KR20240026885A - SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 항체 및 그 용도 - Google Patents

SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 항체 및 그 용도 Download PDF

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켄지 사이토
사치코 스즈키
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타운즈 라보라토리스, 인크.
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Abstract

COVID-19의 원인 바이러스인 SARS-COV-2를 간편 또한 신속하게 고감도로 검출할 수 있고, 비특이적인 반응을 억제할 수 있는 항체, 또한 상기 항체를 포함하는 면역학적 검출법 및 키트를 제공하는 것을 목적으로 한다. SARS-COV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 결합하는 항체 또는 그 단편, 특히, 상기 단백질의 특정한 영역을 인식하는 항체 또는 그 단편을 사용함으로써, 특이적이고 고감도인 면역학적 검출법 및 키트, 특히, 이뮤노크로마토그래피법 또는 ELISA법 등의 샌드위치법에 의한 검출법 외에, 상기 항체를 포함하는 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립 및 상기 테스트 스트립을 포함하는 키트가 제공된다.

Description

SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 항체 및 그 용도
본 발명은 SARS(중증 급성 호흡기 증후군) 코로나 바이러스 2의 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 항체 및 그 용도, 예를 들면, 상기 항체를 사용한 SARS-CoV-2의 면역학적 검출 방법, 및 상기 항체를 사용한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립 및 그것을 포함하는 키트에 관한 것이다.
인간 유래의 코로나 바이러스는 NL63, 229E, OC43, HKU1의 4종류가 동정되어 있고, 감기 원인의 10%∼15%를 차지하고 있다. 이 외에도, 동물에게 감염되는 코로나 바이러스도 알려져 있으며, 동물로부터 인간에게 감염되는 코로나 바이러스는 2002년에 중국의 광둥성에서 감염이 확대된 SARS(중증 급성 호흡기 증후군) 코로나 바이러스와, 2012년에 아라비아 반도에서 보고된 MARS(중동 호흡기 증후군) 코로나 바이러스가 이미 알려져 있다.
2019년 12월에는, 중국의 후베이성 우한시에서 신형 코로나 바이러스가 원인인 폐렴이 발생했다. 이 신형 코로나 바이러스는 SARS 코로나 바이러스나 MARS 코로나 바이러스와 같은 동물 유래의 β 코로나 바이러스인 것이 판명되었다. 2019년 2월에 이 신형 코로나 바이러스는 국제 바이러스 분류 위원회에 의해 SARS-CoV-2라고 명명되고, 이 바이러스에 의해 생기는 질환을 WHO(세계보건기관)는 COVID-19(Coronavirus disease 2019)라고 명명했다.
COVID-19의 초기 증상은 인플루엔자나 감기와 유사하며, 발열, 기침, 인두통, 두통, 권태감, 호흡 곤란 등의 증상을 나타낸다. 또한, 미각 장해나 후각 장해 등의 임상상도 초기 증상으로서 보고되어 있다. 발증으로부터 1주일 정도면 회복하는 환자가 많은 한편으로, 기초 질환이 없는 증례와 비교하면, 고령자, 악성 종양, 만성 폐색성 폐질환, 만성 신장병, 간질환, 비만, 지질 이상증, 고혈압, 당뇨병을 가진 환자는 중증화하는 비율이 높은 경향이 있다. 또한, 심질환, 만성 폐질환, 뇌혈관 장해, 만성 신장병을 가진 증례는 사망하는 비율이 높은 경향이 있다.
후유증으로서 일부의 환자에게는, COVID-19의 발증으로부터 60일 경과한 후에도 후각 이상, 미각 이상, 호흡 곤란, 권태감, 기침 증상이 있고, 120일 경과해도 상기의 증상이 계속되는 것이 보고되어 있다.
SARS-CoV-2에 의한 감염은 여전히 계속되고 있지만, 아직도 SARS-CoV-2에 대한 항바이러스약의 공급은 곤란한 상황에 있다. 합병증에 의한 중증화를 억제하기 위해서도 신속한 검사에 의해 SARS-CoV-2 감염자를 조기에 발견하는 것이 매우 중요해진다. 또한, 감기와 유사한 증상을 보이는 다른 질병과 COVID-19를 판별하기 위해서도, SARS-CoV-2의 감염을 정확하게 검출하는 것은 매우 중요하다.
SARS-CoV-2의 검출 방법으로서, 리얼타임 역전사 PCR법 등을 사용한 핵산 검출법이 주류가 되고 있다. 그러나, 핵산 검출법은 검출 감도가 높은 한편으로, 검사 시간이 긴 것, 전용 기기의 사용이나 조작에 숙련된 인재가 필요한 것, 비용이 높은 것 등의 문제를 들 수 있다. 그 때문에, 간편 그리고 신속하고, 고감도의 검출 방법이 감염자의 조기 발견에 요망되고 있다. 이에, 핵산 검출법보다 간편 그리고 신속한 검출 방법으로서, 이뮤노크로마토그래피법을 사용한 항원 검출법을 들 수 있다.
비특허문헌 1에서는, SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질 중, 121번째부터 419번의 아미노산에 의해 형성되는 C 말단 영역의 뉴클레오캡시드 단백질을 제작하고, 마우스에 면역함으로써, SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 항체를 취득한 것이 개시되어 있다. 얻어진 항체 3종류 중 2종류의 에피토프는 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질의 210번째부터 231번째의 아미노산, 및 382번째부터 397번째의 아미노산이라고 특정되어 있다. 한편으로, 나머지 1종류의 항체의 에피토프는 특정되어 있지 않지만, SARS 코로나 바이러스와의 교차 반응성이 없기 때문에, 335번째부터 348번째의 아미노산을 인식하고 있는 것으로 추찰되고 있다. 이 취득한 항체를 사용하여, 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 제작하여 평가한 결과, rNP에서는 100pg/mL, SARS-CoV-2에서는 5.5×105copies/mL, PCR의 Ct값에서는 27.1까지 반응한 것이 기재되어 있다.
비특허문헌 2에서는, 이미 판매되고 있는 SARS-CoV-2를 검출하는 이뮤노크로마토그래피법을 사용한 제품에 의한 비특이적인 반응에 대해 개시되어 있다. 항원 검출법으로 양성이 확인된 3명을 포함한 57명의 입원 환자와 12명의 시설 스탭을 대상으로 핵산 검출법을 실시한 결과, 모든 사람에게서 음성이라고 판정되었다. 또한, 양성이 확인된 3명의 검사 결과는, 다음날 이후에도, 항원 검출법이 양성이고 핵산 검출법이 음성이었기 때문에, 항원 검출법의 비특이적인 반응에 의한 위양성이었던 것이 보고되어 있다. 이것들로부터, 항원 검출법은 스크리닝으로서 유용하지만, 그 의사 양성의 발생 빈도를 감안하여, SARS-CoV-2의 검출에는 핵산 검출법을 실시하는 것이 바람직하다고 보고되어 있다.
A. Ryo, et al., Highly specific monoclonal antibodies against SARS-CoV-2 nucleocapsid antigen for accurate diagnosis of COVID-19, Cell Reports Medicine, 29 Oct.2020, p.33 K. Itoh, H. Tsutani, et ai., False positive results in severe acute respiratory coronavirus 2(SARS-CoV-2) rapid antigen tests for inpatients, Journal of Infection and Chemotherapy, 22 Mar.2021
그러나, 스크리닝 검사 등도 감안하면, 보다 더욱 고감도이며 신뢰성이 높고, 간편한 항원 검사가 요구되고 있다.
본 발명은 COVID-19의 원인 바이러스인 SARS-CoV-2를 간편하게 신속 그리고 고감도로 검출할 수 있음과 아울러, 충분히 특이적으로 반응하는 항체를 사용한 면역학적 검출법 외에, 상기 항체를 포함하는 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립 및 상기 테스트 스트립을 포함하는 키트를 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자는 상술한 바와 같은 배경을 감안하여 예의 검토한 결과, SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 항체를 취득하여, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
본 발명은 이하의 형태를 포함한다.
〔1〕피검 시료에 포함되는 SARS-CoV-2의 존재를 검출하는 방법으로서, 상기 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 반응하는 항체 또는 그 단편을 사용한 면역학적 측정법에 의해 행하는 상기 SARS-CoV-2의 검출 방법.
〔2〕상기 면역학적 측정법이, 상기 피검 시료를 상기 항체 또는 그 단편에 접촉시키는 것을 포함하는 〔1〕에 기재된 SARS-CoV-2의 검출 방법.
〔3〕상기 면역학적 측정법이 2개의 상이한 상기 항체 또는 그 단편을 사용한 샌드위치법인 〔2〕에 기재된 SARS-CoV-2의 검출 방법.
〔4〕상기 샌드위치법이 이뮤노크로마토그래피법 또는 ELISA법 중 어느 하나인 〔3〕에 기재된 SARS-CoV-2의 검출 방법.
〔5〕상기 항체 또는 그 단편은 하기 (1) 내지 (20)에 기재된 항체 또는 그 단편으로부터 선택된 것인 〔1〕∼〔4〕중 어느 한 항에 기재된 SARS-CoV-2의 검출 방법.
(1) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 2, 3 및 4로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 5, 6 및 7로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(2) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 8, 9 및 10으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 11, 12 및 13으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(3) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 14, 15 및 16으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 17, 18 및 19로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(4) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 20, 21 및 22로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 23, 24 및 25로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(5) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 26, 27 및 28로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 29, 30 및 31로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(6) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 32, 33 및 34로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 35, 36 및 37로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(7) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 38, 39 및 40으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 41, 42 및 43으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(8) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 44, 45 및 46으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 47, 48 및 49로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(9) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 50, 51 및 52로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 53, 54 및 55로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(10) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 56, 57 및 58로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 59, 60 및 61로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(11) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 62, 63 및 64로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 65, 66 및 67로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(12) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 68, 69 및 70으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 71, 72 및 73으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(13) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 74, 75 및 76으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 77, 78 및 79로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(14) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 80, 81 및 82로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 83, 84 및 85로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(15) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 86, 87 및 88로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 89, 90 및 91로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(16) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 92, 93 및 94로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 95, 96 및 97로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(17) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 98, 99 및 100으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 101, 102 및 103으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(18) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 104, 105 및 106으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 107, 108 및 109로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(19) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 110, 111 및 112로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 113, 114 및 115로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(20) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 116, 117 및 118로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 119, 120 및 121로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
〔6〕상기 피검 시료가 생체 시료인 〔1〕내지〔4〕중 어느 한 항에 기재된 SARS-CoV-2의 검출 방법.
〔7〕SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 반응 가능한 제 1 항체 또는 그 단편과, 상기 뉴클레오캡시드 단백질에 반응하는 제 2 항체 또는 그 단편과, 막담체를 구비하고, 상기 제 1 항체 또는 그 단편은 상기 막담체의 소정 위치에 미리 고정되어 포착 부위를 형성하고, 상기 제 2 항체 또는 그 단편은 표지 물질로 표지되고, 또한, 상기 포착 부위로부터 이격된 위치에서 상기 막담체에서 크로마토 전개 가능하도록 준비되어 이루어지는 SARS-CoV-2 검출 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립.
〔8〕상기 제 1 및 제 2 항체 또는 그 단편 중 적어도 어느 일방이 모노클로날 항체 또는 그 단편인 〔7〕에 기재된 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립.
〔9〕상기 모노클로날 항체 또는 그 단편이, 하기 (1) 내지 (20)에 기재되는 항체 또는 그 단편으로부터 선택된 것인 〔7〕또는〔8〕에 기재된 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립.
(1) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 2, 3 및 4로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 5, 6 및 7로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(2) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 8, 9 및 10으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 11, 12 및 13으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(3) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 14, 15 및 16으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 17, 18 및 19로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(4) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 20, 21 및 22로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 23, 24 및 25로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(5) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 26, 27 및 28로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 29, 30 및 31로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(6) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 32, 33 및 34로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 35, 36 및 37로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(7) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 38, 39 및 40으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 41, 42 및 43으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(8) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 44, 45 및 46으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 47, 48 및 49로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(9) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 50, 51 및 52로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 53, 54 및 55로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(10) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 56, 57 및 58로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 59, 60 및 61로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(11) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 62, 63 및 64로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 65, 66 및 67로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(12) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 68, 69 및 70으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 71, 72 및 73으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(13) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 74, 75 및 76으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 77, 78 및 79로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(14) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 80, 81 및 82로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 83, 84 및 85로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(15) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 86, 87 및 88로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 89, 90 및 91로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(16) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 92, 93 및 94로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 95, 96 및 97로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(17) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 98, 99 및 100으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 101, 102 및 103으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(18) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 104, 105 및 106으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 107, 108 및 109로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(19) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 110, 111 및 112로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 113, 114 및 115로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
(20) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 116, 117 및 118로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 119, 120 및 121로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
〔10〕〔7〕에 기재된 SARS-CoV-2 검출 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립과, 피검체를 전개하기 위한 전개 용매를 적어도 포함하는 SARS-CoV-2 검출용 키트.
〔11〕피검 시료에 포함되는 SARS-CoV-2의 존재를 검출하기 위한 항체 또는 그 단편으로서, 상기 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 결합하는 항체 또는 그 단편.
〔12〕상기 항체가 모노클로날 항체인 〔11〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔13〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 2, 3 및 4로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 5, 6 및 7로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔14〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 8, 9 및 10으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 11, 12 및 13으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔15〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 14, 15 및 16으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 17, 18 및 19로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔16〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 20, 21 및 22로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 23, 24 및 25로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔17〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 26, 27 및 28로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 29, 30 및 31로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔18〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 32, 33 및 34로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 35, 36 및 37로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔19〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 38, 39 및 40으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 41, 42 및 43으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔20〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 44, 45 및 46으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 47, 48 및 49로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔21〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 50, 51 및 52로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 53, 54 및 55로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔22〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 56, 57 및 58로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 59, 60 및 61로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔23〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 62, 63 및 64로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 65, 66 및 67로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔24〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 68, 69 및 70으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 71, 72 및 73으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔25〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 74, 75 및 76으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 77, 78 및 79로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔26〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 80, 81 및 82로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 83, 84 및 85로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔27〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 86, 87 및 88로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 89, 90 및 91로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔28〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 92, 93 및 94로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 95, 96 및 97로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔29〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 98, 99 및 100으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 101, 102 및 103으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔30〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 104, 105 및 106으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 107, 108 및 109로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔31〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 110, 111 및 112로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 113, 114 및 115로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
〔32〕상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 116, 117 및 118로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 119, 120 및 121로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 〔12〕에 기재된 항체 또는 그 단편.
본 발명에 의하면, SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 항체를 사용하여, 상기 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질을 검출할 수 있다. 또한, 면역학적 검출에 있어서, 비특이적인 반응을 억제하면서, SARS-CoV-2를 고감도로 검출할 수 있다. 또한, SARS-CoV-2를 특이적 그리고 고감도로 검출 가능한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립, 및 그것을 포함하는 키트를 제공할 수 있다.
도 1의 a는 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 평면도, b는 a에서 나타내어진 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 길이 방향 단면도이다.
본 발명에 있어서, 항체의 제조 및 그 항체를 사용하는 검출법에 있어서의 각 스텝은 각각, 그 자체, 공지의 면역학적 방법에 준거하여 행해진다.
(항체)
본 발명의 항체는 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 특이적으로 결합하는 것으로, 폴리클로날 항체 및 모노클로날 항체 중 어느 것이어도 된다.
SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 특이적인 폴리클로날 항체는 예를 들면, SARS-CoV-2로부터 추출 정제한 뉴클레오캡시드 단백질, 또는 뉴클레오캡시드 단백질의 유전자를 대장균 등에 도입하고, 유전자공학적으로 발현시켜 추출 정제한 뉴클레오캡시드 단백질, 또는 뉴클레오캡시드 단백질의 일부를 구성하는 폴리펩티드를 면역용 항원으로서 동물에 면역하고, 그 항혈청으로부터 얻을 수 있다.
SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 특이적인 모노클로날 항체는 예를 들면, 다음 방법으로 얻을 수 있다. 우선, 상기와 마찬가지로 SARS-CoV-2로부터 추출 정제한 뉴클레오캡시드 단백질, 또는 유전자공학적으로 발현시켜 추출 정제한 뉴클레오캡시드 단백질, 또는 뉴클레오캡시드 단백질의 일부를 구성하는 폴리펩티드를 면역용 항원으로서 사용하여, 마우스, 래트, 토끼 및 닭 등의 동물에 면역한다. 마우스에 면역했을 경우, 면역된 동물의 비장 세포와 미엘로마 세포를 융합하여 얻어진 융합 세포를 HAT 함유 배지로 선택한 후에 증식시킨다. 증식한 세포의 배양 상청을, 예를 들면, 효소 표지 면역법 등에 의해, 상기의 방법으로 얻어진 뉴클레오캡시드 단백질과 반응시킴으로써, 항SARS-CoV-2 항체 산생주를 선별한다. 마우스 이외의 동물에 면역했을 경우, 상기 면역용 항원을 면역된 동물로부터 림프 조직을 적출하고, 항체 유전자를 증폭함으로써 항체 라이브러리를 제작한다. 그 후, 대장균에 도입하여 양성 클론을 선별한다.
또한, 융합 세포나 B세포로부터 RNA를 추출하고, 추출한 RNA에 근거하여 항체 유전자의 중쇄 및 경쇄의 cDNA를 합성한다. 이 때, 합성하는 cDNA는 CDR 영역 등의 면역 글로불린 분자의 부분을 발현하는 것이어도 된다. 그 후, 중쇄 발현 클론 및 경쇄 발현 클론을 포유 동물 세포에 공도입함으로써, 세포 중에서 중쇄 및 경쇄를 공발현시켜, 배양 상청을 회수함으로써 항체를 제작할 수도 있다.
본 발명의 항체는 항체 자체, 및 상기 항체와 실질적으로 동등한 성능의 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 항체 단편 및 개변 항체 중 어느 것이어도 된다. 상기 항체 단편은 본 발명의 항체와 같거나 또는 동등하게 SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질을 특이적으로 인식하는 것이면, Fab 프래그먼트, Fab' 프래그먼트, F(ab')2 프래그먼트, scFv 프래그먼트 등, 또는 V 영역, VH 영역 혹은 CDR 영역 등의 면역 글로불린 분자의 부분이어도 된다. 또한, 상기 개변 항체는 본 발명의 항체와 동등하게 SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질을 특이적으로 인식하는 것이면 되고, 그 구체예로서는, 키메라 또는 인간화한 항체와 같이 동물종을 개변한 항체, 서브타입을 개변한 항체, 아이소타입을 개변한 항체, 유전자공학적으로 재조합 혹은 합성된 항체, 및 2종류의 항원 또는 상이한 2종류의 항원 결정기 중 어느 것에도 결합하는 것이 가능하도록 유전자공학적으로 재조합된 항체 등을 들 수 있다.
본 발명의 항체는 SARS-CoV-2의 전체 길이 419 아미노산(서열번호 1)으로부터 형성되는 뉴클레오캡시드 단백질을 인식할 수 있다. 또한, 본 발명의 항체는 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질을 인식하는 것이 가능하면 되고, 뉴클레오캡시드 단백질의 41번째의 아미노산부터 186번째의 아미노산에 의해 형성되는 N 말단 도메인(NTD)을 인식하는 것이어도 된다. 나아가, 본 발명의 항체는 C 말단 도메인(CTD)인 247번째의 아미노산부터 419번째의 아미노산에 의해 형성되는 영역을 인식하는 것이어도 된다.
본 발명에 있어서의 N 말단 도메인(NTD)을 인식하는 항체는, (1) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 2, 3 및 4로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 5, 6 및 7로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (2) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 8, 9 및 10으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 11, 12 및 13으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (3) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 14, 15 및 16으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 17, 18 및 19로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (4) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 20, 21 및 22로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 23, 24 및 25로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (5) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 26, 27 및 28로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 29, 30 및 31로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (6) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 32, 33 및 34로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 35, 36 및 37로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (7) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 38, 39 및 40으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 41, 42 및 43으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (8) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 44, 45 및 46으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 47, 48 및 49로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (9) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 50, 51 및 52로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 53, 54 및 55로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (10) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 56, 57 및 58로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 59, 60 및 61로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (11) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 62, 63 및 64로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 65, 66 및 67로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (13) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 74, 75 및 76으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 77, 78 및 79로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (17) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 98, 99 및 100으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 101, 102 및 103으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (18) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 104, 105 및 106으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 107, 108 및 109로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (20) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 116, 117 및 118로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 119, 120 및 121로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체이다.
본 발명에 있어서의 C 말단 도메인(CTD)을 인식하는 항체는, (12) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 68, 69 및 70으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 71, 72 및 73으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (14) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 80, 81 및 82로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 83, 84 및 85로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (16) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 92, 93 및 94로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 95, 96 및 97로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체, (19) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 110, 111 및 112로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 113, 114 및 115로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체이다.
본 발명에 있어서의 N 말단 도메인 및 C 말단 도메인 사이에 위치하는 영역을 인식하는 항체는, (15) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 86, 87 및 88로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 89, 90 및 91로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체이다.
제 1 항체가 N 말단 도메인을 인식하는 항체일 경우, 제 2 항체는 N 말단 도메인을 인식하는 항체, C 말단 도메인을 인식하는 항체, N 말단 도메인 및 C 말단 도메인 사이에 위치하는 영역을 인식하는 항체 중 어느 것이어도 된다.
제 1 항체가 C 말단 도메인을 인식하는 항체일 경우, 제 2 항체는 N 말단 도메인을 인식하는 항체, C 말단 도메인을 인식하는 항체, N 말단 도메인 및 C 말단 도메인 사이에 위치하는 영역을 인식하는 항체 중 어느 것이어도 된다.
제 1 항체가 N 말단 도메인 및 C 말단 도메인 사이에 위치하는 영역을 인식하는 항체일 경우, 제 2 항체는 N 말단 도메인을 인식하는 항체, C 말단 도메인을 인식하는 항체, N 말단 도메인 및 C 말단 도메인 사이에 위치하는 영역을 인식하는 항체 중 어느 것이어도 된다.
(검출 방법)
본 발명은 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 특이적으로 반응하는 항체 또는 그 단편을 사용한 면역학적 측정법에 의해, 피검 시료에 포함되는 SARS-CoV-2의 존재를 검출하는 방법도 또한 제공한다. 상기 면역학적 측정 방법은 바람직하게는, 피검 시료를 상기 본 발명의 항체 또는 그 단편과 접촉시키는 것을 포함한다. 본 발명의 검출 방법에 의하면, 피검 시료가 SARS-CoV-2를 포함할 경우, 상기 접촉 공정에 있어서 상기 항체 또는 그 단편과 SARS-CoV-2의 복합체가 형성되기 때문에, 예를 들면, 이 복합체를 정량적 또는 정성적으로 측정함으로써, SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질, 나아가서는 SARS-CoV-2를 검출할 수 있다.
본 발명의 검출 방법에 있어서의 상기 복합체의 검출은 통상의 면역학적 측정법이면 어느 것을 채용해도 행할 수 있다. 면역학적 측정법의 구체예로서는, 효소 면역 측정법 (ELISA법 또는 EIA법), 형광 면역 측정법(FIA), 방사 면역 측정법(RIA), 발광 면역 측정법(LIA), 효소 항체법, 형광 항체법, 이뮤노크로마토그래피법(이뮤노크로마토법), 플로우 스루법, 면역비탁법, 라텍스비탁법, 라텍스 응집 반응 측정법, 적혈구 응집 반응법, 또는 입자 응집 반응법 등을 들 수 있다. 특히 본 발명에 있어서의 SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질의 면역학적 측정법에는, 2개의 항체 또는 그 단편을 사용한 샌드위치법인 ELISA법, 이뮤노크로마토법 및 플로우 스루법이 바람직하다. ELISA법은 판정 시간을 필요로 하지만, 감도와 정량성이 뛰어나, 다검체를 동시에 처리하는 것이 가능하다. 이뮤노크로마토법은 감도와 정량성이 ELISA법에 뒤지지만, 신속 그리고 간편하게 검출할 수 있다. 플로우 스루법은 이뮤노크로마토법에 비하면 조작이 번잡하지만, ELISA법에 감도와 정량성은 필적하고, 또한 신속하게 검출할 수 있다.
샌드위치법에 사용하는 2개의 항체 또는 그 단편은, 항체끼리의 경합 반응을 회피하고, 높은 반응성을 갖기 때문에, 2개의 항체 각각이 상이한 에피토프를 인식하는 것이 바람직하다.
본 발명의 이뮤노크로마토법은 대표적으로는, 항원의 제 1 항원 결정기에서 항원 항체 반응 가능한 제 1 항체를 미리 소정 위치에 고정시켜 형성된 포착 부위를 구비하는 막담체를 준비하고, 상기 항원의 제 2 항원 결정기에서 항원 항체 반응 가능하고 또한 표지된 제 2 항체와 소정량의 피검 시료의 혼합액을, 상기 포착 부위를 향하여 상기 막담체에서 크로마토 전개시켜, 상기 피검 시료 중에 상기 항원이 포함될 경우에, 상기 항원과 상기 제 2 항체의 복합체를 상기 포착 부위에 포착시키는 이뮤노크로마토법에 있어서, 상기 제 1 항체 및 상기 제 2 항체로서, 본 발명의 항체 또는 그 단편을 사용하는 것에 의해 실시할 수 있다.
본 발명에 있어서의 피검 시료는 특별히 제한은 없지만, 비강 흡인액, 비강 닦음액, 비인두 닦음액, 인두 닦음액, 객담, 타액, 기관지 폐포 세정액 등, SARS-CoV-2가 존재할 수 있는 생체 시료를 들 수 있다. 이들 검체 채취 방법은 특별히 한정되지 않고, 공지의 방법으로 채취된다. 예를 들면, 비강 닦음액, 비인두 닦음액, 인두 닦음액의 경우에는 면봉을 사용한 방법이 다용된다. 채취된 피검 시료는 예를 들면 이뮤노크로마토법의 경우에는, 그대로 막담체에 첨가되어도 되지만, 전개 용매 등의 적당한 희석액으로 희석하고 나서 막담체에 첨가되어도 된다. 나아가 채취된 피검 시료는 피검 시료에 포함되는 생체 성분에서 유래하는 점착물이나 고형물을 제거하기 위해서, 필터를 사용하여 여과한 후에 막담체에 첨가해도 된다.
혈액이 혼입된 피검 시료를 사용할 때, 특히 표지 항체의 표지 물질로서 금콜로이드 등의 정색 표지 물질가 사용되는 경우, 시료 첨가용 부재에 혈구 포착 부재를 배치해 두는 것이 바람직하다. 이에 의해, 적혈구가 막담체에 전개되는 것이 저지되기 때문에, 막담체의 포착 부위에 있어서의 정색 표지의 집적의 확인이 용이해진다. 혈구 포착 막부재로서는 카르복시메틸셀룰로오스막이 사용되고, 구체적으로는, 어드밴틱 토요 카부시키가이샤에서 판매되고 있는 이온 교환 여과지 CM(상품명)이나, 왓트만 재팬 카부시키가이샤에서 판매되고 있는 이온 교환 셀룰로오스 페이퍼 등을 사용할 수 있다.
(검출 키트)
본 발명의 검출 방법은 면역학적 측정법에 따른 형태로 실시할 수 있지만, 신속 그리고 간편하게 실시할 수 있는 이뮤노크로마토법에 따른 형태로 실시하는 것이 바람직하다. 이뮤노크로마토법은 공지의 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 구성에 준거하여 용이하게 실시할 수 있다.
일반적으로, 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립은, 항원인 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질의 제 1 항원 결정기에서 항원 항체 반응 가능한 제 1 항체와, 상기 항원의 제 2 항원 결정기에서 항원 항체 반응 가능하고 또한 표지된 제 2 항체와, 막담체를 구비하고, 상기 제 1 항체는 상기 막담체의 소정 위치에 미리 고정되어 포착 부위를 형성하고, 상기 제 2 항체는 상기 포착 부위로부터 이격된 위치에서 상기 막담체에서 크로마토 전개 가능하도록 배치되어 구성된다. 제 1 항체 및 제 2 항체는 상술한 바와 같이 각각 폴리클로날 항체여도 되고 모노클로날 항체여도 되지만, 어느 일방이 모노클로날 항체인 것이 바람직하고, 모두가 모노클로날 항체인 것이 보다 바람직하다. 통상, 제 1 항원 결정기 및 제 2 항원 결정기는 항원 상의 위치 및 구조 모두가 상이하고, 제 1 항체 및 제 2 항체는 「헤테로」의 조합으로 사용된다.
또한, 뉴클레오캡시드 단백질은 바이러스 내의 RNA와 함께 다수 존재하고 있지만, 항체끼리의 경합 반응을 회피하고, 높은 반응성을 달성하기 위해서도, 제 1 항체와 제 2 항체는, SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질에 존재하는 상이한 항원 결정기를 인식하는 항체인 것이 바람직하다.
이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 예로서, 도 1에 나타내어지는 것을 들 수 있다. 도 1은 예시이며, 스트립의 형상, 구성, 사용하는 부재의 종류, 구조는 이것들에 한정되지 않는다. 도 1에 있어서, 숫자 1은 점착 시트, 2는 함침 부재, 3은 막담체, 4는 흡수용 부재, 5는 시료 첨가용 부재, 31은 포착 부위, 32는 대조 포착 부위를 나타내고 있다.
예를 들면, 막담체(3)는 폭 5mm, 길이 36mm의 가늘고 긴 띠상의 니트로셀룰로오스제 멤브레인 필터가 사용되고 있으며, 그 크로마토 전개 개시점측의 말단으로부터 7.5mm의 위치에 제 1 항체가 고정되고, 피검체의 포착 부위(31)가 형성되어 있다. 또한, 막담체(3)의 크로마토 전개 개시점측의 말단으로부터 15mm의 위치에 대조 포착 부위(32)가 형성되어 있어, 피검체의 존재 여부에 상관없이 피검 시료의 크로마토 전개가 정상적으로 행해진 것을 확인할 수 있도록 하고 있다. 통상, 상기 제 2 항체와 면역학적으로 특이적으로 결합하는 물질(피검체를 제외한다)을 막담체(3)에 고상화함으로써 대조 포착 부위(32)를 형성할 수 있다. 예를 들면, 제 2 항체로서 마우스 유래의 항체를 사용했을 경우에는, 마우스 항체에 대한 항체를 사용함으로써 대조 포착 부위(32)를 형성할 수 있다.
막담체(3)로서, 니트로셀룰로오스제 멤브레인 필터를 사용하고 있지만, 막담체(3)는 피검 시료를 크로마토 전개 가능하고, 또한, 제 1 항체의 고정이 가능하며, 상기 포착 부위(31) 및 상기 대조 포착 부위(32)를 형성할 수 있는 것이면 되고, 다른 셀룰로오스제 막, 나일론제 막, 유리 섬유막 등을 사용할 수 있다.
함침 부재(2)는 상기 제 1 항체가 결합하는 제 1 항원 결정기와 상이한 부위에 위치하는 제 2 항원 결정기에서 상기 항원과 항원 항체 반응하는 제 2 항체를 함침시킨 부재로 이루어지고, 상기 제 2 항체는 적당한 표지 물질에 의해 미리 표지된다.
예를 들면, 도시한 예에서는, 함침 부재(2)로서, 폭 5mm, 길이 15mm의 유리 섬유 부직포를 사용하고 있지만, 이것에 한정되는 것이 아니고, 셀룰로오스류 천(여과지, 니트로셀룰로오스막 등), 폴리에틸렌이나 폴리프로필렌 등의 다공질 플라스틱류 천 등도 함침 부재(2)에 사용할 수 있다.
제 2 항체의 표지 물질로서는, 사용 가능한 것이면 어떠한 물질이어도 되고, 정색 표지 물질, 효소 표지 물질, 형광 표지 물질, 방사선 표지 물질 등을 들 수 있다. 이 중, 포착 부위(31)에서의 색의 변화를 육안으로 관찰함으로써 신속 그리고 간편하게 판정할 수 있는 점에서, 정색 표지 물질을 사용하는 것이 바람직하다.
정색 표지 물질로서는, 금콜로이드 및 백금 콜로이드 등의 금속 콜로이드, 또한 그것들의 복합 금속 콜로이드, 적색 및 청색 등의 안료로 착색된 폴리스티렌 라텍스 등의 합성 라텍스, 천연 고무 라텍스 등의 라텍스를 들 수 있다. 이들 중, 금콜로이드 등의 금속 콜로이드가 특히 바람직하다.
상기 함침 부재(2)는 상기 표지 물질에 의해 표지된 제 2 항체의 현탁액을 유리 섬유 부직포 등의 부재에 함침시키고, 건조시키는 것 등에 의해 제작할 수 있다.
도 1에 있어서, 크로마토 전개 개시점측을 「상류」라고 하고, 전개 용매가 흐르는 방향(흡수 부재(4)측)을 하류라고 한다. 막담체(3)를 점착 시트(1)의 중간 정도에 점착하고, 상기 막담체(3)의 상류 말단 위에, 함침 부재(2)의 하류 말단을 중합하여 연접함과 아울러, 함침 부재(2)의 상류 부분을 점착 시트(1)에 접착함으로써, 본 발명의 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 제작할 수 있다.
또한, 막담체(3)의 하류 부분의 상면에 흡수용 부재(4)의 상류 말단을 중합하여 연접함과 아울러, 상기 흡수용 부재(4)의 하류측 부분을 점착 시트(1)에 접착한다. 또한, 함침 부재(2)의 상면이 시료 첨가용 부재(5)의 하류 부분에 의해 피복되도록 배치함과 아울러, 상기 시료 첨가용 부재(5)의 상류부를 점착 시트(1)에 접착한다.
흡수용 부재(4)는 액체를 신속하게 흡수하고, 유지할 수 있는 부재이면 되고, 면포, 여과지, 및 폴리에틸렌이나 폴리프로필렌 등으로 이루어지는 다공질 플라스틱 부직포 등을 들 수 있지만, 여과지가 최적이다.
시료 첨가용 부재(5)는 다공질 폴리에틸렌 및 다공질 폴리프로필렌 등의 다공질 합성 수지의 시트 또는 필름, 및 여과지 및 면포 등의 셀룰로오스제지 또는 직포 혹은 부직포를 사용할 수 있다.
또한, 도 1의 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립은 시료 첨가용 부재(5)와 포착 부위(31)의 상방에 각각 피검 시료 주입부와 판정부가 개구된 적당한 플라스틱제 케이스 내에 수용되어 제공할 수 있다. 한편, 사용자의 2차 감염을 방지할 목적으로 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립은 플라스틱제 케이스 내에 수용되어 제공되는 것이 바람직하다.
본 발명의 이뮤토크로마토 키트는 상기한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립에 더하여, 피검체를 전개하기 위한 전개 용매를 포함하는 것이 바람직하다.
전개 용매는 검체 희석액으로서도 사용하는 것이 가능하며, 통상 용매로서 물을 포함하고, 이 용매에 완충액, 무기염, 유기염, 계면활성제, 단백질, 고분자 화합물, 폴리 음이온, 항균제, 킬레이트제 등등으로부터 선택된 1종 또는 2종 이상을 첨가해도 된다.
또한, 계면활성제, 단백질, 고분자 화합물, 및 폴리 음이온은 항원 항체 반응을 촉진하기 위하여 또는 비특이적 반응을 억제하기 위하여 첨가해도 된다.
특히 본 발명을 실시하는 데에 있어서는, SARS-CoV-2 입자를 구성하는 지질 이중막으로 이루어지는 엔벨로프를 용해시켜, 내재하는 뉴클레오캡시드 단백질을 유리하고, 항SARS-CoV-2 항체의 항원 인식 부위를 노출시키기 위하여 효과적인 것으로서, 비이온성 계면활성제를 전개 용매에 함유시키는 것이 바람직하다. 비이온성 계면활성제로서, 예를 들면, 폴리에틸렌글리콜모노-p-이소옥틸페닐에테르, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노라우레이트, Brij(상표) 35 (상품명) 등을 들 수 있고, 1종 혹은 2종 이상을 첨가해도 된다.
이렇게 하여, 생체 시료 등으로 이루어지는 피검 시료를 필요에 따라 전개 용매와 혼합함으로써 크로마토 전개 가능한 혼합액을 얻은 후, 상기 혼합액을 도 1에 나타내어지는 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 시료 첨가용 부재(5)에 상기 혼합액을 첨가하면, 상기 혼합액은 상기 시료 첨가용 부재(5)를 통과하여 함침 부재(2)에 있어서, 표지된 제 2 항체와 혼합한다. 그 때, 상기 혼합액 중에 피검체가 존재하면, 항원 항체 반응에 의해 피검체와 제 2 항체의 복합체가 형성된다.
이 복합체는 막담체(3) 안을 크로마토 전개되어 포착 부위(31)에 도달하고, 거기에 고정된 제 1 항체와 항원 항체 반응함으로써 포착된다. 표지 물질로서 금콜로이드 등의 정색 표지 물질을 사용할 경우, 상기 정색 표지 물질의 집적에 의해 포착 부위(31)가 발색하기 때문에, 즉시, 피검체를 정성적으로 측정할 수 있다. 또한, 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 포착 부위(31)에 집적한 상기 정색 물질의 정색 강도를 이뮤노크로마토 리더에 의해 광학적으로 판독함으로써, 정색 강도를 수치화하고, 정량적으로 측정할 수 있다.
또한, 정상적으로 크로마토 전개되었을 경우에는, 피검체와 항원 항체 반응하지 않은 제 2 항체가, 대조 포착 부위(32)에 고정화된 제 2 항체에 대한 항체에 의해 포착되고, 상기 포착 부위(31)와 마찬가지로 발색하기 때문에, 정상적으로 크로마토 전개된 것이 확인된다. 한편으로, 대조 포착 부위(32)가 발색하지 않았을 경우, 제 2 항체가 전개되어 있지 않은 등의 문제가 발생한 것이 확인된다.
도시한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립에 있어서, 제 2 항체는 함침 부재(2)에 함침시켜 막담체(3) 상에 배치되어 있지만, 포착 부위(31)로부터 이격된 위치에서 막담체(3)에 전개 가능하도록 준비되어 있으면 되고, 도시한 형태에 한정되지 않는다. 예를 들면, 제 2 항체는 피검 시료와 전개 용매를 혼합하기 위하여 준비되어 튜브 등의 용기 내에 미리 포입되고, 제 1 항체가 미리 고정된 막담체(3)로 이루어지는 테스트 스트립과 함께 들어 있어도 된다.
실시예
하기의 실시예에 의해 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이 실시예에 한정되는 것은 아니다.
(실시예 1: 재조합 뉴클레오캡시드 단백질의 발현 및 정제)
SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질 유전자를 실장한 플라스미드인 pcMV3-2019-nCov-NP-His(Sino bio)를 E.coli DH5α Competent Cells(다카라 바이오)에 도입하고, 카나마이신을 첨가한 Terrific broth에서 밤새 배양함으로써, 상기 플라스미드를 증폭했다. 이 증폭한 플라스미드를 293T 세포에 트랜스펙션하고, 7일 후에 세포의 회수 및 용해를 실시했다. 세포 용해액을 초음파 처리한 후에, 친화성 칼럼을 사용하여 정제했다. 이 정제 단백질을 인산 완충 생리 식염수(이하, PBS라고 칭한다)에 대하여 투석하고, 목적으로 하는 재조합 뉴클레오캡시드 단백질로 했다.
(실시예 2: 재조합 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 모노클로날 항체의 제조)
SARS-CoV-2의 뉴클레오 프로테인으로서 SARS-CoV-2 coronavirus nucleocapsid protein NP(CUSABIO사제)(이하, SARS-CoV-2 리콤비넌트 NP라고 한다) 및 상기 실시예 1에서 제작한 재조합 뉴클레오캡시드 단백질을 사용했다. 각각의 재조합 단백질을 면역용 항원으로서, SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 모노클로날 항체를 제조했다. 마우스에 면역하는 항원은, 사전에 재조합 단백질과 등량의 아쥬반트(니혼 BD)를 혼합함으로써 조제했다. 100μg의 항원량이 되도록 재조합 단백질과 아쥬반트의 혼합물을 마우스(BALB/c, 6주령, 니혼 SLC)에 복수 회 면역하고, 그 비장 세포를 세포 융합에 사용했다. 세포 융합에는 마우스의 골수종 세포인 Sp2/0-Ag 14세포(Shulman 등, 1987)를 사용했다. 세포 융합은 마우스의 비장 세포와 Sp2/0-Ag14 세포 혼합하고, Polyethylene glycol solution(Sigma)을 첨가함으로써 행했다. 융합 세포는 HAT-RPMI[0.1mM Sodium hypoxanthine, 0.4μM Aminopterin 및 0.1mM Thymidine을 포함하는 혈청 첨가 RPMI]로 배양하고, 효소 결합 항체법(ELISA)에 의해 배양 상청 중의 항체 산생을 확인했다. 항체 산생 양성의 세포를 HT-RPMI[0.1mM Sodium hypoxanthine 및 0.1mM Thymidine을 포함하는 혈청 첨가 RPMI]에서 배양하고, 또한 혈청 첨가 배지에서 배양을 계속했다.
(실시예 3: 모노클로날 항체의 조제)
실시예 2에서 클로닝된 세포는 사전에 2,6,10,14-Tetramethylpentadecane(키시다 카가쿠)을 접종된 마우스(BALB/c, 리타이어, 니혼 찰스·리버)의 복강 내에 접종되었다. 그 후, 마우스로부터 복수를 채취하고, 프로틴 G 컬럼에 제공하고, 모노클로날 항체를 정제했다.
최종적으로, SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 모노클로날 항체 산생 세포가 83 클론 취득되었다.
(실시예 4: 항SARS-CoV-2 항체의 아미노산 해석)
실시예 3에서 얻어진 항SARS-CoV-2 항체 중 10 클론의 상보성 결정 영역(CDR)의 해석을 행했다. 실시예 2에서 제작된 모노클로날 항체 산생 세포를 배양하고, 소정량의 세포수로부터 RNA를 정제했다. 정제한 RNA를 주형으로 하여, 올리고 dT 프라이머 및 SuperScript(상표) III 역전사 효소(ThermoFisher SCIENTIFIC)를 사용하여, cDNA를 합성했다. 그 후, 항체 정상 영역 특이적 서열 3' 리버스 프라이머를 사용하여, 가변 부위의 서열을 증폭 후, 시퀀스 해석을 실시했다. 경쇄의 서열은 T 벡터에 삽입 후, 트랜스포메이션되고, T 플라스미드를 정제함으로써, 시퀀스 해석을 실시했다. 시퀀스 해석에 의해 해독한 DNA 서열을 IMGT/V-QUEST, VBASE2, IGBLAST의 3개의 프로그램을 사용하여 해석하고, CDR의 동정이 일치하는 것을 확인했다. CDR 서열의 해석 결과를 표 1에 나타낸다. 한편, 본 발명에 있어서, 표 1에 나타내어지는 각 항체의 CDR 서열은, 같거나 또는 동등하게 SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질을 인식하는 한, 1개 또는 몇 개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가되어도 되는 것은 당업자에게는 명확하다.
[표 1]
(실시예 5: 항SARS-CoV-2 항체의 반응성 시험)
실시예 3에서 얻어진 항SARS-CoV-2 항체의 반응성을 시험했다. 항체의 반응성을 평가하기 위해서, 리콤비넌트 단백질인 SARS-CoV-2 리콤비넌트 NP, 인간 코로나 바이러스 229E(ATCC로부터 취득한 VR-740주), 인간 코로나 바이러스 OC43(ATCC로부터 취득한 VR-1558주)를 소정 농도로 고상화한 마이크로플레이트를 제작했다. 각각의 고상화한 마이크로플레이트에 실시예 3에서 제작한 각 항체를 첨가하고, 실온에서 1시간 반응시켰다. 반응 종료 후, 웰 내의 용액을 흡인 제거한 후, 호스래시디 퍼옥시다아제 표지된 항마우스 항체를 첨가하고, 1시간 반응시켰다. 그 후, 발색 기질로서 3,3',5,5'-테트라메틸벤진 용액을 첨가하여 반응시키고, 2규정의 황산에 의해 반응을 정지시켰다. 마이크로플레이트 리더를 사용하여, 반응 정지 후의 마이크로플레이트의 각 웰에 있어서의 450nm 흡광도를 측정했다. 그 결과를 표 2에 나타낸다.
[표 2]
표 2로부터, 실시예 3에서 제작된 항SARS-CoV-2 항체는, 리콤비넌트 단백질인 SARS-CoV-2 리콤비넌트 NP에 높은 반응성을 나타내고, 음성 대조인 인간 코로나 바이러스 229E 및 OC43과는 교차 반응하지 않는 것이 확인되었다. 따라서, 취득된 항SARS-CoV-2 항체는 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 특이적으로 결합하는 것이 나타났다.
또한, 서열번호 1에 나타내어지는 SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질의 N 말단에 위치하는 41번째부터 186번째의 아미노산으로 이루어지는 재조합 뉴클레오캡시드 단백질(CUSABIO) 및 C 말단에 위치하는 220번째부터 419번째의 아미노산으로 이루어지는 재조합 뉴클레오캡시드 단백질(CUSABIO)을 사용하여 상기 방법에 의해 반응성을 시험했다. 그 결과를 표 3에 나타낸다.
[표 3]
표 3으로부터, 실시예 3에서 제작된 항체는, N 말단에 위치하는 41번째부터 186번째의 아미노산으로 이루어지는 재조합 뉴클레오캡시드 단백질에 반응하는 것이 확인되었다. 이것으로부터, 취득된 항SARS-CoV-2 항체는, SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질의 N 말단 영역, 특히, N 말단으로부터 41번째 내지 186번째의 아미노산으로 이루어지는 영역에 위치하는 에피토프를 인식하는 것이 나타났다.
(실시예 6: 항SARS-CoV-2에 대한 항체의 해리 속도 정수의 산출)
실시예 3에 의해 제작된 항체 각각의 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 해리 정수(Kd)의 산출을 실시했다. Kd값은 Fortebio사제의 BLItz System(상품명)을 사용하고, 바이오 레이어 간섭법에 의해 산출했다. 바이오센서 칩으로서, 항마우스 IgG Fv 항체가 고상화된 것을 사용했다.
측정 준비로서, 상기 바이오센서 칩을 200μL의 완충액에 10분간 침지함으로써, 센서 칩의 수화를 실시했다.
항체의 해리 정수를 측정하기 위해서, 상기 바이오센서 칩을 완충액으로 30초간 세정하여, 초기값으로 교정했다. 그 후, 실시예 3에서 취득된 항체 용액을 100nM로 조제하고, 상기 항체 용액 4μL를 바이오센서 칩에 반응하여, 120초에 걸쳐 바이오센서 칩의 표면에 항SARS-CoV-2 항체를 고상화했다. 그 후, 결합되어 있지 않은 항체를 제거하기 위해서, 완충액으로 30초간 세정했다. 계속해서, 바이오센서 칩 표면에 고상화한 항SARS-CoV-2 항체에 대하여, 100nM로 조제한 SARS-CoV-2 리콤비넌트 NP 4μL를 120초간 상호 작용시킴으로써 항원 항체 반응을 실시한 후, 완충액에 의해 120초간 세정함으로써 항체의 결합 능을 측정했다. 측정 종료 후, 해리 정수를 산출했다. 산출된 각 항체의 결합 속도 정수, 해리 속도 정수 및 해리 정수를 표 4에 나타낸다.
[표 4]
표 4로부터, 이번에 얻어진 항체는 가장 결합력이 약한 항체의 해리 정수가 2.0nM이고, 가장 결합력이 강한 항체의 해리 정수가 38pM인 것이 나타났다. 이것으로부터, 이번에 취득된 항체는 SARS-CoV-2 리콤비넌트 NP에 대하여 2.0nM 이하의 해리 정수를 갖고 있는 것이 나타났다.
(실시예 7: 토끼 유래의 SARS-CoV-2에 대한 면역 세포 시료의 조제)
SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질로서 SARS-CoV-2 리콤비넌트 NP를 면역용 항원으로서 사용하고, 토끼로부터 채혈을 행함으로써 면역 세포를 취득했다. 토끼에 면역하는 항원은, 사전에 재조합 단백질과 등량의 아쥬반트(니혼 BD)를 혼합함으로써 조제했다. 500μg의 항원량이 되도록 SARS-CoV-2 리콤비넌트 NP와 아쥬반트의 혼합물을 토끼에 복수 회 면역하고, 채혈 및 비장의 적출을 행했다. 채혈한 전혈로부터, 원심 분리에 의해 말초혈 단핵구(PBMC)만을 분리하여 회수함으로써, PBMC 시료를 제작했다. 또한, 적출한 비장은 여과함으로써 세포화를 행하고, 토끼 비장 시료로 했다.
(실시예 8: 토끼 유래의 항SARS-CoV-2 항체 유전자의 취득)
실시예 7에서 조제한 토끼 비장 시료로부터, SARS-CoV-2에 대한 림프구를 분리하기 위해서, 분리 용액인 Lymphocyte Separation Medium 1077(PromoCell사)을 사용하여 비중 원심법을 행하고, 토끼 비장 시료로부터 림프구 분획의 분취를 행함으로써, 림프구 시료를 조제했다. PBMC 시료 및 림프구 시료로부터 SARS-CoV-2 리콤비넌트 NP에 반응하는 B 세포를 분취하기 위해서, 각각의 시료와 형광 표지한 SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질을 반응시켰다. 셀 소터(소니사)를 사용하여, 형광 표지한 뉴클레오캡시드 단백질에 반응하는 B 세포를 측정하고, 반응성이 확인된 세포를 싱글 셀 소팅에 의해 마이크로플레이트에 1세포씩 분취했다. 분취한 세포에 대하여 싱글 셀 RT-PCR을 행하고, 모노클로날 항체의 유전자 취득을 행했다. 이에 의해, 합계 200클론의 항체 유전자를 취득했다.
(실시예 9: Fab 항체 유전자의 서열 해석)
실시예 8에서 취득된 항체 유전자 중 10 클론의 항체 유전자의 중쇄 및 경쇄의 DNA 서열을 해석했다. 각각의 가변 영역을 코드하는 cDNA를 pRSET 벡터에 도입하고, 그 DNA 서열을 생어법에 의해 해석했다. 그 후, 얻어진 DNA 서열을 기초로, 아미노산 서열 및 Fab 항체의 CDR의 해석을 행했다. 해석한 DNA 서열로부터 IMGT/V-QUEST, VBASE2, IGBLAST의 3개의 프로그램을 사용하여 CDR을 해석하고, 특정된 CDR이 일치하는 것을 확인했다. CDR 서열의 해석 결과를 표 5에 나타낸다. 한편, 본 발명에 있어서, 표 5에 나타내어지는 각 항체의 CDR 서열은 같거나 또는 동등하게 SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질을 인식하는 한, 1개 또는 몇 개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가되어도 되는 것은 당업자에게는 명확하다.
[표 5]
표 5로부터, TN02, TN06, TN09의 CDR 서열이 1 내지 2 아미노산의 차이밖에 없어, 중쇄 및 경쇄 CDR이 유사하기 때문에, 이들 항체는 항원이 인식하는 에피토프가 동일해지는 것으로 판단했다.
(실시예 10: 무세포 발현계에 의한 Fab 항체의 제작 및 반응성 시험)
실시예 8에서 취득된 10클론의 항체 유전자에, 무세포 발현용의 프로모터 서열 및 리보솜 결합 서열을 부가하여 주형을 제작했다. 각각의 주형을 사용하여, PUREfrex(상표) 2.0(진 프론티어사)에 의해 무세포 전사 번역 공역 반응을 행함으로써, 항SARS-CoV-2Fab 항체의 단백질 발현을 행했다. 이 때, 디술피드 결합을 형성하기 위한 최적의 조건으로 하기 위하여 DsbC Set(진 프론티어사)를 첨가했다. 이것에 의해, 항SARS-CoV-2Fab 항체를 취득했다. 그리고, 얻어진 항SARS-CoV-2Fab 항체에 대하여 반응성 평가를 행했다. 이 때, 항체는 H쇄를 HA택으로 표지된 것을 사용했다. 항체의 반응성을 평가하기 위해서, 취득한 SARS-CoV-2 리콤비넌트 NP를 소정 농도로 고상화한 마이크로플레이트를 제작했다. 이 마이크로플레이트에, HA택 표지된 소정 농도의 항SARS-CoV-2Fab 항체를 반응시킨 후, 항체의 HA택에 대한 호스래시디 퍼옥시다아제 표지된 항HA택 항체를 반응시켰다. 그 후, 발색 기질로서 3,3',5,5'-테트라메틸벤진 용액을 첨가하여 반응시키고, 2규정의 황산에 의해 반응을 정지시켰다. 마이크로플레이트 리더를 사용하여, 반응 정지 후의 마이크로플레이트의 각 웰의 450nm 흡광도를 측정했다.
또한, 항SARS-CoV-2Fab 항체의 발현량을 평가했다. 구체적으로는, 얻어진 HA택 표지된 항SARS-CoV-2Fab 항체를 반응성 평가에서 사용한 소정 농도의 5배 농도로 마이크로플레이트에 고상화했다. 고상화한 항체의 H쇄에 부가한 HA택에 대한 호스래시디 퍼옥시다아제 표지된 항HA택 항체를 반응시켰다. 그 후, 발색 기질로서 3,3',5,5'-테트라메틸벤진 용액을 첨가하여 반응시키고, 2규정의 황산에 의해 반응을 정지시켰다. 마이크로플레이트 리더를 사용하여, 반응 정지 후의 마이크로플레이트의 각 웰의 450nm 흡광도를 측정했다. 그리고, 발현량당의 반응성을 반응률로서 백분율로 산출했다. 사용한 항체의 농도가 반응성 평가와 발현량 평가에서 상이하기 때문에, 측정 결과를 항체 농도로 보정하여 반응률을 산출했다. 그 결과를 표 6에 나타낸다.
[표 6]
표 6으로부터, SARS-CoV-2 리콤비넌트 NP에 대한 흡광도가 높은 항체여도 항체의 발현량이 많고, 반응률이 낮은 항체가 확인되었다. 한편으로, 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 흡광도가 낮은 항체에서는, 항체 발현량이 적고 높은 반응률을 갖고 있는 항체도 확인되었다. 실제로, 반응률이 낮은 항체여도 항체의 발현량이 많을 경우에는, 반응성이 겉보기상 높아지게 된다.
또한, 표 5에서 유사하다고 판단한 TN02, TN06, TN09 중에서 반응률이 가장 높은 항체는 TN09였기 때문에, 3개의 항체 중 TN09를 선택하여, 이후의 시험을 실시했다.
또한, 서열번호 1에 나타내어지는 SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질의 N 말단에 위치하는 41번째부터 186번째의 아미노산으로 이루어지는 재조합 뉴클레오캡시드 단백질(CUSABIO) 및 C 말단에 위치하는 220번째부터 419번째의 아미노산으로 이루어지는 재조합 뉴클레오캡시드 단백질(CUSABIO)을 사용하여 반응성을 시험했다. 각각의 재조합 뉴클레오캡시드 단백질을 고상화한 마이크로플레이트에, 발현시킨 각 Fab 항체를 첨가하고, 실온에서 1시간 반응시켰다. 반응 종료 후, 웰 내의 용액을 흡인 제거한 후, 호스래시디 퍼옥시다아제 표지된 항토끼 항체를 첨가하고, 1시간 반응시켰다. 그 후, 발색 기질로서 3,3',5,5'-테트라메틸벤진 용액을 첨가하여 반응시키고, 2규정의 황산에 의해 반응을 정지시켰다. 마이크로플레이트 리더를 사용하여, 반응 정지 후의 마이크로플레이트의 각 웰의 450nm 흡광도를 측정했다. 실시예 9의 표 5에 나타낸 바와 같이, TN02 및 TN06의 CDR 서열이 TN09의 CDR 서열과 유사하기 때문에, 이들 3종류의 항체는 동일한 에피토프에 결합하는 것으로 시사되었다. 그 때문에, 본 시험에서는 반응률이 가장 높은 TN09에 대해서만 반응 영역을 평가했다. 그 결과를 표 7에 나타낸다.
[표 7]
표 7로부터, 토끼 유래의 유전자를 사용하여 발현시킨 항체 중, TN01, TN03, TN07, TN08 및 TN10은, N 말단에 위치하는 41번째부터 186번째의 아미노산으로 이루어지는 재조합 뉴클레오캡시드 단백질에 반응했기 때문에, 서열번호 1의 41번째부터 186번째의 아미노산 서열의 영역에 위치하는 에피토프를 인식하고 있는 것이 나타났다. 한편으로, TN04 및 TN09는, C 말단에 위치하는 220번째부터 419번째의 아미노산으로 이루어지는 재조합 뉴클레오캡시드 단백질에 반응했기 때문에, 서열번호 1의 220번째부터 419번째의 아미노산 서열의 영역에 위치하는 에피토프를 인식하고 있는 것이 나타났다. TN05는 어느 재조합 뉴클레오캡시드 단백질에도 반응하지 않았다. 그 때문에, 어느 아미노산 서열에도 속하지 않는 위치의 에피토프, 즉, 187번째부터 219번째의 아미노산 서열을 인식하고 있는 것이 시사되었다.
(실시예 11: 항SARS-CoV-2 항체를 사용한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 제작)
실시예 3에서 정제된 항SARS-CoV-2 항체 및 실시예 10에서 제작된 항SARS-CoV-2Fab 항체를 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 제작에 사용했다.
(1) 백금-금 콜로이드 입자 용액의 조제
사용하는 유리 기구를 모두 왕수로 세정했다. 390mL의 초순수를 플라스크에 넣고 비등시키고, 이 비등수에 염화금산 수용액(수용액 1리터당 금으로서 1g, 가타야마 카가쿠 코교 카부시키가이샤제) 30mL를 더하고, 그 후, 1중량% 시트르산나트륨 수용액 60mL를 첨가했다. 시트르산나트륨 수용액의 첨가로부터 6분 45초 후에, 염화백금산 수용액(수용액 1리터당 백금으로서 1g, 와코 쥰야쿠 코교 카부시키가이샤제) 30mL를 더했다. 추가로 그 5분 후에, 1중량% 시트르산나트륨 수용액 60mL를 더하고, 4시간 환류를 행하여, 백금-금 콜로이드 현탁액을 얻었다.
(2) 백금-금 콜로이드 표지 항SARS-CoV-2 항체 용액의 조제
실시예 3에서 얻어진 각각의 항SARS-CoV-2 항체에 대하여, 이하의 순서로 백금-금 콜로이드 표지를 행했다.
항SARS-CoV-2 항체의 단백질 환산 중량 1μg(이하, 단백 환산 중량을 나타낼 때에는, 그 정제 단백질의 중량 분석에 의한 중량 수치로 나타낸다)과 상기 (1)에서 조제한 백금-금 콜로이드 현탁액 1mL를 혼합하고, 4분간 실온에서 정치함으로써 백금-금 콜로이드 입자의 표면에 항SARS-CoV-2 항체를 결합시켰다. 그 후, 전체 액량에 대하여 최종 농도가 0.5%가 되도록 5% BSA 수용액을 더하고, 백금-금 콜로이드 입자의 잔여 표면을 BSA로 블록킹함으로써, 백금-금 콜로이드 표지 항SARS-CoV-2 항체 용액을 조제했다. 그 후, 이 용액을 원심 분리(5600×g, 25분간)하고, 백금-금 콜로이드 표지 항체를 침전시켜, 상청을 제거함으로써 백금-금 콜로이드 표지 항체를 취득했다. 취득한 백금-금 콜로이드 표지 항체를 10% 사카로오스·1% BSA ·0.5% Triton-X100을 함유하는 50mM 트리스 염산 완충액(pH7.4)에 현탁함으로써 백금-금 콜로이드 표지 항체 용액으로 했다.
(3) SARS-CoV-2 검출 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 제작
이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 제작하는 데에 있어, 크로마토 전개용 막담체로서 니트로셀룰로오스막, 백금-금 콜로이드 표지 항체 함침 부재로서 유리 섬유 부직포, 시료 첨가용 부재인 면포, 흡수용 부재인 여과지를 준비했다. 이뮤노크로마토용 멤브레인은, 항SARS-CoV-2 항체 1.0mg/mL이 함유된 용액을 0.5μL가 되도록, 크로마토 전개용 막담체에 있어서의 크로마토 전개 개시점측의 말단으로부터 7.5mm의 위치에 항체 도포 장치(무사시 엔지니어링)에 의해, 선 형상으로 도포하고, 실온에서 건조시킴으로써 제작했다.
그 다음에, 유리 섬유 부직포에는, 백금-금 콜로이드 표지 항체 용액을 37.5μL가 되도록 함침시키고, 동결 건조시킴으로써, 백금-금 콜로이드 표지 항체 함침 부재를 제작했다.
상기에서 제작한 크로마토 전개용 막담체 및 표지 항체 함침 부재, 시료 첨가용 부재, 흡수용 부재를 사용하여, 도 1과 마찬가지의 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 제작했다.
(실시예 12: 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 사용한 재조합 SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 반응성 시험)
실시예 3에서 얻어진 항SARS-CoV-2 항체를, 막담체에 고상화된 제 1 항체(고상화 항체) 및 백금-금 콜로이드 표지 항체인 제 2 항체(표지 항체)로서 다양한 조합으로 사용한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 실시예 11에 기재된 방법으로 제작하고, 반응성 시험을 실시했다. 테스트 스트립의 평가는 15분 후에 있어서의 판정부에의 정색의 유무에 의해 행했다. 정색의 결과는 정색 없음(-), 미약한 정색(±), 충분한 정색(+), 현저한 정색(++)의 4단계로 나타냈다. 일반적으로, 미약한 정색이 얻어진 경우에는 육안으로 정색을 확인할 수 있는 레벨이다.
(1) 제 2 항체(표지 항체)에 TAU002, 제 1 항체(고상화 항체)에 TAU001 또는 TAU004를 사용한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 반응성 시험
실시예 11에 기재된 방법으로, 항SARS-CoV-2 항체 TAU002는 백금-금 콜로이드 표지되고, TAU001 또는 TAU004는 막담체에 고상화되었다. 이것들을 사용하여, 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 제작하고, 제작된 테스트 스트립에 항원으로서 4ng/mL의 SARS-CoV-2 리콤비넌트 NP를 90μL 적하함으로써, 반응성을 평가했다. 그 결과를 표 8에 나타낸다.
[표 8]
표 8의 결과로부터, 백금-금 콜로이드 표지 항체로서 TAU002를 사용했을 경우, TAU001 및 TAU004를 막담체에 고상화함으로써 정색이 얻어졌기 때문에, SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질을 검출할 수 있는 것이 나타났다. 또한, 표지 항체 및 고상화 항체의 조합에 의해, 반응성에 약간의 차이가 생기는 것이 확인되었다.
(2) 제 2 항체(표지 항체)에 TAU003, 제 1 항체(고상화 항체)에 TAU001 또는 TAU004를 사용한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 반응성 시험
실시예 11에 기재된 방법으로, 항SARS-CoV-2 항체 TAU003은 백금-금 콜로이드 표지되고, TAU001 또는 TAU004는 막담체에 고상화되었다. 이것들을 사용하여 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 제작하고, 제작된 테스트 스트립에 항원으로서 4ng/mL의 SARS-CoV-2 리콤비넌트 NP를 90μL 적하함으로써, 반응성을 평가했다. 그 결과를 표 9에 나타낸다.
[표 9]
표 9의 결과로부터, 백금-금 콜로이드 표지 항체로서 TAU003을 사용했을 경우, TAU001 및 TAU004를 막담체에 고상화함으로써 정색이 얻어졌기 때문에, SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질을 검출할 수 있는 것이 나타났다. 마찬가지의 방법으로 시험을 실시한 표 8과 비교하면, TAU003을 표지 항체로서 이용함으로써, 검출 감도를 향상시킬 수 있는 것이 나타났다.
(3) 제 2 항체(표지 항체)에 TAU004, 제 1 항체(고상화 항체)에 TAU001, TAU002, TAU003, TAU005, TAU006을 사용한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 반응성 시험
실시예 11에 기재된 방법으로, 항SARS-CoV-2 항체 TAU004는 백금-금 콜로이드 표지되었다. 그리고 TAU001, TAU002, TAU003, TAU005 또는 TAU006을 막담체에 고상화했다. 이것들을 사용하여 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 제작하고, 제작된 테스트 스트립에 항원으로서 4ng/mL의 SARS-CoV-2 리콤비넌트 NP를 90μL 적하함으로써, 반응성을 평가했다. 그 결과를 표 10에 나타낸다.
[표 10]
표 10의 결과로부터, 백금-금 콜로이드 표지 항체로서 TAU004를 사용했을 경우, 어느 항SARS-CoV-2 항체를 막담체에 고상화하는 것에 의해서도 정색이 얻어졌기 때문에, 어느 조합에 있어서도 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질을 검출할 수 있는 것이 나타났다. 또한, TAU004를 백금-금 콜로이드 표지 항체로서 사용함으로써, 다양한 항체와 조합하여 사용할 수 있는 것이 나타났다. 마찬가지의 방법으로 시험을 실시한 상기 표 9에 비하여, TAU004를 표지 항체로서 이용함으로써, 검출 감도를 향상시킨 채로, 다양한 항체와 조합하는 것이 가능한 것이 나타났다.
(4) 제 2 항체(표지 항체)에 TAU005, 제 1 항체(고상화 항체)에 TAU001 또는 TAU004를 사용한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 반응성 시험
실시예 11에 기재된 방법으로, 항SARS-CoV-2 항체 TAU005는 백금-금 콜로이드 표지되고, TAU001 또는 TAU004는 막담체에 고상화되었다. 이것들을 사용하여 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 제작하고, 제작된 테스트 스트립에 항원으로서 4ng/mL의 SARS-CoV-2 리콤비넌트 NP를 90μL 적하함으로써, 반응성을 평가했다. 그 결과를 표 11에 나타낸다.
[표 11]
표 11의 결과로부터, 백금-금 콜로이드 표지 항체로서 TAU005를 사용했을 경우, TAU001 및 TAU004를 막담체에 고상화함으로써 정색이 얻어졌기 때문에, SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질을 검출할 수 있는 것이 나타났다. 그러나, 상기 표 9에 나타낸 TAU003을 사용했을 경우와 동일한 정도였다.
(5) 제 2 항체(표지 항체)에 TAU006, 제 1 항체(고상화 항체)에 TAU001 또는 TAU004를 사용한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 반응성 시험
실시예 11에 기재된 방법으로, 항SARS-CoV-2 항체 TAU005는 백금-금 콜로이드 표지되고, TAU001 또는 TAU004는 막담체에 고상화되었다. 이것들을 사용하여, 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 제작하고, 제작된 테스트 스트립에 항원으로서 4ng/mL의 SARS-CoV-2 리콤비넌트 NP를 90μL 적하함으로써, 반응성을 평가했다. 그 결과를 표 12에 나타낸다.
[표 12]
표 12의 결과로부터, 백금-금 콜로이드 표지 항체로서 TAU006을 사용했을 경우, TAU001 및 TAU004를 막담체에 고상화함으로써 정색이 얻어졌기 때문에, SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질을 검출할 수 있는 것이 나타나고, TAU006을 사용했을 경우에는, 표지 항체로서 상기 TAU002를 사용했을 경우와 마찬가지의 결과가 얻어졌다.
실시예 12에 나타낸 결과로부터, 실시예 3에서 얻어진 항SARS-CoV-2 항체로부터 2종류의 항체를 선택하여 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 제작했을 경우, 다양한 항체의 조합에 있어서 정색이 확인되었다. 또한, 항체의 조합에 의해, 보다 고감도로 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질을 검출할 수 있는 것이 나타났다. 또한, TAU004를 고상화 항체인 제 1 항체 또는 표지 항체인 제 2 항체 중 어느 하나에 사용함으로써, 다양한 항체와 조합하는 것이 가능하여, 고감도로 SARS-CoV-2를 검출할 수 있는 것이 나타났다.
(실시예 13: 검체를 사용한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 반응성 평가)
실시예 11에 기재된 방법으로, 실시예 10에서 제작된 항SARS-CoV-2 항체를 백금-금 콜로이드 표지하고, 상이한 항SARS-CoV-2 항체를 막담체에 고상화하여, 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 제작했다. 제작한 테스트 스트립에 생체 시료로서 양성 검체 90μL를 적하함으로써 반응성을 평가했다. 이 때, 검체종으로서 비인두 닦음액 검체 및 타액 검체를 사용했다. 테스트 스트립의 평가는 15분 후에 있어서의 판정부에의 정색의 유무에 의해 행하고, 정색의 결과는, 정색 없음(-), 미약한 정색(±), 충분한 정색(+), 현저한 정색(++)의 4단계로 판정했다. 그 결과를 표 13 및 표 14에 나타낸다.
[표 13]
[표 14]
표 13 및 표 14로부터, 어느 검체종을 사용했을 경우라도 많은 조합에서 정색이 확인되었다. 일반적으로, 타액 검체를 사용하면 비인두 검체보다 검출이 곤란한 것으로 일컬어지고 있다. 그러나, 타액 검체를 사용했을 경우라도, 본 발명의 항체를 조합함으로써, 검체에 포함되는 SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질을 검출할 수 있었다. 이것으로부터, 실시예 10에서 얻어진 항SARS-CoV-2 항체를 사용한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립에서는, 타액 검체를 사용했을 경우라도, 비인두 검체와 마찬가지로 SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질을 검출하는 성능을 갖고 있는 것으로 나타났다.
상기와 마찬가지의 방법에 의해, 실시예 3 및 실시예 10에서 제작된 SARS-CoV-2 항체를 다양한 조합으로 사용하고, 이뮤노크로마토그래피법으로 측정함으로써 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 성능을 평가했다. 테스트 스트립의 평가는 15분 후에 있어서의 판정부에의 정색의 유무에 의해 행하고, 정색의 결과는 정색 없음(-), 미약한 정색(±), 충분한 정색(+), 현저한 정색(++)의 4단계로 판정했다. 그 결과를 표 15 내지 표 23에 나타낸다. 이 때, 사용한 검체는 SARS-CoV-2 양성 비인두 검체를 사용했다.
[표 15]
[표 16]
[표 17]
[표 18]
[표 19]
[표 20]
[표 21]
[표 22]
[표 23]
표 15 내지 표 23의 결과로부터, 어느 항체를 제 2 항체로서 사용했다고 해도 다양한 항체의 조합에서 정색이 확인되었다. TAU007을 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU008, TN03, TN05, TN07, TN08, TN09가 바람직하다.
TAU008을 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU007, TN01, TN03, TN04, TN05, TN07, TN08, TN09, TN10이 바람직하다.
TN01을 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU007, TAU008, TN04, TN05, TN09, TN10이 바람직하다.
TN03을 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU007, TAU008, TN04, TN05, TN09, TN10이 바람직하다.
TN04를 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU007, TAU008, TN01, TN03, TN05, TN07, TN08, TN09, TN10이 바람직하다.
TN05를 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU007, TAU008, TN01, TN03, TN04, TN07, TN08, TN10이 바람직하다.
TN08을 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU007, TAU008, TN04, TN05, TN09가 바람직하다.
TN09를 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU007, TAU008, TN01, TN03, TN04, TN07, TN08, TN10이 바람직하다.
TN10을 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU007, TAU008, TN01, TN03, TN04, TN05, TN07, TN09가 바람직하다.
이것들로부터, 얻어진 항체의 다양한 조합으로 비인두 검체에 포함되는 항원을 검출할 수 있는 것이 나타났다.
또한, SARS-CoV-2 양성 타액 검체에 대하여, 실시예 3 및 실시예 8에서 제작된 SARS-CoV-2 항체를 다양한 조합으로 사용하고, 이뮤노크로마토그래피법으로 측정함으로써 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 타액 검체에 대한 성능을 평가했다. 테스트 스트립의 평가는 15분 후에 있어서의 판정부에의 정색의 유무에 의해 행하고, 정색의 결과는 정색 없음(-), 미약한 정색(±), 충분한 정색(+), 현저한 정색(++)의 4단계로 판정했다. 그 결과를 표 24 내지 표 32에 나타낸다.
[표 24]
[표 25]
[표 26]
[표 27]
[표 28]
[표 29]
[표 30]
[표 31]
[표 32]
표 24 내지 표 32의 결과로부터, 타액 검체를 사용했을 경우라도, 어느 항체를 제 2 항체로서 사용했다고 해도, 다양한 항체의 조합에서 정색이 확인되었다. TAU007을 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU008, TN03, TN05, TN07, TN08, TN09가 바람직하다.
TAU008을 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU007, TN01, TN03, TN04, TN05, TN07, TN08, TN09, TN10이 바람직하다.
TN01을 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TN04, TN05, TN09, TN10이 바람직하다.
TN03을 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU007, TAU008, TN04, TN05, TN09, TN10이 바람직하다.
TN04를 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU007, TAU008, TN01, TN03, TN05, TN07, TN08, TN09, TN10이 바람직하다.
TN05를 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU008, TN01, TN03, TN04, TN07, TN08, TN10이 바람직하다.
TN08을 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU007, TAU008, TN04, TN05, TN09가 바람직하다.
TN09를 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU007, TAU008, TN01, TN03, TN04, TN07, TN08, TN10이 바람직하다.
TN10을 제 2 항체로서 사용했을 경우에는, 제 1 항체는 TAU007, TAU008, TN01, TN03, TN04, TN05, TN07, TN09가 바람직하다.
이것들로부터, 얻어진 항체의 다양한 조합으로 타액 검체에 포함되는 항원을 검출할 수 있는 것이 나타났다. 또한, 항체의 조합에 의한 정색 강도는 비인두 검체를 사용했을 경우와 타액 검체를 사용했을 경우에서 차를 볼 수 있는 조합도 나타났다. 그러나, 검체종에 상관없이 기재한 모든 항체의 조합에서, 검체에 포함되는 SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질을 검출할 수 있었다. 이것으로부터, 본 발명의 항체를 조합함으로써, 비인두 검체 및 타액 검체에 포함되는 SARS-CoV-2 뉴클레오캡시드 단백질을 고감도로 검출할 수 있다.
(실시예 14: 음성 검체를 사용한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 비특이적인 반응성 평가)
실시예 11에 기재된 방법으로, 항SARS-CoV-2 항체 TAU004를 제 2 항체로서 백금-금 콜로이드 표지하고, TAU005를 제 1 항체로서 막담체에 고상화하여, 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 제작했다. 제작한 테스트 스트립에 생체 시료인 음성 검체 90μL를 적하함으로써 반응성을 평가했다. 이 때, 검체종으로서 비인두 닦음액 검체 및 타액 검체를 사용하여, 각각 50예 실시했다. 테스트 스트립의 평가는 15분 후에 있어서의 판정부에의 정색의 유무에 의해 행했다. 정색의 결과는 정색 없음(-), 미약한 정색(±), 충분한 정색(+), 현저한 정색(++)의 4단계로 나타내고, 미약한 정색이 얻어진 경우에는 비특이적인 반응으로서 판정했다. 그 결과를 표 33에 나타낸다.
[표 33]
표 33의 결과로부터, 제작한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립에 다양한 검체종의 음성 검체를 적하했을 경우, 50 검체 모두에 있어서 정색이 확인되지 않았다. 이것으로부터, 검체종에 관계없이, TAU004 및 TAU005를 사용한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립은 검체 성분과의 교차 반응에 의한 비특이적인 반응이 확인되지 않았다.
이들 검체에 있어서, 일본 국립 감염증 연구소가 개발한 유전자 검사법 (SARS-CoV-2 유전자 검출·바이러스 분리 매뉴얼 Ver.1.1)에 근거하는 핵산 증폭법 (PCR법)을 실시한 결과, 50 검체 모두에 있어서 음성이 확인되었다.
(실시예 15: 임상 검체를 사용한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 반응성 평가)
임상적으로 SARS-CoV-2의 감염이 의심되는 환자를 대상으로 하여, 환자의 비인두를 멸균 면봉에 의해 찰과함으로써, 비인두 닦음액을 채취했다. 비인두 닦음액을 채취한 면봉을 검체 추출액에 추출하여, 피검 시료를 조제했다. 그리고, 실시예 14와 마찬가지로 제작한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 사용함으로써, 피검 시료 중의 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질의 검출을 실시했다. 한편, 대조로서, 본 발명의 항체와는 다른 항체를 사용하여 제품 판매되고 있는 이뮤노에스(상표) SARS-CoV-2(항원 정성 검출 키트, 타운즈)를 사용했다. 더하여, 채취한 임상 검체는, 일본 국립 감염증 연구소가 개발한 유전자 검사법(SARS-CoV-2 유전자 검출·바이러스 분리 매뉴얼 Ver.1.1)에 근거하는 핵산 증폭법(PCR법)을 실시하여, SARS-CoV-2의 존재를 확인했다. 각 피검 시료를 사용한 이뮤노크로마토그래피의 육안 판정 결과, 및 피검 시료의 PCR법에 있어서의 Ct값을 표 34에 나타낸다. 테스트 스트립의 평가는 15분 후에 있어서의 판정부에의 정색의 유무에 의해 행하고, 정색의 결과는 정색 없음(-), 미약한 정색(±), 충분한 정색(+), 현저한 정색(++)의 4단계로 나타냈다. PCR법의 결과는 검출할 수 없었던 것에 관해서는 ND라고 기재하고, 검출할 수 있었던 것에 관해서는 Ct값을 기재했다.
[표 34]
표 34의 결과로부터, 이뮤노에스(상표) SARS-CoV-2에서는 10 검체 중 3 검체에서 정색이 확인되었다. 한편으로, 실시예 14에서 제작한 테스트 플레이트를 사용하여, 동일한 검체를 반응시킨 결과 5 검체에서 정색이 확인되었다. 이뮤노에스(상표) SARS-CoV-2에서 검출할 수 없었던 2 검체의 Ct값은 33.63 및 24.08이었다. 이것으로부터, 실시예 14에서 제작한 테스트 플레이트는 이미 제품으로서 판매되고 있는 항원 검출 키트보다 검출 감도가 상승되어 있는 것이 나타났다. 또한, 임상 검체 3에 있어서도 정색 강도가 상승되어 있기 때문에, 검출 감도가 향상되어 있는 것이 나타났다. PCR에서 검출되지 않은 임상 검체 1 및 9에 관해서는, 어느 테스트 플레이트를 사용했을 경우라도 정색이 확인되지 않았기 때문에, 검체에 포함되는 그 밖의 성분과는 교차 반응성이 낮은 것이 추찰되었다.
(실시예 16: 타액 검체를 사용한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 반응성 평가)
실시예 12에 기재된 방법으로, 항SARS-CoV-2 항체 TAU008을 제 2 항체로서 백금-금 콜로이드 표지하고, TAU007을 제 1 항체로서 막담체에 고상화하여, 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 제작했다. 임상적으로 SARS-CoV-2의 감염이 의심되는 환자를 대상으로 하여, 환자의 토출한 타액을 멸균 면봉에 흡수함으로써 채취하고, 타액을 채취한 면봉을 검체 추출액으로 추출하여, 제작한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 피검 시료로 했다. 동시에, 동일 환자의 비인두를 멸균 면봉에 의해 찰과함으로써, 비인두 닦음액을 채취했다. 비인두 닦음액을 채취한 면봉을 검체 추출액으로 추출함으로써, 이뮤노에스(상표) SARS-CoV-2(타운즈)의 피검 시료로 했다. 조제한 각각의 피검 시료를 사용하여, 이뮤노에스(상표) SARS-CoV-2(타운즈) 및 제작한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립의 피검 시료에 포함되는 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 성능 평가를 실시했다. 이 때에 대조로서 이뮤노에스(상표) SARS-CoV-2(타운즈)를 사용했다. 더하여, 채취한 임상 검체는 일본 국립 감염증 연구소가 개발한 유전자 검사법(SARS-CoV-2 유전자 검출·바이러스 분리 매뉴얼 Ver.1.1)에 근거하는 핵산 증폭법(PCR법)을 실시하여, SARS-CoV-2의 존재를 확인했다. 각 피검 시료를 사용한 이뮤노크로마토그래피의 육안 판정 결과, 및 피검 시료의 PCR법에 있어서의 Ct값을 표 35에 나타낸다. 테스트 스트립의 평가는 15분 후에 있어서의 판정부에의 정색의 유무에 의해 행하고, 정색의 결과는 정색 없음(-), 미약한 정색(±), 충분한 정색(+), 현저한 정색(++)의 4단계로 나타냈다. PCR법의 결과는 검출할 수 없었던 것에 관해서는 ND라고 기재하고, 검출할 수 있었던 것에 관해서는 Ct값을 기재했다.
[표 35]
표 35로부터, 비인두 검체를 사용한 이뮤노에스(상표) SARS-CoV-2에서는 30 검체 중 18 검체에서 정색이 확인되었다. 한편으로, 실시예 16에서 제작한 테스트 스트립을 사용하여, 동일 피험자의 타액 검체를 반응시킨 결과 30 검체 중 21 검체에서 정색이 확인되었다. 이것으로부터, 타액 검체를 사용했을 경우라도 비인두 검체를 사용했을 경우와 마찬가지로 검출할 수 있었다. 또한, 비인두에 포함되는 바이러스량이 많고, 타액에 포함되는 바이러스량이 적은 피험자 25 및 30에 있어서, 본 실시예에서 제작한 테스트 스트립에서는 정색이 강해졌다. 이것들로부터, 본 실시예에서 제작한 테스트 스트립은 이미 제품으로서 판매되고 있는 항원 검출 키트보다 검출 감도가 향상되어 있는 것이 나타났다. 또한, PCR에서 검출되지 않은 검체에 있어서, 본 실시예에서 제작한 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립을 사용했을 경우라도 정색이 확인되지 않았기 때문에, 검출 감도가 향상되면서 비특이적인 정색을 억제할 수 있었던 것이 추찰되었다.
본 발명에 의하면, SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 항체, 이 항체를 사용한 SARS-CoV-2의 면역학적 검출법 및 키트가 제공된다. 이에 의해, 특수한 기기 및 숙련된 기술을 필요로 하지 않고, SARS-CoV-2의 감염을 신속 그리고 특이적으로 검출하는 것이 가능해진다.
1; 점착 시트
2; 함침 부재
3; 막담체
31; 포착 부위
32; 대조 포착 부위
4; 흡수용 부재
5; 시료 첨가용 부재
SEQUENCE LISTING <110> TAUNS Laboratories, Inc. <120> ANTIBODY AGAINST NUCLEOCAPSID PROTEIN OF SARS-CoV-2 AND USE OF SAME <130> IFP-1612 <160> 121 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 419 <212> PRT <213> SARS CORONAVIRUS 2 <400> 1 Met Ser Asp Asn Gly Pro Gln Asn Gln Arg Asn Ala Pro Arg Ile Thr 1 5 10 15 Phe Gly Gly Pro Ser Asp Ser Thr Gly Ser Asn Gln Asn Gly Glu Arg 20 25 30 Ser Gly Ala Arg Ser Lys Gln Arg Arg Pro Gln Gly Leu Pro Asn Asn 35 40 45 Thr Ala Ser Trp Phe Thr Ala Leu Thr Gln His Gly Lys Glu Asp Leu 50 55 60 Lys Phe Pro Arg Gly Gln Gly Val Pro Ile Asn Thr Asn Ser Ser Pro 65 70 75 80 Asp Asp Gln Ile Gly Tyr Tyr Arg Arg Ala Thr Arg Arg Ile Arg Gly 85 90 95 Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr 100 105 110 Leu Gly Thr Gly Pro Glu Ala Gly Leu Pro Tyr Gly Ala Asn Lys Asp 115 120 125 Gly Ile Ile Trp Val Ala Thr Glu Gly Ala Leu Asn Thr Pro Lys Asp 130 135 140 His Ile Gly Thr Arg Asn Pro Ala Asn Asn Ala Ala Ile Val Leu Gln 145 150 155 160 Leu Pro Gln Gly 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Claims (32)

  1. 피검 시료에 포함되는 SARS-CoV-2의 존재를 검출하는 방법으로서, 상기 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 반응하는 항체 또는 그 단편을 사용한 면역학적 측정법에 의해 행하는 상기 SARS-CoV-2의 검출 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 면역학적 측정법이, 상기 피검 시료를 상기 항체 또는 그 단편에 접촉시키는 것을 포함하는 SARS-CoV-2의 검출 방법.
  3. 제 2 항에 있어서,
    상기 면역학적 측정법이, 2개의 상이한 상기 항체 또는 그 단편을 사용한 샌드위치법인 SARS-CoV-2의 검출 방법.
  4. 제 3 항에 있어서,
    상기 샌드위치법이 이뮤노크로마토그래피법 또는 ELISA법 중 어느 하나인 SARS-CoV-2의 검출 방법.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편은 하기 (1) 내지 (20)에 기재되는 항체 또는 그 단편으로부터 선택된 것인 SARS-CoV-2의 검출 방법.
    (1) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 2, 3 및 4로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 5, 6 및 7로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (2) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 8, 9 및 10으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 11, 12 및 13으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (3) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 14, 15 및 16으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 17, 18 및 19로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (4) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 20, 21 및 22로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 23, 24 및 25로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (5) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 26, 27 및 28로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 29, 30 및 31로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (6) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 32, 33 및 34로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 35, 36 및 37로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (7) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 38, 39 및 40으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 41, 42 및 43으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (8) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 44, 45 및 46으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 47, 48 및 49로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (9) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 50, 51 및 52로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 53, 54 및 55로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (10) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 56, 57 및 58로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 59, 60 및 61로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (11) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 62, 63 및 64로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 65, 66 및 67로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (12) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 68, 69 및 70으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 71, 72 및 73으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (13) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 74, 75 및 76으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 77, 78 및 79로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (14) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 80, 81 및 82로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 83, 84 및 85로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (15) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 86, 87 및 88로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 89, 90 및 91로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (16) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 92, 93 및 94로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 95, 96 및 97로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (17) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 98, 99 및 100으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 101, 102 및 103으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (18) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 104, 105 및 106으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 107, 108 및 109로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (19) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 110, 111 및 112로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 113, 114 및 115로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (20) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 116, 117 및 118로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 119, 120 및 121로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  6. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 피검 시료가 생체 시료인 SARS-CoV-2의 검출 방법.
  7. SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 반응 가능한 제 1 항체 또는 그 단편과, 상기 뉴클레오캡시드 단백질에 반응하는 제 2 항체 또는 그 단편과, 막담체를 구비하고, 상기 제 1 항체 또는 그 단편은 상기 막담체의 소정 위치에 미리 고정되어 포착 부위를 형성하고, 상기 제 2 항체 또는 그 단편은 표지 물질로 표지되고, 또한, 상기 포착 부위로부터 이격된 위치에서 상기 막담체에서 크로마토 전개 가능하도록 준비되어 이루어지는 SARS-CoV-2 검출 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립.
  8. 제 7 항에 있어서,
    상기 제 1 및 제 2 항체 또는 그 단편 중 적어도 어느 일방이 모노클로날 항체 또는 그 단편인 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립.
  9. 제 7 항 또는 제 8 항에 있어서,
    상기 모노클로날 항체 또는 그 단편이 하기 (1) 내지 (20)에 기재되는 항체 또는 그 단편으로부터 선택된 것인 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립.
    (1) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 2, 3 및 4로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 5, 6 및 7로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (2) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 8, 9 및 10으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 11, 12 및 13으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (3) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 14, 15 및 16으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 17, 18 및 19로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (4) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 20, 21 및 22로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 23, 24 및 25로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (5) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 26, 27 및 28로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 29, 30 및 31로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (6) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 32, 33 및 34로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 35, 36 및 37로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (7) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 38, 39 및 40으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 41, 42 및 43으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (8) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 44, 45 및 46으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 47, 48 및 49로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (9) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 50, 51 및 52로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 53, 54 및 55로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (10) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 56, 57 및 58로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 59, 60 및 61로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (11) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 62, 63 및 64로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 65, 66 및 67로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (12) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 68, 69 및 70으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 71, 72 및 73으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (13) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 74, 75 및 76으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 77, 78 및 79로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (14) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 80, 81 및 82로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 83, 84 및 85로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (15) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 86, 87 및 88로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 89, 90 및 91로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (16) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 92, 93 및 94로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 95, 96 및 97로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (17) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 98, 99 및 100으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 101, 102 및 103으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (18) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 104, 105 및 106으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 107, 108 및 109로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (19) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 110, 111 및 112로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 113, 114 및 115로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편,
    (20) 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 116, 117 및 118로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 119, 120 및 121로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  10. 제 7 항에 기재된 SARS-CoV-2 검출 이뮤노크로마토그래피 테스트 스트립과, 피검체를 전개하기 위한 전개 용매를 적어도 포함하는 SARS-CoV-2 검출용 키트.
  11. 피검 시료에 포함되는 SARS-CoV-2의 존재를 검출하기 위한 항체 또는 그 단편으로서, 상기 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 단백질에 결합하는 항체 또는 그 단편.
  12. 제 11 항에 있어서,
    상기 항체가 모노클로날 항체인 항체 또는 그 단편.
  13. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 2, 3 및 4로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 5, 6 및 7로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  14. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 8, 9 및 10으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 11, 12 및 13으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  15. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 14, 15 및 16으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 17, 18 및 19로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  16. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 20, 21 및 22로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 23, 24 및 25로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  17. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 26, 27 및 28로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 29, 30 및 31로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  18. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 32, 33 및 34로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 35, 36 및 37로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  19. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 38, 39 및 40으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 41, 42 및 43으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  20. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 44, 45 및 46으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 47, 48 및 49로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  21. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 50, 51 및 52로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 53, 54 및 55로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  22. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 56, 57 및 58로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 59, 60 및 61로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  23. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 62, 63 및 64로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 65, 66 및 67로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  24. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 68, 69 및 70으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 71, 72 및 73으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  25. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 74, 75 및 76으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 77, 78 및 79로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  26. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 80, 81 및 82로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 83, 84 및 85로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  27. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 86, 87 및 88로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 89, 90 및 91로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  28. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 92, 93 및 94로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 95, 96 및 97로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  29. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 98, 99 및 100으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 101, 102 및 103으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  30. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 104, 105 및 106으로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 107, 108 및 109로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  31. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 110, 111 및 112로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 113, 114 및 115로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
  32. 제 12 항에 있어서,
    상기 항체 또는 그 단편의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 116, 117 및 118로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 서열번호 119, 120 및 121로 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그 단편.
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