4 por ciento de producto estabilizado de
páncreas. Los datos se analizaron en un diseño de bloque completo hecho al azar mediante el procedimiento GLM (SAS Institute Inc., Cary, North Carolina). Como se muestra en el Cuadro 2, el páncreas secado por congelación exhibe un efecto cuadrático, positivo, en ambas, admisión de alimento y ganancia de peso durante la primera semana después de destetado. Ambas de estas medidas aumentan con el por- ciento de páncreas secado por congelación en la dieta. En una ración que contiene 0.2 por ciento de páncreas secado por congelación, la admisión de alimento se mejora por 31 por ciento y la ganancia de peso se mejora por 83 por ciento. Como se muestra en el Cuadro 3, el páncreas secado por congelación no tiene efecto sobre estas medidas durante las dos semanas subsecuentes. Cuadro 2: Reducción de Retraso Después de Destetado en Cerdos Durante la Semana 1 (lado izquierdo)
Tratamiento 1_ 2_ 3_ 4_ 5 _ß Pancreatina 0.00 0.10 0.20 0.00 0.00 0.00 SEM (por ciento) Secado por Congelación 0.00 0.00 0.00 0.10 0.20 0.40 (por ciento) Admisión de Alimentación (gr/día) 145.15 181.44 131.54 294.12 190.51 172.36 26,3
Ganancia de Peso (gr/día) 54.43 99.79 68.04 81.64 88,79 77.11 18.1
Alimentació : Ganancia (Relación 4.26 2.19 3.50 3.97 2.49 1.69 0.808
Cuadro 2: (lado derecho) Tratamiento Valores P Pancreatina Páncreas Lineal Cuadrático Lineal Cuadrático
Admisión de Alimentación 0.735 0.253 0.568 0.117
Ganancia de Peso 0.626 0.106 0.156 0.166
Alimentación: Ganancia (Relación 0.513 0.107 0.224 0.377
Cuadro 3: Reducción de Retraso Después de Destetado en Cerdos Durante Semanas 2-3 (lado izquierdo)
Tratamiento 1 2_ 3_ 4_ 5_ _6 Pancreatina (por ciento) 0,00 0.10 0.20 0.00 0.00 0.00 SEM
Secado por Congelación (por ciento) 0.00 0.00 0.00 0.10 0.20 0.40 Admisión de Alimentación (gr/día) 412.77 403.70 344.73 417.31 439.99 408.24 326.59
Ganancia de Peso (gr/día) 326.59 308.44 317.52 331.12 349.27 349.27 26.30
Alimentación : Ganancia (Relación) 1.29 1.32 1.11 1.30 1.29 1.16 0.082 Cuadro 3: (lado derecho) Tratamiento Valores P Pancreatina Páncreas Lineal Cuadrática Lineal Cuadrática
Admisión de Alimentación 0.165 0.559 0.980 0.542
Ganancia de Peso 0.769 0.721 0.460 0.950
Alimentación : Ganancia (Relación) 0,153 0,297 0.264 0.357
Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente arriba identificadas se incorporan en la presente por referencia. Habiendo descrito de esta manera la invención, será evidente a aquellos expertos en el ramo que la misma se puede variar en muchas formas sin abandonar el espíritu y alcance de la invención. Estas variaciones se incluyen dentro del alcance de la invención que se va a reivindicar.