KR950701974A - 신규한 효소 제제 및 그의 제조방법(novel enzyme preparations and methods for their production) - Google Patents

신규한 효소 제제 및 그의 제조방법(novel enzyme preparations and methods for their production)

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KR950701974A
KR950701974A KR1019940704357A KR19940704357A KR950701974A KR 950701974 A KR950701974 A KR 950701974A KR 1019940704357 A KR1019940704357 A KR 1019940704357A KR 19940704357 A KR19940704357 A KR 19940704357A KR 950701974 A KR950701974 A KR 950701974A
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네발라이넨 헬레나
사아렐라이넨 리트바
팔로헤이모 마르야
라흐티넨 타르야
파거스트룀 리하르트
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안티 쿠오카넨, 시스코 크누쓰-레에톨라
알코 리미티드(Alko Ltd.)
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Abstract

T. reesei xln1과 xln2유전자의 구조 및 단백질의 일차 구조가 설명된다. 헤민셀룰라제 효소가 풍부한 효소 제제가 설명된다. 이러한 효소 제제들은 또한 부분적으로 또는 완전하게 셀룰로스 분해 활성이 결여될 수 있다. 이러한 제제들은 조질의 정제되지 않은 상태로 사용될 수 있으며 특히 펄프 및 종이 제조에 유됴하다.

Description

신규한 효소 제제 및 그의 제조방(NOVEL ENZYME PREPARATIONS AND METHODS FOR THEIR PRODUCTION)
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 유전자를 결실시키기 위한 일반적인 전략을 나타낸 도면.
제2도는 pAL475의 5.7kb(kpnl)삽입물의 제한효소 지도를 나탄 도면. xln2 유전자의 위치가 화살표로 표시되어 있다. 서브클론 pALK573, pALK574, pALK570 및 pALK476에의 삽입이 분리선으로 표시되어 있다. 단편의 5′ 말단에서의 Smal위치가 pUC19의 폴리링커로부터 유도된다.
제3도는 T. reesei xln2 유전자의 뉴클레오타이드 서열을 나타낸 도면〔SEQ ID No. :1:〕. 코딩 대역은 대문자로 표시되어 있다〔SEQ ID No. :2:〕. 정제된 단백질로부터 얻어진 펩티드 서열이 밑줄 표시되어 있으며; 이중 밑줄 그어진 서얼을 이용하여 PCR 프라이머를 제조하였다. TATA 박스는 도트로 표시하였다. 추정적인 시그날 분해 부위를 화살표(↑)로 표시하고 N-글리코실화의 추정 부위는 삼각형 (▼)으로 표시하였다. 성숙한 단백질의 N-말단에 화살표(→)표시를 하였다. 활성부위와 관련 있을 것으로 추측되는 두개의 글루탐산을 박스 안에 나타내었다.
제4도는 xln2 유전자를 cbh1위치에 표적화시키기 위한 플라스미드인 플라스미드 pALK476을 도시한다. xln2 유전자는 그 자신의 프로모터의 통제하에 있다.
제5도는 형질전환에 사용되는 pALK476단편을 도시한 것이다. 1.9kb cbh1 5'-플랭킹 대약(Scal-EcoRl)은 cbh1-코딩 대역의 2.2kb상류로 부터 시작되며, 1.8kb 3'-대역(BamHI-EcoRdI)은 cbh1-코딩 대역 말단의 1.4kb하류로부터 시작된다. amidS 유전자는 p3SR2(3.1 kb SpeI-XbaI 단편)로 부터, xln2 유전자는 pALK475(5.Okb Smal 단편, 제2도 참조)로 부터 유래하였다. 단편 중의 xln2 유전자의 프로모터 대역은 2.3kb 크기였다.

Claims (23)

  1. 트리코더마 리제이(T. reesei) pI 5.5자일라나제의 아미노산 서열 (SEQ ID No. 4)을 코딩하는 핵산 서열 또는 상기 분자에 하이브리다이즈되는 다른 핵산 분자로 이루어지는, 분리된 핵산 분자.
  2. 제1항에 있어서, 상기 핵산 서열이 SEQ ID No.3의 DNA 서열의 핵산 서열인 분리된 핵산 분자.
  3. 트리코더마 리제이(T. reesei) pI 9 자일라나제의 아미노산 서열(SEQ ID No. 2)을 코딩하는 핵산 서열 또는 상기 분자에 하이브리다이즈되는 다른 핵산 분자로 이루어지는, 분리된 핵산 분자.
  4. 제3항에 있어서, 상기 핵산 서열이 SEQ ID NO. 1의 DNA 서열의 핵산 서열인 분리된 핵산 분자.
  5. 제1항 내지 4항 중 어느 한 항에 따른 분리된 핵산 분자를 함유하는 재조합 벡터.
  6. 제5항에 있어서, 상기 벡터가 플라스미드 및 직쇄상 DNA 중에서 선택되는 재조합 벡터.
  7. 제5항에 따른 재조합 벡터에 의해 형질전환된 재조합 숙주.
  8. 제6항에 있어서, 상기 숙주가 트리코더마(Trichoderma)인 재조합 숙주
  9. 제8항에 있어서, 상기 트리코더마(Trichoderma)가 T.reesei인 재조합 숙주.
  10. 제1항 내지 4항 중 어느 한항에 따른 분리된 핵산 분자를 함유하는 재조합 벡터로서, 상기 핵산 서열이 xlnl 프로모터, xln2 프로모터, cbh1 프로모터, cbh2프로모터, egl1 프로모터, 및 egl2프로모터 중에서 선택된 T. reesei 프로모터에 작동적으로 연결된 것인 재조합 벡터.
  11. 제10항에 따른 재조합 벡터에 의해 형질전환된 재조합 숙주.
  12. 제11항에 있어서, 상기 숙주가 Trichoderma인 재조합 숙주.
  13. 제12항에 있어서, 상기 Trichoderma가 T. reesei인 재조합 숙주.
  14. (1)T. reesei xln1 및/또는 T. reesei xln2를 코딩하는 재조합 구축물로 숙주 세포를 형질전환시키고; (2)상기 (1)단계의 숙주 세포로부터 xln1및/또는 xln2가 발현되는 조건 하에서 상기 숙주세포를 배양한 다음; (3)상기 배양 배지를 수집하는 단계로 이루어지는, 자일라나제 활성이 풍부한 효소 제제의 제조방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 숙주 세포가 한가지 이상의 내인성 셀루로스 분해효소를 유전학적으로 발현할 수 없는 것인 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 셀룰로스 분해효소가 CBHI, CBHII, EGI 및 EGII중에서 선택되는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 셀룰로스 분해효소가 CBHI인 방법.
  18. 제14항 내지 17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 숙주가 Trichoderma인 방법.
  19. 제18항에 있어서, 사익 TRichoderma가 T. reesei인 방법.
  20. 제7항 내지 9항 또는 11항 내지 13항 중 어느 한 항에 따른 숙주를 배양한 후 얻어진 배양 배지.
  21. 제20항에 따른 배양 배지를 정제, 건조, 농축 또는 고정화시킴으로써 유도된 생성물.
  22. 제20항에 따른 배양 배지 또는 제21항에 따른 유도된 생성물의 펄프 및 종이 산업에 있어서의 용도.
  23. 제20항에 따른 배양 배지 또는 제21항에 따른 유도된 생성물의 사료 산업에 있어서의 용도.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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