LT3668B - Method using immobilised yeast to produce ethanol and alcoholic beverages - Google Patents

Method using immobilised yeast to produce ethanol and alcoholic beverages Download PDF

Info

Publication number
LT3668B
LT3668B LTIP932A LTIP932A LT3668B LT 3668 B LT3668 B LT 3668B LT IP932 A LTIP932 A LT IP932A LT IP932 A LTIP932 A LT IP932A LT 3668 B LT3668 B LT 3668B
Authority
LT
Lithuania
Prior art keywords
yeast
carrier
reactor
microparticles
process according
Prior art date
Application number
LTIP932A
Other languages
English (en)
Inventor
Heikki Lommi
Juha Ahvenainen
Original Assignee
Cultor Oy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Cultor Oy filed Critical Cultor Oy
Publication of LTIP932A publication Critical patent/LTIP932A/xx
Publication of LT3668B publication Critical patent/LT3668B/lt

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12GWINE; PREPARATION THEREOF; ALCOHOLIC BEVERAGES; PREPARATION OF ALCOHOLIC BEVERAGES NOT PROVIDED FOR IN SUBCLASSES C12C OR C12H
    • C12G3/00Preparation of other alcoholic beverages
    • C12G3/02Preparation of other alcoholic beverages by fermentation
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12CBEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
    • C12C11/00Fermentation processes for beer
    • C12C11/07Continuous fermentation
    • C12C11/075Bioreactors for continuous fermentation
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12CBEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
    • C12C11/00Fermentation processes for beer
    • C12C11/02Pitching yeast
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12CBEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
    • C12C11/00Fermentation processes for beer
    • C12C11/09Fermentation with immobilised yeast
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12CBEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
    • C12C12/00Processes specially adapted for making special kinds of beer
    • C12C12/04Beer with low alcohol content
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12GWINE; PREPARATION THEREOF; ALCOHOLIC BEVERAGES; PREPARATION OF ALCOHOLIC BEVERAGES NOT PROVIDED FOR IN SUBCLASSES C12C OR C12H
    • C12G3/00Preparation of other alcoholic beverages
    • C12G3/02Preparation of other alcoholic beverages by fermentation
    • C12G3/021Preparation of other alcoholic beverages by fermentation of botanical family Poaceae, e.g. wheat, millet, sorghum, barley, rye, or corn
    • C12G3/022Preparation of other alcoholic beverages by fermentation of botanical family Poaceae, e.g. wheat, millet, sorghum, barley, rye, or corn of botanical genus Oryza, e.g. rice
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12GWINE; PREPARATION THEREOF; ALCOHOLIC BEVERAGES; PREPARATION OF ALCOHOLIC BEVERAGES NOT PROVIDED FOR IN SUBCLASSES C12C OR C12H
    • C12G3/00Preparation of other alcoholic beverages
    • C12G3/02Preparation of other alcoholic beverages by fermentation
    • C12G3/024Preparation of other alcoholic beverages by fermentation of fruits other than botanical genus Vitis
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12GWINE; PREPARATION THEREOF; ALCOHOLIC BEVERAGES; PREPARATION OF ALCOHOLIC BEVERAGES NOT PROVIDED FOR IN SUBCLASSES C12C OR C12H
    • C12G3/00Preparation of other alcoholic beverages
    • C12G3/02Preparation of other alcoholic beverages by fermentation
    • C12G3/025Low-alcohol beverages
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/02Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C12P7/04Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
    • C12P7/06Ethanol, i.e. non-beverage
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12CBEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
    • C12C11/00Fermentation processes for beer
    • C12C11/07Continuous fermentation
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02EREDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10Biofuels, e.g. bio-diesel

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Cephalosporin Compounds (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Alcoholic Beverages (AREA)
  • Distillation Of Fermentation Liquor, Processing Of Alcohols, Vinegar And Beer (AREA)
  • Crystals, And After-Treatments Of Crystals (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Šis išradimas susijęs su etanolio gamyba, ir ypatingai su alkoholinių gėrimų gamyba, naudojant imobilizuotas, surištas su regeneruojama, medžiaga-nešikliu, mieles. Mielių imobilizaciją galima atlikti fermentacijos reaktoriuje, iki minimumo sumažinant riziką galimu užkrėtimu imobilizacijos metu.
Fermentacija yra menas, kuris pradėtas prieš rašytinę istoriją. Tačiau, tik 1866 m. Pasteras paskelbė savo darbus apie vyno fermentaciją, išanalizavo vyno gedimo priežastis ir nurodė tinkamus vyno darymo būdus.
Pagal tradicijas, fermentacija vyksta laukinių mielių pagalba, kurios randasi visuose vaisiuose ir uogose. Tam, kad gautų geros kokybės vynus, šiandien vis dažniau fermentacija vykdoma grynomis kultūrinėmis mielėmis. Visi šie bendri vyno gamybos aspektai ir mielių charakteristikos yra pateikiami rinkinyje Biotechnologija'', redaguojamame H.J.Rehm ir G.Red, 5t. : Maisto ir maisto produktų gamyba mikroorganizmų pagalba, Verlag Chemie, o taip pat Preskott'o ir Dunn'o Pramoninė mikrobiologija, 4 leidimas, 9 skyrius, 1982 redaguotas G.Reed'o, kurių pagrindu remiasi čia išdėstyta medžiaga.
Tradicinė periodinė fermentacija sunaudoja daug laiko. įprastai, gaminant vyną, alkoholinė fermentacija trunka mažiausiai 20-50 dienų. Nežiūrint to, kad naudojant suspenduotas mieles, nepertraukiamas procesas gali būti pagreitintas, yra sunku vykdyti procesą išvengiant mikrobinio užkrėtimo. Dar daugiau, norint padidinti fermentacijos greitį, mielių ląstelių koncentraciją fermentacinėje terpėje reikia padidinti, iš kitos pusės, reikia minimizuoti etanolio inhibiciją. Pavyzdžiui, obuolių sulčių periodinėje fermentacijoje, mielių ląstelių koncentracija misoje yra 1-2χ10θ iąstelių/ml.
Aukštesnė mielių ląstelių koncentracija gali būti pasiekta pvz. imobilizuojant mieles ant atitinkamų nešiklių, pakrautų į koloną. Fermentinei misai praeinant per imobilizuotomis mielėmis pakrautą koloną, mielių ląstelių, kontaktuojančių su misos tūriu, skaičius reaktoriuje žymiai išauga. Fermentacija vyksta greičiau ir dėl didesnio kontaktavimo ploto. Be to, naudojant kolonos reaktorių, sumažinama etanolio inhibicija, kadangi etanolį turintis produktas yra pastoviai pašalinamas nuo mielės ląstelės. Toks etanolio inhibicijos sumažinimas yra žymesnis, sudarant sandarios srovės sistemą.
Yra žinoma, kad mielių iąstelės gali būti įjungtos į kalcio aiginatą ir tokios imobilizuotas mielės gali būti naudojamos greitesnei fermentacijai. Daugybėje literatūros nuorodų aprašoma, kaip ši technika paprastai pritaikoma laboratorinėmis sąlygomis. Tačiau buvo bandyta šią techniką pritaikyti ir pramoninėms sąlygoms. Vienas iš labiausiai pavykusių bandymų, tikriausiai yra Kyowa Hakko iš Japonijos, kur imobilizuotas su alginatu mielės buvo pritaikytos maistinio etanolio gamybai.
Pramoninės gamybos atveju, pagrindinis sunkumas susidaro dėl dalelių susidarymo būdo imobilizacijos su alginatu metu. Procesas turi vykti toje gamybos vietoje, kur susimaišo mielių suspensija su natrio alginato tirpalu. Tokį mišinį padavus į kalcio tirpalą, alginatas nusėda ir tuo pačiu metu, viduje nusėdusių dalelių, absorbuojamos mielių ląstelės. Šios dalelės paprastai turi lašelių arba granulių formą.
Pramoniniai įrengimai, kurie naudojami mielių ląstelių imobilizacijai su alginatu, turi turėti specialiai sukonstruotus įrenginius, skirtus kaip tik tokių granulių formavimui. Dar daugiau, egzistuoja potenciali galimybė užkrėsti mieles laukiniais mikroorganizmais. Tai yra ypatingai pavojinga, kai yra svarbus gaminamo alkoholinio gėrimo kvapas ( pvz., alaus, vyno, sidro ir kitų panašių produktų ). Gaminant techninį ar kurui naudojamą etanolį, užkrėtimo kriterijus nėra toks svarbus, tačiau užkrėtimas turi įtakos produktyvumui.
f··.
Kitas didelis sunkumas, kaibant apie alginatinių granulių panaudojimą pramoninės gamybos atveju, yra mechaninis granulių atsparumas. Granulės yra minkštos ir lengvai susispaudžia. Naudojant dideles fermentacijos kolonas, gali kilti problemos, nes greitos žemyn tekančios srovės yra sunkiai valdomos. Iš kitos pusės, esant tipiškam fermentacijos modeliui, kai srovė teka į viršų, granulės greitai susidėvi. Taip pat, reaktoriaus darbas esant gniuždomai medžiagai, kai žemyn tekančios srovės veikiamos spaudimu, faktiškai yra negalimas.
Trečias sunkumas, susijęs su mielių ląstelių įtraukimu, yra difuziniai apribojimai, kurie mažina substrato prieinamumą kontaktuojant su mielėmis granulės viduje.
Pagaliau, jeigu sistema tampa taip užkrėsta ar kaip kitaip pažeista, kad nepertraukiamas procesas turi būti nutrauktas, visa kolonos medžiagos ( aiginatas kartu su mielėmis ) partija turi būti išmesta. Pakartotinas panaudojimas jau yra negalimas.
Taigi, pateikiamo išradimo tikslas yra sukurti nepertraukiamos fermentacijos kolonoje būdą, kuris nereikalauja kolonos medžiagos formavimo on-sitę ( vietoje). Kitas tikslas - sukurti būdą, kuris eliminuotų užterštumo šaltinius. Dar kitas tikslas yra sukurti tokio tipo būdą, kuris gali atlaikyti slėgį. Ir dar vienas šio išradimo tikslas - sukurti būdą, kur medžiaga-nešiklis gali būti regeneruojama ir antrą kartą panaudojama.
Kiti tikslai, kurie sudaro šio išradimo pagrindą, yra procesų sukūrimas, kurių metu alkoholis produkuojamas pakankamai dideliu greičiu taip, kad minimalus kiekis alkoholio, kurį pagamina maždaug 1 sluoksnio tūris, yra 5 procentai alkoholio per dieną.
Šie ir kiti išradimo tikslai yra suformuoti pristatant išradimą, kuris nurodytas kaip būdas pirminei etanolio produktų gamybai. Pagal šį būdą, vandeninis substratas, turintis ištirpusius mielių fermentuotus angliavandenius, kontaktuoja su mielėmis, Imobilizuotomis ant nešiklio, turinčio- anijonitinį pagrindą. Kontaktas gali būti geriau pasiektas praleidžiant vandenyje ištirpintą substratą per reaktorių, pakrautą mieiių imobilizuotų ant nešiklio, matricomis. Tačiau tai taipogi galima pasiekti naudojant imobilizuotas mieles reaktoriuje su skystomis, nepastoviomis matricomis.
Mielės-nešikito kombinacija yra sudaryta surišant mieles su nešiklio poringu paviršiumi. Nešiklis iš esmės napasiduoda gniuždymui. Jis sudarytas iš ištisos poringos matricos, arba iš turinčių duobutes ar tinklinę struktūrą poringų dalelių. Tokia matrica ar dalelės, savo ruožtu, yra sudarytos iš atskirų mikrodaleiių arba mikroskaidulų. Tokia nešiklio struktūra įgalina sudaryti maksimalų paviršiaus plotą nešamoms mielių ląstelėms. To pasėkoje susidaręs didelis mieiių ląstelių skaičius, tenkantis nešiklio vienetui, įgalina greitą fermentacijos procesą.
Nešiklis, sudarytas iš dalelių arba turintis matricos charakterį, gaunamas paprastai surišant, suveliant, suaudžiant, suiipdant ar aglomeruojant ( toliau tekste - surišant ) kartu mikrodaleles arba mikroskaidulas. Surišimas vykdomas sukuriant cheminius, adhezinius arba mechaninius ryšius kai kuriuose kontakto taškuose tarp individualių mikrodalelių arba mikroskaidulų. Cheminis ryšys yra įvykdomas cheminių kryžminių reakcijų, vykstančių šiuose taškuose, dėka. Adhezinis ryšys vyksta dėka mikrodalelių arba mikroskaidulų aglomeracijos arba sulipimo kartu, panaudojant pridėtinius ingredientus, tokius kaip termoplastinė derva. Mechaninis ryšys įvykdomas supainiojant, sumezgant skaidulas kontakto taškuose arba surišant kartu dalelių paviršius. Galutinėje formoje matrica bus sudaryta kaip ištisinė struktūra reaktoriuje, panaši į medvilninius pūkus ar tikrinį popierių, patalpintą i vamzdį. Taipogi galutinėje formoje, dalelės bus atskiros ir individualios.
Mikroskaidulos arba mikrodaleles yra sudarytos iš bet kokios anijonitinės mainų medžiagos, kuri gali būti suformuojama į reikalingas mikroskaidulas arba mikrodaleles nelygiu paviršiumi. Tokioms medžiagoms priklauso gamtinė arba regeneruota celiuliozė ar dirbtinis šilkas, kurie atitinka anijonitinės medžiagos charakterį. Tokios sintetinės anijonitinės mainų dervos kaip fenoiformaldebido derva, o taip pat anijonitinės mainų dervos agarozės ar dekstrino pagrindu. Pirmenybę turintis nešiklis yra poras turinti, anijonitinė derva celiuliozės ar dirbtinio šilko pagrindu, kuri yra chemiškai modifikuota, kad įgytų anijonitinės mainų medžiagos charakterį. Ypač pirmenybę įgyvendinimui turi dietilaminoetiipakeista celiuliozė, mikroskaidulos arba mikrodalelės, tvirtai surištos aglomeracijos būdu su polistirolu.
Manoma, kad elektrinės jėgos, atsirandančios tarp teigiamai įkrautos dervos ir neigiamai įkrautų mielių ląstelių yra svarbiausias momentas susirišant mielių ląstelėms su dervos paviršiumi. Toks susirišimas žymia dalimi minimizuoja mielių šarmėjimą ir dargi leidžia suartinti kontaktą tarp mielių ir vandens terpės.
Vandeninis substratas naudojamas kaip pradinė medžiaga ir yra sudaryta mažiausiai iš vandens ir fermentuojamo angliavandenio, tokio kaip hidrolizintas krakmolas, sacharozė, gliukozė, fruktozė, maltozė ar maltotriozė ( laktozė ir ksilozė ). Cukraus koncentracija turi būti pakankama, kad galėtų vykti nepertraukiamas alkoholio produkavimas, bet' neturi būti tokia aukšta, kad visiškai inhibuotų mielių frmentinį aktyvumą.
Remiantis šio išradimo metodika yra svarbu kontroliuoti tokį proceso parametrą kaip anglies dioksido išskyrimą fermentacijos metu. Anglies dioksodas gali išlikti skysto produkto srovėje arba pasišalinti. Būdas siūlo naudoti tarpusavyje sujungtų kolonų seriją, kurios yra sukonstruotos taip, kad dujų pašalinimas vyksta srovei ištekant iš kolonos viršaus. Kolonas veikiant slėgiu, gali susidaryti karbonizuoti produktai. Jeigu prie visų sujungtų kolonų yra naudojami čiaupai, gaminsis produktas be karbonatų. Veikiant koloną slėgiu, jis vienok neturi būti toks aukštas, kad susilpnėtų mielių fermentacija. Ši riba gali būti nustatyta tradiciniais metodais ir, paprastai, siekia apie 14 barų.
Be slėgio, galima keisti ir kitus proceso parametrus, kurie turėtų įtaką etanolio produkavimui ir produkto skoniui. Šie parametrai, įskaitant kolonos temperatūrą, vandeninio- substrato padavimo greitį, buvimo laiką kolonoje, substrato srovės kryptis kolonoje ( pagal žemės traukos kryptį ar prieš ją), srovės krypties periodinį reversiškumą, mielių kamieną, mielių koncentraciją ir reikalingą mielėms maistinių medžiagų kiekį, esantį vandeniniame substrate. Tinkami intervalai šiems parametrams yra šie: temperatūra nuo 0 iki +40θΟ, maistinių medžiagų padavimo greitis 0,0110 reaktoriaus matricos *ūrių ( BV )/val, išbuvimo laikas kolonoje apie 0,1100 vai ir mielių koncentracija nuo 10θ iki 1012 mielių ląstelių 1 litrui nešiklio. Gali būti naudojamos tokios mielių rūšys kaip Saccharomyces ar Candida. Paprastai šie parametrai įgalina gaminti 0,05:15% koncentracijos etanolį.
Būde, kurį pateikia šis išradimas, pirmiausia kolona pakraunama konkretaus nešiklio mase ir nešiklis gali nusistovėti pakrautoje kolonoje. Nešiklis yra sterilizuojamas tokiu būdu, kaip plovimas karštu šarmu. Po neutralizacijos steriliu praskiestu rūgšties tirpalu ir perplovimo steriliu vandeniu, kolona po to yra eliuuojama mielių terpe taip, kad mielės prisitvirtina prie nešiklio dalelių ir imobilizuojasi. Po šios pirminės procedūros, kolona su mielėmis naudojama taip kaip aprašyta aukščiau.
Dar kitas pateikiamo išradimo bruožas yra tas, kad gaunamas etanolio produktas yra tinkamas vartojimui. Toks produktas gaii būti vynas, sakė, alkoholiniai vaisių, uogų arba daržovių gėrimai, jų karbonizuoti variantai, alus ar šių išvardintų produktų variantai su mažu alkoholio kiekiu.
Vandeninis substratas, naudojamas vartojimo produktų gamybai, gaunamos iš tokių šaltinių, kaip vaisiai, uogos ar daržovių sultys arba ekstraktai, misa, hidroiizuota augalinė medžiaga arba vandeniniai sirupai, turintys fermentuojamą cukrų, gauti iš natūralių arba sintetinių šaltinių. Naudojamos sultys yra skystis, gautas išspaudžiant vaisius, uogas arba daržoves. Ekstraktas yra skystis, gautas sumaišant vaisių, uogų ar daržovių sultis su vandeniu ir apdorojant sutrynimo, virimo, spaudimo, maišymo arba panašiais būdais. Hidroiizuota augalinė medžiaga yra medžiaga, gaunama iš celiuliozės, hemiceliuliozės arba krakmolo, techniškai apdorojant tokiais metodais, kaip rūgštiniu, fermentiniu arba autohidroliziniu.
Kitas išradimo būdas įgalina gauti mažą alkoholio kiekį turinčius gėrimus, kurie turi mažiau negu 0,2 procentus alkoholio kiekio. Pagal šį būdą, naudojamos tokios pačios gamybos stadijos ir mielės-nešiklio medžiaga, kaip ir pagrindiniame gamybos būde. Tačiau cukraus kiekis ir vandeninio substrato padavimo greitis yra modifikuoti, norint gauti· “žemo alkoholio produktus, Maisto medžiagos padavimo greitis yra didinamas iki tokio laipsnio, kokį norima gauti mažesnės alkoholio koncentracijos dydį. Cukraus koncentracija yra taip pat atitinkamai reguliuojama, taip, kad gėrimas nebūtų per daug saldus, kai dar pakankamai yra cukraus, kurį galima, būtų fermentuoti į alkoholį.
išradimas dar apima mielių ir nešiklio kompoziciją bet kokioje formoje. Pirminės formos apima tas, kurios gaunamos i n-sity, kaip aprašyta aukščiau, ir išdžiovintos kombinacijos būdu. Steriliomis sąlygomis išdžiovinta kombinacija gali būti fasuojama, transportuojama į fermentinius įrengimus ir atstatomos jos savybės, pamerkus į vandeninę mitybinę terpę. Iš kitos pusės, sausa forma gali būti fasuojama namų ūkio tikslams.
Fig. 1 rodo supaprastintą srovės tekėjimo schemą, paruošiant imobilizuotų mielių kolonas.
Pateikiamas išradimas grindžiamas mielės-nešiklio sistema, aprašyta aukščiau, kuri yra nesugniuždoma ir tinkama sterilizacijai. Ypač taikomo nešiklio pavyzdys naudojamoje mielės-nešiklio sistemoje yra specifinė DEAE celiuliozė ( silpnas anijonitas ) aglomeruota su polistirolu. Šis nešiklis gaunamas pramoniniu būdu ir yra gerai žinomas fermentų imobilizacijai, kaip tipiška izomerazė ( žiūr. US Nr. 4 355 117 smulkesniems duomenims apie nešiklį).
Pateikiamos mieiės-nešikiio sistemos paruošimas nupieštas fig. 1, kur sausas nešiklis hidrolizuojamas vandenyje ir perpumpuojamas kaip substancija į kolonos reaktorių. Paruoštas DEAE celiuliozinis nešiklis yra stabilus rūgštinėje arba šarminėje aplinkoje ir gali išlaikyti iki 100°G temperatūrą. Tokiu būdu, jis gali būti paprastai sterilizuojamas kolonoje, pavyzdžiui, karštu šarmu. Kitos dervos gali būti atitinkamai sterilizuojamos panašiu būdu.
Mielių imobilizacija ant nešiklio yra atliekama po nešiklio sterilizacijos. Tai yra įvykdoma perpumpuojant kultūrinę, aktyvią mielių substanciją į reaktorių. Po to nešiklis absorbuoja mieles. Dėka optimalaus nešiklio paviršiaus kontūro mielių ląstelės prisitvirtina prie nešiklio paviršiaus. Jis yra šiurkštus, tinklinės struktūros ir egzistuoja kaip ištisinė ar sudaryta iš dalelių poringa matrica. Manoma, kad prisitvirtinimas vyksta dėl elektrinių jėgų tarp nešiklio anijonitinių grupių (turinčių teigiamą krūvį) ir mielės ląstelės sienelės, turinčios neigiamą krūvį.
Yra geriau, kai mielių ląstelės augančios ant nešiklio, sudaro tankį maždaug tokiu santykiu: 10θ -10’’2 ląstelių tenka litrui nešiklio, tačiau optimumas yra 109. Toks tankumas užtikrina pakankamą fermentinį aktyvumą paverčiant cukrų, esantį vandeniniam substrate, alkoholiu.
Nešiklis yra svarbus tuo, kad sukuria adekvatišką aplinką mielių augimui ir įgalina kontaktuoti su vandeniniu substratu. Nepasiduodantis gniuždymui anijonitinis nešiklis, kaip aglomeruota DEAE-celiuitozė, turi keletą naudingų savybių, lyginant su minkštais, gelio-pavidalo nešikliais, kaip algšnato granulės. Šios savybėms taip pat priklauso mažesnės masės perkėlimo problemos, lengvesnė imobilizacija, greitesnis sistemos paleidimas, lengvesnis maštabavimas, žymiai tobulesnė regeneracija ir didesnis nešiklio ilgaamžiškumas.
Laboratorinio eksperimento sąlygomis buvo tarpusavyje palyginti gelio tipo nešiklis, t.y. alginatinės granulės ir šiame išradime pateikiamas nešiklis - DEAE-celiuliozės granulės. Nešiklis, padarytas iš DEAEceliuliozės buvo labiau tinkamas etanolio gamybai ir su daugeliu substratų davė daug didesnį gamybos našumą. Šie rezultatai rodo geresnį kontaktą tarp mielės ir vandeninio substrato perdirbimo metu.
Nenorint atsiriboti nuo išradimo, manoma, kad sąveikos būdas tarp imobilizuotų mielių ir nešiklio gali paaiškinti padidėjusią išeigą. Elektroninės mikrofotografijos rodo, kad aiginato granulėse, mielėms augant kolonijomis kai kurios iš jų perauga kiaurai aiginatų sluoksnį iki granulės paviršiaus. Mielių kolonijos veikia kaip aktyvios vietos aiginato granulėse. Mikrofotografija rodo, kad DEAE-celiuliozės granulės yra poringos, tinklinės struktūros mikroskaidulų matricos. Tokia struktūra leidžia vandeniniam substratui pasiekti mielių ląsteles, augančias granulių viduje. Taigi, mielių ląstelės auga pakankamai laisvai ir atskirai vidinėse ir išorinėse mikroskaidulų kišenėse ir Šios individualios ląstelės veikia kolonoje kaip aktyvios fermentacijos vietos1'. Atsižvelgiant į tai ir naudojant išradimo pateikiamą nešiklį, daug daugiau mielių ląstelių, skaičiuojant nešiklio paviršiaus ploto vienetui, dalyvauja fermentacijoje. Mielių ląstelių imobilizacijos mechanizmas ant nešiklio, tokio kaip granuliuota DEAE-celiuliozė, paviršiaus siūlo daug naudingų aspektų. Pirma, mielių ląstelės yra pagrindinai visos ant nešiklio paviršiaus. Taigi, ląstelės veikia taip, lyg būtų laisvai suspenduotos tirpale.
Antra, nėra trukdymų esminei difuzijai ir fermentinis skystas substratas gali laisvai kontaktuoti su mielėmis. Taip pat maisto medžiagos, kurių reikalauja ląstelė palaikyti gyvybei, yra prieinamos be trukdymų, joms prasiskverbiant į nešiklio dalelių vidų.
Trečia, remiantis išradimu, nešiklio savybės taip pat leidžia lengvai paleisti sistemą arba regeneruoti, kadangi mielių ląstelių imobilizacija gali vykti in-situ ( toje pačioje vietoje ) kolonoje. Ši procedūra sumažina užkrėtimo riziką ir sudaro ištisos ( vienalytės ) sistemos sąlygas. Dar pridursime, kad kolona gali būti lengvai regeneruojama, kas yra svarbi ekonominė ypatybė. Regeneracija kartais yra tikslinga.kadangi būna cheminių teršalų arba nešvarumų iš vandens, gali būti mikrobinis užterštumas arba tų pačių imobilizuotų mielių mutacijos. Norint regeneruoti kolonos reaktorių, padarytą iš tokio nešiklio, kaip pavyzdžiui,
DEAE-celiuliozė, panaudotą koioną galima perplauti vandeniu ir sterilizuoti karštu šarmu arba kokia nors kita sterilizuojančia priemone, kaip organiniu reagentu vandenyje ar pan. Po plovimo ir neutralizacijos, nešiklį galima naudoti darbui ir pakartotinai imobilizuoti. Eksperimentiniuose tūriuose tokia kolona buvo naudojama mažiausiai trylika savaičių be regeneracijos poreikio. Laboratorinėmis sąlygomis panaši kolona buvo naudojama apie 30 savaičių.
iš esmės, ištisa reaktoriaus sistema, įskaitant ir nešikiį, gali būti sterilizuojama aukščiau paminėtais būdais. Kada aseptinės kultūrinės mielės yra pumpuojamos arba eliuuojamos per nešiklio matricą, mielėsnešiklio užkrėtimo rizika laukiniais bakterijų kamienais bus minimali. Prisijungus mielėms prie medžiagos kolonoje (atitinkamas krūvis yra apie 10θ-1012 mielių ląstelių/litrui nešiklio), koloną galima toliau sąlygoti lėtai pumpuojant mitybinę terpę, kaip amonio fosfato arba cukraus vandeninę terpę, per reaktorių maždaug vieną dieną.
Yra tikrai aišku, kad išradimo siūlomose visose mielės-nešiklio sistemose, vienas iš pateikiamų nešiklių, granuliuota DEAE-celiuliozė yra nepasiduodanti gniuždymui (nebrinkstanti). Ši savybė ledžia vykdyti daugybę variantų įvairiomis fermentacijos sąlygomis.
Esant normaliam atmosferos slėgiui, reaktonaus/nepertraukiamo veikimo fermentatoriaus sistema gali veikti tokiu būdu. Substratas paduodamas iš reaktoriaus dugno ir COg, kuris susiformuoja fermentacijos metu, laisvai išsiskiria iš nešiklio matricos. Pagal šią techniką vienok nepasiekiama ideali sandarios srovės sistema ( GO2 burbuliukai visada pažeidžia matricą ) ir toks atgalinis maišymasis sąlygoja etanolio inhibiciją ir žemesnį produktyvumą.
Išradimo pateikiama nepasiduodanti gniuždymui nešiklio sistema taip pat gali veikti esant slėgiui tam, kad susidaręs anglies dioksidas ištiktų ištirpusiame būvyje. Kolona taip pat gali dirbti tokiomis sąlygomis, kai srovė teka žemyn ir tokioje pakrautų matricų sistemoje pasiekiama sandarios srovės sistema.
Keletas slėgiu veikiamų kolonų gali būti sujungtos viena su kita, norint išvengti aukšto slėgio susidarymo. Toks serijinis išsidėstymas ypač naudojamas, jeigu galutiniame produkte pageidaujama didelė alkoholio koncentracija. Šis būdas duoda galimybę eksploatuoti esant tekėjimo srovei žemyn, išvengiant žalingo anglies dioksido susidarymo, kurio pasėkoje gali būti suardytas kolonos pakrovimo tolygumas, tai yra jo pasėkoje gali . susidaryti kanalai. Anglies dioksidas tarp kolonų yra pašalinamas iš srovės. Gali būti naudojamas ir mažesnio dydžio reaktorius, kadangi nereikia didesnės erdvės anglies dioksido pertekliui sumažinti ir atskirti.
Bendrai paėmus, bet koks fermentuojamas skystas substratas gali būti naudojamas kaip žaliavinė medžiaga etanolio produktų gamybai taip, kad bet kokios konkrečios priemaišos yra filtruojamos prieš paduodant jas Į imobilizuotų mielių koloną. Tipiškų substratų pavyzdžiai gali būti:
I) misa H) vaisių sultys
III) uogų sultys
IV) cukraus sirupas
V) krakmolo sirupas
VI) bet koks augalinės medžiagos hidrolizatas
VII) cukraus sirupai, praturtinti bet kokių vaisių, uogų, salyklo arba panašių ekstraktų kvapais
VIII) bet kokie vandeniniai substratai, kurie naudojami alaus, vyno ar likerio gamyboje.
Tipiška bendra cukraus koncentracija sudarys 100-250 g/i, įskaitant tiek pradinį, tiek pridėtą cukrų, priklausomai nuo žaliavos prigimties. Maisto medžiagos, reikalingos mielėms ( įskaitant fosforo, azoto ir kt. šaltinius ) turi būti išbalansuotos iki jos parenkamos kaip žaliavinė medžiaga. Cukraus koncentracija gali kisti plačiose ribose, priklausomai nuo to, kiek daug alkoholio ir kokio saldumo produktą gamybos pabaigoje tikimasi gauti. Jis taip pat gali turėti natūralius kvapus, aliejų ir pan. Cukrus išreiškiamas koncentracija nuo mažiausios reikšmės - apie 1 procentą svorio iki kiekio, kuris inhibuos fermentinę funkciją ( pvz: apie 30-40 svorio procentų ), pageidautina apie 4-25 svorio %, tenkančio bendram terpės svoriui.
Vandeninio substrato tekėjimo greitis per koloną yra svarbus parametras, kadangi etanolio gamybos našumas priklauso nuo tekėjimo greičio. Taip pat buvo parodyta, kad tekėjimo greitis apsprendžia mielių ląstelių skaičių, kurios lieka susirišusias su nešikliu. Esant dideliam tekėjimo greičiui, mielių ląstelių atsikabinimas didėja; taigi, etanolio gamyba taip pat gali priklausyti nuo ląstelių skaičiaus, surištų imobiiizuotoje sistemoje, ir ne tiktai nuo substrato tekėjimo greičio. Jeigu tekėjimo greitis yra per didelis, etanolio gamyba yra nepilna arba neužbaigta; kontroliuojant tekėjimo greitį, etanolio koncentracija gali būti kontroliuojama, tipiškai pasiekiant koncentraciją nuo 0,05 iki 15 procentų, santykinai su bendru vandeninio substrato tūriu. Sureguliavus tekėjimo greitį, galima gauti koncentraciją Šiose ribose.
Mielių ląstelių, kurios pasilieka surištos su nešikliu, kiekis atrodo yra santykinai stabilus esant mažiems tekėjimo greičiams , kas rodo, kad ląstelių augimas ir sušarmėjimas yra subalansuoti. Esant didesniems tekėjimo greičiams, šarmėjimas išauga, bet ląstelių skaičius grįžta į normalią padėtį, kai greitis sumažėja. Tekėjimo greitis turi būti pakankamai didelis, kad įgalintų mirusių ląstelių šarmėjimą, norint išvengti autolizės. Imobilizuotų mielių kolonos darbo metu, mielės išlieka gyvybingos dėl fermentuojamų cukrų vandeniniame substrate.
imobilizuotų mielių kolonos reaktorius gali būti veikiamas slėgiu pagal aukščiau pateiktą aprašymą. Darbinis slėgis turi būti pakankamai aukštas, kad išlaikytų ištirpusi COg kolonoje ir išvengtų galimo kanalų susidarymo, COp burbuliukams einant per imobilizuotų mielių koloną. Tipiškas slėgis yra 14 barų.
Atitinkama temperatūra yra tokia, kokia naudojama tradiciniuose periodinės fermentacijos procesuose. Intervalas yra nuo 0 iki 40°C, pageidaujamos ribos 10-35°C. Tokia temperatūra gali išlikti tiek šildant koloną su kaitinančiais šarvais, tiek paliekant koloną kambaryje su kontroliuojama aplinkos temperatūra, tiek šaldant. Žinoma, mielės išskiria tam tikrą kiekį šilumos, kuri taip pat gali būti panaudojama. Slėgis yra parenkamas atitinkamai pagal darbinę temperatūrą.
Po fermentacijos, išskirtas etanolinis produktas yra šaldomas iki laikymo temperatūros ir sukaupiamas buferio rezervuare įprastiniams pofermentaciniams apdorojimams, pvz. filtravimui, pasterizavimui ir fasavimui.
Etanolio gamybos sistema, aprašyta aukščiau, yra greitesnė ir patogesnė, negu tradiciniai fermentacijos procesai ir pagaminamas produktas gaunamas norimo skonio, ekvivalentiško gaunamo Įprastiniu fermentaciniu procesu, produkto skoniui. Pagal pateikiamą išradimą laikas, reikalingas fermentacijai, sumažėja nuo savaičių iki valandų, kas, įvertinant nepertraukiamą proceso prigimtį, suteikia plačias galimybes sutaupyti laiką ir išlaidas pramoninėje alkoholio ir alkoholinių gėrimų gamyboje.
Sekantys pavyzdžiai toliau iliustruoja daugybę šio išradimo aspektų. Vienok pavyzdžiai nereiškia, kad gali tapti šio išradimo apribojimais arba charakteristika, kadangi išradimas buvo anksčiau pilnai charakterizuotas.
Kolonos reaktoriaus paruošimas. Granuliuota DEAE-celiuliozė ( GDC ) pagaminta pagal US Nr, 4 355 117, kompanijos Finnish Sugar Co. Ltd., yra 315-840 μιτι dalelių dydžio, buvo naudojama kaip nešiklis 1-3 pavyzdžiams. Visuose eksperimentuose nešiklis buvo užpilamas, sterilizuojamas ir imobilizuojamas mielėmis pagal pateikiamą metodiką, naudojant GDC:
GDC kolonos ir imobilizuotu mielių paruošimo metodika. Pagal fig. 1, hidratacijos indas (1) pirmiausia iki pusės pripildomas vandens. Įjungiamas maišymas, ir sausas nešiklis ( GDC ) yra perduodamas į indą (1). Pasiekus visišką hidrataciją ( apie 5 vai. ), imobilizuotų mielių reaktorius (2) yra pripildomas iki pusės vandeniu ir nešiklio vandeninė masė iš hidratacinio indo (1) yra pernešama į reaktorių (2). Vandens lygio palaikymui reaktoriuje, dugne esantis vožtuvas sureguliuojamas taip, kad įėjimo ir išėjimo srovės reaktoriuje yra beveik tokios pačios. Po to nešiklis reaktoriuje yra sterilizuojamas praskiestu šarmu (3), jį pumpuojant per reaktorių (2). Nešiklio matrica po to yra praplaunama vandeniu ir neutralizuojama pumpuojant atitinkamai praskiestą rūgštį (4) per nešiklio matricą reaktoriuje (2), o pabaigoje nešiklis yra praplaunamas steriliu vandeniu.
Mielių masė yra paruošiama inde (5). Po to mielių masė maždaug per 1-4 vai. perpumpuojama per nešiklio matricą ir mielės pačios prisiriša prie nešiklio. Mielės dabar jau yra imobilizuotos ant nešiklio ir reaktorius (2) yra visiškai paruoštas fermentacijai.
Substratas iš indo (6) perpumpuojamas i reaktorių per dugno arba per viršūnės įėjimo angą. Reguliuojant tekėjimo greitį, galima kontroliuoti fermentacijos lygį. Lėtas tekėjimo greitis ( apie 1 matric. tūris/dieną ) reiškia ilgą kontakto laiką tarp nešiklio ir substrato ir tai duoda didelį alkoholio kiekį. Greitesnis tekėjimo greitis mažina alkoholio kiekį. Reaktorius gali dirbti esant atmosferiniam slėgiui, paduodant maisto medžiagas per dugne esančią įėjimo angą, anglies dioksidui atsiskiriant nuo sistemos ir laisvai išeinant per atskyrimo angą (7). Produktas surenkamas į priėmimo indą (8) iš kur jis prieš paskutinį išpilstymą į butelius yra toliau apdorojamas filtruojant ir t.t.
Sistemai veikiant padidinto slėgio sąlygomis, mitybinis substratas (6) paduodamas per viršūnėje esančią įėjimo angą tam, kad nešiklio matricą palaikytų pakrautoje formoje ir tuo išlaikytų sandarios srovės sistemą. Fermentacijos greitis kontroliuojamas ( srovės tekėjimo greičiu ) taip, kad tiekiamas slėgis būtų pakankamai aukštas, kad išlaikytų susidariusį anglies dioksidą ištirpusiame būvyje. Slėgio perteklius išleidžiamas per priėmimo indo vožtuvą (9) iki tokios ribos, kiek galutinis produktas gali išlaikyti anglies dioksido. Tam, kad išlaikytų slėgį ir ištirpusį anglies dvideginį nustatytose ribose, yra tikslinga turėti du ar daugiau panašių, sujungtų į seriją reaktorių (2) ir atpalaiduoti anglies dioksido perteklių tarp kiekvieno reaktoriaus.
pavyzdys. Vynas.
Obuolių sultys gali būti panaudojamos kaip substratas keturiems skirtingiems fermentacijos eksperimentams reaktoriaus kolonoje.
Pirmuose dviejuose eksperimentuose ( ir ) mielės buvo normaliai kultivuojamos kaip ir periodinės fermentacijos atveju, ir nešiklio matrica, kiekviena apie 500 ml tūrio, buvo paruošta su aukščiau aprašytu mielių ląstelių kiekiu.
Tuojau po to, kai mielės absorbavosi ant nešiklio matricos, į dvi kolonas ( diametras - 50 mm ir aukštis - 250-300 mm ) mitybinis substratas buvo paduotas 1 matric. tūris/per dieną tekėjimo greičiu. Substratas buvo pasterizuotos obuolių sultys, kaip mitybinis komponentas mielėms buvo pridėta 1 g/I amonio fosfato. Bendra cukraus koncentracija buvo pasiekta 220 g/ί, pridedant į obuolių sultis cukraus. Fermentacija pradėta lėtai ir po 3 savaičių išpiltas vynas turėjo 4,5-6,5% etanolio.. Nešiklis šiame eksperimente buvo 0,315-0,840 mm dalelių dydžio.
Anglies dioksido pašalinimas iš kolonos buvo sudėtingas dėl siauro kolonos viršaus. Kolona, kuri buvo pakrauta nešikliu, kurio daieiių dydis 0,470-0,840 mm, veikė geriau, kadangi anglies dioksidas galėjo laisvai prasikošti iš nešiklio/mieiės matricos. Iš abiejų kolonų truputis GDC buvo išpūstas su CO2 burbuliukais. Po 50 proceso dienų tekėjimo greitis buvo sumažintas iki 0,8 matric. tūrio per dieną, kas įtakojo etanolio kiekio išaugimą per sekančią savaitę nuo 5 iki 7-8%. Po 75 proceso dienų maisto medžiagos toliau buvo padidintos iki 2g/i, bet nebuvo pastebėtas efektas kolonose Aj arba «2·
Trečias eksperimentas Ag buvo įvykdytas kolonoje, kuri buvo platesnė ir trumpesnė. To pasėkoje, buvo sudarytos lengvesnės sąlygos
CO2 pasišalinimui. Kada nešiklio matrica buvo sterilizuota karštu šarmu, perplauta ir neutralizuota vandeniu bei Na-metabisulfatu, mielių imobilizaeija buvo vykdoma su žymiai aukštesne mielių ląstelių koncentracija. 500 ml GDG buvo naudojama 600 m! mielių masės, turinčios 150 milijonų ląst./ml. Prasisunkusių per koloną ląstelių buvo 5 milijon./ml, taigi, bendras imobilizuotų ląstelių kiekis buvo 9x1010 ląst. Tai sudaro 2x109 ląsf/ml GDG arba 5x10θ ląst/g GDG.
Prieš užpildant koloną obuolių sulčių substratu, vieną dieną kolona buvo eliuuojama mielių mitybinių medžiagų tirpalu. Fermentacija, palyginus su Ai ir buvo pradėta greitai ir sekančią dieną etanolio kiekis buvo jau 8%. Tekėjimo greitis buvo 1 BV/per dieną ir maisto medžiagų kiekis 1 g/1 sulčių. Nedidelis medžiagos kiekis iš kolonos buvo prarastas su COg išsiskyrimu.
Sumažėjęs maitinimo greitis po trijų savaičių buvo vėl išaugusio alkoholio kiekio priežastis. Po 1,5 mėnesio maisto medžiagų kiekis išaugo iki 2g/S, dėl ko toliau didėjo alkoholio kiekis ir sistema stabilizavosi esant 10% etanolio kiekiui trečio gamybos mėnesio metu.
Ketvirtas eksperimentas buvo įvykdytas 8 i reaktoriuje pagal tą pačią procedūrą, kaip ir A3. Reaktorius sukonstruotas taip , kad išėjimo linijoje yra sumontuota tinklinė plokštelė, sulaikanti bet kokias GDC daleles. Sistema stabilizavosi prie 10% alkoholio kiekio per savaitę. Iš 8 I reaktoriaus paimta produkto porcija toliau buvo pervesta į sekančią 500 ml koloną, siekiant padidinti etanolio kieki.
Visi eksperimentai buvo vykdomi kambario temperatūroje 20-23°G. Tuo atveju, kai antras reaktorius dirbo pakankamo slėgio sąlygomis, išlaikant ištirpusį CO2,produktas buvo putojančio šampano tipo vynas, kuris išfasavus į butelius su tuo pačiu slėgiu koks buvo fermentacijos eigoje, tolesnės fermentacijos buteliuose jau nereikalauja, ir tokiu būdu “šampano” darymo procesas yra mažiau komplikuotas.
pavyzdys. Alus.
Šiame pavyzdyje pirminė alaus fermentacija gali būti vykdoma imobilizuotų mielių kolonoje.
Kolonos paruošimas ir mielių imobilizaciją gali būti vykdoma pagal procedūrą, aprašytą ankstesniame skyriuje apie reaktoriaus paruošimą. 500 ml nešiklio matricos gali būti pakraunama stiklinėje kolonoje, kuri yra platesnė viršutinėje dalyje tam, kad lengviau atsiskirtų CO2. Misa gali būti paduodama per fermentacinės kolonos dugną. Paruošiamų mielių ląstelių koncentracija gali siekti 109 ląst./g GDG.
Šiame eksperimente gali būti panaudota tradicinė misa, skirta nestipraus (lager tipo ) alaus gamybos darymui. Misa gali būti gaminama iš 18 kg miežių salyklo ( pilsnerio tipo ), privedant galutinį tūrį iki 100 i misos ( 12,0°P ). Vandens ir salyklo mišinys užraugiamas viename-inde pagal suprogramuotą užpylimo būdą, su temperatūros išlaikymais: 48°C temperatūra 15 min, 63°C temp. 30 minučių, 72°G - 20 min ir 78°Cužraugimo pabaigoje.
Misa gali būti skaidrinama filtraciniame inde ir praplaunama 2 kartus 78°G temperatūros vandeniu. Misa gali būti virinama misos katile apie 90 min. Apynių spurgeliai gali būti pridėti virimo pradžioje ( bendras kiekis alfa-rūgščių turi būti apie 10 g j.Bei kokias virimo metu susidariusias nuosėdas galima atskirti centrifugavimu. Nuskaidrinta misa gali būti atšaldoma plokščiame šilumokaityje nuo 100°C iki 10°C.
Pateikiama parinkta misos sudėtis:
Pradinis ekstraktas 12,0 “Plato
Spalva 10.0 °EBC
Kartumas 25 EBU
pH 5,3
Laukiamas išeigos santykis 85%
Tačiau misos sudėtis gali varijuoti sekančiai:
Pradinis ekstraktas pH
6-18
4,5-5,5
Plato
Laukiamas išeigos santykis 65-100%
Misos fermentacija reaktoriaus kolonoje gali būti pradėta lėtai. Po vienos savaitės trunkančio proceso, greitis, kuris įgalina norimo alaus pagaminimą, bus mažesnis negu vienas matricos tūris /per dieną pamaitinimo greičio. Kolonos sąlygos buvo panašios į aprašytas pavyzdyje 1, gaminant vyną reaktoriuje A< ir A2.
pavyzdys. Sakė.
Šiame pavyzdyje parodyta žemą alkoholio kiekį turinčios sakės ( Japoniška ryžių degtinė ) gamyba. Buvo paruošta kolona ir mielės vėl Imobilizuotas pagal anksčiau aprašytą procedūrą, skyriuje apie reaktoriaus paruošimą.
Padarius substratą, ryžiai pirmiausia suskystinami veikiant juos garu ir hidrolizuojami aifa-amilaze ir amilo gliukozidaze. Gautas hidrolizatas buvo nufiltruotas, siekiant pašalinti visas mechanines priemaišas ir nesusihidrolizavusius likučius. Substratas galutinai atskiestas taip, kad gliukozės koncentracija padavimo į koloną metu sudarė 23%. Kolona buvo užpildyta 500 ml nešiklio. Kolona buvo 70 mm diametro ir diametro santykis su nešiklio aukščiu buvo 1:2. Palyginimas atliktas su Ga-alginato surištomis mielėmis. Abiejų fermentacijų pamaitinimo greitis, parametrai ir rezultatai yra pateikiami lentelėje.
Rezultatai įkrova GDGreaktorius Ca-alginato reaktorius
Fermentacijos 15 25
trukmė(dienos)
Temperatūra, °G 15-20 15-20
Etanolio kiekis 9,99 13.6
(iuris/tūryįe%)
Tekėjimo greitis 0,069 0,099
(matr. tūris/val)
Produktyvumas 5,44 10,62
(g/val/l-jkrovos) pavyzdys.Gėrimai, turintys mažą alkoholio kiekį.
Šiame pavyzdyje aprašyta tradicinių Skandinavijos gėrimų su mažu alkoholio kiekiu gamyba imobilizuotų mielių sistemoje.
Reguliuojant maitinimo greiti fermentacinėje reaktoriaus kolonoje, gaiš būti kontroliuojamas fermentacijos greitis, o taip pat gaunamas norimo kvapo ir alkoholio kiekio produktas.
Kolonos paruošimas ir mielių imobiiizacija atliekama pagal anksčiau aprašytą procedūrą, pateiktą ankstesniame reaktoriaus paruošimo skyriuje. Mielių ląstelių koncentracija siekia 109 ląst./g GDC.
Vandeninis substratas fermentacijai gali būti sudaromas sekančiai:
Kristalinis (baltas) cukrus 500g
Medus 125g
Minkštas rudas cukrus 625g
Dviejų citrinų sultys
Vanduo 101
500 m! nešiklio matrica, esanti stiklinėje kolonoje, eliuuojama substratu, paduodant jį iš apačios. Maitinimo greitis pradžioje gali būti 1 matricos tūris per 5-10 vai. ir fermentacijai stabilizavusis, pamaitinimo greitis gali būti reguliuojamas, paduodant 1 matricos tūrį per 1-5 vai., priklausomai nuo norimo, produkto alkoholio kiekio ir saldumo. Alkoholio kiekis gėrime gali varijuoti nuo 0,2-2,0 tūrių %. Palaikyti mielių gyvybingumą gali būti dedami, kaip mitybinė medžiaga, maži amonio fosfato kiekiai (10-100 m.d.)
Gamyba vykdoma kambario temperatūroje, kiti parametrai - kaip aprašyta aukščiau. Imobilizacijos reaktorius gali taip pat dirbti esant slėgiui bei žemoje temperatūroje. Po to, suisidaręs CO2 ištirpsta ir nereikia papildomai jo pridėti gale.
Be anksčiau nurodyto substrato, kaip substratas gali būti naudojamos ir kitos žaliavos - visi produktai, turintys fermentuojamus cukrus, kaip pvz.: salyklas, vaisiai ir uogos. Galutinis produkto kvapas prikiaisys nuo žaliavinės medžiagos, cukraus koncentracijos ir fermentacijos greičio.
pavyzdys. Mielių imobilizacijos ant kai kurių nešiklių demonstravimas.
Alaus gamybos mielės iš “Suomijos techninio tyrimų centro pramoninių mikro organizmų kolekcijos” (kolekcijos Nr, A-75050) buvo imobilizuotos ant dviejų dervų, pasižyminčių anijotinėmis mainų savybėmis.
Dervos: granuliuota DEAE-celiuiiozė, pažymėta kaip SPEZYME GDG 220 ir sintetinė anijonitinė derva, žymėta DUOLITE A 568.
Imobilizacija formuota pagal pateikiamą procedūrą:
Mielės jnkubuotos 48 vai. .salyklo ekstrakto terpėje 30°C temperatūroje. Derva sterilizuota plaunant 1M NaOH, praplauta buferiu ir perplauta steriliu vandeniu. 10 g sauso svorio dervos pripildyta 20 mm vidinio skersmens stiklinė kolona, įrengta su stiklinio šlako plokštele dugne. 100 ml mielių suspensijos praleista per koloną veikiant gravitacijos jėgoms, maždaug 3 matricų tūriai/val. greičiu, po to kolona buvo plaunama 100 ml sterilaus vandens.
Mielių suspensijos ląstelių koncentracija prieš ir po Imobilizacijos buvo nustatyta, skaičiuojant ant agarizuotos lėkštelės. Pagal gautą skirtumą, suskaičiuotas imobilizuotų ląstelių skaičius. Pateikiami rezultatai kiek imobilizuotų ląstelių tenka gramui dervos:
Derva Mielės Išeitinis sk. Imobiliz. sk.
SPEZYME® A-75050 2,3x108 2,1x108
DUOLITE® A-75050 2.3x108 2,2x108 pavyzdys. Nešiklio regeneracija.
Eksperimente naudotą kolonėlę su DEAE-celiulioze regeneruoja paduodant į kolonėlę karštą (apie 60°C) kaustinės sodos 2% tirpalą (NaOH) tol, kol nešiklis pabąla iki pastovios spalvos. Po to kolonėlę plauna steriliu vandeniu tol, kol išbėgusio vandens pH tampa lygus 10, o po to neutralizuoja natrio pirosulfitu iki pH 7. Po to kolonėlę skalauja steriliu vandeniu ir užpildo misa, turinčia mielių ląstelių (apie 101Q ląstelių/1 litrui nešiklio). Ląsteles augina 24 valandas aeruojamoje misoje, tokiu būdu sistema buvo paruošta substrato fermentacijai.

Claims (27)

  1. IŠRADIMO APIBRĖŽTIS
    1. Etanolio ir alkoholinių gėrimų, naudojant imobilizuotas mieles, gamybos būdas, besiskiriantis tuo, kad vandeninis substratas, turintis fermentinį cukrų, eidamas per mielių ląstelių, imobilizuotų ant nepasiduodančio gniuždymui ir pasižyminčio anijonitinėmis mainų savybėmis nešiklio paviršiaus reaktorių, gamina produktą, turintį etanolį.
  2. 2. Būdas pagal t punktą, besiskiriantis tuo, kad jis apima reaktoriaus pakrovimą vandeniniu mišiniu, sudarytu iš nepasiduodančio gniuždymui ir pasižyminčio anijonitinėmis mainų savybėmis nešiklio bei reaktoriaus paruošimą; pakrauto reaktoriaus sterilizavimą; pakrauto reaktoriaus eliuavimą mielių terpe tam, kad mielės imobilizuotųsi ant nešiklio; vandeninio substrato, turinčio fermentuojamus cukrus, perleidimą per užpildytą imobilizuotomis mielėmis reaktorių, gaunant etanolinį produktą.
  3. 3. Būdas pagal 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad dar jis apima eliuanto regeneravimą, susidariusio vandeniniam substratui perėjus per reaktorių, tokiu būdu pagaminant etanolinį produktą.
  4. 4. Būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad juo gamina vartojimui skirtą etanolinį produktą, o vandeninis substratas yra vaisių arba daržovių sultys, vaisių arba daržovių ekstraktas, javų grūdų ekstraktas arba misa, hidrolizuota augalinė žaliava arba cukraus sirupas.
    S Būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame nešiklis sudaro ištisinę poringą matricą arba duobėtas ar tinklines struktūras, poringas daleles, kur matrica arba dalelės turi struktūrą, suformuotą iš laisvai asocijuotų daugybės mikrodalelių arba mikroskaiduių, kurios yra chemiškai, adheziškai ar mechaniškai surištos kartu mažiausiai keliuose kontakto taškuose tarp atskirų mikrodalelių arba mikroskaiduių.
    8. Būdas pagal 5 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame mikrodaleles arba mikroskaidulas sudarančios dalelės yra sudarytos iš anijonitinės mainų dervos.
  5. 7. Būdas pagal 5 punktą, besiskiriantis tuo.kad jame mikrodaielės ar mikroskaidulos yra sudarytos iš anijonitinės dervos, atrinktos iš grupės, sudarytos iš gamtinės arba regeneruotos celiuliozes, pasižyminčios anijonitinėmis savybėmis arba fenol-formaldehidinės anijonitinės mainų dervos, arba agarozės anijonitinės mainų dervos, arba dekstrinų anijonitinės mainų dervos.
  6. 8. Būdas pagal 7 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame anijonitinė mainų derva yra gamtinė arba regeneruota celiuliozė, pasižyminti anijonitinėmis mainų savybėmis.
  7. 9. Būdas pagal 7 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame mikrodaielės arba mikroskaidulos surištos kartu adheziniais ryšiais.
  8. 10. Būdas pagal 7 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame nešiklis apima daleles, suformuotas iš mikrodalelių arba mikroskaidulų aglomeruotų su polistirolu, o anijonitinė mainų derva yra dietilaminoetilpakeista celiuliozė.
  9. 11. Būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad jis apima vandeninio substrato perėjimą per daugybę reaktorių, sujungtų į seriją, įgalinančių dujų atpalaidavimą iš tirpalo, eliuuoto iš kiekvieno reaktoriaus.
  10. 12. Būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame vandeninis substratas pereina per reaktorių, veikiant slėgiui, kuris įgalina pagrindinei susidariusio anglies dioksido porcijai išlikti ištirpusiame būvyje.
  11. 13. Būdas pagal 12 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame slėgimą visiškai reguliuoja gamybos metu, tokiu būdu gaminant karbonizuotus etanolinius produktus.
  12. 14. Būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad juo gamina pramoninį etanolį.
  13. 15. Būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad juo gamina vartojimui skirtą etanolį.
  14. 16. Būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame maitinimo greitį ir reaktoriaus darbo trukmės laiką parenka taip, kad gautų etanolio produktą, kuriame etanolio koncentracija sudarytų nuo 0,05 iki 15 tūrio % nuo bendro produkto tūrio.
  15. 17. Būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame vandeninio substrato tekėjimo srovės per reaktorių kryptis yra prieš gravitacinę jėgą.
  16. 18. Būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame vandeninio substrato tekėjimo srovė per reaktorių periodiškai keičia kryptį.
  17. 19. Būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad jame nešiklis yra ištisinė matrica arba daugybė duobėtų ar tinklinės struktūros poringų dalelių.
  18. 20. Būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad reaktorius yra kolona.
  19. 21. Būdas pagal 1 arba 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad jis dar apima fermentinio reaktoriaus su praleistom, neproduktyviomis mielėmis našumo regeneravimą, pašalinant neproduktyvias mieles nuo nešiklio, pakrauto kolonoje, taip pat pakrauto nešiklio sterilizavimą ir naujos mielių terpės į reaktorių užpylimą, siekiant imobilizuoti naujas mielių ląsteles ant nešiklio.
  20. 22. Kompozicija, tinkama naudoti fermentacijai, besiskiriantį tuo, kad ji turi mielių ląsteles, i mobilizuotas ant nepasiduodančio gniuždymui ir pasižyminčio anijonitinėmis mainų savybėmis nešiklio paviršiaus.
  21. 23. Kompozicija pagal 22 punktą, besiskirianti tuo, kad joje nešiklis turi daygybę laisvai asocijuotų mikrodalelių arba mikroskaidulų, kurios yra chemiškai, mechaniškai arba adheziškai surištos kartu mažiausiai keliuose inter-mikrodalellų arba inter-mikroskaidulų kontakto taškuose.
  22. 24. Kompozicija pagal 23 punktą, besiskiriantį tuo,kad joje mikroskaidulos arba mikrodalelės yra sudarytos iš anijonitinės mainų dervos.
  23. 25. Kompozicija pagal 23 punktą, besiskirianti tuo, kad joje nešiklis turi daugybę atskirų, duobėtų arba tinklinės struktūros poringų dalelių.
  24. 26. Kompozicija pagal 25 punktą, besiskirianti tuo, kad joje nešikilis turi daugybę poringų dalelių, o kiekviena dalelė suformuota įs individualių mikroskaidulų adheziniais ryšiais kartu surištų mažiausiai keliuose inter-mikroskaidulų kontakto taškuose termoplastinės dervos pagalba.
  25. 27. Kompozicija pagal 23 punktą, besiskirianti tuo, kad kompozicija yra ištisinė matrica.
  26. 28. Kompozicija pagal 22 punktą, besiskirianti tuo, kad ji yra sausoje formoje.
  27. 29. Kompozicija pagal 23 punktą, besiskirianti tuo, kad mikrodaleiės arba mikroskaidulos yra sudarytos iš adaptuotos celiuliozės arba viskozės, turinčios anijonitinių mainų savybių, sintetinės anijonitinės mainų dervos arba agarozės, arba dekstrinų pagrindu anijonitinės mainų dervos.
LTIP932A 1988-09-27 1993-09-03 Method using immobilised yeast to produce ethanol and alcoholic beverages LT3668B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/249,898 US5079011A (en) 1988-09-27 1988-09-27 Method using immobilized yeast to produce ethanol and alcoholic beverages

Publications (2)

Publication Number Publication Date
LTIP932A LTIP932A (en) 1995-03-27
LT3668B true LT3668B (en) 1996-01-25

Family

ID=22945484

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
LTIP932A LT3668B (en) 1988-09-27 1993-09-03 Method using immobilised yeast to produce ethanol and alcoholic beverages

Country Status (16)

Country Link
US (1) US5079011A (lt)
EP (1) EP0361165B1 (lt)
JP (1) JP2695942B2 (lt)
KR (1) KR0153762B1 (lt)
AT (1) ATE114721T1 (lt)
AU (1) AU629849B2 (lt)
CA (1) CA1336764C (lt)
DE (1) DE68919620T2 (lt)
DK (1) DK174923B1 (lt)
ES (1) ES2067510T3 (lt)
FI (1) FI87658C (lt)
GR (1) GR3015024T3 (lt)
LT (1) LT3668B (lt)
LV (1) LV10501B (lt)
NZ (1) NZ230564A (lt)
RU (1) RU2060277C1 (lt)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5314814A (en) * 1985-11-15 1994-05-24 Gist-Brocades Preparation of novel immobilized biocatalysts
FI895116A0 (fi) * 1989-10-27 1989-10-27 Cultor Oy Foerfarande foer framstaellning av en alkoholfri maltdryck.
DE4003404A1 (de) * 1990-02-05 1991-08-08 Moselland Eg Winzergenossensch Gaerprodukt mit vermindertem ethanolgehalt
US5612072A (en) * 1990-10-23 1997-03-18 Cultor Ltd. Process for the production of non-alcoholic or low alcohol malt beverage
DE4239612A1 (de) * 1992-11-25 1994-05-26 Cultor Oy Bioreaktor mit immobilisierten, Milchsäure-produzierenden Bakterien und dessen Verwendung in Fermentationsverfahren
GB9227134D0 (en) * 1992-12-31 1993-02-24 Fuller Jess P Cell support structure
CA2133789A1 (en) * 1994-10-06 1996-04-07 Ronald James Neufeld Immobilized-cell carrageenan bead production and a brewing process utilizing carrageenan bead immobilized yeast cells
ATE230017T1 (de) 1995-10-27 2003-01-15 Adriana Bravo Verfahren zur herstellung eines alkoholischen malzgetränkes mit stabilisiertem geschmack
KR100440723B1 (ko) * 1996-12-30 2004-10-02 오비맥주 주식회사 고정화효모를이용한맥주의제조방법
US6013491A (en) * 1997-08-06 2000-01-11 Martinez; Leticia Fibrous cellulose support containing adhered yeast for converting sucrose to glucose and fructose
DE19848623A1 (de) * 1998-10-21 2000-04-27 Cultor Corp Preiswerte Immobilisierungsmatrizen aus natürlichen Materialien
US20020197273A1 (en) * 2000-04-18 2002-12-26 Shozo Umezawa Antitumor/immunocompetent supplementary healthy foods
ATE542882T1 (de) * 2001-07-26 2012-02-15 Danisco Verfahren zur verbesserung des körpers und geschmacks von malzgetränken
US20030106437A1 (en) * 2001-10-19 2003-06-12 Pajunen Esko Juhani Method and apparatus for the continuous biocatalytic conversion of aqueous solutions, having one or more degassing stages
US20030162287A1 (en) * 2002-02-25 2003-08-28 Pentax Corporation Carrier for cell culture and method for culturing cells
DE10308864B4 (de) * 2003-02-28 2007-03-01 Paulaner Brauerei Gmbh & Co. Kg Neues Brauverfahren, damit gebrautes Bier und dessen Verwendung
WO2006085215A1 (en) * 2005-02-14 2006-08-17 Diageo Great Britain, Ltd. Method of preparing a beverage
DE602006012278D1 (de) * 2006-03-15 2010-04-01 Explora Lab Sa Verfahren zur Immobilisierung von Zellen auf Harzen
US8252566B2 (en) * 2008-05-20 2012-08-28 Jj Florida Properties Llc Ethanol production from citrus waste through limonene reduction
BRPI0908634A2 (pt) * 2008-05-20 2016-08-30 Jj Florida Properties Llc método para produzir etanol a partir de resíduos cítricos
US20100124584A1 (en) * 2008-11-20 2010-05-20 Benjamin Alexander Apparatus and method for continuous fermentation
DE112011102275A5 (de) 2010-07-06 2013-05-29 Agrargenossenschaft Münchehofe e. G. Verfahren zur Herstellung eines Düngemittels
US20200377831A1 (en) * 2017-04-19 2020-12-03 Pint At Home, Llc Systems and methods for processing non-fermented liquids
RU2743488C1 (ru) * 2020-01-28 2021-02-19 Олег Валентинович Синельников Способ улавливания компонентов на любом этапе процесса брожения либо на этапе после прекращения процесса брожения
FR3118061B1 (fr) * 2020-12-18 2023-07-14 Ifp Energies Now Procédé de production d’alcools avec un support sur lequel sont immobilisés des micro-organismes

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US435517A (en) 1890-09-02 Tucking-guide for sewing-machines

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5950313B2 (ja) * 1977-06-29 1984-12-07 東レ株式会社 微生物菌体固定化繊維およびその製造法
US4350765A (en) * 1979-06-13 1982-09-21 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Method for producing ethanol with immobilized microorganism
US4355108A (en) * 1980-05-22 1982-10-19 The Curators Of The University Of Missouri Ethanol production with an immobilized cell reactor
JPS56169590A (en) * 1980-05-30 1981-12-26 Jgc Corp Continuous alcohol fermentation by immobilized yeast
DE3021629A1 (de) * 1980-06-09 1981-12-17 C.H. Boehringer Sohn, 6507 Ingelheim Coimmobilisate aus gaerfaehigen hefen mit angekoppelten enzymen sowie ihre herstellung und anwendung
US4355117A (en) * 1980-10-08 1982-10-19 Nabisco Brands, Inc. Process for preparing agglomerated fibrous cellulose
CA1191098A (en) * 1981-07-13 1985-07-30 Minoru Nagashima Process for manufacturing alcohol by fermentation
JPS5959195A (ja) * 1982-09-27 1984-04-04 Shinenerugii Sogo Kaihatsu Kiko 固定化微生物菌体による連続アルコ−ル製造方法
JPS60186292A (ja) * 1983-10-21 1985-09-21 Res Assoc Petroleum Alternat Dev<Rapad> エタノ−ルの醗酵生産方法
US4698224A (en) * 1984-04-10 1987-10-06 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Production of alcoholic beverages
BR8505366A (pt) * 1984-10-29 1986-08-05 Amoco Corp Processo para fazer um sistema biocatalitico e sistema biocaralisador obtido
CA1321048C (en) * 1987-03-05 1993-08-10 Robert W. J. Lencki Microspheres and method of producing same
US4915959A (en) * 1988-05-09 1990-04-10 Suomen Kokeri Oy Method for the continuous maturation of fermented beer

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US435517A (en) 1890-09-02 Tucking-guide for sewing-machines

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
H. J. REHM, G. RED: "Biotechnology"
SAMUEL CATE PRESCOTT, CECIL GORDON DUNN: "Prescott & Dunns industrial microbiology", pages: 883

Also Published As

Publication number Publication date
US5079011A (en) 1992-01-07
DK472989D0 (da) 1989-09-26
EP0361165B1 (en) 1994-11-30
DE68919620T2 (de) 1995-05-11
DK174923B1 (da) 2004-02-23
JPH02276583A (ja) 1990-11-13
KR900004929A (ko) 1990-04-13
LV10501B (en) 1995-10-20
FI894205A0 (fi) 1989-09-06
FI87658C (fi) 1993-02-10
KR0153762B1 (en) 1998-10-01
LV10501A (lv) 1995-02-20
JP2695942B2 (ja) 1998-01-14
AU629849B2 (en) 1992-10-15
DK472989A (da) 1990-03-28
RU2060277C1 (ru) 1996-05-20
EP0361165A1 (en) 1990-04-04
LTIP932A (en) 1995-03-27
ATE114721T1 (de) 1994-12-15
CA1336764C (en) 1995-08-22
DE68919620D1 (de) 1995-01-12
ES2067510T3 (es) 1995-04-01
GR3015024T3 (en) 1995-05-31
AU4104289A (en) 1990-04-05
NZ230564A (en) 1991-07-26
FI894205A (fi) 1990-03-28
FI87658B (fi) 1992-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
LT3668B (en) Method using immobilised yeast to produce ethanol and alcoholic beverages
Kourkoutas et al. Immobilization technologies and support materials suitable in alcohol beverages production: a review
Margaritis et al. Advances in ethanol production using immobilized cell systems
Nedović et al. Aroma formation by immobilized yeast cells in fermentation processes
Maicas The use of alternative technologies to develop malolactic fermentation in wine
CN106635934B (zh) 一种嗜热型乳酸杆菌及人工添加该嗜热型乳酸杆菌的玉米浸泡方法
CN100497648C (zh) 玉米综合利用生产淀粉糖及无渣发酵燃料酒精方法
Bekatorou et al. Cell immobilization technologies for applications in alcoholic beverages
US4915959A (en) Method for the continuous maturation of fermented beer
EP1106679B1 (en) Process for producing fermentation product
EP0424794B1 (en) A process for the production of non-alcoholic malt beverage
Martynenko et al. Physiological and biochemical characteristics of immobilized champagne yeasts and their participation in champagnizing processes: A review
Tataridis et al. Production of sparkling wine with immobilized yeast fermentation
AU2010333043B2 (en) A method for wine filtration
JPH06319515A (ja) 非アルコール性ビールの製造方法とこの方法を実施するための装置
Linko et al. Continuous ethanol fermentation by immobilized biocatalysts
Hatti-Kaul Enzyme production
Queiroz et al. Optimization of the fermentation process for mead production: a review
JPS58149684A (ja) アルコ−ル製造法
MARWAHA et al. POSTHARVEST TECHNOLOGY OF FRUITS & VEGETABLES
MXPA03007565A (es) Soporte inerte fibroso para la fermentacion de cerveza clara y vino.
MARGARITIS and FAHAR JA MERCHANT
RU2239658C1 (ru) Способ получения биокатализатора для производства спиртосодержащих игристых напитков
CN111117820A (zh) 一种利用毕赤氏酵母菌株制备具有菠萝香味啤酒的方法
JPH0441598B2 (lt)

Legal Events

Date Code Title Description
MM9A Lapsed patents

Effective date: 19950903