KR20240053675A - sBCMA 변이체 및 이의 FC 융합 단백질을 이용한 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생산 감소 방법 - Google Patents
sBCMA 변이체 및 이의 FC 융합 단백질을 이용한 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생산 감소 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20240053675A KR20240053675A KR1020247007973A KR20247007973A KR20240053675A KR 20240053675 A KR20240053675 A KR 20240053675A KR 1020247007973 A KR1020247007973 A KR 1020247007973A KR 20247007973 A KR20247007973 A KR 20247007973A KR 20240053675 A KR20240053675 A KR 20240053675A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- sbcma
- variant
- domain
- amino acid
- seq
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 180
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 title 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 201
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 193
- 102220498722 Protein LRATD2_H19Y_mutation Human genes 0.000 claims description 192
- 102220129326 rs765777463 Human genes 0.000 claims description 135
- 102220593541 PMS1 protein homolog 1_N11D_mutation Human genes 0.000 claims description 103
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 91
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 91
- 102220056952 rs730880947 Human genes 0.000 claims description 91
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 76
- 102220040085 rs587778169 Human genes 0.000 claims description 69
- 102220544598 Tyrosinase_S44G_mutation Human genes 0.000 claims description 60
- 102220064265 rs531598856 Human genes 0.000 claims description 59
- 102220320593 rs1554306309 Human genes 0.000 claims description 54
- 102220069325 rs141790557 Human genes 0.000 claims description 51
- 102200116581 rs28938777 Human genes 0.000 claims description 51
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 50
- 102220221476 rs1060503624 Human genes 0.000 claims description 49
- 102200028671 rs3765620 Human genes 0.000 claims description 49
- 102200068569 rs1058180 Human genes 0.000 claims description 47
- 102220192411 rs749977756 Human genes 0.000 claims description 46
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims description 44
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims description 44
- 102200108123 rs104894540 Human genes 0.000 claims description 44
- 102220563971 Vitamin K-dependent protein S_K50E_mutation Human genes 0.000 claims description 41
- 102200049605 rs1131691346 Human genes 0.000 claims description 41
- 102220282404 rs1555604907 Human genes 0.000 claims description 41
- 102200081451 rs199476398 Human genes 0.000 claims description 41
- 102220094502 rs876658408 Human genes 0.000 claims description 41
- 102000006942 B-Cell Maturation Antigen Human genes 0.000 claims description 40
- 108010008014 B-Cell Maturation Antigen Proteins 0.000 claims description 40
- 102200088705 rs1801394 Human genes 0.000 claims description 39
- 102200156921 rs56309853 Human genes 0.000 claims description 39
- 102220103579 rs755210880 Human genes 0.000 claims description 38
- 102220134669 rs886054796 Human genes 0.000 claims description 36
- 102200016464 rs104894278 Human genes 0.000 claims description 33
- 102220224889 rs1060502705 Human genes 0.000 claims description 33
- 102220254507 rs374725632 Human genes 0.000 claims description 33
- 102220276878 rs768661914 Human genes 0.000 claims description 33
- 102220214673 rs1060502033 Human genes 0.000 claims description 31
- 102220283481 rs1555734967 Human genes 0.000 claims description 31
- 102220097743 rs45512093 Human genes 0.000 claims description 31
- 102200114568 rs281875284 Human genes 0.000 claims description 30
- 102220222046 rs765520187 Human genes 0.000 claims description 30
- 102220505166 Arf-GAP with coiled-coil, ANK repeat and PH domain-containing protein 1_S44D_mutation Human genes 0.000 claims description 29
- 102220472371 Vitamin K epoxide reductase complex subunit 1_S29A_mutation Human genes 0.000 claims description 29
- 102220283965 rs1426424086 Human genes 0.000 claims description 29
- 102220024604 rs267607644 Human genes 0.000 claims description 29
- 102220327453 rs1555509645 Human genes 0.000 claims description 28
- 102220541232 Cystatin-D_H19R_mutation Human genes 0.000 claims description 27
- 102200096120 rs786205665 Human genes 0.000 claims description 27
- 102220347073 c.42C>A Human genes 0.000 claims description 26
- 102220040197 rs117358479 Human genes 0.000 claims description 26
- 102200017391 rs121909254 Human genes 0.000 claims description 26
- 102220014894 rs76757102 Human genes 0.000 claims description 26
- 102220014895 rs76757102 Human genes 0.000 claims description 26
- 102220058912 rs786203228 Human genes 0.000 claims description 26
- 102200158370 rs868333 Human genes 0.000 claims description 26
- 102220534460 6-pyruvoyl tetrahydrobiopterin synthase_L26F_mutation Human genes 0.000 claims description 25
- 101150020334 C18L gene Proteins 0.000 claims description 25
- 102220576080 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain_S48T_mutation Human genes 0.000 claims description 25
- 102220465272 Interferon alpha-8_N53K_mutation Human genes 0.000 claims description 25
- 101100502056 Vaccinia virus (strain Copenhagen) F14L gene Proteins 0.000 claims description 25
- 101100502058 Vaccinia virus (strain Western Reserve) VACWR053 gene Proteins 0.000 claims description 25
- 102200139519 rs104893652 Human genes 0.000 claims description 25
- 102220032306 rs104895313 Human genes 0.000 claims description 25
- 102220040199 rs147660793 Human genes 0.000 claims description 25
- 102220268950 rs1555376567 Human genes 0.000 claims description 25
- 102220325558 rs1555376579 Human genes 0.000 claims description 25
- 102200017902 rs267606847 Human genes 0.000 claims description 25
- 102220240040 rs375440229 Human genes 0.000 claims description 25
- 102200014835 rs727505186 Human genes 0.000 claims description 25
- 102220087239 rs763598472 Human genes 0.000 claims description 25
- 102220107908 rs113480953 Human genes 0.000 claims description 21
- 102220238156 rs1429174414 Human genes 0.000 claims description 21
- 102220239672 rs149003893 Human genes 0.000 claims description 21
- 102200076341 rs199476145 Human genes 0.000 claims description 21
- 102220544599 Tyrosinase_S44R_mutation Human genes 0.000 claims description 20
- 102220094060 rs749212640 Human genes 0.000 claims description 20
- 102220209667 rs146472353 Human genes 0.000 claims description 19
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 8
- 102220605198 Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DS1_L2S_mutation Human genes 0.000 claims description 4
- 102220262581 rs374132087 Human genes 0.000 claims description 4
- 102220000257 rs62514891 Human genes 0.000 claims description 4
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 3
- 208000032671 Allergic granulomatous angiitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006344 Churg-Strauss Syndrome Diseases 0.000 claims description 2
- 208000018428 Eosinophilic granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010159 IgA glomerulonephritis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010021263 IgA nephropathy Diseases 0.000 claims description 2
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 claims description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 claims description 2
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 claims description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 claims description 2
- 206010053219 non-alcoholic steatohepatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002793 renal fibrosis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 2
- 102220060529 rs774330292 Human genes 0.000 claims 64
- 102200081891 rs137854514 Human genes 0.000 claims 11
- 102200132430 rs794728021 Human genes 0.000 claims 10
- 102200131349 rs60446065 Human genes 0.000 claims 9
- 102220278422 rs1440814662 Human genes 0.000 claims 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 abstract description 8
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 abstract description 8
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 abstract description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 196
- 102220521576 Tissue factor_T36A_mutation Human genes 0.000 description 190
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 130
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 129
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 127
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 76
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 76
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 76
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 76
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 76
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 72
- 235000013930 proline Nutrition 0.000 description 72
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 72
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 70
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 62
- 108010065323 Tumor Necrosis Factor Ligand Superfamily Member 13 Proteins 0.000 description 60
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 58
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 56
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 40
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 40
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 40
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 40
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 40
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 40
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 40
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 40
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 40
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 description 40
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 40
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 40
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 40
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 40
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 39
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 39
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 39
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 39
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 39
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 39
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 39
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 39
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 39
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 39
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 39
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 39
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 39
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 39
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 39
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 39
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 39
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 39
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 235000014705 isoleucine Nutrition 0.000 description 39
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 39
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 description 39
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 39
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 39
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 39
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 39
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 39
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 38
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 38
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 38
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 38
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 38
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 37
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 37
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 37
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 36
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 35
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 35
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 35
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 35
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 35
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 34
- 229940099472 immunoglobulin a Drugs 0.000 description 33
- 230000003335 steric effect Effects 0.000 description 32
- 102220218380 rs1060501264 Human genes 0.000 description 30
- 102220236666 rs769235753 Human genes 0.000 description 27
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 24
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 24
- 102220006550 rs545973 Human genes 0.000 description 24
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 23
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 22
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 22
- 101710178302 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B Proteins 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 102000050862 Transmembrane Activator and CAML Interactor Human genes 0.000 description 20
- 102220131850 rs199952414 Human genes 0.000 description 18
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 17
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 17
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 16
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 15
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 15
- 108010046304 B-Cell Activation Factor Receptor Proteins 0.000 description 13
- 102000007536 B-Cell Activation Factor Receptor Human genes 0.000 description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 10
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 10
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 8
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 8
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 8
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 8
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 101000801255 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 17 Proteins 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 102000046935 human TNFRSF17 Human genes 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 6
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 6
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 6
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 6
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 150000001508 asparagines Chemical group 0.000 description 5
- 150000002308 glutamine derivatives Chemical group 0.000 description 5
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 5
- 150000003355 serines Chemical group 0.000 description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 5
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 4
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 4
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 4
- 108020004206 Gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 150000001294 alanine derivatives Chemical group 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000000670 ligand binding assay Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 150000003588 threonines Chemical group 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 150000002614 leucines Chemical group 0.000 description 3
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 2
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 2
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 2
- 108010028006 B-Cell Activating Factor Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 2
- 101000830600 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13 Proteins 0.000 description 2
- 101000851434 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13B Proteins 0.000 description 2
- 235000003332 Ilex aquifolium Nutrition 0.000 description 2
- 241000209027 Ilex aquifolium Species 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- STECJAGHUSJQJN-USLFZFAMSA-N LSM-4015 Chemical compound C1([C@@H](CO)C(=O)OC2C[C@@H]3N([C@H](C2)[C@@H]2[C@H]3O2)C)=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-USLFZFAMSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 102100023105 Sialin Human genes 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 2
- 102100030859 Tissue factor Human genes 0.000 description 2
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 2
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 2
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 102100029675 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B Human genes 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 2
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 2
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 150000002333 glycines Chemical group 0.000 description 2
- 102000050326 human TNFSF13B Human genes 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 150000002741 methionine derivatives Chemical group 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 2
- 150000003679 valine derivatives Chemical group 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000840258 Homo sapiens Immunoglobulin J chain Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102100029571 Immunoglobulin J chain Human genes 0.000 description 1
- 241000824268 Kuma Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000016979 Other receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000219061 Rheum Species 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108090000054 Syndecan-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000003711 Syndecan-2 Human genes 0.000 description 1
- 208000018359 Systemic autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 108700002109 Transmembrane Activator and CAML Interactor Proteins 0.000 description 1
- 102100029690 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C Human genes 0.000 description 1
- 101710178300 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C Proteins 0.000 description 1
- 108091005966 Type III transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000013528 artificial neural network Methods 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 201000005008 bacterial sepsis Diseases 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000003936 denaturing gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 150000002519 isoleucine derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 238000012004 kinetic exclusion assay Methods 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 108010068617 neonatal Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Chemical group 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 150000003147 proline derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000007614 solvation Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
본 발명은 sBCMA 변이체 및/또는 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질을 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 면역글로불린 생성(예: IgA, IgM 및/또는 IgG 등)을 감소시키는 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에게 가용성 B 세포 성숙 항원(sBCMA) 변이체 및/또는 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 면역글로불린 생성(예: IgA, IgM 및/또는 IgG 등)을 감소시키는 방법에 관한 것이다.
B 세포 성숙 항원(BCMA)은 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원의 구성원이다. BCMA의 세포외 도메인의 아미노산 서열은 도 30에 제시되어 있다. 예를 들어, BCMA는 TNF 패밀리의 β-세포 활성화 인자(BAFF) 및 A 증식 유도 리간드(APRIL)에 대한 수용체이다. ADC(항체 약물 접합체)를 포함하는 항BCMA 항체는 BCMA 이중특이적 T 세포 체결 항체 및 BCMA를 사용한 CAR-T 작제물과 마찬가지로 초기 테스트에서 암 치료에 최초의 성공을 보여주었다.
BAFF는 본원에 참고로 포함되는 WO/0012964 및 US 제9,650,430호 B2에 이미 기술되어 있다. BAFF의 세포외 도메인에 대한 아미노산 서열은 도 7에 제시되어 있다. BAFF는 B 세포의 세포 생존 및 성숙 인자이며 BAFF의 과잉생산은 전신 자가면역 질환과 연관이 있다. 인간의 경우, 자가면역 류마티스 질환, 특히 전신홍반루푸스 및 쇼그렌 증후군을 앓고 있는 일부 환자의 혈액에서는 높은 수준의 BAFF가 검출 가능하다(Groom 등 J. Clin. Invest., 2002, 109:59; Zhang 등 J. Immunol., 2001, 166:6; Cheema 등 Arthritis Rheum. 2001, 44:1313, 모두 본원에 참고로 포함됨). BAFF는 또한 T 세포에 대한 효과적인 공동자극제이며, 이 공동자극은 전적으로 BAFF-R을 통해 발생한다(Ng 등 J. Immunol., 2004, 173:807, 본원에 참고로 포함됨).
APRIL은 본원에 참고로 포함된 WO 99 12965 및 US 제7,276,241호 B2에 이미 기술되어 있다. APRIL의 세포외 도메인의 아미노산 서열은 도 30에 제시되어 있다. APRIL 발현 및 기능적 연구는 이 단백질이 종양 세포에 의해 급속한 증식을 유도하는데 활용된다는 것을 시사한다. 또한, APRIL은 다른 질환 환경에서, 예를 들어 세포 집단이 빠르게 확장하는 염증 질환(예: 박테리아성 패혈증) 또는 일부 자가면역 질환(예: 루푸스)과 관련하여 발생하는 것과 같은 세포 증식 질환에서 작용할 수 있다(본원에 참고로 포함되는 US 제7,276,241호 B2).
종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 13B(TNFRSF13B)로도 알려진 막관통 활성화인자 및 CAML 상호작용자(TACI)는 III형 막관통 단백질이다. 몇몇 단백질(BAFF/BLys, APRIL, Syndecan-2)이 TACI 리간드로서 식별되었다. TACI와 이의 리간드의 상호작용은 전사 인자인 NFAT, AP1 및 NF-κ B의 활성화를 유도하고 B 세포 증식 및 생존을 조절하여 체액 면역에 중요한 역할을 한다. B 세포의 TACI 활성화는 항체 이소형 스위치 및 T 세포 독립적 항체 생산을 포함하는 이들의 분화 및 성숙을 야기한다(Chinen 등 J Allergy Clin Immunol. 2011, 127(6): 1579, 본원에 참고로 포함됨).
APRIL 및 BAFF는 BCMA, BAFF-수용체(BAFFR) 및 TACI와 같은 수용체에 결합할 수 있고, 이로써 중화성 APRIL 및/또는 BAFF는, 예를 들어 BCMA, BAFFR 및/또는 TACI를 통한 변경된 신호전달 경로로부터 발생하는 암, 자가면역 질환 및 섬유증과 같은 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다.
환자, 특히 면역글로불린 수준이 상승된 환자에서 자가면역 질환 및/또는 섬유성 장애에 대한 현재의 치료는 낮은 효능, 생존자권에 대한 낮은 영향, 심각한 부작용을 유발하는 독성, 또는 이들의 조합으로 인해 부적절하다. 따라서, IgA, IgM 및/또는 IgG 수준이 상승된 환자에서 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증을 치료하기 위한 추가적인 방법을 개발할 필요가 있다. 본 발명은 적어도 이러한 요구를 충족시킨다.
본 발명의 목적은 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증 장애(들)로 진단된 대상체에게 가용성 B 세포 성숙 항원(sBCMA) 변이체 및/또는 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 면역글로불린 생성(예: IgA, IgM 및/또는 IgG 등)을 감소시키는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명은 특히, 자가면역 질환 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 면역글로불린 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 가용성 B 세포 성숙 항원(sBCMA) 변이체 단백질 및/또는 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 특히 자가면역 질환으로 진단된 대상체에서 면역글로불린 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 특히 자가면역 질환으로 진단된 대상체에서 면역글로불린 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 특히 섬유증으로 진단된 대상체에서 면역글로불린 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 특히 섬유증으로 진단된 대상체에서 면역글로불린 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함한다.
본 발명은 특히 자가면역 질환 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 가용성 B 세포 성숙 항원(sBCMA) 변이체 단백질 및/또는 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 특히 자가면역 질환으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 특히 자가면역 질환으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 특히 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 특히 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 방법은 IgA의 생성을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 방법은 IgM의 생성을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 방법은 IgG의 생성을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 방법은 IgA 및 IgM 둘 다의 생성을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 방법은 IgA 및 IgG 둘 다의 생성을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 방법은 IgM 및 IgG 둘 다의 생성을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 방법은 IgA, IgM 및 IgG의 생성을 감소시킨다.
한 측면에서, 본 발명은 자가면역 질환 또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 가용성 B-세포 성숙 항원(sBCMA) 변이체-Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 1과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 변이체 sBCMA 도메인, 여기서 상기 아미노산 치환은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 19, 20, 22, 23, 25, 26, 29, 31, 32, 35, 36, 38, 39, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53 및 54로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 위치 번호에서 이루어지며, 여기서 넘버링(numbering)은 EU 인덱스(index)에 따른 것임;
b) 선택적 링커; 및
c) Fc 도메인.
추가적인 측면에서, 본 발명은 정상 B 세포 생존력이 변경되지 않는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 IgA의 생성을 감소시키는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가적인 측면에서, 본 발명은 IgM의 생성을 감소시키는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 IgG의 생성을 감소시키는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 IgA 및 IgM 둘 다의 생성을 감소시키는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 IgA 및 IgG 둘 다의 생성을 감소시키는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 IgM 및 IgG 둘 다의 생성을 감소시키는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 IgA, IgM 및 IgG의 생성을 감소시키는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 대상체가 자가면역 질환으로 진단되는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 자가면역 질환이 IgA 신장병, 전신홍반루푸스, 척-스트라우스(Churg-Strauss) 증후군, 중증근육무력증, 다발성 경화증 및 류마티스 관절염으로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다. 추가 측면에서, 본 발명은 자가면역 질환이 루푸스인, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 대상체가 섬유증으로 진단되는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가적인 측면에서, 본 발명은 섬유증이 특발성 폐섬유증, 비알코올성 지방간염, 경피증 및 신장 섬유증으로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 상기 융합 단백질이 N-말단에서 C-말단으로:
a) 상기 변이체 sBCMA 도메인;
b) 상기 선택적 링커; 및
c) 상기 Fc 도메인
을 포함하는, 상기 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 상기 융합 단백질이 N-말단에서 C-말단으로:
a) 상기 Fc 도메인;
b) 상기 선택적 링커; 및
c) 상기 변이체 sBCMA 도메인
을 포함하는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 서열 동일성을 갖는다.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 아미노산 치환(들)은 상기 위치 중 1개, 상기 위치 중 2개, 상기 위치 중 3개, 상기 위치 중 4개, 상기 위치 중 5개, 상기 위치 중 6개, 상기 위치 중 7개, 상기 위치 중 8개, 또는 상기 위치 중 9개에서 발생한다.
추가적인 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 아미노산 치환(들)은 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16G, S16N, S16R, H19L, H19Y, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36A, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택된다.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 아미노산 치환(들)은 M1V, L2S, Q3P, M4T, S9P, N11D, S16G, H19Y, N31S, N31D, T32I, T36A, R39H, N47S, K50E 및 N53E로 이루어지는 그룹으로부터 선택된다.
추가적인 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 아미노산 치환(들)은 S16G, H19Y 및 T36A로 이루어지는 그룹으로부터 선택된다.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 아미노산 치환은 L2S/S9P/E12K/N31D/T36A/N42S/N53S, M1V/T32P/T36A/T46I/N53D/A54V, Q3R/S16N/T36A/A43T, F14L/S16G/T36A/V45A/N47D, M1T/M4V/S9F/S16G/T32A/Q38R, M1A/S9A/Q38R, G6E/Q25R/Q38R, M1V/M4I/G6E/S9P/N11D/V49M/T52M/A54V, N11D/S16G/N31S, N11D/H19Y/I22M/T32P/N47S/N53S, G6E/Q7R/H19Y/L35S, H19Y/N42D/S48P/T52A, M1V/N31D/T32I/T36A, M1V/A5T/H19L/T36A, M1T/N31D/T32A/T36A/Q38R/S44D/V49A/K50E, M1V/T36A/Q38R/A43V, M1V/L2S/S9P/Q10H/T36A/Q38R/K50G, T36A/Q38R/N53S, M1T/L2S/L35P/T36A/Q38R/T46A/K50R, A5T/A20V/T36A/Q38R, M1T/S16G/I22V/T36A/S44G/T46A/V49A, S16G/T36A, M1I/N11D/S16G/I22M/S29A/T36A/S44G/K50R, M1C/L2C/Q3R/M4E/N11D/S16G/T36P, M1I/N11D/S16G/I22M/S29A/T36A/S44G/K50R, N11D/N31D/T32I/T36A/S44N/N47D/N53D, M1R/L2C/Q3R, H19Y/T36A/S44G, H19Y/T32I/T36A/V49A, H19Y/N31S/T36A/V45A, H19Y/N31S/T36A, H19Y/T36P/T52A, H19Y/N31D/T52M, M1V/H19Y/V45M, S16G/H19Y/N47D, S16G/H19Y/K50T, S16G/H19Y/S44N/K50R, N11D/H19Y/S48T, S9P/N11D/S16R/T32A/Q38R/S44G/T46I/T52A/N53D/A54T, N11D/S16G/S44R, H19L/T32A/S44G/G51E/T52A, S16N/H19Y/T36A/K50R, M1V/H19Y/T36A/R39H/T46A, M1V/H19Y/T36A, H19Y/T36A/N42D/N47S/S48P, M1V/H19Y/T36A/S44G/N47D, M1V/H19Y/T36A/N42R/N53S, H19Y/L35P/T36A/N42D/T46I/V49A, Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E, M1V/H19Y/T36A/N42R/N53S, M1T/H19Y/T36A, M1V/S16N/H19Y/I22M/T36A, M1T/N11D/H19Y/T36A/N42S/V45A/N53S, N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D, M1V/S9P/Q10P/S16G/H19Y/L26F/T36A/A43V/N53D, S16G/H19Y/T36A/V49A/N53D, S16G/T36A/A43T/S44G/V45M, M4V/S9P/S16G/T36A/Q38R, S9P/N11S/S16G/T36A/Q38R, N11D/E12K/S16R/T36A/T52M, M4V/T32I/T36A/Q38R/A43T/V45A/S48P, S9P/N11D/S16G/Q25R, M1T/A5T/S9P/S16G/Q25R/N31D/V49M, L2S/S9P/S16G/A20T/T32I/Q38R/N42D/T46A/S48L, S16G/Q25R/T46A, G6E/S9A/S16G/Q25R/N31D/N47S/T52M, H19Y/Q38R/T52M, N11D/H19Y/I22M/T32P/N47S/N53S, S16G/H19Y/T36A, S16G/H19Y/T36A/N53D, S9P/N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D, Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E, M1V/L2S/M4T/N11D/H19Y/T36A, M1V/L2S/M4T/N11D/T36A, M1V/L2S/M4T/H19Y/T36I/V45A/V49M, M1V/L2S/M4T/N11D/H19Y/T36A, M1V/L2S/M4T/S9P/Q10R/H19Y/T36A/T46A/N47S, M1V/L2S/M4T/S16G/N31D/T32I/T36A, M1V/M4T/T36A/Q38R/N53K, M1T/N11D/H19Y/T36A/N42S/V45A/N53S, M1T/N31D/T32A/T36A/A38R/S44D/V49A/K50E, M1T/S9P/P23S/Q38R/N42S/S48P/V49A/A54V, H19Y/T36A/S44G, H19Y/T36A, 및 M4T/T36A/Q38R/N42S/S44G/T46A/N47K/S48P/T52A로 이루어지는 그룹으로부터 선택된다.
추가적인 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 아미노산 치환 S16G/H19Y/T36A, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 아미노산 치환 S16G/H19Y/T36A/N53D, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
추가적인 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 아미노산 치환 S9P/N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, Q10H, Q10P, Q10R, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
추가 측면에서 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 아미노산 치환 Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16G, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 아미노산 치환 M1V/L2S/M4T/S16G/N31D/T32I/T36A, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, L2C, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, H19Y, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31S, T32A, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 치환을 포함한다.
추가 측면에서, 본 발명은 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 67과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가적인 측면에서, 본 발명은 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 68과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 69와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가적인 측면에서, 본 발명은 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 49와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 74와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가적인 측면에서, 본 발명은 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 67의 아미노산 서열을 갖는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 68의 아미노산 서열을 갖는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 69의 아미노산 서열을 갖는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 49의 아미노산 서열을 갖는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가적인 측면에서, 본 발명은 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 74의 아미노산 서열을 갖는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 상기 Fc 도메인이 인간 IgG Fc 도메인 또는 변이체 인간 IgG Fc 도메인인, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가적인 측면에서, 본 발명은 상기 인간 IgG Fc 도메인이 인간 IgG1의 힌지-CH2-CH3을 포함하는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 상기 Fc 도메인이 변이체 인간 IgG Fc 도메인인, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 상기 Fc 도메인이 인간 IgG1 Fc 도메인인, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 상기 링커가 서열번호 87인, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가적인 측면에서, 본 발명은 상기 링커가 (GS)n, (GSGGS)n, (GGGGS)n, 및 (GGGS)n으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 n은 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어지는 그룹으로부터 선택된다.
추가 측면에서, 본 발명은 상기 링커가 서열번호 88인, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가적인 측면에서, 본 발명은 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질이 서열번호 80의 아미노산 서열을 포함하는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질이 서열번호 81의 아미노산 서열을 포함하는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가적인 측면에서, 본 발명은 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질이 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함하는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질이 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함하는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
추가적인 측면에서, 본 발명은 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질이 서열번호 84의 아미노산 서열을 포함하는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
도 1은 비인간 단일 용량 독성 연구 설계를 보여준다.
도 2는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 면역 세포 수를 보여준다. 도 2A, CD3+CD4+ T 림프구. 도 2B, CD3+CD8+ 세포독성 T 세포. 도 2C, CD3-CD16+ NK 세포. 도 2D, CD3-CD19+ 범 B 세포. 도 2E, CD3-CD20+ 성숙 B 세포.
도 3은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 면역 세포 수를 보여준다. 도 3A, CD3+CD4+ T 림프구. 도 3B, CD3+CD8+ 세포독성 T 세포. 도 3C, CD3-CD16+ NK 세포. 도 3D, CD3-CD19+ 범 B 세포. 도 3E, CD3-CD20+ 성숙 B 세포.
도 4는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 4A 및 암컷 4B 시노몰구스 원숭이의 시간 경과에 따른 체중을 보여준다.
도 5는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 5A 및 암컷 5B 시노몰구스 원숭이의 시간 경과에 따른 총 림프구 수를 보여준다.
도 6은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 시간 경과에 따른 면역글로불린 수준의 변화를 보여준다.
도 7은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 시간 경과에 따른 면역글로불린의 변화를 보여준다.
도 8은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 혈액학 패널 I을 보여준다. 약어: RBC(적혈구), HGB(헤모글로빈), HCT(헤마토크릿), MCV(평균 적혈구 용적), MCH(평균 적혈구 헤모글로빈), MCHC(평균 적혈구 헤모글로빈 농도), RDW(적혈구 분포 폭), RET (망상적혈구(절대값)).
도 9는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 혈액학 패널 II를 보여준다. 약어: PLT(혈소판), WBC(백혈구), NEUT(호중구(절대값)), LYMP(림프구(절대값)), MONO(단핵구(절대값)), EOS(호산구(절대값)), BASO(호염기구(절대값)).
도 10은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 혈액학 패널 I을 보여준다. 약어: RBC(적혈구), HGB(헤모글로빈), HCT(헤마토크릿), MCV(평균 적혈구 용적), MCH(평균 적혈구 헤모글로빈), MCHC(평균 적혈구 헤모글로빈 농도), RDW(적혈구 분포 폭), RET (망상적혈구(절대값)).
도 11은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 혈액학 패널 II를 보여준다. 약어: PLT(혈소판), WBC(백혈구), NEUT(호중구(절대값)), LYMP(림프구(절대값)), MONO(단핵구(절대값)), EOS(호산구(절대값)), BASO(호염기구(절대값)).
도 12는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 응고 패널을 보여준다. 약어: PT(프로트롬빈 시간), APTT(활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간), FIB(피브리노겐).
도 13은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 응고 패널을 보여준다. 약어: PT(프로트롬빈 시간), APTT(활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간), FIB(피브리노겐).
도 14는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 화학 패널 I을 보여준다. 약어: ALT(알라닌 아미노전이효소), AST(아스파르트산 아미노전이효소), ALP(알칼리성 인산분해효소), GGT(감마 글루타밀 전이효소), CK(크레아틴 키나제), TBIL(총 빌리루빈), GLU(포도당).
도 15는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 화학 패널 II를 보여준다. 약어: UREA(요소), CREA(크레아티닌), TG(트리글리세라이드), CHOL(총 콜레스테롤), TP(총 단백질), ALB(알부민), GLOB(글로불린).
도 16은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 화학 패널 III을 보여준다. 약어: A/G(알부민/글로불린 비율), Na(나트륨), K(염화칼륨), Cl(염화물), IgA(면역글로불린 A), IgG(면역글로불린 G), IgM(면역글로불린 M).
도 17은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 화학 패널 I을 보여준다. 약어: ALT(알라닌 아미노전이효소), AST(아스파르트산 아미노전이효소), ALP(알칼리성 인산분해효소), GGT(감마 글루타밀 전이효소), CK(크레아틴 키나제), TBIL(총 빌리루빈), GLU(포도당).
도 18은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 화학 패널 II를 보여준다. 약어: UREA(요소), CREA(크레아티닌), TG(트리글리세라이드), CHOL(총 콜레스테롤), TP(총 단백질), ALB(알부민), GLOB(글로불린).
도 19는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 화학 패널 III을 보여준다. 약어: A/G(알부민/글로불린 비율), Na(나트륨), K(염화칼륨), Cl(염화물), IgA(면역글로불린 A), IgG(면역글로불린 G), IgM(면역글로불린 M).
도 20은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 사이토카인 패널 I을 보여준다. 약어: PrD0M(투여 전 0분), 1HPD(투여 후 1시간), 3HPD(투여 후 3시간), 8HPD(투여 후 8시간).
도 21은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 사이토카인 패널 II를 보여준다. 약어: PrD0M(투여 전 0분), 1HPD(투여 후 1시간), 3HPD(투여 후 3시간), 8HPD(투여 후 8시간).
도 22는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 사이토카인 패널 I을 보여준다. 약어: PrD0M(투여 전 0분), 1HPD(투여 후 1시간), 3HPD(투여 후 3시간), 8HPD(투여 후 8시간).
도 23은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 사이토카인 패널 II를 보여준다. 약어: PrD0M(투여 전 0분), 1HPD(투여 후 1시간), 3HPD(투여 후 3시간), 8HPD(투여 후 8시간).
도 24a는 Feb 배취 배양 동안 11일째 sBCMA 변이체 클론 풀(pool)의 생존 세포 밀도를 보여준다. 각 라인은 HyCell CHO 또는 BalanCD CHO에서 성장한 풀링된 클론의 세포 성장을 나타낸다. 도 24b는 Feb 배취 배양 동안 11일째의 sBCMA 변이체 클론 풀의 생존력을 보여준다. 각 라인은 HyCell CHO 또는 BalanCD CHO에서 성장한 풀링된 클론의 세포 성장을 보여준다.
도 25는 비환원(상부) 또는 환원(하부) 형태의 SDS-PAGE를 사용하여 PNGaseF의 존재 및 부재 하에 HyCell CHO 또는 BalanCD CHO에서 sBCMA 변이체 클론의 ProA-정제 물질 및 글리코실화 연구를 보여준다.
도 26은 12일 유가식 배취 실험에서 sBCMA 변이체 단일 세포 클론의 역가, IVCD 및 생존력을 보여준다. IVCD(생존 세포 밀도의 적분).
도 27은 12일 유가식 배취 실험에서 sBCMA 변이체 상위 10개 클론의 N-글리칸 프로파일을 보여준다.
도 28a-28d는 서열번호 1에 제시된 야생형 인간 BCMA의 세포외 도메인의 서열과 비교한 sBCMA 변이체 클론의 서열을 보여준다. 도 28a는 S3 클론# 1-12의 서열을 보여준다. 도 28b는 S4 클론# 13-41의 서열을 보여준다. 도 28c는 S5 클론# 42-74의 서열을 보여준다. 도 28d는 S6 클론# 75-118의 서열을 보여준다.
도 29는 서열번호 80, 서열번호 81, 서열번호 82, 서열번호 83 및 서열번호 84에 제시된 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질의 아미노산 서열을 보여준다. 변이체 sBCMA 도메인에는 밑줄이 그어져 있고 링커 도메인은 굵은 글씨이며 인간 IgG1 Fc 도메인은 이탤릭체이다.
도 30은 야생형 인간 BCMA의 세포외 도메인(서열번호 1), APRIL의 세포외 도메인(서열번호 85), BAFF의 세포외 도메인(서열번호 86), 링커 도메인(서열번호 87) 및 또 다른 링커 도메인(서열번호 88)의 아미노산 서열을 보여준다.
도 31 및 32는 NZBWF1/J 마우스 + Pristane의 루푸스 모델에 대한 sBCMA 변이체의 평가 결과를 보여준다.
도 2는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 면역 세포 수를 보여준다. 도 2A, CD3+CD4+ T 림프구. 도 2B, CD3+CD8+ 세포독성 T 세포. 도 2C, CD3-CD16+ NK 세포. 도 2D, CD3-CD19+ 범 B 세포. 도 2E, CD3-CD20+ 성숙 B 세포.
도 3은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 면역 세포 수를 보여준다. 도 3A, CD3+CD4+ T 림프구. 도 3B, CD3+CD8+ 세포독성 T 세포. 도 3C, CD3-CD16+ NK 세포. 도 3D, CD3-CD19+ 범 B 세포. 도 3E, CD3-CD20+ 성숙 B 세포.
도 4는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 4A 및 암컷 4B 시노몰구스 원숭이의 시간 경과에 따른 체중을 보여준다.
도 5는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 5A 및 암컷 5B 시노몰구스 원숭이의 시간 경과에 따른 총 림프구 수를 보여준다.
도 6은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 시간 경과에 따른 면역글로불린 수준의 변화를 보여준다.
도 7은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 시간 경과에 따른 면역글로불린의 변화를 보여준다.
도 8은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 혈액학 패널 I을 보여준다. 약어: RBC(적혈구), HGB(헤모글로빈), HCT(헤마토크릿), MCV(평균 적혈구 용적), MCH(평균 적혈구 헤모글로빈), MCHC(평균 적혈구 헤모글로빈 농도), RDW(적혈구 분포 폭), RET (망상적혈구(절대값)).
도 9는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 혈액학 패널 II를 보여준다. 약어: PLT(혈소판), WBC(백혈구), NEUT(호중구(절대값)), LYMP(림프구(절대값)), MONO(단핵구(절대값)), EOS(호산구(절대값)), BASO(호염기구(절대값)).
도 10은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 혈액학 패널 I을 보여준다. 약어: RBC(적혈구), HGB(헤모글로빈), HCT(헤마토크릿), MCV(평균 적혈구 용적), MCH(평균 적혈구 헤모글로빈), MCHC(평균 적혈구 헤모글로빈 농도), RDW(적혈구 분포 폭), RET (망상적혈구(절대값)).
도 11은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 혈액학 패널 II를 보여준다. 약어: PLT(혈소판), WBC(백혈구), NEUT(호중구(절대값)), LYMP(림프구(절대값)), MONO(단핵구(절대값)), EOS(호산구(절대값)), BASO(호염기구(절대값)).
도 12는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 응고 패널을 보여준다. 약어: PT(프로트롬빈 시간), APTT(활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간), FIB(피브리노겐).
도 13은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 응고 패널을 보여준다. 약어: PT(프로트롬빈 시간), APTT(활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간), FIB(피브리노겐).
도 14는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 화학 패널 I을 보여준다. 약어: ALT(알라닌 아미노전이효소), AST(아스파르트산 아미노전이효소), ALP(알칼리성 인산분해효소), GGT(감마 글루타밀 전이효소), CK(크레아틴 키나제), TBIL(총 빌리루빈), GLU(포도당).
도 15는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 화학 패널 II를 보여준다. 약어: UREA(요소), CREA(크레아티닌), TG(트리글리세라이드), CHOL(총 콜레스테롤), TP(총 단백질), ALB(알부민), GLOB(글로불린).
도 16은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 화학 패널 III을 보여준다. 약어: A/G(알부민/글로불린 비율), Na(나트륨), K(염화칼륨), Cl(염화물), IgA(면역글로불린 A), IgG(면역글로불린 G), IgM(면역글로불린 M).
도 17은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 화학 패널 I을 보여준다. 약어: ALT(알라닌 아미노전이효소), AST(아스파르트산 아미노전이효소), ALP(알칼리성 인산분해효소), GGT(감마 글루타밀 전이효소), CK(크레아틴 키나제), TBIL(총 빌리루빈), GLU(포도당).
도 18은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 화학 패널 II를 보여준다. 약어: UREA(요소), CREA(크레아티닌), TG(트리글리세라이드), CHOL(총 콜레스테롤), TP(총 단백질), ALB(알부민), GLOB(글로불린).
도 19는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 화학 패널 III을 보여준다. 약어: A/G(알부민/글로불린 비율), Na(나트륨), K(염화칼륨), Cl(염화물), IgA(면역글로불린 A), IgG(면역글로불린 G), IgM(면역글로불린 M).
도 20은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 사이토카인 패널 I을 보여준다. 약어: PrD0M(투여 전 0분), 1HPD(투여 후 1시간), 3HPD(투여 후 3시간), 8HPD(투여 후 8시간).
도 21은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 수컷 시노몰구스 원숭이의 사이토카인 패널 II를 보여준다. 약어: PrD0M(투여 전 0분), 1HPD(투여 후 1시간), 3HPD(투여 후 3시간), 8HPD(투여 후 8시간).
도 22는 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 사이토카인 패널 I을 보여준다. 약어: PrD0M(투여 전 0분), 1HPD(투여 후 1시간), 3HPD(투여 후 3시간), 8HPD(투여 후 8시간).
도 23은 비히클 대조군 및 변이체 sBCMA Fc를 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg으로 사용하여 처리한 단일 용량 독성 연구에서 암컷 시노몰구스 원숭이의 사이토카인 패널 II를 보여준다. 약어: PrD0M(투여 전 0분), 1HPD(투여 후 1시간), 3HPD(투여 후 3시간), 8HPD(투여 후 8시간).
도 24a는 Feb 배취 배양 동안 11일째 sBCMA 변이체 클론 풀(pool)의 생존 세포 밀도를 보여준다. 각 라인은 HyCell CHO 또는 BalanCD CHO에서 성장한 풀링된 클론의 세포 성장을 나타낸다. 도 24b는 Feb 배취 배양 동안 11일째의 sBCMA 변이체 클론 풀의 생존력을 보여준다. 각 라인은 HyCell CHO 또는 BalanCD CHO에서 성장한 풀링된 클론의 세포 성장을 보여준다.
도 25는 비환원(상부) 또는 환원(하부) 형태의 SDS-PAGE를 사용하여 PNGaseF의 존재 및 부재 하에 HyCell CHO 또는 BalanCD CHO에서 sBCMA 변이체 클론의 ProA-정제 물질 및 글리코실화 연구를 보여준다.
도 26은 12일 유가식 배취 실험에서 sBCMA 변이체 단일 세포 클론의 역가, IVCD 및 생존력을 보여준다. IVCD(생존 세포 밀도의 적분).
도 27은 12일 유가식 배취 실험에서 sBCMA 변이체 상위 10개 클론의 N-글리칸 프로파일을 보여준다.
도 28a-28d는 서열번호 1에 제시된 야생형 인간 BCMA의 세포외 도메인의 서열과 비교한 sBCMA 변이체 클론의 서열을 보여준다. 도 28a는 S3 클론# 1-12의 서열을 보여준다. 도 28b는 S4 클론# 13-41의 서열을 보여준다. 도 28c는 S5 클론# 42-74의 서열을 보여준다. 도 28d는 S6 클론# 75-118의 서열을 보여준다.
도 29는 서열번호 80, 서열번호 81, 서열번호 82, 서열번호 83 및 서열번호 84에 제시된 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질의 아미노산 서열을 보여준다. 변이체 sBCMA 도메인에는 밑줄이 그어져 있고 링커 도메인은 굵은 글씨이며 인간 IgG1 Fc 도메인은 이탤릭체이다.
도 30은 야생형 인간 BCMA의 세포외 도메인(서열번호 1), APRIL의 세포외 도메인(서열번호 85), BAFF의 세포외 도메인(서열번호 86), 링커 도메인(서열번호 87) 및 또 다른 링커 도메인(서열번호 88)의 아미노산 서열을 보여준다.
도 31 및 32는 NZBWF1/J 마우스 + Pristane의 루푸스 모델에 대한 sBCMA 변이체의 평가 결과를 보여준다.
청구된 발명의 주제를 보다 명확하고 간결하게 지적하기 위해, 다음의 서면화된 설명 및 첨부된 청구범위에 사용된 특정 용어에 대해 다음과 같은 정의가 제공된다.
A. 서론
본 발명은 아미노산 변형을 함유하는 인간 BCMA의 가용성 형태, 예를 들어 변이체 sBCMA 단백질의 용도에 관한 것이다. 이들 변이체 sBCMA 단백질은 BCMA 리간드인 인간 BAFF 및/또는 인간 APRIL 중 하나 또는 둘 다에 야생형 인간 BCMA보다 더 강한 친화도로 결합한다. APRIL 및 BAFF는 BCMA, BAFFR 및 TACI와 같은 수용체에 결합할 수 있고, 이에 따라 APRIL 및/또는 BAFF 중화는 BCMA, BAFFR 및/또는 TACI를 통한 변경된 신호전달 경로로 인해 발생하는 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다. 이러한 질환으로는 자가면역 질환 및 섬유증을 포함한다. APRIL 단독의 중화는 높은 수준의 BCMA 및 TACI 또는 APRIL에 대한 결합을 통해 활성화되는 다른 수용체를 발현하는 자가면역 질환 및 섬유증을 치료하는 데 효과적일 수 있다. BAFF 단독의 중화는 BCMA, BAFFR 및 TACI, 또는 BAFF에 대한 결합을 통해 활성화되는 다른 수용체를 발현하는 섬유증 및 자가면역 질환을 치료하는 데 효과적일 수 있다. 따라서, 본원에 기술된 변이체 sBCMA는 APRIL 및/또는 BAFF와 같은 리간드(들)에 더 단단하게, 그리고 이에 따라 우선적으로 결합하여 APRIL 또는 BAFF를 갖는 세포 표면에서 BCMA, BAFFR 및/또는 TACI 사이에서 달리 일어날 수 있는 정상 수용체 신호전달을 변경함으로써, BCMA, BAFFR, TACI, 및/또는 APRIL 및/또는 BAFF에 대한 결합을 통해 활성화되는 임의의 다른 수용체를 발현하는 면역조절 장애 및/또는 섬유성 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 면역글로불린 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 또는 둘 다의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgG 또는 둘 다의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgG, IgM 또는 둘 다의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgM의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA 및 IgM의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA 및 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgG 및 IgM의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
추가적으로, 일부 실시양태에서, sBCMA 변이체는 일반적으로 혈류로부터 빠르게 제거되는 작은 단백질이므로, 본 발명은 본원에 논의된 바와 같이 sBCMA 변이체를 인간 또는 변이체 Fc 도메인에 연결한 융합 단백질을 제공한다. Fc 도메인은 FcRn 수용체에 대한 결합을 통해 혈청내 연장된 반감기를 부여하므로 sBCMA 변이체-Fc 도메인 융합 단백질의 생성은 개선된 치료법을 초래한다. 따라서, 본 발명은 때때로 본원에서 "융합 단백질"로 지칭되는 sBCMA 도메인-Fc 도메인 융합 단백질을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 융합 단백질의 sBCMA 변이체 또는 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 1과 비교하여 APRIL에 대해 향상된 결합 친화도를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 융합 단백질의 sBCMA 변이체 또는 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 1과 비교하여 BAFF에 대해 향상된 결합 친화도를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 융합 단백질의 sBCMA 변이체 또는 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 1과 비교하여 APRIL 및 BAFF에 대해 향상된 결합 친화도를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 면역글로불린 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 또는 둘 다의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgG 또는 둘 다의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgG, IgM 또는 둘 다의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgM 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA 및 IgM의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA 및 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgG 및 IgM의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
B. 정의
본원에 사용된 바와 같이, 다음 용어는 달리 명시되지 않는 한 용어에 속하는 의미를 갖는다.
본원에 사용된 용어 "a", "an" 또는 "the"는 하나의 구성원을 갖는 측면을 포함할 뿐만 아니라, 하나보다 많은 구성원을 갖는 측면도 포함한다. 예를 들어, 단수형 "a", "an" 및 "the"는 문맥에서 달리 명시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "세포"에 대한 언급은 복수의 이러한 세포를 포함하고, "작용제"에 대한 언급은 관련 기술분야의 기술자 등에게 공지된 하나 이상의 작용제에 대한 언급을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 본원에서 "단백질"은 단백질, 폴리펩타이드, 올리고펩타이드 및 펩타이드를 포함하는 적어도 2개의 공유 부착된 아미노산을 의미한다.
"단리된"이란 용어는 자연 환경이 실질적으로 없고 다른 단백질이 없는 분자를 지칭한다. 예를 들어, 단리된 단백질에는 이것이 유래된 세포 또는 조직 근원의 세포 물질 또는 기타 단백질이 실질적으로 없다. "단리된"이라는 용어는 또한 단리된 단백질이 약제학적 조성물로 투여되기에 충분히 순수하거나, 적어도 약 70-80%, 80-90%, 또는 90-95%(w/w) 순수하거나, 또는 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(w/w) 순수한 제제를 지칭한다. 특히, 폴리펩타이드가 "본질적으로 순수한 형태"인 것, 즉 폴리펩타이드 제제에 본래 연관되어 있는 다른 폴리펩타이드 물질이 본질적으로 없는 것이 바람직하다. 이는, 예를 들어 잘 알려진 재조합 방법 또는 고전적인 정제 방법에 의해 폴리펩타이드를 제조함으로써 달성될 수 있다.
B 세포 성숙 항원 "BCMA"라는 용어는 문헌[Gras 등 International Immunology, 1995, 7:1093; Y. Laabi 등 EMBO J., 1992, 11:3897]에 기술된 바와 B 세포 성숙을 위한 단백질을 지칭한다. BCMA는 TNF 수용체 슈퍼패밀리의 구성원이다. 예를 들어, BCMA는 APRIL 및 BAFF에 대한 수용체이다. 야생형 인간 BCMA의 세포외 도메인에 대한 아미노산 서열(서열번호 1)은 표 3 및 도 30에 제시되어 있다.
"리간드"라는 용어는 생물학적 목적을 위해 표적 세포의 표면에 존재하는 수용체와 같은 제2 생체분자와 결합하여 복합체를 형성할 수 있는 생체분자를 지칭한다. 리간드는 일반적으로 예를 들어 이온 결합, 수소 결합, 소수성 상호작용, 쌍극자-쌍극자 결합 또는 반데르발스 힘과 같은 분자간 힘에 의해 표적 단백질 상의 부위에 결합하는 이펙터 분자이다. 본 발명에서 APRIL 및 BAFF는 리간드 단백질이다.
"수용체"라는 용어는 리간드와 같은 제2 생체분자와 결합하여 복합체를 형성할 수 있는 표적 세포의 표면에 존재하는 생체분자를 지칭한다. 수용체는 일반적으로 특정 신호 전달 경로를 활성화한다. 예를 들어, BCMA는 TNF 패밀리의 구성원인 APRIL 및 BAFF에 대한 수용체이다.
본원에 사용된 "위치"는 단백질 서열 내의 위치를 의미한다. 본 발명의 일부 실시양태에서, 위치는 예를 들어 도 28에 도시된 인간 BCMA 단백질의 경우, 성숙한 단백질의 첫 번째 아미노산부터 시작하여 순차적으로 번호가 매겨진다. 일부 경우, 예를 들어 본원에 기술된 융합 단백질의 Fc 도메인 부분의 경우, Fc 도메인 위치는 순차적으로 또는 정립된 방식, 예를 들어 EU 인덱스에 따라 번호가 매겨질 수 있다. EU 인덱스 또는 Kabat 또는 EU 넘버링 체계에서와 같은 EU 인덱스는 EU 넘버링을 지칭한다(SEQUENCES OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 5th edition, NIH Publication, No. 91-3242, E.A. Kabat 등 참조, 전체가 참고로 포함됨; 또한 Edelman 등, 1969, Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85 참조, 전체가 본원에 참고로 포함됨).
본원에서 "아미노산 변형" 또는 "아미노산 서열 변형"은 폴리펩타이드 서열에서의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 의미한다.
본원에 사용된 "모 단백질"은 후속적으로 변형되어 변이체를 생성하는 출발 단백질을 의미한다. 모 단백질은 자연 발생의 단백질일 수도 있고, 자연 발생의 단백질의 변이체 또는 조작된 버전일 수도 있다. 모 단백질은 단백질 자체, 모 단백질 또는 이를 암호화하는 아미노산 서열을 포함하는 조성물을 지칭할 수 있다. 이러한 맥락에서, "모 Fc 도메인"은 언급된 변이체에 상대적일 것이며; 따라서 "변이체 인간 IgG Fc 도메인"은 인간 IgG의 모 Fc 도메인과 비교되고, 예를 들어 "변이체 인간 IgG1 Fc 도메인"은 인간 IgG1의 모 Fc 도메인 등과 비교된다.
본원에서 "야생형" 또는 "WT"는 대립유전자 변이를 포함하는 자연에서 발견되는 아미노산 서열 또는 뉴클레오타이드 서열을 의미한다. WT 단백질은 비자연 발생의 서열로 의도적으로 변형되지 않은 아미노산 서열 또는 뉴클레오타이드 서열을 갖는다.
본원에 사용된 바와 같이, "변이체 단백질" 또는 "단백질 변이체" 또는 "변이체"는 적어도 하나의 아미노산 서열 변형으로 인해 모 단백질의 아미노산 서열과 상이한 아미노산 서열을 갖는 단백질을 의미한다. 예를 들어, 본원에 사용된 "변이체 sBCMA" 또는 "sBCMA 변이체"는 이하에 개략된 바와 같이 적어도 하나의 아미노산 서열 변형으로 인해 모 sBCMA 단백질의 아미노산 서열과 상이하지만 여전히 동족 리간드에 결합하는 능력을 보유하는 아미노산 서열을 갖는 단백질을 의미한다. 일부 실시양태에서, 모 단백질은 인간 야생형 서열이다. 일부 실시양태에서, 모 단백질은 변이체를 갖는 인간 서열이다. 단백질 변이체는 단백질 자체, 단백질을 포함하는 조성물, 또는 이를 암호화하는 아미노산 서열을 지칭할 수 있다. 일부 실시양태에서, 단백질 변이체는 1개 위치, 2개 위치, 3개 위치, 4개 위치, 5개 위치, 6개 위치, 7개 위치, 8개 위치, 9개 위치 또는 10개 위치에 아미노산 치환(들)을 갖는다. 본원의 단백질 변이체 서열은 모 단백질 서열과 적어도 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 98% 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 약 85%, 86%, 88%, 90%, 93% 또는 95%의 서열 동일성을 보유할 것이다. 2개의 아미노산 서열 사이 또는 2개의 뉴클레오타이드 서열 사이의 관련성은 매개변수 "서열 동일성" 또는 "동일성"으로 기술된다. 본 발명의 아미노산 서열("본 발명의 서열")과 청구범위에 지칭된 모 아미노산 서열(예: 서열번호 1) 사이의 동일성 정도는 두 서열의 정렬에서 정확한 일치의 수를 "본 발명의 서열"의 길이, 또는 모 아미노산 서열의 길이 중 가장 짧은 것으로 나눈 것으로서 계산된다. 결과는 이하에 계산된 바와 같은 동일성 백분율로 표현된다.
본 발명의 목적을 위해, 서열번호 1에 제시된 sBCMA의 세포외 도메인은 sBCMA 변이체에서 상응하는 아미노산 서열 변형을 결정하기 위한 모 단백질로서 사용된다. sBCMA 변이체 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 1의 아미노산 서열과 정렬되고, 정렬에 기초하여, 서열번호 1에 개시된 임의의 아미노산 잔기에 상응하는 아미노산 위치 번호가 EMBOSS 패키지의 Needle 프로그램(EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice 등, 2000, Trends Genet. 16: 276-277), 바람직하게는 버전 5.0.0 이상에서 구현된 바와 같은, Needleman-Wunsch 알고리즘(Needleman 및 Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453)을 사용하여 결정된다. 사용된 매개변수는 갭 개방 페널티 10, 갭 확장 페널티 0.5 및 EBLOSUM62(BLOSUM62의 EMBOSS 버전) 치환 행렬이다. "가장 긴 동일성"(-nobrief 옵션을 사용하여 수득)이라고 표지된 Needle의 산출값은 동일성 퍼센트로서 사용되고, 다음과 같이 계산된다:
(동일한 잔기 x 100)/(정렬 길이 - 정렬의 총 갭 수)
또 다른 sBCMA 변이체에서 상응하는 아미노산 잔기의 식별은 MUSCLE(로그 기대치에 의한 다중 서열 비교; 버전 3.5 이상; Edgar, 2004, Nucleic Acids Research 32: 1792-1797), MAFFT(버전 6.857 이상; Katoh 및 Kuma, 2002, Nucleic Acids Research 30: 3059-3066; Katoh 등, 2005, Nucleic Acids Research 33: 51 1 -518; Katoh 및 Toh, 2007, Bioinformatics 23: 372-374; Katoh 등, 2009, Methods in Molecular Biology 537: 39-64; Katoh 및 Toh, 2010, Bioinformatics 26: 1899-1900), ClustalW를 이용하는 EMBOSS EMMA(1.83 이상; Thompson 등, 1994, Nucleic Acids Research 22: 4673-4680) 및 Clustal Omega를 이용하는 EMBL-EBI(Sievers 및 Higgins, 2014, Methods Mol Biol. 2014;1079:105-16)을 포함하나, 이에 제한되지 않는 몇몇 컴퓨터 프로그램을 사용하고, 이들 각각의 디폴트 매개변수를 사용하여 다중 폴리펩타이드 서열을 정렬하여 결정할 수 있다.
다른 변이체 폴리펩타이드가 전통적인 서열 기반 비교에서 관계를 검출하지 못할 정도로 야생형 sBCMA로부터 분기된 경우(Lindahl 및 Elofsson, 2000, J.Mol.Biol. 295: 613-615), 다른 쌍별 서열 비교 알고리즘이 사용될 수 있다. 폴리펩타이드 패밀리(프로파일)의 확률적 표현을 활용하여 데이터베이스를 검색하는 검색 프로그램을 사용하면 서열 기반 검색에서 더 큰 감도가 달성될 수 있다. 예를 들어, PSI-BLAST 프로그램은 반복적인 데이터베이스 검색 공정을 통해 프로파일을 생성하고 원거리 상동체를 검출할 수 있다(Atschul 등, 1997, Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402). 폴리펩타이드의 패밀리 또는 슈퍼패밀리가 단백질 구조 데이터베이스에 하나 이상의 대표를 갖고 있다면, 훨씬 더 큰 감도가 달성될 수 있다. 프로그램, 예컨대 GenTHREADER(Jones, 1999, J. Mol. Biol. 287: 797-815; McGuffin 및 Jones, 2003, Bioinformatics 19: 874-881)는 다양한 근원(PSI-BLAST, 2차 구조 예측, 구조 정렬 프로파일, 및 용매화 포텐셜)으로부터의 정보를 쿼리 서열에 대한 구조적 접힘을 예측하는 신경망에 대한 입력값으로 활용한다. 유사하게, 문헌[Gough 등, 2000, J. Mol. Biol. 313: 903-919]의 방법은 SCOP 데이터베이스에 존재하는 슈퍼패밀리 모델과 미지 구조의 서열을 정렬하는 데 사용될 수 있다. 이러한 정렬은 결국 폴리펩타이드에 대한 상동성 모델을 생성하는 데 사용될 수 있으며, 이러한 모델은 해당 목적을 위해 개발된 다양한 도구를 사용하여 정확도에 대해 평가될 수 있다.
알려진 구조의 단백질의 경우, 구조적 정렬을 검색하고 생성하는 데에는 몇몇 도구 및 자원이 이용 가능하다. 예를 들어, 단백질의 SCOP 슈퍼패밀리가 구조적으로 정렬되었으며 이러한 정렬은 액세스 가능하고 다운로드 가능하다. 2개 이상의 단백질 구조는 거리 정렬 행렬(Holm 및 Sander, 1998, Proteins 33: 88-96) 또는 조합 확장(Shindyalov 및 Bourne, 1998, Protein Engineering 11: 739-747)과 같은 다양한 알고리즘을 사용하여 정렬될 수 있고, 이들 알고리즘의 구현은 가능한 구조적 상동체를 발견하기 위해 관심 구조로 구조 데이터베이스를 조회하는 데 추가적으로 활용될 수 있다(예를 들어, Holm 및 Park, 2000, Bioinformatics 16: 566-567).
본 발명의 변이체를 기술하는 데 있어서, 이하에 기술된 명명법은 참조 용이성을 위해 채택한다. 표준적으로 허용되는 IUPAC 단문자 또는 3문자 아미노산 약어가 이용된다.
아미노산 치환의 경우, 다음 명명법이 본원에서 사용된다: 원래의 아미노산, 위치, 치환된 아미노산. 따라서, 43번 위치의 알라닌이 발린으로 치환된 것은 "Ala43Val" 또는 "A43V"으로 표기된다. 다수의 돌연변이는 사선 표식("/")으로 분리되며, 예를 들어 "N11D/S16G/N31S"는 각각 위치 11, 16 및 31에서의 치환을 나타낸다. 20개 아미노산 각각에 대한 명칭, 3문자 약어, 및 1문자 약어는 표 1에 제시된다.
"핵산 작제물"이라는 용어는 자연 발생 유전자로부터 단리되거나, 그렇지 않으면 자연에 존재하지 않는 또는 합성인 방식으로 핵산 분절을 함유하도록 변형되고, 하나 이상의 대조(control) 서열을 포함하는, 단일 가닥 또는 이중 가닥의 핵산 분자를 지칭한다.
용어 "작동 가능하게 연결된"은 제어 서열이 폴리뉴클레오타이드의 암호 서열에 대해 적절한 위치에 배치되어 제어 서열이 암호 서열의 발현을 유도하는 구성을 지칭한다.
본원에 사용된 "Fc 변이체" 또는 "변이체 Fc"는 모 Fc 도메인과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 서열 변형을 포함하는 단백질을 의미한다. 일부 실시양태에서, 모 Fc 도메인은 인간 야생형 Fc 서열, 예컨대 IgG1, IgG2, 또는 IgG3으로부터의 Fc 영역이다. 일부 실시양태에서, 모 Fc 도메인은 변이체를 갖는 인간 Fc 서열이다. 인간 IgG의 Fc 도메인과 관련된 본 발명에서 논의되는 모든 위치에 대해, 달리 명시되지 않는 한, 아미노산 위치 넘버링은 EU 인덱스를 따른다. 변형은 본원에 개략된 바와 같은 첨가, 결실, 치환 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 대안적으로, 변이체 Fc 도메인은 모 Fc 도메인과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 아미노산 변형을 가질 수 있다. 추가적으로, 본원에 논의된 바와 같이, 본원의 변이체 Fc 도메인은 비변성 겔 전기영동과 같은 본원에 기술된 바와 같은 공지된 기술을 사용하여 측정되는 바와 같이, 또 다른 Fc 도메인과 이량체를 형성할 뿐만 아니라 FcRn 수용체에 결합하는 능력을 여전히 보유한다.
본원에서 용어 "가용성 BCMA" 또는 "sBCMA"는 BCMA의 막관통 도메인 또는 세포질(세포내) 도메인 전체가 아닌, 세포외 도메인(ECD) 또는 이의 단편 또는 절두된 버전을 함유하는 BCMA의 가용성 부분을 의미한다. 인간 야생형 sBCMA의 ECD는 서열번호 1로 표시된다. 일부 실시양태에서, 모 야생형 sBCMA 도메인은 절두된 야생형 sBCMA가 이하에 논의되는 바와 같은 APRIL 및/또는 BAFF에 대한 결합과 같은 생물학적 활성을 보유하는 한, N-말단 및/또는 C-말단 절두 구조를 가질 수 있다.
용어 "sBCMA 변이체" 또는 "변이체 sBCMA"는 적어도 하나의 아미노산 서열 변형에 의한 모 sBCMA 단백질의 변이체를 의미한다. 일부 실시양태에서, 모 단백질은 인간 야생형 sBCMA이다. 일부 실시양태에서, sBCMA 변이체는 야생형 sBCMA와 비교하여 APRIL 및/또는 BAFF와 같은 TGF 패밀리 구성원(들)에 대한 특이적 결합을 보유하지만, 아미노산 치환과 같은 아미노산 서열 변형을 갖고, N- 또는 C-말단 절두를 가질 수 있다. 이러한 경우 특이적 결합은 ELISA, Biacore, Sapidyne KinExA 또는 Flow Cytometry 결합 분석과 같은 임의의 적절한 결합 검정에 의해 결정되며, 여기서 검정은 또한 아래에 개략된 바와 같은 결합 친화도를 결정하는 데에도 사용될 수 있다. 본원에 논의된 바와 같이, sBCMA 변이체는 일부 경우에 야생형 sBCMA와 비교하여 TGF 패밀리 구성원(예를 들어 APRIL 및/또는 BAFF)에 대해 증가된 결합 친화도를 가질 수 있다.
"결합 친화도"라는 용어는 수용체 또는 이의 변이체와 같은 단백질과 배위 결합을 형성하는 리간드 또는 이의 변이체의 능력을 지칭한다. 리간드와 단백질(예를 들어, 수용체 또는 이의 변이체) 사이의 결합 친화도는 리간드와 단백질 사이의 koff/kon 비율인 평형 해리 상수(Kd)로 표현될 수 있다. Kd와 결합 친화도는 반비례한다. 예를 들어, Kd 값은 TGF 패밀리 구성원에 결합하는 데 필요한 sBCMA 변이체의 농도와 관련이 있고, 더 낮은 Kd 값(더 낮은 sBCMA 변이체 농도)은 TGF 패밀리 구성원에 대한 더 높은 결합 친화도에 상응한다. 높은 결합 친화도는 리간드와 단백질 사이의 더 큰 분자간 힘에 상응한다. 낮은 결합 친화도는 리간드와 단백질 사이의 낮은 분자간 힘에 상응한다. 일부 경우에, 리간드 결합 친화도의 증가는, 예를 들어 적어도 1.4배, 적어도 1.6배, 적어도 1.8배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 200배, 적어도 500배, 또는 그 이상의 오프율(off-rate)의 감소로서 표현될 수 있다.
특정 리간드 또는 이의 변이체에 "특이적 결합하는" 또는 "특이적으로 결합하다" 또는 "특이적이다"는 비특이적 상호작용과 측정가능하게 상이한 결합을 의미한다. 특이적 결합은, 예를 들어 일반적으로 결합 활성을 갖지 않는 유사한 구조의 분자인 대조 분자의 결합과 비교하여 분자의 결합을 결정함으로써 측정될 수 있다. 예를 들어, 특이적 결합은 표적과 유사한 대조 분자와의 경쟁을 통해 결정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 결합 친화도는 표준 Biacore 검정과 같이 상기 논의된 바와 같이 관련 기술분야의 기술자가 이해할 수 있는 임의의 적절한 검정을 사용하여 측정한다.
특정 리간드 또는 이의 변이체에 대한 특이적 결합은, 예를 들어 또 다른 리간드 단백질에 대한 Kd가 적어도 약 10-4 M, 적어도 약 10-5 M, 적어도 약 10-6 M, 적어도 약 10-7 M, 적어도 약 10-8 M, 적어도 약 10-9 M, 대안적으로 적어도 약 10-10 M, 적어도 약 10-11 M, 적어도 약 10-12 M, 적어도 약 10-15 M 또는 그 이상인 단백질에 의해 나타날 수 있고, 여기서 Kd는 특정 단백질-리간드 상호작용의 해리 속도를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변이체 sBCMA(들)는 대조 분자와 비교하여 1.5-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10-, 15-, 20-, 50-, 100-, 200-, 500-, 1000-, 5,000-, 10,000배 또는 그 이상 더 큰 결합 친화도로 리간드와 결합한다.
본원에 사용된 "잔기"는 단백질 및 이와 연관된 아미노산 정체에서의 위치를 의미한다. 예를 들어, 아스파라긴 297(Asn297 또는 N297이라고도 함)은 인간 항체 IgG1의 위치 297에 있는 잔기이다.
본원에서 "힌지" 또는 "힌지 영역" 또는 "항체 힌지 영역" 또는 "힌지 도메인"이란, 항체의 첫 번째 불변 도메인과 두 번째 불변 도메인 사이의 아미노산을 포함하는 유연한 폴리펩타이드를 의미한다. 구조적으로, IgG CH1 도메인은 EU 위치 215에서 끝나고, IgG CH2 도메인은 잔기 EU 위치 231에서 시작한다. 따라서 IgG의 경우, 항체 힌지는 본원에서 위치 216(IgG1의 E216) 내지 230(IgG1의 p230)을 포함하는 것으로 정의되며, 여기서 넘버링은 Kabat에서와 같은 EU 인덱스에 따른다. 일부 경우에, 힌지 도메인의 N-말단과 C-말단 중 하나 또는 둘 다에 더 적은 수의 아미노산을 함유하는 "힌지 단편"이 사용된다. 본원에 개략된 바와 같이, 일부 경우에, 힌지를 포함하는 Fc 도메인이 사용되며, 힌지는 일반적으로 유연한 링커로 사용된다. (추가로, 본원에 추가로 기술된 바와 같이, 추가적인 유연한 링커 성분이 힌지와 함께 또는 힌지 없이 사용될 수 있다).
본원에 사용된 "Fc" 또는 "Fc 영역" 또는 "Fc 도메인"은 IgG 분자의 CH2-CH3 도메인을 포함하고 일부 경우에 힌지를 포함하는 폴리펩타이드를 의미한다. 인간 IgG1에 대한 EU 넘버링에서 CH2-CH3 도메인은 아미노산 231 내지 447을 포함하고 힌지는 216 내지 230이다. 따라서, "Fc 도메인"의 정의는 아미노산 231-447(CH2-CH3) 또는 216-447(힌지-CH2-CH3) 또는 이의 단편을 모두 포함한다. 따라서 Fc는 IgA, IgD 및 IgG의 마지막 2개의 불변 영역 면역글로불린 도메인, IgE 및 IgM의 마지막 3개의 불변 영역 면역글로불린 도메인을 지칭하며, 일부 경우 이들 도메인에 대해 N-말단에 유연한 힌지를 포함한다. IgA 및 IgM의 경우, Fc는 J 사슬을 포함할 수 있다. IgG의 경우, Fc 도메인은 면역글로불린 도메인 Cγ2 및 Cγ3을 포함하고 일부 경우에는 Cγ1과 Cγ2 사이의 하부 힌지 영역을 포함한다. 이러한 맥락에서 "Fc 단편"은 N-말단과 C-말단 중 하나 또는 둘 다로부터 더 적은 수의 아미노산을 함유할 수 있지만, 일반적으로 크기를 기반으로 하는 표준 방법(예를 들어, 비변성 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피 등)을 사용하여 검출할 수 있는 것으로서, 또 다른 Fc 도메인 또는 Fc 단편과 이량체를 형성하는 능력을 여전히 보유한다. 인간 IgG Fc 도메인은 본 발명에 특히 유용하며, 인간 IgG1, IgG2, 또는 IgG3으로부터의 Fc 도메인일 수 있다. 일반적으로, IgG1 및 IgG2는 IgG3보다 더 자주 사용된다. 일부 실시양태에서, 예를 들어 하나 이상의 FcγR 수용체 또는 FcRn 수용체에 대한 결합을 변경하고/거나 생체내 반감기를 증가시키기 위해 Fc 영역에 아미노산 서열 변형이 이루어진다.
본원에 사용된 "IgG 서브클래스 변형" 또는 "이소형 변형"이란, 하나의 IgG 이소형의 하나의 아미노산을 다른 정렬된 IgG 이소형의 상응하는 아미노산으로 교환하는 아미노산 서열 변형을 의미한다. 예를 들어, IgG1은 티로신을 포함하고 IgG2는 EU 위치 296에 페닐알라닌을 포함하기 때문에, IgG2의 F296Y 치환은 IgG 서브클래스 변형으로 고려된다. 마찬가지로, IgG1은 위치 241에 프롤린을 갖고 IgG4는 세린을 갖기 때문에, S241P가 있는 IgG4 분자는 IgG 서브클래스 변형으로 고려된다. 서브클래스 변형은 본원에서 아미노산 치환으로 고려된다는 점에 유의한다.
본원에 사용된 "아미노산" 및 "아미노산 정체"란 DNA 및 RNA에 의해 암호화되는 20개의 자연 발생 아미노산 중 하나를 의미한다.
본원에 사용된 "이펙터 기능"이란 항체 Fc 영역과 Fc 수용체 또는 리간드의 상호작용으로부터 발생하는 생화학적 이벤트를 의미한다. 이펙터 기능에는 항체 의존성 세포독성(ADCC), 항체 의존성 세포 식세포작용(ADCP) 및 보체 의존성 세포독성(CDC)을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 많은 경우, 상이한 IgG 이소형(예: IgG4)을 사용하거나 또는 Fc 도메인에 아미노산 치환을 사용하여 대부분 또는 모든 이펙터 기능을 제거하는 것이 바람직하다; 그러나, FcRn 수용체에 대한 결합을 보존하는 것이 바람직한데, 그 이유는 이것이 인간 혈청 내 융합 단백질의 반감기에 기여하기 때문이다.
본원에 사용된 "FcRn" 또는 "신생아 Fc 수용체"란 IgG 항체 Fc 영역에 결합하고 FcRn 유전자에 의해 적어도 부분적으로 암호화되는 단백질을 의미한다.
본원에 사용된 "표적 세포"는 표적 폴리펩타이드 또는 단백질을 발현하는 세포를 의미한다.
본 발명에 따른 변이체 sBCMA 또는 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질을 생산하는 맥락에서 "숙주 세포"란, 변이체 sBCMA 또는 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질의 성분을 암호화하는 외인성 핵산을 함유하고, 이러한 변이체 sBCMA 또는 Fc 융합 단백질을 적합한 조건 하에서 발현할 수 있는 세포를 의미한다. 적합한 숙주 세포는 이하에 기술된다.
본원에서 "개선된 활성" 또는 "개선된 기능"이란, 적어도 하나의 생화학적 특성의 바람직한 변화를 의미한다. 이러한 맥락에서 개선된 기능은 바람직한 특성(예: APRIL 및/또는 BAFF에 대한 결합 친화도 및/또는 특이성 증가, 생체내 반감기 증가의 단백질 안정성 증가 등)의 증가에 의한, 특정 활성의 증가 또는 감소 백분율로서, 또는 "배수" 변화로서 측정될 수 있다. 일반적으로, 변화 백분율은 100% 미만의 생화학적 활성의 변화를 기술하기 위해 사용되며, 배수 변화는 100% 초과의 생화학적 활성의 변화를 기술하기 위해 사용된다(모 단백질과 비교하여). 본 발명에서, 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 및 99%의 생화학적 활성의 변화 백분율(보통 증가)이 달성될 수 있다. 본 발명에서, "배수 증가"(또는 감소)는 모 단백질과 비교하여 측정된다. 많은 실시양태에서, 개선은 적어도 1.4배, 1.5배, 1.6배, 1.8배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 50배, 100배, 200배 이상이다.
C. sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질
본 발명의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 변이체 sBCMA 도메인, Fc 도메인, 및 선택적으로 변이체 sBCMA 도메인을 Fc 도메인과 연결하는 링커를 포함하는 조성물을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기술된 바와 같은 조성물을 제공하며, 여기서 상기 융합 단백질은 N-말단에서 C-말단으로:
a) 상기 변이체 sBCMA 도메인;
b) 상기 선택적 링커; 및
c) 상기 Fc 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기술된 바와 같은 조성물을 제공하며, 여기서 상기 융합 단백질은 N-말단에서 C-말단으로:
a) 상기 Fc 도메인;
b) 상기 선택적 링커; 및
c) 상기 변이체 sBCMA 도메인을 포함한다.
D. 변이체 sBCMA 단백질 및 도메인
본 발명은 변이체 sBCMA 단백질을 독립적으로 그리고 Fc 도메인과 융합된 sBCMA 도메인과 같은 융합 단백질 작제물로서 제공한다. 본 발명의 변이체 sBCMA 단백질은 아미노산 변이체와 함께, 인간 BCMA의 가용성 ECD의 적어도 일부, 일반적으로 도 30에 도시된 바와 같은 전체 ECD 도메인(서열번호 1)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 sBCMA 단백질 또는 sBCMA 변이체는 Biacore 또는 Octet 검정과 같은, 관련 기술분야의 결합 친화도 검정에 의해 결정되고 이하에 논의되는 바와 같이 야생형 sBCMA와 비교하여 APRIL 및/또는 BAFF에 대한 증가된 결합 친화도 및/또는 특이성을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 변이체 sBCMA 단백질(단리된 단백질로서 또는 본원의 융합 단백질의 sBCMA 도메인으로서)은 APRIL 및/또는 BAFF에 결합하여 내인성 BCMA, BAFFR 및 TACI 수용체와의 상호작용을 차단하거나 완화시키는 길항제이다. 길항제로서의 변이체 sBCMA 단백질은 BCMA, BAFFR, TACI 및/또는 APRIL 및/또는 BAFF에 대한 결합을 통해 활성화되는 다른 수용체를 통한 변경된 신호전달 경로와 연관된 병태, 특히 종양 요법/화학 요법, 면역조절 및/또는 섬유성 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다.
추가적인 실시양태에서, 변이체 sBCMA 단백질(단리된 단백질로서 또는 본원의 융합 단백질의 sBCMA 도메인으로서)은 APRIL을 발현하는 자가면역 질환이 있는 대상체에서 APRIL의 활성을 억제하는 방법에 사용될 수 있으며, 상기 방법은 대상체에게 본원에 개시된 바와 같은 하나 이상의 상기 변이체 sBCMA 단백질의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
추가적인 실시양태에서, 변이체 sBCMA 단백질(단리된 단백질로서 또는 본원의 융합 단백질의 sBCMA 도메인으로서)은 BCMA, TACI, 및/또는 APRIL과의 결합을 통해 활성화되는 다른 수용체를 발현하는 자가면역 질환을 갖는 대상체에서 APRIL의 활성을 억제하는 방법에 사용될 수 있으며, 상기 방법은 대상체에게 본원에 개시된 하나 이상의 상기 변이체 sBCMA 단백질의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
추가 실시양태에서, 변이체 sBCMA 단백질(단리된 단백질로서 또는 본원의 융합 단백질의 sBCMA 도메인으로서)은 APRIL을 발현하는 섬유증을 갖는 대상체에서 APRIL의 활성을 억제하는 방법에 사용될 수 있으며, 상기 방법은 대상체에게 본원에 개시된 바와 같은 하나 이상의 상기 변이체 sBCMA 단백질의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
추가 실시양태에서, 변이체 sBCMA 단백질(단리된 단백질로서 또는 본원의 융합 단백질의 sBCMA 도메인으로서)은 BCMA, TACI, 및/또는 APRIL과의 결합을 통해 활성화되는 다른 수용체를 발현하는 섬유증을 갖는 대상체에서 APRIL의 활성을 억제하는 방법에 사용될 수 있으며, 상기 방법은 대상체에게 본원에 개시된 하나 이상의 상기 변이체 sBCMA 단백질의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
추가적인 실시양태에서, 변이체 sBCMA 단백질(단리된 단백질로서 또는 본원의 융합 단백질의 sBCMA 도메인으로서)은 대상체에서 B 세포 성장, 면역글로불린 생산 또는 둘 다를 억제하는 방법에 사용될 수 있으며, 여기서 변이체 sBCMA 단백질은 BAFF에 결합하며, 상기 방법은 본원에 개시된 하나 이상의 상기 변이체 sBCMA 단백질의 치료 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
추가 실시양태에서, 변이체 sBCMA 단백질(단리된 단백질로서 또는 본원의 융합 단백질의 sBCMA 도메인으로서)은 B 세포 증식증 또는 BCMA, BAFFR, TACI, 및/또는 BAFF에 대한 결합을 통해 활성화되는 다른 수용체를 발현하는 자가면역 질환을 갖는 대상체에서 BAFF의 활성을 억제하는 방법에 사용될 수 있으며, 상기 방법은 본원에 개시된 하나 이상의 상기 변이체 sBCMA 단백질의 치료 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
추가적인 실시양태에서, 변이체 sBCMA 단백질(단리된 단백질로서 또는 본원의 융합 단백질의 sBCMA 도메인으로서)은 대상체에서 BCMA, BAFFR, TACI, 및 BAFF에 대한 결합을 통해 활성화되는 다른 수용체(들)로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 수용체를 발현하는 자가면역 질환을 치료하는 방법에 사용될 수 있으며, 상기 방법은 대상체에게 본원에 개시된 바와 같은 하나 이상의 상기 변이체 sBCMA 단백질의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
추가 실시양태에서, 변이체 sBCMA 단백질(단리된 단백질로서 또는 본원의 융합 단백질의 sBCMA 도메인으로서)은 대상체에서 BAFF 및/또는 APRIL을 발현하는 자가면역 질환을 치료하는 방법에 사용될 수 있으며, 상기 방법은 대상체에게 본원에 개시된 바와 같은 하나 이상의 상기 변이체 sBCMA 단백질의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
추가적인 실시양태에서, 변이체 sBCMA 단백질(단리된 단백질로서 또는 본원의 융합 단백질의 sBCMA 도메인으로서)은 대상체에서 BCMA, BAFFR 및/또는 TACI를 발현하는 섬유증을 치료하는 방법에 사용될 수 있으며, 상기 방법은 대상체에게 본원에 개시된 바와 같은 하나 이상의 상기 변이체 sBCMA 단백질의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
추가적인 실시양태에서, 변이체 sBCMA 단백질(단리된 단백질로서 또는 본원의 융합 단백질의 sBCMA 도메인으로서)은 대상체에서 BAFF 및/또는 APRIL을 발현하는 섬유증을 치료하는 방법에 사용될 수 있으며, 상기 방법은 대상체에게 본원에 개시된 바와 같은 하나 이상의 상기 변이체 sBCMA 단백질의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 변이체 sBCMA 단백질은 야생형 sBCMA와 비교하여 아미노산 치환, 결실 또는 삽입 또는 이들의 임의의 조합을 포함하고, 야생형 sBCMA와 비교하여 APRIL, BAFF 또는 둘 다에 대한 결합 활성을 증가시킨다.
본 개시내용은 모 sBCMA와 비교하여 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개) 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 변이체 sBCMA 단백질(들)을 제공한다. 일부 실시양태에서, 변이체 sBCMA는 모 sBCMA에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%, 하지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 모 sBCMA 도메인은 인간 야생형 sBCMA이다. 일부 실시양태에서, 모 sBCMA 도메인은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 변이체 sBCMA는 서열번호 1에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%, 하지만 100% 미만의 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 언급된 바와 같이, 변이체 sBCMA는 절두된 변이체 sBCMA가 본원에 개략된 결합 검정 중 하나에 의해 측정되었을 때 생물학적 활성(예를 들어, APRIL 및/또는 BAFF에 대한 결합)을 보유하는 한, 야생형 sBCMA와 비교하여 N-말단 및/또는 C 말단 절두를 가질 수 있다. 명확하게 말하면, 본 발명의 변이체 BCMA는 서열번호 1과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 가지며, 따라서 서열번호 1은 아니다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 변이체 sBCMA는 야생형 sBCMA 폴리펩타이드/도메인보다 더 강력한 TGF 패밀리 구성원(즉, APRIL 및/또는 BAFF)에 대한 결합 친화도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 변이체 sBCMA는 야생형 sBCMA보다 적어도 1.4배, 1.5배, 1.6배, 1.8배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 50배, 100배, 200배 이상인 APRIL 및/또는 BAFF에 대한 결합 친화도를 갖는다.
특정 실시양태에서, APRIL 및/또는 BAFF에 대한 변이체 sBCMA의 결합 친화도는 야생형 sBCMA와 비교하여 적어도 약 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50% 이상 증가한다. 다른 실시양태에서, 본 발명의 변이체 sBCMA 단백질은 APRIL 및/또는 BAFF와의 결합에 대해 약 1 x 10-8 M, 1 x 10-9 M, 1 x 10-10 M, 1 x 10-12 M 또는 1 x 10-15 M 미만의 Kd 값을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, sBCMA 변이체는 생체내, 시험관내 또는 둘 다에서 APRIL 및/또는 BAFF에 대한 결합에 있어서 야생형 sBCMA를 억제하거나 이와 경쟁한다.
1. 특정 변이체 sBCMA 단백질
본 발명은 서열번호 1과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 변이체 sBCMA를 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 상기 아미노산 치환은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 19, 20, 22, 23, 25, 26, 29, 31, 32, 35, 36, 38, 39, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53 및 54로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 위치 번호에서 이루어지고, 여기서 넘버링은 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 변이체 sBCMA는 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작한 위치 넘버링에 따른 위치 1에 메티오닌의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개의 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 프롤린을 활용하지 않는다(입체 효과로 인해). 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T 및 M1V로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 2에 류신의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개의 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 프롤린을 활용하지 않는다(입체 효과로 인해). 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 L2C 또는 L2S이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 3에 글루타민의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개의 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 Q3P 또는 Q3R이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 4에 메티오닌의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개의 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 M4E, M4I, M4T, 및 M4V로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 5에 알라닌의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 A5T이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 6에 글리신의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 G6E이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 7에 글루타민의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 Q7R이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 9에 세린의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 S9A, S9F 및 S9P로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 10에 글루타민의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 Q10H, Q10P 및 Q10R로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 11에 아스파라긴의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 N11D 또는 N11S이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 12에 글루탐산의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 E12K이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 14에 페닐알라닌의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 F14L이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 16에 세린의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 S16G, S16N, 및 S16R로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 19에 히스티딘의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 H19L 또는 H19Y이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 20에 알라닌의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 A20V 또는 A20T이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 22에 이소류신의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 I22M 또는 I22V이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 23에 프롤린의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 P23S이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 25에 글루타민의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 Q25R이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 26에 류신의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 L26F이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 29에 세린의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 S29A이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 31에 아스파라긴의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 N31D 또는 N31S이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 32에 트레오닌의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 T32A, T32I 및 T32P로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 35에 류신의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 L35S 또는 L35P이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 36에 트레오닌의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 T36A, T36I, 및 T36P로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 38에 글루타민의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개의 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 Q38R이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 39에 아르기닌의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 R39H이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 42에 아스파라긴의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 N42D, N42R 및 N42S로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 43에 알라닌의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 A43T 또는 A43V이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 44에 세린의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 S44D, S44G, S44N 및 S44R로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 45에 발린의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 V45A 또는 V45M이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 46에 트레오닌의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 T46A 또는 T46I이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 47에 아스파라긴의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 N47D, N47K, N47R 및 N47S로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 48에 세린의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 S48L, S48P 및 S48T로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 49에 발린의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 V49A 또는 V49M이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 50에 리신의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 K50E, K50G, K50R 및 K50T로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 51에 글리신의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 G51E이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 52에 트레오닌의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 T52A 또는 T52M이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 53에 아스파라긴의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개의 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 N53D, N53K 및 N53S로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 성숙 영역으로부터 시작하는 위치 넘버링에 따른 위치 54에 알라닌의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 임의의 다른 19개 자연 발생 아미노산, 즉 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 시스테인, 글리신, 이소류신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 티로신에 의한 것이고, 일부 실시양태에서는 시스테인(가능한 이황화물 형성으로 인해) 또는 프롤린(입체 효과로 인해)을 활용하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 A54V 또는 A54T이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16G, S16N, S16R, H19L, H19Y, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36A, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 아미노산 치환(들)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 M1V, L2S, Q3P, M4T, S9P, N11D, S16G, H19Y, N31S, N31D, T32I, T36A, R39H, N47S, K50E, 및 N53E로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 아미노산 치환(들)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 S16G, H19Y 및 T36A로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 아미노산 치환(들)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 L2S/S9P/E12K/N31D/T36A/N42S/N53S, M1V/T32P/T36A/T46I/N53D/A54V, Q3R/S16N/T36A/A43T, F14L/S16G/T36A/V45A/N47D, M1T/M4V/S9F/S16G/T32A/Q38R, M1A/S9A/Q38R, G6E/Q25R/Q38R, M1V/M4I/G6E/S9P/N11D/V49M/T52M/A54V, N11D/S16G/N31S, N11D/H19Y/I22M/T32P/N47S/N53S, G6E/Q7R/H19Y/L35S, H19Y/N42D/S48P/T52A, M1V/N31D/T32I/T36A, M1V/A5T/H19L/T36A, M1T/N31D/T32A/T36A/Q38R/S44D/V49A/K50E, M1V/T36A/Q38R/A43V, M1V/L2S/S9P/Q10H/T36A/Q38R/K50G, T36A/Q38R/N53S, M1T/L2S/L35P/T36A/Q38R/T46A/K50R, A5T/A20V/T36A/Q38R, M1T/S16G/I22V/T36A/S44G/T46A/V49A, S16G/T36A, M1I/N11D/S16G/I22M/S29A/T36A/S44G/K50R, M1C/L2C/Q3R/M4E/N11D/S16G/T36P, M1I/N11D/S16G/I22M/S29A/T36A/S44G/K50R, N11D/N31D/T32I/T36A/S44N/N47D/N53D, M1R/L2C/Q3R, H19Y/T36A/S44G, H19Y/T32I/T36A/V49A, H19Y/N31S/T36A/V45A, H19Y/N31S/T36A, H19Y/T36P/T52A, H19Y/N31D/T52M, M1V/H19Y/V45M, S16G/H19Y/N47D, S16G/H19Y/K50T, S16G/H19Y/S44N/K50R, N11D/H19Y/S48T, S9P/N11D/S16R/T32A/Q38R/S44G/T46I/T52A/N53D/A54T, N11D/S16G/S44R, H19L/T32A/S44G/G51E/T52A, S16N/H19Y/T36A/K50R, M1V/H19Y/T36A/R39H/T46A, M1V/H19Y/T36A, H19Y/T36A/N42D/N47S/S48P, M1V/H19Y/T36A/S44G/N47D, M1V/H19Y/T36A/N42R/N53S, H19Y/L35P/T36A/N42D/T46I/V49A, Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E, M1V/H19Y/T36A/N42R/N53S, M1T/H19Y/T36A, M1V/S16N/H19Y/I22M/T36A, M1T/N11D/H19Y/T36A/N42S/V45A/N53S, N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D, M1V/S9P/Q10P/S16G/H19Y/L26F/T36A/A43V/N53D, S16G/H19Y/T36A/V49A/N53D, S16G/T36A/A43T/S44G/V45M, M4V/S9P/S16G/T36A/Q38R, S9P/N11S/S16G/T36A/Q38R, N11D/E12K/S16R/T36A/T52M, M4V/T32I/T36A/Q38R/A43T/V45A/S48P, S9P/N11D/S16G/Q25R, M1T/A5T/S9P/S16G/Q25R/N31D/V49M, L2S/S9P/S16G/A20T/T32I/Q38R/N42D/T46A/S48L, S16G/Q25R/T46A, G6E/S9A/S16G/Q25R/N31D/N47S/T52M, H19Y/Q38R/T52M, N11D/H19Y/I22M/T32P/N47S/N53S, S16G/H19Y/T36A, S16G/H19Y/T36A/N53D, S9P/N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D, Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E, M1V/L2S/M4T/N11D/H19Y/T36A, M1V/L2S/M4T/N11D/T36A, M1V/L2S/M4T/H19Y/T36I/V45A/V49M, M1V/L2S/M4T/N11D/H19Y/T36A, M1V/L2S/M4T/S9P/Q10R/H19Y/T36A/T46A/N47S, M1V/L2S/M4T/S16G/N31D/T32I/T36A, M1V/M4T/T36A/Q38R/N53K, M1T/N11D/H19Y/T36A/N42S/V45A/N53S, M1T/N31D/T32A/T36A/A38R/S44D/V49A/K50E, M1T/S9P/P23S/Q38R/N42S/S48P/V49A/A54V, H19Y/T36A/S44G, H19Y/T36A, 및 M4T/T36A/Q38R/N42S/S44G/T46A/N47K/S48P/T52A로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 아미노산 치환(들)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 아미노산 치환 S16G/H19Y/T36A, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 아미노산 치환 S16G/H19Y/T36A/N53D, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 아미노산 치환 S9P/N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, Q10H, Q10P, Q10R, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 아미노산 치환 Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16G, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 아미노산 치환 M1V/L2S/M4T/S16G/N31D/T32I/T36A, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, L2C, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, H19Y, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31S, T32A, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 서열번호 67과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 서열번호 68과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 서열번호 69와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 서열번호 49와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 서열번호 74와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 서열번호 67의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 서열번호 68의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 서열번호 69의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 서열번호 49의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 서열번호 74의 아미노산 서열을 갖는다.
클론 번호, 서열번호 1의 아미노산 서열과 비교하여 아미노산 치환, 및 예시적인 변이체 sBCMA 단백질의 지정된 서열번호는 표 2에 제시된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 서열번호 1과 비교하여 APRIL 또는 BAFF에 대해 향상된 결합 친화도를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA는 서열번호 1과 비교하여 APRIL 및 BAFF에 대해 향상된 결합 친화도를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 80의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 81의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 82의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 83의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 84의 아미노산 서열을 갖는다.
2. 결합 친화도를 측정하기 위한 검정
본원에 개략된 바와 같이, 본 발명은 인간 APRIL 및/또는 인간 BAFF 중 하나 또는 둘 다에 대해 증가된 결합 친화도를 나타내는 sBCMA 변이체 및 이들 변이체를 포함하는 융합 단백질을 제공한다. 이러한 맥락에서, 증가된 결합 친화도는 이하에 개략된 바와 같이 시험관내 또는 생체외 연구에서 인간 야생형 BCMA 또는 서열번호 1과 비교된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 변이체 sBCMA 도메인은 야생형 sBCMA 폴리펩타이드/도메인 및/또는 서열번호 1보다 강한 TGF 패밀리 구성원(예를 들어, APRIL 및/또는 BAFF)에 대한 결합 친화도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 변이체 sBCMA 도메인은 야생형 sBCMA 및/또는 서열번호 1보다 적어도 1.4배, 1.5배, 1.6배, 1.7배, 1.8배, 1.9배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 50배, 100배, 200배 이상인 APRIL 및/또는 BAFF에 대한 결합 친화도를 갖는다.
APRIL 및/또는 BAFF에 결합하는 sBCMA 변이체의 능력은, 예를 들어 검정 플레이트에 코팅된 APRIL 및/또는 BAFF에 결합하는 추정 리간드의 능력에 의해 결정될 수 있다. 대안적으로, APRIL 및/또는 BAFF에 대한 sBCMA(변이체)의 결합 친화도는 미생물 세포 표면, 예를 들어 효모 세포 표면에 sBCMA(변이체)를 디스플레이하고 결합된 복합체를, 예를 들어 유세포 분석법으로 검출함으로써 결정될 수 있다(실시예 3 참조). APRIL 및/또는 BAFF에 대한 sBCMA(변이체)의 결합 친화도는 방사성 리간드 결합 검정, 비방사성(형광) 리간드 결합 검정, 표면 플라스몬 공명(SPR), 예컨대 Biacore™, Octet™, 플라스몬-도파관 공명(PWR), 열역학적 결합 검정, 전체 세포 리간드-결합 검정 및 구조 기반 리간드 결합 검정을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는 관련 기술분야의 기술자라면 이해하고 있을 임의의 적절한 방법을 사용하여 측정할 수 있다.
3. 융합 단백질의 형식
본원에 기술된 바와 같이, 융합 단백질의 형식은 단백질에서 성분 도메인이 순서가 교체되는 여러 구성을 취할 수 있다(N-말단에서 C-말단으로). 한 실시양태에서, 융합 단백질은 N-말단에서 C-말단으로 변이체 sBCMA 도메인-도메인 링커-Fc 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 N-말단에서 C-말단으로 Fc 도메인-도메인 링커-변이체 sBCMA 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 사용되지 않으며, 이 경우 융합 단백질은 N-말단에서 C-말단으로 변이체 sBCMA 도메인-Fc 도메인 또는 Fc 도메인-변이체 sBCMA 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 동일한 융합 단백질이 다소 상이하게 표지될 수 있음을 유의한다. 예를 들어, Fc 도메인이 힌지 도메인을 포함하는 경우, 변이체 sBCMA 도메인-Fc 도메인을 포함하는 융합 단백질은 여전히 힌지 도메인 형태의 링커를 포함한다. 대안적으로, 이 동일한 단백질은 Fc 도메인에 포함된 힌지 도메인을 갖지 않을 수 있으며, 이 경우에 융합 단백질은 변이체 sBCMA 도메인-CH2-CH3을 포함한다.
따라서, 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA-Fc 융합 단백질을 제공하며, 여기서 Fc 도메인은 힌지 도메인을 포함하고 변이체 sBCMA 도메인은 힌지 도메인에 의해 Fc 도메인과 연결된다: 변이체 sBCMA 도메인-힌지 도메인-CH2-CH3.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 전술한 바와 같은 변이체 sBCMA-Fc 융합 단백질을 제공하며, 여기서 Fc 도메인은 힌지 도메인을 포함하고 변이체 sBCMA 도메인은 본원에 기술된 바와 같은 추가 링커에 의해 Fc 도메인과 연결된다. 즉, 융합 단백질은 N-에서 C-말단으로: 변이체 sBCMA 도메인-도메인 링커-힌지 도메인-CH2-CH3; 변이체 sBCMA 도메인-도메인 링커-CH2-CH3; 힌지 도메인-CH2-CH3-도메인 링커-변이체 sBCMA 도메인 또는 CH2-CH3-도메인 링커-변이체 sBCMA 도메인일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 전술한 바와 같은 변이체 sBCMA-Fc 융합 단백질을 제공하며, 여기서 Fc 도메인은 힌지 도메인을 포함하지 않고 변이체 sBCMA 도메인은 본원에 기술된 바와 같이 도메인 링커(예를 들어, 비힌지)에 의해 Fc 도메인과 연결된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 다음을 포함하는 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질을 포함하는 조성물을 제공한다:
a) 서열번호 1과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 변이체 sBCMA 도메인, 여기서 상기 아미노산 치환은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 19, 20, 22, 23, 25, 26, 29, 31, 32, 35, 36, 38, 39, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53 및 54로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 위치 번호에서 이루어지고, 여기서 넘버링은 EU 인덱스에 따름;
b) 선택적 링커; 및
c) Fc 도메인.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 N-말단에서 C-말단으로 다음을 포함한다:
a) 상기 변이체 sBCMA 도메인;
b) 상기 선택적 링커; 및
c) 상기 Fc 도메인.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 N-말단에서 C-말단으로 다음을 포함한다:
a) 상기 Fc 도메인;
b) 상기 선택적 링커; 및
c) 상기 변이체 sBCMA 도메인.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질의 변이체 sBCMA 도메인은 APRIL 및/또는 BAFF에 대한 결합 친화도를 증가시키는 역할을 한다. 다양한 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질의 (변이체) Fc 도메인은 융합 단백질의 반감기를 증가시킨다. 다수의 실시양태에서, 융합 단백질은 섬유증 및/또는 면역조절 질환을 치료하는데 사용된다.
표기된 단백질/단백질 도메인 및 상응하는 아미노산 서열의 명칭은 각각 표 3에 나열되어 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 야생형 sBCMA와 비교하여 APRIL, BAFF 또는 둘 다에 대한 결합 활성을 증가시키는, 서열번호 1의 아미노산 서열에 대한 아미노산 치환(들), 결실(들) 또는 삽입(들) 또는 이의 임의의 조합을 포함한다.
본 개시내용은 서열번호 1의 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개)의 위치에 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 변이체 sBCMA 도메인을 제공한다. 일부 실시양태에서, 변이체 sBCMA 도메인은 모 sBCMA 도메인과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만, 100% 미만의 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 모 sBCMA 도메인은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 1과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%이지만, 100% 미만의 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 언급된 바와 같이, 변이체 sBCMA 도메인은 절두된 변이체 sBCMA가 본원에 개략된 결합 검정 중 하나에 의해 측정되었을 때 생물학적 활성(예를 들어, APRIL 및/또는 BAFF에 대한 결합)을 보유하는 한, 야생형 sBCMA와 비교하여 N-말단 및/또는 C-말단 절두를 가질 수 있다. 명확히 하면, 본 발명의 변이체 BCMA 도메인은 적어도 하나의 아미노산 치환을 가지며, 따라서 서열번호 1의 아미노산 서열은 아니다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 1개 위치, 2개 위치, 3개 위치, 4개 위치, 5개 위치, 6개 위치, 7개 위치, 8개 위치, 9개 위치, 또는 10개 위치에 아미노산 치환(들)을 갖는다.
특정 실시양태에서, APRIL 및/또는 BAFF에 대한 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인의 결합 친화도는 야생형 sBCMA와 비교하여 적어도 약 0.4%, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50% 이상 증가한다. 다른 실시양태에서, 본 발명의 변이체 BCMA 도메인은 APRIL 및/또는 BAFF에 대해 약 1 x 10-8 M, 1 x 10-9 M, 1 x 10-10 M, 1 x 10-12 M 또는 1 x 10-15 M 미만의 결합 친화도를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 BCMA 도메인은 생체내, 시험관내 또는 둘 다에서 APRIL 및/또는 BAFF에 결합하는 야생형 sBCMA를 억제하거나 이와 경쟁한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 1과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 상기 아미노산 치환은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 19, 20, 22, 23, 25, 26, 29, 31, 32, 35, 36, 38, 39, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53 및 54로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 위치 번호에서 이루어지며, 여기서 넘버링은 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16G, S16N, S16R, H19L, H19Y, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36A, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 아미노산 치환(들)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 M1V, L2S, Q3P, M4T, S9P, N11D, S16G, H19Y, N31S, N31D, T32I, T36A, R39H, N47S, K50E, 및 N53E로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 아미노산 치환(들)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 S16G, H19Y 및 T36A로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 아미노산 치환(들)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 L2S/S9P/E12K/N31D/T36A/N42S/N53S, M1V/T32P/T36A/T46I/N53D/A54V, Q3R/S16N/T36A/A43T, F14L/S16G/T36A/V45A/N47D, M1T/M4V/S9F/S16G/T32A/Q38R, M1A/S9A/Q38R, G6E/Q25R/Q38R, M1V/M4I/G6E/S9P/N11D/V49M/T52M/A54V, N11D/S16G/N31S, N11D/H19Y/I22M/T32P/N47S/N53S, G6E/Q7R/H19Y/L35S, H19Y/N42D/S48P/T52A, M1V/N31D/T32I/T36A, M1V/A5T/H19L/T36A, M1T/N31D/T32A/T36A/Q38R/S44D/V49A/K50E, M1V/T36A/Q38R/A43V, M1V/L2S/S9P/Q10H/T36A/Q38R/K50G, T36A/Q38R/N53S, M1T/L2S/L35P/T36A/Q38R/T46A/K50R, A5T/A20V/T36A/Q38R, M1T/S16G/I22V/T36A/S44G/T46A/V49A, S16G/T36A, M1I/N11D/S16G/I22M/S29A/T36A/S44G/K50R, M1C/L2C/Q3R/M4E/N11D/S16G/T36P, M1I/N11D/S16G/I22M/S29A/T36A/S44G/K50R, N11D/N31D/T32I/T36A/S44N/N47D/N53D, M1R/L2C/Q3R, H19Y/T36A/S44G, H19Y/T32I/T36A/V49A, H19Y/N31S/T36A/V45A, H19Y/N31S/T36A, H19Y/T36P/T52A, H19Y/N31D/T52M, M1V/H19Y/V45M, S16G/H19Y/N47D, S16G/H19Y/K50T, S16G/H19Y/S44N/K50R, N11D/H19Y/S48T, S9P/N11D/S16R/T32A/Q38R/S44G/T46I/T52A/N53D/A54T, N11D/S16G/S44R, H19L/T32A/S44G/G51E/T52A, S16N/H19Y/T36A/K50R, M1V/H19Y/T36A/R39H/T46A, M1V/H19Y/T36A, H19Y/T36A/N42D/N47S/S48P, M1V/H19Y/T36A/S44G/N47D, M1V/H19Y/T36A/N42R/N53S, H19Y/L35P/T36A/N42D/T46I/V49A, Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E, M1V/H19Y/T36A/N42R/N53S, M1T/H19Y/T36A, M1V/S16N/H19Y/I22M/T36A, M1T/N11D/H19Y/T36A/N42S/V45A/N53S, N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D, M1V/S9P/Q10P/S16G/H19Y/L26F/T36A/A43V/N53D, S16G/H19Y/T36A/V49A/N53D, S16G/T36A/A43T/S44G/V45M, M4V/S9P/S16G/T36A/Q38R, S9P/N11S/S16G/T36A/Q38R, N11D/E12K/S16R/T36A/T52M, M4V/T32I/T36A/Q38R/A43T/V45A/S48P, S9P/N11D/S16G/Q25R, M1T/A5T/S9P/S16G/Q25R/N31D/V49M, L2S/S9P/S16G/A20T/T32I/Q38R/N42D/T46A/S48L, S16G/Q25R/T46A, G6E/S9A/S16G/Q25R/N31D/N47S/T52M, H19Y/Q38R/T52M, N11D/H19Y/I22M/T32P/N47S/N53S, S16G/H19Y/T36A, S16G/H19Y/T36A/N53D, S9P/N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D, Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E, M1V/L2S/M4T/N11D/H19Y/T36A, M1V/L2S/M4T/N11D/T36A, M1V/L2S/M4T/H19Y/T36I/V45A/V49M, M1V/L2S/M4T/N11D/H19Y/T36A, M1V/L2S/M4T/S9P/Q10R/H19Y/T36A/T46A/N47S, M1V/L2S/M4T/S16G/N31D/T32I/T36A, M1V/M4T/T36A/Q38R/N53K, M1T/N11D/H19Y/T36A/N42S/V45A/N53S, M1T/N31D/T32A/T36A/A38R/S44D/V49A/K50E, M1T/S9P/P23S/Q38R/N42S/S48P/V49A/A54V, H19Y/T36A/S44G, H19Y/T36A, 및 M4T/T36A/Q38R/N42S/S44G/T46A/N47K/S48P/T52A로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 아미노산 치환 S16G/H19Y/T36A, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 아미노산 치환 S16G/H19Y/T36A/N53D, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 아미노산 치환 S9P/N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, Q10H, Q10P, Q10R, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 아미노산 치환 Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16G, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 아미노산 치환 M1V/L2S/M4T/S16G/N31D/T32I/T36A, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, L2C, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, H19Y, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31S, T32A, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 67과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 68과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 69와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 49와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 74와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 67을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 68을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 69를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 49를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 74를 갖는다.
클론 번호, 서열번호 1의 아미노산 서열과 비교하여 아미노산 치환, 및 예시적인 변이체 sBCMA 도메인의 지정된 서열번호는 표 2에 제시된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 1과 비교하여 APRIL에 대해 향상된 결합 친화도를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 1과 비교하여 BAFF에 대해 향상된 결합 친화도를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 1과 비교하여 APRIL 및 BAFF에 대해 향상된 결합 친화도를 나타낸다.
4. Fc 도메인
본원에 논의된 바와 같이, 상기 기술된 sBCMA 변이체 도메인 외에도, 본 발명의 융합 단백질은 또한 일반적으로 비제한적으로 IgG1, IgG2 및 IgG3을 포함하는 여러 서브클래스를 갖는 IgG 클래스를 기반으로 하는 항체의 Fc 도메인도 포함한다. 본원에 기술된 바와 같이, Fc 도메인은 선택적으로 IgG 항체의 힌지 도메인을 포함한다.
인간 IgG Fc 도메인은 본 발명에서 특히 유용하며, 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG3의 Fc 도메인으로부터 유래될 수 있다. 일반적으로, IgG1 및 IgG2가 IgG3보다 더 자주 사용된다.
본 발명의 융합 단백질에 포함된 인간 IgG 단백질의 Fc 도메인은 융합 단백질의 반감기의 상당한 증가를 부여할 수 있고, Ig 분자와 추가적인 결합 또는 상호작용을 제공할 수 있다. 일부 실시양태에서, sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 단량체 변이체 sBCMA 폴리펩타이드와 비교하여 정제, 다량체화, 결합 및 다른 분자의 중화를 촉진할 수 있다.
Fc 도메인은 또한 필요에 따라 기능을 변경하기 위해 Fc 변이체를 함유할 수 있다. 그러나, 많은 실시양태에 따르면, Fc 변이체는 일반적으로 이량체를 형성하는 능력뿐만 아니라 FcRn에 결합하는 능력 둘 다를 보유할 필요가 있다. 따라서, 본원의 많은 실시양태가 인간 IgG1 도메인의 사용에 의존적인 반면, Fc 변이체는 다른 IgG 도메인의 기능을 증대시키거나 저지하도록 만들어질 수 있다. 따라서, 예를 들어, 관련 기술분야의 기술자라면 이해할 수 있는 것으로서, IgG1 또는 IgG2에서 이펙터 기능을 감소시키거나 제거하는 절제 변이체가 사용될 수 있고/있거나 FcRn 수용체에 대한 보다 단단한 결합을 부여하는 FcRn 변이체가 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, Fc 도메인은 인간 IgG Fc 도메인 또는 변이체 인간 IgG Fc 도메인이다.
다른 실시양태에서, Fc 도메인은 인간 IgG1 Fc 도메인이다.
추가 실시양태에서, Fc 도메인은 인간 IgG1의 힌지-CH2-CH3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, Fc 도메인은 인간 IgG1의 CH2-CH3을 포함한다.
일부 실시양태에서, Fc 도메인은 IgG1 이외의 다른 IgG, 예컨대 인간 IgG2 또는 IgG3으로부터의 Fc 도메인일 수 있다. 일반적으로, IgG2는 IgG3보다 더 자주 사용된다.
추가적인 실시양태에서, Fc 도메인은 변이체 인간 IgG Fc 도메인이다. 그러나, 본원의 변이체 Fc 도메인은 공지된 방법을 사용하여 측정했을 때 다른 Fc 도메인과 이량체를 형성하는 능력을 여전히 보유할 뿐만 아니라, 본원의 융합 단백질의 혈청 반감기 증가에 유의미하게 기여하는 FcRn에 결합하는 능력을 보유한다.
변이체 IgG Fc 도메인은 모 인간 IgG Fc 도메인과 비교하여 첨가, 결실, 치환 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변이체 인간 IgG Fc 도메인은 상응하는 모 인간 IgG Fc 도메인과 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 가질 수 있다(위에서 논의된 동일성 알고리즘을 사용함, 한 실시양태에서는 디폴트 매개변수를 사용하여, 관련 기술분야에 공지된 BLAST 알고리즘을 사용함).
일부 실시양태에서, 본 발명의 변이체 인간 IgG Fc 도메인은 모 인간 IgG Fc 도메인과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 아미노산 서열 변형을 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 Fc 도메인은 인간 IgG Fc 도메인 또는 변이체 인간 IgG Fc 도메인이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 Fc 도메인은 인간 IgG1의 힌지-CH2-CH3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 Fc 도메인은 변이체 인간 IgG Fc 도메인이다.
5. 링커
본 발명의 융합 단백질은 sBCMA 도메인을 Fc 도메인에 연결하기 위한 선택적 링커를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 "링커" 또는 "링커 펩타이드"는 두 분자가 원하는 활성을 보유하도록 서로에 대해 정확한 형태를 취하는 방식으로 두 분자를 연결하기에 적절한 길이를 갖는다. 한 실시양태에서, 링커의 길이는 약 1 내지 20개 아미노산 길이, 바람직하게는 약 1 내지 10개 아미노산 길이이다. 한 실시양태에서, 4 내지 10개 아미노산 길이의 링커가 사용될 수 있다. 유용한 링커로는, IEGRMD 또는 예를 들어 (GS)n, (GSGGS)n, (GGGGS)n 및 (GGGS)n을 포함하고 여기서 n이 적어도 1의 정수(일반적으로 3 내지 4)인 글리신-세린 중합체, 글리신-알라닌 중합체, 알라닌-세린 중합체 및 기타 유연한 링커를 포함한다. 대안적으로, 다양한 비단백질성 중합체, 예를 들어 비제한적으로 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시알킬렌, 또는 폴리에틸렌 글리콜과 폴리프로필렌 글리콜의 공중합체가 링커로서 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 링커는 변이체 sBCMA 도메인을 Fc 도메인과 연결하는 것과 같이 본원에 개략된 임의의 2개의 도메인을 함께 연결하는 데 사용되는 "도메인 링커"이다. 위에서 논의된 바와 같이, 각 도메인이 이의 생물학적 기능을 보유할 수 있도록 충분한 길이 및 유연성으로 두 도메인의 재조합 부착을 허용하기 위해 많은 적합한 링커가 사용될 수 있다. 본원에 논의된 바와 같이, 특히 유용한 도메인 링커는 IgG1의 힌지 도메인에 결합된 IEGRMD 링커이다.
다양한 실시양태에서, 2개의 도메인(예를 들어, sBCMA 변이체 도메인 및 Fc 도메인)은 일반적으로 본원에 기술된 바와 같은 도메인 링커를 사용하여 연결된다. 많은 실시양태에서, 2개의 도메인은 유연한 링커를 사용하여 2개의 도메인이 독립적으로 작용할 수 있는 방식으로 부착된다. 유연한 연결은 기존 링커 및/또는 힌지 링커를 사용하여 다양한 방식으로 달성될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 링커는 IEGRMD(서열번호 87)이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 링커는 GGGGS(서열번호 88)이다.
일부 실시양태에서, 인간 IgG 항체의 힌지 도메인이 사용된다. 일부 경우에, 힌지 도메인은 또한 아미노산 치환도 함유할 수 있다.
일부 실시양태에서, 도메인 링커는 힌지 도메인과 유연한 링커의 조합, 예를 들어 IEGRMD 링커를 갖는 IgG1 힌지이다.
한 실시양태에서, 링커는 길이가 약 1 내지 50개 아미노산, 바람직하게는 약 1 내지 30개 아미노산, 더욱 바람직하게는 약 4 내지 10개 아미노산이다.
6. 본 발명의 특정 실시양태
일부 실시양태에서, sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 80과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 나타낸다.
일부 실시양태에서, sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 81과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 나타낸다.
일부 실시양태에서, sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 82와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 나타낸다.
일부 실시양태에서, sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 83과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 나타낸다.
일부 실시양태에서, sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 84와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 나타낸다.
일부 실시양태에서, sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 80에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 82에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 84에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
E. 치료 방법
1. 치료에 순응성인 대상체
다양한 실시양태는 치료가 필요한 대상체에게 본원에 기술된 바와 같은 하나 이상의 변이체 sBCMA 단백질의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다.
다양한 실시양태는 치료가 필요한 대상체에게 본원에 기술된 바와 같은 치료 유효량의 하나 이상의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 면역글로불린 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 또는 둘 다의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgG 또는 둘 다의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgG, IgM 또는 둘 다의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgM 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA 및 IgM의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA 및 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgG 및 IgM의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 방법은 정상 B 세포 생존력에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시양태에서, 대상체는 자가면역 질환으로 진단된 것이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 섬유증으로 진단된 것이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 면역글로불린 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 또는 둘 다의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgG 또는 둘 다의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgG, IgM 또는 둘 다의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgM 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA 및 IgM의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA 및 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgG 및 IgM의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(들)을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질환(들) 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 방법은 정상 B 세포 생존력에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시양태에서, 대상체는 자가면역 질환으로 진단된 것이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 섬유증으로 진단된 것이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
본 발명은 특히, 자가면역 질환 및/또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질 및/또는 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 특히 자가면역 질환으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 특히 자가면역 질환으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 특히 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 특히 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 자가면역 질환 또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 치료 유효량의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 1과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 변이체 sBCMA 도메인, 여기서, 상기 아미노산 치환은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 19, 20, 22, 23, 25, 26, 29, 31, 32, 35, 36, 38, 39, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53 및 54로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 위치 번호에서 이루어지고, 여기서 넘버링은 EU 인덱스에 따른 것임;
b) 선택적 링커; 및
c) Fc 도메인.
일부 실시양태에서, 본 발명은 정상 B 세포 생존력이 변경되지 않는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체가 자가면역 질환으로 진단된, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 방법은 IgA의 생성을 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 방법은 IgG의 생성을 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 방법은 IgM의 생성을 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 방법은 IgA 및 IgM 둘 다의 생성을 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 방법은 IgA 및 IgG 둘 다의 생성을 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 방법은 IgM 및 IgG의 생성을 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 방법은 IgA, IgM 및 IgG 모두의 생성을 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 자가면역 질환이 IgA 신장병, 전신홍반루푸스, 척-스트라우스 증후군, 중증근육무력증, 다발성 경화증 및 류마티스 관절염으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체가 섬유증으로 진단된, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 섬유증이 특발성 폐섬유증, 비알코올성 지방간염, 경피증 및 신장 섬유증으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 융합 단백질은 N-말단에서 C-말단으로 다음을 포함한다:
a) 상기 변이체 sBCMA 도메인;
b) 상기 선택적 링커; 및
c) 상기 Fc 도메인.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 융합 단백질은 N-말단에서 C-말단으로 다음을 포함한다:
a) 상기 Fc 도메인;
b) 상기 선택적 링커; 및
c) 상기 변이체 sBCMA 도메인.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 아미노산 치환(들)은 상기 위치 중 1개, 상기 위치 중 2개, 상기 위치 중 3개, 상기 위치 중 4개, 상기 위치 중 5개, 상기 위치 중 6개, 상기 위치 중 7개, 상기 위치 중 8개, 또는 상기 위치 중 9개에서 발생한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 아미노산 치환(들)은 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16G, S16N, S16R, H19L, H19Y, A20V, A20T, I22M , I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36A, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 아미노산 치환(들)은 M1V, L2S, Q3P, M4T, S9P, N11D, S16G, H19Y, N31S, N31D, T32I, T36A, R39H, N47S, K50E 및 N53E로 이루어지는 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 아미노산 치환(들)은 S16G, H19Y 및 T36A로 이루어지는 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 아미노산 치환은 L2S/S9P/E12K/N31D/T36A/N42S/N53S, M1V/T32P/T36A/T46I/N53D/A54V, Q3R/S16N/T36A/A43T, F14L/S16G/T36A/V45A/N47D, M1T/M4V/S9F/S16G/T32A/Q38R, M1A/S9A/Q38R, G6E/Q25R/Q38R, M1V/M4I/G6E/S9P/N11D/V49M/T52M/A54V, N11D/S16G/N31S, N11D/H19Y/I22M/T32P/N47S/N53S, G6E/Q7R/H19Y/L35S, H19Y/N42D/S48P/T52A, M1V/N31D/T32I/T36A, M1V/A5T/H19L/T36A, M1T/N31D/T32A/T36A/Q38R/S44D/V49A/K50E, M1V/T36A/Q38R/A43V, M1V/L2S/S9P/Q10H/T36A/Q38R/K50G, T36A/Q38R/N53S, M1T/L2S/L35P/T36A/Q38R/T46A/K50R, A5T/A20V/T36A/Q38R, M1T/S16G/I22V/T36A/S44G/T46A/V49A, S16G/T36A, M1I/N11D/S16G/I22M/S29A/T36A/S44G/K50R, M1C/L2C/Q3R/M4E/N11D/S16G/T36P, M1I/N11D/S16G/I22M/S29A/T36A/S44G/K50R, N11D/N31D/T32I/T36A/S44N/N47D/N53D, M1R/L2C/Q3R, H19Y/T36A/S44G, H19Y/T32I/T36A/V49A, H19Y/N31S/T36A/V45A, H19Y/N31S/T36A, H19Y/T36P/T52A, H19Y/N31D/T52M, M1V/H19Y/V45M, S16G/H19Y/N47D, S16G/H19Y/K50T, S16G/H19Y/S44N/K50R, N11D/H19Y/S48T, S9P/N11D/S16R/T32A/Q38R/S44G/T46I/T52A/N53D/A54T, N11D/S16G/S44R, H19L/T32A/S44G/G51E/T52A, S16N/H19Y/T36A/K50R, M1V/H19Y/T36A/R39H/T46A, M1V/H19Y/T36A, H19Y/T36A/N42D/N47S/S48P, M1V/H19Y/T36A/S44G/N47D, M1V/H19Y/T36A/N42R/N53S, H19Y/L35P/T36A/N42D/T46I/V49A, Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E, M1V/H19Y/T36A/N42R/N53S, M1T/H19Y/T36A, M1V/S16N/H19Y/I22M/T36A, M1T/N11D/H19Y/T36A/N42S/V45A/N53S, N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D, M1V/S9P/Q10P/S16G/H19Y/L26F/T36A/A43V/N53D, S16G/H19Y/T36A/V49A/N53D, S16G/T36A/A43T/S44G/V45M, M4V/S9P/S16G/T36A/Q38R, S9P/N11S/S16G/T36A/Q38R, N11D/E12K/S16R/T36A/T52M, M4V/T32I/T36A/Q38R/A43T/V45A/S48P, S9P/N11D/S16G/Q25R, M1T/A5T/S9P/S16G/Q25R/N31D/V49M, L2S/S9P/S16G/A20T/T32I/Q38R/N42D/T46A/S48L, S16G/Q25R/T46A, G6E/S9A/S16G/Q25R/N31D/N47S/T52M, H19Y/Q38R/T52M, N11D/H19Y/I22M/T32P/N47S/N53S, S16G/H19Y/T36A, S16G/H19Y/T36A/N53D, S9P/N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D, Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E, M1V/L2S/M4T/N11D/H19Y/T36A, M1V/L2S/M4T/N11D/T36A, M1V/L2S/M4T/H19Y/T36I/V45A/V49M, M1V/L2S/M4T/N11D/H19Y/T36A, M1V/L2S/M4T/S9P/Q10R/H19Y/T36A/T46A/N47S, M1V/L2S/M4T/S16G/N31D/T32I/T36A, M1V/M4T/T36A/Q38R/N53K, M1T/N11D/H19Y/T36A/N42S/V45A/N53S, M1T/N31D/T32A/T36A/A38R/S44D/V49A/K50E, M1T/S9P/P23S/Q38R/N42S/S48P/V49A/A54V, H19Y/T36A/S44G, H19Y/T36A, 및 M4T/T36A/Q38R/N42S/S44G/T46A/N47K/S48P/T52A로 이루어지는 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 아미노산 치환 S16G/H19Y/T36A, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 아미노산 치환 S16G/H19Y/T36A/N53D, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 아미노산 치환 S9P/N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, Q10H, Q10P, Q10R, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 아미노산 치환 Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16G, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 아미노산 치환 M1V/L2S/M4T/S16G/N31D/T32I/T36A, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, L2C, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, H19Y, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31S, T32A, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 67과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 68과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 69와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 49와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 74와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 67의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 68의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 69의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 49의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 변이체 sBCMA 도메인은 서열번호 74의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 Fc 도메인은 인간 IgG Fc 도메인 또는 변이체 인간 IgG Fc 도메인이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 인간 IgG Fc 도메인은 인간 IgG1의 힌지-CH2-CH3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 Fc 도메인은 변이체 인간 IgG Fc 도메인이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 Fc 도메인은 인간 IgG1 Fc 도메인이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 링커는 서열번호 87이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 링커는 (GS)n, (GSGGS)n, (GGGGS)n 및 (GGGS)n으로 이루어지는 그룹으로부터 선택되며, 여기서 n은 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어지는 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 상기 링커는 서열번호 88이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 80의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 81의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기서 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 서열번호 84의 아미노산 서열을 포함한다.
2. 치료적 투여
특정 실시양태에서, 하나 이상의 변이체 sBCMA 단백질을 갖는 치료 유효 조성물 또는 제형은 개체에게 전신으로 투여될 수 있거나, 또는 관련 기술분야에 공지된 임의의 다른 투여 경로를 통해 투여될 수 있다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질을 갖는 치료 유효 조성물 또는 제형은 개체에게 전신으로 투여될 수 있거나, 또는 관련 기술분야에 공지된 임의의 다른 투여 경로를 통해 투여될 수 있다.
3. 투약
일부 실시양태에서, 섬유증 및/또는 면역조절 장애의 치료 등을 위한 본 발명의 치료적 실체의 유효량은 투여 수단, 표적 부위, 환자의 생리학적 상태, 환자가 인간인지 동물인지 여부, 투여되는 기타 약물, 및 치료가 예방적인지 치료적인지 여부 등 많은 다양한 요인에 따라 달라진다. 치료 투여량은 안전성 및 효능을 최적화하도록 적정될 수 있다.
VI. 실시예
A. 실시예 1: 시노몰구스 원숭이 단일 용량 독성 연구
본 연구의 목적은 시노몰구스 원숭이에게 정맥내 주입을 통해 AB001(sBCMA 클론 #71-Fc 융합 단백질)을 단회 투여한 후 급성 독성을 평가하고, 후속 독성 연구 및 임상 시험의 설계를 위한 기준으로서 최대 허용 용량(MTD)를 제공하고, 독성 동태학 및 면역원성을 특성화하기 위한 것이었다. 총 10마리의 시노몰구스 원숭이(1마리 동물/성별/그룹)를 5개의 그룹으로 분류하고 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질(0.1, 1, 10 및 100 mg/kg) 또는 비히클을 정맥내로 1회 주입하고 6주 동안 관찰했다. 용량 부피는 동물의 가장 마지막 체중에 따라 조정했다. 실제 주입 기간은 공칭 주입 기간의 5%를 초과하지 않았다(도 1).
평가된 매개변수는 임상 관찰, 체중, 음식 섭취, 혈액학, 응고, 혈장 화학, 림프구 면역표현형, 면역글로불린, 사이토카인 및 육안 병리를 포함했다. 나열된 빈도에 따라 무작위화 다음 날부터 실험 완료까지 매일 임상 관찰을 수행했다. 비투약일: 오전에 한 번, 오후에 한 번. 투약일: 투여 전 1회, 투여 후 1시간 및 3~6시간 이내에 1회. 투여 전 단계 동안 체중 모니터링: -13일 및 -6일에 각각 1회, 이어서 투여 후 1, 2, 7, 14, 21, 28, 35 및 42일에 1회. 혈액 수집은 투여 전 단계 동안 수행했다: -13일, -6일, -3일(M1305, M1407), 1일(투여 전) 및 투약 단계: 4회, 2일, 7일, 14일 및 42일, 그 중 7일과 14일에 응고는 포함되지 않았다. 관찰 기간이 끝날 때 동물을 부검했다(43일). 동물은 부검 전 밤새(24시간 이하) 금식시켰다(도 1). 결론적으로, 관찰 기간 동안 각 그룹의 동물에서 약물과 관련된 체중 이상은 관찰되지 않았다(도 4). 혈액학적 소견은 다음을 포함한다: 100 mg/kg: 1일째 투여전 값과 비교한 경우, LYMP의 감소(56% 정도)가 2일째 수컷 동물(도 5A)에서, 그리고 7일째 암컷 동물(57% 정도)(도 5B)에서 확인되었다. 10 mg/kg: 1일째 투여 전 값과 비교한 경우, LYMP의 감소(31% 정도)가 7일째 암컷 동물에서 확인되었다(도 5B). 수컷 동물에서 유의미한 이상은 확인되지 않았다(도 5A). 1 mg/kg: 1일째 투여 전 값과 비교할 때 7일째 암컷 동물에서는 LYMP의 감소(26% 정도)가 확인되었다(도 5B). 수컷 동물에서는 유의미한 이상이 확인되지 않았다. 0.1 mg/kg: 암컷 또는 수컷 동물에서 유의미한 이상이 발견되지 않았다(도 5). 2일, 7일 및/또는 14일째에 각 그룹의 암컷 및 수컷 동물에서 RBC, HGB 및 HCT의 저하가 관찰되었다. 실험 중 많은 혈액이 채취된 점을 고려하면 RBC, HGB 및 HCT의 감소는 혈액 채취와 관련이 있을 수 있는 것으로 고려되었다(도 8 내지 11). 각 그룹의 암컷 또는 수컷 동물에서는 응고 매개변수의 이상이 확인되지 않았다(도 12-13). 각 그룹의 암컷 또는 수컷 동물에서는 혈장 화학 매개변수의 이상이 확인되지 않았다(도 14 내지 19). 각 그룹의 암컷 또는 수컷 동물에서는 면역표현형의 이상이 확인되지 않았다. 어떤 동물에서도 병리학적 육안 이상은 존재하지 않았다(도 2 및 3). 사이토카인 분석은 100 mg/kg에서 투여 전 값 또는 비히클과 비교했을 때 1일, 2일 또는 3일에 수컷 동물에서 IL-10, IFN-γ, IL-17A의 증가가 확인되는 것으로 나타났다(도 20 및 21). 암컷 동물에서는 사이토카인의 이상이 확인되지 않았다(도 22 및 23). 다른 그룹의 암컷 또는 수컷 동물에서는 사이토카인의 이상이 확인되지 않았다. 중요한 것은, 암컷 및 수컷 치료군 모두에서 면역글로불린 수치의 차이가 확인되었다는 점이다. 구체적으로, 100 mg/kg: 투여 전 값과 비교할 때 2일부터 42일까지 암컷 및/또는 수컷 동물에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 감소가 확인되었다. 10 mg/kg: 투여 전 값과 비교할 때 7일부터 42일까지 암컷 및/또는 수컷 동물에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 감소가 확인되었다. 1 mg/kg: 투여 전 값과 비교할 때 7일 및 14일에 암컷 및/또는 수컷 동물에서 IgA 및 IgM의 감소가 확인되었다. 0.1 mg/kg: 암컷 또는 수컷 동물에서 면역글로불린의 이상이 확인되지 않았다(도 6 및 7, 도 16 및 19).
B. 실시예 2: 세포 발달 및 클론 선택
CHO-K1-C6-4G5 SCB 세포 은행으로부터 해동된 CHO-K1-C6-4G5 숙주 세포는 여러 계대배양에서 HyCell TranFx-C 배지를 사용하여 지수 단계로 유지되었다. 형질감염 당일, 세포를 27mL 세포 배양물(125mL 진탕 플라스크)에서 생존 세포 밀도 1E+06 세포/mL로 조정했다. 형질감염 혼합물은 2.5mL OptiPRO SFM에 50μg의 선형화된 발현 플라스미드를 희석하여 제조했다. 그 다음, FreeStyle MAX 용액을 DNA 용액과 혼합한 후 실온에 10~20분 동안 방치했다. 인큐베이션 후, 용액을 CHO-K1-C6 배양물(125mL 진탕 플라스크 내 25mL)에 첨가했다. 형질감염된 세포를 130rpm, 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 인큐베이션했다. 형질감염된 세포의 1부분을 형질감염 48시간 후 안정한 풀 생성을 위해 사용했다.
형질감염 48시간 후, 형질감염된 세포에 약물 선택을 실시했다. 세포를 선택 약물(15 μg/mL 퓨로마이신 + 800nM MTX)이 포함된 150T 플라스크에서 30 mL 배지(4 mM L-글루타민 및 0.1% F-68을 함유하는 HyCell TransFx-C)에 5 E+05 세포/mL의 밀도로 파종했다. 세포를 0일 동안 37℃, 8% CO2 정적 인큐베이터에서 인큐베이션했다.
5 내지 7일 후, 세포 생존력은 15 내지 25%로 떨어질 것이다. 세포 배양물을 200g, 5분, 22℃에서 원심분리했다. 세포 배양 배지를 제거하고 세포 펠릿을 75T 플라스크에 담긴 10mL의 신선한 선택 배지에 재현탁하고 37℃, 8% CO2 정적 인큐베이터에서 인큐베이션했다. 추가 10 내지 15일 후에 세포는 40 내지 60% 생존력으로 점차 회복될 것이며 75T 플라스크에 담긴 10mL 배양물에서 유지된다. 세포 생존력이 50 내지 60%보다 높게 달성되면, 세포는 125mL 진탕 플라스크에서 20 내지 25mL 배양물로 확장될 것이며 130rpm, 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 인큐베이션했다. 또 다른 8 내지 10일 후에 각 풀은 약 90%의 생존력으로 회복될 것이다. 후속 배양을 통해 각 풀의 생존력이 90%에 도달하면 풀당 적어도 2개 바이알씩 동결보존을 수행했다.
모든 풀이 90% 생존력으로 회복되고 동결보존이 완료되면, 각 풀은 해동되고 11일 유가식 배양 실험으로 평가될 것이다. 50mL Spin 튜브에서 2가지 다른 10mL 배지 HyCell CHO 또는 BalanCD CHO에서 약 5.5E+05 세포/mL의 생존 세포 밀도로 세포의 각 풀을 인큐베이션하는 것은 0일차에 180rpm, 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 인큐베이션했다. 생존 세포 밀도 및 생존력은 BIORAD TC20 세포 계수기로 기록했다(도 24a 및 b).
세포 배양액은 11일차에 수확한 후 2000g, 20분, 22℃에서 원심분리했다. 배양 상청액을 0.22μm 필터를 통과시켜 역가 결정을 준비했다. 여과된 상청액의 일부는 GE Protein A HP SpinTrap 컬럼을 사용하여 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질 클론을 정제하기 위한 소스(source) 물질이었다. ProA 정제된 물질은 비환원 및 환원 SDS-PAGE로 처리했다(도 25a 및 b).
sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질의 2개 풀은 역가 및 성능에 기초하여 선택했고, 해동하고 15 μg/mL 퓨로마이신 및 800 nM MTX 또는 60 μg/mL 퓨로마이신 및 3000 nM MTX와 함께 4 mM L-글루타민을 함유한 HyCell CHO 배지에 약 1주일 동안 적응시켰다. 풀은 지수 단계로 유지시켰고, 130rpm, 37℃ 및 5% CO2 인큐베이터에서 인큐베이션했다. SCC 실험 하루 전날, 세포는 선택 약물과 함께 생존 세포 밀도 5~7E+05 세포/mL로 파종했다. SCC 실험 당일, 세포의 조건은 생존 세포 밀도 약 1.4E+06 세포/mL, 생존력 >= 90%를 달성해야 한다. 200 μL 클로닝 배지를 96 웰 플레이트의 각 웰에 분배했다. 각 풀마다 플레이트는 4개였다. 각 플레이트는 바코드로 표지했다. 40 μm 나일론 메쉬 세포 스트레이너와 같은 세포 스트레이너를 사용하여 적어도 3mL의 균일한 단일 세포 현탁액을 수득했다. 그런 다음 세포를 4 mM L-글루타민이 포함된 HyCell CHO 배지에서 생존 세포 밀도 ~7E+05 세포/mL로 조정했다. 70 μL의 세포를 SCP™ 카트리지에 로딩한다. 단일 세포 프린터의 매개변수는 96웰 플레이트의 각 웰에 단일 세포를 분배하도록 설정했다. 그런 다음 플레이트를 200g, 22℃에서 5분간 원심분리했다. 이미지는 0일, 1일, 및 2일 동안 고해상도 모드 하에 CSI(CloneSelect Imager)로 촬영했다. 그런 다음 플레이트를 37℃, 8% CO2 정적 인큐베이터에서 인큐베이션했다. 14일 또는 18일차에 이미지는 CSI로 다시 촬영했다.
2개의 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질 풀의 96웰 플레이트에서 각각 35개 및 22개의 클론을 선발했다. 스케일업 과정 동안 선택 약물의 농도가 점차적으로 다시 100% 선택 압력으로 높아져 일부 클론은 성장하지 못할 수 있었다. 궁극적으로, 50mL Spin 튜브에서 성장할 수 있고 결국 95% 이상의 생존력 및 1E+06 세포/mL 이상의 생존 세포 밀도를 달성한 클론은 동결보존될 것이다. 동결보존된 클론은 40개였다.
2개의 풀로부터의 40개 클론을 12일 유가식 배양 실험에 의해 스크리닝했다. 각 클론의 세포는 50 mL Spin 튜브에서 총 10 mL 선택 약물 무함유 배지(6mM L-gln 함유 HyCell CHO)에 생존 세포 밀도 5.5E+05 세포/mL로 배양되고, 180rpm, 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 인큐베이션했다. 세포 배양액을 12일차에 수확한 후 2000g, 20분, 22℃에서 원심분리했다. 배양 상청액을 0.22μm 필터를 통과시켜 ProA-HPLC를 사용하여 역가 결정을 준비했다. 여과된 상청액의 일부는 GE Protein A HP SpinTrap 컬럼을 사용하여 JHL9931 항체를 정제하기 위한 소스 물질이었다. ProA-HPLC 역가 및 12일 세포 생존력에 기초하여 상위 클론을 선택했다(도 26). 또한, 상위 클론의 정제된 ProA 물질은 N-글리칸 프로필에 대한 UPLC-FLR 분석으로 처리했다(도 27).
상기에 제시된 실시예는 관련 기술분야의 기술자에게 본 발명의 조성물, 시스템 및 방법의 실시양태를 만들고 사용하는 방법에 대한 완전한 개시 및 설명을 하기 위해 제공된 것이며, 본 발명자들이 자신의 발명으로 간주하는 것의 범위를 제한하려는 것은 아니다. 관련 기술분야의 기술자에게 명백한 본 발명을 수행하기 위한 전술한 모드의 수정은 다음 청구범위의 범위 내에 있는 것으로 의도된다. 본 명세서에 언급된 모든 특허 및 간행물은 본 발명이 속하는 기술 분야의 숙련된 기술자의 기술 수준을 나타낸다. 본 개시내용에 인용된 모든 참고문헌은 각 참고문헌 전체가 개별적으로 참고로 포함된 것과 동일한 정도로 참고로 포함된다.
모든 표제 및 섹션 지정은 명확성과 참고 목적으로만 사용되며 어떤 방식으로든 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다. 예를 들어, 관련 기술분야의 기술자는 본원에 기술된 본 발명의 사상 및 범위에 따라 적절하게 상이한 표제 및 섹션으로부터 다양한 측면을 조합할 때의 유용성을 인식할 것이다.
본원에 인용된 모든 참고문헌은 각각의 개별 간행물, 특허 또는 특허 출원이 모든 목적을 위해 전체 내용이 참고로 포함되도록 구체적이고 개별적으로 표시된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 전체 내용이 본원에 참고로 포함된다.
관련 기술분야의 기술자에게 명백한 바와 같이, 본 출원의 많은 수정 및 변경은 그 사상 및 범위를 벗어나지 않고 이루어질 수 있다. 본원에 기술된 특정 실시양태 및 실시예는 단지 실시예로서 제공되는 것이다.
C. 실시예 3: NZBWF1/J 마우스 + Pristane의 루푸스 모델에 대한 sBCMA 변이체의 평가
프리스탄을 복강내 주사한 NZBWF1/J 마우스의 루푸스 모델에 대한 테스트 물품의 효과를 평가했다. 11~12주령의 NZBWF1/J 마우스를 4개 그룹으로 무작위로 배정했고, 모델 그룹의 동물에는 프리스탄을 투여했다. C57BL/6 마우스는 정상 대조군으로 사용했다.
NZB/W F1 마우스는 NZB와 NZW 계통 사이의 F1 잡종에 의해 생성된 고전적인 루푸스 모델이다. 이 잡종 마우스는 루푸스 환자와 유사한 심각한 루푸스 유사 표현형을 발달시킨다. 이러한 루푸스 유사 표현형에는 림프절병증, 비장종대, 항dsDNA IgG를 포함한 상승된 혈청 항핵 자가항체(ANA), 및 면역 복합체-매개 사구체신염(GN)이 포함된다. SLE 환자의 경우, NZB/W F1 계통의 질환은 부분적으로 에스트로겐 수준으로 인해 암컷에게 강하게 편향되어 있다.
프리스탄의 복강내 주사는 다중 핵 항원에 대한 루푸스 관련 자가항체의 형성을 자극한다. 이는 루푸스 유사 자가면역의 발달과 함께 만성 염증을 야기하며, 여기에는 특히 인간 SLE와 고도의 유사성을 갖는 면역 복합체 신염뿐만 아니라 SLE에 특징적인 항체의 형성을 포함한다.
48마리의 NZBWF1/J 마우스를 실험 전 체중 및 소변 단백질 수준에 기초하여 각 그룹에 12마리씩 4개의 그룹으로 무작위 배정했다. 모든 NZBWF1/J 마우스는 복강내 주사를 통해 0.5mL의 용량으로 프리스탄을 투여받았다. 그룹 1은 프리스탄과 함께 식염수 비히클 대조군을 투여 받았다. 그룹 2는 프리스탄과 함께 텔리타시셉트 10 mg/kg을 주 2회 투여받았다. 그룹 3은 프리스탄과 함께 1 mg/kg sBCMA 변이체를 주 2회 투여받았다. 그룹 4는 프리스탄과 함께 10 mg/kg sBCMA 변이체를 주 2회 투여받았다.
단백뇨 수준(mg/ml)은 치료 후 14일째에 측정했으며, 단백뇨 수준의 감소는 치료 그룹 2, 3 및 4에서 관찰되었다(도 31). 림프절 부종 점수를 기록했다(도 32). 비히클 치료 그룹은 다른 치료 그룹에 비해 림프절 부종 점수가 가장 높았으며 10 mg/kg의 sBCMA 변이체로 치료된 동물에서는 림프절 부종이 관찰되지 않았다.
Claims (48)
- 자가면역 질환 또는 섬유증으로 진단된 대상체에서 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생성을 감소시키는 방법으로서, 상기 대상체에게 치료 유효량의 가용성 B 세포 성숙 항원(sBCMA) 변이체-Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함하고, 상기 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질은 다음을 포함하는 것인, 방법:
a) 서열번호 1과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 변이체 sBCMA 도메인, 여기서 상기 아미노산 치환은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 14, 16, 19, 20, 22, 23, 25, 26, 29, 31, 32, 35, 36, 38, 39, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53 및 54로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 위치 번호에서 이루어지고, 넘버링은 EU 인덱스에 따른 것임;
b) 선택적 링커; 및
c) Fc 도메인. - 제1항에 있어서, 정상 B 세포 생존력은 변경되지 않는, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, IgA의 생성을 감소시키는, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, IgM의 생성을 감소시키는, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, IgG의 생성을 감소시키는, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, IgA 및 IgM 둘 다의 생성을 모두 감소시키는, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, IgA 및 IgG 둘 다의 생성을 감소시키는, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, IgM 및 IgG 둘 다의 생성을 감소시키는, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, IgA, IgM 및 IgG의 생성을 감소시키는, 방법.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 자가면역 질환으로 진단된 것인, 방법.
- 제10항에 있어서, 상기 자가면역 질환은 IgA 신장병, 전신홍반루푸스, 척-스트라우스 증후군, 중증근육무력증, 다발성 경화증 및 류마티스 관절염으로 이루어지는 그룹에서 선택되는, 방법.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 섬유증으로 진단된 것인, 방법.
- 제12항에 있어서, 상기 섬유증은 특발성 폐섬유증, 비알코올성 지방간염, 경피증 및 신장 섬유증으로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는, 방법.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 융합 단백질이 N-말단에서 C-말단으로 다음을 포함하는, 방법:
a) 상기 변이체 sBCMA 도메인;
b) 상기 선택적 링커; 및
c) 상기 Fc 도메인. - 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 융합 단백질이 N-말단에서 C-말단으로 다음을 포함하는, 방법:
a) 상기 Fc 도메인;
b) 상기 선택적 링커; 및
c) 상기 변이체 sBCMA 도메인. - 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 서열 동일성을 갖는, 방법.
- 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아미노산 치환(들)은 상기 위치 중 하나, 상기 위치 중 2개, 상기 위치 중 3개, 상기 위치 중 4개, 상기 위치 중 5개, 상기 위치 중 6개, 상기 위치 중 7개, 상기 위치 중 8개, 또는 상기 위치 중 9개에서 일어나는, 방법.
- 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아미노산 치환(들)이 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16G, S16N, S16R, H19L, H19Y, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36A, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아미노산 치환(들)이 M1V, L2S, Q3P, M4T, S9P, N11D, S16G, H19Y, N31S, N31D, T32I, T36A, R39H, N47S, K50E 및 N53E로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는, 방법.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아미노산 치환(들)이 S16G, H19Y 및 T36A로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아미노산 치환이 L2S/S9P/E12K/N31D/T36A/N42S/N53S, M1V/T32P/T36A/T46I/N53D/A54V, Q3R/S16N/T36A/A43T, F14L/S16G/T36A/V45A/N47D, M1T/M4V/S9F/S16G/T32A/Q38R, M1A/S9A/Q38R, G6E/Q25R/Q38R, M1V/M4I/G6E/S9P/N11D/V49M/T52M/A54V, N11D/S16G/N31S, N11D/H19Y/I22M/T32P/N47S/N53S, G6E/Q7R/H19Y/L35S, H19Y/N42D/S48P/T52A, M1V/N31D/T32I/T36A, M1V/A5T/H19L/T36A, M1T/N31D/T32A/T36A/Q38R/S44D/V49A/K50E, M1V/T36A/Q38R/A43V, M1V/L2S/S9P/Q10H/T36A/Q38R/K50G, T36A/Q38R/N53S, M1T/L2S/L35P/T36A/Q38R/T46A/K50R, A5T/A20V/T36A/Q38R, M1T/S16G/I22V/T36A/S44G/T46A/V49A, S16G/T36A, M1I/N11D/S16G/I22M/S29A/T36A/S44G/K50R, M1C/L2C/Q3R/M4E/N11D/S16G/T36P, M1I/N11D/S16G/I22M/S29A/T36A/S44G/K50R, N11D/N31D/T32I/T36A/S44N/N47D/N53D, M1R/L2C/Q3R, H19Y/T36A/S44G, H19Y/T32I/T36A/V49A, H19Y/N31S/T36A/V45A, H19Y/N31S/T36A, H19Y/T36P/T52A, H19Y/N31D/T52M, M1V/H19Y/V45M, S16G/H19Y/N47D, S16G/H19Y/K50T, S16G/H19Y/S44N/K50R, N11D/H19Y/S48T, S9P/N11D/S16R/T32A/Q38R/S44G/T46I/T52A/N53D/A54T, N11D/S16G/S44R, H19L/T32A/S44G/G51E/T52A, S16N/H19Y/T36A/K50R, M1V/H19Y/T36A/R39H/T46A, M1V/H19Y/T36A, H19Y/T36A/N42D/N47S/S48P, M1V/H19Y/T36A/S44G/N47D, M1V/H19Y/T36A/N42R/N53S, H19Y/L35P/T36A/N42D/T46I/V49A, Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E, M1V/H19Y/T36A/N42R/N53S, M1T/H19Y/T36A, M1V/S16N/H19Y/I22M/T36A, M1T/N11D/H19Y/T36A/N42S/V45A/N53S, N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D, M1V/S9P/Q10P/S16G/H19Y/L26F/T36A/A43V/N53D, S16G/H19Y/T36A/V49A/N53D, S16G/T36A/A43T/S44G/V45M, M4V/S9P/S16G/T36A/Q38R, S9P/N11S/S16G/T36A/Q38R, N11D/E12K/S16R/T36A/T52M, M4V/T32I/T36A/Q38R/A43T/V45A/S48P, S9P/N11D/S16G/Q25R, M1T/A5T/S9P/S16G/Q25R/N31D/V49M, L2S/S9P/S16G/A20T/T32I/Q38R/N42D/T46A/S48L, S16G/Q25R/T46A, G6E/S9A/S16G/Q25R/N31D/N47S/T52M, H19Y/Q38R/T52M, N11D/H19Y/I22M/T32P/N47S/N53S, S16G/H19Y/T36A, S16G/H19Y/T36A/N53D, S9P/N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D, Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E, M1V/L2S/M4T/N11D/H19Y/T36A, M1V/L2S/M4T/N11D/T36A, M1V/L2S/M4T/H19Y/T36I/V45A/V49M, M1V/L2S/M4T/N11D/H19Y/T36A, M1V/L2S/M4T/S9P/Q10R/H19Y/T36A/T46A/N47S, M1V/L2S/M4T/S16G/N31D/T32I/T36A, M1V/M4T/T36A/Q38R/N53K, M1T/N11D/H19Y/T36A/N42S/V45A/N53S, M1T/N31D/T32A/T36A/A38R/S44D/V49A/K50E, M1T/S9P/P23S/Q38R/N42S/S48P/V49A/A54V, H19Y/T36A/S44G, H19Y/T36A, 및 M4T/T36A/Q38R/N42S/S44G/T46A/N47K/S48P/T52A로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 아미노산 치환 S16G/H19Y/T36A, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 아미노산 치환 S16G/H19Y/T36A/N53D, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 아미노산 치환 S9P/N11D/S16G/H19Y/T36A/N47S/N53D, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, Q10H, Q10P, Q10R, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, N31S, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 아미노산 치환 Q3P/S9P/H19Y/N31S/T36A/R39H/N47R/K50E, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, M1V, L2C, L2S, Q3R, M4E, M4I, M4T, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16G, S16N, S16R, H19L, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31D, T32A, T32I, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 아미노산 치환 M1V/L2S/M4T/S16G/N31D/T32I/T36A, 및 추가로 M1A, M1C, M1I, M1R, M1T, L2C, Q3P, Q3R, M4E, M4I, M4V, A5T, G6E, Q7R, S9A, S9F, S9P, Q10H, Q10P, Q10R, N11D, N11S, E12K, F14L, S16N, S16R, H19L, H19Y, A20V, A20T, I22M, I22V, P23S, Q25R, L26F, S29A, N31S, T32A, T32P, L35S, L35P, T36I, T36P, Q38R, R39H, N42D, N42R, N42S, A43T, A43V, S44D, S44G, S44N, S44R, V45A, V45M, T46A, T46I, N47D, N47K, N47R, N47S, S48L, S48P, S48T, V49A, V49M, K50E, K50G, K50R, K50T, G51E, T52A, T52M, N53D, N53K, N53S, A54V, 및 A54T로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 67과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 68과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 69와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 49와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 74와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 67의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 68의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 69의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 49의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 sBCMA 도메인이 서열번호 74의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
- 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc 도메인이 인간 IgG Fc 도메인 또는 변이체 인간 IgG Fc 도메인인, 방법.
- 제37항에 있어서, 상기 인간 IgG Fc 도메인이 인간 IgG1의 힌지-CH2-CH3을 포함하는, 방법.
- 제37항에 있어서, 상기 Fc 도메인이 변이체 인간 IgG Fc 도메인인, 방법.
- 제37항에 있어서, 상기 Fc 도메인이 인간 IgG1 Fc 도메인인, 방법.
- 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커가 서열번호 87인, 방법.
- 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커가 (GS)n, (GSGGS)n, (GGGGS)n, 및 (GGGS)n으로 이루어지는 그룹으로부터 선택되고, 여기서 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 것인, 방법.
- 제42항에 있어서, 상기 링커가 서열번호 88인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질이 서열번호 80의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질이 서열번호 81의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질이 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질이 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 sBCMA 변이체-Fc 융합 단백질이 서열번호 84의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US202163232124P | 2021-08-11 | 2021-08-11 | |
| US63/232,124 | 2021-08-11 | ||
| PCT/US2022/074868 WO2023019223A2 (en) | 2021-08-11 | 2022-08-11 | METHODS OF REDUCING PRODUCTION OF IgA, IgM AND/OR IgG USING sBCMA VARIANTS AND FC FUSION PROTEINS THEREOF |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20240053675A true KR20240053675A (ko) | 2024-04-24 |
Family
ID=85200996
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020247007973A KR20240053675A (ko) | 2021-08-11 | 2022-08-11 | sBCMA 변이체 및 이의 FC 융합 단백질을 이용한 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생산 감소 방법 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP4384201A2 (ko) |
| KR (1) | KR20240053675A (ko) |
| AU (1) | AU2022327178A1 (ko) |
| CA (1) | CA3228678A1 (ko) |
| WO (1) | WO2023019223A2 (ko) |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999012965A2 (en) | 1997-09-12 | 1999-03-18 | Biogen, Inc. | April- a novel protein with growth effects |
| WO2000012964A1 (fr) | 1998-08-28 | 2000-03-09 | Mitutoyo Corporation | Dispositif et procede d'analyse et de generation d'un programme piece destine aux mesures de coordonnees et de proprietes de surface |
| EP2314694A3 (en) | 1999-08-17 | 2013-12-11 | Biogen Idec MA Inc. | BAFF receptor (BCMA), an immunoregulatory agent |
| UA74798C2 (uk) | 1999-10-06 | 2006-02-15 | Байоджен Айдек Ма Інк. | Спосіб лікування раку у ссавця за допомогою поліпептиду, що протидіє взаємодії april з його рецепторами |
| BRPI0415709A (pt) * | 2003-10-20 | 2006-12-19 | Biogen Idec Inc | esquemas terapêuticos para antagonistas de baff |
| WO2008119042A2 (en) * | 2007-03-27 | 2008-10-02 | Zymogenetics, Inc. | Combination of blys inhibition and/or april inhibition and immunnosuppressants for treatment of autoimmune disease |
| UA112434C2 (uk) * | 2011-05-27 | 2016-09-12 | Ґлаксо Ґруп Лімітед | Антигензв'язувальний білок, який специфічно зв'язується з всма |
| EP3980538A1 (en) * | 2019-06-04 | 2022-04-13 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for modulating immunoglobulin expression |
| CN116406371A (zh) * | 2020-08-12 | 2023-07-07 | 斯坦福大学托管董事会 | sBCMA变体及其Fc融合蛋白 |
-
2022
- 2022-08-11 CA CA3228678A patent/CA3228678A1/en active Pending
- 2022-08-11 KR KR1020247007973A patent/KR20240053675A/ko unknown
- 2022-08-11 EP EP22856825.9A patent/EP4384201A2/en active Pending
- 2022-08-11 AU AU2022327178A patent/AU2022327178A1/en active Pending
- 2022-08-11 WO PCT/US2022/074868 patent/WO2023019223A2/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP4384201A2 (en) | 2024-06-19 |
| CA3228678A1 (en) | 2023-02-16 |
| AU2022327178A1 (en) | 2024-03-28 |
| WO2023019223A3 (en) | 2023-09-28 |
| WO2023019223A2 (en) | 2023-02-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20220242930A1 (en) | Immunomodulatory proteins with tunable affinities | |
| US11655277B2 (en) | IL-12 heterodimeric Fc-fusion proteins | |
| JP6644678B2 (ja) | Ｃｔｌａ−４およびｃｄ４０の両方に特異的に結合可能である二重特異性分子 | |
| KR20200100098A (ko) | 조작된 il-2 fc 융합 단백질 | |
| KR20240038176A (ko) | IL15/IL15Rα 이종이량체 Fc-융합 단백질 | |
| US12006345B2 (en) | Untargeted and targeted IL-10 Fc-fusion proteins | |
| KR20170094341A (ko) | 인터류킨 15 단백질 복합체 및 그의 용도 | |
| JP2023113636A (ja) | 改変ＩｇＧ１ Ｆｃドメインおよび該ドメインと抗ＣＤ４０ドメイン抗体の融合物 | |
| KR20160130463A (ko) | 다량체 Fc 단백질 | |
| KR20210003814A (ko) | IL-15/IL-15Rα Fc-융합 단백질 및 TIM-3 항원 결합 도메인을 함유하는 TIM-3 표적화 이종이량체 융합 단백질 | |
| KR20210003813A (ko) | IL-15/IL-15Rα Fc-융합 단백질 및 LAG-3 항원 결합 도메인을 함유하는 LAG-3 표적화 이종이량체 융합 단백질 | |
| CN115916233A (zh) | 靶向IL-12异源二聚体Fc融合蛋白 | |
| KR20230029621A (ko) | T 세포 억제 단백질을 포함하거나 포함하지 않는 april 및 baff 억제 면역조절 단백질 및 이의 사용 방법 | |
| KR20240019124A (ko) | Taci-fc 융합 면역조절 단백질의 투여 및 치료 방법 | |
| JP2023537605A (ja) | ｓＢＣＭＡバリアントおよびそのＦＣ融合タンパク質 | |
| KR20240053675A (ko) | sBCMA 변이체 및 이의 FC 융합 단백질을 이용한 IgA, IgM 및/또는 IgG의 생산 감소 방법 | |
| RU2819097C2 (ru) | Il-12 гетеродимерные слитые белки fc | |
| KR20240042442A (ko) | 혈액암 치료를 위한 IL15/IL15R 알파 이종이량체 Fc-융합 단백질 | |
| KR20240095463A (ko) | 변형된 IgG1 Fc 도메인 및 그와의 항-CD40 도메인 항체 융합체 |