KR20230143177A - 신규한 항-cd24 항체 - Google Patents

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KR20230143177A
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민 뎅
윤 리우
지아메이 루오
후이 유웬
보 산
제이 메이
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안텐진 바이올로직스 리미티드
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Abstract

본 개시내용은 항-CD24 항체, 및 항-CD24/CD47 이중특이적 항체 분자, 이를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드, 이를 포함하는 약제학적 조성물, 및 이의 용도를 제공한다.

Description

신규한 항-CD24 항체
본 개시내용은 일반적으로 신규한 항-CD24 항체에 관한 것이다.
열 안정한 항원(HSA) 또는 소세포 폐 암종 클러스터 4 항원으로도 공지된 분화 클러스터 24(CD24, UniProt: P25063)는 심하게 글리코실화되고 GPI 링크를 통해 세포 표면에 고정된 32-아미노산 뮤신 유사 글리코실포스파티딜이노시톨(GPI) 고정된 분자이다. CD24는 감염, 패혈증, 간 손상 및 만성 이식편 대 숙주 질환에 대한 불리한 염증 반응을 감소시키도록 선천 면역 세포(예컨대, 대식세포)에서 발현되는 시알산 결합 Ig 유사 렉틴 10(Siglec-10)과 상호작용할 수 있다(Pirruccello et al., J. Immunol. 136, 3779-3784 (1986); Chen et al., Glycobiology 9, 800-806 (2014); Chen et al., Cell 152(3), 467-478; Chen GY et al. Nature Biotechnology 29, 428-435 (2011); Chen GY et al. Science 323 (5922), 1722-1725 (2009); and Toubai T et al. Blood 123(22), 3512-3513 (2014)). Siglec-10에 대한 CD24의 결합은 Siglec-10의 세포질 꼬리에 있는 2개의 면역수용체 티로신 기반 억제 모티프(ITIM)와 관련된 SHP-1 및/또는 SHP-2 포스파타제에 의해 매개되는 억제 신호전달 캐스케이드를 유도하여 toll 유사 수용체(TLR) 매개된 염증 및 대식세포에 의한 세포 탐식에 필요한 세포골격 재배열을 차단한다(Crocker PR et al., Nature Reviews Immunology. 7, 255-266 (2007); Abram CL et al., J. Leuko.c Biol. 102(3), 657-675 (2017) and Dietrich J et al., J. Immunol. 166(4), 2514-2521 (2001) 12-14).
CD24의 과발현은 유방암(85%), 직장암(84%), 난소암(83%), 췌장암(72%), 방광암(62%), 담관암종(51%), 전립선암(48%), 소세포 폐암(45%)을 포함하지만 이에 제한 없이 다양한 암세포에서 면역조직화학 연구에 기초하여 관찰되었다. 28건의 연구에 대한 메타 분석은 CD24가 인간 암의 68%에서 과발현되며, CD24 발현은 더 높은 자가 재생 능력, 더 많은 전이 및 불량한 예후와 서로 연관된다는 것을 밝혔다(Krisiansen G. et al., Am J Pathol, 161:1215-1221, 2002; Krisiansen G. et al., Clin cancer Res, 9:4906-4913, 2003; Krisiansen G. et al., Br J Cancer, 88:231-236, 2003; Kristiansen G. et al., Prostate, 58:182-192, 2004; Hocob J. et al., Pancreatology, 4:454-460, 2004; Samuel E D, BioMed Central, 3:3-15, 2004; Min-Cheng S. et al., Cancer letter, 1-6, 2005 and Lee et al., Oncol. Rep. 2009, 22, 1149-115). 최근 연구는 선천 면역계의 CD24 매개된 억제가 Siglec-10을 발현하는 대식세포에 의한 클리어린스(clearance)를 피하기 위한 메커니즘으로서 암세포에 의해 이용될 수 있음을 밝혔다(Amira et al., Nature. 2019 August; 572(7769): 392-396).
CD24를 표적으로 하는 치료제의 개발에도 불구하고, 신규한 항-CD24 항체에 대한 상당한 요구가 있다.
본 명세서 전반에 걸쳐, 단수형태는 본원에서 하나 또는 하나 초과(즉, 적어도 하나)의 대상을 지칭하도록 사용된다. 예로서, "항체"는 하나의 항체 또는 하나 초과의 항체를 의미한다.
본 개시내용은 신규한 항-CD24 항체 분자, 이의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열, 및 이의 용도를 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 서열번호 1, 3, 5, 7, 9, 11, 14, 16, 17, 18, 19, 21, 23, 25, 27, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 95, 96, 97, 104, 105, 106, 113, 114, 115, 126, 127, 128, 136, 137, 150, 151, 152, 160, 161, 162, 168, 169 170, 222, 223 및 224로 이루어진 군으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 서열 및/또는 서열번호 2, 4, 6, 8, 10, 12, 13, 15, 20, 22, 24, 26, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 98, 99, 100, 107, 108, 116, 117, 129, 130, 131, 138, 139, 140, 145, 153, 154, 155, 163, 171, 172, 173, 184, 185, 186, 187, 188, 225, 226 및 227로 이루어진 군으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 경쇄 CDR 서열을 포함하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역을 포함한다:
a) 서열번호 1, 서열번호 3 및 서열번호 5로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
b) 서열번호 7, 서열번호 9 및 서열번호 11로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
c) 서열번호 7, 서열번호 14 및 서열번호 11로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
d) 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
e) 서열번호 19, 서열번호 21 및 서열번호 23으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
f) 서열번호 25, 서열번호 27 및 서열번호 28로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
g) 서열번호 25, 서열번호 30 및 서열번호 28로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
h) 서열번호 32, 서열번호 34 및 서열번호 36으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
i) 서열번호 38, 서열번호 40 및 서열번호 42로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
j) 서열번호 44, 서열번호 46 및 서열번호 48로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
k) 서열번호 95, 서열번호 96 및 서열번호 97로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
l) 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
m) 서열번호 113, 서열번호 114 및 서열번호 115로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
n) 서열번호 126, 서열번호 127 및 서열번호 128로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
o) 서열번호 25, 서열번호 136 및 서열번호 137로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
p) 서열번호 150, 서열번호 151 및 서열번호 152로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
q) 서열번호 160, 서열번호 161 및 서열번호 162로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
r) 서열번호 168, 서열번호 169 및 서열번호 170으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
s) 서열번호 222, 서열번호 223 및 서열번호 224로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역을 포함한다:
a) 서열번호 2, 서열번호 4 및 서열번호 6으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
b) 서열번호 8, 서열번호 10 및 서열번호 12로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
c) 서열번호 13, 서열번호 10 및 서열번호 15로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
d) 서열번호 20, 서열번호 22 및 서열번호 24로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
e) 서열번호 26, 서열번호 22 및 서열번호 24로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
f) 서열번호 29, 서열번호 22 및 서열번호 31로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
g) 서열번호 33, 서열번호 35 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
h) 서열번호 39, 서열번호 41 및 서열번호 43으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
i) 서열번호 45, 서열번호 47 및 서열번호 49로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
j) 서열번호 98, 서열번호 99 및 서열번호 100으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
k) 서열번호 107, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
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n) 서열번호 138, 서열번호 139 및 서열번호 140으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
o) 서열번호 29, 서열번호 145 및 서열번호 24로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
p) 서열번호 153, 서열번호 154 및 서열번호 155로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
q) 서열번호 163, 서열번호 154 및 서열번호 155로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
r) 서열번호 171, 서열번호 172 및 서열번호 173으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
s) 서열번호 184, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
t) 서열번호 185, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
u) 서열번호 186, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
v) 서열번호 187, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
w) 서열번호 188, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및
x) 서열번호 225, 서열번호 226 및 서열번호 227로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기를 포함한다:
a) 서열번호 1, 서열번호 3 및 서열번호 5로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 2, 서열번호 4 및 서열번호 6으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
b) 서열번호 7, 서열번호 9 및 서열번호 11로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 8, 서열번호 10 및 서열번호 12로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
c) 서열번호 7, 서열번호 14 및 서열번호 11로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 13, 서열번호 10 및 서열번호 15로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
d) 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 13, 서열번호 10 및 서열번호 15로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
e) 서열번호 19, 서열번호 21 및 서열번호 23으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 20, 서열번호 22 및 서열번호 24로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
f) 서열번호 25, 서열번호 27 및 서열번호 28로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 26, 서열번호 22 및 서열번호 24로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
g) 서열번호 25, 서열번호 30 및 서열번호 28로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 29, 서열번호 22 및 서열번호 31로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
h) 서열번호 32, 서열번호 34 및 서열번호 36으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 33, 서열번호 35 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
i) 서열번호 38, 서열번호 40 및 서열번호 42로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 39, 서열번호 41 및 서열번호 43으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
j) 서열번호 44, 서열번호 46 및 서열번호 48로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 45, 서열번호 47 및 서열번호 49로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
k) 서열번호 95, 서열번호 96 및 서열번호 97로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 98, 서열번호 99 및 서열번호 100으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
l) 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 107, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
m) 서열번호 113, 서열번호 114 및 서열번호 115로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 13, 서열번호 116 및 서열번호 117로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
n) 서열번호 126, 서열번호 127 및 서열번호 128로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 129, 서열번호 130 및 서열번호 131로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
o) 서열번호 25, 서열번호 136 및 서열번호 137로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 138, 서열번호 139 및 서열번호 140으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
p) 서열번호 25, 서열번호 30 및 서열번호 28로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 29, 서열번호 145 및 서열번호 24로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
q) 서열번호 150, 서열번호 151 및 서열번호 152로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 153, 서열번호 154 및 서열번호 155로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
r) 서열번호 160, 서열번호 161 및 서열번호 162로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 163, 서열번호 154 및 서열번호 155로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
s) 서열번호 168, 서열번호 169 및 서열번호 170으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 171, 서열번호 172 및 서열번호 173으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
t) 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 184, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
u) 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 185, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
v) 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 186, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
w) 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 187, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
x) 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 188, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역; 또는
y) 서열번호 222, 서열번호 223 및 서열번호 224로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 225, 서열번호 226 및 서열번호 227로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 50, 서열번호 54, 서열번호 58, 서열번호 62, 서열번호 66, 서열번호 70, 서열번호 74, 서열번호 78, 서열번호 82, 서열번호 86, 서열번호 101, 서열번호 109, 서열번호 118, 서열번호 122, 서열번호 132, 서열번호 141, 서열번호 146, 서열번호 156, 서열번호 164, 서열번호 174, 서열번호 177, 서열번호 178, 서열번호 179, 서열번호 189, 서열번호 190, 서열번호 191, 서열번호 192, 서열번호 193, 서열번호 194 및 이의 적어도 80%(예컨대, 적어도 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%) 서열 동일성의 상동 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 52, 서열번호 56, 서열번호 64, 서열번호 68, 서열번호 72, 서열번호 76, 서열번호 80, 서열번호 84, 서열번호 88, 서열번호 103, 서열번호 111, 서열번호 120, 서열번호 124, 서열번호 134, 서열번호 143, 서열번호 148, 서열번호 158, 서열번호 166, 서열번호 176, 서열번호 180, 서열번호 181, 서열번호 182, 서열번호 183, 서열번호 195, 서열번호 196, 서열번호 197, 서열번호 198, 서열번호 199, 서열번호 200, 서열번호 201, 서열번호 202, 서열번호 203, 서열번호 221 및 이의 적어도 80%(예컨대, 적어도 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%) 서열 동일성의 상동 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기를 포함한다:
a) 서열번호 50을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 52를 포함하는 경쇄 가변 영역;
b) 서열번호 54를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 56을 포함하는 경쇄 가변 영역;
c) 서열번호 58을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 64를 포함하는 경쇄 가변 영역;
d) 서열번호 62를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 64를 포함하는 경쇄 가변 영역;
e) 서열번호 66을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 68을 포함하는 경쇄 가변 영역;
f) 서열번호 70을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 72를 포함하는 경쇄 가변 영역;
g) 서열번호 74를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 76을 포함하는 경쇄 가변 영역;
h) 서열번호 78을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 80을 포함하는 경쇄 가변 영역;
i) 서열번호 82를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 84를 포함하는 경쇄 가변 영역;
j) 서열번호 86을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 88을 포함하는 경쇄 가변 영역;
k) 서열번호 101을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 103을 포함하는 경쇄 가변 영역;
l) 서열번호 109를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 111을 포함하는 경쇄 가변 영역;
m) 서열번호 118를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 120 또는 서열번호 221을 포함하는 경쇄 가변 영역;
n) 서열번호 122를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 124를 포함하는 경쇄 가변 영역;
o) 서열번호 132를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 134를 포함하는 경쇄 가변 영역;
p) 서열번호 141을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 143을 포함하는 경쇄 가변 영역;
q) 서열번호 146을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 148을 포함하는 경쇄 가변 영역;
r) 서열번호 156을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 158을 포함하는 경쇄 가변 영역;
s) 서열번호 164를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 166을 포함하는 경쇄 가변 영역;
t) 서열번호 174를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 176을 포함하는 경쇄 가변 영역;
u) 서열번호 177을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 180을 포함하는 경쇄 가변 영역;
v) 서열번호 178을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 180을 포함하는 경쇄 가변 영역;
w) 서열번호 179를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 180을 포함하는 경쇄 가변 영역;
x) 서열번호 177을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 181을 포함하는 경쇄 가변 영역;
y) 서열번호 178을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 181을 포함하는 경쇄 가변 영역;
z) 서열번호 179를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 181을 포함하는 경쇄 가변 영역;
aa) 서열번호 177을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 182를 포함하는 경쇄 가변 영역;
bb) 서열번호 178을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 182를 포함하는 경쇄 가변 영역;
cc) 서열번호 179를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 182를 포함하는 경쇄 가변 영역;
dd) 서열번호 177을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 183을 포함하는 경쇄 가변 영역;
ee) 서열번호 178을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 183을 포함하는 경쇄 가변 영역;
ff) 서열번호 179를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 183을 포함하는 경쇄 가변 영역;
gg) 서열번호 189를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 195를 포함하는 경쇄 가변 영역;
hh) 서열번호 189를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 196을 포함하는 경쇄 가변 영역;
ii) 서열번호 189를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 197을 포함하는 경쇄 가변 영역;
jj) 서열번호 189를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 198을 포함하는 경쇄 가변 영역;
kk) 서열번호 189를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 199를 포함하는 경쇄 가변 영역;
ll) 서열번호 190을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 200을 포함하는 경쇄 가변 영역;
mm) 서열번호 190을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 201을 포함하는 경쇄 가변 영역;
nn) 서열번호 190을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 202를 포함하는 경쇄 가변 영역;
oo) 서열번호 190을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 203을 포함하는 경쇄 가변 영역;
pp) 서열번호 191을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 200을 포함하는 경쇄 가변 영역;
qq) 서열번호 191을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 201을 포함하는 경쇄 가변 영역;
rr) 서열번호 191을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 202를 포함하는 경쇄 가변 영역;
ss) 서열번호 191을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 203을 포함하는 경쇄 가변 영역;
tt) 서열번호 192를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 200을 포함하는 경쇄 가변 영역;
uu) 서열번호 192를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 201을 포함하는 경쇄 가변 영역;
vv) 서열번호 192를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 202를 포함하는 경쇄 가변 영역;
ww) 서열번호 192를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 203을 포함하는 경쇄 가변 영역;
xx) 서열번호 193을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 200을 포함하는 경쇄 가변 영역;
yy) 서열번호 193을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 201을 포함하는 경쇄 가변 영역;
zz) 서열번호 193을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 202를 포함하는 경쇄 가변 영역;
aaa) 서열번호 193을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 203을 포함하는 경쇄 가변 영역;
bbb) 서열번호 194를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 200을 포함하는 경쇄 가변 영역;
ccc) 서열번호 194를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 201을 포함하는 경쇄 가변 영역;
ddd) 서열번호 194를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 202를 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
eee) 서열번호 194를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 203을 포함하는 경쇄 가변 영역.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하나 이상의 아미노산 잔기 치환 또는 변형을 추가로 포함하지만 인간 CD24 또는 시노몰구스 원숭이 CD24에 대한 특이적 결합 친화성을 보유한다.
일부 실시양태에서, 치환은 하나 이상의 CDR 서열에 있고/있거나, VH 또는 VL 서열 중 하나 이상에는 있지만 임의의 CDR 서열에는 없다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 면역글로불린 불변 영역, 임의적으로 인간 Ig의 불변 영역, 또는 임의적으로 인간 IgG의 불변 영역을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 불변 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4의 불변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 키메라 또는 인간화된다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 디아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv 단편, 디술파이드 안정화된 Fv 단편(dsFv), (dsFv)2, 이중특이적 dsFv(dsFv-dsFv'), 디술파이드 안정화된 디아바디(ds 디아바디), 단일 쇄 항체 분자(scFv), scFv 이량체(2가 디아바디), 다중특이적 항체, 낙타화된(camelized) 단일 도메인 항체, 나노바디, 도메인 항체, 및 2가 도메인 항체이다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이중특이적이다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD24의 제1 및 제2 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있거나 CD24 및 제2 항원에 특이적으로 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Fab 또는 scFv를 통해 제2 항원에 결합하고, 임의적으로 Fab를 통해 CD24에 결합하고 scFv를 통해 제2 항원에 결합한다.
일부 실시양태에서, 이중특이적 항체 분자는 VL(항-CD24)-CL 형식의 경쇄와 회합된 VH(항-CD24)-CH1-힌지-CH2-CH3-스페이서-제2 항원 결합 scFv 형식의 중쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 제2 항원은 PD-L1, PD-L2, PD-1, CLTA-4, TIM-3, LAG3, CD160, 2B4, TGFβ, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, OX40, CD2, CD27, ICAM-1, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, LFA-1, ICOS, 4-1BB, GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, IL-2, IL-15, CD3, CD16 , SIRPα, Siglec 10, LILRB2, Clever-1, Macro, LILRB4, Siglec15, CSF1R, PSGL-1, VSIG-4, B2M 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 임의적으로 선택되는 면역 관련 표적이다.
일부 실시양태에서, 제2 항원은 종양 항원을 포함한다.
일부 실시양태에서, 종양 항원은 CA-125, 강글리오시드 G(D2), G(M2) 및 G(D3), CD19, CD20, CD33, CD47, CD52, Ep-CAM, CEA, CLDN18.2, 봄베신 유사 펩티드, PSA, HER2/neu, 표피 성장 인자 수용체(EGFR), erbB2, erbB3/HER3, erbB4, CD44v6, CD44v9, Ki-67, 암 관련 뮤신, VEGF, VEGFR(예컨대, VEGFR3), 에스트로겐 수용체, 루이스-Y 항원, TGFβ1, IGF-1 수용체, EGFα, c-Kit 수용체, 트랜스페린 수용체, IL-2R, CDH6, CEA, FOLR1, TROP2, PTK7, SLITRK6, CD142, NECTIN-4, ROR1, ROR2, CD142, CD123, CD22, CD79b, DLL3, SLC 패밀리 또는 CO17-1A를 포함한다.
일부 실시양태에서, 제2 항원은 PD-L1, SIRPα, CD47 및 B2M으로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역억제 분자이다.
일부 실시양태에서, 종양 항원은 CD47이다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하나 이상의 접합체에 연결되고, 임의적으로 접합체는 직접적으로 또는 링커를 통해 공유적으로 부착된다.
일부 실시양태에서, 접합체는 클리어런스 변형제, 화학요법제, 독소, 방사성 동위원소, 란타나이드, 발광 표지, 형광 표지, 효소-기질 표지, DNA 알킬화제, 토포이소머라제 억제제, 튜불린 결합제, 또는 다른 항암 약물을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 CD24에 특이적으로 결합할 수 있고, 임의적으로 CD24는 인간 또는 시노몰구스 원숭이로부터 유래되고, 임의적으로 CD24는 재조합 CD24 또는 세포 표면에 발현된 CD24이다.
한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 동일한 에피토프에 대해 경쟁하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각각 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 107, 184, 185, 186, 187 및 188로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 동일한 에피토프에 대해 경쟁한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각각 서열번호 95, 서열번호 96 및 서열번호 97의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 각각 서열번호 98, 서열번호 99 및 서열번호 100의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 동일한 에피토프에 대해 경쟁한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 비-암세포에 비해 암세포에서 발현되는 CD24에 선택적으로 결합한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 제2 치료제를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 제2 치료제는 하나 이상의 면역억제 분자에 대한 길항제이다.
일부 실시양태에서, 제2 치료제는 CD47 길항제이다.
일부 실시양태에서, CD47 길항제는 SIRPα-Fc 융합 단백질 또는 이의 변이체, 또는 항-CD47 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 102, 110, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219 및 220으로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 숙주 세포를 본원에 제공된 벡터가 발현되는 조건 하에서 배양하는 단계를 포함하는, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현하는 방법을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CD24 활성의 조절로부터 이익을 얻는 대상체에게 치료학적 유효량의 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본원에 제공된 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 질환 또는 병태는 CD24 관련 질환 또는 병태이다.
일부 실시양태에서, 질환 또는 병태는 암, 적응 면역 질환, 자가면역 질환, 염증 질환, 또는 감염 질환이다.
일부 실시양태에서, 암은 폐암, 기관지암, 골암, 간 및 담관암, 췌장암, 유방암, 간암, 난소암, 고환암, 신장암, 방광암, 두경부암, 척추암, 뇌암, 자궁경부암, 자궁암, 자궁내막암, 결장암, 결장직장암, 직장암, 항문암, 식도암, 위장(관)암, 피부암, 전립선암, 뇌하수체암, 위암, 질암, 갑상선암, 교모세포종, 성상세포종, 흑색종, 골수형성이상 증후군, 육종, 기형종, 선암종, 백혈병, 골수종 및 림프종이다. 일부 실시양태에서, 암은 화학내성 암이다.
일부 실시양태에서, 질환 또는 병태는 B 세포 림프종, 예컨대 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종(MM), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 변연부 B 세포 림프종(MZL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 리히터 증후군, 버킷 림프종 또는 소포성 림프종으로부터 선택되는 혈액암이다.
일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대상체에게 치료학적 유효량의 제2 치료제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 치료제는 하나 이상의 면역억제 분자에 대한 길항제이다.
일부 실시양태에서, 제2 치료제는 CD47 길항제이다.
일부 실시양태에서, CD47 길항제는 SIRPα-Fc 융합 단백질 또는 이의 변이체, 또는 항-CD47 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 투여는 경구, 경비, 정맥내, 피하, 설하, 또는 근육내 투여를 통한 것이다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CD24 발현 세포를 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 노출시키는 단계를 포함하는, CD24 발현 세포에서 CD24 활성을 조절하는 방법을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 샘플을 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계 및 샘플에서 CD24의 존재 또는 양을 결정하는 단계를 포함하는, 샘플에서 CD24의 존재 또는 양을 검출하는 방법을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 a) 대상체로부터 샘플을 수득하는 단계; b) 대상체로부터 수득된 샘플을 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계; c) 샘플에서 CD24의 존재 또는 양을 결정하는 단계; 및 d) CD24의 존재 또는 양을 대상체에서 CD24 관련 질환 또는 병태의 존재 또는 상태와 서로 연관시키는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD24 관련 질환 또는 병태를 진단하는 방법을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 대상체에서 CD24 관련 질환 또는 병태를 치료하기 위한 약제의 제조에서 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 약제는 제2 치료제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 치료제는 하나 이상의 면역억제 분자에 대한 길항제이다.
일부 실시양태에서, 제2 치료제는 CD47 길항제이다. 일부 실시양태에서, CD47 길항제는 SIRPα-Fc 융합 단백질 또는 이의 변이체, 및 항-CD47 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CD24 관련 질환 또는 병태를 진단하기 위한 진단제의 제조에서 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도를 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CD24, 임의적으로 재조합 CD24, 세포 표면에 발현된 CD24, 또는 CD24 발현 세포를 검출하는 데 유용한 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 키트를 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 항원 결합 도메인, 막횡단 도메인, 공동자극 신호전달 영역, 및 TCR 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 제공하며, 항원 결합 도메인은 CD24에 특이적으로 결합하고 본원에 제공된 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 단편은 Fab 또는 scFv이다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 CAR은 이중특이적이다.
일부 실시양태에서, CAR은 CD24 이외의 제2 항원 또는 CD24 상의 제2 에피토프에 추가로 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 항원은 종양 항원이다.
일부 실시양태에서, TCR 신호전달 도메인은 CD3ζ, FccRIγ, CD27, CD28, CD137, CD134, MyD88, CD40, CD278, TLR, 또는 이들의 조합의 세포내 신호 영역 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 막횡단 영역은 CD3, CD4, CD8 또는 CD28의 막횡단 영역을 포함한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 키메라 항원 수용체(CAR)를 코딩하는 핵산 서열을 제공한다. 한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 핵산 서열을 포함하는 세포를 제공한다. 한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 핵산 서열을 포함하는 벡터를 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 CAR을 발현하도록 유전자 변형된 세포를 제공한다.
일부 실시양태에서, 세포는 면역세포이고, 임의적으로 면역 세포는 T 림프구, NK 세포, 단핵구, 대식세포 또는 NKT 림프구이다.
한 측면에서, 본 개시내용은 포유동물에게 본원에 제공된 CAR을 발현하도록 유전자 변형된 세포의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물에서 CD24 발현 세포 또는 조직에 대한 T 세포 매개 면역 반응을 자극하는 방법을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 포유동물에게 유효량의 본원에 제공된 세포를 투여함으로써 포유동물을 치료하는 단계를 포함하는, CD24 관련 질환 또는 병태를 갖는 포유동물을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 세포는 자가 T 세포이다.
일부 실시양태에서, CD24 관련 질환 또는 병태는 암이다.
일부 실시양태에서, 포유동물은 인간 대상체이다.
한 측면에서, 본 개시내용은 글리코실화되거나 시알릴화된 CD24에만 결합하는, 바람직하게는 CD24의 시알산에만 결합하는 항-CD24 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 항-CD24 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 비-암세포에 비해 암세포에서 발현되는 CD24에 선택적으로 결합한다.
일부 실시양태에서, 항-CD24 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각각 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 107, 184, 185, 186, 187 및 188로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하거나, 각각 서열번호 95, 서열번호 96 및 서열번호 97의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 각각 서열번호 98, 서열번호 99 및 서열번호 100의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 동일한 에피토프에 대해 경쟁한다.
일부 실시양태에서, 항-CD24 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각각 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 107, 184, 185, 186, 187 및 188로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하거나, 각각 서열번호 95, 서열번호 96 및 서열번호 97의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 각각 서열번호 98, 서열번호 99 및 서열번호 100의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
도 1a는 293F 블랭크 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 1b는 293F-hCD24 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 1c는 MCF7 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 1d는 MDA-MB-468 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 1e는 Nalm1 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 1f는 CHOK1-hCD24 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 1g는 HT-29 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 1h는 NCI H1975 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 1i는 A549 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 1j는 Nalm6 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체의 MFI를 나타낸다.
도 1k는 SU-DHL6 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 1l은 인간 B 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체의 MFI를 나타낸다.
도 1m은 DoHH2 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 1n은 HT29 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 1o는 Huh7 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체의 MFI를 나타낸다.
도 1p는 MCF7 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 1q는 a549 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 1r은 NCI-H1975 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 2a는 293F-hCD24 세포에 대한 키메라 항-CD24 항체 및 참조 항체 SN3의 포식작용 지수를 나타낸다.
도 2b는 HT-29 세포에 대한 키메라 항-CD24 항체 및 참조 항체 SN3의 포식작용 지수를 나타낸다.
도 3a는 HT29 콜레레탈(coleretal) 종양 세포에 대한 항-CD47 항체 hu5F9와 키메라 항-CD24 항체 chAb110D4G4의 조합 치료의 포식작용 지수를 나타낸다.
도 3b는 HT29 콜레레탈 종양 세포에 대한 항-CD47 항체 hu5F9와 키메라 항-CD24 항체 chAb111F3A2의 조합 치료의 포식작용 지수를 나타낸다.
도 3c는 HT29 콜레레탈 종양 세포에 대한 항-CD47 항체 hu5F9와 키메라 항-CD24 항체 chAb81A1F8의 조합 치료의 포식작용 지수를 나타낸다.
도 4a는 HT29 세포에 대한 hIgG4 단독, ch81A1F8-IgG4 단독, 이중특이적 항체(ch81A1F8-IgG4+Hu5F9 유래된 scFv) 및 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 4b는 HT29 세포에 대한 hIgG4 단독, hu5F9 단독, ch81A1F8-IgG4 단독, 이중특이적 항체(ch81A1F8-IgG4+Hu5F9 유래된 scFv) 뿐만 아니라 항-CD24 항체 ch81A1F8-IgG4와 항-CD47 항체 Hu5F9의 조합("콤보")의 포식작용 지수를 나타낸다.
도 5a는 HT-29에 대한 키메라 항-CD24 항체 81A1F8 및 인간화 81A1F8 항체의 MFI를 나타낸다.
도 5b는 Nalm6에 대한 키메라 항-CD24 항체 81A1F8 및 인간화 81A1F8 항체의 MFI를 나타낸다.
도 5c는 HT-29에 대한 키메라 항-CD24 항체 101H9G9A2 및 인간화 101H9G9A2 항체의 MFI를 나타낸다.
도 5d는 가토르프림(Gatorprime) 시스템을 사용하여 측정된 키메라 항-CD24 항체 81A1F8 및 인간화 81A1F8 항체의 KD를 나타낸다.
도 6a-6d는 뉴라미니다제 또는 탈글리코실화로 분해된 세포에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및/또는 벤치 마크 항체 SN3의 MFI를 나타낸다.
도 7a는 비아코어(BIAcore)에 의해 측정된 mFc 태그부착된 인간 CD24에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 및 참조 항체 SWA11의 KD를 나타낸다.
도 7b는 비아코어에 의해 측정된 mFc 태그부착된 인간 CD24에 대한 본원에 제공된 키메라 항-CD24 항체 81A1F8 및 인간화 81A1F8 항체의 KD를 나타낸다.
도 8은 ELISA에 의해 측정된 mFc 태그부착된 인간 CD24에 대한 상이한 농도의 키메라 항-CD24 항체 81A1F8의 정규화된 OD450을 나타낸다.
도 9a는 HT-29 세포에 대한 키메라 항-CD24 항체, 참조 항체 SWA11, 및 항-CD47 항체 hu5F9-IgG4의 포식작용 지수를 나타낸다.
도 9b는 Nalm6 세포에 대한 키메라 항-CD24 항체, 참조 항체 SWA11, 및 항-CD47 항체 hu5F9-IgG4의 포식작용 지수를 나타낸다.
도 9c는 SU-DHL-6 세포에 대한, 단독 또는 리툭시맙과 조합된, 드문 Fc 의존적 기능을 갖는 81A1F8-LALAPG 항체의 포식작용 지수를 나타낸다.
도 9d는 HT-29 세포에 대한 항-CD24 항체 81A1F8 단독, the 항-CD47 항체 Hu5F9 단독 뿐만 아니라 항-CD24 항체 81A1F8과 항-CD47 항체 Hu5F9의 조합의 포식작용 지수를 나타낸다.
도 10a는 HT-29 세포에 대한 키메라 항-CD24 항체 81A1F8 및 인간화 81A1F8 항체에 의해 유도된 ADCC 효과를 나타낸다.
도 10b는 hCD24-MCF7 세포에 대한 키메라 항-CD24 항체 81A1F8 및 인간화 81A1F8 항체에 의해 유도된 CDC 효과를 나타낸다.
도 11a는 C57BL/6J 동계 마우스 모델에서 키메라 항-CD24 항체 81A1F8 단독, 옥살리플라틴 단독 뿐만 아니라 키메라 항-CD24 항체 81A1F8와 옥살리플라틴의 조합 투여 후 종양 부피를 나타낸다.
도 11b는 C57BL/6J 동계 마우스 모델에서 키메라 항-CD24 항체 81A1F8 단독, 옥살리플라틴 단독 뿐만 아니라 키메라 항-CD24 항체 81A1F8와 옥살리플라틴의 조합의 투여 후 체중을 나타낸다.
도 11c는 C57BL/6J 동계 마우스 모델에서 키메라 항-CD24 항체 81A1F8 단독, 옥살리플라틴 단독 뿐만 아니라 키메라 항-CD24 항체 81A1F8와 옥살리플라틴의 조합의 생체내 효능 시험의 요약을 나타낸다.
도 11d는 C57BL/6J 동계 마우스 모델에서 키메라 항-CD24 항체 81A1F8과 옥살리플라틴의 조합 치료에 의해 유도된 CD8/CD4 비율 및 M1/M2 대식세포 비율을 나타낸다.
도 12a는 MC38-hCD24 동계 모델에서 상이한 용량으로 키메라 항-CD24 항체 81A1F8-mIgG2a를 투여한 후의 종양 부피를 나타낸다.
도 12b는 MC38-hCD24 동계 모델에서 재시험감염한 후 상이한 농도의 키메라 항-CD24 항체 81A1F8-mIgG2a 및 키메라 항-CD24 항체 81A1F8-mIgG2a의 투여 후 종양 부피를 나타낸다.
도 12c는 MC38-hCD24 동계 모델에서 상이한 용량으로 키메라 항-CD24 항체 81A1F8-mIgG2a를 투여한 후 각각의 마우스에 대한 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 12d는 상이한 용량에서 키메라 항-CD24 항체 81A1F8-mIgG2a의 생체내 효능에 대한 요약을 나타낸다.
도 13a는 단일 작용제(81A1F8-2141-mIgG2a, 옥살리플라틴 또는 아테졸리주맙) 또는 조합 전략의 투여 후 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 13b는 처리 그룹의 각각의 마우스에 대한 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 13c는 단일 작용제(81A1F8-2141-mIgG2a, 옥살리플라틴 또는 아테졸리주맙) 또는 조합 전략의 생체내 효능에 대한 요약을 나타낸다.
도 14a는 단일 작용제(101H9G9A2-mIgG2a, 81A1F8-2141-mIgG2a, 옥살리플라틴 또는 아테졸리주맙) 또는 조합 전략의 투여 후 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 14b는 단일 작용제(101H9G9A2-mIgG2a, 81A1F8-2141-mIgG2a, 옥살리플라틴 또는 아테졸리주맙) 또는 조합 전략의 투여 후 마우스의 체중을 나타낸다.
도 14c는 단일 작용제(101H9G9A2-mIgG2a, 81A1F8-2141-mIgG2a, 옥살리플라틴 또는 아테졸리주맙) 또는 조합 전략의 생체내 효능에 대한 요약을 나타낸다.
도 15는 cmCD24-293F 세포에 대한 본원에 제공된 항-cmCD24 항체의 MFI를 나타낸다.
도 16a는 cynoCD24-293F 세포에 대한 본원에 제공된 항-cmCD24 항체의 포식작용 지수를 나타낸다.
도 16b는 cmCD24-293F 세포에 대한 본원에 제공된 항-cmCD24 항체에 의해 유도된 ADCC 효과를 나타낸다.
도 16c는 cynoCD24-293F 세포에 대한 본원에 제공된 항-cmCD24 항체에 의해 유도된 CDC 효과를 나타낸다.
본 개시내용의 하기 설명은 단지 본 개시내용의 다양한 실시양태를 설명하기 위한 것이다. 이와 같이, 논의된 특정 변형은 본 개시내용의 범위에 대한 제한으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 범위를 벗어나지 않으면서 다양한 등가, 변화 및 변형이 이루어질 수 있음은 당업자에게 명백하며, 이러한 동등한 실시양태가 본원에 포함되는 것으로 이해된다. 공개문, 특허 및 특허 출원을 포함하여 본원에 인용된 모든 참조문헌은 전체가 참조로 본원에 포함된다.
정의
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항체"는 특정 항원에 결합하는 임의의 면역글로불린, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다가 항체, 2가 항체, 1가 항체, 다중특이적 항체 또는 이중특이적 항체를 포함한다. 천연의 온전한 항체는 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함한다. 포유동물의 중쇄는 알파, 델타, 엡실론, 감마 및 뮤로 분류되며, 각각의 중쇄는 가변 영역(VH) 및 제1, 제2 및 제3 불변 영역(각각 CH1, CH2, CH3)으로 이루어지고; 포유동물 경쇄는 λ 또는 κ로 분류되며, 각각의 경쇄는 가변 영역(VL) 및 불변 영역으로 이루어진다. 항체는 "Y" 모양을 가지며, Y의 줄기는 디술파이드 결합을 통해 함께 결합된 2개의 중쇄의 제2 및 제3 불변 영역으로 이루어진다. Y의 각각의 아암은 단일 경쇄의 가변 영역 및 불변 영역에 결합된 단일 중쇄의 가변 영역 및 제1 불변 영역을 포함한다. 경쇄 및 중쇄의 가변 영역은 항원 결합을 담당한다. 두 쇄의 가변 영역은 일반적으로 상보성 결정 영역(CDR) (LCD1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 CDR, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 CDR)으로 불리는 3개의 고도로 가변적인 루프를 함유한다. 본원에 개시된 항체 및 항원 결합 도메인에 대한 CDR 경계는 카바트(Kabat), IMGT, AbM, 초티아(Chothia) 또는 Al-라지카니(Al-Lazikani)의 관례에 따라 정의되거나 확인될 수 있다(Al-Lazikani, B., Chothia, C., Lesk, A. M., J. Mol. Biol., 273(4), 927 (1997); Chothia, C. et al., J Mol Biol. Dec 5;186(3):651-63 (1985); Chothia, C. and Lesk, A.M., J.Mol.Biol., 196,901 (1987); N. R. Whitelegg et al, Protein Engineering, v13(12), 819-824 (2000); Chothia, C. et al., Nature. Dec 21-28;342(6252):877-83 (1989) ; Kabat E.A. et al., National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991); Marie-Paule Lefranc et al, Developmental and Comparative Immunology, 27: 55-77 (2003); Marie-Paule Lefranc et al, Immunome Research, 1(3), (2005); Marie-Paule Lefranc, Molecular Biology of B cells (second edition), chapter 26, 481-514, (2015)). 3개의 CDR은 CDR보다 더 많이 보존되고 초가변 루프를 지지하는 스캐폴드를 형성하는 프레임워크 영역(FR)으로 공지된 플랭킹 스트레치 사이에 삽입된다. 중쇄 및 경쇄의 불변영역은 항원 결합에는 관여하지 않지만 다양한 이펙터 기능을 나타낸다. 항체는 중쇄의 불변 영역의 아미노산 서열에 기초하여 부류로 지정된다. 항체의 5가지 주요 부류 또는 이소타입은 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이며, 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마 및 뮤 중쇄의 존재를 특징으로 한다. 몇 가지 주요 항체 부류는 IgG1(감마1 중쇄), IgG2(감마2 중쇄), IgG3(감마3 중쇄), IgG4(감마4 중쇄), IgA1(알파1 중쇄) 또는 IgA2(알파2 중쇄)와 같은 하위부류로 나뉜다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항체 분자"는 적어도 하나의 항체 단편(예컨대, CDR 및/또는 가변 영역 서열)을 포함하는 항원 결합 단백질 또는 폴리펩티드를 지칭한다. 항체 분자는, 예컨대 모노클로날 항체, 항체 단편 또는 도메인, 항체 단편 또는 도메인을 포함하는 융합 단백질, 항체 단편 또는 도메인을 포함하는 폴리펩티드 복합체 등을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항원 결합 도메인"(예컨대, CD24 결합 도메인)은 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체의 일부로부터 형성된 항체 단편, 또는 항원에 결합하지만 온전한 천연 항체 구조를 포함하지 않는 임의의 다른 항체 단편을 지칭한다. 항원 결합 도메인의 예는 제한 없이 디아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 디술파이드 안정화된 Fv 단편(dsFv), (dsFv)2, 이중특이적 dsFv(dsFv-dsFv'), 디술파이드 안정화된 디아바디(ds 디아바디), 단일 쇄 항체 분자(scFv), scFv 이량체(2가 디아바디), 이중특이적 항체, 다중특이적 항체, 낙타화된 단일 도메인 항체, 나노바디, 도메인 항체, 및 2가 도메인 항체를 포함한다. 항원 결합 도메인은 모 항체가 결합하는 동일한 항원에 결합할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 하나 이상의 상이한 인간 항체로부터의 프레임워크 영역에 이식된 특정한 인간 항체로부터의 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있다. 항원 결합 도메인의 보다 자세한 형식은 문헌(Spiess et al, 2015, and Brinkman et al., mAbs, 9(2), pp.182-212 (2017), 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재되어 있다.
항체와 관련하여 "Fab"는 디술파이드 결합에 의해 단일 중쇄의 가변 영역 및 제1 불변 영역에 결합된 단일 경쇄(가변 영역 및 불변 영역 모두)로 이루어진 항체의 부분을 지칭한다.
"Fab"는 힌지 영역의 일부를 포함하는 Fab 단편을 지칭한다.
"F(ab')2"는 Fab'의 이량체를 지칭한다.
항체와 관련하여 "단편 디피컬트(fragment difficult) (Fd)"은 Fab를 형성하기 위해 경쇄와 조합될 수 있는 중쇄 단편의 아미노-말단 절반을 지칭한다. 예컨대, Fd 단편은 VH 및 CH1 도메인으로 이루어질 수 있다.
항체와 관련하여 "Fv"는 완전한 항원 결합 부위를 보유하는 항체의 가장 작은 단편을 지칭한다. Fv 단편은 단일 중쇄의 가변 영역에 결합된 단일 경쇄의 가변 영역으로 이루어진다. dsFv를 포함한 다수의 Fv 설계가 제공되었으며, 2개의 도메인 간의 회합은 도입된 디술파이드 결합에 의해 향상되며; scFv는 2개의 도메인을 단일 폴리펩티드로 함께 결합하기 위해 펩티드 링커를 사용하여 형성될 수 있다. 상응하는 면역글로불린 중쇄 또는 경쇄의 가변 및 불변 도메인에 회합된 중쇄 또는 경쇄 면역글로불린의 가변 도메인을 함유하는 Fv 구축물도 생성되었다. Fv는 또한 다중체화되어 디아바디 및 트리아바디를 형성하였다(Maynard et al., Annu Rev Biomed Eng 2 339-376 (2000)).
"단일 쇄 Fv 항체" 또는 "scFv"는 서로 직접적으로 또는 펩티드 링커 서열을 통해 연결된 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역으로 이루어진 조작된 항체를 지칭한다(Huston JS et al. Proc Natl Acad Sci USA, 85:5879(1988)).
"dsFv"는 단일 경쇄의 가변 영역과 단일 중쇄의 가변 영역 사이의 연결이 디술파이드 결합인 디술파이드 안정화된 Fv 단편을 지칭한다. 일부 실시양태에서, "(dsFv)2" 또는 "(dsFv-dsFv')"는 3개의 펩티드 쇄를 포함한다: 2개의 VH 모이어티는 펩티드 링커(예컨대, 긴 유연한 링커)에 의해 연결되고 각각 디술파이드 브릿지를 통해 2개의 VL 모이어티에 결합된다. 일부 실시양태에서, dsFv-dsFv'는 이중특이적이며, 각각의 디술파이드 쌍을 이룬 중쇄 및 경쇄는 상이한 항원 특이성을 갖는다.
항체와 관련하여 "Fc"는 디술파이드 결합을 통해 제2 중쇄의 제2 및 제3 불변 영역에 결합된 제1 중쇄의 제2 및 제3 불변 영역으로 이루어진 항체의 부분을 지칭한다. 항체의 Fc 부분은 항체 의존적 세포 매개된 세포독성(ADCC) 및 보체 의존적 세포독성(CDC)과 같은 다양한 이펙터 기능을 담당하지만 항원 결합에서는 기능하지 않는다.
"낙타화된 단일 도메인 항체", "중쇄 항체" 또는 "HCAb"는 2개의 VH 도메인을 함유하고 경쇄를 함유하지 않는 항체를 지칭한다(Riechmann L. and Muyldermans S., J Immunol Methods. Dec 10;231(1-2):25-38 (1999); Muyldermans S., J Biotechnol. Jun;74(4):277-302 (2001); WO94/04678; WO94/25591; U.S. Patent No. 6,005,079). 중쇄 항체는 원래 카멜리대(Camelidae) (낙타, 단봉낙타, 라마)로부터 유래되었다. 낙타화된 항체는 경쇄가 없지만 진정한 항원 결합 레퍼토리를 갖는다(Hamers-Casterman C. et al., Nature. Jun 3;363(6428):446-8 (1993); Nguyen VK. et al. "Heavy-chain antibodies in Camelidae; a case of evolutionary innovation," Immunogenetics. Apr;54(1):39-47 (2002); Nguyen VK. et al. Immunology. May;109(1):93-101 (2003)). 중쇄 항체의 가변 도메인(VHH 도메인)은 적응 면역 반응에 의해 생성된 공지된 가장 작은 항원 결합 단위를 나타낸다(Koch-Nolte F. et al., FASEB J. Nov;21(13):3490-8. Epub 2007 Jun 15 (2007)).
"나노바디"는 중쇄 항체로부터의 VHH 도메인 및 2개의 불변 도메인, CH2 및 CH3으로 이루어진 항체 단편을 지칭한다.
"디아바디" 또는 "dAb"는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 포함하며, 단편은 동일한 폴리펩티드 쇄(VH-VL 또는 VL-VH)에서 VL 도메인에 연결된 VH 도메인을 포함한다(예컨대, 문헌(Holliger P. et al., Proc Natl Acad Sci U S A. Jul 15;90(14):6444-8 (1993); EP404097; WO93/11161) 참조). 너무 짧아서 동일한 쇄에 있는 2개의 도메인 사이에서 쌍형성을 허용하지 않는 링커를 사용하면 도메인이 또 다른 쇄의 상보적인 도메인과 쌍을 이루게 되어 2개의 항원 결합 부위가 생성된다. 항원 결합 부위는 동일하거나 상이한 항원 (또는 에피토프)을 표적으로 할 수 있다.
특정 실시양태에서, "이중특이적 ds 디아바디"는 2개의 상이한 항원 (또는 에피토프)을 표적으로 하는 디아바디이다.
특정 실시양태에서, "scFv 이량체"는 한 모이어티의 VH가 다른 모이어티의 VL과 코디네이션하고 동일한 항원 (또는 에피토프) 또는 상이한 항원 (또는 에피토프)을 표적으로 할 수 있는 2개의 결합 부위를 형성하도록 또 다른 VH-VL 모이어티와 이량체화된 VH-VL(펩티드 링커에 의해 연결됨)을 포함하는 2가 디아바디 또는 2가 ScFv(BsFv)이다.
다른 실시양태에서, "scFv 이량체"는 VH1 및 VL1이 코디네이션하고 VH2 및 VL2가 코디네이션하고 각각의 코디네이션된 쌍이 상이한 항원 특이성을 갖도록 VL1-VH2(펩티드 링커에 의해 연결됨)와 회합된 VH1-VL2(펩티드 링커에 의해 연결됨)를 포함하는 이중특이적 디아바디이다.
"도메인 항체"는 중쇄의 가변 영역 또는 경쇄의 가변 영역만을 함유하는 항체 단편을 지칭한다. 특정 예에서, 2개 이상의 VH 도메인은 2가 또는 다가 도메인 항체를 생성하기 위해 펩티드 링커와 공유적으로 결합된다. 2가 도메인 항체의 2개의 VH 도메인은 동일하거나 상이한 항원을 표적으로 할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "키메라"는 하나의 종으로부터 유래된 중쇄 및/또는 경쇄의 일부 및 상이한 종으로부터 유래된 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지를 갖는 항체 또는 항원 결합 도메인을 의미한다. 예시적인 예에서, 키메라 항체는 인간으로부터 유래된 불변 영역 및 비-인간 동물로부터, 예컨대 마우스로부터의 가변 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 비-인간 동물은 포유동물, 예컨대 마우스, 래트, 토끼, 염소, 양, 기니피그 또는 햄스터이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "인간화"는 항체 또는 항원 결합 도메인이 비-인간 동물로부터 유래된 CDR, 인간으로부터 유래된 FR 영역, 및 적용 가능한 경우 인간으로부터 유래된 불변 영역을 포함함을 의미한다.
용어 "작동 가능하게 연결하다" 또는 "작동 가능하게 연결된"은 2개 이상의 관심 생물학적 서열이 의도된 방식으로 기능하게 하는 관계에 있도록, 스페이서 또는 링커 또는 개재 서열이 있거나 없는, 상기 생물학적 서열의 병치를 지칭한다. 폴리펩티드와 관련하여 사용될 때, 이는 연결된 생성물이 의도된 생물학적 기능을 갖도록 하는 방식으로 폴리펩티드 서열이 연결됨을 의미하는 것으로 의도된다. 예컨대, 항체 가변 영역은 항원 결합 활성을 갖는 안정한 생성물을 제공하기 위해 불변 영역에 작동 가능하게 연결될 수 있다. 또 다른 예에서, 항원 결합 도메인은 그 사이에 개재 서열을 갖는 또 다른 항원 결합 도메인에 작동 가능하게 연결될 수 있고, 이러한 개재 서열은 스페이서일 수 있거나 항체의 불변 영역과 같은 훨씬 더 긴 서열을 포함할 수 있다. 이 용어는 또한 폴리뉴클레오티드와 관련하여 사용될 수 있다. 하나의 예에서, 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 조절 서열(예컨대, 프로모터, 인핸서, 사일런서 서열 등)에 작동 가능하게 연결되는 경우, 이는 폴리뉴클레오티드 서열이 폴리뉴클레오티드로부터 폴리펩티드의 조절된 발현을 허용하도록 연결됨을 의미하는 것으로 의도된다.
용어 "융합" 또는 "융합된"은 아미노산 서열(예컨대, 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질)과 관련하여 사용되는 경우 2개 이상의 아미노산 서열의, 예컨대 화학적 결합 또는 재조합 수단에 의한 자연적으로 존재하지 않는 단일 아미노산 서열에의 조합을 지칭한다. 융합 아미노산 서열은 2개의 코딩 폴리뉴클레오티드 서열의 유전적 재조합에 의해 생성될 수 있으며, 재조합 폴리뉴클레오티드를 함유하는 구축물을 숙주 세포에 도입하는 방법에 의해 발현될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 "항원"은 세포 배양물(예컨대, 하이브리도마)에 첨가되거나 동물에 주입 또는 흡수되는 조성물(예컨대, 암 특이적 단백질을 포함하는 것)을 포함하여 세포 배양물 또는 동물에서 항체 또는 T 세포 반응의 생성을 자극할 수 있는 화합물, 조성물, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질 또는 물질을 지칭한다. 항원은 이종 항원에 의해 유도되는 것을 포함하여 특정한 체액성 또는 세포성 면역의 생성물(예컨대, 항체)과 반응한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "CD24"는 임의의 형태의 CD24, 예컨대, 1) 천연 비처리된 CD24 분자, "전장" CD24 쇄 또는, 예컨대 스플라이스 변이체 또는 대립형질 변이체를 포함하는 CD24의 자연 발생 변이체; 2) 세포에서의 처리로부터 생성되는 임의의 형태의 CD24; 또는 3) 재조합 방법을 통해 생성되는 CD24 서브유닛의 전장, 단편(예컨대, 말단절단된 형태, 세포외/막횡단 도메인) 또는 변형된 형태(예컨대, 돌연변이된 형태, 글리코실화된/페길화된, His-태그/면역형광 융합된 형태)를 포괄하는 것으로 의도된다.
용어 "항-CD24 항체", "항-CD24 결합 도메인" 또는 "CD24 결합 도메인"은 CD24(예컨대, 인간, 마우스 또는 시노몰구스 원숭이 CD24)에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 항원 결합 도메인을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하다"는, 예컨대 항체와 항원 사이와 같은 2개의 분자 사이의 비-무작위 결합 반응을 지칭한다.
재조합 CD24 또는 세포 표면에 발현된 CD24에 대한 항체의 결합은 또한 "최대 유효 농도의 절반"(EC50) 값으로 나타낼 수 있으며, 이는 최대 효과(예컨대, 결합 또는 억제 등)의 50%가 관찰되는 항체의 농도를 지칭한다. EC50 값은 당업계에 공지된 방법, 예컨대 샌드위치 검정, 예컨대 ELISA, 웨스턴 블롯, 유동 세포측정 검정, 및 다른 결합 검정에 의해 측정될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 및 이의 단편은 유동 세포측정 검정에 의해 0.05 nM 이하, 0.06 nM 이하, 0.07 nM 이하, 0.08 nM 이하, 0.09 nM 이하, 0.1 nM 이하, 0.2 nM 이하, 0.3 nM 이하, 0.4 nM 이하, 0.5 nM 이하, 0.6 nM 이하, 0.7 nM 이하, 0.8 nM 이하, 0.9 nM 이하, 1 nM 이하, 2 nM 이하, 3 nM 이하, 4 nM 이하, 5 nM 이하, 6 nM 이하, 7 nM 이하, 8 nM 이하, 9 nM 이하, 10 nM 이하, 20 nM 이하, 25 nM 이하, 30 nM 이하, 35 nM 이하, 40 nM 이하, 50 nM 이하, 60 nM 이하, 70 nM 이하, 80 nM 이하, 90 nM 이하, 100 nM 이하, 110 nM 이하, 120 nM 이하, 122 nM 이하, 124 nM 이하, 126 nM 이하, 128 nM 이하, 130 nM 이하, 132 nM 이하, 134 nM 이하, 136 nM 이하, 138 nM 이하, 140 nM 이하, 200 nM 이하, 210 nM 이하, 250 nM 이하, 300 nM, 또는 400 nM 이하의 EC50(즉, 50% 결합 농도)로 재조합 인간 CD24에 특이적으로 결합한다.
본원에 사용된 바와 같은 "결합을 차단" 또는 "동일한 에피토프에 대해 경쟁"하는 능력은 2개의 분자(예컨대, 인간 CD24 및 Siglec-10) 사이의 결합 상호작용을 임의의 검출 가능한 정도로 억제하는 항체 또는 항원 결합 도메인의 능력을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 2개의 분자 사이의 결합을 차단하는 항체 또는 항원 결합 도메인은 2개의 분자 사이의 결합 상호작용을 적어도 85% 또는 적어도 90% 억제한다. 특정 실시양태에서, 이러한 억제는 85% 초과 또는 90% 초과일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "에피토프"는 항체가 결합하는 항원 상의 원자 또는 아미노산의 특정 그룹을 지칭한다. 에피토프는 인접한 아미노산(선형 또는 순차적 에피토프로도 불림) 또는 단백질의 3차 접힘에 의해 병치된 비인접한 아미노산(배치형태 또는 입체형태 에피토프로도 불림) 모두로부터 형성될 수 있다. 인접한 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로 단백질의 1차 아미노산 잔기를 따라 선형으로 배열되며, 인접한 아미노산의 작은 세그먼트는 주요 조직적합성 복합체(MHC) 분자와 결합하는 항원으로부터 분해되거나 변성 용매에 노출 시 유지될 수 있는 반면, 3차 접힘에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매로 처리 시 손실된다. 에피토프는 전형적으로 독특한 공간 입체형태로 적어도 3개, 보다 일반적으로는 적어도 5개, 약 7개 또는 약 8-10개의 아미노산을 포함한다. 2개의 항체가 항원에 대해 경쟁적 결합을 나타내는 경우 항원 내의 동일하거나 밀접하게 관련된 에피토프에 결합할 수 있다. 예컨대, 항체 또는 항원 결합 도메인이 항원에 대한 참조 항체의 결합을 적어도 85%, 또는 적어도 90% 또는 적어도 95% 차단하는 경우, 항체 또는 항원 결합 도메인은 참조 항체와 동일하거나 밀접하게 관련된 에피토프에 결합하는 것으로 간주될 수 있다.
아미노산 서열과 관련하여 "보존적 치환"은 아미노산 잔기를 유사한 물리화학적 특성을 갖는 측쇄를 갖는 상이한 아미노산 잔기로 대체하는 것을 지칭한다. 예컨대, 소수성 측쇄를 갖는 아미노산 잔기(예컨대, Met, Ala, Val, Leu 및 Ile), 중성 친수성 측쇄를 갖는 잔기(예컨대, Cys, Ser, Thr, Asn 및 Gln), 산성 측쇄를 갖는 잔기(예컨대, Asp, Glu), 염기성 측쇄를 갖는 아미노산(예컨대, His, Lys 및 Arg), 또는 방향족 측쇄를 갖는 잔기(예컨대, Trp, Tyr 및 Phe) 중에서 보존적 치환이 이루어질 수 있다. 당업계에 공지된 바와 같이, 보존적 치환은 일반적으로 단백질 입체형태 구조에 상당한 변화를 일으키지 않으므로 단백질의 생물학적 활성을 보유할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "상동체" 및 "상동(성)"은 상호교환 가능하고, 최적으로 정렬 시 또 다른 서열에 대해 적어도 80%(예컨대, 적어도 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%)의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열 (또는 이의 상보적 가닥) 또는 아미노산 서열을 지칭한다.
아미노산 서열 (또는 핵산 서열)과 관련하여 "서열 동일성 백분율(%)"은 서열을 정렬하고, 필요한 경우, 갭을 도입하여 동일한 아미노산 (또는 핵산)의 최대 수를 달성한 후 참조 서열의 아미노산 (또는 핵산) 잔기와 동일한 후보 서열의 아미노산 (또는 핵산) 잔기의 백분율로 정의된다. 아미노산 잔기의 보존적 치환은 동일한 잔기로 간주될 수 있거나 간주되지 않을 수 있다. 아미노산 (또는 핵산) 서열 동일성 백분율을 결정하기 위한 목적을 위한 정렬은, 예컨대 공개적으로 이용 가능한 수단, 예컨대 BLASTN, BLASTp(미국 국립 생물공학 정보 센터(U.S. National Center for Biotechnology Information: NCBI)의 웹사이트에서 이용 가능하며, 또한 문헌(Altschul S.F. et al, J. Mol. Biol., 215:403-410 (1990); Stephen F. et al, Nucleic Acids Res., 25:3389-3402 (1997)) 참조), ClustalW2(유럽 생물정보학 연구소(European Bioinformatics Institute)의 웹사이트에서 이용 가능하며, 또한 문헌(Higgins D.G. et al, Methods in Enzymology, 266:383-402 (1996); Larkin M.A. et al, Bioinformatics (Oxford, England), 23(21): 2947-8 (2007)) 참조), 및 ALIGN 또는 메가얼라인(Megaalign) (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 달성될 수 있다. 당업자는 수단에 의해 제공되는 기본 파라미터를 사용할 수 있거나, 예컨대 적합한 알고리즘을 선택함으로써 정렬에 적합하도록 파라미터를 맞춤화할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 "이펙터 기능"은 C1 복합체, Fc 수용체 및 이펙터 세포(예컨대, 대식세포)와 같은 이펙터에 대한 항체의 Fc 영역의 결합에 기인할 수 있는 생물학적 활성을 지칭한다. 예시적인 이펙터 기능은 C1 복합체에서 항체와 C1q의 상호작용에 의해 유도되는 보체 의존성 세포독성(CDC); 이펙터 세포 상의 Fc 수용체에 대한 항체의 Fc 영역의 결합에 의해 유도되는 항체 의존적 세포 매개된 세포독성(ADCC); 및 포식작용에 대한 항체의 Fc 영역의 결합에 의해 유도되는 항체 의존적 세포 포식작용(ADCP)을 포함한다. Fc-CH2 도메인에서 보존된 이중 안테나 글리칸과 관련된 특정 글리칸 구조가 ADCC 및 ADCP를 매개하는 FcγR과의 상호작용 및 CDC로 이어지는 초기 결합 이벤트인 C1q 결합과의 상호작용에 강력하게 영향을 미칠 수 있다는 것이 잘 확립되었다(Reusch D, Tejada ML. Fc glycans of therapeutic antibodies as critical quality attributes. Glycobiology 2015; 25: 1325-34).
본원에 사용된 바와 같은 병태의 "치료"는 병태를 방지 또는 완화하거나, 병태의 발병 또는 발달 속도를 늦추거나, 병태의 발달 위험을 감소시키거나, 병태와 관련된 증상의 발달을 방지 또는 지연시키거나, 병태와 관련된 증상을 감소 또는 종료시키거나, 병태의 완전한 또는 부분적 퇴행을 일으키거나, 병태를 치유하는 것, 또는 이들의 일부 조합을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "대상체" 또는 "개체" 또는 "동물" 또는 "환자"는 질환 또는 장애의 진단, 예후, 개선, 예방 및 치료가 필요한 포유동물 또는 영장류를 포함하는 인간 또는 비-인간 동물을 지칭한다. 포유동물 대상체는 인간, 가축, 농장 동물, 및 동물원, 스포츠, 또는 애완동물, 예컨대 개, 고양이, 기니피그, 토끼, 래트, 마우스, 말, 돼지, 소, 곰 등을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "벡터"는 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 그 단백질의 발현을 야기하도록 작동 가능하게 삽입될 수 있는 비히클을 지칭한다. 벡터는 숙주 세포 내에서 백터가 운반하는 유전 요소의 발현을 일으키도록 숙주 세포를 형질전환, 형질도입 또는 형질감염시키는 데 사용될 수 있다. 벡터의 예는 효모 인공 염색체(YAC), 박테리아 인공 염색체(BAC) 또는 P1 유래된 인공 염색체(PAC)와 같은 플라스미드, 파지미드, 코스미드 및 인공 염색체, 람다 파지 또는 M13 파지와 같은 박테리오파지, 동물 바이러스를 포함한다. 벡터로 사용되는 동물 바이러스의 범주는 레트로바이러스(렌티바이러스 포함), 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 헤르페스바이러스(예컨대, 단순 포진 바이러스), 폭스바이러스, 바쿨로바이러스, 파필로마바이러스 및 파포바바이러스(예컨대, SV40)를 포함한다. 벡터는 프로모터 서열, 전사 개시 서열, 인핸서 서열, 선별 가능한 요소 및 리포터 유전자를 포함하는 발현을 제어하기 위한 다양한 요소를 함유할 수 있다. 또한, 벡터는 복제 기점을 함유할 수 있다. 벡터는 또한 바이러스 입자, 리포솜 또는 단백질 코팅을 포함하지만 이에 제한되지 않는 세포로의 진입을 돕는 물질을 포함할 수 있다. 벡터는 발현 벡터 또는 클로닝 벡터일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 어구 "숙주 세포"는 외인성 폴리뉴클레오티드 및/또는 벡터가 도입된 세포를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "CD24 관련" 질환 또는 병태는 CD24의 발현 또는 활성의 증가 또는 감소에 의해 야기되거나, 악화되거나, 달리 이와 관련된 임의의 질환 또는 병태를 지칭한다. 일부 실시양태에서, CD24 관련 병태는, 예컨대 암, 자가면역 질환, 염증 질환 또는 감염 질환과 같은 면역 관련 장애이다.
본원에 사용된 바와 같은 "암"은 악성 세포 성장 또는 신생물, 비정상적인 증식, 침윤 또는 전이를 특징으로 하는 임의의 의학적 병태를 지칭하고, 고형 종양 및 백혈병과 같은 비-고형 암(혈액 악성종양)을 모두 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 "고형 종양"은 신생물 및/또는 악성 세포의 고형 덩어리를 지칭한다. 암 또는 종양의 예는 혈액학적 악성종양, 구강 암종(예컨대, 입술, 혀 또는 인두의 암), 소화 기관(예컨대, 식도, 위, 소장, 결장, 대장 또는 직장), 복막, 간 및 담도, 췌장, 후두 또는 폐(소세포 및 비-소세포)와 같은 호흡 시스템, 골, 결합 조직, 피부(예컨대, 흑색종), 유방, 생식 기관(나팔관, 자궁, 자궁경부, 고환, 난소 또는 전립선), 요로(예컨대, 방광 또는 신장), 뇌 및 갑상선과 같은 내분비선의 암 또는 종양을 포함한다. 특정 실시양태에서, 암은 난소암, 유방암, 두경부암, 신장암, 방광암, 간세포암 및 결장직장암으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 암은 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종 및 B 세포 림프종으로부터 선택된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "화학내성 암"은 화학요법의 효과에 반응하지 않는 일 유형의 암을 지칭한다. 예컨대, 화학요법 또는 상이한 화학요법의 조합에 반응하였던 암이 갑자기 성장하기 시작하는 암을 화학내성 암으로 지칭할 수 있다.
용어 "약제학적으로 허용되는"은 지정된 담체, 비히클, 희석제, 부형제(들) 및/또는 염이 일반적으로 제형을 구성하는 다른 성분과 화학적 및/또는 물리적으로 양립 가능하고 이의 수용자와 생리학적으로 양립 가능하다는 것을 나타낸다.
항-CD24 항체
본 개시내용은 항-CD24 항체 33E7E12, 71A4F12, 56A7E3, 58F10-1F6, 73H5-1G2, 110D4G4, 81A1F8, 100F2E3, 111F3A2, 81A7A10, 107D10D11, 101H9G9A2, 173B1C1, 107D10E11, 109G10A6, 94G12D11, 92F5B8, 185B11E3, 168B11E2 또는 188H6D3의 하나 이상(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개)의 CDR 서열을 포함하는 항-CD24 항체 및 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항-CD24 항체 및 이의 항원 결합 단편은 CD24에 특이적으로 결합할 수 있다. 임의적으로, CD24는 인간 또는 시노몰구스 원숭이로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, CD24는 재조합 CD24 또는 세포 표면에 발현된 CD24이다.
본원에 사용된 바와 같은 "33E7E12"는 서열번호 50의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 52의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "71A4F12"는 서열번호 54의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 56의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "56A7E3"은 서열번호 58의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 64의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "58F10-1F6"은 서열번호 62의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 64의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "73H5-1G2"는 서열번호 66의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 68의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "110D4G4"는 서열번호 70의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 72의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "81A1F8"은 서열번호 74의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 76의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "100F2E3"은 서열번호 78의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 80의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "111F3A2"는 서열번호 82의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 84의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "81A7A10"은 서열번호 86의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 88의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "107D10D11"은 서열번호 101의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 103의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2"는 서열번호 109의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 111의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "173B1C1"는 서열번호 118의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 120 또는 서열번호 221의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "107D10E11"은 서열번호 122의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 124의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "109G10A6"은 서열번호 132의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 134의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "94G12D11"은 서열번호 141의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 143의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "92F5B8"은 서열번호 146의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 146의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "185B11E3"은 서열번호 156의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 158의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "168B11E2"는 서열번호 164의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 166의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "188H6D3"은 서열번호 174의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 176의 경쇄 가변 영역을 갖는 마우스 모노클로날 항체를 지칭한다.
표 1은 IMGT 넘버링에 따른 이러한 20개의 항-CD24 항체의 CDR 서열을 나타낸다. 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열이 또한 하기에 제공된다.
[표 1]
33E7E12, 71A4F12, 56A7E3, 58F10-1F6, 73H5-1G2, 110D4G4, 81A1F8, 100F2E3, 111F3A2, 81A7A10, 107D10D11 101H9G9A2, 173B1C1, 107D10E11, 109G10A6, 94G12D11, 92F5B8, 185B11E3, 168B11E2 또는 188H6D3 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열이 하기에 제공된다.
33E7E12-VH
아미노산 서열(서열번호 50):
핵산 서열(서열번호 51):
33E7E12-VL
아미노산 서열(서열번호 52):
핵산 서열(서열번호 53):
71A4F12-VH
아미노산 서열(서열번호 54):
핵산 서열(서열번호 55):
71A4F12-VL
아미노산 서열(서열번호 56):
핵산 서열(서열번호 57):
56A7E3-VH
아미노산 서열(서열번호 58):
핵산 서열(서열번호 59):
56A7E3-VL
아미노산 서열(서열번호 64):
핵산 서열(서열번호 61):
58F10-1F6-VH
아미노산 서열(서열번호 62):
핵산 서열(서열번호 63):
58F10-1F6-VL
아미노산 서열(서열번호 64):
핵산 서열(서열번호 65):
73H5-1G2-VH
아미노산 서열(서열번호 66):
핵산 서열(서열번호 67):
73H5-1G2-VL
아미노산 서열(서열번호 68):
핵산 서열(서열번호 69):
110D4G4-VH
아미노산 서열(서열번호 70):
핵산 서열(서열번호 71):
110D4G4-VL
아미노산 서열(서열번호 72):
핵산 서열(서열번호 73):
81A1F8-VH
아미노산 서열(서열번호 74):
핵산 서열(서열번호 75):
81A1F8-VL
아미노산 서열(서열번호 76):
핵산 서열(서열번호 77):
100F2E3-VH
아미노산 서열(서열번호 78):
핵산 서열(서열번호 79):
100F2E3-VL
아미노산 서열(서열번호 80):
핵산 서열(서열번호 81):
111F3A2-VH
아미노산 서열(서열번호 82):
핵산 서열(서열번호 83):
111F3A2-VL
아미노산 서열(서열번호 84):
핵산 서열(서열번호 85):
81A7A10-VH
아미노산 서열(서열번호 86):
핵산 서열(서열번호 87):
81A7A10-VL
아미노산 서열(서열번호 88):
핵산 서열(서열번호 89):
107D10D11-VH
아미노산 서열(서열번호 101):
핵산 서열(서열번호 102):
107D10D11-VL
아미노산 서열(서열번호 103):
핵산 서열(서열번호 110):
101H9G9A2-VH
아미노산 서열(서열번호 109):
핵산 서열(서열번호 204):
101H9G9A2-VL
아미노산 서열(서열번호 111):
핵산 서열(서열번호 205):
173B1C1-VH
아미노산 서열(서열번호 118):
핵산 서열(서열번호 206):
173B1C1-VL(1)
아미노산 서열(서열번호 120):
핵산 서열(서열번호 207):
173B1C1-VL(2)
아미노산 서열(서열번호 221):
핵산 서열(서열번호 208):
107D10E11-VH
아미노산 서열(서열번호 122):
핵산 서열(서열번호 228):
107D10E11-VL
아미노산 서열(서열번호 124):
핵산 서열(서열번호 229):
109G10A6-VH
아미노산 서열(서열번호 132):
핵산 서열(서열번호 209):
109G10A6-VL
아미노산 서열(서열번호 134):
핵산 서열(서열번호 210):
94G12D11-VH
아미노산 서열(서열번호 141):
핵산 서열(서열번호 211):
94G12D11-VL
아미노산 서열(서열번호 143):
핵산 서열(서열번호 212):
92F5B8-VH
아미노산 서열(서열번호 146):
핵산 서열(서열번호 213):
92F5B8-VL
아미노산 서열(서열번호 148):
핵산 서열(서열번호 214):
185B11E3-VH
아미노산 서열(서열번호 156):
핵산 서열(서열번호 215):
185B11E3-VL
아미노산 서열(서열번호 158):
핵산 서열(서열번호 216):
168B11E2-VH
아미노산 서열(서열번호 164):
핵산 서열(서열번호 217):
168B11E2-VL
아미노산 서열(서열번호 166):
핵산 서열(서열번호 218):
188H6D3-VH
아미노산 서열(서열번호 174):
핵산 서열(서열번호 219):
188H6D3-VL
아미노산 서열(서열번호 176):
핵산 서열(서열번호 220):
CDR은 항원 결합을 담당하는 것으로 공지되어 있지만, 6개의 모든 CDR이 필수불가결하거나 변경할 수 없는 것이 아니라는 것이 밝혀졌다. 즉, CD24에 대한 특이적 결합 친화성을 실질적으로 보유하면서 항-CD24 항체 33E7E12, 71A4F12, 56A7E3, 58F10-1F6, 73H5-1G2, 110D4G4, 81A1F8, 100F2E3, 111F3A2, 81A7A10 107D10D11, 101H9G9A2, 173B1C1, 107D10E11, 109G10A6, 94G12D11, 92F5B8, 185B11E3, 168B11E2 또는 188H6D3의 하나 이상의 CDR을 대체 또는 변경 또는 변형하는 것이 가능하다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항-CD24 항체 및 항원 결합 단편은 항-CD24 항체 33E7E12, 71A4F12, 56A7E3, 58F10-1F6, 73H5-1G2, 110D4G4, 81A1F8, 100F2E3, 111F3A2, 81A7A10 107D10D11, 101H9G9A2, 173B1C1, 107D10E11, 109G10A6, 94G12D11, 92F5B8, 185B11E3, 168B11E2 또는 188H6D3 중 하나의 중쇄 CDR3 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항-CD24 항체 및 항원-결합 단편은 서열번호 1, 3, 5, 7, 9, 11, 14, 16, 17, 18, 19, 21, 23, 25, 27, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 97, 104, 105, 106, 113, 114, 115, 126, 127, 128, 136, 137, 150, 151, 152, 160, 161, 162, 168, 169 170, 222, 223 및 224로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 CDR3 서열을 포함한다. 중쇄 CDR3 영역은 항원 결합 부위의 중심에 위치되므로 항원과 가장 많이 접촉하고 항원에 대한 항체의 친화성에 가장 많은 자유 에너지를 제공하는 것으로 여겨진다. 또한, 중쇄 CDR3은 길이, 아미노산 조성 및 다수의 다양화 메카니즘에 의한 입체형태의 측면에서 항원 결합 부위의 가장 다양한 CDR인 것으로 여겨진다(Tonegawa S. Nature. 302:575-81). 중쇄 CDR3의 다양성은 대부분의 항체 특이성(Xu JL, Davis MM. Immunity. 13:37-45) 뿐만 아니라 바람직한 항원 결합 친화성(Schier R, etc. J Mol Biol. 263:551-67)을 생성하기에 충분하다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 및/또는 이의 항원 결합 단편은 항체 및/또는 이의 항원 결합 단편이 CD24에 특이적으로 결합할 수 있는 한 적합한 프레임워크 영역(FR) 서열을 포함한다. 표 1에 제공된 CDR 서열은 마우스 항체로부터 수득되지만, 이들은 재조합 기술과 같은 당업계에 공지된 적합한 방법을 이용하여 무엇보다도 마우스, 인간, 래트, 토끼와 같은 임의의 적합한 종의 임의의 적합한 FR 서열에 이식될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 및/또는 이의 항원 결합 단편은 인간화된다. 인간화 항체 또는 항원 결합 단편은 인간에서 감소된 면역원성 때문에 바람직하다. 인간화 항체는 비-인간 CDR 서열이 인간 또는 실질적으로 인간 FR 서열에 이식되기 때문에 이의 가변 영역에서 키메라이다. 항체 또는 항원 결합 단편의 인간화는 본질적으로 인간 면역글로불린 유전자에서 상응하는 인간 CDR 유전자를 비-인간(예컨대, 뮤린) CDR 유전자로 치환함으로써 수행될 수 있다(예컨대, 문헌(Jones et al. (1986) Nature 321:522-525; Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327; Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534-1536) 참조).
당업계에 공지된 방법을 이용하여 이러한 목적을 달성하기 위해 적합한 인간 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 선택할 수 있다. 예시적인 예에서, 비-인간(예컨대, 설치류) 항체 가변 도메인 서열이 공지된 인간 가변 도메인 서열의 데이터베이스에 대해 스크리닝되거나 BLAST되고, 비-인간 질의 서열에 가장 가까운 인간 서열이 비-인간 CDR 서열을 이식하기 위한 인간 스캐폴드로서 확인되고 사용되는 "최적-적합(best-fit)" 접근법이 이용될 수 있다(예컨대, 문헌(Sims et al, (1993) J. Immunol. 151:2296; Chothia et al. (1987) J. Mot. Biol. 196:901) 참조). 대안적으로, 모든 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 프레임워크는 비-인간 CDR의 이식을 위해 사용될 수 있다(예컨대, 문헌(Carter et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285; Presta et al. (1993) J. Immunol.,151:2623) 참조). 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 인간화 항체 또는 항원 결합 단편은 비-인간인 CDR 서열을 제외하고는 실질적으로 모든 인간 서열로 구성된다. 일부 실시양태에서, 가변 영역 FR 및 불변 영역(존재하는 경우)은 전적으로 또는 실질적으로 인간 면역글로불린 서열로부터의 것이다. 인간 FR 서열 및 인간 불변 영역 서열은 상이한 인간 면역글로불린 유전자, 예컨대 하나의 인간 항체로부터 유래된 FR 서열 및 또 다른 인간 항체로부터의 불변 영역으로부터 유래될 수 있다.
본 개시내용은 또한 인간화 항-CD24 항체 81A1F8-VH11/VL11, 81A1F8-VH21/VL11, 81A1F8-VH31/VL11, 81A1F8-VH11/VL21, 81A1F8-VH21/VL21, 81A1F8-VH31/VL21, 81A1F8-VH11/VL31, 81A1F8-VH21/VL31, 81A1F8-VH31/VL31, 81A1F8-VH11/VL41, 81A1F8-VH21/VL41 또는 81A1F8-VH31/VL41; 또는 101H9G9A2-mVH/mVL-V1, 101H9G9A2-mVH/mVL-V2, 101H9G9A2-mVH/mVL-V3, 101H9G9A2-mVH/mVL-V4, 101H9G9A2-mVH/mVL-V5, 101H9G9A2-hVH1/hVL1, 101H9G9A2-hVH1/hVL2, 101H9G9A2-hVH1/hVL3, 101H9G9A2-hVH1/hVL4, 101H9G9A2-hVH2/hVL1, 101H9G9A2-hVH2/hVL2, 101H9G9A2-hVH2/hVL3, 101H9G9A2-hVH2/hVL4, 101H9G9A2-hVH3/hVL1, 101H9G9A2-hVH3/hVL2, 101H9G9A2-hVH3/hVL3, 101H9G9A2-hVH3/hVL4, 101H9G9A2-hVH4/hVL1, 101H9G9A2-hVH4/hVL2, 101H9G9A2-hVH4/hVL3, 101H9G9A2-hVH4/hVL4, 101H9G9A2-hVH5/hVL1, 101H9G9A2-hVH5/hVL2, 101H9G9A2-hVH5/hVL3 또는 101H9G9A2-hVH5/hVL4의 하나 이상(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개)의 CDR 서열을 포함하는 항-CD24 항체 및 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
본원에 사용된 바와 같은 "81A1F8-VH11/VL11"은 서열번호 177의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 180의 경쇄 가변 영역을 포함하는 81A1F8 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "81A1F8-VH21/VL11"은 서열번호 178의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 180의 경쇄 가변 영역을 포함하는 81A1F8 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "81A1F8-VH31/VL11"은 서열번호 179의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 180의 경쇄 가변 영역을 포함하는 81A1F8 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "81A1F8-VH11/VL21"은 서열번호 177의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 181의 경쇄 가변 영역을 포함하는 81A1F8 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "81A1F8-VH21/VL21"은 서열번호 178의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 181의 경쇄 가변 영역을 포함하는 81A1F8 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "81A1F8-VH31/VL21"은 서열번호 179의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 181의 경쇄 가변 영역을 포함하는 81A1F8 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "81A1F8-VH11/VL31"은 서열번호 177의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 182의 경쇄 가변 영역을 포함하는 81A1F8 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "81A1F8-VH21/VL31"은 서열번호 178의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 182의 경쇄 가변 영역을 포함하는 81A1F8 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "81A1F8-VH31/VL31"은 서열번호 179의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 182의 경쇄 가변 영역을 포함하는 81A1F8 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "81A1F8-VH11/VL41"은 서열번호 177의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 183의 경쇄 가변 영역을 포함하는 81A1F8 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "81A1F8-VH21/VL41"은 서열번호 178의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 183의 경쇄 가변 영역을 포함하는 81A1F8 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "81A1F8-VH31/VL41"은 서열번호 179의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 183의 경쇄 가변 영역을 포함하는 81A1F8 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-mVH/mVL-V1"은 서열번호 189의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 195의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-mVH/mVL-V2"는 서열번호 189의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 196의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-mVH/mVL-V3"은 서열번호 189의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 197의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-mVH/mVL-V4"는 서열번호 189의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 198의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-mVH/mVL-V5"는 서열번호 189의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 199의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH1/hVL1"은 서열번호 190의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 200의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH1/hVL2"는 서열번호 190의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 201의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH1/hVL3"은 서열번호 190의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 202의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH1/hVL4"는 서열번호 190의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 203의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH2/hVL1"은 서열번호 191의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 200의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH2/hVL2"은 서열번호 191의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 201의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH2/hVL3"은 서열번호 191의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 202의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH2/hVL4"는 서열번호 191의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 203의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH3/hVL1"은 서열번호 192의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 200의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH3/hVL2"는 서열번호 192의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 201의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH3/hVL3"은 서열번호 192의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 202의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH3/hVL4"는 서열번호 192의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 203의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH4/hVL1"은 서열번호 193의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 200의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH4/hVL2"는 서열번호 193의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 201의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH4/hVL3"은 서열번호 193의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 202의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH4/hVL4"는 서열번호 193의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 203의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH5/hVL1"은 서열번호 194의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 200의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH5/hVL2"는 서열번호 194의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 201의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH5/hVL3"은 서열번호 194의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 202의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "101H9G9A2-hVH5/hVL4"는 서열번호 194의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 203의 경쇄 가변 영역을 포함하는 101H9G9A2 마우스/키메라에 기초한 인간화 항체를 지칭한다.
표 2는 IMGT 넘버링에 따른 37개의 인간화 항-CD24 항체의 CDR 서열을 나타낸다. 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열이 또한 하기에 제공된다.
[표 2]
이러한 인간화 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역이 하기에 제공된다.
81A1F8-VH11/VL11
VH 아미노산 서열(서열번호 177):
VL 아미노산 서열(서열번호 180):
81A1F8-VH21/VL11
VH 아미노산 서열(서열번호 178):
VL 아미노산 서열(서열번호 180):
81A1F8-VH31/VL11
VH 아미노산 서열(서열번호 179):
VL 아미노산 서열(서열번호 180):
81A1F8-VH11/VL21
VH 아미노산 서열(서열번호 177):
VL 아미노산 서열(서열번호 181):
81A1F8-VH21/VL21
VH 아미노산 서열(서열번호 178):
VL 아미노산 서열(서열번호 181):
81A1F8-VH31/VL21
VH 아미노산 서열(서열번호 179):
VL 아미노산 서열(서열번호 181):
81A1F8-VH11/VL31
VH 아미노산 서열(서열번호 177):
VL 아미노산 서열(서열번호 182):
81A1F8-VH21/VL31
VH 아미노산 서열(서열번호 178):
VL 아미노산 서열(서열번호 182):
81A1F8-VH31/VL31
VH 아미노산 서열(서열번호 179):
VL 아미노산 서열(서열번호 182):
81A1F8-VH11/VL41
VH 아미노산 서열(서열번호 177):
VL 아미노산 서열(서열번호 183):
81A1F8-VH21/VL41
VH 아미노산 서열(서열번호 178):
VL 아미노산 서열(서열번호 183):
81A1F8-VH31/VL41
VH 아미노산 서열(서열번호 179):
VL 아미노산 서열(서열번호 183):
101H9G9A2-mVH/mVL-V1
VH 아미노산 서열(서열번호 189):
VL 아미노산 서열(서열번호 195):
101H9G9A2-mVH/mVL-V2
VH 아미노산 서열(서열번호 189):
VL 아미노산 서열(서열번호 196):
101H9G9A2-mVH/mVL-V3
VH 아미노산 서열(서열번호 189):
VL 아미노산 서열(서열번호 197):
101H9G9A2-mVH/mVL-V4
VH 아미노산 서열(서열번호 189):
VL 아미노산 서열(서열번호 198):
101H9G9A2-mVH/mVL-V5
VH 아미노산 서열(서열번호 189):
VL 아미노산 서열(서열번호 199):
101H9G9A2-hVH1/hVL1
VH 아미노산 서열(서열번호 190):
VL 아미노산 서열(서열번호 200):
101H9G9A2-hVH1/hVL2
VH 아미노산 서열(서열번호 190):
VL 아미노산 서열(서열번호201):
101H9G9A2-hVH1/hVL3
VH 아미노산 서열(서열번호 190):
VL 아미노산 서열(서열번호 202):
101H9G9A2-hVH1/hVL4
VH 아미노산 서열(서열번호 190):
VL 아미노산 서열(서열번호 203):
101H9G9A2-hVH2/hVL1
VH 아미노산 서열(서열번호 191):
VL 아미노산 서열(서열번호 200):
101H9G9A2-hVH2/hVL2
VH 아미노산 서열(서열번호 191):
VL 아미노산 서열(서열번호 201):
101H9G9A2-hVH2/hVL3
VH 아미노산 서열(서열번호 191):
VL 아미노산 서열(서열번호 202):
101H9G9A2-hVH2/hVL4
VH 아미노산 서열(서열번호 191):
VL 아미노산 서열(서열번호 203):
101H9G9A2-hVH3/hVL1
VH 아미노산 서열(서열번호 192):
VL 아미노산 서열(서열번호 200):
101H9G9A2-hVH3/hVL2
VH 아미노산 서열(서열번호 192):
VL 아미노산 서열(서열번호 201):
101H9G9A2-hVH3/hVL3
VH 아미노산 서열(서열번호 192):
VL 아미노산 서열(서열번호 202):
101H9G9A2-hVH3/hVL4
VH 아미노산 서열(서열번호 192):
VL 아미노산 서열(서열번호 203):
101H9G9A2-hVH4/hVL1
VH 아미노산 서열(서열번호 193):
VL 아미노산 서열(서열번호 200):
101H9G9A2-hVH4/hVL2
VH 아미노산 서열(서열번호 193):
VL 아미노산 서열(서열번호 201):
101H9G9A2-hVH4/hVL3
VH 아미노산 서열(서열번호 193):
VL 아미노산 서열(서열번호 202):
101H9G9A2-hVH4/hVL4
VH 아미노산 서열(서열번호 193):
VL 아미노산 서열(서열번호 203):
101H9G9A2-hVH5/hVL1
VH 아미노산 서열(서열번호 194):
VL 아미노산 서열(서열번호 200):
101H9G9A2-hVH5/hVL2
VH 아미노산 서열(서열번호 194):
VL 아미노산 서열(서열번호 201):
101H9G9A2-hVH5/hVL3
VH 아미노산 서열(서열번호 194):
VL 아미노산 서열(서열번호 202):
101H9G9A2-hVH5/hVL4
VH 아미노산 서열(서열번호 194):
VL 아미노산 서열(서열번호 203):
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항-CD24 항체 및 이의 단편은 면역글로불린 불변 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역글로불린 불변 영역은 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 CH1, 힌지 및/또는 CH2-CH3 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 경쇄 불변 영역은 Cκ 또는 Cλ를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-CD24 항체 및 이의 항원 결합 단편은 면역글로불린(Ig), 임의적으로 인간 Ig, 임의적으로 인간 IgG의 불변 영역을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-CD24 항체 및 이의 항원 결합 단편은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 불변 영역을 포함한다.
인간 IgG 이소타입(성숙한 감마 글로불린 부류 G 항체의 아부류; IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)은 이펙터 기능을 모집하는 차등적 능력을 나타낸다. 예컨대 ADCC는 IgG1 및 IgG3에 의해 촉진되고, ADCP는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4에 의해 촉진되고, CDC는 IgG1 및 IgG3에 의해 촉진된다. 이러한 이펙터 기능의 이소타입 특이적 인게이지먼트는 별개의 면역 세포에서 Fc 수용체에 대한 선택성 및 C1q에 결합하여 막 공격 복합체(MAC)의 조립을 활성화하는 능력을 기반으로 한다. 다양한 이소타입 중에서 FcγRI, FcγRIIa/b/c 및 FcγRIIIa/b를 포함하는 Fcγ 수용체에 대한 상대적 친화성은 IgG1 및 IgG3에 대해 높다. 그러나, IgG2에 대한 Fcγ 친화성은 FcγRIIa H131 다형성을 제외하고는 상당히 낮고, IgG4는 단지 FcγRI에 대해 측정 가능한 친화성을 갖는다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항-CD24 항체 및 이의 항원 결합 단편은 ADCC, CDC 또는 ADCP를 유도할 수 있는 IgG1 이소타입의 불변 영역, 또는 감소되거나 고갈된 이펙터 기능을 갖는 IgG4 또는 IgG2 이소타입의 불변 영역을 포함한다. ADCC 및 CDC와 같은 이펙터 기능은 CD24를 발현하는 세포에 대해 세포독성을 유발할 수 있다. 이펙터 기능은 Fc 수용체 결합 검정, C1q 결합 검정 및 세포 용해 검정과 같은 다양한 검정을 이용하여 평가될 수 있다.
항체 변이체
본 개시내용은 또한 본원에 제공된 항체 및/또는 이의 항원 결합 단편의 다양한 변이체를 포괄한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 예시적인 항체의 다양한 유형의 변이체, 즉 33E7E12, 71A4F12, 56A7E3, 58F10-1F6, 73H5-1G2, 110D4G4, 81A1F8, 100F2E3, 111F3A2, 81A7A10 또는 107D10D11을 포괄한다.
특정 실시양태에서, 항체 변이체는 표 1에 제공된 바와 같은 하나 이상의 CDR 서열, 하나 이상의 FR 서열, 본원에 제공된 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 및/또는 불변 영역(예컨대, Fc 영역)에 하나 이상의 변형 또는 치환을 포함한다. 이러한 변이체는 이들의 모 항체의 CD24에 대한 특이적 결합 친화성을 보유하지만, 변형(들) 또는 치환(들)에 의해 부여된 하나 이상의 바람직한 특성을 갖는다. 예컨대, 항체 변이체는 개선된 항원 결합 친화성, 개선된 글리코실화 패턴, 감소된 글리코실화 위험, 감소된 탈아미노화, 감소되거나 고갈된 이펙터 기능(들), 개선된 FcRn 수용체 결합, 증가된 약동학적 반감기, pH 민감성, 및 /또는 접합에 대한 적합성(예컨대, 하나 이상의 도입된 시스테인 잔기)을 가질 수 있다.
모 항체 서열은 당업계에 공지된 방법, 예컨대 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"(예컨대, 문헌(Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085) 참조)을 이용하여 변형되거나 치환될 적합한 또는 바람직한 잔기를 확인하기 위해 스크리닝될 수 있다. 간단히 말해서, 표적 잔기(예컨대, Arg, Asp, His, Lys 및 Glu와 같은 하전된 잔기)를 확인하고 중성 또는 음전하를 띤 아미노산(예컨대, 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체할 수 있으며, 변형된 항체가 생성되고 관심 있는 특성에 대해 스크리닝된다. 특정 아미노산 위치에서의 치환이 관심 있는 기능적 변화를 나타내는 경우, 해당 위치는 변형 또는 치환을 위한 잠재적인 잔기로 확인될 수 있다. 잠재적인 잔기는 상이한 유형의 잔기(예컨대, 시스테인 잔기, 양전하를 띤 잔기 등)로 치환하여 추가로 평가될 수 있다.
친화성 변이체
친화성 변이체는 표 1에 제공된 바와 같은 하나 이상의 CDR 서열, 하나 이상의 FR 서열, 또는 본원에 제공된 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열에서 변형 또는 치환을 함유할 수 있다. 친화성 변이체는 모 항체의 CD24에 대한 특이적 결합 친화성을 보유하거나 심지어 모 항체에 비해 개선된 CD24 특이적 결합 친화성을 갖는다. 특정 실시양태에서, CDR 서열, FR 서열 또는 가변 영역 서열에서 치환(들) 중 적어도 하나 (또는 모두)는 보존적 치환을 포함한다.
당업자는 표 1에 제공된 CDR 서열 및 FR 서열에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 치환될 수 있지만 생성된 항체 또는 항원 결합 단편이 여전히 CD24에 대한 결합 친화성을 보유하거나 심지어 향상된 결합 친화성을 갖는다는 것을 이해할 것이다. 당업계에 공지된 다양한 방법이 이러한 목적을 달성하기 위해 이용될 수 있다. 예컨대, 항체 변이체(예컨대, Fab 또는 scFv 변이체)의 라이브러리를 생성하고 파지 디스플레이 기술로 발현한 다음, 인간 CD24에 대한 결합 친화도에 대해 스크리닝할 수 있다. 또 다른 예로, 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 인간 CD24에 대한 항체의 결합을 가상으로 시뮬레이션하고 결합 인터페이스를 형성하는 항체의 아미노산 잔기를 확인할 수 있다. 이러한 잔기는 결합 친화성의 감소를 방지하기 위해 치환에서 회피되거나, 더 강한 결합을 제공하기 위해 치환을 위해 표적화될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 인간화 항체 또는 항원 결합 단편은 하나 이상의 CDR 서열 및/또는 하나 이상의 FR 서열에 하나 이상의 아미노산 잔기 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 친화성 변이체는 CDR 서열 및/또는 FR 서열에서 총 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 치환을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-CD24 항체 및 이의 항원 결합 단편은 표 1에 열거된 것 (또는 것들)에 대해 적어도 80%(예컨대, 적어도 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%) 서열 동일성을 갖는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하고, 한편 CD24에 대한 결합 친화성을 모 항체와 유사한 또는 심지어 더 높은 수준으로 보유한다.
특정 실시양태에서, 항-CD24 항체 및 이의 항원 결합 단편은 표 1에 열거된 것 (또는 것들)에 대해 적어도 80%(예컨대, 적어도 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%) 서열 동일성을 갖는 하나 이상의 가변 영역 서열을 포함하고, 한편 CD24에 대한 결합 친화성을 모 항체와 유사한 또는 심지어 더 높은 수준으로 보유한다. 일부 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 표 1에 열거된 것 (또는 것들)로부터 선택되는 서열에서 치환, 삽입 또는 결실되었다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 CDR 외부 영역에서(즉, FR에서) 발생한다.
글리코실화 변이체
본원에 제공된 항-CD24 항체 및 항원 결합 단편은 또한 항체 또는 항원 결합 단편의 글리코실화 정도를 증가시키거나 감소시키기 위해 수득될 수 있는 글리코실화 변이체를 포괄한다.
항체 또는 이의 항원 결합 단편은 탄수화물 모이어티(예컨대, 올리고당류 구조)가 부착될 수 있는 측쇄를 갖는 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 항체의 글리코실화는 전형적으로 N-연결되거나 O-연결된다. N-연결은 아스파라긴 잔기, 예컨대 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌과 같은 트리펩티드 서열 내의 아스파라긴 잔기의 측쇄에 대한 탄수화물 모이어티의 부착을 지칭하며, 여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이다. O-연결된 글리코실화는 슈가 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 자일로스 중 하나가 히드록시아미노산, 가장 일반적으로 세린 또는 트레오닌에 부착되는 것을 지칭한다. 천연 글리코실화 부위의 제거는, 예컨대 서열에 존재하는 (N-연결된 글리코실화 부위를 위한) 상기 기재된 트리펩티드 서열 중 하나 또는 (O-연결된 글리코실화 부위를 위한) 세린 또는 트레오닌 잔기가 치환되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성될 수 있다. 새로운 글리코실화 부위는 이러한 트리펩티드 서열 또는 세린 또는 트레오닌 잔기를 도입함으로써 유사한 방식으로 생성될 수 있다.
시스테인 조작된 변이체
본원에 제공된 항-CD24 항체 및 항원 결합 단편은 또한 하나 이상의 도입된 유리 시스테인 아미노산 잔기를 포함하는 시스테인 조작된 변이체를 포괄한다.
유리 시스테인 잔기는 디술파이드 브릿지의 일부가 아닌 것이다. 시스테인-조작된 변이체는, 예컨대 말레이미드 또는 할로아세틸을 통해 조작된 시스테인의 부위에서, 예컨대 특히 세포독성 및/또는 이미징 화합물, 표지 또는 방사성 동위원소와의 접합에 유용하다. 유리 시스테인 잔기를 도입하기 위해 항체 또는 항원 결합 단편을 조작하는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대 WO2006/034488을 참조한다.
Fc 변이체
본원에 제공된 항-CD24 항체 및 항원 결합 단편은 또한 이의 Fc 영역 및/또는 힌지 영역에서 하나 이상의 아미노산 잔기 변형 또는 치환을 포함하는 Fc 변이체를 포괄한다.
특정 실시양태에서, 항-CD24 항체 또는 항원 결합 단편은 신생 Fc 수용체(FcRn)에 대한 pH 의존적 결합을 개선하는 하나 이상의 아미노산 치환(들)을 포함한다. 이러한 변이체는 변이체가 리소좀에서 분해로부터 벗어나게 한 다음 전위되어 세포 밖으로 방출되도록 하는 산성 pH에서 FcRn에 결합하기 때문에 연장된 약동학적 반감기를 가질 수 있다. FcRn과의 결합 친화도를 개선하기 위해 항체 및 이의 항원 결합 단편을 조작하는 방법은 당업계에 널리 공지되어 있으며, 예컨대 문헌(Vaughn, D. et al, Structure, 6(1): 63-73, 1998; Kontermann, R. et al, 항체 Engineering, Volume 1, Chapter 27: Engineering of the Fc region for improved PK, published by Springer, 2010; Yeung, Y. et al, Cancer Research, 70: 3269-3277 (2010); and Hinton, P. et al, J. Immunology, 176:346-356 (2006))을 참조한다.
특정 실시양태에서, 항-CD24 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 의존적 세포 세포독성(ADCC)을 변경하는 하나 이상의 아미노산 치환(들)을 포함한다. Fc 영역의 CH2 도메인에 있는 특정 아미노산 잔기는 향상된 ADCC 활성을 제공하기 위해 치환될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, ADCC 활성을 향상시키기 위해 항체 상의 탄수화물 구조가 변화될 수 있다. 항체 조작에 의해 ADCC 활성을 변경하는 방법은 당업계에 기술되어 있으며, 예컨대 문헌(Shields RL. et al., J Biol Chem. 2001. 276(9): 6591-604; Idusogie EE. et al., J Immunol. 2000.164(8):4178-84; Steurer W. et al., J Immunol. 1995, 155(3): 1165- 74; Idusogie EE. et al., J Immunol. 2001, 166(4): 2571-5; Lazar GA. et al., PNAS, 2006, 103(11): 4005-4010; Ryan MC. et al., Mol. Cancer Ther., 2007, 6: 3009-3018; Richards JO,. et al., Mol Cancer Ther. 2008, 7(8): 2517-27; Shields R. L. et al, J. Biol. Chem, 2002, 277: 26733-26740; Shinkawa T. et al, J. Biol. Chem, 2003, 278: 3466-3473)을 참조한다.
특정 실시양태에서, 항-CD24 항체 또는 항원 결합 단편은, 예컨대 C1q 결합 및/또는 CDC를 개선하거나 감소시킴으로써 보체 의존적 세포독성(CDC)을 변경하는 하나 이상의 아미노산 치환(들)을 포함한다(예컨대, 문헌(WO99/51642; Duncan & Winter Nature 322:738-40 (1988); U.S. Pat. No. 5,648,260; U.S. Pat. No. 5,624,821); 및 Fc 영역 변이체의 다른 예에 대해 WO94/29351) 참조).
특정 실시양태에서, 항-CD24 항체 또는 항원 결합 단편은 Fc 영역의 계면에 하나 이상의 아미노산 치환(들)을 포함하여 이종이량체화를 용이하게 하고/하거나 촉진한다. 이러한 변형은 제1 Fc 폴리펩티드에 돌출부 및 제2 Fc 폴리펩티드에 공동을 도입하는 것을 포함하며, 돌출부는 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드의 상호작용을 촉진하도록 공동에 위치되어 이종이량체 또는 복합체를 형성할 수 있다. 이러한 변형을 갖는 항체를 생성하는 방법은, 예컨대 미국 특허 번호 5,731,168에 기술된 바와 같이 당업계에 공지되어 있다.
항원 결합 단편
항-CD24 항원 결합 단편도 본원에 제공된다. 예컨대, CDR 및 FR 서열이 표 1에 제시된 예시적인 항체, 및 이들의 상이한 변이체(예컨대, 친화성 변이체, 글리코실화 변이체, Fc 변이체, 시스테인 조작된 변이체 등)를 포함하여 다양한 유형의 항원 결합 단편이 당업계에 공지되어 있고, 본원에 제공된 항-CD24 항체에 기초하여 개발될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항-CD24 항원 결합 단편은 낙타화된 단일 도메인 항체, 디아바디, 단일 쇄 Fv 단편(scFv), scFv 이량체, BsFv, dsFv, (dsFv)2, dsFv-dsFv', Fv 단편, Fab, Fab', F(ab')2, 이중특이적 항체, ds 디아바디, 나노바디, 도메인 항체, 단일 도메인 항체 또는 2가 도메인 항체이다.
이러한 항원 결합 단편의 생성을 위해 다양한 기술이 이용될 수 있다. 예시적인 방법은 온전한 항체의 효소적 분해(예컨대, 문헌(Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992); and Brennan et al., Science, 229:81 (1985)) 참조), (예컨대, Fab, Fv 및 ScFv 항체 단편에 대한) 이. 콜리(E. coli)와 같은 숙주 세포에 의한 재조합 발현, (예컨대, ScFv에 대한) 상기에서 논의된 바와 같은 파지 디스플레이 라이브러리로부터의 스크리닝, F(ab')2 단편을 형성하기 위한 2개의 Fab'-SH 단편의 화학적 커플링((Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992))을 포함한다. 항체 단편 생성을 위한 다른 기술은 숙련된 실무자에게 명백할 것이다.
특정 실시양태에서, 항원 결합 단편은 scFv이다. scFv의 생성은, 예컨대 WO 93/16185; 미국 특허 번호 5,571,894; 및 5,587,458에 기술되어 있다. scFv는 아미노 또는 카르복시 말단에서 이펙터 단백질에 융합되어 융합 단백질을 제공할 수 있다(예컨대, 문헌(Antibody Engineering, ed. Borrebaeck) 참조).
이중특이적 항체, 다가 항체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 2가, 4가, 6가 또는 다가이다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 및/또는 이의 항원 결합 단편은 단일특이적 또는 이중특이적이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "가(valent)"는 주어진 분자에서 특정 수의 항원 결합 부위의 존재를 지칭한다. 이와 같이 용어 "2가", "4가" 및 "6가"는 항원 결합 분자에 각각 2개의 결합 부위, 4개의 결합 부위 및 6개의 결합 부위가 존재하는 것을 나타낸다. 2가 분자는 2개의 결합 부위가 모두 동일한 항원 또는 동일한 에피토프의 특이적 결합에 대한 것인 경우 단일특이적일 수 있다. 유사하게, 3가 분자는, 예컨대 2개의 결합 부위가 제1 항원 (또는 에피토프)에 대해 단일특이적이고 제3 결합 부위가 제2 항원 (또는 에피토프)에 대해 특이적인 경우 이중특이적일 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 동일한 항원 또는 에피토프에 특이적인 적어도 2개의 결합 부위와 함께 단일특이적이지만 2가, 3가 또는 4가일 수 있다. 이는 특정 실시양태에서 1가 대응물보다 항원 또는 에피토프에 대해 더 강한 결합을 제공한다. 특정 실시양태에서, 2가 항원 결합 모이어티에서, 결합 부위의 제1의 가 및 결합 부위의 제2의 가는 구조적으로 동일하거나(즉, 동일한 서열을 가짐), 또는 구조적으로 상이하다(즉, 동일한 특이성을 가지지만 상이한 서열을 가짐).
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이중특이적이다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 이중특이적 항체 및 이의 항원 결합 단편은 CD24의 제1 및 제2 에피토프에 결합하며, CD24의 제1 및 제2 에피토프는 상이하다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 이중특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD24의 제1 에피토프 및 CD24 이외의 항원의 제2 에피토프에 결합한다.
본원에 제공된 이중특이적 항체 분자는 당업계에 공지된 임의의 적합한 이중특이적 형식일 수 있다. 당업계에 공지된 참조 이중특이적 항체 형식의 예는 제한 없이 (i) 대칭적 Fc를 갖는 이중특이적 항체, (ii) 비대칭적 Fc를 갖는 이중특이적 항체, (iii) 추가의 항원 결합 모이어티가 부착된 일반 항체, (iv) 이중특이적 항체 단편, (v) 추가적인 항원 결합 모이어티가 부착된 일반 항체 단편, (vi) 인간 알부민 또는 인간 알부민 결합 펩티드가 부착된 이중특이적 항체를 포함한다.
이중특이적 IgG 유사 항체(BsIgG)는 각각의 항원에 대해 1가이며, 단일 숙주 세포에서 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄의 공동 발현에 의해 생성될 수 있다. 부착형 IgG는 경쇄 또는 중쇄의 아미노 또는 카르복실 말단에 추가 항원 결합 단위를 부착함으로써 이중특이적 IgG를 형성하도록 조작된다. 추가적인 항원 결합 단위는 DVD-Ig, 쌍을 이룬 항체 가변 도메인(예컨대, Fv 또는 scFv) 또는 조작된 단백질 스캐폴드와 같은 단일 도메인 항체(쌍을 이루지 않은 VL 또는 VH)일 수 있다.
이중특이적 항체 단편은 항체로부터 유도되지만 항체 불변 도메인의 일부 또는 전부가 결여된 항원 결합 단편이다. 이러한 이중특이적 항체 단편의 예는, 예컨대 단일 도메인 항체, Fv, Fab 및 디아바디 등을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 바와 같은 이중특이적 항체 분자는 전체 IgG 또는 IgG 유사 분자와 같은 "전체" 항체의 형식, 및 탠덤 단일 쇄 가변 단편 분자(taFv)와 같은 작은 재조합 형식, 디아바디(Db), 단일 쇄 디아바디(scDb) 및 이들의 다양한 다른 유도체(문헌(Byrne H. et al. (2013) Trends Biotech, 31 (11): 621-632)에 기술된 바와 같은 이중특이적 항체 형식 참조)에 기초한다. 이중특이적 항체의 예는 쿼드로마(quadroma), 화학적으로 커플링된 Fab(단편 항원 결합) 및 BiTE(이중특이적 T 세포 인게이저)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 형식을 기반으로 한다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 바와 같은 이중특이적 항체 분자는 트리오맙; 하이브리드 하이브리도마(쿼드로마); 다중특이적 안티칼린 플랫폼(Pieris); 디아바디; 단일 쇄 디아바디; 탠덤 단일 쇄 Fv 단편; TandAb, 삼중특이적 Ab(Affimed); 다트(이중 친화성 재표적화, Macrogenics); 이중특이적 Xmab(Xencor); 이중특이적 T 세포 인게이저(Bites; Amgen; 55 kDa); 트리플바디; 트리바디(Fab-scFv) 융합 단백질(CreativeBiolabs) 다기능성 재조합 항체 유도체; 듀오바디 플랫폼(Genmab); 독 앤드 록(Dock and lock) 플랫폼; 놉 인트 홀(Knob into Hole: KIH) 플랫폼; 인간화 이중특이적 IgG 항체(REGN1979) (Regeneron); Mab2 이중특이적 항체(F-Star); DVD-Ig(이중 가변 도메인 면역글로불린) (Abbvie); 카파-람다 바디; TBTI(4가 이중특이적 탠덤 Ig); 및 크로스맙으로부터 선택되는 이중특이적 형식이다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 바와 같은 이중특이적 항체 분자는 크로스맙; DAF(투인원); DAF(포인원); 두타맙; DT-IgG; 놉-인-홀 일반 LC; 놉-인-홀 어셈블리; 전하 쌍; Fab-아암 교환; EEDbody; 트리오맙; LUZ-Y; Fcab; 카파-람다-바디; 및 오르토고날 Fab를 포함하는 BsIgG로부터 선택되는 이중특이적 형식이다. 이중특이적 항체 형식에 대한 자세한 설명은 문헌(Spiess C., Zhai Q. and Carter P. J. (2015) Molecular Immunology 67: 95-106, 전체가 참조로 본원에 포함됨)을 참조한다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 바와 같은 이중특이적 항체 분자는 DVD-IgG; IgG(H)-scFv; scFv-(H)IgG; IgG(L)-scFv; scFV-(L)IgG; IgG(L,H)-Fv; IgG(H)-V; V(H)-IgG; IgG(L)-V; V(L)-IgG; KIH IgG-scFab; 2scFv-IgG; IgG-2scFv; scFv4-Ig; scFv4-Ig; 지바디; 및 DVI-IgG (포인원)를 포함하는 추가적인 항원 결합 모이어티를 갖는 IgG 부착 항체로부터 선택되는 이중특이적 형식이다(Id. 참조).
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 바와 같은 이중특이적 항체 분자는 나노바디; 나노바디-HAS; BiTE; 디아바디; DART; TandAb; sc디아바디; sc-디아바디-CH3; 디아바디-CH3; 트리플 바다; 미니항체; 미니바디; TriBi 미니바디; scFv-CH3 KIH; Fab-scFv; scFv-CH-CL-scFv; F(ab')2; F(ab')2-scFv2; scFv-KIH; Fab-scFv-Fc; 4가 HCAb; sc디아바디-Fc; 디아바디-Fc; 탠덤 scFv-Fc; 및 인트라바디를 포함하는 이중특이적 항체 단편으로부터 선택되는 형식이다(Id. 참조).
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 바와 같은 이중특이적 항체 분자는 독 앤드 록; ImmTAC; HSAbody; sc디아바디-HAS; 및 탠덤 scFv-독소와 같은 이중특이적 형식이다(Id. 참조).
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 바와 같은 이중특이적 항체 분자는 IgG-IgG; Cov-X-바디; 및 scFv1-PEG-scFv2를 포함하는 이중특이적 항체 접합체로부터 선택되는 형식에 기초한다(Id. 참조).
특정 실시양태에서, 제2 항원 결합 도메인은 CD24 결합 도메인의 N 말단 또는 C 말단에 작동 가능하게 연결된다. 특정 실시양태에서, CD24 결합 도메인은 제2 항원 결합 도메인의 N 말단 또는 C 말단에 작동 가능하게 연결된다.
작동 가능한 연결은 직접적인 화학 결합 연결 또는 스페이서를 통한 또는 개재 서열을 통한 간접 연결일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "스페이서"는 펩티드에 의해 결합된 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 잔기, 또는 5 내지 15, 20, 30, 50개 또는 그 초과의 아미노산 잔기 길이를 갖는 인공 아미노산 서열을 지칭하며, scFv 및 Fab 또는 IgG와 같은 하나 이상의 결합 도메인을 연결하는 데 사용된다. 스페이서는 scFv의 펩티드 링커와 동일하거나 상이할 수 있다. 특정 실시양태에서, 스페이서는 서열번호 90, 91, 92 및 93의 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 순차적 또는 탠덤 반복을 포함한다. 특정 실시양태에서, 스페이서는 GGGGS(서열번호 90)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 스페이서는 GGGGSGGGGS(서열 번호 91), GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 92), GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 93)를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 개재 서열은 CD24 결합 도메인 및 제2 항원 결합 도메인 모두가 각각의 항원에 결합할 수 있는 한, CD24 결합 도메인과 제2 항원 결합 도메인 사이에 위치된 임의의 아미노산 서열일 수 있다. 예시적인 예에서, 개재 서열은 중쇄 불변 영역 또는 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함하고, CD24 결합 도메인은 Fab 또는 IgG를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 항원 결합 scFv는 CD24 결합 Fab 또는 IgG의 중쇄의 N 말단 또는 C-말단(예컨대, CD24 결합 Fab 다음에 오는 중쇄 불변 영역의 C-말단), 또는 CD24 결합 Fab 또는 IgG의 경쇄의 N 말단 또는 C-말단, 또는 이들의 임의의 조합, 및 그 반대에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
예시적인 예에서, 이중특이적 항체 분자는 VH(항-CD24)-CH1-힌지-CH2-CH3-스페이서-제2 항원 결합 scFv 또는 제2 항원 결합 scFv-스페이서-VH(항-CD24)-CH1-힌지-CH2-CH3 형식의 중쇄, 및 VL(항-CD24)-CL 형식의 경쇄를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, VH(항-CD24) 및 VL(항-CD24)는 각각 CD24 결합 도메인의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 지칭하고; 제2 항원 결합 scFv는 제2 항원 결합 도메인의 scFv를 지칭하고, CL은 경쇄 불변 영역을 지칭하고; CH1-힌지-CH2-CH3은 집합적으로 중쇄 불변 영역이다.
또 다른 예시적인 예에서, 이중특이적 항체 분자는 제2 항원 결합 scFv-스페이서-VL(항-CD24)-CL 또는 VL(항-CD24)-CL-스페이서-제2 항원 결합 scFv 형식의 경쇄, 및 VH(항-CD24)-CH1-힌지-CH2-CH3 형식의 중쇄를 동일한 토큰으로 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, CD24 결합 도메인은 scFv를 포함하고 제2 항원 결합 도메인은 Fab 또는 IgG를 포함한다. 특정 실시양태에서, CD24 결합 도메인 scFv는 제2 항원 결합 Fab 또는 IgG의 중쇄의 N 말단 또는 C-말단(예컨대, CD24 결합 Fab 다음에 오는 중쇄 불변 영역의 C-말단), 또는 제2 항원 결합 Fab 또는 IgG의 경쇄의 N 말단 또는 C-말단, 또는 이들의 임의의 조합, 및 그 반대에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
예시적인 예에서, 이중특이적 항체 분자는 제2 항원 결합 VH-CH1-힌지-CH2-CH3-스페이서-scFv(항-CD24) 또는 scFv(항-CD24)-스페이서-제2 항원 결합 VH-CH1-힌지-CH2-CH3 형식의 중쇄, 및 제2 항원 결합 VL-CL 형식의 경쇄를 동일한 토큰으로 포함할 수 있다. 또 다른 예시적인 예에서, 이중특이적 항체 분자는 scFv (항-CD24)-스페이서-제2 항원 결합 VL-CL 또는 제2 항원 결합 VL-CL-스페이서-scFv (항-CD24) 형식의 경쇄, 및 중쇄 제2 항원 결합 VH-CH1-힌지-CH2-CH3을 동일한 토큰으로 포함할 수 있다.
본원에 제공된 이중특이적 항체 분자에서, 제2 항원 결합 도메인은 1가(즉, 하나의 scFv 또는 Fab) 또는 다가(예컨대, 하나 초과의 scFv 또는 Fab)일 수 있고/있거나, CD24 결합 도메인은 1가 또는 다가일 수 있다.
특정 실시양태에서, 제2 항원은 PD-L1, PD-L2, PD-1, CLTA-4, TIM-3, LAG3, CD160, 2B4, TGFβ, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, OX40, CD2, CD27, ICAM-1, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, LFA-1, ICOS, 4-1BB, GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, IL-2, IL-15, CD3, CD16, SIRPα, Siglec 10, LILRB2, Clever-1, Macro, LILRB4, Siglec15, CSF1R, PSGL-1, VSIG-4, B2M 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 임의적으로 선택되는 면역 관련 표적이다.
특정 실시양태에서, 제2 항원은 종양 관련 항원 또는 이의 에피토프이다. 용어 "종양 항원"과 상호교환적으로 사용되는 용어 "종양 관련 항원"은 종양 세포 표면에 있거나 제공될 수 있고 종양 세포 상에 또는 종양 세포 내에 위치되는 항원을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 종양 관련 항원은 정상, 즉 비-종양 세포가 아닌 종양 세포에 의해서만 제시될 수 있다. 일부 다른 실시양태에서, 종양 관련 항원은 종양 세포에서만 독점적으로 발현될 수 있거나 비-종양 세포와 비교하여 종양 특이적 돌연변이를 나타낼 수 있다. 일부 다른 실시양태에서, 종양 관련 항원은 종양 세포 및 비-종양 세포 모두에서 발견될 수 있지만, 비-종양 세포와 비교할 때 종양 세포에서 과발현되거나 비-종양 조직에 비해 종양 조직의 덜 조밀한 구조로 인해 종양 세포에서 항체 결합에 접근 가능하다
일부 실시양태에서, 종양 항원은 CA-125, 강글리오시드 G(D2), G(M2) 및 G(D3), CD19, CD20, CD33, CD47, CD52, Ep-CAM, CEA, CLDN18.2, 봄베신 유사 펩티드, PSA, HER2/neu, 표피 성장 인자 수용체(EGFR), erbB2, erbB3/HER3, erbB4, CD44v6, CD44v9, Ki-67, 암 관련 뮤신, VEGF, VEGFR(예컨대, VEGFR3), 에스트로겐 수용체, 루이스-Y 항원, TGFβ1, IGF-1 수용체, EGFα, c-Kit 수용체, 트랜스페린 수용체, IL-2R, CDH6, CEA, FOLR1, TROP2, PTK7, SLITRK6, CD142, NECTIN-4, ROR1, ROR2, CD142, CD123, CD22, CD79b, DLL3, SLC 패밀리 또는 CO17-1A로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 제2 항원은 PD-L1, SIRPα, CD47 및 B2M으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역억제 분자이다.
특정 실시양태에서, 제2 항원은 CD47이다.
일부 실시양태에서, CD47-결합 scFv는 CD24 결합 Fab 다음의 중쇄 불변 영역의 C 말단에 작동 가능하게 연결된다.
특정 실시양태에서, 이중특이적 항체 분자는 VL(항-CD24)-CL 형식의 경쇄와 회합된 VH(항-CD24)-CH1-힌지-CH2-CH3-스페이서-scFv(항-CD47) 형식의 중쇄를 포함한다.
특정 실시양태에서, CD47-결합 scFv는 5F9 유래된 scFv이고, 서열번호 94
의 아미노산 서열을 포함한다.
종양 관련 항원의 다른 예시적 예는 CD10, CD21, CD22, CD25, CD30, CD34, CD37, CD38, CD123, GPRC5D, CD44v6, CD45, CD133, Fms 유사 티로신 키나제 3(FLT-3, CD135), 콘드로이틴 술페이트 프로테오글리칸 4(CSPG4, 흑색종 관련된 콘드로이틴 술페이트 프로테오글리칸), Her2, Her3, IGFR, IL3R, 섬유모세포 활성화 단백질(FAP), CDCP1, Derlin1, 테나신, 프리즐드(frizzled) 1-10, 혈관 항원 VEGFR2(KDR/FLK1), VEGFR3 (FLT4, CD309), PDGFR-알파(CD140a), PDGFR-베타(CD140b), 엔도글린, CLEC14, CLEC12a, Tem1-8, 및 Tie2이다. 추가의 예는 A33, CAMPATH-1 (CDw52), 암배아 항원(CEA), 카르보안히드라제 IX(MN/CA IX), de2-7, EGFRvIII, EpCAM, 폴레이트 결합 단백질, G250, c-Kit(CD117), CSF1R(CD115), HLA-DR, IL-2 수용체, IL3R, MCSP(흑색종 관련된 세포 표면 콘드로이틴 술페이트 프로테오글리칸), Muc-1, 전립선 특이적 막 항원(PSMA), 전립선 줄기 세포 항원(PSCA), 전립선 특이적 항원(PSA), 및 TAG-72를 포함할 수 있다.
본원에 제공된 이중특이적 항체 및 항원 결합 단편은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법으로 제조될 수 있다. 종래의 접근법에서, 상이한 항원 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍은 재조합 방식으로 이중특이적 항체를 생성하기 위해 숙주 세포에서 공동 발현된 후(예컨대, 문헌(Milstein and Cuello, Nature, 305: 537 (1983)) 참조), 친화성 크로마토그래피로 정제될 수 있다.
또한, 2개의 특이성을 위한 항체 중쇄 가변 도메인을 코딩하는 서열이 면역글로불린 불변 도메인 서열에 각각 융합되고 이어서 이중특이적 항체의 재조합 발현을 위한 적합한 숙주 세포에 경쇄 서열을 위한 발현 벡터와 공동 형질감염되는 발현 벡터에 삽입되는 재조합 접근법이 또한 이용될 수 있다(예컨대, 문헌(WO 94/04690; Suresh et al., Methods in Enzymology, 121:210 (1986)) 참조). 유사하게, scFv 이량체는 또한 숙주 세포로부터 재조합적으로 구축되고 발현될 수 있다(예컨대, 문헌(Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)) 참조).
또 다른 방법에서, Fos 및 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 펩티드는 유전자 융합에 의해 2개의 상이한 항체의 Fab' 부분에 연결될 수 있다. 연결된 항체는 힌지 영역에서 4개의 절반 항체(즉, 단량체)로 환원된 다음 재산화되어 이종이량체를 형성한다(Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)).
2개의 항원 결합 도메인은 또한 이중특이적 항체 또는 항원 결합 단편을 형성하기 위해 접합되거나 가교될 수 있다. 예컨대, 하나의 항체는 비오틴에 커플링되고 다른 항체는 아비딘에 결합될 수 있으며, 비오틴과 아비딘 사이의 강한 회합은 두 항체를 함께 복합체화하여 이중특이적 항체를 형성할 것이다(예컨대, 리국 특허 번호 4,676,980; WO 91/00360, WO 92/00373, 및 EP 03089 참조). 또 다른 예에서, 2개의 항체 또는 항원 결합 단편은, 예컨대 미국 특허 번호 4,676,980에 개시된 바와 같이 당업계에 공지된 통상적인 방법에 의해 가교될 수 있다.
이중특이적 항원 결합 단편은, 예컨대 단백질분해적 절단에 의해 또는 화학적 연결에 의해 이중특이적 항체로부터 생성될 수 있다. 예컨대, 항체의 항원 결합 단편(예컨대, Fab')을 제조하고 Fab'-티올 유도체로 전환한 다음, 상이한 항원 특이성을 갖는 또 다른 전환된 Fab' 유도체와 혼합 및 반응시켜 이중특이적 항원 결합 단편을 형성할 수 있다(예컨대, 문헌(Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)) 참조).
특정 실시양태에서, 이중특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 놉-인투-홀 회합이 형성되어 2개의 상이한 항원 결합 부위의 이종이량체화를 촉진할 수 있도록 인터페이스에서 조작될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "놉-인투-홀"은 2개의 폴리펩티드(예컨대, CH3 도메인) 사이의 상호작용을 지칭하며, 하나의 폴리펩티드는 부피가 큰 측쇄를 갖는 아미노산 잔기(예컨대, 티로신 또는 트립토판)의 존재로 인해 돌출부(즉, "놉")를 갖고, 다른 폴리펩티드는 작은 측쇄 아미노산 잔기(예컨대, 알라닌 또는 트레오닌)가 존재하는 공동(즉, "홀")을 가지며, 돌출부는 이종이량체 또는 복합체를 형성하는 2개의 폴리펩티드의 상호작용을 촉진하기 위해 공동에 위치할 수 있다. 놉-인투-홀을 갖는 폴리펩티드를 생성하는 방법은, 예컨대 미국 특허 번호 5,731,168에 기술되어 있는 바와 같이 당업계에 공지되어 있다.
접합체
일부 실시양태에서, 항-CD24 항체 및 이의 항원 결합 단편은 하나 이상의 접합체에 연결되며, 임의적으로 접합체는 직접적으로 또는 링커를 통해 공유적으로 부착된다. 접합체는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 부착될 수 있는 비-단백질성 모이어티이다. 다양한 접합체가 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편에 연결될 수 있음이 고려된다(예컨대, 문헌("Conjugate Vaccines", Contributions to Microbiology and Immunology, J. M. Cruse and R. E. Lewis, Jr. (eds.), Carger Press, New York, (1989)) 참조). 이러한 접합체는 다른 방법 중에서 공유 결합, 친화성 결합, 삽입, 배위 결합, 복합체화, 회합, 블렌딩 또는 부가에 의해 항체 또는 항원 결합 단편에 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, 접합체는 클리어런스 변형제, 화학요법제, 독소, 방사성 동위원소, 란타나이드, 발광 표지, 형광 표지, 효소-기질 표지, DNA 알킬화제, 토포이소머라제 억제제, 튜불린 결합제, 또는 다른 항암 약물를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 및 항원 결합 단편은 하나 이상의 접합체에 결합하기 위해 활용될 수 있는 에피토프 결합 부분 외부의 특정 부위를 함유하도록 조작될 수 있다. 예컨대, 이러한 부위는 접합체에 대한 공유적 연결을 용이하게 하기 위해, 예컨대 시스테인 또는 히스티딘 잔기와 같은 하나 이상의 반응성 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체는 접합체에 간접적으로 또는 또 다른 접합체를 통해 연결될 수 있다. 예컨대, 항체 또는 항원 결합 단편은 비오틴에 접합된 다음 아비딘에 접합된 제2 접합체에 간접적으로 접합될 수 있다. 접합체는 독소(예컨대, 화학요법제), 검출 가능한 표지(예컨대, 방사성 동위원소, 란타나이드, 발광 표지, 형광 표지 또는 효소-기질 표지)일 수 있다.
"독소"는 세포에 유해하거나 세포를 손상시키거나 사멸시킬 수 있는 임의의 작용제일 수 있다. 독소의 예는 제한 없이 탁솔, 시토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜키신, 독소루비신, 다우노루비신, 디히드록시 안트라신 디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데히드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 퓨로마이신 및 이의 유사체, 항대사제(예컨대, 메토트렉세이트, 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 5-플루오로우라실 데카르바진), 알킬화제(예컨대, 메클로레타민, 티오에파 클로람부실, 멜팔란, 카르무스틴(BSNU) 및 로무스틴(CCNU), 사이클로토스파미드, 부술판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C 및 시스-디클로로디아민 백금(II) (DDP) 시스플라틴), 안트라사이클린(예컨대, 다우노루비신(이전의 다우노마이신) 및 독소루비신), 항생제(예컨대, 닥티노마이신(이전의 악티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신, 및 안트라마이신(AMC)), 및 항-유사분열제(예컨대, 빈크리스틴 및 빈블라스틴)를 포함한다.
검출 가능한 표지의 예는 형광 표지(예컨대, 플루오레세인, 로다민, 단실, 피코에리트린 또는 텍사스 레드), 효소-기질 표지(예컨대, 서양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리 포스파타제, 루세리페라제, 글루코아밀라제, 리소자임, 당류 옥시다제 또는 β-D-갈락토시다제), 방사성 동위원소(예컨대, 123I, 124I, 125I, 131I, 35S, 3H, 111In, 112In, 14C, 64Cu, 67Cu, 86Y, 88Y, 90Y, 177Lu, 211At, 186Re, 188Re, 153Sm, 212Bi, 및 32P, 다른 란타나이드, 발광 표지), 발색 모이어티, 디곡시제닌, 비오틴/아비딘, 검출용 DNA 분자 또는 금을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 접합체는 항체의 반감기를 증가시키는 것을 돕는 약동학적 변형 모이어티일 수 있다. 예시적인 예는 PEG, 카르복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 피롤리돈, 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체 등과 같은 수용성 중합체를 포함한다. 중합체는 임의의 분자량일 수 있고, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착된 중합체의 수는 다양할 수 있으며, 하나 초과의 중합체가 부착된 경우 동일한 분자이거나 상이한 분자일 수 있다.
특정 실시양태에서, 접합체는 자기 비드와 같은 정제 모이어티일 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 및/또는 이의 항원 결합 단편은 접합체를 위한 베이스로 사용된다.
폴리뉴클레오티드 및 재조합 방법
본 개시내용은 항-CD24 항체 및 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 특정 실시양태에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 본원에 제공된 예시적인 항체의 가변 영역을 코딩하는 서열번호 51, 서열번호 53, 서열번호 55, 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67, 서열번호 69, 서열번호 71, 서열번호 73, 서열번호 75, 서열번호 77 , 서열번호 79, 서열번호 81, 서열번호 83, 서열번호 85, 서열번호 87, 서열번호 89, 서열번호 102, 서열번호 110, 서열번호 204, 서열번호 205, 서열번호 206, 서열번호 207, 서열번호 208, 서열번호 209, 서열번호 210, 서열번호 211, 서열번호 212, 서열번호 213, 서열번호 214, 서열번호 215, 서열번호 216, 서열번호 217, 서열번호 218, 서열번호 219, 서열번호 228, 서열번호 229 및/또는 서열번호 220에 나타낸 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 모노클로날 항체를 코딩하는 DNA는 통상적인 절차를 이용하여 (예컨대, 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여) 용이하게 단리되고 시퀀싱된다. 코딩 DNA는 또한 합성 방법으로 수득될 수 있다.
항-CD24 항체 및 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드(예컨대, 서열번호 51, 서열번호 53, 서열번호 55, 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67, 서열번호 69, 서열번호 71, 서열번호 73, 서열번호 75, 서열번호 77 , 서열번호 79, 서열번호 81, 서열번호 83, 서열번호 85, 서열번호 87, 서열번호 89, 서열번호 102, 서열번호 110, 서열번호 204, 서열번호 205, 서열번호 206, 서열번호 207, 서열번호 208, 서열번호 209, 서열번호 210, 서열번호 211, 서열번호 212, 서열번호 213, 서열번호 214, 서열번호 215, 서열번호 216, 서열번호 217, 서열번호 218, 서열번호 219, 서열번호 228, 서열번호 229 및/또는 서열번호 220에 나타낸 서열을 포함)는 당업계에 공지된 재조합 기술을 이용하여 추가 클로닝(DNA의 증폭)을 위해 또는 발현을 위해 벡터에 삽입될 수 있다. 많은 벡터가 이용 가능하다. 벡터 성분은 일반적으로 신호 서열, 복제 기점, 하나 이상의 마커 유전자, 인핸서 요소, 프로모터(예컨대, SV40, CMV, EF-1α), 및 전사 종결 서열 중 하나 이상을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 벡터 시스템은 포유동물, 박테리아, 효모 시스템 등을 포함하고, 제한 없이 pALTER, pBAD, pcDNA, pCal, pL, pET, pGEMEX, pGEX, pCI, pCMV, pEGFP, pEGFT, pSV2, pFUSE, pVITRO,pVIVO, pMAL, pMD18-T, pMONO, pSELECT, pUNO, pDUO, Psg5L, pBABE, pWPXL, pBI, p15TV-L, pPro18, pTD, pRS420, pLexA, pACT2.2 등, 및 다른 실험실 및 상업적으로 이용 가능한 벡터와 같은 플라스미드를 포함한다. 적합한 벡터는 플라스미드 또는 바이러스 벡터(예컨대, 복제 결함 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노 관련 바이러스)를 포함할 수 있다.
항체 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터는 클로닝 또는 유전자 발현을 위해 숙주 세포에 도입될 수 있다. 본원의 벡터에서 DNA를 클로닝하거나 이를 발현시키기에 적합한 숙주 세포는 상기 기재된 원핵생물, 효모 또는 고등 진핵생물 세포이다. 이러한 목적에 적합한 원핵생물은 유박테리아, 예컨대 그람 음성 또는 그람 양성 유기체, 예컨대 엔테로박테리아세애(Enterobacteriaceae), 예컨대 에스케리키아(Escherichia), 예컨대 이. 콜리, 엔테로박터(Enterobacter), 에르위니아(Erwinia), 클렙시엘라(Klebsiella), 프로테우스(Proteus), 살모넬라(Salmonella), 예컨대 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium), 세라티아(Serratia), 예컨대, 세라티아 마르세칸스(Serratia marcescans) 및 쉬겔라(Shigella) 뿐만 아니라 바실루스(Bacillus), 예컨대 비. 서브틸리스(B. subtilis) 및 비. 리체니포르미스(B. licheniformis), 슈도모나스(Pseudomonas), 예컨대 피. 아에루기노사(P. aeruginosa) 및 스트렙토미세스(Streptomyces)를 포함한다.
원핵생물 이외에, 사상균 또는 효모와 같은 진핵생물 미생물은 항-CD24 항체 코딩 벡터를 위한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 사카로미세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 일반 빵 효모는 하등 진핵생물 숙주 미생물 중에서 가장 일반적으로 사용된다. 그러나, 쉬조사카로미세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe); 클루이베로미세스(Kluyveromyces) 숙주, 예컨대 케이. 락티스(K. lactis), 케이. 프라길리스(K. fragilis) (ATCC 12,424), 케이. 불가리쿠스(K. bulgaricus) (ATCC 16,045), 케이. 위케라미이(K. wickeramii) (ATCC 24,178), 케이. 왈티이(K. waltii) (ATCC 56,500), 케이. 드로소피라룸(K. drosophilarum) (ATCC 36,906), 케이. 테르모톨레란스(K. thermotolerans), 및 케이. 마르시아누스(K. marxianus); 야로위아(yarrowia) (EP 402,226); 피키아 파스토리스(Pichia pastoris) (EP 183,070); 칸디다(Candida); 트리코데르마 리시아(Trichoderma reesia) (EP 244,234); 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa); 쉬와니오미세스(Schwanniomyces), 예컨대 쉬와니오미세스 옥시덴탈리스(Schwanniomyces occidentalis); 및 사상균, 예컨대 뉴로스포라(Neurospora), 페니실리움(Penicillium), 톨리포클라디움(Tolypocladium), 및 아스페르길루스(Aspergillus) 숙주, 예컨대 에이. 니둘란스(A. nidulans) 및 에이. 니게르(A. niger)와 같은 다수의 다른 속, 종 및 변종이 일반적으로 이용 가능하고 본원에서 유용하다.
본원에 제공된 글리코실화된 항체 또는 항원 단편의 발현에 적합한 숙주 세포는 다세포 유기체로부터 유래된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 많은 바큘로바이러스 스트레인 및 변이체 및 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) (모충), 아데스 아에깁티(Aedes aegypti) (모기), 아데스 알보픽투스(Aedes albopictus) (모기), 드로소필라 멜라노가스테르(Drosophila melanogaster)(프루이프플라이(fruiffly)) 및 봄빅스 모리(Bombyx mori)와 같은 숙주로부터의 상응하는 허용되는 곤충 숙주 세포가 확인되었다. 형질감염을 위한 다양한 바이러스 스트레인, 예컨대 오토그라파 칼리포르니카(Autographa californica) NPV의 L-1 변이체 및 봄빅스 모리 NPV의 Bm-5 스트레인이 공개적으로 이용 가능하며, 이러한 바이러스는 특히 스포도프테라 프루기페르다 세포의 형질감염을 위해 본 발명에 따른 바이러스로 사용될 수 있다. 목화, 옥수수, 감자, 대두, 피튜니아, 토마토 및 담배의 식물 세포 배양물이 또한 숙주로 활용될 수 있다.
그러나, 척추동물 세포에 대한 관심이 가장 컸고, 배양(조직 배양)에서 척추동물 세포의 증식은 일상적인 절차가 되었다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주(COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 세포주(현탁 배양에서의 성장을 위해 서브클로닝된 293 또는 293 세포, Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); 아기 햄스터 신장 세포(BHK, ATCC CCL 10); 중국 햄스터 난소 세포/-DHFR(CHO, Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 마우스 세르톨리 세포(TM4, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); 원숭이 신장 세포(CV1 ATCC CCL 70); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76, ATCC CRL-1587); 인간 자궁경부 암종 세포(HELA, ATCC CCL 2); 개 신장 세포(MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 래트 간 세포(BRL 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포(W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포(Hep G2, HB 8065); 마우스 유방 종양(MMT 060562, ATCC CCL51); TRI 세포(Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)); MRC 5 세포; FS4 세포; 및 인간 간암 세포주(Hep G2)이다.
숙주 세포는 항-CD24 항체 생성을 위한 상기 기재된 발현 또는 클로닝 벡터로 형질전환되고, 프로모터 유도, 형질전환체 선별 또는 원하는 서열을 코딩하는 유전자 증폭에 적합하도록 변형된 통상적인 영양 배지에서 배양된다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 당업계에 공지된 상동성 재조합에 의해 생성될 수 있다.
본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편을 생성하는 데 사용되는 숙주 세포는 다양한 배지에서 배양될 수 있다. 상업적으로 이용 가능한 배지, 예컨대 햄(Ham) F10(Sigma), 최소 필수 배지(MEM) (Sigma), RPMI-1640(Sigma), 및 둘베코 변형된 이글 배지(DMEM) (Sigma)가 숙주 세포 배양에 적합하다. 또한, 문헌(Ham et al., Meth. Enz. 58:44 (1979), Barnes et al., Anal. Biochem. 102:255 (1980), U.S. Pat. No. 4,767,704; 4,657,866; 4,927,762; 4,560,655; 또는 5,122,469; WO 90/03430; WO 87/00195; or U.S. Pat. Re. 30,985)에 기재된 임의의 배지가 숙주 세포용 배양 배지로 사용될 수 있다. 임의의 이러한 배지는 필요에 따라 호르몬 및/또는 다른 성장 인자(예컨대, 인슐린, 트랜스페린 또는 표피 성장 인자), 염(예컨대, 염화나트륨, 칼슘, 마그네슘 및 포스페이트), 버퍼(예컨대, HEPES), 뉴클레오티드(예컨대, 아데노신 및 티미딘), 항생제(예컨대, GENTAMYCINTM 약물), 미량 원소(일반적으로 마이크로몰 범위의 최종 농도로 존재하는 무기 화합물로 정의됨) 및 글루코스 또는 동등한 에너지원으로 보충될 수 있다. 임의의 다른 필요한 보충물이 또한 당업자에게 공지된 적절한 농도로 포함될 수 있다. 온도, pH 등과 같은 배양 조건은 발현을 위해 선택된 숙주 세포와 함께 이전에 사용된 것이며, 당업자에게 명백할 것이다.
재조합 기술을 이용하는 경우, 항체는 주변세포질 공간에서 세포내로 생성되거나 배지로 직접 분비될 수 있다. 항체가 세포 내에서 생성되는 경우, 제1 단계로 미립자 파편(숙주 세포 또는 용해된 단편)이, 예컨대 원심분리 또는 한외여과에 의해 제거된다. 문헌(Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992))은 이. 콜리의 주변세포질 공간으로 분비되는 항체를 단리하는 절차를 기술하고 있다. 간략하게, 세포 페이스트는 나트륨 아세테이트(pH 3.5), EDTA 및 페닐메틸술포닐플루오라이드(PMSF)의 존재 하에 약 30분에 걸쳐 해동된다. 세포 파편은 원심분리로 제거될 수 있다. 항체가 배지로 분비되는 경우, 이러한 발현 시스템으로부터의 상층액은 일반적으로 먼저 상업적으로 이용 가능한 단백질 농축 필터, 예컨대 아미콘(Amicon) 또는 밀리포어 펠리콘(Millipore Pellicon) 한외여과 유닛을 사용하여 농축된다. PMSF와 같은 프로테아제 억제제는 단백질분해를 억제하기 위해 상기 단계 중 임의의 단계에 포함될 수 있고, 항생제는 우발적 오염물의 성장을 방지하기 위해 포함될 수 있다.
세포로부터 제조된 항-CD24 항체 및 이의 항원 결합 단편은, 예컨대 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, DEAE-셀룰로스 이온 교환 크로마토그래피, 황산암모늄 침전, 염석 및 친화성 크로마토그래피를 이용하여 정제될 수 있으며, 친화성 크로마토그래피가 선호되는 정제 기술이다.
특정 실시양태에서, 고체상에 고정된 단백질 A가 항체 및 이의 항원 결합 단편의 면역친화성 정제에 사용된다. 친화성 리간드로서 단백질 A의 적합성은 항체에 존재하는 임의의 면역글로불린 Fc 도메인의 종 및 이소타입에 따라 다르다. 단백질 A는 인간 감마1, 감마2 또는 감마4 중쇄에 기초한 항체를 정제하는 데 사용될 수 있다(Lindmark et al., J. Immunol. Meth. 62:1-13 (1983)). 단백질 G는 모든 마우스 이소타입 및 인간 감마3에 대해 권장된다(Guss et al., EMBO J. 5:1567 1575 (1986)). 친화성 리간드가 부착된 매트릭스는 대부분 아가로스이지만 다른 매트릭스도 이용 가능하다. 제어된 공극 유리 또는 폴리(스티렌디비닐)벤젠과 같은 기계적으로 안정적인 매트릭스는 아가로스로 달성될 수 있는 것보다 더 빠른 유속 및 더 짧은 처리 시간을 허용한다. 항체가 CH3 도메인을 포함하는 경우, 베이커본드(Bakerbond) ABX.TM. 수지(J. T. Baker, Phillipsburg, N.J.)기 정제에 유용하다. 이온 교환 컬럼에서의 분별, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카에서의 크로마토그래피, 헤파린에서의 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교환 수지(예컨대, 폴리아스파르트산 컬럼)에서의 SEPHAROSETM 크로마토그래피, 크로마토포커싱, SDS-PAGE, 및 황산암모늄 침전과 같은 단백질 정제를 위한 다른 기술이 또한 회수하고자 하는 항체에 따라 이용 가능하다.
임의의 예비 정제 단계(들) 후에, 관심 있는 항체 및 오염물을 포함하는 혼합물은 바람직하게는 낮은 염 농도(예컨대, 약 0-0.25M 염)에서 수행되는 약 2.5-4.5의 pH에서 용출 버퍼를 사용하여 낮은 pH 소수성 상호작용 크로마토그래피에 적용될 수 있다.
CAR
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 또한 항원 결합 도메인, 막횡단 도메인, 공동자극 신호전달 영역, 및 TCR 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 제공하고, 항원 결합 도메인은 CD24에 특이적으로 결합하고 본원에 제공된 항원 결합 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 단편은 Fab 또는 scFv이다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 CAR은 이중특이적이다. CAR은 CD24 이외의 제2 항원 또는 CD24 상의 제2 에피토프에 추가로 특이적으로 결합할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 항원은 종양 항원, 종양 관련 항원 또는 상기 언급된 면역 관련 표적이다. TCR 신호전달 도메인은 CD3ζ, FccRIγ, CD27, CD28, CD137, CD134, MyD88, CD40, CD278, TLR 또는 이들의 조합의 세포내 신호 영역 서열로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 막횡단 영역은 CD3, CD4, CD8 또는 CD28의 막횡단 영역을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 항원은 PD-L1, SIRPα, CD47 또는 B2M과 같은 면역억제 분자이다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 또한 상기 언급된 바와 같은 CAR을 코딩하는 핵산 서열 뿐만 아니라 이러한 핵산 서열을 포함하는 세포 또는 벡터 또는 본원에 제공된 CAR을 발현하도록 유전자 변형된 세포를 제공한다. 세포는 면역 세포일 수 있으며, 임의적으로 면역 세포는 T 림프구, NK 세포, 단핵구, 대식세포 또는 NKT 림프구이다.
약제학적 조성물
본 개시내용은 항-CD24 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 추가로 제공한다.
본원에 개시된 약제학적 조성물에 사용하기 위한 약제학적으로 허용되는 담체는, 예컨대 약제학적으로 허용되는 액체, 겔 또는 고체 담체, 수성 비히클, 비수성 비히클, 항미생물제, 등장화제, 버퍼, 항산화제, 마취제, 현탁제/분산제, 봉쇄제 또는 킬레이트제, 희석제, 보조제, 부형제 또는 비-독성 보조 물질, 당업계에 공지된 다른 성분, 또는 이들의 다양한 조합을 포함할 수 있다.
적합한 성분은, 예컨대 항산화제, 충전제, 결합제, 붕해제, 버퍼, 보존제, 윤활제, 향미제, 증점제, 착색제, 유화제 또는 안정화제, 예컨대 슈가 및 사이클로덱스트린을 포함할 수 있다. 적합한 항산화제는, 예컨대 메티오닌, 아스코르브산, EDTA, 티오황산나트륨, 백금, 카탈라제, 시트르산, 시스테인, 티오글리세롤, 티오글리콜산, 티오소르비톨, 부틸화된 히드록사니솔, 부틸화된 히드록시톨루엔 및/또는 프로필 갈레이트를 포함할 수 있다. 본원에 개시된 바와 같이, 본원에 제공된 바와 같은 항체 또는 항원 결합 단편 및 접합체를 포함하는 조성물에 메티오닌과 같은 하나 이상의 항산화제를 포함시키면 항체 또는 항원 결합 단편의 산화가 감소된다. 이러한 산화 감소는 결합 친화성의 손실을 방지하거나 감소시켜 항체 안정성을 개선하고 저장 기간을 최대화한다. 따라서, 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 하나 이상의 항체 또는 항원 결합 단편 및 메티오닌과 같은 하나 이상의 항산화제를 포함하는 조성물이 제공된다. 항체 또는 항원 결합 단편을 메티오닌과 같은 하나 이상의 항산화제와 혼합함으로써 본원에 제공된 바와 같은 항체 또는 항원 결합 단편의 산화를 방지하고/하거나, 저장 기간을 연장하고/하거나, 효능을 개선하는 방법이 추가로 제공된다.
추가 예시를 위해, 약제학적으로 허용되는 담체는, 예컨대 수성 비히클, 예컨대 염화나트륨 주사액, 링거 주사액, 등장성 덱스트로스 주사액, 멸균수 주사액 또는 덱스트로스 및 락테이트화된 링거 주사액, 비수성 비히클, 예컨대 식물성 고정유, 면실유, 옥수수유, 호마유 또는 낙화생유, 정세균 또는 정진균 농도의 항미생물제, 등장제, 예컨대 염화나트륨 또는 덱스트로스, 버퍼, 예컨대 포스페이트 또는 시트레이트 버퍼, 항산화제, 예컨대 중황산나트륨, 국소 마취제, 예컨대 프로카인 히드로클로라이드, 현탁제 및 분산제, 예컨대 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스 또는 폴리비닐피롤리돈, 유화제, 예컨대 폴리소르베이트 80(TWEEN-80), 봉쇄제 또는 킬레이트제, 예컨대 EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 또는 EGTA(에틸렌 글리콜 테트라아세트산), 에틸 알콜, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 수산화나트륨, 염산, 시트르산 또는 락트산을 포함할 수 있다. 담체로 활용되는 항미생물제는 페놀 또는 크레졸, 수은, 벤질 알콜, 클로로부탄올, 메틸 및 프로필 p-히드록시벤조산 에스테르, 티메로살, 벤잘코늄 클로라이드 및 벤제토늄 클로라이드를 포함하는 다중 용량 용기의 약제학적 조성물에 첨가될 수 있다. 적합한 부형제는, 예컨대 물, 식염수, 덱스트로스, 글리세롤 또는 에탄올을 포함할 수 있다. 적합한 비-독성 보조 물질은, 예컨대 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 안정화제, 용해도 향상제, 또는 나트륨 아세테이트, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트 또는 사이클로덱스트린과 같은 작용제를 포함할 수 있다.
약제학적 조성물은 액체 용액, 현탁액, 에멀젼, 환제, 캡슐, 정제, 지속 방출 제형 또는 분말일 수 있다. 경구 제형은 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 폴리비닐 피롤리돈, 나트륨 사카린, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등과 같은 약제학적 등급의 표준 담체를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 약제학적 조성물은 주사용 조성물로 제형화된다. 주사 가능한 약제학적 조성물은, 예컨대 액체 용액, 현탁액, 에멀젼, 또는 액체 용액, 현탁액 또는 에멀젼을 생성하기에 적합한 고체 형태와 같은 임의의 통상적인 형태로 제조될 수 있다. 주사용 제제는 주사용 멸균 및/또는 비-발열 용액, 피하 정제를 포함하여 사용 직전에 용매와 조합될 동결건조 분말과 같은 멸균 건조 가용성 생성물, 주사용 멸균 현탁액, 사용 직전에 비히클과 결합할 조합될 멸균 건조 불용성 생성물, 및 멸균 및/또는 비-발열 에멀젼을 포함할 수 있다. 용액은 수성 또는 비수성일 수 있다.
특정 실시양태에서, 단위 용량 비경구 제제는 앰플, 바이알 또는 바늘이 있는 주사기에 포장된다. 비경구 투여를 위한 모든 제제는 당업계에 공지되고 실시되는 바와 같이 멸균성이고 비발열적이어야 한다.
특정 실시양태에서, 멸균된 동결건조 분말은 본원에 개시된 바와 같은 항체 또는 항원 결합 단편을 적합한 용매에 용해시켜 제조된다. 용매는 안정성을 개선하는 부형제 또는 분말 또는 분말로부터 제조된 재구성된 용액의 다른 약리학적 성분을 함유할 수 있다. 사용될 수 있는 부형제는 물, 덱스트로스, 소르비탈, 프룩토스, 옥수수 시럽, 자일리톨, 글리세린, 글루코스, 수크로스 또는 다른 적합한 작용제를 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 용매는 시트레이트, 인산나트륨 또는 인산칼륨과 같은 버퍼 또는 일 실시양태에서 약 중성 pH에서 당업자에게 공지된 다른 이러한 버퍼를 함유할 수 있다. 용액의 후속 멸균 여과에 이은 당업자에게 공지된 표준 조건 하에서의 동결건조는 바람직한 제형을 제공한다. 한 실시양태에서, 생성된 용액은 동결건조를 위해 바이알에 분배될 것이다. 각각의 바이알은 단일 용량 또는 다중 용량의 항-CD24 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 조성물을 함유할 수 있다. 소정 용량 또는 일련의 용량(예컨대, 약 10%)에 필요한 것보다 적은 양으로 바이알을 과충전하는 것은 정확한 샘플 회수 및 정확한 투약을 용이하게 하기 위해 허용된다. 동결건조된 분말은 약 4℃ 내지 실온과 같은 적절한 조건 하에 저장될 수 있다.
주사용수를 사용한 동결건조 분말의 재구성은 비경구 투여에 사용하기 위한 제형을 제공한다. 한 실시양태에서, 재구성을 위해 멸균 및/또는 비-발열수 또는 다른 적절한 액체 담체가 동결건조 분말에 첨가된다. 정확한 양은 제공되는 선택된 요법에 따라 다르며 경험적으로 결정될 수 있다.
사용 방법
본 개시내용은 또한 치료학적 유효량의 본원에 제공된 바와 같은 항체 또는 항원 결합 단편을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써 CD24 관련 질환 또는 병태를 치료 또는 예방하는 단계를 포함하는 치료 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, CD24 관련 질환 또는 병태는 암, 자가면역 질환, 염증 질환, 적응 면역 질환 또는 감염 질환이다.
암의 예는 비-소세포 폐암(편평/비편평), 소세포 폐암, 신세포암, 결장직장암, 결장암, 난소암, 유방암(기저 유방 암종, 관 암종 및 소엽 유방 암종 포함), 췌장암, 위 암종, 방광암, 식도암, 중피종, 흑색종, 두경부암, 갑상선암, 육종, 전립선암, 교모세포종, 자궁경부암, 흉선 암종, 흑색종, 골수종, 균샹 식육종, 메르켈 세포 암, 간세포 암종(HCC), 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종, 및 다른 육종, 활막종, 중피종, 유윙 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 악성 림프종, 기저 세포 암종, 선암종, 땀샘 암종, 갑상선 수질 암종, 유두상 갑상선 암종, 크롬친화세포종 피지선 암종, 유두상 암종, 유두상 선암종, 수질 암종, 기관지 암종, 간암, 담관 암종, 융모막암종, 윌름스 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 정상피종, 고전적 호지킨 림프종(CHL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종, T 세포/조직구 풍부 B 세포 림프종, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수구성(과립구성) 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 진성다혈구증, 비만 세포 유래 종양, EBV 양성 및 음성 PTLD, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 형질모구 림프종, 결절외 NK/T 세포 림프종, 비인두 암종, HHV8 관련 원발성 삼출 림프종, 비 -호지킨 림프종, 다발성 골수종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 중쇄 질환, 골수형성이상 증후군, 모발 세포 백혈병 및 골수형성이상증, 원발성 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경종, 핍지교종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종 및 망막모세포종을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
특정 실시양태에서, 암은 폐암, 기관지암, 골암, 간 및 담관암, 췌장암, 유방암, 간암, 난소암, 고환암, 신장암, 방광암, 두경부암, 척추암, 뇌암, 자궁경부암, 자궁암, 자궁내막암, 결장암, 결장직장암, 직장암, 항문암, 식도암, 위장암, 피부암, 전립선암, 뇌하수체암, 위암, 질암, 갑상선암, 교모세포종, 성상세포종, 흑색종, 골수형성이상 증후군, 육종, 기형종, 선암종, 백혈병, 골수종 및 림프종이다. 특정 실시양태에서, 암은 화학내성이다.
특정 실시양태에서, 질환 또는 병태는 B 세포 림프종으로부터 선택되는 혈액암이다. B 세포 림프종의 예는 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종(MM), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 변연부 B 세포 림프종(MZL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 리히터 증후군, 버킷 림프종 또는 소포성 림프종을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
자가면역 질환은 후천성 면역결핍 증후군(AIDS, 자가면역 성분을 갖는 바이러스 질환), 원형 탈모증, 강직성 척추염, 항인지질 증후군, 자가면역 애디슨 질환, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 내이 질환(AIED), 자가면역 림프증식성 증후군(ALPS), 자가면역 혈소판감소성 자반증(ATP), 베체트 질환, 심근병증, 복강 스프루-포진성 피부염; 만성 피로 면역 기능장애 증후군(CFIDS), 만성 염증성 탈수초성 다발신경병증(CIPD), 반흔성 천포창, 한랭 응집소 질한, 크레스트 증후군, 크론 질환, 데고스 질환, 소아 피부근염, 원반모양 루푸스, 본태성 혼합 한랭글로불린혈증, 섬유근육통-섬유근염, 그레이브스 질환, 길랭-바레 증후군, 하시모토 갑상선염, 특발성 폐 섬유증, 특발성 혈소판감소증 자색반병(ITP), IgA 신병증, 인슐린 의존적 당뇨병, 소아 만성 관절염(스틸 질환), 소아 류마티스 관절염, 메니에르 질환, 혼합 결합 조직병, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 악성 빈혈, 결절성 다발동맥염, 다발연골염, 다선성 증후군, 류마티스성 다발근통, 다발성근염 및 피부근염, 원발성 무감마글로불린혈증, 원발성 담즙성 간경변, 건선, 건선성 관절염, 레이노 현상, 라이터 증후군, 류마티스 열, 류마티스성 관절염, 유육종증 , 경피증(전신 경화증(SS)으로도 공지된 진행성 전신 경화증(PSS)), 쇼그렌 증후군, 강직 인간 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 타카야수 동맥염, 측두 동맥염/거대 세포 동맥염, 궤양성 결장염, 포도막염, 백반증 및 베게너 육아종증을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
염증 장애는, 예컨대 만성 및 급성 염증 장애를 포함한다. 염증 장애의 예는 알츠하이머 질환, 천식, 아토피성 알레르기, 알레르기, 죽상동맥경화증, 기관지 천식, 습진, 사구체신염, 이식편 대 숙주 질한, 용혈성 빈혈, 골관절염, 패혈증, 뇌졸중, 조직 및 기관, 혈관염, 당뇨병성 망막병증 및 인공 호흡기 유발된 폐 손상을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD24 관련 병태는 염증 질환, 예컨대 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 장 점막 염증, 결장염과 관련된 소모성 질환, 다발성 경화증, 바이러스 감염, 류마티스성 관절염, 골관절염, 콘 질환, 및 염증성 장 질환, 건선, 전신성 경피증, 자가면역 당뇨병 등이다.
감염 질환은 진균 감염, 기생충/원생동물 감염 또는 만성 바이러스 감염, 예컨대 말라리아, 콕시디오이드진균증(coccidioiodmycosis immitis), 히스토플라스마증, 손발톱진균증, 아스페르길루스증, 분아균증, 칸디다증(candidiasis albicans), 파라콕시디오이데스진균증, 미포자충증, 가시아메바 각막염, 아메바증, 회충증, 바베시아증, 발란티듐증, 베일리사스카리아증, 샤가스 질환, 간흡충증, 코클리오미아증, 크립토스포리듐증, 열두조충증, 메디나충증, 포충증, 상피병, 요충증, 간질증, 비대흡충증, 필라리아증, 지아르디아증, 악구충증, 왜소조충증, 이소스포라증, 카타야마 열, 레이쉬마니아증, 라임 질환, 요코가와흡충증, 구더기증, 회선사상충증, 이감염증, 옴, 주혈흡충증, 수면병, 간충증, 촌충증, 톡소카라증, 톡소플라스마증, 선모충증, 편충증, 트리파노소마증, 기생충 감염, B형 간염(HBV), C형 간염(HCV), 헤르페스 바이러스, 엡스타인-바 바이러스, HIV, 시토메갈로바이러스, 단순 포진 바이러스 I형, 단순 포진 바이러스 II형, 인간 파필로마 바이러스, 아데노바이러스, 인간 면역결핍 바이러스 I, 인간 면역결핍 바이러스 II, 카포시 웨스트 육종 관련 헤르페스 바이러스 전염병, 씬 링 바이러스(thin ring virus) (토르케테노바이러스(Torquetenovirus)), 인간 T 림프영양 바이러스 I, 인간 T 림프영양 바이러스 II, 수두 대상포진, JC 바이러스 또는 BK 바이러스의 감염을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
특정 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
또 다른 측면에서, 치료학적 유효량의 본원에 제공된 바와 같은 항체 또는 항원 결합 단편을 CD24 활성의 조절로부터 이익을 얻을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 제공된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "질환 또는 병태"는 용어 "CD24 관련 질환 또는 병태"와 상호교환적으로 사용될 수 있다.
본원에 제공된 바와 같은 항체 또는 항원 결합 단편의 치료학적 유효량은 당업계에 공지된 다양한 요인, 예컨대 체중, 연령, 과거 병력, 현재 약물, 대상체의 건강 상태 및 교차 반응, 알레르기, 민감성 및 불리한 부작용에 대한 가능성 뿐만 아니라 투여 경로 및 질환 발달 정도에 따라 달라질 것이다. 용량은 이들 및 다른 상황 또는 요건에 의해 지시되는 바와 같이 당업자(예컨대, 의사 또는 수의사)에 의해 비례적으로 감소되거나 증가될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 바와 같은 항체 또는 항원 결합 단편은 약 0.01 mg/kg 내지 약 100 mg/kg(예컨대, 약 0.01 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 55 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 65 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 75 mg/kg, 약 80 mg/kg, 약 85 mg/kg, 약 90 mg/kg, 약 95 mg/kg, 또는 약 100 mg/kg)의 치료학적 유효 용량으로 투여될 수 있다. 이들 중 특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 약 50 mg/kg 이하의 용량으로 투여되고, 이들 중 특정 실시양태에서 용량은 10 mg/kg 이하, 5 mg/kg 이하, 3 mg/kg 이하, 1 mg/kg 이하, 0.5 mg/kg 이하 또는 0.1 mg/kg 이하이다. 특정 실시양태에서, 투여 용량은 치료 과정에 걸쳐 변할 수 있다. 예컨대, 특정 실시양태에서, 초기 투여 용량은 후속 투여 용량보다 높을 수 있다. 특정 실시양태에서, 투여 용량은 대상체의 반응에 따라 치료 과정에 따라 달라질 수 있다.
최적의 원하는 반응(예컨대, 치료 반응)을 제공하기 위해 투여 레지먼이 조절될 수 있다. 예컨대, 단일 용량이 투여될 수 있거나 시간에 따라 여러 분할 용량이 투여될 수 있다.
본원에 개시된 항체 및 항원 결합 단편은, 예컨대 비경구(예컨대, 피하, 복강내, 정맥내 주입을 포함하는 정맥내, 근육내 또는 피내 주사) 또는 비-장관외(예컨대, 경구, 비강내, 안내, 설하, 직장 또는 국소) 경로와 같은 당업계에 공지된 임의의 경로로 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편은 단독으로 또는 하나 이상의 추가 치료 수단 또는 작용제와 조합하여 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편은 단독으로 또는 제2 치료제와 조합하여 투여될 수 있다. 예컨대, 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편은 제2 치료제, 예컨대 화학요법제 또는 항암 약물과 조합하여 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편은 하나 이상의 면역억제 분자의 길항제, 예컨대 CD47, SIRPα, PD-L1, 또는 주요 조직적합성 부류 I 복합체(B2M)의 베타-2 마이크로글로불린 서브유닛와 조합하여 투여될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "길항제"는 면역억제 신호의 유도를 방지하도록 CD47, SIRPα, PD-L1 또는 B2M의 각각의 결합 파트너에 대한 결합을 차단하거나 억제하는 임의의 소분자, 소형 또는 마이크로 RNA, 또는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편은 SIRPα-Fc 융합 단백질 또는 이의 변이체, 항-CD47 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 같은 CD47 길항제와 조합하여 투여된다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편은 가용성 CD47 또는 이의 변이체, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 같은 SIRPα 길항제와 조합하여 투여된다.
용어 "항-CD47 항체"는 US9382320B2에 개시된 바와 같은 Hu5F9를 제한 없이 포함하는 임의의 공지된 항-CD47 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭할 수 있다. 항-인간 CD47 항체인 Hu5F9-G4가 또한 사용되며, 인간 IgG4 형식에 상보성 결정 영역(CDR)을 이식함으로써 인간화되어 인간화 5F9 항체(Hu5F9-G4)를 생성한다(Liu J. et al., PLoS One, 2015, 10: e0137345).
이들 중 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여 투여되는 본원에 개시된 바와 같은 항체 또는 항원 결합 단편은 하나 이상의 추가 치료제와 동시에 투여될 수 있고, 이들 중 특정 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편 및 추가 치료제(들)는 동일한 약제학적 조성물의 일부로서 투여될 수 있다. 그러나, 또 다른 치료제와 "조합"하여 투여되는 항체 또는 항원 결합 단편은 작용제와 동시에 또는 동일한 조성물로 투여될 필요는 없다. 항체 또는 항원 결합 단편 및 제2 작용제가 상이한 경로를 통해 투여되더라도, 또 다른 작용제 이전 또는 이후에 투여되는 항체 또는 항원 결합 단편은 본원에서 사용되는 바와 같이 해당 작용제와 "조합"하여 투여되는 것으로 간주된다. 가능한 경우, 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편과 조합하여 투여되는 추가 치료제는 추가 치료제의 제품 정보 시트에 열거된 일정에 따라 또는 문헌(Physicians' Desk Reference 2003 (Physicians' Desk Reference, 57th Ed; Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57th edition (November 2002))) 또는 당업계에 널리 공지된 프로토콜에 따라 투여된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 샘플을 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계, 및 샘플에서 CD24의 존재 또는 양을 결정하는 단계를 포함하는, 샘플에서 CD24의 존재 또는 양을 검출하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 a) 대상체로부터 샘플을 수득하는 단계; b) 대상체로부터 수득된 샘플을 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계; c) 샘플에서 CD24의 존재 또는 양을 결정하는 단계; 및 d) CD24의 존재를 대상체에서 CD24 관련 질환 또는 병태와 서로 연관시키는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD24 관련 질환 또는 병태를 진단하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 또한 대상체에서 CD24 관련 질환 또는 병태를 치료하기 위한 약제의 제조에서, CD24 관련 질환 또는 병태를 진단하기 위한 진단제의 제조에서 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 또한 CD24 발현 세포를 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 노출시키는 단계를 포함하는, CD24 발현 세포에서 CD24 활성을 조절하는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 또한 샘플을 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계, 및 샘플에서 CD24의 존재 또는 양을 결정하는 단계를 포함하는, 샘플에서 CD24의 존재 또는 양을 검출하는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 또한 a) 대상체로부터 샘플을 수득하는 단계; b) 대상체로부터 수득된 샘플을 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계; c) 샘플에서 CD24의 존재 또는 양을 결정하는 단계; 및 d) CD24의 존재 또는 양을 대상체에서 CD24 관련 질환 또는 병태의 존재 또는 상태와 서로 연관시키는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD24 관련 질환 또는 병태를 진단하는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 또한 대상체에서 CD24 관련 질환 또는 병태를 치료하기 위한 약제의 제조에서 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도를 제공한다. 약제는 제2 치료제, 예컨대 CD47 길항제를 추가로 포함할 수 있으며, 임의적으로 CD47 길항제는 SIRPα-Fc 융합 단백질 또는 이의 변이체, 또는 항-CD47 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 또한 CD24 관련 질환 또는 병태를 진단하기 위한 진단 시약의 제조에서 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 또한 CD24, 임의적으로 재조합 CD24, 세포 표면에 발현된 CD24, 또는 CD24 발현 세포를 검출하는 데 유용한 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 키트를 제공한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "재조합"은 하나 이상의 분자 생물학 기술을 이용하여 하나 이상의 생물학적 분자, 예컨대 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 분자를 인위적으로 조작하여 이러한 생물학적 분자(들)를 자연 상태가 아닌 다른 것으로 만드는 것을 지칭한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 또한 포유동물에서 CD24 발현 세포 또는 조직에 대한 T 세포 매개 면역 반응을 자극하는 방법을 제공하며, 방법은 포유동물에게 항원 결합 도메인, 막횡단 도메인, 공동자극 신호전달 영역, 및 TCR 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 발현하도록 유전자 변형된 세포의 유효량을 투여하는 단계를 포함하고, 항원 결합 도메인은 CD24에 특이적으로 결합하고 본원에 제공된 항원 결합 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 단편은 Fab 또는 scFv이다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 CAR은 이중특이적이다. CAR은 CD24 이외의 제2 항원 또는 CD24 상의 제2 에피토프에 추가로 특이적으로 결합할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 항원은 상기 언급된 바와 같은 종양 항원이다. TCR 신호전달 도메인은 CD3ζ, FccRIγ, CD27, CD28, CD137, CD134, MyD88, CD40, CD278, TLR 또는 이들의 조합의 세포내 신호 영역 서열로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 막횡단 영역은 CD3, CD4, CD8 또는 CD28의 막횡단 영역을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 항원은 면역억제 분자, 예컨대 PD-L1, SIRPα, CD47 또는 B2M이다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 또한 포유동물에게 본원에 제공된 CAR을 발현하도록 유전자 변형된 세포(예컨대, 자가 T 세포)의 유효량을 투여함으로써 포유동물을 치료하는 단계를 포함하는, CD24 관련 질환 또는 병태를 갖는 포유동물을 치료하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, CD24 관련 질환 또는 병태는 암이다. 특정 실시양태에서, 포유동물은 인간 대상체이다.
하기 실시예는 청구된 발명을 더 잘 설명하기 위해 제공되며 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 하기에 기술된 모든 특정 조성물, 재료 및 방법은 전체적으로 또는 부분적으로 본 발명의 범위 내에 속한다. 이들 특정 조성물, 재료 및 방법은 본 발명을 제한하려는 것이 아니라 단지 본 발명의 범위 내에 속하는 특정 실시양태를 설명하기 위한 것이다. 당업자는 발명 능력을 발휘하지 않고 본 발명의 범위를 벗어나지 않고 등가의 조성물, 재료 및 방법을 개발할 수 있다. 여전히 본 발명의 범위 내에서 있으면서 본원에 기술된 절차에서 많은 변형이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 이러한 변형이 본 발명의 범위 내에 포함되는 것이 본 발명자들의 의도이다.
실시예
실시예 1: 하이브리도마 개발
1. 방법
1.1 면역화 및 혈청 역가 결정
1.1.1 면역원 및 면역화 전략
세포 면역화: 인간 CD24 과발현 세포(HEK293F-hCD24)
유전자 면역화: 전장 인간 CD24 발현 구축물
단백질 면역화: 재조합 인간 CD24 단백질
Balb/c 및 SJL 마우스를 표 2에 나타난 바와 같이 면역화시켰다. 동물이 하이브리도마 발달에 적합한 만족스러운 항혈청 역가를 발달시킬 때까지 1차 면역화에 이어 여러 번의 부스트를 실시하였다. 혈청 수준에서의 성능 및 면역 반응을 비교하기 위해 모든 면역화 전략을 병렬적으로 수행하였다.
[표 2]
1.1.2 면역화 일정
[표 3]
[표 4]
[표 5]
1.1.3 시험 채혈 항혈청 분석
스크리닝: 시험 채혈을 수행하고 인간 CD24(293F-hCD24) 및 MCF7 세포를 안정적으로 과발현하는 293F 세포주에서 FACS를 사용하여 시험함으로써 평가하였다.
1.2 하이브리도마 생성 및 스크리닝
1.2.1 세포 융합 및 스크리닝
융합: 시험 채혈 FACS에 의해 결정된 바와 같이 면역화에 가장 잘 반응한 마우스에서 비장 세포 융합을 수행하였다. 비장 및 림프절로부터의 림프구를 최적화된 전기융합 프로토콜을 이용하여 Sp2/0-Ag14 세포주에 융합하였다. 프로젝트의 성공을 보장하기 위해 다중 융합이 수행되었다.
스크리닝 및 확장: 융합물을 96 웰 플레이트의 스택에 플레이팅하였다(웰당 104 내지 105개). 플레이트를 성장에 대해 모니터링하고 매주 피딩하였다. 세포 성장을 갖는 웰을 아쿠멘(Acumen) 및/또는 다른 실행 가능한 검정을 이용하여 10-14일에 1차 스크리닝 검정에 의해 스크리닝하였다. 각각의 표적 항원에 대한 다중 융합을 수행하고, 아쿠멘에 의해 스크리닝하였다. 1차 스크리닝에서 293F-hCD24와 양성 결합을 나타낸 양성 모 클론을 2차 스크리닝을 위해 24 웰 플레이트로 확장하였다.
추가 항체 스크리닝: 1차 스크리닝 후, 24 웰 플레이트로 확장된 양성 모 클론을 하기 하이브리도마 스크리닝 펀넬에 기술된 검정으로 다시 스크리닝하였다.
관심 있는 하이브리도마를 선택하여 서브클로닝을 진행하였다.
1.2.2 하이브리도마 서브클로닝, 스크리닝 및 동결보존
서브클로닝: 상기 스크리닝 펀넬로부터 원하는 반응성 및 이소타입을 갖는 모 하이브리도마를 모노 클론이 수득될 때까지 다수 라운드의 제한 희석 또는 단일 세포 분류에 의해 서브클로닝하였다.
스크리닝 & 확장: 서브클로닝 플레이트를 아쿠멘 검정으로 스크리닝하고 결합 능력이 우수한 서브클론을 확인 시험을 위해 24 웰로 확장하였다. 이들 서브클론의 특이성 및 교차 반응성을 FACs 분석으로 확인하였다. 간단히, 모 293F 세포, 293F-hCD24, 유방암 세포(MCF7, MDA-MB-468), 방광암 세포(5637), 만성 골수구성 백혈병 세포(Nalm1), CKOK1-hCD24 세포, 결장직장 세포(HT29), 난소암 세포(SKOV3) 및 폐 암종 세포(H1975 및 A549)를 각각의 서브클론에 의해 생성된 항체와 함께 인큐베이션하였다. 형광 염료 접합된 2차 항체를 사용하여 1차 항체와 세포의 결합을 검출하였다. 중앙값 형광 강도(MFI)를 FACs 분석으로 측정하였다.
동결보존 - 원하는 서브클론 세포주를 시퀀싱하고, 동결보존을 위해 배양 플라스크로 추가 확장하였다. 0.5-1.0 x107개 세포/바이알로 세포주당 4-6개의 바이알을 초기에 동결보존하였다. 원하는 경우 선택된 가장 가치 있는 세포주에 대해 마스터 세포 은행 및 작업 세포 은행을 수립할 수 있었다.
2. 결과
본 발명자들은 인간 CD24 단백질(293F-hCD24)을 안정적으로 과발현하는 293F 세포와 양성 결합을 나타내는 독특한 서열을 갖는 다수의 항체를 발견하였다. 293F 세포, 293F-hCD24, 유방암 세포(MCF7, MDA-MB-468), 방광암 세포(5637), 만성 골수구성 백혈병 세포(Nalm1), CKOK1-hCD24 세포, 결장직장암 세포(HT29), 난소암 세포(SKOV3) 및 폐 암종 세포(H1975 및 A549)를 염색하는 항체의 FACS MFI를 하기 표 6에 요약하였다. 2개의 클론 110D4G4 및 81A1F8은 또한 DLBCL 세포 OCI-LY1, OCI-LY 7 및 SU-DHL-10 세포를 염색하기 위해 적용되었다(표 7).
[표 6]
[표 7]
SN3와 비교하여, 본 발명자들의 항체 몇몇은 시험된 세포에서 훨씬 더 높은 MFI를 나타내었다. 본 발명자들의 항체 대부분은 CD24 저발현 MCF7 세포에서 더 강한 신호를 나타내었다.
실시예 2: 항체 특징규명: 친화성
1. 방법
1.1 인간 CD24에 대한 세포 기반 결합 친화성
인간 IgG4 키메라 항체를 발생시키고 생성하기 위해 표 1로부터의 일부 항체의 서열을 선택하였다. 293F-hCD24 세포 및 인간 유방암 세포(MCF7, MDA-MB-468), 방광암 세포(5637), 만성 골수구성 백혈병 세포(Nalm1), CKOK1-hCD24 세포, 결장직장암 세포(HT29), 난소암 세포(SKOV3), 폐 암종 세포(H1975 및 A549)를 사용하여 이들 항체 및 벤치 마크 항체, SN3 (예컨대, 문헌(T Fukukawa et al., Exp Hematol. 1986 Oct; 14(9):850-5) 참조)의 결합 친화도를 FACs 분석에 의해 결정하였다. FACs 분석을 위한 프로토콜은 하기와 같이 설명된다.
a. TrypLETM 익스프레스 효소(1X)를 사용하여 세포를 분해; 수거된 세포를 400 g에서 5분 동안 원심분리하고 상층액을 버림.
b. 400 g에서 5분 동안 원심분리하여 세포를 차가운 FACS 버퍼로 2회 세척하고 상층액을 버림.
c. 세포를 재현탁하고, 2*105개 세포/웰을 검정 플레이트에 50 ul FACS 버퍼에서 시딩한 다음, 50 ul 1차 항체(1차 항체 최종 농도: 50.00, 16.67, 5.56, 1.85, 0.62, 0.21, 0.07, 0.02, 0.01, 0.00μg/ml)를 첨가함. 40℃에서 1시간 동안 인큐베이션함.
d. 단계 b의 조건을 이용하여 세포를 2회 세척함. 100 μl/웰 희석된 2차 항체와 함께 세포를 재현탁하고, 암실에서 1시간 동안 4도에서 인큐베이션함.
e. 단계 b의 조건을 이용하여 세포를 2회 세척함. 100 μl/웰 차가운 FACS 버퍼로 세포를 재현탁함. FACS 분석을 위해 세포를 암실에서 유지함.
2. 결과
293F-hCD24 세포 및 인간 유방암 세포주, 유방암 세포(MCF7 및 MDA-MB-468), 방광암 세포(5637), 만성 골수구성 백혈병 세포(Nalm1), 급성 림프모구성 백혈병 세포(Nalm6), CKOK1-hCD24 세포, 결장직장암 세포(HT29), 난소암 세포(SKOV3), 폐 암종 세포(NCI-H1975 및 A549), B 세포 림프종 세포(SU-DHL6 및 DoHH2), 인간 B 세포 및 간세포 암종 세포(Huh7)에 대한 본원에 제공된 항체의 결합 친화도를 시험하였다. 일부는 벤치 마크 항체 SN3과 유사하였다. 그러나, 본 발명자들의 mAb-110D4G4 및 mAb-81A7F8은 SN3보다 훨씬 더 잘 거동하였다(표 8a-8b).
SN3과 비교하여, CD24-저발현 세포 MCF7 및 A549에 대한 일부 항체(110D4G4, 81A1F8)의 최대 MFI(50 ug/ml에서의 1차 항체 농도)는 SN3보다 더 높았다(표 8 및 표 9).
본 발명자들의 항체 중 일부(110D4G4-hIgG4, 81A1F8-hIgG4)는 SN3과 비교하여 CD24-저발현 세포 MCF7 및 A549에 대해 더 민감하였으며(도 1), 더 높은 최대 MFI 및 더 높거나 비슷한 결합 친화도를 가졌다(표 8a-8b, 도 1).
[표 8a]
[표 8b]
[표 9]
[표 10]
Figure pct00171
표 10은 293F 세포, 293F-hCD24, 유방암 세포(MCF7, MDA-MB-468), 방광암 세포(5637), 만성 골수구성 백혈병 세포(Nalm1), CKOK1 세포, CKOK1-hCD24 세포, 결장직장암 세포(HT29), 난소암 세포(SKOV3) 및 폐 암종 세포(H1975 및 A549)에 대한 항체의 결합 친화도를 나타낸다. 접두사 "ch-"는 키메라를 의미하며, hIgG1은 인간 IgG1 이소타입의 중쇄 불변 영역을 나타내고, hIgG4는 인간 IgG4 이소타입의 중쇄 불변 영역을 나타낸다.
도 1j-1r은 급성 림프모구성 백혈병 세포(Nalm6), B 세포 림프종 세포(SU-DHL6 및 DoHH2), 인간 B 세포, 결장직장암 세포(HT29), 간세포 암종 세포(Huh7), 유방암 세포(MCF7) 및 폐 암종 세포(NCI-H1975 및 A549)에 대한 항체의 결합 친화도를 나타낸다.
실시예 3. 항체 특징규명: 포식작용
1. 방법
EasysepTM 인간 CD14 양성 선별 키트 II(StemCell, 17858)를 사용하여 PBMC로부터 단핵구를 분리하였다. 단핵구 유래된 대식세포(MDM)는 단핵구를 10% FBS 및 100 ng/mL rhM-CSF가 보충된 RPMI 1640 배지에서 7일 동안 배양하여 유도되었다. 배지의 절반을 교체하고 3 내지 4일마다 시토카인을 공급한다. 100 ng/mL rhTGF-β 및 rhIL-10을 첨가하고, 추가 5일 동안 배양하고; 배지의 절반을 교체하고, 3 내지 4일마다 시토카인을 첨가한다.
HT-29 세포(인간 결장직장 선암종 세포주)를 운영 원고(2 μM CFSE로 1*10^6/ml 세포를 표지하고 20분 동안 37℃에서 세포 인큐베이터에서 인큐베이션함)에 따라 형광 강화 리간드(CFSE, Invitrogen, C34554)로 표지하였다. 96 웰 U 바닥 멸균 플레이트(Corning, cat: 3894)에 100 μL의 40,000개 세포/웰을 시딩한다. 이 후, 각각의 웰에 표 6에 열거된 50 μL의 연속 희석 항체를 첨가하고, 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 한편, MDM 세포를 수거하고, RPMI1640 배지(Gibco, Cat No.#11835-030) +10% FBS에 1*10^6/ml로 재현탁하였다. 상기에서 언급된 MDM 세포를 트립신으로 분리하고, 완전 1640 배지에 106개 세포/mL로 재현탁하였다. 언급된 바와 같이 50 μL MDM(40000개 세포)을 검정 플레이트의 각각의 웰에 공급하였다. 37℃, 5% CO2에서 2시간 인큐베이션 후, 세포 혼합물을 세척하고, 4℃에서 20분 동안 항-CD11b-APC로 세포를 염색하였다. 세포를 세척하고 유동 세포측정기로 샘플을 분석하였다.
2. 결과
2.1 항-CD24 항체는 HT-29 결장직장 암종 세포의 탐식을 증가시킬 수 있었다.
본 발명자들의 모든 항체는 HT-29 세포에 대한 포식작용 효과를 향상시켰다. 본 발명자들의 항체는 HT-29 세포에서 더 높은 최대 포식작용 지수(식세포 지수 = (탐식된 세포를 함유하는 대식세포의 수/계수된 대식세포의 총 수) × 100)를 나타내었고, 이 중 4개는 벤치 마크 항체, SN3에 비해 낮은 EC50을 나타내었다(표 11, 도 2). 포식작용 검정은 상기에서 언급된 방법에 따라 수행되었다. 대식세포 및 종양 세포의 이펙터 대 표적 세포 비율(E:T) (E/T 비율)은 1:1이었다.
[표 11]
본 발명자들의 키메라 항체 중 일부는 또한 hCD24를 과발현하는 HEK293F 세포 뿐만 아니라 결장직장암(CRC) 세포주 HT-29에 대한 포식작용 효과를 향상시켰다. 일부는 이들 세포에서 더 높은 최대 포식작용 지수를 나타내었고, 일부는 참조 항체인 SN3에 비해 훨씬 더 강한 EC50을 나타내었다. hIgG1형 키메라 항체는 ADCP를 유도하여 훨씬 더 우수한 포식작용 효과를 검출할 수 있었다(표 11, 도 2).
2.2 항-CD24 항체와 항-CD47 항체의 조합
항-CD47과 본 발명자들의 항-CD24 키메라 항체(chAb110D4G4, chAb111F3A2 및 chAb81A1 F8)의 조합을 시험하였다. HT29 결장직장암 세포를 표적 세포로 선택하였다.
키메라 항체 chAb110D4G4, chAb111F3A2 및 chA81A1F8을 상이한 농도의 항-CD47 항체(hu5F9, hu5F9-hIgG4, 또는 hu5F9-G4는 도 3에서 상호교환적으로 사용됨)와 조합하여 총 포식작용 효과를 검출하였다. 항-CD24 키메라 항체의 항체 농도는 0.1 nM으로 설정하였고, hu5F9 농도는 0.0033 nM, 0.013 nM, 0.052nM 및 0.208 nM로 설정하였다. 항-CD24와 항-CD47의 조합은 포식작용 지수를 개선하였다. 도 3은 항-CD24 항체와 항-CD47 항체의 조합이 항-CD47 항체 단독보다 훨씬 더 우수한 포식작용 효과를 유도함을 나타낸다.
2.3 이중특이적 항체(IgG + scFv 형식)를 포식작용 검정을 위해 조사하였다.
IgG-scFv 형식 이중특이적 항체를 VL-CL 형식의 경쇄와 회합된 VH-CH1-힌지-CH2-CH3-스페이서-scFv 형식의 2개의 중쇄를 포함하는 chAb81A1F8-IgG4 및 Hu5F9 유래된 scFv로 구축하였다. 이 이중특이적 항체의 친화도를 시험한 다음, 또한 포식작용 검정을 수행하였다(도 4 참조). 모든 항체 농도는 최대 포식작용에 충분한 100 nM로 설정되었다. E/T 비율은 1:5 및 1:1로 설정되었다. 이중특이적 항체는 hu5F9에 비해 개선된 포식작용을 나타내었고, 콤보 그룹은 E/T 비율이 1:5일 때 거의 100% 포식작용을 나타내었다. 도 4에 나타난 바와 같이, 이중특이적 항체 뿐만 아니라 항-CD24 및 항-CD47 항체의 콤보를 포식작용 검정에 의해 시험하였다. 최대 지수는 이전 검정과 같이 E/T 비율이 1:1일 때 85%에 도달할 수 있었고, E/T 비율이 1:5일 때 98%에 도달할 수 있었다. 이중특이적 항체는 매우 우수한 포식작용 효능을 나타내었다.
실시예 4. 항체 인간화
81A1F8 및 101H9G9A2의 인간화를 하기 단계로 수행하였다: 1) 마우스 항체 VH 및 VL 도메인의 모델링; 2) 다양한 바람직한 인간 배선 서열과의 정렬; 3) 비-인간 CDR과 인간 FR 간의 충돌 평가 및 최종 생성물에서 친화성 손실을 방지하기 위한 역돌연변이 설계; 및 4) 바람직한 배선 백본에 CDR 이식. 5개의 상이한 인간화 서열을 생성한 후, 포유동물 발현 시스템에서 모든 인간화 변이체 및 키메라의 클로닝 및 소규모 생성이 뒤따랐다.
실시예 5. 인간화 항체 특징규명: 친화성
인간화 변이체 81A1F8-VH-11/VL-21(81A1F8-1121), 81A1F8-VH-21/VL-21(81A1F8-2121), 81A1F8-VH-11/VL-41(81A1F8-1141), 및 81A1F8-VH-21/VL-41(81A1F8-2141)을 CD24 양성 세포 HT-29 및 Nalm6을 사용하여 세포 기반 결합 검정을 통해 시험하였다. 101H9G9A2의 인간화 변이체를 CD24 양성 세포 HT-29를 사용하여 세포 기반 결합 검정을 통해 시험하였다.
간략하게, HT-29 또는 Nalm6 세포를 PBS를 사용하여 3회 세척하고, 먼저 인간화 변이체와 함께 인큐베이션하였다. 3회 세척 후, 2차 항체를 세포와 함께 인큐베이션하였다. 샘플의 MFI를 유동 세포측정으로 분석하고, 세포 기반 친화도를 계산하였다.
81A1F8의 상기 언급된 인간화 항체의 HT29 및 Nalm6에 대한 결합 친화도는 각각 도 5a 및 도 5b에 나타난 바와 같이 키메라 81A1F8에 필적하였다.
101H9G9A2의 상기 언급된 인간화 항체의 HT29에 대한 결합 친화도를 도 5c에 나타내었다.
81A1F8의 인간화 항체의 단백질 기반 KD를 가토르프림 시스템(항원으로서 hCD24-Fc 단백질)을 사용하여 시험하였고, KD 데이터를 도 5d에 나타내었다.
실시예 6. CD24의 글리코실화/시알화 에피토프
본원에 제공된 항체에 의해 인식되는 에피토프 패턴을 시험하였다. 본원에 제공된 항체 중 일부는 CD24의 글리코실화 또는 시알화된 변형 에피토프를 인식하는 것으로 밝혀졌다.
HT-29, Nalm6, HEK293T-hCD24 및 MCF7-hCD24 세포를 뉴라미니다제 또는 탈글리코실화 믹스 키트로 분해하였다. PBS 대조군과 비교하여, 81A1F8 및 110D4G4는 표적 세포에 대한 친화도를 유지하였고, MFI 신호는 감소하지 않았다. 그러나, 81A7A10, 111F3A2, 100F2E3, 101H9G9A2 및 107D10D11의 MFI는 도 6a 및 도 6b에 나타난 바와 같이 표적 세포를 뉴라미니다제 또는 탈글리코실화 믹스로 처리한 후에 크게 감소하였다. 벤치 마크 항체 SN3도 이전에 보고된 글리코실화 에피토프를 인식하였다. 도 6c 및 도 6d에 나타난 바와 같이, 101H9G9A2는 높은 친화도로 HT-29 세포에 결합하였지만 293T-hCD24에는 전혀 결합할 수 없었다. 107D10D11은 낮은 친화도로 293T-hCD24에 결합하였다. 그러나, SN3은 293T-hCD24 및 HT-29에 정상적으로 결합하였다.
실시예 7. SPR에 의한 항-CD24 mAb 및 인간화 항체에 대한 친화성 시험
mFc 태그부착된 인간 CD24(hCD24-mFc-비오틴)에 대한 항체의 친화도를 비아코어 8K(GE Healthcare)에 의해 결정하였다. 0.8 또는 2.5 μg/ml hCD24-mFc-비오틴을 시리즈 S 센서 칩 SA(Series S Sensor Chip SA)에 10 μl/min의 유속으로 120초 동안 고정화하여 약 1200 RU의 고정화 수준에 도달하였다. 항체는 농도 구배(1.56~50 nM)로 실온에서 30 μl/min의 유속으로 주입되었다. 접촉 시간은 180초로 설정되었고, 해리 시간은 400초였다. 각각의 주기의 끝에서, 10 mM 글리신 pH1.5를 주입하여 표면으로부터 시험된 항체를 제거하였다. 마지막으로, 비아코어 인사이트 평가 소프트웨어(BIAcore Insight Evaluation Software)를 사용하여 결합 동역학을 계산하고, 커브 피팅을 위해 1:1 결합 모델을 사용하였다.
본원에 제공된 일부 항-CD24 mAb에 대한 SPR 분석 결과는 도 7a에 나타나 있다. 인간화 81A1F8 후보에 대한 SPR 분석 결과는 도 7b에 나타나 있다.
실시예 8. 81A1F8에 대한 ELISA 기반 수용체 결합 검정
1. 방법
인간 CD24-mFc 단백질을 플레이트에 코팅하였다. 비오티닐화된 인간 SigLec10 단백질(SIG-HM510B, Kactus)을 다양한 농도의 81A1F8과 함께 혼합한 다음 플레이트에 첨가하였다. 본 발명자들이 사용한 결합 버퍼는 1% Triton-X, 0.3 mM MnCl2, 1 mM CaCl2, 25 mM Tris, 150 mM NaCl, 1 mM MgCl2, pH 7.6이었다. 샘플을 1xPBS 버퍼로 3회 세척하였다. 샘플의 신호를 검출하고, 원래의 SigLec-10 판독값으로 정규화하였다.
2. 결과
상이한 농도의 81A1F8에 대한 ELISA 기반 수용체 결합 검정의 결과를 도 8에 나타내었다.
실시예 9. 81A1F8 및 이의 인간화 변이체에 대한 시험관내 효능 검정
1. 포식작용 검정
실시예 3에서 언급된 바와 같이 인간 단핵구를 분리하고 유도하였다.
A & B: 항-CD24 mAb(hIgG4 Fc) 및 벤치 마크 항체 SWA11 뿐만 아니라 항-CD47 mAb 5F9-IgG4를 사용하여 표적 종양 세포(HT-29 및 Nalm6)의 포식작용을 수행하였다. 결과를 도 9a 및 도 9b에 나타내었다.
C: 드문 Fc 의존적 기능을 갖는 81A1F8-LALAPG를 리툭시맙과 조합하여 리툭시맙의 ADCP 효과를 향상시킬 수 있는지를 확인하였다. 본 발명자들은 부가 효과가 검출될 수 있음을 발견하였다(도 9c 참조).
D: 81A1F8-hIgG4 키메라 항체는 또한 조합 투여 시 항-CD47 항체 hu5F9의 포식작용 효과를 향상시켰다(도 9d 참조).
2. ADCC 및 CDC 검정
A: 81A1F8 및 이의 인간화 변이체의 ADCC 효과를 표적 세포 HT-29에서 시험하였다. HT-29 세포를 PBMC와 함께 인큐베이션하였다. 상이한 농도의 81A1F8 뿐만 아니라 인간화 변이체 81A1F8-1141 및 81A1F8-2141을 샘플에 첨가하였다. 표적 세포의 용해는 LDH 키트를 통해 시험되었다. 도 10a에 나타난 바와 같이 ADCC 효과는 hIgG1 이소타입 항체에 의해서만 유도될 수 있었다.
B: 81A1F8 및 이의 인간화 변이체의 CDC 효과를 표적 세포 hCD24-MCF7에서 시험하였다. 상이한 농도의 항체를 표적 세포 및 보체 시스템과 함께 인큐베이션하였다. 도 10b에 나타난 바와 같이, 표적 세포의 90% 초과 용해가 고농도의 81A1F8 항체 변이체에서 검출될 수 있었다.
실시예 10. 항-CD24 항체의 생체내 효능 검정
81A1F8의 생체내 효능을 C57BL/6J 동계 마우스 모델에서 시험하였다. 간략하게, 100만개의 MC38-hCD24 세포를 암컷의 6-8주 C57BL/6J 마우스에 피하 이식하였다. 평균 종양 부피가 ~60 mm3에 도달하면 마우스를 무작위로 그룹화하고 하기와 같이 처리하였다. hIgG4 이소타입 항체는 단일 작용제(10 mpk, Q3D) 또는 옥살리플라틴과의 콤보(6 mpk, QW)로 시험되었다. 종양 부피 및 마우스 체중을 1주일에 2회 측정하였다. 81A1F8의 생체내 효능을 도 11a-도 1d에 나타내었다.
모든 처리된 그룹은 종양 성장 억제를 나타내었다(도 11a 참조). 81A1F8-hIgG4는 옥살리플라틴과 조합 시 훨씬 더 우수한 효능을 나타내었고 상승 효과를 관찰할 수 있었으며; 모든 마우스의 체중은 감소하지 않았다(도 11b 참조). 생체내 효능 시험의 요약을 도 11c에 나타내었다. 종양 침윤 림프구를 종양 조직으로부터 단리하고, 유동 세포측정을 통해 분석하였다. 도 11d는 대조군(CTRL)과 비교하여 81A1F8-hIgG4와 옥살리플라틴의 조합으로 처리할 때 CD8/CD4 비율 뿐만 아니라 M1/M2 대식세포 비율이 많이 증가함을 나타내었다.
MC38-hCD24 동계 모델에 대한 81A1F8-mIgG2a(인간 IgG1의 상동체)의 생체내 효능도 평가되었다. 용량-효능 시험을 수행하였으며, 본 발명자들은 81A1F8-mIgG2a의 투여 후 6마리 중 4마리의 마우스가 종양이 없었기 때문에 6 mpk 용량이 최고의 효능을 나타냄을 발견하였다(도 12a 참조).
MC38-Hcd24 세포를 다시 접종하여 재시험감염 검정을 수행하였고 종양이 성장할 수 있었다. 그러나, 처리군에서 종양이 다시 재발하지 않았으며, 이는 81A1F8 처리 후 면역 기억이 형성되었음을 나타낸다(도 12b 참조).
도 12c는 비히클 대조군 또는 81A1F8-mIgG2a로 처리된 각각의 마우스에 대한 종양 성장 곡선을 나타내었다.
도 12d는 81A1F8-mIgG2a(또한 "ATG031-mAb011-mIgG2a"로 명명됨)의 생체내 효능에 대한 요약을 나타내었다.
인간화 81A1F8(81A1F8-2141-mIgG2a)에 대한 생체내 효능도 시험되었다. 간략하게, MC38-hCD24 종양 세포를 접종하였다. 평균 종양 부피가 ~120mm3에 도달하였을 때, 마우스를 그룹화하고 단일 작용제(81A1F8-2141-mIgG2a, 옥살리플라틴 또는 아테졸리주맙) 또는 조합 전략으로 처리하였다. 시험된 인간화 81A1F8(81A1F8-2141-mIgG2a)의 종양 억제 효과를 도 13a - 도 13c에 나타내었으며, 도 13a는 약물 투여 후 종양 성장 곡선을 나타내고, 도 13b는 처리군의 각각의 마우스에 대한 종양 성장 곡선을 나타내고, 도 13c는 81A1F8-2141-mIgG2a의 생체내 효능에 대한 요약을 나타내었다.
101H9G9A2-mIgG2a에 대한 생체내 효능 검정을 또한 시험하였다. 간략하게, MC38-hCD24 종양 세포를 상기 언급된 바와 같이 접종하였다. 평균 종양 부피가 ~120mm3에 도달하였을 때 101H9G9A2-mIgG2a, 81A1F8-2141-mIgG2a, 옥살리플라틴 및 아테졸리주맙 또는 이들의 조합을 마우스에 투여하였다. 시험된 101H9G9A2-mIgG2a 및 인간화 81A1F8(81A1F8-2141-mIgG2a)의 종양 억제 효과를 도 14a - 도 14c에 나타내었으며, 도 14a는 도시된 바와 같이 그룹화된 마우스의 종양 부피 곡선을 나타내고, 도 14b는 마우스의 체중을 나타내고, 도 14c는 상이한 치료의 효능의 요약을 나타내었다.
실시예 11. 시노몰구스 원숭이(마카카 파시쿨라리스( Macaca fascicularis )) CD24(cmCD24) 항체 발견
Balb/c 및 SJL 마우스를 cmCD24-Flag를 과발현하는 293F 세포로 면역화시켰으며, 2개의 항체가 시노몰구스 원숭이 CD24를 인식하는 것으로 확인되었다. 세포 기반 결합 데이터를 도 15에 나타내었다.
항-cmCD24 항체의 시험관내 효능 연구를 수행하고, 결과를 도 16a - 도 16c에 나타내었으며, 도 16a는 본원에 제공된 항-cmCD24 항체의 포식작용 검정으로부터의 결과를 나타내고, 도 16b는 본원에 제공된 항-cmCD24 항체의 ADCC 효과를 나타내며, 도 16c는 본원에 제공된 항-cmCD24 항체의 ADCC 효과를 나타내었다.
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gattggagag attaatccta acactggtga tcctagatac 180 gaccagaagt ttaaggccaa ggccacattg actgtagaca gatcctccag cacagcctac 240 atgcacctca agagcctgac atctgaagac tctgcagtct atttctgtgc caggagggac 300 tacggtacta gccttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtcac ctca 354 <210> 72 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 72 Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Tyr Leu Ala Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 73 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 73 gatgtccaga taacccagtc tccatcttat cttgctgcat ctcctggaga aaccattact 60 attaattgca 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Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 197 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 197 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Arg Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asp Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Leu Tyr Gly Ala Arg Ile Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 198 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 198 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Arg Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asp Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Leu Tyr Gly Ala Arg Ile Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 199 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 199 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Arg Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asp Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Leu Tyr Gly Ala Arg Ile Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 200 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 200 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asp Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Arg Ile Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 201 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 201 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asp Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Arg Ile Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 202 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 202 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asp Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Arg Ile Arg Glu Ser Gly Ile 50 55 60 Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 203 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 203 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asp Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Arg Ile Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 204 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 204 caggtgcagc tgctgcagcc cggcgctgag ctggtgagac ccggaagcag cgtgaagctg 60 agctgcaaag ccagcgacta cacattcaca agctactgga tggactgggt gaaacagaga 120 cctggccagg gactggaatg gattggaaac atctacccca gtgacagcaa gacccactac 180 aaccagaagt tcaaggacaa agccaccctg accgtggaca agagcagcag caccgcctac 240 atgcagctga acagcctgac cagcgaagac agcgccgtgt actactgcgc cagaagaggc 300 ggctactacg cctatgccat ggactactgg gggcagggaa ccagcgtgac cgtgagcagc 360 <210> 205 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 205 gacattgtga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgtga gcgccggaga aaaagtgacc 60 atgagatgca agagcagcca gagcctgctg aacagcggga accaggacaa ctacctggcc 120 tggtatcaac agaagcccgg ccagcccccc aaactgctgc tgtatggagc cagaatcaga 180 gagagcggcg tgcccgacag attcatcggc agcggcagcg gaaccgactt caccctgacc 240 atcagcagcg tgcaggctga ggacctggcc gtgtactact gccagaacga ccacagctac 300 ccctatacct ttggaggcgg caccaaggtg gagatcaaa 339 <210> 206 <211> 369 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 206 caggtccagc tgcagcagtc tggggctgaa ctggcaagac ctggtgcctc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggcta cacctttact agcaacacga tgcactgggt aaaacagagg 120 cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatcctg gcagtgctta tactaactac 180 aatcagaagt tcaatgacaa ggccacattg actgcagaca agtcctccag cacagcctcc 240 atgcaactga gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagactcgcg 300 acctactatg ataacgacgg atatgctatg gactattggg gtcaaggaac ctcagtcacc 360 gtctcctca 369 <210> 207 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 207 gacatccaga tgacacagtc tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60 atcagttgca gggcaagtca ggacattagt aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120 gatggaactg ttaaactcct gatctactac acatcaaaat tacactcagg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat ttttctctca ccattaccaa cctggagcaa 240 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggtcatacgc ttccgtggac gttcggtgga 300 ggcaccaaac tggagatcaa a 321 <210> 208 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 208 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60 atcagttgca gggcaagtca ggacattagt aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120 gatggaactg ttaaactcct gatctactac acatcaaaat tacactcagg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat ttttctctca ccattaccaa cctggagcaa 240 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggtcatacgc ttccgtggac gttcggtgga 300 ggcaccaaac tggagatcaa a 321 <210> 209 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 209 gaggtcctgc tgcaacagtc tggacctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60 ccctgcaagg cttctggata cggattcact gactacaaca tggactggat aaaacagagc 120 catggaaaga gccttgagtg gattggagat attaatcctc acaatggtga tactatctac 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccaaattg actgtagaca agtcctccac cactgcctac 240 atggaactcc gcagcctggc atctgaggac accgcagtct attactgtgc aaggaggggg 300 gcatattact acggtagtag ccactatgct ctggacttct ggggtcaagg aacctcagtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 210 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 210 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60 atcagttgca gggcaagtca ggacattacc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120 gatggaactg ttaaactcct gatctactac acatcaagat tattctcagg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctgaaacga 240 gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtaatacgc ttccgtggac gttcggtgga 300 ggcaccaagc tggaaatcaa a 321 <210> 211 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 211 gaggttcagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60 tcctgcaagg cctctggtta cttattcact ggctactaca tgaactgggt gaaacaaagt 120 cctgaaaaga gtcttgagtg gattggagag attaatccta acaaaggtga tagtaatctc 180 aaccagaatt tcaaggccaa ggccacattg actgttgaca aatcctccag cacagcctac 240 atgcagttca agagcctgac atttgaggac tctgcagtct atttctgtgt aagaagggac 300 tacggcacta gtcttgacca ctggggccaa ggcacgactc tcacagtctc ctca 354 <210> 212 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 212 gatgtccaga taacccagtc tccatcttat cttgctacat ctcctggaga aaccattact 60 attaattgca gggcaagtaa gagtattagc aaatatttag cctggtatca agagaaacct 120 gggaaaacta agaagcttct tatctactct ggatccactt tgcatactgc aattccatca 180 aggttcagtg gccgtggatt tggtacagat ttcactctca ccatcagtag cctggagcct 240 gaagattttg caatgtatta ctgtcaacag cataatgaat acccaatcac attcggtggt 300 gggaccaagc tggagctgaa a 321 <210> 213 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 213 gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ttggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60 tcctgcaagg ctactggtta cttattcact ggctactaca tgaactgggt gaagcaaagt 120 cctgaaaaga gccttgagtg gattggagag atcaatccta acactggtga tactaacaac 180 aaccagaagt tcaaggccaa ggccacaatg actgttgaca gatcctccag tacagcctac 240 atgcagctca agagcctgac atctgaggac tctgcagtct attattgtgt aagaagggac 300 tacggtacta gccttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 354 <210> 214 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 214 gatgtccaga taacccagtc tccatcttat cttgctgcat ctcctggaga aaccattact 60 attaattgca gggcaagtaa gagtattaac aaatatttag cctggtatca agagaaacct 120 gggaaaacta ataagcttct tatccactct ggatccactt tgcactctgg aattccatca 180 aggttcagtg gcagtagatc tggaacagat ttcactctca ccatcagtaa cctggagcct 240 gaagattttg caatgtatta ctgtcaacaa cataatgaat acccgctcac gttcggtgct 300 gggaccaagc tggagctgaa a 321 <210> 215 <211> 369 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 215 caggtgcagc tgcagcagag cggcgccgag ctggctagac ccggagcttc cgtgaagatg 60 agctgcaaag ccagcggcta cacattcaca tccaacacaa tgcactgggt gaaacagagg 120 cctggccagg gactggagtg gattgggtac atcaaccccg gcagcgccta caccaactac 180 aaccagaaat tcaatgacaa agccacactg accgccgaca aaagcagcag cacagccagc 240 atgcagctga gcagcctgac ctccgaggac agcgctgtgt actactgcgc cagactggcc 300 acctactacg acaacgacgg atacgccatg gattactggg gacagggaac cagcgtgacc 360 gtgagcagc 369 <210> 216 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 216 gagaatgtgc tgacccagag ccccgccatc atgagtgcca gcccaggaga gaaggtgaca 60 atgacatgca gcgccagcag cagcgtgaat tacatgtact ggtaccagca gagaagcagc 120 accagcccca agctgtggat ctacggcacc agcaagctgg ccagcggagt gcccggcaga 180 ttctccggaa gtggaagcgg aaatagctac agcctgacta tcagcagcat ggaggccgaa 240 gatgttgcta cctactactg ctttcagggc agcggctacc cctacacctt cggcggcggc 300 accaagctgg agatcaag 318 <210> 217 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 217 caggtgcagc tgaaggaaag cggccccggc ctggtggccc catctcagag tctgagcatc 60 acctgcacag tgagcggctt cagcctgaca agctacggcg tgagctgggt gagacagccc 120 cccggaaagg gcctggaatg gctgggcgtg atttggggcg acggcaacac aaactaccac 180 agcgccctga tcagcagact gagcatcagc aaggacaata gcaagagcca ggtgttcctg 240 aagctgaaca gcctgcagac cgacgacacc gccacctact actgcgccaa cctgtacgtg 300 ctgttcgcct actggggcca gggcaccctg gtgaccgtga gcgct 345 <210> 218 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 218 gagaatgtgc tgacccagag ccccgccatc atgagtgcca gcccaggaga gaaggtgaca 60 atgacatgca gcgccagcag cagcgtgagt tacatgcact ggtaccagca gaagagcagc 120 accagcccca aactgtggat ctacgggacc agcaagctgg ccagcggagt gcccggaaga 180 ttcagtggca gcggaagcgg caatagctac agcctgacta tcagcagcat ggaggccgaa 240 gatgttgcta cctactactg ttttcaggga agcggctacc catacacctt cggggggggg 300 accaagctgg aaatcaag 318 <210> 219 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 219 caggtgcagc tgcagcagcc aggcacagag ctggtgaagc ccggcgccag cgtgaaactg 60 agctgcaaag ccagcggcta caccttcaca aactactgga ttcattgggt gaagcagagg 120 cctggccagg gactggagtg gatcggcgac attaacccca caaacggagg cacaaactac 180 aacgagaaat tcaagaccaa agccatcctg accgtggaca gaagcagtag cacagcctac 240 atgcaggtga gcagcctgac cagcgaggac agcgccgtgt actattgcgc cagaagcggc 300 ggctacgact tcgactactg gggccagggc accaccctga ccgtgagcag c 351 <210> 220 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 220 gacgtggtga tgacccagac ccccctgaca ctgagcgtga ccatcggaca gcccgccagc 60 atcagctgca agagcagcca gagcctgctg gacagcgacg gaaaaacata tctgaattgg 120 ctgctgcaga ggcctggcca gagccccaaa agactgatct acctggtgag caagctggac 180 agcggggtgc ccgacagatt caccggcagc ggaagcggca ccgacttcac cctgaagatc 240 tccagagtgg aagccgagga cctgggcgtg tactactgct ggcagggaac ctacttcccc 300 ctgacctttg gagccggcac caagctggaa ctgaag 336 <210> 221 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 221 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Thr Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 222 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 222 Ser Tyr Trp Ile Thr 1 5 <210> 223 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 223 Asp Ile Ser Pro Ala Gly Gly Gly Arg Asn Tyr Asn Glu Arg Phe Lys 1 5 10 15 Asn <210> 224 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 224 Gly Asp Ser Thr Val Asp Leu Asp Tyr 1 5 <210> 225 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 225 Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 226 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 226 Arg Val Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 227 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 227 Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Tyr 1 5 <210> 228 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 228 gaggttcagc tgcagcagtc tgggactgga cttgtgaagc ctgggacttc agtgaagttg 60 tcctgcaagg cttctggcta cagcttcacc agctactgga taacctgggt gaaacagagg 120 cctggacaag gccttgagtg gattggagat atttctcctg ctggtggtgg tcgtaactac 180 aatgagagat tcaagaacaa ggccacactg actgtagacg catcctccag cacagcctac 240 atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgt aagaggtgat 300 agtacggtag acttagacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 354 <210> 229 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 229 gatattgtga tgactcaggc tgcaccctct gtacctgtca ctcctggaga gtcagtatcc 60 atctcctgca ggtctagtaa gagtctcctg catagtaatg gcaacactta cttgtattgg 120 ttcctgcaga ggccaggcca gtctcctcag ctcctgatat atcgggtgtc caaccttgcc 180 tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggga ctgctttcac actgagaatc 240 agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaacatct agaatatccg 300 tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336

Claims (76)

  1. 서열번호 1, 3, 5, 7, 9, 11, 14, 16, 17, 18, 19, 21, 23, 25, 27, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 95, 96, 97, 104, 105, 106, 113, 114, 115, 126, 127, 128, 136, 137, 150, 151, 152, 160, 161, 162, 168, 169 170, 222, 223 및 224로 이루어진 군으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 서열 및/또는 서열번호 2, 4, 6, 8, 10, 12, 13, 15, 20, 22, 24, 26, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 98, 99, 100, 107, 108, 116, 117, 129, 130, 131, 138, 139, 140, 145, 153, 154, 155, 163, 171, 172, 173, 184, 185, 186, 187, 188, 225, 226 및 227로 이루어진 군으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 경쇄 CDR 서열을 포함하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  2. 제1항에 있어서,
    a) 서열번호 1, 서열번호 3 및 서열번호 5로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    b) 서열번호 7, 서열번호 9 및 서열번호 11로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    c) 서열번호 7, 서열번호 14 및 서열번호 11로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    d) 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    e) 서열번호 19, 서열번호 21 및 서열번호 23으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    f) 서열번호 25, 서열번호 27 및 서열번호 28로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    g) 서열번호 25, 서열번호 30 및 서열번호 28로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    h) 서열번호 32, 서열번호 34 및 서열번호 36으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    i) 서열번호 38, 서열번호 40 및 서열번호 42로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    j) 서열번호 44, 서열번호 46 및 서열번호 48로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    k) 서열번호 95, 서열번호 96 및 서열번호 97로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    l) 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    m) 서열번호 113, 서열번호 114 및 서열번호 115로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    n) 서열번호 126, 서열번호 127 및 서열번호 128로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    o) 서열번호 25, 서열번호 136 및 서열번호 137로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    p) 서열번호 150, 서열번호 151 및 서열번호 152로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    q) 서열번호 160, 서열번호 161 및 서열번호 162로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    r) 서열번호 168, 서열번호 169 및 서열번호 170으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
    s) 서열번호 222, 서열번호 223 및 서열번호 224로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    a) 서열번호 2, 서열번호 4 및 서열번호 6으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    b) 서열번호 8, 서열번호 10 및 서열번호 12로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    c) 서열번호 13, 서열번호 10 및 서열번호 15로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    d) 서열번호 20, 서열번호 22 및 서열번호 24로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    e) 서열번호 26, 서열번호 22 및 서열번호 24로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    f) 서열번호 29, 서열번호 22 및 서열번호 31로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    g) 서열번호 33, 서열번호 35 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    h) 서열번호 39, 서열번호 41 및 서열번호 43으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    i) 서열번호 45, 서열번호 47 및 서열번호 49로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    j) 서열번호 98, 서열번호 99 및 서열번호 100으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    k) 서열번호 107, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    l) 서열번호 13, 서열번호 116 및 서열번호 117로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    m) 서열번호 129, 서열번호 130 및 서열번호 131로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    n) 서열번호 138, 서열번호 139 및 서열번호 140으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    o) 서열번호 29, 서열번호 145 및 서열번호 24로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    p) 서열번호 153, 서열번호 154 및 서열번호 155로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    q) 서열번호 163, 서열번호 154 및 서열번호 155로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    r) 서열번호 171, 서열번호 172 및 서열번호 173으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    s) 서열번호 184, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    t) 서열번호 185, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    u) 서열번호 186, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    v) 서열번호 187, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    w) 서열번호 188, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및
    x) 서열번호 225, 서열번호 226 및 서열번호 227로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역
    으로 이루어진 군으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    a) 서열번호 1, 서열번호 3 및 서열번호 5로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 2, 서열번호 4 및 서열번호 6으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    b) 서열번호 7, 서열번호 9 및 서열번호 11로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 8, 서열번호 10 및 서열번호 12로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    c) 서열번호 7, 서열번호 14 및 서열번호 11로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 13, 서열번호 10 및 서열번호 15로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    d) 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 13, 서열번호 10 및 서열번호 15로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    e) 서열번호 19, 서열번호 21 및 서열번호 23으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 20, 서열번호 22 및 서열번호 24로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    f) 서열번호 25, 서열번호 27 및 서열번호 28로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 26, 서열번호 22 및 서열번호 24로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    g) 서열번호 25, 서열번호 30 및 서열번호 28로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 29, 서열번호 22 및 서열번호 31로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    h) 서열번호 32, 서열번호 34 및 서열번호 36으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 33, 서열번호 35 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    i) 서열번호 38, 서열번호 40 및 서열번호 42로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 39, 서열번호 41 및 서열번호 43으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
    j) 서열번호 44, 서열번호 46 및 서열번호 48로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 45, 서열번호 47 및 서열번호 49로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
    k) 서열번호 95, 서열번호 96 및 서열번호 97로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 98, 서열번호 99 및 서열번호 100으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
    l) 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 107, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
    m) 서열번호 113, 서열번호 114 및 서열번호 115로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 13, 서열번호 116 및 서열번호 117로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
    n) 서열번호 126, 서열번호 127 및 서열번호 128로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 129, 서열번호 130 및 서열번호 131로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
    o) 서열번호 25, 서열번호 136 및 서열번호 137로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 138, 서열번호 139 및 서열번호 140으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
    p) 서열번호 25, 서열번호 30 및 서열번호 28로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 29, 서열번호 145 및 서열번호 24로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
    q) 서열번호 150, 서열번호 151 및 서열번호 152로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 153, 서열번호 154 및 서열번호 155로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
    r) 서열번호 160, 서열번호 161 및 서열번호 162로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 163, 서열번호 154 및 서열번호 155로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
    s) 서열번호 168, 서열번호 169 및 서열번호 170으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 171, 서열번호 172 및 서열번호 173으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
    t) 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 184, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
    u) 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 185, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
    v) 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 186, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
    w) 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 187, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역;
    x) 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 188, 서열번호 108 및 서열번호 37로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역; 또는
    y) 서열번호 222, 서열번호 223 및 서열번호 224로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 225, 서열번호 226 및 서열번호 227로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 CDR 서열을 포함하는 카파 경쇄 가변 영역
    을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 50, 서열번호 54, 서열번호 58, 서열번호 62, 서열번호 66, 서열번호 70, 서열번호 74, 서열번호 78, 서열번호 82, 서열번호 86, 서열번호 101, 서열번호 109, 서열번호 118, 서열번호 122, 서열번호 132, 서열번호 141, 서열번호 146, 서열번호 156, 서열번호 164, 서열번호 174, 서열번호 177, 서열번호 178, 서열번호 179, 서열번호 189, 서열번호 190, 서열번호 191, 서열번호 192, 서열번호 193, 서열번호 194 및 이의 적어도 80% 서열 동일성의 상동 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 52, 서열번호 56, 서열번호 64, 서열번호 68, 서열번호 72, 서열번호 76, 서열번호 80, 서열번호 84, 서열번호 88, 서열번호 103, 서열번호 111, 서열번호 120, 서열번호 124, 서열번호 134, 서열번호 143, 서열번호 148, 서열번호 158, 서열번호 166, 서열번호 176, 서열번호 180, 서열번호 181, 서열번호 182, 서열번호 183, 서열번호 195, 서열번호 196, 서열번호 197, 서열번호 198, 서열번호 199, 서열번호 200, 서열번호 201, 서열번호 202, 서열번호 203, 서열번호 221 및 이의 적어도 80% 서열 동일성의 상동 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    a) 서열번호 50을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 52를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    b) 서열번호 54를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 56을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    c) 서열번호 58을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 64를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    d) 서열번호 62를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 64를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    e) 서열번호 66을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 68을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    f) 서열번호 70을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 72를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    g) 서열번호 74를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 76을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    h) 서열번호 78을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 80을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    i) 서열번호 82를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 84를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    j) 서열번호 86을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 88을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    k) 서열번호 101을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 103을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    l) 서열번호 109를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 111을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    m) 서열번호 118를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 120 또는 서열번호 221을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    n) 서열번호 122를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 124를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    o) 서열번호 132를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 134를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    p) 서열번호 141을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 143을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    q) 서열번호 146을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 148을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    r) 서열번호 156을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 158을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    s) 서열번호 164를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 166을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    t) 서열번호 174를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 176을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    u) 서열번호 177을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 180을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    v) 서열번호 178을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 180을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    w) 서열번호 179를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 180을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    x) 서열번호 177을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 181을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    y) 서열번호 178을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 181을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    z) 서열번호 179를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 181을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    aa) 서열번호 177을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 182를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    bb) 서열번호 178을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 182를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    cc) 서열번호 179를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 182를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    dd) 서열번호 177을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 183을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    ee) 서열번호 178을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 183을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    ff) 서열번호 179를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 183을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    gg) 서열번호 189를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 195를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    hh) 서열번호 189를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 196을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    ii) 서열번호 189를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 197을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    jj) 서열번호 189를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 198을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    kk) 서열번호 189를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 199를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    ll) 서열번호 190을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 200을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    mm) 서열번호 190을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 201을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    nn) 서열번호 190을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 202를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    oo) 서열번호 190을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 203을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    pp) 서열번호 191을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 200을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    qq) 서열번호 191을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 201을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    rr) 서열번호 191을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 202를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    ss) 서열번호 191을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 203을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    tt) 서열번호 192를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 200을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    uu) 서열번호 192를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 201을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    vv) 서열번호 192를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 202를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    ww) 서열번호 192를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 203을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    xx) 서열번호 193을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 200을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    yy) 서열번호 193을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 201을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    zz) 서열번호 193을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 202를 포함하는 경쇄 가변 영역;
    aaa) 서열번호 193을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 203을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    bbb) 서열번호 194를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 200을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    ccc) 서열번호 194를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 201을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    ddd) 서열번호 194를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 202를 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    eee) 서열번호 194를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 203을 포함하는 경쇄 가변 영역
    을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 아미노산 잔기 치환 또는 변형을 추가로 포함하지만 인간 CD24 또는 시노몰구스 원숭이 CD24에 대한 특이적 결합 친화성을 보유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 치환이 하나 이상의 CDR 서열에 있고/있거나, VH 또는 VL 서열 중 하나 이상에는 있지만 임의의 CDR 서열에는 없는 것인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 면역글로불린 불변 영역, 임의적으로 인간 Ig의 불변 영역, 또는 임의적으로 인간 IgG의 불변 영역을 추가로 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  11. 제10항에 있어서, 불변 영역이 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 것인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 또는 인간화된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 디아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv 단편, 디술파이드 안정화된 Fv 단편(dsFv), (dsFv)2, 이중특이적 dsFv(dsFv-dsFv'), 디술파이드 안정화된 디아바디(ds 디아바디), 단일 쇄 항체 분자(scFv), scFv 이량체(2가 디아바디), 다중특이적 항체, 낙타화된 단일 도메인 항체, 나노바디, 도메인 항체, 및 2가 도메인 항체인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 이중특이적인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  15. 제14항에 있어서, CD24의 제1 및 제2 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있거나 CD24 및 제2 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  16. 제15항에 있어서, Fab를 통해 CD24에 결합하고 scFv를 통해 제2 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  17. 제16항에 있어서, 제2 항원 결합 scFv가 CD24 결합 Fab 다음에 오는 중쇄 불변 영역의 C 말단에 작동 가능하게 연결되는 것인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  18. 제17항에 있어서, 이중특이적 항체 분자가, VL(항-CD24)-CL 형식의 경쇄와 회합된 VH(항-CD24)-CH1-힌지-CH2-CH3-스페이서-제2 항원 결합 scFv 형식의 중쇄를 포함하는 것인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  19. 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항원이 PD-L1, PD-L2, PD-1, CLTA-4, TIM-3, LAG3, CD160, 2B4, TGFβ, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, OX40, CD2, CD27, ICAM-1, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, LFA-1, ICOS, 4-1BB, GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, IL-2, IL-15, CD3, CD16, SIRPα, Siglec 10, LILRB2, Clever-1, Macro, LILRB4, Siglec15, CSF1R, PSGL-1, VSIG-4, B2M 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 임의적으로 선택되는 면역 관련 표적인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  20. 제16항에 있어서, 제2 항원이 종양 항원을 포함하는 것인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  21. 제20항에 있어서, 종양 항원이 CA-125, 강글리오시드 G(D2), G(M2) 및 G(D3), CD19, CD20, CD33, CD47, CD52, Ep-CAM, CEA, CLDN18.2, 봄베신 유사 펩티드, PSA, HER2/neu, 표피 성장 인자 수용체(EGFR), erbB2, erbB3/HER3, erbB4, CD44v6, CD44v9, Ki-67, 암 관련 뮤신, VEGF, VEGFR(예컨대, VEGFR3), 에스트로겐 수용체, 루이스-Y 항원, TGFβ1, IGF-1 수용체, EGFα, c-Kit 수용체, 트랜스페린 수용체, IL-2R, CDH6, CEA, FOLR1, TROP2, PTK7, SLITRK6, CD142, NECTIN-4, ROR1, ROR2, CD142, CD123, CD22, CD79b, DLL3, SLC 패밀리 또는 CO17-1A를 포함하는 것인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  22. 제21항에 있어서, 종양 항원이 CD47인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  23. 제22항에 있어서, VL(항-CD24)-CL 형식의 경쇄와 회합된 VH(항-CD24)-CH1-힌지-CH2-CH3-스페이서-scFv(항-CD47) 형식의 중쇄를 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이 하나 이상의 접합체에 연결되고, 임의적으로 접합체는 직접적으로 또는 링커를 통해 공유적으로 부착되는 것인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  25. 제24항에 있어서, 접합체가 클리어런스 변형제, 화학요법제, 독소, 방사성 동위원소, 란타나이드, 발광 표지, 형광 표지, 효소-기질 표지, DNA 알킬화제, 토포이소머라제 억제제, 튜불린 결합제, 또는 다른 항암 약물을 포함하는 것인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이 CD24에 특이적으로 결합할 수 있고, 임의적으로 CD24는 인간 또는 시노몰구스 원숭이로부터 유래되고, 임의적으로 CD24는 재조합 CD24 또는 세포 표면에 발현된 CD24인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 동일한 에피토프에 대해 경쟁하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  28. 제27항에 있어서, 각각 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 107, 184, 185, 186, 187 및 188로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 동일한 에피토프에 대해 경쟁하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  29. 제27항에 있어서, 각각 서열번호 95, 서열번호 96 및 서열번호 97의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 각각 서열번호 98, 서열번호 99 및 서열번호 100의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 동일한 에피토프에 대해 경쟁하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  30. 제28항 또는 제29항에 있어서, 비-암세포에 비해 암세포에서 발현되는 CD24에 선택적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  32. 제31항에 있어서, 제2 치료제를 추가로 포함하고, 임의적으로 제2 치료제는 하나 이상의 면역억제 분자에 대한 길항제 또는 항암제(예컨대, 옥살리플라틴, 아테졸리주맙, 리툭시맙)인 약제학적 조성물.
  33. 제32항에 있어서, 제2 치료제가 CD47 길항제이고, 임의적으로 CD47 길항제는 SIRPα-Fc 융합 단백질 또는 이의 변이체, 또는 항-CD47 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 약제학적 조성물.
  34. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
  35. 제34항에 있어서, 서열번호 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 102, 110, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219 및 220으로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
  36. 제34항 또는 제35항의 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
  37. 제36항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  38. 제37항의 숙주 세포를 제36항의 벡터가 발현되는 조건 하에서 배양하는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현하는 방법.
  39. CD24 활성의 조절로부터 이익을 얻는 대상체의 질환 또는 병태를 치료하는 방법으로서, 치료학적 유효량의 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제31항 내지 제33항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 상기 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  40. 제39항에 있어서, 질환 또는 병태가 CD24 관련 질환 또는 병태인 방법.
  41. 제39항에 있어서, 질환 또는 병태가 암, 적응 면역 질환, 자가면역 질환, 염증 질환, 또는 감염 질환인 방법.
  42. 제41항에 있어서, 암이 폐암, 기관지암, 골암, 간 및 담관암, 췌장암, 유방암, 간암, 난소암, 고환암, 신장암, 방광암, 두경부암, 척추암, 뇌암, 자궁경부암, 자궁암, 자궁내막암, 결장암, 결장직장암, 직장암, 항문암, 식도암, 위장암, 피부암, 전립선암, 뇌하수체암, 위암, 질암, 갑상선암, 교모세포종, 성상세포종, 흑색종, 골수형성이상 증후군, 육종, 기형종, 선암종, 백혈병, 골수종 및 림프종이고, 임의적으로 암이 화학내성인 방법.
  43. 제41항에 있어서, 질환 또는 병태가 B 세포 림프종, 임의적으로 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종(MM), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 변연부 B 세포 림프종(MZL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 리히터 증후군, 버킷 림프종 또는 소포성 림프종으로부터 선택되는 혈액암인 방법.
  44. 제39항에 있어서, 대상체가 인간인 방법.
  45. 제39항에 있어서, 대상체에게 치료학적 유효량의 제2 치료제를 투여하는 단계를 포함하고, 임의적으로 제2 치료제는 하나 이상의 면역억제 분자에 대한 길항제인 방법.
  46. 제45항에 있어서, 제2 치료제가 CD47 길항제이고, 임의적으로 CD47 길항제는 SIRPα-Fc 융합 단백질 또는 이의 변이체, 또는 항-CD47 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 방법.
  47. 제39항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 경구, 경비, 정맥내, 피하, 설하, 또는 근육내 투여를 통하는 것인 방법.
  48. CD24 발현 세포를 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 노출시키는 단계를 포함하는, CD24 발현 세포에서 CD24 활성을 조절하는 방법.
  49. 샘플을 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계 및 샘플에서 CD24의 존재 또는 양을 결정하는 단계를 포함하는, 샘플에서 CD24의 존재 또는 양을 검출하는 방법.
  50. a) 대상체로부터 샘플을 수득하는 단계; b) 대상체로부터 수득된 샘플을 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계; c) 샘플에서 CD24의 존재 또는 양을 결정하는 단계; 및 d) CD24의 존재 또는 양을 대상체의 CD24 관련 질환 또는 병태의 존재 또는 상태와 서로 연관시키는 단계를 포함하는, 대상체의 CD24 관련 질환 또는 병태를 진단하는 방법.
  51. 대상체의 CD24 관련 질환 또는 병태를 치료하기 위한 약제의 제조에서 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도.
  52. 제51항에 있어서, 약제가 제2 치료제를 추가로 포함하고, 임의적으로 제2 치료제는 하나 이상의 면역억제 분자에 대한 길항제인 용도.
  53. 제52항에 있어서, 제2 치료제가 CD47 길항제이고, 임의적으로 CD47 길항제는 SIRPα-Fc 융합 단백질 또는 이의 변이체, 또는 항-CD47 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 용도.
  54. CD24 관련 질환 또는 병태를 진단하기 위한 진단제의 제조에서 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도.
  55. CD24, 임의적으로 재조합 CD24, 세포 표면에 발현된 CD24, 또는 CD24 발현 세포를 검출하는 데 유용한 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 키트.
  56. 항원 결합 도메인, 막횡단 도메인, 공동자극 신호전달 영역, 및 TCR 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)로서, 항원 결합 도메인은 CD24에 특이적으로 결합하고 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항원 결합 단편을 포함하는, 키메라 항원 수용체(CAR).
  57. 제56항에 있어서, 항원 결합 단편인 Fab 또는 scFv인 CAR.
  58. 제56항 또는 제57항에 있어서, 이중특이적인 CAR.
  59. 제58항에 있어서, CAR이 CD24 이외의 제2 항원 또는 CD24 상의 제2 에피토프에 추가로 특이적으로 결합할 수 있는 것인 CAR.
  60. 제59항에 있어서, 제2 항원이 종양 항원인 CAR.
  61. 제56항에 있어서, TCR 신호전달 도메인이 CD3ζ, FccRIγ, CD27, CD28, CD137, CD134, MyD88, CD40, CD278, TLR, 또는 이들의 조합의 세포내 신호 영역 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 CAR.
  62. 제56항에 있어서, 막횡단 영역이 CD3, CD4, CD8 또는 CD28의 막횡단 영역을 포함하는 것인 CAR.
  63. 제56항 내지 제62항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체(CAR)를 코딩하는 핵산 서열.
  64. 제63항의 핵산 서열을 포함하는 세포.
  65. 제56항 내지 제62항 중 어느 한 항의 CAR을 발현하도록 유전자 변형된 세포.
  66. 제65항에 있어서, 세포가 면역 세포이고, 임의적으로 면역 세포가 T 림프구, NK 세포, 단핵구, 대식세포 또는 NKT 림프구인 세포.
  67. 제63항의 핵산 서열을 포함하는 벡터.
  68. 포유동물에게 제56항 내지 제62항 중 어느 한 항의 CAR을 발현하도록 유전자 변형된 세포의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물에서 CD24 발현 세포 또는 조직에 대한 T 세포 매개 면역 반응을 자극하는 방법.
  69. CD24 관련 질환 또는 병태를 갖는 포유동물을 치료하는 방법으로서, 상기 포유동물에게 유효량의 제65항의 세포를 투여함으로써 포유동물을 치료하는 단계를 포함하는 방법.
  70. 제69항에 있어서, 세포가 자가 T 세포인 방법.
  71. 제69항에 있어서, CD24 관련 질환 또는 병태가 암인 방법.
  72. 제69항에 있어서, 포유동물이 인간 대상체인 방법.
  73. 글리코실화되거나 시알릴화된 CD24에만 결합하는, 바람직하게는 CD24의 시알산에만 결합하는 항-CD24 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  74. 제73항에 있어서, 항-CD24 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 비-암세포에 비해 암세포에서 발현되는 CD24에 선택적으로 결합하는 것인 방법.
  75. 제74항에 있어서, 항-CD24 항체 또는 이의 항원 결합 단편이, 각각 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 107, 184, 185, 186, 187 및 188로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하거나, 각각 서열번호 95, 서열번호 96 및 서열번호 97의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 각각 서열번호 98, 서열번호 99 및 서열번호 100의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 동일한 에피토프에 대해 경쟁하는 것인 방법.
  76. 제75항에 있어서, 항-CD24 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 각각 서열번호 104, 서열번호 105 및 서열번호 106의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 107, 184, 185, 186, 187 및 188로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하거나, 각각 서열번호 95, 서열번호 96 및 서열번호 97의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 각각 서열번호 98, 서열번호 99 및 서열번호 100의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
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