KR20240039232A - B형 간염 바이러스 감염에 대한 RNAi 작용제 - Google Patents

B형 간염 바이러스 감염에 대한 RNAi 작용제 Download PDF

Info

Publication number
KR20240039232A
KR20240039232A KR1020247009034A KR20247009034A KR20240039232A KR 20240039232 A KR20240039232 A KR 20240039232A KR 1020247009034 A KR1020247009034 A KR 1020247009034A KR 20247009034 A KR20247009034 A KR 20247009034A KR 20240039232 A KR20240039232 A KR 20240039232A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
sequence
hbv
rnai agent
antisense strand
seq
Prior art date
Application number
KR1020247009034A
Other languages
English (en)
Inventor
젠 리
루이 주
크리스틴 아이. 우드델
브루스 디. 기븐
타오 페이
데이비드 엘. 루이스
로랑 제이. 알메이다
데이비드 비. 로제마
대런 에이치. 웨이크필드
Original Assignee
애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 filed Critical 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드
Publication of KR20240039232A publication Critical patent/KR20240039232A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1131—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/675—Phosphorus compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pyridoxal phosphate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/314—Phosphoramidates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/322—2'-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

B형 간염 바이러스 유전자 발현의 저해를 위한 조성물 및 방법이 기재된다. B형 간염 바이러스 유전자의 발현을 저해하기 위한 RNA 간섭(RNAi) 작용제가 기재된다. 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는, 예를 들어, 접합된 표적화 리간드를 사용함으로써 간세포와 같은 세포에 표적화될 수 있다. 선택적으로 하나 이상의 추가의 치료제와 함께, 하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 포함하는 약제학적 조성물이 또한 기재된다. 생체내에서 감염된 간으로의 기재된 HBV RNAi 작용제의 전달은 HBV 유전자 발현의 저해 및 HBV 감염과 관련된 질병 및 질환의 치료를 제공한다.

Description

B형 간염 바이러스 감염에 대한 RNAi 작용제 {RNAi AGENTS FOR HEPATITIS B VIRUS INFECTION}
관련 출원의 상호 참조
본 출원은, 각각의 전체 내용이 본 명세서에 참고로 포함된, 2017년 8월 3일자로 출원된 미국 가출원 제62/540,639호, 2017년 7월 20일자로 출원된 미국 가출원 제62/534,733호, 및 2016년 8월 4일자로 출원된 미국 가출원 제62/370,754호로부터 우선권을 주장한다.
기술분야
B형 간염 바이러스 유전자 발현의 저해를 위한 RNA 간섭(RNAi) 작용제, HBV RNAi 작용제를 포함하는 조성물, 및 이들의 사용 방법이 본 명세서에 개시된다.
B형 간염 바이러스(HBV)는 엄격한 간친화성, 이중 가닥 DNA 함유 바이러스이다. DNA가 유전 물질이지만, 복제 주기는 게놈전(pregenomic) RNA를 DNA로 복사하기 위한 역전사 단계를 수반한다. B형 간염 바이러스는 헤파드나바이러스(Hepadnavirus)의 하나의 구성원으로 분류되고, 헤파드나비리대(Hepadnaviridae) 계열에 속한다. 성인이 B형 간염 바이러스에 의해 일차 감염되면 기관 염증, 발열, 황달 및 혈중 간 트랜스아미나제 증가의 증상을 나타내는 급성 간염이 유발된다. 바이러스 감염을 극복할 수 없는 이들 환자는 수년에 걸쳐 만성 질병 진행을 겪게 되며, 경화 간(cirrhotic liver) 또는 간암의 발병 위험이 높아진다. 신생아에 대한 B형 간염 바이러스 감염된 모체로부터의 신생아로의 주산기 전파가 또한 만성 간염을 유발한다.
뉴클레오캡시드(nucleocapsid)가 간세포에 의해 흡수되면, 이 뉴클레오캡시드는 핵으로 옮겨지고, DNA가 방출된다. 간세포에서, DNA 가닥 합성이 완료되고 갭이 복구되어, 3.2 kb의 공유 결합에 의해 닫힌 원형(covalently closed circular, ccc) 초나선 DNA를 제공한다. cccDNA는 3.5 kb, 3.5 kb, 2.4 kb, 2.1 kb 및 0.7 kb 길이인 5개의 주요 바이러스 mRNA의 전사를 위한 주형으로서의 역할을 한다. 모든 mRNA는 5'-캡핑되고 3'-단부에서 폴리아데닐화된다. 모든 5개의 mRNA 사이에는 3'-단부에서 서열 중첩이 존재한다.
하나의 3.5 kb mRNA는 코어 단백질 및 중합효소 생성을 위한 주형으로서의 역할을 한다. 또한, 동일한 전사체는 게놈전 복제 중간체로서의 역할을 하고, 바이러스 중합효소가 DNA로의 역전사를 개시할 수 있게 한다. 코어 단백질은 뉴클레오캡시드 형성에 필요하다. 다른 하나의 3.5 kb mRNA는 분비가능한 e-항원(HBeAg)인 프리-코어(pre-core)를 인코딩한다. 복제 저해제의 부재 하에서, 혈중 e-항원의 존재비는 간에서의 B형 간염 바이러스 복제와 서로 관련되고, 질병 진행을 모니터링하기 위한 중요한 진단 마커로서의 역할을 한다.
2.4 kb mRNA 및 2.1 kb mRNA는 큰, 중간 및 작은 바이러스 표면 항원의 발현을 위한 오픈 리딩 프레임(open reading frame, "ORF")인 pre-S1, pre-S2 및 S를 지닌다. s-항원은 감염성의 완전한 입자와 회합되어 있다. 또한, 감염된 환자의 혈액은 게놈 DNA 또는 중합효소가 없는, S-항원 단독으로부터 유래된 비감염성 입자도 함유한다. 이들 입자의 기능은 완전히 이해되어 있지 않다. 혈중 검출가능한 s-항원의 완전하고 지속적인 고갈은 B형 간염 바이러스 제거에 대한 신뢰할 만한 지표로 간주된다.
0.7 kb mRNA는 X 단백질을 인코딩한다. 이 유전자 생성물은 바이러스 유전자의 효율적인 전사에 중요하고, 또한 숙주 유전자 발현에 있어서 트랜스액티베이터(transactivator)로서 작용한다. 트랜스액티베이터로서의 활성은 간암의 발병 동안 간세포 변환에 중요한 것으로 보인다.
6 개월이 넘게 s-항원, e-항원, 및/또는 바이러스 DNA가 혈중에서 검출가능한 환자는 만성적으로 감염된 것으로 간주된다. 역전사효소 활성의 저해제로서의 뉴클레오시드 유사체는 전형적으로 많은 환자에 대한 첫 번째 치료 옵션이다. 라미부딘(lamivudine), 테노포비어(tenofovir), 및/또는 엔테카비어(entecavir)의 투여는 간염 바이러스 복제를 억제하며 때때로 검출가능하지 않은 수준까지 억제하는 것으로 밝혀졌고, 간 기능의 개선 및 간 염증의 감소가 전형적으로 가장 중요한 이득으로 나타난다. 그러나, 소수의 환자만이 치료 종료 후에 완전하고 지속적인 관해를 달성한다. 더욱이, B형 간염 바이러스는 치료 기간이 증가함에 따라 약물 내성을 발달시킨다. 이는 B형 간염 및 인간 면역결핍 바이러스(HIV)로 공동 감염된 환자의 경우 특히 어렵다. 둘 모두의 바이러스는 뉴클레오시드 유사체 약물에 민감하고, 내성을 공동으로 발달시킬 수 있다.
제2 치료 옵션은 인터페론-알파의 투여이다. 이 경우, 환자는 6 개월의 기간에 걸쳐 고용량의 인터페론-알파를 투여받는다. 아시안(Asian) 유전자형 B는 매우 불량한 반응 속도를 제공한다. D형 간염 바이러스(HDV) 또는 인간 면역결핍 바이러스에 의한 공동 감염은 인터페론-알파 치료법을 완전히 무력하게 만드는 것으로 밝혀졌다. 심한 간 손상 및 중증 섬유증 질환이 있는 환자는 인터페론-알파 치료법에 적격이지 않다.
특정한 B형 간염 바이러스 특이적 RNA 간섭(RNAi) 작용제가 HBV 유전자 발현을 저해하는 것으로 이미 밝혀졌다. 예를 들어, 전체 내용이 본 명세서에 참고로 포함된, 친(Chin) 등의 미국 특허 출원 공개 제2013/0005793호는 B형 간염 바이러스 유전자의 발현을 저해하기 위한 특정한 이중 가닥 리보핵산(dsRNA) 분자를 개시한다.
B형 간염 바이러스(HBV) 유전자의 발현을 선택적으로 그리고 효율적으로 저해할 수 있는 신규한 B형 간염 바이러스(HBV) 특이적 RNA 간섭(RNAi) 작용제 (본 명세서에서 RNAi 작용제, RNAi 트리거(trigger), 또는 트리거로도 명명됨)에 대한 필요성이 존재한다. 또한, HBV 감염 치료 및 HBV와 관련된 질병의 예방을 위한 신규한 HBV 특이적 RNAi 작용제의 조합에 대한 필요성이 존재한다.
HBV 유전자의 발현을 선택적으로 그리고 효율적으로 감소시킬 수 있는 HBV 유전자 특이적 RNAi 작용제가 본 명세서에 기재된다. 기재된 HBV RNAi 작용제는, 만성 간 질병/장애, 염증, 섬유증 질환, 증식성 장애 (암, 예를 들어, 간세포 암종을 포함함), D형 간염 바이러스(HDV) 감염, 및 급성 HBV 감염을 포함하지만 이로 한정되지 않는 HBV 감염과 관련된 증상 및 질병의 치료적 처치 및/또는 예방을 위한 방법에 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 만성 HBV 감염 및/또는 HDV 감염과 관련된 증상 및 질병의 치료적 처치 및/또는 예방을 위한 방법에 사용될 수 있다. 그러한 방법은 본 명세서에 기재된 바와 같은 하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 대상체, 예를 들어 인간 또는 동물 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
추가로, HBV 유전자의 발현을 선택적으로 그리고 효율적으로 감소시킬 수 있는 개시된 HBV RNAi 작용제 중 하나 이상을 포함하는 조성물이 본 명세서에 기재된다. 하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 포함하는 조성물은, HBV 감염과 관련된 증상 및 질병의 치료 및/또는 예방을 위해 인간 또는 동물 대상체와 같은 대상체에게 투여될 수 있다.
본 명세서에 개시된 각각의 HBV RNAi 작용제는 적어도 센스 가닥과 안티센스 가닥을 포함한다. 센스 가닥과 안티센스 가닥은 서로 부분적으로, 실질적으로, 또는 완전히 상보적일 수 있다. 본 명세서에 기재된 RNAi 작용제의 센스 및 안티센스 가닥의 길이는 각각 길이가 16개 내지 30개 뉴클레오티드일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 독립적으로 길이가 17개 내지 26개 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 독립적으로 길이가 19개 내지 26개 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 독립적으로 길이가 21개 내지 26개 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 독립적으로 길이가 21개 내지 24개 뉴클레오티드이다. 센스 및 안티센스 가닥은 동일한 길이 또는 상이한 길이일 수 있다. 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 HBV의 공지된 대다수의 혈청형에 걸쳐 보존되는 HBV 게놈의 서열에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 포함하도록 설계되었다. 본 명세서에 기재된 RNAi 작용제는, HBV를 발현하는 세포로의 전달시에 생체내에서 또는 시험관내에서 하나 이상의 HBV 유전자의 발현을 저해한다.
HBV RNAi 작용제는 제1 서열을 포함하는 센스 가닥 (패신저(passenger) 가닥으로도 지칭됨) 및 제2 서열을 포함하는 안티센스 가닥 (가이드(guide) 가닥으로도 지칭됨)을 포함한다. 본 명세서에 기재된 HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 HBV mRNA 내의 적어도 16개의 연속 뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 85% 동일성을 갖는 코어 스트레치(core stretch)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, HBV mRNA 내의 서열에 대해 적어도 약 85% 동일성을 갖는 센스 가닥 코어 뉴클레오티드 스트레치는 길이가 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 또는 23개 뉴클레오티드이다. HBV RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 HBV mRNA 내의 서열 및 상응하는 센스 가닥에 대해 적어도 16개의 연속 뉴클레오티드의 코어 스트레치에 걸쳐 적어도 약 85%의 상보성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, HBV mRNA 내의 서열 또는 상응하는 센스 가닥에 대해 적어도 약 85%의 상보성을 갖는 안티센스 가닥 코어 뉴클레오티드 서열은 길이가 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 또는 23개 뉴클레오티드이다.
HBV RNAi 작용제에 사용될 수 있는 HBV RNAi 작용제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 예는 표 3 및 4에 제공된다. HBV RNAi 작용제 이중체(duplex)의 예가 표 5에 제공되어 있다. 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥으로 이루어지거나 이에 포함되는 19개 뉴클레오티드 코어 스트레치 서열의 예가 표 2에 제공되어 있다.
일부 실시 형태에서, 하나 이상의 HBV RNAi 작용제는 당업계에 공지된 임의의 올리고뉴클레오티드 전달 기술을 이용하여 표적 세포 또는 조직에 전달된다. 핵산 전달 방법은 리포좀내 캡슐화에 의한 방법, 이온삼투요법(iontophoresis)에 의한 방법, 또는 다른 비히클, 예를 들어 하이드로겔, 사이클로덱스트린, 생분해성 나노캡슐, 및 생체접착성 미소구체, 단백질성 벡터 또는 동적 폴리컨쥬게이트(Dynamic Polyconjugate, DPC) 내로의 혼입에 의한 방법을 포함하지만, 이로 한정되지 않는다 (예를 들어, WO 2000/053722호, WO 2008/0022309호, WO 2011/104169호, 및 WO 2012/083185호 참조). 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 RNAi 작용제를 표적화 기에 공유 결합에 의해 연결시킴으로써 표적 세포 또는 조직에 전달된다. 일부 실시 형태에서, 표적화 기는 아시알로글리코단백질 수용체(ASGPr) 리간드와 같은 세포 수용체 리간드를 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, ASGPr 리간드는 갈락토스 유도체 클러스터를 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 갈락토스 유도체 클러스터는 N-아세틸-갈락토사민 삼량체 또는 N-아세틸-갈락토사민 사량체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 갈락토스 유도체 클러스터는 N-아세틸-갈락토사민 삼량체 또는 N-아세틸-갈락토사민 사량체이다.
표적화 기는 HBV RNAi 작용제의 센스 가닥 또는 안티센스 가닥의 3' 또는 5' 단부에 연결될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 표적화 기는 센스 가닥의 3' 또는 5' 단부에 연결된다. 일부 실시 형태에서, 표적화 기는 센스 가닥의 5' 단부에 연결된다. 일부 실시 형태에서, 표적화 기는 링커를 통해 RNAi 작용제에 연결된다.
표적화 기는, 링커와 함께 또는 링커 없이, 표 2, 표 3, 및 표 4에 개시된 센스 및/또는 안티센스 가닥 중 임의의 가닥의 5' 또는 3' 단부에 연결될 수 있다. 링커는, 표적화 기와 함께 또는 표적화 기 없이, 표 2, 표 3, 및 표 4에 개시된 센스 및/또는 안티센스 가닥 중 임의의 가닥의 5' 또는 3' 단부에 부착될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 표 5에 개시된 이중체 서열을 갖는 하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 포함하는 조성물이 본 명세서에 기재된다.
일부 실시 형태에서, 상이한 뉴클레오티드 서열을 갖는 적어도 2개의 HBV RNAi 작용제의 조합 또는 칵테일(cocktail)을 포함하는 조성물이 본 명세서에 기재된다. 일부 실시 형태에서, 2개 이상의 상이한 HBV RNAi 작용제는 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 표적화 기에 연결된다. 일부 실시 형태에서, 2개 이상의 상이한 HBV RNAi 작용제는 각각 N-아세틸-갈락토사민으로 구성된 표적화 기에 연결된다. 일부 실시 형태에 있어서, 2개 이상의 RNAi 작용제가 조성물에 포함되는 경우, 각각의 RNAi 작용제는 동일한 표적화 기에 연결된다. 일부 실시 형태에 있어서, 2개 이상의 RNAi 작용제가 조성물에 포함되는 경우, 각각의 RNAi 작용제는 상이한 화학적 구조를 갖는 표적화 기와 같은 상이한 표적화 기에 연결된다.
일부 실시 형태에서, 표적화 기는 추가의 링커의 사용 없이 HBV RNAi 작용제에 연결된다. 일부 실시 형태에서, 표적화 기는 HBV RNAi 작용제로의 결합을 용이하게 하기 위해 쉽게 존재하는 링커를 갖도록 설계된다. 일부 실시 형태에 있어서, 2개 이상의 RNAi 작용제가 조성물에 포함되는 경우, 2개 이상의 RNAi 작용제는 동일한 링커를 사용하여 표적화 기에 연결될 수 있다. 일부 실시 형태에 있어서, 2개 이상의 RNAi 작용제가 조성물에 포함되는 경우, 2개 이상의 RNAi 작용제는 상이한 링커를 사용하여 표적화 기에 연결된다.
일부 실시 형태에서, 상이한 서열을 갖는 적어도 2개의 HBV RNAi 작용제의 조합을 포함하는 조성물이 본 명세서에 기재되며, 각각의 HBV RNAi 작용제는 HBV 유전자의 상이한 위치 또는 상이한 영역을 표적화한다. 일부 실시 형태에서, 적어도 2개의 HBV RNAi 작용제의 조합을 포함하는 조성물이 본 명세서에 기재되며, 각각의 HBV RNAi 작용제는 상이한 HBV 전사체를 표적화하도록 설계된다 (예를 들어, 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하는 조성물로서, 제1 HBV RNAi 작용제는 HBV 유전자의 S ORF에 위치하는 뉴클레오티드 서열에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥을 포함하는 한편, 제2 HBV RNAi 작용제는 HBV 유전자의 X ORF에 위치하는 뉴클레오티드 서열에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥을 포함하는, 조성물). 본 명세서에 사용되는 바와 같이, S ORF에 위치한 뉴클레오티드 서열에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥을 포함하는 RNAi 작용제는 위치 1-1307 및 3185-3221 사이의 서열 번호 1의 HBV 게놈의 일부를 표적화한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, X ORF에 위치한 뉴클레오티드 서열에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥을 포함하는 RNAi 작용제는 위치 1308-1930 사이의 서열 번호 1의 HBV 게놈의 일부를 표적화한다.
HBV mRNA는 폴리시스트론(polycistronic)인 것으로 알려져 있고, 이는 다수의 폴리펩티드의 번역, 및 별개의 mRNA들의 RNA 서열 중첩을 가져오며, 이에 따라 HBV 유전자를 표적화하는 단일 RNAi 작용제는 대부분의 또는 모든 HBV 전사체의 저해를 가져올 수 있다. 그러나, 임의의 이론에 구속시키고자 하는 것이 아니지만, HBV 유전자의 상이한 위치 또는 영역을 표적화하는 2개 이상의 HBV RNAi 작용제 (특히, 하나의 HBV RNAi 작용제는 S ORF를 표적화하고 제2 HBV RNAi 작용제는 X ORF를 표적화하는 2개 이상의 HBV RNAi 작용제)를 포함하는 조성물은, 단일 HBV RNAi 작용제만을 포함하는 조성물에 비하여 (a) 모든 HBV 바이러스 전사체 (즉, 3.5 kb의 게놈전 RNA; 3.5 kb의 코어전(pre-core) mRNA; 2.4 kb의 pre-S1 mRNA; 2.1 kb의 pr e-S2/S mRNA; 0.7 kb의 X mRNA; 이들뿐만 아니라 통합된 HBV DNA로부터 생성된 임의의 S-항원 발현 mRNA)가 표적화됨을 보장하는 것; (b) 유전자형 적용범위를 확장시켜 더 큰 환자 집단을 잠재적으로 다루는 역할을 하는 것; 및/또는 (c) siRNA 결합 부위에서의 돌연변이로 인한 바이러스 내성을 잠재적으로 감소시키는 것과 같은 추가의 이점을 제공할 수 있다는 가설이 세워진다.
일부 실시 형태에서, HBV RNA의 S ORF를 표적화하는 (즉, HBV 게놈의 S 전사체(S, pre-S1, 및 pre-S2), 게놈전 RNA (코어 및 중합효소), 및 코어전 전사체 (HBeAg)를 표적화하는 안티센스 가닥을 갖는) 하나의 HBV RNAi 작용제와, HBV RNA의 X ORF를 표적화하는 (즉, HBV 게놈의 X 전사체, HBV 게놈의 S 전사체 (S, pre-S1, 및 pre-S2), 게놈전 RNA (코어 및 중합효소), 및 코어전 전사체 (HBeAg)를 표적화하는 안티센스 가닥을 갖는) 하나의 HBV RNAi 작용제의 조합을 포함하는 조성물이 본 명세서에 기재되어 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조성물은 HBV 유전자의 S ORF를 표적화하는 서열을 함유하는 적어도 하나의 HBV RNAi 작용제, 및 HBV 유전자의 X ORF를 표적화하는 서열을 함유하는 제2 HBV RNAi 작용제를 포함한다.
HBV 유전자의 발현을 저해하는 방법이 본 명세서에 개시되고, 이 방법은 표 3의 서열 중 임의의 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 갖는 하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
HBV 유전자의 발현을 저해하는 방법이 본 명세서에 개시되고, 이 방법은 표 4의 서열 중 임의의 서열을 포함하는 센스 가닥을 갖는 하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
HBV 유전자의 발현을 저해하는 방법이 본 명세서에 개시되고, 이 방법은 표 3의 서열 중 임의의 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 이 안티센스 가닥에 적어도 부분적으로 상보적인 표 4의 서열 중 임의의 서열을 포함하는 센스 가닥을 갖는 하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
HBV 유전자의 발현을 저해하는 방법이 본 명세서에 개시되고, 이 방법은 표 3의 서열 중 임의의 서열로 이루어진 안티센스 가닥, 및 이 안티센스 가닥에 적어도 부분적으로 상보적인 표 4의 서열 중 임의의 서열로 이루어진 센스 가닥을 갖는 하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 방법이 본 명세서에 개시되고, 이 방법은 표 5의 이중체 구조를 갖는 하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
HBV 감염의 치료 방법 또는 HBV 감염에 의해 야기되는 질병 또는 증상의 예방 방법이 본 명세서에 개시되고, 이 방법은 표 3의 서열 중 임의의 서열을 포함하는 안티센스 가닥을 갖는 하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
HBV 감염의 치료 방법 또는 HBV 감염에 의해 야기되는 질병 또는 증상의 예방 방법이 본 명세서에 개시되고, 이 방법은 표 4의 서열 중 임의의 서열을 포함하는 센스 가닥을 갖는 하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
HBV 감염의 치료 방법 또는 HBV 감염에 의해 야기되는 질병 또는 증상의 예방 방법이 본 명세서에 개시되고, 이 방법은 표 3의 서열 중 임의의 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 이 안티센스 가닥에 적어도 부분적으로 상보적인 표 4의 서열 중 임의의 서열을 포함하는 센스 가닥을 갖는 하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
HBV 감염의 치료 방법 또는 HBV 감염에 의해 야기되는 질병 또는 증상의 예방 방법이 본 명세서에 개시되고, 이 방법은 표 3의 서열 중 임의의 서열로 이루어진 안티센스 가닥, 및 이 안티센스 가닥에 적어도 부분적으로 상보적인 표 4의 서열 중 임의의 서열로 이루어진 센스 가닥을 갖는 하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
HBV 감염의 치료 방법 또는 HBV 감염에 의해 야기되는 질병 또는 증상의 예방 방법이 본 명세서에 개시되고, 이 방법은 표 5의 이중체 구조를 갖는 하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
HBV 유전자의 발현을 저해하는 방법이 본 명세서에 개시되고, 이 방법은 (i) 표 2 또는 표 3의 서열 중 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어진 안티센스 가닥을 갖는 HBV RNAi 작용제, 및 (ii) 표 2 또는 표 3의 서열 중 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어진 센스 가닥을 갖는 제2 HBV RNAi 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
HBV 감염의 치료 방법 또는 HBV 감염에 의해 야기된 질병 또는 증상의 예방 방법이 본 명세서에 개시되고, 이 방법은 (i) 표 2 또는 표 3의 서열 중 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어진 안티센스 가닥을 갖는 HBV RNAi 작용제, 및 (ii) 표 2 또는 표 3의 서열 중 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어진 센스 가닥을 갖는 제2 HBV RNAi 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
HBV 유전자의 발현을 저해하는 방법이 본 명세서에 개시되고, 이 방법은 (i) 표 2 또는 표 3의 서열 중 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어진 안티센스 가닥 및 이 안티센스 가닥에 적어도 부분적으로 상보적인 표 2 또는 표 4의 서열 중 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어진 센스 가닥을 갖는 제1 HBV RNAi 작용제, 및 (ii) 표 2 또는 표 3의 서열 중 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어진 안티센스 가닥 및 이 안티센스 가닥에 적어도 부분적으로 상보적인 표 2 또는 표 4의 서열 중 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어진 안티센스 가닥을 갖는 제2 HBV RNAi 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
HBV 감염의 치료 방법 또는 HBV 감염에 의해 야기된 질병 또는 증상의 예방 방법이 본 명세서에 개시되고, 이 방법은 (i) 표 2 또는 표 3의 서열 중 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어진 안티센스 가닥 및 이 안티센스 가닥에 적어도 부분적으로 상보적인 표 2 또는 표 4의 서열 중 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어진 센스 가닥을 갖는 제1 HBV RNAi 작용제, 및 (ii) 표 2 또는 표 3의 서열 중 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어진 안티센스 가닥 및 이 안티센스 가닥에 적어도 부분적으로 상보적인 표 2 또는 표 4의 서열 중 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어진 안티센스 가닥을 갖는 제2 HBV RNAi 작용제를 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 다음을 포함한다:
a. 서열 (5'3') AUUGAGAGAAGUCCACCAC (서열 번호 7)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') GUGGUGGACUUCUCUCAAU (서열 번호 34)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
b. 서열 (5'3') UUUGAGAGAAGUCCACCAC (서열 번호 8)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') GUGGUGGACUUCUCUCAAA (서열 번호 35)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
c. 서열 (5'3') AAUUGAGAGAAGUCCACCA (서열 번호 12)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') UGGUGGACUUCUCUCAAUU (서열 번호 39)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
d. 서열 (5'3') UAUUGAGAGAAGUCCACCA (서열 번호 13)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') UGGUGGACUUCUCUCAAUA (서열 번호 40)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
e. 서열 (5'3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCC (서열 번호 17)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') GGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 44)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
f. 서열 (5'3') UGAAAAUUGAGAGAAGUCC (서열 번호 18)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') GGACUUCUCUCAAUUUUCA (서열 번호 45)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
g. 서열 (5'3') ACCAAUUUAUGCCUACAGC (서열 번호 22)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') GCUGUAGGCAUAAAUUGGU (서열 번호 49)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
h. 서열 (5'3') UCCAAUUUAUGCCUACAGC (서열 번호 23)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') GCUGUAGGCAUAAAUUGGA (서열 번호 50)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
i. 서열 (5'3') GACCAAUUUAUGCCUACAG (서열 번호 27)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUC (서열 번호 54)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
j. 서열 (5'3') AACCAAUUUAUGCCUACAG (서열 번호 28)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUU (서열 번호 55)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
k. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAG (서열 번호 29)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 56)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 HBV RNAi 작용제를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개 이상의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제는 다음을 포함하고:
i) 서열 (5'3') AAUUGAGAGAAGUCCACCA (서열 번호 12)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') UGGUGGACUUCUCUCAAUU (서열 번호 39)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
ii) 서열 (5'3') UAUUGAGAGAAGUCCACCA (서열 번호 13)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') UGGUGGACUUCUCUCAAUA (서열 번호 40)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥;
제2 HBV RNAi 작용제는 다음을 포함한다:
i) 서열 (5'3') GACCAAUUUAUGCCUACAG (서열 번호 27)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUC (서열 번호 54)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
ii) 서열 (5'3') AACCAAUUUAUGCCUACAG (서열 번호 28)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUU (서열 번호 55)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
iii) 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAG (서열 번호 29)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 56)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개 이상의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제는 다음을 포함하고:
i) 서열 (5'3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCC (서열 번호 17)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') GGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 44)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
ii) 서열 (5'3') UGAAAAUUGAGAGAAGUCC (서열 번호 18)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') GGACUUCUCUCAAUUUUCA (서열 번호 45)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥;
제2 HBV RNAi 작용제는 다음을 포함한다:
i) 서열 (5'3') GACCAAUUUAUGCCUACAG (서열 번호 27)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUC (서열 번호 54)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
ii) 서열 (5'3') AACCAAUUUAUGCCUACAG (서열 번호 28)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUU (서열 번호 55)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
iii) 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAG (서열 번호 29)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 56)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개 이상의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제는 다음을 포함하고:
i) 서열 (5'3') AAUUGAGAGAAGUCCACCA (서열 번호 12)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') UGGUGGACUUCUCUCAAUU (서열 번호 39)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
ii) 서열 (5'3') UAUUGAGAGAAGUCCACCA (서열 번호 13)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') UGGUGGACUUCUCUCAAUA (서열 번호 40)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥;
제2 HBV RNAi 작용제는 HBV mRNA의 X ORF의 일부에 적어도 부분적으로 상보적인 서열을 갖는 안티센스 가닥을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개 이상의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제는 다음을 포함하고:
i) 서열 (5'3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCC (서열 번호 17)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') GGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 44)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
ii) 서열 (5'3') UGAAAAUUGAGAGAAGUCC (서열 번호 18)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') GGACUUCUCUCAAUUUUCA (서열 번호 45)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥;
제2 HBV RNAi 작용제는 HBV mRNA의 X ORF의 일부에 적어도 부분적으로 상보적인 서열을 갖는 안티센스 가닥을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개 이상의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제는 HBV mRNA의 S ORF의 일부에 적어도 부분적으로 상보적인 서열을 갖는 안티센스 가닥을 포함하고, 제2 HBV RNAi 작용제는 다음을 포함한다:
i) 서열 (5'3') GACCAAUUUAUGCCUACAG (서열 번호 27)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUC (서열 번호 54)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
ii) 서열 (5'3') AACCAAUUUAUGCCUACAG (서열 번호 28)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUU (서열 번호 55)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
iii) 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAG (서열 번호 29)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 56)과 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 다음을 포함하고:
a. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGGCCUUAU (서열 번호 149)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
b. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGGCCU (서열 번호 150)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
c. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGGC (서열 번호 151)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
d. 서열 (5'3') UGAAAAUUGAGAGAAGUCCUU (서열 번호 152)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
e. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGUU (서열 번호 154)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
f. 서열 (5'3') UAUUGAGAGAAGUCCACCACG (서열 번호 160)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
g. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCC (서열 번호 162)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
h. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCCUU (서열 번호 163)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
i. 서열 (5'3') UAUUGAGAGAAGUCCACCACGA (서열 번호 170)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
j. 서열 (5'3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 171)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
k. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCUU (서열 번호 172)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
l. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCCU (서열 번호 173)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
m. 서열 (5'3') UAUUGAGAGAAGUCCACCAUU (서열 번호 174)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
n. 서열 (5'3') UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU (서열 번호 175)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
o. 서열 (5'3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCUU (서열 번호 178)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
p. 서열 (5'3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCACUU (서열 번호 179)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
q. 서열 (5'3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCACC (서열 번호 180)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
r. 서열 (5'3') UGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 181)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
s. 서열 (5'3') ACCAAUUUAUGCCUACAGCUU (서열 번호 182)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
t. 서열 (5'3') ACCAAUUUAUGCCUACAGCCUU (서열 번호 183)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
u. 서열 (5'3') ACCAAUUUAUGCCUACAGCCUC (서열 번호 184)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
v. 서열 (5'3') UCCAAUUUAUGCCUACAGCUU (서열 번호 185)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
w. 서열 (5'3') UCCAAUUUAUGCCUACAGCCUU (서열 번호 186)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
x. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCU (서열 번호 187)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
y. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCG (서열 번호 188)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
z. 서열 (5'3') AACCAAUUUAUGCCUACAGCC (서열 번호 189)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
aa. 서열 (5'3') ACCAAUUUAUGCCUACAGCCU (서열 번호 190)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
bb. 서열 (5'3') UCCAAUUUAUGCCUACAGCCU (서열 번호 191)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
cc. 서열 (5'3') ACCAAUUUAUGCCUACAGCCG (서열 번호 192)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
dd. 서열 (5'3') UCCAAUUUAUGCCUACAGCCG (서열 번호 193)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
ee. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGGG (서열 번호 194)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥;
이 HBV RNAi 작용제는 상기 각각의 안티센스 가닥에 적어도 부분적으로 상보적인 센스 가닥을 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 다음을 포함하고:
a. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGGCCUUAU (서열 번호 149)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
b. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGGCCU (서열 번호 150)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
c. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGGC (서열 번호 151)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
d. 서열 (5'3') UGAAAAUUGAGAGAAGUCCUU (서열 번호 152)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
e. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGUU (서열 번호 154)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
f. 서열 (5'3') UAUUGAGAGAAGUCCACCACG (서열 번호 160)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
g. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCC (서열 번호 162)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
h. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCCUU (서열 번호 163)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
i. 서열 (5'3') UAUUGAGAGAAGUCCACCACGA (서열 번호 170)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
j. 서열 (5'3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 171)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
k. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCUU (서열 번호 172)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
l. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCCU (서열 번호 173)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
m. 서열 (5'3') UAUUGAGAGAAGUCCACCAUU (서열 번호 174)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
n. 서열 (5'3') UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU (서열 번호 175)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
o. 서열 (5'3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCUU (서열 번호 178)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
p. 서열 (5'3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCACUU (서열 번호 179)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
q. 서열 (5'3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCACC (서열 번호 180)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
r. 서열 (5'3') UGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 181)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
s. 서열 (5'3') ACCAAUUUAUGCCUACAGCUU (서열 번호 182)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
t. 서열 (5'3') ACCAAUUUAUGCCUACAGCCUU (서열 번호 183)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
u. 서열 (5'3') ACCAAUUUAUGCCUACAGCCUC (서열 번호 184)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
v. 서열 (5'3') UCCAAUUUAUGCCUACAGCUU (서열 번호 185)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
w. 서열 (5'3') UCCAAUUUAUGCCUACAGCCUU (서열 번호 186)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
x. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCU (서열 번호 187)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
y. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCG (서열 번호 188)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
z. 서열 (5'3') AACCAAUUUAUGCCUACAGCC (서열 번호 189)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
aa. 서열 (5'3') ACCAAUUUAUGCCUACAGCCU (서열 번호 190)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
bb. 서열 (5'3') UCCAAUUUAUGCCUACAGCCU (서열 번호 191)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
cc. 서열 (5'3') ACCAAUUUAUGCCUACAGCCG (서열 번호 192)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
dd. 서열 (5'3') UCCAAUUUAUGCCUACAGCCG (서열 번호 193)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
ee. 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGGG (서열 번호 194)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열로 이루어진 안티센스 가닥;
이 HBV RNAi 작용제는 상기 각각의 안티센스 가닥에 적어도 부분적으로 상보적인 센스 가닥을 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 다음을 포함하고:
i. 서열 (5'3') usAfscCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfccsusuAu (서열 번호 61)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
ii. 서열 (5'3') usAfscCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfcscsu (서열 번호 62)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
iii. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfccsu (서열 번호 63)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
iv. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfsc (서열 번호 64)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
v. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgusu (서열 번호 68)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
vi. 서열 (5'3') usAfscscaauUfuAfuGfcCfuacagcsc (서열 번호 85)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
vii. 서열 (5'3') usAfsusugagAfgAfaGfuCfcaccacsg (서열 번호 94)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
viii. 서열 (5'3') usAfsusUfgAfgAfgAfaGfuCfcAfcCfaCfgsa (서열 번호 98)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
ix. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgcsc (서열 번호 102)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
x. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgcusu (서열 번호 103)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xi. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgccsu (서열 번호 104)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xii. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgccusu (서열 번호 105)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xiii. 서열 (5'3') cPrpusAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgusu (서열 번호 107)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xiv. 서열 (5'3') cPrpusAfsusUfgAfgAfgAfaGfuCfcAfcCfaCfsg (서열 번호 108)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xv. 서열 (5'3') usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfausu (서열 번호 109)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xvi. 서열 (5'3') usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacsg (서열 번호 110)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xvii. 서열 (5'3') usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacsusu (서열 번호 111)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xviii. 서열 (5'3') usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacsgsa (서열 번호 112)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xix. 서열 (5'3') usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacusu (서열 번호 120)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xx. 서열 (5'3') asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcusu (서열 번호 125)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥;
xxi. 서열 (5'3') asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcasc (서열 번호 126)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxii. 서열 (5'3') asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcacusu (서열 번호 127)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxiii. 서열 (5'3') asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcacsc (서열 번호 128)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxiv. 서열 (5'3') usGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcusu (서열 번호 129)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxv. 서열 (5'3') usGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcasc (서열 번호 130)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxvi. 서열 (5'3') asCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcusu (서열 번호 131)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxvii. 서열 (5'3') asCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccusu (서열 번호 132)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxviii. 서열 (5'3') asCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccusc (서열 번호 133)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxix. 서열 (5'3') usCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcusu (서열 번호 134)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxx. 서열 (5'3') usCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccusu (서열 번호 135)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxxi. 서열 (5'3') cPrpusAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsc (서열 번호 136)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxxii. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgscsc (서열 번호 137)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxxiii. 서열 (5'3') cPrpusAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgscsc (서열 번호 138)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxxiv. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsu (서열 번호 139)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxxv. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsg (서열 번호 140)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxxvi. 서열 (5'3') asAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsc (서열 번호 141)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxxvii. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfUfAfuGfcCfuAfcAfgusu (서열 번호 142)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxxviii. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgCfsc (서열 번호 143)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xxxix. 서열 (5'3') asCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcCfsu (서열 번호 144)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xl. 서열 (5'3') usCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcCfsu (서열 번호 145)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xli. 서열 (5'3') asCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccsg (서열 번호 146)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xlii. 서열 (5'3') usCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccsg (서열 번호 147)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
xliii. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfggsg (서열 번호 148)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이한 서열을 포함하는 안티센스 가닥;
여기서, a, g, c 및 u는 2'-O-메틸(2'-OMe) 변형된 뉴클레오티드이고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 2'-플루오로 변형된 뉴클레오티드이고; s는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합이고, 나머지 뉴클레오티드 단량체는 포스포디에스테르 결합에 의해 연결되고; cPrpu는 5'-사이클로프로필 포스포네이트-2'-O-메틸 변형된 뉴클레오티드이며; 이 HBV RNAi 작용제는 상기 각각의 안티센스 가닥에 적어도 부분적으로 상보적인 센스 가닥을 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 다음을 포함하고:
i. 서열 (5'3') usAfscCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfccsusuAu (서열 번호 61)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
ii. 서열 (5'3') usAfscCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfcscsu (서열 번호 62)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
iii. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfccsu (서열 번호 63)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
iv. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfsc (서열 번호 64)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
v. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgusu (서열 번호 68)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
vi. 서열 (5'3') usAfscscaauUfuAfuGfcCfuacagcsc (서열 번호 85)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
vii. 서열 (5'3') usAfsusugagAfgAfaGfuCfcaccacsg (서열 번호 94)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
viii. 서열 (5'3') usAfsusUfgAfgAfgAfaGfuCfcAfcCfaCfgsa (서열 번호 98)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
ix. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgcsc (서열 번호 102)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
x. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgcusu (서열 번호 103)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xi. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgccsu (서열 번호 104)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xii. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgccusu (서열 번호 105)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xiii. 서열 (5'3') cPrpusAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgusu (서열 번호 107)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xiv. 서열 (5'3') cPrpusAfsusUfgAfgAfgAfaGfuCfcAfcCfaCfsg (서열 번호 108)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xv. 서열 (5'3') usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfausu (서열 번호 109)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xvi. 서열 (5'3') usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacsg (서열 번호 110)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xvii. 서열 (5'3') usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacsusu (서열 번호 111)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xviii. 서열 (5'3') usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacsgsa (서열 번호 112)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xix. 서열 (5'3') usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacusu (서열 번호 120)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xx. 서열 (5'3') asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcusu (서열 번호 125)로 이루어진 안티센스 가닥;
xxi. 서열 (5'3') asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcasc (서열 번호 126)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxii. 서열 (5'3') asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcacusu (서열 번호 127)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxiii. 서열 (5'3') asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcacsc (서열 번호 128)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxiv. 서열 (5'3') usGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcusu (서열 번호 129)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxv. 서열 (5'3') usGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcasc (서열 번호 130)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxvi. 서열 (5'3') asCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcusu (서열 번호 131)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxvii. 서열 (5'3') asCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccusu (서열 번호 132)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxviii. 서열 (5'3') asCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccusc (서열 번호 133)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxix. 서열 (5'3') usCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcusu (서열 번호 134)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxx. 서열 (5'3') usCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccusu (서열 번호 135)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxxi. 서열 (5'3') cPrpusAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsc (서열 번호 136)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxxii. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgscsc (서열 번호 137)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxxiii. 서열 (5'3') cPrpusAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgscsc (서열 번호 138)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxxiv. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsu (서열 번호 139)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxxv. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsg (서열 번호 140)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxxvi. 서열 (5'3') asAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsc (서열 번호 141)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxxvii. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfUfAfuGfcCfuAfcAfgusu (서열 번호 142)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxxviii. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgCfsc (서열 번호 143)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xxxix. 서열 (5'3') asCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcCfsu (서열 번호 144)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xl. 서열 (5'3') usCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcCfsu (서열 번호 145)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xli. 서열 (5'3') asCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccsg (서열 번호 146)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xlii. 서열 (5'3') usCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccsg (서열 번호 147)로 이루어진 안티센스 가닥; 또는
xliii. 서열 (5'3') usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfggsg (서열 번호 148)로 이루어진 안티센스 가닥;
여기서, a, g, c 및 u는 2'-O-메틸(2'-OMe) 변형된 뉴클레오티드이고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 2'-플루오로 변형된 뉴클레오티드이고; s는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합이고, 나머지 뉴클레오티드 단량체는 포스포디에스테르 결합에 의해 연결되고; cPrpu는 5'-사이클로프로필 포스포네이트-2'-O-메틸 변형된 뉴클레오티드이며; 이 HBV RNAi 작용제는 상기 각각의 안티센스 가닥에 적어도 부분적으로 상보적인 센스 가닥을 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 다음을 포함하고:
a. 서열 (5'3') UUGCCUGUAGGCAUAAAUUGGUAUT (서열 번호 275)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
b. 서열 (5'3') UAUAUGCCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 276)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
c. 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUAUU (서열 번호 278)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
d. 서열 (5'3') CGUGGUGGACUUCUCUCAAUU (서열 번호 285)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
e. 서열 (5'3') CGUGGUGGACUUCUCUCAAUA (서열 번호 289)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
f. 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 292)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
g. 서열 (5'3') GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 294)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
h. 서열 (5'3') UCGUGGUGGACUUCUCUCAAUU (서열 번호 300)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
i. 서열 (5'3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 302)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
j. 서열 (5'3') GCUGUAGGCAUAAAUUGGUAUU (서열 번호 303)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
k. 서열 (5'3') GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUAUU (서열 번호 304)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
l. 서열 (5'3') UGGUGGACUUCUCUCAAUAUU (서열 번호 306)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
m. 서열 (5'3') GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU (서열 번호 307)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
n. 서열 (5'3') AAUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU (서열 번호 308)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
o. 서열 (5'3') GGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 318)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
p. 서열 (5'3') GGUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 319)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
q. 서열 (5'3') GGACUUCUCUCAAUUUUCA (서열 번호 320)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
r. 서열 (5'3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCA (서열 번호 321)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
s. 서열 (5'3') GCUGUAGGCAUAAAUUGGU (서열 번호 322)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
t. 서열 (5'3') GGCUGUAGGCAUAAAUUGGU (서열 번호 323)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
u. 서열 (5'3') GAGGCUGUAGGCAUAAAUUGGU (서열 번호 324)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
v. 서열 (5'3') GCUGUAGGCAUAAAUUGGA (서열 번호 325)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
w. 서열 (5'3') GGCUGUAGGCAUAAAUUGGA (서열 번호 326)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
x. 서열 (5'3') AGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 327)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
y. 서열 (5'3') CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 328)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
z. 서열 (5'3') GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUU (서열 번호 329)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
aa. 서열 (5'3') AGGCUGUAGGCAUAAAUUGGU (서열 번호 330)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥; 또는
bb. 서열 (5'3') AGGCUGUAGGCAUAAAUUGGA (서열 번호 331)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
cc. 서열 (5'3') CGGCUGUAGGCAUAAAUUGGU (서열 번호 332)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
dd. 서열 (5'3') CGGCUGUAGGCAUAAAUUGGA (서열 번호 333)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥; 또는
ee. 서열 (5'3') CCCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 334)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥;
이 HBV RNAi 작용제는 상기 각각의 안티센스 가닥에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥을 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 다음을 포함하고:
a. 핵염기 서열 (5'3') UUGCCUGUAGGCAUAAAUUGGUAUT (서열 번호 275)로 이루어진 센스 가닥; 또는
b. 핵염기 서열 (5'3') UAUAUGCCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 276)로 이루어진 센스 가닥; 또는
c. 핵염기 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUAUU (서열 번호 278)로 이루어진 센스 가닥; 또는
d. 핵염기 서열 (5'3') CGUGGUGGACUUCUCUCAAUU (서열 번호 285)로 이루어진 센스 가닥; 또는
e. 핵염기 서열 (5'3') CGUGGUGGACUUCUCUCAAUA (서열 번호 289)로 이루어진 센스 가닥; 또는
f. 핵염기 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 292)로 이루어진 센스 가닥; 또는
g. 핵염기 서열 (5'3') GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 294)로 이루어진 센스 가닥; 또는
h. 핵염기 서열 (5'3') UCGUGGUGGACUUCUCUCAAUU (서열 번호 300)로 이루어진 센스 가닥; 또는
i. 핵염기 서열 (5'3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 302)로 이루어진 센스 가닥; 또는
j. 핵염기 서열 (5'3') GCUGUAGGCAUAAAUUGGUAUU (서열 번호 303)로 이루어진 센스 가닥; 또는
k. 핵염기 서열 (5'3') GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUAUU (서열 번호 304)로 이루어진 센스 가닥; 또는
l. 핵염기 서열 (5'3') UGGUGGACUUCUCUCAAUAUU (서열 번호 306)로 이루어진 센스 가닥; 또는
m. 핵염기 서열 (5'3') GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU (서열 번호 307)로 이루어진 센스 가닥; 또는
n. 핵염기 서열 (5'3') AAUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU (서열 번호 308)로 이루어진 센스 가닥; 또는
o. 핵염기 서열 (5'3') GGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 318)로 이루어진 센스 가닥; 또는
p. 핵염기 서열 (5'3') GGUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 319)로 이루어진 센스 가닥; 또는
q. 핵염기 서열 (5'3') GGACUUCUCUCAAUUUUCA (서열 번호 320)로 이루어진 센스 가닥; 또는
r. 핵염기 서열 (5'3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCA (서열 번호 321)로 이루어진 센스 가닥; 또는
s. 핵염기 서열 (5'3') GCUGUAGGCAUAAAUUGGU (서열 번호 322)로 이루어진 센스 가닥; 또는
t. 핵염기 서열 (5'3') GGCUGUAGGCAUAAAUUGGU (서열 번호 323)로 이루어진 센스 가닥; 또는
u. 핵염기 서열 (5'3') GAGGCUGUAGGCAUAAAUUGGU (서열 번호 324)로 이루어진 센스 가닥; 또는
v. 핵염기 서열 (5'3') GCUGUAGGCAUAAAUUGGA (서열 번호 325)로 이루어진 센스 가닥; 또는
w. 핵염기 서열 (5'3') GGCUGUAGGCAUAAAUUGGA (서열 번호 326)로 이루어진 센스 가닥; 또는
x. 핵염기 서열 (5'3') AGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 327)로 이루어진 센스 가닥; 또는
y. 핵염기 서열 (5'3') CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 328)로 이루어진 센스 가닥; 또는
z. 핵염기 서열 (5'3') GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUU (서열 번호 329)로 이루어진 센스 가닥; 또는
aa. 핵염기 서열 (5'3') AGGCUGUAGGCAUAAAUUGGU (서열 번호 330)를 포함하는 안티센스 가닥; 또는
bb. 핵염기 서열 (5'3') AGGCUGUAGGCAUAAAUUGGA (서열 번호 331)로 이루어진 센스 가닥; 또는
cc. 핵염기 서열 (5'3') CGGCUGUAGGCAUAAAUUGGU (서열 번호 332)로 이루어진 센스 가닥; 또는
dd. 핵염기 서열 (5'3') CGGCUGUAGGCAUAAAUUGGA (서열 번호 333)로 이루어진 센스 가닥; 또는
ee. 핵염기 서열 (5'3') CCCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 334)로 이루어진 센스 가닥;
이 HBV RNAi 작용제는 상기 각각의 안티센스 가닥에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥을 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'3') UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU (서열 번호 175)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU (서열 번호 307)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGUU (서열 번호 154)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 292)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제는 핵염기 서열 (5'3') UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU (서열 번호 175)로 이루어진 안티센스 가닥, 및 핵염기 서열 (5'3') GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU (서열 번호 307)로 이루어진 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 핵염기 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGUU (서열 번호 154)로 이루어진 안티센스 가닥, 및 핵염기 서열 (5'3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 292)로 이루어진 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 171)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 302)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCG (서열 번호 188)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 328)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제는 핵염기 서열 (5'→3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 171)로 이루어진 안티센스 가닥, 및 핵염기 서열 (5'→3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 302)로 이루어진 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 핵염기 서열 (5'→3'(5'→3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCG (서열 번호 188)로 이루어진 안티센스 가닥, 및 핵염기 서열 (5'→3') CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 328)로 이루어진 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 171)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3'(5'→3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 302)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCC (서열 번호 162)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 294)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제는 핵염기 서열 (5'→3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 171)로 이루어진 안티센스 가닥, 및 핵염기 서열 (5'→3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 302)로 이루어진 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 핵염기 서열 (5'→3'(5'→3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCC (서열 번호 162)로 이루어진 안티센스 가닥, 및 핵염기 서열 (5'→3') GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 294)로 이루어진 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 171)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3'(5'→3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 302)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCC (서열 번호 162)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU (서열 번호 307)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제는 핵염기 서열 (5'→3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 171)로 이루어진 안티센스 가닥, 및 핵염기 서열 (5'→3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 302)로 이루어진 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 핵염기 서열 (5'→3'(5'→3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCC (서열 번호 162)로 이루어진 안티센스 가닥, 및 핵염기 서열 (5'→3') GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU (서열 번호 307)로 이루어진 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형되고/되거나 제1 및/또는 제2 HBV RNAi 작용제 내의 안티센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형된 뉴클레오티드이고, 제1 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU (서열 번호 175)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU (서열 번호 307)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') UACCAAUUUAUGCCUACAGUU (서열 번호 154)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 292)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형되고/되거나 제1 및/또는 제2 HBV RNAi 작용제 내의 안티센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형된 뉴클레오티드이고, 제1 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 171)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 302)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCG (서열 번호 188)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 328)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형되고/되거나 제1 및/또는 제2 HBV RNAi 작용제 내의 안티센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형된 뉴클레오티드이고, 제1 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 171)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 302)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCC (서열 번호 162)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 294)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형되고/되거나 제1 및/또는 제2 HBV RNAi 작용제 내의 안티센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형된 뉴클레오티드이고, 제1 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 171)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 302)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCC (서열 번호 162)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU (서열 번호 307)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형되고/되거나 제1 및/또는 제2 HBV RNAi 작용제 내의 안티센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형된 뉴클레오티드이고, 제1 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU (서열 번호 175)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU (서열 번호 307)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') UACCAAUUUAUGCCUACAGUU (서열 번호 154)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') CUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 292)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제와 제2 HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 N-아세틸-갈락토사민을 포함하는 표적화 리간드에 접합된다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형되고/되거나 제1 및/또는 제2 HBV RNAi 작용제 내의 안티센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형된 뉴클레오티드이고, 제1 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 171)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 302)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCG (서열 번호 188)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 328)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제와 제2 HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 N-아세틸-갈락토사민을 포함하는 표적화 리간드에 접합된다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형되고/되거나 제1 및/또는 제2 HBV RNAi 작용제 내의 안티센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형된 뉴클레오티드이고, 제1 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 171)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 302)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCC (서열 번호 162)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA (서열 번호 294)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제와 제2 HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 N-아세틸-갈락토사민을 포함하는 표적화 리간드에 접합된다.
일부 실시 형태에서, 세포에서 HBV 유전자의 발현을 저해하는 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 2개의 HBV RNAi 작용제를 포함하며, 센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형되고/되거나 제1 및/또는 제2 HBV RNAi 작용제 내의 안티센스 가닥의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형된 뉴클레오티드이고, 제1 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC (서열 번호 171)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU (서열 번호 302)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하고; 제2 HBV RNAi 작용제는 서열 (5'→3') UACCAAUUUAUGCCUACAGCC (서열 번호 162)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 서열 (5'→3') GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU (서열 번호 307)와 0개, 1개, 2개 또는 3개의 핵염기가 상이한 핵염기 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함하며, 제1 HBV RNAi 작용제와 제2 HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 N-아세틸-갈락토사민을 포함하는 표적화 리간드에 접합된다.
일부 실시 형태에서, 유효량의 AD04872와 유효량의 AD05070을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, HBV 감염의 치료 방법 또는 HBV 감염에 의해 야기되는 질병 또는 증상의 예방 방법이 본 명세서에 개시된다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD05070을 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD05070의 비는 약 2:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD05070을 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD05070의 비는 약 3:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD05070을 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD05070의 비는 약 1:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD05070을 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD05070의 비는 약 4:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD05070을 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD05070의 비는 약 5:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD05070을 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD05070의 비는 약 1:2 이다.
일부 실시 형태에서, 약 1 mg/㎏(mpk)의 AD04872와 약 1 mg/㎏의 AD05070이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 1.5 mg/㎏의 AD04872와 약 1.5 mg/㎏의 AD05070이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 2.0 mg/㎏의 AD04872와 약 1.0 mg/㎏의 AD05070이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 3.0 mg/㎏의 AD04872와 약 1.0 mg/㎏의 AD05070이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 3.2 mg/㎏의 AD04872와 약 0.8 mg/㎏의 AD05070이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 2.7 mg/㎏의 AD04872와 약 1.3 mg/㎏의 AD05070이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 4.0 mg/㎏의 AD04872와 약 1.0 mg/㎏의 AD05070이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 3.3 mg/㎏의 AD04872와 약 1.7 mg/㎏의 AD05070이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 0.05 내지 약 5 mg/㎏의 AD04872와 약 0.05 내지 약 5 mg/㎏의 AD05070이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 AD04872와 약 AD05070은 개별적으로 (예를 들어, 별개의 주사로) 투여된다. 일부 실시 형태에서, AD04872의 각 용량과 AD05070의 각 용량은 함께 (예를 들어, 동일한 주사로) 투여된다. 일부 실시 형태에서, AD04872의 각 용량과 AD05070의 각 용량은 단일 약제학적 조성물로 제조된다.
일부 실시 형태에서, 유효량의 AD04872와 유효량의 AD04776을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, HBV 감염의 치료 방법 또는 HBV 감염에 의해 야기되는 질병 또는 증상의 예방 방법이 본 명세서에 개시된다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04776을 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD04776의 비는 약 2:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04776을 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD04776의 비는 약 3:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04776을 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD04776의 비는 약 4:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04776을 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD04776의 비는 약 1:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04776을 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD04776의 비는 약 5:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04776을 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD04776의 비는 약 1:2 이다.
일부 실시 형태에서, 약 1 mg/㎏(mpk)의 AD04872와 약 1 mg/㎏의 AD04776이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 1.5 mg/㎏의 AD04872와 약 1.5 mg/㎏의 AD04776이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 2.0 mg/㎏의 AD04872와 약 1.0 mg/㎏의 AD04776이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 3.0 mg/㎏의 AD04872와 약 1.0 mg/㎏의 AD04776이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 3.2 mg/㎏의 AD04872와 약 0.8 mg/㎏의 AD04776이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 2.7 mg/㎏의 AD04872와 약 1.3 mg/㎏의 AD04776이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 4.0 mg/㎏의 AD04872와 약 1.0 mg/㎏의 AD04776이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 3.3 mg/㎏의 AD04872와 약 1.7 mg/㎏의 AD04776이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 0.05 내지 약 5 mg/㎏의 AD04872와 약 0.05 내지 약 5 mg/㎏의 AD04776이 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04776의 각각의 용량은 개별적으로 (예를 들어, 별개의 주사로) 투여된다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04776의 각각의 용량은 함께 (예를 들어, 동일한 주사로) 투여된다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04776의 각각의 용량은 단일 약제학적 조성물로 제조된다.
일부 실시 형태에서, 유효량의 AD04872와 유효량의 AD04982를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, HBV 감염의 치료 방법 또는 HBV 감염에 의해 야기되는 질병 또는 증상의 예방 방법이 본 명세서에 개시된다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04982를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD04982의 비는 약 2:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04982를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD04982의 비는 약 3:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04982를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD04982의 비는 약 4:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04982를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD04982의 비는 약 1:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04982를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD04982의 비는 약 5:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04982를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04872 대 AD04776의 비는 약 1:2 이다.
일부 실시 형태에서, 약 1 mg/㎏(mpk)의 AD04872와 약 1 mg/㎏의 AD04982가 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 1.5 mg/㎏의 AD04872와 약 1.5 mg/㎏의 AD04982가 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 2.0 mg/㎏의 AD04872와 약 1.0 mg/㎏의 AD04982가 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 3.0 mg/㎏의 AD04872와 약 1.0 mg/㎏의 AD04982가 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 3.2 mg/㎏의 AD04872와 약 0.8 mg/㎏의 AD04982가 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 2.7 mg/㎏의 AD04872와 약 1.3 mg/㎏의 AD04982가 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 4.0 mg/㎏의 AD04872와 약 1.0 mg/㎏의 AD04982가 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 3.3 mg/㎏의 AD04872와 약 1.7 mg/㎏의 AD04982가 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 0.05 내지 약 5 mg/㎏의 AD04872와 약 0.05 내지 약 5 mg/㎏의 AD04982가 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04982의 각각의 용량은 개별적으로 (예를 들어, 별개의 주사로) 투여된다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04982의 각각의 용량은 함께 (예를 들어, 동일한 주사로) 투여된다. 일부 실시 형태에서, AD04872와 AD04982의 각각의 용량은 단일 약제학적 조성물로 제조된다.
일부 실시 형태에서, 유효량의 AD04580과 유효량의 AD04585를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, HBV 감염의 치료 방법 또는 HBV 감염에 의해 야기되는 질병 또는 증상의 예방 방법이 본 명세서에 개시된다. 일부 실시 형태에서, AD04580과 AD04585를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04580 대 AD04585의 비는 약 2:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04580과 AD04585를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04580 대 AD04585의 비는 약 3:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04580과 AD04585를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04580 대 AD04585의 비는 약 4:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04580과 AD04585를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04580 대 AD04585의 비는 약 5:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04580과 AD04585를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04580 대 AD04585의 비는 약 1:1 이다. 일부 실시 형태에서, AD04580과 AD04585를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 AD04580 대 AD04585의 비는 약 1:2 이다. 일부 실시 형태에서, 약 1 mg/㎏(mpk)의 AD04580과 약 1 mg/㎏의 AD04585가 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 1.5 mg/㎏의 AD04580과 약 1.5 mg/㎏의 AD04585가 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 0.05 내지 약 5 mg/㎏의 AD04580과 약 0.05 내지 약 5 mg/㎏의 AD04585가 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 하기로 표시되는 구조를 갖는 나트륨 염으로서 나타낸 (NAG37)s에 연결된 AD05070으로 이루어지거나 이를 포함한다:
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 하기로 표시되는 구조를 갖는 나트륨 염으로서 나타낸 (NAG25)s에 연결된 AD05070으로 이루어지거나 이를 포함한다:
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 하기로 표시되는 구조를 갖는 유리 산으로서 나타낸 (NAG37)s에 연결된 AD05070으로 이루어지거나 이를 포함한다:
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 하기로 표시되는 구조를 갖는 나트륨 염으로서 나타낸 (NAG31)s에 연결된 AD04580으로 이루어지거나 이를 포함한다:
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 하기로 표시되는 구조를 갖는 나트륨 염으로서 나타낸 (NAG25)s에 연결된 AD04585로 이루어지거나 이를 포함한다:
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 하기로 표시되는 구조를 갖는 나트륨 염으로서 나타낸 (NAG37)s에 연결된 AD04872로 이루어지거나 이를 포함한다:
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 하기로 표시되는 구조를 갖는 나트륨 염으로서 나타낸 (NAG25)s에 연결된 AD04872로 이루어지거나 이를 포함한다:
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 하기로 표시되는 구조를 갖는 유리 산으로서 나타낸 (NAG37)s에 연결된 AD04872로 이루어지거나 이를 포함한다:
일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제(들)는 선택적으로 하나 이상의 추가의 치료제 (즉, 제2 치료제, 제3 치료제 등)와 병용된다. 제2 치료제는 다른 HBV RNAi 작용제 (예를 들어, HBV 게놈 내의 상이한 서열을 표적화하는 HBV RNAi 작용제)일 수 있다. 추가의 치료제는 또한 소분자 약물, 항체, 항체 단편, 및/또는 백신일 수 있다. HBV RNAi 작용제는, 하나 이상의 추가의 치료제와 함께 또는 이러한 치료제 없이, 하나 이상의 부형제와 조합되어 약제학적 조성물을 형성할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제(들)는 선택적으로 하나 이상의 추가의 치료제와 병용되며, 이 추가의 치료제는 뉴클레오시드 저해제 또는 뉴클레오티드 저해제이다. 일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제(들)는 선택적으로 하나 이상의 추가의 치료제와 병용되며, 이 추가의 치료제는 엔테카비어, 테노포비어, 테노포비어 알라펜아미드, 테노포비어 디소프록실, 라미부딘, 또는 다른 항바이러스 치료제이다. 일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제(들)는 선택적으로 하나 이상의 추가의 치료제와 병용되며, 이 추가의 치료제는 인터페론이다. 일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제(들)는 선택적으로 하나 이상의 추가의 치료제와 병용되며, 이 추가의 치료제는 인터페론-알파이다. 일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제(들)는 선택적으로 하나 이상의 추가적인 HBV 치료제와 병용되며, 이 추가의 치료제는 HBV 백신이다.
일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제(들)는 단일 투여 형태 (즉, 단일 주사에 포함되는 칵테일)로 선택적으로 하나 이상의 추가의 치료제와 병용된다. 일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제(들)는 하나 이상의 선택적인 추가의 치료제와 별도로 투여될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제(들)는 피하 주사를 통해 이를 필요로 하는 대상체에게 투여되고, 하나 이상의 선택적인 추가의 치료제는 경구 투여되며, 이들은 함께 HBV 감염과 관련된 질병 및 질환에 대한 치료 요법을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제(들)는 피하 주사를 통해 이를 필요로 하는 대상체에게 투여되고, 하나 이상의 선택적인 추가의 치료제는 별도의 피하 주사를 통해 투여된다.
일부 실시 형태에서, 생체내에서 HBV RNAi 작용제를 간 세포에 전달하기 위한 조성물이 본 명세서에 개시되고, 이 조성물은 표적화 기에 접합되거나 연결된 HBV RNAi 작용제를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 표적화 기는 아시알로글리코단백질 수용체 리간드이다. 일부 실시 형태에서, 생체내에서 HBV RNAi 작용제를 간세포에 전달하기 위한 조성물이 기재되고, 이 조성물은 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드에 연결된 HBV RNAi 작용제를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 하나 이상의 기재된 HBV RNAi 작용제는 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제 중에서 포유동물에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 포유동물은 인간이다.
B형 간염 바이러스 RNAi 작용제(들)의 사용은 HBV 감염과 관련된 질환/장애의 치료적 및/또는 예방적 처치를 위한 방법을 제공한다. 기재된 HBV RNAi 작용제는 B형 간염 바이러스의 복제 및/또는 발병에 필요한 하나 이상의 유전자의 발현을 저해하기 위해 RNA 간섭을 매개한다. 특히, 예를 들어, HBV RNAi 작용제는 세포, 조직 또는 포유동물에서 바이러스 중합효소, 코어 단백질, 표면 항원, e-항원 및/또는 X 단백질을 저해할 수 있다. HBV RNAi 작용제는 HBV 감염을 치료하는 데 사용될 수 있다. HBV RNAi 작용제는 또한 HBV 감염과 관련된 만성 간 질환/장애, 염증, 섬유증 질환 및 증식성 장애, 예를 들어, 암을 치료 또는 예방하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 방법은 대상체에서의 D형 간염 바이러스(HDV)의 치료를 추가로 포함한다. 그러한 방법은 HBV RNAi 작용제를 HBV로 감염된 사람 또는 동물에게 투여하는 것을 포함한다. 또한, 생체내에서 HBV RNAi 작용제를 간 세포에 전달하기 위한 조성물이 기재된다.
하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 국소 또는 전신 치료가 요망되는지에 따라 다수의 방식으로 투여될 수 있다. 투여는 정맥내 투여, 동맥내 투여, 피하(subcutaneous) 투여, 복강내 투여, (예를 들어, 이식된 장치를 통한) 진피하(subdermal) 투여, 및 간엽내 투여일 수 있지만, 이로 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 피하 주사에 의해 투여된다.
기재된 HBV RNAi 작용제 및/또는 조성물은 HBV 감염 또는 HBV 감염에 의해 야기되는 질병 또는 질환의 치료적 처치를 위한 방법에 사용될 수 있다. 그러한 방법은 본 명세서에 기재된 바와 같은 HBV RNAi 작용제를 대상체, 예를 들어 인간 또는 동물 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "올리고뉴클레오티드" 및 "폴리뉴클레오티드"는 각각 독립적으로 변형되거나 변형되지 않을 수 있는 연결된 뉴클레오시드의 중합체를 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "RNAi 작용제" 또는 "RNAi 트리거"는 서열 특이적 방식으로 표적 mRNA의 메신저 RNA(mRNA) 전사체의 번역을 분해하거나 저해할 수 있는 RNA 또는 RNA 유사 (예를 들어, 화학적으로 변형된 RNA) 올리고뉴클레오티드 분자를 함유하는 조성물을 의미한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, RNAi 작용제는 RNA 간섭 메커니즘을 통해 (즉, 포유동물 세포의 RNA 간섭 경로 기구 (RNA 유도 침묵 복합체(RNA-induced silencing complex) 또는 RISC)와의 상호작용을 통해 RNA 간섭을 유도함), 또는 임의의 대안적인 메커니즘(들) 또는 경로(들)에 의해 작용할 수 있다. RNAi 작용제는, 이 용어가 본 명세서에 사용되는 바와 같이, RNA 간섭 메커니즘을 통해 주로 작용하는 것으로 여겨지지만, 개시된 RNAi 작용제는 임의의 특정 경로 또는 작용 메커니즘에 의해 구속되거나 이로 한정되지 않는다. 본 명세서에 개시된 RNAi 작용제는 센스 가닥과 안티센스 가닥으로 구성되고, 짧은 간섭 RNA(siRNA), 이중 가닥 RNA(dsRNA), 마이크로 RNA(miRNA), 짧은 헤어핀 RNA(shRNA), 및 다이서 기질(dicer substrate)을 포함하지만, 이로 한정되지 않는다. 본 명세서에 기재된 RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표적화되는 mRNA에 적어도 부분적으로 상보적이다. RNAi 작용제는 변형된 뉴클레오티드 및/또는 하나 이상의 비-포스포디에스테르 결합으로 구성될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 주어진 유전자의 발현을 지칭하는 경우 용어 "침묵", "감소", "저해", "하향 조절", 또는 "녹다운(knockdown)"은, 그 유전자로부터 전사되는 RNA의 수준 또는 그 유전자가 전사되는 세포, 세포의 군, 조직, 또는 대상체에서 mRNA로부터 번역되는 폴리펩티드, 단백질 또는 단백질 서브유닛의 수준에 의해 측정되는 경우, 세포, 세포의 군, 조직, 기관, 또는 대상체가 본 명세서에 기재된 RNAi 작용제와 같은 올리고머 화합물로 처리될 때 그렇게 처리되지 않은 제2 세포, 세포의 군, 조직, 기관, 또는 대상체와 비교하여 그 유전자의 발현이 감소함을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "서열" 또는 "뉴클레오티드 서열"은 표준 명명법을 사용하여 일련의 문자로 기재된, 일련의 또는 일정 순서의 핵염기 또는 뉴클레오티드를 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "뉴클레오티드 염기" 또는 "핵염기"는 모든 핵산의 표준 구성요소인 헤테로사이클릭 피리미딘 또는 퓨린 화합물이고, 뉴클레오티드인 아데닌(A), 구아닌(G), 시토신(C), 티민(T), 및 우라실(U)을 형성하는 염기를 포함한다. 핵염기는, 제한 없이, 범용(universal) 염기, 소수성 염기, 불규칙(promiscuous) 염기, 크기 확대(size-expanded) 염기, 및 불소화 염기를 포함하도록 추가로 변형될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 그리고 달리 나타내지 않는 한, 용어 "상보적"은, 제2 뉴클레오티드 서열 (예를 들어, RNAi 작용제의 안티센스 가닥 또는 단일 가닥 안티센스 올리고뉴클레오티드)과 관련하여 제1 뉴클레오티드 서열 (예를 들어, RNAi 작용제의 센스 가닥 또는 표적화된 mRNA)을 설명하기 위해 사용되는 경우, 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드와 혼성화 (포유동물의 생리학적 조건 (또는 시험관내에서의 유사한 조건) 하에서 염기쌍 수소 결합을 형성)되고 특정 조건 하에서 이중체 또는 이중 나선 구조를 형성하는 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드의 능력을 의미한다. 상보적 서열은 왓슨-크릭 염기 쌍 또는 비-왓슨-크릭 염기쌍을 포함하고, 적어도 상기 혼성화 요건이 충족되는 정도까지 천연 또는 변형된 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 모방체를 포함한다. 서열 동일성 또는 상보성은 변형과 무관하다. 예를 들어, a 및 Af는 U (또는 T)에 상보적이고, 동일성 또는 상보성을 결정하기 위한 목적으로 A와 동일하다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "완벽하게 상보적" 또는 "완전히 상보적"은 제1 폴리뉴클레오티드의 연속 서열 내의 염기의 전부 (100%)가 제2 폴리뉴클레오티드의 연속 서열 내의 동일한 수의 염기와 혼성화되는 것을 의미한다. 연속 서열은 제1 또는 제2 뉴클레오티드 서열의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "부분적으로 상보적"은, 핵염기 서열의 혼성화된 쌍에서 제1 폴리뉴클레오티드의 연속 서열 내의 염기의 전부는 아니지만 적어도 70%가 제2 폴리뉴클레오티드의 연속 서열 내의 동일한 수의 염기와 혼성화되는 것을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "실질적으로 상보적"은, 핵염기 서열의 혼성화된 쌍에서 제1 폴리뉴클레오티드의 연속 서열 내의 염기의 전부는 아니지만 적어도 약 85%가 제2 폴리뉴클레오티드의 연속 서열 내의 동일한 수의 염기와 혼성화되는 것을 의미한다. 본 명세서에서 용어 "상보적", "완전히 상보적", 및 "실질적으로 상보적"은 이중 가닥 RNAi 작용제의 센스 가닥과 안티센스 가닥 사이, RNAi 작용제의 안티센스 가닥과 표적 mRNA의 서열 사이, 또는 단일 가닥 안티센스 올리고뉴클레오티드와 표적 mRNA의 서열 사이의 염기 매칭에 대하여 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "실질적으로 동일한" 또는 "실질적으로 동일성"은 핵산 서열에 적용되는 경우 핵산 서열이 기준 서열과 비교하여 적어도 약 85%, 바람직하게는 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함함을 의미한다. 서열 동일성의 백분율은 비교 윈도우에 걸쳐 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교함으로써 결정된다. 백분율은 둘 모두의 서열에서 동일한 핵산 염기가 존재하는 위치의 수를 결정하여 일치된 위치의 수를 산출하고, 일치된 위치의 수를 윈도우 내의 위치의 총 수로 나누고, 그 결과에 100을 곱하여 서열 동일성 백분율을 산출함으로써 계산된다. 본 명세서에 개시된 발명은 본 명세서, 예를 들어 표 2, 표 3, 및 표 4에 개시된 것과 실질적으로 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 서열은 본 명세서, 예를 들어 표 1, 표 2, 표 3 및 표 4에 개시된 것과 정확히 동일하거나, 또는 적어도 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료" 등은 대상체에서 질병 또는 질환의 하나 이상의 증상의 수, 중증도, 및/또는 빈도의 경감 또는 완화를 제공하기 위해 취해지는 방법 또는 단계를 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 어구 "세포 내로 도입하는"은, 올리고머 화합물을 지칭할 때 올리고머 화합물을 세포 내로 기능적으로 전달하는 것을 의미한다. 어구 "기능적 전달"은 올리고머 화합물이 예측된 생물학적 활성, 예를 들어 유전자 발현의 서열 특이적 저해 활성을 가질 수 있게 하는 방식으로 올리고머 화합물을 세포에 전달하는 것을 의미한다.
달리 언급되지 않는 한, 본 명세서에 사용되는 바와 같은 기호 의 사용은 본 명세서에 기술된 본 발명의 범주에 따른 임의의 기(들)가 그에 연결될 수 있음을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "이성질체"는 동일한 분자식을 갖지만, 이들의 원자의 성질 또는 결합 순서가 상이하거나 이들의 원자의 공간 배열이 상이한 화합물을 지칭한다. 이들의 원자의 공간 배열이 상이한 이성질체는 "입체 이성질체"로 명명된다. 서로 거울상이 아닌 입체 이성질체는 "부분입체 이성질체"로 명명되고, 겹쳐질 수 없는 거울상인 입체 이성질체는 "거울상 이성질체", 또는 때때로 광학 이성질체로 명명된다. 4개의 동일하지 않은 치환기에 결합된 탄소 원자는 "카이랄 중심"으로 명명된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 특정 입체형태를 갖는 것으로 구조에서 구체적으로 확인되지 않는 한, 비대칭 중심이 존재하여 거울상 이성질체, 부분입체이성질체, 또는 다른 입체이성질체 형태를 생성시키는 각각의 구조의 경우, 본 명세서에 기재된 각각의 구조는 광학적으로 순수한 형태 및 라세미 형태를 비롯한 모든 그러한 가능한 이성질체를 나타내도록 의도된다. 예를 들어, 본 명세서에 개시된 구조는 부분입체이성질체뿐만 아니라 단일 입체이성질체의 혼합물을 포함하는 것으로 의도된다.
본 명세서의 청구범위에 사용되는 바와 같이, 어구 "~로 이루어진"은 청구범위에서 명시되지 않은 임의의 요소, 단계, 또는 구성성분을 배제한다. 본 명세서의 청구범위에 사용될 때, 어구 "~로 본질적으로 이루어진"은 명시된 재료 또는 단계, 및 청구된 발명의 기본적이고 신규한 특성(들)에 실질적으로 영향을 주지 않는 재료 또는 단계로 청구범위의 범주를 제한한다.
당업자는 본 명세서에 개시된 화합물 및 조성물이, 화합물 또는 조성물이 배치되는 환경에 따라 양성자화된 또는 탈양성자화된 상태로 특정 원자(예를 들어, N, O, 또는 S 원자)를 가질 수 있음을 쉽게 이해하고 인지할 것이다. 따라서, 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 본 명세서에 개시된 구조는, 예를 들어 OH, SH, 또는 NH와 같은 특정 작용기가 양성자화되거나 탈양성자화될 수 있음을 고려한다. 본 명세서의 개시 내용은, 당업자에 의해 용이하게 이해되는 바와 같이, 환경(예를 들어, pH)에 기초한 양성자화 상태에 관계없이 개시된 화합물 및 조성물을 포함하도록 의도된다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에서 기술되는 것과 유사하거나 동등한 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 재료가 이제 기술된다. 본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 및 기타 참고문헌은 전체적으로 참고로 포함된다. 상충되는 경우, 정의를 포함하는 본 명세서가 우선할 것이다. 또한, 재료, 방법, 및 실시예는 단지 예시적인 것이며, 제한하고자 하는 것이 아니다.
본 발명의 다른 특징 및 이점이 하기 발명의 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백할 것이다.
B형 간염 바이러스(HBV)의 발현을 저해하기 위한 RNAi 작용제 (본 명세서에서 HBV RNAi 작용제 또는 HBV RNAi 트리거로 지칭됨)가 본 명세서에 기재되어 있다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 센스 가닥과 안티센스 가닥을 포함한다. 센스 가닥과 안티센스 가닥은 각각 길이가 16개 내지 30개 뉴클레오티드일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 각각 길이가 17개 내지 26개 뉴클레오티드일 수 있다. 센스 및 안티센스 가닥은 동일한 길이일 수 있거나 상이한 길이일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 각각 독립적으로 길이가 17개 내지 26개 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 각각 독립적으로 길이가 17개 내지 21개 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 각각 길이가 21개 내지 26개의 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 센스 가닥은 길이가 약 19개 뉴클레오티드인 한편, 안티센스 가닥은 길이가 약 21개 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 센스 가닥은 길이가 약 21개 뉴클레오티드인 한편, 안티센스 가닥은 길이가 약 23개 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 각각 길이가 26개의 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에 있어서, RNAi 작용제의 센스 및 안티센스 가닥은 각각 독립적으로 길이가 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 또는 26개의 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에 있어서, 이중 가닥 RNAi 작용제는 약 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개 또는 24개의 뉴클레오티드의 이중체 길이를 가진다. 센스 가닥과 안티센스 가닥 사이의 이러한 완벽한 또는 실질적 상보성 영역은 전형적으로 길이가 15개 내지 25개 (예를 들어, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 또는 25개) 뉴클레오티드이고, 안티센스 가닥의 5' 단부에 또는 이 근처에 존재한다 (예를 들어, 이러한 영역은 안티센스 가닥의 5' 단부로부터 완벽하게 또는 실질적으로 상보적이지 않은 0개, 1개, 2개, 3개, 또는 4개의 뉴클레오티드만큼 떨어져 있을 수 있음).
센스 가닥과 안티센스 가닥은 각각 길이가 16개 내지 23개의 핵염기인 코어 스트레치 서열을 함유한다. 안티센스 가닥의 코어 스트레치 서열은 HBV mRNA 표적에 존재하는 뉴클레오티드 서열 (때때로 예를 들어, 표적 서열로 지칭됨)에 100% (완벽하게) 상보적이거나 적어도 약 85% (실질적으로) 상보적이다. 센스 가닥의 코어 스트레치 서열은 안티센스 가닥 내의 코어 스트레치 서열에 100% (완벽하게) 상보적이거나 적어도 약 85% (실질적으로) 상보적이고, 이에 따라 센스 가닥의 코어 스트레치 서열은 HBV mRNA 표적에 존재하는 뉴클레오티드 서열 (표적 서열)과 완벽하게 동일하거나 적어도 약 85% 동일하다. 센스 가닥의 코어 스트레치 서열은 상응하는 안티센스 코어 서열과 동일한 길이일 수 있거나 상이한 길이일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 안티센스 가닥의 코어 스트레치 서열은 길이가 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 또는 23개 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 센스 가닥의 코어 스트레치 서열은 길이가 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 또는 23개 뉴클레오티드이다.
HBV RNAi 작용제를 형성하는 데 사용되는 센스 및 안티센스 가닥 뉴클레오티드 서열의 예가 표 3 및 표 4에 제공되어 있다. 표 3 및 4의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 RNAi 작용제 이중체의 예가 표 5에 제공되어 있다.
HBV RNAi 작용제의 센스 및 안티센스 가닥은 어닐링(annealing)되어 이중체를 형성한다. HBV RNAi 작용제의 센스 가닥과 안티센스 가닥은 서로 부분적으로, 실질적으로, 또는 완전히 상보적일 수 있다. 상보적 이중체 영역 내에서, 센스 가닥의 코어 스트레치 서열은 안티센스의 코어 스트레치 서열에 적어도 약 85% 상보적이거나 100% 상보적이다. 일부 실시 형태에서, 센스 가닥의 코어 스트레치 서열은 안티센스 가닥의 코어 스트레치 서열의 상응하는 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 또는 21개의 뉴클레오티드 서열에 적어도 약 85% 또는 100% 상보적인 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 적어도 19개, 적어도 20 개, 또는 적어도 21개의 뉴클레오티드의 서열을 함유한다 (즉, HBV RNAi 작용제의 센스 가닥과 안티센스의 코어 스트레치 서열은 적어도 85%가 염기쌍을 이루거나 100%가 염기쌍을 이룬 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 적어도 19개, 적어도 20 개, 또는 적어도 21개의 뉴클레오티드의 영역을 가짐).
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표 2 또는 표 3의 임의의 안티센스 가닥 서열과 0개, 1개, 2개, 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이하다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 표 2 또는 표 4의 임의의 센스 가닥 서열과 0개, 1개, 2개, 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이하다.
본 명세서에 기재된 HBV RNAi 작용제 센스 및 안티센스 가닥의 길이는 독립적으로 길이가 16개 내지 30개 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 독립적으로 길이가 17개 내지 26개 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 길이가 19개 내지 26개 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에 있어서, 기재된 RNAi 작용제의 센스 및 안티센스 가닥은 독립적으로 길이가 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 또는 26개의 뉴클레오티드이다. 센스 및 안티센스 가닥은 동일한 길이일 수 있거나 상이한 길이일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 센스 가닥과 안티센스 가닥은 각각 길이가 26개의 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 센스 가닥은 길이가 23개 뉴클레오티드이고, 안티센스 가닥은 길이가 21개 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 센스 가닥은 길이가 22개 뉴클레오티드이고, 안티센스 가닥은 길이가 21개 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 센스 가닥은 길이가 21개 뉴클레오티드이고, 안티센스 가닥은 길이가 21개 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 센스 가닥은 길이가 19개 뉴클레오티드이고, 안티센스 가닥은 길이가 21개 뉴클레오티드이다.
센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥은 선택적으로 그리고 독립적으로 코어 서열의 3' 단부, 5' 단부, 또는 3' 및 5' 단부 둘 모두에 추가의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 뉴클레오티드 (연장부(extension))를 함유할 수 있다. 존재하는 경우, 안티센스 가닥의 추가의 뉴클레오티드는 HBV mRNA 내의 상응하는 서열에 상보적이거나 상보적이지 않을 수 있다. 존재하는 경우, 센스 가닥의 추가의 뉴클레오티드는 HBV mRNA 내의 상응하는 서열과 동일하거나 동일하지 않을 수 있다. 존재하는 경우, 안티센스 가닥의 추가의 뉴클레오티드는, 존재하는 경우, 상응하는 센스 가닥의 추가의 뉴클레오티드에 상보적이거나 상보적이지 않을 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 연장부는 센스 가닥의 코어 스트레치 서열 및/또는 안티센스 가닥의 코어 스트레치 서열의 5' 및/또는 3' 단부에서 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 뉴클레오티드를 포함한다. 센스 가닥 상의 연장부 뉴클레오티드는 상응하는 안티센스 가닥 내의 코어 스트레치 서열 뉴클레오티드 또는 연장부 뉴클레오티드인 뉴클레오티드에 상보적이거나 상보적이지 않을 수 있다. 반대로, 안티센스 가닥 상의 연장부 뉴클레오티드는 상응하는 센스 가닥 내의 코어 스트레치 서열 뉴클레오티드 또는 연장부 뉴클레오티드인 뉴클레오티드에 상보적이거나 상보적이지 않을 수 있다. 일부 실시 형태에 있어서, RNAi 작용제의 센스 가닥과 안티센스 가닥 둘 모두는 3' 및 5' 연장부를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나의 가닥의 3' 연장부 뉴클레오티드 중 하나 이상은 다른 하나의 가닥의 하나 이상의 5' 연장부 뉴클레오티드와 염기쌍을 이룬다. 다른 실시 형태에서, 하나의 가닥의 3' 연장부 뉴클레오티드 중 하나 이상은 다른 하나의 가닥의 하나 이상의 5' 연장부 뉴클레오티드와 염기쌍을 이루지 않는다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 3' 연장부를 갖는 안티센스 가닥과 5' 연장부를 갖는 센스 가닥을 가진다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 길이가 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개 뉴클레오티드인 3' 연장부를 갖는 안티센스 가닥을 포함한다. 다른 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 길이가 1개, 2개, 또는 3개 뉴클레오티드인 3' 연장부를 갖는 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 안티센스 가닥의 연장부 뉴클레오티드 중 하나 이상은 우라실 또는 티미딘 뉴클레오티드, 또는 상응하는 HBV mRNA 서열에 상보적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 3' 안티센스 가닥의 연장부는 다음을 포함하거나 이로 이루어지지만, 이로 한정되지 않는다: AUA, UGCUU, CUG, UG, UGCC, CUGCC, CGU, CUU, UGCCUA, CUGCCU, UGCCU, UGAUU, GCCUAU, T, TT, U, UU (각각은 5'에서 3' 방향으로 나열됨).
일부 실시 형태에서, 안티센스 가닥의 3' 단부는 추가의 무염기성 뉴클레오시드(Ab)를 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, Ab 또는 AbAb는 안티센스 가닥의 3' 단부에 첨가될 수 있다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 길이가 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 5개 뉴클레오티드인 5' 연장부를 갖는 안티센스 가닥을 포함한다. 다른 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 길이가 1개 또는 2개 뉴클레오티드인 5' 연장부를 갖는 안티센스 가닥을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 안티센스 가닥의 연장부 뉴클레오티드 중 하나 이상은 우라실 또는 티미딘 뉴클레오티드, 또는 상응하는 HBV mRNA 서열에 상보적인 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 5' 안티센스 가닥의 연장부는 UA, TU, U, T, UU, TT, CUC (각각 5'에서 3' 방향으로 나열됨)를 포함하거나 이로 이루어지지만, 이로 한정되지 않는다. 안티센스 가닥은, 존재하는 경우, 기재된 임의의 5' 안티센스 가닥의 연장부와 함께 상기 기재된 임의의 3' 연장부를 가질 수 있다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 길이가 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 5개 뉴클레오티드인 3' 연장부를 갖는 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 센스 가닥의 연장부 뉴클레오티드 중 하나 이상은 아데노신, 우라실, 또는 티미딘 뉴클레오티드, AT 다이뉴클레오티드, 또는 HBV mRNA 서열 내의 뉴클레오티드에 상응하는 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 3' 센스 가닥의 연장부는 다음을 포함하거나 이로 이루어지지만, 이로 한정되지 않는다: T, UT, TT, UU, UUT, TTT, 또는 TTTT (각각은 5'에서 3' 방향으로 나열됨).
일부 실시 형태에서, 센스 가닥의 3' 단부는 추가의 무염기성 뉴클레오시드를 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, UUAb, UAb, 또는 Ab는 센스 가닥의 3' 단부에 첨가될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 센스 가닥의 3' 단부에 첨가된 하나 이상의 무염기성 뉴클레오시드는 역전될 수 있다 (invAb). 일부 실시 형태에 있어서, 하나 이상의 역전된 무염기성 뉴클레오시드는 RNAi 작용제의 표적화 리간드와 센스 가닥의 핵염기 서열 사이에 삽입될 수 있다. 일부 실시 형태에 있어서, RNAi 작용제의 센스 가닥의 말단부(들)에 또는 이 근처에 하나 이상의 역전된 무염기성 뉴클레오시드를 포함하는 것은 RNAi 작용제의 활성 또는 다른 요망되는 특성을 향상시킬 수 있다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 길이가 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개 뉴클레오티드인 5' 연장부를 갖는 센스 가닥을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 센스 가닥의 연장부 뉴클레오티드 중 하나 이상은 우라실 또는 아데노신 뉴클레오티드, 또는 HBV mRNA 서열 내의 뉴클레오티드에 상응하는 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 센스 가닥의 5' 연장부는 다음일 수 있지만, 이로 한정되지 않는다: CA, AUAGGC, AUAGG, AUAG, AUA, A, AA, AC, GCA, GGCA, GGC, UAUCA, UAUC, UCA, UAU, U, UU (각각은 5'에서 3' 방향으로 나열됨). 센스 가닥은 3' 연장부 및/또는 5' 연장부를 가질 수 있다.
일부 실시 형태에서, 센스 가닥의 5' 단부는 추가의 무염기성 뉴클레오시드(Ab) 또는 뉴클레오시드들(AbAb)을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 센스 가닥의 5' 단부에 첨가된 하나 이상의 무염기성 뉴클레오시드는 역전될 수 있다 (invAb). 일부 실시 형태에 있어서, 하나 이상의 역전된 무염기성 뉴클레오시드는 RNAi 작용제의 표적화 리간드와 센스 가닥의 핵염기 서열 사이에 삽입될 수 있다. 일부 실시 형태에 있어서, RNAi 작용제의 센스 가닥의 말단부(들)에 또는 이 근처에 하나 이상의 역전된 무염기성 뉴클레오시드를 포함하는 것은 RNAi 작용제의 활성 또는 다른 요망되는 특성을 향상시킬 수 있다.
HBV RNAi 작용제를 형성하는 데 사용되는 뉴클레오티드 서열의 예가 표 3 및 표 4에 제공되어 있다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표 3의 임의의 서열의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표 3의 임의의 서열의 뉴클레오티드 1-17, 2-15, 2-17, 1-18, 2-18, 1-19, 2-19, 1-20, 2-20, 1-21, 2-21, 1-22, 2-22, 1-23, 2-23, 1-24, 2-24, 1-25, 2-25, 1-26, 또는 2-26의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 표 4의 임의의 서열의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 표 4의 임의의 서열의 뉴클레오티드 1-18, 1-19, 1-20, 1-21, 1-22, 1-23, 1-24, 1-25, 1-26, 2-19, 2-20, 2-21, 2-22, 2-23, 2-24, 2-25, 2-26, 3-20, 3-21, 3-22, 3-23, 3-24, 3-25, 3-26, 4-21, 4-22, 4-23, 4-24, 4-25, 4-26, 5-22, 5-23, 5-24, 5-25, 5-26, 6-23, 6-24, 6-25, 6-26, 7-24, 7-25, 7-25, 8-25, 8-26의 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 RNAi 작용제의 센스 및 안티센스 가닥은 동일한 수의 뉴클레오티드를 함유한다. 일부 실시 형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 RNAi 작용제의 센스 및 안티센스 가닥은 상이한 수의 뉴클레오티드를 함유한다. 일부 실시 형태에 있어서, RNAi 작용제의 센스 가닥의 5' 단부와 안티센스 가닥의 3' 단부는 블런트(blunt) 단부를 형성한다. 일부 실시 형태에 있어서, RNAi 작용제의 센스 가닥의 3' 단부와 안티센스 가닥의 5' 단부는 블런트 단부를 형성한다. 일부 실시 형태에 있어서, RNAi 작용제의 양 단부는 블런트 단부를 형성한다. 일부 실시 형태에 있어서, RNAi 작용제의 어느 단부도 블런트 단부가 아니다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 블런트 단부는 2개의 어닐링된 가닥의 말단 뉴클레오티드가 상보적인 (상보적 염기쌍을 형성하는) 이중 가닥 RNAi 작용제의 단부를 지칭한다. 일부 실시 형태에 있어서, RNAi 작용제의 센스 가닥의 5' 단부와 안티센스 가닥의 3' 단부는 프레이드(frayed) 단부를 형성한다. 일부 실시 형태에 있어서, RNAi 작용제의 센스 가닥의 3' 단부와 안티센스 가닥의 5' 단부는 프레이드 단부를 형성한다. 일부 실시 형태에 있어서, RNAi 작용제의 양 단부는 프레이드 단부를 형성한다. 일부 실시 형태에 있어서, RNAi 작용제의 어느 단부도 프레이드 단부가 아니다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 프레이드 단부는 2개의 어닐링된 가닥의 말단 뉴클레오티드가 쌍을 형성하지만 (즉, 오버행(overhang)을 형성하지 않지만) 상보적이지 않은 (즉, 비상보적인 쌍을 형성하는) 이중 가닥 RNAi 작용제의 단부를 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 오버행은 이중 가닥 RNAi 작용제의 한 가닥의 단부에 있는 하나 이상의 쌍을 이루지 않은 뉴클레오티드의 스트레치이다. 쌍을 이루지 않은 뉴클레오티드는 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상에 존재하여, 3' 또는 5' 오버행을 생성할 수 있다. 일부 실시 형태에 있어서, RNAi 작용제는 다음을 함유한다: 블런트 단부와 프레이드 단부, 블런트 단부와 5' 오버행 단부, 블런트 단부와 3' 오버행 단부, 프레이드 단부와 5' 오버행 단부, 프레이드 단부와 3' 오버행 단부, 2개의 5' 오버행 단부, 2개의 3' 오버행 단부, 5' 오버행 단부와 3' 오버행 단부, 2개의 프레이드 단부, 또는 2개의 블런트 단부.
뉴클레오티드 염기 (또는 핵염기)는 모든 핵산의 구성요소인 헤테로사이클릭 피리미딘 또는 퓨린 화합물이고, 아데닌(A), 구아닌(G), 시토신(C), 티민(T), 및 우라실(U)을 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "뉴클레오티드"는 (예를 들어, 뉴클레오티드 모방체, 무염기성 부위(Ab), 또는 대용의 대체 모이어티(moiety)와 같은) 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 변형된 뉴클레오티드는, 다양한 폴리뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드 작제물에 사용될 때, 세포에서 화합물의 활성을 보존함과 동시에 이들 화합물의 혈청 안정성을 증가시킬 수 있고, 또한 폴리뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드 작제물의 투여시에 인간에서 인터페론 활성을 활성화시킬 가능성을 최소화할 수 있다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 염, 혼합 염, 또는 유리 산으로서 제조되거나 제공된다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 나트륨 염으로서 제조된다. 그러한 형태는 본 명세서에 개시된 본 발명의 범주 내에 있다.
변형된 뉴클레오티드
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 하나 이상의 변형된 뉴클레오티드를 함유한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "변형된 뉴클레오티드"는 리보뉴클레오티드 (2'-하이드록실 뉴클레오티드) 이외의 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 뉴클레오티드의 적어도 50% (예를 들어, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%)가 변형된 뉴클레오티드이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 변형된 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 뉴클레오티드 모방체, 무염기성 뉴클레오티드 (본 명세서에서 Ab로 표시됨), 2'-변형된 뉴클레오티드, 3' 대 3' 결합 (역전된) 뉴클레오티드 (본 명세서에서 invdN, invN, invn, invAb로 표시됨), 비천연 염기 포함 뉴클레오티드, 가교된 뉴클레오티드, 펩티드 핵산(PNA), 2',3'-seco 뉴클레오티드 유사체 (잠금 해제된(unlocked) 핵염기 유사체, 본 명세서에서 NUNA 또는 NUNA로 표시됨), 잠금(locked) 뉴클레오티드(본 명세서에서 NUNA 또는 NLNA로 표시됨), 3'-O-메톡시 (2' 뉴클레오시드간 결합된) 뉴클레오티드 (본 명세서에서 3'-OMen로 표시됨), 2'-F-아라비노 뉴클레오티드 (본 명세서에서 NfANA 또는 NfANA로 표시됨), 5'-Me, 2'-플루오로 뉴클레오티드 (본 명세서에서 5Me-Nf로 표시됨), 모르폴리노 뉴클레오티드, 비닐 포스포네이트 데옥시리보뉴클레오티드 (본 명세서에서 vpdN으로 표시됨), 비닐 포스포네이트 함유 뉴클레오티드, 및 사이클로프로필 포스포네이트 함유 뉴클레오티드(cPrpN)를 포함하지만, 이로 한정되지 않는다. 2'-변형된 뉴클레오티드 (즉, 5 원 당 고리의 2' 위치에 하이드록실 기 이외의 기를 갖는 뉴클레오티드)는 2'-O-메틸 뉴클레오티드 (뉴클레오티드 서열에서 소문자 'n'으로 표시됨), 2'-데옥시-2'-플루오로 뉴클레오티드 (본 명세서에서 Nf로 표시되고, 또한 본 명세서에서 2'-플루오로 뉴클레오티드로 표시됨), 2'-데옥시 뉴클레오티드 (본 명세서에서 dN으로 표시됨), 2'-메톡시에틸 (2'-O-2-메톡시에틸) 뉴클레오티드 (본 명세서에서 NM 또는 2'-MOE로 표시됨), 2'-아미노 뉴클레오티드, 및 2'-알킬 뉴클레오티드를 포함하지만, 이로 한정되지 않는다. 주어진 화합물 내의 모든 위치가 균일하게 변형될 필요는 없다. 반대로, 하나 초과의 변형이 단일 HBV RNAi 작용제에 또는 심지어 이의 단일 뉴클레오티드에 포함될 수 있다. HBV RNAi 작용제의 센스 가닥과 안티센스 가닥은 당업계에 공지된 방법에 의해 합성되고/되거나 변형될 수 있다. 한 뉴클레오티드에서의 변형은 다른 뉴클레오티드에서의 변형과 무관하다.
변형된 핵염기는 합성 및 천연 핵염기, 예를 들어 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미딘 및 N-2, N-6 및 O-6 치환된 퓨린 (예를 들어, 2-아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실, 또는 5-프로피닐시토신), 5-메틸시토신(5-me-C), 5-하이드록시메틸 시토신, 잔틴, 하이포잔틴, 2-아미노아데닌, 아데닌 및 구아닌의 6-알킬 (예를 들어, 6-메틸, 6-에틸, 6-아이소프로필, 또는 6-n-부틸) 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-알킬 (예를 들어, 2-메틸, 2-에틸, 2-아이소프로필, 또는 2-n-부틸) 및 다른 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민, 2-티오시토신, 5-할로우라실, 시토신, 5-프로피닐 우라실, 5-프로피닐 시토신, 6-아조 우라실, 6-아조 시토신, 6-아조 티민, 5-우라실(슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-설프하이드릴, 8-티오알킬, 8-하이드록실 및 다른 8-치환된 아데닌 및 구아닌, 5-할로 (예를 들어, 5-브로모), 5-트라이플루오로메틸, 및 다른 5-치환된 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구닌, 7-데아자아데닌, 3-데아자구아닌, 및 3-데아자아데닌을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, RNAi 작용제의 뉴클레오티드의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형된 뉴클레오티드이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 존재하는 뉴클레오티드의 실질적으로 전부가 변형된 뉴클레오티드인 RNAi 작용제는 리보뉴클레오티드인 센스 가닥과 안티센스 가닥 둘 모두에서 4개 이하 (즉, 0개, 1개, 2개, 3개, 또는 4개)의 뉴클레오티드를 갖는 RNAi 작용제이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 존재하는 뉴클레오티드의 실질적으로 전부가 변형된 뉴클레오티드인 센스 가닥은 리보뉴클레오티드인 센스 가닥에서 2개 이하 (즉, 0개, 1개, 또는 2개)의 뉴클레오티드를 갖는 센스 가닥이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 존재하는 뉴클레오티드의 실질적으로 전부가 변형된 뉴클레오티드인 안티센스 가닥은 리보뉴클레오티드인 센스 가닥에서 2개 이하 (즉, 0개, 1개, 또는 2개)의 뉴클레오티드를 갖는 안티센스 가닥이다. 일부 실시 형태에서, RNAi 작용제의 하나 이상의 뉴클레오티드는 리보뉴클레오티드이다.
변형된 뉴클레오시드간 결합
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제의 하나 이상의 뉴클레오티드는 비표준 결합 또는 골격 (즉, 변형된 뉴클레오시드간 결합 또는 변형된 골격)에 의해 연결된다. 일부 실시 형태에 있어서, 변형된 뉴클레오시드간 결합은 포스페이트 비함유 공유 뉴클레오시드간 결합이다. 변형된 뉴클레오시드간 결합 또는 골격은 5'-포스포로티오에이트 기 (본 명세서에서 소문자 "s"로 표시됨), 카이랄 포스포로티오에이트, 티오포스페이트, 포스포로다이티오에이트, 포스포트라이에스테르, 아미노알킬-포스포트라이에스테르, 알킬 포스포네이트 (예를 들어, 메틸 포스포네이트 또는 3'-알킬렌 포스포네이트), 카이랄 포스포네이트, 포스피네이트, 포스포르아미데이트 (예를 들어, 3'-아미노 포스포르아미데이트, 아미노알킬포스포르아미데이트, 또는 티오노포스포르아미데이트), 티오노알킬-포스포네이트, 티오노알킬포스포트라이에스테르, 모르폴리노 결합, 정상적인 3'-5' 결합을 갖는 보라노포스페이트, 보라노포스페이트의 2'-5' 연결된 유사체, 또는 뉴클레오시드 단위의 인접한 쌍이 3'-5' 대 5'-3' 또는 2'-5' 대 5'-2'로 연결되는 역전된 극성을 갖는 보라노포스페이트를 포함하지만, 이로 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에 있어서, 변형된 뉴클레오시드간 결합 또는 골격은 인 원자를 결여한다. 인 원자를 결여하는 변형된 뉴클레오시드간 결합은 단쇄 알킬 또는 사이클로알킬 당간 결합, 혼합 헤테로 원자 및 알킬 또는 사이클로알킬 당간 결합, 또는 하나 이상의 단쇄 헤테로 원자 또는 헤테로사이클릭 당간 결합을 포함하지만, 이로 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에 있어서, 변형된 뉴클레오시드간 골격은 실록산 골격, 설파이드 골격, 설폭사이드 골격, 설폰 골격, 포름아세틸 및 티오포름아세틸 골격, 메틸렌 포름아세틸 및 티오포름아세틸 골격, 알켄 함유 골격, 설파메이트 골격, 메틸렌이미노 및 메틸렌하이드라지노 골격, 설포네이트 및 설폰아미드 골격, 아미드 골격, 및 혼합 N, O, S 및 CH2 성분을 갖는 다른 골격을 포함하지만, 이로 한정되지 않는다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 포스포로티오에이트 결합을 함유할 수 있거나, HBV RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 포스포로티오에이트 결합을 함유할 수 있거나, 또는 센스 가닥과 안티센스 가닥 둘 모두는 독립적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 포스포로티오에이트 결합을 함유할 수 있다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 1개, 2개, 3개, 또는 4개의 포스포로티오에이트 결합을 함유할 수 있거나, HBV RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 1개, 2개, 3개, 또는 4개의 포스포로티오에이트 결합을 함유할 수 있거나, 또는 센스 가닥과 안티센스 가닥 둘 모두는 독립적으로 1개, 2개, 3개, 또는 4개의 포스포로티오에이트 결합을 함유할 수 있다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 적어도 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합을 함유한다. 일부 실시 형태에서, 적어도 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합은 센스 가닥의 3' 단부로부터 위치 1-3에 있는 뉴클레오티드들 사이에 있다. 일부 실시 형태에서, 적어도 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합은 센스 가닥의 5' 단부로부터 위치 1-3, 2-4, 3-5, 4-6, 4-5, 또는 6-8에 있는 뉴클레오티드들 사이에 있다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 4개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합을 함유한다. 일부 실시 형태에서, 4개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합은 센스 가닥의 5' 단부로부터 위치 1-3에 있는 뉴클레오티드 사이에 그리고 5' 단부로부터 위치 19-21, 20-22, 21-23, 22-24, 23-25, 또는 24-26에 있는 뉴클레오티드들 사이에 있다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 센스 가닥에 적어도 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합을 그리고 안티센스 가닥 내 3개 또는 4개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합을 함유한다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 하나 이상의 변형된 뉴클레오티드 및 하나 이상의 변형된 뉴클레오시드간 결합을 함유한다. 일부 실시 형태에 있어서, 2'-변형된 뉴클레오시드는 변형된 뉴클레오시드간 결합과 조합된다.
HBV RNAi 작용제
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 하기 표 1에 나타낸 HBV 게놈의 위치에 또는 이 근처에 있는 HBV 유전자를 표적화한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표 1에 개시된 표적 HBV 19량체 서열에 완전히, 실질적으로, 또는 적어도 부분적으로 상보적인 코어 스트레치 서열을 포함한다.
[표 1]
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 안티센스 가닥을 포함하며, 안티센스 가닥 (5'→3')의 19번 위치는 표 1에 개시된 19량체 표적 서열의 1번 위치와 염기쌍을 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 안티센스 가닥을 포함하며, 안티센스 가닥 (5'→3')의 1번 위치는 표 1에 개시된 19량체 표적 서열의 19번 위치와 염기쌍을 형성할 수 있다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 안티센스 가닥을 포함하며, 안티센스 가닥 (5'→3')의 2번 위치는 표 1에 개시된 19량체 표적 서열의 18번 위치와 염기쌍을 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 안티센스 가닥을 포함하며, 안티센스 가닥 (5'→3')의 2번 내지 18번 위치는 표 1에 개시된 19량체 표적 서열의 18번 내지 2번 위치에 위치한 각각의 상보적 염기와 각각 염기쌍을 형성할 수 있다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 하기 표 2에 나타낸 코어 19량체 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
[표 2]
표 2의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 HBV RNAi 작용제의 센스 가닥과 안티센스 가닥은 변형된 뉴클레오티드 또는 비변형된 뉴클레오티드일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 표 2의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 이로 이루어진 센스 및 안티센스 가닥 서열을 갖는 HBV RNAi 작용제의 전부 또는 실질적으로 전부가 변형된 뉴클레오티드이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표 2의 임의의 안티센스 가닥 서열과 0개, 1개, 2개, 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이하다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 표 2의 임의의 센스 가닥 서열과 0개, 1개, 2개, 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이하다.
변형된 HBV RNAi 작용제의 안티센스 가닥 서열뿐만 아니라 이들의 기초가 되는 비변형된 서열이 표 3에 제공되어 있다. 변형된 HBV RNAi 작용제의 센스 가닥뿐만 아니라 이들의 기초가 되는 비변형된 서열이 표 4에 제공되어 있다. HBV RNAi 작용제를 형성함에 있어서, 표 3 및 4에 나열된 각각의 비변형된 서열 내의 각각의 뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드일 수 있다.
본 명세서 (표 3 및 표 4를 포함함)에 사용되는 바와 같이, 변형된 뉴클레오티드, 표적화 기, 및 연결 기를 나타내기 위해 하기 표기가 사용된다. 당업자는, 서열에 의해 달리 지시되지 않는 한, 올리고뉴클레오티드에 존재할 때, 단량체가 5'-3'-포스포다이에스테르 결합에 의해 상호 연결됨을 용이하게 이해할 것이다:
A = 아데노신-3'-포스페이트;
C = 시티딘-3'-포스페이트;
G = 구아노신-3'-포스페이트;
U = 우리딘-3'-포스페이트
n = 임의의 2'-OMe 개질된 뉴클레오티드
a = 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트
as = 2'-O-메틸아데노신-3'-포스포로티오에이트
c = 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트
cs = 2'-O-메틸시티딘-3'-포스포로티오에이트
g = 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트
gs = 2'-O-메틸구아노신-3'-포스포로티오에이트
t = 2'-O-메틸-5-메틸우리딘-3'-포스페이트
ts = 2'-O-메틸-5-메틸우리딘-3'-포스포로티오에이트
u = 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트
us = 2'-O-메틸우리딘-3'-포스포로티오에이트
Nf = 임의의 2'-플루오로 변형된 뉴클레오티드
Af = 2'-플루오로아데노신-3'-포스페이트
Afs = 2'-플루오로아데노신-3'-포스포로티오에이트
Cf = 2'-플루오로시티딘-3'-포스페이트
Cfs = 2'-플루오로시티딘-3'-포스포로티오에이트
Gf = 2'-플루오로구아노신-3'-포스페이트
Gfs = 2'-플루오로구아노신-3'-포스포로티오에이트
Tf = 2'-플루오로-5'-메틸우리딘-3'-포스페이트
Tfs = 2'-플루오로-5'-메틸우리딘-3'-포스포로티오에이트
Uf = 2'-플루오로우리딘-3'-포스페이트
Ufs = 2'-플루오로우리딘-3'-포스포로티오에이트
dN = 임의의 2'-데옥시리보뉴클레오티드
dT = 2'-데옥시티미딘-3'-포스페이트
NUNA = 2',3'-seco 뉴클레오티드 모방체 (잠금 해제된 핵염기 유사체)
NLNA = 잠금 뉴클레오티드
NfANA = 2'-F-아라비노 뉴클레오티드
NM = 2'-메톡시에틸 뉴클레오티드
AM = 2'-메톡시에틸아데노신-3'-포스페이트
AMs = 2'-메톡시에틸아데노신-3'-포스포로티오에이트
TM = 2'-메톡시에틸티미딘-3'-포스페이트
TMs = 2'-메톡시에틸티미딘-3'-포스포로티오에이트
R = 리비톨
(invdN) = 임의의 역전된 데옥시리보뉴클레오티드(3'-3' 연결된 뉴클레오티드)
(invAb) = 역전된 (3'-3' 연결된) 무염기성 데옥시리보뉴클레오티드, 표 6 참조
(invAb)s = 역전된 (3'-3' 연결된) 무염기성 데옥시리보뉴클레오티드-5'-
포스포로티오에이트, 표 6 참조
(invn) = 임의의 역전된 2'-OMe 뉴클레오티드 (3'-3' 연결된 뉴클레오티드)
s = 포스포로티오에이트 결합
vpdN = 비닐 포스포네이트 데옥시리보뉴클레오티드
(5Me-Nf) = 5'-Me, 2'-플루오로 뉴클레오티드
cPrp = 사이클로프로필 포스포네이트, 표 6 참조
epTcPr = 표 6 참조
epTM = 표 6 참조
당업자는 주어진 올리고뉴클레오티드 서열의 3' 단부에 있는 말단 뉴클레오티드가 전형적으로 생체외에서 주어진 단량체의 각각의 3' 위치에 포스페이트 모이어티 대신 하이드록실(-OH) 기를 가질 것임을 용이하게 이해할 것이다. 따라서, 예를 들어, 상기 AD05070의 구조 표현에서 상기에 나타낸 바와 같이, AM06606-AS의 안티센스 가닥의 3' 단부 상의 "g" 변형된 뉴클레오티드는 이의 3' 위치에 위치된 하이드록실기를 가진다. 본 명세서에서 달리 명확하게 나타내지 않는 한, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제 및 HBV RNAi 작용제의 조성물을 설명할 때 당업자의 그러한 이해가 사용된다.
표적화 기 및 연결 기는 다음을 포함하며, 이들의 화학 구조는 하기 표 6에 제공되어 있다: (PAZ), (NAG13), (NAG13)s, (NAG18), (NAG18)s, (NAG24), (NAG24)s, (NAG25), (NAG25)s, (NAG26), (NAG26)s, (NAG27), (NAG27)s, (NAG28), (NAG28)s, (NAG29), (NAG29)s, (NAG30), (NAG30)s, (NAG31), (NAG31)s, (NAG32), (NAG32)s, (NAG33), (NAG33)s, (NAG34), (NAG34)s, (NAG35), (NAG35)s, (NAG36), (NAG36)s, (NAG37), (NAG37)s, (NAG38), (NAG38)s, (NAG39), (NAG39)s. 각각의 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥은 상기 나열된 임의의 표적화 기 또는 연결 기뿐만 아니라 서열의 5' 및/또는 3' 단부에 접합된 다른 표적화 또는 연결 기를 가질 수 있다.
[표 3]
[표 4]
본 명세서에 기재된 HBV RNAi 작용제는 센스 가닥과 함께 안티센스 가닥을 어닐링함으로써 형성된다. 표 4에 나열된 서열을 함유하는 센스 가닥은 표 3에 나열된 서열을 함유하는 임의의 안티센스 가닥에 혼성화될 수 있으며, 단, 두 서열은 연속적인 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 또는 21개의 뉴클레오티드 서열에 걸쳐 적어도 약 85%의 상보성 영역을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표 3의 임의의 안티센스 가닥 서열과 0개, 1개, 2개, 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이하다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 표 4의 임의의 센스 가닥 서열과 0개, 1개, 2개, 또는 3개의 뉴클레오티드가 상이하다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표 3의 임의의 서열의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표 3의 임의의 서열의 뉴클레오티드 (5' 단부 → 3' 단부 방향으로) 1-17, 2-17, 1-18, 2-18, 1-19, 2-19, 1-20, 2-20, 1-21, 2-21, 1-22, 2-22, 1-23, 2-23, 1-24, 2-24, 1-25, 2-25, 1-26, 또는 2-26의 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 표 4의 임의의 서열의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 표 4의 임의의 서열의 뉴클레오티드 (5' 단부 → 3' 단부 방향으로) 1-17, 2-17, 3-17, 4-17, 1-18, 2-18, 3-18, 4-18, 1-19, 2-19, 3-19, 4-19, 1-20, 2-20, 3-20, 4-20, 1-21, 2-21, 3-21, 4-21, 1-22, 2-22, 3-22, 4-22, 1-23, 2-23, 3-23, 4-23, 1-24, 2-24, 3-24, 4-24, 1-25, 2-25, 3-25, 4-25, 1-26, 2-26, 3-26, 또는 4-26의 서열을 포함한다.
본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제의 경우, (5' 단부 → 3' 단부 방향으로) 안티센스 가닥의 1번 위치의 뉴클레오티드는 HBV 유전자에 완벽하게 상보적일 수 있거나, HBV 유전자에 대해 비상보적일 수 있다. 일부 실시 형태에서, (5' 단부 → 3' 단부 방향으로) 안티센스 가닥의 1번 위치의 뉴클레오티드는 U, A, 또는 dT 이다. 일부 실시 형태에서, (5' 단부 → 3' 단부 방향으로) 안티센스 가닥의 1번 위치의 뉴클레오티드는 센스 가닥과 함께 A:U 또는 U:A 염기쌍을 형성한다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표 3의 임의의 안티센스 가닥 서열의 뉴클레오티드 (5' 단부 → 3' 단부 방향으로) 2-18 또는 2-19의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제의 센스 가닥은 표 4의 임의의 센스 가닥 서열의 뉴클레오티드 (5' 단부 → 3' 단부 방향으로) 1-17 또는 1-18의 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 (i) 표 3의 임의의 안티센스 가닥 서열의 뉴클레오티드 (5' 단부 → 3' 단부 방향으로) 2-18 또는 2-19의 서열을 포함하는 안티센스 가닥, 및 (ii) 표 4의 임의의 센스 가닥 서열의 뉴클레오티드 (5' 단부→ 3' 단부 방향으로) 1-17 또는 1-18의 서열을 포함하는 센스 가닥을 포함한다.
표 4에 나열된 서열을 함유하는 센스 가닥은 표 3에 나열된 서열을 함유하는 임의의 안티센스 가닥에 혼성화될 수 있으며, 단, 두 서열은 연속적인 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 또는 21개의 뉴클레오티드 서열에 걸쳐 적어도 약 85%의 상보성 영역을 갖는다. 대표적인 서열 쌍은 표 5에 나타낸 이중체 ID 번호에 의해 예시된다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 본 명세서에 제시된 임의의 이중체 ID 번호를 포함한다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 본 명세서에 제시된 임의의 이중체 ID 번호로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 본 명세서에 제시된 임의의 이중체 ID 번호의 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 본 명세서에 제시된 임의의 이중체 ID 번호의 센스 가닥 및 안티센스 가닥 뉴클레오티드 서열 및 및 표적화 기 및/또는 연결 기를 포함하며, 표적화 기 및/또는 연결 기는 센스 가닥 또는 안티센스 가닥에 공유적으로 연결(즉, 접합)된다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 본 명세서에 제시된 임의의 이중체 ID 번호의 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥 변형된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 본 명세서에 제시된 임의의 이중체 ID 번호의 센스 가닥 및 안티센스 가닥 변형된 뉴클레오티드 서열 및 및 표적화 기 및/또는 연결 기를 포함하며, 표적화 기 및/또는 연결 기는 센스 가닥 또는 안티센스 가닥에 공유적으로 연결된다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 표 5의 임의의 안티센스 가닥/센스 가닥 이중체의 뉴클레오티드 서열을 갖는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함하고, 아시알로당단백질 수용체 리간드 표적화 기를 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 표 5의 임의의 이중체의 임의의 안티센스 가닥 및/또는 센스 가닥 뉴클레오티드 서열의 뉴클레오티드 서열을 갖는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함하고, (PAZ), (NAG13), (NAG13)s, (NAG18), (NAG18)s, (NAG24), (NAG24)s, (NAG25), (NAG25)s, (NAG26), (NAG26)s, (NAG27), (NAG27)s, (NAG28), (NAG28)s, (NAG29), (NAG29)s, (NAG30), (NAG30)s, (NAG31), (NAG31)s, (NAG32), (NAG32)s, (NAG33), (NAG33)s, (NAG34), (NAG34)s, (NAG35), (NAG35)s, (NAG36), (NAG36)s, (NAG37), (NAG37)s로 이루어진 군으로부터 선택된 표적화 기를 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 표 5의 임의의 이중체의 임의의 안티센스 가닥 및/또는 센스 가닥 뉴클레오티드 서열의 변형된 뉴클레오티드 서열을 갖는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함한다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 표 5의 임의의 이중체의 임의의 안티센스 가닥 및/또는 센스 가닥의 변형된 뉴클레오티드 서열을 갖는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함하고, 아시알로당단백질 수용체 리간드 표적화 기를 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 표 5의 임의의 이중체를 포함한다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 표 5의 임의의 이중체로 이루어진다.
[표 5]
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 염, 혼합 염, 또는 유리 산으로서 제조되거나 제공된다. 본 명세서에 기재된 RNAi 작용제는, HBV 유전자를 발현하는 세포로의 전달시에, 생체내에서 하나 이상의 HBV 유전자의 발현을 저해하거나 녹다운시킨다.
표적화 기, 연결 기, 및 전달 비히클
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 표적화 기, 연결 기, 전달 중합체, 또는 전달 비히클을 포함하지만 이로 한정되지 않는 하나 이상의 비뉴클레오티드(non-nucleotide) 기에 접합된다. 비뉴클레오티드 기는 RNAi 작용제의 표적화, 전달 또는 부착을 향상시킬 수 있다. 표적화 기 및 연결 기의 예가 표 6에 제공되어 있다. 비뉴클레오티드 기는 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥의 3' 및/또는 5' 단부에 공유적으로 연결될 수 있다. 일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 센스 가닥의 3' 및/또는 5' 단부에 연결된 비뉴클레오티드 기를 함유한다. 일부 실시 형태에서, 비뉴클레오티드 기는 HBV RNAi 작용제의 센스 가닥의 5' 단부에 연결된다. 비뉴클레오티드 기는 링커/연결 기를 통해 RNAi 작용제에 직접적으로 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 실시 형태에 있어서, 비뉴클레오티드 기는 불안정한, 절단가능한, 또는 가역적인 결합 또는 링커를 통해 RNAi 작용제에 연결된다.
일부 실시 형태에 있어서, 비뉴클레오티드 기는 이것이 부착되는 RNAi 작용제 또는 접합체의 약동학적 또는 생체분포 특성을 향상시켜서 접합체의 세포 또는 조직 특이적 분포 및 세포 특이적 흡수를 개선시킨다. 일부 실시 형태에 있어서, 비뉴클레오티드 기는 RNAi 작용제의 세포내이입을 향상시킨다.
표적화 기 또는 표적화 모이어티는 이들이 부착되는 접합체의 약동학적 또는 생체분포 특성을 향상시켜서 접합체의 세포 특이적 분포 및 세포 특이적 흡수를 개선시킨다. 표적화 기는 1가, 2가, 3가, 4가, 또는 더 높은 수가를 가질 수 있다. 대표적인 표적화 기는, 제한 없이, 세포 표면 분자에 대한 친화도를 지닌 화합물, 세포 수용체 리간드, 합텐, 항체, 모노클로날 항체, 항체 단편, 및 세포 표면 분자에 대한 친화도를 지닌 항체 모방체를 포함한다. 일부 실시 형태에 있어서, 표적화 기는 PEG 링커와 같은 링커 또는 1개, 2개, 또는 3개 이상의 무염기성 및/또는 리비톨 (무염기성 리보스) 기를 사용하여 RNAi 작용제에 연결된다. 일부 실시 형태에서, 표적화 기는 갈락토스 유도체 클러스터를 포함한다.
본 명세서에 기재된 HBV RNAi 작용제는 5'-말단에 아민 기와 같은 반응성 기를 가지면서 합성될 수 있다. 반응성 기는 당업계에서 전형적인 방법을 이용하여 표적화 모이어티를 후속적으로 부착하는 데 사용될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 표적화 기는 아시알로글리코단백질 수용체 리간드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 아시알로당단백질 수용체 리간드는 하나 이상의 갈락토스 유도체를 포함하거나 이로 이루어진다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 갈락토스 유도체라는 용어는 갈락토스, 및 갈락토스와 동일하거나 그보다 큰 아시알로당단백질 수용체에 대한 친화도를 갖는 갈락토스의 유도체 둘 모두를 포함한다. 갈락토스 유도체는 다음을 포함하지만, 이로 한정되지 않는다: 갈락토스, 갈락토사민, N-포르밀갈락토사민, N-아세틸-갈락토사민, N-프로피오닐-갈락토사민, N-n-부타노일-갈락토사민, 및 N-아이소-부타노일갈락토사아민 (예를 들어, 문헌[Iobst, S.T. and Drickamer, K. J.B.C. 1996, 271, 6686] 참조). 간으로의 올리고뉴클레오티드 및 다른 분자의 생체내 표적화에 유용한 갈락토스 유도체, 및 갈락토스 유도체의 클러스터는 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Baenziger and Fiete, 1980, Cell, 22, 611-620]; 문헌[Connolly et al., 1982, J. Biol. Chem., 257, 939-945)] 참조). 갈락토스 유도체는 간세포의 표면 상에 발현된 아시알로당단백질 수용체(ASGPr)로의 결합을 통해 생체내에서 분자를 간세포로 표적화하는 데 사용되어 왔다. ASGPr(들)로의 ASGPr 리간드의 결합은 간세포로의 세포 특이적 표적화 및 간세포 내로의 분자의 세포내이입을 용이하게 한다. ASGPr 리간드는 단량체성 (예를 들어, 단일 갈락토스 유도체를 가짐) 또는 다량체성 (예를 들어, 다수의 갈락토스 유도체를 가짐)일 수 있다. 갈락토스 유도체 또는 갈락토스 유도체 클러스터는 당업계에 공지된 방법을 이용하여 RNAi 폴리뉴클레오티드의 3' 또는 5' 단부에 부착될 수 있다. 내지 갈락토스 유도체 클러스터와 같은 표적화 기의 제조는, 예를 들어, 둘 모두의 전체 내용이 본 명세서에 참고로 포함된, 미국 특허 출원 제15/452,324호 및 제15/452,423호에 기재되어 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 갈락토스 유도체 클러스터는 2 내지 4개의 말단 갈락토스 유도체를 갖는 분자를 포함한다. 말단 갈락토스 유도체는 이의 C-1 탄소를 통해 분자에 부착된다. 일부 실시 형태에서, 갈락토스 유도체 클러스터는 갈락토스 유도체 삼량체 (트라이안테나리(tri-antennary) 갈락토스 유도체 또는 3가 갈락토스 유도체로 또한 지칭됨)이다. 일부 실시 형태에서, 갈락토스 유도체 클러스터는 N-아세틸-갈락토사민을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 갈락토스 유도체 클러스터는 3개의 N-아세틸-갈락토사민을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 갈락토스 유도체 클러스터는 갈락토스 유도체 사량체 (테트라안테나리(tetra-antennary) 갈락토스 유도체 또는 4가 갈락토스 유도체로 또한 지칭됨)이다. 일부 실시 형태에서, 갈락토스 유도체 클러스터는 4개의 N-아세틸-갈락토사민을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 갈락토스 유도체 삼량체는 각각 중심 분지점에 연결된 3개의 갈락토스 유도체를 함유한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 갈락토스 유도체 사량체는 각각 중심 분지점에 연결된 4개의 갈락토스 유도체를 함유한다. 갈락토스 유도체는 당류의 C-1 탄소를 통해 중앙 분지점에 부착될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 갈락토스 유도체는 링커 또는 스페이서를 통해 분지점에 연결된다. 일부 실시 형태에서, 링커 또는 스페이서는 PEG 기와 같은 가요성 친수성 스페이서이다 (예를 들어, 미국 특허 제5,885,968호; 문헌[Biessen et al. J. Med. Chem. 1995 Vol. 39 p. 1538-1546] 참조). 일부 실시 형태에서, PEG 스페이서는 PEG3 스페이서이다. 분지점은 3개의 갈락토스 유도체의 부착을 허용하고 RNAi 작용제로의 그 분지점의 부착을 추가로 허용하는 임의의 소분자일 수 있다. 분지점 기의 예는 다이-라이신 또는 다이-글루타메이트이다. RNAi 작용제로의 분지점의 부착은 링커 또는 스페이서를 통해 일어날 수 있다. 일부 실시 형태에서, 링커 또는 스페이서는 PEG 스페이서와 같은 그러나 이로 한정되지 않는 가요성 친수성 스페이서를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 링커는 사이클릭 기, 예를 들어 견고한 링커를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 갈락토스 유도체는 N-아세틸-갈락토사민을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 갈락토스 유도체 클러스터는 예를 들어, N-아세틸-갈락토사민 사량체일 수 있는 갈락토스 유도체 사량체로 구성된다.
일부 실시 형태에서, 생체내에서 HBV RNAi 작용제를 간 세포에 전달하기 위한 약제학적 조성물이 기재된다. 그러한 약제학적 조성물은 예를 들어, 갈락토스 유도체 클러스터에 접합된 HBV RNAi 작용제를 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 갈락토스 유도체 클러스터는, 예를 들어 N-아세틸-갈락토사민 삼량체일 수 있는 갈락토스 유도체 삼량체, 또는 예를 들어 N-아세틸-갈락토사민 사량체일 수 있는 갈락토스 유도체 사량체로 구성된다.
표적화 기는 (PAZ), (NAG13), (NAG13)s, (NAG18), (NAG18)s, (NAG24), (NAG24)s, (NAG25), (NAG25)s, (NAG26), (NAG26)s, (NAG27), (NAG27)s, (NAG28), (NAG28)s, (NAG29), (NAG29)s, (NAG30), (NAG30)s, (NAG31), (NAG31)s, (NAG32), (NAG32)s, (NAG33), (NAG33)s, (NAG34), (NAG34)s, (NAG35), (NAG35)s, (NAG36), (NAG36)s, (NAG37), (NAG37)s, (NAG38), (NAG38)s, (NAG39), 및 (NAG39)s를 포함하지만, 이로 한정되지 않는다. 갈락토스 클러스터 표적화 리간드를 포함하는 다른 표적화 기는 당업계에 공지되어 있다.
일부 실시 형태에 있어서, 연결 기는 RNAi 작용제에 접합된다. 연결 기는 표적화 기 또는 전달 중합체 또는 전달 비히클로의 작용제의 공유 결합을 용이하게 한다. 연결 기는 RNAi 작용제의 센스 가닥 또는 안티센스 가닥의 3' 또는 5' 단부에 연결될 수 있다. 일부 실시 형태에 있어서, 연결 기는 RNAi 작용제의 센스 가닥에 연결된다. 일부 실시 형태에 있어서, 연결 기는 RNAi 작용제의 센스 가닥의 5' 또는 3' 단부에 접합된다. 일부 실시 형태에 있어서, 연결 기는 RNAi 작용제의 센스 가닥의 5' 단부에 접합된다. 연결 기의 예는 다음을 포함하지만, 이로 한정되지 않는다: 반응성 기, 예를 들어 1차 아민 및 알킨, 알킬 기, 무염기성 뉴클레오시드, 리비톨 (무염기성 리보스), 및/또는 PEG 기.
링커 또는 연결 기는 하나 이상의 공유 결합을 통해 하나의 화학적 기 (예를 들어, RNAi 작용제) 또는 관심 세그먼트를 다른 화학적 기(예를 들어, 표적화 기 또는 전달 중합체) 또는 관심 세그먼트에 연결하는 2개의 원자 사이의 연결부이다. 불안정한 결합부(linkage)는 불안정한 결합을 함유한다. 결합부는 2개의 연결된 원자들 사이의 거리를 증가시키는 스페이서를 선택적으로 포함할 수 있다. 스페이서는 그 결합부에 가요성 및/또는 길이를 추가로 부가할 수 있다. 스페이서는 알킬 기, 알케닐 기, 알키닐 기, 아릴 기, 아르알킬 기, 아르알케닐 기, 및 아르알키닐 기를 포함하지만 이로 한정되지 않으며, 이들 각각은 하나 이상의 헤테로 원자, 헤테로사이클, 아미노산, 뉴클레오티드, 및 당류를 함유할 수 있다. 스페이서 기는 당업계에 잘 알려져 있고, 전술한 목록은 설명의 범주를 제한하고자 하는 것이 아니다.
표 3 및 4에 나열된 임의의 HBV RNAi 작용제 뉴클레오티드 서열은, 변형되든지 비변형되든지 간에, 3' 또는 5' 표적화 기 및/또는 연결 기를 함유할 수 있다. 3' 또는 5' 표적화 기 및/또는 연결 기를 함유하는 표 3 및 표 4에 나열된 임의의 HBV RNAi 작용제 서열은 대안적으로 표 3에 나타낸 것을 포함하지만 이로 한정되지 않는 3' 또는 5' 표적화 기 및/또는 연결 기를 함유하지 않을 수 있거나, 표 3에 나타낸 것을 포함하지만 이로 한정되지 않는 상이한 3' 또는 5' 표적화 기 및/또는 연결 기를 함유할 수 있다. 표 5에 나열된 임의의 HBV RNAi 작용제 이중체는, 변형되든지 비변형되든지 간에, 표 3에 나타낸 것을 포함하지만 이로 한정되지 않는 표적화 기 및/또는 연결 기를 추가로 포함할 수 있고, 표적화 기 또는 연결 기는 HBV RNAi 작용제 이중체의 센스 가닥 또는 안티센스 가닥의 3' 또는 5' 말단에 부착될 수 있다.
표적화 기 및 연결 기의 예가 표 6에 제공되어 있다. 표 4는 5' 또는 3' 단부에 연결된 표적화 기 또는 연결 기를 갖는 HBV RNAi 작용제의 센스 가닥의 몇몇 실시 형태를 제공한다.
[표 6]
표 6의 각각의 상기 구조에서, NAG는 N-아세틸-갈락토사민 또는 다른 ASGPr 리간드를 포함하고, 이는 상기 구조 및 본 명세서에 제공된 설명을 고려하여 부착되는 것으로 당업자에 의해 이해될 것이다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, 표 6에 제공된 구조에서 NAG는 하기 구조로 표시된다:
(N-아세틸-갈락토사민)
각각의 (NAGx)는 ((NAG25), (NAG30), 및 (NAG31)에서와 같이) 포스페이트 기, 또는 ((NAG25)s, (NAG29)s, (NAG30)s, (NAG31)s, 또는 (NAG37)s에서와 같이) 포스포로티오에이트 기, 또는 다른 연결 기를 통해 HBV RNAi 작용제에 부착될 수 있다.
포스페이트 기
포로티오에이트 기
당업계에 공지된 다른 연결 기가 사용될 수 있다.
전달 비히클
일부 실시 형태에 있어서, 전달 비히클은 세포 또는 조직에 RNAi 작용제를 전달하는 데 사용될 수 있다. 전달 비히클은 세포 또는 조직으로의 RNAi 작용제의 전달을 개선시키는 화합물이다. 전달 비히클은 다음을 포함하거나 이로 이루어질 수 있지만, 이로 한정되지 않는다: 중합체, 예를 들어 양친매성 중합체, 막 활성 중합체, 펩티드, 멜리틴 펩티드(melittin peptide), 멜리틴 유사 펩티드(melittin-like peptide, MLP), 지질, 가역적으로 변형된 중합체 또는 펩티드, 또는 가역적으로 변형된 막 활성 폴리아민.
일부 실시 형태에 있어서, RNAi 작용제는 지질, 나노입자, 중합체, 리포좀, 미셀, DPC 또는 당업계에서 이용가능한 다른 전달 시스템과 조합될 수 있다. RNAi 작용제는 또한 표적화 기, 지질 (콜레스테롤 및 콜레스테릴 유도체를 포함하지만 이로 한정되지 않음), 나노입자, 중합체, 리포좀, 미셀, DPC (예를 들어, 각각 본 명세서에 참고로 포함된, 국제특허 공개 WO 2000/053722호, WO 2008/0022309호, WO 2011/104169호, 및 WO 2012/083185호, WO 2013/032829호, WO 2013/158141호 참조), 또는 당업계에서 이용가능한 다른 전달 시스템에 화학적으로 접합될 수 있다.
약제학적 조성물 및 제형
본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 약제학적 조성물 또는 제형으로서 제조될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 적어도 하나의 HBV RNAi 작용제를 포함한다. 이들 약제학적 조성물은 표적 세포, 세포 군, 조직, 또는 유기체에서 표적 mRNA의 발현의 저해에 특히 유용하다. 약제학적 조성물은 표적 mRNA의 수준의 감소 또는 표적 유전자의 발현의 저해로부터 이익이 얻어지는 질병 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 데 사용될 수 있다. 약제학적 조성물은 표적 mRNA의 수준의 감소 또는 표적 유전자의 발현의 저해로부터 이익이 얻어지는 질병 또는 장애를 발병할 위험이 있는 대상체를 치료하는 데 사용될 수 있다. 일 실시 형태에서, 방법은 치료될 대상체에게 본 명세서에 기재된 바와 같은 표적화 리간드에 연결된 HBV RNAi 작용제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 (비히클, 담체, 희석제 및/또는 전달 중합체를 포함함)가 HBV RNAi 작용제를 포함하는 약제학적 조성물에 첨가되어, 인간으로의 생체내 전달에 적합한 약제학적 제형을 형성한다.
본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제를 포함하는 약제학적 조성물 및 방법은 세포, 세포 군, 세포 군, 조직, 또는 대상체에서 표적 RNA의 수준을 감소시킬 수 있으며, 치료적 유효량의 본 명세서에 기재된 HBV RNAi 작용제를 대상체에게 투여하여, 대상체에서 표적 mRNA의 발현을 저해하는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제를 포함하는 기재된 약제학적 조성물은 HBV 감염과 관련된 임상 표현(clinical presentation)을 치료 또는 관리하는 데 사용된다. 일부 실시 형태에서, 치료적 또는 예방적 유효량의 하나 이상의 약제학적 조성물은 그러한 치료, 예방 또는 관리를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 개시된 임의의 HBV RNAi 작용제의 투여가 대상체에서 질병의 증상의 수, 중증도, 및/또는 빈도를 감소시키는 데 사용될 수 있다.
HBV RNAi 작용제를 포함하는 기재된 약제학적 조성물은 HBV mRNA 발현의 감소 또는 저해로부터 이익이 얻어지는 질병 또는 장애를 갖는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대상체에게 치료적 유효량의 HBV RNAi 작용제를 포함하는 하나 이상의 약제학적 조성물을 투여함으로써 증상을 치료한다. 다른 실시 형태에서, 대상체에게 예방적 유효량의 하나 이상의 HBV RNAi 작용제를 투여함으로써 적어도 하나의 증상을 예방한다.
투여 경로는 HBV RNAi 작용제가 신체와 접촉하게 되는 경로이다. 일반적으로, 포유동물의 치료를 위해 약물 및 핵산을 투여하는 방법은 당업계에 널리 공지되어 있고, 본 명세서에 기재된 조성물의 투여에 적용될 수 있다. 본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 특정 경로에 맞게 적절하게 만들어진 제제로 임의의 적합한 경로를 통해 투여될 수 있다. 따라서, 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 주사에 의해, 예를 들어 정맥내, 근육내, 피내, 피하, 관절내, 또는 복강내로 투여될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 피하 주사를 통한 약제학적 조성물이 본 명세서에 기재되어 있다.
본 명세서에 기재된 HBV RNAi 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 당업계에 공지된 올리고뉴클레오티드 전달 기술을 이용하여 세포, 세포 군, 종양, 조직, 또는 대상체에 전달될 수 있다. 일반적으로, (시험관내에서 또는 생체내에서) 핵산 분자를 전달하기 위한 당업계에서 인식되는 임의의 적합한 방법은 본 명세서에 기재된 조성물과 함께 사용되도록 구성될 수 있다. 예를 들어, 전달은 국부 투여 (예를 들어, 직접 주사, 이식, 또는 국소 투여), 전신 투여, 또는 두개내 (예를 들어, 심실내, 간엽내 및 척수강내), 근육내, 경피, 기도 (에어로졸), 비강, 구강, 직장, 또는 국소 (협측 및 설하를 포함함) 투여를 비롯한 피하, 정맥내, 복강내, 또는 비경구 경로에 의해 이루어질 수 있다. 특정 구체예에서, 조성물은 피하 또는 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여된다.
따라서, 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 대상체에게 투여하기 위해 제형화될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 약제학적 조성물 또는 의약은 약리학적 유효량의 적어도 하나의 기재된 치료 화합물 및 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함한다. 약제학적으로 허용가능한 부형제 (부형제)는 약물 전달 시스템에 의도적으로 포함되는 활성 약제 구성성분(Active Pharmaceutical ingredient, API, 치료용 생성물, 예를 들어 HBV RNAi 작용제) 이외의 물질이다. 부형제는 의도된 투여량에서 치료 효과를 발휘하지 않거나 치료 효과를 발휘하도록 의도되지 않는다. 부형제는 a) 제조 동안 약물 전달 시스템의 가공에서 도움을 주고, b) API의 안정성, 생체이용률 또는 환자 수용성을 보호하거나, 지지하거나, 향상시키고, c) 제품 식별을 보조하고/하거나, d) 저장 또는 사용 동안 API의 전달의 전반적인 안전성, 유효성의 임의의 다른 속성을 향상시키도록 작용할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 부형제는 비활성 물질이거나 비활성 물질이 아닐 수 있다.
부형제는 다음을 포함하지만, 이로 한정되지 않는다: 흡수 향상제, 부착방지제, 소포제, 산화방지제, 결합제, 완충제, 담체, 코팅제, 착색제, 전달 향상제, 전달 중합체, 덱스트란, 덱스트로스, 희석제, 붕해제, 유화제, 증량제, 충전제, 착향제, 활택제, 보습제, 윤활제, 오일, 중합체, 방부제, 식염수, 염, 용매, 당, 현탁제, 지속 방출 매트릭스, 감미제, 증점제, 긴장성 작용제, 비히클, 발수제, 및 습윤제.
주사가능한 용도에 적합한 약제학적 조성물은 멸균 수용액 (수용성인 경우) 또는 분산물 및 멸균 주사 용액 또는 분산물의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 정맥내 투여의 경우, 적합한 담체는 생리 식염수, 정세균수, Cremophor ELTM (미국 뉴저지주 파시패니 소재의 BASF) 또는 포스페이트 완충 식염수 (PBS)를 포함한다. 이것은 제조 및 저장 조건 하에서 안정해야 하며, 세균 및 진균과 같은 미생물의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다. 담체는, 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜), 및 이의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매체일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어 레시틴과 같은 코팅의 사용에 의해, 분산물의 경우 필요한 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 많은 경우에, 등장화제, 예를 들어 당, 폴리알코올, 예를 들어 만니톨, 소르비톨, 및 염화나트륨을 조성물에 포함시키는 것이 바람직할 것이다. 주사가능한 조성물의 장기간 흡수는 조성물에 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시킴으로써 가져올 수 있다.
멸균 주사 용액은 필요한 양의 활성 화합물을 필요에 따라 상기 열거된 구성성분들 중 하나 또는 이들의 조합과 함께 적절한 용매에 혼입시킨 다음 멸균 여과시킴으로써 제조될 수 있다. 대체로, 분산물은 기본 분산 매체 및 상기 열거된 것으로부터의 필요한 다른 구성성분을 함유하는 멸균 비히클에 활성 화합물을 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 제조 방법은 미리 멸균 여과된 용액으로부터의 활성 구성성분 및 임의의 추가의 요망되는 성분의 분말을 생성시키는 진공 건조 및 동결 건조를 포함한다.
관절내 투여에 적합한 제형은 미정질 형태로 존재할 수 있는 약물의 멸균 수성 제제의 형태, 예를 들어, 수성 미정질 현탁액의 형태일 수 있다. 리포좀 제형 또는 생분해성 중합체 시스템이 또한 관절내 및 안과적 투여 둘 모두를 위한 약물을 제시하기 위해 사용될 수 있다.
활성 화합물은 임플란트 및 미세캡슐화 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제형과 같은 신체로부터 급속한 제거에 대해 화합물을 보호하는 담체로 제조될 수 있다. 생분해성 생체적합성 중합체, 예를 들어 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리안하이드라이드, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이러한 제형의 제조 방법은 당업자에게 명백할 것이다. 리포좀 현탁액은 또한 약제학적으로 허용가능한 담체로서 사용될 수 있다. 이것은, 예를 들어 미국 특허 제4,522,811호에 기술된 바와 같은 당업자에게 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다.
HBV RNAi 작용제는 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위하여 투여 단위 형태의 조성물로 제형화될 수 있다. 투여 단위 형태는 치료될 대상체에 대한 단위 투여량으로 적합한 물리적으로 별개의 단위를 지칭하며; 각각의 단위는 필요한 약학적 담체와 관련하여 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 소정량의 활성 화합물을 함유한다. 본 개시의 투여 단위 형태에 대한 규격(specification)은 활성 화합물의 독특한 특성 및 성취될 치료 효과, 및 개체의 치료를 위한 그러한 활성 화합물을 배합하는 기술 분야에 내재된 제한 사항에 의해 영향을 받고 또한 이들에 직접적으로 좌우된다.
약제학적 조성물은 약제학적 조성물에서 흔히 발견되는 다른 추가의 성분을 함유할 수 있다. 그러한 추가의 성분은 항소양제, 수렴제, 국부 마취제, 또는 항염증제 (예를 들어, 항히스타민, 다이펜하이드라민 등)를 포함하지만, 이로 한정되지 않는다. 본 명세서에 정의된 RNAi 작용제를 발현하거나 포함하는 세포, 조직 또는 단리된 기관이 "약제학적 조성물" 로서 사용될 수 있음이 또한 고려된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "약리학적 유효량", "치료적 유효량", 또는 간단히 "유효량"은 약리학적, 치료적 또는 예방적 결과를 생성하는 RNAi 작용제의 양을 지칭한다.
일반적으로, 활성 화합물의 유효량은 일당 체중 ㎏당 약 0.1 내지 약 100 mg, 예를 들어 체중 ㎏당 약 1.0 내지 약 50 mg의 범위일 것이다. 일부 실시 형태에서, 활성 화합물의 유효량은 용량당 체중 ㎏당 약 0.25 내지 약 5 mg의 범위일 것이다. 일부 실시 형태에서, 활성 성분의 유효량은 용량당 체중 ㎏당 약 0.5 내지 약 3 mg의 범위일 것이다. 투여되는 양은 또한 환자의 전반적인 건강 상태, 전달되는 화합물의 상대적 생물학적 효능, 약물의 제형, 제형 내 부형제의 존재 및 유형, 및 투여 경로와 같은 변수에 아마도 의존할 것이다. 또한, 투여되는 초기 투여량은 원하는 혈액 수준 또는 조직 수준을 신속하게 달성하기 위하여 상기 상위 수준을 넘어 증가될 수 있거나, 초기 투여량은 최적보다 작을 수 있음이 이해되어야 한다.
질병의 치료를 위하여 또는 질병의 치료를 위한 의약 또는 조성물의 형성을 위하여, HBV RNAi 작용제를 포함하는 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 부형제와 또는 다음을 포함하지만 이로 한정되지 않는 제2 치료제 또는 치료와 병용될 수 있다: 제2 또는 다른 RNAi 작용제, 소분자 약물, 항체, 항체 단편, 및/또는 백신.
기재된 HBV RNAi 작용제는, 약제학적으로 허용가능한 부형제 또는 애주번트에 첨가될 때, 키트, 용기, 팩 또는 디스펜서 내로 포장될 수 있다. 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 사전 충전된 주사기 또는 바이알 내에 포장될 수 있다.
치료 방법 및 발현의 저해
본 명세서에 개시된 HBV RNAi 작용제는 화합물의 투여로부터 이익이 얻어지는 질병 또는 장애를 갖는 대상체 (예를 들어, 인간 또는 포유동물)를 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 RNAi 작용제는 HBV mRNA 발현의 감소 또는 저해로부터 이익이 얻어지는 질병 또는 장애를 갖는 대상체 (예를 들어, 인간)를 치료하는 데 사용될 수 있다. 대상체에게 치료적 유효량의 임의의 하나 이상의 RNAi 작용제가 투여된다. 대상체는 인간, 환자, 또는 인간 환자일 수 있다. 대상체는 성인, 청소년, 어린이, 또는 영아일 수 있다. HBV RNAi 작용제를 포함하는 기재된 약제학적 조성물은 질병의 치료적 처치를 위한 방법을 제공하는 데 사용될 수 있다. 그러한 방법은 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물을 인간 또는 동물에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 HBV RNAi 작용제는 HBV로 감염된 대상체를 치료하는 데 사용된다. 일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제는 HBV 감염을 갖는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 치료하는 데 사용된다. 대상체에게 치료적 유효량의 임의의 하나 이상의 기재된 RNAi 작용제가 투여된다.
일부 실시 형태에서, 대상체는 HBV 감염 및 HDV 감염 둘 모두를 가진다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 HBV RNAi 작용제는 HBV와 HDV 둘 모두로 감염된 대상체를 치료하는 데 사용된다. 일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제는 HBV 또는 HDV 감염을 갖는 대상체에서 적어도 하나의 증상을 치료하는 데 사용된다. 대상체에게 치료적 유효량의 임의의 하나 이상의 기재된 RNAi 작용제가 투여된다.
일부 실시 형태에서, HBV RNAi 작용제는 HBV로 감염된 대상체의 임상 표현을 치료하거나 관리하는 데 사용된다. 대상체에게 치료적 유효량의 하나 이상의 본 명세서에 기재된 HBV RNAi 작용제 또는 HBV RNAi 작용제 함유 조성물이 투여된다. 일부 실시 형태에서, 방법은 본 명세서에 기재된 HBV RNAi 작용제를 포함하는 조성물을 치료될 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제가 투여되는 대상체에서의 HBV 유전자의 유전자 발현 수준 및/또는 mRNA 수준은 HBV RNAi 작용제가 투여되기 전의 대상체 또는 HBV RNAi 작용제를 투여받지 않은 대상체에 비해 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 99% 넘게 감소된다. 대상체에서의 유전자 발현 수준 및/또는 mRNA 수준은 대상체의 세포, 세포 군, 및/또는 조직에서 감소될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제가 투여된 대상체에서의 HBV 유전자의 발현된 단백질 수준은 HBV RNAi 작용제가 투여되기 전의 대상체 또는 HBV RNAi 작용제를 투여받지 않은 대상체에 비해 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 99% 넘게 감소된다. 대상체에서의 단백질 수준은 대상체의 세포, 세포 군, 조직, 혈액, 및/또는 다른 유체에서 감소될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제가 투여된 대상체에서의 B형 간염 표면 항원(HBsAg)의 양 또는 수준은 HBV RNAi 작용제가 투여되기 전의 대상체 또는 HBV RNAi 작용제를 투여받지 않은 대상체에 비해 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 99% 넘게 감소된다. 일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제가 투여된 대상체에서의 B형 간염 e-항원(HBeAg)의 양 또는 수준은 HBV RNAi 작용제가 투여되기 전의 대상체 또는 HBV RNAi 작용제를 투여받지 않은 대상체에 비해 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 99% 넘게 감소된다. 일부 실시 형태에서, 기재된 HBV RNAi 작용제가 투여된 대상체에서의 혈청 HBV DNA의 양 또는 수준은 HBV RNAi 작용제가 투여되기 전의 대상체 또는 HBV RNAi 작용제를 투여받지 않은 대상체에 비해 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 99% 넘게 감소된다. 혈청 HBV DNA, HBV 유전자 발현, HBV mRNA, 또는 HBV 단백질의 양 또는 수준의 감소는 당업계에 공지된 방법에 의해 평가될 수 있다. HBV mRNA의 양 또는 수준, 발현된 단백질의 양 또는 수준, 및/또는 혈청 HBV DNA의 양 또는 수준의 감소 또는 저하는 HBV의 감소 또는 저하로 또는 HBV의 발현을 저해 또는 감소시키는 것으로 본 명세서에서 총칭된다.
세포 및 조직 및 비인간(non-human) 유기체
본 명세서에 기재된 HBV RNAi 작용제 중 적어도 하나를 포함하는 세포, 조직, 및 비인간 유기체가 고려된다. 세포, 조직, 또는 비인간 유기체는 RNAi 작용제를 세포, 조직, 또는 비인간 유기체에 전달함으로써 만들어진다.
이제, 상기 제공된 실시 형태 및 항목이 하기의 비제한적인 예로 예시된다.
실시예
실시예 1. HBV RNAi 작용제의 합성.
표 5에 나타낸 HBV RNAi 작용제 이중체를 다음에 따라 합성하였다:
A.합성. 올리고뉴클레오티드 합성에서 사용되는 고체상에서 포스포르아미다이트 기술에 따라 HBV RNAi 작용제의 센스 및 안티센스 가닥을 합성하였다. 규모에 따라, MerMade96E® (Bioautomation), MerMade12® (Bioautomation), 또는 OP Pilot 100 (GE Healthcare)을 사용하였다. 제어된 기공 유리 (CPG, 500 Å 또는 600Å, 미국 펜실베이니아주 애스톤 소재의 Prime Synthesis로부터 입수함)로 제조된 고체 지지체 상에서 합성을 수행하였다. 모든 RNA 및 2'-변형된 포스포라미다이트는 Thermo Fisher Scientific (미국 위스콘신주 밀워키 소재)으로부터 구매하였다. 구체적으로, 하기 2'-O-메틸 포스포르아미다이트를 사용하였다: (5' -O-다이메톡시트라이틸 -N6-(벤조일)-2'-O-메틸-아데노신-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-다이아이소프로필아미노) 포스포르아미다이트, 5'-O-다이메톡시-트라이틸-N4-(아세틸)-2'-O-메틸-시티딘-3'-O-(2-시아노에틸 -N, N-다이아이소프로필-아미노) 포스포르아미다이트, (5'-O-다이메톡시트라이틸-N2-(아이소부티릴)-2'-O-메틸-구아노신-3'-O-(2-시아노에틸-N, N-다이아이소프로필아미노) 포스포르아미다이트, 및 5'-O-다이메톡시트라이틸-2'-O-메틸-우리딘-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-다이아이소프로필아미노) 포스포르아미다이트. 2'-데옥시-2'-플루오로-포스포라미다이트는 2'-O-메틸 아미다이트와 동일한 보호기를 지녔다. 염기성 (3'-O-다이메톡시트라이틸-2'-데옥시리보스-5'-O-(2-시아노에틸-N,N-다이아이소프로필아미노) 포스포르아미다이트를 ChemGenes (미국 매사추세츠주 윌밍턴 소재)로부터 구매하였다. 포스포르아미다이트를 함유하는 표적화 리간드를 무수 다이클로로메탄 또는 무수 아세토니트릴 (50 mM) 중에 용해시키는 한편, 모든 다른 아미다이트를 무수 아세토니트릴 (50 mM)에 용해시키고, 분자체 (3Å)를 첨가하였다. 5-벤질티오-1H-테트라졸 (BTT, 아세토니트릴 중 250 mM) 또는 5-에틸티오-1H-테트라졸 (ETT, 아세토니트릴 중 250 mM)을 활성화제 용액으로서 사용하였다. 커플링 시간은 12 분 (RNA), 15 분 (표적화 리간드), 90 초 (2'OMe), 및 60 초 (2'F)였다. 포스포로티오에이트 결합을 도입하기 위하여, 무수 아세토니트릴 중 3-페닐 1,2,4-다이티아졸린 -5-온 (POS, 미국 매사추세츠주 레오밍스터 소재의 PolyOrg, Inc.로부터 입수함)의 100 mM 용액을 이용하였다.
B. 지지체 결합된 올리고머의 절단 및 탈보호. 고체상 합성의 완료 후에, 건조된 고체 지지체를 30℃에서 1.5 시간 동안 물 중 40 중량% 메틸아민의 1:1 부피 용액과 28% 수산화암모늄 용액 (Aldrich)으로 처리하였다. 용액을 증발시키고 고체 잔사를 물에서 재구성하였다 (하기 참조).
C. 정제 TSKgel SuperQ-5 PW 13 μm 컬럼 및 Shimadzu LC-8 시스템을 사용하여 음이온 교환 HPLC에 의해 미정제 올리고머를 정제하였다. 완충제 A는 20 mM Tris, 5 mM EDTA, pH 9.0 이며 20% 아세토니트릴을 함유하였고, 완충제 B는 완충제 A와 동일한 것으로 1.5 M 염화나트륨이 첨가되었다. 260 nm에서의 UV 트레이스(trace)를 기록하였다. 적절한 분획을 풀링한 후, 여과된 탈이온수 또는 100 mM 중탄산암모늄, pH 6.7 및 20% 아세토니트릴의 러닝(running) 완충액과 함께 세파덱스 G-25 파인(Sephadex G-25 fine)으로 패킹된 GE Healthcare XK 26/40 컬럼을 사용하는 크기 배제 HPLC에서 러닝시켰다.
D. 어닐링. 1× 포스페이트 완충 식염수 (Corning, Cellgro)에서 등몰 RNA 용액 (센스 및 안티센스)을 조합함으로써 상보적 가닥을 혼합하여 RNAi 작용제를 형성하였다. 일부 RNAi 작용제를 동결건조하고 -15℃ 내지 -25℃에서 보관하였다. 1× 포스페이트 완충 식염수 내에서 UV-Vis 분광계 상에서 용액 흡광도를 측정함으로써 이중체 농도를 결정하였다. 이어서, 260 nm 에서의 용액 흡광도에 변환 인자 및 희석 인자를 곱하여 이중체 농도를 결정하였다. 달리 언급되지 않는 한, 모든 변환 인자는 0.037 mg/(mL·cm) 이었다. 일부 실험의 경우, 실험적으로 결정된 흡광 계수로부터 변환 인자를 계산하였다.
실시예 2. pHBV 모델 마우스.
6주령 내지 8주령 암컷 NOD.CB17-Prkdscid/NcrCrl (NOD-SCID) 마우스를, HBV RNAi 작용제 또는 대조군을 투여하기 30 일 내지 45 일 전에 투여되는 유체동역학적 꼬리 정맥 주사 (문헌[Yang PL et al. "Hydrodynamic injection of viral DNA: a mouse model of acute hepatitis B virus infection," PNAS USA 2002 Vol. 99: p. 13825-13830])에 의해 MC-HBV1.3로 생체내에서 일시적으로 트랜스펙션시켰다. MC-HBV1.3은 플라스미드 pHBV1.3 에서와 그리고 HBV1.3.32 트랜스제닉(transgenic) 마우스 (GenBank 수탁 번호 V01460) (문헌[Guidotti LG et al., "High-level hepatitis B virus replication in transgenic mice," J Virol 1995 Vol. 69, p6158-6169])에서와 동일한 말단 중복 인간 B형 간염 바이러스 서열을 함유하는 플라스미드 유래 미니써클(minicircle) 이다. 동물의 체중의 10%의 총 부피의 링거 용액 중 5 또는 10 ㎍ MC-HBV1.3을 꼬리 정맥을 통해 마우스에 주사하여 만성 HBV 감염의 pHBV 모델을 생성하였다. 용액을 이전에 기재된 바와 같이 (문헌[Zhang G et al., "High levels of foreign gene expression in hepatocytes after tail vein injection of naked plasmid DNA." Human Gene Therapy 1999 Vol. 10, p1735-1737.]) 5 내지 7 초 내에 27-게이지 바늘을 통해 주사하였다. 투여 전에 (투여 전 1 일째, -1 일째 또는 -2 일째), 혈청에서의 B형 간염 항원(HBsAg) 발현 수준을 ELISA로 측정하고, 마우스를 평균 HBsAg 발현 수준에 따라 그룹화하였다.
분석: HBV RNAi 작용제의 투여 전 및 후의 다양한 시간에서, 혈청 HBsAg, 혈청 HBeAg, 혈청 HBV DNA, 또는 간 HBV RNA를 측정할 수 있다. HBV 발현 수준을 투여 전 발현 수준에 대해 그리고 포스페이트 완충 식염수("PBS")가 주사된 대조군 마우스에 대해 정규화하였다.
i) 혈청 수집: 마우스를 2% 내지 3% 아이소플루란으로 마취시키고, 혈액 샘플을 하악골하 영역으로부터 혈청 분리 튜브 (독일 뉨브레히트 소재의 Sarstedt AG & Co.) 내로 수집하였다. 혈액을 주위 온도에서 20 분 동안 응고시켰다. 튜브를 8,000 × g 에서 3 분 동안 원심분리하여 혈청을 분리하고, 4℃ 에서 보관하였다.
ii) 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준: 혈청을 수집하고, 5% 무지방 분유를 함유하는 PBS 중에 10배 내지 8000배 희석시켰다. 10 ㎍ HBsAg 발현 플라스미드 pRc/CMV-HBs (미국 노스다코다주 파고 소재의 Aldevron)로 트랜스펙션시킨 ICR 마우스 (Harlan Sprague Dawley)의 혈청으로부터 무지방 우유 용액 중에 희석된 2차 HBsAg 표준물을 제조하였다. GS HBsAg EIA 3.0 키트 (미국 워싱턴주 레드몬드 소재의 Bio-Rad Laboratories, Inc.)로 제조사에 의해 기술된 바와 같이 HBsAg 수준을 결정하였다. PBS 중 무지방 우유 중에 또한 희석된 재조합 HBsAg 단백질인 ayw 서브타입을 1차 표준물 (Aldevron)로 사용하였다.
MC-HBV1.3의 발현에서의 비치료 관련 감소를 설명하기 위하여 각 동물에 대한 HBsAg 발현을 PBS가 주사된 마우스의 대조군에 대해 정규화하였다. 먼저, 일정 시점에서의 각 동물에 대한 HBsAg 수준을 그 동물에서의 처리 전 발현 수준으로 나누어, "처리 전에 대해 정규화된" 발현의 비를 결정하였다. 이어서, 개별 동물에 대한 "처리 전에 대해 정규화된" 비를 정상 PBS 대조군에서의 모든 마우스의 "처리 전에 대해 정규화된" 평균 비로 나눔으로써 특정 시점에서의 발현을 대조군에 대해 정규화하였다.
iii) 혈청 B형 간염 e-항원(HBeAg) 수준: 5% 무지방 분유 중에 4배 내지 20배 희석된 혈청을 사용하여 HBeAg 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA)으로 제조사 (DiaSorin)에 의해 기술된 바와 같이 HBeAg 분석을 수행하였다. 항원의 양을 검정의 선형 범위에서 결정하고, HBeAg 단백질 표준물 (미국 매사추세츠주 엑톤 소재의 Fitzgerald Industries International, catalog # 30-AH18)에 대해 정량화하였다.
MC-HBV1.3의 발현에서의 비치료 관련 감소를 설명하기 위하여 각 동물에 대한 HBeAg 발현을 PBS가 주사된 마우스의 대조군에 대해 정규화하였다. 혈청 중의 HBeAg의 평가를 위하여, 풀링된 그룹 또는 하위 그룹의 혈청 샘플로부터 HBeAg를 분석한다. 먼저, 각각의 풀링된 그룹 또는 하위 그룹에 대한 HBeAg 수준을 동일한 그룹 또는 하위 그룹에서의 처리 전 발현 수준으로 나누어, "처리 전에 대해 정규화된" 발현의 비를 결정하였다. 이어서, 일정 그룹 또는 하위 그룹에 대한 "처리 전에 대해 정규화된" 비를 정상 PBS 대조군에서의 모든 샘플의 "처리 전에 대해 정규화된" 평균 비로 나눔으로써 특정 시점에서의 발현을 대조군에 대해 정규화하였다.
iv) 혈청 HBV DNA 수준: 일정 그룹 또는 하위그룹에서의 마우스로부터의 혈청의 동일한 부피를 100 μL의 최종 부피로 풀링하였다. QIAamp 민일루트 바이러스 스핀 키트(QIAamp MinElute Virus Spin Kit) (미국 캘리포니아주 발렌시아 소재의 Qiagen)를 사용하여 제조사의 사용 설명서에 따라 혈청 샘플로부터 DNA를 단리하였다. 멸균 0.9% 식염수를 각각의 샘플에 200 μL의 최종 부피로 첨가하였다. 혈청 샘플을 완충액과 프로테아제를 함유하는 튜브에 첨가하였다. 담체 RNA를 첨가하여 소량의 DNA의 단리를 보조하였다. 1 ng의 pHCR/UbC-SEAP 플라스미드 DNA (문헌[Wooddell CI, et al. "Long-term RNA interference from optimized siRNA expression constructs in adult mice." Biochem Biophys Res Commun (2005) 334, 117-127])를 회복 대조군으로서 첨가하였다. 15 분 동안 56℃ 에서 인큐베이션한 후에, 에탄올로 핵산을 용해물로부터 침전시키고, 전체 용액을 컬럼에 적용하였다. 세척 후에, 샘플을 50 μL 버퍼(Buffer) AVE의 부피 내로 용리시켰다.
pHBV 마우스 모델 혈청으로부터 단리된 DNA 내의 HBV 게놈의 카피 수를 qPCR에 의해 결정하였다. S 유전자 내의 HBV 게놈의 짧은 세그먼트 (GenBank 수탁 번호 V01460의 염기 353-777)를 인코딩하는 플라스미드 pSEAP-HBV353-777을 사용하여 식스 로그 표준 곡선(six log standard curve)을 생성하였다. pHCR/UbC-SEAP의 검출에 기초하여 평균으로부터 2 표준 편차 미만의 DNA의 회복을 갖는 샘플은 제외하였다. 플루오르/ZEN/IBFQ를 갖는 TaqMan 화학 기반 프라이머 및 프로브를 이용한다.
7500 패스트(Fast) 또는 스텝원 플러스 리얼-타임(StepOne Plus Real-Time) PCR 시스템 (Life Technologies) 상에서 qPCR 검정을 수행하였다. 혈청 중의 HBV DNA의 평가를 위하여, 풀링된 그룹의 혈청 샘플로부터 DNA를 단일 또는 이중 정제 단계로부터 단리하였다. HBV DNA 및 회복 대조군 플라스미드의 정량화를 삼중으로 수행된 qPCR 반응에 의해 결정하였다. HBV 및 pHCR/UbC-SEAP를 정량화하기 위한 프로브를 각각의 반응에 포함시켰다.
실시예 3. pHBV 모델 마우스에서의 HBV RNAi 작용제.
상기 실시예 2에 기재된 pHBV 마우스 모델을 사용하였다. 1 일째에, 각각의 마우스에게, 2 mg/㎏(mpk)의 포스페이트 완충 식염수("PBS") 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제를 함유하는 200 μl의 단일 피하 주사액, 또는 대조군으로 사용될 HBV RNAi 작용제가 없는 200 μl의 포스페이트 완충 식염수를 투여하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 시험한 HBV RNAi 작용제는 하기 표 7에 나타낸 이중체 번호를 갖는 것을 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다. 각 그룹에서 3 마리의 마우스를 시험하였다 (n = 3).
혈청을 8 일째, 15 일째, 22 일째, 및 29 일째에 수집하고, 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표에 나타낸다:
[표 7]
RNAi 작용제 AD04178, AD04579, AD04580, AD04570, AD04572, AD04573, AD04574, AD04575, AD04419, 및 AD04578을, 상기 표 1 및 표 2에 나타낸 HBV 게놈의 위치 1781-1789에 있는 X 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 갖도록 각각 설계하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 모든 측정된 시점에 걸쳐 PBS 대조군과 비교하여 HBsAg의 상당한 감소를 보였다. 예를 들어, AD04580은 처리 전 및 PBS 대조군에 대해 정규화될 때 8 일째에 s-항원 수준의 95% 초과의 감소 (0.048 ± 0.007 HBsAg 수준)를 나타내었다.
추가로, 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라, PBS, AD04579, 및 AD04580 그룹에 대해 8 일째, 15 일째, 22 일째, 29 일째, 36 일째, 43 일째 및 50 일째에 수집된 혈청 샘플로부터 혈청 HBV DNA 수준을 결정하였다. 각 그룹으로부터의 혈청을 풀링하고, 이어서 DNA를 이중 단리로 혈청으로부터 단리하였다. 데이터를 하기 표에 제시한다:
[표 8]
표 8의 데이터는 조사된 둘 모두의 RNAi 작용제가 PBS 군과 비교하여 HBV DNA 수준의 상당한 감소를 제공하였음을 나타내며, AD04580은 최저점 (예를 들어, 15 일째의 0.0869 ± 0.0117의 평균 혈청 DNA 수준)에서 1 로그 녹다운(log knockdown)보다 약간 높은 녹다운을 달성하였다.
실시예 4. pHBV 모델 마우스에서의 HBV RNAi 작용제.
상기 실시예 2에 기재된 pHBV 마우스 모델을 사용하였다. 1 일째에, 각각의 마우스에게, 2 mg/㎏(mpk)의 포스페이트 완충 식염수 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제를 함유하는 200 μl의 단일 피하 투여, 또는 대조군으로 사용될 HBV RNAi 작용제가 없는 200 μl의 포스페이트 완충 식염수를 제공하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 투여된 HBV RNAi 작용제는 하기 표 9에 나열된 것을 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다. 각 그룹에서 3 마리의 마우스를 시험하였다 (n = 3).
혈청을 8 일째, 15 일째, 22 일째, 및 29 일째에 수집하고, 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표에 나타낸다:
[표 9]
RNAi 작용제 AD04010, AD04581, AD04591, AD04434, AD04583, AD04584, AD04585, AD04586, AD04588, 및 AD04438을, 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같은 HBV 게놈의 위치 257-275에 있는 S 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 갖도록 설계하였다. 바로 위의 표 9에 나타낸 각각의 HBV RNAi 작용제는 모든 측정된 시점에 걸쳐 PBS 대조군과 비교하여 HBsAg의 상당한 감소를 보였다. 예를 들어, AD04585는 대략 8 일째에 HBsAg의 90% 감소, 15 일째에 95% 감소, 22 일째에 97% 감소, 및 29 일째에 95% 감소를 보였다.
추가로, 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라, PBS, AD04585 그룹에 대해 8 일째, 15 일째, 22 일째, 29 일째, 36 일째, 43 일째 및 50 일째에 수집된 혈청 샘플로부터 혈청 HBV DNA 수준을 결정하였다. 각 그룹으로부터의 혈청을 풀링하고, 이어서 DNA를 이중 단리로 혈청으로부터 단리하였다. 데이터를 하기 표에 제시한다:
[표 10]
표 10의 데이터는 HBV RNAi 작용제 AD04585가 PBS 그룹과 비교하여 HBV DNA 수준의 감소를 제공하였음을 나타낸다.
실시예 5. pHBV 모델 마우스에서의 HBV RNAi 작용제의 용량 반응 및 조합.
상기 실시예 2에 기재된 pHBV 마우스 모델을 사용하였다. 마우스를 하기 표 11에 기재된 것을 포함하는 다양한 그룹으로 나누고, 표 11에 기재된 투여 요법에 따라 200 μl의 피하 주사액을 마우스에게 제공하였다:
[표 11]
각각의 마우스에게, 표 11에 기재된 바와 같은, 포스페이트 완충 식염수 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제(들)의 양을 함유하는 200 μl의 피하 투여, 또는 HBV RNAi 작용제가 없는 200 μl의 포스페이트 완충 식염수를 제공하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다. 각 그룹에서 3 마리의 마우스를 시험하였다 (n = 3).
혈청을 8 일째, 15 일째, 22 일째, 29 일째, 36 일째, 43 일째, 50 일째, 및 57 일째에 수집하고, 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표에 나타낸다:
[표 12]
HBV RNAi 작용제 AD04580 및 AD04585는 각각 개별적으로 모든 측정된 시점에 걸쳐 PBS 대조군과 비교하여 HBsAg의 감소를 보였다. 더욱이, 상기 실시예에 기재된 바와 같이 HBV 게놈의 상이한 영역을 표적화하는 AD04585와 AD04580의 조합 처리는 또한 모든 측정된 시점에 걸쳐 PBS 대조군과 비교하여 HBsAg의 감소를 보였다.
추가로, 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라, 표 11의 각각의 그룹에 대해 8 일째, 15 일째, 22 일째, 29 일째, 및 36 일째에 수집된 혈청 샘플로부터 혈청 HBV DNA 수준을 결정하였다. 각 그룹으로부터의 혈청을 풀링하고, 이어서 DNA를 이중 반응으로 혈청으로부터 단리하였다. 데이터를 하기 표에 제시한다:
[표 13]
표 13의 데이터는 조사된 RNAi 작용제가, 개별적으로 그리고 조합으로 둘 모두에서, PBS 그룹과 비교하여 HBV DNA 수준의 감소를 제공하였음을 나타낸다. 재투여 또는 투여량의 증가는 추가의 HBV DNA 감소를 가져왔다.
실시예 6. pHBV 마우스에서의 HBV RNAi 작용제: 용량 반응 및 조합 연구.
상기 실시예 2에 기재된 pHBV 마우스 모델을 사용하였다. 마우스를 하기 표 14에 기재된 바와 같이 다양한 그룹으로 나누고, 표 14에 기재된 투여 요법에 따라 200 μl의 단일 피하 주사액을 각각의 마우스에게 투여하였다:
[표 14]
각각의 마우스에게, 표 14에 기재된 바와 같은, 포스페이트 완충 식염수 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제(들)의 양을 함유하는 200 μl의 피하 투여, 또는 HBV RNAi 작용제가 없는 200 μl의 포스페이트 완충 식염수를 제공하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다. 각 그룹에서 3 마리의 마우스를 시험하였다 (n = 3).
혈청을 투여 전 -1 일째에, 이어서 8 일째, 15 일째, 22 일째, 29 일째, 및 36 일째에 수집하고, 혈청 HBsAg 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표 15에 나타내며, 평균 HBsAg는 HBsAg의 정규화된 평균값을 반영한다:
[표 15]
시험된 HBV RNAi 작용제는 모든 측정된 시점에 걸쳐 PBS 대조군과 비교하여 HBsAg의 감소를 보였다. 또한, 실시예 6의 그룹 H, I, 및 J에 나타낸, AD04872 (표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같은 HBV 게놈의 위치 261-279에 있는 S ORF에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 포함함)와, AD04981 또는 AD04963 (둘 모두 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같은 HBV 게놈의 위치 1781-1799에 있는 X ORF에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 포함함)의 조합 처리는, 하나는 HBV 게놈의 S ORF를 표적화하고 다른 하나는 X ORF를 표적화하는 2개의 RNAi 작용제의 조합 처리가 모든 측정된 시점에 걸쳐 PBS 대조군과 비교하여 HBsAg의 감소를 유사하게 나타내었음을 예시한다.
추가로, 혈청 B형 간염 e-항원(HBeAg) 수준을 또한 평가하였다. 각각의 그룹의 마우스로부터의 샘플을 먼저 풀링하고, 생성된 혈청 샘플을 단일의 샘플로 하여 검정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표에 나타낸다:
[표 16]
표 16에 나타낸 바와 같이, AD04872 (HBV 게놈의 S ORF를 표적화함)와, AD04981 또는 AD04963 (둘 모두 HBV 게놈의 X ORF를 표적화함)의 조합은 AD04872 단독의 투여에 비해 HBeAg 수준의 추가의 감소를 보였다.
실시예 7. pHBV 마우스에서의 HBV RNAi 작용제: 추가의 용량 반응 및 조합 연구.
상기 실시예 2에 기재된 pHBV 마우스 모델을 사용하였다. 마우스를 하기 표 17에 기재된 바와 같이 다양한 그룹으로 나누고, 표 17에 기재된 투여 요법에 따라 200 μl의 단일 피하 주사액을 각각의 마우스에게 투여하였다:
[표 17]
각각의 마우스에게, 표 17에 기재된 바와 같은, 포스페이트 완충 식염수 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제(들)의 양을 함유하는 200 μl의 피하 투여, 또는 HBV RNAi 작용제가 없는 200 μl의 포스페이트 완충 식염수를 제공하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다. 각 그룹에서 4 마리의 마우스를 -1 일째 및 8 일째에 시험하고 (n = 4), 이어서 조직학적 평가를 위하여 그룹당 1 마리의 마우스를 안락사시켰다. 각 그룹에서 3 마리의 마우스를 22 일째 및 29 일째에 시험하였다 (n = 3).
혈청을 투여 전 -1 일째에, 이어서 8 일째, 15 일째, 22 일째, 및 29 일째에 수집하고, 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표 18에 나타낸다:
[표 18]
시험된 HBV RNAi 작용제는 모든 측정된 시점에 걸쳐 PBS 대조군과 비교하여 HBsAg의 감소를 보였다.
추가로, 혈청 B형 간염 e-항원(HBeAg) 수준을 또한 평가하였다. 각각의 그룹의 마우스로부터의 샘플을 먼저 풀링하고, 생성된 혈청 샘플을 단일의 샘플로 하여 검정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표에 나타낸다:
[표 19]
[표 19-1]
표 19-1은 대조군과 비교한 HBeAg의 녹다운 배수 비를 반영하고, 이는 대조군 (PBS) 그룹의 정규화된 HBeAg 수준/각각의 RNAi 작용제(들) 그룹의 정규화된 HBeAg 수준 (즉, 1.000/HBeAg 수준)으로 계산된다. 표 19-1의 데이터는 AD04872 (상기에 언급된 바와 같이 HBV 게놈의 위치 261-279에 있는 S ORF에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 포함함)와 AD04982 (HBV 게놈의 위치 1781-1799에 있는 X ORF에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 포함함)의 조합이 개별 RNAi 작용제 단독의 투여에 비해 HBeAg 수준의 추가의 감소를 보였음을 나타낸다(예를 들어, 그룹 H 및 I에 대해 표 19 및 표 19-1 참조). 또한, 본 실시예로부터의 데이터는 AD04872와 AD04982의 조합이 개별적으로 투여되는 AD04872 및 AD04982에서의 HBeAg의 감소 배수의 합보다 큰 HBeAg의 감소 배수를 가져온다는 것을 또한 보여준다. 예를 들어, 그룹 I (3.0 mg/㎏ AD04872+ 2.0 mg/㎏ AD04982의 투여임)은 15 일째에 17.0의 HBeAg의 감소 배수를 가져왔고, 이는 그룹 G (3.0 mg/㎏ AD04872)에 대한 4.6의 감소 배수와 그룹 D (2.0 mg/㎏ AD04982)에 대한 3.2의 감소 배수의 합보다 크다.
또한, 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라, 표 17의 각각의 그룹에 대해 -1 일째, 8 일째, 15 일째, 22 일째, 29 일째, 및 36 일째에 수집된 혈청 샘플로부터 혈청 HBV DNA 수준을 결정하였다. 혈청 HBV DNA를 각 시점에서 각 동물로부터 단리하였다. 데이터를 하기 표에 제시한다:
[표 20]
표 20의 데이터는 조사된 RNAi 작용제가, 개별적으로 그리고 조합으로 둘 모두에서, PBS 그룹과 비교하여 HBV DNA 수준의 감소를 제공하였음을 나타내고, 또한 AD04872 (S ORF를 표적화함)와 AD04982 (X ORF를 표적화함)의 조합이 혈청 HBV DNA를 동일한 양의 AD04872 단독과 유사한 정도로 감소시킴을 추가로 보여준다.
실시예 8. pHBV 마우스에서의 HBV RNAi 작용제: 추가의 용량 반응 및 조합 연구.
상기 실시예 2에 기재된 pHBV 마우스 모델을 사용하였다. 마우스를 하기 표 21에 기재된 바와 같이 다양한 그룹으로 나누고, 표 21에 기재된 투여 요법에 따라 200 μl의 단일 피하 주사액을 각각의 마우스에게 투여하였다:
[표 21]
추가로, 마우스가 하기 일정에 따라 안락사되도록 일정을 계획한다:
11 일째: 그룹 2A, 3A, 4A, 5A, 6A, 7A 및 8A로부터 2 마리의 마우스를 안락사시키고, 그룹 9로부터 1 마리의 마우스를 안락사시킨다.
14 일째: 그룹 2A, 3A, 4A, 5A, 6A, 7A, 및 8A로부터 2 마리의 마우스를 안락사시킨다.
21 일째: 그룹 2B, 3B, 4B, 5B, 6B, 7B, 및 8B로부터 2 마리의 마우스를 안락사시킨다.
28 일째: 그룹 1, 2B, 3B, 4B, 5B, 6B, 7B, 및 8B로부터 2 마리의 마우스를 안락사시키고, 그룹 10 및 12로부터 모든 마우스 (4 마리)를 안락사시킨다.
각각의 마우스에게, 표 21에 기재된 바와 같은, 포스페이트 완충 식염수 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제(들)의 양을 함유하는 200 μl의 피하 투여, 또는 HBV RNAi 작용제가 없는 200 μl의 포스페이트 완충 식염수를 제공하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다. 상기 표 14에 나타낸 바와 같이, 3 마리의 마우스를 시험한 (n = 3) 그룹 10, 11, 12 및 13을 제외하고는, 각 그룹에서 4 마리의 마우스를 시험하였다 (n = 4).
혈청을 투여 전 -1 일째에, 그리고 8 일째, 14 일째, 21 일째, 및 28 일째에 수집하고, 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표에 나타낸다:
[표 22]
단독으로 그리고 조합으로 둘 모두로 시험된 HBV RNAi 작용제는 모든 측정된 시점에 걸쳐 PBS 대조군과 비교하여 HBsAg의 상당한 감소를 보였다.
실시예 9. RNAi 작용제 전달.
상기 실시예 2에 기재된 pHBV 마우스 모델을 사용하였다. 1 일째에, 각각의 마우스에게, 10 mg/㎏(mpk)의 포스페이트 완충 식염수 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제를 함유하는 200 μl의 단일 피하 주사액, 또는 대조군으로 사용될 HBV RNAi 작용제가 없는 200 μl의 포스페이트 완충 식염수를 투여하였다. 시험된 HBV RNAi 작용제는 하기 표 23에 나타낸 이중체 번호를 갖는 것을 포함하였고, 이들 각각은 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같은 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다. 각 그룹에서 3 마리의 마우스를 시험하였다 (n = 3).
혈청을 투여 전에, 이어서 8 일째, 15 일째, 22 일째, 및 29 일째에 수집하고, 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표에 나타낸다:
[표 23]
상기 표 23에 나타낸 각각의 HBV RNAi 작용제는 HBV 게놈의 위치 1781-1799에 있는 X ORF에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 포함하였다. 각각의 RNAi 작용제는 PBS 대조군과 비교하여 유의한 녹다운을 보였다.
실시예 10. pHBV 마우스에서의 HBV RNAi 작용제: 추가의 조합 연구.
상기 실시예 2에 기재된 pHBV 마우스 모델을 사용하였다. 마우스를 하기 표 24에 기재된 바와 같이 다양한 그룹으로 나누고, 표 24에 기재된 투여 요법에 따라 200 μl의 단일 피하 주사액을 각각의 마우스에게 투여하였다:
[표 24]
각각의 마우스에게, 표 24에 기재된 바와 같은, 포스페이트 완충 식염수 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제(들)의 양을 함유하는 200 μl의 피하 투여, 또는 HBV RNAi 작용제가 없는 200 μl의 포스페이트 완충 식염수를 제공하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다. 각 그룹에서 3 마리의 마우스를 시험하였다 (n = 3).
혈청을 투여 전에, 이어서 -1 일째, 8 일째, 15 일째, 22 일째, 29 일째, 36 일째, 43 일째, 50 일째, 57 일째, 및 64 일째에 수집하였다. 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 실험으로부터의 데이터를 다음과 같이 나타낸다:
[표 25]
RNAi 작용제 AD04585 및 AD04771을, 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같은 HBV 게놈의 위치 257-275에 있는 S 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 갖도록 설계하였다. HBV RNAi 작용제 AD04580 및 AD04776을, 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같은 HBV 게놈의 위치 1781-1799에 있는 X 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 갖도록 설계하였다. 시험된 이러한 HBV RNAi 작용제는, 단독으로 그리고 조합으로 둘 모두에서, 모든 측정된 시점에 걸쳐 PBS 대조군과 비교하여 HBsAg의 감소를 보였다. 각각의 후속 용량은 HBsAg 감소의 최저점을 추가로 감소시켰다.
추가로, 표24 중의 그룹 C (3.0 mg/㎏ AD04585), 그룹 E (3.0 mg/㎏ AD04580), 및 그룹 G (1.5 mg/㎏ AD04585 + 1.5 mg/㎏ AD04580)에 대해, 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 -1 일째, 8 일째, 15 일째, 22 일째, 29 일째, 및 36 일째, 43 일째 및 50 일째 수집된 혈청 샘플로부터 혈청 HBV DNA 수준을 결정하였다. 혈청 HBV DNA를 각 동물에 대해 이러한 각각의 시점에서 단리하였다. 데이터를 하기 표에 제시한다:
[표 26]
표 26의 데이터는 조사된 HBV RNAi 작용제가, 개별적으로 그리고 조합으로 둘 모두에서, PBS 그룹과 비교하여 HBV DNA 수준의 감소를 제공하였음을 나타낸다.
실시예 11. pHBV 마우스에서의 HBV RNAi 작용제: 조합 연구.
상기 실시예 2에 기재된 pHBV 마우스 모델을 사용하였다. 마우스를 하기 표 27에 기재된 바와 같이 다양한 그룹으로 나누고, 표 27에 기재된 투여 요법에 따라 200 μl의 단일 피하 주사액을 각각의 마우스에게 투여하였다:
[표 27]
각각의 마우스에게, 표 24에 기재된 바와 같은, 포스페이트 완충 식염수 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제(들)의 양을 함유하는 200 μl의 피하 투여, 또는 HBV RNAi 작용제가 없는 200 μl의 포스페이트 완충 식염수를 제공하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다. 각 그룹에서 3 마리의 마우스를 시험하였다 (n = 3).
혈청을 투여 전 -1 일째에, 이어서 8 일째, 15 일째, 22 일째, 29 일째, 및 36 일째에 수집하고 (그룹 L (AD04882)과 그룹 M (AD04885)은 제외함), 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표에 나타낸다:
[표 28]
RNAi 작용제 AD04962를, 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같은 HBV 게놈의 위치 257-275에 있는 S 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 갖도록 설계하였다. RNAi 작용제 AD04872를, 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같은 HBV 게놈의 위치 261-279에 있는 S 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 갖도록 설계하였다. RNAi 작용제 AD04963을, 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같은 HBV 게놈의 위치 1781-1799에 있는 X 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 갖도록 설계하였다. RNAi 작용제 AD04882 및 AD04885를, 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같은 HBV 게놈의 위치 1780-1798에 있는 X 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 갖도록 설계하였다. 바로 위의 표 9에 나타낸 각각의 HBV RNAi 작용제는, 개별적으로 그리고 조합으로 둘 모두에서, 모든 측정된 시점에 걸쳐 PBS 대조군과 비교하여 HBsAg의 감소를 보였다. 재투여는 추가의 HBsAg 감소를 가져왔다.
추가로, 혈청 B형 간염 e-항원(HBeAg) 수준을 또한 그룹 L 및 M을 제외한 모든 그룹에 대해 평가하였다. 각각의 그룹의 마우스로부터의 샘플을 먼저 풀링하고, 생성된 혈청 샘플을 단일의 샘플로 하여 검정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표에 나타낸다:
[표 29]
또한, 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라, 표 27의 각각의 그룹에 대해 8 일째, 15 일째, 22 일째, 및 29 일째에 수집된 혈청 샘플로부터 혈청 HBV DNA 수준을 결정하였다. 혈청 HBV DNA를 각 시점에서 각 동물로부터 단리하였다. 데이터를 하기 표에 제시한다:
[표 30]
표 30의 데이터는 조사된 RNAi 작용제가, 개별적으로 그리고 조합으로 둘 모두에서, PBS 그룹과 비교하여 HBV DNA 수준의 감소를 제공하였음을 나타낸다. 재투여는 HBV DNA의 추가의 감소를 가져왔다.
실시예 12. pHBV 마우스에서의 HBV RNAi 작용제
상기 실시예 2에 기재된 pHBV 마우스 모델을 사용하였다. 마우스를 하기 표 31에 기재된 바와 같이 다양한 그룹으로 나누고, 표 31에 기재된 투여 요법에 따라 200 μl의 단일 피하 주사액을 각각의 마우스에게 투여하였다:
[표 31]
각각의 마우스에게, 표 24에 기재된 바와 같은, 포스페이트 완충 식염수 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제의 양을 함유하는 200 μl의 피하 투여, 또는 HBV RNAi 작용제가 없는 200 μl의 포스페이트 완충 식염수를 제공하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다. 각 그룹에서 3 마리의 마우스를 시험하였다 (n = 3).
혈청을 투여 전에, 이어서 8 일째, 15 일째, 및 22 일째에 수집하였다. 그룹 A (PBS), 그룹 B (2.0 mg/㎏ AD04871), 그룹 C (2.0 mg/㎏ AD04872), 그룹 D (2.0 mg/㎏ AD04874), 그룹 E (2.0 mg/㎏ AD04875), 및 그룹 F (2.0 mg/㎏ AD04876)는 또한 29 일째, 36 일째, 43 일째, 및 50 일째에 수집된 혈청을 가졌다. 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표에 나타낸다:
[표 32]
RNAi 작용제 AD04871, AD04872, AD04874, AD04875, 및 AD04876을, 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같은 HBV 게놈의 위치 261-279에 있는 S 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 갖도록 각각 설계하였다. 이러한 각각의 HBV RNAi 작용제는 PBS 대조군과 비교하여 HBsAg의 상당한 감소를 나타내어야 한다. 예를 들어, AD04871 (그룹 B), AD04872 (그룹 C), AD04874 (그룹 D), 및 AD04876 (그룹 F) 각각의 단일 2 mg/㎏ 용량은 대조군과 비교하여 15 일째부터 43 일째까지 측정된 각각의 시점에 대해 90% 초과의 HBsAg의 감소를 나타내었다. RNAi 작용제 AD04881, AD04883, AD04884를, 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같은 HBV 게놈의 위치 1780-1798에 있는 X 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 갖도록 각각 설계하였다.
실시예 13. X 영역 녹아웃 모델 마우스에서의 HBV RNAi 작용제의 용량 반응 및 조합.
HBV mRNA의 S ORF에 위치하는 영역에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 포함하는 RNAi 작용제와, HBV mRNA의 X ORF에 위치하는 영역에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 포함하는 제2 RNAi 작용제의 조합의 효과를 평가하는 대안적인 수단으로서, 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같은 위치 1780 및 1781을 표적화하는 HBV RNAi 작용제에 대한 결합 부위가 녹아웃된 HBV 게놈을 포함하는 플라스미드를 생성하였다 (이하, X 영역 녹아웃 마우스로 지칭됨). 이 모델은 이들 RNAi 작용제의 결합 부위 내에서 pHBV1.3 플라스미드 중의 10개의 염기를 돌연변이시킴으로써 생성하였다. S-영역을 포함하는 HBV mRNA의 나머지는 기능적인 상태로 남아있었다. 따라서, 이 HBV 마우스 모델에서, 본 명세서에 개시된 HBV 게놈의 위치 1780 및 1781을 표적화하는 안티센스 가닥을 갖는 HBV RNAi 작용제의 포함은 발현을 침묵시키는 데 효과적이지 않을 것으로 예상된다.
마우스를 하기 표 33에 기재된 것을 포함하는 다양한 그룹으로 나누고, 하기 표 에 기재된 투여 요법에 따라 200 μl의 피하 주사액을 마우스에게 제공하였다:
[표 33]
각각의 마우스에게, 표 33에 기재된 바와 같은, 포스페이트 완충 식염수 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제(들)의 양을 함유하는 200 μl의 피하 투여, 또는 HBV RNAi 작용제가 없는 200 μl의 포스페이트 완충 식염수를 제공하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다. 각 그룹에서 3 마리의 마우스를 시험하였다 (n = 3).
혈청을 5 일째, 8 일째, 15 일째, 22 일째, 및 29 일째에 수집하고, 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 36 일째 및 43 일째에 그룹 1 내지 5에 대해 혈청을 수집하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표 34에 나타낸다:
[표 34]
예상되는 바와 같이, 3.0 mg/㎏의 HBV RNAi 작용제 AD04963의 단일 용량이고 HBV 게놈의 위치 1781-1799에 있는 X 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥을 포함하는 그룹 6은 HBsAg의 녹다운을 제공할 수 없었다. 추가로, 그룹 2 내지 5 각각은 PBS 대조군과 비교하여 HBsAg의 상당한 녹다운을 제공하였으며, 그룹 3과 그룹 5 둘 모두는 최저점에서 2 로그 초과의 HBsAg의 감소를 나타낸다 (22 일째).
실시예 14. X 영역 녹아웃 모델 마우스에서의 HBV RNAi 작용제의 용량 반응 및 조합.
상기 실시예 13에 기재된 X 영역 녹아웃 마우스 모델을 사용하였다. 마우스를 하기 표 31에 기재된 것을 포함하는 다양한 그룹으로 나누고, 표 35에 기재된 투여 요법에 따라 200 μl의 단일 피하 주사액을 각각의 마우스에게 투여하였다:
[표 35]
각각의 마우스에게, 표 35에 기재된 바와 같은, 포스페이트 완충 식염수 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제(들)의 양을 함유하는 200 μl의 피하 투여, 또는 HBV RNAi 작용제가 없는 200 μl의 포스페이트 완충 식염수를 제공하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다. 표 35에 나타낸 각 그룹에서 3 마리의 마우스를 시험하였다 (n = 3).
혈청을 1 일째 (투여 전), 8 일째, 15 일째, 22 일째, 및 29 일째에 수집하고, 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표에 나타낸다:
[표 36]
표 36은 단독으로 투여된 HBV RNAi 작용제 AD04872, 및 AD04872 (HBV 게놈의 위치 261-279에 있는 S 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥을 포함함)와 AD05070 (HBV 게놈의 위치 1781-1799에 있는 X 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥을 포함함)의 조합이, 측정된 각 시점에 걸쳐 PBS 대조군과 비교하여 HBsAg의 유의한 녹다운을 제공하였음을 보여준다. 이 X 영역 녹아웃 모델에서 돌연변이된 표적 부위가 존재하는 0.7 mg/㎏ 내지 2 mg/㎏의 HBV RNAi 작용제 AD05070의 첨가는 2 mg/㎏의 HBV RNAi 작용제 AD04872의 활성을 감소시키지 않았다.
추가로, 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 8 일째, 15 일째, 및 22 일째에 수집된 혈청 샘플로부터 혈청 HBV DNA 수준을 결정하였다. 각 그룹으로부터의 혈청을 풀링하고, 이어서 DNA를 단일 단리로 혈청으로부터 단리하였다. 데이터를 하기 표에 제시한다:
[표 37]
이 X 영역 녹아웃 모델에서 돌연변이된 표적 부위가 존재하는 0.7 mg/㎏ 내지 2 mg/㎏의 HBV RNAi 작용제 AD05070의 첨가는 2 mg/㎏의 HBV RNAi 작용제 AD04872의 활성을 감소시키지 않았다.
실시예 15. pHBV 마우스에서의 HBV RNAi 작용제
상기 실시예 2에 기재된 pHBV 마우스 모델을 사용하였다. 마우스를 하기 표 38에 기재된 것을 포함하는 다양한 그룹으로 나누고, 표 38에 기재된 투여 요법에 따라 200 μl의 단일 피하 주사액을 각각의 마우스에게 투여하였다:
[표 38]
각각의 마우스에게, 표 38에 기재된 바와 같은, 포스페이트 완충 식염수 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제(들)의 양을 함유하는 200 μl의 피하 투여, 또는 HBV RNAi 작용제가 없는 200 μl의 포스페이트 완충 식염수를 제공하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다. 각 그룹에서 3 마리의 마우스를 시험하였다 (n = 3).
혈청을 투여 전 -1 일째에, 이어서 8 일째, 15 일째, 22 일째, 29 일째, 36 일째, 43 일째, 및 50 일째에 수집하였다. 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표 39에 나타내며, 평균 HBsAg는 HBsAg의 정규화된 평균값을 반영한다:
[표 39]
RNAi 작용제 AD04776, AD05069, AD05070, AD05071, AD05073, 및 AD05074를, 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같은 HBV 게놈의 위치 1781-1799에 있는 X 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 갖도록 각각 설계하였다. RNAi 작용제 AD05075, AD05076, AD05077, 및 AD05078을, 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같은 HBV 게놈의 위치 1780-1798에 있는 X 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 갖도록 각각 설계하였다.
표 39는 단독으로 투여된 HBV RNAi 작용제 AD04776, AD05069, AD05070, AD05071, AD05073, 및 AD05074 또는 이들과 AD04872 (HBV 게놈의 위치 261-279에 있는 S 개방 판독 프레임에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥을 포함함)의 조합은 측정된 각각의 시점에 걸쳐 PBS 대조군과 비교하여 HBsAg의 유의한 녹다운을 제공하였음을 보여준다.
실시예 16. pHBV 마우스에서의 HBV RNAi 작용제: 용량 반응 및 조합 연구.
상기 실시예 2에 기재된 pHBV 마우스 모델을 사용하였다. 마우스를 하기 표 40에 기재된 바와 같이 다양한 그룹으로 나누고, 표 40에 기재된 투여 요법에 따라 200 μl의 단일 피하 주사액을 각각의 마우스에게 투여하였다:
[표 40]
각각의 마우스에게, 표 40에 기재된 바와 같은, 포스페이트 완충 식염수 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제(들)의 양을 함유하는 200 μl의 피하 투여, 또는 HBV RNAi 작용제가 없는 200 μl의 포스페이트 완충 식염수를 제공하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다. 각 그룹에서 6 마리의 마우스를 시험하였다 (n = 6).
혈청을 투여 전에, 이어서 8 일째, 15 일째, 22 일째, 및 29 일째에 수집하고, 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표 41에 나타낸다:
[표 41]
개별적으로 그리고 조합으로 둘 모두로 시험된 HBV RNAi 작용제는 모든 측정된 시점에 걸쳐 PBS 대조군과 비교하여 HBsAg의 감소를 보였다. HBsAg 발현은 22 일째에 재투여된 모든 그룹에서 추가로 감소되었다.
추가로, 혈청 B형 간염 e-항원(HBeAg) 수준을 또한 평가하였다. 8 일째 측정을 위하여, 각각의 그룹에서 모든 6 마리의 마우스에 대한 혈청 샘플을 풀링하고, 생성된 샘플을 단일 샘플로 하여 검정하였다. -1 일째, 15 일째, 22 일째, 및 29 일째 측정을 위하여, 각각의 그룹으로부터의 6 마리의 마우스를 각각의 그룹 내에서 쌍을 이루게 하고, 이들 각각의 혈청 샘플을 풀링하여, 각각의 그룹에 대해 3개의 하위 그룹을 형성하였다. 이어서, 각각의 그룹에 대한 3개의 서브그룹 각각에 대한 혈청 샘플을 검정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표 42에 나타낸다:
[표 42]
개별적으로 그리고 조합으로 둘 모두로 시험된 HBV RNAi 작용제는 모든 측정된 시점에 걸쳐 식염수 대조군과 비교하여 HBeAg의 감소를 보였다. HBeAg 발현은 22 일째에 재투여된 모든 그룹에서 추가로 감소되었다.
또한, 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라, 표 40의 각각의 그룹에 대해 -1 일째, 8 일째, 15 일째, 및 22 일째에 수집된 혈청 샘플로부터 혈청 HBV DNA 수준을 결정하였다. 마우스의 각 쌍으로부터의 혈청을 풀링하고, 이어서 각각의 혈청 풀로부터 DNA를 단일 단리로 단리하였다. 데이터를 하기 표에 제시한다:
[표 43]
개별적으로 그리고 조합으로 둘 모두로 시험된 HBV RNAi 작용제는 8 일째에 혈청 HBV DNA의 감소가 없는 그룹 11 및 12를 제외하고 모든 측정된 시점에 걸쳐 식염수 대조군과 비교하여 혈청 HBV DNA의 감소를 보였다.
실시예 17. pHBV 마우스에서의 HBV RNAi 작용제
상기 실시예 2에 기재된 pHBV 마우스 모델을 사용하였다. 마우스를 하기 표 44에 기재된 바와 같이 다양한 그룹으로 나누고, 표 44에 기재된 투여 요법에 따라 200 μl의 단일 피하 주사액을 각각의 마우스에게 투여하였다:
[표 44]
각각의 마우스에게, 표 44에 기재된 바와 같은, 포스페이트 완충 식염수 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제(들)의 양을 함유하는 200 μl의 피하 투여, 또는 HBV RNAi 작용제가 없는 200 μl의 포스페이트 완충 식염수를 제공하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다. 각 그룹에서 3 마리의 마우스를 시험하였다 (n = 3).
혈청을 투여 전에, 이어서 8 일째, 14 일째, 21 일째, 및 29 일째 및 36 일째에 수집하고, 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표 45에 나타낸다:
[표 45]
시험된 HBV RNAi 작용제 조합은 모든 측정된 시점에 걸쳐 식염수 대조군과 비교하여 HBsAg의 감소를 보였다. AD04872를 함유하는 조합은 AD04872 대신에 AD04585를 지닌 동등한 조합보다 큰 감소를 보였다.
추가로, 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 8 일째, 14 일째, 21 일째, 및 29 일째에 수집된 혈청 샘플에 대해 혈청 HBV DNA 수준을 결정하였다. 혈청 HBV DNA를 각 시점에서 각 동물로부터 단리하였다. 데이터를 하기 표 46에 제시한다:
[표 46]
시험된 HBV RNAi 작용제 조합은 모든 측정된 시점에 걸쳐 식염수 대조군과 비교하여 혈청 HBV DNA의 감소를 보였다. AD04872를 함유하는 조합은 AD04872 대신에 AD04585를 지닌 동등한 조합보다 큰 감소를 보였다. 이러한 더 큰 감소는 22 일째 및 29 일째에 관찰되었다.
실시예 18. HBV 감염된 인간화 마우스 모델에서의 HBV RNAi 작용제
이 연구를 위하여, C57BL/6 백그라운드 상의 수컷 FRG ® (유전자형 Fah -/-/ Rag2 -/-/ Il2rg -/-) 삼중 녹아웃 마우스 (Yecuris)에, 이들이 1 개월령 내지 2 개월령이었을 때 인간 간세포를 이식하였다. 인간 간세포가 대략 6 개월 동안 간을 다시 채우게 하였으며, 주기적인 NTBC 처리로 마우스 간세포의 성장을 방해하였다. 9 개월령째에, 마우스에 4 x 108 게놈/㎏ HBV 유전자형 C의 정맥내 접종을 제공하여, 인간 간세포를 감염시켰다. 2 내지 3 개월 후, 혈청 HBV DNA 수준은 인간 간세포가 최대로 감염되었음을 나타내는 평탄역(plateau)에 도달하였다 (마우스 간세포는 HBV에 의해 감염될 수 없음). HBV RNAi 작용제에 의한 치료 시작시 마우스는 1 세령이었으며, 이에 따라 이들의 수명의 마지막에 가까웠다.
처리 전 혈청 샘플을 -10 일째 및 -3 일째에 채취하였다. 1 일째에 시작하여, 물 중에 용해된 0.01 mg/㎏의 엔테카비어를 매일 경구 위관영양으로 각각의 마우스에 투여하여 HBV 복제를 저해하였다. 마우스를 안락사시킬 때까지 엔테카비어의 매일 투여를 계속하였다. 엔테카비어 투여는 만성 감염된 인간 환자에서 혈청 HBV DNA를 감소시키지만, HBsAg를 감소시키지는 않을 것으로 예상된다.
마우스를 하기 표 47에 기재된 것을 포함하는 다양한 그룹으로 나누었다:
[표 47]
바로 위의 표 47에 기재된 바와 같은 일정에 따라, 1 일째 및 29 일째에 (29 일째에 여전히 살아있는 경우), 포스페이트 완충 식염수 중에 제형화된 HBV RNAi 작용제(들)의 양을 함유하는, 체중 20 g당 100 μl의 피하 투여, 또는 HBV RNAi 작용제가 없는 동일한 부피의 포스페이트 완충 식염수를 각각의 마우스에 또한 제공하였다. 각각의 HBV RNAi 작용제는 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이 센스 가닥의 5'-말단부에 접합된 N-아세틸-갈락토사민 표적화 리간드를 포함하였다. 주사는 목과 어깨에 걸쳐 있는 느슨한 피부 내로 피부와 근육 사이에서 (즉, 피하 주사로) 수행하였다.
혈청을 8 일째, 15 일째, 22 일째, 29 일째, 36 일째, 및 40 일째에 수집하고, 혈청 B형 간염 표면 항원(HBsAg) 수준을 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 결정하였다. 실험으로부터의 데이터를 하기 표에 나타낸다:
[표 48]
추가로, 상기 실시예 2에 기재된 절차에 따라 -10 일째, -3 일째, 8 일째, 15 일째, 22 일째, 29 일째, 36 일째, 및 40 일째에 수집된 혈청 샘플로부터 혈청 HBV DNA 수준을 결정하였다. 데이터를 하기 표 49에 제시한다:
[표 49]
예상되는 바와 같이, 엔테카비어의 투여는 HBV RNAi 작용제의 부재 및 존재 하에 바이러스 복제를 감소시켰다.
다른 실시예
본 발명이 이의 상세한 설명과 함께 기재되었지만, 전술한 설명은 예시하고자 하는 것이고, 첨부된 청구범위의 범주에 의해 규정되는 본 발명의 범주를 제한하고자 하는 것이 아님이 이해되어야 한다. 다른 측면, 이점 및 변형이 하기 청구범위 내에 속한다.
SEQUENCE LISTING <110> ARROWHEAD PHARMACEUTICALS, INC. Zhen Li Rui Zhu Christine I. Wooddell Bruce D. Given Tao Pei David L. Lewis Lauren J. Almeida David B. Rozema Darren H. Wakefield <120> RNAi Agents for Hepatitis B Virus Infection <130> 30647-WO1 <150> 62/370,754 <151> 2016-08-04 <150> 62/534,733 <151> 2017-07-20 <150> 62/540,639 <151> 2017-08-03 <160> 334 <210> 1 <211> 3221 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Hepatitis B virus (subtype ADW2), genotype A, complete gene (AM282986.1) <400> 1 ttccactgcc ttccaccaag ctctgcagga tcccaaagtc aggggtctgt attttcctgc 60 tggtggctcc agttcaggaa cagtaaaccc tgctccgaat attgcctctc acatctcgtc 120 aatctccgcg aggactgggg accctgtgac gaatatggag aacatcacat caggattcct 180 aggacccctg ctcgtgttac aggcggggtt tttcttgttg acaagaatcc tcacaatacc 240 gcagagtcta gactcgtggt ggacttctct caattttcta gggggatcac ccgtgtgtct 300 tggccaaaat tcgcagtccc caacctccaa tcactcacca acctcctgtc ctccaatttg 360 tcctggttat cgctggatgt gtctgcggcg ttttatcata ttcctcttca tcctgctgct 420 atgcctcatc ttcttgttgg ttcttctgga ttatcaaggt atgttgcccg tttgtcctct 480 aattccagga acaacaacaa ccagtacggg accatgcaaa acctgcacga ctcctgctca 540 aggcaactct atgtttccct catgttgctg tacaaaacct tcggatggaa attgcacctg 600 tattcccatc ccatcgtctt gggctttcgc aaaataccta tgggagtggg cctcagtccg 660 tttctcttgg ctcagtttac tagtgccatt tgttcagtgg ttcgtagggc tttcccccac 720 tgtttggctt tcagctatat ggatgatgtg gtattggggg ccaagtctgt acagcatcgt 780 gagtcccttt ataccgctgt taccaatttt cttttgtctc tgggtataca tttaaaccct 840 aacaaaacaa aaagatgggg ttattcccta aacttcatgg gttacataat tggaagttgg 900 ggaacgttgc cacaggatca tattgtacaa aagatcaaac actgttttag aaaacttcct 960 gttaacaggc ctattgattg gaaagtatgt caaagaattg tgggtctttt gggctttgct 1020 gctccattta cacaatgtgg atatcctgcc ttaatgcctt tgtatgcctg tatacaagct 1080 aaacaggctt tcactttctc gccaacttac aaggcctttc taagtaaaca gtacatgaac 1140 ctttaccccg ttgctcggca acggcctggt ctgtgccaag tgtttgctga cgcaaccccc 1200 actggctggg gcttggccat aggccatcag cgcatgcgtg gaacctttgt ggctcctctg 1260 ccgatccata ctgcggaact cctagccgct tgttttgctc gcagccggtc tggggcaaag 1320 ctcatcggaa ctgacaattc tgtcgtcctc tcgcggaaat atacatcgtt tccatggctg 1380 ctaggttgta ctgccaactg gatccttcgc gggacgtcct ttgtttacgt cccgtcggcg 1440 ctgaatcccg cggacgaccc ctctcggggc cgcttgggac tctctcgtcc ccttctccgt 1500 ctgccgttcc agccgaccac ggggcgcacc tctctttacg cggtctcccc gtctgtgcct 1560 tctcatctgc cggtccgtgt gcacttcgct tcacctctgc acgttgcatg gagaccaccg 1620 tgaacgccca tcagatcctg cccaaggtct tacataagag gactcttgga ctcccagcaa 1680 tgtcaacgac cgaccttgag gcctacttca aagactgtgt gtttaaggac tgggaggagc 1740 tgggggagga gattaggtta aaggtctttg tattaggagg ctgtaggcat aaattggtct 1800 gcgcaccagc accatgcaac tttttcacct ctgcctaatc atctcttgta catgtcccac 1860 tgttcaagcc tccaagctgt gccttgggtg gctttggggc atggacattg acccttataa 1920 agaatttgga gctactgtgg agttactctc gtttttgcct tctgactttt ttccttccgt 1980 cagagatctc ctagacaccg cctcagctct gtatcgggaa gccttagagt ctcctgagca 2040 ttgctcacct caccatactg cactcaggca agcaattctc tgctgggggg aattgatgac 2100 tctagctacc tgggtgggta ataatttgga agatccagca tccagggatc tagtagtcaa 2160 ttatgttaat actaacatgg gtttaaagat caggcaacta ttgtggtttc atatatcttg 2220 ccttactttt ggaagagaga ctgtacttga atatttggtc tctttcggag tgtggattcg 2280 cactcctcca gcctatagac caccaaatgc ccctatctta tcaacacttc cggaaactac 2340 tgttgttaga cgacgggacc gaggcaggtc ccctagaaga agaactccct cgcctcgcag 2400 acgcagatct caatcgccgc gtcgcagaag atctcaatct cgggaatctc aatgttagta 2460 ttccttggac tcataaggtg ggaaacttta ctgggcttta ttcctctaca gtacctatct 2520 ttaatcctga atggcaaact ccttcctttc ctaagattca tttacaagag gacattatta 2580 ataggtgtca acaatttgtg ggccctctca ctgtaaatga aaagagaaga ttgaaattaa 2640 ttatgcctgc tagattctat cctacccaca ctaaatattt gcccttagac aaaggaatta 2700 aaccttatta tccagatcag gtagttaatc attacttcaa aaccagacat tatttacata 2760 ctctttggaa ggctggtatt ctatataaga gggaaaccac acgtagcgca tcattttgcg 2820 ggtcaccata ttcttgggaa caagagctac agcatgggag gttggtcatc gaaacctcgc 2880 aaaggcatgg ggacgaatct ttctgttccc aaccctctgg gattctttcc cgatcatcag 2940 ttggaccctg cattcggagc caactcaaac aatccagatt gggacttcaa ccccatcaag 3000 gaccactggc cagcagccaa ccaggtagga gtgggagcat tcgggccagg gttcacccct 3060 ccacacggcg gtgttttggg gtggagccct caggctcagg gcatattgac cacagtgtca 3120 acaattcctc ctcctgcctc caccaatcgg cagtcaggaa ggcagcctac tcccatctct 3180 ccacctctaa gagacagtca tcctcaggcc atgcagtgga a 3221 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV cDNA target sequence <400> 2 gtggtggact tctctcaat 19 <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV cDNA target sequence <400> 3 tggtggactt ctctcaatt 19 <210> 4 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV cDNA target sequence <400> 4 ggacttctct caattttct 19 <210> 5 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV cDNA target sequence <400> 5 gctgtaggca taaattggt 19 <210> 6 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV cDNA target sequence <400> 6 ctgtaggcat aaattggtc 19 <210> 7 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <400> 7 auugagagaa guccaccac 19 <210> 8 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <400> 8 uuugagagaa guccaccac 19 <210> 9 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 19 <223> n = any nucleotide <400> 9 auugagagaa guccaccan 19 <210> 10 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 19 <223> n = any nucleotide <400> 10 uuugagagaa guccaccan 19 <210> 11 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1, 19 <223> n = any nucleotide <400> 11 nuugagagaa guccaccan 19 <210> 12 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <400> 12 aauugagaga aguccacca 19 <210> 13 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <400> 13 uauugagaga aguccacca 19 <210> 14 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 19 <223> n = any nucleotide <400> 14 aauugagaga aguccaccn 19 <210> 15 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 19 <223> n = any nucleotide <400> 15 uauugagaga aguccaccn 19 <210> 16 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1, 19 <223> n = any nucleotide <400> 16 nauugagaga aguccaccn 19 <210> 17 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <400> 17 agaaaauuga gagaagucc 19 <210> 18 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <400> 18 ugaaaauuga gagaagucc 19 <210> 19 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 19 <223> n = any nucleotide <400> 19 agaaaauuga gagaagucn 19 <210> 20 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 19 <223> n = any nucleotide <400> 20 ugaaaauuga gagaagucn 19 <210> 21 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1, 19 <223> n = any nucleotide <400> 21 ngaaaauuga gagaagucn 19 <210> 22 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <400> 22 accaauuuau gccuacagc 19 <210> 23 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <400> 23 uccaauuuau gccuacagc 19 <210> 24 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 19 <223> n = any nucleotide <400> 24 accaauuuau gccuacagn 19 <210> 25 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 19 <223> n = any nucleotide <400> 25 uccaauuuau gccuacagn 19 <210> 26 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1,19 <223> n = any nucleotide <400> 26 nccaauuuau gccuacagn 19 <210> 27 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <400> 27 gaccaauuua ugccuacag 19 <210> 28 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <400> 28 aaccaauuua ugccuacag 19 <210> 29 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <400> 29 uaccaauuua ugccuacag 19 <210> 30 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 19 <223> n = any nucleotide <400> 30 gaccaauuua ugccuacan 19 <210> 31 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 19 <223> n = any nucleotide <400> 31 aaccaauuua ugccuacan 19 <210> 32 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 19 <223> n = any nucleotide <400> 32 uaccaauuua ugccuacan 19 <210> 33 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent antisense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1, 19 <223> n = any nucleotide <400> 33 naccaauuua ugccuacan 19 <210> 34 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <400> 34 gugguggacu ucucucaau 19 <210> 35 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <400> 35 gugguggacu ucucucaaa 19 <210> 36 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1 <223> n = any nucleotide <400> 36 nugguggacu ucucucaau 19 <210> 37 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1 <223> n = any nucleotide <400> 37 nugguggacu ucucucaaa 19 <210> 38 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1, 19 <223> n = any nucleotide <400> 38 nugguggacu ucucucaan 19 <210> 39 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <400> 39 ugguggacuu cucucaauu 19 <210> 40 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <400> 40 ugguggacuu cucucaaua 19 <210> 41 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1 <223> n = any nucleotide <400> 41 ngguggacuu cucucaauu 19 <210> 42 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1 <223> n = any nucleotide <400> 42 ngguggacuu cucucaaua 19 <210> 43 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1, 19 <223> n = any nucleotide <400> 43 ngguggacuu cucucaaun 19 <210> 44 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <400> 44 ggacuucucu caauuuucu 19 <210> 45 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <400> 45 ggacuucucu caauuuuca 19 <210> 46 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1 <223> n = any nucleotide <400> 46 ngacuucucu caauuuucu 19 <210> 47 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1 <223> n = any nucleotide <400> 47 ngacuucucu caauuuuca 19 <210> 48 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1, 19 <223> n = any nucleotide <400> 48 ngacuucucu caauuuucn 19 <210> 49 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <400> 49 gcuguaggca uaaauuggu 19 <210> 50 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <400> 50 gcuguaggca uaaauugga 19 <210> 51 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1 <223> n = any nucleotide <400> 51 ncuguaggca uaaauuggu 19 <210> 52 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1 <223> n = any nucleotide <400> 52 ncuguaggca uaaauugga 19 <210> 53 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1, 19 <223> n = any nucleotide <400> 53 ncuguaggca uaaauuggn 19 <210> 54 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <400> 54 cuguaggcau aaauugguc 19 <210> 55 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <400> 55 cuguaggcau aaauugguu 19 <210> 56 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <400> 56 cuguaggcau aaauuggua 19 <210> 57 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1 <223> n = any nucleotide <400> 57 nuguaggcau aaauugguc 19 <210> 58 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1 <223> n = any nucleotide <400> 58 nuguaggcau aaauugguu 19 <210> 59 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1 <223> n = any nucleotide <400> 59 nuguaggcau aaauuggua 19 <210> 60 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi agent sense strand core stretch sequence <220> <221> modified_base <222> 1, 19 <223> n = any nucleotide <400> 60 nuguaggcau aaauuggun 19 <210> 61 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 61 uaccaauuua ugccuacagg ccuuau 26 <210> 62 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 62 uaccaauuua ugccuacagg ccu 23 <210> 63 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 63 uaccaauuua ugccuacagg ccu 23 <210> 64 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 64 uaccaauuua ugccuacagg c 21 <210> 65 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 65 ugugaagcga agugcacacu u 21 <210> 66 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 66 uaccaauuua ugccuacagc cuccgc 26 <210> 67 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 67 uaccaauuua ugccuacagc cuccgc 26 <210> 68 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 68 uaccaauuua ugccuacagu u 21 <210> 69 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 69 uaccaauuua ugccuacagg c 21 <210> 70 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 70 uaccaauuua ugccuacagg c 21 <210> 71 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 71 uaccaauuua ugccuacagu u 21 <210> 72 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 72 auugagagaa guccaccacg a 21 <210> 73 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 73 auugagagaa guccaccacg a 21 <210> 74 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 74 auugagagaa guccaccacu u 21 <210> 75 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 75 uuugagagaa guccaccacg a 21 <210> 76 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 76 aauugagaga aguccaccac g 21 <210> 77 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 77 aauugagaga aguccaccac g 21 <210> 78 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 78 aauugagaga aguccaccau u 21 <210> 79 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 79 uauugagaga aguccaccac g 21 <210> 80 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 80 uaccaauuua ugccuacagg u 21 <210> 81 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 81 uaccaauuua ugccuacagu u 21 <210> 82 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 82 uaccaauuua ugccuacagc c 21 <210> 83 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 83 uaccaauuua ugccuacagc cuu 23 <210> 84 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 84 uaccaauuua ugccuacagc cuc 23 <210> 85 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 85 uaccaauuua ugccuacagc c 21 <210> 86 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 86 uaccaauuua ugccuacagc cuu 23 <210> 87 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 87 uaccaauuua ugccuacagc cuc 23 <210> 88 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 88 auugagagaa guccaccacu u 21 <210> 89 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 89 uuugagagaa guccaccacu u 21 <210> 90 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 90 auugagagaa guccaccacg guu 23 <210> 91 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 91 auugagagaa guccaccacg guu 23 <210> 92 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 92 auugagagaa guccaccacg agu 23 <210> 93 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 93 uauugagaga aguccaccac g 21 <210> 94 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 94 uauugagaga aguccaccac g 21 <210> 95 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 95 uauugagaga aguccaccac guu 23 <210> 96 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 96 uauugagaga aguccaccac gag 23 <210> 97 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 97 uauugagaga aguccaccac gag 23 <210> 98 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 98 uauugagaga aguccaccac ga 22 <210> 99 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 99 uauugagaga aguccaccac ga 22 <210> 100 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 100 agaaaauuga gagaagucca c 21 <210> 101 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 101 uaccaauuua ugccuacagu u 21 <210> 102 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 102 uaccaauuua ugccuacagc c 21 <210> 103 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 103 uaccaauuua ugccuacagc uu 22 <210> 104 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 104 uaccaauuua ugccuacagc cu 22 <210> 105 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 105 uaccaauuua ugccuacagc cuu 23 <210> 106 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 106 uaccaauuua ugccuacagc cuc 23 <210> 107 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 107 uaccaauuua ugccuacagu u 21 <210> 108 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 108 uauugagaga aguccaccac g 21 <210> 109 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 109 uauugagaga aguccaccau u 21 <210> 110 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 110 uauugagaga aguccaccac g 21 <210> 111 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 111 uauugagaga aguccaccac uu 22 <210> 112 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 112 uauugagaga aguccaccac ga 22 <210> 113 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 113 uauugagaga aguccaccac g 21 <210> 114 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 114 uuugagagaa guccaccacu u 21 <210> 115 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 115 uuugagagaa guccaccacg a 21 <210> 116 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 116 uuugagagaa guccaccacg uu 22 <210> 117 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 117 uuugagagaa guccaccacg ag 22 <210> 118 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 118 uuugagagaa guccaccacu u 21 <210> 119 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 119 uauugagaga aguccaccac uu 22 <210> 120 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 120 uauugagaga aguccaccac uu 22 <210> 121 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 121 uauugagaga aguccaccac guu 23 <210> 122 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 122 uauugagaga aguccaccac uu 22 <210> 123 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 123 uauugagaga aguccaccac gag 23 <210> 124 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 124 uauugagaga aguccaccac uu 22 <210> 125 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 125 agaaaauuga gagaaguccu u 21 <210> 126 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 126 agaaaauuga gagaagucca c 21 <210> 127 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 127 agaaaauuga gagaagucca cuu 23 <210> 128 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 128 agaaaauuga gagaagucca cc 22 <210> 129 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 129 ugaaaauuga gagaaguccu u 21 <210> 130 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 130 ugaaaauuga gagaagucca c 21 <210> 131 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 131 accaauuuau gccuacagcu u 21 <210> 132 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 132 accaauuuau gccuacagcc uu 22 <210> 133 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 133 accaauuuau gccuacagcc uc 22 <210> 134 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 134 uccaauuuau gccuacagcu u 21 <210> 135 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 135 uccaauuuau gccuacagcc uu 22 <210> 136 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 136 uaccaauuua ugccuacagc c 21 <210> 137 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 137 uaccaauuua ugccuacagc c 21 <210> 138 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 138 uaccaauuua ugccuacagc c 21 <210> 139 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 139 uaccaauuua ugccuacagc u 21 <210> 140 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 140 uaccaauuua ugccuacagc g 21 <210> 141 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 141 aaccaauuua ugccuacagc c 21 <210> 142 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 142 uaccaauuua ugccuacagu u 21 <210> 143 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 143 uaccaauuua ugccuacagc c 21 <210> 144 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 144 accaauuuau gccuacagcc u 21 <210> 145 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 145 uccaauuuau gccuacagcc u 21 <210> 146 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 146 accaauuuau gccuacagcc g 21 <210> 147 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 147 uccaauuuau gccuacagcc g 21 <210> 148 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand modified sequence <400> 148 uaccaauuua ugccuacagg g 21 <210> 149 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 149 uaccaauuua ugccuacagg ccuuau 26 <210> 150 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 150 uaccaauuua ugccuacagg ccu 23 <210> 151 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 151 uaccaauuua ugccuacagg c 21 <210> 152 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 152 ugugaagcga agugcacacu u 21 <210> 153 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 153 uaccaauuua ugccuacagc cuccgc 26 <210> 154 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 154 uaccaauuua ugccuacagu u 21 <210> 155 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 155 auugagagaa guccaccacg a 21 <210> 156 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 156 auugagagaa guccaccacu u 21 <210> 157 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 157 uuugagagaa guccaccacg a 21 <210> 158 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 158 aauugagaga aguccaccac g 21 <210> 159 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 159 aauugagaga aguccaccau u 21 <210> 160 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 160 uauugagaga aguccaccac g 21 <210> 161 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 161 uaccaauuua ugccuacagg u 21 <210> 162 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 162 uaccaauuua ugccuacagc c 21 <210> 163 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 163 uaccaauuua ugccuacagc cuu 23 <210> 164 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 164 uaccaauuua ugccuacagc cuc 23 <210> 165 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 165 uuugagagaa guccaccacu u 21 <210> 166 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 166 auugagagaa guccaccacg guu 23 <210> 167 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 167 auugagagaa guccaccacg agu 23 <210> 168 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 168 uauugagaga aguccaccac guu 23 <210> 169 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 169 uauugagaga aguccaccac gag 23 <210> 170 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 170 uauugagaga aguccaccac ga 22 <210> 171 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 171 agaaaauuga gagaagucca c 21 <210> 172 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 172 uaccaauuua ugccuacagc uu 22 <210> 173 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 173 uaccaauuua ugccuacagc cu 22 <210> 174 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 174 uauugagaga aguccaccau u 21 <210> 175 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 175 uauugagaga aguccaccac uu 22 <210> 176 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 176 uuugagagaa guccaccacg uu 22 <210> 177 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 177 uuugagagaa guccaccacg ag 22 <210> 178 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 178 agaaaauuga gagaaguccu u 21 <210> 179 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 179 agaaaauuga gagaagucca cuu 23 <210> 180 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 180 agaaaauuga gagaagucca cc 22 <210> 181 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 181 ugaaaauuga gagaagucca c 21 <210> 182 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 182 accaauuuau gccuacagcu u 21 <210> 183 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 183 accaauuuau gccuacagcc uu 22 <210> 184 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 184 accaauuuau gccuacagcc uc 22 <210> 185 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 185 uccaauuuau gccuacagcu u 21 <210> 186 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 186 uccaauuuau gccuacagcc uu 22 <210> 187 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 187 uaccaauuua ugccuacagc u 21 <210> 188 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 188 uaccaauuua ugccuacagc g 21 <210> 189 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 189 aaccaauuua ugccuacagc c 21 <210> 190 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 190 accaauuuau gccuacagcc u 21 <210> 191 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 191 uccaauuuau gccuacagcc u 21 <210> 192 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 192 accaauuuau gccuacagcc g 21 <210> 193 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 193 uccaauuuau gccuacagcc g 21 <210> 194 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent antisense strand unmodified sequence <400> 194 uaccaauuua ugccuacagg g 21 <210> 195 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 195 uugccuguag gcauaaauug guaut 25 <210> 196 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 196 uauaugccug uaggcauaaa uuggua 26 <210> 197 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 197 gcggaggcug uaggcauaaa uuggta 26 <210> 198 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 198 cuguaggcau aaauugguau u 21 <210> 199 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 199 gccuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 200 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 200 gccuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 201 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 201 gccuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 202 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 202 gccuguaggc auaaauuggt a 21 <210> 203 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 203 aacuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 204 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 204 ucguggugga cuucucucaa u 21 <210> 205 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 205 aaguggugga cuucucucaa u 21 <210> 206 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 206 ucguggugga cuucucucaa t 21 <210> 207 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 207 cgugguggac uucucucaau u 21 <210> 208 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 208 aaugguggac uucucucaau u 21 <210> 209 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 209 cgugguggac uucucucaat t 21 <210> 210 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 210 ggacuucucu caauuuucua a 21 <210> 211 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 211 cgugguggac uucucucaau a 21 <210> 212 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 212 ucguggugga cuucucucaa a 21 <210> 213 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 213 accuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 214 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 214 cuguaggcau aaauuggua 19 <210> 215 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 215 cuguaggcau aaauuggua 19 <210> 216 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 216 cuguaggcau aaauuggua 19 <210> 217 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 217 acuguaggca uaaauuggua 20 <210> 218 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 218 ggcuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 219 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 219 aaguggugga cuucucucaa u 21 <210> 220 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 220 aaguggugga cuucucucaa a 21 <210> 221 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 221 ccguggugga cuucucucaa u 21 <210> 222 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 222 ccguggugga cuucucucaa u 21 <210> 223 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 223 cucguggugg acuucucuca au 22 <210> 224 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 224 gugguggacu ucucucaau 19 <210> 225 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 225 gugguggacu ucucucaauu u 21 <210> 226 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 226 ucguggugga cuucucucaa uu 22 <210> 227 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 227 ugguggacuu cucucaauu 19 <210> 228 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 228 ugguggacuu cucucaauu 19 <210> 229 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 229 guggacuucu cucaauuuuc u 21 <210> 230 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 230 cuguaggcau aaauugguau u 21 <210> 231 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 231 gcuguaggca uaaauuggua uu 22 <210> 232 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 232 ggcuguaggc auaaauuggu auu 23 <210> 233 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 233 aacuguaggc auaaauuggu auu 23 <210> 234 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 234 ugguggacuu cucucaauau u 21 <210> 235 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 235 gugguggacu ucucucaaua uu 22 <210> 236 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 236 aaugguggac uucucucaau auu 23 <210> 237 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 237 cgugguggac uucucucaau auu 23 <210> 238 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 238 cgugguggac uucucucaau a 21 <210> 239 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 239 aaguggugga cuucucucaa u 21 <210> 240 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 240 gugguggacu ucucucaaau u 21 <210> 241 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 241 cgugguggac uucucucaaa uu 22 <210> 242 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 242 aaguggugga cuucucucaa auu 23 <210> 243 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 243 ucguggugga cuucucucaa auu 23 <210> 244 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 244 gugguggacu ucucucaaua uu 22 <210> 245 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 245 cgugguggac uucucucaau auu 23 <210> 246 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 246 cucguggugg acuucucuca aua 23 <210> 247 <211> 25 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 247 cucguggugg acuucucuca auauu 25 <210> 248 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 248 ggcuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 249 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 249 gaggcuguag gcauaaauug gua 23 <210> 250 <211> 25 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 250 gaggcuguag gcauaaauug guauu 25 <210> 251 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 251 ggacuucucu caauuuucu 19 <210> 252 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 252 guggacuucu cucaauuuuc u 21 <210> 253 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 253 gguggacuuc ucucaauuuu cu 22 <210> 254 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 254 ggacuucucu caauuuuca 19 <210> 255 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 255 ggacuucucu caauuuuca 19 <210> 256 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 256 gcuguaggca uaaauuggu 19 <210> 257 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 257 ggcuguaggc auaaauuggu 20 <210> 258 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 258 gaggcuguag gcauaaauug gu 22 <210> 259 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 259 gcuguaggca uaaauugga 19 <210> 260 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 260 ggcuguaggc auaaauugga 20 <210> 261 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 261 agcuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 262 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 262 cgcuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 263 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 263 ggcuguaggc auaaauuggu u 21 <210> 264 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 264 cuguaggcau aaauugguau u 21 <210> 265 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 265 cuguaggcau aaauugguau u 21 <210> 266 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 266 aggcuguagg cauaaauugg u 21 <210> 267 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 267 aggcuguagg cauaaauugg a 21 <210> 268 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 268 cggcuguagg cauaaauugg u 21 <210> 269 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 269 cggcuguagg cauaaauugg a 21 <210> 270 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 270 cccuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 271 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 271 cgcuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 272 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 272 cccuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 273 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 273 guggacuucu cucaauuuuc u 21 <210> 274 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand modified sequence <400> 274 cgcuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 275 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 275 uugccuguag gcauaaauug guaut 25 <210> 276 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 276 uauaugccug uaggcauaaa uuggua 26 <210> 277 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 277 gcggaggcug uaggcauaaa uuggta 26 <210> 278 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 278 cuguaggcau aaauugguau u 21 <210> 279 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 279 gccuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 280 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 280 gccuguaggc auaaauuggt a 21 <210> 281 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 281 aacuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 282 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 282 ucguggugga cuucucucaa u 21 <210> 283 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 283 aaguggugga cuucucucaa u 21 <210> 284 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 284 ucguggugga cuucucucaa t 21 <210> 285 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 285 cgugguggac uucucucaau u 21 <210> 286 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 286 aaugguggac uucucucaau u 21 <210> 287 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 287 cgugguggac uucucucaat t 21 <210> 288 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 288 ggacuucucu caauuuucua a 21 <210> 289 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 289 cgugguggac uucucucaau a 21 <210> 290 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 290 ucguggugga cuucucucaa a 21 <210> 291 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 291 accuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 292 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 292 cuguaggcau aaauuggua 19 <210> 293 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 293 acuguaggca uaaauuggua 20 <210> 294 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 294 ggcuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 295 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 295 aaguggugga cuucucucaa a 21 <210> 296 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 296 ccguggugga cuucucucaa u 21 <210> 297 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 297 cucguggugg acuucucuca au 22 <210> 298 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 298 gugguggacu ucucucaau 19 <210> 299 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 299 gugguggacu ucucucaauu u 21 <210> 300 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 300 ucguggugga cuucucucaa uu 22 <210> 301 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 301 ugguggacuu cucucaauu 19 <210> 302 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 302 guggacuucu cucaauuuuc u 21 <210> 303 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 303 gcuguaggca uaaauuggua uu 22 <210> 304 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 304 ggcuguaggc auaaauuggu auu 23 <210> 305 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 305 aacuguaggc auaaauuggu auu 23 <210> 306 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 306 ugguggacuu cucucaauau u 21 <210> 307 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 307 gugguggacu ucucucaaua uu 22 <210> 308 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 308 aaugguggac uucucucaau auu 23 <210> 309 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 309 cgugguggac uucucucaau auu 23 <210> 310 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 310 gugguggacu ucucucaaau u 21 <210> 311 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 311 cgugguggac uucucucaaa uu 22 <210> 312 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 312 aaguggugga cuucucucaa auu 23 <210> 313 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 313 ucguggugga cuucucucaa auu 23 <210> 314 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 314 cucguggugg acuucucuca aua 23 <210> 315 <211> 25 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 315 cucguggugg acuucucuca auauu 25 <210> 316 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 316 gaggcuguag gcauaaauug gua 23 <210> 317 <211> 25 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 317 gaggcuguag gcauaaauug guauu 25 <210> 318 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 318 ggacuucucu caauuuucu 19 <210> 319 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 319 gguggacuuc ucucaauuuu cu 22 <210> 320 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 320 ggacuucucu caauuuuca 19 <210> 321 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 321 guggacuucu cucaauuuuc a 21 <210> 322 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 322 gcuguaggca uaaauuggu 19 <210> 323 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 323 ggcuguaggc auaaauuggu 20 <210> 324 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 324 gaggcuguag gcauaaauug gu 22 <210> 325 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 325 gcuguaggca uaaauugga 19 <210> 326 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 326 ggcuguaggc auaaauugga 20 <210> 327 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 327 agcuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 328 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 328 cgcuguaggc auaaauuggu a 21 <210> 329 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 329 ggcuguaggc auaaauuggu u 21 <210> 330 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 330 aggcuguagg cauaaauugg u 21 <210> 331 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 331 aggcuguagg cauaaauugg a 21 <210> 332 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 332 cggcuguagg cauaaauugg u 21 <210> 333 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 333 cggcuguagg cauaaauugg a 21 <210> 334 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> HBV RNAi Agent sense strand unmodified sequence <400> 334 cccuguaggc auaaauuggu a 21

Claims (25)

  1. 제1 RNAi 작용제 및 제2 RNAi 작용제를 포함하는 조성물로서,
    여기서 제1 RNAi 작용제는 구조 (NAG37)s-(invAb)sguggacuuCfUfCfucaauuuucus(invAb) (서열번호 252)를 가지는 NAG37s의 5' 말단에서 연결되는 센스 가닥 및 구조 asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcasc (서열번호 126)를 가지는 안티센스 가닥을 포함하고,
    제2 RNAi 작용제는 구조 (NAG37)s-(invAb)scgcuguagGfCfAfuaaauugguas(invAb) (서열번호 262)를 가지는 NAG37s의 5' 말단에서 연결되는 센스 가닥 및 구조 sAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsg (서열번호 140)를 가지는 안티센스 가닥을 포함하고,
    여기서 (NAG37)s는 하기 구조를 가지고
    ;
    여기서
    NAG는 N-아세틸-갈락토사민이고
    a, g, c 및 u는 2'-O-메틸(2'-OMe) 변형된 뉴클레오티드이고;
    Af, Cf, Gf, 및 Uf는 2'-플루오로 변형된 뉴클레오티드이고;
    s는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합이고;
    (invAb)는 역전된 (3'-3' 연결된) 무염기성 뉴클레오티드이고;
    여기서 제1 RNAi 작용제 대 제2 RNAi 작용제의 비율은 5:1 내지 1:2의 범위인 것인, 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 제1 RNAi 작용제 및/또는 제2 RNAi 작용제가 염 형태인 것인, 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 제1 RNAi 작용제 및/또는 제2 RNAi 작용제가 나트륨 염 형태인 것인, 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 제1 RNAi 작용제가 하기 구조를 가지고;
    ,
    ,
    , 또는
    ;
    제2 RNAi 작용제가 하기 구조를 가지는 것인, 조성물:
    ,
    ,
    , 또는
    .
  5. 제1항의 RNAi 작용제를 포함하는 조성물로서, 약제학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 것인, 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 피하 주사를 위해 제형화된 것인, 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 멸균 주사 용액인 것인, 조성물.
  8. 제5항에 있어서, 멸균 주사 용액의 제조를 위한 멸균 분말인 것인, 조성물.
  9. 제7항에 있어서, 사전 충전된 주사기 또는 바이알에 포장되는 것인, 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 RNAi 작용제 대 제2 RNAi 작용제의 비율이 2:1인 것인, 조성물.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 만성 HBV 감염의 치료에 사용하기 위한, 조성물.
  12. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 조성물, 및 만성 HBV 감염의 치료에 사용되는 추가의 치료제를 포함하고, 여기서 상기 조성물 및 추가의 치료제가 별도로 투여되는 것인, 조성물 및 추가의 치료제.
  13. 제12항에 있어서, 추가의 치료제가 뉴클레오시드 억제제 또는 뉴클레오티드 억제제인 것인, 조성물 및 추가의 치료제.
  14. 제10항에 있어서, 만성 HBV 감염의 치료에 사용하기 위한, 조성물.
  15. 제10항에 따른 조성물, 및 만성 HBV 감염의 치료에 사용되는 추가의 치료제로서, 여기서 상기 조성물 및 추가의 치료제가 별도로 투여되는 것인, 조성물 및 추가의 치료제.
  16. 제15항에 있어서, 추가의 치료제가 뉴클레오시드 억제제 또는 뉴클레오티드 억제제인 것인, 조성물 및 추가의 치료제.
  17. 제4항의 RNAi 작용제를 포함하는 조성물로서, 약제학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 것인, 조성물.
  18. 제17항에 있어서, 피하 주사를 위해 제형화된 것인, 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 멸균 주사 용액인 것인, 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 멸균 주사 용액의 제조를 위한 멸균 분말인 것인, 조성물.
  21. 제19항에 있어서, 사전 충전된 주사기 또는 바이알에 포장되는 것인, 조성물.
  22. 제17항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 RNAi 작용제 대 제2 RNAi 작용제의 비율이 2:1인 것인, 조성물.
  23. 제22항에 있어서, 만성 HBV 감염의 치료에 사용하기 위한, 조성물.
  24. 제22항의 조성물 및 만성 HBV 감염의 치료에 사용되는 추가의 치료제를 포함하고, 여기서 상기 조성물 및 추가의 치료제가 별도로 투여되는 것인, 조성물 및 추가의 치료제.
  25. 제24항에 있어서, 추가의 치료제가 뉴클레오시드 억제제 또는 뉴클레오티드 억제제인 것인, 조성물 및 추가의 치료제.
KR1020247009034A 2016-08-04 2017-08-04 B형 간염 바이러스 감염에 대한 RNAi 작용제 KR20240039232A (ko)

Applications Claiming Priority (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662370754P 2016-08-04 2016-08-04
US62/370,754 2016-08-04
US201762534733P 2017-07-20 2017-07-20
US62/534,733 2017-07-20
US201762540639P 2017-08-03 2017-08-03
US62/540,639 2017-08-03
PCT/US2017/045446 WO2018027106A2 (en) 2016-08-04 2017-08-04 RNAi AGENTS FOR HEPATITIS B VIRUS INFECTION
KR1020237018497A KR102650107B1 (ko) 2016-08-04 2017-08-04 B형 간염 바이러스 감염에 대한 RNAi 작용제

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237018497A Division KR102650107B1 (ko) 2016-08-04 2017-08-04 B형 간염 바이러스 감염에 대한 RNAi 작용제

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20240039232A true KR20240039232A (ko) 2024-03-26

Family

ID=61073185

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237018497A KR102650107B1 (ko) 2016-08-04 2017-08-04 B형 간염 바이러스 감염에 대한 RNAi 작용제
KR1020237005107A KR102540359B1 (ko) 2016-08-04 2017-08-04 B형 간염 바이러스 감염에 대한 RNAi 작용제
KR1020197006273A KR102500675B1 (ko) 2016-08-04 2017-08-04 B형 간염 바이러스 감염에 대한 RNAi 작용제
KR1020247009034A KR20240039232A (ko) 2016-08-04 2017-08-04 B형 간염 바이러스 감염에 대한 RNAi 작용제

Family Applications Before (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237018497A KR102650107B1 (ko) 2016-08-04 2017-08-04 B형 간염 바이러스 감염에 대한 RNAi 작용제
KR1020237005107A KR102540359B1 (ko) 2016-08-04 2017-08-04 B형 간염 바이러스 감염에 대한 RNAi 작용제
KR1020197006273A KR102500675B1 (ko) 2016-08-04 2017-08-04 B형 간염 바이러스 감염에 대한 RNAi 작용제

Country Status (22)

Country Link
US (5) US10780108B2 (ko)
EP (2) EP4364808A2 (ko)
JP (3) JP7237816B2 (ko)
KR (4) KR102650107B1 (ko)
CN (2) CN109843902B (ko)
AU (2) AU2017306692B2 (ko)
BR (1) BR112019002117A2 (ko)
CA (2) CA3032945A1 (ko)
CL (4) CL2019000278A1 (ko)
CO (1) CO2019002017A2 (ko)
CR (3) CR20220468A (ko)
EC (1) ECSP19015395A (ko)
IL (2) IL305507A (ko)
JO (2) JOP20170161A1 (ko)
MA (1) MA45863A (ko)
MX (3) MX2019001493A (ko)
PE (1) PE20190567A1 (ko)
PH (1) PH12019500245A1 (ko)
SG (2) SG10201913585SA (ko)
TW (1) TW202334420A (ko)
UY (1) UY37353A (ko)
WO (1) WO2018027106A2 (ko)

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8809293B2 (en) 2011-06-30 2014-08-19 Arrowhead Madison Inc. Compositions and methods for inhibiting gene expression of hepatitis B virus
CN115957337A (zh) 2015-08-07 2023-04-14 箭头药业股份有限公司 乙型肝炎病毒感染的RNAi疗法
JOP20170161A1 (ar) 2016-08-04 2019-01-30 Arrowhead Pharmaceuticals Inc عوامل RNAi للعدوى بفيروس التهاب الكبد ب
CA3039618A1 (en) 2016-11-01 2018-05-11 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Alpha-v beta-6 integrin ligands and uses thereof
JP7155239B2 (ja) 2017-04-05 2022-10-18 サイレンス・セラピューティクス・ゲーエムベーハー 産物及び組成物
US11324820B2 (en) 2017-04-18 2022-05-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for the treatment of subjects having a hepatitis b virus (HBV) infection
BR112020007476A2 (pt) 2017-10-20 2020-10-27 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. métodos para tratamento da infecção por hepatite b
JP7445594B2 (ja) 2017-11-01 2024-03-07 アローヘッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド インテグリンリガンドおよびその使用
JP7273417B2 (ja) 2017-12-01 2023-05-15 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド 核酸、当該核酸を含む組成物および複合体ならびに調製方法と使用
KR20200091414A (ko) 2017-12-01 2020-07-30 쑤저우 리보 라이프 사이언스 컴퍼니, 리미티드 이중-가닥 올리고뉴클레오티드, 조성물 및 이중-가닥 올리고뉴클레오티드를 포함하는 접합체, 그의 제조 방법 및 그의 용도
JP7365052B2 (ja) 2017-12-01 2023-10-19 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド 核酸、当該核酸を含む組成物及び複合体ならびに調製方法と使用
EP3719126A4 (en) 2017-12-01 2021-10-20 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. NUCLEIC ACID, COMPOSITION AND CONJUGATE CONTAINING NUCLEIC ACID, ASSOCIATED PREPARATION PROCESS AND USE
US11021692B2 (en) 2017-12-19 2021-06-01 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Hepatitis B virus (HBV) vaccines and uses thereof
KR102617947B1 (ko) 2017-12-29 2023-12-27 쑤저우 리보 라이프 사이언스 컴퍼니, 리미티드 접합체와 제조 및 그 용도
JP2021533767A (ja) 2018-08-13 2021-12-09 アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）ｄｓＲＮＡ物質組成物およびその使用方法
JP2021533800A (ja) 2018-08-21 2021-12-09 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッドSuzhou Ribo Life Science Co., Ltd. 核酸、当該核酸を含む薬物組成物及び複合体ならびにその使用
EP3862024A4 (en) 2018-09-30 2022-08-17 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. SHORT INTERFERENT RNA CONJUGATE, METHOD FOR PREPARATION AND USE THEREOF
EP4285929A3 (en) * 2018-12-20 2024-03-06 Humabs Biomed SA Combination hbv therapy
TW202045723A (zh) * 2019-02-07 2020-12-16 美商艾羅海德製藥公司 用於Ｂ型肝炎病毒感染之ＲＮＡｉ劑
WO2020214974A1 (en) * 2019-04-18 2020-10-22 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treating hepatitis b virus infection
TW202103698A (zh) * 2019-04-18 2021-02-01 美商健生醫藥公司 用於治療b型肝炎病毒感染之組合療法
AU2020297008A1 (en) 2019-06-18 2022-02-17 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Combination of hepatitis B virus (HBV) vaccines and HBV-targeting RNAi
JP2022536945A (ja) 2019-06-18 2022-08-22 ヤンセン・サイエンシズ・アイルランド・アンリミテッド・カンパニー Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）ワクチンおよびＨＢＶを標的化するＲＮＡｉの組合せ
CN110218728A (zh) * 2019-06-28 2019-09-10 厦门甘宝利生物医药有限公司 一种新化合物及其应用
CN115702006A (zh) * 2020-06-10 2023-02-14 南京明德新药研发有限公司 缀合基团及其缀合物
CA3185614A1 (en) * 2020-06-22 2021-12-30 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treatment of hepatitis d virus infection
TW202227135A (zh) 2020-09-11 2022-07-16 美商愛羅海德製藥公司 用於遞送治療劑之脂質結合物
TW202227102A (zh) 2020-09-22 2022-07-16 瑞典商阿斯特捷利康公司 治療脂肪肝病之方法
WO2022078479A1 (en) * 2020-10-16 2022-04-21 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treating hepatitis b virus infection
WO2022133230A1 (en) * 2020-12-18 2022-06-23 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treating hepatitis b virus infection
US20240124879A1 (en) * 2020-12-18 2024-04-18 Olix Pharmaceuticals, Inc. Rnai agent for inhibiting hbv expression and use thereof
WO2022152869A1 (en) * 2021-01-15 2022-07-21 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Use of oligonucleotides for individuals with hepatic impairment
EP4352229A1 (en) * 2021-05-28 2024-04-17 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Rnai agents for inhibiting expression of mucin 5ac (muc5ac), compositions thereof, and methods of use
WO2023233290A1 (en) 2022-05-31 2023-12-07 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Rnai agents targeting pd-l1
WO2023246750A1 (zh) * 2022-06-21 2023-12-28 正大天晴药业集团股份有限公司 用于抑制乙型肝炎病毒的双链核糖核酸
WO2024015796A1 (en) * 2022-07-11 2024-01-18 Sanegene Bio Usa Inc. Optimized 2'- modified ribose derivatives and methods of use

Family Cites Families (162)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
ATE113059T1 (de) 1987-06-24 1994-11-15 Florey Howard Inst Nukleosid-derivate.
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5328470A (en) 1989-03-31 1994-07-12 The Regents Of The University Of Michigan Treatment of diseases by site-specific instillation of cells or site-specific transformation of cells and kits therefor
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
US5264562A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs with novel linkages
EP0942000B1 (en) 1989-10-24 2004-06-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-Modified oligonucleotides
ATE157012T1 (de) 1989-11-03 1997-09-15 Univ Vanderbilt Verfahren zur in vivo-verabreichung von funktionsfähigen fremden genen
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
US5578718A (en) 1990-01-11 1996-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Thiol-derivatized nucleosides
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5212295A (en) 1990-01-11 1993-05-18 Isis Pharmaceuticals Monomers for preparation of oligonucleotides having chiral phosphorus linkages
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US5506351A (en) 1992-07-23 1996-04-09 Isis Pharmaceuticals Process for the preparation of 2'-O-alkyl guanosine and related compounds
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5218105A (en) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US6262241B1 (en) 1990-08-13 2001-07-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compound for detecting and modulating RNA activity and gene expression
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
EP0724447B1 (en) 1991-10-24 2003-05-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Derivatized oligonucleotides having improved uptake
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
US20030206887A1 (en) * 1992-05-14 2003-11-06 David Morrissey RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2002081494A1 (en) 2001-03-26 2002-10-17 Sirna Therapeutics, Inc. Oligonucleotide mediated inhibition of hepatitis b virus and hepatitis c virus replication
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
NL9201440A (nl) 1992-08-11 1994-03-01 Univ Leiden Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing.
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
WO1994022891A1 (en) 1993-03-31 1994-10-13 Sterling Winthrop Inc. Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages
US5571902A (en) 1993-07-29 1996-11-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of oligonucleotides
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5554746A (en) 1994-05-16 1996-09-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Lactam nucleic acids
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US6166197A (en) 1995-03-06 2000-12-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds having pyrimidine nucleotide (S) with 2'and 5 substitutions
US5856459A (en) 1995-06-06 1999-01-05 Hybridon, Inc. Oligonucleotides specific for hepatitis B virus
US5985662A (en) 1995-07-13 1999-11-16 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense inhibition of hepatitis B virus replication
US6127533A (en) 1997-02-14 2000-10-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-aminooxy-modified oligonucleotides
US6172209B1 (en) 1997-02-14 2001-01-09 Isis Pharmaceuticals Inc. Aminooxy-modified oligonucleotides and methods for making same
US6271358B1 (en) 1998-07-27 2001-08-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. RNA targeted 2′-modified oligonucleotides that are conformationally preorganized
CA2346155A1 (en) 1998-10-09 2000-04-20 Ingene, Inc. Enzymatic synthesis of ssdna
US5977341A (en) 1998-11-20 1999-11-02 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of inhibitor-kappa B kinase-beta expression
WO2000053722A2 (en) 1999-03-10 2000-09-14 Phogen Limited Delivery of nucleic acids and proteins to cells
WO2000075164A1 (en) 1999-06-07 2000-12-14 Mirus Corporation COMPOSITIONS AND METHODS FOR DRUG DELIVERY USING pH SENSITIVE MOLECULES
US7019113B2 (en) 1999-06-07 2006-03-28 Mirus Bio Corporation Reversible modification of membrane interaction
US8202979B2 (en) 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
US20050032733A1 (en) 2001-05-18 2005-02-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SiNA)
WO2003070918A2 (en) 2002-02-20 2003-08-28 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Rna interference by modified short interfering nucleic acid
US8273866B2 (en) 2002-02-20 2012-09-25 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SINA)
US9994853B2 (en) * 2001-05-18 2018-06-12 Sirna Therapeutics, Inc. Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference
US20060217331A1 (en) * 2001-05-18 2006-09-28 Sirna Therapeutics, Inc. Chemically modified double stranded nucleic acid molecules that mediate RNA interference
AU2004266311B2 (en) 2001-05-18 2009-07-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
WO2007022369A2 (en) 2005-08-17 2007-02-22 Sirna Therapeutics, Inc. Chemically modified short interfering nucleic acid molecules that mediate rna interference
US10590418B2 (en) 2001-07-23 2020-03-17 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for RNAi mediated inhibition of gene expression in mammals
US20030198627A1 (en) 2001-09-01 2003-10-23 Gert-Jan Arts siRNA knockout assay method and constructs
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
US6635428B2 (en) 2001-12-04 2003-10-21 Quest Diagnostics Investments Incorporated Oligonucleotides and methods for detecting hepatitis B viral nucleic acids
EP2455467B1 (en) 2002-02-01 2016-10-05 Life Technologies Corporation Double-stranded oligonucleotides
US8232383B2 (en) 2002-02-20 2012-07-31 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
EP1432724A4 (en) 2002-02-20 2006-02-01 Sirna Therapeutics Inc RNA inhibition mediated inhibition of MAP KINASE GENES
US9181551B2 (en) 2002-02-20 2015-11-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
SI3222724T1 (sl) 2002-08-05 2019-03-29 Silence Therapeutics Gmbh Nadaljnje nove oblike molekul interferenčne RNA
US7956176B2 (en) 2002-09-05 2011-06-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
WO2004044136A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2’-modified nucleosides for use in gene modulation
US7816337B2 (en) 2003-02-18 2010-10-19 Roche Madison Inc. Reversible attachment of a membrane active polymer to a polynucleotide
US20040162235A1 (en) 2003-02-18 2004-08-19 Trubetskoy Vladimir S. Delivery of siRNA to cells using polyampholytes
CN1257284C (zh) * 2003-03-05 2006-05-24 北京博奥生物芯片有限责任公司 一种体外阻断乙肝病毒表达的方法
US7750144B2 (en) 2003-06-02 2010-07-06 University Of Massachusetts Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of RNA silencing
EP1636385A4 (en) 2003-06-24 2010-06-02 Mirus Bio Corp INHIBITION OF GENE FUNCTION BY IN VIVO DISTRIBUTION OF GENE EXPRESSION INHIBITORS BASED ON POLYNUCLEOTIDES IN MAMMALIAN CELLS
WO2005021751A1 (en) 2003-09-01 2005-03-10 Patrick Arbuthnot A self-processing rna expression cassette
JP2007520461A (ja) 2003-12-16 2007-07-26 エージェンシー フォー サイエンス，テクノロジー アンド リサーチ 肝炎ウイルスの負荷を変えるための方法および化合物
JP2007520474A (ja) 2004-01-12 2007-07-26 ジーンセンス テクノロジーズ インコーポレーテッド リボヌクレオチドレダクターゼｒ２に向けられたアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび癌の処置のための併用療法におけるこの使用
AU2005222965B8 (en) 2004-03-15 2010-07-01 City Of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded RNA
AU2005248147A1 (en) 2004-05-11 2005-12-08 Alphagen Co., Ltd. Polynucleotides for causing RNA interference and method for inhibiting gene expression using the same
CA2577036A1 (en) 2004-08-18 2006-02-23 Genesense Technologies Inc. Small interfering rna molecules against ribonucleotide reductase and uses thereof
KR101012595B1 (ko) 2005-03-09 2011-02-07 재단법인 목암생명공학연구소 작은 간섭 ｒｎａ 및 이를 포함하는 ｂ형 간염 바이러스 치료용 약학 조성물
AU2006230436B2 (en) 2005-03-31 2011-11-24 Calando Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of ribonucleotide reductase subunit 2 and uses thereof
CN101426912A (zh) 2005-08-17 2009-05-06 瑟纳治疗公司 介导rna干扰的化学修饰短干扰核酸分子
RU2418068C2 (ru) 2005-08-17 2011-05-10 Сирна Терапьютикс, Инк. Молекулы химически модифицированной короткой интерферирующей нуклеиновой кислоты, которые опосредуют интерференцию рнк
CA2627585A1 (en) 2005-11-01 2007-05-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Rnai inhibition of influenza virus replication
CN100447243C (zh) 2005-11-15 2008-12-31 中国人民解放军第四军医大学 HBV特异性干涉靶位点基因及其siRNA和其在抗HBV感染中的应用
CN101024088A (zh) 2006-02-20 2007-08-29 桂林医学院 抗乙型肝炎病毒微小核糖核酸干扰分子及其设计方法
AU2007285782B2 (en) 2006-08-18 2010-06-24 Arrowhead Research Corporation Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
WO2008119000A1 (en) 2007-03-27 2008-10-02 University Of Iowa Research Foundation Zinc-finger nuclease and rna interference mediated inactivation of viral genomes
CA2685127C (en) 2007-04-23 2019-01-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycoconjugates of rna interference agents
WO2008146251A2 (en) 2007-05-29 2008-12-04 University Of The Witwatersrand, Johannesburg A primary micro rna expression cassette
US20100209491A1 (en) 2007-09-17 2010-08-19 Mogam Biotechnology Research Institute Method for enhancing serum stability and lowering immune response of sirna down-regulating gene expression of hbv or hcv
EP2205740A2 (en) 2007-10-02 2010-07-14 Rxi Pharmaceuticals Corp. Tripartite rnai constructs
EP3156077B1 (en) 2007-12-04 2022-03-09 Arbutus Biopharma Corporation Targeting lipids
WO2009126933A2 (en) 2008-04-11 2009-10-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
CN101603042B (zh) 2008-06-13 2013-05-01 厦门大学 可用于乙型肝炎病毒感染治疗的rna干扰靶点
CN101322847A (zh) 2008-06-23 2008-12-17 淮安市第四人民医院 基于siRNA池干扰的复合载体介导的抗乙肝病毒基因药物
WO2010080129A2 (en) 2008-12-18 2010-07-15 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Extended dicer substrate agents and methods for the specific inhibition of gene expression
WO2010093788A2 (en) 2009-02-11 2010-08-19 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Multiplex dicer substrate rna interference molecules having joining sequences
WO2010129023A2 (en) 2009-04-28 2010-11-11 President And Fellows Of Harvard College Supercharged proteins for cell penetration
CN102459301B (zh) 2009-05-05 2016-01-20 米拉根医疗公司 亲脂性多聚核苷酸缀合物
US8207138B2 (en) 2009-05-19 2012-06-26 Medtronic, Inc. Methods and devices for improved efficiency of RNA delivery to cells
WO2011003780A1 (en) 2009-07-06 2011-01-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Bi-specific digoxigenin binding antibodies
US20110152349A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Anke Geick Compositions and methods for inhibiting expression of il-18 genes
WO2011100131A2 (en) 2010-01-28 2011-08-18 Alnylam Pharmacuticals, Inc. Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s)
CA2788600C (en) 2010-02-24 2019-12-03 Arrowhead Research Corporation Compositions for targeted delivery of sirna
EP2390327A1 (en) 2010-05-27 2011-11-30 Sylentis S.A. siRNA and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions
CA2807307C (en) * 2010-08-17 2021-02-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Rna interference mediated inhibition of hepatitis b virus (hbv) gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
AU2011302152B2 (en) 2010-09-15 2015-06-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified iRNA agents
CN101948834B (zh) 2010-09-16 2012-07-04 山东大学 用于治疗HBV的siRNA
CN103370415B (zh) 2010-10-28 2017-05-31 本尼特生物制药有限公司 Hbv治疗
EP2632472B1 (en) 2010-10-29 2017-12-13 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acids (sina)
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
ES2605990T3 (es) 2010-12-29 2017-03-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Conjugados de molécula pequeña para la administración intracelular de ácidos nucleicos
EP3505528B1 (en) 2011-04-21 2020-11-25 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
DK2709989T3 (en) 2011-05-18 2018-04-09 Janssen Sciences Ireland Uc QUINAZOLINE DERIVATIVES FOR TREATING VIRUS INFECTIONS AND ADDITIONAL DISEASES
US8809293B2 (en) 2011-06-30 2014-08-19 Arrowhead Madison Inc. Compositions and methods for inhibiting gene expression of hepatitis B virus
TWI575070B (zh) 2011-07-12 2017-03-21 傳斯堅公司 Ｈｂｖ聚合酶突變體
BR112014004585A2 (pt) 2011-08-26 2017-06-13 Arrowhead Res Corp polímeros de poli(éster vinílico) para liberação de ácido nucleico in vivo
KR20220045091A (ko) 2011-11-18 2022-04-12 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 트랜스티레틴（ＴＴＲ） 관련 질병을 치료하기 위한 ＲＮＡｉ 제제, 조성 및 그의 사용방법
US8933047B2 (en) 2012-04-18 2015-01-13 Arrowhead Madison Inc. Poly(acrylate) polymers for in vivo nucleic acid delivery
WO2013159109A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
US9212363B2 (en) 2012-05-11 2015-12-15 City Of Hope RNAI molecules with non-watson crick pairing based on artificial mutation consensus sequences to counter escape mutations
LT2800811T (lt) 2012-05-25 2017-09-11 The Regents Of The University Of California Būdai ir kompozicijos, skirti tikslinės dnr modifikavimui, panaudojant adresuotą rnr, ir transkripcijos moduliavimui, panaudojant adresuotą rnr
GB201215857D0 (en) 2012-09-05 2012-10-24 Sylentis Sau siRNA and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions
CN103333890B (zh) * 2012-12-21 2015-04-15 厦门成坤生物技术有限公司 治疗乙型病毒性肝炎的rna干扰制剂
WO2015042447A1 (en) 2013-09-20 2015-03-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted therapeutic nucleosides and their use
JP6546161B2 (ja) 2013-10-04 2019-07-17 ノバルティス アーゲー Ｂ型肝炎ウイルスを治療するための有機化合物
EP4223315A3 (en) 2014-05-01 2023-08-23 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Method for synthesis of reactive conjugate clusters
CN104059916A (zh) 2014-06-17 2014-09-24 湖北医药学院附属太和医院 乙肝病毒特异性的microRNA样siRNA序列及其用途
JOP20200115A1 (ar) 2014-10-10 2017-06-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc تركيبات وطرق لتثبيط التعبير الجيني عن hao1 (حمض أوكسيداز هيدروكسيلي 1 (أوكسيداز جليكولات))
JOP20200092A1 (ar) 2014-11-10 2017-06-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها
EP3325097B1 (en) 2015-07-17 2021-09-01 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and agents against hepatitis b virus and uses thereof
US20170137821A1 (en) 2015-07-17 2017-05-18 Arcturus Therapeutics, Inc. Molecules and agents for treating hepatitis b virus
US20180208932A1 (en) 2015-07-29 2018-07-26 Arbutus Biopharma Corporation Compositions and methods for silencing hepatitis b virus gene expression
CN115957337A (zh) * 2015-08-07 2023-04-14 箭头药业股份有限公司 乙型肝炎病毒感染的RNAi疗法
CN109069529B (zh) 2016-03-07 2021-08-20 箭头药业股份有限公司 用于治疗性化合物的靶向配体
MA45478A (fr) 2016-04-11 2019-02-20 Arbutus Biopharma Corp Compositions de conjugués d'acides nucléiques ciblés
JOP20170161A1 (ar) 2016-08-04 2019-01-30 Arrowhead Pharmaceuticals Inc عوامل RNAi للعدوى بفيروس التهاب الكبد ب
CN116942841A (zh) 2016-09-02 2023-10-27 箭头药业股份有限公司 靶向配体
US11021692B2 (en) 2017-12-19 2021-06-01 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Hepatitis B virus (HBV) vaccines and uses thereof
US11389531B2 (en) 2017-12-19 2022-07-19 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Methods and apparatus for the delivery of hepatitis B virus (HBV) vaccines
US11020476B2 (en) 2017-12-19 2021-06-01 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Methods and compositions for inducing an immune response against Hepatitis B Virus (HBV)
TW201945003A (zh) 2018-03-01 2019-12-01 愛爾蘭商健生科學愛爾蘭無限公司 ２，４－二胺基喹唑啉衍生物及其醫學用途
TW202045723A (zh) 2019-02-07 2020-12-16 美商艾羅海德製藥公司 用於Ｂ型肝炎病毒感染之ＲＮＡｉ劑
WO2020214974A1 (en) 2019-04-18 2020-10-22 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treating hepatitis b virus infection
CA3139325A1 (en) 2019-05-13 2020-11-19 Vir Biotechnology, Inc. Compositions and methods for treating hepatitis b virus (hbv) infection
JP2022536945A (ja) 2019-06-18 2022-08-22 ヤンセン・サイエンシズ・アイルランド・アンリミテッド・カンパニー Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）ワクチンおよびＨＢＶを標的化するＲＮＡｉの組合せ
EP4178613A1 (en) 2020-07-08 2023-05-17 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Rna replicon vaccines against hbv
WO2022133230A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treating hepatitis b virus infection

Also Published As

Publication number Publication date
JOP20170161A1 (ar) 2019-01-30
TW202018081A (zh) 2020-05-16
CN109843902B (zh) 2023-05-30
US11517584B2 (en) 2022-12-06
KR20190038606A (ko) 2019-04-08
KR102650107B1 (ko) 2024-03-20
KR20230084607A (ko) 2023-06-13
US20230355651A1 (en) 2023-11-09
NZ750390A (en) 2023-11-24
PE20190567A1 (es) 2019-04-22
JP2019527694A (ja) 2019-10-03
IL264575A (en) 2019-02-28
EP4364808A2 (en) 2024-05-08
US11590156B2 (en) 2023-02-28
AU2022205929A1 (en) 2022-10-06
AU2017306692A1 (en) 2019-02-21
US20190255091A1 (en) 2019-08-22
CR20220468A (es) 2023-05-12
IL305507A (en) 2023-10-01
CA3032945A1 (en) 2018-02-08
MA45863A (fr) 2019-06-12
UY37353A (es) 2018-02-28
CN109843902A (zh) 2019-06-04
KR102500675B1 (ko) 2023-02-15
BR112019002117A2 (pt) 2019-07-09
CL2019000278A1 (es) 2020-03-20
JP2023123469A (ja) 2023-09-05
CN116514890A (zh) 2023-08-01
US20190292547A1 (en) 2019-09-26
IL264575B2 (en) 2024-02-01
US20220079973A1 (en) 2022-03-17
CR20220469A (es) 2022-10-26
US10780108B2 (en) 2020-09-22
JP2022068222A (ja) 2022-05-09
EP3494123A4 (en) 2020-07-22
MX2020011806A (es) 2020-12-07
MX2019001493A (es) 2019-07-12
SG11201900910TA (en) 2019-02-27
AU2017306692B2 (en) 2022-08-04
IL264575B1 (en) 2023-10-01
CL2021001195A1 (es) 2021-10-22
CL2022001478A1 (es) 2023-01-13
JOP20190015A1 (ar) 2019-02-04
MX2020011805A (es) 2020-12-07
CR20190056A (es) 2019-05-20
CL2020002156A1 (es) 2020-12-18
JP7237816B2 (ja) 2023-03-13
ECSP19015395A (es) 2019-06-30
KR20230025949A (ko) 2023-02-23
EP3494123A2 (en) 2019-06-12
US20210100829A1 (en) 2021-04-08
TW202334420A (zh) 2023-09-01
PH12019500245A1 (en) 2019-10-14
WO2018027106A2 (en) 2018-02-08
CO2019002017A2 (es) 2019-05-31
WO2018027106A3 (en) 2018-03-15
SG10201913585SA (en) 2020-02-27
KR102540359B1 (ko) 2023-06-02
CA3229270A1 (en) 2018-02-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102650107B1 (ko) B형 간염 바이러스 감염에 대한 RNAi 작용제
KR20210130736A (ko) B형 간염 바이러스 감염에 대한 RNAi 작용제
CN111107853A (zh) 用于抑制载脂蛋白C-III (APOC3)的表达的RNAi试剂和组合物
KR20180038465A (ko) Ｂ형 간염 바이러스 감염에 대한 ｒｎａｉ 치료법
JP2020505415A (ja) 第ｘｉｉ因子遺伝子発現を阻害するための組成物および方法
TWI840321B (zh) 用於B型肝炎病毒感染之RNAi藥劑
OA19828A (en) RNAi agents for hepatitis B virus infection
EA044937B1 (ru) АГЕНТЫ РНКи ПРОТИВ ИНФЕКЦИИ, ВЫЗВАННОЙ ВИРУСОМ ГЕПАТИТА В
OA19470A (en) RNAi agents for hepatitis B virus infection.
NZ790939A (en) RNAi AGENTS FOR HEPATITIS B VIRUS INFECTION
NZ790940A (en) RNAi AGENTS FOR HEPATITIS B VIRUS INFECTION

Legal Events

Date Code Title Description
A107 Divisional application of patent
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal