EA023883B1 - Способ ферментативного синтеза (7s)-3,4-диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбоновой кислоты и применение в синтезе ивабрадина и его солей - Google Patents

Способ ферментативного синтеза (7s)-3,4-диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбоновой кислоты и применение в синтезе ивабрадина и его солей Download PDF

Info

Publication number
EA023883B1
EA023883B1 EA201400171A EA201400171A EA023883B1 EA 023883 B1 EA023883 B1 EA 023883B1 EA 201400171 A EA201400171 A EA 201400171A EA 201400171 A EA201400171 A EA 201400171A EA 023883 B1 EA023883 B1 EA 023883B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
formula
compound
nitrile
acid
iii
Prior art date
Application number
EA201400171A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201400171A1 (ru
Inventor
Сандрин Педрагоза-Моро
Франсуа Лефулон
Original Assignee
Ле Лаборатуар Сервье
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ле Лаборатуар Сервье filed Critical Ле Лаборатуар Сервье
Publication of EA201400171A1 publication Critical patent/EA201400171A1/ru
Publication of EA023883B1 publication Critical patent/EA023883B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
    • C07C51/08—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides from nitriles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C62/00—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of rings other than six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C62/30—Unsaturated compounds
    • C07C62/34—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D223/00—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D223/14—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D223/16—Benzazepines; Hydrogenated benzazepines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C12P41/006—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
    • C12Y305/05—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in nitriles (3.5.5)
    • C12Y305/05001—Nitrilase (3.5.5.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2602/00—Systems containing two condensed rings
    • C07C2602/02—Systems containing two condensed rings the rings having only two atoms in common
    • C07C2602/04—One of the condensed rings being a six-membered aromatic ring
    • C07C2602/06—One of the condensed rings being a six-membered aromatic ring the other ring being four-membered
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Other In-Based Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)

Abstract

Способ ферментативного синтеза соединения формулы (I)Применение в синтезе ивабрадина и его солей присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой.

Description

Настоящее изобретение относится к способу ферментативного синтеза соединения формулы (I)
и к его применению в синтезе ивабрадина формулы (II)
или 3-{3-[{[(78)-3,4-диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]метил}(метил)амино]пропил}-7,8диметокси-1,3,4,5-тетрагидро-2Н-3-бензазепин-2-она, его солей присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой и их гидратов.
Ивабрадин и его соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой и, в особенности, его гидрохлорид обладают весьма ценными фармакологическими и терапевтическими свойствами, в особенности брадикардическими свойствами, которые делают эти соединения пригодными для лечения или профилактики различных клинических состояний ишемии миокарда, таких как стенокардия, инфаркт миокарда и ассоциированные нарушения ритма, а также различных патологий, связанных с нарушением ритма, в частности суправентрикулярных нарушений ритма и сердечной недостаточности.
Получение и терапевтическое применение ивабрадина и его солей присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой и, в особенности, его гидрохлорида были описаны в описании к европейскому патенту ЕР 0534859.
Это патентное описание раскрывает синтез гидрохлорида ивабрадина исходя из соединения формулы (III), (78)-1-(3,4-диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил) Ν-метилметанамин (ПО.
Соединение формулы (III) является ключевым промежуточным соединением в синтезе ивабрадина и его фармацевтически приемлемых солей.
В уровне техники описаны несколько способов получения соединения формулы (III).
В описании к патенту ЕР 0534859 описан синтез соединения формулы (III) путем восстановления нитрила формулы (IV)
с помощью ВН3 в тетрагидрофуране, с последующим добавлением соляной кислоты, получая гидрохлорид рацемического амина формулы (V)
который подвергают реакции с этилхлорформиатом, получая карбамат формулы (VI)
при восстановлении которого с помощью ΕίΆ1ΕΗ4 получают рацемический метилированный амин формулы (VII)
НДС-О.
(VII),
при разделении которого, используя камфорсульфоновую кислоту, получают соединение формулы (III).
- 1 023883
Недостатком этого способа является получение соединения формулы (III) только с очень низким выходом от 2 до 3%, исходя из рацемического нитрила формулы (IV).
Этот чрезвычайно низкий выход обусловлен низким выходом (4-5%) стадии растворения вторичного амина формулы (VII).
В описании к патенту ЕР 2166004 описано получение соединения формулы (III) путем оптического разделения рацемического нитрила формулы (IV) с применением хиральной хроматографии с получением оптически чистого нитрила формулы (IX) н3с-с<
который восстанавливают с помощью ΝαΒΗ4 или гидролитического водорода, получая первичный амин формулы (VIII).
Затем первичный амин может быть метилирован, используя ту же самую последовательность реакции, что описана выше (превращение в карбамат с последующим восстановлением).
Таким образом, соединение формулы (III) может быть получено в ходе 5 стадий, исходя из рацемического нитрила формулы (IV), с выходом в 45,6% для стадии разделения.
Применение гидролитических ферментов нитрилазы (ЕС 3.5.5.1 в международной классификации ферментов) казалось многообещающим для того, чтобы обеспечить получение оптически чистой кислоты формулы (I), непосредственно исходя из рацемического нитрила формулы (IV) и, таким образом, снизить количество стадий получения метилированного амина формулы (III), исходя из рацемического нитрила.
Нитрил формулы (X) был описан как субстрат нитрилаз из набора для скрининга ΝΕ8Κ-1400, который выпускается компанией А1тас
Тем не менее, применение тех же самых нитрилаз на нитриле формулы (IV) (см. сравнительный пример А) показало, что они имеют низкую активность с малой селективностью, что в большинстве случаев приводит к одновременному образованию амида (активность нитрилгидратазы) и кислоты, которую трудно использовать в целях синтеза для получения промежуточных продуктов в синтезе соединения формулы (III).
Соответственно задача настоящего изобретения состояла в том, чтобы найти нитрилазу, обеспечивающую энантиоселективный синтез оптически чистой кислоты формулы (I), исходя из рацемического нитрила формулы (IV), при этом сводя к минимуму образование амида.
Затем заявителем было обнаружено доказательство активности нитрилазы в различных целых микроорганизмах с преимущественным образованием кислоты формулы (I), конфигурации 8. Из протестированных микроорганизмов только Кйобососсш гйобосгош обеспечил получение (8) кислоты с очень хорошей энантиоселективностью, без образования амида (см. сравнительный пример В).
Эта активность была улучшена сверхэкспрессией нитрилазы.
Удивительно, что ферментативный гидролиз с применением этой сверхэкспрессированной нитрилазы не является энантиоселективным для субстрата формулы (X) (см. сравнительный пример С).
В частности, настоящее изобретение относится к способу синтеза оптически чистого соединения формулы (I)
посредством энантиоселективного ферментативного гидролиза рацемического или не оптически
с применением нитрилазы Кйобососсик гйобосгош Νί'ΊΜΒ 11216, сверхэкспрессированной в другом организме, имеющем компетентную биологическую систему, таким как бактерия, дрожжи или гриб, в смеси органического растворителя и водного раствора, имеющего рН от 5 до 10, предпочтительно
- 2 023883 буфера, имеющего рН от 5 до 10, при концентрации от 1 до 500 г/л, предпочтительно от 2 до 100 г нитрила формулы (IV) на 1 л смеси растворителей, при соотношении Ф/С от 1/1 до 1/100, при температуре от 25 до 40°С.
В соответствии с аспектом изобретения нитрилаза сверхэкспрессуется в бактерии, содержащей перестроенную плазмиду, такой как ЕксйепсЫа сой, предпочтительно Е. сой ВЬ21(ОЕ3), Е. сой ВЬ21(ПЕ3)рЬу88, Е. сой ВЬ2151аг(ПЕ3) или Е. сой 1Μ9(ϋΕ3).
В соответствии с аспектом изобретения органический растворитель представляет собой растворитель, полностью или частично смешиваемый с водой, такой как диметилсульфоксид, ДМФ, ацетон, ацетонитрил, спирт, такой как этанол или изопропанол, или простой эфир, такой как ТГФ или МТБЭ.
В соответствии с другим аспектом изобретения органический растворитель не является смешиваемым с водой, например, углеводород, такой как гептан или октан.
Водный раствор предпочтительно является буферным раствором, имеющим рН приблизительно 7.
В соответствии с аспектом изобретения бактерии, которые сверхэкспрессируют нитрилазу, применяют непосредственно в способе, в виде бактериальной взвеси или лиофилизата.
Соотношение Ф/С предпочтительно составляет от 1/1 до 1/10 в случае бактериальной взвеси и от 1/10 до 1/20 в случае лиофилизата.
В соответствии с другим аспектом изобретения нитрилазу применяют в виде очищенного фермента.
Схема ферментативного гидролиза согласно изобретению является следующей:
Преимущественно нитрил конфигурации (К), вторичный продукт реакции, рацемизируют путем реакции органического основания, такого как ДБУ, или минерального основания, такого как гидроксид натрия, гидроксид калия, карбонат калия или карбонат натрия, для того чтобы переработать в процессе ферментативного гидролиза.
Если стадию рацемизации осуществляют ίη 8Йи, то способ согласно изобретению представляет собой процесс динамического кинетического разделения (ДКР), который способствует получению 8 кислоты формулы (I) с эи в более чем 98%.
Кислоту формулы (I) предпочтительно выделяют из реакционной среды после одного или нескольких циклов ферментативного гидролиза.
Определения.
Под оптически чистым соединением следует понимать соединение, имеющее энантиомерный избыток более чем или равный 90%.
Под нитрилом, который не является оптически чистым, следует понимать нитрил, имеющий энантиомерный избыток менее чем 90%.
Под рацемическим нитрилом следует понимать нитрил в виде смеси двух энантиомеров в соотношении от 55:45 до 45:55.
Энантиоселективный гидролиз рацемического, или не оптически чистого, нитрила следует понимать как предпочтительный гидролиз одного из энантиомеров смеси.
Компетентную биологическую систему следует понимать как такую, которая относится к (а) биологическим видам (клетки-хозяева), чей генетический материал был модифицирован путем генетической рекомбинации, делая ее/их способными продуцировать представляющий интерес рекомбинантный белок. Экспрессионный вектор (плазмида), сконструированный для этой цели, позволяет ДНК, кодирующую соответствующий ген, переносить в клетку-хозяин, которая таким образом может эффективно (сверх)экспрессировать функциональный белок.
Другой аспект изобретения относится к способу синтеза соединения формулы (III) только в две стадии, исходя из оптически чистой кислоты формулы (I), которую превращают в оптически чистый амид формулы (XI)
восстановление которого предпочтительно с помощью ВН3, ЫаВН4 или ЫЛ1Н4 на выходе давало соединение формулы (III).
- 3 023883
Соединение формулы (III) впоследствии или сочетают с соединением формулы (XII)
в которой X представляет собой атом галогена, предпочтительно атом йода, или подвергают реакции восстановительного аминирования с соединением формулы (XIII) в присутствии восстанавливающего средства
в которой К2 представляет собой группу, выбранную из СНО и СНК3К4, в которой К3 и К4, каждый, представляет собой линейную или разветвленную (С]-С6)алкоксигруппу. или образуют вместе с атомом углерода, который их несет, 1,3-диоксановое, 1,3-диоксолановое или 1,3диоксепановое кольцо с получением ивабрадина, который затем превращают в соль присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой, указанная соль находится в безводной или гидратированной форме.
Соединение формулы (III) может также применяться в реакции восстановительного аминирования в виде его соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой, предпочтительно его гидрохлорида. В этом случае ивабрадин получают непосредственно в виде гидрохлорида.
В числе фармацевтически приемлемых кислот могут быть указаны, без какого-либо ограничения, хлористо-водородная кислота, бромисто-водородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, уксусная кислота, трифторуксусная кислота, молочная кислота, пировиноградная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, глутаровая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, малеиновая кислота, лимонная кислота, аскорбиновая кислота, щавелевая кислота, метансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота и камфорная кислота.
В числе восстанавливающих средств, которые можно использовать для реакции восстановительного аминирования между соединением формулы (III) и соединением формулы (XIII), могут быть указаны, без какого-либо ограничения, соединения гидридных доноров, такие как триацетоксиборогидрид натрия или цианоборогидрид натрия, водород в присутствии катализатора, такого как палладий, платина, никель, рутений, родий или их соединения, в особенности на подложке или в форме оксидов.
Предпочтительным восстанавливающим средством для реакции восстановительного аминирования между соединением формулы (III) и соединением формулы (XIII) является водород при катализе палладием на угле.
Приведенные ниже примеры иллюстрируют изобретение.
Аббревиатуры.
ТФУ - трифторуксусная кислота,
ТСХ - тонкослойная хроматография,
ДБУ - диазабициклоундецен,
ДКР - динамическое кинетическое разделение,
ДМФ диметилформамид,
ДМСО - диметилсульфоксид
ОП - оптическая плотность,
Е - коэффициент энантиоселективности, эи - энантиомерный избыток, экв. - молярный эквивалент,
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография,
ИПТГ - изопропил β-Ο-1-тиогалактопиранозид,
ЛБ - культуральная среда лизогенный бульон,
МеОН - метанол,
МТБЭ - метил-трет-бутиловый эфир, оп - оптическая или энантиомерная чистота,
Ф/С соотношение - соотношение фермент/субстрат, выраженное в г/г,
ЯМР - ядерный магнитный резонанс (спектроскопия),
МС - масс-спектрометрия,
ТГФ - тетрагидрофуран,
ТМС - тетраметилсилан.
Пример 1. (78)-3,4-Диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбоновая кислота.
Сверхэкспрессия нитрилазы.
Белок нитрилазы Кйобососсик гйобосйтоик Νί'ΊΜΒ 11216 описан в базах данных белков и генов.
- 4 023883
Последовательность искомого гена перечислена под идентификатором 8УА (8едиепсе Уегаоп ЛтсЫуе) ЕР467367 в ΕΝΑ (Европейский нуклеотидный архив) от ЕМВЬ-Ваик. Эта последовательность соответствует ссылке А4ЬА85 в базе данных υηίΡτοίΚΒ/ΤτΕΜΒΕ.
Применяли продуцирующий штамм Е. сой ВЬ21(ЭЕ3), трансформированный экспрессирующим вектором рЕТ28а-№И.
Протокол сверхэкспрессии нитрилазы описан в Аррйеб ВюсйешМгу апб Вю1есйпо1о§у 2010, т. 160(2), сс. 393-400.
Трансформированные таким образом клетки применяли или непосредственно в виде бактериальной взвеси, или лиофилизировали до применения.
Ферментативный гидролиз с применением сверхэкспрессированной нитрилазы.
Клетки, трансформированные согласно указанному выше протоколу, взбалтывали при концентрации в 5.6х109 клеток/мл (1 мл культуры при ОП=1 (600 нм) соответствует 1.109 бактерий и приблизительно 10 мг бактериальной взвеси или 1.5 мг лиофилизата).
К раствору 250 мл фосфатного буфера ΚΗ2ΡΟ4/Να2ΗΡΟ4 1/15 М при рН 7 добавляли 1 г лиофилизата из Е. сой и 500 мг (с=2 г/л, 10 мМ) 3,4-диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбонитрила в 2% ДМСО (5 мл).
Реакционную смесь поддерживали при 30°С с ротационным взбалтыванием при 220 об/мин в течение 6 ч.
За реакцией наблюдали посредством хирально-фазовой ВЭЖХ при условиях, допускающих определение энантиомерного избытка кислоты и нитрила:
СЙ1та1рак 1В колонка
90% н-гексан 10% 2-РгОН +0.1% ТФУ мл/мин 30°С 288 нм
% нитрила ЭИ (нитрил) % кислота ЭИ (кислота) превращение Е
6 часов 49,9 94 50,1 97 0,49 > 100
* коэффициент энантиоселективности Е = 1п[1-с(1+эи(кислота))]/1п[1-с(1-эи(кислота))].
Хроматограмма хирально-фазовой ВЭЖХ через 6 ч показана на фиг. 1.
После взаимодействия в течение 6 ч реакционную смесь подкисляли с помощью 1М НС1 для того, чтобы получить сильнокислый рН (рН 2) и затем экстрагировали посредством 2x100 мл дихлорметана. Органическую фазу сливали. Вторая экстракция с применением толуола (2x100 мл) дает возможность восстановить весь продукт оставшийся в водной фазе. Органические фазы промывали насыщенным раствором Ν;·ιί'Ί и затем высушивали, используя безводный сульфат магния. После выпаривания растворителей получали сырой продукт, который очищали флеш-хроматографией на силикагелевой колонке при следующих условиях:
Тип колонки: 80 д 8ίΟΗ Масйетеу-№де1.
Вещество и способ: Кеуе1ет18®.
Элюант: изократический (циклогексан + 1% уксусная кислота/этилацетат + 1% уксусная кислота 75/25).
Определение: УФ 288 нм.
Скорость потока: 60 мл/мин.
Результат:
нитрил (К): выход 36% (179 мг), эи (К): 96%, кислота (8): выход 39% (246 мг), эи (8): 96%.
Пример 2. 3,4-Диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбонитрил посредством рацемизации (К) нитрила.
Перенос 100 мг (К)-(3,4-диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил)нитрила (0,53 ммоль), 5 мл изопропанола и 121 мг ДБУ (1,5 экв.) в колбу, оснащенную конденсатором и магнитной мешалкой. Нагревание в течение 2 ч при 65°С и затем доведение до температуры окружающей среды. Фильтрование с получением соединения, указанного в заголовке.
Пример 3. (78)-3,4-Диметокси-^метилбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбоксамид.
Суспендировали (78)-3,4-диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбоновую кислоту, полученную в примере 1 (300 мг) в ТГФ (3 мл) при температуре окружающей среды, и затем добавляли триэтиламин (200 мкл). К смеси медленно добавляли этилхлорформиат (150 мкл). Реакционную смесь осаждали (смесь I).
В другой колбе метиламин в виде 2М раствора в ТГФ (2,25 мл) взбалтывали с водой (1 мл) и триэтиламином (300 мкл). Взбалтывание поддерживали в течение 20 мин и затем полученную смесь добавляли к смеси I и взбалтывали при температуре окружающей среды в течение ночи.
Затем реакционную смесь выпаривали и очищали препаративной ВЭЖХ.
(78)-3,4-Диметокси^-метилбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбоксамид получали с выходом в
60%.
- 5 023883
Ή ЯМР (ДМСО-а6, ч. на млн/ТМС) = 2.61 (т; 3Н); 3.16 (т; 2Н); 3.71 (5; 6Н); 4.05 (т; 1Н); 6.78 (5; 1Н); 6.81 (5; 1Н); 7.78 (Ьг 5; 1Н).
Пример 4. (78)-3,4-Диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил] Ν-метилметанамин.
Суспендировали (7§)-3,4-диметокси-П-метилбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбоксамид, полученный в примере 3 (450 мг) в тетрагидрофуране (20 мл), и затем к реакционной смеси при температуре окружающей среды медленно добавляли 1,6 мл 2М раствора ЫА1Н4 в тетрагидрофуране. Наблюдали выделение газа, и реакционная смесь становилась прозрачной. Реакционную смесь нагревали в кобле с обратным холодильником в течение 30 мин.
После возвращения к температуре окружающей среды, гидролиза и затем экстрагирования этилацетатом высушивали над М§§04 и затем выпаривали. Полученный остаток очищали препаративной ВЭЖХ (элюант: вода/ацетонитрил/трифторуксусная кислота от 98/2/0.2 до 20/80/0.2) в течение 30 мин до получения продукта с выходом в 46%.
Ή ЯМР (ДМСО-а6, ч. на млн/ТМС) = 2.60 (т; 3Н); 2.85 (т; 1Н); 3.15 (т; 1Н); 3.25 (аа; 1Н); 3.30 (т; 1Н); 3.62 (т; 1Н); 3.70 (5; 6Н); 6.82 (5; 1Н); 6.89 (5; 1Н); 8.48 (Ьг 5; 1Н).
Пример 5. (78)-3,4-Диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил] Ν-метилметанамин гидрохлорид.
мл молярного раствора ВН3 в тетрагидрофуране при температуре окружающей среды добавляли к смеси 2,2 г (10 ммоль) (7§)-3,4-диметокси-П-метилбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбоксамида, полученного в примере 3 в 45 мл тетрагидрофурана. После взбалтывания в течение 1 ч добавляли 10 мл раствора ВН3 в тетрагидрофуране. После взбалтывания в течение ночи при температуре окружающей среды 20 мл этанола добавляли по каплям и смесь взбалтывали до тех пор, пока больше не выделялся газ (приблизительно 1 ч). Затем по каплям добавляли 20 мл раствора хлористо-водородной кислоты в этанол. После взбалтывания в течение 4 ч полученный осадок (1,2 г продукта, указанного в заголовке) отфильтровывали. Фильтрат концентрировали и дополнительные 0,65 г продукта, указанного в заголовке, получали переведением в твердое вещество в 80/20 смесь этилацетата/этанол.
Два осадка объединяли с получением 1,85 г продукта, указанного в заголовке (выход: 77%).
Пример 6. Гидрохлорид ивабрадина.
В автоклав загружали 5,5 кг 3-[2-(1,3-диоксолан-2-ил)этил]-7,8-диметокси-1,3-дигидро-2Н-3бензазепин-2-она, 27,5 л этанола и 550 г палладия на угле.
Продувка азотом и затем водородом, нагревание до 55°С и затем гидрирование при этой температуре под давлением в 5 бар до поглощения теоретического количества водорода.
Затем возвращали к температуре окружающей среды и сбрасывали давление в автоклаве.
После этого добавляли 4 кг (78)-3,4-диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил] Ν-метилметанамина гидрохлорида, 11 л этанола, 5,5 л воды и 1 кг палладия на угле.
Продувка азотом и затем водородом, нагревание до 85°С и затем гидрирование при этой температуре под давлением в 30 бар до поглощения теоретического количества водорода.
Затем возвращали к температуре окружающей среды, продували автоклав и затем реакционную смесь отфильтровывали; растворители отгоняли и затем выделяли ивабрадина гидрохлорид кристаллизацией из смеси толуол/1-метил-2-пирролидинон.
Посредством этого получали ивабрадина гидрохлорид с выходом в 85% и с химической чистотой более чем 99%.
Сравнительный пример А. Скрининг коммерческих нитрилаз для ферментативного гидролиза 3,4диметоксибицикло [4.2.0] окта-1,3,5 -триен-7-карбонитрила.
Исследовали вес нитрилазы (15 мг) в виде лиофилизата в пробирке и затем добавляли 4 мл 0,1М КН2Р04 буфера рН 7 и 3,4-диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбонитрила (20 мг), растворенного в 100 мкл ДМСО.
Помещали в инкубатор при 28°С и 220 об/мин.
Скорость превращения измеряли с помощью ВЭЖХ через 24 и 72 ч.
Нитрилазы ΝΙΤ 101, ΝΙΤ 102, ΝΙΤ 103, ΝΙΤ 104, ΝΙΤ 105, ΝΙΤ 106, ΝΙΤ 108, ΝΙΤ 109, ΝΙΤ 111, ΝΙΤ 112 и ΝΙΤ 113 (А1тас) не гидролизовали нитрил через 24 ч (не было образования кислоты или амида).
Результаты, полученные с нитрилазами ΝΙΤ 107, ΝΙΤ 110, ΝΙΤ 114 и ΝΙΤ 115 (А1тас) сопоставляли в таблице ниже:
Нитрил аза 72 часа
Амид Кислота Нитрил
ΝΙΤ 107 23% 16% 61%
Ν1Τ 110 24% 15% 61%
ΝΙΤ 114 21 % 22% 57%
ΝΙΤ115 7% 47% 46%
Аналитические условия.
Рйеиотеиех ΕυΝΑ Н5П 50*3 колонка С18(2) 2,5 мкм от 0 до 100% В в течение 8 мин 0,8 мл/мин 40°С
- 6 023883
А (1000 вода+25 АСЫ+1 ТФУ)
В (1000 АСЫ+25 вода+1 ТФУ).
Затем нитрилазу ΝΙΤ 115 использовали в другом исследовании, чтобы определить, является ли гидролиз нитрила энантиоселективным.
Нитрилазу ΝΙΤ 115 (12 мг; А1тас) применяли в 6 мл [2 мг/мл] буфера.
3,4-Диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбонитрил добавляли для того, чтобы достичь его конечной концентрации в 4 мг/мл.
Энантиоселективность измеряли с помощью ВЭЖХ с применением следующих аналитических условий:
СЫта1рак 1С 250*4.6 колонка
30% абсолютный этанол + 0,1% ТФУ + 70% гептан + 0,1% ТФУ мл/мин 30°С 288 нм.
Примечание: при этих условиях энантиомеры кислоты разделяют, но не энантиомеры нитрила.
Полученная хроматограмма после реакции в течение 5 ч показана на фиг. 2.
Вывод: энантиоселективность не наблюдается.
Сравнительный пример В. Скрининг нитрилаз бактериальных и грибковых штаммов для ферментативного гидролиза 3,4-диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбонитрила.
Исследование с использованием ряда бактериальных индукторов (пропионитрил, бензонитрил, 4бромбензонитрил) показало, что пропионитрил обеспечивает наилучшую индукцию активности нитрилазы с 3,4-диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбонитрилом.
Бактериальные штаммы были индуцированы с пропионитрилом при 72 мМ в течение 72 ч, и клетки ресуспендировали в 50 мл (двойной концентрации, конц. 10 мг клеток на 1 мл) 0,1 М фосфатного буфера КН2РО4/К2НРО4 рН 7.3 и 3,4-диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбонитрил добавляли при концентрации в 10 мМ в 2% ДМСО об./об.конечн.
Грибковые штаммы индуцировали с валеронитрилом.
Все реакционные смеси взбалтывали при 220 об/мин при 30°С в случае бактерий и при 27°С в случае грибов и наблюдали в течение 96 ч с помощью обращено-фазовой ВЭЖХ и хирально-фазовой ВЭЖХ в соответствии со способами, описанными ниже:
Обращено-фазовый анализ
Рйепотепех ΓυΝΑ ΗδΤ 50*3 колонка С18(2) 2,5 мкм от 0 до 100% В в течение 8 мин 0,8 мл/мин 40°С А (1000 вода+25 АШ+1 ТФУ)
В (1000 АСХ-25 вода+1 ТФУ).
Хирально-фазовый анализ
СЫта1рак 1С 250*4.6 колонка
30% абсолютный этанол + 0,1% ТФУ + 70% гептан + 0,1% ТФУ мл/мин 30°С 288 нм.
Полученные результаты сопоставлены в таблице ниже
Микроорганизмы % соединений образованных через 96 часов
Остаточный нитрил Амид Кислота
Ккодососсга егу1кгороН$ ΝΟΙΜΒ11215 23 42 35(8)
ШюАососсю гкоАоскгою ΝΟΙΜΒ11216 65 / 35(5)
ЮюАососси! гЬоАоскгоий Ν0ΙΜΒ11273 100 / /
КИос1ососсих г/км/ян 14С1МВ11279 100 / /
Азрег^Шиз т§ег ВО 95 / <5
АзрегрШиз аШасеш' ΝΚΚί 315 95 / <5
Сиппт%катеИа е1е%апз ЫККЬ 1392 95 / <5
Κήίζορυζ т%г'!сап5 ΝΚΚ11477 95 ί <5
АЬпсИа суИпАгоьрога ММР 1569 95 / <5
МогИеге11а РаЬе/Нпа 14ККЬ 1757 95 / <5
Микроорганизмы % соединений образованных через 96 часов
Остаточный нитрил Амид Кислота
Мисог р1итЬеия АТСС 4740 95 / <5
Веаиуепа Ьатапа АТСС 7159 86 / 14
ЗНЬеВаβιηααηα СВ8 548-84 100 / /
8НЬе№а$те(апа СВ8 511-67 100 / /
8ИЪе11а0те1апа СВ8 294-81 100 / /
Сравнительный пример С. Ферментативный гидролиз бицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7карбонитрила с применением сверхэкспрессированной нитрилазы РНобососсщ гйобосйтоик Νί'ΊΜΒ 11216.
- 7 023883
Посев на ЛБ+агар+канамицин, статическая инкубация при 37°С в течение 24 ч (штамм 11216 нитрилазы рекомбинантной Е. сой).
Прекультура в 5 мл ЛБ+канамицин (50 мг/л), инкубация при 37°С, 180 об/мин в течение ночи. Культура: перенос 50 мл ЛБ и 500 мкл прекультуры в неперегороженные 250-мл колбы Эрленмейера, инкубация при 28°С, 160 об/мин до ОП равна 0,6 (т.е. примерно 4 ч).
Индукция с ИПТГ (0,5 мМ), инкубация при 17°С, 160 об/мин в течение ночи (17 ч).
Определение активности: центрифугирование культур при 4°С, 6000 об/мин в течение 20 мин, ресуспендировали взвесь в 10 мл 0,1 М фосфатного буфера рН 7. Добавляли бицикло[4.2.0]окта-1,3,5триен-7-карбонитрил (10 тМ) + 2% этанол. Инкубировали при 220 об/мин, 30°С.
Заметка. Если культуры больше чем 50 мл во время центрифугирования, снимали 50 мл и осуществляли определение активности с применением взвеси 50 мл культуры.
Контроль гидролиза хиральной хроматографией: в 45 мин и 2 ч.
Клонка: Рйепотеиех® ΕυΝΑ Н8Т 50*3 С18(2) 2,5 мкм Элюант: А +В (от 0 до 100% В в течение 8 мин)
А: 1000 вода+25 ΑΟΝ+1 ТФУ
В: 1000 ΑΟΝ+25 вода+1 ТФУ 0,8 мл/мин - 40°С - υν 210 нм Результаты.
Время Нитрил Карбоновая кислота
45 минут 50% 50%
2 часа 0% 100%
Контроль посредством хиральной хроматографии показывает, что реакция не является энантиоселективной.

Claims (15)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ синтеза оптически чистого соединения формулы (I) путем энантиоселективного ферментативного гидролиза рацемического, или не оптически чистого, нитрила формулы (IV) с применением нитрилазы Кйобососсик гйобосйтоик Νί'ΊΜΒ 11216, которая сверхэкспрессируется в другом организме, имеющем компетентную биологическую систему, в смеси органического растворителя и водного раствора, имеющего рН от 5 до 10, при концентрации от 1 до 500 г нитрила формулы (IV) на 1 л смеси растворителей, при соотношении фермент/субстрат (Ф/С) от 1/1 до 1/100, при температуре от 25 до 40°С.
  2. 2. Способ по п.1, причем организм, имеющий компетентную биологическую систему, представляет собой бактерию, содержащую перестроенную плазмиду.
  3. 3. Способ по п.2, причем бактерии, которые сверхэкспрессируют нитрилазу, применяют непосредственно в виде бактериальной взвеси или лиофилизата.
  4. 4. Способ по любому из пп.1-3, причем органический растворитель выбран из диметилсульфоксида, ДМФ, ацетона, ацетонитрила, этанола, изопропанола, ТГФ и метил-трет-бутилового эфира (МТБЭ).
  5. 5. Способ синтеза по любому из пп.1-4, при котором нитрил конфигурации (К), вторичный продукт реакции рацемизируют путем воздействия основания, чтобы образовать рацемический нитрил формулы (IV), с целью переработки в процессе ферментативного гидролиза.
  6. 6. Способ синтеза по п.5, причем основание представляет собой диазабициклоундецен (ДБУ).
  7. 7. Способ синтеза или по п.5 или 6, причем стадию рацемизации осуществляют ίη δίΐιι.
  8. 8. Способ синтеза по любому из пп.5-7, причем кислоту формулы (I) выделяют после одного или
    - 8 023883 нескольких циклов гидролиза.
  9. 9. Способ синтеза соединения формулы (III) исходя из нитрила формулы (IV) который гидролизуют, чтобы образовать оптически чистую кислоту формулы (I) в соответствии с любым из пп.1-8, которую затем превращают в оптически чистый амид формулы (XI) восстановление которого обеспечивает соединение формулы (III).
  10. 10. Способ синтеза по п.9, при котором восстановление соединения формулы (XI), чтобы образовать соединение формулы (III), осуществляют с помощью ВН3, ΝαΒΗ.4 или ЫЛ1Н4.
  11. 11. Способ синтеза солей присоединения ивабрадина с фармацевтически приемлемой кислотой, указанная соль представлена в безводной или гидратированной форме, при котором соединение формулы (III) в соответствии с п.9 или 10 впоследствии сочетают с соединением формулы (XII) в которой X представляет собой атом галогена, с получением ивабрадина, который затем превращают в соль присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой в безводной или гидратированной форме.
  12. 12. Способ синтеза по п.11, причем X представляет собой атом йода.
  13. 13. Способ синтеза солей присоединения ивабрадина с фармацевтически приемлемой кислотой, указанная соль представлена в безводной или гидратированной форме, при котором соединение формулы (III) в соответствии с п.9 или 10 впоследствии подвергают реакции восстановительного аминирования с соединением формулы (XIII) в присутствии восстанавливающего средства в которой К2 представляет собой группу, выбранную из СНО и СНК3К4, в которой К3 и К4, каждый, представляют собой линейную или разветвленную (С1С6)алкоксигруппу, или образуют совместно с атомом углерода, который их несет, 1,3-диоксановое, 1,3-диоксолановое или 1,3-диоксепановое кольцо с получением ивабрадина, который затем превращают в соль присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой в безводной или гидратированной форме.
  14. 14. Способ синтеза по п.13, причем соединение формулы (III) применяют в реакции восстановительного аминирования в виде его гидрохлорида с получением ивабрадина в виде гидрохлорида.
  15. 15. Способ синтеза по п.10 или 14, причем реакцию восстановительного аминирования с соединением формулы (XIII) осуществляют в присутствии водорода при катализе палладием на угле.
EA201400171A 2013-02-28 2014-02-27 Способ ферментативного синтеза (7s)-3,4-диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбоновой кислоты и применение в синтезе ивабрадина и его солей EA023883B1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1351785A FR3002542B1 (fr) 2013-02-28 2013-02-28 Procede de synthese enzymatique de l'acide (7s) 3,4-dimethoxybicyclo[4.2.0]octa-1,3,5-triene 7-carboxylique et application a la synthese de l'ivabradine et de ses sels

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201400171A1 EA201400171A1 (ru) 2014-08-29
EA023883B1 true EA023883B1 (ru) 2016-07-29

Family

ID=48468557

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201400171A EA023883B1 (ru) 2013-02-28 2014-02-27 Способ ферментативного синтеза (7s)-3,4-диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбоновой кислоты и применение в синтезе ивабрадина и его солей

Country Status (30)

Country Link
US (1) US9476071B2 (ru)
EP (1) EP2772547B1 (ru)
JP (1) JP5837114B2 (ru)
KR (1) KR101570727B1 (ru)
CN (1) CN104017832B (ru)
AR (1) AR094883A1 (ru)
AU (1) AU2014200700B2 (ru)
BR (1) BR102014004349A2 (ru)
CA (1) CA2843985C (ru)
CY (1) CY1116826T1 (ru)
DK (1) DK2772547T3 (ru)
EA (1) EA023883B1 (ru)
ES (1) ES2549226T3 (ru)
FR (1) FR3002542B1 (ru)
GE (1) GEP201606578B (ru)
HK (2) HK1198372A1 (ru)
HR (1) HRP20150950T1 (ru)
HU (1) HUE027809T2 (ru)
MA (1) MA35612B1 (ru)
MD (1) MD4440C1 (ru)
ME (1) ME02217B (ru)
MX (1) MX347536B (ru)
NZ (1) NZ620915A (ru)
PL (1) PL2772547T3 (ru)
PT (1) PT2772547E (ru)
RS (1) RS54167B1 (ru)
SG (1) SG2014010854A (ru)
SI (1) SI2772547T1 (ru)
WO (1) WO2014131996A1 (ru)
ZA (1) ZA201401224B (ru)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3101010A1 (en) 2015-06-03 2016-12-07 Urquima S.A. New method for the preparation of highly pure ivabradine base and salts thereof

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101284813A (zh) * 2007-04-12 2008-10-15 上海优拓医药科技有限公司 伊伐布雷定的制备方法
WO2010023383A1 (fr) * 2008-08-29 2010-03-04 Les Laboratoires Servier Nouveau procede de resolution des enantiomeres du (3,4- dimethoxy-bicyclo[4.2.0]octa-13,5-trien-7-yl)nitrile et application a la synthese de l'ivabradine
CN101671265A (zh) * 2008-09-12 2010-03-17 中国科学院上海药物研究所 新的苯并环丁烷,其制备方法与用途
WO2011138625A1 (en) * 2010-05-07 2011-11-10 Richter Gedeon Nyrt. Industrial process for the synthesis of ivabradine salts
CN102249937A (zh) * 2010-05-18 2011-11-23 上海京新生物医药有限公司 1-(s)-4,5-二甲氧基-1-甲胺基甲基-苯并环丁烷的制备方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DD274631A5 (de) * 1987-09-18 1989-12-27 Kk Verfahren zur biologischen herstellung von amiden
CZ280901B6 (cs) * 1988-10-06 1996-05-15 Hideaki Yamada Způsob kultivace bakterií
AU627648B2 (en) * 1990-02-28 1992-08-27 Teruhiko Beppu Dna fragment encoding a polypeptide having nitrile hydratase activity, a transformant containing the gene and a process for the production of amides using the transformant
FR2681862B1 (fr) * 1991-09-27 1993-11-12 Adir Cie Nouvelles (benzocycloalkyl)alkylamines, leur procede de preparation, et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
JP3218133B2 (ja) * 1993-02-03 2001-10-15 三菱レイヨン株式会社 フェニル基を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸の製造法
DE10010149A1 (de) * 2000-03-03 2001-09-06 Basf Ag Nitrilase aus Rhodococcus rhodochrous NCIMB 11216
WO2007035161A1 (en) * 2005-09-22 2007-03-29 Astrazeneca Ab New process for converting aromatic halo-substituted dinitriles into halo-substituted cyanocarboxylic acids
CA2626763A1 (en) 2005-12-20 2007-06-28 Basf Se Method for producing 5-norbornen-2-carboxylic acid from 5-norbornen-2-carbonitrile using an arylacetonitrilase

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101284813A (zh) * 2007-04-12 2008-10-15 上海优拓医药科技有限公司 伊伐布雷定的制备方法
WO2010023383A1 (fr) * 2008-08-29 2010-03-04 Les Laboratoires Servier Nouveau procede de resolution des enantiomeres du (3,4- dimethoxy-bicyclo[4.2.0]octa-13,5-trien-7-yl)nitrile et application a la synthese de l'ivabradine
CN101671265A (zh) * 2008-09-12 2010-03-17 中国科学院上海药物研究所 新的苯并环丁烷,其制备方法与用途
WO2011138625A1 (en) * 2010-05-07 2011-11-10 Richter Gedeon Nyrt. Industrial process for the synthesis of ivabradine salts
CN102249937A (zh) * 2010-05-18 2011-11-23 上海京新生物医药有限公司 1-(s)-4,5-二甲氧基-1-甲胺基甲基-苯并环丁烷的制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
MD20140015A2 (ru) 2014-08-31
KR101570727B1 (ko) 2015-11-23
GEP201606578B (en) 2016-11-25
JP5837114B2 (ja) 2015-12-24
PT2772547E (pt) 2015-08-05
MD4440B1 (ru) 2016-10-31
US20140242644A1 (en) 2014-08-28
AU2014200700B2 (en) 2017-06-22
CN104017832B (zh) 2017-04-12
ES2549226T3 (es) 2015-10-26
CA2843985A1 (fr) 2014-08-28
PL2772547T3 (pl) 2015-12-31
CN104017832A (zh) 2014-09-03
EP2772547B1 (fr) 2015-07-08
ZA201401224B (en) 2015-12-23
HUE027809T2 (en) 2016-11-28
HK1198372A1 (en) 2015-04-10
WO2014131996A1 (fr) 2014-09-04
BR102014004349A2 (pt) 2015-10-20
FR3002542A1 (fr) 2014-08-29
HRP20150950T1 (en) 2015-10-09
US9476071B2 (en) 2016-10-25
JP2014168461A (ja) 2014-09-18
EP2772547A1 (fr) 2014-09-03
MA35612B1 (fr) 2014-11-01
AR094883A1 (es) 2015-09-02
EA201400171A1 (ru) 2014-08-29
NZ620915A (en) 2015-02-27
HK1201564A1 (en) 2015-09-04
CA2843985C (fr) 2018-03-20
SI2772547T1 (sl) 2015-10-30
RS54167B1 (en) 2015-12-31
MX347536B (es) 2017-05-02
DK2772547T3 (en) 2015-10-19
SG2014010854A (en) 2014-09-26
AU2014200700A1 (en) 2014-09-11
FR3002542B1 (fr) 2016-01-22
MX2014001785A (es) 2014-09-08
ME02217B (me) 2016-02-20
CY1116826T1 (el) 2017-03-15
MD4440C1 (ru) 2017-05-31
KR20140108163A (ko) 2014-09-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101119309B1 (ko) （3，4?디메톡시?바이시클로〔4．2．0〕옥타?1，3，5?트리엔?7?일）니트릴의 거울상이성질체의 분리 방법 및 이바브라딘의 합성에서의 적용
US20060014947A1 (en) Process for producing benzoxazine derivative and production intermediate thereof
US20080146819A1 (en) Process for Preparing Levetiracetam
KR0133286B1 (ko) 3-피롤리디놀의 제조방법
KR101495614B1 (ko) （７ｓ）－１－（３，４－디메톡시바이시클로［４．２．０］옥타－１，３，５－트리엔－７－일) ｎ－메틸 메탄아민의 효소적 합성방법, 및 이바브라딘 및 이의 염의 합성에 대한 적용
EA023883B1 (ru) Способ ферментативного синтеза (7s)-3,4-диметоксибицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбоновой кислоты и применение в синтезе ивабрадина и его солей
TWI467019B (zh) （７ｓ）－３，４－二甲氧基雙環［４．２．０］辛－１，３，５－三烯－７－羧酸或其酯類之酵素合成方法及於依伐布雷定（ｉｖａｂｒａｄｉｎｅ）及其鹽類合成之應用
CN109180691A (zh) 一种c3-芳香型吡咯并吲哚类生物碱及其合成方法
US20030181732A1 (en) Process for the preparation of optically active 7-substituted 3-(2-aminopropyl)indole derivatives and intermediates therefor
CN103012198A (zh) 光学活性环状化合物的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM RU