KR940000998B1 - 유산균 발효액의 가수분해 분획물을 함유한 미백화장료 - Google Patents
유산균 발효액의 가수분해 분획물을 함유한 미백화장료 Download PDFInfo
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Abstract
내용 없음.
Description
본 발명은 유산균 배양액의 가수분해 분획물을 함유한 미백화장료에 관한 것이다.
일반적으로 피부가 검게되는 데는 여러가지 원인이 관여되고 있는데, 그 중에서도 가장 중요한 것은 아미노산의 일종인 티로신에 티로시나제(tyrosinase)라고 하는 효소가 작용하여 멜라닌이라는 흑색색소를 생성하는 것이다.
멜라닌이라는 흑색색소의 생성으로 인하여 피부 전체가 검어지거나 기미, 주근깨 등의 색소이상이 나타나며 이러한 것들을 방지하기 위하여 옛날부터 여러가지 미백 화장료가 연구 개발되어 오고 있다.
피부의 흑화를 방지하기 위하여 아스콜빈산, 코지산(일본특공 56-18569), 코지산 유도체(일본특개 56-7710), 글루타치온, 하이드로퀴논 등의 티로시나제 저해활성을 갖는 물질을 화장료에 배합함으로써 피부의 흑색화나 기미, 주근깨 등의 피부질환을 방지하는 방법이 일부 이용되고 있는데 색소침착, 피부의 흑화가 개선되지 않는 경우가 많고 피부에 대한 안정성면에서나 화장료배합시의 안정성면 등에서 나름대로의 문제점을 안고 있어 그 사용이 제한되고 있다.
최근 생약, 천연물, 동물의 장기 등에서 추출 분획물이 분리되어 사용되고 있는 것들도 있으나 값이 고가이고 효과가 확실하지 않은 경우가 많다.
본 발명은 이러한 것을 감안하여 이미 알려져 있는 미백물질들의 문제점들을 극복하고 보다 우수한 원료를 찾고자 자연의 여러가지 미생물들중에서 미백에 유효한 물질을 검색한 결과 유산균 배양액의 가수분해 분획물이 쥐의 멜라닌세포의 티로시나제의 생성을 저해하며 사람의 피부에 도포시 뚜렷한 미백효과를 발휘함을 발견하게 되었다.
미생물은 그 생육특성상 증식속도가 매우 빠르고 값싼 배지를 이용하여 인류에게 유용한 원료를 단시간에 얻을 수 있다는 점에서 항상 새로운 원료의 검색대상이 되어오고 있다.
본 발명은 미생물을 발효시켜 배양액을 얻고 그것을 가수분해하여 저분자량의 분획물을 얻고 이것을 화장료, 다시 말하면 스킨, 로숀, 크림, 팩 등에 첨가하는 것이다. 보다 구체적으로는 미생물 중에서 히아론산을 생성하는 유산균을 선택 배양하여 고농도의 히아론산과 유산이 생성된 발효액을 얻는다. 유산균 배양에 의해 고농도 히아론산과 유산이 생성된 발효액을 히아론산분해효소(시그마사 제품)로 처리하여 히아론산이 저분자량으로 가수분해된 유산균 발효액 가수분해산물을 얻는다. 이것을 원심분리하여 유산균을 제거시키고 상등액을 얻는다. 분리된 상등액은 열처리하여 효소 단백질 등을 변성시키고 변성 고형분을 여과시켜 제거한 후 분자량 6,000 한계의 한외여과막을 통과시켜 단백질, 미가수분해 히아론산 등의 불순물이 제거된 유효분획물을 얻는 것이다.
본 발명을 상세히 설명하면 유산(乳酸) 및 히아론산을 생성하는 균주로서 연쇄상구균인 스트렙토코커스 속의 이퀴(Streptococus equi), 같은 속의 쥬에피데미쿠스(Streptococcus zooepidermicus)등의 미생물을 이용한다. 스트렙토코커스 이퀴 KCTC 1873(1986. 8. 11 한국과학기술원에 기탁되어 있음, 동기관으로 부터 분양가능) 균주 및 스트렙토코커스 쥬에피데미쿠스 KCCM 32300(한국종균협회에 기탁되어 있음, 동기관으로부터 분양 가능) 균주를 제조예 1과 같은 조성의 배양액에 접종하여 pH 7.0-7.5, 온도 35-37℃, 통기량 1.0VVM을 유지하면서 5시간 배양한다. 이때 미리준비된 60%의 포도당용액, 10%의 펩톤용액 등을 펌프를 이용하여 배양액내에 일정수준으로 공급하여 주어 유가 배양 후 24시간만에 배양을 종결한다. 공지의 방법으로 히아론산과 유산을 분석하여 히아론산 3-8그람/리터, 유산 30-70그람/리터의 발효액을 얻는다.
발효액에 시그마사에서 판매되는 히아론산 가수분해효소(Type II hyaluronid ase, 양의 정낭에서 분리된 것)를 발효액 1그람 당 5단위를 넣고 37℃에서 2시간동안 가수분해시켜 점도가 상실된 발효액을 만든다. 가수분해 처리된 발효액을 히다찌 저온 원심분리기를 이용하여 8,000r.p.m.에서 20분간 원심분리하여 유산균이 제거된 발효액 상등액을 얻는다. 발효상등액을 모아 75℃의 수조에서 15분간 열처리하여 가수분해효소 및 발효액 중의 단백질을 변성시킨다. 열처리된 발효상등액은 도요사의 여과지에 통과시켜 변성고형분을 걸러내고 여액은 분자량 6,000 한계의 한외여과기에 통과시켜 분자량 6,000 이하인 분획을 모은다. 이 분획을 역삼투막을 이용하여 수분을 제거하여 배양액 기준으로 5배 고농축시켜 최종적으로 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 얻는다. 최종적으로 모아진 유산균 발효액의 고농축 가수분획물을 0.05-10%, 바람직하게는 0.25-1%로 화장료에 첨가한다.
아래의 제조예, 실시예 및 실험예들은 본 발명의 내용을 설명하나 본 발명의 내용이 여기에 한정되지 않음을 밝혀둔다.
[제조예 1]
(1) 미생물 배양
연쇄상구균인 스트렙토코커스 이퀴 KCTC 1873 균주를 박토트립톤 1.5%, 박토펩톤 0.5%, 식염 및 트리스 완충액으로 조성된 4리터의 배양액에 접조하여 pH 7.0-7.5, 온도 35-37℃, 통기량 1VVM을 유지하면서 5시간 배양한 다음 미리준비된 60%의 포도당용액, 10%의 펩톤용액 등을 펌프를 이용하여 배양액내에 포도당 농도가 6%, 프로테오스 농도가 1%로 일정수준을 유지하도록 공급하여주고 24시간동안의 유가배양후에 배양을 종결하여 히아톤산 8그람/리터, 유산 32그람/리터의 발효액을 얻었다.
스트렙토코커스 이퀴 KCTC 1873 균주와 동일한 방법으로 스트렙토코커스 쥬에피데미쿠스 KCCM 32300 균주를 배양하여 히아론산 3.2그람/리터, 유산 68그람/리터의 발효액을 얻었다.
(2) 배양액으로부터 유효분획의 분리
상기(1)에서 얻어진 유산균 발효액 5리터에 각각에 시그마사에서 판매되는 히아론산 가수분해효소(Type II hyaluronidase, 양의 정낭에서 분리된 것)를 유산균 발효액 1그람당 5단위를 넣고 37℃에서 2시간동안 가수분해시켜 점도가 상실된 발효액을 만들었다. 가수분해처리된 발효액을 히다찌 저온 원심분리기(Hitachi Aut omatic Refrigerator Centrifuge)에서 로타 RPR 9-2-770을 이용하여 7,500r.p.m.으로 20분간 원심분리하여 유산균체가 제거된 발효액 상등액을 얻었다. 발효액 상등액을 모아 75℃의 수조에서 15분간 열처리하여 가수분해효소 및 발효액 중의 단백질을 변성시키고 열처리된 발효상등액은 도요(Toyo Roshi)사의 여과지(Advantic To yo)에 통과시켜 유백색의 변성고형분을 걸러내고 여액은 분자량 6,000 한 개의 필터(DDS사)가 장착된 한외여과기(Millipore사)을 통과시켜 분자량 6,000 이하의 분획 4리터를 모았다. 모아진 분획을 다시 역삼투막(Millipore사)을 통과시켜 다량의 수분을 제거하여, 유산과 히아론산이 각각 153그람과 36그람(스트렙토코커스 이퀴 배양액), 326그람과 14그람(스트렙토코커스 쥬에피데미쿠스 배양액) 함유된 1리터씩의 고농축 가수분해 분획물을 얻었다.
본 발명에 따른 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 함유하는 화장료의 조제를 실시예에 의하여 나타내었다.
[실시예 1]
유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 함유한 화장료 중 유연화장수(스킨)의 처방예로 다음과 같이 조성하였다. 여기서 유산균 발효액의 가수분해 분획물은 제조예1(2)의 것을 말하며 스트렙토코커스 이퀴, 스트렙토코커스 쥬에피데미쿠스 두 균주의 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 각각 시험하였다.
[비교예 1]
실시예 1에서 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 첨가하지 않고 처방을 조성하였다.
[실시예 2]
유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 함유한 화장료 중 영양화장수(로션)의 처방예로 다음과 같이 조성하였다. 여기서 발효액의 가수분해 분획물은 제조예1(2)의 것을 말하며 스트렙토코커스 이퀴, 스트렙토 코커스 쥬에피데미쿠스 두 균주의 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 각각 시험하였다.
[비교예 2]
실시예 2에서 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 첨가하지 않고 처방을 조성하였다.
[실시예 3]
유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 함유한 화장료 중 영양크림의 처방예로 다음과 같이 조성하였다. 여기서 유산균 발효액의 가수분해 분획물은 제조예1(2)의 것을 말하며 스트렙토코커스 이퀴, 스트렙토코커스 쥬에피데미쿠스 두 균주의 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 각각 시험하였다.
[비교예 3]
실시예 3에서 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 첨가하지 않고 처방을 조성하였다.
[실시예 4]
유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 함유한 화장료 중 맛사지크림의 처방도 다음과 같이 조성하였다. 여기서 유산균 발효액의 가수분해 분획물은 제조예1(2)의 것을 말하며 스트렙토코커스 이퀴, 스트렙토코커스 쥬에피데미쿠스 두 균주의 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 각각 시험하였다.
[비교예 4]
실시예 4에서 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 첨가하지 않고 처방을 조성하였다.
[실시예 5]
유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 함유한 화장료 중 팩의 처방예로 다음과 같이 조성하였다. 여기서 유산균 발효액의 가수분해 분획물은 제조예2의 것을 말하며 스트렙토코커스 이퀴, 스트렙토코커스 쥬에피데미쿠스 두 균주의 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 각각 시험하였다.
[비교예 5]
실시예 5에서 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 첨가하지 않고 처방을 조성하였다.
[실험예 1]
멜라닌 생성 억제시험
제조예1(2)에서 얻어진 2종류의 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 흑화를 나타내는 마우스 유래의 멜라노마 세포 배양액에 첨가하여 티로시나제 억제 및 멜라닌 생성 억제시험을 하여 미백활성을 비교하였다.
멜라닌생성억제 확인 세포로는 마우스 멜라노마 B-16 세포(이하 B-16 세포)를 사용하여 확인하였으며 B-16 세포의 배양은 Eagle's MEM 배지에 10% 소태아혈청, 2.2그람/리터의 탄산수소나트륨, 100단위/리터의 페니실린, 100미크로그람/리터의 스트렙토마이신을 첨가하였고 37℃, 5% 이산화탄소하에 시행하였다.
유산균배양에서 얻어진 2종류의 최종분획물을 B-16 세포의 배양시 0, 0.05, 0.1, 0.25, 05, 1.0, 10%로 첨가하였으며 실험시에 B-16의 세포배양을 가, 나의 2군으로 나누어 실시하였다.
각 시험에 있어서 B-16 세포를 세포배양용 플라스크내 20밀리리터의 배지에 1.2×105/플라스크로 접종 후 2일에 한번씩 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물이 함유된 배양액을 갈아 주면서 7일동안 배양하였다.
증식된 세포를 트립신처리에 이해 플라스크 바닥에서 떼어낸 후 1,000r.p.m.으로 10분간 원심분리하여 모은뒤 B-16 세포의 탈흑화정도를 비교관찰 하였다.
탈측화정도의 기준은 다음과 같이 하였으며 유산균 발효액의 가수분해 분획물을 함유한 B-16 세포 배양에서 탈흑화정도의 결과는 표1과 같다.
탈혹화정도의 기준
+++ : 현저한 탈흑화를 보임
++ : 유효한 탈흑화를 보임
+ : 약한 정도의 탈흑화를 보임
± : 미미한 정도의 탈흑화를 보임
- : 탈흑화를 보이지 않음
[표 1]
B-16 세포 배양에서 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물 첨가에 따른 탈흑화 정도의 결과
[실험예 2]
사람의 피부도포시험
건강한 남녀 20명의 실험대상자의 양 팔 하박부에 1×1cm2의 부위를 각각 5부위, 5부위, 6부위씩 설정하였다. 실험대상 부위에만 자외선이 조사되도록 알루미늄 호일을 팔에 씌우고, 10cm의 거리에서 일본 도시바(주)제 FL20S BLB 램프 및 FL205 E-30 램프를 각 2개 동시에 0.8×107erg/cm3/회로 1일 1회씩 연속 3회 조사하였다. 조사건에 실험대상 부위를 70% 이소프로필알콜 수용액으로 잘 세척하였다. 조사후, 자외선 조사부위에 유산균 발효액의 가수분해 분획물을 함유한 실시예 1-5의 처방을 1일에 3회씩 도포하였으며 양팔의 1부위씩은 대조부위로 하여 전혀 처치를 하지 않았다. 3주 도포 후에 육안으로 색소 침착도를 판정하여 실시 및 비교예에 제시한 처방의 색소침착 억제 정도를 대조부위와 비교하여 현저한 효과, 유효, 다소유효, 무효의4단계로 평가하였다. 그 결과는 표 2와 같다.
[표 2]
유산균 발효액의 가수분해 분획물의 피부 색소침착 억제효과
* (가) 스트렙토코커스 이퀴 유래의 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 처방하여 시험한 것임.
(나) 스트렙토코커스 쥬에피데미쿠스 유래의 유산균 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 처방하여 시험한 것임.
Claims (6)
- 고농도의 유산 및 히아론산을 동시에 생성할 수 있는 스트렙토코커스(Streptococcus)속의 유산균을 배양하여 얻은 발효액의 고농축 가수분해 분획물을 함유함을 특징으로 하는 미백 화장료.
- 제1항에 있어서, 스트렙토코커스 속 유산균이 스트렙토코커스 이퀴(Streptoc occus equi, KCTC 1873), 스트렙토코커스 쥬에피데미쿠스(Streptococcus zooepider m icus, KCCM 32300)임을 특징으로 하는 미백 화장료.
- 제1항에 있어서, 가수분해 분획물이 분자량 6,000 이하의 히아론산 가수분해물과 유산을 함유함을 특징으로 하는 미백 화장료.
- 제1항에 있어서, 가수분해 분획물이 5배 농축물인 것을 특징으로 하는 미백 화장료.
- 제4항에 있어서,유산의 농도가 100g/1 이상이고 히아론산의 농도가 10g/1 이상임을 특징으로 하는 미백 화장료.
- 제1항에 있어서, 가수분해 분획물이 0.05-10%로 배합되어 있음을 특징으로 하는 미백 화장료.
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|---|---|---|---|
| KR1019910003587A KR940000998B1 (ko) | 1991-03-06 | 1991-03-06 | 유산균 발효액의 가수분해 분획물을 함유한 미백화장료 |
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|---|---|---|---|
| KR1019910003587A KR940000998B1 (ko) | 1991-03-06 | 1991-03-06 | 유산균 발효액의 가수분해 분획물을 함유한 미백화장료 |
Publications (2)
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Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR940000998B1 (ko) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000038647A1 (de) * | 1998-12-23 | 2000-07-06 | Esparma Gmbh | Mittel zum schutz der haut, enthaltend ein aus hyaluronsäure durch hydrolyse hergestelltes fragmentgemisch |
| US6719986B1 (en) | 1998-12-23 | 2004-04-13 | Esparma Gmbh | Hyaluronate lyase used for promoting penetration in topical agents |
-
1991
- 1991-03-06 KR KR1019910003587A patent/KR940000998B1/ko not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000038647A1 (de) * | 1998-12-23 | 2000-07-06 | Esparma Gmbh | Mittel zum schutz der haut, enthaltend ein aus hyaluronsäure durch hydrolyse hergestelltes fragmentgemisch |
| US6719986B1 (en) | 1998-12-23 | 2004-04-13 | Esparma Gmbh | Hyaluronate lyase used for promoting penetration in topical agents |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR920017633A (ko) | 1992-10-21 |
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