KR20240054152A

KR20240054152A - 왓소니아(Selaginella martensii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20240054152A
Application number: KR1020230032588A
Authority: KR
Inventors: 조영제; 원희택; 김근아; 김정하; 이혜정; 이보화; 박혜진
Original assignee: 경북대학교 산학협력단
Priority date: 2022-10-18
Filing date: 2023-03-13
Publication date: 2024-04-25

Abstract

본 발명은 왓소니아 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 왓소니아 추출물의 항산화 활성, 피부 주름 억제 효과, 모공 수축 효과에 대해 확인하였다. 그 중에서도 왓소니아 열수 추출물이 뛰어난 항산화 활성 피부 주름 억제 효과, 모공 수축 효과를 가지고 있음을 확인하였다.

Description

왓소니아(Selaginella martensii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부개선용 화장료 조성물{Cosmetic composition for improving skin condition comprising Selaginella martensii extract as an active ingredient}

본 발명은 왓소니아(Selaginella martensii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

최근 코로나19 팬데믹으로 인해 사람들의 생활 방식이나 소비 방식이 바뀌게 되었고, 긴 마스크 생활을 겪으며 자연스레 화장은 가벼워지고 색조 화장품의 소비가 줄게 되었다. 하지만 스킨 케어 제품은 큰 타격없이 꾸준히 소비되었으며, 그 중에서도 한국의 기능성 화장품이 해외에서 각광을 받으며 국내 화장품 브랜드의 선호도가 증가하였다. 더 나아가 자연스러움, 풋풋함 등의 화장 방법이 유행하며 맑은 피부, 깨끗한 피부에 대한 관심이 점점 늘어나고 있다. 이러한 트렌드에 화장품 산업에서도 생약을 포함한 식물 원료, 해양 원료 등의 다양한 자연유래 소재들을 원료로 사용하는 천연화장품이 인기를 끌고 있다. 다양한 스킨케어 제품이 등장하고 있지만 앞서 말한 천연화장품이 각광을 받게 되며 소비자는 화장품의 안전성에 더욱 신경쓰고 화학물질에 대해 더욱 주의를 기울인다. 이렇듯 소비자들이 보다 안전하고 깨끗한 것을 찾게되면서 인위적인 화학물질보다는 천연물질을 이용한 자연친화적 화장품 개발의 연구가 진행되고 있다. 이러한 인식의 변화를 통해 화학물질이 적은 순수한 제품을 만들려 천연 유래 물질로 기능성 화장품을 만드는 연구가 계속되고 있다.

본 발명에서 사용된 왓소니아(Selaginella martensii)는 석송식물문의 Sellaginella에 속하며 온대, 열대, 사막 등의 다양한 지역에서 700종 이상 서식하고 있다. 부처손속의 S. martensii는 상록 다년생 양치식물이며, 남아메리카 대륙 및 뉴질랜드에서 서식한다. S. martensii는 분지마다 rhizophore의 모습을 가지며 잎이 하얗게 변하는 특성으로 ‘frosty fern’ 이라 불린다. 두개의 복엽과 배엽이 한 쌍을 이루며 줄기는 반복적으로 분지되는데 분지마다 분열조직에서 잎이 없는 원통형의 rhizophore이 나타나고, 그 끝에 뿌리가 형성되어 하얗게 보이는 것이다. 많은 종류의 2차 대사산물을 함유하고 있어 식물 유래 천연물 소재로 개발 가치가 높다. 이미 다양한 나라에서 Selaginella 종이 약용으로 사용되고 있으며 국내 등에서 일부 종은 관상용으로 쓰인다. Selaginella 는 의학적 가치가 높은 양치식물로 많은 종에서 유용한 기능성 물질을 가지고 있으며, 알칼로이드(alkaloid), 페놀(phenolic), 테르페노이드(terpenoid) 등과 같은 다양한 천연물질을 포함하고 있다. 앞선 실험에서 Selaginella 종에서 추출한 바이플라본(biflavone)인 깅게틴(ginkgetin)과 바이플라보노이드(biflavonoids)에서 항암효과 등의 기능성을 밝혀낸 바 있으며, 이 외의 Selaginella 종에서 다양한 성분과 기능성이 보고되어왔다.

따라서 본 발명에서는 왓소니아 추출물을 이용하여 기능성 화장품 소재로의 활용이 적합한지에 대해 미용 기능성 효능을 확인하였다. 타이로시네이스(Tyrosinase) 활성 억제, 엘라스테이즈(elastase) 활성 억제 및 콜라게네이즈(collagenase) 활성, astringent 활성을 측정하여 왓소니아를 기능성 화장품 소재로 사용될 수 있음을 확인하였다.

대한민국 공개특허 제10-2021-0036803호

본 발명의 목적은 왓소니아(Selaginella martensii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부개선용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 왓소니아(Selaginella martensii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 데 있다.

위와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 왓소니아(Selaginella martensii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 위와 같은 목적을 달성하기 위하여, 왓소니아(Selaginella martensii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명은 왓소니아 추출물의 항산화 효과, 피부 주름 생성 억제 효과, 모공 수축 효과에 대해 확인하였다. 또한, 유기용매가 아닌 열수 추출할 때 모공 수축 효과가 뛰어남을 확인하여, 피부개선용 화장료 조성물 또는 건강기능식품 조성물로 사용할 수 있어, 관련 산업에 유용하게 이용할 수 있다.

도 1은 왓소니아(S.martensii) 추출물의 총 phenolic compounds의 함량을 나타낸 도이다.
도 2는 왓소니아(S.martensii) 추출물 및 고형분(solid)의 총 페놀 함량, DPPH 라디칼 소거능, ABTS 라디칼 소거능의 비교를 나타낸 도이다.
도 3은 왓소니아(S.martensii) 추출물의 DPPH 라디칼 소거능을 나타낸 도이다.
도 4는 왓소니아(S.martensii) 추출물의 ABTS 라디칼 소거능을 나타낸 도이다.
도 5는 왓소니아(S.martensii) 추출물의 Antioxidant protection factor을 나타낸 도이다.
도 6은 왓소니아(S.martensii) 추출물의 TBARs 억제 효과를 나타낸 도이다.
도 7은 왓소니아(S.martensii) 추출물의 Elastase 활성 억제 효과를 나타낸 도이다.
도 8은 왓소니아(S.martensii) 추출물의 Collagenase 활성 억제 효과를 나타낸 도이다.
도 9는 왓소니아(S.martensii) 추출물의 Astringent 효과를 나타낸 도이다.

본 명세서에서 사용되는 용어(Terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시 예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 “포함”한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

본 발명은 왓소니아(Selaginella martensii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 유효성분인 왓소니아 추출물은 당업계에 공지된 추출 및 분리하는 방법을 사용하여 각각 왓소니아로부터 추출 및 분리하여 수득한 것을 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의된 '추출물'은 적절한 용매를 이용하여 추출된 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함한다.

추출을 위한 적절한 용매로는 물 또는 약학적으로 허용되는 유기용매로서 어느 것을 사용해도 무방하다. 예를 들어, 상기 용매로는 물, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol) 및 부탄올(butanol) 등의 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 또는 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있으며, 바람직하게는 쉽게 이용할 수 있는 물이다.

추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 열수추출법을 이용한다.

또한 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 추출물은 1차 추출물을, 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조할 수 있다. 또한 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획으로도 얻을 수 있다.

따라서 본 발명에서 사용되는 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.

본 발명의 왓소니아(S.martensii) 추출물 포함하는 조성물은 피부주름 개선. 모공 수축용 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨, 에센스 등과 같은 화장품류와 샴푸, 린스, 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 팩, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 추출물로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 추출물로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다. 이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및무기안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다. 유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산 부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산 에틸,리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산 트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산 이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴, 카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜 틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인 산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르 계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산 및 메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산 및 메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜 (중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈 및 에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈 및 헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들수 있다. 에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산 콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린 지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE(폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POE 및 POP (폴리옥시에틸렌 및 폴리옥시프로필렌) 공중합체, POE 및 POP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산업, 알킬아미드 인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산 디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아 미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다. 양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드 술포 베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트 수지,디비닐벤젠 및 스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠 및 스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐,살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모 노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시 계피산 이소프로필, 디이소프로필 및 디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 피부개선용 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 밀크 로션, 아스트린젠트, 로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 헤어로션, 헤어토닉, 헤어에센스, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화 아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 피부개선은 항산화 효과를 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 항산화 효과는 라디칼을 소거하는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 라디칼은 DPPH 또는 ABTS 라디칼인 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 항산화 효과는 지질 과산화를 억제하는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 피부개선은 피부 주름 생성 억제 효과를 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 피부 주름 생성 억제는 엘라스테이즈(elastase) 또는 콜라게네이즈(collagenase) 활성 억제인 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 피부개선은 모공 수축 효과를 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 모공 수축은 수렴활성(Astrigent)을 가지는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 왓소니아 추출물은 200~600 μg/mL 농도의 열수 추출물인 것일 수 있다.

또한, 본 발명은 왓소니아(Selaginella martensii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 건강기능식품 조성물은 유효성분인 추출물을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨,소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제 (타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 상기 약학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.

또한 상기 건강기능식품 조성물은 유효성분인 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

본 발명의 건강기능식품 조성물은, 정제,캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공될 수 있다. 본 발명에서 '건강기능식품 조성물.'이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다. 상기 '식품 첨가물 공전'에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료 제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다. 예를 들어, 정제 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다. 캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다. 환 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다. 과립 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분의 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.

본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 '%'는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (w/w) %, 고체/액체는 (w/v) %, 그리고 액체/액체는 (v/v) %이다.

이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 보다 자세히 설명한다. 다만, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허 청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.

<준비예> 왓소니아 시료 제조

왓소니아(Selaginella martensii)는 경기도 고양시에 소재한 무호화훼에서 2022년 6월에 구매하여 줄기와 잎 부분만 수확하여 45℃ dry oven (FO600M, Jeiotech, Daejeon, Korea)에서 건조시킨 후 40 mesh로 분쇄하여 시료로 사용하였다.

<실시예 1> 최적 추출조건 설정 및 왓소니아 추출물의 제조

시료의 최적 추출조건을 설정하기 위해 추출용매로 증류수(Distilled water, DW)와 에탄올, 두 개의 용매를 사용해 왓소니아를 추출하였다. 열수 추출의 경우 DW 200 mL에 S.martensii 건조 분말 1 g을 넣고 100 mL이 될대까지 가열해서 끓인 후 24시간 동안 상온에서 진탕 배양기 (WIS-20, DAIHAN Scientific Ltd, Seoul, Korea)에서 200 rpm으로 교반 추출하였으며, 에탄올 추출은 ethanol 용액 10~100% 농도별로 100 mL에 S.martensii 건조 분말 1 g을 넣고 24시간 동안 상온에서 200 rpm으로 교반 추출하였다. 이후 4000rpm에서 30분간 원심분리기 (FLETA 40, HANIL SCIENCE Ltd, Daejeon, Korea)를 이용해 여과한 후 Folin-Denis 방법으로 Total phenolic compounds를 측정했을 때 ethanol 80%에서 최대 활성이 나타났다. 이를 최적 추출조건으로 설정하였다.

DW와 최적 추출조건인 Ethanol 80%을 이용해 같은 방법으로 추출한 뒤 Whatman No. 1 여과지(Whatman Inc, Piscataway, New Jersey, USA)와 감압여과기 (EYELA A-3S, TOKYO RIKAKIKAI Ltd, Tokyo, Japan)를 이용해 여과한 후, 필요에 따라 감압농축기 (Buchi Rotavapor R-200, Buchi Labotechnik AG, Flawil, Switzerland)로 농축하여 시료로 사용하였다. Solid는 여과한 추출물을 동결건조기(FDS8518, ilShinBioBase. Ltd, Gyeonggi, Korea)를 이용해 건조물로 제작하여 시료로 사용하였다.

<실시예 2> 통계처리

하기 실험예의 실험결과에 대해서는 평균과 표준오차로 나타냈으며, SPSS software 26(SPSS Inc., Chicago, IL, USA)을 이용하여 실험군 간의 유의차를 검증하고자 일원 배치 분산분석(One-way ANOVA)을 실시하였고, Duncan의 방법으로 사후검정을 실시하여 p<0.05 수준에서 상호 비교하였다.

<실험예 1> Total phenolic compounds (TPC) 측정

시료 1 mL에 100% ethanol 1 mL와 DW 5 mL를 첨가하고 1 N Folin reagent 0.5 mL를 넣어 vortex mixer (VM-10, DAIHAN Scientific. Ltd, Wonju, Korea)로 잘 섞어주고 5분 동안 방치한 뒤 종료 시약인 5% Na₂CO₃ 1 mL를 첨가해 섞고 1시간 동안 암실에 방치한 뒤 spectrophotometer (Optizen 3220UV, Mecasys Ltd, Daejeon, Korea)를 이용해 725 nm의 파장으로 흡광도를 측정하였다. TPC 함량은 gallic acid를 표준물질로 사용하여 작성한 추세선(y=0.0119x-0.0483, =0.9937)으로부터 양을 산출하였다. 왓소니아 전초 추출물에서 항산화 활성을 확인할 수 있는 total phenolic compounds (TPC) 함량을 정량하였으며, 열수(DW)와 10%부터 100% ethanol을 용매로 사용해 총 11개의 농도로 제조한 추출물의 TPC 함량을 비교하였다. 결과는 하기 표 1 및 도 1에 나타내었다.

Phenolic compounds
농도(%)	sample	페놀함량 (㎎/g)	편차
DW	Water	2.92	0.07
0	Ethanol	0.00	0.00
10		1.78	0.02
20		1.87	0.06
30		2.04	0.04
40		2.62	0.04
50		3.04	0.10
60		3.28	0.05
70		3.57	0.13
80		3.65	0.02
90		3.29	0.14
100		2.90	0.15

80% ethanol 추출물에서 1 g당 페놀 함량이 3.65mg으로 가장 높게 나타났으며, 열수 추출물은 1g당 2.92mg로 나타났다.

또한, 왓소니아 고형분(solid)과 추출물의 생리활성 비교결과, TPC 함량은 도 2와 같이 DW extract에서 1 mL 당 페놀 함량이 111.13 μg 로 DW solid 보다 높게 나타났으며, 80% ethanol extract에서 1 mL당 페놀 함량이 99.21μg로 80% ethanol solid보다 높게 나타났다. 이러한 결과를 통해, 왓소니아를 열수 추출하는 경우에도 유기용매인 에탄올 추출에 상응하는 양의 유의미한 페놀함량이 추출될 수 있음을 확인하였다.

<실험예 2> 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity 측정

25, 50, 75, 100μg/mL 농도로 희석한 시료액을 각각 1mL씩 넣고 60μM DPPH 용액 3mL를 첨가하여 실온에 15분간 반응시킨 다음, 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 양성 대조군으로 BHA(Butylated Hydroxy Anisole)를 사용하였으며, DPPH radical 소거 활성은 하기 수학식 1을 통하여 산출하였다.

[수학식 1]

(대조구의 흡광도-반응구의 흡광도/대조구의 흡광도)×100

실험결과는 하기 표 2 및 도 3에 나타내었다.

DW
농도(μg/mL)	25	50	75	100
활성(%)	70.38	79.76	81.17	79.47
편차	0.46	0.13	0.59	1.09
80%E
농도(μg/mL)	25	50	75	100
활성(%)	78.21	94.53	100.00	100.00
편차	0.71	0.78	2.89	2.67
BHA
농도(μg/mL)	25	50	75	100
활성(%)	67.42	67.66	71.03	67.98
편차	0.91	1.71	0.61	0.00

DPPH 라디칼 소거 활성은 상기 표 2 및 도 3과 같이, 열수 추출물 25, 50, 75, 100ug/mL의 농도에서 70.38, 79.76, 81.17, 79.47%의 활성을 나타내었고, 80% 에탄올 추출물 25, 50, 75, 100ug/mL의 농도에서는 78.21, 94.53, 100, 100%의 활성을 나타내어 양성대조군이 BHA보다 높은 활성을 나타내었다. 이러한 결과를 통해, 왓소니아 추출물이 항산화 활성을 가지고 있음을 확인하였다.

<실험예 3> 2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline 6-sulphonic acid) (ABTS) radical inhibition activity 측정

7 mM ABTS와 140 mM K₂S₂O₈를 섞은 후 방치하여 ABTS solution을 만들고 흡광도가 0.68~0.72가 되도록 조정하였다. ABTS solution 4 mL, 25, 50, 75, 100μg/mL농도별로 희석한 sample 200 μL를 흔들어 섞어 1.5분간 반응시킨 후 734 nm에서 측정하였다. ABTS radical 억제 효과는 상기 수학식 1을 사용하여 값을 산출하였다. 결과는 하기 표 3과 도 4에 나타내었다.

DW
농도(μg/mL)	25	50	75	100
활성(%)	72.10	93.68	99.13	98.26
편차	2.00	0.22	0.43	0.29
80%E
농도(μg/mL)	25	50	75	100
활성(%)	42.57	55.79	65.11	80.21
편차	0.44	2.83	0.95	1.17
BHA
농도(μg/mL)	25	50	75	100
활성(%)	17.47	70.27	98.99	98.99
편차	9.83	2.05	0.43	1.15

ABTS 라디칼 소거 활성은 상기 표 3 및 도 4와 같이, 열수 추출물 25, 50, 75, 100μg/mL 농도에서 72, 94, 99, 98%의 활성을 나타내었고, 80% 에탄올 추출물 25, 50, 75, 100μg/mL 농도에서는 43, 56, 65, 80%의 활성을 나타냈다. 전체적으로 80% 에탄올 추출물보다는 열수 추출물의 활성이 높았으며, 열수 추출물은 양성대조군인 BHA보다도 높은 활성을 나타내었다. 이러한 결과를 통해 왓소니아 추출물이 항산화 활성을 가지고 있으며, 그 중에서도 열수 추출물이 뛰어난 항산화 활성을 가지고 있음을 확인하였다.

<실험예 4> Antioxidant protection factor (PF) activity 측정

50 mg의 β-carotene을 50mL chloroform에 녹인 용액 5mL를 evaporator용 수기에 넣고 40℃ water bath에서 chloroform을 증류시켰다. 이후 100μL linoleic acid, 920μL Tween 40, 880μL H₂O₂와 250 mL DW를 첨가하여 emulsion을 제조하였다. 0.1 mL 시료액과 5 mL emulsion을 혼합하여 50℃에서 30분간 반응시킨 후 냉각한 다음, 470 nm에서 흡광도를 측정하였다. PF값은 하기 수학식 2를 통해 값을 산출하였다.

[수학식 2]

Antioxidant protection factor (PF) = 반응구의 흡광도/대조구의 흡광도

결과는 하기 표 4 및 도 5에 나타내었다.

DW
농도(μg/mL)	25	50	75	100
PF값	1.08	1.11	1.24	1.27
편차	0.09	0.06	0.08	0.02
80%E
농도(μg/mL)	25	50	75	100
PF값	1.01	1.08	1.09	1.13
편차	0.02	0.06	0.04	0.02
BHT
농도(μg/mL)	25	50	75	100
PF값	1.14	1.11	1.14	1.34
편차	0.12	0.06	0.04	0.09

PF 효과는 상기 표 4 및 도 5와 같이, 열수 추출물 25, 50, 75, 100ug/mL의 농도에서 1.08, 1.11, 1.24, 1.27 PF 값을 나타내었고, 80% 에탄올 추출물 25, 50, 75, 100ug/mL의 농도에서는 1.01, 1.08, 1.09, 1.13 PF 값을 나타내었다. 이러한 결과를 통해 왓소니아 추출물이 항산화 활성을 가지고 있으며 그 중에서도 열수 추출물이 뛰어난 항산화 활성을 가지고 있음을 확인하였다.

<실험예 5> Thiobarbituric acid reactive substance (TBARs) inhibition activity 측정

5% linoleic acid와 1% tween 40을 넣어 hand mixer로 섞은 emulsion 용액을 넣고 50℃ water bath에서 16시간 이상 반응시켰다. 그 후 Trichloroacetic acid (TCA), thiobarbituric acid (TBA), HCl을 혼합하여 제조한 TBA stock solution 100 mL에 2% BHT 3 mL를 섞어서 제조한 TBA reagent 4 mL를 첨가해 혼합하여 끓는 물에 15분간 중탕한 뒤 10분간 냉각하였다. 그 다음 20분간 원심분리기(VISION SCIENTIFIC, Daejeon, Korea) 하여 10분간 방치한 후 532 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로 BHT(2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol)를 사용하였으며, TBARs 억제 활성은 상기 수학식 1을 이용하여 값을 산출하였다. 결과는 하기 표 5 및 도 6에 나타내었다.

DW
농도(μg/mL)	25	50	75	100
억제(%)	34.28	84.51	93.13	96.09
편차	5.50	4.09	1.21	5.02
80%E
농도(μg/mL)	25	50	75	100
억제(%)	67.00	84.44	91.72	91.31
편차	6.84	0.86	0.29	0.29
BHT
농도(μg/mL)	25	50	75	100
억제(%)	68.28	81.28	82.02	91.78
편차	5.43	0.23	0.29	4.45

TBARs 억제 활성은 상기 표 5 및 도 6과 같이, 열수 추출물 25, 50, 75, 100 μg/mL TPC 농도에서 34, 84, 93, 96%의 활성을 나타내었고, 80% 에탄올 추출물 25, 50, 75, 100 μg/mL TPC 농도에서는 67, 84, 91, 91%의 활성을 나타냈다. 80% 에탄올 추출물과 열수 추출물 양성대조군인 BHT와 유사한 수치를 나타내었다. 이러한 결과를 통해, 왓소니아 추출물이 TBARs 억제 활성을 가지고 있어, 지질 산화를 억제하는 것을 확인하였다.

<실험예 6> Elastase inhibition activity 측정

0.2 M Tris-HCl (pH 8.0) 1.0 mL에 N-suc-(Ala)₃-p-nitroanilide 0.1 mL, sample 0.1 mL를 섞고, Porcine pancreatic dlastase (PPE) 0.1 mL를 넣어 흔들어 섞어 37°C에서 20분간 반응시킨 후 410nm에서 측정하였다. 양성 대조군으로 ursolic acid를 사용하였으며, elastase 억제 효과는 상기 수학식 1을 이용하여 값을 산출하였다. 결과는 표 6 및 도 7에 나타내었다.

DW
농도(μg/mL)	50	100	200	400
억제(%)	0.00	0.00	22.82	31.94
편차	0.00	0.00	7.87	2.18
80%E
농도(μg/mL)	50	100	200	400
억제(%)	0.00	0.00	0.00	0.00
편차	0.00	0.00	0.00	0.00
EGCG
농도(μg/mL)	50	100	200	400
억제(%)	5.26	55.35	70.87	99.09
편차	0.00	6.18	8.85	5.29

Elastase 억제 활성은 상기 표 6 및 도 7과 같이, 열수 추출물 400μg/mL TPC 농도에서 22.8, 31.9%의 억제 활성을 가진 것으로 나타내었고, 에탄올 추출물에서는 억제 활성이 나타나지 않았다. 이러한 결과를 통해, 왓소니아 열수 추출물이 피부주름 개선 효과를 가지고 있음을 확인하였다.

<실험예 7> Collagenase inhibition activity 측정

4mM CaCl₂를 첨가한 0.1M의 Tris-HCl buffer(pH 7.5) 0.15 mL에 0.4 mM 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg 0.25 mL와 일정 농도로 희석한 시료액 0.1 mL를 혼합한 후, collagenase 0.15mL를 넣어 25℃에서 20분간 반응시켰다. 여기에 6%의 citric acid 0.5mL를 첨가하여 반응을 정지시킨 후, ethyl acetate 1.5mL를 넣고 골고루 혼합하여 상등액만을 취해 320nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로 EGCG를 사용하였고, collagenase 억제 효과는 상기 수학식 1을 이용하여 값을 산출하였다. 결과는 표 7 및 도 8에 나타내었다.

DW
농도(μg/mL)	50	100	200	400
억제(%)	0.00	0.00	18.39	41.60
편차	0.00	0.00	3.18	2.82
80%E
농도(μg/mL)	50	100	200	400
억제(%)	0.00	0.00	0.00	0.00
편차	0.00	0.00	0.00	0.00
EGCG
농도(μg/mL)	50	100	200	400
억제(%)	28.37	35.11	55.07	83.53
편차	1.06	4.94	4.24	4.92

Collagenase 억제 효과는 상기 표 7 및 도 8과 같이, 80% 에탄올 추출물에서는 모두 효과가 없었고, 열수 추출물 200, 400ug/mL 농도에서 각각 18.39%, 41.60%의 효과를 나타내었다. 상기 결과를 통해 왓소니아 열수 추출물이 주름개선 효과가 있음을 확인하였다.

<실험예 8> Astringent activity 측정

본 발명의 왓소니아 추출물의 모공 수축효과를 확인하기 위하여 Astringent activity 활성을 측정하였으며, 헤모글로빈(hemoglobin) 단백질이 추출물과 결합하는 정도에 따라 수렴 효과를 판단하였다.

피부 단백질과 유사한 혈액 단백질 hemoglobin을 사용하여 원심분리 용기에 각 시료와 헤모글로빈 용액을 1 : 0.5로 넣어서 혼합한 후, 13,500 rpm에서 원심분리하여 576 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조구는 시료 대신 DW를 넣어 반응시켰다. 양성 대조군으로 tannic acid를 사용하였고, astringent 효과는 (대조구의 흡광도-반응구의 흡광도/대조구의 흡광도)×100을 사용하여 값을 산출하였다. 결과는 표 8 및 도 9에 나타내었다.

DW
농도(μg/mL)	50	100	200	400
억제(%)	0.00	0.00	0.00	19.78
편차	0.00	0.00	0.00	5.07
80%E
농도(μg/mL)	50	100	200	400
억제(%)	0.00	0.00	0.00	0.00
편차	0.00	0.00	0.00	0.00
Tannic acid
농도(μg/mL)	50	100	200	400
억제(%)	0.00	0.00	0.00	24.67
편차	0.00	0.00	0.00	1.38

상기 표 8 및 도 9와 같이, 80% 에탄올 추출물에서는 Astringent 효과를 보이지 않지만, 열수 추출물 400 μg/mL 농도에서 19.78%의 활성을 나타내었으며, 양성대조군인 tannic acid의 수렴 활성과 유사한 수준의 효과를 가지고 있었다. 상기 결과를 통해, 왓소니아 열수 추출물이 모공수축 효과가 있음을 확인하였다.

따라서, 본 발명은 왓소니아 추출물의 항산화 효과, 피부 주름 억제 효과 및 모공수축 효과에 대해 확인하였다. 그 중에서도, 왓소니아 열수 추출물이 주름 개선 및 모공수축 효과가 에탄올 추출물보다 뛰어난 것으로 나타나, 왓소니아 열수 추출물이 피부개선용 화장료 조성물 또는 건강기능개선용 식품 조성물로 사용될 수 있음을 확인하였다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

왓소니아(Selaginella martensii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 왓소니아 추출물의 추출용매는 물, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol) 및 부탄올(butanol) 등의 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane)로 이루어진 군에서 선택된 것인, 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 피부개선은 항산화 효과를 포함하는 것인, 화장료 조성물.
제3항에 있어서,
상기 항산화 효과는 라디칼을 소거하는 것인, 화장료 조성물.
제4항에 있어서,
상기 라디칼은 DPPH 또는 ABTS 라디칼인 것인, 화장료 조성물.
제3항에 있어서,
상기 항산화 효과는 지질 과산화를 억제하는 것인, 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 피부개선은 피부 주름 생성 억제 효과를 포함하는 것인, 화장료 조성물.
제7항에 있어서,
상기 피부 주름 생성 억제는 엘라스테이즈(elastase) 또는 콜라게네이즈(collagenase) 활성 억제인 것인, 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 피부개선은 모공 수축 효과를 포함하는 것인, 화장료 조성물.
제9항에 있어서,
상기 모공 수축은 수렴활성(Astrigent)을 가지는 것인, 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 왓소니아 추출물은 200~600 μg/mL 농도의 열수 추출물인, 화장료 조성물.
왓소니아(Selaginella martensii)을 유효성분으로 포함하는 피부개선용 건강기능식품 조성물.
제12항에 있어서,
상기 왓소니아 추출물의 추출용매는 물, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol) 및 부탄올(butanol) 등의 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane)로 이루어진 군에서 선택된 것인, 건강기능식품 조성물.
제12항에 있어서,
상기 피부개선은 항산화 효과를 포함하는 것인, 건강기능식품 조성물.
제14항에 있어서,
상기 항산화 효과는 라디칼을 소거하는 것인, 건강기능식품 조성물.
제15항에 있어서,
상기 라디칼은 DPPH 또는 ABTS 라디칼인 것인, 건강기능식품 조성물.
제14항에 있어서,
상기 항산화 효과는 지질 과산화를 억제하는 것인, 건강기능식품 조성물.
제12항에 있어서,
상기 피부개선은 피부 주름 생성 억제 효과를 포함하는 것인, 건강기능식품 조성물.
제18항에 있어서,
상기 피부 주름 생성 억제는 엘라스테이즈(elastase) 또는 콜라게네이즈(collagenase) 활성 억제인 것인, 건강기능식품 조성물.
제12항에 있어서,
상기 피부개선은 모공 수축 효과를 포함하는 것인, 건강기능식품 조성물.
제20항에 있어서,
상기 모공 수축은 수렴활성(Astrigent)을 가지는 것인, 건강기능식품 조성물.
제12항에 있어서,
상기 왓소니아 추출물은 200~600 μg/mL 농도의 열수 추출물인, 건강기능식품 조성물.