KR900009982A - 유전공학적으로 처리된 중온성 생물로부터 내열성 효소를 분리해내는 방법 - Google Patents

유전공학적으로 처리된 중온성 생물로부터 내열성 효소를 분리해내는 방법 Download PDF

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Abstract

내용 없음

Description

유전공학적으로 처리된 중온성 생물로부터 내열성 효소를 분리해내는 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 BatX I 부위로부터 Bgl Ⅱ 부위까지 약 2.6kb의 서모스 서모필러스 DNA분할을 포함한 플라즈미드 pGL628의 구성을 도식화 하였다.

Claims (21)

  1. (a) 이종의 내열성 효소를 코오딩한 유전자를 형질발현 시킬 수 있도록 유전공학 처리한 중온성 숙주세포를 제공하고, (b) 상기 중온성 숙주 세포를 배양하여 비바람직한 불순물질을 함유한 혼합물중의 상기 내열성 효소를 생성하고 및 (c) 상기의 내열성 효소를 정제하는 단계를 포함하며, 상기 정제법은 비바람직한 불순물을 함유한 혼합물이 이 불순물을 불활성화 시키기엔 충분하지만 내열성 효소를 불활성화 시키기엔 불충분한 온도로 가열시키는 단계를 최소한 한 단계 포함하는 것을 특징으로하는, 비바람직한 불순물이 거의 없는 내열성 효소의 산출방법.
  2. 제1항에 있어서, 배양이후에 중온성 숙주 세포를 분해하여 상기 내열성 효소를 함유한 분해질을 생성하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 정제법이 상기 비바람직한 불순물을 함유한 혼합물을 가열하여 내열성 효소를 함유한 액상으로부터 비바람직한 불순물을 거의 완전히 침전시키는 것을 포함한 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기의 비바람직한 불순물이 단백질을 함유하며, 가열되면 변성하여 침전을 형성하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 내열성 효소가 핵산의 대사. 변형 또는 작용을 촉매하는 방법.
  6. 제1항 또는 제4항에 있어서, 상기 비바람직한 불순물이 엔토뉴클레아제, 엑소뉴클라에제 또는 프로테아제인 방법.
  7. 제5항에 있어서, 내열성 효소가 DNA리가아제 또는 DNA 폴리머라제인 방법.
  8. 제7항에 있어서, 내열성 효소가 호열성 박테리아의 DNA 폴리머라제이거나 DNA리가아제인 방법.
  9. 제8항에 있어서, 내열성 효소가 서모스 플래러스, 서모스 리버, 서모스 서모필러스. 바실러스 스테로서모필러스, 서모스 아쿠아티커스, 서모스 락튜스, 서모스러벤스 및 메타노서모스 퍼르비더스 중 선택된 호열성 박테리아로부터 유도되는 방법.
  10. 제9항에 있어서, 내열성 효소가 서모스 서모필터스의 DNA 리가아제 또는 DNA 폴리머라제인 방법.
  11. 제1항에 있어서, 상기온도가 65℃ 내지 약 100℃인 방법.
  12. 제11항에 있어서, 온도는 80℃ 내지 약 95℃인 방법.
  13. 상기 리가아제의 안정하게 공유결합한 AMP 부가물을 형성하며 상기 부가물을 검출하는 것을 포탐한 NAD-의존성을 갖는 내열성 핵산 리가아제 활성에 대한 효력 검증 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 부가물의 아데닐 부위가 표지된 방법.
  15. 제13항에 있어서, 상기 부가물의 아데닐 부위가 NAD로부터 유도된 방법.
  16. 상기 제13항에 있어서, 상기 리가아제가 호열성 리가아제이며, 상기 리가아제 활성이 비바람직한 불순물을 함유한 샘플 중에서 검출되며, 상기 방법이 상기의 리가아제와 비바람직한 불순물을 함유한 혼합물을 상기의 비바람직한 불순물을 변성 시키거나 불활성화 시키지만 상기 리가아제에는 영향을 끼치지 않는 온도로 가열하는 것을 포함한 방법.
  17. 핵산 단편물의 라이브러리가 숙주 세포로 형질변환되며, 이 형질변환된 세포가 상술한 13항 내지 16항중 어느 한항의 방법으로 리가아제 활성을 형질발현시킨 세포를 확인하기 위해 선별하는 것을 포함한 핵산 리가아제 활성을 코오딩한 핵산의 클로닝 방법.
  18. 클론된 내열성 핵산 리가아제 유전자.
  19. 내열성 핵산 리가아제를 코오딩한 거의 정제된 핵산 서열.
  20. 제18항에 있어서, 상기 유전자의 형질발현을 증진시키는 프로모터를 포함한 형질발현 담체의 일부분인 유전자.
  21. 제20항에 있어서, 상기 형질 발현 담체가 PGL 628인 유전자.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019890018619A 1988-12-16 1989-12-15 유전공학적으로 처리된 중온성 생물로부터 내열성 효소를 분리해내는 방법 KR900009982A (ko)

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