TW202317618A - 新型抗ｃｄ２７６抗體及其用途 - Google Patents

新型抗ｃｄ２７６抗體及其用途 Download PDF

Info

Publication number
TW202317618A
TW202317618A TW111117711A TW111117711A TW202317618A TW 202317618 A TW202317618 A TW 202317618A TW 111117711 A TW111117711 A TW 111117711A TW 111117711 A TW111117711 A TW 111117711A TW 202317618 A TW202317618 A TW 202317618A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
seq
variable region
chain variable
cdr sequences
heavy chain
Prior art date
Application number
TW111117711A
Other languages
English (en)
Inventor
宇文輝
侯冰
李騰騰
陳朋
鄧敏
單波
建明 梅
Original Assignee
香港商德琪生物有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 香港商德琪生物有限公司 filed Critical 香港商德琪生物有限公司
Publication of TW202317618A publication Critical patent/TW202317618A/zh

Links

Images

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本公開提供抗CD276抗體及抗CD276/PD-L1雙特異性抗體分子、編碼其之分離的多核苷酸、包含其之醫藥組合物及其用途。

Description

新型抗CD276抗體及其用途
本公開一般係關於新型抗CD276抗體。
B7-H3 (CD276，Uniprot中之人類胺基酸序列ID：Q5ZPR3，以及小鼠胺基酸序列ID：Q8VE98)為B7及CD28家族中新發現之重要免疫檢查點成員，為根據其胞外域以兩種亞型中之一種存在之I型跨膜共刺激分子。在小鼠中，胞外域由一對免疫球蛋白可變(IgV)樣及免疫球蛋白恆定(IgC)樣域組成，而在人類中，由於外顯子重複，胞外域由一對(2Ig-B7-H3)或兩對相同之域(4Ig-B7-H3)組成。B7-H3 mRNA廣泛分佈於大多數組織中；相比之下，因為B7-H3蛋白質受微小RNA之轉錄後調節，所以它在正常組織中之表現極有限。然而，B7-H3蛋白質在許多不同的癌症類型(所有癌症之60%)上以高頻率表現(「B7-H3：對基於抗體之免疫療法有吸引力之目標(B7-H3: an attractive target for antibody-based immunotherapy)」.《臨床癌症研究(Clinical Cancer Research: clincanres)》.2584.2020)。
B7-H3之作用一直備受爭議。它被分類為用於抑制腫瘤抗原特異性免疫反應之T細胞活化之共刺激分子，或被分類為非免疫作用，諸如促進遷移、腫瘤生長、侵襲、轉移、惡性階段、復發率、血管生成、化療耐藥性、上皮-間質轉化及影響腫瘤細胞代謝。據報道，B7-H3受體為髓樣細胞(TREM)樣轉錄物2 (TLT-2，或TREML2)上表現之觸發受體，其結合B7-H3，特別為共刺激CD8 T細胞之活化。據報道，B7-H3亦藉由連接未知受體而成為NK細胞及成骨細胞之抑制劑。(「B7-H3之對比作用(The contrasting role of B7-H3)」，《美國國家科學院院刊(PNAS)》，2008年7月29日, 105 (30) 10277-10278)。用單株抗體阻斷B7-H3之治療為用於癌症治療之主要免疫治療策略。
基於抑制性免疫檢查點阻斷(CTLA-4、PD-1及PD-L1)之臨床成功，抗CD276 mAb似乎為值得開發之有前景之治療策略。由於CD276在實體瘤上之選擇性表現，一些團隊已經產生抗CD276抗體，諸如依諾妥珠單抗(enoblituzumab)(MGA271)、奧博妥單抗(omburtamab)、MGD009、MGC018、DS-7300a及CAR T細胞(「B7-H3：對基於抗體之免疫療法有吸引力之目標」，《臨床癌症研究》.2584.2020)，並在體外及體內觀測到腫瘤生長抑制。據報道，CD276亦在血液腫瘤細胞中表現(參見Wei Zhang等人，「淋巴瘤中之B7家族成員：用於腫瘤免疫療法之有前景之新目標？(B7 Family Members in Lymphoma: Promising Novel Targets for Tumor Immunotherapy?)」，《腫瘤學前沿(Front. Oncol.)》，2021年3月31日)，表明CD276亦可為治療血液學癌症之潛在目標。
儘管開發了靶向CD276之療法，但對新型抗CD276抗體仍有顯著需求。
在整個本公開中，冠詞「一(a/an)」及「該」在本文中用於指一個(種)或多於一個(種)(亦即，至少一個(種))該冠詞之語法物件。舉例而言，「一種抗體」意指一種抗體或多於一種抗體。
本公開提供新型抗CD276抗體分子、其胺基酸及核苷酸序列及其用途。
在一個態樣，本公開提供了一種分離之抗體或其抗原結合片段，其包含1、2或3個選自由以下組成之群的重鏈互補決定區(CDR)序列：SEQ ID NO: 1-3、9-11、17-19、25-27、33-35、41-43、49-51、57-59、65-67、73-75、81-83、89-91、97-99、105-107、113-115、121-123、129-131、137-139、145-147、153-155、161-163、169-171、177-179、185-187、193-195、201-203、209-211、217-219、225-227、233-235、241-243、249-251、257-259、265-267、273-275、281-283、289-291、297-299、305-307、313-315、321-323、329-331及337-339，及/或1、2或3個選自由以下組成之群的輕鏈CDR序列：SEQ ID NO: 4-6、12-14、20-22、28-30、36-38、44-46、52-54、60-62、68-70、76-78、84-86、92-94、100-102、108-110、116-118、124-126、132-134、140-142、148-150、156-158、164-166、172-174、180-181、188-190、196-198、204-206、212-214、220-222、228-230、236-238、244-246、252-254、260-262、268-270、276-278、284-286、292-294、300-302、308-310、316-318、324-326、332-334及340-342。
在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段包含選自由以下組成之群的重鏈可變區： a)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 1-3之1、2或3個CDR序列； b)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 9-11之1、2或3個CDR序列； c)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 17-19之1、2或3個CDR序列； d)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 25-27之1、2或3個CDR序列； e)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 33-35之1、2或3個CDR序列； f)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 41-43之1、2或3個CDR序列； g)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 49-51之1、2或3個CDR序列； h)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 57-59之1、2或3個CDR序列； i)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 65-67之1、2或3個CDR序列； j)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 73-75之1、2或3個CDR序列； k)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 81-83之1、2或3個CDR序列； l)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 89-91之1、2或3個CDR序列； m)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 97-99之1、2或3個CDR序列； n)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 105-107之1、2或3個CDR序列； o)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 113-115之1、2或3個CDR序列； p)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 121-123之1、2或3個CDR序列； q)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 129-131之1、2或3個CDR序列； r)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 137-139之1、2或3個CDR序列； s)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 145-147之1、2或3個CDR序列； t)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 153-155之1、2或3個CDR序列； u)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 161-163之1、2或3個CDR序列； v)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 169-171之1、2或3個CDR序列； w)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 177-179之1、2或3個CDR序列； x)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 185-187之1、2或3個CDR序列； y)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 193-195之1、2或3個CDR序列； z)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 201-203之1、2或3個CDR序列； aa)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 209-211之1、2或3個CDR序列； bb)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 217-219之1、2或3個CDR序列； cc)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 225-227之1、2或3個CDR序列； dd)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 233-235之1、2或3個CDR序列； ee)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 241-243之1、2或3個CDR序列； ff)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 249-251之1、2或3個CDR序列； gg)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 257-259之1、2或3個CDR序列； hh)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 265-267之1、2或3個CDR序列； ii)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 273-275之1、2或3個CDR序列； jj)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 281-283之1、2或3個CDR序列； kk)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 289-291之1、2或3個CDR序列； ll)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 297-299之1、2或3個CDR序列； mm)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 305-307之1、2或3個CDR序列； nn)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 313-315之1、2或3個CDR序列； oo)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 321-323之1、2或3個CDR序列； pp)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 329-331之1、2或3個CDR序列；及 qq)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 337-339之1、2或3個CDR序列。
在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段包含選自由以下組成之群的輕鏈可變區： a)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 4-6之1、2或3個CDR序列； b)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 12-14之1、2或3個CDR序列； c)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 20-22之1、2或3個CDR序列； d)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 28-30之1、2或3個CDR序列； e)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 36-38之1、2或3個CDR序列； f)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 44-46之1、2或3個CDR序列； g)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 52-54之1、2或3個CDR序列； h)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 60-62之1、2或3個CDR序列； i)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 68-70之1、2或3個CDR序列； j)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 76-78之1、2或3個CDR序列； k)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 84-86之1、2或3個CDR序列； l)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 92-94之1、2或3個CDR序列； m)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 100-102、108-110之1、2或3個CDR序列； n)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 108-110之1、2或3個CDR序列； o)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 116-118之1、2或3個CDR序列； p)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 124-126之1、2或3個CDR序列； q)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 132-134之1、2或3個CDR序列； r)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 140-142之1、2或3個CDR序列； s)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 148-150之1、2或3個CDR序列； t)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 156-158之1、2或3個CDR序列； u)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 164-166之1、2或3個CDR序列； v)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 172-174之1、2或3個CDR序列； w)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 180-181之1、2或3個CDR序列； x)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 188-190之1、2或3個CDR序列； y)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 196-198之1、2或3個CDR序列； z)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 204-206之1、2或3個CDR序列； aa)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 212-214之1、2或3個CDR序列； bb)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 220-222之1、2或3個CDR序列； cc)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 228-230之1、2或3個CDR序列； dd)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 236-238之1、2或3個CDR序列； ee)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 244-246之1、2或3個CDR序列； ff)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 252-254之1、2或3個CDR序列； gg)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 260-262之1、2或3個CDR序列； hh)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 268-270之1、2或3個CDR序列； ii)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 276-278之1、2或3個CDR序列； jj)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 284-286之1、2或3個CDR序列； kk)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 292-294之1、2或3個CDR序列； ll)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 300-302之1、2或3個CDR序列； mm)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 308-310之1、2或3個CDR序列； nn)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 316-318之1、2或3個CDR序列； oo)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 324-326之1、2或3個CDR序列； pp)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 332-334之1、2或3個CDR序列；及 qq)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 340-342之1、2或3個CDR序列。
在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段包含： a)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2及SEQ ID NO: 3之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5及SEQ ID NO: 6之1、2或3個CDR序列； b)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10及SEQ ID NO: 11之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13及SEQ ID NO: 14之1、2或3個CDR序列； c)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18及SEQ ID NO: 19之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21及SEQ ID NO: 22之1、2或3個CDR序列； d)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26及SEQ ID NO: 27之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29及SEQ ID NO: 30之1、2或3個CDR序列； e)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34及SEQ ID NO: 35之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 37及SEQ ID NO: 38之1、2或3個CDR序列； f)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42及SEQ ID NO: 43之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45及SEQ ID NO: 46之1、2或3個CDR序列； g)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50及SEQ ID NO: 51之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53及SEQ ID NO: 54之1、2或3個CDR序列； h)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 58及SEQ ID NO: 59之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 61及SEQ ID NO: 62之1、2或3個CDR序列； i)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66及SEQ ID NO: 67之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 69及SEQ ID NO: 70之1、2或3個CDR序列； j)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 74及SEQ ID NO: 75之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 77及SEQ ID NO: 78之1、2或3個CDR序列； k)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 82及SEQ ID NO: 83之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 85及SEQ ID NO: 86之1、2或3個CDR序列； l)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 89、SEQ ID NO: 90及SEQ ID NO: 91之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 93及SEQ ID NO: 94之1、2或3個CDR序列； m)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 97、SEQ ID NO: 98及SEQ ID NO: 99之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 101及SEQ ID NO: 102之1、2或3個CDR序列； n)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 105、SEQ ID NO: 106及SEQ ID NO: 107之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 109及SEQ ID NO: 110之1、2或3個CDR序列； o)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 113、SEQ ID NO: 114及SEQ ID NO: 115之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 117及SEQ ID NO: 118之1、2或3個CDR序列； p)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 121、SEQ ID NO: 122及SEQ ID NO: 123之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 126之1、2或3個CDR序列； q)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 133及SEQ ID NO: 134之1、2或3個CDR序列； r)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 138及SEQ ID NO: 139之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 141及SEQ ID NO: 142之1、2或3個CDR序列； s)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 145、SEQ ID NO: 146及SEQ ID NO: 147之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 148、SEQ ID NO: 149及SEQ ID NO: 150之1、2或3個CDR序列； t)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 154及SEQ ID NO: 155之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 157及SEQ ID NO: 158之1、2或3個CDR序列； u)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 161、SEQ ID NO: 162及SEQ ID NO: 163之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 164、SEQ ID NO: 165及SEQ ID NO: 166之1、2或3個CDR序列； v)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 169、SEQ ID NO: 170及SEQ ID NO: 171之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 172、SEQ ID NO: 173及SEQ ID NO: 174之1、2或3個CDR序列； w)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 177、SEQ ID NO: 178及SEQ ID NO: 179之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 180、SEQ ID NO: 181及SEQ ID NO: 182之1、2或3個CDR序列； x)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 185、SEQ ID NO: 186及SEQ ID NO: 187之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 188、SEQ ID NO: 189及SEQ ID NO: 190之1、2或3個CDR序列； y)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 193、SEQ ID NO: 194及SEQ ID NO: 195之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 196、SEQ ID NO: 197及SEQ ID NO: 198之1、2或3個CDR序列； z)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 201、SEQ ID NO: 202及SEQ ID NO: 203之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 204、SEQ ID NO: 205及SEQ ID NO: 206之1、2或3個CDR序列； aa)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 209、SEQ ID NO: 210及SEQ ID NO: 211之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 212、SEQ ID NO: 213及SEQ ID NO: 214之1、2或3個CDR序列； bb)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 217、SEQ ID NO: 218及SEQ ID NO: 219之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 220、SEQ ID NO: 221及SEQ ID NO: 222之1、2或3個CDR序列； cc)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 225、SEQ ID NO: 226及SEQ ID NO: 227之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 228、SEQ ID NO: 229及SEQ ID NO: 230之1、2或3個CDR序列； dd)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 233、SEQ ID NO: 234及SEQ ID NO: 235之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 236、SEQ ID NO: 237及SEQ ID NO: 238之1、2或3個CDR序列； ee)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 241、SEQ ID NO: 242及SEQ ID NO: 243之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 244、SEQ ID NO: 245及SEQ ID NO: 246之1、2或3個CDR序列； ff)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 249、SEQ ID NO: 250及SEQ ID NO: 251之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 252、SEQ ID NO: 253及SEQ ID NO: 254之1、2或3個CDR序列； gg)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 257、SEQ ID NO: 258及SEQ ID NO: 259之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 260、SEQ ID NO: 261及SEQ ID NO: 262之1、2或3個CDR序列； hh)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 265、SEQ ID NO: 266及SEQ ID NO: 267之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 268、SEQ ID NO: 269及SEQ ID NO: 270之1、2或3個CDR序列； ii)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 273、SEQ ID NO: 274及SEQ ID NO: 275之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 276、SEQ ID NO: 277及SEQ ID NO: 278之1、2或3個CDR序列； jj)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 281、SEQ ID NO: 282及SEQ ID NO: 283之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 284、SEQ ID NO: 285及SEQ ID NO: 286之1、2或3個CDR序列； kk)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 289、SEQ ID NO: 290及SEQ ID NO: 291之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 292、SEQ ID NO: 293及SEQ ID NO: 294之1、2或3個CDR序列； ll)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 297、SEQ ID NO: 298及SEQ ID NO: 299之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 300、SEQ ID NO: 301及SEQ ID NO: 302之1、2或3個CDR序列； mm)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 305、SEQ ID NO: 306及SEQ ID NO: 307之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 308、SEQ ID NO: 309及SEQ ID NO: 310之1、2或3個CDR序列； nn)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 313、SEQ ID NO: 314及SEQ ID NO: 315之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 316、SEQ ID NO: 317及SEQ ID NO: 318之1、2或3個CDR序列； oo)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 321、SEQ ID NO: 322及SEQ ID NO: 323之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 324、SEQ ID NO: 325及SEQ ID NO: 326之1、2或3個CDR序列； pp)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 329、SEQ ID NO: 330及SEQ ID NO: 331之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 332、SEQ ID NO: 333及SEQ ID NO: 334之1、2或3個CDR序列；或 qq)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 337、SEQ ID NO: 338及SEQ ID NO: 339之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 340、SEQ ID NO: 341及SEQ ID NO: 342之1、2或3個CDR序列。
在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區，該重鏈可變區選自由以下組成之群的序列以及與其具有至少80% (例如，至少85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%)序列同源性之同源序列：SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 71、SEQ ID NO: 79、SEQ ID NO: 87、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 119、SEQ ID NO: 127、SEQ ID NO: 135、SEQ ID NO: 143、SEQ ID NO: 151、SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 167、SEQ ID NO: 175、SEQ ID NO: 183、SEQ ID NO: 191、SEQ ID NO: 199、SEQ ID NO: 207、SEQ ID NO: 215、SEQ ID NO: 223、SEQ ID NO: 231、SEQ ID NO: 239、SEQ ID NO: 247、SEQ ID NO: 255、SEQ ID NO: 263、SEQ ID NO: 271、SEQ ID NO: 279、SEQ ID NO: 287、SEQ ID NO: 295、SEQ ID NO: 303、SEQ ID NO: 311、SEQ ID NO: 319、SEQ ID NO: 327、SEQ ID NO: 335及SEQ ID NO: 343。
在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區選自由以下組成之群的序列以及與其具有至少80% (例如，至少85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%)序列同源性之同源序列：SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 136、SEQ ID NO: 144、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 160、SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 176、SEQ ID NO: 184、SEQ ID NO: 192、SEQ ID NO: 200、SEQ ID NO: 208、SEQ ID NO: 216、SEQ ID NO: 224、SEQ ID NO: 232、SEQ ID NO: 240、SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 256、SEQ ID NO: 264、SEQ ID NO: 272、SEQ ID NO: 280、SEQ ID NO: 288、SEQ ID NO: 296、SEQ ID NO: 304、SEQ ID NO: 312、SEQ ID NO: 320、SEQ ID NO: 328、SEQ ID NO: 336及SEQ ID NO: 344。
在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段包含： a)包含SEQ ID NO: 7之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 8之輕鏈可變區； b)包含SEQ ID NO: 15之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 16之輕鏈可變區； c)包含SEQ ID NO: 23之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 24之輕鏈可變區； d)包含SEQ ID NO: 31之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 32之輕鏈可變區； e)包含SEQ ID NO: 39之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 40之輕鏈可變區； f)包含SEQ ID NO: 47之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 48之輕鏈可變區； g)包含SEQ ID NO: 55之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 56之輕鏈可變區； h)包含SEQ ID NO: 63之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 64之輕鏈可變區； i)包含SEQ ID NO: 71之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 72之輕鏈可變區； j)包含SEQ ID NO: 79之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 80之輕鏈可變區； k)包含SEQ ID NO: 87之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 88之輕鏈可變區； l)包含SEQ ID NO: 95之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 96之輕鏈可變區； m)包含SEQ ID NO: 103之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 104之輕鏈可變區； n)包含SEQ ID NO: 111之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 112之輕鏈可變區； o)包含SEQ ID NO: 119之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 120之輕鏈可變區； p)包含SEQ ID NO: 127之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 128之輕鏈可變區； q)包含SEQ ID NO: 135之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 136之輕鏈可變區； r)包含SEQ ID NO: 143之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 144之輕鏈可變區； s)包含SEQ ID NO: 151之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 152之輕鏈可變區； t)包含SEQ ID NO: 159之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 160之輕鏈可變區； u)包含SEQ ID NO: 167之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 168之輕鏈可變區； v)包含SEQ ID NO: 175之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 176之輕鏈可變區； w)包含SEQ ID NO: 183之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 184之輕鏈可變區； x)包含SEQ ID NO: 191之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 192之輕鏈可變區； y)包含SEQ ID NO: 199之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 200之輕鏈可變區； z)包含SEQ ID NO: 207之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 208之輕鏈可變區； aa)包含SEQ ID NO: 215之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 216之輕鏈可變區； bb)包含SEQ ID NO: 223之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 224之輕鏈可變區； cc)包含SEQ ID NO: 231之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 232之輕鏈可變區； dd)包含SEQ ID NO: 239之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 240之輕鏈可變區； ee)包含SEQ ID NO: 247之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 248之輕鏈可變區； ff)包含SEQ ID NO: 255之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 256之輕鏈可變區； gg)包含SEQ ID NO: 263之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 264之輕鏈可變區； hh)包含SEQ ID NO: 271之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 272之輕鏈可變區； ii)包含SEQ ID NO: 279之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 280之輕鏈可變區； jj)包含SEQ ID NO: 287之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 288之輕鏈可變區； kk)包含SEQ ID NO: 295之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 296之輕鏈可變區； ll)包含SEQ ID NO: 303之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 304之輕鏈可變區； mm)包含SEQ ID NO: 311之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 312之輕鏈可變區； nn)包含SEQ ID NO: 319之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 320之輕鏈可變區； oo)包含SEQ ID NO: 327之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 328之輕鏈可變區； pp)包含SEQ ID NO: 335之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 336之輕鏈可變區；或 qq)包含SEQ ID NO: 343之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 344之輕鏈可變區。
在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段進一步包含一或多個胺基酸殘基取代或修飾，但仍保持對人類CD276之特異性結合親和力。
在一些實施例中，該取代在一或多個CDR序列中，及/或在一或多個VH或VL序列中但不在任何CDR序列中。
在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段進一步包含免疫球蛋白恆定區，視情況人類Ig之恆定區，或視情況人類IgG之恆定區。
在一些實施例中，該恆定區包含人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之恆定區。
在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段為嵌合的或人源化的。
在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段為雙抗體(diabody)、Fab、Fab'、F(ab') 2、Fd、Fv片段、二硫鍵穩定之Fv片段(dsFv)、(dsFv) 2、雙特異性dsFv (dsFv-dsFv')、二硫鍵穩定之雙抗體(ds diabody)、單鏈抗體分子(scFv)、scFv二聚體(二價雙抗體)、多特異性抗體、駱駝化單域抗體、奈米抗體、域抗體及二價域抗體。
在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段為雙特異性的。
在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段能夠特異性地結合CD276之第一及第二表位，或能夠特異性地結合CD276及第二抗原。
在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段藉由scFv與CD276結合並藉由Fab與該第二抗原結合。在一些實施例中，其中結合CD276之scFv可操作地連接於在結合該第二抗原之Fab之後的重鏈恆定區之C末端。在一些實施例中，該抗體包括具有下式之重鏈：VH (抗第二抗原)-CH1-鉸鏈區-CH2-CH3-間隔子-scFv (抗CD276)，其與具有下式之輕鏈相結合：VL (抗第二抗原)-CL。
在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段藉由Fab與CD276結合並藉由scFv與該第二抗原結合。在一些實施例中，其中結合該第二抗原之scFv可操作地連接於在結合CD276之Fab之後的重鏈恆定區之C末端。在一些實施例中，該抗體包括具有下式之重鏈：VH (抗CD276)-CH1-鉸鏈區-CH2-CH3-間隔子-scFv (抗第二抗原)，其與具有下式之輕鏈相結合：VL (抗CD276)-CL。
在一些實施例中，該第二抗原為免疫相關目標，視情況其選自由以下組成之群：PD-L1、PD-L2、PD-1、CTLA-4、TIM-3、LAG3、CD160、2B4、TGF β、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、OX40、CD2、CD27、ICAM-1、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H4、LFA-1、ICOS、4-1BB、GITR、CD30、CD39、CD73、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、IL-2、IL-15、CD3、CD16、SIRPα、唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素10 (Siglec 10)、LILRB2、Clever-1、Macro、LILRB4、唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素15 (Siglec 15)、CSF1R、PSGL-1、VSIG-4、B2M及CD83。
在一些實施例中，該免疫相關目標為PD-L1。
在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段包括具有下式之重鏈：VH (抗PD-L1)-CH1-鉸鏈區-CH2-CH3-間隔子-scFv (抗CD276)，其與具有下式之輕鏈相結合：VL (抗PD-L1)-CL。
在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段包括具有下式之重鏈：VH (抗CD276)-CH1-鉸鏈區-CH2-CH3-間隔子-scFv (抗PD-L1)，其與具有下式之輕鏈相結合：VL (抗CD276)-CL。
在一些實施例中，該第二抗原包括腫瘤抗原。
在一些實施例中，該腫瘤抗原包括CA-125、神經節苷脂G(D2)、G(M2)及G(D3)、CD19、CD20、CD24、CD33、CD47、CD52、Ep-CAM、CEA、CLDN18.2、蛙皮素樣肽、PSA、HER2/neu、表皮生長因子受體(EGFR)、erbB2、erbB3/HER3、erbB4、CD44v6、CD44v9、Ki-67、癌相關黏蛋白、VEGF、VEGFRs (如VEGFR3)、雌激素受體、Lewis-Y抗原、TGFβ1、IGF-1受體、EGFα、c-Kit受體，轉鐵蛋白受體、IL-2R、CDH6、CEA、FOLR1、TROP2、PTK7、SLITRK6、CD142、連接蛋白-4、ROR1、ROR2、CD142，CD123、CD22、CD79b、DLL3、SLC家族或CO17-1A。
在一些實施例中，該抗體或抗原結合片段與一或多種共軛物連接。在一些實施例中，共軛物直接或經由連接子共價連接。在一些實施例中，共軛物包含清除調節劑、化學治療劑、毒素、放射性同位素、鑭系元素、發光標記、螢光標記、酶-受質標記、DNA烷基化劑、拓樸異構酶抑制劑、微管蛋白結合劑或其他抗癌藥物。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段能夠特異性結合CD276。在一些實施例中，CD276源自人類。在一些實施例中，CD276為重組CD276或在細胞表面表現之CD276。
在一個態樣中，本公開提供一種抗體或其抗原結合片段，其與本文提供之抗體或其抗原結合片段競爭相同表位。
在一個態樣中，本公開提供一種醫藥組合物，其包含本文提供之抗體或其抗原結合片段，及醫藥學上可接受之載劑。
在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物進一步包含第二治療劑。
在一些實施例中，該第二治療劑為針對一或多種免疫抑制分子之拮抗劑。
在一些實施例中，該第二治療劑為PD-L1拮抗劑。
在一些實施例中，該PD-L1拮抗劑為PD-L1抗體或其抗原結合片段。
在一個態樣中，本公開提供一種分離之多核苷酸，其編碼本文提供之抗體或其抗原結合片段。
在一個態樣中，本公開提供一種載體，其包含本文提供之分離的多核苷酸。
在一個態樣中，本公開提供一種宿主細胞，其包含本文提供之載體。
在一個態樣中，本公開提供一種表現本文提供之抗體或其抗原結合片段的方法，其包含在表現本文提供之載體之條件下培養本文提供之宿主細胞。
在一個態樣，本公開提供一種治療將受益於調節CD276活性之受試者之疾病或病症的方法，其包含向受試者投與治療有效量之本文提供之抗體或其抗原結合片段或者本文提供之醫藥組合物。
在一些實施例中，該疾病或病症為CD276相關疾病或病症。
在一些實施例中，該疾病或病症為癌症、適應性免疫疾病、自身免疫疾病、發炎性疾病或感染性疾病。
在一些實施例中，該癌症為腎上腺腫瘤、AIDS相關癌症、腺泡軟組織肉瘤、星形細胞腫瘤、膀胱癌、骨癌、腦及脊髓癌、轉移性腦瘤、乳癌、頸動脈體瘤、子宮頸癌、軟骨肉瘤、脊索瘤、嫌色細胞腎細胞癌、透明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性纖維組織細胞瘤、促結締組織增生性小圓細胞瘤、室管膜瘤、尤因瘤、骨外黏液樣軟骨肉瘤、骨纖維發育不全、骨纖維異常增殖症、膽囊癌或膽管癌、胃癌(gastric cancer)、妊娠滋養細胞疾病、生殖細胞瘤、頭頸癌、肝細胞癌、胰島細胞瘤、卡波西肉瘤、腎癌、白血病、脂肪瘤/良性脂肪瘤樣腫瘤、脂肪肉瘤/惡性脂肪瘤樣腫瘤、肝癌、淋巴瘤、肺癌、髓母細胞瘤、黑色素瘤、腦膜瘤、多樣內分泌瘤、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常症候群、成神經細胞瘤、神經內分泌腫瘤、卵巢癌、胰臟癌、甲狀腺乳頭狀癌、甲狀旁腺腫瘤、兒科癌症、外周神經鞘腫瘤、嗜鉻細胞瘤、垂體瘤、前列腺癌、後葡萄膜黑色素瘤、罕見之血液病症、腎轉移癌、橫紋肌樣瘤、橫紋肌肉瘤、肉瘤、皮膚癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌、胃癌(stomach cancer)、滑膜肉瘤、睾丸癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲狀腺轉移癌及子宮癌，視情況，其中該癌症為化學抵抗性的。
在一些實施例中，該疾病或病症係選自由以下組成之群的血液學癌症：B細胞淋巴瘤，諸如霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、多發性骨髓瘤(MM)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、邊緣區B細胞淋巴瘤(MZL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、里克特症候群(Richter's syndrome)、伯基特淋巴瘤或濾泡性淋巴瘤。
在一些實施例中，該受試者為人類。
在一些實施例中，本文提供之方法包含向受試者投與治療有效量之一或多種治療劑。在一些實施例中，該治療劑為化療劑、放射治療劑、激素治療劑、毒素或免疫治療劑。
在一些實施例中，該第二治療劑為PD-L1拮抗劑。
在一些實施例中，該PD-L1拮抗劑為抗PD-L1抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，該投與係經口、經鼻、靜脈內、皮下、舌下或肌肉內投與。
在一些實施例中，該方法進一步包含施與一或多種選自由以下組成之群的額外癌症療法：化學療法、免疫療法、放射療法、激素療法及手術。
在一個態樣，本公開提供一種調節表現CD276之細胞中之CD276活性的方法，其包含將表現CD276之細胞暴露於本文提供之抗體或其抗原結合片段。
在一個態樣，本公開提供一種偵測樣品中CD276之存在或量之方法，其包含將樣品與本文提供之抗體或其抗原結合片段接觸，並確定樣品中CD276之存在或量。
在一個態樣，本公開提供一種在受試者中診斷CD276相關疾病或病症之方法，其包含：a)自受試者中獲得樣品；b)將自受試者獲得之樣品與本文提供之抗體或其抗原結合片段接觸；c)確定樣品中CD276之存在或量；及d)將受試者中CD276之存在或量與CD276相關疾病或病症之存在或狀態相關聯。
在一個態樣，本公開提供本文提供之抗體或其抗原結合片段在生產用於治療受試者之CD276相關疾病或病症之藥物中的用途。
在一些實施例中，該藥物進一步包含第二治療劑。在一些實施例中，該第二治療劑為化療劑、放射治療劑、激素治療劑、毒素或免疫治療劑。
在一些實施例中，該第二治療劑為PD-L1拮抗劑。在一些實施例中，該PD-L1拮抗劑為抗PD-L1抗體或其抗原結合片段。
在一個態樣，本公開提供本文提供之抗體或其抗原結合片段在生產用於診斷CD276相關疾病或病症之診斷試劑中的用途。
在一個態樣，本公開提供一種包含本文提供之抗體或其抗原結合片段之套組，其用於偵測CD276 (視情況為重組CD276)在細胞表面表現之CD276或表現CD276之細胞。
在一個態樣，本公開提供一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含抗原結合域、跨膜域、共刺激傳訊區及TCR傳訊域，其中該抗原結合域特異性結合CD276並包含本文提供之抗原結合片段。在一些實施例中，抗原結合片段為Fab或scFv。
在一些實施例中，本文提供之CAR為雙特異性的。
在一些實施例中，該CAR能夠進一步特異性結合不同於CD276之第二抗原，或CD276上之第二表位。在一些實施例中，該第二抗原為腫瘤抗原。
在一些實施例中，該TCR傳訊域選自由以下組成之群：CD3ζ、FccRIγ、CD27、CD28、CD137、CD134、MyD88、CD40、CD278、TLR之胞內訊號區序列，或其組合。
在一些實施例中，跨膜區包含CD3、CD4、CD8或CD28之跨膜區。
在一個態樣中，本公開提供一種編碼本文提供之嵌合抗原受體(CAR)之核酸序列。在一個態樣中，本公開提供一種包含本文提供之核酸序列之細胞。在一個態樣中，本公開提供一種細胞，其被基因修飾以表現本文提供之CAR。在一些實施例中，該細胞為免疫細胞，視情況，其中該免疫細胞為T淋巴細胞、NK細胞、單核球、巨噬細胞或NKT淋巴細胞。
在一個態樣中，本公開提供一種包含本文提供之核酸序列之載體。
在一個態樣，本公開提供一種在哺乳動物中刺激針對表現CD276之細胞或組織之T細胞介導之免疫反應的方法，該方法包含向哺乳動物投與有效量之經基因修飾以表現本文提供之CAR之細胞。
在一個態樣，本公開提供一種治療患有CD276相關疾病或病症之哺乳動物的方法，其包含向哺乳動物投與有效量之本文提供之細胞，從而治療哺乳動物。在一些實施例中，細胞為自體T細胞。
在一些實施例中，該CD276相關疾病或病症為癌症。
在一些實施例中，該哺乳動物為人類受試者。
在一個態樣，本公開提供經基因修飾以表現本文提供之CAR之細胞在生產用於在哺乳動物中刺激針對表現CD276之細胞或組織的T細胞介導之免疫反應之藥物中的用途。
在一個態樣，本公開提供本文提供之細胞在生產用於治療患有CD276相關疾病或病症之哺乳動物之藥物中的用途。
以下對本公開之描述僅旨在說明本公開之各種實施例。因此，所討論之具體修改不應理解為對本公開之範圍之限制。對本領域之技術人員將顯而易見的為，可在不脫離本公開範圍之情況下作出各種等效物、變化及修改，並且應理解，此等等效實施例將包括在本文中。本文引用之所有參考文獻，包括出版物、專利及專利申請，均以全文引用之方式併入本文中。
定義如本文所用，術語「抗體」包括結合特定抗原之任何免疫球蛋白、單株抗體、多株抗體、多價抗體、二價抗體、單價抗體、多特異性抗體或雙特異性抗體。天然完整抗體包括兩條重(H)鏈及兩條輕(L)鏈。哺乳動物之重鏈被分類為α、δ、ε、γ及μ，每條重鏈由可變區(V H)及第一、第二及第三恆定區(分別為C H1、C H2、C H3)組成；哺乳動物之輕鏈被分類為λ或κ，而每條輕鏈由可變區(V L)及恆定區組成。抗體呈「Y」形，其中Y之主幹由經由二硫鍵合結合在一起的兩條重鏈之第二及第三恆定區組成。Y之各臂包括與單條輕鏈之可變區及恆定區結合之單條重鏈之可變區及第一恆定區。輕鏈及重鏈之可變區負責抗原結合。兩條鏈之可變區一般含有三個高度可變之環，稱為互補決定區(CDR)(輕鏈CDR包括LCDR1、LCDR2及LCDR3，重鏈CDR包括HCDR1、HCDR2、HCDR3)。本文公開之抗體及抗原結合域之CDR邊界可藉由如下慣例定義或標識：Kabat、IMGT、AbM、Chothia或Al-Lazikani (Al-Lazikani, B.、Chothia, C.、Lesk, A. M. 《分子生物學雜誌(J. Mol. Biol.)》, 273(4), 927 (1997)；Chothia, C.等人, 《分子生物學雜誌》12月5日；186(3):651-63 (1985)；Chothia, C.及Lesk, A.M., 《分子生物學雜誌》, 196,901 (1987)；N. R. Whitelegg等人, 《蛋白質工程(Protein Engineering)》第13(12)卷, 819-824 (2000)；Chothia, C.等人, 《自然(Nature)》12月21日至28日; 342(6252):877-83 (1989)；Kabat E.A.等人, 美國國立衛生研究院(National Institutes of Health)，馬里蘭州貝塞斯達(Bethesda, Md.). (1991)；Marie-Paule Lefranc等人, 《發育及比較免疫學(Developmental and Comparative Immunology)》, 27: 55-77 (2003)；Marie-Paule Lefranc等人, 《免疫組學研究(Immunome Research)》, 1(3), (2005)；Marie-Paule Lefranc, 《B細胞之分子生物學(Molecular Biology of B cells)》(第二版)第26章, 481-514, (2015)。三個CDR插入於稱為框架區(FR)之側翼調控區之間，框架區比CDR更高度保守，並形成支撐高變環之支架。重鏈及輕鏈之恆定區不參與抗原結合，但表現出各種效應功能。基於抗體重鏈恆定區之胺基酸序列，將抗體分類。抗體之五種主要類別或同種型為IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，其特徵在於分別存在α、δ、ε、γ及μ重鏈。將若干主要抗體類別劃分為子類，諸如IgG1 (γ1重鏈)、IgG2 (γ2重鏈)、IgG3 (γ3重鏈)、IgG4 (γ4重鏈)、IgA1 (α1重鏈)或IgA2 (α2重鏈)。
如本文所用，術語「抗體分子」係指包含至少一個抗體片段(諸如CDR，及/或可變區序列)之抗原結合蛋白或多肽。抗體分子包括例如單株抗體、抗體片段或域、包含抗體片段或域之融合蛋白質、包含抗體片段或域之多肽複合物等。
如本文所用，術語「抗原結合域」(例如，CD276結合域)係指由包含一或多個CDR之抗體部分形成之抗體片段，或與抗原結合但不包含完整天然抗體結構之任何其他抗體片段。抗原結合域之實例包括但不限於雙抗體(diabody)、Fab、Fab'、F(ab') 2、Fv片段、二硫鍵穩定之Fv片段(dsFv)、(dsFv) 2、雙特異性dsFv (dsFv-dsFv')、二硫鍵穩定之雙抗體(ds diabody)、單鏈抗體分子(scFv)、scFv二聚體(二價雙抗體)、雙特異性抗體、多特異性抗體、駱駝化單域抗體、奈米抗體、域抗體及二價域抗體。抗原結合域能夠結合親本抗體結合之相同抗原。在某些實施例中，抗原結合域可包含一或多個來自特定人類抗體之CDR，該抗體被移植至來自一或多個不同人類抗體之框架區。抗原結合域之更多型式及詳細型式描述於Spiess等人, 2015及Brinkman等人, 《單抗( mAbs)》, 9(2), 第182-212頁(2017)中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。
關於抗體之「Fab」係指由單條輕鏈(可變區及恆定區)藉由二硫鍵與單條重鏈之可變區及第一恆定區結合組成之抗體部分。
「Fab'」係指包括鉸鏈區一部分之Fab片段。
「F(ab') 2」係指Fab'之二聚體。
關於抗體之「困難片段(fragment difficult；Fd)」係指可與輕鏈組合以形成Fab之重鏈片段之胺基末端半部。舉例而言，Fd片段可由VH及CH1域組成。
關於抗體之「Fv」係指帶有完整抗原結合位點之抗體之最小片段。Fv片段由單條輕鏈之可變區與單條重鏈之可變區結合組成。已提供許多Fv設計，包括dsFv，其中藉由引入二硫鍵增強兩個域之間之締合；並且可使用肽連接子將兩個域結合在一起作為單一多肽來形成scFv。亦已經產生了含有與相應免疫球蛋白重鏈或輕鏈之可變域及恆定域相關之重或輕免疫球蛋白鏈之可變域之Fv構築體。Fv亦已被多聚化以形成雙抗體及三抗體(trabodies)(Maynard等人，《生物醫學工程年度回顧(Annu Rev Biomed Eng)》 2 339-376(2000))。
「單鏈Fv抗體」或「scFv」係指由直接相連或經由肽連接子序列相連之輕鏈可變區及重鏈可變區組成之工程抗體(Huston JS 等人《美國國家科學院院刊(Proc Natl Acad Sci USA)》, 85:5879 (1988))。
「dsFv」係指二硫鍵穩定化Fv片段，其中在單條輕鏈之可變區與單條重鏈之可變區之間之鍵聯為二硫鍵。在一些實施例中，「(dsFv) 2」或「(dsFv-dsFv')」包含三個肽鏈：由肽連接子(例如，長的柔性連接子)連接之兩個V H部分，並經由二硫鍵分別與兩個V L部分結合。在一些實施例中，dsFv-dsFv'為雙特異性的，其中每個二硫鍵配對之重鏈及輕鏈具有不同的抗原特異性。
關於抗體之「Fc」係指由第一重鏈之第二及第三恆定區經由二硫鍵合與第二重鏈之第二及第三恆定區結合組成之抗體部分。抗體之Fc部分負責各種效應功能，諸如抗體依賴之細胞介導之細胞毒性作用(ADCC)及補體依賴之細胞毒性(CDC)，但不在抗原結合中起作用。
「駱駝化單域抗體」、「重鏈抗體」或「HCAb」係指含有兩個V H域且不含輕鏈之抗體(Riechmann L.及Muyldermans S., 《免疫學方法雜誌(J Immunol Methods)》. 12月10日; 231(1-2):25-38 (1999)；Muyldermans S., 《生物技術雜誌(J Biotechnol)》. 6月; 74(4):277-302 (2001)；WO94/04678；WO94/25591；美國專利第6,005,079號)。重鏈抗體最初源自 駱駝科( Camelidae)(駱駝、單峰駱駝及羊駝)。儘管缺乏輕鏈，但駱駝化抗體具有真實之抗原結合庫(Hamers-Casterman C. 等人, 《自然》. 6月3日; 363(6428):446-8 (1993)；Nguyen VK. 等人「駱駝科之重鏈抗體；一個演化創新案例(Heavy-chain antibodies in Camelidae; a case of evolutionary innovation)」, 《免疫基因學(Immunogenetics)》. 4月;54(1):39-47 (2002)；Nguyen VK. 等人《免疫學(Immunology)》. 5月;109(1):93-101 (2003))。重鏈抗體之可變域(VHH域)代表由適應性免疫反應產生之最小已知抗原結合單位(Koch-Nolte F. 等人, 《美國實驗生物學聯合會會刊(FASEB J)》. 11月;21(13):3490-8. 電子出版2007年6月15日(2007))。
「奈米抗體」係指由來自重鏈抗體之VHH域及兩個恆定域CH2及CH3組成之抗體片段。
「Diabodies」或「dAbs」包括具有兩個抗原結合位點之小抗體片段，其中該片段包含連接至同一多肽鏈(V H-V L或V L-V H)中之V L域之V H域(參見Holliger P.等，《美國國家科學院院刊(Proc Natl Acad Sci USA)》，7月15日；90(14)：6444-8(1993)；EP404097；WO93/11161)。藉由使用太短而不能在同一條鏈上之兩個域之間配對之連接子，域被迫與另一條鏈之互補域配對，從而產生兩個抗原結合位點。抗原結合位點可靶向相同或不同的抗原(或表位)。
在某些實施例中，「雙特異性ds雙抗體(bispecific ds diabody)」係針對兩種不同抗原(或表位)之雙抗體。
在某些實施例中，「scFv二聚體」為二價雙抗體或二價單鏈抗體(BsFv)，其包含與另一個V H-V L部分二聚之V H-V L(藉由肽連接子連接)，使得一個部分之V H與另一部分之V L協調，並形成兩個結合位點，可靶向相同抗原(或表位)或不同抗原(或表位)。
在其他實施例中，「scFv二聚體」為包含V H1-V L2(藉由肽連接子連接)及V L1-V H2(亦藉由肽連接子連接)之雙特異性雙抗體，使得V H1及V L1與V H2及V L2相協調，每個配位對具有不同的抗原特異性。
「域抗體」係指僅含有重鏈可變區或輕鏈可變區之抗體片段。在某些情況下，兩個或更多個V H域用肽連接子共價接合，產生二價或多價域抗體。二價域抗體之兩個V H域可靶向相同或不同的抗原。
如本文所用，術語「嵌合」意指重鏈及/或輕鏈之一部分源自一個物種且重鏈及/或輕鏈之其餘部分源自不同物種之抗體或抗原結合域。在一示意性實例中，嵌合抗體可包括源自人類之恆定區及源自諸如小鼠之非人類動物之可變區。在一些實施例中，非人類動物為哺乳動物，例如小鼠、大鼠、兔、山羊、綿羊、豚鼠或倉鼠。
如本文所用，術語「人源化」意指抗體或抗原結合域包含源自非人類動物之CDR、源自人類之FR區及(在適用時)源自人類之恆定區。
術語「可操作地連接(operably link或operably linked)」係指兩個或更多個所關注之生物序列在存在或不存在間隔子或連接子或間插序列之情況下之並接，使得它們處於允許它們以預期方式起作用之關係中。當用於多肽時，其意指多肽序列以允許連接之產物具有預期之生物學功能之方式連接。例如，抗體可變區可以可操作地連接於恆定區，以提供具有抗原結合活性之穩定產物。對於另一實例，抗原結合域可以可操作地連接於其間具有間插序列之另一抗原結合域，且此間插序列可為間隔子或可包含長得多的序列，諸如抗體之恆定區。該術語亦可用於多核苷酸。例如，當編碼多肽之多核苷酸與調節序列(例如，啟動子、增強子、沉默子序列等)可操作地連接時，旨在意指多核苷酸序列以允許多肽自多核苷酸可調型表現之方式連接。
術語「融合」或「融合之」在用於胺基酸序列(例如，肽、多肽或蛋白質)時係指兩個或更多個胺基酸序列之組合，例如藉由化學鍵合或重組方式，形成非天然存在之單一胺基酸序列。融合胺基酸序列可藉由兩個編碼多核苷酸序列之基因重組產生，並且可以藉由將含有重組多核苷酸之構築體引入至宿主細胞中之方法表現。
如本文所用，「抗原」係指可刺激細胞培養物或動物中之抗體或T細胞反應之產生之化合物、組合物、肽、多肽、蛋白質或物質，包括添加至細胞培養物(例如，雜交瘤)中或注射或吸收至動物中之組合物(例如，包括癌症特異性蛋白質之組合物)。抗原與特異性體液或細胞免疫(諸如，抗體)之產物反應，該產物包括由異源抗原誘導之產物。
如本文所用，術語「CD276蛋白質」或「B7-H3蛋白質」旨在涵蓋任何形式之CD276，例如，1)天然未加工之CD276分子，「全長」CD276鏈或CD276之天然存在之變體，包括，例如，剪接變體或對偶基因變體；2)細胞中加工產生之任何形式之CD276；或3)藉由重組方法產生之CD276亞單位之全長、片段(例如，截短形式、胞外/跨膜域)或修飾形式(例如，突變形式、糖基化/聚乙二醇化、組胺酸標籤/免疫螢光融合形式)。
術語「抗CD276抗體」、「抗CD276結合域」或「CD276結合域」係指能夠特異性結合CD276 (例如，人類、猴或小鼠CD276)之抗體或抗原結合域。
如本文所用，術語「特異性結合(specific binding或specifically binds)」係指兩個分子之間，諸如例如抗體與抗原之間之非隨機結合反應。
抗體與在細胞表面表現之重組CD276或CD276之結合亦可用「半最大有效濃度」(EC 50)值來表示，該值係指觀測到抗體最大效果(例如，結合或抑制等)之50%時之抗體濃度。EC 50值可藉由本領域已知之方法來量測，例如，夾心分析，諸如ELISA、蛋白質印跡法、流式細胞術分析及其他結合分析。在某些實施例中，本文提供之抗體及其片段藉由流式細胞術分析以不超過0.05 nM、不超過0.06 nM、不超過0.07 nM、不超過0.08 nM、不超過0.09 nM、不超過0.1 nM、不超過0.2 nM、不超過0.3 nM、不超過0.4 nM、不超過0.5 nM、不超過0.6 nM、不超過0.7 nM、不超過0.8 nM、不超過0.9 nM、不超過1 nM、不超過1.5 nM、不超過2 nM、不超過2.5 nM、不超過3.5 nM、不超過3 nM、不超過4 nM、不超過4.5 nM、不超過5 nM、不超過6 nM、不超過7 nM、不超過8 nM、不超過9 nM或不超過10 nM之EC 50(亦即50%結合濃度)特異性結合重組人類CD276。
如本文所用，「阻斷結合」或「競爭相同表位」之能力係指抗體或抗原結合域抑制兩個分子(例如，人類CD276及其結合配體，例如TLT-2)之間之相互結合作用至任何可偵測程度之能力。在某些實施例中，阻斷兩個分子之間結合之抗體或抗原結合域抑制兩個分子之間之相互結合作用至少85%，或至少90%。在某些實施例中，該抑制可大於85%，或者大於90%。
如本文所用，術語「表位」係指抗體所結合之抗原上特定之一組原子或胺基酸。表位可由連續胺基酸(亦稱為線性或連續表位)或藉由蛋白質之三級摺疊並列之非相鄰胺基酸(亦稱為構型或構象表位)形成。由連續胺基酸形成之表位通常沿著蛋白質上之一級胺基酸殘基線性排列，且連續胺基酸之小區段可自與主要組織相容性複合物(MHC)分子之抗原結合中消化或在暴露於變性溶劑時保持，而由三級摺疊形成之表位通常在用變性溶劑處理時丟失。在獨特之空間構象中，表位通常包括至少3個並且更常見地至少5個、約7個或約8-10個胺基酸。若兩種抗體展現針對抗原之競爭性結合，則其可結合該抗原內之相同或緊密相關之表位。例如，若抗體或抗原結合域阻斷參考抗體與抗原之結合至少85%，或至少90%，或至少95%，則該抗體或抗原結合域可視為與參考抗體結合相同/密切相關之表位。
關於胺基酸序列之「保守取代」係指用具有類似生理化學特性之側鏈之不同胺基酸殘基置換胺基酸殘基。例如，保守取代可在具有疏水側鏈之胺基酸殘基(例如，Met、Ala、Val、Leu及Ile)之間、在具有中性親水側鏈之殘基(例如，Cys、Ser、Thr、Asn及Gln)之間、在具有酸性側鏈之殘基(例如，Asp、Glu)之間、在具有鹼性側鏈之胺基酸(例如，His、Lys及Arg)之間，或者在具有芳香側鏈之殘基(例如，Trp、Tyr及Phe)之間進行。如本領域中已知，保守取代通常不會引起蛋白質構象結構之顯著變化，並且因此可保留蛋白質之生物活性。
如本文所用，術語「同源物」及「同源之」為可互換的，並且係指當最佳比對時，與另一序列具有至少80% (例如，至少85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%)序列同源性之核酸序列(或其互補鏈)或胺基酸序列。
與胺基酸序列(或核酸序列)有關之「序列一致性百分比(%)」定義為在比對候選序列與參考序列並在必要時，引入空位以使一致胺基酸(或核酸)達至最大數量之後，該候選序列中與該參照序列中之胺基酸(或核酸)殘基一致之胺基酸(或核酸)殘基之百分比。胺基酸殘基之保守取代可視為或可不視為相同殘基。可進行比對來實現確定胺基酸(或核酸)序列同源性百分比之目的，例如，使用公眾可獲得之工具諸如BLASTN、BLASTp (可在美國國家生物技術資訊中心(NCBI)之網站上獲得，亦可參見Altschul S.F.等人, 《分子生物學雜誌》, 215:403-410 (1990)；Stephen F.等人, 《核酸研究(Nucleic Acids Res.)》, 25:3389-3402 (1997))、ClustalW2 (可在歐洲生物資訊學研究所之網站上獲得，亦可參見Higgins D.G.等人, 《酶學方法(Methods in Enzymology)》, 266:383-402 (1996)；Larkin M.A.等人, 《生物資訊學(Bioinformatics)》(英國牛津), 23(21): 2947-8 (2007))，以及ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。本領域技術人員可使用該工具提供之預設參數，或可自定義適於比對之參數，諸如例如藉由選擇合適演算法進行。
如本文所用，「效應功能」係指由抗體之Fc區與其效應物，諸如C1複合物、Fc受體及效應細胞(例如，巨噬細胞)結合引起之生物活性。示例性效應功能包括：由抗體與C1複合物上之C1q之相互作用誘導之補體依賴之細胞毒性(CDC)；由抗體之Fc區與效應細胞上之Fc受體結合誘導之抗體依賴之細胞介導之細胞毒性作用(ADCC)；及由抗體之Fc區與吞噬作用結合誘導之抗體依賴之細胞吞噬作用(ADCP)。已經確定的為，與Fc-CH2域中保守之雙觸角聚糖相關之特定聚糖結構可強烈影響與介導ADCC及ADCP之FcyRs以及與導致CDC之初始結合事件Clq結合之相互作用(參見Reusch D、Tejada ML.「作為關鍵品質屬性之治療性抗體之Fc聚糖(Fc glycans of therapeutic antibodies as critical quality attributes)」，《糖生物學(Glycobiology)》2015; 25: 1325-34)。
如本文所用，病症之「治療(treating或treatment)」包括預防或減輕病症，減緩病症之發作或發展速率，降低罹患病症之風險，預防或延遲與病症相關之症狀之發展，減少或結束與病症相關之症狀，產生病症之完全或部分消退，治癒病症或其某一組合。
如本文所用，術語「受試者」或「個體」或「動物」或「患者」係指需要診斷、預後、改善、預防及/或治療疾病或障礙之人類或非人類動物，包括哺乳動物或靈長類動物。哺乳動物受試者包括人類、猴、家畜、農場動物及動物園、運動或寵物動物，諸如狗、貓、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、馬、豬、牛、熊等。
如本文所用，術語「載體」係指編碼蛋白質之多核苷酸可以可操作地插入其中從而導致該蛋白質之表現之媒劑。載體可用於轉化、轉導或轉染宿主細胞，以使其攜帶之基因元件在宿主胞內表現。載體之實例包括質體；噬菌粒；黏粒；人工染色體，諸如酵母人工染色體(YAC)、細菌人工染色體(BAC)或P1衍生之人工染色體(PAC)；噬菌體，諸如λ噬菌體或M13噬菌體；及動物病毒。用作載體之動物病毒之類別包括逆轉錄病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相關病毒、疱疹病毒(例如，單純疱疹病毒)、痘病毒、桿狀病毒、乳頭瘤病毒及乳多空病毒(例如，SV40)。載體可含有多種用於控制表現之元件，包括啟動子序列、轉錄起始序列、增強子序列、可選擇元件及報導基因。另外，載體可含有複製起點。載體亦可包括有助於其進入細胞之材料，包括但不限於病毒粒子、脂質體或蛋白質包衣。載體可為表現載體或選殖載體。
如本文所用，片語「宿主細胞」係指已引入外源多核苷酸及/或載體之細胞。
如本文所用，「CD276相關」疾病或病症係指由CD276之表現或活性增加或降低而引起的、加劇的或以其他方式與之相關的任何疾病或病症。在一些實施例中，CD276相關病症為免疫相關障礙，諸如例如，癌症、自身免疫性疾病、發炎性疾病或感染性疾病。
如本文所用，「癌症」係指特徵在於惡性細胞生長或贅瘤、異常增殖、浸潤或轉移之任何醫學病症，並且包括實體腫瘤及非實體癌症(惡性血液病)，諸如白血病。如本文所用，「實體瘤」係指腫瘤細胞及/或惡性細胞之實體塊。癌症或腫瘤之實例包括腎上腺腫瘤、AIDS相關癌症、腺泡狀軟組織肉瘤、星形細胞腫瘤、膀胱癌、骨癌、腦及脊髓癌、轉移性腦瘤、乳癌、頸動脈體瘤、子宮頸癌、軟骨肉瘤、脊索瘤、嫌色細胞腎細胞癌、透明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性纖維組織細胞瘤、促結締組織增生性小圓細胞瘤、室管膜瘤、尤因瘤、骨外黏液樣軟骨肉瘤、骨纖維發育不全、骨纖維異常增殖症、膽囊癌或膽管癌、胃癌(gastric cancer)、妊娠滋養細胞疾病、生殖細胞瘤、頭頸癌、肝細胞癌、胰島細胞瘤、卡波西肉瘤、腎癌、白血病、脂肪瘤/良性脂肪瘤樣腫瘤、脂肪肉瘤/惡性脂肪瘤樣腫瘤、肝癌、淋巴瘤、肺癌、髓母細胞瘤、黑色素瘤、腦膜瘤、多樣內分泌瘤、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常症候群、成神經細胞瘤、神經內分泌腫瘤、卵巢癌、胰臟癌、甲狀腺乳頭狀癌、甲狀旁腺腫瘤、兒科癌症、外周神經鞘腫瘤、嗜鉻細胞瘤、垂體瘤、前列腺癌、後葡萄膜黑色素瘤、罕見之血液病症、腎轉移癌、橫紋肌樣瘤、橫紋肌肉瘤、肉瘤、皮膚癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌、胃癌(stomach cancer)、滑膜肉瘤、睾丸癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲狀腺轉移癌及子宮癌。
在某些實施例中，血液惡性腫瘤包括B細胞淋巴瘤、視情況霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、多發性骨髓瘤(MM)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、邊緣區B細胞淋巴瘤(MZL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、里克特症候群、伯基特淋巴瘤或濾泡性淋巴瘤。
在某些實施例中，癌症選自胃癌、乳癌、頭頸癌、胰臟癌及結腸癌。在某些實施例中，癌症選自淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤及B細胞淋巴瘤。
在某些實施例中，癌症具有化療耐藥性。如本文所用，術語「化療耐藥性癌症」係指不對化學療法之效應起反應之一種癌症。例如，已回應於化學療法或不同化學療法之組合突然開始生長之癌症可被稱為化療耐藥性癌症。
術語「醫藥學上可接受之」表示指定之載劑、媒劑、稀釋劑、賦形劑及/或鹽通常與構成製劑之其他成分在化學上及/或實體上相容，並與接受者在生理上相容。
抗 CD276 抗體本公開提供抗CD276抗體及其抗原結合片段，其包含抗CD276抗體9-E8-F9-C10、10-G6-C4-B2、18-F9-D8-G7、9-G2-H6-E4、20-F8-B5-G2、30-C7-C11-D4、23-F10-G4-F11、6-H11-G5-D8、27-E7-D8-C7、30-E2-G7-G7、5-D1-G6-D9、3-C2-C3-E7、11-G10-B4-B11、16-C6-F7-F5、22-E11-C3-F2、24-C10-F9-G7、25-C8-D7-C5、4-D5-B9-B11、10-B9-D10-A12、15-G1-D1-E3、8-B4-F5-E11、6-F3-G2-G1、9-B9-H11-G7、9-G12-D6-A11、13-A8-C4-G1、15-C8-B5-G7、28-G2-E6-B10、3-G7-D8-D3、14-E7-G9-D4、20-C5-D7-D3、8-C3-E3-F3、2-A7-B10-A3、26-D2-D6-B12、11-C12-F4-F6、16-G3-D10-C10、27-F8-E10-E11、7-E1-F8-F6、25-D3-G4-C6、13-E4-G9-A4、20-A2-D10-G8、3-F2-E7-F9、6-D8-E7-A11及21-B3-B1-H5之一或多個(例如，1個、2個、3個、4個、5個或6個) CDR序列。在某些實施例中，本文提供之抗CD276抗體及其抗原結合片段能夠特異性結合CD276。視情況，CD276源自人類、猴或小鼠。在某些實施例中，CD276為重組CD276或在細胞表面表現之CD276。
本文提供之所有抗CD276抗體及其抗原結合片段均為小鼠單株抗體。表1示出此43種抗CD276抗體根據IMGT編號系統之CDR序列。下文亦提供重鏈及輕鏈可變區序列。
表 1. 抗 CD276 抗體之 CDR 序列
抗體 純系 CDR1 CDR2 CDR3
9-E8-F9-C10 VH SEQ ID NO: 1 GYAFSDYW SEQ ID NO: 2 ICPGSGNI SEQ ID NO: 3 TRLITRVIDY
   VL SEQ ID NO: 4 SSVNY SEQ ID NO: 5 DTS SEQ ID NO: 6 FQGSGYPLT
10-G6-C4-B2 VH SEQ ID NO: 9 GFTLSDYY SEQ ID NO: 10 MRNKANGYTT SEQ ID NO: 11 VRDRDGRPFAY
   VL SEQ ID NO: 12 QSLLNSINQKNF SEQ ID NO: 13 WAS SEQ ID NO: 14 QNDYTYPLT
18-F9-D8-G7 VH SEQ ID NO: 17 GYTFTDYA SEQ ID NO: 18 INTYSGDT SEQ ID NO: 19 ARGGGNYPYWYFDV
   VL SEQ ID NO: 20 SSVSSSY SEQ ID NO: 21 STS SEQ ID NO: 22 QQFSVYPLT
9-G2-H6-E4 VH SEQ ID NO: 25 GYSFTGYF SEQ ID NO: 26 INPNNGDT SEQ ID NO: 27 GRGGLPFGALDY
   VL SEQ ID NO: 28 QSLLYSRNQKNY SEQ ID NO: 29 WAS SEQ ID NO: 30 QQYHSYPYT
20-F8-B5-G2 VH SEQ ID NO: 33 GDSITSAY SEQ ID NO: 34 ISNSGST SEQ ID NO: 35 VRGERYYGYGAY
   VL SEQ ID NO: 36 KSLLHSNGNTYLY SEQ ID NO: 37 RMS SEQ ID NO: 38 MQHLEYPFT
30-C7-C11-D4 VH SEQ ID NO: 41 GYSITSDYA SEQ ID NO: 42 SHSGST SEQ ID NO: 43 ARSLGRRWYFDV
   VL SEQ ID NO: 44 QSLLNSSTQKNY SEQ ID NO: 45 FAS SEQ ID NO: 46 QQHYIIPFT
23-F10-G4-F11 VH SEQ ID NO: 49 GFNIKDYP SEQ ID NO: 50 FDPDNGNV SEQ ID NO: 51 SSPYGAMDY
   VL SEQ ID NO: 52 SSVSY SEQ ID NO: 53 DTS SEQ ID NO: 54 QQGSSNPRT
6-H11-G5-D8 VH SEQ ID NO: 57 GYTFTSYD SEQ ID NO: 58 IFPGNGDT SEQ ID NO: 59 ARDLRLGTFDY
   VL SEQ ID NO: 60 SSVSY SEQ ID NO: 61 DTS SEQ ID NO: 62 QQGSSNPRT
27-E7-D8-C7 VH SEQ ID NO: 65 GYTFTDYA SEQ ID NO: 66 INTYSDNT SEQ ID NO: 67 ARGLLLRSQLGVYFDY
   VL SEQ ID NO: 68 SSVSY SEQ ID NO: 69 ATS SEQ ID NO: 70 QQWSSNPWT
30-E2-G7-G7 VH SEQ ID NO: 73 GFTFSYYA SEQ ID NO: 74 INGDGSHT SEQ ID NO: 75 ASLLQLGPF
   VL SEQ ID NO: 76 QNVGTN SEQ ID NO: 77 SAS SEQ ID NO: 78 QQYNNYPLT
5-D1-G6-D9 VH SEQ ID NO: 81 GLTFSTNY SEQ ID NO: 82 IYGGNGGT SEQ ID NO: 83 TSHDYYGGPMDY
   VL SEQ ID NO: 84 QDISNY SEQ ID NO: 85 FTS SEQ ID NO: 86 QQTNTLPWT
3-C2-C3-E7 VH SEQ ID NO: 89 GYTFTENT SEQ ID NO: 90 INPNTGGT SEQ ID NO: 91 ARRGTNWEHWYFDV
   VL SEQ ID NO: 92 SSVSY SEQ ID NO: 93 DTS SEQ ID NO: 94 QQWSSNPLT
11-G10-B4-B11 VH SEQ ID NO: 97 GYSITSDYA SEQ ID NO: 98 ISYSGST SEQ ID NO: 99 ARGGPWFAY
   VL SEQ ID NO: 100 QSLVHSNGNTY SEQ ID NO: 101 KVS SEQ ID NO: 102 SQSTHVPFT
16-C6-F7-F5 VH SEQ ID NO: 105 GYTFTKYG SEQ ID NO: 106 IWTYTGKP SEQ ID NO: 107 ARDDGYYYTMNY
   VL SEQ ID NO: 108 QSLLHTNGDTY SEQ ID NO: 109 KVS SEQ ID NO: 110 SQSTHIPWT
22-E11-C3-F2 VH SEQ ID NO: 113 GYSFTNYG SEQ ID NO: 114 NPYTGEP SEQ ID NO: 115 GRDDGYHYTMNY
   VL SEQ ID NO: 116 QSLIHSNGDTY SEQ ID NO: 117 KVS SEQ ID NO: 118 SQSTYVPWT
24-C10-F9-G7 VH SEQ ID NO: 121 GYTFTDHT SEQ ID NO: 122 ISTYYGNT SEQ ID NO: 123 ARASYGSGYGPYYWYFDV
   VL SEQ ID NO: 124 EKIYSY SEQ ID NO: 125 NAN SEQ ID NO: 126 QHHYGTPVT
25-C8-D7-C5 VH SEQ ID NO: 129 GFTFSTYA SEQ ID NO: 130 ISGGGIDT SEQ ID NO: 131 ARQGSKGWGAMDY
   VL SEQ ID NO: 132 SSVSF SEQ ID NO: 133 ETS SEQ ID NO: 134 QQWSSNPLT
4-D5-B9-B11 VH SEQ ID NO: 137 GFTFSSYA SEQ ID NO: 138 ISGGGI SEQ ID NO: 139 ARQGSKGWDAMDY
   VL SEQ ID NO: 140 SSVSF SEQ ID NO: 141 ETS SEQ ID NO: 142 QQWSSNPLT
10-B9-D10-A12 VH SEQ ID NO: 145 GYTFTDYT SEQ ID NO: 146 ISTYYGNT SEQ ID NO: 147 ARASYGSGYGPYYWYFDV
   VL SEQ ID NO: 148 EKIYSY SEQ ID NO: 149 NAN SEQ ID NO: 150 QHHYGTPVT
15-G1-D1-E3 VH SEQ ID NO: 153 GYTFTSYW SEQ ID NO: 154 IHPKSGTV SEQ ID NO: 155 ARGENYDYRPQFVY
   VL SEQ ID NO: 156 SQHSTYT SEQ ID NO: 157 LKKDGSH SEQ ID NO: 158 GVGDTIKEQFVYV
8-B4-F5-E11 VH SEQ ID NO: 161 GDTFTSYW SEQ ID NO: 162 IHPDSGTR SEQ ID NO: 163 CSRSYGSRLAWFAY
   VL SEQ ID NO: 164 TGAVTTSNF SEQ ID NO: 165 GTN SEQ ID NO: 166 ALWYTNHFI
6-F3-G2-G1 VH SEQ ID NO: 169 DYTFTNYW SEQ ID NO: 170 IHPNSGTT SEQ ID NO: 171 ASHYGNSYSAMDY
   VL SEQ ID NO: 172 TGAVTTSNY SEQ ID NO: 173 GTS SEQ ID NO: 174 ALWYSTHYV
9-B9-H11-G7 VH SEQ ID NO: 177 GYSITSGYY SEQ ID NO: 178 YISYDGTN SEQ ID NO: 179 ARGDSNSYYFDY
   VL SEQ ID NO: 180 TGAVTTSNY SEQ ID NO: 181 GTS SEQ ID NO: 182 ALWYRTHYV
9-G12-D6-A11 VH SEQ ID NO: 185 GYSITSDYY SEQ ID NO: 186 ISYDGTN SEQ ID NO: 187 ARGKDGSYYFDY
   VL SEQ ID NO: 188 TGAVTTSNY SEQ ID NO: 189 GTS SEQ ID NO: 190 ALWYRTHYV
13-A8-C4-G1 VH SEQ ID NO: 193 SGYIFTSNW SEQ ID NO: 194 IHPNSGTT SEQ ID NO: 195 AGPTTTRRFYPMDY
   VL SEQ ID NO: 196 TGAVTTSNY SEQ ID NO: 197 GTN SEQ ID NO: 198 ALWYSNHFI
15-C8-B5-G7 VH SEQ ID NO: 201 DYTFTSHWMHW SEQ ID NO: 202 IHPNSGTT SEQ ID NO: 203 AWGSSNSYFYAMAY
   VL SEQ ID NO: 204 TGAVTTSNY SEQ ID NO: 205 GTN SEQ ID NO: 206 ALWFSNHLV
28-G2-E6-B10 VH SEQ ID NO: 209 GYTFTSYW SEQ ID NO: 210 IHPNSDTT SEQ ID NO: 211 ARGGLGPHYFVY
   VL SEQ ID NO: 212 TGAVTTSNY SEQ ID NO: 213 GTS SEQ ID NO: 214 ALWYSPHYV
3-G7-D8-D3 VH SEQ ID NO: 217 GYTFTTYW SEQ ID NO: 218 IYPGDGDT SEQ ID NO: 219 ARPYDGYYIDYPMDS
   VL SEQ ID NO: 220 SRINY SEQ ID NO: 221 DTS SEQ ID NO: 222 HQRSSYPFT
14-E7-G9-D4 VH SEQ ID NO: 225 GYTFTNYI SEQ ID NO: 226 INPYNDGI SEQ ID NO: 227 TRWGNYVFYYTMDY
   VL SEQ ID NO: 228 SSVSY SEQ ID NO: 229 ATS SEQ ID NO: 230 QQWSGNPPLT
20-C5-D7-D3 VH SEQ ID NO: 233 GFTFRSYG SEQ ID NO: 234 ISGGGNYT SEQ ID NO: 235 ARHEGLPLDY
   VL SEQ ID NO: 236 ENIYSY SEQ ID NO: 237 NAK SEQ ID NO: 238 QHHYGTPTWT
8-C3-E3-F3 VH SEQ ID NO: 241 GFTFSNYG SEQ ID NO: 242 IGSYGGNTY SEQ ID NO: 243 ARDIYYGNSEAWFAY
   VL SEQ ID NO: 244 KSLLHSNGITY SEQ ID NO: 245 QMS SEQ ID NO: 246 AQNLELPWT
2-A7-B10-A3 VH SEQ ID NO: 249 GYTFTDYA SEQ ID NO: 250 INTNYVNT SEQ ID NO: 251 ARGGKYGNYVFFFAY
   VL SEQ ID NO: 252 QDISNY SEQ ID NO: 253 YTS SEQ ID NO: 254 QQGNTLPYT
26-D2-D6-B12 VH SEQ ID NO: 257 GYIFRNYG SEQ ID NO: 258 INSYTGKPTY SEQ ID NO: 259 ARDDGYWYTMDY
   VL SEQ ID NO: 260 QSLVHSNGHTY SEQ ID NO: 261 KVS SEQ ID NO: 262 SQSTHVPWT
11-C12-F4-F6 VH SEQ ID NO: 265 GYTFRNFG SEQ ID NO: 266 INPYTGEP SEQ ID NO: 267 ARDDGYWYTMDY
   VL SEQ ID NO: 268 QSLVHSNGITY SEQ ID NO: 269 KVS SEQ ID NO: 270 SQSTHVPWT
16-G3-D10-C10 VH SEQ ID NO: 273 GYTFRNYG SEQ ID NO: 274 INPYTGEP SEQ ID NO: 275 ARDDGYWYTMDY
   VL SEQ ID NO: 276 QSLVHSNGITY SEQ ID NO: 277 KVS SEQ ID NO: 278 SQSTHVPWT
27-F8-E10-E11 VH SEQ ID NO: 281 GYTFTEYA SEQ ID NO: 282 INPNIGGT SEQ ID NO: 283 ARFLVPSTEGFTY
   VL SEQ ID NO: 284 SSVSY SEQ ID NO: 285 DTS SEQ ID NO: 286 QQWSSNPLT
7-E1-F8-F6 VH SEQ ID NO: 289 GYTFTDYV SEQ ID NO: 290 IYPRSGNT SEQ ID NO: 291 ARFDIAYSFDY
   VL SEQ ID NO: 292 QSLVHSNGVTY SEQ ID NO: 293 KVS SEQ ID NO: 294 SQGTHVPWT
25-D3-G4-C6 VH SEQ ID NO: 297 GYSFTDYI SEQ ID NO: 298 INPYYNST SEQ ID NO: 299 ARDSFDWYFGV
   VL SEQ ID NO: 300 QSLVHSNGNTY SEQ ID NO: 301 KVS SEQ ID NO: 302 SQSTHVPPLT
13-E4-G9-A4 VH SEQ ID NO: 305 GFTFITYA SEQ ID NO: 306 ISGGGIDT SEQ ID NO: 307 TRQGSQGWGAMDY
   VL SEQ ID NO: 308 SRVSF SEQ ID NO: 309 ETS SEQ ID NO: 310 QQWSSNPLT
20-A2-D10-G8 VH SEQ ID NO: 313 GYTFTDYT SEQ ID NO: 314 ISTYYGNT SEQ ID NO: 315 ARASYGSGYGPYYWYFDV
   VL SEQ ID NO: 316 EKIYSY SEQ ID NO: 317 NAN SEQ ID NO: 318 QHHYGSPVT
3-F2-E7-F9 VH SEQ ID NO: 321 GYTFTDYT SEQ ID NO: 322 ISTYYGNT SEQ ID NO: 323 ARASYGSGYGPYYWYFDV
   VL SEQ ID NO: 324 EKIYSY SEQ ID NO: 325 NAN SEQ ID NO: 326 QHHYGTPVT
6-D8-E7-A11 VH SEQ ID NO: 329 GYTFTNYW SEQ ID NO: 330 IHPNSGTT SEQ ID NO: 331 AGYYGSSFSWFTY
   VL SEQ ID NO: 332 TGAVTTSNF SEQ ID NO: 333 GTS SEQ ID NO: 334 ALWYSTHYV
21-B3-B1-H5 VH SEQ ID NO: 337 GYIFRNYG SEQ ID NO: 338 INSYTGKP SEQ ID NO: 339 ARDDGYWYTMDY
   VL SEQ ID NO: 340 QSLVHSNGHTY SEQ ID NO: 341 KVS SEQ ID NO: 342 SQSTHVPWT
9-E8-F9-C10、10-G6-C4-B2、18-F9-D8-G7、9-G2-H6-E4、20-F8-B5-G2、30-C7-C11-D4、23-F10-G4-F11、6-H11-G5-D8、27-E7-D8-C7、30-E2-G7-G7、5-D1-G6-D9、3-C2-C3-E7、11-G10-B4-B11、16-C6-F7-F5、22-E11-C3-F2、24-C10-F9-G7、25-C8-D7-C5、4-D5-B9-B11、10-B9-D10-A12、15-G1-D1-E3、8-B4-F5-E11、6-F3-G2-G1、9-B9-H11-G7、9-G12-D6-A11、13-A8-C4-G1、15-C8-B5-G7、28-G2-E6-B10、3-G7-D8-D3、14-E7-G9-D4、20-C5-D7-D3、8-C3-E3-F3、2-A7-B10-A3、26-D2-D6-B12、11-C12-F4-F6、16-G3-D10-C10、27-F8-E10-E11、7-E1-F8-F6、25-D3-G4-C6、13-E4-G9-A4、20-A2-D10-G8、3-F2-E7-F9、6-D8-E7-A11及21-B3-B1-H5之重鏈或輕鏈可變區序列在表2中提供。
表 2. 抗 CD276 抗體之可變區序列
純系 VH VL
9-E8-F9-C10 SEQ ID NO: 7 EVQLQQSGAELVRPGTSVKISCKASGYAFSDYWLSWVKQRPGHGLEWIGDICPGSGNIYYNERFKDKVILTADRSSSTAYLQFSSLTSEDSVVYFCTRLITRVIDYWGQGTSVTVST SEQ ID NO: 8 ENVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVNYMHWYQQKSSTSPKLWIYDTSKLSSGVPGRFSGSGSGNSYSLTISSMEAEDVATYYCFQGSGYPLTFGAGTKLELK
10-G6-C4-B2 SEQ ID NO: 15 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTLSDYYMSWVRQPPGKAPEWLGFMRNKANGYTTEYSASVRGRFTISRDTSQSIIYLQMNTLRAEDGATYYCVRDRDGRPFAYWGQGTLVTVSA SEQ ID NO: 16 DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSINQKNFLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAIYYCQNDYTYPLTFGTGTKLELK
18-F9-D8-G7 SEQ ID NO: 23 EVQLQQSGPELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYAMHWVKQSHAQSLEWIGIINTYSGDTNYNQKFKGKATMTVDKSSSTAYMGLARLTSEDSAIFYCARGGGNYPYWYFDVWGAGTTVTVSS SEQ ID NO: 24 ENVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCRASSSVSSSYLHWYQQKSGDSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSVEAEDAATYYCQQFSVYPLTFGAGTKLEIK
9-G2-H6-E4 SEQ ID NO: 31 EVQLQQSGPDLVKPGASVKISCKASGYSFTGYFMNWVKQRHGKSLEWIGYINPNNGDTIYNQKFKGKATLTVDKSSSTAHMELLSLTSEDSAVYYCGRGGLPFGALDYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 32 DIVMSQSPSSLAVSVGEKVNMSCKSSQSLLYSRNQKNYLAWNQQKPGQSPKLLIYWASARESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAAYYCQQYHSYPYTFGGGTKLELK
20-F8-B5-G2 SEQ ID NO: 39 EVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCSVTGDSITSAYWNWIRKFPGNKLEYMGYISNSGSTYYNPSLKSRISITRDTSKNQYYLQLNSVTTEDTGTYYCVRGERYYGYGAYWGQGTLVTVSA SEQ ID NO: 40 DIVMTQATPSVPVTPGESISISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGAGTKLELK
30-C7-C11-D4 SEQ ID NO: 47 EVQLVESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYISHSGSTSYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCARSLGRRWYFDVWGAGTTVTVSS SEQ ID NO: 48 DIVMTQSPSSLAMSVGQKVTLSCKSSQSLLNSSTQKNYLAWYQQKPGQSPKLLVYFASTRDSGVPDRFIGSGSGTEFTLTISSVQAEDLADYFCQQHYIIPFTFGAGTKLEIK
23-F10-G4-F11 SEQ ID NO: 55 EVQLQESGPDLVRPGALVKLSCKSSGFNIKDYPIHWVRQRPEQGLEWIGWFDPDNGNVIYDPRFQGKASITADTSSNTAYLQLNSLTSEDTAVYYCSSPYGAMDYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 56 QIVLTQSPEIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYIHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTIRSMEAEDAATYYCQQGSSNPRTFGGGTKLEIK
6-H11-G5-D8 SEQ ID NO: 63 EVQLQESGPELVKPGTSVKLSCKASGYTFTSYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGNGDTYYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCARDLRLGTFDYWGQGTTLTVSS SEQ ID NO: 64 QIVLTQSPEIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYIHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTIRSMEAEDAATYYCQQGSSNPRTFGGGTKLELK
27-E7-D8-C7 SEQ ID NO: 71 EVQLQESGPELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYAMHWVKQSHAKSLEWIGVINTYSDNTNYNRKFKGKATMTVDKSSSTAYMELARLTSEDSAIYYCARGLLLRSQLGVYFDYWGQGTTLTVSS SEQ ID NO: 72 QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYMHWYQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSSNPWTFGGGTKLEIK
30-E2-G7-G7 SEQ ID NO: 79 EVQLQESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSYYAMSWVRQTPEKRLEWVATINGDGSHTYYPDSVRGRFTISRDNAKNTLYLQVSSLRSEDTAMYYCASLLQLGPFWGQGTTLTVSS SEQ ID NO: 80 DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYHQRPGQSPKPLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYNNYPLTFGSGTKLEIK
5-D1-G6-D9 SEQ ID NO: 87 EVQLQESGAELVKPGASVKLSCKTSGLTFSTNYISWLKQKPGQSLEWIAWIYGGNGGTSYNQRFTGKAQLTVDTSSSTAYMQFSSLTTEDSAIYYCTSHDYYGGPMDYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 88 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYFTSRLHSGVPSRFSASGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQTNTLPWTFGGGTKLEIK
3-C2-C3-E7 SEQ ID NO: 95 EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGYTFTENTMHWVKQSHGKRLEWIGGINPNTGGTTYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARRGTNWEHWYFDVWGAGTTVTVSS SEQ ID NO: 96 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPLTFGAGTKLELK
11-G10-B4-B11 SEQ ID NO: 103 DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYISYSGSTSYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCARGGPWFAYWGQGTLVTVSA SEQ ID NO: 104 DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPFTFGSGTKLEIK
16-C6-F7-F5 SEQ ID NO: 111 QIQLVQSGPEVKKPGETVKISCKASGYTFTKYGINWVKQAPGEGLKWMGWIWTYTGKPTYGDDFKGRFAFSLETSASTAYLQISDLKIEDMATYFCARDDGYYYTMNYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 112 DIVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLLHTNGDTYLHWYLQKAGQPPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHIPWTFGGGTKLEIK
22-E11-C3-F2 SEQ ID NO: 119 QIQLVQSGPELKRPGETVKISCKASGYSFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINPYTGEPTYADDFKGRFAMSLETSASAAYLQINNLKNEDMATYFCGRDDGYHYTMNYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 120 DVVMTQPPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLIHSNGDTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSIRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTYVPWTFGGGTKLEIK
24-C10-F9-G7 SEQ ID NO: 127 EVQLQESGPELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDHTMHWVKESHAQSLEWIGVISTYYGNTNYNQNFKGKATLTVDKSSSTAYMELAGLTSEDSAIYYCARASYGSGYGPYYWYFDVWGAGTTVTVSS SEQ ID NO: 128 DIQMTQSPASLFASVGETVTITCRASEKIYSYLAWYFQKQGKSPQFLVYNANALAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGTYYCQHHYGTPVTFGAGSKLELK
25-C8-D7-C5 SEQ ID NO: 135 EVQLQESGGGLVKPGGSLKFSCAASGFTFSTYAMSWVRQTPEKRLEWVATISGGGIDTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRSEDTAMYYCARQGSKGWGAMDYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 136 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCRASSSVSFMHWYQQKSGTSPKRWIYETSKLASGVPDRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPLTFGAGTKLELK
4-D5-B9-B11 SEQ ID NO: 143 EIGGLVKPGGSLKFSCAASGFTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVATISGGGIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARQGSKGWDAMDYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 144 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCRASSSVSFMHWYQQKSGTSPKRWIYETSKLASGVPDRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPLTFGAGTKLELK
10-B9-D10-A12 SEQ ID NO: 151 EVQLQESGPELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYTMHWVKLSHAKSLEWIGVISTYYGNTNYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELARLTSEDSAIYYCARASYGSGYGPYYWYFDVWGAGTTVTVSS SEQ ID NO: 152 DIQMTQSPASLFASVGETVTITCRASEKIYSYLAWYFQKQGKSPQFLVYNANALAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGTYYCQHHYGTPVTFGAGSKLELK
15-G1-D1-E3 SEQ ID NO: 159 QVQLQQPGAELVKPGTSVKLSCKASGYTFTSYWIHWVKQRPGQGLEWIGMIHPKSGTVDYNEKFKSKATLTADKSSNTAYMQLSSLTSEASVVYYCARGENYDYRPQFVYWGQGTLVTVSA SEQ ID NO: 160 QLVLTQSSSASFSLGASAKLTCTLSSQHSTYTIEWYQQQPLKPPKYVMELKKDGSHRTGDGIPDRFSGSSSGADRYLSISNIQPEDEAIYICGVGDTIKEQFVYVFGGGTKVTVL
8-B4-F5-E11 SEQ ID NO: 167 QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGDTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIHPDSGTRNYNEKVMSKATLNVDKSSSTAYLHLSSLTSEDSAVYYCSRSYGSRLAWFAYWGQGTLVTVSA SEQ ID NO: 168 QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNFANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAVYFCALWYTNHFIFGSGTKVTVL
6-F3-G2-G1 SEQ ID NO: 175 QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASDYTFTNYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIHPNSGTTSYNEKFKNKATLTVDTSSATTYMHLSSLTSEDSAVYYCASHYGNSYSAMDYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 176 QAVVTQESALTTSPGGTVILTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTSNRAPGVPVRFSGSLIGDKAALTITGAQTEDDAMYFCALWYSTHYVFGGGTKVTVL
9-B9-H11-G7 SEQ ID NO: 183 DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSITSGYYWNWIRQFPGNKLEWMVYISYDGTNNYNPSLKNRISITRDTSKNQFFLKLNSVTTEDTATYYCARGDSNSYYFDYWGQGTTLTVSS SEQ ID NO: 184 QAVVTQESALTTSPGGTVILTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTSNRAPGVPVRFSGSLIGDKAALTITGAQTEDDAMYFCALWYRTHYVFGGGTKVTVL
9-G12-D6-A11 SEQ ID NO: 191 DVQLQVSGPGLVKPSQSLSLTCSVAGYSITSDYYWNWIRQFPGNKLEWMGYISYDGTNNYNPSLKNRISITRDTSKGQFFLKFNSVTTEDTATYYCARGKDGSYYFDYWGQGTTLTVSS SEQ ID NO: 192 QAVVTQESALTTSPGGTVILTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTSNRAPGVPVRFSGSLIGDKAALTITGAQTEDDAMYFCALWYRTHYVFGGGTMVTVL
13-A8-C4-G1 SEQ ID NO: 199 QVQLQQPGAELVKPGASMKLSCKASGYIFTSNWMHWVKQRPGQGLEWIGMIHPNSGTTSYNEKFKNKAKLTVDKSSSTAYVQLSSLTSEDSAVYYCAGPTTTRRFYPMDYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 200 QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHFIFGSGTKVTVL
15-C8-B5-G7 SEQ ID NO: 207 QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASDYTFTSHWMHWVKQRPGQGLEWIGMIHPNSGTTHYNENFKNKATLTVDNSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAWGSSNSYFYAMAYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 208 QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPAHLFTGLIGGTNNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWFSNHLVFGGGTKLTVL
28-G2-E6-B10 SEQ ID NO: 215 QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIHPNSDTTDYNEKFKTKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVFYCARGGLGPHYFVYWGQGTTLTVSS SEQ ID NO: 216 QAVVTQESALTTSPGGTVILTCRSSTGAVTTSNYASWVQEKPDHLFTGLIGGTSNRAPGVPVRFSGSLIGDKAALTITGAQTEDDAMYFCALWYSPHYVFGGGTKVTVL
3-G7-D8-D3 SEQ ID NO: 223 QVQLQQSGAELARPGTSVKLSCKASGYTFTTYWIQWVKQRPGQGLEWIGAIYPGDGDTRYTQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSTLASEDSAVYYCARPYDGYYIDYPMDSWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 224 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSRINYMHWYQQKPGTSPIIWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCHQRSSYPFTFGSGTKLEIK
14-E7-G9-D4 SEQ ID NO: 231 EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTNYIMHWVKQKPGQGLEWIGYINPYNDGIKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCTRWGNYVFYYTMDYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 232 QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYMHWYQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSGNPPLTFGAGTKLELK
20-C5-D7-D3 SEQ ID NO: 239 EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFRSYGMSWVRQTPDKRLEWVATISGGGNYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCARHEGLPLDYWGQGTTLTVSS SEQ ID NO: 240 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGNFYCQHHYGTPTWTFGGGTKLEIK
8-C3-E3-F3 SEQ ID NO: 247 EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSNYGLSWVRLTPDKRLEVVATIGSYGGNTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAIYYCARDIYYGNSEAWFAYWGQGTLVTVSA SEQ ID NO: 248 DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSSSGSETDFTLRISRVEAEDVGVYYCAQNLELPWTFGGGTKLEIK
2-A7-B10-A3 SEQ ID NO: 255 QVQLQQSGAELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYAMHWVKQSHAKSLEWIGVINTNYVNTSYNQKFKGKATMTVDKSSSTAFMELARLTSEDSAIYYCARGGKYGNYVFFFAYWGQGTLVTVSA SEQ ID NO: 256 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIK
26-D2-D6-B12 SEQ ID NO: 263 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYIFRNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINSYTGKPTYVDDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARDDGYWYTMDYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 264 DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGHTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPWTFGGGTKLEIK
11-C12-F4-F6 SEQ ID NO: 271 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRNFGMNWVKQGPGKGLKWMGWINPYTGEPTYVGDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARDDGYWYTMDYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 272 DVVMTQTPPSLPVSLGDQASIPCRSSQSLVHSNGITYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPWTFGGGTKLEIK
16-G3-D10-C10 SEQ ID NO: 279 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRNYGMNWVKQGPGKDLKWMGWINPYTGEPTYIGDFKGRFAFSLETSANSAYLQINNLNNEDMATYFCARDDGYWYTMDYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 280 DVVMTQTPPSLPVSLGDQASIPCRSSQSLVHSNGITYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPWTFGGGTKLEIK
27-F8-E10-E11 SEQ ID NO: 287 EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGYTFTEYAMHWVKQSHGKILEWIGGINPNIGGTTYNQKFKDKATLTVDKSSSTASMELRSLTSEDSAVYYCARFLVPSTEGFTYWGQGTLVTVSA SEQ ID NO: 288 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSRVASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPLTFGAGTKLELK
7-E1-F8-F6 SEQ ID NO: 295 QVQLQQSGPELVKPGASVQMSCKASGYTFTDYVISWVNQRTGQGLEWIGEIYPRSGNTYYNEKFKGKATLTADKSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARFDIAYSFDYWGQGTTLTVSS SEQ ID NO: 296 DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSTQSLVHSNGVTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQGTHVPWTFGGGTKLEIK
25-D3-G4-C6 SEQ ID NO: 303 EIQLQQTGPELVKPGASVKISCKASGYSFTDYIILWVKQSHGMSLEWIGNINPYYNSTYYNLKFKGKATLTVDKSSSTAYMQLDSLTSEDSAVYYCARDSFDWYFGVWGAGTTVTVSS SEQ ID NO: 304 DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVETEDLGIYFCSQSTHVPPLTFGAGTKLELK
13-E4-G9-A4 SEQ ID NO: 311 EVMLVESGGGLVKPGGSLKFSCAASGFTFITYAMSWVRQTPEKRLEWVATISGGGIDTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQVNSLRSEDTAMYYCTRQGSQGWGAMDYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 312 QIVLTQSPPIMSASPGERVTMTCRASSRVSFMHWYQQKSGTSPRRWIYETSKLASGVPDRFSGSVSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPLTFGAGTKLELK
20-A2-D10-G8 SEQ ID NO: 319 QVQLQQSGPELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYTMHWVKESHAQSLEWIGVISTYYGNTNYNQNFKGKATLTVDKSSSTAYMELAGLTSEDSAIYYCARASYGSGYGPYYWYFDVWGAGTTVTVSS SEQ ID NO: 320 DIQMTQSPASLFASVGETVTITCRASEKIYSYLAWYFQKQGKSPQFLVYNANALAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKIKSLQPEDFGTYYCQHHYGSPVTFGAGSKLELK
3-F2-E7-F9 SEQ ID NO: 327 QVQLQQSGPELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYTMHWVKESHAKSLEWIGVISTYYGNTNYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELAGLTSEDSAIYYCARASYGSGYGPYYWYFDVWGAGTTVTVSS SEQ ID NO: 328 DIQMTQSPASLFASVGETVTITCRASEKIYSYLAWYFQKQGKSPQFLVYNANALAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGTYYCQHHYGTPVTFGAGSKLELK
6-D8-E7-A11 SEQ ID NO: 335 QVHLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTNYWMHWVKRRPGQGLEWIGMIHPNSGTTSFNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAGYYGSSFSWFTYWGQGTLVTVSA SEQ ID NO: 336 QAVVTQESALTTSPGGTVILTCRSSTGAVTTSNFANWVQEKPDHLFTGLIGGTSNRAPGVPVRFSGSLIGDKAALTITGAQTEDDAMYFCALWYSTHYVFGGGTKVTVL
21-B3-B1-H5 SEQ ID NO: 343 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYIFRNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINSYTGKPTYVDDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARDDGYWYTMDYWGQGTSVTVSS SEQ ID NO: 344 DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGHTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPWTFGGGTKLEIK
已知CDR負責抗原結合，然而，已發現並非所有6個CDR均為必不可少的或不可改變的。換句話說，有可能替換或改變或修飾抗CD276抗體9-E8-F9-C10、10-G6-C4-B2、18-F9-D8-G7、9-G2-H6-E4、20-F8-B5-G2、30-C7-C11-D4、23-F10-G4-F11、6-H11-G5-D8、27-E7-D8-C7、30-E2-G7-G7、5-D1-G6-D9、3-C2-C3-E7、11-G10-B4-B11、16-C6-F7-F5、22-E11-C3-F2、24-C10-F9-G7、25-C8-D7-C5、4-D5-B9-B11、10-B9-D10-A12、15-G1-D1-E3、8-B4-F5-E11、6-F3-G2-G1、9-B9-H11-G7、9-G12-D6-A11、13-A8-C4-G1、15-C8-B5-G7、28-G2-E6-B10、3-G7-D8-D3、14-E7-G9-D4、20-C5-D7-D3、8-C3-E3-F3、2-A7-B10-A3、26-D2-D6-B12、11-C12-F4-F6、16-G3-D10-C10、27-F8-E10-E11、7-E1-F8-F6、25-D3-G4-C6、13-E4-G9-A4、20-A2-D10-G8、3-F2-E7-F9、6-D8-E7-A11及21-B3-B1-H5中一或多個CDR，但基本上保留對CD276之特異性結合親和力。
在某些實施例中，本文提供之抗CD276抗體及抗原結合片段包含抗CD276抗體9-E8-F9-C10、10-G6-C4-B2、18-F9-D8-G7、9-G2-H6-E4、20-F8-B5-G2、30-C7-C11-D4、23-F10-G4-F11、6-H11-G5-D8、27-E7-D8-C7、30-E2-G7-G7、5-D1-G6-D9、3-C2-C3-E7、11-G10-B4-B11、16-C6-F7-F5、22-E11-C3-F2、24-C10-F9-G7、25-C8-D7-C5、4-D5-B9-B11、10-B9-D10-A12、15-G1-D1-E3、8-B4-F5-E11、6-F3-G2-G1、9-B9-H11-G7、9-G12-D6-A11、13-A8-C4-G1、15-C8-B5-G7、28-G2-E6-B10、3-G7-D8-D3、14-E7-G9-D4、20-C5-D7-D3、8-C3-E3-F3、2-A7-B10-A3、26-D2-D6-B12、11-C12-F4-F6、16-G3-D10-C10、27-F8-E10-E11、7-E1-F8-F6、25-D3-G4-C6、13-E4-G9-A4、20-A2-D10-G8、3-F2-E7-F9、6-D8-E7-A11及21-B3-B1-H5之一的重鏈CDR3序列。在某些實施例中，本文提供之抗CD276抗體及抗原結合片段包含選自由以下組成之群的重鏈CDR3序列：SEQ ID NO: 3、11、19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107、115、123、131、139、147、155、163、171、179、187、195、203、211、219、227、235、243、251、259、267、275、283、291、299、307、315、323、331及339。重鏈CDR3區位於抗原結合位點之中心，因此認為其與抗原接觸最多，並為抗體與抗原之親和力提供最多的自由能。還認為重鏈CDR3為迄今為止藉由多個多樣化機制在長度、胺基酸組成及構象態樣最多樣的抗原結合位點之CDR (Tonegawa S.《自然》。302:575-81)。重鏈CDR3之多樣性足以產生大多數抗體特異性(Xu JL、Davis MM.《免疫(Immunity.)》。13:37-45)以及期望之抗原結合親和力(Schier R等《分子生物學雜誌》。263:551-67)。
在某些實施例中，本文提供之抗體及/或其抗原結合片段包含合適之框架區(FR)序列，只要抗體及/或其抗原結合片段能夠特異性結合CD276。表1中提供之CDR序列為自小鼠抗體中獲得的，但可使用本領域已知之合適方法，諸如重組技術，將其移植至諸如小鼠、人類、大鼠、兔等之任何合適物種之任何合適FR序列中。
在某些實施例中，本文提供之抗體及/或其抗原結合片段為人源化的。人源化抗體或抗原結合片段在其降低人類之免疫原性態樣為合乎需要的。人源化抗體在其可變區中為嵌合的，因為非人類CDR序列被移植至人或基本上人FR序列。基本上可藉由用人類免疫球蛋白基因中相應之人類CDR基因取代非人類(如鼠類) CDR基因來進行抗體或抗原結合片段之人源化(參見，例如，Jones等人(1986)《自然》321:522-525; Riechmann等人(1988)《自然》332:323-327; Verhoeyen等人(1988)《科學(Science)》239:1534-1536)。
可使用本領域中已知之方法選擇合適之人重鏈及輕鏈可變域以實現此目的。在一個說明性實例中，可使用「最佳擬合(best-fit)」之方法，其中非人類(例如，嚙齒動物)抗體可變域序列為對照已知人類可變域序列之資料庫進行篩選或搜尋(BLAST)，並且最接近非人類查詢序列之人類序列被找至並用作移植非人類CDR序列之人類支架(參見，例如，Sims等人，(1993)《免疫學雜誌(J. Immunol.)》151:2296；Chothia等人(1987)《分子生物學雜誌》196:901)。可替代地，源自所有人類抗體共有序列之框架可用於非人類CDR之移植(參見，例如，Carter等人(1992)《美國國家科學院院刊》，89:4285；Presta等人(1993)《免疫學雜誌》，151:2623)。在某些實施例中，本文提供之人源化抗體或抗原結合片段基本上由除非人類CDR序列之外之所有人類序列構成。在一些實施例中，可變區FR及恆定區若存在則完全或基本上來自人類免疫球蛋白序列。人類FR序列及人類恆定區序列可源自不同的人類免疫球蛋白基因，例如FR序列源自一種人類抗體，且恆定區源自另一人類抗體。
在某些實施例中，本文提供之抗CD276抗體及其片段進一步包含免疫球蛋白恆定區。在一些實施例中，免疫球蛋白恆定區包含重鏈及/或輕鏈恆定區。重鏈恆定區包含CH1、鉸鏈及/或CH2-CH3區。在某些實施例中，重鏈恆定區包含Fc區。在某些實施例中，輕鏈恆定區包含Cκ或Cλ。
在一些實施例中，本文提供之抗CD276抗體及其抗原結合片段具有免疫球蛋白(Ig)、視情況人類Ig、視情況人類IgG之恆定區。在一些實施例中，本文提供之抗CD276抗體及其抗原結合片段包含人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之恆定區。
人類IgG同種型(成熟丙種球蛋白G類抗體之亞類；IgG1、IgG2、IgG3及IgG4)表現出不同的募集效應功能之能力。例如，ADCC由IgG1及IgG3促進，ADCP由IgG1、IgG2、IgG3及IgG4促進，CDC由IgG1及IgG3促進。此類效應功能之同種型特異性結合係基於不同免疫細胞上Fc受體之選擇性及結合C1q之能力，從而激活膜攻擊複合物(MAC)之裝配。在各種同種型中，IgG1及IgG3對Fcγ受體(包括FcγRI、FcγRIIa/b/c及FcγRIIIa/b)之相對親和力較高。然而，除了FcγRIIa H131多態性之外，IgG2對Fcγ之親和力相當低，並且IgG4僅對FcγRI具有可量測之親和力。
在某些實施例中，本文提供之抗CD276抗體及其抗原結合片段包含人類IgG1同種型之恆定區，其可誘導ADCC、CDC或ADCP，或者IgG4或IgG2同種型之恆定區，其具有降低或耗盡之效應功能。諸如ADCC及CDC之效應功能可導致對表現CD276之細胞之細胞毒性。可藉由各種分析，諸如Fc受體結合分析、C1q結合分析及細胞裂解分析，評估效應功能。
在某些實施例中，本文提供之抗CD276抗體及其抗原結合片段包含小鼠IgG2同種型之恆定區，其可誘導ADCC、CDC或ADCP。
抗體變體本公開還涵蓋本文提供之抗體及/或其抗原結合片段之各種變體。在某些實施例中，本公開涵蓋本文提供之示例性抗體的各種類型之變體，亦即具有選自由以下組成之群的重鏈CDR3序列之抗體：SEQ ID NO: 3、11、19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107、115、123、131、139、147、155、163、171、179、187、195、203、211、219、227、235、243、251、259、267、275、283、291、299、307、315、323、331或339。
在某些實施例中，抗體變體包含表1中提供之一或多個CDR序列、一或多個FR序列、表2中提供之重鏈或輕鏈可變區序列及/或恆定區(例如，Fc區)中之一或多個修飾或取代。此類變體保留了對其親本抗體之CD276的特異性結合親和力，但具有一或多種由修飾或取代賦予之期望性質。例如，抗體變體可具有改善之抗原結合親和力、改善之糖基化模式、降低之糖基化風險、降低之脫胺基作用、降低之或耗盡之效應功能、改善之FcRn受體結合、增加之藥代動力學半衰期、pH敏感性及/或與共軛之相容性(例如，一或多個引入之半胱胺酸殘基)。
可使用本領域中已知之方法，例如「丙胺酸掃描誘變」(參見例如Cunningham及Wells (1989)《科學》, 244:1081-1085)來篩選親本抗體序列以識別合適之或較佳之殘基以進行修飾或取代。簡而言之，目標殘基(例如，帶電荷之殘基，諸如Arg、Asp、His、Lys及Glu)可被鑑定並被中性或帶負電荷之胺基酸(例如，丙胺酸或聚丙胺酸)所置換，並且產生經修飾之抗體並針對所關注之性質進行篩選。若在特定胺基酸位置之取代顯示出所關注之功能變化，則該位置可被識別為進行修飾或取代之潛在殘基。潛在之殘基可藉由用不同類型之殘基(例如，半胱胺酸殘基、帶正電荷之殘基等)取代來進一步評估。
親和力變體親和力變體可含有表1中提供之一或多個CDR序列、一或多個FR序列或表2中提供之重鏈或輕鏈可變區序列中之修飾或取代。親和力變體保留對親本抗體之CD276之特異性結合親和力，或者甚至具有與親本抗體相比改善之CD276特異性結合親和力。在某些實施例中，CDR序列、FR序列或可變區序列中之取代中之至少一個(或全部)包含保守取代。
本領域技術人員將理解，在表1提供之CDR序列及FR序列中，一或多個胺基酸殘基可被取代，但所得抗體或抗原結合片段仍保留對CD276之結合親和力，或者甚至具有改善之結合親和力。此項技術中已知之各種方法可用於實現此目的。例如，抗體變體(諸如Fab或scFv變體)之文庫可用噬菌體展示技術產生及表現，然後篩選與人類CD276之結合親和力。又例如，電腦軟體可用於虛擬類比抗體與人類CD276之結合，並鑑定抗體上形成結合界面之胺基酸殘基。此類殘基可避免進行取代以便防止結合親和力之降低，或作為取代之目標以實現較強結合。
在某些實施例中，本文提供之人源化抗體或抗原結合片段包含一或多個CDR序列及/或一或多個FR序列中之一或多個胺基酸殘基取代。在某些實施例中，親和力變體總共在CDR序列及/或FR序列中包含不超過10個、9個、8個、7個、6個、5個、4個、3個、2個或1個取代。
在某些實施例中，抗CD276抗體及其抗原結合片段包含1個、2個或3個CDR序列，其與表1中列出之序列具有至少80% (例如，至少85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%)之序列同源性，同時保持與其親本抗體相似或甚至更高位準之對CD276之結合親和力。
在某些實施例中，抗CD276抗體及其抗原結合片段包含一或多個可變區序列，其與表1中列出之序列具有至少80% (例如，至少85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%)之序列同源性，同時保持與其親本抗體相似或甚至更高位準之對CD276之結合親和力。在一些實施例中，在選自表1中列出之序列之序列中，總共有1至10個胺基酸被取代、插入或缺失。在一些實施例中，取代、插入或缺失發生在CDR之外的區域(亦即，在FR中)。
糖基化變體本文提供之抗CD276抗體及抗原結合片段亦涵蓋糖基化變體，其可被獲得以增加或減少抗體或其抗原結合片段之糖基化程度。
抗體或其抗原結合片段可包含一或多個胺基酸殘基，其側鏈上可連接碳水化合物部分(例如，寡糖結構)。抗體之糖基化通常為N-連接型或O-連接型。N-連接型係指碳水化合物部分與天冬醯胺殘基(例如，三肽序列，諸如天冬醯胺-X-絲胺酸及天冬醯胺-X-蘇胺酸中之天冬醯胺殘基，其中X為除脯胺酸外之任何胺基酸)之側鏈之連接。O-連接型糖基化係指糖N-乙醯基半乳糖胺、半乳糖或木糖中之一種與羥基胺基酸之連接，最常見地與絲胺酸或蘇胺酸之連接。原生糖基化位點之移除可方便地實現，例如藉由改變胺基酸序列以使得上文所描述之三肽序列中之一個(對於N-連接型糖基化位點)或序列中存在之絲胺酸或蘇胺酸殘基(對於O-連接型糖基化位點)被取代來實現。可以類似方式，藉由引入此類三肽序列或絲胺酸或蘇胺酸殘基來產生新之糖基化位點。
半胱胺酸工程化之變體本文提供之抗CD276抗體及抗原結合片段亦涵蓋半胱胺酸工程化之變體，其包含一或多個引入之游離半胱胺酸胺基酸殘基。
游離半胱胺酸殘基不為二硫橋鍵之一部分。半胱胺酸工程化之變體可用於在工程化之半胱胺酸位點處，藉由例如順丁烯二醯亞胺或鹵代乙醯基與尤其例如細胞毒性及/或成像化合物、標記或放射性同位素結合。用於工程化抗體或抗原結合片段以引入游離半胱胺酸殘基之方法為本領域已知的，參見，例如WO2006/034488。
Fc 變體本文提供之抗CD276抗體及抗原結合片段亦涵蓋Fc變體，其在其Fc區及/或鉸鏈區包含一或多個胺基酸殘基修飾或取代。
在某些實施例中，抗CD276抗體或抗原結合片段包含一或多個胺基酸取代，其改善與新生兒Fc受體(FcRn)之pH依賴性結合。此類變體可具有延長的藥物動力學半衰期，因為其在酸性pH下與FcRn結合，使其避免在溶酶體中降解，並且接著轉位並自細胞釋放出來。工程化抗體及其抗原結合片段以提高與FcRn之結合親和力的方法為本領域眾所周知的，參見，例如，Vaughn, D.等人，《結構(Structure)》，6(1):63-73，1998；Kontermann, R.等人，《抗體工程(Antibody Engineering)》，第1卷，第27章：《工程化Fc區以改善PK(Engineering of the Fc region for improved PK)》，由斯普林格出版社(Springer)出版，2010；Yeung, Y.等人，《癌症研究(Cancer Research)》，70:3269-3277 (2010)；及Hinton, P.等人，《免疫學雜誌》，176:346-356 (2006)。
在某些實施例中，抗CD276抗體或抗原結合片段包含一或多個改變抗體依賴之細胞毒性(ADCC)之胺基酸取代。在Fc區之CH2域處之某些胺基酸殘基可經取代以提供增強之ADCC活性。可替代地或另外地，可改變抗體上之碳水化合物結構以增強ADCC活性。藉由抗體工程化來改變ADCC活性之方法在本領域已有描述，參見，例如Shields RL.等人，《生物化學雜誌(J Biol Chem.)》2001，276(9):6591-604；Idusogie EE.等人，《免疫學雜誌》2000，164(8):4178-84；Steurer W.等人，《免疫學雜誌》1995，155(3):1165-74；Idusogie EE.等人，《免疫學雜誌》2001，166(4):2571-5；Lazar GA.等人, 《美國國家科學院院刊》，2006，103(11):4005-4010；Ryan MC.等人，《分子癌症治療(Mol.Cancer Ther.)》，2007，6:3009-3018；Richards JO.等人，《分子癌症治療》2008，7(8):2517-27；Shields R. L.等人，《生物化學雜誌》，2002，277:26733-26740；Shinkawa T.等人，《生物化學雜誌》, 2003, 278:3466-3473。
在某些實施例中，抗CD276抗體或抗原結合片段包含一或多個胺基酸取代，其改變補體依賴之細胞毒性(CDC)，例如，藉由改善或減少C1q結合及/或CDC (參見，例如，WO99/51642；Duncan及Winter《自然》322:738-40 (1988)；美國專利第5,648,260號、美國專利號第5,624,821號)；及關於Fc區變體之其他實例之WO94/29351)。
在某些實施例中，抗CD276抗體或其抗原結合片段在Fc區之界面中包含一或多個胺基酸取代以方便及/或促進異二聚化。此等修飾包含將突起引入至第一Fc多肽中及將空腔引入至第二Fc多肽中，其中突起可定位在空腔中以便促進第一Fc多肽及第二Fc多肽之相互作用以形成雜二聚體或複合物。產生具有此等修飾之抗體之方法為本領域已知的，例如，如美國專利第5,731,168號所描述。
抗原結合片段本文亦提供抗CD276抗原結合片段。各種類型之抗原結合片段為本領域已知的，並且可基於本文提供之抗CD276抗體來開發，包括，例如，其CDR及FR序列顯示在表1中之示例性抗體及其不同變體(諸如親和力變體、糖基化變體、Fc變體、半胱胺酸工程化之變體等)。
在某些實施例中，本文提供之抗CD276抗原結合片段為駱駝化單域抗體、雙抗體、單鏈Fv片段(scFv)、scFv二聚體、BsFv、dsFv、(dsFv) 2、dsFv-dsFv'、Fv片段、Fab、Fab'、F(ab')2、雙特異性抗體、ds雙抗體、奈米抗體、域抗體、單域抗體或二價域抗體。
各種技術可用於產生此類抗原結合片段。說明性方法包括，完整抗體之酶消化(參見，例如，Morimoto等人，《生物化學及生物實體方法雜誌(Journal of Biochemical and Biophysical Methods)》24:107-117 (1992)；及Brennan等人，《科學》，229:81 (1985))，藉由諸如大腸桿菌之宿主細胞之重組表現(例如，對於Fab、Fv及ScFv抗體片段)，自如上所討論之噬菌體展示文庫中篩選(例如，對於ScFv)，及兩個Fab'-SH片段之化學偶聯以形成F(ab') 2片段(Carter等人，《生物/技術(Bio/Technology)》10:163-167 (1992))。生產抗體片段之其他技術對熟練之自業者來說將為顯而易見的。
在某些實施例中，抗原結合片段為scFv。scFv之產生描述於，例如，WO 93/16185；美國專利第5,571,894號；及第5,587,458號。scFv可在胺基或羧基末端與效應蛋白融合以提供融合蛋白質(參見，例如，《抗體工程》，由Borrebaeck編輯)。
雙特異性抗體、多特異性抗體在某些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段為二價、四價、六價或多價的。在某些實施例中，本文提供之抗體及/或其抗原結合片段為單特異性的或雙特異性的。
本文使用之術語「價」係指給定分子中存在特定數量之抗原結合位點。因此，術語「二價」、「四價」及「六價」分別表示在抗原結合分子中存在兩個結合位點、四個結合位點及六個結合位點。若兩個結合位點都用於同一抗原或同一表位之特異性結合，則二價分子可為單特異性的。類似地，三價分子可為雙特異性的，例如，當兩個結合位點對第一抗原(或表位)為單特異性的並且第三個結合位點對第二抗原(或表位)特異性時。
在某些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段可為單特異性的，但可為二價、三價或四價的，具有至少兩個對相同抗原或表位特異之結合位點。在某些實施例中，此提供了比單價對應物更強之與抗原或表位之結合。在某些實施例中，在二價抗原結合部分中，結合位點之第一價及結合位點之第二價在結構上相同(亦即，具有相同之序列)，或在結構上不同(亦即，儘管具有相同之特異性，但具有不同的序列)。
在某些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段為雙特異性的。在一些實施例中，本文提供之雙特異性抗體及其抗原結合片段結合CD276之第一及第二表位，其中該CD276之第一及第二表位不同。
在一些實施例中，本文提供之雙特異性抗體或其抗原結合片段結合CD276之第一表位及CD276以外之抗原之第二表位。
本文提供之雙特異性抗體分子可為本領域已知之任何合適之雙特異性的形式。本領域已知參考雙特異性的抗體形式之實例包括但不限於：(i)具有對稱Fc之雙特異性抗體、(ii)具有不對稱Fc之雙特異性抗體、(iii)有額外之抗原結合部分之習知抗體、(iv)雙特異性抗體片段、(v)有額外之抗原結合部分之習知抗體片段、(vi)附加有人類白蛋白或人類白蛋白結合肽之雙特異性抗體。
雙特異性IgG樣抗體(BsIgG)對於每個抗原為單價的，其可藉由在單個宿主細胞中共表現兩條輕鏈及兩條重鏈來產生。藉由在輕鏈或重鏈之胺基或羧基末端附加額外之抗原結合單元，設計附加IgG以形成雙特異性IgG。額外之抗原結合單元可為單域抗體(未配對之VL或VH)，例如DVD-Ig、成對之抗體可變域(例如Fv或scFv)或工程化之蛋白支架。
雙特異性抗體片段為衍生自抗體但缺乏部分或全部抗體恆定域之抗原結合片段。此雙特異性抗體片段之實例包括例如單域抗體、Fv、Fab及雙抗體等。
在某些實施例中，本文提供之雙特異性抗體分子基於「完整」抗體之形式，如完整IgG或IgG樣分子，以及小重組形式，如串聯單鏈可變片段分子(taFv)、ScFv、雙抗體(Db)、單鏈雙抗體(scDb)及此等抗體之各種其他衍生物(參見Byrne H.等(2013)《生物技術趨勢(Trends Biotech)》，31(11)：621-632所描述的雙特異性抗體形式)。雙特異性抗體之實例基於包括但不限於四聚體、化學偶聯Fab (片段抗原結合)及BiTE (雙特異性T細胞結合)之形式。
在某些實施例中，本文提供之雙特異性抗體分子為雙特異性形式，選自包括Triomab；雜交瘤(四價體瘤)；多特異性抗鹽平台(Pieris)；雙抗體；單鏈雙抗體；串聯單鏈Fv片段；TandAbs；三特異性抗體(Affimed)；Darts (雙親和重定位；宏觀基因學(Macrogenics))；雙特異性Xmab (Xencor)；雙特異性T細胞結合物(Bites；Amgen；55kDa)；三體(Triplebodies)；三抗體(Fab-scFv)融合蛋白質(CreativeBiolabs)多功能重組抗體衍生物；Duobody平台(Genmab)；停靠鎖定(dock and lock)平台；杵-臼結構(KIH)平台；人源化雙特異性IgG抗體(REGN1979)(Regeneron)；Mab2雙特異性抗體(F-Star)；DVD-Ig (雙可變域免疫球蛋白)(Abbvie)；κ-λ體；TBTI(四價雙特異性串聯Ig)；及CrossMab。
在某些實施例中，本文提供之雙特異性抗體分子為雙特異性形式，選自包括CrossMab；DAF (二合一)；DAF (四合一)；DutaMab；DT-IgG；共有LC之杵-臼結構；杵-臼結構組件；電荷對；Fab臂交換；SEED體(SEEDbody)；Triomab；LUZ-Y；Fcab；κ-λ體；及垂直Fab之BsIgG。有關雙特異性抗體形式之詳細描述，請參見Spiess C.、Zhai Q.及Carter P.J.(2015)《分子免疫(Molecular Immunology)》 67:95-106，該文獻藉由引用全文併入本文。
在某些實施例中，本文提供之雙特異性抗體分子為雙特異性形式，其選自具有額外抗原結合部分之IgG附加抗體，該額外抗原結合部分包括DVD-IgG；IgG(H)-scFv；scFv-(H)IgG；IgG(L)-scFv；scFv-(L)IgG；IgG(L,H)-Fv；IgG(H)-V；V(H)-IgG；IgG(L)-V；V(L)-IgG；KIH-IgG-scFab；2scFv-IgG；IgG-2scFv；scFv4-Ig；scFv4-Ig；Zybody；及DVI IgG (四合一)(參見前文引文)。
在某些實施例中，本文提供之雙特異性抗體分子之形式選自包含奈米體(Nanobody)；奈米體-HAS；BiTE；雙抗體(Diabody)；DART；TandAb；sc雙抗體；sc-雙抗體-CH3；Diabody-CH3；三體(Triple Body)；微抗體(Miniantibody)；微體(Minibody)；TriBi微體；scFv-CH3-KIH；Fab-scFv；scFv-CH-CL-scFv；F(ab') 2；F(ab') 2-scFv 2；scFv-KIH；Fab-scFv-Fc；四價HCAb；sc雙抗體-Fc；雙抗體-Fc；串聯scFv-Fc；及內體(Intrabody)之雙特異性抗體片段(參見前文引文)。
在某些實施例中，本文提供之雙特異性抗體分子之雙特異性形式為如停靠鎖定(Dock and Lock)；ImmTAC；HAS體(HSAbody)；sc雙抗體-HAS；及串聯scFv-毒素之雙特異性結構(參見前文引文)。
在某些實施例中，本文提供之雙特異性抗體分子基於選自包括IgG-IgG；Cov-X-體(Cov-X-Body)；及scFv1-PEG-scFv 2之雙特異性抗體共軛物之形式(參見前文引文)。
在某些實施例中，第二抗原結合域可操作地連接至CD276結合域之N末端或C末端。在某些實施例中，CD276結合域可操作地連接至第二抗原結合域之N末端或C末端。
可操作之連接可為直接化學鍵連接或藉由間隔子或藉由間插序列之間接連接。本文使用之術語「間隔子」係指具有1、2、3、4或5個胺基酸殘基，或長度為5至15、20、30、50或更多個胺基酸殘基之人工胺基酸序列，其藉由肽鍵連接，並用於連接一或多個結合域，如scFv及Fab或IgG。該間隔子可與scFv中之肽連接子相同或不同。在某些實施例中，該間隔子包括SEQ ID NO: 350、352、353及354之1個、2個、3個、4個或更多個順序或串聯重複。在某些實施例中，該間隔子包括GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:350)。在某些實施例中，該間隔子包括GGGGS (SEQ ID NO:352)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:353)或GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ IDNO:354)。如本文所用之間插序列可為位於CD276結合域及第二抗原結合域之間之任何胺基酸序列，只要CD276結合域與第二抗原結合域都能夠與其各自之抗原結合。在說明性示例中，間插序列可包括重鏈恆定區或輕鏈恆定區。
在某些實施例中，第二抗原結合域包括scFv並且CD276結合域包括Fab或IgG。在某些實施例中，第二抗原結合單鏈抗體可以可操作地連接於CD276結合Fab或IgG之重鏈之N末端或C末端(例如，CD276連接Fab之後的重鏈恆定區之C末端)，或連接至CD276結合Fab或IgG之輕鏈之N端或C末端，或其任何組合，反之亦然。
在說明性示例中，雙特異性抗體分子可包括VH (抗CD276)-CH1-鉸鏈-CH2-CH3-間隔子-第二抗原結合scFv或第二抗原結合scFv-間隔子-VH (抗CD276)-CH1-鉸接-CH2-CH3形式之重鏈，以及VL (抗-CD276)-CL形式之輕鏈。如本文所用，VH (抗CD276)及VL (抗-CD276)，分別指CD276結合域之重鏈及輕鏈可變域；第二抗原結合scFv係指第二抗原結合域之scFv，CL係指輕鏈恆定區；以及CH1-鉸鏈-CH2-CH3共同為重鏈恆定區。
在另一個說明性實例中，雙特異性抗體分子可包含形式為第二抗原結合scFv-間隔子-VL (抗CD276)-CL或VL (抗CD276)-CL-間隔子-第二抗原結合scFv之輕鏈，以及同理地形式為VH (抗-CD276)-CH1-鉸鏈區-CH2-CH3之重鏈。
在某些實施例中，CD276結合域包含scFv，第二抗原結合域包括Fab或IgG。在某些實施例中，CD276結合域scFv可以可操作地連接至第二抗原結合Fab或IgG之重鏈之N末端或C末端(例如，CD277結合Fab之後的重鏈恆定區之C末端)，或連接至第二抗原結合Fab或IgG之輕鏈之N端或C末端，或其任何組合，反之亦然。
在一個說明性實例中，雙特異性抗體分子可包含重鏈，其形式為：第二抗原結合VH-CH1-鉸鏈區-CH2-CH3-間隔子-scFv (抗-CD276)或scFv (抗CD276)-間隔子-第二抗原結合VH-CH1-鉸鏈區-CH2-CH3，以及同理地輕鏈，其形式為：第二抗原結合VL-CL。在另一個說明性實例中，雙特異性抗體分子可包含輕鏈，其形式為：scFv (抗CD276)-間隔子-第二抗原結合VL-CL或第二抗原結合VL-CL-間隔子-scFv (抗CD276)，以及同理地重鏈：第二抗原結合VH-CH1-鉸鏈區-CH2-CH3。
在本文提供之雙特異性抗體分子中，第二抗原結合域可為單價的(亦即，一個scFv或Fab)或多價的(例如，一個以上之scFv及Fab)，及/或CD276結合域可為單價或多價。
在某些實施例中，第二抗原為免疫相關目標，視情況係選自：PD-L1、PD-L2、PD-1、CLTA-4、TIM-3、LAG3、CD160、2B4、TGFβ、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、OX40、CD2、CD27、ICAM-1、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160，B7-H4、LFA-1、ICOS、4-1BB、GITR、CD30、CD39、CD73、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、IL-2、IL-15、CD3、CD16、SIRPα、唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素10 (Siglec 10)、LILRB2、Clever-1、Macro、LILRB4、唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素15 (Siglec 15)、CSF1R、PSGL-1、VSIG-4、B2M及CD83。
在某些實施例中，第二抗原為PD-L1。在某些實施例中，CD276結合scFv可操作地連接於PD-L1結合Fab之後的重鏈恆定區之C末端。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含VH (抗PD-L1)-CH1-鉸鏈區-CH2-CH3-間隔子-scFv (抗CD276)之形式之重鏈，其與VL (抗PD-L1)-CL之形式之輕鏈相結合。
在某些實施例中，PD-L1結合Fab為衍生自YN035 (來自WO2019196309A1)之Fab，其包含SEQ ID NO: 345所示之重鏈可變區之胺基酸序列及SEQ ID NO:346所示之輕鏈可變區之胺基酸序列。PD-L1-結合Fab之重鏈及輕鏈可變域分別可操作地連接於小鼠IgG2a之重鏈及輕鏈恆定區從而產生包含SEQ ID NO: 347之重鏈及SEQ ID NO: 348之輕鏈的嵌合抗PD-L1 mAb (小鼠IgG2a)。
Figure 02_image001
Figure 02_image003
在某些實施例中，CD276結合scFv為衍生自6-D8-E7-A11之scFv，包括重鏈可變區及輕鏈可變區，其可操作地藉由間隔子SEQ ID NO: 351 (ASTGGGGSGGGGSGGGGS)或SEQ ID NO: 350 (GGGGSGGGGSGGGGS)連接，並且該scFv具有胺基酸序列SEQ ID NO: 355：
Figure 02_image005
在某些實施例中，抗PD-L1單抗(小鼠IgG2a)及兩種CD276結合scFv以IgG(H)scFv之形式形成雙特異性抗體。CD276結合scFv之重鏈可變區之N端分別藉由間隔子SEQ ID NO: 350 (GGGGSGGGGSGGGGS)可操作地連接於抗PD-L1 mAb (小鼠IgG2a)之重鏈之C末端。IgG(H)scFv之重鏈具有胺基酸序列SEQ ID NO: 349：
Figure 02_image007
Figure 02_image009
在某些實施例中，第二抗原為腫瘤相關抗原或其表位。術語「腫瘤相關抗原」與術語「腫瘤抗原」互換使用，係指存在於或可存在於腫瘤細胞表面且位於腫瘤細胞上或腫瘤胞內之抗原。在一些實施例中，腫瘤相關抗原可僅由腫瘤細胞呈遞，而不為由正常細胞(亦即非腫瘤細胞)呈遞。在一些其他實施例中，腫瘤相關抗原可僅在腫瘤細胞上表現，或者與非腫瘤細胞相比可具有腫瘤特異性突變。在一些其他實施例中，腫瘤相關抗原可在腫瘤細胞及非腫瘤細胞中發現，但當與非腫瘤細胞相比時，腫瘤相關抗原在腫瘤細胞上過度表現，或者由於腫瘤組織與非腫瘤組織相比結構較不緊湊，因此可在腫瘤組織中結合至抗體。
在一些實施例中，腫瘤抗原選自由以下組成之群：CA-125、神經節苷脂G(D2)、G(M2)及G(D3)、CD19、CD20、CD24、CD33、CD47、CD52、Ep-CAM、CEA、CLDN18.2、蛙皮素樣肽、PSA、HER2/neu、表皮生長因子受體(EGFR)、erbB2、erbB3/HER3、erbB4、CD44v6、CD44v9、Ki-67、癌相關黏蛋白、VEGF、VEGFR(例如VEGFR3)、雌激素受體、Lewis-Y抗原、TGFβ1、IGF-1受體、EGFα、c-Kit受體、轉鐵蛋白受體、IL-2R、CDH6、CEA、FOLR1、TROP2、PTK7、SLITRK6、CD142、連接蛋白-4、ROR1、ROR2、CD142及CD123、CD22、CD79b、DLL3、SLC家族或CO17-1A。
腫瘤相關抗原之其他示例性實例為CD10、CD21、CD22、CD25、CD30、CD34、CD37、CD38、CD123、GPRC5D、CD44v6、CD45、CD133、Fms樣酪胺酸激酶3 (FLT-3、CD135)、硫酸軟骨素蛋白多糖4 (CSPG4、黑色素瘤相關硫酸軟骨蛋白多糖)、Her2、Her3、IGFR、IL3R、纖維母細胞激活蛋白(FAP)、CDCP1、Derlin1、腱蛋白(Tenascin)、frizzled 1-10、血管抗原VEGFR2 (KDR/FLK1)、VEGFR3 (FLT4、CD309)、PDGFRα (CD140a)、PDGFRβ (CD140b)、內皮膠質蛋白(Endoglin)、CLEC14、CLEC12a、Tem1-8及Tie2。進一步之實例可包括A33、CAMPATH-1 (CDw52)、癌胚抗原(CEA)、羧酸酐酶IX (MN/CA IX)、de2-7、EGFRvIII、EpCAM、葉酸結合蛋白、G250、c-Kit (CD117)、CSF1R (CD115)、HLA-DR、IL-2受體、IL3R、MCSP(黑色素瘤相關細胞表面硫酸軟骨素蛋白聚糖)、Muc-1、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、前列腺幹細胞抗原(PSCA)、前列腺特異性抗原(PSA)及TAG-72。
本文提供之雙特異性抗體及抗原結合片段可以用本領域已知之任何合適方法製備。在傳統方法中，具有不同抗原特異性的兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對可在宿主細胞中共表現，以重組方式產生雙特異性抗體(例如，參見Milstein及Cuello，《自然(Nature)》，305:537(1983))，隨後藉由親和層析純化。
亦可使用重組方法，其中編碼兩種特異性的抗體重鏈可變域之序列分別與免疫球蛋白恆定域序列融合，然後插入至表現載體中，該表現載體與用於輕鏈序列之表現載體共轉染至合適之宿主細胞，用於重組表現雙特異性抗體(參見例如WO 94/04690；Suresh等人，Methods in Enzymology，121:210(1986))。類似地，scFv二聚體亦可自宿主細胞重組構築及表現(參見例如Gruber等人，J.Immunol.，152:5368(1994))。
在另一種方法中，來自Fos及Jun蛋白之亮胺酸拉鏈肽可藉由基因融合連接至兩種不同抗體之Fab'部分。連接之抗體在鉸鏈區被還原為四個半抗體(亦即單體)，然後再氧化形成異二聚體(Kostelny等人，《免疫學雜誌(J.Immunol.)》，148(5)：1547-1553(1992))。
兩個抗原結合域亦可偶聯或交聯以形成雙特異性抗體或抗原結合片段。例如，一種抗體可偶聯至生物素，而另一種抗體則可偶聯至抗生物素，生物素及抗生物素之間之強締合將使兩種抗體複合在一起，形成雙特異性抗體(例如，參見美國專利號4676980；WO91/00360、WO92/00373及EP03089)。另一個實例為，如美國專利第4676980號中所公開的，此兩種抗體或抗原結合片段可藉由本領域已知之習知方法交聯。
雙特異性抗原結合片段可由雙特異性抗體產生，例如藉由蛋白水解切割或化學連接。例如，可製備抗體之抗原結合片段(例如Fab')並將其轉化為Fab'-硫醇衍生物，然後與具有不同抗原特異性的另一種轉化之Fab'衍生物混合並反應，以形成雙特異性抗原結合片段(參見，例如，Brennan等人，《科學(Science)》，229：81(1985))。
在某些實施例中，雙特異性抗體或抗原結合片段可在界面處工程化，從而可形成杵-臼結構，以促進兩個不同抗原結合位點之異源二聚化。如本文所用之「杵-臼結構」係指兩種多肽(例如CH3域)之間之相互作用，其中一種多肽由於存在具有大側鏈之胺基酸殘基(例如酪胺酸或色胺酸)而具有突起(亦即「杵」)，而另一種多肽由於具有小之側鏈胺基酸殘基(例如丙胺酸或蘇胺酸)而具有空腔(亦即「臼」)，其中突起可定位在空腔中，以促進兩種多肽之相互作用，形成異二聚體或複合物。利用杵-臼結構生成多肽之方法在本領域為已知的，例如，如美國專利第5731168號中所描述的。
共軛物在一些實施例中，抗CD276抗體及其抗原結合片段與一或多種共軛物連接，視情況，其中共軛物直接或經由連接子共價連接。共軛物為可附接至抗體或其抗原結合片段之非蛋白質部分。預期多種共軛物可與本文提供之抗體或抗原結合片段連接(參見，例如，《共軛物疫苗(Conjugate Vaccines)》，《對微生物學及免疫學之貢獻(Contributions to Microbiology and Immunology)》，J. M. Cruse及R. E. Lewis, Jr.(編輯)，Carger出版社，紐約，(1989))。此等共軛物可藉由共價結合、親和力結合、嵌入、配位結合、複合、締合、共混或添加等方法與抗體或抗原結合片段連接。在一些實施例中，共軛物包含清除調節劑、化學治療劑、毒素、放射性同位素、鑭系元素、發光標記、螢光標記、酶-受質標記、DNA烷基化劑、拓樸異構酶抑制劑、微管蛋白結合劑或其他抗癌藥物。
在某些實施例中，本文所公開之抗體及抗原結合片段可被工程化以在表位結合部分之外含有特異性位點，該位點可用於與一或多個共軛物結合。例如，此類位點可包括一或多個反應性胺基酸殘基，諸如，例如半胱胺酸或組胺酸殘基，以方便與共軛物之共價連接。
在某些實施例中，抗體可間接或藉由另一共軛物連接至共軛物。例如，抗體或抗原結合片段可與生物素結合，接著間接與第二共軛物結合，該第二共軛物與抗生物素蛋白結合。共軛物可為毒素(例如，化學治療劑)、可偵測標記(例如，放射性同位素、鑭系元素、發光標記、螢光標記或酶-受質標記)。
「毒素」可為對細胞有害或可破壞或殺死細胞之任何藥劑。毒素之實例包括但不限於紫杉醇(taxol)、細胞鬆弛素B (cytochalasin B)、短桿菌肽D (gramicidin D)、溴化乙錠、吐根素(emetine)、絲裂黴素(mitomycin)、依託泊苷(etoposide)、特諾波賽(tenoposide)、長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、秋水仙鹼(colchicin)、小紅莓(doxorubicin)、道諾黴素(daunorubicin)、二羥基炭疽菌素二酮(dihydroxy anthracin dione)、米托蒽醌(mitoxantrone)、光神黴素(mithramycin)、放線菌素D (actinomycin D)、1-去氫睪固酮、糖皮質激素、普魯卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propranolol)、嘌呤黴素(puromycin)及其類似物、抗代謝物(例如，甲氨蝶呤(methotrexate)、6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷(cytarabine)、5-氟尿嘧啶達卡巴嗪(5-fluorouracil decarbazine))、烷基化劑(例如，氮芥(mechlorethamine)、噻替派苯丁酸氮芥(thioepa chlorambucil)、美法侖(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)(BSNU)及洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、環硫磷醯胺(cyclothosphamide)、白消安(busulfan)、二溴甘露醇、鏈佐黴素(streptozotocin)、絲裂黴素C (mitomycin C)及順-二氯二胺鉑(II)(DDP)，順鉑(cisplatin))、蒽環黴素(anthracyclines)(例如，道諾黴素(以前為柔紅黴素(daunomycin))及阿黴素(doxorubicin))、抗生素(例如，更生黴素(dactinomycin)(以前為放線菌素(actinomycin))、博萊黴素(bleomycin)、光神黴素及安麴黴素(anthramycin)(AMC))及抗有絲分裂劑(例如長春新鹼及長春鹼)。
可偵測標記之實例可包括螢光標記(例如，螢光素、羅丹明、丹磺醯、藻紅蛋白或德克薩斯紅)、酶受質標記(例如，辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、螢光素酶(luceriferase)、葡糖澱粉酶、溶菌酶、糖氧化酶或β-D-半乳糖苷酶)、放射性同位素(例如 123I、 124I、 125I、 131I、 35S、 3H、 111In、 112In、 14C、 64Cu、 67Cu、 86Y、 88Y、 90Y、 177Lu、 211At、 186Re、 188Re、 153Sm、 212Bi及 32P，其他鑭系元素，冷光標記)、發色團部分、地高辛、生物素/親和素、DNA分子或偵測用金。
在某些實施例中，共軛物可為有助於增加抗體之半衰期之藥代動力學修飾部分。說明性實例包括水溶性聚合物，諸如PEG、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、乙二醇/丙二醇之共聚物等。聚合物可具有任何分子量，且可為支化或非支化的。與抗體附接之聚合物之數目可變化，並且若附接超過一個聚合物，則其可為相同或不同的分子。
在某些實施例中，共軛物可為純化部分，諸如磁珠。
在某些實施例中，本文提供之抗體及/或其抗原結合片段用於共軛物之基底。
多核苷酸及重組方法本發明提供編碼抗CD276抗體及其抗原結合片段之分離的多核苷酸。編碼單株抗體之DNA很容易使用習知程式(例如，藉由使用能夠與編碼抗體之重鏈及輕鏈之基因特異性結合的寡核苷酸探針)分離並且定序。編碼DNA亦可藉由合成方法獲得。
使用本領域已知之重組技術，可將編碼抗CD276抗體及其抗原結合片段之分離的多核苷酸插入至載體中用於進一步選殖(擴增DNA)或表現。許多載體為可供使用的。載體組分一般包括但不限於以下一或多種：訊號序列、複製起點、一或多種標記基因、增強子元件、啟動子(例如，SV40、CMV、EF-1α)及轉錄終止序列。
在一些實施例中，載體系統包括哺乳動物、細菌、酵母系統等，且包含質體，諸如但不限於pALTER、pBAD、pcDNA、pCal、pL、pET、pGEMEX、pGEX、pCI、pCMV、pEGFP、pEGFT、pSV2、pFUSE、pVITRO、pVIVO、pMAL、pMD18-T、pMONO、pSELECT、pUNO、pDUO、Psg5L、pBABE、pWPXL、pBI、p15TV-L、pPro18、pTD、pRS420、pLexA、pACT2.2等，及其他實驗載體及市售載體。合適之載體可包括質體或病毒載體(例如，複製缺陷逆轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒)。
可將包含編碼抗體或抗原結合片段之多核苷酸序列之載體引入至宿主細胞中用於選殖或基因表現。用於選殖或表現本文載體中之DNA之適合宿主細胞為上述原核生物、酵母或更高等真核生物細胞。適用於此目的之原核生物包括真細菌，諸如革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體，例如腸桿菌科(諸如埃希氏菌)，如大腸桿菌、腸桿菌、歐文氏菌、克雷伯氏菌、變形桿菌、沙門氏菌(如鼠傷寒沙門氏菌、沙雷氏菌(如黏質沙雷氏菌)及志賀氏菌)，以及桿菌(諸如枯草芽孢桿菌及地衣芽孢桿菌、假單胞菌(諸如銅綠假單胞菌)及鏈黴菌)。
除了原核生物，諸如絲狀真菌或酵母之真核微生物亦為抗CD276抗體編碼載體之合適選殖或表現宿主。釀酒酵母，或普通麵包酵母，為低等真核宿主微生物中最常用的。然而，許多其他之屬、種及品系在本文中為普遍可用及有用的，諸如粟酒裂殖酵母；克魯維酵母屬宿主，諸如例如乳酸克魯維酵母、脆壁克魯維酵母(K. fragilis)(ATCC 12,424)、保加利亞克魯維酵母(K. bulgaricus)(ATCC 16,045)、威克克魯維酵母(K. wickeramii)(ATCC 24,178)、克魯雄酵母(K. waltii)(ATCC 56,500)、果蠅克魯維酵母(K. drosophilarum)(ATCC 36,906)、耐熱克魯維酵母(K. thermotolerans)及馬克斯克魯維酵母(K. marxianus)；耶氏酵母屬(EP 402,226)；畢赤酵母(EP 183,070)；假絲酵母屬；瑞氏木黴(Trichoderma reesia)(EP 244,234)；粗糙脈孢菌；許旺酵母屬，諸如西方許旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)；以及絲狀真菌，諸如例如脈孢菌屬、青黴屬、彎頸黴屬及麴黴屬宿主，諸如構巢麴黴及黑麴黴。
合適之表現在此提供之糖基化抗體或抗原片段之宿主細胞源自多細胞生物體。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已經鑑定出多種桿狀病毒株及變體以及來自如下宿主之相應容許之昆蟲宿主細胞：草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)(毛蟲)、埃及伊蚊(Aedes aegypti)(蚊子)、白紋伊蚊(Aedes albopictus)(蚊子)、黑腹果蠅(Drosophila melanogaster)(果蠅)及家蠶(Bombyx mori)。多種用於轉染之病毒株為可公開獲得的，例如苜蓿銀紋夜蛾(Autographa californica) NPV之L-1變體及家蠶NPV之Bm-5病毒株，並且此類病毒可根據本發明用作本文中之病毒，尤其為用於轉染草地貪夜蛾細胞。棉花、玉米、馬鈴薯、大豆、矮牽牛、番茄及菸草之植物細胞培養物亦可用作宿主。
然而，人們對脊椎動物細胞之興趣最大，脊椎動物細胞之培養繁殖(組織培養)已成為習知程式。有用之哺乳動物宿主細胞株之實例為SV40轉化之猴腎CV1細胞株(COS-7，ATCC CRL 1651)；人類胚腎細胞株(「293或293細胞次選殖用於在懸浮培養物中生長(293 or 293 cells subcloned for growth in suspension culture)」，Graham等人，《普通病毒學雜誌(J. Gen Virol.)》36:59 (1977))；幼倉鼠腎細胞(BHK，ATCC CCL 10)；中國倉鼠卵巢細胞/-DHFR(CHO，Urlaub等人，《美國國家科學院院刊》77:4216 (1980))；小鼠支援細胞(TM4，Mather，《生殖生物學(Biol. Reprod.)》23:243-251(1980))；猴腎細胞(CV1，ATCC CCL 70)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人類子宮頸癌細胞(HELA，ATCC CCL 2)；犬腎細胞(MDCK，ATCC CCL 34)；水牛大鼠(buffalo rat)肝細胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人類肺細胞(W138，ATCC CCL 75)；人類肝細胞(Hep G2，HB 8065)；小鼠乳腺腫瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)；TRI細胞(Mather等人，《紐約科學院年刊(Annals N.Y. Acad. Sci.)》383:44-68 (1982))；MRC 5細胞；FS4細胞；及人類肝癌細胞株(Hep G2)。
用上述表現或選殖載體轉化宿主細胞以產生抗CD276抗體，並在習知營養培養基中培養，該培養基經適當修飾以誘導啟動子、選擇轉化子或擴增編碼期望序列之基因。在另一實施例中，抗體可藉由本領域中已知之同源重組產生。
用於產生本文提供之抗體或抗原結合片段之宿主細胞可在各種培養基中培養。市售培養基諸如Ham F10 (Sigma)、最小必需培養基(MEM)、(Sigma)、RPMI-1640 (Sigma)及杜爾貝科氏改良伊格爾培養基(DMEM)、(Sigma)適用於培養宿主細胞。此外，在Ham等人，《酶學方法(Meth. Enz.)》58:44 (1979)，Barnes等人，《分析生物化學(Anal. Biochem.)》102:255 (1980)，美國專利第4,767,704號；第4,657,866號；第4,927,762號；第4,560,655號；或第5,122,469號；WO 90/03430；WO 87/00195；或美國再公佈專利第30,985號中描述之任何培養基可用作宿主細胞之培養基。此等培養基中之任一種都可視需要補充激素及/或其他生長因子(諸如胰島素、轉鐵蛋白或表皮生長因子)、鹽(諸如氯化鈉、鈣鹽、鎂鹽及磷酸鹽)、緩衝劑(諸如HEPES)、核苷酸(諸如腺苷及胸苷)、抗生素(諸如GENTAMYCIN TM藥物)、微量元素(定義為通常以微莫耳範圍內之最終濃度存在之無機化合物)及葡萄糖或等效能量源。亦可包括本領域技術人員已知之適當濃度之其他必要之補充劑。培養條件(諸如溫度、pH等)為先前與所選之用於表現之宿主細胞一起使用之彼等條件，並且對於普通技術人員而言將為顯而易見的。
當使用重組技術時，抗體可在胞內、在周質空間中產生，或直接分泌至培養基中。若在胞內產生抗體，則作為第一步驟，例如藉由離心或超過濾移除宿主細胞或裂解片段之微粒碎片。Carter等人, 《生物技術(Bio/Technology)》10:163-167 (1992)描述了一種用於分離分泌至大腸桿菌之周質空間之抗體的程式。簡而言之，將細胞糊狀物在乙酸鈉(pH 3.5)、EDTA及苯甲基磺醯氟(PMSF)之存在下經約30分鐘解凍。細胞碎片可藉由離心移除。在抗體分泌至培養基中之情況下，來自此類表現系統之上清液一般首先使用市售之蛋白質濃縮過濾器，例如Amicon或Millipore Pellicon超濾裝置進行濃縮。蛋白酶抑制劑諸如PMSF可包括在任何前述步驟中，以抑制蛋白水解，並且可包括抗生素以防止外來污染物之生長。
自細胞中製備之抗CD276抗體及其抗原結合片段可使用，例如，羥基磷灰石層析、凝膠電泳、透析、DEAE-纖維素離子交換層析、硫酸銨沈澱、鹽析及親和層析來純化，其中親和層析為較佳的純化技術。
在某些實施例中，固定在固相上之蛋白質A用於進行抗體及其抗原結合片段之免疫親和純化。蛋白質A作為親和配體之適合性取決於抗體中存在之任何免疫球蛋白Fc域之種類及同種型。蛋白質A可用於純化基於人類γ1、γ2或γ4重鏈之抗體(Lindmark等人，《免疫學方法雜誌》62:1-13(1983))。蛋白G推薦用於所有小鼠同種型及人類γ3 (Guss等人，《歐洲分子生物學組織會刊(EMBO J.)》5:1567-1575 (1986))。親和配體所附接之基質最通常為瓊脂糖，但亦可使用其他基質。機械穩定性基質(諸如受控孔玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯)比瓊脂糖具有更快之流速及更短之處理時間。當抗體包含CH3域時，Bakerbond ABX.TM樹脂(J. T. Baker，新澤西州菲利普斯堡(Phillipsburg, N.J.))可用於純化。用於蛋白質純化之其他技術，諸如離子交換柱上分級分離、乙醇沈澱、反相HPLC、二氧化矽上之層析、肝素SEPHAROSE TM上之層析、陰離子或陽離子交換樹脂(諸如聚天冬胺酸柱)上之層析、層析焦聚、SDS-PAGE以及硫酸銨沈澱亦為可用的，取決於待回收之抗體。
在任何初步純化步驟之後，可對包含所關注抗體及污染物之混合物進行低pH疏水相互作用層析，使用pH在約2.5-4.5之間之溶離緩衝液，較佳在低鹽濃度(例如，約0-0.25 M鹽)下進行。
CAR在另一個態樣，本公開亦提供一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含抗原結合域、跨膜域、共刺激傳訊區及TCR傳訊域，其中抗原結合域特異性結合CD276並包含本文提供之抗原結合片段。在某些實施例中，抗原結合片段為Fab或scFv。在某些實施例中，本文提供之CAR為雙特異性的。CAR能夠進一步特異性結合不同於CD276之第二抗原，或CD276上之第二表位。在某些實施例中，第二抗原為腫瘤抗原、腫瘤相關抗原或如上所描述的免疫相關目標。TCR傳訊域可選自由以下組成之群：CD3ζ、FccRIγ、CD27、CD28、CD137、CD134、MyD88、CD40、CD278、TLR或其組合之胞內訊號區序列。跨膜區可包含CD3、CD4、CD8或CD28之跨膜區。在某些實施例中，第二抗原為免疫抑制分子，諸如PD-L1、SIRPα、CD47或B2M。
在另一態樣中，本公開亦提供編碼如上文所提及之CAR之核酸序列以及包含此類核酸序列之細胞或載體或被基因修飾以表現本文提供之CAR之細胞。該細胞為免疫細胞，視情況，其中免疫細胞為T淋巴細胞、NK細胞、單核球、巨噬細胞或NKT淋巴細胞。
醫藥組合物本公開進一步提供包含抗CD276抗體或其抗原結合片段以及一或多種醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。
用於本文所公開之醫藥組合物之醫藥學上可接受之載劑可包括例如醫藥學上可接受之液體、凝膠或固體載劑、水性媒劑、非水性媒劑、抗微生物劑、等滲劑、緩衝劑、抗氧化劑、麻醉劑、懸浮/分散劑、螯合(sequestering或chelating)劑、稀釋劑、佐劑、賦形劑或無毒輔助物質、本領域中已知之其他組分或其各種組合。
合適之組分可包括例如抗氧化劑、填充劑、黏合劑、崩解劑、緩衝劑、防腐劑、潤滑劑、調味劑、增稠劑、著色劑、乳化劑或穩定劑，諸如糖及環糊精。合適之抗氧化劑可包括例如甲硫胺酸、抗壞血酸、EDTA、硫代硫酸鈉、鉑、過氧化氫酶、檸檬酸、半胱胺酸、硫代甘油、巰基乙酸、硫代山梨糖醇、丁基化羥基苯甲醚、丁基化羥基甲苯及/或沒食子酸丙酯。如本文所公開，在包含如本文提供之抗體或抗原結合片段及共軛物之組合物中包括一或多種抗氧化劑(諸如甲硫胺酸)，降低抗體或抗原結合片段之氧化。此氧化減少將防止或減少結合親和力之損失，由此提高抗體穩定性並使儲存壽命最大化。因此，在某些實施例中，提供了包括一或多種如本文所公開之抗體或其抗原結合片段及一或多種抗氧化劑(諸如甲硫胺酸)之組合物。進一步提供藉由將如本文提供之抗體或抗原結合片段與一或多種抗氧化劑(諸如甲硫胺酸)混合來防止其氧化、延長其保質期及/或提高其有效性之方法。
為了進一步說明，醫藥學上可接受之載劑可包括，例如，水性媒劑(諸如氯化鈉注射液、林格注射液、等滲葡萄糖注射液、無菌注射用水或葡萄糖及乳酸林格注射液)、非水媒劑(諸如植物源不揮發油、棉籽油、玉米油、芝麻油或花生油)、抑菌或抑真菌濃度之抗微生物劑、等滲劑(諸如氯化鈉或葡萄糖)、緩衝劑(諸如磷酸鹽或檸檬酸鹽緩衝劑)、抗氧化劑(諸如硫酸氫鈉)、局部麻醉劑(諸如鹽酸普魯卡因)、助懸劑及分散劑(諸如羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素或聚乙烯吡咯啶酮)、乳化劑(諸如聚山梨醇酯80 (TWEEN-80))、螯合劑(諸如EDTA (乙二胺四乙酸))或EGTA (乙二醇四乙酸)、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、氫氧化鈉、鹽酸、檸檬酸或乳酸。用作載劑之抗微生物劑可添加至多劑量容器中之醫藥組合物中，該抗微生物劑包括苯酚或甲酚、汞劑、苯甲醇、氯丁醇、對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯紮氯銨及苄索氯銨。合適之賦形劑可包括例如水、生理鹽水、右旋糖、甘油或乙醇。合適之無毒輔助物質可包括例如潤濕劑或乳化劑、pH緩衝劑、穩定劑、溶解性增強劑或諸如乙酸鈉、脫水山梨糖醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯或環糊精之試劑。
醫藥組合物可為液體溶液、懸浮液、乳液、丸劑、膠囊、錠劑、持續釋放製劑或散劑。口服製劑可包括標準載劑，諸如藥用級甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、聚乙烯吡咯啶酮、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。
在某些實施例中，醫藥組合物被配製成可注射組合物。可注射之醫藥組合物可以任何習知形式製備，諸如例如液體溶液、懸浮液、乳液或適合產生液體溶液、懸浮液或乳液之固體形式。注射用製劑可包括準備好用於注射之無菌及/或無熱原質溶液；準備好臨在使用之前與溶劑組合之無菌乾燥可溶性產品，諸如凍乾粉末，包括皮下注射錠劑；準備好用於注射之無菌懸浮液；準備好臨在使用之前與媒劑組合之無菌乾燥不溶性產品；及無菌及/或無熱原質乳液。溶液可為水性或非水性的。
在某些實施例中，單位劑量之腸胃外製劑被包裝在安瓿、小瓶或帶針頭之注射器中。所有用於腸胃外投與之製劑都應該為無菌且無熱原質的，正如本領域中已知及實踐之那樣。
在某些實施例中，藉由將如本文所公開之抗體或抗原結合片段溶解在合適之溶劑中來製備無菌凍乾粉末。溶劑可含有提高粉末或由粉末製備之復原溶液之穩定性或其他藥理學組分之賦形劑。可使用之賦形劑包括但不限於水、右旋糖、山梨醇、果糖、玉米糖漿、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其他合適之試劑。溶劑可含有緩衝劑，諸如檸檬酸鹽、磷酸鈉或磷酸鉀或本領域技術人員已知之其他此類緩衝劑，在一個實施例中，pH約為中性。隨後無菌過濾溶液，接著在本領域技術人員已知之標準條件下凍乾，得至所需製劑。在一個實施例中，將所得溶液分配至小瓶中以凍乾。每個小瓶可含有單劑量或多劑量之抗CD276抗體或其抗原結合片段或其組合物。小瓶灌裝量可略超出一個劑量或一組劑量之所需量(例如，約10%)，以便準確提取樣品及準確給藥。可將凍乾粉儲存在適宜條件下，諸如約4℃至室溫下。
用注射用水重構凍乾粉提供了用於腸胃外投與之製劑。在一個實施例中，為了重構，將無菌及/或無熱原質水或其他合適之液體載劑添加至凍乾粉中。精確量取決於給定之所選療法，並且可憑經驗確定。
使用方法本公開亦提供治療方法，其包含：向有需要之受試者投與治療有效量之如本文提供之抗體或其抗原結合片段，從而治療或預防CD276相關疾病或病症。在一些實施例中，CD276相關疾病或病症為癌症、自身免疫性疾病、發炎性疾病、適應性免疫疾病或感染性疾病。
癌症之實例包括但不限於非小細胞肺癌(鱗狀/非鱗狀)、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、結腸癌、卵巢癌、乳癌(包括基底乳癌、導管癌及小葉乳癌)、胰臟癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、間皮瘤、黑色素瘤、頭頸癌、甲狀腺癌、肉瘤、前列腺癌、膠質母細胞瘤、子宮頸癌、胸腺癌、黑色素瘤、骨髓瘤、蕈樣真菌病、默克爾細胞癌、肝細胞癌(HCC)、纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、成骨肉瘤及其他肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、淋巴惡性腫瘤、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲狀腺髓樣癌、甲狀腺乳頭狀癌、嗜鉻細胞瘤、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、髓樣癌、支氣管癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、維爾姆斯瘤、子宮頸癌、睾丸腫瘤、精原細胞瘤、經典霍奇金淋巴瘤(CHL)、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、富含T細胞/組織細胞之B細胞淋巴瘤、急性淋巴細胞性白血病、急性髓細胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓細胞(粒細胞)白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、真性紅細胞增多症、肥大細胞來源之腫瘤、EBV陽性及陰性PTLD及彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、漿母細胞性淋巴瘤、結外NK/T細胞淋巴瘤、鼻咽癌、HHV8相關之原發性滲出性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、多發性骨髓瘤、瓦登斯特陸巨球蛋白血症、重鏈疾病、骨髓增生異常症候群、毛細胞白血病及骨髓發育不良、原發性CNS淋巴瘤、脊柱軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、星形細胞瘤、髓母細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、血管母細胞瘤、聽神經瘤、少突膠質細胞瘤、腦膜瘤、黑色素瘤、成神經細胞瘤及視網膜母細胞瘤。
在某些實施例中，該癌症為腎上腺腫瘤、AIDS相關癌症、腺泡軟組織肉瘤、星形細胞腫瘤、膀胱癌、骨癌、腦及脊髓癌、轉移性腦瘤、乳癌、頸動脈體瘤、子宮頸癌、軟骨肉瘤、脊索瘤、嫌色細胞腎細胞癌、透明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性纖維組織細胞瘤、促結締組織增生性小圓細胞瘤、室管膜瘤、尤因瘤、骨外黏液樣軟骨肉瘤、骨纖維發育不全、骨纖維異常增殖症、膽囊癌或膽管癌、胃癌(gastric cancer)、妊娠滋養細胞疾病、生殖細胞瘤、頭頸癌、肝細胞癌、胰島細胞瘤、卡波西肉瘤、腎癌、白血病、脂肪瘤/良性脂肪瘤樣腫瘤、脂肪肉瘤/惡性脂肪瘤樣腫瘤、肝癌、淋巴瘤、肺癌、髓母細胞瘤、黑色素瘤、腦膜瘤、多樣內分泌瘤、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常症候群、成神經細胞瘤、神經內分泌腫瘤、卵巢癌、胰臟癌、甲狀腺乳頭狀癌、甲狀旁腺腫瘤、兒科癌症、外周神經鞘腫瘤、嗜鉻細胞瘤、垂體瘤、前列腺癌、後葡萄膜黑色素瘤、罕見之血液病症、腎轉移癌、橫紋肌樣瘤、橫紋肌肉瘤、肉瘤、皮膚癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌、胃癌(stomach cancer)、滑膜肉瘤、睾丸癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲狀腺轉移癌及子宮癌。在某些實施例中，癌症具有化療耐藥性。
在某些實施例中，疾病或病症係選自B細胞淋巴瘤之血液癌。B細胞淋巴瘤之實例包括但不限於霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、多發性骨髓瘤(MM)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、邊緣區B細胞淋巴瘤(MZL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、里克特症候群(Richter's syndrome)、伯基特淋巴瘤或濾泡性淋巴瘤。
自身免疫性疾病包括但不限於獲得性免疫缺陷症候群(AIDS，其為具有自身免疫性組分之病毒性疾病)、斑禿、強直性脊柱炎、抗磷脂症候群、自身免疫性阿狄森氏病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、自身免疫性內耳疾病(AIED)、自身免疫性淋巴增生症候群(ALPS)、自身免疫性血小板減少性紫癜(ATP)、白塞氏病、心肌病、口炎性腹瀉-疱疹樣皮炎；慢性疲勞免疫功能障礙症候群(CFIDS)、慢性炎性脫髓鞘性多發性神經病(CIPD)、瘢痕性天疱瘡、冷凝集素病、肢端硬皮症候群、克羅恩病、德戈病(Degos' disease)、幼年型皮肌炎、盤狀狼瘡、原發性混合冷球蛋白血症、纖維肌痛-纖維肌炎、格雷夫斯病、格林-巴利症候群、橋本甲狀腺炎、特發性肺纖維化、特發性血小板減少性紫癜(ITP)、IgA腎病、胰島素依賴性糖尿病、幼年型慢性關節炎(斯蒂爾病)、幼年型類風濕性關節炎、美尼爾氏病、混合性結締組織病、多發性硬化、重症肌無力、惡性貧血、結節性多動脈炎、多軟骨炎、多腺性症候群、風濕性多肌痛、多肌炎及皮肌炎、原發性無丙種球蛋白血症、原發性膽汁性肝硬化、銀屑病、銀屑病性關節炎、雷諾現象、賴特症候群、風濕熱、類風濕性關節炎、結節病、硬皮病(進行性系統性硬化(PSS)，亦稱為系統性硬化(SS))、乾燥症候群、僵體症候群、系統性紅斑狼瘡、大動脈炎、顳動脈炎/巨細胞動脈炎、潰瘍性結腸炎、葡萄膜炎、白癜風及韋格納肉芽腫。
發炎性疾病包括例如慢性及急性發炎性疾病。發炎性疾病之實例包括阿茲海默病、哮喘、特應性過敏、過敏、動脈粥樣硬化、支氣管哮喘、濕疹、腎小球腎炎、移植物抗宿主病、溶血性貧血、骨關節炎、膿毒症、中風、組織及器官移植、血管炎、糖尿病性視網膜病及呼吸機誘導之肺損傷。在一些實施例中，CD276相關病症為發炎性疾病，諸如系統性紅斑狼瘡(SLE)、腸黏膜炎症、與結腸炎相關之消耗性疾病、多發性硬化、病毒感染、類風濕性關節炎、骨關節炎、克羅恩病及炎性腸病、銀屑病、系統性硬皮病、自身免疫性糖尿病等。
感染性疾病包括但不限於真菌感染、寄生蟲/原蟲感染或慢性病毒感染，例如瘧疾、粗球孢子菌病(coccidioiodmycosis immitis)、組織胞漿菌病、甲真菌病(onychomycosis)、曲黴菌病(aspergilosis)、芽生菌病、白色念珠菌病(candidiasis albicans)、副球孢子菌病(paracoccidioiomycosis)、微孢子蟲病(microsporidiosis)、棘阿米巴角膜炎(Acanthamoeba keratitis)、阿米巴症(Amoebiasis)、蛔蟲病(Ascariasis)、焦蟲病(Babesiosis)、小袋蟲病(Balantidiasis)、貝蛔蟲病(Baylisascariasis)、恰加斯氏病(Chagas disease)、支睾吸蟲病(Clonorchiasis)、錐蠅屬(Cochliomyia)、隱孢子蟲病(Cryptosporidiosis)、裂頭絛蟲病(Diphyllobothriasis)、麥地那龍線蟲病(Dracunculiasis)、包蟲病(Echinococcosis)、象皮病(Elephantiasis)、蟯蟲病(Enterobiasis)、肝片吸蟲病(Fascioliasis)、薑片蟲病(Fasciolopsiasis)、絲蟲病(Filariasis)、賈第鞭毛蟲病(Giardiasis)、顎口線蟲病(Gnathostomiasis)、膜殼絛蟲病(Hymenolepiasis)、等孢球蟲病(Isosporiasis)、片山熱(Katayama fever)、利什曼體病(Leishmaniasis)、萊姆病(Lyme disease)、後殖吸蟲病(Metagonimiasis)、蠅蛆病(Myiasis)、盤尾線蟲病(Onchocerciasis)、虱病(Pediculosis)、疥瘡、血吸蟲病、睡眠病(Sleeping sickness)、類圓線蟲病(Strongyloidiasis)、絛蟲病(Taeniasis)、弓蛔蟲病(Toxocariasis)、弓形蟲病(Toxoplasmosis)、旋毛蟲病(Trichinosis)、鞭蟲病(Trichuriasis)、錐蟲病(Trypanosomiasis)、蠕蟲感染、乙型肝炎(HBV)感染、丙型肝炎(HCV)感染、疱疹病毒、埃-巴二氏病毒(Epstein-Barr virus)、HIV、巨細胞病毒、單純疱疹病毒I型、單純疱疹病毒II型、人類乳頭瘤病毒、腺病毒、人類免疫缺乏病毒I、人類免疫缺乏病毒II、卡-韋二氏肉瘤相關之傳染性疱疹病毒(Kaposi West sarcoma associated herpes virus epidemics)、細環病毒(thin ring virus/Torquetenovirus)、人類T淋巴細胞病毒I、人類T淋巴細胞病毒II、水痘帶狀疱疹、JC病毒或BK病毒。
在某些實施例中，受試者為人類。
在另一態樣，提供治療將受益於調節CD276活性之受試者之疾病或病症的方法，其包含向有需要之受試者投與治療有效量之如本文提供之抗體或其抗原結合片段。如本文所用，術語「疾病或病症」可與術語「CD276相關疾病或病症」互換使用。
如本文提供之抗體或其抗原結合片段之治療有效量將取決於本領域已知之各種因素，諸如例如體重、年齡、既往病史、當前藥物治療、受試者之健康狀況以及交叉反應、過敏、敏感及不良副作用之可能性，以及投與途徑及疾病發展之程度。如由此等及其他情況或要求所指示，本領域一般技術人員(例如，醫生或獸醫)可按比例減少或增加劑量。
在某些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段可以約0.01 mg/kg至約100 mg/kg之治療有效劑量(例如，約0.01 mg/kg、約0.5 mg/kg、約1 mg/kg、約2 mg/kg、約3 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg、約50 mg/kg、約55 mg/kg、約60 mg/kg、約65 mg/kg、約70 mg/kg、約75 mg/kg、約80 mg/kg、約85 mg/kg、約90 mg/kg、約95 mg/kg或約100 mg/kg)投與。在此等實施例中之某些中，抗體或其抗原結合片段以約50 mg/kg或以下之劑量投與，在此等實施例中之某些中，劑量為10 mg/kg或以下、5 mg/kg或以下、3 mg/kg或以下、1 mg/kg或以下、0.5 mg/kg或以下、或0.1 mg/kg或以下。在某些實施例中，投與劑量可在治療過程中改變。例如，在某些實施例中，初始投與劑量可高於後續投與劑量。在某些實施例中，取決於受試者之反應，投與劑量可在治療過程中改變。
可調整劑量方案以提供最佳之期望反應(例如，治療反應)。例如，可投與單次劑量，或可隨時間推移投與若干分次劑量。
本文公開之抗體及其抗原結合片段可藉由本領域已知之任何途徑投與，諸如例如腸胃外(例如，皮下、腹膜內、靜脈內，包括靜脈輸注、肌內或皮內注射)或非腸胃外(例如，口服、鼻內、眼內、舌下、直腸或局部)途徑。
在一些實施例中，本文所公開之抗體或其抗原結合片段可單獨投與或與一或多種額外治療手段或藥劑組合投與。在一些實施例中，本文公開之抗體或其抗原結合片段可單獨投與或與第二種治療劑組合投與。例如，本文公開之抗體或其抗原結合片段可與第二種治療劑，例如化療劑或抗癌藥物組合投與。在某些實施例中，本文公開之抗體或其抗原結合片段可與一或多種免疫抑制分子之拮抗劑組合投與，該免疫抑制分子例如CD24、CD47、SIRPα、PD-L1或主要組織相容性I類複合物(B2M)之β-2微球蛋白亞單位。如本文所用，術語「拮抗劑」可指任何小分子、小或微RNA、或抗體或其抗原結合片段，其阻斷或抑制CD24、CD47、SIRPα、PD-L1或B2M與其各自結合配偶體之結合，從而防止引發免疫抑制訊號。在某些實施例中，本文公開之抗體或其抗原結合片段與PD-L1拮抗劑諸如抗PD-L1抗體或其抗原結合片段組合投與。
術語「抗PD-L1抗體」可指任何已知抗PD-L1抗體或其抗原結合片段，包括但不限於WO2019196309A1中公開之YN035及WO2010077634A1中公開之MPDL3280A。
在此等實施例中之某些中，與一或多種額外治療劑組合投與之本文公開之抗體或其抗原結合片段可與一或多種額外治療劑同時投與，並且在此等實施例中之某些中，抗體或其抗原結合片段及額外治療劑可作為同一醫藥組合物之一部分投與。然而，與另一種治療劑「組合」投與之抗體或其抗原結合片段不為必須與該藥劑同時或在相同之組合物中投與。在另一種藥劑之前或之後投與之抗體或其抗原結合片段被認為與該藥劑「組合」投與，如本文中所使用之片語，亦即使抗體或其抗原結合片段及第二藥劑為經由不同途徑投與的。如有可能，與本發明公開之抗體或其抗原結合片段組合投與之額外治療劑根據額外治療劑產品資訊表中列出之時間表投與，或根據《醫師案頭參考2003(Physicians' Desk Reference 2003)》(醫師案頭參考，第57版；Medical Economics Company；ISBN：1563634457；第57版(2002年11月))或本領域眾所周知之方案投與。
在一些實施例中，本公開提供偵測樣品中CD276之存在或量之方法，其包含將樣品與抗體或其抗原結合片段接觸，並確定樣品中CD276之存在或量。
在一些實施例中，本公開提供在受試者中診斷CD276相關疾病或病症之方法，其包含：a)自受試者中獲得樣品；b)將自受試者獲得之樣品與本文提供之抗體或其抗原結合片段接觸；c)確定樣品中CD276之存在或量；及d)將受試者中CD276之存在與CD276相關疾病或病症相關聯。
在一些實施例中，本公開亦提供本文提供之抗體或其抗原結合片段在生產用於治療受試者之CD276相關疾病或病症之藥物、在生產用於製造診斷CD276相關疾病或病症之診斷試劑中的用途。
在另一個態樣，本公開亦提供一種調節表現CD276之細胞中之CD276活性的方法，其包含將表現CD276之細胞暴露於本文提供之抗體或其抗原結合片段。
在另一個態樣，本公開亦提供一種偵測樣品中CD276之存在或量之方法，其包含將樣品與本文提供之抗體或其抗原結合片段接觸，並確定樣品中CD276之存在或量。
在另一個態樣，本公開亦提供一種在受試者中診斷CD276相關疾病或病症之方法，其包含：a)自受試者中獲得樣品；b)將自受試者獲得之樣品與本文提供之抗體或其抗原結合片段接觸；c)確定樣品中CD276之存在或量；及d)將受試者中CD276之存在或量與CD276相關疾病或病症之存在或狀態相關聯。
在另一個態樣，本公開亦提供本文提供之抗體或其抗原結合片段在生產用於治療受試者之CD276相關疾病或病症之藥物中的用途。該藥物亦可包含第二治療劑，例如PD-L1拮抗劑，視情況，其中該PD-L1拮抗劑為抗PD-L1抗體或其抗原結合片段。
在另一個態樣，本公開亦提供本文提供之抗體或其抗原結合片段在生產用於診斷CD276相關疾病或病症之診斷試劑中的用途。
在另一個態樣，本公開亦提供一種包含本文提供之抗體或其抗原結合片段之套組，其用於偵測CD276、視情況重組CD276、在細胞表面表現之CD276或表現CD276之細胞。如本文所用，術語「重組」係指使用一或多種分子生物學技術人工操控一或多種生物分子，諸如多核苷酸或多肽分子以使此類生物分子成為除其自然狀態以外之某物。
在另一個態樣，本公開亦提供了一種在哺乳動物中刺激針對CD276表現細胞或組織之T細胞介導免疫反應之方法，該方法包含向哺乳動物投與有效量之經基因修飾以表現CAR之細胞，其中該細胞包含抗原結合域、跨膜域、共刺激傳訊區及TCR傳訊域，其中抗原結合域特異性地結合CD276並包含本文提供之抗原結合片段。在某些實施例中，抗原結合片段為Fab或scFv。在某些實施例中，本文提供之CAR為雙特異性的。CAR能夠進一步特異性結合不同於CD276之第二抗原，或CD276上之第二表位。在某些實施例中，第二抗原為如上提至之腫瘤抗原。TCR傳訊域可選自由以下組成之群：CD3ζ、FccRIγ、CD27、CD28、CD137、CD134、MyD88、CD40、CD278、TLR或其組合之胞內訊號區序列。跨膜區可包含CD3、CD4、CD8或CD28之跨膜區。在某些實施例中，第二抗原為免疫抑制分子，例如PD-L1、SIRPα、CD24、CD47或B2M。
在另一個態樣，本公開亦提供了用於治療患有CD276相關疾病或病症哺乳動物之方法，包含向哺乳動物投與有效量之細胞(例如自體T細胞)，該細胞經基因修飾以表現本文提供之CAR，從而治療哺乳動物。在某些實施例中，CD276相關疾病或病症為癌症。在某些實施例中，哺乳動物為人類受試者。
提供以下實例係為了更好地說明所要求之發明，而不應理解為限制本發明之範圍。下面描述之所有具體組合物、材料及方法全部或部分地落入本發明之範圍內。此等特定組合物、材料及方法並不旨在限制本發明，而係僅說明落入本發明範圍內之特定實施例。本領域之技術人員可開發出等效之組合物、材料及方法，而無需行使發明能力且不脫離本發明之範圍。應理解，可在本文所描述的程式中進行許多變化，同時仍保持在本發明之範圍內。本發明人之意圖是此等變化都包括在本發明之範圍內。
實例 實例 1 ：雜交瘤之發展 1. 方法 1.1 免疫及血清效價分析 1.1.1 免疫原及免疫策略細胞免疫 將過度表現人類CD276蛋白質(UniProt ID：Q5ZPR3，亦即，CHO-S-hCD276)或小鼠CD276蛋白質(UniProt ID：Q8VE98，亦即，CHO-S-hCD276)之CHO-S細胞用作免疫原。
蛋白免疫 重組人類CD276蛋白質(SEQ ID NO：357)：重組人類CD276蛋白質藉由用腸激酶消化人類CD276蛋白質來製備，並且人類CD276之胞外域與6xHis標籤及DDDDK (SEQ ID NO：356)相融合。 重組人類CD276蛋白質(SEQ ID NO：357)：
Figure 02_image011
如下所示對Balb/c及SJL小鼠進行免疫。初次免疫後進行數次加強免疫，直至動物產生適於雜交瘤發展之令人滿意的抗血清滴度。
組 免疫原 途徑 動物/品系 群體規模 劑量
1 CHO-S-hCD276細胞 腹膜內注射(I.P.) Balb/c 5 5×10 6
2 重組人類CD276蛋白質 皮下注射(I.H.) Balb/c 5 100 μg
3 CHO-S-mCD276 I.P. Balb/c 5 5×10 6
4 CHO-S-hCD276細胞 I.P. SJL 5 5×10 6
5 重組人類CD276蛋白質 I.H. SJL 5 100 μg
1.1.2 免疫時間表 免疫時間表 ( 第 1 組 )
第0天 預出血(15-30 µL血清/小鼠) 初次：每隻小鼠腹膜內注射5 x 10 6細胞
第14天 加強1：每隻小鼠腹膜內注射5 x 10 6細胞
   測試出血(15-30 µL血清/小鼠)(TB1)
   測試出血FACS
第28天 加強2：腹膜內注射，每隻小鼠腹膜內注射5×10 6細胞。
第38天 測試出血(15-30 µL血清/小鼠)(TB2)
第38天 測試出血FACS
   資料分析及階段總結
第39天 融合前(最終)加強，亦即，皮下注射，每隻小鼠100 µg
●     未選中進行細胞融合之動物將關在籠子裏，並可能給予額外之加強免疫。
免疫時間表 ( 第 2 組 )
第0天 預出血(15-30 µL血清/小鼠) 初次：100 µg/小鼠，皮下注射，CFA
第14天 加強1：100 µg/小鼠，皮下注射，IFA
   測試出血(15-30 µL血清/小鼠)(TB1)
   測試出血FACS
第28天 加強2：皮下注射，100 µg/小鼠，皮下注射，IFA
第38天 測試出血(15-30 µL血清/小鼠)(TB2)
第38天 測試出血FACS
   資料分析及階段總結
第42天 融合前(最終)加強，腹膜內注射，每隻小鼠5×10 6細胞
●     未選中進行細胞融合之動物將關在籠子裏，並可能給予額外之加強免疫。
免疫時間表 ( 第 3 組 )
第0天 預出血(15-30 µL血清/小鼠) 初次：每隻小鼠腹膜內注射5 x 10 6細胞
第14天 加強1：每隻小鼠腹膜內注射5 x 10 6細胞
   測試出血(15-30 µL血清/小鼠)(TB1)
   測試出血FACS
第28天 加強2：腹膜內注射，每隻小鼠腹膜內注射5×10 6細胞。
第38天 測試出血(15-30 µL血清/小鼠)(TB2)
第38天 測試出血FACS
   資料分析及階段總結
第39天 融合前(最終)加強，腹膜內注射，每隻小鼠5×10 6細胞
●     將未選中用於細胞融合之動物關在籠子中，並給予額外之加強免疫。
免疫時間表 ( 第 4 組 )
第0天 預出血(15-30 µL血清/小鼠) 初次：每隻小鼠腹膜內注射5 x 10 6細胞
第14天 加強1：每隻小鼠腹膜內注射5 x 10 6細胞
   測試出血(15-30 µL血清/小鼠)(TB1)
   測試出血FACS
第28天 加強2：腹膜內注射，每隻小鼠腹膜內注射5×10 6細胞。
第38天 測試出血(15-30 µL血清/小鼠)(TB2)
第38天 測試出血FACS
   資料分析及階段總結
第42天 加強2：腹膜內注射，每隻小鼠腹膜內注射5×10 6細胞。
第51天 測試出血(15-30 µL血清/小鼠)(TB2)
第51天 測試出血FACS
   資料分析及階段總結
第52天 融合前(最終)加強，腹膜內注射，每隻小鼠5×10 6細胞
●     將未選中用於細胞融合之動物關在籠子中，並給予額外之加強免疫。
免疫時間表 ( 第 5 組 )
第0天 預出血(15-30 µL血清/小鼠) 初次：100 µg/小鼠，皮下注射，CFA
第14天 加強1：100 µg/小鼠，皮下注射，IFA
   測試出血(15-30 µL血清/小鼠)(TB1)
   測試出血FACS
第28天 加強2：皮下注射，100 µg/小鼠，皮下注射，IFA
第38天 測試出血(15-30 µL血清/小鼠)(TB2)
第38天 測試出血FACS
第42天 加強2：皮下注射，100 µg/小鼠，皮下注射，IFA
第51天 測試出血(15-30 µL血清/小鼠)(TB2)
第51天 測試出血FACS
   資料分析及階段總結
第68天 融合前(最終)加強，皮下注射，100 µg/小鼠
●     將未選中用於細胞融合之動物關在籠子中，並給予額外之加強免疫。
1.1.3 測試出血抗血清分析 篩選-藉由使用FACS對穩定過度表現人類及/或小鼠CD276 (CHO-S-hCD276及/或CHO-S-mCD276)之CHO-S細胞株進行測試，進行測試出血並進行評價。
篩選-使用重組人類CD276蛋白質之胞外域，藉由使用Elisa進行測試，進行測試出血並進行評價。
1.2 雜交瘤之產生及篩選 1.2.1 細胞融合及篩選 融合-針對免疫反應最好之小鼠進行脾細胞融合，如藉由測試出血FACS所確定。使用最佳化電融合方案將來自脾及淋巴結之淋巴細胞融合至Sp2/0細胞株。進行多次融合以確保細胞融合成功。
篩選及擴增-將融合體(每孔2×10 4至10 5)放入一疊96孔板中。監測板之生長並每週進料。在10-14天內，使用FACS及/或其他可行之分析諸如Elisa，藉由初步篩選分析來篩選細胞生長之孔。對每種靶向抗原進行多次融合並進行篩選。將顯示出與CHO-S-CD276陽性結合及來自初步篩選之陽性Elisa訊號之陽性親代選殖擴增至24孔板中用於二次篩選。
額外抗體篩選-在初步篩選之後，藉由下文之雜交瘤篩選漏斗中描述之分析再次篩選擴增至24孔板中之陽性親本選殖。
選擇所關注之雜交瘤繼續進行次選殖。
1.2.2 雜交瘤次選殖、篩選及冷凍保存 次選殖-然後藉由多輪有限稀釋或單細胞分選對來自上述篩選漏斗之具有所需反應性及同種型之親本雜交瘤進行次選殖，直至獲得單株。
篩選及擴增-藉由基於蛋白質或細胞之Elisa篩選次選殖板，將具有良好結合能力之次選殖擴增至24孔用於確認測試。FACS分析證實了此等次選殖之特異性及交叉反應性。簡而言之，將親代CHO-S細胞、CHO-S-hCD276、穩定過度表現食蟹猴CD276之CHO-S細胞株、穩定過度表現小鼠CD276之CHO-K1 S細胞株分別與每個次選殖產生之抗體一起孵育。螢光染料共軛之二級抗體用於偵測初級抗體與細胞之結合。藉由FACS分析量測中值螢光強度。
冷凍保存-對所需次選殖細胞株進行定序，並進一步擴展至培養瓶中進行冷凍保存。最初以0.5-13.0 x10 6細胞/瓶、每個細胞株4-6小瓶進行冷凍保存。若需要，為選擇之最有價值細胞株建立主細胞庫及工作細胞庫。
2. 結果吾等發現了43種具有獨特序列之抗體，其顯示出與穩定過度表現人類CD276蛋白質之CHO-S細胞(CHO-S-hCD276)之陽性結合，但不與親代CHO-S細胞結合，表明此等抗體為人類CD276識別抗體。其中42種抗體能與食蟹猴CD276蛋白質結合，11種抗體能與小鼠CD276蛋白質結合。藉由FACS偵測之小鼠抗體染色CHO-S、CHO-S-hCD276、CHO-S-mCD276、CHO-S-食蟹猴CD276 (CHO-S-cynoCD276)之MFI在下表中總結(表3)。 表 3. 與不同細胞株結合之抗體之 MFI
純系 FACS MFI (CHO-S) FACS MFI(CHO-S-hCD276) FACS MFI CHO-S-mCD276 FACS MFI CHO-S-cynoCD276
15-G1-D1-E3 1585 62545 6610 99442
28-G2-E6-B10 1267 56316 2077 40831
6-D8-E7-A11 2571 37901 92619 100797
8-B4-F5-E11 1574 40419 7366 58650
13-A8-C4-G1 999 54074 6198 95808
6-F3-G2-G1 1441 37392 6978 113858
15-C8-B5-G7 1114 36640 5734 42958
3-G7-D8-D3 1331 82411 1291 6422
14-E7-G9-D4 1331 78067 1304 61808
6-H11-G5-D8 1327 112516 1358 30365
7-E1-F8-F6 1345 6990 1309 5590
9-E8-F9-C10 1309 7607 1951 5705
3-C2-C3-E7 1188 38810 2770 2106
27-F8-E10-E11 1322 15962 1349 80481
9-G2-H6-E4 1309 49603 27620 5404
25-D3-G4-C6 1331 5941 1372 5386
27-E7-D8-C7 1313 94678 1587 87885
2-A7-B10-A3 1322 58948 2039 56030
18-F9-D8-G7 1309 126666 20645 83534
10-B9-D10-A12 1280 399656 3171 10125
24-C10-F9-G7 1342 85105 1184 15198
20-A2-D10-G8 1184 77149 1255 9025
3-F2-E7-F9 1250 52275 1141 35661
5-D1-G6-D9 1349 45271 1529 62228
23-F10-G4-F11 1327 127095 1300 36702
16-C6-F7-F5 1276 141395 1833 19524
22-E11-C3-F2 1188 74329 1667 56507
11-C12-F4-F6 1345 41880 1340 5137
16-G3-D10-C10 1336 23162 1322 6188
26-D2-D6-B12 1345 47467 1313 63076
21-B3-B1-H5 1304 71491 1345 20230
30-C7-C11-D4 1327 138317 8222 96294
11-G10-B4-B11 1307 32768 2798 26386
20-F8-B5-G2 1322 88781 67038 51137
9-B9-H11-G7 1041 96785 1356 145769
9-G12-D6-A11 1066 53167 1422 35661
10-G6-C4-B2 1340 5647 17431 4322
8-C3-E3-F3 1340 63936 1322 12053
30-E2-G7-G7 1322 46988 1296 35122
20-C5-D7-D3 1309 77017 1345 13206
13-E4-G9-A4 1209 148759 1370 16822
25-C8-D7-C5 1188 147755 1157 39074
4-D5-B9-B11 1225 144785 2099 148256
實例 2 ：抗體表徵：親和力 1. 方法 1.1 對 SKOV3 癌細胞株之基於細胞之結合親和力選擇表3中31種小鼠抗體之序列來產生及生產人類IgG1嵌合抗體。此等抗體及基準抗體依諾妥珠單抗(Enoblituzumab)(參見US8802091，MGA271，特別為具有命名為hBRCA84D-2之構築體)及MGC018 (一種抗體-藥物共軛物，其中mAb MGA017 (人類IgG1)經由可裂解之連接子與前藥seco-DUocarmycin hydroxyBenzamide azaindole (DUBA)共軛，該前藥為一種烷化劑，可破壞分裂及非分裂細胞中之DNA，從而導致細胞死亡)與人類患者來源之卵巢癌細胞株SKOV3之結合親和力藉由FACS分析確定。
FACs分析之方案描述如下： 1. 用胰蛋白酶(1X)消化細胞；將收穫之細胞以300 g離心3分鐘，棄去上清液。 2. 藉由以300 g離心3分鐘，用FACS緩衝液洗滌細胞2次，棄去上清液。 3. 重懸細胞，並將2*10 5個細胞/孔接種至50 µl FACS緩衝液中之分析板中，然後加入50 ul第一抗體(第一抗體終濃度：5.00、1.67、0.56、0.19、0.06、0.02、0.01、0.00 µg/ml或20.00、6.67、2.22、0.74、0.25、0.08、0.03、0.00 µg/ml)。在4℃孵育1小時。 4. 使用步驟2中之條件洗滌細胞兩次。用100 µl/孔稀釋之第2抗體重懸細胞，在4℃黑暗環境下孵育1小時。 5. 使用步驟2中之條件洗滌細胞兩次。用100 µl/孔FACS緩衝液重懸細胞。將細胞保持在黑暗中進行FACS分析。
所選抗體對SKOV3之結合親和力高於、低於或相當於基準抗體依諾妥珠單抗(見表6及圖1)。 表 4. 嵌合抗體對 SKOV3 之結合親和力
      SKOV3
數位 名稱 MFI(最大) EC 50(μg/ml)
1 igG 114.8 /
2 依諾妥珠單抗 830.3 0.9847
3 MGC018 2545 0.3847
4 15-G1-D1-E3 3186 0.8113
5 6-D8-E7-A11 2828 0.4022
6 15-C8-B5-G7 2137 0.2929
7 3-G7-D8-D3 1214 0.5095
8 14-E7-G9-D4 2726 1.618
9 6-H11-G5-D8 199.6 1.78
10 7-E1-F8-F6 3378 0.9823
11 3-C2-C3-E7 3703 1.433
12 27-F8-E10-E11 3224 2.26
13 9-G2-H6-E4 291.7 3.659
14 25-D3-G4-C6 3447 1.267
15 27-E7-D8-C7 4750 0.5425
16 18-F9-D8-G7 4610 0.2857
17 10-B9-D10-A12 3879 2.082
18 20-A2-D10-G8 3112 0.7906
19 23-F10-G4-F11 6725 4.425
20 16-C6-F7-F5 5354 0.1858
21 22-E11-C3-F2 5545 0.5228
22 16-G3-D10-C10 3176 1.311
23 21-B3-B1-H5 2718 0.7228
24 30-C7-C11-D4 4266 0.2821
25 11-G10-B4-B11 3747 0.5358
26 20-F8-B5-G2 3012 1.109
27 10-G6-C4-B2 5640 0.8215
28 8-C3-E3-F3 2883 0.6432
29 30-E2-G7-G7 5628 0.814
30 20-C5-D7-D3 2308 0.941
31 13-E4-G9-A4 3076 1.775
32 25-C8-D7-C5 3483 2.031
2. 使用 Biacore(ChemPartner) 進行之基於蛋白質之親和力測試測試條件： 分析物：B7H3 運行緩衝液：HBS-EP +流速：30 µL/min 捕獲：Abs，10 µL/min，60秒 注射連續稀釋之B7H3 接觸時間：180秒 解離時間：400秒 再生：pH 1.5 Gly，30 µL/min，30秒 方法：使用捕獲之多循環動力學/親和力 機器型號：Biacore 8K(GE) 分析溫度：25℃
表 5 示出 Biacore (ChemPartner) 測得之嵌合抗體對 hB7H3 之結合親和力
條目 動力學模型 捕獲物1 溶液 分析物1 溶液 動力學Chi ² (RU ²) ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M)
1 1:1結合 2 μg/ml 15-G1-D1-E3 人B7H3 5.91E-01 5.50E+05 2.11E-04 3.83E-10
2 1:1結合 1 μg/ml 6-D8-E7-A11 人B7H3 8.17E-01 4.64E+05 3.48E-04 7.49E-10
3 1:1結合 2 μg/ml 15-C8-B5-G7 人B7H3 3.70E-01 4.92E+05 1.96E-04 3.99E-10
4 1:1結合 2 μg/ml 7-E1-F8-F6 人B7H3 1.97E-01 2.60E+05 2.22E-04 8.55E-10
5 1:1結合 2 μg/ml 27-F8-E10-E11 人B7H3 2.34E-01 2.78E+05 1.73E-04 6.21E-10
6 1:1結合 2 μg/ml 25-D3-G4-C6 人B7H3 1.42E-01 1.08E+05 2.50E-04 2.31E-09
7 1:1結合 1 μg/ml 18-F9-D8-G7 人B7H3 8.59E-01 4.89E+05 2.39E-04 4.89E-10
8 1:1結合 2 μg/ml 20-A2-D10-G8 人B7H3 8.74E-01 5.08E+05 2.82E-04 5.55E-10
9 1:1結合 2 μg/ml 16-C6-F7-F5 人B7H3 2.15E+00 3.77E+05 2.43E-04 6.45E-10
10 1:1結合 2 μg/ml 16-G3-D10-C10 人B7H3 1.29E-01 1.85E+05 2.14E-04 1.16E-09
11 1:1結合 1 μg/ml 10-G6-C4-B2 人B7H3 1.80E-01 2.52E+05 1.98E-04 7.85E-10
12 1:1結合 1 μg/ml 8-C3-E3-F3 人B7H3 4.26E-01 9.90E+05 4.40E-04 4.44E-10
13 1:1結合 2 μg/ml 20-C5-D7-D3 人B7H3 5.33E-01 6.45E+05 4.16E-04 6.44E-10
14 1:1結合 2 μg/ml 25-C8-D7-C5 人B7H3 3.97E-01 2.03E+05 2.43E-04 1.20E-09
15 1:1結合 1 μg/ml 10-B9-D10-A12 人B7H3 6.25E-01 3.75E+05 2.82E-04 7.52E-10
16 1:1結合 1 μg/ml依諾妥珠單抗 人B7H3 5.98E-01 1.28E+05 4.86E-04 3.80E-09
17 1:1結合 2 μg/ml MGC018 人B7H3 6.03E-02 8.89E+05 4.08E-04 4.59E-10
3. B7H3 在幾種癌細胞株中之表現模式用6-D8-E7-A11藉由FACS偵測B7H3表現。發現B7H3在諸如BxPC3 (胰腺)、MCF7 (乳腺)、Dentroit562 (頭頸)、RKO (結腸)及SUN620 (胃)之幾種癌細胞株上之高表現位準(見圖2)。
實例 3 ：抗體表徵： ADCC 1. 方法為確定抗CD276抗體之ADCC，將1×10 5個/孔SKOV3接種至96孔平底無菌板上，然後加入2×10 4個Jurkat-NFAT-螢光素酶-CD16作為效應細胞。之後，將連續稀釋之抗體加入至每個孔中，並將平板在37℃、5% CO 2下孵育18小時。最後，偵測螢光素酶活性以評估抗體之ADCC活性。
2. 結果吾等所有之抗體在SKOV3細胞(一種人卵巢癌細胞株)上顯示出有效之ADCC效應。與基準抗體依諾妥珠單抗相比，一些抗體顯示出較低或相當之EC 50(表6及圖3)，表明其在介導SKOV3細胞上之ADCC效應態樣比依諾妥珠單抗(MGA271)更有效。 表 6. 抗體誘導 SKOV3 上 ADCC 效應之 EC 50
   EC 50(μg/ml)
依諾妥珠單抗 0.08636
9-E8-F9-C10 4.052
10-G6-C4-B2 0.2369
18-F9-D8-G7 0.5032
27-E7-D8-C7 0.1035
3-C2-C3-E7 0.1864
16-C6-F7-F5 0.006641
22-E11-C3-F2 0.01792
30-E2-G7-G7 0.2473
23-F10-G4-F11 0.1367
11-G10-B4-B11 17.34
30-C7-C11-D4 0.03268
5-D1-G6-D9 1.553
20-F8-B5-G2 3.013
9-G2-H6-E4 13.6
10-B9-D10-A12 0.2585
20-A2-D10-G8 0.2625
20-C5-D7-D3 0.06897
13-E4-G9-A4 0.8762
25-C8-D7-C5 0.1228
16-G3-D10-C10 0.04186
21-B3-B1-H5 0.6478
8-C3-E3-F3 0.1111
15-G1-D1-E3 0.06548
15-C8-B5-G7 0.6968
27-F8-E10-E11 0.02385
25-D3-G4-C6 0.03723
2-A7-B10-A3 4.207
3-G7-D8-D3 0.008984
14-E7-G9-D4 0.2516
7-E1-F8-F6 0.01771
6-D8-E7-A11 0.06677
實例 4 ：抗體表徵： CDC 1. 方法為確定抗CD276抗體之CDC，將CHO-S-hCD276細胞以4E5個細胞/mL重懸於細胞培養基中，然後以50 μL/孔加入至96孔不透明壁板中。用完全F-12K培養基稀釋抗CD276抗體，並以50 μL/孔之量加入至96孔不透明壁板。用細胞培養基稀釋人血清補體，並以50 μL/孔之量加入至相同之板中。混合物在37℃之CO 2培養箱中孵育2小時。以50 μL/孔之量加入用於確定細胞毒性之CellTiter-Glo試劑，混合物在室溫下孵育10分鐘。記錄在酶標儀上活細胞之發光訊號。
2. 結果與基準抗體依諾妥珠單抗(MGA271)相比，所有抗CD276抗體均顯示出對CHO-S-hCD276細胞之有效CDC作用及較低之EC 50(見表7及圖4)。 表 7. 抗體誘導 CDC 效應之最大 CHO-S-hCD276 殺傷百分率及 EC 50
   EC 50(nM) 最高細胞毒性(%)
18-F9-D8-G7 2.441 70.33
30-C7-C11-D4 3.215 60.27
10-G6-C4-B2 2.738 93.53
16-C6-F7-F5 1.284 92.09
15-C8-B5-G7 7.537 86.1
7-E1-F8-F6 1.69 91.89
25-D3-G4-C6 2.413 89.7
MGA271-WT Fc 8.913 19.63
20-A2-D10-G8 1.922 85.07
16-G3-D10-C10 1.428 93.56
25-C8-D7-C5 2.417 91.37
6-D8-E7-A11 1.575 92.45
MGC018 1.672 93.32
MGA271 7.28 80.09
MGA271-WT Fc 9.64 19.77
實例 5 ：抗體表徵：間接 ADC 細胞毒性 1. 方法Fab-ZAP為山羊抗人單價抗體(二抗)及核糖體失活蛋白皂草素(saporin)之化學共軛物。Fab-ZAP用於確定抗體之內化能力。在此分析中，將80 μL SKOV-3細胞以2000細胞/孔之量鋪在96孔板中，並在37℃下孵育一夜。然後以40 μL/孔之量加入抗CD276抗體。以4 0μL/孔之量加入人類Fab-ZAP稀釋液，並在37℃之CO 2培養箱中孵育96小時。以100 μL/孔之量加入用於確定細胞毒性之CellTiter-Glo試劑，並在室溫下孵育10分鐘。記錄在酶標儀上活細胞之發光訊號。
2. 結果所有抗CD276抗體對SKOV3細胞顯示出有效之間接ADC效應，與基準抗體MGC018相比，IC 50較低或相當(表8，圖5)，表明其為製造ADC之潛在候選物。 表 8.ADC 對 SKOV3 間接細胞毒性之 IC 50
   IC 50(nM)
MGC018 0.013
6-D8-E7-A11 0.008
15-C8-B5-G7 0.008
7-E1-F8-F6 0.028
25-D3-G4-C6 0.023
18-F9-D8-G7 0.014
10-B9-D10-A12 0.021
20-A2-D10-G8 0.007
16-C6-F7-F5 0.009
22-E11-C3-F2 0.016
10-G6-C4-B2 0.008
8-C3-E3-F3 0.012
20-C5-D7-D3 0.007
13-E4-G9-A4 0.021
25-C8-D7-C5 0.018
實例 6 ：抗體在雌性 C57BL/6 小鼠中治療皮下 MC-38-hCD276 鼠結腸癌之體內有效性 1. 研究設計與方法構築並表現了幾種具有小鼠IgG2a Fc之單株抗體，用於體內有效性研究。還使用mAb 6-D8-E7-A11及PD-L1 mAb (上海原能細胞醫療技術有限公司；參見WO2019196309A1，YN035)與小鼠IgG2a以IgG(H)scFv之形式構築了雙特異性抗體，命名為Bs-6-D7-E7.A11小鼠IgG2a。將抗B7H3 scFv VH之N末端及(GGGGS) 3-VL連接於PD-L1抗體之Fc區之C末端。 1. MC-38-hCD276 (B7H3)腫瘤細胞用補充有10%胎牛血清之DMEM培養基在37℃及5% CO 2之空氣環境下進行體外維持。在接種腫瘤之前，收穫處於指數生長期之細胞，並藉由細胞計數器進行定量。 2. 每隻小鼠在右後肋區域皮下接種0.1 ml PBS中之MC-38-hCD276 (B7H3)腫瘤細胞(1×10^6)，用於腫瘤發育。隨機化之日期表示為第0天，自第0天開始給藥。 3. 當平均腫瘤大小達至約50-60 mm 3時，將開始隨機化。本研究納入60隻小鼠。所有動物隨機分配至7個研究組。根據隨機區組設計進行隨機化。 4. 使用測徑器每週兩次在二維方向上量測腫瘤體積，體積以mm 3計，使用式V =(L×W×W)/2，其中V為腫瘤體積，L為腫瘤長度(最長的腫瘤尺寸)，W為腫瘤寬度(最長腫瘤尺寸，垂直於L)。給藥以及腫瘤及體重量測均在層流櫃中進行(見表9，圖6)。 5. 阿特珠單抗(Atezolizumab，一種抗PD-L1抗體，亦稱為Tecentriq或MPDL3280A，參見WO2010077634A1)及Antengene-084M (用小鼠IgG2a構築之MGA271之Fab序列(參見US8802091B))用作對照。 表 9. 體內有效性試驗之研究設計
組 編號 小鼠品系 腫瘤模型 處理 劑量位準 (mg/kg) 給藥溶液 (mg/ml) 給藥體積 (μL/g) ROA 給藥頻率及持續時間
1 6 C57BL/6 MC-38-hCD276 小鼠IgG2A 5 0.5 10 i.p. Q3D x 5劑
2 6 C57BL/6 MC-38-hCD276 阿特珠單抗 5 0.5 10 i.p. Q3D x 5劑
3 6 C57BL/6 MC-38-hCD276 16-C6-F7-F5小鼠IgG2a 5 0.5 10 i.p. Q3D x 5劑
4 6 C57BL/6 MC-38-hCD276 25-C8-D7-C5小鼠IgG2a 5 0.5 10 i.p. Q3D x 5劑
5 6 C57BL/6 MC-38-hCD276 30-C7-C11-D4小鼠IgG2a 5 0.5 10 i.p. Q3D x 5劑
6 6 C57BL/6 MC-38-hCD276 18-F9-D8-G7小鼠IgG2a 5 0.5 10 i.p. Q3D x 5劑
7 6 C57BL/6 MC-38-hCD276 6-D8-E7-A11小鼠IgG2a 5 0.5 10 i.p. Q3D x 5劑
8 6 C57BL/6 MC-38-hCD276 10-G6-C4-B2小鼠IgG2a 5 0.5 10 i.p. Q3D x 5劑
9 6 C57BL/6 MC-38-hCD276 Antengene-084M小鼠IgG2a 5 0.5 10 i.p. Q3D x 5劑
10 6 C57BL/6 MC-38-hCD276 Bs-6-D8-E7-A11小鼠IgG2a 8.3 0.83 10 i.p. Q3D x 5劑
2. 結果如圖6所示，一些抗CD276抗體顯示出強效之體內有效性。特別地，25-C8-D7-C5小鼠IgG2a及Bs-6-D8-E7-A11小鼠IgG2a顯示出比Antengene-084M小鼠IgG2a更高之腫瘤抑制。
圖式僅出於說明之目的而非限制。
圖1示出藉由FAC分析量測之本文提供之抗CD276抗體對SKOV3細胞之結合親和力。
圖2A至圖2E示出藉由FAC分析量測之6-D8-E7-A11與若干個表現B7H3之癌細胞株之結合。
圖3A至圖3C示出本文提供之抗CD276抗體對SKOV3細胞之ADCC效應。
圖4A及圖4B示出本文提供之抗CD276抗體對CHO-S-hCD276細胞之CDC效應。
圖5A至圖5E示出本文提供之抗CD276抗體對SKOV3細胞之間接ADC細胞毒性作用。
圖6示出本文提供之抗CD276抗體在用MC-38-hCD276 (B7H3)腫瘤細胞接種之小鼠模型中抑制腫瘤生長之體內有效性。

Claims (72)

  1. 一種特異性結合CD276之分離之抗體或其抗原結合片段，其包含1、2或3個選自由以下組成之群的重鏈互補決定區(CDR)序列：SEQ ID NO: 1-3、9-11、17-19、25-27、33-35、41-43、49-51、57-59、65-67、73-75、81-83、89-91、97-99、105-107、113-115、121-123、129-131、137-139、145-147、153-155、161-163、169-171、177-179、185-187、193-195、201-203、209-211、217-219、225-227、233-235、241-243、249-251、257-259、265-267、273-275、281-283、289-291、297-299、305-307、313-315、321-323、329-331及337-339，及/或1、2或3個選自由以下組成之群的輕鏈CDR序列：SEQ ID NO: 4-6、12-14、20-22、28-30、36-38、44-46、52-54、60-62、68-70、76-78、84-86、92-94、100-102、108-110、116-118、124-126、132-134、140-142、148-150、156-158、164-166、172-174、180-181、188-190、196-198、204-206、212-214、220-222、228-230、236-238、244-246、252-254、260-262、268-270、276-278、284-286、292-294、300-302、308-310、316-318、324-326、332-334及340-342。
  2. 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其包含選自由以下組成之群的重鏈可變區： a)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 1-3之1、2或3個CDR序列； b)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 9-11之1、2或3個CDR序列； c)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 17-19之1、2或3個CDR序列； d)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 25-27之1、2或3個CDR序列； e)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 33-35之1、2或3個CDR序列； f)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 41-43之1、2或3個CDR序列； g)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 49-51之1、2或3個CDR序列； h)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 57-59之1、2或3個CDR序列； i)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 65-67之1、2或3個CDR序列； j)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 73-75之1、2或3個CDR序列； k)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 81-83之1、2或3個CDR序列； l)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 89-91之1、2或3個CDR序列； m)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 97-99之1、2或3個CDR序列； n)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 105-107之1、2或3個CDR序列； o)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 113-115之1、2或3個CDR序列； p)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 121-123之1、2或3個CDR序列； q)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 129-131之1、2或3個CDR序列； r)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 137-139之1、2或3個CDR序列； s)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 145-147之1、2或3個CDR序列； t)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 153-155之1、2或3個CDR序列； u)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 161-163之1、2或3個CDR序列； v)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 169-171之1、2或3個CDR序列； w)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 177-179之1、2或3個CDR序列； x)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 185-187之1、2或3個CDR序列； y)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 193-195之1、2或3個CDR序列； z)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 201-203之1、2或3個CDR序列； aa)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 209-211之1、2或3個CDR序列； bb)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 217-219之1、2或3個CDR序列； cc)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 225-227之1、2或3個CDR序列； dd)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 233-235之1、2或3個CDR序列； ee)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 241-243之1、2或3個CDR序列； ff)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 249-251之1、2或3個CDR序列； gg)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 257-259之1、2或3個CDR序列； hh)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 265-267之1、2或3個CDR序列； ii)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 273-275之1、2或3個CDR序列； jj)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 281-283之1、2或3個CDR序列； kk)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 289-291之1、2或3個CDR序列； ll)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 297-299之1、2或3個CDR序列； mm)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 305-307之1、2或3個CDR序列； nn)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 313-315之1、2或3個CDR序列； oo)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 321-323之1、2或3個CDR序列； pp)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 329-331之1、2或3個CDR序列；及 qq)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 337-339之1、2或3個CDR序列。
  3. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其包括選自由以下組成之群的輕鏈可變區： a)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 4-6之1、2或3個CDR序列； b)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 12-14之1、2或3個CDR序列； c)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 20-22之1、2或3個CDR序列； d)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 28-30之1、2或3個CDR序列； e)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 36-38之1、2或3個CDR序列； f)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 44-46之1、2或3個CDR序列； g)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 52-54之1、2或3個CDR序列； h)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 60-62之1、2或3個CDR序列； i)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 68-70之1、2或3個CDR序列； j)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 76-78之1、2或3個CDR序列； k)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 84-86之1、2或3個CDR序列； l)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 92-94之1、2或3個CDR序列； m)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 100-102之1、2或3個CDR序列 n)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 108-110之1、2或3個CDR序列； o)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 116-118之1、2或3個CDR序列； p)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 124-126之1、2或3個CDR序列； q)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 132-134之1、2或3個CDR序列； r)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 140-142之1、2或3個CDR序列； s)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 148-150之1、2或3個CDR序列； t)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 156-158之1、2或3個CDR序列； u)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 164-166之1、2或3個CDR序列； v)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 172-174之1、2或3個CDR序列； w)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 180-181之1、2或3個CDR序列； x)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 188-190之1、2或3個CDR序列； y)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 196-198之1、2或3個CDR序列； z)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 204-206之1、2或3個CDR序列； aa)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 212-214之1、2或3個CDR序列； bb)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 220-222之1、2或3個CDR序列； cc)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 228-230之1、2或3個CDR序列； dd)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 236-238之1、2或3個CDR序列； ee)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 244-246之1、2或3個CDR序列； ff)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 252-254之1、2或3個CDR序列； gg)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 260-262之1、2或3個CDR序列； hh)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 268-270之1、2或3個CDR序列； ii)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 276-278之1、2或3個CDR序列； jj)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 284-286之1、2或3個CDR序列； kk)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 292-294之1、2或3個CDR序列； ll)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 300-302之1、2或3個CDR序列； mm)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 308-310之1、2或3個CDR序列； nn)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 316-318之1、2或3個CDR序列； oo)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 324-326之1、2或3個CDR序列； pp)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 332-334之1、2或3個CDR序列；及 qq)輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 340-342之1、2或3個CDR序列。
  4. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其包含： a)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2及SEQ ID NO: 3之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5及SEQ ID NO: 6之1、2或3個CDR序列； b)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10及SEQ ID NO: 11之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13及SEQ ID NO: 14之1、2或3個CDR序列； c)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18及SEQ ID NO: 19之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21及SEQ ID NO: 22之1、2或3個CDR序列； d)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26及SEQ ID NO: 27之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29及SEQ ID NO: 30之1、2或3個CDR序列； e)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34及SEQ ID NO: 35之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 37及SEQ ID NO: 38之1、2或3個CDR序列； f)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42及SEQ ID NO: 43之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45及SEQ ID NO: 46之1、2或3個CDR序列； g)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50及SEQ ID NO: 51之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53及SEQ ID NO: 54之1、2或3個CDR序列； h)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 58及SEQ ID NO: 59之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 61及SEQ ID NO: 62之1、2或3個CDR序列； i)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66及SEQ ID NO: 67之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 69及SEQ ID NO: 70之1、2或3個CDR序列； j)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 74及SEQ ID NO: 75之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 77及SEQ ID NO: 78之1、2或3個CDR序列； k)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 82及SEQ ID NO: 83之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 85及SEQ ID NO: 86之1、2或3個CDR序列； l)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 89、SEQ ID NO: 90及SEQ ID NO: 91之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 93及SEQ ID NO: 94之1、2或3個CDR序列； m)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 97、SEQ ID NO: 98及SEQ ID NO: 99之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 101及SEQ ID NO: 102之1、2或3個CDR序列； n)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 105、SEQ ID NO: 106及SEQ ID NO: 107之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 109及SEQ ID NO: 110之1、2或3個CDR序列； o)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 113、SEQ ID NO: 114及SEQ ID NO: 115之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 117及SEQ ID NO: 118之1、2或3個CDR序列； p)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 121、SEQ ID NO: 122及SEQ ID NO: 123之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 125及SEQ ID NO: 126之1、2或3個CDR序列； q)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 129、SEQ ID NO: 130及SEQ ID NO: 131之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 133及SEQ ID NO: 134之1、2或3個CDR序列； r)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 138及SEQ ID NO: 139之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 141及SEQ ID NO: 142之1、2或3個CDR序列； s)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 145、SEQ ID NO: 146及SEQ ID NO: 147之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 148、SEQ ID NO: 149及SEQ ID NO: 150之1、2或3個CDR序列； t)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 154及SEQ ID NO: 155之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 157及SEQ ID NO: 158之1、2或3個CDR序列； u)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 161、SEQ ID NO: 162及SEQ ID NO: 163之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 164、SEQ ID NO: 165及SEQ ID NO: 166之1、2或3個CDR序列； v)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 169、SEQ ID NO: 170及SEQ ID NO: 171之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 172、SEQ ID NO: 173及SEQ ID NO: 174之1、2或3個CDR序列； w)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 177、SEQ ID NO: 178及SEQ ID NO: 179之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 180、SEQ ID NO: 181及SEQ ID NO: 182之1、2或3個CDR序列； x)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 185、SEQ ID NO: 186及SEQ ID NO: 187之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 188、SEQ ID NO: 189及SEQ ID NO: 190之1、2或3個CDR序列； y)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 193、SEQ ID NO: 194及SEQ ID NO: 195之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 196、SEQ ID NO: 197及SEQ ID NO: 198之1、2或3個CDR序列； z)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 201、SEQ ID NO: 202及SEQ ID NO: 203之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 204、SEQ ID NO: 205及SEQ ID NO: 206之1、2或3個CDR序列； aa)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 209、SEQ ID NO: 210及SEQ ID NO: 211之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 212、SEQ ID NO: 213及SEQ ID NO: 214之1、2或3個CDR序列； bb)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 217、SEQ ID NO: 218及SEQ ID NO: 219之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 220、SEQ ID NO: 221及SEQ ID NO: 222之1、2或3個CDR序列； cc)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 225、SEQ ID NO: 226及SEQ ID NO: 227之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 228、SEQ ID NO: 229及SEQ ID NO: 230之1、2或3個CDR序列； dd)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 233、SEQ ID NO: 234及SEQ ID NO: 235之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 236、SEQ ID NO: 237及SEQ ID NO: 238之1、2或3個CDR序列； ee)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 241、SEQ ID NO: 242及SEQ ID NO: 243之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 244、SEQ ID NO: 245及SEQ ID NO: 246之1、2或3個CDR序列； ff)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 249、SEQ ID NO: 250及SEQ ID NO: 251之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 252、SEQ ID NO: 253及SEQ ID NO: 254之1、2或3個CDR序列； gg)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 257、SEQ ID NO: 258及SEQ ID NO: 259之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 260、SEQ ID NO: 261及SEQ ID NO: 262之1、2或3個CDR序列； hh)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 265、SEQ ID NO: 266及SEQ ID NO: 267之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 268、SEQ ID NO: 269及SEQ ID NO: 270之1、2或3個CDR序列； ii)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 273、SEQ ID NO: 274及SEQ ID NO: 275之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 276、SEQ ID NO: 277及SEQ ID NO: 278之1、2或3個CDR序列； jj)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 281、SEQ ID NO: 282及SEQ ID NO: 283之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 284、SEQ ID NO: 285及SEQ ID NO: 286之1、2或3個CDR序列； kk)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 289、SEQ ID NO: 290及SEQ ID NO: 291之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 292、SEQ ID NO: 293及SEQ ID NO: 294之1、2或3個CDR序列； ll)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 297、SEQ ID NO: 298及SEQ ID NO: 299之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 300、SEQ ID NO: 301及SEQ ID NO: 302之1、2或3個CDR序列； mm)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 305、SEQ ID NO: 306及SEQ ID NO: 307之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 308、SEQ ID NO: 309及SEQ ID NO: 310之1、2或3個CDR序列； nn)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 313、SEQ ID NO: 314及SEQ ID NO: 315之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 316、SEQ ID NO: 317及SEQ ID NO: 318之1、2或3個CDR序列； oo)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 321、SEQ ID NO: 322及SEQ ID NO: 323之1、2或3個CDR序列；及輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 324、SEQ ID NO: 325及SEQ ID NO: 326之1、2或3個CDR序列； pp)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 329、SEQ ID NO: 330及SEQ ID NO: 331之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 332、SEQ ID NO: 333及SEQ ID NO: 334之1、2或3個CDR序列；或 qq)重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 337、SEQ ID NO: 338及SEQ ID NO: 339之1、2或3個CDR序列；及κ輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO: 340、SEQ ID NO: 341及SEQ ID NO: 342之1、2或3個CDR序列。
  5. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區選自由以下組成之群的序列以及與其具有至少80%序列同源性之同源序列：SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 71、SEQ ID NO: 79、SEQ ID NO: 87、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 119、SEQ ID NO: 127、SEQ ID NO: 135、SEQ ID NO: 143、SEQ ID NO: 151、SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 167、SEQ ID NO: 175、SEQ ID NO: 183、SEQ ID NO: 191、SEQ ID NO: 199、SEQ ID NO: 207、SEQ ID NO: 215、SEQ ID NO: 223、SEQ ID NO: 231、SEQ ID NO: 239、SEQ ID NO: 247、SEQ ID NO: 255、SEQ ID NO: 263、SEQ ID NO: 271、SEQ ID NO: 279、SEQ ID NO: 287、SEQ ID NO: 295、SEQ ID NO: 303、SEQ ID NO: 311、SEQ ID NO: 319、SEQ ID NO: 327、SEQ ID NO: 335及SEQ ID NO: 343。
  6. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區選自由以下組成之群的序列以及與其具有至少80%序列同源性之同源序列：SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 136、SEQ ID NO: 144、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 160、SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 176、SEQ ID NO: 184、SEQ ID NO: 192、SEQ ID NO: 200、SEQ ID NO: 208、SEQ ID NO: 216、SEQ ID NO: 224、SEQ ID NO: 232、SEQ ID NO: 240、SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 256、SEQ ID NO: 264、SEQ ID NO: 272、SEQ ID NO: 280、SEQ ID NO: 288、SEQ ID NO: 296、SEQ ID NO: 304、SEQ ID NO: 312、SEQ ID NO: 320、SEQ ID NO: 328、SEQ ID NO: 336及SEQ ID NO: 344。
  7. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其包含： a)包含SEQ ID NO: 7之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 8之輕鏈可變區； b)包含SEQ ID NO: 15之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 16之輕鏈可變區； c)包含SEQ ID NO: 23之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 24之輕鏈可變區； d)包含SEQ ID NO: 31之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 32之輕鏈可變區； e)包含SEQ ID NO: 39之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 40之輕鏈可變區； f)包含SEQ ID NO: 47之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 48之輕鏈可變區； g)包含SEQ ID NO: 55之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 56之輕鏈可變區； h)包含SEQ ID NO: 63之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 64之輕鏈可變區； i)包含SEQ ID NO: 71之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 72之輕鏈可變區； j)包含SEQ ID NO: 79之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 80之輕鏈可變區； k)包含SEQ ID NO: 87之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 88之輕鏈可變區； l)包含SEQ ID NO: 95之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 96之輕鏈可變區； m)包含SEQ ID NO: 103之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 104之輕鏈可變區； n)包含SEQ ID NO: 111之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 112之輕鏈可變區； o)包含SEQ ID NO: 119之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 120之輕鏈可變區； p)包含SEQ ID NO: 127之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 128之輕鏈可變區； q)包含SEQ ID NO: 135之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 136之輕鏈可變區； r)包含SEQ ID NO: 143之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 144之輕鏈可變區； s)包含SEQ ID NO: 151之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 152之輕鏈可變區； t)包含SEQ ID NO: 159之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 160之輕鏈可變區； u)包含SEQ ID NO: 167之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 168之輕鏈可變區； v)包含SEQ ID NO: 175之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 176之輕鏈可變區； w)包含SEQ ID NO: 183之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 184之輕鏈可變區； x)包含SEQ ID NO: 191之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 192之輕鏈可變區； y)包含SEQ ID NO: 199之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 200之輕鏈可變區； z)包含SEQ ID NO: 207之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 208之輕鏈可變區； aa)包含SEQ ID NO: 215之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 216之輕鏈可變區； bb)包含SEQ ID NO: 223之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 224之輕鏈可變區； cc)包含SEQ ID NO: 231之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 232之輕鏈可變區； dd)包含SEQ ID NO: 239之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 240之輕鏈可變區； ee)包含SEQ ID NO: 247之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 248之輕鏈可變區； ff)包含SEQ ID NO: 255之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 256之輕鏈可變區； gg)包含SEQ ID NO: 263之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 264之輕鏈可變區； hh)包含SEQ ID NO: 271之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 272之輕鏈可變區； ii)包含SEQ ID NO: 279之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 280之輕鏈可變區； jj)包含SEQ ID NO: 287之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 288之輕鏈可變區； kk)包含SEQ ID NO: 295之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 296之輕鏈可變區； ll)包含SEQ ID NO: 303之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 304之輕鏈可變區； mm)包含SEQ ID NO: 311之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 312之輕鏈可變區； nn)包含SEQ ID NO: 319之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 320之輕鏈可變區； oo)包含SEQ ID NO: 327之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 328之輕鏈可變區； pp)包含SEQ ID NO: 335之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 336之輕鏈可變區；及 qq)包含SEQ ID NO: 343之重鏈可變區及包含SEQ ID NO: 344之輕鏈可變區。
  8. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其進一步包含一或多個胺基酸殘基取代或修飾，但仍保持對人類CD276之特異性結合親和力。
  9. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該取代在一或多個CDR序列中，及/或在一或多個該等VH或VL序列中，但不在任何該等CDR序列中。
  10. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其還包含免疫球蛋白恆定區，視情況之人類Ig之恆定區，或視情況之人類IgG之恆定區。
  11. 如請求項10之抗體或其抗原結合片段，其中該恆定區包含人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之恆定區。
  12. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其為嵌合的或人源化的。
  13. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其為雙抗體(diabody)、Fab、Fab'、F(ab') 2、Fd、Fv片段、二硫鍵穩定之Fv片段(dsFv)、(dsFv) 2、雙特異性dsFv (dsFv-dsFv')、二硫鍵穩定之雙抗體(ds diabody)、單鏈抗體分子(scFv)、scFv二聚體(二價雙抗體)、多特異性抗體、駱駝化單域抗體、奈米抗體、域抗體及二價域抗體。
  14. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其為雙特異性的。
  15. 如請求項14之抗體或其抗原結合片段，其能夠特異性地結合CD276之第一及第二表位，或能夠特異性地結合CD276及第二抗原。
  16. 如請求項15之抗體或其抗原結合片段，其藉由scFv與CD276結合並藉由Fab與該第二抗原結合。
  17. 如請求項16之抗體或其抗原結合片段，其中結合CD276之scFv可操作地連接於在結合該第二抗原之Fab之後的重鏈恆定區之C末端。
  18. 如請求項17之抗體或其抗原結合片段，該抗體包含具有下式之重鏈：VH (抗第二抗原)-CH1-鉸鏈區-CH2-CH3-間隔子-scFv (抗CD276)，其與具有下式之輕鏈相結合：VL (抗第二抗原)-CL。
  19. 如請求項15至18中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該第二抗原為免疫相關目標，視情況其選自由以下組成之群：PD-L1、PD-L2、PD-1、CTLA-4、TIM-3、LAG3、CD160、2B4、TGF β、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、OX40、CD2、CD27、ICAM-1、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H4、LFA-1、ICOS、4-1BB、GITR、CD30、CD39、CD73、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、IL-2、IL-15、CD3、CD16、SIRPα、唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素10 (Siglec 10)、LILRB2、Clever-1、Macro、LILRB4、唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素15 (Siglec 15)、CSF1R、PSGL-1、VSIG-4、B2M及CD83。
  20. 如請求項19之抗體或其抗原結合片段，其中該免疫相關目標為PD-L1。
  21. 如請求項20之抗體或其抗原結合片段，其包括具有下式之重鏈：VH (抗PD-L1)-CH1-鉸鏈區-CH2-CH3-間隔子-scFv (抗CD276)，其與具有下式之輕鏈相結合：VL (抗PD-L1)-CL。
  22. 如請求項16之抗體或其抗原結合片段，其中該第二抗原包括腫瘤抗原。
  23. 如請求項22之抗體或其抗原結合片段，其中該腫瘤抗原包括CA-125、神經節苷脂G(D2)、G(M2)及G(D3)、CD19、CD20、CD24、CD33、CD47、CD52、Ep-CAM、CEA、CLDN18.2、蛙皮素樣肽、PSA、HER2/neu、表皮生長因子受體(EGFR)、erbB2、erbB3/HER3、erbB4、CD44v6、CD44v9、Ki-67、癌相關黏蛋白、VEGF、VEGFRs (如VEGFR3)、雌激素受體、Lewis-Y抗原、TGFβ1、IGF-1受體、EGFα、c-Kit受體，轉鐵蛋白受體、IL-2R、CDH6、CEA、FOLR1、TROP2、PTK7、SLITRK6、CD142、連接蛋白-4、ROR1、ROR2、CD142，CD123、CD22、CD79b、DLL3、SLC家族或CO17-1A。
  24. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段連接至一或多個共軛物，視情況，其中該共軛物直接或經由連接子共價附接。
  25. 如請求項24之抗體或其抗原結合片段，其中該共軛物包含清除調節劑、化學治療劑、毒素、放射性同位素、鑭系元素、發光標記、螢光標記、酶-受質標記、DNA烷基化劑、拓樸異構酶抑制劑、微管蛋白結合劑或其他抗癌藥物。
  26. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該CD276源自人類，並且視情況，其中該CD276為重組CD276或在細胞表面表現之CD276。
  27. 一種抗體或其抗原結合片段，其與如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段競爭相同表位。
  28. 一種醫藥組合物，其包含如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，及醫藥學上可接受之載劑。
  29. 如請求項28之醫藥組合物，其進一步包含第二治療劑，視情況，其中該第二治療劑係針對一或多種免疫抑制分子之拮抗劑。
  30. 如請求項29之醫藥組合物，其中該第二治療劑為PD-L1拮抗劑，視情況，其中該PD-L1拮抗劑為PD-L1抗體或其抗原結合片段。
  31. 一種分離之多核苷酸，其編碼如請求項1至26中任一項之抗體或其抗原結合片段。
  32. 一種載體，其包含如請求項31之分離的多核苷酸。
  33. 一種宿主細胞，其包含如請求項32之載體。
  34. 一種表現如請求項1至26中任一項之抗體或其抗原結合片段的方法，其包含在表現如請求項32之載體之條件下培養如請求項33之宿主細胞。
  35. 一種治療將受益於調節CD276活性之受試者之疾病或病症的方法，其包含向該受試者投與治療有效量之如請求項1至26中任一項之抗體或其抗原結合片段或如請求項29至30中任一項之醫藥組合物。
  36. 如請求項35之方法，其中該疾病或病症為CD276相關疾病或病症。
  37. 如請求項35之方法，其中該疾病或病症為癌症、適應性免疫疾病、自身免疫疾病、發炎性疾病或感染性疾病。
  38. 如請求項37之方法，其中該癌症為腎上腺腫瘤、AIDS相關癌症、腺泡狀軟組織肉瘤、星形細胞腫瘤、膀胱癌、骨癌、腦及脊髓癌、轉移性腦瘤、乳癌、頸動脈體瘤、子宮頸癌、軟骨肉瘤、脊索瘤、嫌色細胞腎細胞癌、透明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性纖維組織細胞瘤、促結締組織增生性小圓細胞瘤、室管膜瘤、尤因瘤、骨外黏液樣軟骨肉瘤、骨纖維發育不全、骨纖維異常增殖症、膽囊癌或膽管癌、胃癌(gastric cancer)、妊娠滋養細胞疾病、生殖細胞瘤、頭頸癌、肝細胞癌、胰島細胞瘤、卡波西肉瘤、腎癌、白血病、脂肪瘤/良性脂肪瘤樣腫瘤、脂肪肉瘤/惡性脂肪瘤樣腫瘤、肝癌、淋巴瘤、肺癌、髓母細胞瘤、黑色素瘤、腦膜瘤、多樣內分泌瘤、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常症候群、成神經細胞瘤、神經內分泌腫瘤、卵巢癌、胰臟癌、甲狀腺乳頭狀癌、甲狀旁腺腫瘤、兒科癌症、外周神經鞘腫瘤、嗜鉻細胞瘤、垂體瘤、前列腺癌、後葡萄膜黑色素瘤、罕見之血液病症、腎轉移癌、橫紋肌樣瘤、橫紋肌肉瘤、肉瘤、皮膚癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌、胃癌(stomach cancer)、滑膜肉瘤、睾丸癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲狀腺轉移癌及子宮癌，視情況，其中該癌症為化學抵抗性的。
  39. 如請求項37之方法，其中該疾病或病症係選自B細胞淋巴瘤，視情況霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、多發性骨髓瘤(MM)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、邊緣區B細胞淋巴瘤(MZL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、里克特症候群(Richter's syndrome)、伯基特淋巴瘤或濾泡性淋巴瘤之血液學癌症。
  40. 如請求項35之方法，其中該受試者為人類。
  41. 如請求項35之方法，其包含向該受試者投與治療有效量之一或多種治療劑。
  42. 如請求項35之方法，其中該治療劑為化療劑、放射治療劑、激素治療劑、毒素或免疫治療劑。
  43. 如請求項42之方法，其中該第二治療劑為PD-L1拮抗劑，視情況，其中該PD-L1拮抗劑為抗PD-L1抗體或其抗原結合片段。
  44. 如請求項35至43中任一項之方法，其中該投與係經口、經鼻、靜脈內、皮下、舌下或肌肉內投與。
  45. 如請求項35至44之方法，其中該方法進一步包含施與一或多種選自由化學療法、免疫療法、放射療法、激素療法及手術組成之群的額外癌症療法。
  46. 一種調節表現CD276之細胞中之CD276活性的方法，其包含將該表現CD276之細胞暴露於如請求項1至26中任一項之抗體或其抗原結合片段。
  47. 一種偵測樣品中CD276之存在或量之方法，其包含將該樣品與如請求項1至26中任一項之抗體或其抗原結合片段接觸，並確定該樣品中CD276之該存在或該量。
  48. 一種在受試者中診斷CD276相關疾病或病症之方法，其包含：a)自該受試者獲得樣品；b)將自該受試者獲得之該樣品與如請求項1至26中任一項之抗體或其抗原結合片段接觸；c)確定該樣品中CD276之存在或量；及d)將該受試者中CD276之該存在或該量與該CD276相關疾病或病症之存在或狀態相關聯。
  49. 一種如請求項1至26中任一項之抗體或其抗原結合片段在生產用於治療受試者之CD276相關疾病或病症之藥物中的用途。
  50. 如請求項49之用途，其中該藥物進一步包含第二治療劑，視情況，其中該第二治療劑係針對一或多種免疫抑制分子之拮抗劑。
  51. 如請求項50之用途，其中該第二治療劑為PD-L1拮抗劑，視情況，其中該PD-L1拮抗劑為抗PD-L1抗體或其抗原結合片段。
  52. 一種如請求項1至26中任一項之抗體或其抗原結合片段在生產用於診斷CD276相關疾病或病症之診斷試劑中的用途。
  53. 一種套組，其包含如請求項1至26中任一項之抗體或其抗原結合片段，其用於偵測CD276、視情況重組CD276、在細胞表面表現之CD276或表現CD276之細胞。
  54. 一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含抗原結合域、跨膜域、共刺激傳訊區及TCR傳訊域，其中該抗原結合域特異性結合CD276並且包含如請求項1至26中任一項之抗原結合片段。
  55. 如請求項54之CAR，其中該抗原結合片段為Fab或scFv。
  56. 如請求項54或55之CAR，其為雙特異性的。
  57. 如請求項56之CAR，其中該CAR能夠進一步特異性結合不同於CD276之第二抗原或CD276上的第二表位。
  58. 如請求項57之CAR，其中該第二抗原為腫瘤抗原。
  59. 如請求項54之CAR，其中該TCR傳訊域選自由CD3ζ、FccRIγ、CD27、CD28、CD137、CD134、MyD88、CD40、CD278、TLR或其組合組成之群的胞內訊號區序列。
  60. 如請求項54之CAR，其中該跨膜區包含CD3、CD4、CD8或CD28之跨膜區。
  61. 一種核酸序列，其編碼如請求項54至60中任一項之嵌合抗原受體(CAR)。
  62. 一種細胞，其包含如請求項61之核酸序列。
  63. 一種細胞，其經基因修飾以表現如請求項54至60中任一項之CAR。
  64. 如請求項63之細胞，其中該細胞為免疫細胞，視情況，其中該免疫細胞為T淋巴細胞、NK細胞、單核球、巨噬細胞或NKT淋巴細胞。
  65. 一種載體，其包含如請求項61之核酸序列。
  66. 一種用於在哺乳動物中刺激針對表現CD276之細胞或組織之T細胞介導之免疫反應的方法，該方法包含向該哺乳動物投與有效量之經基因修飾以表現如請求項54至60中任一項之CAR之細胞。
  67. 一種治療患有CD276相關疾病或病症之哺乳動物的方法，其包含向該哺乳動物投與有效量之如請求項62或63之細胞，從而治療該哺乳動物。
  68. 如請求項66或67之方法，其中該細胞為自體T細胞。
  69. 如請求項66或67之方法，其中該CD276相關疾病或病症為癌症。
  70. 如請求項66或67之方法，其中該哺乳動物為人類受試者。
  71. 一種經基因修飾以表現如請求項54至60中任一項之CAR之細胞在生產用於在哺乳動物中刺激針對表現CD276之細胞或組織的T細胞介導之免疫反應之藥物中的用途。
  72. 一種如請求項62或63之細胞在生產用於治療患有CD276相關疾病或病症之哺乳動物之藥物中的用途。
TW111117711A 2021-05-11 2022-05-11 新型抗ｃｄ２７６抗體及其用途 TW202317618A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
WOPCT/CN2021/093157 2021-05-11
CN2021093157 2021-05-11

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202317618A true TW202317618A (zh) 2023-05-01

Family

ID=87378759

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW111117711A TW202317618A (zh) 2021-05-11 2022-05-11 新型抗ｃｄ２７６抗體及其用途

Country Status (1)

Country Link
TW (1) TW202317618A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12485298B2 (en) Anti-CD3epsilon antibodies
WO2019179391A1 (en) Novel bispecific pd-1/ctla-4 antibody molecules
US20240052052A1 (en) Novel anti-cd24 antibodies
US20240400689A1 (en) Novel anti-cd276 antibodies and the uses thereof
KR20230110546A (ko) 이작용성 분자
WO2020192709A1 (en) Novel bispecific polypeptide complexes
WO2019179422A1 (en) Novel bispecific pd-1/lag-3 antibody molecules
WO2019179421A1 (en) Novel bispecific pd-1/ctla-4 antibody molecules
US12486325B2 (en) Anti-CD3epsilon antibodies
TW202342514A (zh) 新型抗ｃｄ２７６抗體及其用途
TW202317618A (zh) 新型抗ｃｄ２７６抗體及其用途
WO2024099295A9 (en) Novel multi-specific antibodies and uses thereof
US20260116974A1 (en) Novel anti-cd3epsilon antibodies
EA052500B1 (ru) Новые антитела против cd24
EA051839B1 (ru) Новые антитела к cd276 и их применения