KR930701463A - 미지 비루스에 오염되지 않는 글리코스핀고리피드 혼합물의 제조 및 정제방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 말초 및 중추신경계에 대한 생물학적, 약리학적 특성의 변화없이, 잘 알려져 있지 않은, 생명을 위협하는 비루스에 결합되어 있는 오염물질이 없는 강글리오사이드 혼합물을 제조하는 방법에 관한 것이다.

Description

미지 비루스에 오염되지 않은 글리코스핀고리피드 혼합물의 제조 및 정제방법

본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

제1도는 본 발명의 방법에 대한 개략적인 다이아그램이고,

제2도는 본 발명의 방법의 중간과정에서 채취한 일부시료를 부넉하기 위한 웨스턴 블롯(Westen Blot) 기술에 의해 항-Prp_27-30항체를 사용하여 얻어진 결과를 보여주는 사진이고,

제3도는 본 발명의 방법의 여러 과정에서 채취한 일부 시료에 대한 소의 제놈성 DNA의 분석결과를 보여주는 사진이고,

제4도는 본 발명의 방법의 중간과정에서 채취한 일부 시료를 분석하기 위한 웨스턴 블록기술에서 항-MBP 항체를 사용하여 얻어 결과를 보여주는 시진이고,

제5도는 본 발명의 방법에 따라 제조된 강글리오사이드 혼합물의 실리카겔 크로마토그라피 분석결과 사진이고,

제6도는 본 발명에 따라 제조된 강글리오사이드 혼합물의 생물학적 활성을 보여주는 사진이고,

제7도는 본 발명의 중간과정에서 채취한 일부시료의 항-Prp_27-30항체와의 면역화학적 분석결과를 보여주는 사진이다.

Claims (33)

1. a) 강글리오사이드를 함유하는 조직을 아세톤으로 처리하여 리피드를 제거하고 아세톤 침전물을 생성시키는 단계; b) 상기 아세톤 침전물을 친수성물질로 부터 소수성물질을 분획시킬 수 있는 제1용매혼합물에서 현탁시키는 단계: c) 상기 분획혼합물을 여과시켜 제1액상을 얻는 단계: d) 상기 제1액상을 침전시켜 제1조생성물을 얻는 단계; e) 상기 제1조생성물을 용해시키고 상기 용해된 제1조생성물을 약 12의 pH에서 가열처리하는 단계: f) 상기 가열 및 용해된 제1조생성물을 친수성물질로 부터 소수성물질을 분획시킬 수 있는 제2용매혼합물로 제2분획처리하는 단계; g) 상기 제2분획혼합물을 분리하여 유기층을 제거하고, 수성층을 얻는 단계; h) 상기 수성층을 침전시켜서 제2조생성물을 생성하는 단계; i) 상기 제2조생성물을 용해시키고 냉각처리하여 제3조생성물을 생성하는 단계; j) 상기 제3조생성물을 강염기에 용해시키는 단계; k) 상기 용해된 제3조생성물을 중화시키는 단계; 1) 상기 중화 및 용해된 제3조생성물을 적어도 약 10kd의 분자량을 통과시키는 막으로 투석처리하여 강글리오사이드 혼합물을 생성시키는 단계로 이루어진 강글리오사이드 혼합물의 제조방법.
2. 제1항에 있어서, 상기 제1용매혼합물은 염화메틸렌, 메탄올 및 수산화 나트륨의 혼합물인 방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 아세톤 침전물을 함유하는 제1용매 혼합물은 약 30 내지 35℃에서 최소한 약 3시간 동안 가열처리되는 방법.
4. 제1항 내지 제3항중 어느 하나에 항에 있어서, 상기 제1조생성물의 침전은 염화칼슘과 아세톤을 첨가하여서 실시하는 방법.
5. 제1항 내지 제4항중 어느 하나에 항에 있어서, 상기 제1조생성물의 가열은 약 38 내지 43℃의 온도에서 약 4 내지 8시간 동안 실시하는 방법.
6. 제1항 내지 제5항중 어느 하나에 항에 있어서, 상기 제1조생성물은 물, 클로로포름 및 메탄올 혼합물중에서 용해되고, 가열된 후에, 물, 클로로포름 및 n-부탄올로 이루어진 제2용매혼합물이 첨가되는 방법.
7. 제1항 내지 제6항중 어느 하나에 항에 있어서, 상기 제2조생성물의 침전은 아세톤과 염화나트륨을 첨가하여서 실시하는 방법.
8. 제1항 내지 제7항중 어느 하나에 항에 있어서, 상기 제2조생성물의 용해는 메탄올 중에서 실시하는 방법.
9. 제1항 내지 제8항중 어느 하나에 항에 있어서, 상기 제3조생성물의 용해는 1N의 수산화나트륨중에서 실시하는 방법.
10. 제1항 내지 제9항중 어느 하나에 항에 있어서, 상기 강글리오사이드를 함유하는 조직은 소의 뇌조직인 방법.
11. 제1항 내지 제10항중 어느 하나에 항에 있어서, 상기 생성된 강글리오사이드 혼합물은 건조처리되어 최종 생성물인 강글리오사이드 혼합물을 생성하는 방법.
12. 제11항에 있어서, 상기 최종 생성물인 강글리오사이드 혼합물을 완충용액에서 현탁하고 멸균처리하여 멸균된 강글리오사이드 혼합생성물을 생성하는 방법.
13. a) 소의 뇌조직을 아세톤으로 처리하여 리피드를 제거하고 아세톤 침전물을 생성시키는 단계; b) 상기 아세톤 침전물을 메틸렌, 메탄올 및 수산화 나트륨의 제1용매혼합물에서 현탁시키는 단계; c) 상기 아세톤화합물을 함유하는 제1용매 혼합물을 여과시켜 제1액상을 얻는 단계: d) 상기 제1액상을 염화칼슘을 첨가하여 침전 처리시켜서 제1조생성물을 얻는 단계: e) 상기 제1조생성물을 물, 플로로포름 및 메탄올에 용해시키고 상기 용해된 조생성물을 약 12의 pH와 38 내지 43℃에서 최소한 약 4시간 내지 8시간 동안 가열처리하는 단계; f) 상기 가열 및 용해된 제1조생성물을 물, n-부탄올 및 클로로포름 혼합물에서 제2분획처리하는 단계: 9) 상기 제2분획혼합물을 분리하여 유기층을 제거하고, 수성층을 얻는 단계: h) 상기 수성층을 아세탄과 염화나트륨을 첨가시켜서 침전처리하고 원심분리하여 제2조생성물을 생성하는 단계, j) 상기 제2조생성물을 메탄올에서 용해 및 가열시키는 단계: j) 상기 용해 및 가열된 제2조생성물을 원심분리하여 상징액을 생성시키는 단계: k) 상기 상징액을 냉각시켜서 제3조생성물을 생성시키는 단계; l) 상기 제3조생성물을 약 1시간 동안 수산화나트륨에 용해시키는 단계: m) 상기 용해된 제3조생성물을 중화시키는 단계; n) 상기 중화 및 용해된 제3조생성물을 적어도 약 10kd의 분자량을 통과시키는 막으로 투석처리하여 강글리오사이드 혼합물을 생성시키는 단계로 이루어진 강글리오사이드 혼합물의 제조방법.
14. 제13항에 있어서, 상기 제3조생성물의 용해는 1N의 수산화나트륨에서 실시하는 방법.
15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 강글레오사이드를 함유하는 조직은 소의 뇌조직인 방법.
16. 제13항 내지 제15항중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 생성된 강글리오사이드 혼합물은 건조처리되어 최종생성물인 강글리오사이드 혼합물을 생성하는 방법.
17. 제16항에 있어서, 상기 최종생성물인 강글리오사이드 혼합물을 완충용액에서 현탁하고, 멸균처리하여 멸균된 최종 강글리오사이드 혼합생성물을 생성하는 방법.
18. 상기 제1항 내지 제17항중 어느 하나의 항에 따라 제조된 강글리오사이드 혼합물.
19. 강글리오사이드 GM₁, GD_1a, GD_1b및 GT_1b의 혼합물로 이루어진 상기 제1항 내지 제17항중 어느 하나에 따라 제조된 강글리오사이드 혼합물.
20. GM₁이 약 18 내지 24%, GD_1a가 약 36 내지 47%, GD_1b가 약 12 내지 18% 및 GT_1b가 약 16 내지 22%로 이루어진 상기 제19항에 따른 강글리오사이드 혼합물.
21. 제1항 내지 제17항중 어느 하나의 항에 있어서, 개개의 강글리오사이드 성분으로 강글리오사이드 혼합물을 분리하는 단계가 추가로 이루어진 방법.
22. 제21항에 있어서, 강글리오사이드 GM₁은 강글리오산이드 혼합물에서 분리시키는 방법.
23. 제22항에 따라 제조된 강글리오사이드 GM₁으로 이루어진 제재.
24. 활성성분으로서 상기 제18항 내지 제20항과 제23항 중 어느 하나의 항에 따른 유효량의 강글리오사이드 생성물과 제약적으로 허용가능한 담체 또는 희석제로 이루어진 말초와 중추신경계의 병리치료를 위한 제약적 조성물.
25. 제18항 내지 제20항과 제23항중 어느 하나의 항에 따른 강글리오사이드 생성물의 말초와 중추신경계의 병리치료를 위한 용도.
26. 제18항에 있어서, 비지의 비루스로 오염되지 않은 혼합물.
27. 제19항에 있어서, 미지의 비루스로 오염되지 않은 혼합물.
28. 제20항에 있어서, 미지의 비루스로 오염되지 않은 혼합물.
29. 비경구적 투여를 위한 상기 제24항에 따른 제약조성물.
30. 경피적 투여를 위한 상기 제24항에 따른 제약조성물.
31. 흡입 투여를 위한 상기 제24항에 따른 제약조성물.
32. 경구 투여를 위한 상기 제24항에 따른 제약조성물.
33. ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.