JPS5881800A - グルコ−ス検出用試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は本質的に試薬として吸着剤マトリックス、グル
コースオキシダーゼ（ＩＩｉ化酵素）、ばルオキシダー
ゼ（過酸化酵素）および色原体を含有し、そして硝酸塩
そして場合によ、９ｖｖ吸収剤を含有する、生物学的液
体中のグルコースを検出する九めの試薬に関する。

真性糖尿病は継続的に監視しなければならない慢性疾患
である。糖尿病患者にとっては医師が指示したのちに、
必要ならば変化する要求に適合せしめる丸めに必要なイ
ンシュリンｉｉを即時に調節することができるように、
自分自身の代謝状態を監視することが合理的であると証
明され九０代謝のチェックは尿中かまたは血液中のグル
コース含量を常套的に測定することによシ行われる。一
般的には糖尿病患者は自分自身の尿中のグルコース値を
半定量的Ｋｌ）ｉｌｌ定するが、これとは対照的に血糖
の定量的測定は寥門家により行われる。

尿中グルコースの測定は尿１００ｄあたｐグルコース約
５９までのＩＩｋＩｉＩＬ範囲を包含すべきである。

現在グルコースの迅速な半定量的測定方法は２つある。

ｔ　イネデイクトの非特異的還元方法による試験錠剤お
よび ２、％異的に反応するグルコースオキシダーゼ、色原体
およびイルオキシダーゼを含浸し九試験片 試験片に含まれるグルコースオキシダーゼは酸素による
グルコースの酸化を触媒作用してグルコノラクト／およ
び過酸化水素を生成する。

それに続く非特異的な反応において過酸化水素がイルオ
キシダーゼ触媒とともに色原体を酸化して色素を与える
。

上鮎の２つの方法はつぎのよう々欠点を有する。

還元法は他の還元性化合物たとえばガラクトースもまた
検出されるので非特異的である。さらＫこの方法では腐
食性の試薬ｔ−使用する必要がある（Ｇ、Ｆｒｉ＊ｄｒ
ｉａｈ氏著［Ｄｌｒ　ｉｎｆｏｒｍｓｒｔｓ　Ａｒ１ｔ
　Ｊ第８巻第９号別刷（１９８０年）］、さらにその反
応はかなシの発熱および妨害性の発泡を伴う６錠剤およ
び試験管を用いてこの試験を実施することは手間がかか
υ、不便であシ、そして費用もかかる。

同様のことは第二の測定方法に４あてはまる。

従来尿のための半定量的な試験片は尿１００−あ九シ最
高グルコース２９までの指示範囲を含むだけであるので
、日常の基本的試験操作を行うのには不適尚である。な
ぜならば一層高濃度のグルコースも当然同時に検出され
るからである。

この欠点を回避する丸めに希釈方法の使用が提案された
（１３ｏｒｇｅおよび１３ａｈｌ＠ｂｕｓａｈ両氏着「
励ム−ｇｉｎｉｓｃｈ＠ｘ１ｔｎｉｋ、Ｊ　ＪＩｇ　７
５巻第５８７−５９１頁（１９８０年）〕、この種の希
釈方法は簡単な基本的測定の丸めには不利である。なぜ
ならば未経験の糖尿病患者が精通していないような手作
業（ビはットの使用、希釈および評１ｉｌ）が期待され
るからである。衛生学的な要求は極めて厳密であシ、常
に満たすことができるとは限らない。

対照的に教わるのが容易であシ、衛生学的に許容するこ
とができ、そしてできるだけ広い濃１範囲を含むような
簡単な試験を糖尿病患者に提供することは重畳である。

従って本宛明の対象は生物学的液体中のグルコースを測
定するための改良された試薬である。

グルコースオキシダーゼは硝酸ナトリウムによ、９１５
％だけ抑制されることが「Ｂｉｏａｈ＠ｍ、Ｊｏｕｒｍ
ｌＪ第４２巻＄１２２１頁（１９４８年）から知られて
いる。

この抑制作用は大過剰の酵嵩が使用されるグルコース試
験片に対しては極めて小さいのでそれは現在まで使用さ
れてはいなかった０本発明者自身の実験によりグルコー
スを測定するための和尚する迅速な試験は硝酸塩によシ
抑制されないことが示された。

驚くべきことには籍に疎水性のＪ［（ＬＹｉａｈｉツ々
氏著［Ｑｕａｌｉｔｙ　０ｏｎｔｒｏ１ｉｎ　Ｃ！１ｉ
ｎｉｃａｌ　Ｃ！ｌｕｍｉｓｔｒｙ、臘ｄＯＪ第４２５
頁（Ｄｅ　Ｇｒｕｙｔｅｒ社１９７５年発行）が使用さ
れる場合には、逆に硝酸塩を含浸したグルコース試験片
によシそれらの指示範囲は有意に拡大されることが見い
出された。この方法により尿１００ｄあた＃）ｌｔＬ高
グルコース約２７１までの、通常の半定量的試験領斌の
指示範囲は、尿１００ｍあたりグルコース５ｐ以上にま
で拡大することができる。従ってこれらの変更せしめら
れ九試験片はそれらの使用範囲に関しては簡単な診断補
助剤に対する糖尿病患者の１求に適合する。

さらにこの種の試験片は衛生学的畳求も満たしている。

さらにこれらの試験片の光に対する抵抗性―石吸収剤の
添加によシ改豐できることが見い出された。

今や、上記の目的は通常の成分に加えて硝酸塩を、そし
て場合によＪｔＵｖ吸収剤を含有する試薬によシ達成さ
れた。

従って本発明は本質的に色原体、グルコースオキシダー
ゼ、ペルオキシダーゼを、そして場合によシ硝酸塩を含
有する安定剤を、モして場合により１７７吸収剤を含有
する吸着剤！トリックスから成る、生物学的液体中のグ
ルコースを検出するための試薬に関する。

さらに本発明は硝酸アンモニウムま九は硝酸の周期律表
第１族元素の塩（硝酸アンモニウムおよび硝酸す）ＩＪ
ウムが好ましい）の使用に関する。使用することができ
るｔｙｖ吸収剤の例はベンゾフェノン、安息香酸、蓚酸
またはベンゾトリアジンの誘導体である。

この種の化合物は「Ｕｌｌｍａｎｎｓ　ｌｎｇｙｋｌｏ
ｐｉｄｉｅ　ａｍｔ＠ａｈｎｉｓｏｈ＠ｎ　Ｏｈ＠ｍ１
ｅＪ　ｌ１ｇ　４版第１５巻第２５９頁に記載されてい
る。２．２′−ジヒドロ中シー４−メトキシベンゾフェ
ノン〔シアソルプ（購５ｏｒｂ）ｔＴＶ２４、アメリカ
ンシアナにド社製品〕、２−ヒドロキシ−４−メトキシ
ベンゾフェノン−５−スルホン酸［ａｙ吸収剤ＨＭＢ８
　「リーデル（Ｒ１ｅｌ＊１　）　Ｊ、ＲＬａｌｅｌ−
１１６Ｈ＆＠ｎ　ＡＧ製製品管たはジヒドロキシベンゾ
フェノンが好ましい。

このように本発明による試薬はグルコースオキシダーゼ
、ペルオキシダーゼ、色原体、水溶性の硝酸塩を、そし
て場合にょＩｔｒｖ吸収剤を會浸し九吸着性支持マトリ
ックスから成る。天然物を九は合成品由来の板状構造を
し九すべての吸着剤九とえば不織布、紙、石綿ま九は重
合体膜を支持マトリックスとして使用することがで暑る
。

上記の試薬は水性溶液中に硝酸塩とともに含まれる色原
体、緩衝剤および酵素を試験紙に適用するようにして有
利に製造される。ＵＶ吸収剤はま九この含浸溶液に溶解
することもできる。

まｆｒ−ＵＶ＠収剤を水忌避剤とともに奄う一つの段階
で支持マトリックスに適用することも可能である。含浸
段階の順序は任意であり、水忌避剤の適用から始めるこ
ともできる。最初に指示薬ベースの紙に色原体、緩衝剤
、酵素、湿潤剤、安定剤、水溶性の硝酸塩およびＴ７Ｖ
吸収剤を含浸するような方法が有効であることがわかっ
た。

つぎに水と混和しない有機溶媒たとえばトルエンに溶解
されたもう一つのｔｌＶ吸収剤および水忌避剤たとえば
エチルセルロースをＪ用ｆる。

従って本発明による試薬の好ましい製造法は２段階から
成る。乾燥後反応支持体を一層容易に取シ扱うためにプ
ラスチックの膜上べ積層する。

それぞれの場合に使用される硝酸塩の量は臨界的ではな
く、予想される特定の使用に適合するように、すなわち
その濃度範囲が包含されるようＶＣｌ２節することがで
きる。硝酸アンモニウムに関しては０１〜７．１　（Ｗ
：マ）であってもよい。

Ａ５〜４．０％（ｖ：ｖ）のｌｌ１１Ｆが好ましい。

使用されるＵＶ吸収剤の量もまた臨界的ではない、一般
的にはよシ多量の硝酸塩に対してより多量のＵＶ吸収剤
が使用される。　ａＶ吸収剤の最大濃度は選ばれ九溶媒
中でのその溶解度によシ限定される。そのＩＩｌ＆は１
１〜５．０９１（Ｗ；リテ変、することかできるが、ａ
４〜五ｏ−（ｗ：りの濃度範囲が好ましい。

上記の試薬を使用する丸めには試薬されるべき液体にそ
れを短時間浸す、その液体中のグルコース含量に応じて
段階のついた発色反応が生起し、それによシ尿１００ｄ
あたシのグルコース５ｔまでを半定量的にＲ＃付けする
ことがで暑る。

本発明の利点は先行技術による迅速な診断補助剤を用い
九比較研究から明らかになった。

実施例１〜５に従って６枚の試験紙を製造し、そのうち
の１ａ＃′ｉ先行技術を表わす、１ｂは水溶性の硝酸塩
を用いて製造され九、１Ｃは１ｂと同様であるが、九だ
し七の試験紙にはさらにＷ吸収剤を含浸し友。

つぎの試験は完成し九試験紙を用いて行われ九。

試験紙１＆、１ｂおよび１０を日光にさらし九。

約２０分後にＩｂＦｉ濃緑色に変色したので、つぎにグ
ルコースを含まない溶液で漏した場合に間違つ九正の結
果を与え九、対照的に試験紙１＆および１ｏｉ！６０分
後でさえもそれらの最初の色を変光なかつえ。

もう一つの一連の試験において尿１００ｍあ九シグルコ
ース５０．１５０．５００．１，５００．翫０００およ
びｓ、ｏｏｏｑを含有する尿の試料に試験紙１ａおよび
１Ｃを浸した。Ｌ５００１ｆ／ｄｌ　ｔで０＃度段階は
試験紙１＆を用いて容易に区別することかで１１九が、
２つのさらに高いグルコースｌｌｌ１ｅは区別されなか
った。これとは対照的に試験＃１０を用いた場合には尿
１００ｍあた）グルコース５０ＷＩＰから尿１００−あ
たシグルー−ス氏ｏｏｏｓｐまでの完全なスペクトルを
区別することができ丸。

本発明をさらによく理解せしめる丸めに以下に実施例を
あげて説明する。

実施例１　試験紙１ａ つぎの成分を１１Ｍ（えん駿緩衝液（Ｉ）１５．５）１
００ｓｓＪＫ溶解して溶液１とする。

ゼラチン　　　　　　α５Ｐ タートラジ／　　　　　　　　　　スＯｇＩＪＩＯ−ト
リジ／ジ塩酸塩　　　　　　　　　　　ＣＬ６ｐイルオ
キクダーゼ　　　　　　　　　　α２ｐグルコースオキ
シダーゼ　　　　　　　　　　α３Ｐポリエチレングリ
コール１５００　　　　　　　　　　　　’１．ＯＰ試
験紙Ｎａ２３１６　（８ｏｈｌｓｉｏｈｅｒおよび８（
！ｈｔｉ１１社製品）にとの含浸解液を含浸した。乾燥
６中８０℃で乾燥し九のち、トルエン１００ｗＬＩ中に
エチルセルロースα６ｐを含有する溶液２を用いて上記
の試験紙を第２０含浸操作に付した。

実施例２　試験紙１１ 実施例１に従って試験紙１ｂを製造し九が、九だしさら
に硝酸アン峰ニウム２ｔを溶液１に溶解した。第２の含
浸操作は溶液２を用いて行つ九。

実施例３　試験紙１０ 実施例１による含浸用溶液１１００−にさらにつぎの成
分を溶解した。

硝酸アンモニウム　　　　　　　　　　２．ＯＰＷ吸収
剤園田「リーデルＪ　　　　　　　　　　　ｔｏｐ第゛
２の含浸の九めにトルエン１００−にっぎの成分を溶解
した。

エテルセルロース　　　　　　　　　　α５ｐシアソル
プシアナンド　　　　　　　　　　　　　２．Ｏｐ試験
紙ｉａ、１ｂおよび１ｃは上記のような特性を示した。

特許出願人　　ベーリングゲエルヶ・アクチェンゲゼル
シャフト

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）本質的に色原体、グルコースオキシダーゼ、イルオ
   キシダーゼを、そして場合によｐ硝酸塩を含有する安定
   剤を、そして場合によ９石吸収剤を含有する吸着剤マト
   リックスから成る、生物学的液体中のグルコースを検出
   するための試薬。 ２）硝酸塩が硝酸の周期律表第１族元素の塩であるか、
   を友は硝酸アンモニウムである、特許請求の範８第１項
   記載の試薬。 り　　Ｗ吸収剤が安息香酸、ベンゾフェノン、蓚酸の誘
   導体であるか、または（ンゾトリアジンである特許請求
   の範囲第１項記載の試薬。 ４）硝酸塩が硝酸アンモニウムまたは硝酸ナトリウムで
   ある％ｔ’ｒｉｉｅ求の範１１！２項記載Ｏ試６ ５）　　ｔｒｖ吸収剤が２．２′−ジヒドロキシ−４−
   メトキシベンゾフェノンおよび２−ヒドロキシ−４−メ
   ト中ジベンゾフェノンー５−スルホン酸である特許請求
   の範囲第３項記載の試薬。 ６）硝酸塩、場合によ、ｆｉＵＶ吸収剤、酵素および色
   原体を含有する水性溶液で支持体を処理し、そして乾燥
   し九のち、もう１種のＵｖａ収剤および水忌避剤を含有
   する水非混和性の溶液で処理することから成る、特許請
   求の範ｉＦｔ［１項記載の試薬の製造法。