KR20240031906A - 뽕나무 유래 화합물을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 개선용 화장료 조성물 - Google Patents
뽕나무 유래 화합물을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 개선용 화장료 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 뽕나무(Morus alba) 유래 화합물을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 뽕나무 분획물에서 유래한 특정 화합물이 항노화 및 미백 효과를 동시에 나타내는 것을 확인함으로써, 피부 질환 예방, 치료 또는 개선용 조성물로써, 유용하게 활용될 수 있다.
Description
본 발명은 뽕나무(Morus alba) 유래 화합물을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
최근 들어 생활수준의 향상, 소득수준 증가, 미(美)에 대한 사회적 관심 증가 등으로 미적 요소가 중요한 사회적 경쟁력으로 인식되고 있으며, 좀 더 젊고 아름다운 모습을 유지하려는 욕구 또한 강해져 화장품에 대한 수요와 관심이 계속 증가하고 있다. 기능성 화장품의 경우, 항노화, 자외선 차단, 주름 개선, 미백 등 다양한 피부 개선 효과를 나타내는 복합기능성화장품이 많이 사용되고 있고, 아시아 쪽 시장에서는 특히 미백 화장품에 대한 수요가 높다.
노화는 시간의 흐름에 따라 생물의 신체기능이 퇴화하는 현상이다. 세포의 노화는 세포가 분열할 수 있는 능력을 잃어버리는 것으로 나타난다. 일반적으로 세포의 노화는 Rb(retinoblastoma) 단백질에 의존적인 노화기전과 염색체를 보호하는 역할을 담당하는 텔로미어(telomere)의 손실로 일어나는 노화, 항산화 스트레스에 의한 노화, DNA 손상에 의한 노화 등이 있다. 그 중, 피부 노화는 내인성 노화(내적 노화; intrinsic aging)와 외인성 노화(외적 노화; extrinsic aging)로 구분된다. 내인성 노화는 외부환경과는 무관하게 유전적 요소의 영향으로 시간의 흐름에 따라 자연스럽게 나타나는 현상으로, 인위적인 조절이 어렵고, 육안적, 형태학적 변화보다는 기능적 변화가 나타난다. 반면, 외인성 노화는 만성 태양광선 노출 등 외부환경 요소에 의해 유발되는 현상으로, 인위적인 조절이 비교적 용이하고, 구조적, 생리적 변화가 뚜렷하게 일어난다. 주로 태양광선(자외선) 노출에 의해 발생하기 때문에 광노화(photoaging)로도 불린다. 노화된 피부에서는 약물투과 증가, 자극성 접촉피부염에 대한 감수성 증가, 피부 건조증 악화, 가려움증, 주름, 색소이상(검버섯, 기미 등) 등이 발생한다.
한편, 사람의 피부색은 크게 멜라닌의 양, 헤모글로빈, 카로틴 등에 의해 결정되는데 이 중에서 표피의 기저 세포층에 존재하는 멜라닌 형성 세포에 의해 합성되는 멜라닌이라는 퀴논복합체가 가장 중요한 역할을 한다. 멜라닌은 사람의 피부색을 결정할 뿐만 아니라 피부 보호 작용의 역할을 하지만 피부 내에 과다하게 생성되면 피부 내에서 색소침착 현상이 일어나게 되어 피부색이 검게 되거나 기미, 주근깨 등이 생기게 된다. 멜라닌 생성의 원인으로는 자외선 노출, 대기오염 물질, 복용 약물, 자극성 피부 외용제, 스트레스 등의 외부의 환경변화와 호르몬 불균형, 염증 반응 인자, 싸이토카인 등의 내적요인들이 복합적으로 작용하지만, 그 중에서도 가장 중요한 것은 자외선에 대한 노출이다.
멜라닌 합성에 티로시네이스(tyrosinase) 효소가 결정적인 역할을 한다는 것이 밝혀지면서 티로시네이스 활성 저해효과를 갖는 물질들을 화장료에 배합하거나, 멜라닌 생성과정 중의 일부 반응을 저해함으로써 멜라닌의 생성을 감소시키는 방법이 일반적으로 사용되고 있다. 대표적인 티로시네이스 활성 저해 소재는 하이드로퀴논(hydroquinone), 아젤라산(azelaic acid), 코직산(kojic acid) 등이 있고, 하이드로퀴논+트레티노인+스테로이드 조합의 외용제 형태로도 사용되고 있으나, 그 효과가 아직 만족스럽지는 않은 상황이다.
따라서 항노화, 자외선 차단, 주름 개선, 미백 등 다양한 피부 개선 효과를 나타내는 소재 개발을 위한 연구가 활발히 진행 중인 상황이다.
본 발명의 목적은 뽕나무(Morus alba) 유래 화합물을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 화합물을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 화합물을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
또한, 본 발명은 상기 화합물 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에 따르면, 뽕나무(Morus alba) 분획물에서 유래한 특정 화합물이 항노화 및 미백 효과를 동시에 나타내는 것을 확인함으로써, 피부 질환 예방, 치료 또는 개선용 조성물로써, 유용하게 활용될 수 있다.
도 1은 뽕나무(Morus alba) 분획물 유래 화합물인 M55 화합물의 멜라닌 세포에서 세포독성을 분석한 결과이다.
도 2는 멜라닌 세포에서 상기 M55 화합물이 티로시네이스(tyrosinase) 발현에 미치는 영향을 분석한 결과이다.
도 3은 실시예 2-1에서 제작한 3종의 세포모델에서 M55 화합물이 티로시네이스(tyrosinase) 발현에 미치는 영향을 분석한 결과이다.
도 4는 각질형성세포에서 M55 화합물이 p16(Ink4a) 발현에 미치는 영향을 분석한 결과이다.
도 2는 멜라닌 세포에서 상기 M55 화합물이 티로시네이스(tyrosinase) 발현에 미치는 영향을 분석한 결과이다.
도 3은 실시예 2-1에서 제작한 3종의 세포모델에서 M55 화합물이 티로시네이스(tyrosinase) 발현에 미치는 영향을 분석한 결과이다.
도 4는 각질형성세포에서 M55 화합물이 p16(Ink4a) 발현에 미치는 영향을 분석한 결과이다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 뽕나무(Morus alba)에서 유래한 것일 수 있다.
또한, 상기 화합물 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 항노화 또는 미백 효과를 나타낼 수 있고, p16(Ink4a) 또는 티로시네이스(tyrosinase) 발현을 억제할 수 있다.
상기 피부 질환은 피부 노화 질환; 또는 멜라닌 과다 생성에 따른 피부 질환일 수 있다.
상기 피부 노화 질환은 피부 주름, 광노화증, 흑화증, 피부 색소침착증, 피부화상, 피부 염증 및 피부암으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있고, 상기 멜라닌 과다 생성에 따른 피부 질환은 기미, 주근깨, 잡티, 검버섯 및 오타모반으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 "미백"은 멜라닌 색소 등의 과다 침착을 억제, 저해, 또는 완화시켜, 상기 색소 침착으로 야기되는 피부의 흑화를 방지하여 피부 트러블을 개선하는 작용을 의미한다.
상기 "화장료"란, 피부 질환 개선 등의 효과를 가지는 기능성 화장료를 포함할 수 있고, 상기 기능성 화장료는 일반 화장료와 달리 생리활성적인 효능, 효과가 강조된 전문적인 기능성을 갖는 것으로, 화장품법에 정의된 바에 따라 피부 질환 개선 등 특정 효능과 효과가 강조된 화장료를 의미한다.
상기 “유효성분으로 포함하는”은 피부 질환 개선 효과를 나타낼 수 있는 유효량을 함유하는 것을 의미할 수 있다.
구체적으로, 상기 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형으로 제조할 수 있다. 예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등의 화장수; 훼이셜 로션, 바디로션 등의 유액; 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등의 크림; 에센스; 화장연고; 스프레이; 젤; 팩; 선 스크린; 메이크업 베이스; 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션; 파우더; 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일 등의 메이크업 제거제; 또는 클렌징 폼, 비누, 바디워시 등의 세정제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 피부 외용제는, 연고, 패치, 겔, 크림 또는 분무제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물은 각각의 제형에 있어서 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 허용 가능한 담체는 제형에 따라 달리할 수 있다. 예컨대, 연고, 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 추출물이 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 추출물이 사용될 수 있고, 스프레이의 경우 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 사용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물이 비누로 제형화될 때, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.
다만, 상기 보조제 및 그 혼합 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 영향을 미치지 않도록 적절히 선택할 수 있다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
본 발명은 통상적으로 이용되는 식품으로써 일반적으로 사용될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 건강기능식품으로서 사용될 수 있다. 상기“건강기능식품”이라 함은 건강기능 식품에 관한 법률에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, “기능성”이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
상기 건강기능식품 조성물은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 상기 “식품 첨가물”로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전처에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
상기 “식품 첨가물 공전”에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류들을 들 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공할 수 있다. 예를 들어, 캡슐 형태의 건강기능 식품 중 경질 캡슐제는 통상의 경질 캡슐에 본 발명에 따른 조성물을 부형제 등의 첨가제와 혼합 및 충진 하여 제조할 수 있으며, 연질 캡슐제는 본 발명에 따른 조성물을 부형제 등의 첨가제와 혼합하고 젤라틴 등 캡슐기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캡슐제 는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.
상기 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 교미제, 착향제 등에 대한 용어 정의 는 당업계에 공지된 문헌에 기재된 것으로 그 기능 등이 동일 내지 유사한 것들을 포함한다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한이 없으며, 통상적인 의미에서의 건강 기능식품을 모두 포함한다.
본 발명에서 용어“예방”은 본 발명에 따른 조성물의 투여로 피부 질환을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 말한다.
본 발명에서 용어 “치료”는 본 발명에 따른 조성물의 투여로 피부 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 말한다.
본 발명에서 용어 “개선”은 본 발명에 따른 조성물의 투여로 피부 질환의 나쁜 상태를 좋게 하는 모든 행위를 말한다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
본 발명의 약학 조성물은 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다.
상기 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸 히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 약학 조성물에 포함되는 첨가제의 함량은 특별히 한정되는 것은 아니며 통상의 제제화에 사용되는 함량 범위 내에서 적절하게 조절될 수 있다.
상기 약학 조성물은 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립, 정제, 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 및 카타플라스마제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 피부 외용제 형태로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 약학 조성물은 제형화를 위해 추가로 있는 약학적으로 허용 가능한 담체 및 희석제를 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 담체 및 희석제는 전분, 당 및 만니톨과 같은 부형제, 칼슘 포스페이트 등과 같은 충전제 및 증량제, 카르복시메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스 등과 같은 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 알긴산염, 폴리비닐 피롤리돈 등과 같은 결합제, 활석, 스테아린산 칼슘, 수소화 피마자유 및 폴리에틸렌글리콜과 같은 윤활제, 포비돈 및 크로스포비돈과 같은 붕해제, 폴리소르베이트, 세틸알코올, 글리세롤 등과 같은 계면활성제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 약학적으로 허용 가능한 담체 및 희석제는 대상체에게 생물학적 및 생리학적으로 친화적인 것일 수 있다. 희석제의 예로는 염수, 수용성 완충액, 용매 및/또는 분산제(dispersion media)를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있다. 경구 투여일 경우, 정제, 트로키제(troches), 로젠지(lozenge), 수용성 현탁액, 유성 현탁액, 조제 분말, 과립, 에멀젼, 하드 캡슐, 소프트 캡슐, 시럽, 엘릭시르제 등으로 제형화될 수 있다. 비경구 투여일 경우, 주사액, 좌제, 호흡기 흡입용 분말, 스프레이용 에어로졸제, 연고, 도포용 파우더, 오일, 크림 등으로 제형화 될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 투여량은 환자의 상태, 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이 체질 특이성, 제제의 성질, 질병의 정도, 조성물의 투여시간, 투여방법, 투여기간 또는 간격, 배설율 및 약물 형태에 따라 그 범위가 다양할 수 있으며, 이 분야 통상의 기술자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예컨대, 약 0.1 내지 10,000mg/kg의 범위일 수 있으나 이제 제한되지 않으며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여될 수 있다.
상기 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여되거나 비경구 투여(예를 들면, 정맥 내, 피하 내, 복강 내 또는 국소에 적용)될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 약학적 유효량 및 유효 투여량은 약학 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여 시간, 투여 경로 등에 의해 다양해질 수 있으며, 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 투여는 하루에 1회 투여될 수 있고, 수회에 나누어 투여될 수도 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
[실험예 1] 세포 배양
1-1. 각질형성세포
각질형성세포는 반복적인 제왕절개와 포경수술을 통해 얻은 정상 성인 피부조직에서 분리하여 사용하였다. 상기 세포를 EpiLife Medium에 분주하고, 소 뇌하수체 추출물(Bovine pituitary extract; BPE), 소 인슐린(Bovine insulin; BI), 하이드로코르티손(hydrocortisone), 인간 표피성장인자(Epidermal growth factor; EGF) 및 소 트랜스페린(Bovine transferrin; BT)을 넣어 배양하였다. 3~5차 계대배양한 세포를 실험에 사용하였다. 상기 뇌하수체 추출물, 소 인슐린, 하이드로코르티손, 인간 표피성장인자 및 소 트랜스페린은 Invitrogen에서 구매하여 사용하였다.
1-2. 멜라닌 세포
멜라닌 세포(melanocyte)는 반복적인 제왕절개와 포경수술을 통해 얻은 정상 성인 피부조직에서 분리하여 사용하였다. Dispase 2.4U(#295 825; Roche, Mannheim, 독일)를 1시간 처리하여 표피를 분리하고, 0.05% 트립신(trypsin)을 10분간 처리하여 멜라닌 세포를 분리하였다. 그 후, Medium 254에 상기 세포를 현탁하고, 소 뇌하수체 추출물(BPE), 우태아혈청(Fetal bovine serum; FBS), 하이드로코르티손(hydrocortisone), bFGF(Basic fibroblast growth factor), 소 트랜스페린(Bovine transferrin; BT), 헤파린(Heparin) 및 PMA(phorbol 12-myristate13-acetate)(Invitrogen)를 넣어 배양하였다. 3~5차 계대배양한 세포를 실험에 사용하였다.
[실시예 1] 피부 미백 효과 물질 스크리닝
피부 미백 효과를 나타내는 물질을 확인하기 위해, 하기 136종의 후보소재를 준비하였다. 하기 후보소재는 서울대 천연물연구소의 진영원 교수님으로부터 분양받아 사용하였다.
1) 남가새(Tribulus terrestris) 분획물 유래 35종의 화합물(T1~T35)
2) 뽕나무(Morus alba) 분획물 유래 63종의 화합물(M1~M63)
3) 그 외 38종의 화합물(CZ1~CZ38)
1-1. 세포독성 분석
상기 136종의 후보소재의 세포독성을 확인하기 위해, MTT assay를 수행하였다. 멜라닌 세포에 상기 후보소재를 각각 농도별로(10, 50 및 100μM)로 48시간 동안 처리한 후, 세포생존율을 측정하여 각 후보소재의 세포독성이 나타나지 않는 농도 범위를 확인하였다.
그 결과, 각 후보소재의 세포독성이 나타나지 않는 농도를 확인하였고, 도 1과 같이, 뽕나무에서 추출한 분획물 중 하나인 M55 화합물은 10μM 처리 농도까지 세포독성이 나타나지 않았다.
1-2. 피부 미백 효과 분석
상기 136종의 후보소재의 피부 미백 효과를 확인하기 위해, 웨스턴 블롯(Western blot)을 수행하였다. 멜라닌 세포에 상기 후보소재를 각각 실시예 1-2에서 확인한 멜라닌 세포에 세포독성을 나타내지 않는 농도로 48시간 동안 처리한 후, 세포 내 티로시네이스(tyrosinase) 발현을 측정하였다. 실험은 4회 이상 반복 수행하였다.
그 결과, 16종의 후보소재 처리군에서 티로시네이스 발현이 유의하게 감소하였고, 도 2와 같이, 그 중에서 대조군(CON; 후보소재 무처리군) 대비 M55 화합물 처리군(10μM)에서 티로시네이스 발현이 유의하게 감소하였다.
[실시예 2] 피부 미백 및 항노화 효과를 나타내는 물질 분석
2-1. 세포모델 제작
상기 실시예 1-2에서 16종의 후보소재 중에서 피부 미백 및 항노화 효과를 모두 나타내는 물질을 확인하기 위해, 하기와 같이, 3종의 세포모델을 먼저 제작하였다.
1) ARG2 과발현 각질형성세포 및 정상 멜라닌 세포를 공배양한 세포모델
2) CDH11 과발현 각질형성세포 및 멜라닌 세포를 공배양한 세포모델
3) GDA 과발현 각질형성세포 및 멜라닌 세포를 공배양한 세포모델
각질형성세포를 2×105 /ml로 배양용기에 파종(seeding)하고, 24시간 후 3종의 유전자[ARG2(Arginase 2, NCBI Gene ID: 384), CDH11(Cadherin 11, NCBI Gene : 1009) 및 GDA(Guanine deaminase, NCBI Gene : 9615)] 중 하나의 유전자를 함유하는 pCMV 플라스미드를 Lipofectamine 2000을 이용하여 세포에 형질주입(transfection)시켜 과발현을 유도하고, supplement가 포함되지 않은 DMEM(Dulbecco's Modified Essential Medium) 배양액으로 4시간 배양한 후, 0.5×105 /ml의 멜라닌 세포를 supplement가 포함된 각질형성세포 배양액에 혼합하여 동일 배양용기에서 공배양하였다. 24시간 후, supplement가 포함되지 않은 각질형성세포 배양액으로 갈아주고 5시간 후 정상 멜라닌 세포에서 상기 16종의 후보소재를 48시간 동안 처리하였다. 상기 3종의 유전자(ARG2, CDH11 및 GDA) 각각의 대조유전자 과발현 각질형성세포와 정상 멜라닌 세포를 공배양한 세포모델을 대조군으로 설정하였고, 상기 3종의 유전자 각각의 대조유전자 과발현 각질형성세포는 각질형성세포에 상기 3종의 유전자를 넣지 않은 공벡터를 함유하는 pCMV 플라스미드를 형질주입시켜 제조하였다.
2-2. 피부 미백 및 항노화 효과 분석
상기 실시예 1-2의 16종의 후보소재의 피부 미백 및 항노화 효과를 확인하기 위해, 피부 미백 효과는 상기 실시예 2-1에서 제작한 3종의 세포모델에 각각 상기 16종의 후보소재를 각각 실시예 1-1에서 확인한 멜라닌 세포에서 세포독성을 나타내지 않는 농도로 48시간 동안 처리한 후, 웨스턴 블롯을 수행하여 티로시네이스 발현을 측정하였다. 실험은 4회 반복 수행하였고, P < 0.05를 유의하다고 판정하였다. 또한, 항노화 효과 분석은 각질형성세포에 상기 16종의 후보소재를 각각 48시간 동안 처리한 후, 웨스턴 블롯을 수행하여 p16(Ink4a) 발현을 측정하였다. 실험은 4회 반복 수행하였고, P < 0.05를 유의하다고 판정하였다.
그 결과, 상기 16종의 후보소재 중에서 5종의 후보소재 처리군에서 피부 미백 및 항노화 효과가 함께 나타났고, 상기 5종의 후보소재에 M55 화합물도 포함되는 것을 확인하였다.
구체적으로, 피부 미백 효과의 경우, 도 3과 같이, 대조군(CON; 소재 무처리군; 소재를 용해시키는 용매만 처리한 군)의 경우, 대조유전자 과발현 공배양 세포모델(pCMV) 대비 ARG2 과발현 공배양 세포모델(ARG2)에서 티로시네이스 발현이 유의하게 증가하였다. M55 처리군(M55, 10μM)은 대조군 대비 티로시네이스 발현이 유의하게 감소하였다.
또한, 도 3과 같이, 대조군(CON; 소재 무처리군; 소재를 용해시키는 용매만 처리한 군)의 경우, 대조유전자 과발현 공배양 세포모델(pCMV) 대비 CDH11 과발현 공배양 세포모델(CDH11)에서 티로시네이스 발현이 유의하게 증가하였다. 대조유전자 과발현 공배양 세포모델의 경우, 대조군 대비 M55 처리군(M55, 10μM)에서 발현이 증가하였고, CDH11 과발현 공배양 세포모델의 경우, 대조군 대비 M55 처리군에서 티로시네이스 발현이 감소하였다.
또한, 도 3과 같이, 대조군(CON; 소재 무처리군; 소재를 용해시키는 용매만 처리한 군)의 경우, 대조유전자 과발현 공배양 세포모델(pCMV) 대비 GDA 과발현 공배양 세포모델(GDA)에서 티로시네이스 발현이 유의하게 증가하였다. M55 처리군(M55, 10μM)은 대조군 대비 티로시네이스 발현이 유의하게 감소하였다.
또한, 항노화 효과의 경우, 도 4와 같이, 대조군(CON; 후보소재 무처리군) 대비 M55 처리군(M55, 10μM)에서 p16 발현이 유의하게 감소하였다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 즉, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다.
Claims (9)
- 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
[화학식 1]
- 제1항에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 뽕나무(Morus alba)에서 유래한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 화합물 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 항노화 또는 미백 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 피부 질환은 피부 노화 질환; 또는 멜라닌 과다 생성에 따른 피부 질환인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 피부 노화 질환은 피부 주름, 광노화증, 흑화증, 피부 색소침착증, 피부화상, 피부 염증 및 피부암으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 멜라닌 과다 생성에 따른 피부 질환은 기미, 주근깨, 잡티, 검버섯 및 오타모반으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 이루어진 군에서 선택된 하나의 제형을 가지는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
[화학식 1]
- 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
[화학식 1]
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