CN112912394B - 针对hrsv的n抗原的单抗，可用于治疗感染、其检测和诊断 - Google Patents
针对hrsv的n抗原的单抗，可用于治疗感染、其检测和诊断 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及单克隆抗体或其片段，其识别人呼吸道合胞病毒(HRSV)的核衣壳的N蛋白，可用于诊断HRSV感染的方法的开发，以及用于治疗、保护和/或预防HRSV感染的药物组合物的生产。
Description
技术领域
本发明涉及单克隆抗体或其片段，其识别人呼吸道合胞病毒(RSV)的N(核衣壳)蛋白，可用于RSV感染的诊断方法的开发，以及目的在于RSV感染的治疗、保护和/或预防的药物组合物的生产。
背景技术
急性呼吸道感染是全世界儿科住院和死亡的主要原因(Bryce et al.,2005)。在寒冷的月份期间，由病毒引起的呼吸道感染变得更加急性，并且引起病例数量的增加，呈现暴发流行的特征的情况。导致这些在儿科人群中流行的病毒主要是人呼吸道合胞病毒(hRSV)、腺病毒(ADV)、流感病毒以及偏肺病毒(hMPV)。然而，RSV是世界范围内婴幼儿急性呼吸道感染的主要病原体，在冬季月份中导致了严重的爆发。根据WHO，这种病毒每年感染6400万人，其中160,000人死亡。由这种病毒引起的感染导致了大范围的临床症状，其可以是轻度的，诸如鼻炎或可以严重得多，诸如肺炎或细支气管炎，最严重的状况可以在婴幼儿、早产儿、先天性心脏病患儿和免疫抑制患者中观察到(Cabalka,2004；Carpenter andStenmark,2004；Weisman,2003)。此外，由这种病毒引起的感染是极其频繁和反复的，因为几乎100％的大于三岁的儿童已经出现过至少一次RSV感染的发作(Bont et al.,2002；Hall et al.,1991)。因为这种感染不会留下足够的免疫记忆(Bont et al.,2002)，再感染是频繁的，随着患者年龄的增加，严重程度降低。然而，再感染的个体会充当贮主，并且是小于1岁儿童的传染的源头，这些儿童确实产生严重的呼吸道症状。在智利，在寒冷的月份期间(五月-八月)，这种病毒是需要住院的下呼吸道急性感染的70％的原因( etal.,2003)，导致了他们中的0.1％死亡。尽管这个百分比是低的，但是大量的病例使死亡数非常显著。这种情况导致了紧急护理服务的饱和，这经常要求在健康服务中紧急措施的应用，诸如住院的儿科患者的病床转换，中止选择和计划的手术以及在爆发发生的几个月的期间内雇用支持人员。通常用于医院护理服务的RSV诊断方法是基于通过鼻咽分离物直接免疫荧光法检测病毒抗原的诊断测试。测试的局限性在于对于处理和分析样品的训练的人员的需求以及，此外，所述测试的结果不是立即获得的事实，留下了一段时间，在这段时间内患者仍没有被诊断，但是感染继续其进程。面对此种问题，高效的单克隆抗体的开发，其可以被用于创建选择性的hRSV检测测试，其需要最少的训练并且快速执行(诸如免疫色谱法测试)似乎是满足这一需求的必要的替代选择，因为它们允许对hRSV感染的患者的样本中的病毒抗原的特异性识别，而且需要低的样本数量。以这种方式，本发明转化为能够以非常高效的、有效的方式以及以少量抗原存在下检测hRSV抗原的抗体，这允许对于hRSV感染的患者的快速、有效和准确的检测和诊断的替代方法的开发，以确定影响疾病进展的早期和适当的治疗。
从治疗的角度来看，目前用于预防在最脆弱的人群中潜在更严重的hRSV感染的病例的唯一的标准方案是使用帕利珠单抗(Palivizumab)(Olchanski,et.Al.,2018)。这是针对hRSV的另一种蛋白质，F蛋白，的人源化的单克隆抗体。此类抗体的作用机制是使病毒进入靶细胞中和，所以这需要在冬季期间内的多次给药。由于这种抗体识别病毒的高度可变的表面蛋白，一些株不能被这种抗体识别，使其使用无效。作为这类问题的替代解决方案，发明人已经证明了本发明的抗-蛋白N抗体在预防由hRSV感染的肺部表现的发展也是有效的，这使建议使用其用于制备目的在于治疗和/或预防hRSV感染的药物组合物成为可能。这种新抗体具有附加的优势，N蛋白(Collins et.Al,2013)比F蛋白的更低的变异性，因此允许更多的病毒株的识别。
附图说明
图1：通过杂交瘤产生抗N抗体的验证
ELISA技术证明了抗N抗体对于N蛋白而不是其他病毒蛋白的亲和力。为了确定通过两种不同技术生长的杂交瘤培养物的上清液的活性，通过ELISA测量抗体对于它们的配体的特异性。在图中示出：抗N批次1＝获得自在6孔板中生长的第一批次的杂交瘤细胞的上清液。抗N批次2＝获得自在T75培养瓶中生长的第二批次的杂交瘤细胞并超声处理的上清液。抗N阳性对照＝识别N蛋白的单克隆抗体，其在本试验中作为第一阳性对照被使用。在以下孔中评价上清液：在未活化的孔中、用hRSV N蛋白活化的孔中以及用hRSV F蛋白活化的孔中。随后，检测与用HRP(辣根过氧化物酶)标记的二级抗体的缀合，此外，只有二级抗体的对照＝只有HRP被包括。结果示出了，用两种杂交瘤培养方法的其中一种获得的本发明的抗体对N蛋白的高识别，几乎是多克隆抗N抗体的阳性对照的三倍。
图2：通过斑点印迹技术评估对于N蛋白的抗N单克隆抗体的特异性通过斑点印迹测定，图像表现了对于RSV N抗原的抗体的特异性。(A)示出了膜的哪种蛋白(每个圈中)被致敏。每个膜在5个点中都浸渍有5种蛋白质。PBS和BSA作为空白对照被使用，hVRS的F蛋白作为技术的特异性对照以及作为阳性对照，以及最后两个点是作为抗原的蛋白N。(B)暴露于总Ab5分钟后获得的图像，对应于纯化之前的杂交瘤的上清液。本发明的抗N抗体的纯化的Ab，识别F蛋白的市售抗体帕利珠单抗，以及多克隆抗N抗体。结果示出了本发明的抗体在总上清液中的形式，以及纯化的形式二者，强烈且特异性识别hVRS的N蛋白。
图3：作为技术的ELISA的建立允许在批次之间验证抗N抗体的产生，还确证它的特异性和灵敏度。在A中，示出了在不同的试验中纯化杂交瘤上清液中部分的ELISA结果。批1是第一次纯化。批2对应于随后进行的纯化，其由获得自6的平板培养(批2板)的和T75瓶(批2瓶)的上清液组成。阳性特异性对照对应于识别病毒M2蛋白的抗M2抗体。孔用hVRS N和M2蛋白活化。SA＝没有活化的孔。N(2nd)以及M(2nd)对应于活化的孔，其中没有加入一级抗体。在另一方面，在B中，示出了本发明的抗N抗体的纯化部分的连续稀释，以达到N蛋白检测限稀释。通过不观察针对其他hRSV蛋白诸如F的反应性，以及在未活化的(SA)孔或者在一级抗体N(2rio)以及F(2rio)没有被加入的孔的情况下，这种试验还评估了抗N抗体的特异性。作为阴性对照，使用不识别N蛋白的相同IgG2A同种型的另一抗体(同种型)，并且作为特异型对照，使用识别F蛋白的帕利珠单抗。
图4：通过抗N抗体检测的N蛋白的最小浓度的评估图对应于用连续稀释的hRSV的N蛋白活化的孔进行的ELISA的结果，自50ng开始至0.375ng，以及在本发明的抗N抗体的恒定稀释度下(1/5000)。在这种ELISA中包括了没有活化(SA)的孔，以及用N蛋白活化但仅用二级抗体[N(2rio)]测试的孔的技术对照。结果示出了抗体能可靠地识别6.25ng以上的N蛋白。
图5：通过流式细胞术技术的抗N抗体检测hRSV感染的细胞的能力。在图(5A)中，示出了表达绿色荧光蛋白(GFP)的感染了1.8x105 PFU的hRSV的Hep-2细胞培养物。培养物被维持48小时以促进hRSV复制，以及使得能够通过流式细胞术检测当表达GFP蛋白时的感染的细胞。随后，细胞用4％PFA固定并且用0.2％皂苷渗透，以在细胞内用抗N抗体染色，随后是与APC偶联的二级抗体染色。以这种方式，感染的细胞(GFP+)和抗N抗体可以被连续测量。未感染的细胞、未用抗N抗体染色的感染的细胞和仅用第二抗体染色的细胞作为细胞术对照使用。在图5中，可以看出通过用抗N抗体(GFP+抗N+)的染色识别了所有hRSV感染的细胞(GFP+)。图(5B)中总结结果。
图6：在临床前模型中评估抗N抗体的治疗能力。流式细胞仪试验的结果，其中在用hRSV感染后的第4天对用本发明的抗体先前免疫动物的支气管肺泡灌洗液(BALF)中在肺中浸润性中性粒细胞的数量进行作图(6A)。观察未感染的对照＝模拟(Mock)，病毒感染的未免疫的动物对照＝hRSV，用hRSV的市售抗F蛋白抗体先前免疫的动物的对照＝帕利珠单抗(抗F)，用本发明的抗体先前免疫的动物＝抗N，以及同种型对照，即相同同种型的另一种抗体，IgG2A，其不识别N蛋白。
另外，在用hRSV感染后的第4天对测量病毒载量的实时PCR的结果作图(6B)，使用本发明的抗体先前免疫的动物。观察未感染的对照＝模拟(Mock)，病毒感染的未免疫的动物对照＝hRSV，用hRSV的市售抗F蛋白抗体先前免疫的动物的对照＝帕利珠单抗(抗F)，用本发明的抗体抗N蛋白先前免疫的动物＝抗N，以及同种型对照。在所有情况下，抗体剂量是5mg/kg。
具体实施方式
本发明旨在对于呼吸道合胞病毒(RSV)特异的单克隆抗体。特别地，由在实验室生成的杂交瘤细胞系分泌的IgG2A单克隆抗体特异性针对病毒N蛋白，其与病毒的核衣壳连接。抗体可以用于hRSV感染的检测和/或测定的试验。这种抗体处于它的纯的状态，并且不含其它任何污染生物材料。
发明人已经测序了本发明的抗体，其中重链的可变区的序列在SEQ ID No.2中示出，编码它的核苷酸序列在SEQ ID No.1中示出。另外，轻链的可变区的序列在SEQ ID No.4中示出，并且编码它的核苷酸序列在SEQ ID No.3中示出。这种抗体的重链的CDR在SEQ IDNo.5、6和7的肽序列中示出以及轻链的CDR在SEQ ID No.11、12和13的肽序列中示出。同时，编码它们的核苷酸序列在以下中示出：对于重链为SEQ ID No.8、9和10以及对于轻链为SEQID No.14、15和16。
在本发明或的一个方面，提供了用于在给定的宿主中的由人呼吸道合胞病毒(hRSV)引起的感染的预防和治疗的方法，其包括以预防疾病的足够剂量给药包括本发明的单克隆抗体的组合物。在人使用的情况下，抗体可以被人源化以最小化针对使用它的宿主(患者)的免疫应答的可能性。
此外，本发明使得提供本发明的单克隆抗体的任何药学上的形式的制剂以用于由治疗和预防hRSV引起的疾病成为可能。
本发明也提供了用于诊断和检测在生物样品中的hRSV病毒抗原，其中本发明的单克隆抗体被用于试验诸如：ELISA、免疫荧光显微法、免疫组织化学法、流式细胞术、细胞纯化(细胞分选仪，通过荧光、通过与磁性球体的联合或任何使用抗体的分离方法)免疫沉淀、蛋白质印迹和色谱法。样品可以是hRSV感染的体外细胞或获得自怀疑感染hRSV的个体的样品。在样品来自个体的情况下，它们可以对应于鼻分泌物、鼻清洗液(nasal washes)、咽部分泌物、支气管清洗液或分泌物或任何其他种类的被认为是合适的样品。本发明提供了开发分离和检测生物样品和细胞培养物中的呼吸道合胞病毒的方法的机会，使该生物样品和细胞培养物与偶联至任何类型的固体承载体，诸如硝化纤维素、尼龙膜的或其他承载体的本发明的单克隆抗体接触。本发明给出了开发包含本发明的抗体的用于呼吸道合胞病毒的快速检测试剂盒或类似的机会。它还提供了以下可能性：并入了化学连接至本发明抗体的任何种类的分子或底物，诸如荧光团、生物素、放射性同位素、金属、酶和/或任和与上述单克隆抗体偶联的化学元素，作为在生物样品中的检测方法，治疗，分析和/或诊断。本发明具有巨大的潜力以用作用于人的治疗方法，或预防，对于此，其必须被人源化。
因此，本发明涉及IgG2A同种型单克隆抗体，其特异性识别人呼吸道合胞病毒(hRSV)的核衣壳的N蛋白。
单克隆抗体是一种均一的抗体，其特征是特异性识别单一抗原。它们是由单一杂交细胞(杂交瘤)产生的，其是B淋巴细胞克隆和肿瘤浆细胞融合的产物。与抗原特异性结合并对抗原有高亲和力的特性已经促进了单克隆抗体的发展，单克隆抗体作为分子检测的非常有用的工具产生了巨大的科学、临床和工业兴趣。目前，由于它们的特异性和它们获得的结果的可再现性，其允许更好的证实调查，单克隆抗体在基础和应用研究二者中被广泛使用。然而，单克隆抗体在生物医学领域已经具有庞大的实际应用，既对于多种感染性疾病的诊断和治疗，又作为其他病理的疗法。虽然单克隆抗体确实用于所有种类的检测和诊断科技中，但是在体外诊断试剂盒中，获得了最好结果。为此，目前有各种快速检测试剂盒，诸如妊娠试验，其是基于使用抗hCG抗体对尿中的绒毛膜促性腺素(hCG)水平的测定。此外，对于治疗使用的单克隆抗体已经得到了巨大的相关性。目前，通过使用市售单克隆抗体，对于不同的病理存在不同的治疗处理，诸如：阿仑单珠抗(Alemtuzumab)、吉妥珠单抗奥加米星(Gemtuzumab ozogamicin)、利妥昔单抗(Rituximab)、曲妥珠单抗(Trastumab)，等等。
hRSV是包膜RNA病毒，其属于副粘病毒科(Paramyxoviridae)，肺病毒亚科(Pneumovirinae)(Alfonso et.Al,2016)。它的RNA被转录为10种mRNA，每种都编码一种病毒蛋白，除了M2 mRNA，其具有两个22个核苷酸重叠的开放阅读框(ORFs)，其编码两种不同的蛋白M2-1和M2-2。通过其他mRNA编码的蛋白质是核蛋白(N)、磷蛋白(phosphoprotein)(P)、L蛋白、基质蛋白(M)、NS1、NS2、SH、融合蛋白(F)以及G(Collins et.Al.,2013)。N蛋白与基因组RNA结合形成核衣壳，L是核衣壳有关的RNA聚合酶，P与N和L相互作用，M是在病毒包膜的内表面上存在的非糖基化的蛋白，NS1和NS2是非结构蛋白，以及SH、G和F是病毒包膜的部分。目前开发的RSV诊断试剂盒使用的针对RSV的F、N和/或G蛋白的抗体，以及建议用于RSV感染的治疗和预防的抗体也是针对F、M2和G蛋白的(CL948-96,CN101130765,US6790611,WO 2009088159, et.Al.,2018)。
N是44Kd分子量的多肽，与P和L蛋白一起属于病毒的核衣壳。最近的研究表明了这种N蛋白将会干扰免疫系统的细胞的功能——特别是树突状细胞和T淋巴细胞(CéspedesPF et al.2014)。这种发现允许我们去假设，这种抗原可以被考虑作为对于新的抗病毒治疗的靶标。
根据对本发明进行的调查，涉及来自于人呼吸道合胞病毒(hRSV)的病毒抗原对免疫系统的影响；特异性小鼠单克隆抗体被生成用于RSV抗原的检测，其具有超过可市售获得的那些的优势。特别地，发现由在发明者的实验室中生成的杂交瘤产生的单克隆抗体，在使用各种检测技术的在体内和体外免疫分析二者中，对于hRSV感染测定是非常有用的。由于这一点，所述抗体提供了对于由人呼吸道合胞病毒引起的感染的检测、诊断和/或治疗的有价值的工具。本发明的单克隆抗体可以具有对于诊断和治疗使用的多种应用，诸如在免疫印迹技术、免疫荧光法、免疫色谱法、流式细胞术中、生产包括它的药学形式，或任何涉及其使用的其他方面，包括用于人使用。抗体可以被连接至允许它的检测的标记。可能的标记的实例对应于荧光团、生物素、放射性同位素、金属、酶以及任何其他种类的用于抗体的合适的标记。
本发明的单克隆抗体可以以它的天然形式存在，如由杂交瘤分泌的，或作为抗原结合片段。抗原结合片段是能够结合抗原的抗体的片段，诸如Fab或Fab’片段。在本申请中，本发明的抗体的应用，在提及抗体的使用的同时，也包括抗N单克隆抗体结合片段的使用。此外，在生成包括本发明抗体的组合物的情况下，所述组合物可以包括小鼠抗体或本发明 的人源化的或嵌合抗体。这个在对于人给药的组合物中是特别有用的，作为最小化用组合物治疗的个体的免疫系统将生成对本发明的抗体的应答的可能性的方法。
以这种方式，本发明是指与结合至人呼吸道合胞病毒(hRSV)核蛋白N蛋白的单克隆抗体或其片段，其中所述抗体具有与SEQ ID No:2至少95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的重链的可变区，以及具有与SEQ ID No:4至少95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的轻链的可变区。同样地，本发明也可定义为结合至RSV核蛋白N蛋白的单克隆抗体或其片段，其中其重链可变区被具有与SEQ ID No:1以及其相应的互补反向序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的核苷酸序列编码，并且其可变区轻链被具有与SEQ ID No:3至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的核苷酸序列编码。
在优选的实施方式中，结合至人呼吸道合胞病毒(hRSV)核蛋白N蛋白的本发明的抗体具有的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由具有与SEQ ID No:8,SEQ ID No:9以及SEQ ID No:10至少95％、96％、97％、98％、99％以及100％同一性的序列编码，并且具有的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由具有与SEQ ID No:14,SEQ ID No:15以及SEQ IDNo:16至少95％、96％、97％、98％、99％以及100％同一性的序列编码。
在优选的实施方式中，结合至人呼吸道合胞病毒(hRSV)的核蛋白N蛋白的本发明的抗体具有的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别具有与SEQ ID No:5、SEQ ID No:6以及SEQ ID No:7至少95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，并且同时具有的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别具有与SEQ ID No:11、SEQ ID No:12以及SEQ IDNo:13至少95％,96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
对于本领域技术人员是显而易见的是，结合至hRSV核蛋白N蛋白的单克隆抗体或它的功能片段可以在邻近可变区的区被修饰，以获得嵌合抗体，特别是人源化抗体。如在先前段落定义的可变区，即具有与SEQ ID No:2至少95％同一性的重链可变区以及具有与SEQID No:4至少95％同一性的轻链可变区，赋予所述嵌合或人源化抗体的特异性。
在一种实施方式中，本发明提供了用于治疗和/或预防由RSV引起的感染的药物组合物，其中这种药物组合物包括所限定的结合至RSV核蛋白N蛋白的单克隆抗体或其片段，即，其具有与SEQ ID No:2至少95％同一性的重链可变区以及具有与SEQ ID No:4至少95％同一性的轻链可变区，以及药学上可接受的载体。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于在样品中检测人呼吸道合胞病毒的方法，包括将样品与如所限定的结合至RSV核蛋白N蛋白的单克隆抗体或其片段(即，其具有与SEQ ID No:2至少95％同一性的重链的可变区以及具有与SEQ ID No:4至少95％同一性的轻链可变区)接触，以及检测抗体与抗原的结合。其中，用于检测抗体与抗原的结合的技术对应于ELISA、免疫荧光法、免疫组织化学法、免疫色谱法、流式细胞术、细胞分选仪、免疫沉淀、蛋白质印迹、或任何其他在本领域可用的。可替代地，如限定的抗体或其片段，即，具有的重链可变区具有与SEQ ID No:2至少95％的同一性以及具有的轻链可变区具有与SEQ IDNo:4至少95％的同一性，与允许检测其的标记缀合。其中所述标记选自由荧光团、生物素、放射性同位素、金属、酶或任何其他在本领域可用的标记组成的组。
在一种实施方式中，在固体承载体上固定如所限定的抗体或其片段，即，其重链可变区具有与SEQ ID No:2至少95％同一性以及轻链可变区具有与SEQ ID No:4至少95％同一性。其中所述固体承载体选自硝化纤维素、纤维素、聚乙烯、尼龙或任何其他在本领域可用的合适的承载体。
最后，本发明也旨在治疗和预防合胞病毒的方法，其包括向动物或人类给药包括具有的重链可变区与SEQ ID No:2具有至少95％同一性以及具有的轻链可变区与SEQ IDNo:4具有至少95％同一性的结合至RSV核蛋白N蛋白的抗体或其片段，以及药学上可接受的载体的药物组合物。在优选的实施方式中，这种药物组合物是肌肉内给药的。
下面描述了允许示出本发明单克隆抗体的不同应用的实施例。
实施例1：获得本发明的抗体
发明人获得了抗N单克隆抗体的分泌杂交瘤。培养该杂交瘤约一个月，以及获得稳定的细胞培养物。在这种稳定的培养物中，生成了与在-150℃下储存的储液相对应的多个等分。测序本发明的抗体，并且在本专利中披露序列。重链可变区的序列在SEQ ID No.2中示出，并且编码它的核苷酸序列在SEQ ID No.1中示出。另外，轻链可变区的序列在SEQ IDNo.4中示出，并且编码它的核苷酸序列在SEQ ID No.3中示出。
实施例2：RSV抗原检测试验，抗N单克隆抗体对于纯化的RSV抗原的特异性。
进行ELISA以验证由杂交瘤细胞分泌的抗体识别hRSV的N蛋白。板用N和F蛋白来敏感化以评估抗体的特异性，未活化的板作为对照使用，以及还评估了仅用二级抗体的板。如图1中所示，本发明的抗体，以杂交瘤的上清液评估(批1和批2)，只能识别N蛋白而不能识别F蛋白，这证明了抗体对于N蛋白的高特异性。如在图的详细表述中所表明的，本发明的抗体对于N蛋白具有高识别率，几乎是阳性对照，多克隆抗N抗体的三倍。
使用斑点印迹技术进行第二测试以评估本发明的抗体的特异性。每个膜用在2个点中的hRSV N蛋白，2个阴性对照(PBS[磷酸盐缓冲盐水]和BSA[牛血清白蛋白])以及RSV F蛋白来敏感化。在图2中示出的结果，评价完整杂交瘤的上清液(总Ab)、纯化的本发明的抗体(纯化的Ab)、识别RSV F蛋白的帕利珠单抗以及针对RSV N蛋白的多克隆抗体。结果示出了为总的和纯化的上清液二者形式的本发明的抗体强烈且特异性识别hVRS的N蛋白。
实施例3：确定单克隆抗体检测病毒抗原的效率和特异性的试验
在确定纯化的抗体识别hRSV的蛋白质后，进行ELISA以确认它的特异性。在这种ELISA中，使用不同浓度的一级抗体，并且N蛋白的浓度保持不变(50ng)。使用针对病毒蛋白M2的α-M2抗体和针对病毒F蛋白的市售抗F抗体作为特异性对照。图3A示出了抗体能够结合至N蛋白，在用蛋白M2活化的或没有活化(SA)的孔中没有观察到信号。评估来自2种不同的生产的本发明的抗体，批1是第一次纯化。批2对应于随后进行的纯化，其中杂交瘤培养在板中和在T75培养瓶中同时进行。结果示出了本发明抗体在检测RSV N蛋白中的高效率，在测试的不同的纯化之间没有显著的差异。由抗N抗体的纯化的和浓缩的部分，制备了从1/2000开始的稀释以确定能够识别N蛋白的抗N抗体的最小量。如在图3B，再次确定抗N抗体结合至N蛋白的能力，在用F蛋白活化的或未活化(SA)的孔中没有观察到信号。结果示出了即使在研究的最低浓度下，1/80000，本发明的抗体也可以检测hRSV N蛋白的存在。
实施例4.抗N单克隆抗体对RSV抗原的灵敏度
为了确定本发明的抗体能够检测N蛋白的最小量(分析灵敏度)，连续稀释的蛋白N被制备，自50ng开始至0.375ng。然后，通过ELISA技术，在抗N抗体的恒定稀释度(1/5000)，确定抗体能够可靠地识别最高至6.25ng的N蛋白，如图4中所示出。
实施例5.使用抗N抗体通过流式细胞术检测RSV感染的人细胞。
为了评估抗N抗体的检测RSV感染的人细胞的能力，使用对应于人癌上皮Hep-2的细胞系。当病毒复制时，用表达绿色荧光蛋白(GFP)的1.8x104PFU的hRSV体外感染这些细胞2小时。培养物被维持48小时以促进hRSV复制，以及使得能够通过流式细胞术检测当表达GFP蛋白时的感染的细胞。另外，这些细胞用4％ PFA固定并且用0.2％皂苷渗透，以与抗N抗体细胞内染色。在与抗N抗体孵育30分钟后，细胞被洗涤并且与别藻蓝蛋白(APC)偶联的二级抗体一起孵育。以这种方式，感染的细胞(GFP+)和抗N抗体可以被连续测量。未感染的细胞、未用抗N抗体染色的感染的细胞和仅用第二抗体染色的细胞作为细胞术对照使用。在图5A中，可以看出通过用抗N抗体(GFP+抗N+)的染色来识别了所有用hRSV感染的细胞(GFP+)。此外，当量化在流式细胞术中获得的数据时，可以推断抗N抗体能够特异性鉴别感染的细胞(图5B)。
实施例6：本发明的抗体预防RSV感染的作用的评估。
为了评估本发明的抗体在预防在患者中的疾病或至少减少其影响的能力，向BALB/c小鼠给药5mg/kg剂量(每只动物约200ug)的抗N单克隆抗体。通过向另一组BALB/c小鼠给药帕利珠单抗和同种型对照来进行对照。被动免疫后，用hRSV感染这些动物加上未免疫的对照组，在感染后第四天测试结束，测量支气管肺泡灌洗中浸润性中性粒细胞的数量，这是与疾病严重性相关的参数。结果在图6A中示出。可以看出用本发明的抗体的免疫将在肺水平的中性粒细胞的浸润降低至与用帕利珠单抗对照达到的水平相似的水平。对于确定疾病严重性的重要的额外的临床参数是在感染的小鼠的肺中的病毒载量的量。为了确定病毒载量，从小鼠的肺中获得RNA并且由其进行实时PCR以定量病毒基因的表达，在这种情况下是核蛋白基因(N)的表达。根据在图6B中示出的结果，本发明的抗N抗体能够在hRSV感染时降低肺病毒载量，其比例与hRSV的商购抗F蛋白抗体，帕利珠单抗，所达到的比例相当。
这些实施例证明了本发明的抗体的特异性，以及其在以下两个方面的实用性：病毒检测，并因此用于RSV感染诊断方法的开发；以及中和其，并因此用于生产目的在于治疗、保护和/或预防RSV感染的药物组合物。
参考文献
1.Bryce J,Boschi-Pinto C,Shibuya K,Black RE；WHO Child HealthEpidemiology Reference Group.WHO estimates of the causes of death inchildren.Lancet.2005Mar 26-Apr 1；365(9465):1147-52.
2.Cabalka AK.Physiologic risk factors for respiratory viralinfections and immunoprophylaxis for respiratory syncytial virus in youngchildren with congenital heart disease.Pediatr Infect Dis J.2004Jan；23(1Suppl):S41-5.
3.Carpenter TC,Stenmark KR.Predisposition of infants with chroniclung disease to respiratory syncytial virus-induced respiratory failure:avascular hypothesis.Pediatr Infect Dis J.2004Jan；23(1Suppl):S33-40.
4.Weisman L.Populations at risk for developing respiratory syncytialvirus and risk factors for respiratory syncytial virus severity:infants withpredisposing conditions.Pediatr Infect Dis J.2003Feb；22(2Suppl):S33-7；discussion S37-9.
5.Louis Bont,Paul A.Checchia,Brigitte Fauroux,Josep Figueras-Aloy,Paolo Manzoni,Bosco Paes,Eric A.F.and Xavier Carbonell-Estrany.Defining the Epidemiology and Burden of Severe Respiratory SyncytialVirus Infection Among Infants and Children in Western Countries.Infect DisTher.2016 Sep；5(3):271–298.Published online 2016 Aug 1.doi:10.1007/s40121-016-0123-0
6.Hall CB,Walsh EE,Long CE,Schnabel KC.Immunity to and frequency ofreinfection with respiratory syncytial virus.J Infect Dis.1991 Apr；163(4):693-8.
7.Luis F.María Angélica Palomino and Carmen />Surveillance for Respiratory Syncytial Virus in Infants Hospitalized forAcute Lower Respiratory Infection in Chile(1989 to 2000).J ClinMicrobiol.2003 Oct；41(10):4879–4882.doi:10.1128/JCM.41.10.4879-4882.2003
8.Collins PL,Fearns R,Graham BS.Respiratory syncytial virus:virology,reverse genetics,and pathogenesis of disease.Curr Top Microbiol Immunol 2013；372:3–38.Available from http://link.springer.com/10.1007/978-3-642-38919-1
9.Natalia Olchanski,Ryan N Hansen,Elle Pope,Brittany D’Cruz,JaimeFergie,Mitchell Goldstein,Leonard R Krilov,Kimmie K McLaurin,Barbara Nabrit-Stephens,Gerald Oster,Kenneth Schaecher,Fadia T Shaya,Peter J Neumann andSean D Sullivan.Palivizumab Prophylaxis for Respiratory Syncytial Virus:Examining the Evidence Around Value Open Forum Infect Dis.2018 Mar；5(3):ofy031.Published online 2018 Feb 7.doi:10.1093/ofid/ofy031
10.Alfonso CL,Amarasinghe GK,Bányai K,et al.Taxonomy of the orderMononegavirales:update 2016.Arch Virol.2016；161:2351–2360.Available from:http://link.springer.com/10.1007/s00705-016-2880-1
11.Natalia Magdalena S.Pizarro-Ortega,Emma Rey-Jurado,Fabián E.Díaz,Susan M.Bueno and Alexis M.Kalergis.Patterns of antibodyresponse during natural hRSV infection:insights for the development of newantibody-based therapies.https://doi.org/10.1080/13543784.2018.1511699
12.Céspedes P.,Bueno SM,Ramírez BA,Gomez RS,Riquelme SA,PalavecinoCE,Mackern-Oberti JP,Mora JE,Depoil D,Sacristán C,Cammer M,Creneguy A,NguyenTH,Riedel CA,Dustin ML and Kalergis AM.Surfaceexpression of the hRSVnucleoprotein impairs immunological synapseformation with T cells.Proc NatlAcad Sci U S A.2014 Aug 5；111(31):E3214-23.doi:10.1073/pnas.1400760111.Epub2014 Jul 23。
序列表
<110> 智利天主教教皇大学 (PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATOLICA DE CHILE)
科佩克-卡托利卡大学基金会 (FUNDACION COPEC UNIVERSIDAD CATÓLICA)
<120> 针对 HRSV 的 N 抗原的单抗，可用于治疗感染、其检测和诊断
<130> PPI21170434CL
<160> 16
<170> PatentIn 版本 3.5
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Claims (13)
1.与人呼吸道合胞病毒(HRSV)的核蛋白N蛋白结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段具有重链可变区，其CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID No:5、SEQID No:6以及SEQ ID No:7所示，并且同时具有的轻链可变区，其CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID No:11、SEQ IDNo:12以及SEQ ID No:13所示。
2.根据权利要求1所述的与HRSV的核蛋白N蛋白结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQ IDNo:8、SEQ ID No:9以及SEQ ID No:10所示的序列编码或分别由它们各自的互补反向序列编码，以及具有的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别由SEQ IDNo:14、SEQ ID No:15以及SEQ ID No:16所示的序列编码或分别由它们各自的互补反向序列编码。
3.根据权利要求1所述的与HRSV的核蛋白N蛋白结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段是人源化或嵌合抗体。
4.用于治疗和/或预防由HRSV引起的感染的药物组合物，其特征在于，包括根据权利要求1所述的与HRSV的核蛋白N蛋白结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体。
5.根据权利要求1所述的与HRSV的核蛋白N蛋白结合的单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于检测样品中人呼吸道合胞病毒(HRSV)的试剂盒中的用途，其中，所述试剂盒用于将所述样品与所述单克隆抗体或其抗原结合片段接触，以及检测所述抗体与抗原的结合。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，用于检测所述抗体或其抗原结合片段与抗原的结合的技术对应于ELISA、免疫荧光法、免疫组织化学法、免疫色谱法、细胞分选仪、免疫沉淀和/或蛋白质印迹。
7.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，用于检测所述抗体或其抗原结合片段与抗原的结合的技术对应于流式细胞术。
8.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的抗体或其抗原结合片段与允许其检测的标记缀合。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段结合至选自由荧光团、生物素、放射性同位素、金属以及酶组成的组的标记。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段固定在固体承载体中。
11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述固体承载体选自硝化纤维素、纤维素、聚乙烯以及尼龙。
12.权利要求4所述的药物组合物在制备用于治疗或预防由呼吸道合胞病毒引起的感染的药物中的用途。
13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述药物是肌肉内给药的。
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|---|---|---|---|---|
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993020210A1 (en) * | 1992-04-06 | 1993-10-14 | Scotgen Limited | Antibodies for treatment and prevention of respiratory syncytial virus infection |
| CN103998465A (zh) * | 2011-11-25 | 2014-08-20 | 智利天主教教皇大学 | 对于呼吸道合胞病毒(rsv)的m2-1抗原而言特异的单克隆抗体 |
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Non-Patent Citations (2)
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|---|
| "Characterization of Monoclonal Antibodies Raised against Recombinant Respiratory Syncytial Virus Nucleocapsid (N) Protein: Identification of a Region in the Carboxy Terminus of N Involved in the Interaction with P Protein ";Jillian Murray 等;《Virology》;第252–261页 * |
| "Respiratory Syncytial Virus Detection in Cells and Clinical Samples by Using Three New Monoclonal Antibodies ";Roberto S 等;《Journal of Medical Virology》;第1256–1266页 * |
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