KR950704475A - 분비 생성물에 의한 직접적인 세포 선별(direct selection of cells by se-cretion product) - Google Patents

분비 생성물에 의한 직접적인 세포 선별(direct selection of cells by se-cretion product)

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Abstract

세포를 그것의 표면에서 생성물에 특이적인 결합파트너에 커플링시키고 생성물이 분비 및 방출될때 특정 결합파트너에 의해 생성물이 포획되게 함으로써 효율적인 방식으로 세포가 분비 및 방출하는 생성물로 세포를 표지화시킬 수 있다. 그 다음엔 생성물-표지화된 세포를 원한다면 적합한 표지에 더욱 커플링시킬 수 있고, 생성물의 존재, 부재, 또는 양에 따라 분리할 수 있다.

Description

분비 생성물에 의한 직접적인 세포 선별(DIRECT SELECTION OF CELLS BY SE-CRETION PROOUCT)
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 덱스트란에 바이오티닐 및 팔미토일기를 도입하는 것에 대한 도해이다.
제2도는 N-히드록시숙신이미드(NHS) 에스테르와 염기성 형태의 일차 아미노기의 반응에 대한 도해이다.
제3a도 및 제3b도는 각각 바이오티닐덱스트란 및 바이오티닐팔미토일텍스트란으로 처리한 세포와 스트렙트아비딘의 결합에 대한 형광 활성화 세포 선별 분석 (FACScan)의 트레이스의 사진복사이다.

Claims (68)

  1. 세포의 분리가 생성물로 표지화되는 정도에 따라 이루어지는, 세포에 의해 분비되고 방출되는 생성물에 따라 세포를 분리하는 방법에 있어서, 세포의 표면을 포획부에 커플링시키고 세포를 생성물이 분비, 방출되고 특이적으로 포획부에 결합되는 조건하에서 세포를 배양시키는 단계, 결합된 생성물의 기초하에 세포를 분리하는 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 추가로 분리전에 생성물을 표지화시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제2항에 있어서, 생성물을 표지부로 표지화시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제3항에 있어서, 표지부는 생성물에 특이적인 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 표지부는 형광색소로 염색되고 분리는 세포선별(cell sorting)에 의하여 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제1항에 있어서, 표지부는 자화될 수 있고 분리는 표지부를 자화시킬 만큼 충분한 강도의 자기장에서 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 표지부는 약 5 내지 200nm의 전형적인 직경을 갖는 콜로이드 자기 입자를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제1항에 있어서, 포획부는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제8항에 있어서, 항체 또는 그것의 항원결합 단편이 이특이적인 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제1항에 있어서, 선택적으로 연결부를 통해서 포획부에 연결된 지질고정부를 통해서 커플링이 되는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제1항에 있어서, 선택적으로 링커를 통해서 포획부에 연결된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 통해서 커플링이 되는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제1항에 있어서, 선택적으로 링커를 통해서 세포표면상이 성분과 포획부의 직접적인 화학적 커플링을 통해서 커플링이 되는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제9항에 있어서, 항체와 세포의 특이적인 결합을 통해서 커플링이 되는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 세포에 의해 분비되고 방출되는 생성물로 세포를 표지화하는 방법에 있어서, 세포 표면을 포획부에 커플링시키는 단계, 생성물이 분비 및 방출되고 생성물이 포획부에 의해 포획되는 조건하에서 세포를 배양시키는 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제14항에 있어서, 생성물을 표지부로 표지화시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제15항에 있어서, 표지부가 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제14항에 있어서, 특이적인 결합 파트너는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 항체가 이특이적인 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 제14항에 있어서, 선택적으로 연결부를 통해서 특이적인 결합파트너에 연결된 지질고정부를 통해서 커플링이 되는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제14항에 있어서, 선택적으로 링커를 통해서 특이적인 결합파트너에 연결된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 통해서 커플링이 되는 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 제18항에 있어서, 항체와 세포외 특이적인 결합을 통해서 커플링이 되는 것을 특징으로 하는 방법.
  22. 세포에 의해 분비되고 방출되는 생성물을 포획할 수 있는 세포를 함유하는 물질의 조성물에서, 세포의 표면이 포획부에 커플링되고 특이적인 결합파트너가 합텐이 아닌 것을 특징으로 하는 조성물.
  23. 제22항에 있어서, 추가로 생성물에 커플링된 것을 특징으로 하는 조성물.
  24. 제22항에 있어서, 포획부는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인 것을 특징으로 하는 조성물.
  25. 제24항에 있어서, 항체가 이특이적인 것을 특징으로 하는 조성물
  26. 제22항에 있어서, 선택적으로 연결부를 통해서 포획부에 연결된 지질고정부를 통해서 커플링이 되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  27. 제22항에 있어서, 선택적으로 링커를 통해서 포획부에 연결된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 통해서 커플링이 되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  28. 제25항에 있어서, 항체와 세포의 특이적인 결합을 통해서 커플링이 되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  29. 제1항의 방법에 따라 분리된 세포 및 그것의 자손.
  30. 제1항의 방법에 따라 분리된 세포.
  31. 세포집단에서 다른 세포와 상대적으로 일정량의 생성물을 분비하는 세포를 식별하거나 계수하기 위하여 세포집단을 분석하는 방법에 있어서, 세포를 제14항에 따른 방법에 의해 표지화시키는 단계, 포획 생성물을 표지화시키지 않는 적어도 하나의 추가 표지로 세포를 표지화시키는 단계, 추가 표지와 상대적인 양의 생성물 표지를 검출하는 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
  32. 세포집단에서 분비활성의 분포를 결정하는 방법에 있어서, 세포를 제14항에 따른 방법에 의 해 표지화시키는 단계, 세포당 생성물 표지의 양을 결정하는 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
  33. 제14항에 있어서, 추가로 세포당 생성물 표지의 양과 타입을 결정하는 단계로서, 세포집단에서 분비 생성물 타입과 각 분비 생성물 타입에 대한 분비 활성의 분포를 결정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  34. 원하는 생성물을 분비하는 세포의 검출에 사용하기 위한 키트에 있어서, 적어도 하나의 고정부와 적어도 하나의 포획부로 이루어진 생성물 포획시스템, 및 적어도 하나의 표지부로 이루어진 것을 특징으로 하는 키트.
  35. 원하는 생성물을 분비하는 세포의 검출에 사용하기 위한 키트에 있어서, 적어도 하나의 세포 타입에 대한 적어도 하나의 항원인식부위 및 생성물에 특이적인 적어도 하나의 항원인식부위를 갖는 적어도 하나의 이특이적인 항체, 적어도 하나의 표지부로 이루어진 것을 특징으로 하는 키트.
  36. 제35항에 있어서, 적어도 하나의 이특이적인 항체 및 적어도 하나의 표지부가 단일 바이알 속에 있는 것을 특징으로 하는 키트.
  37. 제35항에 있어서, 적어고 하나의 이특이적인 항체가 세포표면 분자를 통해서 세포에 결합하는 것을 특징으로 하는 키트.
  38. 제37항에 있어서, 세포표면 분자는 천연적으로 존재하는 세포표면 단백질인 것을 특징으로 하는 키트.
  39. 제37항에 있어서, 세포표면 분자는 세포표면 마커인 것을 특징으로 하는 키트.
  40. 제39항에 있어서, 세포표면 분자는 CD4, CD8, CD19, CD20, CD14, CD15, CD16, CD45, 클래스 I MHC 분자 및 클래스Ⅱ 분자, CD34, CD38, CD33, CD56 T 세포리셉터, Fc리셉터, β2-마이크로글로불린, 및 면역글로불린을 구성되는 군으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 키트.
  41. 제34항에 있어서, 배양조건은 고점도 또는 겔 형성 배지를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  42. 제41항에 있어서, 배지는 젤라틴. 아가로스, 알키네이트, 및 그것의 조합으로 구성되는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 키트.
  43. 제37항에 있어서, 표지부가 항체인 것을 특징으로 하는 키트.
  44. 제43항에 있어서, 항체가 검출가능한 표지를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  45. 제44항에 있어서, 검출가능한 표지는 형광단, 방사성 동위원소, 발색단, 및 자기입지로 구성되는 군으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 키트.
  46. 제45항에 있어서, 표지부는 형광 활성화 세포선별에 의해 검출되는 것을 특징으로 하는 키트.
  47. 제37항에 있어서, 표지부는 제3항체에 의해 검출되는 것을 특징으로 하는 키트.
  48. 제37항에 있어서, 표지부는 디곡시게닌에 커플링되고 제3항체는 디곡시게닌에 특이적인것을 특징으로 하는 키트.
  49. 제47항에 있어서. 제3항체가 검출가능 표지를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  50. 제35항에 있어서, 추가로 생물학적 변형제를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  51. 제35항에 있어서, 추가로 세포-세포 교차오염을 감소시키는 포획 시스템을 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  52. 생성물을 분비하는 세포를 식별하는 방법에 있어서, 혼합된 세포집단을 적어도 하나의 첫번째의 이특이적인 항체와 결합시키는 단계로서 각 항체는 적어도 하나의 생성물과 세포표면의 분자에 특이적인 결합부위를 갖는 단계, 적어도 한 생성물을 세포가 분비하는데 충분한 조건하에서 그리고 충분한 시간동안 결합물을 배양하는 단계, 적어도 하나의 표지부를 첨가하는 단계, 적어도 하나의 표지부를 검출하는 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
  53. 제52항에 있어서, 추가로 혼합된 세포집단으로 부터 생성물을 분비하는 세포를 분리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  54. 제53항에 있어서, 세포표면분자는 천연적으로 존재하는 세포표면 단백질인 것을 특징으로 하는 방법.
  55. 제54항에 있어서, 단백질은 세포표면 마커인 것을 특징으로 하는 방법.
  56. 제55항에 있어서, 세포표면 마커는 CD4, CD8, CD19, CD20, CD14, CD16, CD15, CD45, 클래스 I MHC 분자 및 클래스Ⅱ 분자, CD34, CD38, CD33, CD56 T 세포리셉터, Fc리셉터, β2-마이크로글로불린, 및 면역글로블린을 구성되는 군으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  57. 제52항에 있어서, 배양조건은 고점도 또는 겔형성 배지를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  58. 제52항에 있어서, 표지부가 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  59. 제58항에 있어서, 항체가 검출가능 표지를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  60. 제59항에 있어서, 표지는 형광단, 방사성 동위원소, 발색단, 및 자기압자로 구성되는 군으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  61. 제60항에 있어서, 표지부는 형광 활성화 세포선별에 의해 검출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  62. 제61항에 있어서, 표지부는 제3항체에 의해 검출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  63. 제62항에 있어서, 표지부는 디곡시게닌에 커플링되고 제3항체는 디곡시게닌에 특이적인것을 특징으로 하는 방법.
  64. 제62항에 있어서, 제3항체는 검출가능 표지를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  65. 제64항에 있어서, 표지는 형광단, 방사성 동위원소, 발색단, 및 자기압자로 구성되는 군으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  66. 제65항에 있어서, 표지부는 형광 활성화 세포 선별에 의해 검출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  67. 제52항에 있어서. 표지부는 자화될 수 있는 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  68. 제67항에 있어서, 표지부는 자화될 수 있는 부분에 커플링된 제3항체에 의해 검출되는 것을 특징으로 하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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