LU84282A1 - Procede,composition et produit virulicides - Google Patents

Description

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La présente invention concerne une classe de compositions virulicides hautement efficaces contre les virus respiratoires communs tels que les rhinovi- rus, les virus paragrippaux et les adénovirus \ l'in- 5 vention concerne également les procédés et les produits utilisant ces compositions. En particulier, l'inven-% tion concerne un nouveau type de composition virulici- v de que l'on peut appliquer sur différents substrats tels que des nappes cellulosiques, des structures non 10 tissées et des matières à base textile. En outre, les compositions virulicides de la classe faisant l'objet de l'invention peuvent également être incorporées dans des pulvérisations nasales, des crèmes faciales, des lotions pour les mains, des crayons à lèvres et des 15 préparations cosmétiques analogues. Ces compositions peuvent également être utilisées comme ingrédients dans des produits de nettoyage pour les cuisines et les salles de bains, les polis pour meubles et parquets et préparations ménagères semblables, 20 Les virologistes spécialisés dans le domaine des virus respiratoires sont généralement d'accord pour admettre que les rhinovirus, les virus grippaux * et les adénovirus font partie du groupe le plus important des agents pathogènes provoquant des maladies 25 respiratoires. On pense que les rhinovirus, en particulier, constituent l'agent causatif principal de ce que l'on appelle généralement le "rhume ordinaire", , L'expression "rhinovirus" implique l'appari tion de décharges nasales copieuses lorsque les infec-30 tions sont provoquées par ce groupe de virus. Les rhinovirus appartiennent a la famille des pico-RNA virus qui, étant dépourvus d'une enveloppe extérieure, sont souvent appelés "virus nus". Bien que l'on connaisse plus de 100 types différents d'antigènes des 35 rhinovirus, ils partagent certaines caractéristiques <4 » 3 » importantes. Par exemple, ils sont tous dotés de capsides résistant'à 1*éther et ils contiennent tous du RNA monocaténaire (RNA = acide ribonucléique) (environ 2,6-x 10^ daltons). Il est également diffi— 5 eile de les rendre inactifs par des germicides communs ^ tels que des composés d’ammonium quaternaire,

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Les adénovirus englobent plus de 30 types -f ^ antigéniques. Lorsqu’ils envahissent les voies res pi- .t 5« ratoires, ils provoquent une inflammation des tissus, 10 conduisant ainsi aux symptômes de la pharyngite, de la bronchite, etc. Bien que la plupart des infections dues aux adénovirus se manifestent au cours de l’enfance, il n’est pas rare de voir également apparaître des infections chez l'adulte. Tout comme les rhino-15 virus, les adénovirus sont dépourvus d'une enveloppe mais, contrairement au rhino-noyau, l’adéno-noyau comporte un DNA bicaténaire (DNA = acide désoxyribonucléique) , Les adénovirus sont rarement résistants à l’inactivation.

20 Les virus paragrippaux appartiennent à la famille des paramyxovirus. Ils jouent un rôle important dans l'apparition des maladies des voies respiratoires inférieures chez l'enfant et des maladies des voies respiratoires supérieures chez l'adulte.

25 Les virus paragrippaux sont des virus contenant du RNA et ils sont dotés d'une enveloppe de lipoprotéine sensible à l’éther et entourant le nucléocapside.

Ces virus résistent à l’inactivation par les acides carboxÿliques en faibles concentrations, 30 Les travaux récents de Dick et autres [Dick, E,C. et Chesney, P.J,, "Textbook of Pédiatrie Diseases", Feigin, R.D. et Cherry, J.D. éd., Volume II, page II67 (I98I) W.B. Saunders Pub. Co,, Phila, PA] ont éclairci considérablement le mode de transmission 35 des maladies des voies respiratoires provoquées par * » 4 les rhinovirus. Bien que l’on ne comprenne pas parfaitement le mode exact de transmission des maladies des voies respiratoires, des études concrètes entreprises par les chercheurs précités ont démontré de 5 toute évidence que la transmission effective de mala— „ ~ dies telles que le rhume ordinaire nécessite habituel-

Pi lement une association ou un contact intime (direct ou : î indirect) entre le sujet infecté et la victime virtuel le. (Un contact indirect peut être considéré comme 10 un contact ayant lieu via une surface intermédiaire, par exemple, un dessus de table, un bouton de porte, etc.). Dès lors, on peut interrompre la chaîne d’infection et réduire son pouvoir d’extension si les virus peuvent être neutralisés dès leur sortie du nez 15 ou de la bouche de la personne infectée et ce, par exposition immédiate à un agent virulicide. De plus, après leur sortie, les virus qui peuvent se nicher sur le visage ou les mains de la personne infectée, peuvent également être “tués" si un agent virulicide approprié 20 · est mis rapidement en contact avec la surface anatomique appropriée, c’est-à-dire le visage, les mains, etc. Un tissu facial contenant une composition virulicide efficace à action rapide constituerait un moyen simple pour réaliser les interventions mentionnées 25 ci-dessus.

Depuis longtemps, on ressent la nécessité de trouver un agent virulicide sûr et peu coûteux en vue de combattre efficacement les virus communs des voies respiratoires. De simples germicides ménagèrs 30 ne sont pas efficaces contre les rhinovirus et les adénovirus.

Dans le brevet des Etats-Unis d’Amérique n° 4«045«364 au nom de Richter, on décrit un papier à jeter imprégné d’un iodophore (c’est-à-dire de 35 l’iode et un support) ayant des propriétés germicides * 5 et utile comme agent de prélavage selon une routine d’épuration chirurgicale. Dans ce brevet, il est stipule que la stabilité de 1 * iodophore est améliorée à un pH inférieur et que, pour régler le pH, on peut 5 ajouter de faibles quantités d’acides organiques faibles tels que l’acide citrique ou l’acide acétique.

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Dans le brevet des Etats-Unis d’Amérique n° 3.881.210 , aux noms de Drach et al., on décrit un mouchoir pré— 1* humidifié à des fins hygiéniques et pouvant contenir 10 un bactéricide. Dans le brevet des Etats-Unis d’Amérique n° 3»654·I65 aux noms de Bryant et al., on décrit un produit nettoyant hygiénique à frotter contenant de l’iode exerçant une action bactéricide. Dans le brevet des Etats-Unis d’Amérique n° 3*567*118 aux 15 noms de Shepherd et·al,, on décrit une matière fibreuse à des fins de nettoyage comportant un revêtement d’un acrylate ou d’un méthacrylate hydrophile renfermant, entre autres, un bactéricide.

Bien que, dans la technique antérieure, il 20 ait été stipulé que les compositions et les produits iodés exercent un effet virulicide à large spectre, on n’a pas encore élaboré, à l’échelle industrielle, un produit peu coûteux permettant d’interrompre efficacement la propagation de virus tels que le rhi-25 novirus ou le virus grippal. Les problèmes que pose l’iode résultent, par exemple, de sa toxicité et du fait qu’il est un produit irritant pour les tissus animaux. L’action de l’iode est non sélective, par exemple, entre les protéines bactériennes et les pro-30 téines des mammifères, tandis que son utilisation incontrôlée sur la peau peut provoquer des irritations graves. De plus, son activité peut être diminuée ou neutralisée par l’action de fluides biologiques tels que le sérum sanguin. - Les -efforts-entrepris en vue 35 de modifier l’iode pour éviter ces difficultés n’ont li 6 « t pas été pleinement couronnés de succès.

Il existe, dans la littérature, des références relatives à 1*action bactéricide d’acides tels que l’acide -citrique [par exemple, Reid, James D», 5 "The Disinfectant Action of Certain Organic Acids",

American Journal of Hygiene, 163 540-556 (1932)]· Toutefois, l’action virulicide est fondamentalement , différente de l’action bactéricide en ce sens que les virus et les bactéries représentent des micro-organis-10 mes différents ayant des caractéristiques différentes. Par exemple, contrairement aux bactéries, les virus ne reproduisent pas les cellules hôtes de l'extérieur.

Les composés d’ammonium quaternaire tels que le chlorure de benzalkonium sont souvent efficaces contre 15 les bactéries, mais non contre les virus tels que les différents rhinovirus.

Bien que, comme on le sait, les rhinovirus soient labiles vis-à-vis de solutions aqueuses d’acides dans des conditions dans lesquelles règne un fai-20 ble pH [ par exemple, Davis, B.D. et al.j "Microbiology" page 1303, Harper E, Row (Publishers) New York, 1973 et Rueckert, R,R., "Picornaviràl Architecture" Comparative Virology — Academie Press, New York (1971)> pages 194-306], les références connues ne font pas 25 mention de l’utilisation de ce concept dans des contextes épidémiologiques tels que l’interruption de la chaîne d*infection provoquée par les rhinovirus. Au mieux des connaissances actuelles de la Demanderesse, la seule étude systématique de l’action virulicide 30 d’acides organiques (acide citrique, acide malique, etc,) qui existe dans la littérature généralement disponible, a été effectuée par Poli, Blondi, Uberti, Ponti, Balsari et Cantoni [Poli, G, et al, : "Viruci-dal Activity of Organic Acids" Food Chem, (Grande-35 Bretagne) 4(4)251-8 (1979)]· Ces chercheurs ont 7 découvert que l’acide citrique, l’acide malique, l’acide’pyruvique et l’acide succinique, entre autres, étaient efficaces contre le virus de l’herpès, l’or-thomyxovirus- .et le rhabdovirus (virus rabique) · Leurs 5 expériences ont été effectuées à la température ambiante avec des solutions aqueuses d’acides purs«

Aucun substrat ou support n’a été utilisé. Les trois virus choisis pour les études effectuées par ces chercheurs étaient tous des virus "enveloppés" res-10 semblant, à cet égard, au virus paragrippal 3· Poli et al. ont également observé que ces acides n’étaient pas efficaces contre l’adénovirus qui, faut—il le rappeler, est un virus "nu". Sur la base de ces observations, ces chercheurs ont conclu que ces acides 15 étaient efficaces contre les virus "enveloppés", mais non contre les virus "nus".

L’homme de métier sait que les adénovirus sont résistants aux acides.

La présente invention fournit un produit, 20 une composition et un procédé virulicides qui sont hautement efficaces vis—à—vis d’un large spectre de virus, ce produit - et cette composition pouvant être préparés et utilisés en toute sécurité. L’invention résulte de la découverte selon laquelle des acides 25 carboxyliques tels que l’acide citrique, l’acide malique et l’acide succinique, déployés dans un support approprié et physiologiquement acceptables,étaient efficaces non seulement contre certains virus "enveloppés" des voies respiratoires, mais également contre 30 le rhinovirus qui est un "virus nu". De plus, en présence d’un agent tensio-actif tel que le dodécyl-sulfate de sodium, i3s sont également efficaces contre l’adénovirus· En outre, les produits de la présente invention peuvent englober un substrat tel qu’un-** 35 tissu facial ou une nappe non tissée contenant des

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* 8 compositions cfe ce type. Dans le procédé de 1*invention, on met une quantité efficace de cette composition en contact avec la zone atteinte en utilisant ces produits·,.. En règle générale, ces compositions · 5 peuvent être manipulées sans difficulté et l’on pense qu’elles n’exercent aucun effet néfaste lorsqu’elles s, sont utilisées conformément à l’invention. En outre, lorsqu’elles sont appliquées à un substrat tel qu’un ’ tissu facial, ces compositions exercent peu ou pas 10 d’effet néfaste sur la coloration, l’odeur, la force et d’autres propriétés importantes. Les produits peuvent être utilisés sous forme d’un mouchoir sec ou maintenu humide,et ils peuvent être utilisés, par exemple, comme mouchoir imprégné.

15 < L’invention sera décrite en s'e référant à · certaines de ses formes de réalisation préférées, mais il est entendu qu’elle n’y est nullement limitée.

Au contraire, il est entendu qu’elle englobe toutes les variantes, modifications et formes de réalisation 20 équivalentes pouvant rentrer dans l’esprit et le cadre de l’invention tels qu’ils sont définis dans les revendications ci-après.

La présente invention résulte de la découverte inattendue suivante : certains acides tels que 25 l’acide citrique, l’acide malique, l’acide succinique et 1*açide benzoïque, utilisés en concentrations appropriées et comme décrit plus en détail ci-après, sont hautement efficaces contre les rhinovirus Ιό, IA et 86. Lorsqu’ils sont utilisés en présence d’un 30 agent tensio-actif tel que le dodécyl—sulfate de sodium (SDS), on a constaté que ces acides étaient également efficaces contre le virus paragrippal 3 ôt l’adénovirus 5· (Les virus particuliers choisis pour les études effectuées, c’est-à-dire RV-16, RV-IA, 35 RV-86, para-3 et adéno-5 sont des virus représentatifs

Il 9 * de leurs classes). En règle générale, les acides carboxyliques hydrosolubles utiles suivant la présente invention possèdent la structure suivante :

R-COOH

5 où R peut représenter un groupe alkyle inférieur (l à 6 atomes de carbone), un groupe alkyle inférieur subs— I· titué [par exemple, un groupe hydroxy—alkyle inférieur (par exemple, HOCH^-), un groupe carboxy-alkyle infé-’ rieur (par exemple, HOOC-CH2-CH2—) , un groupe carboxy- 10 hydroxy-alkyle inférieur (par exemple; H00CCH2CH0H-)J un groupe carboxy-halo-alkyle inférieur (par exemple, HOOCCILjCHBr-) $ un groupe carboxy-dihydroxy-alkyle inférieur (par exemple, H00C-CH0H-CH0H-) i un groupe dicarboxy -hydroxy-alkyle 15 inférieur (par exemple : OH — hooc-ch2c-ch2- ), C00H __ un groupe alcênyle inférieur, un groupe carboxy-20 alcênyle inférieur (par exemple, H00CCH=CH-), un groupe dicarboxy-alcényle inférieur (par exemple,

CO OH

H00C-CH2C=CH-), tux groupe phényle (par exemple, C^H^-), un groupe phényle substitué (par exemple, un 25 groupe hydroxyphényle HO-C^H^-)· Parmi d'autres acides, il y a, par exemple : 1*acide lactique (acide hydroxy-alkylique inférieur) ; 1*acide 2—méthyl— malique (acide carboxy-hydroxy-alkylique inférieur) ; l'acide 2-chloro-3-méthyl~succinique (acide carboxy-30 halo-alkylique inférieur) ; l'acide 2—méthyl-tartri-que (acide carboxy-dihydroxy—alkylique inférieur) j l'acide 2-méthyl-citrique (acide dicarboxy-hydroxy-alkylique inférieur) et l'acide fumarique (acide carboxy—alcénylique inférieur). Les définitions' ci— 35 dessus sont utilisées à titre d'illustration, mais * 10 sans aucun caractère limitatif, L*expression "substitué^) " indique qu’un ou plusieurs atomes d’hydrogène est ou sont substitué(s) par un ou plusieurs atomes d’halogènes (F, Cl, Br, I), groupes hydroxy, -5 groupes amino, groupes thiol, groupes nitro, groupes cyano, etc.

L’agent tensio-actif peut être non ionique (par exemple, les alkylphénols polyoxyéthylénés tels que "TRITON X-100" (marque commerciale déposée), fa-10 briqué par "Rhom and Haas" $ les esters de sorbitol polyoxyéthylénés tels que "TWEEN 40" (marque commerciale déposée), fabriqué par "ICI United States, Inc·"), cationique (par exemple, le chlorure de cétylpyridi— nium (CcH_N+(CH9)1 rCH- Cl""),.le chlorure de méthyl-0 ο z *0 o 15 benzéthonium

Me (Me3CCH2C(Me)2-C6H3(Me)-OCH2CH2OCH2-CH2NÎCH2C6H5 Cl“)

Me ou anionique (par exemple, le dodécyl-sulfate de 20 sodium (CH3(CH2)10-CH20S037-Na) , l’ester l,4-bis-(2-éthylhexylique), le sel de sodium de l’acide sulfo-succinique, par exemple, celui fabriqué par "American Cyanamid Company" sous le nom commercial "AEROSOL 0T". Les agents tensio-actifs anioniques préférés peuvent 25 être représentés par les structures suivantes : 1. (roso3)xm+ ou (rso3)xm+ où M+ représente un cation d’un métal monovalent, bivalent ou trivalent ou un ion ammonium ou ammonium substitué ; x est un nombre entier 5 et R représente 30 un groupe alkyle.

/ CH„C0„R1 \ ,M+( I2 21) \ -03S-CHC02R2 / x où M+ et x ont les significations définies ci-dessus^ 35 tandis que R^ et R2 peuvent être identiques ou diffé- * 11 rents et peuvent représenter des groupes aliphatiques à chaîne droite ou ramifiée. Les agents tensio-actifs anioniques ci-dessus sont donnés à titre d’illustration plutôt que dans un sens limitatif. En règle 5 générale, à eux seuls, les agents tensio-actifs ne sont pas virulicides vis-à-vis de virus nus tels que le rhinovirus.

Bien que l’invention ne soit nullement limitée à l’utilisation d’une nappe cellulosique (par 10 exemple, un tissu facial, un tissu pour salle de bains, des serviettes à mains pour cabinets de toilette et autres utilisations et analogues) comme substrat ou support pour les agents virulicides, un tissu facial imprégné de ces nouveaux agents virulicides illustre 15 à suffisance le principe à la base de l’invention dont il représente une application simple et utile.

Pour cette raison, les expériences décrites ci-après ont été effectuées en utilisant des tissus faciaux comme substrat. Parmi les substrats non tissés ap— 20 propriés, il y a, par exemple, les matières de nettoyage imprégnées telles que les serviettes à mains crêpées par voie humide, de même que les nappes polymères liées par extrusion et soufflées en masse fondue que l’on emploie habituellement dans la fabrication 25 d’articles à jeter pour hôpitaux tels que les vêtements chirurgicaux, les blouses de chirurgiens, les draps de lit, les oreillers et analogues* Des matières textiles de tous types, y compris des lamifiés de matières différentes, peuvent constituer des substrats appro-30 priés. Par exemple, les masques faciaux hygiéniques utilisés par les personnes souffrant de maladies respiratoires constituent un excellent moyen de mise en oeuvre de la présente invention. D’autres supports physiologiquement acceptables et essentiellement 35 inertes, c’est-à-dire ceux qui sont essentiellement « 12 non toxiques et non irritants pour les tissus humains ou animaux dans des conditions d1utilis ation normale seront évidents pour 1*homme de métier en vue d*applications telles, que des lotions, des pulvérisations, 5 des crèmes, des vernis et analogues.

En termes généraux, le procédé expérimental adopté pour la préparation des échantillons mentionnés dans les exemples ci—après était simple et direct. Par simple immersion, on a imprégné des tissus faciaux 10 "KLEENEX" (marque commerciale déposée) à trois plis (280 x 305 nun $ poids de base : environ 12 kg/268 m2 pour les trois plis combinés) avec des solutions aqueuses d*acide citrique, d*acide malique, 1*acide succi-nique et d1acide benzoïque. On a utilisé les acides 15 soit individuellement, soit sous forme de mélanges homogènes. Habituellement, la solution d1imprégnation contenait également un faible pourcentage d,un agent tensio-actif tel que "Aerosol-OT" [sel de sodium de 1*ester 1,4-bis-(2-éthylhexylique) de l'acide sulfo-20 succinique, fabriqué par "American Cyanamid"] ou le dodécyl-sulfate de sodium. Dans certains cas, on a également utilisé une faible quantité de glycérol pour améliorer la souplesse du tissu. On a pressé les tissus saturés entre des rouleaux afin d'exprimer 25 l'excès d'agent saturant et-assurer l'uniformité de la saturation. On a pesé les tissus, on les a séchés et on a calculé le degré de saturation (c'est-à-dire le pourcentage d'absorption.de l'agent saturant). Ensuite, les tissus étaient prêts pour pratiquer 30 l'essai de détermination de l'efficacité virulicide.

Le procédé adopté pour l'essai de détermination de l'efficacité virulicide est conforme aux techniques classiques de dosage virologique (DICT^q = dos e~ infectaeuse~d^ une -culture de tissu à 50%) en — 35 apportant de simples variations que nécessite la pré- 13 sence du substrat cellulosique. On donnera ci-après une description du procédé : PROCEDE DE DOSAGE VIRÜLICIDE I, Matières - : 5 A, Solutions :

1, Solution neutralisante : 6,4 ml de NaoHP04 2M

v ï —2 4 1,2 ml d'acide citrique IM 92,4 ml de milieu 199 IX (milieu nutritif 10 ‘ pour la culture de tissu) 2, Solution saline de Hanks-Mcllvaine (HMSS) : 2,0 ml d'acide citrique IM Dilution à 2 litres

18,0 ml de Na2HP04 stérile 2M Ha^T

15 Le pH de cette solution est de 7* 3# Solution saline équilibrée de Hanks : g/litre dans de l'eau de distillation double

NaCl 8,0 20 KC1 0,4

MgS04.7H20 0,2

CaCl2 (anhydre) 0,14

Na„HP0.,2Ho0 0,00 2 · 4 " KHoP0. (anhydre) 0,06 ^ 4 25 Glucose 1,0

Rouge de phénol 0,005

NaHC03 0,35

Remarque : les solutions ci-dessus ne sont pas virulicides, 30 B, Virus et lignes de cellules de culture de tissus : 1, Rhinovirus type 16, type IA et type 86 :

Les rhinovirus types 16, IA et 86 (RV 16,

IA et 86 respectivement) sont élevés dans des cellules de culture de tissus HeLa (0-HeLa) de l'état 35 d'Ohio (E.U.A.) et ils sont conservés à -51jll°C

14 » » jusqu*à leur utilisation* Ifessai virulicide dans lequel interviennent les rhinovirus, est effectué en utilisant des éprouvettes de culture de tissus 0—HeLa incubées sur- un tambour à rouleaux à 33°C* 5 2. Virus paragrippal type 3 : le virus paragrippal type 3 (para 3) est élevé dans des cellules de culture de tissus de reins de singes rhésus et il est conservé à -51,11°C jusqu*à son utilisation, L*essai viruli- « eide dans lequel intervient le virus para 3, est ef-10 fectué en utilisant des éprouvettes de culture de tissus Ο-HeLa incubées en position fixe à 33 °C.

3* Adénovirus type 5 ï L*adénovirus type 5 (adéno 5) est élevé dans des cellules de culture de tissus HEp-2 et il est conservé à -51jll°C jusqu*à son utili-15 sation, L*essai virulicide dans lequel intervient le virus adéno 5* est effectué en utilisant des éprouvettes de culture de tissus du carcinome d*épithélium humain — 2 (HEp-2), incubées en position fixe à 37° C. II, Méthodes 20 A, Essai virulicide

On prépare un mélange 1:1 (volume/volume) de virus et de salive. On découpe un échantillon de 6,451 cm2 de tissu “KLEENEX" (marque commerciale déposée) traité de Kimberly-Clark et on le dépose dans 25 une boite de Petri en matière plastique. (Un tissu traité est un tissu imprégné de 1*agent virulicide examiné). Au moyen d*une pipette, on dépose directement 0,1 ml du mélange virus/salive sur cet échantillon et on le laisse réagir pendant une minute. Il est 30 à noter qu*il s*agit là d*une dilution double de virus. Après un temps de réaction d*une minute, au moyen d*une pipette, on dépose 5 ml de solution neutralisante sur 1*échantillon se trouvant dans la plaque de Petri et on agite pendante trois, secondes. II.

35 s*agit alors d*une dilution centuple de virus. Au * * 15 moyen d*une pipette, on prélève ensuite le mélange de solution neutralisante/virus/salive hors de la plaque de Petri et on 1*ajoute dans un tube contenant 5 ml d*une solution saline de Hanks — Mcllvaine· On ajoute 5 1*échantillon dans le même tube en inclinant la plaque et en utilisant la pointe dfune pipette pour l*intro- *> • duire dans le tube. On fait tourbillonner le tube contenant les 10 ml de solutions et 11 échantillon pendant 30 secondes. Ce tube contient une dilution 10 10 ou 1;200 de virus, A partir de la dilution ΙΟ"-^*^, on forme des dilutions décuples en série (pipette fraîche pour chaque dilution) en prélevant 0,3 ml de la dilution précédente et en 1*ajoutant à 2,7 ml de solution saline de Hanks - Mcllvaine, On 15 inocule 0,1 ml dans' chaque éprouvette de culture de tissu. En règle générale, on procède à une inoculation dans deux éprouvettes par dilution.

Pour chaque expériënce, on utilise deux groupes de témoins. Le premier est appelé "témoin de 2° virus" et il est destiné à contrôler 1*infectiosité de la suspension de virus elle-même sans la salive ou le substrat de tissu. On soumet la suspension de virus à une dilution en série à.10 fois dans la solution saline de Hanks - Mcllvaine, On inocule 0,1 ml 25 de dilutions spécifiques par éprouvette de cellules de culture de tissu. Les informations obtenues avec ce témoin donnent le nombre d*unités virales infectieuses qui sont contenues dans la solution de virus conservée à -51,11°C et elles confirment que la partie 30 aliquote de la solution de virus utilisée lors de l*expérience n*a pas perdu son infectiosité au cours des processus de congélation, de conservation ou de décongélation,

Le deuxième - témoin, _it .savoir.. le_ ".témoin, de .... 35 tissu" consiste à effectuer 1*expérience d1 essai viru- %

LI

16 licide en utilisant 6,451 cm2 d’un tissu "KLEENEX" (marque commerciale déposée) non traité. Les infor*-mations fournies par ce témoin donnent le nombre d’unités virales infectieuses pouvant être récupérées 5 d’un mouchoir non traité en carré de 25,4 mm après le procédé d’essai virulicide* Les éprouvettes de culture de tissus ayant reçu les inoculations font l’objet d’un examen pendant 7 jours en vue de déterminer l’infection virale.

10 Le point final d’un essai virulicide pour un mouchoir donné est la dilution de virus qui donne réellement lieu à une infection ou qui est calculée pour infecter une seulë des deux éprouvettes ayant reçu l’inoculation. Ce nombre constitue la dose in— 15 fectieuse de culture de tissu (DICT^-q)* Les résultats • de l’activité virulicide d’un mouchoir donné sont habituellement indiqués par la "différence logarith- m mique" entre le logarithme commun du résultat de la valeur DICT^q de l’échantillon traité, soustrait du 20 logarithme commun de la valeur DICT^q de l’échantillon non traité.

L’efficacité virulicide d’un échantillon peut être déterminée d’après la "différence logarithmique" de la manière suivante : 25 Efficacité virulicide = ( ). 100$ où X = concentration initiale du virus (unités infectieu— ses/0,1 ml) de l’échantillon non traité utilisé comme témoin.

30 Y = concentration finale du virus (unités infectieuses/ 0,1 ml) de l’échantillon traité.

Les exemples ci—après permettent d’expliquer la méthode de calcul* (Dans les expériences, la concentration finale en virus était toujours inférieure 35 ou égale à 10>ύ unités infectieuses/0,1 ml). Pour la

A

17 majorité des résultats, la concentration finale en virus était inférieure à 10 3 ce qui, avec une concentration initiale en virus de 10^î3, signifierait une différence logarithmique supérieure à 4 et une -5 "mortalité“ supérieure à 99,99$· 1* Concentration initiale : X = 10 3 ° “ - 2 3

Concentration finale : Y = 10 3°

Différence logarithmique = (log 10^ 3 3 - log 10^33)=4 1()6,3 _ in2>3 10 Efficacité virulicide = (-r—r-) x 100$ 10°>3 = (10 *3 ~ ^ ) x 100$ 10°33 15 = 99,99$.

« 8 2. Concentration initiale : X = 10^ 3 2 o

Concentration finale : Y = 10 90 m

Différence logarithmique =2,5 1q4>8 ^ iq2,3 20 Efficacité virulicide = (--—π- ) x 100$ 104'8 = 99,7#.

Le procédé décrit ci-dessus est conforme aux techniques classiques de dosage microbiologique. Il 25 donne des résultats fiables et reproductibles dans les limites de variabilité associées à des expériences biologiques.

RESULTATS

Les résultats sont repris dans les tableaux 30 I, II et III. Les données du tableau I démontrent que des acides carboxyliques organiques simples tels que 1*acide citrique, 1*acide malique, 1*acide tartri— que, 1*acide succinique et leurs dérivés substitués (par exemple,—1* acide - 2-bromosuccinique) , de même 35 que 1*acide benzoïque et ses dérivés substitués 9 18 (acide salicylique) , utilisés dans un tissu facial en concentrations appropriées-, sont hautement viru-licides contre le rhinovirus 16 et le virus paragrip-pal 3· ' 5 De plus, les données du tableau I démontrent qu*en les utilisant conjointement avec un agent tensio— actif tel que 1* “Aerosol OT” ou le dodécyl-sulfate de sodium, les concentrations des acides dans le tissu facial peuvent être réduites sans pour autant altérer 10 Inefficacité virulicide.

Le tableau XX donne les résultats d*expériences effectuées avec des mélanges d1acides choisis parmi le groupe comprenant 1*acide citrique, 1*acide benzoïque, 1*acide succinique et 1*acide malique. Les 15 données de ce tableau démontrent que les tissus faciaux traités avec les mélanges d*acides sont virulicides contre le rhinovirus 16 et le virus paragrippal 3« Les données du tableau II démontrent également qu*un tissu facial imprégné avec un système d1acides mixtes tels 20 que 1*acide citrique et 1*acide malique, ainsi qu*avec un agent tensio-actif approprié tel que le dodécyl-sulfate de sodium, est efficace contre les rhinovirus 16, IA et 86, ainsi que contre l*adénqvirus 5· Comme le démontrent ces exemples, suivant la présente inven-25 tion, lorsqu*on les utilise conjointement avec un agent tensio-actif approprié tel que le dodécyl-sulfate de sodium, des acides organiques simples tels que 1*acide citrique/acide malique/acide succinique Sont hautement virulicides contre les virus communs 30 des voies respiratoires dont les rhinovirus 16, IA et 86, le virus paragrippal 3 et l*adénovirus 5 sont des exemples spécifiques* En outre, des produits dans lesquels on utilise des tissus faciaux comme moyen de déploiement des compositions virulicides mention-35 nées sont hautement efficaces* ; 19 » » L1importance de 11invention réside dans le fait qulelle fournit la base permettant d1interrompre la chaîne d1 infection provoquée par les virus des voies respiratoires# Etant donné que les virus ne 5 reproduisent pas les cellules hôtes à l1extérieur, le degré d1inactivation qu1ont démontré les expérien- y ’ ces, constitue un moyen simple et pratique en vue de réduire la concentration des virus au voisinage d,une personne infectée par un virus des voies respiratoires, 10 ce qui, à son tour, permet de réduire sensiblement, le potentiel de propagation de 11infection.

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Afin d1illustrer plus spécifiquement les meilleurs effets obtenus conformément à 1*invention, on a procédé à des exemples supplémentaires en faisant varier la concentration des compositions acides choi-5 sies et en mesurant 1*activité virulicide après une et cinq minutes. Les résultats sont repris dans le tableau IV· En règle générale, les compositions acides rentrant dans le cadre de 1*invention exercent un.effet virulicide à un haut degré ; par exemple, 10 dans le cas des rhinovirus ou des virus paragrippaux, élles produisent une inactivation correspondant à une différence logarithmique de 2 ou plus, en une minute ou moins. Pour les adénovirus, ce temps d*inactivation sera de 5 minutes ou moins. En règle générale, 15 le degré d1 inactivation est plus important après 5 minutes quraprès 1 minute comme on peut d*ailleurs s*y attendre. Certaines contradictions mineures apparaissent dans les résultats mentionnés en raison de la marge d*erreur et de la nature du procédé d1 essai. 20 L*homme de métier comprendra que 1*efficacité est également influencée par la quantité de la composition disponible pour· le contact avec le virus, cette quantité dépendant, à son tour, de la nature du support.

Par exemple, comme indiqué dans le tableau IV ci-après, 25 ‘ un support relativement épais comportant de grands espaces vides, par exemple, la laine, peut être inefficace s*il n*est pas traité avec d1importantes quantités de la composition* D1autre part, une structure légère et relativement fermée telle qu*un tissu ou 30 une matière non tissée exigera une plus faible quantité de la composition. Toutefois, sur la base des essais décrits, on peut déterminer 1*efficacité d*une combinaison donnée de la composition et du support.

Par exemple, comme indiqué dans le tableau IV, 1*acide 35 citrique est efficace à des concentrations de S à 10% 24 (en addition). Le procédé adopté est décrit ci-après.

Pour ces exemples, on a obtenu les résultats relatifs à la valeur DXCT^q en utilisant des cellules WÎ-38 à faible passage des laboratoires 5 "Flow Laboratories, Inc.” que l*on a fait passer initialement au moins une fois pour assurer le potentiel de croissance. On a divisé les flacons dans le rapport de 1:2 et on les a ensemencés dans 96 plaques de cultures de tissus groupées en logements en 10 forme de puits ayant une surface de croissance de . base plate de 0,32 cm2, ces plaques étant fournies par "M.A. Bioproducts". On a incubé les cellules à 37°C sous une atmosphère de CO2 à 5% et, après 24 heures, on les a disposées en tapis à 80-90$ de la IS manière habituelle, leur aspect étant normal avant 1*utilisation lors du dosage. Le milieu (MM à 2%) , utilisé pour les deux dilutions et le maintien des cellules était le milieu "MEM EaglesM avec "Earles BSS" (ayec addition de glutamine, de gentamycine et 20. de sérum foetal de veau à 2%). Le rhinovirus IA a été fourni par le "National Institute of Allergy· and Infectious Diseases", Bethesda, Maryland, E.U.A. On a soumis une fiole à une croissance dans des cellules "WI—38" et on a procédé à la récolte après avoir 25 observé un effet cytopathogène de 4 deux jours v après 1*inoculation. On a récolté le virus et on en a • formé des parties aliquotes que l*on a ensuite congelées à -70°C pour les soumettre ultérieurement à un titrage dans des cellules WI-38 dans 96 plaques 30 groupées en logements.

Pour le dosage, on a éliminé le milieu des plaques en plaçant une gaze stérile entre chaque plaque et le couvercle et en retournant la plaque* Tous les six -logements utilisés ont-reçu 0,1 ml-de 35 MM à 2%. Aux logements devant être utilisés comme 25 témoins de cellules, on a ajouté une autre fraction de . 0,1 ml de MM à 2%% Aux cellules qui ont dû. recevoir les composés, on a ajouté, dans chacun des six logements, 0,1 ml. .de la dilution appropriée de matière* .

5 Pour la dilution initiale, on a mélangé le virus sou che dans le rapport de 1:2 avec MM à 2%m On a ensuite ajouté 100 micromillilitres de cette dilution de virus à un disque traité dans une boite de Petri. On a ap-' pliqué uniformément le virus sur un disque de tissu 10 en utilisant une seringue à microlitres* On a laissé subsister le virus sur le disque pendant une ou cinq minutes, puis on a ajouté 5 ml de MM à 2% au disque se trouvant dans la boîte de Petri et l*on a soumis ce disque à une légère agitation. On a retiré le dis-15 que et la.solution, on les a déposés dans un tube stérile et on les a agités en leur imprimant un mouvement tourbillonnaire pendant 30 secondes, ce qui m représente la première dilution* A partir du tube initial, on a formé trois dilutions décuples et l*on 20 a ajouté 0,1 ml des quatre dilutions aux cellules nWI-38n disposées en une seule couche. On a ‘utilisé six logements pour chaque dilution. On à soumis des témoins non traités à des essais à une et cinq minutes, avec et sans virus et l*on a également effectué un 25 titrage de virus avec chaque dosage* On a réincubé les plaques à 37°C dans une atmosphère de CO2 à 5% pendant la durée de 1*essai.

On a également constaté que des acides tels que 1*acide sulfamique et 1*acide phosphorique étaient 30 virulicides. Toutefois, on a constaté que ces acides dégradaient des supports tels que des tissus.

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m q, 28 REMARQUE : a Dans certains cas, en particulier, avec addition d1un agent tensio—actif, des effets cytopathiques ont empêché d1obtenir des informations utiles. Ces 5 effets sont décrits par Lennette et al. dans “Diagnostic Procedures for Viral, Rickettsial, and \ ’ Chlamydial Infections", 1979» 5e édition, page 67· * 29 (fl •η ό w +3 ΤΗ ο Φ Ο · +3 0\ θ' Ον •0 « Μ · -fl Ον Ον Ον •ri A 3 fl * * . ·» Ο ·γ) Ρ ·Η ον Ον ον Ον γΙ ·* ·Η S θ' Ον Ον Ον 3-0¾ ιη Λ A Λ Ρ © fl

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Etant donné que ces acides sont solubles dans l*eau, ils peuvent être appliqués très aisément en solutions aqueuses sur de nombreux substrats par immersionj enduction ou d* autres moyens classiques 5 tels que la pulvérisation ou 1*héliogravure. Lors— qu*on applique la composition sur les substrats, elle \ ' doit être utilisée en une quantité suffisante pour exercer 1*activité virulicide définie dans la présente * spécification# Bien que la limite efficace inférieure 10 des acides nlait pas été déterminée avec précision, en règle générale, pour une substance telle qu*un tissu facial ayant un poids de base se situant dans 1*intervalle de 10,41 à 14*04 kg/268 m2 (trois plis), on doit avoir une absorption d*au moins environ 2% 15 et, dé préférence, d*environ 5% d*acides tels que 1*acide citrique, calculé sur une base sèche# On peut également utiliser d* autres substrats tels que des matières non tissées#

En ce qui concerne d*autres substrats, la 20 préférence est donnée à ceux ayant une haute aptitude à 1*imprégnâtion# Comme on l*a indiqué, on pense que le faible effet virulicide obtenu avec des substrats tels que la laine est dû à 1*inaptitude de la composition virulicide à pénétrer dans le substrat# 25 Lorsqu*on utilise des mélanges d*acides, ceux-ci peuvent être en n*importe quelle proportion mais, de préférence, les mélanges contiennent au moins environ 0,2 à 10$ de chaque acide, calculé sur le poids du substrat après séchage# 30 Lorsqu*on fait intervenir des agents tensio- actifs, ceux-ci sont choisis, de préférence, parmi le groupe des agents tensio—actifs anioniques et leur quantité se situe entre environ 0,05 et 5$* calculé sur le poids du substrat après séchage# » 31 r

Lors de 1 * application des acides organiques à activité virulicide définis dans la présente spécification dans dTautres substrats ou supports tels que des lotions,-des collutoires, des crèmes, des pulvéri-5 sations, des vernis et analogues, la quantité efficace du point de vue virulicide peut être déterminée aisément en appliquant les procédés décrits dans la présente spécification* Par exemple, une différence logarithmi— .. ' que de 2 ou plus signifierait que 99% ou plus des virus 10 hôtes sont rendus inactifs au contact des compositions acides antivirales décrites et revendiquées dans la présente spécification* Dès lors, il est évident que la présente invention fournit un produit virulicide qui, dans des 15 conditions d* utilisation normale, réalise pleinement les objets et avantagés énoncés ci-dessus*

Bien que 1*invention ait été décrite en se référant à certaines de ses formes de réalisation spécifiques, il est évident que de nombreuses varian— 20 tes, modifications et variations apparaîtront à 1*homme de métief* à la lecture de la description ci-dessus* En conséquence, il est entendu que l1invention englobe ces variantes, modifications et variations rentrant dans 1*esprit et le cadre des revendications 25 ci-après*

Claims (21)

1· Procédé en vue d’interrompre ou de prévenir la propagation des virus des voies respiratoires, caractérisé en ce qu’il consiste à mettre une · 5 zone renfermant des virus en contact avec une composition à activité virulicide en une quantité efficace du point de vue virulicide, cette composition compre- · nant un ou plusieurs acides virulicides qui sont es-: sentiellement non toxiques et non irritants pour les 10 tissus humains ou animaux, chacun de ces acides ayant la structure suivante : R-CO OH où. R est choisi parmi le groupe comprenant un groupe alkyle inférieur ; un groupe alkyle inférieur subs-15 · titué ; un groupe carboxy-alkyle inférieur; un groupe carboxy-hydroxy-alkyle inférieur ; un·groupe carboxy-halo-alkyle inférieur ; un groupe carboxy-dihydroxy-alkyle inférieur ; un groupe dicarboxy—hydroxy-alkyle inférieur j un groupe alcényle inférieur ; un groupe 20 carboxy-alcényle inférieur·; un groupe dicarboxy— alcényle inférieur ; un groupe phényle et un groupe phényle substitué,

2, Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que ces compositions englobent égale-25 ment un agent tensio-actif choisi parmi le groupe comprenant les agents tensio-actifs non ioniques, cationiques et anioniques, 3* Procédé suivant l’une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que l’acide 30 est choisi parmi le groupe comprenant l’acide citrique, l’acide malique, l’acide succinique, l’acide benzoïque et leurs dérivés substitués, de même que des mélanges de deux de ces acides ou plus,

4· Procédé -suivant-la revendication._3, ca- .. 35 ractérisé en ce que l’agent tensio-actif est choisi « » parmi le groupe comprenant les alkyl-phénols polyoxy-éthylénés , les esters de'sorbitol polyoxyéthylénés, les sels d*ammonium quaternaire ou les sels esters de 1* acide sulfurique et les sels esters de 1* acide sul-fo-5 succinique ayant la structure suivante : / CHC09R1V · h/ j λ (RS03)M+ ou (R0S03)xM+, ou \;-03S-CHC02R2yχ 1° où. M* représente un cation d’un métal monovalent, bivalent ou trivalent ou encore un ion ammonium ou ammonium substitué, x est un nombre entier ; et R représente un groupe alkyle, tandis que R^ et R2 représentent des groupes aliphatiques à chaîne droite 15 ou ramifiée, identiques ou différents·

5· Procédé suivant la revendication 3? caractérisé en ce que l’agent tensio-actif est choisi parmi le groupe comprenant le sel de sodium de l’ester 1,4-bis-(2~éthylhexylique) de l’acide sulfosuccinique 20 et le dodécyl-sulfate de sodium.

6. Procédé suivant la revendication 3, caractérisé en ce que l’acide est un mélange de l’acide citrique et de l’acide malique. . 7« Procédé suivant la revendication 3? ca-25 ractérisé en ce que l’acide est un mélange de l’acide citrique et de l’acide benzoïque,

8. Procédé suivant la revendication 3* caractérisé en ce que l’acide est un mélange de l’acide citrique et de l’acide succinique. 30 9* Procédé suivant la revendication 3 3 ca ractérisé en ce que l’acide est un mélange de l’acide malique et de l’acide benzoïque.

10, Procédé suivant la revendication 33 caractérisé en ce que l’acide est un mélange de l’acide 35 malique et de l’acide succinique.

11· Procédé suivant la revendication 3, caractérisé en ce que 1*acide est un mélange de l’acide succinique et de 1*acide benzoïque. 12,.. Composition virulicide comprenant un· 5 support physiologiquement acceptable contenant, en une quantité efficace du point de vue virulicide, un ' * ou plusieurs acides qui sont non toxiques et non ir ritants pour les tissus humains ou animaux dans la quan-; ' tité utilisée, chacun de ces acides ayant la structure 10 suivante : R-C00H où. R est choisi parmi le groupe comprenant un groupe alkyle inférieur 3 un groupe alkyle inférieur substitué j un groupe carboxy—alkyle inférieur 3 un groupe 15 carboxy-hydroxy-alkyle inférieur ; un groupe carboxy- halo-alkyle inférieur 5 un groupe carboxy-dihydroxy- alkyle inférieur ; un groupe dicarboxy-hydroxy-alkyle * inférieur ; un groupe alcényle inférieur 3 un groupe carboxy-alcényle inférieur 3 un groupe dicarboxy— 20 alcényle inférieur 3 ainsi qu’un groupe phényle et vin groupe phényle substitué.

13. Composition suivant la revendication 12, caractérisée en ce qu’elle contient également vin agent tensio—actif choisi parmi le groupe comprenant 25 les agents tensio-actifs non ioniques, cationiques et anioniques,

14. Composition suivant la revendication 12, caractérisée en ce que l’acide est choisi parmi le groupe comprenant l’acide citrique, l’acide mali— 30 que, l’acide succinique, l’acide benzoïque et leurs dérivés substitués, ainsi que des mélanges de n’importe lequel de ces acides.

15. Composition suivant l’une quelconque des revendications 12 et 13, caractérisée en ce que - 35 l’agent tensio-actif est choisi parmi le groupe corn- * « prenant les alkyl-phénols polyoxyéthylénés , les esters de sorbitol polyoxyéthylénés, les sels d'ammonium quaternaire, les sels esters de l'acide sulfurique, les sels d'acides alkyl-sulfoniques et les sels esters 5 de l'acide sulfo-succinique ayant les structures suivantes : *. ‘ , ch9co9riX M+r I ) (RS03)M+, .ou (R0S03)x M+, ou \-O^-CHCO^ / χ 10 où M représente un cation d'un métal monovalent, bivalent ou trivalent, un ion ammonium ou un ion ammonium substitué i x est un nombre entier 5 et R est un groupe alkyle, tandis que R^ et R2 représentent des 15 groupes aliphatiques à chaîne droite ou ramifiée, identiquesou différents· l6· . Composition suivant la revendication 159 caractérisée eh ce que l'agent tensio-actif est choisi parmi le groupe comprenant le sel de sodium 20 de l'ester 1,4-bis-(2-éthylhexylique) de l'acide sulfosuccinique et le dodécyl-sulfate de sodium, r 17· Composition suivant la revendication 14, caractérisée en ce que l'acide est un mélange de l'acide citrique et de l'acide malique· 25 ' 18. Composition suivant la revendication 14, caractérisée en ce que l'acide est un mélange de l'acide citrique et de l'acide benzoïque, 19* Composition suivant la revendication H, caractérisée en ce que l'acide est un mélange de 30 l'acide citrique et de l'acide succinique,

20· Composition suivant la revendication 14, caractérisée en ce que l'acide est un mélange de l'acide malique et de l'acide benzoïque,

21. JComposition suivant la revendication 35 14, caractérisée en ce que l'acide est un mélange de » P 1*acide malique et de 1*acide succinique·

22. Composition suivant la revendication 14, caractérisée en ce que 1*acide est un mélange de 1*acide succinique et de 1*acide benzoi*que. 5 23, Produit virulicide comprenant un subs trat en nappe contenant, en une quantité efficace du * * point de vue virulicide, une composition comprenant f un ou plusieurs acides qui sont non toxiques et non irritants pour les tissus humains ou animaux dans la 10 quantité utilisée, chacun de ces acides ayant la structure suivante : R-C00H où R est choisi parmi le groupe comprenant un groupe alkyle inférieur ; un.groupe alkyle inférieur subs- 15 titué $ un groupe carboxy—alkyle inférieur 5 un groupe carboxy-hydroxy-alkyle inférieur 5 un groupe carboxy- halo-alkyle inférieur ; un groupe carboxy—dihydroxy- * alkyle inférieur ; un groupe dicarboxy—hydroxy—alkyle inférieur ; un groupe alcényle inférieur j un groupe 20 carboxy-alcényle inférieur 5 un groupe dicarboxy-, alcényle inférieur ; de même qu’un groupe phényle et un groupe phényle substitué*

24· Produit suivant la revendication 23, caractérisé en ce que cette composition englobe égale— 25 ment un agent.tensio-actif choisi parmi le groupe comprenant les agents tensio-actifs non ioniques, cationiques et anioniques.

25. Produit suivant l’une quelconque des revendications 23 et 24, caractérisé en ce que le 30 substrat est choisi parmi le groupe comprenant les tissus cellulosiques, les tissus non tissés et les matières textiles.

26. Produit suivant la revendication 25, caractérisé en ce que l’acide est choisi parmi le 35 groupe comprenant l’acide citrique, l’acide succini- * « que, 1* a ci de benzoi'que et leurs dérivés substitués, de même que des mélanges de n*importe lequel de ces acides, cet acide étant présent en une quantité d*environ 2% ou plus, calculé sur le poids du substrat. ’ 5 27· Produit suivant la revendication 25, caractérisé en ce que le substrat est un tissu facial *4 *- cellulosique. - 28. Produit suivant la revendication 25, ; caractérisé en ce que 1*agent tensio-actif est choisi 10 parmi le groupe comprenant les alkyl-phénols polyoxy— éthylénés, les esters de sorbitol polyoxyéthÿiénés, les sels d*ammonium quaternaire, les sels esters de 1*acide sulfurique, les sels d*acides alkyl—sulfoni— ques, les sels esters de 1*acide sulfosuceinique ayant 15 les structures suivantes î , f2C02Rl\ (RS03)M , ou (R0S03)x M , ou ( j V-°3S-CHC02R2 A 20 ‘ · O- ^ j · où M représente un cation d*un métal monovalent, Γ bivalent ou trivalent·, un ion ammonium ou un ion ammonium substitué $ x est un nombre entier $ et R est un groupe alkyle, tandis que R^ et R2 représen-25 tent des groupes aliphatiques à chaîne droite ou ramifiée, identiques ou différents.

29. Produit suivant la revendication 25, caractérisé en ce que 1*.agent tensio-actif est choisi parmi le groupe comprenant le sel de sodium de l*es- 30 ter 1,4-bis-(2-éthylhexylique) de 1*acide sulfosucci-nique et le dodécyl-sulfate de sodium.

30. Produit suivant la revendication 25, caractérisé en ce que l1acide est un mélange de lucide citrique et de l1 acide mâlique. i

31· Produit suivant la revendication 25, caractérisé en ce que 11acide est un mélange de 11acide citrique et de 11acide benzoïque· 32» .. Produit suivant la revendication 25, 5 caractérisé en ce que 11acide est un mélange de 11acide citrique et de 11acide succinique1 - 33· Produit suivant la revendication 25, j ; caractérisé en ce que 11acide est un mélange de 11aci de malique et de 11acide benzoïque. 10 · 34. Produit suivant la revendication 25, caractérisé en ce que 11acide est un mélange de l'acide malique et de l'acide succinique.

35. Produit suivant la revendication 25, caractérisé en ce que l'acide est un mélange de 15 l'acide succinique et de l'acide benzoïque.