MD4440C1 - Procedeu de sinteză enzimatică a acidului (7S)-3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carboxilic şi aplicarea acestuia în sinteza ivabradinei şi a sărurilor sale - Google Patents
Procedeu de sinteză enzimatică a acidului (7S)-3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carboxilic şi aplicarea acestuia în sinteza ivabradinei şi a sărurilor sale Download PDFInfo
- Publication number
- MD4440C1 MD4440C1 MDA20140015A MD20140015A MD4440C1 MD 4440 C1 MD4440 C1 MD 4440C1 MD A20140015 A MDA20140015 A MD A20140015A MD 20140015 A MD20140015 A MD 20140015A MD 4440 C1 MD4440 C1 MD 4440C1
- Authority
- MD
- Moldova
- Prior art keywords
- formula
- compound
- nitrile
- iii
- synthesis
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title claims abstract description 19
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title claims abstract description 16
- ACRHBAYQBXXRTO-OAQYLSRUSA-N ivabradine Chemical compound C1CC2=CC(OC)=C(OC)C=C2CC(=O)N1CCCN(C)C[C@H]1CC2=C1C=C(OC)C(OC)=C2 ACRHBAYQBXXRTO-OAQYLSRUSA-N 0.000 title claims abstract description 12
- 229960003825 ivabradine Drugs 0.000 title claims abstract description 11
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims abstract description 10
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 title abstract description 3
- IHPWCJZOCLQJPX-QMMMGPOBSA-N (7s)-3,4-dimethoxybicyclo[4.2.0]octa-1,3,5-triene-7-carboxylic acid Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC2=C1[C@@H](C(O)=O)C2 IHPWCJZOCLQJPX-QMMMGPOBSA-N 0.000 title description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 40
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 claims abstract description 34
- 108010033272 Nitrilase Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 claims abstract description 13
- 241000187693 Rhodococcus rhodochrous Species 0.000 claims abstract description 8
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 27
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N dimethyl sulfoxide Natural products CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 8
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 7
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 claims description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 6
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 claims description 5
- 229910010084 LiAlH4 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000012280 lithium aluminium hydride Substances 0.000 claims description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 3
- 230000006340 racemization Effects 0.000 claims description 3
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 claims description 3
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000004191 (C1-C6) alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 2
- VDFVNEFVBPFDSB-UHFFFAOYSA-N 1,3-dioxane Chemical compound C1COCOC1 VDFVNEFVBPFDSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- CZLMRJZAHXYRIX-UHFFFAOYSA-N 1,3-dioxepane Chemical group C1CCOCOC1 CZLMRJZAHXYRIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 1,3-dioxolane Chemical compound C1COCO1 WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WADSJYLPJPTMLN-UHFFFAOYSA-N 3-(cycloundecen-1-yl)-1,2-diazacycloundec-2-ene Chemical group C1CCCCCCCCC=C1C1=NNCCCCCCCC1 WADSJYLPJPTMLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical group [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910000085 borane Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 2
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 claims description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical group [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 claims 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 9
- HJTHVTHXHHFXMJ-UHFFFAOYSA-N 3,4-dimethoxybicyclo[4.2.0]octa-1,3,5-triene-7-carbonitrile Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC2=C1C(C#N)C2 HJTHVTHXHHFXMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- ZNTNZZSGPNCART-VIFPVBQESA-N (7s)-3,4-dimethoxy-n-methylbicyclo[4.2.0]octa-1,3,5-triene-7-carboxamide Chemical compound COC1=C(OC)C=C2[C@@H](C(=O)NC)CC2=C1 ZNTNZZSGPNCART-VIFPVBQESA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- -1 amine hydrochloride Chemical class 0.000 description 4
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- HLUKNZUABFFNQS-ZMBIFBSDSA-N ivabradine hydrochloride Chemical compound Cl.C1CC2=CC(OC)=C(OC)C=C2CC(=O)N1CCCN(C)C[C@H]1CC2=C1C=C(OC)C(OC)=C2 HLUKNZUABFFNQS-ZMBIFBSDSA-N 0.000 description 4
- 229960000504 ivabradine hydrochloride Drugs 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 3
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 3
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- JFDZBHWFFUWGJE-UHFFFAOYSA-N benzonitrile Chemical compound N#CC1=CC=CC=C1 JFDZBHWFFUWGJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 238000003821 enantio-separation Methods 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- FVSKHRXBFJPNKK-UHFFFAOYSA-N propionitrile Chemical compound CCC#N FVSKHRXBFJPNKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N tetramethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)C CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010640 amide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- FJIDKRPZJBUHME-UHFFFAOYSA-N bicyclo[4.2.0]octa-1,3,5-triene-7-carbonitrile Chemical compound C1=CC=C2C(C#N)CC2=C1 FJIDKRPZJBUHME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Substances [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 2
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- MIOPJNTWMNEORI-GMSGAONNSA-N (S)-camphorsulfonic acid Chemical compound C1C[C@@]2(CS(O)(=O)=O)C(=O)C[C@@H]1C2(C)C MIOPJNTWMNEORI-GMSGAONNSA-N 0.000 description 1
- SAVVFXUMMFHSJC-SECBINFHSA-N 1-[(7s)-3,4-dimethoxy-7-bicyclo[4.2.0]octa-1,3,5-trienyl]-n-methylmethanamine Chemical compound COC1=C(OC)C=C2[C@@H](CNC)CC2=C1 SAVVFXUMMFHSJC-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- NPAQKATYYLLTKM-UHFFFAOYSA-N 3-[2-(1,3-dioxolan-2-yl)ethyl]-7,8-dimethoxy-1h-3-benzazepin-2-one Chemical compound C1=CC=2C=C(OC)C(OC)=CC=2CC(=O)N1CCC1OCCO1 NPAQKATYYLLTKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HQSCPPCMBMFJJN-UHFFFAOYSA-N 4-bromobenzonitrile Chemical compound BrC1=CC=C(C#N)C=C1 HQSCPPCMBMFJJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001570673 Absidia cylindrospora Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 241001261360 Aspergillus alliaceus Species 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 241000751139 Beauveria bassiana Species 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000235556 Cunninghamella elegans Species 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241000378863 Mucor plumbeus Species 0.000 description 1
- 108010024026 Nitrile hydratase Proteins 0.000 description 1
- RFFFKMOABOFIDF-UHFFFAOYSA-N Pentanenitrile Chemical compound CCCCC#N RFFFKMOABOFIDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000235546 Rhizopus stolonifer Species 0.000 description 1
- 241000187561 Rhodococcus erythropolis Species 0.000 description 1
- 241001518123 Rhodococcus rhodnii Species 0.000 description 1
- KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N Ruthenium Chemical compound [Ru] KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229910020175 SiOH Inorganic materials 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000306282 Umbelopsis isabellina Species 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000000059 bradycardiac effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000009903 catalytic hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- IQDGSYLLQPDQDV-UHFFFAOYSA-N dimethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CNC IQDGSYLLQPDQDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- CETRZFQIITUQQL-UHFFFAOYSA-N dmso dimethylsulfoxide Chemical compound CS(C)=O.CS(C)=O CETRZFQIITUQQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- COTNUBDHGSIOTA-UHFFFAOYSA-N meoh methanol Chemical compound OC.OC COTNUBDHGSIOTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010641 nitrile hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N octane Chemical compound CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 229910052703 rhodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010948 rhodium Substances 0.000 description 1
- MHOVAHRLVXNVSD-UHFFFAOYSA-N rhodium atom Chemical compound [Rh] MHOVAHRLVXNVSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052707 ruthenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012321 sodium triacetoxyborohydride Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- WHRNULOCNSKMGB-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran thf Chemical compound C1CCOC1.C1CCOC1 WHRNULOCNSKMGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
- C07C51/08—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides from nitriles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C62/00—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of rings other than six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
- C07C62/30—Unsaturated compounds
- C07C62/34—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D223/00—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D223/14—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D223/16—Benzazepines; Hydrogenated benzazepines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/006—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
- C12Y305/05—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in nitriles (3.5.5)
- C12Y305/05001—Nitrilase (3.5.5.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C2602/00—Systems containing two condensed rings
- C07C2602/02—Systems containing two condensed rings the rings having only two atoms in common
- C07C2602/04—One of the condensed rings being a six-membered aromatic ring
- C07C2602/06—One of the condensed rings being a six-membered aromatic ring the other ring being four-membered
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Other In-Based Heterocyclic Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la un procedeu de sinteză enzimatică a compusului cu formula (I):prin hidroliza enzimatică enantioselectivă a nitrilului racemic sau non optic pur cu formula (IV):cu ajutorul nitrilazei Rhodococcus rhodochrous NCIMB 11216 cu supraexpresie într-un alt organism care are un sistem biologic competent, într-un amestec de solvent organic şi soluţie apoasă.Invenţia se referă, de asemenea, la un procedeu de sinteză a ivabradinei, a sărurilor sale acceptabile farmaceutic sub formă anhidră sau de hidrat, cu utilizarea compusului cu formula (I).
Description
Prezenta invenţie se referă la un procedeu de sinteză enzimatică a compusului cu formula (I):
precum şi la aplicarea acestuia în sinteza ivabradinei cu formula (II):
sau 3-{3-[{[(7S)-3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-il]metil}(metil)amino]propil}-7,8-dimetoxi-1,3,4,5-tetrahidro-2H-3-benzazepin-2-onă, a sărurilor sale de adiţie cu un acid acceptabil farmaceutic şi a hidraţilor acestora.
Ivabradina, precum şi sărurile sale de adiţie cu un acid acceptabil farmaceutic, îndeosebi clorhidratul său, posedă proprietăţi farmacologice şi terapeutice foarte valoroase, în special proprietăţi bradicardice, ceea ce face ca aceşti compuşi să fie utili în tratamentul sau prevenirea diverselor situaţii clinice de ischemie miocardică, cum este angina pectorală, infarctul miocardic şi tulburările asociate ale ritmului, precum şi în diverse patologii ce se referă la tulburări ale ritmului, în special supraventriculare, şi în cazuri de insuficienţă cardiacă.
Prepararea şi utilizarea terapeutică a ivabradinei şi a sărurilor sale de adiţie cu un acid acceptabil farmaceutic, îndeosebi a clorhidratului său, au fost descrise în brevetul european EP 0 534 859 [1].
Brevetul respectiv descrie sinteza clorhidratului de ivabradină pornind de la compusul cu formula (III), (7S)-1-(3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-il) N-metilmetanamină:
Compusul cu formula (III) este un intermediar important în sinteza ivabradinei şi a sărurilor sale acceptabile farmaceutic.
Stadiul cunoscut al tehnicii dezvăluie mai multe procedee de obţinere a compusului cu formula (III).
Brevetul EP 0 534 859 descrie sinteza compusului cu formula (III) prin reducerea nitrilului cu formula (IV):
prin BH3 în tetrahidrofuran,
urmată de adăugarea acidului clorhidric, pentru a obţine clorhidratul de amină racemică cu formula (V):
care este supus reacţiei cu cloroformiatul de etil pentru a obţine carbamatul cu formula (VI):
reducerea căruia, prin LiAlH4, duce la obţinerea aminei metilate racemice cu formula (VII):
descompunerea căreia cu ajutorul acidului camforsulfonic duce la obţinerea compusului cu formula (III).
Dezavantajul acestei metode constă în faptul că permite obţinerea compusului cu formula (III) cu un randament foarte redus, de 2...3%, pornind de la nitrilul racemic cu formula (IV).
Acest randament foarte redus este determinat de randamentul redus (4...5%) al etapei de descompunere a aminei secundare cu formula (VII).
Brevetul EP 2 166 004 [2] descrie obţinerea compusului cu formula (III) prin descompunerea optică a nitrilului racemic cu formula (IV) cu ajutorul cromatografiei chirale pentru a obţine nitrilul optic pur cu formula (IX):
care este redus cu ajutorul NaBH4 sau prin hidrogenare catalitică, pentru a obţine amina primară cu formula (VIII).
Amina primară poate fi apoi metilată cu ajutorul aceleiaşi secvenţe reacţionale descrise mai sus (transformare în carbamat şi apoi reducerea).
Compusul cu formula (III) poate fi obţinut astfel în 5 etape pornind de la nitrilul racemic cu formula (IV), cu un randament de 45,6% pentru etapa de descompunere.
Utilizarea enzimelor hidrolitice de nitrilază (CE 3.5.5.1 în clasificarea internaţională a enzimelor) s-a arătat a fi promiţătoare pentru a permite obţinerea directă a acidului optic pur cu formula (I) pornind de la nitrilul racemic cu formula (IV), astfel reducându-se numărul de etape pentru obţinerea aminei metilate cu formula (III) pornind de la nitrilul racemic.
Nitrilul cu formula (X) a fost descris ca un substrat de nitrilaze din setul de screening NESK-1400 comercializat de compania Almac:
Cu toate acestea, utilizarea acestor nitrilaze pe nitril cu formula (IV) (a se vedea Exemplul comparativ A) a demonstrat că ele posedă o activitate redusă şi puţină selectivitate, rezultând în majoritatea cazurilor în formarea simultană a amidei (activitatea nitril hidratazei) şi acidului, care este dificil de exploatat în scopul obţinerii substanţelor intermediare în sinteza compusului cu formula (III).
Prin urmare, problema prezentei invenţii este de a găsi o nitrilază care ar permite sinteza enantioselectivă a acidului optic pur cu formula (I) pornind de la nitrilul racemic cu formula (IV), cu reducerea la minimum a formării amidei.
Solicitantul a găsit atunci dovadă a activităţii nitrilazei în diverse microorganisme întregi cu formarea preferenţială a acidului cu formula (I), cu configurarea S. Dintre microorganismele testate, doar Rhodococcus rhodochrous a permis obţinerea acidului (S) cu o enantioselectivitate foarte bună, fără formarea amidei (a se vedea Exemplul comparativ B).
Această activitate a fost îmbunătăţită prin expresia în exces a nitrilazei.
În mod surprinzător, hidroliza enzimatică cu utilizarea acestei nitrilaze exprimate în exces nu este enantioselectivă pentru substratul cu formula (X) (a se vedea Exemplul comparativ C).
În mod mai specific, prezenta invenţie se referă la un procedeu de sinteză a compusului optic pur cu formula (I):
prin hidroliza enzimatică enantioselectivă a nitrilului racemic, sau non optic pur, cu formula (IV):
cu ajutorul nitrilazei Rhodococcus rhodochrous NCIMB 11216 cu supraexpresie într-un alt organism având un sistem biologic competent, cum ar fi o bacterie, drojdie sau ciupercă, într-un amestec de solvent organic şi soluţie apoasă având un pH cuprins între 5 şi 10, de preferinţă o soluţie tampon având un pH cuprins între 5 şi 10, într-o concentraţie cuprinsă între 1 şi 500 g, de preferinţă între 2 g şi 100 g de nitril cu formula (IV) pe litru de amestec de solvent, într-un raport E/S cuprins între 1/1 şi 1/100, la o temperatură cuprinsă între 25 şi 40°C.
Conform unui aspect al invenţiei, nitrilaza este exprimată în exces într-o bacterie ce cuprinde o plasmidă rearanjată, cum ar fi Escherichia coli, de preferinţă E. coli BL21(DE3), E. coli BL21(DE3)pLysS, E. coli BL21star(DE3) sau E. coli JM9(DE3).
Conform unui aspect al invenţiei, solventul organic este un solvent complet sau parţial miscibil cu apa, cum ar fi dimetilsulfoxidul, dimetilformamida, acetona, acetonitrilul, un alcool, cum ar fi etanolul sau izopropanolul, sau un eter, cum ar fi tetrahidrofuranul şi eterul metil-terţ-butilic.
Conform unui alt aspect al invenţiei, solventul organic nu este miscibil cu apa, de exemplu o hidrocarbură, cum ar fi heptan sau octan.
Soluţia apoasă este, de preferinţă, o soluţie tampon având un pH de circa 7.
Conform unui aspect al invenţiei, bacteriile care exprimă nitrilaza în exces sunt utilizate direct în procedeu, sub formă de suspensie bacteriană sau liofilizat.
Raportul E/S este, de preferinţă, cuprins între 1/1 şi 1/10 în cazul unei suspensii bacteriene şi între 1/10 şi 1/20 în cazul unui liofilizat.
Conform unui alt aspect al invenţiei, nitrilaza este utilizată sub formă de enzimă purificată.
Schema hidrolizei enzimatice conform invenţiei este următoarea:
În mod avantajos, nitrilul de configurare (R) ˗ produsul secundar al reacţiei, este racemizat prin acţiunea unei baze organice, cum ar fi diazabicicloundecenul sau a unei baze minerale, cum ar fi hidroxidul de sodiu, hidroxidul de potasiu, carbonatul de potasiu sau carbonatul de sodiu, pentru a fi reciclat în procesul de hidroliză enzimatică.
Atunci când etapa de racemizare este efectuată in situ, procedeul conform invenţiei este un procedeu de rezoluţie cinetică dinamică (dynamic kinetic resolution (DKR)), care permite obţinerea acidului S cu formula (I) cu un exces enantiomeric mai mare de 98%.
Acidul cu formula (I) este, de preferinţă, izolat din mediul de reacţie după unul sau mai multe cicluri de hidroliză enzimatică.
Definiţii
Prin compus optic pur se înţelege un compus cu un exces enantiomeric mai mare sau egal cu 90%.
Prin nitril care nu este optic pur se înţelege un nitril cu un exces enantiomeric mai mic de 90%.
Prin nitril racemic se înţelege un nitril sub formă de un amestec din doi enantiomeri într-un raport cuprins între 55:45 şi 45:55.
Prin hidroliza enantioselectivă a unui nitril racemic, non optic pur, se înţelege hidroliza preferenţială a unuia dintre enantiomerii amestecului.
Prin sistem biologic competent se înţelege (a) specia(ile) biologică(e) (celulele gazdă), al cărei(or) material genetic a fost modificat prin recombinarea genetică ce o/le face capabilă(e) să producă o proteină recombinantă de interes. Un vector de expresie (plasmidă) creat pentru acest scop permite transferarea ADN-ului care codifică gena de interes în celula gazdă, care poate astfel să exprime (în exces) în mod eficient proteina funcţională.
Un alt aspect al invenţiei se referă la un procedeu de sinteză a compusului cu formula (III) în doar două etape, pornind de la acidul optic pur cu formula (I), care este transformat în amidă optic pură cu formula (XI):
reducerea căreia, preferabil prin BH3, NaBH4 sau LiAlH4, duce la obţinerea compusului cu formula (III).
Compusul cu formula (III) este ulterior fie cuplat cu un compus cu formula (XII):
unde X reprezintă un atom de halogen, de preferinţă, un atom de iod,
fie este supus unei reacţii de aminare reductivă cu un compus cu formula (XIII) în prezenţa unui agent reducător:
unde R2 reprezintă o grupă selectată din CHO şi CHR3R4,
unde R3 şi R4 reprezintă fiecare o grupă (C1-C6)alcoxi liniară sau ramificată sau formează, împreună cu atomul de carbon care le poartă, un ciclu 1,3-dioxan, 1,3-dioxolan sau 1,3-dioxepan,
pentru a duce la obţinerea ivabradinei, care este apoi transformată într-o sare de adiţie cu un acid acceptabil farmaceutic, unde sarea menţionată este sub formă anhidră sau de hidrat.
Compusul cu formula (III) poate fi de asemenea utilizat în reacţia de aminare reductivă sub formă de sarea sa de adiţie cu un acid acceptabil farmaceutic, de preferinţă, clorhidratul său. În acest caz, ivabradina este obţinută direct sub formă de clorhidrat.
Printre acizii acceptabili farmaceutic pot fi menţionaţi, fără a se limita la acidul clorhidric, bromhidric, sulfuric, fosforic, acetic, trifluoroacetic, lactic, piruvic, malonic, succinic, glutaric, fumaric, tartric, maleic, citric, ascorbic, oxalic, metansulfonic, benzensulfonic şi camforic.
Printre agenţii reducători care pot fi utilizaţi pentru reacţia de aminare reductivă între compusul cu formula (III) şi compusul cu formula (XIII) pot fi menţionaţi, fără a se limita la compuşii donori de hidrură, cum sunt triacetoxiborohidrura de sodiu sau cianoborohidrura de sodiu, şi dihidrogenul în prezenţa unui catalizator, cum este paladiul, platina, nichelul, ruteniul, rodiul sau un compus al acestora, în special pe un suport sau sub formă de oxizi.
Agentul reducător preferat pentru reacţia de aminare reductivă între compusul cu formula (III) şi compusul cu formula (XIII) este dihidrogenul catalizat de paladiu pe carbon.
Exemplele de mai jos ilustrează invenţia.
Abbrevieri
ATF - acidul trifluoroacetic
CSS - cromatografia în strat subţire
DBU - diazabicicloundecen
RCD - rezoluţie cinetică dinamică
DMF - dimetilformamidă
DMSO - dimetilsulfoxid
OD - densitatea optică
E - coeficientul de enantioselectivitate
ee - exces enantiomeric
ech - echivalent molar
HPLC - High Performance Liquid Chromatography (Cromatografie în fază lichidă de înaltă performanţă)
IPTG - izopropil β-D-1-tiogalactopiranozidă
BL - mediu de cultură din bulion de lizogen
MeOH - metanol
MTBE - eter metil-terţ-butilic
op - puritate optică sau enantiomerică
raportul E/S - raportul Enzimă/Substrat, exprimat în (g/g)
RMN - Rezonanţă magnetică nucleară (spectroscopie)
SM - spectrometrie de masă
THF - tetrahidrofuran
TMS - tetrametilsilan
EXEMPLUL 1: Acid (7S)-3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carboxilic
Exprimarea în exces a nitrilazei
Proteina nitrilază Rhodococcus rhodochrous NCIMB 11216 este descrisă în bazele de date ale proteinelor şi genomilor. Secvenţa genei cercetate este înscrisă sub identificatorul SVA (Sequence Version Archive) "EF467367" în ENA (European Nucleotide Archive - Arhiva europeană a nucleotidelor) a EMBL-Bank. Această secvenţă corespunde referinţei "A4LA85" în baza de date UniProtKB/TrEMBL.
A fost utilizată tulpina de producţie E. coli BL21(DE3), transformată cu vectorul de expresie pET28a-Nit1.
Protocolul de exprimare în exces a nitrilazei este descris în Applied Biochemistry and Biotechnology 2010, vol. 160 (2), p. 393-400.
Celulele transformate astfel sunt fie utilizate direct sub formă de suspensie bacteriană, fie liofilizate înainte de utilizare.
Hidroliza enzimatică cu nitrilaza exprimată în exces.
Celulele transformate conform protocolului menţionat sunt amestecate într-o concentraţie de 5,6 x 109 celule/ml (1ml de cultură la DO=1 (600 nm) corespunde cu 1,109 bacterii şi circa 10 mg de suspensie bacteriană sau 1,5 mg de liofilizat).
La o soluţie de 250 ml de soluţie tampon de fosfat KH2PO4/ Na2HPO4 1/15 M la pH 7 se adaugă 1 g de liofilizat de E. coli şi 500 mg (c=2 g/l, 10mM) de 3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carbonitril în 2% de DMSO (5 ml).
Amestecul reacţiei este menţinut la 30°C, fiind agitat rotativ la 220 rpm, timp de 6 ore.
Reacţia este monitorizată prin HPLC în fază chirală în condiţii ce permit determinarea excesului enantiomeric al acidului şi nitrilului:
Coloana chiralpak IB
90% n-hexan 10% 2-PrOH + 0,1% ATF
1 ml/min 30°C 288 nm
% nitril ee (nitril) % acid ee (acid) transformare E 6 ore 49,9 94 50,1 97 0,49 >100
* coeficientul de enantioselectivitate E = ln[1-c(1+ee(acid))] / ln[1-c(1-ee(acid))]
Cromatograma HPLC în fază chirală după 6 ore este arătată în Figura 1.
După ce s-a aflat în reacţie timp de 6 ore, amestecul reacţiei este oxidat cu HCl 1M pentru a obţine un pH (pH 2) extrem de acid şi apoi este extras cu 2 x 100 ml de diclormetan. Faza organică este înlăturată. A doua extragere cu ajutorul toluenului (2 x 100 ml) permite extragerea întregului produs rămas în fază apoasă. Fazele organice sunt spălate cu soluţie saturată de NaCl şi apoi sunt uscate cu ajutorul sulfatului de magneziu anhidru. După evaporarea solvenţilor, este obţinut produsul în stare brută, care este purificat prin cromatografia flash pe coloana de siliciu în următoarele condiţii:
Tipul coloanei: 80 g SiOH Macherey-Nagel
Materialul şi metoda: Reveleris®
Eluantul: Izocratic (ciclohexan + 1% acid acetic / acetat de etil + 1% acid acetic 75/25)
Detectarea: UV 288 nm
Viteza de curgere: 60 ml/min
Rezultatul:
Nitril (R): randament 36% (179 mg), ee (R): 96%
Acid (S): randament 39% (246 mg), ee (S): 96%
EXEMPLUL 2: 3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carbonitril
prin racemizarea nitrilului (R)
Se transferă 100 mg de (R)-(3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-il)nitril (0,53 mmol), 5 ml de izopropanol şi 121 mg de DBU (1,5 ech.) într-un balon prevăzut cu un condensator şi un agitator magnetic. Se încălzeşte timp de 2 ore la 65°C şi apoi se lasă să revină la temperatura ambiantă. Se filtrează pentru a obţine compusul indicat în denumire.
EXEMPLUL 3: (7S)-3,4-dimetoxi-N-metilbiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carboxamidă
Se pune în suspensie acidul (7S)-3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carboxilic obţinut în Exemplul 1 (300 mg) în THF (3 ml) la temperatura ambiantă şi apoi se adaugă trietilamină (200 µl). Se adaugă lent cloroformiat de etil (150 µl) la amestec. Amestecul reacţiei se precipită (amestecul I).
Într-un alt balon, metilamina în formă de soluţie 2M în THF (2,25 ml) se agită cu apă (1 ml) şi trietilamină (300 µl). Se menţine agitarea timp de 20 minute, apoi amestecul rezultat se adaugă la amestecul I şi se agită la temperatura ambiantă timp de o noapte.
Amestecul reacţiei este apoi evaporat şi purificat prin HPLC preparativă.
Se obţine (7S)-3,4-dimetoxi-N-metilbiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carboxamidă cu un randament de 60%.
1H RMN (DMSO-d6, ppm / TMS) = 2,61 (m; 3H); 3,16 (m; 2H); 3,71 (s; 6H); 4,05 (m; 1H); 6,78 (s; 1H); 6,81 (s; 1H); 7,78 (br s; 1H).
EXEMPLUL 4: (7S)-3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-il] N-metil metanamină
Se pune în suspensie (7S)-3,4-dimetoxi-N-metilbiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carboxamida obţinută în Exemplul 3 (450 mg) în tetrahidrofuran (20 ml), apoi la amestecul reacţiei se adaugă lent 1,6 ml de soluţie LiAlH4 2M în tetrahidrofuran la temperatura ambiantă. Se observă o degajare puternică a gazului şi amestecul reacţiei devine limpede. Se încălzeşte amestecul reacţiei la reflux timp de 30 minute.
După reîntoarcerea la temperatura ambiantă, se hidrolizează şi apoi se extrage cu acetat de etil. Se usucă pe MgSO4 şi apoi se evaporă. Precipitatul obţinut este purificat prin HPLC preparativă (eluant: apă/acetonitril/acid trifluoracetic de la 98/2/0,2 până la 20/80/0,2) timp de 30 minute pentru a obţine produsul indicat în denumire cu un randament de 46%.
1H RMN (DMSO-d6, ppm / TMS) = 2,60 (m; 3H); 2,85 (m; 1H); 3,15 (m; 1H); 3,25 (dd; 1H); 3,30 (m; 1H); 3,62 (m; 1H); 3,70 (s; 6H); 6,82 (s; 1H); 6,89 (s; 1H); 8,48 (br s; 1H).
EXEMPLUL 5: (7S)-3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-il] N-metil metanamină, clorhidrat
Se adaugă 20 ml de soluţie molară de BH3 în tetrahidrofuran, la temperatura ambiantă, la un amestec de 2,2 g (10 mmol) de (7S)-3,4-dimetoxi-N-metilbiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carboxamidă obţinută în Exemplul 3 în 45 ml de tetrahidrofuran. După agitare timp de 1 oră, se adaugă 10 ml de soluţie de BH3 în tetrahidrofuran. După agitare timp de o noapte la temperatura ambiantă, se adaugă 20 ml de etanol prin picurare şi amestecul se agită până când nu se mai degajă gaz (circa 1 oră). Apoi se adaugă prin picurare 20 ml de soluţie de acid clorhidric în etanol. După agitarea timp de 4 ore, precipitatul obţinut (1,2 g de produsul indicat în denumire) este filtrat. Filtratul este concentrat, obţinându-se o cantitate suplimentară de 0,65 g de produsul indicat în denumire prin solidificarea acestuia într-un amestec de acetat de etil/etanol 80/20.
Cele două precipitate sunt combinate pentru a obţine 1,85 g de produsul indicat în denumire (randament: 77%).
EXEMPLUL 6: Clorhidrat de ivabradină
Se încarcă într-o autoclavă 5,5 kg de 3-[2-(1,3-dioxolan-2-il)etil]-7,8-dimetoxi-1,3-dihidro-2H-3-benzazepin-2-onă, 27,5 litri de etanol şi 550 g de paladiu-pe-carbon.
Se purifică cu azot şi apoi cu hidrogen, se încălzeşte până la 55°C, apoi se hidrogenează la această temperatură sub o presiune de 5 bari până la absorbţia cantităţii teoretice de hidrogen. Apoi se readuce la temperatura ambiantă şi se reduce presiunea în autoclavă. Se adaugă 4 kg de clorhidrat de (7S)-3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-il] N-metil metanamină, 11 litri de etanol, 5,5 litri de apă şi 1 kg de paladiu-pe-carbon.
Se purifică cu azot, apoi cu hidrogen, se încălzeşte până la 85°C, se hidrogenează la această temperatură sub o presiune de 30 bari până la absorbţia cantităţii teoretice de hidrogen. Apoi se readuce la temperatura ambiantă, se curăţă autoclava şi se filtrează amestecul reacţiei; se distilează solvenţii şi se izolează clorhidratul de ivabradină prin cristalizare dintr-un amestec de toluen/1-metil-2-pirolidinonă.
Clorhidratul de ivabradină este obţinut cu un randament de 85% şi o puritate chimică mai mare de 99%.
EXEMPLUL COMPARATIV A: Screening-ul nitrilazelor comerciale pentru hidroliza enzimatică a 3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carbonitrilului
Se cântăreşte nitrilaza studiată (15 mg), sub formă de liofilizat, într-o eprubetă, apoi se adaugă 4 ml de soluţie tampon 0,1 M KH2PO4 cu pH=7 şi 3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carbonitril (20 mg) dizolvat în 100 µl de DMSO.
Se pune în incubator la 28°C şi 220 rpm.
Viteza de transformare a fost măsurată prin HPLC după 24 ore şi 72 ore.
Nitrilazele NIT 101, NIT 102, NIT 103, NIT 104, NIT 105, NIT 106, NIT 108, NIT 109, NIT 111, NIT 112 şi NIT 113 (Almac) nu hidrolizează nitrilul după 24 ore (nicio formare de acid sau amidă).
Rezultatele obţinute cu nitrilazele NIT 107, NIT 110, NIT 114 şi NIT 115 (Almac) sunt rezumate în tabelul de mai jos:
Nitrilază 72 ore Amidă Acid Nitril NIT 107 23% 16% 61% NIT 110 24% 15% 61% NIT 114 21% 22% 57% NIT 115 7% 47% 46%
Condiţii analitice:
Coloana Phenomenex LUNA HST 50*3 C18(2) 2,5 µm
0% până la 100% B în 8 min 0,8 ml/min 40°C
A (1000 apă+25 ACN+1 ATF)
B (1000 ACN+25 apă+1 ATF)
Nitrilaza NIT 115 a fost apoi utilizată într-un alt studiu pentru a determina dacă hidroliza nitrilului este enantioselectivă.
Nitrilaza NIT 115 (12 mg; Almac) a fost utilizată în 6 ml [2 mg/ml] de soluţie tampon.
S-a adăugat 3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carbonitril pentru a atinge o concentraţie finală de 4 mg/ml a acesteia.
Enantioselectivitatea a fost măsurată prin HPLC folosind următoarele condiţii analitice:
Coloana Chiralpak IC 250*4,6
30% etanol pur + 0,1% ATF + 70% heptan + 0,1% ATF
1 ml/min 30°C 288 nm
Notă: În aceste condiţii, enantiomerii acidului sunt separaţi, însă nu cei ai nitrilului.
Cromatograma obţinută după 5 ore de reacţie este prezentată în fig. 2.
Concluzie: Nu s-a observat nicio enantioselectivitate.
EXEMPLUL COMPARATIV B: Screening-ul nitrilazelor de tulpini bacteriene şi fungice pentru hidroliza enzimatică a 3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carbonitrilului
Un studiu în care se utilizează mai mulţi inductori bacterieni (propionitril, benzonitril, 4-bromobenzonitril) a demonstrat că propionitrilul a permis cea mai bună inducere a activităţii nitrilazei cu 3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carbonitril.
Tulpinile bacteriene au fost induse cu propionitril la 72mM timp de 72 ore, iar celulele au fost extrase în 50 ml (concentrate de două ori, conc. 10 mg de celule per ml) de soluţie tampon de fosfat 0,1M KH2PO4/K2HPO4 cu pH=7,3 cu adaos de 3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carbonitril într-o concentraţie de 10mM în 2% de DMSO v/vfinal.
Tulpinile fungice au fost induse cu valeronitril.
Toate amestecurile reacţiei au fost agitate la 220 rpm la 30°C în cazul bacteriilor şi la 27°C în cazul ciupercilor şi monitorizate timp de 96 ore prin HPLC în fază inversă şi prin HPLC în fază chirală conform metodelor descrise mai jos.
Analiza fazei inverse
Coloana Phenomenex LUNA HST 50*3 C18(2) 2,5 µm
0% B până la 100% B în 8 min 0,8 ml/min 40°C
A (1000 apă+25 ACN+1 ATF)
B (1000 ACN+25 apă +1 ATF)
Analiza în fază chirală
Coloana Chiralpak IC 250*4,6
30% etanol pur + 0,1% ATF + 70% heptan + 0,1% ATF
1 ml/min 30°C 288 nm
Rezultatele obţinute sunt rezumate în tabelul de mai jos:
MICROORGANISME % compuşi formaţi după 96 ore Nitril rezidual Amidă Acid Rhodococcus erythropolis NCIMB11215 23 42 35 (S) Rhodococcus rhodochrous NCIMB11216 65 / 35 (S) Rhodococcus rhodochrous NCIMB11273 100 / / Rhodococcus rhodnii NCIMB11279 100 / / Aspergillus niger BO Aspergillus alliaceus NRRL 315 95 95 / / < 5 < 5 Cunninghamella elegans NRRL 1392 95 / < 5 Rhizopus nigricans NRRL 1477 95 / < 5 Absidia cylindrospora MMP 1569 95 / < 5 Mortierella isabellina NRRL 1757 95 / < 5 Mucor plumbeus ATCC 4740 95 / < 5 Beauveria bassiana ATCC 7159 Stibella fimetaria CBS 548-84 Stibella fimetaria CBS 511-67 Stibella fimetaria CBS 294-81 86 100 100 100 / / / / 14 / / /
EXEMPLUL COMPARATIV C: Hidroliza enzimatică a biciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carbonitrilului cu utilizarea nitrilazei exprimate în exces de Rhodococcus rhodochrous NCIMB 11216
Placare pe LB+agar+kanamicină, incubare statică la 37°C timp de 24 ore (tulpină 11216 de nitrilază a E. coli recombinantă).
Precultură în 5 ml de LB+kanamicină (50 mg/l), incubare la 37°C, 180 rpm timp de o noapte.
Cultură: se transferă 50 ml de LB şi 500 µl de precultură în baloane Erlenmeyer de 250 ml fără despărţituri, incubare la 28°C, 160 rpm până ce DO este egală cu 0,6 (adică circa 4 ore).
Inducere cu IPTG (0,5mM), incubare la 17°C, 160 rpm timp de o noapte (17 ore).
Testul de activitate: se centrifughează culturile la 4°C, 6000 rpm timp de 20 minute, se repune în suspensie amestecul în 10 ml de soluţie tampon de fosfat 0,1M cu pH-ul 7. Se adaugă biciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carbonitril (10mM) + 2 % etanol. Se incubează la 220 rpm, 30°C.
Notă: Dacă cultura este într-o cantitate mai mare de 50 ml în timpul centrifugării, se extrag 50 ml şi se efectuează testul de activitate cu ajutorul unei suspensii de 50 ml de cultură.
Monitorizarea hidrolizei prin cromatografia chirală: la 45 minute şi 2 ore.
Coloană: Phenomenex® LUNA HST 50*3 C18(2) 2,5 µm
Eluant: A +B (de la 0% până la 100% B în 8 minute)
A: 1000 apă+25 ACN+1 ATF
B: 1000 ACN+25 apă+1 ATF
0,8 ml/min - 40°C - UV 210 nm
Rezultate:
Durata Nitril Acid carboxilic 45 minute 50% 50% 2 ore 0% 100%
Monitorizarea prin cromatografia chirală demonstrează că reacţia nu este enantioselectivă.
1. EP 0534859 B1 1994.11.17
2. EP 2166004 B1 2010.10.06
Claims (14)
1. Procedeu de sinteză a compusului optic pur cu formula (I):
prin hidroliza enzimatică enantioselectivă a nitrilului racemic, sau non optic pur cu formula (IV):
cu ajutorul nitrilazei Rhodococcus rhodochrous NCIMB 11216 cu supraexpresie într-un alt organism care are un sistem biologic competent, într-un amestec de solvent organic şi soluţie apoasă având un pH cuprins între 5 şi 10, într-o concentraţie cuprinsă între 1 şi 500 g de nitril cu formula (IV) pe litru de amestec de solvenţi, într-un raport E/S cuprins între 1/1 şi 1/100, la o temperatură cuprinsă între 25 şi 40°C.
2. Procedeu, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că organismul care are un sistem biologic competent este o bacterie ce conţine o plasmidă rearanjată.
3. Procedeu, conform revendicării 2, caracterizat prin aceea că bacteriile care exprimă nitrilaza în exces sunt utilizate direct, sub formă de suspensie bacteriană sau liofilizat.
4. Procedeu, conform oricăreia dintre revendicările 1 - 3, caracterizat prin aceea că solventul organic este selectat dintre dimetilsulfoxid, dimetilformamidă, acetonă, acetonitril, etanol, izopropanol, tetrahidrofuran şi eter metil-terţ-butilic.
5. Procedeu, conform oricăreia dintre revendicările 1 - 4, caracterizat prin aceea că nitrilul de configurare (R), produsul secundar al reacţiei:
este racemizat prin acţiunea unei baze în nitrilul racemic cu formula (IV) pentru a fi reciclat în procedeul de hidroliză enzimatică.
6. Procedeu, conform revendicării 5, caracterizat prin aceea că baza este diazabicicloundecen.
7. Procedeu, conform revendicării 5 sau 6, caracterizat prin aceea că etapa de racemizare se efectuează in situ.
8. Procedeu, conform oricăreia dintre revendicările 5 - 7, caracterizat prin aceea că acidul cu formula (I) este izolat după unul sau mai multe cicluri de hidroliză enzimatică.
9. Procedeu de sinteză a compusului cu formula (III):
pornind de la nitrilul cu formula (IV):
care este hidrolizat pentru a forma acidul optic pur cu formula (I):
conform oricăreia dintre revendicările 1 - 8,
care este apoi transformat în amidă optic pură cu formula (XI):
reducerea căreia duce la obţinerea compusului cu formula (III).
10. Procedeu, conform revendicării 9, caracterizat prin aceea că reducerea compusului cu formula (XI) pentru a forma compusul cu formula (III) se efectuează cu BH3, NaBH4 sau LiAlH4.
11. Procedeu de sinteză a ivabradinei, caracterizat prin aceea că compusul cu formula (III): ,
obţinut conform revendicării 9, este fie cuplat cu un compus cu formula (XII):
unde X reprezintă un atom de halogen,
fie este supus unei reacţii de aminare reductivă cu un compus cu formula (XIII) în prezenţa unui agent reducător:
unde R2 reprezintă o grupă selectată dintre CHO şi CHR3R4,
unde R3 şi R4 reprezintă fiecare o grupă alcoxi (C1-C6) liniară sau ramificată sau formează împreună cu atomul de carbon care le poartă un ciclu 1,3-dioxan, 1,3-dioxolan sau 1,3-dioxepan,
pentru a obţine ivabradina, care poate fi transformată într-o sare de adiţie cu un acid acceptabil farmaceutic sub formă anhidră sau de hidrat.
12. Procedeu, conform revendicării 11, unde X este un atom de iod.
13. Procedeu, conform revendicării 11, unde compusul cu formula (III) este utilizat în reacţia de aminare reductivă sub formă de clorhidratul său pentru a obţine ivabradina sub formă de clorhidrat.
14. Procedeu, conform revendicării 11 sau 13, unde reacţia de aminare reductivă cu compusul cu formula (XIII) se efectuează în prezenţa dihidrogenului catalizat de paladiu pe carbon.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1351785A FR3002542B1 (fr) | 2013-02-28 | 2013-02-28 | Procede de synthese enzymatique de l'acide (7s) 3,4-dimethoxybicyclo[4.2.0]octa-1,3,5-triene 7-carboxylique et application a la synthese de l'ivabradine et de ses sels |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MD20140015A2 MD20140015A2 (ro) | 2014-08-31 |
| MD4440B1 MD4440B1 (ro) | 2016-10-31 |
| MD4440C1 true MD4440C1 (ro) | 2017-05-31 |
Family
ID=48468557
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MDA20140015A MD4440C1 (ro) | 2013-02-28 | 2014-02-24 | Procedeu de sinteză enzimatică a acidului (7S)-3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carboxilic şi aplicarea acestuia în sinteza ivabradinei şi a sărurilor sale |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9476071B2 (ro) |
| EP (1) | EP2772547B1 (ro) |
| JP (1) | JP5837114B2 (ro) |
| KR (1) | KR101570727B1 (ro) |
| CN (1) | CN104017832B (ro) |
| AR (1) | AR094883A1 (ro) |
| AU (1) | AU2014200700B2 (ro) |
| BR (1) | BR102014004349A2 (ro) |
| CA (1) | CA2843985C (ro) |
| CY (1) | CY1116826T1 (ro) |
| DK (1) | DK2772547T3 (ro) |
| EA (1) | EA023883B1 (ro) |
| ES (1) | ES2549226T3 (ro) |
| FR (1) | FR3002542B1 (ro) |
| GE (1) | GEP201606578B (ro) |
| HK (1) | HK1201564A1 (ro) |
| HR (1) | HRP20150950T1 (ro) |
| HU (1) | HUE027809T2 (ro) |
| MA (1) | MA35612B1 (ro) |
| MD (1) | MD4440C1 (ro) |
| ME (1) | ME02217B (ro) |
| MX (1) | MX347536B (ro) |
| NZ (1) | NZ620915A (ro) |
| PL (1) | PL2772547T3 (ro) |
| PT (1) | PT2772547E (ro) |
| RS (1) | RS54167B1 (ro) |
| SG (1) | SG2014010854A (ro) |
| SI (1) | SI2772547T1 (ro) |
| WO (1) | WO2014131996A1 (ro) |
| ZA (1) | ZA201401224B (ro) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3101010A1 (en) | 2015-06-03 | 2016-12-07 | Urquima S.A. | New method for the preparation of highly pure ivabradine base and salts thereof |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0534859B1 (fr) * | 1991-09-27 | 1994-11-17 | Adir Et Compagnie | 3-Benzazépin-zones substituées par un groupe benzocyclobutyl- ou indanyl-alkyl-amino-alkyle, utiles dans le traitement des affections cardiovasculaires |
| EP0610049B1 (en) * | 1993-02-03 | 1999-11-03 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Process for producing optically active alpha-hydroxycarboxylic acid having phenyl group |
| DE10010149A1 (de) * | 2000-03-03 | 2001-09-06 | Basf Ag | Nitrilase aus Rhodococcus rhodochrous NCIMB 11216 |
| WO2007071578A2 (de) * | 2005-12-20 | 2007-06-28 | Basf Se | Verfahren zur herstellung von 5 -norbornen-2-carbonsäure aus 5-norbornen-2-carbonitril unter verwendung einer arylacetonitrilase |
| EP2166004B1 (fr) * | 2008-08-29 | 2010-10-06 | Les Laboratoires Servier | Nouveau procédé de résolution des énantiomères du (3,4-diméthoxy-bicyclo[4.2.0]octa-1,3,5-trién-7-yl)nitrile et application à la synthèse de l'ivabradine |
| WO2011138625A1 (en) * | 2010-05-07 | 2011-11-10 | Richter Gedeon Nyrt. | Industrial process for the synthesis of ivabradine salts |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MX169933B (es) * | 1987-09-18 | 1993-08-02 | Hideaki Yamada | Procedimiento para la produccion biologica de amidas |
| CZ280901B6 (cs) * | 1988-10-06 | 1996-05-15 | Hideaki Yamada | Způsob kultivace bakterií |
| AU627648B2 (en) * | 1990-02-28 | 1992-08-27 | Teruhiko Beppu | Dna fragment encoding a polypeptide having nitrile hydratase activity, a transformant containing the gene and a process for the production of amides using the transformant |
| JP2009508522A (ja) * | 2005-09-22 | 2009-03-05 | アストラゼネカ・アクチエボラーグ | 芳香族ハロ−置換ジニトリルをハロ−置換シアノカルボン酸に変換する新規な方法 |
| CN101284813B (zh) * | 2007-04-12 | 2012-08-15 | 上海优拓医药科技有限公司 | 伊伐布雷定的制备方法 |
| CN101671265B (zh) * | 2008-09-12 | 2012-08-15 | 中国科学院上海药物研究所 | 一种苯并环丁烷类化合物及其制备方法与用途 |
| CN102249937A (zh) * | 2010-05-18 | 2011-11-23 | 上海京新生物医药有限公司 | 1-(s)-4,5-二甲氧基-1-甲胺基甲基-苯并环丁烷的制备方法 |
-
2013
- 2013-02-28 FR FR1351785A patent/FR3002542B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-02-07 NZ NZ620915A patent/NZ620915A/en not_active IP Right Cessation
- 2014-02-10 AU AU2014200700A patent/AU2014200700B2/en not_active Ceased
- 2014-02-11 SG SG2014010854A patent/SG2014010854A/en unknown
- 2014-02-14 MX MX2014001785A patent/MX347536B/es active IP Right Grant
- 2014-02-18 ZA ZA2014/01224A patent/ZA201401224B/en unknown
- 2014-02-18 CN CN201410054182.0A patent/CN104017832B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2014-02-24 MD MDA20140015A patent/MD4440C1/ro not_active IP Right Cessation
- 2014-02-24 CA CA2843985A patent/CA2843985C/fr not_active Expired - Fee Related
- 2014-02-24 MA MA36779A patent/MA35612B1/fr unknown
- 2014-02-25 BR BR102014004349A patent/BR102014004349A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2014-02-26 US US14/190,702 patent/US9476071B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2014-02-26 AR ARP140100591A patent/AR094883A1/es unknown
- 2014-02-26 GE GEAP201413399A patent/GEP201606578B/en unknown
- 2014-02-27 WO PCT/FR2014/050423 patent/WO2014131996A1/fr not_active Ceased
- 2014-02-27 HU HUE14156910A patent/HUE027809T2/en unknown
- 2014-02-27 PL PL14156910T patent/PL2772547T3/pl unknown
- 2014-02-27 KR KR1020140023556A patent/KR101570727B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2014-02-27 JP JP2014036219A patent/JP5837114B2/ja active Active
- 2014-02-27 EP EP14156910.3A patent/EP2772547B1/fr active Active
- 2014-02-27 PT PT141569103T patent/PT2772547E/pt unknown
- 2014-02-27 ES ES14156910.3T patent/ES2549226T3/es active Active
- 2014-02-27 ME MEP-2015-153A patent/ME02217B/me unknown
- 2014-02-27 SI SI201430006T patent/SI2772547T1/sl unknown
- 2014-02-27 EA EA201400171A patent/EA023883B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2014-02-27 RS RS20150519A patent/RS54167B1/sr unknown
- 2014-02-27 DK DK14156910.3T patent/DK2772547T3/en active
-
2015
- 2015-03-02 HK HK15102081.9A patent/HK1201564A1/xx unknown
- 2015-09-08 HR HRP20150950TT patent/HRP20150950T1/hr unknown
- 2015-09-16 CY CY20151100811T patent/CY1116826T1/el unknown
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0534859B1 (fr) * | 1991-09-27 | 1994-11-17 | Adir Et Compagnie | 3-Benzazépin-zones substituées par un groupe benzocyclobutyl- ou indanyl-alkyl-amino-alkyle, utiles dans le traitement des affections cardiovasculaires |
| EP0610049B1 (en) * | 1993-02-03 | 1999-11-03 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Process for producing optically active alpha-hydroxycarboxylic acid having phenyl group |
| DE10010149A1 (de) * | 2000-03-03 | 2001-09-06 | Basf Ag | Nitrilase aus Rhodococcus rhodochrous NCIMB 11216 |
| WO2007071578A2 (de) * | 2005-12-20 | 2007-06-28 | Basf Se | Verfahren zur herstellung von 5 -norbornen-2-carbonsäure aus 5-norbornen-2-carbonitril unter verwendung einer arylacetonitrilase |
| EP2166004B1 (fr) * | 2008-08-29 | 2010-10-06 | Les Laboratoires Servier | Nouveau procédé de résolution des énantiomères du (3,4-diméthoxy-bicyclo[4.2.0]octa-1,3,5-trién-7-yl)nitrile et application à la synthèse de l'ivabradine |
| WO2011138625A1 (en) * | 2010-05-07 | 2011-11-10 | Richter Gedeon Nyrt. | Industrial process for the synthesis of ivabradine salts |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Gradley M., Deverson C., Knowles C. Asymmetric hydrolysis of R-(-), S(+)-2-methylbutyronitrile by Rhodococcus rhodochrous NCIMB 11216. Archives of Microbiology, 1994, vol. 161, nr. 3, p. 246-251 * |
| Hoyle A., Bunch A., Knowles C. The nitrilases of Rhodococcus rhodochrous NCIMB 11216. Enzyme and Microbial Technology, 1998, vol. 23, nr. 7-8, p. 475-482 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5764151B2 (ja) | （７ｓ）−３，４−ジメトキシビシクロ［４．２．０］オクタ−１，３，５−トリエン−７−カルボン酸又はそのエステルの酵素的合成の方法、ならびにイバブラジン及びその塩の合成における適用 | |
| KR101495614B1 (ko) | （７ｓ）－１－（３，４－디메톡시바이시클로［４．２．０］옥타－１，３，５－트리엔－７－일) ｎ－메틸 메탄아민의 효소적 합성방법, 및 이바브라딘 및 이의 염의 합성에 대한 적용 | |
| MD4440C1 (ro) | Procedeu de sinteză enzimatică a acidului (7S)-3,4-dimetoxibiciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-carboxilic şi aplicarea acestuia în sinteza ivabradinei şi a sărurilor sale | |
| HK1198372B (en) | Method for enzymatic synthesis of (7s)-3,4-dimethoxybicyclo [4.2.0] octa-1,3,5-triene-7-carboxylic acid, and use for the synthesis of ivabradine and the salts thereof | |
| HK1188255A (en) | Process for the enzymatic synthesis of (7s)-3,4-dimethoxybicyclo[4.2.0]octa-1,3,5-triene-7-carboxylic acid or esters thereof, and application in the synthesis of ivabradine and salts thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG4A | Patent for invention issued | ||
| KA4A | Patent for invention lapsed due to non-payment of fees (with right of restoration) | ||
| MM4A | Patent for invention definitely lapsed due to non-payment of fees |