KR870005091A - 인체 라이소자임을 제조하는 방법 - Google Patents

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Abstract

내용 없음

Description

인체 라이소자임을 제조하는 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 Ei-ON19 및 Ei-ON20이 프라이머(primer)이고 주형이 세포라인 U-937로부터 분리된 RNA인 경우의 프라이머 연장(extension) 실험의 결과를 도시한 것이다.
제2도는 반점-블롯 하이브리드화의 결과를 도시한 것이다.
제3a도는 HLZ cDNA(클론 HL14-1)의 구조를 도시한 것이고,
제3b도는 HLZ cDNA의 뉴클레오타이드 서열을 측정하는
제5도는 공개된 HLZ 아미노산 서열(윗줄)과 클론 HL14-1의 cDNA로부터 유도된 아미노산 서열(아랫줄)과의 비교도이다.
제6도는 다복제 하이브리드 벡터 pEAS 102를 도시한 것이다.

Claims (12)

  1. a) HLZ를 코드화하는 mRNA를 인체 세포라인, 바람직하게는 U-937 세포라인으로부터 분리하여, 이의 진정한 DNA 서열을 합성하고,
    b) 상기 DNA 서열을 플라스미드에 삽입하여 숙주 세포에서 복제 및 발현 가능한 하이브리드 플라스미드를 생성시킨후,
    c) 상기 하이브리드 플라스미드를 사용하여 숙주세포, 바람직하게는 원시핵 세포, 진핵세포 또는 포유동물 세포를 형질전환시켜, 상기 단백질이 숙주세포에 의해 발현되도록 한 다음,
    d) 숙주세포에 의해 분리된 상기 단백질을 분리하여 정제함을 특징으로 하여, 인체 라이소자임(HLZ)을 제조하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 DNA 서열이 하기 서열(A) 또는 (B) 이고, 이 서열 다음에 정지코돈이 있는 방법.
  3. 제2항에 있어서 상기 DNA 서열을 플라스미드 pUC9의 Pst I-절단부위사이에 삽입하는 방법.
  4. 제1항에 있어서 형질전환에 사용되는 하이브리드 플라스미드가 플라스미드 pHL2, pHL8, pHL14-1, pHL21, pHL23, pHL14-23 또는 pHL35인 방법.
  5. 제4항에 있어서 HLZ를 코드화하는 DNA 서열을 엄격한 조건하에서 플라스미드 pHL14-1 또는 pHL14-23의 삽입물을 사용하여 하이브리드화시키고, 이 DAN 서열이 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상 동종성을 나타내는 방법.
  6. 제1내지 5항중 어느 한 항에 있어서, HLZ를 코드화하는 상기 하이브리드 플라스미드의 DNA 영역을 프로모터, 리이더 서열 또는 터미네이터에 커플링시키고, 해독개시 시그널을 HLZ에 대한 코드화 영역과 프로모터 사이에 위치시키는 방법.
  7. 제1 내지 6항중 어느 한 항에 있어서 형질전환 및 발현에 사용되는 숙주 세포가 이. 콜라이(E. coli), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae)또는 포유동물 세포인 방법.
  8. 제1내지 7항중 어느 한 항에 있어서, 발현 벡터가 성숙 HLZ를 코드화하거나, 제2항에 기술한 뉴클레오타이드 서열을 함유하는 방법.
  9. 제8항에 있어서 발현벡터 바람직하게는 pWS290D 또는 pWS296D가 ADHⅠ프로모터 α-인자 리이더 HLZ 유전자 및 ADHⅡ 터미네이터로 이루어지거나 성분 α-인자 프로모터, α-인자 리이더, 유전자 HLZ 및 α-인자 타미네이터로 이루어지고, 상기 발현 벡터가, 분비가능한 성숙 HLZ를 만드는 방법.
  10. HLZ에 동종인 혼합 서열의 올리고뉴클레오타이드 푸울2개를 고체상 포스포트리-에스테르 방법으로 합성하여, 올리고뉴클레오타이드의 DNA 서열이 아미노산 서열 Ala Asn Trp Met Cys Leu 또는 Tyr Trp Cys Asn Asp Gly에 상응함을 특징으로 하여 DNA 올리고뉴클레오타이드를 제조하는 방법.
  11. 제7항에 기술된 숙주세포를, 플라스미드 129/29를 사용하여 형질전환시켜, 형질전환된 숙주가 복제 및 발현 가능한 벡터에서 바람직하게는 제4, 5또는 9항에 기술한 벡터에서 제2항에 기술된 뉴클레오타이드 서열을 함유함을 특징으로 하는 형질전환 된 숙주를 제조하는 방법.
  12. 제1내지 11항중 어느 한 항에 있어서, 재조합 HLZ 단백질이 진정한 HLZ와 동일하거나, 그의 생물학적 활성 변형체를 구성하거나 또는 하기의 아미노산 서열(Ⅰ) 또는 (Ⅱ)를 함유함을 특징으로 하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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