KR970701262A - 2-케토-L-굴론산의 제조방법(Method for producing 2-keto-L-gulonic acid) - Google Patents

2-케토-L-굴론산의 제조방법(Method for producing 2-keto-L-gulonic acid)

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KR970701262A
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미네오 니와
요시마사 사이토
요시노리 이시이
마사루 요시다
히로미 하야시
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후지야마 아키라
후지사와 야꾸힝 고교 가부시키가이샤
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Abstract

본 발명은 L-소르보즈 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA 및 L-소르보손 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA를 함유하는 발현벡터; D-소르비톨로부터 L-소르보즈를 고수율로 생산할 수 있으며 2-케토-L-굴론산(이후 2 KLGA로 칭함)-분해활성이 전혀 없거나 낮은 숙주 미생물, 또는 상기 언급한 특성 이외에 L-굴론산-생산활성이 전혀 없거나 낮은 숙주 미생물을 상기 발현벡터로 형질전환시킴으로써 제조된 D-소르비톨로부터 2KLGA를 고수율로 생산할 수 있는 형질전환체; 및 이 형질전환체를 D-소르비톨을 함유하는 배지에서 배양시킴을 특징으로 하여 2KLGA를 제조하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따르면 L-아스코르빈산의 생산에 적합한 2KLGA를 간단한 배양공정에 의해 대량으로 용이하게 생산할 수 있다.

Description

2-케토-L-굴론산의 제조방법(Method for producing 2-keto-L-gulonic acid)
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 플라스미드 pUC18SD180의 제한효소지도이다.
제2도는 플라스미드 pUC19SD5의 제한효소지도이다.
제3도는 플라스미드 pF3, pF3 및 pF4의 제한효소지도이다.
제5도는 셔틀벡터 pFG14A의 구조를 나타낸 것이다.
제7도는 플라스미드 pSD5-RIBg의 제한효소지도를 나타낸 것이다.

Claims (24)

  1. L-소르보즈 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA 및 L-소르보손 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA를 함유하는 발현벡터.
  2. 제1항에 있어서, L-소르보즈 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA 및 L-소르보손 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA가 전사가 하나의 프로모터에 의해 연속적으로 일어나거나, 각각의 DNA의 전사가 상이한 프로모터의 조절하에서 일어나도록 구성된 발현벡터.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 프로모터가 L-소르보손 데하이드로게나제 유전자의 프로모터 부위 또는 프로모터 활성을 갖는 그의 일부분인 발현벡터.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 프로모터가 에스케리키아 콜리(Escherichia coli)로부터 유도된 발현벡터.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 프로모터가 에스케리키아 콜리 프로모터 tufB, λPL, trp 또는 tac인 발현벡터.
  6. 제1항 내지 제5항 중의 하나에 있어서, D-소르비톨로부터 L-소르보즈를 고수율로 생산할 수 있으며, 2-케토-L-굴론산-분해 활성이 전혀 없거나 낮은 숙주 미생물을 형질전환시키는데 적합한 발현벡터.
  7. 제1항 내지 제5항 중의 하나에 있어서, D-소르비톨로부터 L-소르보즈를 고수율로 생산할 수 있고, 2-케토-L-굴론산-분해 활성이 전혀 없거나 낮으며, L-요오돈산-생산 활성이 없거나 낮은 숙주 미생물을 형질전환시키는데 적합한 발현벡터.
  8. 제1항 내지 제7항 중의 어느 하나에 있어서, L-소르보즈 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA 및 L-소르보손 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA가 글루코노박터 옥시단스 T-100으로부터 유되된 상기 효소를 코드화하는 DNA인 발현벡터.
  9. 제1항 내지 제8항 중의 어느 하나에 있어서, L-소르보즈 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA 및 L-소르보손 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA가 각각 서열 리스트 SQ : ID No,1 및 SQ : ID No.2로 도시된 아미노산 서열을 갖는 발현벡터.
  10. 제1항 내지 제8항 중의 어느 하나에 있어서, L-소르보즈 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA 및 L-소르보손 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA가 각각 서열 리스트 SQ : ID No,3 및 SQ : ID No.4로 도시된 뉴클레오타이드 서열을 갖는 발현벡터.
  11. D-소르비톨로부터 L-소르보즈를 고수율로 생산할 수 있으며 2-케토-L-굴론산-분해활성이 전혀 없거나 낮은 숙주 미생물을 제1항 내지 10항 중의 어느 하나에 따른 발현벡타로 형질전환시킴으로써 수득되는, D-소르비톨로부터 2-케토-L-굴론산울 생산할 수 있는 형질전환체.
  12. D-소르비톨로부터 L-소르보즈를 고수율로 생산할 수 있으며 2-케토-L-굴론산-분해활성이 전혀 없거나 낮은 숙주 미생물을 L-소르보즈를 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA 및 L-소르보손 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA를 함유하는 발현 벡타로 형질전환시킴으로써 수득되는, D-소르비톨로부터 2-케토-L-굴론산울 생산할 수 있는 형질전환체.
  13. D-소르비톨로부터 L-소르보즈를 고수율로 생산할 수 있고, 2-케토-L-굴론산-분해활성이 전혀 없거나 낮으며, L-요오돈산 생산활성이 전혀 없거나 낮은 숙주 미생물을 제1항 내지 10항 중의 어느 하나에 따른 발현 벡터로 형질전환시킴으로써 수득되는, D-소르비톨로부터 2-케토-L-굴론산울 생산할 수 있는 형질전환체.
  14. D-소르비톨로부터 L-소르보즈를 고수율로 생산할 수 있고,2-케토-L-굴론산-분해활성이 전혀 없거나 낮으며, L-요오돈산 생산활성이 전혀 없거나 낮은 숙주 미생물을 L-소르보즈 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA 및 L-소르보손 데하이드로게나제를 코드화하는 DNA를 함유하는 발현벡터로 형질전환시킴으로써 수득되는, D-소르비톨로부터 2-케토-L-굴론산울 생산할 수 있는 형질전환체.
  15. D-소르비톨로부터 L-소르보즈를 고수율로 생산하고, 2-케토-L-굴론산-분해활성이 전혀 없거나 낮은 숙주 미생물.
  16. D-소르비톨로부터 L-소르보즈를 고수율로 생산하고, 2-케토-L-굴론산-분해활성이 전혀 없거나 낮으며, L-요오돈산 생산활성이 전혀 없거나 낮은 숙주 미생물.
  17. 제15항 또는 제16항에 있어서, 글루코노박터(Gluconobacter) 또는 아세토박터(Acetobacter) 속에 속하는 숙주 미생물.
  18. 글루코노박터 옥시단스 G624.
  19. 글루코노박터 옥시단스 NB6939.
  20. 제11항 내지 제14항 중의 어느 하나에 따른 형질전환체를 D-소르비톨을 함유하는 배지에서 배양하고, 수득한 배양물로부터 2-케토-L-굴론산을 수거함을 특징으로 하여, 2-케토-L-굴론산을 제조하는 방법.
  21. 일렉트로포레이션(electroporation)에 의해 제17항의 숙주 미생물을 형질전환시키는 방법.
  22. 제17항의 숙주 미생물을 D-만니톨을 함유하는 배지에서 배양함을 특징으로 하여, 일렉트로포레이션에 적합한 감응 세포를 제조하는 방법.
  23. 글루코노박터 속으로부터 유도된 플라스미드 pF2, pF3 또는 pF4.
  24. 셔틀 벡터 pFG5B,pFG14A 또는 pFG15A.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019960704615A 1994-02-25 1995-02-24 2-케토-L-굴론산의 제조방법(Method for producing 2-keto-L-gulonic acid) KR970701262A (ko)

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