KR870700093A - 세린프로테아제억제제의 제조를 위한 재결합방법과 그에 유용한 dna씨퀀스 - Google Patents

세린프로테아제억제제의 제조를 위한 재결합방법과 그에 유용한 dna씨퀀스

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KR870700093A
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벤디오페디야 프레딥 케이
피. 아이젠버그 스티븐
엘. 스테틀러 게리
씨. 톰슨 로버트
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케니쓰 제이. 콜린즈
씨네겐 바이오로지칼즈, 인코포레이티드
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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Abstract

내용 없음.

Description

세린프로테아제억제제의 제조를 위한 재결합방법과 그에 유용한 DNA씨퀀스
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 플라스미드 pSGE6의 도해.

Claims (14)

  1. 적어도 하나이상의 활성 세린 프로테아제억제제 활성을 갖는 하나의 폴리펩타이드사슬로된 세린프로테아제억제제를 제조하기 위해서 (가) 귀밑셈 분비선으로부터 분리해낸 천연의 세린프로 테아제억제제와 실질적으로 동형인 억제제로서, 세린프로테아제억제제 활성을 갖는 단백질을 숙주미생물이 생성할 수 있도록 DNA씨퀀스를 얻어내고, (나) 이 DNA씨퀀스의 작용요소를 함유하며 전이시킬 수 있는 보균자에 상기 DNA씨퀀스를 클로닝시켜 숙주미생물내에서 복제시킨 다음, (다) 이런한 DNA 씨퀀스와 작용요소를 함유하고 있는 보균자를 프로테아제억제 단백질을 나타낼 수 있는 숙주미생물로 전이시키며, (라) 이 전이된 보균자를 확대시키고 그 억제제를 나타내기에 적당한 조건하에서 상기 숙주미생물을 배양시킨 후, (마) 억제제를 얻어내고, (바) 그 억제제를 활성을 갖는 3차구조가 되도록 하여서 세린프로테아제억제제 활성을 갖도록 하므로써, 세린프로테아제 억제제의 제조를 위한 DNA재결합방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 DNA씨퀀스는 합성씨퀀스임을 특징으로 하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 DNA씨퀀스는 천연의 DNA씨퀀스임을 특징으로 하는 방법.
  4. 제3항에 있어서, 천연의 DNA씨퀀스는 (1) 세린 프로테아제 억제제를 형성시킬 수 있는 세포로부터 사람의 cDNA라이브러리를 얻어낸 다음, (2) 프로테아제 억제제 유전자나 그의 단백질 생성물에 결합할 수 있는 하나이상의 탐침으로 사람의 DNA라이브러리를 찾아서, (3) 클론의 능력에 의해 하나이상의 탐침에 유전자나 그의 단백질생성물이 결합하도록 억제제의 유전자 코딩을 함유하는 하나 이상의 클론을 확인한 후, (4) 확인된 클론으로부터 억제제를 코딩하는 유전자를 분리시켜서, (5) 그 유전자나 그의 적당한 분획물을 숙주미생물내에 유전자를 유지시키면서 표현하는데 필요한 작용요소에 연결시키므로써 얻어짐을 특징으로 하는 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 세포는 사람의 귀밑샘 세포임을 특징으로 하는 방법.
  6. 제3항에 있어서, 천연의 DNA씨퀀스는 (1) 사람의 유전자 DNA라이브러리를 얻어낸 다음, (2) 세린 단백질 억제제 유전자나 그의 단백질생성물에 결합할 수 있는 하나 이상의 탐침으로 사람의 유전자 DNA라이브러리를 찾아서, (3) 클론의 능력에 의해 하나 이상의 탐침에 유전자나 그의 단백질 생성물이 결합하도록 억제제의 유전자 코딩을 함유하는 하나이상의 클론을 확인한 후, (4) 확인된 클론으로부터 억제제를 코딩하는 유전자를 분리시켜서, (5) 그 유전자나 그의 적당한 분획물을 숙주미생물내에 유전자를 유지시키면서 표현하는데 필요한 작용요소에 연결시키므로써 얻어짐을 특징으로 하는 방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기 보균자는 pBR322와 pIQ중에서 선택된 보균자의 일부분으로부터된 것임을 특징으로 하는 방법.
  8. 제1항에 있어서, 상기 숙주미생물은 Escherichia, Bacillus 및 Saccharomyces종 미생물중에서 선택됨을 특징으로 하는 방법.
  9. 제1항에 있어서, 얻어낸 억제제를 좀 더 정제시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제9항에 있어서, 정제는 상기 억제제를 활성을 갖는 형태로 되도록 하기전에 이루어짐을 특징으로 하는 방법.
  11. 제9항에 있어서, 정제는 상기 억제제를 활성을 갖는 형태로 되도록한 다음에 이루어짐을 특징으로 하는 방법
  12. 적어도 하나 이상의 활성장소에서 귀밑샘 분비선으로부터 분리시킨 천연의 세린 프로테아제 억제제와 실질적으로 동형인 단백질로서 세린프로테아제 억제제활성을 갖는 하나의 폴리펩타이드 사슬로된 세린프로테아제 억제제를 직접 미생물에서 합성시킬 수 있는 합성 DNA씨퀀스.
  13. 제12항에 있어서, DNA씨퀀스는 다음의 (1)이나 (2)중에서 선택되어진 것임.
    (2) 같은 단백질의 제조를 위한 유전학적으로 대등한 씨퀀스.
  14. TAACGAGGCGCAAAAAATGAAAAAGACAGCTATCGCGATCAAGGAGAAATAAATG뉴클레오티드 씨퀀스를 갖는 해독결합기.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019860700537A 1984-12-06 1985-12-04 세린프로테아제억제제의 제조를 위한 dna 재조합 방법 KR940011339B1 (ko)

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US678822 1984-12-06
PCT/US1985/002385 WO1986003519A1 (en) 1984-12-06 1985-12-04 Recombinant methods for production of serine protease inhibitors and dna sequences useful for same

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