KR920701477A - 핵산의 증폭기술에 대한 개량 - Google Patents

Abstract

내용 없음

Description

핵산의 증폭기술에 대한 개량

본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

제1도는 상술한 바와 같은, 다시 말해 그 끝이 사용된 프라이머 A와B의 5'엔드에 의해 한정된 소위 말하는 오염물 핵산으로 출발하여 PCR에 의해 얻어진 종래의 대수 증폭 과정을 예시한 것이다. 제3도는 이 비교를 예시한 것이고, 상술한 바와 같이 위에정 특정한 것과는 다른 조건하에서 생성한 PCR생성물이 브롬화 에티듐으로 염색한 아가로즈겔(1.4%)에서 전기영동으로 분리될 때 본 발명에 따른 방법으로 얻어진 허위 양성의 제거를 나타낸 것이다.

Claims (11)

1. 핵산 시퀀스나 효소증폭을 포함한 핵산 시퀀스를 감지 및 동정하기 위한 방법에 있어서, 핵산을 추출하기 위해 생물학적인 샘플을 적당히 용해한 후에 상기 방법은 다음과 같은 단계로 되어 있는 것을 특징으로 하는 있는 핵산 시퀀스를 감지 및 동정하기 위한 방법.

   (1) 상기 생물학적 샘플을 37-42℃에서 활성인 적당한 시약과 접촉시키므로써 샘플에 존재하는 두가닥의 핵산 시퀀스의 5'엔드를 파괴하는 단계; (2) 상기(1)에서 얻은 샘플을 열에 안정한 DNA중합효소의 존재하에서 적당한 시약, 특히 감지될 표적 시퀀스의 증폭에 적합한 증폭프라이머와 접촉시키는 것에 의한 실제적인 증폭단계; (3) 증폭된 특이적 표적 시퀀스의 감지단계.
2. 제1항에 있어서, 오염물 시퀀스와 표적 시퀀스 사이의 판별용 지정시약인 상기 단계(1)의 시약은 약알칼리 매질에서 작용하는 적당한 화학적 생성물 및 효소로 된 그룹으로부터 선택한 것을 특징으로 하는 방법.
3. 제2항에 있어서, 효소는 5'-엑소뉴클리아제인 것을 특징으로 하는 방법.
4. 제3항에 있어서, 5'-엑소뉴클리아제는 람다 5'-엑소뉴클리아제인 것을 특징으로 하는 방법.
5. 제4항에 있어서, 상기 단계(2)의 증폭에 사용된 프라이머는 이들의 5'엔드에서 인산화되는 것을 특징으로 하는 방법.
6. 제1항에서 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 두가닥 핵산 시퀀스의 5'앤드의 파괴단계인 상기 단계(1)은 상기 단계(2)가 최소한 한번 반복되었을 때에 한번만 실시되는 것을 특징으로 하는 방법.
7. 제1항에서 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법의 단계(2)는 온도에 민감한 DNA중합효소의 존재하에 실시되는 것을 특징으로하는 방법.
8. 제1항에서 제7항 중 어느 한 항에 따른 감지방법을 실시하기 위한 효소조성물에 있어서, 이 조성물은 소위 오염물 시퀀스와 표적 시퀀스사이의 판별용 시약인 두가닥 핵산 시퀀스의 5'앤드를 파괴하는 시약과 열에 안정한 DNA중합효소를 포함하는 것을 특징으로 하는 효소조성물.
9. 제8항에 있어서, 상기 판별시약은 온도에 민감한 5'-엑소뉴클리아제인 것을 특징으로하는 효소조성물.
10. 제8항 또는 제9항 중 어느 한항에 있어서, 37-42℃에서 활성(온도에 민감)인 DNA중합효소를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 효소조성물.
11. 제1항에 제7항 중 어느 한 항에 따른 방법에 실시하기 위한 즉시 사용가능한 아웃피트, 키트 또는 통합어셈블리에 있어서, 최소한 하나의 적당한 프라이머 쌍과 선택적으로 최소한 하나의 프로우브의 적당한 시약 및 적당한 완충용액의 양외에 제8항에서 제10항 중 어느 한항에 따른 효소조성물의 적당량을 포함하는 것을 특징으로하는 아웃피트, 키트 또는 통합어셈블리.

    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.