KR850001297B1 - 혈당 측정용 시험지의 제조방법 - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

혈당 측정용 시험지의 제조방법

본 발명은 혈액중의 포도당 함량을 신속하고 정확히 측정할 수 있는 새롭고도 진보된 혈당측정용 시험지의 제조방법에 관한 것이다.

혈액중의 포도당 농도 측정은 당뇨병 환자의 당흡수량을 조절하기 위한 포도당 농도의 규칙적인 일상검사에 활용되어 당뇨병 환자의 조기발견과 치료과정중의 당 검사에 중요한 지표로 활용되고 있다. 특히 뇨당검사는 일상적인 신체검사시에 실시되어 조기진단에 활용되며 혈당검사는 당뇨병 환자의 포도당 함량의 반정량에 이용되어 연속적인 당습취 조절에 중요한 역할을 하고 있다.

혈당검사의 측정방법은 임상화학검사에 주지된 방법으로 신속하고 정확하며 용이하게 측정할 수 있는 시험지법이 많이 활용되고 있다.

본 발명의 혈당검사 시험지 측정법은 포도당 산화효소와 과산화효소를 사용한 효소적 측정법의 기본원리를 응용한 측정방법으로 본 발명의 주요목적은 혈액과 같은 체액중의 포도당 농도의 변화를 신속, 정확히 측정할 수 있는 개선된 반정량적 포도당검사를 제공함을 목적으로 혈당측정용 시험지법을 발명한 것이다.

종래의 혈당 시험지 조성물은 예를들어 미국특허 3,061,523 및 일본특허 50-39558에 의하면 효소제로 포도당 산화효소와 과산화효소를 사용하고, 완충제로 구연산용액, PH6.0과 안정제로 제라틴, 알긴산, 폴리비닐피로리돈 및 폴리비닐알콜, 색원체로 오르소톨리딘, 벤디딘, 3-아미노-9-아미노푸로필칼바종 및 2,7-디아미후루오렌등을 사용하여 혼합조성액을 만들고, 여기에 침적 용액의 담체로 일정 두께와 크기의 셀루로즈 종이에 흡수시켜 건조한 조성물로 구성되고 있다. 이때 전혈용의 혈당검사 시험지는 반투과성피막 또는막 상의 휠림형성용 중합체 물질과 혼합하여 피막을 형성함으로써 과잉의 액체 또는 혈색소를 제거하며 지시약이 효과적으로 반응하여 판별되도록 구성된 것이다.

상기와 같은 조성물로 구성된 혈당시험지를 사용하여 전혈중의 포도당 농도 측정시에 과잉량의 혈색소를 제거해야만 시험지의 반응색소를 용이하게 판별할 수 있다. 이때 일정시간 반응후 혈색소의 제거수단으로 증류수를 사용하여 시험지 표면을 세척하거나 또는 탈지면과 같은 세척기로 시험지 표면을 문질러 혈색소를 제거한 후 판별하게 고안되어 있다.

그러나 과잉량의 혈색소를 제거시에 반투과성 피복막의 종합체가 쉽게 떨어지거나 시험지 표면의 지시약 반응색이 균일하게 나타나지 않는 단점이 있다.

특히 에틸셀루로즈나 폴리비닐아세티드등의 합성중합체로써 피복막을 형성하고 담체로 합성호일 표면에 피복한 종류는 반응색의 판별은 용이하나 혈당 반응시간이 길고 예민도가 떨어지며, 반대로 셀루로즈 종이에 피복한 시험지는 예민도는 높지만 지시약의 반응색이 고르지 못하여 혈당의 반정량 방법으로는 정확하지 못하다.

본 발명의 특징은 상기의 단점을 보완하기 위하여 신속하고 정확하며, 보다 용이하게 실시할 수 있는 개선된 새로운 혈당의 반정량용 시험지를 발명한 것이다.

즉, 혈당시험지의 측정원리는 주지된 바와 같이 포도당 산화효소와 과산화효소에 의한 포도당의 산화반응을 기본원리로 하고 색원체로 오르소톨리딘과 벤디딘 혼합체를 사용하여 반응된 지시약의 색소변화를 관찰하여 측정하는 것이다.

즉, 종래의 반투과성막을 형성하는 휠림 형성용 종합체를 사용하는 대신에 효소안정제로 혼합되는 수용성 폴리비닐알콜 셀루로즈 시험지에 피복하여 셀루로즈 시험지를 안정화시킨다.

이것은 활성화된 셀루로즈 시험지를 일정크기로 절단하여 담체에 부착시켜 검사에 사용할 때 시험지 표면에 발색정도를 일정하게 유지해주는 역할을 한다. 셀루로즈 시험지는 0.05% 에틸셀루로즈 알콜용액에 침적건조하는 방법으로 전처리한 후 포도당 산화효소와 과산화효소, 색원체로 오르소 톨리딘과 벤디딘 및 휠림 형성체로 폴리비닐알콜을 완충용액에 혼합한 침적액을 엷은 막상으로 도말피복하여 건조시킨다.

그러나 이때의 시험지 표면은 원래 윤택이나는 미끄러운 상태가 아니기 때문에 이것을 다시 0.01% 에틸셀루로즈 알콜용액에 후 처리한 후 건조하는 것을 특징으로 한다.

이와 같이 만든 검사용 시험지를 혈당검사시 전혈중의 혈색소를 제거하는 단계에서 피복된 엷은 막을 손상치 않고 거의 완전하게 혈색소가 제거됨으로 이와 같이 만든 검사용 시험지를 전혈중의 혈당검사에 사용시에는 일정시간 반응 후 전혈중의 혈색소를 제거하는 단계에서 탈지면과 같은 부드러운 물질로 문지를때 표면의 도말 피복된 엷은 막을 손상치않고 거의 완전하게 혈색소가 제거되여 반응색의 판별을 용이하게하며, 정량용 모니터를 이용할 때에도 반응색이 일정하므로 정확하게 정량할 수가 있다. 따라서 종래의 기술방법에 의한 시험지법보다 예민도와 안정성이 매우 높고 정확하며 용이하게 검사할 수 있는 새로운 혈당검사용 시험지법을 발명한 것이다.

본 발명의 구성요소로는 혈당측정용 간이시험지법을 기본제조방법으로 하고 활성 함침용액을 만들기 위해 활성효소제로 포도당 산화효소와 과산화효소, 완충용액으로 구연산염과 구연산용액, 효소안정제로 폴리비닐알콜, 색원체로 오르소틀리딘과 벤디딘 및 적합한 계면활성제등을 혼합한 용액을 만든다. 이때 활성성분의 최적농도범위는 합리적인 넓은 범위가 적용됨이 판명되었다.

본 발명에서 사용된 포도당 산화효소와 과산화효소는 시판되고 있는 고순도 정제효소를 사용하고 효소반응계에서 포도당 산화효소와 과산화효소및 색원체의 혼합액은 전혈중의 포도당을 분해하여 발생된 과산화효소의 효소적 반응에 의하여 색원체를 발색시켜주는 기본원리를 이용한 것이다.

따라서 전술한 본 발명의 특징에서 전혈중의 포도당 정량을 신속하고 정확하며 보다 용이하게 제거하고 분자량이 적은 포도당만을 엷은 반투과성 중합체막을 피복한 셀루로즈 담체의 표면상에서 일정하게 발색케 하여 정량적으로 용이하게 측정하는 것이다.

이때 반투과성막 형성용으로 사용된 중합체로 수용성 폴리비닐알콜을 혼합사용 한 것이 특징이다.

종래에는 에틸셀루로즈와 같은 셀루로즈에텔과 에스텔 및 폴리비닐 아세티드 같은 합성중합체를 유기용매에 용해하여 상기와 동일한 목적을 달성키 위해 반투과성 막을 형성하여 혈당검사용으로 사용하므로 과잉량의 혈색소를 제거시 막이 떨어지거나 반응색소가 균일하지 못하고 예민도가 떨어지는 단점이 있다.

본 발명의 폴리빌닐알콜은 수용성 중합체로 셀루로즈 담체에 막을 형성케 하여 혈액과 접착할 때 용이하게 포도당과 반응하고 혈색소등의 고분자물질은 막을 통과하지 않고 표면에 남아 있어 반응이 끝난 후 혈색소를 제거할 때 막을 손상하지 않고 반응새소를 용이하게 식별할 수 있는 잇점이 있다.

검사반응에 관여하는 조성물중의 효소활성 이외에 안정제등의 첨가제가 포함된다. 첨가제로는 주로 효소안정제의 작용에 관여된 것으로 폴리비닐피로 리돈(PVP), 제라틴, 알긴산, 소의혈청알부민, 폴리비닐알콜(PVA) 및 게면활성제등이 사용된다.

본 발명에서는 전술한 바와같이 반투과성막을 형성하는 중합체로 폴리비닐 알콜올 첨가함으로써 별도의 안정제가 필요없이 폴리비닐알콜만으로도 효과적으로 혈당검사의 기능을 발휘할 수 잇는 것이 특징이다.

상기 검사용혼합조성물에 발색 색원체로 오르소톨리딘과 벤디딘 또는 이들 혼합색소를 첨가하여 와트만 셀루로즈 여과지 두께 약 0.15mm에 흡착 또는 도말 피복시킨 다음 상온에서 건조한 시험지를 혈당검사용 시험지로 사용한다.

본 검사용 시험지를 시료액인 전혈과 접착하고 반응시간 30초후에 혈색소를 제거한 다음 표면에 색이 암청자색으로 발색되었을 때 육안적으로 표준색과 식별하거나 정량용 모니타에서 혈당량을 정량할 수 있다.

본 발명의 혈당검사용 시험지의 실제 제조는 다음 실시예에서 상세히 예중하여 줄것이나 본 명세서중의 발명범위에 국한되는 것은 아니다.

[실시예]

혈당검사용 혼합액 100㎖를 제조하기 위해 다음 조성성분량을 혼합한다.

구연산 완충용액, pH6.0 50㎖에 폴리비닐알콜 15g을 혼합하고 온도 약 95°에서 천천히 교반 가열하면서 완전히 용해한다. 온도를 약 35°로 냉각시킨 다음 별도로 용해한 포도당 산화효소와 과산화효소를 혼합하고 색원체로 오르소를 라딘과 베디딘을 50% 메탄올 5㎖에 용해하여 상기 혼합액에 추가로 진탕하면서 혼합한다.

담체로 사용할 시험지로는 왓토만 셀루로즈 여과지 0.15mm를 일정한 크기로 절단한 다음 0.05% 에틸셀루로즈 알콜용액에 침적하여 전처리 과정을 거친 건조한 시험지를 사용한다.

상기 조성의 혼합액을 도말기로 일정 두께의 막이 형성되도록 시험지 표면에 고르게 피복하고 온도 약 45℃의 열풍건조기에서 약 20분이내에 건조시킨 다음 일정한 크기 5mm×7mm의 장방형절편으로 절단한후 폭 5mm와 길이 7㎝의 액체불침투성 플라스틱 휠림의 한쪽끝에 접착제로 접착한다.

약 30분간 실온에서 건조시킨 시험지 부분을 0.01% 에틸셀루로즈 알콜용액에 다시 침적하여 후처리 과정을 거친 건조한 시험지를 혈당검사용 시험지로 사용한다.

상기와 같이 제조한 혈당검사용 시험지를 0에서 800㎎% 농도의 포도당 증가량을 함유하는 각종인공 혈액시료에 접속한 다음 정확히 30초후 과잉량의 혈색소를 씻어내고 나타난 반응색은 다음표와 같다.

상기 결과의 반응색외로부터 전혈중의 포도당 정량할 수 있음으로 본 발명의 혈당시험지를 사용하면 정확한 혈당정량 분석을 실시할 수 있다.

Claims (1)

1. 포도당 산화효소와 과산화효소 및 색원체로 오르소톨리딘과 베디딘을 함유하는 공지의 포도당 함량의 효소적 측정용 혼합용액에 반투과성 중합체와 안정제로 15% 폴리비닐알콜을 혼합한 조성물의 용액을 0.05% 에틸셀루로즈 알콜용액에 전처리한 셀루로즈 여과지 표면에 엷은 막이 형성되도록 건조한후 다시 0.01% 에틸셀루로즈 알콜용액 후처리 건조시킨것을 특징으로 하는 혈당측정용 시험지의 제조방법.