LU84439A1 - Nouveaux derives du 3-amino pregn-5-ene,leurs sels,leur preparation,leur application a titre de medicaments et les compositions les renfermant - Google Patents

Description

/ 4 3 -gl|So, MEMOIRE DESCRIPTIF dépose à l'appui d'une demande d'un BREVET D'INVENTION au GRAND DUCHE DE LUXEMBOURG.

Nouveaux dérivés du 3-amino prêgn-5-ène, leurs sels, leur préparation, leur application à titre de médicaments et les compositions les renfermant.

Société Anonyme dite ; ROUSSEL-UCLAF.

Convention Internationale ~ Priorité d'une demande de brevet déposée en France le 27 octobre 1981 sous le n° 81~2Q135.

(Inventeurs : Vesperto TORELLI, Josette BENZONI et Roger DERAEDT)

La présente invention concerne de nouveaux dérivés de 3-amino pregn-5-ène, ainsi que leurs sels, le procédé de préparation, l'application à titre de médicaments de ces nouveaux dérivés et les compositions les renfermant.

3 L'invention a pour objet de nouveaux dérivés du 3-amino pregn-5-ène, ainsi que leurs sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale I : R2 P3 Γ3 10 dans laquelle X représente un groupement j, ou ' ,

/\ / "•'OH

les traits ondulés signifient que le radical correspondant se trouve dans l'une ou l'autre des configurations «( ou /5 , représente un atome d'hydrogène ou un radical hydroxy alcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de‘carbone.

15 R2 représente un atome d'hydrogène, un radical hydroxy alcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, acyle aliphatique * 2

A

renfermant de 3 à 8 atomes, de carbone ou alcoxy carbonyle renfermant de' 2 à 8 atomes de carbone ou un radical dérivé d'un acide <^-aminé ou d'un peptide comprenant 2 ou 3 acides aminés dont l'amine est soit libre, soit mono ou dishbstituée 5 par un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, étant entendu que d'une part, R1 et R2 ne représentent pas en même temps un atome d'hydrogène et que d'autre part, si le groupement amino est en position 3 ß , " i)lorsque X représente un groupement : CH_ /-0 10 R^ et R2 ne peuvent pas représenter en même temps un radical hydroxy éthyle, ii) Lorsque X représente un groupement : (jJH^

/ OH

si R^ représente un atome d'hydrogène, R2 ne représente pas un radical éthoxy carbonyle, ainsi qu'à la formule générale I 15 ci-dessus, dans laquelle X représente un groupement : CH3 } R^ représente un atome d'hydrogène, R2 représente un radical méthyle et le groupement amino est en position 3 c( .

Dans la formule générale I et dans ce qui suit, le terme radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, désigne, 20 par exemple, un radical méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle ou pentyle, le terme radical hydroxyalcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone désigne, par exemple, un radical hydroxyéthyle ou hydroxypropyle ; le terme radical ' acyle renfermant de 3 à 8 atomes de carbone, désigne, par 25 exemple, un radical propionyle, n-butyryle ou isobutyryle, le terme radical alcoxycarbonyle renfermant de 2 à 8 atomes de carbone désigne, par exemple, un radical méthoxy, éthoxy ou propoxycarbonyle ; le reste dérivé d'un acide o^-aminé peut être choisi par exemple dans le groupe constitué par Ala, Val, 30 Leu, Ile, Asp, Asn, Glu, Gin, Ser, Thr, Cys, Met, Lys, Arg, Phe, Tyr,,Trp, His, Pro, Nva, Nie, Eyp, Orn, ces acides aminés étant sous la forme D ou L, ainsi que par Sar et Gly ; lorsque R2 représente un radical dérivé d'un peptide comprenant 2 ou 3 acides o(-aminés, ceux-ci sont choisis dans le groupe constitué 35 par les acides ^-aminés ci-dessus.

A *, 3

Lorsque les acides «(-aminés ou les peptides sont N-mono-ou di-alcoylés, c'est de préférence par des radicaux méthyle, éthyle ou propyle.

On admettra par convention que les symboles des acides 5 *[ -aminés représentent ces acides sous leur configuration D

ou L (par exemple, le terme Ala signifie Alanine sous forme D ou sous forme L).

La nomenclature utilisée dans la présente demande est la nomenclature IUPAC, dont les règles sont publiées notamment 10 dans BiocheM. J. (1972) 126, 773-780.

Les sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques peuvent être, par exemple, les sels formés avec les acides chlorhydrique, bromhydrique, nitrique, sulfurique, phosphorique, acétique, formique, propionique, benzoïque, maléique, fumarique 15 succinique, tartrique, citrique, oxalique, · glyoxylique, aspartique, alcane sulfoniques tels que les acides méthane ou éthane sulfoniques, arylsulfoniques, tels que les acides benzène ou paratoluène sulfoniques et arylcarboxyliques.

Parmi les produits, objet de l'invention, on peut citer 20 notamment les dérivés répondant à la formule I ci-dessus, ainsi que leurs sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques caractérisés en ce que, dans ladite formule I, le groupement amino est en position 3 i, représente un atome d'hydrogène et R2 représente un radical dérivé d'un acide e(-aminé ou d'un 25 peptide comprenant 2 ou 3 acides aminés.

*»

Parmi ceux-ci, on peut citer plus particulièrement les dérivés, caractérisés en ce que, dans ladite formule I, X représente un groupement : CH^ ou CH^

A A

dont l'hydroxyde est en position 20°( et tout particulièrement 30 la 3o( -méthylamino pregn-5-ène 20-one et les autres dérivés préparés dans les exemples.

L'invention a également pour obj et un procédé de préparation des dérivés, tels que définis par la formule I ci-dessus, ainsi que de leurs sels, caractérisé en ce que l'on fait réagir 35 une amine de formule II : * *. 4 h2n dans laquelle le trait ondulé et X ont la signification déjà indiquée, - - soit avec un halogénure de formule III :

5 Eal-R ' 2 III

dans laquelle Hal représente un atome de chlore, de brome ou d'iode, et R'2 représente un radical acyle aliphatique renfermant de 3 à 8 atomes de carbone ou alcoxycarbonyle renfermant de 2 à 8 atomes de carbone, pour obtenir un produit 10 de formule I dans laquelle R^ représente un atome d'hydrogène, R2 représente un radical R'2 tel que défini ci-dessus, X et le trait ondulé ont la signification déjà indiquée, produit de formule I que l'on isole et salifié, si désiré, - soit avec un acide ou un anhydride d'acide de formule III' : 15 A-0-R"2 III' dans laquelle A représente un atome d'hydrogène ou un radical R"2 et R"2 représente un radical acyle aliphatique renfermant de 3 à 8 atomes de carbone, pour obtenir un produit de formule I dans laquelle R^ représente un atome d'hydrogène, 20 représente R'^ tel que défini ci-dessus et X et le trait ondulé ont la signification déjà indiquée, produit de formule I que l'on isole et salifie, si désiré.

- soit avec un ^-amino acide ou un peptide comprenant 2 ou 3 acides aminés dont la fonction amine est monosubstituée ou 25 disubstituée par un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou encore libre et, lorsqu'elle est libre, est protégée par un groupement facilement clivable notamment par hydrolyse acide ou par hydrogénolyse, puis traite de façon à éliminer le groupement protecteur, pour obtenir un produit de 30 formule I dans laquelle R^ représente un atome d'hydrogène, R2 représente un radical dérivé d'un acide ©('-aminé ou d'un peptide comprenant 2 ou 3 acides ©('-aminés et X et le trait ondulé ont la signification déjà indiquée, que l'on isole et salifieysi désiré, 35 - soit avec un halogénure d1hydroxyalcoyle renfermant de 2 à 5 5 atomes de carbone et dont 1'halogène est un atome de chlore, de brome ou d'iode, pour obtenir un produit de formule I dans laquelle l'amine en 3 est mono ou disubstituée par un radical hydroxy alcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone et X 5 et le trait ondulé ont la signification déjà indiquée, - soit dans le cas où X représente un gr oupement : -C^CH^ $ et où le groupement amino est en position 3^, avec un - halogénure de méthyle, pour obtenir un produit de formule I, dans laquelle X représente un groupement - CH^, 0 10 représente un atome d'hydrogène, R2 représente un radical méthyle et le groupement amino est en position 3tf, produit de formule I que, ou bien l'on isole et salifie, si désiré, ou bien, dans le cas où R2 représente un atome d'hydrogène, l'on fait réagir ledit produit de formule I avec un 15 halogénure de formule IV :

Hal-R"'2 IV

dans laquelle R'"2 représente un radical hydroxy alcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, acyle aliphatique renfermant de 3 à 8 atomes de carbone ou alcoxycarbonyle 20 renfermant de 2 à 8 atomes de carbone et Hal a la signification déjà indiquée, pour obtenir un produit de formule I dans laquelle R^ représente un radical hydroxyalcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, R2 représente un radical R"'2 tel que défini ci-dessus, et X et le trait ondulé ont la signification 25 déjà indiquée, que l'on isole et salifie si désiré, ou bien encore dans le cas où R2 représente un atome d'hydrogène, l'on fait réagir ledit produit de formule I avec un e(-amino acide ou un peptide comprenant 2 ou 3 acides aminés dont la fonction amine est monosubstituée ou disubstituée par un radical 30 alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou protégée par un groupement facilement clivable notamment par hydrolyse acide ou par hydrogénolyse, puis traite, le cas échéant, de façon à éliminer le groupement protecteur, pour obtenir un produit de formule I dans laquelle R^ représente un radical hydroxy 35 alcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, R2 représente un radical dérivé d'un acide of-aminé ou d'un peptide comprenant 2 ou 3 acides o{-aminés et X et le trait ondulé ont la signification déjà indiquée, que l'on isole et salifie, si désiré.

6

Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre de l'invention, le procédé de préparation ci-dessus décrit, est caractérisé en ce que : a) La réaction de 11 amine de formule II avec 1'halogénure êe 5 formule III est effectuée en présence d'un agent fixateur d'acides, en particulier un hydroxyde, un carbonate, un bicarbonate ou un acétate alcalin (par exemple de sodium ou de potassium), un carbonate alcalino-terreux, (par exemple de calcium), une amine tertiaire (par exemple, une trialcoylamine ou la pyridine) ou un alcoolate alcalin (par exemple 1'éthylate de sodium). La réaction peut s'effectuer, par exemple, dans des solvants ou milieux de suspension inertes tels que le dioxanne, le diméthylformamide, le benzène, le toluène ou un hydrocarbure halogéné, tel que le 15 chlorure de méthylène.

b) La réaction de 1'amine de formule II avec un acide de formule III' est effectuée avec un agent d'activation tel qu'un carbodiimide. D'autres techniques sont utilisables, telles que celles décrites, par exemple, dans "The Peptides" 20 Voll Academie press 1979.

c) La réaction de 1'amine de formule II ou du produit de formule I, dans laquelle R2 représente un atome d'hydrogène et R^ représente un radical hydroxyalcoyle, avec 1'acide ©(-aminé ou le peptide dont la fonction aminée est monosubstituée, 25 disubstituée ou protégée par un groupement protecteur facilement clivable, a lieu en présence d'un agent de condensation. L'agent de condensation a, dans ce cas, pour but d'activer la fonction acide de 1'amino-acide.

Comme agent de condensation, on peut utiliser un carbodii-30 mide de formule : A1-N=C=N-B1 dans laquelle A^ et représentent un radical alcoyle renfermant de 1 à 8 atomes de carbone éventuellement porteur d'un radical dialcoylamino, ou représentent un radical cycloalcoyle. 35 On peut citer, par exemple, le dicyclohexylcarbodiijTiide ou le 1-éthyl 3-(3-diméthylaminopropyl)carbodiimide, de préférence, ce dernier.

On peut utiliser également un halogénure de 2-chloro N-méthyl pyridinium tel que 1'iodure.

40 On peut aussi utiliser un chloroformiate d'alcoyle . 7 comme, par exemple, le chloroformiate de méthyle, d'éthyle ou d'isobutyle; on peut aussi utiliser un pyrophosphite d'alcoyle, comme par exemple le pyrophosphite d'éthyle.

Comme groupement protecteur facilement clivable, on 5 peut utiliser selon le cas, de préférence le groupement henzyloxycarbonyle (Z) ou le groupement terbutyloxycarbonyle (BOC).

Pour éliminer le groupement protecteur facilement clivable • ci-dessus, on utilise de préférence comme agent de clivage un 10 acide tel que l'acide chlorhydrique; on opère par exemple à l'aide d'une solution alcoolique d'acide chlorhydrique, ou à 1'aide d'acide chlorhydrique anhydre par barbotage dans le ni-trométhane. On peut aussi utiliser des acides tels que l'acide paratoluène sulfonique, l'acide formique ou l'acide trifluoro-15 acétique. On peut utiliser également l'hydrogène en présence de palladium, pour le groupement protecteur Z par exemple.

d) La réaction de l'amine de formule II avec l'halogènure de méthyle ou d'hydroxyalcoyle se fait en présence des mêmes agents fixateurs d'acides et solvants que dans le cas de la réaction 20 avec l'halogènure de formule III.

La fonction hydroxy de l’hydroxy <- alcoyle est avantageusement bloquée par un groupement protecteur facilement clivable notamment par hydrolyse acide.

e) La réaction du produit de formule I dans laquelle repré-25 sente un atome d'hydrogène, représente un radical hydroxyalcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone et X et le trait ondulé ont la signification déjà indiquée, avec l'halogènure de formule IV est effectuée selon la nature de R1" 2' ^ans les conditions précédemment décrites pour la réaction de 11 amine de for- 30 mule II avec l’halogènure de formule III.

Pour la préparation des produits de formule (I) N-méthylés, il peut être intéressant d'opérer de façon particulière : on peut préparer un carbamate de l'amine du produit de formule (II), par exemple par action d'un haloformiate d'alcoyle tel que 35 d'éthyle, puis réduire le carbamate, par exemple à l'aide d'hy-drure d'aluminium-lithium. O

Dans le cas où X représente un radical C , lors de la 7 CH3 réduction, il faut protéger la cétone en 20, par exemple par action d'éthylène glycol, puis, après la réduction, hydrolyser 8 le cétal, par exemple à l'aide d'un acide minéral tel que l'acide chlorhydrique.

Les dérivés de formule (I), è l'exception de ceux pour lesquels représente un radical acyle ou alcoxycarbonyle, présen-5 tent un caractère basique. On peut avantageusement préparer les sels d'addition des dérivés de formule (I), en faisant réagir, en proportions sensiblement stoechiométriques, un acide minéral ou organique avec ledit dérivé de formule (I). Les sels peuvent “ être préparés sans isoler les bases correspondantes.

10 Les dérivés, objet de la présente invention, possèdent de très intéressantes propriétés pharmacologiques; ils sont doués notamment de remarquables propriétés immunothérapeutiques. Ils sont en particulier capables de stimuler les réactions immunitaires .

15 Ces propriétés sont illustrées plus loin dans la partie expérimentale.

Ces propriétés justifient l'utilisation des dérivés du 3-amino pregn-5-ène, ainsi que de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, à titre de médicaments.

20 La présente demande a ainsi également pour objet l'applica tion, à titre de médicaments, des dérivés du 3-amino pregn-5-ène, tels que définis par la formule (I), ainsi que de leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables.

Parmi les médicaments, objet de l'invention, on retient, de 25 préférence, les médicaments caractérisés en ce qu'ils sont constitués par les nouveaux dérivés du 3-amino pregn-5-ène répondant à la formule (I), dans laquelle le groupement amino est en position 3e<, représente un atome d'hydrogène et R2 représente un radical dérivé d1 un acide p<-aminé ou d'un peptide comprenant 2 30 ou 3 acides aminés, ainsi que leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables.

Parmi ceux-ci, on retient notamment ceux répondant à la formule (I), dans laquelle X représente un groupement CH- CH0 I 3 I 8 CL ou CIL dont l'hydroxyle est position 20^, ainsi

' XD OH

35 que leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables.

Parmi ces derniers, on retient tout particulièrement les dérivés dont les noms suivent : 9 - le 2-amino N-(20-oxo pregn-5-ène 3«(-yl) acétamide, - le (2S) 2-amino N-(20-oxo pregn-5-ène 3pS-yl) propionamide, - la SiX’-méthylamino pregn-5-ène 20-one, ainsi que leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutique-5 ment acceptables.

Les médicaments selon l’invention trouvent leur emploi par exemple, dans le traitement des immunodéficiences, et notamment des maladies autoimmunes résultant d’une déficience en certains lymphocytes, qu’il s’agisse—«- lOde maladies du tissu conjonctif non spécifiques d'un organe comme par exemple l'arthrite rhumatoïde, le lupus érythémateux systémique ou qu'il s'agisse de maladies spécifiques d'un organe comme la thyroïdite, le pemphigus ou l'anémie hémolytique.

Les produits de 1'invention peuvent être ainsi utilisés 15 comme traitement adjuvant de l'antibiothérapie et de la chimiothérapie anti-cancéreuse.

La dose usuelle, variable selon le dérivé utilisé, le sujet traité et l'affection en cause peut être, par exemple, de , 10 mg à 1 g par jour, par voie orale chez l'homme du dérivé de ' -20-1 ' exemple ' 4 comme adj uvant d1 antibiothérapie.

L'invention a enfin pour objet les compositions pharmaceutiques qui renferment au moins un dérivé précité ou l'un de ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables, 25 à titre de principe actif.

A titre de médicaments, les dérivés répondant à la formule I et leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables peuvent être incorporés dans des compositions pharmaceutiques destinées à la voie digestive ou parentérale.

30 Ces compositions pharmaceutiques peuvent être, par exemple, solides ou liquides et se présenter sous les formes pharmaceutiques couramment utilisées en médecine humaine, comme par exemple, les comprimés, simples ou dragéifiés, les gélules, les granulés, les suppositoires, les préparations injectables; elles 35 sont préparées selon les méthodes usuelles. Le ou les principes actifs peuvent y être incorporés à des excipients habituellement employés dans ces compositions pharmaceutiques, tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de cacao, les véhicules aqueux ou non, les corps 40 gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou émul- 10 sifiants, les conservateurs.

Les produits de départ de formule (II) dans laquelle X

CH-| 3 représente un groupement CH peuvent être préparés comme / ΌΗ suit.

5 On réduit un produit de formule (V) : dans laquelle le trait ondulé a la signification déjà indiquée, par exemple à l'aide d'un métal alcalin, tel que le sodium, dans un solvant tel qu'un alcool aliphatique inférieur comme 101'éthanol, pour obtenir un produit de formule il , f3

_JCEL

η dans laquelle les traits ondulés ont la signification déjà indiquée, sous forme d'un mélange d'isomères 20 (d) et 20 (¢), que l'on sépare, par exemple par préparation du dérivé trifluoroacé-15 tylé de l'amine et de l'alcool, chromatographie, puis hydrolyse des groupements trifluoroacétyls des isomères séparés.

Un exemple d'une telle préparation figure ci-après dans la partie expérimentale.

Les acides aminés ou peptides dont la fonction amine est 20 mono ou disubstituée, peuvent être préparés, lorsqu’ils ne sont pas connus, par les procédés classiques d'alcoylation des amines.

Les exemples suivants illustrent l'invention, sans toutefois la limiter.

‘ . : - 11 - EXEMPLE 1 : Chlorhydrate de 3a-méthylamino prégn-5-èn 20-one Stade_A : (20-oxo-gregn-5-èn_3a-^l2çarbamate_d_|_éthyle.

On dissout 6 g de 3a-amino pregn-5-ène-20-one (holamine) dans 100 cm3 de chlorure de méthylène, ajoute entre + 5 et + 10° C .5 22 cm3 de soude aqueuse N, puis en 10 minutes, 2 cm3 de chlo- roformiate d’éthyle et agite pendant 1 heure.

On acidifie par 15 cm3 d'une solution aqueuse d’acide chlorhydrique 2N, décante, lave la phase organique à l'eau, sèche et amène à sec. On reprend le résidu obtenu par 70 cm3 10 d’éther éthylique, porte au reflux, essore, lave à l'éther, sèche et obtient 6,25 g du produit attendu. pF = 202° C.

: (20.?i20-éthylène dioxy prégn-5-èn 3a-yl)carbamate d’éthyle.

On chauffe vers 50° C sous atmosphère inerte, 10,9 g de 15 produit tel qu’obtenu au stade précédent avec 54,5 cm3 d'éthylène glycol et 22 cm3 d'orthoformiate d’éthyle. On ajoute 220 mg d’acide paratoluène sulfonique monohydraté et agite pendant 3 heures environ. On refroidit à 20° C, ajoute 4,2 cm3 de triéthylamine, verse sous agitation sur 550 cm3 d'eau, essore, 20 lave à l'eau, sèche à 60° C et obtient 12 g du produit attendu.

F0 - 200° C.

· 5a-méthyl^amino prégn-5-èn 20-one (N-méthyl holamine) et son chlorhydrate.

On met en suspension sous atmosphère inerte 1,145 g 25 d'hydrure d’aluminium et de lithium dans 110 cm3 de tétrahydro-furanne et introduit au reflux, en 30 minutes, 6,51 g du produit obtenu au stade précédent en solution dans 65 cm3 de tétrahydro-furanne. Après 1 heure 5 minutes de reflux, on ramène à 15-20°C, ajoute avec précaution 15 cm3 d'eau, puis 15 cm3 d'acide chlorhy-30 drique concentré et agite pendant 1 heure 45 minutes. On alcalinise par 25 cm3 de lessive de potasse et 5 cm3 d’ammoniaque concentrée, agite pendant 10 minutes, ajoute 100 cm3 de solution de sel de Seignette, décante, extrait à l'acétate d’éthyle, lave à l'eau saturée au chlorure de sodium, sèche, amène à sec 35 sous pression réduite, recristallise dans l’acétate d'éthyle et obtient 4,07 g du produit attendu. F ~ 139° c.

Formation du chlorhydrate :

On dissout 1,5 g de base dans 30 cm3 d'acétate d'éthyle à 25 - 30° C, ajoute un excès d'acide chlorhydrique dissous dans - 12 - l’acétate d’éthyle, glace, essore, lave à l’acétate d’éthyle, sèche à 40° C s*>us pression réduite, recristallise dans l’éthanol et obtient 1,31 g de produit attendu. F - 270° C.

Analyse pour C22H36N0C1 = 365’99 5 Calculé C % 72,20 H % 9,?1 N % 3,83 Cl % 9,69

Trouvé 72,4 10,1 3,8 9,7 EXEMPLE 2 : fumarate de 2-amino N-méthyl N-(2Q-oxo prégn-5-ène-3a-vl) acétamide.

Stade_A : 2-// (phénylméthqxy)carbonyl>/amino7_N-/ (20-oxo)prégn-5-10 gg~3a-yl/ N-méthyl·acétamide.

On dissout sous atmosphère inerte 4,43 g de la base de l'exemple 1 dans 130 cm3 de chloroforme et 27 cm3 de triéthy-lamine, ajoute 5,6 g de N-(benzyloxy carbonyl)glycine (Z glycine) puis en 20 minutes, sous agitation, 3,89 g d'iodure de 2-chloro 15 N-méthyl pyridinium. Une heure après on rajoute 800 mg du sel de pyridinium ci-dessus, agite pendant 20 minutes, ajoute encore 400mgde sel de pyridinium, agite encore pendant 20 minutes, lave avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique N, puis de soude N, avec de l'eau, sèche, amène à sec, purifie par chromatographie 20 sur silice,( éluant : chlorure de méthylène-acétate d'éthyle 9/1), recristallise dans l'acétate d'éthyle pour obtenir 5,8 g de produit attendu. F = 130°C, puis 150°C.

Stade B : 2-amino N-méthyl N-(20-oxo prégn-5-ène 3a-yl)acétamide et son fumarate.

25 On dissout sous atmosphère inerte 6,2 g du produit obtenu au stade A, dans 60 cm3 de tétrahydrofuranne, ajoute 1,2 g de charbon palladié à 5¾ et fait barboter de l'hydrogène-Après 2 heures,on filtre, lave le catalyseur avec du chlorure de méthylène/ amène à sec et obtient 4,55 g du produit attendu sous forme de 30 résine.

Formation du fumarate :

On dissout à chaud-1,9- g. de la..base ai-dessus dans 4 cm3 d'éthanol à 95° , ajoute une solution chaude de 560 mg d’acide fumarique dans 6 cm3 d'éthanol à 95°, amorce la cristallisation, 35 glace pendant 1 heure, essore, lave à l’éthanol glacé,, sèche à 60? C sous vide, et obtient 2,02 g du produit attendu sous forme d’hémi-hydrate. F 160° C.

. : - 13 -

Analyse pour C24H38N2°2’ C4H4°4’ ^ H2° = 511,63

Calculé : C% 65,73 H % 8,67 N % 5,47

Trouvé : 65,6 8,5 5,4 EXEMPLE 3 : (2S) 2-amino N-(20-oxo prégn-5-èn-3a-vl)prop-iona-5 mide et son chlorhydrate.

Stade_A : S-^lj^l^diméthYléthox^SËîI^SSïlZ-ËïïiSS-.îîli^QzS^S-.EîIÉSîl·" 5-èn-^gç-2l2_Erogionami de.

On dissout sous atmosphère inerte 3,15 g â' bolamine et 2,08 g de tert-butyloxy carbonyl L-alanine (BOC L-alanine) 10 dans 75 cm3 de chloroforme et 15 cm3 de pyridine, ajoute 2,1 g de chlorhydrate de 1 -éthyl-3-(3-diméthy 1 amino propyl)carbodiinuiâe et agite pendant 1 heure 15 minutes.Oôilave avec une solution aqueuse d’acide chlorhydrique 2N, avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium, sèche, distille à sec sous pression 15 réduite, purifie par chromatographie sur silice (éluant : benzène méthyl éthyl cétone 1 - 1) et obtient 4,5 g du produit attendu sous forme d’huile.

StadeJB : chlorhydrate^de_(2S^2-amino W~(20-oxo pregn-5-èn-5-yl) propionamide.

20 On agite pendant 2 heures 30 minutes sous atmosphère inerte 4,5 g du produit obtenu au stade A, en solution dans 30 cm3 d’une solution 2N d'acide chlorhydrique sec dans le méthanol. On distille à sec sous pression réduite à 30° C, cristallise dans 30 cm3 d’acétate d’éthyle, essore, dissout dans 25 15 cm3 de méthanol au reflux, filtre, ajoute 50 cm3 d’acétate d’éthyle, concentre à mi volume, essore, sèche à 40° C sous pression réduite et obtient 2,5 g du produit attendu.

F = 260° C.

Analyse pour = 423,03 30 Calculé : C % 68,14 H % 9,29 N % 6,62 Cl % 8,38

Trouvé : 68,4 9,5 6,5 8,5 EXEMPLE 4 : chlorhydrate de 2-amino N-(20-oxo prégn-5-en-3a-vl) acétamide.

En opérant selon un procédé analogue à celui décrit 35 ci-dessus pour l’exemple n° 2, en faisant réagir la Z-glycine ouN-(benzyloxy carbonyl) glycine avec l’holamine, on a préparé le produit attendu. F0 = 295° C après cristallisation dans l’acétate d’éthyle.

- : - 14 -

Analyse pour ^23^36^2^2 ’ HCl = 409,019

Calculé : C % 67,54 H % 9,12 Cl % 8,67 N % 6,85

Trouve : 67,8 9,1 8,5 6,7 EXEMPLE 5 : fumarate de (2S) 2-amino N-(20-oxo prégn-5-èn-5oc-yl) 5 1 H-indole-3-Î>ropanamide.

En opérant selon un procédé analogue à celui décrit ci-dessus pour l’exemple 3, en faisant réagir le BOC L-trypto-phane avec l’holamine, on a préparé le produit attendu.

F0- = 180° C après cristallisation dans le méthanol.

10 Analyse pour C^H^N 02, H00C-CH=.CH-COOH, CH3OH * 617,76

Calculé : C % 68,39 H % 7,91 N % 6,47

Trouvé _: 68,1 8,0 6,5 EXEMPLE 6 i chlorhydrate de 2-amino N-/(20 S)20-hydroxy prégn- 5-èn-5a-vl/acétamide.

15 En opérant selon un procédé identique à celui décrit ci-dessus pour la préparation de l’exemple 2, en faisant réagir la Z-glycine avec le (20 S) 3a-amino prégn-5-èn-20-ol, on a préparé le produit attendu. PF° = 264° cfavec décomposition) après cristallisation dans, l’acétate d’éthyle.

20 Analyse pour Cg^H^NgC^HCl = 447,495

Calculé : C % 67,20 H % 9,56 Cl % 8,63 N % 6,82

Trouvé : 67,3 9,6 8,7 6,8

Le (20 S) 3a-amino prégn-5-èn-20-ol de départ peut être préparé comme suit : 25 Stade_2 : 3<x-amino prégn-5-èn-20-ol.

On porte au reflux 100 cm3 de propanol, ajoute en 20 minutes et simultanément 5 g de sodium par petites portions et une solution de 5 g d’holamine dans 5 cm3 de propanol et maintient le reflux. Après 1 heure 25 minutes, on laisse revenir à température 30 ambiante, glace, acidifie à l'acide acétique jusqu'à pH = 6, revient à pH = 8 à l'aide de carbonate de potassium, dilue avec 500 cm3 d'eau, évapore en partie, reprend par 300 cm3 d'eau, laisse cristalliser pendant 24 heures au réfrigérateur, filtre, rince les cristaux à 1'eau, les dissout dans 10 cm3 de chlorure 35 de méthylène, ajoute 50 cm3 d'acétate d'éthyle et 30 cm3 d'éther isopropylique:, évapore le chlorure de méthylène, laisse cristalliser 16 heures au réfrigérateur et obtient 3 g du produit attendu. F0 = 160°C.

. : --15-

Stade 2 : trifluoroacétate de (20 S) /3a-(trifluoroacétylamino) prégn-5-èn-20-yle/

On dissout 5,5 g de produit tel qu’obtenu ci-dessus dans 55 cm3 de chlorure de méthylène, ajoute 5,5 cm3 de pyridine, 5 amène à 0° C, ajoute 5,5 cm3 d’anhydride trifluoroacétique en 5 mn, agite à température ambiante pendant 15 minutes, amène à sec, reprend au cyclohexane, filtre, concentre à sec, chromatographie le résidu sur silice (éluant : cyclohexane-acétate d'éthyle 9/1) et obtient trois fractions, la première correspon-10 dant à l'isomère (20R), la seconde (3,56 g) à un mélange (20R-20S), la troisième (1,5 g) à l'isomère (20S) recherché. P =140°C. Stade_3 : ( 20 S) 3<x-amino prégn-5-èn-20-ol.

On refroidit au bain de glace une suspension de 2,4 g de produit tel qu’obtenu ci-dessus dans 24 çm3 de méthanol, ajoute 15 12 cm3 de solution aqueuse de soude 2N, agite pendant 2 heures 30 minutes à température ambiante, dilue à l’eau, extrait au chlorure de méthylène, lave la phase organique à l’eau saturée de chlorure de sodium, sèche, évapore et obtient 1,42 g de la base attendue. P = 190° C.

20 EXEMPLE 7 : On a préparé des comprimés répondant à la formule î - chlorhydrate de 2-amino N-(20-oxo prégn-5-èn-3a-yl) acétamide .......................................... 20 mg - excipient q.s. pour un comprimé terminé à..........100 mg (détail de l'excipient : lactose, amidon, talc, stéarate Mg)

25 ETUDE PHARMACOLOGIQUE

1 - Adjuvant du choc anaphylactique

Principe : L’administration à des animaux d’un produit capable de stimuler l’activité des systèmes immunitaires se traduit par 30 une augmentation du choc en réponse à l’administration d’un antigène auquel l'animal était sensibilisé.

Des souris mâles pesant 30 à 35 g sont sensibilisées par voie intra-plantaire avec l’albumine sérique de boeuf. 8 jours plus tard, elles reçoivent cet antigène par voie intra-veineuse, 35 Dans des conditions de sensibilisation minimum les animaux témoins ne font pas de choc mortel lors de cette dernière administration.

Le produit à tester est injecté par voie intra-plantaire 16 mélangé avec l’antigène : si ce produit est adjuvant, il va augmenter la sensibilisation et il en résultera un choc mortel lors d’une administration par voie intraveineuse.

On retient comme dose active la dose qui provoque une 5 mortalité égale ou supérieure à 50 % des animaux.

T-Ä-!--7 Résultats : | Produit de l’exemple : Dose par animal en mg ) I T : ; 1 { 6 ; 4 ] i_·__1 2 - Test des rosettes aux globules rouges de mouton Principe : L’administration à des animaux d’un produit capable de 10 stimuler l’activité des systèmes immunitaires se traduit par une augmentation de leur capacité de réaction à l’injection d’un produit immunogène.

Des rats mâles âgés de 3 mois sont sensibilisés par voie intra-péritonéale avec des érythrocytes de mouton (jour 0).

15 7 jours plus tard' (Jour 7) leur rate est prélevée et les splénocytes sont mis en contact avec des érythrocytes de mouton : on compte ensuite le pourcentage de leucocytes autour desquels les érythrocytes ont formé des rosettes.

Le produit à étudier est administré per os quotidiennement 20 du jour -1 au jour 1.

On considère comme dose immunostimulante la dose de produit qui multiplie environ par 2 le pourcentage de rosettes observé chez les animaux témoins.

[ : Dose par animal en j Résultats : ( Produit de l’exemple : mg/feg per- os j (4 : 5 )

’i__:___JL

25 3 - Etude de la toxicité aigüe.

On a évalué les doses non létales(DL^ de différents composés 17 testés après administration par voie orale chez la souris.

On appelle DLq la dose maximale ne provoquant aucune mortalité en 8 jours.

Les résultats obtenus sont les suivants : p-1-ï-'--7 ( Produit de l’exemple : DLq en mg/kg ) ( ï ) 5 C 3 : > 400 ) (4 : 600 ) (6 : > 400 ) L_________:_J.

Claims (10)

1, - Nouveaux dérivés du 3-amino pregn-5-ène, ainsi que leurs sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale (I) : 1 ÇH, CH, , [3 I 3 5 dans laquelle X représente un groupement G ou CH , / Ό / \h les traits ondulés signifient que le radical correspondant se trouve dans l'une ou l'autre des configurations ¢( ou ^ , R^ représente un atome d'hydrogène ou un radical hydroxyalcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, R2 représente un atome d'hy-10 drogène, un radical hydroxyalcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, acyle aliphatique renfermant de 3 à 8 atomes de carbone ou alcoxycarbonyle renfermant de 2 à 8 atomes de carbone, ou un radical dérivé d'un acide 0<-aminé ou d'un peptide comprenant 2 ou 3 acides aminés dont l'amine est soit libre, soit mono ou di-15 substituée par un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, étant entendu que d'une part, R^ et R2 ne représentent pas en même temps un atome d'hydrogène, et que d'autre part, si le groupement amino est en position 3β, CH, I ^ i) lorsque X représente un groupement C , R1 et R„ ne peuvent /\ 20 pas représenter en même temps un radical hydroxyéthyle, ch3 ii) lorsque X représente un groupement bî , si R.^ représen- / 'OH te un atome d'hydrogène, R2 ne représente pas un radical éthoxy-carbonyle, ainsi qu'à la formule générale (I) ci-dessus, dans /CH3 laquelle X représente un groupement -C^ , R^ représente un o 25 atome d'hydrogène, R2 représente un radical méthyle et le groupement amino est en position 3e>(.

2. Les nouveaux dérivés du 3-amino pregn-5-ène selon la revendication 1, ainsi que leurs sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale (I) : ...xsS^ * î R2 CH. CH-, | 3 , 3 dans laquelle X représente un groupement C ou CH , les ' Ό / ΌΗ 5 traits ondulés signifient que le radical correspondant se trouve dans l'une ou l'autre des configurations oi ou représente un atome d'hydrogène ou un radical hydroxyalcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, R2 représente un atome d'hydrogène, un hydroxyalcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, acyle aliphatique renfermant 10 de 3 à 8 atones de carbone ou alcoxycarbonyle renfermant de 2 à 8 atones de carbone ou un radical dérivé d'un acide o(-aminé ou d'un peptide comprenant 2 ou 3 acides aminés dont l'amine est libre, mono ou disubs-tituéepar un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, étant entendu que d'une part, et R£ ne représentent pas 15en même temps un atome d'hydrogène, et que d'autre part, si le groupement amino est en position 3p, CH, I 3 i) lorsque X représente un groupement C , R- et R- ne peuvent /\ pas représenter en même temps un radical hydroxyéthyle, CH, I 3 ii) lorsque X représente un groupement CH , si R^ représente / \)H 20un atome d'hydrogène, R2 ne représente pas un radical éthoxycar-bonyle. 3, - Nouveaux dérivés du 3-amino pregn-5-ène, tels que définis par la formule (I) de la revendication 1, ainsi que leurs sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques, caractérisés 25 en ce que le groupement amino est en position 2>d, R^ représente un atome d'hydrogène et R2 représente un radical dérivé d'un acide o^-aminé ou d'un peptide comprenant 2 ou 3 acides aminés.

4. Nouveaux dérivés du 3-amino pregn-5-ène selon la revendication 3, ainsi que leurs sels d'addition avec les acides minéraux 30ou organiques, caractérisés en ce que X représente un groupement * » ÇEL CH, ! 3 I 3 CU OU CH /\ /\h dont l'hydroxyle est en position 20<*.

5. Le 2-amino N-(20-oxo pregn-5-èn-3o<-yl) acétamide, le (2S) 2-amino N-(20-oxo pregn-5-èn-3^-yl) propionamide, ainsi que 5 leurs sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques.

6. La 3o(-méthylamino pregn-5-èn-20-one, ainsi que ses sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques.

7. Procédé de préparation des dérivés du 3-amin.o prégn-5-ène, tels que définis par la formule I de la revendication 1, ainsi 10 que de leurs sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques, caractérisé en ce que l'on fait réagir une amine de formule II : xtS^' - H2N dans laquelle le trait ondulé et X ont la signification déjà 15 indiquée, - soit avec un halogénure de formule (III) : Hal-R'2 (III) dans laquelle Hal représente un atome de chlore, de brome ou d'iode, et R'2 représente un radical acyle aliphatique renfer-20 mant de 3 à 8 atomes de carbone ou alcoxycarbonyle renfermant de 2 à 8 atomes de carbone, pour obtenir un produit de formule (I) dans laquelle R1 représente un atome d'hydrogène, R2 représente un radical R'2 tel que défini ci-dessus, X et le trait ondulé ont la signification déjà indiquée, produit de formule (I) 25 que l'on isole et salifie si désiré, - soit avec un acide ou un anhydride d'acide de formule (III1) A-O-R"2 (III') dans laquelle A représente un atome d'hydrogène ou un radical R"2 et R"2 représente un radical acyle aliphatique renfermant 30 de 3 à 8 atomes de carbone, pour obtenir un produit de formule (I) dans laquelle R^ représente un atome d'hydrogène, R2 représente R"2 tel que défini ci-dessus et X et le trait ondulé ont la signification déjà indiquée, produit de formule (I) que l'on * * isole et salifie si désiré, - soit avec un tf-amino acide ou un peptide comprenant 2 ou 3 acides aminés dont la fonction amine est monosubstituée ou di-substituée par un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de 5 carbone ou encore libre, et lorsqu'elle est libre, est protégée par un groupement facilement clivable notamment par hydrolyse acide ou par hydrogénolyse, puis traite de façon à éliminer le groupement protecteur, pour obtenir un produit de formule (I) ' dans laquelle représente un atome d'hydrogène, R2 représente 10 un radical dérivé d'un acide o<-aminé ou d'un peptide comprenant 2 ou 3 acides o^-aminés, et X et le trait ondulé ont la signification déjà indiquée, que l'on isole et salifie si désiré, - soit avec un halogénure d'hydroxyalcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone et dont l'halogène est un atome de chlore, de 15 brome ou d'iode, pour obtenir un produit de formule (I) dans laquelle 1'amine en 3 est mono ou disubstituée par un radical hydroxyalcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone et X et le trait ondulé ont la signification déjà indiquée, - soit, dans le cas où X représente un groupement -C-CH3 et où o 20 le groupement amino est en position 3<tf, avec un halogénure de méthyle, pour obtenir un produit de formule (I), dans laquelle X représente un groupement -C-CH?, R1 représente un atome d'hy- S drogène, R2 représente un radical méthyle et le groupement amino est en position 3tf, produit de formule (I) que ou bien l'on isole 25 et salifie si désiré , ou bien, dans le cas où R2 représente un atome d'hydrogène, l'on fait réagir ledit produit de formule (I) * avec un halogénure de formule (IV) : Hal-R'"2 (IV) dans laquelle R'"2 représente un radical hydroxyalcoyle renfer-30 mant de 2 à 5 atomes de carbone, acyle aliphatique renfermant de 3 à 8 atomes de carbone ou alcoxycarbonyle renfermant de 2 à 8 atomes de carbone et Hal a la signification déjà indiquée, pour obtenir un produit de formule (I) dans laquelle R^ représente un radical hydroxyalcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, R2 35 représente un radical R1" 2 Que défini cri-dessus, et X et le trait ondulé ont la signification déjà indiquée, que l'on isole et salifie si désiré, ou bien encore dans le cas où R2 représente un atome d'hydrogène, l'on fait réagir ledit produit de for- . ; 22 mule (I) avec un û(-amino acide ou un peptide comprenant 2 ou 3 acides aminés dont la fonction amine est monosubstituée ou di-substituée par un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou protégée par un groupement facilement clivable notam-5 ment par hydrolyse acide ou par hydrogénolyse , puis traite, le cas échéant, de façon à éliminer le groupement protecteur, pour obtenir un produit de formule (I) dans laquelle représente un radical hydroxyalcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, . R2 représente un radical dérivé d'un acide e(-aminé ou d'un pep- tide comprenant 2 ou 3 acides o(-aminés et X et le trait ondulé ont la signification déjà indiquée, que l'on isole et salifie si désiré.

8. Médicaments, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par les nouveaux dérivés du 3-amino pregn-5-ène, tels que définis 15. la revendication 1, ainsi que par leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables.

9. Médicaments, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par les nouveaux dérivés du 3-amino pregn-5-ène, tels que définis à la revendication 2, ainsi que par leurs sels d'addition avec les 20 acides pharmaceutiquement acceptables.

10. Médicaments, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par les nouveaux dérivés du 3-amino pregn-5-ène, tels que définis à la revendication 3, 4 ou 5, ainsi que par leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables. 25 11.- Médicaments, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par la 3oé-méthylamino pregn-5-èn-20-one, ainsi que par ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables.

12.- Compositions pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles renferment, à titre de principe actif, l'un au moins des médica-30 ments, tels que définis à l'une des revendications 8 à 11.