KR940005793A - 정제 콘도로이티나제의 제조법 및 의약조성 - Google Patents

정제 콘도로이티나제의 제조법 및 의약조성 Download PDF

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Abstract

분자량이 SDS-PAGE 및 겔여과법에 있어서의 약 100,000탈톤이고, N말단 아미노산이 알라닌이며, C 말단 아미노산이 프를린이고 결정화되기쉬운 정제 콘도로이티나제 ABC. 콘도로이티나제 ABC산생균체 추출물에서 핵산을 제거하고, 약가티온 교환수지와 강가티온 교환수지와를 사용하여 농도구배가 컬럼 크로마토그래피 처 리하여 결정화하여 얻는 정 제 콘도로 이 티 나제 ABC를 정 제하는 방법. 콘도로이티나제와 혈청 알부민, 젤라틴 또는 비온성 계면활성제로 되는 조성물 그 조성물이 안정성이 높고 주사제로서 추간판 헤르니아 치료제를 위하여 사용되는 것.

Description

정제 콘도로이티나제의 제조법 및 의약조성
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 본 발명의 콩도로이티나제 ABC결정 현미경 사진을 나타낸 것임, 제2도는 본 발명의 콘도로이티나제 ABC의 활성과 반응 pH와의 관계를 나타낸 것임, 제3도는 본 발명의 콘도로이키나제 ABC의 소정의 PH에 있어서 25℃에서 24시간 방치한 때의 pH와 잔존 활성과의 관계를 나타낸 것임.

Claims (26)

  1. 다음의 특성을 가지는 정제 콘도로이터나제 ABC.
    (i) 분자량이 SDS-폴리아크릴아미노겔 전기영동(SDS-PAGE)에 의한 측정(환원 및 비환원의 어느 것에 있어서도) 및 겔여과법에 의한 측정에서 약 100,000달톤임. (ii)등전점이 약 pH 8.2 내지 약 pH 8.5임. (iii)최적 pH는 8.0~8.2(기질; 콘도로이탄황산 C, 완충액: 도리스 염산완충액), 최적온도 37℃임. (iv)ZN2+, Ni2+, Fe3+, 및 Cu2+에 의하여 활성이 저해됨. (v) N 말단 아미노산이 알라닌이고, C말단 아미노산이 플로린임. (vi)SDS-PAGE에 의해 단일의 밴드를 나타내며, 고속액체 크로마토그래피-(켈여과 및 가티온 교환)에 있어서도 단일의 피크를 나타냄. (vii)엔도톡신을 실질적으로 포함하지 않고, 헥산, 프로테아제 함향은 검출한계 이하임. (viii)결정화 되기 쉬움. (ix)비활성이 300U/mg 이상임.
  2. 콘도로이티나제 ABC 산생 균체에서 콘도로이티나제 ABC를 추출하고 추출액을 정제함을 특징으로 하는 제1항 기재의 정제 콘도로이티나제 ABC의 제조방법.
  3. 제2항에 있어서 추출을 계면활성제 용액을 사용하는 정제 콘도로이티나제 ABC의 제조방법.
  4. 다음 공정으로 된 제1항의 정제 콘도로이티나제 ABC의 제조방법.
    (i)콘도로이티나제 ABC의 산생균체에서 효소추출액을 얻는 공정(공정 1). (ii)얻어진 효소추출액에서 헥산을 제거하는 공정(공정2). (iii)헥산이 제거된 효소추출액을, (a) 약가티온 교환수지를 사용하여 크로마토그래피 처리를 하여서 콘도로이티나 ABC를 흡착시켜 흡착된 그 효소를 용출시키고, 용출액을 강가티온 교환수지를 사용하여 크로마토그래피처리를 행하여서 콘도로이티나제 ABC를 흡착, 용출시키는 공정(공정(3-1) 또는 (b)강가티온 교환수지를 사용하여 크로마토그래피처리를 하고 콘도로이티나제 ABC를 흡착, 용출시켜, 용출액을 약가티온 교환수지를 사용하여 크로마토그래피처리를 하여 콘도로이타나제를 흡착, 용출시키는 공정(공정 3-2).
  5. 제4항에 있어서 공정 3-1또는 3-2에 있어서, 약가티온 교환수지로서 교환기가 카르복시 알킬기인 수지를 사용하며, 강가티온교환수지로서는 교환기거 얼칼가안 슈자를 성허눈 종재 콘도로이티나제 ABC의 제조방법.
  6. 제4항에 있어서 공정 1에서 콘도로이티나아제 ABC산생균체를 계면활성제 용액을 사용하여 추출하고 효소추출액을 얻는 정제콘도로이타나제 ABC의 제조방법.
  7. 다음 공정으로 된 제1항의 정제 콘도로이티나제 ABC의 제조방법.
    (i)콘도로이티나제 ABC의 산생균체에서 계면활성제 용액을 사용하여 추출하고 효소 추출액을 얻는 공정. (ii)얻어진 효소추출액을 약가티온 교환수지 또는 강가티온 교환수지의 어느 하나를 사용하여 크로마토그래피 처리를 하여서 콘도로이티나제 ABC를 그 수지에 흡착시키는 공정. (ii)그 수지에 흡착된 콘도로이티나제ABC를 용리액의 이용강도를 연속적으로 변화시켜서 용출하는 공정.
  8. 제1항의 측성과 침상 또는 주상 결정인 콘도로이티나제 ABC결정.
  9. 제8항에 있어서, 양 말단이 수산기인 구조를 가지는 폴리에테 사용하여 결정화시킨 콘도로이티나제 ABC결정
  10. 제1항에 있어서 다음의 결정 바로 메터를 나타내는 사방정계 또는 단사정계의 콘도로이티나제 침상 또는 추상결정.
  11. 콘도로이티나제 ABC와 혈팅알부민 또는 젤라틴과로된 콘도로이티나제 조성물.
  12. 제11항에 있어서. 용액상태로 하였을때 pH 5∼9를 나타내도록 조정되어 있는 조성물.
  13. 제11항 또는 제12항의 어느 한항에 있어서, 콘도로이티나제 비활성 300u/mg이상의 정제콘도로이티나제 ABC인 조성물
  14. 제11항 내지 제13항의 어느 한항에 있어서, 콘도로이티나제에 대하여 적어도 0.001배 중량의 혈청 알부민 또는 젤라틴을 함유하는 조성물.
  15. 제11항 내지 제13항의 어느 한항에 있어서, 정제 콘도로이티나제가 비활성이 300u/mg이상이고, 엔도톡신을 실질적으로 함유치 않으며, 핵산, 프로테아제 함량은 검출 한계 이하인 정제 콘도로이티나제 ABC조성물.
  16. 제11항 내지 제15항의 어느 한항에 있어서, 용액 또는 건조물인 조성물.
  17. 제11항 내지 제16항의 어느 한항에 있어서, 용액 상태에서 pH 5∼9를 나타내고 1∼100 mM의 생리학상 허용되는 완충제를 함유하는 조성물.
  18. 제17항에 있어서. 완충제가 염산, 수산화나트륨, 탈산니트륨, 탄산수소나트륨, 인산, 인산 2수소칼륨, 인산수소 2칼륨, 인산 2수소나트릅, 인산수소 2나트룸, 아미노초산. 안식항산나트륨, 구연산. 구연산나트륨,초산, 초산나트륨, 주석산, 주석산나트륨, 젖산, 젖산나트륨, 에탄올아민, 알기니 및 에틸렌디아민에서 된 군에 서 선택된 성분을 함유하는 완충제인 콘도로이티나제 조성물.
  19. 코도로이티나제 ABC와 혈청 알부민 또는 젤라틴으로된 의약 조성물.
  20. 콘도로이티나제 ABC와 혈청 알부민 또는 젤라틴으로된 조성물을 함유하는 주사제.
  21. 피. 비온성 게면활성제를 배합하고, 용액상태에서 PH 5∼9를 나타내도록 조정된 콘도로이티나제를 함유하는 조성물.
  22. 제21항에 있어서, 콘도로이티나제의 비활성이 300u/mg이상일 조성물.
  23. 제21항에 있어서, 비온성 계면활성제가 폴리옥시에틸렌 솔비탄 지방산 에스테르인 조성물.
  24. 제21항에 있어서, 비활성이 300U/mg 이상의 콘도로이티나제 1중량부에 대해, 비온성 계면활성제 0.6~300중량부를 가하고 10~50mm 인산완충액으로 pH 6~8로 조정한 조성물.
  25. 제10항에 기재된 조성물을 유효성분으로 하는 주사제가 주간판헤르니아치료제를 위한 용도.
  26. 제27항 기재의 수성용액 제제 주사제가 추간판 헤르니아 치료제인 용도.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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