KR870700022A - 항유로키나제 모노클론 항체, 그의 기질, 이를 사용하는 시험방법 및 생화학적 시험키트 - Google Patents

항유로키나제 모노클론 항체, 그의 기질, 이를 사용하는 시험방법 및 생화학적 시험키트

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Abstract

내용 없음.

Description

항유로키나제 모노클론 항체, 그의 기질, 이를 사용하는 시험방법 및 생화학적 시험키트
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims (33)

  1. 다음의 특성을 갖는 항인체 유로키나제 모노클론 항체. a) 이 항체는 IgGl이다, b) 이 항체는 본질적으로트 사피스와 그이 공동 연구자의 Eur.J. Biochem. 제64권, 제369페이지 (1976년)에 기재된 방법으로 측정할 경우, 고정된 인체의 유로키나제에 대한 이 항체의 친화력 상수가(1.42±1.5)×107ℓmole-1이다. c) 이 항체는 저분자량(33,000MW) 유로키나제에 결합됨이 없이 고분자량(54,000MW)유로키나제 및 (또는) 단일사슬 유로키나제 전구체에 결합된다. d) 이 항체는 유로키나제 A-사슬의 18,000단백질 분해 단편에 결합된다. e) 이 항체는 유로키나제 이외의 혈청 또는 뇨의 효소적으로 활성인 단백질 분해 효소와 교차 반응하지 않는다.
  2. 제1항에 있어서, 다음과 같은 특성을 더 갖는 항인체 유로키나제 모노클론 항체. a) 이 항체는 유로키나제의 효소적 활성을 손상시키지 않는다. b) 이 항체의 등전점은 약 5.75이다.
  3. 제1항에 있어서, 적당한 매트릭스에 커플링시킬 경우에, 0.5M염화나트륨 수용액 존재 하에서도 pH4.5내지 8.0에서 항원을 결합시킬 수 있고, 결합된 항원을 pH3.0 내지 4.0에서 0.5 내지 1M 염화나트륨 수용액 중에 방출시킬 수 있는 특성을 더 갖는 항인체 유로키나제 모노클론 항체.
  4. 아가로오스, 개질 및 활성화된 아가로오스, 가교 결합 덱스트란, 셀룰로오스 및 카르복시메틸 셀룰로오스로부터 선택된 매트릭스에 제1항의 모노클론 항체를 결합시켜서 얻은, 인체 유로키나제 및 (또는) 그의 단일 사슬 유로키나제 전구체를 정제시키기 위한 면역 흡착제.
  5. 아가로오스인 매트릭스에 제1항의 모노클론 항체를 결합시켜서 얻은, 인체 유로키나제 및 (또는) 그의 단일 사슬 유로키나제 전구체를 정제시키기 위한 면역 흡착제.
  6. 제4항 또는 5항에 있어서, 유로키나제 정제 공정에 사용한 경우, 다음의 특성을 갖는 유로키나제 생성물을 얻는 것을 추가 특징으로 하는 면적 흡착제. a) 이 면역 흡착제의 섬유소 용해역가는 130,000IU/ml이상이다. b) 이 면역 흡착제는 고분자량 유로키나제 및 (또는) 그의 단일사슬 유로키나제 전구체 중에 다량들어있다. c) 이 면역 흡착제에는 실제적으로 저분자량의 유로키나제는 없다. d) 이 면역 흡착제의 섬유소 용해/에스테르 분해 활성비가 2,000이상이다. 이 면역 흡착제에는 실제적으로 트롬보플라스틴 오염 물질이 없다. (200 IU/ml
  7. 제4항 또는 5항에 있어서, 단일 사슬 인체 유로키나제 전구체의 정제공정에 사용될 경우, 다음의 특성을 갖는 인체 유로키나제 전구체를 얻는 것을 추가 특징으로 하는 면역 흡착제, a) 이 면역 흡착제는 50내지 54,000MW의 단일 사슬 프로테인이다. b) 이 면역 흡착제는 아미드 분해 활성이 거의없다. c)이 면역 흡착제는 높은 피브린 활성이 있다. d) 이 면역 흡착제는 혈장 억제제에 의해 불활성되지 않는다. e) 이 면역 흡착제는 플라스민으로 처리시킴으로써 2-사슬의 활성 플라스미노겐 활성화제로 전환된다.
  8. 54,000MW 유로키나제 또는 그의 단일 유로키나제 전구체를 면역 흡착제에 선택적으로 결합시키기 위하여 pH4.5 내지 8.0에서 생물학적 공급원 또는 그 농축물을 제4 또는 5항의 면역 흡착제와 접촉시키고, pH 6 내지 8의 완충액의로 씻어낸 후, pH3.0 내지 4.0의 0.5M 내지 1M 염화나트륨 수용액을 임의로 함유하는 용출액으로 용출시켜서 면역 흡착제로부터 결합된 항원을 방출시키는 것을 특징으로 하는 생물학적 공급원으로부터 54,000MW 유로키나제 또는 그의 단일 사슬 유로키나제 전구체의 정제방법.
  9. 제8항에 있어서, 면역 흡착제에 대한 항원의 결합이 최대 농도 0.5M의 염화나트륨 수용액 존재 하에서 이루어지는 방법.
  10. 제9항에 있어서, 다음과 같은 특성을 갖는 유로키나제 생성물을 얻는 것을 특징으로 하는 방법. a) 이 생성물의 섬유소 용해 역가는 130,000IU/ml 이상이다. b) 이 생성물은 고분자량 유로키나제 또는 그의 단일 사슬 유로키나제 전구체에 다량 들어 있다. c) 이 생성물에는 실질적으로 저분자량의 유로키나제가 없다. d) 이 생성물의 섬유소 용해/에스테르 분해 활성비는 2,000이상이다. e) 이 생성물에는 실질적으로 트롬보플라스틴 오염 물질이 없다 (200 IU/ml의 농도에서 응집 활성이 0임).
  11. 친화력 크로마토그라피에 의한 인체 유로키나제 또는 그의 단일사슬 유로키나제 전구체의 정제에사용하나 위한 제1항 또는 2항의 모노클론 항체의 용도.
  12. 친화력 크로마토그라피에 의한 인체유로키나제 또는 그의 단일사슬 유로키나제 전구체의 정제에 사용하기 위한 제4항 또는 5항의 면역 흡착제의 용도.
  13. 융합 촉진제 존재하에 54,000MW 유로키나제로 면역화된 숙주의 세포의 체세융포 합을 동일한 동물종의 골수종 세포를 사용하여 수행하고, 소기의 생성된 하이브리도마를 통상의 항유로키나제 항혈청을 사용하여 효소 결합 면역 분석법에 의해 차단시키고, 생성된 항체의 군 특이성, 친화력 상수 및 특이 에피토프를 측정함을 특징으로 하는 배양 후, 제1항의 항유로키나제 항체를 생성할 수 있는 항유로키나제모노클론 항체 생성 하이브리도마의 제조 방법.
  14. 제13항에 있어서, 체세포가 마우스 비장 세포이고, 골수종 세포가 마우스 곡수종 세포인 방법.
  15. 제13항에 있어서, 골수종 세포가 X63-Ag 8653으로서 공지된 마우스 골수종 세포인 방법.
  16. 제13항에 잇어서, 유로키나제 고정시킨 숙주가 토끼인 방법.
  17. 제13항에 잇어서, 융합 촉진제가 폴리에틸렌글리콜인 방법.
  18. 제13항에 있어서, 융합 촉진제가 폴리에틸렌글리콜 6000(PEG 6000)인 방법.
  19. 제13항에 의해서 얻은 하이브리도마를 적당한 숙주 또는 배양배지 중에서 배양시킴을 특징으로 하는 제1항의 항유로키나제 모노클론 항체의 제조 방법.
  20. a) 항원을 함유하는 시험 용액을 고체 담체상에 고정시킨 1차 항유로키나제 항체와 반응시켜서 항원을 그 고체에 결합시키는 공정. b) 이 결합된 항원을 여기에 측정 가능한 표지(마커)가 결합된 2차 항유로키나제 항체를 함유하는 용액과 접촉시키는 공정(여기서, 상기 1차 및 2차 항체는 본 발명의 모노클론 항체이다)과, c) 측정 가능한 표지(마커)가 고체 담체에 결합된 정도로 항원을 검출 또는 분석하는 공정을 특징으로 하는 인체 유로키나제 및 그의 결합을 전구체로부터 선택된 항원을 검출 또는 분석하기 위한 이중 항체 샌드위치법.
  21. 제20항에 있어서, "1"차항체가 항유로키나제 항혈청, 항유로 키나제 정제시킨 면역글로블린 G(IgGs) 및 "2" 차모노클 론항체의 결합 부위와는 상이한 항원의 부위에 결합하는 것으로 알려진 모노클론 항체로부터 선택되고, 2차 항체가 제1항 또는 제2항에 의한 모노클론 항체인 방법.
  22. 제20항에 있어서, 피검 용액이 희석생체액, 희석되지 않은 생체액 또는 농축된 생체액 및 유전 공학적으로 생성된 미생물 또는 세포 배지의 발효액 또는 추출액으로부터 선택되는 방법.
  23. 제20항에 있어서, "2차" 항체에 결합된 측정 가능한 표지가 효소인 방법.
  24. 제20항에 있어서, "2차" 항체에 결합된 측정 가능한 표지가 고추냉이 퍼옥시다제인 방법.
  25. 제20항에 있어서, 고체 담체가 셀룰로오스, 폴리아크릴아미드, 가교시킨 덱스트란, 실리콘 고무, 미세결정 유리 및 플라스틱 입자로부터 선택되는 방법.
  26. 제20항에 있어서, 고체 담체가 폴리스티렌, 폴리프로필렌 또는 폴리비닐 튜우브, 디스크 또는 마이크로플레이트와 같은 성형된 플라스틱제 재료인 방법.
  27. 제20항에 있어서, 고체 담체가 성형된 폴리비닐 마이크로플레이트인 방법.
  28. a) 표면에 1차 항유로키나제 항체를 고정시킨 고체 담체 및 b) 여기에 결합된 측정 가능한 표지(마커)를 갖는 2차 항유로키나제 항체의 용액을 또는 동결 건조시킨 제제 (여기서 상기 1차 및 2차 항체 중의 하나는 제1항의 모노클론 항체이다)을 포함하는 (HMW)인체 유로키나제 또는 그의 단일 사슬전구체 분석용 생체 시험키트.
  29. 제28항에 있어서, 2차 항체가 제1항의 모노클론 항체인 키트.
  30. 제28항에 있어서, 2차 항체가 제1항의 모노클론 항체이고, 1차 항체가 항유로키나제 항혈청, 항유로키나제 정제시킨 IgG(s) 및 2차 결합부위와는 상이한 항원 부분에 결합하는 모노클론 항체로부터 선택되는 키트.
  31. 제28항에 있어서, 1차 및 2차 항 체중의 하나가 제1항의 모노클론 항체이고, 다른 하나가 항원의 상이한 부위에 결합되는 것으로 알려진 모노클론 항체인 키트.
  32. 제28항에 있어서, 측정 가능한 표지(마커)가 효소인 키트.
  33. 제28항에 있어서, 측정 가능한 표지(마커)가 고추냉이 퍼옥시다제인 키트.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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