KR20250040638A - 핵산 전달을 위한 양이온성 지질 화합물과 조성물 및 용도 - Google Patents

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KR20250040638A
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cationic lipid
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융 후
야페이 리
자오위 후
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셴젠 레겐 바이오테크놀러지 컴퍼니 리미티드
우한 레겐 바이오테크놀로지 컴퍼니 리미티드
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Abstract

본 발명은 핵산 전달을 위한 양이온성 지질 화합물과 조성물 및 용도를 제공한다. 상기 화합물은 하기 식(I)로 나타낸 바와 같다. 본 발명은 상기 화합물을 핵심 성분으로 하는 나노 지질 입자의 핵산 전달 측면에서의 용도, 전달 담체를 포함하는 성분, 제조 방법 및 사용 방법을 더 제공한다.
(I)

Description

핵산 전달을 위한 양이온성 지질 화합물과 조성물 및 용도
본 발명은 지질 전달 담체 분야에 관한 것으로, 다른 지질 성분과 결합하여 약물을 담지할 수 있는 나노 지질 입자를 형성하여, 시험관 내 및 생체 내에서 세포 외부에서 세포 내부로의 핵산 전달을 실현할 수 있는 양이온성 지질 화합물에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 핵산 전달을 위한 양이온성 지질 화합물과 조성물 및 용도에 관한 것이다.
핵산 약물은 외인성 유전자를 표적 세포나 조직에 도입하여 특정 유전자를 대체, 보상, 차단 또는 변형함으로써 질병을 치료하고 예방하는 목적을 달성한다. R&D 및 생산 공정이 상대적으로 간단하며, R&D 주기가 짧고 임상 개발 성공률이 높으며 개선을 위한 가소성이 더 좋은 등 장점이 있다. 핵산 백신은 최근 몇 년 동안 코로나19를 예방하는 주요 수단 중 하나였으며 시장에서의 큰 잠재력도 입증되었다.
그러나, 나출(naked) mRNA는 생체내 순환 시간이 짧고, 쉽게 분해되며, 표적 세포 또는 표적 조직에 들어가기 어렵다. 따라서 mRNA 약물의 생체내 전달 효율을 개선하는 것은 해당 종류의 제품의 효과를 개선하기 위한 핵심 방향 중 하나이다.
현재 가장 널리 사용되는 핵산 약물의 전달 담체는 지질 나노 입자로, 유전자 약물의 효능 및 표적 전달 효과를 개선하는 특징을 가지고 있으며, 핵산이 생체내에서 빠르게 분해되지 않도록 보호하고, 순환 시간을 연장하고, 표적 전달을 향상시킬 수 있다. 지질 나노 입자는 양이온성 지질 화합물, 0-2종의 보조 지질 및 0-1종의 PEG 지질을 포함하는 2-4개의 지질 성분으로 구성된다. 여기서 양이온성 지질 화합물은 핵산의 캡슐화 및 방출에서 핵심적인 역할을 하므로 새롭고 효율적이며 독성이 낮은 양이온성 지질 화합물을 개발하는 것이 중요하다.
본 발명은 약학적으로 허용 가능한 염 및 이의 입체 이성질체 또는 호변 이성질체를 포함하는 황 함유 양이온성 지질 화합물을 제공한다. 주요 용도는 다른 지질 성분과 특정 비율로 병용되어 예방제 또는 치료제(예를 들면 치료용 핵산) 전달을 위한 지질 나노 입자를 형성하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 이러한 지질 화합물의 합성 방법을 제공하는 것으로, 상기 합성 방법은 사용 원료를 쉽게 구할 수 있고, 조건이 온화한 반응 경로를 사용하고, 생성물 수율이 높고, 기기 및 장비에 대한 요구가 낮으며 조작이 간단하다.
일부 예에서, 치료용 핵산은 플라스미드 DNA, 메신저 RNA, 안티센스 올리고뉴클레오타이드(ASON), 마이크로 RNA(miRNA), 간섭 RNA(micRNA), dicer기질 RNA, 상보적 DNA(cDNA)를 포함한다.
동시에 본 발명은 이러한 양이온성 지질 화합물과 다른 지질 성분을 병용하는 경우의 제제 비율 및 사용 방법, 및 세포와 동물 모델에서의 응용을 더 제공한다.
본 발명의 실시방안에서는, 하기 식(I)의 구조를 갖는 양이온성 지질 화합물:
(I)
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변 이성질체 또는 입체 이성질체를 사용하고,
L1, L2는 연결 결합 또는 2가 연결기이고, 상기 2가 연결기는 각각 독립적으로 -C(=O)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -O-, -S-, -S-S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -N(R8)C(=O)-, -C(=O)N(R8)-, -N(R8)C(=O)O-, -OC(=O)N(R8)-, -SC(＝O)N(R8)-, -N(R8)C(＝O)S-, -C(＝S)-, -SC(＝S)-, 및 -C(＝S)S- 중 어느 하나로부터 선택되고, 상기 R8은 H 또는 C1-C12알킬이고;
R2 및 R3은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C18직쇄 알킬렌 또는 -R9-L3-R10-이고; 상기 R9 및 R10은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C10직쇄 알킬렌이고, L3은 O 또는 S이고;
R4, R5, R6 및 R7은 독립적으로 수소, 또는 치환 또는 비치환된 C1-C30지방족 탄화수소이거나, 또는 -R11-L4-R12이고; 상기 R11 및 R12는 나타날 때마다 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C18지방족 탄화수소이고, L4는 O 또는 S이고;
상기 R2, R3, R4, R5, R6 및 R7은 적어도 하나의 O 또는 S를 함유하고;
R1은 H, -R13, -OR13, -R13-OH, -R13-OR14, -R13-OC(=O)R14, -R13-NHC(=O)-R14, -R13-OCH3 또는 -R13-N(R14)(R15)이고; R13은 C1-C12직쇄 알킬 또는 분지쇄 알킬이고, R14 및 R15는 각각 독립적으로 각각 H 또는 C1-C12직쇄 알킬이거나, 또는, R14와 R15 및 이의 연결된 N원자는 C3-C10헤테로시클로알킬을 형성한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, R8은 H 또는 메틸이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, R1은 -R13-OH 또는 -R13-N(R14)(R15)이고, R13은 C1-C12직쇄 알킬이고; R14 및 R15는 각각 독립적으로 각각 C1-C12직쇄 알킬이고;
R2는 C1-C18직쇄 알킬렌이고;
L1은 -C(=O)S-, -SC(=O)-, -OC(=O)- 또는 -C(=O)O-이고;
R4 및 R5는 각각 독립적으로 C1-C30지방족 탄화수소이고;
R3은 C1-C18직쇄 알킬렌이고;
L2는 -C(=O)S-, -SC(=O)-, -OC(=O)- 또는 -C(=O)O-이고;
R6은 메틸 또는 에틸이고;
R7은 -R11-L4-R12이고; 상기 R11 및 R12는 나타날 때마다 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C18지방족 탄화수소이고, L4는 O 또는 S이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, R13은 C1-C8직쇄 알킬 또는 분지쇄 알킬이고, R14 및 R15는 각각 독립적으로 각각 H 또는 C1-C5직쇄 알킬이거나, 또는, R14와 R15 및 이의 연결된 N원자는 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, R2 및 R3은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C18직쇄 알킬이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, R2 및 R3은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C12직쇄 알킬이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, R4, R5, R6 및 R7은 독립적으로 수소, 또는 치환 또는 비치환된 C1-C18지방족 탄화수소이거나, 또는 -R11-L4-R12이고; 상기 R11 및 R12는 나타날 때마다 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C10지방족 탄화수소이고, L4는 O 또는 S이고; R4, R5, R6 및 R7은 적어도 하나의 O 또는 S를 함유하고, 최대 2개는 수소이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 식(I)의 구조에서 R4, R5, R6 및 R7구조는 각각 독립적으로 H 또는 하기의 알킬쇄이거나, 또는 각각 독립적으로 하기의 알킬쇄의 임의의 탄소 원자가 O 또는 S로 대체되어 형성된 에테르 또는 티오에테르이다:
.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, R1은 -R13-OH 또는 -R13-N(R14)(R15)이고, R13은 C1-C5직쇄 알킬이고, 바람직하게는 C2-C4직쇄 알킬이고; R14 및 R1는 각각 독립적으로 각각 C1-C12직쇄 알킬이고, 바람직하게는 각각 독립적으로 각각 C1-C3직쇄 알킬이고;
R2는 C2-C12직쇄 알킬렌이고, 바람직하게는 C5-C9직쇄 알킬이고, 더 바람직하게는 C5-C7직쇄 알킬이고;
L1은 -C(=O)S-, -SC(=O)-, -OC(=O)- 또는 -C(=O)O-이고;
R4 및 R5는 각각 독립적으로 C3-C13지방족 탄화수소이고, 바람직하게는 C6-C10직쇄 알킬이고, 더 바람직하게는 C6-C8직쇄 알킬이고;
R3은 C2-C10직쇄 알킬렌이고, 바람직하게는 C3-C7직쇄 알킬이고, 더 바람직하게는 C5-C7직쇄 알킬이고;
L2는 -C(=O)S-, -SC(=O)-, -OC(=O)- 또는 -C(=O)O-이고;
R6은 메틸 또는 에틸이고;
R7은 -R11-L4-R12이고; 상기 R11은 C1-C10알킬이고, 바람직하게는 C1-C3알킬이고; R12는 C3-C13알킬이고, 바람직하게는 C6-C10알킬이고, 더 바람직하게는 C6-C8알킬이고; L4는 O 또는 S이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면,
R1은 -R13-OH이고, R13은 C1-3직쇄 알킬이고;
R2는 C5-9직쇄 알킬이고;
L1은 -OC(=O)- 또는 -C(=O)O-이고;
R4 및 R5는 각각 독립적으로 C6-10직쇄 알킬이고;
R3은 C5-7직쇄 알킬이고;
L2는 -OC(=O)- 또는 -C(=O)O-이고;
R6은 메틸, 에틸 또는 프로필이고;
R7은 -R11-L4-R12이고; 상기 R11은 C1-C2알킬이고; R12는 C3-C13알킬이고; L4는 O 또는 S이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면,
R1은 -R13-OH이고, R13은 C2직쇄 알킬이고;
R2는 C5-7직쇄 알킬이고; 바람직하게는 C7 직쇄 알킬이고;
L1은 -OC(=O)- 또는 -C(=O)O-이고;
R4 및 R5는 각각 독립적으로 C8직쇄 알킬이고;
R3은 C5-7직쇄 알킬이고; 바람직하게는 C5직쇄 알킬이고;
L2는 -OC(=O)-이고;
R6은 메틸이고;
R7은 -R11-L4-R12이고; 상기 R11은 C1알킬이고; R12는 C5-C8알킬이고; L4는 O 또는 S이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면,
L1, L2는 각각 독립적으로 -OC(=O)-, -C(=O)O-, -C(=O)S-, -SC(=O)- 중 어느 하나로부터 선택되고;
R2 및 R3은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C18직쇄 알킬렌이고;
R4, R5 및 R6는 독립적으로 수소, 또는 치환 또는 비치환된 C1-C30지방족 탄화수소이고;
R7은 -R11-L4-R12이고; 상기 R11 및 R12는 나타날 때마다 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C18지방족 탄화수소이고, L4는 O 또는 S이고;
R1은 H, -R13-OH, -R13-OCH3 또는 -R13-N(R14)(R15)이고; R13은 C1-C12직쇄 알킬 또는 분지쇄 알킬이고, R14 및 R15는 각각 독립적으로 각각 H 또는 C1-C12직쇄 알킬이거나, 또는, R14와 R15 및 이의 연결된 N원자는 C3-C10헤테로시클로알킬을 형성한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면,
L1, L2는 각각 독립적으로 -OC(=O)-, -C(=O)O-, -C(=O)S-, -SC(=O)- 중 어느 하나로부터 선택되고;
R2 및 R3은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C3-C10직쇄 알킬렌이고;
R4, R5 및 R6는 독립적으로 수소, 또는 치환 또는 비치환된 C1-C15지방족 탄화수소이고;
R7은 -R11-L4-R12이고; 상기 R11 및 R12는 나타날 때마다 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C18지방족 탄화수소이고, L4는 O 또는 S이고;
R1은 -R13-OH이고; R13은 C1-C6직쇄 알킬 또는 분지쇄 알킬이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면,
L1, L2는 각각 독립적으로 -OC(=O)-, -C(=O)O- 중 어느 하나로부터 선택되고;
R2 및 R3은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C3-C10직쇄 알킬렌이고;
R4, R5 및 R6는 독립적으로 수소, 또는 치환 또는 비치환된 C1-C15지방족 탄화수소이고;
R7은 -R11-L4-R12이고; 상기 R11 및 R12는 나타날 때마다 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C10지방족 탄화수소이고, L4는 O 또는 S이고;
R1은 -R13-OH이고; R13은 C1-C6직쇄 알킬 또는 분지쇄 알킬이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면,
L1, L2는 각각 독립적으로 -OC(=O)-, -C(=O)O- 중 어느 하나로부터 선택되고;
R2 및 R3은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C3-C9직쇄 알킬렌이고;
R4, R5 및 R6는 독립적으로 수소, 또는 치환 또는 비치환된 C1-C12지방족 탄화수소이고;
R7은 -R11-L4-R12이고; 상기 R11 및 R12는 나타날 때마다 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C9지방족 탄화수소이고, L4는 O 또는 S이고;
R1은 -R13-OH이고; R13은 C1-C5직쇄 알킬 또는 분지쇄 알킬이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 양이온성 지질 화합물은 하기 표에 나타낸 구조 중 하나를 갖는다:
본 발명은 하나 이상의 본 발명의 양이온성 지질 화합물과 예방용 또는 치료용 핵산을 포함하는 리포솜 제제를 더 제공하고, 상기 리포솜 제제는 특정 질병을 예방하거나 치료하기 위한 것이다.
상기 리포솜 제제는 중성 지질, 하전 지질, 스테로이드 및 폴리머 접합 지질로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 포함한다. 본 발명에 사용되는 치료 물질은 플라스미드 DNA, 메신저 RNA, 안티센스 올리고뉴클레오타이드(ASON), 마이크로 RNA(miRNA), 간섭 RNA(micRNA), dicer기질 RNA, 상보적 DNA(cDNA)을 포함하는 치료용 핵산이다. 바람직하게는 플라스미드 DNA, 메신저 RNA 및 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 핵산과 상기 양이온성 지질 화합물의 몰비는 20:1 내지 1:1이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 핵산과 상기 양이온성 지질 화합물의 몰비는 10:1 내지 4:1이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 리포솜 제제의 직경은 50 nm 내지 300 nm이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 리포솜 제제의 직경은 50 nm 내지 150 nm이거나, 또는 150 nm 내지 200 nm이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 중성 지질, 스테로이드 및 폴리머 접합 지질을 포함하거나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 다른 지질 성분을 더 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 포함된 스테로이드는 콜레스테롤이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 콜레스테롤과 양이온성 지질 화합물의 몰비는 (0-1.5):1이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 폴리머 접합 지질 중의 폴리머는 폴리에틸렌글리콜(PEG)이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 양이온성 지질 화합물과 상기 PEG화된 지질의 몰비는 100:1 내지 20:1이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 PEG화된 지질은 PEG-DAG, PEG-PE, PEG-SDAG, PEG-cer, PEG-DMG 또는 ALC-0159이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 리포솜 제제는 DSPC, DPPC, DMPC, DOPC, POPC, DOPE 및 SM로부터 선택된 하나 이상의 중성 지질을 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 중성 지질은 DSPC 또는 DOPE이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 중성 지질과 상기 양이온성 지질 화합물의 몰비는 (0-0.5):1이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 리포솜 제제는 핵산을 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 핵산은 안티센스 RNA 및/또는 메신저 RNA로부터 선택된다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 핵산은 메신저 RNA이다.
본 발명은 본 발명에 따른 양이온성 지질 화합물 또는 상술한 리포솜 제제의 대상자에서 단백질 발현을 유도하기 위한 약물의 제조에서의 용도를 더 제공한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 대상자는 포유동물이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 대상자는 비인간 영장류이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시방안에 따르면, 상기 대상자는 사람이다.
달리 명시되지 않는 한, 본 출원의 명세서 및 청구범위에 사용된 용어는 아래와 같은 의미를 갖는다.
“알킬”은 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄 포화 지방족 탄화수소를 포함하고, 탄소수 1 내지 20의 알킬, 탄소수 1 내지 8의 알킬, 탄소수 1 내지 6의 알킬, 탄소수 1 내지 4의 알킬을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 비제한적 실시예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, n-헥실 및 이의 다양한 분지쇄 이성질체를 포함하고; 본 명세서에 나타난 알킬의 정의는 본 정의와 일치하다.
“알킬렌”은 치환 또는 비치환된 직쇄 및 분지쇄의 2가 탄화수소를 포함하고, (CH2)v(v는 1 내지 10의 정수임)를 포함하며, 알킬렌의 실시예는 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, 부틸렌을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
“지방족 탄화수소”는 포화 또는 불포화, 직쇄 또는 분지쇄의 사슬형 또는 고리형 탄화수소, 헤테로 원자를 포함하거나 포함하지 않는 지방족 탄화수소를 포함하고; 상기 헤테로 원자는 질소 원자, 산소 원자, 불소 원자, 인 원자, 황 원자 및 셀레늄 원자를 의미한다. 상기 지방족 탄화수소의 유형은 알킬, 알케닐, 알키닐 등으로부터 선택될 수 있다. 용어 “C1-10지방족 탄화수소”는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, tert-부틸, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, n-헥실, n-헵틸, 비닐, 1-프로페닐, 2-프로페닐, 1-메틸비닐, 1-부테닐, 1-에틸비닐, 1-메틸-2-프로페닐, 2-부테닐, 3-부테닐, 2-메틸-1-프로페닐, 2-메틸-2-프로페닐, 1-펜테닐, 1-헥세닐, 에티닐, 1-프로피닐, 2-프로피닐, 1-부티닐, 1-메틸-2-프로피닐, 3-부티닐, 1-펜티닐, 1-헥시닐, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실 등을 포함한다.
"헤테로시클로알킬"은 헤테로 원자를 함유하는 치환 또는 비치환된 포화 시클로알킬을 포함하고, 3 내지 10의 원자, 3내지 8의 원자를 포함하지만 이에 제한되지 않고, 1내지 3개의 N, O 또는 S로부터 선택된 헤테로 원자를 포함하고, 헤테로시클로알킬의 고리에서 선택적으로 치환된 N, S는 다양한 산화 상태로 산화될 수 있다. 헤테로시클로알킬은 헤테로 원자 또는 탄소 원자에 연결될 수 있고, 헤테로시클로알킬은 방향족 고리 또는 비방향족 고리에 연결될 수 있으며, 헤테로시클로알킬은 브리징 고리 또는 스피로 고리가 연결되어 있을 수 있고, 비제한적인 실시예는 에폭시에틸, 아지리디닐, 옥세티디닐, 아제티디닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로-2H-피라닐, 디옥솔라닐, 디옥사닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 이미다졸리디닐, 옥사졸리디닐, 옥사지나닐, 모르폴리노, 헥사하이드로피리미디닐, 피페라지닐을 포함한다.
종합하면, 본 발명은 핵산 전달을 위한 양이온성 지질 화합물 및 리포솜 제제 및 용도를 제공한다. 본 발명의 기술방안은 아래와 같은 장점이 있다:
본 발명의 양이온성 지질 화합물은 에테르 결합 또는 티오에테르 결합을 가지고, 에테르 결합 또는 티오에테르 결합의 도입은 상기 화합물을 더 쉽게 분해되게 하여, 상기 지질 화합물의 생체내 제거 속도를 향상시킴으로써, 상기 화합물로 구성된 담체의 독성이 더 낮고 생체내 잔류물을 더 적게 한다. 또한 구조적 최적화 후, 선별된 양이온성 화합물의 생체내 형질감염 효율은 일부 상업적 형질감염 양이온성 지질 화합물보다 우수하다. 또한 상기 아미노 지질 화합물의 제조 방법은 사용 원료를 쉽게 구할 수 있고, 반응 조건이 온화하고, 생성물 수율이 높고, 기기 및 장비에 대한 요구가 낮으며 조작이 간단한 장점을 갖는다.
도 1은 실시예 21의 근육내 주사된 마우스의 생체 영상 상대적 형광 강도이다.
도 2는 실시예 22의 폐 분무로 전달된 마우스의 생체 영상 상대적 형광 강도이다.
도 3은 실시예 23의 결합 항체 역가이다.
도 4는 실시예 24의 결합 항체 역가이다.
도 5는 실시예 25의 간 및 신장 기능 평가도이다.
도 6은 실시예 28의 형광 영상도이다.
도 7은 실시예 28의 형광 영상 결과 통계 수치이다.
이하, 첨부된 도면과 실시예를 참조하여 본 발명의 기술 방안을 상세히 설명하지만, 본 발명의 보호 범위는 이에 제한되지 않는다.
실시예 1
화합물 2의 합성
단계 1:
화합물 2-1(3.00 g)의 tert-부탄올(20 mL) 용액에 1-데칸올(3.23 g) 및 탄산세슘(11.1 g)을 순차적으로 첨가한다. 용액을 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 박층크로마토그래피(석유 에테르:에틸아세테이트=10:1)는 새로운 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응액을 여과하고, 얻어진 여액을 농축한 후의 조생성물은 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-10%의 에틸아세테이트(부피 백분율)를 함유한 석유 에테르 용액이다)로 정제하여 화합물 2-2(3.93 g, 69％ 수율)를 얻었다.
단계 2:
화합물 2-2(3.00g)의 THF(20 mL) 및 물의 용액에 수산화리튬(860 mg)을 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반한다. TLC는 극성이 커진 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하여 테트라히드로푸란을 제거하였고, 물을 첨가하여 희석한 후, 에틸아세테이트(30 mL)로 1회 추출하고, 묽은 염산으로 수상을 pH=2로 조절하고, 에틸아세테이트(30 mL)로 2회 추출하고, 유기층을 합치고, 농축하여 화합물 2-3(2.10 g, 95％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
화합물 2-3(2.0 g)을 DCM(20 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반하고, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 염산염(EDCI, 2.0g), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 1.3 g) 및 5-브로모-1-펜탄올(1.5 g)을 순차적으로 취하여 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 2-3표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(PE/EA=10/1, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 극성이 작아진 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 감압 증발시키고, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(10 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-5% 20min, 5-5% 5min, 유속 15ml/min) 무색 오일상 액체 화합물2-4(2.8 g, 87％ 수율)을 얻었다.
단계 4:
화합물 2-5(5.0 g)을 디클로로메탄(70 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반하고, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 염산염(EDCI, 4.48g), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 3.57 g) 및 8-브로모옥탄산(4.78 g)을 순차적으로 취하여 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 2-5표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(PE/EA=10/1, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 극성이 작아진 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 감압 증발시키고, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(60 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-5% 20min, 5-5% 5min, 유속 30ml/min) 무색 오일상 액체 화합물2-6(8.0 g, 88.9％ 수율)을 얻었다. 하기 실시예 1-6, 8-10, 11-13, 16-18의 2-6화합물은 모두 이 방법으로 합성하였다.
단계 5:
화합물 2-6(8.0 g) 및 에탄올아민(1.59 g)의 아세토니트릴 용액(50 mL)에 탄산칼륨(7.19 g)을 첨가한다. 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 교반한다. TLC는 화합물 2-6이 완전히 사라지고 하나의 극성이 커진 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응액을 여과하고, 얻어진 여액을 농축한 후의 조생성물에, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(25 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-10% 20min, 10-10% 5min, 유속 20ml/min) 무색 오일상 액체 화합물2-7(4.2 g, 54.9％ 수율)을 얻었다.
단계 6:
화합물 2-4(500 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(191 mg), K2CO3(527 mg) 및 화합물 2-7(673 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85°C에서 3시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 2-7에 비해 극성이 작은 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 농축하여 담황색 오일상 액체 화합물2(700 mg, 73％ 수율)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.80 (s, 1H), 4.16 - 4.01 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 3.75 - 3.45 (m, 6H), 2.78 - 2.68 (dd, J = 8.2, 5.8 Hz, 2H), 2.61 - 2.51 (m, 2H), 2.50 - 2.45 (m, 4H), 2.31 - 2.16 (m, 2H), 1.70 - 1.69 (s, 1H), 1.68 - 1.66 (s, 1H), 1.58 - 1.57 (s, 2H), 1.57 - 1.55 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 1.55 - 1.51 (m, 6H), 1.50 - 1.48 (s, 2H), 1.38 - 1.35 (d, J = 1.0 Hz, 4H), 1.35 - 1.30 (m, 20H), 1.30 - 1.27 (m, 20H), 1.19 - 1.17 (m, 3H), 0.91 - 0.88 (m, 9H).
실시예 2
화합물 3의 합성
단계 1:
화합물 3-1(3.00 g)의 tert-부탄올(20 mL) 용액에 1-데칸올(4.45 g) 및 탄산세슘(15.3 g)을 순차적으로 첨가한다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 박층크로마토그래피(석유 에테르:에틸아세테이트=10:1)는 새로운 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응액을 여과하고, 얻어진 여액을 농축한 후의 조생성물, 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-10%의 에틸아세테이트(부피 백분율)를 함유한 석유 에테르 용액이다)로 정제하여 화합물 3-2(3.1 g, 46％ 수율)를 얻었다.
단계 2:
화합물 3-2(3.00g)의 THF(20 mL) 및 물의 용액에 수산화리튬(860 mg)을 첨가하고 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반한다. TLC(석유 에테르:에틸아세테이트=10:1)는 극성이 커진 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하여 테트라히드로푸란을 제거하였고, 물을 첨가하여 희석한 후, 에틸아세테이트(30 mL)로 1회 추출하고, 묽은 염산으로 수상을 pH=2로 조절하고, 에틸아세테이트(30 mL)로 2회 추출하고, 유기층을 합치고, 농축하여 화합물 3-3(2.50 g, 92％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
화합물 3-3(2.0 g)을 DCM(20 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반하고, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 염산염(EDCI, 2.0g), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 1.3 g) 및 5-브로모-1-펜탄올(1.5 g)을 순차적으로 취하여 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 3-3표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(PE/EA=10/1, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 극성이 작아진 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 감압 증발시키고, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(10 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-5% 20min, 5-5% 5min, 유속 15ml/min) 무색 오일상 액체 화합물3-4(2.6 g, 83％ 수율)을 얻었다.
단계 4:
화합물 3-4(500 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(191 mg), K2CO3(527 mg) 및 화합물 2-7(673 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85°C에서 3시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 2-7에 비해 극성이 작은 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 농축하여 담황색 오일상 액체 화합물3(750 mg, 80％ 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.14 - 4.02 (d, J = 2.6 Hz, 2H), 3.73 - 3.46 (m, 6H), 2.61 (s, 1H), 2.59 - 2.50 (m, 2H), 2.49 - 2.45 (m, 4H), 2.29 - 2.18 (m, 2H), 1.71 - 1.63 (m, 4H), 1.60 - 1.50 (m, 12H), 1.49 (s, 2H), 1.38 - 1.36 (d, J = 0.6 Hz, 4H), 1.35 - 1.30 (m, 20H), 1.30 - 1.26 (m, 20H), 0.92 (s, 3H), 0.91 - 0.87 (s, 9H).
실시예 3
화합물 4의 합성
단계 1:
화합물 4-1(3.00 g)의 tert-부탄올(20 mL) 용액에 1-데칸올(4.6 g) 및 탄산세슘(16.1 g)을 순차적으로 첨가한다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 박층크로마토그래피(석유 에테르:에틸아세테이트=10:1)는 새로운 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응액을 여과하고, 얻어진 여액을 농축한 후의 조생성물, 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-10%의 에틸아세테이트(부피 백분율)를 함유한 석유 에테르 용액이다)로 정제하여 화합물 4-2(3.0 g, 47.3％ 수율)를 얻었다.
단계 2:
화합물 4-2(3.00g)의 THF(20 mL) 및 물의 용액에 수산화리튬(860 mg)을 첨가하고 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반한다. TLC(석유 에테르:에틸아세테이트=10:1)는 극성이 커진 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하여 테트라히드로푸란을 제거하였고, 물을 첨가하여 희석한 후, 에틸아세테이트(30 mL)로 1회 추출하고, 묽은 염산으로 수상을 pH=2로 조절하고, 에틸아세테이트(30 mL)로 2회 추출하고, 유기층을 합치고, 농축하여 화합물 4-3(2.50 g, 92％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
화합물 4-3(2.0 g)을 DCM(20 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반하고, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 염산염(EDCI, 2.1g), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 1.4 g) 및 5-브로모-1-펜탄올(1.6 g)을 순차적으로 취하여 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 3-3표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(PE/EA=10/1, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 극성이 작아진 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 감압 증발시키고, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(10 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-5% 20min, 5-5% 5min, 유속 15ml/min) 무색 오일상 액체 화합물4-4(2.6 g, 84％ 수율)을 얻었다.
단계 4:
화합물 4-4(500 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(191 mg), K2CO3(527 mg) 및 화합물 2-7(673 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85°C에서 3시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 2-7에 비해 극성이 작은 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 %(DCM/MeOH 용액 내 메탄올의 부피 백분율, 이하 동일) 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 농축하여 담황색 오일상 액체 화합물4(610 mg, 65.7% 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.80 - 4.74 (s, 1H), 4.15 - 4.01 (d, J = 2.6 Hz, 2H), 3.73 - 3.44 (m, 6H), 2.56 - 2.50 (m, 3H), 2.49 - 2.45 (m, 4H), 2.29 - 2.18 (m, 2H), 1.71 - 1.47 (m, 18H), 1.41 - 1.26 (m, 46H), 0.96 - 0.92 (m, 3H), 0.99 (s, 9H).
실시예 4
화합물 6의 합성
단계 1:
화합물 6-1(19.0 g)의 tert-부탄올(20 mL) 용액에 1-데칸올(3.0 g) 및 탄산세슘(12.4 g)을 순차적으로 첨가한다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 박층크로마토그래피(석유 에테르:에틸아세테이트=10:1)는 새로운 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응액을 여과하고, 얻어진 여액을 농축한 후의 조생성물, 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-10%의 에틸아세테이트(부피 백분율)를 함유한 석유 에테르 용액이다)로 정제하여 화합물 6-2(2.1 g, 43％ 수율)을 얻었다.
단계 2:
화합물 6-2(2.1g)의 THF(20 mL) 및 물(10 mL)의 용액에 수산화리튬(584 mg)을 첨가하고 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반한다. TLC(석유 에테르:에틸아세테이트=10:1)는 극성이 커진 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하여 테트라히드로푸란을 제거하였고, 물을 첨가하여 희석한 후, 에틸아세테이트(30 mL)로 1회 추출하고, 묽은 염산으로 수상을 pH=2로 조절하고, 에틸아세테이트(30 mL)로 2회 추출하고, 유기상을 합치고, 농축하여 화합물 6-3(1.6 g, 85％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
화합물 6-3(2.0 g)을 DCM(20 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반하고, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 염산염(EDCI, 2.0g), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 1.3 g) 및 5-브로모-1-펜탄올(1.5 g)을 순차적으로 취하여 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 6-3표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(PE/EA=10/1, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 극성이 작아진 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 감압 증발시키고, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(10 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-5% 20min, 5-5% 5min, 유속 15ml/min) 무색 오일상 액체 화합물 6-4(2.5 g, 82％ 수율)을 얻었다.
단계 4:
화합물 6-4(500 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(191 mg), K2CO3(527 mg) 및 화합물 2-7(673 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85°C에서 3시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 2-7에 비해 극성이 작은 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 농축하여 담황색 오일상 액체 화합물 6(742 mg, 75％ 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.11 (s, 2H), 3.68 - 3.57 (d, J = 5.0 Hz, 4H), 3.55 - 3.46 (s, 2H), 2.61 - 2.43 (m, 8H), 2.28 - 2.17 (s, 2H), 1.73 - 1.63 (d, J = 3.9 Hz, 4H), 1.60 - 1.46 (m, 12H), 1.39 - 1.23 (m, 40H), 0.96 - 0.84 (s, 9H).
실시예 5
화합물 7의 합성
단계 1:
화합물 2-1(3.00 g)의 tert-부탄올(20 mL) 용액에 옥탄올(3.1 g) 및 탄산세슘(11.0 g)을 순차적으로 첨가한다. 용액을 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 박층크로마토그래피(석유 에테르:에틸아세테이트=10:1)는 새로운 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응액을 여과하고, 얻어진 여액을 농축한 후의 조생성물은 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-10%의 에틸아세테이트(부피 백분율)를 함유한 석유 에테르 용액이다)로 정제하여 화합물 7-2(3.6 g, 69％ 수율)를 얻었다.
단계 2:
화합물 7-2(3.00g)의 THF(20 mL) 및 물의 용액에 수산화리튬(860 mg)을 첨가하고 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반한다. TLC는 극성이 커진 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하여 테트라히드로푸란을 제거하였고, 물을 첨가하여 희석한 후, 에틸아세테이트(30 mL)로 1회 추출하고, 묽은 염산으로 수상을 pH=2로 조절하고, 에틸아세테이트(30 mL)로 2회 추출하고, 유기층을 합치고, 농축하여 화합물 7-3(2.0 g, 94％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
화합물 7-3(2.0 g)을 DCM(20 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반하고, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 염산염(EDCI, 2.0g), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 1.3 g) 및 5-브로모-1-펜탄올(1.5 g)을 순차적으로 취하여 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 7-3표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(PE/EA=10/1, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 극성이 작아진 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 감압 증발시키고, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(10 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-5% 20min, 5-5% 5min, 유속 15ml/min) 무색 오일상 액체 화합물 7-4(2.5 g, 74％ 수율)을 얻었다.
단계 4:
화합물 7-4(500 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(191 mg), K2CO3(527 mg) 및 화합물 2-7(673 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85°C에서 3시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하고 희석하여 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 2-7에 비해 극성이 작은 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 농축하여 담황색 오일상 액체 화합물 7(750 mg, 75％ 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.09 (d, J = 2.2 Hz, 2H), 3.78 - 3.37 (m, 6H), 2.75 (s, 1H), 2.55 (d, J = 3.8 Hz, 2H), 2.49 - 2.43 (m, 4H), 2.30 - 2.16 (m, 2H), 1.71 - 1.65 (m, 2H), 1.64 (s, 2H), 1.60 - 1.50 (m, 10H), 1.49 (s, 2H), 1.37(d, J = 0.6 Hz, 4H), 1.35 - 1.30 (m, 20H), 1.30 - 1.26 (m, 16H), 1.22 - 1.14 (m, 3H), 0.99 (s, 9H).
실시예 6
화합물 14의 합성
단계 1:
화합물 14-1(3.0 g) 및 트리에틸아민(5.3 g)의 디클로로메탄(50 mL) 용액에 아이스 배스 조건에서 p-톨루엔설포닐 클로라이드(7.4 g)를 첨가한다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 DCM(30 mL)으로 희석하고, 묽은 염산 및 염수(100 mL)로 세척한다. 유기층을 합치고 Na2SO4로 건조하고, 진공에서 용매를 제거하여 조생성물을 얻었고, 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-10％EA(부피 백분율)을 함유하는 n-헥산 용액이다)로 정제하여 화합물 14-2(6.0 g, 86％ 수율)을 얻었다.
단계 2:
아이스 배스 조건에서, tert-부틸디메틸히드록시에톡시실란(2.0 g)의 DMF (20 mL) 용액에 NaH(680 mg, 60%)를 첨가하고, 혼합물을 0 ℃에서 30분 동안 교반 한 후, 14-2를 용액에 서서히 첨가하고, 용액을 80 ℃에서 2시간 동안 교반한다. 용액이 실온으로 냉각된 후, 포화 염화암모늄 용액을 첨가하여 퀀칭하고, 에틸아세테이트로 추출하고, 유기층을 합치고 Na2SO4로 건조하고, 진공에서 용매를 제거하여 조생성물을 얻었고, 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-10％EA(부피 백분율)을 함유하는 n-헥산 용액이다)로 정제하여 화합물 14-3(2.5 g, 80％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
아이스 배스 조건에서, 14-3 (2.5 g)의 무수 테트라히드로푸란(20 mL) 용액에 1M TBAF 용액을 첨가하고, 용액을 실온으로 승온시키고, 실온에서 2시간 동안 교반하고, 포화 염화암모늄 용액을 첨가하고, 물을 첨가하여 희석한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 유기층을 합치고 Na2SO4로 건조하고, 진공에서 용매를 제거하여 조생성물을 얻었고, 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-60％EA(부피 백분율)의 n-헥산을 함유하는 용액이다)로 정제하여 화합물 14-4(1.4 g, 96％ 수율)를 얻었다.
단계 4:
화합물 14-4(1.4 g)의 DCM(20 mL) 용액에 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 1.07 g), 7-브로모헵탄산(2.01 g) 및 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)(EDCl, 2.01g)를 순차적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 DCM(30 mL)으로 희석하고, 포화 NaHCO3(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척한다. 유기층을 합치고 Na2SO4로 건조하고, 진공에서 용매를 제거하여 조생성물을 얻었고, 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-1％EA(부피 백분율)를 함유하는 n-헥산 용액이다)로 정제하고, 순수한 생성물 분획을 증발시켜, 화합물14-5(2.10g, 68％ 수율)을 얻었다.
단계 5:
화합물 14-5(500 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(191 mg), K2CO3(527 mg) 및 화합물 2-7(673 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85°C에서 3시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 2-7에 비해 극성이 작은 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 농축하여 담황색 오일상 액체 화합물14(820 mg, 81％ 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.21 (s, 2H), 3.64 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.53 (s, 2H), 2.55 (s, 2H), 2.48 (s, 4H), 2.24 (s, 4H), 1.71 - 1.65 (m, 4H), 1.58 (d, J = 6.4 Hz, 4H), 1.53 (s, 4H), 1.51 (s, 2H), 1.38 - 1.35 (m, 6H), 1.35 - 1.33 (m, 8H), 1.32 (d, J = 1.0 Hz, 4H), 1.32 - 1.31 (m, 10H), 1.29 (s, 4H), 1.29 (s, 2H), 1.29 - 1.27 (m, 8H), 0.97 - 0.82 (m, 9H).
실시예 7
화합물 17의 합성
단계 1:
화합물 2-1(5.00 g)의 tert-부탄올(40 mL) 용액에 n-헥산올(2.90 g) 및 탄산세슘(27.8g)을 순차적으로 첨가한다. 용액을 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 박층크로마토그래피(석유 에테르:에틸아세테이트=10:1)는 새로운 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응액을 여과하고, 얻어진 여액을 농축한 후의 조생성물은 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-10%의 에틸아세테이트(부피 백분율)를 함유한 석유 에테르 용액이다)로 정제하여 화합물 17-2(3.14 g, 39.8％ 수율)을 얻었다.
단계 2:
화합물 17-2(3.00g)의 THF(20 mL) 및 물(20 mL)의 용액에 수산화리튬(1.03 g)을 첨가하고 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반한다. TLC는 극성이 커진 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하여 테트라히드로푸란을 제거하였고, 물을 첨가하여 희석한 후, 에틸아세테이트(30 mL)로 1회 추출하고, 묽은 염산으로 수상을 pH=2로 조절하고, 에틸아세테이트(30 mL)로 2회 추출하고, 유기층을 합치고, 농축하여 화합물 17-3(1.80 g, 88.7％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
화합물 17-3(2.0 g)을 DCM(20 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반하고, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 염산염(EDCI, 3.1g), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 2.0 g) 및 7-브로모-1-헵탄올(2.3g)을 순차적으로 취하여 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 2-3표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(PE/EA=10/1, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 극성이 작아진 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 감압 증발시키고, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(10 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-5% 20min, 5-5% 5min, 유속 15ml/min) 무색 오일상 액체 화합물 17-4(2.8 g, 74％ 수율)를 얻었다.
단계 4:
화합물 44-5 (2.00 g)의 DCM(15 mL) 용액에 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 200 mg) 및 7-브로모-1-헵탄올(1.51 g)을 순차적으로 첨가한다. 혼합물을 25℃에서 5분 동안 교반한 후, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)(EDCl, 1.62 g)을 첨가하고, 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반한다. TLC는 초기 화합물 44-5이 완전히 사라짐을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하여 조생성물을 얻었고, 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-1％EA(부피 백분율)를 함유하는 석유 에테르 용액이다)로 정제하고, 순수한 생성물 분획을 증발시켜, 화합물44-6(2.4 g, 74％ 수율)을 얻었다.
단계 5:
화합물 44-6(2.0 g) 및 에탄올아민(530 mg)의 아세토니트릴 용액(50 mL) 용액에 탄산칼륨(1.80 g)을 첨가한다. 혼합물을 70℃에서 3시간 동안 교반한다. TLC는 화합물 44-6이 완전히 사라지고, 하나의 극성이 커진 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응액을 여과하고, 얻어진 여액을 농축한 후의 조생성물에, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(25 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-10% 20min, 10-10% 5min, 유속 20ml/min) 무색 오일상 액체 화합물17-5(1.0 g, 53.8％ 수율)를 얻었다.
단계 6:
화합물 17-4(500 mg)를 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(191 mg), K2CO3(527 mg) 및 화합물 17-5(673 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85℃에서 2시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 17-5에 비해 극성이 작은 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 농축하여 담황색 오일상 액체 화합물 17(725 mg, 70％ 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.15 - 4.03 (m, 4H), 3.56 - 3.45 (m, 6H), 2.75 (s, 1H), 2.55 (d, J = 3.8 Hz, 2H), 2.48 (d, J = 1.0 Hz, 4H), 2.29 (s, 1H), 1.65 (s, 4H), 1.50 - 1.46 (m, 10H), 1.40 - 1.38 (s, 4H), 1.36 (d, J = 0.6 Hz, 2H), 1.34 (d, J = 0.6 Hz, 4H), 1.32 (d, J = 1.0 Hz, 10H), 1.32 - 1.30 (m, 10H), 1.28 (d, J = 1.2 Hz, 12H), 1.18 (s, 3H), 0.94 - 0.84 (m, 9H).
실시예 8
화합물 28의 합성
단계 1:
화합물 2-6(2.0 g) 및 N,N-디에틸에틸렌디아민(755 mg)의 아세토니트릴 용액(50 mL) 용액에 탄산칼륨(1.2 g)을 첨가한다. 혼합물을 70℃에서 3시간 동안 교반한다. 하나의 극성이 커진 스팟이 생성되었다. 반응액을 여과하고, 얻어진 여액을 농축한 후의 조생성물에, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min) 무색 오일상 액체 화합물28-1(900 mg, 30％ 수율)을 얻었다.
단계 2:
화합물 28-1(500 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(146 mg), K2CO3(406 mg) 및 화합물 7-4(425 mg)를 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85℃에서 2시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 새로운 스팟의 생성이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 농축하여 담황색 오일상 액체 화합물7(94 mg, 11％ 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.09 (d, J = 2.2 Hz, 2H), 3.73 - 3.60 (m, 4H), 2.75 (s, 1H), 2.69 - 2.57 (m, 8H), 2.51 - 2.40 (m, 4H), 2.31 - 2.17 (m, 2H), 1.72 - 1.65 (m, 4H), 1.60 - 1.50 (m, 10H), 1.48 (s, 2H), 1.36 (d, J = 0.6 Hz, 4H), 1.35 - 1.30 (m, 20H), 1.30 - 1.26 (m, 16H), 1.19 (s, 3H), 1.00 (s, 6H), 0.90 (s, 9H).
실시예 9
화합물 29의 합성
단계 1:
화합물 1-데칸티올(2.28 g) 및 KOH(2.20 g)를 에탄올(20 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 화합물 29-1(2.00 g)을 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 밤새 교반한다. TLC(PE/EA=3/1, 인몰리브덴산)에서 새로운 스팟이 생성되었다. 반응 혼합액에 200ml의 물을 첨가하고, 진한 HCl를 적가하여 pH를 약 3으로 조절한다. 600ml 에틸아세테이트로 상기 혼합액을 추출하고, 유기상을 Na2SO4로 건조시킨 후 갑압 증발시킨다. 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(30 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 10min, 0-2% 20min, 2-2% 5min, 유속 30ml/min), 박층크로마토그래피로 모니터링하고, 순수한 생성물 분획의 일부를 증발시켜 백색 고체29-2(950 mg, 30％ 수율)를 얻었다.
단계 2:
화합물 29-2(950 mg)을 DCM(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반하고, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 염산염(EDCI, 924 mg), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 95 mg) 및 5-브로모-1-펜탄올(708 mg)을 순차적으로 취하여 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 29-2표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(PE/EA=10/1, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 극성이 작아진 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 감압 증발시키고, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(10 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-5% 20min, 5-5% 5min, 유속 15ml/min), 박층크로마토그래피로 모니터링하고, 순수한 생성물 분획의 일부를 증발시켜, 무색 오일상 액체 화합물 29-3(1.45 g, 95％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
화합물 29-3(750 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(170 mg), K2CO3(350 mg) 및 화합물 2-7(559 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85℃에서 2시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 2-7표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 2-7에 비해 극성이 작은 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 박층크로마토그래피로 모니터링하고, 순수한 생성물 분획의 일부를 증발시켜 담황색 오일상 액체 화합물29(850 mg)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, cdcl3) δ 4.86 (p, J = 6.4 Hz, 1H), 4.09 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.61 (dt, J = 11.8, 6.4 Hz, 4H), 2.51 (dd, J = 14.4, 6.8 Hz, 6H), 2.28 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.70 - 1.55 (m, 6H), 1.50 (dd, J = 16.6, 10.9 Hz, 8H), 1.40 - 1.21 (m, 46H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H).
실시예 10
화합물 30의 합성
단계 1:
화합물 30-1(2.00 g)의 DMF(15 mL) 용액에 1-데칸티올(2.10 g) 및 수산화나트륨(1.20 g)을 순차적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 3시간 동안 교반한다. TLC는 초기 화합물 30-1이 완전히 사라짐을 나타냈다. 반응액을 H2O(50 mL)에 부어 넣고, EA(20 mL)를 첨가하여 1회 추출하고, 2M의 묽은 염산으로 수상의 pH를 3으로 조절하고, EA(20 mL)를 첨가하여 3회 추출하고, 유기상을 합치고, 무수황산나트륨으로 건조한다. 여과하고 농축하여 화합물 30-2(1.70 g, 54％ 수율)를 얻었다.
단계 2:
화합물 30-2(1.70 g)의 DCM(15 mL) 용액에 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 160 mg) 및 5-브로모펜탄올(1.31 g)을 순차적으로 첨가한다. 혼합물을 25℃에서 5분 동안 교반한 후, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)(EDCl, 1.56 g)을 첨가하고, 반응 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반한다. TLC는 초기 화합물 30-2이 완전히 사라짐을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하여 조생성물을 얻었고, 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-1％EA(부피 백분율)를 함유하는 석유 에테르 용액이다)로 정제하고, 순수한 생성물 분획을 증발시켜, 화합물 30-3(1.54 g, 57％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
화합물 30-3 (1.5 g)의 에탄올(15 mL) 용액에 에탄올아민 (783 mg)을 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 교반한다. TLC는 초기 화합물 30-3이 소량 남아있음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하여 조생성물을 얻었고, 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-10％의 CH3OH(부피 백분율)을 함유하는 디클로로메탄 용액이고, 메탄올에 1%의 암모니아수를 첨가한다)로 정제하고, 순수한 생성물 분획을 증발시켜, 화합물 30-4(824 mg, 58％ 수율)를 얻었다.
단계 4:
화합물 30-4 (724 mg)의 DMF(7 mL) 용액에 헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트(1.03 g), NaI(278 mg) 및 K2CO3(770 mg)을 순차적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 반응시킨다. TLC는 초기 화합물 30-4이 소량 남아있음을 나타냈다. 반응액을 H2O(50 mL)에 부어 넣고, EA(20 mL)를 첨가하여 3회 추출하고, 유기상을 합치고, 유기상을 포화 식염(20 mL)으로 2회 세척하고, 유기상을 무수황산나트륨으로 건조한다. 여과하고 농축하여 조생성물을 얻었고, 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-10％의 CH3OH(부피 백분율)를 함유하는 디클로로메탄 용액이고, 메탄올에 1%의 암모니아수를 첨가한다)로 정제하고, 순수한 생성물 분획을 증발시켜, 화합물 30(1.02g, 71％ 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.86 (dd, J = 12.4, 6.0 Hz, 1H), 4.09 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.54 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.83 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 2.73 - 2.38 (m, 12H), 2.27 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.68 - 1.18 (m, 61H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 9H).
실시예 11
화합물 35의 합성
단계 1:
화합물 35-1(2.00 g)의 DMF(15 mL) 용액에 1-옥탄티올(2.10 g) 및 수산화나트륨(1.20 g)을 순차적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 3시간 동안 교반한다. TLC는 초기 화합물 35-1이 완전히 사라짐을 나타냈다. 반응액을 H2O(50 mL)에 부어 넣고, EA(20 mL)를 첨가하여 1회 추출하고, 2M의 묽은 염산으로 수상의 pH를 3으로 조절하고, EA(20 mL)를 첨가하여 3회 추출하고, 유기상을 합치고, 무수황산나트륨으로 건조한다. 여과하고 농축하여 화합물 35-2(1.80 g, 56.6％ 수율)를 얻었다.
단계 2:
화합물 35-2(1000 mg)을 DCM(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반하고, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 염산염(EDCI, 924 mg), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 95 mg) 및 5-브로모-1-펜탄올(708 mg)을 순차적으로 취하여 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 35-2표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(PE/EA=10/1, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 극성이 작아진 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 감압 증발시키고, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(10 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-5% 20min, 5-5% 5min, 유속 15ml/min), 박층크로마토그래피로 모니터링하고, 순수한 생성물 분획의 일부를 증발시켜, 무색 오일상 액체 화합물 35-3(1.30 g, 79.2％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
화합물 35-3(750 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(170 mg), K2CO3(350 mg) 및 화합물 2-7(559 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85°C에서 3시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 35-3표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 35-3에 비해 극성이 작은 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 박층크로마토그래피로 모니터링하고, 순수한 생성물 분획의 일부를 증발시켜 담황색 오일상 액체 화합물 35(830 mg, 56.9％ 수율)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.86 (dd, J = 12.4, 6.0 Hz, 1H), 4.09 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.54 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.83 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 2.73 - 2.38 (m, 12H), 2.27 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.68 - 1.18 (m, 61H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 9H).
실시예 12
화합물 36의 합성
단계 1:
화합물 1-옥탄티올(2.50 g) 및 NaOH(2.20 g)를 에탄올(20 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 화합물 36-1(2.00 g)을 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 밤새 교반한다. TLC(PE/EA=3/1, 인몰리브덴산)에서 새로운 스팟이 생성된 것으로 모니터링 되었다. 반응 혼합액에 200ml의 물을 첨가하고, 진한 HCl를 적가하여 pH를 약 3으로 조절한다. 600ml의 에틸아세테이트로 상기 혼합액을 추출하고, 유기상을 Na2SO4로 건조시킨 후 갑압 증발시킨다. 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(30 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 10min, 0-2% 20min, 2-2% 5min, 유속 30ml/min), 박층크로마토그래피로 모니터링하고, 순수한 생성물 분획의 일부를 증발시켜 백색 고체 36-2(1.09 g, 40.2％ 수율)를 얻었다.
단계 2:
화합물 36-2(1000 mg)을 DCM(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반하고, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 염산염(EDCI, 924 mg), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 95 mg) 및 5-브로모-1-펜탄올(708 mg)을 순차적으로 취하여 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 36-2표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(PE/EA=10/1, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 극성이 작아진 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 감압 증발시키고, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(10 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-5% 20min, 5-5% 5min, 유속 15ml/min), 박층크로마토그래피로 모니터링하고, 순수한 생성물 분획의 일부를 증발시켜, 무색 오일상 액체 화합물 36-3(1.20 g, 74.7％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
화합물 36-3(750 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(170 mg), K2CO3(350 mg) 및 화합물 2-7(559 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85°C에서 3시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 2-7표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 2-7에 비해 극성이 작은 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 박층크로마토그래피로 모니터링하고, 순수한 생성물 분획의 일부를 증발시켜 담황색 오일상 액체 화합물 35(830 mg, 56.9％ 수율)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.86 (dd, J = 12.4, 6.0 Hz, 1H), 4.09 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.54 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.83 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 2.73 - 2.38 (m, 14H), 2.27 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.68 - 1.18 (m, 57H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 9H).
실시예 13
화합물 41의 합성
단계 1:
화합물 41-1(2.00 g)의 DMF(15 mL) 용액에 1-데칸티올(2.30 g) 및 수산화나트륨(1.20 g)을 순차적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 교반한다. TLC는 초기 화합물 41-1이 완전히 사라짐을 나타냈다. 반응액을 H2O(50 mL)에 부어 넣고, 에틸아세테이트(20 mL)를 첨가하여 1회 추출하고, 2M의 묽은 염산으로 수상의 pH를 3으로 조절하고, 에틸아세테이트(20 mL)를 첨가하여 3회 추출하고, 유기상을 합치고, 무수황산나트륨으로 건조한다. 여과하고 농축하여 화합물 41-2(1.80 g, 56.6％ 수율)를 얻었다.
단계 2:
화합물 41-2(1000 mg)을 DCM(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반하고, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 염산염(EDCI, 1.05 g), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 560 mg) 및 8-브로모옥탄산(1.02 g)을 순차적으로 취하여 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 41-2표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(PE/EA=10/1, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 극성이 작아진 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 감압 증발시키고, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(15 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-5% 20min, 5-5% 5min, 유속 15ml/min) 무색 오일상 액체 화합물 41-3(1.5 g, 77％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
화합물 41-3(700 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(170 mg), K2CO3(350 mg) 및 화합물 2-7(559 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85°C에서 3시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 2-7표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 2-7에 비해 극성이 작은 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 담황색 오일상 액체 화합물 41(600 mg, 44.8％ 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.86 (p, J = 6.4 Hz, 1H), 4.09 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.61 (dt, J = 11.8, 6.4 Hz, 4H), 2.51 (dd, J = 14.4, 6.8 Hz, 6H), 2.28 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.70 - 1.55 (m, 6H), 1.50 (dd, J = 16.6, 10.8 Hz, 8H), 1.40 - 1.21 (m, 50H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H).
실시예 14
화합물 44의 합성
단계 1:
화합물 44-1(2.00 g)의 DMF(15 mL) 용액에 1-옥탄티올(2.63 g) 및 수산화나트륨(1.44 g)을 순차적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 3시간 동안 교반한다. TLC는 초기 화합물 44-1이 완전히 사라짐을 나타냈다. 반응액을 H2O(50 mL)에 부어 넣고, EA(20 mL)를 첨가하여 1회 추출하고, 2M의 묽은 염산으로 수상의 pH를 3으로 조절하고, EA(20 mL)를 첨가하여 3회 추출하고, 유기상을 합치고, 무수황산나트륨으로 건조한다. 여과하고 농축하여 화합물 44-2(1.63 g, 53％ 수율)를 얻었다.
단계 2:
화합물 44-2(1.63 g)의 DCM(15 mL) 용액에 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 172 mg) 및 5-브로모펜탄올(1.41 g)을 순차적으로 첨가한다. 혼합물을 25℃에서 5분 동안 교반한 후, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)(EDCl, 1.75 g)을 첨가하고, 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반한다. TLC는 초기 화합물 44-2이 완전히 사라짐을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하여 조생성물을 얻었고, 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-1％EA(부피 백분율)를 함유하는 석유 에테르 용액이다)로 정제하고, 순수한 생성물 분획을 증발시켜, 화합물 44-3(1.65 g, 62％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
화합물 44-3 (1.5 g)의 아세토니트릴(15 mL) 용액에 에탄올아민 (960 mg) 및 탄산칼륨(1.15 g)을 첨가하고, 용액을 70℃에서 12시간 동안 교반한다. TLC는 초기 화합물 44-3이 소량 남아있음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하여 조생성물을 얻었고, 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은0-10％의 CH3OH(부피 백분율)를 함유하는 디클로로메탄 용액이고, 메탄올에 1%의 암모니아수를 첨가한다)로 정제하고, 순수한 생성물 분획을 증발시켜, 화합물 44-4(800 mg, 56％ 수율)를 얻었다.
단계 4:
화합물 44-5 (2.00 g)의 DCM(15 mL) 용액에 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 200 mg) 및 7-브로모-1-헵탄올(1.51 g)을 순차적으로 첨가한다. 혼합물을 25℃에서 5분 동안 교반한 후, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)(EDCl, 1.62 g)을 첨가하고, 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반한다. TLC는 초기 화합물 44-5이 완전히 사라짐을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하여 조생성물을 얻었고, 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-1％EA(부피 백분율)를 함유하는 석유 에테르 용액이다)로 정제하고, 순수한 생성물 분획을 증발시켜, 화합물 44-6(2.40 g, 74％ 수율)을 얻었다.
단계 5:
화합물 44-4 (800 mg)의 DMF (7 mL) 용액에 44-6 (1.12 g ), NaI(332 mg) 및 K2CO3(918 mg)을 순차적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 반응시킨다. TLC는 초기 화합물 44-4이 소량 남아있음을 나타냈다. 반응액을 H2O(50 mL)에 부어 넣고, EA(20 mL)를 첨가하여 3회 추출하고, 유기상을 합치고, 유기상을 포화 식염(20 mL)으로 2회 세척하고, 유기상을 무수황산나트륨으로 건조한다. 여과하고 농축하여 조생성물을 얻었고, 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼, 용리액은 0-10％의 CH3OH(부피 백분율)를 함유하는 디클로로메탄 용액이고, 메탄올에 1%의 암모니아수를 첨가한다)로 정제하고, 순수한 생성물 분획을 증발시켜, 화합물 44(950 mg, 58％ 수율)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.09 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 3.72 - 3.55 (m, 2H), 3.05 - 2.86 (m, 2H), 2.84 (s, 1H), 2.59 - 2.41 (m, 8H), 2.31 - 2.17 (m, 2H), 1.72 - 1.64 (m, 4H), 1.62 - 1.60 (s, 2H), 1.59 - 1.51 (m, 8H), 1.55(s, 2H), 1.39 - 1.35 (m, 6H), 1.33 (d, J = 3.0 Hz, 6H), 1.31 (d, J = 3.0 Hz, 12H), 1.31 - 1.28 (m, 4H), 1.30-1.26(m, 12H), 1.24 (s, 3H), 0.94 - 0.82 (m, 9H).
실시예 15
화합물 46의 합성
단계 1:
화합물 1-헵탄티올(2.1 g) 및 NaOH(1.0 g)를 DMF(20 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 화합물 46-1(2.00 g)을 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 60 ℃에서 밤새 교반한다. TLC(PE/EA=3/1, 인몰리브덴산)에서 새로운 스팟이 생성되었다. 반응 혼합액에 200ml의 물을 첨가하고, 진한 HCl를 적가하여 pH를 약 3으로 조절한다. 600ml의 에틸아세테이트로 상기 혼합액을 추출하고, 유기상을 Na2SO4로 건조시킨 후 갑압 증발시킨다. 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(30 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 10min, 0-2% 20min, 2-2% 5min, 유속 30ml/min), 박층크로마토그래피로 모니터링하고, 순수한 생성물 분획의 일부를 증발시켜 무색 오일상 액체 46-2(1.5 g, 62％ 수율)를 얻었다.
단계 2:
화합물 46-2(1.5 g)의 THF(20 mL) 및 물의 용액에 수산화리튬(360 mg)을 첨가하고 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반한다. TLC는 극성이 커진 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하여 테트라히드로푸란을 제거하였고, 물을 첨가하여 희석한 후, 에틸아세테이트(30 mL)로 1회 추출하고, 묽은 염산으로 수상을 pH=2로 조절하고, 에틸아세테이트(30 mL)로 2회 추출하고, 유기층을 합치고, 농축하여 화합물 46-3(1.2 g, 88％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
화합물 46-3(1.2 g)을 DCM(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반하고, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 염산염(EDCI, 1.01 g), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 534 mg) 및 6-브로모-n-헥산올(792 mg)을 순차적으로 취하여 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 46-3표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(PE/EA=10/1, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 극성이 작아진 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 감압 증발시키고, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(10 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-5% 20min, 5-5% 5min, 유속 15ml/min), 박층크로마토그래피로 모니터링하고, 순수한 생성물 분획의 일부를 증발시켜 무색 오일상 액체 화합물 46-4(1.6g, 84％ 수율)를 얻었다.
단계 4:
화합물 46-4(1.6 g) 및 에탄올아민(447 mg)의 아세토니트릴 용액(50 mL) 용액에 탄산칼륨(1.52 g)을 첨가한다. 혼합물을 85℃에서 2시간 동안 환류시킨다. TLC는 화합물 46-4이 완전히 사라지고, 하나의 극성이 커진 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응액을 여과하고, 얻어진 여액을 농축한 후의 조생성물에, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(25 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-10% 20min, 10-10% 5min, 유속 20ml/min) 무색 오일상 액체 화합물46-5(870 mg, 57％ 수율)을 얻었다.
단계 5:
화합물 46-6(2.0 g)을 DCM(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반하고, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 염산염(EDCI, 1.79 g), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 950 mg) 및 6-브로모-n-헥산올(1.41 mg)을 순차적으로 취하여 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 46-6표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(PE/EA=10/1, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 극성이 작아진 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 감압 증발시키고, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(25 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-5% 20min, 5-5% 5min, 유속 15ml/min), 박층크로마토그래피로 모니터링하고, 순수한 생성물 분획의 일부를 증발시켜, 무색 오일상 액체 화합물 46-7(2.8 g, 86％ 수율)을 얻었다.
단계 6:
화합물 46-5(500 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(180 mg), K2CO3(497 mg) 및 화합물 46-7(502 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85°C에서 3시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 46-7에 비해 극성이 작은 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 농축하여 담황색 오일상 액체 화합물 46(700 mg, 77％ 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.10 (m, 4H), 3.64 (m, 3H), 2.61 - 2.42 (m, 8H), 2.29 (s, 1H), 1.98 -1.90 (m, 2H), 1.67 - 1.61 (m, 6H), 1.59 - 1.45 (m, 8H), 1.43 (s, 4H), 1.41 - 1.37 (m, 4H), 1.37 - 1.33 (m, 10H), 1.33 - 1.30 (m, 14H), 1.30 - 1.26 (m, 12H), 0.95 - 0.83 (m, 12H).
실시예 16
화합물 48의 합성
단계 1:
화합물 2-6(8.0 g) 및 프로판올아민(1.9 g)의 아세토니트릴 용액(50 mL)에 탄산칼륨(7.19 g)을 첨가한다. 혼합물을 85℃에서 2시간 동안 환류시킨다. TLC는 화합물 2-6이 완전히 사라지고 하나의 극성이 커진 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응액을 여과하고, 얻어진 여액을 농축한 후의 조생성물에, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(40g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-10% 20min, 10-10% 5min, 유속 20ml/min) 무색 오일상 액체 화합물 48-1(5.0 g, 63.3％ 수율)을 얻었다.
단계 2:
화합물 35-3(750 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(170 mg), K2CO3(350 mg) 및 화합물 48-1(620 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85°C에서 3시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 48-1표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 48-1에 비해 극성이 작은 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 박층크로마토그래피로 모니터링하고, 순수한 생성물 분획의 일부를 증발시켜 담황색 오일상 액체 화합물 48(650 mg, 69％ 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.09 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 3.65 - 3.56 (m, 2H), 3.00 - 2.88 (m, 3H), 2.56 - 2.40 (m, 8H), 2.31 - 2.17 (m, 2H), 1.73 - 1.63 (m, 6H), 1.62 (d, J = 1.0 Hz, 2H), 1.59 - 1.50 (m, 8H), 1.58 (s, 2H), 1.40 - 1.35 (m, 6H), 1.34 - 1.30 (m, 18H), 1.30 - 1.27 (m, 16H), 1.24 (s, 3H), 0.95 - 0.82 (m, 9H).
실시예 17
화합물 55의 합성
단계 1:
화합물 2-6(4.0 g) 및 N,N-디메틸에틸렌디아민(1.53 g)의 아세토니트릴 용액(50 mL) 용액에 탄산칼륨(3.59 g)을 첨가한다. 혼합물을 85℃에서 3시간 동안 교반 환류시킨다. TLC는 화합물 2-6이 완전히 사라지고 하나의 극성이 커진 스팟이 생성됨을 나타냈다. 반응액을 여과하고, 얻어진 여액을 농축한 후의 조생성물에, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(25 g순상 컬럼, 0.1% NH3H2O, MeOH/DCM, 0-0 % 5min, 0-10% 20min, 10-10% 5min, 유속 20ml/min) 무색 오일상 액체 화합물 55-1(1.3 g, 32％ 수율)을 얻었다.
단계 2:
브로모에탄올(2.00 g)의 DMF(15 mL) 용액에 화합물 55-2(1.93 g) 및 수산화나트륨(1.20 g)을 순차적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 교반한다. TLC는 초기 화합물 55-2이 완전히 사라짐을 나타냈다. 반응액을 H2O(50 mL)에 부어 넣고, 에틸아세테이트(20 mL)를 첨가하여 1회 추출하고, 2M의 묽은 염산으로 수상의 pH를 3으로 조절하고, 에틸아세테이트(20 mL)를 첨가하여 3회 추출하고, 유기상을 합치고, 무수황산나트륨으로 건조한다. 여과하고 농축하여 화합물 55-3(1.56 g, 62.3％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
화합물 55-3(872 mg)을 DCM(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반하고, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 염산염(EDCI, 1.05 g), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 560 mg) 및 8-브로모옥탄산(1.02 g)을 순차적으로 취하여 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 55-3표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(PE/EA=10/1, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 극성이 작아진 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 감압 증발시키고, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(15 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5min, 0-5% 20min, 5-5% 5min, 유속 15mL/min) 무색 오일상 액체 화합물 55-4(1.27 g, 70％ 수율)를 얻었다.
단계 4:
화합물 55-1(500 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(146 mg), K2CO3(406 mg) 및 화합물 55-4(393 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85°C에서 3시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 새로운 스팟의 생성이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 농축하여 담황색 오일상 액체 화합물 55(108 mg, 14％ 수율)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.23 (s, 2H), 2.80 (s, 2H), 2.60 (s, 2H), 2.57 (s, 2H), 2.52 (s, 2H), 2.45 (s, 4H), 2.30 (s, 6H), 2.27 (s, 2H), 2.24 (s, 2H), 1.71 - 1.66 (m, 2H), 1.62 (s, 2H), 1.58 - 1.57 (d, J = 6.8 Hz, 4H), 1.54 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 1.53 - 1.50 (m, 4H), 1.37 (d, J = 1.0 Hz, 6H), 1.35 - 1.30 (m, 24H), 1.30 - 1.25 (m, 16H), 0.96 - 0.81 (m, 9H).
실시예 18
화합물 57의 합성
단계 1:
화합물 55-1(500 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(146 mg), K2CO3(406 mg) 및 화합물 29-3(422 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85℃에서 2시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 새로운 스팟의 생성이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min, 유속 25ml/min), 농축하여 담황색 오일상 액체 화합물 57(103 mg, 12％ 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.12 (s, 2H), 2.96 - 2.77 (m, 2H), 2.62 - 2.56 (m, 6H), 2.50 (s, 2H), 2.45 (d, J = 2.2 Hz, 4H), 2.30 (s, 6H), 2.24 (s, 2H), 1.71 - 1.66 (m, 2H), 1.65 (s, 2H), 1.62 (s, 2H), 1.58 (s, 2H), 1.57 - 1.50 (m, 6H), 1.49 (s, 2H), 1.38 (d, J = 0.8 Hz, 6H), 1.34 - 1.30 (m, 18H), 1.30 - 1.26 (m, 20H), 0.94 - 0.82 (m, 9H).
실시예 19
화합물 51의 합성
단계 1:
화합물 1-헥산티올(2.10 g) 및 NaOH(2.40 g)를 에탄올(20 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 화합물 51-1(2.00 g)을 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 밤새 교반한다. TLC(PE/EA=3/1, 인몰리브덴산)에서 새로운 스팟이 생성된 것으로 모니터링 되었다. 반응 혼합액에 200 ml의 물을 첨가하고, 진한 염산을 적가하여 pH를 약 3으로 조절한다. 600 ml의 에틸아세테이트로 상기 혼합액을 추출하고, 유기상을 무수 Na2SO4로 건조시킨 후 감압 증발시킨다. 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(30 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 10 min, 0-2% 20 min, 2-2% 5 min, 유속 30 ml/min), TLC박층크로마토그래피로 모니터링하고, 순수한 생성물 분획의 일부를 증발시켜 백색 고체 51-2(2.10 g, 85.8％ 수율)를 얻었다.
단계 2:
화합물 51-2(1000 mg)을 DCM(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반하고, 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 염산염(EDCI, 986 mg), 4-디메틸아미노피리딘(DMAP, 105 mg) 및 7-브로모-1-헵탄올(1050 mg)을 순차적으로 취하여 반응 체계에 나누어 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 51-2표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(PE/EA=10/1, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 극성이 작아진 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 감압 증발시키고, 적당량의 실리카겔과 DCM을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하여(10 g순상 컬럼, PE/EA, 0-0 % 5 min, 0-5% 20 min, 5-5% 5 min, 유속 15 ml/min), TLC박층크로마토그래피로 모니터링하고, 순수한 생성물 분획의 일부를 증발시켜, 무색 오일상 액체 화합물 51-3(1.40 g, 75.0％ 수율)을 얻었다.
단계 3:
화합물 51-3(750 mg)을 아세토니트릴(10 ml)에 용해시키고, 실온에서 교반한다. 이후 NaI(170 mg), K2CO3(350 mg) 및 화합물 2-7(559 mg)을 순차적으로 취하여 상기 반응 체계에 나누어 첨가하고, 85℃에서 3시간 동안 가열 및 환류시켜 교반한다. 소량의 반응액을 취하여 희석하고 51-3표준 샘플과 대조하여 박층크로마토그래피(DCM/MeOH=10/1, 1d 암모니아수, 인몰리브덴산)를 수행하였고, 51-3에 비해 극성이 작은 새로운 스팟이 관찰되었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후 감압 증발시키고, 적당량의 DCM과 실리카겔을 첨가하여 샘플을 혼합하고, 정제하고(25 g순상 컬럼, DCM/MeOH, 0.1% 암모니아수, 0-0 % 10 min, 0-7.5% 20 min, 7.5-7.5% 5 min, 유속 25 ml/min), TLC박층크로마토그래피로 모니터링하고, 순수한 생성물 분획의 일부를 증발시켜 담황색 오일상 액체 화합물 51(740 mg, 50.7％ 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.86 (p, J = 6.3 Hz, 1H), 4.09 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.51 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.82 (dd, J = 12.7, 7.0 Hz, 1H), 2.65 (h, J = 6.9 Hz, 1H), 2.58 - 2.54 (m, 3H), 2.53 - 2.47 (m, 2H), 2.43 (q, J = 7.0 Hz, 4H), 2.27 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.82 - 1.18 (m, 53H), 0.87 (t, J = 6.6 Hz, 7H).
실시예 20
루시퍼라제mRNA를 10-100 mM, pH 4.0의 시트르산 완충액에 희석하고; 각 지질 성분(본 발명에 따른 양이온성 지질:DSPC:콜레스테롤:PEG지질(DMG-PEG2000))을 50:10:38.5:1.5의 몰비로 에탄올에 용해시켰다.
3 mL의 mRNA완충액 및 1 mL의 지질 용액을 2개의 5 mL의 주사기에 각각 넣고, 마이크로 유체 제어 펌프에 장착하고, 칩을 주사기에 연결하고, 주사기 펌프의 유속을 설정하고, 주사기 펌프의 시작 버튼을 클릭하여, 유속 비율이 3:1인 방식으로 칩에 주입한다. 칩 출구의 생성물 색상을 관찰하고, 처음 5방울의 유백색 액체 방울(약 100 μL)을 버린 후, 백엔드 샘플을 EP튜브에 수집하였다. 수집된 생성물을 투석백에 넣고, 10 mM PBS(pH 7.4)로 6시간 동안 투석(MWCO: 100 KDa)한 후, 한외 여과를 통해 이상적인 농도로 농축한 다음, 지질 나노 입자를 0.22 μm의 멸균 필터로 여과하고, 4℃에서 보관하였다.
Ribogreen키트 설명서에 따라, 생성물의 캡슐화율을 테스트하여 계산하였고; Malvern Zetasize사의 Zetasizer nano기기에서 표준 검출 방법으로 입자 크기 및 다분산 지수(PDI)의 검출, Zeta전위 분석을 진행하였다.
본 실시예에 의해 제조된 mRNA가 로딩된 LNP의 입자 크기, PDI 및 캡슐화율의 검출 결과는 표 1에 나타낸 바와 같다. 결과에 따르면, 해당 처방에서의 지질 및 mRNA로 형성된 나노 입자는 캡슐화율이 비교적 높고, 약 100 nm의 균일한 입자 크기를 가지므로, 핵산 전달 담체의 기본 특징에 부합한다.
표 1 상이한 양이온성 지질로 제조된 나노 입자 특성화 결과
번호 양이온성 지질 캡슐화율 (%) 입자 크기 (nm) PDI Zeta전위(mV)
1 화합물 2 87.8 97.3 0.12 0.49
2 화합물 3 87.5 113.9 0.10 1.95
3 화합물 4 83.7 94.4 0.21 0.39
4 화합물 6 63.9 95.6 0.17 0.79
5 화합물 7 96.1 78.9 0.17 -3.77
6 화합물 14 95.7 119.0 0.22 -3.27
7 화합물 17 92.5 90.9 0.10 -0.15
8 화합물 28 95.9 127.6 0.04 5.29
9 화합물 29 95.6 105.5 0.03 -1.31
10 화합물 30 95.7 121.2 0.11 -0.26
11 화합물 35 90.4 104.5 0.11 -2.10
12 화합물 36 93.9 98.4 0.11 0.55
13 화합물 41 94.9 123.4 0.17 -7.02
14 화합물 44 96.4 104.1 0.21 -2.82
15 화합물 46 95.6 101.3 0.11 -4.12
16 화합물 48 92.5 94.2 0.10 -0.14
17 화합물 55 91.1 102.3 0.13 7.37
18 화합물 57 94.1 122.8 0.24 7.09
19 DLin-MC3-DMA* 87.6 102.3 0.19 -0.03
20 Lipid M** 98.5 145.3 0.14 -0.53
*DLin-MC3-DMA는 상업적 핵산 전달 시스템 Onpattro의 양이온성 지질이다.
**표 1의 Lipid M의 출처는 <Optimization of Lipid Nanoparticles for Intramuscular Administration of mRNA Vaccines>Mol Ther Nucleic Acids 2019 Vol. 15 Pages 1-11이고, SM-102과 같은 종류의 지질이다.
실시예 21 나노 지질 입자 조성물의 꼬리정맥 주사를 이용해 전달된 루시퍼라제mRNA의 생체내 발현 효과 측정
6-8주령의 BALB/c마우스에게 5 μg의 mRNA를 함유하는 LUC-mRNA-지질나노 입자(LUC-mRNA에 대응하는 뉴클레오티드 서열은 특허 공개 제CN114380724A호의 SEQ　ID　NO:1 참조)를 꼬리정맥을 통해 주사하였고, 제조 방법은 실시예 19와 동일하다. 특정 시점에 마우스의 꼬리정맥에 D-Luciferin Potassium Salt 100 μg을 주사하고, PerkinElmer소형 동물 영상 시스템을 사용하여 검출하였다. Fluc는 일반적으로 유전자 발현과 세포 생존력을 측정하기 위해 포유류 세포 배양물에 사용되며, 기질인 플루오레세인의 존재하에 생물학적 형광을 방출한다. 사용된 mRNA의 기본 특징은 ARCA캡 구조이고, polyA꼬리 길이는 100-120 nt이고, 슈도우리딘이 완전히 치환되었다. 검출 결과는 도 1에 도시된 바와 같고, 본 발명에 의해 설계된 화합물로 조성된 나노 지질 입자 조성물이 mRNA를 간에 전달하는 수준은 대부분 DLin-MC3-DMA와 동일하거나 더 우수하고; 일부 화합물은 Lipid M보다 우수하다.
실시예 22 나노 지질 입자 조성물의 폐 분무를 이용해 전달된 루시퍼라제mRNA의 생체내 발현 효과 측정
6-8주령의 BALB/c마우스에 대해 분무 방식을 통해 5 μg의 mRNA를 함유하는 LUC-mRNA-지질 나노 입자를 폐에 전달하였고, 제조 방법은 실시예 19와 동일하다. 특정 시점에 마우스의 꼬리정맥에 D-Luciferin Potassium Salt 100 μg을 주사하고, PerkinElmer소형 동물 영상 시스템을 사용하여 검출하였다. 검출 결과는 도 2에 도시된 바와 같고, 화합물 7, 35로 조성된 나노 지질 입자 조성물이 전달한 mRNA이 발현하는 형광 수준은 Lipid M 및 SM-102에 비해 우수하다.
실시예 23 나노 지질 입자 조성물을 이용한 신종 코로나바이러스 mRNA백신의 전달
6주령의 BALB/c마우스를 사용하여, 0일, 14일에 상이한 나노 지질 입자 조성물에 의해 전달되는 mRNA신종 코로나바이러스 백신(Omicron항원 mRNA, 대응하는 뉴클레오타이드 서열은 특허 공개 제CN114380724A호의 SEQ　ID　NO:6을 참조)을 근육 내 주사하여 면역화시키고, 28일(2차 면역화 후 14일)에 혈액 샘플을 채취하고, 효소 결합 면역 흡착을 통해 중화 항체 역가를 측정하고, 상이한 나노 지질 입자 조성물에 의해 전달되는 mRNA신종 코로나바이러스 백신의 SARS-CoV-2바이러스 균주에 의한 감염에 대한 보호 효과를 평가하였다. 결과는 도 3에 도시된 바와 같고, 결과를 통해 알 수 있듯이, 화합물 35로 조성된 나노 지질 입자 조성물에 의해 전달되는 신종 코로나mRNA로 인한 결합 항체 역가는 140만인 반면, Lipid M의 경우 약 93만이다.
실시예 24 나노 지질 입자 조성물을 이용한 신종 코로나바이러스 mRNA백신의 폐 전달
실시예 20에 따라 더 많은 지질 나노 입자를 제조하여, 폐를 전달되는 신종 코로나바이러스 mRNA백신의 면역 효과를 검증하였다. 8주령의 BALB/c마우스를 사용하여, 0일에 2 μg의 상이한 나노 지질 입자 조성물에 의해 전달되는 mRNA신종 코로나바이러스 백신(Omicron항원mRNA, 대응하는 뉴클레오타이드 서열은 특허 공개 제CN114380724A호의 SEQ ID NO:6 참조)을 폐에 분무하여 면역화시키고, 14일에 혈액 샘플을 채취하고, 효소 결합 면역 흡착을 통해 결합 항체 역가를 측정하고, 상이한 나노 지질 입자 조성물에 의해 전달되는 mRNA신종 코로나바이러스 백신의 SARS-CoV-2바이러스 균주에 의한 감염에 대한 보호 효과를 평가하였다(결과는 도 4에 도시된 바와 같다). 결과를 통해 알 수 있듯이, 본 특허 화합물에 의한 결합 항체 역가의 증가는 Lipid 5에 비해 우수하다.
실시예 25 상이한 지질 성분 및 비율의 나노 지질 입자 조성물의 특성화
상이한 보조 지질 및 지질 비율에서의 약물성을 연구하기 위해, 화합물 35에 대해 실험 설계를 진행하였다. 상이한 구조의 지질(DOPE, DSPC), 상이한 지질 비율(양이온 45~55%, PEG지질1.5~2.5%, 구조 지질8~22%, 콜레스테롤20.5~45.5%), 상이한 질소 대 인 비율(5~10)의 지질 혼합물과 Luc mRNA를 미세 유체 제어 방법(방법은 실시예 19와 동일하다)을 통해 혼합하여 나노 입자를 제조하려고 시도하였다. 결과는 표 2에 나타낸 바와 같다.
표 2, 상이한 지질 비율(몰비)로 제조된 나노 입자 특성화 결과
번호 화합물 35 DMG-PEG2000 DSPC 콜레스테롤 N/P 입자 크기(nm) PDI 캡슐화율(%)
1 55 2.5 22 20.5 5 100.5 0.193 85.78
2 45 1.5 22 31.5 10 98.13 0.121 96.98
3 45 2.5 8 44.5 5 70.02 0.138 97.38
4 45 1.5 8 45.5 10 98.19 0.121 96.70
5 50 1.5 15 33.5 7.5 85.09 0.051 96.10
6 55 1.5 15 28.5 10 93.83 0.122 94.46
번호 화합물 35 DMG-PEG2000 DOPE 콜레스테롤 N/P 입자 크기(nm) PDI 캡슐화율(%)
7 55 2.5 22 20.5 5 145.0 0.169 90.26
8 45 1.5 22 31.5 10 114.9 0.205 94.11
9 45 2.5 8 44.5 5 92.41 0.173 94.62
10 45 1.5 8 45.5 10 113.7 0.233 96.36
11 50 1.5 15 33.5 7.5 140.2 0.155 92.54
12 55 1.5 15 28.5 10 129.1 0.190 96.16
표 2의 결과를 통해 알 수 있듯이, 상기 범위 내의 지질 혼합물과 mRNA에 의해 형성된 나노 입자는 입자 크기가 균일하고, 캡슐화율이 높고, 약물성이 좋다.
실시예 26 상이한 양이온에 의해 전달되는 루시퍼라제mRNA의 생체내 발현 효과 연구
실시예 20 및 실시예 21의 방법에 따라 더 많은 양이온성 지질에 의해 전돨되는 루시퍼라제mRNA의 효과를 검증하였다. 하기 표 3은 특성화 결과이다.
표 3
번호 양이온성 지질 캡슐화율 (%) 입자 크기 (nm) PDI 상대적 형광 밝기(%)
1 화합물 7 96.8 82.9 0.15 754±32
2 화합물 16 95.6 90.9 0.20 574±102
3 화합물 17 97.6 68.2 0.11 686±45
4 화합물 23 97.0 75.4 0.10 764±39
5 화합물 35 96.2 80.4 0.14 962±78
6 화합물 44 97.1 71.1 0.10 843±52
7 화합물 45 96.8 80.9 0.15 559±33
8 화합물 51 98.0 91.0 0.11 734±51
9 DLin-MC3-DMA 0.2 101.5 0.16 100
비고: 실험 배치가 다르므로 본 표 3의 캡슐화율, 입자 크기 DPI데이터는 표 1과 약간 상이하다.
상기 표를 통해 알 수 있듯이, 이상의 화합물은 캡슐화율이 높고, 입자 크기가 균일하고, 생체내 Luciferase mRNA전달 효율이 상업용 지질DLin-MC3-DMA에 비해 훨씬 높다.
실시예 27 상이한 양이온성 지질 단백질 발현 효율 연구
본 실시예에서는, 상이한 양이온성 지질에 의한 에리트로포이에틴(EPO)의 생체내 형질감염 효과를 비교하였다. 나노 입자 제조 방법은 실시예 20과 동일하고, 사용된 EPO mRNA에 대응하는 뉴클레오타이드 서열은 제CN114380724B호, SEQ　ID　NO: 2를 참조하기 바란다. 제조 후 20 μg의 EPO-mRNA지질 나노 입자를 68주령의 암컷 Balb/c마우스의 꼬리정맥에 주사하여 주입하였고, 6시간 후 마우스의 눈 프레임에서 혈액을 채취하고, 원심 분리에 의해 혈청을 분리한 후, ELISA법을 사용하여 EPO단백질 발현량을 측정하였다. 사용된 mRNA의 기본 특징은 ARCA캡 구조이고, polyA꼬리 길이는 100-120 nt이고, 슈도우리딘이 완전히 치환되었다. 제조 및 단백질 검출 결과는 표 4에 나타낸 바와 같다.
표 4
번호 양이온성 지질 캡슐화율 (%) 입자 크기 (nm) PDI EPO농도(pg/mL)
1 화합물 7 97.8 88.8 0.09 4.21×107
2 화합물 16 96.5 75.4 0.12 3.01×107
3 화합물 17 96.9 74.0 0.09 3.25×107
4 화합물 23 96.5 81.7 0.11 4.11×107
5 화합물 35 96.1 79.1 0.12 5.73×107
6 화합물 44 95.5 82.5 0.17 4.89×107
7 화합물 45 93.9 81.0 0.15 3.46×107
8 화합물 51 95.0 75.3 0.14 6.68×107
9 DLin-MC3-DMA 90.1 97.6 0.19 4.37×106
비고: 실험 배치가 다르므로 본 표 4의 캡슐화율, 입자 크기 DPI데이터는 표 3과 약간 상이하다.
표를 통해 알 수 있듯이, 이상의 화합물은 캡슐화율이 높고, 입자 크기가 균일하고, 생체내 전달된 EPO mRNA의 단백질 번역 효율이 상업용 지질DLin-MC3-DMA에 비해 훨씬 높다.
실시예 28 상이한 양이온성 지질의 이상 독성 연구
본 실험은 실시예 27에서 제조된 나노 입자를 사용하였고, 체중이 200~250g인 암컷 SD마우스에게 5mg/kg의 용량으로 꼬리정맥 주사하였고, 대조군 마우스에게는 대응하는 부피의 생리식염수를 주사하였다. DLin-MC3-DMA군 마우스는 주사 후 18h 내에 사망하였고, 나머지 마우스의 체중, 섭식, 활동 상태는 관찰기간 동안 이상이 없었다. DLin-MC3-DMA지질은 독성 부작용이 더 강하다는 것을 보여준다. 주사 후 120h 혈액 샘플을 채취하고, 자동 생화학 분석기를 사용하여 알라닌 아미노전달효소(ALT), 아스파테이트 아미노전달효소(AST), 요소 질소(BUN), 크레아티닌(SCR)을 간 및 신장 기능 평가 지표로 사용하였다. 도 5의 결과가 보여주듯이, 35호(화합물 35) 및 51호(화합물 51) 지질의 BUN 수치를 제외하고 약간 감소하였지만 수치는 모두 건강한 정상 지표 범위 내에 있으며, 나머지 지질 나노 입자의 나머지 지표는 크게 변하지 않았고, 이러한 양이온성 지질은 간 및 신장 기능에 영향을 미치지 않으며 독성 부작용이 낮고 단백질 대체 파이프라인으로 사용하기 적합하다는 것을 의미한다.
실시예 29 상이한 나노 지질 입자 조성물의 종양 내 주사 효과 비교
실시예 20의 제조 방법에 따라 상이한 유형의 루시퍼라제mRNA가 캡슐화된 지질 나노 입자를 제조하였고, 6-8주령의 암컷 C57BL6마우스를 사용하여, 5 x 105 개 B16F10세포(출처 Chinese Academy of Sciences Cell Bank, CSTR:19375.09.3101MOUTCM36)/마우스로 오른쪽 복부 피하 주사를 진행하고, 종양의 성장을 정기적으로 관찰 및 기록하였고, 접종 후 8일 째에, 버니어 캘리퍼스를 사용하여 종양의 길이(L, mm)와 너비(D, mm)를 측정하고, 종양 부피(V)를 계산하였고, 계산 공식 V=(L x D2)/2이고, 종양 부피가 80-120mm3인 마우스를 취하여 무작위로 그룹화하고, 상이한 유형의 루시퍼라제 mRNA가 캡슐화된 지질 나노 입자를 종양 내 주사하고, 주사 부피는 25 μL/2.5 μg이고, 24시간 후에 해부학적 이미징을 진행하여, 마우스의 간 및 종양의 형광 밝기를 검출하였다(도 6 및 도 7에 도시된 바와 같다). 결과를 통해 알 수 있듯이, 35 및 51호 화합물의 종양 부분의 밝기가 더 밝고, 간의 밝기가 더 낮다. 이는 종양 현장 발현 효과가 더 우수하고 간 전이가 더 낮다는 것을 보여주며, 종양 치료와 관련된 일부 핵산 약물의 캡슐화 및 전달에 적용된다.

Claims (31)

  1. 하기 구조식(I)의 구조를 갖는 핵산 전달을 위한 양이온성 지질 화합물: (I)
    또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 호변 이성질체 또는 입체 이성질체에 있어서,
    L1, L2는 연결 결합 또는 2가 연결기이고, 상기 2가 연결기는 각각 독립적으로 -C(=O)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -O-, -S-, -S-S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -N(R8)C(=O)-, -C(=O)N(R8)-, -N(R8)C(=O)O-, -OC(=O)N(R8)-, -SC(＝O)N(R8)-, -N(R8)C(＝O)S-, -C(＝S)-, -SC(＝S)-, 및 -C(＝S)S- 중 어느 하나로부터 선택되고, 상기 R8은 H 또는 C1-C12알킬이고;
    R2 및 R3은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C18직쇄 알킬렌 또는 -R9-L3-R10-이고; 상기 R9 및 R10은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C10직쇄 알킬렌이고, L3은 O 또는 S이고;
    R4, R5, R6 및 R7은 독립적으로 수소, 또는 치환 또는 비치환된 C1-C30지방족 탄화수소이거나, 또는 -R11-L4-R12이고; 상기 R11 및 R12는 나타날 때마다 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C18지방족 탄화수소이고, L4는 O 또는 S이고;
    상기 R2, R3, R4, R5, R6 및 R7은 적어도 하나의 O 또는 S를 함유하고;
    R1은 H, -R13, -OR13, -R13-OH, -R13-OR14, -R13-OC(=O)R14, -R13-NHC(=O)-R14, -R13-OCH3 또는 -R13-N(R14)(R15)이고; R13은 C1-C12직쇄 알킬 또는 분지쇄 알킬이고, R14 및 R15는 각각 독립적으로 각각 H 또는 C1-C12직쇄 알킬이거나, 또는, R14와 R15 및 이의 연결된 N원자는 C3-C10헤테로시클로알킬을 형성하는, 양이온성 지질 화합물.
  2. 제1항에 있어서,
    R8은 H 또는 메틸인, 양이온성 지질 화합물.
  3. 제2항에 있어서,
    R13은 C1-C8직쇄 알킬 또는 분지쇄 알킬이고, R14 및 R15는 각각 독립적으로 각각 H 또는 C1-C5직쇄 알킬이거나, 또는, R14와 R15 및 이의 연결된 N원자는 C3-C8헤테로시클로알킬을 형성하는, 양이온성 지질 화합물.
  4. 제3항에 있어서,
    R2 및 R3은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C18직쇄 알킬인, 양이온성 지질 화합물.
  5. 제4항에 있어서,
    R2 및 R3은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C12직쇄 알킬인, 양이온성 지질 화합물.
  6. 제5항에 있어서,
    R4, R5, R6 및 R7은 독립적으로 수소, 또는 치환 또는 비치환된 C1-C18지방족 탄화수소이거나, 또는 -R11-L4-R12이고; 상기 R11 및 R12는 나타날 때마다 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C10지방족 탄화수소이고, L4는 O 또는 S이고; R4, R5, R6 및 R7은 적어도 하나의 O 또는 S를 함유하고, 최대 2개는 수소인, 양이온성 지질 화합물.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 식의 구조에서 R4, R5, R6 및 R7구조는 각각 독립적으로 H 또는 하기의 알킬쇄이거나, 또는 각각 독립적으로 하기의 알킬쇄의 임의의 탄소 원자가 O 또는 S로 대체되어 형성된 에테르 또는 티오에테르인, 양이온성 지질 화합물.
  8. 제1항에 있어서,
    R1은 -R13-OH이고, R13은 C1-3직쇄 알킬이고;
    R2는 C5-9직쇄 알킬이고;
    L1은 -OC(=O)- 또는 -C(=O)O-이고;
    R4 및 R5는 각각 독립적으로 C6-10직쇄 알킬이고;
    R3은 C5-7직쇄 알킬이고;
    L2는 -OC(=O)- 또는 -C(=O)O-이고;
    R6은 메틸, 에틸 또는 프로필이고;
    R7은 -R11-L4-R12이고; 상기 R11은 C1-C2알킬이고; R12는 C3-C13알킬이고; L4는 O 또는 S인, 양이온성 지질 화합물.
  9. 제8항에 있어서,
    R1은 -R13-OH이고, R13은 C2직쇄 알킬이고;
    R2는 C5-7직쇄 알킬이고;
    L1은 -OC(=O)- 또는 -C(=O)O-이고;
    R4 및 R5는 각각 독립적으로 C8직쇄 알킬이고;
    R3은 C5-7직쇄 알킬이고;
    L2는 -OC(=O)-이고;
    R6은 메틸이고;
    R7은 -R11-L4-R12이고; 상기 R11은 C1알킬이고; R12는 C5-C8알킬이고; L4는 O 또는 S인, 양이온성 지질 화합물.
  10. 제1항에 있어서,
    L1, L2는 각각 독립적으로 -OC(=O)-, -C(=O)O-, -C(=O)S-, -SC(=O)- 중 어느 하나로부터 선택되고;
    R2 및 R3은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C18직쇄 알킬렌이고;
    R4, R5 및 R6는 독립적으로 수소, 또는 치환 또는 비치환된 C1-C30지방족 탄화수소이고;
    R7은 -R11-L4-R12이고; 상기 R11 및 R12는 나타날 때마다 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C18지방족 탄화수소이고, L4는 O 또는 S이고;
    R1은 H, -R13-OH, -R13-OCH3 또는 -R13-N(R14)(R15)이고; R13은 C1-C12직쇄 알킬 또는 분지쇄 알킬이고, R14 및 R15는 각각 독립적으로 각각 H 또는 C1-C12직쇄 알킬이거나, 또는, R14와 R15 및 이의 연결된 N원자는 C3-C10헤테로시클로알킬을 형성하는, 양이온성 지질 화합물.
  11. 제10항에 있어서,
    L1, L2는 각각 독립적으로 -OC(=O)-, -C(=O)O-, -C(=O)S-, -SC(=O)- 중 어느 하나로부터 선택되고;
    R2 및 R3은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C3-C10직쇄 알킬렌이고;
    R4, R5 및 R6는 독립적으로 수소, 또는 치환 또는 비치환된 C1-C15지방족 탄화수소이고;
    R7은 -R11-L4-R12이고; 상기 R11 및 R12는 나타날 때마다 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C18지방족 탄화수소이고, L4는 O 또는 S이고;
    R1은 -R13-OH이고; R13은 C1-C6직쇄 알킬 또는 분지쇄 알킬인, 핵산 전달을 위한 양이온성 지질 화합물.
  12. 제11항에 있어서,
    L1, L2는 각각 독립적으로 -OC(=O)-, -C(=O)O- 중 어느 하나로부터 선택되고;
    R2 및 R3은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C3-C10직쇄 알킬렌이고;
    R4, R5 및 R6는 독립적으로 수소, 또는 치환 또는 비치환된 C1-C15지방족 탄화수소이고;
    R7은 -R11-L4-R12이고; 상기 R11 및 R12는 나타날 때마다 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C10지방족 탄화수소이고, L4는 O 또는 S이고;
    R1은 -R13-OH이고; R13은 C1-C6직쇄 알킬 또는 분지쇄 알킬인, 양이온성 지질 화합물.
  13. 제12항에 있어서,
    L1, L2는 각각 독립적으로 -OC(=O)-, -C(=O)O- 중 어느 하나로부터 선택되고;
    R2 및 R3은 독립적으로 치환 또는 비치환된 C3-C9직쇄 알킬렌이고;
    R4, R5 및 R6는 독립적으로 수소, 또는 치환 또는 비치환된 C1-C12지방족 탄화수소이고;
    R7은 -R11-L4-R12이고; 상기 R11 및 R12는 나타날 때마다 독립적으로 치환 또는 비치환된 C1-C9지방족 탄화수소이고, L4는 O 또는 S이고;
    R1은 -R13-OH이고; R13은 C1-C5직쇄 알킬 또는 분지쇄 알킬인, 양이온성 지질 화합물.
  14. 제5항에 있어서,
    상기 양이온성 지질 화합물은 하기 표에 나타낸 구조 중 하나를 갖는, 양이온성 지질 화합물.





  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 양이온성 지질 화합물과 예방용 또는 치료용 핵산을 포함하는 리포솜 제제에 있어서,
    상기 제제는 특정 질병을 예방하거나 치료하기 위한 것인, 리포솜 제제.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 핵산과 상기 양이온성 지질 화합물의 몰비는 20:1 내지 1:1인, 리포솜 제제.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 핵산과 상기 양이온성 지질 화합물의 몰비는 10:1 내지 4:1인, 리포솜 제제.
  18. 제15항에 있어서,
    상기 리포솜 제제의 직경은 50 nm 내지 300 nm인, 리포솜 제제.
  19. 제18항에 있어서,
    상기 리포솜 제제의 직경은 50 nm 내지 150 nm이거나, 또는 150 nm 내지 200 nm인, 리포솜 제제.
  20. 제15항에 있어서,
    중성 지질, 스테로이드 및 폴리머 접합 지질을 포함하는 하나 이상의 다른 지질 성분을 더 포함하는, 리포솜 제제.
  21. 제20항에 있어서,
    포함된 스테로이드는 콜레스테롤인, 리포솜 제제.
  22. 제21항에 있어서,
    상기 콜레스테롤과 양이온성 지질 화합물의 몰비는 (0-1.5):1인, 리포솜 제제.
  23. 제15항에 있어서,
    폴리머 접합 지질 중의 폴리머는 폴리에틸렌글리콜(PEG)인, 리포솜 제제.
  24. 제23항에 있어서,
    상기 양이온성 지질 화합물과 상기 폴리에틸렌글리콜 접합 지질의 몰비는 100:1 내지 20:1인, 리포솜 제제.
  25. 제23항에 있어서,
    상기 폴리에틸렌글리콜 접합 지질은 PEG-DAG, PEG-PE, PEG-SDAG, PEG-cer, PEG-DMG 또는 ALC-0159인, 리포솜 제제.
  26. 제20항에 있어서,
    상기 중성 지질은 DSPC, DPPC, DMPC, DOPC, POPC, DOPE 및 SM 중의 하나 이상의 조합으로부터 선택되는, 리포솜 제제.
  27. 제26항에 있어서,
    상기 중성 지질과 양이온성 지질 화합물의 몰비는 (0-0.5):1인, 리포솜 제제.
  28. 제15항에 있어서,
    상기 핵산은 안티센스 RNA 및/또는 메신저 RNA로부터 선택되는, 리포솜 제제.
  29. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 양이온성 지질 화합물 또는 제15항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 리포솜 제제의 대상자에서 단백질 발현을 유도하기 위한 약물의 제조에서의 용도.
  30. 제29항에 있어서,
    상기 대상자는 포유동물인, 용도.
  31. 제29항에 있어서,
    상기 대상자는 비인간 영장류 동물 또는 인간인, 용도.
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