KR20240040093A - scFv 등의 링커에 결합하는 항체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은, 링커에 대해서 새로운 결합 양식으로 결합하는 항체를 제공한다. 보다 구체적으로는, 본 발명은, scFv 구조에 있어서의 제1 영역과 링커의 연결부에 결합하는 항체, 및 링커와 제2 영역의 연결부에 결합하는 항체를 제공한다.

Description

scFv 등의 링커에 결합하는 항체
본 발명은, scFv 등의 링커에 결합하는 항체에 관한 것이다. 본 발명은, 특히, scFv의 프레임워크 영역과 링커 영역의 연결부에 결합하는 항체로서, scFv의 CDR 영역의 서열에 상관없이, 여러 가지 scFv를 인식할 수 있는 항체에 관한 것이다.
융합 단백질에 있어서, 단백질 사이는 링커를 개재시켜 연결되는 경우가 있다. 링커로서는, G와 S로 이루어지는 GS 링커 등의 플렉시블 링커가 이용되고, 단백질 사이의 연결에 있어서 구조적 제약을 부가하지 않을 것이 일부의 용도에 있어서 요구되고 있다.
항체의 단편으로서 scFv가 알려져 있다. scFv에 있어서는, 항체의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역이 링커를 개재시켜 연결되어 있다. 이와 같은 융합 단백질은, 프로틴 L에 의해 검출할 수 있다. 그러나, 프로틴 L은, 다른 면역글로불린에도 친화성을 가져, scFv에의 특이성이 높지 않기 때문에, 인비보(in vivo)에서의 사용이나, 다른 면역글로불린이 혼재하는 계에서의 사용에는 적합하지 않다(비특허문헌 1). 이와 같은 융합 단백질의 링커에 결합하는 항체가 개발되고 있다. 예를 들어, 특허문헌 1에서는, Whitlow 링커에 대해서 결합하는 항체가 개시되어 있다. 이들 문헌에서는, 링커의 면역원성의 낮음을 회피하기 위해서 프롤린(P)이나 리신(K), 아스파라긴산(D) 등의 아미노산을 링커에 삽입하고 있다.
US2019/0092818A
Hu Y. and Huang J., Front. Immunol. 11:1770, 2020.
본 발명은, scFv 등의 링커에 대해서 결합하는 항체를 제공한다. 보다 구체적으로는, 본 발명은, scFv에 있어서, 항체의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역과 링커의 연결부에 결합하는 항체를 제공한다.
본 발명자들은, 항체의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역과 링커의 연결부에 결합하는 항체를 제작했다. 이것에 의해, 링커 자체의 면역원성의 높이에 상관없이, 링커 주변부에 결합하는 항체를 얻을 수 있음을 발견했다. 얻어진 항체는, scFv의 상보성 결정 영역(CDR) 서열에 상관없이 다양한 scFv에 대해서 결합함을 발견했다. 본 발명은 이와 같은 지견에 기초한다.
본 발명에 의하면, 예를 들어 이하의 발명이 제공된다.
[1] 제1 영역, 링커, 및 제2 영역을 포함하는 scFv에 결합하는 항체로서,
상기 scFv 중에 있어서, 상기 제1 영역, 상기 링커, 및 상기 제2 영역은, N말단측으로부터 C말단측을 향하여 이 순번으로 배치되어 있고,
제1 영역 및 제2 영역은 각각, 항체의 중쇄 가변 영역 및 항체의 경쇄 가변 영역이거나, 또는 항체의 경쇄 가변 영역 및 항체의 중쇄 가변 영역이고,
상기 항체는, 이하 (i)∼(vi)의 적어도 1개를 만족시키는 항체인
{(i) (i-a) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역과, (i-b) 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는다;
(ii) (ii-a) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역과, (ii-b) 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는다;
(iii) 서열 번호 19, 20, 23 및 24의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합한다;
(iv) 서열 번호 19∼24 및 50∼71의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합한다;
(v) (v-a) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역 및/또는 (v-b) 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역(예를 들어, 제1 영역과 링커의 연결부)에 결합한다; 및
(vi) (vi-a) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역, 및/또는 (vi-b) 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역(예를 들어, 링커와 제2 영역과의 연결부)에 결합한다},
항체.
[2] (i) (i-a) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역과, (i-b) 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는, 상기 [1]에 기재된 항체.
[3] (ii) (ii-a) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역과, (ii-b) 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는, 상기 [1]에 기재된 항체.
[4] (iii) 서열 번호 19, 20, 23 및 24의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하는, 상기 [1]에 기재된 항체.
[5] (iv) 서열 번호 19∼24 및 50∼71의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하는, 상기 [1]에 기재된 항체.
[6] (v) (v-a) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역 및/또는 (v-b) 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역(예를 들어, 제1 영역과 링커와의 연결부)에 결합하는, 상기 [1]에 기재된 항체.
[7] (vi) (vi-a) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역, 및/또는 (vi-b) 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역(예를 들어, 링커와 제2 영역의 연결부)에 결합하는, 상기 [1]에 기재된 항체.
[8] (vii) 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서는, 유의한 결합 친화성을 나타내지 않는, 상기 [1]∼[7]의 어느 하나에 기재된 항체.
[9] (viii) 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서도 유의한 결합 친화성을 나타내는, 상기 [1]∼[7]의 어느 하나에 기재된 항체.
[10] 상기 scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)에 결합하는, 상기 [1]∼[9]의 어느 하나에 기재된 항체.
[11] 상기 scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포에 결합하는, 상기 [1]∼[10]의 어느 하나에 기재된 항체.
[12] scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 검출하는 방법으로서, 상기 세포와, 상기 [11]에 기재된 항체를 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
[13] scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 검출하기 위한 키트 또는 검사약으로서, 상기 [11]에 기재된 항체를 포함하는, 키트 또는 검사약.
[14] 대상에 있어서, scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 표적화하는 방법으로서,
대상에게 scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 투여하는 것과,
대상에게 상기 [11]에 기재된 항체를 투여하는 것
을 포함하는, 방법.
[15] scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포가 투여된 대상에 있어서, scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 표적화하는 것에 이용하기 위한 항체 제제로서, 상기 [11]에 기재된 항체를 포함하는, 항체 제제.
[16] scFv에 결합하는 항체를 취득하는 방법(또는 선택 혹은 동정하는 방법)으로서,
scFv는, 제1 영역, 링커, 및 제2 영역을 포함하고, 상기 scFv 중에 있어서, 상기 제1 영역, 상기 링커, 및 상기 제2 영역은, N말단측으로부터 C말단측을 향하여 이 순번으로 배치되어 있고, 제1 영역 및 제2 영역은 각각, 항체의 중쇄 가변 영역 및 항체의 경쇄 가변 영역이거나, 또는 항체의 경쇄 가변 영역 및 항체의 중쇄 가변 영역이고,
방법은, 항체군으로부터, scFv에 결합하는 항체로서, 이하 (i)∼(vi)의 적어도 1개를 만족시키는 항체를 선택 또는 동정하는 것을 포함하는, 방법:
{(i) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역과, 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는다;
(ii) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역과, 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는다;
(iii) 서열 번호 19, 20, 23 및 24의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합한다;
(iv) 서열 번호 19∼24 및 50∼71의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합한다
(v) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역 및 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역에 결합한다; 및
(vi) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역, 및 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역에 결합한다}.
[17] (vii) 항체가, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서는, 유의한 결합 친화성을 나타내지 않는, 상기 [16]에 기재된 방법.
[18] (viii) 항체가, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서도, 유의한 결합 친화성을 나타내는, 상기 [16]에 기재된 방법.
[19] 당해 선별된 항체의 중쇄 CDR1∼3 및 경쇄 CDR1∼3의 아미노산 서열을 갖는 항체를 항체 산생 세포에 산생시키는 것을 추가로 포함하는, 상기 [16]∼[18] 중 어느 한 항에 기재된 방법.
[20] 상기 (vii)을 추가로 만족시키는, 상기 [2]∼[7] 중 어느 하나에 기재된 항체.
[21] 상기 (viii)을 추가로 만족시키는, 상기 [2]∼[7] 중 어느 하나에 기재된 항체.
[22] 제1 영역 또는 제2 영역의 부분 펩타이드를 포함하지 않고, 링커 부분의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드에 대해서는, 결합하지 않거나, 약한 결합 친화성을 가지고서밖에 결합하지 않는, 상기 [2]∼[8] 중 어느 하나에 기재된 항체.
[23] 제1 영역 또는 제2 영역의 부분 펩타이드를 포함하지 않고, 링커 부분의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드에 대해서도 결합하는, 상기 [2]∼[7] 및 [9] 중 어느 하나에 기재된 항체.
[24] 상기 (vii)을 추가로 만족시키는, 상기 [10] 또는 [11]의 어느 하나에 기재된 항체.
[25] 상기 (viii)을 추가로 만족시키는, 상기 [10] 또는 [11]의 어느 하나에 기재된 항체.
[26] 제1 영역 또는 제2 영역의 부분 펩타이드를 포함하지 않고, 링커 부분의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드에 대해서는, 결합하지 않거나, 약한 결합 친화성을 가지고서밖에 결합하지 않는, 상기 [10] 또는 [11]의 어느 하나에 기재된 항체.
[27] 제1 영역 또는 제2 영역의 부분 펩타이드를 포함하지 않고, 링커 부분의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드에 대해서도 결합하는, 상기 [10] 또는 [11]의 어느 하나에 기재된 항체.
[28] scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)에 결합하는, 상기 [20]∼[27] 중 어느 하나에 기재된 항체.
[29] 상기 [20]∼[28] 중 어느 하나에 기재된 항체를 포함하는 조성물.
[30] scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 검출하는 방법으로서, 상기 세포와, 상기 [28]에 기재된 항체를 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
[31] scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 검출하기 위한 키트 또는 검사약으로서, 상기 [28]에 기재된 항체를 포함하는, 키트 또는 검사약.
[32] 대상에 있어서, scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 표적화하는 방법으로서,
대상에게 scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 투여하는 것과,
대상에게 상기 [28]에 기재된 항체를 투여하는 것
을 포함하는, 방법.
[33] scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포가 투여된 대상에 있어서, scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 표적화하는 것에 이용하기 위한 항체 제제로서, 상기 [28]에 기재된 항체를 포함하는, 항체 제제.
[34] 상기 항체군은, 상기 [1]의 (i)∼(iv) 중 어느 하나에 규정된 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [1]에 기재된 항체.
[35] 상기 항체군은, 상기 [1]의 (i)로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [1]의 (i)에 기재된 항체.
[36] 상기 항체군은, 상기 [1]의 (ii)로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [1]의 (ii)에 기재된 항체.
[37] 상기 항체군은, 상기 [1]의 (iii)으로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [1]의 (iii)에 기재된 항체.
[38] 상기 항체군은, 상기 [1]의 (iv)로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [1]의 (iv)에 기재된 항체.
[39] 상기 항체군은, 상기 [16]의 (i)로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [16]의 (i)에 기재된 항체를 선택하는 것을 포함하는, 상기 [16]∼[18]의 어느 하나에 기재된 방법.
[40] 상기 항체군은, 상기 [16]의 (ii)로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [16]의 (ii)에 기재된 항체를 선택하는 것을 포함하는, 상기 [16]에 기재된 방법.
[41] 상기 항체군은, 상기 [16]의 (iii)으로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [16]의 (iii)에 기재된 항체를 선택하는 것을 포함하는, 상기 [16]에 기재된 방법.
[42] 상기 항체군은, 상기 [16]의 (iv)로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [16]의 (iv)에 기재된 항체를 선택하는 것을 포함하는, 상기 [16]에 기재된 방법.
[43] 상기 항체군은, 상기 [16]의 (i)로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [16]의 (i)에 기재된 항체로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서는, 유의한 결합 친화성을 나타내지 않는 항체를 선택하는 것을 포함하는, 상기 [17]에 기재된 방법.
[44] 상기 항체군은, 상기 [16]의 (ii)로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [16]의 (ii)에 기재된 항체로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서는, 유의한 결합 친화성을 나타내지 않는 항체를 선택하는 것을 포함하는, 상기 [17]에 기재된 방법.
[45] 상기 항체군은, 상기 [16]의 (iii)으로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [16]의 (iii)에 기재된 항체로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서는, 유의한 결합 친화성을 나타내지 않는 항체를 선택하는 것을 포함하는, 상기 [17]에 기재된 방법.
[46] 상기 항체군은, 상기 [16]의 (iv)로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [16]의 (iv)에 기재된 항체로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서는, 유의한 결합 친화성을 나타내지 않는 항체를 선택하는 것을 포함하는, 상기 [17]에 기재된 방법.
[47] 상기 항체군은, 상기 [16]의 (i)로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [16]의 (i)에 기재된 항체로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서도 유의한 결합 친화성을 나타내는 항체를 선택하는 것을 포함하는, 상기 [18]에 기재된 방법.
[48] 상기 항체군은, 상기 [16]의 (ii)로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [16]의 (ii)에 기재된 항체로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서도 유의한 결합 친화성을 나타내는 항체를 선택하는 것을 포함하는, 상기 [18]에 기재된 방법.
[49] 상기 항체군은, 상기 [16]의 (iii)으로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [16]의 (iii)에 기재된 항체로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서도 유의한 결합 친화성을 나타내는 항체를 선택하는 것을 포함하는, 상기 [18]에 기재된 방법.
[50] 상기 항체군은, 상기 [16]의 (iv)로 규정될 수 있는, 단리 단쇄 펩타이드로 비인간 포유동물을 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있는, 상기 [16]의 (iv)에 기재된 항체로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서도 유의한 결합 친화성을 나타내는 항체를 선택하는 것을 포함하는, 상기 [18]에 기재된 방법.
[51] scFv에 결합하는 항체로서, 서열 번호 92에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 93에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 94에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 96에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 97에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 98에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체.
[52] scFv에 결합하는 항체로서, 서열 번호 100에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 101에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 102에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 104에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 105에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 106에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체.
[53] 서열 번호 91에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 95에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 상기 [51]에 기재된 항체.
[54] 서열 번호 99에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 103에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 상기 [52]에 기재된 항체.
[55] scFv에 결합하는 항체를 취득(또는 선택 혹은 동정하는) 방법으로서,
scFv는, 제1 영역, 링커, 및 제2 영역을 포함하고, 상기 scFv 중에 있어서, 상기 제1 영역, 상기 링커, 및 상기 제2 영역은, N말단측으로부터 C말단측을 향하여 이 순번으로 배치되어 있고, 제1 영역 및 제2 영역은 각각, 항체의 중쇄 가변 영역 및 항체의 경쇄 가변 영역이거나, 또는 항체의 경쇄 가변 영역 및 항체의 중쇄 가변 영역이고,
방법은, 항체군으로부터, scFv에 결합하는 항체를 선택 또는 동정하는 것을 포함하고, 항체군은, 상기 [53]에 기재된 항체와 scFv와의 결합에 관해서 경합하는 항체군인, 방법.
[56] scFv에 결합하는 항체를 취득(또는 선택 혹은 동정하는) 방법으로서,
scFv는, 제1 영역, 링커, 및 제2 영역을 포함하고, 상기 scFv 중에 있어서, 상기 제1 영역, 상기 링커, 및 상기 제2 영역은, N말단측으로부터 C말단측을 향하여 이 순번으로 배치되어 있고, 제1 영역 및 제2 영역은 각각, 항체의 중쇄 가변 영역 및 항체의 경쇄 가변 영역이거나, 또는 항체의 경쇄 가변 영역 및 항체의 중쇄 가변 영역이고,
방법은, 항체군으로부터, scFv에 결합하는 항체를 선택 또는 동정하는 것을 포함하고, 항체군은, 상기 [54]에 기재된 항체와 scFv와의 결합에 관해서 경합하는 항체군인, 방법.
[57] 천연(생체 내)의 면역글로불린에 실질적으로 결합하지 않는, 상기 어느 하나에 기재된 항체.
[58] VH-L1-VL형 scFv와는 실질적으로 결합하지 않고, VL-L1-VH형 scFv와 결합하는, 상기 어느 하나에 기재된 항체.
[59] VL-L1-VH형 scFv와는 실질적으로 결합하지 않고, VH-L1-VL형 scFv와 결합하는, 상기 어느 하나에 기재된 항체.
[60] VH-L2-VL형 scFv와는 실질적으로 결합하지 않고, VL-L2-VH형 scFv와 결합하는, 상기 어느 하나에 기재된 항체.
[61] VL-L2-VH형 scFv와는 실질적으로 결합하지 않고, VH-L2-VL형 scFv와 결합하는, 상기 어느 하나에 기재된 항체.
[62] 천연(생체 내)의 면역글로불린에 실질적으로 결합하지 않는, 상기 [58]에 기재된 항체.
[63] 천연(생체 내)의 면역글로불린에 실질적으로 결합하지 않는, 상기 [59]에 기재된 항체.
[64] 천연(생체 내)의 면역글로불린에 실질적으로 결합하지 않는, 상기 [60]에 기재된 항체.
[65] 천연(생체 내)의 면역글로불린에 실질적으로 결합하지 않는, 상기 [61]에 기재된 항체.
[66] 인간 키메라 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체인, 상기 어느 하나에 기재된 항체.
[67] 비인간 동물 항체인, 상기 어느 하나에 기재된 항체.
[68] 상기 어느 하나에 기재된 항체를 포함하는 조성물.
[69] 상기 [57]에 기재된 항체를 포함하는 조성물.
[70] scFv를 검출하는 것에 이용하기 위한 상기 [68]에 기재된 조성물.
[71] 인간 체내에 있어서 scFv를 검출하는 것에 이용하기 위한 상기 [68]에 기재된 조성물.
[72] 인간 체내에 있어서 scFv를 표적화하는 것에 이용하기 위한 상기 [68]에 기재된 조성물.
[73] 인비보에 있어서 scFv를 검출하는 것에 이용하기 위한 상기 [68]에 기재된 조성물.
[74] scFv를 검출하는 것에 이용하기 위한 상기 [69]에 기재된 조성물.
[75] 인간 체내에 있어서 scFv를 검출하는 것에 이용하기 위한 상기 [69]에 기재된 조성물.
[76] 인간 체내에 있어서 scFv를 표적화하는 것에 이용하기 위한 상기 [69]에 기재된 조성물.
[77] 인비보에 있어서 scFv를 검출하는 것에 이용하기 위한 상기 [69]에 기재된 조성물.
[78] 상기 [62]∼[65]의 어느 하나에 기재된 항체를 포함하는 조성물.
[79] scFv를 검출하는 것에 이용하기 위한 상기 [78]에 기재된 조성물.
[80] 인간 체내에 있어서 scFv를 검출하는 것에 이용하기 위한 상기 [78]에 기재된 조성물.
[81] 인간 체내에 있어서 scFv를 표적화하는 것에 이용하기 위한 상기 [78]에 기재된 조성물.
[82] 인비보에 있어서 scFv를 검출하는 것에 이용하기 위한 상기 [78]에 기재된 조성물.
[도 1] 도 1은, 일반적인 scFv의 구조와, 본 발명의 항체의 예로서 항체 1과 2가 나타나 있다. 도 1에서는, 항체 1은, 제1 영역과 링커의 연결부에 결합하는 양상이 나타나고, 항체 2는, 링커와 제2 영역의 연결부에 결합하는 양상이 나타나 있다.
[도 2] 도 2는, scFv를 포함하는 항원 결합성 화합물의 일례로서, 다양한 scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포에 대한 본 발명에 있어서의 예시적 항체와의 결합 친화성을 나타낸다. 도 2에서는, VH-L1-VL형 scFv에 대한 항체를 몇몇 하이브리도마 클론의 배양 상청으로부터 회수하여 CAR-T 세포와의 결합성을 확인했다. 도 2에서는, 결합 친화성이 강할수록 PE의 강도가 강해진다. CAR-T 세포로서는, S＃031, ＃673, 및 ＃530이 이용되었다. 이들 CAR-T 세포의 상세는, 표 5에 기재되는 바와 같다.
[도 3] 도 3은, scFv를 포함하는 항원 결합성 화합물의 일례로서, 다양한 scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포에 대한 본 발명에 있어서의 예시적 항체와의 결합 친화성을 나타낸다. 도 3에서는, VH-L1-VL형 scFv에 대한 항체를 몇몇 하이브리도마 클론의 배양 상청으로부터 회수하여 CAR-T 세포와의 결합성을 확인했다. 도 3에서는, 결합 친화성이 강할수록 PE의 강도가 강해진다. CAR-T 세포로서는, S＃067, S＃075, 및 ＃231이 이용되었다. 이들 CAR-T 세포의 상세는, 표 5에 기재되는 바와 같다.
[도 4] 도 4는, scFv를 포함하는 항원 결합성 화합물의 일례로서, 다양한 scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포에 대한 본 발명에 있어서의 예시적 항체와의 결합 친화성을 나타낸다. 도 4에서는, VH-L1-VL형 scFv에 대한 항체를 몇몇 하이브리도마 클론의 배양 상청으로부터 회수하여 CAR-T 세포와의 결합성을 확인했다. 도 4에서는, 결합 친화성이 강할수록 PE의 강도가 강해진다. CAR-T 세포로서는, ＃673, 및 S＃017이 이용되었다. 이들 CAR-T 세포의 상세는, 표 5에 기재되는 바와 같다.
[도 5] 도 5는, scFv를 포함하는 항원 결합성 화합물의 일례로서, 다양한 scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포에 대한 본 발명에 있어서의 예시적 항체와의 결합 친화성을 나타낸다. 도 4에서는, VL-L1-VH형 scFv에 대한 항체를 몇몇 하이브리도마 클론의 배양 상청으로부터 회수하여 CAR-T 세포와의 결합성을 확인했다. 도 5에서는, 결합 친화성이 강할수록 PE의 강도가 강해진다. CAR-T 세포로서는, S＃067, S＃075, ＃231, 및 S＃031이 이용되었다. 이들 CAR-T 세포의 상세는, 표 5에 기재되는 바와 같다.
＜정의＞
본 명세서에서는, 「포함하는」(comprise)은, 「로 이루어지는」(consist of)을 포함하는 의미로 이용된다. 「포함하는」은, 포함되는 것 이외의 구성 요소를 포함하고 있어도 됨을 의미하고, 「로 이루어지는」은, 포함되는 것 이외의 구성 요소는 본질적으로는 포함하지 않음을 의미한다. 「만으로 이루어지는」은, 포함되는 것 이외의 구성 요소를 포함하지 않음을 의미한다.
본 명세서에서는, 「대상」은, 포유동물이며, 예를 들어, 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트), 개, 고양이, 소, 말, 돼지, 영장류(예를 들어, 원숭이, 고릴라, 오랑우탄, 보노보, 침팬지 및 인간)일 수 있고, 예를 들어, 인간일 수 있다.
본 명세서에서는, 「처치」란, 치료(치료적 처치)와 예방(예방적 처치)을 포함하는 의미로 이용된다. 본 명세서에서는, 「치료」란, 질환 혹은 장애의 치료, 치유, 방지 혹은, 관해의 개선, 또는, 질환 혹은 장애의 진행 속도의 저감을 의미한다. 본 명세서에서는, 「예방」이란, 질환 혹은 병태의 발증의 가능성을 저하시키거나, 또는 질환 혹은 병태의 발증을 늦추는 것을 의미한다.
본 명세서에서는, 「질환」이란, 치료가 유익한 증상을 의미한다. 본 명세서에서는, 「암」이란 악성 종양을 의미한다.
본 명세서에서는, 「치료상 유효량」이란, 질환이나 상태를 처치(예방 또는 치료)하기 위해서 유효한 약제의 양을 의미한다. 치료상 유효량의 약제는, 질환 또는 상태의 증상의 악화 속도를 저하시키는 것, 상기 증상의 악화를 멈추는 것, 상기 증상을 개선하는 것, 상기 증상을 치유하는 것, 또는 상기 증상의 발증 또는 발전을 억제하는 것이 가능하다.
본 명세서에서는, 「항체」는, 면역글로불린을 의미한다. 항체는, 일반적으로, 한 쌍의 다이설파이드 결합으로 안정화된 2본의 중쇄(H쇄)와 2본의 경쇄(L쇄)가 회합한 구조를 취한다. 중쇄는, 중쇄 가변 영역 VH, 중쇄 정상 영역 CH1, CH2, CH3, 및 CH1과 CH2의 사이에 위치하는 힌지 영역으로 이루어지고, 경쇄는, 경쇄 가변 영역 VL과 경쇄 정상 영역 CL로 이루어진다. 이 중에서, VH와 VL로 이루어지는 가변 영역 단편(Fv)이, 항원 결합에 직접 관여하여, 항체에 다양성을 주는 영역이다. 또한, VL, CL, VH, CH1로 이루어지는 항원 결합 영역을 Fab 영역이라고 부르고, 힌지 영역, CH2, CH3으로 이루어지는 영역을 Fc 영역이라고 부른다. 가변 영역 중, 직접 항원과 접촉하는 영역은 특히 변화가 크고, 상보성 결정 영역(complementarity-determining region: CDR)이라고 불린다. CDR 이외의 비교적 변이가 적은 부분을 프레임워크(framework region: FR)라고 부른다. 경쇄와 중쇄의 가변 영역에는, 각각 3개의 CDR이 존재하고, 각각 N말단측으로부터 순차로, 중쇄 CDR1∼3 및 경쇄 CDR1∼3으로 불린다. 항체는, 다양한 아이소타입의 항체일 수 있고, 예를 들어, IgG일 수 있다. 항체는, 인간 키메라 항체, 인간화 항체, 또는 인간 항체일 수 있다. 인간 키메라 항체는, 비인간 항체의 정상 영역을 인간 항체의 정상 영역으로 치환하는 것에 의해 제작될 수 있다. 인간화 항체는, 비인간 항체의 6개의 CDR 이외의 영역을, 인간 항체의 대응하는 영역으로 치환하는 것에 의해 제작될 수 있다. 인간 항체는, 면역글로불린의 적어도 중쇄 가변 영역을 인간의 유전자자리의 대응하는 영역으로 치환한 동물(예를 들어, 마우스)을 이용하여 제작할 수 있다. 정상 영역이 비인간인 경우에는, 정상 영역을 인간의 항체의 아미노산 서열로 치환함으로써 인간 항체를 얻을 수 있다. 항체는, 일반적으로, 그 항원에 대해서 선택적으로, 또는 특이적으로 결합할 수 있다.
본 명세서에서는, 「CDR」은, 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역에 존재하는 상보성 결정 영역이다. 중쇄 및 경쇄 가변 영역에, 각각 3개 존재하고, N말단으로부터 CDR1, CDR2, 및 CDR3으로 불린다. 중쇄 가변 영역에 존재하는 CDR은, 중쇄 CDR1∼3(HCDR1∼3)으로 불린다. 경쇄 가변 영역에 존재하는 CDR은, 경쇄 CDR1∼3(LCDR1∼3)으로 불린다. CDR은, 예를 들어, Kabat 등의 번호 붙이기(Kabat, E. A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., 1991, Bethesda: US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH.), Chothia, AbM, contact, IMGT, Aho, Martin(Enhanced Chothia) 등에 기초하여 결정될 수 있다. 이와 같이 하여, 중쇄 CDR1∼3 및 경쇄 CDR1∼3은 각각, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열에 기초하여 통상적 방법에 기초하여 추정될 수 있다.
본 명세서에서는, 「scFv」는, 중쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역과 경쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역을 갖는 항체의 항원 결합성 단편이다. scFv에 있어서는, 중쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역과 경쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역이 링커를 개재시켜 연결되어 있다. 본 명세서에서는, scFv는, 도 1에 나타나는 바와 같이 N말단측으로부터 C말단측을 향하여 제1 영역, 링커, 및 제2 영역을 이 순번으로 갖는다. 제1 영역은, 중쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역일 수 있고, 제2 영역은, 경쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역일 수 있다. 혹은, 제1 영역은, 경쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역일 수 있고, 제2 영역은, 중쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역일 수 있다. 링커로서는, 일반적으로는 플렉시블 링커가 바람직하게 이용된다. scFv에 있어서는, 중쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역과 경쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역은, 면역한 동물의 항체에서 유래하는 서열을 포함할 수 있다. scFv에 있어서는, 중쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역과 경쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역은, 인간화되어 있어도 된다. scFv에 있어서는, 중쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역과 경쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역은, 인간 항체의 중쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역과 경쇄 가변 영역 또는 그 항원 결합 영역일 수 있다. scFv는, 항원 결합성 화합물에 그 일부로서 짜 넣어져 있는 경우가 있고, scFv는, 당해 항원 결합성 화합물 중에서는 항원 결합 부위로서 기능할 수 있다.
본 명세서에서는, 「제1 영역과 링커의 연결부에 결합하는 항체」에는, 제1 영역에만 결합하는 항체, 링커에만 결합하는 항체, 및 제1 영역과 링커의 양쪽에 결합하는 항체(예를 들어, 링커만의 구축물에 결합하지 않고, 제1 영역만의 구축물에 결합하지 않는 항체)가 포함될 수 있다. 본 명세서에서는, 「제2 영역과 링커의 연결부에 결합하는 항체」에는, 제2 영역에만 결합하는 항체, 링커에만 결합하는 항체, 및 제2 영역과 링커의 양쪽에 결합하는 항체(예를 들어, 링커만의 구축물에 결합하지 않고, 제2 영역만의 구축물에 결합하지 않는 항체)가 포함될 수 있다. 본 명세서에서는, 「제1 영역과 링커의 연결부」 및 「제2 영역과 링커의 연결부」 및 유사한 표현에 있어서의 「연결부」는, 항체의 항원 결합성 단편(예를 들어, scFv)의 프레임워크 영역과 링커를 포함한다. 프레임워크만의 구축물에 결합하는 항체는, 천연의 이뮤노글로불린에도 결합할 가능성이 있다. 예를 들어, 인비보로 투여하는 항체가, 천연의 이뮤노글로불린에는 실질적으로 결합하지 않을 것이 요구되는 경우에는, 당해 항체는, 천연의 이뮤노글로불린에는 실질적으로 결합하지 않는 것이 바람직하고, 예를 들어, 프레임워크 영역만의 구축물에는 실질적으로 결합하지 않는 것이 바람직하다. 또한, 개체에 투여하는 항체는, 특히, 제2 영역과 링커의 연결부에 결합하지만, 링커만의 구축물에 결합하지 않고, 제1 영역만의 영역 또는 제2 영역만의 구축물에 결합하지 않는 항체인 것이 바람직하다. 항체의 결합 특성은, 각각의 영역을 포함하는 펩타이드와 항체의 결합을 시험하는 것에 의해 확인할 수 있다. 또한, 개체에 투여하는 항체는, 항체 단편의 CDR 이외의 서열이 투여되는 개체의 서열로 치환하는 것이 바람직하다. 이 관점에서, 인간에게 투여되는 항체는, 바람직하게는 인간 키메라 항체, 보다 바람직하게는 인간화 항체, 더 바람직하게는 인간 항체일 수 있다. 인비트로(in vitro)로 이용하는 항체에는, 특별히 그와 같은 제약은 없고, 연결부에 결합하는 항체(예를 들어, 비인간 동물 항체, 비인간 포유동물 항체, 인간 키메라 항체, 인간화 항체, 및 인간 항체)를 인비보로 바람직하게 이용할 수 있다.
본 명세서에서는, 「단리」란, 계에 존재하는 적어도 1 이상의 다른 성분과 분리하는 것을 의미한다.
본 명세서에서는, 「키메라 항원 수용체」(CAR)는, 항체의 항원 결합성 단편(특히, scFv)과 면역 세포의 활성화 도메인을 갖는 키메라 분자이다. CAR은, 일반적으로는, scFv, 세포외 힌지 도메인, 막관통 도메인(예를 들어, CD8α 또는 CD28), 및 활성화 시그널 전달 도메인(예를 들어, CD3ζ)이 연결되어 이루어지는 분자이다. CAR은, 세포에 도입하여, 세포 표면에 발현시킬 수 있다. CAR을 발현한 세포는 특정의 항원에 대해서 표적화할 수 있다. CAR은, 예를 들어, T 세포 또는 NK 세포 등의 면역 세포에 도입되어, T 세포 또는 NK 세포 등의 면역 세포를 암에 표적화한다. 제1세대 CAR에서는, scFv, 세포외 힌지 도메인, 막관통 도메인(예를 들어, CD8α 또는 CD28), 및 활성화 시그널 전달 도메인(예를 들어, CD3ζ)이 연결되어 있었지만, 제2세대 CAR은, CAR이 도입된 면역 세포 활성화를 위해서, 공자극 분자 시그널 전달 도메인을 추가로 포함한다. 공자극 분자 시그널 전달 도메인으로서는, CD28, 4-1BB, OX40, CD27, 및 ICOS 등의 공자극 인자가 이용되고 있다. 제3세대 CAR에서는, 공자극 인자가 복수 짜 넣어져 있다. 이와 같이, CAR에 있어서는, CAR을 도입한 면역 세포를 생체 내에서 지속적으로 증식시키기 위한 개량이 더해져 오고 있다. scFv 부분 이외의 어느 도메인도 인간 단백질 유래인 것이 바람직하다.
＜본 발명의 scFv를 검출할 수 있는 항체＞
본 발명에 의하면, scFv에 결합하는 항체가 제공된다. 본 발명의 항체는, 다양한 항원에 대한 scFv에 결합시키기 위해서, 링커 부근(특히, 제1 영역과 링커의 연결부, 또는 링커와 제2 영역의 연결부)에 결합하도록 설계되어 있다.
모든 태양에 있어서, scFv는, 인간 중쇄 가변 영역 및 인간 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역을 바람직하게 가질 수 있다. 바람직한 태양에 있어서, scFv는, 인간 항체 유래의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 가질 수 있다.
＜1＞ 제1 영역과 링커의 연결부에 결합하는 항체
본 발명자들은, 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리 단쇄 펩타이드(예를 들어, 10∼20아미노산 길이, 예를 들어, 13∼20아미노산을 갖는다)를 항원으로서 이용하여 취득할 수 있는 항체가, 다양한 항원에 대한 scFv에 결합함을 발견했다. 링커가 플렉시블 링커인 경우에는, 링커에 대해서 결합하는 항체를 취득하는 것은 용이하지 않은 경우가 있지만, 본 발명에 의하면, 링커로서 플렉시블 링커를 이용했을 경우여도, 제1 영역 또는 제2 영역의 면역원성 때문에 링커 부근에 결합하는 항체를 양호하게 취득할 수 있다.
즉, 본 발명에서는, 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역을 포함하는 단리 단쇄 펩타이드에 결합하는 항체가, 제공된다. 단쇄 펩타이드는, 바람직하게는 scFv의 부분 펩타이드일 수 있다.
중쇄 CDR3(HCDR3)보다 C말단측의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은, 예를 들어, WGQGTLVTVSS(서열 번호 1), WGQGTLVTVSS(서열 번호 2), WGQGTLVTVSS(서열 번호 3), WGQGTTLTVS(서열 번호 4), WGQGTTVTVSSGILGS(서열 번호 5), GQGTLVTVSS(서열 번호 109), GAGTTVTVSS(서열 번호 110), GQGTLVTVSA(서열 번호 111), GQGTLVTVSS(서열 번호 117), GQGTTVTVSSGILGS(서열 번호 118), 및 GQGTLVTVSS(서열 번호 119)로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있다. 따라서, 단쇄 펩타이드는, 이들 서열의 C말단측으로부터 1∼10아미노산, 바람직하게는 1∼5아미노산, 예를 들어, 3∼5아미노산(예를 들어, VSS, TVSS, VTVSS(서열 번호 6), 혹은, VTVSA(서열 번호 120); TVS, LTVS, 혹은 TLTVS(서열 번호 79); 또는, LGS, ILGS, 혹은 GILGS(서열 번호 80))을 포함하도록 설계될 수 있다. 그리고, 항체는, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산을 포함하는 영역, 바람직하게는, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼5아미노산(예를 들어, 1아미노산, 1∼2아미노산, 1∼3아미노산, 1∼4아미노산, 또는 1∼5아미노산)의 영역에 결합할 수 있다.
경쇄 CDR3(LCDR3)보다 C말단측의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은, 예를 들어, FGGGTKLEIK(서열 번호 7), FGAGTKLELKR(서열 번호 8), FGGGTQLTVLS(서열 번호 9), FGGGTKVEIK(서열 번호 81), FGGGTKVEIK(서열 번호 107), FGGGTKLEIK(서열 번호 108), FGGGTKVEIK(서열 번호 112), FGGGTKLEIK(서열 번호 113), FGGGTKLEIK(서열 번호 114), FGGGTKLEIK(서열 번호 115), 및 FGGGTKVEIK(서열 번호 116)로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있다. 따라서, 단쇄 펩타이드는, 이들 서열의 C말단측으로부터 1∼10아미노산, 바람직하게는 1∼5아미노산, 예를 들어, 3∼5아미노산(예를 들어, EIK, LEIK, 혹은 KLEIK(서열 번호 10); LKR, ELKR, 혹은 LELKR(서열 번호 11); VLS, TVLS, 혹은 LTVLS(서열 번호 12); 또는, EIK, VEIK, 혹은 KVEIK(서열 번호 82))을 포함하도록 설계될 수 있다. 그리고, 항체는, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산을 포함하는 영역, 바람직하게는, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼5아미노산(예를 들어, 1아미노산, 1∼2아미노산, 1∼3아미노산, 1∼4아미노산, 또는 1∼5아미노산)의 영역에 결합할 수 있다.
본 발명의 어느 바람직한 태양에서는, (a) 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역과, (b) 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 면역원으로서 이용하여 항체를 취득할 수 있다. 이와 같이 함으로써, 제1 영역과 링커의 연결부에 대한 항체가 얻어질 수 있다. 이 태양에 있어서, 상기 단리 단쇄 펩타이드에는, (a) 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역, 바람직하게는 1∼5아미노산, 예를 들어, 3∼5아미노산(예를 들어, VTV, TVS, VSS, VTVS, TVSS, VTVSS(서열 번호 6), 혹은, VTVSA(서열 번호 120); TVS, LTVS, 혹은 TLTVS(서열 번호 79); 또는, LGS, ILGS, 혹은 GILGS(서열 번호 80))을 포함하도록 설계될 수 있다. 이 태양에 있어서, 상기 단리 단쇄 펩타이드에는, (b) 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역, 바람직하게는 1∼8아미노산, 예를 들어, 3∼8아미노산(예를 들어, 1아미노산, 2아미노산, 3아미노산, 4아미노산, 5아미노산, 6아미노산, 7아미노산, 또는 8아미노산)을 포함하도록 설계될 수 있다. 이 태양에 있어서, 상기 단리 단쇄 펩타이드에는, (b) 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역, 바람직하게는 1∼8아미노산, 예를 들어, 3∼8아미노산(예를 들어, GGG, GGGG, GGGGS(서열 번호 13) 혹은 GGGGSG(서열 번호 14); 또는, SSA, SAD, SSAD, SADD, SSADD(서열 번호 15), SSADDA(서열 번호 16), SSADDAK(서열 번호 17), 혹은 SSADDAKK(서열 번호 18) 등의 3아미노산, 4아미노산, 5아미노산, 6아미노산, 7아미노산, 또는 8아미노산)을 포함하도록 설계될 수 있다. 어느 태양에 있어서, 상기 단리 단쇄 펩타이드에는, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼5아미노산과 링커의 N말단측으로부터 3∼8아미노산이 포함될 수 있다. 바람직한 태양에서는, 상기 단리 단쇄 펩타이드에는, 제1 영역의 C말단으로부터 적어도 3∼5아미노산(예를 들어, VTV, TVS, VSS, VTVS, TVSS, 또는 VTVSS(서열 번호 6))과 링커의 N말단측으로부터 적어도 3∼8아미노산(예를 들어, GGG, GGGG, GGGGS(서열 번호 13) 혹은 GGGGSG(서열 번호 14), SSA, SAD, SSAD, SADD, 또는 SSADD(서열 번호 15), SSADDA(서열 번호 16), SSADDAK(서열 번호 17), 혹은 SSADDAKK(서열 번호 18)을 포함하는 펩타이드를 들 수 있다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 이하 표 1의 1∼16의 어느 하나를 포함할 수 있다.
Figure pct00001
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는,
서열 번호 19: VTVSSSSADDAKK의 아미노산 서열
을 포함할 수 있다. 이 태양에서는, 단쇄 펩타이드는, 중쇄 가변 영역의 C말단측과 링커의 N말단측이 연결된 영역을 포함한다. 어느 바람직한 태양에서는, 본 명세서에서 개시되는 단리 단쇄 펩타이드에는, N말단과 C말단에 각각 1∼3아미노산(예를 들어, 각각 2아미노산 및 1아미노산, 예를 들어, 각각 GG 및 C)을 부가할 수 있다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는,
서열 번호 20: VTVSSGGGGSG의 아미노산 서열
을 포함할 수 있다. 이 태양에서는, 단쇄 펩타이드는, 중쇄 가변 영역의 C말단측과 링커의 N말단측이 연결된 영역을 포함한다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는,
서열 번호 21: GGVTVSSSSADDAKKC의 아미노산 서열, 또는
서열 번호 22: GGVTVSSGGGGSGC에 기재된 아미노산 서열
일 수 있다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는,
서열 번호 23: LEIKSSADDAKK의 아미노산 서열
을 포함할 수 있다. 이 태양에서는, 단쇄 펩타이드는, 경쇄 가변 영역의 C말단측과 링커의 N말단측이 연결된 영역을 포함한다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는,
서열 번호 24: LEIKGGGGSG의 아미노산 서열
을 포함할 수 있다. 이 태양에서는, 단쇄 펩타이드는, 경쇄 가변 영역의 C말단측과 링커의 N말단측이 연결된 영역을 포함한다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는,
서열 번호 70: GGLEIKSSADDAKKC의 아미노산 서열, 또는
서열 번호 71: GGLEIKGGGGSGC의 아미노산 서열
일 수 있다.
어느 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, 상기의 단리 단쇄 펩타이드에 결합할 수 있고, 또한, scFv에 결합할 수 있다. scFv는, 어느 태양에서는, 다른 항원 결합성 화합물(예를 들어, CAR 분자)에 짜 넣어진 형태일 수 있다. 항원 결합성 화합물로서는, scFv를 항원 결합성 부분으로서 포함하는 모든 단백질 분자를 들 수 있고, 특별히 한정되지 않지만 예를 들어, CAR, IgG-scFv(IgG 분자의 Fc 영역에 scFv가 연결된 분자), scFv-Fc(항체의 가변 영역이 scFv로 치환된 분자), scFv2-Fc(항체의 가변 영역이 scFv로 치환되어 있고, 또한 Fc 영역에 scFv가 연결된 분자), scFv-HSA-scFv(인간 혈청 알부민의 N말단과 C말단 각각에 scFv가 연결된 분자), Fab-scFv-Fc(항체의 가변 영역 각각이 Fab 및 scFv로 치환되어 있고, 또한 Fc 영역에 Fab와 scFv가 연결된 분자), Fab-scFv(Fab에 scFv가 연결된 분자), 및 BiTE(2개의 scFv가 연결된 분자)를 들 수 있다.
scFv에 있어서, 어느 태양에서는, 링커는, 10∼40아미노산 길이, 예를 들어, 15∼25아미노산 길이일 수 있다.
scFv에 있어서, 어느 태양에서는, 링커는, 플렉시블 링커일 수 있다. 플렉시블 링커로서는, GGGGSGGGGS(서열 번호 25), GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 26), GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 27) 및 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 28)등의 G와 S를 포함하는 링커, 및 SSADDAKKDAAKKDDAKKDDAKKDG(서열 번호 29)를 들 수 있다.
어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 상기의 단리 단쇄 펩타이드에 결합할 수 있고, 또한, scFv에 결합할 수 있다. 더하여, 본 발명의 항체는, 상기 단리 단쇄 펩타이드에 있어서의 제1 영역과 링커의 연결부를 인식할 수 있다.
어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 제1 영역만을 포함하는 펩타이드, 및 링커만을 포함하는 펩타이드에는, 상기의 단리 단쇄 펩타이드에 대한 결합 친화성보다도 약한 결합 친화성(예를 들어, 50% 이하, 40% 이하, 30% 이하, 20% 이하, 10% 이하, 또는 1% 이하, 1/1000 이하, 또는 1/10000 이하)으로 결합하거나, 또는 유의한 결합 친화성을 갖지 않는다. 혹은, 본 발명의 항체는, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번(즉, 제1 영역과 제2 영역)을 바꿔 넣은 scFv에 대해서는, 제1 영역과 링커와 제2 영역이 이 순번으로 연결된 scFv에 대한 약한 결합 친화성(예를 들어, 50% 이하, 40% 이하, 30% 이하, 20% 이하, 10% 이하, 또는 1% 이하, 1/1000 이하, 또는 1/10000 이하)으로 결합하거나, 또는 유의한 결합 친화성을 갖지 않는다. 혹은, 결합 친화성이 약하다는 것이란, 예를 들어, 결합 해리 상수 KD에 있어서, 비교 대상이 되는 결합의 KD치의 1배를 초과하는, 1.1배 이상, 1.2배 이상, 1.3배 이상, 1.4배 이상, 1.5배 이상, 2배 이상, 3배 이상, 4배 이상, 5배 이상, 6배 이상, 7배 이상, 8배 이상, 9배 이상, 10배 이상, 100배 이상, 또는 1000배 이상의 KD치를 갖는 것을 의미할 수 있다.
＜2＞ 링커와 제2 영역의 연결부에 결합하는 항체
상기에 있어서는, 제1 영역과 링커의 연결부에 결합하는 항체를 기술했지만, 링커와 제2 영역의 연결부에 결합하는 항체도 마찬가지로 유익하게 가질 수 있다.
본 발명의 어느 태양에서는, 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 단쇄 펩타이드에 결합하는 항체가 제공될 수 있다.
본 발명의 어느 태양에서는, (c) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역과, (d) 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 단쇄 펩타이드(예를 들어, 10∼20아미노산 길이, 예를 들어, 13∼20아미노산을 갖는다)에 결합하는 항체가 제공될 수 있다.
중쇄 CDR1(HCDR1)보다 N말단측의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은, 예를 들어, QVTLKESGPA(서열 번호 30), QVQLVQSGAE(서열 번호 31), EVQLVQSGAE(서열 번호 32), SQVQLKESGP(서열 번호 33), 및 QVQLQQSGPG(서열 번호 34)를 포함할 수 있다. 따라서, 단쇄 펩타이드는, 이들 서열의 C말단측으로부터 1∼10아미노산, 바람직하게는 1∼5아미노산, 예를 들어, 3∼5아미노산(예를 들어, VTVSS(서열 번호 6))을 포함하도록 설계될 수 있다. 그리고, 항체는, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산을 포함하는 영역, 바람직하게는, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼5아미노산(예를 들어, 1아미노산, 1∼2아미노산, 1∼3아미노산, 1∼4아미노산, 또는 1∼5아미노산)의 영역에 결합할 수 있다.
경쇄 CDR1보다 N말단측의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은, 예를 들어, DIVMTQSPLS(서열 번호 35), DIVMTQSPDS(서열 번호 36), DIQLTQSPSS(서열 번호 37), DIQMTQSPKF(서열 번호 38), 및 QPVLTQSSSL(서열 번호 39)을 포함할 수 있다. 따라서, 단쇄 펩타이드는, 이들 서열의 N말단측으로부터 1∼10아미노산, 바람직하게는 1∼5아미노산, 예를 들어, 3∼5아미노산(예를 들어, VTVSS(서열 번호 6))을 포함하도록 설계될 수 있다. 그리고, 항체는, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산을 포함하는 영역, 바람직하게는, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼5아미노산(예를 들어, 1아미노산, 1∼2아미노산, 1∼3아미노산, 1∼4아미노산, 또는 1∼5아미노산)의 영역에 결합할 수 있다.
본 발명의 어느 바람직한 태양에서는, (c) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역과, (d) 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 면역원으로서 이용하여 항체를 취득할 수 있다. 이와 같이 함으로써, 제2 영역과 링커의 연결부에 대한 항체가 얻어질 수 있다. 이 태양에 있어서, 상기 단리 단쇄 펩타이드에는, (c) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역, 바람직하게는 1∼8아미노산, 예를 들어, 3∼8아미노산(예를 들어, GGS, GGGS, GGGGS(서열 번호 13), 혹은 SGGGGS(서열 번호 40), 또는 KDG, KKDG, AKKDG(서열 번호 41), DAKKDG(서열 번호 42), DDAKKDG(서열 번호 43), 혹은 KDDAKKDG(서열 번호 44) 등의 3아미노산, 4아미노산, 5아미노산, 6아미노산, 7아미노산, 또는 8아미노산)을 포함하도록 설계될 수 있다. 이 태양에 있어서, 상기 단리 단쇄 펩타이드는, (d) 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터, 1∼10아미노산의 영역, 바람직하게는 1∼5아미노산, 예를 들어, 3∼5아미노산(예를 들어, DX1X2X3T{여기에서, X1은 I 또는 P이고, X2는 V 또는 Q이고, X3은 M 또는 L이다}(서열 번호 45), 예를 들어, DIVMT(서열 번호 46), DIQLT(서열 번호 47), DIQMT(서열 번호 48), 또는 QPVLT(서열 번호 49))을 포함하도록 설계될 수 있다. 이 태양에 있어서, 상기 단리 단쇄 펩타이드에는, 링커의 C말단측으로부터 3∼8아미노산과 제2 영역의 N말단으로부터 1∼5아미노산이 포함될 수 있다. 바람직한 태양에서는, 상기 단리 단쇄 펩타이드에는, 예를 들어, 링커의 C말단측으로부터 3∼8아미노산(예를 들어, GGS, GGGS, GGGGS(서열 번호 13), 혹은 SGGGGS(서열 번호 40), 또는 KDG, KKDG, AKKDG(서열 번호 41), DAKKDG(서열 번호 42), DDAKKDG(서열 번호 43), 혹은 KDDAKKDG(서열 번호 44))과 제2 영역의 N말단으로부터 3∼5아미노산을 포함하는 펩타이드를 들 수 있다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 이하 표 2의 1∼27의 어느 하나를 포함할 수 있다.
Figure pct00002
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는,
서열 번호 50: KDDAKKDGQVTLK의 아미노산 서열,
서열 번호 51: KDDAKKDGQVQLV의 아미노산 서열,
서열 번호 52: KDDAKKDGEVQLV의 아미노산 서열,
서열 번호 53: KDDAKKDGSQVQL의 아미노산 서열, 또는
서열 번호 54: KDDAKKDGQVQLQ의 아미노산 서열
을 포함할 수 있다. 이 태양에서는, 단쇄 펩타이드는, 링커의 C말단측과 중쇄 가변 영역의 N말단측이 연결된 영역을 포함한다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는,
서열 번호 55: SGGGGSQVTLK의 아미노산 서열,
서열 번호 56: SGGGGSQVQLV의 아미노산 서열,
서열 번호 57: SGGGGSEVQLV의 아미노산 서열,
서열 번호 58: SGGGGSSQVQL의 아미노산 서열, 또는
서열 번호 59: SGGGGSQVQLQ의 아미노산 서열
을 포함할 수 있다. 이 태양에서는, 단쇄 펩타이드는, 링커의 C말단측과 경쇄 가변 영역의 N말단측이 연결된 영역을 포함한다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는,
서열 번호 83: KDDAKKDGDIVMT의 아미노산 서열,
서열 번호 84: KDDAKKDGDIQLT의 아미노산 서열,
서열 번호 85: KDDAKKDGDIQMT의 아미노산 서열, 또는
서열 번호 86: KDDAKKDGQPVLT의 아미노산 서열
을 포함할 수 있다. 이 태양에서는, 단쇄 펩타이드는, 링커의 C말단측과 경쇄 가변 영역의 N말단측이 연결된 영역을 포함한다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는,
서열 번호 87: SGGGGSDIVMT의 아미노산 서열,
서열 번호 88: SGGGGSDIQLT의 아미노산 서열,
서열 번호 89: SGGGGSDIQMT의 아미노산 서열, 또는
서열 번호 90: SGGGGSQPVLT의 아미노산 서열
을 포함할 수 있다. 이 태양에서는, 단쇄 펩타이드는, 링커의 C말단측과 경쇄 가변 영역의 N말단측이 연결된 영역을 포함한다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는,
서열 번호 60: GGKDDAKKDGQVTLKC의 아미노산 서열,
서열 번호 61: GGKDDAKKDGQVQLVC의 아미노산 서열,
서열 번호 62: GGKDDAKKDGEVQLVC의 아미노산 서열,
서열 번호 63: GGKDDAKKDGSQVQLC의 아미노산 서열, 또는
서열 번호 64: GGKDDAKKDGQVQLQC의 아미노산 서열
일 수 있다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는,
서열 번호 65: GGSGGGGSQVTLKC의 아미노산 서열,
서열 번호 66: GGSGGGGSQVQLVC의 아미노산 서열,
서열 번호 67: GGSGGGGSEVQLVC의 아미노산 서열,
서열 번호 68: GGSGGGGSSQVQLC의 아미노산 서열, 또는
서열 번호 69: GGSGGGGSQVQLQC의 아미노산 서열
일 수 있다.
이와 같이, 링커와 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 연결 부분의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 이용하여 동물을 면역하고, 항체를 취득하는 것에 의해, 당해 연결부에 결합하는 항체를 얻을 수 있다. 그리고, 그에 따라, 링커 자체가 면역원성이 낮은 경우여도, 링커 부근에 결합하는 항체가 얻어질 수 있다.
어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 상기 단리 단쇄 펩타이드에 결합하지만, 제2 영역밖에 갖지 않는 펩타이드, 및 링커의 서열밖에 갖지 않는 펩타이드에는, 그것보다 약한 결합 친화성(예를 들어, 50% 이하, 40% 이하, 30% 이하, 20% 이하, 10% 이하, 또는 1% 이하, 1/1000 이하, 또는 1/10000 이하)으로밖에 결합하지 않거나, 또는 유의하게는 결합하지 않는다. 혹은, 결합 친화성이 약하다는 것이란, 예를 들어, 결합 해리 상수 KD에 있어서, 비교 대상이 되는 결합의 KD치의 1배를 초과하는, 1.1배 이상, 1.2배 이상, 1.3배 이상, 1.4배 이상, 1.5배 이상, 2배 이상, 3배 이상, 4배 이상, 5배 이상, 6배 이상, 7배 이상, 8배 이상, 9배 이상, 10배 이상, 100배 이상, 또는 1000배 이상의 KD치를 갖는 것을 의미할 수 있다.
어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 상기 단리 단쇄 펩타이드에 결합하지만, 제2 영역밖에 갖지 않는 펩타이드, 및 링커의 서열밖에 갖지 않는 펩타이드의 어느 것에는 유의한 결합 친화성으로 결합한다.
＜3＞ 주로 링커에 결합하는 항체
어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 상기 단리 단쇄 펩타이드에 결합할 수 있고, 또한, scFv에 결합할 수 있다. 어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 주로 제1 영역 및 링커의 어느 하나에 결합할 수 있다. 어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 상기 단리 단쇄 펩타이드에 결합하고, 또한, 주로 scFv의 링커에 결합하는 것이어도 된다. 주로 scFv의 링커에 결합하는 항체란, 어느 scFv에 결합하는 경우에, 그 제1 및 제2 영역을 바꿔 넣은 scFv에도 결합하는 항체를 의미하고, 실제의 결합에 있어서, 링커에만 결합하고 있을 필요는 없고, 제1 또는 제2 영역의 링커에 인접한 제1 영역 또는 제2 영역의 아미노산에도 결합하고 있어도 된다. 어느 태양에서는, 주로 scFv의 링커에 결합하는 항체는, 링커의 아미노산 서열로 이루어지는 펩타이드에 결합할 수 있다.
어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 서열 번호 13∼18 및 26∼29의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드의 어느 하나에 결합하고, 또한, scFv에 결합할 수 있다. 어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 서열 번호 13 또는 14의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드에 결합하고, 또한 scFv에 결합할 수 있다. 어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 서열 번호 15∼18의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드의 어느 하나에 결합하고, 또한, scFv에 결합할 수 있다. 어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 서열 번호 26∼28의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드의 어느 하나에 결합하고, 또한, scFv에 결합할 수 있다. 어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드에 결합하고, 또한, scv에 결합할 수 있다.
실시예에 나타나는 바와 같이, 링커와 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 연결 부분의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 이용하여 동물을 면역하고, 항체를 취득하는 것에 의해, 링커 자체의 면역원성이 낮은 경우여도, 결과로서 주로 링커에 결합하는 항체가 얻어질 수 있다.
주로 링커에 결합하는 항체는, 제1 및 제2 영역을 바꿔 넣은 scFv에 대해서도 결합하고, 또한, 주로 링커에 결합하는 항체는, 제1 및 제2 영역의 서열이 상이한 scFv에 대해서도 결합하므로, 범용성이 높다.
＜4＞ 보다 구체적인 펩타이드 서열에 결합하는 항체
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 19에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 20에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 21에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 23에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 24에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 보다 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, 상기 단리 단쇄 펩타이드의 어느 하나 이상과, scFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편에 결합할 수 있다. ScFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편으로서는, 상기의 scFv를 항원 결합성 부분으로서 포함하는 모든 단백질 분자를 들 수 있다. 구체적으로는, ScFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편으로서는, 특별히 한정되지 않지만 예를 들어, CAR, IgG-scFv(IgG 분자의 Fc 영역에 scFv가 연결된 분자), scFv-Fc(항체의 가변 영역이 scFv로 치환된 분자), scFv2-Fc(항체의 가변 영역이 scFv로 치환되어 있고, 또한 Fc 영역에 scFv가 연결된 분자), scFv-HSA-scFv(인간 혈청 알부민의 N말단과 C말단 각각에 scFv가 연결된 분자), Fab-scFv-Fc(항체의 가변 영역 각각이 Fab 및 scFv로 치환되어 있고, 또한 Fc 영역에 Fab와 scFv가 연결된 분자), Fab-scFv(Fab에 scFv가 연결된 분자), 및 BiTE(2개의 scFv가 연결된 분자)를 들 수 있다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 50에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 51에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 52에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 53에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 54일 수 있다. 보다 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, 상기 단리 단쇄 펩타이드의 어느 하나 이상과, scFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편에 결합할 수 있다. ScFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편으로서는, 상기의 scFv를 항원 결합성 부분으로서 포함하는 모든 단백질 분자를 들 수 있다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 55에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 56에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 57에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 58에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 59에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 보다 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, 상기 단리 단쇄 펩타이드의 어느 하나 이상과, scFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편에 결합할 수 있다. ScFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편으로서는, 상기의 scFv를 항원 결합성 부분으로서 포함하는 모든 단백질 분자를 들 수 있다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 60에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 61에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 62에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 63에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 64에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 보다 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, 상기 단리 단쇄 펩타이드의 어느 하나 이상과, scFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편에 결합할 수 있다. ScFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편으로서는, 상기의 scFv를 항원 결합성 부분으로서 포함하는 모든 단백질 분자를 들 수 있다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 65에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 66에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 67에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 68에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 69에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 보다 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, 상기 단리 단쇄 펩타이드의 어느 하나 이상과, scFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편에 결합할 수 있다. ScFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편으로서는, 상기의 scFv를 항원 결합성 부분으로서 포함하는 모든 단백질 분자를 들 수 있다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 70에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 71에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다. 보다 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, 상기 단리 단쇄 펩타이드의 어느 하나 이상과, scFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편에 결합할 수 있다. ScFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편으로서는, 상기의 scFv를 항원 결합성 부분으로서 포함하는 모든 단백질 분자를 들 수 있다.
어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드는, 서열 번호 19, 20, 23 및 24의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩타이드일 수 있다.
어느 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, scFv에 결합할 수 있다. 보다 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, scFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편에 결합할 수 있다. 더 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, CAR에 결합할 수 있다.
특히 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, scFv의 제1 영역의 C말단측의 1∼10아미노산의 영역에 결합한다. 특히 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, scFv의 제2 영역의 N말단측의 1∼10아미노산의 영역에 결합한다. 따라서, 특히 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, 링커의 서열(예를 들어 그 전장)을 포함하고, scFv의 제1 영역의 C말단측의 아미노산을 포함하지 않는 펩타이드, 및, 링커의 서열(예를 들어 그 전장)을 포함하고, scFv의 제2 영역의 N말단측의 아미노산 서열을 포함하지 않는 펩타이드는 결합하지 않거나, 또는 약한 결합 친화성을 가지고서밖에 결합하지 않는다. 특히 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, scFv의 제1 영역의 C말단측의 1∼10아미노산의 영역과 링커의 연결부에 결합하지만, 링커 부분(예를 들어 그 전장)에는 결합하지 않거나, 또는 약한 결합 친화성을 가지고서밖에 결합하지 않는다. 특히 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, 링커와 scFv의 제2 영역의 연결부에 결합하지만, 링커 부분(예를 들어 그 전장)에는 결합하지 않거나, 또는 약한 결합 친화성을 가지고서밖에 결합하지 않는다. 약한 결합 친화성이란, scFv의 제1 영역의 C말단측의 1∼10아미노산의 영역과 링커의 연속된 아미노산 영역을 포함하는 펩타이드에 대한 결합 친화성(KD치)에 대해서, 1배를 초과하는, 1.1배 이상, 1.2배 이상, 1.3배 이상, 1.4배 이상, 1.5배 이상, 2배 이상, 3배 이상, 4배 이상, 5배 이상, 6배 이상, 7배 이상, 8배 이상, 9배 이상, 10배 이상, 100배 이상, 또는 1000배 이상의 KD치를 갖는 것을 의미할 수 있다.
어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 서열 번호 13∼18 및 26∼29의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드의 어느 하나에 결합하고, 또한, scFv에 결합할 수 있다. 어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 서열 번호 13 또는 14의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드에 결합하고, 또한 scFv에 결합할 수 있다. 어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 서열 번호 15∼18의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드의 어느 하나에 결합하고, 또한, scFv에 결합할 수 있다. 어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 서열 번호 26∼28의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드의 어느 하나에 결합하고, 또한, scFv에 결합할 수 있다. 어느 태양에서는, 본 발명의 항체는, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드에 결합하고, 또한, scFv에 결합할 수 있다. 어느 태양에서는, scFv의 제1 영역의 C말단측의 1∼10아미노산의 영역 또는 제2 영역의 N말단측의 1∼10아미노산의 영역으로 이루어지는 펩타이드에 대한 결합 친화성(KD치)에 대해서, 링커로 이루어지는 펩타이드에 대한 결합 친화성(KD치)이, 예를 들어, 1배 미만, 1/10 이하, 1/100 이하, 1/1,000 이하, 10-4배 이하, 10-5배 이하, 10-6배 이하, 10-7배 이하, 10-8배 이하, 10-9배 이하, 10-10배 이하, 10-11배 이하, 또는 10-12배 이하인 것을 의미할 수 있다.
어느 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, 상기 단리 단쇄 펩타이드와 scFv에 결합할 수 있다. 보다 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, 상기 단리 단쇄 펩타이드와 scFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편(특히 그 scFv 부분)에 결합할 수 있다. ScFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 단편으로서는, 상기의 scFv를 항원 결합성 부분으로서 포함하는 모든 단백질 분자를 들 수 있다. 더 바람직한 태양에서는, 본 발명의 항체는, 상기 단리 단쇄 펩타이드와 CAR(특히 그 scFv 부분)에 결합할 수 있다.
어느 태양에서는, 본 발명의 항체는,
scFv에 결합하는 항체로서,
(i) 서열 번호 91에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 중쇄 CDR1∼3을 각각 중쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 95에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 경쇄 CDR1∼3을 각각 경쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
(ii) 서열 번호 92에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 93에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 94에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 96에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 97에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 98에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
(iii) 서열 번호 99에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 중쇄 CDR1∼3을 각각 중쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 100에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 경쇄 CDR1∼3을 각각 경쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
(iv) 서열 번호 100에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 101에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 102에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 104에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 105에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 106에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
(v) 서열 번호 121에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 중쇄 CDR1∼3을 각각 중쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 122에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 경쇄 CDR1∼3을 각각 경쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
(vi) 서열 번호 153에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 중쇄 CDR1∼3을 각각 중쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 154에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 경쇄 CDR1∼3을 각각 경쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
(vii) 서열 번호 91에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 95에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
(viii) 서열 번호 99에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 103에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
(ix) 서열 번호 121에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 122에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
(x) 서열 번호 153에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 154에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
(xi) 상기 (vii), (viii), (ix), 또는 (x)에 기재된 항체와, scFv와의 결합에 관해서 경합하는 항체; 또는
(xii) 상기 어느 하나의 항체로서 천연(생체 내)의 면역글로불린과는 실질적으로 결합하지 않는 항체
일 수 있다. 이들 항체는, 비인간 항체여도 되지만, 바람직하게는 인간화 항체 또는 인간 항체일 수 있다. 예를 들어, 인간에게 투여되는 항체는, (xii)에 기재된 항체이며, 또한, 인간화 항체 또는 인간 항체인 것이 바람직하다. 인비트로 검사에 이용하는 항체는, 비인간 항체여도 되고, 또한, (xii)에 기재된 특성을 갖지 않아도 된다. (ix)에 기재된 항체와, scFv와의 결합에 관해서 경합하는 항체는, 천연(생체 내)의 면역글로불린과는 실질적으로 결합하지 않는 항체일 수 있다. 또한, (x)에 기재된 항체와, scFv와의 결합에 관해서 경합하는 항체는, 천연(생체 내)의 면역글로불린과는 실질적으로 결합하지 않는 항체일 수 있다. (ix)에 기재된 항체와, scFv와의 결합에 관해서 경합하는 항체는, VH-L1-VL형 scFv와는 실질적으로 결합하지 않는 항체일 수 있다. (ix)에 기재된 항체와, scFv와의 결합에 관해서 경합하는 항체는, VH-L1-VL형 scFv와는 실질적으로 결합하지 않는 항체일 수 있다. (ix)에 기재된 항체와, scFv와의 결합에 관해서 경합하는 항체는, 천연(생체 내)의 면역글로불린과는 실질적으로 결합하지 않고, 또한, VH-L1-VL형 scFv와는 실질적으로 결합하지 않는 항체일 수 있다. 또한, (x)에 기재된 항체와, scFv와의 결합에 관해서 경합하는 항체는, VH-L1-VL형 scFv와는 실질적으로 결합하지 않는 항체일 수 있다. (ix)에 기재된 항체와, scFv와의 결합에 관해서 경합하는 항체는, 천연(생체 내)의 면역글로불린과는 실질적으로 결합하지 않고, 또한, VH-L1-VL형 scFv와는 실질적으로 결합하지 않는 항체일 수 있다.
어느 태양에서는, 본 발명의 항체는,
VL-L1-VH형 scFv에 결합하는 항체로서,
(xv) 서열 번호 123∼125에 각각 기재된 중쇄 CDR1∼3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 126∼128에 각각 기재된 경쇄 CDR1∼3을 갖는 경쇄 가변 영역을 갖는 항체;
(xv-2) 서열 번호 129∼131에 각각 기재된 중쇄 CDR1∼3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 132∼134에 각각 기재된 경쇄 CDR1∼3을 갖는 경쇄 가변 영역을 갖는 항체;
(xv-3) 서열 번호 135∼137에 각각 기재된 중쇄 CDR1∼3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 138∼140에 각각 기재된 경쇄 CDR1∼3을 갖는 경쇄 가변 영역을 갖는 항체;
(xv-4) 서열 번호 141∼143에 각각 기재된 중쇄 CDR1∼3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 144∼146에 각각 기재된 경쇄 CDR1∼3을 갖는 경쇄 가변 영역을 갖는 항체;
(xv-5) 서열 번호 147∼149에 각각 기재된 중쇄 CDR1∼3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 150∼152에 각각 기재된 경쇄 CDR1∼3을 갖는 경쇄 가변 영역을 갖는 항체;
(xvi) 서열 번호 155∼157에 각각 기재된 중쇄 CDR1∼3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 158∼160에 각각 기재된 경쇄 CDR1∼3을 갖는 경쇄 가변 영역을 갖는 항체;
(xvi-2) 서열 번호 161∼163에 각각 기재된 중쇄 CDR1∼3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 164∼166에 각각 기재된 경쇄 CDR1∼3을 갖는 경쇄 가변 영역을 갖는 항체;
(xvi-3) 서열 번호 167∼169에 각각 기재된 중쇄 CDR1∼3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 170∼172에 각각 기재된 경쇄 CDR1∼3을 갖는 경쇄 가변 영역을 갖는 항체;
(xvi-4) 서열 번호 173∼175에 각각 기재된 중쇄 CDR1∼3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 176∼178에 각각 기재된 경쇄 CDR1∼3을 갖는 경쇄 가변 영역을 갖는 항체;
(xvi-5) 서열 번호 179∼181에 각각 기재된 중쇄 CDR1∼3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 182∼184에 각각 기재된 경쇄 CDR1∼3을 갖는 경쇄 가변 영역을 갖는 항체; 또는
(xvii) 상기 어느 하나의 항체로서 천연(생체 내)의 면역글로불린과는 실질적으로 결합하지 않는 항체
가 제공된다. 이들 항체는, 비인간 항체여도 되지만, 바람직하게는 인간화 항체 또는 인간 항체일 수 있다. 예를 들어, 인간에게 투여되는 항체는, (xvii)에 기재된 항체이며, 또한, 인간화 항체 또는 인간 항체인 것이 바람직하다. 인비트로 검사에 이용하는 항체는, 비인간 항체여도 되고, 또한, (xvii)에 기재된 특정을 갖지 않아도 된다. 이들 항체는, 바람직하게는, 천연(생체 내)의 면역글로불린과는 실질적으로 결합하지 않는 항체이다. 이들 항체는 또한, 바람직하게는, VH-L1-VL형 scFv와는 실질적으로 결합하지 않는 항체이다. 이들 항체는, 보다 바람직하게는, 천연(생체 내)의 면역글로불린과는 실질적으로 결합하지 않고, 또한, VH-L1-VL형 scFv와는 실질적으로 결합하지 않는 항체일 수 있다.
어느 태양에서는, 본 발명의 항체는,
VL-L1-VH형 scFv에 결합하는 항체로서,
서열 번호 121에 기재된 아미노산 서열의 6∼10아미노산 길이의 부분 서열로서, 서열 번호 185에 기재된 아미노산 서열(TSY)을 포함하는 서열을 갖는 중쇄 CDR1과,
서열 번호 121에 기재된 아미노산 서열의 5∼16아미노산 길이의 부분 서열로서, 서열 번호 186에 기재된 아미노산 서열(WNDGD)을 포함하는 서열을 갖는 중쇄 CDR2와,
서열 번호 121에 기재된 아미노산 서열의 8∼9아미노산 길이의 부분 서열로서, 서열 번호 187에 기재된 아미노산 서열(MNGYKD)을 포함하는 서열을 갖는 중쇄 CDR3
을 포함하는 중쇄 가변 영역과,
서열 번호 122에 기재된 아미노산 서열의 6∼11아미노산 길이의 부분 서열로서, 서열 번호 188에 기재된 아미노산 서열(KRY)을 포함하는 서열을 갖는 경쇄 CDR1과,
서열 번호 122에 기재된 아미노산 서열의 3∼10아미노산 길이의 부분 서열로서, 서열 번호 189에 기재된 아미노산 서열(EDS)을 포함하는 서열을 갖는 경쇄 CDR2와,
서열 번호 122에 기재된 아미노산 서열의 10∼11아미노산 길이의 부분 서열로서, 서열 번호 190에 기재된 아미노산 서열(HSTYSDDKLR)을 포함하는 서열을 갖는 경쇄 CDR3
을 포함하는 경쇄 가변 영역
을 포함하는, 항체가 제공된다. 이들 항체는, 비인간 항체여도 되지만, 바람직하게는 인간화 항체 또는 인간 항체일 수 있다. 예를 들어, 인간에게 투여되는 항체는, (xvii)에 기재된 항체이며, 또한, 인간화 항체 또는 인간 항체인 것이 바람직하다. 인비트로 검사에 이용하는 항체는, 비인간 항체여도 되고, 또한, (xvii)에 기재된 특정을 갖지 않아도 된다. 이들 항체는, 바람직하게는, 천연(생체 내)의 면역글로불린과는 실질적으로 결합하지 않는 항체이다. 이들 항체는 또한, 바람직하게는, VH-L1-VL형 scFv와는 실질적으로 결합하지 않는 항체이다. 이들 항체는, 보다 바람직하게는, 천연(생체 내)의 면역글로불린과는 실질적으로 결합하지 않고, 또한, VH-L1-VL형 scFv와는 실질적으로 결합하지 않는 항체일 수 있다.
어느 태양에서는, 본 발명의 항체는,
VL-L1-VH형 scFv에 결합하는 항체로서,
서열 번호 153에 기재된 아미노산 서열의 6∼8아미노산 길이의 부분 서열로서, 서열 번호 191에 기재된 아미노산 서열(TSY)을 포함하는 서열을 갖는 중쇄 CDR1과,
서열 번호 153에 기재된 아미노산 서열의 5∼16아미노산 길이의 부분 서열로서, 서열 번호 192에 기재된 아미노산 서열(YYDGD)을 포함하는 서열을 갖는 중쇄 CDR2와,
서열 번호 153에 기재된 아미노산 서열의 7∼9아미노산 길이의 부분 서열로서, 서열 번호 193에 기재된 아미노산 서열(SIGAED)을 포함하는 서열을 갖는 중쇄 CDR3
을 포함하는 중쇄 가변 영역과,
서열 번호 154에 기재된 아미노산 서열의 6∼11아미노산 길이의 부분 서열로서, 서열 번호 194에 기재된 아미노산 서열(KRY)을 포함하는 서열을 갖는 경쇄 CDR1과,
서열 번호 154에 기재된 아미노산 서열의 3∼10아미노산 길이의 부분 서열로서, 서열 번호 195에 기재된 아미노산 서열(EDS)을 포함하는 서열을 갖는 경쇄 CDR2와,
서열 번호 154에 기재된 아미노산 서열의 10∼11아미노산 길이의 부분 서열로서, 서열 번호 196에 기재된 아미노산 서열(HSTYSDDKLR)을 포함하는 서열을 갖는 경쇄 CDR3
을 포함하는 경쇄 가변 영역
을 포함하는, 항체가 제공된다. 이들 항체는, 비인간 항체여도 되지만, 바람직하게는 인간화 항체 또는 인간 항체일 수 있다. 예를 들어, 인간에게 투여되는 항체는, (xvii)에 기재된 항체이며, 또한, 인간화 항체 또는 인간 항체인 것이 바람직하다. 인비트로 검사에 이용하는 항체는, 비인간 항체여도 되고, 또한, (xvii)에 기재된 특정을 갖지 않아도 된다. 이들 항체는, 바람직하게는, 천연(생체 내)의 면역글로불린과는 실질적으로 결합하지 않는 항체이다. 이들 항체는 또한, 바람직하게는, VH-L1-VL형 scFv와는 실질적으로 결합하지 않는 항체이다. 이들 항체는, 보다 바람직하게는, 천연(생체 내)의 면역글로불린과는 실질적으로 결합하지 않고, 또한, VH-L1-VL형 scFv와는 실질적으로 결합하지 않는 항체일 수 있다.
VL-L1-VH형 scFv는, VL, 링커, 및 VH를 이 순번으로 포함하고, 링커가 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 scFv를 나타낸다. VH-L1-VL형 scFv는, VH, 링커, 및 VL을 이 순번으로 포함하고, 링커가 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 scFv를 나타낸다.
상기 (i), (iii), (v), 및 (vi)에 있어서, CDR의 아미노산 서열은, 전술한 바와 같이 Kabat, Chothia, AbM, contact, IMGT, Aho, Martin(Enhanced Chothia) 등의 수법으로 결정된 것으로 할 수 있다. 상기 (ii), (iv), (xv-2), 및 (xvi-2)에 있어서의 CDR의 아미노산 서열은, 일례로서 Kabat에 의해 결정된 것이지만, Kabat에 의해 결정된 CDR은 바람직하게 사용할 수 있다.
본 발명의 항체 또는 그 항원 결합성 단편에는, 상기 항체에 대해서, 1∼수 개의 아미노산의 삽입, 결실, 부가 및 치환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 변이를 갖는 항체 또는 그 항원 결합성 단편이 포함될 수 있다. 어느 실시태양에 있어서, 본 발명의 항체 또는 그 항원 결합성 단편에 있어서의 적어도 1개의 CDR, 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 그 이상의 CDR과 실질적으로 동일한, 적어도 1개의 CDR, 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 그 이상의 CDR을 포함하는 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 제공한다. 다른 실시태양에서는, 본 발명의 항체 또는 그 항원 결합성 단편에 있어서의, 또는 본 발명의 항체 또는 그 항원 결합성 단편에서 유래하고, 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 CDR과 실질적으로 동일한 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 CDR을 갖는 항체가 포함된다. 어느 실시태양에서는, 본 발명의 항체 또는 그 항원 결합성 단편에 있어서의 적어도 1개, 2개, 또는 3개의 CDR과 적어도 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 CDR이 포함된다. 어느 실시태양에 있어서, 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 CDR은, 본 발명의 항체 또는 그 항원 결합성 단편에 있어서의, 또는 본 발명의 항체 또는 그 항원 결합성 단편에서 유래하고, 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 CDR에 있어서, 적어도 1개의 삽입, 결실, 부가 또는 치환이 포함된다. 본 발명의 항체 또는 그 항원 결합성 단편에는, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 또는 95% 이상의 아미노산 서열의 동일성을 갖고, 항체의 항원 특이성을 갖는 항체 또는 그 항원 결합성 단편이 포함될 수 있다. 본 발명의 항체 또는 그 항원 결합성 단편에는, 6개의 CDR 이외의 영역에 있어서, 상기 항체 또는 그 항원 결합 단편과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 또는 95% 이상의 아미노산 서열의 동일성을 갖고, 항체의 항원 특이성을 갖는 항체 또는 그 항원 결합성 단편이 포함될 수 있다.
＜본 발명의 단쇄 펩타이드＞
본 발명에 의하면, 상기 단리 단쇄 펩타이드가 제공될 수 있다. 단리 단쇄 펩타이드는, 10∼20아미노산 길이, 예를 들어, 13∼20아미노산 길이를 가질 수 있다. 단리 단쇄 펩타이드는, 예를 들어, 서열 번호 19∼24 및 50∼71 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 가질 수 있다. 여기에서, 「단리」란, scFv 외의 영역으로부터 분리되어 있는 것을 의미한다. 또한, 「단쇄」란, 예를 들어, 겨우 50아미노산, 바람직하게는 30아미노산 이하, 보다 바람직하게는 20아미노산 이하의 길이를 갖는 것을 의미한다. 어느 바람직한 태양에서는, 단리 단쇄 펩타이드에 있어서, scFv 부분의 면역원성을 살리는 관점에서, 링커 부분보다도 scFv의 아미노산 서열의 길이 쪽이 1배 이상, 1.1배 이상, 1.2배 이상, 1.3배 이상, 1.4배 이상, 1.5배 이상, 1.6배 이상, 1.7배 이상, 1.8배 이상, 1.9배 이상, 2.0배 이상, 2.1배 이상, 2.2배 이상, 2.3배 이상, 2.4배 이상, 2.5배 이상, 2.6배 이상, 2.7배 이상, 2.8배 이상, 2.9배 이상, 또는 3배 이상 길게 포함된다.
＜항체의 취득 방법＞
항체는, 주지된 방법을 이용하여 제작할 수 있다. 예를 들어, 상기 단리 펩타이드를 동물(예를 들어, 마우스, 래트, 토끼 등)에 면역하는 것에 의해 얻어질 수 있다. 단리 펩타이드는, 캐리어 단백질로서의 키홀 림펫 헤모시아닌(KHL)과 연결시키는 것에 의해 면역원성을 높일 수 있다. 필요에 따라서 복수회의 추가 면역을 행할 수 있다. 비장 및 림프절 등의 림프 조직으로부터 항체 산생 세포를 취득하여, 모노클로날 항체를 산생하는 세포를 얻을 수 있다. 모노클로날 항체를 산생하는 세포는, 얻어진 항체 산생 세포와 미엘로마를 세포 융합시켜, 하이브리도마를 얻고, 하이브리도마를 싱글 셀 클로닝하는 것에 의해 얻어질 수 있다. 또한, 모노클로날 항체는, 당해 하이브리도마의 배양 상청으로서 얻어질 수 있다. 얻어진 모노클로날 항체는, 항원과의 반응성을 확인하는 시험(예를 들어, ELISA)에 제공할 수 있다. 얻어진 모노클로날 항체는 또한, scFv 또는 scFv를 항원 결합 부위로서 포함하는 항원 결합성 화합물과의 반응성을 확인하는 시험(예를 들어, ELISA)에 제공할 수 있다. 얻어진 모노클로날 항체는 또한, CAR-T 세포와의 반응성을 확인하는 시험(예를 들어, 플로 사이토메트리)에 제공할 수 있다. 이와 같이 하여, 항체군으로부터 이하 (i)∼(vi)의 적어도 1개를 만족시키는 항체를 선택 또는 동정할 수 있다:
{(i) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역과, 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는다;
(ii) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역과, 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는다;
(iii) 서열 번호 19, 20, 23 및 24의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합한다;
(iv) 서열 번호 19∼24 및 50∼71의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합한다;
(v) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역 및 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역에 결합한다; 및
(vi) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역, 및 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역에 결합한다}. 이와 같이 하여, scFv에 결합하는 항체를 선택할 수 있다. 어느 태양에서는, 항체군은, scFv에 결합하는 항체군일 수 있다. 바람직한 태양에서는, 항체군은, 상기 단리 단쇄 펩타이드의 어느 하나에 결합하는 항체군일 수 있다. 보다 바람직한 태양에서는, 상기 단리 단쇄 펩타이드의 어느 하나에 결합하고, 링커 부분(예를 들어 그 전장)에는 결합하지 않거나, 또는 약한 결합 친화성을 가지고서밖에 결합하지 않는 항체군일 수 있다.
또한, 어느 태양에서는,
항체군으로부터,
(b-iii) 서열 번호 91에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 95에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
(b-iv) 서열 번호 99에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 103에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
(b-xi) 서열 번호 121에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 122에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체; 및
(b-xii) 서열 번호 153에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 154에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
의 어느 하나와,
scFv와의 결합에 관해서 경합하는 항체이며, 또한, scFv와 결합하는 항체를 선택 또는 동정하는 것을 포함하는, 방법이 제공된다.
어느 태양에서는, 항체군은, 예를 들어, scFv와 결합하는 항체의 군일 수 있다. 어느 태양에서는, 항체군은,
(i) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역과, 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는다;
(ii) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역과, 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는다;
(iii) 서열 번호 19, 20, 23 및 24의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합한다;
(iv) 서열 번호 19∼24 및 50∼71의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합한다;
(v) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역 및 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역에 결합한다; 및
(vi) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역, 및 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역에 결합한다
로부터 선택되는 1 이상을 만족시키는 항체군일 수 있고, scFv와 결합한다는 조건을 추가로 만족시키는 항체군이어도 된다.
어느 태양에서는, 항체군은, (iii) 서열 번호 19, 20, 23 및 24의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하거나; 또는 (iv) 서열 번호 19∼24 및 50∼71의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하는 항체군일 수 있다.
어느 태양에서는, 상기 항체는,
(vii) 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서는, 유의한 결합 친화성을 나타내지 않는다.
어느 태양에서는, 상기 항체는,
(viii) 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서도, 유의한 결합 친화성을 나타낸다.
항체의 펩타이드 또는 scFv에 대한 결합 친화성은, 예를 들어, ELISA 등의 주지된 방법에 의해 결정할 수 있다. 항체가, (vii) 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서는, 유의한 결합 친화성을 나타내지 않는 것은, 당해 scFv에 대한 ELISA와, 바꿔 넣지 않았던 원래의 scFv에 대한 ELISA를 실시하는 것에 의해 결정할 수 있다. 항체가, 링커 부분(예를 들어 그 전장)에는 결합하지 않거나, 또는 약한 결합 친화성을 가지고서밖에 결합하지 않는 항체인 것은, 당해 링커 부분의 펩타이드에 대한 ELISA를 실시하고, 상기 단리 펩타이드의 어느 하나에 대한 ELISA의 결과와 비교하는 것에 의해 결정할 수 있다. 이와 같이, 본 개시에서는, 항체는, 항체의 결합 특성에 기초하여 적절한 어세이계를 짤 수 있고, 적절한 어세이계에 의해 선택할 수 있다.
선택 또는 동정된 항체는, 그 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산의 서열 및 그 아미노산 서열을 추정할 수 있다. 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산의 서열은, 예를 들어, 항체를 산생하는 세포로부터 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 mRNA를 취득하고, cDNA를 합성하여 그 서열을 해독하는 것에 의해, 각각의 핵산 서열을 추정할 수 있다. 또한, 추정된 핵산 서열로부터 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열을 추정할 수 있다. 추정된 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열로부터는, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 추정할 수 있다. 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열로부터는, 중쇄 CDR1∼3과 경쇄 CDR1∼3의 아미노산 서열을 추정할 수 있다. 항체는, 통상적 방법을 이용하여, 유전자 재조합 기술을 이용하여 항체 산생 세포(예를 들어, 차이니즈 햄스터 난소 세포(CHO))로부터 산생시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법은, 동정된 항체의 중쇄 CDR1∼3을 포함하는 중쇄 가변 영역과 경쇄 CDR1∼3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 코딩하는 유전자를 포함하는 항체 산생 세포로부터, 상기 중쇄 CDR1∼3을 포함하는 중쇄 가변 영역과 경쇄 CDR1∼3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 얻는 것을 추가로 포함하고 있어도 된다.
＜세포의 표적화, 또는 세포를 검출하는 방법＞
본 발명에 의하면, 세포를 검출하는 방법이 제공된다. 검출되는 세포는, scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포일 수 있다. 어느 태양에서는, 검출은, 본 발명의 항체를 이용하여 행할 수 있다. 구체적으로는, 본 발명의 방법은, 본 발명의 항체와 scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 또는 발현한다고 생각되는 세포를 접촉시켜, 항체와 세포의 복합체를 형성시키는 것을 포함할 수 있다. 복합체는, 항체에 대한 표지 등을 이용하여 검출할 수 있다. 검출은, 플로 사이토메트리를 이용하여 행할 수 있다.
본 발명에 의하면, 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포는, 면역 세포일 수 있다. 면역 세포는, 바람직하게는, T 세포 또는 NK 세포일 수 있다. 어느 바람직한 태양에서는, 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포는, CAR-T 세포일 수 있다.
본 발명에 의하면, scFv를 검출하기 위한 키트 또는 검사약이 제공될 수 있다. 또한 어느 태양에서는, 본 발명에 의하면, scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 검출하기 위한 키트 또는 검사약으로서, 본 발명의 항체를 포함하는, 키트 또는 검사약이 제공될 수 있다. 키트 또는 검사약은, 항체를 포함하는 용액을 포함하고 있어도 된다. 키트 또는 검사약은, 항체를 포함하는 용액과, scFv의 검출을 위한 시약(예를 들어, 표지된 2차 항체, 반응 완충액, 블로킹액, 및 세정액 등)을 포함하고 있어도 된다. 키트 또는 검사약은, 항체를 포함하는 용액과, scFv의 검출을 위한 지시서를 포함하고 있어도 된다.
본 발명에서는, scFv의 항원은, 암 세포에 발현하는 항원(예를 들어, 암 항원)일 수 있다. scFv의 항원으로서는, 예를 들어, CD16, CD19, CD20, CD22, CD123, CD171, 상피 성장 인자 수용체(EGFR), 특히 EGFRvIII, 3형 EGFR, de2-7EGFR 및 HER2, 암 태아성 항원(CEA), 전립선 줄기세포 항원(PSCA), B 세포 성숙 항원(BCMA), CS1, NKG2D, NKp30, B7H6, MUC-16(CA125), 수용체 티로신 키나제용 오르판 수용체 1(ROR-1), GD3, GM2, 글리피칸-3(GPC3), 메소테린, IL13R, c-KIT, c-MET, NY-ESO-1, WT1, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A10, HPV의 E6, HPV의 E7, CMV, AFP, PRAME, SSX2, KRAS, HER2, 및 PD-L1로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 이상일 수 있다. scFv의 항원은 또한, 예를 들어, 단백질성의 태그여도 된다. scFv의 항원은 예를 들어, 플루오레세인 아이소싸이오사이아네이트(FITC) 등의 형광 단백질일 수 있다.
본 발명에서는, CAR 발현 세포는, CAR에 더하여, 사이토카인을 발현할 수 있다. CAR 발현 세포는, 예를 들어, 인터류킨-7(IL-7) 및 CCL19를 발현하고 있어도 된다. 바람직한 태양에서는, CAR 발현 세포는, CAR 발현 T 세포일 수 있다. 본 발명에서는, CAR 발현 세포는, 세포 제거 등의 목적으로, 티미딘 키나제(예를 들어, 단순 헤르페스 바이러스의 티미딘 키나제)를 코딩하는 유전자를 포함하고 있어도 된다. 티미딘 키나제를 발현하는 세포는, 간시클로비르를 흡수하면 간시클로비르를 인산화하여 강한 독성을 발생시켜, 티미딘 키나제를 발현하는 세포를 살상할 수 있다. 따라서, 이 구조를 이용하여, 예를 들어, CAR 발현 세포를 제거 또는 제어할 수 있다.
본 발명에 의하면, 생체 외 또는 생체 내에 있어서, 세포나 항체를 표적화하는 방법이 제공된다. 표적화되는 세포는, scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포일 수 있다. 어느 태양에서는, 세포의 표적화는, 본 발명의 항체를 이용하여 행할 수 있다. 구체적으로는, 본 발명의 방법은, scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포가 투여된 대상에 있어서 실시될 수 있다. 대상은, 체 내에 scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 가질 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체를 당해 대상에게 투여하는 것에 의해, 대상의 체내에 있어서 상기 세포를 표적화할 수 있다. 본 발명의 항체는, 표적화되는 세포의 기능을 제어할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체는, CAR-T 세포와 표적 항원의 결합을 저해하는 것에 의해, CAR-T 세포의 기능을 저하시킬 수 있다.
표적화되는 항체는, 상기 단리 단쇄 펩타이드의 어느 하나 이상과, scFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 또는 그 단편일 수 있다. 어느 태양에서는, 항체의 표적화는, 본 발명의 항체를 이용하여 행할 수 있다. 구체적으로는, 본 발명의 방법은, 표적화되는 항체가 투여된 대상에 있어서 실시될 수 있다. 본 발명의 항체를 당해 대상에게 투여하는 것에 의해, 대상의 체내에 있어서 상기 단리 단쇄 펩타이드의 어느 하나 이상과, scFv를 부분 구조에 있어서 포함하는 항체 또는 그 단편을 표적화할 수 있다. 본 발명의 항체는, 표적화되는 항체의 기능을 제어할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체는, 표적화되는 항체와 그 항원의 결합을 저해하는 것에 의해, 표적화되는 항체의 기능을 저하시킬 수 있다.
본 발명의 항체를, 세포나 항체의 표적화에 이용할 때, 본 발명의 항체에 다른 의약이나 시약을 결합시킬 수 있고, 이러한 의약이나 시약을, 표적화되는 세포 혹은 항체 또는 그 치료 표적에 송달시킬 수도 있다. 본 발명의 항체에 결합시키는 의약이나 시약은 특별히 한정되지 않지만, 표적화되는 세포나 항체 자체의 기능을 항진 또는 저하시키는 화합물(예를 들어 세포 활성화제), 표적화되는 세포나 항체의 치료 표적에 작용하는 화합물, 표적화되는 세포 혹은 항체 또는 그들의 치료 표적을 검출 가능하게 표지하는 화합물 등을 들 수 있다.
본 발명에 의하면, scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포가 투여된 대상에 있어서, scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 표적화하는 것에 이용하기 위한 항체 제제로서, 본 발명의 항체를 포함하는, 항체 제제가 제공된다.
실시예
실시예 1: scFv의 링커 영역에 결합하는 항체의 제작
본 실시예에서는, scFv의 링커 영역에 결합하는 항체의 제작을 시도했다. 구체적으로는, 도 1에 나타나는 바와 같이 제1 영역과 링커 영역과 제2 영역을 이 순번으로 포함하는 scFv에 있어서, 제1 영역과 링커 영역에 걸치는 영역에 위치하는 단리된 펩타이드에 대한 항체를 얻었다. 제1 영역 및 제2 영역은 각각, 항체의 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)으로 하거나, 또는, 경쇄 가변 영역(VL) 및 중쇄 가변 영역(VH)으로 했다.
scFv는, 아이소타입 컨트롤 IgG의 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)으로부터, 제1 영역 및 제2 영역, 또는, 제2 영역 및 제1 영역을 설계했다. 링커로서는, 서열 번호 27(GGGGSGGGGSGGGGS) 또는 서열 번호 29(SSADDAKKDAAKKDDAKKDDAKKDG)에 기재된 아미노산 서열을 갖는 링커를 이용했다.
이하 실험에서는, VH-L1-VL은, VH, 링커, 및 VL을 이 순번으로 포함하고, 링커가 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 scFv를 나타낸다. VL-L1-VH는, VL, 링커, 및 VH를 이 순번으로 포함하고, 링커가 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 scFv를 나타낸다. 또한, VH-L2-VL은, VH, 링커, 및 VL을 이 순번으로 포함하고, 링커가 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 scFv를 나타낸다. VL-L2-VH는, VL, 링커, 및 VH를 이 순번으로 포함하고, 링커가 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 scFv를 나타낸다.
링커에 대한 항체는 취득이 용이하지 않다. 예를 들어, US2019/0092818A에 의하면, 링커의 아미노산 서열을 개변하여 항체 취득을 용이하게 하여, 당해 개변한 아미노산 서열을 갖는 링커에 결합하는 항체를 얻고 있다. 본 실시예에서는, 기존의 링커 서열을 그대로 이용하여, 보다 범용성이 높은 항체를 얻는 것을 목적으로 한다. 이를 위해, 제1 영역과 링커에 걸치는 부분의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드로 면역하여 항체를 취득하는 것을 시도했다. 구체적으로는, 제1 영역의 C말단측의 4 또는 5아미노산의 서열에 링커의 서열을 연결시켜 4종류의 펩타이드 서열을 얻어, 각각 합성했다. 하기에서는, 면역원으로서 이용한 단리 펩타이드의 서열을 나타낸다.
Figure pct00003
상기 펩타이드 1 및 3에 있어서, 밑줄은 중쇄 가변 영역의 C말단으로부터 5아미노산의 영역의 서열이며, 펩타이드 2 및 4에 있어서, 밑줄은 경쇄 가변 영역의 C말단으로부터 4아미노산의 영역이다. 상기 펩타이드 1 및 2에 있어서, 이탤릭은 서열 번호 27의 링커의 N말단측의 6아미노산이며, 상기 펩타이드 3 및 4에 있어서, 이탤릭은 서열 번호 29의 링커의 N말단측의 8아미노산이다. 상기 펩타이드 1∼4의 N말단에는, GG가 부가되고, C말단에는 C가 부가되었다. 이들 아미노산은 N말단을 아세틸화했다.
상기 펩타이드 1∼4를 화학 합성하고, 그 후, 캐리어 단백질로서의 키홀 림펫 헤모시아닌(KHL)과 각각의 펩타이드와 C말단에 부가한 C를 개재시켜 통상적 방법에 의해 컨주게이트했다. 얻어진 펩타이드 컨주게이트를 래트의 족척(足蹠)에 면역하고, 추가 면역을 미근부(尾根部)에 면역했다. 장골 림프절로부터 림프구를 단리하여, 미엘로마와의 세포 융합에 제공했다. 얻어진 하이브리도마를 클로닝에 제공했다. 클로닝은, 메틸셀룰로스법에 의해, 싱글 콜로니를 픽업하는 것에 의해 행했다. 얻어진 하이브리도마를 96웰 플레이트에 파종하고, 배양 도중에 배지를 교환하면서, 배양을 행했다. 얻어진 각 클론의 배양 상청에 대해 scFv에 대한 결합을 시험했다. 펩타이드 1로 면역하여 얻어진 클론은 scFv(VH-L2-VL) 플라스미드(＃530), 펩타이드 2로 면역하여 얻어진 클론은 scFv(VL-L2-VL) 플라스미드(＃350), 펩타이드 3으로 면역하여 얻어진 클론은 scFv(VH-L1-VL) 플라스미드(＃602), 펩타이드 4로 면역하여 얻어진 클론은 scFv(VL-L1-VH) 플라스미드(＃231)를, 각각 일과성으로 발현시킨 HEK293T 세포에 대해서 배양 상청을 접촉시켜, 결합의 유무를 확인했다. 음성 대조로서 상기 플라스미드의 트랜스펙션을 하지 않았던 293 T 세포를 이용했다. 항체의 양성 대조로서는, 펩타이드 1∼3으로 면역하여 얻어진 클론에 대해서는 비오틴화 프로틴 L을, 펩타이드 4로 면역하여 얻어진 클론에 대해서는 FITC-DEX를 이용했다.
펩타이드 4로 면역하여 얻어진 하이브리도마가 산생하는 항체 중에서, scFv에 대한 결합 친화성이 특히 높은 2D12, 4B12, 및 3A4를 선택했다. 결합 친화성의 측정 결과는, 표 3에 나타나는 바와 같았다. 표 3에서는, 수치가 높을수록 결합 친화성이 강함을 의미한다.
Figure pct00004
이와 같이 하여, 제1 영역과 링커의 경계 영역에 설계한 단리 펩타이드를 면역원으로서 scFv에 결합하는 항체를 얻을 수 있었다. 이들 항체는, 면역원으로서 이용한 단리 펩타이드(펩타이드 3)에 결합하는 것은 물론이거니와, scFv에 대해서도 결합하는 항체이다.
선택한 2D12, 4B12, 및 3A4를 싱글 셀 클로닝하고, 한번 더 scFv에의 반응성을 확인했다.
Figure pct00005
2D12로부터 싱글 셀 클로닝에 의해 D10, B3, B12, A10, 및 D6을 취득했다. 또한, 3A4로부터 싱글 셀 클로닝에 의해 A10, H11, B11, 및 D11을 취득했다. 또한, 4B12는, C5, C4, 및 D4를 취득했다. 이들 클론은, 표 4에 나타나는 바와 같이 모두 scFv에 결합하는 항체를 산생하는 클론이었다. 이들 클론으로부터 산생되는 항체와 scFv(VH-L1-VL형 및 VH-L2-VL)를 포함하는 CAR-T 세포의 반응성을 확인했다. CAR은, 각각 상이한 항원에 결합하는 것을 이용했다.
이용한 CAR은 표 5에 기재되는 바와 같았다.
Figure pct00006
여기에서, 인간 제2세대(4-1BB)는, scFv 영역, CD8α의 막관통 도메인, 4-1BB 도메인 및 CD3ζ 도메인이 이 순번으로 연결된 분자로서, 각각이 인간 유래인 분자를 나타낸다. 인간 제3세대는, scFv 영역, CD8α의 막관통 도메인, CD28 도메인, 4-1BB 도메인 및 CD3ζ 도메인이 이 순번으로 연결된 분자로서, 각각이 인간 유래인 분자를 나타낸다. hIL7＿hCCL19＿HSVtk는, 인간 IL-17과 인간 CCL19를 발현함과 함께, 자살 유전자로서 단순 헤르페스 바이러스의 티미딘 키나제를 탑재한 세포인 것을 나타낸다. 상기 자살 유전자는, 간시클로비르에 의해 활성화되어, CAR 발현 세포를 살상할 수 있다.
표 5의 CAR-T가 갖는 scFv 영역의 제1 영역의 C말단(CDR3보다도 C말단측)의 서열은 표 6에 기재하는 바와 같았다.
Figure pct00007
결과는, 도 2에 나타나는 바와 같았다. 도 2에 나타나는 바와 같이, 2D12 유래의 클론 B3, B12, A10, 및 3A4 유래의 클론 A10이, 항원 D에 대한 VH-L1-VL형 scFv를 포함하는 CAR-T 세포(S＃031)에 대해서 반응성을 나타냈다. 이들 클론은, 항원 E에 대한 VH-L1-VL형 scFv를 포함하는 CAR-T 세포(＃673)에 대해서도 반응성을 나타냈다. 한편, 어느 항체도 링커의 아미노산 서열이 상이한 VH-L2-VL형 scFv(음성 대조, ＃530)에 대해서는 유의한 결합 친화성을 나타내는 경우는 없었다. 이것으로부터, 얻어진 항체는, 링커 또는 VH와 링커의 경계 영역에 결합한다고 생각되었다.
또한, 상기 클론이 산생하는 항체와, 각종 VL-L1-VH형 scFv를 포함하는 CAR-T 세포(S＃067, S＃075, 및 ＃231)의 반응성을 확인했다. 결과는, 도 3에 나타나는 바와 같았다. 도 3에 나타나는 바와 같이, 어느 클론도, VL-L1-VH형의 scFv 및 이것을 포함하는 CAR-T 세포에 반응성을 나타냈다. 더욱이, 3A4-A10을 추가로 싱글 클로닝하여 3개의 클론을 얻어 scFv를 발현하는 CAR-T 세포에 대한 결합성을 평가했다. 결과는, 도 4에 나타나는 바와 같다. 모두 양호하게 VH-L1-VL형 scFv에는 결합하고, VH-L2-VL형 scFv를 포함하는 CAR-T 세포에는 유의한 반응성을 나타내지 않았다. 이들로부터, 얻어진 항체는, 주로 링커에 결합한다고 생각되었다.
펩타이드 4로 면역하여 얻어진 항체에 대해 VL-L1-VH형 scFv와의 결합성을 확인했다. 얻어진 하이브리도마가 산생하는 항체 중에서, scFv에 대한 결합 친화성이 특히 높은 1H5, 2C7, 3E7, 및 4B9를 선택했다. 결합 친화성의 측정 결과는, 표 7에 나타나는 바와 같았다. 표 7에서는, 수치가 높을수록 결합 친화성이 강함을 의미한다.
Figure pct00008
이와 같이 하여, 제1 영역과 링커의 경계 영역에 설계한 단리 펩타이드를 면역원으로 하여, scFv에 결합하는 항체를 얻을 수 있었다. 이들 항체는, 면역원으로서 이용한 단리 펩타이드(펩타이드 4)에 결합하는 것은 물론이거니와, scFv에 대해서도 결합하는 항체이다.
표 8은, 3E7과 4B9에 대해 싱글 셀 클로닝 후의 scFv에의 반응성을 나타낸다.
Figure pct00009
대표적인 결과를 도 5에 나타낸다. 도 5에 나타나는 바와 같이, 검토한 클론은, VL-L1-VH형 scFv를 갖는 CAR에 대해서 결합성을 나타낸 한편으로, VH-L1-VL형 scFv를 갖는 CAR에 대해서는 약하게밖에 결합성을 나타내지 않았다. 이것으로부터, 이들 클론은, 제1 영역과 링커에 걸쳐 결합한다고 생각되었다.
이하, 표 9에서는, 각 클론의 각 CAR-T 세포 상의 CAR에의 반응성(%)을 나타낸다. 반응성은, CAR에 결합한 항체를 PE 표지 2차 항체로 검출하는 것에 의해 행했다. 반응성은, 전 세포에 대한 PE 양성 세포수로서 구했다.
Figure pct00010
표 9에 나타나는 CAR-T 중 표 6에 나타나 있지 않은 것에 대해서, CAR-T가 갖는 scFv 영역의 제1 영역의 C말단(CDR3보다도 C말단측)의 서열을 표 10에 나타낸다.
Figure pct00011
표 9에 나타나는 바와 같이, (i) scFv의 가변 영역의 정상 영역과 링커를 지향하여 제작한 모노클로날 항체는, scFv의 CDR 영역의 아미노산 서열에 상관없이, scFv에 결합할 수 있었다. 따라서, 제작된 모노클로날 항체는, 동일한 서열을 갖는 다양한 scFv를 CDR 영역의 아미노산 서열에 상관없이 널리 검출하는 항체가 될 수 있다. 또한, 표 9에 나타나는 바와 같이, (ii) 3E7-C1, 4B9-B11 클론은, VL-L1-VH에 대해서는 결합했지만, VH와 VL의 배치를 바꿔 넣은 scFv에는 결합하지 않았다. 이것은, 이들 항체가 VH/VL과 링커에 걸쳐 결합함을 나타낸다. 이와 같은 항체는, scFv의 CDR 영역의 아미노산 서열에 상관없이, 동일한 서열을 갖는 다양한 scFv를 널리 검출하는 항체가 될 수 있다. 이들 항체와 경합하는 항체도, 이들 항체와 동일한 위치에 결합하여, scFv의 CDR 영역의 아미노산 서열에 상관없이, 동일한 서열을 갖는 다양한 scFv를 널리 검출하는 항체가 될 수 있다. 또한, 이들 항체와 같이, VH/VL과 링커에 걸쳐 결합하는 항체는, 계 중의 면역글로불린을 비특이적으로 검출하지 않고, 목적하는 CAR이 발현하고 있는 것을 특이적으로 검출할 수 있는 점에서 유용할 수 있다.
이에 반해서, 2D12-B12, 3A4-A10-7 클론은, VH와 VL의 배치를 바꿔 넣은 scFv에도 결합했지만, 링커를 다른 링커로 치환한 scFv에는 결합을 나타내지 않았다. 이것은, 이들 클론이 주로 링커에 결합하는 항체인 것을 나타낸다. 링커에 결합하는 항체를 얻는 것은 용이하지 않은 바, 본 발명에서는, VH/VL의 부분 펩타이드와의 융합 펩타이드를 이용하는 것에 의해, 링커 부분의 면역원성이 개선되어, 주로 링커에 결합하는 항체를 효율 좋게 취득할 수 있었던 것이 시사되었다. 이와 같은 항체는, scFv의 CDR 영역의 아미노산 서열에 상관없이, 또한 VH와 VL의 순서에 관계없이, scFv를 널리 검출할 수 있다.
따라서, 본 발명의 항체는, scFv및 scFv를 포함하는 CAR 발현 세포를, scFv의 CDR 영역의 아미노산 서열에 상관없이(항원에 상관없이) 검출할 수 있는 점에서 유익하다는 것이 나타났다.
더욱이, 표 9에 의하면, VH-L1-VL 및 VL-L1-VH형 scFv에 대한 항체는, 상이한 링커를 갖는 VH-L2-VL 및 VL-L2-VH형 scFv에 대해서는 거의 반응을 나타내지 않았다. 이에 반해서, VL-L1-VH형 scFv를 지향하여 제작한 항체는, VL-L1-VH형 scFv를 갖는 CAR을 발현하는 CAR-T 세포에 대해서 강한 반응성을 나타냈다. 또한, VH-L1-VL형 scFv를 지향하여 제작한 항체는, VH-L1-VL형 scFv를 갖는 CAR을 발현하는 CAR-T 세포에 대해서 강한 반응성을 나타냈다.
VL-L1-VH형 scFv에 대한 항체는, VH-L1-VL형 scFv에 대해서 거의 반응성을 나타내지 않았으므로, 링커 또는 VL에만 결합한다고 하는 항체는 아니고, VL과 링커의 연결부에 대해서 결합하는 항체(특히, VL과 링커에 걸쳐 결합하는 항체)라고 생각된다. 이와 같이, VH 또는 VL과 링커의 연결부를 면역원으로 하는 것에 의해, 당해 연결부에 대한 항체(또는, VL과 링커에 걸쳐 결합하는 항체)를 얻을 수 있다. 이와 같은 연결부에 대한 항체는, 다양한 scFv에 대해서 유의한 반응성을 나타냈다. 또한, VH 부분 혹은 VL 부분에 결합하는 항체, 또는 링커에 결합하는 항체도 유익할 수 있다.
2D12-B12 항체에 대해 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 mRNA로부터 cDNA를 합성하고, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 추정했다. 그 결과, 중쇄 가변 영역은, 서열 번호 91에 기재된 아미노산 서열을 갖고, 경쇄 가변 영역은, 서열 번호 95에 기재된 아미노산 서열을 갖는다고 추정되었다. 중쇄 CDR1∼3(HCDR1∼3) 및 경쇄 CDR1∼3(LCDR1∼3)의 아미노산 서열을 Kabat에 의한 부번 시스템(Kabat, E. A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., 1991, Bethesda: US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH.)에 의해 추정했다. 그 결과, HCDR1∼3은 각각, 서열 번호 92∼94에 기재된 아미노산 서열을 갖는다고 추정되고, LCDR1∼3은 각각, 서열 번호 96∼98에 기재된 아미노산 서열을 갖는다고 추정되었다.
또한, 3A4-A10-7에 대해 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 mRNA로부터 cDNA를 합성하고, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 추정했다. 그 결과, 중쇄 가변 영역은, 서열 번호 99에 기재된 아미노산 서열을 갖고, 경쇄 가변 영역은, 서열 번호 103에 기재된 아미노산 서열을 갖는다고 추정되었다. 중쇄 CDR1∼3(HCDR1∼3) 및 경쇄 CDR1∼3(LCDR1∼3)의 아미노산 서열을 마찬가지로 Kabat에 의한 부번 시스템에 의해 추정했다. 그 결과, HCDR1∼3은 각각, 서열 번호 100∼102에 기재된 아미노산 서열을 갖는다고 추정되고, LCDR1∼3은 각각, 서열 번호 104∼106에 기재된 아미노산 서열을 갖는다고 추정되었다.
또한, 3E7-C1에 대해 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 mRNA로부터 cDNA를 합성하고, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 추정했다. 그 결과, 중쇄 가변 영역은, 서열 번호 121에 기재된 아미노산 서열을 갖고, 경쇄 가변 영역은, 서열 번호 122에 기재된 아미노산 서열을 갖는다고 추정되었다. 중쇄 CDR1∼3(HCDR1∼3) 및 경쇄 CDR1∼3(LCDR1∼3)의 아미노산 서열을 추정하면 각각, IMGT로는, 서열 번호 123∼125 및 서열 번호 126∼128, Kabat으로는, 서열 번호 129∼131 및 서열 번호 132∼134, Chothia로는, 서열 번호 135∼137 및 서열 번호 138∼140, Contact로는, 서열 번호 141∼143 및 서열 번호 144∼146, AbM으로는, 서열 번호 147∼149 및 서열 번호 150∼152로 추정되었다. 추정된 어느 하나의 HCDR1∼3과 LCDR1∼3의 세트를 3E7-C1의 CDR이라고 추정할 수 있다. 당업자이면, 적절히 CDR을 선택하여, 3E7-C1과 마찬가지의 결합 특성을 갖는 항체를 제작할 수 있다. 예를 들어, Kabat 등의 번호 붙이기에 기초하여 3E7-C1과 마찬가지의 결합 특성을 갖는 항체를 제작할 수 있다.
또한, 4B9-B11에 대해 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 mRNA로부터 cDNA를 합성하고, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 추정했다. 그 결과, 중쇄 가변 영역은, 서열 번호 153에 기재된 아미노산 서열을 갖고, 경쇄 가변 영역은, 서열 번호 154에 기재된 아미노산 서열을 갖는다고 추정되었다. 중쇄 CDR1∼3(HCDR1∼3) 및 경쇄 CDR1∼3(LCDR1∼3)의 아미노산 서열을 추정하면 각각, IMGT로는, 서열 번호 155∼157 및 서열 번호 158∼160, Kabat로는, 서열 번호 161∼163 및 서열 번호 164∼166, Chothia로는, 서열 번호 167∼169 및 서열 번호 170∼172, Contact로는, 서열 번호 173∼175 및 서열 번호 176∼178, AbM으로는, 서열 번호 179∼181 및 서열 번호 182∼184로 추정되었다. 추정된 어느 하나의 HCDR1∼3과 LCDR1∼3의 세트를 4B9-B11의 CDR이라고 추정할 수 있다. 당업자이면, 적절히 CDR을 선택하여, 4B9-B11과 마찬가지의 결합 특성을 갖는 항체를 제작할 수 있다. 예를 들어, Kabat 등의 번호 붙이기에 기초하여 4B9-B11과 마찬가지의 결합 특성을 갖는 항체를 제작할 수 있다.
[표 11-1]
Figure pct00012
[표 11-2]
Figure pct00013
[표 11-3]
Figure pct00014
[표 11-3]
Figure pct00015
[표 11-4]
Figure pct00016
[표 11-5]
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020

Claims (21)

  1. 제1 영역, 링커, 및 제2 영역을 포함하는 scFv에 결합하는 항체로서,
    상기 scFv 중에 있어서, 상기 제1 영역, 상기 링커, 및 상기 제2 영역은, N말단측으로부터 C말단측을 향하여 이 순번으로 배치되어 있고,
    제1 영역 및 제2 영역은 각각, 항체의 중쇄 가변 영역 및 항체의 경쇄 가변 영역이거나, 또는 항체의 경쇄 가변 영역 및 항체의 중쇄 가변 영역이고,
    상기 항체는, 이하 (i)∼(vi)의 적어도 1개를 만족시키는 항체인
    {(i) (i-a) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역과, (i-b) 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는다;
    (ii) (ii-a) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역과, (ii-b) 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는다;
    (iii) 서열 번호 19, 20, 23 및 24의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합한다;
    (iv) 서열 번호 19∼24 및 50∼71의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합한다;
    (v) (v-a) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역 및/또는 (v-b) 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역에 결합한다; 및
    (vi) (vi-a) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역, 및/또는 (vi-b) 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역에 결합한다},
    항체.
  2. 제 1 항에 있어서,
    (i) (i-a) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역과, (i-b) 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는, 항체.
  3. 제 1 항에 있어서,
    (ii) (ii-a) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역과, (ii-b) 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는, 항체.
  4. 제 1 항에 있어서,
    (iii) 서열 번호 19, 20, 23 및 24의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하는, 항체.
  5. 제 1 항에 있어서,
    (iv) 서열 번호 19∼24 및 50∼71의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하는, 항체.
  6. 제 1 항에 있어서,
    (v) (v-a) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역 및/또는 (v-b) 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역에 결합하는, 항체.
  7. 제 1 항에 있어서,
    (vi) (vi-a) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역, 및/또는 (vi-b) 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역에 결합하는, 항체.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (vii) 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서는, 유의한 결합 친화성을 나타내지 않는, 항체.
  9. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (viii) 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서도 유의한 결합 친화성을 나타내는, 항체.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)에 결합하는, 항체.
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포에 결합하는, 항체.
  12. scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 검출하는 방법으로서, 상기 세포와, 제 11 항에 기재된 항체를 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
  13. scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 검출하기 위한 키트 또는 검사약으로서, 제 11 항에 기재된 항체를 포함하는, 키트 또는 검사약.
  14. 대상에 있어서, scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 표적화하는 방법으로서,
    대상에게 scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 투여하는 것과,
    대상에게 제 11 항에 기재된 항체를 투여하는 것
    을 포함하는, 방법.
  15. scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포가 투여된 대상에 있어서, scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 표적화하는 것에 이용하기 위한 항체 제제로서, 제 11 항에 기재된 항체를 포함하는, 항체 제제.
  16. scFv에 결합하는 항체를 취득하는 방법으로서,
    scFv는, 제1 영역, 링커, 및 제2 영역을 포함하고, 상기 scFv 중에 있어서, 상기 제1 영역, 상기 링커, 및 상기 제2 영역은, N말단측으로부터 C말단측을 향하여 이 순번으로 배치되어 있고, 제1 영역 및 제2 영역은 각각, 항체의 중쇄 가변 영역 및 항체의 경쇄 가변 영역이거나, 또는 항체의 경쇄 가변 영역 및 항체의 중쇄 가변 영역이고,
    방법은, 항체군으로부터, scFv에 결합하는 항체로서, 이하 (i)∼(vi)의 적어도 1개를 만족시키는 항체를 선택 또는 동정하는 것을 포함하는, 방법:
    {(i) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역과, 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는다;
    (ii) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역과, 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합하고, 여기에서 상기 단리된 펩타이드는, 13∼20아미노산 길이를 갖는다;
    (iii) 서열 번호 19, 20, 23 및 24의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합한다;
    (iv) 서열 번호 19∼24 및 50∼71의 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 결합한다;
    (v) 제1 영역 내의 영역으로서, 제1 영역의 C말단으로부터 1∼10아미노산의 영역 및 당해 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 N말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역에 결합한다; 및
    (vi) 제2 영역과 연속하는 링커의 일부의 영역으로서, 링커의 C말단측으로부터 1∼10아미노산의 영역, 및 제2 영역 내의 영역으로서, 제2 영역의 N말단으로부터 1∼10아미노산의 영역에 결합한다}.
  17. 제 16 항에 있어서,
    (vii) 항체가, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서는, 유의한 결합 친화성을 나타내지 않는, 방법.
  18. 제 16 항에 있어서,
    (viii) 항체가, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 순번을 바꿔 넣은 scFv에 대해서도, 유의한 결합 친화성을 나타내는, 방법.
  19. 제 16 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
    당해 선별된 항체의 중쇄 CDR1∼3 및 경쇄 CDR1∼3의 아미노산 서열을 갖는 항체를 항체 산생 세포에 산생시키는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  20. scFv에 결합하는 항체로서,
    (i) 서열 번호 91에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 중쇄 CDR1∼3을 각각 중쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 95에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 경쇄 CDR1∼3을 각각 경쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (ii) 서열 번호 92에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 93에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 94에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 96에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 97에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 98에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (iii) 서열 번호 99에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 중쇄 CDR1∼3을 각각 중쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 100에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 경쇄 CDR1∼3을 각각 경쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (iv) 서열 번호 100에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 101에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 102에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 104에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 105에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 106에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (v) 서열 번호 121에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 중쇄 CDR1∼3을 각각 중쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 122에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 경쇄 CDR1∼3을 각각 경쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (vi) 서열 번호 153에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 중쇄 CDR1∼3을 각각 중쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 154에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 경쇄 CDR1∼3을 각각 경쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (vii) 서열 번호 91에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 95에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (viii) 서열 번호 99에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 103에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (ix) 서열 번호 121에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 122에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (x) 서열 번호 153에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 154에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (xi) 상기 (vii), (viii), (ix), 및 (x)의 어느 하나에 기재된 항체와, scFv와의 결합에 관해서 경합하는 항체;
    (xii) 상기 어느 하나의 항체로서 천연(생체 내)의 면역글로불린과는 실질적으로 결합하지 않는 항체; 또는
    (xiii) 상기 어느 하나에 기재된 항체의 아미노산 서열과 90% 이상의 동일성을 갖는 항체.
  21. scFv에 결합하는 항체를 취득하는 방법으로서,
    항체군으로부터,
    (i) 서열 번호 91에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 중쇄 CDR1∼3을 각각 중쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 95에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 경쇄 CDR1∼3을 각각 경쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (ii) 서열 번호 92에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 93에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 94에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 96에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 97에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 98에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (iii) 서열 번호 99에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 중쇄 CDR1∼3을 각각 중쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 100에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 경쇄 CDR1∼3을 각각 경쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (iv) 서열 번호 100에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 101에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 102에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 104에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 105에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 106에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (v) 서열 번호 121에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 중쇄 CDR1∼3을 각각 중쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 122에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 경쇄 CDR1∼3을 각각 경쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (vi) 서열 번호 153에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 중쇄 CDR1∼3을 각각 중쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 154에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 경쇄 CDR1∼3을 각각 경쇄 CDR1∼3으로서 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (vii) 서열 번호 91에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 95에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (viii) 서열 번호 99에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 103에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (ix) 서열 번호 121에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 122에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (x) 서열 번호 153에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 154에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체;
    (xi) 상기 (vii), (viii), (ix), 및 (x)의 어느 하나에 기재된 항체와, scFv와의 결합에 관해서 경합하는 항체;
    (xii) 상기 어느 하나의 항체로서 천연(생체 내)의 면역글로불린과는 실질적으로 결합하지 않는 항체; 및
    (xiii) 상기 어느 하나의 항체의 아미노산 서열과 90% 이상의 동일성을 갖는 항체
    의 어느 하나를 만족시키고, 또한, scFv와 결합하는 항체를 선택 또는 동정하는 것을 포함하는, 방법.
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