KR920009414A - 소마토트로핀 및 부위조종 돌연변이유발을 수행하는 방법 - Google Patents

소마토트로핀 및 부위조종 돌연변이유발을 수행하는 방법 Download PDF

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KR920009414A
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Abstract

내용 없음

Description

소마토트로핀 및 부위조종 돌연변이유발을 수행하는 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 제조합체 돼지 소마토트로핀(recombinant porcine somatotropin; rpST)DNA의 제한지도이다,
제2도는 플라스미드 pEFF-902의 구조 및 제한지도이다,
제3도는 pGHGEM3Z의 구조 및 부분적인 제한지도이다.

Claims (34)

  1. 소마토트로핀의 알파나선 3 영역에서의 돌연변이의 의해, 상기 소마토트로핀을 지속방출 배합물내 생물학적 활성을 유지하는 한편 상기 소마토트로핀의 천연형태보다 가용성이 되게함으로 구성되는 소마토트로핀.
  2. 제1항에 있어서, 사람, 소, 돼지, 양, 염소, 말, 어류 또는 조류의 소마토트로핀인 소마토트로핀.
  3. 제2항에 있어서, 상기 알파나선 3 돌연변이물은 I122L, L115E, L115K, L115KL118E, L118E, L118E, L118T, L118K, L118E1122K, I122E, E119LQ123L, M126A, L118A, G121A, K114R, K116R, I122LM126A 또는 I122LL118A을 포함하는 소마토트로핀.
  4. 제3항에 있어서, 상기 알파나선 3 돌연변이물은 I122L인 소마토트로핀.
  5. 제4항에 있어서, 돼지 또는 소의 소마토트로핀인 소마토트로핀.
  6. 제5항에 있어서, 돼지의 소마토트로핀인 소마토트로핀.
  7. 소마토트로핀이 알파나선 2에서의 돌연변이에 의해, 상기 소마토트로핀을 지속방출 배합물내 생물학적 활성을 유지하는 한편 상기 소마토트로핀의 천연 형태보다 가용성이 되게함으로 구성되는 소마토트로핀.
  8. 제7항에 있어서, 사람, 소, 돼지, 양, 염소, 말, 어류 또는 조류의 소마토트로핀인 소마토트로핀.
  9. 제8항에 있어서, 상기 알파나선 2 돌연변이물은 S81,87L 또는 L82, 84Q인 소마토트로핀.
  10. 제9항에 있어서, 돼지 또는 소의 소마토트로핀인 소마토트로핀.
  11. 제10항에 있어서, 돼지의 소마토트로핀인 소마토트로핀.
  12. 제1항에 있어서, 부가적으로 소마토트로핀의 알파나선 2영역에서의 돌연변이를 포함하는 소마토트로핀.
  13. 제12항에 있어서, 사람, 소, 돼지, 양, 염소, 말, 어류 또는 조류의 소마토트로핀인 소마토트로핀.
  14. 제13항에 있어서, 상기 알파나서 2 돌연변이물은 S81,87L 또는 L82, 84Q인 소마토트로핀.
  15. 제14항에 있어서, 상기 알파나선 3돌연변이물은 I122L, L115E, L115K, L115KL118E, L118E, L118E, L118T, L118K, L118E1122K, I122E, E119LQ123L, M126A, L118A, G121A, K114R, K116R, I122LM126A 또는 I122LL118A을 포함하는 소마토트로핀.
  16. 제15항에 있어서, 상기 알파나선 3돌연변이물은 I122L인 소마토트로핀.
  17. 제1항에 있어서, 위치 183과 191에서 시스테인이 글루탐산으로 대체된 소마토트로핀.
  18. 제1항에 있어서, 4개의 시스테인, 작은 고리에서 2개 및 큰 고리에서 2개 중에서, 적어도 하나가 삭제된 소마토트로핀.
  19. 제1항에 있어서, 4개 시스테인 시스테인산으로 변형된 소마토트로핀.
  20. 제4항에 있어서, 위치 183과 191에서 시스테인이 글루탐산으로 대체된 소마토트로핀.
  21. 제4항에 있어서, 4개의 시스테인, 작은 고리에서 2개 및 큰 고리에서 2개중에서, 적어도 1개가 삭제된 소마토트로핀.
  22. 제4항에 있어서, 4개 시스테인 시스테인산으로 변형된 소마토트로핀.
  23. 제7항에 있어서, 위치 183과 191에서 시스테인이 글루탐산으로 대체된 소마토트로핀.
  24. 제7항에 있어서, 4개의 시스테인, 작은 고리에서 2개 및 큰 고리에서 2개중에서, 적어도 1개가 삭제된 소마토트로핀.
  25. 제7항에 있어서, 4개 시스테인 시스테인산으로 변형된 소마토트로핀.
  26. 제12항에 있어서, 위치 183과 191에서 시스테인이 글루탐산으로 대체된 소마토트로핀.
  27. 제12항에 있어서, 4개의 시스테인, 작은 고리에서 2개 및 큰 고리에서 2개중에서, 적어도 1개가 삭제된 소마토트로핀.
  28. 제12항에 있어서, 4개 시스테인 시스테인산으로 변형된 소마토트로핀.
  29. 제조합으로 유도된 단백질 또는 폴리펩티드 상에서 부위조종 돌연변이 유발을 수행하는 방법으로, 상기 DNA의 일부에 상보적이고 DNA에 잘못 짝짓기하는 영역을 함유하는 합성 올리고뉴클레오티드에 어닐링되는 단일가닥 DNA를 생성하여 DNA분절을 클로닝하고; 상기 DNA 이중 가닥을 만들고; 상기 이중가닥 DNA를, 집락화를 위해 적적한 숙주내로 형질전환하고; 상기 올리고뉴클레오티드 교잡에 상응하는 돌연변이된 서열을 선택하고; 상기 선택된 서열을 발현 프라스미드 내로 재구성하고; 상기의 결과 생성된 재조합으로 유래된 단백질 또는 폴리펩티드를 발현함으로 구성되는 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 상기 돌연변이 부위에서 또는 부근에서 제한 엔도뉴클레아제 인식부위를 함유하는 방법.
  31. 제30항에 있어서, 상기 제한 엔도뉴클레아제 인식부위를 함유하는 클론은 바람직한 제한 엔도뉴클로아제로 소화시키는 방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 재조합으로 유래된 단백질 또는 폴리펩티드는 소마토트로핀인 방법.
  33. 제32항에 있어서, 상기 소마토트로핀은 사람, 소, 돼지, 양, 염소, 말, 어류 또느 조류의 소마토트로핀인 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 SacI293, XbaI353, S81L, S87L, Q8082, K113, E116, K113E116, E116K120, E120, L120-3, A124-2, E113EHQ116, E113D, L115A, L118A, L118TK, L118T, L117, 121, Leu1172D, K114R/AccI, G121A/XmnI, K116R/BglII, A14D/HindIII, A6T, S11RA14D/Sal, Q21HH22R/ClaI 또는 PvuII인 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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